FI122970B - Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttaman hyperimmunoglobulinemian hoitoon - Google Patents

Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttaman hyperimmunoglobulinemian hoitoon Download PDF

Info

Publication number
FI122970B
FI122970B FI20115753A FI20115753A FI122970B FI 122970 B FI122970 B FI 122970B FI 20115753 A FI20115753 A FI 20115753A FI 20115753 A FI20115753 A FI 20115753A FI 122970 B FI122970 B FI 122970B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
antibody
group
blood
cells
mouse
Prior art date
Application number
FI20115753A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI20115753A (fi
Inventor
Tadamitsu Kishimoto
Asao Katsume
Hiroyuki Saito
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Tadamitsu Kishimoto
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17300476&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI122970(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd, Tadamitsu Kishimoto filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Publication of FI20115753A publication Critical patent/FI20115753A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI122970B publication Critical patent/FI122970B/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Description

Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttaman hyperimmunoglobu-linemian hoitoon - Farmaceutiska kompositioner för behandling av hype-rimmunoglobulinemia förorsakade av IL-6-produktion 5
Tekninen alue Tämä keksintö koskee farmaseuttisia koostumuksia sellaisten sairauksien estämiseen tai hoitoon, joita interleukiini-6:n (IL-6) tuotto aiheuttaa, jolloin sairaus on hyper-10 immunoglobulinemia, ja mainitut koostumukset sisältävät vasta-aineen interleukiini-6:n reseptoria (IL-6R) kohtaan (anti-IL-6R-vasta-aine).
Keksinnön tausta 15 IL-6 on monifunktionaalinen sytokiini, jonka uskotaan toimivan immunologisten, hematologisten ja akuutin faasin reaktioiden eri tasoilla Taga, T. et ai., Critical Rewiews in Immunol. 11:265 - 280, 1992] sekä esittävän tärkeitä rooleja multippelissa mye-loomassa kasvutekijänä sekä sairauksissa, joihin plasmasytoosi liittyy, kuten reumatismissa [Hirano, T. et ai., Eur. J. Immunol. 18:1797 - 1801, 1988; Houssiau, F. A. et 20 ai., Arth. Rheum. 31:784 - 788, 1988], Castlemanin taudissa [Yoshizaki, K. et ai., Blood 74:1360 - 1367, 1989; Brant, S. J. et ai., J. Clin. Invest. 86:592 - 599, 1990], nefriitissä eli munuaistulehduksessa, jossa mesangiaalisolut lisääntyvät [Ohta, K. et ai., Clin. Nephrol. (Saksa) 38:185 - 189, 1992; Fukatsu, A. et ai., Lab. Invest. 65:61 -66, 1991; Horii, Y. et ai., J. Immunol. 143:3949 - 3955, 1989], kakeksiassa, johon 25 liittyy kasvaimen kasvu [Strassmann, G. et ai., J. Clin. Invest. 89:1681 -1684,1992], jne..
CM
oj Sellaisissa transgeenisissä H-2 Ld hlL-6 -hiirissä (IL-6 Tgm), joissa geenitekniikan i 0 avulla on ilmennetty liiallisia määriä ihmisen IL-6:tta, on havaittu lgG1-plasmasytoosi, i 30 nefriitti, jossa mesangiaalisolut lisääntyvät, anemia, trombosytopeniaa eli veri- 1 hiutaleniukkuutta, autovasta-aineiden esiintymistä jne. [Miyai, T. et ai., esitys Japan
CC
“ Immunology Societyn 21. kokouksessa, "Hematological Change in H-2 L hlL-6 S transgenic mice with age", 1991], mikä viittaa siihen, että IL-6 liittyy suureen määrän sairauksia. Ei tiedetä kuitenkaan, että interleukiini-6-reseptorin vasta-aine on tehokas ^ 35 sairauksissa, joita interleukiinin tuotto aiheuttaa.
2
Keksinnön kuvaus Tämän keksinnön mukaan annetaan täten käyttöön interleukiini-6-reseptorin vasta-aineen käyttö farmaseuttisen koostumuksen valmistukseen sellaisten sairauksien 5 estämiseksi ja hoitamiseksi, joita interleukiini-6:n tuotto aiheuttaa, jolloin sairaus on hyperimmunoglobulinemia.
Edellä esitettyjen ongelmien ratkaisemiseksi tämä keksintö saa aikaan farmaseuttisia koostumuksia sellaisten sairauksien estämiseksi tai hoitoon, joita interleukiini-6:n 10 tuotto aiheuttaa, ja mainitut farmaseuttiset koostumukset sisältävät interleukiini-6-reseptorin vasta-ainetta.
Piirrosten lyhyt selitys 15 Kuvio 1 on graafinen esitys, joka osoittaa muutoksen kunkin ryhmän eläinten ruumiinpainon lisääntymisessä.
Kuvio 2 on graafinen esitys, joka osoittaa muutoksen virtsaproteiinin positiivisessa suhteessa kullakin ryhmällä. Virtsan proteiinin positiivinen suhde oli nolla muissa 20 ryhmissä kuin ensimmäisessä ja kolmannessa.
Kuvio 3 on graafinen esitys, joka osoittaa hemoglobiinitason muutoksen kullakin ryhmällä.
25 Kuvio 4 on graafinen esitys, joka osoittaa punasolujen lukumäärän muutoksen kullakin ryhmällä.
C\J
° Kuvio 5 on graafinen esitys, joka osoittaa verihiutaleiden lukumäärän muutoksen i § kullakin ryhmällä, δ 30 x Kuvio 6 on graafinen esitys, joka osoittaa valkoisten verisolujen lukumäärän muutok- sen kullakin ryhmällä.
CO
m li Kuvio 7 on graafinen esitys, joka osoittaa seerumin lgG1:n pitoisuuden muutoksen ^ 35 kullakin ryhmällä.
Kuvio 8 on graafinen esitys, joka osoittaa humaani IL-6-pitoisuuden muutoksen ryhmillä 1-5.
3
Kuvio 9 esittää tuloksen solulajittelusta, joka on toteutettu fluoresenssivasta-ainetekniikalla, jossa käytettiin kontrollivasta-ainetta IgG ja Gr-1 ryhmissä 1 ja 2.
5 Kuvio 10 edustaa tulosta solulajittelusta, joka toteutettiin fluoresenssivasta-ainetekniikalla, jossa käytettiin kontrollivasta-ainetta IgG ja Gr-1 ryhmässä 6 ja 7.
Kuvio 11 on graafinen esitys, joka osoittaa kunkin ryhmän eläinten pernan painon kokeen lopussa.
10
Kuvio 12 on graafinen esitys, joka osoittaa eläinten ruumiinpainon muutoksen kussakin ryhmässä.
Kuvio 13 on graafinen esitys, joka osoittaa triglyseridipitoisuuden hiirien veressä 11. 15 koepäivänä.
Kuvio 14 on graafinen esitys, joka osoittaa glukoosipitoisuuden hiirien veressä 15. koepäivänä.
20 Kuvio 15 on graafinen esitys, joka osoittaa ionisoidun kalsiumin pitoisuuden hiirien veressä 11. koepäivänä.
Kuvio 16 on graafinen esitys, joka osoittaa sellaisten henkiinjääneiden kontrollihiirien määrän, joissa on kasvain.
25
Kuvio 17 on graafinen esitys, joka osoittaa hiirien ruumiinpainon 10. ja 12. päivänä ^ kokeen alusta, δ
C\J
i 0 Kuvio 18 on graafinen esitys, joka osoittaa ionisoidun kalsiumin pitoisuuden hiirien i 30 veressä 10. ja 12. päivänä kokeen aloittamisesta.
CC
Yksityiskohtainen selvitys
CO
m
Interleukiini-6:n tuoton aiheuttamiin sairauksiin kuuluvat esimerkiksi plasmasytoosi, ^ 35 kuten reumatismi, ja Castlemanin sairaus; hyperimmunoglobulinemia; anemia; nef- riitti, jossa mesangiaalisolut lisääntyvät, kakeksia, jne.
4 lnterleukiini-6:n reseptorin vasta-aine, jota on käytettävä tässä keksinnössä, voi olla mitä tahansa alkuperää tai tyyppiä (monoklonaalinen, polyklonaalinen), sikäli kuin se voi estää signaalitransduktion, joka tapahtuu IL-6:n avulla, ja inhiboi IL-6:n biologisen aktiivisuuden. Se on kuitenkin mieluummin monoklonaalinen vasta-aine, joka on pe-5 räisin nisäkkäästä. Vasta-aine estää signaalitransduktion, joka tapahtuu IL-6:n avulla, ja se inhiboi IL-6:n biologisen aktiivisuuden, siten että se inhiboi IL-6:n sitoutumisen IL-6R:ään.
Monoklonaalista vasta-ainetta tuottava solu voi olla minkä tahansa sellaisen eläinlajin 10 solu, joka kuuluu nisäkkäisiin, tai vasta-aine voi olla ihmisen vasta-aine tai se voi olla peräisin eläimestä, muusta kuin ihmisestä. Muusta eläimestä kuin ihmisestä peräisin olevat monoklonaaliset vasta-aineet ovat mieluummin sellaisia monoklonaalisia vasta-aineita, jotka ovat peräisin kaniinista tai jyrsijästä, koska tällaisten vasta-aineiden tuottaminen on helppoa. Termiin jyrsijä kuuluu mieluummin hiiriä, rottia, hamstereita 15 jne., mutta termi ei rajoitu niihin.
