TWI609965B - 新穎兔抗體人化方法以及經人化之兔抗體 - Google Patents

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Abstract

本發明係針對兔重可變區及輕可變區之新穎改良式人化方法。所得經人化之兔重鏈及輕鏈及其抗體及抗體片段極為適合用於免疫治療及免疫診斷，原因在於其保有親代抗體之結合親和力且基於其與人抗體序列之極為高度序列相同度，故須大致上於人體為非免疫原性。本發明舉例說明治療性經人化之抗人TNF－α抗體及抗人IL－6抗體之製造方案。

Description

新穎兔抗體人化方法以及經人化之兔抗體 相關申請案
本案係有關且請求美國第60/924,550及60/924,551號申請案及新型申請案第11/802,235號之優先權，各案申請日皆為2007年5月21日，其內容以引用方式併入此處。此外，本案請求PCT專利申請案，申請日2008年5月21日，名稱「IL－6抗體及其用途」及「TNF－α抗體」之優先權，該等PCT申請案係以代理人檔號67858－701902及67858－701802提出申請且全文以引用方式併入此處。
發明領域
本發明提供一種用於得自密切相關種屬諸如兔形目之兔抗體胺基酸可變重鏈及輕鏈多肽序列或抗體之改性(人化)之新穎改良式基於胺基酸序列及基於同源性之方法。所得經改性之抗體序列相對於其親代抗體例如兔抗體用於人體較少或不具有免疫原性，且相對於衍生得該經改性(經人化)之抗體序列之親代抗體，仍然保有相同或實質上相同之抗原結合親和力。
本發明進一步提供藉此等方法所製成之衍生自兔抗體之經人化之可變輕鏈及可變重鏈。如此處顯示，本發明方法可重複再現來獲得經人化之抗體，其保有原先兔抗體之抗原特異性及親和力。本發明程序大致上係仰賴含於兔抗體互補性決定區(CDR)之特定胺基酸殘基(「選擇性決定殘基」)從兔抗體轉移至同源人抗體可變重鏈及輕鏈多肽序 列上。
於更特定實施例中，本發明舉例說明對介白素－6(IL－6)或腫瘤壞死因子α(後文稱作為「TNF－α」)具有結合特異性之經人化之抗體及經人化之抗體片段及其變異株，其係使用此處提供之新穎人化方案製造。但須瞭解此處提供之新穎人化方案適用於特異性結合至任何期望之抗原之兔或其它兔形目衍生之抗體之人化。如此包括例如對得自感染劑(病毒、細菌、真菌、寄生蟲等)、過敏原、人類抗原諸如酶、激素、自體抗原、生長因子、細胞激素、受體、受體之配體、免疫調節分子及免疫調控分子等之抗原具有特異性之抗體。
本發明亦係關於根據本發明製造之經人化之抗體及抗體片段用於治療目的及診斷目的，例如用於檢測與此等抗原相關之疾病及病症之試管內及活體內篩檢分析。例如包括使用抗IL－6或TNF－α之活體內成像篩檢法，及經由投予該等經人化之抗體或其片段而治療與TNF－α或IL－6相關疾病或病症之方法。
 發明背景
抗體於人體免疫反應中扮演關鍵性要角。抗體可去活化病毒及細菌毒素，抗體對於召募補體系統及各型白血球來殺滅入侵的微生物及大型寄生蟲為必需。抗體排它地係藉B淋巴細胞合成，可製造成數百萬種形式各自有不同的胺基酸序列及不同的抗原結合位置。抗體合稱為免疫球蛋白 (Ig)，抗體屬於血液中含量最豐富的蛋白質組分。Alberts等人，細胞之分子生物學，第2版，1989年，嘉蘭出版公司(Garland Publishing,Inc)。
典型抗體為有二相同重(H)鏈(各自含約440胺基酸)及二相同輕(L)鏈(各自含約220胺基酸)之Y字形分子。四鏈藉由非共價鍵及共價鍵(雙硫鍵)之組合而結合在一起。蛋白質分解酶諸如木瓜蛋白酶及胃蛋白酶可將抗體分子裂解成為不同特徵片段。木瓜蛋白酶製造兩個分開且相同的Fab片段，各自有一個抗原結合部位及一個Fc片段。胃蛋白酶產生一個F(ab’)2 片段。Alberts等人，細胞之分子生物學，第2版，1989年，嘉蘭出版公司。
L鏈及H鏈二者於其胺基端具有可變序列，但於其羧基端具有恆定序列。L鏈具有長約110胺基酸之恆定區及相等大小之可變區。H鏈也具有長約110胺基酸之可變區，但依據H鏈之類別而定，H鏈之恆定區長約為330或440胺基酸。Alberts等人，細胞之分子生物學，第2版，1989年，嘉蘭出版公司，於1019頁。
只有部分可變區直接參與抗原之結合。研究顯示於L鏈及H鏈二者之可變區之變異性大半限於各鏈之三個小型高度可變區(也稱作為互補性決定區或CDR)。可變區之其餘部分稱作為骨架區(FR)相當恆定。Alberts等人，細胞之分子生物學，第2版，1989年，嘉蘭出版公司，於1019－1020頁。
天然免疫球蛋白已經用於檢定分析、診斷以及用於治療至較為有限程度。但此等用途，特別係治療用途受天然 免疫球蛋白之多株本質的妨礙。具有經過界定之特異性之單株抗體的降臨，提高用於治療用途的機會。但大半單株抗體係於使用標靶蛋白質將齧齒類宿主動物免疫接種，隨後將製造感興趣之抗體之齧齒類動物脾細胞與齧齒類動物骨髓瘤細胞融合而製造。因此主要為齧齒類蛋白質，因此於人體自然具有免疫原性，經常導致非期望之免疫反應，定名為HAMA(人抗小鼠抗體)反應。
有多個研究小組設計出降低治療用抗體之免疫原性之技術。傳統上，人化樣板係藉與施體抗體之同源性程度選擇，亦即與可變區中之非人抗體最為同源之人抗體用作為人化樣板。其理由在於骨架序列用來將CDR固定於其正確空間方向性來與抗原交互作用，骨架殘基偶爾甚至參與抗原的結合。如此，若所選定之人骨架序列最為類似施體骨架序列，則將讓經人化之抗體保有親和力之機率最大化。例如Winter(EP No.0239400)提示使用長寡核苷酸藉位置導向突變發生，俾便接枝來自於重鏈及輕鏈可變區個別之三個互補性決定區(CDR1、CDR2及CDR3)而產生經人化之抗體。雖然此種辦法顯示有效，但其限制選擇可支援施體CDR之最佳人樣板的可能。
雖然經人化之抗體比其天然對應體或嵌合對應體於人體中之免疫原性較低，但多個研究團體發現經CDR接枝之經人化之抗體驗證結合親和力顯著降低(例如參考Riechmann等人，1988，自然3 32：323－327)。例如Riechmann及其同僚發現單獨CDR區的轉移不足以提供經CDR接枝產 物中滿意的抗原結合活性，也須將於人序列之位置27之絲胺酸殘基轉成相對應之鼠苯丙胺酸殘基。此等結果指示改變成CDR區以外之人序列殘基可能為獲得有效抗原結合活性所需。即使如此，結合親和力仍然顯著低於原先單株抗體之結合親和力。
例如Queen等人(美國專利案5,530,101)說明經由將鼠單株抗體之CDR(anti－Tac MAb)與人免疫球蛋白骨架區及恆定區組合，來製備結合至介白素－2受體之經人化之抗體。人骨架區經選擇來讓與anti－Tac MAb序列之同源性變最大化。此外，使用電腦模型製作來識別可能與CDR或抗原交互作用之骨架胺基酸殘基，小鼠胺基酸用於經人化之抗體之此等位置。報告所得經人化之anti－Tac抗體具有對介白素－2受體(p55)之親和力為3×10－9 M－1 ，仍然只有鼠MAb之親和力之三分之一。
其它研究小組識別於可變區骨架內部(亦即於可變區之CDR及結構回路外側)於該處殘基之胺基酸身分促成獲得具有滿意之結合親和力之經CDR接枝產物之額外位置。例如參考美國專利案6,054,297及5,929,212。仍然無法事先瞭解對任何給定之感興趣抗體如何有效作特定CDR接枝配置。
Leung(美國專利申請公告案第US 2003/0040606號)說明一種骨架補片辦法，其中免疫球蛋白之可變區被隔間於FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4內部，個別FR序列係藉非人抗體與人抗體樣板間之最佳同源性選擇。但此種辦法勞力密集，不易識別最理想骨架區。
隨著愈來愈多治療性抗體的發展，且保有更有展望的結果，重要地係減少或消除由投予的抗體提引出的人體免疫反應。如此，新穎辦法允許抗體有效快速之工程處理變成人化，及/或允許減少人化抗體所耗用的勞力，提供重大效果及醫學價值。
此處參考文獻之引用或討論不可視為承認該等參考文獻為本發明之先前技術。
 發明概要
本發明部分係基於一種用於製造人化可變重區及/或可變輕區及衍生自兔抗體或其它兔形目抗體之含有此種人化可變重區及可變輕區之經人化之抗體或抗體片段之新穎人化策略。較佳用於人化之此等兔或其它兔形目衍生抗體係衍生自得自免疫接種兔之純株B細胞族群。
特定言之，本發明提供一種衍生自兔抗體或其它兔形目抗體用於抗體可變輕鏈之人化之新穎人化策略，其仰賴適當同源人輕鏈可變區之選擇及兔輕鏈CDR所含之特定特異性決定殘基保持作為人化策略之一部分。
「選擇性決定殘基」係如後文進一步定義其細節，但大致上係與兔CDR區所含之特定胺基酸殘基大致上相對應。該等特定胺基酸殘基比較於用來衍生經人化之抗體之人生殖系列CDR中所含之相對應胺基酸序列，基於其結構及/或化學性質，相信對抗原的識別及/或抗原結合具有顯著影響。
更特定言之，本發明也提供用於衍生自兔或其它兔形 目抗體之抗體可變重鏈之新穎人化策略，該策略係仰賴適當同源重鏈可變序列之選擇及特定特異性決定殘基之保持作為人化策略之一部分。
更特定言之，本發明也提供用於製造包含衍生自兔或其它兔形目抗體可變重鏈及可變輕鏈多肽之人化可變重鏈及/或輕鏈之經人化之抗體及抗體片段之新穎人化策略。
甚至更特定言之，本發明提供一種用於製造衍生自兔形目(兔)輕鏈抗體序列之經人化之輕鏈抗體序列之人化策略，該策略包含下列步驟：(i)由可特異性結合至期望之抗原之兔抗體獲得兔輕鏈抗體序列，及識別跨據骨架1(FR1)起點至骨架3(FR3)終點(含)之胺基酸殘基；(ii)使用跨據FR1起點至FR3終點序列之該兔輕抗體胺基酸序列對含有人輕鏈抗體可變序列之存庫進行同源性研究，以及識別實質上具有序列同源性之人輕鏈抗體序列，亦即較佳具有至少80%－90%相同度及/或相對於存庫中之其它人輕鏈抗體可變序列，於胺基酸層面具有最大序列相同度；(iii)於兔及人輕鏈可變序列中，識別與FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2區相對應之配置及其特定殘基，且於兔及選定之人抗體輕鏈中對齊此等分開區；(iv)組成DNA或胺基酸序列，其中於選定之同源性人輕鏈序列之CDR1區及CDR2區中之與兔輕鏈CDR1及CDR2之相對應選擇性決定殘基不同的至少該等胺基酸殘基係經以兔CDR1區及CDR2區中之相對應選擇性決定殘基取代； (v)進一步將編碼相對應之兔CDR3輕鏈抗體序列之胺基酸殘基之DNA序列或含有該等胺基酸殘基之多肽附接至步驟(iv)所得之DNA或胺基酸序列；(vi)進一步選出與兔輕鏈所含之FR4同源之人輕鏈骨架4區(FR4)，其差異至多為2－4個胺基酸殘基，且將編碼該人FR4之DNA序列或相對應之該人FR4胺基酸殘基附接至步驟(v)之後所得之該DNA或胺基酸序列上；及(vii)合成編碼或含有得自步驟(i)至(vi)之經人化之兔輕鏈序列之DNA或胺基酸序列。
更特定言之，本發明提供一種用於製造衍生自兔重鏈抗體序列之經人化之重鏈抗體序列之人化策略，該策略包含下列步驟：(i)由可特異性結合至期望之抗原之兔抗體獲得兔重鏈抗體序列，及識別跨據骨架1(FR1)起點至骨架3(FR3)終點(含)之胺基酸殘基；(ii)使用跨據FR1起點至FR3終點序列之該兔重抗體胺基酸序列，進行同源性研究(例如經由BLAST搜尋含人生殖系列抗體序列存庫)，以及識別出具有同源性之人重鏈抗體序列，亦即於胺基酸層面較佳至少具有80%－90%相同度及/或相對於存庫中之其它人重鏈抗體可變序列，於胺基酸層面具有最大序列相同度；(iii)於兔及人重鏈序列二者中，識別與FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2區相對應之配置及其特定殘基，且相對於所選定之同源人抗體重鏈之相對區，對齊兔之此等分開區； (iv)組成DNA或胺基酸序列，其中於所選定之同源性人重鏈序列之CDR1區及CDR2區中，與於兔重鏈CDR1區及CDR2區中之相對應之選擇性決定殘基不同的至少該等胺基酸殘基係經以兔重鏈序列之CDR1區及CDR2區中所含之相對應選擇性決定殘基取代，進一步視需要地以兔重鏈FR1之相對應端末1－3胺基酸置換人重鏈FR1區之端末1－3胺基酸殘基；及/或以相對應之兔重鏈骨架2之端末胺基酸殘基視需要可置換人重鏈骨架2區之端末胺基酸殘基；及/或以相對應之人CDR2殘基(典型為絲胺酸)視需要可置換距兔重鏈CDR2端末之第四胺基酸(典型為色胺酸)；(v)進一步將編碼或具有含於同一個兔重鏈抗體序列中之該兔重鏈CDR3之相對應胺基酸殘基之DNA序列，附接至步驟(iv)所得之DNA或胺基酸序列；該兔CDR3典型長5－19胺基酸(其中該CDR3典型係位於殘基WGXG前方，且進一步其中X典型為Q或P)；(vi)進一步選擇同源性人重鏈骨架4區(FR4)(較佳係與經人化之兔抗體重鏈序列所含之FR4之差異至多為4個胺基酸殘基)，且將編碼該所選定之同源性人FR4或該人FR4之相對應胺基酸殘基之DNA序列附接至步驟(v)所得之DNA或胺基酸序列(經常此種人FR4 DNA或多肽序列將編碼或包含WGQGTLVTVSS)；及(vii)合成編碼或含有得自步驟(i)至(vi)之經人化之兔重鏈序列之DNA或胺基酸序列。
更特定言之，本發明提供製造一種含有至少一個衍生 自兔輕鏈抗體序列之經人化之輕鏈抗體序列及/或至少一個衍生自兔抗體重鏈之經人化之重鏈序列之經人化之抗體或抗體片段之人化策略，其中此種經人化之輕鏈序列及/或重鏈序列係根據下列步驟衍生自兔重鏈及輕鏈：(i)由可特異性結合至期望之抗原之兔抗體獲得兔輕鏈抗體序列，及識別跨據骨架1(FR1)起點至骨架3(FR3)終點(含)之胺基酸殘基；(ii)使用跨據FR1起點至FR3終點序列之該兔輕抗體胺基酸序列對含有人輕鏈抗體可變序列之存庫進行同源性研究，以及識別實質上具有序列同源性之人輕鏈抗體序列，亦即較佳具有至少80%－90%相同度及/或相對於存庫中之其它人輕鏈抗體可變序列，於胺基酸層面具有最大序列相同度；(iii)於兔及人輕鏈可變序列中，識別與FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2區相對應之配置及其特定殘基，且對齊兔輕鏈之此等分開區與所選定之同源性人輕鏈區之相對應區；(iv)組成DNA或胺基酸序列，其中於選定之同源性人輕鏈序列之CDR1區及CDR2區中之與兔可變輕鏈CDR1及CDR2之相對應選擇性決定殘基不同的至少該等胺基酸殘基係經以於兔輕鏈序列之兔CDR1區及CDR2區中之選擇性胺基酸殘基取代；(v)進一步將編碼或具有於該兔輕鏈抗體序列中所含之相對應CDR3之胺基酸殘基之DNA序列附接至藉步驟(iv)所得之DNA或胺基酸序列；(vi)進一步選出與兔抗體輕鏈所含之FR4同源之人輕鏈 骨架4區(FR4)，該人FR4與兔抗體輕鏈序列之FR4之差異較佳至多為2－4個胺基酸殘基，且將編碼該人FR4之DNA序列或相對應之該人FR4胺基酸殘基附接至步驟(v)之後所得之該DNA或胺基酸序列上；及(vii)合成編碼或含有得自步驟(i)至(vi)之經人化之兔輕鏈序列之DNA或胺基酸序列；及/或進一步由兔重鏈抗體序列製造經人化之重鏈抗體序列，包含下列步驟：(i)由可特異性結合至期望之抗原之兔抗體獲得兔重鏈抗體序列，及識別跨據骨架1(FR1)起點至骨架3(FR3)終點(含)之胺基酸殘基；(ii)使用跨據FR1起點至FR3終點序列之該兔重抗體胺基酸序列，進行同源性研究例如經由BLAST搜尋含人生殖系列抗體序列存庫，以及識別於胺基酸層面至少有85%－90%相同度之人重鏈抗體序列及/或相對於存庫中之其它人重鏈抗體可變序列，於胺基酸層面具有最大序列相同度；(iii)於兔及人重鏈序列二者中，識別與FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2區相對應之配置及其特定殘基，且相對於所選定之同源人抗體重鏈之相對應，對齊兔之此等分開區；(iv)組成DNA或胺基酸序列，其中於所選定之同源性人重鏈序列之CDR1區及CDR2區中，與於兔重鏈CDR1區及CDR2區中之相對應之選擇性決定殘基不同的至少該等胺基酸殘基係經以兔重鏈序列之CDR1區及CDR2區中所含之相對應選擇性決定殘基取代，進一步視需要地以兔重鏈FR1 之相對應端末1－3胺基酸置換人重鏈FR1區之端末1－3胺基酸殘基；及/或以相對應之兔重鏈骨架2之端末胺基酸殘基視需要可置換人重鏈骨架2區之端末胺基酸殘基；及/或以相對應之人CDR2殘基(典型為絲胺酸)視需要可置換距兔重鏈CDR2端末之第四胺基酸(典型為色胺酸)；(v)進一步將編碼或具有含於同一個兔重鏈抗體序列中之該兔重鏈CDR3之相對應胺基酸殘基之DNA序列，附接至步驟(iv)所得之DNA或胺基酸序列；(該CDR3典型長5－19個胺基酸)(及該CDR3典型係在WGXG的前方)；(vi)進一步選擇同源性人重鏈骨架4區(FR4)(亦即較佳係與經人化之兔抗體重鏈序列所含之FR4之差異至多為2－4個胺基酸殘基)，且將編碼該所選定之同源性人FR4或該人FR4之相對應胺基酸殘基之DNA序列附接至步驟(v)所得之DNA或胺基酸序列(經常此種人FR4 DNA或多肽序列將編碼或包含WGQGTLVTVSS)；及(vii)合成編碼或含有得自步驟(i)至(vi)之經人化之兔重鏈序列之DNA或胺基酸序列；及使用該等如前文說明製造之合成的經人化之重鏈及輕鏈DNA或胺基酸序列來製造編碼含有至少一個經人化之兔輕鏈及/或至少一個經人化之兔重鏈之經人化之抗體或片段或DNA序列。
本發明也提供藉本人化方法所製造之新穎改良式經人化之抗體重鏈及輕鏈及包含該經人化之重鏈及輕鏈之抗體，及其用於治療及診斷方法之用途。
特定言之，本發明提供經人化之抗體輕鏈其含有下列：(i)包括人輕鏈生殖系列序列之CDR1區及CDR2區之跨據FR1第一個殘基至FR3終點之該胺基酸殘基，該人輕鏈生殖系列序列係基於至跨據FR1至FR3之胺基酸殘基，與對欲經人化之期望抗原具有特異性之親代兔抗體輕鏈之相對應胺基酸殘基，於胺基酸層面有較高同源性(序列相同度)(較佳比較存庫中之其它人輕鏈生殖系列序列，相對於跨據FR1至FR3之兔可變輕鏈該區，具有於胺基酸層面之最大序列相同度百分比之序列)而選自於人生殖系列序列之一存庫；以及(ii)進一步其中與相同親代兔抗體之輕鏈中之「選擇性決定殘基」相對應之於CDR1及CDR2中之CDR殘基係經以相對應之兔選擇性決定殘基置換；(iii)涵蓋相同親代兔抗體之整個CDR3區之胺基酸殘基；(iv)基於與含於相同親代兔抗體之輕鏈中之相對應FR4區有較高同源性(序列相同度)，涵蓋衍生自人生殖系列序列存庫之抗體輕鏈之整個FR4區之胺基酸殘基；以及(v)進一步其中於所選定之同源性人FR區中人FR1、FR2、FR3及FR4區之FR殘基中極少或未以相對應之兔FR殘基取代(亦即存在於親代兔輕鏈抗體序列之相對應位置經人化之殘基)。
此外，本發明提供經人化之抗體重鏈多肽，其至少含有下列：(i)包括一人生殖系列序列之CDR1區及CDR2區之跨據FR1之第一殘基至FR3終點之胺基酸殘基，該人系列序列係基於其跨據FR1至FR3之選定的胺基酸殘基與對欲經人化之期望抗原具有特異性之親代兔抗體重鏈之相對應胺 基酸殘基具有較高同源性(與胺基酸層面之序列相同度百分比)(相較於存庫中之其它人生殖系列序列)而選自於一個人生殖系列序列存庫；及(ii)進一步其中於同一個親代兔抗體之重鏈之CDR1區及CDR2區中與「選擇性決定殘基」相對應之人重鏈之CDR1區及CDR2區中之該等CDR殘基係以兔重鏈之CDR1區及CDR2區中所含之相對應的重鏈選擇性決定殘基置換；(iii)涵蓋同一個親代兔抗體之整個CDR3區之胺基酸殘基；(iv)基於與同一個親代兔抗體之重鏈所含相對應FR4區有較高同源性(序列相同度)，而衍生自人生殖系列序列之一個存庫之FR4區；及(v)其中人重鏈FR1區之最末1－3個胺基酸視需要可經以相對應之兔重鏈FR1殘基之端末1－3個胺基酸置換；及/或人重鏈骨架2區之端末胺基酸視需要可經以兔重鏈骨架2之相對應之端末胺基酸殘基視需要地置換；及/或距兔重鏈CDR2終端之第四個胺基酸(典型為色胺酸)視需要經以相對應之人CDR2殘基(典型為絲胺酸)置換；及(vi)其中該選定之同源性人FR區之其餘FR殘基極少或未經以相對應之兔FR殘基(亦即存在於兔抗體重鏈經人化之相對應位置之FR殘基)取代。
進一步，本發明提供含有前述經人化之重鏈及輕鏈多肽之新穎改良式經人化之抗體；及編碼該經人化之重鏈及輕鏈多肽及含有該經人化之重鏈及輕鏈之經人化之抗體之核酸序列；以及載體；以及含有該等載體及核酸序列之宿主細胞；及其用於治療及診斷方法及組成物之用途。
本發明進一步涵蓋將該經人化之重鏈或輕鏈附接至 DNA或多肽或附接至含有或編碼期望之抗體恆定功能部位較佳為人抗體恆定功能部位之DNA或多肽序列，及/或將於抗體多肽或核酸序列之羧基端或胺基端(直接或間接)附接至期望之效應物(effector)部分例如毒素、藥物、放射性核種、螢光基團、酶、細胞激素、或轉位序列諸如信號胜肽其協助親和隔離之多肽。
發明之簡單概要
如此處討論，本發明提供用於獲得衍生自兔抗體之人化可變輕鏈及可變重鏈之新穎改良式方法，及編碼藉此等方法所製造之經人化之重鏈及/或輕鏈多肽及DNA。本發明方法可重複再現地獲得經人化之抗體，其於人體須實質上為不具免疫原性，且保有抗原特異性及實質上或完整親代兔抗體之結合親和力。大致上本發明程序係仰賴將特定胺基酸殘基從施體兔抗體(特別為抗原辨識及結合推定有助益之選擇性決定殘基，及若有所需少數骨架殘基)轉移至同源性受體人抗體可變重鏈及輕鏈序列。
特定言之，本發明係針對用於衍生自兔抗體之抗體可變輕鏈人化之新穎人化策略，該抗體可變輕鏈結合於此處稱作為「選擇性決定殘基」之分開多個兔輕鏈CDR殘基，以及視需要地無或極少數骨架殘基至同源性人抗體輕鏈殘基上。
此外更特定言之，本發明提供用於衍生自兔抗體之抗體可變重鏈之新穎人化策略，該抗體未摻混或極少摻混分開多個兔CDR至同源性人重鏈序列上。
進一步更特定言之，本發明係針對用於製造經人化之抗體及經人化之抗體片段之新穎改良式人化策略，該片段包含人化可變重鏈及/或輕鏈其係衍生自兔抗體可變重鏈及輕鏈多肽，其包含適當同源性人抗體可變重鏈及輕鏈多肽，因而至少與兔重鏈及輕鏈CDR之相對應選擇性決定殘基(選擇性決定殘基)不同之含於人重鏈及輕鏈CDR之至少特定殘基係保留於該經人化之重鏈及輕鏈區；以及其中於該人輕鏈中之極少數或無骨架殘基及於人重鏈中極少數骨架殘基係經以相對應之兔骨架殘基取代。
進一步更特定言之，本發明係針對一種用於製造衍生自施體兔輕鏈抗體序列及受體人輕鏈抗體序列之經人化之輕鏈抗體序列之人化策略，該策略包含下列步驟：(i)由可特異性結合至期望之抗原之兔抗體獲得兔輕鏈抗體序列，及識別跨據骨架1(FR1)起點至骨架3(FR3)終點(含)之胺基酸殘基；(ii)使用跨據FR1起點至FR3終點序列之該兔輕抗體胺基酸序列對含有人輕鏈抗體序列之存庫進行同源性研究，以及識別實質上具有序列同源性之人輕鏈抗體序列，亦即胺基酸層面較佳具有至少80%－90%相同度及/或相對於存庫中之其它序列含於人輕鏈抗體序列，胺基酸層面較佳具有最大序列相同度百分比；(iii)於兔及人輕鏈序列中，識別與FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2區相對應之方向性及其特定殘基，且於兔及選定之人抗體輕鏈中對齊此等分開區； (iv)組成DNA或胺基酸序列，其中於選定之同源性人輕鏈序列之CDR1區及CDR2區中之與兔輕鏈CDR1及CDR2之相對應選擇性決定殘基不同的至少該等胺基酸殘基係經以含於兔輕鏈序列之CDR1區及CDR2區中之相對應選擇性決定殘基取代；(v)進一步將編碼相對應之兔CDR3輕鏈抗體序列之胺基酸殘基之DNA序列或含有該等胺基酸殘基之多肽附接至步驟(iv)所得之DNA或胺基酸序列；(vi)進一步選出與兔輕鏈所含之FR4同源之人輕鏈骨架4區(FR4)，其差異至多為2－4個胺基酸殘基，且將編碼該人FR4之DNA序列或相對應之該人FR4胺基酸殘基附接至步驟(v)之後所得之該DNA或胺基酸序列上；及(vii)合成編碼或含有得自步驟(i)至(vi)之經人化之兔輕鏈序列之DNA或胺基酸序列。
更特定言之，本發明提供一種用於製造衍生自兔重鏈抗體序列之經人化之重鏈抗體序列之人化策略，該策略包含下列步驟：(i)由可特異性結合至期望之抗原之兔抗體獲得兔重鏈抗體序列，及識別跨據骨架1(FR1)起點至骨架3(FR3)終點(含)之胺基酸殘基；(ii)使用跨據FR1起點至FR3終點序列之該兔重抗體胺基酸序列，進行同源性研究(例如經由BLAST搜尋含人生殖系列抗體序列存庫)，以及識別出具有同源性之人重鏈抗體序列，亦即於胺基酸層面較佳至少具有85%－90%相同度及/ 或相對於存庫中含有人重鏈抗體序列之其它序列，於胺基酸層面具有最大序列相同度百分比；(iii)於兔及人輕鏈序列二者中，識別與FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2區相對應之殘基，且相對於所選定之同源人抗體重鏈之相對區，對齊兔之此等分開區；(iv)組成DNA或胺基酸序列，其中於所選定之同源性人重鏈序列之CDR1區及CDR2區中，與於兔重鏈序列CDR1區及CDR2區中之相對應之選擇性決定殘基不同的至少該等胺基酸殘基係經以兔重鏈序列之CDR1區及CDR2區中所含之相對應選擇性決定殘基取代，進一步視需要地以兔重鏈FR1之相對應端末1－3胺基酸置換人重鏈FR1區之端末1－3胺基酸殘基；及/或以相對應之兔重鏈骨架2之端末胺基酸殘基視需要可置換人重鏈骨架2區之端末胺基酸殘基；及/或以相對應之人CDR2殘基(典型為絲胺酸)視需要可置換距兔重鏈CDR2端末之第四胺基酸(典型為色胺酸)；(v)進一步將編碼或具有含於同一個兔重鏈抗體序列中之該兔重鏈CDR3之相對應胺基酸殘基之DNA序列，附接至步驟(iv)所得之DNA或胺基酸序列；該兔CDR3典型長5－19胺基酸(本CDR3典型位於殘基WGXG前方)；(vi)進一步選擇同源性人重鏈骨架4區(FR4)(較佳係與經人化之兔抗體重鏈序列所含之FR4之差異至多為1－4個胺基酸殘基)，且將編碼該所選定之同源性人FR4或該人FR4之相對應胺基酸殘基之DNA序列附接至步驟(v)所得之DNA或胺基酸序列(經常此種人FR4 DNA或多肽序列將編 碼或包含WGQGTLVTVSS)；及(vii)合成編碼或含有得自步驟(i)至(vi)之經人化之兔重鏈序列之DNA或胺基酸序列。
更特定言之，本發明提供製造一種含有至少一個衍生自兔輕鏈抗體序列之經人化之輕鏈抗體序列及/或至少一個衍生自兔抗體重鏈之經人化之重鏈序列之經人化之抗體或抗體片段之人化策略，其中此種經人化之輕鏈序列及重鏈序列係根據下列步驟衍生自兔重鏈及輕鏈：(i)由可特異性結合至期望之抗原之兔抗體獲得兔輕鏈抗體序列，及識別跨據骨架1(FR1)起點至骨架3(FR3)終點(含)之胺基酸殘基；(ii)使用跨據FR1起點至FR3終點序列之該兔輕抗體胺基酸序列對含有人輕鏈抗體可變序列之存庫進行同源性研究，以及識別實質上具有序列同源性之人輕鏈抗體序列，亦即於胺基酸層面較佳具有至少80%－90%相同度及/或相對於存庫中含有人輕鏈抗體序列之其它序列，於胺基酸層面較佳具有最大序列相同度百分比；(iii)於兔及人輕鏈可變序列中，識別與FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2區相對應之方向性及其特定殘基，且對齊兔輕鏈之此等分開區與所選定之同源性人輕鏈區之相對應區；(iv)組成DNA或胺基酸序列，其中於選定之同源性人輕鏈序列之CDR1區及CDR2區中之與兔之CDR1區及CDR2區所含之相對應選擇性決定殘基不同的至少該等胺基酸殘基係經以兔輕鏈序列之相對應CDR1區及CDR2區取代； (v)進一步將編碼或具有於該兔輕鏈抗體序列中所含之相對應CDR3之胺基酸殘基之DNA序列附接至藉步驟(iv)所得之DNA或胺基酸序列(CDR3典型包含9－15個胺基酸殘基且經常係位於FGGG殘基前方)；(vi)進一步選出與兔抗體輕鏈所含之FR4同源之人輕鏈骨架4區(FR4)，該人FR4與兔抗體輕鏈序列之FR4之差異較佳至多為2－4個胺基酸殘基，且將編碼該人FR4之DNA序列或相對應之該人FR4胺基酸殘基附接至步驟(v)之後所得之該DNA或胺基酸序列上；及(vii)合成編碼或含有得自步驟(i)至(vi)之經人化之兔輕鏈序列之DNA或胺基酸序列；及/或進一步由兔重鏈抗體序列製造經人化之重鏈抗體序列，包含下列步驟：(i)由可特異性結合至期望之抗原之兔抗體獲得兔重鏈抗體序列，及識別跨據骨架1(FR1)起點至骨架3(FR3)終點(含)之胺基酸殘基；(ii)使用跨據FR1起點至FR3終點序列之該兔重抗體胺基酸序列，進行同源性研究例如經由BLAST搜尋含人生殖系列抗體序列存庫，以及識別於胺基酸層面至少有80－90%相同度之人重鏈抗體序列及/或相對於存庫中之其它人重鏈抗體可變序列，於胺基酸層面具有最大序列相同度百分比；(iii)於兔及人重鏈序列二者中，識別與FR1、FR2、FR3、CDR1、CDR2區相對應之殘基，且相對於所選定之同源人抗體重鏈之相對應，對齊兔之此等分開區； (iv)組成DNA或胺基酸序列，其中於所選定之同源性人重鏈序列之CDR1區及CDR2區中，與於兔重鏈CDR1區及CDR2區中之相對應之選擇性決定殘基不同的至少該等胺基酸殘基係經以兔重鏈序列之相對應CDR1區及CDR2區取代，進一步視需要地以兔重鏈FR1之相對應端末1－3胺基酸置換人重鏈FR1區之端末1－3胺基酸殘基；及/或以相對應之兔重鏈骨架2之端末胺基酸殘基視需要可置換人重鏈骨架2區之端末胺基酸殘基；及/或以相對應之人CDR2殘基(典型為絲胺酸)視需要可置換距兔重鏈CDR2端末之第四胺基酸(典型為色胺酸)；(v)進一步將編碼或具有含於同一個兔重鏈抗體序列中之該兔重鏈CDR3之相對應胺基酸殘基之DNA序列，附接至步驟(iv)所得之DNA或胺基酸序列；(該CDR3典型長5－19個胺基酸且典型位於WGXG前方)；(vi)進一步選擇同源性人重鏈骨架4區(FR4)(亦即較佳係與經人化之兔抗體重鏈序列所含之FR4之差異至多為2－4個胺基酸殘基)，且將編碼該所選定之同源性人FR4或該人FR4之相對應胺基酸殘基之DNA序列附接至步驟(v)所得之DNA或胺基酸序列(經常此種人FR4 DNA或多肽序列將編碼或包含WGQGTLVTVSS)；及(vii)合成編碼或含有得自步驟(i)至(vi)之經人化之兔重鏈序列之DNA或胺基酸序列；及製造含有經人化之輕鏈及重鏈中之至少一者之核酸序列或多肽；及合成編碼經人化之抗體或抗體片段之DNA或包含經人 化之抗體或抗體片段之多肽而其含有含根據前述各步驟所製造之至少一個經人化之輕鏈序列及/或至少一個經人化之重鏈序列之DNA編碼或多肽。
本發明進一步涵蓋將該經人化之抗體DNA或多肽附接至期望的恆定功能部位，較佳為人恆定功能部位及/或於羧基端或胺基端(直接或間接)附接至期望之效應物部分，例如毒素、藥物、放射性核種、螢光基團、酶、細胞激素、轉位序列諸如信號胜肽及可協助親和隔離之多肽。
於更特定實施例中，本發明係針對對TNF－α或IL－6具有結合親和力之特定經人化之抗體及其片段，特別為具有特定抗原決定部位特異性及/或功能性質之經經人化之抗體。
本發明之一個實施例涵蓋可結合至IL－6或TNF－α及/或TNF－α/TNFR或IL－6/IL－6R複合體之特定經人化之抗體及其片段。
本發明之另一個實施例係有關具有結合親和力(Kd)低於50皮莫耳及/或Koff 值小於或等於10－4 S－1 之經人化之抗體。
於本發明之較佳實施例中，此等經人化之抗體及經人化之抗體片段及版本將衍生自兔免疫細胞(B淋巴細胞)，或較不佳地係衍生自可分泌期望抗原之特異性兔抗體之融合瘤。此外，用於人化之兔抗體進一步係基於其與人生殖系列抗體序列之同源性(序列相同度)來選用。此等抗體可進一步協助於經人化後保有功能性質，原因在於使用本人化方法受到修改的胺基酸較少。
本發明之又一個實施例係針對根據本發明所製造之經 人化之抗體片段，例如含有根據本發明所製造之經人化之VH 、VL 及CDR多肽對IL－6或TNF－α具有特異性，例如衍生自由兔免疫細胞所分泌之抗體及編碼該等抗體之多核苷酸以及此等抗體片段及其編碼多核苷酸用於形成可辨識期望之抗原諸如IL－6、TNF－α及/或TNF－α/TNFR或IL－6/IL－6R複合體之新穎抗體及多肽組成物。
本發明也涵蓋本經人化之兔抗體及片段之軛合物，例如經人化之抗－TNF－α或抗－IL－6抗體及其結合片段軛合至一個或多個功能部分或可檢測部分。本發明也涵蓋此等經人化之抗－TNF－α、IL－6或抗－TNF－α/TNFR或抗－IL－6/IL－6R複合體抗體及其片段之製造方法。於一個實施例中，結合片段包括但非限於經人化之Fab、Fab’、F(ab’)2 、Fv及scFv片段。
本發明之實施例進一步係關於對期望之抗原為特異性之本經人化之抗體例如經人化之抗－TNF－α或抗－IL－6抗體用於與特定抗原例如TNF－α、IL－6或其異常表現相關聯之疾病及病症之診斷、評估及治療之用途。本發明也涵蓋使用根據本發明之經人化之抗體片段，例如經人化之抗－TNF－α或抗－IL－6抗體用於與特定抗原例如IL－6、TNF－α或其異常表現相關聯之疾病及病症之診斷、評估及治療之用途。
本發明之其它實施例係有關根據新穎改良式人化方案所製造之經經人化之抗體及經經人化之抗體片段於重組宿主細胞，較佳為二倍體酵母諸如二倍體比奇菌(Pichia)及其它酵母菌種系中衍生自兔抗體序列之製造。
圖式簡單說明
第1圖含有示意顯示本發明之兔抗體人化方案之流程圖。
第2圖含有特定實例可變輕鏈多肽序列及可變重鏈多肽序列之對齊，亦即抗原特異性兔抗體可變輕鏈多肽及可變重鏈多肽序列，及於人生殖系列序列中識別的同源性人序列及使用本發明之人化方案所製造之最終經人化之序列。骨架區於其中識別為FR1－FR4。互補性決定區(CDR)識別為CDR1－CDR3。胺基酸殘基之編號係如該圖所示且遵照Kabat編號方案。初始兔序列於本圖中及後文中對兔可變輕鏈多肽序列及可變重鏈多肽序列分別稱作為RbtVL及BbtVh。於人生殖系列序列存庫中識別之由FR1起點跨至FR3終點之最類似的人生殖系列抗體序列中之三種對齊於兔序列下方。被考慮為最為類似兔序列之人序列緊接在兔序列下方。於本發明之人化策略之本實例中，最類似之人生殖系列序列為輕鏈之L12A及重鏈之3－64－04。人CDR3序列並未顯示。最靠近的人骨架4序列對齊於兔骨架4序列下方。縱虛線指示兔殘基與相同位置之人殘基中之一者或多者相同之一個殘基。粗體字殘基指示於該位置之人殘基係與於相同位置之兔殘基相同。終經人化之序列對可變輕序列及可變重序列分別稱作為VLh及VHh。於本圖中，下方劃線殘基指示該殘基係與該位置之兔殘基相同，但與三列對齊的人序列中於該位置之人殘基不同。
第3圖同樣含有衍生自IL－6特異性抗體之相同親代兔可變重鏈及輕鏈序列、同源性人生殖系列序列及使用本人 化策略由其中所製造之兩個經人化之可變重鏈及輕鏈序列之對齊。特定言之，本圖含有原先兔輕鏈及重鏈序列、三個同源性人生殖系列序列及兩個經人化之重鏈序列及兩個經人化之輕鏈序列於此處稱作為「aggres」及「consrv」。由對齊可知於有或無特異性兔骨架殘基之存在之下，經人化之「aggres」與「consrv」序列彼此不同。
第4圖比較嵌合體相對於使用本發明之人化程序所製造之衍生自hIL－6及TNF－α特異性兔抗體之經經人化之抗體之解離常數。
第5圖含有實驗，比較藉使用本發明之人化程序所製造之衍生自特定兔抗－IL－6抗體之不同經經人化之抗體對IL－6相依性T1165細胞增生之拮抗作用。
第6圖含有實驗，比較藉使用本發明之人化程序所製造之衍生自特定兔抗－hIL－6抗體之不同經經人化之抗體對hIL－6相依性T1165細胞增生之拮抗作用。
第7圖含有一個實驗比較藉衍生自兔抗－hTNF－α抗體之嵌合體抗－TNF－α抗體與根據本發明之人化程序所製造之衍生自其中之經人化之抗體的hTNF－α相依性胞毒性之拮抗作用。
 較佳實施例之詳細說明 定義
須瞭解本發明並非限於所述特定方法、方案、細胞系、動物種屬及反應劑，此等各項皆可能改變。須瞭解此處所 使用之術語僅用於描述特定實施例之用而絕非意圖囿限本發明之範圍，本發明之範圍僅由隨附之申請專利範圍限制。
如此處使用單數形「一」、「一個」及「該」等詞除非另行指示否則包括複數形。如此例如，述及「一個細胞」包括多個此種細胞；以及述及「該蛋白質」包括述及一種或多種蛋白質或熟諳技藝人士已知之蛋白質相當物等。除非另行明白指示，否則此處所使用之全部科技術語皆具有與本發明所屬之熟諳技藝人士一般瞭解的相同定義。
如此處使用，「受體」及「受體抗體」或「原先抗體」或「親代抗體」等詞係指可提供或編碼用來根據本發明由兔抗體可變序列製造經人化之抗體序列之該人抗體序列或核酸序列。典型地，受體抗體將提供一個或多個骨架區之胺基酸序列中之至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少%96、97、98、99或100%。於若干實施例中，「受體」係指提供或編碼恆定區之抗體或核酸序列。於又另一個實施例中，「受體」一詞係指提供或編碼骨架區及恆定區中之一者或多者之抗體或核酸序列。於特定實施例中，「受體」一詞係指提供或編碼骨架區中之一者或多者之胺基酸序列之至少80%，較佳至少85%，至少90%，至少95%，至少%96、97、98、99或100%之人抗體或核酸序列。根據本實施例，受體含有未出現於人抗體之一個或多個特定位置之至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、或至少10個胺基酸殘基。受體骨架區及/或受體恆定區例如可衍生自生殖系列抗體基因、成熟抗體基因、功能抗體(例如技藝界眾 所周知之抗體、發展中之抗體、或市售抗體)。
如此處使用，「抗體」及「多數抗體」等詞係指單株抗體、多特異性抗體、人抗體、經人化之抗體、經負重化之抗體、嵌合體抗體、單鏈Fv(scFv)單鏈抗體、單一功能部位抗體、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2 片段、雙硫鏈接Fv(sdFv)、抗－特應性(anti－Id)抗體、及前述任一者之抗原決定部位結合片段。特別，抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性片段，亦即含有抗原結合位置之分子。免疫球蛋白分子可屬於任一型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或亞類。如已知，本發明大致上係有關經由將期望之抗原之特異性兔施體抗體之特定殘基與同源性人(受體)抗體序列組合所製造之經人化之抗體及經人化之抗體片段。
典型抗體含有與兩個輕鏈成對之兩個重鏈。全長重鏈大小約50 kD(長約446胺基酸)且係由重鏈可變區基因(約116胺基酸)及恆定區基因所編碼。於本發明中，大致上主要為編碼經人化之可變輕鏈序列及經人化之可變重鏈序列之兩個核酸或遺傳組分(含有具有期望之抗原特異性及功能性質之兔抗體之特定CDR殘基，且可簡稱為「表現序列」)融合在一起來製造編碼經人化之可變鏈之組成體，當此組成體於適當表現系統中表現時，導致經人化之可變區之表現。
若存在有恆定區，則本經人化之抗體將含有人恆定區。不同恆定區基因編碼不同的同型基因之重鏈恆定區，諸如α、γ(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε、及μ序列。全 長輕鏈之大小約為25 Kd(長約214胺基酸)，係由輕鏈可變區基因(約110胺基酸)及
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或λ恆定區基因編碼。輕鏈及/或重鏈之可變區負責結合至抗原，恆定區負責抗體之典型效應物功能。
如此處使用，於含蛋白質劑(例如蛋白質、多肽及胜肽諸如抗體)之內文中，「類似物」一詞係指具有第二含蛋白質劑之類似功能或相同功能之一種含蛋白質劑，但非必然包含第二含蛋白質劑之相同或類似的胺基酸序列或具有第二含蛋白質劑之類似或相同結構。具有類似之胺基酸序列之含蛋白質劑係指滿足下列標準中之至少一者之第二含蛋白質劑：(a)具有胺基酸序列與第二含蛋白質劑之胺基酸序列至少30%，至少35%，至少40%，至少45%，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，或至少96、97、98、99或100%相同之一種含蛋白質劑；(b)由一個核苷酸序列所編碼之一種含蛋白質劑，該含核苷酸序列於苛刻條件下係雜交至具有至少5個連續胺基酸殘基、至少10個連續胺基酸殘基、至少15個連續胺基酸殘基、至少20個連續胺基酸殘基、至少25個連續胺基酸殘基、至少40個連續胺基酸殘基、至少50個連續胺基酸殘基、至少60個連續胺基酸殘基、至少70個連續胺基酸殘基、至少80個連續胺基酸殘基、至少90個連續胺基酸殘基、至少100個連續胺基酸殘基、至少125個連續胺基酸殘基、或至少150個連續胺基酸殘基之編碼第二種含蛋白質劑之一個核苷酸序列；以及(c)由與編 碼第二含蛋白質劑之該核苷酸序列至少30%，至少35%，至少40%，至少45%，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，或至少96、97、98、99或100%相同度之一核苷酸序列所編碼之一種含蛋白質劑。具有類似第二含蛋白質劑之結構之一種含蛋白質劑係指具有類似第二含蛋白質劑之次級結構、第三級結構或第四級結構之一種含蛋白質劑。含蛋白質劑之結構可藉熟諳技藝人士已知方法測定，包括但非限於胜肽定序、X光晶相學、核磁共振、圓二色性、及晶相學電子顯微術。
為了測定兩種胺基酸序列或兩種核酸序列之相同度百分比，序列對齊來獲得最佳比較(第一胺基酸序列或第一核酸序列中可導入間隙來獲得與第二胺基酸或第二核酸序列之最佳對齊)。然後比較於相對應之胺基酸位置或核苷酸位置之胺基酸殘基或核苷酸。當於第一序列之位置係由於第二序列之相對應位置之相同胺基酸殘基或核苷酸所佔據時，則於該位置之分子為相同。二序列間之相同度百分比為由二序列所分享之相同位置數目之函數(亦即%相同度＝相同重疊位置數目/位置總數乘100%)。於一個實施例中，兩個序列之長度相等。如所述，本發明於其人化策略選擇具有與用來衍生相對應之「經人化之」變異株的兔輕鏈或重鏈可變區之相對應可變區具有高度序列相同度或同源性之人可變區。典型地，選用之人可變區於可變區之含於CDR1區及CDR2區之特定部分將具有與相對應之兔可變序 列至少80%或以上之序列相同度。理想上，藉適當方法諸如BLAST搜尋測定，比較含人抗體可變區編碼序列之人生殖系列序列之族群或存庫中之全部其它成員，所選用之人可變區將與兔可變區具有最大同源性或序列相同度。此外，基於與人生殖系列序列具有高度同源性或序列相同度，用於本人化策略之較佳或首選兔抗體候選者將選自於(具有可相媲美之親和力及/或功能特性之)兔抗體族群。此點為可能，原因在於於較佳實施例中，本發明使用一種B細胞免疫接種方案來產生其親代抗體，該方案發現可獲得多種(例如10種或以上)可識別於抗原目標諸如IL－6上之不同抗原決定部位之該目標之特異性高度親和力抗體。於某些情況下，若人抗體與兔抗體間相對於其它典型用於人化之動物諸如齧齒類及天竺具有高度序列相同度，則此種相同度相當高，讓經人化之抗體及親代抗體於人體具有類似之免疫原性。
兩種序列間之相同度百分比之測定也可使用數學演繹法則來達成。用於比較二序列之數學演繹法則之非限制性實例為Karlin及Altschul,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87：2264－2268之演繹法則，修飾成如Karlin及Altschul,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：5873－5877所述。此種演繹法則併入Altschul等人，1990,J.Mol.Biol.215：403之NBLAST及XBLAST程式。BLAST核苷酸搜尋係以NBLAST核苷酸程式參數集合例如用於分數＝100、字元長度＝12執行，獲得與本發明之核酸分子同源之核苷酸分子。BLAST蛋白質搜尋 可使用XBLAST程式參數集合例如字分數＝50、字元長度＝3執行，獲得與本發明之蛋白質分子同源之核苷酸序列。為了供比較用獲得加入間隙的對齊，加入間隙之BLAST可如Altschul等人，1997，核酸研究，25：3389－3402所述利用。另外，PSI－BLAST可用來執行迭代搜尋，檢測分子間之距離關係(Id)。當利用BLAST、加間隙之BLAST、及PSI－Blast程式時，可使用個別程式(例如XBLAST及NBLAST)之內設值參數(例如參考NCBI網址)。用於各序列之比較之數學演繹法則之另一種較佳非限制性實例為Myers及Miller，1988,CABIOS 4：11－17之演繹法則。此種演繹法則併入ALIGN程式(2.0版)，該程式為GCG序列校準套裝軟體之一部分。當利用ALIGN程式來比較胺基酸序列時，可使用PAM120加權殘值表，間隙長度補償值12及間隙補償值4。
兩種序列間之相同度百分比可使用類似前文說明之技術(有或無容許間隙)測定。計算相同度百分比時，考慮典型唯一確切匹配。
如此處使用，「CDR」一詞係指於抗體可變序列內部之補體決定區。於重鏈及輕鏈可變區各有三個CDR，對各個可變區分別標示為CDRI、CDR2及CDR3。根據不同系統此等CDR之正確邊界有不同定義。Kabat所述系統(Kabat等人，免疫學上感興趣之蛋白質序列(美國國家衛生院，馬里蘭州貝色拉(1987年)及(1991年))不僅提供適用於抗體之任何可變區之明確殘基編號系統，同時也提供定義三個CDR之精確殘基邊界。此等CDR可稱作為Kabat CDR。Chothia 及其同仁(Chothia&Leska,J.Mol.Biol.196：901－917(1987)及Chothia等人，自然342：877－883(1989))發現Kabat CDR內部之某些小部分採用幾乎完全相同之胜肽骨架構型，但於胺基酸序列層面有極大多樣性。此等小部分標示為L1、L2及L3或H1、H2及H3，此處「L」及「H」分別表示輕鏈區及重鏈區。此等區可稱作為Chothia CDR，其邊界係重疊Kabat CDR邊界。定義與Kabat CDR重疊之CDR之其它邊界為Padlan(FASEB J.9：133－139(1995))及MacCallum(J Mol Biol 262(5)：732－45(1996))所述。又其它CDR邊界定義並非嚴格遵循前述系統之一，反而將重疊Kabat CDR，但鑑於預測或實驗發現特定殘基或殘基群或甚至整個CDR並未顯著影響抗原結合，故CDR邊界定義可縮短或延長。此處使用之方法可利用根據前述任一種系統所定義之CDR，但較佳實施例係使用Kabat或Chothia所定義之CDR。容後詳述，此等CDR含有相信於抗原結合或辨識上有意義之分開殘基，稱作為「選擇性決定殘基」。
本發明中表示法「選擇性決定殘基」係指相信顯著涉及抗原辨識及/或抗原結合之兔可變重鏈及輕鏈多肽中所含之特定胺基酸殘基。於本發明之人化策略中，此等決定兔CDR區之殘基之選擇性係經由將全部兔CDR殘基與於選定之同源性人可變區中相對應之殘基做比較，且基於此項比較來識別推定之「選擇性決定殘基」而以實驗方式識別。大致上根據Kabat編號體系，若一個特定CDR殘基實質上與相對應之人CDR殘基不同，則該特定CDR殘基可視為選擇 性決定殘基。「實質上」一詞於此處表示兔與人生殖系列CDR胺基酸殘基間有顯著化學差異或結構差異，例如電荷差異，帶電相對於未帶電、存在有或不存在有龐大支鏈等。例如，若兔CDR胺基酸殘基含有龐大支鏈，而相對應之人CDR胺基酸殘基不含龐大支鏈，則該兔CDR殘基將視為選擇性決定殘基，且將保有於人化可變區。此外，若兔可變區中之CDR胺基酸殘基為鹼性胺基酸，而於人CDR之相對應胺基酸殘基為酸性胺基酸殘基，則於兔CDR中之此一殘基將被判定為選擇性決定殘基且將保有於人化可變區。相反地，若兔CDR中之CDR殘基及人CDR中之相對應殘基皆為酸性或皆含有類似的龐大支鏈，則判定該殘基非為選擇性決定殘基，於人化可變區中該人CDR殘基將不會被修改。如此表示將兔CDR區之特定殘基分類為「選擇性決定區」或「非選擇性決定區」用於本人化策略來選出須保留於人化可變區之特定兔CDR殘基之分類係類似於蛋白質突變發生中所使用之標準，該標準係用來判定胺基酸取代修改是否可視為保留性或非保留性。但須瞭解雖然基於假定各個選擇性決定殘基有助於抗原之辨識及/或抗原結合，本發明典型地將全部此等選擇性決定殘基保留於人化可變區多肽，於某些情況下，於不同人化可變鏈變異株合成時，就含人化可變區之抗體之抗原結合而言，保留特定推定之選擇性決定殘基並非必要。舉例言之，若親代兔抗體對目標抗原具有極高抗原親和力，則對導出具有期望之抗原結合辨識及親和力之經人化之抗體而言，保有全部推定之選 擇性決定殘基並非必要。可藉合成不同人化可變區多肽來以實驗方式判定。此外，特定CDR殘基被識別為選擇性決定殘基與否可依據該特定序列或選定之同源性人可變區序列而改變。
表示法「可變區」或「VR」係指於抗體中之各對輕鏈及重鏈內部直接涉及抗體與抗原結合之功能部位。各個重鏈於一端有可變功能部位(VH )，接著為多個恆定功能部位。各個輕鏈於一端有一個可變功能部位(VL )及於另一端有一個恆定功能部位；該輕鏈之恆定功能部位係對齊重鏈之第一恆定功能部位，該輕鏈可變功能部位係對齊該重鏈可變功能部位。
「骨架區」或「FR」一詞係指於抗體之輕鏈及重鏈可變區內部一個或多個骨架區(參考Kabat,E.A.等人，免疫學感興趣之蛋白質序列，美國國家衛生院，馬里蘭州貝色拉(1987年))。骨架區或FR包括插置於包含於抗體之輕鏈及重鏈可變區內部之CDR間之胺基酸序列區。
如此處使用，「標準型」殘基一詞係指定義特定標準型CDR結構之CDR或骨架中之殘基，如Chothia等人定義(J.Mol.Biol.196：901－907(1987)；Chothia等人，J.Mol.Biol.227：799(1992)，二文皆以引用方式併入此處。根據Chothia等人，儘管胺基酸序列層面有重大多樣性，但多種抗體之CDR之關鍵部分都具有接近相同之胜肽骨架構型。各個標準型結構主要對形成一個回路之胺基酸殘基之一連續線段規定胜肽骨架扭角集合。
如此處使用，於含蛋白質劑(例如蛋白質、多肽及胜肽諸如抗體)內文中「衍生物」一詞係指包含已經藉由導入胺基酸殘基之取代、刪失及/或加成而變更之一種胺基酸序列之一種含蛋白質劑。如此處使用，「衍生物」一詞也指已經被修改之含蛋白質劑，亦即藉任一型分子共價附接至該含蛋白質劑來修改。舉例言之但非限制性，抗體例如可藉非糖化、糖化、乙醯化、PEG化、磷酸化、醯胺化、藉已知保護劑/阻斷劑衍生、蛋白質分解裂解、鏈接至細胞配體或其它蛋白質等而修改。較佳抗體係經非糖化。含蛋白質劑之衍生物可使用熟諳技藝人士已知技術包括但非限於特定化學裂解、乙醯化、甲醯化、衣黴素(tunicamycin)之代謝合成等，藉化學改性而製造。進一步，含蛋白質劑衍生物可含有一種或多種非典型胺基酸。含蛋白質劑衍生物具有與其衍生自其中之該含蛋白質劑類似的或相同的功能。
如此處使用，「病症」或「疾病」等詞可互換用來表示個體之病情。
如此處使用，「施體」或「施體抗體」等詞係指提供一種或多種CDR之抗體。於較佳實施例中，施體抗體係得自與該骨架區得自或衍生自其中之該抗體不同的種屬所得之抗體。於經人化之抗體之內文中，「施體抗體」一詞係指可提供一種或多種CDR之非人(兔)抗體。
如此處使用，「有效量」一詞係指足夠減輕或改善病症或其一種或多種症狀之嚴重度及/或時間長度、預防病症的惡化、造成病症的退行、預防病症相關之一種或多種症狀 的復發、發展、起點或進行、檢測病症或增強或改善另一種治療之預防效果或治療效果(例如預防劑或治療劑)之治療用量。
如此處使用，「抗原決定部位」一詞係指於動物，較佳於哺乳動物及最佳於人類具有抗原活性或免疫原活性之多肽或蛋白質片段。具有免疫原活性之抗原決定部位為可提引出動物體之抗體反應之多肽或蛋白質片段。具有抗原活性之抗原決定部位為藉熟諳技藝人士眾所周知之任一種方法例如藉免疫檢定分析測定抗體可以免疫特異性方式結合之多肽或蛋白質片段。抗原性抗原決定部位並非必然為免疫原性。如所述，本發明較佳使用純株B細胞免疫辦法來製造抗特定目標抗原之兔抗體，發現該蛋白可對抗原目標上某個範圍之不同的抗原決定部位產生高度親和力之抗體。
如此處使用，「融合蛋白質」一詞係指包含第一蛋白質或多肽或功能片段之胺基酸序列、其類似物或衍生物及異源性蛋白質、多肽或胜肽之胺基酸序列(亦即與第一蛋白質或片段、其類似物或衍生物不同之第二蛋白質或多肽或片段、其類似物或衍生物)之多肽或蛋白質(包括但非限於抗體)。於一個實施例中，融合蛋白質包含融合至異源性蛋白質、多肽或胜肽之預防劑或治療劑。根據本實施例，異源性蛋白質、多肽或胜肽可為或可非為不同類型預防劑或治療劑。例如，具有免疫調控活性之兩種不同蛋白質、多肽或胜肽可共同融合來形成融合蛋白質。於較佳實施例中，融合蛋白質保有或具有原先蛋白質、多肽或胜肽於融合至 異源性蛋白質、多肽或胜肽之前之活性相對之改良活性。
如此處使用，「片段」一詞係指保有另一種多肽或蛋白質之胺基酸序列中之至少5個連續胺基酸殘基、至少10個連續胺基酸殘基、至少15個連續胺基酸殘基、至少20個連續胺基酸殘基、至少25個連續胺基酸殘基、至少40個連續胺基酸殘基、至少50個連續胺基酸殘基、至少60個連續胺基酸殘基、至少70個連續胺基酸殘基、至少80個連續胺基酸殘基、至少90個連續胺基酸殘基、至少100個連續胺基酸殘基、至少125個連續胺基酸殘基、至少150個連續胺基酸殘基、至少175個連續胺基酸殘基、至少200個連續胺基酸殘基、或至少250個連續胺基酸殘基之胺基酸序列之一種胜肽或多肽(包括但非限於抗體)。於特定實施例中，蛋白質或多肽之片段至少保有該蛋白質或多肽之至少一項功能。
如此處使用，「功能片段」一詞係指包含第二種不同多肽或蛋白質之胺基酸序列之至少5個連續胺基酸殘基、至少10個連續胺基酸殘基、至少15個連續胺基酸殘基、至少20個連續胺基酸殘基、至少25個連續胺基酸殘基、至少40個連續胺基酸殘基、至少50個連續胺基酸殘基、至少60個連續胺基酸殘基、至少70個連續胺基酸殘基、至少80個連續胺基酸殘基、至少90個連續胺基酸殘基、至少100個連續胺基酸殘基、至少125個連續胺基酸殘基、至少150個連續胺基酸殘基、至少175個連續胺基酸殘基、至少200個連續胺基酸殘基、或至少250個連續胺基酸殘基之胺基酸序列之胜肽或多肽(包括但非限於抗體)，其中該多肽或蛋白質保有該 第二種不同多肽或蛋白質之至少一項功能。於特定實施例中，多肽或蛋白質片段保有該蛋白質或多肽之至少兩項、三項、四項或五項功能。較佳，免疫特異性結合至特定抗原之抗體片段保有免疫特異性結合至該抗原之能力。
