KR20180095843A

KR20180095843A - Serpinc1-연관 장애의 치료를 위한 방법 및 조성물

Info

Publication number: KR20180095843A
Application number: KR1020187019085A
Authority: KR
Inventors: 아킨 아키니크; 베니 소렌센; 푸시칼 가그; 가브리엘 로비
Original assignee: 젠자임 코포레이션
Priority date: 2015-12-07
Filing date: 2016-12-07
Publication date: 2018-08-28
Also published as: EP4424828A1; RU2021124592A; CN108601795A; JP2019504112A; IL259795B1; US20220017902A1; RU2754188C2; WO2017100236A1; SG11201804729RA; TWI836281B; AU2016368289B2; KR20230119027A; WO2017100236A8; MX2018006989A; AU2023200828A1; CO2018006590A2; AU2016368289C1; JP6985283B2; KR20210157474A; MX2024008022A

Abstract

본 발명은 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA, 예를 들어, 이중 가닥 리보핵산 (dsRNA) 조성물, 및 이러한 iRNA, 예를 들어, dsRNA 조성물을 사용하여 Serpinc1의 발현을 억제하고 Serpinc1-연관 질환, 예를 들어, 출혈 장애, 예컨대 혈우병에 걸린 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

Serpinc1-연관 장애의 치료를 위한 방법 및 조성물

관련 출원

본 출원은 미국 특허 가출원 번호 62/264,013 (2015년 12월 7일 출원), 미국 특허 가출원 번호 62/315,228 (2016년 3월 30일 출원), 미국 특허 가출원 번호 62/366,304 (2016년 7월 25일 출원), 및 미국 특허 가출원 번호 62/429,241 (2016년 12월 2일 출원)을 우선권 주장한다. 상기 특허 출원 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

본 출원은 미국 특허 가출원 번호 61/992,057 (2014년 5월 12일 출원), 미국 특허 가출원 번호 62/089,018 (2014년 12월 8일 출원), 미국 특허 가출원 번호 62/102,281 (2015년 1월 12일 출원), 및 PCT 특허 출원 번호 PCT/US2015/030337 (2015년 5월 12일 출원)에 관련된다. 상기 특허 출원 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

추가적으로, 본 출원은 미국 특허 가출원 번호 61/638,952 (2012년 4월 26일 출원), 미국 특허 가출원 번호 61/669,249 (2012년 7월 9일 출원), 미국 특허 가출원 번호 61/734,573 (2012년 12월 7일 출원), 미국 특허 출원 번호 13/837,129 (2013년 3월 15일 출원) (현재 미국 특허 번호 9,127,274), 미국 특허 출원 번호 14/806,084 (2015년 7월 22일 출원) (현재 미국 특허 번호 9,376,680), 미국 특허 출원 번호 15/070,358 (2016년 3월 15일 출원), 및 PCT 특허 출원 번호 PCT/US2013/038218 (2013년 4월 25일 출원)에 관련된다. 본 출원은 PCT 특허 출원 번호 PCT/US2012/065601 (2012년 11월 16일 출원)에 또한 관련된다. 상기 특허 출원 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

서열 목록

본 출원은 ASCII 양식으로 전자식으로 제출되고 이에 의해 전문이 참조로 포함된 서열 목록을 함유한다. 2016년 12월 6일에 생성된 상기 ASCII 카피는 명칭이 121301-05220_SL.TXT이고, 크기가 21,140 바이트이다.

Serpinc1은 세린 프로테이나제 억제제 (세르핀) 슈퍼패밀리의 구성원이다. Serpinc1은 트롬빈, 뿐만 아니라 응고 시스템의 다른 활성화된 세린 프로테아제, 예컨대 인자 X, IX, XI, XII 및 VII을 억제하고, 따라서 혈액 응고 케스케이드를 조절하는 혈장 프로테아제 억제제이다. 트롬빈:항트롬빈 (TAT) 복합체의 형성을 촉매하는 헤파린 및 다른 관련된 글리코스아미노글리칸의 존재에 의해 Serpinc1의 항응고제 활성이 강화된다.

유전성 또는 후천성 출혈 장애는 부적합한 혈액 응고가 있는 병태이다. 예를 들어, 혈우병은 신체가 혈액 응고 또는 응고를 제어하는 능력을 손상시키는 일군의 유전성 유전 출혈 장애이다. A형 혈우병은 기능성 응고 인자 VIII의 결여를 수반하는 열성 X-연관 유전 장애이고, 혈우병 사례의 80%를 나타낸다. B형 혈우병은 기능성 응고 인자 IX의 결여를 수반하는 열성 X-연관 유전 장애이다. 이는 혈우병 사례의 대략 20%를 이룬다. C형 혈우병은 기능성 응고 인자 XI의 결여를 수반하는 보통염색체 유전 장애이다. 이형접합 개체 또한 출혈 증가를 나타내는 바와 같이, C형 혈우병은 완전히 열성이지 않다.

현재 혈우병이 치유되지 않지만, 부족한 응고 인자, 예를 들어, A형 혈우병에서의 인자 VIII의 정기적인 주입으로 이를 제어할 수 있다. 그러나, 일부 혈우병환자에서 이들에게 제공된 교체 인자에 대한 항체 (억제제)가 발달되고, 따라서 이들은 교체 응고 인자에 대해 불응성이게 된다. 따라서, 이러한 대상체에서의 출혈이 적합하게 제어될 수 없다.

예를 들어 인자 VIII 및 다른 응고 인자에 대한 고-역가 억제제의 발달은 혈우병 요법의 가장 심각한 합병증이고, 출혈 치료를 매우 어렵게 만든다. 현재, 이러한 대상체에서 출혈을 멈추는 유일한 전략은 "우회 작용제" 예컨대 인자 8 억제제 우회 활성 (FEIBA) 및 활성화된 재조합 인자 VII (rFVIIa), 혈장분리반출술, 지속적인 인자 교체, 및 면역 내성 요법을 사용하는 것이고, 이들 중 어느 것도 완전히 효과적이지 않다. 따라서, 출혈 장애, 예컨대 혈우병에 걸린 대상체에 대한 대안적인 치료가 관련 분야에서 요구된다.

본 발명은 Serpinc1 유전자의 발현을 억제하기 위해 Serpinc1 유전자의 RNA 전사체의 RNA-유도 침묵화 복합체 (RISC)-매개 절단을 초래하는 iRNA 조성물을 사용하여, Serpinc1 유전자의 발현을 억제하거나 감소시키는 것으로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예컨대 혈우병에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은, 적어도 부분적으로, 매우 낮은 용량 (예를 들어, 관련 분야에 교시된 용량보다 적어도 약 30배 더 낮은 용량)의 특정한 화학적 변형을 포함하는 GalNAc 연결 이중 가닥 RNAi 작용제가 Serpinc1의 발현을 억제하는 예외적인 효능, 뿐만 아니라 Serpinc1 발현의 예외적인 억제 기간을 나타낸다는 뜻밖의 발견을 기초로 한다. 구체적으로, GalNAc 리간드 및 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는 낮은 용량의 RNAi 작용제, 예컨대 작용제의 절단 부위 또는 절단 부위 근처의 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프 이상 (하나의 이러한 모티프를 포함함), 6개의 포스포로티오에이트 연결, 및 GalNAc 리간드를 포함하는 RNAi 작용제가 Serpinc1 유전자의 활성을 침묵화하는 것에서 예외적으로 효과적이고 지속성이 있는 것으로 본원에서 나타났다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 RNAi 작용제를 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하며, 여기서 센스 가닥은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 5의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하며, 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥이 리간드에 접합되며, 예를 들어, 리간드가 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 이중 가닥 RNAi 작용제를 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 서열식별번호: 1의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 5의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하며, 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

한 실시양태에서, 센스 가닥의 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이다.

또 다른 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 표 2 및 3 중 어느 하나에 열거된 서열 중 어느 하나와 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함한다.

일부 실시양태에서, 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오티드, 2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드, 5'-포스포로티오에이트 기를 포함하는 뉴클레오티드, 및 콜레스테릴 유도체 또는 도데칸산 비스데실아미드 기에 연결된 말단 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 추가 실시양태에서, 변형된 뉴클레오티드는 2'-데옥시-2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형된 뉴클레오티드, 잠금형 뉴클레오티드, 비-잠금형 뉴클레오티드, 입체형상 제한 뉴클레오티드, 구속형 에틸 뉴클레오티드, 무염기 뉴클레오티드, 2'-아미노-변형된 뉴클레오티드, 2'-알킬-변형된 뉴클레오티드, 2'-O-알릴 변형된 뉴클레오티드, 2'-C-알릴 변형된 뉴클레오티드, 2'-히드록실 변형된 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 포스포르아미데이트, 및 비-천연 염기를 포함하는 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택된다.

이중 가닥 RNAi 작용제의 또 다른 실시양태에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개의 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 2개의 뉴클레오티드, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함한다. 다른 실시양태에서, RNAi 작용제의 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개의 뉴클레오티드의 5' 오버행을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 2개의 뉴클레오티드, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 뉴클레오티드의 5' 오버행을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제의 하나의 가닥의 3' 및 5' 단부 둘 다가 적어도 1개의 뉴클레오티드의 오버행을 포함한다.

특정 실시양태에서, 리간드는 N-아세틸갈락토스아민 (GalNAc)이다. 리간드는 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 RNAi 작용제에 부착된 하나 이상의 GalNAc일 수 있다. 리간드는 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥의 3' 단부, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 단부, 이중 가닥 RNAi 작용제의 안티센스 가닥의 3' 단부, 또는 이중 가닥 RNAi 작용제의 안티센스 가닥의 5' 단부에 접합될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 이중 가닥 RNAi 작용제는 복수의 1가 링커를 통해 이중 가닥 RNAi 작용제의 복수의 뉴클레오티드에 각각 독립적으로 부착된, 복수, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 GalNAc를 포함한다.

특정 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 투여하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 상보적인 센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 Serpinc1을 코딩하는 mRNA의 일부분에 상보적인 영역을 포함하며, 각각의 가닥은 약 14 내지 약 30개의 뉴클레오티드의 길이이고, 이중 가닥 RNAi 작용제는 화학식 (IIIe)로 표현되고:

센스: 5'-N_a-YYY-N_a-3'

안티센스: 3' n_p'-N_a'-Y'Y'Y'-N_a'-5' (IIIe)

여기서

n_p'는 2개의 뉴클레오티드의 오버행이고, n_p' 내의 각각의 뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 연결을 통해 이웃 뉴클레오티드에 연결되고;

각각의 N_a 및 N_a'는 변형되었거나 비변형되었거나 또는 그의 조합인 0-25개의 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 독립적으로 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형된 뉴클레오티드를 포함하고;

YYY 및 Y'Y'Y'는 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프 1개를 각각 독립적으로 나타내고, 이러한 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형이고;

센스 가닥 및 안티센스 가닥은 5'-말단에 2개의 포스포로티오에이트 연결을 각각 독립적으로 포함하며;

센스 가닥은 적어도 하나의 리간드에 접합되고, 이러한 리간드는 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체이고,

이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 상보적인 센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 Serpinc1을 코딩하는 mRNA의 일부분에 상보적인 영역을 포함하며, 각각의 가닥은 약 14 내지 약 30개의 뉴클레오티드의 길이이고, 이중 가닥 RNAi 작용제는 화학식 (IIIe)로 표현되고:

센스: 5'-N_a-YYY-N_a-3'

안티센스: 3' n_p'-N_a'-Y'Y'Y'-N_a'-5' (IIIe)

여기서

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 단일 용량으로 또는 2회 이상의 용량, 예를 들어, 3, 4, 5, 또는 6회의 용량으로 투여된다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 1회, 6주마다 1회, 2개월마다 1회, 분기별로 1회, 또는 필요에 따라 투여된다.

이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게, 예를 들어, 약 0.200 내지 약 1.825 mg/kg, 0.200 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.875 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.100 mg/kg, 또는 약 0.925 내지 약 1.000 mg/kg의 매월 용량으로서, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8개월 또는 그 초과 동안의 매월 용량으로서 투여될 수 있다.

대상체는 인간, 예컨대 출혈 장애, 예컨대 후천성 출혈 장애 또는 유전성 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병, B형 혈우병, 또는 C형 혈우병에 걸린 인간일 수 있다.

한 실시양태에서, 대상체는 A형 혈우병이고, 억제제 대상체이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 B형 혈우병이고, 억제제 대상체이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 C형 혈우병이고, 억제제 대상체이다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 혈액 응고의 증가 및/또는 Serpinc1 단백질 축적의 감소를 야기한다.

한 실시양태에서, 방법은 대상체 내의 트롬빈 수준을 측정하는 것을 추가로 포함한다.

이중 가닥 RNAi 작용제는 피하 또는 정맥내 투여될 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제의 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 변형 및 2'-플루오로 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형을 포함한다. 한 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 모든 뉴클레오티드 및 안티센스의 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이다.

한 실시양태에서, YYY 모티프는 센스 가닥의 절단 부위에서 또는 절단 부위 근처에서 발생한다.

한 실시양태에서, Y'Y'Y' 모티프는 5'-단부로부터의 안티센스 가닥의 11, 12 및 13 위치에서 발생한다.

이중 가닥 영역은 15-30개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 17-23개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 17-25개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 23-27개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 19-21개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 또는 21-23개의 뉴클레오티드 쌍의 길이일 수 있다.

각각의 가닥은 15-30개의 뉴클레오티드, 또는 19-30개의 뉴클레오티드가 있을 수 있을 수 있다.

한 실시양태에서, 센스 가닥은 총 21개의 뉴클레오티드가 있고, 안티센스 가닥은 총 23개의 뉴클레오티드가 있다.

한 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

한 실시양태에서, 리간드는 센스 가닥의 3'-단부에 부착된다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 하기 화학식에 제시된 바와 같이 리간드에 접합된다:

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 실시양태에서, 듀플렉스의 안티센스 가닥의 5'-단부의 1 위치의 염기 쌍은 AU 염기 쌍이다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 AD-57213 ((센스 (5'에서 3'로): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf (서열식별번호: 13); 안티센스 (5'에서 3'로): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (서열식별번호: 14) [여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결임]))이다.

한 실시양태에서, 작용제는 제약 조성물로서 투여된다. 한 실시양태에서, RNAi 작용제는 비완충 용액, 예컨대 염수 또는 물 중에서 투여된다.

또 다른 실시양태에서, siRNA는 완충제 용액, 예컨대 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카르보네이트, 또는 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 완충제 용액과 함께 투여된다. 한 실시양태에서, 완충제 용액은 포스페이트 완충 염수 (PBS)이다.

한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 2회 이상의 용량으로 투여될 수 있다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 1회 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 6주마다 1회 투여된다. 한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 2개월마다 1회 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 분기별로 1회 투여된다.

이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게, 예를 들어, 약 0.200 내지 약 1.825 mg/kg, 0.200 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.875 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.100 mg/kg, 또는 약 0.925 내지 약 1.000 mg/kg의 매월 용량으로서 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 용량은 대상체에게 약 0.200 mg/kg 내지 약 0.250 mg/kg의 매월 용량으로서; 또는 약 0.425 mg/kg 내지 약 0.475 mg/kg의 매월 용량으로서; 또는 약 0.875 mg/kg 내지 약 0.925 mg/kg의 매월 용량으로서; 또는 약 1.775 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 0.225 mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 0.450 mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 0.900 mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1.800 mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 피하 투여된다.

한 실시양태에서, 이러한 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체 내의 Serpinc1 활성을 약 70% 내지 약 95%만큼 저하시킨다.

또 다른 실시양태에서, 이러한 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체 내의 피크 트롬빈 수준을 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸리지 않은 대상체 내의 피크 트롬빈 수준의 범위 내로 증가시킨다.

한 실시양태에서, 이러한 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체 내의 피크 트롬빈 생성 수준을 대상체에게 인자 VIII을 투여하는 것에 의해 달성되는 것과 거의 동일한 수준으로 달성하는데 충분하다.

또 다른 실시양태에서, 이러한 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체에서 약 40% 초과의 피크 트롬빈 생성 수준을 달성하는데 충분하다.

또 다른 실시양태에서, 이러한 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체의 연간 출혈률 (ABR)을 이중 가닥 RNAi 작용제가 투여되지 않은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체의 과거 온-디맨드 ABR 중앙값과 비교하여 약 80 내지 약 95%만큼 감소시킨다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 완충제 용액, 예컨대 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카르보네이트, 또는 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 완충제 용액과 함께 투여된다. 한 실시양태에서, 완충제 용액은 포스페이트 완충 염수 (PBS)이다.

한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

장애는 출혈 장애, 예컨대 후천성 출혈 장애 또는 유전성 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병, B형 혈우병, 또는 C형 혈우병일 수 있다.

한 실시양태에서, 변형된 뉴클레오티드는 2'-데옥시-2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형된 뉴클레오티드, 잠금형 뉴클레오티드, 무염기 뉴클레오티드, 2'-아미노-변형된 뉴클레오티드, 2'-알킬-변형된 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 포스포르아미데이트, 및 비-천연 염기를 포함하는 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.

상보성 영역은 적어도 17개의 뉴클레오티드의 길이 또는 19개의 뉴클레오티드의 길이일 수 있다.

한 실시양태에서, 상보성 영역은 19개 내지 21개의 뉴클레오티드의 길이이다. 또 다른 실시양태에서, 상보성 영역은 21개 내지 23개의 뉴클레오티드의 길이이다.

한 실시양태에서, 각각의 가닥은 30개 이하의 뉴클레오티드의 길이이다.

이중 가닥 RNAi 작용제의 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개의 뉴클레오티드의 3' 오버행 또는 적어도 2개의 뉴클레오티드, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, RNAi 작용제의 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개의 뉴클레오티드의 5' 오버행을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 2개의 뉴클레오티드, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 뉴클레오티드의 5' 오버행을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제의 하나의 가닥의 3' 및 5' 단부 둘 다가 적어도 1개의 뉴클레오티드의 오버행을 포함한다.

특정 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 실시양태에서, X는 O이다.

한 실시양태에서, 상보성 영역은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열로 이루어진다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.

한 실시양태에서, 센스 가닥은 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)을 포함하고, 안티센스 가닥은 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)을 포함하며, 여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결이다.

한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 RNAi 작용제를 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량으로 투여하는 것을 포함하며, 여기서 센스 가닥은 서열식별번호: 1의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 5의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하며, 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 이중 가닥 RNAi 작용제를 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량으로 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 센스 가닥은 서열식별번호: 1의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하고, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 5의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하며, 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 투여하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 상보적인 센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 Serpinc1을 코딩하는 mRNA의 일부분에 상보적인 영역을 포함하며, 각각의 가닥은 약 14 내지 약 30개의 뉴클레오티드의 길이이고, 이중 가닥 RNAi 작용제는 화학식 (IIIe)로 표현되고:

센스: 5'-N_a-YYY-N_a-3'

안티센스: 3' n_p'-N_a'-Y'Y'Y'-N_a'-5' (IIIe)

여기서

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 투여하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 상보적인 센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 Serpinc1을 코딩하는 mRNA의 일부분에 상보적인 영역을 포함하며, 각각의 가닥은 약 14 내지 약 30개의 뉴클레오티드의 길이이고, 이중 가닥 RNAi 작용제는 화학식 (IIIe)로 표현되고:

센스: 5'-N_a-YYY-N_a-3'

안티센스: 3' n_p'-N_a'-Y'Y'Y'-N_a'-5' (IIIe)

여기서

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 2개월마다 1회, 분기별로 1회, 또는 필요에 따라 투여된다.

이중 가닥 RNAi 작용제 대상체에게, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 95 mg, 약 25 mg 내지 약 90 mg, 약 25 mg 내지 약 85 mg, 약 25 mg 내지 약 80 mg, 약 25 mg 내지 약 75 mg, 약 25 mg 내지 약 70 mg, 약 25 mg 내지 약 65 mg, 약 25 mg 내지 약 60 mg, 약 25 mg 내지 약 50 mg, 약 50 mg 내지 약 100 mg, 약 50 mg 내지 약 95 mg, 약 50 mg 내지 약 90 mg, 약 50 mg 내지 약 85 mg, 약 50 mg 내지 약 80 mg, 약 30 mg 내지 약 100 mg, 약 30 mg 내지 약 90 mg, 약 30 mg 내지 약 80 mg, 약 40 mg 내지 약 100 mg, 약 40 mg 내지 약 90 mg, 약 40 mg 내지 약 80 mg, 약 60 mg 내지 약 100 mg, 약 60 mg 내지 약 90 mg, 약 25 mg 내지 약 55 mg, 약 25 mg 내지 약 65 mg, 약 30 mg 내지 약 95 mg, 약 30 mg 내지 약 85 mg, 약 30 mg 내지 약 75 mg, 약 30 mg 내지 약 65 mg, 약 30 mg 내지 약 55 mg, 약 40 mg 내지 약 95 mg, 약 40 mg 내지 약 85 mg, 약 40 mg 내지 약 75 mg, 약 40 mg 내지 약 65 mg, 약 40 mg 내지 약 55 mg, 또는 약 45 mg 내지 약 95 mg의 고정 용량으로서, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8개월 또는 그 초과 동안의 고정 용량으로서 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 약 25 mg, 약 30 mg, 약 35 mg, 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg, 약 70 mg, 약 75 mg, 약 80 mg, 약 85 mg, 약 90 mg, 약 95 mg, 또는 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여될 수 있다.

이중 가닥 RNAi 작용제는 피하 또는 정맥내 투여될 수 있다.

각각의 가닥은 15-30개의 뉴클레오티드, 또는 19-30개의 뉴클레오티드가 있을 수 있다.

한 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 하기 화학식에 제시된 바와 같이 리간드에 접합된다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 2개월마다 1회, 분기별로 1회, 또는 필요에 따라 투여된다.

이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 95 mg, 약 25 mg 내지 약 90 mg, 약 25 mg 내지 약 85 mg, 약 25 mg 내지 약 80 mg, 약 25 mg 내지 약 75 mg, 약 25 mg 내지 약 70 mg, 약 25 mg 내지 약 65 mg, 약 25 mg 내지 약 60 mg, 약 25 mg 내지 약 50 mg, 약 50 mg 내지 약 100 mg, 약 50 mg 내지 약 95 mg, 약 50 mg 내지 약 90 mg, 약 50 mg 내지 약 85 mg, 약 50 mg 내지 약 80 mg, 약 30 mg 내지 약 100 mg, 약 30 mg 내지 약 90 mg, 약 30 mg 내지 약 80 mg, 약 40 mg 내지 약 100 mg, 약 40 mg 내지 약 90 mg, 약 40 mg 내지 약 80 mg, 약 60 mg 내지 약 100 mg, 약 60 mg 내지 약 90 mg, 약 25 mg 내지 약 55 mg, 약 25 mg 내지 약 65 mg, 약 30 mg 내지 약 95 mg, 약 30 mg 내지 약 85 mg, 약 30 mg 내지 약 75 mg, 약 30 mg 내지 약 65 mg, 약 30 mg 내지 약 55 mg, 약 40 mg 내지 약 95 mg, 약 40 mg 내지 약 85 mg, 약 40 mg 내지 약 75 mg, 약 40 mg 내지 약 65 mg, 약 40 mg 내지 약 55 mg, 또는 약 45 mg 내지 약 95 mg의 고정 용량으로서 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 약 25 mg, 약 30 mg, 약 35 mg, 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg, 약 70 mg, 약 75 mg, 약 80 mg, 약 85 mg, 약 90 mg, 약 95 mg, 또는 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 약 25 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 50 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 80 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여된다.

한 실시양태에서, 이러한 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체 내의 Serpinc1 활성을 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%만큼, 또는 95% 초과만큼 저하시킨다.

또 다른 실시양태에서, 이러한 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체에서 약 40%, 45%, 50%, 55% 초과, 또는 약 60% 초과의 피크 트롬빈 생성 수준을 달성하는데 충분하다.

또 다른 실시양태에서, 이러한 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것은 대상체의 연간 출혈률 (ABR)을 이중 가닥 RNAi 작용제가 투여되지 않은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체의 과거 온-디맨드 ABR 중앙값과 비교하여 약 80% 내지 약 95%, 약 80% 내지 약 85%, 약 85% 내지 약 90%, 또는 약 90% 내지 약 95%만큼 감소시킨다.

한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

특정 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 실시양태에서, X는 O이다.

한 실시양태에서, 센스 가닥은 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)을 포함하고, 안티센스 가닥은 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)을 포함하며, 여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결이고; 여기서 센스 가닥은 하기 화학식에서 제시된 바와 같이 리간드에 접합된다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

추가 측면에서, 본 발명은 본 발명의 방법을 수행하기 위한 키트를 제공한다. 이러한 키트는 본 발명의 RNAi 작용제, 및 사용 설명서, 및 임의적으로, RNAi 작용제를 대상체에게 투여하기 위한 수단을 포함할 수 있다.

한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

한 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 장기적으로 투여된다.

특정 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 실시양태에서, X는 O이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

또 다른 실시양태에서, siRNA는 완충제 용액, 예컨대 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카르보네이트, 또는 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 완충제 용액과 함게 투여된다. 한 실시양태에서, 완충제 용액은 포스페이트 완충 염수 (PBS)이다.

한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

특정 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 실시양태에서, X는 O이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 측면에서, 본 발명은 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), B형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), 또는 C형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재)에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), B형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), 또는 C형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재)에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에를 치료하는 것을 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), B형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), 또는 C형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재)에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), B형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), 또는 C형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재)에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에를 치료하는 것을 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), B형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), 또는 C형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재)에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제가 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 이중 가닥 RNAi 작용제가 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥 및 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)의 뉴클레오티스 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결이고; 여기서 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), B형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), 또는 C형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재)에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥 및 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)의 뉴클레오티스 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결이고; 여기서 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), B형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), 또는 C형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재)에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제가 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 이중 가닥 RNAi 작용제가 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥 및 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)의 뉴클레오티스 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결이고; 여기서 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), B형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재), 또는 C형 혈우병 (억제제 존재 또는 부재)에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고, 여기서 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 1개월에 약 1회 투여되고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥 및 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)의 뉴클레오티스 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결이고; 여기서 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

특정 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 실시양태에서, X는 O이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 40 mg 내지 약 90 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 40 mg 내지 약 90 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게, 예를 들어, 약 50 mg 내지 약 90 mg, 약 50 mg 내지 약 85 mg, 약 50 mg 내지 약 80 mg, 약 40 mg 내지 약 80 mg, 약 60 mg 내지 약 90 mg, 약 25 mg 내지 약 55 mg, 약 25 mg 내지 약 65 mg, 약 40 mg 내지 약 85 mg, 약 40 mg 내지 약 75 mg, 약 40 mg 내지 약 65 mg, 또는 약 40 mg 내지 약 55 mg의 고정 용량으로서 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg, 약 70 mg, 약 75 mg, 약 80 mg, 약 85 mg, 또는 약 90 mg의 고정 용량으로서 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 약 40 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 50 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 80 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 90 mg의 고정 용량으로서 투여된다.

한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

특정 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 실시양태에서, X는 O이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 측면에서, 본 발명은 대상체에서 Serpinc1의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 40 mg 내지 약 90 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 Serpinc1의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 약 40 mg 내지 약 90 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고, 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 리간드를 포함하고, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥은 센스 가닥의 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된다.

한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

한 실시양태에서, 대상체는 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸려 있다. 장애는 출혈 장애, 예컨대 후천성 출혈 장애 또는 유전성 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병, 예를 들어, A형 혈우병, B형 혈우병, 또는 C형 혈우병일 수 있다.

특정 실시양태에서, 리간드는 하기이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

한 실시양태에서, X는 O이다.

여기서 X는 O 또는 S이다.

도 1a는 1명의 건강한 인간 대상체에서의 혈장 트롬빈 생성 수준에 대한 단일 피하 0.03 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 1b는 1명의 건강한 인간 대상체에서의 혈장 트롬빈 생성 수준에 대한 단일 피하 0.03 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 1c는 1명의 건강한 인간 대상체에서의 혈장 트롬빈 생성 수준에 대한 단일 피하 0.03 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 1d는 1명의 건강한 인간 대상체에서의 혈장 트롬빈 생성 수준에 대한 단일 피하 0.03 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 2a는 1명의 건강한 인간 대상체에서의 혈장 AT (Serpinc1) 단백질 수준에 대한 단일 피하 0.03 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 2b는 1명의 건강한 인간 대상체에서의 혈장 AT (Serpinc1) 단백질 수준에 대한 단일 피하 0.03 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 3은 단일 피하 0.03 mg/kg 용량의 AD-57213이 투여된 건강한 대상체에서의 AT (Serpinc1) 녹다운의 퍼센트와 피크 트롬빈 생성의 퍼센트 증가 사이의 연관을 도시하는 그래프이다.
도 4는 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 대상체에서의 혈장 AT (Serpinc1) 단백질 수준에 대한 다중 0.015 mg/kg, 0.045 mg/kg, 또는 0.075 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 5a는 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 대상체에서의 혈장 AT (Serpinc1) 단백질 수준에 대한 다중 0.225 mg/kg, 0.450 mg/kg, 0.900 mg/kg, 1.800 mg/kg, 또는 80 mg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다
도 5b는 인간 대상체에서의 혈장 AT (Serpinc1) 단백질 수준에 대한 AD-57213의 용량 의존적 효과를 도시하는 그래프이다.
도 6a A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 대상체에서의 피크 트롬빈 수준에 대한 다중 0.015 mg/kg 또는 0.045 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 6b는 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 대상체에서의 군 기준선에 비교된 퍼센트 변화로서의 트롬빈 생성에 대한 다중 0.015 mg/kg 또는 0.045 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 7은 A형 혈우병에 걸린 1명의 대상체 (대상체 101-009)에서의 응괴 형성 시간 및 응고 시간에 대한 다중 0.045 mg/kg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 8은 매월 등가 용량에 의한 평균 최대 AT 저하를 도시하는 그래프이다.
도 9는 AT 저하 사분위수에 의한 트롬빈 생성에 대한 다중 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 10a는 225 mcg/kg qM의 AD-57213이 투여된 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 10b는 1800 mcg/kg qM의 AD-57213이 투여된 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 10c는 80 mg qM의 AD-57213이 투여된 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 11은 AT 저하 사분위수에 의한 출혈 사례에 대한 다중 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 12는 AD-57213의 I상 임상 시험의 파트 C에 등록된 대상체에 대한 출혈 사례 데이터를 나타내는 표이다.
도 13a는 AD-57213의 I상 임상 시험의 파트 C 내의 모든 투약 코호트에 대한 연구 개시 전, 연구의 착수 부분 및 연구의 관찰 부분 동안의 연간 출혈률 (ABR) 중앙값을 나타내는 그래프이다.
도 13b는 AD-57213의 I상 임상 시험의 파트 C 내의 매월 80 mg (80 mg qM x3) 코호트에 대한 연구 개시 전, 연구의 착수 부분 및 연구의 관찰 부분 동안의 연간 출혈률 (ABR) 중앙값을 나타내는 그래프이다.
도 14a는 고정된 매월 50 mg 용량의 AD-57213이 투여된 억제제 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 14b는 고정된 매월 50 mg 용량의 AD-57213이 투여된 억제제 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 14c는 고정된 매월 50 mg 용량의 AD-57213이 투여된 억제제 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 14d는 고정된 매월 50 mg 용량의 AD-57213이 투여된 억제제 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 14e는 고정된 매월 50 mg 용량의 AD-57213이 투여된 억제제 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 14f는 고정된 매월 50 mg 용량의 AD-57213이 투여된 억제제 대상체에서 결정된 바와 같은 인자 VIII로 달성된 퍼센트 피크 트롬빈 생성에 비교된 상대적인 AT 활성을 도시하는 그래프이다.
도 15는 억제제가 있는 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 대상체에서의 기준선에 비교된 평균 AT (Serpinc1) 활성에 대한 다중 50 mg 또는 80 mg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 16은 다중 50 mg 용량의 AD-57213의 AT 저하 효과가 A형 혈우병에 걸린 대상체에서 트롬빈 생성 증가와 상관된다는 것을 도시하는 그래프이다.
도 17a는 AD-57213의 I상 임상 시험의 파트 D에 등록된 대상체에 대한 출혈 사례 데이터를 나타내는 표이다.
도 17b는 AD-57213의 I상 임상 시험의 파트 D 내의 모든 대상체에 대한 연구 개시 전, 연구의 착수 부분 및 연구의 관찰 부분 동안의 연간 출혈률 (ABR) 중앙값을 나타내는 그래프이다.
도 18은 AD-57213의 II상 표지 공개 연장 (OLE) 연구에서의 억제제가 없는 혈우병에 걸린 인간 대상체에서의 기준선에 비교된 평균 AT (Serpinc1) 활성에 대한 다중 80 mg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 19a는 AD-57213의 II상 표지 공개 연장 (OLE) 연구에서의 억제제가 없는 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 대상체에서의 기준선에 비교된 평균 AT (Serpinc1) 활성에 대한 다중 50 mg 또는 80 mg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 19b는 AD-57213의 II상 표지 공개 연장 (OLE) 연구에서의 억제제가 없는 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 대상체에서의 피크 트롬빈 생성에 대한 다중 50 mg 또는 80 mg 용량의 AD-57213의 효과를 도시하는 그래프이다. 그래프의 음영 부분은 실시예 1에 기술된 AD-57213의 I상 시험에서의 AD-57213이 투여되고 AT 녹다운이 25% 미만인 건강한 인간 지원자 (HV)에서 관찰된 피크 트롬빈 수준의 범위를 나타낸다. HV 범위를 통과하는 점선은 실시예 1에 기술된 AD-57213의 I상 시험에서의 AT 녹다운이 25% 미만이고 AD-57213이 투여된 건강한 인간 지원자 (HV)에서 관찰된 피크 트롬빈 수준 중앙값을 나타낸다.
도 20a는 AD-57213의 II상 OLE 임상 시험에 등록된 대상체에 대한 출혈 사례 데이터를 나타내는 표이다.
도 20b는 AD-57213의 II상 OLE 임상 시험 내의 모든 대상체에 대한 연구 개시 전, 연구의 착수 부분 및 연구의 관찰 부분 동안의 연간 출혈률 (ABR) 중앙값을 나타내는 그래프이다.

본 발명은, 적어도 부분적으로, 매우 낮은 용량 (예를 들어, 관련 분야에 교시된 용량보다 적어도 약 30배 더 낮은 용량)의 특정한 화학적 변형을 포함하는 GalNAc 연결 이중 가닥 RNAi 작용제가 Serpinc1의 발현을 억제하는 예외적인 효능, 뿐만 아니라 Serpinc1 발현의 예외적인 억제 기간을 나타낸다는 뜻밖의 발견을 기초로 한다. 구체적으로, 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드인 GalNAc 리간드를 포함하는 낮은 용량의 RNAi 작용제, 예컨대 작용제의 절단 부위 또는 절단 부위 근처의 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프 이상 (하나의 이러한 모티프를 포함함), 6개의 포스포로티오에이트 연결, 및 GalNAc 리간드를 포함하는 RNAi 작용제가 Serpinc1 유전자의 활성을 침묵화하는 것에서 예외적으로 효과적이고 지속성이 있는 것으로 본원에서 나타났다.

따라서, 본 발명은 Serpinc1 유전자의 RNA 전사체의 RNA-유도 침묵화 복합체 (RISC)-매개 절단을 초래하는 iRNA 조성물을 사용하여, Serpinc1 유전자의 발현을 억제하거나 감소시키는 것으로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, Serpinc1-연관 질환, 예컨대 혈우병 (예를 들어, A형 혈우병, B형 혈우병, 또는 C형 혈우병에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상, 예를 들어, 출혈을 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명은 Serpinc1 유전자의 RNA 전사체의 RNA-유도 침묵화 복합체 (RISC)-매개 절단을 초래하는 iRNA 조성물을 사용하여, Serpinc1 유전자의 발현을 억제하거나 감소시키는 것으로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예컨대 혈우병 (예를 들어, A형 혈우병, B형 혈우병, 또는 C형 혈우병)에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 추가로 제공한다.

본 발명의 방법에서 사용하기 위한 iRNA 작용제는 약 30개의 뉴클레오티드 이하의 길이, 예를 들어, 15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23, 또는 21-22개의 뉴클레오티드의 길이인 영역이 있는 RNA 가닥 (안티센스 가닥)을 일반적으로 포함하고, 이러한 영역은 Serpinc1 유전자의 mRNA 전사체의 적어도 일부분에 실질적으로 상보적이다.

다른 실시양태에서, 본 발명의 이중 가닥 RNAi 작용제의 한쪽 가닥 또는 양쪽 가닥은 66개 이하의 뉴클레오티드의 길이, 예를 들어, 36-66, 26-36, 25-36, 31-60, 22-43, 27-53개의 뉴클레오티드의 길이이고, Serpinc1 유전자의 mRNA 전사체의 적어도 일부분에 실질적으로 상보적인 적어도 19개의 인접한 뉴클레오티드의 영역이 있다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 18-30개의 인접한 뉴클레오티드의 듀플렉스를 형성한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 iRNA 작용제는 66개 이하의 뉴클레오티드의 길이, 예를 들어, 36-66, 26-36, 25-36, 31-60, 22-43, 27-53개의 뉴클레오티드의 길이일 수 있고 Serpinc1 유전자의 mRNA 전사체의 적어도 일부분에 실질적으로 상보적인 적어도 19개의 인접한 뉴클레오티드의 영역이 있는 RNA 가닥 (안티센스 가닥)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 더 긴 길이의 안티센스 가닥이 있는 이러한 iRNA 작용제는 20-60개의 뉴클레오티드의 길이의 제2 RNA 가닥 (센스 가닥)이 있을 수 있고, 여기서 센스 및 안티센스 가닥은 18-30개의 인접한 뉴클레오티드의 듀플렉스를 형성한다.

하기의 상세한 설명은 Serpinc1 유전자의 발현을 억제하기 위한 iRNA를 함유하는 조성물의 제조 및 사용 방법, 뿐만 아니라 이러한 유전자의 발현의 억제 및/또는 감소로부터 이익을 얻을 질환 및 장애에 걸린 대상체를 치료하기 위한 조성물, 용도 및 방법을 개시한다.

I. 정의

본 발명이 더욱 쉽게 이해될 수 있기 위하여, 특정 용어가 먼저 정의된다. 추가적으로, 파라미터의 값 또는 값의 범위가 열거될 때마다, 열거된 값에 대한 중간의 값 또는 범위도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다는 것을 주지하여야 한다.

단수형은 이러한 관사의 하나 또는 하나 초과 (즉, 적어도 하나)의 문법적 대상을 지칭하도록 본원에서 사용된다. 예를 들어, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소, 예를 들어, 복수의 요소를 의미한다.

"포함하는"이라는 용어는 "포함하지만 이에 제한되지 않는"이라는 구절을 의미하도록 본원에서 사용되고, 이와 상호교환가능하게 사용된다.

"또는"이라는 용어는, 문법적으로 명확하게 달리 지시하지 않는 한, "및/또는"이라는 용어를 의미하도록 본원에 사용되고, 이와 상호교환가능하게 사용된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "Serpinc1"은 세포에서 발현되는 특정 폴리펩티드를 지칭한다. Serpinc1은 세르핀 펩티다제 억제제, 클레이드 C (항트롬빈; AT), 구성원 1; 항트롬빈 III; AT3; 항트롬빈; 및 헤파린 보조인자 1로도 공지되어 있다. 인간 Serpinc1 mRNA 전사체의 서열을, 예를 들어, 진뱅크 등록 번호(GenBank Accession No.) GI:254588059 (NM_000488; 서열식별번호: 1)에서 확인할 수 있다. 붉은털원숭이 Serpinc1 mRNA의 서열을, 예를 들어, 진뱅크 등록 번호 GI:157167169 (NM_001104583; 서열식별번호: 2)에서 확인할 수 있다. 마우스 Serpinc1 mRNA의 서열을, 예를 들어, 진뱅크 등록 번호 GI:237874216 (NM_080844; 서열식별번호: 3)에서 확인할 수 있다. 래트 Serpinc1 mRNA의 서열을, 예를 들어, 진뱅크 등록 번호 GI:58865629 (NM_001012027; 서열식별번호: 4)에서 확인할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같은 "Serpinc1"이라는 용어는 Serpinc1 유전자의 천연 발생 DNA 서열 변이, 예컨대 Serpinc1 유전자에서의 단일 뉴클레오티드 다형성에 의해 세포에서 발현되는 특정 폴리펩티드를 또한 지칭한다. Serpinc1 유전자 내의 다수의 SNP가 확인되었고, 예를 들어, NCBI dbSNP에서 이를 확인할 수 있다 (예를 들어, www.ncbi.nlm.nih.gov/snp를 참조한다). Serpinc1 유전자 내의 SNP의 비제한적인 예를 NCBI dbSNP 등록 번호 rs677; rs5877; rs5878; rs5879; rs941988; rs941989; rs1799876; rs19637711; rs2008946; 및 rs2227586에서 확인할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "대상체"는 동물, 예컨대 영장류 (예컨대 인간, 비-인간 영장류, 예를 들어, 원숭이, 및 침팬지), 비-영장류 (예컨대 소, 돼지, 낙타, 라마, 말, 염소, 토끼, 양, 햄스터, 기니 피그, 고양이, 개, 래트, 마우스, 말, 및 고래)를 포함하는 포유동물, 또는 조류 (예를 들어, 오리 또는 거위)이다. 한 실시양태에서, 대상체는 인간, 예컨대 본원엔 기술된 바와 같은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 질환, 장애 또는 병태에 대해 치료 또는 평가 중인 인간; Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 질환, 장애 또는 병태의 위험이 있는 인간; Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 질환, 장애 또는 병태에 걸린 인간; 및/또는 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 질환, 장애 또는 병태에 대해 치료 중인 인간이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 검출가능한지 또는 검출가능하지 않은지와 관계없이, 하나 이상의 증상의 경감 또는 호전, 출혈 정도를 감소시키는 것, 안정화된 출혈 상태 (즉, 악화되고 있지 않음), 출혈의 호전 또는 완화를 포함하지만 이에 제한되지 않는 이롭거나 바람직한 결과를 지칭한다. "치료"는 치료 부재 시의 예상 생존에 비교하여 생존을 연장시키는 것을 또한 의미할 수 있다. 본 발명의 방법에서, 치료는 출혈 에피소드의 온-디맨드 치료 및 제어, 수술전후 기간의 출혈 관리, 및 출혈 에피소드의 빈도를 감소시키기 위한 일상적인 예방을 포함한다.

