DE60118395T2

DE60118395T2 - Pharmazeutische zusammensetzungen mit verzögerter freisetzung für die parenterale applikation von hydrophilen wirkstoffen

Info

Publication number: DE60118395T2
Application number: DE60118395T
Authority: DE
Inventors: Francesco Autuori; Carlo Bianchini; Giuseppe Bottoni; Flavio Leoni; Paolo Mascagni; Valmen Monzani; Oreste Piccolo
Original assignee: Italfarmaco SpA
Current assignee: Italfarmaco SpA
Priority date: 2000-05-26
Filing date: 2001-05-23
Publication date: 2006-12-07
Anticipated expiration: 2021-05-24
Also published as: ZA200209520B; WO2001089479A2; CY1105262T1; AU2001281786B2; BR0111016A; EP1283700A2; US7157099B2; ES2257428T3; SK16552002A3; NO20025621D0; JP4954423B2; SI1283700T1; AU2001281786B8; EP1283700B1; HUP0301921A2; CA2409854A1; JP2003534265A; CN100479856C; BRPI0111016B8; RU2272615C2

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft pharmazeutische Zusammensetzungen mit langsamer Abgabe bzw. nachhaltiger Freisetzung zur parenteralen Verabreichung von aktiven Inhaltsstoffen, die hydrophil sind oder durch geeignete Derivatisierung hydrophil gemacht werden, in Form von stabilen, biologisch annehmbaren und leicht herstellbaren Wasser-in-Öl-Mikroemulsionen (w/o). So werden insbesondere aktive Peptidbestandteile oder biologisch aktive Oligo- oder Polysaccharide, für die ein Schutz vor dem unmittelbaren Angriff durch in lebenden Organismen vorliegende hydrolytische Enzyme, sowie zur Vermeidung wiederholter Verabreichungen eine langsame Abgabe über die Zeit wünschenswert sind, durch die Mikroemulsionen vorteilhaft formuliert. Diese Formulierungen können zur therapeutischen Verwendung ohne Probleme und wesentliche Nebenwirkungen injiziert werden und sind einfach industriell herstellbar, wodurch ein beachtlicher technischer Fortschritt bereitgestellt wird.
Mikroemulsionen können im Allgemeinen als optisch isotrope Systeme definiert werden, die bei Betrachtung unter polarisiertem Licht nicht doppelbrechend, transparent, thermodynamisch stabil sind, von extrem reduzierter Größe sind, mit einem Tropfendurchmesser von 5 bis 200 nm, erzeugt durch Dispersion von zwei nicht mischbaren Flüssigkeiten, die durch das Vorliegen eines Emulgators, der die chemisch-physikalischen Eigenschaften der Trennungsoberfläche zwischen den beiden Flüssigkeiten ändert, stabilisiert werden, wobei die Grenzflächenspannung im Wesentlichen gegen null reduziert wird. Üblicherweise sollte ein Öl, Wasser, ein oberflächenaktives Mittel oder Tensid und wahlweise ein Co-Surfactant bzw. Co-Tensid (co-surfactant) oder ein Co-Tensid (co-tenside) vorhanden sein, um Mikroemulsionen zu bilden, wobei die Tendenz eine Wasser-in-Öl- (w/o) oder Öl-in-Wasser- (o/w)- Mikroemulsion zu bilden, von den jeweiligen Anteilen wässriger und öliger Phasen sowie von der Beschaffenheit des oberflächenaktiven Mittels abhängt. So ermöglichen insbesondere ternäre, gemäß experimenteller Daten erhaltene Phasendiagramme, die als Komponenten Wasser, eine hydrophobe Verbindung und ein Gemisch aus oberflächenaktivem Mittel und Co-Surfactant aufweisen, den Bereich auszuwählen, in dem w/o- und o/w-Mikroemulsionen vorliegen und stabil sind. Aboofazeli et al. (Int. J. Pharm. 111 (1994) 63–72) untersuchten beispielsweise die Fähigkeit verschiedener Verbindungen, die eine Co-Surfactant-Aktivität aufweisen, um w/o-Mikroemulsionen zu bilden. Das von den Autoren untersuchte System bestand aus Gemischen eines Fettsäureesters, eines 1:1 Lecithin-Co-Surfactants und Wasser in verschiedenen Verhältnissen. Eine Skala der Wirksamkeit der als Co-Surfactante verwendeten Verbindungen wurde definiert: Primäre Amine > Alkohole > Fettsäuren. Weiterhin wurde gezeigt, dass die Wirksamkeit mit der Länge der Alkylkette des Alkohols und der entsprechenden Fettsäure zusammenhängt; deshalb Butanol > Pentanol > Hexanol > Pentansäure > Capronsäure. Auf der Grundlage dieser experimentellen Daten scheinen Alkohole, wie Butanol und Pentanol und, zu einem geringeren Ausmaß, die entsprechenden Fettsäuren, als die besten Kandidaten. Die Verwendung der beschriebenen Verbindungen ermöglicht stabile w/o-Mikroemulsionen herzustellen, wobei jedoch die Verträglichkeit der Formulierungen nicht sichergestellt wird, insbesondere für die Depotverwendung, bei der die Formulierung und das subkutane oder intramuskuläre Gewebe für Tage oder sogar Wochen in Kontakt bleiben.