如此處使用，「生殖系列抗體基因」或「基因片段」等詞係指未曾進行成熟過程，導致基因重排及突變用於表現特定免疫球蛋白之由非淋巴細胞所編碼之免疫球蛋白序列(例如參考Shapiro等人，Crit.Rev.Immunol.22(3)：183－200(2002)；Marchalonis等人，Adv Exp Med Biol.484：13－30(2001))。本發明之多個實施例所提供之優點之一係植基於辨識出生殖系列抗體基因比成熟抗體基因更加可能保有該種屬之個體之必需胺基酸序列結構特性，如此當以治療方式用於該種屬時較不可能被識別為來自於異體來源。
如此處使用，「關鍵」殘基一詞係指對抗體特別為經人化之抗體具有結合特異性及/或親和力之較大影響之可變區內部之某些殘基。包括前述選擇性決定殘基，且進一步包括但非限於下列中之一者或多者：相鄰於CDR之殘基、可能糖化位置(可為N－或O－糖化位置)、罕見殘基、可與抗原交互作用之殘基、可與CDR交互作用之殘基、標準殘基、重鏈可變區與輕鏈可變區間之接觸殘基、微調區帶內部之殘基、及可變重鏈CDR1之Chothia定義與第一重鏈骨架之Kabat定義間之重疊區之殘基。
如此處使用，「腫瘤壞死因子－α」或(TNF－α)或TNF－α不僅涵蓋得自基因存庫蛋白質存取號碼CAA26669(人類 TNF－α)如下233個胺基酸序列：MSTESMIRDVELAEEALPKKTGGPQGSRRCLFLSLFSFLIVAGATTLFCLLHFGVIGPQREEFPRDLSLISPLAQAVRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL(SEQ ID NO：1)，同時也涵蓋此種TNF－α胺基酸序列之任何前－原、原－、成熟、可溶、及/或與膜結合之形式以及此序列之突變株(突變體)、剪接變異株、同源基因株、同系株及變異株。
此處使用之「介白素－6」或(IL－6)不僅涵蓋得自基因存庫蛋白質存取號碼NP_000591之如下212個胺基酸序列：MNSFSTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM(SEQ ID NO：2)，同時也包括此種IL－6胺基酸序列之前－原、原－、及成熟形式以及此種序列之突變株及變異株包括對偶基因變異株。
此處使用「配對勝任酵母種屬」一詞廣義涵蓋可穩定維持於培養中之任一種二倍體酵母。此種酵母種屬係以單倍體形式及二倍體形式存在。於適當條件下，二倍體細胞可以二倍體形式增生無限多代。二倍體細胞也可形成孢子來形成單倍體細胞。此外，透過異養型二倍體之進一步配 對，循序配對可導致四倍體種系。於本發明中，二倍體或多倍體酵母細胞較佳配對或原生質球融合產生。
於本發明之一個實施例中，配對勝任酵母為酵母科(Saccharomycetaceae)之成員，酵母科包括下列各屬：阿席歐酵母屬(Arxiozyma)；糞盤菌屬(Ascobotryozyma)；固囊酵母屬(Citeromyces)；德巴利酵母屬(Debaryomyces)；德克酵母屬(Dekkera)；假囊酵母屬(Eremothecium)；伊薩酵母屬(Issatchenkia)；卡薩酵母屬(Kazachstania)；克魯維酵母屬(Kluyveromyces)；可達酵母屬(Kodamaea)；洛德酵母屬(Lodderomyces)；管囊酵母屬(Pachysolen)；比奇菌屬(Pichia)；酵母屬(Saccharomyces)；飽和孢酵母屬(Saturnispora)；四重孢酵母屬(Tetrapisispora)；有孢圓酵母屬(Torulaspora)；擬威爾酵母屬(Williopsis)；及接合酵母屬(Zygosaccharomyces)。可用於本發明之其它酵母種型包括亞洛酵母屬(Yarrowia)、紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium)、假絲酵母屬(Candida)、漢遜酵母屬(Hansenula)、絲狀擔子菌屬(Filobasium)、線黑粉菌屬(Filobasidellla)、鎖擲酵母屬(Sporidiobolus)、布勒彈孢酵母屬(Bullera)、白冬孢酵母屬(Leucosporidium)及線黑粉菌屬。
於本發明之較佳實施例中，配對勝任酵母屬於比奇菌屬之成員。於本發明之又更佳實施例中，比奇菌屬之配對勝任酵母為下列種屬中之一員：巴斯多比奇菌(Pichia pastoris)、甲醇比奇菌(Pichia methanolica)、及多形性漢遜酵母(Hansenula polymorpha)(角形比奇菌(Pichia angusta))。於本發明之特佳實施例中，比奇菌屬之配對勝任酵母為巴斯多比奇菌。
此處使用「單倍體酵母細胞」一詞係指具有單套其正常基因體(染色體)補體之各個基因之酵母細胞。
如此處使用「多倍體酵母細胞」一詞係指具有多於一套其正常基因體(染色體)補體之酵母細胞。
如此處使用「二倍體酵母細胞」一詞係指其每個正常基因體補體基因有至少兩套(對偶基因)且典型係藉兩個單倍體細胞融合(配對)方法所形成之酵母細胞。
如此處使用「四倍體酵母細胞」一詞係指其每個正常基因體補體基因有至少四套(對偶基因)且典型係藉兩個單倍體細胞融合(配對)方法所形成之酵母細胞。四倍體可攜載兩個、三個或四個不同卡匣。此種四倍體可經由選擇性配對同型接合的異宗的a/α及α/α或a/a二倍體而於啤酒酵母(S.cerevisiae)獲得；以及經由單倍體之循序配對獲得異養型二倍體而於比奇菌屬獲得。例如[met his]單倍體可與[ade his]單倍體配對來獲得二倍體[his]；及[met arg]單倍體可與[ade arg]單倍體配對來獲得二倍體[arg]；然後二倍體[his]x二倍體[arg]來獲得四倍體原養型。熟諳技藝人士須瞭解述及二倍體細胞之好處及用途也適用於四倍體細胞。
「酵母配對」一詞係指兩個單倍體酵母細胞自然融合來形成一個二倍體酵母細胞之過程。
此處使用「減數分裂」一詞係指二倍體酵母細胞進行減數分裂而形成四個單倍體芽孢產物之過程。然後各個芽 孢可出芽來形成單倍體營養生長性細胞系。
此處使用「可選擇標記」一詞係指一種可選擇標記其為於接受該基因之細胞例如經由轉形事件接收該基因之細胞上賦予生長表現型(物理生長特徵)之一基因或基因片段。可選擇標記允許該細胞於未接受該可選擇標記基因之細胞無法生長的條件下於選擇性生長培養基中存活與生長。可選擇標記基因通常分成四類，包括陽性可選擇標記基因諸如當兩個ts突變株交叉或一個ts突變株轉形時對細胞賦予對抗抗生素或其它藥物、溫度之抗性之基因；陰性可選擇標記基因諸如生物合成基因，其對細胞賦予可於不含有未具有該生物合成基因之全部細胞所需的特定營養素之培養基生長的能力；或突變發生生物合成基因，其對細胞提供不具有該野生型基因之細胞無法生長的能力等。適當標記包括但非限於：ZEO；G418；LYS3；MET1；MET3a；ADE1；ADE3；URA3；等。
此處使用「表現載體」一詞係指DNA載體，其含有可協助操縱用來於目標宿主細胞內表現異體蛋白質之元體。方便地，序列之操縱及轉形用DNA的製造係首先於細菌宿主例如大腸桿菌(E.coli)進行，通常宿主將包括可協助操縱的序列，包括複製之細菌來源及適當細菌性選擇標記。選擇標記編碼已轉形之宿主細胞於選擇性培養基存活或生長所需的蛋白質。未以含該選擇基因之載體轉形之宿主細胞將無法於該培養基中存活。典型選擇基因編碼蛋白質，該蛋白質(a)提供對抗生素或其它毒素之抗性，(b)互補異養型 缺陷，或(c)供給由複雜培養基無法取得之關鍵性營養素。
適合用於木發明方法之表現載體進一步包括酵母特異性序列，包括用於識別已轉形酵母種系之可選擇異養型標記或藥物標記。藥物標記進一步用來於酵母細胞擴增載體之套數。
感興趣之多肽編碼序列操作式鏈接至可提供於酵母細胞之多肽表現之轉錄調節序列及轉譯調節序列。載體組分包括但非限於下列中之一者或多者：加強基因元體、啟動基因及轉錄終結序列。也包括用於分泌多肽之序列，例如信號序列等。酵母複製起點為視需要使用，原因在於表現載體經常性整合入酵母基因體。
於本發明之一個實施例中，感興趣之多肽係操作式鏈接至或融合至可供從酵母二倍體細胞最佳化選擇多肽之序列。
有關核酸序列之「操作式鏈接」一詞表示此等序列係位於彼此具有功能關係。舉例言之，編碼信號序列之DNA若表現成參與多肽之分泌之前蛋白質，則該編碼信號序列之DNA可操作式鏈接至該多肽之DNA；若啟動基因或加強基因影響序列之轉錄，則啟動基因或加強基因可操作式鏈接至編碼序列。通常「操作式鏈接」表示所鏈接之DNA序列為連續，而於分泌先導子之情況下該DNA序列為連續且位於讀取框內。但加強基因無需為連續。鏈接可藉於方便之限剪位置接合來完成，或另外，鏈接可透過熟諳技藝人士熟知之PCR/重組方法達成(蓋威(Gateway)技術；因維左金公司(Invitrogen)，加州卡斯貝)。若不存在有此種位置，則 依據習知實務使用合成寡核苷酸配接子或鏈接子。
「啟動基因」一詞係指控制該序列操作式鏈接之特定核酸序列之轉錄及轉譯之位在結構基因起始密碼子上游(5’)之未經轉譯的序列(通常於約100 bp至1000 bp以內)。此種啟動基因分成數類：誘導型啟動基因、組成型啟動基因、及阻遏型啟動基因(回應於不存在有阻遏子而提高轉錄程度)。誘導型啟動基因可回應於培養條件之若干變化，例如是否存在有營養素或溫度的改變，引發其所控制之下的DNA之轉錄程度提高。
酵母啟動基因片段也用作為表現載體同源重組且接合入酵母基因體內相同位置之位置；另外，可選擇標記用作為同源重組位置。比奇菌屬轉形係說明於Cregg等人(1985)Mol.Cell.Biol. 5：3376－3385。
得自比奇菌屬之適當啟動基因之實例包括AOX1及啟動基因(Cregg等人(1989)Mol.Cell.Biol. 9：1316－1323)；ICL1啟動基因(Menendez等人(2003)酵母20(13)：1097－108)；甘油醛－3－磷酸去氫酶啟動基因(GAP)(Waterham等人(1997)基因186(1)：37－44)；及FLD1啟動基因(Shen等人(1998)基因216(1)：93－102)。GAP啟動基因為強力組成型啟動基因而AOX啟動基因及FLD1啟動基因為誘導型啟動基因。
其它啟動基因包括ADHI、醇去氫酶II、GAL4、PHO3、PHO5、Pyk、及衍生自其中之嵌合型基因。此外，非酵母啟動基因也可用於本發明，諸如哺乳類、昆蟲類、植物、 爬蟲類、兩棲類、病毒性、及鳥類啟動基因。最典型地，啟動基因包含哺乳類啟動基因(可能為所表現的基因之內生性基因)或包含提供用來於酵母系統有效轉錄之酵母啟動基因或病毒性啟動基因。
感興趣之多肽不僅可直接重組製造，同時也可呈與異源性多肽之融合多肽製造，異源性多肽例如為信號序列或具有於成熟蛋白質或多肽N端之特定裂解位置之其它多肽。通常信號序列為載體組分，或可為插入載體之多肽編碼序列之一部分。所選用之異源性信號序列較佳為經由宿主細胞內部有用之標準徑路中之一者識別與處理之信號序列。已經證實啤酒酵母α因子前－原信號可有效用於從巴斯多比奇菌分泌多種重組蛋白質。其它酵母信號序列包括配對因子α信號序列、轉化酶信號序列、及衍生自其它所分泌之酵母多肽之信號序列。此外，此等信號多肽序列可經基因改造來提供於二倍體酵母表現系統之分泌加強。其它感興趣之分泌信號也包括哺乳類信號序列，該信號序列可為所分泌蛋白質之異源性信號序列，或可為該所分泌蛋白質之天然序列。信號序列包括前－胜肽序列，某些情況下包含原胜肽序列。多種此等信號序列為技藝界所已知，包括出現於免疫球蛋白鏈上之信號序列，例如K28前原毒素序列、PHA－E、FACE、人MCP－1、人血清白蛋白信號序列、人Ig重鏈、人Ig輕鏈等。例如參考Hashimoto等人，蛋白質基因改造；及Kobayashi等人，治療辦法2(4)257(1998)。
經由將轉錄活化劑序列插入載體可提高轉錄。此等活 化劑為DNA之cis－作用元體通常為10 bp至300 bp，作用於啟動基因來增加其轉錄。轉錄加強基因與方向性及位置相對獨立無關，發現於轉錄單元之5’端及3’端，於插入序列內部及於編碼序列本身內部。加強基因可剪接入表現載體位於編碼序列之5’或3’位置，但較佳係位於啟動基因之5’位置。
用於真核宿主細胞之表現載體也含有結束轉錄及穩定mRNA需要的序列。此等序列常見得自轉譯終結密碼子之3’端，於真核細胞或病毒DNA或cDNA之未經轉譯區內。此等區含有於未經轉譯之mRNA部分轉錄成多腺苷化片段之核苷酸節段。
含有前文列舉之組分中之一者或多者之適當載體組成係採用標準接合技術或PCR/重組方法。經分離的質體或DNA片段經過割裂、裁剪以及重新接合成為產生所需質體期望的形式或透過重組方法進行。為了分析證實所組成之質體中之正確序列，接合混合物用來轉形宿主細胞且於適當時藉抗生素抗藥性(例如安比西林(ampicillin)或席歐辛(Zeocin))選出成功的轉形株。得自該等轉形株之質體經製備，藉限剪核酸內切酶消化分析及/或定序。
至於片段之限剪及接合之替代之道，可使用基於att位置及重組酶之重組方法來將DNA序列插入載體。此種方法例如係由Landy(1989)Ann.Rev.Biochem.58：913－949說明且為熟諳技藝人士所已知。此等方法利用藉λ與大腸桿菌編碼之重組蛋白質之混合物媒介的分子間DNA重組。重組出現於交互作用之DNA分子上之特定附接att位置間。有關att 位置之說明，參考Weisberg及Landy(1983)於噬菌體λ之位置特異性重組，λII，Weisberg編輯(冷泉港，紐約：冷泉港出版社)，211－250頁。重組位置旁出之DNA節段經切換，於重組後，att位置為包含各個親代載體供給之序列之混成序列。任一種拓樸結構之DNA間皆可能發生重組。
Att位置可導入感興趣之序列，導入方式係經由將感興趣之序列接合入適當載體；透過使用特定引子產生含att B位置之PCR產物；產生轉殖入含att位置之適當載體之cDNA存庫等。
如此處使用，摺疊一詞表示多肽及蛋白質之三度空間結構，胺基酸殘基間之交互作用用來穩定結構。雖然非共價交互作用對於結構之決定上重要，但通常感興趣之蛋白質將具有由兩個半胱胺酸殘基所形成之分子內及/或分子間共價雙硫鍵。對天然蛋白質及多肽或其衍生物及變異株，適當摺疊典型為導致最佳生物活性之排列，且可藉活性例如配體接合活性、酶活性等檢定分析方便地監控。
於若干情況下，例如期望之產物為合成來源，基於生物活性之檢定分析將較無意義。此等分子之適當摺疊係基於物理性質、能量考量、模型化研究等決定。
經由導入編碼加強摺疊與雙硫鍵形成之一種或多種酶，亦即摺疊酶(foldases)、伴護素(chaperonins)等之序列，可更進一步修改表現載體。此等序列可使用技藝界已知之載體、標記等而於酵母宿主細胞組成性表現或誘導性表現。較佳包括足夠用於期望之表現樣式之轉錄調節元體之 該等序列，經由靶定方法而穩定地整合入酵母基因體。
例如真核PDI不僅為蛋白質半胱胺酸氧化及雙硫鍵異構化之有效催化劑，同時也具有伴護蛋白活性。PDI之共同表現可協助生產有多個雙硫鍵之活性蛋白質。也令人感興趣者為BIP(免疫球蛋白重鏈結合蛋白)；環親和素(cyclophilin)等之表現。於本發明之一個實施例中，單倍體親代種系各自表現一個不同的摺疊酶，例如一個種系表現BIP，而另一個種系表現PDI或其組合。
「期望蛋白質」或「目標蛋白質」等詞互換使用，大致上用來表示此處所述之經經人化之抗體或其結合部分。本發明中，可用作為根據本發明之起始物料之製造抗體來源為兔子。已經說明多種抗體編碼序列而其它序列可藉技藝界眾所周知之方法推出。其實例包括嵌合體抗體、人抗體及其它非人哺乳類抗體、經人化之抗體、單鏈抗體Fv(scFv)、駱駝體、SIMPS、及抗體片段諸如Fabs、Fab’片段、F(ab’)2 等。
例如，抗體或抗原結合片段可藉遺傳基因改造生產。於本技術中如同使用其它方法，可製造抗體之細胞敏化至期望之抗原或免疫原。由可產生抗體之細胞分離之信使RNA用作為使用PCR擴大反應來製造cDNA之樣板。經由將擴大後之免疫球蛋白cDNA之適當區帶插入表現載體，製造載體存庫，載體各自含有一重鏈基因及一輕鏈基因且保有初始抗原特異性。經由將重鏈基因存庫與輕鏈基因存庫組合可組成綜合存庫。如此導致可共同表現重鏈及輕鏈之純 株存庫(類似於抗體分子之Fab片段或抗原結合片段)。載有此等基因之載體共同轉移感染宿主細胞。當抗體基因之合成被導入已轉移感染之宿主時，重鏈及輕鏈蛋白自我組裝來製造活性抗體，該活性抗體可經由使用抗原或免疫原篩檢檢測。
感興趣之抗體編碼序列包括由天然序列編碼之序列及核酸，由於遺傳密碼之簡併性緣故於序列中並非與所揭示之核酸完全相同，及其變異株。變異株多肽包括胺基酸(aa)的取代、加成或刪失。胺基酸取代可為保留性胺基酸取代或去除非必需胺基酸之取代，諸如變更糖化位置，或藉非功能所需之一個或多個半胱胺酸殘基之取代或刪失來減少錯誤摺疊。變異株可設計成保有蛋白質特定區(例如一個功能部位、催化胺基酸殘基等)之生物活性或具有增強之生物活性。變異株也包括此處揭示之多肽片段，特別為生物活性片段及/或與功能部位相對應之片段。經選殖基因之試管內突變發生技術為已知。也包括於本發明者為已經使用尋常分子生物學技術修改，因而改良對蛋白質分解之抗性或最佳化溶解度性質或讓其更適合用作為治療劑之多肽。
藉重組手段可製造嵌合型抗體，重組手段係經由將得自一個種屬之抗體產生性細胞之可變輕鏈及重鏈區(VL 及VH )與得自另一個種屬之恆定輕鏈及重鏈區組合。典型地，嵌合型抗體利用齧齒類或兔可變區及人恆定區來製造具有主控之人功能部位之一種抗體。此種嵌合型抗體之製造為技藝界眾所周知，且可藉標準手段達成(如美國專利案第 5,624,659號所述，全文以引用方式併入此處)。進一步預期本發明之嵌合型抗體之人恆定區可選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19恆定區。
「穩定表現或長期表現期望之所分泌之異源多肽之多倍體酵母」係指可於臨界值表現程度，典型至少為10－25毫克/升且更佳實質上為更高濃度，分泌該多肽為期數日至一週，更佳至少1個月又更佳至少1－6個月及又更佳多於一年之酵母培養。
「分泌期望之重組多肽數量之多倍體酵母培養」一詞係指可穩定或長期分泌至少10－25毫克/升，更佳至少50－500毫克/升及最佳500－1000毫克/升或以上之異源多肽之培養。
若根據遺傳密碼，多核苷酸序列轉譯獲得多肽序列(亦即該多核苷酸序列「編碼」該多肽序列)，則該多核苷酸序列係與該多肽序列「相對應」；若兩個多核苷酸序列編碼相同多肽序列，則一種多核苷酸序列係與另一種多核苷酸序列相對應。
DNA組成體之「異源區」或「異源功能部位」等詞係指於大型DNA分子未出現與自然界之該大型分子相關之可識別的DNA節段。如此當該異源區編碼哺乳類基因時，該基因通常係由於來源有機體之基因體中並未旁出於該哺乳動物基因體DNA之DNA所旁出。另一個異源區之實例為編碼序列本身並非自然界出現之編碼序列之構成體(例如一 種cDNA此處基因體編碼序列含有插入序列，或具有與天然基因不同之密碼子之合成序列)。對偶基因變異或天然突變事件不會產生如此處所定義之DNA異源區。
「編碼序列」一詞係指(鑑於基因密碼)對應於或編碼蛋白質或胜肽序列之密碼子之框內序列。若兩個編碼序列或其互補序列編碼相同胺基酸序列，則該二編碼序列彼此相對應。與適當調節序列相關之編碼序列可轉錄成或轉譯成多肽。多腺苷化信號及轉錄終結信號通常係位於編碼序列之3’端。
此處使用「載體」一詞係指用來將異體物質諸如DNA、RNA或蛋白質導入一個有機體或宿主細胞之材料。典型載體包括重組病毒(用於多核苷酸)及微脂粒(用於多肽)。「DNA載體」為一個複製子，諸如質體、噬菌體或黏粒，另一個多核苷酸節段可附接於該複製子上因而造成附接節段的複製。此處「表現載體」為含有調節序列之DNA載體，該調節序列將指示藉適當宿主細胞進行多肽之合成。通常表示結合RNA聚合酶且起始mRNA之轉錄之啟動基因以及指示mRNA轉譯成多肽之核糖體結合位置及起始信號。多核苷酸序列於適當位置且於正確讀取框將多核苷酸序列結合入一個表現載體，接著藉該載體轉形適當宿主細胞，允許製造由該多核苷酸序列所編碼之多肽。
於多核苷酸序列之內文中，「擴大」一詞係指於試管內製造多套特定核酸序列。擴大序列通常係呈DNA形式。多種進行此種擴大之技術係說明於Van Brunt之綜論文章 (1990,Bio/Technol.,8(4)：291－294)。聚合酶連鎖反應或PCR為核酸擴大之雛型反應，此處使用PCR須視為其它適當擴大技術之範例。
發明之詳細說明
本人化方法通用地適合用於人化任何兔抗體或其可變區，亦即此等抗體可特定結合至不同的期望抗原。此外，本人化辦法適用於人化其它種屬的抗體，例如得自與兔密切相關動物諸如兔形目或兔科(Leporidae)之其它哺乳動物，包括不同種兔及野兔之抗體。此等哺乳動物由於與當地之兔密切相關，故必然具有與此處使用作為人化來源或兔抗體之本地兔種屬密切相關之可變序列。如此，舉例說明與人化抗－TNF－α或抗－IL－6抗體之合成相對應之說明如下。本發明之人化方案示意顯示於第1圖且說明其進一步細節如下。後文揭示之方法說明提供通用原則以及此等原則應用至第2圖所示特定序列(舉例)。
本發明涵蓋本人化策略用於製造對任何期望之抗原具有特異性之經人化之重鏈及輕鏈及含該等重鏈及輕鏈之抗體及抗體片段。適當抗原之實例包括人蛋白質諸如生長因子、細胞激素、酶、激素、腫瘤特異性抗原、致癌基因等、過敏原、得自感染劑諸如細菌、病毒、真菌、酵母、寄生蟲等之過敏原、毒素等。如下實例舉例說明可用來獲得TNF－α及IL－6之特異性經人化之兔抗體之方法，且舉例說明本發明方法及其特有之優點。
本發明也涵蓋包括一個或多個根據本發明所製造之經 人化之重鏈或輕鏈之抗體片段。本發明特別涵蓋對TNF－α或IL－6具有結合特異性之經人化之抗體片段。此等抗體片段可以下列非限制性形式中之一種或多種存在：Fab、Fab’、F(ab’)2 、Fv及單鏈Fv抗體形式。
如前文說明，於本發明之較佳具體實施例中，用於人化之抗體係源自於或選自於一個或多個於起始此處揭示之人化過程前之純株抗原特異性兔B細胞群。
如前述，抗體及其片段可於轉譯後改性來增加效應物部分諸如化學鏈接劑、可檢測部分諸如螢光染料、酶、酶基質、生物發光材料、放射性材料、及化學冷光部分、或功能部分諸如鏈絲菌抗生物素、抗生物素、生物素、細胞毒素、細胞毒劑、及放射性材料。
有關可檢測部分額外酶實例包括但非限於辣根過氧化酶、乙醯膽鹼過氧化酶、鹼性磷酸酶、β－半乳糖苷酶、及蟲螢光素酶。螢光材料之額外實例包括但非限於若丹明、螢光素、異硫氰酸螢光素、繖花酮、二氯三
Figure TWI609965BD00002
基胺、藻紅素、及丹黃醯氯。化學冷光部分之額外實例包括但非限於魯米諾(luminal)。生物發光材料之額外實例包括但非限於蟲螢光素及水素(aequorin)。放射性材料之額外實例包括但非限於碘125(125 I)、碳14(14 C)、硫35(35 S)、氚(3 H)及磷32(32 P)。
有關功能部分，胞毒劑之實例包括但非限於胺甲喋呤(methotrexate)、胺基喋呤(aminopterin)、6－巰基嘌呤、6－巰鳥嘌呤、賽塔拉賓(cytarabine)、5－氟尿嘧啶去咔
Figure TWI609965BD00003
；烷化劑諸如甲氯乙胺(mechlorethamine)、席歐帕(thioepa)氯拉布 西(chlorambucil)、美法蘭(melphalan)、卡慕司汀(carmustine)(BSNU)、米妥黴素(mitomycin)C、羅慕司汀(lomustine)(CCNU)、1－甲基亞硝基脲、環福法邁(cyclophosphamide)、甲氯乙胺、布蘇方(busulfan)、二氯甘露糖醇、史翠妥左妥辛(streptozotocin)、米妥黴素C、順－二氯二胺鉑(II)(DDP)西鉑汀(cisplatin)及卡鉑汀(carboplatin)(帕拉鉑汀(paraplatin))；蒽環素(anthracyclines)包括道諾魯冰心(daunorubicin)(前名道諾黴素(daunomycin))、朵索魯冰心(doxorubicin)(阿黴素(adriamycin))、地妥魯冰心(detorubicin)、諾黴素(carminomycin)、伊達魯冰心(idarubicin)、伊皮魯冰心(epirubicin)、米妥山左(mitoxantrone)及二山特林(bisantrene)；抗生素包括戴堤諾黴素(dactinomycin)(放線黴素(actinomycin)D)、布里歐黴素(bleomycin)、卡里奇黴素(calicheamicin)、米索拉黴素(mithramycin)、及安索拉黴素(anthramycin)(AMC)；及抗霉菌劑諸如長春花生物鹼、文克里斯汀(vincristine)及文布拉斯汀(vinblastine)。其它胞毒劑包括太平洋紫杉醇(paclitaxel)(紫杉醇(taxol))、蓖麻毒蛋白、假單孢桿菌(pseudomonas)外毒素、金西塔賓(gemcitabine)、賽妥恰拉辛(cytochalasin)B、葛拉米西丁(gramicidin)D、溴化乙号 、吐根鹼、伊妥普賽(etoposide)、堤諾普賽(tenoposide)、秋水仙素、二羥基炭疽菌素二酮、1－去氫睪固酮、糖皮質激素類、普卡因(procaine)、泰特卡因(tetracaine)、里朵卡因(lidocaine)、普帕諾羅(propranolol)、普羅黴素(puromycin)、 普卡巴辛(procarbazine)、羥基脲、天冬醯胺酶、皮質類固醇類、米妥坦(mytotane)(O,P’－(DDD))、干擾素、及此等胞毒劑混合物。
額外胞毒劑包括但非限於化學治療劑諸如卡鉑汀、西鉑汀、太平洋紫杉醇、金西塔賓、卡里奇黴素、朵索魯冰心、5－氟尿嘧啶、米妥黴素C、放線黴素D、環福法邁、文克里斯汀及布里歐黴素。得自植物及動物之毒性酶諸如蓖麻毒蛋白、白喉毒素及假單孢桿菌毒素可軛合至經人化之抗體或其結合片段來產生細胞型特異性殺滅劑(Youle等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 77：5483(1980)；Gilliland等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 77：4539(1980)；Krolick等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 77：5419(1980))。
其它胞毒劑包括如Goldenberg於美國專利案第6,653,104號所述之胞毒劑核糖核酸酶。本發明之實施例也係關於放射性免疫軛合物，可發射α粒子或β粒子之放射性核種穩定耦合至抗體或其結合片段，使用或未使用複合體形成劑。此種放射性核種包括β－發射體諸如磷－32(32 P)、鈧－47(47 Sc)、銅－67(67 Cu)、鎵－67(67 Ga)、釔－88(88 Y)、釔－90(90 Y)、碘－125(125 I)、碘－131(131 I)、釤－153(153 Sm)、鎦－177(177 Lu)、錸－186(186 Re)或錸－188(188 Re)；及α－發射體諸如砈－211(211 At)、鉛－212(212 Pb)、鉍－212(212 Bi)或鉍－213(213 Bi)或錒－225(225 Ac)。
將抗體或其結合片段軛合至可檢測部分等之方法為技藝界所已知，例如Hunter等人，自然144：945(1962)；David 等人，生物化學13：1014(1974)；Pain等人，J.Immunol.Meth.40：219(1981)；及Nygren,J.,Histochem及Cytochem.30：407(1982)所述方法。
此處所述實施例進一步包括與此處列舉之抗體、抗體片段、多肽、可變區及CDR實質上同源之變異株及相當物。此等含有例如保留性取代突變(亦即藉類似之胺基酸取代一個或多個胺基酸)。例如，保留性取代係指以同一類中之另一種胺基酸取代一個胺基酸，例如以另一個酸性胺基酸取代一個胺基酸，以另一個鹼性胺基酸取得一個鹼性胺基酸，或以另一個中性胺基酸取得一個中性胺基酸。保留性胺基酸取代之目的為技藝界眾所周知。
於另一個實施例中，本發明涵蓋有至少90%或以上之序列係與此處所述抗體片段、可變區及CDR之經人化之多肽序列中之一者或多者同源性之多肽序列。更佳，本發明涵蓋與根據本發明所製造之經人化之抗體片段中之任一者或多者具有至少95%或以上序列同源性，又更佳至少98%或以上序列同源性，及又更佳至少99%或以上序列同源性之經人化之多肽序列。
本人化方案之顯著優點為含有根據本發明所製造之經人化之可變序列之抗體之結合親和力相對於親代兔抗體之結合親和力實質上維持完好(不變)。較佳，藉本發明所製造之經人化之抗體諸如經人化之抗－IL－6或TNF－α抗體及其片段將具有對IL－6、TNF－α、或其它人類治療上有用之抗原具有結合特異性，且將結合至其抗原具有解離常數(KD )小於 或等於5×10－7 M－1 、10－7 M－1 、5×10－8 M－1 、10－8 M－1 、5×10－9 M－1 、10－9 M－1 、5×10－10 M－1 、10－10 M－1 、5×10－11 M－1 、10－11 M－1 、5×10－12 M－1 、10－12 M－1 、5×10－13 M－1 、10－13 M－1 、5×10－14 M－1 、10－14 M－1 、5×10－15 M－1 或10－15 M－1 。較佳本經人化之抗體將以解離常數小於或等於5×10－10 M－1 結合其抗原目標諸如IL－6或TNF－α抗體。
於本發明之另一個實施例中，由兔抗體所製造之經人化之抗體及其片段將以偏移率小於或等於10－4 S－1 、10－5 S－1 、5×10－6 S－1 、10－6 S－1 、5×10－7 S－1 、或10－7 S－1 具有與抗原諸如IL－6或TNF－α之結合特異性。
於本發明之又一實施例中，本發明之經人化之抗體及其片段之活性具有對抗原諸如TNF－α之結合特異性，且具有可促效或拮抗特定抗原之功能之活性。較佳抗原將為治療目標，經人化之抗體將改善或減輕或另外治療與特定抗原諸如IL－6或TNF相關疾病及病症或其它治療目標諸如人腫瘤多肽、自體抗原、過敏原、或感染劑之特定抗原相關之疾病及病症。
B－ 細胞篩檢及分離
如前述，本發明提供適用於有效人化任何兔抗體亦即對任何期望之抗原具有特異性之抗體之概略方法。此等抗體可衍生自分泌兔抗體或密切相關種屬諸如兔形目之抗體之融合瘤細胞、血清或免疫細胞。若使用免疫細胞，則較佳此等細胞組成對期望之目標抗原具有特異性之B細胞抗體，且係藉下述B細胞分離方案衍生。發現此方案可提供B 細胞群，其於選擇上可獲得具有良好結合親和力之抗體，此外，可獲得抗體之完整集合或分集，亦即一群抗體包括結合至寬廣範圍之不同抗原決定部位之抗體。於此較佳實施例中，本發明提供得自免疫兔之抗原特異性B細胞之純株群之分離方法，該方法可用於分離至少一個抗原特異性細胞。如後文說明及舉例說明，此等方法含有一系列培養步驟及選擇步驟，該等步驟可分開、組合、循序、重複、或週期性循環使用。較佳此等方法用於分離至少一個抗原特異性細胞，其可用來製造對期望之抗原具有特異性之單株抗體或此種抗體之相對應之核酸序列。
大致上，此等方法包含下列步驟：a.製備包含至少一個抗原特異性B細胞之細胞群；b.例如藉層析術豐富該細胞群來形成包含至少一個抗原特異性B細胞之已豐富的細胞群；c.由該已豐富的B細胞群分離單一B細胞；及d.判定該單一B細胞是否製造該抗原之特異性抗體。
此等方法提供分離單一可製造抗體之B細胞之方法之改良，改良部分包含對已經經過免疫接種或自然暴露於抗原之宿主所得之B細胞群進行豐富化，其中該豐富步驟係於任何選擇步驟之前進行，包含至少一個培養步驟，結果獲得可製造對該抗原具有特異性之單一單株抗體之B細胞純株群。
至於全文說明書中於本發明之人化辦法所採用之較佳用來衍生兔B細胞分泌性抗體之此等方法，「純株B細胞群」 係指只分泌對期望之抗原具有特異性之單一抗體之B細胞群。換言之，此等細胞只產生一型對該期望之抗原具有特異性之單株抗體。
於此等方法之說明中，「豐富化」一細胞群細胞一詞表示增加於混合細胞群中期望之細胞典型為抗原特異性細胞之出現頻率，例如由對期望抗原進行免疫接種之宿主衍生得之含B細胞之單離株。如此，已豐富之細胞群涵蓋由於豐富化步驟結果有較高抗原特異性細胞頻率之一細胞群，但此細胞群可含有且可製造不同的抗體。
於此等方法之進一步說明中，「細胞群」一詞通稱涵蓋豐富前及豐富後之細胞群，須牢記當執行多個豐富化步驟時，一細胞群可為豐富前及豐富後二者。更佳，此等用於衍生抗原特異性B細胞純株群之方法包含：a.由經免疫接種之宿主收穫一細胞群來獲得收穫之細胞群；b.由該收穫之細胞群形成至少一種單細胞懸浮液；c.豐富化至少一種單細胞懸浮液來形成第一已豐富之細胞群；d.豐富化該第一已豐富之細胞群來形成一第二已豐富之細胞群；e.豐富化該第二已豐富之細胞群來形成一第三已豐富之細胞群；及f.選出由第三已豐富的細胞群之抗原特異性細胞所製造之抗體。
各細胞群可直接用於次一步驟，或可部分冷凍或全部冷凍供長期儲存或短期儲存或用於隨後各步驟。此外，得自一細胞群之細胞可個別懸浮來獲得單細胞懸浮液。單細胞懸浮液可經豐富化，讓單細胞懸浮液用作為豐富前之細胞群。然後，一種或多種抗原特異性單細胞懸浮液共同形成已豐富化之細胞群；抗原特異性單細胞懸浮液可共同集合，例如重新接種用於進一步分析及/或用於抗體之製造。
可對任何抗原測量抗原特異性。抗原可為抗體可結合之任何物質，抗原包括但非限於胜肽、蛋白質或其片段；碳水化合物；有機分子及無機分子；由動物細胞、細菌細胞及病毒所產生之受體；酶；生物徑路之激動劑及拮抗劑；激素；及細胞激素。抗原之實例包括但非限於IL－2、IL－4、IL－6、IL－10、IL－12、IL－13、IL－18、IFN－α、IFN－γ、BAFF、CXCL13、IP－10、VEGF、EPO、EGF、HRG、MIF、及群落刺激因子、TPA、干擾素、腫瘤相關抗原、HIV抗原諸如env及gag及pol、流行性感冒抗原、禽流感抗原等。較佳抗原包括IL－6、IL－13、TNF－α、VEGF－α、海普西汀(hepcidin)及肝細胞生長因子及對特定人體癌症具有特異性之腫瘤抗原。於利用多於一個豐富步驟之方法中，用於各個豐富步驟之抗原可彼此相同或相異。使用相同抗原之多個豐富步驟可獲得大量及/或多樣化之抗原特異性細胞群；使用不同抗原之多個豐富步驟可獲得對不同抗原具有交叉特異性之已豐富之細胞群。
細胞群之豐富化可藉技藝界已知用於單離抗原特異性 細胞之任一種細胞選擇手段執行。舉例言之，可藉層析技術例如米坦尼(Miltenyi)珠粒技術或磁珠技術將細胞群豐富化。珠粒可直接或間接附接至感興趣之抗原。於較佳實施例中，細胞群之豐富化方法包括至少一個層析豐富步驟。
經由藉技藝界已知之任一種抗原特異性檢定分析技術例如ELISA檢定分析或暈圈檢定分析可執行細胞群之豐富化步驟。ELISA檢定分析包括但非限於選擇性抗原制動化(例如藉鏈絲菌抗生物素、抗生物素、或中性抗生物素塗覆板進行經生物素化抗原之捕捉)、非特異性抗原板塗覆、以及透過抗原積聚策略(例如選擇性抗原捕捉接著為結合伴侶添加來產生非同質蛋白質－抗原複合體)。抗原可直接或間接附接至固體基體或撐體，例如管柱。暈圈檢定分析包含細胞與載有抗原之珠粒接觸，標記出對宿主有特異性之抗宿主抗體來收穫B細胞。標記可為例如螢光基團。於一個實施例中，對至少一種單細胞懸浮液執行至少一個檢定分析豐富步驟。於另一個實施例中，細胞群之豐富方法包括至少一個層析豐富步驟及至少一個檢定分析豐富步驟。
藉大小或密度「豐富化」一細胞群之方法為技藝界所已知。除了藉抗原特異性來豐富化細胞群之外，此等步驟也可用於本方法。
此等方法使用之細胞群含有可辨識抗原之至少一個細胞。抗原辨識性細胞包括但非限於B細胞、漿細胞及其子代。典型地，此等方法將於可產生含有單一型抗原特異性B細胞之純株細胞群之條件下執行，亦即該細胞群產生對期 望之抗原具有特異性之單一單株抗體。於本發明中，此等抗原特異性B細胞典型為兔，或另外，可為得自密切相關之哺乳類種屬之B細胞。
相信主要包含抗原特異性抗體分泌性細胞之B細胞純株抗原特異性群係藉此處提供之新穎培養及選擇方案獲得。
於此等方法中，單一B細胞之單離可藉於任何選擇步驟前豐富化得自宿主之細胞群來執行，例如由細胞群中選出特定B細胞及/或選擇由特定細胞所製造之抗體。豐富步驟可以一、二、三或更多個步驟執行。於一個實施例中，於驗證單一B細胞是否分泌具有抗原特異性及/或期望之性質之抗體之前，由已豐富的細胞群中單離單一B細胞。
於本發明之較佳實施例中，得自免疫接種期望之抗原之兔體之已豐富的細胞群用於抗體製造及/或選擇方法，該細胞群為本人化策略之起始物料。該方法包括下列步驟：製備包含至少一種抗原特異性細胞之細胞群，經由單離至少一種抗原特異性細胞豐富化該細胞群來形成已豐富的細胞群，及誘導由至少一種抗原特異性細胞製造抗體。於較佳實施例中，已豐富的細胞群含有多於一種抗原特異性細胞。於一個實施例中，已豐富之細胞群中之各個抗原特異性細胞係於特定條件下培養來獲得一純株抗原特異性B細胞群，隨後由其中單離抗體產生性細胞及/或使用該B細胞來製造抗體，或與用於本人化策略之此種抗體相對應之核酸序列。與先前技術相反，先前技術中抗體係由具有低抗原特異性細胞頻率之細胞群所製造，本發明允許由高頻率 抗原特異性細胞中進行抗體之選擇。因於抗體選擇前使用豐富步驟，故用於抗體製造之大部分細胞且較佳實質上全部細胞皆為抗原特異性細胞。經由從具有較高抗原特異性頻率之細胞群製造抗體，抗體數量及抗體多樣性增加，如此提供更多用於人化之起始物料。
當使用此等抗體選擇方法來衍生用於人化之兔抗體時，較佳於豐富步驟及培養步驟後選出抗體，結果導致獲得抗原特異性B細胞純株群。該等方法進一步包含由一種或多種已單離的抗原特異性細胞定序一種選定之抗體或其部分之步驟。技藝界已知之任一種定序方法皆可使用且包括定序重鏈、輕鏈、可變區及/或互補決定區(CDR)。
除了豐富步驟外，抗體選擇方法也包括篩選細胞群之抗原辨識及/或抗體功能之一個或多個步驟。舉例言之，期望之抗體具有特定結構特徵，諸如結合至特定抗原決定部位或特定結構擬態；拮抗劑活性或激動劑活性；或中和活性，例如抑制抗原與配體間之結合。於一個實施例中，抗體功能篩檢為配體相依性。抗體功能之篩檢包括但非限於試管內蛋白質－蛋白質交互作用檢定分析，重新形成抗原配體與重組受體蛋白質之天然交互作用；及配體相依性且容易監視之基於細胞之反應(例如增生反應)。於一個實施例中，抗體選擇方法包括藉測定抑制濃度(IC50)篩檢細胞群之抗體功能之步驟。於一個實施例中，已單離之抗原特異性細胞中之至少一者製造具有IC50低於約100、50、30、25、10微克/毫升或其中之增量之抗體。
除了豐富步驟外，抗體選擇方法也包含篩檢細胞群之抗體結合強度之一個或多個步驟。抗體結合強度可藉技藝界已知之任一種方法測定(例如拜可(Biacore))。於一個實施例中，已單離之抗原特異性細胞中之至少一者製造具有高抗原親和力之抗體，例如解離常數(Kd)小於約5×10－10 M－1 ，較佳約為1×10－13 M－1 至5×10－10 M－1 、1×10－12 M－1 至7.5×10－11 M－1 、1×10－11 M－1 至2×10－11 M－1 、或約1.5×10－11 M－1 或以下或其中之增量。於本實施例中，抗體據稱為親和力成熟。於較佳實施例中，此處用於人化之抗體之親和力可媲美或高於帕諾瑞斯(Panorex)(伊德可羅馬(edrecolomab))、瑞吐山(Rituxan)(瑞吐西馬(rituximab))、赫西汀(Herceptin)(特吐祖馬(traztuzumab))、麥羅塔(Mylotarg)(金吐祖馬(gentuzumab))、坎佩斯(Campath)(阿列吐祖馬(alemtuzumab))、贊法林(Zevalin)(伊比吐莫馬(ibritumomab)、伊比吐(Erbitux)(色吐西馬(cetuximab))、阿法汀(Avastin)(本維西祖馬(bevicizumab)、拉堤法(Raptiva)(伊法里祖馬(efalizumab))、瑞米卡(Remicade)(因福里西馬(infliximab))、胡米拉(Humira)(阿達里慕馬(adalimumab))、及左萊(Xolair)(歐馬里祖馬(omalizumab))中之任一者之親和力。較佳抗體之親和力係可媲美或高於胡米拉之親和力。抗體親和力也可藉已知親和力成熟技術提高。於一個實施例中，至少一種細胞群篩檢抗體功能及抗體結合強度中之至少一者且較佳為二者。
除了豐富步驟外，用於選擇人化候選者之抗體選擇方 法也包括篩檢兔細胞群之抗體序列同源性特別為人同源性之一個或多個步驟。於一個實施例中，已單離之抗原特異性細胞中之至少一者製造之抗體具有與人抗體之同源度約50%至約100%、或其中之增量、或大於約60%、70%、80%、85%、90%、或95%同源度。
於另一個較佳實施例中，本發明也提供根據前文就IC50、Kd及/或同源度之任一個實施例，由抗體所製造之兔衍生之經經人化之抗體。
此處揭示之B細胞選擇方案較佳用於識別具有親和力及功能性質因而讓B細胞變成用於人化之良好候選者之B細胞製造之抗體，該B細胞選擇方案比較其它獲得抗體分泌性B細胞及對期望之目標抗原具有特異性之單株抗體之其它方法具有多種特有之優點。此等優點包括但非限於下列：
第一，發現當此等選擇程序用於期望之抗原諸如IL－6或TNF－α時，該等方法可重複再現地獲得抗原特異性B細胞例如衍生自可產生顯然為實質上抗體之綜合補體之兔，亦即該抗體可結合至抗原之多個不同抗原決定部位。不欲受特定理論所限，假設綜合補體可歸因於於初步B細胞回收前所進行之抗原豐富步驟。此外，本優點允許具有與此等性質不同的性質之抗體之單離及選擇可依據特定抗體之抗原決定部位之特異性而改變。此等抗體為用於本發明之人化策略之理想的起始物料。
第二，發現本發明之B細胞選擇方案可重複再現地獲得一純株B細胞培養，該B細胞培養含有單一B細胞或其子 代，分泌單一單株抗體，該抗體通常以相當高之結合親和力結合至期望之抗原。相反地，先前抗體選擇方法傾向於獲得相當少數高度親和力抗體，因此要求全面性篩檢程序來單離具有治療潛力之抗體。不欲受理論所限，假設本發明方案可獲得於活體內宿主之B細胞免疫接種(一次免疫接種)，接著為試管內B細胞刺激(二次抗原打底步驟)二者，二次步驟可提升所回收之純株B細胞分泌對抗原目標具有特異性之單一高度親和力單株抗體之能力與傾向。
第三，發現本發明之B細胞選擇方案可重複再現地獲得已豐富的B細胞產生性IgG，其平均對期望之目標具有高度選擇性(抗原特異性)。部分植基於此，藉本發明方法回收的抗原已豐富的B細胞相信含有可獲得如前文討論之抗原決定部位特異性之期望全長補體之B細胞。
第四，觀察到本B細胞選擇方案即使用於小型抗原，亦即長100胺基酸或以下例如5－50個胺基酸長度之胜肽時，可重複再現地獲得一種純株B細胞培養，其可分泌對小型抗原例如胜肽之單一高度親和力抗體。此點相當出人意表，原因在於製造對小型胜肽之高度親和力抗體通常相當困難、勞力密集、且偶爾甚至不可行。如此，此等方法用來製造用於衍生對期望之胜肽目標例如病毒性、細菌性或自體抗原胜肽之經人化之治療性抗體的理想候選者，因而允許製造具有極為不同之結合性質之單株抗體，或甚至製造對不同胜肽目標例如不同病毒種系之單株抗體混合液。此項優點特別可用於具有所需價數之治療性疫苗或預防性疫苗， 諸如可誘導對不同HPV種系之保護免疫力之HPV疫苗之製造方面。
第五，本B細胞選擇方案特別當用於衍生自兔之B細胞時，傾向於可重複再現地獲得抗原特異性抗體序列，該抗體序列極為類似內生性人免疫球蛋白(於胺基酸層面之類似度約為90%)且含有長度極為類似人免疫球蛋白之CDR，因此極少或不需要做序列修改(典型如前文說明，至多只有親代抗體序列之少數個CDR殘基需要修改，而未導入任何框架外生性殘基)俾便消除可能之免疫原性疑慮。特別，較佳重組抗體只含有用於抗原辨識所需之宿主(兔)CDR1及CDR2殘基及整個CDR3，原因在於如此似乎對抗體親和力的成熟相當重要。因此，根據本發明之B細胞及抗體選擇方案所製造之經回收的抗體序列之高抗原結合親和力即使經過人化過程仍然維持完好或實質上完好。
要言之，本發明方法可用於製造經人化之抗體，該經人化之抗體經由使用比較先前已知方案更有效之方案，因而對更多種不同抗原決定部位具有更高的結合親和力。
於一個特定實施例中，本發明提供一種識別單一B細胞之方法，該B細胞分泌於本發明方案中具有對用於人化之期望抗原具有特異性之抗體，且該B細胞視需要可具有至少一種期望之功能性質諸如親和力、活性、細胞分解活性等，該識別方法包含下列步驟：a.免疫接種宿主抗一種抗原；b.由該宿主收穫B細胞； c.豐富化所收穫之B細胞來增加抗原特異性細胞之頻率；d.形成至少一種單細胞懸浮液；e.於有利於每個培養孔中之單一抗原特異性B細胞存活之條件下，培養得自該單細胞懸浮液之一亞群；f.由該亞型單離少於10個至12個B細胞；及g.決定單一B細胞是否製造對該抗原具有特異性之抗體。
本發明方法進一步包含額外步驟，分離且定序編碼期望之抗體之多肽及核酸序列全體或部分，來識別關鍵性殘基諸如選擇性決定殘基，以便使用本序列作為BLAST搜尋之一部分來識別用於衍生理想之人化版本之同源人可變序列之候選者。此等序列或其人化版本或部分可於期望之宿主細胞表現來製造對期望之抗原諸如IL－6、TNF－α、肝細胞生長因子、海普西汀等之重組抗體。
如前述，相信B細胞純株群主要包含可產生抗期望之抗原之抗體之抗體分泌性B細胞。也相信基於使用若干抗原及使用不同B細胞群所得實驗結果，根據本發明所製造之純株B細胞及由其中所衍生之經單離之抗原特異性B細胞可分泌典型有相當高親和力之單株抗體，以及此外，比較由培養之抗原特異性B細胞衍生單株抗體之其它方法，根據本發明方法可有效地且可重複再現地選擇具有較高抗原決定部位變化程度之單株抗體。於本發明中，用於此種B細胞選擇方法之免疫細胞群將衍生自兔或其密切相關動物諸如其它兔形目種屬。相信使用兔或密切相關哺乳類作為B細胞來源，可加強用於本發明衍生人化版本之單株抗體之多樣 性。此外，根據本發明衍生自兔之抗體序列典型具有對人抗體序列之高度序列相同度之序列，由於可獲得具有極低抗原性之經人化之變異株，因而讓該抗體序列可有利地用於人體。於人化過程中，最終所得經人化之抗體含有遠較低之異體/宿主殘基含量，通常限於宿主CDR殘基之一個子集，該等經人化之抗體由於其本質而與用於接枝之人目標序列有重大差異。如此提高使用本發明之人化策略製造之經人化之抗體蛋白質完全回復活性之機率。
使用此處揭示之豐富步驟進行抗體選擇之方法包括一個步驟，由經免疫接種之動物獲得含免疫細胞之細胞群。由經免疫接種宿主獲得含免疫細胞之細胞群之方法為業界眾所周知，該方法通常包括於宿主誘發免疫反應，及由宿主收穫細胞來獲得一個或多個細胞群。經由對期望之抗原免疫接種宿主，可提引出反應。另外，用作為免疫細胞來源之宿主天然暴露於期望之抗原，諸如已經感染特定病原體諸如細菌或病毒之個體，或另外，已經對患有癌症之個體武裝抗癌症之特異性抗體反應。於本方法中，宿主為兔。
如所述，由於疾病結果可能自然發生免疫反應，或可經由使用抗原免疫接種來誘導出免疫反應。免疫接種可藉技藝界已知之任一種方法執行，諸如有或無可加強免疫反應之作用劑例如完全福恩氏(Freund’s)輔劑或不完全福恩氏輔劑藉注射一次或注射多次抗原來免疫接種。至於活體內免疫接種宿主動物之替代之道，該方法包含於試管內免疫接種宿主細胞培養。
於允許一段免疫反應時間(如藉血清抗體之檢測決定時間)後，宿主動物細胞經收穫來獲得一或多個細胞群。於較佳實施例中，收穫之細胞群篩檢抗體結合強度及/或抗體功能性。收穫的細胞群較佳係得自脾、淋巴結、骨髓、及/或周邊血液單核細胞(PBMC)中之至少一者。細胞可由多於一個來源收穫及匯集。某些來源用於某些抗原為較佳。例如脾、淋巴結、及PBMC對IL－6為較佳；及淋巴結對TNF為較佳。細胞群較佳係於免疫接種後約20日至約90日或其增量收穫，較佳約50日至約60日收穫。收穫之細胞群及/或由其中所得單細胞懸浮液可經豐富化、篩檢及/或培養進行抗體之選擇。於所收穫之細胞群內部之抗原特異性細胞之頻率通常為約1%至約5%或其增量。
於一個實施例中，得自所收穫之細胞群之單細胞懸浮液較佳使用米坦尼珠粒豐富化。由具有抗原特異性細胞頻率約1%至約5%之所收穫之細胞群，如此經衍生之豐富化細胞群具有抗原特異性細胞頻率趨近於100%。
使用豐富步驟進行抗體選擇之方法包括由得自豐富化細胞群中之至少一種抗原特異性細胞製造抗體之步驟。試管內抗體之製造步驟為技藝界已知且可採用任一種適當方法。於一個實施例中，已豐富化之細胞群諸如得自所收穫之細胞群之抗原特異性單細胞懸浮液係以各種細胞密度接種，諸如每孔50、100、250、500、或1至1000個細胞間之任何增量接種。較佳亞群包含不超過約10,000個抗原特異性抗體分泌性細胞，更佳約50－10,000、約50－5,000、約 50－1,000、約50－500、約50－250抗原特異性抗體分泌性細胞或其增量。然後較佳於有利於每個培養孔單一增生抗體分泌性細胞存活之條件下，於進料機層上使用適當培養基(例如活化T細胞經調理之培養基，特別為1－5%活化兔T細胞經調理之培養基)培養細胞亞群。進料機層較佳包含經過照光之細胞物質例如EL4B細胞未組成細胞群之一部分。細胞於適當培養基培養足夠產生抗體之時間，例如約1日至約2週，約1日至約10日，至少約3日，約3日至約5日，約5日至約7日，至少約7日，或其中之其它增量。於一個實施例中，同時培養多個亞群。較佳單一抗體產生性細胞及其子代可於各個孔內存活，因而提供於各孔內之抗原特異性B細胞純株群。於此階段，由該純株群所製造之免疫球蛋白G(IgG)與抗原特異性間有高度交互關係。於較佳實施例中，IgG具有與抗原特異性之交互關係，大於約50%，更佳大於約70%、85%、90%、95%、99%或其中之增量。經由於經過限制之條件下建立B細胞培養來獲得每孔單一抗原特異性抗體產物，驗證交互關係。比較抗原特異性相對於一般IgG合成。觀察三個族群：識別單一抗原形成株之IgG(生物素化及直接塗覆)、可檢測IgG及抗原辨識而與免疫接種獨立無關、及單獨IgG之製造。IgG之製造與抗原特異性有高度交互關係。
含該等抗體之上清液視需要可經收集，然後可根據前述步驟經豐富化、篩選、及/或培養來進行抗體之選擇。於一個實施例中，上清液經豐富化(較佳藉抗原特異性檢定分 析，特別為ELISA檢定分析豐富化)及/或篩選抗體之功能。
於另一個實施例中，由其中視需要可篩選出前述上清液來檢測期望之所分泌的單株抗體之存在之經豐富化且較佳為純株之抗原特異性B細胞群，用於少數B細胞且較佳為單一B細胞之單離，然後以適當檢定分析試驗來驗證於該純株B細胞群中存在有單一抗體產生性B細胞。於一個實施例中，約1個至約20個細胞係單離自純株B細胞群，較佳少於15、12、10、5、或3個細胞或其中之增量，最佳為單一細胞。篩選較佳係藉抗原特異性檢定分析特別為暈圈檢定分析。暈圈檢定分析可使用全長蛋白質或其片段進行。含抗體上清液也可篩檢下列各項中之至少一者：抗原結合親和力；抗原－配體結合之促效作用或拮抗作用、特定目標細胞種型增生之誘導或抑制；目標細胞分解之誘導或抑制，及涉及該抗原之生物徑路之誘導或抑制。
所識別之衍生自兔宿主之抗原特異性細胞可用來衍生編碼可用於本發明之免疫接種辦法之期望的單株抗體之相對應核酸序列(AluI消化產物驗證每孔只製造單一型單株抗體)。如前述，此等序列隨後較佳藉本發明之人化方案突變來讓其更適合用於人用藥物。
如所示，用於本發明方法之得自兔之已豐富化B細胞群也可根據前述各步驟(可以不同順序重複或執行)更進一步豐富化、篩檢及/或培養用於細胞之選擇。於較佳實施例中，經過豐富化之較佳為純株抗原特異性細胞群中之至少一種細胞經分離、培養、及用於抗體之選擇。
如此，於另一個實施例中，本發明提供一種用於本人化方法之抗體候選者之單離方法，包含：a.由經免疫接種之兔宿主收穫一細胞群來獲得經收穫之細胞群；b.由經收穫之細胞群形成至少一種單細胞懸浮液；c.較佳藉層析術豐富化至少一種單細胞懸浮液來形成第一已豐富化之細胞群；d.較佳藉ELISA檢定分析豐富化該第一已豐富化的細胞群，形成第二已豐富化的細胞群，其較佳為純株，亦即只含有單一型抗原特異性B細胞；e.較佳藉暈圈檢定分析豐富化該第二已豐富化的細胞群，形成含有單一個或少數可產生對期望之抗原具有特異性之抗體之B細胞之第三已豐富化之細胞群；及f.選出由單離自該第三已豐富化之細胞群之一個抗原特異性細胞所產生之抗體。
該方法進一步包括一個或多個步驟：篩檢所收穫之細胞群有關抗體結合強度(親和力、活性)及/或抗體功能性。適當篩檢步驟包括但非限於檢定分析方法其檢測：由所識別之抗原特異性B細胞製造之抗體是否可產生具有最低抗原結合親和力之抗體；該抗體是否促效或是否拮抗期望之抗原對配體之結合；抗體是否誘導或抑制特定細胞種型之增生；抗體是否誘導或提引出對目標細胞之細胞分解反應；抗體是否結合至特定抗原決定部位以及抗體是否調控(抑制或促效)涉及該抗原之特定生物徑路或多個徑路。
同理，該方法包括篩檢第二已豐富化的細胞群有關抗體結合強度及/或抗體功能性之一個或多個步驟。
該方法進一步包括下述步驟，定序所選出之抗體之多肽序列或相對應之核酸序列，來識別出關鍵性殘基，俾便進行用於本人化方法之適當同源性人生殖系列抗體序列之BLAST研究。該方法也包括使用所選出之抗體之序列、其片段或經基因改性之經人化版本來製造重組抗體之步驟。此等人化突變方法可獲得具有期望之效應物功能、免疫原性、安定性、糖化之移除或添加等之重組抗體。此處所述重組經人化之抗體或經人化之抗體片段可藉任一種適當重組細胞製造，該等重組細胞包括但非限於哺乳類細胞諸如CHO、COS、BHK、HEK－293、細菌細胞、酵母細胞、植物細胞、昆蟲細胞、及兩棲類細胞。於較佳實施例中，親代兔抗體及衍生自此等抗體及同源性人可變序列之經人化之抗體係於多倍體酵母細胞亦即二倍體酵母細胞特別為比奇菌屬表現。
大致上該方法執行如下：a.將兔宿主對一種抗原免疫接種來獲得兔抗體；b.篩檢所得之兔抗體有關抗原特異性及中和性質；c.由該兔收穫B細胞；d.豐富化所收穫之兔B細胞來形成有較高抗原特異性細胞頻率之已豐富化的細胞群；e.於有利於單一B細胞存活之條件下，培養得自該已豐富化之細胞群之一個或多個亞群，俾於至少一個培養孔中 製造一純株群；f.判定該純株群是否可產生對該抗原具有特異性之兔抗體；g.分離單一兔B細胞；以及h.定序由該單一B細胞所製造之兔抗體之核酸序列以及i.使用此抗體序列，使用本發明之人化策略，來衍生具有親和力及視需要可具有親代兔抗體之其它性質之經人化之抗體。
