JPH11335299A - 抗癌剤または放射線療法の副作用軽減剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】新規な抗癌剤または放射線療法の副作用軽減剤
の提供。 【解決手段】Ｆａｓアンタゴニストを有効成分とする抗
癌剤または放射線療法の副作用予防・軽減剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はＦａｓアンタゴニス
トを有効成分として含有することを特徴とする抗癌剤ま
たは放射線療法の副作用予防・軽減剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】Ｆａｓは、ヒト線維芽細胞でマウスを免
疫して得られたモノクローナル抗体であるＦａｓ抗体
（Ｙｏｎｅｈａｒａ Ｓ．等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，
１６９巻、１７４７−１７５６頁、１９８９年）によっ
て認識され、アポトーシスのシグナルを細胞に伝達する
細胞表面抗原である。Ｉｔｏｈ Ｎ．等によって、Ｆａ
ｓ遺伝子がクローニングされ、Ｆａｓが約４５ｋＤの細
胞膜上の蛋白質であり、そのアミノ酸配列からＴＮＦレ
セプターファミリーに属することが判明した（Ｃｅｌ
ｌ，６６巻、２３３−２４３頁、１９９１年）。また、
マウスＦａｓ遺伝子もクローニングされ、Ｆａｓ ｍＲ
ＮＡが、マウスの胸腺、肝、肺、心臓、卵巣で発現して
いることが確認された（Ｗａｔａｎａｂｅ−Ｆｕｋｕｎ
ａｇａ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８巻、１２７４
−１２７９頁、１９９２年）。

【０００３】ヒトＦａｓリガンドは、Ｆａｓを発現する
細胞に対してアポトーシスを誘導する生体内分子とし
て、Ｎａｇａｔａ等により報告されたポリペプチドであ
る（Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｔ．等、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、６巻、１５６７−１
５７４頁、１９９４年）。ヒトＦａｓリガンドは、ＴＮ
Ｆファミリーに属する分子量約４０ｋＤのII型糖蛋白質
で、ＴＮＦと同様に、生体内で３量体を形成すると考え
られている（Ｔａｎａｋａ Ｍ．等、ＥＭＢＯＪｏｕｒ
ｎａｌ，１４巻、１１２９−１１３５頁、１９９５
年）。また、ヒトＦａｓリガンドはラットＦａｓリガン
ド（Ｓｕｄａ Ｔ．等、Ｃｅｌｌ，７５巻、１１６９−
１１７８頁、１９９３年）やマウスＦａｓリガンド（Ｔ
ａｋａｈａｓｈｉ Ｔ．等、Ｃｅｌｌ，７６巻、９６９
−９７６頁、１９９４年）と細胞外領域において高いホ
モロジーを有しており、ヒトＦａｓリガンドはヒトＦａ
ｓのみでなくマウスＦａｓをも認識し、アポトーシスを
誘導することができる。逆に、ラットＦａｓリガンド及
びマウスＦａｓリガンドも、ヒトＦａｓを認識してアポ
トーシスを誘導することができる。

【０００４】また、Ｆａｓを介するアポトーシスの細胞
内シグナル伝達機序に関しても研究が進んでおり、Ｆａ
ｓの細胞内領域、特にデスドメイン（Ｄｅａｔｈ ｄｏ
ｍａｉｎ）と呼ばれる領域と相互作用してシグナルを伝
達または抑制する因子の同定及びクローニングが報告さ
れている他、インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）
関連チオールプロテアーゼがＦａｓを介するアポトーシ
スのシグナル伝達に寄与している可能性が示唆されてい
る。近年、アポトーシス、特にＦａｓを介するアポトー
シスと種々の疾患及び生理現象との関連が示唆されてい
る。たとえば、ウイルス性劇症肝炎における肝細胞死及
びある種の自己免疫疾患等において、Ｆａｓを介するア
ポトーシスの異常が関与する可能性が示唆されている。
また、Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド系はアポトーシス以外の
機能、たとえば、好中球に作用して起炎症性に働く作用
等も担っている可能性が示唆されている（Ｋａｙａｇａ
ｋｉ Ｎ．等、臨床免疫 ２８巻、６６７−６７５頁、
１９９６年）。

【０００５】現在の抗癌剤は、大別するとマイトマイシ
ン、ブレオマイシン及びドキソルビシン等の抗生物質、
ニトロソウレア剤及びシクロフォスファミド等のアルキ
ル化剤、フルオロウラシル及びメトトレキサート等の代
謝拮抗剤、エトポシド及びカンプトテシン等の植物成分
製剤並びにシスプラチン等多種の抗癌剤があり、広く臨
床で使用されている。しかし、抗癌剤は癌細胞に対する
効果が強いほど、正常細胞または生体に対する副作用が
強いために充分な効果が上げられていない。例えば、マ
イトマイシンの血小板減少、ニトロソウレア系の造血障
害及び腎毒性、シクロフォスファミドの消化器毒性、シ
スプラチンの腎毒性及び後述するブレオマイシンの副作
用等がよく知られている。したがって、多くの癌におい
て抗癌効果を上げるためまたは副作用を軽減するため
に、化学療法、放射線療法または外科的療法とがそれぞ
れ組み合わされて行われている。しかし、放射線療法に
おいても脱毛及び呼吸器障害等の副作用が知られてお
り、組み合わせ療法も効果の発揮には限度が生じてい
る。

【０００６】ブレオマイシンは、活性酸素との複合体を
形成してＤＮＡ鎖を切断する機序により抗癌効果を示
す。皮膚癌、頭頸部癌、肺癌、食道癌、子宮頸癌、悪性
リンパ腫、神経膠腫及び甲状腺癌の適応として広く使用
されている。しかしブレオマイシンの副作用は呼吸器障
害、皮膚毒性、粘膜障害、発熱及び腎毒性が知られてお
り、そのために投与量が限定されている。副作用の中で
もびまん性肺疾患を引き起こすことが知られている呼吸
器障害は最も重大な副作用であり、比較的頻度も多い。
これはブレオマイシンが肺に高濃度に集積しやすく、ブ
レオマイシンを加水分解する酵素も肺に少なく不活化さ
れにくいためと考えられている（Ｏｈｔｓｕｋａ Ｍ．
等、臨床免疫 ２２巻、９１４〜９２０頁、１９９０
年）。発明者らは、マウスの肺にブレオマイシンを吸入
させると、気管支及び肺胞上皮細胞にアポトーシスが起
こること、並びに肺胞上皮細胞にＦａｓ、及び浸潤Ｔ細
胞にＦａｓリガンドの発現が認められることを報告して
いる（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏｌ．、１６巻、９１〜１０１頁、１９９７年）。し
かしながら、上記の病態にＦａｓ／Ｆａｓリガンドを介
したアポトーシスが、直接若しくは間接的に関与してい
るかどうかは依然として不明である。

【０００７】ブレオマイシンの他にもドキソルビシン、
シスプラチン、マイトマイシン、フルオロウラシル、カ
ンプトテシン及びシクロフォスファミド等もＦａｓ／Ｆ
ａｓリガンドを介したアポトーシスを誘導することが報
告されている（Ｍｉｚｕｔａｎｉ Ｙ．、Ｃａｎｃｅ
ｒ，７９巻、１１８０〜１１８９頁、１９９７年、Ｍｉ
ｃｈｅａｕ Ｏ．、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎ
ｓｔ．、８９巻、７８３〜７８９頁、１９９７年、Ｌｅ
ｅ Ｊ．Ｈ．，Ｊ．Ｋｏｒｅａｎ Ｍｅｄ．Ｓｃｉ、１
２巻、１８５〜１８９頁、１９９７年）。これらの他に
もアルキル化剤、代謝拮抗剤、または植物成分製剤（Ｋ
ａｔａｏｋａ Ｙ．等、最新医学、４９巻、１１５２〜
１１５７頁、１９９４年、Ｋｏｈｎ Ｋ．Ｗ．，Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５６巻、５５３３〜５５４
６頁、１９９６年）等様々な作用機序を有する抗癌剤に
よるアポトーシスの誘導が報告されている。この様に抗
癌剤とアポトーシスの関係が研究されているが、現在の
ところ、アポトーシスを抑制するという新規な作用機序
を持つＦａｓアンタゴニストを含有する抗癌剤の副作用
予防・軽減剤は全く知られていない。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、Ｆａ
ｓ／Ｆａｓリガンド系を介するアポトーシスを抑制する
という新規な作用機序による抗癌剤または放射線療法の
副作用予防・軽減剤を提供することである。より詳しく
は、本発明はＦａｓアンタゴニストを有効成分とする抗
癌剤または放射線療法の副作用軽減剤及び予防・治療剤
を提供する。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、癌患者あ
るいは抗癌剤または放射線療法の副作用に侵されている
患者を救うべく、Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド系の機能及び
Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド系を介するアポトーシスと抗癌
剤または放射線療法の副作用の関連性を鋭意研究してき
たが、抗癌剤の副作用モデルにおいてＦａｓアンタゴニ
ストがその副作用または病態を改善することを見出し、
本発明を完成した。すなわち、本発明は、下記の予防・
治療剤に関するものである。 （１）Ｆａｓアンタゴニストを有効成分とする抗癌剤ま
たは放射線療法の副作用予防・軽減剤。 （２）前記ＦａｓアンタゴニストがＦａｓ−Ｆａｓリガ
ンドの結合を抑制する物質である（１）に記載の副作用
予防・軽減剤。 （３）前記ＦａｓアンタゴニストがＦａｓ誘導体である
（１）または（２）のいずれかに記載の副作用予防・軽
減剤。 （４）前記Ｆａｓアンタゴニストが抗Ｆａｓリガンド抗
体である（１）または（２）のいずれかに記載の副作用
予防・軽減剤。 （５）前記副作用がアポトーシスの異常が関与すること
を特徴とする（１）〜（４）のいずれかに記載の副作用
予防・軽減剤。 （６）前記副作用が呼吸器疾患であることを特徴とする
（１）〜（５）のいずれかに記載の副作用予防・軽減
剤。 （７）前記副作用がびまん性肺疾患であることを特徴と
する（１）〜（５）のいずれかに記載の副作用予防・軽
減剤。 （８）前記抗癌剤がアポトーシスを誘導することを特徴
とする請求項（１）〜（５）のいずれかに記載の副作用
予防・軽減剤。

【００１０】

【発明の実施の形態】以下にさらに詳細に本発明を説明
する。本発明の抗癌剤または放射線療法の副作用予防・
軽減剤の対象となる副作用には種々の抗癌剤による副作
用が含まれる。副作用の原因となる抗癌剤はアルキル化
剤、代謝拮抗剤、抗生物質製剤、植物成分製剤またはそ
の他の抗癌剤等が含まれる。アルキル化剤はイホスファ
ミド、ナイトロジェンマスタード、ニムスチン、カルボ
コン、シクロホスファミド、ダカルバジン、チオテパ、
トシルサニンルロスルファン、ブスルファン、ミトブロ
ニトール、メルファラン、ラニムスチンまたはエストラ
ムスチン等が含まれる。代謝拮抗剤はエノシタビン、カ
ルモフール、シタラビン、テガフール、ドキシフルリジ
ン、ヒドロキシカルバミド、フルオロウラシル、メトト
レキサートまたはメルカプトプリン等が含まれる。抗生
物質製剤はアクチノマイシンＤ、アクラルブシン、イダ
ルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビ
シン、ピラルビシン、ブレオマイシン、ジノスタチンス
チマラマー、ネオカルチノスタチン、マイトマイシンＣ
またはペプロマイシン等が含まれる。植物製剤はエトポ
シド、カンプトテシン、イリノテカン、ビンクリスチ
ン、ビンデシンまたはビンブラスチン等が含まれる。そ
の他の抗癌剤はアセグラトン、ウベニメクス、アスパラ
ギナーゼ、ファドロール、プラカルバジン、ミトキサン
トロン、カルバプラスチン、タモキシフェン、トレミフ
ェン、クレスチン、メドロキシプロゲステロン、シスプ
ラチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、トレチノイン、
ネダプラチン、ピシバニール、フルタミド、ペントスタ
チン、ポロフィマーナトリウムまたはレンチナン等が含
まれる。これらの抗癌剤または放射線療法により種々の
副作用が生じる。副作用を臓器により大別すると血液に
及ぼす障害（造血器障害または骨髄抑制等）、消化器障
害、呼吸器障害、皮膚障害、神経障害、生殖器障害、心
障害、肝障害、泌尿器障害、内分泌障害、免疫機能障害
または感染症が含まれる。その他にも低血糖、高血糖、
発熱、注射局所の疼痛、血栓性静脈炎、耳下腺痛、奇形
または二次的発癌等の障害が含まれる。

【００１１】本発明の抗癌剤または放射線療法の副作用
予防・軽減剤の対象となる副作用には放射線療法による
副作用が含まれる。放射線療法の副作用は急性障害また
は晩発障害がある。急性障害は皮膚障害、口腔等の粘膜
障害、悪心、嘔吐、下痢、嚥下困難、喉頭浮腫、呼吸困
難、脱毛または頭蓋内圧亢進が含まれる。晩発障害は白
内障、脳壊死、歯若しくは顎骨の壊死、食道狭窄、間質
性肺炎／肺線維症、心不全、イレウス、重腸出血、膀胱
炎または二次的誘発癌等が含まれる。

【００１２】本発明の抗癌剤または放射線療法の副作用
予防・軽減剤の対象となる副作用のうち、好ましくは呼
吸器障害が対象となる。呼吸器障害には間質性肺炎／肺
繊維症、肺炎、喉頭浮腫または呼吸困難等が含まれる。
また、呼吸器障害を誘引する抗癌剤にはブレオマイシ
ン、ブスルファン、メトトレキサートまたはメルカプト
プリン等が含まれる。上述のように放射線療法も呼吸器
障害を誘引する。

【００１３】本発明の抗癌剤または放射線療法の副作用
予防・軽減剤はこれら種々の抗癌剤または放射線療法に
よる種々の副作用が対象となるが、好ましくはアポトー
シスを誘導する抗癌剤の副作用が対象であり、より好ま
しくはＦａｓを介するアポトーシスを誘導する抗癌剤の
副作用が対象である。また、本発明の抗癌剤または放射
線療法の副作用予防・軽減剤はこれら種々の抗癌剤また
は放射線療法による種々の副作用が対象となるが、好ま
しくは抗癌剤または放射線療法のアポトーシスの異常が
関与する副作用が対象であり、より好ましくは抗癌剤ま
たは放射線療法のＦａｓを介するアポトーシスの異常が
関与する副作用が対象である。Ｆａｓアンタゴニストが
各副作用で起こっているアポトーシスを抑制し、副作用
の予防・治療効果をもたらす。なお、治療対象としては
ヒトが重要であるが、ヒト以外の哺乳類も含みうる。

【００１４】本発明で使用されるアポトーシスを抑制す
る物質とは、アポトーシスを抑制または阻害するもので
あれば特に限定されない。具体的にはＦａｓアンタゴニ
ストまたはＦａｓ−Ｆａｓリガンドの結合を抑制する物
質がある。これらは、Ｆａｓによるシグナルの発生また
は伝達をいずれかの段階で遮断し、Ｆａｓ／Ｆａｓリガ
ンド系の機能または生物作用（特にアポトーシス）を抑
制するものであれば特に限定されず、Ｆａｓリガンド若
しくはＦａｓの作用、機能若しくは発現を抑制するも
の、Ｆａｓリガンド細胞外領域若しくはＦａｓ細胞外領
域と相互作用するもの、ＦａｓリガンドとＦａｓの相互
作用を抑制するもの、Ｆａｓ細胞内領域とそれと相互作
用する細胞内因子との相互作用に影響するもの、または
Ｆａｓを介するアポトーシスのシグナル伝達に関する細
胞内因子（例えばＩＣＥ様プロテアーゼ）の活性を抑制
するもの等のさまざまな作用機序を有するものが含まれ
る。また、タンパク質性の高分子物質または低分子の化
合物のいずれもが含まれる。

