CZ20032396A3

CZ20032396A3 - Dimerzní isoflavony

Info

Publication number: CZ20032396A3
Application number: CZ20032396A
Authority: CZ
Inventors: Andrew Heaton; Graham Edmund Kelly; Naresh Kumar
Original assignee: Novogen Research Pty Ltd
Priority date: 2001-03-08
Filing date: 2002-03-08
Publication date: 2004-02-18
Also published as: BR0208053A; HUP0303463A1; US7312344B2; NZ528067A; MXPA03008076A; WO2002070502A1; CA2440642A1; HK1066797A1; CN100436439C; IL157750A; AUPR363301A0; EP1373242A4; IL157750A0; EP1373242A1; HUP0303463A3; NO20033898D0; CN1505618A; JP2004529900A; US20040152761A1; NO20033898L

Description

Dimerní isoflavony

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových dimerních molekul, odvozených od cyklické struktury 1,2-difenylpropanu (isoflavonoidů). Tento vynález se také týká synthesy dimerních isoflavonoidnich molekul, směsí obsahujících tyto sloučeniny a jejich použití jako terapeutík.

Dosavadní stav techniky

Přírodní rostlinné isoflavonoidy jsou známé širokým rozpětím důležitých biologických účinků na lidské buňky včetně antioxidačních účinků a podpůrnou či omezující regulací řady enzymů a signálních transdukčních mechanismů. Mitotická vazba a cytotoxicita lidských rakovinných buněk, zvýšená propustnost vlásečnic, zvýšená buněčná přilnavost, zvýšená reakce cévních buněk hladkých svalů k činidlům působícím uvolnění cév a agonismus receptorů estrogenu je pár příkladů reakce živočišných buněk na biologický účinek přírodních isoflavonoidů.

Rozsah terapeutických výhod jako výsledek těchto biologických výstupů byl stanoven včetně ošetření a prevence pre-menopauzálních příznaků jako je premenstruační syndrom, endometriosa, děložní benigní nádor, hyperlipidemie (nadbytek tuků v krvi), kardiovaskulární onemocnění, menopauzální příznaky jako osteoporóza a senilní demence, alkoholismus, nádorová prostatická hypertrofie a rakovina jako taková, prostaty, prsu a tlustého střeva [viz WO 93/23069; WO 96/10341; US 5424331; JP 62-106017; JP-62-106016; US 5516528; JP 62-106016A2; JP 62-106017A2; JP 61-246124; WO 98/50026; WO 99/43335; WO 00/49009; WO 00/644438; WO 99/48496],

Zatímco je popsáno více než 700 různých přírodních isoflavonoidů, pouze u několika z nich se potvrdilo, že vykazují možné terapeutické účinky na zvířata, včetně lidí. Tyto látky ·· ···· zahrnují daidzein, genistein, formononetin, biochanin a glycitein. Tyto látky a všechny přírodní isoflavonoidy se v přírodě nacházejí jako monomery, buď volné nebo, častěji, vázané na cukernou jednotku (glykosid). Isoflavonoid musí být oddělen od této jednotky, aby se stal biologicky aktivní látkou.

O řadě sloučenin se strukturou podobnou přírodním rostlinným isoflavononům je známo, že vykazují biologické vlastnosti s potenciálním terapeutickým účinkem pro živočichy včetně lidí. Tyto látky zahrnují sloučeniny, které jsou přírodními metabolity rostlinných isoflavonů vznikajícími při bakteriální fermentaci střevní florou a zahrnují sloučeniny jako equol a (2-desmethylangolensin [WO 93/23069; WO 98/08503; WO 01/17986; WO 00/66576], V této skupině je též zahrnut synthetický isoflavonoidní ipriflavon, který je vyvinut pro ošetření postmenopauzální osteoporózy [WO 91/14429] a široký výběr synthetických isoflavonoidních analogů [WO 98/08503],

Nedávno se objektem zájmu staly i biologické vlastnosti dimerních forem isoflavonoidů. Čtyři formy bis-isoflavonů následujících struktur mají inhibiční aktivitu k 5alfa-reduktase, což je užitečné při léčení zvětšení prostaty [JP 9067362-A],

OH O OH O

O • ·

Bis-isoflavonový dimer s můstkem C-C, jak ukazuje vzorec níže, byl rovněž popsán, avšak nejsou mu přičítány žádné terapeutické účinky [Al-Maharik a spol.].

Stále existuje potřeba nové generace látek, které by vykazovaly významné farmakologické účinky pro použití jako profylaktika a v terapii.

Podstata vynálezu

Vynálezci objevili podle tohoto patentu novou třídu molekul odvozených od dimerních isoflavonových sloučenin a derivátů. Dimerní molekuly podle vynálezu vykazují obecně vysokou schopnost vázat se na estrogenové receptory a tudíž vykazovat pozoruhodnou fyziologickou aktivitu.

První nárok tohoto patentu se vztahuje k látce obecného vzorce (I) nebo (II):

• · · ·

ve kterém

Ri, R₂, R3, R4, R5, Re, R7 a R« jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, OR₉, OC(O)H, OC(O)R₉, OS(O)R₉, OSí(Rio)₃, C(O)Rh, CO2R12, alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino, nitro nebo halo,

R₉ je alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl nebo alkylaryl,

• ·

Rio je nezávisle vodík, alkyl nebo aryl,

Rii je vodík, alkyl, aryl, alkylaryl nebo aminokyselina a

R12 je vodík, alkyl, haloalkyl, aryl nebo arylalkyl,

X je O, NR4 nebo S, a kreslený symbol „===“ je buď jednoduchá nebo dvojná vazba, kterážto sloučenina zahrnuje její farmaceuticky použitelné soli, s podmínkou, že ve vzorci (I) je alespoň jeden ze substituentů R5, R<5, R7 a Rg vodík.

Druhý nárok tohoto patentu se vztahuje k procesu výroby látky vzorce (I) nebo (II) tím, že se nechá reagovat látka vzorce (III)

Ri (EQ) ve kterém

Ri, R₂, R₃, R4, R₅, Ré, R7 a Rg jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, OR9, OC(O)H, OC(O)R₉, OS(O)R₉, OSí(Rio)₃, C(O)Rn, CO₂R₁₂, alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino, nitro nebo halo,

R₉ je alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl nebo alkylaryl,

R10 je nezávisle vodík, alkyl nebo aryl,

R11 je vodík, alkyl, aryl, alkylaryl nebo aminokyselina a

Ri₂ je vodík, alkyl, haloalkyl, aryl nebo arylalkyl,

Xje O, NR4 nebo S, a kreslený symbol ,,===“ je buď jednoduchá nebo dvojná vazba,

• · · · · • · · · • · · ·· ·· · kterážto sloučenina zahrnuje její farmaceuticky použitelné soli, s podmínkou, že vzorci (I) je alespoň jeden ze substituentů R5, Rg, R7 a Rs vodík, s kondenzačním činidlem.