抗體之人化方法
如所述，本發明提供一種用於人化兔抗體重鏈及輕鏈之新穎改良式方法。本發明方法可如下執行用於兔抗體重鏈及輕鏈之人化：
兔抗體輕鏈之人化
1.識別接在信號胜肽序列後方之第一個胺基酸。此乃框架1之起點。信號胜肽始於第一起始蛋胺酸，對兔輕鏈蛋白質序列典型為長22個胺基酸但非必要。成熟多肽之起點也可藉N端蛋白質定序而以實驗方式決定，或可使用預測演繹法則預測。也是如熟諳技藝人士傳統定義之框架1之起點。
實例：第2圖之RbtVL胺基酸殘基1始於「AYDM...」。
2.識別框架3之終點，典型位在框架1起點後方86－90個胺基酸，典型為半胱胺酸殘基前方接著兩個酪胺酸殘基。此乃如業界人士傳統定義之框架3之終點。
實例：第2圖之RbtVL胺基酸殘基88始於「TYYC」。
3.使用如前文定義始於框架1起點至框架3終點之該多 肽之兔輕鏈序列，對最類似之人抗體蛋白質序列進行序列同源性搜尋。典型係於抗體成熟前對人生殖系列序列搜尋來降低免疫原性之機率，但任何人序列皆可使用。典型地程式例如BLAST程式可用於搜尋序列之資料庫找出最高同源性。人抗體序列之資料庫可參考多個來源諸如NCBI(國家生技資訊中心)。
實例：第2圖中，由殘基號碼1至號碼8之RbtVL胺基酸序列對人抗體生殖系列資料庫進行BLAST運算。最上方三個獨特回程序列於第2圖顯示為L12A、V1及Vx02。
4.通常最高同源性人生殖系列可變輕鏈序列用作為人化之基礎。但熟諳技藝人士可基於其它因素(包括序列間隙及框架類似性)使用另一個序列，該序列藉同源性演繹法則測得並非為最高同源性之序列。
實例：第2圖中，L12A為最高同源性人生殖系列可變輕鏈序列，且係用作為RbtVL之人化基礎。
5.判定人同源序列之框架及CDR排列(FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2)用於輕鏈人化。係使用如業界所述之傳統佈局。將兔可變輕鏈序列與人同源序列對齊，同時維持框架區及CDR區之佈局。
實例：第2圖中，RbtVL序列與人同源序列L12A對齊，指示框架功能部位及CDR功能部位。
6.以得自兔序列之CDR1及CDR2序列置換人同源輕鏈序列CDR1區及CDR2區。若兔與人之CDR序列之長度有差異，則使用整個兔CDR序列及其長度。若執行較小或較大 之序列交換，或若變更特定殘基，可能所得經人化之抗體之特異性、親和力及/或免疫原性不變，但所述交換可成功地使用也未排除允許其它改變的機會。
實例：第2圖中，人同源可變輕鏈L12A之CDR1及CDR2胺基酸殘基以得自RbtVL兔抗體輕鏈序列之CDR1及CDR2胺基酸序列置換。人L12A框架1、2及3不變。所得經人化之序列於如下顯示為由殘基號碼1至88之VLh。注意唯有與L12A人序列不同的殘基才於下方劃線，如此為兔衍生之胺基酸殘基。於本實例中，88個殘基中只有8個殘基係與人序列不同。
7.於步驟6形成新穎混成序列之框架3後，附接兔輕鏈抗體序列之完整CDR3。CDR3序列具有不等長度，但典型長9至15個胺基酸殘基。CDR3區及隨後框架4區之起點可由熟諳技藝人士傳統定義及識別。典型地，框架4之起點係於CDR3終點後方，該起點包含序列「FGGG...」，但此等殘基可能存在有若干變化。
實例：於第2圖中，於指示為VLh之經人化序列中之框架3終點後方加上RbtVL(胺基酸殘基號碼89－100)之CDR3。
8.兔輕鏈框架4，典型為可變輕鏈之最後11個胺基酸殘基，起點如上步驟7指示，典型終點為胺基酸序列「...VVKR」，該輕鏈框架4以通常得自生殖系列序列之最接近的人輕鏈框架4同源序列置換。經常此種人輕鏈框架4具有序列「FGGGTKVEIKR」。可能並非最高同源性或相異之其它人輕鏈框架4序列也可使用，而不影響所得經人化之抗 體之特異性親和力及/或免疫原性。此種人輕鏈框架4序列添加至恰在得自如上步驟7之CDR3序列後方之該可變輕鏈人化序列之終點。現在變成可變輕鏈經人化之胺基酸序列終點。
實例：於第2圖中，RbtVL兔輕鏈序列之框架4(FR4)為如上顯示之同源性人FR4序列。人FR4序列添加至如上步驟7所添加之CD3區終點恰在其後方之該經人化之可變輕鏈序列(VLh)。
兔抗體重鏈之人化
1.識別於信號胜肽序列後方之第一個胺基酸。此乃框架1之起點。該信號胜肽始於第一個起始蛋胺酸，對兔重鏈蛋白質序列而言典型長19個胺基酸。典型地但非必然經常性，兔重鏈信號胜肽之最後三個胺基酸殘基為「...VQC」，接著為框架1之起點。成熟多肽之起點也可以實驗方式藉N端蛋白質定序決定，或可使用預測演繹法則預測。也是熟諳技藝人士傳統定義的框架1之起點。
實例：第2圖中RbtVH胺基酸殘基1，始於「QEQL...」。
2.識別框架3之終點。典型位於框架1起點之後95－100個胺基酸，且典型具有最末序列「...CAR」(但丙胺酸也可為纈胺酸)。此乃如業界人士傳統定義的框架3之終點。
實例：第2圖之RbtVH胺基酸殘基98終於「...FCVR」。
3.使用如前文定義始於框架1起點至框架3終點之該多肽之兔重鏈序列，對最類似之人抗體蛋白質序列進行序列同源性搜尋。典型係於抗體成熟前對人生殖系列序列搜尋 來降低免疫原性之機率，但任何人序列皆可使用。典型地程式例如BLAST程式可用於搜尋序列之資料庫找出最高同源性。人抗體序列之資料庫可參考多個來源諸如NCBI(國家生技資訊中心)。
實例：第2圖中，由殘基號碼1至號碼98之RbtVH胺基酸序列對人抗體生殖系列資料庫進行BLAST運算。最上方三個獨特回程序列於第2圖顯示為3－64－04、3－66－04及3－53－02。
4.通常最高同源性人生殖系列可變重鏈序列用作為人化之基礎。但熟諳技藝人士可基於其它因素(包括序列間隙及框架類似性)使用另一個序列，該序列藉同源性演繹法則測得並非為最高同源性之序列。
實例：第2圖中，3－64－04為最高同源性人生殖系列可變重鏈序列，且係用作為RbtVH之人化基礎。
5.判定人同源序列之框架及CDR排列(FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2)用於重鏈人化。係使用如業界所述之傳統佈局。將兔可變重鏈序列與人同源序列對齊，同時維持框架區及CDR區之佈局。
實例：第2圖中，RbtVH序列與人同源序列3－64－04對齊，指示框架功能部位及CDR功能部位。
6.以得自兔序列之CDR1及CDR2序列置換人同源重鏈序列CDR1區及CDR2區。若兔與人之CDR序列之長度有差異，則使用整個兔CDR序列及其長度。此外，可能須以兔重鏈框架1之最後三個胺基酸置換人重鏈框架1區之最後三 個胺基酸。典型地但非經常性，於兔重鏈框架1中，此等三個殘基係接在甘胺酸殘基後方而前方有個絲胺酸殘基。此外，可能須以兔重鏈框架2之最後胺基酸置換人重鏈框架2區之最後胺基酸。典型地但非必然經常性，於兔重鏈框架2中此乃甘胺酸殘基前方接著異白胺酸殘基。若執行更小的更大的序列交換，或若變更特定殘基，則所得經人化之抗體之特異性、親和力及/或免疫原性可能不變，但如所述之交換已經成功地使用，但未排除允許其它改變之可能。例如，色胺酸胺基酸殘基典型係出現於兔重鏈CDR2區結束前之四個殘基，而於人重鏈CDR2中此一殘基典型為絲胺酸殘基。將此兔色胺酸殘基改成於此位置的人絲胺酸殘基，已經驗證對經人化之抗體之特異性或親和力極少影響至毫無影響，如此進一步減少於經人化之序列中由兔序列所衍生之胺基酸殘基之含量。
實例：第2圖中，人同源可變重鏈之CDR1及CDR2胺基酸殘基係以得自RbtVH兔抗體輕鏈序列之CDR1及CDR2胺基酸序列置換，框出來的殘基除外，該殘基於兔序列(位置號碼63)為色胺酸而於人序列之相同位置為絲胺酸，保持為人絲胺酸殘基。除了CDR1及CDR2改變外，框架1之最後三個胺基酸(位置28－30)及框架2之最後殘基(位置49)維持兔胺基酸殘基而非人胺基酸殘基。所得經人化之序列於後文顯示為由殘基號碼1至98之VHh。注意只有與3－64－04人序列不同的殘基才下方劃線，如此為兔衍生之胺基酸殘基。於本實例中，98個殘基中只有15個與人序列不同。
7.於步驟6形成的新穎混成序列之框架3之後，附接兔重鏈抗體序列之完整CDR3。CDR3序列可具有不等長度，典型長5至19個胺基酸殘基。CDR3區及隨後框架4區之起點可由業界人士傳統定義且可識別。典型地，框架4之起點如此位於CDR3終點後方包含序列WGXG...(此處X通常為Q或P)，但此等殘基可能存在有若干變化。
實例：RbtVH(胺基酸殘基號碼99－110)之CDR3添加於標示為VHh之經人化序列之框架3終點後方。
8.兔重鏈框架4，典型為可變重鏈之最後11個胺基酸殘基，起點如上步驟7指示，典型終點為胺基酸序列「...TVSS」，該重鏈框架4以通常得自生殖系列序列之最接近的人重鏈框架4同源序列置換。經常此種人重鏈框架4具有序列「WGQGTLVTVSS」。可能並非最高同源性或相異之其它人重鏈框架4序列也可使用，而不影響所得經人化之抗體之特異性親和力及/或免疫原性。此種人重鏈框架4序列添加至恰在得自如上步驟7之CDR3序列後方之該可變重鏈人化序列之終點。現在變成可變重鏈經人化之胺基酸序列終點。
實例：於第2圖中，RbtVH兔重鏈序列之框架4(FR4)為如上顯示之同源性人重FR4序列。人FR4序列添加至如上步驟7所添加之CD3區終點恰在其後方之該經人化之可變重鏈序列(VHh)。
前述人化方法提供優於先前人化方法之顯著效果。例如，本發明提供一種用於人化得自兔抗體序列之抗體序列 之方法，該方法係以得自所選定之同源性已對齊的人抗體序列中之人抗體殘基置換極高百分比之兔胺基酸殘基。結果用於人體較不可能產生免疫原性。
此外，本發明方法只仰賴一次序列之比較而無需依賴或需要(i)瞭解施體或受體抗體序列之三度空間結構；(ii)瞭解殘基於表面定位相對於埋置式殘基之定位；(iii)嘗試於特定位置或隨機位置之不同框架殘基替代之道之不同版本或不同變化。結果，本發明比較較複雜之人化辦法高度有效，而未有損所得經人化之抗體之期望性質，諸如結合親和力性質及其它功能性質。
進一步與前文說明相關，藉本發明方法製造之經人化之抗體具有相對於親代兔抗體之相同結合親和力或實質上相同結合親和力。
此外，本發明方法無需額外「親和力成熟」來最佳化或提升抗原親和力。相反地，於大部分其它人化辦法中，需要經由執行「親和力成熟」方案之迭代來於人化後顯著提高抗原親和力(變成於可行性之有用劑量為治療上有效或診斷上有效)，該方案篩檢多個隨機序列變異株或經界定的序列變異株來識別出具有增高的結合親和力之變異株。結果，本發明比較先前人化辦法更簡單更有效。
又復，本人化方法為優異，原因在於所得經人化之可變輕鏈及重鏈序列可用於製造全長抗體及經人化之抗體片段或含有該等抗體及抗體片段之融合蛋白質。因此此等經人化之抗體、經人化之抗體片段及含有該等抗體及抗體片 段之融合蛋白質諸如附接至治療劑或診斷劑，適合用於免疫治療，以及活體內免疫診斷及免疫預後，諸如用於腫瘤細胞、癌細胞轉移、動脈粥狀硬化斑塊、發炎部位等的成像用途。
本發明之經人化之抗體及其片段之較佳重組製造方法
本發明亦係針對此處所述經人化之兔抗體或其片段之較佳製法。與此處所述之抗體或其片段相對應之重組多肽較佳係由配對勝任效能之多倍體且較佳為二倍體或四倍體種系分泌。本發明係針對使用包含多倍體效能之培養經歷長時間，亦即至少數日至一週，較佳至少一個月或數個月及又更佳至少6個月至一年或更長呈分泌形式製造此等重組多肽之方法。此等多倍體酵母培養較佳將表現至少10－25毫克/升多肽，更佳至少50－250毫克/升，又更佳至少500－1000毫克/升及最佳1克/升或以上之重組多肽。
於本發明之一個實施例中，一對經過遺傳標記之酵母單倍體細胞以包含期望之異質多聚體蛋白質亞單位之表現載體轉形。一個單倍體細胞包含第一表現載體，及第二單倍體細胞包含第二表現載體。於另一個實施例中，二倍體酵母細胞將以一種或多種表現載體轉形，該表現載體提供本發明所提供之重組經人化之多肽中之一者或多者之表現及分泌。於又另一個實施例中，單一單倍體細胞可以一種或多種載體轉形，用來藉融合策略或配對策略而製造多倍體酵母。於又另一個實施例中，二倍體酵母培養可以一種或多種載體轉形，該等載體提供根據本發明所製造之期望 的經人化之兔重鏈或輕鏈或抗體多肽或多肽之表現及分泌。此等載體可包含維持於染色體外之質體，或可包含載體，該載體例如為隨機或藉同源重組而整合入酵母細胞的基因體之線性化質體。視需要地，額外表現載體可導入單倍體細胞或二倍體細胞；或第一或第二表現載體可包含額外編碼序列；用於非同質三聚體、非同質四聚體之合成等。非相同多肽之表現程度可個別校準且透過適當選擇、載體拷貝數目、啟動基因強度及/或誘導等來調整。已轉形的單倍體細胞經過交叉或融合基因改造。所得二倍體或四倍體種系用來製造及分泌完全經組裝且具有生物功能之蛋白質、此處所述之經人化之抗體或其片段。
二倍體細胞或四倍體細胞用於蛋白質製造提供出乎意外的效果。細胞於對單倍體生長可能有害之條件下生成用於製造目的亦即數目增加歷一段長時間，該等條件包括高細胞密度；於最低培養基生長；於低溫生長；於無選擇壓力存在下生長；可提供非同質基因序列完好的維持以及隨著時間之經過高度表現的維持。不欲受理論所限，發明人獲得一項結論，此等效果至少部分係來自於由兩個分開親代單倍體細胞形成二倍體種系。此種單倍體種系包含無數微小的自養型突變，該等突變於二倍體或四倍體中得到互補，允許於高度選擇性條件下生長。
經轉形之配對勝任單倍體酵母細胞提供允許期望之經人化之抗體蛋白質進行亞單位配對之基因改造方法。單倍體酵母種系以兩種表現載體各自轉形，第一載體係指導多 肽鏈之合成，而第二載體係指導第二非相同多肽鏈亦即經人化之兔重鏈及輕鏈多肽之合成。兩個單倍體種系配對而提供一個二倍體宿主，此處可獲得最佳化目標蛋白質(經人化之兔抗體或經人化之兔抗體片段)之製造。
視需要可提供額外非相同的編碼序列。此等序列存在於額外表現載體上或存在於第一或第二表現載體中。如技藝界所已知，多個編碼序列可由個別啟動基因分開表現；或可透過含括「內部核糖體進入位置」或「IRES」而配位表現，IRES為可啟動直接內部核糖體進入順反子(蛋白質編碼區)之起始密碼子諸如ATG之元體，因而導致該基因之cap－獨立轉譯。於酵母具有功能之IRES元體係說明於Thompson等人(2001)，P.N.A.S. 98：12866－12868。
於本發明之一個實施例中，抗體序列係組合分泌性J鏈製造，J鏈提供IgA增高的穩定性(參考美國專利案5,959,177；及5,202,422)。
於較佳實施例中，兩個單倍體酵母種系各自為異養型，需要對培養基補充養分來允許單倍體細胞之生長。成對之異養體彼此為互補，故二倍體產物將於不含有單倍體細胞需要之補充養分之存在下生長。多種此等遺傳標記為酵母所已知，包括對胺基酸(例如met、lys、his、arg等)、核苷(例如ura3、ade1等)等之需求。胺基酸標記對本發明方法為較佳。另外，含有期望之載體之二倍體細胞可藉其它手段選擇，例如使用其它可選擇標記選擇，諸如綠螢光蛋白質、多種顯性可選擇標記等。
兩個已轉形的單倍體細胞可基因雜交，由此配對事件所得之二倍體種系藉其混成營養需求做選擇。另外，兩種已轉形之單倍體種系族群轉成球形質體且融合，再生且選出二倍體子代。經由任一種方法可識別且選擇性生長二倍體種系，原因在於不似其單倍體親代，二倍體種系不具有相同的營養需求。舉例言之，二倍體細胞可於最低培養基生長。二倍體合成策略具有某些優勢。二倍體種系可透過對潛在突變(該等突變可能影響重組蛋白質之製造及/或分泌)更寬廣的互補作用來製造更高含量之異源蛋白質。
如前述，於若干實施例中，單倍體酵母可以單一載體或多個載體轉形，且與非轉形細胞配對或融合來製造含載體之二倍體細胞。於其它實施例中，二倍體酵母細胞可以一種或多種載體轉形，該等載體提供由該二倍體酵母細胞表現及分泌期望之經人化之兔抗體多肽或多數多肽。
於本發明之一個實施例中，兩個單倍體種系係以多肽存庫轉形，例如根據本發明所製造之經人化之兔抗體重鏈或輕鏈存庫。合成多肽之經轉形之單倍體細胞係與互補單倍體細胞配對。所得二倍體細胞接受功能性蛋白質的篩選。二倍體細胞提供將功能測試用之大量多肽的組合快速地、方便地且廉價地結合在一起的手段。此項技術特別適用於非同質二聚體蛋白質產物的產生，此處最佳化的亞單位合成程度對功能性蛋白質之表現與分泌上具有關鍵重要性。
於本發明之另一個實施例中，兩種亞單位之表現程度比經調節來最大化產物的產生。非同質二元體亞單位蛋白 質含量先前已經顯示可影響終產物的產生(Simmons LC,J Immunol方法，2002年5月1日；263(1－2)：133－47)。於配對步驟前，經由選擇存在於表現載體上之標記，可達成調節作用。經由穩定增加載體之拷貝套數，可提高表現程度。於某些情況下，可能期望提高一鏈相對於另一鏈的含量，因而達成多肽亞單位間之比例平衡。抗生素抗藥性標記可用於此項目的例如席歐辛抗藥性標記、G418抗藥性標記等，且提供經由選出對高濃度席歐辛或G418具有抗藥性之轉形株，而提供於一個種系中含有整合多套表現載體之種系之豐富化手段。亞單位基因之適當比例例如1：1；1：2等對有效蛋白質製造相當重要。甚至當相同啟動基因用於轉錄兩個亞單位時，多項其它因素促成蛋白質之最終表現程度，因此可用於增加一種編碼基因相對於另一種編碼基因之拷貝套數。另外，經由配對兩個單倍體種系，二種系皆有多套表現載體拷貝，可形成比較單一拷貝載體種系，可製造更高度經人化之抗體多肽之二倍體種系。
宿主細胞以前述表現載體轉形，經配對來形成二倍體種系，且於經過改性而適合用於誘導啟動基因、選擇轉形株或擴大期望序列之編碼基因之習知營養素培養基內培養。適合用於酵母生長之多種最低培養基為技藝界所已知。任一種培養基皆可視需要而補充鹽類(諸如氯化鈉、鈣、鎂、及磷酸鹽)、緩衝劑(例如HEPES、磷酸鉀、磷酸鈉)、核苷(諸如腺苷及胸腺苷)、抗生素、微量元素、及葡萄糖或相當之能量來源。任何其它需要的補充劑也可以熟諳技藝 人士已知之適當濃度含括。培養條件諸如溫度、pH等為先前用於選用來表現之宿主細胞所使用之培養條件，且為熟諳技藝人士顯然易知。
由培養基回收分泌的蛋白質。蛋白酶抑制劑諸如苯甲基磺醯氟(PMSF)可用於純化過程中抑制蛋白質之分解降解，可含括抗生素來防止意外污染物的生長。組成物可使用技藝界已知方法濃縮、過濾、透析等。
本發明之二倍體細胞生長用於製造用途。此種製造用途期望包括於最低培養基中生長，該最低培養基缺乏預先形成之胺基酸及其它複合體生物分子，例如培養基包含氨作為氮源，及葡萄糖作為能源及碳源及鹽類作為磷酸根、鈣等之來源。較佳此種生產性培養基缺選擇劑諸如抗生素、胺基酸、嘌呤、嘧啶等。二倍體細胞可生長至高細胞密度，例如至少約50克/升；更常見至少約100克/升；或至少約300克/升，約400克/升，約500克/升或以上。
於本發明之一個實施例中，用於製造用途之本細胞之生長係於低溫進行，溫度可於對數生長期、穩態生長期或於二期期間降低。「低溫」一詞係指至少約15℃，更常見至少約17℃，可能約20℃且常見不超過約25℃，更常見不超過約22℃之溫度。生長溫度可能影響全長分泌蛋白質於生產培養中之製造，降低培養生長溫度強烈提升完好的產物產率。降低的溫度顯然透過宿主所使用之摺疊徑路及後轉譯處理徑路來協助胞內交通，來產生目標產物，連同減少胞內蛋白酶之降解作用。
本發明方法提供分泌之活性蛋白質較佳為哺乳類蛋白質之表現。於一個實施例中，如此處使用之分泌之「活性蛋白質」係指至少有兩個適當成對鏈之正確摺疊多聚體，該多聚體正確結合其關聯的抗原。活性蛋白質之表現程度通常至少約10－50毫克/升培養，更常見至少約100毫克/升，較佳至少約500毫克/升且可為1000毫克/升或以上。
本發明方法可於製造期間提供宿主及異源性編碼序列之安定性提高。此種安定性經由隨著時間之經過可維持高度表現程度可證，經歷約20次分裂、50次分裂、100次分裂或以上，起始表現程度降低不超過約20%，常見不超過10%，且可降低不超過約5%。
種系安定性也提供隨著時間之經過維持異源性基因序列的完好，經歷約20次分裂、50次分裂、100次分裂或以上，活性編碼序列及所需轉錄調節元體之序列係維持於至少約99%二倍體細胞，常見至少約99.9%二倍體細胞，及較佳至少約99.99%二倍體細胞。較佳實質上全部二倍體細胞皆維持活性編碼序列及所需轉錄調節元體之序列。
第二表現載體係使用熟諳技藝人士眾所周知之相同習知手段製造，該表現載體含有一操縱基因及編碼抗體輕鏈之DNA序列，其中編碼抗體特異性所需CDR之該DNA序列係衍生自兔B細胞來源，而編碼抗體鏈之其餘部分之DNA序列係衍生自人細胞來源。
表現載體藉熟諳技藝人士眾所周知之習知技術轉移感染宿主細胞來製造已轉移感染的宿主細胞，該已轉移感染 的宿主細胞藉熟諳技藝人士眾所周知之習知培養技術培養來製造該抗體多肽。
宿主細胞可與前述兩種表現載體共同轉移感染，第一表現載體含有編碼操縱基因及經人化之兔輕鏈衍生多肽之DNA，及第二表現載體含有編碼操縱基因及經人化之兔重鏈衍生多肽之DNA。兩個載體含有不同的可選擇標記，但較佳可選擇標記可達成重鏈多肽及輕鏈多肽之實質上相等表現。另外可使用單一載體，該載體包括編碼經人化之兔重鏈及輕鏈多肽二者之DNA。
兩種經轉形之單倍體細胞可經過基因交配，由此配對事件所得之二倍體種系係藉其混成營養需求及/或抗生素抗藥性範圍做選擇。另外，兩種經轉形之單倍體種系族群經球形質體化且經融合，再生且選出二倍體子代。藉由任一種方法，二倍體種系可基於該二倍體種系與其親代於不同培養基中生長的能力來做識別及選擇。例如，該等二倍體細胞可於包括抗生素之最低培養基生長。二倍體合成策略有若干優點。二倍體種系經由與潛在突變更寬廣互補而可能製造較高濃度之異源蛋白質，該等突變可能影響重組蛋白質之製造及/或分泌。此外，一旦獲得穩定的種系，任一種用來選擇該等種系之抗生素皆無需持續存在於生長培養基。
用來表現抗體多肽之宿主細胞可為細菌細胞諸如大腸桿菌或真核細胞。於本發明之特佳實施例中，可使用用於此項目的之經過明確界定的哺乳類細胞類型，諸如骨髓瘤 細胞或中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系。
可組成載體之大致方法、製造宿主細胞所需轉移感染方法及由該宿主細胞製造抗體多肽所需培養方法皆包括習知技術。雖然較佳用於製造抗體之細胞系為哺乳動物細胞系，但也可使用任何其它適當細胞系，諸如細菌細胞系諸如大腸桿菌衍生之細菌種系或酵母細胞系。
同理，一旦製造後，該等經人化之兔抗體多肽可根據技藝界之標準程序純化，諸如十字流過濾、硫酸銨沉澱、親和管柱層析術等。
此處所述經人化之抗體多肽也可用於胜肽模擬物或非胜肽模擬物之設計及合成，該等模擬物可用於本發明之抗體多肽之相同治療用途。例如參考Saragobi等人，科學，253：792－795(1991)，全文以引用方式併入此處。
投予
含有根據本發明所製造之經人化之兔抗體及其片段及融合物較佳係用於人類之治療方法或診斷方法諸如腫瘤部位之活體內成像。於本發明之一個實施例中，此處所述之經經人化之抗體、或其經人化之結合片段及該等抗體片段之組合物係以約0.05至10.0毫克/千克接受者個體體重之濃度投予該個體。於本發明之較佳實施例中，此處所述之經經人化之抗體、或其經人化之結合片段及該等抗體片段之組合物係以約0.1至1.0毫克/千克接受者個體體重之濃度投予該個體。
於本發明之另一個實施例中，此處所述之經經人化之 抗體、或其經人化之結合片段及該等抗體片段之組合物係呈藥物調配物投予個體。
「藥物組成物」係指適合投予哺乳動物之化學組成物或生物組成物。此等組成物特別係調配成經由多個途徑中之一者或多者投藥，該等投藥途徑包括但非限於經頰、皮外、硬膜外、吸入、動脈內、心內、腦室內、皮內、肌肉、鼻內、眼內、腹內、脊椎內、鞘內、靜脈、經口、經腸道外、透過浣腸或栓劑經直腸、皮下、皮膚下、舌下、經皮、及經黏膜。此外，可利用注射、散劑、液劑、膠漿劑、滴劑、或其它投藥手段投藥。
「藥學賦形劑」或「藥學上可接受之賦形劑」為其中調配活性治療劑之載劑，通常為液體。於本發明之一個實施例中，該活性治療劑為IL－6或TNF－α之特異性經人化之抗體或其一個或多個片段。賦形劑通常並未對調配物提供任何藥理活性，但可提供化學安定性及/或生物學安定性及釋放特性。調配物之實例可參考雷明頓製藥科學，第19版，Grennaro,A.編輯，1995年，以引用方式併入此處。
如此處使用，「藥學上可接受之載劑」或「賦形劑」包括生理上可相容性之任何及全部溶劑、分散介質、塗覆劑、抗菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑。於一個實施例中，載劑適合用於經腸道外投藥。另外，載劑適合用於經靜脈、腹內、肌肉或舌下投藥。藥學上可接受之載劑包括無菌水性溶液劑或分散液劑及用於臨時準備無菌注射溶液劑或注射分散液劑之無菌粉末。此等介質及作用劑用於藥 學活性物質之用途為技藝界眾所周知。除非與活性化合物不可相容之習知介質或作用劑之外，皆預期涵蓋其用於本發明之藥學組成物。補充性活性化合物也摻混於組成物。
於製造及儲存條件下，藥學組成物典型必須為無菌且安定。組成物可調配成溶液、微乳液、微脂粒、或其它適合高藥物濃度之有序結構。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、及液體聚乙二醇)及其適當混合物之溶劑或分散介質。例如經由使用諸如卵磷脂之塗覆劑，於分散液劑之情況下經由維持所要求之粒徑，以及經由使用界面活性劑，可維持適當流動性。
於多種情況下，較佳含括等張劑例如糖類、多元醇類諸如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化鈉於組成物。經由於組成物內含括一種延遲吸收劑例如一硬脂酸鹽類及明膠，可獲得注射用組成物之吸收延長。此外，鹼性多肽可調配於定時釋放調配物，例如調配成包括緩慢釋放聚合物之組成物。活性化合物可使用保護化合物免於快速釋放之載劑製備，該載劑諸如經控制釋放之調配物包括植體及微囊封遞送系統。可使用可生物分解之生物相容性聚合物，諸如乙烯－乙酸乙烯酯、聚酐類、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯類、聚乳酸及聚乳酸－聚乙醇酸共聚物(PLG)。多種此等調配物之製備方法為熟諳技藝人士眾所周知。
對所引述之各個實施例而言，化合物可藉多種劑型投予。預期涵蓋熟諳技藝人士已知之任何生物上可接受之劑型及其組合物。此等劑型之實例包括但非限於可重新調製 之粉末、酏劑、液劑、溶液劑、懸浮液劑、乳液劑、散劑、粒劑、粒子劑、微粒子劑、可分散粒劑、扁囊劑、吸入劑、噴霧吸入劑、貼片劑、粒子吸入劑、植體、長效植體、注射劑(包括皮下、肌肉、靜脈、及皮內)、輸注劑、及其組合物。
前文本發明之多個具體實施例之說明絕非意圖為羅列盡淨或限制本發明於所揭示之確切形式。雖然此處用於舉說明目的已經說明本發明之特定實施例及實例，但如熟諳技藝人士瞭解，於本發明之範圍內可做出多種相當之修改。此處提供之本發明之教示可應用於前述實例以外之其它目的。
鑑於前文詳細說明部分，可對本發明做出此等及其它改變。大致上，於如下申請專利範圍，使用之術語不可解譯為囿限本發明於說明書中及申請專利範圍所揭示之特定實施例。如此，本發明並未受此處揭示所限，反而本發明之範圍全然係由如下申請專利範圍決定。
本發明可以前文說明及實例中特別敘述之方式以外之方式實施。鑑於前文教示可對本發明做出多種修改及變化，因此該等修改及變化係落入本發明之範圍。
有關抗原特異性B細胞純株純之獲得方法之相關教示係揭示於美國臨時專利申請案第60/801,412號，申請日2006年5月19日，該案揭示全文以引用方式併入此處。
有關使用配對勝任酵母及對應方法製造抗體或其片段之若干教示係揭示於美國專利申請案第11/429,053號，申請日2006年5月8日(美國專利申請公告案第US 2006/0270045 號)，全文以引用方式併入此處。
於發明背景、詳細說明及實例中所引用之各文件(包括專利案、專利申請案、期刊文章、摘要、手冊、書籍或其它揭示)之完整揭示全文以引用方式併入此處。
列舉下列實例讓熟諳技藝人士對如何製造及使用本發明有完整揭示及說明，但非意圖限制本發明之範圍，試圖就所使用之各數值(例如數量、溫度、濃度等)確保精確，但容許有若干實驗誤差及偏差。除非另行指示，否則份數為份數重量比，分子量為平均分子量，溫度以攝氏度數表示及壓力係於大氣壓或近大氣壓。
實例 實例1 ：已經的抗原特異性B細胞抗體培養之製造
經由免疫接種傳統抗體宿主動物，衍生出一群評估用抗體，來探討該感興趣之目標抗原之自然免疫反應。典型地，用於免疫接種之宿主為兔或使用類似之成熟方法可產生抗體且提供具有可相媲美之多樣性例如抗原決定部位的多樣性之一群抗原特異性B細胞產生性抗體之其它宿主。初步抗原免疫接種可使用完全福稜氏輔劑(CFA)進行，隨後之追加接種係使用不完全輔劑進行。於免疫接種後約50－60日，較佳於第55日，測試抗體效價，若確定為適當效價則開始進行抗體選擇(ABS)方法。開始ABS的兩個關鍵標準為強力抗原辨識及多株血清之功能修改活性。
於建立陽性抗體效價時，犧牲動物，分離B細胞來源。此等來源包括：脾臟、淋巴結、骨髓及周邊血液單核細胞 (PBMC)。產生單細胞懸浮液，細胞懸浮液經洗滌來確保可用於低溫長期儲存。然後典型地將細胞冷凍。
開始抗體識別過程，將小部分冷凍細胞懸浮液解凍、洗滌、及置於組織培養基。然後懸浮液混合用來產生動物免疫反應之生物素化抗原形式，使用米坦尼磁珠細胞選擇方法回收抗原特異性細胞。使用鏈絲菌抗生物素珠粒進行特定豐富化。已豐富化的族群經回收且前進至特定B細胞單離之下一期。
實例2 ：純株含抗原特異性B細胞培養之製造
根據實例1所製造之已豐富化的B細胞隨後以每孔不等細胞密度接種於96孔微效價孔板。通常每組10片孔板，每孔有50、100、250或500個細胞。培養基補充4%經活化之兔T細胞調理培養基連同50K經冷凍且經照射之EL4B飼養細胞。此等培養未受干擾靜置5日至7日，此時收集含有所分泌之抗體之上清液及於分開檢定分析設備評估目標性質。其餘上清液保持完好，孔板於－70℃冷凍。於此等條件下，培養過程典型導致含有包含抗原特異性B細胞純株群之混合細胞群之孔，亦即單孔只含有對期望之抗原具有特異性之單一單株抗體。
實例3 ：篩檢抗體上清液之具有期望特異性及/或功能性質之單株抗體
衍生自根據實例2所製造之含有純株抗原特異性B細胞群之孔之含抗體之上清液初步使用ELISA方法篩檢抗原之辨識情況。包括選擇性抗原免疫接種(例如藉鏈絲菌抗生物 素塗覆板捕捉生物素化抗原)、非特異性抗原板塗覆，或另外，透過抗原累積策略(例如選擇性抗原補捉接著為結合伴侶的添加來產生異體蛋白質－抗原複體)。然後抗原陽性孔上清液於功能改性檢定分析中做選擇性測試，該檢定分析係與配體有嚴格相依性。其中一個實例為試管內蛋白質－蛋白質交互作用檢定分析，再度形成抗原配體與重組受體蛋白質之自然交互作用。另外，利用配體相依性且容易監視之基於細胞之反應(例如增生反應)。顯示顯著抗原辨識及強度之上清液確實為陽性孔。衍生自原先陽性孔之細胞隨後過渡至抗體回收期。
實例4 ：具有期望抗原特異性之單一抗體產生性B細胞的回收
若干細胞單離自含有抗原特異性B細胞之純株群(根據實例2或3製造)之孔，該細胞群係分泌單一抗體序列。然後經單離之細胞經檢定分析來單離單一抗體分泌性細胞。迪諾(Dynal)鏈絲菌抗生物素珠粒於經過緩衝之培養基下塗覆以生物素化之目標抗原，製備可用於細胞存活之含抗原微珠粒。其次，載有抗原之珠粒、得自陽性孔之抗體產生性細胞、及經螢光素異硫氰酸酯(FITC)標記之抗宿主H&L IgG抗體(如所記，宿主可為任一種哺乳動物宿主，例如兔、小鼠、大鼠等)於37℃共同培養。然後此混合物以一整份再度滴量至載玻片上，各整份平均具有單一抗體產生性B細胞。然後藉由螢光顯微術來檢測抗原特異性抗體分泌性細胞。由於珠粒上結合有抗原，所分泌的抗體局部集中在相鄰的珠粒上，基於強螢光信號而提供局部化資訊。透過與分泌 細胞相鄰之所形成之抗體－抗原複體藉FITC檢測，可識別出抗體分泌性細胞。然後使用微操縱器回收於此複體中心的單一細胞。細胞於衣本朵夫(eppendorf) PCR試管內於－80℃短期冷凍儲存至開始抗體序列的回收。
實例5 ：由抗原特異性B細胞回收抗體序列
使用基於RT－PCR之組合方法，由根據實例4所製造之單一離體B細胞或從根據實例2所得之純株B細胞群單離之抗原特異性B細胞回收抗體序列。引子係設計成於目標免疫球蛋白基因之保留區及恆定區(重及輕)諸如兔免疫球蛋白序列配對，使用二步驟式巢套PCR回收步驟來獲得抗體序列。得自各孔之擴大區分析來回收及分析尺寸之完好。然後所得片段以AluI消化來決定序列純株之指紋。相同序列於電泳分析顯示共通分段樣式。顯然證實細胞純株性的此種共通分段樣式即使於原先接種高達1000個細胞/孔之各孔內通常可觀察得。然後原先重鏈及輕鏈之擴大區片段使用HindIII及XhoI或HindIII及BsiwI進行限剪酶消化，製備用於選殖用之各片DNA。然後所得消化接合入表現載體，轉形入細菌用於質體繁殖及製造。選擇群落用於決定序列之特徵。
實例6 ：具有期望之抗原特異性及/或功能性質之單株抗體之重組製造
對含有單一單株抗體之各孔，確立正確全長抗體序列，使用奎金(Qiagen)固相方法準備迷你製品DNA。然後此DNA用來轉移感染哺乳類細胞而製造重組全長抗體。測試 抗體粗產物之抗原辨識及功能性質，驗證原先之特性出現於重組抗體蛋白質。若屬適當，完成大規模暫時性哺乳類轉移感染，透過蛋白質A親和層析術純化抗體。Kd係使用標準方法(例如拜雅克(Biacore))及強度檢定分析中之IC50評估。
實例7 ：結合期望之抗原諸如HuTNF－α或IL－6之抗體之製備
經由使用此處所述抗體選擇方案，可產生一種具有對TNF－α或IL－6或其它期望之抗原有強力功能拮抗作用之抗體集合。該等抗體有多種不同之抗原決定部位，如此可用作為靶定於先前識別用於特定抗原之抗原決定部位，諸如於Hu－TNF－α之情況下為TNF－α抗原決定部位諸如雷米卡(Remicade)(茵福西馬(infliximab))之替代品或輔助品。
於IL－6或TNF－α之特定情況下，可採用篩檢方法來識別結合其它IL－6或TNF－α抗原決定部位之抗體，同時保有顯著功能拮抗作用。例如於TNF－α之情況下，於一次抗原識別篩檢後，陽性BCC孔測試對TNF－α之功能拮抗性以及測試抗原決定部位之競爭性，例如與茵福西馬之競爭性，經由福特拜爾(ForteBio)奧特泰(Octet)抗體－TNF－α結合競爭研究，可建立獨特抗原決定部位辨識作用。尋找顯示功能活性且缺乏競爭之BCC孔，回收此等孔內所存在之抗體之編碼序列。大部分回收之序列將顯示原先目標特性：強力抗原辨識、功能拮抗、及獨特抗原決定部位辨識。如此，所得抗體集合建立與強力功能拮抗作用相關聯之多個新穎抗原決定部位區。於以引用方式併入此處之臨時專利申請案 中，使用IL－6驗證得類似的結果。
免疫接種策略： 兔可使用TNF－α(R&D # 210－TA)及對人IL－6免疫接種，如美國臨時專利申請案第60/924,551及60/924,551號所述，申請日2007年5月21日，全文以引用方式併入此處。
抗體選擇效價評估 藉此處所述方案可對TNF－α或人IL－6決定抗原辨識檢定分析。
功能效價評估 試樣之功能活性係如所引述之臨時專利申請案的說明測定。例如，於個別TNF－α之情況下，於圓底96孔孔板內，以1：100倍稀釋(於所述培養基)接著為跨該孔板為1：10倍稀釋(第2－10欄，第11欄為只有TNF－α對照組之培養基)添加血清試樣，每孔50微升，5次重複(列B－F，列G為只用於背景對照之培養基)。含TNF－α為終EC50(先前對每批測定之濃度)4倍濃度及1微克/毫升放線黴素D之50微升/孔培養基添加至各試樣孔，列F除外。孔板於37℃培養1小時。
於1小時時，50微升血清/抗原複體及對照組移至含固體密度50微升/孔反應者細胞之96孔平底孔板(終體積：100微升/孔)及於37℃培養24小時。(第1至12欄及列A至列H填充以200微升培養基以防止蒸散而造成邊緣效應)。
於24小時時，每孔20微升細胞效價96(CellTiter96)試劑(普米嘉公司(Promega))遵照製造商方案添加至全部測試孔，孔板於37℃培養2小時。於2小時時，孔板溫和振搖來 允許測試孔之均質化。孔板於490奈米波長讀取。使用Graph Pad Prizm，OD相對於稀釋度作圖(使用非線性S字形劑量/反應曲線)及決定功能效價。
組織收穫 收穫兔脾臟、淋巴結、及全血，如前摘臨時專利申請案所述方式處理及冷凍。
B細胞培養(BCC) B細胞培養係如以引用方式併入此處之臨時專利申請案所述製備。
抗原識別篩檢 抗原識別篩檢係如前文說明以單點進行。
功能活性篩檢 功能活性篩檢係如所引用之臨時專利申請案所述進行。例如於TNF－α之情況下係藉WEHI胞毒性檢定分析測定。得自母板之上清液於經過TNF－α刺激之WEHI胞毒性檢定分析(如前文說明)以單點測試。上清液係如其中之說明淨測試。
重組抗體之二次功能活性檢定分析：藉經以huTNF－α處理之HUVEC細胞阻斷IL－6之表現 TNF－α或IL－6特異性檢定分析可如前述臨時專利申請案所述方式執行。例如於TNF－α之情況下，人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)例行性維持於內皮生長培養基(EGM)及適當HUVEC補充品(坎布拉斯(Cambrex))。於檢定分析當天，藉崔旁藍(trypan blue)測定HUVEC之存活能力。細胞以5E05/ 毫升再懸浮於檢定分析所需之需要量培養基(100微升/孔)。細胞接種於96孔平底培養孔板之中孔，200微升培養基添加至外側各孔以防蒸散。孔板於37℃培養24小時。
於24小時時，以期望最終濃度之4倍濃度於EGM做出適當抗體稀釋液。(起始抗體濃度為1微克/毫升；跨該孔板執行1：3倍稀釋，只有最末列除外)。等體積rhuTNF－α於EGM(期望終濃度之4倍濃度)添加至各孔。孔板於37℃培養1小時來形成抗體/抗原複體。於1小時時，由HUVEC培養孔板取出50微升培養基拋棄。加入50微升抗體－抗原混合物，孔板於37℃培養48小時。含括標準陽性對照及陰性對照。
於48小時時，經過調理之培養基之IL－6濃度藉ELISA檢定分析。免疫接種物(Immulon)板以50微升/孔之1微克/毫升山羊抗－huIL－6塗覆，於4℃隔夜或於室溫歷1小時時間。孔板於孔板洗滌機於PBS＋0.5%吞恩(Tween)20洗滌(200微升/孔；3次)。孔板於室溫以200微升/孔FGS阻斷1小時。阻斷溶液抽取去除，將孔板打點。設定huIL－6標準，始於1微克/毫升及跨孔板稀釋1：3倍(全部稀釋液皆係於FSG進行)。得自HUVEC培養之試樣添加至標準曲線下方各孔及於室溫培養1小時。重複洗滌。1微克/毫升經人化之抗體(anti－huIL－6)以50微升/孔添加至孔板及於室溫培養1小時。重複洗滌。於1：5000倍稀釋之二次抗人IgG Fc HRP以50微升/孔添加及於室溫培養45分鐘。重複洗滌。檢定分析使用50微升/孔3,3’,5,5’－四甲基聯苯胺(TMB)顯影至少5分鐘。以50微升/孔鹽酸中止反應，孔板於孔板讀取器於450奈米讀 取。資料使用Graph Pad Prizm分析。
B細胞回收 對huIL－6及huTNF－α之焦點方案係如前摘臨時專利申請案所述進行。
實例8 ：根據本發明之經人化之兔抗體(IL－6特異性)之實例之製備
如引用之臨時專利申請案所述且根據先前各實例所製造之衍生自兔抗－huIL－6抗體之重鏈及輕鏈使用此處所述且如第1圖示意顯示之人化策略經人化。兔抗－IL－6抗體實例之可變輕鏈區(含有本IL－6特異性抗體之由FR1至FR3終端之一區)使用BLAST對人生殖系列序列存庫篩檢，鑑定出相對於本存庫中之其它人生殖系列序列三個有顯著同源性之生殖系列序列，亦即V1－6、V1－27及V1－5。發現生殖系列序列V1－6具有與兔輕鏈可變序列之最大序列相同度，因而選用作為製造第3圖中標示為「aggres」及「consrv」之兩種經人化之輕鏈版本之起始物料。此等序列之主要衍生方式係經由以得自兔親代抗－IL－6 CDR1區及CDR2區之特定選擇性決定殘基，修改V1－6人生殖系列序列，如該圖上半所示，進一步摻混少數(consrv版本)或未摻混施體(兔)FR殘基(aggres版本)。特定言之，如第3圖所示，製造一個經人化之輕鏈(於該圖中稱作為「aggres」)，其中未摻混兔FR殘基，經由V1－6序列融合至兔輕鏈CDR3及兔輕鏈FR4序列之同源性人FR4序列。製造同一幅圖中顯示為「consrv」之另一個版本，含有得自兔輕鏈FR1之兩個FR殘基。
使用類似之人化方法且如第1圖示意說明，含有CDR1及CDR2及相關FR區之較佳抗－IL－6抗體之可變區用來使用BLAST法對人生殖系列序列存庫篩檢，俾便識別最具有同源性之人生殖系列序列。如圖所示，本篩檢識別含有第2圖之序列之三個同源人生殖系列序列V3－66、V3－53及V3－23。最高同源性之人生殖系列序列V3－23再度用作為起始物料製造兩個經人化之版本，該人化版本同樣係經由摻混有利於相對應之人CDR1及CDR2殘基之重鏈之CDR1區及CDR2區之特定選擇性決定殘基，進一步摻混少數分開的兔FR殘基且融合至兔CDR3區及同源性人FR4區來修改。再度被稱作為「aggres」及「consrv」之所得兩個經人化之重鏈顯示於第3圖底。基於已對齊的序列，可知此等經人化之版本差異只在於若干兔FR3殘基存在於「consrv」版本而不存在於「aggres」版本。此二序列比較人生殖系列序列只有相當少的幾個殘基不同，因而於人體應該實質上不具有免疫原性。
發現含「aggres」經人化之重鏈及輕鏈及「consrv」之經人化之抗IL－6抗體具有IL－6結合親和力極為近似親代兔抗體。如此驗證本發明之經人化策略之功效，進一步提示此等方法可用來製造具有序列極為「類似人類」，實質上於人體不具有免疫原性之對不同抗原之抗體。
實例9 ：根據本發明所製造之經人化之兔抗體(hIL－6及hTNF－α特異性)之實例保有的親和力性質
如後文討論，本發明之顯著優點為本人化方法可重複再現性獲得具有高度親和力之經人化之抗體，亦即該結合 親和力係可媲美親代兔抗體或衍生自其中之嵌合性抗體。以第4圖之解離常數舉例說明。於第4圖中，兩種不同兔嵌合型抗－hIL－6抗體之解離常數分別可媲美皆使用本發明方法所製造之衍生自其中之3種及2種不同經人化之抗體。由本圖資料可知，於大部分情況下由嵌合型變異株至經人化之變異株，解離常數粗略不變。於最惡劣情況下，解離常數粗略降低3.5倍。此點與其它人化方法相反，其它人化方法典型獲得抗原結合親和力之實質上喪失，亦即比該人化版本相關之親代之結合親和力喪失一個次羃幅度或以上。
此外，同樣第4圖含有兩種不同嵌合型兔抗－hTNF－α抗體與使用本發明之人化方法由其中衍生得之經經人化之抗體之解離常數之資料比較。同理，親代兔衍生之嵌合型抗－hTNF－α抗體與經人化之抗體之解離常數實質上相同。此等結果驗證本人化方法之重複再現性，亦即可廣泛應用於人化不同兔抗體序列及人化不同抗原之特異性抗體。
實例10 ：根據本發明所製造之經人化之兔抗體(hIL－6及hTNF－α特異性)之實例保有的功能性質
如前一個實例所示，根據本發明製造之經人化之抗體具有可媲美其衍生自其中之該親代兔抗體之抗原結合常數。基於此點，預測親代嵌合型抗體及由其中衍生之經人化之變異株之拮抗性質也同樣可相媲美。實際上證實發明人之期待。
如第5圖及第6圖所示，發明人比較兩種不同衍生自兔抗－IL－6抗體之嵌合型抗體與兩種不同衍生自其中之經經人 化之抗體之拮抗性質。於檢測此等抗－hIL－6抗體對hIL－6依賴型細胞增生之效應之檢定分析，此乃檢測拮抗活性之為人所接受的功能檢定分析中比較拮抗作用。由第5圖及第6圖之資料可知，對由其中衍生之嵌合型抗體及經人化之抗體之hIL－6依賴型細胞增生抑制作用實質上相同。(細胞增生資料曲線於不同抗體濃度為實質上重疊或極為類似)。
此外，如第7圖所示，發明人比較衍生自兔抗－hTNF－α抗體之hTNF－α特異性嵌合型抗體與使用本人化方法所製造之衍生自其中之經經人化之抗體之拮抗性質。於檢測此等抗－hTNF－α抗體對hTNF－α依賴型胞毒性效應，此乃檢測抗－hTNF－α抗體拮抗活性之為眾人所接受之功能檢定分析中比較拮抗作用。由第7圖資料可知對衍生自其中之嵌合型抗體及經人化之抗－hTNF－α抗體之hTNF－α依賴型胞毒性抑制作用極為類似。(胞毒性資料於不同抗體濃度實質上重疊或極為類似)。
此等實例意圖舉例說明本發明及其特有之優點。實際上，本人化方法可用於人化對期望之抗原具有特異性之任何兔抗體(或密切相關種屬之抗體)。較佳此等抗體對適合用於人體治療之目標抗原具有特異性且對此目標抗原具有高度親和力。例如此等抗體特別包括美國專利申請案第60/924,550及60/924,551號及PCT申請案(申請日2008年5月21日分別具有代理人檔號67858.901902及67858.701802，發明名稱IL－6抗體及其用途以及抗－TNF－α抗體，該等臨時專利申請案及PCT申請案全文以引用方式併入此處，包括其 中報告之全部抗體序列)所揭示之任何兔抗體重鏈及輕鏈序列。此外，為了進一步舉例說明本案請求之人化方法及藉此獲得之經人化之抗體產物，二PCT申請案之序列表置於申請專利部分前方。此等序列表含有根據本發明方法所製造之對IL－6及TNF－α具有特異性之兔抗體序列及經人化之版本。
進一步，本發明之人化方案可用於人化任何可用之兔重鏈或輕鏈序列，亦即任何期望之抗原諸如多肽、蛋白質、糖蛋白、半抗原、碳水化合物等。較佳抗原為人抗原或得自感染人體或造成人體生病或與人體生病有關之作用因子之抗原。較佳，兔抗體係衍生自藉前述ABS篩檢方案所分離之衍生自兔B細胞之抗體。
第1圖含有示意顯示本發明之兔抗體人化方案之流程圖。
第2圖含有特定實例可變輕鏈多肽序列及可變重鏈多肽序列之對齊，亦即抗原特異性兔抗體可變輕鏈多肽及可變重鏈多肽序列，及於人生殖系列序列中識別的同源性人序列及使用本發明之人化方案所製造之最終經人化之序列。骨架區於其中識別為FR1－FR4。互補性決定區(CDR)識別為CDR1－CDR3。胺基酸殘基之編號係如該圖所示且遵照Kabat編號方案。初始兔序列於本圖中及後文中對兔可變輕鏈多肽序列及可變重鏈多肽序列分別稱作為RbtVL及BbtVh。於人生殖系列序列存庫中識別之由FR1起點跨至FR3終點之最類似的人生殖系列抗體序列中之三種對齊於 兔序列下方。被考慮為最為類似兔序列之人序列緊接在兔序列下方。於本發明之人化策略之本實例中，最類似之人生殖系列序列為輕鏈之L12A及重鏈之3－64－04。人CDR3序列並未顯示。最靠近的人骨架4序列對齊於兔骨架4序列下方。縱虛線指示兔殘基與相同位置之人殘基中之一者或多者相同之一個殘基。粗體字殘基指示於該位置之人殘基係與於相同位置之兔殘基相同。終經人化之序列對可變輕序列及可變重序列分別稱作為VLh及VHh。於本圖中，下方劃線殘基指示該殘基係與該位置之兔殘基相同，但與三列對齊的人序列中於該位置之人殘基不同。
第3圖同樣含有衍生自IL－6特異性抗體之相同親代兔可變重鏈及輕鏈序列、同源性人生殖系列序列及使用本人化策略由其中所製造之兩個經人化之可變重鏈及輕鏈序列之對齊。特定言之，本圖含有原先兔輕鏈及重鏈序列、三個同源性人生殖系列序列及兩個經人化之重鏈序列及兩個經人化之輕鏈序列於此處稱作為「aggres」及「consrv」。由對齊可知於有或無特異性兔骨架殘基之存在之下，經人化之「aggres」與「consrv」序列彼此不同。
第4圖比較嵌合體相對於使用本發明之人化程序所製造之衍生自hIL－6及TNF－α特異性兔抗體之經經人化之抗體之解離常數。
第5圖含有實驗，比較藉使用本發明之人化程序所製造之衍生自特定兔抗－IL－6抗體之不同經經人化之抗體對IL－6相依性T1165細胞增生之拮抗作用。
第6圖含有實驗，比較藉使用本發明之人化程序所製造之衍生自特定兔抗－hIL－6抗體之不同經經人化之抗體對hIL－6相依性T1165細胞增生之拮抗作用。
第7圖含有一個實驗比較藉衍生自兔抗－hTNF－α抗體之嵌合體抗－TNF－α抗體與根據本發明之人化程序所製造之衍生自其中之經人化之抗體的hTNF－α相依性胞毒性之拮抗作用。
<110> 艾爾德生物控股有限責任公司 布里斯托爾-邁爾斯史庫柏公司
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<150> 60/924,550
<151> 2007-05-21
<160> 1067
<210> 1
<211> 233
<212> PRT
<213> 人類
<400> 1
Figure TWI609965BD00004
Figure TWI609965BD00005
<210> 2 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1輕鏈可變功能部位<400> 2
Figure TWI609965BD00006
<210> 3 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1重鏈可變功能部位<400> 3
Figure TWI609965BD00007
<210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1輕鏈CDR 1 <400> 4
Figure TWI609965BD00008
<210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1輕鏈CDR 2 <400> 5
Figure TWI609965BD00009
<210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1輕鏈CDR 3 <400> 6
Figure TWI609965BD00010
<210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1重鏈CDR 1 <400> 7
Figure TWI609965BD00011
<210> 8 <211> 16 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1重鏈CDR 2 <400> 8
Figure TWI609965BD00012
<210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1重鏈CDR 3 <400> 9
Figure TWI609965BD00013
<210> 10 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1輕鏈可變功能部位<400> 10
Figure TWI609965BD00014
<210> 11 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1重鏈可變功能部位<400> 11
Figure TWI609965BD00015
<210> 12 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1輕鏈CDR 1 <400> 12
Figure TWI609965BD00016
<210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1輕鏈CDR 2 <400> 13
Figure TWI609965BD00017
<210> 14 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1輕鏈CDR 3 <400> 14
Figure TWI609965BD00018
<210> 15 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1重鏈CDR 1 <400> 15
Figure TWI609965BD00019
<210> 16 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1重鏈CDR 2 <400> 16
Figure TWI609965BD00020
<210> 17 <211> 24 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab1重鏈CDR 3 <400> 17
Figure TWI609965BD00021
<210> 18 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2輕鏈可變功能部位<400> 18
Figure TWI609965BD00022
<210> 19 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2重鏈可變功能部位<400> 19
Figure TWI609965BD00023
<210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2輕鏈CDR 1 <400> 20
Figure TWI609965BD00024
<210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2輕鏈CDR 2 <400> 21
Figure TWI609965BD00025
<210> 22 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2輕鏈CDR 3 <400> 22
Figure TWI609965BD00026
<210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2重鏈CDR 1 <400> 23
Figure TWI609965BD00027
<210> 24 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2重鏈CDR 2 <400> 24
Figure TWI609965BD00028
<210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2重鏈CDR 3 <400> 25
Figure TWI609965BD00029
