PL135808B1 - Process for preparing novel n-oxide of 2-isopropylaminepyrimidine - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowego N-tlenku 2-izopropyloaminopirymidyny o wzorze przedstawionym na rysunku i jego tera¬ peutycznie dopuszczalnych soli. Zwiazek ten jest szczególnie przydatny w dziedzinie regeneracji ner¬ wów i do leczenia zaniku miesni.Sposób wedlug wynalazku wytwarzania N-tlenku 2-izopropyloaminopirymidyny o wzorze przedsta¬ wionym na rysunku, charakteryzuje sie tym, ze 2- -izopropyloaminopirymidyne poddaje sie w tempe¬ raturze 15—45°C lagodnemu utlenianiu przy uzy¬ ciu stechiometrycznej ilosci lub niewielkiego nad¬ miaru, do 10%, odpowiedniego srodka utleniajacego, takiego jak nadtlenek wodoru, kwas m-chloronad- benzoesowy, nadtlenojednosiarczan potasowy, kwas chromowy, kwas nadfosforowy, kwas nadoctowy, nadtlenoboran sodowy lub wodoronadtlenek Illrz.- -butylu i ewentualnie przeprowadza sie w sól. Po¬ zadane sole mozna wytwarzac znanymi sposobami.Toksycznosc wytworzonego zwiazku oznaczano na samicach szczurów wistar, przy podawaniu bada¬ nych zwiazków dootrzewnowo i doustnie. Przy sto¬ sowaniu znanych sposobów badania dla pierwszego sposobu podawania uzyskano 1,2 g/kg i 1,9 g/kg dla drugiego sposobu.Przeprowadzone badania wykazaly, ze zwiazek wytwarzany sposobem wedlug wynalazku oddzia- lywuje na wzrost i regeneracje nerwów, a ponadto wykazuje czynnosc przeciwbólowa, co stanowi bar¬ dzo korzystny efekt uboczny. 15 20 25 30 Dzialanie zwiazku wytwarzanego sposobem we¬ dlug wynalazku (BN 1041) okreslano porównawczo wzgledem dzialania ortofosforanu 2-izopropyloami¬ nopirymidyny (IAPP) na postepujace zapalenie ner¬ wu komórek rdzenia kregowego i koncowych roz¬ galezien (u szczurów), wykorzystujac sposób opisa¬ ny w „La Neuvelle Presse Medicale" 11, Nr 16, s. 1238—1242. Te badania in vitro przeprowadzano na kulturach komórek rdzenia kregowego embrionów szczurów (14 dniowych), przy czym kazda plytka z kultura 35 mm zawiera polowe rdzenia kregowe¬ go (5-106 komórek).Obydwa zwiazki badano przy dawkach zmniejsza¬ jacych sie w zakresie od 10-8 do 10_9M w celu okreslenia granic toksycznosci, stezen zapewniaja¬ cych maksimum i minimum dzialania na parametry wzrostu neuronów i wyników dla trzech dni przy optymalnych stezeniach. Wyniki podano w tablicy 1.Tablica 1 1 Granica toksycznosci Stezenie, przy którym przebiega wzrost pomi¬ mo dzialania toksycz¬ nego Najlepsze stezenie uzy- 1 tkowe IAPP 10-5M 10-* M 10-5 M BN 14)41 1 10-*M | 10-«M | 10-»M 1 135 808135 808 30 Nalezy zwrócic uwage na fakt, ze wzrost przebie¬ ga przy tym samym stezeniu 10-8M, które lezy po¬ wyzej (IAPP) lub ponizej (BN 1041) granicy toksycz¬ nosci, jakkolwiek najlepsze stezenia sa odmienne i wynosza 10~5 M dla IAPP lub 10~9 M dla zwiazku 5 ¦ wytworzonego sposobem wedlug wynalazku. Przy tych stezeniach wzorcowy zwiazek jest toksyczny, natomiast zwiazek wytworzony sposobem wedlug wynalazku nie wykazuje toksycznosci.Nastepnie