Vynálezci zjistili, že dimerní isoflavony obecného vzorce (I) a (II) jsou s výhodou použitelné a účinné v léčení, profylaxi, zlepšení obrany proti a/nebo prevence jedné či více následujících onemocnění či potíží (pro jednoduchost označovaných od tohoto místa jako „terapeutické indikace“):

(a) všech forem rakoviny (pre-maligní, nádorové a maligní) ve všech tělních tkáních.

V tomto ohledu mohou být látky použity jako takové v protirakovinné terapii nebo v kombinaci s jinými formami protirakovinné terapie včetně radioterapie a chemoterapie, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(b) nemocí a potíží souvisejících se zánětlivými reakcemi abnormální či prodloužené povahy v jakékoli z tělních tkání, včetně revmatické arthritidy, zánětu šlach, zánětu střeva, vředového zánětu tlustého střeva, Crohnovy nemoci, sklerotizující cholangitidy, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(c) puchýřovité poranění kůže včetně sarkoidózy, angiosarkomu, Kaposiho sarkomu, Fabryho nemoci, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(d) šupinatě puchýřovité poranění kůže včetně psoriasy, Bowenovy nemoci a Reiterovy nemoci, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(e) poranění zářením charakterizované degenerativními změnami kůže včetně sluneční keratosy, fotosensitivních onemocnění a svrašťování, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(f) nemoci a poranění spojené s abnormální angiogenesí ovlivňující jakoukoli tkáň uvnitř těla včetně hemangiomu a teleangiektázie, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

• · · · · · (g) bujením způsobené poruchy tvorby kostní dřeně včetně megaloblastové nemoci, myelodysplastického syndromu, pravé polycythemie, thrombocytosy a myelofibrosy, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(h) autoimunitní onemocnění abnormální imunologickou odezvou včetně roztroušené sklerózy, diabetes typu 1, systemické vředové erythematosy a žlučová cirrhosa, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(i) neurodegenerativní onemocnění a potíže charakterizované degenerativními změnami ve struktuře neurologického systému včetně Parkinsonovy nemoci, Alzheimerovy nemoci, svalové dystrofie, Lou-Gehrigovy nemoci, onemocnění nervových center pohybu, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(j) onemocnění a potíže spojené s degenerativními změnami uvnitř stěn krevních buněk včetně atherosklerosy, atheromie, onemocnění srdeční tepny, mrtvice, infarktu myokardu, hypertenzní cévní onemocnění, nádorová hypertenze thromboangiitis obliterans, fíbromuskulární dysplasie, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(k) onemocnění a potíže spojené s abnormálními imunologickými odezvami včetně dermatomyosy a sklerodermie, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(l) onemocnění a potíže spojené s degenerativními změnami oka včetně šedého zákalu, makulární degenerace, atrofie sítnice, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo. Dimerní isoflavony mají s výhodou účinek na produkci a funkci rozmnožovacích hormonů jako estrogenů a androgenů. Z tohoto hlediska mohou tyto látky být použity při léčení a prevenci jedné nebo více potíží a onemocnění:

(a) podmínky u žen spojené s abnormálním obsahem estrogenu/androgenu, včetně cyklické mastalgie, akné, bolestivé menstruace, děložní benigní nádor, endometriózy, vaječníkové cysty, prementruálního syndromu, symptomu akutní menopausy,

• · osteoporózy, senilní demence, neplodnosti, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo; a (b) podmínky u mužů spojené s abnormálním obsahem estrogenu/androgenu, včetně benigní prostatické hypertrofíe, neplodnosti, gynekomastie, ztráty vlasů, dědičnosti a různých dalších forem holohlavosti.

Podle třetího nároku tohoto patentu byla vyvinuta metoda léčení, profylaxe a zlepšení onemocnění nebo potíží, kterážto metoda zahrnuje proces dávkování terapeuticky účinné dávky jedné či více látek vzorce (I) a (II) subjektu.

Čtvrtý nárok tohoto patentu se vyznačuje způsobem použití jedné nebo více látek vzorce (I) a (II) při výrobě léku pro léčení onemocnění.

Pátý nárok tohoto patentu se vyznačuje způsobem použití jedné nebo více látek vzorce (I) a (II) jako antiestrogenní nebo selektivního modulátoru receptoru pro estrogen (ŠERM).

Šestý nárok tohoto patentu se vyznačuje uvedením prostředku pro léčení, profylaxi a zlepšení onemocnění, kterýžto prostředek obsahuje jednu nebo více látek vzorce (I) nebo (II).

Sedmý nárok tohoto patentu se vyznačuje uvedením farmaceutického přípravku, který obsahuje jednu nebo více látek vzorce (I) a (II) ve spojení s jedním nebo více farmaceutickými nosiči a/nebo přísadami.

Osmý nárok tohoto patentu se vyznačuje uvedením přípravku na pití či do jídla, který obsahuje jednu nebo více látek vzorce (I) a (II).

Skrze tuto specifikaci a pomocí nároků, které následují, pokud z kontextu nevyplývá jinak, slovo „obsahovat“ a jeho obměny jako „obsahuje“ nebo „obsahující“, budou chápány tak, že povedou k zahrnutí toho kterého prvku nebo kroku nebo skupiny prvků nebo kroků, avšak ne vyloučení kteréhokoli prvku nebo kroku nebo skupiny prvků nebo kroků.

Dimerní molekuly podle tohoto vynálezu jsou strukturně příbuzné monomerním isoflavonovým látkám a jejich derivátům. Pojem „isoflavon“ zde použitý musí být chápán ·« ···· ·· ···· • · · • · ··· • « · • · · ·· ··· ·· · · · • · · · • · · · · • · · · ♦ • ··· ·· ·· široce, protože zahrnuje benzopyranové molekuly substituované fenylovou skupinou na pyranovém kruhu, kteréžto molekuly jsou deriváty 1,2-difenylpropanového systému. Skupiny sloučenin, o které se jedná, označované obecně jako isoflavony, isoflaveny, isoflavany, isoflavanony, isoflavanoly a podobně jsou zde genericky nazývány jako isoflavony, isoflavonové deriváty a isoflavonoidní molekuly.

Pojem „alkyl“ označuje rovný, jakož i větvený řetězec alkylových skupin jako jsou methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sekundární butyl, terciární butyl a podobně. Alkylová skupina mál až 10 uhlíkových atomů, s výhodou od 1 do 6 uhlíkových atomů, s větší výhodou methyl, ethyl, propyl nebo isopropyl. Alkylová skupina může být s výhodou substituována jedním nebo více atomy fluoru, chloru, bromu, jodu, karboxylem, Ci až C4alkoxykarbonylem, Ci až C4-alkylaminokarbonylem, di-(Ci až C4-alkyl)aminokarbonylem, hydroxylem, Ci až C4-alkoxylem, formyloxylem, Ci až C4-alkylkarbonyloxylem, Ci až C4alkylthioskupinou, C3 až Ce-cykloalkylem nebo fenylem.