<210> 26 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2輕鏈可變功能部位<400> 26
Figure TWI609965BD00030
Figure TWI609965BD00031
<210> 27 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2重鏈可變功能部位<400> 27
Figure TWI609965BD00032
<210> 28 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2輕鏈CDR 1 <400> 28
Figure TWI609965BD00033
<210> 29 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2輕鏈CDR 2 <400> 29
Figure TWI609965BD00034
<210> 30 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2輕鏈CDR 3 <400> 30
Figure TWI609965BD00035
<210> 31 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2重鏈CDR 1 <400> 31
Figure TWI609965BD00036
<210> 32 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2重鏈CDR 2 <400> 32
Figure TWI609965BD00037
<210> 33 <211> 24 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab2重鏈CDR 3 <400> 33
Figure TWI609965BD00038
<210> 34 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3輕鏈可變功能部位<400> 34
Figure TWI609965BD00039
Figure TWI609965BD00040
<210> 35 <211> 127 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3重鏈可變功能部位<400> 35
Figure TWI609965BD00041
Figure TWI609965BD00042
<210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3輕鏈CDR 1 <400> 36
Figure TWI609965BD00043
<210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3輕鏈CDR 2 <400> 37
Figure TWI609965BD00044
<210> 38 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3輕鏈CDR 3 <400> 38
Figure TWI609965BD00045
<210> 39 <211> 5 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3重鏈CDR 1 <400> 39
Figure TWI609965BD00046
<210> 40 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3重鏈CDR 2 <400> 40
Figure TWI609965BD00047
<210> 41 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3重鏈CDR 3 <400> 41
Figure TWI609965BD00048
<210> 42 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3輕鏈可變功能部位<400> 42
Figure TWI609965BD00049
<210> 43 <211> 381 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3重鏈可變功能部位<400> 43
Figure TWI609965BD00050
Figure TWI609965BD00051
<210> 44 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3輕鏈CDR 1 <400> 44
Figure TWI609965BD00052
<210> 45 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3輕鏈CDR 2 <400> 45
Figure TWI609965BD00053
<210> 46 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3輕鏈CDR 3 <400> 46
Figure TWI609965BD00054
<210> 47 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3重鏈CDR 1 <400> 47
Figure TWI609965BD00055
<210> 48 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3重鏈CDR 2 <400> 48
Figure TWI609965BD00056
<210> 49 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab3重鏈CDR 3 <400> 49
Figure TWI609965BD00057
<210> 50 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4輕鏈可變功能部位<400> 50
Figure TWI609965BD00058
Figure TWI609965BD00059
<210> 51 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4重鏈可變功能部位<400> 51
Figure TWI609965BD00060
Figure TWI609965BD00061
<210> 52 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4輕鏈CDR 1 <400> 52
Figure TWI609965BD00062
<210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4輕鏈CDR 2 <400> 53
Figure TWI609965BD00063
<210> 54 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4輕鏈CDR 3 <400> 54
Figure TWI609965BD00064
<210> 55 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4重鏈CDR 1 <400> 55
Figure TWI609965BD00065
<210> 56 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4重鏈CDR 2 <400> 56
Figure TWI609965BD00066
<210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4重鏈CDR 3 <400> 57
Figure TWI609965BD00067
<210> 58 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4輕鏈可變功能部位<400> 58
Figure TWI609965BD00068
<210> 59 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4重鏈可變功能部位 <400> 59
Figure TWI609965BD00069
<210> 60 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4輕鏈CDR 1 <400> 60
Figure TWI609965BD00070
<210> 61 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4輕鏈CDR 2 <400> 61
Figure TWI609965BD00071
<210> 62 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4輕鏈CDR 3 <400> 62
Figure TWI609965BD00072
<210> 63 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4重鏈CDR 1 <400> 63
Figure TWI609965BD00073
<210> 64 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4重鏈CDR 2 <400> 64
Figure TWI609965BD00074
<210> 65 <211> 27 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab4重鏈CDR 3 <400> 65
Figure TWI609965BD00075
<210> 66 <211> 122 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5輕鏈可變功能部位<400> 66
Figure TWI609965BD00076
<210> 67 <211> 120 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5重鏈可變功能部位 <400> 67
Figure TWI609965BD00077
<210> 68 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5輕鏈CDR 1 <400> 68
Figure TWI609965BD00078
<210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5輕鏈CDR 2 <400> 69
Figure TWI609965BD00079
<210> 70 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5輕鏈CDR 3 <400> 70
Figure TWI609965BD00080
<210> 71 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5重鏈CDR 1 <400> 71
Figure TWI609965BD00081
<210> 72 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5重鏈CDR 2 <400> 72
Figure TWI609965BD00082
<210> 73 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5重鏈CDR 3 <400> 73
Figure TWI609965BD00083
<210> 74 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5輕鏈可變功能部位<400> 74
Figure TWI609965BD00084
Figure TWI609965BD00085
<210> 75 <211> 360 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5重鏈可變功能部位<400> 75
Figure TWI609965BD00086
<210> 76 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5輕鏈CDR 1 <400> 76
Figure TWI609965BD00087
<210> 77 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5輕鏈CDR 2 <400> 77
Figure TWI609965BD00088
<210> 78 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5輕鏈CDR 3 <400> 78
Figure TWI609965BD00089
<210> 79 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5重鏈CDR 1 <400> 79
Figure TWI609965BD00090
<210> 80 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5重鏈CDR 2 <400> 80
Figure TWI609965BD00091
<210> 81 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab5重鏈CDR 3 <400> 81
Figure TWI609965BD00092
<210> 82 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6輕鏈可變功能部位<400> 82
Figure TWI609965BD00093
<210> 83 <211> 126 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6重鏈可變功能部位<400> 83
Figure TWI609965BD00094
<210> 84 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6輕鏈CDR 1 <400> 84
Figure TWI609965BD00095
<210> 85 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6輕鏈CDR 2 <400> 85
Figure TWI609965BD00096
<210> 86 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6輕鏈CDR 3 <400> 86
Figure TWI609965BD00097
<210> 87 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6重鏈CDR 1 <400> 87
Figure TWI609965BD00098
<210> 88 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6重鏈CDR 2 <400> 88
Figure TWI609965BD00099
<210> 89 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6重鏈CDR 3 <400> 89
Figure TWI609965BD00100
<210> 90 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6輕鏈可變功能部位<400> 90
Figure TWI609965BD00101
Figure TWI609965BD00102
<210> 91 <211> 378 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6重鏈可變功能部位<400> 91
Figure TWI609965BD00103
<210> 92 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6輕鏈CDR 1 <400> 92
Figure TWI609965BD00104
<210> 93 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6輕鏈CDR 2 <400> 93
Figure TWI609965BD00105
<210> 94 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6輕鏈CDR 3 <400> 94
Figure TWI609965BD00106
<210> 95 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6重鏈CDR 1 <400> 95
Figure TWI609965BD00107
<210> 96 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6重鏈CDR 2 <400> 96
Figure TWI609965BD00108
<210> 97 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab6重鏈CDR 3 <400> 97
Figure TWI609965BD00109
<210> 98 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7輕鏈可變功能部位<400> 98
Figure TWI609965BD00110
Figure TWI609965BD00111
<210> 99 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7重鏈可變功能部位<400> 99
Figure TWI609965BD00112
Figure TWI609965BD00113
<210> 100 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7輕鏈CDR 1 <400> 100
Figure TWI609965BD00114
<210> 101 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7輕鏈CDR 2 <400> 101
Figure TWI609965BD00115
<210> 102 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7輕鏈CDR 3 <400> 102
Figure TWI609965BD00116
<210> 103 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7重鏈CDR 1 <400> 103
Figure TWI609965BD00117
<210> 104 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7重鏈CDR 2 <400> 104
Figure TWI609965BD00118
<210> 105 <211> 8 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7重鏈CDR 3 <400> 105
Figure TWI609965BD00119
<210> 106 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7輕鏈可變功能部位<400> 106
Figure TWI609965BD00120
<210> 107 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7重鏈可變功能部位<400> 107
Figure TWI609965BD00121
Figure TWI609965BD00122
<210> 108 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7輕鏈CDR 1 <400> 108
Figure TWI609965BD00123
<210> 109 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7輕鏈CDR 2 <400> 109
Figure TWI609965BD00124
<210> 110 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7輕鏈CDR 3 <400> 110
Figure TWI609965BD00125
<210> 111 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7重鏈CDR 1 <400> 111
Figure TWI609965BD00126
<210> 112 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7重鏈CDR 2 <400> 112
Figure TWI609965BD00127
<210> 113 <211> 24 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab7重鏈CDR 3 <400> 113
Figure TWI609965BD00128
<210> 114 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8輕鏈可變功能部位<400> 114
Figure TWI609965BD00129
Figure TWI609965BD00130
<210> 115 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8重鏈可變功能部位<400> 115
Figure TWI609965BD00131
Figure TWI609965BD00132
<210> 116 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8輕鏈CDR 1 <400> 116
Figure TWI609965BD00133
<210> 117 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8輕鏈CDR 2 <400> 117
Figure TWI609965BD00134
<210> 118 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8輕鏈CDR 3 <400> 118
Figure TWI609965BD00135
<210> 119 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8重鏈CDR 1 <400> 119
Figure TWI609965BD00136
<210> 120 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8重鏈CDR 2 <400> 120
Figure TWI609965BD00137
<210> 121 <211> 8 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8重鏈CDR 3 <400> 121
Figure TWI609965BD00138
<210> 122 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8輕鏈可變功能部位<400> 122
Figure TWI609965BD00139
<210> 123 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8重鏈可變功能部位 <400> 123
Figure TWI609965BD00140
<210> 124 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8輕鏈CDR 1 <400> 124
Figure TWI609965BD00141
<210> 125 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8輕鏈CDR 2 <400> 125
Figure TWI609965BD00142
<210> 126 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8輕鏈CDR 3 <400> 126
Figure TWI609965BD00143
<210> 127 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8重鏈CDR 1 <400> 127
Figure TWI609965BD00144
<210> 128 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8重鏈CDR 2 <400> 128
Figure TWI609965BD00145
<210> 129 <211> 24 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab8重鏈CDR 3 <400> 129
Figure TWI609965BD00146
<210> 130 <211> 122 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9輕鏈可變功能部位<400> 130
Figure TWI609965BD00147
<210> 131 <211> 120 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9重鏈可變功能部位 <400> 131
Figure TWI609965BD00148
<210> 132 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9輕鏈CDR 1 <400> 132
Figure TWI609965BD00149
<210> 133 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9輕鏈CDR 2 <400> 133
Figure TWI609965BD00150
<210> 134 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9輕鏈CDR 3 <400> 134
Figure TWI609965BD00151
<210> 135 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9重鏈CDR 1 <400> 135
Figure TWI609965BD00152
<210> 136 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9重鏈CDR 2 <400> 136
Figure TWI609965BD00153
<210> 137 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9重鏈CDR 3 <400> 137
Figure TWI609965BD00154
<210> 138 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9輕鏈可變功能部位<400> 138
Figure TWI609965BD00155
Figure TWI609965BD00156
<210> 139 <211> 360 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9重鏈可變功能部位<400> 139
Figure TWI609965BD00157
<210> 140 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9輕鏈CDR 1 <400> 140
Figure TWI609965BD00158
<210> 141 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9輕鏈CDR 2 <400> 141
Figure TWI609965BD00159
<210> 142 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9輕鏈CDR 3 <400> 142
Figure TWI609965BD00160
<210> 143 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9重鏈CDR 1 <400> 143
Figure TWI609965BD00161
<210> 144 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9重鏈CDR 2 <400> 144
Figure TWI609965BD00162
<210> 145 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab9重鏈CDR 3 <400> 145
Figure TWI609965BD00163
<210> 146 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10輕鏈可變功能部位<400> 146
Figure TWI609965BD00164
<210> 147 <211> 120 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10重鏈可變功能部位<400> 147
Figure TWI609965BD00165
<210> 148 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10輕鏈CDR 1 <400> 148
Figure TWI609965BD00166
<210> 149 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10輕鏈CDR 2 <400> 149
Figure TWI609965BD00167
<210> 150 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10輕鏈CDR 3 <400> 150
Figure TWI609965BD00168
<210> 151 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10重鏈CDR 1 <400> 151
Figure TWI609965BD00169
<210> 152 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10重鏈CDR 2 <400> 152
Figure TWI609965BD00170
<210> 153 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10重鏈CDR 3 <400> 153
Figure TWI609965BD00171
<210> 154 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10輕鏈可變功能部位<400> 154
Figure TWI609965BD00172
Figure TWI609965BD00173
<210> 155 <211> 360 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10重鏈可變功能部位<400> 155
Figure TWI609965BD00174
<210> 156 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10輕鏈CDR 1 <400> 156
Figure TWI609965BD00175
<210> 157 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10輕鏈CDR 2 <400> 157
Figure TWI609965BD00176
<210> 158 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10輕鏈CDR 3 <400> 158
Figure TWI609965BD00177
<210> 159 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10重鏈CDR 1 <400> 159
Figure TWI609965BD00178
<210> 160 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10重鏈CDR 2 <400> 160
Figure TWI609965BD00179
<210> 161 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab10重鏈CDR 3 <400> 161
Figure TWI609965BD00180
<210> 162 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11輕鏈可變功能部位<400> 162
Figure TWI609965BD00181
Figure TWI609965BD00182
<210> 163 <211> 120 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11重鏈可變功能部位<400> 163
Figure TWI609965BD00183
Figure TWI609965BD00184
<210> 164 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11輕鏈CDR 1 <400> 164
Figure TWI609965BD00185
<210> 165 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11輕鏈CDR 2 <400> 165
Figure TWI609965BD00186
<210> 166 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11輕鏈CDR 3 <400> 166
Figure TWI609965BD00187
<210> 167 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11重鏈CDR 1 <400> 167
Figure TWI609965BD00188
<210> 168 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11重鏈CDR 2 <400> 168
Figure TWI609965BD00189
<210> 169 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11重鏈CDR 3 <400> 169
Figure TWI609965BD00190
<210> 170 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11輕鏈可變功能部位<400> 170
Figure TWI609965BD00191
<210> 171 <211> 360 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11重鏈可變功能部位<400> 171
Figure TWI609965BD00192
<210> 172 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11輕鏈CDR 1 <400> 172
Figure TWI609965BD00193
<210> 173 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11輕鏈CDR 2 <400> 173
Figure TWI609965BD00194
<210> 174 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11輕鏈CDR 3 <400> 174
Figure TWI609965BD00195
<210> 175 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11重鏈CDR 1 <400> 175
Figure TWI609965BD00196
<210> 176 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11重鏈CDR 2 <400> 176
Figure TWI609965BD00197
<210> 177 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab11重鏈CDR 3 <400> 177
Figure TWI609965BD00198
<210> 178 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12輕鏈可變功能部位<400> 178
Figure TWI609965BD00199
Figure TWI609965BD00200
<210> 179 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12重鏈可變功能部位<400> 179
Figure TWI609965BD00201
Figure TWI609965BD00202
<210> 180 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12輕鏈CDR 1 <400> 180
Figure TWI609965BD00203
<210> 181 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12輕鏈CDR 2 <400> 181
Figure TWI609965BD00204
<210> 182 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12輕鏈CDR 3 <400> 182
Figure TWI609965BD00205
<210> 183 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12重鏈CDR 1 <400> 183
Figure TWI609965BD00206
<210> 184 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12重鏈CDR 2 <400> 184
Figure TWI609965BD00207
<210> 185 <211> 15 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12重鏈CDR 3 <400> 185
Figure TWI609965BD00208
<210> 186 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12輕鏈可變功能部位<400> 186
Figure TWI609965BD00209
<210> 187 <211> 384 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12重鏈可變功能部位<400> 187
Figure TWI609965BD00210
Figure TWI609965BD00211
<210> 188 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12輕鏈CDR 1 <400> 188
Figure TWI609965BD00212
<210> 189 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12輕鏈CDR 2 <400> 189
Figure TWI609965BD00213
<210> 190 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12輕鏈CDR 3 <400> 190
Figure TWI609965BD00214
<210> 191 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12重鏈CDR 1 <400> 191
Figure TWI609965BD00215
<210> 192 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12重鏈CDR 2 <400> 192
Figure TWI609965BD00216
<210> 193 <211> 45 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab12重鏈CDR 3 <400> 193
Figure TWI609965BD00217
<210> 194 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13輕鏈可變功能部位 <400> 194
Figure TWI609965BD00218
<210> 195 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13重鏈可變功能部位<400> 195
Figure TWI609965BD00219
Figure TWI609965BD00220
<210> 196 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13輕鏈CDR 1 <400> 196
Figure TWI609965BD00221
<210> 197 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13輕鏈CDR 2 <400> 197
Figure TWI609965BD00222
<210> 198 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13輕鏈CDR 3 <400> 198
Figure TWI609965BD00223
<210> 199 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13重鏈CDR 1 <400> 199
Figure TWI609965BD00224
<210> 200 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13重鏈CDR 2 <400> 200
Figure TWI609965BD00225
<210> 201 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13重鏈CDR 3 <400> 201
Figure TWI609965BD00226
<210> 202 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13輕鏈可變功能部位<400> 202
Figure TWI609965BD00227
<210> 203 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13重鏈可變功能部位<400> 203
Figure TWI609965BD00228
<210> 204 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13輕鏈CDR 1 <400> 204
Figure TWI609965BD00229
<210> 205 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13輕鏈CDR 2 <400> 205
Figure TWI609965BD00230
<210> 206 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13輕鏈CDR 3 <400> 206
Figure TWI609965BD00231
<210> 207 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13重鏈CDR 1 <400> 207
Figure TWI609965BD00232
<210> 208 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13重鏈CDR 3 <400> 208
Figure TWI609965BD00233
<210> 209 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab13重鏈CDR 3 <400> 209
Figure TWI609965BD00234
<210> 210 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14輕鏈可變功能部位<400> 210
Figure TWI609965BD00235
<210> 211 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14重鏈可變功能部位<400> 211
Figure TWI609965BD00236
<210> 212 <211> 11 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14輕鏈CDR 1 <400> 212
Figure TWI609965BD00237
<210> 213 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14輕鏈CDR 2 <400> 213
Figure TWI609965BD00238
<210> 214 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14輕鏈CDR 3 <400> 214
Figure TWI609965BD00239
<210> 215 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14重鏈CDR 1 <400> 215
Figure TWI609965BD00240
<210> 216 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14重鏈CDR 2 <400> 216
Figure TWI609965BD00241
<210> 217 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14重鏈CDR 3 <400> 217
Figure TWI609965BD00242
<210> 218 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14輕鏈可變功能部位<400> 218
Figure TWI609965BD00243
Figure TWI609965BD00244
<210> 219 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14重鏈可變功能部位<400> 219
Figure TWI609965BD00245
<210> 220 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14輕鏈CDR 1 <400> 220
Figure TWI609965BD00246
<210> 221 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14輕鏈CDR 2 <400> 221
Figure TWI609965BD00247
<210> 222 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14輕鏈CDR 3 <400> 222
Figure TWI609965BD00248
<210> 223 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14重鏈CDR 1 <400> 223
Figure TWI609965BD00249
<210> 224 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14重鏈CDR 2 <400> 224
Figure TWI609965BD00250
<210> 225 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab14重鏈CDR 3 <400> 225
Figure TWI609965BD00251
<210> 226 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15輕鏈可變功能部位<400> 226
Figure TWI609965BD00252
Figure TWI609965BD00253
<210> 227 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15重鏈可變功能部位<400> 227
Figure TWI609965BD00254
Figure TWI609965BD00255
<210> 228 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15輕鏈CDR 1 <400> 228
Figure TWI609965BD00256
<210> 229 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15輕鏈CDR 2 <400> 229
Figure TWI609965BD00257
<210> 230 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15輕鏈CDR 3 <400> 230
Figure TWI609965BD00258
<210> 231 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15重鏈CDR 1 <400> 231
Figure TWI609965BD00259
<210> 232 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15重鏈CDR 2 <400> 232
Figure TWI609965BD00260
<210> 233 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15重鏈CDR 3 <400> 233
Figure TWI609965BD00261
<210> 234 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15輕鏈可變功能部位<400> 234
Figure TWI609965BD00262
<210> 235 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15重鏈可變功能部位<400> 235
Figure TWI609965BD00263
<210> 236 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15輕鏈CDR 1 <400> 236
Figure TWI609965BD00264
<210> 237 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15輕鏈CDR 2 <400> 237