【００１５】より具体的には、Ｆａｓを介するアポトー
シスを抑制する活性を有する、Ｆａｓ誘導体、抗Ｆａｓ
抗体、抗Ｆａｓリガンド抗体、Ｆａｓ若しくはＦａｓリ
ガンドの遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレオチ
ド、Ｆａｓ若しくはＦａｓリガンドのｍＲＮＡに対する
アンチセンスオリゴヌクレオチド、Ｆａｓの細胞内領域
と相互作用する物質またはＩＣＥ阻害剤が挙げられる。
ここで、本発明で用いるＦａｓアンタゴニストとして
は、Ｆａｓを介するアポトーシスを抑制する作用を有す
る、Ｆａｓ誘導体、抗Ｆａｓ抗体または抗Ｆａｓリガン
ド抗体が好ましい。さらに、抗Ｆａｓ抗体または抗Ｆａ
ｓリガンド抗体はその治療対象由来のそれぞれの種のＦ
ａｓまたはＦａｓリガンドを抗原とする抗体が好まし
い。例えば、ヒトの治療にはヒト由来のＦａｓまたはＦ
ａｓリガンドを抗原とする抗体すなわち抗ヒトＦａｓ抗
体または抗ヒトＦａｓリガンド抗体が好ましい。また、
抗Ｆａｓリガンド抗体はキメラ抗体またはヒト化抗体が
好ましい。キメラ抗体は、例えばヒトの治療にはヒト抗
体からの定常領域及び非ヒト抗体からの可変領域からな
るキメラ抗体が好ましい。ヒト化抗体は、例えばヒトの
治療には定常領域及びフレームワーク領域（ＦＲ）がヒ
ト由来で、相補性決定領域（ＣＤＲ）が非ヒト由来であ
るのが好ましい。非ヒト抗体は、ヒトの治療に用いる際
には比較的循環半減期が短い、重要な免疫グロブリンの
機能的特性を欠くまたは免疫原性を有する等の生物学的
短所が生じることがある。キメラ抗体またはヒト化抗体
はこれらを克服する。また、本発明で用いるＦａｓアン
タゴニストは、国際特許出願公開公報ＷＯ９５／１３２
９３などに記載されている適当なアッセイ法においてＦ
ａｓ発現細胞のアポトーシスを抑制するものが好ましい
（本明細書はこの公報を引用し、これをもって本明細書
の一部とする。）。

【００１６】なお、本発明で用いられる抗体はポリクロ
ーナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよ
く、また、本発明に使用される抗体の分子種は特に限定
されない。抗原に結合しＦａｓを介するアポトーシスを
阻害するかぎり、通常の形態の抗体分子であってもよい
し、抗体の断片も使用することができる。これらのうち
でも特に平成７年６月２２日付で日本国茨城県つくば市
東一丁目一番三号の工業技術院生命工学工業技術研究所
に寄託し（受託番号Ｐ−１５００２）、さらに平成８年
５月９日付で原寄託から国際寄託に移管した（受託番号
ＦＥＲＭ ＢＰ−５５３５）ハイブリドーマＦ９１９−
９−１８により産生されるマウスＦ９１９−９−１８抗
体が好ましい例である。本発明で用いる抗Ｆａｓリガン
ド抗体または抗Ｆａｓ抗体は、公知技術を利用して作製
することが出来る。例えば国際特許出願公開公報ＷＯ９
５／１３２９３及び国際特許出願公開公報ＷＯ９５／０
２２９０等に作成方法が記載されている（本明細書はこ
の公報を引用し、これをもって本明細書の一部とす
る。）。本発明で用いる事ができるキメラ抗体は、既知
のキメラ抗体の製造方法を用いて製造することができ
る。例えば国際特許出願公開公報ＷＯ９５／１３２９３
の実施例１にキメラ蛋白質の作成方法が記載されている
（本明細書はこの公報を引用し、これをもって本明細書
の一部とする。）。

【００１７】本発明に用いるヒト化抗体は、Ｒｉｅｃｈ
ｍａｎｎ Ｌ．等、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻、３２３
頁、１９８８年、ヨーロッパ特許公報第０２３９４００
号公報、Ｑｕｅｅｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６巻、１００２９号、１９８９
年、国際特許出願公開公報ＷＯ９０／０７８６１、国際
特許出願公開公報ＷＯ９２／１１０１８、Ｃｏ等、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８巻、
２８６９頁、１９９１年、Ｃｏ等、Ｎａｔｕｒｅ、３５
１巻、５０１頁、１９９１年及びＣｏ等、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．、１４８巻、１１４９頁、１９９２年等に開示
されている方法を用いて製造することができる。（本明
細書はこの文献を引用し、これをもって本明細書の一部
とする。）本発明の好適な例としては、国際特許出願公
開公報ＷＯ９７／０２２９０の実施例に開示されている
マウス抗体Ｆ９１９−９−１８抗体のＣＤＲを有するヒ
ト化抗Ｆａｓリガンド抗体が挙げられる。

【００１８】本発明で使用されているＦａｓ誘導体は、
少なくともＦａｓリガンドとの結合能を有するかまたは
Ｆａｓリガンドによるアポトーシスを抑制するものであ
れば、特に限定されない。公知のＦａｓアミノ酸配列中
に１以上のアミノ酸が欠失、置換または付加といった任
意の変異を有し、Ｆａｓリガンドとの結合活性を維持し
たまま、Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド系の生物作用（特にＦ
ａｓを介するアポトーシス）を抑制するものが含まれ
る。具体的には、Ｆａｓ変異体、切断型（ｔｒｕｎｃａ
ｔｅｄ ｆｏｒｍ）Ｆａｓ、キメラタンパク質、融合タ
ンパク質または化学的に修飾されたもの等が含まれる。
なお、その由来となるＦａｓは上記の性質を有する限
り、その動物種を問わないが、抗原性を考慮すればヒト
由来のものを使用するのが好ましい。