Außerdem wird in der Literatur berichtet, dass das Verhältnis von Co-Surfactant zu oberflächenaktivem Mittel entscheidend ist; die von Aboofazeli et al. berichteten Daten beziehen sich auf ein 1:1-Verhältnis zwischen den beiden Komponenten. Atwood et al. (Int. J. Pharmacy 84 R5 (1992)) untersuchten das Verhalten von Lecithin/Wasser/Fettsäureester/Butanol-Gemischen, bei denen das oberflächenaktive Mittel/Co-Surfactant-Verhältnis von ungefähr 1,7 auf 3 erhöht wird. Die Autoren haben bewiesen, dass die Verringerung der Menge an Co-Surfactant zu Gunsten von Lecithin den Bereich, in dem das Vorliegen einer w/o-Mikroemulsion beobachtet wurde, drastisch begrenzt, selbst wenn ein außergewöhnlich wirksames Co-Surfactant wie Butanol verwendet wird.
Oberflächenaktive Mittel werden im Allgemeinen nach einer als hydrophile-lipophile Balance (HLB) bekannten empirischen Skala klassifiziert, die Werte von 1 bis 40 zuordnet. Geeignete Co-Surfactante für w/o-Mikroemulsionen weisen in der Regel niedrige HLB auf, während solche, die für o/w-Mikroemulsionen geeignet sind, hohe HLB aufweisen. Wenn die Grenzflächenspannung < 2 × 10^–2 dyn/cm ist, kann sich eine stabile Mikroemulsion bilden. Das wahlweise Vorliegen eines Co-Surfactants ermöglicht die Fluidität der Grenzflächen zu erhöhen, da die Co-Surfactantmoleküle zwischen die Moleküle des oberflächenaktiven Mittels eindringen, wodurch eine ungleichförmiger Oberflächenfilm erzeugt wird. Co-Surfactante können auch die Hydrophilie der wässrigen Phase und damit die Grenzflächenspannung zwischen den beiden Phasen verringern. Im Prinzip ist die Verwendung von Co-Surfactanten insofern vorteilhaft, dass sie ermöglichen die Menge an notwendigem oberflächenaktiven Mittel zu verringern, während die Stabilität der Mikroemulsion erhöht wird; wobei jedoch, wie bereits vorstehend aufgeführt, bevorzugt wird deren Verwendung zu begrenzen, da sie eine mögliche topische Toxizität, hauptsächlich im Fall eines länger anhaltenden Kontakts zwischen dem Träger und den subkutanen oder intramuskulären Geweben aufweisen.
Die zahlreichen Vorteile der Verwendung einer Mikroemulsion als Träger für aktive Bestandteile sind bekannt.
Unter speziellen Bedingungen von Verhältnissen zwischen den Komponenten, können sich Mikroemulsionen spontan bilden, ohne eine Notwendigkeit für einen hohen Aufwand für deren Herstellung; deshalb kann ihre Herstellung in einem industriellen Maßstab einfach sein. Die spontanen Mikroemulsionen sind thermodynamisch stabil, homogen und transparent, so dass sie durch spektroskopische Methoden überwacht werden können. Es können Mikroemulsionen mit mittleren Durchmessern <100 nm hergestellt werden, die durch Filtration mittels handelsüblicher Filter durch eine 0,22 Mikron-Membran kalt sterilisiert werden können. Die Mikroemulsionen können eine Verabreichung von schwer löslichen oder wenig stabilen Arzneimitteln ermöglichen.
Weiterhin können die Systeme eine Phaseninversion durchlaufen, wenn ein Überschuss der dispergierten Phase vorliegt, oder als eine Folge eines Temperaturwechsels: diese Eigenschaft kann die Bioverfügbarkeit des aktiven Bestandteils durch einen bis jetzt nicht geklärten Mechanismus beeinflussen.
Die w/o-Mikroemulsionen können die Abgabe des aktiven Bestandteils steuern oder dessen Stabilität in physiologischen Flüssigkeiten durch einen Schutz vor der Einwirkung von hydrolytischen Enzymen verlängern. Es gibt mehrere Übersichtsartikel über Mikroemulsionen, beispielsweise "Industrial application of microemulsions" Marcel Dekker Hrsg. 1997, der in dem Kapitel "Microemulsions in the Pharmaceutical field: perspectives and applications" die Nützlichkeit derer in dem pharmazeutischen Gebiet behandelt, und "Handbook of Microemulsion Technology", Hrsg. Kumar Mittal (1999), bezüglich der chemisch-physikalischen Aspekte.
In der Patentliteratur wird die Verwendung von w/o-Mikroemulsionen als Vehikel berichtet, um eine gesteuerte Abgabe von aktiven Bestandteilen, die hydrophil sind oder durch geeignete Derivatisierung hydrophil gemacht werden, zu erhalten.
