CZ298325B6 - Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy - Google Patents

Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy Download PDF

Info

Publication number
CZ298325B6
CZ298325B6 CZ20050477A CZ2005477A CZ298325B6 CZ 298325 B6 CZ298325 B6 CZ 298325B6 CZ 20050477 A CZ20050477 A CZ 20050477A CZ 2005477 A CZ2005477 A CZ 2005477A CZ 298325 B6 CZ298325 B6 CZ 298325B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
antibody
group
cells
blood
groups
Prior art date
Application number
CZ20050477A
Other languages
English (en)
Inventor
Kishimoto@Tadamitsu
Katsume@Asao
Saito@Hiroyuki
Original Assignee
Kishimoto@Tadamitsu
Ghugai Seiyaku Kabushiki Kaisha
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17300476&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ298325(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Kishimoto@Tadamitsu, Ghugai Seiyaku Kabushiki Kaisha filed Critical Kishimoto@Tadamitsu
Publication of CZ298325B6 publication Critical patent/CZ298325B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)

Abstract

Je popsáno použití protilátky proti receptoru interleukinu-6 pro výrobu farmaceutického prípravku pro prevenci nebo lécení onemocnení zpusobených produkcí interleukinu-6, kterým je plasmocytosa. Jakoprotilátka proti receptoru interleukinu-6 se používá monoklonální protilátka, PM-1 protilátka, chimérní protilátka, pretvorená lidská protilátka, respektive pretvorená lidská PM-1 protilátka.

