DE3238305C2

DE3238305C2 -

Info

Publication number: DE3238305C2
Application number: DE3238305A
Authority: DE
Inventors: Andre Paris Fr Esanu
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1981-10-16
Filing date: 1982-10-15
Publication date: 1989-02-09
Also published as: DK156393C; FR2514764B1; SE461276B; KR860001468B1; NL8203991A; PL135808B1; AT383119B; IT1152718B; AU554162B2; DK458082A; YU225382A; SG91584G; PT75663B; FI823445A0; PL238643A1; NO823440L; HU189185B; NO157737C; KR840001957A; ATA382482A

Description

Die Erfindung betrifft ein Isopropylaminderivat, ein Verfahren zu seiner Herstellung und Arzneimittel, die diese Verbindung enthalten.

Aus den DE-OS 30 09 071 und 30 16 549 sind 2-Isopropylaminopyrimidinverbindungen bekannt, die am Pyrimidinring durch Hydroxyl- oder Halogenreste substituiert sind. Diese Verbindungen wirken nervenregenerierend.

Gegenstand der Erfindung ist 2-Isopropylaminopyrimidin-N-oxid der Formel

sowie pharmakologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.

Diese Verbindung eignet sich besonders auf dem Gebiet der Nervenregeneration und zur Behandlung von Muskeldystrophie.

Erfindungsgemäß kann 2-Isopropylaminopyrimidin-N-oxid durch Oxidation von 2-Isopropylaminopyrimidin mit einem geeigneten Oxidationsmittel, wie Wasserstoffperoxid, m-Chlorperoxybenzoesäure, Kaliumperoxymonosulfat, Chromsäure, Perphosphorsäure, Peressigsäure, Natriumperborat oder tert.- Butylhydroperoxid, hergestellt werden. Das Oxidationsmittel wird in stöchiometrischen Mengen oder in einem geringen, bis zu 10prozentigen stöchiometrischen Überschuß verwendet. Die gewünschten Salze können nach üblichen Verfahren hergestellt werden.

Darreichungsform

Die Verbindung der Erfindung kann zu beliebigen, therapeutisch geeigneten Darreichungsformen verarbeitet werden, beispielsweise zu Tabletten oder Gelatinekapseln, die pro Dosiseinheit 50 mg Wirkstoff zusammen mit einem Verdünnungsmittel, wie Lactose, enthalten. Injektionspräparate in Fläschchen enthalten beispielsweise mindestens 5 mg in Wasser gelösten Wirkstoff. Zur oralen Therapie beim Menschen sind pro Tag 100 mg bis 1 g Wirkstoff erforderlich, während für Injektionszwecke Dosen von 5 mg bis 100 mg pro Tag verabreicht werden.

Nachstehend ist ein Beispiel für die Zusammensetzung von Tabletten angegeben:

2-Isopropylaminopyrimidin-N-oxid\|50 mg
mikrokristalline Cellulose	20 mg
Maisstärke	15 mg
Talcum	7 mg
Kieselsäure	6 mg
Magnesiumstearat	2 mg
	100 mg

Herstellungsbeispiel

In einen 4 Liter fassenden Reaktor, der mit einer Rührvorrichtung und einem Calciumchlorid-Schutzrohr versehen ist, werden 100 g (0,728 Mol) 2-Isopropylaminopyrimidin und 2 Liter Aceton gegeben. Nach Rühren werden 0,8 Mol m-Chlorperoxybenzoesäure zugesetzt und die Temperatur wird auf etwa 35°C erhöht. Nach der Zugabe wird eine weitere Stunde gerührt und das Gemisch sodann unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit 450 ml Wasser behandelt, wobei ein Niederschlag entsteht. Sodann wird mit 245 ml (2,4 Mol) Natriumcarbonatwaschflüssigkeit, die mit Natriumchlorid gesättigt ist, behandelt. Die Lösung wird sodann mit CHCl₃ behandelt, wodurch man erneut einen Niederschlag erhält. Nach Filtrieren, Waschen mit Diäthyläther und Trocknen erhält man 99,2 g (90 Prozent d. Th.) eines öligen Produkts, das aufgrund seiner Elementaranalyse der Summenformel C₇H₁₁ON₃ entspricht. Der Schmelzpunkt der Base beträgt 74 bis 76°C (Tottoli). Diese Verbindung ist in Wasser und Methanol sehr gut löslich und gut löslich in Chloroform bei Raumtemperatur. Der pH-Wert einer 5prozentigen wäßrigen Lösung beträgt 6,1 bis 6,4.

Das entsprechende Hydrochlorid schmilzt bei 94°C. Das durch Umsetzung der Base mit Bernsteinsäure in Aceton beim Siedepunkt erhaltene Succinat schmilzt bei 92°C. Auf übliche Weise werden auch das Maleat, Aspartat und Orthophosphat hergestellt. Da jedoch die Base selbst gut wasserlöslich ist, sowie eine gute Stabilität und günstige organoleptische Eigenschaften aufweist, kann sie direkt eingesetzt werden. Die Base wird nachstehend als "BN 1041" bezeichnet.

Toxizität

Die Toxizität wird an weiblichen Wistar-Ratten durch intraperitoneale und perorale Verabreichung bestimmt. Für die intraperitoneale Verabreichung ergibt sich ein Wert von 1,2 g/kg und für die perorale Verabreichung von 1,9 g/kg.

Pharmakologie

Die durchgeführten Untersuchungen zeigen, daß die Verbindung der Erfindung eine günstige Wirkung auf das Wachstum und die Regeneration von Nerven hat. Sie besitzt auch eine gute analgetische Wirkung, was eine hochinteressante Nebenwirkung darstellt.

1. Vergleich der Wirkung auf das Neuritis-Wachstum

Die Wirkung der Verbindung der Erfindung (BN 1041) auf das Wachstum von Neuritis von Rückenmarkzellen und Endverzweigungen (Ratten) wurde gemäß dem in La Nouvelle Presse M´dicale, Bd. 11, Nr. 16, S. 1238 bis 1242, beschriebenen Verfahren mit der Wirkung von 2-Isopropylaminopyrimidin-orthophosphat (IAPP) verglichen. Diese in vitro-Untersuchung wurde an Kulturen von Rattenembryo(14 Tage)-Rückenmarkzellen durchgeführt, wobei jede 35-mm-Kulturbox die Hälfte eines Rückenmarks (5×10⁶ Zellen) enthielt.

Beide Verbindungen wurden in von 10^-3- bis 10^-9molaren abnehmenden Dosen untersucht, um die Toxizitätsgrenzen, die Konzentrationen, die zu einer maximalen bzw. einer minimalen Wirkung auf die Neuronenwachstum-Parameter führten, und die Ergebnisse an 3 Tagen für die optimalen Konzentrationen festzustellen. Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle zusammengestellt.

Es ist festzustellen, daß Wachstum jeweils bei der gleichen Konzentration von 10^-3molar erfolgt, was für IAPP eine stärker toxische und für BN 1041 eine weniger toxische Konzentration darstellt. Bezüglich der jeweils optimalen Konzentration bestehen Unterschiede. Sie beträgt für IAPP 10^-5molar und für die Verbindung der Erfindung 10^-9molar. Bei diesen Konzentrationen ist die Vergleichsverbindung toxisch, während die Verbindung der Erfindung keinerlei toxische Wirkung aufweist.

2. Reinnervation von Skelettmuskel (Ratte)

Dieser Versuch wurde an erwachsenen männlichen Albinoratten unter Verwendung von 2-Isopropylaminopyridin-orthophosphat als Vergleichsverbindung durchgeführt. Es wurden jeweils drei Gruppen von Ratten verwendet: Eine Kontrollgruppe, eine für die Vergleichsverbindung und eine Gruppe für die erfindungsgemäße Verbindung.

Bei sämtlichen Tieren wurde eine Läsion des linken Ischiasnervs durch 3 oder 4 lokale Auftragungen von flüssigem Stickstoff (etwa -180°C) auf den gleichen Nervenbereich hervorgerufen, wodurch eine gefrorene Zone von etwa 2 bis 3 mm erzeugt wurde. Dieses Verfahren ist wirkungsvoller, zuverlässiger und leichter reproduzierbar als das bekannte Verfahren, bei dem eine mechanische Quetschung des Nervs durchgeführt wird. Außerdem erfolgt eine raschere und vollständigere Wiederherstellung.

Am Tag nach der Läsion erhielten die Kontrolltiere eine intraperitoneale Injektion von 1 ml/100 g physiologischer Kochsalzlösung, während die Tiere der zweiten Gruppe eine intraperitoneale Verabreichung von 300 mg/kg der Vergleichsverbindung und die Tiere der dritten Gruppe von 100 mg/kg der erfindungsgemäßen Verbindung erhielten.

Der Fortschritt der Nervenregeneration wurde an den darauffolgenden Tagen durch elektrische Stimulierung des Nervs untersucht. Die Reinnervation wurde bei den Gruppen 2 und 3 am 16. Tag und bei der Kontrollgruppe am 18. Tag erreicht.

Am 18. Tag wurde die Wiederherstellung am inneren Wadenmuskel unter Vergleich mit dem rechten homologen Muskel durch intrazelluläre Aufzeichnung der Potentiale der motorischen Endplatte ermittelt.

Bei den getöteten Tieren (am 18. Tag) zeigten die Ischiasnerven der mit der erfindungsgemäßen Verbindung behandelten Ratten zu mehr als 37 Prozent eine mehrfache Innervation. Bei der mit der Vergleichsverbindung behandelten Gruppe betrug der Wert 30 Prozent und bei den Kontrolltieren nur 16 Prozent. Es ist festzuhalten, daß die Verbindung der Erfindung zu einer regelmäßigeren Reinnervation führt, wobei häufig 2 bis 3 Axone pro motorische Endplatte beteiligt sind (bei der Vergleichsverbindung nur 1 bis 2 Axone).

3. Analgetische Wirkung

Diese Wirkung wurde unter Anwendung des Zahnnerv-Stimulationstests am Rhesusaffen bestimmt. Es wurden Glafenin (30 und 60 mg/kg p.o.), 2-Isopropylaminopyrimidin-orthophosphat (IAPP; 30, 60 und 120 mg/kg p.o.) und die Verbindung der Erfindung (BN 1041; 30, 60 und 120 mg/kg p.o.) verabreicht und auf ihre analgetische Wirkung untersucht, wozu die Hemmung der Schmerzreaktion gegenüber einer Stimulierung des Zahnnervs beim Rhesusaffen (erwachsene weibliche Rhesusaffen Macaca mulatta) herangezogen wurde.

Die Affen wurden daran gewöhnt, angebunden in Einzelstühlen zu sitzen. Am Versuchstag wurden vor der Medikation die Elektrodenableitungen mit einem Grass-Stimulator verbunden. Die Schmerzschwelle der einzelnen Tiere wurde unter Anwendung von vorübergehenden Stimuli zunehmender Stärke auf den Zahnnerv bestimmt. Bei jedem Stimulierungsversuch blieben Frequenz, Impulsbreite und Dauer des Reizes konstant bei 10 Hz, 5 ms bzw. 10 s. Nur die Spannung wurde geändert. Die Schmerzschwelle wurde als die Spannung festgelegt, die zum Hervorrufen individueller Reaktionen, wie Gähnen und Zahnlecken, erforderlich war. Die Medikation erfolgte oral. Die Schwellenspannungen wurden 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 240 und 300 Minuten nach der Medikation angelegt. Das Auftreten oder das Ausbleiben von individuellen Reaktionen auf die Schwellenspannung wurde sodann festgehalten.

Zwischen den einzelnen Versuchen wurde eine Pause von mindestens 7 Tagen eingehalten.

Die zu untersuchenden Verbindungen wurden in wäßriger, 0,5prozentiger Carboxymethylcellulose oral unter Verwendung eines konstanten Dosisvolumens von 4 ml/kg verabreicht. Die Kontrolltiere erhielten lediglich 4 ml/kg Trägerstoff. Die Wirkung der oralen Verabreichung der verschiedenen Testverbindungen auf die Schmerzreaktion bei elektrischer Reizung des Zahnnervs, d. h. die analgetische Wirkung, ist in Tabelle I zusammengestellt. Ungefähre ED₅₀-Werte, die aus den Ergebnissen von Tabelle I ableitbar sind, sind in Tabelle II angegeben.

Alle drei zu untersuchenden Verbindungen erwiesen sich bei diesem Versuch als wirksam. Die Werte in Tabelle I zeigen, daß sich bei Glafenin eine maximale Aktivität 30 Minuten nach der Dosierung ergibt und bei einem Tier die Wirkung 150 Minuten nach der Medikation anhält. Die Verbindung IAPP zeigte ihre maximale Wirkung 90 Minuten nach der Medikation, wobei 300 Minuten danach noch eine gewisse Wirkung feststellbar war. BN 1041 ist wirksamer als Glafenin oder IAPP. Es erreicht seine maximale Wirkung 120 Minuten nach der Medikation, wobei Restwirkungen bis zu 300 Minuten anhalten. Der ED₅₀- Wert zum Zeitpunkt der maximalen Wirkung betrug etwa 30 mg/kg.

Tabelle I

Tabelle II

Die ungefähren ED₅₀-Werte wurden unter Anwendung des Verfahrens der beweglichen Mittelwerte (vgl. W. R. Thompson, Bacteriological Reviews, Bd. 11 (1947), S. 115 bis 145) berechnet.

Vergleichsversuch (nachgereicht am 20. 5. 1987)

Die erfindungsgemäßen Verbindungen weisen bei vergleichbarer Nervenregenerierungswirkung eine geringere akute Toxizität auf als die Verbindungen der DE-OS 30 09 071 und 30 16 549, wie die folgenden Angaben zeigen.

Claims

1. 2-Isopropylaminopyrimidin-N-oxid der Formel sowie dessen pharmakologisch verträgliche Salze.

2. Verfahren zur Herstellung der Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man 2-Isopropylaminopyrimidin bei 15 bis 45°C der Oxidation mit stöchiometrischen Mengen oder einem geringen, bis zu 10prozentigen stöchiometrischen Überschuß eines geeigneten Oxidationsmittels unterwirft.

3. Arzneimittel, enthaltend eine Verbindung nach Anspruch 1 zusammen mit einem geeigneten Trägerstoff.