JP3258348B2 - Ｈｉｖ感染阻害剤 - Google Patents
Ｈｉｖ感染阻害剤Info
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- JP3258348B2 JP3258348B2 JP21663191A JP21663191A JP3258348B2 JP 3258348 B2 JP3258348 B2 JP 3258348B2 JP 21663191 A JP21663191 A JP 21663191A JP 21663191 A JP21663191 A JP 21663191A JP 3258348 B2 JP3258348 B2 JP 3258348B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、インタ−ロイキン−６
（ＩＬ−６）、ＩＬ−６の産生を誘導する物質若しくは
ＩＬ−６の産生能力を付与され又はＩＬ−６の産生能力
を増強された細胞を有効成分として含む、ＨＩＶ感染阻
害剤に関する。
（ＩＬ−６）、ＩＬ−６の産生を誘導する物質若しくは
ＩＬ−６の産生能力を付与され又はＩＬ−６の産生能力
を増強された細胞を有効成分として含む、ＨＩＶ感染阻
害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＡＩＤＳ（後天的免疫不全症候群、以下
エイズという）は、ＨＩＶ（Human Immunodeficiency V
irus）の感染が原因で起こる疾患である。
エイズという）は、ＨＩＶ（Human Immunodeficiency V
irus）の感染が原因で起こる疾患である。
【０００３】エイズ患者では、Ｔ細胞表面抗原であるＣ
Ｄ４が陽性のＴ細胞群が著しく減少していることが報告
されており（ H.K.Lyerly ら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.
S.A.84巻、p4601 、1987年）、これが種々の免疫疾患に
関与すると考えられているものの、ＨＩＶ感染から発病
に至までのメカニズムは不明である。
Ｄ４が陽性のＴ細胞群が著しく減少していることが報告
されており（ H.K.Lyerly ら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.
S.A.84巻、p4601 、1987年）、これが種々の免疫疾患に
関与すると考えられているものの、ＨＩＶ感染から発病
に至までのメカニズムは不明である。
【０００４】近年になり、エイズ患者の増加が社会問題
になっているが、エイズを克服するためには、発病した
エイズの治療は勿論、エイズの予防即ちＨＩＶ感染の阻
害が重要である。
になっているが、エイズを克服するためには、発病した
エイズの治療は勿論、エイズの予防即ちＨＩＶ感染の阻
害が重要である。
【０００５】ＩＬ−６はサイトカインと呼ばれる蛋白質
の一つであり、標的細胞上のＩＬ−６レセプタ−と結合
することにより、重要な生理活性を誘導する等、広く細
胞の増殖、分化に関与している。
の一つであり、標的細胞上のＩＬ−６レセプタ−と結合
することにより、重要な生理活性を誘導する等、広く細
胞の増殖、分化に関与している。
【０００６】ＩＬ−６については、エイズ患者に頻発に
発病するカポジ肉腫がＩＬ−６を産生し、そのＩＬ−６
に反応して増殖すること（ S.A.Mile ら、Proc.Natl.Ac
ad.Sci.U.S.A. 87巻、p4068 、1990年）、エイズ患者血
清中のその濃度が症状の進行とともに増加すること（本
多ら、J.Immunol. 145巻、p4059 、1990年及びE.C.Bree
n ら、J.Immunol. 142巻、p4248 、1990年）が報告され
ているのみであり、ＨＩＶの細胞への感染に対するＩＬ
−６の作用、とりわけＨＩＶの細胞への感染をＩＬ−６
が阻害するということについては知られていない。
発病するカポジ肉腫がＩＬ−６を産生し、そのＩＬ−６
に反応して増殖すること（ S.A.Mile ら、Proc.Natl.Ac
ad.Sci.U.S.A. 87巻、p4068 、1990年）、エイズ患者血
清中のその濃度が症状の進行とともに増加すること（本
多ら、J.Immunol. 145巻、p4059 、1990年及びE.C.Bree
n ら、J.Immunol. 142巻、p4248 、1990年）が報告され
ているのみであり、ＨＩＶの細胞への感染に対するＩＬ
−６の作用、とりわけＨＩＶの細胞への感染をＩＬ−６
が阻害するということについては知られていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】エイズに関しては、こ
れといった確立された治療法や予防法が確立されていな
いのが現状である。
れといった確立された治療法や予防法が確立されていな
いのが現状である。
【０００８】そこで本発明は、ＨＩＶ感染を阻害すると
いう、ＩＬ−６が有する、従来知られていない特性を利
用したＨＩＶの感染阻害剤を提供するものである。
いう、ＩＬ−６が有する、従来知られていない特性を利
用したＨＩＶの感染阻害剤を提供するものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＩＬ−６
の従来知られていない特性、即ちＩＬ−６がＨＩＶの感
染を阻害する特性を有することを見出だし、この特性を
利用することで本発明を完成する至った。