Pojem „aryl“ zahrnuje fenyl a naftyl, který může být s výhodou substituován jedním či více Ci až C4-alkylovými skupinami, hydroxylovými skupinami, Ci až C4-alkoxylovými skupinami, karbonylovými skupinami, Ci až C4-alkoxykarbonylovými skupinami, Ci až C4alkylkarbonyloxylovými skupinami nebo haloskupinami.

Pojem „halo“ zahrnuje fluor, chlor, brom a jod, s výhodou fluor a chlor, s větší výhodou fluor. Odkaz na například „haloalkyl“ označuje monohalogenovanou, dihalogenovanou až perhalogenovanou alkyl skupinu. Preferovanými haloalkylovými skupinami jsou trifluormethyl a pentafluorethyl.

Látky podle vynálezu zahrnují všechny soli, jako soli vzniklé po přídavku kyseliny, anionické soli a zwitterionické soli, s výhodou zahrnují farmaceuticky vhodné soli.

Pojem „farmaceuticky vhodná sůl“ zahrnuje organickou nebo anorganickou skupinu, která je nositelem rozpustnosti a která může být aplikována ve spojení s farmaceuticky ·· «··· ·· ···· • · · · • · ··· • · · · • · · ·· ··· · účinnou látkou, například, jako iont, označovaný v odborné literatuře výrazem counter-kationt nebo counter-aniont, v soli. Farmaceuticky vhodné kationty jsou odborníkům pracujícím v oboru známé a zahrnují bez jakéhokoli omezení sodík, draslík, vápník, zinek a kvarterní amin. Farmaceuticky vhodné anionty jsou odborníkům pracujícím v oboru známé a zahrnují bez jakéhokoli omezení chlorid, acetát, citrát, bikarbonát a karbonát.

Dimerní isoflavonové molekuly a deriváty se v literatuře objevily teprve nedávno. Japonská patentová přihláška č. JP 9067362-A (Sankyo Co. Ltd.) popisuje bis-isoflavony spojené buď skrze fenylový substituent nebo skrze fenylový substituent jednoho z monomerů na aromatický benzopyranový kruh druhého isoflavonového monomeru. U bis-isoflavonů se předpokládá jejich inhibiční účinek na 5-alfa reduktasu.

Synthesa C-C spojených bis-isoflavonů byla též popsána nukleofilní substitucí derivátů 2-brommethyl isoflavonů (Al-Maharik a spol.). Dvojnásobná alkylační reakce umožňuje vznik přemostěných bis-isoflavonů, spojených prostřednictvím 2-methylových skupin. Žádná aktivita nebyla v souvislosti s nově synthetisovanými bis-isoflavony zmíněna.

Naopak dimerní molekuly podle vynálezu jsou spojeny skrze polohu 4 isoflavonového pyranového kruhu k jednomu z obou aromatických kruhů. To znamená, že poloha 4 pyranového kruhu je spojena s aromatickým benzopyranovým kruhem (vzorec I) nebo se substituující fenylovou skupinou (vzorec II).

Dimerní molekuly podle vynálezu se s výhodou vyznačují obecným vzorcem (Ia) a (Ha):

r · · » · · · ·* ··

ve kterém

Ri, R₂, R3, R4, R5, R«, R7 a Rx jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, 0R₉, OC(O)H, 0C(0)R9, OS(O)R9, OSí(Rio)₃, C(O)Ru, CO2R12, alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino, nitro nebo halo,

R9 je alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl nebo alkylaryl,

R10 je nezávisle vodík, alkyl nebo aryl, • · • · ··· · · · · · • · ·· · ···· ·· · · · · · · ·· ··· ··· ··· ·· ··

Ru je vodík, alkyl, aryl, alkylaryl nebo aminokyselina a

R12 je vodík, alkyl, haloalkyl, aryl nebo arylalkyl,

Xje O, NR4 nebo S, a kreslený symbol „====“ je buď jednoduchá nebo dvojná vazba, kterážto sloučenina zahrnuje její farmaceuticky použitelné soli, s podmínkou, že vzorci (Ia) je alespoň jeden ze substituentů R5, R/>, R7 a Rg vodík;

s výhodou mají následující substituenty, v nichž

Ri, R2, R3, R4, R5, R7 a Rg jsou vodík, hydroxy, OR9, 0C(0)R9, OS(O)R9, alkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, brom, chlor nebo fluor,

Ré je vodík,

R9 je alkyl, fluoralkyl nebo alkylaryl, a

Xje O;

s větší výhodou mají následující substituenty, v nichž

Ri a Ré jsou vodík,

R₂, R3, R5, a Rg jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, OR9, 0C(0)R9, alkyl, aryl nebo arylalkyl,

R4 a R7 jsou nezávisle hydroxy, OR9 nebo OCfOjRg,

R₉ je methyl, ethyl, propyl, isopropyl nebo trifluormethyl, a

Xje O; a s největší výhodou mají následující substituenty, v nichž

Ri a Ré jsou vodík,

R2, R3, R5, a Rg jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, OR9, 0C(0)R9 nebo methyl,

R4 a R7 jsou hydroxy, OR9 nebo OCýOjRg,

Rg je methyl,

Xje O.

S největší výhodou jsou nové dimerní sloučeniny vzorců (I) a (II): Tetraacetoxy-6-(4-(isoflavan-4’,7-diol))-isoflav-3-en-4’,7-diol (2) 6-(4-(Isoflavan-4’,7-diol))-isoflav-3-en-4’,7-diol (3) Tetraacetoxy-6-(4-(isoflavan-4’,7-diol))-isoflavan-4’,7-diol (4) 6-(4-(Isoflavan-4’,7-diol))-isoflavan-4’,7-diol (5)

6-(4-(4 ’, 7-Dimethoxyisoflavan))-4 ’, 7-dimethoxyisoflav-3 -en (6) 6-(4-(4’,7-Dimethoxyisoflavan))-4’,7-dimethoxyisoflavan (7)

Tetraacetoxy-3 ’ -(4-(isoflavan-4 ’, 7-diol))-isoflav-3 -en-4 7-diol (8)

3’-(4-(Isoílavan-4’,7-diol))-isoflav-3-en-4’,7-diol (9)

Tetraacetoxy-3 ’ -(4-(isoflavan-4 ’, 7-diol))-isoflavan-4’, 7-diol (10) 3’-(4-(Isoflavan-4’,7-diol))-isoflavan-4’,7-diol (11)

Látky 2 až 11 jsou znázorněny následujícími strukturními vzorci:

• ·

Aniž bychom chtěli omezovat teorii, věříme, že dimerní molekuly podle vynálezu vznikají elektrofilní aromatickou substitucí jednoho z aromatických kruhů. Obecně, isoflavonové sloučeniny z rostlin mají hydroxylové skupiny alespoň v polohách 4’ a 7 isoflavonového skeletu. Tyto elektrony poskytující skupiny zřejmě pomáhají elektrofilní aromatické substituci a umožňují ji do poloh ortho nebo para vzhledem k poloze substituentu poskytujícího elektrony.

