CH654834A5

CH654834A5 - Derive de l'isopropylamino pyrimidine, procede pour sa preparation et composition therapeutique contenant ce derive.

Info

Publication number: CH654834A5
Application number: CH5725/82A
Authority: CH
Inventors: Andre Esanu
Original assignee: Scras
Priority date: 1981-10-16
Filing date: 1982-09-29
Publication date: 1986-03-14
Also published as: ES8401478A1; ZA827137B; AU8939982A; MY8600124A; DK156393C; OA07230A; PT75663A; DE3238305C2; DK156393B; DE3238305A1; FI76788B; FI823445A0; SE461276B; FI76788C; IE54028B1; IE822504L; US4492701A; NO157737C; NO823440L; ATA382482A

Description

La présente invention concerne un nouveau dérivé de l'isopropylaminopyrimidine, un procédé pour sa préparation, ainsi que des compositions thérapeutiques contenant ces composés à titre de principe actif.

L'invention a pour objet l'isopropylamino-2-pyrimidine-N-oxyde répondant à la formule:

O

f

/A /ch3

ainsi que ses sels thérapeutiquement acceptables.

Ce composé est particulièrement intéressant dans le domaine de la régénération nerveuse, ainsi que dans le traitement des dystro-phies musculaires. Selon l'invention, ce composé peut être préparé par oxydation ménagée de risopropylamino-2-pyrimidine à l'aide d'agents d'oxydation choisis parmi l'eau oxygénée, l'acide m-chloroperoxybenzoïque, le peroxymonosulfate de potassium, l'acide chromique, l'acide perphosphorique, l'acide peracétique, le perborate de sodium et l'hydroperoxyde de tertiobutyle. L'agent d'oxydation est utilisé, selon les cas, soit en proportion stœchiométrique, soit en léger excès ne dépassant pas 10% par rapport à cette proportion. Les sels voulus peuvent être préparés par les méthodes habituelles.

L'invention sera d'ailleurs mieux comprise grâce à la description de l'exemple qui suit.

Exemple:

Dans un réacteur de 41 équipé de moyens d'agitation et d'une protection au chlorure de calcium, on verse 100 g (0,728 mol) d'iso-propylamino-2-pyrimidine et 21 d'acétone. On ajoute ensuite, sous agitation, 0,8 mol d'acide m-chloroperoxybenzoïque et la température s'élève à environ 35° C. On maintient l'agitation pendant 1 h après cette addition, puis le mélange réactionnel est évaporé à sec sous pression réduite. Le résidu est repris par 450 ml d'eau, ce qui donne un précipité, puis par 245 ml (2,4 mol) de lessive de soude saturée de chlorure de sodium. On traite cette solution par CHC13, ce qui donne un nouveau précipité que l'on filtre, lave à l'éther éthy-lique et sèche; on obtient ainsi 99,2 g (rendement 90%) d'un produit

2

huileux dont l'analyse élémentaire montre une parfaite correspondance avec la formule C7H, jON3 ; le point de fusion de la base est 74-76: C (Tottoli). Ce composé est très soluble dans l'eau par le mé-thanol, et a une bonne solubilité dans le chloroforme à la tempéra-5 ture ambiante. Le pH d'une solution aqueuse à 5% est compris entre 6,1 et 6,4. Le chlorhydrate correspondant fond à 94 C. Le succinate obtenu par la réaction de l'acide succinique sur la base, dans l'acétone, au reflux, fond à 92°C; les maléate, aspartate et orthophosphate ont également été préparés par les techniques usuelles; cepen-îo dant, comme la base elle-même possède une bonne solubilité, une bonne stabilité et des caractéristiques organoleptiques favorables, on peut l'utiliser telle quelle. Dans ce qui suit, la base sera désignée par BN 1041.

Toxicité

La toxicité a été déterminée sur les rats femelles de souche wistar par voie i.p. et p.o. Les chiffres obtenus par les techniques usuelles en la matière sont de 1,2 g/kg i.p. et 1,9 g/kg p.o. pour la base (DL50).

20 Pharmacologie

Les diverses expérimentations pharmacologiques entreprises ont permis de démontrer l'intérêt du composé selon l'invention sur la croissance et la régénération des fibres nerveuses. Elles ont aussi permis de mettre en évidence une activité analgésique de bon niveau, 25 ce qui est un effet secondaire extrêmement intéressant.

