CN102552187B - 口服羟丝肽纳米粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种可延长羟丝肽的半衰期、提高羟丝肽的口服生物利用度的口服羟丝肽纳米粒及其制备方法。口服羟丝肽纳米粒含有如下质量百分比的组分：羟丝肽5~15%、载体20~45%、聚乙烯醇20~45%及乳化剂5~20%，其制备方法是超声乳化法制备羟丝肽与载体材料的W/O初乳；W/O初乳超声分散在稳定剂溶液中形成W/O/W复乳；W/O/W复乳溶剂挥发得到纳米粒混悬液；纳米粒混悬液的纯化及冷冻干燥，即得到纳米粒粉末。

Description

口服羟丝肽纳米粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种羟丝肽制剂，尤其是一种可延长羟丝肽的半衰期、提高羟丝肽的口服生物利用度的口服羟丝肽纳米粒及其制备方法。

背景技术

羟丝肽，化学名为环反式-4左旋-羟脯氨酰丝氨酸，首先是从日本抗肝炎药物Laennec（人胎盘水解物商品名）提取分离出来的具有活性的二肽，其化学结构式如下：

目前由株式会社日本生物制剂公司人工合成羟丝肽并已公开销售。已有实验表明羟丝肽具有良好的抗肝炎活性，不良反应小。但是，羟丝肽水溶性好且分子量小（200道尔顿左右），属于低渗透性的药物，渗透系数约为5.01×10^-6 (cm/sec)，即口服药物的膜渗透性较差，难以通过生物膜屏障。另外由于胃肠道内存在大量肽水解酶和蛋白水解酶，直接口服羟丝肽极易发生首过效应而被肝脏代谢消除。实验结果是大鼠直接口服羟丝肽后，t_1/2只有30~40min，口服吸收不完全，生物利用度约为30%，只能通过频繁给药，才能达到治疗效果，费时费力。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种可延长羟丝肽的半衰期、提高羟丝肽的口服生物利用度的口服羟丝肽纳米粒及其制备方法。

本发明的技术解决方案是：一种口服羟丝肽纳米粒，其特征在于含有如下质量百分比的组分：羟丝肽5~15%、载体20~45%、聚乙烯醇20~45%及乳化剂5~20%。

所述载体为聚乙交酯丙交酯共聚物或聚乳酸；所述乳化剂为F68或吐温80。

所述聚乙交酯丙交酯共聚物的分子链段中丙交酯与乙交酯的摩尔比为50：50。

一种上述口服羟丝肽纳米粒的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：

a．将聚乙烯醇溶解在去离子水中，制备质量体积分数1~2.5%的稳定剂溶液；按质量体积比为10~40mg/ml向稳定剂溶液中加入羟丝肽并溶解，形成内水相；将载体和乳化剂加至乙酸乙酯溶液中并溶解，形成油相，所述油相中载体的浓度为15~75mg/ml、乳化剂的浓度为15~45mg/m；将内水相和油相按体积比为1：2~10混合，100~ 200W超声乳化0.5~2min，得到W/O初乳；

b. 将聚乙烯醇溶解在去离子水中，聚乙烯醇的质量体积分数为0.5~2.5%，即形成外水相；将外水相与步骤a得到的W/O初乳按体积比为2~10：1混合，100~200W超声乳化0.5~2min，得到W/O/W复乳；

c. 将步骤b得到的W/O/W复乳在35~45℃水浴、减压旋转蒸发，得到带蓝色乳光的纳米粒混悬液；

d. 将步骤c得到的纳米粒混悬液浓缩，取浓缩液于-15~-25℃下预冻12h，再于-40~-60℃真空冷冻干燥12~32h，得到纳米粒粉末。

本发明是以羟丝肽为主要药理活性物质，将羟丝肽用载体材料包载形成纳米粒，其包封率约为15~40%，纳米粒粒径约为100~150nm，分布均匀，与现有技术相比，具有以下有益效果：

1．提高了羟丝肽在胃肠道中的稳定性，起到了缓释作用，促进羟丝肽的淋巴循环及胃肠道吸收，从而提高了羟丝肽的相对生物利用度；

2．载体材料为聚乙丙交酯（PLGA）或聚乳酸（PLA），为生物可降解材料，在体内无蓄积，并能控制药物延缓释放；

3. 采用聚乙烯醇（PVA）作为内水相的稳定剂，可提高羟丝肽纳米粒的包封率；

4. 采用PVA作为外水相的稳定剂，可稳定制备过程中形成的乳液以及干燥后的纳米粒子，防止乳液和纳米粒子聚集；

5．采用不溶于水的有机溶剂乙酸乙酯，并在其中加入乳化剂，使W/O初乳容易形成且较稳定，更容易与外水相形成复乳，在减压旋转蒸发的过程中，乙酸乙酯容易蒸出，形成纳米混悬液；

