HU225392B1 - Use of an antibody againts interleukin-6-receptor for producing a pharmaceutical composition for treating anemia and cachexia caused by il-6 production - Google Patents

Use of an antibody againts interleukin-6-receptor for producing a pharmaceutical composition for treating anemia and cachexia caused by il-6 production Download PDF

Info

Publication number
HU225392B1
HU225392B1 HU9701900A HU9701900A HU225392B1 HU 225392 B1 HU225392 B1 HU 225392B1 HU 9701900 A HU9701900 A HU 9701900A HU 9701900 A HU9701900 A HU 9701900A HU 225392 B1 HU225392 B1 HU 225392B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
antibody
group
blood
interleukin
mouse
Prior art date
Application number
HU9701900A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT77035A (hu
Inventor
Tadamitsu Kishimoto
Tomoo Katsume
Hiroyuki Saito
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Tadamitsu Kishimoto
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17300476&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU225392(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd, Tadamitsu Kishimoto filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Publication of HUT77035A publication Critical patent/HUT77035A/hu
Publication of HU225392B1 publication Critical patent/HU225392B1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Description

A találmány interleukin-6-receptor (IL-6R) elleni antitest (anti-IL-6R antitest) alkalmazására vonatkozik interleukin-6 (IL-6)-termelődés által okozott anémia és leromlás megelőzésére vagy kezelésére alkalmas gyógyászati készítmény előállítására.
Az IL—6 egy többfunkciós citokin, amely valószínűleg az immunológiai, hematológiai és akut fázis reakciók különféle stádiumaiban működik [Taga T. és munkatársai, Critical Reviews in Immunoi. 11, 265-280 (1992)], és fontos szerepet játszik növekedési faktorként a többszörös mielomában, valamint a plazmacitózissal kísért betegségekben, ilyen például a reuma [Hirano T. és munkatársai, Eur. J. Immunoi. 18, 1797-1801 (1988); Houssiau F. A. és munkatársai, Arth. Rheum. 31, 784-788 (1988)]; a Castleman-féle betegségben [Yoshizaki K. és munkatársai, Blood 74, 1360-1367 (1989); Brant S. J. és munkatársai, J. Clin. Invest. 86, 592-599 (1990)]; a mesangiumsejt-burjánzásos nephritisben [Ohta K. és munkatársai, Clin. Nephrol. (Németország) 38, 185-189 (1992); Fukatsu A. és munkatársai, Láb. Invest. 65, 61-66 (1991); Horii Y. és munkatársai, J. Immunoi. 143, 3949-3955 (1989)] és a daganatok növekedésével kapcsolatos leromlásban [Strassmann G. és munkatársai, J. Clin. Invest. 89, 1681-1684(1992)].
H-2 Ld hIL—6 transzgenikus egérben (IL—6 Tgm) amely géntechnológiai beavatkozások eredményeként nagy koncentrációban expresszál humán IL-6-ot (hIL—6) - kimutatható lgG1 plazmacitózis, mezangiumsejt-burjánzásos nephritis, anémia, trombocitopénia, autoantitestek megjelenése stb. [Miyai T. és munkatársai, Japan Immunology Society 21. ülésén tartott előadás: „Hematological change in H-2 Ld hlL-6 transgenic mice with age” (1991)], ami arra utal, hogy az IL—6 számos betegségben szerepet játszik. Az azonban nem volt ismert, hogy az interleukin-6-receptorral szembeni antitest hatásos lehet interleukintermelődés által okozott anémia és leromlás kezelésében.
A találmány tárgya ennek megfelelően az interleukin-6-receptorral szembeni antitest alkalmazása gyógyászati készítmények előállítására, amelyek interleukin-6-termelődés által okozott anémia és leromlás megelőzésére vagy kezelésére használhatók.
Az ábrákat röviden az alábbiakban ismertetjük.
Az 1. ábra egy grafikon, amely az egyes állatcsoportokban a testtömeg-növekedés változását mutatja.
A 2. ábra egy grafikon, amely az egyes állatcsoportokban a vizeletprotein pozitív arányban való változását mutatja. A vizeletprotein pozitív arány az összes csoportban 0 volt, az 1. és 3. csoport kivételével.
A 3. ábra egy grafikon, amely az egyes csoportokban a hemoglobinszint változását mutatja.
A 4. ábra egy grafikon, amely az egyes csoportokban a vörösvértestek számának változását mutatja.
Az 5. ábra egy grafikon, amely az egyes csoportokban a vérlemezkeszám változását mutatja.
A 6. ábra egy grafikon, amely a fehérvérsejtszám változását mutatja az egyes csoportokban.
A 7. ábra egy grafikon, amely az egyes csoportokban az lgG1-koncentráció változását mutatja a szérumban.
A 8. ábra egy grafikon, amely az 1-5. csoportokban a humán IL-6-koncentráció változását mutatja.
A 9. ábra mutatja az 1. és 2. csoportban a fluoreszcens antitest módszerrel végzett sejtosztályozás eredményét, amelyben kontrollantitestként IgG és Gr-1 antitestet használtunk.
A 10. ábra mutatja a 6. és 7. csoportban a fluoreszcens antitest módszerrel végzett sejtosztályozás eredményét, amelyben kontrollantitestként IgG és Gr-1 antitestet használtunk.
A 11. ábra egy grafikon, amely az egyes állatcsoportokban a lép tömegét mutatja a kísérlet végén.
A 12. ábra egy grafikon, amely az egyes állatcsoportokban a testtömeg változását mutatja.
A 13. ábra egy grafikon, amely a kísérlet 11. napján a trigliceridkoncentrációt mutatja az egerek vérében.
A 14. ábra egy grafikon, amely a kísérlet 15. napján a glükózkoncentrációt mutatja az egerek vérében.
A 15. ábra egy grafikon, amely a kísérlet 11. napján a kalciumion-koncentrációt mutatja az egerek vérében.
A 16. ábra egy grafikon, amely a tumoros kontroliegerek túlélési arányát mutatja.
A 17. ábra egy grafikon, amely a kísérlet megkezdése utáni 10. és 12. napon mutatja az egerek testtömegét.
A 18. ábra egy grafikon, amely a kísérlet megkezdése után a 10. és 12. napon mutatja a kalciumion-koncentrációt az egerek vérében.
A találmány értelmében az interleukin-6-receptor ellen alkalmazható antitest bármilyen eredetű vagy típusú (monoklonális, poliklonális) lehet, amennyiben képes megakadályozni az IL—6 általi jelátvitelt, és gátolni az IL—6 biológiai aktivitását. Előnyösen azonban ez egy monoklonális antitest, amely emlősből származik. Az antitest megakadályozza az IL—6 általi jelátvitelt, és gátolja az IL—6 biológiai aktivitását azáltal, hogy gátolja az IL—6 IL-6R-hez való kötődését.
A monoklonális antitestet termelő sejt bármely emlősállatfajból származhat, lehet humán antitest, vagy egyéb állati antitest. A nem emberből származó monoklonális antitestek előnyösen nyúlból vagy rágcsálókból származó monoklonális antitestek, mivel ezeket
HU 225 392 Β1 könnyű tenyészteni. A rágcsáló előnyösen egér, patkány, hörcsög stb. lehet.
Az interleukin-6-receptorokkal szembeni antitest például MR16-1 antitest [Tamura T. és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 11 924-11 928 (1993)], PM-1 antitest [Hirata Y. és munkatársai, J. Immunoi. 143, 2900-2906 (1989)] stb. lehet.
A monoklonális antitesteket lényegében ismert eljárásokkal lehet előállítani az alábbiak szerint. A monoklonális antitesteket például úgy állítjuk elő, hogy immunizálóantigénként IL—6R-t használunk, az immunizálást a szokásos módon elvégezzük, majd a kapott immunocitákat szokásos sejtfúziós eljárással egy ismert szülősejttel fuzionáljuk, hogy az antitestet termelő sejteket szokásos szűrővizsgálattal kiszűrhessük.
Még közelebbről, a monoklonális antitesteket az alábbi módon állítjuk elő. Az immunizálóantigént például az EP 325474 számon publikált szabadalmi leírásban ismertetett humán IL-6R génszekvencia alkalmazásával állíthatjuk elő. A humán IL-6R génszekvenciát ismert expressziós vektorrendszerbe illesztjük, majd megfelelő gazdasejtbe transzformáljuk, ezután a kívánt IL-6R proteint a gazdasejtből vagy a sejt tenyészetének felülúszójából tisztítjuk, és a kapott tisztított IL-6R proteint használjuk alkalmazzuk immunizálóantigénként.
Az egérből származó immunizálóantigént a JP 3(1991)-155795 számon publikált szabadalmi leírásból ismert egér IL-6R génszekvenciát alkalmazva állíthatjuk elő a humán IL-6R génszekvencia esetén is alkalmazott eljárással.
Ami az IL—6R-t illeti, a sejtmembránon expresszálódottakon kívül a sejtmembránról valószínűleg leváltakat (sIL—6R) is alkalmazhatjuk antigénként. Az SÍL-6R alapvetően az IL-6R sejtmembránhoz kötött extracelluláris doménjéből áll, és abban különbözik a membránhoz kötött IL-6R-től, hogy az előbbiből hiányzik a transzmembrándomén, vagy a transzmembrándoménen kívül az intracelluláris dómén is.
Az immunizálóantigénnel immunizált emlősök köre nem szükségszerűen korlátozott, előnyösen azonban figyelembe kell venni annak kompatibilitását a sejtfúzióban alkalmazott szülősejttel, és rendszerint egeret, patkányt, hörcsögöt, nyulat stb. alkalmazunk.