Figure TWI609965BD00265
<210> 238 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15輕鏈CDR 3 <400> 238
Figure TWI609965BD00266
<210> 239 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15重鏈CDR 1 <400> 239
Figure TWI609965BD00267
<210> 240 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15重鏈CDR 2 <400> 240
Figure TWI609965BD00268
<210> 241 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab15重鏈CDR 3 <400> 241
Figure TWI609965BD00269
<210> 242 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16輕鏈可變功能部位<400> 242
Figure TWI609965BD00270
Figure TWI609965BD00271
<210> 243 <211> 125 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16重鏈可變功能部位<400> 243
Figure TWI609965BD00272
Figure TWI609965BD00273
<210> 244 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16輕鏈CDR 1 <400> 244
Figure TWI609965BD00274
<210> 245 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16輕鏈CDR 2 <400> 245
Figure TWI609965BD00275
<210> 246 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16輕鏈CDR 3 <400> 246
Figure TWI609965BD00276
<210> 247 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16重鏈CDR 1 <400> 247
Figure TWI609965BD00277
<210> 248 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16重鏈CDR 2 <400> 248
Figure TWI609965BD00278
<210> 249 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16重鏈CDR 3 <400> 249
Figure TWI609965BD00279
<210> 250 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16輕鏈可變功能部位<400> 250
Figure TWI609965BD00280
<210> 251 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16重鏈可變功能部位<400> 251
Figure TWI609965BD00281
Figure TWI609965BD00282
<210> 252 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16輕鏈CDR 1 <400> 252
Figure TWI609965BD00283
<210> 253 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16輕鏈CDR 2 <400> 253
Figure TWI609965BD00284
<210> 254 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16輕鏈CDR 3 <400> 254
Figure TWI609965BD00285
<210> 255 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16重鏈CDR 1 <400> 255
Figure TWI609965BD00286
<210> 256 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16重鏈CDR 2 <400> 256
Figure TWI609965BD00287
<210> 257 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab16重鏈CDR 3 <400> 257
Figure TWI609965BD00288
<210> 258 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17輕鏈可變功能部位<400> 258
Figure TWI609965BD00289
<210> 259 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17重鏈可變功能部位<400> 259
Figure TWI609965BD00290
<210> 260 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17輕鏈CDR 1 <400> 260
Figure TWI609965BD00291
<210> 261 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17輕鏈CDR 2 <400> 261
Figure TWI609965BD00292
<210> 262 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17輕鏈CDR 3 <400> 262
Figure TWI609965BD00293
<210> 263 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17重鏈CDR 1 <400> 263
Figure TWI609965BD00294
<210> 264 <211> 16 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17重鏈CDR 2 <400> 264
Figure TWI609965BD00295
<210> 265 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17重鏈CDR 3 <400> 265
Figure TWI609965BD00296
<210> 266 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17輕鏈可變功能部位<400> 266
Figure TWI609965BD00297
<210> 267 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17重鏈可變功能部位<400> 267
Figure TWI609965BD00298
<210> 268 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17輕鏈CDR 1 <400> 268
Figure TWI609965BD00299
<210> 269 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17輕鏈CDR 2 <400> 269
Figure TWI609965BD00300
<210> 270 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17輕鏈CDR 3 <400> 270
Figure TWI609965BD00301
<210> 271 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17重鏈CDR 1 <400> 271
Figure TWI609965BD00302
<210> 272 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17重鏈CDR 2 <400> 272
Figure TWI609965BD00303
<210> 273 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab17重鏈CDR 3 <400> 273
Figure TWI609965BD00304
<210> 274 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18輕鏈可變功能部位<400> 274
Figure TWI609965BD00305
<210> 275 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18重鏈可變功能部位<400> 275
Figure TWI609965BD00306
<210> 276 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18輕鏈CDR 1 <400> 276
Figure TWI609965BD00307
<210> 277 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18輕鏈CDR 2 <400> 277
Figure TWI609965BD00308
<210> 278 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18輕鏈CDR 3 <400> 278
Figure TWI609965BD00309
<210> 279 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18重鏈CDR 1 <400> 279
Figure TWI609965BD00310
<210> 280 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18重鏈CDR 2 <400> 280
Figure TWI609965BD00311
<210> 281 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18重鏈CDR 3 <400> 281
Figure TWI609965BD00312
<210> 282 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18輕鏈可變功能部位<400> 282
Figure TWI609965BD00313
Figure TWI609965BD00314
<210> 283 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18重鏈可變功能部位<400> 283
Figure TWI609965BD00315
<210> 284 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18輕鏈CDR 1 <400> 284
Figure TWI609965BD00316
<210> 285 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18輕鏈CDR 2 <400> 285
Figure TWI609965BD00317
<210> 286 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18輕鏈CDR 3 <400> 286
Figure TWI609965BD00318
<210> 287 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18重鏈CDR 1 <400> 287
Figure TWI609965BD00319
<210> 288 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18重鏈CDR 2 <400> 288
Figure TWI609965BD00320
<210> 289 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab18重鏈CDR 3 <400> 289
Figure TWI609965BD00321
<210> 290 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19輕鏈可變功能部位<400> 290
Figure TWI609965BD00322
Figure TWI609965BD00323
<210> 291 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19重鏈可變功能部位<400> 291
Figure TWI609965BD00324
Figure TWI609965BD00325
<210> 292 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19輕鏈CDR 1 <400> 292
Figure TWI609965BD00326
<210> 293 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19輕鏈CDR 2 <400> 293
Figure TWI609965BD00327
<210> 294 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19輕鏈CDR 3 <400> 294
Figure TWI609965BD00328
<210> 295 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19重鏈CDR 1 <400> 295
Figure TWI609965BD00329
<210> 296 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19重鏈CDR 2 <400> 296
Figure TWI609965BD00330
<210> 297 <211> 8 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19重鏈CDR 3 <400> 297
Figure TWI609965BD00331
<210> 298 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19輕鏈可變功能部位<400> 298
Figure TWI609965BD00332
<210> 299 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19重鏈可變功能部位<400> 299
Figure TWI609965BD00333
Figure TWI609965BD00334
<210> 300 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19輕鏈CDR 1 <400> 300
Figure TWI609965BD00335
<210> 301 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19輕鏈CDR 2 <400> 301
Figure TWI609965BD00336
<210> 302 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19輕鏈CDR 3 <400> 302
Figure TWI609965BD00337
<210> 303 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19重鏈CDR 1 <400> 303
Figure TWI609965BD00338
<210> 304 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19重鏈CDR 2 <400> 304
Figure TWI609965BD00339
<210> 305 <211> 24 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab19重鏈CDR 3 <400> 305
Figure TWI609965BD00340
<210> 306 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈可變功能部位<400> 306
Figure TWI609965BD00341
Figure TWI609965BD00342
<210> 307 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20重鏈可變功能部位<400> 307
Figure TWI609965BD00343
Figure TWI609965BD00344
<210> 308 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈CDR 1 <400> 308
Figure TWI609965BD00345
<210> 309 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈CDR 2 <400> 309
Figure TWI609965BD00346
<210> 310 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈CDR 3 <400> 310
Figure TWI609965BD00347
<210> 311 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20重鏈CDR 1 <400> 311
Figure TWI609965BD00348
<210> 312 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20重鏈CDR 2 <400> 312
Figure TWI609965BD00349
<210> 313 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20重鏈CDR 3 <400> 313
Figure TWI609965BD00350
<210> 314 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈可變功能部位<400> 314
Figure TWI609965BD00351
<210> 315 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20重鏈可變功能部位 <400> 315
Figure TWI609965BD00352
<210> 316 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈CDR 1 <400> 316
Figure TWI609965BD00353
<210> 317 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈CDR 2 <400> 317
Figure TWI609965BD00354
<210> 318 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈CDR 3 <400> 318
Figure TWI609965BD00355
<210> 319 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20重鏈CDR 1 <400> 319
Figure TWI609965BD00356
<210> 320 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈CDR 2 <400> 320
Figure TWI609965BD00357
<210> 321 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab20輕鏈CDR 3 <400> 321
Figure TWI609965BD00358
<210> 322 <211> 125 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21輕鏈可變功能部位<400> 322
Figure TWI609965BD00359
<210> 323 <211> 127 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21重鏈可變功能部位 <400> 323
Figure TWI609965BD00360
<210> 324 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21輕鏈CDR 1 <400> 324
Figure TWI609965BD00361
<210> 325 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21輕鏈CDR 2 <400> 325
Figure TWI609965BD00362
<210> 326 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21輕鏈CDR 3 <400> 326
Figure TWI609965BD00363
<210> 327 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21重鏈CDR 1 <400> 327
Figure TWI609965BD00364
<210> 328 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21重鏈CDR 2 <400> 328
Figure TWI609965BD00365
<210> 329 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21重鏈CDR 3 <400> 329
Figure TWI609965BD00366
<210> 330 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21輕鏈可變功能部位<400> 330
Figure TWI609965BD00367
Figure TWI609965BD00368
<210> 331 <211> 381 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21重鏈可變功能部位<400> 331
Figure TWI609965BD00369
<210> 332 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21輕鏈CDR 1 <400> 332
Figure TWI609965BD00370
<210> 333 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21輕鏈CDR 2 <400> 333
Figure TWI609965BD00371
<210> 334 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21輕鏈CDR 3 <400> 334
Figure TWI609965BD00372
<210> 335 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21重鏈CDR 1 <400> 335
Figure TWI609965BD00373
<210> 336 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21重鏈CDR 2 <400> 336
Figure TWI609965BD00374
<210> 337 <211> 42 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab21重鏈CDR 3 <400> 337
Figure TWI609965BD00375
<210> 338 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22輕鏈可變功能部位<400> 338
Figure TWI609965BD00376
Figure TWI609965BD00377
<210> 339 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22重鏈可變功能部位<400> 339
Figure TWI609965BD00378
<210> 340 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22輕鏈CDR 1 <400> 340
Figure TWI609965BD00379
<210> 341 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22輕鏈CDR 2 <400> 341
Figure TWI609965BD00380
<210> 342 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22輕鏈CDR 3 <400> 342
Figure TWI609965BD00381
<210> 343 <211> 5 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22重鏈CDR 1 <400> 343
Figure TWI609965BD00382
<210> 344 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22重鏈CDR 2 <400> 344
Figure TWI609965BD00383
<210> 345 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22重鏈CDR 3 <400> 345
Figure TWI609965BD00384
<210> 346 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22輕鏈可變功能部位 <400> 346
Figure TWI609965BD00385
<210> 347 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22重鏈可變功能部位<400> 347
Figure TWI609965BD00386
<210> 348 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22輕鏈CDR 1 <400> 348
Figure TWI609965BD00387
<210> 349 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22輕鏈CDR 2 <400> 349
Figure TWI609965BD00388
<210> 350 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22輕鏈CDR 3 <400> 350
Figure TWI609965BD00389
<210> 351 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22重鏈CDR 1 <400> 351
Figure TWI609965BD00390
<210> 352 <211> 48 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22重鏈CDR 2 <400> 352
Figure TWI609965BD00391
<210> 353 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab22重鏈CDR 3 <400> 353
Figure TWI609965BD00392
<210> 354 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23輕鏈可變功能部位<400> 354
Figure TWI609965BD00393
Figure TWI609965BD00394
<210> 355 <211> 129 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23重鏈可變功能部位<400> 355
Figure TWI609965BD00395
Figure TWI609965BD00396
<210> 356 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23輕鏈CDR 1 <400> 356
Figure TWI609965BD00397
<210> 357 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23輕鏈CDR 2 <400> 357
Figure TWI609965BD00398
<210> 358 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23輕鏈CDR 3 <400> 358
Figure TWI609965BD00399
<210> 359 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23重鏈CDR 1 <400> 359
Figure TWI609965BD00400
<210> 360 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23重鏈CDR 2 <400> 360
Figure TWI609965BD00401
<210> 361 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23重鏈CDR 3 <400> 361
Figure TWI609965BD00402
<210> 362 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23輕鏈可變功能部位<400> 362
Figure TWI609965BD00403
<210> 363 <211> 387 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23重鏈可變功能部位<400> 363
Figure TWI609965BD00404
Figure TWI609965BD00405
<210> 364 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23輕鏈CDR 1 <400> 364
Figure TWI609965BD00406
<210> 365 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23輕鏈CDR 2 <400> 365
Figure TWI609965BD00407
<210> 366 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23輕鏈CDR 3 <400> 366
Figure TWI609965BD00408
<210> 367 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23重鏈CDR 1 <400> 367
Figure TWI609965BD00409
<210> 368 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23重鏈CDR 2 <400> 368
Figure TWI609965BD00410
<210> 369 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab23重鏈CDR 3 <400> 369
Figure TWI609965BD00411
<210> 370 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24輕鏈可變功能部位<400> 370
Figure TWI609965BD00412
<210> 371 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24重鏈可變功能部位<400> 371
Figure TWI609965BD00413
Figure TWI609965BD00414
<210> 372 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24輕鏈CDR 1 <400> 372
Figure TWI609965BD00415
<210> 373 <211> 7 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24輕鏈CDR 2 <400> 373
Figure TWI609965BD00416
<210> 374 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24輕鏈CDR 3 <400> 374
Figure TWI609965BD00417
<210> 375 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24重鏈CDR 1 <400> 375
Figure TWI609965BD00418
<210> 376 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24重鏈CDR2 <400> 376
Figure TWI609965BD00419
<210> 377 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24重鏈CDR 3 <400> 377
Figure TWI609965BD00420
<210> 378 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24輕鏈可變功能部位<400> 378
Figure TWI609965BD00421
<210> 379 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24重鏈可變功能部位<400> 379
Figure TWI609965BD00422
<210> 380 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24輕鏈CDR 1 <400> 380
Figure TWI609965BD00423
<210> 381 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24輕鏈CDR 2 <400> 381
Figure TWI609965BD00424
<210> 382 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24輕鏈CDR 3 <400> 382
Figure TWI609965BD00425
<210> 383 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24重鏈CDR 1 <400> 383
Figure TWI609965BD00426
<210> 384 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24重鏈CDR 2 <400> 384
Figure TWI609965BD00427
<210> 385 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab24重鏈CDR 3 <400> 385
Figure TWI609965BD00428
<210> 386 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25輕鏈可變功能部位<400> 386
Figure TWI609965BD00429
<210> 387 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25重鏈可變功能部位<400> 387
Figure TWI609965BD00430
<210> 388 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25輕鏈CDR 1 <400> 388
Figure TWI609965BD00431
<210> 389 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25輕鏈CDR 2 <400> 389
Figure TWI609965BD00432
<210> 390 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25輕鏈CDR 3 <400> 390
Figure TWI609965BD00433
<210> 391 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25重鏈CDR 1 <400> 391
Figure TWI609965BD00434
<210> 392 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25重鏈CDR 2 <400> 392
Figure TWI609965BD00435
<210> 393 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25重鏈CDR 3 <400> 393
Figure TWI609965BD00436
<210> 394 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25輕鏈可變功能部位<400> 394
Figure TWI609965BD00437
Figure TWI609965BD00438
<210> 395 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25重鏈可變功能部位<400> 395
Figure TWI609965BD00439
<210> 396 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25輕鏈CDR 1 <400> 396
Figure TWI609965BD00440
<210> 397 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25輕鏈CDR 2 <400> 397
Figure TWI609965BD00441
<210> 398 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25輕鏈CDR 3 <400> 398
Figure TWI609965BD00442
<210> 399 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25重鏈CDR 1 <400> 399
Figure TWI609965BD00443
<210> 400 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25重鏈CDR 2 <400> 400
Figure TWI609965BD00444
<210> 401 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab25重鏈CDR 3 <400> 401
Figure TWI609965BD00445
<210> 402 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26輕鏈可變功能部位<400> 402
Figure TWI609965BD00446
Figure TWI609965BD00447
<210> 403 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26重鏈可變功能部位<400> 403
Figure TWI609965BD00448
Figure TWI609965BD00449
<210> 404 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26輕鏈CDR 1 <400> 404
Figure TWI609965BD00450
<210> 405 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26輕鏈CDR 2 <400> 405
Figure TWI609965BD00451
<210> 406 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26輕鏈CDR 3 <400> 406
Figure TWI609965BD00452
<210> 407 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26重鏈CDR 1 <400> 407
Figure TWI609965BD00453
<210> 408 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26重鏈CDR 2 <400> 408
Figure TWI609965BD00454
<210> 409 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26重鏈CDR 3 <400> 409
Figure TWI609965BD00455
<210> 410 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26輕鏈可變功能部位<400> 410
Figure TWI609965BD00456
<210> 411 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26重鏈可變功能部位<400> 411
Figure TWI609965BD00457
<210> 412 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26輕鏈CDR 1 <400> 412
Figure TWI609965BD00458
<210> 413 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26輕鏈CDR 2 <400> 413
Figure TWI609965BD00459
<210> 414 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26輕鏈CDR 3 <400> 414
Figure TWI609965BD00460
<210> 415 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26重鏈CDR 1 <400> 415
Figure TWI609965BD00461
<210> 416 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26重鏈CDR 2 <400> 416
Figure TWI609965BD00462
<210> 417 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－TNF－α抗體Ab26重鏈CDR 3 <400> 417
Figure TWI609965BD00463
<210> 418 <211> 105 <212> PRT <213> 人造序列<220> <223>
Figure TWI609965BD00464
恆定功能部位<400> 418
Figure TWI609965BD00465
Figure TWI609965BD00466
<210> 419 <211> 315 <212> DNA <213> 人造序列<220> <223>
Figure TWI609965BD00467
恆定功能部位<400> 419
Figure TWI609965BD00468
<210> 420 <211> 330 <212> PRT <213> 人造序列<220> <223> γ－1恆定功能部位<400> 420
Figure TWI609965BD00469
Figure TWI609965BD00470
<210> 421 <211> 990 <212> DNA <213> 人造序列 <220> <223> γ－1恆定功能部位<400> 421
Figure TWI609965BD00471
<210> 422 <211> 183 <212> PRT <213> 人<400> 422
Figure TWI609965BD00472
Figure TWI609965BD00473
<210> 423 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1輕鏈可變功能部位<400> 423
Figure TWI609965BD00474
<210> 424 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1重鏈可變功能部位<400> 424
Figure TWI609965BD00475
<210> 425 <211> 11 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1輕鏈CDR 1 <400> 425
Figure TWI609965BD00476
<210> 426 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1輕鏈CDR 2 <400> 426
Figure TWI609965BD00477
<210> 427 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1輕鏈CDR 3 <400> 427
Figure TWI609965BD00478
<210> 428 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1重鏈CDR 1 <400> 428
Figure TWI609965BD00479
<210> 429 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1重鏈CDR 2 <400> 429
Figure TWI609965BD00480
<210> 430 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1重鏈CDR 3 <400> 430
Figure TWI609965BD00481
<210> 431 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1輕鏈可變功能部位<400> 431
Figure TWI609965BD00482
Figure TWI609965BD00483
<210> 432 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1重鏈可變功能部位<400> 432
Figure TWI609965BD00484
<210> 433 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1輕鏈CDR 1 <400> 433
Figure TWI609965BD00485
<210> 434 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1輕鏈CDR 2 <400> 434
Figure TWI609965BD00486
<210> 435 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1輕鏈CDR 3 <400> 435
Figure TWI609965BD00487
<210> 436 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1重鏈CDR 1 <400> 436
Figure TWI609965BD00488
<210> 437 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1重鏈CDR 2 <400> 437
Figure TWI609965BD00489
<210> 438 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab1重鏈CDR 3 <400> 438
Figure TWI609965BD00490
<210> 439 <211> 109 <212> PRT <213> 兔<400> 439
Figure TWI609965BD00491
Figure TWI609965BD00492
<210> 440 <211> 109 <212> PRT <213> 兔<400> 440
Figure TWI609965BD00493
<210> 441 <211> 99 <212> PRT <213> 兔<400> 441
Figure TWI609965BD00494
<210> 442 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2輕鏈可變功能部位<400> 442
Figure TWI609965BD00495
Figure TWI609965BD00496
<210> 443 <211> 126 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab2重鏈可變功能部位<400> 443
Figure TWI609965BD00497
Figure TWI609965BD00498
<210> 444 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2輕鏈CDR 1 <400> 444
Figure TWI609965BD00499
<210> 445 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2輕鏈CDR 2 <400> 445
Figure TWI609965BD00500
<210> 446 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2輕鏈CDR 3 <400> 446
Figure TWI609965BD00501
<210> 447 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2重鏈CDR 1 <400> 447
Figure TWI609965BD00502
<210> 448 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2重鏈CDR 2 <400> 448
Figure TWI609965BD00503
<210> 449 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2重鏈CDR 3 <400> 449