Je zvláštní výhodou tohoto patentu, že uvádí, že isoflavon-diacetoxytetrahydrodiadzein (1), R=Ac, se spojuje za vzniku dimerní molekuly dehydratací monomeru pomocí oxidu fosforečného.

Elektrofilní substituce kondenzovaného benzenového kruhu látky (1) se projevuje přednostně do polohy alfa k substituentu 7-oxy a beta ke spojení kruhů. O poloze beta se předpokládá, že je přístupnější vzhledem k nižší stérické náročnosti, než poloha alfa vzhledem ke spojení kruhů. Kyslíkový atom pyranu zřejmě pomáhá selektivitě substituce aktivací kondenzovaného benzenového kruhu k elektrofilní aromatické substituci před substitucí další substituující fenylové skupiny.

Další synthetické metody, které jsou dobře známé těm, kteří jsou v této oblasti odborníky, mohou být též použity při synthese dimerních molekul podle vynálezu. Takové vhodné metody zahrnují Friedelovu-Craftsovu alkylační kondenzaci dvou isoflavonů nebo jejich derivátů. Během typických podmínek Friedelovy-Craftsovy reakce se používají • · · · · · • · · · · · reagenty jako chlorid hlinitý, fluorid boritý nebo podobné Lewisovy katalyzátory. Kondenzační reakce není omezena na podmínky Friedelovy-Craftsovy reakce, ale může zahrnovat další reakční podmínky pro generování karbokationtů, jako je konverze sekundárních alkoholů na fosfítové estery nebo podobné snadno odstupující skupiny. Podmínky oxidativní kondenzace, jako použití peroxidu vodíku, zředěného manganistanu, oxidu fosforečného nebo dalších oxidačních látek, jsou též možné v synthese dimerních molekul podle vynálezu.

Spojení dvou monomerních isoflavonových sloučenin nebo derivátů přemosťující skupinou může rovněž vést k dimerním isoflavonovým molekulám podle vynálezu.

Vhodnými dvojvaznými přemosťujícími skupinami mohou být například -0-, -S-, -CH2-, -(C(R)H)_n-, -NR- nebo -C=0.

Chránění chemických funkčních skupin, odchránění, tvorba synthonů a další techniky známé odborníkům vzdělaným v tomto oboru, se používají tam, kde je to vhodné k usnadnění synthesy látek podle vynálezu a jejich výchozích surovin.

Preferovaný výchozí isoflavonový monomer, diacetoxytetrahydrodaidzein (I) R=Ac, může být získán standardním postupem známým v této oblasti. Zvláštní důležitost mají publikované mezinárodní patentové přihlášky WO 98/08503 a WO 00/49009 a citace tam uvedené (Novogen Research Pty Ltd) kvůli užitečným synthetickým metodám výroby látky (I) a podobných isoflavonů.

Isoflavonové monomery pro použití podle vynálezu však mohou být odvozeny od mnoha zdrojů známých lidem vzdělaným v této oblasti. Jako příklad se může uvést, že isoflavony jsou komerčně dostupné či mohou být extrahovány z rostlinného materiálu. Ti, kteří jsou v oblasti odborníky, jsou schopni identifikovat vhodné rostlinné druhy, které mohou být použity k přípravě vhodných extraktů isoflavonů, které je možné použít ve smyslu vynálezu, avšak rostliny zvláštního významu pro použití ve vynálezu zahrnují například druhy •· ···· · · ·· ···· ··· ·· · · · · · ····· · · ·· · • · · · · ···· · ·· · · · · · · · ·· ··· ··· ··· ·· ·· cizrnu, sóju a jetel. S výhodou jsou extrakty isoflavonů získávány z druhů červeného jetele a jetele středozemního.

Extrakt isoflavonů je možno připravit řadou způsobů známých v této oblasti.

Například se může vhodný extrakt isoflavonů připravit extrakcí směsí vody a organického rozpouštědla z přírodního rostlinného zdroje. S výhodou může být extrakt isoflavonů připraven z jakékoli jednotné tkáně daného druhu rostliny nebo z kombinace dvou či více různých tkání dané rostliny. Podobně se může extrakt připravit z výchozího materiálu, který obsahuje heterogenní směs tkání dvou a vícerůzných rostlinných druhů.

Obecně tam, kde se extrakt isoflavonů připraví z rostlinného materiálu, musí tento materiál být rozdrcen či rozsekán na malé kousky, částečně rozdrcen či rozsekán na malé kousky a musí přijít do kontaktu s vodou a s organickým rozpouštědlem takovým, jako je organické rozpouštědlo mísitelné s vodou. Nebo musí přijít rostlinný materiál do kontaktu s vodou a s organickým rozpouštědlem bez jakéhokoli předchozího zpracování. Poměr vody a organického rozpouštědla může obecně být v rozmezí od 1:10 do 10:1 a může například sestávat ze stejného dílu vody a rozpouštědla nebo z 1% až 30% (v/v) organického rozpouštědla. Může se použít jakékoli organické rozpouštědlo nebo směs takových rozpouštědel. Organické rozpouštědlo může s výhodou být C2 až CIO, s větší výhodou Cl až C4 organické rozpouštědlo (jako methanol, chloroform, ethanol, propanol, propylenglykol, erythrit, butanol, butandiol, acetonitril, ethylenglykol, ethylacetát, glycidol, glycerol, dihydroxyacetone nebo aceton). Možné jsou i směsi vody a organického rozpouštědla, které obsahují enzym štěpící isoflavonové glykosidy na aglykonovou formu. Směs je možné intenzivně míchat, až vytvoří emulzi. Teplota směsi se může měnit, například od obvyklé teploty až po teplotu varu. Doba extrakce může být mezi jednou hodinou až několika týdny.

Jedna z vhodných extrakčních period je dvacet čtyři hodin při 90 °C. Extrakt se od nerozpuštěného rostlinného materiálu může oddělit a organické rozpouštědlo odstranit třeba • · ··· · • · · ·· ·· · · · • · ··· · · · · · • · · · · ···· · • · · · · · · · · ·· ··· ··· ··· ·· ·· destilací, odpařením na rotační odparce nebo jinou standardní metodou pro odstraňování rozpouštědel. Výsledný extrakt, obsahující ve vodě rozpustné a nerozpustné složky, se může vysušit a získá se extrakt obsahující isoflavony, který může být formulován s jedním či více farmaceuticky vhodnými nosiči, inertními přísadami a/nebo pomocnými materiály podle vynálezu.