Description

Oblast techniky
Tento vynález se týká použití protilátky proti receptoru interleukinu-6 pro výrobu farmaceutického přípravku pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobeného produkcí interleukinu-6, kterým je plasmocytosa. Tento přípravek obsahuje protilátku (anti-IL-R6-protilátku) na receptor interleukinu-6 (IL-6R).
Dosavadní stav techniky
IL-6 je vícefunkční cytokin, o kterém se předpokládá, že funguje v různých stupních imunologických reakcích, hematologických reakcích a reakcích v akutní fázi [Taga T. a spol.: Critical Reviews in Immunol. 11, 265 (1992).] a že hraje důležité role u násobného myelomu jako růstový faktor a také u takových onemocnění, která souvisejí s plasmocytosou, jako je revmatismus [Hirano T. a spol.: Eur. J. Immunol. 18, 1797 (1988) a Houssiau F. A. a spol.: Arth. Rheum. 31, 784 (1988).], u Castlemanova onemocnění [Yoshizaki K. a spol.: Blood 74, 1360 (1989), Brant S. J. a spol.: J. Clin. Invest. 86, 592 (1990).], proliferační nefritida mezangiálních buněk [OhtaK. a spol.: Clin. Nephrol. (Německo) 38, 185 (1992), Fukatsu A. a spol.: Lab. Invest. 65, 61 (1991) a Horii Y. a spol.: J. Immunol. 143, 3949 (1989).] a kachexie doprovázená růstem nádoru [Strassmann G. a spol.: J. Clin. Invest. 89, 1681 (1992).] atd.
U H-2 Ld hIL-6 transgenních myší (IL-6 Tgm), které genetickým inženýrstvím exprimují nadbytečné hladiny lidského IL-6 (hIL-6), byla pozorována IgGl plasmocytosa, proliferační nefritida mezangiálních buněk, anemie, trombocytopenie, objevení se protilátek atd. [Miyai T. a spol.: přednáška na 21. setkání japonské imunologické společnosti „Hematological change in H-2 Ld hlL-6 transgenic mice with age“, 1991.], což ukazuje na to, že IL-6 souvisí s různými nemocemi. Není však známo, že protilátka proti receptoru interleukinu-6 je účinná na onemocnění způsobená produkcí interleukinu.
Podstata vynálezu
Pro vyřešení shora uvedených problémů poskytuje předložený vynález použití protilátky proti receptoru interleukinu-6 pro výrobu farmaceutického přípravku pro prevenci nebo léčení plasmocytosy.
Jako protilátka proti receptoru interleukinu—6 se používá monoklonální protilátka, PM—1 protilátka, chimémí protilátka, přetvořená lidská protilátka, respektive přetvořená lidská PM-1 protilátka.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 je graf, který ukazuje změnu zvýšení tělesné hmotnosti zvířat v každé skupině.
Obrázek 2 je graf, který ukazuje změnu pozitivního poměru proteinu v moči v každé skupině. Tento pozitivní poměr byl nula u jiných skupin než skupiny 1 a 3.
Obrázek 3 je graf, který ukazuje změnu hladiny hemoglobinu v každé skupině.
Obrázek 4 je graf, který ukazuje změnu počtu červených krvinek v každé skupině.
Obrázek 5 je graf, který ukazuje změnu počtu destiček v každé skupině.
Obrázek 6 je graf, který ukazuje změnu počtu bílých krvinek v každé skupině.
- 1 CZ 298325 B6
Obrázek 7 je graf, který ukazuje změnu koncentrace IgGl v každé skupině.
Obrázek 8 je graf, který ukazuje změnu koncentrace lidského IL-6 ve skupině 1 až 5.
Obrázek 9 znamená výsledek sortování buněk technikou fluorescenční protilátky použitím kontrolní protilátky IgG a Gr-1 protilátky ve skupině 1 a 2.
Obrázek 10 znamená výsledek sortování buněk technikou fluorescenční protilátky použitím kontrolní protilátky IgG a Gr-1 protilátky ve skupině 6 a 7.
Obrázek lije graf ukazující hmotnost sleziny živočichů v každé skupině na konci pokusu.
Obrázek 12 je graf, který ukazuje změnu tělesné hmotnosti zvířat v každé skupině.
Obrázek 13 je graf, který ukazuje koncentraci triglyceridu v krvi myší 11. den pokusu.
Obrázek 14 je graf, který ukazuje koncentraci glukosy v krvi myší 15. den pokusu.
Obrázek 15 je graf, který ukazuje koncentraci ionizovaného vápníku v krvi myší 11. den pokusu.
Obrázek 16 je graf ukazující přežívání kontrolních myší a nádorem.
Obrázek 17 je graf ukazující tělesnou hmotnost myší 10. a 12. den po počátku pokusu.
Obrázek 18 je graf ukazující koncentraci ionizovaného vápníku v krvi myší 10. a 12. den po počátku pokusu.
Protilátka proti receptoru interleukinu-6, která se používá podle předloženého vynálezu, může být jakéhokoliv původu nebo typu (monoklonální, polyklonální), pokud může blokovat transdukci signálu 1L-6 a inhibovat biologickou aktivitu IL-6. S výhodou však znamená monoklonální protilátku odvozenou od savce. Tato protilátka blokuje transdukci signálu IL-6 a inhibuje biologickou aktivitu IL-6 inhibováním navázání IL-6 na IL-6R.
Živočišné druhy buněk pro produkci monoklonální protilátky mohou být od jakéhokoliv druhu živočicha, který patří mezi savce. Protilátkou může být lidská protilátka nebo protilátka odvozená od jiného živočicha než je člověk. Monoklonální protilátky, odvozené od jiného živočicha než je člověk, jsou s výhodou monoklonální protilátky odvozené od králíků nebo hlodavců, protože se snázeji připravují. Mezi vybrané hlodavce patří, ale bez omezení jenom na ně, myši, krysy, křečci atd.
Mezi protilátky, které jsou IL-6R protilátkami, patří například protilátka MR16-1 [Tamura T. a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci USA 90, 11924 (1993).], PM1 protilátka [Hirata Y. a spol.:
J. Immunol. 143, 2900 (1989).] atd.
Monoklonální protilátky se mohou připravovat v podstatě následujícími způsoby známými z oblasti techniky. Tak se mohou vyrábět použitím IL-6R jako imunizačního činidla, které se používá pro imunizaci konvenčním způsobem. Potom se získané imunocyty podrobí napojení buněk se známými rodičovskými buňkami konvenčním způsobem napojování buněk. Buňky, které produkují monoklonální protilátku, se vyhodnocují konvenčními způsoby vyhodnocování.
Podrobněji - monoklonální protilátky se připravují následujícím způsobem. Například se imunizační antigen může získat použitím genové sekvence lidského IL-6R, jak je uvedeno v evropské patentové přihlášce EP 325474. Sekvence genu lidského IL-6R se vloží do známého expresního vektorového systému pro transformaci vhodné hostitelské buňky. Potom se žádaný IL-6R protein vyčistí od hostitelských buněk nebo od supernatantu jejich kultury. Vyčištěný 1L-6R protein se pak použije jako imunizační antigen.
Imunizační antigen odvozený od myší se může získat použitím genové sekvence myšího 1L-6R, který byl popsán v japonském patentovém spisu bez průzkumu 3(1991)-155795 stejným způsobem, jako byl způsob použitý pro shora uvedenou genovou sekvenci lidského IL-6R.
-2CZ 298325 B6
Jako IL-6R se vedle těch, které se exprimují na buněčné membráně, mohou jako antigen použít ty (sIL-6R), které jsou možná odpojeny od buněčné membrány. sIL-6R sestává hlavně z extracelulámí domény IL-6R, která je navázána na buněčnou membránu, a to ho odlišuje od IL-6R navázaného na membránu v tom, že mu chybí transmembránová doména nebo jak transmembránová membrána tak intracelulámí doména.
Savci imunizovaní imunizačním antigenem nejsou nijak zvlášť omezeni, ale jsou s výhodou vybráni tak, že se vezme v úvahu jejich slučitelnost s rodičovskými buňkami používanými pro napojení buněk. Obvykle se používají myši, krysy, křečci, králíci atd.
Imunizace živočichů imunizačním antigenem se může provádět známým způsobem z oblasti techniky. Obecný způsob například zahrnuje intraperitoneální nebo subkutánní podání imunizačního antigenu savci. Imunizační činidlo je zředěno nebo suspendováno v PBS (fosforečnanem pufrovaný solný roztok), fyziologickém solném roztoku atd. na vhodný objem a společně, jestliže je žádoucí, s vhodným množstvím adjuvans, jako je Freundovo kompletní adjuvans, se emulguje. Potom se tato emulze podává několikrát denně savcům každých 4 až 21 dnů. Pro imunizaci se může s imunizačním antigenem použít také vhodný nosič.
Po imunizaci živočicha, jak shora uvedeno, a po potvrzení zvýšených hladin žádané protilátky v séru se od savce odeberou imunocyty pro napojení buněk. Zvláště výhodnými imunocyty jsou buňky sleziny.