Figure TWI609965BD00504
<210> 450 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2輕鏈可變功能部位<400> 450
Figure TWI609965BD00505
<210> 451 <211> 378 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab2重鏈可變功能部位<400> 451
Figure TWI609965BD00506
Figure TWI609965BD00507
<210> 452 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2輕鏈CDR 1 <400> 452
Figure TWI609965BD00508
<210> 453 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2輕鏈CDR 2 <400> 453
Figure TWI609965BD00509
<210> 454 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2輕鏈CDR 3 <400> 454
Figure TWI609965BD00510
<210> 455 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2重鏈CDR 1 <400> 455
Figure TWI609965BD00511
<210> 456 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2重鏈CDR 2 <400> 456
Figure TWI609965BD00512
<210> 457 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab2重鏈CDR 3 <400> 457
Figure TWI609965BD00513
<210> 458 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3輕鏈可變功能部位<400> 458
Figure TWI609965BD00514
<210> 459 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab3重鏈可變功能部位<400> 459
Figure TWI609965BD00515
<210> 460 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3輕鏈CDR 1 <400> 460
Figure TWI609965BD00516
<210> 461 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3輕鏈CDR 2 <400> 461
Figure TWI609965BD00517
<210> 462 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3輕鏈CDR 3 <400> 462
Figure TWI609965BD00518
<210> 463 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3重鏈CDR 1 <400> 463
Figure TWI609965BD00519
<210> 464 <211> 16 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3重鏈CDR 2 <400> 464
Figure TWI609965BD00520
<210> 465 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3重鏈CDR 3 <400> 465
Figure TWI609965BD00521
<210> 466 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3輕鏈可變功能部位<400> 466
Figure TWI609965BD00522
<210> 467 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab3重鏈可變功能部位<400> 467
Figure TWI609965BD00523
<210> 468 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3輕鏈CDR 1 <400> 468
Figure TWI609965BD00524
<210> 469 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3輕鏈CDR 2 <400> 469
Figure TWI609965BD00525
<210> 470 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3輕鏈CDR 3 <400> 470
Figure TWI609965BD00526
<210> 471 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3重鏈CDR 1 <400> 471
Figure TWI609965BD00527
<210> 472 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3重鏈CDR 2 <400> 472
Figure TWI609965BD00528
<210> 473 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab3重鏈CDR 3 <400> 473
Figure TWI609965BD00529
<210> 474 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4輕鏈可變功能部位<400> 474
Figure TWI609965BD00530
<210> 475 <211> 126 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab4重鏈可變功能部位<400> 475
Figure TWI609965BD00531
<210> 476 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4輕鏈CDR 1 <400> 476
Figure TWI609965BD00532
<210> 477 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4輕鏈CDR 2 <400> 477
Figure TWI609965BD00533
<210> 478 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4輕鏈CDR 3 <400> 478
Figure TWI609965BD00534
<210> 479 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4重鏈CDR 1 <400> 479
Figure TWI609965BD00535
<210> 480 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4重鏈CDR 2 <400> 480
Figure TWI609965BD00536
<210> 481 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4重鏈CDR 3 <400> 481
Figure TWI609965BD00537
<210> 482 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4輕鏈可變功能部位<400> 482
Figure TWI609965BD00538
Figure TWI609965BD00539
<210> 483 <211> 378 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab4重鏈可變功能部位<400> 483
Figure TWI609965BD00540
<210> 484 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4輕鏈CDR 1 <400> 484
Figure TWI609965BD00541
<210> 485 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4輕鏈CDR 2 <400> 485
Figure TWI609965BD00542
<210> 486 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4輕鏈CDR 3 <400> 486
Figure TWI609965BD00543
<210> 487 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4重鏈CDR 1 <400> 487
Figure TWI609965BD00544
<210> 488 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4重鏈CDR 2 <400> 488
Figure TWI609965BD00545
<210> 489 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab4重鏈CDR 3 <400> 489
Figure TWI609965BD00546
<210> 490 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5輕鏈可變功能部位<400> 490
Figure TWI609965BD00547
Figure TWI609965BD00548
<210> 491 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab5重鏈可變功能部位<400> 491
Figure TWI609965BD00549
Figure TWI609965BD00550
<210> 492 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5輕鏈CDR 1 <400> 492
Figure TWI609965BD00551
<210> 493 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5輕鏈CDR 2 <400> 493
Figure TWI609965BD00552
<210> 494 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5輕鏈CDR 3 <400> 494
Figure TWI609965BD00553
<210> 495 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5重鏈CDR 1 <400> 495
Figure TWI609965BD00554
<210> 496 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5重鏈CDR 2 <400> 496
Figure TWI609965BD00555
<210> 497 <211> 9 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5重鏈CDR 3 <400> 497
Figure TWI609965BD00556
<210> 498 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5輕鏈可變功能部位<400> 498
Figure TWI609965BD00557
<210> 499 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab5重鏈可變功能部位<400> 499
Figure TWI609965BD00558
Figure TWI609965BD00559
<210> 500 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5輕鏈CDR 1 <400> 500
Figure TWI609965BD00560
<210> 501 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5輕鏈CDR 2 <400> 501
Figure TWI609965BD00561
<210> 502 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5輕鏈CDR 3 <400> 502
Figure TWI609965BD00562
<210> 503 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5重鏈CDR 1 <400> 503
Figure TWI609965BD00563
<210> 504 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5重鏈CDR 2 <400> 504
Figure TWI609965BD00564
<210> 505 <211> 27 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab5重鏈CDR 3 <400> 505
Figure TWI609965BD00565
<210> 506 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6輕鏈可變功能部位<400> 506
Figure TWI609965BD00566
Figure TWI609965BD00567
<210> 507 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab6重鏈可變功能部位<400> 507
Figure TWI609965BD00568
Figure TWI609965BD00569
<210> 508 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6輕鏈CDR 1 <400> 508
Figure TWI609965BD00570
<210> 509 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6輕鏈CDR 2 <400> 509
Figure TWI609965BD00571
<210> 510 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6輕鏈CDR 3 <400> 510
Figure TWI609965BD00572
<210> 511 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6重鏈CDR 1 <400> 511
Figure TWI609965BD00573
<210> 512 <211> 17 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6重鏈CDR 2 <400> 512
Figure TWI609965BD00574
Figure TWI609965BD00575
<210> 513 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6重鏈CDR 3 <400> 513
Figure TWI609965BD00576
<210> 514 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6輕鏈可變功能部位<400> 514
Figure TWI609965BD00577
<210> 515 <211> 384 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab6重鏈可變功能部位<400> 515
Figure TWI609965BD00578
<210> 516 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6輕鏈CDR 1 <400> 516
Figure TWI609965BD00579
<210> 517 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6輕鏈CDR 2 <400> 517
Figure TWI609965BD00580
<210> 518 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6輕鏈CDR 3 <400> 518
Figure TWI609965BD00581
<210> 519 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6重鏈CDR 1 <400> 519
Figure TWI609965BD00582
<210> 520 <211> 51 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6重鏈CDR 2 <400> 520
Figure TWI609965BD00583
<210> 521 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab6重鏈CDR 3 <400> 521
Figure TWI609965BD00584
<210> 522 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7輕鏈可變功能部位<400> 522
Figure TWI609965BD00585
<210> 523 <211> 125 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab7重鏈可變功能部位<400> 523
Figure TWI609965BD00586
<210> 524 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7輕鏈CDR 1 <400> 524
Figure TWI609965BD00587
<210> 525 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7輕鏈CDR 2 <400> 525
Figure TWI609965BD00588
<210> 526 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7輕鏈CDR 3 <400> 526
Figure TWI609965BD00589
<210> 527 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7重鏈CDR 1 <400> 527
Figure TWI609965BD00590
<210> 528 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7重鏈CDR 2 <400> 528
Figure TWI609965BD00591
<210> 529 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7重鏈CDR 3 <400> 529
Figure TWI609965BD00592
<210> 530 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7輕鏈可變功能部位<400> 530
Figure TWI609965BD00593
Figure TWI609965BD00594
<210> 531 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab7重鏈可變功能部位<400> 531
Figure TWI609965BD00595
<210> 532 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7輕鏈CDR 1 <400> 532
Figure TWI609965BD00596
<210> 533 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7輕鏈CDR 2 <400> 533
Figure TWI609965BD00597
<210> 534 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7輕鏈CDR 3 <400> 534
Figure TWI609965BD00598
<210> 535 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7重鏈CDR 1 <400> 535
Figure TWI609965BD00599
<210> 536 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7重鏈CDR 2 <400> 536
Figure TWI609965BD00600
<210> 537 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab7重鏈CDR 3 <400> 537
Figure TWI609965BD00601
<210> 538 <211> 109 <212> PRT <213> 兔<400> 538
Figure TWI609965BD00602
<210> 539 <211> 109 <212> PRT <213> 兔<400> 539
Figure TWI609965BD00603
<210> 540 <211> 100 <212> PRT <213> 兔<400> 540
Figure TWI609965BD00604
Figure TWI609965BD00605
<210> 541 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<400> 541
Figure TWI609965BD00606
<210> 542 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<400> 542
Figure TWI609965BD00607
<210> 543 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8輕鏈可變功能部位<400> 543
Figure TWI609965BD00608
<210> 544 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab8重鏈可變功能部位<400> 544
Figure TWI609965BD00609
<210> 545 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8輕鏈CDR 1 <400> 545
Figure TWI609965BD00610
<210> 546 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8輕鏈CDR 2 <400> 546
Figure TWI609965BD00611
<210> 547 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8輕鏈CDR 3 <400> 547
Figure TWI609965BD00612
<210> 548 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8重鏈CDR 1 <400> 548
Figure TWI609965BD00613
Figure TWI609965BD00614
<210> 549 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8重鏈CDR 2 <400> 549
Figure TWI609965BD00615
<210> 550 <211> 15 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8重鏈CDR 3 <400> 550
Figure TWI609965BD00616
<210> 551 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8輕鏈可變功能部位<400> 551
Figure TWI609965BD00617
Figure TWI609965BD00618
<210> 552 <211> 384 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab8重鏈可變功能部位<400> 552
Figure TWI609965BD00619
<210> 553 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8輕鏈CDR 1 <400> 553
Figure TWI609965BD00620
<210> 554 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8輕鏈CDR 2 <400> 554
Figure TWI609965BD00621
<210> 555 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8輕鏈CDR 3 <400> 555
Figure TWI609965BD00622
<210> 556 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8重鏈CDR 1 <400> 556
Figure TWI609965BD00623
<210> 557 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8重鏈CDR 2 <400> 557
Figure TWI609965BD00624
<210> 558 <211> 45 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab8重鏈CDR 3 <400> 558
Figure TWI609965BD00625
<210> 559 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9輕鏈可變功能部位<400> 559
Figure TWI609965BD00626
Figure TWI609965BD00627
<210> 560 <211> 126 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab9重鏈可變功能部位<400> 560
Figure TWI609965BD00628
Figure TWI609965BD00629
<210> 561 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9輕鏈CDR 1 <400> 561
Figure TWI609965BD00630
<210> 562 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9輕鏈CDR 2 <400> 562
Figure TWI609965BD00631
<210> 563 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9輕鏈CDR 3 <400> 563
Figure TWI609965BD00632
<210> 564 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9重鏈CDR 1 <400> 564
Figure TWI609965BD00633
<210> 565 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9重鏈CDR 2 <400> 565
Figure TWI609965BD00634
<210> 566 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9重鏈CDR 3 <400> 566
Figure TWI609965BD00635
<210> 567 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9輕鏈可變功能部位<400> 567
Figure TWI609965BD00636
<210> 568 <211> 378 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab9重鏈可變功能部位<400> 568
Figure TWI609965BD00637
<210> 569 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9輕鏈CDR 1 <400> 569
Figure TWI609965BD00638
<210> 570 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9輕鏈CDR 2 <400> 570
Figure TWI609965BD00639
<210> 571 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9輕鏈CDR 3 <400> 571
Figure TWI609965BD00640
<210> 572 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9重鏈CDR 1 <400> 572
Figure TWI609965BD00641
<210> 573 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9重鏈CDR 2 <400> 573
Figure TWI609965BD00642
<210> 574 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab9重鏈CDR 3 <400> 574
Figure TWI609965BD00643
<210> 575 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10輕鏈可變功能部位<400> 575
Figure TWI609965BD00644
Figure TWI609965BD00645
<210> 576 <211> 129 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab10重鏈可變功能部位<400> 576
Figure TWI609965BD00646
Figure TWI609965BD00647
<210> 577 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10輕鏈CDR 1 <400> 577
Figure TWI609965BD00648
<210> 578 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10輕鏈CDR 2 <400> 578
Figure TWI609965BD00649
Figure TWI609965BD00650
<210> 579 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10輕鏈CDR 3 <400> 579
Figure TWI609965BD00651
<210> 580 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10重鏈CDR 1 <400> 580
Figure TWI609965BD00652
<210> 581 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10重鏈CDR 2 <400> 581
Figure TWI609965BD00653
<210> 582 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10重鏈CDR 3 <400> 582
Figure TWI609965BD00654
<210> 583 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10輕鏈可變功能部位<400> 583
Figure TWI609965BD00655
<210> 584 <211> 387 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab10重鏈可變功能部位<400> 584
Figure TWI609965BD00656
<210> 585 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10輕鏈CDR 1 <400> 585
Figure TWI609965BD00657
<210> 586 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10輕鏈CDR 2 <400> 586
Figure TWI609965BD00658
<210> 587 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10輕鏈CDR 3 <400> 587
Figure TWI609965BD00659
<210> 588 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10重鏈CDR 1 <400> 588
Figure TWI609965BD00660
<210> 589 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10重鏈CDR 2 <400> 589
Figure TWI609965BD00661
<210> 590 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab10重鏈CDR 3 <400> 590
Figure TWI609965BD00662
<210> 591 <211> 123 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11輕鏈可變功能部位<400> 591
Figure TWI609965BD00663
<210> 592 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab11重鏈可變功能部位<400> 592
Figure TWI609965BD00664
<210> 593 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11輕鏈CDR 1 <400> 593
Figure TWI609965BD00665
<210> 594 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11輕鏈CDR 2 <400> 594
Figure TWI609965BD00666
<210> 595 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11輕鏈CDR 3 <400> 595
Figure TWI609965BD00667
<210> 596 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11重鏈CDR 1 <400> 596
Figure TWI609965BD00668
<210> 597 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11重鏈CDR 2 <400> 597
Figure TWI609965BD00669
<210> 598 <211> 8 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11重鏈CDR 3 <400> 598
Figure TWI609965BD00670
<210> 599 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11輕鏈可變功能部位<400> 599
Figure TWI609965BD00671
Figure TWI609965BD00672
<210> 600 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab11重鏈可變功能部位<400> 600
Figure TWI609965BD00673
<210> 601 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11輕鏈CDR 1 <400> 601
Figure TWI609965BD00674
<210> 602 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11輕鏈CDR 2 <400> 602
Figure TWI609965BD00675
<210> 603 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11輕鏈CDR 3 <400> 603
Figure TWI609965BD00676
<210> 604 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11重鏈CDR 1 <400> 604
Figure TWI609965BD00677
<210> 605 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11重鏈CDR 2 <400> 605
Figure TWI609965BD00678
<210> 606 <211> 24 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab11重鏈CDR 3 <400> 606
Figure TWI609965BD00679
<210> 607 <211> 119 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12輕鏈可變功能部位<400> 607
Figure TWI609965BD00680
Figure TWI609965BD00681
<210> 608 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab12重鏈可變功能部位<400> 608
Figure TWI609965BD00682
<210> 609 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12輕鏈CDR 1 <400> 609
Figure TWI609965BD00683
<210> 610 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12輕鏈CDR 2 <400> 610
Figure TWI609965BD00684
<210> 611 <211> 9 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12輕鏈CDR 3 <400> 611
Figure TWI609965BD00685
<210> 612 <211> 6 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12重鏈CDR 1 <400> 612
Figure TWI609965BD00686
<210> 613 <211> 17 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12重鏈CDR 2 <400> 613
Figure TWI609965BD00687
<210> 614 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12重鏈CDR 3 <400> 614
Figure TWI609965BD00688
<210> 615 <211> 357 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12輕鏈可變功能部位<400> 615
Figure TWI609965BD00689
<210> 616 <211> 384 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab12重鏈可變功能部位<400> 616
Figure TWI609965BD00690
<210> 617 <211> 33 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12輕鏈CDR 1 <400> 617
Figure TWI609965BD00691
<210> 618 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12輕鏈CDR 2 <400> 618
Figure TWI609965BD00692
<210> 619 <211> 27 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12輕鏈CDR 3 <400> 619
Figure TWI609965BD00693
<210> 620 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12重鏈CDR 1 <400> 620
Figure TWI609965BD00694
<210> 621 <211> 51 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12重鏈CDR 2 <400> 621
Figure TWI609965BD00695
<210> 622 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab12重鏈CDR 3 <400> 622
Figure TWI609965BD00696
<210> 623 <211> 119 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13輕鏈可變功能部位<400> 623
Figure TWI609965BD00697
Figure TWI609965BD00698
<210> 624 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab13重鏈可變功能部位<400> 624
Figure TWI609965BD00699
Figure TWI609965BD00700
<210> 625 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13輕鏈CDR 1 <400> 625
Figure TWI609965BD00701
<210> 626 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13輕鏈CDR 2 <400> 626
Figure TWI609965BD00702
<210> 627 <211> 9 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13輕鏈CDR 3 <400> 627
Figure TWI609965BD00703
<210> 628 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13重鏈CDR 1 <400> 628
Figure TWI609965BD00704
<210> 629 <211> 17 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13重鏈CDR 2 <400> 629
Figure TWI609965BD00705
<210> 630 <211> 11 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13重鏈CDR 3 <400> 630
Figure TWI609965BD00706
<210> 631 <211> 357 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13輕鏈可變功能部位<400> 631
Figure TWI609965BD00707
<210> 632 <211> 384 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab13重鏈可變功能部位<400> 632
Figure TWI609965BD00708
Figure TWI609965BD00709
<210> 633 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13輕鏈CDR 1 <400> 633
Figure TWI609965BD00710
<210> 634 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13輕鏈CDR 2 <400> 634
Figure TWI609965BD00711
<210> 635 <211> 27 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13輕鏈CDR 3 <400> 635
Figure TWI609965BD00712
<210> 636 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13重鏈CDR 1 <400> 636
Figure TWI609965BD00713
<210> 637 <211> 51 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13重鏈CDR 2 <400> 637
Figure TWI609965BD00714
<210> 638 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab13重鏈CDR 3 <400> 638
Figure TWI609965BD00715
<210> 639 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14輕鏈可變功能部位<400> 639
Figure TWI609965BD00716
Figure TWI609965BD00717
<210> 640 <211> 133 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab14重鏈可變功能部位<400> 640
Figure TWI609965BD00718
Figure TWI609965BD00719
<210> 641 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14輕鏈CDR 1 <400> 641
Figure TWI609965BD00720
<210> 642 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14輕鏈CDR 2 <400> 642
Figure TWI609965BD00721
<210> 643 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14輕鏈CDR 3 <400> 643
Figure TWI609965BD00722
<210> 644 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14重鏈CDR 1 <400> 644
Figure TWI609965BD00723
<210> 645 <211> 16 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14重鏈CDR 2 <400> 645
Figure TWI609965BD00724
<210> 646 <211> 19 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14重鏈CDR 3 <400> 646
Figure TWI609965BD00725
<210> 647 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14輕鏈可變功能部位<400> 647
Figure TWI609965BD00726
Figure TWI609965BD00727
<210> 648 <211> 399 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab14重鏈可變功能部位<400> 648
Figure TWI609965BD00728
<210> 649 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14輕鏈CDR 1 <400> 649
Figure TWI609965BD00729
<210> 650 <211> 21 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14輕鏈CDR 2 <400> 650
Figure TWI609965BD00730
<210> 651 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14輕鏈CDR 3 <400> 651
Figure TWI609965BD00731
<210> 652 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14重鏈CDR 1 <400> 652
Figure TWI609965BD00732
<210> 653 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14重鏈CDR 2 <400> 653
Figure TWI609965BD00733
<210> 654 <211> 57 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab14重鏈CDR 3 <400> 654
Figure TWI609965BD00734
<210> 655 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15輕鏈可變功能部位<400> 655
Figure TWI609965BD00735
Figure TWI609965BD00736
<210> 656 <211> 119 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab15重鏈可變功能部位<400> 656
Figure TWI609965BD00737
<210> 657 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15輕鏈CDR 1 <400> 657
Figure TWI609965BD00738
<210> 658 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15輕鏈CDR 2 <400> 658
