PL182089B1 - Pharmaceutic compositions for treating diseases caused by production of il-6 - Google Patents

Pharmaceutic compositions for treating diseases caused by production of il-6

Info

Publication number
PL182089B1
PL182089B1 PL95319785A PL31978595A PL182089B1 PL 182089 B1 PL182089 B1 PL 182089B1 PL 95319785 A PL95319785 A PL 95319785A PL 31978595 A PL31978595 A PL 31978595A PL 182089 B1 PL182089 B1 PL 182089B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
antibody
blood
interleukin
group
production
Prior art date
Application number
PL95319785A
Other languages
English (en)
Other versions
PL319785A1 (en
Inventor
Tadamitsu Kishimoto
Asao Katsume
Hiroyuki Saito
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Tadamitsu Kishimoto
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17300476&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL182089(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd, Tadamitsu Kishimoto filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Publication of PL319785A1 publication Critical patent/PL319785A1/xx
Publication of PL182089B1 publication Critical patent/PL182089B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Abstract

1. Srodek farmaceutyczny do zapobiegania lub leczenia choroby powodowanej przez wytwarzanie inter- leukiny-6, w szczególnosci takiej jak nadmierna liczba komórek plazmatycznych we krwi lub tkankach, hiper- immunoglobulinemia, anemia, zapalenie nerek, kacheksja, choroba Castlemana, rozrostowe mazangialne zapalenie nerek, zawierajacy czynnik aktywny i farmaceutycznie dopuszczalny nosnik, znamienny tym, ze jako czynnik aktywny zawiera przeciwcialo skierowane przeciw receptorowi interleukiny-6, korzystnie wybrane sposród przeciwciala MR16-1, przeciwciala PM-1 i ich pochodnych. 2. Srodek farmaceutyczny wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze zawiera rzeczone przeciwcialo w ilosci dawkowej wynoszacej od 1 do 100 mg. ( 1 2 ) OPIS PATENTOWY ( 1 9 ) PL ( 1 1 ) 182089 (13) B1 (51) IntCl7 A61K 39/395 A61P 37/02 PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest środek farmaceutyczny do zapobiegania lub leczenia choroby powodowanej przez wytwarzanie inetrleukiny-6, w szczególności takiej jak nadmierna liczba komórek plazmatycznych we krwi lub tkankach, hiperimmuno-globulinemia, anemia, zapalenie nerek, kocheksja, choroba Castlemana, rozrostowe mazangialne zapalenie nerek, zawierający
182 089 czynnik aktywny i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, charakteryzujący się tym, że jako czynnik aktywny zawiera przeciwciało skierowane przeciw receptorowi interleukiny-6, korzystnie wybrane spośród przeciwciała MR16-1, przeciwciała PM-1 i ich pochodnych. Korzystnie środek farmaceutyczny według wynalazku zawiera rzeczowe przeciwciało w ilości dawkowej wynoszącej od 1 do 100 mg.
Krótki opis rysunków
Figura 1 jest wykresem przedstawiającym zmianę przyrostów masy ciała zwierząt z każdej grupy.
Figura 2 jest wykresem przedstawiającym zmianę dodatkowego wskaźnika białka w moczu w każdej grupie. Dodatni wskaźnik białka w moczu wynosił zero w grupach innych niż grupa 1 i 3.
F igura 3 j est wykresem przedstawiaj ącym zmianę poziomu hemoglobiny w każdej grupie.
Figura 4 jest wykresem przedstawiającym zmianę ilości krwinek czerwonych w każdej grupie.
Figura 5 jest wykresem przedstawiającym zmianę ilości płytek krwi w każdej grupie.
Figura 6 jest wykresem przedstawiającym zmianę ilości krwinek białych w każdej grupie.
Figura 7 jest wykresem przedstawiającym zmianę stężenia IgGl w surowicy w każdej grupie.
Figura 8 jest wykresem przedstawiającym zmianę w stężeniu ludzkiej IL-6 w grupach od 1 do 5.
Figura 9 przestawia wynik sortowania komórek techniką fluorescencyjnych przeciwciał z zastosowaniem IgG przeciwciała kontrolnego oraz przeciwciała Gr-1 w grupach 1 i 2.
Figura 10 przedstawia wynik sortowania komórek techniką fluorescencyjnych przeciwciał z zastosowaniem IgG przeciwciała kontrolnego oraz przeciwciała Gr-1 w grupach 6 i 7.
F igura 11 jest wykresem przedstawiaj ącym masę śledziony zwierząt w każdej grupie po zakończeniu doświadczenia.
Figura 12 jest wykresem przedstawiającym zmianę masy ciała zwierząt z każdej grupy.
Figura 13 jest wykresem przedstawiającym stężenie triglicerydów w krwi myszy w 11 dniu doświadczenia.
Figura 14 jest wykresem przedstawiającym stężenie glukozy we krwi myszy w 15 dniu doświadczenia.
Figura 15 jest wykresem przedstawiającym stężenie zjonizowanego wapnia we krwi myszy w 11 dniu doświadczenia.
Figura 16 jest wykresem przedstawiającym współczynnik przeżycia myszy kontrolnych z nowotworem.
Figura 17 jest wykresem przedstawiającym masę ciała myszy w 10 i 12 dniu po rozpoczęciu doświadczenia.
Figura 18 jest wykresem przedstawiającym stężenie zjonizowanego wapnia we krwi myszy w 10 i 12 dniu po rozpoczęciu doświadczenia.
Szczegółowe wyjaśnienie
Choroby powodowane przez wytwarzanie interleukiny-6 obejmują, na przykład, nadmierną obecność komórek plazmatycznych we krwi lub tkankach, tak jak w przypadku reumatyzmu i choroby Castelmana; hiperimmunoglobulinemię; anemię, zapalenie nerek, takie jak rozrostowe mazangialne zapalenie nerek; wyniszczenie itp.
Przeciwciało skierowane przeciw receptorowi interleukiny-6 przeznaczone do stosowania w niniejszym wynalazku może być dowolnego pochodzenia lub rodzaju (monoklonalne, poliklonalne), o ile może blokować przekazywanie sygnału IL-6 i hamować aktywność biologiczną IL-6. Szczególnie korzystne jest jednak przeciwciało monoklonalne pochodzące z organizmu ssaka. Przeciwciało blokuje przekazywanie sygnału IL-6 i hamuje aktywność biologiczną IL-6 przez hamowanie wiązania IL-6 z IL-6R.
Gatunkiem zwierzęcia, z którego pochodzi komórka wytwarzająca przeciwciało monoklonalne może być każdy gatunek zwierzęcia należący do ssaków i można stosować przeciwciała ludzkie lub przeciwciała pochodzące od ssaka innego niż człowiek. Przeciwciałami
182 089 monoklonalnymi pochodzącymi od ssaka innego niż człowiek sąkorzystnie przeciwciała monoklonalne pochodzące od królików lub gryzoni, z powodu łatwości ich wytwarzania. Korzystnie, gryzonie obejmują, ale nie ograniczają się do myszy, szczurów, chemików itp.
Takie przeciwciała skierowane przeciw receptorowi interleukiny-6 obejmują, na przykład, przeciwciało MR16-1 (Tamura, T. i in., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 11924-11928, 1993), przeciwciało PM-1 (Hirata, Y. i in., J. immunol. 143: 2900-2906, 1989) itp.
Przeciwciała monoklonalne można przygotować zasadniczo, metodami znanymi w nauce w następujący sposób. A mianowicie, można je wytwarzać stosując IL-6Rjako antygen immunizujący, który stosuje się do immunizacji konwencjonalną metodą a następnie otrzymane immunocyty poddaje się fuzji ze znanymi komórkami macierzystymi konwencjonalną metodą fuzji komórek, a komórki wytwarzające przeciwciała monoklonalne przeszukuje się konwencjonalnymi metodami poszukiwania.
Bardziej szczegółowo, przeciwciała monoklonalne wytwarza się następującą metodą. Na przykład, rzeczowy antygen immunizujący można otrzymać wykorzystując sekwencję ludzkiego IL-6R podaną w europejskim zgłoszeniu patentowym numer EP 325474. Po wstawieniu sekwencji ludzkiego IL-6R do znanego układu wektora ekspresyjnego do transformacji odpowiedniej komórki gospodarza, pożądane białko IL-6R oczyszcza się z komórek gospodarza lub z supematantu ich hodowli w celu wykorzystania rzeczowego oczyszczonego białka IL-6R jako antygenu immunizuj ącego.
Ponadto, rzeczony czynnik immunizujący pochodzący od myszy można otrzymać wykorzystując sekwencję genu IL-6R myszy, który opisano w japońskiej niebadanej publikacji patentowej numer 3(1991)-155795, stosując taką samą metodę jak zastosowana dla wymienionej powyżej sekwencji genu IL-6R człowieka.
Jako antygen IL-6R, poza tymi ulegającymi ekspresji na błonie komórkowej, można użyć tych, które mogą odłączyć się od błony komórkowej (sIL-6R). sLI-6R składa się głównie z zewnątrz komórkowej domeny IL-6R związanego z błoną komórkową od związanego z błoną IL-6R różniąc się tym, że pozbawiony jest domeny transbłonowej lub domeny transbłonowej i domeny wewnątrzkomórkowej.
Ssaki immunizowane antygenem immunizuj ącym nie są szczególnie ograniczone, ale korzystnie wybiera się je biorąc pod uwagę ich kompatybilność z komórkami macierzystymi stosowanymi do fuzji komórek, i na ogół stosuje się myszy, szczury, chomiki, króliki itp.
Immunizację zwierząt antygenem uczulającym można prowadzić zgodnie z metodami powszechnie znanymi specjalistom w tej dziedzinie. Ogólna metoda obejmuje, na przykład, dootrzewnową lub podskórną iniekcję antygenu immunizuj ącego ssakowi. Szczegółowo, antygen immunizujący rozcieńczony lub zawieszony w odpowiedniej objętości PBS (soli fizjologicznej zbuforowanej fosforanami), soli fizjologicznej itp. miesza się i emulguje, jeśli jest to pożądane, aż odpowiednią ilością adiuwanta, takiego jak kompletny adiuwant Freunda, a następnie korzystną rzeczoną emulsję podaje się ssakowi kilka razy w odstępach od 4 do 21 dni. Ponadto, podczas immunizacji antygenem immunizuj ącym można stosować odpowiedni nośnik.
Po immunizacji zwierzęcia w opisany powyżej sposób i potwierdzeniu zwiększenia ilości przeciwciała w surowicy do pożądanego poziomu, z ssaka pobiera się immunocyty i poddaje je fuzji komórkowej. Jako korzystny immunocyt wymienia się szczególnie komórkę śledziony.
Korzystne komórki szpiczaka stosowane w niniej szym wynalazku jako komórki macierzyste, które poddaje się fuzji z rzeczowym immunocytem obejmująróżne znane linie komórkowe, na przykład P3 (P3x63Ag8.653)(J. Immunol. 123:1548,1978),p3-Ul (CurrentTopicsinMicrobiology and Immunology 81: 1-7, 1978), NS-1 (Eur. J. Immunol. 6: 511-519, 1976), MPC-11 (Cell, 8: 405-415,1976), SP2/0 (Nature, 276: 269-270,1978), FO (J. Immunol. Meth. 35: 1-21, 1980), S194 (J. Exp. Med. 148: 313-323, 1978), R210 (Nature, 277: 131-133, 1979) itp.
Fuzję komórkową rzeczowego immunocytu z komórką szpiczaka można przeprowadzać zasadniczo zgodnie ze znaną metodą takąjak opisana przez Milsteina i in. (Milstein i in., Methods Enzymol. 73: 3-46, 1981) itp.
182 089
Bardziej szczegółowo, rzeczoną fuzję komórkową przeprowadza się w zwykłym podłożu odżywczym w obecności na przykład czynnika przyspieszającego fuzję komórkową. Jako czynnik przyspieszający fuzję komórkową można zastosować glikol polietylenowy (PEG) lub wirusa Sendai (HVJ) itp., a jeśli jest to pożądane, dla zwiększenia wydajności fuzji komórkowej można bezpośrednio dodać czynnik wspomagający, taki jak dimetylosulfotlenek.
Zastosowaneproporcja immunocytów i komórek szpiczaka korzystnie wynosi 1 do 10 razy więcej immunocytów od komórek szpiczaka. Jako płynne podłoże hodowlane stosowane do powyższej fuzji komórek wymienia się, na przykład, podłoże płynne RPMI 1640 lub podłoże płynne MEM, które są najbardziej odpowiednie do wzrostu linii komórek szpiczaka, i inne zwykłe buliony hodowlane stosowane do hodowli komórek; można również stosować uzupełnienie surowicą, takąjak płodowa surowica cielęca (FCS) itp.
Pożądane fuzje komórkowe (hybrydomy) można tworzyć przez dokładne mieszanie danej ilości wspomnianych powyżej immunocytów z komórkami szpiczaka we wspomnianym powyżej bulionie odżywczym i dodanie roztworu PEG uprzednio ogrzanego do temperatury 37°C, na przykład roztworu PEG o średniej masie cząsteczkowej w zakresie od 1000 do 6000, w stężeniu 30 do 60% (w/v). Następnie, po stopniowym dodawaniu odpowiedniego podłoża hodowlanego i wirowaniu dla usunięcia supematantu, można usunąć czynnik pobudzający fuzję komórek itp., które są niekorzystne dla wzrostu hybrydom.
Rzeczoną hybrydomę można wyselekcjonować przez hodowanie w konwencjonalnym podłożu selekcyjnym, takim jak, na przykład, podłoże do hodowli płynnych HAT (podłoże do hodowli płynnych zawierające hipoksantynę, aminopterynę i tyminę). Hodowlę w rzeczonym podłożu HAT kontynuuje się w ciągu okresu wystarczającego do śmierci komórek innych niż pożądane hybrydomy (komórek, które nie uległy fuzji), zazwyczaj kilku dni do kilku tygodni. Następnie do przeszukiwania i identyfikacji pojedynczych klonów hybrydom wytwarzających pożądane przeciwciała stosuje się konwencjonalną metodę szeregu rozcieńczeń granicznych.
Z przygotowanych w ten sposób hybrydom wytwarzających przeciwciała monoklonalne można założyć hodowlę pochodną w konwencjonalnym podłożu płynnym i przechowywać przez długi czas w ciekłym azocie.
W celu uzyskania przeciwciała monoklonalnego z rzeczonej hybrydomy, wykorzystuje się takie metody, jak ta, w której hybrydomę hoduje się zgodnie z konwencjonalną metodą dla uzyskania supematantu hodowli, lub ta, w której hybrydomę wszczepia się i namnaża w ssaku z nią kompatybilnym, a następnie otrzymuje się przeciwciało w postaci płynu wysiękowego. Pierwsza metoda jest odpowiednia do otrzymywania przeciwciał o wysokiej czystości, podczas gdy druga metoda jest odpowiednia do wytwarzania przeciwciał w dużej ilości.
Otrzymane tymi metodami przeciwciała monoklonalne można ponadto oczyszczać stosując konwencjonalne sposoby oczyszczania, takie jak wysalanie, sączenie molekularne, chromatografia powinowactwa itp.
Zdolność tak przygotowanych przeciwciał monoklonalnych do rozpoznawania antygenu z wysokim powinowactwem i dużą dokładnością można potwierdzić konwencjonalnymi metodami immunologicznymi, takimi jak oznaczenie radioimmunologiczne (RIA), enzymatyczne oznaczenia immunologiczne (EIA, ELISA), technika fluorescencyjnych przeciwciał (analiza immunofluorescencyjna) itp.
Przeciwciało monoklonalne stosowane w niniejszym wynalazku nie ogranicza się do wytworzonego przez hybrydomę przeciwciała monoklonalnego, i może być przeciwciałem, które sztucznie zmieniono w celu obniżeniaheteroantygenowości dla ludzi. Naprzykład, można stosować przeciwciało chimeryczne, które obejmuje zmienne regiony przeciwciała monoklonalnego myszy oraz stałe regiony przeciwciała ludzkiego. Takie przeciwciało chimeryczne można wytworzyć znaną metodą wytwarzania przeciwciał chimerycznych, zwłaszcza metodą inżynierii genetycznej.
Ponadto, w niniejszym wynalazku można stosować przekształcone przeciwciało ludzkie. Jest to przeciwciało, w którym regiony determinujące komplementamość przeciwciała ludzkiego zastąpiono regionami determinującymi komplementamość przeciwciała ssaka nie będącego
182 089 człowiekiem, np. przeciwciała myszy, a ogólne metody ich inżynierii genetycznej są dobrze znane w nauce. Stosując taką znaną metodę można otrzymać przekształcone przeciwciało ludzkie, które jest użyteczne według wynalazku.
Jeśli jest to konieczne, aminokwasy regionów zrębu (FR) zmiennego regionu przeciwciała można podstawić w taki sposób, że region determinujący komplementamość odtworzonego przeciwciała ludzkiego może tworzyć odpowiednie miejsce wiążące antygen przeciwciała (Sato i in., Cancer Res. 53:1 -6,1993). Jako korzystny przykład takiego przekształconego przeciwciała ludzkiego można podać humanizowane przeciwciało PM-1 (hPM-1) (patrz międzynarodowe zgłoszenie patentowe numer WO 9219759).
Do wymienionych powyżej celów można skonstruować geny kodujące fragmenty przeciwciała, na przykład Fab lub Fv, jednołańcuchowy Fv (scFv), w którym Fv łańcuchów H i L są połączone odpowiednim łącznikiem, i uzyskać ich ekspresję w odpowiednich komórkach gospodarza, o ile fragment wiążę się z antygenem i hamuje aktywność IL-6 (patrz, na przykład, Bird i in., TIBTECH, 9:132-137,1991; Hustoni in.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883, 1988). Ponadto, dla przygotowania scFV można zastosować powyższy przekształcony region V przeciwciała można zastosować do Fv łańcuchów H i L.
W niniejszym wynalazku można stosować kompozycje farmaceutyczne do zapobiegania lub leczenia chorób powodowanych przez wytwarzanie IL-6, zawierające jako składnik aktywny przeciwciało skierowane przeciw receptorowi IL-6 według niniejszego wynalazku, o ile blokują one przekazywanie sygnału IL-6 i są skuteczne wobec chorób powodowanych przez wytwarzanie IL-6.
Kompozycje farmaceutyczne do zapobiegania lub leczenia chorób powodowanych przez wytwarzanie IL-6 można korzystnie podawać pozajelitowo, na przykład przez iniekcję dożylną, domięśniową, dootrzewnową, podskórną itp., albo ogólnoustrojowo, albo miejscowo. Ponadto, może mieć ona również postać kompozycji farmaceutycznej lub zestawu z przynajmniej jednym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem farmaceutycznym.