Az állat immunizálását az immunizálóantigénnel ismert módon végezzük. Általában úgy járunk el, hogy az immunizálóantigént az emlősnek intraperitoneálisan vagy szubkután módon adagoljuk.
Közelebbről, az immunizálóantigént foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), fiziológiás sóoldattal stb. hígítjuk vagy szuszpendáljuk megfelelő térfogatra, és kívánt esetben megfelelő mennyiségű adjuvánssal, például egy komplett Freund-féle adjuvánssal elegyítjük és emulgeáljuk, majd előnyösen ezt az emulziót adjuk az emlősnek több alkalommal minden 4-21. napon. Ezenkívül megfelelő hordozóanyagot is alkalmazhatunk az immunizálóantigénnel történő immunizáláskor.
Miután az állatot a fent leírtak szerint immunizáltuk, és megállapítottuk, hogy az antitest szintje a szérumban a kívánt szintre növekedett, az immunocitákat az emlősből eltávolítjuk, és sejtfúziónak vetjük alá. Előnyös immunocitaként a lépsejteket említjük közelebbről.
Az előnyös mielomasejtek, amelyeket a találmány értelmében partner szülősejtként az immunocitával fuzionálunk, különféle ismert sejtvonalak lehetnek, mint például a P3 (P3*63Ag8.653) [J. Immunoi. 123, 1548 (1978)]; p3-U1 [Current Topics in Microbiology and Immunology 81, 1-7 (1978)]; NS-1 [Eur. J. Immunoi. 6, 511-519 (1976)]; MPC-11 [Cell 8, 405-415 (1976)]; SP2/0 [Natúré 276, 269-270 (1978)]; FO [J. Immunoi. Meth. 35, 1-21 (1980)]; S194 [J. Exp. Med. 148, 313-323 (1978)]; R210 [Natúré 277, 131-133 (1979)] stb.
Az immunocita mielomasejttel történő sejtfúzióját lényegében ismert módon végezhetjük, például a Milstein és munkatársai által ismertetett eljárással [Milstein és munkatársai, Methods Enzymol. 73, 3-46 (1981)] vagy hasonló módon.
Közelebbről, a sejtfúziót például egy sejtfúziót felgyorsító szer jelenlétében hajthatjuk végre, szokásos tápközegben. Sejtfúziót felgyorsító szerként például polietilénglikolt (PEG), Sendai-vírust (HVJ) stb. alkalmazhatunk, és egy adjuvánst, például dimetil-szulfoxidot stb. adhatunk közvetlenül kívánt esetben a sejtfúzió hatékonyságának fokozása érdekében.
Az immunocitákat előnyösen 1-10-szeres mennyiségben alkalmazzuk a mielomasejtekre vonatkoztatva. A sejtfúzió végrehajtására alkalmazott cseppfolyós tápközegként például RPMI 1640 folyékony tápközeget vagy MÉM folyékony tápközeget alkalmazhatunk, amelyek a legalkalmasabbak a mieloma-sejtvonal szaporítására, és sejttenyésztésre leggyakoribban alkalmazott tápközegek, ezenkívül alkalmazhatunk szérumkiegészítőt, például magzati borjúszérumot (FCS) stb. is.
A kívánt fuzionált sejteket (hibridómákat) úgy alakíthatjuk ki, hogy a fent említett immunociták meghatározott mennyiségét a mielomasejtekkel alaposan összekeverjük a fent ismertetett tápközegben, és hozzáadjuk az előzőleg 37 °C-ra melegített PEG-oldatot, például egy 1000-6000 átlagos móltömegű PEG 30-60 vegyes%-os oldatát. Ezután fokozatosan hozzáadjuk a megfelelő tenyészközeget, majd centrifugáljuk, hogy a felülúszóból a sejtfúziós szereket stb. - amelyek a hibridómasejtek tenyésztéséhez nem kívánatosak - eltávolítsuk.
A fenti hibridómákat úgy szelektáljuk, hogy szokásos szelekciós közegben, például HAT folyékony tápközegben (hipoxantint, aminoptrerint és timidint tartalmazó folyékony tápközeg) tenyésztjük. A HAT közegben a tenyésztést addig folytatjuk, amíg a kívánt hibridómáktól eltérő sejtek (nem fuzionált sejtek) elpusztulnak, ez rendszerint néhány napot - néhány hetet vesz igénybe. Ezután szokásos határhígításos eljárással kiszűrjük és monoklónozzuk a kívánt antitestet termelő hibridómákat.
A monoklonális antitesteket termelő, fenti módon előállított hibridómákat ezután szokásos folyékony közegben tenyészthetjük, és hosszabb időn keresztül cseppfolyós nitrogénben tárolhatjuk.
HU 225 392 Β1
A fenti hibridómákból úgy állíthatjuk elő a monoklonális antitesteket, hogy a hibridómát szokásos módon tenyésztjük, és előállítjuk a tenyészet felülúszóját, vagy a hibridómát egy azzal kompatibilis emlősbe implantáljuk és abban elszaporítjuk, majd az antitestet aszcitesz folyadékként kinyerjük, és hasonló módon. Az előbb említett eljárás alkalmas nagy tisztaságú antitest előállítására, míg az utóbbi eljárással az antitest nagy mennyiségekben állítható elő.
Ezenkívül a fenti eljárásokkal előállított monoklonális antitesteket szokásos tisztítási eljárásokkal, például kisózással, gélszűréssel, affinitás! kromatográfiával stb. tisztíthatjuk.
Azt, hogy a fenti módon előállított antitestek nagy affinitással és nagy pontossággal képesek felismerni az antigént, szokásos immunológiai módszerekkel mutatjuk ki, például radioimmunvizsgálattal, enzim-immunvizsgálattal (EIA, ELISA), fluoreszcens antitest módszerrel (immunfluoreszcens analízis) stb.
A találmány értelmében alkalmazott monoklonális antitestek nem korlátozódnak a hibridóma által termelt monoklonális antitestekre, és mesterségesen is megváltoztathatók abból a célból, hogy az emberrel szembeni heteroantigenicitást csökkentsük. Alkalmazhatunk például kiméraantitesteket, amelyek egy egér monoklonális antitest variábilis régióit, és egy humán antitest konstans régióit tartalmazzák. Az ilyen kiméraantitesteket ismert eljárásokkal állíthatjuk elő, főleg géntechnológiai eljárásokkal.
Ezenkívül átformált humán antitest is alkalmazható a találmány értelmében. Ez egy olyan antitest, amelyben egy humán antitest komplementaritást meghatározó régiói egy más emlősantitest, például egy egérantitest komplementaritást meghatározó régióival vannak helyettesítve, ezeket szintén ismert géntechnológiai módszerekkel állíthatjuk elő. A fenti ismert eljárás alkalmazásával olyan átformált humán antitestet állíthatunk elő, amely a találmány értelmében alkalmazható.
Szükség esetén az antitest variábilis régióinak keretrégióiban az aminosavakat úgy helyettesíthetjük, hogy a rekonstituált humán antitest komplementaritást meghatározó régiója megfelelő antigénkötő helyet alkosson [Sato és munkatársai, Cancer Rés. 53, 1-6 (1993)]. Az ilyen átformált humán antitestre előnyös példaként említhetjük humanizált PM-1 (hPM-1) antitestet (lásd WO 92 19759 számon publikált nemzetközi szabadalmi bejelentést).
Létrehozhatunk egy antitest fragmentumait - például Fab-t vagy Fv-t, vagy egyláncú Fv-t (scFv), ahol egy H-lánc és egy L-lánc Fv-i megfelelő összekötővel vannak összekapcsolva - kódoló géneket, és ezeket megfelelő gazdasejtben expresszálhatjuk, és a fenti célra alkalmazhatjuk, amennyiben a fragmentumok az antigénhez kötődnek, és gátolják az IL—6 aktivitását [lásd például Bírd és munkatársai, TIBTECH 9, 132-137 (1991); Huston és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. 85, 5879-5883 (1988)]. Ezen túlmenően az antitest fenti módon átformált V régióját alkalmazhatjuk a H-lánc és az L-lánc Fv-jeként egy scFv kialakítására.
Az IL-6-termelődés által okozott betegségek megelőzésére vagy kezelésére használható gyógyászati készítmények - amelyek IL-6-receptorhoz kötődő antitestet tartalmaznak hatóanyagként - a találmány értelmében alkalmazhatók, amennyiben ezek megakadályozzák az IL—6 jelátvitelét, és hatékonyak IL-6-termelődés által okozott betegségek ellen.
Az IL-6-termelődés által okozott anémia és leromlás megelőzésére vagy kezelésére használható gyógyászati készítményeket előnyösen parenterálisan adagolhatjuk, például intravénás, intramuszkuláris, intraperitoneális vagy szubkután injekció formájában stb., mind szisztémásán, mind helyileg. Ezen túlmenően gyógyászati készítmény vagy készlet formájában is lehetnek legalább egy, gyógyászatilag elfogadható hordozóval vagy hígítóval kombinálva.
Noha a találmány szerinti alkalmazásnak megfelelő gyógyászati készítmények dózisa a beteg állapotától, korától vagy az adagolás módjától függően változhat, az alkalmas mennyiségeket meg kell választani. Például a dózis betegenként 1-1000 mg lehet, amelyet legfeljebb négy dózisra osztva adhatunk. Alternatív módon a találmány szerinti gyógyászati készítményeket 1-10 mg/kg/hét dózisban is adagolhatjuk. Azonban a fent említett betegségek kezelésére vagy megelőzésére használható találmány szerinti gyógyászati készítményeket nem kívánjuk a fent említett dózistartományra korlátozni.
