CZ290070B6 - Gen ldc kódující lysindekarboxylázu, mikroorganismus a způsob výroby L-lysinu - Google Patents
Gen ldc kódující lysindekarboxylázu, mikroorganismus a způsob výroby L-lysinu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ290070B6 CZ290070B6 CZ19971746A CZ174697A CZ290070B6 CZ 290070 B6 CZ290070 B6 CZ 290070B6 CZ 19971746 A CZ19971746 A CZ 19971746A CZ 174697 A CZ174697 A CZ 174697A CZ 290070 B6 CZ290070 B6 CZ 290070B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- gene
- lysine
- leu
- gly
- ala
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Popisuje se zp sob v²roby L-lysinu kultivac v kapaln m m diu za pomoci mikroorganismu rodu Escherichia, v n m byla aktivita dekarboxyl zy odpov dn za rozklad L-lysinu sn ena nebo u in na nefunk n , nap° klad bakterie rodu Escherichia se sn enou expres nov ho genu k duj c ho lysindekarboxyl zu a/nebo zn m ho genu cadA, p°i kter m se ponech L-lysin produkovat a akumulovat v kultiva n m m diu a potom se izoluje.\
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nového genu Escherichia coli pro lysindekarboxylázu, který odpovídá za rozklad L-lysinu, mikroorganismu náležejícího krodu Escherichia se sníženou expresí tohoto genu a/nebo dalšího genu pro lysindekarboxylázu, známého jako gen cadA a způsob výroby L-lysinu s použitím tohoto mikroorganismu. V poslední době totiž vzrůstá potřeba L-lysinu jako přídavku ke krmivům.
Dosavadní stav techniky
Lysindekarboxyláza, která katalyzuje dekarboxylaci L-lysinu za vzniku kadaverinu, je známa jako L-lysin rozkládající enzym bakterie Escherichia coli. Sekvence nukleotidů jejího genu, nazývaného cadA a aminokyselinová sekvence, kódovaná tímto genem, již byla popsána (Meng, S. a Bennett, G. N., J. Bacteriol., 174, 2659 (1992)). Existují dvě zprávy o lysindekarboxyláze kódované jiným genem než je gen cadA Escherichia coli, které popisují mírnou aktivitu, detekovanou u mutantního kmene Escherichia coli (Goldemberg, S. H., J. Bacteriol., 141, 1428 (1980); Wertheimer, S. J. a Leifer, Z., Biochem. Biophys. Res. Commun., 114, 882 (1983)). Goldemberg uvádí, že po působení tepla 60 °C po dobu 4 minut klesá enzymová aktivita přibližně o 30 %, zatímco Wertheimer uvádí, že tento jev nebyl pozorován. Přítomnost druhé dekarboxylázy lysinu je proto nejistá.
Na druhé straně je L-lysin vyráběn známými metodami za použití Escherichia coli, včetně způsobu, zahrnujícího kultivaci mutantního kmene, rezistentního k analogu lysinu nebo rekombinantního kmene, nesoucího vektor s vloženou deoxyribonukleovou kyselinou, která deoxyribonukleovou kyselinou, která nese genetickou informaci odpovídající biosyntéze L-lysinu (zveřejněná japonská patentová přihláška No. 56 18596). Není tam však žádná zmínka o výrobě L-lysinu s použitím mikroorganismu z rodu Escherichia se sníženou expresí genu pro lysindekarboxylázu.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu je nový gen pro lysindekarboxylázu Escherichia coli, vytvoření mikroorganismu z rodu Escherichia produkujícího L-lysin se sníženou expresí tohoto genu a/nebo genu cadA a způsob výroby L-lysinu kultivací mikroorganismu z rodu Escherichia.
Když byl autory vynálezu vytvořen kmen Escherichia coli, ve kterém byl vyřazen z funkce gen cadA, známý jako gen pro lysindekarboxylázu, bylo zjištěno, že tento kmen dále produkuje kadaverin jako produkt rozkladu L-lysinu. Byl tedy předpoklad, že v Escherichia coli by měl být přítomen neznámý gen pro lysindekarboxylázu, a že by mohl značně ovlivnit výrobu L-lysinu fermentací spoužitím mikroorganismu zrodu Escherichia. Výsledkem pokusů pro dosažení klonování tohoto genu bylo získání nového genu pro lysindekarboxylázu, který je odlišný od genu cadA. Bylo rovněž zjištěno, že enzymová aktivita rozkládající L-lysin se podstatně snížila nebo zmizela omezením exprese tohoto genu, a omezením exprese genu cadA v bakterii Escherichia coli produkující L-lysin, čímž výrazně vzrostla produktivita jeho výroby.
Předkládaný vynález poskytuje nový gen, kódující lysindekarboxylázu, pocházející z Escherichia coli. Tento gen byl označen jako „Idc“.
V dalším hledisku poskytuje předkládaný vynález mikroorganismus z rodu Escherichia produkující L-lysin se sníženou nebo chybějící lysindekarboxylázovou aktivitou.
-1 CZ 290070 B6
V ještě dalším aspektu poskytuje předkládaný vynález způsob výroby L-lysinu, který zahrnuje kroky kultivace mikroorganismu z rodu Escherichia popsaného výše v kapalném médiu, ve kterém se L-lysin vytváří a akumuluje, a jeho získání.
Mikroorganismus z rodu Escherichia popisovaný výše zahrnuje mikroorganismus, ve kterém je aktivita lysindekarboxylázy v buňkách snížena nebo odstraněna omezením exprese genu Idc a/nebo cadA. Předkládaný vynález je zevrubně popisován dále.
(1) Příprava fragmentu DNA, obsahující nový gen pro lysindekarboxylázu
Fragment DNA, obsahující nový gen lysindekarboxylázy (Idc) podle předkládaného vynálezu, je možno získat z dostupného kmene Escherichia coli, například kmene K-12 nebo odvozených kmenů následujícím způsobem.
Nejprve se získá gen cadA, který je genem známé lysindekarboxylázy, z chromozomální DNA kmene W3110 pocházejícího z Escherichia coli K-12 s použitím PCR (polymerázové řetězové reakce). Sekvence nukleotidů genu cadA a jím kódovaná sekvence aminokyselin je uvedena v SEQ ID NO: 5 a 6. Běžnými metodami pro práci s plazmidovými nebo fágovými vektory jsou klonovány z knihovny chromozomální DNA bakterie Escherichia coli W3110 fragmenty DNA se sekvencí podobnou genu cadA pro potvrzení, jestli je nový gen pro lysindekarboxylázu obsažen ve fragmentech DNA. Potvrzení faktu, že je předmětný gen přítomen, může být provedeno hybridizací podle Southema s použitím sondy, připravené metodou PCR.
Sekvence nukleotidů genu, obsaženého v takto získaném fragmentu DNA se určuje následujícím způsobem. Jako první krok je fragment DNA Iigován s plazmidovým vektorem, který se v buňkách Escherichia coli autonomně replikuje, a takto připravená rekombinantní DNA je potom zavedena do kompetentních buněk Escherichia coli. Získaný transformant je kultivován v kapalném médiu a rekombinantní DNA se získá z rozmnožených buněk. Úplná nukleotidová sekvence fragmentu DNA, obsaženého v získané rekombinantní DNA, se určuje dideoxymetodou (Sanger, F. a další, Proč. Nati. Acad. Sci., 74 5463 (1977)). Struktura DNA se analyzuje proto, aby bylo možno určit existující pozice promotoru, operátoru, sekvence SD, iniciačního kodonu, terminačního kodonu, otevřeného čtecího rámce apod.
Nový gen lysindekarboxylázy podle předkládaného vynálezu má sekvenci od 1005-1007 ATG do 3141-3143 GGA úplné nukleotidové sekvence fragmentu DNA, ukázaného v SEQ ID NO: 3 výpisu sekvencí. Tento gen kóduje lysindekarboxylázu se sekvencí aminokyselin, ukázanou v SEQ ID NO: 4 výpisu sekvencí. Bylo zjištěné, že homologie mezi novou lysindekarboxylázou a lysindekarboxylázou, kódovanou genem cadA, je 69,4 °/o.
Gen podle předkládaného vynálezu může být takový, který kóduje lysindekarboxylázu se sekvencí aminokyselin, ukázanou v SEQ ID NO: 4 výpisu sekvencí, jejíž sekvence nukletidů však není omezena na výše popsanou sekvenci nukleotidů. Lysindekarboxyláza kódovaná genem podle předkládaného vynálezu, může mít substituce, delece nebo inzerce jednoho nebo více aminokyselinových zbytků výše popsané sekvence aminokyselin bez podstatného poškození aktivity lysindekarboxylázy. Geny, kódující lysindekarboxylázu s takovou delecí, inzercí nebo substitucí je možno získat z variant, spontánně mutovaných kmenů nebo uměle mutovaných kmenů Escherichia coli nebo z mikroorganismů patřících k rodu Escherichia jiných než je Escherichia coli. Mutantní geny kódující lysindekarboxylázu s delecí, inzercí nebo substitucí mohou být také získány provedením mutace in vitro nebo místně specifické mutageneze genu, kódujícího lysindekarboxylázu, který má sekvencí aminokyselin, ukázanou v SEQ ID NO: 4. Tyto mutace je možno provádět v oboru dobře známým způsoby, jak je popsáno níže.
Gen, který kóduje lysindekarboxylázu se substitucí, delecí nebo inzercí jednoho nebo více aminokyselinových zbytků, jak se zde popisuje, však zahrnuje geny, které pocházejí z „genu Idc“ a je možno je pokládat za v podstatě stejné jako gen Idc. Význam nemá být rozšířen na geny,
-2CZ 290070 B6 které mají různý původ. Je nemožné konkrétně předepsat určité rozmezí „plurality“. Odborníkům v oboru je však jasně zřejmé, že například gen cadA, kódující protein, který se neliší více než 200 zbytky aminokyselin od proteinu s aminokyselinovou sekvencí uvedenou v SEQ ID NO: 3, se liší od genu podle předkládaného vynálezu, a geny, které kódují proteiny se stejnou lysindekarboxylázovou aktivitou jsou zahrnuty do předkládaného vynálezu, i když se liší od genu s aminokyselinovou sekvencí podle SEQ ID: 3 o 2 nebo 3 aminokyselinové zbytky.
(2) Vytvoření mikroorganismu rodu Escherichia se sníženou expresí lysindekarboxylázového genu
Mikroorganismus rodu Escherichia podle předkládaného vynálezu je mikroorganismus, který patří do rodu Escherichia, a u kterého je aktivita lysindekarboxylázy v buňkách snížena nebo úplně odstraněna. Mikroorganismus rodu Escherichia zahrnuje Escherichia coli. Lysindekarboxylázová aktivita v buňkách se sníží nebo zmizí například omezením exprese jak nového genu lysindekarboxylázy (Idc), tak i známého genu cadA, který se popisuje výše. Alternativně může být snížena nebo odstraněna lysindekarboxylázová aktivita v buňkách snížením nebo odstraněním specifických účinků lysindekarboxylázových enzymů kódovaných těmito geny modifikací struktury enzymů.
Prostředkem pro omezení exprese genu Idc a známého genu cadA je například způsob snížení exprese genů na transkripční úrovni způsobením substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze jednoho nebo více nukleotidů v promotorových sekvencích těchto genů a snížením účinnosti promotoru (M. Rosenberg a D. Court, Ann. Rev. Genetics 13 (1979) str. 319 a P. Youderian, S. Bouvier a M. Sussking, Cell 30 (1982) str. 843-853). Alternativně může být exprese těchto genů omezena na úrovni translace substitucí, delecí, inzercí, adicí nebo inverzí jednoho nebo více nukleotidů v oblasti mezi SD sekvencí a iniciačním kodonem (J. J. Dunn, R. Buzash-Pollert a F. W. Studier, Proč. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 75 (1978) str. 2743). Navíc je pro snížení nebo odstranění specifické aktivity lysindekarboxylázy k dispozici způsob, kterým je modifikována nebo vyřazena z funkce kódovací oblast lysindekarboxylázy způsobením substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze jednoho nebo více nukleotidů v sekvenci nukleotidů kódující oblasti.
Geny, kterých se může týkat substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze, mohou být navíc k genům Idc nebo cadA geny Idc nebo cadA, u kterých se vyskytuje substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze jednoho nebo více zbytků aminokyselin, která nezničí podstatnou část aktivity kódované lysindekarboxylázy.
Způsob provedení substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze v genu zahrnuje zvláště místně specifickou metodou mutageneze (Kramer, W. a Frits, H. J., Methods in Enzymology, 154, 350 (1987)) a působení chemického prostředku, jako je dithioničitan sodný a hydroxylamin (Shořte, D. aNathans, D„ Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 75, 270 (1978)).
Místně specifická metoda mutageneze je také metoda použití syntetického oligonukleotidu, která umožní zavedení případné substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze do omezeného páru nukleotidů. Aby bylo možno využít této metody, je nejprve připravena jednořetězcová DNA denaturaci plazmidů, který obsahuje klonovaný gen s určenou nukleotidovou sekvencí DNA. Potom je syntetizován oligonukleotid komplementární k části, ve které má být způsobena mutace. Při tomto postupu však nesmí mít syntetický oligonukleotid úplně komplementární sekvenci, ale je navržen tak, aby se v něm vyskytla případná substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze nukleotidu. Potom se jednořetězcová DNA nechá spojit se syntetickým oligonukleotidem, který obsahuje případnou substituci, deleci, inzerci, adici nebo inverzi nukleotidu. Kompletní dvojřetězcový plazmid je syntetizován použitím T4 ligázy a Klenowova fragmentu DNA polymerázy I, a ten se potom zavede do kompetentních buněk Escherichia coli. Některé z transformantů tedy mají plazmid obsahující gen s případnou substitucí, delecí, inzercí, adicí nebo inverzí nukleotidů. Jako podobná metoda, schopná zavést do genu mutaci, aby byl
-3CZ 290070 B6 modifikován nebo vyřazen, je použitelná rekombinantní metoda PCR (PCR Technology, Stockton press (1989).
Metoda mutace chemickými prostředky je způsob, ve kterém je nukleotidová substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze náhodně zavedena do fragmentu DNA působením dithioničitanu sodného, hydroxylaminu a podobných látek na fragment DNA, obsahující předmětný gen.
Exprese genu Idc a/nebo cadA může být omezena náhradou normálního genu v chromozomu mikroorganismu rodu Escherichia modifikovaným nebo nefunkčním genem, který je získán zavedením mutace jak je popsáno výše. Způsob náhrady genu zahrnuje způsoby, které používají homologní rekombinace (Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory press (1972); Matsuyama, S. a Mizushima, S., J. Bacteriol., 162, 1196 (1985). Homologní rekombinace je založena na schopnosti, kterou mají obecně mikroorganismy rodu Escherichia. Když je plazmid nebo podobná homologní sekvence k sekvenci v chromozomu zaveden do buňky, vyskytne se s určitou frekvencí na místě sekvenční homologie rekombinace a celý zavedený plazmid se inkorporuje do chromozomu. Je také možné, že se na místě homologní sekvence k sekvenci na chromozomu vyskytne další rekombinace, takže plazmid z chromozomu opět vypadne. V průběhu tohoto procesu však gen se zavedenou mutací je fixován přednostně na chromozom v závislosti na poloze, ve které k rekombinaci dojde, a originální původní gen vypadne z chromozomu spolu s plazmidem. Selekce takových mikrobiálních kmenů umožňuje získat mikrobiální kmen, ve kterém je normální gen na chromozomu substituován modifikovaným nebo nefunkčním genem, získaným zavedením mutace působením substituce, delece, inzerce, adice nebo inverze nukleotidové sekvence.
Mikroorganismus z rodu Escherichia, který má být vystaven substituci genu, je mikroorganismus produkující L-lysin. Mikroorganismus roku Escherichia, produkující L-lysin, například mikrobiální kmen Escherichia coli, může být získán působením mutace na kmen bez produkce L-lysinu tak, aby tento kmen získal rezistenci k analogu lysinu, jako je S-(2-aminoethyl)-Lcystein (dále označovaný jako „AEC“). Mutace může být způsobena vystavením buněk Escherichia coli chemickým prostředkům, jako je N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin a kyselina dusitá nebo působení ultrafialového záření, rentgenového záření apod. Takovým mikrobiálním kmenem je zvláště Escherichia coli AJ13069 (FERM P-14690). Tento mikrobiální kmen byl získán přidáním AEC rezistence do kmenu W3110, který vychází z Escherichia coli K-12. Escherichia coli AJ13069 byla uložena ve sbírce National Institute of Bioscience and Human Technology of Agency of Industrial Science and Technology, postál code 305, 1-3, Higashi 1-chrome, Tsukuba-shi, Ibarakiken, Japan, pod depozitním číslem FERM P-14690 6. prosince 1994, převedena na mezinárodní uložení podle budapešťské smlouvy 29. září 1995 a opatřena depozitním číslem FERM PB-5252.
Mikrobiální kmen Escherichia coli produkující L-lysin může být také získán zavedením a zesílením DNA, která nese genetickou informaci vztahující se k biosyntéze L-lysinu, pomocí rekombinantní genové technologie. Zavedeny mají být geny, které kódují enzymy biosyntetické dráhy L-lysinu, jako je aspartokináza, dihydrodipikolinát syntetáza, dihydrodipikolinát reduktáza, sukcinyldiaminopimelát transamináza a sukcinyldiaminopimelát deacyláza. V případě genu pro enzym, který podléhá zpětnovazební inhibici L-lysinem, jako je aspartokináza a dihydrodipikolinát syntetáza je žádoucí použít mutantního typu genu, který kóduje enzym k uvedené inhibici necitlivý. Pro zavedení a zesílení genu je k dispozici metoda, při které je gen ligován do vektoru autonomně se replikujícího v buňkách Escherichia coli za účelem přípravy rekombinantní DNA, kterou je Escherichia coli transformována. Alternativně může být také gen zaveden do chromozomu hostitele s využitím transdukce, transpozonu (Berg, D. E. a Berg, C. M., Bio/Technol., 1, 417 (1983), fága Mu (japonská zveřejněná přihláška No. 2-109985) nebo homologní rekombinace (Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Lab. (1972)).
Další způsoby pro získání mikroorganismu rodu Escherichia s vyřazenou funkcí genu zahrnují mutaci genu působením chemického činidla, jako je N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidinu
-4CZ 290070 B6 a kyseliny dusité nebo působením ozáření ultrafialovým světlem, rentgenovým zářením apod. na buňky rodu Escherichia, který uvedený gen obsahují.
V níže popsaném příkladu byl vytvořen kmen Escherichia coli s vyřazenou funkcí lysindekarboxylázového genu delecí části jeho kódovací oblasti a vložením genu pro rezistenci k léčivu na její místo s cílem získat lysindekarboxylázový gen, který byl použit pro náhradu lysindekarboxylázového genu chromozomu Escherichia coli podle způsobu, využívajícího výše popsané homologní rekombinace.
Je možné omezit expresi některého z nového lysindekarboxylázového genu podle předkládaného vynálezu a genu cadA nebo omezit expresi obou z nich v jediném mikrobiálním kmenu. Exprese lysindekarboxylázového genu může být omezena v mikroorganismu rodu Escherichia produkujícím L-lysin, nebo může být schopnost produkovat L-lysin vložena do mikroorganismu rodu Escherichia s omezenou expresí lysindekarboxylázového genu výše popsaným způsobem.
(3) Produkce L-lysinu mikroorganismem rodu Escherichia s omezenou expresí lysindekarboxylázového genu
V kultivační kapalině se při kultivaci mikroorganismu rodu Escherichia s omezenou expresí lysindekarboxylázového genu, získaného výše popsaným způsobem, produkuje a hromadí značné množství L-lysinu. Množství akumulovaného L-lysinu je zvýšeno pouze omezením exprese známého genu cadA. Pro zvýšení akumulovaného množství L-lysinu je však účinnější omezit expresi nového lysindekarboxylázového genu podle předkládaného vynálezu. Nejvýhodnější výsledky při výrobě L-lysinu se získají použitím kmenu, ve kterém je omezena exprese jak genu cadA, tak i nového genu podle předkládaného vynálezu.
Médium pro výrobu L-lysinu je obyčejné médium, obsahující zdroj uhlíku, dusíku, anorganické ionty a popřípadě další organické stopové živy. Jako zdroj uhlíku je možné použít cukry jako je glukóza, laktóza, galaktóza, fruktóza a hydrolyzáty škrobu; alkoholy, jako glycerol a sorbitol; a organické kyseliny jako je kyselina fumarová, citrónová a jantarová. Jako zdroj dusíku je možno použít anorganické amonné soli jako je síran amonný, chlorid amonný a fosforečnan amonný; organické zdroje dusíku jako je sojový hydrolyzát; plynný amoniak; a vodný roztok amoniaku. Jako anorganické ionty se přidávají v malých množstvích fosforečnan draselný, síran hořečnatý, iont železa, manganu apod. Kromě výše uvedených živin je vhodné přidat vhodné množství vitaminu Bi a kvasničného extraktu jako zdrojů organických stopových živných látek.
Kultivace se s výhodou provádí za aerobních podmínek po dobu přibližně 16 až 72 hodin. Teplota kultivace je nastavena na 30 až 45 °C a pH na hodnotu 5 až 7. Pro nastavení pH je možno použít anorganických nebo organických, kyselých nebo alkalických látek, nebo plynného amoniaku a podobně.
Po skončení kultivace je možno vhodným způsobem izolovat L-lysin z fermentačního média kombinací obvyklé metody s použitím iontoměničové pryskyřice, srážecí metody a dalších známých metod.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 ukazuje strukturu plazmidu pUC6F5HH5 obsahující nový gen pro lysindekarboxylázu.
Obr. 2 ukazuje strukturu teplotně citlivého plazmidu pTS6F5HH5 obsahujícího nový gen pro lysindekarboxylázu a konstrukci plazmidu pTS6F5HH5Cm, ve kterém je část genu nahrazena fragmentem s genem pro rezistenci na chloramfenikol.
-5CZ 290070 B6
Obr. 3 ukazuje porovnání enzymatických aktivit rozkládajících L-lysin v kmenu WC 196 nesoucím normální gen pro lysindekarboxylázu a kmenů WC196C, WC196L a WC196LC s nefunkčními geny pro lysindekarboxylázu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 (1) Klonování nového genu pro lysindekarboxylázu
Obvyklým způsobem byla z buněk kmene W3110 Escherichia coli K-12, získaného zNational Institute of Genetics (Yata 1111, Mishima-shi, Shizuoka-ken, Japonsko) extrahována chromozomální DNA. Zároveň byly syntetizovány pomocí obvyklé metody dva syntetické DNA primeiy, jak je ukázáno v SEQ ID NO: 1 a 2 výpisu sekvencí, založená na nukleotidoví sekvenci genu cadA (viz SEQ ID NO: 5), popsané v Meng, S. a Bennett, G. N., J. Bacteriol., 174, 2659 (1992). Jejich sekvence byly homologní k 5'-koncové části proti směru a 3'-koncové části genu cadA. Pro provedení metody PCR podle Erlich a další, PCR Technology, Stockton press (1989) byla použita chromozomální DNA a DNA primery. Byl tak získán fragment DNA o velikosti 2,1 kbp obsahující téměř všechny části genu cadA. Tento fragment byl označen soupravou Random Primer Labeling Kit (firma Takara Shuzo) a [a-32P]dCTP (firma Amersham Japonsko), čímž byla připravena sonda pro hybridizaci.
Obvyklým způsobem byla pak provedena hybridizace podle (Molecular Cloning, 2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory press (1989) s použitím připravené sondy a Escherichia coli/Gene Mapping Membrane (firmy Takara Suzo). Na Escherichia coli/Gene Mapping Membrane byla adsorbována knihovna podle Kohara a další (lambda phage library of Escherichia coli chromasomal DNA, viz Kohara, viz Kohara, Y. a další Cell, 50, 495-508 (1987)). Klony fágu lambda se sekvencemi podobnými cadA genu byly získány zmírněním podmínek pro omývání sondy (2 x SSC, 55 °C, 30 min) při provádění hybridizace. Výsledkem bylo, že se podařilo najít slabé signály ze tří klonů E2B8, 6F5H a 10F9 navíc k silným signálům z klonů, obsahujícím genovou oblast cadA (21H11, 5G7). Sekvence tří klonů fágu lambda E2B8, 6F5H a 10F9 na chromozomu Escherichia coli sousedí, přičemž se vzájemně překrývají. DNA fága lambda 6F5H z knihovny podle Kohara, Y. a další, Cell, 50, 495-508 (1987) byla oddělena obvyklým způsobem, štěpena různými restrikčními enzymy pro provedení Southem blot hybridizace s použitím výše popsané sondy podobným způsobem jako je popsáno výše. Bylo zjištěno, že v DNA fragmentu o délce přibližně 5 kbp, získaném štěpením Hindlll, byla přítomna sekvence podobná genu cadA.
Fragment o délce přibližně 5 kbp, získaný štěpením DNA fága lambda F65H enzymem Hindlll byl tedy ligo ván splazmidem pUC19 (firmy Takara Suzo), který byl rovněž štěpen Hindlll, s použitím T4 DNA ligázy. Tato reakční směs byla použita pro transformaci Escherichia coli JM109 (firma Takara Suzo), aby byly získány kmeny rezistentní na ampicilin, rostoucí na plotnách s kompletním médiem (obsahující 10 g polypeptonu, 5g kvasničného extraktu, 5g chloridu sodného v 1 1 vody) s přídavkem 50 mg/1 ampicilinu. Byl tak získán mikrobiální kmen, kteiý nesl plazmid s inzertem fragmentu o délce přibližně 5 kbp, získaný štěpením DNA fága lambda 6F5H Hindlll. Plazmid byl extrahován z buněk a tak byl získán plazmid pUC6F5HH5. Strukturu tohoto plazmidu ukazuje obr. 1.
Kmen Escherichia coli JM109/pUC6F5HH5 nesoucí tento plazmid byl označen jako AJ13068, uložen vNational Institute of Bioscience and Human Technology of Agency of Industrial Science and Technology pod depozitním číslem FERM P-14689 6. prosince 1994, převeden na mezinárodní uložení podle budapešťské smlouvy 29. září 1995 a označen depozitním číslem FERM BP-5251.
-6CZ 290070 B6 (2) Určení sekvence nukleotidů nového genu pro lysindekarboxylázu
Metodou, popsanou vMolecular Cloning, 2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory press (1989), byla určena sekvence oblasti mezi restrikčními štěpícími místy Clal a HindlII získaného plazmidu pUC6F5HH5. Bylo zjištěno, že jde o sekvenci nukleotidů podle SEQ ID NO: 3 výpisu sekvence. Tato sekvence DNA obsahuje otevřený čtecí rámec, který kóduje sekvenci aminokyselin ukázanou v SEQ ID NO: 4 výpisu sekvence.
(3) Příprava Escherichia coli produkující L-lysin
Escherichia coli W3110 byla kultivována při 37 °C 4 hodiny v kompletním médiu (obsahujícím 10 g polypeptonu, 5 g kvasničního extraktu a 5 g chloridu sodného v 1 1 vody) a takto získané buňky byly vystaveny mutačnímu působení 30 min při 37 °C v roztoku N-methyl-N-nitro-Nnitrosoguanidinu v koncentraci 200 pg/ml, promyty a potom naneseny na plotny s minimálním médiem (obsahujícím 7 g hydrogenfosforečnanu sodného, 3 g dihydrogenfosforečnanu draselného, 1 g chloridu amonného, 0,5 g chloridu sodného, 5 g glukózy, 0,25 g heptahydrátu síranu hořečnatého a 15 g agaru v 1 1 vody) s přídavkem 5 g/1 AEC. AEC - rezistentní kmeny byly získány oddělením kolonií, které se objevily po 48 hodinové kultivaci při 37 °C. Mezi nimi produkoval L-lysin také kmen WC 196. Kmen WC 196 byl označen jako AJ 13069, uložen v National Institute of Bioscience and Human Technology of Agency of Industrial Science and Technology pod depozitním číslem FERM P-14690 6. prosince 1994, převeden na mezinárodní uložení podle budapešťské smlouvy 29. září 1995 a označen depozitním číslem FERM BP-5252.
(4) Vytvoření kmene WC 196 se zničenou funkcí nového genu pro lysindekarboxylázu
Fragment o délce přibližně 5 kbp, získaný štěpením DNA fága lambda 6F5H enzymem HindlII popsaný výše, byl ligován s teplotně citlivým plazmidem pMAN031, štěpeným HindlII (Yasueda, H. a další, Appl. Microbiol. Biotechnol., 36, 211 (1991)) pomocí T4 DNA ligázy. Tato reakční směs byla použita pro transformaci Escherichia coli JMI09, následovanou 24 hodinovou kultivací při 37 °C na plotnách s kompletním médiem s přídavkem 50 mg/1, kde vyrostly kmeny s rezistencí na ampicilin. Byly tak získány kmeny, nesoucí plazmid s vloženým fragmentem o délce přibližně 5 kbp, získaným štěpením DNA fága lambda 6F5H enzymem HindlII.
Plazmid byl z buněk extrahován a byl získán plazmid p6S6F5HH5. Plazmid pTS6F5HH5 byl štěpen EcoRV pro odstranění fragmentu DNA o délce přibližně 1 kbp. Potom byla použita T4 ligáza pro vložení fragmentu genu pro chloramfenikolovou rezistenci o délce přibližně 1 kbp, který byl získán štěpením pHSG399 (vytvořený od Takara Suzo) enzymem Accl. Tak byl zkonstruován plazmid pTS6FRHH5Cm. Byl tedy úspěšně vytvořen plazmid nesoucí fragment DNA s vyřazenou funkcí nového genu pro lysindekarboxylázu. Strukturu plazmidu pTS6FRHH5 a plazmidu pTS6FRHH5Cm ukazuje obr. 2.
Potom byl technikou homologní rekombinace (Matsuyama, S. a Mizushima, S. J. Bacteriol., 162, 1196 (1985)) vytvořen kmen, ve kterém byl nový gen pro lysindekarboxylázu na chromozomu kmene WC 196 nahrazen fragmentem DNA s vyřazenou funkcí nového genu lysindekarboxylázy s využitím citlivosti plazmidu pTS6F5HH5Cm k teplotě. Nejdřív byl transformován kmen WC196 plazmidem pTS6F5HH5Cm, aby byl získán kmen rezistentní k ampicilinu a rezistentní k chloramfenikolu při 30 °C. Potom byl tento kmen použit pro získání kmene, který byl rezistentní k ampicilinu a rezistentní k chloramfenikolu při 40 °C. Dále byl tento kmen použit pro získání kmene, který je senzitivní na ampicilin a rezistentní k chloramfenikolu při 30 °C. Tak byl vytvořen výše popsaný kmen, ve kterém byl nahrazen nový lysindekarboxylázový gen na chromozomu kmene WC 196 fragmentem DNA s vyřazenou funkcí nového lysindekarboxylázového genu. Tento kmen byl označen jako WC196L.
-7CZ 290070 B6 (5) Příprava kmene WC196 a WC196L s chybějícím genem cadA
Escherichia coli, ve které je nefunkční gen známé lysindekarboxylázy cadA, je již známý, jako například kmen GNB10181, který pochází z Escherichia coli K-12 (viz Auger, E. A. a další, Mol. Microbiol., 3, 609 (1986); tento mikrobiální kmen je například dostupný ve sbírce Escherichia coli Genetic Stock Center (Connecticut, USA). Bylo zjištěno, že v tomto mikrobiálním kmenu chybí oblast genu cadA. Tato genová deficience cadA kmene GNB10181 byla transdukována do kmene WC 196 podle obecné metody s použitím fága PÍ (A Short Course in Bacterial Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1992) za vytvoření kmene WC196C. Nepřítomnost genu cadA kmene WC 196 byla potvrzena hybridizací typu Southem blot. Navíc byl podobným způsobem jak je popsáno výše vytvořen z kmene WC196L kmen WC196LC s chybějícím genem cadA.
Příklad 2 (1) Potvrzení aktivity enzymů rozkládajících L-lysin kmenů WC 196, EC195C, WC196L aWC196LC
Čtyři výše popsané kmeny byly kultivovány při 37 °C po dobu 17 hodin na médiu pro produkci L-lysinu (obsahující 40 g glukózy, 16 g síranu amonného, 1 g dihydrogenfosforečnanu draselného, 2 g kvasničného extraktu, 10 mg pentahydrátu síranu manganatého a 10 mg heptahydrátu síranu železnatého v 1 1 vody; pH bylo nastaveno hydroxidem draselným na 7,0 a potom bylo přidáno 30 g odděleně sterilizovaného uhličitanu vápenatého). Získané mikrobiální buňky byly dvakrát promyty fyziologickým roztokem, suspendovány v médiu pro testování rozkladu L-lysinu (obsahujícím 17 g dodekahydrátu hydrogenfosforečnanu sodného, 3 g dihydrogenfosforečnanu draselného, 0,5 g chloridu sodného a lOg hydrochloridu L-lysinu v 11 vody) a kultivovány 31 hodin při 37 °C.
Obrázek 3 ukazuje změny množství zbývajícího L-lysinu v kultivačních médiích v závislosti na době kultivace. Množství L-lysinu bylo kvantitativně stanovováno použitím analyzátoru Biotech Analyzer AS-210 (firma Asahi Chiemical Industry). U kmene WČ196 byl pozorován výrazný rozklad L-lysinu. Tato aktivita byla poněkud snížena v kmenu WC196C s chybějícím genem cadA pro známý gen pro lysindekarboxylázu. Rozklad L-lysinu nebyl pozorován u kmenů WC196L a WC196LC s nefunkčním novým genem lysindekarboxylázy. Koncentrace L-lysinu v kultivačním médiu klesala v průběhu přibližně tří hodin od začátku kultivace u všech mikrobiálních kmenů. Tento jev však byl způsoben inkorporací L-lysinu do mikrobiálních buněk a nebyl způsoben rozkladem.
(2) Produkce L-lysinu kmeny WC 196, WC 196C, WC 196L a WC 196LC
Výše popsané čtyři kmeny byly kultivovány 20 hodin při 37 °C ve výše popsaném médiu pro produkci L-lysinu. Bylo měřeno množství vyprodukovaného L-lysinu a kadaverinu, akumulované v kultivačním médiu. Množství L-lysinu bylo kvantitativně stanoveno s použitím analyzátoru Biotech Analyzer AS-210 jak je popsáno výše. Množství kadaverinu bylo kvantitativně stanoveno použitím HPLC.
Výsledky jsou ukázány v tabulce 1. U kmene WC196C s nefunkčním genem cadA se ve srovnání s kmenem WC 196 a u kmene WC196L s nefunkčním novým genem lysindekarboxylázy ve srovnání s kmeny WC196 a WC196C byla zvýšena akumulace L-lysinu a snížena akumulace kadaverinu jako rozkladného produktu L-lysinu. Akumulace L-lysinu byla dále zvýšena a přítomnost kadaverinu jako rozkladného produktu L-lysinu nebyla zjištěna u kmene WC196LC s nefunkčními oběma geny pro lysindekarboxylázu.
-8CZ 290070 B6
Tabulka 1
Kmen | Akumulace L-lysinu | Akumulace kadaverinu ígZD |
WC 196 | 1,4 | 0,6 |
WC196C | 1,9 | 0,4 |
WC196L | 2,3 | 0,1 |
WC196LC | 3,3 | nebyla detekována |
Příklad 3
Escheria coli WC196LC bez aktivity rozkládající lysin byla transformována plazmidem pUC6F5HH5, který obsahuje nový lysindekarboxylázový gen, aby byl získán kmen rezistentní kampicilinu. Kmeny WC196LC a WC196LC/pUC6F5HH5 byly kultivovány 16 hod při 37 °C v médiu pro produkci L-lysinu doplněném 5 g/1 L-lysinu a bylo měřeno množství vyprodukovaného kadaverinu.
Výsledky jsou ukázány v tabulce 2. Kmen WC196LC L-lysin na kadaverin nepřeměňoval, zatímco kmen WC196LC/pUC6F5HH5 měl schopnost přeměňovat L-lysin na kadaverin.
Tabulka 2
Kmen
WC196LC
WC196LC/pUC6F5HH5
Vyprodukované množství kadaverinu (g/1) nebylo detekováno
0,93
Průmyslová využitelnost
Nový lysindekarboxylázový gen podle předkládaného vynálezu se účastní rozkladu L-lysinu v Escherichia coli. L-lysin může být tedy produkován levně a účinně kultivací bakterie rodu Escherichia produkující L-lysin s omezenou expresí výše popsaného genu a/nebo genu cadA.
VÝPIS SEKVENCÍ (1) Obecné informace:
(i) Žadatel: Ajinomoto Co., Ind.
(ii) Název vynálezu: Gen kódující lysindekarboxylázu, mikroorganismus a způsob výroby L-lysinu (iii) Počet sekvencí: 6 (iv) Adresa pro korespondenci:
(A) Jméno:
(B) Ulice:
(C) Město:
(E): Země:
-9CZ 290070 B6 (F) PSČ:
(v) Počítačová forma:
(A) Typ média: disketa (B) Počítač: IBM PC kompatibilní (C) Operační systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: FastSEQ Version 1.5 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 1 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 20 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: j iná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc = „syntetic DNA“ (iii) HYPOTETICKÁ: ne (iv) V OPAČNÉM SMYSLU: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 1:
TGGATAACCA CACCGCGTCT 20 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 20 bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc = „syntetic DNA“ (iii) HYPOTETICKÁ: ne (iv) V OPAČNÉM SMYSLU: ano (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 2:
GGAAGGATCA TATTGGCGTT 20
-10CZ 290070 B6 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 3269 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: dvojitý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: genomová DNA (A) POPIS: /desc = „syntetic DNA“ (iii) HYPOTETICKÁ: ne (iv) V OPAČNÉM SMYSLU: ne (vi) PŮVODNÍ ZDROJ:
(A) ORGANISMUS: Escherichia coli (B) KMEN: W3110 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 1005 ..3143 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 3:
-11 CZ 290070 B6
ATCGATTCTC GAAGTGCATC GGTGCATGGC GTTCGCCTGG AAAGCTATCG CAAAAAGGTC GGTTACCGCA ACCTTTATCG GAAGCCATTG GTTATCGGTG ATGCTGCAAT AAGAGCGCCG AAAGAACTGA CCGGAAGCGA GTGTTAAGCA GCGTAATTCG TTTGAGCAGG
TGACTGCGGT GTCTGCGTGA AGATTGCGCA CATTTGATGA TCGGTGGTAT GTGAAACCAA AAGCACTGCG ACACCCCGGG CACGCAACCT AAGGTGGTTC ACAGCACCTA ACAAAGCGCC AACTGATCGA TGGCGGCATC CTGAAGATTT CAAAAGTTCT CTATGATTAA
TAGCCGTCAG AAAAAGCGTA ACTGGCACGC ATTTGACGAA CGCCCGTCTC AGAAAAAATT TCTGATGCAA GGCTTATCCT GCGTGAAATG TGGCGGTGCG TTCCGTTATC GCTGGCGGCT CTCCATCATC GTTGAAAGCG AAAAAATCGT GAAAAAGGGT GGAAGGATTT
GATGAGAAAC GAACTGACAC CATCCACAGC CTGGCTGGCG GATGGTCGTC CGCCGTAACT ATGGCTGAAC GGCGTGGGCG TCTCGCCTCG CTGGCGATTG TCGCCGGAAG GAAGCGATGG CCGGAACCAC CAACTGCTGG CGTTATCAGC CACTTCGGTG TCCAGGAGGA
TGGATATTAA GTAAAATCTT GTCCTTATAC ACCGCGCGTA CGGTGATGAT TTGGTATGCC GCTTTAAGAT CAGAAGAGCG GCGTACCGGT GCGTGGGCGA GTTGTGCGTC GTATCATTGC TGGGTGGTGC CGGATCTGGC GCCTGATGAG GCCCTTTTTT
CATCGATGAA CGCCGATCTC CCTGGATTAC TGCAGACGAT CATTGGTCAT AGCGCCAGAA GCCTATCATC TGGTCAGTCT AGTTTGTACG TAAAGTGAAT CATTCTGTGG TCCGCGTCTG TCACCGTAAC CGÁTCTCGAC CTACGGTTAC ATCGCCACGG
ACAC ATG AAC ATC ATT
120 180 240. 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960
1016
Met Asn Ile Ile
GCC | ATT | ATG | GGA | CCG | CAT | GGC | GTC | TTT | TAT | AAA | GAT | GAG | CCC | ATC | AAA | 1064 |
Ala | Ile | Met | Gly | Pro | His | Gly | Val | Phe | Tyr | Lys | Asp | Glu | Pro | Ile | Lys | |
5 | 10 | 15 | 20 | |||||||||||||
GAA | CTG | GAG | TCG | GCG | CTG | GTG | GCG | CAA | GGC | TTT | CAG | ATT | ATC | TGG | CCA | 1112 |
Glu | Leu | Glu | Ser | Ala | Leu | Val | Ala | Gin | Gly | Phe | Gin | Ile | Ile | Trp | Pro | |
25 | 30 | 35 | ||||||||||||||
CAA | AAC | AGC | GTT | GAT | TTG | CTG | AAA | TTT | ATC | GAG | CAT | AAC | CCT | CGA | ATT | 1150 |
Gin | Asn | Ser | Val | Asp | Leu | Leu | Lys | Phe | Ile | Glu | His | Asn | Pro | Arg | Ile | |
40 | 45 | 50 | ||||||||||||||
TGC | GGC | GTG | ATT | TTT | GAC | TGG | GAT | GAG | TAC | AGT | CTC | GAT | TTA | TGT | AGC | 1208 |
Cys | Gly | Val | Ile | Phe | Asp | Trp | Asp | Glu | Tyr | Ser | Leu | Asp | Leu | Cys | Ser | |
55 | 60 | < z 03 |
GAT | ATC | AAT | CAG | CTT | AAT | GAA | TAT | CTC | CCG | CTT | TAT | GCC | TTC | ATC | AAC | 1256 |
Asp | Ile | Asn | Gin | Leu | Asn | G1U | Tyr | Leu | Pro | Leu | Tyr | Ala | Phe | Ile | Asn | |
70 | 75 | 80 | ||||||||||||||
ACC | CAC | TCG | ACG | ATG | GAT | GTC | AGC | GTG | CAG | GAT | ATG | CGG | ATG | GCG | CTC | 1304 |
Thr | His | Ser | Thr | Met | Asp | Val | Ser | Val | Gin | Asp | Met | Arg | Met | Ala | Leu | |
85 | 90 | 95 | 100 | |||||||||||||
TGG | TTT | TTT | GAA | TAT | GCG | CTG | GGG | CAG | GCG | GAA | GAT | ATC | GCC | ATT | CGT | 1352 |
Trp | Phe | Phe | Glu | Tyr | Ala | Leu | Gly | Gin | Ala | Glu | Asp | Ile | Ala | Ile | Arg | |
105 | 110 | 115 | ||||||||||||||
ATG | CGT | CAG | TAC | ACC | GAC | GAA | TAT | CTT | GAT | AAC | ATT | ACA | CCG | CCG | TTC | 1400 |
Met | Arg | Gin | Tyr | Thr | Asp | Glu | Tyr | Leu | Asp | Asn | Ile | Thr | Pro | Pro | Phe | |
120 | 125 | 130 | 1448 | |||||||||||||
ACG | AAA | GCC | TTG | TTT | ACC | TAC | GTC | AAA | GAG | CGG | AAG | TAC | ACC | TTT | TGT | |
Thr | Lys | Ala | Leu | Phe | Thr | Tyr | Val | Lys | Glu | Arg | Lys | Tyr | Thr | Phe | Cys | |
135 | 140 | 145 | ||||||||||||||
ACG | CCG | GGG | CAT | ATG | GGC | GGC | ACC | GCA | TAT | CAA | AAA | AGC | CCG | GTT | GGC | 1496 |
Thr | Pro | Gly | His | Met | Gly | Gly | Thr | Ala | Tyr | Gin | Lys | Ser | Pro | Val | Gly | |
150 | 155 | 160 | ||||||||||||||
TGT | CTG | TTT | TAT | GAT | TTT | TTC | GGC | GGG | AAT | ACT | CTT | AAG | GCT | GAT | GTC | 1544 |
Cys | Leu | Phe | Tyr | Asp | Phe | Phe | Gly | Gly | Asn | Thr | Leu | Lys | Ala | Asp | Val | |
165 | 170 | 175 | 180 | 1592 | ||||||||||||
TCT | ATT | TCG | GTC | ACC | GAG | CTT | GGT | TCG | TTG | CTC | GAC | CAC | ACC | GGG | CCA | |
Ser | Ile | Ser | Val | Thr | Glu | Leu | Gly | Ser | Leu | Leu | Asp | His | Thr | Gly | Pro | |
185 | 190 | 195 | ||||||||||||||
CAC | CTG | GAA | GCG | GAA | GAG | TAC | ATC | GCG | CGG | ACT | TTT | GGC | GCG | GAA | CAG | L64O |
His | Leu | Glu | Ala | Glu | Glu | Tyr | Ile | Ala | Arg | Thr | Phe | Gly | Ala | Glu | Gin | |
200 | 205 | 210 |
- 12CZ 290070 B6
AGT | TAT | ATC | GTT | ACC | AAC | GGA | ACA | TCG | ACG | TCG | AAC | AAA | ATT | GTG | GGT | 1688 |
Ser | Tyr | Ile | Val | Thr | Asn | Gly | Thr | Ser | Thr | Ser | Asn | Lys | Ile | Val | Gly | |
215 | 220 | 225 | ||||||||||||||
ATG | TAC | GCC | GCG | CCA | TCC | GGC | AGT | ACG | CTG | TTG | ATC | GAC | CGC | AAT | TGT | 1736 |
Met | Tyr | Ala | Ala | Pro | Ser | Gly | Ser | Thr | Leu | Leu | Ile | Asp | Arg | Asn | cys | |
230 | 235 | 240 | ||||||||||||||
CAT | AAA | TCG | CTG | GCG | CAT | CTG | TTG | ATG | ATG | AAC | GAT | GTA | GTG | CCA | GTC | 1734 |
His | Lys | Ser | Leu | Ala | His | Leu | Leu | Met | Met | Asn | Asp | Val | Val | Pro | Val | |
245 | 250 | 255 | 260 | |||||||||||||
TGG | CTG | AAA | CCG | ACG | CGT | AAT | GCG | TTG | GGG | ATT | CTT | GGT | GGG | ATC | CCG | 1332 |
Trp | Leu | Lys | Pro | Thr | Arg | Asn | Ala | Leu | Glv | Ile | Leu | Gly | Gly | Ile | Pro | |
265 | 270 | 275 | ||||||||||||||
CGC | CGT | GAA | TTT | ACT | CGC | GAC | AGC | ATC | GAA | GaG | AAA | GTC | GCT | GCT | ACC | Í880 |
Arg | Arg | Glu | Phe | Thr | Arg | Asp | Ser | Ile | Glu | Glu | Lys | Val | Ala | Ala | Thr | |
280 | 285 | 290 | ||||||||||||||
ACG | CAA | GCA | CAA | TGG | CCG | GTT | CAT | GCG | GTG | ATC | ACC | AAC | TCC | ACC | TAT | 1928 |
Thr | Gin | Ala | Gin | Trp | Pro | Val | His | Ala | Val | Ile | Thr | Asn | Ser | Thr | Tyr | |
295 | 300 | 305 | ||||||||||||||
GAT | GGC | TTG | CTC | TAC | AAC | ACC | GAC | TGG | ATC | AAA | CAG | ACG | CTG | GAT | GTC | 1976 |
Asp | Gly | Leu | Leu | Tyr | Asn | Thr | Asp | Trp | ILe | Lys | Gin | Thr | Leu | Asp | Val | |
310 | 315 | 320 | ||||||||||||||
CCG | TCG | ATT | CAC | TTC | GAT | TCT | GCC | TGG | GTG | CCG | TAC | ACC | CAT | CAT | 2024 | |
Pro | Ser | Ile | His | Phe | Asp | Ser | Ala | Trp | Val | Pro | Tyr | Thr | His | Phe | His | |
325 | 330 | 335 | 340 | |||||||||||||
CCG | ATC | TAC | CAG | GGT | AAA | AGT | GGT | ATG | AGC | GGC | GAG | CGT | GTT | GCG | GGA | 2072 |
Pro | Ile | Tyr | Gin | Gly | Lys | Ser | Gly | Met | Ser | Gly | Glu | Arg | Val | Ala | Gly | |
345 | 350 | 355 | ||||||||||||||
AAA | GTG | ATC | TTC | GAA | ACG | CAA | TCG | ACC | CAC | AAA | ATG | CTG | GCG | GCG | TTA | 2120 |
Lys | Val | Ile | Phe | Glu | Thr | Gin | Ser | Thr | His | Lys | Met | Leu | Ala | Ala | Leu | |
360 | 365 | 370 | ||||||||||||||
TCG | CAG | GCT | TCG | CTG | ATC | CAC | ATT | AAA | GGC | GAG | TAT | GAC | GAA | GAG | GCC | 2168 |
Ser | Gin | Ala | Ser | Leu | Ile | His | Ile | Lys | Gly | Glu | Tyr | Asp | Glu | Glu | Ala | |
375 | 380 | 385 | ||||||||||||||
TTT | AAC | GAA | GCC | TTT | ATG | ATG | CAT | ACC | ACC | ACC | TCG | CCC | AGT | TAT | CCC | 2216 |
Phe | Asn | Glu | Ala | Phe | Met | Met | His | Thr | Thr | Thr | Ser | Pro | Ser | Tyr | Pro | |
390 | 395 | 400 | ||||||||||||||
ATT | GTT | GCT | TCG | GTT | GAG | ACG | GCG | GCG | GCG | ATG | CTG | CGT | GGT | AAT | CCG | 2264 |
Ile | Val | Ala | Ser | Val | Glu | Thr | Ala | Ala | Ala | Met | Leu | Arg | Gly | Asn | Pro | |
405 | 410 | 415 | 420 | |||||||||||||
GGC | AAA | CGG | CTG | ATT | AAC | CGT | TCA | GTA | GAA | CGA | GCT | CTG | CAT | TTT | CGC | 2312 |
Gly | Lys | Arg | Leu | Ile | Asn | Arg | Ser | Val | Glu | Arg | Ala | Leu | His | Phe | Arg | |
425 | 430 | 435 | ||||||||||||||
AAA | GAG | GTC | CAG | CGG | CTG | CGG | GAA | GAG | TCT | GAC | GGT | TGG | TTT | TTC | GAT | 2360 |
Lys | Glu | Val | Gin | Arg | Leu | Arg | Glu | Glu | Ser | Asp | Gly | Trp | Phe | Phe | Asp | |
440 | 445 | 450 | ||||||||||||||
ATC | TGG | CAA | CCG | CCG | CAG | GTG | GAT | GAA | GCC | GAA | TGC | TGG | CCC | GTT | GCG | 2408 |
Ile | Trp | Gin | Pro | Pro | Gin | val | Asp | Glu | Ala | Glu | Cys | Trp | Pro | Val | Ala | |
455 | 460 | 465 | ||||||||||||||
CCT | GGC | GAA | CAG | TGG | CAC | GGC | TTT | AAC | GAT | GCG | GAT | GCC | GAT | CAT | ATG | 2456 |
Pro | Gly | Glu | Gin | Trp | His | Gly | Phe | Asn | Asp | Ala | Asp | Ala | Asp | His | Met | |
470 | 475 | 480 | ||||||||||||||
TTT | CTC | GAT | CCG | GTT | AAA | GTC | ACT | ATT | TTG | ACA | CCG | GGG | ATG | GAC | GAG | 2504 |
Phe | Leu | Asp | Pro | Val | Lys | Val | Thr | Ile | Leu | Thr | Pro | Gly | Met | Asp | Glu | |
485 | 490 | 495 | 500 | |||||||||||||
CAG | GGC | AAT | ATG | AGC | GAG | GAG | GGG | ATC | CCG | GCG | GCG | CTG | GTA | GCA | AAA | 2552 |
Gin | Gly | Asn | Met | Ser | Glu | Glu | Gly | Ile | Pro | Ala | Ala | Leu | Val | Ala | Lys | |
505 | 510 | 515 |
-13 CZ 290070 B6
TTC | CTC | GAC | GAA | CGT | GGG | ATC | GTA | GTA | GAG | AAA | ACC | GGC | CCT | TAT | AAC | 2600 |
Phe | Leu | Asp | Glu | Arg | Gly | Ile | Val | Val | Glu | Lys | Thr | Gly | Pro | Tyr | Asn | |
520 | 525 | 530 | ||||||||||||||
CTG | CTG | TTT | CTC | TTT | AGT | ATT | GGC | ATC | GAT | AAA | ACC | AAA | GCA | ATG | GGA | 2648 |
Leu | Leu | Phe | Leu | Phe | Ser | Ile | Gly | Ile | Asp | Lys | Thr | Lys | Ala | Met | Gly | |
535 | 540 | 545 | ||||||||||||||
TTA | TTG | CGT | GGG | TTG | ACG | GAA | TTC | AAA | CGC | TCT | TAC | GAT | CTC | AAC | CTG | 2696 |
Leu | Leu | Arg | Gly | Leu | Thr | Glu | Phe | Lys | Arg | Ser | Tyr | Asp | Leu | Asn | Leu | |
550 | 555 | 560 | ||||||||||||||
CGG | ATC | AAA | AAT | ATG | CTA | CCC | GAT | CTC | TAT | GCA | GAA | GAT | CCC | GAT | TTC | 2744 |
Arg | Ile | Lys | Asn | Met | Leu | Pro | Asp | Leu | Tyr | Ala | Glu | Asp | Pro | Asp | Phe | |
565 | 570 | 575 | 580 | |||||||||||||
TAC | CGC | AAT | ATG | CGT | ATT | CAG | GAT | CTG | GCA | CAA | GGG | ATC | CAT | AAG | CTG | 2792 |
Tyr | Arg | Asn | Met | Arg | Ile | Gin | Asp | Leu | Ala | Gin | Gly | Ile | His | Lvs | Leu | |
585 | 590 | 595 | ||||||||||||||
ATT | CGT | AAA | CAC | GAT | CTT | CCC | GGT | TTG | ATG | TTG | CGG | GCA | TTC | GAT | ACT | 2840 |
Ile | Arg | Lys | His | Asp | Leu | Pro | Gly | Leu | Met | Leu | Arg | Ala | Phe | Asp | Thr | |
600 | 605 | 610 | ||||||||||||||
TTG | CCG | GAG | ATG | ATC | ATG | ACG | CCA | CAT | CAG | GCA | TGG | CAA | CGA | CAA | ATT | 2883 |
Leu | Pro | Glu | Met | Ile | Met | Thr | Pro | His | Gin | Ala | Trp | Gin | Arg | Gin | Ile | |
615 | 620 | 625 | ||||||||||||||
AAA | GGC | GAA | GTA | GAA | ACC | ATT | GCG | CTG | GAA | CAA | CTG | GTC | GGT | AGA | GTA | 2936 |
Lys | Gly | Glu | Val | Glu | Thr | Ile | Ala | Leu | Glu | Gin | Leu | Val | Gly | Arg | Val | |
630 | 635 | 640 | ||||||||||||||
TCG | GCA | AAT | ATG | ATC | CTG | Ux- x | TAT | CCA | CCG | GGC | GTA | CCG | CTG | TTG | ATG | 2984 |
Ser | Ala | Asn | Met | Ile | Leu | Pro | Tyr | Pro | Pro | Gly | Val | Pro | Leu | Leu | Met | |
645 | 650 | 655 | 660 | |||||||||||||
CCT | GGA | GAA | ATG | CTG | ACC | AAA | GAG | AGC | CGC | ACA | GTA | CTC | GAT | TTT | CTA | 3032 |
Pro | Gly | Glu | Met | Leu | Thr | Lys | Glu | Ser | Arg | Thr | Val | Leu | Asp | Phe | Leu | |
665 | 670 | 67 5 | ||||||||||||||
CTG | ATG | CTT | TGT | TCC | GTC | GGG | CAA | CAT | TAC | CCC | GGT | TTT | GAA | ACG | GAT | 3080 |
Leu | Met | Leu | Cys | Ser | Val | Gly | Gin | His | Tyr | Pro | Gly | Phe | Glu | Thr | Asp | |
680 | 685 | 690 | ||||||||||||||
ATT | CAC | GGC | GCG | AAA | CAG | GAC | GAA | GAC | GGC | m | TAC | CGC | GTA | CGA | GTC | 3123 |
Ile | His | Gly | Ala | Lys | Gin | Asp | Glu | Asp | Gly | Val | Tyr | Arg | Val | Arg | Val | |
695 | 700 | 705 | ||||||||||||||
CTA | AAA | ATG | GCG | GGA | TAAC | TTGCCA GAGCGGCTTC CGGGCGAGTA ACGTTCT | 3183 | |||||||||
Leu | Lys | Met | Ala | Gly |
710
AACAAATAAA GGAGACGTTA TGCTGGGTTT AAAACAGGTT CACCATATTG CGATTATTGC 3243 GACGGATTAT GCGGTGAGCA AAGCTT 3269
- 14CZ 290070 B6 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 713 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární ío (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 4:
Met Asn Ile Ile Ala Ile Met | Gly | Pro His | Gly Val | Phe | Tyr | Lys | Asp | ||||||||
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Glu | Pro | Ile | Lys | Glu | Leu | Glu | Ser | Ala | Leu | Val | Ala | Gin | Gly | Phe | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ile | Ile | Trp | Pro | Gin | Asn | Ser | Val | Asp | Leu | Leu | Lys | Phe | Ile | Glu | His |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Asn | Pro | Arg | Ile | Cys | Gly | Val | Ile | Phe | Asp | Trp | Asp | Glu | Tyr | Ser | Leu |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asp | Leu | Cys | Ser | Asp | Ile | Asn | Gin | Leu | Asn | Glu | Tyr | Leu | Pro | Leu | Tyr |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ala | Phe | Ile | Asn | Thr | His | Ser | Thr | Met | Asp | Val | Ser | Val | Gin | Asp | Met |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Arg | Met | Ala | Leu | Trp | Phe | Phe | Glu | Tyr | Ala | Leu | Gly | Gin | Ala | Glu | Asp |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ile | Ala | Ile | Arg | Met | Arg | Gin | Tyr | Thr | Asp | Glu | Tyr | Leu | Asp | Asn | Ile |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Thr | Pro | Pro | Phe | Thr | Lys | Ala | Leu | Phe | Thr | Tyr | Val | Lys | Glu | Arg | Lys |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Tyr | Thr | Phe | Cys | Thr | Pro | Gly | His | Met | Gly | Gly | Thr | Ala | Tyr | Gin | Lys |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ser | Pro | Val | Gly | Cys | Leu | Phe | Tyr | Asp | Phe | Phe | Gly | Gly | Asn | Thr | Leu |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Lys | Ala | Asp | Val | Ser | Ile | Ser | Val | Thr | Glu | Leu | Gly | Ser | Leu | Leu | Asp |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
His | Thr | Gly | Pro | His | Leu | Glu | Ala | Glu | Glu | Tyr | Ile | Ala | Arg | Thr | Phe |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Gly | Ala | Glu | Gin | Ser | Tyr | Ile | Val | Thr | Asn | Gly | Thr | Ser | Thr | Ser | Asn |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Lys | Ile | Val | Gly | Met | Tyr | Ala | Ala | Pro | Ser | Gly | Ser | Thr | Leu | Leu | Ile |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asp | Arg | Asn | Cys | His | Lys | Ser | Leu | Ala | His | Leu | Leu | Met | Met | Asn | Asp |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Val | Val | Pro | Val | Trp | Leu | Lys | Pro | Thr | Arg | Asn | Ala | Leu | Gly | Ile | Leu |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Gly | Gly | Ile | Pro | Arg | Arg | Glu | Phe | Thr | Arg | Asp | Ser | Ile | Glu | Glu | Lys |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Val | Ala | Ala | Thr | Thr | Gin | Ala | Gin | Trp | Pro | Val | His | Ala | Val | Ile | Thr |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Asn | Ser | Thr | Tyr | Asp | Gly | Leu | Leu | Tyr | Asn | Thr | Asp | Trp | Ile | Lys | Gin |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Thr | Leu | Asp | Val | Pro | Ser | Ile | His | Phe | Asp | Ser | Ala | Trp | Val | Pro | Tyr |
325 | 330 | 335 |
-15CZ 290070 B6
Thr | His | Phe | His Pro Ile Tyr Gin Gly Lys Ser Gly Met Ser Gly Glu | ||||||||||||
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Arg | Val | Ala | Gly | Lys | Val | Ile | Phe | Glu | Thr | Gin | Ser | Thr | His | Lys | Met |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Leu | Ala | Ala | Leu | Ser | Gin | Ala | Ser | Leu | Ile | His | Ile | Lys | Gly | Glu | Tyr |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Asp | Glu | Glu | Ala | Phe | Asn | Glu | Ala | Phe | Met | Met | His | Thr | Thr | Thr | Ser |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Pro | Ser | Tyr | Pro | Ile | Val | Ala | Ser | Val | Glu | Thr | Ala | Ala | Ala | Met | Leu |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Arg | Gly | Asn | Pro | Gly | Lys | Arg | Leu | Ile | Asn | Arg | Ser | Val | Glu | Arg | Ala |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Leu | His | Phe | Arg | Lys | Glu | Val | Gin | Arg | Leu | Arg | Glu | Glu | Ser | Asp | Gly |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Trp | Phe | Phe | Asp | Ile | Trp | Gin | Pro | Pro | Gin | Val | Asp | Glu | Ala | Glu | Cys |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Trp | Pro | Val | Ala | Pro | Gly | Glu | Gin | Trp | His | Gly | Phe | Asn | Asp | Ala | Asp |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Ala | Asp | His | Met | Phe | Leu | Asp | Pro | val | Lys | Val | Thr | Ile | Leu | Thr | Pro |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Gly | Met | Asp | Glu | Gin | Gly | Asn | Met | Ser | Glu | Glu | Gly | Ile | Pro | Ala | Ala |
500 | 505 | 510 | |||||||||||||
Leu | Val | Ala | Lys | Phe | Leu | Asp | Glu | Arg | Gly | Ile | Val | Val | Glu | Lys | Thr |
515 | 520 | 525 | |||||||||||||
Gly | Pro | Tyr | Asn | Leu | Leu | Phe | Leu | Phe | Ser | Ile | Gly | Ile | Asp | Lys | Thr |
530 | 535 | 540 | |||||||||||||
Lys | Ala | Met | Gly | Leu | Leu | Arg | Gly | Leu | Thr | Glu | Phe | Lys | Arg | Ser | Tyr |
545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
Asp | Leu | Asn | Leu | Arg | Ile | Lys | Asn | Met | Leu | Pro | Asp | Leu | Tyr | Ala | Glu |
565 | 570 | 575 | |||||||||||||
Asp | Pro | Asp | Phe | Tyr | Arg | Asn | Met | Arg | Ile | Gin | Asp | Leu | Ala | Gin | Gly |
580 | S8S | 590 | |||||||||||||
Ile | His | Lys | Leu | Ile | Arg | Lys | His | Asp | Leu | Pro | Gly | Leu | Met | Leu | Arg |
595 | 600 | 605 | |||||||||||||
Ala | Phe | Asp | Thr | Leu | Pro | Glu | Met | Ile | Met | Thr | Pro | His | Gin | Ala | Trp |
610 | 615 | 620 | |||||||||||||
Gin | Arg | Gin | Ile | Lys | Gly | Glu | Val | Glu | Thr | Ile | Ala | Leu | Glu | Gin | Leu |
625 | 630 | 635 | 640 | ||||||||||||
Val | Gly | Arg | val | Ser | Ala | Asn | Met | Ile | Leu | Pro | Tyr | Pro | Pro | Gly | Val |
645 | 650 | 655 | |||||||||||||
Pro | Leu | Leu | Met | Pro | Gly | Glu | Met | Leu | Thr | Lys | Glu | Ser | Arg | Thr | Val |
660 | 665 | 670 | |||||||||||||
Leu | Asp | Phe | Leu | Leu | Met | Leu | Cys | Ser | Val | Gly | Gin | His | Tyr | Pro | Gly |
675 | 680 | 685 | |||||||||||||
Phe | Glu | Thr | Asp | Ile | His | Gly | Ala | Lys | Gin | Asp | Glu | Asp | Gly | Val | Tyr |
690 | 695 | 700 | |||||||||||||
Arg | Val | Arg | Val | Leu | Lys | Met | Ala | Gly |
705 710
-16CZ 290070 B6 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 2145 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: dvojitý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: genomová DNA (A) POPIS: /desc = „syntetic DNA“ (iii) HYPOTETICKÁ: ne (iv) V OPAČNÉM SMYSLU: ne (vi) PŮVODNÍ ZDROJ:
(A) ORGANISMUS: Escherichia coli (B) KMEN: CS520 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 1 ..2145 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 5:
ATG | AAC | GTT | ATT | GCA | ATA | TTG | AAT | CAC | ATG | GGG | GTT | TAT | TTT | AAA | GAA | 48 |
Met | Asn | Val | Ile | Ala | Ile | Leu | Asn | His | Met | Gly | Val | Tyr | Phe | Lys | Glu | |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||||
GAA | CCC | ATC | CGT | GAA | CTT | CAT | CGC | GCG | k» Á X | GAA | CGT | CTG | AAC | ttc | CAG | 96 |
Glu | Pro | Ile | Arg | Glu | Leu | His | Arg | Ala | Leu | Glu | Arg | Leu | Asn | Phe | Gin | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
ATT | GTT | TAC | CCG | AAC | GAC | CGT | GAC | GAC | TTA | TTA | AAA | CTG | ATC | GAA | AAC | 144 |
Ile | Val | Tyr | Pro | Asn | Asp | Arg | Asp | Asp | Leu | Leu | Lys | Leu | Ile | Glu | Asn | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
AAT | GCG | CGT | CTG | TGC | GGC | GTT | ATT | TTT | GAC | TGG | GAT | AAA | TAT | AAT | CTC | 192 |
Asn | Ala | Arg | Leu | Cys | Gly | Val | Ile | Phe | Asp | Trp | Asp | Lys | Tyr | Asn | Leu | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
GAG | CTG | TGC | GAA | GAA | ATT | AGC | AAA | ATG | AAC | GAG | AAC | CTG | CCG | TTG | TAC | 240 |
Glu | Leu | Cys | Glu | Glu | Ile | Ser | Lys | Met | Asn | Glu | Asn | Leu | Pro | Leu | Tyr | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
GCG | TTC | GCT | AAT | ACG | TAT | TCC | ACT | CTC | GAT | GTA | AGC | CTG | AAT | GAC | CTG | 288 |
Ala | Phe | Ala | Asn | Thr | Tyr | Ser | Thr | Leu | Asp | Val | Ser | Leu | Asn | Asp | Leu | |
85 | 90 | 95 |
-17CZ 290070 B6
CGT | TTA | CAG | ATT | AGC | TTC | TTT | GAA | TAT | GCG | CTG | GGT | GCT | GCT | GAA | GAT | 336 |
Arg | Leu | Gin | Ile | Ser | Phe | Phe | Glu | Tyr | Ala | Leu | Gly | Ala | Ala | Glu | Asp | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
ATT | GCT | AAT | AAG | ATC | AAG | CAG | ACC | ACT | GAC | GAA | TAT | ATC | AAC | ACT | ATT | 384 |
Ile | Ala | Asn | Lys | Ile | Lys | Gin | Thr | Thr | Asp | Glu | Tyr | Ile | Asn | Thx | Ile | |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
CTG | CCT | CCG | CTG | ACT | AAA | GCA | CTG | TTT | AAA | TAT | GTT | CGT | GAA | GGT | AAA | 432 |
Leu | Pro | Pro | Leu | Thr | Lys | Ala | Leu | Phe | Lys | Tyr | Val | Arg | Glu | Gly | Lys | |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
TAT | ACT | TTC | TGT | ACT | CCT | GGT | CAC | ATG | GGC | GGT | ACT | GCA | TTC | CAG | AAA | 480 |
Tyr | Thr | Phe | Cys | Thr | Pro | Gly | His | Met | Gly | Gly | Thr | Ala | Phe | Gin | Lys | |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
AGC | CCG | GTA | GGT | AGC | CTG | TTC | TAT | GAT | TTC | TTT | GGT | CCG | AAT | ACC | ATG | 528 |
Ser | Pro | Val | Gly | Ser | Leu | Phe | Tyr | Asp | Phe | Phe | Gly | Pro | Asn | Thr | Met | |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
AAA | TCT | GAT | ATT | TCC | ATT | TCA | GTA | TCT | GAA | CTG | GGT | TCT | CTG | CTG | GAT | 576 |
Lys | Ser | Asp | Ile | Ser | Ile | Ser | Val | Ser | Glu | Leu | Gly | Ser | Leu | Leu | Asp | |
130 | 185 | 190 | ||||||||||||||
CAC | AGT | GGT | CCA | CAC | AAA | GAA | GCA | GAA | CAG | TAT | ATC | GCT | CGC | GTC | TTT | 624 |
His | Ser | Gly | Pro | His | Lys | Glu | Ala | Glu | Gin | Tyr | Ile | Ala | Arg | Val | Phe | |
195 | 200 | 205 | ||||||||||||||
AAC | GCA | GAC | CGC | AGC | TAC | ATG | GTG | ACC | AAC | GGT | ACT | TCC | ACT | GCG | AAC | 672 |
Asn | Ala | Asp | Arg | Ser | Tyr | Met | Val | Thr | Asn | Gly | Thr | Ser | Thr | Ala | Asn | |
210 | 215 | 220 | ||||||||||||||
AAA | ATT | GTT | GGT | ATG | TAC | TCT | GCT | CCA | GCA | GGC | AGC | ACC | ATT | CTG | ATT | 720 |
Lys | Ile | Val | Gly | Met | Tyr | Se *“ | Ala | Pro | Ala | Gly | Ser | Thr | Ile | Leu | Ile | |
225 | 230 | 235 | 240 | |||||||||||||
GAC | CGT | AAC | TGC | CAC | AAA | TCG | CTG | ACC | CAC | CTG | ATG | ATG | ATG | AGC | GAT | 768 |
Asp | Arg | Asn | Cys | His | Lys | Ser | Leu | Thr | His | Leu | Met | Met | Met | Ser | Asp | |
245 | 250 | 255 | ||||||||||||||
GTT | ACG | CCA | ATC | TAT | TTC | CGC | CCG | ACC | CGT | AAC | GCT | TAC | GGT | ATT | CTT | 816 |
Val | Thr | Pro | Ile | Tyr | Phe | Arg | Pro | Thr | Arg | Asn | Ala | Tyr | Gly | Ile | Leu | |
260 | 265 | 270 | ||||||||||||||
GGT | GGT | ATC | CCA | CAG | AGT | GAA | TTC | CAG | CAC | GCT | ACC | ATT | GCT | AAG | CGC | 864 |
Gly | Gly | Ile | Pro | Gin | Ser | Glu | Phe | Gin | His | Ala | Thr | Ile | Ala | Lys | Arg | |
275 | 280 | 285 | ||||||||||||||
GTG | AAA | GAA | ACA | CCA | AAC | GCA | ACC | TGG | CCG | GTA | CAT | GCT | GTA | ATT | ACC | 912 |
Val | Lys | Glu | Thr | Pro | Asn | Ala | Thr | Trp | Pro | Val | His | Ala | Val | Ile | Thr | |
290 | 295 | 300 | ||||||||||||||
AAC | TCT | ACC | TAT | GAT | GGT | CTG | CTG | TAC | AAC | ACC | GAC | TTC | ATC | AAG | AAA | 960 |
Asn | Ser | Thr | Tyr | Asp | Gly | Leu | Leu | Tyr | Asn | Thr | Asp | Phe | Ile | Lys | Lys | |
305 | 310 | 315 | 320 | |||||||||||||
ACA | CTG | GAT | GTG | AAA | TCC | ATC | CAC | TTT | GAC | TCC | GCG | TGG | GTG | CCT | TAC | 1008 |
Thr | Leu | Asp | Val | Lys | Ser | Ile | His | Phe | Asp | Ser | Ala | Trp | Val | Pro | Tyr | |
32S | 330 | 335 | 1056 | |||||||||||||
ACC | AAC | TTC | TCA | CCG | ATT | TAC | GAA | GGT | AAA | TGC | GGT | ATG | AGC | GGT | GGC | |
Thr | Asn | Phe | ser | Pro | Ile | Tyr | G1U | Gly | Lys | Cys | Gly | Met | Ser | Gly | Gly | |
340 | 345 | 350 | ||||||||||||||
CGT | GTA | GAA | GGG | AAA | GTG | ATT | TAC | GAA | ACC | CAG | TCC | ACT | CAC | AAA | CTG | 1104 |
Arg | Val | Glu | Gly | Lys | Val | Ile | Tyr | Glu | Thr | Gin | Ser | Thr | His | Lys | Leu |
355 360 365
-18CZ 290070 B6
CTG | GCG | GCG | TTC | TCT | CAG | GCT | TCC | ATG | ATC | CAC | GTT | AAA | GGT | GAC | GTA | 1152 |
Leu | Ala | Ala | Phe | Ser | Gin | Ala | Ser | Met | Ile | His | Val | Lys | Gly | Asp | Val | |
370 | 375 | 380 | ||||||||||||||
AAC | GAA | GAA | ACC | TTT | AAC | GAA | GCC | TAC | ATG | ATG | CAC | ACC | ACC | ACT | TCT | 1200 |
Asn | Glu | Glu | Thr | Phe | Asn | Glu | Ala | Tyr | Met | Met | His | Thr | Thr | Thr | Ser | |
385 | 390 | 395 | 400 | |||||||||||||
CCG | CAC | TAC | GGT | ATC | GTG | GCG | TCC | ACT | GAA | ACC | GCT | GCG | GCG | ATG | ATG | 1248 |
Pro | His | Tyr | Gly | Ile | Val | Ala | Ser | Thr | Glu | Thr | Ala | Ala | Ala | Met | Met | |
405 | 410 | 415 | ||||||||||||||
AAA | GGC | AAT | GCA | GGT | AAG | CGT | CTG | ATC | AAC | GGT | TCT | ATT | GAA | CGT | GCG | 1296 |
Lys | Gly | Asn | Ala | Gly | Lys | Arg | Leu | Ile | Asn | Gly | Ser | Ile | Glu | Arg | Ala | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
ATC | AAA | TTC | CGT | AAA | GAG | ATC | AAA | CGT | CTG | AGA | ACG | GAA | TCT | GAT | GGC | 1344 |
Ile | Lys | Phe | Arg | Lys | Glu | Ile | Lys | Arg | Leu | Arg | Thr | Glu | Ser | Asp | Gly | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
TGG | TTC | TTT | GAT | GTA | TGG | CAG | CCG | GAT | CAT | ATC | GAT | ACG | ACT | GAA | TGC | 1392 |
Trp | Phe | Phe | Asp | Val | Trp | Gin | Pro | Asp | His | Ile | Asp | Thr | Thr | Glu | Cys | |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
TGG | CCG | CTG | CGT | TCT | GAC | AGC | ACC | TGG | CAC | GGC | TTC | AAA | AAC | ATC | GAT | 1440 |
Trp | Pro | Leu | Arg | Ser | Asp | Ser | Thr | Trp | His | Gly | Phe | Lys | Asn | ile | Asp | |
465 | 470 | 475 | 480 | |||||||||||||
AAC | GAG | CAC | ATG | TAT | CTT | GAC | CCG | ATC | AAA | GTC | ACC | CTG | CTG | ACT | CCG | 1488 |
Asn | G1U | His | Met | Tyr | Leu | Asp | Pro | Ile | Lys | Val | Thr | Leu | Leu | Thr | Pro | |
485 | 490 | 495 | ||||||||||||||
GGG | ATG | GAA | AAA | GAC | GGC | ACC | ATG | AGC | GAC | TT” | GGT | ATT | CCG | GCC | AGC | 1536 |
Gly | Met | Glu | Lys | Asp | Gly | Thr | Met | Ser | Asp | Phe | Gly | Ile | Pro | Ala | Ser | |
500 | 505 | 510 | ||||||||||||||
ATC | GTG | GCG | AAA | TAC | CTC | GAC | GAA | CAT | GGC | ATC | GTT | GTT | GAOa | AAA | ACC | 1584 |
Ile | Val | Ala | Lys | Tyr | Leu | Asp | Glu | His | Gly | Ile | Val | val | Glu | Lys | Thr | |
515 | 520 | 525 | ||||||||||||||
GGT | CCG | TAT | AAC | CTG | CTG | TTC | CTG | TTC | AGC | ATC | GGT | ATC | GAT | AAG | ACC | 1632 |
Gly | Pro | Tyr | Asn | Leu | Leu | Phe | Leu | Phe | Ser | Ile | Gly | Ile | Asp | Lys | Thr | |
530 | 535 | 540 | ||||||||||||||
AAA | GCA | CTG | AGC | CTG | CTG | CGT | GCT | CTG | ACT | GAC | TTT | AAA | CGT | GCG | TTC | 1680 |
Lys | Ala | Leu | Ser | Leu | Leu | Arg | Ala | Leu | Thr | Asp | Phe | Lys | Arg | Ala | Phe | |
545 | 550 | 555 | 560 | |||||||||||||
GAC | CTG | AAC | CTG | CGT | GTG | AAA | AAC | ATG | CTG | CCG | TCT | CTG | TAT | GAA | 1723 | |
Asp | Leu | Asn | Leu | Arg | Val | Lys | Asn | Met | Leu | Pro | Ser | Leu | Tyr | Arg | Glu | |
565 | 570 | 575 | ||||||||||||||
GAT | CCT | GAA | TTC | TAT | GAA | AAC | ATG | CGT | ATT | CAG | GAA | CTG | GCT | CAG | AAT | 1776 |
Asp | Pro | Glu | Phe | Tyr | Glu | Asn | Mec | Arg | Ile | Gin | Glu | Leu | Ala | Gin | Asn | |
580 | 585 | 590 | ||||||||||||||
ATC | CAC | AAA | CTG | ATT | GTT | CAC | CAC | AAT | CTG | CCG | GAT | CTG | ATG | TAT | CGC | 1324 |
Ile | His | Lys | Leu | Ile | Val | His | His | Asn | Leu | Pro | Asp | Leu | Met | Tyr | Arg | |
595 | 600 | 605 | ||||||||||||||
GCA | TTT | GAA | GTG | CTG | CCG | ACG | ATG | GTA | ATG | ACT | CCG | TAT | GCT | GCA | TTC | 1372 |
Ala | Phe | Glu | Val | Leu | Pro | Thr | Met | Val | Met | Thr | Pro | Tyr | Ala | Ala | Phe | |
610 | 615 | 620 | ||||||||||||||
CAG | AAA | GAG | CTG | CAC | GGT | ATG | ACC | GAA | GAA | GTT | TAC | CTC | GAC | GAA | ATG | 1920 |
Gin | Lys | G1U | Leu | His | Gly | Met | Thr | Glu | Glu | Val | Tyr | Leu | Asp | Glu | Met | |
625 | 630 | 635 | 640 |
- 19CZ 290070 B6
GTA | GGT | CGT | AAC | GCC | AAT | ATG | ATC | CTT | CCG | TAC | CCG | CCG | GGA | GTT | 1968 | |
Val | Gly | Arg | Ile | Asn | Ala | Asn | Met | Ile | Leu | Pro | Tyr | Pro | Pro | Gly | Val | |
645 | 650 | 655 | ||||||||||||||
CCT | CTG | GTA | ATG | CCG | GGT | GAA | ATG | ATC | ACC | GAA | GAA | AGC | CGT | CCG | GTT | 2016 |
Pro | Leu | Val | Met | Pro | Gly | Glu | Met | Ile | Thr | Glu | Glu | Ser | Arg | Pro | Val | |
660 | 665 | 670 | ||||||||||||||
CTG | GAG | TTC | CTG | CAG | ATG | CTG | TGT | GAA | ATC | GGC | GCT | CAC | TAT | CCG | GGC | 2064 |
Leu | Glu | Phe | Leu | Gin | Met | Leu | Cys | Glu | Ile | Gly | Ala | His | Tyr | Pro | Gly | |
675 | 630 | 685 | ||||||||||||||
TTT | GAA | ACC | GAT | ATT | CAC | GGT | GCA | TAC | CGT | CAG | GCT | GAT | GGC | CGC | TAT | 2112 |
Phe | Glu | Thr | Asp | Ile | His | Gly | Ala | Tyr | Arg | Gin | Ala | Asp | Gly | Arg | Tyr | |
690 | 695 | 700 | ||||||||||||||
ACC | GTT | AAG | GTA | TTG | AAA | GAA | GAA | AGC | AAA | AAA | 2145 | |||||
Thr | Val | Lys | Val | Leu | Lys | Glu | Glu | Ser | Lys | Lys | ||||||
705 | 710 | 715 |
(2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 715 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 6:
Met 1 | Asn Val | Ile Ala Ile Leu Asn His Met Gly Val Tyr | Phe | Lys 15 | Glu | ||||||||||
5 | 10 | ||||||||||||||
Glu | Pro | Ile | Arg | Glu | Leu | His | Arg | Ala | Leu | Glu | Arg | Leu | Asn | Phe | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ile | Val | Tyr | Pro | Asn | Asp | Arg | Asp | Asp | Leu | Leu | Lys | Leu | Ile | Glu | Asn |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Asn | Ala | Arg | Leu | Cys | Gly | Val | Ile | Phe | Asp | Trp | Asp | Lys | Tyr | Asn | Leu |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Glu | Leu | Cys | Glu | Glu | Ile | Ser | Lys | Met | Asn | Glu | Asn | Leu | Pro | Leu | Tyr |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ala | Phe | Ala | Asn | Thr | Tyr | Ser | Thr | Leu | Asp | Val | Ser | Leu | Asn | Asp | Leu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Arg | Leu | Gin | Ile | Ser | Phe | Phe | Glu | Tyr | Ala | Leu | Gly | Ala | Ala | Glu | Asp |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ile | Ala | Asn | Lys | Ile | Lys | Gin | Thr | Thr | Asp | Glu | Tyr | Ile | Asn | Thr | Ile |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Leu | Pro | Pro | Leu | Thr | Lys | Ala | Leu | Phe | Lys | Tyr | Val | Arg | Glu | Gly | Lys |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Tyr | Thr | Phe | Cys | Thr | Pro | Gly | His | Met | Gly | Gly | Thr | Ala | Phe | Gin | Lys |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ser | Pro | Val | Gly | Ser | Leu | Phe | Tyr | Asp | Phe | Phe | Gly | Pro | Asn | Thr | Met |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Lys | Ser | Asp | Ile | Ser | Ile | Ser | Val | Ser | Glu | Leu | Gly | Ser | Leu | Leu | Asp |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
His | Ser | Gly | Pro | His | Lys | Glu | Ala | Glu | Gin | Tyr | Ile | Ala | Arg | Val | Phe |
195 200 205
-20CZ 290070 B6
Asn Ala 210 | Asp Arg Val Gly | Ser Tyr Met val Thr Asn 215 | Gly Thr | Ser Thr Ala | Asn Ile 240 | ||||||||||
Gly 235 | 220 Ser | ||||||||||||||
Lys 225 | Ile | Met | Tyr Ser 230 | Ala | Pro | Ala | Thr | Ile | Leu | ||||||
Asp | Arg | Asn | Cys | His | Lys | Ser | Leu | Thr | His | Leu | Met | Met | Met | Ser | Asp |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Val | Thr | Pro | Ile | Tyr | Phe | Arg | Pro | Thr Arg | Asn | Ala | Tyr | Gly | Ile | Leu | |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Gly | Gly | Ile | Pro | Gin | Ser | Glu | Phe | Gin | His | Ala | Thr | Ile | Ala | Lys | Arg |
275 | 230 | 285 | |||||||||||||
Val | Lys | Glu | Thr | Pro | Asn | Ala | Thr | Trp | Pro | Val | His | Ala | Val | Ile | Thr |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Asn | Ser | Thr | Tyr | Asp | Gly | Leu | Leu | Tyr | Asn | Thr | Asp | Phe | Ile | Lys | Lys |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Thr | Leu | Asp | Val | Lys | Ser | Ile | His | Phe | Asp | Ser | Ala | Trp | Val | Pro | Tyr |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Thr | Asn | Phe | Ser | Pro | Ile | Tyr | Glu | Gly | Lys | Cys | Gly | Met | Ser | Gly | Gly |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Arg | Val | Glu | Gly | Lys | Val | Ile | Tyr | Glu | Thr | Gin | Ser | Thr | His | Lys | Leu |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Leu | Ala | Ala | Phe | Ser | Gin | Ala | Ser | Met | Ile | His | Val | Lys | Gly | Asp | Val |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Asn | Glu | Glu | Thr | Phe | Asn | Glu | Ala | Tyr | Met | Met | His | Thr | Thr | Thr | Ser |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Pro | His | Tyr | Gly | Ile | Val | Ala | Ser | Thr | Glu | Thr | Ala | Ala | Ala | Met | Met |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Lys | Gly | Asn | Ala | Gly | Lys | Arg | Leu | Ile | Asn | Gly | Ser | Ile | Glu | Arg | Ala |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Ile | Lys | Phe | Arg | Lys | Glu | Ile | Lys | Arg | Leu | Arg | Thr | Glu | Ser | Asp | Gly |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Trp | Phe | Phe | Asp | Val | Trp | Gin | Pro | Asp | His | Ile | Asp | Thr | Thr | Glu | Cys |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Trp | Pro | Leu | Arg | Ser | Asp | Ser | Thr | Trp | His | Gly | Phe | Lys | Asn | Ile | Asp |
465 | 470 | 47S | 480 | ||||||||||||
Asn | Glu | His | Met | Tyr | Leu | Asp | Pro | Ile | Lys | Val | Thr | Leu | Leu | Thr | Pro |
48S | 490 | 495 | |||||||||||||
Gly | Met | Glu | Lys | Asp | Gly | Thr | Met | Ser | Asp | Phe | Gly | Ile | Pro | Ala | Ser |
500 | 505 | 510 | |||||||||||||
Ile | Val | Ala | Lys | Tyr | Leu | Asp | Glu | His | Gly | Ile | Val | Val | Glu | Lys | Thr |
515 | 520 | 525 | |||||||||||||
Gly | Pro | Tyr | Asn | Leu | Leu | Phe | Leu | Phe | Ser | Ile | Gly | Ile | Asp | Lys | Thr |
530 | 535 | 540 | |||||||||||||
Lys | Ala | Leu | Ser | Leu | Leu | Arg | Ala | Leu | Thr | Asp | Phe | Lys | Arg | Ala | Phe |
545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
Asp | Leu | Asn | Leu | Arg | Val | Lys | Asn | Met | Leu | Pro | Ser | Leu | Tyr | Arg | Glu |
565 | 570 | 575 | |||||||||||||
Asp | Pro | Glu | Phe | Tyr | Glu | Asn | Met | Arg | Ile | Gin | Glu | Leu | Ala | Gin | Asn |
580 | 585 | 590 | |||||||||||||
Ile | His | Lys | Leu | Ile | Val | His | His | Asn | Leu | Pro | Asp | Leu | Met | Tyr | Arg |
595 | 600 | 605 |
-21 CZ 290070 B6
Ala Phe Glu 610 Gin Lys Glu 625 Val Gly Arg | Val Leu Ile | Leu His Asn 645 | Pro Thr Met Val Met Thr 615 | Pro Tyr Ala Ala Phe | |||||||||||
620 Tyr Tyr | Leu Asp Glu Met 640 | ||||||||||||||
Gly 630 Ala | Met Thr | Glu Glu Val 635 | |||||||||||||
Asn | Met | ||||||||||||||
Ile | Leu 650 | Pro | Pro | Pro Gly 655 | Val | ||||||||||
Pro | Leu | Val | Met | Pro | Gly | Glu | Met | Ile | Thr | Glu | Glu | Ser | Arg | Pro | Val |
660 | 665 | 670 | |||||||||||||
Leu | Glu | Phe | Leu | Gin | Met | Leu | Cys | Glu | Ile | Gly | Ala | His | Tyr | Pro | Gly |
675 | 680 | 685 | |||||||||||||
Phe | Glu | Thr | Asp | Ile | His | Gly | Ala | Tyr | Arg | Gin | Ala | Asp | Gly | Arg | Tyr |
690 | 695 | 700 | |||||||||||||
Thr | Val | Lys | Val | Leu | Lys | Glu | Glu | Ser | Lys | Lys | |||||
705 | 710 | 715 |
PATENTOVÉ NÁROKY
1. Gen Idc kódující lysindekarboxylázu, která má sekvenci aminokyselin uvedenou v SEQ ID NO: 4 výpisu sekvencí.
Claims (10)
1. Gen Idc kódující lysindekarboxylázu, která má sekvenci aminokyselin uvedenou v SEQ ID NO: 4 výpisu sekvencí.
2. Gen Idc podle nároku 1, kde uvedený gen má sekvenci nukleotidů od kodonu 1005 do 3143, uvedenou v SEQ ID NO: 3 výpisu sekvencí.
3. Gen Idc podle nároku 1, kde uvedená sekvence aminokyselin obsahuje substituci, deleci nebo inzerci jednoho nebo více zbytků aminokyselin, přičemž nedojde k podstatnému snížení lysindekarboxylázové aktivity.
4. Mikroorganismus rodu Escherichia produkující L-lysin se sníženou nebo chybějící lysindekarboxylázovou aktivitou v buňkách, přičemž lysindekarboxylázová aktivita v buňkách je snížena nebo chybí omezením exprese genu Idc podle některého z nároku 1 až 3.
5. Mikroorganismus podle nároku 4, kterým je Escherichia coli.
6. Mikroorganismus podle nároku 4, který má dále omezenou expresi genu cadA.
7. Mikroorganismus podle nároku 4, kde exprese genu Idc je snížena dosažením nefunkčnosti genu Idc.
8. Mikroorganismus podle nároku 4, kde nefunkčnost genu Idc je dosažena substitucí, deleci, inzercí, adicí nebo inverzí jednoho nebo více nukleotidů v sekvenci nukleotidů.
9. Způsob výroby L-lysinu, vyznačující se tím, že se kultivuje mikroorganismus podle některého z nároků 4 až 8 v kapalném médiu, přičemž se dosáhne produkce a akumulace L-lysinu v kultivačním médiu, a L-lysin se izoluje.
10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že se kultivuje mikroorganismus podle nároku 6.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP30638694 | 1994-12-09 | ||
PCT/JP1995/002481 WO1996017930A1 (fr) | 1994-12-09 | 1995-12-05 | Nouveau gene de decarboxylase de lysine et procede de production de lysine l |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ174697A3 CZ174697A3 (en) | 1997-11-12 |
CZ290070B6 true CZ290070B6 (cs) | 2002-05-15 |
Family
ID=17956402
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19971746A CZ290070B6 (cs) | 1994-12-09 | 1995-12-05 | Gen ldc kódující lysindekarboxylázu, mikroorganismus a způsob výroby L-lysinu |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5827698A (cs) |
EP (1) | EP0796912B9 (cs) |
JP (1) | JP3692538B2 (cs) |
KR (1) | KR100420743B1 (cs) |
CN (2) | CN100357431C (cs) |
AU (1) | AU703308B2 (cs) |
BR (1) | BR9509896A (cs) |
CA (1) | CA2207271C (cs) |
CZ (1) | CZ290070B6 (cs) |
DE (1) | DE69534801T3 (cs) |
DK (1) | DK0796912T4 (cs) |
ES (1) | ES2256850T5 (cs) |
HU (1) | HU223706B1 (cs) |
MX (1) | MX9704236A (cs) |
MY (1) | MY113738A (cs) |
PE (1) | PE59996A1 (cs) |
PL (1) | PL182903B1 (cs) |
RU (1) | RU2188235C2 (cs) |
SK (1) | SK283478B6 (cs) |
WO (1) | WO1996017930A1 (cs) |
ZA (1) | ZA9510442B (cs) |
Families Citing this family (118)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SK283478B6 (sk) * | 1994-12-09 | 2003-08-05 | Ajinomoto Co., Inc. | Gén, ktorý kóduje lyzínovú dekarboxylázu, mikroorganizmus a spôsob výroby L-lyzínu |
MXPA02007154A (es) | 2000-01-21 | 2004-09-06 | Ajinomoto Kk | Procedimiento para producir l-lisina. |
US7329514B2 (en) * | 2002-02-28 | 2008-02-12 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing n-acetylneuraminic acid |
BR0304860A (pt) * | 2002-11-11 | 2004-08-31 | Ajinomoto Kk | Método para produzir uma substância alvo pela utilização de uma-bactéria pertencente ao gênero escherichia |
EP1424397B1 (en) | 2002-11-26 | 2011-01-19 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-glutamine and L-glutamine producing bacterium |
BR0317537A (pt) * | 2002-12-20 | 2005-11-22 | Metanomics Gmbh & Co Kgaa | Processo para preparar aminoácidos em organismos transgênicos, construção de ácido nucleico, vetor, organismo procariótico ou eucariótico transgênico, uso dos organismos transgênicos, e, sequencia de aminoácidos |
JP2004254544A (ja) * | 2003-02-25 | 2004-09-16 | Ajinomoto Co Inc | 新規リジンデカルボキシラーゼ遺伝子及びl−リジンの製造法 |
CN103088080B (zh) | 2004-10-07 | 2016-02-17 | 味之素株式会社 | 生产碱性物质的方法 |
RU2004137719A (ru) | 2004-12-23 | 2006-06-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae |
US7547531B2 (en) * | 2005-01-18 | 2009-06-16 | Ajinomoto Co., Inc. | L-amino acid producing microorganism which has been modified to inactive the fimH gene, and a method for producing I-amino acid |
JP2007185184A (ja) * | 2005-12-16 | 2007-07-26 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸生産菌及びl−アミノ酸の製造法 |
WO2007086618A1 (en) | 2006-01-30 | 2007-08-02 | Ajinomoto Co., Inc. | L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid |
JP2009095237A (ja) | 2006-02-02 | 2009-05-07 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
JP2009118740A (ja) * | 2006-03-03 | 2009-06-04 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
EP2004803A2 (en) | 2006-03-23 | 2008-12-24 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using bacterium of theenterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small rna |
JP2009060791A (ja) | 2006-03-30 | 2009-03-26 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸生産菌及びl−アミノ酸の製造法 |
WO2007119890A1 (en) | 2006-04-18 | 2007-10-25 | Ajinomoto Co., Inc. | A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE sfmACDFH-fimZ CLUSTER OR THE fimZ GENE |
JP2009165355A (ja) * | 2006-04-28 | 2009-07-30 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸を生産する微生物及びl−アミノ酸の製造法 |
EP2021458A1 (en) | 2006-05-23 | 2009-02-11 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family |
BRPI0715584B8 (pt) * | 2006-07-19 | 2017-02-21 | Ajinomoto Kk | método para produzir um l-aminoácido |
JP2010017081A (ja) * | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
US20080213305A1 (en) * | 2006-12-08 | 2008-09-04 | Martin Levine | Vaccine for periodontitis and methods of use |
WO2008072761A2 (en) * | 2006-12-11 | 2008-06-19 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing an l-amino acid |
RU2006143864A (ru) | 2006-12-12 | 2008-06-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ |
JP2010041920A (ja) | 2006-12-19 | 2010-02-25 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
RU2006145712A (ru) * | 2006-12-22 | 2008-06-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина |
BRPI0703692B1 (pt) | 2006-12-25 | 2016-12-27 | Ajinomoto Kk | método para se obter os cristais de um hidrocloreto de aminoácido básico compreendendo gerar um aminoácido básico usando células microbianas por fermentação em um caldo de fermentação ou por um método enzimático em uma solução de reação de enzima usando as células como catalisadores |
EP2116595B1 (en) | 2007-01-22 | 2017-04-05 | Ajinomoto Co., Inc. | An l-amino acid-producing microorganism and a method for producing an l-amino acid |
DE102007005072A1 (de) | 2007-02-01 | 2008-08-07 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Cadaverin |
JP2010088301A (ja) | 2007-02-01 | 2010-04-22 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
JP2010110217A (ja) * | 2007-02-22 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸生産菌及びl−アミノ酸の製造法 |
JP2010263790A (ja) * | 2007-09-04 | 2010-11-25 | Ajinomoto Co Inc | アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
RU2395579C2 (ru) * | 2007-12-21 | 2010-07-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia |
EP2192170B1 (en) | 2007-09-04 | 2017-02-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Amino acid-producing microorganism and method of producing amino acid |
US7794726B2 (en) * | 2007-12-07 | 2010-09-14 | The Boards of Regents of the University of Oklahoma | Mutants of lysine decarboxylase, vaccines for periodontitis, and methods of use |
JP2011067095A (ja) | 2008-01-10 | 2011-04-07 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による目的物質の製造法 |
CN102348806A (zh) | 2008-01-23 | 2012-02-08 | 味之素株式会社 | L-氨基酸的生产方法 |
RU2008105793A (ru) | 2008-02-19 | 2009-08-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена |
WO2009109102A1 (en) | 2008-03-03 | 2009-09-11 | Global Bil-Chem Technology Group Company Limited | Recombinant microorganism and method for producing l-lysine |
WO2010027045A1 (ja) | 2008-09-08 | 2010-03-11 | 味の素株式会社 | L-アミノ酸を生産する微生物及びl-アミノ酸の製造法 |
JP2012029565A (ja) | 2008-11-27 | 2012-02-16 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
JP2010142200A (ja) | 2008-12-22 | 2010-07-01 | Ajinomoto Co Inc | L−リジンの製造法 |
EP2382320B1 (en) | 2009-01-23 | 2018-04-18 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing l-amino acids employing bacteria of the enterobacteriacea family in a culture medium with controlled glycerol concentration |
JP5521347B2 (ja) | 2009-02-16 | 2014-06-11 | 味の素株式会社 | L−アミノ酸生産菌及びl−アミノ酸の製造法 |
DE102009030342A1 (de) | 2009-06-25 | 2010-12-30 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur fermentativen Herstellung von organisch chemischen Verbindungen |
EP2460883A4 (en) | 2009-07-29 | 2013-01-16 | Ajinomoto Kk | PROCESS FOR THE PREPARATION OF L-AMINO ACID |
JP2012196144A (ja) | 2009-08-03 | 2012-10-18 | Ajinomoto Co Inc | ビブリオ属細菌を用いたl−リジンの製造法 |
JP2012223092A (ja) | 2009-08-28 | 2012-11-15 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
JP2013013329A (ja) | 2009-11-06 | 2013-01-24 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
RU2460793C2 (ru) | 2010-01-15 | 2012-09-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae |
RU2010101135A (ru) | 2010-01-15 | 2011-07-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата |
JP2013074795A (ja) | 2010-02-08 | 2013-04-25 | Ajinomoto Co Inc | 変異型rpsA遺伝子及びL−アミノ酸の製造法 |
RU2471868C2 (ru) | 2010-02-18 | 2013-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот |
CA2796363A1 (en) * | 2010-04-12 | 2011-10-20 | Toray Industries, Inc. | Method for producing 1,5-pentanediamine |
DE102010019059A1 (de) | 2010-05-03 | 2011-11-03 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Sensoren zur intrazellulären Metabolit-Detektion |
RU2471870C2 (ru) | 2010-06-03 | 2013-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА И L-ЦИТРУЛЛИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА pepA |
RU2010122646A (ru) | 2010-06-03 | 2011-12-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина |
RU2501858C2 (ru) | 2010-07-21 | 2013-12-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae |
RU2482188C2 (ru) | 2010-07-21 | 2013-05-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ РОДА Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН astCADBE |
JP2014036576A (ja) | 2010-12-10 | 2014-02-27 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
CN103492553B (zh) * | 2011-02-22 | 2018-06-12 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于生产尸胺的方法和重组微生物 |
DE102011006716A1 (de) | 2011-04-04 | 2012-10-04 | Evonik Degussa Gmbh | Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Herstellung einer organisch-chemischen Verbindung |
JPWO2012157699A1 (ja) | 2011-05-18 | 2014-07-31 | 味の素株式会社 | 動物用免疫賦活剤、それを含む飼料及びその製造方法 |
DE102011118019A1 (de) | 2011-06-28 | 2013-01-03 | Evonik Degussa Gmbh | Varianten des Promotors des für die Glyzerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase kodierenden gap-Gens |
RU2011134436A (ru) | 2011-08-18 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности |
JP2015013812A (ja) | 2011-11-01 | 2015-01-22 | 味の素株式会社 | 植物ウイルスの感染抑制剤およびそれを用いた植物ウイルス感染抑制方法 |
DK2796555T3 (en) * | 2011-12-21 | 2018-12-10 | Cj Cheiljedang Corp | Process for the preparation of L-lysine using microorganisms capable of producing L-lysine |
BR112014021439B1 (pt) | 2012-04-27 | 2021-12-21 | Evonik Technochemie Gmbh | Polipeptídeo de isopropilmalato sintase e a sequência de nucleotídeos que o codifica, vetor, microrganismo do gênero corynebacterium e uso do mesmo, bem como processo fermentativo para a produção de kic ou l-leucina |
DE102012024435A1 (de) | 2012-12-14 | 2014-07-10 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zur Identifizierung einer Zelle mit gegenüber ihrem Wildtyp erhöhten intrazellulären Konzentration eines bestimmten Metaboliten, wobei die Veränderung der Zelle durch Rekombi-neering erreicht wird, sowie ein Verfahren zur Herstellung einer gegenüber ihrem Wildtyp genetisch veränderten Produktionszelle mit optimierter Produktion eines bestimmten Metaboliten, ein Verfahren zur Herstellung dieses Metaboliten, sowie dafür geeignete Nukleinsäuren |
EP2762571A1 (de) | 2013-01-30 | 2014-08-06 | Evonik Industries AG | Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren |
RU2013118637A (ru) | 2013-04-23 | 2014-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK |
EP2868745B1 (en) | 2013-05-13 | 2017-06-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for manufacturing an L-amino acid |
DK2811028T3 (en) | 2013-06-03 | 2017-05-01 | Evonik Degussa Gmbh | Process for Preparation of L-Valine Using Recombinant Coryn Bacteria Containing the Propionate Inducible IlvBN Operon |
RU2013140115A (ru) | 2013-08-30 | 2015-03-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕНА ЭКСПРЕССИЯ КЛАСТЕРА ГЕНОВ znuACB |
JP2016192903A (ja) | 2013-09-17 | 2016-11-17 | 味の素株式会社 | 海藻由来バイオマスからのl−アミノ酸の製造方法 |
RU2013144250A (ru) | 2013-10-02 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР |
JP5958653B2 (ja) | 2013-10-02 | 2016-08-02 | 味の素株式会社 | アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法 |
WO2015060314A1 (ja) | 2013-10-21 | 2015-04-30 | 味の素株式会社 | L-アミノ酸の製造法 |
JP6519476B2 (ja) | 2013-10-23 | 2019-05-29 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
RU2014105547A (ru) | 2014-02-14 | 2015-08-20 | Адзиномото Ко., Инк. | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, ИМЕЮЩЕЙ СВЕРХЭКСПРЕССИРУЕМЫЙ ГЕН yajL |
RU2015120052A (ru) | 2015-05-28 | 2016-12-20 | Аджиномото Ко., Инк. | Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA |
KR101791837B1 (ko) * | 2015-08-06 | 2017-10-31 | 서울대학교산학협력단 | 라이신 디카르복실라아제의 변이주 개발 방법 및 그의 응용 |
US11208649B2 (en) | 2015-12-07 | 2021-12-28 | Zymergen Inc. | HTP genomic engineering platform |
US9988624B2 (en) | 2015-12-07 | 2018-06-05 | Zymergen Inc. | Microbial strain improvement by a HTP genomic engineering platform |
BR112018011503A2 (pt) | 2015-12-07 | 2018-12-04 | Zymergen Inc | promotores da corynebacterium glutamicum |
EP3420096A1 (en) | 2016-02-25 | 2019-01-02 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing l-amino acids using a bacterium of the family enterobacteriaceae overexpressing a gene encoding an iron exporter |
JP2019519241A (ja) | 2016-06-30 | 2019-07-11 | ザイマージェン インコーポレイテッド | グルコース透過酵素ライブラリーを生成するための方法およびその使用 |
WO2018005655A2 (en) | 2016-06-30 | 2018-01-04 | Zymergen Inc. | Methods for generating a bacterial hemoglobin library and uses thereof |
CN106222231A (zh) * | 2016-07-12 | 2016-12-14 | 南京工业大学 | 一种快速生产高光学纯度d‑赖氨酸的方法 |
CN110291101B (zh) * | 2016-12-30 | 2023-08-08 | 上海凯赛生物技术股份有限公司 | 修饰的赖氨酸脱羧酶 |
JP2020513764A (ja) | 2016-12-30 | 2020-05-21 | クイデル コーポレーション | ファージ媒介性イムノアッセイ及び抗生物質又はプロバイオティック薬剤に対する細菌の感受性を決定するための方法 |
EP3562938A4 (en) * | 2016-12-30 | 2020-11-11 | Cathay Biotech Inc. | LYSINE DECARBOXYLASES WITH CHANGES IN THE LEVELS OF TITRABLE AMINO ACIDS |
JP7066977B2 (ja) | 2017-04-03 | 2022-05-16 | 味の素株式会社 | L-アミノ酸の製造法 |
CN108795912B (zh) * | 2017-05-05 | 2022-08-02 | 上海凯赛生物技术股份有限公司 | 赖氨酸脱羧酶突变体及其应用 |
DE102017004566A1 (de) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Pyruvatcarboxylase und für die Pyruvatcarboxylase kodierende DNA, Plasmid enthaltend die DNA, sowie Mikroorganismus zur Produktion und Verfahren zur Herstellung von Produkten, deren Biosynthese Oxalacetat als Vorstufe beinhaltet, Chromosom und Screeningverfahren |
CN111748549B (zh) * | 2017-05-16 | 2022-09-23 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 新的赖氨酸脱羧酶突变体及其应用 |
DE102017004751A1 (de) | 2017-05-18 | 2018-11-22 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Pyruvatcarboxylase und für die Pyruvatcarboxylase kodierende DNA, Plasmid enthaltend die DNA, sowie Mikroorganismus zur Produktion und verfahren zur Herstellung von Produkten, deren Bioynthese Oxalacetat als Vorstufe beeinhaltet und Chromosom |
DE102017004750A1 (de) | 2017-05-18 | 2018-11-22 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Pyruvvatcarboxylase und für die Pyrovatcarboxylase kodierende DNA, Plasmid enthaltend die DNA, sowie Mikroorganismen zur Produktion und Verfahren zur Herstellung von Produkten, deren Biosynthese Oxalacetat als Vorstufe beeinhaltet und Chromsom |
US20200239897A1 (en) | 2017-06-07 | 2020-07-30 | Zymergen Inc. | Promoters from corynebacterium glutamicum and uses thereof in regulating ancillary gene expression |
CA3076516A1 (en) | 2017-10-02 | 2019-04-11 | Quidel Corporation | Phage-based detection method for antimicrobial susceptibility testing and identification of bacterial species |
EP3861109A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-08-11 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
WO2020081958A2 (en) * | 2018-10-18 | 2020-04-23 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Compositions and methods for identifying mutations of genes of multi-gene systems having improved function |
WO2020138178A1 (en) | 2018-12-27 | 2020-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing basic l-amino acids or salts thereof by fermentation of an enterobacteriaceae bacterium |
BR112021014194A2 (pt) | 2019-02-22 | 2021-12-28 | Ajinomoto Kk | Método para a produção de um l-aminoácido |
JP2022526181A (ja) | 2019-04-05 | 2022-05-23 | 味の素株式会社 | L-アミノ酸の製造方法 |
JP2022550084A (ja) | 2019-09-25 | 2022-11-30 | 味の素株式会社 | 細菌の発酵によるl-アミノ酸の製造方法 |
CN111117940B (zh) * | 2019-12-04 | 2022-06-28 | 天津大学 | 一种高产戊二胺的大肠杆菌工程菌与方法 |
TWI748408B (zh) * | 2020-04-14 | 2021-12-01 | 中國石油化學工業開發股份有限公司 | 用於生產1,5-戊二胺之重組微生物及方法 |
CN117737102A (zh) * | 2020-07-02 | 2024-03-22 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种用于合成戊二胺的赖氨酸脱羧酶及其应用 |
JP2023534790A (ja) | 2020-07-15 | 2023-08-14 | エボニック オペレーションズ ゲーエムベーハー | オキシドレダクターゼをコードするアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド |
WO2023016890A1 (en) | 2021-08-09 | 2023-02-16 | Evonik Operations Gmbh | Method for producing a recombinant bacterial collagen-like protein (clp) |
EP4384539A1 (en) | 2021-08-09 | 2024-06-19 | Evonik Operations GmbH | Polynucleotide encoding a bacterial collagen-like protein |
CN117813315A (zh) | 2021-08-09 | 2024-04-02 | 赢创运营有限公司 | 用于生产重组细菌胶原样蛋白(clp)的方法 |
CN117999103A (zh) | 2021-09-20 | 2024-05-07 | 赢创运营有限公司 | 非粘附性胶原蛋白样水凝胶 |
WO2023161038A1 (en) | 2022-02-25 | 2023-08-31 | Evonik Operations Gmbh | Sponges based on collagen-like proteins |
WO2023165952A1 (en) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Evonik Operations Gmbh | Biotechnological production of collagen proteins and bacterial collagen-like proteins by recombinant microorganisms |
CN115089733B (zh) * | 2022-06-28 | 2024-05-24 | 滨州医学院 | 用于治疗高赖氨酸血症的组合物及应用 |
CN114990043B (zh) * | 2022-06-28 | 2024-04-30 | 滨州医学院 | 代谢赖氨酸的工程菌及其构建方法与应用 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB820268A (en) * | 1955-12-09 | 1959-09-16 | Pfizer & Co C | Preparation of lysine |
JPS519393B2 (cs) * | 1973-09-22 | 1976-03-26 | ||
SK283478B6 (sk) * | 1994-12-09 | 2003-08-05 | Ajinomoto Co., Inc. | Gén, ktorý kóduje lyzínovú dekarboxylázu, mikroorganizmus a spôsob výroby L-lyzínu |
-
1995
- 1995-12-05 SK SK702-97A patent/SK283478B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1995-12-05 BR BR9509896A patent/BR9509896A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-12-05 KR KR1019970703726A patent/KR100420743B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-12-05 MX MX9704236A patent/MX9704236A/es unknown
- 1995-12-05 CA CA2207271A patent/CA2207271C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-05 DK DK95938648.3T patent/DK0796912T4/da active
- 1995-12-05 EP EP95938648.3A patent/EP0796912B9/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-05 PL PL95320645A patent/PL182903B1/pl unknown
- 1995-12-05 AU AU39948/95A patent/AU703308B2/en not_active Expired
- 1995-12-05 DE DE69534801T patent/DE69534801T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-05 JP JP51747996A patent/JP3692538B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-05 CN CNB951975773A patent/CN100357431C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-05 HU HU9800907A patent/HU223706B1/hu active IP Right Grant
- 1995-12-05 CN CN2007101819693A patent/CN101220366B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-05 US US08/849,212 patent/US5827698A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-05 CZ CZ19971746A patent/CZ290070B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-12-05 WO PCT/JP1995/002481 patent/WO1996017930A1/ja active IP Right Grant
- 1995-12-05 RU RU97111783/13A patent/RU2188235C2/ru active
- 1995-12-05 ES ES95938648T patent/ES2256850T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-07 MY MYPI95003782A patent/MY113738A/en unknown
- 1995-12-07 PE PE1995286684A patent/PE59996A1/es not_active IP Right Cessation
- 1995-12-08 ZA ZA9510442A patent/ZA9510442B/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ290070B6 (cs) | Gen ldc kódující lysindekarboxylázu, mikroorganismus a způsob výroby L-lysinu | |
KR101208480B1 (ko) | 말산 효소 활성이 감쇠된 에스케리키아 세균을 사용하는l-라이신 또는 l-트레오닌의 생산방법 | |
JP3331472B2 (ja) | 発酵法によるl−スレオニンの製造法 | |
EP0811682B2 (en) | Method of producing L-lysine | |
KR100337959B1 (ko) | 돌연변이체포스포에놀피루베이트카복실라제,이의유전자및아미노산의제조방법 | |
US8486670B2 (en) | Method of producing L-threonine using Escherichia coli strain with phosphoenolpyruvate carboxylase promoter replaced with cysteine synthase promoter | |
JPH10113183A (ja) | 発酵法によるl−アミノ酸の製造法 | |
US10526586B2 (en) | Pyruvate dehydrogenase variants, a microorganism comprising the same and a method for producing L-amino acid using the same | |
JP2000139471A (ja) | 発酵法によるl−メチオニンの製造法 | |
JP2001046067A (ja) | 好熱性バチルス属細菌由来のl−リジン生合成系遺伝子 | |
US20040229311A1 (en) | Novel lysine decarboxylase gene and method for producing L-lysine | |
BR112018000074B1 (pt) | Micro-organismo que produz l-lisina e método para produzir l-lisina com o uso do mesmo | |
DK2430152T3 (en) | A microorganism with increased L-lysine productivity and method for producing L-lysine using the same | |
CN112725254A (zh) | 一种l-高丝氨酸的生产菌株及其构建方法和应用 | |
JP4495788B2 (ja) | 温度感受性dtsR遺伝子 | |
US20230040524A1 (en) | Novel modified polypeptide with attenuated activity of citrate synthase and method for producing l-amino acid using the same | |
JP3767066B2 (ja) | 新規遺伝子 | |
CN115612680A (zh) | 生产苏氨酸的重组微生物、其构建方法及其生产苏氨酸的方法 | |
WO2023142871A1 (zh) | 一种修饰的棒状杆菌属微生物及其构建方法与应用 | |
MXPA97010044A (en) | Method to produce l-lysine by means of fermentation | |
JP2007135602A (ja) | L−グルタミン酸の製造法 | |
JP2004242564A (ja) | メチロフィラス属細菌のベクター |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MK4A | Patent expired |
Effective date: 20151205 |