Insbesondere wird, in Bezug auf biologisch abbaubare Moleküle wie Peptide, die parenterale Verabreichung von w/o-Mikroemulsionen, welche die aktiven Bestandteile umfasst, in einer Studie [M.R.Gasco et al., Int. J. Pharm., 62, 119 (1990)] berichtet, in der ein LHRH-Hormonanalog in einer Mikroemulsion, die als bioannehmbar eingeschätzte Komponenten umfasst und 500 μg/ml des aktiven Bestandteils enthält, gebildet wird und durch eine einmalige intramuskuläre Injektion mit einer Dosis von 3 mg/kg erwachsenen männlichen, ungefähr 200 g wiegenden Ratten verabreicht wurde, den Testosteronspiegel im Plasma für einen Zeitraum von ungefähr 30 Tagen nach der Injektion verringerte; wobei die Spiegel niedriger als jene waren, die in einer zweiten Gruppe von Mäusen beobachtet wurden, die mit wiederholten Injektionen (eine pro Tag über 28 Tage) mit einer Dosis von 100 μg/kg an aktivem Bestandteil in Pufferlösung behandelt wurden.
Es sollte jedoch erwähnt werden, dass die Verringerung der Testosteronkonzentration über den Beobachtungszeitraum nicht gleichmäßig war, und sie erst 8 Tage nach der Verabreichung therapeutisch wirksam wurde.
Diese Verzögerung in der therapeutischen Wirkung ist nicht sehr vorteilhaft, insbesondere bei der Behandlung eines Prostatatumors, von dem bekannt ist, dass er Testosteron zum Wachstum benötigt; deshalb ist die Behandlung umso wirksamer, je schneller die normale Testosteronproduktion gestoppt wird.
Die vorstehend aufgeführte Veröffentlichung zeigt die Wirksamkeit einer w/o-Mikroemulsion für die langsame Abgabe von Peptiden, die Ethyloleat (60,5 %), Wasser (10,1 %), Phosphatidylcholin (18,9 %) und Capronsäure (10,5 %) umfasst. Das Verhältnis von oberflächenaktiven Mittel (Phosphatidylcholin) zu Co-Surfactant (Capronsäure) beträgt 1,8. Die Komponenten der Mikroemulsion werden, einzeln genommen, von den Autoren als biologisch annehmbar betrachtet. Die Bioannehmbarkeit der Mikroemulsion als Ganzes, sowie der Zustand des subkutanen Gewebes, das mit der Formulierung in Kontakt steht, wird nicht erwähnt.
Gemäß der Lehre der Veröffentlichung wurde eine w/o-Mikroemulsion hergestellt, die Leuprolidacetat als aktiven Bestandteil mit LHRH-Aktivität umfasst, die Ethyloleat (66,9 %), Wasser (9,7 %), Phosphatidylcholin (19,4 %) und ein Capronsäure/Buttersäure-3/1-Gemisch (3,9 %) beinhaltet. Gemäß dieser Veröffentlichung wurde das Gemisch mit Buttersäure anstelle von Capronsäure alleine verwendet, um das Verhältnis von oberflächenaktivem Mittel zu Co-Surfactant zu minimieren, das in diesem Fall 4,9 anstelle von 1,8 beträgt. Der in vivo Test, der in Ratten durch eine subkutane Injektion des Produkts durchgeführt wurde, bestätigte die Wirksamkeit, zeigte jedoch auch überraschenderweise eine alarmierende lokale Ulzerogenität und eine anhaltende Bildung von subkutanen Granulomen. Dieses pharmakologisch nicht akzeptable Ergebnis beweist, ungeachtet der niedrigeren Mengen an verwendetem Co-Surfactant, dass die Bioannehmbarkeit der einzelnen Komponenten der Mikroemulsion nicht ausreichend war, um die Bioannehmbarkeit des die Mikroemulsion ausmachenden Gemisches sicherzustellen, wenn es für die parenterale Verabreichung verwendet wird.
In ähnlicher Weise lehren die in verschiedenen Patenten, beispielsweise WO 94/08610, offenbarten und beanspruchten Gemische, trotz Bereitstellung von stabilen Mikroemulsionen und möglichen gesteuerten Abgaben des aktiven Bestandteils zur rechten Zeit, dem Fachmann nicht, wie die langsame Abgabe eines hydrophilen aktiven Bestandteils erhalten wird, während derartige Nebenwirkungen verhindert werden. Tatsächlich umfassen die Mikroemulsionen gewöhnlich Wasser, eine ölige Komponente, ein oberflächenaktives Mittel, ein Co-Surfactant und wahlweise Elektrolyte in verschiedenen Verhältnissen. Weder ist die Bioannehmbarkeit der Mikroemulsion "in toto" beurteilt, noch sind die nötigen Verhältnisse von Komponenten des Gemisch zum aktiven Bestandteil angezeigt, um eine Stabilität sowohl des aktiven Bestandteils als auch der Mikroemulsion sowie Bioannehmbarkeit der Formulierung zu erhalten.
Andererseits betrachten die Patente nicht speziell die Probleme hinsichtlich lokaler Verträglichkeit in Verbindung mit intramuskulären (i.m) und subkutanen (s.c.) Verabreichungen, welche die am besten geeigneten und einfachen Routen zur parenteralen Verabreichung sind.
Eine bereits im industriellen Maßstab verwendete alternative Technik zur langsamen Abgabe von Peptiden ist jene, die in einer Vielzahl von Patenten, unter anderem US-P 3,976,071, beschrieben und beansprucht ist, wobei eine derartige Abgabe durch die Verwendung von bioerodierbaren Polymeren erhalten wird, in denen der aktive Bestandteil ein geschlossen ist. Gewöhnliche Beispiele von bioerodierbaren Polymeren sind auf Glykolsäure und Milchsäure basierende Polymere. Der Nachteil der Technik liegt darin, dass sie, verglichen mit den vorstehend beschriebenen Mikroemulsionen, relativ teuer und mühevoll ist, und weiterhin die Verwendung organischer, insbesondere chlorierter Lösungsmittel während der Herstellung benötigt, was bezüglich Umwelteinfluss und Sicherheit der pharmazeutischen Formulierung Probleme beinhaltet.