Figure TWI609965BD00739
<210> 659 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15輕鏈CDR 3 <400> 659
Figure TWI609965BD00740
<210> 660 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15重鏈CDR 1 <400> 660
Figure TWI609965BD00741
<210> 661 <211> 17 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15重鏈CDR 2 <400> 661
Figure TWI609965BD00742
<210> 662 <211> 4 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15重鏈CDR 3 <400> 662
Figure TWI609965BD00743
<210> 663 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15輕鏈可變功能部位<400> 663
Figure TWI609965BD00744
<210> 664 <211> 357 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab15重鏈可變功能部位<400> 664
Figure TWI609965BD00745
<210> 665 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15輕鏈CDR 1 <400> 665
Figure TWI609965BD00746
<210> 666 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15輕鏈CDR 2 <400> 666
Figure TWI609965BD00747
<210> 667 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15輕鏈CDR 3 <400> 667
Figure TWI609965BD00748
<210> 668 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15重鏈CDR 1 <400> 668
Figure TWI609965BD00749
<210> 669 <211> 51 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15重鏈CDR 2 <400> 669
Figure TWI609965BD00750
<210> 670 <211> 12 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab15重鏈CDR 3 <400> 670
Figure TWI609965BD00751
<210> 671 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16輕鏈可變功能部位<400> 671
Figure TWI609965BD00752
Figure TWI609965BD00753
<210> 672 <211> 125 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab16重鏈可變功能部位<400> 672
Figure TWI609965BD00754
Figure TWI609965BD00755
<210> 673 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16輕鏈CDR 1 <400> 673
Figure TWI609965BD00756
<210> 674 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16輕鏈CDR 2 <400> 674
Figure TWI609965BD00757
<210> 675 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16輕鏈CDR 3 <400> 675
Figure TWI609965BD00758
<210> 676 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16重鏈CDR 1 <400> 676
Figure TWI609965BD00759
<210> 677 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16重鏈CDR 2 <400> 677
Figure TWI609965BD00760
<210> 678 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16重鏈CDR 3 <400> 678
Figure TWI609965BD00761
<210> 679 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16輕鏈可變功能部位<400> 679
Figure TWI609965BD00762
<210> 680 <211> 375 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab16重鏈可變功能部位<400> 680
Figure TWI609965BD00763
Figure TWI609965BD00764
<210> 681 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16輕鏈CDR 1 <400> 681
Figure TWI609965BD00765
<210> 682 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16輕鏈CDR 2 <400> 682
Figure TWI609965BD00766
<210> 683 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16輕鏈CDR 3 <400> 683
Figure TWI609965BD00767
<210> 684 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16重鏈CDR 1 <400> 684
Figure TWI609965BD00768
<210> 685 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16重鏈CDR 2 <400> 685
Figure TWI609965BD00769
<210> 686 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab16重鏈CDR 3 <400> 686
Figure TWI609965BD00770
<210> 687 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab17輕鏈可變功能部位<400> 687
Figure TWI609965BD00771
Figure TWI609965BD00772
<210> 688 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab17重鏈可變功能部位<400> 688
Figure TWI609965BD00773
Figure TWI609965BD00774
<210> 689 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17輕鏈CDR 1 <400> 689
Figure TWI609965BD00775
<210> 690 <211> 7 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17輕鏈CDR 2 <400> 690
Figure TWI609965BD00776
<210> 691 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17輕鏈CDR 3 <400> 691
Figure TWI609965BD00777
<210> 692 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17重鏈CDR 1 <400> 692
Figure TWI609965BD00778
<210> 693 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17重鏈CDR 2 <400> 693
Figure TWI609965BD00779
<210> 694 <211> 8 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17重鏈CDR 3 <400> 694
Figure TWI609965BD00780
<210> 695 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab17輕鏈可變功能部位<400> 695
Figure TWI609965BD00781
<210> 696 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab17重鏈可變功能部位<400> 696
Figure TWI609965BD00782
<210> 697 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17輕鏈CDR 1 <400> 697
Figure TWI609965BD00783
<210> 698 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17輕鏈CDR 2 <400> 698
Figure TWI609965BD00784
<210> 699 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17輕鏈CDR 3 <400> 699
Figure TWI609965BD00785
<210> 700 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17重鏈CDR 1 <400> 700
Figure TWI609965BD00786
<210> 701 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17重鏈CDR 2 <400> 701
Figure TWI609965BD00787
<210> 702 <211> 24 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab17重鏈CDR 3 <400> 702
Figure TWI609965BD00788
<210> 703 <211> 120 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab18輕鏈可變功能部位<400> 703
Figure TWI609965BD00789
<210> 704 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab18重鏈可變功能部位<400> 704
Figure TWI609965BD00790
<210> 705 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18輕鏈CDR 1 <400> 705
Figure TWI609965BD00791
<210> 706 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18輕鏈CDR 2 <400> 706
Figure TWI609965BD00792
<210> 707 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18輕鏈CDR 3 <400> 707
Figure TWI609965BD00793
<210> 708 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18重鏈CDR 1 <400> 708
Figure TWI609965BD00794
Figure TWI609965BD00795
<210> 709 <211> 18 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18重鏈CDR 2 <400> 709
Figure TWI609965BD00796
<210> 710 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18重鏈CDR 3 <400> 710
Figure TWI609965BD00797
<210> 711 <211> 360 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab18輕鏈可變功能部位<400> 711
Figure TWI609965BD00798
Figure TWI609965BD00799
<210> 712 <211> 384 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab18重鏈可變功能部位<400> 712
Figure TWI609965BD00800
<210> 713 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18輕鏈CDR 1 <400> 713
Figure TWI609965BD00801
<210> 714 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18輕鏈CDR 2 <400> 714
Figure TWI609965BD00802
<210> 715 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18輕鏈CDR 3 <400> 715
Figure TWI609965BD00803
<210> 716 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18重鏈CDR 1 <400> 716
Figure TWI609965BD00804
<210> 717 <211> 54 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18重鏈CDR 2 <400> 717
Figure TWI609965BD00805
<210> 718 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab18重鏈CDR 3 <400> 718
Figure TWI609965BD00806
<210> 719 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab19輕鏈可變功能部位<400> 719
Figure TWI609965BD00807
Figure TWI609965BD00808
<210> 720 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab19重鏈可變功能部位<400> 720
Figure TWI609965BD00809
Figure TWI609965BD00810
<210> 721 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19輕鏈CDR 1 <400> 721
Figure TWI609965BD00811
<210> 722 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19輕鏈CDR 2 <400> 722
Figure TWI609965BD00812
<210> 723 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19輕鏈CDR 3 <400> 723
Figure TWI609965BD00813
Figure TWI609965BD00814
<210> 724 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19重鏈CDR 1 <400> 724
Figure TWI609965BD00815
<210> 725 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19重鏈CDR 2 <400> 725
Figure TWI609965BD00816
<210> 726 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19重鏈CDR 3 <400> 726
Figure TWI609965BD00817
<210> 727 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab19輕鏈可變功能部位<400> 727
Figure TWI609965BD00818
<210> 728 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab19重鏈可變功能部位<400> 728
Figure TWI609965BD00819
<210> 729 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19輕鏈CDR 1 <400> 729
Figure TWI609965BD00820
<210> 730 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19輕鏈CDR 2 <400> 730
Figure TWI609965BD00821
<210> 731 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19輕鏈CDR 3 <400> 731
Figure TWI609965BD00822
<210> 732 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19重鏈CDR 1 <400> 732
Figure TWI609965BD00823
<210> 733 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19重鏈CDR 2 <400> 733
Figure TWI609965BD00824
<210> 734 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab19重鏈CDR 3 <400> 734
Figure TWI609965BD00825
<210> 735 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab20輕鏈可變功能部位<400> 735
Figure TWI609965BD00826
Figure TWI609965BD00827
<210> 736 <211> 129 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab20重鏈可變功能部位<400> 736
Figure TWI609965BD00828
Figure TWI609965BD00829
<210> 737 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20輕鏈CDR 1 <400> 737
Figure TWI609965BD00830
<210> 738 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20輕鏈CDR 2 <400> 738
Figure TWI609965BD00831
<210> 739 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20輕鏈CDR 3 <400> 739
Figure TWI609965BD00832
<210> 740 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20重鏈CDR 1 <400> 740
Figure TWI609965BD00833
<210> 741 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20重鏈CDR 2 <400> 741
Figure TWI609965BD00834
<210> 742 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20重鏈CDR 3 <400> 742
Figure TWI609965BD00835
<210> 743 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab20輕鏈可變功能部位<400> 743
Figure TWI609965BD00836
<210> 744 <211> 387 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab20重鏈可變功能部位 <400> 744
Figure TWI609965BD00837
<210> 745 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20輕鏈CDR 1 <400> 745
Figure TWI609965BD00838
<210> 746 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20輕鏈CDR 2 <400> 746
Figure TWI609965BD00839
<210> 747 <211> 33 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20輕鏈CDR 3 <400> 747
Figure TWI609965BD00840
<210> 748 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20重鏈CDR 1 <400> 748
Figure TWI609965BD00841
<210> 749 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20重鏈CDR 2 <400> 749
Figure TWI609965BD00842
<210> 750 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab20重鏈CDR 3 <400> 750
Figure TWI609965BD00843
<210> 751 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab21輕鏈可變功能部位<400> 751
Figure TWI609965BD00844
<210> 752 <211> 130 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab21重鏈可變功能部位 <400> 752
Figure TWI609965BD00845
<210> 753 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21輕鏈CDR 1 <400> 753
Figure TWI609965BD00846
<210> 754 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21輕鏈CDR 2 <400> 754
Figure TWI609965BD00847
<210> 755 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21輕鏈CDR 3 <400> 755
Figure TWI609965BD00848
<210> 756 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21重鏈CDR 1 <400> 756
Figure TWI609965BD00849
Figure TWI609965BD00850
<210> 757 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21重鏈CDR 2 <400> 757
Figure TWI609965BD00851
<210> 758 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21重鏈CDR 3 <400> 758
Figure TWI609965BD00852
<210> 759 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab21輕鏈可變功能部位<400> 759
Figure TWI609965BD00853
Figure TWI609965BD00854
<210> 760 <211> 390 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab21重鏈可變功能部位<400> 760
Figure TWI609965BD00855
<210> 761 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21輕鏈CDR 1 <400> 761
Figure TWI609965BD00856
<210> 762 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21輕鏈CDR 2 <400> 762
Figure TWI609965BD00857
<210> 763 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21輕鏈CDR 3 <400> 763
Figure TWI609965BD00858
<210> 764 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21重鏈CDR 1 <400> 764
Figure TWI609965BD00859
<210> 765 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21重鏈CDR 2 <400> 765
Figure TWI609965BD00860
<210> 766 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab21重鏈CDR 3 <400> 766
Figure TWI609965BD00861
<210> 767 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab22輕鏈可變功能部位<400> 767
Figure TWI609965BD00862
Figure TWI609965BD00863
<210> 768 <211> 130 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab22重鏈可變功能部位<400> 768
Figure TWI609965BD00864
Figure TWI609965BD00865
<210> 769 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22輕鏈CDR 1 <400> 769
Figure TWI609965BD00866
<210> 770 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22輕鏈CDR 2 <400> 770
Figure TWI609965BD00867
<210> 771 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22輕鏈CDR 3 <400> 771
Figure TWI609965BD00868
<210> 772 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22重鏈CDR 1 <400> 772
Figure TWI609965BD00869
<210> 773 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22重鏈CDR 2 <400> 773
Figure TWI609965BD00870
<210> 774 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22重鏈CDR 3 <400> 774
Figure TWI609965BD00871
<210> 775 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab22輕鏈可變功能部位<400> 775
Figure TWI609965BD00872
<210> 776 <211> 390 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab22重鏈可變功能部位<400> 776
Figure TWI609965BD00873
Figure TWI609965BD00874
<210> 777 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22輕鏈CDR 1 <400> 777
Figure TWI609965BD00875
<210> 778 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22輕鏈CDR 2 <400> 778
Figure TWI609965BD00876
<210> 779 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22輕鏈CDR 3 <400> 779
Figure TWI609965BD00877
<210> 780 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22重鏈CDR 1 <400> 780
Figure TWI609965BD00878
<210> 781 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22重鏈CDR 2 <400> 781
Figure TWI609965BD00879
<210> 782 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab22重鏈CDR 3 <400> 782
Figure TWI609965BD00880
<210> 783 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab23輕鏈可變功能部位<400> 783
Figure TWI609965BD00881
Figure TWI609965BD00882
<210> 784 <211> 130 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab23重鏈可變功能部位<400> 784
Figure TWI609965BD00883
Figure TWI609965BD00884
<210> 785 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23輕鏈CDR 1 <400> 785
Figure TWI609965BD00885
<210> 786 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23輕鏈CDR 2 <400> 786
Figure TWI609965BD00886
<210> 787 <211> 9 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23輕鏈CDR 3 <400> 787
Figure TWI609965BD00887
<210> 788 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23重鏈CDR 1 <400> 788
Figure TWI609965BD00888
<210> 789 <211> 18 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23重鏈CDR 2 <400> 789
Figure TWI609965BD00889
Figure TWI609965BD00890
<210> 790 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23重鏈CDR 3 <400> 790
Figure TWI609965BD00891
<210> 791 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab23輕鏈可變功能部位<400> 791
Figure TWI609965BD00892
<210> 792 <211> 390 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab23重鏈可變功能部位<400> 792
Figure TWI609965BD00893
<210> 793 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23輕鏈CDR 1 <400> 793
Figure TWI609965BD00894
<210> 794 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23輕鏈CDR 2 <400> 794
Figure TWI609965BD00895
<210> 795 <211> 27 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23輕鏈CDR 3 <400> 795
Figure TWI609965BD00896
<210> 796 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23重鏈CDR 1 <400> 796
Figure TWI609965BD00897
<210> 797 <211> 54 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23重鏈CDR 2 <400> 797
Figure TWI609965BD00898
<210> 798 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab23重鏈CDR 3 <400> 798
Figure TWI609965BD00899
<210> 799 <211> 120 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab24輕鏈可變功能部位<400> 799
Figure TWI609965BD00900
<210> 800 <211> 127 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab24重鏈可變功能部位<400> 800
Figure TWI609965BD00901
<210> 801 <211> 11 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24輕鏈CDR 1 <400> 801
Figure TWI609965BD00902
<210> 802 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24輕鏈CDR 2 <400> 802
Figure TWI609965BD00903
<210> 803 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24輕鏈CDR 3 <400> 803
Figure TWI609965BD00904
<210> 804 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24重鏈CDR 1 <400> 804
Figure TWI609965BD00905
<210> 805 <211> 18 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24重鏈CDR 2 <400> 805
Figure TWI609965BD00906
<210> 806 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24重鏈CDR 3 <400> 806
Figure TWI609965BD00907
<210> 807 <211> 360 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab24輕鏈可變功能部位<400> 807
Figure TWI609965BD00908
<210> 808 <211> 381 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab24重鏈可變功能部位<400> 808
Figure TWI609965BD00909
<210> 809 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24輕鏈CDR 1 <400> 809
Figure TWI609965BD00910
<210> 810 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24輕鏈CDR 2 <400> 810
Figure TWI609965BD00911
<210> 811 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24輕鏈CDR 3 <400> 811
Figure TWI609965BD00912
<210> 812 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24重鏈CDR 1 <400> 812
Figure TWI609965BD00913
<210> 813 <211> 54 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24重鏈CDR 2 <400> 813
Figure TWI609965BD00914
<210> 814 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab24重鏈CDR 3 <400> 814
Figure TWI609965BD00915
<210> 815 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab25輕鏈可變功能部位<400> 815
Figure TWI609965BD00916
Figure TWI609965BD00917
<210> 816 <211> 130 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab25重鏈可變功能部位<400> 816
Figure TWI609965BD00918
Figure TWI609965BD00919
<210> 817 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25輕鏈CDR 1 <400> 817
Figure TWI609965BD00920
<210> 818 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25輕鏈CDR 2 <400> 818
Figure TWI609965BD00921
<210> 819 <211> 12 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25輕鏈CDR 3 <400> 819
Figure TWI609965BD00922
<210> 820 <211> 6 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25重鏈CDR 1 <400> 820
Figure TWI609965BD00923
<210> 821 <211> 17 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25重鏈CDR 2 <400> 821
Figure TWI609965BD00924
<210> 822 <211> 14 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25重鏈CDR 3 <400> 822
Figure TWI609965BD00925
<210> 823 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab25輕鏈可變功能部位<400> 823
Figure TWI609965BD00926
<210> 824 <211> 390 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab25重鏈可變功能部位<400> 824
Figure TWI609965BD00927
Figure TWI609965BD00928
<210> 825 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25輕鏈CDR 1 <400> 825
Figure TWI609965BD00929
<210> 826 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25輕鏈CDR 2 <400> 826
Figure TWI609965BD00930
<210> 827 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25輕鏈CDR 3 <400> 827
Figure TWI609965BD00931
<210> 828 <211> 18 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25重鏈CDR 1 <400> 828
Figure TWI609965BD00932
<210> 829 <211> 51 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25重鏈CDR 2 <400> 829
Figure TWI609965BD00933
<210> 830 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab25重鏈CDR 3 <400> 830
Figure TWI609965BD00934
<210> 831 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab26輕鏈可變功能部位<400> 831
Figure TWI609965BD00935
<210> 832 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab26重鏈可變功能部位<400> 832
Figure TWI609965BD00936
Figure TWI609965BD00937
<210> 833 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26輕鏈CDR 1 <400> 833
Figure TWI609965BD00938
<210> 834 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26輕鏈CDR 2 <400> 834
Figure TWI609965BD00939
<210> 835 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26輕鏈CDR 3 <400> 835
Figure TWI609965BD00940
<210> 836 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26重鏈CDR 1 <400> 836
Figure TWI609965BD00941
<210> 837 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26重鏈CDR 2 <400> 837
Figure TWI609965BD00942
<210> 838 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26重鏈CDR 3 <400> 838
Figure TWI609965BD00943
<210> 839 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab26輕鏈可變功能部位<400> 839
Figure TWI609965BD00944
<210> 840 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab26重鏈可變功能部位<400> 840
Figure TWI609965BD00945
<210> 841 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26輕鏈CDR 1 <400> 841
Figure TWI609965BD00946
<210> 842 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26輕鏈CDR 2 <400> 842
Figure TWI609965BD00947
<210> 843 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26輕鏈CDR 3 <400> 843
Figure TWI609965BD00948
<210> 844 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26重鏈CDR 1 <400> 844
Figure TWI609965BD00949
<210> 845 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26重鏈CDR 2 <400> 845
Figure TWI609965BD00950
<210> 846 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab26重鏈CDR 3 <400> 846
Figure TWI609965BD00951
<210> 847 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab27輕鏈可變功能部位<400> 847
Figure TWI609965BD00952
<210> 848 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab27重鏈可變功能部位<400> 848
Figure TWI609965BD00953
<210> 849 <211> 11 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27輕鏈CDR 1 <400> 849
Figure TWI609965BD00954
<210> 850 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27輕鏈CDR 2 <400> 850
Figure TWI609965BD00955
<210> 851 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27輕鏈CDR 3 <400> 851
Figure TWI609965BD00956
<210> 852 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27重鏈CDR 1 <400> 852
Figure TWI609965BD00957
<210> 853 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27重鏈CDR 2 <400> 853
Figure TWI609965BD00958
<210> 854 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27重鏈CDR 3 <400> 854
Figure TWI609965BD00959
<210> 855 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab27輕鏈可變功能部位<400> 855
Figure TWI609965BD00960
Figure TWI609965BD00961
<210> 856 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab27重鏈可變功能部位<400> 856
Figure TWI609965BD00962
<210> 857 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27輕鏈CDR 1 <400> 857
Figure TWI609965BD00963
<210> 858 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27輕鏈CDR 2 <400> 858
Figure TWI609965BD00964
<210> 859 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27輕鏈CDR 3 <400> 859
Figure TWI609965BD00965
<210> 860 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27重鏈CDR 1 <400> 860
Figure TWI609965BD00966
<210> 861 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27重鏈CDR 2 <400> 861
Figure TWI609965BD00967
<210> 862 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab27重鏈CDR 3 <400> 862
Figure TWI609965BD00968
<210> 863 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab28輕鏈可變功能部位<400> 863
Figure TWI609965BD00969
Figure TWI609965BD00970
<210> 864 <211> 127 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab28重鏈可變功能部位<400> 864