przeprowadzono badania odtworzenia io nerwu porazonego miesnia szkieletowego, porównu¬ jac z dzialaniem ortofosforanu 2-izopropyloamino- pirymidyny (IAPP) zastosowanego jako zwiazek wzorcowy, na doroslych samcach szczurów albino¬ sów. Uzyto trzech grup po 5 szczurów: jedna dla 15 kontroli, jedna dla zwiazku wzorcowego i jedna dla zwiazku wytwarzanego sposobem wedlug wyna¬ lazku.U wszystkich tych zwierzat wywolano uszkodze¬ nie tylnego nerwu skórnego lewego uda w wyniku 20 przylozenia w 3 lub 4 miejscach kriody z cieklym azotem (temperatura okolo — 180°C) w tym samym obszarze nerwu, co powoduje zamrozenie strefy okolo 2—3 mm. Technika ta jest bardziej skutecz¬ na, bardziej niezawodna i latwiej powtarzalna niz M znana technika mechanicznego miazdzenia nerwu, a ponadto wyzdrowienie przebiega szybciej i jest bardziej kompletne.Dzien po uszkodzeniu kontrolnej grupie zwierzat wstrzyknieto dootrzewnowo 1 ml/100 g roztworu soli fizjologicznej, podczas gdy druga grupa zwie¬ rzat otrzymala dootrzewnowo 300 mg/kg wzorcowe¬ go zwiazku, zas trzecia grupa zwierzat 100 mg/kg zwiazku wytwarzanego sposobem wedlug wynalaz¬ ku. W nastepnych dniach sprawdzano postep rege- 35 neracji nerwu przez jedno pobudzanie elektryczne.Regeneracje nerwu osiagano po 16 dniach dla grup 2 i 3 oraz po 18 dniach dla grupy kontrolnej. Po 18 dniach ocenia sie powrót do zdrowia na podsta¬ wie badania wewnetrznego miesnia brzuchatego le- 40 wej lydki przez porównanie z miesniem prawej lyd¬ ki, stosujac techniki wewnatrzkomórkowego zapisu potencjalów plytki nerwowej miesnia.Po 18 dniach zwierzeta zabito i zbadano tylny nerw skórny uda; nerwy te w przypadku szczurów leczonych zwiazkiem wytwarzanym sposobem we¬ dlug wynalazku wykazuja ponad 37% wielokrotnych unerwien, podczas gdy dla wzorcowego zwiazku okolo 30%; zwierzeta z grupy kontrolnej wykazuja tylko 16% wielokrotnych unerwien. Nalezy ponad- M to stwierdzic, ze zwiazek wytwarzany sposobem wedlug wynalazku pozwala osiagnac bardziej regu¬ larne odtwarzanie nerwu, obejmujace czesto 2 do 3 aksonów na plytke nerwowa miesnia (podczas gdy zwiazek wzorcowy tylko 1—2 akson). W Czynnosc przeciwbólowa okreslano stosujac próbe draznienia miazgi zebowej u rezusów. Dla porówna¬ nia glafenine (podawana doustnie w dawkach 30 i 60 mg/kg), ortofosforan 2-izopropyloaminopirymi- dyny = IAPP (podawany doustnie w dawkach 30, 60 60 i 120 mg/kg) i zwiazek wytwarzany sposobem we¬ dlug wynalazku = B^T 1041 (podawany w ilosci 30, 60 i 120 mg/kg doustnie) badano na czynnosc prze¬ ciwbólowa, wykorzystujac w tym celu hamowanie reakcji bólowej na podraznienie miazgi zebowej w 45 u rezusów (grupa skladala sie z samic rezusów ga¬ tunku Macaca mulatta).Malpy tresowano w siedzeniu w krzeslach ogra¬ niczajacych swobode ruchów. W dniu badania, przed podaniem badanego srodka, przewody elektrod la¬ czono ze stymulatorem Grassa i okreslano próg bólu dla kazdego zwierzecia, przy zastosowaniu ciagu przejsciowych, ale rosnacych bodzców