1. Action comparée sur la croissance des neuntes

L'action du composé selon l'invention (BN 1041) a été déterminée de façon comparative avec celle de l'orthophosphate de l'isopro-30 pylamino-2-pyrimidine sur la croissance des neurites de cellules de moelle épinière du rat et sur le développement de leurs ramifications terminales, par la méthode décrite dans «La Nouvelle Presse Médicale», 11, N° 16, 1238-1242. Cette expérimentation in vitro a été conduite sur des cultures de cellules de moelle épinière d'embryons de 35 rats de 14 d, chaque boîte de culture de 35 mm contenant une demi-moelle épinière, soit environ 5 - 10e cellules. Les deux composés ont été testés à des doses décroissantes de 10"3 à 10~9 M afin de déterminer les limites de toxicité, les concentrations conduisant à l'action minimale et maximale sur les paramètres de croissance des neurones, 40 ainsi que les résultats à 3 d pour les concentrations optimales. Les chiffres correspondants sont portés dans le tableau suivant:

IAPP

BN 1041

Limite de toxicité

> 10"5 M

>IO"2 M

Concentration à laquelle la croissance apparaît malgré la toxicité

10~3M

10"3 M

Meilleure concentration opératoire

IO~5M

IO"9 M

On peut noter que la croissance apparaît à la même concentra-5s tion de 10~3 M qui est plus (IAPP) ou moins (BN 1041) toxique, quoique les meilleures concentrations opératoires soient différentes: 10~5 M pour l'IAPP et 10"9 M pour le composé selon l'invention. A ces concentrations, le composé de référence est toxique, tandis que le composé selon l'invention ne présente aucune toxicité.

60 2. Rêinnervation du muscle squelettique chez le rat

Cette expérimentation a été effectuée également en comparaison avec l'orthophosphate d'isopropylamino-2-pyrimidine à titre de composé de référence, sur des rats mâles adultes, de souche albinos. Trois lots de chacun 5 rats ont été utilisés: l'un à titre de témoin, 65 l'un pour traitement à l'aide du produit de référence et le dernier pour le traitement à l'aide du composé selon l'invention.

Sur tous les animaux, on a provoqué une lésion du nerf sciatique gauche, en appliquant 3 ou 4 fois localement un cryode à azote li-

3

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quide (température environ — 180°C) sur la même région du nerf, ce qui a amené la création d'une zone congelée de 2 à 3 mm de long.

Cette technique est plus efficace, plus sûre et plus facile à reproduire que la technique bien connue d'écrasement mécanique du nerf; en outre, la récupération s'effectue plus rapidement et de façon plus 5 complète.

Le lendemain du jour où la lésion a été provoquée, on injecte i.p. aux animaux témoins 1 ml/100 g de soluté physiologique, 300 mg/kg du composé de référence pour les animaux du deuxième lot et 100 mg/kg du composé selon l'invention pour les animaux du troi- 10 sième lot.

L'évolution du processus de régénération nerveuse est contrôlée dans les jours suivants par stimulation électrique du nerf. La réinnervation est obtenue au bout de 16 d pour les animaux du second et du troisième lot, et au bout de 18 d seulement pour les animaux du 15 lot témoin.

A 18 d, la récupération peut être appréciée en comparant les réactions du muscle gastrocnémique interne gauche avec celles de son homologue droit, par les techniques d'enregistrement intracellulaires des potentiels de la plaque motrice. 20

Sur les animaux sacrifiés (à 18 d), on peut noter, pour les rats qui ont été traités par les produits selon l'invention, un pourcentage supérieur à 37% d'innervations multiples; pour les rats qui ont été traités avec le produit de référence, un pourcentage d'environ 30% et, pour les rats du lot témoin, un pourcentage de seulement 16%. Il 25 y a lieu de remarquer que le produit selon l'invention conduit à une réinnervation plus régulière, portant fréquemment sur 2 ou 3 axones par plaque motrice, alors que, pour le composé de référence, elle ne porte que sur 1 ou 2 axones.

30

3. Activité analgésique

Cette activité a été déterminée par le test de stimulation de la pulpe dentaire chez le singe rhésus. A titre de comparaison, l'expérimentation a été conduite parallèlement avec la glafénine (30 à 35 40 mg/kg per os), l'orthophosphate d'isopropylamino-2-pyrimidine, IAPP (30, 60 et 120 mg/kg per os), ainsi qu'avec le composé selon l'invention BN 1041 (30, 60 et 120 mg/kg per os); dans cette expérimentation, l'activité analgésique a été décelée en mesurant une inhibition à la réponse douloureuse à une stimulation de la pulpe den- 40 taire sur des singes rhésus femelles adultes Macaca mulatta.

Les singes ont été préalablement habitués à se tenir assis sur des sièges individuels, sur lesquels ils sont attachés. Le jour d'expérimentation, avant toute administration des composés, les électrodes ont été connectées à un stimulateur Grass, et le seuil de douleur pour chacun des animaux a été déterminé par l'application d'une série de Stimuli brefs d'intensité croissante. Dans chaqe cycle de stimulation, la fréquence, le rythme de l'impulsion et la durée de la stimulation ont été constants et égaux respectivement à 10 Hz, 5 ms et 10 s; le seul paramètre variable était le voltage. Le seuil de douleur a été déterminé par la valeur du voltage nécessaire pour amener chez chaque animal des réactions individuelles telles que l'ouverture de la bouche et le léchage des dents. Une fois ces seuils déterminés, les différents animaux ont reçu par voie orale les doses indiquées ci-dessus de chacun des produits et les voltages de seuil ont ensuite été appliqués à 15, 30, 60, 90, 120, 150,180, 240 et 300 min après l'administration. La présence ou l'absence de réactions individuelles lors de l'application du voltage de seuil ont été notées. Les animaux étant utilisés pour plusieurs expériences, des intervalles d'au moins une semaine entre deux expériences étaient prévus.