Andererseits verursachen die Formulierungen zweckmäßigerweise keine persistenten Granulome und induzieren keine lokale Ulzerogenität.
Das Ziel der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen mit langsamer Abgabe in Form von stabilen w/o-Mikroemulsionen, die einfach herzustellen sind, sterilisiert werden können, frei sind von auffallenden systemischen oder topischen Nebenwirkungen, zur parenteralen Verabreichung, vorzugsweise i.m. oder s.c., aktiver Bestandteile geeignet sind, die hydrophil sind oder durch geeignete Derivatisierung hydrophil gemacht werden, wodurch, verglichen mit der bekannten Methode, ein beachtlicher technischer Fortschritt erhalten wird.
Es wurde ein Verfahren aufgefunden, welches die klinischen, Obduktions- und histologischen Untersuchungen von Tieren umfasst, die mit den vorstehend aufgeführten Mikroemulsionen behandelt wurden, das zur gründlichen Bewertung der Bioannehmbarkeit von beliebigen Formulierungen zur Verabreichung mit langsamer Abgabe geeignet ist.
Nach diesem Verfahren wird, nach Angaben in der Literatur (Protein Formulation and Delivery – F. J. McKelly, 2000, Seiten 245–247), eine Mikroemulsion als akzeptierbar betrachtet, wenn jede lokale Schwellung, mehr oder weniger deutlich in Abhängigkeit der verabreichten Dosis, auf jeden Fall reversibel ist; andererseits eine ähnliche Gewebeantwort auch für als biologisch abbaubar betrachtete Materialien beobachtet wird, deren Antwort offensichtlich beim Beeinflussen der langsamen Abgabe des Arzneimittels zur rechten Zeit, wichtig ist. Eine lokale Unverträglichkeit in der Form persistenter Geschwürbildungen wird im Gegenzug als nicht akzeptierbar betrachtet.
Die erfindungsgemäßen Mikroemulsionen umfassen bis zu 20 % einer inneren hydrophilen wässrigen Phase, die den aktiven Bestandteil beinhaltet, 30 bis 98 % einer hydrophoben äußeren Phase und bis zu 50 % ein oberflächenaktives Mittel alleine oder in Bemischung mit einem Co-Surfactant. Die Mikroemulsion enthält vorzugsweise einen Prozentsatz ≤ 35 % an oberflächenaktivem Mittel und Co-Surfactant, mit einen oberflächenaktiven Mittel/Co-Surfactant-Verhältnis ≥ 2, und am meisten bevorzugt ≥ 3,5.
Andere biologisch kompatible Hilfsstoffe, welche die Stabilität der Mikroemulsion nicht beeinflussen, können ebenfalls vorhanden sein.
Geeignete oberflächenaktive Mittel für die erfindungsgemäßen Mikroemulsionen sind ausgewählt unter natürlichen und synthetischen Glycerophospholipiden, die Reste von C₄-C₂₀-gesättigten oder ungesättigten Carbonsäuren enthalten, die als Phosphoesterteil einen Rest von Cholin, Ethanolamin, Serin, Glycerin; Cholesterin; C₁₂-C₂₀-Fettsäureester von Zuckern wie Sorbit, Galactose, Glucose, Saccharose; Polyoxyethylensorbitan-C₁₂-C₂₀-Fettsäureester aufweisen.
Die wahlweise vorhandenen Co-Surfactante sind ausgewählt unter C₈-C₂₀-Fettsäuren, C₂-C₁₄-Polyhydroxyalkanen, insbesondere Propylenglykol, Hexandiol und Glycerin, C₂-C₁₂-Alkoholen, Milchsäureestern mit einem C₂-C₈-Alkoholrest.
Die hydrophobe kontinuierliche Phase ist ausgewählt unter den folgenden Verbindungen, alleine oder in einem Gemisch: Ester von C₈-C₂₀-gesättigten oder ungesättigten Carbonsäuren mit einem C₂-C₈-Alkoholanteil oder Mono-, Di- und Triglyceriden von C₈-C₂₀-Fettsäuren, oder für die parenterale Verabreichung geeignete Pflanzenölen, wie Sojabohne, Erdnuss, Sesam, Baumwollsamen, Sonnenblumenöle.
Die erfindungsgemäßen Mikroemulsionen sind ferner durch einen pH-Wert gekennzeichnet, der von 4,5 bis 7,5, vorzugsweise von 5 bis 7, reicht, wobei der pH-Wert, falls nicht wesentlich für die Zusammensetzung der Mikroemulsion, vorzugsweise durch Zugabe einer geeigneten Menge einer natürlichen Aminosäure zu der Mikroemulsion erlangt wird, ohne deren Stabilität und die durchschnittliche Größe der Tropfen zu beeinflussen.