Extrakt, vyrobený podle popisu z předchozích odstavců, může obsahovat malá množství oleje, který obsahuje isoflavony v jejich aglykonové formě (zde zvanými isoflavony). Tento olej obohacený o isoflavony se může podrobit HPLC za účelem určení poměru isoflavonů nebo, jestliže obsahuje požadovaný poměr isoflavonů, se může sušit, například v přítomnosti silikagelu a může být formulován s jedním či více nosiči, inertními přísadami a/nebo pomocnými materiály tak, aby poskytl extrakt obsahující isoflavony. Nebo se olej obsahující isoflavony v daném nízkém množství může dále koncentrovat přídavkem ve vodě nerozpustného organického rozpouštědla jako je hexan, heptan, oktan, aceton, nebo směs jednoho či více takových rozpouštědel. Jedním příkladem je 80% hexanu, 20% acetonu (w/w), která se vyznačuje vysokou rozpouštěcí schopností oleje, ale nízkou rozpouštěcí schopností isoflavonů. Olej se přímo oddělí do organického rozpouštědla a obohacený extrakt obsahující isoflavony se z roztoku vyloučí. Takto získaný extrakt se může sušit například v peci od 50 °C do 120 °C a formulovat s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči, inertními přísadami a/nebo pomocnými materiály.

Jiné vhodné metody jsou popsány například Changem a spol., kteří objevili metody vhodné pro synthesu různých isoflavonů a jejich derivátů.

Dimerní isoflavonové struktury znázorněné vzorci (Ia) a (Iia) mají schopnost zamezit takové konformaci dvou monomerních struktur, která vede k orthogonálnímu uspořádání. Předpokládá se, že zřejmá větší konformační rigidita orthogonálního uspořádání a vlastní schopnost určit nahrazení donorů s H vazbou ve vazebné oblasti monomerní části dimerního ·· ···· · · ·· ···· • · · ·· ·· · · · • ···· · · · · · ·· ·· · · · · · · ·· · · · · · · · ·· ··· ··· ··· ·· ·· ligandu vede ke zmírnění normálních agonistických účinků monomerů na buněčné receptory.

Ve většině případů toto zmírnění má za následek horní hranici regulace biologické aktivity, zatímco v některých případech má za následek dolní hranici regulace takové aktivity. To znamená, že biologický profil monomeru, který je v širokém rozmezí předpověditelný vzhledem k známému vztahu mezi strukturou a funkcí, který je výsledkem zkušenosti s testováním rozsáhlé knihovny takových látek, je nemožné předvídat u dimerních forem.

Vlastnosti, které jsou změněny konverzí monomerní formy na dimerní jsou následující: absolutní hladiny agonismu a antagonismu hER-α a hER-β, jakož i relativní hladiny agonismu/antagonismu obou receptorových typů; inhibice 5oc-reduktasy a 17P-steroidní hydrogenasy; antioxidace; mitotická vazba a indukce apoptózy rakovinných buněk; vylučování prostaglandinu a zánětlivého cytokininu; vázoaktivita; vysoké hladiny hustoty lipoproteinů a nízké hladiny hustoty lipoproteinů.

Podle předkládaného vynálezu se zjistilo, že dimerní molekuly podle vynálezu představují skupinu nových látek, které jsou určené k léčení a prevenci řady významných onemocnění a potíží lidí, které byly zmíněny výše. Tato onemocnění a potíže zahrnují rakovinu, zánětlivé potíže, potíže s autoimunitou, kardiovaskulární potíže a potíže spojené s aktivací receptorů estrogenu.

S výhodou pak dimerní látky podle vynálezu inhibují v důsledku své významné schopnosti proliferaci rakovinných buněk a indukují apoptózu a naznačují použití prevenci a léčení rakoviny, pojmu, kterému jakákoli osoba vzdělaná v oboru rozumí, zahrnuje nenormální růst jak benigních tak maligních nádorů kterékoli ze všech tkání v těle od epitelních, přes mezenchymální až po neurální typy. To zahrnuje, ale bez jakéhokoli omezení, karcinomy, adenokarcinomy, sarkomy, blastomy, adenomy, lymfomy, leukémie, glyomy a melanomy.

• · ···· ·· ··· · ··· · · · · ·· · • · ··· · · · · · • · · · · · · · · · ·· · · · ···· ·· ··· ··· ··· ·· ··

S výhodou pak dimerní látky podle vynálezu, v důsledku své významné schopnosti, mohou působit jako agonisti h-ERp a mohou poskytovat estrogenní podporu zvláště u žen v perimenopauzálním a menopauzálním věku a předcházet a léčit problémy obecně známé a representující akutní nedostatek steroidního estrogenu, jako vázomotorických symptomů (prudké návaly a noční pocení) a citové symptomy (úzkost, deprese, změny nálad), problémy obecně známé a representující subakutní nedostatek steroidního estrogenu, jako neschopnost udržet moč a výhřez močového měchýře a problémy obecně známé a representující chronický nedostatek steroidního estrogenu, jako osteopaenie a osteoporóza a senilní demence.

S výhodou pak dimerní látky podle vynálezu, v důsledku své významné schopnosti, mohou půsibit jako antagonisti h-ERa, kteří mohou předcházet nebo léčit příznaky u premenopauzálních žen, u kterých je obecně známé, že jsou spojeny se zvýšenou stimulací receptorů h-ERa a vedou k takovým znakům jako jsou cyklická mastalgie, endometrióza, endometriální hyperplazie, nádory močového měchýře, polycystické onemocnění vaječníků a premenstruální syndrom.

S výhodou pak dimerní látky podle vynálezu, v důsledku své významné schopnosti, mohou indukovat rozšíření cév a potlačit křečovité stahy krevních cév a naznačují použití v léčení a prevenci potíží, o kterých je obecně známé, že jsou spojené s krevním tlakem buď přímo nebo nepřímo a zahrnují bez jakéhokoli omezení hypertensi a migrénové bolesti hlavy.

S výhodou pak dimerní látky podle vynálezu, v důsledku své významné schopnosti, mohou působit antagonisticky k zánětlivým procesům a tlumit imunologické procesy a naznačují použití v prevenci a léčení potíží, o kterých je známé, že jsou spojené s nadměrnou zánětlivostí nebo dysfunkcí imunitního systému a zahrnují bez jakéhokoli omezení zánětlivá onemocnění gastrointestinálního traktu včetně onemocnění zánětem střev, vředovým zánětem tlustého střeva, Crohnovy nemoci a sklerotizující cholangitidy a zánětlivých onemocnění synoviálních membrán včetně revmatické arthritidy.