A találmány szerinti alkalmazásnak megfelelő gyógyászati készítményeket szokásos módon állíthatjuk elő. így például a parenterális készítményeket úgy állíthatjuk elő, hogy a tisztított IL-6R antitestet egy oldószerben, például fiziológiás sóoldatban, pufferoldatban stb. oldjuk, amelyhez abszorpciót gátló szert, például Tween 80-at, zselatint, humán szérumalbumint (HSA) stb. adunk, vagy liofilizált formába hozzuk, amelyet alkalmazás előtt oldással rekonstituálunk. Liofilizációs segédanyagként például cukoralkoholt, például mannitot, glükózt vagy szacharidokat alkalmazhatunk.
A találmányt közelebbről - a korlátozás szándéka nélkül - az alábbi referenciapéldákkal és példákkal kívánjuk szemléltetni.
1. referenciapélda
B6 Ld-IL-6 transzgenikus egér létrehozása
Egy 3,3 kbp hosszúságú Sph1-Xhol fragmentumot (Ld-IL—6) - amely a humán IL—6 cDNS-t a H-2 Ld promoterhez kötve tartalmazza [Suematsu és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86, 7547 (1989)] egy C57BL/6J (B6) egér (Nihon Clea) megtermékenyített petesejtjének pronukleuszába injektáljuk mikroinjekcióval, Jamamura és munkatársai módszere szerint [Jamamura és munkatársai, Biochem. 96, 357 (1984)].
A megtermékenyített petesejtet egy nőstény ICR egér petevezetékébe transzplantáljuk, amelyet előzetesen álterhességi kezelésnek vetettünk alá. Ezután az újszülött egeret az EcoRI-gyel emésztett DNS-vég Southern-blot-analízisével vizsgáltuk a hlL-6 cDNS integrációja szempontjából, próbaként a humán IL—6 cDNS 32P-jelzett Taql-Banll fragmentumát alkal4
HU 225 392 Β1 mazva. A beépülés szempontjából pozitívnak talált állatokat B6 egérrel tenyésztve kialakítottunk egy egérvonalat, amely azonos genotípussal rendelkezik.
2. referenciapélda
Patkány anti-IL-6R antitest előállítása
Az egér oldható IL—6R-t termelő CHO-sejteket Saito és munkatársai módszere szerint állítottuk elő [Saito és munkatársai, J. Immunoi. 147, 168-173 (1991)]. A sejteket 5% magzati borjúszérumot (FBS) tartalmazó aMEM tápközegben 37 °C-on inkubáltuk 5% szén-dioxidot tartalmazó nedves levegőben. A kondicionált tápközeget kinyertük, és ezt alkalmaztuk egér slL-6R készítményként. Az egér slL-6R koncentrációját a tápközegben szendvics-ELISA eljárással határoztuk meg, monoklonális antiegér IL-6R antitest RS15 [Saito és munkatársai, J. Immunoi. 147,168-173 (1991)] és nyúl poliklonális antiegér IL-6R antitest segítségével.
Az egér slL-6R készítményből az egér SIL-6R antitestet affinitási oszlopot alkalmazva tisztítottuk, amelyhez monoklonális antiegér IL-6R antitestet (RS12) abdszorbeáltunk. 50 pg tisztított egér slL-6R-t komplett Freund-féle adjuvánsban szubkután injektáltunk egy Wistar-patkánynak, majd az állatnak a második héttől kezdődően, hetente egyszer emlékeztető injekciót adtunk, nem komplett Freund-féle adjuvánsban 50 pg egér slL-6R szubkután injektálásával. Az első emlékeztető injekció után 1 héttel a patkányoknak intravénásán 50 pg egér slL-6R-t adtunk 100 pl foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS).
nappal később a lépet eltávolítottuk a patkányból, és a patkánylépsejteket egér p3-U1 mielomasejtekkel fuzionáltuk 10:1 arányban. A sejteket 37 °C-on egy éjszakán keresztül inkubáltuk 10% FBS-t tartalmazó 100 pl RPMI 1640 tápközegben egy 96 rezervoáros lemez rezervoárjaiban (Falcon 3075), majd 100 pl tápközeget adtunk hozzá, amely hipoxantint/aminopterint/timidint (HAT) tartalmazott. A tápközeg felét naponta HAT tápközeggel helyettesítettük 4 napon át.
nap elteltével az antiegér slL-6R-t termelő hibridómákat egér slL-6R-kötő vizsgálattal (ELISA) szelektáltuk. Röviden, a hibridómák tenyészetének felülúszójából 100 pl-t inkubáltunk előzetesen 1 pg/ml nyúl poliklonális antipatkány IgG antitesttel bevont lemezen. A lemezt mostuk, majd 100 pg/ml egér slL-6R-rel inkubáltuk. Mosás után 2 pg/ml koncentrációban nyúl poliklonális antiegér IL-6R antitestet adtunk hozzá, a lemezt mostuk, majd lúgos foszfatázzal konjugált kecske poliklonális antinyúl IgG antitesttel (Tago) inkubáltuk 60 percen keresztül.
Végül, mosás után a lemezt a lúgos foszfatáz egy szubsztrátjával (Sigma 104; p-nitro-fenil-foszfát) inkubáltuk, és 405 nm-en leolvastuk az eredményeket, lemezleolvasó segítségével (Toso). Az egér slL-6R-t felismerő hibridómákat kétszer klónoztuk határhígításos módszerrel. Az aszciteszfolyadék előállítására BALB/c nu/nu egérbe 2»<0,5 ml pristant injektáltunk, és 3 nap elteltével a kapott hibridóma sejtekből 3*106 sejtet injektáltunk intraperitoneálisan. 10-20 nappal később az aszciteszfolyadékot összegyűjtöttük, és az MR16-1 monoklonális antitestet protein G oszlop (Oncogene Science) alkalmazásával tisztítottuk.
Az MR16-1 által termelt antitest IL-6-ot semlegesítő képességét 3H-timidin MH60.BSF2 sejtekbe történő beépülésével vizsgáltuk [Matsuda és munkatársai, Eur. J. Immunoi. 18, 951-956 (1988)]. Az MH60.BSF2 sejtekből 1*104 sejt/200 pl/rezervoár mért mennyiségeket helyeztünk egy 96 rezervoáros lemez rezervoárjaiba, majd a rezervoárokba 10 pg/ml egér IL-6-ot és MR16-1 vagy RS12 antitestet adtunk, és a sejteket 37 °C-on 5% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában 44 órán keresztül inkubáltuk. Ezután 1 mCi 3H-timidint adtunk minden egyes rezervoárba, és 4 óra elteltével vizsgáltuk a 3H-timidin beépülését.
1. példa
A humán IL—6 cDNS-sel rendelkező 31 transzgenikus egeret - amelyek az 1. referenciapélda szerint létrehozott B6 IL—6 transzgenikus egértől (B6 IL—6 Tgm) származtak - és egy normális, humán IL—6 cDNS-sel nem rendelkező alomtársukat (mindkétfajta egér 4 hetes és hím) használtuk a kísérletekben. A B6 IL—6 Tgm egereket 5 csoportra osztottuk (1-5. csoportok), a 2-5. csoportok 6 állatból álltak, csak az 1. csoport állt 7 állatból. A normálegereket két csoportra osztottuk, a 6. csoport 5, a 7. csoport 6 egérből állt.
A kezelési rend az alábbi volt:
1. csoport (B6 IL—6 Tgm): négyhetes korban (kísérlet első napja) patkány lgG1 antitestet (KH5) (kontroliantitest) injektáltunk intravénásán 2 mg/0,2 ml dózisban, és öthetes korban (kísérlet 8. napján), és azután hetente kétszer (minden harmadik vagy negyedik napon) 100 pg KH5 antitestet injektáltunk szubkután módon.
2. csoport (B6 IL—6 Tgm): négyhetes korban intravénásán MR16-1 antitestet injektáltunk 2 mg/0,2 ml dózisban, és öthetes korban, és azután hetente kétszer 100 pg MR16-1-et injektáltunk szubkután módon.
3. csoport (B6 IL—6 Tgm): négyhetes korban 0,2 ml foszfáttal pufferolt sóoldatot injektáltunk intravénásán, és öthetes korban, és azután hetente kétszer 100 pg MR16-1-et injektáltunk szubkután módon.
4. csoport (B6 IL—6 Tgm): négyhetes korban 2 mg/0,2 ml dózisban MR16-1 antitestet injektáltunk intravénásán, és öthetes korban, és azután minden második héten egyszer 400 pg MR16-1-et injektáltunk szubkután módon.
5. csoport (B6 IL—6 Tgm): négyhetes korban 2 mg/0,2 ml MR16-1-et injektáltunk intravénásán, és öthetes korban, és azután minden második héten 1 mg MR16-1-et injektáltunk szubkután módon.
6. csoport (B6 normálalomtárs): négyhetes korban 2 mg/0,2 ml kontroll KH5 antitestet injektáltunk intravénásán, és öthetes korban, és azután kétszer hetente 100 pg KH5 antitestet injektáltunk szubkután módon.
7. csoport (B6 normálalomtárs): négyhetes korban 2 mg/0,2 ml MR16-1-et injektáltunk intravénásán, és öthetes korban, és azután kétszer hetente 100 pg MR16-1-et injektáltunk szubkután módon.
HU 225 392 Β1
Az alkalmazott vizsgálati eljárások az alábbiak:
Testtömeg mérése és vizeletprotein meghatározása
A testtömeg mérését és a vizeletprotein meghatározását vizeletprotein-tesztpapírral (Combistics Sankyo) minden héten elvégeztük. A vizeletprotein-leolva- 5 sásokból a három plusz értéket (100-300 mg/dl) vagy ennél magasabb értéket vettünk pozitívnak.
Vérvétel
A vért a retroorbitális sinusból vettük minden második héten a kísérlet kezdetétől számítva (négyhetes 10 kor), és a teljes vért a véna cava inferiorból vettük a kísérlet befejezésekor (tizennyolc hetes korban).
Vérsejtszámlálás
Mikrosejtszámláló alkalmazásával (Sysmex F-800) határoztuk meg a fehérvérsejtszámot (WBC), a vörös- 15 vértestszámot (RBC), a vérlemezkeszámot (PLT), valamint a hemoglobinszámot (HGB). A kísérlet végén egyes csoportokból (1., 2., 6. és 7. csoport) vérkenetet készítettünk, és differenciális fehérvérsejt-számlálást végeztünk, amelyet százalékban adtunk meg. 20 lgG1-koncentráció meghatározása a vérben
A meghatározást egér IgG 1-specifikus ELISA-val végeztük, standardként mielomaproteint alkalmazva.
IL-6-koncentráció meghatározása a vérben
A mérést hlL-6-specifikus ELISA-val végeztük. 25
Antipatkány IgG antitest (IgG osztály) titerének meghatározása a vérben