6．本发明的制备方法不影响羟丝肽的稳定性及药理活性，且制备工艺简单、成本低。

附图说明

图1为本发明实施例5的透射电镜图。

图2为本发明实施例5的粒径分布图。

图3为本发明实施例5的大鼠口服纳米粒和药物水溶液后体内药动学曲线图。

具体实施方式

实施例1

a. 称取10mg聚乙烯醇（PVA），溶解在1ml去离子水中，得到质量体积分数为1%的PVA溶液，将10mg的羟丝肽溶于0.5ml上述PVA溶液中形成内水相；称取15mg 吐温80和30 mg聚乙交酯丙交酯共聚物（PLGA，分子量为15000，购于singma公司）溶于1.5ml乙酸乙酯中，形成油相；取0.2ml内水相和1.5ml油相混合，100W超声乳化30 sec，得到W/O初乳；

b. 称取150mg PVA，溶解在15ml去离子水中，形成质量体积分数为1%的外水相；将12ml外水相与1.7ml步骤a得到的W/O初乳混合，100W超声乳化60 sec，得到W/O/W复乳；

c. 将步骤b得到的W/O/W复乳在40℃水浴、减压旋转蒸发，得到带蓝色乳光的纳米粒混悬液；

d．将步骤c得到的纳米粒混悬液经15000r/min下离心30min浓缩，取浓缩液水洗，于-25℃下预冻12h，再于-60℃真空冷冻干燥16h得到纳米粒粉末。

实施例1得到的羟丝肽纳米粒包封率为15%，其中含有如下质量百分比的组分：羟丝肽5~15%、聚乙交酯丙交酯共聚物20~45%、聚乙烯醇20~45%及吐温80 5~20%，生产过程中所使用的去离子水、乙酸乙酯均被蒸发。

实施例2：

a. 称取20mg聚乙烯醇（PVA），溶解在1ml去离子水中，得到质量体积分数为2%的PVA溶液，将30mg的羟丝肽溶于1ml上述PVA溶液中形成内水相；称取40mg F68和40mg 聚乳酸（PLA，购于济南岱罡生物工程公司）溶于2ml乙酸乙酯中，形成油相；取0.5ml内水相和2ml油相混合，200W超声乳化1min，得到W/O初乳；

b. 称取300mg PVA，溶解在15ml去离子水中，形成质量体积分数为2%的外水相；将12ml外水相与2.5ml步骤a得到的W/O初乳混合，100W超声乳化2min，得到W/O/W复乳；

c. 将步骤b得到的W/O/W复乳在35℃水浴、减压旋转蒸发，得到带蓝色乳光的纳米粒混悬液；

d. 将步骤c得到的纳米粒混悬液经15000r/min下离心30min浓缩，取浓缩液水洗，于-25℃下预冻12h，再于-60℃真空冷冻干燥16h得到纳米粒粉末。

实施例2得到的羟丝肽纳米粒包封率为19%，其中含有如下质量百分比的组分：羟丝肽5~15%、聚乳酸20~45%、聚乙烯醇20~45%及F68 5~20%，生产过程中所使用的去离子水、乙酸乙酯均被蒸发。

实施例3：

a. 称取10mg聚乙烯醇（PVA），溶解在0.5ml去离子水中，得到质量体积分数为2%的PVA溶液，将20mg的羟丝肽溶于0.5ml上述PVA溶液中形成内水相；称取45mg F68和60 mg聚乙交酯丙交酯共聚物（PLGA，分子量为47000，购于singma公司）溶于1.5ml乙酸乙酯中，形成油相；取0.5ml内水相和1.5ml油相混合，100W超声乳化1.5min，得到W/O初乳；

b. 称取200mg PVA，溶解在20ml去离子水中，形成质量体积分数为1%的外水相；将18ml外水相与2ml步骤a得到的W/O初乳混合，100W超声乳化1min，得到W/O/W复乳；

c. 将步骤b得到的W/O/W复乳在45℃水浴、减压旋转蒸发，得到带蓝色乳光的纳米粒混悬液；

d. 将步骤c得到的纳米粒混悬液经超滤膜（截留分子量为3K）过滤，浓缩，于-25℃下预冻12h，再于-50℃真空冷冻干燥20h得到纳米粒粉末。

实施例3得到的羟丝肽纳米粒包封率为24%，其中含有如下质量百分比的组分：羟丝肽5~15%、聚乙交酯丙交酯共聚物20~45%、聚乙烯醇20~45%及F68 5~20%，生产过程中所使用的去离子水、乙酸乙酯均被蒸发。