Výhodné myelomové buňky, použité podle předloženého vynálezu jako partnerské rodičovské buňky, které jsou napojeny se shora uvedenými imunocyty, zahrnují různé známé buněčné linie, například P3 (P2x63Ag8.653) [J. Immunol. 123, 1548 (1978).], p3-Ul [Current Topics in Micro-biology and Immunology 81, 1 (1978).], NS-1 [Eur. J. Immunol. 6, 511 (1976).], MPC-11 [Cell 8, 405 (1976).], SP2/0 [Nátuře 276, 269 (1978).], FO [J. Immunol. Meth. 35, 1 (1980).], S194 [J. Exp. Med. 148, 313 (1978).] a R210 rNature 277, 131 (1979).] atd.
Napojení buněk imunocytů s myelomovými buňkami může být prováděno v podstatě podle způsobů známých z oblasti techniky, například postupem podle Milsteina a spol. [Milstein a spol.: Methods Enzymol. 73, 3 (1981).] atd.
Podrobněji - shora uvedené napojení buněk se provádí v konvenční živné kultuře v přítomnosti například činidla urychlujícího napojení buněk. Činidlem urychlujícím napojení může být například polyethylenglykol (PEG) nebo Sendai virus (HVJ) atd. Pro zvýšení účinnosti napojení buněk, jestliže je to žádoucí, se může přímo přidávat adjuvans, jako je dimethylsulfoxid atd.
Použité poměry imunocytů a myelomových buněk jsou s výhodou 1 až 10-násobek imunocytů k myelomovým buňkám. Kapalným kultivačním médiem použitým pro shora uvedené napojení buněk může být například RPMI 1640 kapalné médium nebo kapalné médium MEM, která jsou nejvhodnější pro růst myelomové buněčné linie, a obvyklé kultivační živné půdy používané pro kultivaci buněk. Společně s médiem se mohou používat také doplňkové sérové roztoky, jako je plodové telecí sérum (FCS) atd.
Žádané napojené buňky (hybridomy) se mohou vytvořit řádným promícháním daných množství shora uvedených imunocytů a myelomových buněk ve shora popsané živné půdě, přidáním PEG roztoku předem zahřátého na 37 °C, například PEG s průměrnou molekulovou hmotností 1000 až 6000, na koncentraci 30 až 60 % (hmotn. k obj.). Po postupném přidávání vhodného kultivačního média a odstřeďování, aby se odstranil supematant, se mohou odstranit činidla pro napojování buněk atd., která jsou nežádoucí pro růst hybridomů.
Vhodné hybridomy se vyberou kultivací v konvenčním selektivním kultivačním médiu, jako je například HAT kapalné kultivační médium (kapalné kultivační médium obsahující hypoxanthin, aminopterin a thymidin). Kultivace v HAT médiu pokračuje po takovou dobu, obvykle několik
-3 CZ 298325 B6 dnů až několik týdnů, která je dostatečná pro smrt buněk jiných než jsou žádané hybridomy (nenapojených buněk). Potom se provádí normální omezené ředění a hybridomy, které produkují žádanou protilátku, se analyzují a monoklonují.
Hybridom, který produkuje monoklonální protilátky a který se připraví podle tohoto způsobu, se může kultivovat v konvenčním kapalném médiu. Může se také umístit do kapalného dusíku pro dlouhodobé skladování.
Aby se zhybridomu získala monoklonální protilátka, používají se takové způsoby, při nichž se hybridom kultivuje podle konvenčního způsobu, aby se získal supernatant z kultivace. Nebo se použije jiný způsob, přičemž se hybridom implantuje slučitelnému savci, nechá se růst a získá se protilátka jako kapalina z ascitů apod. První způsob je vhodný pro získání protilátky o vysoké čistotě, zatímco pozdější způsob je vhodný pro masovou produkci protilátky.
Monoklonální protilátky, získané podle shora uvedených způsobů, mohou pak být vyčištěny konvenčními způsoby čištění, jako je vysolení, gelová filtrace, afinitní chromatografie nebo podobné.
Schopnost monoklonální protilátky, vyrobené tímto způsobem, rozpoznávat antiogen s vysokou afinitou a vysokou přesností se může potvrdit konvenčními imunologickými způsoby, jako je radioimunoanalýza, enzymová imunoanalýza (EIA, ELISA), technika fluorescenční protilátky (imunofluorescenční analýza) atd.
Monoklonální protilátka, použitá podle předloženého vynálezu, není omezena na monoklonální protilátku produkovanou hybridomy. Může jí být taková protilátka, která byla uměle upravena pro účely snížení heteroantigeničnosti na člověka. Například se může použít chimémí protilátka, která obsahuje proměnné oblasti myší monoklonální protilátky a konstantní oblasti lidské protilátky. Taková chimémí protilátka se může vyrobit známým způsobem výroby chimémích protilátek, zvláště způsobem genetického inženýrství.
V předloženém vynálezu se může používat také přetvářená lidská protilátka. To je protilátka, v níž oblasti určující komplementaritu lidské protilátky byly nahrazeny oblastmi určujícími komplementaritu savčí protilátky jiné než lidské, např. myší protilátky. Obecný způsob genetického inženýrství je znám z oblasti techniky. Použitím známého způsobu se může získat přetvořená lidská protilátka, která je užitečná pro předložený vynález.
Jestliže je to nutné, mohou být aminokyseliny základních oblastí (FR) proměnné oblasti protilátky substituovány tak, že oblast určující doplňkovost rekonstituované lidské protilátky může vytvořit příslušné vazebné místo antigenu [Sáto a spol.: Cancer Res. 53, 1 (1993).]. Výhodným příkladem takové přetvařované lidské protilátky je humanizovaná PM-1 (hPM-1) protilátka (viz mezinárodní patentová přihláška WO 92/19759).
Geny, které kódují fragmenty protilátky, jak je Fab nebo Fv, jednoduchý řetězec Fv (scFv), přičemž H a L řetězce Fv jsou spojeny vhodným linkerem, se mohou zkonstruovat a exprimovat ve vhodných hostitelských buňkách a mohou se použít pro shora uvedený účel, pokud se tyto fragmenty vážou na antigen a inhibují aktivitu IL-6 [viz například Bird a spol.: Tibtech 9, 132 (1991) a Huston a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85, 5879 (1988).]. Dále se shora uvedená přetvořená V oblast protilátky může použít pro Fv H řetězce a L řetězce a získat se tak scFv.
Farmaceutické přípravky pro předcházení nebo léčení onemocnění způsobených produkcí IL-6, které mají jako účinnou složku protilátku receptorú IL-6 podle předloženého vynálezu, se mohou používat v předloženém vynálezu, pokud blokují přenos signálu IL-6 a pokud jsou účinné pro onemocnění způsobená produkcí IL-6.
Farmaceutické přípravky pro léčení nebo předcházení onemocnění způsobených produkcí IL-6 jsou s výhodou podávány parenterálně, například intravenozní, intramuskulámí, intraperitoneální
-4CZ 298325 B6 nebo subkutánní injekcí, atd., jak systémově tak místně. Mohou existovat ve formě farmaceutického přípravku nebo sestavy společně s alespoň jedním farmaceutickým nosičem nebo ředidlem.
I když dávkování farmaceutických přípravků podle předloženého vynálezu závisí na stavu pacientova onemocnění, na věku pacienta a na způsobu podávání, je nutné vybrat vhodné množství. Jako příklad lze uvést množství v rozmezí od 1 do 1000 mg/pacienta rozdělené na čtyři dávky. Mohou se podávat také v množství 1 až 10 mg/kg/týden. Farmaceutický přípravek podle předloženého vynálezu pro prevenci nebo léčení však není shora uvedeným dávkováním omezen.
Farmaceutický přípravek podle předloženého vynálezu se může připravovat podle konvenčního způsobu. Například parenterální přípravky se mohou vyrobit rozpuštěním vyčištěné IL-6R protilátky v rozpouštědle, jako je např. fyziologický solný roztok nebo pufrovací roztok atd., k němuž se přidá antiadsorpční činidlo, např. Tween 80, želatina, lidský sérový albumin (HSA) atd. Směs se může před použitím rekonstituovat rozpuštěním, takže pak existuje v lyofilizované formě. Excipienty (ředidla), které se používají pro lyofilizaci, zahrnují například cukerný alkohol, jako je manitol nebo glukosa, nebo sacharidy.
Vynález bude nyní vysvětlen podrobněji pomocí následujících referenčních příkladů a příkladů, které nesmějí být zkonstruovány tak, aby omezovaly rozsah předloženého vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Referenční příklad 1
Konstrukce B6Ld-IL-6 transgenních myší
Sphl-Xhol fragment (Ld-IL-6) o 3 300 pn (párech nukleotidů) s lidskou IL-6 cDNA navázanou na H-2Ld promotor [Suematsu a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 86, 7547 (1989).] se injektuje do pronuklea oplodněného vajíčka C57BL/6J (B6) myší (Nihon Clea) mikroinjekcí podle způsobu popsaného Yamamurou a spol.: J. Biochem. 96, 357 (1984).