• · · ·· · • *9 • · ··· • · · ·

S výhodou pak dimerní látky podle vynálezu, v důsledku své významné schopnosti, mohou působit jako antioxidanty a naznačují použití v prevenci a léčení onemocnění, o kterých je obecně známé, že jsou spojené s oxidací vedoucí k degenerativním změnám a zahrnují bez jakéhokoli omezení taková onemocnění, jako jsou šedý zákal, poškození v důsledku vystavení záření a atheroskleróza.

S výhodou pak dimerní látky podle vynálezu, v důsledku své významné schopnosti, mohou inhibovat androgenezi a naznačují použití v prevenci a léčení onemocnění, o kterých je obecně známé, že jsou spojené (přímo či nepřímo) s nenormální funkcí androgenů a zahrnují bez jakéhokoli omezení mužskou plešatost (alopecia hereditaria) a prostatický adenom.

Množství jedné nebo více látek vzorců I a II, které je potřebné pro vyvolání terapeutického účinku podle vynálezu závisí na řadě faktorů, které zahrnují specifickou aplikaci, povahu použité látky, onemocnění, které má být léčeno, způsob podávání a pacientův stav. Látky vzorců I a II se mohou podávat způsobem, který se běžně používá. Viz například Goodman a Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 1299 (7. vydání, 1985). Specifické použité dávkování bude záviset na onemocnění, které má být léčeno, stavu subjektu, způsobu podávání a dalších dobře známých faktorech zmíněných výše. Obecně, denní pacientova dávka může být v rozmezí od 0.1 mg do 2 g; s výhodou od 0.5 mg do 1 g; s větší výhodou od 20 mg do 200 mg.

Výroba farmaceutických přípravků pro léčení terapeutických indikací zde popsaných probíhá s výhodou smícháním látek podle vynálezu (pro jednoduchost od tohoto místa označovaných jako „aktivní sloučeniny“) s jednou nebo více farmaceuticky či veterinárně přijatelnými nosiči a/nebo inertní přísady a je dobře známa odborníkům v oboru.

Nosič musí samozřejmě být použitelný ve smyslu jeho kompatibility s dalšími složkami ve formulaci a nesmí být škodlivý pro subjekt. Nosič nebo inertní přísada mohou být

9999 ·♦ ···· • · · ···· ·· · • · ··· · · · · · • · » · · ···· · • · * · · · « · · ·· ··· 999 ♦ ·· 99 99 pevné látky či kapaliny nebo obojí a jsou s výhodou formulovány se sloučeninou ve formě jediné dávky, například tablety, která může obsahovat od 0.5% do 59% aktivní sloučeniny podle váhy, nebo až do 100% aktivní sloučeniny podle váhy. Jedna nebo více aktivních sloučenin může být součástí formulace podle vynálezu, která může být připravena kterýmkoli známým farmaceutickým způsobem, zahrnujícím zvláště smíchání složek, někdy zahrnujícím jednu či více přídavných složek.

Formulace podle vynálezu zahrnují takové formulace, které jsou vhodné pro orální, rektální, optické, bukální (například aplikace pod jazyk), mimostřevní (například podkožní, nitrosvalové a nitrožilní) a podávání skrze kůži, ačkoli nejvhodnější způsob v kterékoli z daných případů bude záviset na povaze a vážnosti onemocnění, které má být léčeno a na povaze aktivní sloučeniny, která má být použita.

Formulace vhodná pro orální podávání se může dodávat v oddělených dávkách, jako jsou kapsle, tobolky, pastilky nebo tablety, z nichž každá obsahuje předem určené množství aktivní sloučeniny; ve formě prášku či granulí; ve formě roztoku nebo suspenze ve vodné či nevodné kapalině; jako emulzi oleje ve vodě či vody v oleji. Takové formulace se mohou připravit pomocí jakékoli farmaceuticky vhodného způsobu, který zahrnuje krok, v němž se spojí aktivní sloučenina s vhodným nosičem (který může obsahovat jednu či více pomocných složek, jak bylo popsáno výše). Obecně jsou formulace podle vynálezu připravovány jednotným a dokonalým smícháním aktivní sloučeniny s kapalným nebo jemným pevným nosičem, či s oběma nosiči a poté, pokud je třeba, vytvarováním výsledné směsi do formy jediné dávky. Například tablety je možné připravovat stlačováním nebo formováním prášku nebo granulí obsahujících aktivní sloučeninu, případně s jednou či více přídavnými složkami. Stlačené tablety se mohou připravit stlačováním ve vhodném zařízení, přičemž látka schopná samostatného pohybu, jako prášek či granule, se někdy míchá s spojovací látkou, pojivém, inertním ředidlem a/nebo povrchově aktivní/dispersní přísadou (přísadami). Formované • · · · · · • · · · · · • · · · • · · · · • · · * • ♦ · • · · · · · tablety se připravují formováním ve vhodném zařízení, přičemž prášková látka je zvlhčena inertním kapalným pojivém.

Formulace vhodné pro bukální (aplikace pod jazyk) podávání zahrnují tobolky obsahující aktivní sloučeniny, ochucené obvykle sacharosou a gumou z akacie či gumou tragakantovou; a pastilky obsahující sloučeninu na inertní bázi, jako je želatina a glycerin nebo sacharosa a guma z akacie.

Přípravky podle vynálezu, které jsou vhodné k mimostřevnímu podávání obsahují s výhodou sterilní vodné přípravky na bázi aktivních sloučenin, kteréžto jsou s výhodou isotonické s krví uvažovaného pacienta. Tyto přípravky se s výhodou podávají nitrožilně, ačkoli se může aplikovat i podávání podkožním způsobem, nitrosvalově nebo nitrokožní injekcí. Takové přípravky se mohou s výhodou připravit smícháním sloučeniny s vodou nebo glycerinovým pufrem a sterilizací a takovou úpravou výsledného roztoku, který jej učiní isotonickým s krví. Formulace pro injekční aplikace podle vynálezu obsahují obecně od 0.1% do 60% w/v aktivní sloučeniny a podávají se rychlostí 0.1 ml/minuta/kg.

Formulace vhodné pro rektální podávání jsou s výhodou na bázi jednotlivých dávek. Tyto přípravky mohou být získány smícháním aktivní sloučeniny s jedním nebo více běžnými pevnými nosiči, například kakaovým máslem, a poté vytvarováním výsledné směsi.

Formulace nebo přípravky vhodné pro topikální aplikaci na kůži nesou s výhodou formu masti, krému, mléka, pasty, gelu, spreje, aerosolu nebo oleje. Jako nosiče se mohou použít Vaselina, lanolin, polyethylenglykol, alkoholy a kombinace dvou či více těchto nosičů. Aktivní sloučenina je obecně přítomna v koncentraci od 0.1% do 0.5% w/w, například od 0.5% do 2% w/w. Příklady takových přípravků zahrnují kosmetické pleťové krémy.