Mivel a beadott antitest egy heterogén antitest az egér számára, az antitesttermelést a beadott antitestre ELISA-val határoztuk meg, patkány IgG-t használva 30 antigénként. Az eredményt egységben fejeztük ki, standardként a patkányantitesttel kezelt felnőtt állat IL—6 Tgm szérumát alkalmaztuk.
Vér kémiai paramétereinek meghatározása
Az 1., 2., 3., 6. és 7. csoportba tartozó egerek szé- 35 rumában a kísérlet végén meghatároztuk a teljes proteint (TP), albumint (Alb), glükózt (Glu), trigliceridet (TG), kreatinint (CRE), vérkarbamid-nitrogént (BÚN), kalciumot (Ca), lúgos foszfatázt (ALP), glutamin-piruvát-transzaminázt (GOT) és glutamát-piruvát-transz- 40 aminázt (GPT), autoanalizátor (COBAS FARA II, Roche) alkalmazásával.
Csontvelő és lépsejtek FACS-analízise
A kísérlet végén az 1., 2., 6. és 7. csoportból 1-1 állatból csontvelőt és lépsejtet vettünk, és FACScannel (Beckton Dickinson) analizáltuk a sejtfelületi antigéneket. Az alkalmazott antitestek Gr-1 (csontvelősejtek), CD4, CD8 és B220 (lépsejtek) elleni antitestek (Pharmingen) voltak.
Boncolás
A kísérlet végén boncolást végeztünk, mértük a lép tömegét, és a fő szerveket vizuálisan megvizsgáltuk.
Testtömeg
Az egyes csoportok testtömegének változását az
1. ábra mutatja. Az 1. és 3. csoportban testtömeg-növekedést tapasztaltunk. A többi csoport testtömegében nem figyeltünk meg különbséget.
Vizeletprotein
Az 1. csoportban vizeletprotein-pozitív állatok jelentek meg tizenhárom hetes kortól (2. ábra), és hét állatból négy (kettő tizenhat hetes korban és kettő tizenhét hetes korban) elpusztult a boncolás időpontjáig. A többi csoportban nem észleltünk pusztulást. A 3. csoportban is két állat pozitívvá vált vizeletprotein szempontjából a kísérlet végére, de a többi csoportban nem találtunk pozitív állatot.
Hematológiai eredmények
Az 1. csoportban megfigyeltük a hemoglobintükör csökkenését (3. ábra) és az RBC-szám csökkenését (4. ábra), a csökkenés mértéke a korral súlyosabbá vált. A vérlemezkeszám (5. ábra) átmeneti növekedést mutatott, de ezután gyorsan csökkent. A 3. csoportban hasonló tendenciát figyeltünk meg, noha az 1. csoporthoz viszonyítva kis késedelemmel. Másrészről nem találtunk csökkenést a hemoglobintükörben vagy az RBC-számban, sem növekedést, majd ezt követően csökkenést a vérlemezkeszámban a 2., 4. és 5. csoport közül egyikben sem. A vérkenetekben a differenciális vérsejtszám meghatározásakor az 1. csoportban a neutrofilek és monociták számának növekedését és a limfocitafrakció releváns csökkenését tapasztaltuk, míg a 2. csoport normális értékeket mutatott (1. táblázat). Nem találtunk szignifikáns különbséget a 6. és 7. csoport között sem.
1. táblázat
Csoport Fiatal neutrofilek Érett neutrofilek Eozinofilek Bazofilek Monociták Limfociták Egyebek
1. Átlagérték 2,00 31,33 1,33 0,00 9,33 56,00 0,00
SD* 2,00 3,79 0,58 0,00 4,93 9,54 0,00
2. Átlagérték 0,33 13,83 2,33 0,00 2,00 81,00 0,50
SD* 0,52 4,17 1,03 0,00 2,28 4,82 0,55
t-teszt 0,0676 0,0000 0,0557 - 0,0129 0,006 0,0676
6. Átlagérték 0,30 14,10 2,80 0,00 1,30 81,40 0,10
SD* 0,45 4,60 0,91 0,00 1,04 4,08 0,22
7. Átlagérték 0,42 10,67 2,42 0,08 0,58 85,75 0,08
SD* 0,38 2,32 0,97 0,20 0,49 1,92 0,20
t-teszt 0,6484 0,1406 0,5101 0,3816 0,1644 0,0427 0,8992
*SD: standard deviáció
HU 225 392 Β1
IgGO-koncentráció a vérben
Az 1. csoportban a vérben az lgG1 koncentrációja jelentősen növekedett azonnal a kísérlet megkezdése után, végül körülbelül 100-szoros értéket ért el a normális egérben mért koncentrációhoz viszonyítva (7. ábra). A 3. csoportban az IgG 1-koncentráció növekedését egy kicsit később figyeltük meg, mint az 1. csoportban. Ezzel szemben nem találtunk növekedést az lgG1 koncentrációjában a 2., 4. és 5. csoportban, ezekben szinte az egész kísérlet során azonos szintet találtunk. Másrészről az antitestadagolással kapcsolatos semmiféle változást nem figyeltünk meg normális egerekben.
hlL-6-koncentráció a vérben A hIL—6 koncentrációja a vérben ugyanúgy változott, mint az lgG1 koncentrációja (8. ábra), az 1. és 3. csoportban növekedett, míg szinte azonos szinten ma5 radt a többi csoportban a kísérlet folyamán. Antipatkány IgG antitest titere a vérben Az antipatkány IgG elleni antitestet az 1., 3. és 6.
csoportban mutattuk ki (2. táblázat). Az 1. és 3. csoportba tartozó összes állatban magas titer alakult ki, míg a 6. csoportban öt állat közül csak kettőben növekedett a titer. Másrészről nem találtunk szignifikáns növekedést a többi csoportban.
2. táblázat
Egér antipatkány antitest (egység/ml)
Csoport Kor (hét)
4 6 8 10 12 14 16 18
1. 0,15 0,78 1,69 7,41 100< 100< 100< 100<
2. 0,22 0,34 0,45 0,38 0,43 0,50 0,39 0,30
3. 0,14 0,61 0,69 0,67 2,27 4,74 14,25 41,24
4. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. 0,57
5. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. 0,28
6. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. 3,55
7. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. N. D. 0,20
N. D.: nincs meghatározva
A vér kémiai paramétereinek meghatározása Az 1. és 3. csoportban növekedett a TP és csökkent az Alb. A TG és ALP csökkent az 1. és 3. csoportban, és még a Glu is csökkent az 1. csoportban. Nem tapasztaltunk ilyen változásokat a 2. csoportban. Az eredményeket a 3. táblázat tartalmazza.
3. táblázat
Csoport TP (g/dl) Alb (g/di) Glu (mg/dl) TG (mg/dl) CRE (mg/dl) BÚN (mg/dl) Ca (mg/dl) ALP (U/l)* GOT (IU/I)* GPT (U/l)*
1. Átlag 14 2,41 77,4 20,7 0,4 34,8 8,6 27,67 33,33 6
SD 1,33 0,3 14,5 8,33 0,2 23,7 0,35 5,69 5,86 1,73
2. Átlag 5,68 3,31 199 62,3 0,51 28,3 8,67 156,5 37,5 5,6
SD 0,3 0,2 29,5 10,9 0,22 4,08 0,58 14,31 8,22 1,14
3. Átlag 12,6 2,92 253 41 0,61 26,4 9,82 54,17 27,33 6,83
SD 2,85 0,64 60,2 16,3 0,17 6,25 0,83 42,62 5,65 1,72
6. Átlag 5,9 3,84 289 105 0,87 27,9 8,9 181 33,2 9,6
SD 0,65 0,46 98,9 28,8 0,22 6,32 0,74 21,24 8,9 5,81
7. Átlag 5,86 3,63 300 94 0,75 26,8 8,98 196,83 34,5 6,5
SD 0,53 0,34 25,5 20 0,2 5,26 0,82 21,68 4,89 3,08
*U/l=egység/liter
FACS-analízis
Az 1., 2., 6. és 7. csoportban a csontvelősejtek (BM) és lépsejtek (sp) analízise azt mutatta, hogy az
1., 2., 6. és 7. csoportban rendkívüli mértékben megnövekedett a Gr-1-pozitív sejtek aránya (amelyek granu60 locitás prekurzorsejtek) az 1. csoportban a BM-sejtekben (9. és 10. ábra), de ezek a 2. csoportban a normális alomtársakéhoz hasonló értékeket mutattak. Lényegében nem találtunk különbséget a 6. és 7. csoport között. Ami a lépsejtekben a CD4-, CD8- és B220-pozitív
HU 225 392 Β1 sejtek arányát illeti, nem volt különbség a csoportok között, az 1. csoport kivételével, ahol a CD8- és B220-pozitív sejtek száma csökkent a plazmasejtek számának növekedése következtében (4. táblázat).
4. táblázat
Lépsejtek felületi antigénjének analízise
Csoport CD4+ CD8+ B220+
1. 13,2% 5,4% 23,1%
2. 18,5% 14,3% 50,0%
3. 19,9% 15,0% 53,1%
4. 13,9% 10,6% 57,3%
Boncolási eredmények
Az 1. és 3. csoportban a szisztémás nyirokcsomók duzzadása és a lép megnagyobbodása gyanús volt (11. ábra), és ilyen volt a vese elszíntelenedése is. A máj megnagyobbodását is észleltük részben. Ezeket a változásokat nem figyelhettük meg a többi csoportban, és nem tapasztaltunk figyelemre méltó változást, kivéve azt, hogy a 2., 4. és 5. csoportban a lép enyhe megnagyobbodását észleltük a normális alomtársakhoz viszonyítva.
A kísérlet eredményeit az alábbiakban értékeljük.
Az IL—6 Tgm csoportban (1. csoport), amelynek a kontrollantitestet adagoltuk, számos tünetet figyeltünk meg, például lgG1 plazmacitózíst, anémiát, trombocitózist, trombocitopéniát, veseelégtelenséget, a vér abnormális kémiai paraméterei stb. Azonban nyilvánvaló volt, hogy ezek a tünetek teljesen szuppresszálhatók MR16-1-gyei.
Ismert, hogy az IL—6 váltja ki a B-sejtek végső differenciálódását plazmasejtekké [Muraguchi A. és munkatársai, J. Exp. Med. 167, 332-344 (1988)], és az IL—6 Tgm esetében az IL-6-termelődés az lgG1-koncentráció növekedését okozta a vérben, és a TP-koncentráció növekedését, és az Alb-koncentráció csökkenését a szérumban. Ezek a tények azt jelzik, hogy megtörtént az IgG 1 plazmacitózis fellépése.
A szisztémás nyirokszövetek, például nyirokcsomók figyelemre méltó megnagyobbodásának, és ennek következtében a lép megnagyobbodásának tulajdonítható a testtömeg-növekedés, az általános állapot súlyosbodása ellenére, amelyet a betegség kifejlődése okozott az 1. és 3. csoportban. Az MR16-1 nemcsak teljesen szuppresszálta ezeket a tüneteket, hanem az IL-6-koncentráció növekedését is elnyomta a vérben, így megerősítettük, hogy az IL-6-koncentráció növekedése a vérben az idő előrehaladtával - amelyet az IL—6 Tgm esetén megfigyeltünk - közvetlen kapcsolatban van a plazmacitózis kifejlődésével. Ezért azt hisszük, hogy maguk az elburjánzott plazmasejtek termelik aktívan az IL-6-ot, amely tovább fokozza a plazmasejtek szaporodását, és ennek következtében az IL—6 nagy mennyiségben termelődik.