Chociaż dawkowanie kompozycj i farmaceutycznych według niniej szego wynalazku może różnić się w zależności od stanów chorobowych i wieku pacjenta oraz metody podawania, konieczne jest wybranie odpowiednich dawek. Na przykład, można podawać ilość w zakresie około od 1 do 1000 mg/pacjenta, podzieloną na do 4 dawek. Alternatywnie, można je podawać w ilości od około 1 do 10 mg/kg/tydzień. Jednakże, kompozycje farmaceutyczne do zapobiegania lub leczenia według niniejszego wynalazku nie są ograniczone do tych dawek.
Kompozycji farmaceutycznej według wynalazku można nadawać postać konwencjonalnymi metodami. Na przykład, preparaty pozajelitowe można przygotowywać przez rozpuszczenie oczyszczonego przeciwciała skierowanego przeciw IL-6R w rozpuszczalniku, np. soli fizjologicznej, roztworze buforu itp., do których dodaje się czynnika przeciwadsorpcyjnego, np. Tween 80, żelatyny, albuminy surowicy ludzkiej (HSA) itp., lub mająpostać zliofilizowaną, którąprzed użyciem można przywrócić do postaci roztworu przez rozpuszczenie. Zarobki stosowane do liofilizacji obejmują, na przykład, alkohol cukrowy, taki jak mannitol, glukoza itp. lub sacharydy.
Wynalazek zostanie wyjaśniony teraz bardziej szczegółowo przez podanie poniższych przykładów odniesienia i przykładów, ale należy je rozumieć jako nie ograniczające zakresu niniejszego wynalazku w żaden sposób.
Przykład odniesienia 1. Konstruowanie myszy transgenicznej B6L6-IL-6
Fragment Sphl-XhoI o długości 3,3 kbp (L6-IL-6), posiadający cDNA IL-6 ludzkiej połączony z promotorem H-2Ld (Suematsu i in., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 7547, 1989) wstrzyknięto do przedjądrza zapłodnionej komórki jajowej myszy C57 BL/6J (B6) (Nihon Clea) przez mikroinjekcję zgodnie z metodą opisaną w Yamamura i in., J. Biochem. 96: 357, 1984.
Zapłodnioną komórkę jajową przeszczepiono do jajowodu samicy myszy ICR, którą poddano traktowaniu prowadzącemu do pseudociąży. Następnie noworodki mysie przeszukiwano pod kątem integracji cDNA hIL-6 przez analizę biotów Southerna strawionego EcoRI DNA pobranego z ogona, jako sondę stosując wyznakowany 32P fragment TaqI-BanII ludzkiego
182 089 cDNA IL-6. Zwierzęta, u których wynik testu pod kątem integracji był dodatni, krzyżowano z myszami B6 dla ustalenia linii myszy posiadjących ten sam genotyp.
Przykład odniesienia 2. Przygotowywanie przeciwciała szczura skierowano przeciw IL-6R
Komórki CHO wytwarzające rozpuszczalny IL-6R myszy przygotowano jak opisali Saito i in., J. Immunol., 147, 168-173,1991). Komórki inkubowano w podłożu aMEM zawierającym 5% płodową surowicę bydlęcą (FBS) w temperaturze 37°C w nawilżonym powietrzu zawierającym 5% CO2. Odzyskano kondycjonowane podłoże i stosowano jako preparat mysiego sIL-6R. Stężenie mysiego sIL-6R w podłożu określono metodąELISA typu „sandwich” z zastosowaniem przeciwciała monoklonalnego RS 15 skierowanego przeciw IL-6R myszy (Saito i in.,
J. Immunol., 147, 168-173,1991) i króliczego przeciwciała poliklonalnego skierowanego przeciw IL-6R myszy.
sIL-6R myszy oczyszczono z preparatu sIL-6R myszy stosując kolumnę powinowactwa, ze związanym przeciwciałem monoklonalnym skierowanym przeciw rozpuszczalnemu receptorowi IL-6 myszy (RS 12). Pięćdziesiąt mikrogramów oczyszczonego sIL-6R w kompletnym adiuwancie Freunda iniekowano podskórnie szczurowi Wistar, a następnie, po dwóch tygodniach, cztery razy, raz w tygodniu, prowadzono immunizacj ę przypominaj ącą przez podskórną iniekcj ę 50 pg sIL-6R myszy w niekompletnym adiuwancie Freunda. Po tygodniu od pierwszej iniekcji przypominającej szczurom podawano dożylnie 50 pg sIL-6R myszy w 100 pl soli fizjologicznej zbuforowanej fosforanami (PBS).
Trzy dni później ze szczurów usunięto śledziony i splenocyty poddawano fuzji z komórkami szpiczaka P3U1 myszy w stosunku 10:1. Komórki inkubowano przez noc w temperaturze 37°C w 100 pl podłoża RPMI 1640 zawierającego 10% FBS w studzienkach 96-studzienkowych płytek (Falcon 3075), a następnie dodawano do nich 100 pl podłoża zawierającego hipoksantynę/aminopterynę/tymidynę (HAT). W ciągu czterech dni codziennie połowę podłoża zastępowano podłożem HAT.
Siedem dni później hybrydomy wytwarzające przeciwciała skierowane przeciw sIL-6R myszy wyselekcjonowano w oznaczeniu wiązania sIL-6R myszy (ELISA). Krótko, 100 pl supernatantu hodowli hybrydomy inkubowano w płytce uprzednio opłaszczonej króliczym przeciwciałem skierowanym przeciw IgG szczura o stężeniu 1 pg/ml. Płytkę przemywano, a następnie inkubowano z sIL-6R myszy o stężeniu 100 pg/ml. Po przemyciu, dodawano królicze przeciwciało poliklonalne skierowane przeciw IL-6R myszy do stężenia 2 pg/ml, płytkę przemywano, a następnie inkubowano w ciągu 60 minut ze sprzęgniętym z alkalic:a^<ąfosfa1^in^iąprzeciwciałem poliklonalnym owcy skierowanym przeciw IgG królika (Tago).
Ostatecznie, po przemyciu, płytkę inkubowano z substratem fosfatazy alkalicznej (Sigma 104; fosforan p-nitrofenylu) i odczytywano przy długości fali stosując czytnik płytek (Toso). Hybrydomy, które rozpoznają sIL-6R myszy dwukrotnie sklonowano metodą rozcieńczeń granicznych. W celu przygotowania płynu wysiękowego, myszom BALB/c nu/nu dwukrotnie wstrzykiwano 0,5 ml pristane, a trzy dni później dootrzewnowo wstrzykiwano 3 x 106 komórek ustalonych linii hybrydom. Dziesięć do dwudziestu dni później zbierano płyn wysiękowy i oczyszczono z niego przeciwciało monoklonalne MR16-1 stosując kolumnę białka G (Oncogene Science).
Neutralizujący wpływ przeciwciała wytwarzanego przez MR16-1 testowano przez pomiary inkorporacji 3H-tymidyny do komórek MH60.BSF2 (Matsuda i in., Eur. J. Immunol. 18: 951-956, 1988). Komórki MH60.BSF2 dodawano do 96-studzienkowej płytki w ilości 1 x 104 komórek/200 pi/studzienkę, a następnie dodawano IL-6 myszy (10 pg/ml) i przeciwciało .MR16-1 lub przeciwciało RS12 przed inkubacją komórek hodowlą w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2 w ciągu 44 godzin. Następnie do każdej studzienki dodawano 3H-tymidynę (1 pCi/studzienkę) i po 4 godzinach mierzono jej inkorporację.
Przykład 1
Wykorzystano trzydzieści jeden myszy transgenicznych posiadających cDNA IL-6 człowieka, które rozmnożono z myszy transgenicznej B6 IL-6 (B6 IL-6 Tgm) przygotowanej w przykładzie odniesienia 1, oraz 11 myszy z normalnych miotów nie posiadających cDNA IL-6 człowieka (obie grupy w wieku 4 tygodni; samce). B6 IL-6 T gm podzielono na pięć grup (grupy 1
182 089 do 5) po sześć zwierząt na każdą grupę, a tylko grupa 1 składała się z siedmiu zwierząt. Myszy z normalnych miotów podzilono na grupę 6, liczącą 5 myszy, i grupę 7, liczącą sześć myszy.
Schemat podawania był następujący:
Grupa 1 (B6 IL-6 Tgm): W wieku 4 tygodni (pierwszy dzień doświadczenia) dożylnie wstrzykiwano przeciwciało skierowane przeciw IgGl szczura (KH5) (przeciwciało kontrolne) w dawce 2 mg/0,2 ml, a w wieku 5 tygodni (8 dzień doświadczenia) i później dwa razy w tygodniu (co trzy lub cztery dni) podskórnie wstrzykiwano 100 pg przeciwciała kH5.
Grupa 2 (B6 IL-6 Tgm): W wieku 4 tygodni dożylnie wstrzykiwano przeciwciało MR16-1 w dawce 2 mg/0,2 ml, a w wieku 5 tygodni i później dwa razy w tygodniu podskórnie wstrzykiwano 100 pg przeciwciała MR16-1.
Grupa 3 (B6 IL-6 Tgm): W wieku 4 tygodni dożylnie wstrzykiwano 0,2 ml soli fizjologicznej zbuforowanej fosforanami, a w wieku 5 tygodni i później dwa razy w tygodniu podskórnie wstrzykiwano 100 pg MR16-1.