Formulace vhodné pro aplikaci skrze kůži jsou jednotlivé náplasti upravené tak, aby byly ve styku s pokožkou příjemce po delší časové období. Takové náplasti s výhodou

• · • · · · · · • · · • · · · · • · · · • · · • · · · · obsahují aktivní sloučeninu v pufrovaném vodném roztoku, například o koncentraci 0.1 M až

0.2 M vzhledem k dané aktivní sloučenině.

Formulace vhodné pro aplikaci skrze kůži se též mohou aplikovat iontoforézou (viz například Panchagnula a spol) a s výhodou mohou být ve formě pufrováného vodného roztoku aktivní sloučeniny. Vhodné formulace obsahují citrát nebo Bis/Tris pufr (pH 6) nebo ethanol/vodu a obsahují od 0.1 M do 0.2 M aktivní složky.

Aktivní sloučeniny mohou existovat ve formě potravní ingredience, takové, která se přimíchává k potravě, směšuje s ní, obaluje v ní, kombinuje s ní nebo jinak se do potravy přidává. Pojem potravní ingredience se používá v jeho nejširším možném smyslu a zahrnuje kapalné formulace jako nápoje včetně mléčných výrobků a jiné potravy jako jsou zdravotní tyčinky, zákusky atd. Potravní formulace obsahující sloučeniny podle vynálezu se mohou přímo připravit podle standardních postupů.

Formulace vhodné pro inhalace se dodávají jako sprejové přípravky ve formě roztoku, suspenze nebo emulze. Sprejový přípravek pro inhalace může dále obsahovat farmaceuticky použitelný pohonnou látku jako oxid uhličitý nebo oxid dusný.

Přípravky podle vynálezu se mohou podávat lidem ve formě dietních doplňků. Dietní doplňky obsahující aktivní sloučeniny se mohou připravit přidáním přípravku do potravy v procesu přípravy potravy. Jakákoli potravina může být použita bez jakéhokoli omezení, včetně mas jako výživných mas, emulsifikovaných mas a marinovaných mas; nápojů jako výživných nápojů, nápojů pro sportovní účely, nápojů obohacených o proteiny, džusů, mléka, náhražek mléka a nízkokalorických nápojů; sýrů jako tvrdých a měkkých sýrů, krémových sýrů a sýrů typu cottage; mražených desertů jako zmrzlin, mléčné zmrzliny, nízkolkalorických mražených desertů a mražených desertů bez obsahu mléka; jogurtů; polévek; pudinků; pekárenských produktů; salátových zálivek; a pomazánek jako majonézy, margarinu, másla,

máslových náhražek a dalších pomazánek obsahujících tuky. Přípravek se přidá do potravy v množství určeném k podání v požadované dávce přípravku konzumentovi takové potravy.

Sloučeniny podle vynálezu mají antioxidační účinek a tak nalézají široké uplatnění pro farmaceutické a veterinární použití, v kosmetice jako v pleťových krémech k potlačení stárnutí pokožky, v krémech pro opalování, v potravě, zdravotních nápojích, šamponech a tak podobně.

S překvapením se zjistilo, že sloučeniny vzorců I nebo II synergicky interagují s vitamínem E při ochraně lipidů, proteinů a dalších biologických molekul před oxidací.

Podobně dalším aspektem tohoto vynálezu je přípravek obsahující jednu nebo více sloučenin vzorců I nebo II, vitamin E a případně farmaceuticky, veterinárně či kosmeticky použitelný nosič a/nebo inertní přísadu.

Terapeutické postupy, použití a přípravky mohou být pro aplikaci lidem nebo zvířatům jako společenským či domácím zvířatům (jako jsou psy a kočky), ptákům (jako jsou drůbež, krocani, kachny), hospodářská zvířata (jako krávy, ovce, prasata a kozy) a tak podobně.

Jak je zde použito, pojem „léčení“ musí být použit v nejširším kontextu. Pojem nutně neznamená, že živočich je léčen až do úplného uzdravení. Podobně „léčení“ zahrnuje zlepšení symptomů nebo závažnosti daného onemocnění nebo napomáhá prevenci či jinak omezuje riziko vývoje takových podmínek pro onemocnění.

„Farmaceuticky použitelný nosič, inertní přísada, pomocný materiál a/nebo ředidlo“ tak, jak se zde používají, zahrnují jakýkoli nosič, inertní přísadu, pomocný materiál nebo ředidlo, které je považováno za použitelné při výrobě farmaceutického přípravku. Takové nosiče, inertní přísady, pomocné materiály nebo ředidla budou obecně bezpečná, nejedovatá a nebudou biologicky ani jinak nevhodná. Pojem zahrnuje nosiče, inertní přísady, pomocné materiály nebo ředidla, která jsou použitelná pro veterinární použití, jakož i pro lidské • · farmaceutické použití. Jak se používá pojem zde, „farmaceuticky použitelné nosiče, inertní přísady, pomocné materiály a/nebo ředidla“ zahrnují jednu či více než jednu takovou látku.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: Synthesa tetraacetoxy-6-(4-(isoflavan-4’,7-diol))isoflav-3-en-4’,7-diolu (2)

Směs přibližně 1:1 cis- a /rans-diacetoxytetrahydrodaidzeinu (1) (300 g) se rozpustí v suchém dichlormethanu a míchá se v atmosféře dusíku při 15°C, dokud se všechen materiál nerozpustí. Oxid fosforečný (500 g) se rychle přidá za intenzivního míchání a reakce pokračuje 4 až 6 hodin. Reakční směs se poté přefiltruje přes silikagel, přičemž dimerní struktura má nižší Rf než monomerní produkt. Dimerní sloučenina se dále čistí selektivní rekrystalizací z ethylacetátu.

^NMRÍCDCb, 400MHz): 7.40 (2H, d, J=8Hz), 7.15 (2H, d, J=8Hz), 7.13 (2H, d, J=8Hz), 7.05 (2H, d, J=8Hz), 6.90 (1H, d, J=7.6Hz), 6.75 (1H, d, J=1.5Hz), 6.65 (1H, bs s), 6.63 (1H, br s), 6.60 (1H, dd, J=7.6, 1.5Hz), 6.58 (1H, br s), 5.05 (2H, brs), 4.38 (1H, dd, J=9.3Hz), 4.30 (1H, dd, J=7Hz), 4.25 (1H, dd, J=9.6Hz), 3.38 (1H, m), 2.32 (3H, s), 2.30 (3H, s), 2.28 (3H, s), 2.08 (3H, br s).