Ami az IL—6 hemocitákra kifejtett hatásait illeti, a vérlemezkeszám növekedése [Ishibashi T. és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. 86, 5953-5957 (1989); Ishibashi T. és munkatársai, Blood 74, 1241-1244 (1989)] és a makrocitás anémia indukálása [Hawley R. G. és munkatársai, J. Exp. Med. 176, 1149-1163 (1992)] ismert. A fentieken kívül az IL—6 Tgm-ben trombocitopéniát is megfigyeltünk az állatok öregedése során, ami véleményünk szerint a poliklonális B-sejt-aktiválásra vonatkozó autoimmunitás (Miyai, Tatsuya és munkatársai, ibid).
Az MR16-1 teljesen meggátolta az IL—6 hemocitákra kifejtett közvetlen és közvetett hatását, de nem befolyásolta a normális alomtársak vérsejtszámát. így megerősítettük, hogy az anti-IL-6-receptor antitest egyáltalán nem befolyásolja a hematocitákat. Az IL—6 Tgmben megfigyeltük a Gr-1-pozitív sejtek arányának növekedését, amelyek granulocita prekurzorsejteknek tekinthetők, és a perifériális neutrofilek arányának növekedését. Noha az IL—6 ismerten növeli a neutrofilek számát, részletes hatásmechanizmusa még nem tisztázott. Vizsgálataink során azt tapasztaltuk, hogy ez a hatás egy olyan jelenség, amely a csontvelőben a prekurzorsejtek szintjén megy végbe. E vizsgálat során azt is tapasztaltuk, hogy az MR16-1 teljesen elnyomja az IL—6 hatását, de nem befolyásolja a neutrofilek szintjét a csontvelőben és a perifériás vérben.
Az MR16-1 a nephritis fellépését is elfojtja IL—6 Tgm-ben. Leírták, hogy az IL—6, mint a mesangiumsejtek autokrin növekedési faktora szoros kapcsolatban van a mesangiumburjánzásos nephritis fellépésével. Noha a nephritis az IL—6 Tgm-ben is mesangiumburjánzásos nephritisnek bizonyult, az IL—6 által fokozott immunrendszer szerepe nem tagadható [Katsume Asao és munkatársai, a Japan Immunology Society 21. ülésén elhangzott előadás, „Characterization of SCIDx(SCIDxH-2 Ld hlL-6 transgenic mice)” (1991)]. Azonban, mivel a vizeletprotein megjelenése és a pusztulás megszűnt, világossá vált, hogy az anti-IL-6-receptor antitest az IL-6-termelődés által okozott nephritis fellépését hatékonyan megszünteti.
Az IL—6 Tgm-ben megfigyeltük a szérum-Glu- és Tg-koncentrációk szignifikáns csökkenését, amelyek a leromlás indikátorai. Jelen kísérletünkben az MR16-1 antitest adagolása hatásosnak bizonyult a leromlás gyógyításában, mivel a Glu- és Tg-értékek csökkentek az 1. csoportban, míg a 2. csoportban ezek az értékek a normálissal szinte azonos szintre álltak vissza.
Mivel az MR16-1 egy patkány lgG1, ez egerekre nézve heteroprotein, könnyen érthető, hogy a beadott antitest ellen is termelődhetnek antitestek, amelyek a beadott antitestet hatástalaníthatják.
Megkíséreltünk immunológiai toleranciát indukálni azáltal, hogy az első szenzitivizálás során a kísérletben nagy mennyiségű antigént adtunk az állatoknak, a csoportokat úgy állítottuk fel, hogy intravénásán egerenként 2 mg antitestet adtunk az első kezeléskor. Az MR16-1 antitesttel kezelt csoportokban azok a csoportok, amelyeket így kezeltünk (1., 4. és 5.), nem termeltek kimutatható mennyiségű, a betegség fellépésének teljes elfojtásához vezető antipatkány IgG antitestet, függetlenül a kezelési intervallumtól és a dózistól. Azonban a 3. csoport végül ugyanolyan tüneteket mutatott, mint az 1. csoport, vagyis a kontrollantitesttel ke8
HU 225 392 Β1 zelt csoport, noha ebben a csoportban az antipatkány IgG antitest növekedett, és a betegség kitörése kissé késett az 1. csoporthoz képest.
Ezért úgy véljük, hogy az immunológiai tolerancia indukálására szolgáló kezelés hatásos volt, de az antipatkány IgG antitestet az 1. csoport összes állatában és a 6. csoportban öt állat közül kettőben is kimutattuk, amelyeknek azonos adagolási renddel a kontrollantitestet adtuk. Mivel a plazmacitózis előrehaladása poliklonális B-sejt-aktiválást okoz az IL—6 Tgm-ben, nem lehet arra következtetni, hogy az 1. és 3. csoportban kimutatott antipatkány IgG antitest egy, az adott antitestre specifikus antitest. Azonban arra következtettünk, hogy az immunológiai tolerancia indukálása az első érzékenyítéskor nagy mennyiségű antigénnel való kezeléssel a
2., 4. és 5. csoportban, és a specifikus antitest termelődését gátló hatás az MR16-1 nagy mennyiségének beadásával együttesen teljes toleranciát váltott ki.
A jelen kísérletben tisztáztuk, hogy az anti-IL-6-receptor antitest rendkívül hatásos az IL-6-termelődés által okozott betegségek egész sora ellen, a normális szint befolyásolása nélkül.
2. példa
Egér IL-6-receptor antitest hatását vizsgáltuk vastagbél 26 sejtek által okozott leromlásra. A kísérletben hathetes, hím BALB/c egereket alkalmaztunk, amelyekbe egy 2 mm-es vastagbél 26 sejttömböt implantáltunk szubkután módon az egér látuszába a kísérlet első napján. Az MR16-1 egér IL-6-receptor antitestet (lásd 2. referenciapéldát) intravénásán adtuk 2 mg/egér dózisban közvetlenül a vastagbél 26 sejtek implantálása után a kísértet első napján, majd szubkután módon adtuk 0,5 mg/egér dózisban a kísérlet 7.,
11., 14. és 18. napján (n=7). Az előző kísérletben már megerősítettük, hogy ilyen módszert alkalmazva nem jelennek meg könnyen a heteroprotein elleni semlegesítőantitestek. A tumorhordozó kontrollcsoportnak patkány lgG1 kontroliantitestet (KH5) adtunk hasonló menetrend szerint (n=7). Ezenkívül nem tumoros kontrollcsoportként egy csoportot PBS-sel kezeltünk (n=7). A kísérlet megkezdése után mindennap mértük a testtömeget, és a vér kémiai paramétereit és a kalciumion-koncentrációt a vérben a kísérlet megkezdése után a 11. és 15. napon határoztuk meg.
Jelentős testtömegcsökkenést figyeltünk meg a tumoros csoportban a 10. napon és azt követően, a nem tumoros csoporttal összehasonlítva, míg az MR16-1gyel kezelt csoportban a testtömeg csökkenését részlegesen szuppresszáló hatást figyeltünk meg (12. ábra). A 13. ábrán látható a triglicerid koncentrációja a vérben a 11. napon, és a 14. ábrán a glükóz koncentrációja a vérben a 15. napon. Ezek az értékek lényegesen kisebbek voltak a tumoros kontrollcsoportban, mint a nem tumoros kontrollcsoportban, míg az MR16-1-gyei kezelt csoportban a glükóz esetén elfojtóhatást és a triglicerid esetén szignifikáns elfojtóhatást figyeltünk meg.
A vér kalciumion-koncentrációja a 11. napon jelentősen magasabb volt a tumoros kontrollcsoportban, mint a nem tumoros kontrollcsoportban, míg az MR16-1-gyei kezelt csoportban szignifikáns elfojtóhatást figyeltünk meg (15. ábra).
A fentiekhez hasonló adagolási rend szerint (n=10) elvégeztünk egy olyan kísérletet is, amelyben a túlélési időre kifejtett hatást vizsgáltuk. Ennek eredményeként kimutattuk, hogy az MR16-1 a túlélési időt is befolyásolja (16. ábra).
3. példa
Ebben a példában az IL-6-receptor antitestek hatását occ-1-gyel indukált, hiperkalcémiával járó leromlási modellben vizsgáltuk. A kísérletben hathetes hím csupasz egereket használtunk. A kísérlet első napján az occ-1 pikkelyes karcinóma-sejtvonalat szubkután módon implantáltuk az egér látuszába. Az MR16-1 egér IL-6-receptor antitestet (lásd 2. referenciapélda) intravénásán adtuk 2 mg/egér dózisban közvetlenül az occ-1 implantálása előtt a kísérlet első napján, majd 100 pg/egér dózisban szubkután módon adtuk a 7. és a 10. napon (n=6). Az előző kísérletben már kimutattuk, hogy így nem jelennek meg könnyen a heteroprotein, vagyis a patkányantitest elleni semlegesítőantitestek. A tumoros kontrollcsoportnak azonos menetrend szerint (n=6) adagoltuk a patkány lgG1 kontroliantitestet (KH5). Ezenkívül nem tumoros kontrollcsoportként felállítottunk egy PBS-sel kezelt csoportot is (n=7). A kísérlet megkezdése utáni 10. és 12. napon mértük a testtömeget és a kalciumion-koncentrációt a vérben.
A tumoros kontrollcsoportban a testtömeg csökkent, míg az MR16-1-gyei kezelt csoportban a testtömeg változása hasonló volt, mint a nem tumoros kontrollcsoportban, amiből a testtömegcsökkenés szuppressziójára következtettünk (17. ábra).
A kalciumion-koncentráció a vérben jelentősen növekedett a tumoros kontrollcsoportban a nem tumoros kontrollcsoporthoz képest, míg az MR16-1-gyei kezelt csoportban a növekedés erősen gátolt volt (18. ábra).