实施例4：

a. 称取15mg聚乙烯醇（PVA），溶解在1.0ml去离子水中，得到质量体积分数为1.5%的PVA溶液，将20mg的羟丝肽溶于0.5ml上述PVA溶液中形成内水相；称取40mg F68和100 mg聚乙交酯丙交酯共聚物（PLGA，分子量为47000，购于singma公司）溶于2ml乙酸乙酯中，形成油相；取0.5ml内水相和2ml油相混合，200W超声乳化1min，得到W/O初乳；

b. 称取250mg PVA，溶解在10ml去离子水中，形成质量体积分数为2.5%的外水相；将10ml外水相与2.5ml步骤a得到的W/O初乳混合，100W超声乳化1min，得到W/O/W复乳；

c. 将步骤b得到的W/O/W复乳在40℃水浴、减压旋转蒸发，得到带蓝色乳光的纳米粒混悬液；

d. 将步骤c得到的纳米粒混悬液经超滤膜（截留分子量为3K）过滤，浓缩，于-20℃下预冻12h，再于-40℃真空冷冻干燥32h得到纳米粒粉末。

实施例4得到的羟丝肽纳米粒包封率为27%，其中含有如下质量百分比的组分：羟丝肽5~15%、聚乙交酯丙交酯共聚物20~45%、聚乙烯醇20~45%及F68 5~20%，生产过程中所使用的去离子水、乙酸乙酯均被蒸发。

实施例5：

a. 称取25mg聚乙烯醇（PVA），溶解在1ml去离子水中，得到质量体积分数为2.5%的PVA溶液，将40mg的羟丝肽溶于1ml上述PVA溶液中形成内水相；称取60mg F68和150 mg聚乙交酯丙交酯共聚物（PLGA，分子链段中丙交酯与乙交酯的摩尔比为50：50，购于singma公司）溶于3ml乙酸乙酯中，形成油相；取1ml内水相和3ml油相混合，200W超声乳化50sec，得到W/O初乳；

b. 称取150mg PVA，溶解在10ml去离子水中，形成质量体积分数为1.5%的外水相；将10ml外水相与3.5ml步骤a得到的W/O初乳混合，100W超声乳化100sec，得到W/O/W复乳；

c. 将步骤b得到的W/O/W复乳在40℃水浴、减压旋转蒸发，得到带蓝色乳光的纳米粒混悬液；

d. 将步骤c得到的纳米粒混悬液经超滤膜（截留分子量为3K）过滤，浓缩，于-20℃下预冻12h，再于-60℃真空冷冻干燥18h得到纳米粒粉末。

实施例5得到的羟丝肽纳米粒包封率为30%，其中含有如下质量百分比的组分：羟丝肽5~15%、聚乙交酯丙交酯共聚物20~45%、聚乙烯醇20~45%及F68 5~20%，生产过程中所使用的去离子水、乙酸乙酯均被蒸发。

用透射电镜观察本发明实施例5的羟丝肽纳米粒，其透射电镜图如图1所示，本发明实施例5的羟丝肽纳米粒呈球形，粒径在100~150nm，分布较均匀。

本发明实施例5的粒径分布图如图2所示，纳米粒平均粒径为145nm，分散指数（简称：PDI）=0.21，分布较均匀。

取本发明实施例5进行大鼠体内药动学实验，分别口服灌胃本发明实施例6（25mg/kg）和游离羟丝肽水溶液（25mg/kg）后的大鼠血药浓度如图3所示。结果表明：本发明实施例5的羟丝肽纳米粒在体内的生物利用度有显著提高，有较显著的缓释作用，以水溶液为对照，本发明实施例5的纳米粒对水溶液的AUC值之比为178.2%。

Claims (4)

1.一种口服羟丝肽纳米粒，其特征在于含有如下质量百分比的组分：羟丝肽5~15%、载体20~45%、聚乙烯醇20~45%及乳化剂5~20%。

2.根据权利要求1所述的口服羟丝肽纳米粒，其特征在于：所述载体为聚乙交酯丙交酯共聚物或聚乳酸；所述乳化剂为F68或吐温80。

3.根据权利要求2所述的口服羟丝肽纳米粒，其特征在于：所述聚乙交酯丙交酯共聚物的分子链段中丙交酯与乙交酯的摩尔比为50：50。

4.一种如权利要求1或2或3所述的口服羟丝肽纳米粒的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：

a．将聚乙烯醇溶解在去离子水中，制备质量体积分数1~2.5%的稳定剂溶液；按质量体积比为10~40mg/ml向稳定剂溶液中加入羟丝肽并溶解，形成内水相；将载体和乳化剂加至乙酸乙酯溶液中并溶解，形成油相，所述油相中载体的浓度为15~75mg/ml、乳化剂的浓度为15~45mg/ml；将内水相和油相按体积比为1：2~10混合，100~ 200W超声乳化0.5~2min，得到W/O初乳；

b. 将聚乙烯醇溶解在去离子水中，聚乙烯醇的质量体积分数为0.5~2.5%，即形成外水相；将外水相与步骤a得到的W/O初乳按体积比为2~10：1混合，100~200W超声乳化0.5~2min，得到W/O/W复乳；

c. 将步骤b得到的W/O/W复乳在35~45℃水浴、减压旋转蒸发，得到带蓝色乳光的纳米粒混悬液；

d. 将步骤c得到的纳米粒混悬液浓缩，取浓缩液于-15~-25℃下预冻12h，再于-40~-60℃真空冷冻干燥12~32h，得到纳米粒粉末。