Die erfindungsgemäßen w/o-Mikroemulsionen sind insbesondere als Träger für Peptide geeignet, insbesondere LHRH-Analoge wie Leuprolidacetat, Goserelin, Triptorelin, Nafarelinacetat, Histrelin, Cetrorelix oder die entsprechenden Acetate oder Peptide, wie Somatostatin oder dessen Analogen, wie Octreotid- und Lanreotidacetat.
Weiterhin sind die erfindungsgemäßen Mikroemulsionen insbesondere geeignet als Träger für Polysaccharide, insbesondere nicht fraktioniertes Heparin oder Heparine mit niedrigem Molekulargewicht.
Die erfindungsgemäßen Mikroemulsionen ermöglichen Formulierungen mit einer langsamen Abgabe von hydrophilen aktiven Bestandteilen herzustellen. Die Formulierungen mit langsamer Abgabe, die ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind, induzieren keine lokale Ulzerogenität und erzeugen keine persistenten Granulome, die während der Zeit, in der das Medikament wirksam ist, rückresorbiert werden. Im Fall von LHRH-Typ-Peptiden, und insbesondere Leuprolid, Goserelin, Triptorelin, Nafarelinacetat, Histrelin, Cetrorelix und der entsprechenden Acetate kann eine langsame Abgabe über mindestens 30 Tage erhalten werden. Im Fall von Somatostatin, Octreotid und Lanreotid kann eine langsame Abgabe über mindestens 8 Tage erhalten werden.
Die Erfindung betrifft ferner die Verwendung einer erfindungsgemäßen Mikroemulsion, die Leuprolid, Goserelin, Triptorelin, Nafarelinacetat, Histrelin, Cetrorelix oder die entsprechenden Acetate, zur Herstellung eines Medikaments zur Unterdrückung der Testosteronproduktion für mindestens 30 Tage nach einmaliger Verabreichung umfasst, wobei sich der Testosteronspiegel bereits 48 h nach der Verabreichung verringert.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der Mikroemulsionen, die Octreotid oder dessen Analoge umfassen, zur Herstellung eines Medikaments zur Unterdrückung der Produktion von Wachstumshormonen für mindestens 8 Tage.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der Mikroemulsionen, die nicht fraktioniertes Heparin oder Heparine mit niedrigem Molekulargewicht umfassen, zur Herstellung von Medikamenten mit langsamer Abgabe nach einmaliger Verabreichung.
Die nachfolgenden Beispiele stellen die vorliegende Erfindung näher dar.
Beispiel 1 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Leuprolidacetat umfasst
a) Herstellung der wässrigen Phase
350 mg Leuprolidacetat werden in 10 ml Wasser für Injektionen, das mit 200 mg Lysin angereichert ist, gelöst.
b) Herstellung der öligen Phase
60 g Ethyloleat, 25 g Sojalecithin (Reinheit > 95 %) und 5 g Caprylsäure werden unter Rühren in einem geeigneten Gefäß einzeln gemischt, das auf eine Temperatur von 60–70 °C eingestellt ist. Die erhaltene klare, homogene Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt.
c) Herstellung der Mikroemulsion
Die wässrige Phase (Lösung a) wird unter Rühren zu der öligen Phase (Lösung b) zugegeben, um eine optisch transparente, homogene Mikroemulsion zu erhalten. Basierend auf den verwendeten Mengen an Lysin- und Caprylsäureanteil, die in der wässrigen Phase löslich sind, wurde ein pH-Wert von ungefähr 6 bestimmt.
Die Mikroemulsion wird durch eine geeignete 0,22 μm Membran sterilfiltriert.
Der Leuprolidacetat-Gehalt der Mikroemulsion wurde durch HPLC-Analyse unter folgenden Bedingungen bestimmt:

Stationäre Phase: Vydac C18 5μ Säule (250 × 4 mm)

Mobile Phase A: H₂O + 0,1 % TFA

B: CH₃OH + 0,1 % TFA

Gradient: 20' 100 % A auf 100 % B

Fluss: 0,8 ml/min

Detektor: UV 214 nm
Der Gehalt an Leuprolidacetat beträgt 3 mg/ml.
Beispiel 2 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Leuprolidacetat umfasst
Es wurde dem Verfahren aus Beispiel 1 gefolgt, wobei jedoch 600 mg Leuprolidacetat in 10 ml Wasser solubilisiert wurden.
Beispiel 3 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Leuprolidacetat umfasst
Es wurde dem Verfahren aus Beispiel 1 gefolgt, jedoch ohne die Zugabe von 200 mg Lysin. Der bestimmte pH-Wert beträgt ungefähr 3.
Beispiel 4 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Leuprolidacetat umfasst
Es wurde dem Verfahren aus Beispiel 1 gefolgt, wobei jedoch 900 mg Leuprolidacetat in 10 ml Wasser solubilisiert wurden.
Beispiel 5 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Leuprolidacetat umfasst
Es wurde dem Verfahren aus Beispiel 1 gefolgt, wobei jedoch die Mengen an oberflächenaktivem Mittel und Co-Surfactant auf 15 g Sojalecithin beziehungsweise 3 g Caprylsäure verändert wurden. Trotz unveränderter Beibehaltung des Verhältnisses zwischen den beiden Komponenten (5:1), wird auf diesem Weg die Gesamtmenge des oberflächenaktiven Mittels/Co-Surfactant-Gemischs von 30 % auf 18 % verändert.
Beispiel 6 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Octreotid umfasst
Es wurde dem Verfahren aus Beispiel 1 gefolgt, wobei jedoch anstelle von 350 mg Leuprolidacetat in 10 ml Wasser 3 g Octreotid in 10 ml Wasser solubilisiert wurden.
Beispiel 7 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Heparin umfasst
Es wurde dem Verfahren aus Beispiel 1 gefolgt, wobei jedoch anstelle von 350 mg Leuprolidacetat 50 mg nicht fraktioniertes Heparin in Form von Calcium- oder Natriumsalz in 10 ml Wasser solubilisiert wurden.
Beispiel 8 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Leuprolidacetat umfasst
Es wurde dem Verfahren aus Beispiel 1 gefolgt, wobei jedoch die quali-quantitative Zusammensetzung der öligen Phase verändert wurde: Ethyloleat (66,9 %), Phosphatidylcholin (19,4 %) und ein 3:1 Capronsäure-Buttersäure-Gemisch (gesamt 3,9 %).
Beispiel 9 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Leuprolidacetat umfasst
a) Herstellung der wässrigen Phase
60 mg Leuprolidacetat werden in 0,6 ml Wasser für Injektionen gelöst, das mit 8 mg Lysin angereichert ist.
b) Herstellung der öligen Phase
2,1 g Ethyloleat, 215 mg Polyoxyethylensorbitan-Monooleat und 1 g Sojalecithin werden in einem geeigneten Gefäß gemischt, das unter Rühren auf 50 °C erhitzt wird. Das erhaltene klare, homogene Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die wässrige Lösung wird langsam unter Rühren in Portionen zu dem öligen Gemisch zugegeben, um eine optisch klare Mikroemulsion zu erhalten, die 1,5 % an Leuprolidacetat umfasst.
Beispiel 10 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Leuprolidacetat umfasst
a) Herstellung der wässrigen Phase
60 mg Leuprolidacetat werden in 0,2 ml Wasser für Injektionen gelöst, das mit 4,1 mg Lysin angereichert ist.
b) Herstellung der öligen Phase
1,2 g Ethyloleat, 0,5 g Polyoxyethylensorbitan-Monooleat und 0,1 g Caprylsäure werden in einem geeigneten Gefäß gemischt, das unter Rühren auf 50 °C erhitzt wird. Das erhaltene klare, homogene Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die wässrige Lösung wird unter Rühren in Portionen langsam zu dem öligen Gemisch zugegeben, um eine optisch klare Mikroemulsion zu erhalten, die 3 mg/ml an Leuprolidacetat umfasst.
Beispiel 11 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Octreotidacetat umfasst
a) Herstellung der wässrigen Phase
20 mg Octreotidacetat werden in 0,2 ml Wasser für Injektionen, das 0,2 g Propylenglykol und 4 mg Lysin enthält, gelöst.
b) Herstellung der öligen Phase
0.98 g Ethyloleat, 0,5 g Sojalecithin und 0,1 g Caprylsäure werden in einem geeigneten Gefäß gemischt, das unter Rühren auf 50 °C erhitzt wird. Das erhaltene klare, homogene Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die wässrige Lösung wird unter Rühren in Portionen langsam zu dem öligen Gemisch zugegeben. Die erhaltene optisch klare Mikroemulsion umfasst 10 mg/ml Octreotidacetat. Beispiel 12 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Octreotidacetat umfasst
a) Herstellung der wässrigen Phase
10 mg Octreotidacetat werden in 0,1 ml Wasser für Injektionen gelöst, das mit 2 mg Lysin angereichert ist.
b) Herstellung der öligen Phase
0.59 g Ethyloleat, 0,25 g Sojalecithin und 0,05 g Caprylsäure werden in einem geeigneten Gefäß gemischt, das unter Rühren auf 50 °C erhitzt wird. Das erhaltene klare, homogene Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die wässrige Lösung wird unter Rühren in Portionen langsam zu dem öligen Gemisch zugegeben. Die erhaltene optisch klare Mikroemulsion umfasst 1 % Octreotidacetat.
Beispiel 13 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Octreotidacetat umfasst
0.59 g Ethyloleat, 0,25 g Sojalecithin und 0,05 g Caprylsäure werden in einem geeigneten Gefäß gemischt, das unter Rühren auf 50 °C erhitzt wird. Das erhaltene klare, homogene Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt. Es werden 0,1 g Wasser für Injektionen, das 2 mg Lysin enthält, schrittweise unter Rühren zu der öligen Lösung zugegeben. Zu der erhaltenen optisch klaren Mikroemulsion wird unter Rühren 10 mg Octreotidacetat zugegeben. Der aktive Bestandteil wird in der Mikroemulsion innerhalb weniger Sekunden eingeschlossen. Die Mikroemulsion wird durch einen 0,22 mcm Polysulfon-Filter filtriert. Die erhaltene optisch klare Mikroemulsion, die mittels HPLC analysiert wurde, zeigt einen Gehalt an Octreotidacetat von 6,35 mg/ml.
Beispiel 14 – Herstellung einer w/o-Mikroemulsion, die Myoglobin umfasst
a) Herstellung der wässrigen Phase
5,5 mg Myoglobin werden in 1,5 ml Wasser für Injektionen gelöst, das mit 10 mg Lysin angereichert ist.
b) Herstellung der öligen Phase
2 g Ethyloleat, 1,2 g Sojalecithin und 0,25 g Caprylsäure werden in einem geeigneten Gefäß gemischt, das auf 50 °C erhitzt wird. Das erhaltene klare, homogene Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die wässrige Lösung wird unter Rühren in Portionen langsam zu dem öligen Gemisch zugegeben. Die erhaltene optisch klare Mikroemulsion umfasst 1,3 mg/ml Myoglobin.
Beispiel 15 – In vivo Beurteilung der Wirksamkeit der Leuprolidacetat umfassenden Mikroemulsion, die wie in Beispielen 1 und 2 beschrieben, hergestellt ist.
Drei Gruppen von männlichen Sprague Dawley Ratten (10 pro Gruppe) wurden vor der Behandlung für 5 Tage mit Wasser und Nahrung nach Belieben, beherbergt.
Zwei Mikroemulsions-Formulierungen, die wie in Beispielen 1 und 2 beschrieben, hergestellt sind, mit verschiedenen Konzentrationen an Leuprolidacetat, nämlich 3 mg/ml (Beispiel 1) und 6 mg/ml (Beispiel 2) wurden in einer einmaligen Dosis, jeweils in einer Gruppe von Ratten, verabreicht, wobei die Dosis des Aktiven 0,750 mg/kg entspricht.
Kontrolltiere (3 pro Gruppe) erhielten eine Salzlösung.
Nach der Entnahme der Blutproben wurden die Testosteronspiegel im Plasma an den Tagen 1, 2, 3, 4, 7, 14, 21, 28, 42 und 56 bestimmt. Die Blutproben wurden zentrifugiert und das Testosteron im Serum wurde durch einen EIA-Kit erfasst.
Die Testosteronspiegel im Serum wurden bis 60 Tage nach Verabreichung bestimmt.
Die Ergebnisse sind in 1 beschrieben.
Die folgende Tabelle 1 fasst die Daten bezüglich der Organgewichte in den behandelten Tieren zusammen.
Die erfindungsgemäßen Formulierungen sind, unabhängig von der Konzentration des Aktiven in der Mikroemulsion, frei von wesentlichen systemischen oder lokalen Nebenwirkungen und stellen eine langsame Abgabe des aktiven Bestandteils über einen Zeitraum von mindestens 30 Tagen und eine therapeutische Wirksamkeit bereits 48 h nach der Injektion bereit.
Die Wirksamkeit ist zu der vergleichbar, die erhalten werden kann, wenn die handelsübliche Depot-Formulierung "Enatone", die auf bioerodierbaren Polymeren basiert, verwendet wird.
Beispiel 16 – Beurteilung der subkutanen Verträglichkeit der Mikroemulsionen
Der Test zur Beurteilung der subkutanen Verträglichkeit erfolgte durch Injektion von Gruppen aus mindestens 9 Ratten mit einer einmaligen Verabreichung der Mikroemulsionen, die in der folgenden Tabelle 2 dargestellt sind.
Klinische, Obduktions- und histologische Untersuchungen wurden 48 h, 7 Tage und 14 Tage nach der Verabreichung durchgeführt.
Tabelle 2

(1) Mikroemulsion hergestellt wie in Beispiel 1 beschrieben.
(2) Mikroemulsion hergestellt wie in Beispiel 8 beschrieben.
* Offenbarung der Auswertung: 1 leichte Wirkung; 2 mittelmäßig; 3 schwer.

Dieser Test betrachtet die Formulierungen als biologisch annehmbar, die keine persistente lokale Bildung von Geschwüren induzieren, wohingegen das Vorliegen einer Schwellung eine Funktion der Menge des injizierten Produkts und der Eliminierungsrate des Ethyloleat aus den subkutanen Geweben ist, wie bei Howard et al. in Int. J. Pharm. 16 (1983) 31–39 beschrieben.
Beispiel 17 – In vivo Beurteilung der Wirksamkeit der Mikroemulsion, die Octreotidacetat umfasst
Eine Dosis entsprechend 6 mg/Ratte einer Octreotid umfassenden Mikroemulsion, die wie in Beispiel 11 beschrieben hergestellt ist, wurde 6 männlichen Ratten, die ungefähr 175–200 g wogen, verabreicht. Plasmaproben wurden vor der Verabreichung der Verbindung und 0,5 Stunden, 24 Stunden, 4, 6 und 8 Tage nach der Behandlung genommen.
Octreotid wurde aus dem Plasma extrahiert und mittels einer LC-MS-MS-Vorrichtung gegen eine Eichkurve analysiert. Die Plasmaspiegel sind in der folgenden Tabelle 3 dargestellt: Tabelle 3
Signifikante Octreotidspiegel im Plasma wurden bis 8 Tage nach Behandlung gefunden.
Beispiel 18 – Beurteilung des Dosis/Wirksamkeit-Verhältnis der Leuprolidacetat umfassenden Mikroemulsion
Die Leuprolidacetat umfassende Formulierung, die wie in Beispiel 2 beschrieben hergestellt ist, wurde Ratten in einer einmaligen Dosis von 2,25 mg/kg (Beispiel) verabreicht. Kontrolltiere erhielten eine entsprechende Dosis einer Salzlösung (Kontrolle).
Die Testosteronspiegel im Plasma von Blutproben wurden an den Tagen 0, 1, 2, 3, 5, 7, 14, 21, 28, 42 und 56 bestimmt. Die Blutproben wurden zentrifugiert und das Testosteron im Serum wurde durch einen Elisa-Kit erfasst.
Die Ergebnisse sind in 2 dargestellt.
Die Daten bezüglich der Organgewichte in behandelten Tieren sind in der folgenden Tabelle 4 zusammengefasst.
Tabelle 4: Wirkung einer Leuprolidacetat-Mikroemulsion oder einer Salzlösung auf das Körpergewicht und das Gewicht der Reproduktionsorgane in Ratten (Beispiel und Kontrolle).
Eine Reduktion von sowohl der Testosteronspiegel im Plasma als auch des Gewichts der Reproduktionsorgane ist 56 Tage nach der Verabreichung der Mikroemulsion klar bewiesen.

Claims

Stabile, biologisch annehmbare, gut verträgliche Wasser/Öl-Mikroemulsion, welche für die parenterale Verabreichung biologisch aktiver, hydrophiler oder mittels geeigneter Derivatisierung hydrophil gemachter Verbindungen geeignet sind, welche die verlangsamte Abgabe der darin enthaltenen aktiven Verbindungen liefert, wobei die Mikroemulsion besteht aus: a) bis zu 20 % einer inneren hydrophilen, wässrigen Phase, die die therapeutisch aktive, hydrophile Verbindung enthält; b) 30 bis 98 % einer hydrophoben, äußeren Phase, ausgewählt unter Estern von gesättigten oder ungesättigten C₈-C₂₀-Fettsäuren mit einem C₂-C₈-Alkoholrest oder Mono-, Di- und Triglyceriden von C₈-C₂₀-Fettsäuren. c) bis zu 50 % eines oberflächenaktiven Mittels in Mischung mit einem Co-Tensid, wobei das oberflächenaktive Mittel ausgewählt ist unter natürlichen oder synthetischen Glycerophospholipiden mit Resten von gesättigten oder ungesättigten C₄-C₂₀-Carbonsäuren mit einem Cholin-, Ethanolamin-, Serin-, Glycerin-Rest als Phosphorestergruppe, und wobei das Co-Tensid ausgewählt ist unter C₈-C₂₀-Fettsäuren oder C₂-C₁₂-Alkoholen und worin das oberflächenaktive Mittel/Co-Tensid-Verhältnis ≥ 2 ist.
Mikroemulsion nach Anspruch 1, worin die hydrophilen, biologisch aktiven Verbindungen Peptide, Proteine, Oligo- oder Polysaccharide sind.
Mikroemulsion nach Anspruch 2, worin die biologisch aktive Verbindung ein Peptid ist.
Mikroemulsion nach Anspruch 3, worin die biologisch aktive Verbindung ein LHRH-Hormon-Peptidanalog ist.
Mikroemulsion nach Anspruch 4, worin die biologisch aktive Verbindung Leuprolidacetat, Goserelin, Triptorelin, Nafarelin, Histrelin, Cetrorelix oder die entsprechenden Acetate sind.
Mikroemulsion nach Anspruch 4, worin die biologisch aktive Verbindung Somatostatin, Oktreotid oder Lanreotid ist.
Mikroemulsion nach Anspruch 2, worin die biologisch aktive Verbindung ein Oligo- oder Polysaccharid ist.
Mikroemulsion nach Anspruch 7, worin die biologisch aktive Verbindung nicht-fraktioniertes Heparin oder Heparine mit niedrigem Molekurgewicht ist.
Mikroemulsion nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin die wässrige Phase mit der biologischen aktiven Verbindung einen pH-Wert zwischen 4,5 und 7,5 aufweist.
Mikroemulsion nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin die wässrige Phase mit der biologisch aktiven Verbindung einen pH-Wert zwischen 5 und 7 aufweist.
Mikroemulsion nach Anspruch 9 oder 10, worin der pH-Wert durch Zugabe von natürlichen Aminosäuren eingestellt wird.
Mikroemulsion nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin das oberflächenaktive Mittel/Co-Tensid-Verhältnis ≥ 3,5 ist.
Mikroemulsion nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin der Gehalt an oberflächenaktivem Mittel und Co-Tensid unter 35 % liegt.
Verwendung einer Mikroemulsion nach einem der vorstehenden Ansprüche, umfassend, Leuprolid, Goserelin, Triptorelin, Nafarelinacetat, Histrelin, Cetrorelix oder die entsprechenden Acetate oder andere LHRH-Analoge zu Herstellung eines Medikaments zur Unterdrückung der Testosteron-Produktion nach einer einzigen Verabreichung für mindestens 30 Tage, wobei der Testosteron-Spiegel bereits 48 Stunden nach der Verabreichung abnimmt.
Verwendung einer Mikroemulsion nach einem der vorstehenden Ansprüche, umfassend, Octreotid oder dessen Analoge zur Herstellung eines Medikaments zur Unterdrückung der Wachstumshormon-Produktion für mindestens 8 Tage.
Verwendung einer Mikroemulsion nach einem der vorstehenden Ansprüche, enthaltend, nicht-fraktioniertes Heparin oder Heparine mit niedrigem Molekulargewicht zur Herstellung von Medikamenten mit langsamer Abgabe nach einer einzigen Verabreichung.