Claims (6)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. lnterleukin-6-receptorral szembeni antitest alkalmazása interleukin-6-termelődés által okozott anémia és leromlás megelőzésére vagy kezelésére alkalmas gyógyászati készítmény előállítására.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az interleukin-6-receptorral szembeni antitest egy monoklonális antitest.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az interleukin-6-receptorral szembeni antitest a PM-1 antitest.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az interleukin-6-receptorral szembeni antitest egy kiméraantitest.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az interleukin-6-receptorral szembeni antitest egy átformált humán antitest.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az átformált humán antitest az átformált humán PM-1 antitest.
HU9701900A 1994-10-21 1995-10-20 Use of an antibody againts interleukin-6-receptor for producing a pharmaceutical composition for treating anemia and cachexia caused by il-6 production HU225392B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP25701094 1994-10-21
PCT/JP1995/002169 WO1996012503A1 (fr) 1994-10-21 1995-10-20 Remede contre des maladies provoquees par la production d'il-6

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT77035A HUT77035A (hu) 1998-03-02
HU225392B1 true HU225392B1 (en) 2006-11-28

Family

ID=17300476

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0304064A HU227708B1 (en) 1994-10-21 1995-10-20 Use of anti-interleukin-6-receptor antibodies mr-16 and pm-1 and derivatives thereof for producing pharmaceutical preparation for treating diseases caused by il-6 production
HU9701900A HU225392B1 (en) 1994-10-21 1995-10-20 Use of an antibody againts interleukin-6-receptor for producing a pharmaceutical composition for treating anemia and cachexia caused by il-6 production

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0304064A HU227708B1 (en) 1994-10-21 1995-10-20 Use of anti-interleukin-6-receptor antibodies mr-16 and pm-1 and derivatives thereof for producing pharmaceutical preparation for treating diseases caused by il-6 production