Termiin interleukiini-6-reseptorin vasta-aine kuuluvat esimerkiksi MR16-1-vasta-aine (Tamura, T. et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 90:11924-11928, 1993), PM-1-vasta-aine (Hirata, Y. et ai., J. Immunol. 143:2900-2906, 1989), jne.
20
Monoklonaalisia vasta-aineita voidaan tuottaa olennaisesti tekniikan tason mukaisin, tunnetuin menetelmin seuraavasti. Täten niitä voidaan tuottaa, siten että käytetään IL-6R:ää immunisoivana antigeeninä, jolla immunisoidaan tavanomaista menetelmää käyttämällä, ja saatuihin immunosyytteihin käytetään sitten solufuusiomenetelmää 25 vasta-aineita tuottavien solujen seulomiseksi tavanomaisella seulontamenetelmällä.
Yksityiskohtaisemmin esitettynä tuotetaan monoklonaalisia vasta-aineita seuraavalla ° menetelmällä. Mainittu immunisoiva antigeeni voidaan saada esimerkiksi siten, että § käytetään humaani IL-6R:n geenisekvenssiä, joka esitetään Eurooppalaisessa pa- 30 tenttihakemuksessa EP 325474. Sen jälkeen kun ihmisen IL-6R:n geenisekvenssi on x insertoitu tunnettuun ekspressiovektorijärjestelmään sopivan isäntäsolun transfor-
CC
mointia varten, puhdistetaan haluttu IL-6R-proteiini isäntäsoluista tai niiden vil-lo jelmäsupernatantista mainitun puhdistetun IL-6R-proteiinin käyttöä varten immuni- !£ soivana antigeeninä.
δ 35
CM OD
Mainittu immunisoiva antigeeni, joka on peräisin hiirestä, voidaan tämän lisäksi saada siten, että käytetään hiiren IL-6R:n geenisekvenssiä, joka kuvattiin Japanilaises 5 sa, tutkimattomassa patenttijulkaisussa 3 (1991)-155795, samalla menetelmällä, kuin käytettiin humaani IL-6R:n edellä mainitulle geenisekvenssille.
Koska IL-6R:ää niiden lisäksi, jotka ilmentyvät solumembraanilla, niitä (slL-6R), jotka 5 ovat mahdollisesti erillään solumembraanista, voidaan käyttää antigeeninä. slL-6R koostuu pääasiassa solun membraaniin sidotun IL-6R:n solunulkopuolisesta do-meenista, ja se eroaa membraaniin sidotusta IL-6R:stä siinä, että ensiksi mainitulta puuttuu transmembraanidomeeni eli kalvodomeeni tai sekä transmembraanidomeeni että solunsisäinen domeeni.
10
Sellaisten nisäkkäiden piirissä, jotka on immunisoitu immunisoivalla antigeenillä, on suotavaa ottaa huomioon nisäkkään yhteensopivuus solufuusioon käytetyn isän-täsolun kanssa, ja tavallisesti käytetään hiiriä, rottia, hamstereita, kaniineja jne., mutta niihin ei ole välttämättä rajoituttava.
15
Eläimen immunisointi immunisoivalla antigeenillä voidaan saada aikaan ammattimiehen tuntemin menetelmin. Yleisessä menetelmässä annetaan mainittua immunisoivaa antigeeniä nisäkkäälle vatsaonteloon tai ihonalaisesti. Immunisoiva antigeeni tarkemmin sanottuna laimennetaan tai lietetään sopivaan tilavuuteen PBS:ää (fos-20 faatilla puskuroituun keittosuolaliuokseen), fysiologista keittosuolaliuosta jne. ja sekoitetaan, jos niin halutaan, sopivan määrän kanssa täydellistä Freundin adjuvanttia sekä emulgoidaan ja sitten mainittu emulsio annetaan nisäkkäälle, mieluummin useita kertoja, joka neljäs - 21. päivä. Immunisoinnin yhteydessä voidaan tämän lisäksi immunisoivan antigeenin kanssa käyttää sopivaa kantajaa.
25
Sen jälkeen kun eläin on immunisoitu edellä kuvatulla tavalla ja on varmistettu, että £! seerumin vasta-ainetaso on noussut halutulle tasolle, immunosyytit poistetaan nisäk- ° käästä ja ne käytetään solufuusioon. Edullisena immunosyyttinä mainitaan erityisesti § pernasolu.
S 30 x Sellaisiin edullisiin myeloomasoluihin, joita käytetään tässä tutkimuksessa kantasolu- jen partnerina, joka yhdistetään mainitun immunosyytin kanssa, kuuluu erilaisia tun-ίο nettuja solulinjoja, esimerkiksi P3 (P3x63Ag8.653) (J. Immunol. 123:1548, 1978), p3- i U1 (Curren Topics i Micro-biology and Immunology 81:1-7, 1978), NS-1 (Eur. J. Im- S 35 munol. 6:511 -519, 1976), MPC-11 (Cell 8:405^15, 1976), SP2/0 (Nature 276:269- 270, 1978), FO (J. Immunol. Meth. 35:1 - 21, 1980), S194 (J. Exp. Med. 148:313-323, 1978), R210 (Nature 277:131-133, 1979), jne.
6
Mainittu immunosyytti voidaan sulauttaa myeloomasolun kanssa olennaisesti tunnetun menetelmän mukaan, jota Milstein et ai. kuvaavat (Milstein et ai., Methods En-zymol. 73:3^16, 1981), jne.
Mainittu solufuusio voidaan toteuttaa tarkemmin sanottuna esimerkiksi solufuusiota 5 kiihdyttävän agenssin läsnä ollessa tavallisessa ravintoalustassa. Solufuuusiota jouduttavana agenssina voidaan käyttää polyetyleeniglykolia (PEG), Sendai-virusta (HVJ) jne. ja solufuusion tehokkuuden lisäämiseksi voidaan lisätä suoraan adjuvant-tia, kuten dimetyylisulfoksidia.
10 Immunosyyttien suhde käytettyihin myeloomasoluihin on mieluummin yhdestä kymmeneen kertaa enemmän immunosyyttejä kuin myeloomasoluja. Edellä esitettyyn solufuusioon käytettynä nestemäisenä viljelyalustana mainitaan esimerkiksi nestemäinen RPM11640 -alustaja nestemäinen MEM-alusta, jotka sopivat parhaiten mye-loomasolulinjan kasvatukseen, sekä tavalliset soluviljelyyn käytettävät viljelyliemet, ja 15 tämän lisäksi voidaan käyttää seerumitäydennystä, kuten vasikan sikiön seerumia (FCS) jne.
Halutut sulautetut solut (hybridoomat) voidaan muodostaa siten, että sekoitetaan annettu määrä edellä mainittuja immunosyyttejä myeloomasolujen kanssa edellä 20 mainitussa ravintoliemessa ja lisätään PEG-liuosta, joka on edeltä käsin lämmitetty 37 °C:seen, esimerkiksi PEG-liuosta, jonka keskimääräinen molekyylipaino on alueella 1000-6000, 30-60 prosentin (paino/tilavuus) pitoisuutena. Sitten, sen jälkeen kun peräkkäin on lisätty sopivaa viljelyalustaa ja tämän jälkeen on poistettu superna-tantti, voidaan poistaa solunsulauttamisagenssit jne., jotka eivät ole suotavia hybri-25 dooman kasvun kannalta.
^ Mainittu hybridooma voidaan valita viljelemällä tavanomaisessa valinta-alustassa, ° kuten nestemäisessä HAT-viljelyalustassa (nestemäisessä viljelyalustassa, joka si- § sältää hypoksantiinia, aminopteriiniä ja tymidiiniä). Jatketaan viljelyä mainitussa i 30 HAT-alustassa ajan verran, joka on riittävä siihen, että muut solut (sulautumattomat i solut), kuin halutut hybridoomasolut, kuolevat, tavallisesti joistakin päivistä muuta- maan viikkoon. Tämän jälkeen toteutetaan tavanomainen rajalaimennusmenetelmä in haluttua vasta-ainetta tuottavan hybridooma seulomiseksi ja monokloonausta varten.
LO
° 35 Hybridoomaa, joka tuottaa täten valmistettuja monoklonaalisia vasta-aineita, voidaan alaviljellä tavanomaisessa, nestemäisessä alustassa ja säilyttää nestetypessä pit kähköjä ajanjaksoja.
7
Jotta monoklonaalinen vasta-aine saadaan mainitusta hybridoomasta, käytetään esimerkiksi menetelmää, jossa mainittua hybridoomaa viljellään tavanomaisen menetelmän mukaan, jotta saadaan viljelysupernatantti, tai menetelmällä, jossa hybri-dooma siirretään nisäkkääseen, joka on hybridooman kanssa yhteensopiva, ja viljel-5 lään tässä nisäkkäässä, jotta saadaan vasta-aine askitesnesteenä tai muuna sen tapaisena nesteenä. Edellinen menetelmä soveltuu erittäin puhtaan vasta-aineen saantiin, kun taas viimeksi mainittu menetelmä sopii vasta-aineen suurten määrien tuottoon.
10 Edellä mainituilla menetelmillä saadut monoklonaaliset vasta-aineet voidaan tämän lisäksi puhdistaa tavanomaisilla puhdistusmenettelytavoilla, kuten suolautuksella irti liuoksesta, geelisuodatuksella, affiniteettikromatografialla, jne.
Täten valmistettujen monoklonaalisten vasta-aineiden kyky tunnistaa antigeeni suu- 15 rella affiniteetilla ja erittäin tarkasti voidaan varmistaa tavanomaisilla immunologisilla menetelmillä, kuten radioimmunologisella määritysmenetelmällä, entsyymi-immunologisella määritysmenetelmällä (EIA, ELISA), menetelmällä, jossa käytetään fluoroivaa vasta-ainetta (immunofluoresenssianalyysillä) jne.
20 Tässä kokeessa käytetty monoklonaalinen vasta-aine ei rajoitu hybridooman tuottamaan monoklonaaliseen vasta-aineeseen, ja se voi olla keinotekoisesti muutettu vasta-aine, jonka tarkoituksena on vähentää heteroantigeenisyyttä ihmistä kohtaan. Voidaan käyttää esimerkiksi kimeeravasta-ainetta, jossa on hiiren monoklonaalisen vasta-aineen vaihtelevia alueita ja ihmisen vasta-aineen muuttumattomia alueita.
25 Tällainen kimeeravasta-aine voidaan valmistaa siten, että käytetään tunnettua ki-meeravasta-aineiden tuottamismenetelmää, erityisesti geenitekniikkamenetelmää.
C\J
° Tämän lisäksi tässä keksinnössä voidaan käyttää uudelleen muotoiltua ihmisen vas- o ta-ainetta. Tämä on vasta-aine, jossa ihmisen vasta-aineen komplementaarisuutta 30 määräävät alueet on korvattu nisäkkään vasta-aineen, muun kuin ihmisen vasta-x aineen, esimerkiksi hiiren vasta-aineen, komplementaarisuutta määräävillä alueilla, ja yleiset menetelmät sitä varten ovat tekniikan tason mukaan tunnettuja. Tällaista S menetelmää käyttämällä voidaan saada uudelleen muodostettu ihmisen vasta-aine, ^ joka on tässä keksinnössä käyttökelpoinen.
CVJ 00
Kun on välttämätöntä, voidaan korvata vasta-aineen vaihtelevan alueen runkoalueis-sa (FR) aminohapot siten, että ihmisen uudelleen muodostetun vasta-aineen komplementaarisuutta määräävä alue voi muodostaa sopivan, antigeeniä sitovan kohdan 8 (Sato et ai., Cancer Res. 53:1-6,1993). Tällaisen uudelleen muodostetun humaanin vasta-aineen esimerkkinä voidaan esittää edullisesti humanisoitu PM-1 (hPM-1) (katso Kansainvälinen patenttihakemus WO 9219759).
5 Voidaan muodostaa sellaisia geenejä, jotka koodittavat vasta-aineen fragmentteja, esimerkiksi Fab:tä tai Fv:tä, yksinkertaista ketjua Fv (scFv), jossa Fv:n H- ja L-ketju on yhdistetty sopivalla linkkerillä, ja ne voidaan ilmentää sopivissa isäntäsoluissa, sikäli kuin fragmentit sitoutuvat antigeeniin ja inhiboivat IL-6:n aktiivisuutta (katso esimerkiksi julkaisua Bird et ai., Tibtech 9:132-137, 1991; Huston et ai., Proc. Natl. 10 Acad. Sei. U.S.A. 85:5879-5883, 1988). Tämän lisäksi scFv:n tekemiseen voidaan käyttää vasta-aineen uudelleen muodostettua V-aluetta H- ja L-ketjun Fv-aluetta varten.
Tässä keksinnössä voidaan käyttää sellaisia farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuo-15 ton aiheuttamien sairauksien estämiseen ja hoitoon, joissa on tämän keksinnön mukainen IL-6-reseptorin vasta-aine, sikäli kuin mainitut koostumukset estävät IL-6:n signaalitransmission ja ovat tehokkaista IL-6:n tuoton aiheuttamia sairauksia vastaan.
20 Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n aiheuttamia sairauksien estämiseen ja hoitoon voidaan antaa mieluummin parenteraalisesti, esimerkiksi ruiskeena laskimoon, lihakseen, vatsaonteloon tai ihon alle jne., sekä systeemisesti että paikallisesti. Ne voivat olla tämän lisäksi farmaseuttisen koostumuksen tai pakkauksen muodossa yhdistettyinä ainakin yhteen farmaseuttiseen kantajaan tai laimentimeen.
25
Vaikka tämän keksinnön farmaseuttisten koostumusten annos voi vaihdella potilaan ^ sairauden tilan, iän tai antomenetelmän mukaan, on välttämätöntä valita sopiva mää- ° rä soveltuvalla tavalla. Niitä voidaan antaa vaihtoehtoisesti määränä, joka on 1-1000 § mg potilaan painon kilogrammaa kohti viikossa. Tämän keksinnön farmaseuttisia i 30 koostumuksia ei rajoiteta kuitenkaan edellä mainittuihin annoksiin.
CC
Tämän keksinnön farmaseuttiset koostumukset voidaan formuloida tavanomaisella ίο menetelmällä. Parenteraaliset valmisteet voidaan valmistaa esimerkiksi siten, että i puhdistettu IL-6R-vasta-aine liuotetaan liuottimeen, esimerkiksi fysiologiseen keit- ^ 35 tosuolaliuokseen, puskuriliuokseen jne., johon lisätään adsorption estävää ainetta, esimerkiksi Tween 80:tä, gelatiinia, ihmisen seerumin albumiinia (HSA), jne., tai ne voivat olla lyofilisoidussa muodossa, joka voidaan muodostaa uudelleen liuottamalla 9 se ennen käyttöä. Lyofilisoinnin lisäaineisiin sisältyvät esimerkiksi sokerialkoholi, kuten mannitoli, glukoosi, jne. tai sakkarideja.
ESIMERKIT
5
Keksintöä kuvataan nyt yksityiskohtaisemmin esimerkkien avulla viittaamalla seuraa-viin viite-esimerkkeihin ja esimerkkeihin, joita ei ole tarkoitettu rajoittamaan tämän keksinnön piiriä.
10 Viite-esimerkki 1. Transgeenisen B6Ld-IL-6-hiiren konstruointi
Sellainen 3,3 kbp:n suuruinen fragmentti (Ld-IL-6), jossa oli ihmisen IL-6-cDNA kytkettynä H-2Ld-promoottoriin (Suematsu et ai. Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 86:7547, 1989), ruiskutettiin C57BL/6J (B6) -hiiren (Nihon Clea) hedelmöitetyn munan esitu-15 maan mikroinjektion avulla, menetelmän mukaan, jota kuvataan julkaisussa Yamu-ara et ai., J. Biochem. 96:357,1984.
Hedelmöitetty muna siirrettiin sellaisen naaraspuolisen hiiren munanjohtimeen, joka oli saanut hoitoa valeraskauden vuoksi. Tämän jälkeen tutkittiin vastasyntyneestä 20 hiirestä hlL-6-cDNA:n integroituminen Southern blot - analyysin avulla, joka toteutettiin EcoRkllä pilkotulle häntä-DNA:lle, siten että käytettiin koettimena 32P:llä leimattua ihmisen IL-6-cDNA:n Taql-Banll-fragmenttia. Sellaiset eläimet, joissa tutkimuksen mukaan integraatio oli toteutunut, käytettiin siitokseen B6-hiirien kanssa, jotta saatiin aikaan hiirisuku, jolla oli sama genotyyppi.
25
Viite-esimerkki 2. Rotan anti-IL-6R-vasta-aineen valmistus
CM
cg CHO-soluja tuottavaa hiiren liukoista IL-6R:ää valmistettiin tavalla, jota Saito et ai.
§ kuvaavat julkaisussa J. Immunol. 147:168-173, 1991. Soluja inkuboitiin aMEM:ssä, 30 joka sisälsi viisi prosenttia härän sikiön seerumia (FBS), 37 °C:ssa, kostutetussa il-i massa, joka sisälsi viisi prosenttia C02:a. Ilmastoitu alusta otettiin talteen ja käytettiin “ hiiren slL-6R:n valmistukseen. Hiiren slL-6R:n pitoisuus alustassa määritettiin kerin roksittaisella eli "sandwitch"-ELISAIIa, siten että käytettiin monoklonaalista anti-hiiri- !£ IL-6R-vasta-ainetta RS15 (Saito et ai., J. Immunol. 147:168 - 173, 1991) sekä kanii- ^ 35 nin polyklonaalista anti-hiiri-IL-6R-vasta-ainetta.
Hiiren slL-6R puhdistettiin hiiren sll_-6R-valmisteesta siten, että käytettiin affiniteetti-pylvästä, johon oli adsorboitu monoklonaalista hiiren anti-hiiri-IL-6R-vasta-ainetta 10 (RS12). Puhdistettua hiiren slL-6R:ää, joka oli Freundin adjuvantissa, ruiskutettiin Wistar-rotan ihon alle ja eläimelle annettiin kahden viikon kuluttua ihonalle neljä kertaa kerran viikossa tehosterokotus, joka oli 50 pg hiiren slL-6R:ää Freundin epätäydellisessä adjuvantissa. Viikon kuluttua ensimmäisestä tehosterokotuksesta an-5 nettiin rotille laskimoon 50 pg hiiren slL-6R:ää, joka oli 100 plitrassa fosfaatilla puskuroitua keittosuolaliuosta (PBS).
Kolme päivää myöhemmin rotista poistettiin perna ja niiden splenosyyteille eli pernasoluille toteutettiin fuusiokäsittely hiiren p3U1-myeloomasolujen kanssa siten, että 10 solujen suhde oli 10:1. Soluja inkuboitiin 37 °C:ssa, yön ajan, 100 plitrassa RPMI 1640 -alustaa, joka sisälsi 10 prosenttia FBS:ää 96-kammioisten levyjen kammioissa (Falcon 3075), ja sitten niihin lisättiin 100 plitraa alustaa, joka sisälsi hypoksantiinia, aminopteriiniä ja tymidiiniä (FIAT). Puolet alustasta korvattiin FIAT-alustalla päivittäin, neljän päivän ajan.
15
Seitsemän päivää myöhemmin valittiin hiiren slL-6R:ää sitovalla määrityksellä (ELISA) hybridooma, joka tuotti anti-hiiri-slL-6R:ää. Lyhyesti sanottuna inkuboitiin 100 plitraa hybridooman viljelmäsupernatanttia levyssä, joka aiemmin oli päällystetty kaniinin polyklonaalisella rotan anti-lgG:n vasta-aineella (1 pg millitrassa). Levy pestiin 20 ja sitten sitä inkuboitiin hiiren slL-6R:n kanssa (100 pg millitrassa). Pesun jälkeen lisättiin kaniinin polyklonaalista anti-hiiri-IL-6R-vasta-ainetta 2 pg:aan saakka millitrassa, levy pestiin ja sitten sitä inkuboitiin alkaliseen fosfataasiin konjugoidun, vuohen polyklonaalisen anti-kaniini-IgG-vasta-aineen kanssa (Tago) 60 minuutin ajan.
25 Lopuksi pesun jälkeen levyä inkuboitiin alkalisen fosfataasin substraatin kanssa (Sigma 194; p-nitrofenyylifosfaatti) ja se luettiin 405 nm:ssä levylukijaa käyttämällä (Toso). Hybridooma, joka tunnistaa hiiren slL-6R:n, kloonattiin kaksi kertaa raja-^ laimennusmenetelmällä. Askitesnesteiden valmistusta varten ruiskutettiin BALB/c i o nu/nu -hiireen kaksi kertaa 0,5 millilitraa pristaania ja kolme päivää myöhemmin ruis- i 30 kutettiin sen vatsaonteloon 3 x 106 hybridoomasolua, jotka oli saatu aikaan. Kymme- x nen - kaksikymmentä päivää myöhemmin koottiin askitesneste ja siitä puhdistettiin monoklonaalinen vasta-aine MR16-1 siten, että käytettiin proteiini G -pylvästä (On- jn cogene Science), m ^ 35 Neutraloiva vaikutus MR16-1 :llä tuotettuun IL-6:n vasta-aineeseen tutkittiin liittämällä 3H-tymidiiniä MH60.BSF2-solujen avulla (Matsuda et ai., Eur. J. Immunol. 18:951 -956,1988). MH60.BSF2-soluja annosteltiin 96-kammioisen levyn kammioihin 1 x 104 solua 200 pl:ssa kammiota kohti ja sitten kammioihin lisättiin hiiren IL-6:tta (10 11 pg/ml)ja kammioihin lisättiin MR16-1- tai RS12-vasta-ainetta, minkä jälkeen soluja inkuboitiin 37 °C:ssa, 5-prosenttisessa C02:ssa, 44 tunnin ajan. Tämän jälkeen lisättiin kuhunkin kammioon 3H-tymidiiniä (yksi mCi/kammio) ja neljä tuntia myöhemmin niistä tutkittiin 3H-tymidiinin liittyminen.
5
Esimerkki 1
Kokeessa yksi käytettiin 31 transgeenistä hiirtä, joissa oli ihmisen IL-6-cDNA:ta ja jotka oli lisätty transgeenisestä B6 IL-6 -hiiristä (B6 IL-6 Tgm), ja käytettiin 11 nor-10 maalia poikueen jälkeläistä, joissa ei ollut ihmisen IL-6 cDNA:ta (molemmat olivat neljän viikon ikäisiä; koiraspuolisia). B6 IL-6 Tgm:t jaettiin viiteen ryhmään (ryhmä 1 -ryhmä 5), joissa kussakin oli kuusi eläintä ja joista vain ryhmä 1 koostui seitsemästä eläimestä. Normaalit poikueen jälkeläiset jaettiin viiden hiiren muodostamaan ryhmään kuusi ja ryhmään seitsemän, jossa oli kuusi hiirtä.
15
Anto-ohjelma oli seuraava:
Ryhmä 1 (B6 IL-6 Tgm): Neljän viikon ikäiselle hiirelle (kokeen ensimmäinen päivä) ruiskutettiin laskimoon rotan lgG1-vasta-ainetta (KH5) (kontrollivasta-aine) annokse-20 na, joka oli 2 mg 0,2 millilitrassa, ja viiden viikon ikäiselle (kokeen kahdeksas päivä) ja sitä vanhemmalle hiirelle ruiskutettiin ihon alle 100 pg KH5-vasta-ainetta kahdesti viikossa (joka kolmas ja neljäs päivä).
Ryhmä 2 (B6 IL-6 Tgm): neljän viikon ikäisille hiirille ruiskutettiin laskimoon MR16-1- 25 vasta-ainetta annoksena, joka oli 2 mg 0,2 millilitrassa, ja viiden viikon ikäisille sekä sitä vanhemmille hiirille ruiskutettiin ihon alle 100 pg MR16-1:htä kaksi kertaa viikos- ^ sa.
δ
C\J
i § Ryhmä 3 (B6 IL-6 Tgm): Neljän viikon ikäisille hiirille ruiskutettiin laskimoon 0,2 miliisi 30 litraa fosfaatilla puskuroitua keittosuolaliuosta ja viiden viikon ikäisille ja sitä vanhem- i mille hiirille ruiskutettiin ihon alle 100 pg MR16-1 :htä kaksi kertaa joka viikko.
CL
S3 Ryhmä 4 (B6 I-6 Tgm): Neljän viikon ikäisille hiirille ruiskutettiin laskimoon MR16- !£ 1 :htä 2 mg 0,2 millilitrassa ja viiden viikon ikäisille ja sitä vanhemmille hiirille ruisku in 35 tettiin ihon alle 400 pg MR16-1 :htä kerran joka toinen viikko.
12
Ryhmä 5 (B6 IL-6 Tgm): Neljän viikon ikäisille hiirille Ruiskutettiin laskimoon MR16-1 :htä 2 mg 0,2 millilitrassa ja viiden viikon ikäisille ja sitä vanhemmille hiirille ruiskutettiin ihon alle 1 mg MR16-1 :htä joka toinen viikko.
5 Ryhmä 6 (normaaleita B6-poikueen jälkeläisiä): Neljän viikon ikäisille hiirille ruiskutettiin laskimoon kontrollivasta-ainetta KH5 2 mg 0,2 millilitrassa ja viiden viikon ikäisille ja sitä vanhemmille hiirille ruiskutettiin ihon alle 100 pg KH5:ttä kaksi kertaa joka viikko.
10 Ryhmä 7 (normaaleita B6-poikueen jälkeläisiä): Neljän viikon ikäisille hiirille ruiskutettiin laskimoon MR16-1:htä 2 mg 0,2 millitlirassa ja viiden viikon ikäisille ja sitä vanhemmille hiirille ruiskutettiin ihon alle 100 pg MR16-1 :htä kaksi kertaa joka viikko.
Tässä yhteydessä käytetyt koemenetelmät olivat seuraavat: 15
Ruumiin painon mittaus ja virtsan proteiinin määrittäminen: Joka viikko mitattiin ruumiin paino ja määritettiin virtsan proteiini vi rtsan prote i i n i testi paperi Ha (Combistics Sa-kyo). Virtsan proteiinin lukemat, jotka olivat kolme plussaa (100-300 mg desilitrassa) tai sitä enemmän, otettiin positiivisiksi arvoiksi.
20
Veren keräys: Veri koottiin silmäkuopantakaisesta veriviemäristä joka toinen viikko kokeen alusta lähtien (neljän viikon ikäisiltä hiiriltä) ja kokonaisveri koottiin alaontto-laskimosta kokeen lopussa (18 viikon ikäisiltä hiiriltä).
25 Verisolujen laskemiset: Mikrosolulaskijaa (Sysmex F-800) käyttäen määritettiin veren valkosolut (WBC), punasolut (RBC) sekä verihiutaleet (PLT) samoin kuin hemoglo-^ biinin (HBG) määrä. Kokeen lopussa valmistettiin tiettyjä ryhmiä vastaavat (ryhmä 1, c3 2, 6 ja 7) mikroskoopin tippamaiset preparaatit ja toteutettiin valkoisten verisolujen 0 erittelylaskenta prosentteina.
- 30 C\1 1 lgG1-pitoisuuden määrittäminen verestä: Se mitattiin hiiren lgG1:lle spesifisellä ELI-SAIIa, siten että standardina käytettiin myeloomaproteiinia.
CO
LO
Γ-- !£ Veren IL-6:n pitoisuuden määritys: Se mitattiin hlL-6:lle spesifisellä ELISAIIa.
O OK
CM
Rotan anti-lgG:n vasta-aineen (IgG-luokka) tiitterin määrittäminen verestä: Koska annettu vasta-aine on hiirelle heterogeeninen vasta-aine, vasta-aineen tuotto annettua vasta-ainetta vastaan mitattiin ELISAIIa siten, että antigeeninä käytettiin rotan 13 lgG:tä. Tulos ilmaistiin yksiköinä siten, että standardina käytettiin aikuisen eläimen IL-6-Tgm-seerumia, joka oli annettu, rotalla kehitetty vasta-aine.
Veren kemiallisten parametrien määritys: Ryhmien 1, 2, 3, 6 ja 7 hiirien seerumeista 5 määritettiin kokeen lopussa kokonaisproteiini (TP), albumiini (Alb), glukoosi (Glu), triglyseridi (TG), kreatiniini (CRE), veren ureatyppi (BUN), kalsium (Ca), alkalinen fosfataasi (ALP), glutamiini-pyruvaattitransaminaasi (GOT) sekä glutamaattipyruvaat-titransaminaasi (GTP) siten, että käytettiin autoanalysaattoria (COBAS FARA II, Roche).
10
Luuytimen ja splenosyyttien FACS-analyysi: Kokeen lopussa analysoitiin solun pinta-antigeenit FACScanillä (Beckton Dickensian) luuytimestä ja splenosyyteistä, jotka oli saatu yhdeltä eläimeltä kustakin ryhmistä 1,2, 6 ja 7. Käytetyt vasta-aineet ovat vasta-aineita (Pharmingen), jotka on kohdistettu vastaavasti Gr-1:hteen (luuydinsolut), 15 CD4:ään, CD8:aan sekä B220:een (splenosyytit).
Autopsia eli ruumiinavaus: Kokeen lopussa toteutettiin autopsia ja mitattiin pernan paino ja pääelimet tutkittiin visuaalisesti.
20 Ruumiinpainot: Kunkin ryhmän ruumiinpainojen muutokset esitetään kuviossa 1. Ryhmissä 1 ja 3 ruumiinpainot kasvoivat. Muiden ryhmien piirissä ei havaittu mitään eroa ruumiinpainojen muutoksissa.
Virtsan proteiini: Ryhmässä 1, 13 viikon iästä lähtien, eläimillä alkoi ilmetä virtsan 25 proteiinin positiivisuutta (kuvio 2), neljä (kaksi 16 viikon ikäistä ja kaksi 17 viikon ikäistä) eläintä seitsemästä kuoli ruumiinavaukseen mennessä. Kuolemia ei kuiten-kaan ilmennyt muissa ryhmissä. Myös ryhmässä 3 kahdella kuudesta eläimestä virt-^ san proteiini tuli positiiviseksi kokeen lopussa, mutta tutkimusten perusteella positii- § vista virtsan proteiinin tulosta ei ollut yhdelläkään eläimellä muissa ryhmissä.
- 30
CM
x Hematologiset havainnot: Ryhmässä 1 havaittiin vähenemistä hemoglobiinin mää- “ rässä (kuvio 3) ja RBC-lukumäärissä (kuvio 4), ja aste tuli vakavammaksi iän myötä.
So Verihiutaleiden lukumäärä (kuvio 5) lisääntyi ohimenevästi, mutta laski nopeasti sen !£ jälkeen. Ryhmässä 3 havaittiin samanlainen suuntaus, vaikka se viivästyi vähän ° 35 ryhmään 1 verrattuna. Toisaalta hemoglobiinin taso eikä RBC vähentyneet, eivätkä verihiutaleet lisääntyneet eivätkä vähentyneet myöhemmin missään ryhmissä 2, 4 ja 5. Verinäytteiden mikroskooppisessa solujen erittelylaskennassa ilmeni, että ryhmässä 1 neutrofiilit ja monosyytit lisääntyivät ja lymfosyyttijakeessa ilmeni merkityk- 14 sellistä vähenemistä, mutta ryhmällä 2 on ilmennyt normaaliarvoja (taulukko 1). Myös ryhmien 6 ja 7 välillä ei ollut mitään merkittävää eroa.
C\J
δ c\j i
CD
O
C\j
X
cc
CL
CD
m m δ c\j
Taulukko 1_
Ryhmä Nuoruu- Kypsät Eosinofi Basofiilit Mo- Lymfo- siän neut- neutral® nosyytit syytit rofiilit 1 Keskiaivo 2,00 31,33 1,33 0,00 9,33 56,00 SD* 2,00 3,79 0,58 0,00 4,93 9,54 2 Keskiarvo 0,33 13,83 2,33 0,00 2,00 81,00 SD* 0,52 4,17 1,03 0,00 2,28 4,82 t-testi 0,0676 0,0000 0,0557 0,0129 0,006 6 Keskiarvo 0,30 14,10 2,80 0,00 1,30 81,40 SD* 0,45 4,60 0,91 0,00 1,04 4,08 n 7 Keksiarvo 0,42 10,67 2,42 0,08 0,58 85,75 ° SD* 0,38 2,32 0,97 0,20 0,49 1,92 § t-testi 0,6484 0,1405 0,5101 0,3816 0,1644 0,0427
N
£ *SD: Standardipoikkeama Q.
CO
in 16 lgG1 -pitoisuus veressä: On osoitettu, että ryhmässä 1 lgG1-pitoisuus lisääntyy huomattavasti, välittömästi kokeen alun jälkeen, ja se saavuttaa lopulta noin 100-kertaisesti pitoisuuden, joka on normaalilla hiirellä (kuvio 7). lgG1:n pitoisuuden nousu huomattiin ryhmässä 3 vähän myöhemmin kuin ryhmässä 1. Ryhmissä 2, 4 ja 5 5 lgG1 :n pitoisuus ei sitä vastoin noussut yhtään, ja se pysyi lähes samalla tasolla kokeen ajan. Toisaalta normaalissa hiiressä ei havaittu mitään muutosta, joka liittyi vasta-aineen antoon.
Veren hlL-6-pitoisuus: Veren hlL-6-pitoisuus vaihteli samalla tavalla kuin lgG1, siten 10 että se osoitti lisääntyvän ryhmissä 1 ja 3, kun taas se pysyi lähes samana muissa ryhmissä kokeen ajan.
Anti-rotta-IgG-vasta-aineen tiitteri veressä: Vasta-aine rotan lgG:n vasta-ainetta vastaan havaittiin ryhmissä 1, 3 ja 6 (taulukko 2). Kaikilla eläimillä ryhmissä 1 ja 3 on 15 osoitettu suuri tiitteri, kun taas ryhmässä 6 vain kahdella viidestä eläimestä osoitettiin tiitterin suurentuneen. Toisaalta muissa ryhmissä ei havaittu mitään merkittävää lisäystä.
C\J
δ c\j i
CD
O
C\j
X
cc
CL
CD
m m δ c\j
Taulukko 2 Rotan vasta-aineen vasta-aine hiirellä (yksiköitä millilitrassa)_
Ryhmä Ikä (viikkoja) 4 6 8 10 12 14 16 18 1 0,15 0,78 1,69 7,41 100< 100< 100< 100< 2 0,22 0,34 0,45 0,38 0,43 0,50 0,39 0,30 3 0,14 0,61 0,69 0,67 2,27 4,74 14,25 41,24 4 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. 0,57 5 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. 0,28 6 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. 3,55 l 7 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. 0,20 C\] -
(O
0 1 N.D: Ei määritetty 5 cc Q.
CO
in 18
Veren kemiallisten parametrien määritys: TP lisääntyi ja Alb väheni ryhmissä 1 ja 3. TG ja ALP vähenivät ryhmissä 1 ja 3 ja vieläpä Glu väheni ryhmässä 1. Ryhmässä 2 ei havaittu mitään tällaisia muutoksia.
C\J
δ c\j i
CD
O
C\j
X
cc
CL
CD
m m δ c\j
Taulukko 3_
Ryhmä TP Alb Glu TG CRE BUN Ca ALF
(g/dl) (g/dl) (mg/dl) (mg/dl) (mg/dl) (mg/dl) (mg/dl) (U/l 1 Kes- 14 2,41 77,4 20,7 0,4 34,8 8,6 27, kiar- vo SD 1,33 0,3 14,5 8,33 0,2 23,7 0,35 5,f 2 Kes 5,68 3,31 199 62,3 0,51 28,3 8,67 156 ki- arvo SD 0,3 0,2 29,5 10,9 0,22 4,08 0,58 14, 3 Kes- 12,6 2,29 253 41 0,61 26,4 9,82 54, kiar- vo SD 2,85 0,64 60,2 16,3 0,17 6,25 0,83 42, r 6 Kes- 5,09 3,84 289 105 0,87 27,9 8,9 181 c\i kiar- (D vo 9 SD 0,65 0,46 98,9 28,8 0,22 6,32 0,74 21, r-__________ l 7 kes· 5,86 3,63 300 94 0,75 26,8 8,98 196 £ kiar- oo vo » SD 0,53 0,34 25,5 20 0,2 5,26 0,82 21, 20 FACS-analyysi: Ryhmien 1,2, 6 ja 7 luuydinsolujen (BM) ja splenosyyttien (sp) analyysi paljasti, että voimakas lisäys oli Gr-1 :n sellaisten positiivisten solujen suhteessa, jotka olivat granulosyyttien esiastesoluja, ryhmän 1 BM-soluissa (kuvio 9 ja kuvio 10), mutta ryhmän 2 solujen arvot olivat samanlaiset kuin normaalien poikueiden jälkeläi-5 sillä. Ryhmien 6 ja 7 välillä ei ollut mitään olennaista eroa. Mitä tulee CD4-, CD8- ja B220-positiivisten solujen suhteeseen splenosyyteissä, ei ollut mitään eroa ryhmien välillä, paitsi että ryhmässä 1 CD8- ja B220-positiiviset solut vähenivät, mikä johtui plasmasolujen lisääntymisestä (taulukko 4).
10 Taulukko 4
Splenosyyttien pinta-antigeenien analyysi
Ryhmä CD4+ CD8+ B220+ % % % 1 13,2 5,4 23,1 2 18,5 14,3 50,0 3 19,9 15,0 53,1 4 13,9 10,6 57,3 1
Ruumiinavaushavainnot: Systeemisten lymfasolmukkeiden turpoaminen ja pernan suurentuminen olivat selviä ryhmissä 1 ja 3 (kuvio 11), ja samoin munuaisten värin poistuminen oli helposti havaittavissa. Havaittiin myös osittaisesti maksan laajen-o tumista. Näitä muutoksia ei havaittu muissa ryhmissä, eikä ollut mitään huomattavia
CvJ
^ 20 muutoksia paitsi, että havaittiin vähäistä pernan laajentumista ryhmissä 2, 4 ja 5 ° normaaleihin poikueiden jälkeläisiin verrattuina.
C\j | Tämän kokeen tulokset selitetään nyt seuraavalla tavalla. IL-6 Tgrmssä (ryhmä 1), co jolle oli annettu kontrollivasta-ainetta, havaittiin moninaisia oireita, kuten lgG1-
Ln 25 plasmasoluverisyys eli plasmasytoosi, anemia, verihiutalerunsaus, verihiutale-^ niukkuus, munuaisvika, veren epänormaaleja kemiallisia parametreja, jne.. Tuli kui- 00 tenkin ilmeiseksi, että MR16-1 voi tukahduttaa täydellisesti nämä oireet.
21
On tunnettua, että IL-6 aiheuttaa sen, että B-solut erilaistuvat lopuksi plasmasoluiksi [Muraguchi, A. et ai., J. Exp. Med. 167:332-344, 1988], ja IL-6 Tgm:n tapauksessa IL-6:n tuotto aiheutti lisääntymisen veren lgG1-pitoisuudessa ja seerumin TP:n pitoisuus pieneni ja Alb:n pitoisuus väheni. Nämä seikat osoittavat, että lgG1-5 plasmaverisyys on puhjennut.
Tämän aiheuttama systeemisten lymfakudosten, kuten lymfasolmukkeiden ja pernan, laajentuminen voisivat olla vastuussa siitä, että ruumiinpaino lisääntyy huolimatta yleisen tilan huononemisesta, jonka sairauden jatkuva paheneminen aiheuttaa 10 ryhmissä 1 ja 3. MR16-1 ei vain tukahduttanut täydellisesti tällaisia tiloja, vaan se esti myös veren IL-6-pitoisuuden lisääntymisen. Täten varmistuttiin siitä, että veren IL-6-pitoisuuden lisääntyminen iän mukana, kuten havaittiin IL-6 Tgm:n yhteydessä, liittyy suoraan plasmasoluverisyyden jatkuvaan pahenemiseen. Uskottiin sen tähden, että lisääntyneet plasmasolut tuottavat itse aktiivisesti IL-6:tta, joka lisää edelleen plas-15 masolujen kasvua, josta seuraa, että IL-6:tta tuotetaan suuria määriä.
Kuten IL-6:n vaikutukset hemosyytteihin, lisääntyvien verihiutaleiden vaikutus [Ishi-bashi, T. et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 86:5953-5957,1989; Ishibashi, T. et ai., Blood 74:1241-1244, 1989] ja indusoituvan makrosytaarisen (isopunasoluisen) 20 anemian vaikutus [Hawley, R. G. et ai., J. Exp. Med. 176:1149-1163, 1992] ovat tunnettuja. Sen lisäksi, mitä edellä esitettiin IL-6 Tgm:stä, havaitaan verihiutaleniuk-kuutta, joka liittyy ikääntymiseen ja jonka uskotaan liittyvän autoimmuniteetin kautta polyklonaalisen B solun aktivoitumiseen [Miyai, Tatsuya et ai., samassa julkaisussa].
25 MR16-1 inhiboi täydellisesti IL-6:n suorat ja epäsuorat vaikutukset hemosyyttiin, mutta se ei vaikuttanut normaalien poikueiden jälkeläisten verisolujen lukumäärään. Tä-^ ten varmistuttiin siitä, että IL-6-reseptorin vasta-aineen vasta-aine ei vaikuttanut ol- ° lenkaan hematosyytteihin. IL-6 Tgm:ssä havaittiin lisääntymistä Gr-1-positiivisten i o solujen suhteessa, joita soluja pidetään granulosyyttien prekursorisoluina, sekä peri- i 30 feeristen neutrofiilien suhteessa. Vaikka tiedetään, että IL-6 lisää neutrofiilejä, sen x yksityiskohtaista mekanismia ei vielä tunneta. Tässä tutkimuksessa havaittiin, että tämä vaikutus on ilmiö, joka tapahtuu luuytimessä prekursorisolujen tasolla. Tässä S tutkimuksessa havaittiin myös, että MR16-1 tukahdutti IL-6:n vaikutukset täydellises- ti, mutta sillä ei ollut vaikutusta neutrofiilien tasoon luuytimessä eikä perifeerisessä ^ 35 veressä.
M16-1 tukahdutti myös nefriitin puhkeamisen, joka havaittiin IL-6 Tgm:ssä. On raportoitu, että IL-6 liittyy läheisesti mesangiumsoluja tuottavaan nefriittiin mesangiumsolu- 22 jen autokriinisenä kasvutekijänä. Vaikka nefriitti IL-6 Tgm:ssä on varmistettu myös mesangiumsoluja tuottavaksi nefriitiksi, ei voida kieltää, että immuunijärjestelmän voimistuminen IL-6:lla liittyy mainittuun nefriittiin [Katsume, Asao et ai., A presentation at the 21 st Meeting of Japan Immunology Society, "Characterization of 5 SCID x (SCID x H-2ld hlL-6 transgenic mice"), 1991]. Joka tapauksessa, koska virtsan proteiinin ilmestyminen ja kuolemat tukahtuivat, tehtiin selväksi, että anti-IL-6-reseptorivasta-aine on tehokas tukahdutettaessa sellaisen nefriitin puhkeamista, jonka IL-6:n tuottaminen aiheuttaa.
10 IL-6 Tgm:ssä havaittiin merkittävä väheneminen seerumin Glu- ja Tg-pitoisuuksissa, jotka ovat kakeksian indikaattoreita. Tässä kokeessa havaittiin, että MR16-1-vasta-aineen anto oli tehokasta kakeksian parantamiseksi, koska Glu- ja Tg-arvot pienenivät ryhmässä 1, kun taas ryhmässä 2 nämä arvot pienenivät lähes normaalien arvojen tasolle.
15
Koska MR16-1 on rotan lgG1, joka on hiirelle heteroproteiini, on helposti otaksuttavissa, että annettua vasta-ainetta vastaan voidaan tuottaa sellaisia vasta-aineita, jotka tekisivät annetut vasta-aineet tehottomiksi.
20 Kun yritettiin saada aikaan immunologinen sietokyky siten, että kokeen ensimmäisessä herkistyksessä asetettiin alttiiksi suurelle antigeenimäärälle, muodostettiin ryhmiä, joille ensimmäisessä annossa annettiin laskimoon vasta-ainetta 2 mg hiirtä kohti. Sellaisten ryhmien joukossa, joille annettiin MR16-1:htä, tälle hoidolle alistetut ryhmät (ryhmä 1,4 ja 5) eivät tuottaneet yhtään havaittavaa rotan anti-lgG:n vasta- 25 ainetta antovälistä ja käytetystä annoksesta huolimatta. Mutta ryhmällä 3 on lopulta esiintynyt samoja oireita kuin ryhmällä 1, joka on ryhmä, jolle annetaan kontrollivas-^ ta-ainetta, vaikka rotan IgG-vasta-aineen vasta-aineen on tässä ryhmässä havaittu ° lisääntyvän ja sairauden puhkeamisen on havaittu vähän viivästyvän ryhmään 1 ver- 0 rattuna.
s 30 x Uskotaan sen tähden, että hoito oli tehokasta immunologisen sietokyvyn aikaan- saamiseksi, mutta rotan anti-lgG:n vasta-ainetta havaittiin myös kaikissa ryhmän 1 S eläimissä ja kahdella viidestä ryhmän 5 eläimistä, joille annettiin kontrollivasta-ainetta 1 saman ohjelman mukaan. Koska plasmasoluverisyyden jatkuva paheneminen saa ^ 35 aikaan polyklonaalisen B-solun aktivoitumisen IL-6 Tgrmssä, ei voida päätellä, että ryhmissä 1 ja 3 havaittu rotan anti-lgG:n vasta-aine on annetulle vasta-aineelle spesifinen vasta-aine. Tehtiin kuitenkin johtopäätös, että immunologisen vastustuskyvyn aikaansaava vaikutus, kun on altistettu suurelle määrälle antigeeniä ryhmien 2, 4 ja 5 23 ensimmäisessä herkistyksessä yhdistettynä spesifisten vasta-aineiden tuoton inhiboivaan vaikutukseen, johtuu suuren määrän annosta MR16-1 :htä, joka oli käytössä täydellisen vastustuskyvyn aikaansaamiseksi.
5 Tässä kokeessa selvitettiin, että IL-6-reseptorin vasta-aineen vasta-aine on erittäin tehokas erilaisia, sellaisia sairauksia vastaan, joita IL-6:n tuotto aiheuttaa, vaikuttamatta normaaliin tasoon.
Esimerkki 2 10
Tutkittiin hiiren IL-6-reseptorivasta-aineen vaikutusta kooloni 26:n indusoimaan ka-keksiamalliin. Kokeeseen käytetyt hiiret olivat kuuden viikon ikäisiä, koiraspuolisia BALB/c-hiiriä, joihin implantoitiin kylkeen ihon alle kooloni 26:n muodostama kahden millimetrin este kokeen ensimmäisenä päivänä. Hiiren IL-6:n reseptorin vasta-ainetta 15 MR16-1:htä (katso viite-esimerkki 2) annettiin laskimoon annoksena, joka oli 2 mg hiirtä kohti, ensimmäisenä koepäivänä, välittömästi ennen kooloni 26:n implantaatio-ta ja sitten ihon alle annoksena, joka oli 0,5 mg hiirtä kohti seitsemäntenä, 11., 14. ja 18. päivänä (n=7). Aiemmassa kokeessa on jo varmistettu, että neutraloivat hetero-proteiinin vasta-aineet eivät tule esiin tällä menetelmällä. Rotan lgG1-kontrollivasta-20 ainetta (KH5) annettiin kasvainta kantavalle kontrolliryhmälle saman ohjelman mukaan (n=7). Muodostettiin ryhmä, jolle annettiin PBS:ää, sellaisena kontrolliryhmänä (n=7), jolla oli kasvain. Kokeen alun jälkeen ruumiinpaino mitattiin joka päivä ja kokeen alusta 11. ja 15. päivänä mitattiin veren kemialliset parametrit ja ionisoidun kalsiumin määrä.
25
Sellaisessa ryhmässä, jolla oli kasvain, ruumiin paino laski huomattavasti kymme-^ nentenä päivänä ja sen jälkeen, kun verrattiin ryhmään, jossa ei ollut kasvainta, kun w taas ruumiin painon vähenemistä tukahduttava vaikutus ilmaistiin ryhmässä, jolle o annettiin MR16-1:tä. Veren triglyseridipitoisuus 11. päivänä ja veren glukoosipitoi- ^ 30 suus 15. päivänä esitetään vastaavasti kuvioissa 13 ja 14. Nämä arvot vähenivät x huomattavasti kontrolliryhmässä, jossa oli kasvain verrattuna sellaiseen kontrolliryh- mään, jolla ei ollut kasvainta, kun taas ryhmässä, jolle annettiin MR16-1 :tä, havaittiin S3 glukoosia tukahduttava taipumus ja triglyseridejä merkittävästi tukahduttava taipuisi mus.
§ 35
Ionisoituneen kalsiumin pitoisuus nousi huomattavasti 11. päivänä kontrolliryhmässä, jossa oli kasvain, verrattuna sellaiseen kontrolliryhmään, jossa ei ollut kasvainta, kun 24 taas ryhmässä, jolle annettiin MR16-1:tä, havaittiin merkittävä tukahduttava vaikutus (kuvio 15).
Toteutettiin koe eloonjäämisaikaan kohdistuvan vaikutuksen varmistamiseksi ja käy-5 tettiin samaa ohjelmaa kuin edellä on esitetty (n=10). Tulos oli, että havaittiin eloonjäämisaikaan kohdistuva vaikutus ryhmässä, jolle annettiin MR16-1 :tä.
Esimerkki 3 10 Tutkittiin IL-6-reseptorivasta-aineen vaikutus occ-1 :llä indusoituun kakeksiamalliin, johon liittyi hyperkalsemia eli veren liiallinen kalsiumpitoisuus. Kokeeseen käytetyt hiiret olivat kuuden viikon ikäisiä, koiraspuolisia, karvattomia hiiriä. Ensimmäisenä koepäivänä implantoitiin suomuista karsinoomasolulinjaa occ-1 hiiren kylkeen ihon alle. Ensimmäisenä koepäivänä, välittömästi ennen occ-1 :n implantaatiota annettiin 15 kullekin hiirelle laskimoon 2 mg:n annos hiiren IL-6-reseptorin vasta-ainetta MR16-1 ja sitten sitä annettiin 100 pg hiirtä kohti ihon alle seitsemäntenä ja kymmenentenä päivänä (n=6). Aiemmassa kokeessa on jo varmistettu, että heteroproteiinin, rotan vasta-aineen vastaiset, neutraloivat vasta-aineet eivät tule helposti esiin tässä menetelmässä. Kontrolliryhmälle, jonka koe-eläimillä oli kasvain, annettiin rotan lgG1:n 20 kontrollivasta-ainetta (KH5) saman ohjelman mukaan (n=6). Tämän lisäksi annettiin PBS:ää sellaiselle muodostetulle kontrolliryhmälle, jonka koe-eläimillä ei ollut kasvainta (n=7). Kokeen alun jälkeen mitattiin ruumiin paino ja ionisoituneen kalsiumin pitoisuus veressä 10. ja 12. päivänä kokeen aloittamisesta.
25 Ruumiin paino laski ryhmässä, jonka jäsenillä oli kasvain, mutta MR16-1 :tä saaneessa ryhmässä ei ilmennyt ruumiin painon muutosta kuin kontrolliryhmässä, jonka jä-£! senillä oli kasvain, mikä ilmaisee, että ruumiin painon väheneminen tukahtui (kuvio w 17).
CD
cp 30 Veren ionisoidun kalsiumin pitoisuus lisääntyi huomattavasti kontrolliryhmällä, jolla oli i kasvain, verrattuna sellaiseen kontrolliryhmään, jonka jäsenillä ei ollut kasvainta, kun “ taas MR16-1 :tä saaneessa ryhmässä ruumiin painon lisääntyminen tukahtui voimakin kaasti (kuvio 18).
LO
δ
CVI

Claims (4)

1. lnterleukiini-6-reseptorin vasta-aineen käyttö farmaseuttisen koostumuksen valmistukseen sellaisten sairauksien estämiseksi ja hoitamiseksi, joita interleukiini- 5 6:n tuotto aiheuttaa, jolloin sairaus on hyperimmunoglobulinemia.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että mainittu vasta-aine on monoklonaalinen vasta-aine.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että mainittu vasta-aine on PM-1-vasta-aine, kimeerinen vasta-aine tai uudelleen muodostettu humaani vasta-aine.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että mainittu vasta-aine 15 on uudelleen muodostettu humaani PM-1-vasta-aine. C\J δ c\j i CD O C\j X cc CL CD m m δ c\j
FI20115753A 1994-10-21 2011-07-15 Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttaman hyperimmunoglobulinemian hoitoon FI122970B (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP25701094 1994-10-21
JP25701094 1994-10-21
JP9502169 1995-10-20
PCT/JP1995/002169 WO1996012503A1 (fr) 1994-10-21 1995-10-20 Remede contre des maladies provoquees par la production d'il-6

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FI20115753A FI20115753A (fi) 2011-07-15
FI122970B true FI122970B (fi) 2012-09-14

Family

ID=17300476

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI971669A FI121455B (fi) 1994-10-21 1997-04-18 Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttamien sairauksien hoitoon
FI20105844A FI122406B (fi) 1994-10-21 2010-08-11 Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttamien sairauksien hoitoon, jolloin sairaus on nefriitti eli munuaistulehdus
FI20115753A FI122970B (fi) 1994-10-21 2011-07-15 Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttaman hyperimmunoglobulinemian hoitoon

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI971669A FI121455B (fi) 1994-10-21 1997-04-18 Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttamien sairauksien hoitoon
FI20105844A FI122406B (fi) 1994-10-21 2010-08-11 Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttamien sairauksien hoitoon, jolloin sairaus on nefriitti eli munuaistulehdus

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20070036785A1 (fi)
EP (3) EP1884524A3 (fi)
JP (1) JP4896093B2 (fi)
CN (4) CN100350973C (fi)
CA (1) CA2203182C (fi)
CZ (3) CZ296979B6 (fi)
FI (3) FI121455B (fi)
HK (1) HK1067062A1 (fi)
HU (2) HU227708B1 (fi)
NO (6) NO324046B1 (fi)
PL (1) PL182089B1 (fi)
RU (1) RU2147442C1 (fi)
WO (1) WO1996012503A1 (fi)

Families Citing this family (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
GB9702944D0 (en) * 1997-02-13 1997-04-02 Univ Manchester Reducing fibrosis
ATE547119T1 (de) 1997-03-21 2012-03-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Präventives oder therapeutisches mittel mit einem il-6-antagonisten als wirkstoff für durch sensibilisierte t-zellen vermittelte erkrankungen
KR20010022846A (ko) * 1997-08-15 2001-03-26 나가야마 오사무 항 인터루킨-6 수용체 항체를 유효성분으로서 함유하는 전신성 홍반성 낭창의 예방 및/또는 치료제
US6723319B1 (en) 1998-03-17 2004-04-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of treating inflammatory intestinal diseases containing as the ingredient IL-6 receptors antibodies
DE69934698T2 (de) 1998-08-24 2007-10-04 Chugai Seiyaku K.K. Mittel zur vorbeugung oder behandlung von pankreatitis die anti-il-6 receptor antikörper als aktive komponente enthalten
DE19948126A1 (de) * 1999-10-06 2001-04-12 Max Delbrueck Centrum Pharmazeutisches Mittel zur Behandlung von Kachexie und/oder kardiogenem Schock
DK1334731T3 (da) * 2000-10-25 2008-05-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Forebyggende eller terapeutisk middel mod psoriasis omfattende anti-IL-6-receptorantistof som aktiv bestanddel
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
SI1475101T1 (sl) 2002-02-14 2011-03-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Farmacevtski proizvodi iz raztopine, ki vsebuje protitelo
NZ537089A (en) * 2003-02-24 2007-07-27 Morinaga Milk Industry Co Ltd Interleukin 6 production inhibitor
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
SI1690550T1 (sl) 2003-10-17 2012-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Terapevtska sredstva za mezoteliom
US8617550B2 (en) 2003-12-19 2013-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist
EP3269738A1 (en) 2004-03-24 2018-01-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor
AR048335A1 (es) 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
EP1870459B1 (en) 2005-03-31 2016-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
HUE029021T2 (en) * 2005-06-21 2017-02-28 Xoma (Us) Llc IL-1beta-binding antibodies and fragments thereof
CA2625773C (en) 2005-10-14 2015-05-12 Fukuoka University Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation
KR101239051B1 (ko) * 2005-10-21 2013-03-04 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 심장질환 치료제
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
AU2007208678B2 (en) 2006-01-27 2013-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization
DK2009101T3 (en) 2006-03-31 2018-01-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibody modification method for purification of a bispecific antibody
DK2006381T3 (en) 2006-03-31 2016-02-22 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PROCEDURE FOR REGULATING ANTIBODIES BLOOD PHARMACOKINETICS
US9260516B2 (en) 2006-04-07 2016-02-16 Osaka University Method for promoting muscle regeneration by administering an antibody to the IL-6 receptor
MY159787A (en) 2006-06-02 2017-01-31 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
CN101528778A (zh) * 2006-08-18 2009-09-09 埃博灵克斯股份有限公司 用于治疗与il-6-介导的信号传导相关的疾病和病症的针对il-6r的氨基酸序列以及包括其的多肽
AU2007285695B2 (en) 2006-08-18 2012-05-24 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with IL-6-mediated signalling
EP2123302B1 (en) 2007-01-23 2015-12-09 Shinshu University Il-6 inhibitors to treat chronic rejection
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
WO2008144757A1 (en) * 2007-05-21 2008-11-27 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US8404235B2 (en) * 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US7906117B2 (en) 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
US20090238825A1 (en) * 2007-05-21 2009-09-24 Kovacevich Brian R Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
LT2164514T (lt) 2007-05-21 2017-03-10 Alderbio Holdings Llc Il-6 antikūnai ir jų naudojimas
HUE029635T2 (en) 2007-09-26 2017-03-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd A method for modifying an isoelectric point of an antibody by amino acid substitution in CDR
CN101939425B (zh) 2007-09-26 2014-05-14 中外制药株式会社 抗il-6受体抗体
SG193868A1 (en) 2007-09-26 2013-10-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modified antibody constant region
KR101643005B1 (ko) 2007-12-05 2016-07-28 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ｎｒ１０ 항체 및 그의 이용
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
DK2708559T3 (en) 2008-04-11 2018-06-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule capable of repeatedly binding two or more antigen molecules
MX2010012031A (es) 2008-05-13 2011-01-20 Novimmune Sa Anticuerpos anti-il-6/il-6r y metodos de uso de los mismos.
TW201503898A (zh) 2008-06-05 2015-02-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 神經浸潤抑制劑
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
US9452227B2 (en) * 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
WO2010107108A1 (ja) * 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 関節リウマチ治療剤
TWI682995B (zh) 2009-03-19 2020-01-21 日商中外製藥股份有限公司 抗體恆定區域改變體
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2417162A2 (en) 2009-04-10 2012-02-15 Ablynx N.V. Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
BRPI1013877A2 (pt) * 2009-04-10 2017-08-15 Ablynx Nv Sequências de aminoácidos melhoradas contra il-6r e polipeptídeos que compreendem os mesmos para o tratamento de doenças e distúrbios relacionados com il-6r
MA33405B1 (fr) 2009-05-15 2012-07-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorps anti-axl
WO2011037158A1 (ja) 2009-09-24 2011-03-31 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
SI3202785T1 (sl) 2009-10-26 2024-08-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek za proizvodnjo glikoziliranega imunoglobulina
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
WO2011066369A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antagonists of il-6 to raise albumin and/or lower crp
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
TWI609698B (zh) 2010-01-20 2018-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 穩定化的含抗體溶液製劑
WO2011108714A1 (ja) 2010-03-04 2011-09-09 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
DK2578231T3 (da) * 2010-05-28 2022-12-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antitumor-t-celle-reaktionsforstærker
US20130149302A1 (en) 2010-05-28 2013-06-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for pancreatic cancer
WO2012064627A2 (en) 2010-11-08 2012-05-18 Genentech, Inc. Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody
RU2620071C2 (ru) 2010-11-17 2017-05-22 Чугаи Сеияку Кабушики Каиша Мультиспецифическая связывающая антиген молекула, которая обладает альтернативной функцией к функции фактора свертывания крови viii
DK2643018T3 (da) 2010-11-23 2021-01-18 Vitaeris Inc Anti-il-6-antistoffer til behandling af oral mucositis
TWI812066B (zh) * 2010-11-30 2023-08-11 日商中外製藥股份有限公司 具有鈣依存性的抗原結合能力之抗體
WO2012101251A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Sanofi Human antibodies to pcsk9 for use in methods of treatment based on particular dosage regimens
KR20230005405A (ko) 2011-02-25 2023-01-09 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 ＦｃγＲＩＩｂ 특이적 Ｆｃ 항체
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
EP2747782B1 (en) 2011-09-23 2018-01-17 Ablynx NV Prolonged inhibition of interleukin-6 mediated signaling
TW201817744A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
EP3939996A1 (en) 2011-09-30 2022-01-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
CN108866101A (zh) 2011-10-28 2018-11-23 瑞泽恩制药公司 人源化il-6和il-6受体
EP2878305B1 (en) 2012-05-21 2017-07-19 Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology Pharmaceutical composition for use in preventing or treating stat3-mediated disease, comprising salvia plebeia r. br. extract or fraction thereof as active ingredient composition
EP2896291B1 (en) * 2012-09-13 2019-03-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gene knock-in non-human animal
JP6442404B2 (ja) 2013-06-11 2018-12-19 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 再発寛解型多発性硬化症（ｒｒｍｓ）患者の治療予後予測方法、及び新規治療適応判断方法
RU2674996C2 (ru) 2013-07-04 2018-12-14 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Иммуноферментный анализ с подавлением интерференции для определения антител к лекарствам в образцах сыворотки
CA2925256C (en) 2013-09-27 2023-08-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
EP3209327A1 (en) 2014-10-21 2017-08-30 Ablynx N.V. Treatment of il-6r related diseases
TWI779010B (zh) 2014-12-19 2022-10-01 日商中外製藥股份有限公司 抗肌抑素之抗體、含變異Ｆｃ區域之多胜肽及使用方法
PL3233921T3 (pl) 2014-12-19 2022-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Przeciwciała anty-c5 i sposoby ich stosowania
EP3253778A1 (en) 2015-02-05 2017-12-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibodies comprising an ion concentration dependent antigen-binding domain, fc region variants, il-8-binding antibodies, and uses therof
CN107249637A (zh) 2015-02-27 2017-10-13 中外制药株式会社 用于治疗il‑6相关疾病的组合物
EP3279216A4 (en) 2015-04-01 2019-06-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PROCESS FOR PREPARING POLYPEPTIDE HETERO OLIGOMER
PL3299810T3 (pl) 2015-05-19 2021-12-13 National Center Of Neurology And Psychiatry Sposób określania zastosowania nowej terapii u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym (sm)
US11174317B2 (en) 2015-06-04 2021-11-16 National Center Of Neurology And Psychiatry Therapeutic agent for mental illness comprising IL-6 inhibitor as active ingredient
CN107922507B (zh) 2015-08-18 2022-04-05 瑞泽恩制药公司 抗pcsk9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者
WO2017087708A1 (en) 2015-11-19 2017-05-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Lymphocyte antigen cd5-like (cd5l)-interleukin 12b (p40) heterodimers in immunity
EP3394098A4 (en) 2015-12-25 2019-11-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
EP3398965A4 (en) 2015-12-28 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHOD FOR PROMOTING THE EFFICACY OF PURIFYING A POLYPEPTIDE CONTAINING AN FC REGION
WO2017147169A1 (en) 2016-02-22 2017-08-31 Ohio State Innovation Foundation Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin a analogues or metabolites, and estradiol metabolites
US11072666B2 (en) 2016-03-14 2021-07-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell injury inducing therapeutic drug for use in cancer therapy
KR102538749B1 (ko) 2016-08-05 2023-06-01 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-8 관련 질환의 치료용 또는 예방용 조성물
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
WO2018139623A1 (en) 2017-01-30 2018-08-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-sclerostin antibodies and methods of use
EP3596175A4 (en) 2017-03-17 2021-01-13 The Ohio State Innovation Foundation NANOPARTICLE FOR THE DELIVERY OF CHEMOPREVENTIVE AGENTS
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
JP7235249B2 (ja) 2017-10-20 2023-03-08 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
CA3093729A1 (en) 2018-03-15 2019-09-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-dengue virus antibodies having cross-reactivity to zika virus and methods of use
CN114206442A (zh) 2019-01-31 2022-03-18 赛诺菲生物技术公司 用于治疗幼年特发性关节炎的抗il-6受体抗体
WO2020201362A2 (en) 2019-04-02 2020-10-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
CN117247451B (zh) * 2023-11-17 2024-02-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种针对人白介素6蛋白的单域抗体及其应用

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5670373A (en) * 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
CA1341152C (en) 1988-01-22 2000-12-12 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human b cell stimulatory factor-2
US5814307A (en) * 1989-04-10 1998-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Method for regulating cell growth, leukocyte differentiation and tumor cell growth using Oncostatin M to stimulate synthesis of IL-6
US5216128A (en) * 1989-06-01 1993-06-01 Yeda Research And Development Co., Ltd. IFN-β2/IL-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
ATE144713T1 (de) * 1989-07-20 1996-11-15 Tadamitsu Kishimoto Antikörper gegen menschlichen interleukin-6- rezeptor
JPH03155795A (ja) * 1989-11-13 1991-07-03 Chuzo Kishimoto マウス・インターロイキン―６レセプター蛋白質
JP3045172B2 (ja) * 1990-05-19 2000-05-29 岸本 忠三 Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット
JP3212597B2 (ja) * 1990-08-01 2001-09-25 忠三 岸本 ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット
JPH04187645A (ja) * 1990-11-22 1992-07-06 Chuzo Kishimoto インターロイキン―６作用抑制剤
DK0628639T3 (da) * 1991-04-25 2000-01-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Rekonstitueret humant antistof mod human interleukin-6-receptor
JPH05227970A (ja) * 1992-02-19 1993-09-07 Chugai Pharmaceut Co Ltd ヒトインターロイキン−６受容体に対する再構成ヒト抗体
JP3258348B2 (ja) * 1991-08-02 2002-02-18 東ソー株式会社 Ｈｉｖ感染阻害剤
FR2694767B1 (fr) * 1992-08-13 1994-10-21 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
DE69331703D1 (de) * 1992-08-21 2002-04-18 Us Gov Health & Human Serv B-lymphomazellinie und antigen
JP3525221B2 (ja) * 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤
US5888510A (en) * 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
US5759546A (en) * 1994-02-04 1998-06-02 Weinberg; Andrew D. Treatment of CD4 T-cell mediated conditions
CA2211578C (en) * 1995-02-13 2010-09-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Muscle protein proteolysis inhibiting agent containing il-6 receptor antibody
US20020187150A1 (en) * 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
US6723319B1 (en) * 1998-03-17 2004-04-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of treating inflammatory intestinal diseases containing as the ingredient IL-6 receptors antibodies
AU2000279625A1 (en) * 2000-10-27 2002-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Blood mmp-3 level-lowering agent containing il-6 antgonist as the active ingredient
UA80091C2 (en) * 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
MXPA04009243A (es) * 2002-04-12 2005-06-08 Pfizer Uso de ligandos para el receptor ep4 en el tratamiento de enfermedades vinculadas a il-6.
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases

Also Published As

Publication number Publication date
CN1164194A (zh) 1997-11-05
CZ298325B6 (cs) 2007-08-29
NO330588B1 (no) 2011-05-23
CN1306963C (zh) 2007-03-28
NO20073432L (no) 1997-06-18
FI122406B (fi) 2012-01-13
CA2203182A1 (en) 1996-05-02
CN101011574A (zh) 2007-08-08
CZ118997A3 (en) 1997-09-17
EP1884524A3 (en) 2008-06-25
EP2319535A2 (en) 2011-05-11
HU225392B1 (en) 2006-11-28
CN101829325A (zh) 2010-09-15
NO20073431L (no) 1997-06-18
HK1067062A1 (en) 2005-04-01
EP2319535A3 (en) 2011-08-31
NO971816L (no) 1997-06-18
JP4896093B2 (ja) 2012-03-14
EP0791359A4 (en) 2002-09-11
HU227708B1 (en) 2011-12-28
FI971669A0 (fi) 1997-04-18
FI20105844A (fi) 2010-08-11
AU689657B2 (en) 1998-04-02
CN101011574B (zh) 2012-10-03
HUT77035A (hu) 1998-03-02
FI121455B (fi) 2010-11-30
PL319785A1 (en) 1997-08-18
NO330615B1 (no) 2011-05-30
NO971816D0 (no) 1997-04-18
US20070036785A1 (en) 2007-02-15
PL182089B1 (en) 2001-11-30
RU2147442C1 (ru) 2000-04-20
CN100350973C (zh) 2007-11-28
EP0791359A1 (en) 1997-08-27
CA2203182C (en) 2009-11-24
NO330589B1 (no) 2011-05-23
FI971669A (fi) 1997-06-17
NO331944B1 (no) 2012-05-07
NO20073427L (no) 1997-06-18
CZ296979B6 (cs) 2006-08-16
NO324046B1 (no) 2007-08-06
HU0304064D0 (en) 2004-03-01
AU3709995A (en) 1996-05-15
CN1535728A (zh) 2004-10-13
NO330582B1 (no) 2011-05-16
WO1996012503A1 (fr) 1996-05-02
FI20115753A (fi) 2011-07-15
JP2008297315A (ja) 2008-12-11
NO20073429L (no) 1997-06-18
NO20073430L (no) 1997-06-18
EP1884524A2 (en) 2008-02-06
CZ298790B6 (cs) 2008-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI122970B (fi) Farmaseuttisia koostumuksia IL-6:n tuoton aiheuttaman hyperimmunoglobulinemian hoitoon
JP4540132B2 (ja) Ｉｌ−６レセプター抗体を含んでなる筋蛋白分解抑制剤
JP5834004B2 (ja) ループス治療のための方法および組成物
US20120058082A1 (en) Methods and compositions for treatment
EP1387697A2 (en) Methods of treating antibody-mediated pathologies using agents which inhibit cd21
JP3827350B2 (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤
Bergijk et al. Prevention of glomerulosclerosis by early cyclosporine treatment of experimental lupus nephritis
CA2361256A1 (en) Method of treating demyelinating inflammatory disease using ccr1 antagonists
JP2004224801A (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤
Nyirenda et al. THU0039 DECIPHERING DISEASE-RELEVANT T CELL SUBSETS IN RHEUMATOID ARTHRITIS IDENTIFIES A NOVEL CELLULAR SUBSET OF PATHOGENETIC IMPORTANCE IN THERAPEUTIC RESISTANCE.
Doran et al. Natural and artificial lipoproteins modulate lipopolysaccharide-induced tumour necrosis factor production in vitro and in vivo
Lin THE ROLE OF BP180 IN GRANULOPOIESIS AND NLRP3 INFLAMMASOME ACTIVATION IN BULLOUS PEMPHIGOID
JPH11335299A (ja) 抗癌剤または放射線療法の副作用軽減剤

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 122970

Country of ref document: FI

Kind code of ref document: B

MM Patent lapsed