【００１９】より具体的には、公知のＦａｓの細胞外領
域若しくは膜貫通領域を欠失したＦａｓ、またはＦａｓ
細胞外領域と他のタンパク質とのキメラタンパク質（例
えばヒトＦａｓ細胞外領域とヒト免疫グロブリンのＦｃ
領域のキメラタンパク質であるヒトＦａｓ−Ｆｃ等）が
挙げられる。Ｆａｓ誘導体は、いずれの製法のものでも
良く、公知の配列及び公知の遺伝子組換技術等により製
造することができる。例えば国際特許出願公開公報ＷＯ
９５／１３２９３の実施例１及び国際特許出願公開公報
ＷＯ９７／４２３１９の実施例中等に作成方法が記載さ
れている（本明細書はこの公報を引用し、これをもって
本明細書の一部とする。）。また、ＦａｓのＮ末端に欠
失を有するＦａｓ誘導体も好ましく、これらのうちでも
特に平成８年３月１４日付けで日本国茨城県つくば市東
一丁目一番三号の工業技術院生命工学工業技術研究所に
寄託し（受託番号Ｐ―１５５１４及び受託番号Ｐ−１５
５１５）、さらに平成９年３月６日付で原寄託から国際
寄託に移管（受託番号ＦＥＲＭＢＰ−５８５４及び受託
番号ＦＥＲＭＢＰ−５８５５）されている大腸菌が含む
プラスミド（ｐＭ１３０４及びｐＭ１３１７）にコード
されているＦａｓ誘導体ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ
（国際特許出願公開公報ＷＯ９７／４２３１９）は、公
知のヒトＦａｓのＮ末端の１番目から２９番目までのア
ミノ酸を欠失したＦａｓ細胞外領域を含有する誘導体で
あり、活性が高く、本発明の肝硬変の予防・治療剤の有
効成分として好適な例である（本明細書はこの文献を引
用し、これをもって本明細書の一部とする。）。これら
の本発明に用いるＦａｓ誘導体は、適当なアッセイ法に
よりＦａｓリガンドに結合活性またはＦａｓを介するア
ポトーシスの抑制活性を有することがわかる。

【００２０】本発明で使用されるＦａｓまたはＦａｓリ
ガンドの遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドまたはＦａｓ若しくはＦａｓリガンドのｍＲＮＡに対
するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｆａｓまたは
Ｆａｓリガンドの発現を抑制するものであれば、その配
列は限定されない。その例として国際特許出願公開公報
ＷＯ９５／１３２９３の実施例２０に開示されているＦ
ａｓリガンドのアンチセンスオリゴヌクレオチド等が挙
げられる（本明細書はこの公報を引用し、これをもって
本明細書の一部とする。）。

【００２１】本発明の抗癌剤または放射線療法の副作用
予防・軽減剤は、抗癌剤または放射線療法の副作用に侵
されている患者に対して抗癌剤の副作用の治療剤として
使用することが可能である。また、抗癌剤を投与される
患者または放射線療法を施される患者に対して抗癌剤の
副作用に対する予防剤として使用することが可能であ
る。本発明の抗癌剤または放射線療法の副作用予防・軽
減剤は、上述のＦａｓアンタゴニストを含有することを
特徴とし、少なくとも一種の医薬用担体または媒体（例
えば滅菌水、生理食塩水、植物油、鉱油、高級アルコー
ル、高級脂肪酸または無害性有機溶媒等、さらには必要
に応じて賦形剤、着色剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性
剤、溶解補助剤、吸着防止剤、安定化剤、保存剤、酸化
防止剤、緩衝剤、等張化剤または無痛化剤等）を適宜組
み合わせて医薬組成物やキットの形態を取ることがで
き、経口的に、または静脈内、冠動脈内、皮下、筋肉
内、経皮、吸入、直腸内若しくは局所等の非経口的に投
与することができる。好ましくは非経口的に、全身また
は局部的に、急速または持続的に投与することができ
る。

【００２２】ヒトに対する投与量は患者の病態、年齢ま
たは投与方法により異なるが、適宣適当な量を選択する
ことが必要である。例えば、全身投与の場合、約０．０
１〜１００ｍｇ／Ｋｇの範囲で適当な分割容量を選択す
ることが可能である。しかしながら、本発明の抗癌剤ま
たは放射線療法の副作用予防・軽減剤の使用はこれらの
投与方法または投与量に制限されるものではない。さら
に、Ｆａｓ−Ｆａｓリガンドの結合を抑制する物質若し
くは抗Ｆａｓリガンド抗体等の複数のＦａｓアンタゴニ
ストを組み合わせて使用しても、または他の薬剤と併用
しても良い。

【００２３】本発明の抗癌剤または放射線療法の副作用
予防・軽減剤は常法に従って製剤化することができる。
例えば注射用製剤は、精製されたＦａｓアンタゴニスト
（Ｆａｓ−Ｆａｓリガンドの結合を抑制する物質若しく
は抗Ｆａｓリガンド抗体等）を生理食塩水若しくは緩衝
液等の溶剤に溶解し、必要に応じて吸着防止剤等を加え
て製剤化する。また、使用前に溶解再構成するために凍
結乾燥させたり、凍結乾燥のための一般的な賦形剤を加
えたりして製剤化しても良い。

【００２４】本発明の抗癌剤または放射線療法の副作用
予防・軽減剤に用いるＦａｓアンタゴニストは、抗癌剤
の副作用モデル（特にアポトーシスの異常が関与するこ
とが示唆されている抗癌剤の副作用モデル）においてそ
の副作用または病態の改善効果を示す。例えば実施例の
ようなブレオマイシンの肺に対する副作用モデルにおい
て組織学的に病態を改善し、また気管支肺胞所見を改善
する。さらに、実施例では、マウスを用いたモデルで実
験を行っているため、抗マウスＦａｓリガンド抗体を使
用し副作用予防・軽減剤の効果を示しているが、ヒトに
用いる場合は抗ヒトＦａｓリガンド抗体により実施例と
同様の効果が期待できる。また抗ヒトＦａｓリガンド抗
体は実施例に示す通り、ヒト癌細胞を用いた抗癌剤の抗
癌作用には影響を与えない。なお、本発明の抗癌剤の副
作用予防・軽減剤は、実施例において示すとおり毒性が
なく、安全に使用できる。すなわち、本発明の抗癌剤の
副作用予防・軽減剤は、抗癌剤の主作用には影響を与え
ず、抗癌剤の副作用を予防、治療または改善することが
期待される。

【００２５】

【実施例】以下に実施例をもって、本発明をいっそう具
体的に説明するが、これらは実施の一例として示すもの
であり、本発明はこれらにより何ら限定されるものでは
ない。また、以下の記載において用いる略号は当該分野
において慣例として用いられる略号に基づくものであ
る。本発明のＦａｓアンタゴニストに含まれるＦａｓ誘
導体であるｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ及びｓｈＦａ
ｓ（ｎｄ２９）−ｈｉｎｇｅの製法並びにアポトーシス
抑制活性は国際特許出願公開公報ＷＯ９７／４２３１９
の実施例２，３，５，６及び８に開示されている。ま
た、本発明のＦａｓアンタゴニストに含まれるヒト化抗
ヒトＦａｓリガンド抗体であるヒト化Ｆ９１９抗体の製
法及びアポトーシス抑制活性は国際特許出願公開公報Ｗ
Ｏ９７／０２２９０の実施例７〜１１に開示されてい
る。さらに以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００２６】実施例１ ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ
の毒性試験 （１）試験方法 雄性、６週齢、ＢＤＦ１マウス（日本チャールス・リバ
ー製）にｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃを１０及び３０
ｍｇ／ｋｇの容量で２日に１回、１２日間、計7回尾静
脈内から投与し、その影響を調べた。実験はコントロー
ル群、ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ １０ｍｇ／ｋｇ
投与群及びｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ ３０ｍｇ／
ｋｇ投与群の３群とし、各群３例とした。なお、各投与
群の投与タンパク質量を３０ｍｇ／ｋｇと等しくするた
めに、コントロール群には３０ｍｇ／ｋｇのヒト血清ア
ルブミンを、ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ １０ｍｇ
／ｋｇ群にはｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ １０ｍｇ
／ｋｇとヒト血清アルブミン ２０ｍｇ／ｋｇを、ｓｈ
Ｆａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ ３０ｍｇ／ｋｇ投与群には
ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ ３０ｍｇ／ｋｇを投与
した。投与開始日から、２日に１回、体重測定を行っ
た。投与開始日１４日目に眼底静脈より採血を行い血球
数を測定後、血漿を調製し、ＧＯＴ、ＧＰＴ及びクレア
チニンを測定した。また、採血終了後、剖検を行い、目
視により主要臓器（肺、心臓、肝臓、腎臓、脾臓及び
腸）の変化を調べた。血球数の測定は自動血球測定装置
Ｋ−２０００（Ｓｙｓｍｅｘ製）を用いて行った。ＧＯ
Ｔ、ＧＰＴ及びクレアチニンはオートアナライザーＣＯ
ＢＡＳＦＡＲＡ（ロッシュ製）を用いて測定した。 （２）試験結果 １０及び３０ｍｇ／ｋｇのｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆ
ｃを２日に１回、１２日間、計７回マウスに投与しても
体重増加、血球数、肝臓（ＧＯＴ及びＧＰＴ）、腎臓
（クレアチニン）並びにその他の主要臓器（肉眼的所
見）への有意な影響は認められなかった。

【００２７】実施例２ ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ
のマウスブレオマイシンの肺に対する副作用モデルの改
善作用 （１）ブレオマイシンの肺に対する副作用モデルの作製 実験には雄性、６週齢、ＩＣＲマウス（九動製）を用い
た。体重測定の後、ペントバルビタール（ダイナボット
製）を腹腔内に投与し、麻酔した。４ｍｇ／ｋｇとなる
ように生理食塩水に溶解したブレオマイシン塩酸塩（日
本化薬製）溶液５０μｌを肺に投与した。 （２）ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃの投与 ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃは以下に示した方法で投
与した。ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃの静脈内投与
は、ブレオマイシン投与７日若しくは１０日後に５０μ
ｇ／マウスの用量で投与した。ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）
−Ｆｃの肺への吸入投与は、１０ｍｌの５０μｇ／ｍｌ
のｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ溶液をウルトラソニッ
クネブライザー（オムロン製）にセットし、ブレオマイ
シン投与２、４、６及び８日後若しくは２、４、６、
８、１０及び１２日後に３０分間吸入させ行なった。ブ
レオマイシンのみ投与し、ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆ
ｃを投与しないマウスをコントロール群とした。

【００２８】（３）組織学的評価 ブレオマイシン投与１４日後に開胸し、生理食塩水を用
いて肺動脈血を洗い出した後、肺を摘出した。摘出した
右肺を１０％ホルマリン溶液を用いて２４時間固定し
た。パラフィン包埋後、切片をヘマトキシリン−エオジ
ン染色した。得られた切片を光学顕微鏡下で評価した。
組織学的スコアは表１に示した基準を用いて三人の判定
者がそれぞれスコアリングを行い、その平均値を各個体
の組織学的スコアとした。 結果を以下の表２に示す。

【００２９】

【００３０】（４）気管支肺胞洗浄 ブレオマイシン投与１４日後にペントバルビタールをマ
ウス腹腔内に投与して麻酔した。肺を露出させ、気管チ
ューブを挿入した後、カニュレーションしたチューブを
通して５ｍｌの室温にした生理食塩水を用いて気管支肺
胞洗浄を行った。回収した洗浄液を金属製のメッシュに
通し、粘液を除去した。肺胞洗浄液中の細胞は血球計算
板を用いて測定した。マクロファージ、リンパ球、好中
球、好酸球の細胞数はＤｉｆｆ−Ｑｕｉｋ（Ｂａｘｔｅ
ｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製）を用いて染色した１０
０個の細胞中に占める各細胞の割合を測定し、気管支肺
胞洗浄液中の全細胞数を乗じて算出した。気管支肺胞洗
浄液の解析結果を以下の表３に示す。

【００３１】

【表１】

【００３２】（５）ヒドロキシプロリンの測定 ブレオマイシン投与１４日後に肺を摘出し、液体窒素を
用いて凍結した。均一の大きさになるよう細かく刻み、
６Ｎ塩酸中で１６時間、１２０℃に加温して加水分解し
た。各サンプル中のヒドロキシプロリン量は、Ｈａｇｉ
ｍｏｔｏ Ｎ．等の方法（Ａｍ Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．ｃ
ｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．、１７巻、２７２〜２７８
頁、１９９７年）で測定した。１ｍｇの肺乾燥重量に対
するヒドロキシプロリン量を指標に各群間の比較を行な
った。ヒドロキシプロリン量の測定結果を以下の表４に
示す。

【００３３】 （６）結果のまとめ 組織学的解析では、ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ投与
群は、炎症または線維化に伴う組織の障害がコントロー
ル群よりも軽度であった。気管支肺胞洗浄液中の細胞数
の解析では、ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃ投与群はコ
ントロール群に比較し、全細胞数、マクロファージ、リ
ンパ球及び好中球の細胞数のすべて若しくは一部が少な
かった。ヒドロキシプロリンの測定の結果、ｓｈＦａｓ
（ｎｄ２９）−Ｆｃ投与群は、コントロール群よりも肺
組織中のヒドロキシプロリン量が少なかった。ヒドロキ
シプロリンは、線維化の指標であるコラーゲンに特有な
アミノ酸であることから、ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆ
ｃ投与群は、コントロール群よりも肺組織中のコラーゲ
ン量が少なく、ｓｈＦａｓ（ｎｄ２９）−Ｆｃに線維化
抑制効果が認められた。

【００３４】実施例３ 抗マウスＦａｓリガンド抗体の
作製、生産及び精製 （１）抗マウスＦａｓリガンド抗体の作製 遺伝子工学的手法を用いたマウスＦａｓリガンドＷＸ２
（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５７巻、３９１８−３
９２４頁、１９９６年）由来のマウスＦａｓリガンド細
胞外領域とマウスＣＤ４０リガンドの細胞内領域、膜貫
通領域および細胞外領域の一部（Ｎ末端から７８アミノ
酸）を融合したキメラ蛋白質をコードする遺伝子をヒト
エロンゲーションファクター（ＥＦ）プロモータ（Ｍｉ
ｚｕｓｈｉｍａ−Ｎａｇａｔａ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１８巻、５３２２頁、１９
９０年）の下流に有するプラスミドを作製した。上記プ
ラスミドをＷＲ１９Ｌ細胞にトランスフェクトし、細胞
膜上にマウスＦａｓリガンドを発現している組換え細胞
Ｗ４０ＬＦＬを得て、投与抗原として用いた。免疫動物
としてアルメニアハムスターを用いた。フロイント完全
アジュバントと混合した１×１０⁷ 個のＷ４０ＬＦＬを
アルメニアハムスターの皮下に投与し、１ヶ月後にＰＢ
Ｓに懸濁した２×１０⁷ 個のＷ４０ＬＦＬを皮下に投与
した。さらに１ヶ月後、ＰＢＳに懸濁した５×１０⁶ 個
のＷ４０ＬＦＬをフットパッドに投与した。３日後、リ
ンパ節細胞を取り出し、マウスミエローマ細胞Ｐ３−Ｘ
６３−Ａｇ８−Ｕ１（Ｐ３−Ｕ１）と細胞融合した。Ｈ
ＡＴ培地（ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジ
ン）による選択の後、生育したハイブリドーマの中か
ら、その培養上清中にマウスＦａｓリガンドによる細胞
障害性を中和する活性を有するハイブリドーマＦＬＩＭ
５８を得た。 （２）ＦＬＩＭ５８の生産および精製 ハイブリドーマＦＬＩＭ５８を無血清培地Ｈｙｂｒｉｄ
ｏｍａ−ＳＦＭ（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ）にて培養し、そ
の培養上清をプロテイン−Ａカラム（ＰＲＯＳＥＰ−
Ａ、Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ）で精製し、精製抗体
ＦＬＩＭ５８を得た。蛋白濃度は２８０ｎｍの吸光度よ
り算出した。

【００３５】実施例４ 抗マウスＦａｓリガンド抗体Ｆ
ＬＩＭ５８の毒性試験 （１）方法 雄性、８週齢、ＤＢＡ／１ＪマウスおよびＣ３Ｈ／Ｈｅ
マウス（日本チャールス・リバー製）を用いた。抗マウ
スＦａｓリガンド抗体ＦＬＩＭ５８を１００ｍｇ／３０
ｍｌ／ｋｇの用量で尾静脈から投与した。またコントロ
ール群には生理食塩水を３０ｍｌ／ｋｇの用量で尾静脈
から投与した。２種の系統ともに各群３例とした。観察
期間を７日間とし、体重測定、血液学的検査（赤血球、
白血球、血小板）、血液生化学的検査（ＧＯＴ、ＧＰ
Ｔ、尿素窒素）、肉眼による剖検を行った。 （２）結果 抗マウスＦａｓリガンド抗体ＦＬＩＭ５８投与群の投与
後の体重増加、血液学的検査値（赤血球、白血球、血小
板）、血液生化学的検査値（ＧＯＴ、ＧＰＴ、尿素窒
素）はコントロール群と比べて差を認めなかった。ま
た、肉眼による剖検所見においても抗マウスＦａｓリガ
ンド抗体ＦＬＩＭ５８投与群に異常は認められなかっ
た。

【００３６】実施例５ 抗マウスＦａｓリガンド抗体Ｆ
ＬＩＭ５８のマウスブレオマイシンの肺に対する副作用
モデルの改善作用 （１）ブレオマイシンの肺に対する副作用モデルの作製 ブレオマイシンの肺に対する副作用モデルは１Ｕ／ｋｇ
となるように生理食塩水に溶解したブレオマイシン塩酸
塩（日本化薬製）溶液を用いて、実施例２と同様に作成
した。 （２）ＦＬＩＭ５８の投与 ＦＬＩＭ５８は、ブレオマイシン投与の翌日及び７日後
に各１００μｇ／マウス（計２００μｇ／マウス）の用
量、またはブレオマイシン投与の７日後に２００μｇ／
マウスの用量で尾静脈内から投与した（各々４例および
１０例）。ブレオマイシンのみ投与し、ＦＬＩＭ５８を
投与しないマウスをコントロール群（１０例）とした。 （３）組織学的評価 組織学的評価は実施例２と同様に行った。組織学的評価
の結果を表５に示す。

【００３７】 （４）結果 組織学的解析では、ＦＬＩＭ５８投与群は、炎症または
線維化に伴う組織の障害がコントロール群よりも軽度で
あった。

【００３８】実施例６ ブレオマイシン抗癌作用におけ
るヒト化抗ヒトＦａｓリガンド抗体（ヒト化Ｆ９１９抗
体）の影響 （１）方法 ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞株ＭＯＬＴ−３細胞
（ＡＴＣＣ）を、１０％の非働化ＦＢＳ（ＪＲＨ Ｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇ
ＩＢＣＯ ＢＲＬ）で６．０×１０⁵ 個／ｍｌに調製
し、９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ）の各ウェルに、
３．０×１０⁴ 個／５０μｌ／ウェルで植え込んだ。同
時に１０％非働化ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で３
または３０μｇ力価／ｍｌに調製したブレオマイシン塩
酸塩（日本化薬製）を、各ウェルに５０μｌずつ添加し
た。さらに、ヒト化Ｆ９１９抗体を１０％非働化ＦＢＳ
含有ＲＰＭＩ１６４０培地で３０μｇ／ｍｌになるよう
に調製し、終濃度１０μｇ／ｍｌとなるようウェルに５
０μｌ添加した。同様に、ＭＯＬＴ−３細胞及びブレオ
マイシン含有ウェルにヒトＩｇＧ４（ＡＴＨＥＮＳ Ｒ
ＥＳＥＲＴＨ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ製）を添
加し、コントロールとした。ブレオマイシン非添加群に
は、各ウェル１５０μｌ／ウェルとなるようＭＯＬＴ−
３細胞及び１０％非働化ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培
地を添加した（各群６例）。５％ＣＯ₂ 存在下で、３７
℃にて３日間培養し、増殖細胞数をＡｌａｍａｒ Ｂｌ
ｕｅ（岩城硝子製）を用いて判定した。すなわち、上述
の３日間培養液に、Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅを１５μｌ
／ウェル添加し、さらに５％ＣＯ₂存在下３７℃で、４
時間培養した。その後、培養液の吸光度をＥＴＹ−９６
（ＥＬＩＳＡ ＡＮＡＬＹＺＥＲ、東洋測器製）で測定
した。なお、１０％非働化ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０
培地１５０μｌにＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅを１５μｌ添
加したウェルをブランクとした。なお、生存率は以下の
下式に基づき求めた。 式 生存率（％）＝検体（△ＯＤ）／ブレオマイシン非添加
群（△ＯＤ）×１００ △ＯＤ：ＯＤ５７７ｎｍ−ＯＤ６００ｎｍ

【００３９】（２）結果 結果を図１に示す。ＭＯＬＴ−３細胞に対する１μｇ／
ｍｌブレオマイシンによる細胞増殖抑制作用にヒト化Ｆ
９１９抗体は影響を与えなかった。また、細胞増殖を完
全に抑制した３μｇ／ｍｌブレオマイシン添加時におい
てもヒト化Ｆ９１９抗体は影響を与えなかった。またコ
ントロールとして試験したヒトＩｇＧ４も影響を与えな
かった。

【００４０】

【発明の効果】本発明のＦａｓアンタゴニストを有効成
分とする抗癌剤または放射線療法の副作用予防・軽減剤
は、Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド系を介するアポトーシスの
抑制作用により、特にＦａｓを介した細胞の死に代表さ
れるＦａｓ／Ｆａｓリガンド系の生物作用等のアポトー
シスが関与する抗癌剤または放射線療法の副作用に対し
て予防または治療効果を有する。従って、本発明のＦａ
ｓアンタゴニストは、アポトーシスが関与する抗癌剤ま
たは放射線療法の副作用に対する予防・治療剤として期
待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒト化抗ヒトＦａｓリガンド抗体（ヒト化Ｆ
９１９抗体）がブレオマイシンの抗癌作用に影響を及ぼ
さないことを示す実施例５の測定結果のグラフである。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】Ｆａｓアンタゴニストを有効成分とする抗
   癌剤または放射線療法の副作用予防・軽減剤。
2. 【請求項２】前記ＦａｓアンタゴニストがＦａｓ−Ｆａ
   ｓリガンドの結合を抑制する物質である請求項１に記載
   の副作用予防・軽減剤。
3. 【請求項３】前記ＦａｓアンタゴニストがＦａｓ誘導体
   である請求項１または２に記載の副作用予防・軽減剤。
4. 【請求項４】前記Ｆａｓアンタゴニストが抗Ｆａｓリガ
   ンド抗体である請求項１または２に記載の副作用予防・
   軽減剤。
5. 【請求項５】前記副作用がアポトーシスの異常が関与す
   る請求項１〜４のいずれかに記載の副作用予防・軽減
   剤。
6. 【請求項６】前記副作用が呼吸器疾患である請求項１〜
   ５のいずれかに記載の副作用予防・軽減剤。
7. 【請求項７】前記副作用がびまん性肺疾患である請求項
   １〜５のいずれかに記載の副作用予防・軽減剤。
8. 【請求項８】前記抗癌剤がアポトーシスを誘導する請求
   項１〜５のいずれかに記載の副作用予防・軽減剤。