Les composés ont été administrés par gavage oral d'une dose-volume constante de 4 ml/kg dans une suspension aqueuse à 0,5% de carboxyméthylcellulose à laquelle a été ajoutée la dose d'expérimentation du produit considéré. Les animaux témoins ont reçu le même volume de 4 ml/kg de suspension aqueuse de carboxyméthylcellulose, sans aucune autre substance. Les effets de l'administration orale des différents composés testés sur la réponse à la douleur.par stimulation électrique de la pulpe dentaire, c'est-à-dire, en fait, l'activité analgésique, sont reportés dans le tableau 1. Les DES0 dérivant des résultats du tableau 1 sont données dans le tabléau 2.

Les trois composés testés ont montré une activité dans cette expérimentation. On peut voir dans le tableau 1 que la glafénine a atteint son activité maximale 30 min après administration de la dose, et qu'elle était encore active chez un animal 150 min après l'administration. Le composé IAPP a atteint son activité maximale 90 min après son administration, une activité résiduelle étant encore notée 300 min après cette administration. Cependant, le composé BN 1041 apparaît plus actif que les deux précédents, en présentant une activité maximale 120 min après l'administration, avec une activité résiduelle 300 min après administration, au temps où est constatée l'activité maximale, la valeur de la DE50 est approximativement de 30 mg/kg.

lui

Traitement

Dose (mg/kg) p.o.

Nombre de singes sur lesquels une analgésie est constatée (... min après dosage)

15

30

60

90

120

150

180

240

300

Excipient

—

0/4

Glafénine

30 60

0/4 1/4

1/4 2/4

0/4 2/4

1/4 2/4

1/4 1/4

1/4 0/4

IAPP

30 60 120

0/4 0/4 1/4

0/4 1/4 1/4

1/4 1/4 2/4

0/4 1/4 2/4

1/4 1/4 2/4

0/4 1/4 2/4

0/4 1/4 1/4

BN 1041

30 60 120

1/4 1/4 0/4

1/4 2/4 2/4

1/4 2/4 4/4

2/4 3/4 4/4

1/4 3/4 3/4

1/4 3/4 2/4

1/4 2/4 1/4

Tableau 2

Traitement

Valeurs approximatives de la DEso (... min après adminstration)

15

30

60

90

120

150

180

240

300

Glafénine

> 60

~ 60

> 60

IAPP

>120

—120

~120

~ 120

—120

>120

BN 1041

>120

~ 85

53

~ 30

42

~ 42

?

654 834

4

Les valeurs approximatives de la DE50 ont été calculées par la méthode des moyennes mobiles (Thompson, W.R., «Bacteriological Reviews» (1947), 11, 115-145).

Présentation - Posologie

Ce composé peut être présenté sous toute forme thérapeutique acceptable et, par exemple, sous forme de comprimé ou de gélule contenant chacun 50 mg par unité de dosage, associé à un excipient tel que, par exemple, le lactose; pour la forme injectable, le produit peut être dosé en ampoules contenant au moins 5 mg de principe actif dissous dans de l'eau. La posologie en thérapeutique humaine,

par voie orale, est de 100 mg à 1 g/d et, par voie injectable, de 5 mg à 100 g/d.

A titre d'exemple, on peut donner la formule d'un comprimé:

Isopropylamino-2-pyrimidine-N-oxyde 50 mg

Cellulose microcristalline 20 mg

Amidon de blé 15 mg

Talc 7 mg

Acide salicylique 6 mg

Stéarate de magnésium 2 mg

100 mg

R

Claims

654 834 REVENDICATIONS

1. Isopropylamino-2-pyrimidine-N-oxyde de formule:

O

t

/=\ yCH3

\r^

2. Procédé de préparation du composé selon la revendication 1 consistant à soumettre, à une température comprise entre 15 et 45° C, l'isopropylamino-2-pyrimidine à une oxydation ménagée à l'aide d'une quantité stœchiométrique, ou en excès jusqu'à 10% par rapport à cette quantité, d'un agent d'oxydation choisi parmi l'eau oxygénée, l'acide m-chloroperoxybenzoïque, le peroxymonosulfate de potassium, l'acide chromique, l'acide perphosphorique, l'acide peracétique, le perborate de sodium et l'hydroperoxyde de tertiobu-tyle.

3. Composition thérapeutique comprenant, à titre de principe actif, le composé selon la revendication 1, associé avec un excipient approprié.