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20070036785A1 (hu)
EP (3) EP0791359A4 (hu)
JP (1) JP4896093B2 (hu)
CN (4) CN101829325A (hu)
CA (1) CA2203182C (hu)
CZ (3) CZ298790B6 (hu)
FI (3) FI121455B (hu)
HK (1) HK1067062A1 (hu)
HU (2) HU227708B1 (hu)
NO (6) NO324046B1 (hu)
PL (1) PL182089B1 (hu)
RU (1) RU2147442C1 (hu)
WO (1) WO1996012503A1 (hu)

Families Citing this family (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
GB9702944D0 (en) * 1997-02-13 1997-04-02 Univ Manchester Reducing fibrosis
KR100838862B1 (ko) 1997-03-21 2008-06-16 츄가이 세이야꾸 가부시키가이샤 아이엘-6 안타고니스트를 유효성분으로 함유하는 감작 티 세포 관여 질환의 예방 또는 치료제
PT1004315E (pt) 1997-08-15 2008-07-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Profilácticos e/ou medicamentos contendo anticorpos neutralizantes anti-receptor de il-6 para reduzir a excreção de proteínas urinárias no lúpus eritematoso sistémico
CN100374159C (zh) 1998-03-17 2008-03-12 中外制药株式会社 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂
WO2000010607A1 (fr) 1998-08-24 2000-03-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Produits preventifs ou therapeutiques de la pancreatite contenant des antagonistes de il-6 comme substance active
DE19948126A1 (de) * 1999-10-06 2001-04-12 Max Delbrueck Centrum Pharmazeutisches Mittel zur Behandlung von Kachexie und/oder kardiogenem Schock
CN1259973C (zh) * 2000-10-25 2006-06-21 中外制药株式会社 含有il－6拮抗剂作为有效成分的牛皮癣的预防或治疗剂
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
KR101080021B1 (ko) 2002-02-14 2011-11-04 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체함유 용액제제
CN1311870C (zh) 2003-02-24 2007-04-25 森永乳业株式会社 白介素－6产生抑制剂
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
NZ546557A (en) 2003-10-17 2010-01-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Therapeutic agent for mesothelioma comprising interleukin-6
US8617550B2 (en) 2003-12-19 2013-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist
AR048335A1 (es) 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
JPWO2005090405A1 (ja) 2004-03-24 2008-04-17 中外製薬株式会社 インターロイキン−６受容体に対するヒト型化抗体のサブタイプ
DK3050963T3 (da) 2005-03-31 2019-12-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af polypeptid ved regulering af arrangement
JP4931919B2 (ja) * 2005-06-21 2012-05-16 ゾーマ テクノロジー リミテッド ＩＬ−１β結合抗体およびその断片
CA2625773C (en) 2005-10-14 2015-05-12 Fukuoka University Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation
KR101239051B1 (ko) 2005-10-21 2013-03-04 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 심장질환 치료제
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
WO2007086490A1 (ja) 2006-01-27 2007-08-02 Keio University 脈絡膜血管新生を伴う疾患の治療剤
CN105177091A (zh) 2006-03-31 2015-12-23 中外制药株式会社 用于纯化双特异性抗体的抗体修饰方法
AU2007232873B2 (en) 2006-03-31 2014-02-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
CA2648644C (en) 2006-04-07 2016-01-05 Osaka University Muscle regeneration promoter
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
BRPI0712224B8 (pt) 2006-06-02 2021-05-25 Regeneron Pharma anticorpos de alta afinidade para o receptor de il-6 humano e composições farmacêuticas
US8629244B2 (en) 2006-08-18 2014-01-14 Ablynx N.V. Interleukin-6 receptor binding polypeptides
CN101528778A (zh) * 2006-08-18 2009-09-09 埃博灵克斯股份有限公司 用于治疗与il-6-介导的信号传导相关的疾病和病症的针对il-6r的氨基酸序列以及包括其的多肽
CL2008000188A1 (es) 2007-01-23 2008-07-18 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente para suprimir la reaccion de rechazo cronica que comprende como ingrediente activo un inhibidor de il-6; y uso del inhibidor de il-6.
US7906117B2 (en) * 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US20090238825A1 (en) * 2007-05-21 2009-09-24 Kovacevich Brian R Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US8404235B2 (en) * 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
TWI609965B (zh) * 2007-05-21 2018-01-01 艾爾德生物控股有限責任公司 新穎兔抗體人化方法以及經人化之兔抗體
SI2164514T1 (sl) 2007-05-21 2017-04-26 Alderbio Holdings Llc Protitelesa proti IL-6 in njihova uporaba
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8062864B2 (en) * 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
PE20091205A1 (es) 2007-09-26 2009-09-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-receptor de il-6
KR101680906B1 (ko) 2007-09-26 2016-11-30 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체 정상영역 개변체
EP4368721A2 (en) 2007-09-26 2024-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr
BRPI0821110B8 (pt) * 2007-12-05 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpo de neutralização de anti-nr10/il31ra, composição farmacêutica compreendendo o referido anticorpo e uso do mesmo
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
TWI564021B (zh) 2008-04-11 2017-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Repeated binding of antigen to antigen binding molecules
AU2009246430B2 (en) 2008-05-13 2015-07-02 Novimmune S.A. Anti-IL-6/IL-6R antibodies and methods of use thereof
KR101665729B1 (ko) * 2008-06-05 2016-10-12 국립연구개발법인 고쿠리츠간켄큐센터 신경침윤 억제제
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US9452227B2 (en) 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
RU2524152C2 (ru) * 2009-03-19 2014-07-27 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Средство для лечения ревматоидного артрита
EP2826789A1 (en) 2009-03-19 2015-01-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
EP2409991B1 (en) 2009-03-19 2017-05-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
WO2010115995A2 (en) 2009-04-10 2010-10-14 Ablynx Nv Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
BRPI1013877A2 (pt) 2009-04-10 2017-08-15 Ablynx Nv Sequências de aminoácidos melhoradas contra il-6r e polipeptídeos que compreendem os mesmos para o tratamento de doenças e distúrbios relacionados com il-6r
US9340615B2 (en) 2009-05-15 2016-05-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-AXL antibody
US10150808B2 (en) 2009-09-24 2018-12-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant regions
US20110117087A1 (en) 2009-10-26 2011-05-19 Reinhard Franze Method for the production of a glycosylated immunoglobulin
CN102740888B (zh) 2009-11-24 2016-10-12 奥尔德生物制药公司 Il-6抗体及其用途
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
JO3417B1 (ar) * 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
TWI505838B (zh) 2010-01-20 2015-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Stabilized antibody solution containing
EP2543730B1 (en) 2010-03-04 2018-10-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
WO2011149051A1 (ja) 2010-05-28 2011-12-01 中外製薬株式会社 抗腫瘍t細胞応答増強剤
EP2578233B1 (en) 2010-05-28 2017-04-26 National Cancer Center Therapeutic agent for pancreatic cancer
KR20200059320A (ko) 2010-11-08 2020-05-28 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
MY166429A (en) 2010-11-17 2018-06-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Multi-specific antigen-binding molecule having alternative function to function of blood coagulation factor viii
US9304134B2 (en) 2010-11-23 2016-04-05 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of anemia
EP2647706B1 (en) * 2010-11-30 2023-05-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
JP6032818B2 (ja) 2011-02-25 2016-11-30 中外製薬株式会社 ＦｃγＲＩＩｂ特異的Ｆｃ抗体
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
CA2849195A1 (en) 2011-09-23 2013-03-28 Ablynx Nv Prolonged inhibition of interleukin-6 mediated signaling
EP2762493B1 (en) 2011-09-30 2021-06-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
TW201817745A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
KR102084927B1 (ko) 2011-10-28 2020-03-06 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 사람화된 ｉｌ-6 및 ｉｌ-6 수용체
WO2013176471A1 (ko) 2012-05-21 2013-11-28 한국생명공학연구원 곰보배추의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, stat3 매개 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
EP2896291B1 (en) * 2012-09-13 2019-03-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gene knock-in non-human animal
JP6442404B2 (ja) 2013-06-11 2018-12-19 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 再発寛解型多発性硬化症（ｒｒｍｓ）患者の治療予後予測方法、及び新規治療適応判断方法
RU2674996C2 (ru) 2013-07-04 2018-12-14 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Иммуноферментный анализ с подавлением интерференции для определения антител к лекарствам в образцах сыворотки
EP3050896B1 (en) 2013-09-27 2021-07-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
AU2015334984A1 (en) 2014-10-21 2017-04-13 Ablynx Nv Treatment of IL-6R related diseases
TWI656133B (zh) 2014-12-19 2019-04-11 日商中外製藥股份有限公司 抗肌抑素之抗體、含變異Ｆｃ區域之多胜肽及使用方法
MY183415A (en) 2014-12-19 2021-02-18 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-c5 antibodies and methods of use
EP3253778A1 (en) 2015-02-05 2017-12-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibodies comprising an ion concentration dependent antigen-binding domain, fc region variants, il-8-binding antibodies, and uses therof
AU2016224409B2 (en) 2015-02-27 2021-01-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for treating IL-6-related diseases
JP7082484B2 (ja) 2015-04-01 2022-06-08 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
JP6875683B2 (ja) 2015-05-19 2021-05-26 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 多発性硬化症（ｍｓ）患者の新規治療適用判断方法
JP7128460B2 (ja) 2015-06-04 2022-08-31 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６阻害剤を有効成分とする精神疾患治療剤
MA42657A (fr) 2015-08-18 2018-06-27 Regeneron Pharma Anticorps inhibiteurs anti-pcsk9 destinés au traitement des patients atteints d'hyperlipidémie subissant une aphérèse de lipoprotéines
AU2016355178B9 (en) 2015-11-19 2019-05-30 Massachusetts Institute Of Technology Lymphocyte antigen CD5-like (CD5L)-interleukin 12B (p40) heterodimers in immunity
US11359009B2 (en) 2015-12-25 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
EP3398965A4 (en) 2015-12-28 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHOD FOR PROMOTING THE EFFICACY OF PURIFYING A POLYPEPTIDE CONTAINING AN FC REGION
WO2017147169A1 (en) 2016-02-22 2017-08-31 Ohio State Innovation Foundation Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin a analogues or metabolites, and estradiol metabolites
CN109069640B (zh) 2016-03-14 2023-10-03 中外制药株式会社 用于癌症治疗的诱导细胞损伤的治疗药物
CA3026050A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for prophylaxis or treatment of il-8 related diseases
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
EP3574010A4 (en) 2017-01-30 2020-12-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-SCLEROSTIN ANTIBODIES AND METHOD OF USE
EP3596175A4 (en) 2017-03-17 2021-01-13 The Ohio State Innovation Foundation NANOPARTICLE FOR THE DELIVERY OF CHEMOPREVENTIVE AGENTS
WO2018203545A1 (ja) 2017-05-02 2018-11-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
WO2019078344A1 (ja) 2017-10-20 2019-04-25 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
KR20200132938A (ko) 2018-03-15 2020-11-25 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 지카 바이러스에 대해 교차-반응성을 갖는 항-뎅기 바이러스 항체 및 사용 방법
US11498969B2 (en) 2019-01-31 2022-11-15 Sanofi Biotechnology Compositions and methods for treating juvenile idiopathic arthritis
EP3947737A2 (en) 2019-04-02 2022-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
CN117247451B (zh) * 2023-11-17 2024-02-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种针对人白介素6蛋白的单域抗体及其应用