の従来知られていない特性、即ちＩＬ−６がＨＩＶの感
染を阻害する特性を有することを見出だし、この特性を
利用することで本発明を完成する至った。
【００１０】即ち本発明は、ＩＬ−６を有効成分とする
ＨＩＶ感染阻害剤であり、ＩＬ−６の産生を誘導するＩ
Ｌ−６産生誘導物質を有効成分とするＨＩＶ感染阻害剤
であり、更にはＩＬ−６の産生能力を付与され又はＩＬ
−６の産生能力を増強された細胞を含むＨＩＶ感染阻害
剤である。以下、本発明を詳細に説明する。
ＨＩＶ感染阻害剤であり、ＩＬ−６の産生を誘導するＩ
Ｌ−６産生誘導物質を有効成分とするＨＩＶ感染阻害剤
であり、更にはＩＬ−６の産生能力を付与され又はＩＬ
−６の産生能力を増強された細胞を含むＨＩＶ感染阻害
剤である。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１１】ＩＬ−６は、細胞膜上に存在するＩＬ−６
レセプタ−（ヒトＩＬ−６レセプタ−については特開平
２−２８８８９８号、K.Yamasakiら、Science 47巻、p8
25、1988年等、マウスＩＬ−６レセプタ−については特
願平２−２１５８８６号等）に結合することでその生理
活性を発現し得るものである。従って本発明で使用する
ＩＬ−６は、天然に生産されたＩＬ−６、遺伝子工学的
に生産されたＩＬ−６及び化学的に合成されたＩＬ−６
のいずれであっても、実際に投与されるものに対して生
理活性を発現し得るものであれば制限はない。
レセプタ−（ヒトＩＬ−６レセプタ−については特開平
２−２８８８９８号、K.Yamasakiら、Science 47巻、p8
25、1988年等、マウスＩＬ−６レセプタ−については特
願平２−２１５８８６号等）に結合することでその生理
活性を発現し得るものである。従って本発明で使用する
ＩＬ−６は、天然に生産されたＩＬ−６、遺伝子工学的
に生産されたＩＬ−６及び化学的に合成されたＩＬ−６
のいずれであっても、実際に投与されるものに対して生
理活性を発現し得るものであれば制限はない。
【００１２】遺伝子工学的にＩＬ−６を生産するには、
ＣＨＯ細胞で例示される動物細胞や大腸菌で例示される
微生物を宿主として使用し、これにＩＬ−６を暗号化す
るｃＤＮＡを導入するなどすれば良い（ヒトＩＬ−６に
ついては、特開昭６３−１５７９９６号、特開平１−５
０３３５４号等、ラットＩＬ−６については、特開平２
−１９５８８５号）。
ＣＨＯ細胞で例示される動物細胞や大腸菌で例示される
微生物を宿主として使用し、これにＩＬ−６を暗号化す
るｃＤＮＡを導入するなどすれば良い（ヒトＩＬ−６に
ついては、特開昭６３−１５７９９６号、特開平１−５
０３３５４号等、ラットＩＬ−６については、特開平２
−１９５８８５号）。
【００１３】本発明のＨＩＶ感染阻害剤は、それが投与
されるものの体重１kgに対し、およそ10μ gから10mg程
度のＩＬ−６を含んでいれば十分である。また、その投
与方法は、例えば静脈内投与、筋肉内投与又は経皮投与
等の非経口的投与方法によることが好ましい。
されるものの体重１kgに対し、およそ10μ gから10mg程
度のＩＬ−６を含んでいれば十分である。また、その投
与方法は、例えば静脈内投与、筋肉内投与又は経皮投与
等の非経口的投与方法によることが好ましい。
【００１４】本発明の阻害剤は、例えば生理食塩水、ブ
ドウ糖液、マンニト−ル、メチルセルロ−ス又はゼラチ
ン等と混合して得られる常用の賦活剤を使用することで
製剤化が可能である。また、本発明のＨＩＶ感染阻害剤
は、凍結乾燥して保存することも可能であるが、凍結乾
燥した場合には、使用に先立って生理食塩水、５％程度
のブドウ糖液又はリンゲル液等の等張液で再溶解して使
用すれば良い。
ドウ糖液、マンニト−ル、メチルセルロ−ス又はゼラチ
ン等と混合して得られる常用の賦活剤を使用することで
製剤化が可能である。また、本発明のＨＩＶ感染阻害剤
は、凍結乾燥して保存することも可能であるが、凍結乾
燥した場合には、使用に先立って生理食塩水、５％程度
のブドウ糖液又はリンゲル液等の等張液で再溶解して使
用すれば良い。
【００１５】ＩＬ−６を有効成分とする本発明の阻害剤
は、ＩＬ−６の他に可溶性ＩＬ−６レセプタ−（特願平
１−９７７４号等）を作用増強剤として含んでいること
が好ましい。可溶性ＩＬ−６レセプタ−は、ＩＬ−６と
結合することにより、細胞にＩＬ−６の生理活性を伝達
することが可能だからである。
は、ＩＬ−６の他に可溶性ＩＬ−６レセプタ−（特願平
１−９７７４号等）を作用増強剤として含んでいること
が好ましい。可溶性ＩＬ−６レセプタ−は、ＩＬ−６と
結合することにより、細胞にＩＬ−６の生理活性を伝達
することが可能だからである。
【００１６】ところで、ＨＩＶ患者に頻繁に発病するカ
ポジ肉腫は、ＩＬ−６を産生し、これに反応して増殖す
ることが報告されている。従って、本発明のＨＩＶ感染
阻害剤は、カポジ肉腫を発病していない者に投与するこ
とが好ましい。
ポジ肉腫は、ＩＬ−６を産生し、これに反応して増殖す
ることが報告されている。従って、本発明のＨＩＶ感染
阻害剤は、カポジ肉腫を発病していない者に投与するこ
とが好ましい。
【００１７】本発明のＨＩＶ感染阻害剤は、ＩＬ−６そ
れ自体を有効成分とする上述のような阻害剤の他に、Ｉ
Ｌ−６の産生を誘導するＩＬ−６産生誘導物質を有効成
分とするものである。
れ自体を有効成分とする上述のような阻害剤の他に、Ｉ
Ｌ−６の産生を誘導するＩＬ−６産生誘導物質を有効成
分とするものである。