przykladanych do miazgi zebowej. W kazdym przebiegu draznienia czestotliwosc, szerokosc impulsu i czas trwania bodzca pozostawaly stale, odpowiednio na wartosci 10 Hz, 5ms i 10 s, zmieniano tylko napiecie. Próg bólu okreslano jako napiecie wymagane dla spowo¬ dowania indywidualnych reakcji, takich jak ziewa¬ nie i lizanie zeba. Zwiazki badane podawano bada¬ nym zwierzetom doustnie i po uplywie 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 240 i 300 minut przykladano na¬ piecie progowe; notowano wystapienie lub brak in¬ dywidualnych reakcji na napiecie progowe. Pomie¬ dzy kolejnymi badaniami robiono przerwy co naj¬ mniej siedmiodniowe.Badane zwiazki podawano w 0,5% wodnym roz¬ tworze karboksymetylocelulozy przez zglebnik wpro¬ wadzony przez usta, stosujac stala objetosc dawki 4 ml/kg. Zwierzeta kontrolne otrzymywaly samo podloze, równiez w objetosci dawki 4 ml/kg. Efekty podawania doustnie róznych badanych zwiazków na reakcje bólowa w odpowiedzi na elektryczne draz¬ nienie miazgi zebowej, to znaczy czynnosc przeciw¬ bólowa, zestawiono w tablicy 2. W tablicy 3 po¬ dano przyblizone wartosci dawki skutecznej w 50% przypadków obliczone z wyników zawartych w ta¬ blicy 2.Wszystkie trzy badane zwiazki wykazaly czyn¬ nosc w tym badaniu. Z danych zawartych w tabli¬ cy 2 wynika, ze glafenina osiagnela szczytowa aktywnosc po uplywie 30 minut od podania, a u jed¬ nego zwierzecia wykazywala nadal aktywnosc jesz¬ cze po uplywie 150 minut. Zwiazek IAPP wykazy¬ wal szczytowa aktywnosc po uplywie 90 minut od podania, a pewien efekt, wystepowal jeszcze w, 300 minut po podaniu. Bardziej aktywny zarówno od glafaniny jak i IAPP wydaje sie byc zwiazek BN 1041, który szczytowa aktywnosc wykazywal po uplywie 120 minut po podaniu, a szczatkowe efekty wystepowaly do 300 minut po podaniu; wartosc dawki skutecznej w 50% przypadków w czasie szczy¬ towej aktywnosci wynosila w przyblizeniu 30 mg/kg.Przyblizone wartosci dawki skutecznej w 50% przypadków obliczono wykorzystujac metode rucho¬ mych srednich (Thompson, W.R,, Bacteriological Re- views, (1947), 11, 115—145).Zwiazek mozna podawac w dowolnie dobranej, terapeutycznie dopuszczalnej postaci, na przyklad w tabletkach lub zelatynowych kapsulkach zawie¬ rajacych 50 mg jednostkowa dawke wraz z doda¬ tkiem takim jak laktoza; zas do zastrzyków pro¬ dukt ten moze byc dawkowany w ampulkach za¬ wierajacych co najmniej 5 mg skladnika czynnego rozpuszczonego w wodzie. Jesli chodzi o dawkowa¬ nie leków dla ludzi, to przy podawaniu doustnym trzeba od 100mg do Ig na dzien, podczas gdy przy podawaniu w postaci zastrzyków mozna stosowac dawki od 5 mg do 100 mg na dzien.Wynalazek ilustruje podany ponizej przyklad.135 808 Leczenie Podloze Glafenina IAPP BN 1041 Dawka doustna (mg/kg) 30~ 60~ 30 60 120 30 60 ~~ 120 ~~ 15 0/4 0/4 C/4 q/4 ~l/4_ Oj/4 Liczba 30 ty4 " 1/4 2/4 Cy'4~~ 0^4 i/i- 1/4 2/4 2/4 Tablica 2 malp wykazujacych znieczulenie w czasie uplywajacym od podania zwiazku (minuty) 60 0/4 0/4 2/4 0/4 l/4~" 1/4 1/4 2/4 2/4 90 0/4 1/4 a/4 V4 1/4 2/4 1/4 2/4 4/4 120 0/4 1/4 2/4 0/4 i?4~~ 2/4 2/4 3/4 4/4 150 0/4 1/4 1/4 1/4 1/4 2/4 2/4 3/4 4/4 180 0/4 1/4 0/4 0/4_ 1/4 ^4 _ l/4_ "3/4 240 0/4 1/4 0/4 0/4 1/4 i?4— 1/4 3/4 2/4 300 0/4 1/4 0/4 | 0/4 | 1/4 | 1/4 | 1/4 | a/4 1/4 | Tablica 3 Leczenie Glafenina IAPP BN 1041 Przyblizone wartosci dawki skutecznej w 50% przypadków (mg/kg) w czasie uplywajacym od podania zwiazku (minuty) 15 60 " 120 120 30 ~60 1"20 ~85 60 90 120 ~ 60 1 /v 60 | ~ 60 120 | ~120 | ~120 ^85 | ~53 | ^30 150 ~60 ~120 ~30 180 60 /v/120 42 240 60 120 ~42 300 60 120 ? Przyklad. Do 4-litrowego reaktora zaopatrzo¬ nego w mieszadlo i rurke z chlorkiem wapniowym* zabezpieczajaca przed dostepem wilgoci, wlano 100 g (0,728 mola) 2-izopropyloaminopirymidyny i 21 ace¬ tonu. Po wymieszaniu dodano 0,8 mola kwasu m- -chloronadbenzoesowego i podniesiono temperature do okolo 35°C. Mieszanie kontynuowano przez jed¬ na godzine po dodaniu reagentów i nastepnie mie-» szanine reakcyjna odparowano do sucha pod zmniej¬ szonym cisnieniem. Pozostalosc potraktowano 450 ml wody, w wyniku czego powstaje osad, a nastepnie 245 ml (2,4 mola) roztworu wodorotlenku sodowego nasyconego chlorkiem sodowym. Roztwór ten z kolei potraktowano CHClsi w wyniku czego wytraca sie nowy osad; po odsaczeniu, przemyciu eterem etylo¬ wym i wysuszeniu, otrzymano 99,2 g (wydajnosc 90%) oleistego produktu; analiza elementarna wy¬ kazala, ze odpowiada ona wzorowi C7HuON3; tem¬ peratura topnienia zasady wynosi 74—76°C (Tottoli).Zwiazek ten jest dobrze rozpuszczalny w wodzie i metanolu, jak równiez w chloroformie w tempe¬ raturze pokojowej. Wartosc pH 5% wodnego roz¬ tworu wynosi 6,1—6,4.Odpowiadajacy chlorowodorek posiada tempera¬ ture topnienia 94°C. Bursztynian otrzymany w wy- 30 40 45 50 niku dzialania na zasade kwasem bursztynowym w acetonie w temperaturze wrzenia posiada tempera¬ ture topnienia 92°C; znanymi sposobami wytworzo¬ no takze maleinian, aspartanian i ortofosforan. Jed¬ nakze ze wzgledu na fakt, ze sama zasada jest dobrze rozpuszczalna w wodzie, wykazuje dobra stabilnosc i korzystne charakterystyki organolep¬ tyczne, mozna ja stosowac jako taka. W opisie po¬ wyzszym zasada oznaczona jest symbolem „BN 1041".Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania N-tlenku 2-izopropyloamino¬ pirymidyny o wzorze przedstawionym na rysunku i jego terapautycznie dopuszczalnych soli, znamien¬ ny tym, ze 2-izopropyloaminopirymidyne poddaje sie w temperaturze 15 do 45°C lagodnemu utlenia¬ niu przy uzyciu stechiometrycznej ilosci lub nie¬ wielkiego nadmiaru, do 10%, odpowiedniego srodka utleniajacego, takiego jak nadtlenek wodoru, kwas m-chloronadbenzoesowy, nadtlenojednosiarczan po¬ tasowy, kwas chromowy, kwas nadfosforowy, kwas nadoctowy, nadtlenoboran sodowy lub wodoronad- tlenek IIIrz.-butylu i ewentualnie przeprowadza sie w sól.135 808 0 l N /-NH- N CHo / -CH \ CH3 WZÓR 2GK 0338/1331/6 85 egz.Cena 100 zl PL PL PL PL