Grupa 4 (B6 IL-6 Tgm): W wieku 4 tygodni dożylnie wstrzykiwano 2 mg/0,2 ml MR16-1, a w wieku 5 tygodni i później raz w tygodniu podskórnie wstrzykiwano 400 pg MR16-1.
Grupa 5 (B6 IL-6 Tgm): W wieku 4 tygodni dożylnie wstrzykiwano 2 mg/0,2 ml MR16-1, a w wieku 5 tygodni i później raz w tygodniu podskórnie wstrzykiwano 1 mg MR16-1.
Grupa 6 (myszy z normalnych miotów B6): W wieku 4 tygodni dożylnie wstrzykiwano 2 mg/0,2 ml przeciwciała kontrolnego KH5, a w wieku 5 tygodni i później dwa razy w tygodniu podskórnie wstrzykiwano 100 pg KH5.
Grupa 7 (myszy z normalnych miotów B6): W wieku 4 tygodni dożylnie wstrzykiwano przeciwciało 2 mg/0,2 ml MR16-1, a w wieku 5 tygodni i później dwa razy w tygodniu podskórnie wstrzykiwano 100 pg MR16-1.
Stosowane tu metody badania były następujące:
Pomiar wagi ciała i oznaczanie białka w moczu: pomiar wagi ciała i oznaczanie białka w moczu papierkami testowymi na białko w moczu (Combistics Sankyo) prowadzono co tydzień. Odczyty białka w moczu +++ (100 do 300 mg/dl) lub wyższe uznawano za dodatnie.
Pobieranie krwi: krew pobierano z zatoki pozaoczodołowej co tydzień od rozpoczęcia doświadczenia (wiek 4 tygodni), a po zakończeniu doświadczenia (wiek 18 tygodni) pobierano całą krew z żyły głównej dolnej.
Liczba komórek krwi: stosując mikrolicznik do komórek (Sysmex F-800), określano liczbę krwinek białych (WBC), krwinek czerwonych (RBC), płytek krwi (PLT), jak również ilość hemoglobiny (HGB). Po zakończeniu doświadczenia przygotowywano rozmazy krwi dla niektórych grup (grupy 1, 2, 6 i 7) i obliczono procent odsetkowego wzoru krwinek białych.
Oznaczanie stężenia IgGl we krwi: mierzono je w oznaczeniu ELISA specyficznym wobec IgGl, jako standard stosując białko szpiczaka.
Oznaczanie stężenia IL-6 we krwi: mierzono je przez w oznaczeniu ELISA specyficznym wobec hIL-6.
Oznaczanie miana przeciwciał skierowanych przeciw IgG szczura (klasa IgG) we krwi: ponieważ podawane przeciwciało jest heterologiczne dla myszy, wytwarzanie przeciwciał skierowanych przeciw podawanemu przeciwciału mierzono w oznaczeniu ELISA stosując IgG szczura jako antygen. Wynik wyrażono w jednostkach wykorzystując jako standard surowicę IL-6 Tgm dorosłego zwierzęcia, któremu podano przeciwciało szczura.
Oznaczanie chemicznych parametrów krwi: Po zakończeniu doświadczenia w surowicach myszy z grup 1, 2, 3, 6 i 7 mierzono stężenie białka całkowitego (TP), albuminy (Alb), glukozy (Glu), triglicerydów (TG), kreatyniny (CRE), azotu mocznika krwi (BUN), wapnia (Ca), aktywność fosfatazy alkalicznej (ALP), transaminazy glutaminowopirogronianowej (GOT) i transaminazy glutaminianopirogronianowej (GPT) wykorzystując automatyczny analizator (COBAS FARA II, Roche).
Analiza FACS szpiku kostnego i splenocyty: po zakończeniu doświadczenia z jednego zwierzęcia z każdej z grup 12,6 i 7 pobrano szpik kostny i splenocyty i poddano analizie antygenów powierzchniowych komórek przez FACScan (Beckton Dickensian). Zastosowanymi prze182 089 ciwciałami były przeciwciała (Pharmingen) skierowane odpowiednio wobec Gr-1 (komórki szpiku kostnego), CD4, CD8 i B220 (splenocyty).
Autopsja: po zakończeniu doświadczenia przeprowadzono autopsję i mierzono wagę śledziony, a głównie narządy oceniono wizualnie.
Wagi ciała: zmiany wag ciała w każdej grupie przedstawiono na Fig. 1. Wzrost wystąpił w grupach 1 i 3. Wśród zwierząt z innych grup nie zaobserwowano żadnych różnic w zmianach wagi ciała.
Białko w moczu: w grupie 1 zwierzęta dodatnie pod względem białka w moczu zaczęły pojawiać się od wieku 13 tygodni (fig. 2), i cztery (dwa w wieku 16 tygodni i dwa w wieku 17 tygodni) zwierzęta z siedmiu zdechły do czasu autopsji. W innych grupach nie obserwowano jednak śmierci. W grupie 3 także dwa z sześciu zwierząt stały się dodatnie pod względem białka w moczu pod koniec doświadczenia, ale brak było wyników dodatnich w innych grupach.
Wyniki hematologiczne: w grupie 1 obserwowano obniżenie poziomu hemoglobiny (fig. 3) i liczby RBC (fig. 4), których stopień stawał się cięższy z wiekiem. Liczby płytek krwi (fig. 5) wykazywały przejściowy wzrost, ale potem szybko opadały. W grupie 3 obserwowano podobną tendencję, chociaż była ona nieznacznie opóźniona w porównaniu z grupą 1. Z drugiej strony, w żadnej z grup 2,4 i 5 nie wystąpiło ani obniżenie poziomu hemoglobiny i RBC, ani wzrost i późniejsze obniżenie liczby płytek krwi. W obserwacji odsetkowego wzoru krwinek białych w rozmazach krwi, grupa 1 wykazała podwyższenie pod względem granulocytów obojętnochłonnych i monocytów oraz obserwowano istotne obniżenia we frakcji limfocytów, choć grupa 2 wykazywała normalne wartości (Tabela 1). Nie było również znaczącej różnicy pomiędzy grupami 6 i 7.
Tabela 1
Grupa Młode granulocyty obojętno- chłonne Dojrzałe granulocyty obojętno- chłonne Granulocyty kwaso- chłonne Granulocyty zasado- chłonne Monocyty Limfocyty Inne
1 Średnia 2,00 31,33 1,33 0,00 9,33 56,00 0,00
SD* 2,00 3,79 0,58 0,00 4,93 9,54 0,00
2 Średnia 0,33 13,83 2,33 0,00 2,00 81,00 0,50
SD* 0,52 4,17 1,03 0,00 2,28 4,82 0,55
test t 0,0676 0,0000 0,0557 - 0,0129 0,006 0,0676
6 Średnia 0,33 14,10 2,80 0,00 1,30 81,40 0,10
SD* 0,45 4,60 0,91 0,00 1,04 4,08 0,22
7 Średnia 0,42 10,67 2,42 0,08 0,58 85,75 0,08
SD* 0,38 2,32 0,97 0,20 0,49 1,92 0,20
test t 0,6484 0,1406 0,5101 0,3816 0,1644 0,0427 0,8992
SD: odchylenie standardowe
Stężenie IgGl we krwi: w grupie 1 stężenie IgGl we krwi wykazywało znaczny wzrost bezpośrednio po rozpoczęciu doświadczenia, ostatecznie osiągając wartość około 100-krotnie przewyższającą stężenie u myszy normalnych (fig. 7). W grupie 3 wzrosty stężenia IgGl zaobserwowano nieco później niż w grupie 1. W przeciwieństwie, nie występowały wzrosty stężenia IgGl w grupach 2, 4 i 5, pozostając podczas doświadczenia na prawie tym samym poziomie. Z drugiej strony, u myszy normalnych nie obserwowano zmian związanych z podawaniem przeciwciała.
Stężenie hIL-6 we krwi: stężenie hIL-6 we krwi (fig. 8) zróżnicowane było w taki sam sposób jak IgGl, wykazując wzrosty w grupach 1 i 3, a pozostając na prawie tym samym poziomie podczas doświadczenia w innych grupach.
182 089
Miano przeciwciał skierowanych przeciw IgG szczura we krwi: przeciwciała skierowane przeciw IgG szczura wykryto w grupach 1,3 i 6 (Tabela 2). Wszystkie zwierzęta w grupach 1 i 3 wykazywały wysokie miano, podczas gdy w grupie 6 tylko dwa z pięciu zwierząt wykazywało wzrost miana. Z drugiej strony, w innych grupach nie obserwowano znaczącego wzrostu.
Tabela 2
Mysie przeciwciało skierowane przeciw immunoglobulinom szczura (jednostki/ml)
Grupa Wiek (tygodnie) 4 6 8 10 12 14 16 18
1 0,15 0,78 1,69 7,41 100< 100< 100< 100<
2 0,22 0,34 0,45 0,38 0,43 0,50 0,50 0,30
3 0,14 0,61 0,69 0,67 2,27 4,74 4,74 41,24
4 n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. 0,57
5 n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. 0,28
6 n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. 3,55
7 n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. n.o. 0,20
n.o.: nie oznaczano
Oznaczanie parametrów chemicznych krwi: w grupach 1 i 3 występował wzrost TP i obniżenie Alb. TG i ALP obniżone były w grupach 1 i 3, a w grupie 1 obniżone było nawet Glu. Żadnej z tych zmian nie obserwowano w grupie 2.