【００１８】このような阻害剤は最終的に、体内におけ
るＩＬ−６の濃度を上昇させ、ＩＬ−６そのものを投与
したのと同様の効果を達成する。具体的にＩＬ−６産生
誘導物質として、ＩＬ−１（M.Kohaseら、Mol.Cell.Bio
l. 7巻、p273、1987年）やＴＮＦ（M.Kohaseら、Mol.Ce
ll.Biol. 7巻、p273、1987年）に代表されるサイトカイ
ン、ＮＦＩＬ−６（S.Akira ら、EMBO J.9巻、p 1897、
1990年）等のＤＮＡ結合蛋白質、ポリＡ・Ｔ等のオリゴ
ヌクレオチド又はシクロヘキシミド等の有機化合物が例
示できる。
るＩＬ−６の濃度を上昇させ、ＩＬ−６そのものを投与
したのと同様の効果を達成する。具体的にＩＬ−６産生
誘導物質として、ＩＬ−１（M.Kohaseら、Mol.Cell.Bio
l. 7巻、p273、1987年）やＴＮＦ（M.Kohaseら、Mol.Ce
ll.Biol. 7巻、p273、1987年）に代表されるサイトカイ
ン、ＮＦＩＬ−６（S.Akira ら、EMBO J.9巻、p 1897、
1990年）等のＤＮＡ結合蛋白質、ポリＡ・Ｔ等のオリゴ
ヌクレオチド又はシクロヘキシミド等の有機化合物が例
示できる。
【００１９】上記のようなＩＬ−６産生誘導物質を有効
成分とする本発明のＨＩＶ感染阻害剤は、それを生体に
投与した場合に、投与されたものの体重１kgに対し、お
よそ10μg から10mg程度のＩＬ−６を誘導できるＩＬ−
６産生誘導物質を含んでいれば良い。
成分とする本発明のＨＩＶ感染阻害剤は、それを生体に
投与した場合に、投与されたものの体重１kgに対し、お
よそ10μg から10mg程度のＩＬ−６を誘導できるＩＬ−
６産生誘導物質を含んでいれば良い。
【００２０】ＩＬ−６産生誘導物質を有効成分とする阻
害剤においても、可溶性ＩＬ−６レセプタ−を作用増強
剤として含むことが好ましい。また、カポジ肉腫を発病
していない者に投与することが好ましい。
害剤においても、可溶性ＩＬ−６レセプタ−を作用増強
剤として含むことが好ましい。また、カポジ肉腫を発病
していない者に投与することが好ましい。
【００２１】本発明は更に、ＩＬ−６の産生能力を付与
され又はＩＬ−６の産生能力を増強された細胞を含むＨ
ＩＶ感染阻害剤である。このような阻害剤も、ＩＬ−６
そのものを投与し又はＩＬ−６産生誘導物質を投与した
場合と同様に、生体におけるＩＬ−６の濃度を上昇させ
ることが可能であり、最終的に、ＩＬ−６の特定の性質
により、ＨＩＶの感染を阻害することが可能である。
され又はＩＬ−６の産生能力を増強された細胞を含むＨ
ＩＶ感染阻害剤である。このような阻害剤も、ＩＬ−６
そのものを投与し又はＩＬ−６産生誘導物質を投与した
場合と同様に、生体におけるＩＬ−６の濃度を上昇させ
ることが可能であり、最終的に、ＩＬ−６の特定の性質
により、ＨＩＶの感染を阻害することが可能である。
【００２２】このような本発明のＨＩＶ感染阻害剤の一
例として、それを投与しようとするものの細胞を事前に
採取し、これにＩＬ−６を暗号化する遺伝子及びそれを
発現するのに必要な遺伝子を導入し、再び生体に戻す方
法が例示できる。この方法においては、特にリンパ球を
利用すると良い。
例として、それを投与しようとするものの細胞を事前に
採取し、これにＩＬ−６を暗号化する遺伝子及びそれを
発現するのに必要な遺伝子を導入し、再び生体に戻す方
法が例示できる。この方法においては、特にリンパ球を
利用すると良い。
【００２３】ＩＬ−６の産生能力を付与され又はＩＬ−
６の産生能力を増強された細胞を含む阻害剤において
も、投与されたものの体重１kgに対し、およそ10μg か
ら10mg程度のＩＬ−６を産生し又は増産できるようにそ
の産生能力や細胞数等を調整すれば良い。また更には可
溶性ＩＬ−６レセプタ−を作用増強剤として含むことが
好ましく、またカポジ肉腫が発病していない患者に投与
することが好ましい。この点については、これまでに説
明した他のＨＩＶ感染阻害剤と同様である。ところで好
ましくＩＬ−６レセプタ−を作用増強剤として使用する
場合に、このような本発明の阻害剤では、細胞ついて同
時に可溶性ＩＬ−６レセプタ−の産生能力を付与しても
良い。
６の産生能力を増強された細胞を含む阻害剤において
も、投与されたものの体重１kgに対し、およそ10μg か
ら10mg程度のＩＬ−６を産生し又は増産できるようにそ
の産生能力や細胞数等を調整すれば良い。また更には可
溶性ＩＬ−６レセプタ−を作用増強剤として含むことが
好ましく、またカポジ肉腫が発病していない患者に投与
することが好ましい。この点については、これまでに説
明した他のＨＩＶ感染阻害剤と同様である。ところで好
ましくＩＬ−６レセプタ−を作用増強剤として使用する
場合に、このような本発明の阻害剤では、細胞ついて同
時に可溶性ＩＬ−６レセプタ−の産生能力を付与しても
良い。
【００２４】これまで説明してきた本発明のＨＩＶ感染
阻害剤は、特にＨＩＶに限らずに、他の例えばチンパン
ジ−やＳＣＩＤマウスにおいてヒトエイズと類似した症
状を引き起こす、ＨＩＶに類似したウイルスの感染に対
しても効果を有することが容易に考えられる。
阻害剤は、特にＨＩＶに限らずに、他の例えばチンパン
ジ−やＳＣＩＤマウスにおいてヒトエイズと類似した症
状を引き起こす、ＨＩＶに類似したウイルスの感染に対
しても効果を有することが容易に考えられる。
【００２５】また、本発明のＨＩＶ阻害剤のうち、例え
ばヒトに投与するものであればヒトＩＬ−６レセプタ−
と結合し得るＩＬ−６、該ＩＬ−６の産生誘導物質若し
くは該ＩＬ−６の産生能力を付与され又は該ＩＬ−６の
産生能力を増強された細胞のいずれかを含めば良く、例
えばマウスに投与するものであればマウスＩＬ−６レセ
プタ−と結合し得るＩＬ−６、該ＩＬ−６の産生誘導物
質若しくは該ＩＬ−６の産生能力を付与され又は該ＩＬ
−６の産生能力を増強された細胞のいずれかを含めば良
い。
ばヒトに投与するものであればヒトＩＬ−６レセプタ−
と結合し得るＩＬ−６、該ＩＬ−６の産生誘導物質若し
くは該ＩＬ−６の産生能力を付与され又は該ＩＬ−６の
産生能力を増強された細胞のいずれかを含めば良く、例
えばマウスに投与するものであればマウスＩＬ−６レセ
プタ−と結合し得るＩＬ−６、該ＩＬ−６の産生誘導物
質若しくは該ＩＬ−６の産生能力を付与され又は該ＩＬ
−６の産生能力を増強された細胞のいずれかを含めば良
い。
【００２６】ここで、ヒトに投与する本発明の阻害剤を
例にして記載すれば、この阻害剤に含まれ得るＩＬ−６
やこの阻害剤によりヒト体内で生産されるＩＬ−６等は
ヒトＩＬ−６レセプタ−と結合し得るものであれば、例
えマウスやラット等のヒト以外の動物に由来するＩＬ−
６であっても制限はない。しかし、ヒト体内において投
与され又は産生されたＩＬ−６の抗原性という問題を考
慮し、ヒトに対してはヒトＩＬ−６又はヒトＩＬ−６の
生産能力を付与された細胞等を使用することが好まし
い。
例にして記載すれば、この阻害剤に含まれ得るＩＬ−６
やこの阻害剤によりヒト体内で生産されるＩＬ−６等は
ヒトＩＬ−６レセプタ−と結合し得るものであれば、例
えマウスやラット等のヒト以外の動物に由来するＩＬ−
６であっても制限はない。しかし、ヒト体内において投
与され又は産生されたＩＬ−６の抗原性という問題を考
慮し、ヒトに対してはヒトＩＬ−６又はヒトＩＬ−６の
生産能力を付与された細胞等を使用することが好まし
い。
【００２７】本発明の阻害剤の作用増強剤として使用す
る可溶性ＩＬ−６レセプタ−についても同様に、投与さ
れたものの細胞にＩＬ−６の生理活性を伝達し得るもの
であれば特別の制限はないが、抗原性等の問題から、投
与しようとするものに由来するＩＬ−６レセプタ−の細
胞貫通領域を欠失した分子を使用すると良い。
る可溶性ＩＬ−６レセプタ−についても同様に、投与さ
れたものの細胞にＩＬ−６の生理活性を伝達し得るもの
であれば特別の制限はないが、抗原性等の問題から、投
与しようとするものに由来するＩＬ−６レセプタ−の細
胞貫通領域を欠失した分子を使用すると良い。
【００２８】本発明により提供されるＨＩＶ感染阻害剤
は、後の実施例で示されるようにＨＩＶの細胞への感染
を阻害するばかりでなく、ＨＩＶ感染細胞におけるＨＩ
Ｖの増殖を阻害する効果をも有する。従って本発明の阻
害剤は、単にＨＩＶの細胞への感染を阻害し得る薬剤で
はなく、ＨＩＶ感染からエイズの発病を抑制し得る阻害
剤としても有用な薬剤である。
は、後の実施例で示されるようにＨＩＶの細胞への感染
を阻害するばかりでなく、ＨＩＶ感染細胞におけるＨＩ
Ｖの増殖を阻害する効果をも有する。従って本発明の阻
害剤は、単にＨＩＶの細胞への感染を阻害し得る薬剤で
はなく、ＨＩＶ感染からエイズの発病を抑制し得る阻害
剤としても有用な薬剤である。
【００２９】
【実施例】以下に本発明のＨＩＶ感染阻害剤をより詳細
に説明するために実施例を記載するが、これら実施例は
本発明の一例であり、本発明を限定するものではない。
に説明するために実施例を記載するが、これら実施例は
本発明の一例であり、本発明を限定するものではない。
【００３０】なお、本実施例で使用したＩＬ−６は、As
agoeらの方法（Biotechnology 、6巻、p806、1988年）
に従って遺伝子工学的に製造したヒトＩＬ−６である。 実施例１ ヒトマクロファ−ジへのＨＩＶの感染に対す
るＩＬ−６の阻害効果 ヒトマクロファ−ジ様細胞株Ｕ９３７（大日本製薬株式
会社製）を、ＲＰＭＩ１６４０を用いて５％ＣＯ２、３
７℃の通常条件下で培養し、ＨＩＶの一種であるＲＯＤ
（本多ら、J.Immunol.145 巻、p4059 、1990年）を１細
胞当たり５０００ウイルスを添加した。
agoeらの方法（Biotechnology 、6巻、p806、1988年）
に従って遺伝子工学的に製造したヒトＩＬ−６である。 実施例１ ヒトマクロファ−ジへのＨＩＶの感染に対す
るＩＬ−６の阻害効果 ヒトマクロファ−ジ様細胞株Ｕ９３７（大日本製薬株式
会社製）を、ＲＰＭＩ１６４０を用いて５％ＣＯ２、３
７℃の通常条件下で培養し、ＨＩＶの一種であるＲＯＤ
（本多ら、J.Immunol.145 巻、p4059 、1990年）を１細
胞当たり５０００ウイルスを添加した。
【００３１】細胞へのウイルスの添加に続き、種々の濃
度となるようにＩＬ−６を添加した後、６日間細胞を培
養した。このとき、ＩＬ−６の効果をより明確に調べる
目的で、ＩＬ−６の代わりに培養に用いた培養液を添加
する操作も行った。
度となるようにＩＬ−６を添加した後、６日間細胞を培
養した。このとき、ＩＬ−６の効果をより明確に調べる
目的で、ＩＬ−６の代わりに培養に用いた培養液を添加
する操作も行った。
【００３２】培養終了後、培養上清中のリバ−ストラン
スクリプタ−ゼ（ＲＴ）活性及びｐ２４抗原の量を測定
した。ＲＴ活性は、ＨＩＶ等のレトロウイルスが持つ逆
転写酵素を定量的に示すこと（Spire.B ら、Lancet、p1
88からp189、1985年）から、またｐ２４抗原は、ＨＩＶ