Oplodněné vajíčko se transplantuje do vejcovodu ICR myších samiček, které byly podrobeny pseudotěhotenskému ošetření. Potom se u narozených myší vyhodnocuje integrace hIL-6 cDNA Southemovou blotovou analýzou koncové DNA rozštěpené působením EcoRI použitím sondy 32P-označeného Taql-Banll fragmentu lidské IL-6 cDNA. Zvířata, která byla testována jako pozitivní na integraci, byla rozmnožována s B6 myšmi, aby se zajistila linie myší se stejným genotypem.
Referenční příklad 2
Příprava krysí anti-IL-6R protilátky
CHO buňky produkující myší rozpustný IL-6R byly připraveny jak dříve uvedli Saito a spol.: J. Immunol. 147, 168 (1991). Buňky byly inkubovány v aMEM obsahujícím 5 % hmotn. plodového hovězího séra (FBS) při 37 °C ve zvlhčeném vzduchu obsahujícím 5 % hmotn. oxidu uhličitého. Upravené médium bylo izolováno a bylo použito jako přípravek myšího sIL-6R. Koncentrace myšího sIL-6R v médiu byla stanovena sendvičovým ELISA testem použitím monoklonální anti-myší IL-6 protilátky RS15 [Saito a spol.: J. Immunol. 147, 168 (1991).] a králičí polyklonální anti-myší IL-6R protilátky.
Myší sIL-6R byl vyčištěn od myšího sIL-6R přípravku afinitní kolonou, na které byla adsorbována monoklonální anti-myší IL-6R protilátka (RS12). Padesát mikrogramů vyčištěného myšího sIL-6R v úplném Freundově adjuvans bylo subkutánní injekcí podáno kryse Wistar. Potom byly zvířeti podávány čtyřikrát subkutánní injekce po 50 pg myšího sIL-6R v neúplném
-5CZ 298325 B6
Freundově adjuvans jednou týdně od doby po uplynutí dvou týdnů. Jeden týden po první další injekci bylo krysám intravenosně podáno 50 pg myšího SÍL-6R ve 100 μΐ fosforečnanem pufrovaného solného roztoku (PBS).
Po třech dnech byly krysám odebrány sleziny. Krysí slezinové buňky (splenocyty) byly podrobeny napojování s myšími p3Ul myelomovými buňkami v poměru 10:1. Buňky byly inkubovány při 37 °C přes noc ve 100 μΐ RPMI 1640 média obsahujícího 10 % hmotn. FBS v jamkách desek o 96 jamkách (Falcon 3075). Potom k nim bylo přidáno 100 μΐ média obsahujícího hypoxanthin/aminopterin/thymidin (HAT). Polovina média byla denně nahrazována HAT médiem po dobu 4 dnů.
O sedm dnů později se hybridom, který produkuje anti-myší sIL-6R, vybere testem navázání myšího SÍL-6R (ELISA). Ve stručnosti - 100 μΐ supematantu kultury hybridomu se inkubuje na desce předem potažené 1 pg/ml králičí polyklonální anti-krysí IgG protilátky. Deska se promyje a potom se inkubuje se 100 pg/ml myšího sIL-6R. Po promytí se přidá 2 pg/ml králičí polyklonální anti-myší IL-6R protilátky, deska se promyje a potom se inkubuje s kozí polyklonální anti-králičí IgG protilátkou (Tágo) konjugovanou s alkalickou fosfatasou 60 minut.
A konečně se po promytí deska inkubuje se substrátem alkalické fosfatasy (Sigma 104, p-nitrofenylfosfát) a odečte se při 405 nm čtečkou desek (Toso). Hybridom, který rozpoznává myší sIL-6R, byl dvakrát klonován omezujícím zřeďovacím způsobem. Pro přípravu ascitů bylo BALB/c nu/nu myši injekčně dvakrát podáno 0,5 ml přistanu a o tři dny později intraperitoneální injekcí 3.106 buněk připravených hybridomových buněk. O 10 až 20 dnů později byly ascity izolovány. Monoklonální protilátka MR16-1 byla vyčištěna použitím kolony s proteinem G (Oncogene Science).
Neutralizující účinek na IL-6 protilátku produkovanou MR16-1 byl testován inkorporací 3H-thymidinu MH60.BSF2 buňkami [Matsuda a spol.: Eur. J. Immunol. 18, 951 (1988).]. MH60.BSF2 buňky byly rozděleny na jednotlivé podíly v množství 1 TO4 buněk/200 μΙ/jamku na desku o 96 jamkách. Potom byl do jamek přidán myší IL-6 (10 pg/ml) a MR16-1 nebo RS12 protilátka. Následovala inkubace buněk 44 h při 37 °C v 5 % hmotn. CO2. Následně byl do každé buňky přidán 3H-thymidin (1 mCi/jamku) a po 4 h byl proveden test na inkorporaci 3H-thymidinu.
Příklad 1
Třicet jedna transgenní myš s lidskou IL-6 cDNA byla získána z B6 IL-6 transgenní myši (B6 IL-6 Tgm) získané v referenčním příkladu 1. Bylo použito 11 normálních myší ze stejného hnízda, které neměly žádnou lidskou IL-6 cDNA (oboje jsou samci ve stáří 4 týdnů). B6 IL-6 Tgm byly rozděleny do 5 skupin (skupina 1 až 5) po šesti zvířatech ve skupině, pouze skupina 1 sestávala ze 7 zvířat. Normální myši byly rozděleny do skupiny 6 s 5 zvířaty a skupiny 7 se 6 zvířaty.
Schéma podávání bylo následující:
Skupina 1 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů (první den pokusu) byla intravenozní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána krysí IgGÍ protilátka (KH5) (kontrolní protilátka), ve stáří 5 týdnů (8. den pokusu) a později bylo subkutánní injekcí podáváno 100 pg KH5 protilátky dvakrát každý týden (každé 3 až 4 dny).
Skupina 2 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů byla intravenozní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána MR16-1 protilátka, ve stáří 5 týdnů a později bylo subkutánní injekcí podáváno 100 pg MR16-1 dvakrát každý týden.
-6CZ 298325 B6
Skupina 3 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů byl intravenozní injekcí podán fosforečnanem pufrovaný solný roztok, ve stáří 5 týdnů a později bylo subkutánní injekcí podáváno 100 pg MR16-1 dvakrát každý týden.
Skupina 4 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů byla intravenozní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána MR16-1 protilátka, ve stáří 5 týdnů a později bylo subkutánní injekcí podáváno 400 pg MR16-1 jednou za 2 týdny.
Skupina 5 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů byla intravenozní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána MR16-1, ve stáří 5 týdnů a později byl subkutánní injekcí podáván 1 mg MR16-1 jednou za dva týdny.
Skupina 6 (B6 normální myši): Ve stáří 4 týdnů byla intravenozní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána kontrolní protilátka KH5 a ve stáří 5 týdnů a později bylo subkutánní injekcí podáváno 100 pg KH5 dvakrát každý týden.
Skupina 7 (B6 normální myši): Ve stáří 4 týdnů byla intravenozní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána MR16-1 a ve stáří 5 týdnů a později byla subkutánní injekcí podávána v dávce 100 mg MR16-1 dvakrát týdně.
Způsoby testů, které se zde používají, jsou následující:
Měření tělesné hmotnosti a stanovení proteinů v moči: Měření tělesné hmotnosti a stanovení proteinů v moči papírkem pro testování proteinů v moči (Combistics Sankyo) se provádí každý týden. Hodnoty proteinu v moči tři plus (100 až 300 mg/dl) nebo vyšší byly vzaty jako pozitivní.
Odebírání krve: Krev byla odebírána z retroorbitální dutiny každý druhý týden od počátku pokusu (stáří 4 týdny). Celková krev byla z dolní duté žíly odebrána na konci pokusu (stáří 18 týdnů).
Počet krvinek: Použitím mikropočítače buněk (Sysmex F-800) byl stanoven počet bílých krvinek (WBC), červených krvinek (RBC) a destiček (PLT) a také množství hemoglobinu (HGB). Na konci pokusu byly pro některé skupiny (skupina 1, 2, 6 a 7) provedeny krevní nátěry a byl vypočten diferenční počet bílých krvinek (v procentech).
Stanovení koncentrace IgGl v krvi: Koncentrace IgGl byla změřena testem ELISA specifickým pro myší IgGl s použitím myelomového proteinu jako standardu.
Stanovení koncentrace IL-6 v krvi: Koncentrace IL-6 byla měřena ELISA testem specifickým pro hIL-6.
Stanovení titru anti-krysí IgG protilátky (skupina IgGl) v krvi: Jelikož podávaná protilátka je pro myš heterogenní protilátka, produkce protilátky na danou protilátku byla měřena testem ELISA s použitím krysího IgG jako antigenu. Výsledky byly vyjádřeny jako jednotky s použitím IL-6 TgM séra dospělého zvířete, kterému byla podána krysí protilátka, jako standardu.
Stanovení chemických parametrů krve: Použitím autoanalyzátoru (Cobas, Fara II, Roche) byly na konci pokusu u séra myší ze skupiny 1, 2, 3, 6 a 7 měřeny: celkový protein (TP), albumin (Alb), glukosa (Glu), triglycerid (TG), kreatinin (CRE), dusík močoviny v krvi (BUN), vápník (Ca), alkalická fosfatasa (ALP), glutamin-pyruvát-transaminasa (GOT) a glutamát-pyruvát-transaminasa (GPT).
FACS analýza kostní dřeně a buněk sleziny: Na konci pokusu byla kostní dřeň a buňky sleziny, které byly získány od jednoho zvířete z každé skupiny 1, 2, 6 a 7, analyzovány na buněčné
-7CZ 298325 B6 povrchové antigeny zařízením FACScan (Beckton Dickensian). Použité protilátky jsou protilátky (Pharmingen) směrované na Gr-1 (buňky kostní dřeně), CD4, CD8 a B220 (splenocyty).
Pitva: Na konci pokusu byla provedena pitva. Byla změřena hmotnost sleziny a hlavní orgány byly vizuálně prohlédnuty.
Tělesné hmotnosti: Změny v tělesných hmotnostech každé skupiny jsou uvedeny na obr. 1. Ve skupinách 1 a 3 existuje zvýšení hmotností. Žádný rozdíl nebyl pozorován ve změnách tělesných hmotností u dalších skupin.
Protein v moči: Ve skupině 1 byla zvířata pozitivní na protein v moči zřetelná od stáří 13 týdnů (obr. 2), čtyři (dvě ve stáří 16 týdnů a 2 ve stáří 17 týdnů) ze 7 zvířat zemřela v době pitvy. Žádné úmrtní však nebylo pozorováno u dalších skupin. Také ve skupině 3 byla dvě ze šesti zvířat pozitivní na protein v moči na konci pokusu, ale žádné jiné zvíře v ostatních skupinách nebylo testováno jako pozitivní.
Hematologická zjištění: Ve skupině 1 bylo pozorováno snížení hemoglobinu (obr. 3) a počet RBC (obr. 4); stupeň se zhoršoval se stářím. Počet destiček (obr. 5) vykázal přechodné zvýšení, ale pak rychle poklesl. Ve skupině 3 byla pozorována podobná tendence, i když byla trochu zpožděna proti skupině 1. Na druhou stranu však neexistovalo ani snížení množství hemoglobinu a RBC ani zvýšení počtu destiček a následné snížení ve kterékoliv ze skupin 2, 4 a 5. Při pozorování diferenčního počtu krevních buněk krevních nátěrů bylo u skupiny 1 zjištěno zvýšení neutrofilů a monocytů a odpovídající snížení v lymfocytové frakci, ale skupina 2 vykazovala normální hodnoty (tabulka 1). Rovněž neexistoval významný rozdíl mezi skupinami 6 a 7.
Tabulka 1
skupina juvenilní neutrofily maturované neutrofily eosinofilj baso- mono- lymfo- jiné
r fily cyty cyty
1 střed 2,00 31,33 1,33 0,00 9,33 56,00 0,00
SD* 2,00 3,79 0,58 0,00 4,93 9,54 0,00
2 střed 0,33 13,83 2,33 0,00 2,00 81,00 0,50
SD* 0,52 4,17 1,03 0,00 2,28 4,82 0,55
t-test 0,0676 0,000 0,0557 0,0129 0,006 0,0676
3 střed 0,30 14,10 2,80 0,00 1,30 81,40 0,10
SD* 0,45 4,60 0,91 0,00 1,04 4,08 0,22
7 střed 0,42 10,67 2,42 0,08 0,58 85,75 0,08
SD* 0,38 2,32 0,97 0,20 0,49 1,92 0,20
t-test 0,6484 0,1406 0,5101 0,3816 0,1644 0,0427 0,8992
SD znamená standardní odchylka
-8CZ 298325 B6
Koncentrace IgGl v krvi: Bylo ukázáno, že koncentrace IgGl v krvi ve skupině 1 vykazuje významné zvýšení okamžitě po počátku pokusu, nakonec dosahuje asi stonásobku koncentrace u normálních myší (obr. 7). Ve skupině 3 bylo zvýšení koncentrace IgGl zaznamenáno poněkud později než u skupiny 1. Naproti tomu u skupin 2, 4 a 5 nedošlo k žádnému zvýšení koncentrace IgGl, která zůstala na téměř stejné úrovni během pokusu. Na druhé straně u normálních myší nebyla pozorována žádná změna související s podáváním protilátky.
Koncentrace hIL-6 v krvi: Koncentrace hIL-6 v krvi (obr. 8) se měnila stejným způsobem jako ulgGl, vykazuje tedy zvýšení u skupin 1 a 3, zatímco zůstává na téměř stejné úrovni během pokusu u ostatních skupin.
Titr anti-krysí IgG protilátky v krvi: Protilátka proti anti-krysímu IgG byla detegována u skupiny 1, 3 a 6 (tabulka 2). Všechna zvířata ve skupině 1 a 3 vykazují vysoký titr, zatímco ve skupině 6 pouze 2 z 5 zvířat vykazovaly zvýšení titru. Na druhé straně však nebylo pozorováno žádné významné zvýšení u ostatních skupin.
Tabulka 2
Myší proti-kiysí protilátka (jednotky/ml)
sku- 6 věk 8 (v týdnech)
pina 4 10 12 14 16 18
1 0,15 0,78 1,69 7,41 100< 100< 100< 100<
2 0,22 0,34 0,45 0,38 0,43 0,50 0,39 0,30
3 0,14 0,61 0,69 0,67 2,27 4,74 14,25 41,24
4 ND ND ND ND ND ND ND 0,57
5 ND ND ND ND ND ND ND 0,28
6 ND ND ND ND ND ND ND 3,55
7 ND ND ND ND ND ND ND 0,20
ND znamená nestanoveno
Stanovení chemických parametrů krve: U skupin 1 a 3 nedošlo ke zvýšení TP a snížení Alb. TG a ALP byly sníženy u skupiny 1 a 3, u skupiny 1 byla dokonce snížena Glu. U skupiny 2 nebyly žádné takové změny pozorovány.
-9CZ 298325 B6
Tabulka 3*
sku- TP Alb (9/ dl) Glu (D>9/ dl) TG (»9/ dl) CRE (mg/ dl) BUN (mg/ dl) ca (mg/ dl) ALP (j·/ 1) GOT (mj./ 1) GPT ( j·/ 1)
pi- na (9/ dl)
1 14 2,41 77,4 20,7 0,4 34,8 8,6 27,67 33,33 6
1,33 0,3 14,5 8,33 0,2 23,7 0,35 5,69 5,86 1,73
2 5,68 3,31 199 62,3 0,51 28,3 8,67 156,5 37,5 5,6
0,3 0,2 29,5 10,9 0,22 4,08 0,58 14,31 8,22 1,14
3 12,6 2,92 253 41 0,61 26,4 9,82 54,17 27,33 6,83
2,85 0,64 60,2 16,3 0,17 6,25 0,83 42,62 5,65 1,72
6 5,9 3,84 289 105 0,87 27,9 8,9 181 33,2 9,6
0,65 0,46 98,9 28,8 0,22 6,32 0,74 21,24 8,9 5,81
7 5,86 3,63 300 94 0,75 26,8 8,98 196,83 34,5 6,5
0,53 0,34 25,5 20 0,2 5,26 0,82 21,68 4,89 3,08
Číslice na první řádce u dané skupiny znamenají střední hodnotu, číslice na druhé řádce pak znamenají střední odchylku.
FACS analýza: Analýza buněk kostní dřeně (LB) a analýza splenocytů (sp) skupin 1, 2, 6 a 7 odhalila, že existuje extrémní zvýšení počtu Gr-1 pozitivních buněk, které jsou granulocytovými prekurzorovými buňkami, v BM buňkách ve skupině 1 (obr. 9 a obr. 10), ale ve skupině 2 mají podobné hodnoty jako normální myši. Mezi skupinou 6 a 7 nebyl v podstatě žádný rozdíl. Pokud ίο jde o poměr CD4-, CD8- a B220-pozitivních buněk v sp, nebyly mezi skupinami žádné rozdíly až na to, že u skupiny 1 byl počet CD8- a B200-pozitivních buněk snížen díky zvýšení plazmových buněk (tabulka 4).
Tabulka 4
Analýza povrchového antigenu splenocytů
skupina CD4* CD8+ B220+
1 13,2 % 5,4 % 23,1 %
2 18,5 % 14,3 % 50,0 %
3 19,9 % 15,0 % 53,1 %
4 13,9 % 10,6 % 57<3 %
-10CZ 298325 B6
Pitevní nálezy: U skupiny 1 a 3 bylo viditelné nabobtnání systémových lymfatických žláz a zvětšení sleziny (obr. 11), stejně jako odbarvení ledvin. Částečně bylo zaznamenáno také zvětšení jater. Tyto změny nebyly pozorovány u ostatních skupin. Vyjma nepatrného zvětšení sleziny u skupiny 2, 4 a 5, neexistovaly pozoruhodné změny při srovnání s normálními zvířaty.
Nyní budou vysvětleny výsledky tohoto pokusu. U IL-6 Tgm (skupina 1), které byla podávána kontrolní protilátka, byly pozorovány rozmanité příznaky, jako je IgGl plasmocytosa, anemie, trombocytosa, trombocytopenie, renální selhání, abnormální chemické parametry krve atd. Bylo však zřejmé, že tyto příznaky mohou být úplně potlačeny MR16-1.
Je známo, že IL-6 způsobuje, že B buňky se nakonec diferencují na plazmové buňky [Maraguchi A. a spol.: J. Exp. Med. 167, 332 (1988).]. V případě IL-6 Tgm produkce IL-6 způsobila zvýšení koncentrace IgGl v krvi a zvýšení koncentrace TP a snížení koncentrace Alb v séru. Tyto skutečnosti ukazují nástup IgGl plazmocyty.
Pozoruhodné zvětšení systémových lymfatických tkání, jako jsou lymfatické žlázy a slezina, by bylo zodpovědné za zvýšení tělesné hmotnosti přes zhoršení obecného stavu způsobeného progresí onemocnění ve skupinách 1 a 3. MR16-1 nejen že potlačuje tyto stavy, ale potlačuje také zvýšení koncentrace IL-6 v krvi. Bylo tedy potvrzeno, že zvýšení koncentrace IL-6 v krvi se stárnutím, jak bylo pozorováno u IL-6 Tgm, přímo souvisí s progresí plasmocytosy. Předpokládá se proto, že proliferované plazmové buňky samy aktivně produkují IL-6, který dále zvyšuje růst plazmových buněk, což vede k tomu, že IL-6 je produkován ve velkých množstvích.
Jsou známy vlivy IL-6 na hemocyty, vliv na zvýšení množství destiček [Ishibashi T. a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 86, 5953 (1989) a Ishibisahi T. a spol.: Blood 74, 1241 (1989).] a vliv na indukci makrocytické anemie [Hawley R. G. a spol.: J. Exp. Med. 176, 1149 (1992).]. Vedle shora uvedených byla u IL-6 Tgm pozorována trombocytopenie související se stárnutím, o níž se předpokládá, že jde o autoimunitu související s aktivací polyklonálních B buněk [Miyai, Tatsui a spol.: viz shora.].
MR16-1 úplně inhibuje přímé a nepřímé vlivy IL-6 na hemocyty, ale neovlivňuje počty krvinek normálních myší. Bylo tedy potvrzeno, že protilátka anti IL-6 receptorů vůbec neovlivňuje hematocyty. U IL-6 Tgm bylo pozorováno zvýšení poměru Gr-l-pozitivních buněk, které jsou považovány za granulocytické prekurzorové buňky, a poměru periferních neutrofilů. I když je známo, že IL-6 zvyšuje počet neutrofilů, podrobný mechanizmus nebyl dosud objasněn. V této studii bylo zjištěno, že tento účinek je jev, který se odehrává na úrovni prekurzorových buněk v kostní dřeni. Při této studii bylo také zjištěno, že MR16-1 úplně potlačuje vlivy IL-6, ale neovlivňuje hladinu neutrofilů v kostní dřeni a periferní krvi.
MR16-1 potlačuje také nástup nefritidy pozorované u IL-6 Tgm. Bylo popsáno, že IL-6 úzce souvisí s nástupem mezangiální proliferační nefritidy jako autokrinní faktor růstu mezangiálních buněk. 1 když bylo potvrzeno, že nefritida u IL-6 Tgm je mezangiální proliferační nefritida, nemůže být popřeno zahrnutí imunního systému zvýšeného IL-6 [Katsume, Asao a spol.: příspěvek na 21. setkání Japonské imunologické společnosti: „Characterization of SC1D x (Scid x H2Ld hIL-6 transgenní myš)“, 1991.]. Jelikož neexistovalo potlačení proteinu v moči a úmrtí, bylo jasné, že protilátka anti-IL-6 receptorů je účinná pro potlačování nástupu nefritidy způsobené produkcí IL-6.
U IL-6 Tgm bylo pozorováno významné snížení koncentrací Glu a Tg v séru, což jsou příznaky kachexie. V předloženém pokusu bylo zjištěno, že podání MR16-1 protilátky je účinné pro zlepšení kachexie, protože hodnoty Glu a Tg byly u skupiny 1 sníženy, zatímco u skupiny 2 se tyto hodnoty vrátily téměř na stejnou hodnotu jako u normálních myší.
Jelikož MR16-1 je krysí IgGl, heteroprotein pro myši, lze snadno předvídat, že mohou být produkovány protilátky proti podávané protilátce, což by způsobilo, že protilátky budou neúčinné.
-11 CZ 298325 B6
Při pokusu indukovat imunologickou snášenlivost vystavením velkému množství antigenů při první senzibilizaci předloženého pokusu byly připraveny skupiny, kterým bylo při prvním podání intravenosně podáno 2 mg/myš protilátky. Ze skupin, jimž byla podána MR16-1, ty skupiny, které byly ošetřeny uvedeným způsobem (skupina 1, 4 a 5) neposkytly žádnou detegovatelnou anti-krysí IgG protilátku bez ohledu na interval a dávku podávání, což vede k úplnému potlačení nástupu onemocnění. Skupina 3 však popřípadě vykázala stejné příznaky jako skupina 1, která je skupinou podávání kontrolní protilátky, i když tato skupina vykázala zvýšení anti-krysí IgG protilátky a nástup onemocnění byl nepatrně zpožděn proti skupině 1.
Předpokládá se tedy, že léčení bylo účinné pro indukování imunologické snášenlivosti, ale anti-krysí IgG protilátka byla detegována také ve všech zvířatech skupiny 1 a 2 z 5 zvířat skupiny 6, kterým byla v tomto schématu dána kontrolní protilátka. Jelikož progrese plasmocytosy indukuje aktivaci polyklonálních B buněk v IL-6 Tgm, nemůže být z toho vyvozeno, že anti-krysí IgG protilátka detegovaná ve skupině 1 a 3 je protilátka specifická pro danou protilátku. Bylo však usouzeno, že indukuje efekt imunologické snášenlivosti vystavením velkému množství antigenů při první senzibilizaci u skupin 2, 4 a 5 kombinovaný s inhibujícím účinkem produkce specifické protilátky díky podání velkého množství MR16-1 slouží pro indukování úplné tolerance.
V předloženém pokusu bylo objasněno, že anti-IL-6 receptorová protilátka je mimořádně účinná na rozmanitá onemocnění způsobená produkcí IL-6 bez ovlivnění normální hladiny.
Příklad 2
Byl zkoumán účinek protilátky myšího IL-6 receptorů na model kachexie indukované tračníkem
26. Používané myší byly myší samečci BALB/c stáří 6 týdnů, jimž byl subkutánně implantován 2mm blok tračníku 26 do bodu myši první den pokusu. Myší protilátka MR16-1 IL-6 receptorů (víz referenční příklad 2) byla intravenosně podána v dávce 2 mg/myš bezprostředně před implantací tračníku 26 první den pokusu. Potom byla subkutánně podána dávka 0,5 mg/myš 7.,
11., 14. a 18. den (n=7). Již v předchozím pokusu bylo potvrzeno, že neutralizující protilátky proti heteroproteinu se nesnadno objevují v tomto způsobu. Kontrolní skupině nesoucí nádor byla podle stejného schématu podávána krysí IgGl kontrolní protilátka (n=7). Skupina, které byl podáván PBS, byla ustavena jako kontrolní skupina bez nádoru (n=7). Po počátku pokusu byla tělesná hmotnost měřena každý den. 11. a 15. den po počátku pokusu byly měřeny chemické parametry krve a koncentrace ionizovaného vápníku.
Existovali pozoruhodné snížení tělesné hmotnosti u skupiny s nádorem 10. den po srovnání se skupinou bez nádoru, zatímco u skupiny, které byla podána MR16-1 (obr. 12), byl ukázán částečný účinek potlačení snížení tělesné hmotnosti. Koncentrace triglyceridu v krvi 11. den a koncentrace glukosy v krvi 15. den jsou uvedeny na obr. 13 a 14. Tyto hodnoty byly pozoruhodně sníženy u kontrolní skupiny nesoucí nádor při srovnání s kontrolní skupinou bez nádoru, zatímco u skupiny, které byla podána MR16-1, bylo pozorováno potlačení tendence glukosy a významné potlačení triglyceridu.
Koncentrace ionizovaného vápníku v krvi 11. den byla pozoruhodně zvýšena u kontrolní skupiny s nádorem při srovnání s kontrolní skupinou bez nádoru, zatímco u skupiny, které byla podána MR-16, byl pozorován významný potlačující účinek (obr. 15).
Pokus potvrdit účinek na dobu přežití byl proveden podle podobného časového schématu jak shora uvedeno (n=10). Výsledkem bylo, že vliv na dobu přežití byl pozorován u skupiny, které byla podána MR16-1 (obr. 16).
- 12CZ 298325 B6
Příklad 3
Byl zkoumán účinek protilátky IL-6 receptorů na model kachexie indukované occ-1 doprovázené hyperkalcemií. Jako myši byli použiti myší nazí samečci ve stáří 6 týdnů. První den pokusu byla do boku myší subkutánně implantována karcinomová buněčná linie, occ-1. Protilátka MR16-1 myšího IL-6 receptorů (viz referenční příklad 2) byla podána intravenosně v dávce 2 mg/myš bezprostředně před implantací occ-1 první den pokusu. Potom byla podána subkutánně 7. a 10. den 100 pg/myš (n=6). V předchozím pokusu bylo již potvrzeno, že neutralizující protilátky proti heteroproteinu, krysí protilátce, se snadno neobjevují v tomto způsobu. Kontrolní skupině nesoucí nádor byla podána krysí IgG 1 kontrolní protilátka (KH5) ve stejném časovém rozmezí (n=6). Skupina, které byl podán PBS, byla vedena jako kontrolní skupina bez nádoru (n=7). Po počátku pokusu byla 10. a 12. den změřena tělesná hmotnost a koncentrace ionizovaného vápníku.
U skupiny nesoucí nádor došlo ke snížení hmotnosti, ale skupina, které byla podána MR16-1, vykazovala podobnou změnu v tělesné hmotnosti jako kontrolní skupina bez nádoru, což ukazuje na potlačení snížení tělesné hmotnosti (obr. 17).
Koncentrace ionizovaného vápníku v krvi byla pozoruhodně zvýšena u kontrolní skupiny s nádorem při srovnání s kontrolní skupinou bez nádoru, zatímco u skupiny, které byla podána MR16-1, bylo zvýšení silně potlačeno (obr. 18).
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (6)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použití protilátky proti receptorů interleukinu-6 pro výrobu farmaceutického přípravku pro prevenci nebo léčení plasmocytosy.
  2. 2. Použití podle nároku 1, kde protilátkou proti receptorů interleukinu-6 je monoklonální protilátka.
  3. 3. Použití podle nároku 2, kde protilátkou proti receptorů interleukinu-6 je PM-1 protilátka.
  4. 4. Použití podle nároku 2, kde protilátkou proti receptorů interleukinu-6 je chimérní protilátka.
  5. 5. Použití podle nároku 2, kde protilátkou proti receptorů interleukinu-6 je přetvořená lidská protilátka.
  6. 6. Použití podle nároku 5, kde protilátkou proti receptorů interleukinu-6 je přetvořená lidská PM-1 protilátka.
    18 výkresů
CZ20050477A 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy CZ298325B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP25701094 1994-10-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ298325B6 true CZ298325B6 (cs) 2007-08-29

Family

ID=17300476

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20060678A CZ298790B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení kachexie
CZ20050477A CZ298325B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy
CZ0118997A CZ296979B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení Castlemanovy nemoci

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20060678A CZ298790B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení kachexie

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0118997A CZ296979B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení Castlemanovy nemoci

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20070036785A1 (cs)
EP (3) EP0791359A4 (cs)
JP (1) JP4896093B2 (cs)
CN (4) CN1306963C (cs)
CA (1) CA2203182C (cs)
CZ (3) CZ298790B6 (cs)
FI (3) FI121455B (cs)
HK (1) HK1067062A1 (cs)
HU (2) HU225392B1 (cs)
NO (6) NO324046B1 (cs)
PL (1) PL182089B1 (cs)
RU (1) RU2147442C1 (cs)
WO (1) WO1996012503A1 (cs)

Families Citing this family (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
GB9702944D0 (en) * 1997-02-13 1997-04-02 Univ Manchester Reducing fibrosis
EP2322216A1 (en) 1997-03-21 2011-05-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A preventive or therapeutic agent for sensitized T cell-mediated diseases comprising IL-6 antagonist as an active ingredient
ATE395933T1 (de) 1997-08-15 2008-06-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Präventiva oder arzneien enthaltend neutralisierende anti-il6-rezeptor antikörper zur reduktion urinären proteins bei systemischen lupus erythematosus
PT1074268E (pt) 1998-03-17 2008-02-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes profilácticos ou terapêuticos para doenças intestinais inflamatórias contendo anticorpos antagonistas do receptor il-6
JP4711507B2 (ja) * 1998-08-24 2011-06-29 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する膵炎の予防又は治療剤
DE19948126A1 (de) * 1999-10-06 2001-04-12 Max Delbrueck Centrum Pharmazeutisches Mittel zur Behandlung von Kachexie und/oder kardiogenem Schock
PT1334731E (pt) 2000-10-25 2008-03-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes preventivos ou medicamentos para a psoríase que contêm um antagonista da il-6 como ingrediente activo
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
EP1475101B1 (en) * 2002-02-14 2010-10-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody-containing solution pharmaceuticals
EP1598076A4 (en) 2003-02-24 2008-07-09 Morinaga Milk Industry Co Ltd INTERLEUKIN 6 MANUFACTURER
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
TWI350175B (en) * 2003-10-17 2011-10-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Mesothelioma therapeutic agent
US8617550B2 (en) 2003-12-19 2013-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist
AR048335A1 (es) 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
EP1728801A4 (en) * 2004-03-24 2009-10-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd SUBTYP OF A HUMANIZED ANTIBODY AGAINST THE INTERLEUKIN-6 RECEPTOR
WO2006106905A1 (ja) 2005-03-31 2006-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 会合制御によるポリペプチド製造方法
DE602006010072D1 (de) * 2005-06-21 2009-12-10 Chen Gang Il-1 bindende antikörper und fragmente davon
JP5014143B2 (ja) 2005-10-14 2012-08-29 学校法人福岡大学 膵島移植における移植膵島障害抑制剤
AR058135A1 (es) 2005-10-21 2008-01-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes para el tratamiento de cardiopatias
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
US8771686B2 (en) * 2006-01-27 2014-07-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for treating a disease involving choroidal neovascularization by administering an IL-6 receptor antibody
US11046784B2 (en) 2006-03-31 2021-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
EP4218801A3 (en) 2006-03-31 2023-08-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody modification method for purifying bispecific antibody
JP5754875B2 (ja) 2006-04-07 2015-07-29 国立大学法人大阪大学 筋再生促進剤
MY159787A (en) * 2006-06-02 2017-01-31 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
CN101528778A (zh) * 2006-08-18 2009-09-09 埃博灵克斯股份有限公司 用于治疗与il-6-介导的信号传导相关的疾病和病症的针对il-6r的氨基酸序列以及包括其的多肽
JP2010500876A (ja) 2006-08-18 2010-01-14 アブリンクス エン．ヴェー． Ｉｌ−６媒介性シグナル伝達に関連する疾患及び障害の治療のための、ｉｌ−６ｒに指向性を有するアミノ酸配列及びこれを含むポリペプチド
TWI438208B (zh) 2007-01-23 2014-05-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 抑制慢性排斥反應之藥劑
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
SG183742A1 (en) 2007-05-21 2012-09-27 Alderbio Holdings Llc Antibodies to il-6 and use thereof
US20090238825A1 (en) * 2007-05-21 2009-09-24 Kovacevich Brian R Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US8404235B2 (en) 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
US7906117B2 (en) 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
MX2009012493A (es) * 2007-05-21 2010-01-20 Alder Biopharmaceuticals Inc Metodos de humanizacion de anticuerpo de conejo novedosos y anticuerpos de conejo humanizados.
SI2202245T1 (sl) 2007-09-26 2016-10-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Postopek modificiranja izoelektrične točke protitelesa preko aminokislinske substitucije v CDR
ES2687808T3 (es) 2007-09-26 2018-10-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Región constante de anticuerpo modificado
MX2010003329A (es) 2007-09-26 2010-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-receptor de il-6.
KR101643005B1 (ko) * 2007-12-05 2016-07-28 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ｎｒ１０ 항체 및 그의 이용
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
PL2275443T3 (pl) * 2008-04-11 2016-05-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Cząsteczka wiążąca antygen zdolna do wiązania dwóch lub więcej cząsteczek antygenu w sposób powtarzalny
JP2011520898A (ja) 2008-05-13 2011-07-21 ノビミューン エスアー 抗ｉｌ−６／ｉｌ−６ｒ抗体およびそれらの使用方法
CN104906581A (zh) * 2008-06-05 2015-09-16 国立研究开发法人国立癌症研究中心 神经浸润抑制剂
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
US9452227B2 (en) * 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8323649B2 (en) * 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
TWI544077B (zh) 2009-03-19 2016-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibody constant region change body
KR101314880B1 (ko) * 2009-03-19 2013-10-04 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 관절류머티즘 치료제
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2417163B1 (en) 2009-04-10 2019-02-27 Ablynx N.V. Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
WO2010115995A2 (en) 2009-04-10 2010-10-14 Ablynx Nv Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
CN102459344A (zh) 2009-05-15 2012-05-16 中外制药株式会社 抗axl抗体
EP2481752B1 (en) 2009-09-24 2016-11-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant regions
DK2493922T3 (en) 2009-10-26 2017-04-24 Hoffmann La Roche Process for preparing a glycosylated immunoglobulin
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
MX2012005927A (es) 2009-11-24 2012-11-23 Alder Biopharmaceuticals Inc Anticuerpos para il-6 uso de los mismos.
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
AR080428A1 (es) 2010-01-20 2012-04-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulaciones liquidas estabilizadas contentivas de anticuerpos
WO2011108714A1 (ja) 2010-03-04 2011-09-09 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
JP5904552B2 (ja) 2010-05-28 2016-04-13 国立研究開発法人国立がん研究センター 膵癌治療剤
JP6051049B2 (ja) 2010-05-28 2016-12-21 中外製薬株式会社 抗腫瘍ｔ細胞応答増強剤
KR20200059320A (ko) 2010-11-08 2020-05-28 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
KR101398363B1 (ko) 2010-11-17 2014-05-22 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 혈액응고 제viii 인자의 기능을 대체하는 기능을 갖는 다중특이성 항원 결합 분자
WO2012071561A2 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Anti-il-6 antibodies for the treatment of anemia
MX365235B (es) 2010-11-30 2019-05-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécula de unión a antígeno capaz de unir repetidamente a la pluralidad de moléculas de antígeno.
RU2604139C2 (ru) 2011-01-28 2016-12-10 Санофи Байотекнолоджи Фармацевтические композиции, содержащие антитела к pcsk9 человека
EP2679681B2 (en) 2011-02-25 2023-11-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha FcgammaRIIB-specific FC antibody
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
EP3311837A1 (en) 2011-09-23 2018-04-25 Ablynx NV Prolonged inhibition of interleukin-6 mediated signaling
US20150050269A1 (en) 2011-09-30 2015-02-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
TW201817745A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
DK2818478T3 (en) 2011-10-28 2017-05-22 Regeneron Pharma HUMANIZED IL-6 AND IL-6 RECEPTOR
KR101487935B1 (ko) 2012-05-21 2015-02-02 한국생명공학연구원 곰보배추의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, stat3 매개 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JP6282591B2 (ja) * 2012-09-13 2018-02-21 中外製薬株式会社 遺伝子ノックイン非ヒト動物
JP6442404B2 (ja) 2013-06-11 2018-12-19 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 再発寛解型多発性硬化症（ｒｒｍｓ）患者の治療予後予測方法、及び新規治療適応判断方法
CN105378480B (zh) 2013-07-04 2018-06-12 豪夫迈·罗氏有限公司 检测血清样品中抗药物抗体的干扰抑制性免疫测定
EP3050896B1 (en) 2013-09-27 2021-07-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
EP3209327A1 (en) 2014-10-21 2017-08-30 Ablynx N.V. Treatment of il-6r related diseases
KR102650420B1 (ko) 2014-12-19 2024-03-21 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-마이오스타틴 항체, 변이체 Fc 영역을 함유하는 폴리펩타이드, 및 사용 방법
EA201791366A1 (ru) 2014-12-19 2018-02-28 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антитела к c5 и способы их применения
US9969800B2 (en) 2015-02-05 2018-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha IL-8 antibodies
CA2972393A1 (en) 2015-02-27 2016-09-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for treating il-6-related diseases
US11142587B2 (en) 2015-04-01 2021-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide hetero-oligomer
US10697883B2 (en) 2015-05-19 2020-06-30 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for determining application of therapy to multiple sclerosis (MS) patient
JP7128460B2 (ja) 2015-06-04 2022-08-31 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６阻害剤を有効成分とする精神疾患治療剤
CA2995645A1 (en) 2015-08-18 2017-02-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-pcsk9 inhibitory antibodies for treating patients with hyperlipidemia undergoing lipoprotein apheresis
AU2016355178B9 (en) * 2015-11-19 2019-05-30 Massachusetts Institute Of Technology Lymphocyte antigen CD5-like (CD5L)-interleukin 12B (p40) heterodimers in immunity
US11359009B2 (en) 2015-12-25 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
MX2018007781A (es) 2015-12-28 2018-09-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodo para promover la eficiencia de purificacion del polipeptido que contiene la region de fragmento cristalizable (fc).
WO2017147169A1 (en) 2016-02-22 2017-08-31 Ohio State Innovation Foundation Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin a analogues or metabolites, and estradiol metabolites
KR20180116215A (ko) 2016-03-14 2018-10-24 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 암의 치료에 이용하기 위한 세포상해 유도 치료제
EP3494991A4 (en) 2016-08-05 2020-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING DISEASES RELATING TO IL-8
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
US11608374B2 (en) 2017-01-30 2023-03-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-sclerostin antibodies and methods of use
AU2018234844B2 (en) 2017-03-17 2024-01-25 Ohio State Innovation Foundation Nanoparticles for delivery of chemopreventive agents
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
JP7235249B2 (ja) 2017-10-20 2023-03-08 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
TWI827585B (zh) 2018-03-15 2024-01-01 日商中外製藥股份有限公司 對茲卡病毒具有交叉反應性的抗登革病毒抗體及其使用方法
CN114206442A (zh) 2019-01-31 2022-03-18 赛诺菲生物技术公司 用于治疗幼年特发性关节炎的抗il-6受体抗体
US20220177978A1 (en) 2019-04-02 2022-06-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
CN117247451B (zh) * 2023-11-17 2024-02-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种针对人白介素6蛋白的单域抗体及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03139293A (ja) * 1989-07-20 1991-06-13 Chuzo Kishimoto ヒトインタ―ロイキン―６レセプターに対する抗体
JPH03155795A (ja) * 1989-11-13 1991-07-03 Chuzo Kishimoto マウス・インターロイキン―６レセプター蛋白質
JPH03157400A (ja) * 1989-06-01 1991-07-05 Yeda Res & Dev Co Ltd ヒトインターフェロン―β２／インターロイキン―６受容体
WO1992019759A1 (en) * 1991-04-25 1992-11-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstituted human antibody against human interleukin 6 receptor

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5171840A (en) 1988-01-22 1992-12-15 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human B cell stimulatory factor-2
US5670373A (en) * 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
US5814307A (en) * 1989-04-10 1998-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Method for regulating cell growth, leukocyte differentiation and tumor cell growth using Oncostatin M to stimulate synthesis of IL-6
JP3045172B2 (ja) * 1990-05-19 2000-05-29 岸本 忠三 Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット
JP3212597B2 (ja) * 1990-08-01 2001-09-25 忠三 岸本 ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット
JPH04187645A (ja) * 1990-11-22 1992-07-06 Chuzo Kishimoto インターロイキン―６作用抑制剤
JPH05227970A (ja) * 1992-02-19 1993-09-07 Chugai Pharmaceut Co Ltd ヒトインターロイキン−６受容体に対する再構成ヒト抗体
JP3258348B2 (ja) * 1991-08-02 2002-02-18 東ソー株式会社 Ｈｉｖ感染阻害剤
FR2694767B1 (fr) * 1992-08-13 1994-10-21 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
EP0672118B1 (en) * 1992-08-21 2002-03-13 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES A novel b-lymphoma cell line and antigen
JP3525221B2 (ja) * 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤
US5888510A (en) * 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
US5759546A (en) * 1994-02-04 1998-06-02 Weinberg; Andrew D. Treatment of CD4 T-cell mediated conditions
WO1996025174A1 (fr) * 1995-02-13 1996-08-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Inhibiteur de decomposition des proteines musculaires contenant un anticorps du recepteur de l'interleukine-6
US20020187150A1 (en) * 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
PT1074268E (pt) * 1998-03-17 2008-02-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes profilácticos ou terapêuticos para doenças intestinais inflamatórias contendo anticorpos antagonistas do receptor il-6
WO2002036165A1 (fr) * 2000-10-27 2002-05-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agent à base d'antagoniste d'il-6, faisant baisser le niveau des mmp-3 dans le sang
UA80091C2 (en) * 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
CN101023946A (zh) * 2002-04-12 2007-08-29 美国辉瑞有限公司 Ep4受体配体在治疗il－6相关疾病的应用
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03157400A (ja) * 1989-06-01 1991-07-05 Yeda Res & Dev Co Ltd ヒトインターフェロン―β２／インターロイキン―６受容体
JPH03139293A (ja) * 1989-07-20 1991-06-13 Chuzo Kishimoto ヒトインタ―ロイキン―６レセプターに対する抗体
JPH03155795A (ja) * 1989-11-13 1991-07-03 Chuzo Kishimoto マウス・インターロイキン―６レセプター蛋白質
WO1992019759A1 (en) * 1991-04-25 1992-11-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstituted human antibody against human interleukin 6 receptor

Also Published As

Publication number Publication date
CN101011574B (zh) 2012-10-03
EP0791359A4 (en) 2002-09-11
HK1067062A1 (en) 2005-04-01
CZ296979B6 (cs) 2006-08-16
NO330615B1 (no) 2011-05-30
CA2203182C (en) 2009-11-24
CZ118997A3 (en) 1997-09-17
FI20105844A (fi) 2010-08-11
FI20115753A (fi) 2011-07-15
NO971816L (no) 1997-06-18
NO971816D0 (no) 1997-04-18
CN101011574A (zh) 2007-08-08
CN1535728A (zh) 2004-10-13
CA2203182A1 (en) 1996-05-02
CN1306963C (zh) 2007-03-28
AU689657B2 (en) 1998-04-02
NO330589B1 (no) 2011-05-23
HU0304064D0 (en) 2004-03-01
NO20073432L (no) 1997-06-18
HU227708B1 (en) 2011-12-28
WO1996012503A1 (fr) 1996-05-02
HU225392B1 (en) 2006-11-28
CN101829325A (zh) 2010-09-15
FI122406B (fi) 2012-01-13
NO331944B1 (no) 2012-05-07
AU3709995A (en) 1996-05-15
PL319785A1 (en) 1997-08-18
US20070036785A1 (en) 2007-02-15
FI971669A0 (fi) 1997-04-18
RU2147442C1 (ru) 2000-04-20
JP4896093B2 (ja) 2012-03-14
EP2319535A3 (en) 2011-08-31
NO324046B1 (no) 2007-08-06
EP2319535A2 (en) 2011-05-11
NO20073429L (no) 1997-06-18
CZ298790B6 (cs) 2008-01-30
JP2008297315A (ja) 2008-12-11
CN1164194A (zh) 1997-11-05
FI971669A (fi) 1997-06-17
NO330588B1 (no) 2011-05-23
PL182089B1 (en) 2001-11-30
NO20073427L (no) 1997-06-18
HUT77035A (hu) 1998-03-02
CN100350973C (zh) 2007-11-28
NO330582B1 (no) 2011-05-16
NO20073430L (no) 1997-06-18
EP1884524A2 (en) 2008-02-06
NO20073431L (no) 1997-06-18
FI122970B (fi) 2012-09-14
EP0791359A1 (en) 1997-08-27
EP1884524A3 (en) 2008-06-25
FI121455B (fi) 2010-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ298325B6 (cs) Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy
JP4540132B2 (ja) Ｉｌ−６レセプター抗体を含んでなる筋蛋白分解抑制剤
RU2147443C1 (ru) Лечебные средства против хронического ревматоидного артрита, содержащие антагонист il-6 в качестве эффективного компонента
EP2298332B1 (en) BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of the B-cell response
Reap et al. Conventional B cells, not B-1 cells, are responsible for producing autoantibodies in lpr mice.
JPH08505365A (ja) 自己免疫疾患および炎症性疾患の治療
RU2607022C2 (ru) Способы и композиции для лечения волчанки
US20120058082A1 (en) Methods and compositions for treatment
JP3827350B2 (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤
JP2004224801A (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20131020