대상체 내의 Serpinc1 또는 질환 마커 또는 증상의 수준의 맥락에서의 "저하시킨다"라는 용어는 이러한 수준의 통계적으로 유의한 감소를 지칭한다. 감소는, 예를 들어, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 그 초과일 수 있고, 바람직하게는 이러한 장애가 없는 개체에 대한 정상 범위 내인 것으로 허용되는 수준으로 내려간다.

본원에서 사용된 바와 같이, "예방" 또는 "예방하는"은, Serpinc1 유전자의 발현의 감소로부터 이익을 얻을 질환, 장애 또는 그의 병태와 관련하여 사용될 때, 대상체에서 이러한 질환, 장애 또는 병태와 연관된 증상, 예를 들어, 출혈과 같은 증상이 발달될 가능성의 감소를 지칭한다. 예를 들어, 출혈에 대한 하나 이상의 위험 인자가 있는 개체에서 출혈이 발달되지 못하거나, 또는 동일한 위험 인자가 있고 본원에 기술된 바와 같은 치료를 받지 않은 집단에 비교하여 더 적은 중증도로 출혈이 발달될 때, 출혈이 발달될 가능성이 감소된다. 질환, 장애 또는 병태가 발달하지 못하는 것, 또는 이러한 질환, 장애 또는 병태와 연관된 증상의 발달이 감소되는 것 (예를 들어, 이러한 질환 또는 장애에 대한 임상적으로 허용되는 척도에서 적어도 약 10%만큼 감소되는 것), 또는 증상 지연 (예를 들어, 수일, 수주, 수개월 또는 수년만큼 지연되는 것)이 나타나는 것이 효과적인 예방으로 간주된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "출혈 장애"는 불량한 혈액 응고 및/또는 과도한 출혈을 초래하는 질환 또는 장애이다. 출혈 장애는 유전성 장애, 예컨대 혈우병 또는 빌레브란트병, 또는 후천성 장애, 예를 들어, 예를 들어, 파종성 혈관내 응고, 임신-연관 자간증, 비타민 K 결핍증, 자가면역 장애, 염증성 장 질환, 궤양 대장염, 피부과 장애 (예를 들어, 건선, 천포창), 호흡 질환 (예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환), 알레르기성 약물 반응, 예를 들어, 약제, 예컨대 아스피린, 헤파린 및 와파린의 결과, 당뇨병, 급성 B형 간염 감염, 급성 C형 간염 감염, 악성 또는 고형 종양 (예를 들어, 전립성, 폐, 결장, 췌장, 위, 담관, 두경부, 자궁경부, 유방, 흑색종, 신장, 및/또는 혈액 악성종양)과 연관된 것일 수 있다. 한 실시양태에서, 유전성 출혈 장애는 혈우병, 예를 들어, A형, B형, 또는 C형 혈우병이다. 한 실시양태에서, 유전성 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체는 교체 응고 요법에 대한 억제제, 예를 들어, 동종항체 억제제가 발달되어 있고, 본원에서 "억제제 대상체"로 지칭된다. 한 실시양태에서, 억제제 대상체는 A형 혈우병이다. 또 다른 실시양태에서, 억제제 대상체는 B형 혈우병이다. 또 다른 실시양태에서, 억제제 대상체는 C형 혈우병이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "치료적 유효량"은 출혈 장애 및 출혈이 있는 대상체에게 투여되었을 때, (예를 들어, 기존 질환 또는 질환의 하나 이상의 증상을 감소시키거나, 호전시키거나 또는 유지시킴으로써) 질환의 치료를 일으키는데 충분한 RNAi 작용제의 양을 포함하도록 의도된다. "치료적 유효량"은 RNAi 작용제, 작용제가 투여되는 방법, 질환 및 그의 중증도, 및 병력, 연령, 체중, 가족력, 유전적 구성, 선행 또는 동반 치료 (필요한 경우)의 유형, 및 치료될 대상체의 다른 개별적인 특성에 따라 다를 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같은 "예방적 유효량"은 출혈 장애가 있지만 출혈은 없는 대상체, 예를 들어, 출혈 장애가 있고 수술이 예정된 대상체 (예를 들어, 수술전후 기간 치료)에게 투여되었을 때, 질환 또는 질환의 하나 이상의 증상을 예방하거나 호전시키는데 충분한 iRNA의 양을 포함하도록 의도된다. 질환을 호전시키는 것은 질환 과정을 느리게 하는 것 또는 이후에 발달되는 질환의 중증도를 감소시키는 것을 포함한다. "예방적 유효량"은 iRNA, 작용제가 투여되는 방법, 질환 위험의 정도, 및 병력, 연령, 체중, 가족력, 유전적 구성, 선행 또는 동반 치료 (필요한 경우)의 유형, 및 치료될 환자의 다른 개별적인 특성에 따라 다를 수 있다.

"치료적 유효량" 또는 "예방적 유효량"은 임의의 치료에 적용가능한 합리적인 이익/위험 비로 약간의 원하는 국소적 또는 전신 효과를 일으키는 RNAi 작용제의 양을 또한 포함한다. 본 발명의 방법에서 사용되는 iRNA는 이러한 치료에 적용가능한 합리적인 이익/위험 비를 일으키는데 충분한 양으로 투여될 수 있다.

"제약상 허용되는"이라는 구절은 견실한 의학적 판단의 범주 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 부합하여, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 대상체 및 동물 대상체의 조직과의 접촉에서 사용하기에 적절한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투약 형태를 지칭하도록 본원에서 사용된다.

본원에서 사용된 바와 같은 "제약상 허용되는 담체"라는 구절은 대상 화합물을 하나의 기관 또는 신체 일부분으로부터 또 다른 기관 또는 신체 일부분으로 운반하거나 수송하는데 수반되는, 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 제작 보조제 (예를 들어, 윤활제, 탈크 마그네슘, 스테아르산칼슘 또는 스테아르산아연, 또는 스테아르산), 또는 물질을 캡슐화하는 용매를 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과 혼화성이고 치료되는 대상체에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 제약상 허용되는 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 하기를 포함한다: (1) 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말화 트라가탄트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 소듐 라우릴 술페이트 및 탈크; (8) 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; (9) 오일, 예컨대 땅콩 오일, 면실 오일, 홍화씨 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두 오일; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 발열원이 없는 물; (17) 등장성 염수; (18) 링거 용액; (19) 에틸 알콜; (20) pH 완충 용액; (21) 폴리에스테르, 폴리카르보네이트 및/또는 다가무수물; (22) 벌크화제, 예컨대 폴리펩티드 및 아미노산, (23) 혈청 성분, 예컨대 혈청 알부민, HDL 및 LDL; 및 (22) 제약 제형에서 사용되는 다른 비-독성 혼화성 물질.

본원에서 사용된 바와 같이, "표적 서열"은 1차 전사 생성물의 RNA 프로세싱의 생성물인 mRNA를 포함하여 Serpinc1 유전자의 전사 동안 형성된 mRNA 분자의 뉴클레오티드 서열의 인접한 부분을 지칭한다. 한 실시양태에서, 적어도 서열의 표적 부분은 Serpinc1 유전자의 전사 동안 형성된 mRNA 분자의 뉴클레오티드 서열의 이러한 부분에서 또는 이러한 부분 근처에서 iRNA-지시 절단에 대한 기질로서의 역할을 하기에 충분히 길 것이다.

표적 서열은 약 9-36개의 뉴클레오티드의 길이, 예를 들어, 약 15-30개의 뉴클레오티드의 길이일 수 있다. 예를 들어, 표적 서열은 약 15-30개의 뉴클레오티드, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23, 또는 21-22개의 뉴클레오티드의 길이일 수 있다. 상기 열거된 범위 및 길이의 중간인 범위 및 길이 또한 본 발명의 일부인 것으로 고려된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "서열을 포함하는 가닥"이라는 용어는 표준 뉴클레오티드 명명법을 사용하여 지칭되는 서열에 의해 기술되는 뉴클레오티드들의 사슬을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 지칭한다.

"G", "C", "A", "T" 및 "U" 각각은 염기로서 구아닌, 시토신, 아데닌, 티미딘 및 우라실을 각각 함유하는 뉴클레오티드를 일반적으로 가리킨다. 그러나, "리보뉴클레오티드" 또는 "뉴클레오티드"라는 용어는 하기에 추가로 기술된 바와 같은 변형된 뉴클레오티드, 또는 대용 교체 모이어티 (예를 들어, 표 1 참조)를 또한 지칭할 수 있다는 것이 이해될 것이다. 통상의 기술자는 교체 모이어티를 보유하는 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드의 염기 쌍형성을 실질적으로 변경시키지 않으면서 구아닌, 시토신, 아데닌 및 우라실이 다른 모이어티로 교체될 수 있다는 것을 잘 알고 있다. 예를 들어, 비제한적으로, 이노신을 그의 염기로서 포함하는 뉴클레오티드는 아데닌, 시토신 또는 우라실을 함유하는 뉴클레오티드와 염기 쌍을 형성할 수 있다. 따라서, 우라실, 구아닌 또는 아데닌을 함유하는 뉴클레오티드가 본 발명에서 특색화되는 dsRNA의 뉴클레오티드 서열에서 예를 들어 이노신을 함유하는 뉴클레오티드로 교체될 수 있다. 또 다른 예에서, 올리고뉴클레오티드 내의 어딘가의 아데닌 및 시토신이 각각 구아닌 및 우라실로 교체되어, 표적 mRNA와 G-U 워블 염기 쌍을 형성할 수 있다. 이러한 교체 모이어티를 함유하는 서열이 본 발명에서 특색화되는 조성물 및 방법에 적절하다.

본원에서 상호교환가능하게 사용된 바와 같은 "iRNA", "RNAi 작용제", "iRNA 작용제", "RNA 간섭 작용제"라는 용어들은 RNA (이러한 용어는 본원에서 정의된 바와 같다)를 함유하고 RNA-유도 침묵화 복합체 (RISC) 경로를 통해 RNA 전사체의 표적화된 절단을 매개하는 작용제를 지칭한다. iRNA는 RNA 간섭 (RNAi)으로 공지된 공정을 통해 mRNA의 서열-특이적 분해를 지시한다. iRNA는 세포, 예를 들어, 대상체, 예컨대 포유동물 대상체 내의 세포에서의 Serpinc1의 발현을 조정하고, 예를 들어, 이를 억제한다.

한 실시양태에서, 본 발명의 RNAi 작용제는 표적 RNA 서열, 예를 들어, Serpinc1 표적 mRNA 서열과 상호작용하여 표적 RNA의 절단을 지시하는 단일 가닥 RNA를 포함한다. 이론에 제한되기를 원치 않으면서, 세포 내로 도입된 긴 이중 가닥 RNA가 다이서(Dicer)로 공지된 제III형 엔도뉴클레아제에 의해 siRNA로 분해되는 것으로 여겨진다 (Sharp et al. (2001) Genes Dev. 15:485). 리보뉴클레아제-III-유사 효소인 다이서는 dsRNA를 특징적인 2-염기 3' 오버행이 있는 19-23개의 염기 쌍의 짧은 간섭 RNA로 프로세싱한다 (Bernstein, et al., (2001) Nature 409:363). 그 후, siRNA가 RNA-유도 침묵화 복합체 (RISC) 내로 혼입되고, 여기에서 하나 이상의 헬리카제가 siRNA 듀플렉스를 풀어서, 상보적인 안티센스 가닥이 표적 인식을 인도하는 것을 가능하게 한다 (Nykanen, et al., (2001) Cell 107:309). 적합한 표적 mRNA에 결합 시, RISC 내의 하나 이상의 엔도뉴클레아제가 표적을 절단하여 침묵화를 유도한다 (Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15:188). 따라서, 한 측면에서, 본 발명은 세포 내에서 생성되고, RISC 복합체의 형성을 촉진하여 표적 유전자, 즉, Serpinc1 유전자의 침묵화를 일으키는 단일 가닥 RNA (siRNA)에 관한 것이다. 따라서, "siRNA"라는 용어는 상기 기술된 바와 같은 RNAi를 지칭하도록 본원에서 사용되기도 한다.

또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제는 표적 mRNA를 억제하기 위해 세포 또는 생물 내로 도입되는 단일 가닥 siRNA일 수 있다. 단일 가닥 RNAi 작용제는 RISC 엔도뉴클레아제인 아르고노트(Argonaute) 2에 결합하고, 그 후 이는 표적 mRNA를 절단한다. 단일 가닥 siRNA는 일반적으로, 15-30개의 뉴클레오티드이고, 화학적으로 변형된다. 단일 가닥 siRNA의 디자인 및 테스트가 미국 특허 번호 8,101,348 및 문헌 [Lima et al., (2012) Cell 150: 883-894]에 기술되어 있고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다. 본원에 기술된 안티센스 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것이 본원에 기술된 바와 같은 또는 문헌 [Lima et al., (2012) Cell 150;:883-894]에 기술된 방법에 의해 화학적으로 변형된 바와 같은 단일 가닥 siRNA로서 사용될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물, 용도, 및 방법에서 사용하기 위한 "iRNA"는 이중 가닥 RNA이고, 본원에서 "이중 가닥 RNAi 작용제", "이중 가닥 RNA (dsRNA) 분자", "dsRNA 작용제", 또는 "dsRNA"로서 지칭된다. "dsRNA"라는 용어는 표적 RNA, 즉, Serpinc1 유전자에 대해 "센스" 및 "안티센스" 배향을 갖는 것으로 지칭되는 2개의 역평행이고 실질적으로 상보적인 핵산 가닥을 포함하는 듀플렉스 구조를 갖는, 리보핵산 분자의 복합체를 지칭한다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNA (dsRNA)는 본원에서 RNA 간섭 또는 RNAi로 지칭되는 전사-후 유전자-침묵화 메커니즘을 통해 표적 RNA, 예를 들어, mRNA의 분해를 촉발한다.

일반적으로, dsRNA 분자의 각각의 가닥의 대다수의 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드이지만, 본원에서 상세하게 기술된 바와 같이, 각각의 가닥 또는 둘 다의 가닥은 하나 이상의 비-리보뉴클레오티드, 예를 들어, 데옥시리보뉴클레오티드 및/또는 변형된 뉴클레오티드를 또한 포함할 수 있다. 추가적으로, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "RNAi 작용제"는 화학적 변형이 있는 리보뉴클레오티드를 포함할 수 있다; RNAi 작용제는 다중 뉴클레오티드에서 실질적인 변형을 포함할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "변형된 뉴클레오티드"라는 용어는 변형된 당 모이어티, 변형된 뉴클레오티드간 연결, 및/또는 변형된 핵염기를 독립적으로 갖는 뉴클레오티드를 지칭한다. 따라서, 변형된 뉴클레오티드라는 용어는 뉴클레오시드 연결, 당 모이어티, 또는 핵염기에 대한 예를 들어 관능기 또는 원자의 치환, 부가 또는 제거를 포괄한다. 본 발명의 작용제에서 사용하기에 적절한 변형은 본원에 개시되었거나 관련 분야에 공지된 모든 유형의 변형을 포함한다. siRNA 유형 분자에서 사용된 바와 같은 임의의 이러한 변형이 본 명세서 및 특허청구범위의 목적을 위해 "RNAi 작용제"에 포괄된다.

듀플렉스 영역은 RISC 경로를 통한 원하는 표적 RNA의 특이적 분해를 허용하는 임의의 길이일 수 있고, 약 9 내지 36개의 염기 쌍의 길이, 예를 들어, 약 15-30개의 염기 쌍의 길이, 예를 들어, 약 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 또는 36 base pairs in length, 예컨대 약 15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23, 또는 21-22개의 염기 쌍의 길이의 범위일 수 있다. 상기 열거된 범위 및 길이의 중간인 범위 및 길이 또한 본 발명의 일부인 것으로 고려된다.

듀플렉스 구조를 형성하는 2개의 가닥은 하나의 더 큰 RNA 분자의 상이한 부분들일 수 있거나, 또는 별개의 RNA 분자들일 수 있다. 2개의 가닥이 하나의 더 큰 분자의 일부이고, 따라서 하나의 가닥의 3'-단부와 듀플렉스 구조를 형성하는 각각의 다른 가닥의 5'-단부 사이의 뉴클레오티드들의 중단되지 않은 사슬에 의해 연결되는 경우, 연결 RNA 사슬이 "헤어핀 루프"로 지칭된다. 헤어핀 루프는 적어도 1개의 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 헤어핀 루프는 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 20개, 적어도 23개 또는 그 초과의 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

dsRNA의 2개의 실질적으로 상보적인 가닥을 별개의 RNA 분자들이 포함하는 경우, 이러한 분자들은 그럴 필요는 없지만, 공유결합으로 연결될 수 있다. 2개의 가닥이 하나의 가닥의 3'-단부와 듀플렉스 구조를 형성하는 각각의 다른 가닥의 5'-단부 사이의 뉴클레오티드들의 중단되지 않은 사슬 이외의 수단에 의해 공유결합으로 연결되는 경우, 연결 구조가 "링커"로 지칭된다. RNA 가닥들은 뉴클레오티드의 개수가 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 염기 쌍의 최대 개수는 dsRNA의 가장 짧은 가닥 내의 뉴클레오티드의 개수에서 듀플렉스 내에 존재하는 임의의 오버행을 뺀 것이다. 듀플렉스 구조에 더하여, RNAi는 하나 이상의 뉴클레오티드 오버행을 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명의 RNAi 작용제는 표적 RNA 서열, 예를 들어, Serpinc1 표적 mRNA 서열과 상호작용하여 표적 RNA의 절단을 지시하는 24-30개의 뉴클레오티드의 dsRNA이다. 이론에 의해 제한되기를 원치 않으면서, 세포 내로 도입된 긴 이중 가닥 RNA가 다이서로 공지된 제III형 엔도뉴클레아제에 의해 siRNA로 분해되는 것으로 여겨진다 (Sharp et al. (2001) Genes Dev. 15:485). 리보뉴클레아제-III-유사 효소인 다이서는 dsRNA를 특징적인 2-염기 3' 오버행이 있는 19-23개의 염기 쌍의 짧은 간섭 RNA로 프로세싱한다 (Bernstein, et al., (2001) Nature 409:363). 그 후, siRNA가 RNA-유도 침묵화 복합체 (RISC) 내로 혼입되고, 여기에서 하나 이상의 헬리카제가 siRNA 듀플렉스를 풀어서, 상보적인 안티센스 가닥이 표적 인식을 인도하는 것을 가능하게 한다 (Nykanen, et al., (2001) Cell 107:309). 적합한 표적 mRNA에 결합 시, RISC 내의 하나 이상의 엔도뉴클레아제가 표적을 절단하여 침묵화를 유도한다 (Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15:188).

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "뉴클레오티드 오버행"은 iRNA, 예를 들어, dsRNA의 듀플렉스 구조로부터 돌출되는 적어도 하나의 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드를 지칭한다. 예를 들어, dsRNA의 하나의 가닥의 3'-단부가 다른 가닥의 5'-단부 너머로 확장되거나 또는 반대인 경우에, 뉴클레오티드 오버행이 있다. dsRNA는 적어도 1개의 뉴클레오티드의 오버행을 포함할 수 있다; 대안적으로, 오버행은 적어도 2개의 뉴클레오티드, 적어도 3개의 뉴클레오티드, 적어도 4개의 뉴클레오티드, 적어도 5개의 뉴클레오티드 또는 그 초과를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 오버행은 데옥시뉴클레오티드/뉴클레오시드를 포함하는 뉴클레오티드/뉴클레오시드 유사체를 포함할 수 있거나 또는 이로 이루어질 수 있다. 오버행(들)은 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 그의 임의의 조합 상에 있을 수 있다. 추가로, 오버행의 뉴클레오티드(들)은 dsRNA의 안티센스 또는 센스 가닥 중 하나의 5'-단부, 3'-단부 또는 양쪽 단부 상에 존재할 수 있다.

한 실시양태에서, dsRNA의 안티센스 가닥은 1-10개의 뉴클레오티드, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 뉴클레오티드의 오버행이 3'-단부 및/또는 5'-단부에 있다. 한 실시양태에서, dsRNA의 센스 가닥 1-10개의 뉴클레오티드, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 뉴클레오티드의 오버행이 3'-단부 및/또는 5'-단부에 있다. 또 다른 실시양태에서, 오버행 내의 뉴클레오티드 중 하나 이상이 뉴클레오시드 티오포스페이트로 교체된다.

특정 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥, 또는 둘 다 상의 오버행은 10개의 뉴클레오티드보다 긴 연장된 길이, 예를 들어, 10-30개의 뉴클레오티드, 10-25개의 뉴클레오티드, 10-20개의 뉴클레오티드 또는 10-15개의 뉴클레오티드의 길이를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥 상에 있다. 특정 실시양태에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥의 3' 단부 상에 존재한다. 특정 실시양태에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥의 5' 단부 상에 존재한다. 특정 실시양태에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥 상에 있다. 특정 실시양태에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥의 3' 단부 상에 존재한다. 특정 실시양태에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥의 5' 단부 상에 존재한다. 특정 실시양태에서, 연장된 오버행 내의 뉴클레오티드 중 하나 이상이 뉴클레오시드 티오포스페이트로 교체된다.

"평활" 또는 "평활 단부"는 이중 가닥 RNAi 작용제의 이러한 단부에 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드가 없는 것, 즉, 뉴클레오티드 오버행이 없는 것을 의미한다. "평활 단부" RNAi 작용제는 그의 전체 길이에 걸쳐 이중 가닥인 dsRNA이고, 즉, 분자의 어느 한쪽 단부에 뉴클레오티드 오버행이 없다. 본 발명의 RNAi 작용제는 한쪽 단부에 뉴클레오티드 오버행이 있는 RNAi 작용제 (즉, 하나의 오버행 및 하나의 평활 단부가 있는 작용제) 또는 양쪽 단부에 뉴클레오티드 오버행이 있는 RNAi 작용제를 포함한다.

"안티센스 가닥" 또는 "가이드 가닥"이라는 용어는 표적 서열, 예를 들어, Serpinc1 mRNA에 실질적으로 상보적인 영역을 포함하는 iRNA, 예를 들어, dsRNA의 가닥을 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "상보성 영역"은 본원에 기술된 바와 같은 서열, 예를 들어 표적 서열, 예를 들어, Serpinc1 뉴클레오티드 서열에 실질적으로 상보적인 안티센스 가닥 상의 영역을 지칭한다. 상보성 영역이 표적 서열에 완전히 상보적이지 않은 경우, 미스매치가 분자의 내부 또는 말단 영역 내에 있을 수 있다. 일반적으로, 대부분의 허용되는 미스매치는 말단 영역 내에, 예를 들어, iRNA의 5'-및/또는 3'-말단으로부터 5, 4, 3, 또는 2개의 뉴클레오티드 내에 있다.

본원에서 사용된 바와 같은 "센스 가닥", 또는 "패신저 가닥"이라는 용어는 안티센스 가닥 (이러한 용어는 본원에서 정의된 바와 같다)의 영역에 실질적으로 상보적인 영역을 포함하는 iRNA의 가닥을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "절단 영역"은 절단 부위에 바로 인접하여 위치하는 영역을 지칭한다. 절단 부위는 절단이 일어나는 표적 상의 부위이다. 일부 실시양태에서, 절단 영역은 절단 부위의 어느 한쪽 단부에 있고 이에 바로 인접한 3개의 염기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 절단 영역은 절단 부위의 어느 한쪽 단부에 있고 이에 바로 인접한 2개의 염기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 절단 부위는 안티센스 가닥의 뉴클레오티드 10 및 11이 결합하는 부위에서 발생하고, 절단 영역은 뉴클레오티드 11, 12 및 13을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 그리고 달리 지시되지 않는 한, 제1 뉴클레오티드 서열을 제2 뉴클레오티드 서열과 관련하여 기술할 때 사용되는 경우의 "상보적"이라는 용어는, 통상의 기술자가 이해할 바와 같이, 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드가 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드와 특정 조건 하에 혼성화하여 듀플렉스 구조를 형성하는 능력을 지칭한다. 이러한 조건은, 예를 들어, 엄격한 조건일 수 있고, 엄격한 조건은 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6.4, 1 mM EDTA, 12-16시간 동안 50℃ 또는 70℃에 이어서 세정하는 것을 포함할 수 있다 (예를 들어, 문헌 ["Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Sambrook, et al. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press]을 참조한다). 다른 조건, 예컨대 생물 내부에서 마주칠 수 있는 바와 같은 생리적으로 적절한 조건을 적용할 수 있다. 통상의 기술자는 혼성화된 뉴클레오티드의 궁극적인 용도에 따라 두 서열의 상보성의 테스트에 가장 적합한 조건들의 세트를 결정할 수 있을 것이다.

iRNA, 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 dsRNA 내의 상보성 서열은 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드와 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드가 하나 또는 둘 다의 뉴클레오티드 서열의 전체 길이에 걸쳐 염기 쌍을 형성하는 것을 포함한다. 이러한 서열들은 본원에서 서로에 대해 "완전히 상보적"인 것으로 지칭될 수 있다. 그러나, 제1 서열이 본원에서 제2 서열과 관련하여 "실질적으로 상보적"인 것으로 지칭되는 경우, 2개의 서열은 완전히 상보적일 수 있거나, 또는 이들의 궁극적인 용도, 예를 들어, RISC 경로를 통한 유전자 발현의 억제에 가장 적절한 조건 하에 혼성화하는 능력을 유지하면서, 30개 이하의 염기 쌍의 듀플렉스에 대해 하나 이상이지만 일반적으로 5, 4, 3 또는 2개 이하인 미스매치 염기 쌍을 형성할 수 있다. 그러나, 2개의 올리고뉴클레오티드가 혼성화 시 하나 이상의 단일 가닥 오버행을 형성하도록 디자인된 경우, 이러한 오버행은 상보성 결정과 관련하여 미스매치로서 간주되지 않아야 한다. 예를 들어, 더 긴 올리고뉴클레오티드가 더 짧은 올리고뉴클레오티드에 완전히 상보적인 21개의 뉴클레오티드의 서열을 포함하는, 21개의 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드 하나 및 23개의 뉴클레오티드 길이의 또 다른 올리고뉴클레오티드를 포함하는 dsRNA는 본원에 기술된 목적을 위해 여전히 "완전히 상보적"인 것으로 지칭될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "상보적" 서열은, 이들이 혼성화하는 능력에 관련된 상기 요건이 충족되는 한, 또한 비-왓슨-크릭 염기 쌍 및/또는 비-천연 및 변형된 뉴클레오티드로부터 형성된 염기 쌍을 포함할 수 있거나 또는 전적으로 이로부터 형성될 수 있다. 이러한 비-왓슨-크릭 염기 쌍은 G:U 워블 또는 후그스타인 염기 쌍 형성을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

본원에서의 "상보적", "완전히 상보적" 및 "실질적으로 상보적"이라는 용어들은, 이들이 사용된 맥락으로부터 이해될 바와 같이, dsRNA의 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이, 또는 iRNA 작용제의 안티센스 가닥과 및 표적 서열 사이의 염기 매칭과 관련하여 사용될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 메신저 RNA (mRNA)의 "적어도 일부분에 실질적으로 상보적인" 폴리뉴클레오티드는 관심 mRNA (예를 들어, Serpinc1을 코딩하는 mRNA)의 인접한 부분에 실질적으로 상보적인 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 예를 들어, Serpinc1을 코딩하는 mRNA의 중단되지 않은 부분에 서열이 실질적으로 상보적이면 폴리뉴클레오티드가 Serpinc1 mRNA의 적어도 일부분에 상보적이다.

따라서, 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 폴리뉴클레오티드는 표적 Serpinc1 서열에 완전히 상보적이다. 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 폴리뉴클레오티드는 표적 Serpinc1 서열에 실질적으로 상보적이고, 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 1의 단편의 뉴클레오티드 서열의 등가의 영역에 적어도 약 80% 상보적인, 예컨대 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 상보적인 인접 뉴클레오티드 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 발명의 RNAi 작용제는 안티센스 폴리뉴클레오티드에 실질적으로 상보적인 센스 가닥을 포함하고, 차례로 안티센스 폴리뉴클레오티드는 표적 Serpinc1 서열에 상보적이며, 센스 가닥 폴리뉴클레오티드는 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 5의 단편의 뉴클레오티드 서열의 등가의 영역에 적어도 약 80% 상보적인, 예컨대 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 상보적인 인접 뉴클레오티드 서열을 포함한다.

본 발명의 한 측면에서, 본 발명의 방법 및 조성물에서 사용하기 위한 작용제는 안티센스 억제 메커니즘을 통해 표적 mRNA를 억제하는 단일 가닥 안티센스 RNA 분자이다. 단일 가닥 안티센스 RNA 분자는 표적 mRNA 내의 서열에 상보적이다. 단일 가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드는 mRNA와 염기 쌍을 형성하고 번역 기구를 물리적으로 방해함으로써 화학량론적 방식으로 번역을 억제할 수 있으며, 문헌 [Dias, N. et al., (2002) Mol Cancer Ther 1:347-355]을 참조한다. 단일 가닥 안티센스 RNA 분자는 약 15 내지 약 30개의 뉴클레오티드의 길이일 수 있고, 표적 서열에 상보적인 서열을 갖는다. 예를 들어, 단일 가닥 안티센스 RNA 분자는 본원에 기술된 안티센스 서열 중 임의의 하나로부터의 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20개, 또는 그 초과의 인접한 뉴클레오티드인 서열을 포함할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "억제하는"이라는 용어는 "감소시키는", "침묵화시키는", "하향 조절하는", "저해하는" 및 다른 유사 용어와 상호교환가능하게 사용되고, 임의 수준의 억제를 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "Serpinc1의 발현을 억제하는"이라는 구절은 임의의 Serpinc1 유전자 (예를 들어, 마우스 Serpinc1 유전자, 래트 Serpinc1 유전자, 원숭이 Serpinc1 유전자, 또는 인간 Serpinc1 유전자), 뿐만 아니라 Serpinc1 단백질을 코딩하는 Serpinc1 유전자의 변이체 또는 돌연변이체의 발현의 억제를 포함한다.

"Serpinc1 유전자의 발현을 억제하는"은 Serpinc1 유전자의 임의 수준의 억제, 예를 들어, Serpinc1 유전자의 발현의 적어도 부분적인 억제, 예컨대 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%만큼의 억제를 포함한다.

Serpinc1 유전자 발현과 연관된 임의의 변수의 수준, 예를 들어, Serpinc1 mRNA 수준, Serpinc1 단백질 수준, 또는, 예를 들어, 트롬빈 생성 잠재력의 척도로서의 트롬빈:항트롬빈 복합체 수준, 출혈 시간, 프로트롬빈 시간 (PT), 혈소판 카운트, 및/또는 활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간 (aPTT)을 기초로 Serpinc1 유전자의 발현을 평가할 수 있다. 대조군 수준에 비교된 이러한 변수 중 하나 이상의 절대 또는 상대 수준의 감소에 의해 억제를 평가할 수 있다. 대조군 수준은 관련 분야에서 이용되는 임의 유형의 대조군 수준, 예를 들어, 투약-전 기준선 수준, 또는 처리되지 않았거나 또는 대조군 (예를 들어, 완충제만 있는 대조군 또는 불활성 작용제 대조군)으로 처리된 유사한 대상체, 세포 또는 샘플로부터 결정된 수준일 수 있다.

한 실시양태에서, Serpinc1 유전자가 전사되고 Serpinc1 유전자의 발현이 억제되도록 처리된 제1 세포 또는 세포군에서 단리되거나 검출될 수 있는 Serpinc1 mRNA의 양이 제1 세포 또는 세포군과 실질적으로 동일하지만 이렇게 처리되지 않은 제2 세포 또는 세포군 (대조군 세포)에 비교하여 감소되는 것에 의해 Serpinc1 유전자의 발현의 적어도 부분적인 억제가 평가된다. 억제 정도가 하기 식으로 표현될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "세포를 RNAi 작용제와 접촉시키는", 예컨대 세포를 dsRNA와 접촉시키는이라는 구절은 세포를 임의의 가능한 수단에 의해 접촉시키는 것을 포함한다. 세포를 RNAi 작용제와 접촉시키는 것은 세포를 시험관 내에서 iRNA와 접촉시키는 것 또는 세포를 생체 내에서 iRNA와 접촉시키는 것을 포함한다. 접촉은 직접적으로 또는 간접적으로 행해질 수 있다. 따라서, 예를 들어, RNAi 작용제는 방법을 수행하는 개체에 의해 세포와 물리적으로 접촉될 수 있거나, 또는 대안적으로, RNAi 작용제는 결과적으로 이를 세포와 접촉되게 허용 또는 야기할 상황에 놓일 수 있다.

세포를 시험관 내에서 접촉시키는 것은, 예를 들어, 세포를 RNAi 작용제와 함께 인큐베이션하는 것에 의해 행해질 수 있다. 세포를 생체 내에서 접촉시키는 것은, 예를 들어, RNAi 작용제를 세포가 위치하는 조직 내 또는 근처로 주입함으로써 행해질 수 있거나, 또는 RNAi 작용제를 또 다른 구역, 예를 들어, 혈류 또는 피하 공간 내로 주입함으로써 행해질 수 있어, 접촉될 세포가 위치하는 조직에 작용제가 이후에 도달할 것이다. 예를 들어, RNAi 작용제가 RNAi 작용제를 관심 부위, 예를 들어, 간으로 지시하는 리간드, 예를 들어, GalNAc3를 함유하고/하거나 이에 커플링될 수 있다. 시험관내 및 생체내 접촉 방법의 조합이 또한 가능하다. 예를 들어, 세포가 시험관 내에서 RNAi 작용제와 접촉되고, 이후에 대상체 내로 이식될 수도 있다.

한 실시양태에서, 세포를 iRNA와 접촉시키는 것은 세포 내로의 섭취 또는 흡수를 용이하게 하거나 초래함으로써 "iRNA를 세포 내로 전달하는 것" 또는 "도입하는 것"을 포함한다. iRNA 흡수 또는 섭취는 도움을 받지 않은 확산성 또는 능동 세포 프로세스를 통해, 또는 보조 작용제 또는 장치에 의해 발생할 수 있다. iRNA를 세포 내로 도입하는 것은 시험관내 또는 생체내일 수 있다. 예를 들어, 생체내 도입의 경우, iRNA를 조직 부위 내로 주입하거나 또는 전신 투여할 수 있다. 베타-글루칸 전달 시스템, 예컨대 미국 특허 번호 5,032,401 및 5,607,677, 및 미국 공개 번호 2005/0281781 (이들의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다)에 기술된 것에 의해 생체내 전달을 행할 수도 있다. 세포 내로의 시험관내 도입은 관련 분야에 공지된 방법 예컨대 전기천공 및 리포펙션을 포함한다. 추가 접근법이 본원에서 하기에서 기술되고/되거나, 관련 분야에 공지되어 있다.

II. 본 발명의 방법

본 발명은 Serpinc1-연관 질환, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병 (예를 들어, A형 혈우병, B형 혈우병, 또는 C형 혈우병)에 걸린 대상체에게 iRNA 작용제 또는 본 발명의 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 치료 및 예방 방법을 제공한다. 본 발명의 일부 측면에서, 이러한 방법은 대상체에게 추가적인 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제가 작용제의 절단 부위 또는 절단 부위 근처의 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프 이상 (하나의 이러한 모티프를 포함함), 6개의 포스포로티오에이트 연결, 및 GalNAc 리간드를 포함하는 경우, 이러한 작용제는 약 0.200 내지 약 1.825 mg/kg, 0.200 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.875 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.100 mg/kg, 또는 약 0.925 내지 약 1.000 mg/kg의 용량으로 투여된다. 상기 언급된 값에 대한 중간의 값 및 범위도 본 발명의 일부인 것으로 의도되고, 예를 들어, RNAi 작용제는 대상체에게 약 0.015 mg/kg 내지 약 0.45 mg/mg의 용량으로 투여될 수 있다.

예를 들어, RNAi 작용제, 예를 들어, 제약 조성물 내의 RNAi 작용제는 약 0.2 mg/kg, 0.225 mg/kg, 0.25 mg/kg, 0.275 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.325 mg/kg, 0.35 mg/kg, 0.375 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.425 mg/kg, 0.45 mg/kg, 0.475 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 0.525 mg/kg, 0.55 mg/kg, 0.575 mg/kg, 약 0.6 mg/kg, 0.625 mg/kg, 0.65 mg/kg, 0.675 mg/kg, 약 0.7 mg/kg, 0.725 mg/kg, 0.75 mg/kg, 0.775 mg/kg, 약 0.8 mg/kg, 0.925 mg/kg, 0.95 mg/kg, 0.975 mg/kg, 약 1.0 mg/kg, 1.025 mg/kg, 1.05 mg/kg, 1.075 mg/kg, 약 1.1 mg/kg, 1.125 mg/kg, 1.15 mg/kg, 1.175 mg/kg, 약 1.2 mg/kg, 1.225 mg/kg, 1.25 mg/kg, 1.275 mg/kg, 약 1.3 mg/kg, 1.325 mg/kg, 1.35 mg/kg, 1.375 mg/kg, 약 1.4 mg/kg, 1.425 mg/kg, 1.45 mg/kg, 1.475 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 1.525 mg/kg, 1.55 mg/kg, 1.575 mg/kg, 약 1.6 mg/kg, 1.625 mg/kg, 1.65 mg/kg, 1.675 mg/kg, 약 1.7 mg/kg, 1.725 mg/kg, 1.75 mg/kg, 1.775 mg/kg, 또는 약 1.8 mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 열거된 값에 대한 중간의 값도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA (예를 들어, 본 발명의 dsRNA를 포함하는 제약 조성물)를 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공하고, 이는 대상체, 예를 들어, 인간에게 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.800 mg/kg의 용량의 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제 또는 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물을 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 본 발명의 iRNA, 예를 들어, dsRNA의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 용도를 제공한다.

추가 측면에서, 본 발명은 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 본 발명의 iRNA 작용제의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 본 발명의 iRNA 작용제의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체를 치료하기 위한 용도를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 유전자를 표적화하는 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA, 또는 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제가 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 경우, 이러한 작용제는 약 0.200 내지 약 1.825 mg/kg의 용량으로, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 0.250 mg/kg의 용량으로서; 또는 약 0.425 mg/kg 내지 약 0.475 mg/kg의 용량으로서; 또는 약 0.875 mg/kg 내지 약 0.925 mg/kg의 용량으로서; 또는 약 1.775 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량으로서 투여된다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제 (예를 들어, RNAi 작용제를 포함하는 제약 조성물)를 대상체에게 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량으로 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공하고, 이는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제, 또는 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물을 대상체, 예를 들어, 인간에게 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량으로 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이며, 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된, 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 용도를 제공한다.

추가 측면에서, 본 발명은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이며, 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된, 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이며, 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된, 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체를 치료하기 위한 용도를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이며, 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된, Serpinc1 유전자를 표적화하는 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA, 또는 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 포함하는 제약 조성물의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 iRNA 작용제는 대상체에게 고정 용량으로서 투여된다. "고정 용량" (예를 들어, mg 단위의 용량)은 임의의 대상체-관련 요인, 예컨대 체중과 관계없이 하나의 용량의 iRNA 작용제가 모든 대상체에게 사용된다는 것을 의미한다. 한 특정 실시양태에서, 본 발명의 iRNA 작용제의 고정 용량은 미리 결정된 체중 또는 연령을 기초로 한다.

일부 실시양태에서, RNAi 작용제는 약 25 mg 내지 약 100 mg, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 95 mg, 약 25 mg 내지 약 90 mg, 약 25 mg 내지 약 85 mg, 약 25 mg 내지 약 80 mg, 약 25 mg 내지 약 75 mg, 약 25 mg 내지 약 70 mg, 약 25 mg 내지 약 65 mg, 약 25 mg 내지 약 60 mg, 약 25 mg 내지 약 50 mg, 약 50 mg 내지 약 100 mg, 약 50 mg 내지 약 95 mg, 약 50 mg 내지 약 90 mg, 약 50 mg 내지 약 85 mg, 약 50 mg 내지 약 80 mg, 약 30 mg 내지 약 100 mg, 약 30 mg 내지 약 90 mg, 약 30 mg 내지 약 80 mg, 약 40 mg 내지 약 100 mg, 약 40 mg 내지 약 90 mg, 약 40 mg 내지 약 80 mg, 약 60 mg 내지 약 100 mg, 약 60 mg 내지 약 90 mg,, 약 25 mg 내지 약 55 mg, 약 25 mg 내지 약 65 mg, 약 30 mg 내지 약 95 mg, 약 30 mg 내지 약 85 mg, 약 30 mg 내지 약 75 mg, 약 30 mg 내지 약 65 mg, 약 30 mg 내지 약 55 mg, 약 40 mg 내지 약 95 mg, 약 40 mg 내지 약 85 mg, 약 40 mg 내지 약 75 mg, 약 40 mg 내지 약 65 mg, 약 40 mg 내지 약 55 mg, 또는 약 45 mg 내지 약 95 mg의 고정 용량으로서 투여된다.

일부 실시양태에서, RNAi 작용제는 약 25 mg, 약 30 mg, 약 35 mg, 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg, 약 70 mg, 약 75 mg, 약 80 mg, 약 85 mg, 약 90 mg, 약 95 mg, 또는 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여된다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상체에게 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA (예를 들어, 본 발명의 dsRNA를 포함하는 제약 조성물)를 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 이러한 방법은 대상체에게 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 50 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA (예를 들어, 본 발명의 dsRNA를 포함하는 제약 조성물)를 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 방법은 대상체에게 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 80 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA (예를 들어, 본 발명의 dsRNA를 포함하는 제약 조성물)를 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공하고, 이는 대상체, 예를 들어, 인간에게 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제 또는 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물을 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 이러한 방법은 대상체에게 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 50 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA (예를 들어, 본 발명의 dsRNA를 포함하는 제약 조성물)를 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 방법은 대상체에게 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 80 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA (예를 들어, 본 발명의 dsRNA를 포함하는 제약 조성물)를 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA, 예를 들어, dsRNA의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 50 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA, 예를 들어, dsRNA의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 80 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA, 예를 들어, dsRNA의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 용도를 제공한다.

추가 측면에서, 본 발명은 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 50 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 80 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체를 치료하기 위한 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 50 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체를 치료하기 위한 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 80 mg의 고정 용량의 본 발명의 iRNA 작용제의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체를 치료하기 위한 용도를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 유전자를 표적화하는 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA 또는 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 Serpinc1 유전자를 표적화하는 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA 또는 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 50 mg의 고정 용량의 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 Serpinc1 유전자를 표적화하는 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA 또는 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 80 mg의 고정 용량의 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제가 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 경우, 이러한 작용제는 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량으로, 예를 들어, 약 25 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 50 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 80 mg의 고정 용량으로서; 또는 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여된다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제 (예를 들어, RNAi 작용제를 포함하는 제약 조성물)를 대상체에게 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량으로 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하는 방법을 제공하고, 이는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제, 또는 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물을 대상체, 예를 들어, 인간에게 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량으로 투여하고, 이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이며, 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된, 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

추가 측면에서, 본 발명은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이며, 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된, 예방적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제의 Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 장애, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이며, 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된, 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체를 치료하기 위한 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이며, 센스 가닥이 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된, Serpinc1 유전자를 표적화하는 본 발명의 iRNA 작용제, 예를 들어, dsRNA, 또는 치료적 유효 용량, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 포함하는 제약 조성물의 대상체, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예컨대 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체를 치료하기 위한 약제의 제작에서의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

본 발명의 방법 및 용도는 표적 Serpinc1 유전자의 발현이 예컨대 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 약 80일 동안 감소되도록 본원에 기술된 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 표적 Serpinc1 유전자의 발현이 연장된 기간, 예를 들어, 적어도 약 7일 이상, 예를 들어, 약 1주, 2주, 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 2개월, 약 3개월, 또는 그 초과 동안 감소된다.

관련 분야에 공지된 임의의 방법으로 유전자 발현의 감소를 평가할 수 있다. 예를 들어, 관련 분야의 통상의 기술자에게 일상적인 방법, 예를 들어, 노던 블롯팅, qRT-PCR을 사용하여 Serpinc1의 mRNA 발현 수준을 결정함으로써, 관련 분야의 통상의 기술자에게 일상적인 방법, 예를 들어, 웨스턴 블롯팅, 면역학적 기술을 사용하여 Serpinc1의 단백질 수준을 결정함으로써, 및/또는 Serpinc1의 생물학적 활성, 예컨대 세포 혈액 응고 메커니즘 (또는 생체 내 환경에서, 혈액 응고 자체)과 연관된 하나 이상의 분자에 영향을 미치는 것을 결정함으로써, Serpinc1의 발현의 감소를 결정할 수 있다. 한 실시양태에서, 예를 들어, 전혈의 ROTEM® 트롬보엘라스토메트리(Thromboelastometry) 분석을 사용하여 Serpinc1 발현을 평가하기 위해 트롬빈 생성 시간, 응괴 형성 시간 및/또는 응고 시간을 결정한다.

본 발명의 방법 및 용도에 따른 dsRNA의 투여는 Serpinc1-연관 질환이 있는 환자에서 이러한 질환 또는 장애의 중증도, 징후, 증상 및/또는 마커의 감소를 초래할 수 있다. 이러한 맥락에서의 "감소"는 이러한 수준의 통계적으로 유의한 감소를 의미한다. 감소는, 예를 들어, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 약 100%일 수 있다.

질환 진행, 질환 완화, 증상 중증도, 출혈 빈도, 통증 감소, 삶의 질, 치료 효과를 유지하는데 요구되는 약제의 용량, 질환 마커의 수준, 또는 치료 중이거나 예방이 표적화되는 소정의 질환에 적합한 임의의 다른 측정가능한 파라미터를 측정함으로써, 질환 치료 또는 예방의 효능을 평가할 수 있다. 이러한 파라미터 중 임의의 하나 또는 임의의 파라미터 조합을 측정함으로써 치료 또는 예방의 효능을 모니터링하는 것은 충분히 관련 분야의 통상의 기술자의 능력 내에 있다. 예를 들어, 출혈 장애 치료의 효능을, 예를 들어, 트롬빈:항-트롬빈 수준의 주기적인 모니터링에 의해 평가할 수 있다. 이후 판독값과 초기 판독값의 비교는 치료가 효과적인지 여부의 지표를 의사에게 제공한다. 이러한 파라미터 중 임의의 하나 또는 임의의 파라미터 조합을 측정함으로써 치료 또는 예방의 효능을 모니터링하는 것은 충분히 관련 분야의 통상의 기술자의 능력 내에 있다. Serpinc1을 표적화하는 iRNA 또는 그의 제약 조성물의 투여와 관련하여, 출혈 장애에 대해 "효과적인"은 임상적으로 적합한 방식의 투여가 적어도 통계적으로 유의한 분율의 환자에 대한 이로운 효과, 예컨대 증상 개선, 치유, 질환 감소, 수명 연장, 삶의 질 개선, 또는 출혈 장애 및 관련된 원인의 치료에 익숙한 의사가 일반적으로 긍정적으로 인식하는 다른 효과를 초래한다는 것을 가리킨다.

질환 상태의 하나 이상의 파라미터의 통계적으로 유의한 개선이 있을 때, 또는 그렇지 않은 경우에 예상될 증상이 악화되거나 발달되지 못하는 것에 의해, 치료 또는 예방 효과가 명백하다. 예로서, 측정가능한 질환 파라미터의 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 20%, 30%, 40%, 50% 또는 그 초과의 유리한 변화가 효과적인 치료를 가리킬 수 있다. 관련 분야에 공지된 바와 같은 소정의 질환에 대한 실험 동물을 사용하여 소정의 iRNA 약물 또는 이러한 약물의 제형에 대한 효능을 판단할 수도 있다. 실험 동물 모델을 사용하는 경우, 마커 또는 증상의 통계적으로 유의한 감소가 관찰될 때 치료 효능이 입증된다.

대안적으로, 임상적으로 허용되는 질환 중증도 등급화 척도를 기초로 진단 분야의 통상의 기술자에 의해 결정되는 바와 같이 질환 중증도의 감소에 의해 효능이 측정될 수 있다. 적합한 척도를 사용하여 측정된 질환 중증도의 감소를 예를 들어 초래하는 임의의 긍정적인 변화는 본원에 기술된 바와 같은 iRNA 또는 iRNA 제형을 사용한 적합한 치료를 나타낸다.

iRNA (또는 iRNA를 포함하는 제약 조성물)는 대상체에게 1주일에 약 1회, 1개월에 약 1회, 6주마다 약 1회, 2개월마다 약 1회, 또는 분기별로 1회로 투여될 수 있다.

이중 가닥 iRNA 작용제는 대상체에게 1회 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 이중 가닥 iRNA 작용제는 대상체에게 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 매월 용량으로서 투여될 수 있다. 대안적으로, 이중 가닥 iRNA 작용제는 대상체에게 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여될 수 있다.

한 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 약 0.200 mg/kg 내지 약 0.250 mg/kg, 예를 들어, 약 0.225 mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 약 0.425 mg/kg 내지 약 0.475 mg/kg, 예를 들어, 약 0.450 mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 약 0.875 mg/kg 내지 약 0.925 mg/kg, 예를 들어, 약 0.900mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

한 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 약 1.775 mg/kg 내지 약 1.825, mg/kg, 예를 들어, 약 1.800 mg/kg의 매월 용량으로서 투여된다.

한 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 이중 가닥 RNAi 작용제는 대상체에게 약 25 내지 약 100 mg, 예를 들어, 약 25 mg, 50 mg, 80 mg, 또는 100 mg의 고정 용량으로서 투여된다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

1개월, 2개월, 3개월, 4개월 또는 그 초과 동안의 투여가, 예를 들어, 정기적으로, 예컨대 매월 반복될 수 있다. 초기 치료 체계 후, 치료가 덜 빈번하게 투여될 수 있다. 예를 들어, 3개월 동안 매월 투여한 후, 1년 이상 동안 분기별로 1회로 투여를 반복할 수 있다.

따라서, 일부 실시양태에서, RNAi 작용제는 투여 간격이 가까운 "로딩기"를 포함하고, RNAi 작용제가 더 긴 간격으로 투여되는 "유지기"가 이어질 수 있는 투약 체계로 투여된다.

로딩 투약 일정 및/또는 유지 투약 일정은 1회 이상의 반복을 위해 임의적으로 반복될 수 있다. 반복 횟수는 원하는 효과, 예를 들어, Serpinc1 유전자 억제의 달성, 및/또는 치료 또는 예방 효과, 예를 들어, 혈액 응고 증가, 응괴 형성 시간 감소, 및/또는 응고 시간 감소의 달성에 좌우될 수 있다.

iRNA 투여는 예를 들어, 환자의 세포, 조직, 혈액, 소변 또는 다른 구획에서, Serpinc1 수준을 적어도 약 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 약 99% 또는 그 초과만큼 감소시킬 수 있다.

일정 기간에 걸쳐, 예컨대 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24분, 또는 약 25분 기간에 걸쳐 정맥내 주입에 의해 iRNA가 투여될 수 있다.

전체 용량의 iRNA를 투여하기 전에, 환자에게 더 적은 용량, 예컨대 5% 주입물을 환자에게 투여하고, 유해 효과, 예컨대 알레르기 반응에 대해 환자를 모니터링할 수 있다. 또 다른 예에서, 원치 않는 면역자극 효과, 예컨대 시토카인 (예를 들어, TNF-알파 또는 INF-알파) 수준 증가에 대해 환자를 모니터링할 수 있다.

Serpinc1 발현에 대한 억제 효과로 인해, 본 발명에 따른 조성물 또는 이로부터 제조된 제약 조성물은 삶의 질을 강화할 수 있다.

본 발명의 iRNA는 "네이키드(naked)" 형태로, 또는 "유리 iRNA"로서 투여될 수 있다. 네이키드 iRNA는 제약 조성물의 부재 하에 투여된다. 네이키드 iRNA는 적절한 완충제 용액 내에 있을 수 있다. 완충제 용액은 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카르보네이트, 또는 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 완충제 용액은 포스페이트 완충 염수 (PBS)이다. iRNA를 함유하는 완충제 용액의 pH 및 삼투압은 대상체에게 투여하기에 적절하도록 조정될 수 있다.

대안적으로, 본 발명의 iRNA는 제약 조성물, 예컨대 dsRNA 리포솜 제형으로서 투여될 수 있다.

Serpinc1 유전자 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체는 출혈 장애, 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 유전성 출혈 장애 또는 후천성 출혈 장애에 걸린 대상체이다. 한 실시양태에서, 유전성 출혈 장애에 걸린 대상체는 혈우병, 예를 들어, A형, B형 또는 C형 혈우병이다. 한 실시양태에서, 유전성 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체는 억제제 대상체 (교체 응고 인자에 대해 불응성이 된 대상체)이다. 한 실시양태에서, 억제제 대상체는 A형 혈우병이다. 또 다른 실시양태에서, 억제제 대상체는 B형 혈우병이다. 또 다른 실시양태에서, 억제제 대상체는 C형 혈우병이다. Serpinc1 유전자 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체의 치료는 치료적 처치 (예를 들어, 온-디맨드이고, 예를 들어, 대상체가 출혈 중이고 (자연적인 출혈 또는 외상 결과로서의 출혈), 응고에 실패함), 및 예방적 처치 (예를 들어, 대상체가 출혈 중이지 않고/않거나 수술을 받을 예정임)를 포함한다.

본 발명은 iRNA 또는 그의 제약 조성물을, 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소 및/또는 억제로부터 이익을 얻을 대상체, 예를 들어, 출혈 장애가 있는 대상체를 치료하기 위해, 다른 제약 및/또는 다른 치료 방법, 예를 들어, 공지된 제약 및/또는 공지된 치료 방법, 예를 들어, 이러한 장애를 치료하기 위해 현재 사용되는 것들과 조합하여 사용하기 위한 방법 및 용도를 추가로 제공한다.

예를 들어, 특정 실시양태에서, Serpinc1을 표적화하는 iRNA는, 예를 들어, 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같은 출혈 장애를 치료하는데 유용한 작용제와 조합되어 투여된다. 예를 들어, Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 대상체, 예를 들어, 출혈 장애가 있는 대상체를 치료하는데 적절한 추가적인 치료제 및 치료 방법은 신선-동결 혈장 (FFP); 재조합 FVIIa; 재조합 FIX; FXI 농축물; 바이러스-불활성화, vWF-함유 FVIII 농축물; 대용량의 FVIII 또는 FIX를 포함할 수 있는 탈감작 요법과 스테로이드 또는 정맥내 면역글로불린 (IVIG) 및 시클로포스파미드; 항섬유소용해 요법의 존재 또는 부재 하의, 혈장분리반출술과 면역억제 및 FVIII 또는 FIX 주입; 면역억제 요법 (예를 들어, 시클로포스파미드, 프레드니손 및/또는 항-CD20)의 존재 또는 부재 하의 면역 내성 유도 (ITI); 데스모프레신 아세테이트 [DDAVP]; 항섬유소용해제, 예컨대 아미노카프로산 및 트라넥삼산; 활성화된 프로트롬빈 복합체 농축물 (PCC); 항혈우병제; 코르티코스테로이드; 면역억제제; 및 에스트로겐을 포함한다.

iRNA 및 추가적인 치료제 및/또는 치료는 동시에 및/또는 동일한 조합으로, 예를 들어, 비경구적으로 투여될 수 있거나, 또는 추가적인 치료제는 별개의 조성물의 일부로서 또는 별개의 시간에 및/또는 관련 분야에 공지되거나 본원에 기술된 또 다른 방법에 의해 투여될 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 화합물 AD-57213 (센스 가닥: 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13) 및 안티센스 가닥: 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14) [여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결임])을 약 0.200 mg/kg 내지 약 1.800 mg/kg의 용량, 예를 들어, 약 0.200 mg/kg 내지 약 0.250 mg/kg; 약 0.425 mg/kg 내지 약 0.475 mg/kg; 약 0.875 mg/kg 내지 약 0.925 mg/kg; 또는 약 1.775 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 매월 용량으로 피하 투여함으로써, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 화합물 AD-57213 (센스 가닥: 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13) 및 안티센스 가닥: 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14) [여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결임])을 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량, 예를 들어, 약 25 mg, 약 50 mg, 약 80 mg 또는 약 100 mg의 고정 용량으로 피하 투여함으로써, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 고정 용량은 50 mg이다. 또 다른 실시양태에서, 고정 용량은 80 mg이다.

III. 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 iRNA

세포, 예컨대 Serpinc1-연관 장애, 예를 들어, 출혈 장애, 예를 들어, 혈우병에 걸린 대상체, 예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간 내의 세포에서 Serpinc1 유전자의 발현을 억제하는 개선된 이중 가닥 RNAi 작용제의 사용을 위한 방법이 본원에서 기술된다.

따라서, 본 발명은 생체 내에서 표적 유전자 (즉, Serpinc1 유전자)의 발현을 억제할 수 있는 화학적 변형이 있는 이중 가닥 RNAi 작용제를 제공한다. 본 발명의 특정 측면에서, 본 발명의 iRNA의 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명의 iRNA의 모든 뉴클레오티드가 변형된다. "실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형된" 본 발명의 iRNA는 대부분 변형되지만 전체적으로 변형되지는 않고, 5, 4, 3, 2, 또는 1개 이하의 미변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다. RNAi 작용제의 각각의 가닥은 12-30개의 뉴클레오티드의 길이의 범위일 수 있다. 예를 들어, 각각의 가닥은 14-30개의 뉴클레오티드의 길이, 17-30개의 뉴클레오티드의 길이, 19-30개의 뉴클레오티드의 길이, 25-30개의 뉴클레오티드의 길이, 27-30개의 뉴클레오티드의 길이, 17-23개의 뉴클레오티드의 길이, 17-21개의 뉴클레오티드의 길이, 17-19개의 뉴클레오티드의 길이, 19-25개의 뉴클레오티드의 길이, 19-23개의 뉴클레오티드의 길이, 19-21개의 뉴클레오티드의 길이, 21-25개의 뉴클레오티드의 길이, 또는 21-23개의 뉴클레오티드의 길이일 수 있다.

전형적으로 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 본원에서 "RNAi 작용제"로도 지칭되는 듀플렉스 이중 가닥 RNA ("dsRNA")를 형성한다. RNAi 작용제의 듀플렉스 영역은 12-30개의 뉴클레오티드 쌍의 길이일 수 있다. 예를 들어, 듀플렉스 영역은 14-30개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 17-30개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 27-30개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 17-23개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 17-21개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 17-19개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 19-25개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 19-23개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 19- 21개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 21-25개의 뉴클레오티드 쌍의 길이, 또는 21-23개의 뉴클레오티드 쌍의 길이일 수 있다. 또 다른 예에서, 듀플렉스 영역은 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 및 27개의 뉴클레오티드의 길이로부터 선택된다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 하나의 가닥 또는 둘 다의 가닥의 3'-단부, 5'-단부, 또는 양쪽 단부에 하나 이상의 오버행 영역 및/또는 캡핑 기를 함유할 수 있다. 오버행은 1-6개의 뉴클레오티드의 길이, 예를 들어 2-6개의 뉴클레오티드의 길이, 1-5개의 뉴클레오티드의 길이, 2-5개의 뉴클레오티드의 길이, 1-4개의 뉴클레오티드의 길이, 2-4개의 뉴클레오티드의 길이, 1-3개의 뉴클레오티드의 길이, 2-3개의 뉴클레오티드의 길이, 또는 1-2개의 뉴클레오티드의 길이일 수 있다. 오버행은 하나의 가닥이 다른 것보다 더 긴 것의 결과, 또는 동일한 길이의 2개의 가닥이 엇갈린 것의 결과일 수 있다. 오버행은 표적 mRNA와 미스매치를 형성할 수 있거나 또는 표적화되는 유전자 서열에 상보적일 수 있거나 또는 또 다른 서열에 상보적일 수 있다. 제1 및 제2 가닥은, 예를 들어, 헤어핀을 형성하는 추가적인 염기에 의해, 또는 다른 비-염기 링커에 의해 연결될 수도 있다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제의 오버행 영역 내의 뉴클레오티드들은, 각각 독립적으로, 2'-당 변형, 예컨대 2-F, 2'-O-메틸, 티미딘 (T), 2`-O-메톡시에틸-5-메틸우리딘 (Teo), 2`-O-메톡시에틸아데노신 (Aeo), 2`-O-메톡시에틸-5-메틸시티딘 (m5Ceo), 및 그의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 변형 또는 미변형된 뉴클레오티드일 수 있다. 예를 들어, TT가 어느 한쪽 가닥 상의 어느 한쪽 단부에 대한 오버행 서열일 수 있다. 이러한 오버행은 표적 mRNA와 미스매치를 형성할 수 있거나 또는 표적화되는 유전자 서열에 상보적일 수 있거나 또는 또 다른 서열일 수 있다.

RNAi 작용제의 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 둘 다의 가닥의 5'- 또는 3'-오버행이 인산화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 오버행 영역(들)은 2개의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트가 있는 2개의 뉴클레오티드를 함유하고, 여기서 2개의 뉴클레오티드는 동일하거나 상이할 수 있다. 한 실시양태에서, 오버행은 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 둘 다의 가닥의 3'-단부에 존재한다. 한 실시양태에서, 이러한 3'-오버행은 안티센스 가닥 내에 존재한다. 한 실시양태에서, 이러한 3'-오버행은 센스 가닥 내에 존재한다.

RNAi 작용제는 RNAi의 간섭 활성을 그의 전체적인 안정성에 영향을 미치지 않으면서 강화할 수 있는 단일 오버행만 함유할 수 있다. 예를 들어, 단일 가닥 오버행이 센스 가닥의 3'-말단 단부에, 또는, 대안적으로, 안티센스 가닥의 3'-말단 단부에 위치할 수 있다. RNAi는 안티센스 가닥의 5'-단부 (또는 센스 가닥의 3'-단부)에 또는 반대로 위치하는 평활 단부가 있을 수도 있다. 일반적으로, RNAi의 안티센스 가닥은 3'-단부에 뉴클레오티드 오버행이 있고, 5'-단부는 평활하다. 이론에 의해 제한되기를 원치 않으면서, 안티센스 가닥의 5'-단부의 비대칭 평활 단부 및 안티센스 가닥의 3'-단부 오버행이 RISC 프로세스 내로의 가이드 가닥 로딩에 유리하다.

본 발명에서 특색화된 핵산 중 임의의 것이 관련 분야에 잘 확립되어 있는 방법, 예컨대 문헌 ["Current protocols in nucleic acid chemistry," Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA] (이에 의해 본원에 참조로 포함됨)에 기술된 것에 의해 합성 및/또는 변형될 수 있다. 변형은, 예를 들어, 단부 변형, 예를 들어, 5'-단부 변형 (인산화, 접합, 연결 역전) 또는 3'-단부 변형 (접합, DNA 뉴클레오티드, 연결 역전 등); 염기 변형, 예를 들어, 안정화 염기, 탈안정화 염기, 또는 확장된 레퍼토리의 파트너와 염기 쌍을 이루는 염기로 교체하는 것, 염기 제거 (무염기 뉴클레오티드), 또는 접합된 염기); 당 변형 (예를 들어, 2'-위치 또는 4'-위치에서의 변형) 또는 당 교체; 및/또는 포스포디에스테르 연결의 변형 또는 교체를 포함하는 백본 변형을 포함한다. 본원에 기술된 실시양태에서 유용한 iRNA 화합물의 구체적인 예는 변형된 백본 또는 비-천연 뉴클레오시드간 연결을 함유하는 RNA를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 변형된 백본이 있는 RNA는, 특히, 백본 내에 인 원자가 없는 것을 포함한다. 본 명세서의 목적을 위해, 그리고 관련 분야에서 때때로 언급되는 바와 같이, 뉴클레오시드 백본 내에 인 원자가 없는 변형된 RNA도 올리고뉴클레오시드인 것으로 간주될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 iRNA는 그의 뉴클레오시드간 백본 내에 인 원자가 있을 것이다.

변형된 RNA 백본은, 예를 들어, 포스포로티오에이트, 키랄 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬포스포트리에스테르, 메틸 및 다른 알킬 포스포네이트 (3'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트 포함), 포스피네이트, 포스포르아미데이트 (3'-아미노 포스포르아미데이트 및 아미노알킬포스포르아미데이트 포함), 티오노포스포르아미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르, 및 정상적인 3'-5' 연결이 있는 보라노포스페이트, 그의 2'-5'-연결 유사체, 및 인접한 뉴클레오시드 단위 쌍이 3'-5'에서 5'-3'로 또는 2'-5'에서 5'-2'로 연결되어 있는, 극성이 역전된 것을 포함한다. 다양한 염, 혼합된 염, 및 유리 산 형태 또한 포함된다.

상기 인-함유 연결의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허 번호 3,687,808; 4,469,863; 4,476,301; 5,023,243; 5,177,195; 5,188,897; 5,264,423; 5,276,019; 5,278,302; 5,286,717; 5,321,131; 5,399,676; 5,405,939; 5,453,496; 5,455,233; 5,466,677; 5,476,925; 5,519,126; 5,536,821; 5,541,316; 5,550,111; 5,563,253; 5,571,799; 5,587,361; 5,625,050; 6,028,188; 6,124,445; 6,160,109; 6,169,170; 6,172,209; 6, 239,265; 6,277,603; 6,326,199; 6,346,614; 6,444,423; 6,531,590; 6,534,639; 6,608,035; 6,683,167; 6,858,715; 6,867,294; 6,878,805; 7,015,315; 7,041,816; 7,273,933; 7,321,029; 및 US 특허 RE39464를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

내부에 인 원자를 포함하지 않는 변형된 RNA 백본은 짧은 사슬 알킬 또는 시클로알킬뉴클레오시드간 연결, 혼합된 헤테로원자 및 알킬 또는 시클로알킬뉴클레오시드간 연결, 또는 하나 이상의 짧은 사슬 헤테로원자 또는 헤테로시클릭 뉴클레오시드간 연결에 의해 형성된 백본을 갖는다. 이들은 모르폴리노 연결(부분적으로 뉴클레오시드의 당 부분으로부터 형성됨)이 있는 것; 실록산 백본; 술피드, 술폭시드 및 술폰 백본; 포름아세틸 및 티오포름아세틸 백본; 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 백본; 알켄 함유 백본; 술파메이트 백본; 메틸렌이미노 및 메틸렌히드라지노 백본; 술폰 및 술폰아미드 백본; 아미드 백본; 및 N, O, S 및 CH₂ 성분 부분이 혼합되어 있는 다른 백본을 포함한다.

상기 올리고뉴클레오시드의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허 번호 5,034,506; 5,166,315; 5,185,444; 5,214,134; 5,216,141; 5,235,033; 5,64,562; 5,264,564; 5,405,938; 5,434,257; 5,466,677; 5,470,967; 5,489,677; 5,541,307; 5,561,225; 5,596,086; 5,602,240; 5,608,046; 5,610,289; 5,618,704; 5,623,070; 5,663,312; 5,633,360; 5,677,437; 및 5,677,439를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

다른 실시양태에서, 뉴클레오티드 단위의 당 및 뉴클레오시드간 연결 둘 다, 즉 백본이 신규 기로 교체된 적절한 RNA 모방체가 iRNA에서의 사용에 구상된다. 염기 단위는 적합한 핵산 표적 화합물과의 혼성화를 위해 유지된다. 우수한 혼성화 성질이 있는 것으로 나타난 RNA 모방체인 한 이러한 올리고머 화합물이 펩티드 핵산 (PNA)으로 지칭된다. PNA 화합물에서, RNA의 당 백본이 아미드 함유 백본, 특히 아미노에틸글리신 백본으로 교체된다. 핵염기는 유지되고, 백본의 아미드 부분의 아자 질소 원자에 직접적으로 또는 간접적으로 결합된다. PNA 화합물의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허 번호 5,539,082; 5,714,331; 및 5,719,262를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다. 본 발명의 iRNA에서 사용하기에 적절한 추가적인 PNA 화합물이, 예를 들어, 문헌 [Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500]에 기술되어 있다.

본 발명에서 특색화된 일부 실시양태는 포스포로티오에이트 백본 및 올리고뉴클레오시드와 헤테로원자 백본, 특히 상기 언급된 미국 특허 번호 5,489,677의 --CH₂--NH--CH₂-, --CH₂--N(CH₃)--O--CH₂--[메틸렌 (메틸이미노) 또는 MMI 백본으로 공지됨], --CH₂--O--N(CH₃)--CH₂--, --CH₂--N(CH₃)--N(CH₃)--CH₂-- 및 --N(CH₃)--CH₂--CH₂--[천연 포스포디에스테르 백본은 --O--P--O--CH₂--로 표현됨], 및 상기 언급된 미국 특허 번호 5,602,240의 아미드 백본이 있는 RNA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 특색화된 RNA는 상기 언급된 미국 특허 번호 5,034,506의 모르폴리노 백본 구조를 갖는다.

변형된 RNA는 하나 이상의 치환된 당 모이어티를 또한 함유할 수 있다. 본원에서 특색화된 iRNA, 예를 들어, dsRNA는 하기 중 하나를 2'-위치에 포함할 수 있다: OH; F; O-, S-, 또는 N-알킬; O-, S-, 또는 N-알케닐; O-, S- 또는 N-알키닐; 또는 O-알킬-O-알킬 [여기서 알킬, 알케닐 및 알키닐은 치환 또는 비치환 C₁ 내지 C₁₀ 알킬 또는 C₂ 내지 C₁₀ 알케닐 및 알키닐일 수 있다]. 예시적인 적절한 변형은 O[(CH₂)_nO]_mCH₃, O(CH₂)_nOCH₃, O(CH₂)_nNH₂, O(CH₂) _nCH₃, O(CH₂)_nONH₂, 및 O(CH₂)_nON[(CH₂)_nCH₃)]₂ [여기서 n 및 m은 1 내지 약 10임]를 포함함다. 다른 실시양태에서, dsRNA는 하기 중 하나를 2' 위치에 포함한다: C₁ 내지 C₁₀ 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 알크아릴, 아르알킬, O-알크아릴 또는 O-아르알킬, SH, SCH₃, OCN, Cl, Br, CN, CF₃, OCF₃, SOCH₃, SO₂CH₃, ONO₂, NO₂, N₃, NH₂, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알크아릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실릴, RNA 절단 기, 리포터 기, 인터칼레이터, iRNA의 약동학적 성질을 개선하기 위한 기, 또는 iRNA의 약역학적 성질을 개선하기 위한 기, 및 유사한 성질이 있는 다른 치환기. 일부 실시양태에서, 변형은 2'-메톡시에톡시 (2'-O--CH₂CH₂OCH₃, 일명 2'-O-(2-메톡시에틸) 또는 2'-MOE) (Martin et al., Helv . Chim . Acta, 1995, 78:486-504), 즉, 알콕시-알콕시 기를 포함한다. 또 다른 예시적인 변형은 하기의 본원의 실시예에 기술된 바와 같은 2'-디메틸아미노옥시에톡시, 즉, O(CH₂)₂ON(CH₃)₂ 기 (일명 2'-DMAOE), 및 2'-디메틸아미노에톡시에톡시 (관련 분야에 2'-O-디메틸아미노에톡시에틸 또는 2'-DMAEOE로도 공지됨), 즉, 2'-O--CH₂--O--CH₂--N(CH₂)₂이다.

다른 변형은 2'-메톡시 (2'-OCH₃), 2'-아미노프로폭시 (2'-OCH₂CH₂CH₂NH₂) 및 2'-플루오로 (2'-F)를 포함한다. 유사한 변형이 iRNA의 RNA 상의 다른 위치, 특히 3' 말단 뉴클레오티드 상 또는 2'-5' 연결 dsRNA 내의 당의 3' 위치, 또는 5' 말단 뉴클레오티드의 5' 위치에서 이루어질 수 있다. iRNA에 펜토푸라노실 당 대신에 당 모방체 예컨대 시클로부틸 모이어티가 있을 수도 있다. 이러한 변형된 당 구조의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허 번호 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,658,873; 5,670,633; 및 5,700,920를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 중 몇몇은 본 출원과 공동으로 소유된다. 상기 특허 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

iRNA는 핵염기 (관련 분야에서 종종 "염기"로 간단하게 지칭됨) 변형 또는 치환을 또한 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "비변형" 또는 "천연" 핵염기는 퓨린 염기인 아데닌 (A) 및 구아닌 (G), 및 피리미딘 염기인 티민 (T), 시토신 (C) 및 우라실 (U)을 포함한다. 변형된 핵염기는 다른 합성 및 천연 핵염기 예컨대 데옥시-티민 (dT), 5-메틸시토신 (5-me-C), 5-히드록시메틸 시토신, 크산틴, 하이포크산틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 우라실 및 시토신, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-히드록실 및 다른 8-치환 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아제아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌을 포함한다. 추가 핵염기는 미국 특허 번호 3,687,808에 개시된 것들, 문헌 [Modified nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008]에 개시된 것들; 문헌 [The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990]에 개시된 것들, 문헌 [Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613]에 개시된 것들, 및 문헌 [Sanghvi, Y S., Chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993]에 개시된 것들을 포함한다. 이러한 핵염기 중 몇몇이 본 발명에서 특색화된 올리고머 화합물의 결합 친화력을 증가시키는데 특히 유용하다. 이는 5-치환 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 0-6 치환 퓨린 (2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신 포함)을 포함한다. 5-메틸시토신 치환은 핵산 듀플렉스 안정성을 0.6-1.2℃만큼 증가시키는 것으로 나타났고 (Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278), 예시적인 염기 치환이며, 2'-O-메톡시에틸 당 변형과 조합되었을 때 더욱 더 특히 그러하다.

상기 언급된 변형된 핵염기 중 몇몇, 뿐만 아니라 다른 변형된 핵염기의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 상기 언급된 미국 특허 번호 3,687,808, 4,845,205; 5,130,30; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121, 5,596,091; 5,614,617; 5,681,941; 5,750,692; 6,015,886; 6,147,200; 6,166,197; 6,222,025; 6,235,887; 6,380,368; 6,528,640; 6,639,062; 6,617,438; 7,045,610; 7,427,672; 및 7,495,088를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

iRNA의 RNA는 하나 이상의 비시클릭 당 모이어티를 포함하도록 변형될 수도 있다. "비시클릭 당"은 2개의 원자의 브릿징에 의해 변형된 푸라노실 고리이다. "비시클릭 뉴클레오시드" ("BNA")는 당 고리의 2개의 탄소 원자를 연결하는 브릿지를 포함함으로써 비시클릭 고리 시스템을 형성하는 당 모이어티가 있는 뉴클레오시드이다. 특정 실시양태에서, 브릿지는 당 고리의 4'-탄소 및 2'-탄소를 연결한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명의 작용제는 iRNA의 RNA가 하나 이상의 잠금형 핵산 (LNA)을 포함하도록 변형될 수도 있는 것을 포함할 수 있다. 잠금형 핵산은 리보스 모이어티가 2' 및 4'를 연결하는 여분의 브릿지를 포함하는 변형된 리보스 모이어티가 있는 뉴클레오티드이다. 달리 말하면, LNA는 4'-CH2-O-2' 브릿지를 포함하는 비시클릭 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오티드이다. 이러한 구조는 3'-엔도 구조 형상에서 리보스를 효과적으로 "잠근다". siRNA에 잠금형 핵산을 부가하는 것은 혈청 내에서의 siRNA 안정성을 증가시키고 표적을 벗어나는 효과를 감소시키는 것으로 나타났다 (Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447; Mook, OR. et al., (2007) Mol Canc Ther 6(3):833-843; Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193).

본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 사용하기 위한 비시클릭 뉴클레오시드의 예는 비제한적으로 4'과 2' 리보실 고리 원자 사이에 브릿지를 포함하는 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 폴리뉴클레오티드 작용제는 4'에서 2'로의 브릿지를 포함하는 하나 이상의 비시클릭 뉴클레오시드를 포함한다. 이러한 4'에서 2'로의 가교 비시클릭 뉴클레오시드의 예는 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' ("구속형 에틸" 또는 "cEt"로도 지칭됨) 및 4'-CH(CH2OCH3)-O-2' (및 그의 유사체; 예를 들어, 미국 특허 번호 7,399,845 참조); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' (및 그의 유사체; 예를 들어, 미국 특허 번호 8,278,283 참조); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (및 그의 유사체; 예를 들어, 미국 특허 번호 8,278,425 참조); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (예를 들어, 미국 특허 공개 번호 2004/0171570 참조); 4'-CH2-N(R)-O-2' [여기서 R은 H, C1-C12 알킬, 또는 보호기임] (예를 들어, 미국 특허 번호 7,427,672 참조); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (예를 들어, 문헌 [Chattopadhyaya et al., J. Org . Chem., 2009, 74, 118-134] 참조); 및 4'-CH2-C(=CH2)-2' (및 그의 유사체; 예를 들어, 미국 특허 번호 8,278,426)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

잠금형 핵산 뉴클레오티드의 제조를 교시하는 추가적인 대표적인 미국 특허 및 미국 특허 공개는 미국 특허 번호 6,268,490; 6,525,191; 6,670,461; 6,770,748; 6,794,499; 6,998,484; 7,053,207; 7,034,133;7,084,125; 7,399,845; 7,427,672; 7,569,686; 7,741,457; 8,022,193; 8,030,467; 8,278,425; 8,278,426; 8,278,283; US 2008/0039618; 및 US 2009/0012281을 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

α-L-리보푸라노스 및 β-D-리보푸라노스를 예를 들어 포함하는 하나 이상의 입체화학적 당 형상을 갖는 상기 비시클릭 뉴클레오티드 중 임의의 것을 제조할 수 있다 (WO 99/14226 참조).

iRNA의 RNA는 하나 이상의 구속형 에틸 뉴클레오티드를 포함하도록 변형될 수도 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "구속형 에틸 뉴클레오티드" 또는 "cEt"는 4'-CH(CH3)-O-2' 브릿지를 포함하는 비시클릭 당 모이어티를 포함하는 잠금형 핵산이다. 한 실시양태에서, 구속형 에틸 뉴클레오티드는 본원에서 "S-cEt"로 지칭되는 S 형상이다.

본 발명의 iRNA는 하나 이상의 "입체적으로 제한된 뉴클레오티드" ("CRN")를 포함할 수도 있다. CRN은 리보스의 C2' 및 C4' 탄소 또는 리보스의 C3 및 -C5'탄소를 연결하는 링커가 있는 뉴클레오티드 유사체이다. CRN은 리보스 고리를 안정적인 형상으로 잠그고, mRNA에 대한 혼성화 친화력을 증가시킨다. 링커는 산소를 안정성 및 친화력에 대한 최적의 위치에 배치하여 더 적은 리보스 고리 퍼커링(puckering)을 초래하는데 충분한 길이이다.

상기 언급된 CRN 중 몇몇의 제조를 교시하는 대표적인 공보는 미국 특허 공개 번호 2013/0190383; 및 PCT 공개 WO 2013/036868를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

본 발명의 iRNA의 뉴클레오티드 중 하나 이상은 히드록시메틸-치환 뉴클레오티드를 또한 포함할 수 있다. "히드록시메틸-치환 뉴클레오티드"는 "비-잠금형 핵산" ("UNA") 변형으로 또한 지칭되는 비-시클릭 2'-3'-seco-뉴클레오티드이다.

UNA의 제조를 교시하는 대표적인 미국 공보는 미국 특허 번호 8,314,227; 및 미국 특허 공개 번호 2013/0096289; 2013/0011922; 및 2011/0313020을 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

RNA 분자의 단부에 대한 잠재적으로 안정화시키는 변형은 N-(아세틸아미노카프로일)-4-히드록시프롤리놀 (Hyp-C6-NHAc), N-(카프로일-4-히드록시프롤리놀 (Hyp-C6), N-(아세틸-4-히드록시프롤리놀 (Hyp-NHAc), 티미딘-2'-0-데옥시티미딘 (에테르), N-(아미노카프로일)-4-히드록시프롤리놀 (Hyp-C6-아미노), 2-도코사노일-우리딘-3"-포스페이트, 역전 염기 dT(idT) 등을 포함할 수 있다. 이러한 변형의 개시내용을 PCT 공개 번호 WO 2011/005861에서 확인할 수 있다.

A. 본 발명의 모티프를 포함하는 변형된 iRNA

본 발명의 특정 측면에서, 본 발명의 이중 가닥 RNAi 작용제는, 예를 들어, 미국 가출원 번호 61/561,710 (2011년 11월 18일 출원), 또는 PCT/US2012/065691 (2012년 11월 16일 출원)에 개시된 바와 같은 화학적 변형이 있는 작용제를 포함하고, 이들 각각의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.

본원, 가출원 번호 61/561,710, 및 PCT/US2012/065691에 제시된 바와 같이,특히 절단 부위 또는 절단 부위 근처에서, 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프 이상을 RNAi 작용제의 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내로 도입함으로써 우수한 결과가 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 다른 식으로 완전히 변형될 수 있다. 이러한 모티프의 도입은 센스 및/또는 안티센스 가닥의 변형 패턴 (존재하는 경우)을 방해한다. RNAi 작용제는, 예를 들어 센스 가닥 상에서, GalNAc 유도체 리간드와 임의적으로 접합될 수 있다. 생성된 RNAi 작용제는 우수한 유전자 침묵화 활성을 나타낸다.

더욱 구체적으로, 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 RNAi 작용제의 적어도 하나의 가닥의 절단 부위 또는 절단 부위 근처에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프가 하나 이상 있도록 변형되었을 때, RNAi 작용제의 유전자 침묵화 활성이 우수하게 강화되었다는 것이 뜻밖에 발견되었다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 19개의 뉴클레오티드의 길이의 이중 단부 블런트머이고, 여기서 센스 가닥은 5' 단부로부터의 7, 8, 9 위치에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-F 변형의 모티프를 적어도 1개 함유한다. 안티센스 가닥은 5' 단부로부터의 11, 12, 13 위치에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 모티프를 적어도 1개 함유한다.

또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제는 20개의 뉴클레오티드의 길이의 이중 단부 블런트머이고, 여기서 센스 가닥은 5' 단부로부터의 8, 9, 10 위치에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-F 변형의 모티프를 적어도 1개 함유한다. 안티센스 가닥은 5' 단부로부터의 11, 12, 13 위치에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 모티프를 적어도 1개 함유한다.

또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제는 21개의 뉴클레오티드의 길이의 이중 단부 블런트머이고, 여기서 센스 가닥은 5' 단부로부터의 9, 10, 11 위치에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-F 변형의 모티프를 적어도 1개 함유한다. 안티센스 가닥은 5' 단부로부터의 11, 12, 13 위치에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 모티프를 적어도 1개 함유한다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 21개의 뉴클레오티드의 센스 가닥 및 23개의 뉴클레오티드의 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 5' 단부로부터의 11, 12, 13 위치에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-F 변형의 모티프를 적어도 1개 함유하고, 안티센스 가닥은 5' 단부로부터의 9, 10, 11 위치에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 모티프를 적어도 1개 함유하며, RNAi 작용제의 한쪽 단부는 평활한 한편, 다른쪽 단부는 2개의 뉴클레오티드의 오버행을 포함한다. 바람직하게는, 2개의 뉴클레오티드의 오버행이 안티센스 가닥의 3'-단부에 있다. 2개의 뉴클레오티드의 오버행이 안티센스 가닥의 3'-단부에 있을 때, 말단의 3개의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결이 있을 수 있고, 3개의 뉴클레오티드 중 2개는 오버행 뉴클레오티드이며, 세번째 뉴클레오티드는 오버행 뉴클레오티드 옆의 쌍을 이룬 뉴클레오티드이다. 한 실시양태에서, RNAi 작용제는 추가적으로 센스 가닥의 5'-단부 및 안티센스 가닥의 5'-단부 둘 다의 말단의 3개의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결이 있다. 한 실시양태에서, 모티프의 일부분인 뉴클레오티드를 포함하여, RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 내의 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드이다. 한 실시양태에서, 각각의 잔기는, 예를 들어, 교대되는 모티프에서, 독립적으로 2'-O-메틸 또는 3'-플루오로로 변형된다. 임의적으로, RNAi 작용제는 리간드 (바람직하게는 GalNAc₃)를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 센스 및 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 RNAi 작용제는 적어도 25개, 최대 29개의 뉴클레오티드의 길이인 제1 가닥, 및 5' 단부로부터 11, 12, 13 위치에 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 모티프가 적어도 1개 있는 최대 30개의 뉴클레오티드의 길이인 제2 가닥을 포함하고, 제1 가닥의 3' 단부 및 제2 가닥의 5' 단부는 평활 단부이고, 제2 가닥은 그의 3' 단부에서 제1 가닥보다 1-4개의 뉴클레오티드가 더 길고, 듀플렉스 영역 영역은 적어도 25개의 뉴클레오티드의 길이이고, 제2 가닥은 제2 가닥 길이의 적어도 19개의 뉴클레오티드를 따라 표적 mRNA에 충분히 상보적이어서 RNAi 작용제가 포유동물 세포 내로 도입되었을 때 표적 유전자 발현을 감소시키고, RNAi 작용제의 다이서 절단은 제2 가닥의 3' 단부를 포함하는 siRNA를 우선적으로 초래함으로써, 포유동물 내의 표적 유전자의 발현을 감소시킨다. 임의적으로, RNAi 작용제는 리간드를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥은 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프를 적어도 1개 함유하고, 여기서 이러한 모티프 중 하나는 센스 가닥의 절단 부위에서 발생한다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제의 안티센스 가닥이 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프를 적어도 1개 또한 함유할 수 있고, 여기서 이러한 모티프 중 하나는 안티센스 가닥의 절단 부위 또는 절단 부위 근처에서 발생한다.

17-23개의 뉴클레오티드 길이의 듀플렉스 영역이 있는 RNAi 작용제의 경우, 안티센스 가닥의 절단 부위는 전형적으로 5'-단부로부터 대략 10, 11 및 12 위치이다. 따라서, 3개의 동일한 변형의 모티프는 안티센스 가닥의 9, 10, 11 위치; 10, 11, 12 위치; 11, 12, 13 위치; 12, 13, 14 위치; 또는 13, 14, 15 위치에서 발생할 수 있고, 이때 안티센스 가닥의 5'-단부로부터 첫번째인 뉴클레오티드로부터 계수가 시작되거나, 또는 안티센스 가닥의 5'-단부로부터 첫번째인 듀플렉스 영역 내의 쌍을 이룬 뉴클레오티드로부터 계수가 시작된다. 안티센스 가닥 내의 절단 부위는 5'-단부로부터의 RNAi의 듀플렉스 영역의 길이에 따라 또한 변할 수 있다.

RNAi 작용제의 센스 가닥이 가닥의 절단 부위에서 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프를 적어도 1개 함유할 수 있고, 안티센스 가닥은 가닥의 절단 부위 또는 절단 부위 근처에 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프가 적어도 1개 있을 수 있다. 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 dsRNA 듀플렉스를 형성하는 경우, 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 센스 가닥 상의 3개의 뉴클레오티드의 모티프 하나 및 안티센스 가닥 상의 3개의 뉴클레오티드의 모티프 하나가 적어도 1개의 뉴클레오티드 중첩이 있도록, 즉 센스 가닥 내의 모티프의 3개의 뉴클레오티드 중 적어도 1개가 안티센스 가닥 내의 모티프의 3개의 뉴클레오티드 중 적어도 1개와 염기 쌍을 형성하도록 정렬될 수 있다. 대안적으로, 적어도 2개의 뉴클레오티드가 중첩될 수 있거나, 또는 모든 3개의 뉴클레오티드가 중첩될 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥은 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프를 1개 초과로 함유할 수 있다. 제1 모티프가 가닥의 절단 부위에서 또는 절단 부위 근처에서 발생할 수 있고, 다른 모티프는 날개 변형일 수 있다. 본원에서의 "날개 변형"이라는 용어는 가닥의 절단 부위 또는 절단 부위 근처의 모티프로부터 분리된, 동일한 가닥의 또 다른 부분에서 발생하는 모티프를 지칭한다. 날개 변형은 제1 모티프에 인접하거나, 또는 적어도 1개 이상의 뉴클레오티드만큼 분리된다. 모티프들이 서로 바로 인접하면 모티프들의 화학이 서로 구별되고, 모티프들이 1개 이상의 뉴클레오티드만큼 분리되면 화학이 동일하거나 상이할 수 있다. 2개 이상의 날개 변형이 존재할 수 있다. 예를 들어, 2개의 날개 변형이 존재할 때, 각각의 날개 변형은 절단 부위 또는 절단 부위 근처에 있는 제1 모티프에 대해 한쪽 단부에서 또는 선도 모티프의 어느 한쪽 면 상에서 발생할 수 있다.

센스 가닥과 같이, RNAi 작용제의 안티센스 가닥이 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프를 1개 초과로 함유할 수 있고, 이때 모티프 중 적어도 1개는 가닥의 절단 부위 또는 절단 부위 근처에서 발생한다. 이러한 안티센스 가닥은 센스 가닥 내에 존재할 수 있는 날개 변형과 유사한 정렬로 하나 이상의 날개 변형을 또한 함유할 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 날개 변형은 전형적으로 가닥의 3'-단부, 5'-단부 또는 양쪽 단부의 처음 1개 또는 2개의 말단 뉴클레오티드를 포함하지 않는다.

또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 날개 변형은 전형적으로 가닥의 3'-단부, 5'-단부 또는 양쪽 단부의 듀플렉스 영역 내의 처음 1개 또는 2개의 쌍을 이룬 뉴클레오티드를 포함하지 않는다.

RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 각각이 적어도 1개의 날개 변형을 함유하는 경우, 날개 변형은 듀플렉스 영역의 동일한 단부 상에 위치할 수 있고, 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드의 중첩이 있다.

RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 각각이 적어도 2개의 날개 변형을 함유하는 경우, 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 하나의 가닥으로부터의 2개의 변형 각각이 듀플렉스 영역의 한쪽 단부 상에 위치하고, 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드의 중첩이 있도록; 하나의 가닥으로부터의 2개의 변형 각각이 듀플렉스 영역의 다른 단부 상에 위치하고, 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드의 중첩이 있도록; 하나의 가닥으로부터의 2개의 변형이 선도 모티프의 각각의 측면 상에 위치하고, 듀플렉스 영역 내에 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드의 중첩이 있도록 정렬될 수 있다.

한 실시양태에서, 모티프의 일부분인 뉴클레오티드를 포함하여, RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 내의 모든 뉴클레오티드가 변형될 수 있다. 각각의 뉴클레오티드는 비-연결 포스페이트 산소 중 하나 또는 둘 다 및/또는 연결 포스페이트 산소 중 하나 이상의 변경; 리보스 당의 구성성분, 예를 들어, 리보스 당의 2' 히드록실의 변경; 포스페이트 모이어티의 "데포스포" 링커로의 대대적인 교체; 천연 발생 염기의 변형 또는 교체; 및 리보스-포스페이트 백본의 교체 또는 변형을 하나 이상 포함할 수 있는 동일하거나 상이한 변형으로 변형될 수 있다.

핵산은 서브유닛의 중합체이기 때문에, 다수의 변형, 예를 들어, 염기, 포스페이트 모이어티, 또는 포스페이트 모이어티의 비-연결 O의 변형이 핵산 내에서 반복되는 위치에서 발생할 수 있다. 일부 경우에는 변형이 핵산 내의 모든 대상 위치에서 발생할 것이지만, 다수의 경우에 그렇지 않을 것이다. 예를 들어, 변형이 3' 또는 5' 말단 위치에서만 발생할 수 있고, 말단 영역, 예를 들어, 말단 뉴클레오티드 상에 있거나 가닥의 마지막 2, 3, 4, 5, 또는 10개의 뉴클레오티드 내에 있는 위치에서만 발생할 수 있다. 변형은 이중 가닥 영역, 단일 가닥 영역, 또는 둘 다에서 발생할 수 있다. 변형은 RNA의 이중 가닥 영역에서만 발생할 수 있거나, 또는 RNA의 단일 가닥 영역에서만 발생할 수 있다. 예를 들어, 비-연결 O 위치의 포스포로티오에이트 변형이 한쪽 또는 양쪽 말단에서만 발생할 수 있거나, 말단 영역, 예를 들어, 말단 뉴클레오티드 상에 있거나 가닥의 마지막 2, 3, 4, 5, 또는 10개의 뉴클레오티드 내에 있는 위치에서만 발생할 수 있거나, 또는 이중 가닥 및 단일 가닥 영역에서, 특히 말단에서 발생할 수 있다. 5' 단부 또는 단부들은 인산화될 수 있다.

단일 가닥 오버행, 예를 들어, 5' 또는 3' 오버행, 또는 둘 다에서, 예를 들어, 안정성을 강화하거나, 오버행 내에 특정 염기를 포함하거나, 또는 변형된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 대용물을 포함하는 것이 가능할 수 있다. 예를 들어, 오버행 내에 퓨린 뉴클레오티드를 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어, 본원에 기술된 변형으로, 3' 또는 5' 오버행 내의 염기 중 일부 또는 모두가 변형될 수 있다. 변형은, 예를 들어, 관련 분야에 공지된 변형이 있는 리보스 당의 2' 위치에서의 변형의 사용, 예를 들어, 핵염기의 리보당 대신의 변형된 데옥시리보뉴클레오티드, 2'-데옥시-2'-플루오로 (2'-F) 또는 2'-O-메틸의 사용, 및 포스페이트 기에서의 변형, 예를 들어, 포스포로티오에이트 변형을 포함할 수 있다. 오버행은 표적 서열과 상동성일 필요가 없다.

한 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 잔기는 LNA, HNA, CeNA, 2'-메톡시에틸, 2'-O-메틸, 2'-O-알릴, 2'-C-알릴, 2'-데옥시, 2'-히드록실, 또는 2'-플루오로로 독립적으로 변형된다. 가닥은 하나 초과의 변형을 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 잔기는 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로로 독립적으로 변형된다.

적어도 2개의 상이한 변형이 센스 가닥 및 안티센스 가닥 상에 전형적으로 존재한다. 이러한 2개의 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형, 또는 다른 것일 수 있다.

한 실시양태에서, N_a 및/또는 N_b는 교대 패턴의 변형을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같은 "교대 모티프"라는 용어는 하나 이상의 변형이 있고 각각의 변형이 하나의 가닥의 교대 뉴클레오티드 상에서 발생하는 모티프를 지칭한다. 교대 뉴클레오티드는 2개의 뉴클레오티드마다 하나 또는 3개의 뉴클레오티드마다 하나, 또는 유사한 패턴을 지칭할 수 있다. 예를 들어, A, B 및 C 각각이 뉴클레오티드에 대한 하나의 변형 유형을 나타내면, 교대 모티프는 "ABABABABABAB..." "AABBAABBAABB..." "AABAABAABAAB..." "AAABAAABAAAB..." "AAABBBAAABBB..." 또는 "ABCABCABCABC..." 등일 수 있다.

교대 모티프 내에 함유된 변형의 유형은 동일하거나 상이할 수 있다. 예를 들어, A, B, C, D 각각의 뉴클레오티드 상에서의 하나의 변형 유형을 나타내면, 교대 패턴, 즉 2개의 뉴클레오티드마다의 변형이 동일할 수 있지만, 각각의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥이 "ABABAB...", "ACACAC..." "BDBDBD..." 또는 "CDCDCD..." 등과 같은 교대 모티프 내의 몇몇 가능한 변형으로부터 선택될 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명의 RNAi 작용제는 안티센스 가닥 상의 교대 모티프에 대한 변형 패턴에 비교하여 센스 가닥 상의 교대 모티프에 대한 변형 패턴이 이동된 것을 포함한다. 이러한 이동은 센스 가닥의 뉴클레오티드의 변형된 기가 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 상이하게 변형된 기에 상응하도록 하는 것 또는 그 반대일 수 있다. 예를 들어, 센스 가닥이 dsRNA 듀플렉스 내의 안티센스 가닥과 쌍을 이루었을 때, 센스 가닥 내의 교대 모티프는 가닥의 5'-3'로부터 "ABABAB"로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥 내의 교대 모티프는 듀플렉스 영역 내의 가닥의 5'-3'로부터 "BABABA"로 시작할 수 있다. 또 다른 예로서, 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이에 변형 패턴의 완전한 또는 부분적인 이동이 있도록, 센스 가닥 내의 교대 모티프는 가닥의 5'-3'로부터 "AABBAABB"로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥 내의 교대 모티프는 듀플렉스 영역 내의 가닥의 5'-3'로부터 "BBAABBAA"로 시작할 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 최초의 센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형 및 2'-F 변형의 교대 모티프의 패턴이 최초의 안티센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형 및 2'-F 변형의 교대 모티프의 패턴에 비교하여 이동된 것, 즉, 센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오티드가 안티센스 가닥 상의 2'-F 변형된 뉴클레오티드와 염기 쌍을 이루는 것, 또는 그 반대를 포함한다. 센스 가닥의 1 위치가 2'-F 변형으로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥의 1 위치가 2'-O-메틸 변형으로 시작할 수 있다.

3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프 이상이 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥에 도입되는 것은 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥에 존재하는 최초의 변형 패턴을 방해한다. 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프 이상을 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥에 도입하는 것에 의해 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 변형 패턴을 이렇게 방해하는 것은 놀랍게도 표적 유전자에 대한 유전자 침묵화 활성을 강화시킨다.

한 실시양태에서, 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프가 가닥 중 임의의 것에 도입되는 경우, 모티프 옆의 뉴클레오티드의 변형은 모티프의 변형과 상이한 변형이다. 예를 들어, 모티프를 함유하는 서열의 부분은 "...N_aYYYN_b..." [여기서 "Y"는 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프의 변형을 나타내고, "N_a" 및 "N_b"는 Y의 변형과 상이한, 모티프 "YYY" 옆의 뉴클레오티드에 대한 변형을 나타내며, N_a 및 N_b는 동일하거나 상이한 변형일 수 있다]이다. 대안적으로, 날개 변형이 존재하는 경우 N_a 및/또는 N_b가 존재 또는 부재할 수 있다.

RNAi 작용제는 적어도 1개의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드간 연결 변형은 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 또는 양쪽 가닥의 임의의 뉴클레오티드 상에서 가닥의 임의의 위치에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 뉴클레오티드간 연결 변형이 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 상의 모든 뉴클레오티드 상에서 발생할 수 있거나, 각각의 뉴클레오티드간 연결 변형이 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 상에서 교대 패턴으로 발생할 수 있거나, 또는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥이 교대 패턴으로 둘 다의 뉴클레오티드간 연결 변형을 함유할 수 있다. 센스 가닥 상의 뉴클레오티드간 연결 변형의 교대 패턴은 안티센스 가닥과 동일하거나 상이할 수 있고, 센스 가닥 상의 뉴클레오티드간 연결 변형의 교대 패턴은 안티센스 가닥 상의 뉴클레오티드간 연결 변형의 교대 패턴에 비교하여 이동이 있을 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi는 오버행 영역 내에 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드간 연결 변형을 포함한다. 예를 들어, 오버행 영역이 2개의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드간 연결이 있는 2개의 뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 오버행 뉴클레오티드를 듀플렉스 영역 내의 쌍을 이룬 말단 뉴클레오티드와 연결시키도록 뉴클레오티드간 연결 변형이 이루어질 수도 있다. 예를 들어, 적어도 2, 3, 4개, 또는 모든 오버행 뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드간 연결을 통해 연결될 수 있고, 임의적으로, 오버행 뉴클레오티드 옆의 쌍을 이룬 뉴클레오티드와 오버행 뉴클레오티드를 연결시키는 추가적인 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드간 연결이 있을 수 있다. 예를 들어, 말단의 3개의 뉴클레오티드 사이에 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결이 있을 수 있고, 여기서 3개의 뉴클레오티드 중 2개는 오버행 뉴클레오티드이고, 세번째는 오버행 뉴클레오티드 옆의 쌍을 이룬 뉴클레오티드이다. 이러한 말단의 3개의 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 3'-단부, 센스 가닥의 3'-단부, 안티센스 가닥의 5'-단부, 및/또는 안티센스 가닥의 5'-단부에 있을 수 있다.

한 실시양태에서, 2개의 뉴클레오티드의 오버행이 안티센스 가닥의 3'-단부에 있고, 말단의 3개의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결이 있으며, 여기서 3개의 뉴클레오티드 중 2개는 오버행 뉴클레오티드이고, 세번째는 오버행 뉴클레오티드 옆의 쌍을 이룬 뉴클레오티드이다. 임의적으로, RNAi 작용제는 추가적으로 센스 가닥의 5'-단부 및 안티센스 가닥의 5'-단부 둘 다에서 말단의 3개의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결이 있을 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 표적과의 미스매치, 듀플렉스 내의 미스매치, 또는 그의 조합을 포함한다. "미스매치"는 뉴클레오티드들의 비-정규 염기 쌍 또는 정규 이외의 쌍일 수 있다. 미스매치는 오버행 영역 또는 듀플렉스 영역에서 발생할 수 있다. 염기 쌍은 해리 또는 용융을 촉진하는 그의 경향을 기초로 순위가 매겨질 수 있다 (예를 들어, 특정 쌍의 회합 또는 해리의 자유 에너지를 기초로, 가장 간단한 접근법은 개별적인 쌍 기준으로 쌍들을 시험하는 것이지만, 다음의 이웃하거나 유사한 분석을 또한 사용할 수 있다). 해리를 촉진하는 관점에서, A:U가 G:C보다 바람직하고; G:U가 G:C보다 바람직하며; I:C가 G:C보다 바람직하다 (I=이노신). 미스매치, 예를 들어, 비-정규이거나 정규 이외의 것인 쌍 (본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같음)이 정규 (A:T, A:U, G:C) 쌍보다 바람직하고, 만능 염기를 포함하는 쌍이 정규 쌍보다 바람직하다. "만능 염기"는 유의하게 이웃한 염기-쌍 상호작용을 유의하게 탈안정화시키거나 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 예상되는 기능적인 생화학적 유용성을 파괴하지 않으면서 4개의 표준 염기 (G, C, A, 및 U) 중 임의의 것을 교체하는 능력을 나타내는 염기이다. 만능 염기의 비제한적인 예는 2'-데옥시이노신 (하이포크산틴 데옥시뉴클레오티드) 또는 그의 유도체, 니트로아졸 유사체, 및 소수성 방향족 비-수소-결합 염기를 포함한다.

한 실시양태에서, 듀플렉스의 5'-단부에서의 안티센스 가닥의 해리를 촉진하기 위해, RNAi 작용제는 안티센스 가닥의 5'-단부로부터의 처음 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 듀플렉스 영역 내 염기 쌍 중 적어도 하나가 A:U, G:U, I:C, 및 미스매치 쌍, 예를 들어, 비-정규이거나 정규 이외의 것인 쌍 또는 만능 염기를 포함하는 쌍의 군으로부터 독립적으로 선택된 것을 포함한다.

한 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5'-단부로부터의 듀플렉스 영역 내의 1 위치의 뉴클레오티드는 A, dA, dU, U, 및 dT로 이루어진 군으로부터 선택된다. 대안적으로, 안티센스 가닥의 5'-단부로부터의 듀플렉스 영역 내의 처음 1, 2 또는 3개의 염기 쌍 중 적어도 하나는 AU 염기 쌍이다. 예를 들어, 안티센스 가닥의 5'-단부로부터의 첫번째인 듀플렉스 영역 내의 염기 쌍이 AU 염기 쌍이다.

또 다른 실시양태에서, 센스 가닥의 3'-단부의 뉴클레오티드는 데옥시-티민 (dT)이다. 또 다른 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3'-단부의 뉴클레오티드는 데옥시-티민 (dT)이다. 한 실시양태에서, 데옥시-티민 뉴클레오티드의 짧은 서열, 예를 들어, 2개의 dT 뉴클레오티드가 센스 및/또는 안티센스 가닥의 3'-단부 상에 있다.

한 실시양태에서, 센스 가닥 서열은 화학식 화학식 (I)로 표현될 수 있다:

5' n_p-N_a-(XXX)_i-N_b-YYY-N_b-(ZZZ)_j-N_a-n_q 3' (I)

여기서

i 및 j는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;

p 및 q는 각각 독립적으로 0-6이고;

각각의 N_a는 독립적으로 0-25개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형된 뉴클레오티드를 포함하고;

각각의 N_b는 독립적으로 0-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고;

각각의 n_p 및 n_q는 독립적으로 오버행 뉴클레오티드를 나타내고;

Nb 및 Y는 동일한 변형을 갖지 않고;

XXX, YYY 및 ZZZ는 각각 독립적으로 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프를 나타낸다. 바람직하게는, YYY는 모두 2'-F 변형된 뉴클레오티드이다.

한 실시양태에서, N_a 및/또는 N_b는 교대 패턴의 변형을 포함한다.

한 실시양태에서, YYY 모티프는 센스 가닥의 절단 부위 또는 절단 부위 근처에서 발생한다. 예를 들어, RNAi 작용제에 17-23개의 뉴클레오티드 길이의 듀플렉스 영역이 있을 때, YYY 모티프는 센스 가닥의 절단 부위에서 또는 절단 부위에 인접하여 발생할 수 있고 (예를 들어, 6, 7, 8번, 7, 8, 9번, 8, 9, 10번, 9, 10, 11번, 10, 11, 12 또는 11, 12, 13 위치에서 발생할 수 있음), 이때 계수는 5'-단부로부터 첫번째인 뉴클레오티드로부터 시작되거나, 또는 임의적으로, 계수는 5'-단부로부터 첫번째인 듀플렉스 영역 내의 쌍을 이룬 뉴클레오티드로부터 시작된다.

한 실시양태에서, i는 1이고 j는 0이거나, 또는 i는 0이고 j는 1이거나, 또는 i 및 j 둘 다가 1이다. 따라서 센스 가닥은 하기 화학식으로 표현될 수 있다:

5' n_p-N_a-YYY-N_b-ZZZ-N_a-n_q 3' (Ib);

5' n_p-N_a-XXX-N_b-YYY-N_a-n_q 3' (Ic); 또는

5' n_p-N_a-XXX-N_b-YYY-N_b-ZZZ-N_a-n_q 3' (Id).

센스 가닥이 화학식 (Ib)로 표현될 때, N_b는 0-10개, 0-7개, 0-5개, 0-4개, 0-2개 또는 0개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다.

센스 가닥이 화학식 (Ic)로서 표현될 때, N_b는 0-10개, 0-7개, 0-10개, 0-7개, 0-5개, 0-4개, 0-2개 또는 0개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다.

센스 가닥이 화학식 (Id)로서 표현될 때, 각각의 N_b는 독립적으로 0-10개, 0-7개, 0-5개, 0-4개, 0-2개 또는 0개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 바람직하게는, N_b는 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개이다. 각각의 N_a는 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다.

각각의 X, Y 및 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있다.

다른 실시양태에서, i는 0, j는 0이고, 센스 가닥은 하기 화학식으로 표현될 수 있다:

5' n_p-N_a-YYY-N_a-n_q 3' (Ia).

센스 가닥이 화학식 (Ia)로 표현될 때, 각각의 N_a는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi의 안티센스 가닥 서열은 화학식 (II)로 표현될 수 있다:

5' n_q _'-N_a'-(Z'Z'Z')_k-N_b'-Y'Y'Y'-N_b'-(X'X'X')_l-N'_a-n_p' 3' (II)

여기서

k 및 l은 각각 독립적으로 0 또는 1이고;

p' 및 q'는 각각 독립적으로 0-6이고;

각각의 N_a'는 독립적으로 0-25개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형된 뉴클레오티드를 포함하고;

각각의 N_b'는 독립적으로 0-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고;

각각의 n_p' 및 n_q'는 독립적으로 오버행 뉴클레오티드를 나타내고;

N_b' 및 Y'는 동일한 변형을 갖지 않고;

X'X'X', Y'Y'Y'및 Z'Z'Z'는 각각 독립적으로 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프를 나타낸다.

한 실시양태에서, N_a' 및/또는 N_b'는 교대 패턴의 변형을 포함한다.

Y'Y'Y' 모티프는 안티센스 가닥의 절단 부위 또는 절단 부위 근처에서 발생한다. 예를 들어, RNAi 작용제에 17-23개의 뉴클레오티드 길이의 듀플렉스 영역이 있을 때, Y'Y'Y' 모티프는 안티센스 가닥의 9, 10, 11번; 10, 11, 12번; 11, 12, 13번; 12, 13, 14번; 또는 13, 14, 15 위치에서 발생할 수 있고, 이때 계수는 5'-단부로부터 첫번째인 뉴클레오티드로부터 시작되거나, 또는 임의적으로, 계수는 5'-단부로부터 첫번째인 듀플렉스 영역 내의 쌍을 이룬 뉴클레오티드로부터 시작된다. 바람직하게는, Y'Y'Y' 모티프는 11, 12, 13 위치에서 발생한다.

한 실시양태에서, Y'Y'Y' 모티프는 모두 2'-OMe 변형된 뉴클레오티드이다.

한 실시양태에서, k는 1, l은 0이거나, 또는 k는 0, l은 1이거나, 또는 k 및 l 둘 다 1이다.

따라서 안티센스 가닥은 하기 화학식으로 표현될 수 있다:

5' n_q'-N_a'-Z'Z'Z'-N_b'-Y'Y'Y'-N_a'-n_p' 3' (IIb);

5' n_q'-N_a'-Y'Y'Y'-N_b'-X'X'X'-n_p' 3' (IIc); 또는

5' n_q'-N_a'-Z'Z'Z'-N_b'-Y'Y'Y'-N_b'-X'X'X'-N_a'-n_p' 3' (IId).

안티센스 가닥이 화학식 (IIb)로 표현될 때, N_b'는 0-10개, 0-7개, 0-10개, 0-7개, 0-5개, 0-4개, 0-2개 또는 0개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a'는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.

안티센스 가닥이 화학식 (IIc)로서 표현될 때, N_b'는 0-10개, 0-7개, 0-10개, 0-7개, 0-5개, 0-4개, 0-2개 또는 0개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a'는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.

안티센스 가닥이 화학식 (IId)로서 표현될 때, 각각의 N_b'는 독립적으로 0-10개, 0-7개, 0-10개, 0-7개, 0-5개, 0-4개, 0-2개 또는 0개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a'는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 바람직하게는, N_b는 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개이다.

다른 실시양태에서, k는 0, l은 0이고, 안티센스 가닥은 하기 화학식으로 표현될 수 있다:

5' n_p'-N_a'-Y'Y'Y'-N_a'-n_q' 3' (Ia).

안티센스 가닥이 화학식 (IIa)로서 표현될 때, 각각의 N_a'는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.

각각의 X', Y' 및 Z'는 서로 동일하거나 상이할 수 있다.

센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 뉴클레오티드는 독립적으로 LNA, HNA, CeNA, 2'-메톡시에틸, 2'-O-메틸, 2'-O-알릴, 2'-C-알릴, 2'-히드록실, 또는 2'-플루오로로 변형될 수 있다. 예를 들어, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 뉴클레오티드는 독립적으로 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로로 변형된다. 각각의 X, Y, Z, X', Y' 및 Z'는, 특히, 2'-O-메틸 변형 또는 2'-플루오로 변형을 나타낼 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥은 듀플렉스 영역이 21개의 nt인 경우 9, 10 및 11 위치에서 발생하는 YYY 모티프를 함유할 수 있고, 이때 계수는 5'-단부로부터 첫번째인 뉴클레오티드로부터 시작되거나, 또는 임의적으로, 계수는 5'-단부로부터 첫번째인 듀플렉스 영역 내의 쌍을 이룬 뉴클레오티드로부터 시작되고; Y는 2'-F 변형을 나타낸다. 센스 가닥은 듀플렉스 영역의 반대쪽 단부에 XXX 모티프 또는 ZZZ 모티프를 날개 변형으로서 추가적으로 함유할 수 있고; XXX 및 ZZZ는 각각 독립적으로 2'-OMe 변형 또는 2'-F 변형을 나타낸다.

한 실시양태에서, 안티센스 가닥은 가닥의 11, 12, 13 위치에서 발생하는 Y'Y'Y' 모티프를 함유할 수 있고, 이때 계수는 5'-단부로부터 첫번째인 뉴클레오티드로부터 시작되거나, 또는 임의적으로, 계수는 5'-단부로부터 첫번째인 듀플렉스 영역 내의 쌍을 이룬 뉴클레오티드로부터 시작되고; Y'는 2'-O-메틸 변형을 나타낸다. 안티센스 가닥은 듀플렉스 영역의 반대쪽 단부에 X'X'X' 모티프 또는 Z'Z'Z' 모티프를 날개 변형으로서 추가적으로 함유할 수 있고; X'X'X' 및 Z'Z'Z'는 각각 독립적으로 2'-OMe 변형 또는 2'-F 변형을 나타낸다.

상기 화학식 (Ia), (Ib), (Ic), 및 (Id) 중 어느 하나로 표현되는 센스 가닥은 각각 화학식 (IIa), (IIb), (IIc), 및 (IId) 중 어느 하나로 표현되는 안티센스 가닥과 듀플렉스를 형성한다.

따라서, 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함할 수 있고, 각각의 가닥은 14 내지 30개의 뉴클레오티드가 있고, RNAi 듀플렉스는 화학식 (III)으로 표현된다:

센스: 5' n_p -N_a-(XXX)_i-N_b-YYY-N_b-(ZZZ)_j-N_a-n_q 3'

안티센스: 3' n_p'-N_a'-(X'X'X')_k-N_b'-Y'Y'Y'-N_b'-(Z'Z'Z')_l-N_a'-n_q' 5'

(III)

여기서

i, j, k, 및 l은 각각 독립적으로 0 또는 1이고;

p, p', q, 및 q'는 각각 독립적으로 0-6이고;

각각의 N_a 및 N_a'는 독립적으로 0-25개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형된 뉴클레오티드를 포함하고;

각각의 N_b 및 N_b'는 독립적으로 0-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고;

각각의 n_p', n_p, n_q', 및 n_q (이들 각각은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있다)는 독립적으로 오버행 뉴클레오티드를 나타내고;

XXX, YYY, ZZZ, X'X'X', Y'Y'Y', 및 Z'Z'Z'는 각각 독립적으로 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프를 나타낸다.

한 실시양태에서, i는 0, j는 0이거나; 또는 i는 1, j는 0이거나; 또는 i는 0, j는 1이거나; 또는 i 및 j 둘 다가 0이거나; 또는 i 및 j 둘 다가 1이다. 또 다른 실시양태에서, k는 0, l은 0이거나; 또는 k는 1, l은 0이거나; k는 0, l은 1이거나; 또는 k 및 l 둘 다가 0이거나; 또는 k 및 l 둘 다가 1이다.

RNAi 듀플렉스를 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 예시적인 조합은 하기 화학식을 포함한다:

5' n_p-N_a-YYY-N_a-n_q 3'

3' n_p'-N_a'-Y'Y'Y'-N_a'n_q' 5'

(IIIa)

5' n_p-N_a-YYY-N_b-ZZZ-N_a-n_q 3'

3' n_p'-N_a'-Y'Y'Y'-N_b'-Z'Z'Z'-N_a'n_q' 5'

(IIIb)

5' n_p-N_a-XXX-N_b-YYY-N_a-n_q 3'

3' n_p'-N_a'-X'X'X'-N_b'-Y'Y'Y'-N_a'-n_q' 5'

(IIIc)

5' n_p -N_a-XXX-N_b-YYY-N_b-ZZZ-N_a-n_q 3'

3' n_p'-N_a'-X'X'X'-N_b'-Y'Y'Y'-N_b'-Z'Z'Z'-N_a-n_q' 5'

(IIId)

5'-N_a-YYY-N_a-3'

3' n_p'-N_a'-Y'Y'Y'-N_a' 5'

(IIIe)

RNAi 작용제가 화학식 (IIIa)로 표현될 때, 각각의 N_a는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.

RNAi 작용제가 화학식 (IIIb)로 표현될 때, 각각의 N_b는 독립적으로 1-10개, 1-7개, 1-5개 또는 1-4개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.

RNAi 작용제가 화학식 (IIIc)로서 표현될 때, 각각의 N_b, N_b'는 독립적으로 0-10개, 0-7개, 0-10개, 0-7개, 0-5개, 0-4개, 0-2개 또는 0개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.

RNAi 작용제가 화학식 (IIId)로서 표현될 때, 각각의 N_b, N_b'는 독립적으로 0-10개, 0-7개, 0-10개, 0-7개, 0-5개, 0-4개, 0-2개 또는 0개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a, N_a'는 독립적으로 2-20개, 2-15개, 또는 2-10개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 N_a, N_a', N_b 및 N_b'는 독립적으로 교대 패턴의 변형을 포함한다.

RNAi 작용제가 화학식 (IIIe)로서 표현될 때, 각각의 N_a 및 N_a'는 독립적으로 0-25개의 뉴클레오티드 (변형 또는 미변형 또는 그의 조합임)를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형된 뉴클레오티드를 포함한다.

화학식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), 및 (IIIe) 내의 각각의 X, Y 및 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있다.

RNAi 작용제가 화학식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), 및 (IIIe)로 표현될 때, Y 뉴클레오티드 중 적어도 1개가 Y' 뉴클레오티드 중 하나와 염기 쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, Y 뉴클레오티드 중 적어도 2개가 상응하는 Y' 뉴클레오티드와 염기 쌍을 형성하거나; 또는 모든 3개의 Y 뉴클레오티드 모두가 상응하는 Y' 뉴클레오티드와 염기 쌍을 형성한다.

RNAi 작용제가 화학식 (IIIb) 또는 (IIId)로 표현될 때, Z 뉴클레오티드 중 적어도 1개가 Z' 뉴클레오티드 중 하나와 염기 쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, Z 뉴클레오티드 중 적어도 2개가 상응하는 Z' 뉴클레오티드와 염기 쌍을 형성하거나; 또는 모든 3개의 Z 뉴클레오티드 모두가 상응하는 Z' 뉴클레오티드와 염기 쌍을 형성한다.

RNAi 작용제가 화학식 (IIIc) 또는 (IIId)로서 표현될 때, X 뉴클레오티드 중 적어도 1개가 X' 뉴클레오티드 중 하나와 염기 쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, X 뉴클레오티드 중 적어도 2개가 상응하는 X' 뉴클레오티드와 염기 쌍을 형성하거나; 또는 모든 3개의 X 뉴클레오티드 모두가 상응하는 X' 뉴클레오티드와 염기 쌍을 형성한다.

한 실시양태에서, Y 뉴클레오티드 상의 변형은 Y' 뉴클레오티드 상의 변형과 상이하고/하거나, Z 뉴클레오티드 상의 변형은 Z' 뉴클레오티드 상의 변형과 상이하고/하거나, X 뉴클레오티드 상의 변형은 X' 뉴클레오티드 상의 변형과 상이하다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제가 화학식 (IIId)로 표현될 때, N_a 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형이다. 또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제가 화학식 (IIId)로 표현될 때, N_a 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형이고, n_p' > 0이며, 적어도 하나의 n_p'가 이웃 뉴클레오티드에 포스포로티오에이트 연결을 통해 연결된다. 또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제가 화학식 (IIId)로 표현될 때, N_a 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형이고, n_p' > 0이며, 적어도 하나의 n_p'가 이웃 뉴클레오티드에 포스포로티오에이트 연결을 통해 연결되고, 센스 가닥이 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, RNAi 작용제가 화학식 (IIId)로 표현될 때, N_a 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형이고, n_p' > 0이며, 적어도 하나의 n_p'가 이웃 뉴클레오티드에 포스포로티오에이트 연결을 통해 연결되고, 센스 가닥이 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함하며, 센스 가닥이 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제가 화학식 (IIIa)로 표현될 때, N_a 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형이고, n_p' > 0이며, 적어도 하나의 n_p'가 이웃 뉴클레오티드에 포스포로티오에이트 연결을 통해 연결되고, 센스 가닥이 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함하며, 센스 가닥이 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 화학식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), 및 (IIIe)로 표현되는 적어도 2개의 듀플렉스를 함유하는 다량체이고, 여기서 듀플렉스들은 링커에 의해 연결된다. 링커는 절단성 또는 비-절단성일 수 있다. 임의적으로, 이러한 다량체는 리간드를 추가로 포함한다. 각각의 듀플렉스는 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 또는 각각의 듀플렉스는 2개의 상이한 표적 부위의 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.

한 실시양태에서, RNAi 작용제는 3, 4, 5, 6종 또는 그 초과의 화학식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), 및 (IIIe)로 표현되는 듀플렉스를 함유하는 다량체이고, 여기서 듀플렉스들은 링커에 의해 연결된다. 링커는 절단성 또는 비-절단성일 수 있다. 임의적으로, 이러한 다량체는 리간드를 추가로 포함한다. 각각의 듀플렉스는 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 또는 각각의 듀플렉스는 2개의 상이한 표적 부위의 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.

한 실시양태에서, 화학식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), 및 (IIIe)로 표현되는 2개의 RNAi 작용제는 서로 5' 단부에서 연결되고, 3' 단부 중 하나 또는 둘 다는 임의적으로 리간드에 접합된다. 각각의 작용제는 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 또는 각각의 작용제는 2개의 상이한 표적 부위의 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.

다양한 공보가 본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 다량체성 RNAi 작용제를 기술한다. 이러한 공보는 WO2007/091269, 미국 특허 번호 7858769, WO2010/141511, WO2007/117686, WO2009/014887 및 WO2011/031520을 포함하고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

RNAi 작용제에 대한 하나 이상의 탄수화물 모이어티의 접합을 함유하는 RNAi 작용제는 RNAi 작용제의 하나 이상의 성질을 최적화할 수 있다. 다수의 경우에, 탄수화물 모이어티는 RNAi 작용제의 변형된 서브유닛에 부착될 것이다. 예를 들어, dsRNA 작용제의 하나 이상의 리보뉴클레오티드 서브유닛의 리보스 당이 탄수화물 리간드가 부착되는 또 다른 모이어티, 예를 들어, 비-탄수화물 (바람직하게는 시클릭) 캐리어로 교체될 수 있다. 서브유닛의 리보스 당이 이렇게 교체된 리보뉴클레오티드 서브유닛은 본원에서 리보스 교체 변형 서브유닛 (RRMS)으로 지칭된다. 시클릭 캐리어는 카르보시클릭 고리 시스템일 수 있고, 즉, 모든 고리 원자가 탄소 원자이거나, 또는 헤테로고리형 고리 시스템일 수 있고, 즉, 하나 이상의 고리 원자가 헤테로원자, 예를 들어, 질소, 산소, 황일 수 있다. 고리형 캐리어는 1고리형 고리 시스템일 수 있거나, 또는 2개 이상의 고리, 예를 들어 융합 고리를 함유할 수 있다. 고리형 캐리어는 완전히 포화된 고리 시스템일 수 있거나, 또는 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있다.

캐리어를 통해 리간드가 폴리뉴클레오티드에 부착될 수 있다. 캐리어는 (i) 적어도 하나의 "백본 부착점", 바람직하게는 2개의 "백본 부착점" 및 (ii) 적어도 하나의 "테더링 부착점을 포함한다". 본원에서 사용된 바와 같은 "백본 부착점"은 캐리어가 백본, 예를 들어, 리보핵산의 포스페이트 또는 변형된 포스페이트 백본, 예를 들어, 황 함유 백본 내로 혼입되는데 이용가능하고 이에 적절한, 관능기, 예를 들어, 히드록실 기, 또는 일반적으로는 결합을 지칭한다. 일부 실시양태에서의 "테더링 부착점" (TAP)은 선택된 모이어티를 연결하는, 시클릭 캐리어의 구성성분 고리 원자, 예를 들어, 탄소 원자 또는 헤테로원자 (백본 부착점을 제공하는 원자와 별개의 것)를 지칭한다. 모이어티는, 예를 들어, 탄수화물, 예를 들어, 모노사카라이드, 디사카라이드, 트리사카라이드, 테트라사카라이드, 올리고사카라이드 및 폴리사카라이드일 수 있다. 임의적으로, 선택된 모이어티는 개재 테더에 의해 시클릭 캐리어에 연결된다. 따라서, 시클릭 캐리어는 종종 관능기, 예를 들어, 아미노 기를 포함하거나, 또는 일반적으로는 결합을 제공할 것이고, 이는 또 다른 화학 물질, 예를 들어, 리간드가 구성원 고리에 혼입 또는 테더링되는데 적절하다.

캐리어를 통해 RNAi 작용제가 리간드에 접합될 수 있고, 여기서 캐리어는 시클릭 기 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 바람직하게는 시클릭 기는 피롤리디닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, [1,3]디옥솔란, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 퀴녹살리닐, 피리다지노닐, 테트라히드로푸릴 및 데칼린으로부터 선택되고, 바람직하게는 비-시클릭 기는 세리놀 백본 또는 디에탄올아민 백본으로부터 선택된다.

특정한 구체적 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 RNAi 작용제는 AD-57213 (센스 가닥: 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13) 및 안티센스 가닥: 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14) [여기서 A, C, G, 및 U는 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf는 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s는 포스포로티오에이트 연결임])이다.

이러한 작용제들은 리간드를 추가로 포함할 수 있다.

리간드

본 발명의 이중 가닥 RNA (dsRNA) 작용제는 임의적으로 하나 이상의 리간드에 접합될 수 있다. 리간드는 3'-단부, 5'-단부 또는 양쪽 단부에서 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 양쪽 가닥에 부착될 수 있다. 예를 들어, 리간드는 센스 가닥에 부착될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 리간드는 센스 가닥의 3'-단부에 접합된다.

한 실시양태에서, 리간드는 탄수화물 접합체, 예컨대 모노사카라이드이다. 한 실시양태에서, 리간드는 N-아세틸갈락토스아민 (GalNAc) GalNAc 또는 GalNAc 유도체이다. 본 발명의 특정 실시양태에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 1가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 작용제에 부착된다. 일부 실시양태에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 2가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 작용제에 부착된다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 3가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 작용제에 부착된다.

한 실시양태에서, 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 탄수화물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 GalNAc₃이다.

일부 실시양태에서, 리간드, 예를 들어, GalNAc 리간드는 RNAi 작용제의 3' 단부에 부착된다. 한 실시양태에서, RNAi 작용제는 하기 화학식에 나타난 바와 같이 리간드, 예를 들어, GalNAc 리간드에 접합된다.

여기서 X는 O 또는 S이다. 한 실시양태에서, X는 O이다.

광범위한 물질이 본 발명의 RNAi 작용제에 커플링될 수 있다. 바람직한 모이어티는 리간드이고, 이는 직접적으로 또는 간접적으로 개재 테더를 통해 커플링되고, 바람직하게는 공유결합으로 커플링된다.

바람직한 실시양태에서, 리간드는 자신이 혼입되는 분자의 분포, 표적화 또는 수명을 변경시킨다. 바람직한 실시양태에서, 리간드는, 예를 들어, 이러한 리간드가 없는 종에 비교하여, 선택된 표적, 예를 들어, 분자, 세포 또는 세포 유형, 구획, 수용체, 예를 들어, 세포 또는 기관 구획, 조직, 기관 또는 신체 영역에 대한 강화된 친화력을 제공한다. 선택된 표적에 대한 강화된 친화력을 제공하는 리간드는 또한 표적화 리간드로 명명된다.

일부 리간드는 엔도솜용해성 성질이 있을 수 있다. 엔도솜용해성 리간드는 엔도솜의 용해 및/또는 본 발명의 조성물 또는 그의 성분을 세포의 엔도솜에서 세포질로 운반하는 것을 촉진한다. 엔도솜용해성 리간드는 pH-의존적 막 활성 및 융합원성을 나타내는 다중음이온성 펩티드 또는 펩티드모방체일 수 있다. 한 실시양태에서, 엔도솜용해성 리간드는 엔도솜 pH에서 그의 활성 형상을 취한다. "활성" 형상은 엔도솜용해성 리간드가 엔도솜의 용해 및/또는 본 발명의 조성물 또는 그의 성분을 세포의 엔도솜에서 세포질로 운반하는 것을 촉진하는 형상이다. 예시적인 엔도솜용해성 리간드는 GALA 펩티드 (Subbarao et al., Biochemistry, 1987, 26: 2964-2972), EALA 펩티드 (Vogel et al., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118: 1581-1586), 및 그의 유도체 (Turk et al., Biochem. Biophys . Acta, 2002, 1559: 56-68)를 포함한다. 한 실시양태에서, 엔도솜용해성 성분은 pH 변화에 반응하여 전하 또는 양성자화의 변화가 진행될 화학기 (예를 들어, 아미노산)를 함유할 수 있다. 엔도솜용해성 성분은 선형 또는 분지형일 수 있다.

리간드는 운반, 혼성화 및 특이성 성질을 개선할 수 있고, 또한 생성된 천연 또는 변형된 올리고리보뉴클레오티드 또는 본원에 기술된 단량체 및/또는 천연 또는 변형된 리보뉴클레오티드의 임의의 조합을 포함하는 중합체성 분자의 뉴클레아제 저항성을 개선할 수 있다.

일반적으로 리간드는 치료 변형제 (예를 들어, 흡수 강화용); 진단 화합물 또는 리포터 기 (예를 들어, 분포 모니터링용); 가교제; 및 뉴클레아제-저항성 부여 모이어티를 포함할 수 있다. 일반적인 예는 지질, 스테로이드, 비타민, 당, 단백질, 펩티드, 폴리아민, 및 펩티드 모방체를 포함한다.

리간드는 천연 발생 물질, 예컨대 단백질 (예를 들어, 인간 혈청 알부민 (HSA), 저밀도 지질단백질 (LDL), 고밀도 지질단백질 (HDL), 또는 글로불린); 탄수화물 (예를 들어, 덱스트란, 풀루란, 키틴, 키토산, 이눌린, 시클로덱스트린 또는 히알루론산); 또는 지질을 포함할 수 있다. 리간드는 또한 재조합 또는 합성 분자, 예컨대 합성 중합체, 예를 들어, 합성 폴리아미노산, 올리고뉴클레오티드 (예를 들어, 앱타머)일 수 있다. 폴리아미노산의 예는 폴리리신 (PLL), 폴리 L-아스파르트산, 폴리 L-글루탐산, 스티렌-말레산 무수물 공중합체, 폴리(L-락티드-코-글리콜화) 공중합체, 디비닐 에테르-말레산 무수물 공중합체, N-(2-히드록시프로필)메타크릴아미드 공중합체 (HMPA), 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리비닐 알콜 (PVA), 폴리우레탄, 폴리(2-에틸아크릴산), N-이소프로필아크릴아미드 중합체, 또는 폴리포스파진을 포함한다. 폴리아민의 예는 폴리에틸렌이민, 폴리리신 (PLL), 스퍼민, 스퍼미딘, 폴리아민, 슈도펩티드-폴리아민, 펩티드모방체 폴리아민, 덴드리머 폴리아민, 아르기닌, 아미딘, 프로타민, 양이온성 지질, 양이온성 포피린, 폴리아민의 4차 염, 또는 알파 나선형 펩티드를 포함한다.

리간드는 표적화 기, 예를 들어, 세포 또는 조직 표적화 작용제, 예를 들어, 렉틴, 당단백질, 지질 또는 단백질, 예를 들어, 특정 세포 유형 예컨대 신장 세포에 결합하는 항체를 또한 포함할 수 있다. 표적화 기는 갑상선자극호르몬, 멜라노트로핀, 렉틴, 당단백질, 계면활성제 단백질 A, 뮤신 탄수화물, 다가 락토스, 다가 갈락토스, N-아세틸-갈락토사민, N-아세틸-글루코사민 다가 만노스, 다가 푸코스, 글리코실화 폴리아미노산, 다가 갈락토스, 트랜스페린, 비스포스포네이트, 폴리글루타메이트, 폴리아스파르테이트, 지질, 콜레스테롤, 스테로이드, 담즙산, 폴레이트, 비타민 B12, 비오틴, RGD 펩티드, RGD 펩티드 모방체 또는 앱타머일 수 있다.

리간드의 다른 예는 염료, 인터칼레이팅제 (예를 들어, 아크리딘), 가교제(예를 들어, 소랄렌, 미토마이신 C), 포피린 (TPPC4, 텍사피린, 사피린), 폴리시클릭 방향족 탄화수소 (예를 들어, 페나진, 디히드로페나진), 인공 엔도뉴클레아제 또는 킬레이터 (예를 들어, EDTA), 친지성 분자, 예를 들어, 콜레스테롤, 콜산, 아다만탄 아세트산, 1-피렌 부티르산, 디히드로테스토스테론, 1,3-비스-O(헥사데실)글리세롤, 제라닐옥시헥실 기, 헥사데실글리세롤, 보르네올, 멘톨, 1,3-프로판디올, 헵타데실 기, 팔미트산, 미리스틱산, O3-(올레오일)리토콜산, O3-(올레오일)콜렌산, 디메톡시트리틸, 또는 페녹사진) 및 펩티드 접합체 (예를 들어, 안테나페디아 펩티드, Tat 펩티드), 알킬화제, 포스페이트, 아미노, 메르캅토, PEG (예를 들어, PEG-40K), MPEG, [MPEG]₂, 폴리아미노, 알킬, 치환 알킬, 방사선표지 마커, 효소, 합텐(예를 들어, 비오틴), 운반/흡수 촉진제 (예를 들어, 아스피린, 비타민 E, 엽산), 합성 리보뉴클레아제 (예를 들어, 이미다졸, 비스이미다졸, 히스타민, 이미다졸 클러스터, 아크리딘-이미다졸 접합체, 테트라아자마크로사이클의 Eu3+ 복합체), 디니트로페닐, HRP, 또는 AP를 포함한다.

리간드는 단백질, 예를 들어, 당단백질, 또는 펩티드, 예를 들어, 공동-리간드에 대한 특이적인 친화력이 있는 분자, 또는 항체, 예를 들어, 특정 세포 유형 예컨대 암 세포, 내피 세포 또는 뼈 세포에 결합하는 항체일 수 있다. 리간드는 호르몬 및 호르몬 수용체를 또한 포함할 수 있다. 이는 비-펩티드 종, 예컨대 지질, 렉틴, 탄수화물, 비타민, 보조인자, 다가 락토스, 다가 갈락토스, N-아세틸-갈락토사민, N-아세틸-글루코사민, 다가 만노스, 다가 푸코스, 또는 앱타머를 또한 포함할 수 있다. 리간드는, 예를 들어, 지질폴리사카라이드, p38 MAP 키나제의 활성화제, 또는 NF-κB의 활성화제일 수 있다.

리간드는, 예를 들어, 세포의 세포골격을 파괴하는 것에 의해, 예를 들어, 세포의 미세관, 마이크로필라멘트 및/또는 중간 필라멘트를 파괴하는 것에 의해, 세포 내로의 iRNA 작용제 흡수를 증가시킬 수 있는 물질, 예를 들어, 약물일 수 있다. 약물은, 예를 들어, 탁손, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 시토칼라신, 노코다졸, 자플라키놀리드, 라트룬쿨린 A, 팔로이딘, 스윈홀리드 A, 인다노신, 또는 미오서빈일 수 있다.

리간드는, 예를 들어, 염증 반응을 활성화시키는 것에 의해, 세포 내로의 올리고뉴클레오티드 흡수를 증가시킬 수 있다. 이러한 효과가 있을 예시적인 리간드는 종양 괴사 인자 알파 (TNF알파), 인터루킨-1 베타, 또는 감마 인터페론을 포함한다.

한 측면에서, 리간드는 지질 또는 지질-기반 분자이다. 이러한 지질 또는 지질-기반 분자는 바람직하게는 혈청 단백질, 예를 들어, 인간 혈청 알부민 (HSA)에 결합한다. HSA 결합 리간드는 접합체가 표적 조직, 예를 들어, 신체의 비-신장 표적 조직으로 분포되게 한다. 예를 들어, 표적 조직은 간의 실질 세포를 포함하는 간일 수 있다. HSA에 결합할 수 있는 다른 분자도 리간드로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 나프록센 또는 아스피린이 사용될 수 있다. 지질 또는 지질-기반 리간드는 (a) 접합체의 분해에 대한 저항성을 증가시킬 수 있고/있거나, (b) 표적 세포 또는 세포막 내로의 표적화 또는 운반을 증가시킬 수 있고/있거나, (c) 혈청 단백질, 예를 들어, HSA에 결합하는 것을 조정하는데 사용될 수 있다.

지질 기반 리간드는 접합체가 표적 조직에 결합하는 것을 조정하는데, 예를 들어, 제어하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, HSA에 더욱 강하게 결합하는 지질 또는 지질-기반 리간드는 신장에 표적화될 가능성이 낮을 것이고, 따라서 신체로부터 소거될 가능성이 낮을 것이다. HSA에 덜 강하게 결합하는 지질 또는 지질-기반 리간드는 접합체를 신장에 표적화하는데 사용될 수 있다.

바람직한 실시양태에서, 지질 기반 리간드는 HSA에 결합한다. 바람직하게는, 이는 충분한 친화력으로 HSA에 결합하여, 바람직하게는 접합체가 비-신장 조직에 분포될 것이다. 그러나, HSA-리간드 결합이 역전될 수 없도록 친화력이 너무 강하지 않은 것이 바람직하다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 지질 기반 리간드는 HSA에 약하게 결합하거나 전혀 결합하지 않아서, 바람직하게는 접합체가 신장에 분포될 것이다. 신장 세포로 표적화되는 다른 모이어티가 지질 기반 리간드 대신에 또는 이에 더하여 사용될 수도 있다.

또 다른 측면에서, 리간드는 표적 세포, 예를 들어, 증여기서인 세포가 흡수하는 모이어티, 예를 들어, 비타민이다. 이는 원치 않는 세포 증식을 특징으로 하는 장애, 예를 들어, 악성 또는 비-악성 유형의 장애, 예를 들어, 암 세포를 치료하는데 특히 유용하다. 예시적인 비타민은 비타민 A, E, 및 K를 포함한다. 다른 예시적인 비타민은 비타민 B, 예를 들어, 엽산, B12, 리보플라빈, 비오틴, 피리독살, 또는 암 세포가 흡수하는 다른 비타민 또는 영양소를 포함한다. HAS, 저밀도 지질단백질 (LDL) 및 고밀도 지질단백질 (HDL)도 포함된다.

또 다른 측면에서, 리간드는 세포-투과제, 바람직하게는 나선형 세포-투과제이다. 바람직하게는, 이러한 작용제는 양친매성이다. 예시적인 작용제는 펩티드 예컨대 tat 또는 안테노페디아이다. 작용제가 펩티드이면, 이는 펩티드모방제, 인버토머, 비-펩티드 또는 슈도-펩티드 연결, 및 D-아미노산의 사용을 포함하여 변형될 수 있다. 나선형 작용제는 바람직하게는 알파-나선형 작용제이고, 이는 바람직하게는 친지성 및 소지성 상이 있다.

리간드는 펩티드 또는 펩티드모방체일 수 있다. 펩티드모방체 (본원에서 올리고펩티드모방체로도 지칭됨)는 천연 펩티드와 유사한 규정된 3차원 구조로 폴딩될 수 있는 분자이다. 펩티드 또는 펩티드모방체 모이어티는 약 5-50개의 아미노산의 길이, 예를 들어, 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50개의 아미노산의 길이일 수 있다. 펩티드 또는 펩티드모방체는, 예를 들어, 세포 투과 펩티드, 양이온성 펩티드, 양친매성 펩티드, 또는 소수성 펩티드 (예를 들어, 주로 Tyr, Trp 또는 Phe로 이루어짐)일 수 있다. 펩티드 모이어티는 덴드리머 펩티드, 구속형 펩티드 또는 가교 펩티드일 수 있다. 또 다른 대안에서, 펩티드 모이어티는 소수성 막 전위 서열 (MTS)을 포함할 수 있다. 예시적인 소수성 MTS-함유 펩티드는 아미노산 서열 AAVALLPAVLLALLAP(서열식별번호: 9)의 RFGF이다. 소수성 MTS를 함유하는 RFGF 유사체 (예를 들어, 아미노산 서열 AALLPVLLAAP (서열식별번호: 10)) 또한 표적화 모이어티일 수 있다. 펩티드 모이어티는 펩티드, 올리고뉴클레오티드 및 단백질을 포함하는 대형 극성 분자를 세포막을 가로질러 운반할 수 있는 "전달" 펩티드일 수 있다. 예를 들어, HIV Tat 단백질 (GRKKRRQRRRPPQ (서열식별번호: 11)) 및 드로소필라 안테나페디아(Drosophila Antennapedia) 단백질 (RQIKIWFQNRRMKWKK (서열식별번호: 12))로부터의 서열이 전달 펩티드로서 기능할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 파지-디스플레이 라이브러리 또는 1-비드-1-화합물 (OBOC) 조합형 라이브러리로부터 확인된 펩티드와 같이, 펩티드 또는 펩티드모방체는 무작위 DNA 서열에 의해 코딩될 수 있다 (Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991). 바람직하게는, 혼입된 단량체 단위를 통해 iRNA 작용제에 테더링된 펩티드 또는 펩티드모방체는 세포 표적화 펩티드 예컨대 아르기닌-글리신-아스파르트산 (RGD)-펩티드, 또는 RGD 모방체이다. 펩티드 모이어티는 길이가 약 5개의 아미노산 내지 약 40개의 아미노산의 범위일 수 있다. 펩티드 모이어티는, 예컨대 안정성을 증가시키거나 형상 성질을 지시하기 위해, 구조적 변형이 있을 수 있다. 하기 기술된 구조적 변형 중 임의의 것을 이용할 수 있다. RGD 펩티드 모이어티는 종양 세포, 예컨대 내피 종양 세포 또는 유방암 종양 세포를 표적화하는데 사용될 수 있다 (Zitzmann et al., Cancer Res., 62:5139-43, 2002). RGD 펩티드는 iRNA 작용제를 폐, 신장, 지라 또는 간을 포함하는 다양한 다른 조직의 종양에 표적화하는 것을 용이하게 할 수 있다 (Aoki et al., Cancer Gene Therapy 8:783-787, 2001). 바람직하게는, RGD 펩티드는 iRNA 작용제를 신장에 표적화하는 것을 용이하게 할 것이다. RGD 펩티드는 선형 또는 시클릭일 수 있고, 특정 조직으로의 표적화를 용이하게 하기 위해 변형, 예를 들어, 글리코실화 또는 메틸화될 수 있다. 예를 들어, 글리코실화 RGD 펩티드는 iRNA 작용제를 α_Vß₃을 발현하는 종양 세포로 전달할 수 있다 (Haubner et al., Jour. Nucl . Med ., 42:326-336, 2001). 증여기서인 세포에서 강화된 마커를 표적화하는 펩티드가 사용될 수 있다. 예를 들어, RGD 함유 펩티드 및 펩티드모방체는 암 세포, 특히 인테그린을 나타내는 세포를 표적화할 수 있다. 따라서, RGD 펩티드, RGD를 함유하는 시클릭 펩티드, D-아미노산을 포함하는 RGD 펩티드, 뿐만 아니라 합성 RGD 모방체를 사용할 수 있다. RGD에 더하여, 인테그린 리간드를 표적화하는 다른 모이어티를 사용할 수 있다. 일반적으로, 이러한 리간드는 증여기서인 세포 및 혈관생성을 제어하는데 사용될 수 있다. 이러한 유형의 리간드의 바람직한 접합체는 PECAM-1, VEGF, 또는 다른 암 유전자, 예를 들어, 본원에 기술된 암 유전자를 표적화한다.

"세포 투과 펩티드"는 세포, 예를 들어, 미생물 세포, 예컨대 박테리아 또는 진균 세포, 또는 포유동물 세포, 예컨대 인간 세포를 투과할 수 있다. 미생물 세포-투과 펩티드는, 예를 들어, α-나선형 선형 펩티드 (예를 들어, LL-37 또는 세로핀 P1), 디술피드 결합-함유 펩티드 (예를 들어, α-디펜신, β-디펜신 또는 박테네신), 또는 1개 또는 2개의 우세 아미노산만 함유하는 펩티드 (예를 들어, PR-39 또는 인돌리시딘)일 수 있다. 세포 투과 펩티드는 핵 국소화 신호 (NLS)를 또한 포함할 수 있다. 예를 들어, 세포 투과 펩티드는 양분성 양친매성 펩티드, 예컨대 MPG이고, 이는 SV40 대형 T 항원의 NLS 및 HIV-1 gp41의 융합 펩티드 도메인으로부터 유래된다 (Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 31:2717-2724, 2003).

한 실시양태에서, 표적화 펩티드는 양친매성 α-나선형 펩티드일 수 있다. 예시적인 양친매성 α-나선형 펩티드는 세크로핀, 리코톡신, 파라닥신, 부포린, CPF, 봄비닌-유사 펩티드 (BLP), 카텔리시딘, 세라토톡신, 에스. 클라바(S. clava) 펩티드, 해그피쉬 장 항균 펩티드 (HFIAP), 마가이닌, 브레비닌-2, 더마셉틴, 멜리틴, 플레우로시딘, H₂A 펩티드, 제노푸스(Xenopus) 펩티드, 에스쿨렌티니스-1, 및 캐린을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는 다수의 요인이 나선 안정성의 무결성을 유지하는데 고려될 것이다. 예를 들어, 최대 개수의 나선 안정화 잔기가 이용될 것이고 (예를 들어, leu, ala, 또는 lys), 및 최소 개수의 나선 탈안정화 잔기가 이용될 것이다 (예를 들어, 프롤린, 또는 시클릭 단량체 단위). 캡핑 잔기가 고려될 것이고/이거나 (예를 들어, Gly이 예시적인 N-캡핑 잔기이다), C-말단 아미드화가 여분의 H-결합을 제공하여 나선을 안정화시키는데 사용될 수 있다. i ± 3, 또는 i ± 4 위치만큼 분리된, 전하가 반대인 잔기들 사이에 염 브릿지가 형성되는 것이 안정성을 제공할 수 있다. 예를 들어, 양이온성 잔기 예컨대 리신, 아르기닌, 호모-아르기닌, 오르니틴 또는 히스티딘이 음이온성 잔기인 글루타메이트 또는 아스파르테이트와 염 브릿지를 형성할 수 있다.

펩티드 및 펩티드모방체 리간드는 천연 발생 또는 변형된 펩티드, 예를 들어, D 또는 L 펩티드; α, β, 또는 γ 펩티드; N-메틸 펩티드; 아자펩티드; 하나 이상의 아미드, 즉 펩티드 연결이 하나 이상의 요소, 티오우레아, 카르바메이트 또는 술포닐 우레아 연결로 교체된 펩티드; 또는 시클릭 펩티드가 있는 것들을 포함한다.

표적화 리간드는 특정 수용체를 표적화할 수 있는 임의의 리간드일 수 있다. 예는 폴레이트, GalNAc, 갈락토스, 만노스, 만노스-6P, 당 클러스터 예컨대 GalNAc 클러스터, 만노스 클러스터, 갈락토스 클러스터, 또는 앱타머이다. 클러스터는 2개 이상의 당 단위의 조합이다. 표적화 리간드는 인테그린 수용체 리간드, 케모카인 수용체 리간드, 트랜스페린, 비오틴, 세로토닌 수용체 리간드, PSMA, 엔도텔린, GCPII, 소마토스타틴, LDL 및 HDL 리간드를 또한 포함한다. 리간드는 핵산, 예를 들어, 앱타머를 기초로 할 수도 있다. 앱타머는 비변형될 수 있거나, 또는 본원에 개시된 변형의 임의의 조합이 있을 수 있다.

엔도솜 방출제는 이미다졸, 폴리 또는 올리고이미다졸, PEI, 펩티드, 융합원성 펩티드, 폴리카르복실레이트, 다중양이온, 차폐된 올리고 또는 다중 양이온 또는 음이온, 아세탈, 폴리아세틸, 케탈/폴리케탈, 오르토에스테르, 차폐된 또는 차폐되지 않은 양이온성 또는 음이온성 전하가 있는 중합체, 차폐된 또는 차폐 되지 않은 양이온성 또는 음이온성 전하가 있는 덴드리머를 포함한다.

PK 조정제는 약동학 조정제를 가리킨다. PK 조정제는 친지체, 담즙산, 스테로이드, 인지질 유사체, 펩티드, 단백질 결합제, PEG, 비타민 등을 포함한다. 예시적인 PK 조정제는 콜레스테롤, 지방산, 콜산, 리토콜산, 디알킬글리세리드, 디아실글리세리드, 인지질, 스핑고지질, 나프록센, 이부프로펜, 비타민 E, 비오틴 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다수의 포스포로티오에이트 연결을 포함하는 올리고뉴클레오티드는 혈청 단백질에 결합하는 것으로 또한 공지되어 있고, 따라서 짧은 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, 백본 내에 다중 포스포로티오에이트 연결을 포함하는 약 5개의 염기, 10개의 염기, 15개의 염기 또는 20개의 염기의 올리고뉴클레오티드 또한 리간드로서 (예를 들어, PK 조정 리간드로서) 본 발명에 적용가능하다.

추가적으로, 혈청 성분 (예를 들어, 혈청 단백질)에 결합하는 앱타머 또한 PK 조정 리간드로서 본 발명에 적용가능하다.

본 발명에 적용가능한 다른 리간드 접합체가 미국 특허 출원 USSN: 10/916,185 (2004년 8월 10일 출원); USSN: 10/946,873 (2004년 9월 21일 출원); USSN: 10/833,934 (2007년 8월 3일 출원); USSN: 11/115,989 (2005년 4월 27일 출원) 및 USSN: 11/944,227 (2007년 11월 21일 출원)에 기술되어 있고, 이들은 모든 목적을 위해 전문이 참조로 포함된다.

2개 이상의 리간드가 존재할 때, 리간드들은 모두 동일한 성질을 가질 수 있거나, 모두 상이한 성질을 가질 수 있거나, 또는 일부 리간드는 동일한 성질을 갖는 한편 다른 것들은 상이한 성질을 가질 수 있다. 예를 들어, 리간드는 표적화 성질이 있거나, 엔도솜용해성 활성이 있거나, 또는 PK 조정 성질이 있을 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 모든 리간드는 상이한 성질을 갖는다.

리간드는 다양한 장소, 예를 들어, 3'-단부, 5'-단부, 및/또는 내부 위치에서 올리고뉴클레오티드에 커플링될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 리간드는 개재 테더, 예를 들어, 본원에 기술된 캐리어를 통해 올리고뉴클레오티드에 부착된다. 리간드 또는 테더링된 리간드는 성장 중인 가닥 내로 단량체가 혼입될 때 단량체 상에 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 리간드는 성장 중인 가닥 내로 "전구체" 단량체가 혼입된 후에 커플링을 통해 "전구체" 단량체에 혼입될 수 있다. 예를 들어, 아미노-말단 테더가 있는 (즉, 회합된 리간드가 없는) 단량체, 예를 들어, TAP-(CH₂)_nNH₂가 성장 중인 올리고뉴클레오티드 가닥 내로 혼입될 수 있다. 후속 공정에서, 즉, 전구체 단량체가 가닥 내로 혼입된 후에, 친전자성 기, 예를 들어, 펜타플루오로페닐 에스테르 또는 알데히드 기가 있는 리간드가 리간드의 친전자성 기와 전구체 단량체의 테더의 말단 친핵성 기를 커플링시키는 것에 의해 후속하여 전구체 단량체에 부착될 수 있다.

또 다른 예에서, 클릭 화학 반응에 참여하는데 적절한 화학기, 예를 들어, 아지드 또는 알킨 말단 테더/링커가 있는 단량체가 혼입될 수 있다. 후속 공정에서, 즉, 전구체 단량체가 가닥 내로 혼입된 후에, 상보적인 화학기, 예를 들어 알킨 또는 아지드가 있는 리간드가 알킨 및 아지드를 함께 커플링시키는 것에 의해 전구체 단량체에 부착될 수 있다.

이중-가닥 올리고뉴클레오티드의 경우, 리간드는 한쪽 또는 양쪽 가닥에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이중 가닥 iRNA 작용제는 센스 가닥에 접합된 리간드를 함유한다. 다른 실시양태에서, 이중 가닥 iRNA 작용제는 안티센스 가닥에 접합된 리간드를 함유한다.

일부 실시양태에서, 리간드는 핵산 분자의 핵염기, 당 모이어티, 또는 뉴클레오시드간 연결에 접합될 수 있다. 퓨린 핵염기 또는 그의 유도체에 접합되는 것은 고리내 및 고리외 원자를 포함하여 임의의 위치에서 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 퓨린 핵염기의 2-, 6-, 7-, 또는 8-위치가 접합체 모이어티에 부착된다. 피리미딘 핵염기 또는 그의 유도체에 접합되는 것 또한 임의의 위치에서 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 피리미딘 핵염기의 2-, 5-, 및 6-위치가 접합체 모이어티로 치환될 수 있다. 뉴클레오시드의 당 모이어티에 접합되는 것은 임의의 탄소 원자에서 발생할 수 있다. 접합체 모이어티에 부착될 수 있는 당 모이어티의 탄소 원자의 예는 2', 3', 및 5' 탄소 원자를 포함한다. 예컨대 무염기 잔기에서, 1' 위치 또한 접합체 모이어티에 부착될 수 있다. 뉴클레오시드간 연결 또한 접합체 모이어티를 보유할 수 있다. 인-함유 연결 (예를 들어, 포스포디에스테르, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로아미데이트 등)의 경우, 접합체 모이어티가 직접적으로 인 원자에 또는 인 원자에 결합된 O, N, 또는 S 원자에 부착될 수 있다. 아민- 또는 아미드-함유 뉴클레오시드 연결 (예를 들어, PNA)의 경우, 접합체 모이어티가 아민 또는 아미드의 질소 원자에 또는 인접한 탄소 원자에 부착될 수 있다.

RNA 간섭 분야의 임의의 적절한 리간드를 사용할 수 있지만, 리간드는 전형적으로 탄수화물, 예를 들어 모노사카라이드 (예컨대 GalNAc), 디사카라이드, 트리사카라이드, 테트라사카라이드, 폴리사카라이드이다.

리간드를 핵산에 접합시키는 링커는 상기 논의된 것들을 포함한다. 예를 들어, 리간드는 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc (N-아세틸글루코사민) 유도체일 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명의 dsRNA는 화학식 (IV) - (VII) 중 임의의 것에서 제시된 구조를 포함하는 2가 또는 3가 분지형 링커에 접합된다:

여기서

q^2A, q^2B, q^3A, q^3B, q4^A, q^4B, q^5A, q^{5B 및}q^5C는 독립적으로 각각의 경우에 대해 0-20을 나타내고, 반복 단위는 동일하거나 상이할 수 있고;

P^2A, P^2B, P^3A, P^3B, P^4A, P^4B, P^5A, P^5B, P^5C, T^2A, T^2B, T^3A, T^3B, T^4A, T^4B, T^4A, T^5B, T^5C는 각각 독립적으로 각각의 경우에 대해 부재하거나, CO, NH, O, S, OC(O), NHC(O), CH₂, CH₂NH 또는 CH₂O이고;

Q^2A, Q^2B, Q^3A, Q^3B, Q^4A, Q^4B, Q^5A, Q^5B, Q^5C는 독립적으로 각각의 경우에 대해 부재하거나, 알킬렌, 치환된 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌이 O, S, S(O), SO₂, N(R^N), C(R')=C(R"), C≡C 또는 C(O) 중 하나 이상에 의해 중단 또는 종결될 수 있고;

R^2A, R^2B, R^3A, R^3B, R^4A, R^4B, R^5A, R^5B, R^5C는 각각 독립적으로 각각의 경우에 대해 부재하거나, NH, O, S, CH₂, C(O)O, C(O)NH, NHCH(R^a)C(O), -C(O)-CH(R^a)-NH-, CO, CH=N-O,

또는 헤테로시클릴이고;

L^2A, L^2B, L^3A, L^3B, L^4A, L^4B, L^5A, L^{5B 및}L^5C는 리간드; 즉 각각 독립적으로 각각의 경우에 대해 모노사카라이드 (예컨대 GalNAc), 디사카라이드, 트리사카라이드, 테트라사카라이드, 올리고사카라이드, 또는 폴리사카라이드를 나타내고;

R^a는 H 또는 아미노산 측쇄이다.

GalNAc 유도체를 접합시키는 3가, 예컨대 화학식 (VII)의 것이 표적 유전자의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제와 함께 사용하는데 특히 유용하다:

여기서 L^5A, L^5B 및 L^5C는 모노사카라이드, 예컨대 GalNAc 유도체를 나타낸다.

GalNAc 유도체를 접합시키는 적절한 2가 및 3가 분지형 링커 기의 예는 하기의 화합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다:

RNA 접합체의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허 번호 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928 및 5,688,941; 6,294,664; 6,320,017; 6,576,752; 6,783,931; 6,900,297; 7,037,646; 8,106,022를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들 각각의 전체 내용은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.

소정의 화합물 내의 모든 위치가 균일하게 변형될 필요는 없고, 실제로, 하나 초과의 상기 언급된 변형이 단일 화합물 내에, 또는 심지어 iRNA 내의 단일 뉴클레오시드에서 혼입될 수 있다. 본 발명은 키메라 화합물인 iRNA 화합물을 또한 포함한다.

"키메라" iRNA 화합물 또는 "키메라"는, 본 발명의 맥락에서, 각각 적어도 하나의 단량체 단위, 즉 dsRNA 화합물의 경우 뉴클레오티드로 구성된 2개 이상의 화학적으로 별개인 영역을 함유하는 iRNA 화합물, 바람직하게는 dsRNA이다. 전형적으로 이러한 iRNA는 뉴클레아제 분해에 대한 저항성 증가, 세포 흡수 증가, 미치/또는 표적 핵산에 대한 결합 친화력 증가를 iRNA에 부여하도록 RNA가 변형된 영역을 적어도 하나 함유한다. iRNA의 추가적인 영역이 RNA:DNA 또는 RNA:RNA 하이브리드를 절단할 수 있는 효소에 대한 기질로서의 역할을 할 수 있다. 예를 들어, RNase H는 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단하는 세포성 엔도뉴클레아제이다. 따라서, RNase H의 활성화는 RNA 표적의 절단을 초래하고, 이에 의해 유전자 발현의 iRNA 억제의 효율을 크게 강화한다. 결과적으로, 동일한 표적 영역에 혼성화하는 포스포로티오에이트 데옥시 dsRNA에 비교하여, 키메라 dsRNA가 사용될 때 더 짧은 iRNA로 유사한 결과가 종종 수득될 수 있다. 겔 전기영동에 의해, 그리고 필요하다면 관련 분야에 공지된 연관된 핵산 혼성화 기술에 의해 RNA 표적의 절단을 일상적으로 검출할 수 있다.

특정 예에서, iRNA의 RNA가 비-리간드 기에 의해 변형될 수 있다. iRNA의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 강화하기 위해 다수의 비-리간드 분자가 iRNA에 접합되었고, 이러한 접합을 수행하기 위한 절차가 과학 문헌에서 입수가능하다. 이러한 비-리간드 모이어티는 지질 모이어티, 예컨대 콜레스테롤 (Kubo, T. et al., Biochem . Biophys . Res. Comm., 2007, 365(1):54-61; Letsinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 1989, 86:6553), 콜산 (Manoharan et al., Bioorg . Med . Chem . Lett., 1994, 4:1053), 티오에테르, 예를 들어, 헥실-S-트리틸티올 (Manoharan et al., Ann. N.Y . Acad. Sci., 1992, 660:306; Manoharan et al., Bioorg . Med . Chem . Let., 1993, 3:2765), 티오콜레스테롤 (Oberhauser et al., Nucl . Acids Res., 1992, 20:533), 지방족 사슬, 예를 들어, 도데칸디올 또는 운데실 잔기 (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49), 인지질, 예를 들어, 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 1,2-디-O-헥사데실-rac-글리세로-3-H-포스포네이트 (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651; Shea et al., Nucl . Acids Res., 1990, 18:3777), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬 (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969), 또는 아다만탄 아세트산 (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651), 팔미틸 모이어티 (Mishra et al., Biochim . Biophys. Acta, 1995, 1264:229), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티 (Crooke et al., J. Pharmacol . Exp . Ther., 1996, 277:923)를 포함하였다. 이러한 RNA 접합체의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허가 상기에서 열거되었다. 전형적인 접합 프로토콜은 서열의 하나 이상의 위치에 아미노링커를 보유하는 RNA의 합성을 수반한다. 그 후, 적합한 커플링 또는 활성화 시약을 사용하여 아미노 기를 접합되는 분자와 반응시킨다. 접합 반응은 고체 지지체 상에 여전히 결합된 RNA로 또는 RNA의 절단 후에 용액 상에서 수행될 수 있다. 전형적으로, HPLC에 의한 RNA 접합체의 정제로 순수한 접합체가 산출된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 이중 가닥 RNAi 작용제는 AD-57213이다.

VI. 본 발명의 iRNA의 전달

세포, 예를 들어, 대상체, 예컨대 인간 대상체 (예를 들어, 이를 필요로 하는 대상체, 예컨대 출혈 장애가 있는 대상체) 내의 세포에 본 발명의 iRNA를 전달하는 것은 다수의 상이한 방식으로 달성될 수 있다. 예를 들어, 시험관 내에서 또는 생체 내에서 세포와 본 발명의 iRNA를 접촉시킴으로써 전달이 수행될 수 있다. 생체내 전달은 iRNA, 예를 들어, dsRNA를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 직접적으로 수행될 수 있다. 대안적으로, 생체내 전달은 iRNA를 코딩하고 그의 발현을 지시하는 하나 이상의 벡터를 투여함으로써 간접적으로 수행될 수 있다. 이러한 대안들이 하기에서 추가로 논의된다.

일반적으로, 핵산 분자를 (시험관 내에서 또는 생체 내에서) 전달하는 임의의 방법을 본 발명의 iRNA와 함께 사용하기 위해 개조할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Akhtar S. and Julian RL. (1992) Trends Cell. Biol. 2(5):139-144] 및 WO94/02595를 참조하고, 이들은 전문이 본원에 참조로 포함된다). 생체내 전달의 경우, iRNA 분자를 전달하기 위해 고려할 요인은, 예를 들어, 전달되는 분자의 생물학적 안정성, 비-특이적 효과의 방지, 및 전달되는 분자의 표적 조직에서의 축적을 포함한다. iRNA의 비-특이적 효과는 국소 투여에 의해, 예를 들어, 조직 내로의 직접적인 주사 또는 이식 또는 제제를 국부적으로 투여하는 것에 의해 최소화될 수 있다. 처치 부위로의 국소 투여는 작용제의 국소 농도를 최대화하고, 그렇지 않으면 작용제에 의해 손상될 수 있거나 또는 작용제를 분해할 수 있는 전신 조직으로의 작용제 노출을 제한하며, 더 낮은 총 용량의 iRNA 분자가 투여되게 허용한다. 몇몇 연구에서, iRNA가 국소적으로 투여되었을 때 유전자 산물의 성공적인 녹다운이 나타났다. 예를 들어, 사이노몰거스 원숭이에서의 유리체내 주사 (Tolentino, MJ., et al. (2004) Retina 24:132-138) 및 마우스에서의 망막하 주사 (Reich, SJ., et al. (2003) Mol. Vis. 9:210-216)에 의한 VEGF dsRNA의 안구내 전달이 둘 다 연령-관련 황반 변성의 실험 모델에서 혈관신생을 예방하는 것으로 나타났다. 추가적으로, 마우스에서의 dsRNA의 직접적인 종양내 주사가 종양 부피를 감소시키고 (Pille, J., et al. (2005) Mol . Ther.11:267-274), 종양-보유 마우스의 생존을 연장할 수 있다 (Kim, WJ., et al. (2006) Mol . Ther. 14:343-350; Li, S., et al. (2007) Mol . Ther. 15:515-523). RNA 간섭은 또한 직접적인 주사에 의한 CNS로의 국소 전달 (Dorn, G., et al. (2004) Nucleic Acids 32:e49; Tan, PH., et al. (2005) Gene Ther. 12:59-66; Makimura, H., et al. (2002) BMC Neurosci. 3:18; Shishkina, GT., et al. (2004) Neuroscience 129:521-528; Thakker, ER., et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:17270-17275; Akaneya,Y., et al. (2005) J. Neurophysiol. 93:594-602) 및 비강내 투여에 의한 폐로의 국소 전달 (Howard, KA., et al. (2006) Mol. Ther. 14:476-484; Zhang, X., et al. (2004) J. Biol. Chem. 279:10677-10684; Bitko, V., et al. (2005) Nat. Med. 11:50-55)로 성공을 나타냈다. 질환 치료를 위해 iRNA를 전신적으로 투여하기 위해, RNA는 변형될 수 있거나 또는 대안적으로 약물 전달 시스템을 사용하여 전달될 수 있고, 둘 다의 방법은 생체 내에서의 엔도- 및 엑소-뉴클레아제에 의한 dsRNA의 급속한 분해를 방지하는 작용을 한다. RNA의 변형 또는 제약 담체가 또한 iRNA 조성물을 표적 조직으로 표적화하는 것을 허용할 수 있고, 표적을 벗어나는 바람직하지 않은 효과를 피할 수 있다. 세포 흡수를 강화하고 분해를 방지하도록 친지성 기 예컨대 콜레스테롤에 화학적으로 접합되는 것에 의해 iRNA 분자가 변형될 수 있다. 예를 들어, 친지성 콜레스테롤 모이어티에 접합된 ApoB에 대해 지시된 iRNA를 마우스 내로 전신 주사하였고, 이는 간 및 공장 둘 다에서 apoB mRNA의 녹다운을 초래하였다 (Soutschek, J., et al. (2004) Nature 432:173-178). iRNA가 앱타머에 접합되는 것이 전립선암의 마우스 모델에서 종양 성장을 억제하고 종양 퇴행을 매개하는 것으로 나타났다 (McNamara, JO., et al. (2006) Nat. Biotechnol. 24:1005-1015). 대안적인 실시양태에서, 약물 전달 시스템 예컨대 나노입자, 덴드리머, 중합체, 리포솜, 또는 양이온성 전달 시스템을 사용하여 iRNA가 전달될 수 있다. 양으로 하전된 양이온성 전달 시스템은 iRNA 분자 (음으로 하전됨)의 결합을 용이하게 하고, 또한 음으로 하전된 세포막에서의 상호작용을 강화하여 세포에 의한 iRNA의 효율적인 흡수를 허용한다. 양이온성 지질, 덴드리머, 또는 중합체가 iRNA에 결합될 수 있거나, 또는 iRNA를 담는 소포 또는 미셀을 형성하도록 유도될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Kim SH., et al. (2008) Journal of Controlled Release 129(2):107-116] 참조). 소포 또는 미셀 형성은 전신적으로 투여되었을 때 iRNA 분해를 추가로 방지한다. 양이온성-iRNA 복합체의 제조 및 투여 방법은 충분히 관련 분야의 기술자의 능력 내이다 (예를 들어, 문헌 [Sorensen, DR., et al. (2003) J. Mol . Biol 327:761-766; Verma, UN., et al. (2003) Clin. Cancer Res. 9:1291-1300; Arnold, AS et al. (2007) J. Hypertens. 25:197-205]을 참조하고, 이들은 전문이 본원에 참조로 포함된다). iRNA의 전신 전달에 유용한 약물 전달 시스템의 일부 비제한적 예는 DOTAP (Sorensen, DR., et al. (2003), 상기 문헌; Verma, UN., et al. (2003), 상기 문헌), 올리고펙타민(Oligofectamine), "고체 핵산 지질 물질" (Zimmermann, TS., et al. (2006) Nature 441:111-114), 카르디올리핀 (Chien, PY., et al. (2005) Cancer Gene Ther . 12:321-328; Pal, A., et al. (2005) Int J. Oncol. 26:1087-1091), 폴리에틸렌이민 (Bonnet ME., et al. (2008) Pharm . Res. Aug 16 Epub ahead of print; Aigner, A. (2006) J. Biomed. Biotechnol. 71659), Arg-Gly-Asp (RGD) 펩티드 (Liu, S. (2006) Mol . Pharm. 3:472-487), 및 폴리아미도아민 (Tomalia, DA., et al. (2007) Biochem . Soc. Trans. 35:61-67; Yoo, H., et al. (1999) Pharm . Res. 16:1799-1804)을 포함한다. 일부 실시양태에서, iRNA는 전신 투여를 위해 시클로덱스트린과 복합체를 형성한다. iRNA 및 시클로덱스트린의 투여 방법 및 제약 조성물을 미국 특허 번호 7,427,605에서 확인할 수 있고, 이는 전문이 본원에 참조로 포함된다.

A. 벡터에 의해 코딩된 본 발명의 iRNA

DNA 또는 RNA 벡터 내로 삽입된 전사 단위로부터 Serpinc1 유전자를 표적화하는 iRNA가 발현될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Couture, A, et al., TIG . (1996), 12:5-10]; 스킬런 에이(Skillern, A.) 등의 국제 PCT 공개 번호 WO 00/22113, 콘라드(Conrad)의 국제 PCT 공개 번호 WO 00/22114, 및 콘라드의 미국 특허 번호 6,054,299 참조). 사용된 특정 구축물 및 표적 조직 또는 세포 유형에 따라, 발현은 일시적일 수 있거나 (수시간 내지 수주) 또는 지속적일 수 있다 (수주 내지 수개월 이상). 이러한 트랜스진(transgene)은 선형 구축물, 원형 플라스미드, 또는 바이러스 벡터로서 도입될 수 있고, 이들은 통합 또는 비-통합 벡터일 수 있다. 트랜스진은 염색체외 플라스미드로서 유전되는 것을 허용하도록 구축될 수도 있다 (Gassmann, et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA (1995) 92:1292).

발현 벡터 상의 프로모터로부터 iRNA의 개별적인 가닥 또는 가닥들이 전사될 수 있다. 2개의 별개의 가닥이 예를 들어 dsRNA를 생성하도록 발현되어야 하는 경우, 2개의 별개의 발현 벡터가 (예를 들어, 형질감염 또는 감염에 의해) 표적 세포 내로 공동-도입될 수 있다. 대안적으로, 둘 다 동일한 발현 플라스미드 상에 위치하는 프로모터들에 의해 dsRNA의 각각의 개별적인 가닥이 전사될 수 있다. 한 실시양태에서, dsRNA는 dsRNA가 줄기 및 루프 구조를 갖도록 링커 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 연결된 역위 반복 폴리뉴클레오티드로서 발현된다.

iRNA 발현 벡터는 일반적으로 DNA 플라스미드 또는 바이러스 벡터이다. 진핵생물 세포와 상용성인 발현 벡터, 바람직하게는 척추동물 세포와 상용성인 것을 본원에 기술된 바와 같은 iRNA의 발현을 위한 재조합 구축물을 생산하는데 사용할 수 있다. 진핵생물 세포 발현 벡터는 관련 분야에 널리 공지되어 있고, 다수의 시판원으로부터 입수가능하다. 전형적으로, 원하는 핵산 분절의 삽입을 위한 편리한 제한 부위를 함유하는 이러한 벡터가 제공된다. iRNA를 발현하는 벡터의 전달은, 예컨대 정맥내 또는 근육내 투여에 의해, 환자로부터 외식된 표적 세포에 투여한 후 환자 내로 재도입하는 것에 의해, 또는 원하는 표적 세포 내로의 도입을 허용하는 임의의 다른 수단에 의해, 전신성일 수 있다.

iRNA 발현 플라스미드는 양이온성 지질 담체 (예를 들어, 올리고펙타민) 또는 비-양이온성 지질-기반 담체 (예를 들어, 트랜짓-TKO(Transit-TKO)™)와의 복합체로서 표적 세포 내로 형질감염될 수 있다. 1주일 이상의 기간에 걸쳐 표적 RNA의 상이한 영역들을 표적화하는 iRNA-매개 녹다운을 위한 다중 지질 형질감염이 또한 본 발명에 의해 구상된다. 숙주 세포 내로의 성공적인 벡터 도입을 다양한 공지된 방법을 사용하여 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 일시적인 형질감염을 리포터, 예컨대 형광 마커, 예컨대 녹색 형광 단백질 (GFP)로 신호화할 수 있다. 형질감염된 세포에 특정 환경 요인 (예를 들어, 항생제 및 약물)에 대한 저항성, 예컨대 히그로마이신 B 저항성을 제공하는 마커를 사용하여 세포의 생체 외에서의 안정적인 형질감염을 확실하게 할 수 있다.

본원에 기술된 방법 및 조성물과 함께 이용될 수 있는 바이러스 벡터 시스템은 (a) 아데노바이러스 벡터; (b) 렌티바이러스 벡터, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 레트로바이러스 벡터; (c) 아데노-연관 바이러스 벡터; (d) 헤르페스 심플렉스 바이러스 벡터; (e) SV40 벡터; (f) 폴리오마 바이러스 벡터; (g) 유두종 바이러스 벡터; (h) 피코르나바이러스 벡터; (i) 폭스바이러스 벡터 예컨대 오르토폭스, 예를 들어, 우두 바이러스 벡터 또는 조류폭스, 예를 들어, 카나리아두 또는 계두; 및 (j) 헬퍼-의존적 또는 무기력 아데노바이러스를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 복제-결함 바이러스가 또한 유리할 수 있다. 상이한 벡터는 세포의 게놈 내로 혼입되거나 또는 혼입되지 않을 것이다. 구축물은 원한다면 형질감염을 위한 바이러스 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 구축물은 에피솜 복제가 가능한 벡터, 예를 들어 EPV 및 EBV 벡터 내로 혼입될 수 있다. iRNA의 재조합 발현을 위한 구축물은 일반적으로 표적 세포에서의 iRNA 발현을 확실히 하기 위해 조절 요소, 예를 들어, 프로모터, 인핸서 등을 필요로 할 것이다. 벡터 및 구축물에 대해 고려할 다른 측면들이 하기에서 추가로 기술된다.

iRNA 전달에 유용한 벡터는 표적 세포 또는 조직에서의 iRNA 발현에 충분한 조절 요소 (프로모터, 인핸서 등)을 포함할 것이다. 조절 요소는 구성적 또는 조절/유도성 발현을 제공하도록 선택될 수 있다.

예를 들어, 특정 생리학적 조절인자, 예를 들어, 순환 글루코스 수준, 또는 호르몬에 감수성인 유도성 조절 서열을 사용함으로써, iRNA의 발현을 정확하게 조절할 수 있다 (Docherty et al., 1994, FASEB J. 8:20-24). 세포 또는 포유동물에서의 dsRNA 발현의 제어에 적절한 이러한 유도성 발현 시스템은, 예를 들어, 엑디손, 에스트로겐, 프로게스테론, 테트라사이클린, 이량체화의 화학적 유도제, 및 이소프로필-베타-D1-티오갈락토피라노시드 (IPTG)에 의한 조절을 포함한다. 관련 분야의 기술자는 iRNA 트랜스진의 의도되는 용도를 기초로 적합한 조절인자/프로모터 서열을 선택할 수 있을 것이다.

iRNA를 코딩하는 핵산 서열을 함유하는 바이러스 벡터를 사용할 수 있다. 예를 들어, 레트로바이러스 벡터를 사용할 수 있다 (문헌 [Miller et al., Meth . Enzymol. 217:581-599 (1993)] 참조). 이러한 레트로바이러스 벡터는 바이러스 게놈의 정확한 패키징 및 숙주 세포 DNA 내로의 통합에 필요한 성분을 함유한다. iRNA를 코딩하는 핵산 서열이 하나 이상의 벡터 내로 클로닝되고, 이는 환자 내로의 핵산 전달을 용이하게 한다. 레트로바이러스 벡터에 관한 더 많은 상세사항을, 예를 들어, 문헌 [Boesen et al., Biotherapy 6:291-302 (1994)]에서 확인할 수 있고, 이는 줄기 세포를 화학요법에 더욱 저항성이게 만들기 위해 레트로바이러스 벡터를 사용하여 mdr1 유전자를 조혈 줄기 세포에 전달하는 것을 기술한다. 유전자 요법에서 레트로바이러스 벡터를 사용하는 것을 설명하는 다른 참고문헌은 문헌 [Clowes et al., J. Clin . Invest. 93:644-651 (1994); Kiem et al., Blood 83:1467-1473 (1994); Salmons and Gunzberg, Human Gene Therapy 4:129-141 (1993); 및 Grossman and Wilson, Curr . Opin . in Genetics 및 Devel. 3:110-114 (1993)]이다. 사용이 구상되는 렌티바이러스 벡터는, 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 미국 특허 번호 6,143,520; 5,665,557; 및 5,981,276에 기술된 HIV 기반 벡터를 포함한다.

아데노바이러스가 본 발명의 iRNA의 전달에서 사용하는데 또한 구상된다. 예를 들어, 유전자를 호흡기 상피로 전달하기 위해, 아데노바이러스가 특히 매력적인 비히클이다. 아데노바이러스는 천연적으로 호흡기 상피를 감염시키고, 여기에서 가벼운 질환을 야기한다. 아데노바이러스-기반 전달 시스템의 다른 표적은 간, 중추신경계, 내피 세포, 및 근육이다. 아데노바이러스는 비-분열 세포를 감염시킬 수 있는 장점이 있다. 문헌 [Kozarsky and Wilson, Current Opinion in Genetics and Development 3:499-503 (1993)]이 아데노바이러스-기반 유전자 요법의 리뷰를 제시한다. 문헌 [Bout et al., Human Gene Therapy 5:3-10 (1994)]에서는 아데노바이러스 벡터를 사용하여 유전자를 붉은털원숭이의 호흡기 상피에 전달하는 것이 증명되었다. 유전자 요법에서 아데노바이러스 벡터를 사용하는 것의 다른 예를 문헌 [Rosenfeld et al., Science 252:431-434 (1991); Rosenfeld et al., Cell 68:143-155 (1992); Mastrangeli et al., J. Clin . Invest. 91:225-234 (1993); PCT 공보 WO94/12649; 및 Wang, et al., Gene Therapy 2:775-783 (1995)]에서 확인할 수 있다. 본 발명에서 특색화된 iRNA의 발현을 위한 적절한 AV 벡터, 재조합 AV 벡터의 구축 방법, 및 벡터를 표적 세포 내로 전달하는 방법이 문헌 [Xia H et al. (2002), Nat. Biotech. 20: 1006-1010]에 기술되어 있다.

아데노-연관 바이러스 (AAV) 벡터를 본 발명의 iRNA를 전달하는데 또한 사용할 수 있다 (Walsh et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204:289-300 (1993); 미국 특허 번호 5,436,146). 한 실시양태에서, iRNA는 예를 들어, U6 또는 H1 RNA 프로모터, 또는 사이토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터가 있는 재조합 AAV 벡터로부터 2개의 분리된 상보적인 단일 가닥 RNA 분자로서 발현될 수 있다. 본 발명에서 특색화된 dsRNA를 발현시키기 위한 적절한 AAV 벡터, 재조합 AV 벡터의 구축 방법, 및 벡터를 표적 세포 내로 전달하는 방법이 문헌 [Samulski R et al. (1987), J. Virol . 61: 3096-3101; Fisher K J et al. (1996), J. Virol, 70: 520-532; Samulski R et al. (1989), J. Virol . 63: 3822-3826; 미국 특허 번호 5,252,479; 미국 특허 번호 5,139,941; 국제 특허 출원 번호 WO 94/13788; 및 국제 특허 출원 번호 WO 93/24641에 기술되어 있고, 이들의 전체 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.

본 발명의 iRNA의 전달에 적절한 또 다른 바이러스 벡터는 폭스 바이러스, 예컨대 우두 바이러스, 예를 들어, 약독화된 우두 예컨대 예컨대 변형된 바이러스 앙카라(Modified Virus Ankara) (MVA) 또는 NYVAC, 조류폭스 예컨대 계두 또는 카나리아두이다.

적합한 경우, 벡터를 다른 바이러스로부터의 외피 단백질 또는 다른 표면 항원으로 슈도타이핑함으로써 또는 상이한 바이러스 캡시드 단백질로 치환함으로써, 바이러스 벡터의 향성을 변형시킬 수 있다. 예를 들어, 렌티바이러스 벡터를 수포성 구내염 바이러스 (VSV), 광견병, 에볼라, 모콜라 등으로부터의 표면 단백질로 슈도타이핑할 수 있다. 상이한 캡시드 단백질 혈청형을 발현하도록 벡터를 조작함으로써 AAV 벡터를 상이한 세포를 표적화하도록 만들 수 있다; 예를 들어, 문헌 [Rabinowitz J E et al. (2002), J Virol 76:791-801]을 참조하고, 그의 전체 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.

벡터의 제약 제제는 허용가능한 희석제 내의 벡터를 포함할 수 있거나, 또는 유전자 전달 비히클이 매립되어 있는 저속 방출 매트릭스를 포함할 수 있다. 대안적으로, 완전한 유전자 전달 벡터, 예를 들어, 레트로바이러스 벡터가 재조합 세포로부터 무손상으로 생산될 수 있는 경우, 제약 제제는 유전자 전달 시스템을 생산하는 하나 이상의 세포를 포함할 수 있다.

V. 본 발명의 제약 조성물

본 발명은 본 발명의 iRNA를 포함하는 제약 조성물 및 제형을 또한 제공한다. 한 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 iRNA 및 제약상 허용되는 담체를 함유하는 제약 조성물이 본원에서 제공된다. iRNA를 함유하는 제약 조성물은 Serpinc1 유전자의 발현 또는 활성과 연관된 질환 또는 장애, 예를 들어 Serpinc1-연관 질환를 치료하는데 유용하다. 이러한 제약 조성물은 전달 방식을 기초로 제형화될 수 있다. 한 예는 비경구 전달을 통해, 예를 들어, 피하 (SC) 또는 정맥내 (IV) 전달에 의해 전신 투여하기 위해 제형화된 조성물이다. 또 다른 예는, 예를 들어, 뇌 내로의 주입에 의해, 예컨대 연속 펌프 주입에 의해, 뇌 실질 내로 직접 전달하기 위해 제형화된 조성물이다. 본 발명의 제약 조성물은 Serpinc1 유전자의 발현을 억제하는데 충분한 투여량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 예를 들어, 제약 조성물이 작용제의 절단 부위 또는 절단 부위 근처의 3개의 연속적인 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 1개의 모티프 이상 (하나의 이러한 모티프를 포함함), 6개의 포스포로티오에이트 연결, 및 GalNAc 리간드를 포함하는 이중 가닥 RNAi 작용제를 포함하는 경우, 이러한 조성물은 0.200 내지 약 1.825 mg/kg, 0.200 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.875 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.100 mg/kg, 또는 약 0.925 내지 약 1.000 mg/kg의 용량으로 투여된다. 상기 언급된 값에 대한 중간의 값 및 범위도 본 발명의 일부인 것으로 의도되고, 예를 들어, RNAi 작용제는 대상체에게 약 0.015 mg/kg 내지 약 0.45 mg/mg의 용량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제가 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 경우, 제약 조성물 내의 이러한 작용제는 약 0.200 내지 약 1.825 mg/kg, 0.200 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.200 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.200 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.225 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.225 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.250 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.250 내지 약 0.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.425 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.425 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.450 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.450 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.475 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.800 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.700 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.600 mg/kg, 약 0.475 내지 약 0.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.875 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.875 내지 약 0.900 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.100 mg/kg, 약 0.900 내지 약 1.000 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.825 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.800 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.700 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.600 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.500 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.400 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.200 mg/kg, 약 0.925 내지 약 1.100 mg/kg, 또는 약 0.925 내지 약 1.000 mg/kg의 용량으로 투여된다. 상기 언급된 값에 대한 중간의 값 및 범위도 본 발명의 일부인 것으로 의도되고, 예를 들어, RNAi 작용제는 대상체에게 약 0.015 mg/kg 내지 약 0.45 mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물은 대상체에게 고정 용량으로서 투여된다. "고정 용량" (예를 들어, mg 단위의 용량)은 임의의 대상체-관련 요인, 예컨대 체중과 관계없이 하나의 용량의 iRNA 작용제가 모든 대상체에게 사용된다는 것을 의미한다. 한 특정 실시양태에서, 본 발명의 iRNA 작용제의 고정 용량은 미리 결정된 체중 또는 연령을 기초로 한다.

일부 실시양태에서, iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물은 약 25 mg 내지 약 100 mg, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 95 mg, 약 25 mg 내지 약 90 mg, 약 25 mg 내지 약 85 mg, 약 25 mg 내지 약 80 mg, 약 25 mg 내지 약 75 mg, 약 25 mg 내지 약 70 mg, 약 25 mg 내지 약 65 mg, 약 25 mg 내지 약 60 mg, 약 25 mg 내지 약 50 mg, 약 50 mg 내지 약 100 mg, 약 50 mg 내지 약 95 mg, 약 50 mg 내지 약 90 mg, 약 50 mg 내지 약 85 mg, 약 50 mg 내지 약 80 mg, 약 30 mg 내지 약 100 mg, 약 30 mg 내지 약 90 mg, 약 30 mg 내지 약 80 mg, 약 40 mg 내지 약 100 mg, 약 40 mg 내지 약 90 mg, 약 40 mg 내지 약 80 mg, 약 60 mg 내지 약 100 mg, 약 60 mg 내지 약 90 mg,, 약 25 mg 내지 약 55 mg, 약 30 mg 내지 약 95 mg, 약 30 mg 내지 약 85 mg, 약 30 mg 내지 약 75 mg, 약 30 mg 내지 약 65 mg, 약 30 mg 내지 약 55 mg, 약 40 mg 내지 약 95 mg, 약 40 mg 내지 약 85 mg, 약 40 mg 내지 약 75 mg, 약 40 mg 내지 약 65 mg, 약 40 mg 내지 약 55 mg, 또는 약 45 mg 내지 약 95 mg의 고정 용량으로서 투여된다.

일부 실시양태에서, iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물은 약 25 mg, 약 30 mg, 약 35 mg, 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg, 약 70 mg, 약 75 mg, 약 80 mg, 약 85 mg, 약 90 mg, 약 95 mg, 또는 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여된다.

iRNA를 포함하는 제약 조성물은 대상체에게 1개월에 약 1회, 5주마다 약 1회, 6주마다 약 1회, 2개월마다 약 1회, 또는 분기별로 1회 투여될 수 있다.

iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물은 대상체에게 1회 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이중 가닥 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물은 대상체에게 약 0.200 mg/kg 내지 약 0.250 mg/kg의 매월 용량, 약 0.425 mg/kg 내지 약 0.475 mg/kg의 매월 용량, 약 0.875 mg/kg 내지 약 0.925 mg/kg의 매월 용량, 또는 약 1.775 mg/kg 내지 약 1.825 mg/kg의 매월 용량으로서 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이중 가닥 iRNA 작용제를 포함하는 제약 조성물은 대상체에게 약 25 mg 내지 약 100 mg, 예를 들어, 약 25 mg, 약 50 mg, 약 80 mg, 또는 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여될 수 있다.

제약 조성물은 소정의 기간에 걸쳐, 예컨대 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24분, 또는 약 25분 기간에 걸쳐 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 투여는, 예를 들어, 정기적으로, 예컨대 매주, 격주로 (즉, 2주마다), 매월, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다 또는 그 초과마다 반복될 수 있다. 초기 치료 체계 후, 치료가 덜 빈번하게 투여될 수 있다. 예를 들어, 3개월 동안 매주 또는 격주로 투여한 후, 6개월 또는 1년 이상 동안 매월 1회로 투여를 반복할 수 있다.

제약 조성물이 하루에 1회 투여될 수 있거나, 또는 iRNA가 하루에 걸쳐 적합한 간격으로 2회, 3회 또는 그 초과의 하위-용량으로서 또는 심지어 제어 방출 제형을 통해 연속 주입 또는 전달을 사용하여 투여될 수 있다. 이러한 경우, 각각의 하위-용량에 함유된 iRNA는 총 1일 투여량을 달성하기 위해 상응하여 더 작아야 한다. 투여량 단위는, 예를 들어, 수일 기간에 걸친 iRNA의 지속 방출을 제공하는 통상적인 지속 방출 제형을 사용하여, 수일에 걸친 전달을 위해 배합될 수도 있다. 지속 방출 제형은 관련 분야에 널리 공지되어 있고, 특정 부위에서의 작용제 전달에 특히 유용하며, 예컨대 본 발명의 작용제와 함께 사용될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 투여량 단위는 상응하는 다중 1일 용량을 함유한다.

다른 실시양태에서, 단일 용량의 제약 조성물이 길게 지속될 수 있어, 후속 용량이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8주 이하의 간격으로 투여된다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 단일 용량의 본 발명의 제약 조성물이 매월 1회로 투여된다.

통상의 기술자는 질환 또는 장애의 중증도, 이전 치료, 대상체의 일반적인 건강 및/또는 연령, 및 존재하는 다른 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는 특정 요인이 대상체를 효과적으로 치료하는데 요구되는 투여량 및 시기에 영향을 미친다는 것을 이해할 것이다. 또한, 대상체를 치료적 유효량의 조성물로 치료하는 것은 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다. 본원의 다른 곳에 기술된 바와 같이, 적합한 동물 모델을 사용하는 생체내 테스트를 기초로, 또는 통상적인 방법을 사용하여, 본 발명이 포괄하는 개별적인 iRNA들에 대한 유효 투여량 및 생체내 반감기를 평가할 수 있다.

마우스 유전학에서의 진보로 다양한 인간 질환, 예컨대 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 출혈 장애의 연구를 위한 다수의 마우스 모델이 생성되었다. 이러한 모델을 iRNA의 생체내 테스트, 뿐만 아니라 치료적 유효 용량의 결정에 사용할 수 있다. 적절한 마우스 모델이 관련 분야에 공지되어 있고, 예를 들어, A형 혈우병 마우스 모델 및 B형 마우스 모델, 예를 들어, 응고 인자 유전자의 녹아웃을 포함하는 마우스, 예컨대 문헌 [Bolliger, et al. (2010) Thromb Haemost 103:1233-1238, Bi L, et al. (1995) Nat Genet 10: 119-21, Lin et al. (1997) Blood 90: 3962-6, Kundu et al. (1998) Blood 92: 168-74, Wang et al. (1997) Proc Natl Acad Sci U S A 94: 11563-6, 및 Jin, et al. (2004) Blood 104:1733]에 기술된 것들을 포함한다.

본 발명의 제약 조성물은 국소 또는 전신 투여가 요망되는지 여부 및 치료될 영역에 따라 다수의 방식으로 투여될수 있다. 투여는 국부 (예를 들어, 경피 패치에 의한 것), 폐, 예를 들어, 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 통기에 의한 것 (네불라이저 포함); 기관내, 비강내, 표피 및 경피, 경구 또는 비경구일 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복막내 또는 근육내 주사 또는 주입; 진피하, 예를 들어, 이식 장치를 통한 것; 또는 두개내, 예를 들어, 뇌실질내, 척수강내 또는 뇌실내에 의한 것인 투여를 포함한다.

iRNA는 특정 조직, 예컨대 간 (예를 들어, 간의 간세포)을 표적화하는 방식으로 전달될 수 있다.

국부 투여용 제약 조성물 및 제형은 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 겔, 점적제, 좌약, 스프레이, 액체 및 분말을 포함할 수 있다. 통상적인 제약 담체, 수성, 분말 또는 오일성 기재, 증점제 등이 필요하거나 바람직할 수 있다. 코팅 콘돔, 장갑 등도 유용할 수 있다. 적절한 국부 제형은 본 발명에서 특색화된 iRNA가 국부 전달 작용제 예컨대 지질, 리포솜, 지방산, 지방산 에스테르, 스테로이드, 킬레이팅제 및 계면활성제와 혼합되어 있는 것을 포함한다. 국부 제형이 미국 특허 번호 6,747,014에 상세하게 기술되어 있고, 이는 본원에 참조로 포함된다.

A. 추가적인 제형

i. 에멀젼

본 발명의 조성물은 에멀젼으로서 제조 및 제형화될 수 있다. 전형적으로 에멀젼은 하나의 액체가 일반적으로 직경이 0.1 μm를 초과하는 액적 형태로 또 다른 액체에 분산되어 있는 비균질 시스템이다 (예를 들어, 문헌 [Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301] 참조). 에멀젼은 종종 서로 밀접하게 혼합 및 분산된 2개의 비혼화성 액체 상을 포함하는 2상 시스템이다. 일반적으로, 에멀젼은 유중수 (w/o) 또는 수중유 (o/w) 종류일 수 있다. 수성 상이 벌크한 오일성 상 내로 미세하게 분할되어 미소 액적으로서 분산될 때, 생성된 조성물은 유중수 (w/o) 에멀젼으로 칭해진다. 대안적으로, 오일성 상이 벌크한 수성 상 내로 미세하게 분할되어 미소 액적으로서 분산될 때, 생성된 조성물은 수중유 (o/w) 에멀젼으로 칭해진다. 에멀젼은 분산된 상들, 및 수성 상 또는 오일성 상 내의 용액으로서 또는 자체적으로 별개의 상으로서 존재할 수 있는 활성 약물에 더하여 추가적인 성분을 함유할 수 있다. 필요하다면 제약 부형제, 예컨대 유화제, 안정화제, 염료, 및 항산화제가 에멀젼 내에 또한 존재할 수 있다. 제약 에멀젼은, 예를 들어, 유중수중유 (o/w/o) 및 수중유중수 (w/o/w) 에멀젼의 경우와 같이, 2개 초과의 상으로 구성된 다중 에멀젼일 수도 있다. 이러한 복합 제형은 단순한 2상 에멀젼이 제공하지 않는 특정 장점을 종종 제공한다. o/w 에멀젼의 개별적인 오일 액적이 작은 물 액적을 둘러싸고 있는 다중 에멀젼이 w/o/w 에멀젼을 구성한다. 유사하게, 오일성 연속 상 내에 안정화된 물의 구체 내에 둘러싸인 오일 액적의 시스템이 o/w/o 에멀젼을 제공한다.

에멀젼은 열역학적 안정성이 거의 없거나 없는 것을 특징으로 한다. 종종, 에멀젼의 분산되거나 불연속적인 상이 외부 또는 연속 상 내로 잘 분산되고, 유화제 또는 제형의 점도를 통해 이러한 형태로 유지된다. 에멀젼-스타일 연고 기재 및 크림의 경우인 것과 같이, 에멀젼의 어느 한쪽 상이 반고체 또는 고체일 수 있다. 에멀젼을 안정화시키는 다른 수단은 에멀젼의 어느 한쪽 상 내로 혼입될 수 있는 유화제의 사용을 수반한다. 유화제는 크게 4개의 카테고리로 분류될 수 있다: 합성 계면활성제, 천연 발생 유화제, 흡수 기재, 및 미세 분산 고체 (예를 들어, 문헌 [Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199] 참조).

합성 계면활성제 (일명 표면 활성 작용제)는 에멀젼을 제형하는 것에서 광범위한 용도가 발견되고, 문헌에서 개관되었다 (예를 들어, 문헌 [Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rieger, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199] 참조). 계면활성제는 전형적으로 양친매성이고, 친수성 및 소수성 부분을 포함한다. 계면활성제의 친수성 대 소수성 성질의 비가 친수성/친유성 균형 (HLB)으로 명명되었고, 이는 계면활성제를 카테고리화하고 이를 제형 제조에서 선택하는 것에서 유익한 도구이다. 계면활성제는 친수성 기의 성질을 기초로 상이한 클래스로 분류될 수 있다: 비이온성, 음이온성, 양이온성 및 양쪽성 (예를 들어, 문헌 [Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY, Rieger, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285] 참조).

에멀젼 제형에서 사용되는 천연 발생 유화제는 라놀린, 밀랍, 포스파티드, 레시틴 및 아카시아를 포함한다. 무수 라놀린 및 친수성 광유과 같이, 흡수 기재는 물을 흡수하여 w/o 에멀젼을 형성하도록 친수성 성질을 보유하지만, 이들의 반고체 경도를 유지한다. 특히 계면활성제와 조합되어, 그리고 점성 제제에서, 미세 분할 고체 또한 우수한 유화제로서 사용되었다. 이는 극성 유기 고체, 예컨대 중금속 수산화물, 비-팽윤 점토 예컨대 벤토나이트, 아타풀자이트, 헥토라이트, 카올린, 몬트모릴로나이트, 콜로이드성 알루미늄 실리케이트 및 콜로이드성 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 안료, 및 비극성 고체 예컨대 탄소 또는 글리세릴 트리스테아레이트를 포함한다.

매우 다양한 비-유화 물질이 에멀젼 제형 내에 또한 포함되고, 에멀젼의 성질에 기여한다. 이는 지방, 오일, 왁스, 지방산, 지방 알콜, 지방 에스테르, 보습제, 친수성 콜로이드, 보존제 및 항산화제를 포함한다 (Block, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).

친수성 콜로이드 또는 히드로콜로이드는 천연 발생 고무 및 합성 중합체 예컨대 폴리사카라이드 (예를 들어, 아카시아, 아가, 알긴산, 카라기난, 구아 검, 카라야 검, 및 트래거캔스), 셀룰로스 유도체 (예를 들어, 카르복시메틸셀룰로스 및 카르복시프로필셀룰로스), 및 합성 중합체 (예를 들어, 카르보머, 셀룰로스 에테르, 및 카르복시비닐 중합체)를 포함한다. 이들은 물에서 분산 또는 팽윤되어, 분산된 상 액적 주변에 강한 계면 필름을 형성하고 외부 상의 점도를 증가시킴으로써 에멀젼을 안정화시키는 콜로이드성 용액을 형성한다.

에멀젼은 미생물의 성장을 용이하게 지지할 수 있는 다수의 성분 예컨대 탄수화물, 단백질, 스테롤 및 포스파티드를 종종 함유하기 때문에, 이러한 제형에 종종 보존제가 혼입된다. 에멀젼 제형에 포함되는 통상적으로 사용되는 보존제는 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 4급 암모늄 염, 벤즈알코늄 클로라이드, p-히드록시벤조산의 에스테르, 및 붕산을 포함한다. 항산화제 또한 에멀젼 제형에 통상적으로 첨가되어 제형의 열화를 방지한다. 사용된 항산화제는 유리 라디칼 스캐빈저 예컨대 토코페롤, 알킬 갈레이트, 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시톨루엔, 또는 환원제 예컨대 아스코르브산 및 소듐 메타비술파이트, 및 항산화제 상승작용제 예컨대 시트르산, 타르타르산 및 레시틴일 수 있다.

피부과적, 경구 및 비경구 경로를 통한 에멀젼 제형의 적용 및 그의 제작 방법이 문헌에서 개관되었다 (예를 들어, 문헌 [Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199] 참조). 제형하기 용이함, 뿐만 아니라 흡수로부터의 효능 및 생체이용률 관점으로 인해, 경구 전달용 에멀젼 제형이 매우 광범위하게 사용되었다 (예를 들어, 문헌 [Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199] 참조). 미네랄 오일-기반 설사제, 지용성 비타민 및 고지방 영양 제제는 통상적으로 o/w 에멀젼으로서 경구 투여된 물질 중 하나이다.

ii. 마이크로에멀젼

본 발명의 한 실시양태에서, iRNA 및 핵산의 조성물은 마이크로에멀젼으로서 제형화된다. 마이크로에멀젼은 단일한 광학적으로 등방성이고 열역학적으로 안정적인 액체 용액인 물, 오일 및 양친매성 물질의 시스템으로서 정의될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245] 참조). 전형적으로 마이크로에멀젼은 먼저 오일을 수성 계면활성제 용액에 분산시킨 후, 충분한 양의 제4 성분, 일반적으로는 중간 사슬 길이의 알콜을 첨가하여 투명한 시스템을 형성시킴으로써 제조되는 시스템이다. 따라서, 마이크로에멀젼은 표면-활성 분자의 계면 필름에 의해 안정화된 2개의 비혼화성 액체의 열역학적으로 안정적이고, 등방성으로 투명한 분산액으로서도 기술되었다 (Leung and Shah, Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215). 통상적으로 마이크로에멀젼은 오일, 물, 계면활성제, 공동-계면활성제 및 전해질을 포함하는 3 내지 5개의 성분의 조합을 통해 제조된다. 마이크로에멀젼이 유중수 (w/o) 유형인지 또는 수중유 (o/w) 유형인지 여부는 사용된 오일 및 계면활성제의 성질, 및 계면활성제 분자의 극성 머리 및 탄화수소 꼬리의 구조 및 기하학적 패킹에 좌우된다 (Schott, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271).

상 다이아그램을 이용하는 현상학적 접근법이 광범위하게 연구되었고, 당업자에게 마이크로에멀젼을 제형하는 방법에 대한 포괄적인 지식을 제공하였다 (예를 들어, 문헌 [Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335] 참조). 통상적인 에멀젼에 비교하여, 마이크로에멀젼은 자발적으로 형성되는 열역학적으로 안정적인 액적의 제형 내에 수불용성 약물을 가용화하는 장점을 제공한다.

마이크로에멀젼의 제조에서 사용되는 계면활성제는 단독이거나 공동계면활성제와 조합된 이온성 계면활성제, 비이온성, Brij 96, 폴리옥시에틸렌 올레일 에테르, 폴리글리세롤 지방산 에스테르, 테트라글리세롤 모노라우레이트 (ML310), 테트라글리세롤 모노올레에이트 (MO310), 헥사글리세롤 모노올레에이트 (PO310), 헥사글리세롤 펜타올레에이트 (PO500), 데카글리세롤 모노카프레이트 (MCA750), 데카글리세롤 모노올레에이트 (MO750), 데카글리세롤 세퀴올레에이트 (SO750), 데카글리세롤 데카올레에이트 (DAO750)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 공동계면활성제, 일반적으로 단쇄 알콜 예컨대 에탄올, 1-프로판올, 및 1-부탄올은 계면활성제 내로 침투하고, 결과적으로, 계면활성제 분자들 사이에 생성된 빈 공간으로 인해 무질서한 필름을 생성시킴으로써 계면 유동성을 증가시키는 역할을 한다. 그러나, 공동계면활성제를 사용하지 않고 마이크로에멀젼을 제조할 수 있고, 무알콜 자가-유화 마이크로에멀젼 시스템이 관련 분야에 공지되어 있다. 수성 상은 전형적으로 물, 약물의 수성 용액, 글리세롤, PEG300, PEG400, 폴리글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 에틸렌 글리콜의 유도체일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 오일 상은 캅텍스(Captex) 300, 캅텍스 355, 캅물(Capmul) MCM, 지방산 에스테르, 중간 사슬 (C8-C12) 모노, 디 및 트리-글리세리드, 폴리옥시에틸화 글리세릴 지방산 에스테르, 지방 알콜, 폴리글리콜화 글리세리드, 포화 폴리글리콜화 C8-C10 글리세리드, 식물성 오일 및 실리콘 오일과 같은 물질을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

마이크로에멀젼은 약물 가용화 및 강화된 약물 흡수의 관점에서 특히 흥미롭다. 액체 기반 마이크로에멀젼 (o/w 및 w/o 둘 다)이 펩티드를 포함하는 약물의 경구 생체이용률을 강화하는 것으로 제안되었다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,191,105; 7,063,860; 7,070,802; 7,157,099; 문헌 [Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth . Find. Exp . Clin. Pharmacol., 1993, 13, 205] 참조). 마이크로에멀젼은 약물 가용화가 개선되고, 효소에 의한 분해로부터 약물을 보호하며, 막 유동성 및 투과성의 계면활성제-유도 변경으로 인해 약물 흡수가 강화될 가능성이 있고, 제조가 용이하고, 고체 투여 형태에 비해 경구 투여가 용이하고, 임상 효능이 개선되며, 독성이 감소되는 장점을 부여한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,191,105; 7,063,860; 7,070,802; 7,157,099; 문헌 [Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm . Sci ., 1996, 85, 138-143] 참조). 종종 마이크로에멀젼은 이들의 성분이 주위 온도에서 함께 모일 때 자발적으로 형성될 수 있다. 이는 열에 불안정한 약물, 펩티드 또는 iRNA를 제형할 때 특히 유리할 수 있다. 마이크로에멀젼은 화장용 및 제약 용도 둘 다에서 활성 성분의 경피 전달에서 또한 효과적이었다. 본 발명의 마이크로에멀젼 조성물 및 제형이 위장관으로부터의 iRNA 및 핵산의 전신 흡수 증가를 용이하게 할 뿐만 아니라, iRNA 및 핵산의 국소적인 세포 흡수를 개선할 것으로 예상된다.

본 발명의 마이크로에멀젼은 제형의 성질을 개선하고 본 발명의 iRNA 및 핵산의 흡수를 강화하기 위해 추가적인 성분 및 첨가제 예컨대 소르비탄 모노스테아레이트 (그릴 3), 라브라솔, 및 투과 강화제를 또한 함유할 수 있다. 본 발명의 마이크로에멀젼에서 사용되는 투과 강화제는 5가지의 광범위한 카테고리 중 하나에 속하는 것으로 분류될 수 있다 - 계면활성제, 지방산, 담즙산염, 킬레이팅제, 및 비-킬레이팅 비-계면활성제 (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). 각각의 이러한 클래스가 상기에서 논의되었다.

iii. 미립자

본 발명의 RNAi 작용제는 입자, 예를 들어, 미립자 내로 혼입될 수 있다. 미립자는 분무-건조에 의해 생산될 수 있지만, 동결건조, 증발, 유동층 건조, 진공 건조, 또는 이러한 기술들의 조합을 포함하는 다른 방법에 의해서 생산될 수도 있다.

iv. 투과 강화제

한 실시양태에서, 본 발명은 동물 피부로의 핵산, 특히 iRNA의 효율적인 전달을 일으키기 위해 다양한 투과 강화제를 사용한다. 대부분의 약물은 이온화 및 비-이온화 형태 둘 다로 용액 내에 존재한다. 그러나, 일반적으로 지질 용해성 또는 친지성 약물만 세포막을 쉽게 가로지른다. 가로지를 막을 투과 강화제로 처리하면 심지어 비-친지성 약물도 세포막을 가로지를 수 있다는 것이 발견되었다. 세포막을 가로지르는 비-친지성 약물의 확산을 보조하는 것에 더하여, 투과 강화제는 또한 친지성 약물의 투과성을 향상시킨다.

투과 강화제는 5가지의 광범위한 카테고리, 즉 계면활성제, 지방산, 담즙산염, 킬레이팅제, 및 비-킬레이팅 비-계면활성제 중 하나에 속하는 것으로 분류될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92] 참조). 각각의 상기 언급된 클래스의 투과 강화제가 하기에서 더욱 상세하게 기술된다.

계면활성제 (또는 "표면-활성 작용제")는 수성 용액에 용해되었을 때 용액의 표면 장력 또는 수성 상과 또 다른 액체 사이의 계면 장력을 감소시키고, 그 결과 점막을 통한 iRNA의 흡수가 강화되는 화학 물질이다. 담즙산염 및 지방산에 더하여, 이러한 투과 강화제는, 예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르 및 폴리옥시에틸렌-20-세틸 에테르) (예를 들어, 문헌 [Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92] 참조); 및 퍼플루오로케미칼 에멀젼, 예컨대 FC-43 (Takahashi et al., J. Pharm . Pharmacol., 1988, 40, 252)을 포함한다.

투과 강화제로서 작용하는 다양한 지방산 및 그의 유도체는, 예를 들어, 올레산, 라우르산, 카프르산 (n-데칸산), 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 디카프레이트, 트리카프레이트, 모노올레인 (1-모노올레오일-rac-글리세롤), 디라우린, 카프릴산, 아라키돈산, 글리세롤 1-모노카프레이트, 1-도데실아자사이클로헵탄-2-온, 아실카르니틴, 아실콜린, 그의 C_1-20 알킬 에스테르 (예를 들어, 메틸, 이소프로필 및 t-부틸), 및 그의 모노- 및 디-글리세리드(즉, 올레에이트, 라우레이트, 카프레이트, 미리스테이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 리놀레에이트 등)를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Touitou, E., et al. Enhancement in Drug Delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al., J. Pharm . Pharmacol., 1992, 44, 651-654] 참조).

담즙의 생리학적 역할은 지질 및 지용성 비타민의 분산 및 흡수를 용이하게 하는 것을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Brunton, Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Chapter 38, Hardman et al. Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935] 참조). 다양한 천연 담즙산염, 및 그의 합성 유도체가 투과 강화제로서 작용한다. 따라서, "담즙산염"이라는 용어는 담즙의 천연 발생 성분 중 임의의 것, 뿐만 아니라 그의 합성 유도체 중 임의의 것을 포함한다. 적절한 담즙산염은, 예를 들어, 콜산 (또는 그의 제약상 허용되는 소듐 염, 소듐 콜레이트), 데히드로콜산 (소듐 데히드로콜레이트), 데옥시콜산 (소듐 데옥시콜레이트), 글루콜산 (소듐 글루콜레이트), 글리콜산 (소듐 글리콜레이트), 글리코데옥시콜산 (소듐 글리코데옥시콜레이트), 타우로콜산 (소듐 타우로콜레이트), 타우로데옥시콜산 (소듐 타우로데옥시콜레이트), 케노데옥시콜산 (소듐 케노데옥시콜레이트), 우르소데옥시콜산 (UDCA), 소듐 타우로-24,25-디히드로-푸시데이트 (STDHF), 소듐 글리코디히드로푸시데이트 및 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르 (POE)를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Swinyard, Chapter 39 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pages 782-783; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579-583] 참조).

킬레이팅제는, 본 발명과 관련하여 사용된 바와 같이, 금속성 이온과 복합체를 형성함으로써 이를 용액으로부터 제거하고, 그 결과 점막을 통한 iRNA의 흡수가 강화되는 화합물로서 정의될 수 있다. 본 발명에서의 투과 강화제로서의 그의 용도와 관련하여, 킬레이팅제는 DNase 억제제로서의 역할도 하는 추가 장점이 있는데, 이는 대부분의 특성화된 DNA 뉴클레아제가 촉매 작용을 위해 2가 금속 이온을 필요로 하고, 따라서 킬레이팅제에 의해 억제되기 때문이다 (Jarrett, J. Chromatogr ., 1993, 618, 315-339). 적절한 킬레이팅제는 디소듐 에틸렌디아민테트라아세테이트 (EDTA), 시트르산, 살리실레이트 (예를 들어, 소듐 살리실레이트, 5-메톡시살리실레이트 및 호모바닐레이트), 콜라겐의 N-아실 유도체, 라우레트-9 및 베타-디케톤의 N-아미노 아실 유도체 (에나민)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다 (예를 들어, 문헌 [Katdare, A. et al., Excipient development for pharmaceutical, biotechnology, and drug delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Buur et al., J. Control Rel ., 1990, 14, 43-51] 참조).

본원에서 사용된 바와 같이, 비-킬레이팅 비-계면활성제 투과 강화 화합물은 킬레이팅제 또는 계면활성제로서의 활성을 미미하게 나타내지만 그럼에도 불구하고 소화 점막을 통한 iRNA의 흡수를 강화하는 화합물로서 정의될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33] 참조). 이러한 클래스의 투과 강화제는, 예를 들어, 불포화 시클릭 요소, 1-알킬- 및 1-알케닐아자시클로-알카논 유도체 (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92); 및 비-스테로이드성 항염증제 예컨대 디클로페낙 소듐, 인도메타신 및 페닐부타존 (Yamashita et al., J. Pharm . Pharmacol., 1987, 39, 621-626)을 포함한다.

세포 수준에서 iRNA의 흡수를 강화하는 작용제가 본 발명의 제약 조성물 및 다른 조성물에 또한 첨가될 수 있다. 예를 들어, 양이온성 지질, 예컨대 리포펙틴 (주니치(Junichi) 등, 미국 특허 번호 5,705,188), 양이온성 글리세롤 유도체, 및 다가양이온성 분자, 예컨대 폴리리신 (롤로(Lollo) 등, PCT 공개 WO 97/30731)이 dsRNA의 세포 흡수를 강화하는 것으로 또한 공지되어 있다. 시판되는 형질감염 시약의 예는, 예를 들어, 리포펙타민(Lipofectamine)™ (인비트로젠(Invitrogen); 캘리포니아주 칼즈배드), 리포펙타민 2000™ (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), 293펙틴(293fectin)™ (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), 셀펙틴(Cellfectin)™ (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), DMRIE-C™ (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), 프리스타일™ 맥스(FreeStyle™ MAX) (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), 리포펙타민™ 2000 CD (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), 리포펙타민™ (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), RNAiMAX (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), 올리고펙타민(Oligofectamine)™ (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), 옵티펙트(Optifect)™ (인비트로젠; 캘리포니아주 칼즈배드), 엑스-트림진(X-tremeGENE) Q2 형질감염 시약 (로슈(Roche): 스위스 그렌짜체스트라쎄), DOTAP 리포솜 형질감염 시약 (스위스 그렌짜체스트라쎄), DOSPER 리포솜 형질감염 시약 (스위스 그렌짜체스트라쎄), 또는 퓨진(Fugene) 스위스 그렌짜체스트라쎄), 트랜스펙탐(Transfectam)® 시약 (프로메가(Promega); 위스컨신주 매디슨), 트랜스패스트(TransFast)™ 형질감염 시약 (프로메가; 위스컨신주 매디슨), Tfx™-20 시약 (프로메가; 위스컨신주 매디슨), Tfx™-50 시약 (프로메가; 위스컨신주 매디슨), 드림펙트(DreamFect)™ (OZ 바이오사이언시즈(OZ Biosciences); 프랑스 마르세이유), 에코트랜스펙트(EcoTransfect) (OZ 바이오사이언시즈; 프랑스 마르세이유), 트랜스패스(TransPass)^a D1 형질감염 시약 (뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs); 미국 매사추세츠주 입시치), 라이오벡(LyoVec)™/리포젠(LipoGen)™ (인비트로젠; 미국 캘리포니아주 샌디에고), 퍼펙틴(PerFectin) 형질감염 시약 (젠란티스(Genlantis); 미국 캘리포니아주 샌디에고), 뉴로포터(NeuroPORTER) 형질감염 시약 (젠란티스; 미국 캘리포니아주 샌디에고), 진포터(GenePORTER) 형질감염 시약 (젠란티스; 미국 캘리포니아주 샌디에고), 진포터 2 형질감염 시약 (젠란티스; 미국 캘리포니아주 샌디에고), 사이토펙틴(Cytofectin) 형질감염 시약 (젠란티스; 미국 캘리포니아주 샌디에고), 배큘로포터(BaculoPORTER) 형질감염 시약 (젠란티스; 미국 캘리포니아주 샌디에고), 트로간포터(TroganPORTER)™ 형질감염 시약 (젠란티스; 미국 캘리포니아주 샌디에고), 리보펙트(RiboFect) (바이오라인(Bioline); 미국 매사추세츠주 톤턴), 플라스펙트(PlasFect) (바이오라인; 미국 매사추세츠주 톤턴), 유니펙터(UniFECTOR) (B-브리지 인터내셔널(B-Bridge International); 미국 캘리포니아주 마운틴뷰), 슈어펙터(SureFECTOR) (B-브리지 인터내셔널; 미국 캘리포니아주 마운틴뷰), 또는 하이펙트(HiFect)™ (B-브리지 인터내셔널, 미국 캘리포니아주 마운틴뷰)를 특히 포함한다.

글리콜 예컨대 에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜, 피롤 예컨대 2-피롤, 아존, 및 테르펜 예컨대 리모넨 및 멘톤을 포함하여, 다른 작용제가 투여된 핵산의 투과를 강화하는데 사용될 수 있다.

v. 담체

본 발명의 특정 조성물은 제형 내에 담체 화합물이 또한 혼입된다. 본원에서 사용된 바와 같이, "담체 화합물" 또는 "담체"는 불활성이지만 (즉, 그 자체로 생물학적 활성을 지니지 않음), 예를 들어, 생물학적으로 활성인 핵산을 분해하거나 또는 순환으로부터의 그의 제거를 촉진함으로써 생물학적 활성이 있는 핵산의 생체이용률을 감소시키는 생체내 프로세스가 핵산으로서 인식하는 핵산 또는 그의 유사체를 지칭할 수 있다. 핵산 및 담체 화합물의 공동투여, 전형적으로는 후자 물질이 과량인 공동투여는 간, 신장 또는 다른 순환외 저장소에서 회수되는 핵산의 양의 실질적인 감소를 초래할 수 있고, 이는 아마도 공통 수용체에 대한 담체 화합물과 핵산 사이의 경쟁때문일 것이다. 예를 들어, 폴리이노신 산, 덱스트란 술페이트, 폴리시티딘산 또는 4-아세트아미도-4'이소티오시아노-스틸벤-2,2'-디술폰산과 함께 공동투여될 때 간 조직 내의 부분적 포스포로티오에이트 dsRNA의 회수가 감소될 수 있다 (Miyao et al., DsRNA Res. Dev., 1995, 5, 115-121; Takakura et al., DsRNA & Nucl. Acid Drug Dev., 1996, 6, 177-183).

vi. 부형제

담체 화합물과 대조적으로, "제약 담체" 또는 "부형제"는 하나 이상의 핵산을 동물에게 전달하기 위한 제약상 허용되는 용매, 현탁제 또는 임의의 다른 약리학적으로 불활성인 비히클이다. 부형제는 액체 또는 고체일 수 있고, 계획된 투여 방식을 염두에 두고, 소정의 제약 조성물의 핵산 및 다른 성분과 조합되었을 때 원하는 벌크, 조도 등을 제공하도록 선택된다. 전형적인 제약 담체는 결합제 (예를 들어, 예비젤라틴화 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필 메틸셀룰로스 등); 충전제 (예를 들어, 락토스 및 다른 당, 미세결정질 셀룰로스, 펙틴, 젤라틴, 황산칼슘, 에틸 셀룰로스, 폴리아크릴레이트 또는 인산수소칼슘 등); 윤활제 (예를 들어, 스테아르산마그네슘, 탈크, 실리카, 콜로이드성 이산화규소, 스테아르산, 금속성 스테아레이트, 수소첨가 식물성 오일, 옥수수 전분, 폴리에틸렌 글리콜, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨 등); 붕해제 (예를 들어, 전분, 소듐 스타치 글리콜레이트 등); 및 습윤제 (예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트 등)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

핵산과 유해하게 반응하지 않는 비경구가 아닌 투여에 적절한 제약상 허용되는 유기 또는 무기 부형제도 본 발명의 조성물을 제형하는데 사용될 수 있다. 적절한 제약상 허용되는 담체는 물, 염 용액, 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 락토스, 아밀로스, 스테아르산마그네슘, 탈크, 규산, 점성 파라핀, 히드록시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

핵산의 국소 투여를 위한 제형은 무균성 및 비-무균성 수성 용액, 통상적인 용매 예컨대 알콜 내의 비-수성 용액, 또는 액체 또는 고체 오일 기재 내의 핵산의 용액을 포함할 수 있다. 용액은 완충제, 희석제 및 다른 적절한 첨가제를 또한 함유할 수 있다. 핵산과 유해하게 반응하지 않는 비경구가 아닌 투여에 적절한 제약상 허용되는 유기 또는 무기 부형제를 사용할 수 있다.

적절한 제약상 허용되는 부형제는 물, 염 용액, 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 락토스, 아밀로스, 스테아르산마그네슘, 탈크, 규산, 점성 파라핀, 히드록시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

vii. 다른 성분

본 발명의 조성물은 제약 조성물에서 통상적으로 발견되는 다른 보조 성분을 관련 분야에 확립된 그의 사용 수준으로 추가적으로 함유할 수 있다. 따라서, 예를 들어, 조성물은 추가적이고, 혼화성이며, 제약상 활성인 물질, 예를 들어, 항소양제, 아스트린젠트, 국소 마취제 또는 항염증제를 함유할 수 있거나, 또는 다양한 투약 형태의 본 발명의 조성물을 물리적으로 제형하는데 유용한 추가적인 물질, 예컨대 염료, 풍미제, 보존제, 항산화제, 유백제, 증점제 및 안정화제를 함유할 수 있다. 그러나, 이러한 물질은, 첨가되었을 때, 본 발명의 조성물의 성분들의 생물학적 활성을 과도하게 방해하지 않아야 한다. 제형은 멸균될 수 있고, 원한다면, 제형의 핵산(들)과 유해하게 상호작용하지 않는 보조 작용제, 예를 들어, 윤활제, 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치지 위한 염, 완충제, 착색제, 풍미화 및/또는 향료 물질 등과 혼합될 수 있다.

수성 현탁액은 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 소르비톨 및/또는 덱스트란을 예를 들어 포함하는, 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 현탁액은 안정화제를 또한 함유할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명에서 특색화되는 제약 조성물은 (a) 하나 이상의 iRNA 화합물 및 (b) 비-RNAi 메커니즘에 의해 기능하고 용혈 장애를 치료하는데 유용한 하나 이상의 작용제를 포함한다. 이러한 작용제의 예는 항염증제, 항지방증 작용제, 항바이러스 및/또는 항섬유증 작용제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가적으로, 간을 보호하는데 통상적으로 사용되는 다른 물질, 예컨대 실리마린도 본원에 기술된 iRNA와 함께 사용될 수 있다. 간 질환을 치료하는데 유용한 다른 작용제는 텔비부딘, 엔테카비드, 및 프로테아제 억제제 예컨대 텔라프레비르 및 예를 들어 미국 출원 공개 번호 2005/0148548, 2004/0167116, 및 2003/0144217; 및 헤일(Hale) 등의 미국 출원 공개 번호 2004/0127488에 개시된 것들을 포함한다.

이러한 화합물의 독성 및 치료 효능을, 예를 들어, LD50 (집단의 50%에 치사성인 용량) 및 ED50 (집단의 50%에서 치료적으로 효과적인 용량)을 결정하기 위해, 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 제약 절차에 의해 결정할 수 있다. 독성 효과과 치료 효과 사이의 용량 비가 치료 지수이고, 이는 LD50/ED50 비로 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다.

세포 배양 검정법 및 동물 연구로부터 수득된 데이터가 인간에서 사용하기 위한 투여량 범위를 제형하는데 사용될 수 있다. 본 발명에서의 본원에서 특색화된 조성물의 투여량은, 일반적으로, 독성이 거의 없거나 없는 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 투약 형태 및 이용된 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 변할 수 있다. 본 발명에서 특색화된 방법에서 사용되는 임의의 화합물에 대해, 먼저 세포 배양 검정법으로부터 치료적 유효 용량을 추정할 수 있다. 세포 배양에서 결정된 바와 같은 ISERPINC10 (즉, 증상의 절반-최대 억제를 달성하는 테스트 화합물의 농도)을 포함하는 화합물 또는 적합한 경우 표적 서열의 폴리펩티드 생성물의 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 (예를 들어, 감소되는 농도의 폴리펩티드를 달성함), 동물 모델에서 용량을 제형할 수 있다. 이러한 정보를 사용하여 인간에서 유용한 용량을 더욱 정확하게 결정할 수 있다. 혈장에서의 수준은, 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정할 수 있다.

투여에 더하여, 상기 논의된 바와 같이, 본 발명에서 특색화된 iRNA는 SERPINC1 발현에 의해 매개되는 병리학적 프로세스의 치료에서 효과적인 다른 공지된 작용제와 조합되어 투여될 수 있다. 임의의 사례에서, 투여 의사는 관련 분야에 공지되어 있거나 본원에 기술된 표준 효능 측정을 사용하여 관찰된 결과를 기초로 iRNA 투여의 양 및 시기를 조정할 수 있다.

VI. 키트

본 발명은 임의의 본 발명의 방법을 수행하기 위한 키트를 또한 제공한다. 이러한 키트는 하나 이상의 RNAi 작용제(들) 및 사용 설명서, 예를 들어, 예방적 또는 치료적 유효량의 RNAi 작용제(들)를 투여하기 위한 설명서를 포함한다. 키트는 RNAi 작용제를 투여하기 위한 수단 (예를 들어, 주사 장치), 또는 Serpinc1의 억제를 측정하기 위한 수단 (예를 들어, Serpinc1 mRNA, Serpinc1 단백질, 및/또는 Serpinc1 활성의 억제를 측정하기 위한 수단)을 임의적으로 추가로 포함할 수 있다. Serpinc1 억제를 측정하기 위한 이러한 수단은 대상체로부터 샘플, 예를 들어, 혈장 샘플을 수득하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 본 발명의 키트는 치료적 유효량 또는 예방적 유효량을 결정하기 위한 수단을 임의적으로 추가로 포함할 수 있다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것들과 유사하거나 등가인 방법 및 물질이 본 발명에서 특색화된 iRNA 및 방법을 실행 또는 테스트하는데 사용될 수 있지만, 적절한 방법 및 물질이 하기에서 기술된다. 본원에서 언급된 모든 출판물, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌은 전문이 참조로 포함된다. 추가적으로, 물질, 방법 및 예는 예시적일 뿐이고, 제한적인 것으로 의도되지 않는다.

실시예

표 1: 핵산 서열 표시에서 사용된 뉴클레오티드 단량체의 약어. 이러한 단량체들이, 올리고뉴클레오티드 내에 존재할 때, 서로 5'-3'-포스포디에스테르 결합에 의해 연결된다는 것이 이해될 것이다.

실시예 1: 건강한 인간 대상체의 단일 용량의 AD-57213의 투여

3:1 (활성:위약)의 코호트 내의 24명의 건강한 인간 지원자에게 단일 용량의 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.6 mg/kg, 또는 1.0 mg/kg의 AD-57213 (센스 (5'에서 3'로): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (서열식별번호: 13); 안티센스 (5'에서 3'로): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (서열식별번호: 14))을 투여하였다. AT 단백질 수준, AT 활성, 및 AT 단백질 침묵화 기간을 모니터링하기 위해 투여 후 제0일, 제1일, 제2일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일, 제21일, 제28일, 제42일, 제56일, 및 제70일에 혈장 샘플을 수집하였다. ELISA를 사용하여 AT 단백질 수준을 모니터링하였고, 보정된 자동 트롬빈 검사기(Calibrated Automated Thrombinoscope) (조직 인자 = 1 pM)를 사용하여 트롬빈 생성 곡선을 생성시킴으로써 AT 활성 수준을 모니터링하였다. 각각의 대상체에 대해 2개의 투약-전 값에 대한 평균 피크 트롬빈 값에 비교하여 피크 트롬빈의 배수 변화를 계산하였다.

중증 유해 사례가 없었고, 작용제 투여와 관련되지 않았을 것 같은 3개의 경도 유해 사례, 및 작용제 투여와 잠재적으로 관련된 1개의 경도 유해 사례 (두통)가 있었다. 또한 주사 부위 반응이 없었고, 모든 대상체의 신체 검사, 활력 징후 및 심전도가 정상 범위 내였다. 추가적으로, 모든 대상체의 모든 간 기능 테스트, 총 빌리루빈, 프로트롬빈 시간의 국제 표준화 비 (PT/INR), 혈소판 카운트, 헤모글로빈 수준, 및 응고 테스트 (즉, 활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간 (APTT), 프로트롬빈 시간 (PT), 피브리노겐 수준, 및 피브린 D-이량체 수준)가 연구 과정 동안 변화되지 않았고, 정상 범위 내였다.

도 1a - d 및 2a - b는 단일 용량의 0.03 mg/kg의 AD-57213이 60일을 초과하는 저하 지속력으로 AT 단백질 수준의 대략 20% 내지 33% 이하의 감소 (도 2a 및 2b) 및 AT 활성의 상응하는 감소 (도 1a - d)를 초래한다는 것을 나타낸다.

도 3은 AT 녹다운과 피크 트롬빈 생성 사이에 유의한 연관이 있다는 것을 추가로 증명한다. 구체적으로, 피크 트롬빈 생성의 152%까지의 증가가 관찰되었고, 이때 피크 트롬빈의 평균 최대 증가는 138% ± 8.9% (평균 ± SEM)였다. 추가적으로, 그리고 AT 녹다운이 증가되면서 트롬빈 생성이 증가되는 것과 일관되게, 인자 VIII 또는 IX의 수준이 정상이었다.

실시예 2: A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 환자의 다중 용량의 AD-57213의 투여

I상 - 파트 B, C, 및 D 임상 시험

AD-57213 (센스 (5'에서 3'로): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (서열식별번호: 13); 안티센스 (5'에서 3'로): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (서열식별번호: 14))의 I상 임상 시험의 파트 B에서는, A형 혈우병 (n=2) 또는 B형 혈우병 (n=1)에 걸린 3명의 환자에게 0.015 mg/kg의 AD-57213을 3주 동안 매주 피하 투여하였고 (15 마이크로그램/kg qw x 3; 15 mcg/kg); A형 혈우병에 걸린 6명의 환자에게 0.045 mg/kg의 AD-57213을 3주 동안 매주 피하 투여하였으며 (45 마이크로그램/kg qw x 3; 45 mcg/kg); 및 A형 혈우병 (n=2) 또는 B형 혈우병 (n=1)에 걸린 3명의 환자에게 0.075 mg/kg의 AD-57213을 3주 동안 매주 피하 투여하였다 (75 마이크로그램/kg qw x 3; 75 mcg/kg).

AD-57213 (센스 (5'에서 3'로): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (서열식별번호: 13); 안티센스 (5'에서 3'로): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (서열식별번호: 14))의 I상 임상 시험의 파트 C에서는, A형 혈우병 (n=2) 또는 B형 혈우병 (n=1)에 걸린 3명의 환자에게 매월 0.225 mg/kg 용량의 AD-57213을 3개월 동안 피하 투여하였고 (225 마이크로그램/kg qm x 3; 225 mcg/kg); A형 혈우병 (n=2) 또는 B형 혈우병 (n=1)에 걸린 3명의 환자에게 매월 0.450 mg/kg 용량의 AD-57213을 3개월 동안 피하 투여하였고 (450 마이크로그램/kg qm x 3; 450 mcg/kg); A형 혈우병에 걸린 3명의 환자에게 매월 0.900 mg/kg 용량의 AD-57213을 3개월 동안 피하 투여하였고 (900 마이크로그램/kg qm x 3; 900 mcg/kg); A형 혈우병에 걸린 3명의 환자에게 매월 1.800 mg/kg 용량의 AD-57213을 3개월 동안 피하 투여하였으며 (1800 마이크로그램/kg qm x 3; 1800 mcg/kg); A형 혈우병 (n=3) 또는 B형 혈우병 (n=3)에 걸린 6명의 환자에게 매월 80 mg의 고정 용량의 AD-57213을 3개월 동안 피하 투여하였다 (80 mg qM x 3).

AD-57213 (센스 (5'에서 3'로): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (서열식별번호: 13); 안티센스 (5'에서 3'로): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (서열식별번호: 14))의 I상 임상 시험의 파트 D에서는, A형 혈우병 (n=5) 또는 B형 혈우병 (n=1)에 걸렸고 출혈 관리를 위해 우회 작용제 (BPA)를 사용하는 6명의 억제제 환자에게 50 mg의 고정 용량의 AD-57213을 3개월 동안 매달 피하 투여하였고 (50 mg qM x 3); A형 혈우병에 걸렸고 출혈 관리를 위해 우회 작용제 (BPA)를 사용하는 10명의 환자에게 80 mg의 고정 용량의 AD-57213을 3개월 동안 매달 피하 투여하였다 (80 mg qM x 3).

AT 단백질 수준, AT 활성, 및 AT 단백질 침묵화 기간을 모니터링하기 위해 AD-57213 투여 후 혈장 샘플을 수집하였다. ELISA를 사용하여 AT 단백질 수준을 모니터링하였고, 보정된 자동 트롬빈 검사기 (조직 인자 = 1 pM)를 사용하여 트롬빈 생성 곡선을 생성시킴으로써 AT 활성 수준을 모니터링하였다. 각각의 대상체에 대해 2개의 투약-전 값에 대한 평균 피크 트롬빈 값에 비교하여 피크 트롬빈의 배수 변화를 계산하였다.

연구의 파트 B, C, 및 D에 참여하는 환자의 인구통계 및 기준선 특성이 표 2에서 제공된다.

표 2. 연구 참여자의 인구통계 및 기준선 특성

연구의 파트 B, C, 및 D의 경우, 중증 유해 사례, 중단, 주사 부위 반응이 없었고, 모든 환자의 신체 검사, 활력 징후 및 심전도가 정상 범위 내였다. 추가적으로, 모든 환자의 모든 간 기능 테스트, 및 전체 혈액 카운트가 연구 과정 동안 변화되지 않았고, 정상 범위 내였다. 또한 어떠한 환자에서도 이러한 연구 과정 동안 혈전색전성 사례가 없었고, 유의한 피브린 D-이량체 수준 증가가 없었다. 표준 교체 인자 또는 우회 작용제 투여로 임의의 출혈 사례가 성공적으로 관리되었다. 또한, 항-약물 항체 (ADA)가 형성되는 경우가 없었다.

기준선에 비교된 평균 AT 녹다운으로서 제시되는, 15 mcg/kg, 45 mcg/kg, 및 75 mcg/kg 코호트에서의 AT 녹다운 수준이 도 4에서 도시된다. 도 4는 3주 동안의 0.015 mg/kg의 매주 용량의 AD-57213이 29% ± 12% (평균 ± SEM)의 평균 최대 AT 녹다운을 초래하였음을 증명한다. 최대 AT 녹다운은 최대 53%였다. 도 4는 3주 동안의 0.045 mg/kg의 매주 용량의 AD-57213이 55 ± 9% (평균 ± SEM)의 평균 최대 AT 녹다운 및 86%의 최대 AT 녹다운을 초래한다는 것을 또한 증명한다. 추가적으로, 도 4는 3주 동안의 0.075 mg/kg 매주 용량의 AD-57213이 61 ± 8% (평균 ± SEM)의 평균 최대 AT 녹다운 및 74%의 최대 AT 녹다운을 초래한다는 것을 또한 증명한다.

기준선에 비교된 평균 AT 녹다운으로서 제시되는, 225 mcg/kg, 450 mcg/kg, 900 mcg/kg, 1800 mcg/kg, 및 80 mg 코호트에서의 AT 녹다운 수준이 도 5a에서 도시된다. 도 5a는 3개월 동안의 0.225 mg/kg의 매월 용량의 AD-57213이 70% ± 9% (평균 ± SEM)의 평균 최대 AT 녹다운을 초래한다는 것을 증명한다. 최대 AT 녹다운은 최대 80%였다. 도 5a는 3개월 동안의 0.450 mg/kg의 매월 용량의 AD-57213이 77 ± 5% (평균 ± SEM)의 평균 최대 AT 녹다운 및 85%의 최대 AT 녹다운을 초래한다는 것을 또한 증명한다. 추가적으로, 도 5a는 3개월 동안의 0.900 mg/kg의 매월 용량의 AD-57213이 78 ± 7% (평균 ± SEM)의 평균 최대 AT 녹다운 및 88%의 최대 AT 녹다운을 초래한다는 것을 또한 증명한다. 추가로, 도 5a는 3개월 동안의 1.800 mg/kg의 매월 용량의 AD-57213이 79 ± 3% (평균 ± SEM)의 평균 최대 AT 녹다운 및 84%의 최대 AT 녹다운을 초래한다는 것을 증명한다. 도 5a는 3개월 동안의 80 mg의 매월 용량의 AD-57213이 87 ± 1% (평균 ± SEM)의 평균 최대 AT 녹다운을 초래한다는 것을 또한 증명한다.

AD-57213의 용량 대 AT 단백질 수준의 상대적인 최저점을 도시하는 도 5b에서 증명된 바와 같이, AD-57213를 인간 환자에게 투여하는 것은 용량 의존적 방식으로 AT 단백질 수준을 저하시킨다.

건강한 인간 지원자 (실시예 1) 및 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 환자에서의 트롬빈 생성의 평가는 매주 용량의 AD-57213이 AT가 ≥50%만큼 녹다운되었을 때 기준선에 비교하여 혈우병 환자에서 112 ± 38% (p<0.05)의 트롬빈 생성의 평균 증가와 함께 트롬빈 생성의 최대 334% 증가 (기준선에 비교됨)를 초래하였음을 증명하였다 (도 6b). 도 6a는 매주 용량의 AD-57213이 투여된 A형 또는 B형 혈우병 환자에서 달성된 최대 피크 트롬빈이 정상 대상체에서의 트롬빈 생성의 낮은 범위에 있었음을 증명한다.

1명의 대상체 (대상체 101-009)로부터의 전혈의 ROTEM® 트롬보엘라스토메트리 분석 (예를 들어, 문헌 [Young, et al. (2013) Blood 121:1944] 참조)에서, 0.045 mg/kg의 AD-57213을 3주 동안 매주 투여하는 것이 피크 트롬빈 생성의 증가를 초래할 뿐만 아니라, 응괴 형성 시간 및 응고 시간의 감소에 의해 증명되는 바와 같이 전혈 응괴 형성에서의 현저하고 지속적인 개선을 또한 초래한다는 것이 증명된다 (도 7). 대상체 101-009은 제2일 이후부터 출혈 사례가 없었고, 현재 47일 동안 출혈이 없다.

AT 저하 사분위수에 의한 트롬빈 생성의 사후 분석 (파트 B 및 C)은, 가장 높은 AT 저하 사분위수 (>75% AT 저하)에서, 기준선에 비교하여 평균 트롬빈 생성이 289% 증가된다는 것을 증명한다 (도 9). 이러한 수준의 트롬빈 생성은 건강한 지원자에서 관찰되는 트롬빈 생성의 범위 내이다.

3명의 환자의 하위-연구로 AD-57213 투여 및 인자 VIII 투여의 등가성을 탐구하였다. 간략하게, 인자 VIII을 3명의 환자 각각에게 투여하고, 투여하고 나서 -0.5, 1, 2, 6, 24, 및 48시간 후에 환자로부터 혈장을 수집하였다. 각각의 대상체로부터의 샘플을 인자 VIII 수준 및 트롬빈 생성 수준에 대해 분석하고, 개별화된 인자 VIII-피크 트롬빈 생성 관계를 확립하는데 사용하였다. 그 후, 이러한 데이터를 AD-57213의 투여로 달성된 피크 트롬빈 생성 수준과의 비교에 사용하였다. 도 10a-10c에 나타난 바와 같이, AD-57213 투여가 대상체에서의 피크 트롬빈 생성 수준을 대상체에게 인자 VIII을 투여하는 것에 의해 달성되는 것과 거의 동일한 수준으로 달성하는데 충분하고, 대상체에서 약 40% 초과의 피크 트롬빈 생성 수준을 달성하는데 충분하다.

AT 저하 사분위수에 의한 출혈 사례의 사후 분석 (파트 B 및 C)은 AT 저하 수준의 증가와 함께 출혈 감소의 경향이 있고, 이때 가장 높은 AT 저하 사분위수에서 평균 추정 연간 출혈률 (ABR)이 5 ± 2 (중앙값 = 1)임을 증명한다 (도 11). 이러한 분석은 16명의 환자에서 AT 저하 >75%의 1100일을 초과하는 누적일을 포함한다.

파트 C 코호트에서의 출혈 사례의 사후 분석을 또한 수행하였다. 도 12는 이러한 분석에 사용된 환자 데이터를 제공한다. 도 13a에서 증명된 바와 같이, 코호트 C에 등록되고 예방적 (PPx) 교체 인자가 제공된 모든 환자에 대한 과거 ABR 중앙값은 2였고, 코호트 C에 등록되고 온-디맨드 (OD) 교체 인자가 제공된 모든 환자에 대한 과거 ABR 중앙값은 28이었다. 이러한 환자들에게 AD-57213을 투여하는 것은 ABR 중앙값의 유의한 감소를 초래하였다. 특히, AD-57213 투여가 관찰 기간 (제29일부터 최종 연구 방문 또는 최종 투약 + 56일 (어느쪽이든 더 빠른 것)) 동안 53%의 중앙값의 환자가 출혈을 보고하지 않고, 82%의 중앙값의 환자가 관찰 기간 동안 자발적인 출혈을 보고하지 않는 것을 초래하였다. 도 13b는 코호트 C에 있고 예방적 (PPx) 교체 인자가 제공된, 매월 80 mg 용량의 AD-57213가 제공된 환자에 대해, 과거 ABR 중앙값이 6이었음을 증명한다. 그러나, AD-57213 투여 후, 관찰 기간 동안의 ABR 중앙값이 0이었다.

I상 연구의 파트 D는 제공된 교체 인자에 대한 항체 (억제제)가 발달되었고, 따라서 교체 응고 인자에 불응성이게 된 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 환자에서의 AD-57213 투여의 효과를 평가하였다. 따라서, 이러한 환자에서의 피크 트롬빈 반응을 평가하기 위해, AD-57213 투여 전에, 50 mg 코호트에 등록된 환자에게 그의 표준 우회 작용제 (BPA) (예를 들어, 활성화 프로트롬빈 복합체 농축물 (APCC) 및/또는 재조합 활성화 FVII (rFVIIa))를 투여하였고, BPA를 투여하고 나서 -1, 2, 6, 및 24시간 후에 혈장 샘플을 수집하고, 샘플을 트롬빈 생성에 대해 분석하였다. 도 14a-14f에 제시된 바와 같이, AD-57213이 투여된 억제제 환자에서의 AT 저하 및 트롬빈 생성이 비-억제제 환자에서 유사한 용량으로 AD-57213을 투여한 후에 관찰된 AT 저하 및 트롬빈 생성에 필적하였다. 또한, 도 14a-14f는 AD-57213 투여 후의 트롬빈 생성이 BPA 투여로 달성된 일시적인 수준을 일관되게 초과한다는 것을 증명한다.

도 15에서 증명된 바와 같이, 50 mg 및 80 mg의 AD-57213의 매월 1회 피하 투약은 억제제가 있는 혈우병 환자에서 약 80%의 용량-의존적 AT 저하를 달성한다. 또한, 도 16에서 증명된 바와 같이, AD-57213이 투여된 환자에서 달성된 AT 저하 효과가 트롬빈 생성 증가와 상호관련된다.

연구의 파트 D의 환자에서의 출혈 사례의 탐색적 사후 분석을 또한 수행하였다. 도 17a는 AD-57213을 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 억제제 환자에게 50 mg 또는 80 mg의 용량으로 매월 1회 투여하는 것이 연구-전 ABR의 유의한 감소를 초래한다는 것을 나타낸다. 또한, 도 17b에서 증명된 바와 같이, 이러한 I상 연구의 파트 D에서 AD-57213이 투여된 모든 억제제 환자에 대한 연간 출혈률 (ABR) 중앙값이 0이고, 환자의 56%가 출혈이 없으며, 환자의 69%가 자발적인 출혈을 전혀 경험하지 않았다.

요약하면, AD-57213이 억제제가 있는 또는 억제제가 없는 A형 및 B형 혈우병 환자에서 잘 허용된다. 연구 약물과 관련된 SAE가 없었고, 혈전색전성 사례가 없었다. 데이터는 비-억제제 환자에서 임상 활성 및 혈우병 표현형의 수정이 있다는 것을 증명한다. 데이터는 매월 1회 피하 용량 체계로 용량-의존적 AT 저하 및 트롬빈 생성 증가가 있다는 것과 고정된 50 mg 또는 80 mg 용량의 AD-57213의 투여가 약 80%의 일관적인 AT 저하를 제공한다는 것을 추가로 증명한다.

또한, 데이터는 AD-57213을 억제제 환자에게 투여하는 것이 비-억제제 환자와 일관되게 AT 저하 및 트롬빈 생성 증가를 초래한다는 것과 트롬빈 생성 증가가 BPA 투여로 일시적으로 달성된 것을 일관적으로 초과한다는 것을 증명한다.

실시예 3: A형 또는 B형 혈우병에 걸린 인간 환자의 다중 용량의 AD-57213의 투여

II상 표지 공개 연장 ( OLE ) 임상 시험

AD-57213 (센스 (5'에서 3'로): GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAfL96 (서열식별번호: 13); 안티센스 (5'에서 3'로): usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg (서열식별번호: 14))의 II상 OLE 연구에서, 상기 기술된 I상 파트 B 및 C 임상 시험에서 AD-57213이 이전에 투여된, 억제제가 없는 환자가 II상 공개 표지 연장 (OLE) 연구에 등록하는데 적격이었다. 0.015 mg/kg의 AD-57213이 3주 동안 매주 피하 투여되었거나 (15 마이크로그램/kg qw x 3; 15 mcg/kg); 또는 0.045 mg/kg의 AD-57213이 3주 동안 매주 피하 투여되었거나 (45 마이크로그램/kg qw x 3; 45 mcg/kg); 또는 0.075 mg/kg의 AD-57213이 3주 동안 매주 피하 투여된 (75 마이크로그램/kg qw x 3; 75 mcg/kg), A형 또는 B형 혈우병에 걸린 I상 파트 B 연구로부터의 12명의 환자; 및 매월 0.225 mg/kg 용량의 AD-57213이 3개월 동안 피하 투여되었거나 (225 마이크로그램/kg qm x 3; 225 mcg/kg); 또는 매월 0.450 mg/kg 용량의 AD-57213이 3개월 동안 피하 투여되었거나 (450 마이크로그램/kg qm x 3; 450 mcg/kg); 또는 매월 0.900 mg/kg 용량의 AD-57213이 3개월 동안 피하 투여되었거나 (900 마이크로그램/kg qm x 3; 900 mcg/kg); 또는 매월 1.800 mg/kg 용량의 AD-57213이 3개월 동안 피하 투여되었거나 (1800 마이크로그램/kg qm x 3; 1800 mcg/kg); 또는 매월 80 mg의 고정 용량의 AD-57213이 3개월 동안 피하 투여된 (80 mg qM x 3), A형 또는 B형 혈우병에 걸린 I상 파트 C 연구로부터의 18명의 환자가 이러한 연구에 등록하는데 적격이었다.

16명의 환자가 등록되었다. A형 혈우병 (n=6) 또는 B형 혈우병 (n=2)에 걸린 8명의 환자에게 50 mg의 고정 용량의 AD-57213을 3개월 동안 매월 피하 투여하였고 (50 mg qM x 3); A형 혈우병 (n=7) 또는 B형 혈우병 (n=1)에 걸린 8명의 환자에게 80 mg의 고정 용량의 AD-57213을 3개월 동안 매월 피하 투여하였다 (50 mg qM x 3). 이러한 연구에 등록된 환자의 인구통계 및 기준선 특성이 하기 표 3에서 제시된다.

표 3. 연구 참여자의 인구통계 및 기준선 특성

AD-57213이 II상 OLE에서 억제제가 없는 환자에서 일반적으로 잘 허용되었고, 이때 최장 노출 기간은 최대 14개월의 연속 치료였으며, 약물-관련 중증 유해 사례 (SAE), 유해 사례로 인한 중단, 및 혈전색전성 사례 또는 병리학적 응괴 형성의 실험실 증거가 없었다. 모든 유해 사례 (AE)가 중증도 면에서 경도 또는 중등도였고, 이때 가장 통상적인 AE는 4/16명 (25 퍼센트)의 환자에서의 경도 주사 부위 반응 (ISR)으로 이루어졌다. 정상 상한 (ULN)의 3배를 초과하는 무증상 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT) 증가가, ULN의 2배를 초과하는 빌리루빈의 동반 상승 없이, 3명의 환자에서 관찰되었고, 이들 모두는 C형 간염 감염의 병력이 있다. 모든 돌발 출혈 사례가 교체 인자로 성공적으로 관리되었다. 또한, 항-약물 항체 (ADA)가 형성되는 경우가 없었다.

도 19a 및 19b는 AD-57213 투여의 임상 활성을 추가로 증명한다. 구체적으로, 도 19a에서 증명된 바와 같이, 50 mg 또는 80 mg의 AD-57213의 매월 1회 피하 투약이 ~80%의 용량-의존적 AT 저하를 달성하고, 도 19b에서 증명된 바와 같이, 50 mg 또는 80 mg의 AD-57213의 매월 1회 피하 투약이 정상 범위의 하한에 접근하는 트롬빈 생성 수준을 달성한다.

II상 OLE 연구 내의 비-억제제 환자에서의 출혈 사례의 탐색적 사후 분석을 또한 수행하였다. 도 20a는 AD-57213을 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 환자에게 50 mg 또는 80 mg의 용량으로 매월 1회 투여하는 것이 연구-전 ABR의 유의한 감소를 초래한다는 것을 나타낸다. 또한, 도 20b에서 증명된 바와 같이, AD-57213을 A형 또는 B형 혈우병에 걸린 환자에게 50 mg 또는 80 mg의 용량으로 매월 1회 투여하는 것은 연간 출혈률 (ABR) 중앙값을 1로 감소시키고, 연간 자발적 출혈률 (AsBR) 중앙값을 0으로 감소시킨다.

추가적으로, II상 OLE 동안, 1명의 환자 (대상체 C1-3)가 선택적 수술 절차를 받았다. 구체적으로, 매달 50 mg AD-57213이 제공되는 중증 A형 혈우병 환자가 선택적 비중격성형술을 받았다. 연관된 유해 사례 없이 절차가 성공적으로 수행되었다. 추가로, 개인 통신을 통해 연구원이 보고한 바와 같이, 재조합 인자 VIII의 누적 수술전후 기간 이용이 중증 A형 혈우병 환자에서의 이러한 유형의 수술에 연구원이 전형적으로 사용하는 것보다 대략 5배 더 적었다. 국제 혈전증 및 지혈 협회(International Society of Thrombosis and Haemostasis) (ISTH)의 지혈 효능 점수를 기초로, 연구원들은 수술중, 수술 후 24시간 후 및 수술 후 7일 기간의 지혈 제어를 모두 "우수함"으로 등급화하였다.

요약하면, AD-57213이 억제제가 없는 A형 및 B형 혈우병 환자에서 일반적으로 잘 허용되었다. AD-57213 투여와 관련된 SAE 및 혈전색전성 사례가 없었다. 추가적으로, 데이터는 50 mg 및 80 mg의 매월 1회 피하 투약이 ~80%의 용량-의존적 AT 저하 및 정상 범위의 하한에 접근하는 트롬빈 생성 수준을 달성한다는 점에서 AD-57213이 임상 활성이 있다는 것을 증명한다. 또한, 억제제가 없는 A형 및 B형 혈우병에 걸린 환자에서의 출혈 사례의 탐색적 사후 분석은 AD-57213 투여가 ABR 중앙값을 1로, 연간 자발적 출혈률 (AsBR) 중앙값을 0으로 감소시켰음을 증명한다. 16명 중 8명 (50%)의 환자가 출혈이 없었고, 16명 중 11명 (69%)의 환자가 자발적인 출혈을 전혀 경험하지 않았다. 또한, 중증 A형 혈우병에 걸렸고 AD-57213이 투여된 대상체의 1차 수술 증례 동안, 교체 인자의 유의한 감소가 대상체에서 지혈을 유지하는데 이용되었다.

SEQUENCE LISTING <110> ALNYLAM PHARMACEUTICALS, INC. AKINC, AKIN SORENSEN, BENNY GARG, PUSHKAL ROBBIE, GABRIEL <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING A SERPINC1-ASSOCIATED DISORDER <130> 121301-05220 <140> <141> <150> 62/429,241 <151> 2016-12-02 <150> 62/366,304 <151> 2016-07-25 <150> 62/315,228 <151> 2016-03-30 <150> 62/264,013 <151> 2015-12-07 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1599 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 tctgccccac cctgtcctct ggaacctctg cgagatttag aggaaagaac cagttttcag 60 gcggattgcc tcagatcaca ctatctccac ttgcccagcc ctgtggaaga ttagcggcca 120 tgtattccaa tgtgatagga actgtaacct ctggaaaaag gaaggtttat cttttgtcct 180 tgctgctcat tggcttctgg gactgcgtga cctgtcacgg gagccctgtg gacatctgca 240 cagccaagcc gcgggacatt cccatgaatc ccatgtgcat ttaccgctcc ccggagaaga 300 aggcaactga ggatgagggc tcagaacaga agatcccgga ggccaccaac cggcgtgtct 360 gggaactgtc caaggccaat tcccgctttg ctaccacttt ctatcagcac ctggcagatt 420 ccaagaatga caatgataac attttcctgt cacccctgag tatctccacg gcttttgcta 480 tgaccaagct gggtgcctgt aatgacaccc tccagcaact gatggaggta tttaagtttg 540 acaccatatc tgagaaaaca tctgatcaga tccacttctt ctttgccaaa ctgaactgcc 600 gactctatcg aaaagccaac aaatcctcca agttagtatc agccaatcgc ctttttggag 660 acaaatccct taccttcaat gagacctacc aggacatcag tgagttggta tatggagcca 720 agctccagcc cctggacttc aaggaaaatg cagagcaatc cagagcggcc atcaacaaat 780 gggtgtccaa taagaccgaa ggccgaatca ccgatgtcat tccctcggaa gccatcaatg 840 agctcactgt tctggtgctg gttaacacca tttacttcaa gggcctgtgg aagtcaaagt 900 tcagccctga gaacacaagg aaggaactgt tctacaaggc tgatggagag tcgtgttcag 960 catctatgat gtaccaggaa ggcaagttcc gttatcggcg cgtggctgaa ggcacccagg 1020 tgcttgagtt gcccttcaaa ggtgatgaca tcaccatggt cctcatcttg cccaagcctg 1080 agaagagcct ggccaaggta gagaaggaac tcaccccaga ggtgctgcaa gagtggctgg 1140 atgaattgga ggagatgatg ctggtggtcc acatgccccg cttccgcatt gaggacggct 1200 tcagtttgaa ggagcagctg caagacatgg gccttgtcga tctgttcagc cctgaaaagt 1260 ccaaactccc aggtattgtt gcagaaggcc gagatgacct ctatgtctca gatgcattcc 1320 ataaggcatt tcttgaggta aatgaagaag gcagtgaagc agctgcaagt accgctgttg 1380 tgattgctgg ccgttcgcta aaccccaaca gggtgacttt caaggccaac aggcctttcc 1440 tggtttttat aagagaagtt cctctgaaca ctattatctt catgggcaga gtagccaacc 1500 cttgtgttaa gtaaaatgtt cttattcttt gcacctcttc ctatttttgg tttgtgaaca 1560 gaagtaaaaa taaatacaaa ctacttccat ctcacatta 1599 <210> 2 <211> 1545 <212> DNA <213> Macaca mulatta <400> 2 ggcacgagga ccatctccac ttgcccagcc ctgtggaaga ttagcgacca tgtattccaa 60 tgtgatagga accgtagcct ctggaaaaag gaaggtttat cttctgtcct tgctgctcat 120 tggcctctgg gactgtatga cctgtcacgg gagccctgtg gacatctgca cagccaagcc 180 gcgggacatt cccatgaatc ccatgtgcat ttaccgctcc ccggagaaga aggcaactga 240 ggatgagggc tcagaacaga agatccccga ggccaccaac cggcgcgtct gggaactgtc 300 caaggccaat tcccgctttg ctaccacttt ctatcagcac ctggcagatt ccaagaacga 360 caaggataac attttcctgt cacccctgag tgtctccacg gcttttgcta tgaccaagct 420 gggtgcctgt aatgacaccc tcaagcaact gatggaggta tttaagtttg acaccatatc 480 tgagaaaaca tctgatcaga tccacttctt ctttgccaaa ctgaactgcc gactctatcg 540 aaaagccaac aaatcctcca agttagtatc agccaatcgc ctttttggag acaaatccct 600 taccttcaat gagacctacc aggacatcag tgagttggta tacggagcca agctccagcc 660 cctggacttc aaggaaaatg cagagcaatc cagagcggcc atcaacaaat gggtgtccaa 720 taagaccgaa ggccgaatca ccgatgtcat tcccccggaa gccatcaacg agctcactgt 780 tctggtgctg gttaacacca tttacttcaa gggcctgtgg aagtcaaagt ttagccctga 840 gaacacaagg atggaaccgt tctacaaggc tgatggagag tcgtgttcag cgtctatgat 900 gtaccaggaa ggcaagttct gttatcggcg cgtggctgaa ggcacccagg tgcttgagtt 960 gcccttcaag ggtgatgaca tcaccatggt gctcatcctg cccaagcctg agaagagcct 1020 gaccaaggtg gagcaggaac tcaccccaga ggtgctgcag gagtggctgg atgagttgga 1080 ggagatgatg ctggtggttc acatgccccg cttccgcatt gaggacggct tcagtttgaa 1140 ggagcagctg caagacatgg gccttgtcga tctgttcagc cctgaaaagt ccaaactccc 1200 aggtattgtt gcagaaggcc gggatgacct ctatgtctcc gatgcattcc ataaggcatt 1260 tcttgaggta aatgaagaag gcagtgaagc agctgcaagt accgccattg ggattgctgg 1320 ccgttcgcta aaccccaaca gggtgacctt caaggccaac aggcctttcc tggtttttat 1380 aagagaagtt cctctgaaca ctattatctt catgggcaga 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gccaaactga actgccgact ctatcgaaaa gccaacaagt 720 cctctgactt ggtatcagcc aaccgccttt ttggagacaa atccctcacc ttcaacgaga 780 gctatcaaga tgttagtgag gttgtctatg gagccaagct ccagcccctg gacttcaagg 840 agaatccgga gcaatccaga gtgaccatca acaactgggt agctaataag actgaaggcc 900 gcatcaaaga tgtcatccca cagggcgcca ttaacgagct cactgccctg gttctggtta 960 acaccattta cttcaagggc ctgtggaagt caaagttcag ccctgagaac acaaggaagg 1020 aaccgttcta taaggtcgat gggcagtcat gcccagtgcc tatgatgtac caggaaggca 1080 aattcaaata ccggcgcgtg gcagagggca cccaggtgct agagctgccc ttcaaggggg 1140 atgacatcac catggtgctc atcctgccca agcctgagaa gagcctggcc aaggtggagc 1200 aggagctcac cccagagctg ctgcaggagt ggctggatga gctgtcagag actatgcttg 1260 tggtccacat gccccgcttc cgcaccgagg atggcttcag tctgaaggag cagctgcaag 1320 acatgggcct cattgatctc ttcagccctg aaaagtccca actcccaggg atcgttgctg 1380 gaggcaggga cgacctctat gtctccgacg cattccacaa agcatttctt gaggtaaatg 1440 aggaaggcag tgaagcagca gcgagtactt ctgtcgtgat tactggccgg tcactgaacc 1500 ccaatagggt gaccttcaag gccaacaggc ccttcctggt tcttataagg gaagttgcac 1560 tgaacactat tatattcatg gggagagtgg ctaatccttg tgtgaactaa aatattctta 1620 atctttgcac cttttcctac tttggtgttt gtgaatagaa gtaaaaataa atacgactgc 1680 cacctcacga gaatggactt ttccacttga agacgagaga ctggagtaca gatgctacac 1740 cacttttggg caagtgaagg gggagcagcc agccacggtg gcacaaacct atatcctggt 1800 gcttttgaag gtagaagcag ggcggtcagg agttaaggcc agttgaggct gggctgcaga 1860 gtgaaagacc atgtctcaag atggtctttc tcctccccaa agtagaaaag aaaaccataa 1920 aaacaagagg taaatatatt actatttcat cttagaggat agcaggcatc ttgaaagggt 1980 agagggacct taaattctca ttattgcccc catactacaa actaaaaaac aaacccgaat 2040 caatctccca taaagacaga gattcaaata agagtattaa acgttttatt tctcaaacca 2100 ctcacatgca taatgttctt atacacagtg tcaaaataaa gagaaatgca tttttataca 2160 aaaaaaaaaa a 2171 <210> 4 <211> 1561 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <400> 4 cggagggatt gctcagcact gtctccacgg cttctctgca gaagcgtcca ccatgtattc 60 cccgggaata ggaagtgcgg ttgctggaga gaggaagctt tgtctcctct ctctgctact 120 cattggtgcc ttgggctgtg ctgtctgtca tggaaaccct gtggacgaca tctgcatagc 180 gaagccccga gacatccccg tgaaccccat gtgcatttac cgctcccctg cgaagaaggc 240 cacggaggag gatgtcctag agcagaaggt tccggaagcc accaaccggc gggtctggga 300 actgtccaag gccaattctc gatttgccac taacttctat cagcacctgg cagactccaa 360 gaacgacaac gacaacattt tcctgtcacc cttgagcatc tccacggcgt ttgctatgac 420 caagctgggt gcttgtaata acaccctcaa gcagctgatg gaggttttta aatttgatac 480 catctccgag aagacatccg accagatcca cttcttcttt gccaaactga actgccgact 540 ctatcgaaaa gccaacaagt cctctaactt ggtgtcagcc aaccgccttt ttggagacaa 600 atcccttacc ttcaatgaga gctatcaaga cgttagtgag attgtctatg gagccaagct 660 tcagcccctg gacttcaagg agaatccgga gcaatccaga gtgaccatca acaactgggt 720 agctaataag actgaaggcc gcatcaaaga cgtcatcccc caaggagcca ttgatgagct 780 cactgccctg gtgctggtta acaccattta cttcaagggc ctgtggaagt caaagttcag 840 ccctgagaac acaaggaagg aaccattcca caaagttgat gggcagtcat gcctggtgcc 900 catgatgtac caggaaggca aattcaaata caggcgtgtg ggagagggta cccaggtgct 960 agagatgccc ttcaaggggg acgacatcac catggtgctc atcctgccca agcctgagaa 1020 gagcctggct aaggtggagc aggaactcac cccggagctg ctgcaggagt ggctggatga 1080 gctgtcggag gtcatgcttg tggtccacgt gccccgcttc cgcatcgagg acagcttcag 1140 tctgaaggag cagctgcaag acatgggcct tgttgatctc ttcagccctg agaagtccca 1200 actcccaggg atcattgctg aaggcaggga cgacctcttt gtctccgatg cattccacaa 1260 agcgtttctt gaggtaaatg aggaaggcag tgaagcagca gcgagtactt ctgtcgtgat 1320 tactggccgg tcactgaacc ccagtagggt gaccttcaag gccaacaggc ccttcctggt 1380 tcttataagg gaagtcgcac tgaacactat tatattcatg gggagagtgt ctaatccttg 1440 tgtgaactaa aatattctta atctttgcac cttttcctat ctcggtgttt gttaatggaa 1500 gtaaaaataa atatgactgc cacctcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560 a 1561 <210> 5 <211> 1599 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 taatgtgaga tggaagtagt ttgtatttat ttttacttct gttcacaaac caaaaatagg 60 aagaggtgca aagaataaga acattttact taacacaagg gttggctact ctgcccatga 120 agataatagt gttcagagga acttctctta taaaaaccag gaaaggcctg ttggccttga 180 aagtcaccct gttggggttt agcgaacggc cagcaatcac aacagcggta cttgcagctg 240 cttcactgcc ttcttcattt acctcaagaa atgccttatg gaatgcatct gagacataga 300 ggtcatctcg gccttctgca acaatacctg ggagtttgga cttttcaggg ctgaacagat 360 cgacaaggcc catgtcttgc agctgctcct tcaaactgaa gccgtcctca atgcggaagc 420 ggggcatgtg gaccaccagc atcatctcct ccaattcatc cagccactct tgcagcacct 480 ctggggtgag ttccttctct accttggcca ggctcttctc aggcttgggc aagatgagga 540 ccatggtgat gtcatcacct ttgaagggca actcaagcac ctgggtgcct tcagccacgc 600 gccgataacg gaacttgcct tcctggtaca tcatagatgc tgaacacgac tctccatcag 660 ccttgtagaa cagttccttc cttgtgttct cagggctgaa ctttgacttc cacaggccct 720 tgaagtaaat ggtgttaacc agcaccagaa cagtgagctc attgatggct tccgagggaa 780 tgacatcggt gattcggcct tcggtcttat tggacaccca tttgttgatg gccgctctgg 840 attgctctgc attttccttg aagtccaggg gctggagctt ggctccatat accaactcac 900 tgatgtcctg gtaggtctca ttgaaggtaa gggatttgtc tccaaaaagg cgattggctg 960 atactaactt ggaggatttg ttggcttttc gatagagtcg gcagttcagt ttggcaaaga 1020 agaagtggat ctgatcagat gttttctcag atatggtgtc aaacttaaat acctccatca 1080 gttgctggag ggtgtcatta caggcaccca gcttggtcat agcaaaagcc gtggagatac 1140 tcaggggtga caggaaaatg ttatcattgt cattcttgga atctgccagg tgctgataga 1200 aagtggtagc aaagcgggaa ttggccttgg acagttccca gacacgccgg ttggtggcct 1260 ccgggatctt ctgttctgag ccctcatcct cagttgcctt cttctccggg gagcggtaaa 1320 tgcacatggg attcatggga atgtcccgcg gcttggctgt gcagatgtcc acagggctcc 1380 cgtgacaggt cacgcagtcc cagaagccaa tgagcagcaa ggacaaaaga taaaccttcc 1440 tttttccaga ggttacagtt cctatcacat tggaatacat ggccgctaat cttccacagg 1500 gctgggcaag tggagatagt gtgatctgag gcaatccgcc tgaaaactgg ttctttcctc 1560 taaatctcgc agaggttcca gaggacaggg tggggcaga 1599 <210> 6 <211> 1545 <212> DNA <213> Macaca mulatta <400> 6 tttttttttt ttttttttta atgtaagatg ggagtagttg tatttatttt tacttctatt 60 cacaaaccaa aataggaaga ggtacaaaga ataagaacag tttagctcac acaagggttg 120 gctactctgc ccatgaagat aatagtgttc agaggaactt ctcttataaa aaccaggaaa 180 ggcctgttgg ccttgaaggt caccctgttg gggtttagcg aacggccagc aatcccaatg 240 gcggtacttg cagctgcttc actgccttct tcatttacct caagaaatgc cttatggaat 300 gcatcggaga catagaggtc atcccggcct tctgcaacaa tacctgggag tttggacttt 360 tcagggctga acagatcgac aaggcccatg tcttgcagct gctccttcaa actgaagccg 420 tcctcaatgc ggaagcgggg catgtgaacc accagcatca tctcctccaa ctcatccagc 480 cactcctgca gcacctctgg ggtgagttcc tgctccacct tggtcaggct cttctcaggc 540 ttgggcagga tgagcaccat ggtgatgtca tcacccttga agggcaactc aagcacctgg 600 gtgccttcag ccacgcgccg ataacagaac ttgccttcct ggtacatcat agacgctgaa 660 cacgactctc catcagcctt gtagaacggt tccatccttg tgttctcagg gctaaacttt 720 gacttccaca ggcccttgaa gtaaatggtg ttaaccagca ccagaacagt gagctcgttg 780 atggcttccg ggggaatgac atcggtgatt cggccttcgg tcttattgga cacccatttg 840 ttgatggccg ctctggattg ctctgcattt tccttgaagt ccaggggctg gagcttggct 900 ccgtatacca actcactgat gtcctggtag gtctcattga aggtaaggga tttgtctcca 960 aaaaggcgat tggctgatac taacttggag gatttgttgg cttttcgata gagtcggcag 1020 ttcagtttgg caaagaagaa gtggatctga tcagatgttt tctcagatat ggtgtcaaac 1080 ttaaatacct ccatcagttg cttgagggtg tcattacagg cacccagctt ggtcatagca 1140 aaagccgtgg agacactcag gggtgacagg aaaatgttat ccttgtcgtt cttggaatct 1200 gccaggtgct gatagaaagt ggtagcaaag cgggaattgg ccttggacag ttcccagacg 1260 cgccggttgg tggcctcggg gatcttctgt tctgagccct catcctcagt tgccttcttc 1320 tccggggagc ggtaaatgca catgggattc atgggaatgt cccgcggctt ggctgtgcag 1380 atgtccacag ggctcccgtg acaggtcata cagtcccaga ggccaatgag cagcaaggac 1440 agaagataaa ccttcctttt tccagaggct acggttccta tcacattgga atacatggtc 1500 gctaatcttc cacagggctg ggcaagtgga gatggtcctc gtgcc 1545 <210> 7 <211> 2171 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 7 tttttttttt ttgtataaaa atgcatttct ctttattttg acactgtgta taagaacatt 60 atgcatgtga gtggtttgag aaataaaacg tttaatactc ttatttgaat ctctgtcttt 120 atgggagatt gattcgggtt tgttttttag tttgtagtat gggggcaata atgagaattt 180 aaggtccctc taccctttca agatgcctgc tatcctctaa gatgaaatag taatatattt 240 acctcttgtt tttatggttt tcttttctac tttggggagg agaaagacca tcttgagaca 300 tggtctttca ctctgcagcc cagcctcaac tggccttaac tcctgaccgc cctgcttcta 360 ccttcaaaag caccaggata taggtttgtg ccaccgtggc tggctgctcc cccttcactt 420 gcccaaaagt ggtgtagcat ctgtactcca gtctctcgtc ttcaagtgga aaagtccatt 480 ctcgtgaggt ggcagtcgta tttattttta cttctattca caaacaccaa agtaggaaaa 540 ggtgcaaaga ttaagaatat tttagttcac acaaggatta gccactctcc ccatgaatat 600 aatagtgttc agtgcaactt cccttataag aaccaggaag ggcctgttgg ccttgaaggt 660 caccctattg gggttcagtg accggccagt aatcacgaca gaagtactcg ctgctgcttc 720 actgccttcc tcatttacct caagaaatgc tttgtggaat gcgtcggaga catagaggtc 780 gtccctgcct ccagcaacga tccctgggag ttgggacttt tcagggctga agagatcaat 840 gaggcccatg tcttgcagct gctccttcag actgaagcca tcctcggtgc ggaagcgggg 900 catgtggacc acaagcatag tctctgacag ctcatccagc cactcctgca gcagctctgg 960 ggtgagctcc tgctccacct tggccaggct cttctcaggc ttgggcagga tgagcaccat 1020 ggtgatgtca tcccccttga agggcagctc tagcacctgg gtgccctctg ccacgcgccg 1080 gtatttgaat ttgccttcct ggtacatcat aggcactggg catgactgcc catcgacctt 1140 atagaacggt tccttccttg tgttctcagg gctgaacttt gacttccaca ggcccttgaa 1200 gtaaatggtg ttaaccagaa ccagggcagt 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taaagtcttc aggtagatat gtcttctgat 2100 tatgtcttat atctcaccac ttcactaaaa tgtctcagat acaaatcaga tctatttcta 2160 aaattaccta t 2171 <210> 8 <211> 1561 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <400> 8 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttgaggt ggcagtcata tttattttta 60 cttccattaa caaacaccga gataggaaaa ggtgcaaaga ttaagaatat tttagttcac 120 acaaggatta gacactctcc ccatgaatat aatagtgttc agtgcgactt cccttataag 180 aaccaggaag ggcctgttgg ccttgaaggt caccctactg gggttcagtg accggccagt 240 aatcacgaca gaagtactcg ctgctgcttc actgccttcc tcatttacct caagaaacgc 300 tttgtggaat gcatcggaga caaagaggtc gtccctgcct tcagcaatga tccctgggag 360 ttgggacttc tcagggctga agagatcaac aaggcccatg tcttgcagct gctccttcag 420 actgaagctg tcctcgatgc ggaagcgggg cacgtggacc acaagcatga cctccgacag 480 ctcatccagc cactcctgca gcagctccgg ggtgagttcc tgctccacct tagccaggct 540 cttctcaggc ttgggcagga tgagcaccat ggtgatgtcg tcccccttga agggcatctc 600 tagcacctgg gtaccctctc ccacacgcct gtatttgaat ttgccttcct ggtacatcat 660 gggcaccagg catgactgcc catcaacttt gtggaatggt tccttccttg tgttctcagg 720 gctgaacttt gacttccaca ggcccttgaa gtaaatggtg ttaaccagca ccagggcagt 780 gagctcatca atggctcctt gggggatgac gtctttgatg cggccttcag tcttattagc 840 tacccagttg ttgatggtca ctctggattg ctccggattc tccttgaagt ccaggggctg 900 aagcttggct ccatagacaa tctcactaac gtcttgatag ctctcattga aggtaaggga 960 tttgtctcca aaaaggcggt tggctgacac caagttagag gacttgttgg cttttcgata 1020 gagtcggcag ttcagtttgg caaagaagaa gtggatctgg tcggatgtct tctcggagat 1080 ggtatcaaat ttaaaaacct ccatcagctg cttgagggtg ttattacaag cacccagctt 1140 ggtcatagca aacgccgtgg agatgctcaa gggtgacagg aaaatgttgt cgttgtcgtt 1200 cttggagtct gccaggtgct gatagaagtt agtggcaaat cgagaattgg ccttggacag 1260 ttcccagacc cgccggttgg tggcttccgg aaccttctgc tctaggacat cctcctccgt 1320 ggccttcttc gcaggggagc ggtaaatgca catggggttc acggggatgt ctcggggctt 1380 cgctatgcag atgtcgtcca cagggtttcc atgacagaca gcacagccca aggcaccaat 1440 gagtagcaga gagaggagac aaagcttcct ctctccagca accgcacttc ctattcccgg 1500 ggaatacatg gtggacgctt ctgcagagaa gccgtggaga cagtgctgag 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Claims

대상체에게 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고,
여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며,
이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함하는,
Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법.
대상체에게 약 25 mg 내지 약 100 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고,
여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며,
이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함하는,
Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제가 1개월에 1회, 6주마다 1회, 2개월마다 1회, 또는 분기별로 대상체에게 투여되는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 약 25 mg의 고정 용량으로서 투여되는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량으로서 투여되는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량으로서 투여되는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여되는 것인 방법.
제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 피하 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체 내의 Serpinc1 활성을 약 70% 내지 약 95%만큼 저하시키는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체 내의 피크 트롬빈 수준을 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸리지 않은 대상체 내의 피크 트롬빈 수준의 범위 내로 증가시키는 것인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체 내의 피크 트롬빈 생성 수준을 대상체에게의 인자 VIII의 투여에 의해 달성되는 것과 거의 동일한 수준으로 달성하는데 충분한 것인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체에서 약 40% 초과의 피크 트롬빈 생성 수준을 달성하는데 충분한 것인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체의 연간 출혈률 (ABR)을 이중 가닥 RNAi 작용제가 투여되지 않은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체의 과거 온-디맨드 ABR 중앙값과 비교하여 약 80 내지 약 95%만큼 감소시키는 것인 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 장애가 출혈 장애인 방법.
제15항에 있어서, 출혈 장애가 후천성 출혈 장애 또는 유전성 출혈 장애인 방법.
제15항에 있어서, 출혈 장애가 혈우병인 방법.
제17항에 있어서, 혈우병이 A형 혈우병, B형 혈우병, 또는 C형 혈우병이거나; 혈우병이 A형 혈우병이고 대상체가 억제제 대상체이거나; 혈우병이 B형 혈우병이고 대상체가 억제제 대상체이거나; 또는 혈우병이 C형 혈우병이고 대상체가 억제제 대상체인 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 피하 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥의 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드인 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 뉴클레오티드가 2'-데옥시-2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형된 뉴클레오티드, 잠금형 뉴클레오티드, 무염기 뉴클레오티드, 2'-아미노-변형된 뉴클레오티드, 2'-알킬-변형된 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 포스포르아미데이트, 및 비-천연 염기를 포함하는 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 것인 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상보성 영역이 적어도 17개의 뉴클레오티드의 길이인 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상보성 영역이 19개 내지 21개의 뉴클레오티드의 길이인 방법.
제23항에 있어서, 상보성 영역이 19개의 뉴클레오티드의 길이인 방법.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 가닥이 30개 이하의 뉴클레오티드의 길이인 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 가닥이 적어도 1개의 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 가닥이 적어도 2개의 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드가 N-아세틸갈락토스아민 (GalNAc) 유도체인 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드가 하기인 방법.
제29항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 하기 화학식에서 제시된 바와 같이 리간드에 접합되며,

여기서 X는 O 또는 S인
방법.
제30항에 있어서, X가 O인 방법.
제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상보성 영역이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열로 이루어지는 것인 방법.
제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 것인 방법.
제33항에 있어서, 센스 가닥이 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)을 포함하고, 안티센스 가닥이 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)를 포함하며,
A, C, G, 및 U가 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u가 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf가 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s가 포스포로티오에이트 연결인
방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥이 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)을 포함하고, 안티센스 가닥이 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)을 포함하며,
A, C, G, 및 U가 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u가 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf가 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s가 포스포로티오에이트 연결이고;
센스 가닥이 하기 화학식에서 제시된 바와 같이 리간드에 접합되며,

여기서 X는 O 또는 S인
방법.
제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 제약 조성물로서 투여되는 것인 방법.
제36항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 비완충 용액 중에서 투여되는 것인 방법.
제37항에 있어서, 비완충 용액이 염수 또는 물인 방법.
제36항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 완충제 용액과 함께 투여되는 것인 방법.
제39항에 있어서, 완충제 용액이 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카르보네이트, 또는 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
제40항에 있어서, 완충제 용액이 포스페이트 완충 염수 (PBS)인 방법.
a) 이중 가닥 RNAi 작용제, 및
b) 사용 설명서, 및
c) 임의적으로, 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하기 위한 수단
을 포함하는, 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하기 위한 키트.
대상체에게 약 40 mg 내지 약 90 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고,
여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며,
이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 것을 포함하는,
Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체에서 적어도 하나의 증상을 예방하는 방법.
대상체에게 약 40 mg 내지 약 90 mg의 고정 용량의 이중 가닥 리보핵산 (RNAi) 작용제를 투여하고,
여기서 이중 가닥 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 상기 안티센스 가닥은 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열과 3개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 15개의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 상보성 영역을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이고, 여기서 센스 가닥은 3'-말단에서 부착된 리간드에 접합된 것이며,
이에 의해 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 것을 포함하는,
Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체를 치료하는 방법.
제43항 또는 제44항에 있어서, 고정 용량의 이중 가닥 RNAi 작용제가 1개월에 1회, 6주마다 1회, 2개월마다 1회, 또는 분기별로 대상체에게 투여되는 것인 방법.
제43항 또는 제44항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 약 25 mg의 고정 용량으로서 투여되는 것인 방법.
제43항 또는 제44항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 약 50 mg의 고정 용량으로서 투여되는 것인 방법.
제43항 또는 제44항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 약 80 mg의 고정 용량으로서 투여되는 것인 방법.
제43항 또는 제44항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 약 100 mg의 고정 용량으로서 투여되는 것인 방법.
제46항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 피하 투여되는 것인 방법.
제43항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체 내의 Serpinc1 활성을 약 70% 내지 약 95%만큼 저하시키는 것인 방법.
제43항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체 내의 피크 트롬빈 수준을 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸리지 않은 대상체 내의 피크 트롬빈 수준의 범위 내로 증가시키는 것인 방법.
제43항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체 내의 피크 트롬빈 생성 수준을 대상체에게의 인자 VIII의 투여에 의해 달성되는 것과 거의 동일한 수준으로 달성하는데 충분한 것인 방법.
제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체에서 약 40% 초과의 피크 트롬빈 생성 수준을 달성하는데 충분한 것인 방법.
제43항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 대상체에게의 투여가 대상체의 연간 출혈률 (ABR)을 이중 가닥 RNAi 작용제가 투여되지 않은 Serpinc1 발현의 감소로부터 이익을 얻을 장애에 걸린 대상체의 과거 온-디맨드 ABR 중앙값과 비교하여 약 80 내지 약 95%만큼 감소시키는 것인 방법.
제43항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
제43항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 장애가 출혈 장애인 방법.
제57항에 있어서, 출혈 장애가 후천성 출혈 장애 또는 유전성 출혈 장애인 방법.
제57항에 있어서, 출혈 장애가 혈우병인 방법.
제59항에 있어서, 혈우병이 A형 혈우병, B형 혈우병, 또는 C형 혈우병이거나; 혈우병이 A형 혈우병이고 대상체가 억제제 대상체이거나; 혈우병이 B형 혈우병이고 대상체가 억제제 대상체이거나; 또는 혈우병이 C형 혈우병이고 대상체가 억제제 대상체인 방법.
제43항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 피하 투여되는 것인 방법.
제43항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥의 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오티드인 방법.
제43항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 뉴클레오티드가 2'-데옥시-2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형된 뉴클레오티드, 잠금형 뉴클레오티드, 무염기 뉴클레오티드, 2'-아미노-변형된 뉴클레오티드, 2'-알킬-변형된 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 포스포르아미데이트, 및 비-천연 염기를 포함하는 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 것인 방법.
제43항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상보성 영역이 적어도 17개의 뉴클레오티드의 길이인 방법.
제43항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상보성 영역이 19개 내지 21개의 뉴클레오티드의 길이인 방법.
제65항에 있어서, 상보성 영역이 19개의 뉴클레오티드의 길이인 방법.
제43항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 가닥이 30개 이하의 뉴클레오티드의 길이인 방법.
제43항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 가닥이 적어도 1개의 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함하는 것인 방법.
제43항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 가닥이 적어도 2개의 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함하는 것인 방법.
제43항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드가 N-아세틸갈락토스아민 (GalNAc) 유도체인 방법.
제43항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드가 하기인 방법.
제71항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 하기 화학식에서 제시된 바와 같이 리간드에 접합되며,

여기서 X는 O 또는 S인
방법.
제72항에 있어서, X가 O인 방법.
제43항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상보성 영역이 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열로 이루어지는 것인 방법.
제43항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (서열식별번호: 16)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (서열식별번호: 15)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 것인 방법.
제75항에 있어서, 센스 가닥이 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)을 포함하고, 안티센스 가닥이 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)를 포함하며,
A, C, G, 및 U가 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u가 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf가 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s가 포스포로티오에이트 연결인
방법.
제43항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥이 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (서열식별번호: 13)을 포함하고, 안티센스 가닥이 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (서열식별번호: 14)을 포함하며,
A, C, G, 및 U가 리보스 A, C, G 또는 U이고; a, c, g, 및 u가 2'-O-메틸 (2'-OMe) A, C, G, 또는 U이고; Af, Cf, Gf 또는 Uf가 2'-플루오로 A, C, G 또는 U이고; s가 포스포로티오에이트 연결이고;
센스 가닥이 하기 화학식에서 제시된 바와 같이 리간드에 접합되며,

여기서 X는 O 또는 S인
방법.
제43항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 제약 조성물로서 투여되는 것인 방법.
제78항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 비완충 용액 중에서 투여되는 것인 방법.
제79항에 있어서, 비완충 용액이 염수 또는 물인 방법.
제78항에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제가 대상체에게 완충제 용액과 함께 투여되는 것인 방법.
제81항에 있어서, 완충제 용액이 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카르보네이트, 또는 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
제82항에 있어서, 완충제 용액이 포스페이트 완충 염수 (PBS)인 방법.
a) 이중 가닥 RNAi 작용제, 및
b) 사용 설명서, 및
c) 임의적으로, 이중 가닥 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하기 위한 수단
을 포함하는, 제43항 내지 제83항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하기 위한 키트.