が持つコア蛋白であること（T.Matsumoto.Immunohaemat
ology 、10巻、p320からp324、1988年）からＨＩＶ感染
を示すパラメ−タ−として広く一般に使用されている。
スクリプタ−ゼ（ＲＴ）活性及びｐ２４抗原の量を測定
した。ＲＴ活性は、ＨＩＶ等のレトロウイルスが持つ逆
転写酵素を定量的に示すこと（Spire.B ら、Lancet、p1
88からp189、1985年）から、またｐ２４抗原は、ＨＩＶ
が持つコア蛋白であること（T.Matsumoto.Immunohaemat
ology 、10巻、p320からp324、1988年）からＨＩＶ感染
を示すパラメ−タ−として広く一般に使用されている。
【００３３】ＲＴ活性は、Alen,J.Smithらの方法（J.Vi
rology, 64巻,p2743-2750,1990年）に従い、ラジオアイ
ソト−プラベルした一本鎖ＤＮＡが、培養上清中に含ま
れるＲＴによりｍＲＮＡを鋳型とする二本鎖核酸の合成
の際に取り込まれる量により測定し、一方、ｐ２４抗原
濃度は、ｐ２４抗原濃度測定キット（アボット社製、Ｈ
ＩＶ−ｐ２４ＥＬＩＳＡキット）を使用して測定した。
rology, 64巻,p2743-2750,1990年）に従い、ラジオアイ
ソト−プラベルした一本鎖ＤＮＡが、培養上清中に含ま
れるＲＴによりｍＲＮＡを鋳型とする二本鎖核酸の合成
の際に取り込まれる量により測定し、一方、ｐ２４抗原
濃度は、ｐ２４抗原濃度測定キット（アボット社製、Ｈ
ＩＶ−ｐ２４ＥＬＩＳＡキット）を使用して測定した。
【００３４】なお、ヒトマクロファ−ジ様細胞株Ｕ９３
７はヒトマクロファ−ジから調製された細胞株であっ
て、細胞表面抗原や増殖能力という性質からヒトマクロ
ファ−ジ細胞と同等のものであることが認めされた細胞
（ＡＴＣＣ ＣＲＬ-1593 ）である。
７はヒトマクロファ−ジから調製された細胞株であっ
て、細胞表面抗原や増殖能力という性質からヒトマクロ
ファ−ジ細胞と同等のものであることが認めされた細胞
（ＡＴＣＣ ＣＲＬ-1593 ）である。
【００３５】結果を図１及び図２に示す。図１はＲＴ活
性に関し、ＩＬ−６濃度に応じて培養上清中のＲＴ活性
が低下することが示されている。図２はｐ２４抗原に関
し、ＩＬ−６により培養上清中のｐ２４抗原の濃度が低
下することが示されている。
性に関し、ＩＬ−６濃度に応じて培養上清中のＲＴ活性
が低下することが示されている。図２はｐ２４抗原に関
し、ＩＬ−６により培養上清中のｐ２４抗原の濃度が低
下することが示されている。
【００３６】これらの結果は、ＨＩＶとＩＬ−６が共存
する場合に、ＩＬ−６によりＨＩＶの細胞への感染が阻
害されることを示している。 実施例２ ＩＬ−６のＨＩＶ感染阻害効果に対する抗ヒ
トＩＬ−６レセプタ−抗体又は抗ＩＬ−６抗体の効果 実施例１と同様にヒトマクロファ−ジ様細胞株Ｕ９３７
を培養し、ＲＯＤウイルスを添加し、更に種々の濃度の
ＩＬ−６を添加した。このとき、抗ヒトＩＬ−６レセプ
タ−モノクロ−ナル抗体ＰＭ−１（Y.Hirataら、J.Immu
nol. 143巻、p2900、1989年）又は抗ヒトＩＬ−６モノ
クロ−ナル抗体ＭＨ１６６（T.Matsudaら、Eur.J.Immun
ol.18巻、p951、1988年）を添加した。
する場合に、ＩＬ−６によりＨＩＶの細胞への感染が阻
害されることを示している。 実施例２ ＩＬ−６のＨＩＶ感染阻害効果に対する抗ヒ
トＩＬ−６レセプタ−抗体又は抗ＩＬ−６抗体の効果 実施例１と同様にヒトマクロファ−ジ様細胞株Ｕ９３７
を培養し、ＲＯＤウイルスを添加し、更に種々の濃度の
ＩＬ−６を添加した。このとき、抗ヒトＩＬ−６レセプ
タ−モノクロ−ナル抗体ＰＭ−１（Y.Hirataら、J.Immu
nol. 143巻、p2900、1989年）又は抗ヒトＩＬ−６モノ
クロ−ナル抗体ＭＨ１６６（T.Matsudaら、Eur.J.Immun
ol.18巻、p951、1988年）を添加した。
【００３７】培養終了後、培養上清中のＲＴ活性及びｐ
２４抗原の量を、実施例１に記載したのと同様の方法で
調べた。
２４抗原の量を、実施例１に記載したのと同様の方法で
調べた。
【００３８】結果を図３及び図４に示す。図３はＲＴ活
性に関し、ＲＴ活性を低下させるという実施例１で示さ
れたＩＬ−６の効果がＭＨ１６６又はＰＭ−１抗体の添
加により中和されたことが示されている。図４はｐ２４
抗原に関し、ｐ２４抗原の濃度を低下させるという実施
例１で示されたＩＬ−６の効果がＭＨ１６６又はＰＭ−
１抗体の添加により中和されたことが示されている。 実施例３ ＨＩＶ感染者由来の末梢血リンパ球に対する
ＩＬ−６の効果 ＨＩＶ感染者より採取した末梢血から、フィコ−ルを用
いた通常の比重遠心法によりリンパ球画分を分離し、Ｔ
２５フラスコ中で、１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭ
Ｉ１６４０を用いて５％ＣＯ２、３７℃の通常条件下で
培養した。
性に関し、ＲＴ活性を低下させるという実施例１で示さ
れたＩＬ−６の効果がＭＨ１６６又はＰＭ−１抗体の添
加により中和されたことが示されている。図４はｐ２４
抗原に関し、ｐ２４抗原の濃度を低下させるという実施
例１で示されたＩＬ−６の効果がＭＨ１６６又はＰＭ−
１抗体の添加により中和されたことが示されている。 実施例３ ＨＩＶ感染者由来の末梢血リンパ球に対する
ＩＬ−６の効果 ＨＩＶ感染者より採取した末梢血から、フィコ−ルを用
いた通常の比重遠心法によりリンパ球画分を分離し、Ｔ
２５フラスコ中で、１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭ
Ｉ１６４０を用いて５％ＣＯ２、３７℃の通常条件下で
培養した。
【００３９】培養開始後１週間してリンパ球がブラスト
化した段階で、培養液に１０ U／mlとなるようにＩＬ−
６を添加し、更に６日間培養を行った。またこのとき、
ＩＬ−６の代わりに１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭ
Ｉ１６４０を添加する操作も行った。
化した段階で、培養液に１０ U／mlとなるようにＩＬ−
６を添加し、更に６日間培養を行った。またこのとき、
ＩＬ−６の代わりに１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭ
Ｉ１６４０を添加する操作も行った。
【００４０】培養終了後、培養上清中のｐ２４抗原の量
を、実施例１に記載したのと同様の方法により調べた。
を、実施例１に記載したのと同様の方法により調べた。
【００４１】結果を図５に示す。図５によれば、ＩＬ−
６を添加していない場合には１４ng／mlであったｐ２４
抗原の濃度が、ＩＬ−６を添加することで６ng／mlに低
下することが分かる。
６を添加していない場合には１４ng／mlであったｐ２４
抗原の濃度が、ＩＬ−６を添加することで６ng／mlに低
下することが分かる。
【００４２】この結果は、ＩＬ−６を有効成分とする本
発明のＨＩＶ感染阻害剤が、単にＨＩＶの細胞への感染
を阻害するのみではなく、ＨＩＶ感染細胞におけるＨＩ
Ｖの増殖をも阻害するという驚くべき事実を示すもので
ある。
発明のＨＩＶ感染阻害剤が、単にＨＩＶの細胞への感染
を阻害するのみではなく、ＨＩＶ感染細胞におけるＨＩ
Ｖの増殖をも阻害するという驚くべき事実を示すもので
ある。
【００４３】また、本実施例の結果は、実施例１又は実
施例２におけるＩＬ−６の感染阻害効果が、ヒトマクロ
ファ−ジ様細胞株Ｕ９３７に特有の効果ではないことを
示している。
施例２におけるＩＬ−６の感染阻害効果が、ヒトマクロ
ファ−ジ様細胞株Ｕ９３７に特有の効果ではないことを
示している。
【００４４】
【発明の効果】本発明は、ＩＬ−６の有する特定の性質
を利用する、ＨＩＶ感染阻害剤を提供するものである。
を利用する、ＨＩＶ感染阻害剤を提供するものである。
【００４５】ＨＩＶは、近年大きな社会問題となってい
るエイズを引き起こすウイルスであり、このウイルスの
感染を阻害（予防）できれば、エイズの発病自体を阻害
（予防）することが可能なのである。
るエイズを引き起こすウイルスであり、このウイルスの
感染を阻害（予防）できれば、エイズの発病自体を阻害
（予防）することが可能なのである。
【００４６】これまでのところ、ＩＬ−６がどのような
メカニズムでＨＩＶの感染を阻害するかは不明である
が、エイズが治療又は予防方法の確立が急がれる疾患で
あるだけに、本発明の意義は大きい。
メカニズムでＨＩＶの感染を阻害するかは不明である
が、エイズが治療又は予防方法の確立が急がれる疾患で
あるだけに、本発明の意義は大きい。
【００４７】本発明のＨＩＶ感染阻害剤は、ＨＩＶと共
存した場合にはＨＩＶにより細胞が感染するのを阻害す
る効果を有し、更に驚くべきことには、ＨＩＶにより感
染した細胞においては、感染細胞中でのＨＩＶの増殖を
阻害する効果をも有する。
存した場合にはＨＩＶにより細胞が感染するのを阻害す
る効果を有し、更に驚くべきことには、ＨＩＶにより感
染した細胞においては、感染細胞中でのＨＩＶの増殖を
阻害する効果をも有する。
【００４８】従って本発明のＨＩＶ感染阻害剤は、ＨＩ
Ｖの細胞への感染を阻害する効果を通してエイズの予防
を実現し、ＨＩＶ感染細胞におけるＨＩＶの増殖を阻害
する効果を通してＨＩＶの感染症状の進行更にはＨＩＶ
感染後のエイズの発病を阻害（予防）を実現する。
Ｖの細胞への感染を阻害する効果を通してエイズの予防
を実現し、ＨＩＶ感染細胞におけるＨＩＶの増殖を阻害
する効果を通してＨＩＶの感染症状の進行更にはＨＩＶ
感染後のエイズの発病を阻害（予防）を実現する。
【００４９】本発明の阻害剤は、ＩＬ−６を有効成分と
するか、ＩＬ−６の産生を誘導するＩＬ−６産生誘導物
質を有効成分とするか若しくはＩＬ−６の産生能力を付
与され又はＩＬ−６の産生能力を増強された細胞を含む
ものであり、いずれの場合にも、直接的には対象である
ヒト又は動物の体内におけるＩＬ−６の濃度を上昇させ
る作用を通して以上説明した効果を達成するものであ
る。
するか、ＩＬ−６の産生を誘導するＩＬ−６産生誘導物
質を有効成分とするか若しくはＩＬ−６の産生能力を付
与され又はＩＬ−６の産生能力を増強された細胞を含む
ものであり、いずれの場合にも、直接的には対象である
ヒト又は動物の体内におけるＩＬ−６の濃度を上昇させ
る作用を通して以上説明した効果を達成するものであ
る。
【図１】図１は、本発明の実施例１における、細胞培養
上清中のＲＴ活性を示すものである。縦軸は測定された
ＲＴ活性を示す。第１から第８のカラムはそれぞれ、Ｉ
Ｌ−６の代わりに培養液を添加したもの（１）、0.006U
／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの（２）、0.07
5U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの（３）、0.
15 U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの（４）、
0.3U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの（５）、
0.45 U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（６）、0.6U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（７）、30 U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（８）の結果を示す。本図によれば、ＨＩＶのＲＴ活性
は共存するＩＬ−６の濃度に依存して低下することが分
かり、ＨＩＶの細胞への感染及び感染細胞におけるＨＩ
Ｖの増殖がＩＬ−６により阻害されることが示されてい
る。
上清中のＲＴ活性を示すものである。縦軸は測定された
ＲＴ活性を示す。第１から第８のカラムはそれぞれ、Ｉ
Ｌ−６の代わりに培養液を添加したもの（１）、0.006U
／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの（２）、0.07
5U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの（３）、0.
15 U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの（４）、
0.3U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの（５）、
0.45 U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（６）、0.6U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（７）、30 U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（８）の結果を示す。本図によれば、ＨＩＶのＲＴ活性
は共存するＩＬ−６の濃度に依存して低下することが分
かり、ＨＩＶの細胞への感染及び感染細胞におけるＨＩ
Ｖの増殖がＩＬ−６により阻害されることが示されてい
る。
【図２】図２は、本発明の実施例１における、細胞培養
上清中のｐ２４抗原の濃度を示すものである。縦軸はｐ
２４抗原の濃度（ng／ml）を示す。第１から第８のカラ
ムは、それぞれ図１おける第１から第８のカラムと同様
の操作を行った場合についての結果を示すものである。
本図によれば、ｐ２４抗原の濃度は共存するＩＬ−６に
より低下することが分かり、ＨＩＶの細胞への感染及び
感染細胞におけるＨＩＶの増殖がＩＬ−６により阻害さ
れていることが示されている。
上清中のｐ２４抗原の濃度を示すものである。縦軸はｐ
２４抗原の濃度（ng／ml）を示す。第１から第８のカラ
ムは、それぞれ図１おける第１から第８のカラムと同様
の操作を行った場合についての結果を示すものである。
本図によれば、ｐ２４抗原の濃度は共存するＩＬ−６に
より低下することが分かり、ＨＩＶの細胞への感染及び
感染細胞におけるＨＩＶの増殖がＩＬ−６により阻害さ
れていることが示されている。
【図３】図３は、本発明の実施例２における、細胞培養
上清中のＲＴ活性を示すものである。横軸は測定された
ＲＴ活性を示す。縦軸に記載した第１から第９のカラム
はそれぞれ、ＩＬ−６の代わりに培養液を添加したもの
（１）、30 U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（２）、0.6U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（３）、ＭＨ１６６モノクロ−ナル抗体を２μ g／mlと
なるように添加したもの（４）、ＩＬ−６及びＭＨ１６
６抗体をそれぞれ30 U／ml、２μ g／mlとなるように添
加したもの（５）、ＩＬ−６及びＭＨ１６６抗体をそれ
ぞれ0.6U／ml、２μ g／mlとなるように添加したもの
（６）、ＰＭ１モノクロ−ナル抗体を２μg／mlとなる
ように添加したもの（７）、ＩＬ−６及びＰＭ１抗体を
それぞれ30U／ml、２μ g／mlとなるように添加したも
の（８）、ＩＬ−６及びＰＭ１抗体をそれぞれ0.6U／m
l、２μ g／mlとなるように添加したもの（９）の結果
を示している。先に図１において説明したように、ＨＩ
ＶのＲＴ活性は共存するＩＬ−６の濃度に依存して低下
するが、抗ＩＬ−６抗体（ＭＨ１６６）又は抗ＩＬ−６
レセプタ−抗体（ＰＭ１）が共存した場合には、このよ
うな現象は消失することが分かる。
上清中のＲＴ活性を示すものである。横軸は測定された
ＲＴ活性を示す。縦軸に記載した第１から第９のカラム
はそれぞれ、ＩＬ−６の代わりに培養液を添加したもの
（１）、30 U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（２）、0.6U／mlとなるようにＩＬ−６を添加したもの
（３）、ＭＨ１６６モノクロ−ナル抗体を２μ g／mlと
なるように添加したもの（４）、ＩＬ−６及びＭＨ１６
６抗体をそれぞれ30 U／ml、２μ g／mlとなるように添
加したもの（５）、ＩＬ−６及びＭＨ１６６抗体をそれ
ぞれ0.6U／ml、２μ g／mlとなるように添加したもの
（６）、ＰＭ１モノクロ−ナル抗体を２μg／mlとなる
ように添加したもの（７）、ＩＬ−６及びＰＭ１抗体を
それぞれ30U／ml、２μ g／mlとなるように添加したも
の（８）、ＩＬ−６及びＰＭ１抗体をそれぞれ0.6U／m
l、２μ g／mlとなるように添加したもの（９）の結果
を示している。先に図１において説明したように、ＨＩ
ＶのＲＴ活性は共存するＩＬ−６の濃度に依存して低下
するが、抗ＩＬ−６抗体（ＭＨ１６６）又は抗ＩＬ−６
レセプタ−抗体（ＰＭ１）が共存した場合には、このよ
うな現象は消失することが分かる。
【図４】図４は、本発明の実施例２における、細胞培養
上清中のｐ２４抗原の濃度を示すものである。横軸はｐ
２４抗原の濃度（ng／ml）を示し、各カラムは図３にお
いて説明したような操作についての結果を示すものであ
る。本図からは、ＭＨ１６６抗体又はＰＭ１抗体が存在
する場合には、ＩＬ−６によるｐ２４抗原の濃度の低下
現象は消失することが分かる。
上清中のｐ２４抗原の濃度を示すものである。横軸はｐ
２４抗原の濃度（ng／ml）を示し、各カラムは図３にお
いて説明したような操作についての結果を示すものであ
る。本図からは、ＭＨ１６６抗体又はＰＭ１抗体が存在
する場合には、ＩＬ−６によるｐ２４抗原の濃度の低下
現象は消失することが分かる。
【図５】図５は、本発明の実施例３の結果を示すもので
ある。図中横軸はｐ２４抗原の濃度（ng／ml）を示すも
のである。第１のカラムは、ＩＬ−６の代わりに培養液
を添加したものであり、第２のカラムは10 U／mlとなる
ようにＩＬ−６を添加した場合の結果を示すものであ
る。本図によれば、ＩＬ−６のｐ２４抗原の濃度を減少
させる作用は、ＨＩＶとＩＬ−６が共存した場合にのみ
観察されるのではなく、既にＨＩＶに感染した細胞に対
しても観察されることが分かる。このことは、本発明の
ＨＩＶ感染阻害剤がＨＩＶ感染細胞におけるウイルスの
増殖を阻害するという驚くべき事実を明確に示すもので
ある。
ある。図中横軸はｐ２４抗原の濃度（ng／ml）を示すも
のである。第１のカラムは、ＩＬ−６の代わりに培養液
を添加したものであり、第２のカラムは10 U／mlとなる
ようにＩＬ−６を添加した場合の結果を示すものであ
る。本図によれば、ＩＬ−６のｐ２４抗原の濃度を減少
させる作用は、ＨＩＶとＩＬ−６が共存した場合にのみ
観察されるのではなく、既にＨＩＶに感染した細胞に対
しても観察されることが分かる。このことは、本発明の
ＨＩＶ感染阻害剤がＨＩＶ感染細胞におけるウイルスの
増殖を阻害するという驚くべき事実を明確に示すもので
ある。
フロントページの続き 特許法第30条第１項適用申請有り 宮坂信之 編「最新 医学からのアプローチ１ サイトカイン」株式会社メジ カルビュー社発行（1991年５月30日）Ｐ．96−109 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 38/00 A61K 35/12 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (2)
- 【請求項１】インターロイキン−６を有効成分とするＨ
ＩＶ感染阻害剤。 - 【請求項２】インターロイキン−６の産生能力を付与さ
れ又はインターロイキン−６の産生能力を増強された細
胞を含むＨＩＶ感染阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21663191A JP3258348B2 (ja) | 1991-08-02 | 1991-08-02 | Ｈｉｖ感染阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21663191A JP3258348B2 (ja) | 1991-08-02 | 1991-08-02 | Ｈｉｖ感染阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06183994A JPH06183994A (ja) | 1994-07-05 |
| JP3258348B2 true JP3258348B2 (ja) | 2002-02-18 |
Family
ID=16691463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21663191A Expired - Fee Related JP3258348B2 (ja) | 1991-08-02 | 1991-08-02 | Ｈｉｖ感染阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3258348B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996012503A1 (fr) * | 1994-10-21 | 1996-05-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remede contre des maladies provoquees par la production d'il-6 |
-
1991
- 1991-08-02 JP JP21663191A patent/JP3258348B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06183994A (ja) | 1994-07-05 |
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