Tabela 3
Grupa TP (g/dl) Alb (g/dl) Glu (mg/dl) TG (mg/dl) CRE (mg/dl) BUN (mg/dl) Ca (mg/dl) ALP (U/l) GOT (IU/1) GTP (U/l)
1 Średnia 14 2,41 77,4 20,7 0,4 34,8 8,6 27,67 33,33 6
SD 1,33 0,3 14,5 8,33 0,2 23,7 0,35 5,69 5,86 1,73
2 Średnia 5,68 3,31 199 62,3 0,51 28,3 8,67 156,5 37,5 5,6
SD 0,3 0,2 29,5 10,9 0,22 4,08 0,58 14,31 8,22 1,14
3 Średnia 12,6 2,92 253 41 0,61 26,4 9,82 54,17 27,33 6,83
SD 2,85 0,64 60,2 16,3 0,17 6,25 0,83 42,62 5,65 1,72
6 Średnia 5,9 3,84 289 105 0,87 27,9 8,9 181 33,2 9,6
SD 0,65 0,46 98,9 28,8 0,22 6,32 0,74 21,24 8,9 5,81
7 Średnia 5,86 3,63 3,63 94 0,75 26,8 8,98 196,83 34,5 6,5
SD 0,53 0,34 25,5 20 0,2 5,26 0,82 21,68 4,89 3,08
Analiza FACS; analiza komórek szpiku kostnego (BM) i splenocytów (sp) w grupach 1,2, 6 i 7 ujawniła, że w grupie 1 (fig. 9 i Fig. 10) wśród komórek BM występował skrajny wzrost stosunku komórek dodatnich pod względem Gr-1, które sąkomórkami prekursorowymi granulocytów, ale te komórki w grupie 2 wykazywały podobne wartości, jak u myszy z normalnych miotów. Zasadniczo nie występowały różnice pomiędzy grupami 6 i 7. Co się tyczy stosunku komórek dodatnich pod względem CD4, CD8 i B220 u sp, nie było żadnych różnic pomiędzy grupami, z wyjątkiem tego, że w grupie 1 ilość komórek dodatnich pod względem CD8 i B220 obniżała się w wyniku wzrostu ilości komórek plazmatycznych (Tabela 4).
182 089
Tabela 4
Analiza antygenów powierzchniowych splenocytów
Grupa CD4+ CD8+ B220+
1 13,2% 5,4% 23,1%
2 18,5% 14,3% 50,0%
3 19,9% 15,0% 53,1%
4 13,9% 10,6% 57,3%
Obserwacje z autopsji: w grupach 1 i 3 wyraźne było obrzmienie węzłów chłonnych organizmu i powiększenie śledziony (fig. 11) oraz odbarwienie nerki. Częściowo, odnotowano również powiększenie wątroby. Zmian tych nie obserwowano w innych grupach i brak było znacznych zmian, z wyjątkiem odnotowania w grupach 2,4 i 5 nieznacznego powiększenia śledziony w porównaniu z myszami z normalnych miotów.
Wyniki tego doświadczenia zostanąteraz wyjaśnione. U IL-6 Tgm (grupa 1), którym podawano przeciwciało kontrolne, obserwowano różnorodne objawy, takie jak nadmierna ilość komórek plazmatycznych wytwarzających IgGl we krwi lub tkankach, anemia, thrombocytoza, małopłytkowość, uszkodzenia nerek, nienormalne parametry chemiczne krwi itp. Jednakże, stało się oczywiste, że objawy te można całkowicie zahamować MR16-1.
Wiadomo, że IL-6 powoduje ostateczne różnicowanie komórek B w komórki osocza [Muraguchi, A. i in., J. Exp. Med. 167: 332-344,1988], a w przypadku IL-6 Tgm, wytwarzanie IL-6 powodowało wzrost stężenia IgGl we krwi oraz wzrost stężenia TP i obniżenie stężenia Alb w surowicy. Fakty te wskazują, że wystąpił przypadek nadmiernej ilości komórek plazmatycznych we krwi.
Powodowane tym znaczne powiększenie tkanki chłonnej organizmu, takiej jak węzłów chłonnych i śledziony może być odpowiedzialne za przyrosty wagi ciała pomimo pogorszenia się ogólnych stanów, powodowanych przez postępy choroby w grupach 1 i 3. MR16-1 nie tylko całkowicie zahamowała te stany, ale również zahamowała wzrost stężenia IL-6 we krwi. A zatem, potwierdzono, że związany z wiekiem wzrost stężenie IL-6 we krwi., jak obserwowany u 11-6 Tgm, jest bezpośrednio powiązany z postępem nadmiernej ilości komórek plazmatycznych we krwi. Dlatego uważano, że namnożone komórki plazmatyczne same aktywnie wytwarzają IL-6, która dalej zwiększa wzrost komórek plazmatycznych, czego wynikiem jest wytwarzanie dużych ilości IL-6.
Jako wpływy IL-6 na komórki krwi znane są wpływ zwiększania liczby płytek krwi [Ishibashi, T. i in., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 5953-5957, 1989; Ishibashi, T. i in., Blood 74: 1241-1244,1989] i wpływ indukowania anemia makrocytowa [Hawley, R.G. i in., J. Exp. Med. 176:1149-1163,1992]. Poza powyższymi, u IL-6 Tgm obserwuje się małopłytkowość związaną z wiekiem, którą uważa się za autoimmunizację związaną z aktywacją poliklonalnych komórek B [Miyai, Tatsuya i in., ibid].
M16-1 całkowicie hamowało bezpośrednie i pośrednie wpływy IL-6 na komórki krwi, ale nie wpływało na liczbę krwinek u myszy z normalnych miotów. A zatem, potwierdzono, że przeciwciało skierowane przeciw receptorowi IL-6 w ogóle nie wpływa na komórki krwi. U IL-6 Tgm obserwowano wzrost stosunku komórek dodatnich pod względem Gr-1, które uważa się za prekursory komórek granulocytowych, oraz stosunku obwodowych granulocytów obojętnochłonnych. Chociaż wiadomo, że IL-6 zwiększa liczbę granulocytów obojętnochłonnych, nie wyjaśniono dotąd szczegółowo mechanizmu jej działania. W badaniach tych stwierdzono, że wpływ ten jest zjawiskiem mającym miejsce na poziomie komórek prekursorowych w szpiku kostnym. W badaniach tych stwierdzono także, że MR16-1 całkowicie hamuje wpływy IL-6, ale nie wpływa na poziom granulocytów obojętnochłonnych w szpiku i krwi obwodowej.
MR16-1 hamuje początek zapalenia nerek obserwowanego u IL-6 Tgm. Donoszono, że IL-6 jest ściśle związana z rozpoczynaniem się rozrostowego mezangialnego zapalenia nerek jako autocrine czynnik wzrostowy komórek mezangium. Chociaż potwierdzono, że zapalenie
182 089 nerek i IL-6 Tgm jest rozrostowym mezangialnym zapaleniem nerek, nie można wykluczyć wzmacnianego przez IL-6 udziału immunologicznego [Katsume, Asao i in., prezentacja na 21 st Meeting of Japan Immunology Society, „Characterization of SCID x (SCID x H-2Ld hIL-6 transgenic mice),” 1991 ]. W każdym razie, ponieważ występowało hamowanie pojawiania się białka w moczu i przypadków śmierci, stało się oczywiste, że przeciwciało skierowane przeciw receptorowi IL-6 jest skuteczne w hamowaniu rozpoczynania się zapalenia nerek powodowanego przez wytwarzanie IL-6.
U IL-6 Tgm obserwowano znaczące obniżenia stężeń Glu i Tg, które są wskaźnikami wyniszczenia. W niniejszym doświadczeniu stwierdzono, że podawanie przeciwciała MR16-1 jest skuteczne do poprawy stanu wyniszczenia, ponieważ wartości Glu i Tg były obniżone w grupie 1, podczas gdy w grupie 2 wartości te powróciły prawie do normalnego poziomu.
Ponieważ MR16-1 jest heterologicznym dla myszy IgGl szczura, łatwo jest przewidzieć, że mogą być wytwarzane przeciwciała skierowane przeciw podanemu przeciwciału, co mogłoby czynić podawanie przeciwciał nieskutecznym.
Podczas próby indukcji w niniejszym doświadczeniu tolerancji immunologicznej przez wystawienie na działanie dużej ilości antygenu podczas pierwszego uczulania, utworzono grupy, którym przy pierwszym podawaniu dożylnie podano 2 mg przeciwciała na mysz . Wśród grup, którym podawano M16-1, grupy poddane temu traktowaniu (grupy 1,4 i 5) nie wytwarzały wykrywalnych przeciwciał skierowanych przeciw IgG szczura bez względu na odstępy podawania i dawki, co prowadziło do całkowitego zahamowania rozpoczynania się choroby. Jednak grupa 3 wykazywała ostatecznie takie same objawy jak grupa 1, której podawano przeciwciało kontrolne, chociaż grupa 3 wykazywała wzrost stężenia przeciwciała skierowanego przeciw IgG szczura i początek choroby był nieznacznie opóźniony w porównaniu grupą 1.
Dlatego też, uważa się, że traktowanie było skuteczne do indukcji tolerancji immunologicznej , ale przeciwciało skierowane przeciw IgG szczura wykryto u wszystkich zwierząt z grupy 1 i 2/5 zwierząt z grupy 6, którym podawano przeciwciało stosując ten sam schemat. Ponieważ rozwój nadmiernej ilości komórek plazmatycznych we krwi lub tkankach indukuje aktywację poliklonalnych komórek B u IL-6 Tgm, nie można wyciągnąć wniosku, że wykryte w grupach 1 i 3 przeciwciało skierowane przeciw IgG szczura jest przeciwciałem specyficznym wobec podanego przeciwciała. Jednakże, wyciągnięto wniosek, że wpływ indukujący tolerancję immunologiczną przez wystawienie na działanie dużej ilości antygenu przy pierwszym uczulaniu w grupach 2,4 i 5, w połączeniu z hamującym wpływem na wytwarzanie specyficznych przeciwciał na skutek podania dużej ilości MR16-1, były przyczyną indukcji pełnej tolerancji.
W niniejszym doświadczeniu wyjaśniono, że przeciwciało skierowane przeciw receptorowi 11-6 jest bardzo skuteczne wobec różnych chorób powodowanych przez wytwarzanie IL-6, bez wpływu na normalny poziom.
Przykład 2
Badano wpływ przeciwciała skierowanego przeciw receptorowi IL-6 myszy w modelu indukowanego colon 26 wyniszczenia. Wykorzystano 6-tygodniowe samce myszy BALB/c, którym pierwszego dnia doświadczenia podskórne implantowano 2 mm blok colon 26. Skierowane przeciw receptorowi IL-6 myszy przeciwciało MR16-1 (patrz Przykład odniesienia 2) podawano dożylnie w dawce 2 mg/mysz bezpośrednio przed implantacją colon 26 pierwszego dnia doświadczenia, a następnie podawano podskórnie w dawce 0,5 mg/mysz w dniach 7,11, 14 i 18 (n = 7). W poprzednim doświadczeniu potwierdzono już, że neutralizujące przeciwciała skierowane przeciw białku heterologicznemu nie pojawiają się łatwo w tej metodzie. Grupie kontrolnej z nowotworem, przeciwciało kontrolne IgGl szczura (KH5) podawano według tego samego schematu (n = 7). Ponadto jako grupę kontrolną bez nowotworu, utworzono grupę, której podawano PBS (n = 7). Po rozpoczęciu doświadczenia wagę ciała mierzono codziennie, a parametry chemiczne krwi i stężenia zjonizowanego wapnia we krwi mierzono 11 i 15 dnia po rozpoczęciu doświadczenia.
Wystąpiło znaczące obniżenie wagi ciała w grupie z nowotworem w dniach 10 i następnych w porównaniu z grupąbez nowotworu, podczas gdy częściowy wpływ hamujący obni182 089 żenią wagi ciała wykazywały zwierzęta w grupie, której podawano MR16-1 (fig. 12). Stężenie triglicerydów we krwi 11 dnia i stężenie glukozy we krwi dnia 15 przedstawiono, odpowiednio, na fig. 13 i fig. 14. Wartości te były znacznie obniżone w grupie kontrolnej z nowotworem, w porównaniu z grupą kontrolną bez nowotworu, podczas gdy w grupie, której podawano MR16-1, obserwowano tendencję znoszenia hamowania dla glukozy i wpływ znoszący hamowanie dla triglicerydów.
Stężenie zjonizowanego wapnia we krwi 11 dnia było znacząco podwyższone w grupie kontrolnej z nowotworem w porównaniu z grupą kontrolną bez nowotworu, podczas gdy w grupie, której podawano MR16-1, obserwowano znaczący hamujący wpływ (fig. 15).
Doświadczenie dla potwierdzenia wpływu na czas przeżycia przeprowadzono stosując podobny schemat jak powyżej (n = 10). W wyniku zaobserwowano wpływ na czas przeżycia w grupie, której podawano MR16-1 (fig. 16).
Przykład 3
Badano wpływ przeciwciała skierowanego przeciw receptorowi IL-6 w modelu wyniszczenia indukowanego occ-1, któremu towarzyszy hiperkalcemia. Wykorzystano 6-tygodniowe samce normalnych myszy. Pierwszego dnia doświadczenia myszom podskórnie implantowano linię komórek raka płaskokomórkowego, occ-1. Skierowane przeciw receptorowi IL-6 myszy przeciwciało MR16-1 (patrz Przykład odniesienia 2) podawano dożylnie w dawce 2 mg/mysz bezpośrednio przed implantacją occ-1 pierwszego dnia doświadczenia, a następnie w dniach 7 i 10 podawano podskórnie 100 pg/mysz (n=6). W poprzednim doświadczeniu potwierdzono już, że neutralizujące przeciwciała skierowane przeciw białku heterologicznemu, przeciwciału szczura nie pojawiają się łatwo w tej metodzie. Grupie kontrolnej z nowotworem, przeciwciało kontrolne IgGl szczura (KH5) podawano według tego samego schematu (n = 6). Ponadto, jako grupę kontrolnąbez nowotworu utworzono grupę, której podawano PBS (n = 7). Po rozpoczęciu doświadczenia wagę ciała i stężenia zjonizowanego wapnia we krwi mierzono 10 i 12 dnia po rozpoczęciu doświadczenia.
Stężenie zjonizowanego wapnia we krwi 11 dnia było znacząco podwyższone w grupie kontrolnej z nowotworem w porównaniu z grupą kontrolną bez nowotworu, podczas gdy w grupie, której podawano MR16-1, podwyższenie było silnie zahamowane (fig. 18).
182 089
Waga ciała (g)
Fig.1
7
Wiek (tygodnie)
182 089
Dodatni wskaźnik białka
Fig.2
Wiek (tygodnie)
182 089
Fig .3
Poziom hemoglobiny
Wiek (tygodnie)
182 089
F i g .4
Liczba krwinek czerwonych (x!0 /mm co
--o- 3 —o— 5 —6
Wiek (tygodnie)
182 089
Fig 5
❖
7
Wiek (tygodnie)
Liczba krwinek białych (xlO —o— 3
--O--5 —a— θ —7
182 089
Stężenie IgGl w surowicy (mg/ml)
Fig.7
Wiek (tygodnie)
182 089
F i g .8
Stężenie ludzkiej IL-6 (Pg/ml)
Wiek (tygodnie)
182 089
182 089
co
Ο co
co co <£>
ίβ
CU rt rt o
rt
CU rt rt
O
182 089
Fig .11
Grupa
Waga śledziony (g)
182 089
Fig.12
182 089
Fig.13
Stężenie triglicerydów we krwi (mg/dl)
bez raka p<0.05
Kontrola z rakiem
MR16-1
182 089
Fig. 14
2001
Stężenie glukozy we krwi (mg/dl)
Kontrola Kontrola bez z rakiem raka
182 089
Stężenie zjonizowanego wapnia we krwi (mmol/1)
Fig.15
kontrola bez raka kontrola z rakiem
MR16-1
182 089
Fig.16
Dni po transplantacji
182 089
Waga ciała (g)
Fig.17
LI kontrola bez raka £2 kontrola z rakiem □ MR16-1
182 089
2.5Stężenie zjonizowanego wapnia (nmol/1)
Fig.18
Dni po transplantacji
Q kontrola bez raka £2 kontrola z rakiem □ MR16-1
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz.
Cena 4,00 zł.

Claims (2)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Środek farmaceutyczny do zapobiegania lub leczenia choroby powodowanej przez wytwarzanie interleukiny-6, w szczególności takiej jak nadmierna liczba komórek plazmatycznych we krwi lub tkankach, hiperimmunoglobulinemia, anemia, zapalenie nerek, kacheksja, choroba Castlemana, rozrostowe mazangialne zapalenie nerek, zawierający czynnik aktywny i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienny tym, że jako czynnik aktywny zawiera przeciwciało skierowane przeciw receptorowi interleukiny-6, korzystnie wybrane spośród przeciwciała MR16-1, przeciwciała PM-1 i ich pochodnych.
  2. 2. Środek farmaceutyczny według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera rzeczone przeciwciało w ilości dawkowej wynoszącej od 1 do 100 mg.
    Niniejszy wynalazek dotyczy środków farmaceutycznych do zapobiegania lub leczenia chorób powodowanych przez wytwarzanie interleukiny-6 (IL-6), zawierających przeciwciało (przeciwciało anty-IL-6R) skierowane przeciw receptorowi interleukiny-6 (IL-6).
    IL-6 jest wieloczynno ściową cytokiną, która, jak się uważa, działa na różnych etapach reakcji immunologicznych, hematologicznych i ostrej fazy [Taga, t. i in., Critical Reviews in Immunol. 11: 265-280,1992] i odgrywa ważną rolę jako czynnik wzrostowy w szpiczaku mnogim, jak również w chorobach, którym towarzyszy nadmierna ilość komórek plazmatycznych we krwi lub tkankach, takich jak reumatyzm [Hirano, T. i in., Eur. J. Immunol. 18: 1797-1801, 1988; Houssiau, F.A. i in., Arth. Reum. 31: 784-788,1988], w chorobie Castlemana [Yoshizaki, K. i in., Blood 74: 1360-1367, 1989; Brant, SJ. i in., J. Clin. Invest. 86: 592-599, 1990], rozrostowym mezangialnym zapaleniu nerek [Ohta, K. i in., Clin. Nephrol. (Germany) 38: 185-189, 1992; Fukatsu, A. i in. Lab. Invest. 65: 61-66,1991; Horii, Y. i in., J. Immunol. 143: 3949-3955,1989], wyniszczeniu związanym ze wzrostem nowotworu [Strassmann, G. i in., J. Clin. Invest. 89: 1681-1684, 1992] itp.
    U myszy transgenicznych H-2 Ld hIL-6 (IL-6 Tgm), u których zachodzi ekspresja IL-6 człowieka (hIL-6) na nadmiernym poziomie uzyskana w wyniku inżynierii genetycznej, obserwowano nadmiemąilość we krwi lub tkankach komórek plazmatycznych wytwarzających IgG1, rozrostowe mezangialne zapalenie nerek, anemię, małopłytkowość, pojawianie się autoprzeciwcialitp. [Miyai,T. iin.,prezentacjana21stMeetingofJapan Immunology Society „Hematological change in H-2 Ld hIL-6 transgenic mice with age”, 1991], co sugeruje udział IL-6 w różnych chorobach. Jednakże, nie wiadomo, czy przeciwciało skierowane przeciw receptorowi interleukiny-6 jest skuteczne w przypadku chorób powodowanych przez wytwarzanie interleukiny.
    Wynalazek ujawnia środki farmaceutyczne do zapobiegania lub leczenia chorób powodowanych przez wytwarzanie interleukiny.
    W celu rozwiązania powyższych problemów, niniejszy wynalazek ujawnia środki farmaceutyczne do zapobiegania lub leczenia chorób powodowanych przez wytwarzanie interleukiny-6, przy czym rzeczowe środki farmaceutyczne zawierają przeciwciało kierowane przeciw receptorowi interleukiny-6.
    Istota wynalazku
PL95319785A 1994-10-21 1995-10-20 Pharmaceutic compositions for treating diseases caused by production of il-6 PL182089B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP25701094 1994-10-21
PCT/JP1995/002169 WO1996012503A1 (fr) 1994-10-21 1995-10-20 Remede contre des maladies provoquees par la production d'il-6

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL319785A1 PL319785A1 (en) 1997-08-18
PL182089B1 true PL182089B1 (en) 2001-11-30

Family

ID=17300476

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL95319785A PL182089B1 (en) 1994-10-21 1995-10-20 Pharmaceutic compositions for treating diseases caused by production of il-6

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20070036785A1 (pl)
EP (3) EP1884524A3 (pl)
JP (1) JP4896093B2 (pl)
CN (4) CN100350973C (pl)
CA (1) CA2203182C (pl)
CZ (3) CZ296979B6 (pl)
FI (3) FI121455B (pl)
HK (1) HK1067062A1 (pl)
HU (2) HU227708B1 (pl)
NO (6) NO324046B1 (pl)
PL (1) PL182089B1 (pl)
RU (1) RU2147442C1 (pl)
WO (1) WO1996012503A1 (pl)

Families Citing this family (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
GB9702944D0 (en) * 1997-02-13 1997-04-02 Univ Manchester Reducing fibrosis
ATE547119T1 (de) 1997-03-21 2012-03-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Präventives oder therapeutisches mittel mit einem il-6-antagonisten als wirkstoff für durch sensibilisierte t-zellen vermittelte erkrankungen
KR20010022846A (ko) * 1997-08-15 2001-03-26 나가야마 오사무 항 인터루킨-6 수용체 항체를 유효성분으로서 함유하는 전신성 홍반성 낭창의 예방 및/또는 치료제
US6723319B1 (en) 1998-03-17 2004-04-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of treating inflammatory intestinal diseases containing as the ingredient IL-6 receptors antibodies
DE69934698T2 (de) 1998-08-24 2007-10-04 Chugai Seiyaku K.K. Mittel zur vorbeugung oder behandlung von pankreatitis die anti-il-6 receptor antikörper als aktive komponente enthalten
DE19948126A1 (de) * 1999-10-06 2001-04-12 Max Delbrueck Centrum Pharmazeutisches Mittel zur Behandlung von Kachexie und/oder kardiogenem Schock
DK1334731T3 (da) * 2000-10-25 2008-05-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Forebyggende eller terapeutisk middel mod psoriasis omfattende anti-IL-6-receptorantistof som aktiv bestanddel
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
SI1475101T1 (sl) 2002-02-14 2011-03-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Farmacevtski proizvodi iz raztopine, ki vsebuje protitelo
NZ537089A (en) * 2003-02-24 2007-07-27 Morinaga Milk Industry Co Ltd Interleukin 6 production inhibitor
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
SI1690550T1 (sl) 2003-10-17 2012-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Terapevtska sredstva za mezoteliom
US8617550B2 (en) 2003-12-19 2013-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist
EP3269738A1 (en) 2004-03-24 2018-01-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor
AR048335A1 (es) 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
EP1870459B1 (en) 2005-03-31 2016-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
HUE029021T2 (en) * 2005-06-21 2017-02-28 Xoma (Us) Llc IL-1beta-binding antibodies and fragments thereof
CA2625773C (en) 2005-10-14 2015-05-12 Fukuoka University Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation
KR101239051B1 (ko) * 2005-10-21 2013-03-04 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 심장질환 치료제
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
AU2007208678B2 (en) 2006-01-27 2013-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization
DK2009101T3 (en) 2006-03-31 2018-01-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibody modification method for purification of a bispecific antibody
DK2006381T3 (en) 2006-03-31 2016-02-22 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PROCEDURE FOR REGULATING ANTIBODIES BLOOD PHARMACOKINETICS
US9260516B2 (en) 2006-04-07 2016-02-16 Osaka University Method for promoting muscle regeneration by administering an antibody to the IL-6 receptor
MY159787A (en) 2006-06-02 2017-01-31 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
CN101528778A (zh) * 2006-08-18 2009-09-09 埃博灵克斯股份有限公司 用于治疗与il-6-介导的信号传导相关的疾病和病症的针对il-6r的氨基酸序列以及包括其的多肽
AU2007285695B2 (en) 2006-08-18 2012-05-24 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with IL-6-mediated signalling
EP2123302B1 (en) 2007-01-23 2015-12-09 Shinshu University Il-6 inhibitors to treat chronic rejection
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
WO2008144757A1 (en) * 2007-05-21 2008-11-27 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US8404235B2 (en) * 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US7906117B2 (en) 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
US20090238825A1 (en) * 2007-05-21 2009-09-24 Kovacevich Brian R Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
LT2164514T (lt) 2007-05-21 2017-03-10 Alderbio Holdings Llc Il-6 antikūnai ir jų naudojimas
HUE029635T2 (en) 2007-09-26 2017-03-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd A method for modifying an isoelectric point of an antibody by amino acid substitution in CDR
CN101939425B (zh) 2007-09-26 2014-05-14 中外制药株式会社 抗il-6受体抗体
SG193868A1 (en) 2007-09-26 2013-10-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modified antibody constant region
KR101643005B1 (ko) 2007-12-05 2016-07-28 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ｎｒ１０ 항체 및 그의 이용
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
DK2708559T3 (en) 2008-04-11 2018-06-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule capable of repeatedly binding two or more antigen molecules
MX2010012031A (es) 2008-05-13 2011-01-20 Novimmune Sa Anticuerpos anti-il-6/il-6r y metodos de uso de los mismos.
TW201503898A (zh) 2008-06-05 2015-02-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 神經浸潤抑制劑
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
US9452227B2 (en) * 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
WO2010107108A1 (ja) * 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 関節リウマチ治療剤
TWI682995B (zh) 2009-03-19 2020-01-21 日商中外製藥股份有限公司 抗體恆定區域改變體
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2417162A2 (en) 2009-04-10 2012-02-15 Ablynx N.V. Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
BRPI1013877A2 (pt) * 2009-04-10 2017-08-15 Ablynx Nv Sequências de aminoácidos melhoradas contra il-6r e polipeptídeos que compreendem os mesmos para o tratamento de doenças e distúrbios relacionados com il-6r
MA33405B1 (fr) 2009-05-15 2012-07-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorps anti-axl
WO2011037158A1 (ja) 2009-09-24 2011-03-31 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
SI3202785T1 (sl) 2009-10-26 2024-08-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek za proizvodnjo glikoziliranega imunoglobulina
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
WO2011066369A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antagonists of il-6 to raise albumin and/or lower crp
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
TWI609698B (zh) 2010-01-20 2018-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 穩定化的含抗體溶液製劑
WO2011108714A1 (ja) 2010-03-04 2011-09-09 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
DK2578231T3 (da) * 2010-05-28 2022-12-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antitumor-t-celle-reaktionsforstærker
US20130149302A1 (en) 2010-05-28 2013-06-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for pancreatic cancer
WO2012064627A2 (en) 2010-11-08 2012-05-18 Genentech, Inc. Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody
RU2620071C2 (ru) 2010-11-17 2017-05-22 Чугаи Сеияку Кабушики Каиша Мультиспецифическая связывающая антиген молекула, которая обладает альтернативной функцией к функции фактора свертывания крови viii
DK2643018T3 (da) 2010-11-23 2021-01-18 Vitaeris Inc Anti-il-6-antistoffer til behandling af oral mucositis
TWI812066B (zh) * 2010-11-30 2023-08-11 日商中外製藥股份有限公司 具有鈣依存性的抗原結合能力之抗體
WO2012101251A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Sanofi Human antibodies to pcsk9 for use in methods of treatment based on particular dosage regimens
KR20230005405A (ko) 2011-02-25 2023-01-09 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 ＦｃγＲＩＩｂ 특이적 Ｆｃ 항체
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
EP2747782B1 (en) 2011-09-23 2018-01-17 Ablynx NV Prolonged inhibition of interleukin-6 mediated signaling
TW201817744A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
EP3939996A1 (en) 2011-09-30 2022-01-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
CN108866101A (zh) 2011-10-28 2018-11-23 瑞泽恩制药公司 人源化il-6和il-6受体
EP2878305B1 (en) 2012-05-21 2017-07-19 Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology Pharmaceutical composition for use in preventing or treating stat3-mediated disease, comprising salvia plebeia r. br. extract or fraction thereof as active ingredient composition
EP2896291B1 (en) * 2012-09-13 2019-03-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gene knock-in non-human animal
JP6442404B2 (ja) 2013-06-11 2018-12-19 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 再発寛解型多発性硬化症（ｒｒｍｓ）患者の治療予後予測方法、及び新規治療適応判断方法
RU2674996C2 (ru) 2013-07-04 2018-12-14 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Иммуноферментный анализ с подавлением интерференции для определения антител к лекарствам в образцах сыворотки
CA2925256C (en) 2013-09-27 2023-08-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
EP3209327A1 (en) 2014-10-21 2017-08-30 Ablynx N.V. Treatment of il-6r related diseases
TWI779010B (zh) 2014-12-19 2022-10-01 日商中外製藥股份有限公司 抗肌抑素之抗體、含變異Ｆｃ區域之多胜肽及使用方法
PL3233921T3 (pl) 2014-12-19 2022-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Przeciwciała anty-c5 i sposoby ich stosowania
EP3253778A1 (en) 2015-02-05 2017-12-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibodies comprising an ion concentration dependent antigen-binding domain, fc region variants, il-8-binding antibodies, and uses therof
CN107249637A (zh) 2015-02-27 2017-10-13 中外制药株式会社 用于治疗il‑6相关疾病的组合物
EP3279216A4 (en) 2015-04-01 2019-06-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PROCESS FOR PREPARING POLYPEPTIDE HETERO OLIGOMER
PL3299810T3 (pl) 2015-05-19 2021-12-13 National Center Of Neurology And Psychiatry Sposób określania zastosowania nowej terapii u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym (sm)
US11174317B2 (en) 2015-06-04 2021-11-16 National Center Of Neurology And Psychiatry Therapeutic agent for mental illness comprising IL-6 inhibitor as active ingredient
CN107922507B (zh) 2015-08-18 2022-04-05 瑞泽恩制药公司 抗pcsk9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者
WO2017087708A1 (en) 2015-11-19 2017-05-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Lymphocyte antigen cd5-like (cd5l)-interleukin 12b (p40) heterodimers in immunity
EP3394098A4 (en) 2015-12-25 2019-11-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
EP3398965A4 (en) 2015-12-28 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHOD FOR PROMOTING THE EFFICACY OF PURIFYING A POLYPEPTIDE CONTAINING AN FC REGION
WO2017147169A1 (en) 2016-02-22 2017-08-31 Ohio State Innovation Foundation Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin a analogues or metabolites, and estradiol metabolites
US11072666B2 (en) 2016-03-14 2021-07-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell injury inducing therapeutic drug for use in cancer therapy
KR102538749B1 (ko) 2016-08-05 2023-06-01 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-8 관련 질환의 치료용 또는 예방용 조성물
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
WO2018139623A1 (en) 2017-01-30 2018-08-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-sclerostin antibodies and methods of use
EP3596175A4 (en) 2017-03-17 2021-01-13 The Ohio State Innovation Foundation NANOPARTICLE FOR THE DELIVERY OF CHEMOPREVENTIVE AGENTS
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
JP7235249B2 (ja) 2017-10-20 2023-03-08 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
CA3093729A1 (en) 2018-03-15 2019-09-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-dengue virus antibodies having cross-reactivity to zika virus and methods of use
CN114206442A (zh) 2019-01-31 2022-03-18 赛诺菲生物技术公司 用于治疗幼年特发性关节炎的抗il-6受体抗体
WO2020201362A2 (en) 2019-04-02 2020-10-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
CN117247451B (zh) * 2023-11-17 2024-02-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种针对人白介素6蛋白的单域抗体及其应用

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5670373A (en) * 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
CA1341152C (en) 1988-01-22 2000-12-12 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human b cell stimulatory factor-2
US5814307A (en) * 1989-04-10 1998-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Method for regulating cell growth, leukocyte differentiation and tumor cell growth using Oncostatin M to stimulate synthesis of IL-6
US5216128A (en) * 1989-06-01 1993-06-01 Yeda Research And Development Co., Ltd. IFN-β2/IL-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
ATE144713T1 (de) * 1989-07-20 1996-11-15 Tadamitsu Kishimoto Antikörper gegen menschlichen interleukin-6- rezeptor
JPH03155795A (ja) * 1989-11-13 1991-07-03 Chuzo Kishimoto マウス・インターロイキン―６レセプター蛋白質
JP3045172B2 (ja) * 1990-05-19 2000-05-29 岸本 忠三 Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット
JP3212597B2 (ja) * 1990-08-01 2001-09-25 忠三 岸本 ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット
JPH04187645A (ja) * 1990-11-22 1992-07-06 Chuzo Kishimoto インターロイキン―６作用抑制剤
DK0628639T3 (da) * 1991-04-25 2000-01-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Rekonstitueret humant antistof mod human interleukin-6-receptor
JPH05227970A (ja) * 1992-02-19 1993-09-07 Chugai Pharmaceut Co Ltd ヒトインターロイキン−６受容体に対する再構成ヒト抗体
JP3258348B2 (ja) * 1991-08-02 2002-02-18 東ソー株式会社 Ｈｉｖ感染阻害剤
FR2694767B1 (fr) * 1992-08-13 1994-10-21 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
DE69331703D1 (de) * 1992-08-21 2002-04-18 Us Gov Health & Human Serv B-lymphomazellinie und antigen
JP3525221B2 (ja) * 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤
US5888510A (en) * 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
US5759546A (en) * 1994-02-04 1998-06-02 Weinberg; Andrew D. Treatment of CD4 T-cell mediated conditions
CA2211578C (en) * 1995-02-13 2010-09-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Muscle protein proteolysis inhibiting agent containing il-6 receptor antibody
US20020187150A1 (en) * 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
US6723319B1 (en) * 1998-03-17 2004-04-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of treating inflammatory intestinal diseases containing as the ingredient IL-6 receptors antibodies
AU2000279625A1 (en) * 2000-10-27 2002-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Blood mmp-3 level-lowering agent containing il-6 antgonist as the active ingredient
UA80091C2 (en) * 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
MXPA04009243A (es) * 2002-04-12 2005-06-08 Pfizer Uso de ligandos para el receptor ep4 en el tratamiento de enfermedades vinculadas a il-6.
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases

Also Published As

Publication number Publication date
CN1164194A (zh) 1997-11-05
CZ298325B6 (cs) 2007-08-29
NO330588B1 (no) 2011-05-23
CN1306963C (zh) 2007-03-28
NO20073432L (no) 1997-06-18
FI122406B (fi) 2012-01-13
CA2203182A1 (en) 1996-05-02
CN101011574A (zh) 2007-08-08
CZ118997A3 (en) 1997-09-17
EP1884524A3 (en) 2008-06-25
EP2319535A2 (en) 2011-05-11
HU225392B1 (en) 2006-11-28
CN101829325A (zh) 2010-09-15
NO20073431L (no) 1997-06-18
HK1067062A1 (en) 2005-04-01
EP2319535A3 (en) 2011-08-31
NO971816L (no) 1997-06-18
JP4896093B2 (ja) 2012-03-14
EP0791359A4 (en) 2002-09-11
HU227708B1 (en) 2011-12-28
FI971669A0 (fi) 1997-04-18
FI20105844A (fi) 2010-08-11
AU689657B2 (en) 1998-04-02
CN101011574B (zh) 2012-10-03
HUT77035A (hu) 1998-03-02
FI121455B (fi) 2010-11-30
PL319785A1 (en) 1997-08-18
NO330615B1 (no) 2011-05-30
NO971816D0 (no) 1997-04-18
US20070036785A1 (en) 2007-02-15
RU2147442C1 (ru) 2000-04-20
CN100350973C (zh) 2007-11-28
EP0791359A1 (en) 1997-08-27
CA2203182C (en) 2009-11-24
NO330589B1 (no) 2011-05-23
FI971669A (fi) 1997-06-17
NO331944B1 (no) 2012-05-07
FI122970B (fi) 2012-09-14
NO20073427L (no) 1997-06-18
CZ296979B6 (cs) 2006-08-16
NO324046B1 (no) 2007-08-06
HU0304064D0 (en) 2004-03-01
AU3709995A (en) 1996-05-15
CN1535728A (zh) 2004-10-13
NO330582B1 (no) 2011-05-16
WO1996012503A1 (fr) 1996-05-02
FI20115753A (fi) 2011-07-15
JP2008297315A (ja) 2008-12-11
NO20073429L (no) 1997-06-18
NO20073430L (no) 1997-06-18
EP1884524A2 (en) 2008-02-06
CZ298790B6 (cs) 2008-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL182089B1 (en) Pharmaceutic compositions for treating diseases caused by production of il-6
EP2298332B1 (en) BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of the B-cell response
JP4540132B2 (ja) Ｉｌ−６レセプター抗体を含んでなる筋蛋白分解抑制剤
US9545086B2 (en) BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of B-cell response and treatment of autoimmune disorders
US20100233179A1 (en) BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of B-cell response
JP3827350B2 (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤
JP2004224801A (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20131020