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1341152C (en) 1988-01-22 2000-12-12 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human b cell stimulatory factor-2
US5670373A (en) * 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
US5814307A (en) * 1989-04-10 1998-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Method for regulating cell growth, leukocyte differentiation and tumor cell growth using Oncostatin M to stimulate synthesis of IL-6
US5216128A (en) * 1989-06-01 1993-06-01 Yeda Research And Development Co., Ltd. IFN-β2/IL-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
ATE144713T1 (de) * 1989-07-20 1996-11-15 Tadamitsu Kishimoto Antikörper gegen menschlichen interleukin-6- rezeptor
JPH03155795A (ja) * 1989-11-13 1991-07-03 Chuzo Kishimoto マウス・インターロイキン―６レセプター蛋白質
JP3045172B2 (ja) * 1990-05-19 2000-05-29 岸本 忠三 Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット
JP3212597B2 (ja) * 1990-08-01 2001-09-25 忠三 岸本 ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット
JPH04187645A (ja) * 1990-11-22 1992-07-06 Chuzo Kishimoto インターロイキン―６作用抑制剤
JPH05227970A (ja) * 1992-02-19 1993-09-07 Chugai Pharmaceut Co Ltd ヒトインターロイキン−６受容体に対する再構成ヒト抗体
KR100249937B1 (ko) * 1991-04-25 2000-04-01 나가야마 오사무 인간 인터루킨-6 수용체에 대한 재구성 인간 항체
JP3258348B2 (ja) * 1991-08-02 2002-02-18 東ソー株式会社 Ｈｉｖ感染阻害剤
FR2694767B1 (fr) * 1992-08-13 1994-10-21 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
JPH08503603A (ja) * 1992-08-21 1996-04-23 ザ ガバメント オブ ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ，アズ リプリゼンテッド バイ ザ セクレタリー，デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 新規のｂリンパ腫細胞株および抗原
JP3525221B2 (ja) * 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤
US5888510A (en) * 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
US5759546A (en) * 1994-02-04 1998-06-02 Weinberg; Andrew D. Treatment of CD4 T-cell mediated conditions
DK0811384T3 (da) * 1995-02-13 2006-10-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Muskelproteinnedbrydningsinhibitor indeholdende IL-6-receptor-antistof
US20020187150A1 (en) * 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
CN100374159C (zh) * 1998-03-17 2008-03-12 中外制药株式会社 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂
AU2000279625A1 (en) * 2000-10-27 2002-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Blood mmp-3 level-lowering agent containing il-6 antgonist as the active ingredient
UA80091C2 (en) * 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
CN100579518C (zh) * 2002-04-12 2010-01-13 美国辉瑞有限公司 Ep4受体配体在制备治疗il-6相关疾病的药物中的应用
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases

Also Published As

Publication number Publication date
NO331944B1 (no) 2012-05-07
CZ296979B6 (cs) 2006-08-16
EP0791359A4 (en) 2002-09-11
RU2147442C1 (ru) 2000-04-20
US20070036785A1 (en) 2007-02-15
NO971816D0 (no) 1997-04-18
FI122970B (fi) 2012-09-14
JP2008297315A (ja) 2008-12-11
EP2319535A2 (en) 2011-05-11
NO324046B1 (no) 2007-08-06
CZ118997A3 (en) 1997-09-17
NO20073429L (no) 1997-06-18
CN1164194A (zh) 1997-11-05
CN1306963C (zh) 2007-03-28
FI971669A (fi) 1997-06-17
JP4896093B2 (ja) 2012-03-14
NO330582B1 (no) 2011-05-16
EP1884524A2 (en) 2008-02-06
CN101011574B (zh) 2012-10-03
FI20115753A (fi) 2011-07-15
HUT77035A (hu) 1998-03-02
EP1884524A3 (en) 2008-06-25
NO20073427L (no) 1997-06-18
CN101011574A (zh) 2007-08-08
FI122406B (fi) 2012-01-13
CN1535728A (zh) 2004-10-13
CZ298790B6 (cs) 2008-01-30
NO20073430L (no) 1997-06-18
NO330615B1 (no) 2011-05-30
HU0304064D0 (en) 2004-03-01
HU227708B1 (en) 2011-12-28
NO330589B1 (no) 2011-05-23
AU3709995A (en) 1996-05-15
HK1067062A1 (en) 2005-04-01
CN100350973C (zh) 2007-11-28
NO330588B1 (no) 2011-05-23
WO1996012503A1 (fr) 1996-05-02
FI971669A0 (fi) 1997-04-18
FI121455B (fi) 2010-11-30
AU689657B2 (en) 1998-04-02
PL319785A1 (en) 1997-08-18
CA2203182A1 (en) 1996-05-02
CN101829325A (zh) 2010-09-15
PL182089B1 (en) 2001-11-30
CA2203182C (en) 2009-11-24
NO971816L (no) 1997-06-18
EP0791359A1 (en) 1997-08-27
NO20073431L (no) 1997-06-18
CZ298325B6 (cs) 2007-08-29
EP2319535A3 (en) 2011-08-31
NO20073432L (no) 1997-06-18
FI20105844A (fi) 2010-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU225392B1 (en) Use of an antibody againts interleukin-6-receptor for producing a pharmaceutical composition for treating anemia and cachexia caused by il-6 production
JP4540132B2 (ja) Ｉｌ−６レセプター抗体を含んでなる筋蛋白分解抑制剤
Grabstein et al. Inhibition of murine B and T lymphopoiesis in vivo by an anti-interleukin 7 monoclonal antibody.
CA2201781C (en) Chronic rheumatoid arthritis therapy containing il-6 antagonist as effective component
US8017121B2 (en) Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
KR100824824B1 (ko) 아이엘-6 안타고니스트를 유효 성분으로서 함유하는건선의 예방 또는 치료제
US20120058082A1 (en) Methods and compositions for treatment
CN110179989B (zh) 治疗狼疮的方法和组合物
US20030077273A1 (en) Methods of treating antibody-mediated pathologies using agents which inhibit CD21
JP3827350B2 (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤
JP2004224801A (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤
Lin THE ROLE OF BP180 IN GRANULOPOIESIS AND NLRP3 INFLAMMASOME ACTIVATION IN BULLOUS PEMPHIGOID

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees