RU2754188C2 - Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства - Google Patents
Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства Download PDFInfo
- Publication number
- RU2754188C2 RU2754188C2 RU2018123712A RU2018123712A RU2754188C2 RU 2754188 C2 RU2754188 C2 RU 2754188C2 RU 2018123712 A RU2018123712 A RU 2018123712A RU 2018123712 A RU2018123712 A RU 2018123712A RU 2754188 C2 RU2754188 C2 RU 2754188C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- subject
- hemophilia
- sense strand
- double
- nucleotides
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 171
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 23
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 claims abstract description 528
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims abstract description 367
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 claims abstract description 359
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims abstract description 132
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims abstract description 120
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims abstract description 84
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims abstract description 71
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims abstract description 70
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 claims abstract description 67
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims abstract description 67
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 claims abstract description 65
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 claims abstract description 63
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 claims abstract description 62
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 claims abstract description 52
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 claims abstract description 52
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 claims abstract description 52
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 51
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims abstract description 40
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 547
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 200
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 75
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 61
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 61
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 52
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims description 40
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 36
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 36
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical group P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 34
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 34
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 22
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 21
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 21
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 20
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 20
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 20
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 17
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 17
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 claims description 17
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 14
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 102100022977 Antithrombin-III Human genes 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 3
- 101000757319 Homo sapiens Antithrombin-III Proteins 0.000 claims description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 claims 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 151
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 144
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 38
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 26
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract description 15
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 abstract description 7
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 abstract 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 846
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 720
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 169
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 169
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 113
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 75
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 66
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 64
- 101150026876 SERPINC1 gene Proteins 0.000 description 55
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 51
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 50
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 50
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 50
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 48
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 47
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 42
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 40
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 39
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 39
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 39
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 37
- 208000011664 congenital factor XI deficiency Diseases 0.000 description 33
- 201000007219 factor XI deficiency Diseases 0.000 description 33
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 33
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 28
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 27
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 25
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 19
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 19
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 18
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 16
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 16
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 15
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- -1 siloxane backbones Chemical group 0.000 description 15
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 13
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 13
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 12
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 12
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 11
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 11
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 11
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 10
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 10
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 10
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 9
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 9
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 8
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 8
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 8
- 230000000021 endosomolytic effect Effects 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 150000002780 morpholines Chemical class 0.000 description 8
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 8
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 7
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 7
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 7
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 7
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 6
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 6
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 6
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 6
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 6
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 5
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 5
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 5
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 5
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 5
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KBDWGFZSICOZSJ-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2,3-dihydro-1H-pyrimidin-4-one Chemical compound N1CNC=C(C1=O)C KBDWGFZSICOZSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 4
- 102100037293 Atrial natriuretic peptide-converting enzyme Human genes 0.000 description 4
- 101000952934 Homo sapiens Atrial natriuretic peptide-converting enzyme Proteins 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 4
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 4
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 4
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- 108010013773 recombinant FVIIa Proteins 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 3
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 3
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 3
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 3
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 3
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 2-amino-7-methyl-1,7-dihydro-6H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC(O)=C2N(C)C=NC2=N1 FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 4-sulfanylidene-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound SC=1C=CNC(=O)N=1 OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 5-(hydroxymethyl)cytosine Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1CO RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCGHYQLFMPXSDU-UHFFFAOYSA-N 7-methyladenine Chemical compound C1=NC(N)=C2N(C)C=NC2=N1 HCGHYQLFMPXSDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N Butadiene Chemical group C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 102100030563 Coagulation factor XI Human genes 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 108010000437 Deamino Arginine Vasopressin Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010056495 Haemophilia B without inhibitors Diseases 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- WSDRAZIPGVLSNP-UHFFFAOYSA-N O.P(=O)(O)(O)O.O.O.P(=O)(O)(O)O Chemical group O.P(=O)(O)(O)O.O.O.P(=O)(O)(O)O WSDRAZIPGVLSNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N Phalloidin Chemical compound N1C(=O)[C@@H]([C@@H](O)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C[C@@](C)(O)CO)NC(=O)[C@H](C2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](O)CN3C(=O)[C@@H]1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 2
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 2
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 2
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 2
- 102000008847 Serpin Human genes 0.000 description 2
- 108050000761 Serpin Proteins 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000001567 anti-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- MMXKVMNBHPAILY-UHFFFAOYSA-N ethyl laurate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCC MMXKVMNBHPAILY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000004023 fresh frozen plasma Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 2
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- QTNLALDFXILRQO-UHFFFAOYSA-N nonadecane-1,2,3-triol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)CO QTNLALDFXILRQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002811 oleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 2
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 1
- DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N (+)-borneol Chemical compound C1C[C@@]2(C)[C@@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- REPVLJRCJUVQFA-UHFFFAOYSA-N (-)-isopinocampheol Natural products C1C(O)C(C)C2C(C)(C)C1C2 REPVLJRCJUVQFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- PUDXUJRJLRLJIU-QYVSTXNMSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-3-ol Chemical compound COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 PUDXUJRJLRLJIU-QYVSTXNMSA-N 0.000 description 1
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 1
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- FYADHXFMURLYQI-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-triazine Chemical class C1=CN=NC=N1 FYADHXFMURLYQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIZMDHZLHJBNSQ-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydrophenazine Chemical compound C1=CC=C2N=C(C=CCC3)C3=NC2=C1 ZIZMDHZLHJBNSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEVQCHBUJFYGQO-DNRKLUKYSA-N 1-[(2r,3r,4r,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 NEVQCHBUJFYGQO-DNRKLUKYSA-N 0.000 description 1
- KIGHLLZHFAOEHO-PKPIPKONSA-N 1-[(2s)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)N1CC(O)C[C@H]1CO KIGHLLZHFAOEHO-PKPIPKONSA-N 0.000 description 1
- MZMNEDXVUJLQAF-UHFFFAOYSA-N 1-o-tert-butyl 2-o-methyl 4-hydroxypyrrolidine-1,2-dicarboxylate Chemical compound COC(=O)C1CC(O)CN1C(=O)OC(C)(C)C MZMNEDXVUJLQAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNXSUXRNBHUCSF-HSYVXBRLSA-N 107658-43-5 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)OC(=O)CC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)OC(=O)[C@H](CCC(=O)OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)N)C1C=NC=N1 PNXSUXRNBHUCSF-HSYVXBRLSA-N 0.000 description 1
- TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 10H-phenoxazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3OC2=C1 TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- UHUHBFMZVCOEOV-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazo[4,5-c]pyridin-4-amine Chemical compound NC1=NC=CC2=C1N=CN2 UHUHBFMZVCOEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 2,3-dihydroxybutanedioic acid (2S,3S)-3,4-dimethyl-2-phenylmorpholine Chemical compound OC(C(O)C(O)=O)C(O)=O.C[C@H]1[C@@H](OCCN1C)c1ccccc1 VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 0.000 description 1
- AZUHIVLOSAPWDM-UHFFFAOYSA-N 2-(1h-imidazol-2-yl)-1h-imidazole Chemical compound C1=CNC(C=2NC=CN=2)=N1 AZUHIVLOSAPWDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSHACTSJHMKXTE-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminopropyl)-7h-purin-6-amine Chemical compound CC(N)CC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 QSHACTSJHMKXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 2-(2-azaniumylethylamino)acetate Chemical group NCCNCC(O)=O PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 2-aminopropane-1,3-diol Chemical group OCC(N)CO KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROUWQQRXUBECT-UHFFFAOYSA-N 2-ethylacrylic acid Chemical compound CCC(=C)C(O)=O WROUWQQRXUBECT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004200 2-methoxyethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- FIEYHAAMDAPVCH-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1h-quinazolin-4-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C)=NC(=O)C2=C1 FIEYHAAMDAPVCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FTBBGQKRYUTLMP-UHFFFAOYSA-N 2-nitro-1h-pyrrole Chemical class [O-][N+](=O)C1=CC=CN1 FTBBGQKRYUTLMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYSRRFNXTXNWCD-UHFFFAOYSA-N 3-(2-phenylethenyl)furan-2,5-dione Chemical compound O=C1OC(=O)C(C=CC=2C=CC=CC=2)=C1 PYSRRFNXTXNWCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUEIFVRYWPOXHJ-DNRKLUKYSA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4r,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidin-2-one Chemical compound COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C(C)=C1 GUEIFVRYWPOXHJ-DNRKLUKYSA-N 0.000 description 1
- ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CC1=CNC(=S)NC1=O ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091027075 5S-rRNA precursor Proteins 0.000 description 1
- KXBCLNRMQPRVTP-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1,5-dihydroimidazo[4,5-c]pyridin-4-one Chemical compound O=C1NC(N)=CC2=C1N=CN2 KXBCLNRMQPRVTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPIAFVALSSSQJN-RGURZIINSA-N 6-amino-1-[(2s)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]hexan-1-one Chemical compound NCCCCCC(=O)N1CC(O)C[C@H]1CO VPIAFVALSSSQJN-RGURZIINSA-N 0.000 description 1
- DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1h-pyrimidine-2-thione Chemical compound NC1=CC=NC(S)=N1 DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)N=C1N QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 7-deazaguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1CC=N2 LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRYKDUPGBWLLHO-UHFFFAOYSA-N 8-azaadenine Chemical compound NC1=NC=NC2=NNN=C12 HRYKDUPGBWLLHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062307 AAVALLPAVLLALLAP Proteins 0.000 description 1
- 206010059193 Acute hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000006374 C2-C10 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- KERQKKXVHHBJKM-RGURZIINSA-N CCCCCC(=O)N1CC(O)C[C@H]1CO Chemical compound CCCCCC(=O)N1CC(O)C[C@H]1CO KERQKKXVHHBJKM-RGURZIINSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029767 Congenital, Hereditary, and Neonatal Diseases and Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- LAJXCUNOQSHRJO-ZYGJITOWSA-N Cytochalasin E Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2[C@@H]([C@]3(O[C@H]3[C@@H]3/C=C/C[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)/C=C/OC(=O)O[C@@]23C(=O)N1)C)C)C1=CC=CC=C1 LAJXCUNOQSHRJO-ZYGJITOWSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 108700006830 Drosophila Antp Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054265 Factor VIIa Proteins 0.000 description 1
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087294 GALA peptide Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000780643 Homo sapiens Protein argonaute-2 Proteins 0.000 description 1
- 101100216157 Homo sapiens SERPINC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010070875 Human Immunodeficiency Virus tat Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010007013 Melanocyte-Stimulating Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N N-acetylcarnosine Chemical compound CC(=O)NCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 108010009711 Phalloidine Proteins 0.000 description 1
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010069381 Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100034207 Protein argonaute-2 Human genes 0.000 description 1
- 101000781681 Protobothrops flavoviridis Disintegrin triflavin Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 102000007615 Pulmonary Surfactant-Associated Protein A Human genes 0.000 description 1
- 108010007100 Pulmonary Surfactant-Associated Protein A Proteins 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 208000007400 Relapsing-Remitting Multiple Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000147 Styrene maleic anhydride Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 201000000839 Vitamin K Deficiency Bleeding Diseases 0.000 description 1
- 206010047634 Vitamin K deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037919 acquired disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 231100000354 acute hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000037628 acute hepatitis B virus infection Diseases 0.000 description 1
- JIMXXGFJRDUSRO-UHFFFAOYSA-N adamantane-1-carboxylic acid Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(=O)O)C3 JIMXXGFJRDUSRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical group OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005083 alkoxyalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005600 alkyl phosphonate group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 102000018568 alpha-Defensin Human genes 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-NEEWWZBLSA-N alpha-L-ribose Chemical compound OC[C@@H]1O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-NEEWWZBLSA-N 0.000 description 1
- 108050007802 alpha-defensin Proteins 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001409 amidines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005122 aminoalkylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000603 anti-haemophilic effect Effects 0.000 description 1
- 108010018823 anti-inhibitor coagulant complex Proteins 0.000 description 1
- 239000000504 antifibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 229940082620 antifibrinolytics Drugs 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-TXICZTDVSA-N beta-D-ribose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-TXICZTDVSA-N 0.000 description 1
- 102000012265 beta-defensin Human genes 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116229 borneol Drugs 0.000 description 1
- CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N borneol Natural products C1CC2(C)C(C)CC1C2(C)C CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002680 canonical nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- BHONFOAYRQZPKZ-LCLOTLQISA-N chembl269478 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BHONFOAYRQZPKZ-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 1
- 229940105774 coagulation factor ix Drugs 0.000 description 1
- 229940105778 coagulation factor viii Drugs 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004281 desmopressin Drugs 0.000 description 1
- NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N desmopressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSCCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(N)=O)=O)CCC(=O)N)C1=CC=CC=C1 NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N 0.000 description 1
- 229960002845 desmopressin acetate Drugs 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N desoxyinosine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical group OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 1
- DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N dl-isoborneol Natural products C1CC2(C)C(O)CC1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 208000002296 eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- CHNUOJQWGUIOLD-NFZZJPOKSA-N epalrestat Chemical compound C=1C=CC=CC=1\C=C(/C)\C=C1/SC(=S)N(CC(O)=O)C1=O CHNUOJQWGUIOLD-NFZZJPOKSA-N 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 229940105776 factor viii inhibitor bypassing activity Drugs 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 125000003843 furanosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000370 gamma-poly(glutamate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000052834 human SERPINC1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 125000002632 imidazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002636 imidazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 210000003963 intermediate filament Anatomy 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003965 isoxazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- DDVBPZROPPMBLW-ZJBINBEQSA-N latrunculin a Chemical compound C([C@H]1[C@@]2(O)C[C@H]3C[C@H](O2)CC[C@@H](/C=C\C=C/CC\C(C)=C/C(=O)O3)C)SC(=O)N1 DDVBPZROPPMBLW-ZJBINBEQSA-N 0.000 description 1
- DDVBPZROPPMBLW-UHFFFAOYSA-N latrunculin-A Natural products O1C(=O)C=C(C)CCC=CC=CC(C)CCC(O2)CC1CC2(O)C1CSC(=O)N1 DDVBPZROPPMBLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L magnesium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Mg+2] VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000347 magnesium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001862 magnesium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 125000002960 margaryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 1
- WDWDWGRYHDPSDS-UHFFFAOYSA-N methanimine Chemical compound N=C WDWDWGRYHDPSDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDBOAVAEGRJRIZ-UHFFFAOYSA-N methylidenehydrazine Chemical group NN=C IDBOAVAEGRJRIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- 125000002757 morpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZSVEZZAQGRTBE-PXYINDEMSA-N n-[6-[(2s)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-6-oxohexyl]acetamide Chemical compound CC(=O)NCCCCCC(=O)N1CC(O)C[C@H]1CO OZSVEZZAQGRTBE-PXYINDEMSA-N 0.000 description 1
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000031990 negative regulation of inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229910052758 niobium Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 125000000160 oxazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical group 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024335 physical disease Diseases 0.000 description 1
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 125000005575 polycyclic aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229920005996 polystyrene-poly(ethylene-butylene)-polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 230000032361 posttranscriptional gene silencing Effects 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 229940024790 prothrombin complex concentrate Drugs 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003072 pyrazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002755 pyrazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940068953 recombinant fviia Drugs 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 102220107749 rs5877 Human genes 0.000 description 1
- 102220107748 rs5878 Human genes 0.000 description 1
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003354 serine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 108091069025 single-strand RNA Proteins 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-N sulfamic acid Chemical group NS(O)(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical group 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical group 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 1
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 125000001984 thiazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013169 thromboelastometry Methods 0.000 description 1
- 229960000874 thyrotropin Drugs 0.000 description 1
- 230000001748 thyrotropin Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N tranexamic acid Chemical compound NC[C@H]1CC[C@H](C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N 0.000 description 1
- 229960000401 tranexamic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 208000016794 vitamin K deficiency hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical compound [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- SFVVQRJOGUKCEG-OPQSFPLASA-N β-MSH Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H]2C(COC(=O)[C@@](O)([C@@H](C)O)C(C)C)=CCN21 SFVVQRJOGUKCEG-OPQSFPLASA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/335—Modified T or U
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
- C12N2310/3521—Methyl
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
- C12N2310/3533—Halogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/35—Special therapeutic applications based on a specific dosage / administration regimen
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области медицины, а именно к гематологии и наследственным заболеваниям, и предназначена для лечения субъектов, имеющих заболевания, ассоциированные с Serpinc1. Для предотвращения по меньшей мере одного симптома гемофилии у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B, подкожно вводят субъекту, нуждающемуся в этом, дозу от 50 мг до 90 мг молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) один раз в месяц. Молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь, где смысловая цепь содержит последовательность 5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь. Также представлены способ лечения субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B; способ уменьшения частоты эпизодов кровотечений у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B; способ снижения частоты кровотечений в год (ABR) у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B; и способ снижения ежегодной частоты спонтанных кровотечений (AsBR) у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия В. В других воплощениях обеспечиваются альтернативные варианты выполнения указанных способов и набор для осуществления указанных способов. Использование группы изобретений позволяет повысить эффективность лечения субъектов, имеющих ассоциированные с Serpinc1 заболевания, за счет исключительно эффективного подавления экспрессии Serpinc1 и исключительной продолжительности подавления экспрессии Serpinc1. 16 н. и 24 з.п. ф-лы, 20 ил., 3 табл., 3 пр.
Description
Родственные заявки
Данная заявка испрашивает преимущество приоритета предварительной патентной заявки США №: 62/264013, поданной 7 декабря 2015 года, предварительной патентной заявки США №: 62/315228, поданной 30 марта 2016 года, предварительной патентной заявки США №: 62/366304, поданной 25 июля 2016 года и предварительной патентной заявки США №: 62/429241, поданной 2 декабря 2016 года. Полное содержание каждой из вышеприведенных патентных заявок включено в данный документ посредством ссылки.
Данная заявка связана с предварительной патентной заявкой США №: 61/992057, поданной 12 мая 2014 года, предварительной патентной заявкой США №: 62/089018, поданной 8 декабря 2014 года, предварительной патентной заявкой США №: 62/102281, поданной 12 января 2015 года, и PCT Патентной заявкой PCT/US2015/030337, поданной 12 мая 2015 года. Полное содержание каждой из вышеприведенных патентных заявок включено в данный документ посредством ссылки.
Кроме того, данная заявка связана с предварительной патентной заявкой США №: 61/638952, поданной 26 апреля 2012 года, предварительной патентной заявкой США №: 61/669249, поданной 9 июля 2012 года, предварительной патентной заявкой США №: 61/734573, поданной 7 декабря 2012 года, патентной заявкой США №: 13/837129, поданной 15 марта 2013 года, теперь патентом США №: 9127274, патентной заявкой США №: 14/806084, поданной 22 июля 2015 года, теперь патентом США №: 9376680, патентной заявкой США №: 15/070358, поданной 15 марта 2016 года, и PCT патентной заявкой № PCT/US2013/038218, поданной 25 апреля 2013 года. Данная заявка также связана с PCT патентной заявкой № PCT/US2012/065601, поданной 16 ноября 2012 года. Полное содержание каждой из вышеприведенных патентных заявок включено в данный документ посредством ссылки.
Список последовательностей
Настоящая заявка содержит список последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Указанная копия ASCII, созданная 6 декабря 2016 года, называется 121301-05220_SL.TXT и имеет размер 21140 байт.
Уровень техники настоящего изобретения
Serpinc1 является членом суперсемейства ингибиторов сериновых протеиназ (серпинов). Serpinc1 является ингибитором плазменных протеаз, который ингибирует тромбин, а также другие активированные сериновые протеазы свертывающей системы, такие как факторы X, IX, XI, XII и VII и, таким образом, регулирует каскад свертывания крови. Противосвертывающая активность Serpinc1 усиливается в присутствии гепарина и других родственных гликозаминогликанов, которые катализируют образование комплексов тромбин:антитромбин (ТАТ).
Расстройства, сопровождающиеся кровоточивостью, как наследственные, так и приобретенные, являются условиями, при которых происходит неадекватное свертывание крови. Например, гемофилия представляет собой группу наследственных генетических нарушений, сопровождающихся кровоточивостью, которые нарушают способность организма контролировать образование кровяного сгустка или свертываемость. Гемофилия А является рецессивным X-сцепленным генетическим расстройством, связанным с отсутствием функционального фактора свертывания VIII и составляет 80% случаев гемофилии. Гемофилия B является рецессивным X-сцепленным генетическим расстройством, связанным с отсутствием функционального фактора свертывания IX. Она включает приблизительно 20% случаев гемофилии. Гемофилия C является аутосомным генетическим расстройством, связанным с отсутствием функционального фактора свертывания XI. Гемофилия C не является полностью рецессивной, так как гетерозиготные особи также демонстрируют повышенную кровоточивость.
Хотя в настоящее время нет лечения для гемофилии, ее можно контролировать с помощью регулярных инфузий дефицитного фактора свертывания крови, например, фактора VIII при гемофилии А. Однако у некоторых больных гемофилией вырабатываются антитела (ингибиторы) против вводимых им заместительных факторов и, таким образом, становятся невосприимчивыми к заместительным факторам свертывания. Соответственно, кровотечения у таких субъектов невозможно надлежащим образом контролировать.
Развитие высоких титров ингибиторов, например, к фактору VIII и другим факторам свертывания является наиболее серьезным осложнением терапии гемофилии и делает лечение кровотечений весьма сложным. В настоящее время единственными стратегиями прекращения кровотечений у таких субъектов являются использование «средств обходного действия», таких как функция обхода ингибиторов к фактору VIII (FEIBA) и рекомбинантный активированный фактор VII (rFVIIa), плазмаферез, непрерывное замещение фактора и терапия иммунной толерантности, ни один из которых не является полностью эффективным. Соответственно, в данной области существует потребность в альтернативных методах лечения субъектов, страдающих расстройством, сопровождающимся кровоточивостью, таким как гемофилия.
Сущность изобретения
В настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь ингибирование или уменьшение экспрессии гена Serpinc1, например, расстройства, сопровождающегося кровоточивостью, такого как гемофилия, с использованием композиций иРНК, которые воздействуют на опосредованное индуцируемым РНК комплексом сайленсинга (RISC) расщепление транскриптов РНК гена Serpinc1 для подавления экспрессии гена Serpinc1.
Настоящее изобретение по меньшей мере частично основано на неожиданном открытии, что очень низкие дозы (например, дозы, по меньшей мере примерно в 30 раз ниже, чем дозы, практикуемые в данной области) связанного с GalNAc средства двухцепочечной RNAi, включая конкретные химические модификации, показывают исключительную эффективность для подавления экспрессии Serpinc1, а также исключительную продолжительность подавления экспрессии Serpinc1. Конкретно, низкие дозы средств RNAi, содержащих лиганд GalNAc и смысловую нить и антисмысловую нить, в которых по существу все нуклеотиды являются модифицированными, такие как средства RNAi, содержащие один или более мотивов трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, включая один такой мотив на участке расщепления средств или около него, шесть тиофосфатных связей, и лиганд GalNAc, показаны в данном изобретении исключительно эффективными и продолжительными по подавлении активности гена Serpinc1.
Соответственно, в одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства двухцепочечной RNAi, которая содержит смысловую нить и антисмысловую нить, образующие двухцепочечную область, при этом смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, а антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:5, при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, например, лиганд присоединен на 3'-конце смысловой нити.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства двухцепочечной RNAi, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, образующие двухцепочечную область, при этом смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, а антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:5, при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
В другом варианте осуществления смысловая нить и антисмысловая нить содержат область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от любой одной из последовательностей, перечисленных в любой одной из таблиц 2 и 3.
В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-O-метил модифицированного нуклеотида, 2'-фтор модифицированного нуклеотида, нуклеотида, содержащего 5'-тиофосфатную группу, и концевого нуклеотида, связанного с производным холестерила или бисдециламидной группы додекановой кислоты. В дополнительных вариантах осуществления модифицированный нуклеотид выбирают из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, неблокированного нуклеотида, конформационно ограниченного нуклеотида, ограниченного этилом нуклеотида, нуклеотида с удаленным азотистым основанием, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, 2'-O-аллил модифицированного нуклеотида, 2'-C-аллил модифицированного нуклеотида, 2'-гидроксил модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего искусственное основание.
В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi, по меньшей мере одна нить содержит 3' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна нить содержит 3' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна нить средства RNAi содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна нить содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления и 3'-, и 5'-конец одной нити средства RNAi содержит «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления лигандом является N-ацетилгалактозамин (GalNAc). Лиганд может представлять собой один или более GalNAc, прикрепленный к средству RNAi через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер. Лиганд можно конъюгировать с 3'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 5'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 3'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi или 5'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi.
В некоторых вариантах осуществления средства двухцепочечной RNAi изобретения содержат множество, например, 2, 3, 4, 5 или 6, GalNAc, каждый из которых независимо прикреплен к множеству нуклеотидов средства двухцепочечной RNAi через множество моновалентных линкеров.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства двухцепочечной RNAi, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, комплементарную антисмысловой нити, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности части мРНК, кодирующей Serpinc1, при этом каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, при этом средство двухцепочечной RNAi представлено формулой (IIIe):
смысловая: 5' -Na -Y Y Y-Na-3'
антисмысловая: 3' np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'-5' (IIIe)
при этом:
np' представляет собой «липкий» конец из 2 нуклеотидов, а каждый нуклеотид внутри np' связан с соседним нуклеотидом посредством тиофосфатной связи;
каждый Na и Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, или их комбинациями, причем каждая последовательность содержит по меньшей мере два разных модифицированных нуклеотида;
YYY и Y'Y'Y' каждый независимо представляют один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и при этом модификации представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации;
при этом смысловая нить и антисмысловая нить каждая независимо содержат две тиофосфатные связи на 5'-конце; и
при этом смысловую нить конъюгируют по меньшей мере с одним лигандом, при этом лиганд представляет собой одно или более производное GalNAc, присоединенное через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер,
тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства двухцепочечной RNAi, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, комплементарную антисмысловой нити, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности части мРНК, кодирующей Serpinc1, при этом каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, при этом средство двухцепочечной RNAi представлено формулой (IIIe):
смысловая: 5' -Na -Y Y Y-Na-3'
антисмысловая: 3' np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'-5' (IIIe)
при этом:
np' представляет собой «липкий» конец из 2 нуклеотидов, а каждый нуклеотид внутри np' связан с соседним нуклеотидом посредством тиофосфатной связи;
каждый Na и Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, или их комбинациями, причем каждая последовательность содержит по меньшей мере два разных модифицированных нуклеотида;
YYY и Y'Y'Y' каждый независимо представляют один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и при этом модификации представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации;
при этом смысловая нить и антисмысловая нить каждая независимо содержат две тиофосфатные связи на 5'-конце; и
при этом смысловую нить конъюгируют по меньшей мере с одним лигандом, при этом лиганд представляет собой одно или более производное GalNAc, прикрепленное через моновалентный, бивалентный и трехвалентный разветвленный линкер,
тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в разовой дозе или в двух или более дозах, например, в 3, 4, 5 или 6 дозах.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц, каждые шесть недель, каждые 2 месяца, каждые три месяца или при необходимости.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в виде, например, месячной дозы от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,825 мг/кг, от 0,200 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,100 мг/кг, или приблизительно 0,925 до приблизительно 1,000 мг/кг, в виде, например, месячной дозы в течение одного, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми месяцев или более.
Субъектом может быть человек, такой как человек, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия, например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
В одном варианте осуществления субъект страдает гемофилией A и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления, субъект страдает гемофилией B и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией C и является субъектом с ингибиторами.
В одном варианте осуществления введение субъекту средства двухцепочечной RNAi вызывает увеличение свертываемости крови и/или снижение накопления белка Serpinc1.
В одном варианте осуществления способы дополнительно предусматривают измерение уровней тромбина у субъекта.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить подкожно или внутривенно.
В одном варианте осуществления по существу все нуклеотиды антисмысловой нити и по существу все нуклеотиды смысловой нити средства RNAi содержат модификацию, выбираемую из группы, состоящей из 2'-O-метил модификации и 2'-фтор модификации. В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой цепи средства RNAi являются модифицированными нуклеотидами.
В одном варианте осуществления мотив YYY возникает на участке расщепления смысловой нити или около него.
В одном варианте осуществления мотив Y'Y'Y' возникает в позициях 11, 12 и 13 антисмысловой нити от 5'-конца.
Двухцепочечная область может составлять 15-30 нуклеотидных пар в длину, 17-23 нуклеотидных пар в длину, 17-25 нуклеотидных пар в длину, 23-27 нуклеотидных пар в длину,19-21 нуклеотидных пар в длину или 21-23 нуклеотидных пар в длину.
Каждая нить может иметь 15-30 нуклеотидов или 19-30 нуклеотидов.
В одном варианте осуществления смысловая нить имеет всего 21 нуклеотида, а антисмысловая нить имеет всего 23 нуклеотида.
В одном варианте осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления лиганд прикреплен к 3-концу смысловой нити.
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
при этом X представляет собой O или S.
В одном варианте осуществления пара оснований в 1 позиции 5-конца антисмысловой нити дуплекса представляет собой пару оснований AU.
В одном варианте осуществления средство RNAi представляет собой AD-57213 ((Смысловой (от 5' к 3'): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf (SEQ ID NO:13); Антисмысловой (от 5' к 3'): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь)).
В одном варианте осуществления средство вводят в виде фармацевтической композиции. В одном варианте осуществления средство RNAi вводят в незабуференном растворе, таком как физиологический солевой раствор или вода.
В другом варианте осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в двух или более дозах.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц. В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые шесть недель. В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые 2 месяца. В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые три месяца.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в виде, например, месячной дозы от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,825 мг/кг, от 0,200 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,100 мг/кг или от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,000 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту в виде месячной дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 0,250 мг/кг; или в виде месячной дозы от приблизительно 0,425 мг/кг до приблизительно 0,475 мг/кг; или в виде месячной дозы от приблизительно 0,875 мг/кг до приблизительно 0.925 мг/кг; или в виде месячной дозы от приблизительно 1,775 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в виде месячной дозы, составляющей 0,225 мг/кг.
В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в виде месячной дозы, составляющей 0,450 мг/кг.
В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в виде месячной дозы, составляющей 0,900 мг/кг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в виде месячной дозы, составляющей 1,800 мг/кг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту снижает у субъекта активность Serpinc1 на от приблизительно 70% до приблизительно 95%.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту повышает пиковые уровни тромбина у субъекта до диапазона пиковых уровней тромбина у субъекта, у которого нет расстройства, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для доведения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта до приблизительно такого же уровня, который достигается посредством введения субъекту фактора VIII.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта выше, чем приблизительно 40%.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту уменьшает частоту кровотечений в год (ABR) у субъекта на от приблизительно 80 до приблизительно 95% по сравнению со средней анамнестической зарегистрированной ABR у субъектов, имеющих расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, которым не вводили средство двухцепочечной RNAi.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном варианте осуществления субъектом является человек.
Расстройство может представлять собой расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия, например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
В одном варианте осуществления субъект страдает гемофилией A и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией B и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией C и является субъектом с ингибиторами.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
В одном варианте осуществления модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, нуклеотида с удаленным азотистым основанием, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего искусственное основание.
Область комплементарности может составлять по меньшей мере 17 нуклеотидов в длину или 19 нуклеотидов в длину.
В одном варианте осуществления область комплементарности составляет между 19 и 21 нуклеотидом в длину. В другом варианте осуществления область комплементарности составляет между 21 и 23 нуклеотидами в длину.
В одном варианте осуществления каждая нить составляет не более чем 30 нуклеотидов в длину.
По меньшей мере одна нить средства двухцепочечной RNAi может содержать 3' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида или 3' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь средства RNAi содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления и 3'-, и 5'-конец одной нити средства RNAi содержат «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления лигандом является N-ацетилгалактозамин (GalNAc). Лиганд может представлять собой один или более GalNAc, прикрепленный к средству RNAi через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер. Лиганд можно конъюгировать с 3'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 5'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 3'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi или 5'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi.
В некоторых вариантах осуществления средства двухцепочечной RNAi изобретения содержат множество, например, 2, 3, 4, 5 или 6 GalNAc, каждый из которых независимо прикреплен к множеству нуклеотидов средства двухцепочечной RNAi через множество моновалентных линкеров.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления X представляет собой O.
В одном варианте осуществления область комплементарности состоит из нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3'(SEQ ID NO: 16), а антисмысловая нить содержит нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), а антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства двухцепочечной RNAi, которая содержит смысловую нить и антисмысловую нить, образующие двухцепочечную область, при этом смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, и антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:5, при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства двухцепочечной RNAi, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, образующие двухцепочечную область, при этом смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, и антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:5, при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
В другом варианте осуществления смысловая нить и антисмысловая нить содержат область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от любой одной из последовательностей, перечисленных в любой одной из таблиц 2 и 3.
В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-O-метил модифицированного нуклеотида, 2'-фтор модифицированного нуклеотида, нуклеотида, содержащего 5'-тиофосфатную группу, и концевого нуклеотида, связанного с производным холестерила или бисдециламидной группы додекановой кислоты. В дополнительных вариантах осуществления модифицированный нуклеотид выбирают из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотид, неблокированного нуклеотида, конформационно ограниченного нуклеотида, ограниченного этилом нуклеотида, нуклеотида с удаленным азотистым основанием, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, 2'-O-аллил модифицированного нуклеотида, 2'-C-аллил модифицированного нуклеотида, 2'-гидроксил модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего искусственное основание.
В другом варианте осуществления средства двухцепочечной RNAi, по меньшей мере одна цепь содержит 3' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 3' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь средства RNAi содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления и 3'-, и 5'-конец одной нити средства RNAi содержит «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства двухцепочечной RNAi, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, комплементарную антисмысловой нити, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности части мРНК, кодирующей Serpinc1, при этом каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, при этом средство двухцепочечной RNAi представлено формулой (IIIe):
смысловая: 5' -Na -Y Y Y-Na-3'
антисмысловая: 3' np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'-5' (IIIe)
при этом:
np' представляет собой «липкий» конец из 2 нуклеотидов, а каждый нуклеотид внутри np' связан с соседним нуклеотидом через тиофосфатную связь;
каждый Na и Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, или их комбинации, причем каждая последовательность содержит по меньшей мере два разных модифицированных нуклеотида;
YYY и Y'Y'Y' каждый независимо представляет один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и при этом модификации представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации;
при этом смысловая нить и антисмысловая нить каждая независимо содержат две тиофосфатные связи на 5'-конце; и
при этом смысловую нить конъюгируют по меньшей мере с одним лигандом, при этом лиганд представляет собой одно или более производное GalNAc, прикрепленное через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер,
тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства двухцепочечной RNAi, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, комплементарную антисмысловой нити, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности части мРНК, кодирующей Serpinc1, при этом каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, при этом средство двухцепочечной RNAi представлено формулой (IIIe):
смысловая: 5' -Na -Y Y Y-Na-3'
антисмысловая: 3' np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'-5' (IIIe)
при этом:
np' представляет собой «липкий» конец из 2 нуклеотидов, а каждый нуклеотид внутри np' связан с соседним нуклеотидом через тиофосфатную связь;
каждый Na и Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными или их комбинациями, причем каждая последовательность содержит по меньшей мере два разных модифицированных нуклеотида;
YYY и Y'Y'Y' каждый независимо представляют один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и при этом модификации представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации;
при этом смысловая нить и антисмысловая нить каждая независимо содержат две тиофосфатные связи на 5'-конце; и
при этом смысловую нить конъюгируют по меньшей мере с одним лигандом, при этом лиганд представляет собой одно или более производное GalNAc, прикрепленное через моновалентный, бивалентный и трехвалентный разветвленный линкер,
тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в разовой дозе или в двух или более дозах, например, в 3, 4, 5 или 6 дозах.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц, однократно каждые пять недель, каждые шесть недель, однократно каждые семь недель, каждые 2 месяца, каждые три месяца или при необходимости.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в виде, например, фиксированной дозы, составляющей между приблизительно 25 мг и приблизительно 100 мг, например, между приблизительно 25 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 70 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 60 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 50 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 55 мг, или между приблизительно 45 мг и приблизительно 95 мг as например, фиксированной дозы в течение одного, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми месяцев или более.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 25 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 65 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 85 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 95 мг или приблизительно 100 мг.
Субъектом может быть человек, такой как человек, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия, например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
В одном варианте осуществления субъект страдает гемофилией A и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией B и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией C и является субъектом с ингибиторами.
В одном варианте осуществления введение субъекту средства двухцепочечной RNAi вызывает увеличение свертываемости крови и/или уменьшает накопление белка Serpinc1.
В одном варианте осуществления способы дополнительно предусматривают измерение уровней тромбина у субъекта.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить подкожно или внутривенно.
В одном варианте осуществления по существу все нуклеотиды антисмысловой нити и по существу все нуклеотиды смысловой нити средства RNAi содержат модификацию, выбираемую из группы, состоящей из 2'-O-метил модификации и 2'-фтор модификации. В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой цепи средства RNAi являются модифицированными нуклеотидами.
В одном варианте осуществления мотив YYY возникает на участке расщепления смысловой нити или около него.
В одном варианте осуществления мотив Y'Y'Y' возникает в позициях 11, 12 и 13 антисмысловой нити от 5'-конца.
Двухцепочечная область может составлять 15-30 нуклеотидных пар в длину, 17-23 нуклеотидных пар в длину, 17-25 нуклеотидных пар в длину, 23-27 нуклеотидных пар в длину,19-21 нуклеотидных пар в длину или 21-23 нуклеотидных пар в длину.
Каждая нить может иметь 15-30 нуклеотидов или 19-30 нуклеотидов.
В одном варианте осуществления смысловая нить имеет всего 21 нуклеотид, и антисмысловая нить имеет всего 23 нуклеотида.
В одном варианте осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления лиганд прикреплен к 3'-концу смысловой нити.
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
при этом X представляет собой O или S.
В одном варианте осуществления пара оснований в 1 позиции 5'-конца антисмысловой нити дуплекса представляет собой пару оснований AU.
В одном варианте осуществления средство RNAi представляет собой AD-57213 ((Смысловой (от 5' к 3'): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf (SEQ ID NO:13); Антисмысловой (от 5' к 3'): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G или U; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь)).
В одном варианте осуществления средство вводят в виде фармацевтической композиции. В одном варианте осуществления средство RNAi вводят в незабуференном растворе, таком как солевой раствор или вода.
В другом варианте осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3'(SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3'(SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в двух или более дозах.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц, однократно каждые пять недель, каждые шесть недель, однократно каждые семь недель, каждые 2 месяца, каждые три месяца или при необходимости.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц. В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые шесть недель. В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые 2 месяца. В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые три месяца.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в виде, например, фиксированной дозы, составляющей между приблизительно 25 мг и приблизительно 100 мг, например, между приблизительно 25 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 70 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 60 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 50 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 55 мг, или между приблизительно 45 мг и приблизительно 95 мг.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi можно вводить в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 25 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 65 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 85 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 95 мг или приблизительно 100 мг.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 25 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 100 мг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту снижает у субъекта активность Serpinc1 на от приблизительно 70% до приблизительно 95%, от приблизительно 70% до приблизительно 80%, от приблизительно 80% до приблизительно 90%, от приблизительно 90% до приблизительно 95% или более чем на 95%.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту повышает пиковые уровни тромбина у субъекта до диапазона пиковых уровней тромбина у субъекта, у которого нет расстройства, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для доведения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта до приблизительно такого же уровня, который достигается посредством введения субъекту фактора VIII.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина выше, чем приблизительно 40%, 45%, 50%, 55%, или выше, чем приблизительно 60% у субъекта.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту уменьшает частоту кровотечений в год (ABR) у субъекта на от приблизительно 80% до приблизительно 95%, от приблизительно 80% до приблизительно 85%, от приблизительно 85% до приблизительно 90% или от приблизительно 90% до приблизительно 95% по сравнению со средней анамнестической зарегистрированной ABR у субъектов, имеющих расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, которым не вводили средство двухцепочечной RNAi.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном варианте осуществления субъектом является человек.
Расстройство может представлять собой расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия, например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
В одном варианте осуществления субъект страдает гемофилией A и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией B и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией C и является субъектом с ингибиторами.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
В одном варианте осуществления модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, нуклеотида с удаленным азотистым основанием, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего искусственное основание.
Область комплементарности может составлять по меньшей мере 17 нуклеотидов в длину или 19 нуклеотидов в длину.
В одном варианте осуществления область комплементарности составляет между 19 и 21 нуклеотидом в длину. В другом варианте осуществления область комплементарности составляет между 21 и 23 нуклеотидами в длину.
В одном варианте осуществления каждая нить составляет не более чем 30 нуклеотидов в длину.
По меньшей мере одна цепь средства двухцепочечной RNAi может содержать 3' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида, или 3' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь средства RNAi содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления и 3'-, и 5'-конец одной нити средства RNAi содержит «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления лигандом является N-ацетилгалактозамин (GalNAc). Лиганд может представлять собой один или более GalNAc, прикрепленный к средству RNAi через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер. Лиганд можно конъюгировать с 3'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 5'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 3'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi или 5'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi.
В некоторых вариантах осуществления средства двухцепочечной RNAi изобретения содержат множество, например, 2, 3, 4, 5 или 6, GalNAc, каждый из которых независимо прикреплен к множеству нуклеотидов средства двухцепочечной RNAi через множество моновалентных линкеров.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления X представляет собой O.
В одном варианте осуществления область комплементарности состоит из нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3'(SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3'(SEQ ID NO: 16), и антисмысловая нить содержит нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3'(SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь.
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь; и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления средство вводят в виде фармацевтической композиции. В одном варианте осуществления средство RNAi вводят в незабуференном растворе, таком как физиологический солевой раствор или вода.
В другом варианте осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены наборы для осуществления способов изобретения. Наборы могут содержать средство RNAi изобретения и инструкции по применению, и необязательно средство для введения средства RNAi субъекту.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту снижает у субъекта активность Serpinc1 на от приблизительно 70% до приблизительно 95%, от приблизительно 70% до приблизительно 80%, от приблизительно 80% до приблизительно 90%, от приблизительно 90% до приблизительно 95% или более чем на 95%.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту повышает пиковые уровни тромбина у субъекта до диапазона пиковых уровней тромбина у субъекта, у которого нет расстройства, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для доведения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта до приблизительно такого же уровня, который достигается посредством введения субъекту фактора VIII.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина выше, чем приблизительно 40%, 45%, 50%, 55%, или выше чем приблизительно 60% у субъекта.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту уменьшает частоту кровотечений в год (ABR) у субъекта на от приблизительно 80% до приблизительно 95%, от приблизительно 80% до приблизительно 85%, от приблизительно 85% до приблизительно 90% или от приблизительно 90% до приблизительно 95% по сравнению со средней анамнестической зарегистрированной ABR у субъектов, имеющих расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, которым не вводили средство двухцепочечной RNAi.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном варианте осуществления субъектом является человек.
Расстройство может представлять собой расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия, например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
В одном варианте осуществления субъект страдает гемофилией A и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией B и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией C и является субъектом с ингибиторами.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту длительно.
В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
В одном варианте осуществления модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, нуклеотида с удаленным азотистым основанием, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего искусственное основание.
Область комплементарности может составлять по меньшей мере 17 нуклеотидов в длину или 19 нуклеотидов в длину.
В одном варианте осуществления область комплементарности составляет между 19 и 21 нуклеотидом в длину. В другом варианте осуществления область комплементарности составляет между 21 и 23 нуклеотидами в длину.
В одном варианте осуществления каждая нить составляет не более чем 30 нуклеотидов в длину.
По меньшей мере одна цепь средства двухцепочечной RNAi может содержать 3' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида, или 3' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь средства RNAi содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления и 3'-, и 5'-конец одной нити средства RNAi содержит «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления лигандом является N-ацетилгалактозамин (GalNAc). Лиганд может представлять собой один или более GalNAc, прикрепленный к средству RNAi через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер. Лиганд можно конъюгировать с 3'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 5'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 3'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi или 5'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi.
В некоторых вариантах осуществления средства двухцепочечной RNAi изобретения содержат множество, например, 2, 3, 4, 5 или 6, GalNAc, каждый из которых независимо прикреплен к множеству нуклеотидов средства двухцепочечной RNAi через множество моновалентных линкеров.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления X представляет собой O.
В одном варианте осуществления область комплементарности состоит из нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3'(SEQ ID NO: 16), и антисмысловая нить содержит нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь.
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь; и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления средство вводят в виде фармацевтической композиции. В одном варианте осуществления средство RNAi вводят в незабуференном растворе, таком как физиологический солевой раствор или вода.
В другом варианте осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены наборы для осуществления способов изобретения. Наборы могут содержать средство RNAi изобретения и инструкции по применению, и необязательно средство для введения средства RNAi субъекту.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3'(SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту снижает у субъекта активность Serpinc1 на от приблизительно 70% до приблизительно 95%, от приблизительно 70% до приблизительно 80%, от приблизительно 80% до приблизительно 90%, от приблизительно 90% до приблизительно 95% или более чем на 95%.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту повышает пиковые уровни тромбина у субъекта до диапазона пиковых уровней тромбина у субъекта, у которого нет расстройства, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для доведения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта до приблизительно такого же уровня, который достигается посредством введения субъекту фактора VIII.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина выше, чем приблизительно 40%, 45%, 50%, 55%, или выше, чем приблизительно 60% у субъекта.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту уменьшает частоту кровотечений в год (ABR) у субъекта на от приблизительно 80% до приблизительно 95%, от приблизительно 80% до приблизительно 85%, от приблизительно 85% до приблизительно 90%, или от приблизительно 90% до приблизительно 95% по сравнению со средней анамнестической зарегистрированной ABR у субъектов, имеющих расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, которым не вводили средство двухцепочечной RNAi.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном варианте осуществления субъектом является человек.
Расстройство может представлять собой расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия, например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
В одном варианте осуществления субъект страдает гемофилией A и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией B и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией C и является субъектом с ингибиторами.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту длительно.
В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
В одном варианте осуществления модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, нуклеотида с удаленным азотистым основанием, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего искусственное основание.
В одном варианте осуществления каждая нить составляет не более чем 30 нуклеотидов в длину.
По меньшей мере одна цепь средства двухцепочечной RNAi может содержать 3' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида, или 3' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь средства RNAi содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления и 3'-, и 5'-конец одной нити средства RNAi содержит «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления лигандом является N-ацетилгалактозамин (GalNAc). Лиганд может представлять собой один или более GalNAc, прикрепленный к средству RNAi через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер. Лиганд можно конъюгировать с 3'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 5'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 3'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi или 5'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi.
В некоторых вариантах осуществления средства двухцепочечной RNAi изобретения содержат множество, например, 2, 3, 4, 5 или 6, GalNAc, каждый из которых независимо прикреплен к множеству нуклеотидов средства двухцепочечной RNAi через множество моновалентных линкеров.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления X представляет собой O.
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь.
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь; и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В другом варианте осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены наборы для осуществления способов изобретения. Наборы могут содержать средство RNAi изобретения и инструкции по применению, и необязательно средство для введения средства RNAi субъекту.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего гемофилию, например, гемофилию A (с ингибиторами или без ингибиторов), гемофилию B (с ингибиторами или без ингибиторов) или гемофилию C (с ингибиторами или без ингибиторов). Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего гемофилию, например, гемофилию A (с ингибиторами или без ингибиторов), гемофилию B (с ингибиторами или без ингибиторов) или гемофилию C (с ингибиторами или без ингибиторов). Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего гемофилию, например, гемофилию A (с ингибиторами или без ингибиторов), гемофилию B (с ингибиторами или без ингибиторов) или гемофилию C (с ингибиторами или без ингибиторов). Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего гемофилию, например, гемофилию A (с ингибиторами или без ингибиторов), гемофилию B (с ингибиторами или без ингибиторов) или гемофилию C (с ингибиторами или без ингибиторов). Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего гемофилию, например, гемофилию A (с ингибиторами или без ингибиторов), гемофилию B (с ингибиторами или без ингибиторов) или гемофилию C (с ингибиторами или без ингибиторов). Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит нуклеотидную последовательность 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего гемофилию, например, гемофилию A (с ингибиторами или без ингибиторов), гемофилию B (с ингибиторами или без ингибиторов) или гемофилию C (с ингибиторами или без ингибиторов). Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит нуклеотидную последовательность 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего гемофилию, например, гемофилию A (с ингибиторами или без ингибиторов), гемофилию B (с ингибиторами или без ингибиторов) или гемофилию C (с ингибиторами или без ингибиторов). Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит нуклеотидную последовательность 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего гемофилию, например, гемофилию A (с ингибиторами или без ингибиторов), гемофилию B (с ингибиторами или без ингибиторов) или гемофилию C (с ингибиторами или без ингибиторов). Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом фиксированную дозу средства двухцепочечной RNAi вводят субъекту приблизительно один раз в месяц, при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит нуклеотидную последовательность 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту снижает у субъекта активность Serpinc1 на от приблизительно 70% до приблизительно 95%, от приблизительно 70% до приблизительно 80%, от приблизительно 80% до приблизительно 90%, от приблизительно 90% до приблизительно 95% или более чем на 95%.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту повышает пиковые уровни тромбина у субъекта до диапазона пиковых уровней тромбина у субъекта, у которого нет расстройства, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для доведения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта до приблизительно такого же уровня, который достигается посредством введения субъекту фактора VIII.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина выше, чем приблизительно 40%, 45%, 50%, 55%, или выше, чем приблизительно 60% у субъекта.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту уменьшает частоту кровотечений в год (ABR) у субъекта на от приблизительно 80% до приблизительно 95%, от приблизительно 80% до приблизительно 85%, от приблизительно 85% до приблизительно 90% или от приблизительно 90% до приблизительно 95% по сравнению со средней анамнестической зарегистрированной ABR у субъектов, имеющих расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, которым не вводили средство двухцепочечной RNAi.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном варианте осуществления субъектом является человек.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту длительно.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления X представляет собой O.
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь; и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В другом варианте осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены наборы для осуществления способов изобретения. Наборы могут содержать средство RNAi изобретения и инструкции по применению, и необязательно средство для введения средства RNAi субъекту.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 40 мг до приблизительно 90 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 40 мг до приблизительно 90 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в двух или более дозах.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц, однократно каждые пять недель, каждые шесть недель, однократно каждые семь недель, каждые 2 месяца, каждые три месяца или при необходимости.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц. В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые шесть недель. В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые 2 месяца. В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые три месяца.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в виде, например, фиксированной дозы, составляющей между приблизительно 50 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 65 мг, или между приблизительно 40 мг и приблизительно 55 мг.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi можно вводить в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 40 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 65 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 85 мг или приблизительно 90 мг.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 40 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 90 мг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту снижает у субъекта активность Serpinc1 на от приблизительно 70% до приблизительно 95%.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту повышает пиковые уровни тромбина у субъекта до диапазона пиковых уровней тромбина у субъекта, у которого нет расстройства, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для доведения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта до приблизительно такого же уровня, который достигается посредством введения субъекту фактора VIII.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта выше, чем приблизительно 40%.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту уменьшает частоту кровотечений в год (ABR) у субъекта на от приблизительно 80 до приблизительно 95% по сравнению со средней анамнестической зарегистрированной ABR у субъектов, имеющих расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, которым не вводили средство двухцепочечной RNAi.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном варианте осуществления субъектом является человек.
Расстройство может представлять собой расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия, например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
В одном варианте осуществления субъект страдает гемофилией A и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией B и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией C и является субъектом с ингибиторами.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
В одном варианте осуществления модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, нуклеотида с удаленным азотистым основанием, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего искусственное основание.
Область комплементарности может составлять по меньшей мере 17 нуклеотидов в длину или 19 нуклеотидов в длину.
В одном варианте осуществления область комплементарности составляет между 19 и 21 нуклеотидом в длину. В другом варианте осуществления область комплементарности составляет между 21 и 23 нуклеотидами в длину.
В одном варианте осуществления каждая нить составляет не более чем 30 нуклеотидов в длину.
По меньшей мере одна цепь средства двухцепочечной RNAi может содержать 3' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида, или 3' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь средства RNAi содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления и 3'-, и 5'-конец одной нити средства RNAi содержит «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления лигандом является N-ацетилгалактозамин (GalNAc). Лиганд может представлять собой один или более GalNAc, прикрепленный к средству RNAi через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер. Лиганд можно конъюгировать с 3'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 5'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 3'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi, или 5'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi.
В некоторых вариантах осуществления средства двухцепочечной RNAi изобретения содержат множество, например, 2, 3, 4, 5 или 6, GalNAc, каждый из которых независимо прикреплен к множеству нуклеотидов средства двухцепочечной RNAi через множество моновалентных линкеров.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления X представляет собой O.
В одном варианте осуществления область комплементарности состоит из нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь.
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь; и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления средство вводят в виде фармацевтической композиции. В одном варианте осуществления средство RNAi вводят в незабуференном растворе, таком как физиологический солевой раствор или вода.
В другом варианте осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены наборы для осуществления способов изобретения. Наборы могут содержать средство RNAi изобретения и инструкции по применению, и необязательно средство для введения средства RNAi субъекту.
В одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы подавления экспрессии Serpinc1 у субъекта. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 40 мг до приблизительно 90 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы подавления экспрессии Serpinc1 у субъекта. Способы предусматривают введение субъекту фиксированной дозы от приблизительно 40 мг до приблизительно 90 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), при этом средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом средство двухцепочечной RNAi содержит лиганд, например, смысловую нить средства двухцепочечной RNAi конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу смысловой нити.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в двух или более дозах.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц, однократно каждые пять недель, каждые шесть недель, однократно каждые семь недель, каждые 2 месяца, каждые три месяца или при необходимости.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту один раз в месяц. В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые шесть недель. В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые 2 месяца. В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту каждые три месяца.
Средство двухцепочечной RNAi можно вводить субъекту в виде, например, фиксированной дозы, составляющей между приблизительно 50 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 65 мг, или между приблизительно 40 мг и приблизительно 55 мг.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi можно вводить в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 40 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 65 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 85 мг или приблизительно 90 мг.
В некоторых вариантах осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 40 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 90 мг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту снижает у субъекта активность Serpinc1 на от приблизительно 70% до приблизительно 95%.
В одном варианте осуществления субъектом является человек.
В одном варианте осуществления субъект имеет расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. Расстройство может представлять собой расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия, например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
В одном варианте осуществления субъект страдает гемофилией A и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией B и является субъектом с ингибиторами. В другом варианте осуществления субъект страдает гемофилией C и является субъектом с ингибиторами.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту повышает пиковые уровни тромбина у субъекта до диапазона пиковых уровней тромбина у субъекта, у которого нет расстройства, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В одном варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для доведения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта до приблизительно такого же уровня, который достигается посредством введения субъекту фактора VIII.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина выше чем приблизительно 40% у субъекта.
В другом варианте осуществления введение дозы средства двухцепочечной RNAi субъекту уменьшает частоту кровотечений в год (ABR) у субъекта на от приблизительно 80 до приблизительно 95% по сравнению со средней анамнестической зарегистрированной ABR у субъектов, имеющих расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, которым не вводили средство двухцепочечной RNAi.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi вводят субъекту подкожно.
В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
В одном варианте осуществления модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтор модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, нуклеотида с удаленным азотистым основанием, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего искусственное основание.
Область комплементарности может составлять по меньшей мере 17 нуклеотидов в длину или 19 нуклеотидов в длину.
В одном варианте осуществления область комплементарности составляет между 19 и 21 нуклеотидом в длину. В другом варианте осуществления область комплементарности составляет между 21 и 23 нуклеотидами в длину.
В одном варианте осуществления каждая нить составляет не более чем 30 нуклеотидов в длину.
По меньшей мере одна цепь средства двухцепочечной RNAi может содержать 3' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида, или 3' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь средства RNAi содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 5' «липкий» конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления и 3'-, и 5'-конец одной нити средства RNAi содержит «липкий» конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления лигандом является N-ацетилгалактозамин (GalNAc). Лиганд может представлять собой один или более GalNAc, прикрепленный к средству RNAi через моновалентный, бивалентный или трехвалентный разветвленный линкер. Лиганд можно конъюгировать с 3'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 5'-концом смысловой нити средства двухцепочечной RNAi, 3'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi или 5'-концом антисмысловой нити средства двухцепочечной RNAi.
В некоторых вариантах осуществления средства двухцепочечной RNAi изобретения содержат множество, например, 2, 3, 4, 5 или 6, GalNAc, каждый из которых независимо прикреплен к множеству нуклеотидов средства двухцепочечной RNAi через множество моновалентных линкеров.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой
В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления X представляет собой O.
В одном варианте осуществления область комплементарности состоит из нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и антисмысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь.
В одном варианте осуществления смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), и антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь; и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, как показано в следующей схеме
В одном варианте осуществления средство вводят в виде фармацевтической композиции. В одном варианте осуществления средство RNAi вводят в незабуференном растворе, таком как физиологический солевой раствор или вода.
В другом варианте осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как буферный раствор, содержащий ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены наборы для осуществления способов изобретения. Наборы могут содержать средство RNAi изобретения и инструкции по применению, и необязательно средство для введения средства RNAi субъекту.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1A представлен график, отображающий действие однократной подкожно введенной дозы 0,03 мг/кг AD-57213 на уровни выработки тромбина в плазме у одного здорового субъекта-человека.
На фиг. 1B представлен график, отображающий действие однократной подкожно введенной дозы 0,03 мг/кг AD-57213 на уровни выработки тромбина в плазме у одного здорового субъекта-человека.
На фиг. 1C представлен график, отображающий действие однократной подкожно введенной дозы 0,03 мг/кг AD-57213 на уровни выработки тромбина в плазме у одного здорового субъекта-человека.
На фиг. 1D представлен график, отображающий действие однократной подкожно введенной дозы 0,03 мг/кг AD-57213 на уровни выработки тромбина в плазме у одного здорового субъекта-человека.
На фиг. 2A представляют собой график, отображающий действие однократной подкожно введенной дозы 0,03 мг/кг AD-57213 на уровни белка (Serpinc1) АТ в плазме у одного здорового субъекта-человека.
На фиг. 2B представляют собой график, отображающий действие однократной подкожно введенной дозы 0,03 мг/кг AD-57213 на уровни белка (Serpinc1) АТ в плазме у одного здорового субъекта-человека.
На фиг. 3 представлен график, отображающий связь между процентным выражением нокаута AT (Serpinc1) и процентным выражением повышения пиковой выработки тромбина у здоровых субъектов, которым подкожно вводили однократную дозу 0,03 мг/кг AD-57213.
На фиг. 4 представлен график, отображающий действие множественных доз 0,015 мг/кг, 0,045 мг/кг, или 0,075 мг/кг AD-57213 на уровни белка (Serpinc1) АТ в плазме у субъектов-людей, имеющих гемофилию A или B.
На фиг. 5A представлен график, отображающий действие множественных доз 0,225 мг/кг, 0,450 мг/кг, 0,900 мг/кг, 1,800 мг/кг, или 80 мг AD-57213 на уровни белка (Serpinc1) АТ в плазме у субъектов-людей, имеющих гемофилию A или B.
На фиг. 5B представлен график, отображающий дозозависимое действие AD-57213 на уровни белка (Serpinc1) АТ в плазме у субъектов-людей.
На фиг. 6A представлен график, отображающий действие множественных доз 0,015 мг/кг или 0,045 мг/кг AD-57213 на пиковые уровни тромбина у субъектов-людей, имеющих гемофилию A или B.
На фиг. 6B представлен график, отображающий действие множественных доз 0,015 мг/кг или 0,045 мг/кг AD-57213 на выработку тромбина в виде процентного изменения по сравнению с исходным уровнем группы у субъектов-людей, имеющих гемофилию A или B.
На фиг. 7 представлен график, отображающий действие множественных доз 0,045 мг/кг AD-57213 на время образования сгустка и время свертывания у одного субъекта, имеющего гемофилию A (субъект 101-009).
На фиг. 8 представлен график, отображающий среднее максимальное снижение AT за счет эквивалентной ежемесячной дозы.
На фиг. 9 представлен график, отображающий действие множественных доз AD-57213 на выработку тромбина за счет квартилей снижения AT.
На фиг. 10A представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта, которому вводили 225 мкг/кг qM AD-57213.
На фиг. 10B представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта, которому вводили 1800 мкг/кг qM AD-57213.
На фиг. 10C представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта, которому вводили 80 мг qM AD-57213.
На фиг. 11 представлен график, отображающий действие множественных доз AD-57213 на эпизоды кровотечения в квартилях снижения AT.
На фиг. 12 представлена таблица, демонстрирующая данные об эпизодах кровотечения для субъектов, включенных в часть C клинического испытания фазы I AD-57213.
На фиг. 13A представлен график, демонстрирующий среднюю частоту кровотечений в год (ABR) перед началом исследования в начальной части исследования и во время наблюдательной части исследования для всех когорт дозирования в части C клинического испытания фазы I AD-57213.
На фиг. 13B представлен график, демонстрирующий среднюю частоту кровотечений в год (ABR) перед началом исследования в начальной части исследования и во время наблюдательной части исследования для когорты 80 мг ежемесячно (80 мг qM x3) в части C клинического испытания фазы I AD-57213.
На фиг. 14A представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта с ингибиторами, которому вводили фиксированную месячную дозу 50 мг AD-57213.
На фиг. 14B представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта с ингибиторами, которому вводили фиксированную месячную дозу 50 мг AD-57213.
На фиг. 14C представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта с ингибиторами, которому вводили фиксированную месячную дозу 50 мг AD-57213.
На фиг. 14D представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта с ингибиторами, которому вводили фиксированную месячную дозу 50 мг AD-57213.
На фиг. 14E представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта с ингибиторами, которому вводили фиксированную месячную дозу 50 мг AD-57213.
На фиг. 14F представлен график, отображающий относительную активность АТ по отношению к пиковой выработке тромбина в процентах, достигнутой с фактором VIII, которую определяли у субъекта с ингибиторами, которому вводили фиксированную месячную дозу 50 мг AD-57213.
На фиг. 15 представлен график, отображающий действие множественных доз 50 мг или 80 мг AD-57213 на среднюю активность АТ (Serpinc1) по сравнению с исходным уровнем у субъектов-людей, имеющих гемофилию A или B с ингибиторами.
На фиг. 16 представлен график, отображающий, что понижающее АТ действие множественных доз 50 мг AD-57213 коррелирует с увеличенной выработкой тромбина у субъекта, имеющего гемофилию A.
На фиг. 17A представлена таблица, демонстрирующая данные об эпизодах кровотечения для субъектов, включенных в часть D клинического испытания фазы I AD-57213.
На фиг. 17B представлен график, демонстрирующий среднюю частоту кровотечений в год (ABR) перед началом исследования, в начальной части исследования и во время наблюдательной части исследования для всех субъектов в части D клинического испытания фазы I AD-57213.
На фиг. 18 представлен график, отображающий действие множественных доз 80 мг AD-57213 на среднюю активность АТ (Serpinc1) по сравнению с исходным уровнем у субъекта-человека, имеющего гемофилию без ингибиторов в фазе II открытого расширенного исследования (OLE) AD-57213.
На фиг. 19A представлен график, отображающий действие множественных доз 50 мг или 80 мг AD-57213 на среднюю активность АТ (Serpinc1) по сравнению с исходным уровнем у субъектов-людей, имеющих гемофилию A или B без ингибиторов в фазе II открытого расширенного исследования (OLE) AD-57213.
На фиг. 19B представлен график, отображающий действие множественных доз 50 мг или 80 мг AD-57213 на пиковую выработку тромбина у субъектов-людей, имеющих гемофилию A или B без ингибиторов в фазе II открытого расширенного исследования (OLE) AD-57213. Заштрихованная часть графика представляет диапазон пиковых уровней тромбина, наблюдаемых у здоровых людей-добровольцев (HV), которым вводили AD-57213, и с менее чем 25% нокаутом АТ в фазе I испытания AD-57213, описанного в примере 1. Пунктирная линия через диапазон HV представляет средний пиковый уровень тромбина, наблюдаемый у здоровых людей-добровольцев (HV) и с менее чем 25% нокаутом АТ, которым вводили AD-57213 в фазе I испытания AD-57213, описанного в примере 1.
На фиг. 20A представлена таблица, демонстрирующая данные об эпизодах кровотечения для субъектов, включенных в фазу II OLE клинического испытания AD-57213.
На фиг. 20B представлен график, демонстрирующий среднюю частоту кровотечений в год (ABR) перед началом исследования, в начальной части исследования и во время наблюдательной части исследования для всех субъектов в фазе II OLE клинического испытания AD-57213.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение основано по меньшей мере частично на неожиданном открытии, что очень низкие дозы (например, дозы по данным мере примерно в 30 раз ниже, чем дозы, практикуемые в данной области) связанного с GalNAc средства двухцепочечной RNAi, включая конкретные химические модификации, демонстрирует исключительную эффективность для подавления экспрессии Serpinc1, а также исключительную продолжительность подавления экспрессии Serpinc1. Конкретно, низкие дозы средств RNAi, содержащих лиганд GalNAc, в которых по существу все нуклеотиды являются модифицированными нуклеотидами, таких как средство RNAi, содержащее один или более мотивов трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, включая один такой мотив на участке расщепления средств или около него, шесть тиофосфатных связей и лиганд GalNAc, как показано в данном документе, являются исключительно эффективными и продолжительными по подавлению активности гена Serpinc1.
Соответственно, в настоящем изобретении предоставлены способы предотвращения по меньшей мере одного симптома, например, кровотечения, у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь ингибирование или уменьшение экспрессии гена Serpinc1, например, заболевание, ассоциированное с Serpinc1, такое как гемофилия (например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C), с использованием композиций иРНК, которые воздействуют на опосредованное индуцируемым РНК комплексом сайленсинга (RISC) расщепление транскриптов РНК гена Serpinc1. Настоящее изобретение дополнительные предоставляет способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь ингибирование или уменьшение экспрессии гена Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, такое как гемофилия (например, гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C), с использованием композиций иРНК, которые воздействуют на опосредованное индуцируемым РНК комплексом сайленсинга (RISC) расщепление транскриптов РНК гена Serpinc1.
Средства iRNA для применения в способах изобретения, как правило, содержат нить РНК (антисмысловую нить), имеющую область, которая составляет приблизительно 30 нуклеотидов или менее в длину, например, 15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23 или 21-22 нуклеотида в длину, и эта область по существу комплементарна по меньшей мере части транскрипта мРНК гена Serpinc1.
В других вариантах осуществления одна или обе нити двухцепочечных средств RNAi изобретения составляет вплоть до 66 нуклеотидов в длину, например, 36-66, 26-36, 25-36, 31-60, 22-43, 27-53 нуклеотида в длину, с областью, составляющей по меньшей мере 19 смежных нуклеотидов, которая по существу комплементарна по меньшей мере части транскрипта мРНК гена Serpinc1. В некоторых вариантах осуществления смысловая и антисмысловая нити образуют дуплекс, состоящий из 18-30 смежных нуклеотидов.
В некоторых вариантах осуществления средства iRNA для применения в способах изобретения содержат нить РНК (антисмысловую нить), которая может составлять вплоть до 66 нуклеотидов в длину, например, 36-66, 26-36, 25-36, 31-60, 22-43, 27-53 нуклеотидов в длину, с областью, составляющей по меньшей мере 19 смежных нуклеотидов, которая по существу комплементарна по меньшей мере части транскрипта мРНК гена Serpinc1. В некоторых вариантах осуществления такие средства iRNA, имеющие более длинные антисмысловые нити, могут содержать вторую нить РНК (смысловую нить) из 20-60 нуклеотидов в длину, при этом смысловая и антисмысловая нити образуют дуплекс, состоящий из 18-30 смежных нуклеотидов.
Следующее подробное описание раскрывает, как получать и применять композиции, содержащие iRNA, для подавления экспрессии гена Serpinc1, а также композиции, применение и способы для лечения субъектов, имеющих заболевания и расстройства, которым могло бы помочь ингибирование или уменьшение экспрессии этого гена.
I. Определения
Для того, чтобы настоящее изобретение было более понятным, сначала определены некоторые термины. Кроме того, следует отметить, что всякий раз, когда указано значение или диапазон значений параметра, предполагается, что значения и диапазоны, промежуточные по отношению к указанным значениям, также являются частью настоящего изобретения.
Неопределенные артикли используются в данном документе для обозначения одного или более чем одного (то есть по меньшей мере одного) грамматического объекта пункта. В качестве примера «элемент» означает один элемент или более чем один элемент, например, множество элементов.
Термин «содержащий» используются в данном документе для обозначения и используется взаимозаменяемо с фразой «включая, но без ограничения».
Термин «или» используются в данном документе для обозначения и используется взаимозаменяемо с термином «и/или», если контекст явно не указывается на иное.
В рамках изобретения «Serpinc1» относится к конкретному полипептиду, экспрессируемому в клетке. Serpinc1 также известен как ингибитор серпиновых пептидаз, клада C (антитромбин; AT), член 1; антитромбин III; AT3; антитромбин; и кофактор гепарина 1. Последовательность транскрипта мРНК Serpinc1 человека можно найти, например, в GenBank Номер доступа GI:254588059 (NM_000488; SEQ ID NO:1). Последовательность мРНК Serpinc1 макак-резусов можно найти, например, в GenBank Номер доступа GI:157167169 (NM_001104583; SEQ ID NO:2). Последовательность мРНК Serpinc1 мышей можно найти, например, в GenBank Номер доступа GI:237874216 (NM_080844; SEQ ID NO:3). Последовательность мРНК Serpinc1 крыс можно найти, например, в GenBank Номер доступа GI:58865629 (NM_001012027; SEQ ID NO:4).
Термин «Serpinc1», в рамках изобретения также относится к конкретному полипептиду, экспрессируемому в клетке в виде вариантов последовательностей ДНК природного происхождения гена Serpinc1, таких как одиночный нуклеотидный полиморфизм гена Serpinc1. Внутри гена Serpinc1 идентифицирован ряд SNP и их можно найти, например, в NCBI dbSNP (см., например, www.ncbi.nlm.nih.gov/snp). Неограничивающие примеры SNP внутри гена Serpinc1 можно найти в NCBI dbSNP Номера доступа rs677; rs5877; rs5878; rs5879; rs941988; rs941989; rs1799876; rs19637711; rs2008946 и rs2227586.
В рамках изобретения «субъект» представляет собой животное, такое как млекопитающее, включая приматов (например, человека, примата, не относящегося к человеку, например, обезьяну и шимпанзе), не приматов (таких как корова, свинья, верблюд, лама, лошадь, коза, кролик, овца, хомяк, морская свинка, кошка, собака, крыса, мышь, лошадь и кит) или птица (например, утка или гусь). В одном варианте осуществления субъектом является человек, такой как человек, подлежащий лечению или обследованный на предмет заболевания, расстройства или состояния, которому могло бы помочь уменьшение экспрессии Serpinc1; человек с риском заболевания, расстройства или состояния, которому могло бы помочь уменьшение экспрессии Serpinc1; человек, имеющий заболевание, расстройство или состояние, которому могло бы помочь уменьшение экспрессии Serpinc1; и/или человек, подлежащий лечению заболевания, расстройства или состояния, которому могло бы помочь уменьшение экспрессии Serpinc1, согласно настоящему изобретению.
В рамках изобретения термины «лечение» или «обработка» относятся к благоприятному или желаемому результату, включающему, без ограничения, облегчение или улучшение одного или нескольких симптомов, уменьшение степени кровотечения, стабилизированное (то есть не ухудшающееся) состояние кровотечения, улучшение или ослабление кровотечения, независимо от того, обнаружено оно или не обнаружено. «Лечение» также может означать продление выживаемости по сравнению с ожидаемой выживаемостью в отсутствие лечения. В способах изобретения лечение включает в себя лечение по требованию и контроль эпизодов кровотечения, периоперационное управление кровотечениями и рутинную профилактику для снижения частоты эпизодов кровотечения.
Термин «нижний» в контексте уровня Serpinc1 у субъекта или маркера или симптома болезни относится к статистически значимому снижению такого уровня. Уменьшение может составлять, например, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, или более и предпочтительно до уровня, принятого в качестве пределах нормы для индивидуума без такого расстройства.
В рамках изобретения «профилактика» или «предотвращение» при использовании в связи с заболеванием, расстройством или его состоянием, которому могло бы помочь уменьшение экспрессии гена Sertpinc1, относится к уменьшению вероятности того, что у субъекта будет развиваться симптом, связанный с таким заболеванием, расстройством или состоянием, например, такой симптом как кровотечение. Вероятность развития кровотечения снижается, например, когда у человека, имеющего один или несколько факторов риска кровотечения, кровотечение либо не развивается, либо кровотечение развивается с меньшей степенью тяжести по сравнению с популяцией, имеющей те же факторы риска и не получающей лечение согласно настоящему изобретению. Эффективной профилактикой считается невозможность развития заболевания, расстройства или состояния или уменьшение развития симптома, связанного с таким заболеванием, расстройством или состоянием (например, по меньшей мере, примерно на 10% в клинически приемлемом масштабе для этого заболевания или расстройства) или противодействие отсроченных симптомов, отсроченных (например, на дни, недели, месяцы или годы).
В рамках изобретения термин «расстройство, сопровождающееся кровоточивостью» представляет собой заболевание или расстройство, которое приводит к плохой свертываемости крови и/или чрезмерной кровоточивости. Расстройством, сопровождающимся кровоточивостью, может быть врожденное расстройство, такое как гемофилия или болезнь Виллебранда, или приобретенное расстройство, ассоциированное, например, с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием, эклампсией беременных, дефицитом витамина К, аутоиммунным расстройством, воспалительным заболеванием кишечника, язвенным колитом, дерматологическим расстройство (например, псориазом, пузырчаткой), респираторным заболеванием (например, астмой, хроническим обструктивным заболеванием легких), аллергической реакцией на лекарственные препараты, например, результатом медикаментозного лечения, таким как аспирин, гепарин и варфарин, диабетом, инфекцией острым гепатитом В, инфекцией острым гепатитом С, злокачественной опухолью или солидной опухолью (например, простаты, легких, толстой кишки, поджелудочной железы, желудка, желчных протоков, головы и шеи, шейки матки, молочной железы, меланомы, почки и/или гематологической злокачественной опухолью). В одном варианте осуществления врожденным расстройством, сопровождающимся кровоточивостью, является гемофилия, например, гемофилия A, B или C. В одном варианте осуществления у субъекта, имеющего врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию, вырабатываются ингибиторы, например, ингибиторы аллоантител, для заместительной терапии свертывания, и они упоминаются в данном документе как «субъект с ингибитором». В одном варианте осуществления субъект с ингибитором имеет гемофилию A. В другом варианте осуществления субъект с ингибитором имеет гемофилию B. В другом варианте осуществления субъект с ингибитором имеет гемофилию C.
«Терапевтически эффективное количество», в рамках изобретения предназначено для включения количества средства RNAi, которое при введении субъекту, имеющему расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, и кровотечение, является достаточным для эффективного лечения заболевания (например, посредством уменьшения, улучшения или поддержания существующего заболевания или одного или более симптомов заболевания). «Терапевтически эффективное количество» может варьировать в зависимости от средства RNAi, от того, как средство вводят, от заболевания и степени его тяжести и анамнеза, пола, массы, семейного анамнеза, набора генов, типов предшествующего или сопутствующего лечения, при наличии, и других индивидуальных характеристик субъекта, подлежащего лечению.
«Профилактически эффективное количество», в рамках изобретения предназначено для включения количества средства RNAi, которое при введении субъекту, имеющему расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, но не кровотечение, например, субъекту, имеющему расстройство, сопровождающееся кровоточивостью и которому запланировано хирургическое вмешательство (например, периоперационное лечение), является достаточным для предотвращения или улучшения заболевания или одного или более симптомов заболевания. Улучшение заболевания включает замедление течения заболевания или уменьшение степени тяжести развившегося позже заболевание. «Профилактически эффективное количество» может варьировать в зависимости от iRNA, как вводят средство, степени риска заболевания, и анамнеза, пола, массы, семейного анамнеза, набора генов, типов предшествующего или сопутствующего лечения, при наличии, и других индивидуальных характеристик субъекта, подлежащего лечению.
«Терапевтически эффективное количество» или «профилактически эффективное количество» также включает количество средства RNAi, которое приводит к желаемому локальному или системному эффекту при разумном соотношении выгода/риск, применимому к любому лечению. iRNA, задействованную в способах настоящего изобретения, можно вводить в достаточном количестве для получения разумного соотношения выгода/риск, применимого к такому лечению.
Фразу «фармацевтически приемлемый» используют в данном документе со ссылкой на те соединения, композиции и/или лекарственные формы, которые в рамках здравого медицинского суждения, являются приемлемыми для применения в контакте с тканями субъектов-людей и субъектов-животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, соизмеримых с разумным соотношением выгода/риск.
В рамках изобретения фраза «фармацевтически приемлемый носитель» обозначает фармацевтически приемлемый материал, композицию или наполнитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, растворитель, эксципиент, производственное приспособление (например, любрикант, тальк, стеарат магния, кальция или цинка или стеариновую кислоту) или материал для инкапсулирования растворителя, участвующий в переносе или транспортировке исследуемого соединения из одного органа или части тела в другой орган или часть тела. Каждый носитель должен быть «приемлемым» в смысле совместимости с другими ингредиентами состава и не наносить вреда субъекту, подлежащему лечению. Некоторые примеры материалов, которые служат фармацевтически приемлемыми носителями, включают: (1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, таким как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; (3) целлюлозу и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и целлюлозы ацетат; (4) порошкообразный трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) смазывающие средства, такие как магния стеарат, лаурилсульфат натрия и тальк; (8) эксципиенты, такие как масло какао и воски для суппозиториев; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, масло сафлор, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, таким как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные средства, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновую кислоту; (16) апирогенную воду; (17) изотонический солевой раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) буферные растворы для поддержания pH; (21) полиэстеры, поликарбонаты и/или полиангидриды; (22) объемобразующие средства, такие как полипептиды и аминокислоты (23) компонент сыворотки, такой как сывороточный альбумин, HDL и LDL; и (22) другие нетоксичные совместимые вещества, задействованные в фармацевтических составах.
В рамках изобретения «целевая последовательность» относится к смежному участку нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образованному во время транскрипции гена Serpinc1, содержащему мРНК, который представляет собой продукт процессинга РНК первичного продукта транскрипции. В одном варианте осуществления целевой участок последовательности будет по меньшей мере достаточно длинным, чтобы служить в качестве iRNA-направленного расщепления в том участке или вблизи того участка нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образованной во время транскрипции гена Serpinc1.
Целевая последовательность может состоять из приблизительно 9-36 нуклеотидов в длину, например, приблизительно 15-30 нуклеотидов в длину. Например, целевая последовательность может состоять из приблизительно 15-30 нуклеотидов, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23 или 21-22 нуклеотида в длину. Диапазоны и длины, промежуточные к указанным выше диапазонам и длинам, также считаются частью изобретения.
В рамках изобретения термин «нить, содержащая последовательность» относится к олигонуклеотиду, содержащему цепь нуклеотидов, которая описывается последовательностью, относящейся к стандартной нуклеотидной номенклатуре.
«G», «C», «A», «T» и «U» каждый, как правило, расшифровывает нуклеотид, который включает гуанин, цитозин, аденин, тимидин и урацил в качестве основания, соответственно. Однако будет понятно, что термин «рибонуклеотид» или «нуклеотид» также может относиться к модифицированному нуклеотиду, как дополнительно подробно описано ниже, или к фрагменту суррогатного замещения (см., например, таблицу 1). Специалист в данной области хорошо понимает, что гуанин, цитозин, аденин, и урацил могут быть заменены другими фрагментами по существу без изменения свойств парных оснований олигонуклеотида, содержащего нуклеотид, несущий такой замещающий фрагмент. Например, без ограничения, нуклеотид, содержащий инозин в качестве основания, может образовывать пару с нуклеотидами, содержащими аденин, цитозин или урацил. Следовательно, нуклеотиды, содержащие урацил, гуанин или аденин, могут быть замещены в нуклеотидных последовательностях двухцепочечной РНК, представленных в изобретении, нуклеотидом, содержащим, например, инозин. В другом примере аденин и цитозин повсеместно в олигонуклеотиде могут быть замещены гуанином и урацилом, соответственно, для образования неоднозначной пары оснований G-U с мРНК-мишенью. Последовательности, содержащие такие замещающие фрагменты, пригодны для композиций и способов, представленных в изобретении.
Термины «iRNA», «средство RNAi» «средство iRNA», «средство РНК-интерференции», которые взаимозаменяемо используются в данном документе, относятся к средству, которое содержит РНК, согласно определению термина в рамках изобретения, и который опосредует целевое расщепление транскрипта РНК через путь индуцируемого РНК комплекса сайленсинга (RISC). iRNA направляет сиквенс-специфичную деградацию мРНК через процесс, известный как РНК-интерференция (RNAi). iRNA модулирует, например, подавляет, экспрессию Serpinc1 в клетке, например, клетке субъекта, такого как субъект-млекопитающее.
В одном варианте осуществления средство RNAi изобретения содержит однонитевую РНК, которая взаимодействует с целевой последовательностью РНК, например, с целевой последовательностью мРНК Serpinc1, чтобы направлять расщепление целевой РНК. Не желая связывать себя теорией, предполагается, что длинная двухцепочечная РНК, проникающая в клетки, расщепляется до миРНК эндонуклеазой III типа, известной как Dicer (Sharp et al. (2001) Genes Dev. 15:485). Dicer, фермент, подобный рибонуклеазе-III, процессирует двухцепочечную РНК на короткие интерферирующие РНК из 19-23 пар оснований с характерными 3'-«липкими» концами из двух оснований (Bernstein, et al., (2001) Nature 409:363). Затем миРНК встраиваются в индуцируемый РНК комплекс сайленсинга (RISC), в котором одна или более геликаз раскручивает дуплекс миРНК, позволяя комплементарной антисмысловой нити направлять распознавание мишени (Nykanen, et al., (2001) Cell 107:309). При связывании с соответствующей мРНК-мишенью одна или несколько эндонуклеаз внутри RISC расщепляют мишень для индуцирования сайленсинга (Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15:188). Таким образом, в одном аспекте изобретение относится к однонитевой РНК (миРНК), вырабатывающейся в клетке, которая способствует образованию комплекса RISC для осуществления сайленсинга гена-мишени, т.е., гена Serpinc1. Соответственно, термин «миРНК» также используют в данном документе со ссылкой на RNAi, как описано выше.
В другом варианте осуществления средство RNAi может представлять собой одноцепочечную миРНК, которую вводят в клетку или организм для ингибирования целевой РНК. Одноцепочечные средства RNAi связываются с RISC эндонуклеазой, Argonaute 2, которая затем расщепляет целевую мРНК. Одноцепочечные миРНК, как правило, состоят из 15-30 нуклеотидов и являются химически модифицированными. Разработка и тестирование одноцепочечных миРНК описаны в патенте США № 8101348 и у Lima et al., (2012) Cell 150: 883-894, полное содержание каждого из которых настоящим включено в данный документ посредством ссылки. Любую из антисмысловых нуклеотидных последовательностей в рамках изобретения можно использовать в виде одноцепочечной миРНК согласно настоящему изобретению или химически модифицированными посредством способов, описанных у Lima et al., (2012) Cell 150;:883-894.
В другом варианте осуществления «iRNA» для применения в композициях, путях использования и способах изобретения представляет собой двухцепочечную РНК и в данном документе называется «средство двухцепочечной RNAi», «двухцепочечная молекула РНК (двухцепочечная РНК)», «средство двухцепочечной РНК» или «двухцепочечная РНК». Термин «двухцепочечная РНК» относится к комплексу молекул рибонуклеиновых кислот, имеющему структуру дуплекса, содержащему две антипараллельные и по существу комплементарные нити нуклеиновых кислот, упоминаемые, как имеющие «смысловую» и «антисмысловую» ориентацию по отношению к целевой РНК, т.е. Гену Serpinc1. В некоторых вариантах осуществления изобретения двухцепочечная РНК (двухцепочечная РНК) инициирует деградацию целевой РНК, например, мРНК, посредством механизма посттранскрипционного сайленсинга генов, называемого в данном документе РНК-интерференцией или RNAi.
В общем, большинство нуклеотидов каждой нити молекулы двухцепочечной РНК представляют собой рибонуклеотиды, но, как подробно описано в данном документе, каждая или обе нити также могут содержать один или более нерибонуклеотидов, например, дезоксирибонуклеотид и/или модифицированный нуклеотид. Кроме того, в рамках изобретения «средство RNAi» может содержать рибонуклеотиды с химическими модификациями; средство RNAi может содержать существенные модификации множества нуклеотидов.
В рамках изобретения термин «модифицированный нуклеотид» относится к нуклеотиду, независимо имеющему модифицированный сахарный фрагмент, модифицированную межнуклеотидную связь и/или модифицированное нуклеооснование. Таким образом, термин модифицированный нуклеотид охватывает замещения, дополнения или удаление, например, функциональной группы или атома, межнуклеозидных связей, фрагментой сахара или нуклеооснований. Модификации, пригодные для применения в средствах изобретения, включают все типы модификаций, раскрытых в данном документе или известных в данной области. Любые такие модификации, которые используются в молекуле типа миРНК, охвачены «средством RNAi» для целей настоящего описания и формулы изобретения.
Дуплексная область может иметь любую длину, которая допускает специфическую деградацию желаемой целевой РНК через путь RISC и может составлять от 9 до 36 пар оснований в длину, например, около 15-30 пар оснований в длину, например, приблизительно 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 или 36 пар оснований в длину, например, приблизительно 15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23 или 21-22 пар оснований в длину. Диапазоны и длины, промежуточные к указанным выше диапазонам и длинам, также считаются частью изобретения
Две нити, образующие дуплексную структуру, могут являться различными частями одной более крупной молекулы РНК, или они могут быть отдельными молекулами РНК. Если две нити являются частью одной более крупной молекулы и поэтому связаны непрерывной цепочкой нуклеотидов между 3'-концом одной нити и 5'-концом соответствующей другой нити, образующей дуплексную структуру, связывающая цепь РНК называется «шпилечной петлей». Шпилечная петля может содержать по меньшей мере один неспаренный нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления шпилечная петля может содержать по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 23 или более неспаренных нуклеотидов.
Когда две по существу комплементарные нити двухцепочечной РНК состоят из отдельных молекул РНК, нет необходимости, но возможно, чтобы эти молекулы были ковалентно связаны. Если две нити ковалентно соединены с помощью иных средств, чем непрерывная цепь нуклеотидов между 3'-концом одной нити и 5'-концом соответствующей другой нити, образующей дуплексную структуру, соединительная структура называется «линкер». Нити РНК могут иметь одинаковое или различное количество нуклеотидов. Максимальное число пар оснований составляет количество нуклеотидов в самой короткой цепи двухцепочечной РНК минус любые «липкие» концы, присутствующие в дуплексе. В дополнение к дуплексной структуре RNAi может содержать один или несколько нуклеотидных «липких» концов.
В одном варианте осуществления средство RNAi изобретения представляет собой двухцепочечную РНК из 24-30 нуклеотидов, которая взаимодействует с целевой РНК последовательностью, например, целевой последовательностью мРНК Serpinc1, чтобы направлять расщепление целевой РНК. Не желая связывать себя теорией, длинная двухцепочечная РНК, вводимая в клетки, расщепляется до миРНК эндонуклеазой III типа, известной как Dicer (Sharp et al. (2001) Genes Dev. 15:485). Dicer, фермент, подобный рибонуклеазе-III, процессирует двухцепочечную РНК на короткие интерферирующие РНК из 19-23 пар оснований с характерными 3'-«липкими» концами из двух оснований (Bernstein, et al., (2001) Nature 409:363). Затем миРНК встраиваются в индуцируемый РНК комплекс сайленсинга (RISC), в котором одна или более геликаз раскручивает дуплекс миРНК, давая возможность комплементарной антисмысловой нити направлять распознавание (Nykanen, et al., (2001) Cell 107:309). При связывании с соответствующей мРНК-мишенью одна или несколько эндонуклеаз внутри RISC расщепляют мишень, индуцируя сайленсинг (Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15:188).
В рамках изобретения термин «нуклеотидный «липкий» конец» относится по меньшей мере к одному неспаренному нуклеотиду, который выпячивается из дуплексной структуры iRNA, например, двухцепочечной РНК. Например, нуклеотидный «липкий» конец имеется когда 3'-конец одной нити двухцепочечной РНК простирается за 5'-конец другой нити или наоборот. Двухцепочечная РНК может содержать «липкий» конец, составляющий по меньшей мере один нуклеотид; в качестве альтернативы «липкий» конец может содержать по меньшей мере два нуклеотида, по меньшей мере три нуклеотида, по меньшей мере четыре нуклеотида, по меньшей мере пять нуклеотидов или более. Нуклеотидный «липкий» конец может содержать или состоять из нуклеотидного/нуклеозидного аналога, содержащего дезоксинуклеотид/нуклеозид. «Липкий» конец (концы) может быть на смысловой нити, антисмысловой нити или любой их комбинации. Более того, нуклеотид (нуклеотиды) «липкого» конца могут присутствовать на 5'-конце, 3'-конце или обоих концах либо антисмысловой, либо смысловой нити двухцепочечной РНК.
В одном варианте осуществления антисмысловая нить двухцепочечной РНК на 3'-конце и/или 5'-конце имеет «липкий» конец, состоящий из 1-10 нуклеотидов, например, из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов. В одном варианте осуществления смысловая нить двухцепочечной РНК на 3'-конце и/или 5'-конце имеет «липкий» конец, состоящий из 1-10 нуклеотидов, например, из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов. В другом варианте осуществления один или более нуклеотидов в «липком» конце замещены нуклеозидтиофосфатом.
В некоторых вариантах осуществления «липкий» конец на смысловой нити или антисмысловой нити или и той и другой может иметь увеличенную длину более 10 нуклеотидов, например 10-30 нуклеотидов, 10-25 нуклеотидов, 10-20 нуклеотидов или 10-15 нуклеотидов в длину. В некоторых вариантах осуществления протяженный «липкий» конец находится на смысловой нити дуплекса. В некоторых вариантах осуществления протяженный «липкий» конец находится на 3'-конце смысловой нити дуплекса. В некоторых вариантах осуществления протяженный «липкий» конец находится на 5'-конце смысловой нити дуплекса. В некоторых вариантах осуществления протяженный «липкий» конец находится на антисмысловой нити дуплекса. В некоторых вариантах осуществления протяженный «липкий» конец находится на 3'-конце антисмысловой нити дуплекса. В некоторых вариантах осуществления протяженный «липкий» конец находится на 5'-конце антисмысловой нити дуплекса. В некоторых вариантах осуществления один или более нуклеотидов в протяженном «липком» конце замещены нуклеозидтиофосфатом.
«Тупой» или «тупой конец» означает, что на этом конце средства двухцепочечной RNAi нет неспаренных нуклеотидов, то есть нет нуклеотидного «липкого» конца. Средство RNAi «с тупым концом» представляет собой двухцепочечную РНК, которая является двухцепочечной по всей своей длине, то есть не имеет нуклеотидного «липкого» конца на обоих концах молекулы. Средства RNAi изобретения включают средства RNAi с нуклеотидными «липкими» концами на одном конце (т.е., средства с одним «липким» концом и одним тупым концом) или с нуклеотидными «липкими» концами на обоих концах.
Термин «антисмысловая нить» или «направляющая нить» относится к нити iRNA, например, двухцепочечной РНК, которая содержит область, по существу комплементарную целевой последовательности, например, мРНК Serpinc1. В рамках изобретения термин «область комплементарности» относится к области на антисмысловой нити, которая по существу комплементарна последовательности, например, целевой последовательности, например, нуклеотидной последовательности Serpinc1 в рамках изобретения. Когда область комплементарности не полностью комплементарна целевой последовательности, во внутренней или терминальных областях молекулы могут быть несоответствия. Как правило, наиболее допустимые несоответствия находятся в терминальных областях, например, в пределах 5, 4, 3 или 2 нуклеотидов 5'-и/или 3'-конца iRNA.
Термин «смысловая нить» или «сопровождающая нить» в рамках изобретения относится к нити iRNA, которая содержит область, по существу комплементарную области антисмысловой нити согласно определению термина в рамках изобретения.
В рамках изобретения термин «область расщепления» относится к области, которая расположена непосредственно рядом с участком расщепления. Участок расщепления представляет собой участок на мишени, на котором происходит расщепление. В некоторых вариантах осуществления область расщепления содержит три основания на обоих концах участка расщепления и непосредственно вблизи с участком расщепления. В некоторых вариантах осуществления область расщепления содержит два основания на обоих концах участка расщепления и непосредственно вблизи с участком расщепления. В некоторых вариантах осуществления участок расщепление конкретно возникает на участке, связанном 10 и 11 нуклеотидами антисмысловой нити, а область расщепления содержит 11, 12 и 13 нуклеотиды.
В рамках изобретения и если не указано иное, термин «комплементарный» при использовании для описания первой нуклеотидной последовательности по отношению ко второй нуклеотидной последовательности относится к способности олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, гибридизировать и образовывать дуплексную структуру при определенных условиях с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, как должно быть понятно специалисту в данной области. Такие условия могут быть, например, строгими условиями, причем строгие условия могут включать: 400 мМ NaCl, 40 мМ PIPES с pH 6,4, 1 мМ ЭДТА, 50°C или 70°C в течение 12-16 часов с последующим промыванием (см., например, «Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Sambrook, et al. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press). Можно применять другие условия, такие как физиологически значимые условия, которые могут встречаться внутри организма. Специалист в данной области сможет определить набор условий, наиболее подходящих для проверки комплементарности двух последовательностей в соответствии с конечным применением гибридизированных нуклеотидов.
Комплементарные последовательности в iRNA, например, в пределах двухцепочечной РНК согласно настоящему изобретению включают спаренные основания олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность по всей длине одной или обеих нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности можно назвать «полностью комплементарными» по отношению друг к другу в данном документе. Однако когда в данном документе первая последовательность называется «по существу комплементарной» по отношению ко второй последовательности, две последовательности могут быть полностью комплементарными, или они могут образовывать одну или более, но, как правило, не более 5, 4, 3 или 2 ошибочно спаренных пар оснований при гибридизации для дуплекса до 30 пар оснований, сохраняя при этом способность гибридизоваться в условиях, наиболее значимых для их конечного применения, например, подавления экспрессии гена через путь RISC. Однако когда два олигонуклеотида предназначены для образования при гибридизации одного или нескольких однонитевых «липких» концов, такие «липкие» концы не должны рассматриваться как несоответствия в отношении определения комплементарности. Например, двухцепочечная РНК, содержащая 21 нуклеотид в длину одного олигонуклеотида и 23 нуклеотида в длину другого олигонуклеотида, при этом более длинный олигонуклеотид содержит последовательность из 21 нуклеотида, которая полностью комплементарна более короткому олигонуклеотиду, может все-таки называться «полностью комплементарной» для целей в рамках изобретения.
«Комплементарные» последовательности, в рамках изобретения также могут содержать или быть полностью образованы из не-Уотсон-Криковских пар оснований и/или пар оснований, образованных из ненатуральных и модифицированных нуклеотидов, в той мере, в которой выполняются вышеуказанные требования в отношении их способности к гибридизации. Такие не-Уотсон-Криковские пары оснований включают, без ограничения, неоднозначные или Хугстиновские пары оснований G:U.
Термины «комплементарный», «полностью комплементарный» и «по существу комплементарный» в данном документе можно использовать в отношении сопоставления оснований между смысловой нитью и антисмысловой нитью двухцепочечной РНК или между антисмысловой нитью средства iRNA и целевой последовательностью, как будет понятно из контекста их использования.
В рамках изобретения полинуклеотид, «по существу комплементарный по меньшей мере части» сопровождающей РНК (мРНК), относится к полинуклеотиду, по сути комплементарному смежному участку рассматриваемой мРНК (например, мРНК, кодирующей Serpinc1). Например, полинуклеотид комплементарен по меньшей мере части мРНК Serpinc1, если последовательность по существу комплементарна непрерывному участку мРНК, кодирующей Serpinc1.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды антисмысловой нити согласно настоящему документу полностью комплементарны целевой последовательности Serpinc1. В других вариантах осуществления полинуклеотиды антисмысловой нити согласно настоящему документу по существу комплементарны целевой последовательности Serpinc1 и содержат смежную нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80% комплементарна по всей своей длине эквивалентной области нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или фрагменту SEQ ID NO:1, например, комплементарна приблизительно на 85%, приблизительно 86%, приблизительно 87%, приблизительно 88%, приблизительно 89%, приблизительно 90%, приблизительно % 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98% или приблизительно на 99%.
В одном варианте осуществления средство RNAi изобретения содержит смысловую нить, по существу комплементарную антисмысловому полинуклеотиду, который, в свою очередь, комплементарен целевой последовательности Serpinc1, и при этом полинуклеотид смысловой нити содержит смежную нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80% комплементарна по всей своей длине эквивалентной области нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:5, или фрагменту любой из SEQ ID NO:5, например, комплементарна на приблизительно 85%, приблизительно 86%, приблизительно 87%, приблизительно 88%, приблизительно 89%, приблизительно 90%, приблизительно % 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98% или на приблизительно 99%.
В одном аспекте изобретения средство для применения в способах и композициях изобретения представляет собой одноцепочечную антисмысловую молекулу РНК, которая ингибирует целевую РНК через механизм антисмыслового ингибирования. Одноцепочечная молекула антисмысловой РНК комплементарна последовательности в пределах мРНК-мишени. Одноцепочечные антисмысловые олигонуклеотиды могут ингибировать трансляцию стехиометрическим образом путем спаривания оснований с мРНК и физическим препятствием для механизма трансляции, см. Dias, N. et al., (2002) Mol Cancer Ther 1:347-355. Одноцепочечная молекула антисмысловой РНК может иметь от приблизительно 15 до приблизительно 30 нуклеотидов в длину и иметь последовательность, комплементарную целевой последовательности. Например, одноцепочечная молекула антисмысловой РНК может содержать последовательность по меньшей мере из приблизительно 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных нуклеотидов из любой одной из антисмысловых последовательностей в рамках изобретения.
Термин «ингибирование» в рамках изобретения используют взаимозаменяемо с «уменьшением», «сайленсингом», «понижающим регулированием», «подавлением» и другими сходными терминами и включает любой уровень ингибирования.
Фраза «подавление экспрессии Serpinc1», в рамках изобретения включает подавление экспрессии любого гена Serpinc1 (такого как, например, ген Serpinc1 мышей, ген Serpinc1 крыс, ген Serpinc1 обезьян или ген Serpinc1 человека), а также варианты или мутанты гена Serpinc1, которые кодируют белок Serpinc1.
«Подавление экспрессии гена Serpinc1» включает любой уровень подавления гена Serpinc1, например, по меньшей мере частичной супрессии экспрессии гена Serpinc1, такой как подавление по меньшей мере на приблизительно 5%, по меньшей мере на приблизительно 10%, по меньшей мере на приблизительно 15%, по меньшей мере на приблизительно 20%, по меньшей мере на приблизительно 25%, по меньшей мере на приблизительно 30%, по меньшей мере на приблизительно 35%,по меньшей мере на приблизительно 40%, по меньшей мере на приблизительно 45%, по меньшей мере на приблизительно 50%, по меньшей мере на приблизительно 55%, по меньшей мере на приблизительно 60%, по меньшей мере на приблизительно 65%, по меньшей мере на приблизительно 70%, по меньшей мере на приблизительно 75%, по меньшей мере на приблизительно 80%, по меньшей мере на приблизительно 85%, по меньшей мере на приблизительно 90%, по меньшей мере на приблизительно 91%, по меньшей мере на приблизительно 92%, по меньшей мере на приблизительно 93%, по меньшей мере на приблизительно 94%, по меньшей мере на приблизительно 95%, по меньшей мере на приблизительно 96%, по меньшей мере на приблизительно 97%, по меньшей мере на приблизительно 98% или по меньшей мере на приблизительно 99%.
Экспрессию гена Serpinc1 можно оценить на основе уровня любой переменной, связанной с экспрессией гена Serpinc1, например, уровня мРНК Serpinc1, уровня белка Serpinc1, или, например, уровня комплекса тромбин:антитромбин в качестве показателя потенциала выработки тромбина, времени кровотечения, протромбинового времени (PT), подсчета тромбоцитов и/или активированного частичного тромбопластинового времени (aPTT). Ингибирование можно оценить посредством уменьшения абсолютного или относительного уровня одной или более из этих переменных по сравнению с контрольным уровнем. Контрольным уровнем может быть любой тип контрольного уровня, который используется в данной области техники, например, исходный уровень перед введением дозы или уровень, определенный у аналогичного субъекта, в клетке или образце, которые не обрабатывали или обрабатывали контролем (например, только буферным контролем или контролем неактивным средством).
В одном варианте осуществления подавление экспрессии гена Serpinc1 оценивают путем уменьшения количества мРНК Serpinc1, которую можно выделить или обнаружить в первой клетке или группе клеток, в которой транскрибируется ген Serpinc1, и которая обработана или была обработана таким образом, что экспрессия гена Serpinc1 подавляется по сравнению со второй клеткой или группой клеток, по существу идентичной первой клетке или группе клеток, но которая была или не была обработана таким образом(контрольные клетки). Степень подавления можно выразить в показателях
Фраза «контакт клетки со средством RNAi», таким как двухцепочечная РНК, в рамках изобретения включает контакт клетки любыми возможными средствами. Контакт клетки со средством RNAi включает контакт клетки с iRNA in vitro или контакт клетки с iRNA in vivo. Контакт можно осуществить напрямую или опосредованно. Таким образом, например, человек, осуществляющий этот способ, может привести средство RNAi в физический контакт с клеткой, или в качестве альтернативы, средство RNAi можно поместить в ситуацию, которая позволит или заставит его впоследствии вступать в контакт с клеткой.
Контакт клетки in vitro можно осуществить, например, инкубируя клетки со средством RNAi. Контакт клетки in vivo можно осуществить, например, посредством инъецирования средства RNAi в ткань или вблизи ткани, где расположены клетки, или посредством инъецирования средства RNAi в другую зону, например, кровоток или подкожное пространство, так чтобы средство впоследствии достигло ткани, в которой расположены клетки, подлежащие контакту. Например, средство RNAi может содержать и/или быть соединено с лигандом, например, GalNAc3, который направляет средство RNAi в интересующий сайт, например, печень. Также возможны комбинации способов контакта in vitro и in vivo. Например, клетка также может контактировать in vitro со средством RNAi и в последующем быть трансплантирована субъекту.
В одном варианте осуществления контакт клетки с iRNA включает «введение» или «доставку iRNA в клетку» путем облегчения или осуществления поглощения или всасывания в клетку. Абсорбция или поглощение iRNA может происходить посредством процессов самостоятельной диффузии или активных клеточных процессов или с помощью вспомогательных средств или устройств. Введение iRNA в клетку может быть in vitro и/или in vivo. Например, для введения in vivo iRNA можно инъецировать в участок ткани или вводить системно. Доставка in vivo также может осуществляться с помощью системы доставки бета-глюкана, такой как описана в патентах США №№ 5032401 и 5607677, и публикации США № 2005/0281781, полное содержание которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки. Введение в клетку in vitro включает способы, известные в данной области, такие как электропорация и липофекция. Дополнительные подходы описаны в данном документе ниже и/или известны в данной области.
II. Способы изобретения
В настоящем изобретении предоставлены терапевтические и профилактические способы, которые включают введение субъекту, имеющему заболевание, ассоциированное с Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию (например, гемофилию A, гемофилию B или гемофилию C), средства iRNA или фармацевтической композиции, содержащей средство iRNA изобретения. В некоторых аспектах изобретения способы дополнительно предусматривают введение субъекту дополнительного терапевтического средства.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, например, когда средство двухцепочечной RNAi содержит один или более мотивов трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, включая один такой мотив на участке расщепления средств или около него, шесть тиофосфатных связей и лиганд GalNAc, такое средство вводят в дозе, составляющей от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,825 мг/кг, от 0,200 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,200 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,225 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,250 до приблизительно 0,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,425 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,450 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,800 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,700 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,600 мг/кг, от приблизительно 0,475 до приблизительно 0,500 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,875 до приблизительно 0,900 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,100 мг/кг, от приблизительно 0,900 до приблизительно 1,000 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,825 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,800 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,700 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,600 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,500 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,200 мг/кг, от приблизительно 0,925 до приблизительно 1,100 мг/кг или приблизительно 0,925 до приблизительно 1,000 мг/кг. Значения и диапазоны, промежуточные к вышеперечисленным значениям, также предназначены для того, чтобы быть частью этого изобретения, например, средство RNAi можно вводить субъекту в дозе, составляющей от приблизительно 0,015 мг/кг до приблизительно 0,45 мг/мг.
Например, средство RNAi, например, средство RNAi в фармацевтической композиции, можно вводить в дозе, составляющей приблизительно 0,2 мг/кг, 0,225 мг/кг, 0,25 мг/кг, 0,275 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,325 мг/кг, 0,35 мг/кг, 0,375 мг/кг, 0,4 мг/кг, 0,425 мг/кг, 0,45 мг/кг, 0,475 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, 0,525 мг/кг, 0,55 мг/кг, 0,575 мг/кг, приблизительно 0,6 мг/кг, 0,625 мг/кг, 0,65 мг/кг, 0,675 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, 0,725 мг/кг, 0,75 мг/кг, 0,775 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, 0,925 мг/кг, 0,95 мг/кг, 0,975 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, 1,025 мг/кг, 1,05 мг/кг, 1,075 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, 1,125 мг/кг, 1,15 мг/кг, 1,175 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, 1,225 мг/кг, 1,25 мг/кг, 1,275 мг/кг, приблизительно 1,3 мг/кг, 1,325 мг/кг, 1,35 мг/кг, 1,375 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, 1,425 мг/кг, 1,45 мг/кг, 1,475 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, 1,525 мг/кг, 1,55 мг/кг, 1,575 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, 1,625 мг/кг, 1,65 мг/кг, 1,675 мг/кг, приблизительно 1,7 мг/кг, 1,725 мг/кг, 1,75 мг/кг, 1,775 мг/кг, или приблизительно 1,8 мг/кг. Значения, являющиеся промежуточными по отношению к вышеуказанным указанным значениям, также предназначены для того, чтобы быть частью этого изобретения.
Соответственно, В одном аспекте изобретение предоставляет способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию. Способы предусматривают введение субъекту профилактически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг, средства iRNA, например, двухцепочечную РНК изобретения, (например, фармацевтической композиции, содержащей двухцепочечную РНК изобретения), тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию, которые включают введение субъекту, например, человеку, терапевтически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,800 мг/кг, средства iRNA, нацеленного на ген Serpinc1, или фармацевтической композиции, содержащей средство iRNA, нацеленный на ген Serpinc1, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте изобретение предоставляет виды применения профилактически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг, iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения, для предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройства, сопровождающегося кровоточивостью, например, гемофилии.
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены виды применения профилактически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства iRNA изобретения, при получении лекарственного средства для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилии.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены виды применения терапевтически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства iRNA изобретения для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1.
В еще одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены применение средства iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения, нацеленной на ген Serpinc1, или фармацевтической композиции, содержащему терапевтически эффективную дозу, например, дозу, составляющую от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг, средства iRNA, нацеленного на ген Serpinc1, при получении лекарственного средства для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как субъект, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, например, когда средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, такое средство вводят в дозе, составляющей от приблизительно 0,200 до приблизительно 1,825 мг/кг, например, в виде дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 0,250 мг/кг; или в виде дозы от приблизительно 0,425 мг/кг до приблизительно 0,475 мг/кг; или в виде дозы от приблизительно 0,875 мг/кг до приблизительно 0,925 мг/кг; или в виде дозы от приблизительно 1,775 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг.
Соответственно, в одном аспекте изобретение предоставляет способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию. Способы предусматривают введение субъекту профилактически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу (например, фармацевтической композиция содержащему средство RNAi), тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию, которые включают введение субъекту, например, человеку, терапевтически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, или фармацевтической композиции, содержащей средство iRNA, нацеленное на ген Serpinc1, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте изобретение предоставляет виды применения профилактически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилии.
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены виды применения профилактически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, при получении лекарственного средства для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилии.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены виды применения терапевтически эффективной дозы, например, дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1.
В еще одном аспекте в настоящем изобретении предоставлено применение средства iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения, нацеленного на ген Serpinc1, или фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективную дозу, например, дозу, составляющую от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, при получении лекарственного средства для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как субъект, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию.
В некоторых вариантах осуществления средство iRNA изобретения вводят субъекту в виде фиксированной дозы. «Фиксированная доза» (например, доза в мг) означает, что одну дозу средства iRNA применяют для всех субъектов независимо от любых конкретных связанных с субъектом факторов, таких как масса. В одном конкретном варианте осуществления фиксированная доза, составляющая средство iRNA изобретения, основывается на заранее определенной массе или возрасте.
В некоторых вариантах осуществления средство RNAi вводят в виде фиксированной дозы, составляющей между приблизительно 25 мг и приблизительно 100 мг, например, между приблизительно 25 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 70 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 60 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 50 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 55 мг, или между приблизительно 45 мг и приблизительно 95 мг.
В некоторых вариантах осуществления средство RNAi вводят в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 25 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 65 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 85 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 95 мг или приблизительно 100 мг.
Соответственно, в одном аспекте изобретение предоставляет способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию. Способы предусматривают введение субъекту профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, средства iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения (например, фармацевтической композиции, содержащей двухцепочечную РНК изобретения), тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. В одном варианте осуществления способы предусматривают введение субъекту профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг, средства iRNA, например, двухцепочечной РНК, изобретения (например, фармацевтической композиции, содержащей двухцепочечную РНК изобретения), тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. В другом варианте осуществления способы предусматривают введение субъекту профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг, средства iRNA, например, двухцепочечной РНК, изобретения (например, фармацевтической композиции, содержащей двухцепочечную РНК изобретения), тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию, которые включают введение субъекту, например, человеку, терапевтически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, средства iRNA, нацеленного на ген Serpinc1, или фармацевтической композиции, содержащей средство iRNA, нацеленный на ген Serpinc1, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. В одном варианте осуществления способы предусматривают введение субъекту терапевтически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг, средства iRNA, например, двухцепочечной РНК, изобретения (например, фармацевтической композиции, содержащей двухцепочечную РНК изобретения), тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. В другом варианте осуществления способы предусматривают введение субъекту терапевтически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг, средства iRNA, например, двухцепочечнойо РНК изобретения (например, фармацевтической композиции, содержащей двухцепочечную РНК изобретения), тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1.
В другом аспекте изобретение предоставляет виды применения профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия. В одном варианте осуществления изобретение предоставляет виды применения профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг, iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия. В другом варианте осуществления изобретение предоставляет виды применения профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия.
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены виды применения профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства iRNA изобретения при получении лекарственного средства для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия. В одном варианте осуществления в настоящем изобретении предоставлены виды применения профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг средства iRNA изобретения при получении лекарственного средства для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия. В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предоставлены виды применения профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг средства iRNA изобретения при получении лекарственного средства для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилия.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены виды применения терапевтически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, средства iRNA изобретения для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1. В одном варианте осуществления в настоящем изобретении предоставлены виды применения терапевтически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг, средства iRNA изобретения для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1. В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предоставлены виды применения терапевтически эффективной дозы, например, фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг, средства iRNA изобретения для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1.
В еще одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены применение средства iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения, нацеленного на ген Serpinc1, или фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективную дозу, например, фиксированную дозу, составляющую от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, средства iRNA, нацеленного на ген Serpinc1, при получении лекарственного средства для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как субъект, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию. В одном варианте осуществления в настоящем изобретении предоставлены применение средства iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения, нацеленной на ген Serpinc1, или фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективную дозу, например, фиксированную дозу, составляющую приблизительно 50 мг, средства iRNA, нацеленного на ген Serpinc1, при получении лекарственного средства для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как субъект, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию. В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предоставлены применение средства iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения, нацеленного на ген Serpinc1, или фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективную дозу, например, фиксированную дозу, составляющую приблизительно 80 мг, средства iRNA, нацеленного на ген Serpinc1, при получении лекарственного средства для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как субъект, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию.
В некоторых вариантах осуществления изобретения например, когда средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, такое средство вводят в фиксированной дозе, составляющей от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, например, в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 25 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 50 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 80 мг; или в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 100 мг. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
Соответственно, в одном аспекте изобретение предоставляет способы предотвращения по меньшей мере одного симптома у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию. Способы предусматривают введение субъекту профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу (например, фармацевтическая композиция, содержащая средство RNAi), тем самым предотвращая по меньшей мере один симптом у субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1, например, расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию, которые включают введение субъекту, например, человеку, терапевтически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу или фармацевтическая композиция, содержащая средство iRNA нацеленный на ген Serpinc1, тем самым осуществляя лечение субъекта, имеющего расстройство, которому могло бы помочь снижение экспрессии Serpinc1. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
В другом аспекте изобретение предоставляет виды применения профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилии. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предоставлены виды применения профилактически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, при получении лекарственного средства для предотвращения по меньшей мере одного симптома субъекта, страдающего от расстройства, которому могло бы помочь уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилии. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
В другом аспекте в настоящем изобретении предоставлены виды применения терапевтически эффективной дозы, например, фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
В еще одном аспекте в настоящем изобретении предоставлены применение средства iRNA, например, двухцепочечной РНК изобретения, нацеленного на ген Serpinc1, или фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективную дозу, например, фиксированную дозу, составляющую от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (RNAi), содержащего смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, при получении лекарственного средства для лечения субъекта, например, субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, такого как субъект, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
Способы и виды применения изобретения включают введение композиции, описанной в данном документе, так что экспрессия гена-мишени Serpinc1 снижена, например, в течение приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 или приблизительно 80 дней. В одном варианте осуществления экспрессия гена-мишени Serpinc1 снижена в течение продолжительного срока, например, по меньшей мере приблизительно семи дней или более, например, приблизительно одной недели, двух недель, трех недель, приблизительно четырех недель, приблизительно 5 недель, приблизительно 6 недель, приблизительно 2 месяцев, приблизительно квартала или дольше.
Уменьшение экспрессии гена можно оценить любыми способами, известными в данной области. Например, уменьшение экспрессии можно определить посредством определения уровня экспрессии мРНК Serpinc1 с использованием способов, общепринятых для специалистов в данной области, например, нозерн-блоттинга, количественной ПЦР в реальном времени, посредством определения уровня белка Serpinc1, используя способы, общепринятые для специалистов в данной области, такие как вестерн-блоттинг, иммунологические методики, и/или посредством определения биологической активности Serpinc1, таким как влияние на одну или более молекул, ассоциированных с клеточным механизмом свертывания крови (или в условиях in vivo самого свертывания крови). В одном варианте осуществления время выработки тромбина, время образования сгустка и/или время свертывания определяют для оценки экспрессии Serpinc1, используя, например, тромбоэластометрический анализ цельной крови ROTEM®.
Введение двухцепочечной РНК в соответствии со способами и видами применения изобретения могут привести к уменьшению степени тяжести, признаков, симптомов и/или маркеров таких заболеваний или расстройств у пациента с заболеванием, ассоциированным с Serpinc1. В данном контексте «уменьшением» обозначают статистически значимое снижение такого уровня. Уменьшение может быть, например, по меньшей мере приблизительно на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или приблизительно на 100%.
Эффективность лечения или предотвращения заболевания можно оценить, например, измеряя прогрессирование заболевания, ремиссию заболевания, степень тяжести симптомов, частоту кровотечений, уменьшение боли, качество жизни, дозу лекарственного средства, требуемого для поддержания лечебного эффекта, уровня маркеров заболевания или любого другого измеряемого параметра, соответствующего данному заболеванию, подлежащего лечению или предназначенного для предотвращения. В компетенцию специалиста в данной области входит осуществление мониторинга эффективности лечения или предотвращения, измеряя любой из таких параметров или любую комбинацию параметров. Например, эффективность лечения расстройства, сопровождающегося кровоточивостью, можно оценить, например, посредством периодического мониторинга уровней тромбина:антитромбина. Сравнение более поздних показаний с первичными показаниями предоставляет врачу указание на то, является ли лечение эффективным. В возможность специалиста в данной области входит мониторинг эффективности лечения или предотвращения, измеряя любой из таких параметров или любую комбинацию параметров. В связи с введением iRNA, нацеленной на Serpinc1, или его фармацевтической композиции, «эффективное против» расстройства, сопровождающегося кровоточивостью, указывает на то, что введение клинически подходящим образом приводит к благоприятному эффекту, по меньшей мере, для статистически значимой части пациентов, такому как улучшение симптомов, лечения, уменьшение заболевания, продление жизни, улучшение качества жизни или другие эффекты, которые в целом признаны позитивными врачами, знакомыми с лечением расстройств, сопровождающихся кровоточивостью, и связанными с ними причинами.
Лечебный или профилактический эффект очевидны, когда имеется статистически значимое улучшение одного или нескольких параметров состояния заболевания или неспособность ухудшения или развития симптомов, когда их ожидали в противном случае. В качестве примера, об эффективном лечении может свидетельствовать благоприятное изменение, составляющее по меньшей мере 10% измеряемого параметра заболевания, а предпочтительно по меньшей мере 20%, 30%, 40%, 50% или более. Об эффективности данного лекарственного препарата iRNA или готовой формы такого лекарственного препарата также можно судить, используя экспериментальную животную модель для данного заболевания, как известно в данной области. При использовании экспериментальной животной модели эффективность лечения очевидна, когда наблюдается статистически значимое уменьшение маркера или симптома.
В качестве альтернативы, эффективность может определяться уменьшением степени тяжести заболевания, которое определяет специалист в области диагностики на основе клинически приемлемой шкалы оценки тяжести заболевания. Любое положительное изменение, приводящее, например, к уменьшению степени тяжести заболевания, измеренного с использованием соответствующей шкалы, представляет адекватное лечение с использованием iRNA или готовой формы iRNA, согласно настоящему изобретению.
iRNA (или фармацевтическую композицию, содержащую iRNA) можно вводить субъекту приблизительно один раз в неделю, приблизительно два раза в месяц, приблизительно каждые шесть недель, приблизительно каждые 2 месяца или каждые три месяца.
Двухнитевое средство iRNA можно вводить субъекту в виде одной или более доз. Например, двухнитевое средство iRNA можно вводить субъекту в виде месячной дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг. В качестве альтернативы, двухнитевое средство iRNA можно вводить субъекту в виде фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi, содержащее смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, вводят субъекту в виде месячной дозы от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 0,250 мг/кг, например, приблизительно 0,225 мг/кг.
В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi, содержащее смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, вводят субъекту в виде месячной дозы, составляющей т приблизительно 0,425 мг/кг до приблизительно 0,475 мг/кг, например, приблизительно 0,450 мг/кг.
В другом варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi, содержащее смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, вводят субъекту в виде месячной дозы от приблизительно 0,875 мг/кг до приблизительно 0,925 мг/кг, например, приблизительно 0,900 мг/кг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi, содержащее смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, вводят субъекту в виде месячной дозы от приблизительно 1,775 мг/кг до приблизительно 1,825, мг/кг, например, приблизительно 1,800 мг/кг.
В одном варианте осуществления средство двухцепочечной RNAi, содержащее смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, вводят субъекту в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 25 до приблизительно 100 мг, например, приблизительно 25 мг, 50 мг, 80 мг, или 100 мг. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
Введение можно повторять, например, регулярно, например, ежемесячно, в течение одного месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев или дольше. После первоначальной схемы лечения лечение можно проводить менее часто. Например, после ежемесячного введения в течение трех месяцев введение можно повторять один раз в квартал, в течение года или дольше.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления средство RNAi вводят в режиме дозирования, который включает «фазу загрузки» близко расположенных введений, за которой может следовать «поддерживающая фаза», при которой средство RNAi вводят с более длинными интервалами.
Режим дозирования загрузки и/или поддерживающий режим дозирования необязательно можно повторить в течение один или более повторений. Количество повторений от достижения желаемого эффекта, например, подавления гена Serpinc1 и/или достижения терапевтического или профилактического эффекта, например, увеличения свертывания крови, уменьшения времени образования сгустка и/или уменьшения время свертывания.
Введение iRNA может снизить уровни Serpinc1, например, в клетке, ткани, крови, моче или другом компартменте пациента, по меньшей мере, приблизительно на 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или по меньшей мере приблизительно 99% или более.
IRNA можно вводить с помощью внутривенной инфузии в течение периода времени, например, в течение периода 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или приблизительно 25 минут.
Перед введением всей дозы iRNA пациентам можно ввести меньшую дозу, такую как 5% инфузию, и контролировать неблагоприятные эффекты, такие как аллергическая реакция. В другом примере можно проводить мониторинг пациента на нежелательные иммуностимулирующие эффекты, такие как повышенный уровень цитокинов (например, TNF-альфа или INF-альфа).
Благодаря ингибирующему действию на экспрессию Serpinc1 композиция в соответствии с изобретением или полученная из нее фармацевтическая композиция могут повысить качество жизни.
iRNA изобретения можно вводить в «голой» форме или в виде «свободной iRNA». Голую iRNA вводят в отсутствие фармацевтической композиции. Голая iRNA может находиться в подходящем буферном растворе. Буферный раствор может содержать ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). pH и осмолярность буферного раствора, содержащего iRNA, можно регулировать так, чтобы он был подходящим для введения субъекту.
В качестве альтернативы, iRNA изобретения можно вводить в виде фармацевтической композиции, такой как липосомальная готовая форма двухцепочечной РНК.
Субъектами, на которых уменьшение и/или подавление экспрессии гена Serpinc1 окажет благотворное воздействие, являются субъекты, имеющие расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, или приобретенное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, согласно настоящему изобретению. В одном варианте осуществления субъект, имеющий врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, имеет гемофилию, например, гемофилию A, B, или C. В одном варианте осуществления субъект, имеющий врожденное расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилию, является субъектом с ингибиторами (субъект который стал невосприимчивым к заместительным факторам свертывания). В одном варианте осуществления субъект с ингибитором имеет гемофилию A. В другом варианте осуществления субъект с ингибитором имеет гемофилию B. В другом варианте осуществления субъект с ингибитором имеет гемофилию C. Лечение субъекта, на которого уменьшение и/или подавление экспрессии гена Serpinc1 окажет благотворное воздействие, включает терапевтическое (например, по требованию, например, при кровотечении у субъекта (спонтанное кровотечение или кровотечение в результате травмы) и неспособности к образованию сгустка) и профилактическое (например, у субъекта нет кровотечения и/или он подвергается хирургическому вмешательству) лечение.
Изобретение дополнительно предоставляет способы и виды применения для применения iRNA или его фармацевтической композиции, например, для лечения субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, например, субъекта, имеющего расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, в комбинации с другими фармацевтическими средствами и/или другим терапевтическими способами, например, с известными фармацевтическими средствами и/или известными терапевтическими способами, такими как, например, задействованные в настоящее время для лечения этих расстройств.
Например, В некоторых вариантах осуществления iRNA. Нацеливающий Serpinc1, вводят в комбинации, например, со средством, пригодным для лечения расстройства, сопровождающегося кровоточивостью, как описано в другом месте данного документа. Например, дополнительные терапевтические средства и терапевтические способы, пригодные для лечения субъекта, которому могло бы принести пользу уменьшение и/или подавление экспрессии Serpinc1, например, субъекта, имеющего расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, включают свежезамороженную плазму (FFP); рекомбинантный FVIIa; рекомбинантный FIX; концентраты FXI; вирус-инактивированные, vWF-содержащие концентраты FVIII; десенсибилизирующая терапия, которая может включать большие дозы FVIII или FIX, наряду со стероидами или внутривенным иммуноглобулином (IVIG) и циклофосфамидом; плазмаферез в сочетании с иммуносупрессией и инфузией FVIII или FIX, с антифибринолитической терапией или без нее; стимуляция иммунной толерантности (ITI) с иммуносупрессивной терапией (например, циклофосфамид, преднизон и/или анти-CD20) или без нее; десмопрессин ацетат [DDAVP]; антифибринолитики, такие как аминокапроновая кислота и транексамовая кислота; концентрат факторов активированного протромбинового комплекса (PCC); антигемофильные средства; кортикостероиды; иммунодепрессанты и эстрогены.
iRNA и дополнительный терапевтический средство и/или лечение можно вводить в одно и то же время и/или в одной и той же комбинации, например, парентерально, или дополнительный терапевтический средство можно вводить в виде части отдельной композиции или в разное время и/или другим способом, известным в данной области или описанным в данном документе.
В одном варианте осуществления в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, страдающего от расстройства, сопровождающееся кровоточивостью, например, гемофилии, путем подкожного введения субъекту соединения AD-57213 (Смысловая нить: 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13) и антисмысловая нить: 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь) в дозе, составляющей от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 1,800 мг/кг, например, месячной дозе, составляющей от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 0,250 мг/кг; от приблизительно 0,425 мг/кг до приблизительно 0,475 мг/кг; от приблизительно 0,875 мг/кг до приблизительно 0,925 мг/кг; или от приблизительно 1,775 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг.
В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предоставлены способы лечения субъекта, страдающего от расстройства, сопровождающегося кровоточивостью, например, гемофилии, путем подкожного введения субъекту соединения AD-57213 (Смысловая нить: 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13) и антисмысловая нить: 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь) в фиксированной дозе, составляющей от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, например, фиксированной дозе, составляющей приблизительно 25 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 80 мг или приблизительно 100 мг. В одном варианте осуществления фиксированная доза составляет 50 мг. В другом варианте осуществления фиксированная доза составляет 80 мг.
III. iRNA для применения в способах изобретения
В данном документе описаны способы применения усовершенствованных средств двухцепочечной RNAi, которые ингибируют экспрессию гена Serpinc1 в клетке, например, в клетке субъекта, например, млекопитающего, такого как человек, имеющего ассоциированное с Serpinc1 расстройство, например, нарушение свертываемости, например, гемофилию.
Соответственно, изобретение предоставляет средства двухцепочечной RNAi с химическими модификациями, способными ингибировать экспрессию гена-мишени (т.е., гена Serpinc1) in vivo. В некоторых аспектах изобретения по существу все нуклеотиды iRNA изобретения являются модифицированными. В других вариантах осуществления изобретения все нуклеотиды iRNA изобретения являются модифицированными. iRNA изобретения, в которых «по существу все нуклеотиды являются модифицированными», модифицированы в значительной степени, но не целиком и могут содержать не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 немодифицированных нуклеотидов.
Средство RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить. Каждая нить средства RNAi может варьировать от 12-30 нуклеотидов в длину. Например, каждая нить может быть между 14-30 нуклеотидов в длину, 17-30 нуклеотидов в длину, 19-30 нуклеотидов в длину, 25-30 нуклеотидов в длину, 27-30 нуклеотидов в длину, 17-23 нуклеотида в длину, 17-21 нуклеотидов в длину, 17-19 нуклеотидов в длину, 19-25 нуклеотидов в длину, 19-23 нуклеотида в длину, 19-21 нуклеотид в длину, 21-25 нуклеотидов в длину или 21-23 нуклеотида в длину.
Смысловая нить и антисмысловая нить обычно образуют дуплексную двухцепочечную РНК («dsRNA»), также называемую в данном документе «средство RNAi». Дуплексная область средства RNAi может быть 12-30 нуклеотидных пар в длину. Например, дуплексная область может быть между 14-30 нуклеотидных пар в длину, 17-30 нуклеотидных пар в длину, 27-30 нуклеотидных пар в длину, 17-23 нуклеотидных пар в длину, 17-21 нуклеотидных пар в длину, 17-19 нуклеотидных пар в длину, 19-25 нуклеотидных пар в длину, 19-23 нуклеотидных пар в длину, 19-21 нуклеотидных пар в длину, 21-25 нуклеотидных пар в длину или 21-23 нуклеотидных пар в длину. В другом примере дуплексную область выбирают из 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 и 27 нуклеотидов в длину.
В одном варианте осуществления средство RNAi может содержать одну или более «липких» концевых областей и/или блокирующих групп на 3'-конце, 5'-конце или обоих концах одной или обеих нитей. «Липкий» конец может иметь 1-6 нуклеотидов в длину, например, 2-6 нуклеотидов в длину, 1-5 нуклеотидов в длину, 2-5 нуклеотидов в длину, 1-4 нуклеотида в длину, 2-4 нуклеотида в длину, 1-3 нуклеотида в длину, 2-3 нуклеотида в длину или 1-2 нуклеотида в длину. «Липкие» концы могут быть результатом одной нити, более длинной чем другие, или результатом двух нитей одинаковой длины, являющихся ступенчатыми. «Липкий» конец может иметь несовместимость с мРНК-мишенью, или он может быть комплементарным последовательностям генов, являющихся мишенями, или может иметь другую последовательность. Первую и вторую нити также можно объединить, например, с помощью дополнительных оснований с образованием шпильки или с помощью других неосновных линкеров.
В одном варианте осуществления нуклеотиды в «липкой» концевой области средства RNAi каждый независимо может представлять собой модифицированный или немодифицированный нуклеотид, включая, без ограничения 2'-сахар модифицированный, например, 2-F, 2'-O-метил, тимидин (T), 2`-O-метоксиэтил-5-метилуридин (Teo), 2'-O-метоксиэтиладенозин (Aeo), 2'-O-метоксиэтил-5-метилцитидин (m5Ceo) и любые их комбинации. Например, TT может представлять собой «липкую» концевую последовательность для каждого конца на каждой нити. «Липкий» конец может образовать несовместимость с мРНК-мишенью, или он может быть комплементарным последовательностям генов, являющихся мишенями, или может иметь другую последовательность.
5'-или 3'-«липкие» концы в смысловой нити, антисмысловой нити или в обеих нитях средства RNAi могут быть фосфорилированы. В некоторых вариантах осуществления «липкая» концевая область (области) содержат два нуклеотида, имеющих тиофосфат между двумя нуклеотидами, причем два нуклеотида могут быть одинаковыми или отличаться. В одном варианте осуществления «липкий» конец находится на 3'-конце смысловой нити, антисмысловой нити или обеих нитей. В одном варианте осуществления этот 3'-«липкий» конец находится в антисмысловой нити. В одном варианте осуществления этот 3'-«липкий» конец находится в смысловой нити.
Средство RNAi может содержать только единственный «липкий» конец, который может усилить интерференционную активность RNAi, не влияя на ее общую стабильность. Например, одноцепочечный «липкий» конец может находиться в 3'-концевой области смысловой нити или в качестве альтернативы в 3'-концевой области антисмысловой нити. RNAi также может иметь тупой конец, находящийся на 5'-конце антисмысловой нити (или 3'-конце смысловой нити) или vice versa. Как правило, антисмысловая нить RNAi имеет «липкий» конец нуклеотида на 3'-конце, а 5'-конец является тупым. Не желая связывать себя теорией, ассиметричный тупой конец на 5'-конце антисмысловой нити и 3'-«липкий» конец антисмысловой нити способствуют направлению загрузки нити в процесс RISC.
Любую из нуклеиновых кислот, представленных в изобретении, можно синтезировать и/или модифицировать способами, хорошо зарекомендованными в данной области, такими как способы, описанные в ʺCurrent protocols in nucleic acid chemistry,ʺ Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA, который включен настоящим в данный документ посредством ссылки. Модификации включают, например, концевые модификации, например, 5'-концевые модификации (фосфорилирование, конъюгация, перевернутые связи) или 3'-концевые модификации (конъюгация, ДНК нуклеотиды, перевернутые связи, и т.д.); модификации оснований, например, замену стабилизирующими основаниями, дестабилизирующими основаниями или основаниями, которые имеют пару оснований с расширенным репертуаром партнеров, удаление оснований (нуклеотидов с удаленным азотистым основанием), или конъюгированных оснований; модификации сахаров (например, в 2'-позиции или 4'-позиции) или замену сахара; и/или модификацию остова, включая модификацию или замену сложных фосфодиэфирных связей. Конкретные примеры соединений iRNA, используемых в вариантах осуществления в рамках изобретения, включают, без ограничения RNA, содержащие модифицированные остовы или без натуральных межнуклеозидных связей. RNA, имеющие модифицированные остовы, среди прочего включают RNA, которые не имеют в остове атома фосфора. Для цели этого описания и в качестве определенной ссылки на данную область модифицированные RNA, которые не имеют атома фосфора в их интернуклеозидном остове, также можно считать олигонуклеозидами. В некоторых вариантах осуществления модифицированная iRNA будет иметь атом фосфора в своем интернуклеозидном остове.
Модифицированные РНК остовы содержат, например, тиофосфаты, хиральные тиофосфаты, дитиофосфаты, фосфотрисложные эфиры, аминоалкилфосфотрисложные эфиры, метиловые и другие алкиловые фосфонаты, содержащие 3'-алкиленовые фосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включая 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотрисложные эфиры и боранофосфаты, имеющие нормальные 3'-5' связи, 2'-5'-связанные их аналоги, и аналоги, имеющие перевернутую полярность, при этом соседние пары нуклеозидных единиц связаны 3'-5' с 5'-3' или 2'-5' с 5'-2'. Также включены разные соли, смешанные соли и свободные кислые формы.
Типовые патенты США, которые излагают получение приведенных выше фосфорсодержащих связей, включают, без ограничения, патент США № 3,687,808; 4,469,863; 4,476,301; 5,023,243; 5,177,195; 5,188,897; 5,264,423; 5,276,019; 5,278,302; 5,286,717; 5,321,131; 5,399,676; 5,405,939; 5,453,496; 5,455,233; 5,466,677; 5,476,925; 5,519,126; 5,536,821; 5,541,316; 5,550,111; 5,563,253; 5,571,799; 5,587,361; 5,625,050; 6,028,188; 6,124,445; 6,160,109; 6,169,170; 6,172,209; 6, 239,265; 6,277,603; 6,326,199; 6,346,614; 6,444,423; 6,531,590; 6,534,639; 6,608,035; 6,683,167; 6,858,715; 6,867,294; 6,878,805; 7,015,315; 7,041,816; 7,273,933; 7,321,029; и US Pat RE39464, полное содержание каждого из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
Модифицированные РНК остовы, которые не содержат в себе атом фосфора, имеют остовы, которые образованы короткоцепочечными алкиловыми или циклоалкиловыми межнуклеозидным связям, смешанными гетероатомами и алкиловыми или циклоалкиловыми межнуклеозидными связями, или одной или более короткоцепочечными гетероатомными или гетероциклическими межнуклеозидными связями. Они включают связи, имеющие морфолино связи (образованные частично из сахарной части нуклеозида); силоксановые остовы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы; формацетиловые и тиоформацетиловые остовы; метиленовые формацетиловые и тиоформацетиловые остовы; алкенсодержащие остовы; сульфаматовые остовы; метилениминовые и метиленгидразиновые остовы; сульфонатовые и сульфонамидные остовы; амидные остовы; и другие имеющие смешанные составные части N, O, S и CH2.
Типовые патенты США, которые излагают получение приведенных выше олигонуклеозидов включают, без ограничения, патент США № 5,034,506; 5,166,315; 5,185,444; 5,214,134; 5,216,141; 5,235,033; 5,64,562; 5,264,564; 5,405,938; 5,434,257; 5,466,677; 5,470,967; 5,489,677; 5,541,307; 5,561,225; 5,596,086; 5,602,240; 5,608,046; 5,610,289; 5,618,704; 5,623,070; 5,663,312; 5,633,360; 5,677,437; и, 5,677,439, полное содержание каждого из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
В других вариантах осуществления для применения в iRNA предусмотрены пригодные РНК миметики, в которых как сахарная, так и интернуклеозидная связь, т.е. остов нуклеотидных единиц замещены новыми группами. Базовые единицы сохранены для гибридизации с подходящим целевым соединением нуклеиновой кислоты. Одно такое олигомерное соединение, РНК миметик, которое было показано обладающим превосходными гибридизационными свойствами, называется пептидная нуклеиновая кислота (PNA). В соединениях PNA сахарный остов РНК замещен амидосодержащим остовом, в частности аминоэтилглициновым остовом. Нуклеооснования удерживаются и связаны непосредственно или опосредованно с аза атомами азота амидной части остова. Типовые патенты США, которые излагают получение соединений PNA, включают, без ограничения, патент США № 5,539,082; 5,714,331; и 5,719,262, полное содержание каждого из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки. Дополнительные соединения PNA, пригодные для применения в iRNA изобретения, описаны, например, у Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500,
Некоторые варианты осуществления, представленные в изобретении, включают RNA с тиофосфатными остовами и олигонуклеозиды с гетероатомными остовами, и в частности --CH2--NH--CH2-, --CH2--N(CH3)--O--CH2--[известный как метиленовый (метилимино) или MMI остов], --CH2--O--N(CH3)--CH2--, --CH2--N(CH3)--N(CH3)--CH2-- и --N(CH3)--CH2--CH2--[при этом нативный сложный фосфодиэфирный остов представлен как --O--P--O--CH2--], приведенного выше патента США № 5,489,677, и амидные остовы, приведенные выше в патенте США № 5,602,240. В некоторых вариантах осуществления RNA, приведенные в данном документе, имеют структуры морфолино остова, приведенные выше в патенте США № 5,034,506.
Модифицированные RNA также могут содержать один или более замещенных фрагментов сахаров. iRNA, например, двухцепочечные РНК, приведенные в данном документе, могут содержать одно из следующего в 2'-позиции: OH; F; O-, S- или N-алкил; O-, S- или N-алкенил; O-, S-или N-алкинил; или O-алкил-O-алкил, при этом алкил, алкенил и алкинил может представлять собой замещенный или незамещенный C1-C10 алкил или C2-C10 алкенил и алкинил. Иллюстративные пригодные модификации включают O[(CH2)nO] mCH3, O(CH2).nOCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2) nCH3, O(CH2)nONH2, и O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2, причем n и m составляют от 1 до приблизительно 10. В других вариантах осуществления двухцепочечные РНК содержат одно из следующего в 2' позиции: C1-C10 низший алкил, замещенный низший алкил, алкарил, аралкил, O-алкарил или O-аралкил, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, гетероциклоалкил, гетероциклоалкарил, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенный силил, расщепляющую РНК группу, репортерную группу, интеркалятор, группу для улучшения фармакокинетических свойств iRNA или группу для улучшения фармакодинамических свойств iRNA и другие заместители, имеющие похожие свойства. В некоторых вариантах осуществления модификация включает 2'-метоксиэтокси (2'-O--CH2CH2OCH3, также известный как 2'-O-(2-метоксиэтил) или 2'-MOE) (Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78:486-504) т.е., группу алкокси-алкокси. Другой иллюстративной модификацией является 2'-диметиламинооксиэтокси, т.е., группа O(CH2)2ON(CH3)2, также известная как 2'-DMAOE, согласно примерам в данном документе ниже, и 2'-диметиламиноэтоксиэтокси (также известный в данной области как 2'-O-диметиламиноэтоксиэтил или 2'-DMAEOE), т.е., 2'-O--CH2--O--CH2--N(CH2)2.
Другие модификации включают 2'-метокси (2'-OCH3), 2'-аминопропокси (2'-OCH2CH2CH2NH2) и 2'-фтор (2'-F). Похожие модификации также можно сделать в других позициях на РНК iRNA, особенно в 3' позиции сахара на 3'-концевом нуклеотиде или в 2'-5' связанных двухцепочечных РНК и в 5' позиции 5' концевого нуклеотида. iRNA также могут иметь сахарные миметики, такие как циклобутиловые фрагменты вместо пентофуранозилового сахара. Типовые патенты США, которые излагают получение таких структур модифицированного сахара, включают, без ограничения, патент США № 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,658,873; 5,670,633; и 5,700,920, некоторые из которых имеют общего владельца с рассматриваемой в данный момент заявкой. Полное содержание каждого из изложенного выше включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
iRNA также может содержать модификации или замещения нуклеооснования (часто называемого в данной области просто «основание»). В рамках изобретения «немодифицированные» или «натуральные» нуклеооснования включают пуриновые основания аденин (A) и гуанин (G) и пиримидиновые основания тимин (T), цитозин (C) и урацил (U). Модифицированные нуклеооснования включают другие синтетические и натуральные нуклеооснования, такие как дезокси-тимин (dT), 5-метилцитозин (5-me-C), 5-гидроксиметил цитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галоурацил и цитозин, 5-пропинил урацил и цитозин, 6-азо урацил, цитозин и тимин, 5-урацил (всевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-гало, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-гало, особенно 5-бромо, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-даазааденин и 3-деазагуанин и 3-деазааденин. Дополнительные нуклеооснования включают нуклеооснования, раскрытые в патенте США № 3,687,808, нуклеооснования, раскрытые в Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008; нуклеооснования, раскрытые в The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990, нуклеооснования, раскрытые Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613, и нуклеооснования, раскрытые Sanghvi, Y S., Chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993. Некоторые из этих нуклеооснований особенно используются для повышения связывающей аффинности олигомерных соединений, представленных в изобретении. Они включают 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2, N-6 и 0-6 замещенные пурины, включая 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин. Было показано, что 5-метилцитозиновые замещения увеличивают дуплексную стабильность нуклеиновых кислот на 0,6-1,2°C (Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278), и они являются иллюстративными замещениями оснований, еще более конкретно, при комбинировании с 2'-O-метоксиэтиловыми модификациями сахаров.
Типовые патенты США, которые излагают получение некоторых приведенных выше отмеченных модифицированных нуклеооснований, а также других модифицированных нуклеооснований, включают, без ограничения, отмеченный выше патент США № 3,687,808, 4,845,205; 5,130,30; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121, 5,596,091; 5,614,617; 5,681,941; 5,750,692; 6,015,886; 6,147,200; 6,166,197; 6,222,025; 6,235,887; 6,380,368; 6,528,640; 6,639,062; 6,617,438; 7,045,610; 7,427,672; и 7,495,088, полное содержание каждого из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
РНК iRNA также может быть модифицирована, чтобы содержать один или более бициклических фрагментов сахаров. «Бициклический сахар» представляет собой фуранозильное кольцо, модифицированное за счет мостика из двух атомов. «Бициклический нуклеозид» («BNA») представляет собой нуклеозид, имеющий фрагмент сахара, содержащий мостик, соединяющий два атома углерода сахарного кольца, образуя тем самым бициклическую кольцевую систему. В некоторых вариантах осуществления мостик соединяет 4'-углерод и 2'-углерод сахарного кольца. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления средство изобретения может содержать РНК, или iRNA также можно модифицировать, чтобы она содержала одну или более заблокированных нуклеиновых кислот (LNA). Заблокированная нуклеиновая кислота представляет собой нуклеотид, имеющий модифицированный фрагмент рибозы, при этом фрагмент рибозы содержит дополнительный мостик, соединяющий 2' и 4' углерод. Другими словами, LNA представляет собой нуклеотид, содержащий бициклический фрагмент сахара, содержащий 4'-CH2-O-2' мостик. Эта структура эффективно «блокирует» рибозу в 3'-концевой структурной конформации. Было показано, что присоединение заблокированных нуклеиновых кислот к миРНК повышает стабильность миРНК в сыворотке и уменьшает ненаправленные действия (Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447; Mook, OR. et al., (2007) Mol Canc Ther 6(3):833-843; Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193).
Примеры бициклических нуклеозидов для применения в полинуклеотидах изобретения включают без ограничения нуклеозиды, содержащие мостик между 4' и 2' атомами кольца рибозы. В некоторых вариантах осуществления средства изобретения с антисмысловыми полинуклеотидами содержат один или более бициклических нуклеозидов, содержащих 4'-2' мостик. Примеры таких бициклических нуклеозидов с 4'-2' мостиком включают без ограничения 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' (также называемый «ограниченный этил» или «cEt») и 4'-CH(CH2OCH3)-O-2' (и его аналоги; см., например, патент США № 7,399,845); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' (и его аналоги; см., например, патент США № 8,278,283); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (и его аналоги; см., например, патент США № 8,278,425); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (см., например, публикацию патента США № 2004/0171570); 4'-CH2-N(R)-O-2', при этом R представляет собой H, C1-C12 алкил или защитную группу (см., например, патент США № 7,427,672); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (см., например, Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); и 4'-CH2-C(=CH2)-2' (и его аналоги; см., например, патент США № 8,278,426). Полное содержание каждого из изложенного выше включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
Дополнительные типовые патенты США и публикации патентов США, которые излагают получение нуклеотидов заблокированных нуклеиновых кислот, включают, без ограничения, следующее: патент США № 6,268,490; 6,525,191; 6,670,461; 6,770,748; 6,794,499; 6,998,484; 7,053,207; 7,034,133;7,084,125; 7,399,845; 7,427,672; 7,569,686; 7,741,457; 8,022,193; 8,030,467; 8,278,425; 8,278,426; 8,278,283; US 2008/0039618; и US 2009/0012281, полное содержание каждого из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
Может быть получен любой из вышеизложенных бициклических нуклеозидов, имеющий одну или более стереохимических конфигурций сахаров, включая, например α-L-рибофураноз и β-D-рибофураноз (см. WO 99/14226).
РНК iRNA также можно модифицировать, чтобы она содержала один или более ограниченных этилом нуклеотидов. В рамках изобретения «ограниченный этилом нуклеотид» или «cEt» представляет собой заблокированную нуклеиновую кислоту, содержащую бициклический фрагмент сахара, содержащий 4'-CH(CH3)-0-2' мостик. В одном варианте осуществления ограниченный этилом нуклеотид находится в конформации S, называемой в данном документе «S-cEt».
iRNA изобретения также может содержать один или более «конформационно ограниченных нуклеотидов» («CRN»). CRN представляют собой аналоги нуклеотидов с линкером, соединяющим C2' и C4' атомы углерода рибозы или C3 и -C5' атомы углерода рибозы. CRN запирают кольцо рибозы в устойчивую структуру и повышают аффинность гибридизации с мРНК. Линкер имеет достаточную длину для помещения кислорода в оптимальное положение для стабильности и аффинности, приводящее к меньшей деформации кольца рибозы.
Типовые публикации, которые излагают получение некоторых из приведенных выше отмеченных CRN, включают, без ограничения, публикацию патента США № 2013/0190383; и публикацию PCT WO 2013/036868, полное содержание каждой из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
Один или более нуклеотидов iRNA изобретения также может содержать замещенный гидроксиметилом нуклеотид. «Замещенный гидроксиметилом нуклеотид» представляет собой aциклический 2'-3'-секо-нуклеотид, также называемый модификация «незаблокированной нуклеиновой кислоты» («UNA»).
Типовые Публикации США, которые излагают получение UNA, включают, без ограничения, патент США № 8,314,227; и публикацию патента США № 2013/0096289; 2013/0011922; и 2011/0313020, полное содержание каждого из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
Потенциально стабилизирующие модификации на концах молекул РНК могут включать N-(ацетиламинокапроил)-4-гидроксипролинол (Hyp-C6-NHAc), N-(капроил-4-гидроксипролинол (Hyp-C6), N-(ацетил-4-гидроксипролинол (Hyp-NHAc), тимидин-2'-0-дезокситимидин (эфир), N-(аминокапроил)-4-гидроксипролинол (Hyp-C6-амино), 2-докосаноил-уридин-3''-фосфат, перевернутое основание dT(idT) и другие. Раскрытие этой модификации можно найти в публикации PCT № WO 2011/005861.
A. Модифицированные iRNA, Содержащие Мотивы изобретения
В некоторых аспектах изобретения средства двухцепочечной RNAi изобретения включают средства с химическими модификациями, которые раскрыты, например, в предварительной заявке США № 61/561,710, поданной 18 ноября 2011 года, или в PCT/US2012/065691, поданной 16 ноября 2012 года, полное содержание каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки.
Как показано в данном документе, в предварительной заявке № 61/561,710, и в PCT/US2012/065691, превосходный результат может быть получен посредством введения одного или более мотивов трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов в смысловую нить и/или антисмысловую нить средства RNAi, особенно на участке расщепления или около него. В некоторых вариантах осуществления смысловую нить и антисмысловую нить средства RNAi можно полностью модифицировать иным образом. Введение этих мотивов прерывает схему модификации, при наличии, смысловой и/или антисмысловой нити. Средство RNAi необязательно можно конъюгировать с лигандом производного GalNAc, например, на смысловой нити. Полученные в результате средства RNAi обеспечивают превосходную активность выключения генов.
Более конкретно, было неожиданно открыто, что когда смысловую нить и антисмысловую нить средства двухцепочечной RNAi модифицируют с наличием одного или более мотивов трех идентичных модификаций на трех последовательных нуклеотидах на или около участка расщепления по меньшей мере одной нити средства RNAi, значительно улучшается активность выключения генов средства RNAi.
В одном варианте осуществления средство RNAi представляет собой двусторонний блантмер из 19 нуклеотидов в длину, при этом смысловая нить содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F модификаций трех последовательных нуклеотидов в позициях 7, 8, 9 от 5' конца. Антисмысловая нить содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-O-метиловых модификаций трех последовательных нуклеотидов в позициях 11, 12, 13 от 5' конца.
В другом варианте осуществления средство RNAi представляет собой двусторонний блантмер из 20 нуклеотидов в длину, при этом смысловая нить содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F модификаций трех последовательных нуклеотидов в позициях 8, 9, 10 от 5' конца. Антисмысловая нить содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-O-метил модификаций трех последовательных нуклеотидов в позициях 11, 12, 13 от 5' конца.
В другом варианте осуществления средство RNAi представляет собой двусторонний блантмер из 21 нуклеотида в длину, при этом смысловая нить содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F модификаций трех последовательных нуклеотидов в позициях 9, 10, 11 от 5' конца. Антисмысловая нить содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-O-метил модификаций трех последовательных нуклеотидов в позициях 11, 12, 13 от 5' конца.
В одном варианте осуществления средство RNAi содержит 21 нуклеотидную смысловую нить и 23 нуклеотидную антисмысловую нить, при этом смысловая нить содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F модификаций трех последовательных нуклеотидов в позициях 9, 10, 11 от 5' конца; антисмысловая нить содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-O-метил модификаций трех последовательных нуклеотидов в позициях 11, 12, 13 от 5' конца, при этом один конец средства RNAi является тупым, тогда как другой конец содержит «липкий» конец из 2 нуклеотидов. Предпочтительно, «липкий» конец из 2 нуклеотидов находится на 3'-конце антисмысловой нити. Когда «липкий» конец из 2 нуклеотидов находится на 3'-конце антисмысловой нити, между концевыми тремя нуклеотидами могут быть две тиофосфатные межнуклеотидные связи, при этом два из трех нуклеотидов представляют собой «липкие» концевые нуклеотиды, а третий нуклеотид представляет собой парный нуклеотид рядом с «липким» концевым нуклеотидом. В одном варианте осуществления средство RNAi дополнительно имеет две тиофосфатные межнуклеотидные связи между концевыми тремя нуклеотидами на обоих 5'-концах смысловой нити и на 5'-конце антисмысловой нити. В одном варианте осуществления каждый нуклеотид в смысловой нити и антисмысловой нити средства RNAi, включая нуклеотиды, которые составляют часть мотивов, являются модифицированными нуклеотидами. В одном варианте осуществления каждый остаток независимо модифицируют 2'-O-метилом или 3'-фтором, например, в чередующемся мотиве. Необязательно, средство RNAi дополнительно содержит лиганд (предпочтительно GalNAc3).
В одном варианте осуществления средство RNAi содержит смысловую и антисмысловую нити, при этом средство RNAi содержит первую нить, имеющую длину, которая составляет по меньшей мере 25, а самое большее 29 нуклеотидов, и вторую нить, имеющую длину, которая составляет самое большее 30 нуклеотидов по меньшей мере с одним мотивов из трех 2'-O-метил модификаций трех последовательных нуклеотидов в позиции 11, 12, 13 от 5' конца; при этом 3'-конец первой нити и 5'-конец второй нити образуют тупой конец, а вторая нить на 1-4 нуклеотида длиннее на своем 3' конце, чем первая нить, при этом дуплексная область, которая составляет по меньшей мере 25 нуклеотидов в длину, и вторая нить является достаточно комплементарными целевой мРНК вдоль длины второй нити по меньшей мере из 19 нуклеотидов для уменьшения экспрессии гена-мишени, когда средство RNAi вводят в клетку млекопитающего, и при этом расщепление дайсера средством RNAi предпочтительно приводит к миРНК, содержащей 3'-конец второй нити, тем самым уменьшая экспрессию гена-мишени у млекопитающего. Необязательно, средство RNAi дополнительно содержит лиганд.
В одном варианте осуществления смысловая нить средства RNAi содержит по меньшей мере один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, причем один из мотивов возникает в смысловой нити на участке расщепления.
В одном варианте осуществления антисмысловая нить средства RNAi также может содержать по меньшей мере один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, причем один из мотивов возникает в антисмысловой нити на участке расщепления или около него.
Для средства RNAi, имеющего дуплексную область из 17-23 нуклеотидов в длину, участок расщепления антисмысловой нити обычно находится приблизительно в 10, 11 и 12 позициях от 5'-конца. Таким образом мотивы трех идентичных модификаций могут возникать в 9, 10, 11 позициях; 10, 11, 12 позициях; 11, 12, 13 позициях; 12, 13, 14 позициях; или 13, 14, 15 позициях антисмысловой нити, считая начиная с 1ого нуклеотида от 5'-конца антисмысловой нити, или, считая начиная с 1ого парного нуклеотида внутри дуплексной области от 5'-конца антисмысловой нити. Участок расщепления в антисмысловой нити также может изменяться согласно длине области дуплекса RNAi от 5'-конца.
Смысловая нить средства RNAi может содержать по меньшей мере один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов на участке расщепления нити; и антисмысловая нить может иметь по меньшей мере один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов на участке расщепления нити или около него. Когда смысловая нить и антисмысловая нить образуют двухцепочечный РНК дуплекс, смысловую нить и антисмысловую нить можно выровнять так, что один мотив из трех нуклеотидов на смысловой нити и один мотив из трех нуклеотидов на антисмысловой нити имеют перекрытие по меньшей мере из одного нуклеотида, т.е., по меньшей мере один из трех нуклеотидов мотива в смысловой нити образует пару оснований с по меньшей мере одним из трех нуклеотидов мотива в антисмысловой нити. В качестве альтернативы, перекрываться могут по меньшей мере два нуклеотида, или перекрываться могут все три нуклеотида.
В одном варианте осуществления смысловая нить средства RNAi может содержать более чем один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов. Первый мотив может возникать на участке расщепления нити или около него, а другие мотивы могут представлять собой крыльевую модификацию. Термин «крыльевая модификация» в данном документе относится к мотиву, возникающему в другой части нити, которая отделена от мотива на участке расщепления одной и той же нити или около него. Крыльевая модификация находится либо рядом с первым мотивом, либо отделена по меньшей мере одним или более нуклеотидами. Когда мотивы расположены непосредственно рядом друг с другом, то химический состав мотивов отличается друг от друга, а когда мотивы разделены одним или более нуклеотидом, то химические составы могут быть одинаковыми или отличаться. Может иметься две или более крыльевых модификации. Например, когда имеются две крыльевые модификации, каждая крыльевая модификация может возникать в одном конце относительно первого мотива, который находится на сайте расщепления или около него или на какой-либо стороне переднего мотива.
Как смысловая нить, антисмысловая нить средства RNAi может содержать более чем один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, с по меньшей мере одним из мотивов, возникающих на участке расщепления нити или около него. Эта антисмысловая нить также может содержать одну или более крыльевых модификаций, выровненных по аналогии с крыльевыми модификациями, которые могут иметься на смысловой нити.
В одном варианте осуществления крыльевая модификация на смысловой нити или антисмысловой нити средства RNAi обычно не содержит первые один или два концевых нуклеотида на 3'-конце, 5'-конце или обоих концах нити.
В другом варианте осуществления крыльевая модификация на смысловой нити или антисмысловой нити средства RNAi обычно не содержит первые один или два парных нуклеотида внутри дуплексной области на 3'-конце, 5'-конце или обоих концах нити.
Когда смысловая нить и антисмысловая нить средства RNAi каждая содержит по меньшей мере одну крыльевую модификацию, крыльевые модификации могут попадать на один и тот же конец дуплексной области, и иметь перекрытие одним, двумя или тремя нуклеотидами.
Когда смысловая нить и антисмысловая нить средства RNAi каждая содержит по меньшей мере две крыльевых модификации, смысловую нить и антисмысловую нить можно выровнять так, что две модификации каждая из одной нити попадают на один конец дуплексной области, имеющей перекрытие из одного, двух или трех нуклеотидов; две модификации каждая из одной нити попадают на другой конец дуплексной области, имеющей перекрытие из одного, двух или трех нуклеотидов; две модификации из одной нити попадают с каждой стороны переднего мотива, имеющего перекрытие из одного, двух или трех нуклеотидов в дуплексной области.
В одном варианте осуществления можно модифицировать каждый нуклеотид в смысловой нити и антисмысловой нити средства RNAi, содержащие нуклеотиды, которые составляют часть мотивов. Каждый нуклеотид можно модифицировать с однимаковой или с разными модификациями, которые могут включать одну или более альтераций одного или обоих несвязанных атомов кислорода фосфата и/или одного или более связанных атомов кислорода фосфата; альтерацию составной части сахара рибозы, например, 2' гидроксила сахара рибозы; массовую замену фрагмента фосфата «деосфо» линкерами; модификацию или замену основания природного происхождения; и замену или модификацию рибозо-фосфатного остова.
Так как нуклеиновые кислоты являются полимерами субъединиц, много модификаций возникает в позиции, которая повторяется внутри нуклеиновой кислоты, например, модификация основания или фрагмента фосфата или несвязанного O фрагмента фосфата. В некоторых случаях модификация будет возникать во всех объектных позициях в нуклеиновой кислоте, но во многих случаях нет. В качестве примера модификация может возникать только в 3' или 5' концевой позиции, может возникать только в концевой области, например, в позиции на концевом нуклеотиде или в последних 2, 3, 4, 5 или 10 нуклеотидах нити. Модификация может происходить в области двойной нити, в области одинарной нити или в обеих. Модификация может происходить только в области двойной нити РНК или может происходить только в области одинарной нити RNA. Например, модификация тиофосфата в позиции несвязанного O может происходить только на одном или обоих концах, может происходить только в концевой области, например, в позиции на концевом нуклеотиде или в последних 2, 3, 4, 5 или 10 нуклеотидах нити, или может происходить в областях двойной нити и одинарной нити, особенно на концах. 5'-конец или концы могут быть фосфорилированы.
Может быть возможно, например, повысить стабильность, включить конкретные основания в «липкие» концы или включить модифицированные нуклеотиды или нуклеотидные суррогаты на «липких» концах одинарной нити, например, на 5' или 3' «липком» конце или на обоих. Например, может быть необходимо включить пуриновые нуклеотиды в «липкие» концы. В некоторых вариантах осуществления можно модифицировать все или некоторые из оснований на 3' или 5' «липком» конце, например, с помощью модификации в рамках изобретения. Модификации могут включать, например, использование модификаций в 2' позиции сахара рибозы с помощью модификаций, которые известны в данной области, например, использование дезоксирибонуклеотидов, 2'-дезокси-2'-фтор (2'-F) или 2'-O-метил модифицированных вместо рибосахара нуклеооснования, и модификации в фосфатной группе, например, модификации тиофосфата. Надо, чтобы «липкие» концы были гомологичными с последовательностью-мишенью.
В одном варианте осуществления каждый остаток смысловой нити и антисмысловой нити независимо модифицируют LNA, HNA, CeNA, 2'-метоксиэтилом, 2'-O-метилом, 2'-O-аллилом, 2'-C-аллилом, 2'-дезокси, 2'-гидроксилом или 2'-фтором. Нити могут содержать более чем одну модификацию. В одном варианте осуществления каждый остаток смысловой нити и антисмысловой нити независимо модифицируют 2'-O-метилом или 2'-фтором.
На смысловой нити и антисмысловой нити обычно имеются по меньшей мере две разные модификации. Эти две модификации могут быть 2'-O-метил или 2'-фтор модификации или другие.
В одном варианте осуществления Na и/или Nb содержат модификации чередующейся схемы. Термин «чередующийся мотив» в рамках изобретения относится к мотиву, имеющему одну или более модификации, каждая модификация возникает на чередующихся нуклеотидах одной нити. Чередующийся нуклеотид может относиться к одному на каждые два нуклеотида или к одному на каждые три нуклеотида или в похожей схеме. Например, если A, B и C каждый представляет один тип модификации нуклеотида, чередующимся мотивом может быть «ABABABABABAB…», «AABBAABBAABB…», «AABAABAABAAB…», «AAABAAABAAAB…», «AAABBBAAABBB…» или «ABCABCABCABC…» и т.д.
Тип модификаций, содержащихся в чередующемся мотиве, может быть одинаковым или отличаться. Например, если A, B, C, D каждый представляет на нуклеотиде модификацию одного типа, чередующаяся схема, т.е., модификации на каждом другом нуклеотиде, могут быть одинаковыми, но каждую смысловую нить или антисмысловую нить можно выбирать из нескольких возможностей модификаций внутри чередующегося мотива, таких как «ABABAB…», «ACACAC…» «BDBDBD…» или «CDCDCD…» и т.д.
В одном варианте осуществления средство RNAi изобретения содержит схему модификации для чередующегося мотива на смысловой нити относительно схемы модификации для чередующегося мотива на антисмысловой нити со сдвигом. Сдвиг может быть такой, что модифицированная группа нуклеотидов смысловой нити соответствует иным образом модифицированной группе нуклеотидов антисмысловой нити и наоборот. Например, смысловая нить при спаривании с антисмысловой нитью в двухцепочечном РНК дуплексе, чередующийся мотив в смысловой нити может начинаться с «ABABAB» от 5' 3' нити, а чередующийся мотив в антисмысловой нити может начинаться с «BABABA» от 5'-3' нити внутри дуплексной области. В качестве другого примера чередующийся мотив в смысловой нити может начинаться с «AABBAABB» от 5' 3' нити, а чередующийся мотив в антисмысловой нити может начинаться с «BBAABBAA» от 5'-3' нити внутри дуплексной области, так что происходит полный или частичный сдвиг схем модификации между смысловой нитью и антисмысловой нитью.
В одном варианте осуществления средство RNAi содержит схему чередующегося мотива 2'-O-метил модификации, а 2'-F модификация на смысловой нити первоначально имеет сдвиг относительно первоначальной схемы чередующегося мотива 2'-O-метил модификации и 2'-F модификации на антисмысловой нити, т.е., 2'-O-метил модифицированный нуклеотид на паре оснований смысловой нити с 2'-F модифицированным нуклеотидом на антисмысловой нити и vice versa. 1 позиция смысловой нити может начинаться с 2'-F модификации, а 1 позиция антисмысловой нити может начинаться с 2'-O-метил модификации.
Введение в смысловую нить и/или антисмысловую нить одного или более мотивов трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов прерывает первоначальную схему модификации, имеющуюся в смысловой нити и/или в антисмысловой нити. Это прерывание схемы модификации смысловой и/или антисмысловой нити посредством введения в смысловую и/или антисмысловую нить одного или более мотивов трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов неожиданно усиливает активность выключения генов для гена-мишени.
В одном варианте осуществления, когда мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов вводят в любую из нитей, модификация нуклеотида рядом с мотивом представляет собой иную модификацию, чем модификация мотива. Например, часть последовательности, содержащей мотив, составляет «…NaYYYNb…», причем «Y» представляет модификацию мотива трех идентичных модификаций на трех последовательных нуклеотидах, и «Na» и «Nb» представляет модификацию нуклеотида рядом с мотивом «YYY», которая отличается от модификации Y, и причем Na и Nb могут быть одинаковыми или различными модификациями. Альтернативно, Na и/или Nb может иметься или отсутствовать, когда имеется крыльевая модификация.
Средство RNAi может дополнительно содержать по меньшей мере одну тиофосфатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь. Модификация тиофосфатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи может происходить на любой нуклеотидной смысловой нити или антисмысловой нити или обеих нитях в любой позиции нити. Например, модификация межнуклеотидной связи может происходить на каждом нуклеотиде на смысловой нити и/или антисмысловой нити; каждая модификация межнуклеотидной связи может происходить в чередующейся схеме на смысловой нити и/или антисмысловой нити; или смысловая нить или антисмысловая нить может содержать обе модификации межнуклеотидной связи в чередующейся схеме. Чередующаяся схема модификации межнуклеотидной связи на смысловой нити может быть одинаковой или отличаться от антисмысловой нити, а чередующаяся схема модификации межнуклеотидной связи на смысловой нити может иметь сдвиг относительно чередующейся схемы модификации межнуклеотидной связи на антисмысловой нити.
В одном варианте осуществления RNAi содержит модификация межнуклеотидной связи тиофосфата или метилфосфоната в «липкой» концевой области. Например, «липкая» концевая область может содержать два нуклеотида, имеющие тиофосфатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь между двумя нуклеотидами. Модификации межнуклеотидной связи также можно сделать для связи «липких» концевых нуклеотидов с концевыми парными нуклеотидами внутри дуплексной области. Например, по меньшей мере 2, 3, 4 или все «липкие» концевые нуклеотиды могут быть связаны через тиофосфатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь, и необязательно, могут иметься дополнительные тиофосфатные или метилфосфонатные межнуклеотидные связи, связывающие «липкий» концевой нуклеотид с парным нуклеотидом, который находится рядом с «липким» концевым нуклеотидом. Например, может быть по меньшей мере две тиофосфатные межнуклеотидные связи между концевыми тремя нуклеотидами, в которых два из трех нуклеотидов представляют собой «липкие» концевые нуклеотиды, а третий представляет собой парный нуклеотид рядом с «липким» концевым нуклеотидом. Эти три концевые нуклеотиды могут быть на 3'-конце антисмысловой нити, 3'-конце смысловой нити, 5'-конце антисмысловой нити и/или 5'-конце антисмысловой нити.
В одном варианте осуществления «липкий» конец из 2 нуклеотидов находится на 3'-конце антисмысловой нити, и между концевыми тремя нуклеотидами имеется две тиофосфатные межнуклеотидные связи, при этом два из трех нуклеотидов представляют собой «липкие» концевые нуклеотиды, а третий нуклеотид представляет собой парный нуклеотид рядом с «липким» концевым нуклеотидом. Необязательно, средство RNAi может дополнительно иметь две тиофосфатные межнуклеотидные связи между концевыми тремя нуклеотидами на обоих 5'-концах смысловой нити и на 5'-конце антисмысловой нити.
В одном варианте осуществления средство RNAi имеет несовместимость (несовместимости) с мишенью, внутри дуплекса, или их комбинации. «Несовместимостью» может быть неканоническое спаривание оснований или отличающееся от канонического спаривание нуклеотидов. Несовместимость может происходить в «липкой» концевой области или дуплексной области. Пару оснований можно ранжировать на основе их способности содействовать диссоциации или плавлению (например, при свободной энергии ассоциации или диссоциации конкретного спаривания, самый простой подход состоит в том, чтобы исследовать пары на основе индивидуальных пар, хотя также можно использовать следующих соседей или похожий анализ). С точки зрения содействия диссоциации: A:U предпочтительнее чем G:C; G:U предпочтительнее чем G:C; и I:C предпочтительнее чем G:C (I=инозин). Ошибочные нуклеотиды, например, неканонического или отличающегося от канонического спаривания (как описано в другом месте в данном документе) предпочтительнее, чем канонические (A:T, A:U, G:C) спаривания; и спаривания, которые содержат универсальное основание, предпочтительнее, чем канонические спаривания. «универсальное основание» представляет собой основание, которое демонстрирует способность заменять любое из четырех нормальных оснований (G, C, A и U) без существенной дестабилизации взаимодействий соседних пар оснований или нарушения ожидаемой функциональной биохимической полезности модифицированного олигонуклеотида. Неограничивающие примеры универсальных оснований включают 2'-дезоксиинозин (гипоксантин дезоксинуклеотид) или его производные, аналоги нитроазола и гидрофобные ароматические основания без водородных связей.
В одном варианте осуществления средство RNAi содержит по меньшей мере одно из первых 1, 2, 3, 4 или 5 пар оснований внутри дуплексных областей от 5'-конца антисмысловой нити независимо выбираютной из группы: A:U, G:U, I:C, и ошибочно спаренных пары, например, неканонические или отличающиеся от канонических спаривания или спаривания, которые содержат универсальное основание, способствующее диссоциации антисмысловой нити на 5'-конце дуплекса.
В одном варианте осуществления нуклеотид в 1 позиции внутри дуплексной области от 5'-конца в антисмысловой нити выбирают из группы, состоящей из A, dA, dU, U и dT. В качестве альтернативы, по меньшей мере одно из первых 1, 2 или 3 пары оснований внутри дуплексной области от 5'-конца антисмысловой нити представляет собой пару оснований AU. Например, первая пара оснований внутри дуплексной области от 5'-конца антисмысловой нити представляет собой пару оснований AU.
В другом варианте осуществления нуклеотидом на 3'-конце смысловой нити является дезокси-тимин (dT). В другом варианте осуществления нуклеотидом на 3'-конце антисмысловой нити является дезокси-тимин (dT). В одном варианте осуществления имеется короткая последовательность дезокси-тимин нуклеотидов, например, два dT нуклеотида на 3'-конце смысловой и/или антисмысловой нити.
В одном варианте осуществления последовательность смысловой нити может быть представлена формулой (I):
5' np-Na-(X X X )i-Nb-Y Y Y -Nb-(Z Z Z )j-Na-nq 3' (I)
при этом:
i и j каждый независимо составляет 0 или 1;
p и q каждый независимо составляет 0-6;
каждый Na независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 модифицированных нуклеотидов, каждая последовательность содержит по меньшей мере два разных модифицированных нуклеотида;
каждый Nb независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 модифицированных нуклеотидов;
каждый np и nq независимо представляет «липкий» концевой нуклеотид;
при этом Nb и Y не имеют одинаковую модификацию; и
XXX, YYY и ZZZ каждый независимо представляет один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов. Предпочтительно YYY представляет собой все 2'-F модифицированные нуклеотиды.
В одном варианте осуществления Na и/или Nb содержат модификации чередующейся схемы.
В одном варианте осуществления мотив YYY возникает на участке расщепления смысловой нити или около него. Например, когда средство RNAi имеет дуплексную область из 17-23 нуклеотидов в длину, мотив YYY может возникать на участке расщепления или поблизости от него (например: может возникать в позициях 6, 7, 8, 7, 8, 9, 8, 9, 10, 9, 10, 11, 10, 11, 12 или 11, 12, 13) смысловой нити, начиная подсчет с 1го нуклеотида от 5'-конца; или необязательно начиная подсчет с 1го парного нуклеотида внутри дуплексной области от 5'-конца.
В одном варианте осуществления i составляет 1, а j составляет 0, или i составляет 0, а j составляет 1, или как i, так и j составляют 1. Вследствие этого смысловая нить может быть представлена следующими формулами:
5' np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Ib);
5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq 3' (Ic); или
5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Id).
Когда смысловая нить представлена формулой (Ib), Nb представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na независимо может представлять собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Когда смысловая нить представлена в виде формулы (Ic), Nb представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na может независимо представлять олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Когда смысловая нить представлена в виде формулы (Id), каждый Nb независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Предпочтительно, Nb составляет 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Каждый Na может независимо представлять олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Каждый из X, Y и Z может быть одинаковым или отличаться друг от друга.
В других вариантах осуществления i составляет 0, а j составляет 0, а смысловая нить может быть представлена формулой:
5' np-Na-YYY-Na-nq 3' (Ia).
Когда смысловая нить представлена формулой (Ia), каждый Na независимо может представлять собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
В одном варианте осуществления антипоследовательность смысловой нити RNAi может быть представлена формулой (II):
5' nq'-Na'-(Z'Z'Z')k-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-(X'X'X')l-N'a-np' 3' (II)
при этом:
k и l каждый независимо составляет 0 или 1;
p' и q' каждый независимо составляет 0-6;
каждый Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 модифицированных нуклеотидов, каждая последовательность содержит по меньшей мере два разных модифицированных нуклеотида;
каждый Nb' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 модифицированных нуклеотидов;
каждый np' и nq' независимо представляет «липкий» концевой нуклеотид;
при этом Nb' и Y' не имеют одинаковой модификации;
а
X'X'X', Y'Y'Y' и Z'Z'Z' каждый независимо представляют один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов.
В одном варианте осуществления Na' и/или Nb' содержат модификации чередующейся схемы.
Мотив Y'Y'Y' возникает на участке расщепления антисмысловой нити или около него. Например, когда средство RNAi имеет дуплексную область из 17-23 нуклеотидов в длину, мотив Y'Y'Y' может возникать в позициях 9, 10, 11;10, 11, 12; 11, 12, 13; 12, 13, 14; или 13, 14, 15 антисмысловой нити, начиная подсчет с 1го нуклеотида, от 5'-конца; или необязательно, начиная подсчет на 1ом парном нуклеотиде внутри дуплексной области, от 5'-конца. Предпочтительно, мотив Y'Y'Y' возникает в позициях 11, 12, 13.
В одном варианте осуществления Y'Y'Y' мотив представляет собой все 2'-OMe модифицированные нуклеотиды.
В одном варианте осуществления k составляет 1 и l составляет 0, или k составляет 0, а l составляет 1, или и k и l составляют 1.
Антисмысловая нить может вследствие этого быть представлена следующими формулами:
5' nq'-Na'-Z'Z'Z'-Nb'-Y'Y'Y'-Na'-np' 3' (IIb);
5' nq'-Na'-Y'Y'Y'-Nb'-X'X'X'-np' 3' (IIc); или
5' nq'-Na'-Z'Z'Z'-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-X'X'X'-Na'-np' 3' (IId).
Когда антисмысловая нить представлена формулой (IIb), Nb' представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Когда антисмысловая нить представлена в виде формулы (IIc), Nb' представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Когда антисмысловая нить представлена в виде формулы (IId), каждый Nb' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов. Предпочтительно, Nb составляет 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
В других вариантах осуществления k составляет 0, а l составляет 0, а антисмысловая нить может быть представлена формулой:
5' np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'-nq' 3' (Ia).
Когда антисмысловая нить представлена в виде формулы (IIa), каждый Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Каждый из X', Y' и Z' может быть одинаковым или отличаться друг от друга.
Каждый нуклеотид смысловой нити и антисмысловой нити может быть независимо модифицирован LNA, HNA, CeNA, 2'-метоксиэтилом, 2'-O-метилом, 2'-O-аллилом, 2'-C-аллилом, 2'-гидроксилом или 2'-фтором. Например, каждый нуклеотид смысловой нити и антисмысловой нити независимо модифицируют 2'-O-метилом или 2'-фтором. Каждый X, Y, Z, X', Y' и Z', в частности, может представлять 2'-O-метил модификацию или 2'-фтор модификацию.
В одном варианте осуществления смысловая нить средства RNAi может содержать YYY мотив, возникающий в 9, 10 и 11 позициях нити, когда дуплексная область составляет 21 нуклеотид, начиная подсчет с 1го нуклеотида от 5'-конца, или необязательно, начиная подсчет с 1го парного нуклеотида внутри дуплексной области, от 5'-конца; и Y представляет 2'-F модификацию. Смысловая нить может дополнительно содержать XXX мотив или ZZZ мотивы в виде крыльевых модификаций на противоположном конце дуплексной области; и XXX и ZZZ каждый независимо представляет 2'-OMe модификацию или 2'-F модификацию.
В одном варианте осуществления антисмысловая нить может содержать Y'Y'Y' мотив, возникающий в позициях 11, 12, 13 нити, начиная подсчет с 1го нуклеотида от 5'-конца, или необязательно, начиная подсчет на 1ом парном нуклеотиде внутри дуплексной области от 5'-конца; и Y' представляет 2'-O-метил модификацию. Антисмысловая нить может дополнительно содержать X'X'X' мотив или Z'Z'Z' мотивы в виде крыльевых модификаций на противоположном конце дуплексной области; и X'X'X' и Z'Z'Z' каждый независимо представляет 2'-OMe модификацию или 2'-F модификацию.
Смысловая нить, представленная любой одной из приведенных выше формул (Ia), (Ib), (Ic) и (Id), образует дуплекс с антисмысловой нитью, представленной любой одной из формул (IIa), (IIb), (IIc) и (IId), соответственно.
Соответственно, средства RNAi для применения в способах изобретения могут содержать смысловую нить и антисмысловую нить, причем каждая нить имеет 14-30 нуклеотидов, дуплекс RNAi представлен формулой (III):
смысловая: 5' np -Na-(X X X)i -Nb-Y Y Y -Nb -(Z Z Z)j-Na-nq 3'
антисмысловая: 3' np '-Na '-(X'X'X')k-Nb '-Y'Y'Y'-Nb '-(Z'Z'Z')l-Na '-nq ' 5'
(III)
при этом:
i, j, k и l каждый независимо составляет 0 или 1;
p, p', q и q' каждый независимо составляет 0-6;
каждый Na и Na ' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 модифицированных нуклеотидов, каждая последовательность содержит по меньшей мере два разных модифицированных нуклеотида;
каждый Nb и Nb ' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 модифицированных нуклеотидов;
при этом
каждый np', np, nq' и nq, каждый из которых может иметься или не иметься, независимо представляет «липкий» концевой нуклеотид; а
XXX, YYY, ZZZ, X'X'X', Y'Y'Y' и Z'Z'Z', каждый независимо представляет один мотив трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов.
В одном варианте осуществления i составляет 0, а j составляет 0; или i составляет 1, а j составляет 0; или i составляет 0, а j составляет 1; или и i и j составляют 0; или и i и j составляют 1. В другом варианте осуществления k составляет 0, а l составляет 0; или k составляет 1, а l составляет 0; k составляет 0, а l составляет 1; или и k и l составляют 0; или и k и l составляют 1.
Иллюстративные комбинации смысловой нити и антисмысловой нити, образующие дуплекс RNAi, содержат формулы ниже:
5' np-Na -Y Y Y -Na-nq 3'
3' np '-Na '-Y'Y'Y' -Na 'nq ' 5'
(IIIa)
5' np -Na -Y Y Y -Nb -Z Z Z -Na-nq 3'
3' np '-Na '-Y'Y'Y'-Nb '-Z'Z'Z'-Na 'nq ' 5'
(IIIb)
5' np-Na-X X X -Nb -Y Y Y-Na-nq 3'
3' np '-Na '-X'X'X'-Nb '-Y'Y'Y'-Na '-nq ' 5'
(IIIc)
5' np -Na -X X X -Nb-Y Y Y -Nb-Z Z Z -Na-nq 3'
3' np '-Na '-X'X'X'-Nb '-Y'Y'Y'-Nb '-Z'Z'Z'-Na-nq ' 5'
(IIId)
5'-Na -Y Y Y -Na-3'
3' np '-Na '-Y'Y'Y' -Na ' 5'
(IIIe)
Когда средство RNAi представлено формулой (IIIa), каждый Na независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Когда средство RNAi представлено формулой (IIIb), каждый Nb независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 1-10, 1-7, 1-5 или 1-4 модифицированных нуклеотида. Каждый Na независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Когда средство RNAi представлено в виде формулы (IIIc), каждый Nb, Nb' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Когда средство RNAi представлено в виде формулы (IIId), каждый Nb, Nb' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na, Na ' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов. Каждый из Na, Na', Nb и Nb ' независимо содержит модификации чередующейся схемы.
Когда средство RNAi представлено в виде формулы (IIId), каждый Nb, Nb' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na, Na ' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов. Каждый из Na, Na', Nb и Nb ' независимо содержит модификации чередующейся схемы.
Когда средство RNAi представлено в виде формулы (IIIe), каждый Na и Na' независимо представляет олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными или их комбинациями, причем каждая последовательность содержит по меньшей мере два разных модифицированных нуклеотида.
Каждый из X, Y и Z в формулах (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId) и (IIIe) может быть одинаковым или отличаться друг от друга.
Когда средство RNAi представлено формулой (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId) и (IIIe), по меньшей мере один из Y нуклеотидов может образовать пару оснований с одним из Y' нуклеотидов. В качестве альтернативы, по меньшей мере два из Y нуклеотидов образуют пары оснований с соответствующими Y' нуклеотидами; или все три Y нуклеотида все образуют пары оснований с соответствующими Y' нуклеотидами.
Когда средство RNAi представлено формулой (IIIb) или (IIId), по меньшей мере один из Z нуклеотидов может образовать пару оснований с одним из Z' нуклеотидов. В качестве альтернативы, по меньшей мере два из Z нуклеотидов образуют пары оснований с соответствующими Z' нуклеотидами; или все три Z нуклеотидов все образуют пары оснований с соответствующими Z' нуклеотидами.
Когда средство RNAi представлено в виде формулы (IIIc) или (IIId), по меньшей мере один из X нуклеотидов может образовать пару оснований с одним из X' нуклеотидов. В качестве альтернативы, по меньшей мере два из X нуклеотидов образуют пары оснований с соответствующими X' нуклеотидами; или все три X нуклеотида все образуют пары оснований с соответствующими X' нуклеотидами.
В одном варианте осуществления модификация Y нуклеотида иная чем модификация Y' нуклеотида, модификация Z нуклеотида иная чем модификация Z' нуклеотида и/или модификация X нуклеотида иная чем модификация X' нуклеотида.
В одном варианте осуществления, когда средство RNAi представлено формулой (IIId), модификации Na представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации. В другом варианте осуществления, когда средство RNAi представлено формулой (IIId), модификации Na представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации, и np' >0, а по меньшей мере один np' связан с соседним нуклеотидом посредством тиофосфатной связи. В другом варианте осуществления, когда средство RNAi представлено формулой (IIId), модификации Na представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации, np' >0, и по меньшей мере один np' связан с соседним нуклеотидом посредством тиофосфатной связи, и смысловую нить конъюгируют с одним или более производными GalNAc, присоединенными с помощью моновалентного, бивалентного или трехвалентного разветвленного линкера. В другом варианте осуществления, когда средство RNAi представлено формулой (IIId), Na модификации представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации, np' >0, и по меньшей мере один np' связан с соседним нуклеотидом посредством тиофосфатной связи, смысловая нить содержит по меньшей мере одну тиофосфатную связь, и смысловую нить конъюгируют с одним или более производными GalNAc, присоединенными с помощью моновалентного, бивалентного или трехвалентного разветвленного линкера.
В одном варианте осуществления, когда средство RNAi представлено формулой (IIIa), Na модификации представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор модификации, np' >0, и по меньшей мере один np' связан с соседним нуклеотидом посредством тиофосфатной связи, смысловая нить содержит по меньшей мере одну тиофосфатную связь, и смысловую нить конъюгируют с одним или более производными GalNAc, присоединенными с помощью моновалентного, бивалентного или трехвалентного разветвленного линкера.
В одном варианте осуществления средство RNAi представляет собой мультимер, содержащий по меньшей мере два дуплекса, представленный формулой (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId) и (IIIe), при этом дуплексы связаны линкером. Линкер может быть расщепляемым или нерасщепляемым. Необязательно, мультимер дополнительно содержит лиганд. Каждый из дуплексов может выделять один и тот же ген или два разных гена; или каждый из дуплексов может выделять один и тот же ген на двух разных сайтах-мишенях.
В одном варианте осуществления средство RNAi представляет собой мультимер, содержащий три, четыре, пять, шесть или более дуплексов, представленных формулой (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId) и (IIIe), при этом дуплексы связаны линкером. Линкер может быть расщепляемым или нерасщепляемым. Необязательно, мультимер дополнительно содержит лиганд. Каждый из дуплексов может выделять один и тот же ген или два разных гена; или каждый из дуплексов может выделять один и тот же ген на двух разных сайтах-мишенях.
В одном варианте осуществления два средства RNAi, представленные формулой (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId) и (IIIe), соединены друг с другом на 5'-конце и на одном или обоих 3'-концах и необязательно конъюгируюты с лигандом. Каждое из средств может выделять один и тот же ген или два разных гена; или каждое из средств может выделять один и тот же ген на двух разных сайтах-мишенях.
В разных публикациях описаны мультимерные средства RNAi, которые можно использовать в способах изобретения. Такие публикации включают WO2007/091269, патент США № 7858769, WO2010/141511, WO2007/117686, WO2009/014887 и WO2011/031520, полное содержание каждого из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
В средстве RNAi, в котором содержатся конъюгации одного или более углеводных фрагментов со средством RNAi, можно оптимизировать одно или более свойств средства RNAi. Во многих случаях углеводный фрагмент будет прикреплен к модифицированной субъединице средства RNAi. Например, сахар рибоза одной или более рибонуклеотидных субъединиц средства двухцепочечного РНК может быть замещен другим фрагментом, например, неуглеводным (предпочтительно циклическим) носителем, к которому присоединен углеводный лиганд. Рибонуклеотидная субъединица, в которой сахар рибоза субъединицы был замещен таким образом, называется согласно изобретению субъединица модификации замены рибозы (RRMS). Циклическим носителем может быть карбоциклическая кольцевая система, т.е. все атомы кольца представляют собой атомы углерода, или гетероциклическая кольцевая система, т.е. один или более атомов кольца может представлять собой гетероатом, например, азот, кислород, серу. Циклическим носителем может быть моноциклическая кольцевая система, или он может содержать два или более колец, например слитые кольца. Циклический носитель может представлять собой полностью насыщенную кольцевую систему, или он может содержать один или более двойных связей.
Лиганд может быть прикреплен к полинуклеотиду посредством носителя. Носители содержат (i) по меньшей мере одну «точку прикрепления остова», предпочтительно две «точки прикрепления остова» и (ii) по меньшей мере одну «точку прикрепления связи». «Точка прикрепления остова» в рамках изобретения относится к функциональной группе, например, к гидроксильной группе, или как правило к связи, доступной для включения носителя в остов рибонуклеиновой кислоты и которая для этого подходит, например, остов, содержащий фосфат или, например, модифицированный фосфат, серу. «точка прикрепления связи» (TAP) в некоторых вариантах осуществления относится к составляющему атому кольца циклического носителя, например, к атому углерода или гетероатому (отличающемуся от атома, который предоставляет точку прикрепления остова), который соединяется с выбираютным фрагментом. Фрагментом может быть, например, углевод, например, моносахарид, дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олигосахарид и полисахарид. Необязательно, выбранный фрагмент соединяют промежуточной связью с циклическим носителем. Таким образом, циклический носитель будет часто содержать функциональную группу, например, амино группу, или как правило, обеспечивать связь, которая подходит для включения или привязки другого химического объекта, например, лиганда к составляющему кольцу.
Средства RNAi можно конъюгировать с лигандом посредством носителя, при этом носителем может быть циклическая группа или aциклическая группа; предпочтительно, циклическую группу выбирают из пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, пиперидинила, пиперазинила, [1,3]диоксолана, оксазолидинила, изоксазолидинила, морфолинила, тиазолидинила, изотиазолидинила, квиноксалинила, пиридазинонила, тетрагидрофурила и декалина; предпочтительно, aциклическую группу выбирают из серинольного остова или диэтаноламинного остова.
В некоторых конкретных вариантах осуществления средством RNAi для применения в способах изобретения является AD-57213 (смысловая нить: 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13) и антисмысловая нить: 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14), при этом A, c, g и u представляют собой A, C, G или U рибозы; a, c, g и u представляют собой A, C, G или U 2'-O-метил (2'-OMe) рибозы; Af, Cf, Gf или Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G или U; и s представляет собой тиофосфатную связь.
Эти средства могут дополнительно содержать лиганд.
Лиганды
Средства изобретения с двухнитевой РНК (двухцепочечной РНК) необязательно можно конъюгировать с одним или более лигандами. Лиганд можно прикрепить к смысловой нити, антисмысловой нити или к обеим нитям, на 3'-конце, 5'-конце или на обоих концах. Например, лиганд можно конъюгировать со смысловой нитью. В предпочтительных вариантах осуществления лиганд конъюгируют с 3'-концом смысловой нити.
В одном варианте осуществления лиганд представляет собой конъюгат углевода, такого как моносахарид. В одном варианте осуществления лигандом является N-ацетилгалактозамин (GalNAc) GalNAc или производное GalNAc. В некоторых вариантах осуществления изобретения GalNAc или производное GalNAc прикрепляют к средству iRNA изобретения посредством моновалентного линкера. В некоторых вариантах осуществления GalNAc или производное GalNAc прикрепляют к средству iRNA изобретения посредством бивалентного линкера. В других вариантах осуществления изобретения GalNAc или производное GalNAc прикрепляют к средству iRNA изобретения посредством трехвалентного линкера.
В одном варианте осуществления конъюгат углевода для применения в композициях и способах изобретения выбирают из группы, состоящей из:
В одном варианте осуществления GalNAc или производное GalNAc представляет собой GalNAc3:
В некоторых вариантах осуществления лиганд, например, лиганд GalNAc, прикреплен к 3-концу средства RNAi. В одном варианте осуществления средство RNAi конъюгируют с лигандом, например, с лигандом GalNAc, как показано в следующей схеме
где X представляет собой O или S. В одном варианте осуществления X представляет собой O.
Со средствами RNAi настоящего изобретения можно соединить большое множество соединений. Предпочтительными фрагментами являются лиганды, которые соединены, предпочтительно ковалентно, либо непосредственно, либо опосредованно посредством промежуточной связи.
В предпочтительных вариантах осуществления лиганд изменяет распределение, выделение или срок действия молекулы, в которую он включен. В предпочтительных вариантах осуществления лиганд обеспечивает улучшенную аффинность для выбранных мишеней, например, молекулы, клетки или типа клеток, пространства, рецептора, например, клеточного или органного пространства, ткани, органа или области организма, например, по сравнению с видами, у которых отсутствует такой лиганд. Лиганды, обеспечивающие улучшенную аффинность для выбранных мишеней, также называют целевые лиганды.
Некоторые лиганды могут обладать эндосомолитическими свойствами. Эндосомолитические лиганды способствуют лизису эндосомы и/или транспортировке композиции изобретения или ее компонентов из эндосомы в цитоплазму клетки. Эндосомолитическим лигандом может быть полианионный пептид или пептидомиметик, который показывает pH-зависимую мембранную активность и фузогеничность. В одном варианте осуществления эндосомолитический лиганд принимает свою активную структуру при эндосомальном pH. «Активной» структурой является та структура, в которой эндосомолитический лиганд способствует лизису эндосомы и/или транспортировке композиции изобретения или ее компонентов из эндосомы в цитоплазму клетки. Иллюстративные эндосомолитические лиганды включают GALA пептид (Subbarao et al., Biochemistry, 1987, 26: 2964-2972), EALA пептид (Vogel et al., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118: 1581-1586), и их производные (Turk et al., Biochem. Biophys. Acta, 2002, 1559: 56-68). В одном варианте осуществления эндосомолитический компонент может содержать химическую группу (например, аминокислоту), которая будет подвергаться изменению заряда или протонирования в ответ на изменение pH. Эндосомолитический компонент может быть линейным или разветвленным.
Лиганды могут улучшать транспортировку, гибридизацию и свойства специфичности, а также могут улучшать устойчивость к нуклеазе получающегося в результате натурального или модифицированного олигорибонуклеотида или полимерной молекулы, содержащей любую комбинацию мономеров в рамках изобретения и/или натуральных или модифицированных рибонуклеотидов.
Лиганды в общем могут включать терапевтические модификаторы, например, для усиления поглощения; диагностических соединений или репортерных групп, например, для мониторинга распределения; поперечно-сшивающие вещества; и обеспечивающие устойчивость к нуклеазам фрагменты. Общие примеры включают липиды, стероиды, витамины, сахара, белки, пептиды, полиамины и пептидомиметики.
Лиганды могут включать вещество природного происхождения, такое как белок (например, человеческий сывороточный альбумин (HSA), липопротеин низкой плотности (LDL), липопротеин высокой плотности (HDL) или глобулин); углевод (например, декстран, пуллулан, хитин, хитозан, инулин, циклодекстрин или гиаулороновая кислота); или липид. Лиганд также может представлять собой рекомбинантную или синтетическую молекулу, такую как синтетический полимер, например, синтетическую полиаминокислоту, олигонуклеотид (например, аптамер). Примеры полиаминокислот включают: полиаминокислота представляет собой полилизин (PLL), поли L-аспарагиновую кислоту, поли L-глутаминовую кислоту, сополимер стирола и ангидрида малеиновой кислоты, сополимер поли(L-лактид-ко-гликолид), сополимер дивинилового эфира и малеинового ангидрида, сополимер N-(2-гидроксипропил)метакриламида (HMPA), полиэтиленгликоль (PEG), поливиниловый спирт (PVA), полиуретан, поли(2-этилакриловая кислота), полимеры N-изопропилакриламиды или полифосфазин. Пример полиаминов включают: полиэтиленимин, полилизин (PLL), спермин, спермидин, полиамин, псевдопептид-полиамин, пептидомиметик полиамин, дендример полиамин, аргинин, амидин, протамин, катионный липид, катионный порфирин, четвертичная соль полиамина или альфа спиральный пептид.
Лиганды также могут содержать выделяющие группы, например, выделяющее клетку или ткань средство, например, лектин, гликопротеин, липид или белок, например, антитело, которое связывается с заданным типом клеток, таким как клетка почки. Выделяющей группой может быть тиротропин, меланотропин, лектин, гликопротеин, поверхностно-активный белок A, углевод муцина, многовалентная лактоза, многовалентная галактоза, N-ацетил-галактозамин, N-ацетил-глюкозамин многовалентная манноза, многовалентная фукоза, гликозилированные полиаминокислоты, многовалентная галактоза, трансферрин, бисфосфонат, полиглутамат, полиаспартат, липид, холистерин, стероид, желчная кислота, фолат, витамин B12, биотин, RGD пептид, RGD пептидомиметик или аптамер.
Другие примеры лигандов включают красители, интеркалирующие средства (например, акридины), перекрестносшивающие аегнты (например, псорален, митомицин C), порфирины (TPPC4, тексафирин, сапфирин), полициклические ароматические углеводороды (например, феназин, дигидрофеназин), искуственные эндонуклеазы или хелатирующее средство (например, EDTA), липофильные молекулы, например, холистерин, холевая кислота, адамантановая уксусная кислота, 1-пирен масляная кислота, дигидротестостерон, 1,3-Бис-O(гексадецил)глицерин, геранилоксигексиловая группа, гексадецилглицерин, борнеол, ментол, 1,3-пропандиол, гептадециловая группа, пальмитиновая кислота, миристиновая кислота, O3-(олеоил)литохолевая кислота, O3-(олеоил)холеновая кислота, диметокситритил или феноксазин) и пептидные конъюгаты (например, antennapedia пептид, Tat пептид), алкилирующие средства, фосфат, амино, меркапто, PEG (например, PEG-40K), MPEG, [MPEG]2, полиамино, алкил, замещенный алкил, радиомеченые маркеры, ферменты, гаптены (например, биотин), облегчающие транспортировку/абсорбцию средсва (например, аспирин, витамин E, фолиевая кислота), синтетическую рибонуклеазы (например, имидазол, бисимидазол, гистамин, кластеры имидазола, конъюгаты акридина и имидазола, Eu3+ комплексы тетраазамакроциклов), динитрофенил, HRP или AP.
Лигандами могут быть белки, например, гликопротеины или пептиды, например, молекулы, обладающие специфической аффинностью для колиганда, или антитела, например, антитело, которое связывается с заданным типом клеток, таким как раковая клетка, эндотелиальная клетка или костная клетка. Лиганды также могут включать гормоны и рецепторы гормонов. Они также могут включать непептидные виды, такие как липиды, лектины, углеводы, витамины, кофакторы, многовалентную лактозу, многовалентную галактозу, N-ацетил-галактозамин, N-ацетил-глюкозамин многовалентную маннозу, многовалентную фукозу или аптамеры. Лигандом может быть, например, липополисахарид, активатор p38 MAP киназы или активатор NF-κB.
Лигандом может быть вещество, например, лекарственное вещество, которое может увеличивать поглощение средства iRNA в клетку, например, за счет нарушения цитоскелета клетки, например, за счет нарушения микротрубочек, микрофиламентов клетки и/или промежуточных филаментов. Лекарственным веществом может быть, например, таксон, винкристин, винбластин, цитохалазин, носодазол, джаплакинолид, латрункулин A, фаллоидин, свинголид A, инданоцин или миосервин.
Лиганд может увеличивать поглощение олигонуклеотида в клетку, например, за счет активации противовоспалительного ответа. Иллюстративные лиганды, которые могут иметь такое действие, включают фактор некроза опухоли альфа (TNFальфа), интелейкин-1 бета или интерферон гамма.
В одном аспекте лиганд представляет собой липид или основанную на липиде молекулу. Такой липид или основанная на липиде молекула предпочтительно связывает белок сыворотки, например, человеческий сывороточный альбумин (HSA). HSA связывающий лиганд предусматривает распределение конъюгата в ткань-мишень, например, непочечную ткань-мишень организма. Например, тканью-мишенью может быть печень, содержащая паренхимные клетки печени. В качестве лигандов также можно использовать другие молекулы, которые могут связывать HSA. Например, можно использовать напроксен или аспирин. Липид или основанный на липиде лиганд может (a) увеличивать устойчивость к деградации конъюгата, (b) увеличивать выделение или транспортировку в мишень, клетку или клеточную мембрану, и/или (c) его можно использовать для регулировки связывания с белком сыворотки, например, HSA.
Основанный на липиде лиганд можно использовать для модулирования, например, управления связыванием конъюгата с тканью-мишенью. Например, липид или основанный на липиде лиганд, который связывается с HSA более сильно, менее вероятно будет будет выделен в почке и вследствие этого менее вероятно будет удален из организма. Липид или основанный на липиде лиганд, который связывается с HSA менее сильно, можно использовать для выделения конъюгата в почке.
В предпочтительном варианте осуществления основанный на липиде лиганд связывает HSA. Предпочтительно, он связывает HSA с достаточной аффинностью, так что конъюгат будет предпочтительно распределяться в непочечную ткань. Однако, предпочтительно чтобы аффинность была не столь сильной, чтобы связь HSA-лиганд не могла быть обратимой.
В другом предпочтительном варианте осуществления основанный на липиде лиганд связывает HSA слабо или не связывает совсем, так что конъюгат будет предпочтительно распределяться в почку. Вместо или в дополнение к основанному на липиде лиганду также можно использовать другие фрагменты, которые выделяют клетки почки.
В другом аспекте лиганд представляет собой фрагмент, например, витамин, который поглощает клетка-мишень, например, пролиферирующая клетка. Это особенно полезно для лечения расстройств, характеризующихся нежелательной клеточной пролиферацией, например, злокачественного или незлокачественного типа, например, раковые клетки. Иллюстративные витамины включают витамин A, E и K. Другие иллюстративные витамины включают витамины B, например, фолиевую кислоту, B12, рибофлавин, биотин, пиродоксал или другие витамины или питательные вещества, поглощаемые раковыми клетками. Также включены HAS, липопротеин низкой плотности (LDL) и липопротеин высокой плотности (HDL).
В другом аспекте лиганд представляет собой проникающее в клетку средство, предпочтительно спиральное проникающее в клетку средство. Предпочтительно, средство является амфипатическим. Иллюстративное средство представляет собой пептид, такое как tat или antennopedia. Если средство представляет собой пептид, он может быть модифицированным, включая пептидилмиметик, инвертомеры, непептидные или псевдопептидные связи, и использование D-аминокислот. Спиральным средством предпочтительно является альфа-спиральное средство, которое предпочтительно имеет липофильную и липофобную фазу.
Лигандом может быть пептид или пептидомиметик. Пептидомиметик (также называемый в данном документе олигопептидомиметик) представляет собой молекулу, способную складываться в определенную трехмерную конструкцию, похожую на натуральный пептид. Фрагмент пептида или пептидомиметика может иметь длину приблизительно 5-50 аминокислот, например, длину приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислот. Пептидом или пептидомиметиком может быть, например, проникающий в клетку пептид, катионный пептид, амфифатический пептид или гидрофобный пептид (например, состоящий главным образом из Tyr, Trp или Phe). Фрагментом пептида может быть дендримерный пептид, ограниченный пептид или поперечносшитый пептид. В другом альтернативном варианте фрагмент пептида может содержать гидрофобную последовательность транслокации мембраны (MTS). Иллюстративным содержащим гидрофобную MTS пептидом является RFGF, имеющий аминокислотную последовательность AAVALLPAVLLALLAP (SEQ ID NO: 9). Аналогом RFGF (например, аминокислотной последовательности AALLPVLLAAP (SEQ ID NO: 10)), содержащим гидрофобную MTS, также может быть выделяющий фрагмент. Пептидным фрагментом может быть «доставляющий» пептид, который может нести большие полярные молекулы, содержащие пептиды, олигонуклеотиды и белок поперек клеточных мембран. Например, было обнаружено, что последовательности из белка HIV Tat (GRKKRRQRRRPPQ (SEQ ID NO: 11)) и белка Drosophila Antennapedia (RQIKIWFQNRRMKWKK (SEQ ID NO: 12)) способны функционировать в качестве доставляющих пептидов. Пептид или пептидомиметик может быть закодирован случайной последовательностью ДНК, такой как пептид, идентифицированный из библиотеки фаговых дисплеев или из комбинаторной библиотеки один-шарик-одно-соединение (OBOC) (Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991). Предпочтительно пептид или пептидомиметик, привязанный к средству iRNA посредством инкопорированной мономерной единицы, представляет собой выделяющий клетку пептид, такой как аргинин-глицин-аспарагиновая кислота (RGD)-пептид, или имитатор RGD. Фрагмент пептида может варьировать в длину от приблизительно 5 аминокислот до приблизительно 40 аминокислот. Фрагменты пептида могут иметь структурную модификацию, например, для увеличения стабильности или прямых конформационных свойств. Можно использовать любую из структурных модификаций, описанных ниже. Фрагмент пептида RGD можно использовать для выделения опухолевой клетки, такой как эндотелиальная опухолевая клетка или опухолевая клетка рака молочной железы (Zitzmann et al., Cancer Res., 62:5139-43, 2002). RGD пептид может облегчать выделение средством iRNA опухолей множества других тканей, включая легкие, почку, селезенку или печень (Aoki et al., Cancer Gene Therapy 8:783-787, 2001). Предпочтительно, RGD пептид облегчит выделение почки средством iRNA. RGD пептид может быть линейным или циклическим и может быть модифицирован, например, гликозилирован или метилирован для облегчения выделения конкретных тканей. Например, гликозилированный RGD пептид может доставлять средство iRNA в опухолевую клетку, экспрессирующую αVβ3 (Haubner et al., Jour. Nucl. Med., 42:326-336, 2001). Можно использовать пептиды, которые выделяют маркеры, обогащенные в пролиферирующих клетках. Например, содержащие RGD пептиды и пептидомиметики могут выделять раковые клетки, в частности клетки, которые демонстрируют интегрин. Таким образом, можно использовать RGD пептиды, циклические пептиды, содержащие RGD, RGD пептиды, которые содержат D-аминокислоты, а также синтетические RGD имитаторы. В дополнение к RGD можно использовать другие фрагменты, которые выделяют интегрин лиганд. Как правило, такие лиганды можно использовать для управления пролиферирующими клетками и ангиогенезом. Предпочтительные конъюгаты этого типа лиганда выделяют PECAM-1, VEGF или другой раковый ген, например, раковый ген в рамках изобретения.
«Проникающий в клетку пептид» способен проникать в клетку, например, в микробную клетку, такую как клетка бактерий или грибов, или в клетку млекопитающих, такую как клетка человека. Проникающим в микробную клетку пептидом может быть, например, α-спиральный линейный пептид (например, LL-37 или Ceropin P1), содержащий дисульфидную связь пептид (например, α-дефензин, β-дефензин или бактенецин), или пептид, содержащий только одну или две доминирующие аминокислоты (например, PR-39 или индолицидин). Проникающий в клетку пептид также может содержать клеточный сигнал внутриядерной локализации (NLS). Например, проникающим в клетку пептидом может быть состоящий из двух частей амфипатический пептид, такой как MPG, который получают в результате слияния пептидного домена HIV-1 gp41 и NLS большого T антигена SV40 (Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 31:2717-2724, 2003).
В одном варианте осуществления выделяющим пептидом может быть амфипатический α-спиральный пептид. Иллюстративный амфипатический α-спиральный пептиды включают, без ограничения, цекропин, ликотоксины, парадаксины, буфорин, CPF, бомбилинподобный пептид (BLP), кателицидины, цератотоксины, S. clava пептиды, миксиновые желудочные антимикробные пептиды (HFIAP), маганинины, бревининс-2, дермазептины, меллитины, плеуроцидин, H2A пептиды, Xenopus пептиды, esculentinis-1, и caerins. Ряд факторов будут считатаься предпочтительными для поддержания целостности стабильности спирали. Например, будет использовано максимальное количество стабилизирующих спираль остатков (например, leu, ala или lys), и будет использовано минимальное количество дестабилизирующих спираль остатков (например, пролин или циклических мономерных звеньев. Кэпирующим остатком будет считаться, например Gly, который представляет собой иллюстративный N-кэпирующий остаток, и/или для стабилизации спирали для обеспечения дополнительной H-связи можно использовать C-концевое амидирование. Стабильность может обеспечить образование солевых мостиков между остатками с противоположными зарядами, разделенными позициями i ± 3, или i ± 4. Например, катионные остатки, такие как лизин, аргинин, гомоаргинин, орнитин или гистидин, могут образовать солевые мостики с анионными остатками, глутаматом или аспартатом.
Пептидные и пептидомиметические лиганды включают лиганды, имеющие пептиды природного происхождения или модифицированные, например, D или L пептиды; α, β или γ пептиды; N-метил пептиды; азапептиды; пептиды, имеющие один или более амид, т.е., пептидные связи, замещенные одной или более мочевинной, тиомочевинной, карбаматной или сульфонил мочевинной связями; или циклические пептиды.
Выделяющим лигандом может быть любой лиганд, который способен выделять специфический рецептор. Примерами являются: фолат, GalNAc, галактоза, манноза, манноза-6P, кластеры сахаров, такие как кластер GalNAc, кластер маннозы, кластер галактозы, или аптамер. Кластер представляет собой комбинацию двух или более сахарных звеньев. Выделяющие лиганды также включают лиганды рецепторов интегрина, лиганды рецепторов хемокина, трансферрин, биотин, лиганды рецепторов серотонина, PSMA, эндотелин, GCPII, соматостатин, лиганды LDL и HDL. Лиганды также могут быть основаны на нуклеиновой кислоте, например, аптамер. Аптамер может быть немодифицированным или иметь любую комбинацию модификаций согласно настоящему документу.
Средства эндосомального высвобождения включают имидазолы, поли или олигоимидазолы, PEI, пептиды, фузогенные пептиды, поликарбоксилаты, поликатионы, маскированные олиго или поли катионы или анионы, ацетали, полиацетали, кетали/поликетали, ортосложные эфиры, полимеры с маскированными или немаскированными катионными или анионными зарядами, дендримеры с маскированными или немаскированными катионными или анионными зарядами.
Стенды ФК модуляторов для фармакокинетического модулятора. ФК модуляторы включают липофилы, желчные кислоты, стероиды, аналоги фосфолипидов, пептиды, связывающие белки средства, PEG, витамины и т.д. Иллюстративные ФК модуляторы включают, без ограничения, холистерин, жирные кислоты, холевую кислоту, литохолевую кислоту, диалкилглицериды, диацилглицерид, фосфолипиды, сфинголипиды, напроксен, ибупрофен, витамин E, биотин и т.д. Также известны олигонуклеотиды, которые содержат ряд тиофосфатных связей, связывающихся с белком сыворотки, таким образом с короткими олигонуклеотидами, например, олигонуклеотидами, составляющими приблизительно 5 оснований, 10 оснований, 15 оснований или 20 оснований, включая многочисленные тиофосфатные связи в остове также подходящие для настоящего изобретения в качестве лигандов (например, в качестве модулирующих ФК лигандов).
Кроме того, аптамеры, которые связывают компоненты сыворотки (например, белки сыворотки) также подходят для настоящего изобретения в качестве модулирующих ФК лигандов.
Другие конъюгаты лигандов, подходящие для изобретения, описаны в Патентных заявках США USSN: 10/916,185, поданной 10 августа 2004 года; USSN: 10/946,873, поданной 21 сентября 2004 года; USSN: 10/833,934, поданной 3 августа 2007 года; USSN: 11/115,989 поданной 27 апреля 2005 года и USSN: 11/944,227 поданной 21 ноября 2007 года, которые включены посредством ссылки во всей полноте для всех целей.
Когда имеется два или более лигандов, все лиганды могут иметь одинаковые свойства, все могут иметь разные свойства, или некоторые лиганды могут иметь одинаковые свойства, тогда как другие могут иметь разные свойства. Например, лиганд может иметь свойства выделения, обладать эндосомолитической активностью или иметь модулирующие ФК свойства. В предпочтительном варианте осуществления все лиганды имеют разные свойства.
Лиганды можно соединять с олигонуклеотидами в разных местах, например, на 3'-конце, 5'-конце и/или во внутренней позиции. В предпочтительных вариантах осуществления лиганд прикрепляют к олигонуклеотидам посредством промежуточной связи, например, посредством носителя в рамках изобретения. Лиганд или связанный лиганд может иметься на мономере, когда мономер встроен в растущую нить. В некоторых вариантах осуществления лиганд можно встроить за счет соединения с мономером «предшественником» после встраивания мономера «предшественника» в растующую нить. Например, мономер, имеющий, например, концевую амино связь (т.е., не имеющий ассоциированного лиганда), например, TAP-(CH2)nNH2 можно встраивать в растущую олигонуклеотидную нить. В последующей операции т.е. После встраивания мономера предшественника в нить, лиганд, имеющий электрофильную группу, например, пентафторфенильный сложный эфир или альдегидную группу, можно впоследствии прикрепить к мономеру предшественнику путем соединения электрофильной группы лиганда с концевой нуклеофильной группой связи мономера предшественника.
В другом примере можно встроить мономер, обладающий химической группой, пригодной для участия в реакции клик-химии, например, азидовую или алкиновую концевую связь/линкер. В последующей операции, т.е., после встраивания мономера предшественника в нить, лиганд, имеющий комплементарную химическую группу, например, алкин или азид, можно прикрепить к мономеру предшественнику путем соединения вместе алкина и азида.
Для двухнитевых олигонуклеотидов лиганды можно прикрепить к одной или обеим нитям. В некоторых вариантах осуществления двухнитевое средство iRNA содержит лиганд, конъюгируютный со смысловой нитью. В других вариантах осуществления двухнитевое средство iRNA содержит лиганд, конъюгируютный с антисмысловой нитью.
В некоторых вариантах осуществления лиганд можно конъюгировать с нуклеооснованиями, фрагментами сахаров или интернуклеозидными связями молекул нуклеиновых кислот. Конъюгация с пуриновыми нуклеооснованиями или их производными может возникать в любой позиции, включая, эндоциклические и экзоциклические атомы. В некоторых вариантах осуществления 2-, 6-, 7-, или 8-позиции пуринового нуклеооснования прикрепляют к фрагменту конъюгату. Конъюгация с пиримидиновыми нуклеооснованиями или их производными также может происходить в любой позиции. В некоторых вариантах осуществления 2-, 5- и 6-позиции пиримидиновых нуклеооснований могут быть замещены фрагментом конъюгата. Конъюгация с фрагментами сахаров нуклеозидов может происходить в любом атоме углерода. Иллюстративные атомы углерода фрагмента сахара, которые можно прикрепить к фрагменту конъюгата, включают 2', 3' и 5' атомы углерода. 1' позиция также может быть прикреплена к фрагменту конъюгата, например, в остатке с удаленным азотистым основанием. Интернуклеозидные связи также могут нести фрагменты конъюгатов. Для фосфорсодержащих связей (например, сложных фосфодиэфиров, тиофосфата, дитиофосфата, фосфорамидата и тому подобное) фрагмент конъюгата можно прикрепить непосредственно к атому фосфора или к атому O, N или S, связанному с атомом фосфора. Для амин- или амид- содержащих интернуклеозидных связей (например, PNA), фрагмент конъюгата можно прикрепить к атому азота амина или амида или к соседнему атому углерода.
Можно использовать любой пригодный лиганд в области РНК-интерференции, хотя лиганд обычно представляет собой углевод, например, моносахарид (такой как GalNAc), дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, полисахарид.
Линкеры, которые конъюгируют лиганд с нуклеиновой кислотой, включают обсуждавшиеся выше линкеры. Например, лигандом может быть одно или более производных GalNAc (N-ацетилглукозамина), присоединенных с помощью моновалентного, бивалентного или трехвалентного разветвленным линкер.
В одном варианте осуществления двухцепочечную РНК изобретения конъюгируют с бивалентными и трехвалентными разветвленными линкерами, содержащим структуры, показанные в любой из формул (IV) -(VII):
при этом:
q2A, q2B, q3A, q3B, q4A, q4B, q5A, q5B и q5C представляет независимо для каждого случая 0-20 и при этом повторяющийся элемент может быть одинаковым или отличаться;
P2A, P2B, P3A, P3B, P4A, P4B, P5A, P5B, P5C, T2A, T2B, T3A, T3B, T4A, T4B, T4A, T5B, T5C каждый независимо отсутствует для каждого случая, CO, NH, O, S, OC(O), NHC(O), CH2, CH2NH или CH2O;
Q2A, Q2B, Q3A, Q3B, Q4A, Q4B, Q5A, Q5B, Q5C независимо отсутствуют для каждого случая, представляют собой алкилен, замещенный алкилен, при этом один или более метиленов могут быть нарушены или завершены одним или более из O, S, S(O), SO2, N(RN), C(R')=C(R''), C≡C или C(O);
R2A, R2B, R3A, R3B, R4A, R4B, R5A, R5B, R5C каждый независимо отсутствует для каждого случая, представляют собой NH, O, S, CH2, C(O)O, C(O)NH, NHCH(Ra)C(O), -C(O)-CH(Ra)-NH-, CO, CH=N-O, , , , ,или гетероциклил;
L2A, L2B, L3A, L3B, L4A, L4B, L5A, L5B и L5C представляет лиганд; т.е. Каждый независимо для каждого случая моносахарид (такой как GalNAc), дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олигосахарид или полисахарид; и
Ra представляет собой H или боковую цепь аминокислоты.
Трехвалентные конъюгирующие производные GalNAc особенно подходят для применения со средствами RNAi для ингибирования экспрессии гена-мишени, такие как производные формулы (VII):
в которой L5A, L5B и L5C представляют моносахарид, такой как производное GalNAc.
Примеры подходящих бивалентных и трехвалентных разветвленных линкерных групп, конъюгирующих производные GalNAc, включают, без ограничения, следующие соединения:
Типовые патенты США, которые излагают получение РНК конъюгатов, включают, без ограничения, патент США № 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928 и 5,688,941; 6,294,664; 6,320,017; 6,576,752; 6,783,931; 6,900,297; 7,037,646; 8,106,022, полное содержание каждого из которых включено настоящим в данный документ посредством ссылки.
Нет необходимости, чтобы все позиции в заданном соединении были однородно модифицированы, и в действительности более чем одна из вышеупомянутых модификаций может быть встроена в единственное соединение или даже в единственный нуклеозид внутри iRNA. Настоящее изобретение также включает iRNA соединения, представляющие собой химерные соединения.
«Химерные» iRNA соединения или «химеры» в контексте этого изобретения представляют собой iRNA соединения, предпочтительно двухцепочечные РНК, которые содержат две или более химически различные области, каждая из которых состоит по меньшей мере из одной мономерной единицы, т.е., нуклеотида в случае двухцепочечного РНК соединения. Эти iRNA обычно содержат по меньшей мере одну область, в которой РНК модифицирована таким образом, чтобы при повышенной устойчивости iRNA к деградации нуклеазы придавать целевой нуклеиновой кислоте повышенное клеточное поглощение и/или повышенную аффинность связывания. Дополнительная область iRNA может служить в качестве субстрата для ферментов, способных расщеплять гибриды RNA:DNA или RNA:RNA. В качестве примера, RNase H представляет собой клеточную эндонуклеазу, которая расщепляет нить РНК дуплекса RNA:DNA. Вследствие этого, активация RNase H приводит к расщеплению РНК мишени, тем самым значительно повышая эффективность iRNA подавления экспрессии гена. Следовательно, при использовании химерных двухцепочечных РНК часто можно получать сравнимые результаты с более короткими iRNA по сравнению с дезокситиофосфат двухцепочечной РНК, гибридизированной с одной и той же целевой областью. Расщепление РНК мишени можно обычно обнаружить с помощью гель-электрофореза, и если необходимо с помощью известных в данной области связанных методик гибридизации нуклеиновой кислоты.
В некоторых случаях РНК iRNA можно модифицировать с помощью нелигандной группы. В научной литературе имеется количество нелигандных молекул, конъюгируютных с iRNA для повышения активности, клеточного распределения или клеточного поглощения iRNA, и методики для проведения конъюгации. Такие нелигандные фрагменты содержат липидные фрагменты, такие как холистерин (Kubo, T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 2007, 365(1):54-61; Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553), холевая кислота (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053), тиоэфир, например, гексил-S-тритилтиол (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765), тиохолистерин (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533), алифатическая цепь, например, остатки додекандиола или ундецила (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49), фосфолипид, например, дигексадецил-rac-глицерин или триэтиламмоний 1,2-ди-O-гексадецил-rac-глицеро-3-H-фосфонат (Manoharan et al., Тетраhedron Lett., 1995, 36:3651; Shea et al., Nucl. Кислоты Res., 1990, 18:3777), полиамин или полиэтиленгликолевая цепь Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969), или адамантановая уксусная кислота (Manoharan et al., Тетраhedron Lett., 1995, 36:3651), палмитиловый фрагмент (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229) или октадециламин или гексиламино-карбонил-оксихолистериновый фрагмент (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923). Типовые патенты США, которые излагают получение таких РНК конъюгатов, были перечислены выше. Типичные протоколы конъюгации включают синтез RNA, несущих аминолинкер в одной или более позициях последовательности. Затем аминогруппу вводят в реакцию с молекулой, конъюгируютной с использованием подходящих соединяющих или активирующих реагентов. Реакцию конъюгации можно проводить либо с РНК, все еще связанной с твердой подложкой, либо после расщепления RNA в фазе раствора. Очистка конъюгата РНК с помощью HPLC обычно дает чистый конъюгат.
В некоторых вариантах осуществления средством двухцепочечной RNAi изобретения является AD-57213.
VI. Доставка iRNA изобретения
Доставка iRNA изобретения в клетку, например, в клетку субъекта, такого как субъект-человек (например, нуждающийся в этом субъект, такой как субъект, имеющий расстройство, сопровождающееся кровоточивостью), может достигаться рядом разных путей. Например, доставку можно выполнять за счет контакта клетки с iRNA изобретения либо in vitro, либо in vivo. Доставку In vivo можно выполнять непосредственно путем введения субъекту композиции, содержащей iRNA, например, двухцепочечную РНК. В качестве альтернативы, доставку In vivo можно выполнять опосредованно путем введения одного или более векторов, которые кодируют и направляют экспрессию iRNA. Эти альтернативы дополнительно обсуждаются ниже.
В общем, любой способ доставки молекулы нуклеиновой кислоты (in vitro или in vivo) может быть адаптирован для применения с iRNA изобретения (см. например, Akhtar S. and Julian RL. (1992) Trends Cell. Biol. 2(5):139-144 и WO94/02595, которые включены в данный документ посредством ссылки во всей полноте). Для доставки In vivo, факторы, которые следует учитывать для доставки молекул iRNA, включают, например, биологическую стабильность доставляемых молекул, предотвращение неспецифических действий и аккумулирование доставляемых молекул в ткани-мишени. Неспецифические действия iRNA можно свести к минимуму за счет локального введения, например, за счет прямой инъекции или имплантации в ткань или местного введения препарата. Локальное введение в место лечения делает максимальным локальную концентрацию средства, ограничивает воздействие средства на системные ткани, которые в противном случае могут повреждаться средством или которые могут разрушать средство, и обеспечивает низкую общую дозу молекул iRNA, подлежащую введению. В нескольких исследованиях было показано успешное снижение количества генных продуктов при локальном введении iRNA. Например, внутриглазная доставка двухцепочечной РНК VEGF посредством интравитреальной инъекции яванским макакам (Tolentino, MJ., et al (2004) Retina 24:132-138) и субретинальных инъекций мышам (Reich, SJ., et al (2003) Mol. Vis. 9:210-216) обе показали предотвращение неоваскуляризации в экспериментальной модели возрастной макулярной дистрофии. Кроме того, прямая внутриопухолевая инъекция двухцепочечной РНК у мышей уменьшает объем опухоли (Pille, J., et al (2005) Mol. Ther.11:267-274) и может пролонгировать выживание имеющих опухоль мышей (Kim, WJ., et al (2006) Mol. Ther. 14:343-350; Li, S., et al (2007) Mol. Ther. 15:515-523). РНК-интерференция также продемонстрировала успех локальной доставки в CNS путем прямой инъекции (Dorn, G., et al. (2004) Нуклеиновые кислоты 32:e49; Tan, PH., et al (2005) Gene Ther. 12:59-66; Makimura, H., et al (2002) BMC Neurosci. 3:18; Shishkina, GT., et al (2004) Neuroscience 129:521-528; Thakker, ER., et al (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:17270-17275; Akaneya,Y., et al (2005) J. Neurophysiol. 93:594-602) и в легкие путем интраназального введения (Howard, KA., et al (2006) Mol. Ther. 14:476-484; Zhang, X., et al (2004) J. Biol. Chem. 279:10677-10684; Bitko, V., et al (2005) Nat. Med. 11:50-55). Для введения iRNA системно для лечения заболевания РНК можно модифицировать или в качестве альтернативы доставлять с использованием системы доставки лекарственных веществ; оба способа действуют для предотвращения быстрой деградации двухцепочечной РНК посредством эндо- и экзо-нуклеазы in vivo. Модификация РНК или фармацевтического носителя также может обеспечить выделение iRNA композицией ткани-мишени и избежать нежелательных побочных явлений. iRNA молекулы можно модифицировать путем химической конъюгации с липофильными группами, такими как холистерин, для повышения клеточного поглощения и предотвращения деградации. Например, iRNA, направленную против ApoB, конъюгируютного с фрагментом липофильного холистерина, системно инъецировали мышам, что приводило к резкому снижению apoB мРНК как в печени, так и в тонкой кишке (Soutschek, J., et al (2004) Nature 432:173-178). Было показано, что конъюгация iRNA с аптамером ингибирует рост опухоли и опосредует регрессию опухоли в мышиной модели рака предстательной железы (McNamara, JO., et al (2006) Nat. Biotechnol. 24:1005-1015). В альтернативном варианте осуществления iRNA можно доставлять с использованием систем доставки лекарственных веществ, таких как наночастица, дендример, полимер, липосомы или система катионной доставки. Положительно заряженные катионные системы доставки облегчают связывание молекул iRNA (отрицательно заряженных), а также усиливают взаимодействия на отрицательно заряженных клеточных мембранах, обеспечивая эффективное поглощение iRNA клеткой. Катионные липиды, дендримеры или полимеры могут либо связываться с iRNA, либо индуцировать образование везикул или мицелл (см. например, Kim SH., et al (2008) Journal of Controlled Release 129(2):107-116), которые заключают iRNA. Образование везикул или мицелл при системном введении дополнительно предотвращает деградацию iRNA. Способы создания и введения катионных комплексов iRNA хорошо известны специалистам в данной области (см. например, Sorensen, DR., et al (2003) J. Mol. Biol 327:761-766; Verma, UN., et al (2003) Clin. Cancer Res. 9:1291-1300; Arnold, AS et al (2007) J. Hypertens. 25:197-205, которые включены в данный документ посредством ссылки во всей полноте). Некоторые неограничивающие примеры систем доставки лекарственных веществ, используемых для системной доставки iRNA, включают DOTAP (Sorensen, DR., et al (2003), supra; Verma, UN., et al (2003), supra), олигофектамин, «твердые липидные частицы нуклеиновой кислоты» (Zimmermann, TS., et al (2006) Nature 441:111-114), кардиолипин (Chien, PY., et al (2005) Cancer Gene Ther. 12:321-328; Pal, A., et al (2005) Int J. Oncol. 26:1087-1091), полиэтиленимин (Bonnet ME., et al (2008) Pharm. Res. Aug 16 Epub ahead of print; Aigner, A. (2006) J. Biomed. Biotechnol. 71659), пептиды Arg-Gly-Asp (RGD) (Liu, S. (2006) Mol. Pharm. 3:472-487), и полиамидоамины (Tomalia, DA., et al (2007) Biochem. Soc. Trans. 35:61-67; Yoo, H., et al (1999) Pharm. Res. 16:1799-1804). В некоторых вариантах осуществления iRNA образует комплекс с циклодекстрином для системного введения. Способы введение и фармацевтические композиции iRNA и циклодекстринов можно найти в патенте США № 7,427,605, который включен в данный документ посредством ссылки во всей полноте.
Вектор, кодированный iRNA изобретения
iRNA, выделяющую ген Serpinc1, можно экспрессировать из транскрипционных единиц, введенных в ДНК или РНК векторы (см., например, Couture, A, et al., TIG. (1996), 12:5-10; Skillern, A., et al., Международная публикация PCT № WO 00/22113, Conrad, Международная публикация PCT № WO 00/22114, и Conrad, патент США № 6,054,299). Экспрессия может быть временной (порядка от часов до недель) или длительной (от недель до месяцев или дольше) в зависимости от специфического используемого конструкта и типа ткани- или клетки-мишени. Эти трансгены можно вводить в виде линейного конструкта, кольцевой плазмиды или вирусного вектора, который может представлять собой интегрированный или не интегрированный вектор. Трансген также может быть сконструирован так, чтобы он мог наследоваться, как экстрахромосомная плазмида (Gassmann, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:1292).
Отдельную нить или нити iRNA можно транскрибировать с промотора на вектор экспрессии. Когда две отдельные нити необходимо экспрессировать для получения, например, двухцепочечной РНК, два отдельных вектора экспрессии можно совместно ввести (например, путем трансфекции или инфекции) в клетку-мишень. В качестве альтернативы каждую отдельную нить двухцепочечной РНК можно транскрибировать промоторами, которые оба находятся на одной и той же плазмиде экспрессии. В одном варианте осуществления двухцепочечную РНК экспрессируют в виде перевернутых повторяющихся полинуклеотидов, соединенных последовательностью полинуклеотидных линкеров, так чтобы двухцепочечная РНК имела структуру петли на стебле.
Векторами экспрессии iRNA как правило являются ДНК плазмиды или вирусные векторы. Векторы экспрессии, совместимые с эукариотическими клетками, предпочтительно векторы экспрессии, совместимые с клетками позвоночных, можно использовать для получения рекомбинантных конструктов для экспрессии iRNA согласно настоящему изобретению. Векторы экспрессии эукариотических клеток хорошо известны в данной области и доступны из ряда коммерческих источников. Обычно, предоставляют такие векторы, которые содержат удобные сайты рестрикции для введения сегмента требуемой нуклеиновой кислоты. Доставка экспрессирующих векторов iRNA может быть системной, например, путем внутривенного или внутримышечного введенияе, путем введения в клетки-мишени, эксплантироанные у пациента, с последующим повторным введение пациенту, или путем любого другого средства, которое предусматривает введение в требуемую клетку-мишень.
Плазмиды экспрессии iRNA можно трансфицировать в клетки-мишени в виде комплекса с катионными липидными носителями (например, олигофектамином) или некатионными основанными на липидах носителями (например, Transit-TKO™). В изобретении также предусматриваются многочисленные липидные трансфекции для iRNA-опосредованных резких снижений, выделяющих разные области целевой РНК в течение периода недели или более. Успешное введение векторов в клетки-хозяева можно отслеживать с использованием разных известных способов. Например, о временной трансфекции может сигнализировать репортер, такой как флуоресцентный маркер, такой как Зеленый Флуоресцентный Белок (GFP). Устойчивую трансфекцию клеток ex vivo можно обеспечить с использованием маркеров, которые снабжают трансфицированную клетку устойчивостью к специфическим окружающим факторам (например, анибиотикам и лекарственным веществам), например, устойчивостью к гигромицину B.
Вирусные векторные системы, которые можно использовать со способами и композициями в рамках изобретения, включают, без ограничения, (a) аденовирусные векторы; (b) ретровирусные векторы, содержащие без ограничения лентивирусные векторы, вирус мышиного лейкоза Молони и т.д.; (c) аденоассоциированные вирусные векторы; (d) векторы вируса простого герпеса; (e) SV 40 векторы; (f) векторы вируса полиомы; (g) векторы вируса папилломы; (h) пикорнавирусные векторы; (i) покс вирусные векторы, такие как ортопокс, например, вектор на основе вируса осповакцины или авипоксвируса, например, поксвирус канареек или оспа птиц; и (j) хелпер-зависимый или безрезультатный аденовирус. Также могут быть предпочтительными вирусы с дефектной репликацией. Разные векторы будут встраиваться или не встраиваться в клеточный геном. При необходимости конструкты могут содержать вирусные последовательности для трансфекции. В качестве альтернативы, конструкт можно встраивать в векторы, способные к эписомальной репликации, например EPV и EBV векторы. Конструктам для рекомбинантной экспрессии iRNA как правило будут требоваться регуляторные элементы, например, промоторы, энхансеры и т.д., для обеспечения экспрессии iRNA в клетки-мишени. Другие аспекты рассмотрения для векторов и конструктов дополнительно описаны ниже.
Векторы, используемые для доставки iRNA, будут содержать регуляторные элементы (промотор, энхансер и т.д.), достаточные для экспрессии iRNA в требуемой клетке или ткани-мишени. Регуляторные элементы можно выбирать, чтобы обеспечить либо конститутивную, либо регулируемую/индуцируемую экспрессию.
Экспрессия iRNA может быть точно регулируемой, например, за счет использования индуцируемой регуляторной последовательности, которая чувствительна к некоторым физиологическим регуляторам, например, к уровням циркулирующей глюкозы или гормонам (Docherty et al., 1994, FASEB J. 8:20-24). Такие индуцируемые системы экспрессии, пригодные для управления экспрессией двухцепочечной РНК в клетках или у млекопитающих включают, например, регуляцию экдизолом, эстрогеном, прогестероном, тетрациклином, химическими индукторами димеризации и изопропил-бета-D1-тиогалактопиранозидом (IPTG). Специалист в данной области будет способен выбрать подходящую регуляторную/промоторную последовательность, основанную на предполагаемом применении iRNA трансгена.
Можно использовать вирусные векторы, которые содержат последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие iRNA. Например, можно использовать ретровирусный вектор (см. Miller et al., Мет. Enzymol. 217:581-599 (1993)). Эти ретровирусные векторы содержат компоненты, необходимые для правильной упаковки вирусного генома и интеграции в клетку-хозяин ДНК. Последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие iRNA, клонируют в один или более векторов, которые облегчают доставку нуклеиновой кислоты пациенту. Более подробную информацию о ретровирусных векторах можно найти, например, в Boesen et al., Biotherapy 6:291-302 (1994), в котором описано применение ретровирусного вектора для доставки гена mdr1 в гематопоэтические стволовые клетки для того, чтобы сделать стволовые клетки более устойчивыми к химиотерапии. Другие ссылки, иллюстрирующие применение ретровирусных векторов в генной терапии: Clowes et al., J. Clin. Invest. 93:644-651 (1994); Kiem et al., Blood 83:1467-1473 (1994); Salmons and Gunzberg, Human Gene Therapy 4:129-141 (1993); and Grossman and Wilson, Curr. Opin. in Genetics и Devel. 3:110-114 (1993). Лентивирусные векторы, предусмотренные для применения, включают, например, HIV основанные векторы, описанные в патенте США № 6,143,520; 5,665,557; и 5,981,276, которые включены в данный документ посредством ссылки.
Аденовирусы также предусмотрены для применения в доставке iRNA изобретения. Аденовирусы являются особенно привлекательными наполнителями, например, для доставки генов в дыхательный эпителий. Аденовирусы в обычных условиях инфецируют дыхательный эпителий, где они вызывают среднее заболевание. Другими мишенями для основанных на аденовирусах системах доставки являются печень, центральная нервная система, эндотелиальные клетки и мышцы. Аденовирусы имеют преимущество в том, что они способны инфицировать неделящиеся клетки. Kozarsky and Wilson, Current Opinion in Genetics and Development 3:499-503 (1993) представляют обзор генной терапии, основанной на аденовирусах. Bout et al., Human Gene Therapy 5:3-10 (1994) продемонстрировал применение аденовирусных векторов для переноса генов в дыхательный эпителий резус-макак. Другие примеры применения аденовирусов в генной терапии можно найти у Rosenfeld et al., Science 252:431-434 (1991); Rosenfeld et al., Cell 68:143-155 (1992); Mastrangeli et al., J. Clin. Invest. 91:225-234 (1993); PCT Publication WO94/12649; and Wang, et al., Gene Therapy 2:775-783 (1995). У Xia H et al. (2002), Nat. Biotech. 20: 1006-1010 описаны подходящий AV вектор для экспрессии iRNA, представленный в изобретении, способ конструирования рекомбинантного AV вектора и способ доставки вектора в клетки-мишени.
Аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы также можно использовать для доставки iRNA изобретения (Walsh et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204:289-300 (1993); патент США № 5,436,146). В одном варианте осуществления iRNA можно экспрессировать в виде двух отдельных, комплементарных одноцепочечных РНК молекул из рекомбинантного AAV вектора, имеющего, например, либо U6, либо H1 промоторы РНК, или промотор цитомегаловируса (CMV). Подходящие AAV векторы для экспрессии двухцепочечной РНК, представленные в изобретении, способы конструирования рекомбинантного AV вектора и способы доставки векторов в клетки-мишени описаны у Samulski R et al. (1987), J. Virol. 61: 3096-3101; Fisher K J et al. (1996), J. Virol, 70: 520-532; Samulski R et al. (1989), J. Virol. 63: 3822-3826; патент США № 5,252,479; в патенте США № 5,139,941; в международной патентной заявке № WO 94/13788; и в международной патентной заявке № WO 93/24641, полные раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки.
Другой вирусный вектор, пригодный для доставки iRNA изобретения, представляет собой поксвирус, такой как вирус вакцины, например, ослабленная вакцина, такая как модифицированный Virus Ankara (MVA) или NYVAC, avipox, такая как оспа птиц или канареечная оспа.
Тропизм вирусных векторов можно модифицировать путем псевдотипирования векторов с белками оболочки или другими поверхностными антигенами от других вирусов или путем замещения по необходимости белков капсид разных вирусов. Например, лентивирусные векторы можно псевдотипировать поверхностными белками вируса везикулярного стоматита (VSV), бешенства, эбола, мокола и тому подобное. AAV векторы можно получить для выделения разных клеток путем конструирования векторов для экспрессии разных серотипов белка капсид; см., например, Rabinowitz J E et al. (2002), J Virol 76:791-801, полное раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки.
Фармацевтический препарат вектора может содержать вектор в приемлемом растворителе или может содержать матрикс замедленного высобождения, в который погружен наполнитель для доставки гена. В качестве альтернативы, когда из рекомбинантных клеток можно получить полный интактный вектор доставки гена, например, ретровирусные векторы, фармацевтический препарат может содержать одну или более клеток, которые продуцируют систему доставки гена.
V. Фармацевтические Композиции изобретения
В настоящем изобретении также предоставлены фармацевтические композиции и готовые формы, которые содержат iRNA изобретения. В одном варианте осуществления в данном документе предоставлены фармацевтические композиции, содержащие iRNA согласно настоящему изобретению, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтические композиции, содержащие iRNA, используют для лечения заболевания или расстройства, связанного с экспрессией или активностью гена Serpinc1, например, заболевания, ассоциированного с Serpinc1. Такие фармацевтические композиции составляют на основе режима доставки. Одним примером являются композиции, которые составляют для системного введения посредством парентеральной доставки, например, посредством подкожной (SC) или внутривенной (IV) доставки. Другим примером являются композиции, которые составляют для прямой доставки в мозговую паренхиму, например, путем инфузии в мозг, например, путем непрерывной помповой инфузии. Фармацевтические композиции изобретения можно вводить в дозировках, достаточных для подавления экспрессии гена Serpinc1.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, например, когда фармацевтическая композиция, содержащая средство двухцепочечной RNAi, включает один или более мотивов трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, включая один такой мотив на участке расщепления средства или около него, шесть тиофосфатных связей, и лиганд GalNAc, такую композицию вводят в дозе от 0,200 до приблизительно 1,825 мг/кг, от 0,200 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,400 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,400 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,400 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,100 мг/кг, или приблизительно 0,925 до приблизительно 1,000 мг/кг. Значения и промежуточные диапазоны для вышеизложенных перечисленных значений также предназначены составлять часть этого изобретения, например, средство RNAi можно вводить субъекту в дозе, составляющей приблизительно 0,015 мг/кг до приблизительно 0,45 мг/мг.
Например, средство RNAi, например, средство RNAi в фармацевтической композиции можно вводить в дозе, составляющей приблизительно 0,2 мг/кг, 0,225 мг/кг, 0,25 мг/кг, 0,275 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,325 мг/кг, 0,35 мг/кг, 0,375 мг/кг, 0,4 мг/кг, 0,425 мг/кг, 0,45 мг/кг, 0,475 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, 0,525 мг/кг, 0,55 мг/кг, 0,575 мг/кг, приблизительно 0,6 мг/кг, 0,625 мг/кг, 0,65 мг/кг, 0,675 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, 0,725 мг/кг, 0,75 мг/кг, 0,775 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, 0,925 мг/кг, 0,95 мг/кг, 0,975 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, 1,025 мг/кг, 1,05 мг/кг, 1,075 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, 1,125 мг/кг, 1,15 мг/кг, 1,175 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, 1,225 мг/кг, 1,25 мг/кг, 1,275 мг/кг, приблизительно 1.3 мг/кг, 1.325 мг/кг, 1.35 мг/кг, 1.375 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, 1,425 мг/кг, 1,45 мг/кг, 1,475 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, 1,525 мг/кг, 1,55 мг/кг, 1,575 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, 1,625 мг/кг, 1,65 мг/кг, 1,675 мг/кг, приблизительно 1,7 мг/кг, 1,725 мг/кг, 1,75 мг/кг, 1,775 мг/кг или приблизительно 1,8 мг/кг. Промежуточные значения для вышеизложенных перечисленных значений также предназначены составлять часть этого изобретения.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, например, когда средство двухцепочечной RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличаясь не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), при этом по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и при этом смысловую нить конъюгируют с лигандом, прикрепленным к 3'-концу, такое средство в фармацевтической композиции вводят в дозе, составляющей приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,825 мг/кг, от 0,200 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно от 0,200 до приблизительно 0,400 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,225 до приблизительно 0,400 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,250 до приблизительно 0,400 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,425 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,450 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,800 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,700 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,600 мг/кг, приблизительно 0,475 до приблизительно 0,500 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,875 до приблизительно 0,900 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,100 мг/кг, приблизительно 0,900 до приблизительно 1,000 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,825 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,800 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,700 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,600 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,500 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,400 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,200 мг/кг, приблизительно 0,925 до приблизительно 1,100 мг/кг или приблизительно 0,925 до приблизительно 1,000 мг/кг. Промежуточные значения и диапазоны вышеизложенных перечисленных значений также предназначены составлять часть этого изобретения, например, средство RNAi можно вводить субъекту в дозе, составляющей приблизительно 0,015 мг/кг до приблизительно 0,45 мг/кг.
Например, средство RNAi, например, средство RNAi в фармацевтической композиции, можно вводить в дозе, составляющей приблизительно 0,2 мг/кг, 0,225 мг/кг, 0,25 мг/кг, 0,275 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,325 мг/кг, 0,35 мг/кг, 0,375 мг/кг, 0,4 мг/кг, 0,425 мг/кг, 0,45 мг/кг, 0,475 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, 0,525 мг/кг, 0,55 мг/кг, 0,575 мг/кг, приблизительно 0,6 мг/кг, 0,625 мг/кг, 0,65 мг/кг, 0,675 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, 0,725 мг/кг, 0,75 мг/кг, 0,775 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, 0,925 мг/кг, 0,95 мг/кг, 0,975 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, 1,025 мг/кг, 1,05 мг/кг, 1,075 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, 1,125 мг/кг, 1,15 мг/кг, 1,175 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, 1,225 мг/кг, 1,25 мг/кг, 1,275 мг/кг, приблизительно 1.3 мг/кг, 1.325 мг/кг, 1.35 мг/кг, 1.375 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, 1,425 мг/кг, 1,45 мг/кг, 1,475 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, 1,525 мг/кг, 1,55 мг/кг, 1,575 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, 1,625 мг/кг, 1,65 мг/кг, 1,675 мг/кг, приблизительно 1,7 мг/кг, 1,725 мг/кг, 1,75 мг/кг, 1,775 мг/кг или приблизительно 1,8 мг/кг. Промежуточные значения вышеизложенных перечисленных значения также предназначены составлять часть этого изобретения.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция, содержащая средство iRNA, вводят субъекту в виде фиксированной дозы. «Фиксированная доза» (например, доза в мг) означает, что одну дозу средства iRNA используют для всех субъектов независимо от любых специфических связанных с субъектом факторов, таких как масса. В одном конкретном варианте осуществления фиксированная доза, составляющая средство iRNA изобретения, основана на заданной массе или возрасте.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию, содержащую средство iRNA, вводят в виде фиксированной дозы, составляющей между приблизительно 25 мг и приблизительно 100 мг, например, между приблизительно 25 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 70 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 60 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 50 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 50 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 80 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 100 мг, между приблизительно 60 мг и приблизительно 90 мг, между приблизительно 25 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 30 мг и приблизительно 55 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 95 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 85 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 75 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 65 мг, между приблизительно 40 мг и приблизительно 55 мг или между приблизительно 45 мг и приблизительно 95 мг.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию, содержащую средство iRNA, вводят в виде фиксированной дозы, составляющей приблизительно 25 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 65 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 85 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 95 мг или приблизительно 100 мг.
Фармацевтическую композицию, содержащую iRNA, можно вводить субъекту приблизительно один раз в месяц, приблизительно однократно каждые пять недель, приблизительно каждые шесть недель, приблизительно каждые 2 месяца или каждые три месяца.
Фармацевтическую композицию, содержащую средство iRNA, можно вводить субъекту в виде одной или более доз. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, содержащие двухнитевое средство iRNA, можно вводить субъекту в виде месячной дозы, составляющей от приблизительно 0,200 мг/кг до приблизительно 0,250 мг/кг, месячной дозы, составляющей от приблизительно 0,425 мг/кг до приблизительно 0,475 мг/кг, месячной дозы, составляющей от приблизительно 0,875 мг/кг до приблизительно 0,925 мг/кг, или в виде месячной дозы, составляющей от приблизительно 1,775 мг/кг до приблизительно 1,825 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, содержащие двухнитевое средство iRNA, можно вводить субъекту в виде фиксированной дозы от приблизительно 25 мг до приблизительно 100 мг, например, приблизительно 25 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 80 мг или приблизительно 100 мг.
Фармацевтическую композицию можно вводить путем внутривенной инфузии в течение периода времени, например, в течение 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 и 21, 22, 23, 24 или приблизительно 25 минутного периода. Введение можно повторять, например, на регулярной основе, например, раз в неделю, раз в две недели (т.е., каждые две недель), ежемесячно, каждые два месяца, каждые три месяца, каждые четыре месяца или дольше. После режима первоначального лечения лечение можно давать на менее частой основе. Например, после введения раз в неделю или раз в две недели в течение трех месяцев, введение можно повторять один раз в месяц, в течение шести месяцев или года или дольше.
Фармацевтическую композицию можно вводить один раз в день, или iRNA можно вводить в виде двух, трех или более субдоз с подходящими интервалами в течение дня или даже с использованием непрерывной инфузии или доставки посредством готовой формы с регулируемым высвобождением. В этом случае iRNA, содержащаяся в каждой субдозе, должна быть соответственно меньше для того, чтобы достигать общей суточной дозировки. Единица дозировки также может быть составлена для доставки в течение нескольких дней, например, с использованием обычной готовой формы с длительным высвобождением, которая обеспечивает длительное высвобождение iRNA в течение периода нескольких дней. Готовые формы с длительным высвобождением хорошо известны в данной области и особенно подходят для доставки средств в конкретный участок, например, их можно использовать со средствами настоящего изобретения. В этом варианте осуществления единица дозировки содержит соответствующее кратное значение суточной дозы.
В других вариантах осуществления разовая доза фармацевтических композиций может иметь длительный эффект, так что последующие дозы вводят не более чем с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 недельными интервалами. В некоторых вариантах осуществления изобретения разовую дозу фармацевтических композиций изобретения вводят один раз в месяц.
Специалисту должно быть понятно, что некоторые факторы могут влиять на дозировку и время, необходимые для эффективного лечения субъекта, включая, без ограничения степени тяжести заболевания или расстройства, предшествующее лечение, общее здоровье и/или возраст субъекта и другие имеющиеся заболевания. Кроме того, лечение субъекта терапевтически эффективным количеством композиции может включать единичное лечение или серию лечений. Оценки эффективных дозировок и периодов полувыведения in vivo для отдельных iRNA, охваченных изобретением, можно получить с использованием обычных методик или на основе тестирования in vivo с использованием подходящих животной модели, как описано в другом месте в данном документе.
В развитии генетики мышей создан ряд мышиных моделей для изучения разных человеческих заболеваний, таких как расстройство, сопровождающееся кровоточивостью, которое могло бы быть полезным в результате уменьшения экспрессии Serpinc1. Такие модели можно использовать для тестирования iRNA in vivo, а также для определения терапевтически эффективной дозы. В данной области известны пригодные мышиные модели, которые включают, например, мышиные модели Гемофилии A и мышиные модели Гемофилии B, например, у мышей, содержащих инактивирование гена фатора свертывания крови, такого как ген, описанный у Bolliger, et al. (2010) Thromb Haemost 103:1233-1238, Bi L, et al. (1995) Nat Genet 10: 119-21, Lin et al. (1997) Blood 90: 3962-6, Kundu et al. (1998) Blood 92: 168-74, Wang et al. (1997) Proc Natl Acad Sci U S A 94: 11563-6, and Jin, et al. (2004) Blood 104:1733.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения можно вводить множеством способов в зависимости от того, желательно ли местное или системное лечение и от области, подлежащей лечению. Введение может быть местным (например, с помощью трансдермального пластыря), легочным, например, с помощью ингаляции или вдыхания порошков или аэрозолей, в том числе с помощью небулайзера; внутритрахеальным, интраназальным, эпидермальным и трансдермальным, пероральным или парентеральным. Парентеральное введение включает внутривенную, внутреартериальную, подкожную, интраперитонеальную или внутримышечную инъекцию или инфузию; субдермальную, например, посредством имплантированного устройства; или интракраниального, например, путем внутрипаренхимного, интратекального или интравентрикулярного введения.
iRNA можно доставлять способом для выделения конкретной ткани, такой как печень (например, гепатоцитов печени).
Фармацевтические композиции и готовые формы для местного введения могут содержать трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, спреи, жидкости и порошки. Могут быть необходимы или желательны обычные фармацевтические носители, водные, порошковые или масляные основы, загустители и тому подобное. Также можно использовать презервативы, перчатки с нанесенным покрытием и тому подобное. Пригодные местные готовые формы включают готовые формы, в которых iRNA, представленные в изобретении, смешаны со средством местной доставки, таким как липиды, липосомы, жирные кислоты, сложные эфиры жирных кислот, стероиды, комплексообразующие средства и поверхностно-активные вещества. Местные готовые формы подробно описаны в патенте США № 6,747,014, который включен в данный документ посредством ссылки.
Дополнительные Готовые формы
Эмульсии
Композиции настоящего изобретения можно получать и составлять в виде эмульсий. Эмульсии обычно представляют собой гетерогенные системы из одной жидкости, диспергированной в другой в виде капель, обычно превышающих 0,1 мкм в диаметре (см. например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301). Эмульсии часто являются двухфазными системами, содержащими две несмешиваемые жидкие фазы тщательно перемешанные и диспергированные друг с другом. В общем, эмульсии могут представлять собой вариант либо вода-в-масле (w/o) или масло-в-воде (o/w). Когда водную фазу в итоге делят на и диспергируют в виде мельчайших капель в объемную масляную фазу, полученную в результате композицию называют эмульсия вода-в-масле (w/o). В качестве альтернативы, когда масляную фазу в итоге делят на и диспергируют в виде мельчайших капель в объемную водную фазу, полученную в результате композицию называют эмульсия масло-в-воде (o/w). Эмульсии могут содержать дополнительные компоненты в дополнение к диспергированным фазам, и активное лекарственное вещество, которое может присутсвовать в виде раствора в каждой из водной фазы, масляной фазы, либо само по себе в виде отдельной фазы. Также при необходимости в эмульсии могут иметься фармацевтические эксципиенты, такие как эмульгаторы, стабилизаторы, красители и антиоксиданты. Фармацевтическими эмульсиями также могут быть многочисленные эмульсии, которые состоят из более чем двух фаз, как, например, в случае эмульсии масло-в-воде-в-масле (o/w/o) и вода-в-масле-в-воде (w/o/w). Такие комплексные готовые формы часто обеспечивают некоторые преимущества, которые не обеспечивают простые двойные эмульсии. Многочисленные эмульсии, в которых отдельные масляные капли o/w эмульсии окружают небольшие водные капли, составляют эмульсию w/o/w. Также система масляных капель, заключенных в глобулы воды, стабилизированной в масляной непрерывной фазе, обеспечивает эмульсию o/w/o.
Эмульсии характеризуются небольшой термодинамической стабильностью или ее отсутствием. Часто, диспергированная или несплошная фаза эмульсии хорошо диспергируется во внешнюю или непрерывную фазу и сохраняется в таком виде через среднее значение эмульгаторов или вязкость готовой формы. Любая из фаз эмульсии может быть полутвердой или твердой, как в случае основ для мазей в виде эмульсии и кремов. Другое средство стабилизации эмульсии влечет за собой применение эмульгаторов, которые можно встраивать в каждую фазу эмульсии. Эмульгаторы можно широко классифицировать на четыре категории: синтетические поверхностно-активные вещества, эмульгаторы природного происхождения, абсорбирующие основания и тонко диспергированные твердые вещества (см. например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
Синтетические поверхностно-активные вещества, также известные как поверхностно-активные средства, выявили широкую применимость в составлении эмульсий и были рассмотрены в литературе (см. например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199). Поверхностно-активные вещества обычно являются амфифильными и содержат гидрофильную и гидрофобную часть. Отношение гидрофильной к гидрофобной сущности поверхностно-активного вещества назвали гидрофильный/липофильный баланс (HLB), и оно представляет собой ценный инструмент для категоризации и отбора поверхностно-активных веществ при получении готовых форм. Поверхностно-активные вещества можно классифицировать на разные классы на основании природы гидрофильной группы: неионные, анионные, катионные и амфотерные (см. например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285).
Эмульгаторы природного происхождения, используемые в готовых формах эмульсий, включают ланолин, пчелиный воск, фосфатиды, лецитин и акацию. Абсорбирующие основания обладают гидрофильными свойствами, так что они могут впитывать воду с образованием эмульсий w/o, сохраняя также свою полутвердую консистенцию, например безводный ланолин и гидрофильный вазелин. Мелко разделенные твердые вещества также используют в качестве хороших эмульгаторов особенно в комбинации с поверхностно-активными веществами и в вязких препаратах. Они содержат полярные неорганические твердые вещества, такие как гидроксиды тяжелых металлов, ненабухающие глины, такие как бентонит, аттапульгит, гекторит, каолин, монтморрилонит, коллоидный силикат алюминия и коллоидный алюмосиликат магния, пигменты и неполярные твердые вещества, такие как углерод или глицерилтристеарат.
большое множество неэмульгирующих материалов также включены в готовые формы эмульсии и вносят вклад в свойства эмульсий. Они включают жиры, масла, воски, жирные кислоты, жирные спирты, жирные сложные эфиры, увлажнители, гидрофильные коллоиды, консерванты и антиоксиданты (Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
Гидрофильные коллоиды или гидроколлоиды включают камеди природного происхождения и синтетические полимеры, такие как полисахариды (например, акация, агар, альгиновая кислота, каррагенан, гуаровая камедь, камедь карайи и трагакант), производные целлюлозы (например, карбоксиметилцеллюлозу и карбоксипропилцеллюлозу) и синтетическую полимеры (например, карбополы, эфиры целлюлозы и карбоксивиниловые полимеры). Они диспергируют или набухают в воде с образованием коллоидных растворов, которые стабилизируют эмульсии путем образования прочных пленок на поверхности раздела вокруг капель диспергированной фазы и путем повышения вязкости внешней фазы.
Поскольку эмульсии часто содержат ряд таких ингредиентов, как углеводы, белки, стеролы и фосфатиды, которые могут легко поддерживать рост микробов, эти готовые формы часто содержат консерванты. Обычно используемые консерванты, содержащиеся в готовых формах эмульсии, содержат метилпарабен, пропилпарабен, соли четвертичного аммония, бензалкония хлорид, сложные эфиры p-оксибензойной кислоты и борная кислота. Для предотвращения ухудшения готовой формы в готовые формы эмульсии также обычно добавляют антиоксиданты. Используемыми антиоксидантами могут быть поглотители свободных радикалов, такие как токоферолы, алкилгаллаты, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуен или восстанавливающие средства, такие как аскорбиновая кислота и натрия метабисульфит, и антиоксидантные синергисты, такие как лимонная кислота, винная кислота и лецитин.
Нанесение готовых форм эмульсии посредством дерматологических, пероральных и парентеральных путей и способы их получения было рассмотрено в литературе (см. например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199). Готовые формы эмульсии для пероральной доставки очень широко используют по причине легкого состава, а также с точки зрения эффективности абсорбции и биодоступности (см. например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199). Среди материалов, которые обычно вводят перорально в виде эмульсий o/w, находятся слабительные на масляно-минеральной основе, маслорастворимые витамины и высокожирные питательные препараты.
ii. Микроэмульсии
В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиции iRNA и нуклеиновые кислоты получают в виде готовых форм микроэмульсий. Микроэмульсию можно определить как систему воды, масла и амфифильного вещества, которое представляет собой единый оптически изотропный и термодинамически устойчивый жидкий раствор (см. например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245). Обычно микроэмульсии представляют собой системы, которые получают путем диспергирования сперва масла в водном поверхностно-активном растворе, а затем добавления достаточного количества четвертого компонента, как правило спирта с цепью с промежуточной длиной с образованием прозрачной системы. Вследствие этого, микроэмульсии также описаны как термодинамически устойчивые, изотропно чистые дисперсии двух несмешиваемых жидкостей, которые стабилизируют путем пленок на поверхности раздела поверхность-активных молекул (Leung and Shah, in: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215). Микроэмульсии обычно получают посредством комбинации от трех до пяти компонентов, которые содержат масло, воду, поверхностно-активное вещество, вспомогательное поверхностно-активное вещество и электролит. Относится ли микроэмульсия к типу вода-в-масле (w/o) или масло-в-воде (o/w) зависит от свойств используемого масла и поверхностно-активного вещества и от структурной и геометрической упаковки полярных головок и углеводородных хвостов поверхностно-активных молекул (Schott, in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271).
Широко изучали феноменологический подход с использованием фазовых диаграмм, и он дал специалисту в данной области всесторонние знания, как составить микроэмульсии (см. например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335). По сравнению с обычными эмульсиями микроэмульсии предлагают преимущество солюбилизации нерастворимых в воде лекарственных веществ в составе термодинамически устойчивых капель, которые спонтанно образуются.
Поверхностно-активные вещества, используемые при получении микроэмульсии, включают, без ограничения, ионные поверхностно-активные вещества, неионные поверхностно-активные вещества, Brij 96, полиоксиэтилен олеил эфиры, сложные эфиры полиглицерина и жирных кислот, тетраглицерин монолаурат (ML310), тетраглицерин моноолеат (MO310), гексаглицерин моноолеат (PO310), гексаглицерин пентаолеат (PO500), декаглицерин монокапрат (MCA750), декаглицерин моноолеат (MO750), декаглицерин секвиолеат (SO750), декаглицерин декаолеат (DAO750), отдельно или в комбинации со вспомогательными поверхностно-активными веществами. Вспомогательные поверхностно-активные вещества, обычно спирт с короткой цепью, такой как этанол, 1-пропанол и 1-бутанол, служат для увеличения межфазной текучести за счет проникновения в пленку поверхностно-активного вещества и следовательно создания неупорядоченной пленки по причине ппустого пространства, получающегося между молекулами поверхностно-активного вещества. Однако, микроэмульсии можно получать без применения вспомогательных поверхностно-активных веществ и не содержащих спирта самоэмульгирующихся микроэмульсионных систем, известных в данной области. Обычно водной фазой может быть, но без ограничения, вода, водный раствор лекарственного вещества, глицерин, PEG300, PEG400, полиглицерины, пропиленгликоли и производные этиленгликоля. Масляная фаза может содержать, но без ограничения такие материалы как Captex 300, Captex 355, Capmul MCM, сложные эфиры жирных кислот, (C8-C12) моно, ди и триглицериды со средней цепью, полиоксиэтилированные сложные эфиры глицерина и жирных кислот, жирные спирты, полигликозилированные глицериды, насыщенные полигликозилированные C8-C10 глицериды, растительные масла и силиконовое масло.
Микроэмульсии представляют особенный интерес с точки зрения солюбилизации лекарственных веществ и улучшенной абсорбции лекарственных веществ. Микроэмульсии на основе липидов (и o/w и w/o) были предложены для повышения пероральной биодоступности лекарственных веществ, содержащих пептиды (см. например, патент США № 6,191,105; 7,063,860; 7,070,802; 7,157,099; Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol., 1993, 13, 205). Микроэмульсии обеспечивают преимущества улучшенной солюбилизации лекарственных веществ, защиты лекарственных веществ от ферментного гидролиза, возможного усиления абсорбции лекарственных веществ вследствие вызванных поверхностно-активным веществом изменений текучести и проницаемости мембраны, легкости получения, легкости перорального введения по сравнению с твердыми лекарственными формами, улучшенной клинической эффективности и уменьшенной токсичности (см. например, патент США № 6,191,105; 7,063,860; 7,070,802; 7,157,099; Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138-143). Часто микроэмульсии могут образовываться спонтанно, когда их компоненты сводят вместе при внешней температуре. Это может быть особенно предпочтительно при составлении термолабильных лекарственных веществ, пептидов или iRNA. Микроэмульсии также являются эффективными в трансдермальной доставке активных компонентов как в косметических, так и в фармацевтических вариантах применения. Ожидается, что микроэмульсионные композиции и готовые формы настоящего изобретения облегчат повышенную системную абсорбцию iRNA и нуклеиновых кислот из желудочно-кишечного тракта, а также улучшат локальное клеточное поглощение iRNA и нуклеиновых кислот.
Микроэмульсии настоящего изобретения также могут содержать дополнительные компоненты и добавки, такие как сорбитанмоностеарат (Grill 3), Labrasol, и усилители проникновения для улучшения свойств готовой формы и повышения абсорбции iRNA и нуклеиновых кислот настоящего изобретения. Усилители проникновения, используемые в микроэмульсиях настоящего изобретения, можно классифицировать как относящиеся к одной из пяти больших категорий--поверхностно-активные вещества, жирные кислоты, желчные соли, комплексообразующие средства и некомплексообразующие неповерхностно-активные вещества (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). Каждый из этих классов обсуждался выше.
iii. Микрочастицы
Средство RNAi изобретения можно встраивать в частицу, например, микрочастицу. Микрочастицы можно получать путем сушки распылением, но также можно получать другими способами, включая лиофилизацию, испарение, сушку в псевдосжиженном слое, вакуумную сушку или комбинацию этих методик.
iv. Усилители проникновения
В одном варианте осуществления в настоящем изобретении используют разные усилители проникновения для осуществления эффективной доставки нуклеиновых кислот, особенно iRNA, в кожу животных. Большая часть лекарственных веществ присутствует в растворе как в ионизированной, так и в неионизированной формах. Однако, обычно только жирорастворимые или липофильные лекарственные вещества легко пересекают клеточные мембраны. Было обнаружено, что даже нелипофильные лекарственные вещества могут пересекать клеточные мембраны, если мембрану, подлежащую пересечению, обрабатывают усилителем проникновения. В дополнение к содействию диффузии нелипофильных лекарственных веществ через клеточные мембраны, усилители проникновения также усиливают проницаемость липофильных лекарственных веществ.
Усилители проникновения можно классифицировать, как относящиеся к одной из пяти широких категорий, т.е., поверхностно-активные вещества, жирные кислоты, желчная соли, комплексообразующие средства и некомплексообразующие неповерхностно-активные вещества (см. например, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92). Каждый из приведенных выше классов усилителей проникновения описан ниже более подробно.
Поверхностно-активные вещества (или «поверхностно-активные средства») представляют собой химические объекты, которые при растворении в водном растворе уменьшают поверхностное натяжение раствора или межфазное натяжение между водным раствором и другой жидкостью с улучшением в результате абсорбции iRNA через слизистую оболочку. В дополнение к желчным солям и жирным кислотам эти усилители проникновения содержат, например, лаурилсульфат натрия, полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир и полиоксиэтилен-20-цетиловый эфир) (см. например, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92); и перфторированные эмульсии, такие как FC-43. Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252).
Разные жирные кислоты и их производные, которые выступают в качестве усилителей проникновения, включают, например, олеиновую кислоту, лауриновую кислоту, каприновую кислоту (n-декановую кислоту), миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, моноолеин (1-моноолеоил-rac-глицерин), дилаурин, каприловую кислоту, арахидоновую кислоту, глицерин 1-монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, ацилкарнитины, ацилхлорины, их C1-20 алкиловые сложные эфиры (например, метил, изопропил и t-бутил) и их моно- и ди-глицериды (т.е., олеат, лаурат, капрат, миристат, пальмитат, стеарат, линолеат и т.д.) (см. например, Touitou, E., et al. Enhancement in Drug Delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654).
Физиологическая роль желчи включает облегчение дисперсии и абсорбции липидов и жирорастворимых витаминов (см. например, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Brunton, Chapter 38 in: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al. Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935). Разные натуральные желчные соли и их синтетические производные выступают в качестве усилителей проникновения. Таким образом термин «желчные соли» включает любой из компонентов желчи природного происхождения, а также любое из их синтетических производных. Пригодные желчные соли включают, например, холевую кислоту (или ее фармацевтически приемлемую натриевую соль, натрия холат), дегидрохолевую кислоту (натрия дегидрохолат), дезоксихолевую кислоту (натрия дезоксихолат), глюхолевую кислоту (натрия глюхолат), глихолевую кислоту (натрия гликохолат), гликодезоксихолевую кислоту (натрия гликодезоксихолат), таурохолевую кислоту (натрия таурохолат), тауродезоксихолевую кислоту (натрия тауродезоксихолат), хенодезоксихолевую кислоту (натрия хенодезоксихолат), урсодезоксихолевую кислоту (UDCA), натрия тауро-24,25-дигидро-фузидат (STDHF), натрия гликодигидрофузидат и полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир (POE) (см. например, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Swinyard, Chapter 39 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pages 782-783; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579-583).
Комплексообразующие средства в рамках настоящего изобретения можно определить, как соединения, которые удаляют ионы металла из раствора за счет образования с ними комплексов, в результате чего улучшается абсорбция iRNA через слизистую оболочку. Что касается их применения в настоящем изобретении в качестве усилителей проникновения, комплексообразующие средства добавляют преимущество, выступая также в качестве ингибиторов ДНКазы, поскольку большинству охарактеризованных ДНК нуклеаз для катализа требуется ион двухвалентного металла, и они таким образом ингибируются комплексообразующими средствами (Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339). Пригодные комплексообразующие средства включают без ограничения динатрия этилендиаминтетраацетат (EDTA), лимонную кислоту, салицилаты (например, натрия салицилат, 5-метоксисалицилат и гомовалинат), N-ациловые производные коллагена, лаурет-9 и N-аминоациловые производные бетадикетонов (енаминов) (см. например, Katdare, A. et al., Excipient development for pharmaceutical, biotechnology, and drug delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Buur et al., J. Control Rel., 1990, 14, 43-51).
В рамках изобретения некомплексообразующие неповерхностно-активные усиливающие проникновение соединения можно определить, как соединения, которые демонстрируют незначительную активность в качестве комплексообразующих средств или в качестве поверхностно-активных веществ, но которые тем не менее усиливают абсорбцию iRNA через алиментарную слизистую оболочку (см. например, Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33). Этот класс усилителей проникновения включает, например, ненасыщенные циклические мочевины, 1-алкил- и 1-алкенилазацикло-алконовые производные (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92); и нестероидные противовоспалительные средства, такие как диклофенак натрия, индометацин и фенилбутазон (Yamashita et al., J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621-626).
В фармацевтические и другие композиции настоящего изобретения также можно добавлять средства, которые усиливают поглощение iRNA на клеточном уровне,. Например, для повышения клеточного поглощения двухцепочечных РНК также известны катионные липиды, такие как липофектин (Junichi et al, патент США № 5,705,188), производные катионного глицерина и поликатионные молекулы, такие как полилизин (Lollo et al., заявка PCT WO 97/30731). Примеры коммерчески доступных реагентов для трансфекции среди прочего включают, например Lipofectamine™ (Invitrogen; Carlsbad, CA), Lipofectamine 2000™ (Invitrogen; Carlsbad, CA), 293fectin™ (Invitrogen; Carlsbad, CA), Cellfectin™ (Invitrogen; Carlsbad, CA), DMRIE-C™ (Invitrogen; Carlsbad, CA), FreeStyle™ MAX (Invitrogen; Carlsbad, CA), Lipofectamine™ 2000 CD (Invitrogen; Carlsbad, CA), Lipofectamine™ (Invitrogen; Carlsbad, CA), RNAiMAX (Invitrogen; Carlsbad, CA), Oligofectamine™ (Invitrogen; Carlsbad, CA), Optifect™ (Invitrogen; Carlsbad, CA), X-tremeGENE Q2 Transfection Reagent (Roche; Grenzacherstrasse, Switzerland), DOTAP Liposomal Transfection Reagent (Grenzacherstrasse, Switzerland), DOSPER Liposomal Transfection Reagent (Grenzacherstrasse, Switzerland), or Fugene (Grenzacherstrasse, Switzerland), Transfectam® Reagent (Promega; Madison, WI), TransFast™ Transfection Reagent (Promega; Madison, WI), Tfx™-20 Reagent (Promega; Madison, WI), Tfx™-50 Reagent (Promega; Madison, WI), DreamFect™ (OZ Biosciences; Marseille, France), EcoTransfect (OZ Biosciences; Marseille, France), TransPassª D1 Transfection Reagent (New England Biolabs; Ipswich, MA, USA), LyoVec™/LipoGen™ (Invitrogen; San Diego, CA, USA), PerFectin Transfection Reagent (Genlantis; San Diego, CA, USA), NeuroPORTER Transfection Reagent (Genlantis; San Diego, CA, USA), GenePORTER Transfection reagent (Genlantis; San Diego, CA, USA), GenePORTER 2 Transfection reagent (Genlantis; San Diego, CA, USA), Cytofectin Transfection Reagent (Genlantis; San Diego, CA, USA), BaculoPORTER Transfection Reagent (Genlantis; San Diego, CA, USA), TroganPORTER™ transfection Reagent (Genlantis; San Diego, CA, USA ), RiboFect (Bioline; Taunton, MA, USA), PlasFect (Bioline; Taunton, MA, USA), UniFECTOR (B-Bridge International; Mountain View, CA, USA), SureFECTOR (B-Bridge International; Mountain View, CA, USA), или HiFect™ (B-Bridge International, Mountain View, CA, USA).
Для повышения проникновения введенных нуклеиновых кислот можно использовать другие средства, включая гликоли, такие как этиленгликоль и пропиленгликоль, пирролы, такие как 2-пиррол, азоны и терпены, такие как лимонен и ментон.
v. Носители
Некоторые композиции настоящего изобретения также содержат в готовой форме соединения-носители. В рамках изобретения «соединение-носитель» или «носитель» может относиться к нуклеиновой кислоте или его аналогу, являющемуся инертным (т.е., сам по себе не обладает биологической активностью), но распознается в качестве нуклеиновой кислоты с помощью способов in vivo, которые уменьшают биодоступность нуклеиновой кислоты, имеющей биологическую активность, например, за счет разрушения биологически активной нуклеиновой кислоты или содействия ее удалению из кровотока. Совместное введение нуклеиновой кислоты и соединения-носителя, обычно с избытком последнего вещества, может приводить к существенному уменьшению количества нуклеиновой кислоты, восстанавливаемой в печене, почке или в других дополнительных резервуарах кровотока, предположительно вследствие конкуренции между соединением-носителем и нуклеиновой кислотой за общий рецептор. Например, извлечение частично тиофосфатной двухцепочечной РНК в ткани печени можно уменьшить, когда ее вводят совместно с полиинозиновой кислотой, декстрана сульфатом, полицитидиловой кислотой или 4-ацетамидо-4'изотиоциано-стильбен-2,2'-дисульфоновой кислотой (Miyao et al., DsRNA Res. Dev., 1995, 5, 115-121; Takakura et al., DsRNA & Nucl. Acid Drug Dev., 1996, 6, 177-183.
Эксципиенты
В отличие от соединения-носителя «фармацевтический носитель» или «эксципиент» представляет собой фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующее средство или любой другой фармакологически инертный наполнитель для доставки животному одной или более нуклеиновых кислот. Эксципиент может быть жидкий или твердый, и его выбирают с учетом планируемого способа введения таким образом, чтобы обеспечить требуемый объем, консистенцию и т.д. При комбинировании с нуклеиновой кислотой и другими компонентами заданной фармацевтической композиции. Типичные фармацевтические носители включают, без ограничения, связывающие средства (например, прежелатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлозу и т.д.); наполнители (например, лактозу и другие сахара, микрокристаллическую целлюлозу, пектин, желатин, кальция сульфат, этилцеллюлозу, полиакрилаты или дикальций фосфат и т.д.); любриканты (например, магния стеарат, тальк, кремнезем, коллоидный диоксид кремния, стеариновую кислоту, стеараты металлов, гидрогенированные растительные масла, кукурузный крахмал, полиэтиленгликоли, натрия бензоат, натрия ацетат и т.д.); разрыхлители (например, крахмал, натрия крахмал гликолят и т.д.); и смачивающие средства (например, натрия лаурил сульфат, и т.д.).
Для составления композиций настоящего изобретения также можно использовать фармацевтически приемлемые органические или неорганические эксципиенты, пригодные для непарентерального введения, которые не реагируют пагубно с нуклеиновыми кислотами. Пригодные фармацевтически приемлемые носители включают, без ограничения, воду, солевые растворы, спирты, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилоза, магний стеарат, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и тому подобное.
Готовые формы для местного введения нуклеиновых кислот могут содержать стерильные и нестерильные водные растворы, неводные растворы в обычных растворителях, таких как спирты, или растворы нуклеиновых кислот в жидких или твердых масляных основаниях. Растворы также могут содержать буферы, растворители и другие пригодные добавки. Можно использовать фармацевтически приемлемые органические или неорганические эксципиенты, пригодные для непарентерального введения, которые не реагируют пагубно с нуклеиновыми кислотами.
Пригодные фармацевтически приемлемые эксципиенты включают, без ограничения воду, солевые растворы, спирт, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, магния стеарат, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и тому подобное.
Другие Компоненты
Композиции настоящего изобретения могут дополнительно содержать другие дополнительные компоненты, обычно находящиеся в фармацевтических композициях при их утвердившихся в данной области уровнях использования. Таким образом, например, композиции могут содержать дополнительные совместимые, фармацевтически активные материалы, такие как, например, противозудные средства, вяжущие средства, локальные анестетические средства или противовоспалительные средства, или могут содержать дополнительные материалы, используемые в физически составляемых разных лекарственных формах композиций настоящего изобретения, такие как красители, ароматизирующие средства, консерванты, антиоксиданты, придающие непрозрачность средства, загущающие средства и стабилизаторы. Однако, такие материалы при добавлении не должны чрезмерно мешать биологической активности компонентов композиции настоящего изобретения. Готовые формы можно стерилизовать и при необходимости смешивать со вспомогательными средствами, например, любрикантами, консервантами, стабилизаторами, смачивающими средствами, эмульгаторами, солями для влияния на осмотическое давление, буферами, красителями, вкусовыми и/или ароматическими веществами и тому подобное, которые не взаимодействуют пагубно с нуклеиновой кислотой (кислотами) готовой формы.
Водные суспензии могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, включая, например, натрия карбоксиметилцеллюлозу, сорбитол и/или декстран. Суспензия также может содержать стабилизаторы.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, представленные в изобретении, содержат (a) одно или более iRNA соединений и (b) одно или более средств, которые не функционируют по механизму RNAi и которые используют при лечении гемолитического расстройства. Примеры таких средств включают, но без ограничения противовоспалительное средство, средство против ожирения, противовирусное и/или противофиброзное средство. Кроме того, в сочетании с iRNA согласно настоящему изобретению также можно использовать другие вещества, обычно используемые для защиты печени, такие как силимарин. Другие средства, используемые для лечения заболеваний печени, включают телбивуден, энтекавир и ингибиторы протеаз, такие как телапревир и другие, раскрытые, например, у Tung et al., публикация заявки США № 2005/0148548, 2004/0167116, и 2003/0144217; и у Hale et al., публикация заявки США № 2004/0127488.
Токсичность и терапевтическую эффективность таких соединений можно определить с помощью стандартных фармацевтических методик в культурах клеток или экспериментальных животных, например, для определения LD50 (летальной дозы для 50% популяции) и ED50 (терапевтически эффективной дозы в 50% популяции). Соотношение дозы между токсическим и терапевтическим действиями является терапевтическим индексом, и его можно выразить, как отношение LD50/ED50. Предпочтительные являются соединения, которые демонстрируют высокие терапевтические индексы.
Данные, полученные из анализов культуры клеток и исследований животных, можно использовать при составлении диапазона дозировки для применения у людей. Дозировка композиций изобретения, приведенных в данном документе, как правило находится в пределах диапазона концентраций в кровотоке, которые содержат ED50 с небольшой токсичностью или без нее. Дозировки могут варьировать в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения. Для любого соединения, используемого в способах, представленных в изобретении, терапевтически эффективную дозу можно оценить первоначально из анализов культуры клеток. В животных моделях дозу можно составить для достижения диапазона концентрации в плазме кровотока соединения или при необходимости полипептидного продукта целевой последовательности (например, для достижения пониженной концентрации полипептида), которая включает ISERPINC10 (т.е., концентрацию тестируемого соединения, которая достигает половины максимального подавления симптомов), которую определяют в культуре клеток. Такую информацию можно использовать для более точного определения используемых доз у людей. Уровни в плазме можно измерить, например, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
В дополнение к их введению, как обсуждалось выше, iRNA, представленные в изобретении, можно вводить в комбинации с другими известными средствами, эффективными при лечении патологических процессов, опосредованных экспрессией Serpinc1. В любом случае лечащий врач может регулировать количество и время введения iRNA на основе результатов, наблюдаемых с использованием стандартных мер эффективности, известные в данной области или в рамках изобретения.
VI. Наборы
В настоящем изобретении также предоставлены наборы для проведения любого из способов изобретения. Такие наборы содержат одно или более средство (средства) RNAi и инструкции для применения, например, инструкции для введения профилактически или терапевтически эффективного количества средства (средств) RNAi. Наборы необязательно могут дополнительно содержать средство введения средства RNAi (например, инъекционное устройство), или средство для измерения ингибирования Serpinc1 (например, средство для измерения ингибирования мРНК Serpinc1, белка Serpinc1 и/или активности Serpinc1). Такое средство для измерения ингибирования Serpinc1 может содержать средство для получения пробы субъекта, такой как, например, проба плазмы. Наборы изобретения необязательно могут дополнительно содержать средство определения терапевтически эффективного или профилактически эффективного количества.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое значение, которое обычно понятно рядовому специалисту в области, к которой относится это изобретение. Ниже описаны пригодные способы и материалы, хотя для реализации на практике или тестировании iRNA и способов представленных в изобретении, можно использовать способы и материалы, аналогичные или эквивалентные способам и материалам в рамках изобретения. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упоминаемые в данном документе, включены посредством ссылки во всей полноте. Кроме того, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения.
ПРИМЕРЫ
Таблица 1: Сокращения мономеров нуклеотидов, используемых в представлении последовательности нуклеиновых кислот. Должно быть понятно, что эти мономеры, когда имеются в олигонуклеотиде, взаимно связаны с помощью 5'-3'-сложных фосфодиэфирных связей.
Сокращение | Нуклеотид (Нуклеотиды) |
A | Аденозин-3'-фосфат |
Af | 2'-фтораденозин-3'-фосфат |
Afs | 2'-фтораденозин-3'-тиофосфат |
As | аденозин-3'-тиофосфат |
C | цитидин-3'-фосфат |
Cf | 2'-фторцитидин-3'-фосфат |
Cfs | 2'-фторцитидин-3'-тиофосфат |
Cs | цитидин-3'-тиофосфат |
G | гуанозин-3'-фосфат |
Gf | 2'-фторгуанозин-3'-фосфат |
Gfs | 2'-фторгуанозин-3'-тиофосфат |
Gs | гуанозин-3'-тиофосфат |
T | 5'-метилуридин-3'-фосфат |
Tf | 2'-фтор-5-метилуридин-3'-фосфат |
Tfs | 2'-фтор-5-метилуридин-3'-тиофосфат |
Ts | 5-метилуридин-3'-тиофосфат |
U | Уридин-3'-фосфат |
Uf | 2'-фторуридин-3'-фосфат |
Ufs | 2'-фторуридин-3'-тиофосфат |
Us | уридин-3'-тиофосфат |
N | любой нуклеотид (G, A, C, T или U) |
a | 2'-O-метиладенозин-3'-фосфат |
as | 2'-O-метиладенозин-3'-тиофосфат |
c | 2'-O-метилцитидин-3'-фосфат |
cs | 2'-O-метилцитидин-3'-тиофосфат |
g | 2'-O-метилгуанозин-3'-фосфат |
gs | 2'-O-метилгуанозин-3'-тиофосфат |
t | 2'-O-метил-5-метилуридин-3'-фосфат |
ts | 2'-O-метил-5-метилуридин-3'-тиофосфат |
u | 2'-O-метилуридин-3'-фосфат |
us | 2'-O-метилуридин-3'-тиофосфат |
s | тиофосфатной связи |
L96 | N-[трис(GalNAc-алкил)-амидодеканоил)]-4-гидроксипролинол Hyp-(GalNAc-алкил)3 |
Пример 1: Введение разовой дозы AD-57213 здоровым субъектам-людям
Двадцати четырем здоровым добровольцам-людям в когортах 3:1 (активное вещество:плацебо) вводили разовую дозу, равную 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,6 мг/кг или 1,0 мг/кг AD-57213 (Смысловая (5'-3'): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (SEQ ID NO:13); Антисмысловая (5'-3'): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (SEQ ID NO:14)). Пробы плазмы собирали на 0, 1, 2, 3, 7, 10, 14, 21, 28, 42, 56 и 70 день после введения для мониторинга уровней белка AT, активности AT и продолжительности сайленсинга белка AT. уровни белка AT отслеживали с использованием ELISA, и уровни активности AT отслеживали путем создания кривых генерирования тромбина с использованием калибровочного автоматического тромбиноскопа (тканевый фактор=1 пМ). Кратность изменения пикового тромбина расчитывали относительно значения среднего пикового тромбина для двух значений для каждого субъекта перед применением дозы.
Серьезные побочные явления не наблюдались, 3 легкие побочные явления вероятно не были связаны с введением средства, и 1 легкое побочное явление (головная боль) было потенциально связано с введением средства. Также не было реакций в месте инъекции, и физические наблюдения, показатели жизнедеятельности и электрокардиограммы всех субъектов были внутри нормальных границ. Кроме того, все тесты функции печени, уровни общего билирубина, международное нормализованное отношение протромбинового времени (PT/INR), количество тромбоцитов, уровни гемоглобина и коагуляционные пробы (т.е., активированное частичное тромбопластиновое время (APTT), протромбиновое время (PT), уровни фибриногенов и уровни D-димера фибрина) всех субъектов не изменялись в ходе исследования и были внутри нормальных границ.
Фиг. 1A-D и 2A-B показывают, что разовая доза 0,03 мг/кг AD-57213 приводит к приблизительно 20% и до 33% уменьшению уровней белка AT (Фиг. 2A и 2B) и соответствующему уменьшению активности AT (Фиг. 1A-D) со стойкостью снижения больше, чем 60 дней.
Фиг. 3 дополнительно показал, что имеется существенная связь между нокаутом АТ и выработкой пикового тромбина. Конкретно, наблюдали до 152% повышения пиковой выработки тромбина со средним максимальным увеличением пикового тромбина 138% ± 8,9% (среднее ± SEM). Кроме того и в соответствии с повышенной выработкой тромбина с повышенным нокаутом АТ, уровни фактора VIII или IX были нормальные.
Пример 2: Введение Множественных Доз AD-57213 пациентам-людям, имеющим Гемофилию A или B
Клинические испытания Фаза I - Части B, C и D
В Части B Фазы I клинического испытания AD-57213 (Смысловая (5'-3'): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (SEQ ID NO:13); Антисмысловая (5'-3'): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (SEQ ID NO:14)), трем пациентам, имеющим Гемофилию A (n=2) или B (n=1), подкожно вводили AD-57213 0,015 мг/кг раз в неделю в течение трех недель (15 микрограмм/кг qw x 3; 15 мкг/кг); шести пациентам, имеющим Гемофилию A, подкожно вводили AD-57213 0,045 мг/кг раз в неделю в течение трех недель (45 микрограмм/кг qw × 3; 45 мкг/кг); и трем пациентам, имеющим Гемофилию A (n=2) или B (n=1), подкожно вводили AD-57213 0,075 мг/кг раз в неделю в течение трех недель (75 микрограмм/кг qw × 3; 75 мкг/кг).
В части C Фазы I клинического испытания AD-57213 (Смысловой (5'-3'): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (SEQ ID NO:13); Антисмысловой (5'-3'): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (SEQ ID NO:14)), трем пациентам, имеющим Гемофилию A (n=2) или B (n=1), подкожно вводили AD-57213 ежемесячно в дозе 0,225 мг/кг в течение трех месяцев (225 микрограмм/кг qm x 3; 225 мкг/кг); трем пациентам, имеющим Гемофилию A (n=2) или B (n=1), подкожно вводили AD-57213 ежемесячно в дозе 0,450 мг/кг в течение трех месяцев (450 микрограмм/кг qm x 3; 450 мкг/кг); трем пациентам, имеющим Гемофилию A, подкожно вводили AD-57213 ежемесячно в дозе 0,900 мг/кг в течение трех месяцев (900 микрограмм/кг qm x 3; 900 мкг/кг); трем пациентам, имеющим Гемофилию A, подкожно вводили AD-57213 ежемесячно в дозе 1,800 мг/кг в течение трех месяцев (1800 микрограмм/кг qm x 3; 1800 мкг/кг); и шести пациентам, имеющим Гемофилию A (n=3) или B (n=3), подкожно вводили ежемесячно фиксированную дозу 80 мг AD-57213 в течение трех месяцев (80 мг qM × 3).
В части D фазы I клинического испытания AD-57213 (Смысловой (5'-3'): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (SEQ ID NO:13); Антисмысловой (5'-3'): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (SEQ ID NO:14)), шести пациентам с ингибиторами, имеющим Гемофилию A (n=5) или B (n=1), и используя средства обходного действия (BPA) для управления кровотечением подкожно вводили фиксированную дозу, составляющую 50 мг AD-57213, ежемесячно в течение трех месяцев (50 мг qM x 3); и 10 пациентам, имеющим Гемофилию A, и используя средства обходного действия (BPA) для управления кровотечением подкожно вводили фиксированную дозу, составляющую 80 мг AD-57213 ежемесячно в течение трех месяцев (80 мг qM × 3).
Пробы плазмы собирали после введения AD-57213 для мониторинга уровней белка AT, активности AT и продолжительности сайленсинга белка AT. Уровни белка AT отслеживали с использованием ELISA, и уровни активности AT отслеживали путем создания кривых выработки тромбина с использованием калибровочного автоматического тромбиноскопа (тканевый фактор = 1 пМ). Кратность изменения пикового тромбина расчитывали относительно значения среднего пикового тромбина для двух значений для каждого субъекта перед применением дозы.
В Таблице 2 предоставлены демографические и базовые характеристики пациентов, участвующих в частях B, C и D исследования.
Таблица 2. Демографические и базовые характеристики исследуемых участников
Часть B Подкожно Раз в неделю × 3 |
Часть C Подкожно Ежемесячно × 3 |
Часть D Подкожно Ежемесячно × 3 |
||||||||
15 мкг/кг N=3 |
45 мкг/кг N=6 |
75 мкг/кг N=3 |
225 мкг/кг N=3 |
450 мкг/кг N=3 |
900 мкг/кг N=3 |
1800 мкг/кг N=3 |
80 мг N=6 |
50 мг N=6 |
80 мг N=10 |
|
Возраст, среднее (SD) | 28 (9) |
42 (14) |
40 (4) |
37 (21) |
37 (15) |
38 (16) |
46 (12) |
32 (12) |
32 (7) |
37 |
Гемофилия A Гемофилия B |
2 1 |
6 0 |
2 1 |
2 1 |
2 1 |
3 0 |
3 0 |
3 3 |
5 1 |
10 0 |
Тяжелый Умеренный |
3 0 |
6 0 |
3 0 |
2 1 |
3 0 |
2 1 |
3 0 |
5 1 |
6 0 |
10 0 |
Масса (кг), среднее (SD) | 76 (10) |
80 (22) |
82 (8) |
85 (12) |
76 (16) |
76 (2) |
71 (12) |
74 (10) |
73 (17) |
73 |
История заболевания гепатита C | 3 | 9 |
Для частей B, C и D исследования не было серьезных побочных явлений, не было досрочных завершений, не было реакций в месте инъекции, и физические обследования, показатели жизнедеятельности и электрокардиограммы всех пациентов были внутри нормальных границ. Кроме того, все тесты функции печени и полный анализ крови всех пациентов не изменились в ходе исследования и были внутри нормальных границ. Также в ходе этого исследования ни у одного из пациентов не было тромбоэмболических явлений и не было клинически значимых увеличений уровня D-димера фибрина. Любыми явлениями кровотечения успешно управляли с помощью стандартного заместительного фактора или введения средства обходного действия. Более того, не было случаев образования антител против лекарственного вещества (ADA).
Нокаут уровней AT в когортах 15 мкг/кг, 45 мкг/кг и 75 мкг /кг, показанное как средний нокаут АТ по сравнению с исходным уровнем, показан на фиг. 4. Фиг. 4 показал, что еженедельные дозы 0,015 мг/кг в течение трех недель AD-57213 приводят к среднему максимальному нокауту АТ, равному 29% ± 12% (среднее ± SEM). Максимальный нокаут АТ был до 53%. Фиг. 4 также показал, что еженедельные дозы 0,045 мг/кг AD-57213 в течение трех недель приводят к среднему максимальному нокауту АТ 55 ± 9% (среднее ± SEM) и максимальному нокауту АТ 86%. Кроме того, Фиг. 4 также показал, что еженедельные дозы 0,075 мг/кг в течение трех недель AD-57213 приводят среднему максимальному нокауту АТ 61 ± 8% (среднее ± SEM) и максимальному нокауту АТ 74%.
Нокаут уровней AT в когортах 225 мкг/кг, 450 мкг/кг, 900 мкг/кг, 1800 мкг/кг и 80 мг, показанный в виде среднего нокаута АТ по сравнению с исходным уровнем, показан на фиг. 5A. Фиг. 5A показал, что ежемесячные дозы 0,225 мг/кг в течение трех месяцев AD-57213 приводят к среднему максимальному нокауту АТ 70% ± 9% (среднее ± SEM). Максимальный нокаут АТ был до 80%. Фиг. 5A также показал, что ежемесячные дозы 0,450 мг/кг в течение трех месяцев AD-57213 приводят к среднему максимальному нокауту АТ 77 ± 5% (среднее ± SEM) и максимальному нокауту АТ 85%. Кроме того, Фиг. 5A также показал, что ежемесячные дозы AD-57213 0,900 мг/кг в течение трех месяцев приводят к среднему максимальному нокауту АТ 78 ± 7% (среднее ± SEM) и максимальному нокауту АТ 88%. Кроме того, Фиг. 5A показал, что ежемесячные дозы AD-57213 1,800 мг/кг в течение трех месяцев приводят к среднему максимальному нокауту АТ 79 ± 3% (среднее ± SEM) и максимальному нокауту АТ 84%. Фиг. 5A также показал, что ежемесячные дозы AD-57213 80 мг в течение трех месяцев приводят к среднему максимальному нокауту АТ 87 ± 1% (среднее ± SEM).
Как показано на фиг. 5B, на которой в виде диаграммы показана доза AD-57213 в зависимости относительной низшей точки уровней белка AT, введение AD-57213 пациентам-людям понижает уровни белка AT дозозависимым образом.
Оценка выработки тромбина у здоровых людей-добровольцев (Пример 1) и пациентов, имеющих гемофилию A или B, продемонстрировала, что еженедельные дозы AD-57213 приводили к увеличению выработки тромбина до 334% (по сравнению с исходным уровнем) у пациентов с гемофилией со средним увеличением выработки тромбина 112 ± 38% (p<0,05) по сравнению с исходным уровнем при нокауте AT на ≥50% (Фиг. 6B). На Фиг. 6A представлено, что максимальный пиковый тромбин, достигаемый у пациентов с гемофилией A или B, которым вводили еженедельные дозы AD-57213, был в низком диапазоне выработки тромбина у нормальных субъектов.
Анализ тромбоэластометрии на ROTEM® (см., например, Young, et al. (2013) Blood 121:1944) цельной крови одного субъекта (субъект 101-009) показал, что введение AD-57213 при 0,045 мг/кг раз в неделю в течение трех недель не только приводит к повышению пиковой выработки тромбина, но также приводит к выраженному и продолжительному улучшению образования сгустков цельной крови, как показано за счет уменьшения времени образования сгустка и време свертывания (Фиг. 7). У субъекта 101-009 не было явлений кровотечения со 2 дня, и нет кровотечения до текущего 47 дня.
Ретроспективный анализ выработки тромбина по квартилям снижения AT (Части B и C) показал, что в квартиле с самым большим снижением AT (снижение AT >75), происходит увеличение средней выработки тромбина на 289% по сравнению с исходным уровнем (Фиг. 9). Этот уровень выработки тромбина находится внутри диапазона выработки тромбина, наблюдаемой у здоровых добровольцев.
В дополнительном исследовании трех пациентов изучали эквивалентность введения AD-57213 и введения Фактора VIII. Коротко, фактор VIII вводили каждому из трех пациентов, и у пациентов собирали плазму через -0,5, 1, 2, 6, 24 и 48 часов после введения. Пробы каждого субъекта анализировали на уровни фактора VIII и уровни выработки тромбина и использовали для устанолвения индивидуализированных взаимосвязей выработки фактора VIII и пикового тромбина. Затем эти данные использовали для сравнения с пиковыми уровнями выработки тромбина, достигаемыми при введении AD-57213. Как показано на фиг. 10A-10C, введение AD-57213 достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта до приблизительно такого же уровня, который достигается посредством введения субъекту фактора VIII и достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина у субъекта выше, чем приблизительно 40%.
Ретроспективный анализ явлений кровотечения в квартиле снижения AT (Части B и C) показал, что имеется тенденция уменьшения кровотечения с повышением уровней снижения AT, причем средняя оценка скорости годовых кровотечений (ABR) составляет 5 ± 2 (медиана=1) в квартиле с самым высоким снижением AT (Фиг. 11). Этот анализ включает более чем 1100 кумулятивных дней со снижением AT >75% у 16 пациентов.
Также провели ретроспективный анализ явлений кровотечения в когорте части C. На Фиг. 12 представлены данные пациентов, используемые для этого анализа. Как показано на фиг. 13A, историческая медиана ABR для всех пациентов, включенных в когорту C и получающих профилактические заместительные факторы (PPx) составляла 2, а историческая медиана ABR для всех пациентов, включенных в когорту C и получающих заместительные факторы по необходимости (OD) составляла 28. Введение AD-57213 этим пациентам приводило к значительному уменьшению медианы ABR. В частности, введение AD-57213 приводило к медиане, равной 53% у пациентов, не сообщивших о кровотечении во время периода наблюдения (с 29 дня до последнего визита исследования или до последней дозы +56 дней, что наступило раньше), и медиане, равной 82% у пациентов, не сообщивших о спонтанных кровотечениях во время периода наблюдения. На Фиг. 13B показано, что для пациентов, получающих ежемесячно AD-57213 в дозе 80 мг в когорте C и получающих профилактические (PPx) заместительные факторы, средняя анамнестическая ABR была 6. однако, после введения AD-57213 медиана ABR во время периода наблюдения была 0.
В части D Фазы I изучения оценивали эффект введения AD-57213 у пациентов, имеющих Гемофилию A или B, у которых развились антитела (ингибиторы) против получаемых ими заместительных факторов, и которые, таким образом, стали отражением заместительного фактора свертывания. Соответственно, для того, чтобы оценить пиковый тромбиновый ответ у этих пациентов перед введением AD-57213, пациентам, включенным в когорту 50 мг, вводили их стандартное средство обходного действия (BPA) (например, активированный концентрат протромбинового комплекса (APCC) и/или рекомбинантный активированный FVII (rFVIIa)), пробы плазмы собирали через -1, 2, 6 и 24 часов после введения BPA, и пробы анализировали на выработку тромбина. Как показано на фиг. 14A-14F, снижение AT и выработка тромбина у пациентов с ингибиторами, которым вводили AD-57213, сравнимы со снижениеи AT и выработкой тромбина, наблюдаемых после введения AD-57213 с похожими дозами у пациентов без ингибиторов. Более того, на Фиг. 14A-14F показано, что выработка тромбина после введения AD-57213 последовательно превышает временные уровни, достигаемые при введении BPA.
Как показано на фиг. 15, подкожное введение дозы AD-57213 один раз в месяц по 50 мг и 80 мг достигает дозозависимого снижения AT, составляющего приблизительно 80% у пациентов с гемофилией с ингибиторами. Более того, как показано на фиг. 16, эффект снижения AT достигаемый у пациентов, которым вводили AD-57213, коррелирует с повышенной выработкой тромбина.
Также проводили ретроспективный анализ исследования явлений кровотечения у пациентов в части D исследования. На Фиг. 17A показано, что введение AD-57213 пациентам с ингибиторами, имеющим Гемофилию A или B один раз в месяц в дозе либо 50 мг, либо 80 мг приводит к значительному уменьшению ABR перед исследованием. Более того, как показано на фиг. 17B, средняя частота кровотечений в год (ABR) равняется нулю для всех пациентов с ингибиторами, которым вводили AD-57213 в части D этой фазы I изучения, и у 56% пациентов кровотечений не было, и 69% пациентов испытывали ноль спонтанный кровотечений.
В итоге, AD-57213 хорошо переносится у пациентов с гемофилией A и B с ингибиторами и без них. Не было SAE, связанных с лекарственным веществом исследования и не было тромбоэмболических явлений. Данные демонстрируют, что имеется клиническая активность и коррекция гемофилического фенотипа у пациентов без ингибиторов. Данные дополнительно демонстрируют, что происходит дозозависимое снижение AT и увеличение выработки тромбина при схеме подкожного введения дозы один раз в месяц и что введение фиксированной дозы AD-57213 50 мг или 80 мг обеспечивает последовательное снижение AT приблизительно на 80%.
Более того, данные демонстрируют, что введение AD-57213 пациентам с ингибиторами приводит к снижению AT и последовательному увеличению выработки тромбина у пациентов без ингибиторов и что увеличения выработки тромбина последовательно превышают увеличения, временно достигаемые при введении BPA.
Пример 3: Введение Множественных Доз AD-57213 пациентам-людям, Имеющим Гемофилию A или B
Фаза II открытого дополнительного (OLE) Клинического испытания
В Фазе II OLE изучения AD-57213 (Смысловой (5'-3'): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (SEQ ID NO:13); Антисмысловой (5'-3'): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (SEQ ID NO:14)), пациенты без ингибиторов, которым ранее вводили AD-57213 в фазе I Часть B и C клинических испытаний, описанных выше, отобрали для включения в Фазу II открытого дополнительного (OLE) изучения. Двенадцать пациентов из Фазы I Часть B изучения, имеющих Гемофилию A или B, которым подкожно вводили AD-57213 0,015 мг/кг раз в неделю в течение трех недель (15 микрограмм/кг qw x 3; 15 мкг/кг); или которым подкожно вводили AD-57213 0,045 мг/кг раз в неделю в течение трех недель (45 микрограмм/кг qw x 3; 45 мкг/кг); или которым подкожно вводили AD-57213 0,075 мг/кг раз в неделю в течение трех недель (75 микрограмм/кг qw x 3; 75 мкг/кг); и 18 пациентов из Фазы I Часть C изучения, имеющих Гемофилию A или B, которым подкожно вводили ежемесячно дозу AD-57213 0,225 мг/кг в течение трех месяцев (225 микрограмм/кг qm x 3; 225 мкг/кг); или которым подкожно вводили ежемесячно дозу AD-57213 0,450 мг/кг в течение трех месяцев (450 микрограмм/кг qm x 3; 450 мкг/кг); или которым подкожно вводили ежемесячно дозу AD-57213 0,900 мг/кг в течение трех месяцев (900 микрограмм/кг qm x 3; 900 мкг/кг); или которым подкожно вводили ежемесячно дозу AD-57213 1,800 мг/кг в течение трех месяцев (1800 микрограмм/кг qm x 3; 1800 мкг/кг); или которым подкожно вводили ежемесячно фиксированную дозу 80 мг AD-57213 в течение трех месяцев (80 мг qM x 3) отобрали для включения в это исследование.
Было включено шестнадцать пациентов. Восьми пациентам, имеющим Гемофилию A (n=6) или Гемофилию B (n=2), подкожно вводили фиксированную дозу, составляющую 50 мг AD-57213 ежемесячно в течение трех месяцев (50 мг qM × 3); и 8 пациентам, имеющим Гемофилию A (n=7) или Гемофилию B (n=1), подкожно вводили фиксированную дозу, составляющую 80 мг AD-57213 ежемесячно в течение трех месяцев (50 мг qM x 3). Демографические и базовые характеристики пациентов, включенных в это исследование, показаны в Таблице 3 ниже.
Таблица 3. Демографические и базовые характеристики участников исследования
50 мг N=8 |
80 мг N=8 |
|
Возраст, лет; среднее (диапазон) | 35 (19-61) |
41 (24-58) |
Масса, кг; среднее (диапазон) | 80 (65-94) |
74 (58-80) |
Гемофилия A Гемофилия B |
6 2 |
7 1 |
Тяжелый Умеренный |
7 1 |
6 2 |
История заболевания гепатита C† | 6 | 6 |
AD-57213 было как правило хорошо переносился пациентами без ингибиторов в фазе II OLE с самым длинным периодом воздействия до 14 месяцев непрерывного лечения, и не было связанных с лекарственным веществом серьезных побочных явлений (SAE), не было досрочных завершений вследствие побочных явлений и не было тромбоэмболических явлений или лабораторного подтверждения патологического образования сгустков. Все побочные явления (AE) по тяжести были легкими или умеренными, причем наиболее общие AE составляли легкие реакции в месте инъекции (ISR) у 4/16 (25 процентов) пациентов. Бессимптомные увеличения аланиновой аминотрансферазы (ALT) более чем в 3 раза верхнего предела нормы (ULN) без параллельного повышения билирубина более чем в 2 раза ULN, наблюдалось у 3 пациентов, у которых у всех в анамнезе имелась инфекция гепатита C. Всеми явлениями кровотечения на фоне профилактического лечения успешно управляли с помощью заместительного фактора. Более того, не было случаев образования антител против лекарственного вещества (ADA).
На Фиг. 19A и 19B дополнительно показана клиническая активность введения AD-57213. Конкретно, как показано на фиг. 19A, подкожное введение один раз в месяц дозы AD-57213 при 50 мг или 80 мг достигает дозозависимого снижения AT на ~80% и как показано на фиг. 19B, подкожное введение дозы AD-57213 один раз в месяц при 50 мг или 80 мг достигает уровней выработки тромбина, приближающихся к нижнему концу нормального диапазона.
Также провели ретроспективный анализ исследования явлений кровотечения у пациентов без ингибиторов в фазе II OLE изучения. На Фиг. 20A показано, что введение AD-57213 пациентам, имеющим Гемофилию A или B, один раз в месяц в дозе либо 50 мг, либо 80 мг приводит к значительному уменьшению ABR перед исследованием. Более того, как показано на фиг. 20B, введение AD-57213 пациентам, имеющим Гемофилия A или B, один раз в месяц в дозе либо 50 мг, либо 80 мг уменьшает среднюю частоту кровотечений в год (ABR) до 1 и уменьшает до нуля медиану нормы спонтанных кровотечений (AsBR) в год.
Кроме того, во время Фазы II OLE одного пациента (субъекта C1-3) подвергли плановой хирургической процедуре. Конкретно, пациента с тяжелой гемофилией A, получающего AD-57213 50 мг ежемесячно, подвергли плановой пластике носовой перегородки. Процедура была проведена успешно без связанных побочных явлений. Кроме того, как сообщил исследователь посредством личного сообщения, кумулятивное перипроцедурное использование рекомбинантного фактора VIII было приблизительно в 5 раз меньше, чем обычно использует исследователь для этого типа хирургического вмешательства для пациента с тяжелой гемофилией A. На основании оценки эффективности гемостаза Международного Общества Тромбоза и Гемостаза (ISTH) исследователь оценил управление гемостазом во внутреоперационный, 24 часовой послеоперационный и 7 дневный послеоперативный периоды, как все прошло «превосходно».
В итоге, AD-57213 в целом хорошо переносился пациентами с гемофилией A и B без ингибиторов. Не было SAE и не было тромбоэмболических явлений, связанных с введением AD-57213. Кроме того, данные демонстрируют, что AD-57213 имеет клиническую активность в том, что при подкожном введении один раз в месяц дозы при 50 мг и 80 мг достигается дозозависимое снижение AT на ~80%, а уровни выработки тромбина приближаются к нижнему концу нормального диапазона. Более того, ретроспективный анализ исследования явлений кровотечение у пациентов, имеющих Гемофилию A или B без ингибиторов, показал, что введение AD-57213 уменьшало медиану ABR до 1, а медиану годовой спонтанной нормы кровотечений (AsBR) до нуля. Восемь из шестнадцати (50%) пациентов не имели кровотечений, а одиннадцать из шестнадцати (69%) пациентов испытывали ноль спонтанных кровотечений. Кроме того, во время первого хирургического события у субъекта, имеющего тяжелую Гемофилию A и которому вводили AD-57213, для поддержания гемостаза у субъекта использовали значительное уменьшение заместительного фактора.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ALNYLAM PHARMACEUTICALS, INC.
AKINC, AKIN
SORENSEN, BENNY
GARG, PUSHKAL
ROBBIE, GABRIEL
<120> СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАССТРОЙСТВА, АССОЦИИРОВАННОГО С SERPINC1
<130> 121301-05220
<140>
<141>
<150> 62/429,241
<151> 2016-12-02
<150> 62/366,304
<151> 2016-07-25
<150> 62/315,228
<151> 2016-03-30
<150> 62/264,013
<151> 2015-12-07
<160> 16
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1599
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 1
tctgccccac cctgtcctct ggaacctctg cgagatttag aggaaagaac cagttttcag 60
gcggattgcc tcagatcaca ctatctccac ttgcccagcc ctgtggaaga ttagcggcca 120
tgtattccaa tgtgatagga actgtaacct ctggaaaaag gaaggtttat cttttgtcct 180
tgctgctcat tggcttctgg gactgcgtga cctgtcacgg gagccctgtg gacatctgca 240
cagccaagcc gcgggacatt cccatgaatc ccatgtgcat ttaccgctcc ccggagaaga 300
aggcaactga ggatgagggc tcagaacaga agatcccgga ggccaccaac cggcgtgtct 360
gggaactgtc caaggccaat tcccgctttg ctaccacttt ctatcagcac ctggcagatt 420
ccaagaatga caatgataac attttcctgt cacccctgag tatctccacg gcttttgcta 480
tgaccaagct gggtgcctgt aatgacaccc tccagcaact gatggaggta tttaagtttg 540
acaccatatc tgagaaaaca tctgatcaga tccacttctt ctttgccaaa ctgaactgcc 600
gactctatcg aaaagccaac aaatcctcca agttagtatc agccaatcgc ctttttggag 660
acaaatccct taccttcaat gagacctacc aggacatcag tgagttggta tatggagcca 720
agctccagcc cctggacttc aaggaaaatg cagagcaatc cagagcggcc atcaacaaat 780
gggtgtccaa taagaccgaa ggccgaatca ccgatgtcat tccctcggaa gccatcaatg 840
agctcactgt tctggtgctg gttaacacca tttacttcaa gggcctgtgg aagtcaaagt 900
tcagccctga gaacacaagg aaggaactgt tctacaaggc tgatggagag tcgtgttcag 960
catctatgat gtaccaggaa ggcaagttcc gttatcggcg cgtggctgaa ggcacccagg 1020
tgcttgagtt gcccttcaaa ggtgatgaca tcaccatggt cctcatcttg cccaagcctg 1080
agaagagcct ggccaaggta gagaaggaac tcaccccaga ggtgctgcaa gagtggctgg 1140
atgaattgga ggagatgatg ctggtggtcc acatgccccg cttccgcatt gaggacggct 1200
tcagtttgaa ggagcagctg caagacatgg gccttgtcga tctgttcagc cctgaaaagt 1260
ccaaactccc aggtattgtt gcagaaggcc gagatgacct ctatgtctca gatgcattcc 1320
ataaggcatt tcttgaggta aatgaagaag gcagtgaagc agctgcaagt accgctgttg 1380
tgattgctgg ccgttcgcta aaccccaaca gggtgacttt caaggccaac aggcctttcc 1440
tggtttttat aagagaagtt cctctgaaca ctattatctt catgggcaga gtagccaacc 1500
cttgtgttaa gtaaaatgtt cttattcttt gcacctcttc ctatttttgg tttgtgaaca 1560
gaagtaaaaa taaatacaaa ctacttccat ctcacatta 1599
<210> 2
<211> 1545
<212> ДНК
<213> Macaca mulatta
<400> 2
ggcacgagga ccatctccac ttgcccagcc ctgtggaaga ttagcgacca tgtattccaa 60
tgtgatagga accgtagcct ctggaaaaag gaaggtttat cttctgtcct tgctgctcat 120
tggcctctgg gactgtatga cctgtcacgg gagccctgtg gacatctgca cagccaagcc 180
gcgggacatt cccatgaatc ccatgtgcat ttaccgctcc ccggagaaga aggcaactga 240
ggatgagggc tcagaacaga agatccccga ggccaccaac cggcgcgtct gggaactgtc 300
caaggccaat tcccgctttg ctaccacttt ctatcagcac ctggcagatt ccaagaacga 360
caaggataac attttcctgt cacccctgag tgtctccacg gcttttgcta tgaccaagct 420
gggtgcctgt aatgacaccc tcaagcaact gatggaggta tttaagtttg acaccatatc 480
tgagaaaaca tctgatcaga tccacttctt ctttgccaaa ctgaactgcc gactctatcg 540
aaaagccaac aaatcctcca agttagtatc agccaatcgc ctttttggag acaaatccct 600
taccttcaat gagacctacc aggacatcag tgagttggta tacggagcca agctccagcc 660
cctggacttc aaggaaaatg cagagcaatc cagagcggcc atcaacaaat gggtgtccaa 720
taagaccgaa ggccgaatca ccgatgtcat tcccccggaa gccatcaacg agctcactgt 780
tctggtgctg gttaacacca tttacttcaa gggcctgtgg aagtcaaagt ttagccctga 840
gaacacaagg atggaaccgt tctacaaggc tgatggagag tcgtgttcag cgtctatgat 900
gtaccaggaa ggcaagttct gttatcggcg cgtggctgaa ggcacccagg tgcttgagtt 960
gcccttcaag ggtgatgaca tcaccatggt gctcatcctg cccaagcctg agaagagcct 1020
gaccaaggtg gagcaggaac tcaccccaga ggtgctgcag gagtggctgg atgagttgga 1080
ggagatgatg ctggtggttc acatgccccg cttccgcatt gaggacggct tcagtttgaa 1140
ggagcagctg caagacatgg gccttgtcga tctgttcagc cctgaaaagt ccaaactccc 1200
aggtattgtt gcagaaggcc gggatgacct ctatgtctcc gatgcattcc ataaggcatt 1260
tcttgaggta aatgaagaag gcagtgaagc agctgcaagt accgccattg ggattgctgg 1320
ccgttcgcta aaccccaaca gggtgacctt caaggccaac aggcctttcc tggtttttat 1380
aagagaagtt cctctgaaca ctattatctt catgggcaga gtagccaacc cttgtgtgag 1440
ctaaactgtt cttattcttt gtacctcttc ctattttggt ttgtgaatag aagtaaaaat 1500
aaatacaact actcccatct tacattaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1545
<210> 3
<211> 2171
<212> ДНК
<213> Mus musculus
<400> 3
ataggtaatt ttagaaatag atctgatttg tatctgagac attttagtga agtggtgaga 60
tataagacat aatcagaaga catatctacc tgaagacttt aaggggagag ctccctcccc 120
cacctggcct ctggacctct cagatttagg ggaaagaacc agttttcgga gtgatcgtct 180
cagtcagcac catctctgta ggagcatcgg ccatgtattc ccctggggca ggaagtgggg 240
ctgctggtga gaggaagctt tgtctcctct ctctgctcct catcggtgcc ttgggctgtg 300
ctatctgtca cggaaaccct gtggacgaca tctgcatagc gaagccccga gacatccccg 360
tgaatccctt gtgcatttac cgctcccctg ggaagaaggc caccgaggag gatggctcag 420
agcagaaggt tccagaagcc accaaccggc gggtctggga actgtccaag gccaattcgc 480
gatttgccac taacttctac cagcacctgg cagactccaa gaatgacaac gacaacattt 540
tcctgtcacc cttgagcatc tccactgctt ttgctatgac caagctgggt gcctgtaacg 600
acactctcaa gcagctgatg gaggttttta aatttgatac catctccgag aagacatccg 660
accagatcca cttcttcttt gccaaactga actgccgact ctatcgaaaa gccaacaagt 720
cctctgactt ggtatcagcc aaccgccttt ttggagacaa atccctcacc ttcaacgaga 780
gctatcaaga tgttagtgag gttgtctatg gagccaagct ccagcccctg gacttcaagg 840
agaatccgga gcaatccaga gtgaccatca acaactgggt agctaataag actgaaggcc 900
gcatcaaaga tgtcatccca cagggcgcca ttaacgagct cactgccctg gttctggtta 960
acaccattta cttcaagggc ctgtggaagt caaagttcag ccctgagaac acaaggaagg 1020
aaccgttcta taaggtcgat gggcagtcat gcccagtgcc tatgatgtac caggaaggca 1080
aattcaaata ccggcgcgtg gcagagggca cccaggtgct agagctgccc ttcaaggggg 1140
atgacatcac catggtgctc atcctgccca agcctgagaa gagcctggcc aaggtggagc 1200
aggagctcac cccagagctg ctgcaggagt ggctggatga gctgtcagag actatgcttg 1260
tggtccacat gccccgcttc cgcaccgagg atggcttcag tctgaaggag cagctgcaag 1320
acatgggcct cattgatctc ttcagccctg aaaagtccca actcccaggg atcgttgctg 1380
gaggcaggga cgacctctat gtctccgacg cattccacaa agcatttctt gaggtaaatg 1440
aggaaggcag tgaagcagca gcgagtactt ctgtcgtgat tactggccgg tcactgaacc 1500
ccaatagggt gaccttcaag gccaacaggc ccttcctggt tcttataagg gaagttgcac 1560
tgaacactat tatattcatg gggagagtgg ctaatccttg tgtgaactaa aatattctta 1620
atctttgcac cttttcctac tttggtgttt gtgaatagaa gtaaaaataa atacgactgc 1680
cacctcacga gaatggactt ttccacttga agacgagaga ctggagtaca gatgctacac 1740
cacttttggg caagtgaagg gggagcagcc agccacggtg gcacaaacct atatcctggt 1800
gcttttgaag gtagaagcag ggcggtcagg agttaaggcc agttgaggct gggctgcaga 1860
gtgaaagacc atgtctcaag atggtctttc tcctccccaa agtagaaaag aaaaccataa 1920
aaacaagagg taaatatatt actatttcat cttagaggat agcaggcatc ttgaaagggt 1980
agagggacct taaattctca ttattgcccc catactacaa actaaaaaac aaacccgaat 2040
caatctccca taaagacaga gattcaaata agagtattaa acgttttatt tctcaaacca 2100
ctcacatgca taatgttctt atacacagtg tcaaaataaa gagaaatgca tttttataca 2160
aaaaaaaaaa a 2171
<210> 4
<211> 1561
<212> ДНК
<213> Rattus norvegicus
<400> 4
cggagggatt gctcagcact gtctccacgg cttctctgca gaagcgtcca ccatgtattc 60
cccgggaata ggaagtgcgg ttgctggaga gaggaagctt tgtctcctct ctctgctact 120
cattggtgcc ttgggctgtg ctgtctgtca tggaaaccct gtggacgaca tctgcatagc 180
gaagccccga gacatccccg tgaaccccat gtgcatttac cgctcccctg cgaagaaggc 240
cacggaggag gatgtcctag agcagaaggt tccggaagcc accaaccggc gggtctggga 300
actgtccaag gccaattctc gatttgccac taacttctat cagcacctgg cagactccaa 360
gaacgacaac gacaacattt tcctgtcacc cttgagcatc tccacggcgt ttgctatgac 420
caagctgggt gcttgtaata acaccctcaa gcagctgatg gaggttttta aatttgatac 480
catctccgag aagacatccg accagatcca cttcttcttt gccaaactga actgccgact 540
ctatcgaaaa gccaacaagt cctctaactt ggtgtcagcc aaccgccttt ttggagacaa 600
atcccttacc ttcaatgaga gctatcaaga cgttagtgag attgtctatg gagccaagct 660
tcagcccctg gacttcaagg agaatccgga gcaatccaga gtgaccatca acaactgggt 720
agctaataag actgaaggcc gcatcaaaga cgtcatcccc caaggagcca ttgatgagct 780
cactgccctg gtgctggtta acaccattta cttcaagggc ctgtggaagt caaagttcag 840
ccctgagaac acaaggaagg aaccattcca caaagttgat gggcagtcat gcctggtgcc 900
catgatgtac caggaaggca aattcaaata caggcgtgtg ggagagggta cccaggtgct 960
agagatgccc ttcaaggggg acgacatcac catggtgctc atcctgccca agcctgagaa 1020
gagcctggct aaggtggagc aggaactcac cccggagctg ctgcaggagt ggctggatga 1080
gctgtcggag gtcatgcttg tggtccacgt gccccgcttc cgcatcgagg acagcttcag 1140
tctgaaggag cagctgcaag acatgggcct tgttgatctc ttcagccctg agaagtccca 1200
actcccaggg atcattgctg aaggcaggga cgacctcttt gtctccgatg cattccacaa 1260
agcgtttctt gaggtaaatg aggaaggcag tgaagcagca gcgagtactt ctgtcgtgat 1320
tactggccgg tcactgaacc ccagtagggt gaccttcaag gccaacaggc ccttcctggt 1380
tcttataagg gaagtcgcac tgaacactat tatattcatg gggagagtgt ctaatccttg 1440
tgtgaactaa aatattctta atctttgcac cttttcctat ctcggtgttt gttaatggaa 1500
gtaaaaataa atatgactgc cacctcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560
a 1561
<210> 5
<211> 1599
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 5
taatgtgaga tggaagtagt ttgtatttat ttttacttct gttcacaaac caaaaatagg 60
aagaggtgca aagaataaga acattttact taacacaagg gttggctact ctgcccatga 120
agataatagt gttcagagga acttctctta taaaaaccag gaaaggcctg ttggccttga 180
aagtcaccct gttggggttt agcgaacggc cagcaatcac aacagcggta cttgcagctg 240
cttcactgcc ttcttcattt acctcaagaa atgccttatg gaatgcatct gagacataga 300
ggtcatctcg gccttctgca acaatacctg ggagtttgga cttttcaggg ctgaacagat 360
cgacaaggcc catgtcttgc agctgctcct tcaaactgaa gccgtcctca atgcggaagc 420
ggggcatgtg gaccaccagc atcatctcct ccaattcatc cagccactct tgcagcacct 480
ctggggtgag ttccttctct accttggcca ggctcttctc aggcttgggc aagatgagga 540
ccatggtgat gtcatcacct ttgaagggca actcaagcac ctgggtgcct tcagccacgc 600
gccgataacg gaacttgcct tcctggtaca tcatagatgc tgaacacgac tctccatcag 660
ccttgtagaa cagttccttc cttgtgttct cagggctgaa ctttgacttc cacaggccct 720
tgaagtaaat ggtgttaacc agcaccagaa cagtgagctc attgatggct tccgagggaa 780
tgacatcggt gattcggcct tcggtcttat tggacaccca tttgttgatg gccgctctgg 840
attgctctgc attttccttg aagtccaggg gctggagctt ggctccatat accaactcac 900
tgatgtcctg gtaggtctca ttgaaggtaa gggatttgtc tccaaaaagg cgattggctg 960
atactaactt ggaggatttg ttggcttttc gatagagtcg gcagttcagt ttggcaaaga 1020
agaagtggat ctgatcagat gttttctcag atatggtgtc aaacttaaat acctccatca 1080
gttgctggag ggtgtcatta caggcaccca gcttggtcat agcaaaagcc gtggagatac 1140
tcaggggtga caggaaaatg ttatcattgt cattcttgga atctgccagg tgctgataga 1200
aagtggtagc aaagcgggaa ttggccttgg acagttccca gacacgccgg ttggtggcct 1260
ccgggatctt ctgttctgag ccctcatcct cagttgcctt cttctccggg gagcggtaaa 1320
tgcacatggg attcatggga atgtcccgcg gcttggctgt gcagatgtcc acagggctcc 1380
cgtgacaggt cacgcagtcc cagaagccaa tgagcagcaa ggacaaaaga taaaccttcc 1440
tttttccaga ggttacagtt cctatcacat tggaatacat ggccgctaat cttccacagg 1500
gctgggcaag tggagatagt gtgatctgag gcaatccgcc tgaaaactgg ttctttcctc 1560
taaatctcgc agaggttcca gaggacaggg tggggcaga 1599
<210> 6
<211> 1545
<212> ДНК
<213> Macaca mulatta
<400> 6
tttttttttt ttttttttta atgtaagatg ggagtagttg tatttatttt tacttctatt 60
cacaaaccaa aataggaaga ggtacaaaga ataagaacag tttagctcac acaagggttg 120
gctactctgc ccatgaagat aatagtgttc agaggaactt ctcttataaa aaccaggaaa 180
ggcctgttgg ccttgaaggt caccctgttg gggtttagcg aacggccagc aatcccaatg 240
gcggtacttg cagctgcttc actgccttct tcatttacct caagaaatgc cttatggaat 300
gcatcggaga catagaggtc atcccggcct tctgcaacaa tacctgggag tttggacttt 360
tcagggctga acagatcgac aaggcccatg tcttgcagct gctccttcaa actgaagccg 420
tcctcaatgc ggaagcgggg catgtgaacc accagcatca tctcctccaa ctcatccagc 480
cactcctgca gcacctctgg ggtgagttcc tgctccacct tggtcaggct cttctcaggc 540
ttgggcagga tgagcaccat ggtgatgtca tcacccttga agggcaactc aagcacctgg 600
gtgccttcag ccacgcgccg ataacagaac ttgccttcct ggtacatcat agacgctgaa 660
cacgactctc catcagcctt gtagaacggt tccatccttg tgttctcagg gctaaacttt 720
gacttccaca ggcccttgaa gtaaatggtg ttaaccagca ccagaacagt gagctcgttg 780
atggcttccg ggggaatgac atcggtgatt cggccttcgg tcttattgga cacccatttg 840
ttgatggccg ctctggattg ctctgcattt tccttgaagt ccaggggctg gagcttggct 900
ccgtatacca actcactgat gtcctggtag gtctcattga aggtaaggga tttgtctcca 960
aaaaggcgat tggctgatac taacttggag gatttgttgg cttttcgata gagtcggcag 1020
ttcagtttgg caaagaagaa gtggatctga tcagatgttt tctcagatat ggtgtcaaac 1080
ttaaatacct ccatcagttg cttgagggtg tcattacagg cacccagctt ggtcatagca 1140
aaagccgtgg agacactcag gggtgacagg aaaatgttat ccttgtcgtt cttggaatct 1200
gccaggtgct gatagaaagt ggtagcaaag cgggaattgg ccttggacag ttcccagacg 1260
cgccggttgg tggcctcggg gatcttctgt tctgagccct catcctcagt tgccttcttc 1320
tccggggagc ggtaaatgca catgggattc atgggaatgt cccgcggctt ggctgtgcag 1380
atgtccacag ggctcccgtg acaggtcata cagtcccaga ggccaatgag cagcaaggac 1440
agaagataaa ccttcctttt tccagaggct acggttccta tcacattgga atacatggtc 1500
gctaatcttc cacagggctg ggcaagtgga gatggtcctc gtgcc 1545
<210> 7
<211> 2171
<212> ДНК
<213> Mus musculus
<400> 7
tttttttttt ttgtataaaa atgcatttct ctttattttg acactgtgta taagaacatt 60
atgcatgtga gtggtttgag aaataaaacg tttaatactc ttatttgaat ctctgtcttt 120
atgggagatt gattcgggtt tgttttttag tttgtagtat gggggcaata atgagaattt 180
aaggtccctc taccctttca agatgcctgc tatcctctaa gatgaaatag taatatattt 240
acctcttgtt tttatggttt tcttttctac tttggggagg agaaagacca tcttgagaca 300
tggtctttca ctctgcagcc cagcctcaac tggccttaac tcctgaccgc cctgcttcta 360
ccttcaaaag caccaggata taggtttgtg ccaccgtggc tggctgctcc cccttcactt 420
gcccaaaagt ggtgtagcat ctgtactcca gtctctcgtc ttcaagtgga aaagtccatt 480
ctcgtgaggt ggcagtcgta tttattttta cttctattca caaacaccaa agtaggaaaa 540
ggtgcaaaga ttaagaatat tttagttcac acaaggatta gccactctcc ccatgaatat 600
aatagtgttc agtgcaactt cccttataag aaccaggaag ggcctgttgg ccttgaaggt 660
caccctattg gggttcagtg accggccagt aatcacgaca gaagtactcg ctgctgcttc 720
actgccttcc tcatttacct caagaaatgc tttgtggaat gcgtcggaga catagaggtc 780
gtccctgcct ccagcaacga tccctgggag ttgggacttt tcagggctga agagatcaat 840
gaggcccatg tcttgcagct gctccttcag actgaagcca tcctcggtgc ggaagcgggg 900
catgtggacc acaagcatag tctctgacag ctcatccagc cactcctgca gcagctctgg 960
ggtgagctcc tgctccacct tggccaggct cttctcaggc ttgggcagga tgagcaccat 1020
ggtgatgtca tcccccttga agggcagctc tagcacctgg gtgccctctg ccacgcgccg 1080
gtatttgaat ttgccttcct ggtacatcat aggcactggg catgactgcc catcgacctt 1140
atagaacggt tccttccttg tgttctcagg gctgaacttt gacttccaca ggcccttgaa 1200
gtaaatggtg ttaaccagaa ccagggcagt gagctcgtta atggcgccct gtgggatgac 1260
atctttgatg cggccttcag tcttattagc tacccagttg ttgatggtca ctctggattg 1320
ctccggattc tccttgaagt ccaggggctg gagcttggct ccatagacaa cctcactaac 1380
atcttgatag ctctcgttga aggtgaggga tttgtctcca aaaaggcggt tggctgatac 1440
caagtcagag gacttgttgg cttttcgata gagtcggcag ttcagtttgg caaagaagaa 1500
gtggatctgg tcggatgtct tctcggagat ggtatcaaat ttaaaaacct ccatcagctg 1560
cttgagagtg tcgttacagg cacccagctt ggtcatagca aaagcagtgg agatgctcaa 1620
gggtgacagg aaaatgttgt cgttgtcatt cttggagtct gccaggtgct ggtagaagtt 1680
agtggcaaat cgcgaattgg ccttggacag ttcccagacc cgccggttgg tggcttctgg 1740
aaccttctgc tctgagccat cctcctcggt ggccttcttc ccaggggagc ggtaaatgca 1800
caagggattc acggggatgt ctcggggctt cgctatgcag atgtcgtcca cagggtttcc 1860
gtgacagata gcacagccca aggcaccgat gaggagcaga gagaggagac aaagcttcct 1920
ctcaccagca gccccacttc ctgccccagg ggaatacatg gccgatgctc ctacagagat 1980
ggtgctgact gagacgatca ctccgaaaac tggttctttc ccctaaatct gagaggtcca 2040
gaggccaggt gggggaggga gctctcccct taaagtcttc aggtagatat gtcttctgat 2100
tatgtcttat atctcaccac ttcactaaaa tgtctcagat acaaatcaga tctatttcta 2160
aaattaccta t 2171
<210> 8
<211> 1561
<212> ДНК
<213> Rattus norvegicus
<400> 8
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttgaggt ggcagtcata tttattttta 60
cttccattaa caaacaccga gataggaaaa ggtgcaaaga ttaagaatat tttagttcac 120
acaaggatta gacactctcc ccatgaatat aatagtgttc agtgcgactt cccttataag 180
aaccaggaag ggcctgttgg ccttgaaggt caccctactg gggttcagtg accggccagt 240
aatcacgaca gaagtactcg ctgctgcttc actgccttcc tcatttacct caagaaacgc 300
tttgtggaat gcatcggaga caaagaggtc gtccctgcct tcagcaatga tccctgggag 360
ttgggacttc tcagggctga agagatcaac aaggcccatg tcttgcagct gctccttcag 420
actgaagctg tcctcgatgc ggaagcgggg cacgtggacc acaagcatga cctccgacag 480
ctcatccagc cactcctgca gcagctccgg ggtgagttcc tgctccacct tagccaggct 540
cttctcaggc ttgggcagga tgagcaccat ggtgatgtcg tcccccttga agggcatctc 600
tagcacctgg gtaccctctc ccacacgcct gtatttgaat ttgccttcct ggtacatcat 660
gggcaccagg catgactgcc catcaacttt gtggaatggt tccttccttg tgttctcagg 720
gctgaacttt gacttccaca ggcccttgaa gtaaatggtg ttaaccagca ccagggcagt 780
gagctcatca atggctcctt gggggatgac gtctttgatg cggccttcag tcttattagc 840
tacccagttg ttgatggtca ctctggattg ctccggattc tccttgaagt ccaggggctg 900
aagcttggct ccatagacaa tctcactaac gtcttgatag ctctcattga aggtaaggga 960
tttgtctcca aaaaggcggt tggctgacac caagttagag gacttgttgg cttttcgata 1020
gagtcggcag ttcagtttgg caaagaagaa gtggatctgg tcggatgtct tctcggagat 1080
ggtatcaaat ttaaaaacct ccatcagctg cttgagggtg ttattacaag cacccagctt 1140
ggtcatagca aacgccgtgg agatgctcaa gggtgacagg aaaatgttgt cgttgtcgtt 1200
cttggagtct gccaggtgct gatagaagtt agtggcaaat cgagaattgg ccttggacag 1260
ttcccagacc cgccggttgg tggcttccgg aaccttctgc tctaggacat cctcctccgt 1320
ggccttcttc gcaggggagc ggtaaatgca catggggttc acggggatgt ctcggggctt 1380
cgctatgcag atgtcgtcca cagggtttcc atgacagaca gcacagccca aggcaccaat 1440
gagtagcaga gagaggagac aaagcttcct ctctccagca accgcacttc ctattcccgg 1500
ggaatacatg gtggacgctt ctgcagagaa gccgtggaga cagtgctgag caatccctcc 1560
g 1561
<210> 9
<211> 16
<212> PRT
<213> неизвестно
<220>
<221> источник
<223> /примечание ="описание неизвестного:
пептид RFGF"
<400> 9
Ala Ala Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Ala Pro
1 5 10 15
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> неизвестно
<220>
<221> источник
<223> /примечание="описание неизвестного:
аналога пептида RFGF"
<400> 10
Ala Ala Leu Leu Pro Val Leu Leu Ala Ala Pro
1 5 10
<210> 11
<211> 13
<212> PRT
<213> вирус иммунодефицита человека
<400> 11
Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Pro Gln
1 5 10
<210> 12
<211> 16
<212> PRT
<213> Drosophila sp.
<400> 12
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
<210> 13
<211> 21
<212> RNA
<213> искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид"
<400> 13
gguuaacacc auuuacuuca a 21
<210> 14
<211> 23
<212> RNA
<213> искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид"
<400> 14
uugaaguaaa ugguguuaac cag 23
<210> 15
<211> 23
<212> RNA
<213> искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид"
<400> 15
uugaaguaaa ugguguuaac cag 23
<210> 16
<211> 21
<212> RNA
<213> искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид"
<400> 16
gguuaacacc auuuacuuca a 21
<---
Claims (116)
1. Способ предотвращения по меньшей мере одного симптома гемофилии у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B,
включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы от 50 мг до 90 мг молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь содержит последовательность 5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь, и
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на схеме
и где X представляет собой О.
2. Способ лечения субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы от 50 мг до 90 мг молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) один раз в месяц, где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь включает последовательность 5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь включает последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь,
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на схеме
и где X представляет собой О.
3. Способ уменьшения частоты эпизодов кровотечений у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы от 50 мг до 90 мг молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь включает последовательность 5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь включает последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь,
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на схеме
и где X представляет собой О.
4. Способ снижения частоты кровотечений в год (ABR) у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B,
включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы от 50 мг до 90 мг молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, причем смысловая цепь содержит последовательность 5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
5. Способ снижения ежегодной частоты спонтанных кровотечений (AsBR) у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B,
включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы от 50 мг до 90 мг молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь содержит последовательность 5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af , Cf , Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где субъекту вводят дозу 50 мг молекулы дцРНК.
7. Способ по любому из пп. 1-5, где субъекту вводят дозу 80 мг молекулы дцРНК.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где введение молекулы дцРНК субъекту снижает активность SERPINC1 у субъекта на 70-95%.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где введение молекулы дцРНК субъекту увеличивает пиковые уровни тромбина у субъекта в пределах диапазона пиковых уровней тромбина у субъекта, у которого нет гемофилии А или В.
10. Способ по любому из пп. 1-9, где введения молекулы дцРНК субъекту достаточно для достижения пикового уровня выработки тромбина у субъекта до того же уровня, который достигается введением субъекту фактора VIII.
11. Способ по любому из пп. 1-10, где введения молекулы дцРНК субъекту достаточно для достижения пиковых уровней выработки тромбина, превышающих 40%-ный эквивалент при введении субъекту фактора VIII.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где введение молекулы дцРНК субъекту уменьшает частоту кровотечений в год (ABR) у субъекта на 80-95% по сравнению со средней анамнестической зарегистрированной ABR у субъектов, имеющих гемофилию A или B, которым не вводили молекулу дцРНК.
13. Способ по любому из пп. 1-12, где субъектом является пациент с гемофилией А с ингибиторами.
14. Способ по любому из пп. 1-12, где субъектом является пациент с гемофилией А без ингибиторов.
15. Способ по любому из пп. 1-12, где субъектом является пациентом с гемофилией B с ингибиторами.
16. Способ по любому из пп. 1-12, где субъект является пациентом с гемофилией B без ингибиторов.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где дозу молекулы дцРНК вводят субъекту в виде подходящей фармацевтической композиции.
18. Способ по п. 17, где фармацевтическая композиция находится в незабуференном растворе.
19. Способ по п. 18, где незабуференный раствор представляет собой физиологический раствор или воду.
20. Способ по п. 17, где фармацевтическая композиция находится в забуференном растворе.
21. Способ по п. 20, где забуференный раствор содержит ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию.
22. Способ по п. 20, где забуференный раствор представляет собой забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS).
23. Способ предотвращения по меньшей мере одного симптома гемофилии у субъекта, у которого имеется гемофилия А или гемофилия В, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 50 мг молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь включает последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf–3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’- usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg–3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
24. Способ лечения субъекта, у которого имеется гемофилия А или гемофилия В, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 50 мг молекулы двунитевой РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь включает последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf–3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg–3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
25. Способ предотвращения или снижения частоты эпизодов кровотечений у субъекта, у которого имеется гемофилия А или гемофилия В, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 50 мг молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь включает последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf–3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’–usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg–3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
26. Способ снижения частоты кровотечений в год (ABR) у субъекта, у которого имеется гемофилия А или гемофилия B, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 50 мг молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, и
где смысловая цепь включает последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf–3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’–usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где 3'-конец смысловой цепи конъюгирован с лигандом, как показано на следующей схеме:
где X представляет собой О.
27. Способ снижения годовой частоты спонтанного кровотечения (AsBR) у субъекта, у которого имеется гемофилия А или гемофилия B, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 50 мг молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, и
где смысловая цепь содержит последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’–usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg–3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
28. Способ предотвращения по меньшей мере одного симптома гемофилии у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 80 мг молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь включает последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf–3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg–3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
29. Способ лечения субъекта, у которого имеется гемофилия А или гемофилия В, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 80 мг молекулы двунитевой РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь включает последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf–3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg–3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
30. Способ предотвращения или снижения частоты эпизодов кровотечений у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 80 мг молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь,
где смысловая цепь включает последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf–3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’–usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg–3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
31. Способ снижения частоты кровотечений в год (ABR) у субъекта, у которого имеется гемофилия А или гемофилия B, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 80 мг молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, и
где смысловая цепь включает последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf–3’ (SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’–usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме:
где X представляет собой О.
32. Способ снижения ежегодной частоты спонтанных кровотечений (AsBR) у субъекта, у которого имеется гемофилия А или гемофилия B, включающий подкожное введение субъекту, нуждающемуся в этом, дозы 80 мг молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) один раз в месяц,
где молекула дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, и
где смысловая цепь содержит последовательность 5’–GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO:13) и антисмысловая цепь содержит последовательность 5’–usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg–3’ (SEQ ID NO:14), где a, c, g и u представляют собой 2'-O-метил (2'-OMe) A, C, G и U соответственно; Af, Cf, Gf и Uf представляют собой 2'-фтор A, C, G и U соответственно; и s представляет собой фосфоротиоатную связь;
где лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи, как показано на следующей схеме
и где X представляет собой О.
33. Способ по любому из пп. 23-32, где субъектом является пациент с гемофилией А с ингибиторами.
34. Способ по любому из пп. 23-32, где субъектом является пациент с гемофилией B с ингибиторами.
35. Способ по любому из пп. 23-32, где субъектом является пациент с гемофилией А без ингибиторов.
36. Способ по любому из пп. 23-32, где субъект является пациентом с гемофилией В без ингибиторов.
37. Способ по любому из пп. 4, 26 или 31, где введение молекулы дцРНК снижает ABR у субъекта до одного или менее.
38. Способ по любому из пп. 5, 27 или 32, где введение молекулы дцРНК снижает AsBR у субъекта до нуля.
39. Набор для осуществления способа по любому из пп. 1-38, содержащий молекулу дцРНК и инструкции по применению.
40. Набор по п. 39, дополнительно содержащий средство для введения молекулы дцРНК субъекту.
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562264013P | 2015-12-07 | 2015-12-07 | |
US62/264,013 | 2015-12-07 | ||
US201662315228P | 2016-03-30 | 2016-03-30 | |
US62/315,228 | 2016-03-30 | ||
US201662366304P | 2016-07-25 | 2016-07-25 | |
US62/366,304 | 2016-07-25 | ||
US201662429241P | 2016-12-02 | 2016-12-02 | |
US62/429,241 | 2016-12-02 | ||
PCT/US2016/065245 WO2017100236A1 (en) | 2015-12-07 | 2016-12-07 | Methods and compositions for treating a serpinc1-associated disorder |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021124592A Division RU2021124592A (ru) | 2015-12-07 | 2016-12-07 | Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2018123712A RU2018123712A (ru) | 2020-01-10 |
RU2018123712A3 RU2018123712A3 (ru) | 2020-04-30 |
RU2754188C2 true RU2754188C2 (ru) | 2021-08-30 |
Family
ID=58800158
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021124592A RU2021124592A (ru) | 2015-12-07 | 2016-12-07 | Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства |
RU2018123712A RU2754188C2 (ru) | 2015-12-07 | 2016-12-07 | Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021124592A RU2021124592A (ru) | 2015-12-07 | 2016-12-07 | Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11091759B2 (ru) |
EP (1) | EP3386518A1 (ru) |
JP (3) | JP6985283B2 (ru) |
KR (3) | KR20180095843A (ru) |
CN (1) | CN108601795A (ru) |
AU (2) | AU2016368289C1 (ru) |
BR (1) | BR112018011450A2 (ru) |
CA (1) | CA3007014A1 (ru) |
CO (1) | CO2018006590A2 (ru) |
IL (2) | IL259795B2 (ru) |
MX (1) | MX2018006989A (ru) |
RU (2) | RU2021124592A (ru) |
SG (2) | SG10201913085TA (ru) |
TW (2) | TWI836281B (ru) |
WO (1) | WO2017100236A1 (ru) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016069694A2 (en) | 2014-10-30 | 2016-05-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting serpinc1 (at3) and methods of use thereof |
KR20180095843A (ko) | 2015-12-07 | 2018-08-28 | 젠자임 코포레이션 | Serpinc1-연관 장애의 치료를 위한 방법 및 조성물 |
EP3649243A1 (en) * | 2017-07-07 | 2020-05-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating or preventing contact-activation pathway-associated diseases using irna compositions targeting factor xii (hageman factor) (f12) |
KR20200026960A (ko) * | 2017-07-10 | 2020-03-11 | 젠자임 코포레이션 | 혈우병을 갖는 대상체에서 출혈 사건을 치료하기 위한 방법 및 조성물 |
EP3550021A1 (en) * | 2018-04-05 | 2019-10-09 | Silence Therapeutics GmbH | Products and compositions for inhibiting expression of a target gene |
EP3775209A1 (en) * | 2018-04-05 | 2021-02-17 | Silence Therapeutics GmbH | Sirnas with at least two ligands at different ends |
EP3898977A1 (en) * | 2018-12-20 | 2021-10-27 | Praxis Precision Medicines, Inc. | Compositions and methods for the treatment of kcnt1 related disorders |
SG11202107669WA (en) * | 2019-01-16 | 2021-08-30 | Genzyme Corp | Serpinc1 irna compositions and methods of use thereof |
KR20230027277A (ko) * | 2020-06-22 | 2023-02-27 | 젠자임 코포레이션 | 혈우병을 치료하기 위한 방법 및 조성물 |
IL303452A (en) | 2020-12-06 | 2023-08-01 | Genzyme Corp | Treatment of hemophilia with Fitusiran |
WO2022120291A1 (en) | 2020-12-06 | 2022-06-09 | Genzyme Corporation | Treatment of hemophilia with fitusiran |
TW202342065A (zh) | 2021-12-22 | 2023-11-01 | 美商健臻公司 | 治療血友病的方法和組成物 |
WO2023118150A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Royal College Of Surgeons In Ireland | A conjugate for use in localising a molecule to the vascular endothelium. |
US20240000744A1 (en) | 2022-06-08 | 2024-01-04 | Genzyme Corporation | Treatment of Hemophilia with Fitusiran |
WO2023240193A2 (en) | 2022-06-08 | 2023-12-14 | Genzyme Corporation | Treatment of hemophilia with fitusiran in pediatric patients |
WO2024094706A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Audible indicator, indicator holder and method of assembling an audible indicator |
WO2024094704A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Arrangement for a drug delivery device, drug delivery device and method for assembly |
WO2024094707A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Drug delivery device with feedback element and method for providing a user of a drug delivery device feedback regarding a dose dispensing process |
WO2024094701A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Assembly for a drug delivery device |
WO2024094702A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Device body for a drug delivery device, assembly for a drug delivery device and drug delivery device |
WO2024094699A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Container holder and drug delivery device comprising the container holder |
WO2024094705A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Drug delivery device having a two-part user indicator |
WO2024094700A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Method for assembling an assembly for a drug delivery device and drug delivery device. |
WO2024094703A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Plunger for expelling a drug, drug delivery device, rear sub-assembly and corresponding methods |
WO2024094698A1 (en) | 2022-10-31 | 2024-05-10 | Sanofi | Front sub-assembly for a drug delivery device |
WO2024097190A1 (en) | 2022-11-02 | 2024-05-10 | Genzyme Corporation | Systems and methods for modeling thrombin-antithrombin |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013163430A2 (en) * | 2012-04-26 | 2013-10-31 | Alnylam Pharmaceuticals | Serpinc1 irna compositions and methods of use thereof |
WO2015175510A1 (en) * | 2014-05-12 | 2015-11-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating a serpinc1-associated disorder |
Family Cites Families (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4517294A (en) | 1982-03-03 | 1985-05-14 | Genentech, Inc. | Human antithrombin III |
US5783701A (en) | 1992-09-08 | 1998-07-21 | Vertex Pharmaceuticals, Incorporated | Sulfonamide inhibitors of aspartyl protease |
WO1994012649A2 (en) | 1992-12-03 | 1994-06-09 | Genzyme Corporation | Gene therapy for cystic fibrosis |
RU2123492C1 (ru) | 1993-02-19 | 1998-12-20 | Ниппон Синяку Ко., Лтд | Производные глицерина, средство для доставки физиологически активного вещества и фармацевтическая композиция |
US6191105B1 (en) | 1993-05-10 | 2001-02-20 | Protein Delivery, Inc. | Hydrophilic and lipophilic balanced microemulsion formulations of free-form and/or conjugation-stabilized therapeutic agents such as insulin |
US6054299A (en) | 1994-04-29 | 2000-04-25 | Conrad; Charles A. | Stem-loop cloning vector and method |
US5858401A (en) | 1996-01-22 | 1999-01-12 | Sidmak Laboratories, Inc. | Pharmaceutical composition for cyclosporines |
US5994316A (en) | 1996-02-21 | 1999-11-30 | The Immune Response Corporation | Method of preparing polynucleotide-carrier complexes for delivery to cells |
EP2253639A1 (en) | 1997-09-12 | 2010-11-24 | Exiqon A/S | Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleoide analogues |
US6436989B1 (en) | 1997-12-24 | 2002-08-20 | Vertex Pharmaceuticals, Incorporated | Prodrugs of aspartyl protease inhibitors |
KR20010033595A (ko) | 1997-12-24 | 2001-04-25 | 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 아스파틸 프로테아제 억제제의 전구약물 |
CA2346155A1 (en) | 1998-10-09 | 2000-04-20 | Ingene, Inc. | Enzymatic synthesis of ssdna |
CA2345936A1 (en) | 1998-10-09 | 2000-04-20 | Ingene, Inc. | Production of ssdna in a cell |
TWI260322B (en) | 1999-02-12 | 2006-08-21 | Vertex Pharma | Inhibitors of aspartyl protease |
US6794493B2 (en) | 2000-04-07 | 2004-09-21 | Wisys Technology Foundation, Inc. | Antithrombin H-helix mutants |
IT1318539B1 (it) | 2000-05-26 | 2003-08-27 | Italfarmaco Spa | Composizioni farmaceutiche a rilascio prolungato per lasomministrazione parenterale di sostanze idrofile biologicamente |
US7063860B2 (en) | 2001-08-13 | 2006-06-20 | University Of Pittsburgh | Application of lipid vehicles and use for drug delivery |
ATE517992T1 (de) | 2002-11-14 | 2011-08-15 | Dharmacon Inc | Funktionelle und hyperfunktionelle sirna |
WO2006006948A2 (en) | 2002-11-14 | 2006-01-19 | Dharmacon, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY |
BRPI0412282A (pt) | 2003-07-02 | 2006-09-19 | Musc Found For Res Dev | imunidade especìfica e não-especìfica induzida de dsrna em crustáceos e outros invertebrados, e veìculos de bioliberação para uso nestes |
JP2005117918A (ja) | 2003-10-14 | 2005-05-12 | Glycomedics Inc | 新規糖鎖プライマー |
EP1752536A4 (en) | 2004-05-11 | 2008-04-16 | Alphagen Co Ltd | POLYNUCLEOTIDE CAUSING RNA INTERFERENCE AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION WITH THE USE OF THE SAME |
EP2061443A4 (en) | 2006-08-18 | 2013-07-24 | Arrowhead Res Corp | POLYCONJUGATE FOR IN VIVO ADMINISTRATION OF POLYNUCLEOTIDES |
AU2007299629C1 (en) | 2006-09-21 | 2012-05-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the HAMP gene |
WO2008109361A1 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc, | Nucleic acid compounds for inhibiting erbb family gene expression and uses thereof |
CA2694047C (en) | 2007-07-20 | 2018-01-30 | Universite Paris-Sud Xi | Use of mutated antithrombins for treating or preventing coagulation disorders |
EP2231195B1 (en) | 2007-12-04 | 2017-03-29 | Arbutus Biopharma Corporation | Targeting lipids |
CA2713379A1 (en) | 2008-01-31 | 2009-11-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Optimized methods for delivery of dsrna targeting the pcsk9 gene |
CA2717045C (en) | 2008-03-13 | 2018-04-10 | Celera Corporation | Genetic polymorphisms associated with venous thrombosis, methods of detection and uses thereof |
US8822654B2 (en) | 2009-01-16 | 2014-09-02 | Universite Paris—Sud XI | Mutated antithrombins, a process for preparing the same and their use as drugs |
WO2010120526A2 (en) | 2009-03-31 | 2010-10-21 | Emory University | Methods and systems for screening for and diagnosing dna methylation associated with autism spectrum disorders |
EP2253715A1 (en) | 2009-05-14 | 2010-11-24 | RWTH Aachen | New targets for cancer therapy and/or diagnosis |
LT2440183T (lt) | 2009-06-10 | 2018-08-10 | Arbutus Biopharma Corporation | Patobulinta lipido kompozicija |
WO2011005861A1 (en) | 2009-07-07 | 2011-01-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide end caps |
SG183374A1 (en) | 2010-02-24 | 2012-09-27 | Arrowhead Res Corp | Compositions for targeted delivery of sirna |
EP2723758B1 (en) | 2011-06-21 | 2018-06-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compostions and methods of use thereof |
US20140356377A1 (en) | 2011-08-25 | 2014-12-04 | Umc Utrecht Holding B.V. | Compounds for use in boosting coagulation |
EP3336189A1 (en) | 2012-04-20 | 2018-06-20 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
MY176712A (en) | 2013-05-22 | 2020-08-19 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Serpina1 irna compositions and methods of use thereof |
US10689647B2 (en) | 2015-05-08 | 2020-06-23 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of antithrombin 3 (AT3) by double-stranded RNA |
KR20180095843A (ko) | 2015-12-07 | 2018-08-28 | 젠자임 코포레이션 | Serpinc1-연관 장애의 치료를 위한 방법 및 조성물 |
-
2016
- 2016-12-07 KR KR1020187019085A patent/KR20180095843A/ko not_active IP Right Cessation
- 2016-12-07 KR KR1020237025828A patent/KR20230119027A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-12-07 BR BR112018011450A patent/BR112018011450A2/pt active Search and Examination
- 2016-12-07 TW TW110138147A patent/TWI836281B/zh active
- 2016-12-07 MX MX2018006989A patent/MX2018006989A/es unknown
- 2016-12-07 WO PCT/US2016/065245 patent/WO2017100236A1/en active Application Filing
- 2016-12-07 JP JP2018549141A patent/JP6985283B2/ja active Active
- 2016-12-07 IL IL259795A patent/IL259795B2/en unknown
- 2016-12-07 EP EP16822817.9A patent/EP3386518A1/en active Pending
- 2016-12-07 IL IL308717A patent/IL308717A/en unknown
- 2016-12-07 TW TW105140410A patent/TWI743069B/zh active
- 2016-12-07 SG SG10201913085TA patent/SG10201913085TA/en unknown
- 2016-12-07 US US15/371,300 patent/US11091759B2/en active Active
- 2016-12-07 SG SG11201804729RA patent/SG11201804729RA/en unknown
- 2016-12-07 KR KR1020217041486A patent/KR20210157474A/ko not_active IP Right Cessation
- 2016-12-07 CN CN201680081199.2A patent/CN108601795A/zh active Pending
- 2016-12-07 RU RU2021124592A patent/RU2021124592A/ru unknown
- 2016-12-07 RU RU2018123712A patent/RU2754188C2/ru active
- 2016-12-07 AU AU2016368289A patent/AU2016368289C1/en active Active
- 2016-12-07 CA CA3007014A patent/CA3007014A1/en active Pending
-
2018
- 2018-06-26 CO CONC2018/0006590A patent/CO2018006590A2/es unknown
-
2021
- 2021-07-14 US US17/375,785 patent/US20220017902A1/en active Pending
- 2021-11-24 JP JP2021189823A patent/JP7422120B2/ja active Active
-
2023
- 2023-02-14 AU AU2023200828A patent/AU2023200828A1/en active Pending
-
2024
- 2024-01-12 JP JP2024002987A patent/JP2024046760A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013163430A2 (en) * | 2012-04-26 | 2013-10-31 | Alnylam Pharmaceuticals | Serpinc1 irna compositions and methods of use thereof |
WO2015175510A1 (en) * | 2014-05-12 | 2015-11-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating a serpinc1-associated disorder |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
SEHGAL A et al. An RNAi therapeutic targeting antithrombin to rebalance the coagulation system and promote hemostasis in hemophilia. Nat Med., 2015 May, 21(5), p.492-7. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2754188C2 (ru) | Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства | |
JP6933670B2 (ja) | Serpinc1 iRNA組成物およびその使用方法 | |
US20230158058A1 (en) | Methods and compositions for treating a bleeding event in a subject having hemophilia | |
JP2020141685A (ja) | アポリポタンパク質C3(APOC3)iRNA組成物およびその使用方法 | |
TW201607559A (zh) | 治療serpinc1相關疾患之方法和組成物 | |
RU2801263C2 (ru) | Способы и композиции для лечения явления кровотечения у больного гемофилией | |
TWI843703B (zh) | 於患有血友病之個體中治療出血事件之方法及組成物 | |
TW202423457A (zh) | 治療serpinc1相關疾患之方法及組成物 | |
AKINC et al. | Patent 3007014 Summary | |
EA040963B1 (ru) | Композиции на основе irna против ангиопоэтин-подобного белка 3 (angptl3) и способы их применения |