Figure TWI609965BD00971
Figure TWI609965BD00972
<210> 865 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28輕鏈CDR 1 <400> 865
Figure TWI609965BD00973
<210> 866 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28輕鏈CDR 2 <400> 866
Figure TWI609965BD00974
<210> 867 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28輕鏈CDR 3 <400> 867
Figure TWI609965BD00975
Figure TWI609965BD00976
<210> 868 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28重鏈CDR 1 <400> 868
Figure TWI609965BD00977
<210> 869 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28重鏈CDR 2 <400> 869
Figure TWI609965BD00978
<210> 870 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28重鏈CDR 3 <400> 870
Figure TWI609965BD00979
<210> 871 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab28輕鏈可變功能部位<400> 871
Figure TWI609965BD00980
<210> 872 <211> 381 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab28重鏈可變功能部位<400> 872
Figure TWI609965BD00981
<210> 873 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28輕鏈CDR 1 <400> 873
Figure TWI609965BD00982
<210> 874 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28輕鏈CDR 2 <400> 874
Figure TWI609965BD00983
<210> 875 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28輕鏈CDR 3 <400> 875
Figure TWI609965BD00984
<210> 876 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28重鏈CDR 1 <400> 876
Figure TWI609965BD00985
<210> 877 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28重鏈CDR 2 <400> 877
Figure TWI609965BD00986
<210> 878 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab28重鏈CDR 3 <400> 878
Figure TWI609965BD00987
<210> 879 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab29輕鏈可變功能部位<400> 879
Figure TWI609965BD00988
Figure TWI609965BD00989
<210> 880 <211> 126 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab29重鏈可變功能部位<400> 880
Figure TWI609965BD00990
Figure TWI609965BD00991
<210> 881 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29輕鏈CDR 1 <400> 881
Figure TWI609965BD00992
<210> 882 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29輕鏈CDR 2 <400> 882
Figure TWI609965BD00993
<210> 883 <211> 9 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29輕鏈CDR 3 <400> 883
Figure TWI609965BD00994
<210> 884 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29重鏈CDR 1 <400> 884
Figure TWI609965BD00995
<210> 885 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29重鏈CDR 2 <400> 885
Figure TWI609965BD00996
<210> 886 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29重鏈CDR 3 <400> 886
Figure TWI609965BD00997
<210> 887 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab29輕鏈可變功能部位<400> 887
Figure TWI609965BD00998
<210> 888 <211> 378 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab29重鏈可變功能部位<400> 888
Figure TWI609965BD00999
Figure TWI609965BD01000
<210> 889 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29輕鏈CDR 1 <400> 889
Figure TWI609965BD01001
<210> 890 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29輕鏈CDR 2 <400> 890
Figure TWI609965BD01002
<210> 891 <211> 27 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29輕鏈CDR 3 <400> 891
Figure TWI609965BD01003
<210> 892 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29重鏈CDR 1 <400> 892
Figure TWI609965BD01004
<210> 893 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29重鏈CDR 2 <400> 893
Figure TWI609965BD01005
<210> 894 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab29重鏈CDR 3 <400> 894
Figure TWI609965BD01006
<210> 895 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab30輕鏈可變功能部位 <400> 895
Figure TWI609965BD01007
<210> 896 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab30重鏈可變功能部位<400> 896
Figure TWI609965BD01008
Figure TWI609965BD01009
<210> 897 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30輕鏈CDR 1 <400> 897
Figure TWI609965BD01010
<210> 898 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30輕鏈CDR 2 <400> 898
Figure TWI609965BD01011
<210> 899 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30輕鏈CDR 3 <400> 899
Figure TWI609965BD01012
<210> 900 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30重鏈CDR 1 <400> 900
Figure TWI609965BD01013
<210> 901 <211> 16 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30重鏈CDR 2 <400> 901
Figure TWI609965BD01014
<210> 902 <211> 15 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30重鏈CDR 3 <400> 902
Figure TWI609965BD01015
<210> 903 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab30輕鏈可變功能部位<400> 903
Figure TWI609965BD01016
<210> 904 <211> 384 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab30重鏈可變功能部位<400> 904
Figure TWI609965BD01017
<210> 905 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30輕鏈CDR 1 <400> 905
Figure TWI609965BD01018
<210> 906 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30輕鏈CDR 2 <400> 906
Figure TWI609965BD01019
<210> 907 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30輕鏈CDR 3 <400> 907
Figure TWI609965BD01020
<210> 908 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30重鏈CDR 1 <400> 908
Figure TWI609965BD01021
<210> 909 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30重鏈CDR 2 <400> 909
Figure TWI609965BD01022
<210> 910 <211> 45 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab30重鏈CDR 3 <400> 910
Figure TWI609965BD01023
<210> 911 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab31輕鏈可變功能部位<400> 911
Figure TWI609965BD01024
<210> 912 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab31重鏈可變功能部位<400> 912
Figure TWI609965BD01025
<210> 913 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31輕鏈CDR 1 <400> 913
Figure TWI609965BD01026
<210> 914 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31輕鏈CDR 2 <400> 914
Figure TWI609965BD01027
<210> 915 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31輕鏈CDR 3 <400> 915
Figure TWI609965BD01028
<210> 916 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31重鏈CDR 1 <400> 916
Figure TWI609965BD01029
<210> 917 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31重鏈CDR 2 <400> 917
Figure TWI609965BD01030
<210> 918 <211> 15 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31重鏈CDR 3 <400> 918
Figure TWI609965BD01031
<210> 919 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab31輕鏈可變功能部位<400> 919
Figure TWI609965BD01032
Figure TWI609965BD01033
<210> 920 <211> 384 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab31重鏈可變功能部位<400> 920
Figure TWI609965BD01034
<210> 921 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31輕鏈CDR 1 <400> 921
Figure TWI609965BD01035
<210> 922 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31輕鏈CDR 2 <400> 922
Figure TWI609965BD01036
<210> 923 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31輕鏈CDR 3 <400> 923
Figure TWI609965BD01037
<210> 924 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31重鏈CDR 1 <400> 924
Figure TWI609965BD01038
<210> 925 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31重鏈CDR 2 <400> 925
Figure TWI609965BD01039
<210> 926 <211> 45 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab31重鏈CDR 3 <400> 926
Figure TWI609965BD01040
<210> 927 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab32輕鏈可變功能部位<400> 927
Figure TWI609965BD01041
Figure TWI609965BD01042
<210> 928 <211> 123 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab32重鏈可變功能部位<400> 928
Figure TWI609965BD01043
Figure TWI609965BD01044
<210> 929 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32輕鏈CDR 1 <400> 929
Figure TWI609965BD01045
<210> 930 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32輕鏈CDR 2 <400> 930
Figure TWI609965BD01046
<210> 931 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32輕鏈CDR 3 <400> 931
Figure TWI609965BD01047
<210> 932 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32重鏈CDR 1 <400> 932
Figure TWI609965BD01048
<210> 933 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32重鏈CDR 2 <400> 933
Figure TWI609965BD01049
<210> 934 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32重鏈CDR 3 <400> 934
Figure TWI609965BD01050
<210> 935 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab32輕鏈可變功能部位<400> 935
Figure TWI609965BD01051
<210> 936 <211> 369 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab32重鏈可變功能部位<400> 936
Figure TWI609965BD01052
Figure TWI609965BD01053
<210> 937 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32輕鏈CDR 1 <400> 937
Figure TWI609965BD01054
<210> 938 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32輕鏈CDR 2 <400> 938
Figure TWI609965BD01055
<210> 939 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32輕鏈CDR 3 <400> 939
Figure TWI609965BD01056
<210> 940 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32重鏈CDR 1 <400> 940
Figure TWI609965BD01057
<210> 941 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32重鏈CDR 2 <400> 941
Figure TWI609965BD01058
<210> 942 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab32重鏈CDR 3 <400> 942
Figure TWI609965BD01059
<210> 943 <211> 121 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab33輕鏈可變功能部位<400> 943
Figure TWI609965BD01060
Figure TWI609965BD01061
<210> 944 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab33重鏈可變功能部位<400> 944
Figure TWI609965BD01062
Figure TWI609965BD01063
<210> 945 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33輕鏈CDR 1 <400> 945
Figure TWI609965BD01064
<210> 946 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33輕鏈CDR 2 <400> 946
Figure TWI609965BD01065
Figure TWI609965BD01066
<210> 947 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33輕鏈CDR 3 <400> 947
Figure TWI609965BD01067
<210> 948 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33重鏈CDR 1 <400> 948
Figure TWI609965BD01068
<210> 949 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33重鏈CDR 2 <400> 949
Figure TWI609965BD01069
<210> 950 <211> 8 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33重鏈CDR 3 <400> 950
Figure TWI609965BD01070
<210> 951 <211> 363 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab33輕鏈可變功能部位<400> 951
Figure TWI609965BD01071
<210> 952 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab33重鏈可變功能部位<400> 952
Figure TWI609965BD01072
<210> 953 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33輕鏈CDR 1 <400> 953
Figure TWI609965BD01073
<210> 954 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33輕鏈CDR 2 <400> 954
Figure TWI609965BD01074
<210> 955 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33輕鏈CDR 3 <400> 955
Figure TWI609965BD01075
<210> 956 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33重鏈CDR 1 <400> 956
Figure TWI609965BD01076
<210> 957 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33重鏈CDR 2 <400> 957
Figure TWI609965BD01077
<210> 958 <211> 24 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab33重鏈CDR 3 <400> 958
Figure TWI609965BD01078
<210> 959 <211> 122 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab34輕鏈可變功能部位<400> 959
Figure TWI609965BD01079
<210> 960 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab34重鏈可變功能部位<400> 960
Figure TWI609965BD01080
<210> 961 <211> 13 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34輕鏈CDR 1 <400> 961
Figure TWI609965BD01081
<210> 962 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34輕鏈CDR 2 <400> 962
Figure TWI609965BD01082
<210> 963 <211> 10 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34輕鏈CDR 3 <400> 963
Figure TWI609965BD01083
<210> 964 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34重鏈CDR 1 <400> 964
Figure TWI609965BD01084
<210> 965 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34重鏈CDR 2 <400> 965
Figure TWI609965BD01085
<210> 966 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34重鏈CDR 3 <400> 966
Figure TWI609965BD01086
<210> 967 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab34輕鏈可變功能部位<400> 967
Figure TWI609965BD01087
Figure TWI609965BD01088
<210> 968 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab34重鏈可變功能部位<400> 968
Figure TWI609965BD01089
<210> 969 <211> 39 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34輕鏈CDR 1 <400> 969
Figure TWI609965BD01090
<210> 970 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34輕鏈CDR 2 <400> 970
Figure TWI609965BD01091
<210> 971 <211> 30 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34輕鏈CDR 3 <400> 971
Figure TWI609965BD01092
<210> 972 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34重鏈CDR 1 <400> 972
Figure TWI609965BD01093
<210> 973 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34重鏈CDR 2 <400> 973
Figure TWI609965BD01094
<210> 974 <211> 33 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab34重鏈CDR 3 <400> 974
Figure TWI609965BD01095
<210> 975 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab35輕鏈可變功能部位<400> 975
Figure TWI609965BD01096
Figure TWI609965BD01097
<210> 976 <211> 128 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab35重鏈可變功能部位<400> 976
Figure TWI609965BD01098
<210> 977 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35輕鏈CDR 1 <400> 977
Figure TWI609965BD01099
<210> 978 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35輕鏈CDR 2 <400> 978
Figure TWI609965BD01100
<210> 979 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35輕鏈CDR 3 <400> 979
Figure TWI609965BD01101
<210> 980 <211> 5 <212> PRT <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35重鏈CDR 1 <400> 980
Figure TWI609965BD01102
<210> 981 <211> 17 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35重鏈CDR 2 <400> 981
Figure TWI609965BD01103
<210> 982 <211> 14 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35重鏈CDR 3 <400> 982
Figure TWI609965BD01104
<210> 983 <211> 366 <212> DNA <213> 兔 <220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab35輕鏈可變功能部位<400> 983
Figure TWI609965BD01105
<210> 984 <211> 384 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab35重鏈可變功能部位<400> 984
Figure TWI609965BD01106
<210> 985 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35輕鏈CDR 1 <400> 985
Figure TWI609965BD01107
<210> 986 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35輕鏈CDR 2 <400> 986
Figure TWI609965BD01108
<210> 987 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35輕鏈CDR 3 <400> 987
Figure TWI609965BD01109
<210> 988 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35重鏈CDR 1 <400> 988
Figure TWI609965BD01110
<210> 989 <211> 51 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35重鏈CDR 2 <400> 989
Figure TWI609965BD01111
<210> 990 <211> 42 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab35重鏈CDR 3 <400> 990
Figure TWI609965BD01112
<210> 991 <211> 122 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab36輕鏈可變功能部位<400> 991
Figure TWI609965BD01113
Figure TWI609965BD01114
<210> 992 <211> 124 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab36重鏈可變功能部位<400> 992
Figure TWI609965BD01115
Figure TWI609965BD01116
<210> 993 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36輕鏈CDR 1 <400> 993
Figure TWI609965BD01117
<210> 994 <211> 7 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36輕鏈CDR 2 <400> 994
Figure TWI609965BD01118
<210> 995 <211> 12 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36輕鏈CDR 3 <400> 995
Figure TWI609965BD01119
<210> 996 <211> 5 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36重鏈CDR 1 <400> 996
Figure TWI609965BD01120
<210> 997 <211> 16 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36重鏈CDR 2 <400> 997
Figure TWI609965BD01121
<210> 998 <211> 11 <212> PRT <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36重鏈CDR 3 <400> 998
Figure TWI609965BD01122
<210> 999 <211> 366 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab36輕鏈可變功能部位<400> 999
Figure TWI609965BD01123
<210> 1000 <211> 372 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6－抗體Ab36重鏈可變功能部位<400> 1000
Figure TWI609965BD01124
Figure TWI609965BD01125
<210> 1001 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36輕鏈CDR 1 <400> 1001
Figure TWI609965BD01126
<210> 1002 <211> 21 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36輕鏈CDR 2 <400> 1002
Figure TWI609965BD01127
<210> 1003 <211> 36 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36輕鏈CDR 3 <400> 1003
Figure TWI609965BD01128
<210> 1004 <211> 15 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36重鏈CDR 1 <400> 1004
Figure TWI609965BD01129
<210> 1005 <211> 48 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36重鏈CDR 2 <400> 1005
Figure TWI609965BD01130
<210> 1006 <211> 33 <212> DNA <213> 兔<220> <223> 抗－IL－6抗體Ab36重鏈CDR 3 <400> 1006
Figure TWI609965BD01131
<210> 1007 <211> 105 <212> PRT <213> 人造序列<220> <223> Ab1之
Figure TWI609965BD01132
恆定功能部位<400> 1007
Figure TWI609965BD01133
Figure TWI609965BD01134
<210> 1008 <211> 315 <212> DNA <213> 人造序列<220> <223> Ab1之
Figure TWI609965BD01135
恆定功能部位<400> 1008
Figure TWI609965BD01136
Figure TWI609965BD01137
<210> 1009 <211> 330 <212> PRT <213> 人造序列<220> <223> Ab1之γ－1恆定功能部位<400> 1009
Figure TWI609965BD01138
Figure TWI609965BD01139
Figure TWI609965BD01140
<210> 1010 <211> 990 <212> DNA <213> 人造序列<220> <223> Ab1之γ－1恆定功能部位<400> 1010
Figure TWI609965BD01141
Figure TWI609965BD01142
<210> 1011 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1011
Figure TWI609965BD01143
<210> 1012 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1012
Figure TWI609965BD01144
<210> 1013 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1013
Figure TWI609965BD01145
<210> 1014 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1014
Figure TWI609965BD01146
<210> 1015 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1015
Figure TWI609965BD01147
<210> 1016 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1016
Figure TWI609965BD01148
<210> 1017 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1017
Figure TWI609965BD01149
<210> 1018 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1018
Figure TWI609965BD01150
<210> 1019 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1019
Figure TWI609965BD01151
<210> 1020 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1020
Figure TWI609965BD01152
<210> 1021 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1021
Figure TWI609965BD01153
<210> 1022 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1022
Figure TWI609965BD01154
<210> 1023 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1023
Figure TWI609965BD01155
<210> 1024 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1024
Figure TWI609965BD01156
<210> 1025 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1025
Figure TWI609965BD01157
<210> 1026 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1026
Figure TWI609965BD01158
<210> 1027 <211> 15 <212> PRT <213> 人 <400> 1027
Figure TWI609965BD01159
<210> 1028 <211> 15 <212> PRT <213> 人<400> 1028
Figure TWI609965BD01160
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Claims (18)

  1. 一種用於製造經人化之抗體或經人化之抗體片段的方法，該抗體或抗體片段係衍生自一可結合至期望之抗原的親代兔抗體，且其係適合用於人類治療，其中該方法包含下列步驟：(1)製造一編碼經人化之輕鏈序列或其片段的DNA藉由：(i)由可特異性結合至該期望之抗原之兔抗體獲得兔輕鏈抗體序列，及識別跨距且包含骨架1(FR1)、互補決定區1(CDR1)、骨架2(FR2)、互補決定區2(CDR2)以及骨架3(FR3)之胺基酸殘基；(ii)使用跨距FR1、CDR1、FR2、CDR2及FR3之該兔輕鏈胺基酸序列篩查含有人輕鏈胺基酸序列之存庫進行同源性搜尋，以及於該兔輕鏈序列及一或多個人輕鏈序列二者中識別與FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2區相對應之配置及其特定殘基，且將該兔輕鏈胺基酸序列中之此等離散區與經選擇之人抗體輕鏈胺基酸序列的該等相對應區對齊，並選擇在胺基酸層級上具有與該兔輕鏈序列至少95%序列一致性之人輕鏈抗體序列；(iii)獲得編碼於步驟(1)(ii)中所識別之該經選擇之人輕鏈胺基酸序列的第一DNA；(iv)將編碼該兔輕鏈序列之互補決定區3(CDR3)的胺基酸殘基之第二DNA以讀碼框內(in-frame)之方式附接至該第一DNA的3’端； (v)選擇一人輕鏈骨架4(FR4)，其與該兔輕鏈序列之FR4差異至多為2-4個胺基酸殘基，且將編碼該經選擇之人FR4之第三DNA序列以讀碼框內(in-frame)之方式附接至步驟(1)(iv)中所獲得之該DNA的3’端，以導致一編碼經人化之輕鏈的DNA，其中該編碼人輕鏈骨架(FR)胺基酸殘基之DNA密碼子無一者經另一DNA密碼子取代，該另一DNA密碼子編碼與該兔輕鏈序列之FR胺基酸殘基相對應之一不同的胺基酸殘基；以及(2)製造一編碼經人化之重鏈或其片段的DNA藉由：(i)由可特異性結合至該期望之抗原之該相同的兔抗體獲得兔重鏈序列，及識別跨距且包含FR1、CDR1、FR2、CDR2及FR3之胺基酸殘基；(ii)使用跨距FR1、CDR1、FR2、CDR2及FR3之該兔重鏈胺基酸序列篩查含有人重鏈胺基酸序列之存庫進行同源性搜尋，以及於該兔重鏈胺基酸序列及一或多個人重鏈胺基酸序列二者中識別與FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2區相對應之配置及其特定殘基，且將該兔重鏈胺基酸序列中之此等離散區與經選擇之人重鏈胺基酸序列的該等相對應區對齊，並選擇在胺基酸層級上具有與該兔重鏈胺基酸序列至少95%序列一致性之人重鏈序列；(iii)獲得編碼步驟(2)(ii)中所識別之該人重鏈胺基酸序列之第一DNA；(iv)將編碼該兔重鏈序列之CDR3的胺基酸殘基之 第二DNA以讀碼框內(in-frame)之方式附接至該第一DNA的3’端；(v)選擇一人重鏈FR4，其與該兔重鏈序列之FR4差異至多為4個胺基酸殘基，且將編碼該經選擇之人FR4之第三DNA以讀碼框內(in-frame)之方式附接至步驟(2)(iv)中所獲得之該DNA的3’端，以導致一編碼人重鏈之DNA，其中該編碼人重鏈FR胺基酸殘基之DNA密碼子無一者經另一DNA密碼子取代，該另一DNA密碼子編碼與該兔重鏈序列之FR胺基酸殘基相對應之一不同的胺基酸殘基；以及(3)於一合適之宿主細胞中表現得自步驟(1)(v)之該DNA，其係編碼一經人化之輕鏈，以及表現得自步驟(2)(v)之該DNA，其係編碼一經人化之重鏈，藉此，該表現導致一能結合至該期望之抗原的經人化之抗體或經人化之抗體片段；以及其中該方法不包括任何進一步之親和力成熟步驟來最佳化或提升該所導致之經人化之抗體或抗體片段的抗原親和力。
  2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中(a)該第一FR1之第一個胺基酸為於該兔輕鏈之信號序列的C端(C-terminal)殘基後之第一個胺基酸，(b)該兔輕鏈之信號序列包含20-22個胺基酸殘基，(c)人輕鏈序列係於含有人可變輕鏈序列之一存庫中被識別， (d)該兔輕鏈序列中之該FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2區係藉由將該兔FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2區與該相對應之人輕鏈FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2區對齊來識別，(e)該兔輕鏈中之該兔CDR3包含9個至15個胺基酸殘基，(f)該兔輕鏈FR4區包含11個胺基酸殘基，(g)該兔輕鏈中之該FR3的C端胺基酸殘基係YYC，(h)該兔輕鏈中之該FR4的N端(N-terminal)胺基酸殘基係FGGGG，(i)該兔FR4之N端胺基酸殘基係VVKR，或(j)該經選擇之人FR4輕鏈序列包含FGGGTKVEIKR。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該所得之經人化抗體或經人化抗體片段能特異性地結合至選自於微生物抗原、人抗原、病毒性抗原、及過敏原中之一種抗原。
  4. 如申請專利範圍第1項之方法，其中(a)該兔重鏈之該第一個FR1胺基酸為於該兔重鏈之信號序列的C端之後的該第一個胺基酸，(b)該兔重鏈中之該FR3之C端末(C-terminal end)係距該兔重鏈中的該FR1之N端殘基95-100個胺基酸殘基，(c)該兔重鏈之信號序列包含不多於19個胺基酸殘基，(d)該經選擇之人重鏈胺基酸序列係藉由抗體成熟前所得之人生殖系列序列的BLAST搜尋被識別，(e)該經選擇之人重鏈在胺基酸層級上具有與該兔重鏈 之相對應區至少95%序列一致性，(f)該兔重鏈序列中之該FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2區係藉由將該兔FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2區與該相對應之人重鏈FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2區對齊來識別，(g)該人重鏈中之人FR1之C端的3個胺基酸殘基係經以該相對應之兔FR1之3個殘基置換，且該兔FR1之該3個殘基前方為ser-gly，(h)該人FR2之C端胺基酸殘基係以該相對應之兔FR2殘基置換，若該兔FR2殘基為甘胺酸，(i)位於距該兔CDR2之C端4個殘基之內的色胺酸殘基係以絲胺酸殘基置換，(j)該兔CDR3包含5-19個胺基酸殘基，(k)該兔CDR3隨後接著殘基WGXG，其中”X”為Q或P，(l)該兔FR4包含11個胺基酸殘基，或(m)該兔FR4包含WGQGTLVTVSS。
  5. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該經人化之抗體或經人化之抗體片段包含下列之一或多者：(a)能結合至一人抗原，該人抗原係選自於人自體抗原、細胞激素、受體蛋白質、酶、激素、受體配體、類固醇、生長因子及致癌基因，(b)其係附接至一效用部分(effector moiety)，或(c)能特異性地結合至細胞激素、生長因子或腫瘤特異性多肽。
  6. 如申請專利範圍第5項之方法，其中該效用部分係選自於藥物、毒素、酶、放射性核種、螢光基團、細胞激素、親和標記、及轉位多肽。
  7. 如申請專利範圍第6項之方法，其中該細胞激素、生長因子或腫瘤特異性多肽係選自IL-6、TNF、VEGF、IL-12、海普西汀或肝細胞生長因子之抗原。
  8. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該經人化之親代兔抗體係藉由一純株B細胞群製造，該B細胞群係(i)獲自一經免疫接種之兔子，以及(ii)分泌對該期望之抗原有特異性之單一抗體。
  9. 如申請專利範圍第1項之方法，其中用於表現該經人化之抗體或抗體片段之該宿主細胞係細菌、酵母或哺乳動物細胞。
  10. 如申請專利範圍第9項之方法，其中該酵母細胞係二倍體巴斯多比奇菌(Pichia pastoris)細胞。
  11. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該抗體或抗體片段係無糖基化(aglycosylated)。
  12. 如申請專利範圍第1項之方法其中該經人化之抗體或抗體片段係於多倍體酵母培養中表現，該培養可穩定表現且於培養基內分泌至少10-25毫克/升該抗體。
  13. 如申請專利範圍第12項之方法，其中該酵母係選自於下列菌屬：阿席歐酵母屬(Arxiozyma)；糞盤菌屬(Ascobotryozyma)；固囊酵母屬(Citeromyces)；德巴利酵母屬(Debaryomyces)；德克酵母屬(Dekkera)；假囊酵母 屬(Eremothecium)；伊薩酵母屬(Issatchenkia)；卡薩酵母屬(Kazachstania)；克魯維酵母屬(Kluyveromyces)；可達酵母屬(Kodamaea)；洛德酵母屬(Lodderomyces)；管囊酵母屬(Pachysolen)；比奇菌屬(Pichia)；酵母屬(Saccharomyces)；飽和孢酵母屬(Saturnispora)；四重孢酵母屬(Tetrapisispora)；有孢圓酵母屬(Torulaspora)；擬威爾酵母屬(Williopsis)；及接合酵母屬(Zygosaccharomyces)。
  14. 如申請專利範圍第13項之方法，其中該酵母菌屬為比奇菌屬。
  15. 如申請專利範圍第14項之方法，其中該比奇菌種屬係選自於巴斯多比奇菌(Pichia pastoris)、甲醇比奇菌(Pichia methanolica)及多形性漢遜酵母(Hansenula polymorpha)(角形比奇菌(Pichia angusta))。
  16. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該經人化之抗體或抗體片段係以小於或等於5×10-7M、10-7M、5×10-8M、10-8M、5×10-9M、10-9M、5×10-10M、10-10M、5×10-11M、10-11M、5×10-12M、10-12M、5×10-13M、10-13M或5×10-14M之解離常數(KD)結合至一抗原。
  17. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該經人化之抗體或抗體片段係以小於或等於5x10-10M之解離常數(KD)結合至一抗原。
  18. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該經人化之抗體或抗體片段係以小於或等於10-4S-1、5×10-5S-1、10-5S-1、 5×10-6S-1、10-6S-1、5×10-7S-1、或10-7S-1之解離率(Koff)結合至一抗原。
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