Příklad 2: Synthesa 6-(4-(isoflavan-4’,7-diol))isoflav-3-en-4’,7-diolu (3)

Imidazol (0.166 g) se přidá k suspenzi tetraacetoxy-6-(4-(isoflavan-4’,7-diol))isoflav-3-en4’,7-diolu (0.2 g) v absolutním ethanolu (2.0 ml). Směs se refluxuje pod dusíkem 12 hodin. Roztok se zakoncentrujeza vakua a produkt se sráží přídavkem deionizované vody (10 ml). Směs se ponechá přes noc v mrazničce. Bělavá pevná látka se zfiltruje, vymrazí a získá se (0.1 g, 67%) volné fenolické dimerní sloučeniny.

‘HNMR (D6-DMSO, 400MHz): 9.1 (4H, br, OH), 7.26 (2H, d, J=7.6Hz), 7.04 (2H, d, j-7.6Hz), 6.72 (2H, d, J=7.6Hz), 6.61 (1H, s), 6.60 (2H, d, J'7.6Hz), 6.56 (1H, s), 6.46 (1H, • · ··· · · · · ·· · ····· · · · · · • · » · · · · · · · • · · · · · · · · ·· ·«» ··· ··· ·· ·· d, J=8Hz), 6.25 (1H, s), 6.22 (1H, brd, J=8Hz), 6.20 (1H, brs), 4.95 (2H, s), 4.44 (1H, d,

J=8.4Hz), 4.13 (1H, dd, J=11, 3.3Hz), 4.06 (1H, dd, J=11, 7.7Hz), 3.28 (1H, ddd, J-8.4, 7.7,

3.3Hz).

Příklad 3: Vazebný test receptoru pro estrogen

Schopnost tetrafenolického dimeru (struktura 3) a dimerní tetraacetoxysloučeniny (struktura 2) vstoupit do interakce s estrogenovým receptorem alfa a beta byla stanovena použitím komerčně dostupné sady pro stanovení vazebné síly receptoru pro estrogen. Tato sada používá konkurenční vazebný test k určení relativní vazebné afinity testované sloučeniny pro rekombinantní lidský estrogenní receptor alfa (ER-a) a beta (ER-/?). V krátkosti, rekombinantní lidský estrogenní receptor alfa nebo beta se přidá k fluorescenčně značenému estrogennímu ligandu, aby se vytvořil komplex estrogenního ligandu s receptorem, který se vyznačuje vysokou fluorescenční polarizací. Komplex se pak přidá ke snižující se koncentraci látky testované jako konkurenční. Změna polarizace v přítomnosti testované látky se použije k určení relativní afinity testované sloučeniny pro estrogenový receptor. Během testování, při použití specifikací výrobce, jsme určili koncentraci estradiolu nutnou k nahrazení 50% navázaného fluorescenčního estrogeního ligandu (EC50) při 0.011 μΜ pro ER-alfa a 0.006 μΜ pro ER-beta, což bylo ve shodě s publikovanými hodnotami (Bolger a spol., 1998).

Tetrafenolický dimer (struktura 3) vykázal tutéž vazebnou afinitu pro estrogenní receptor alfa a beta (ER-cr0.35 ± 0.05 μΜ; ER-/? 0.37 ± 0.05 μΜ), avšak dimerní tetraacetoxysloučenina (struktura 2) se nevázala na žádný z receptoru.

Příklad 4: Protirakovinná účinnost

Protirakovinný potenciál tetrafenolického dimeru (struktura 3) a dimerní tetraacetoxysloučeniny (struktura 2) se stanovila použitím řady lidských rakovinných ·· ···· · · ·· ···· ··· · · ·· ·· · • · ··· · · ··· · · « · ···· · • · · · · · · · · ·· «·· ··· ··· ·· ·· buněčných druhů, včetně glyomů (C6), buněk z prostaty (PC3), buněk z prsou (MCF-7), buněk z měkkých tkání (Kym-1) a plic (NCI-H23 a NCI-H460). Cytotoxický test buněk se prováděl podle metody popsané Alleyem a spol., 1988. Buněčné linie byly vystaveny různé koncentraci testované sloučeniny po stanovený pevný čas. Na závěr testu byla životaschopnost buněčných populací určena použitím reagentu, který je akceptorem vodíku, 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid (MTT). Koncentrace sloučeniny potřebná k inhíbici 50% buněčného růstu ve srovnání s kontrolou (IC50) je indikátorem účinnosti sloučeniny (tj., čím nižší koncentrace sloučeniny je třeba k inhibici 50% normální buněčné proliferace, tím je sloučenina účinnější). Oba dimery vykazovaly silnou protirakovinnou účinnost proti testovaným rakovinným typům (tabulka 1).

Tabulka 1. Určení IC50 pro oba dimerní isoflavony proti rakovinným buněčným druhům.

IC50 pro buněčné druhy (μΜ)

Dimer	MCF-7	PC3	C6 glyom	Kym-1	NCI-H460	NCI-H23
Struktura 3	18±2	13.5	17.5	3.2	14.4	13.5
Struktura 2	10± 5	6	NT	NT	NT	7.3

NT = netestováno

Odkaz na jakýkoli dříve publikovaný způsob není, a neměl by tak ani být chápán, ohodnocením jakéhokoli způsobu návrhu, že by takový dříve publikovaný způsob mohl být částí obecné znalosti v oboru, kterým se zabývá tento patent.

• · · · · · • · · · · ·

Odborníci v oboru ocení, že vynález zde popsaný může být snadno modifikován i jiným způsobem, než je zde popsáno. Je třeba pochopit, že vynález zahrnuje všechny takové změny a modifikace. Vynález také zahrnuje všechny kroky, znaky, přípravky a sloučeniny, na které je zde odkazováno nebo které jsou uvedeny v této specifikaci samostatně či hromadně a jakoukoli ze všech kombinací jakýchkoli dvou či více kroků nebo znaků.

Odkazy

Patenty:

JP 9067362-A A; Vlastník patentu Sankyo Co. Ltd; „Nové Bis-iso-flavon(y) jako inhibitory 5-alfa reduktasy - připraveny z Microbiospory, použité pro léčení zvětšení prostaty.“

WO 00/49009; Vlastník patentu Novogen Research Pty Ltd; „Výroba isoflavonových derivátů“

WO 91/14429; Chiesi P a Pavesi L patent; Vlastník: Chiesi; „Farmaceutické přípravky obsahující ipriflavon, způsob jeho výroby a relativní terapeutické použití.“

WO 93/23069; Kelly „GE Health Supplements“.

WO 96/10341; Schouten Food and Health Products

US 5424331; Shlyankevich; „Farmaceutické přípravky a dietní sojové potravní produkty pro prevenci osteoporózy“.

JP 62-106017; Yamanouchi Pharmaceuticals co Ltd; „Protirakovinný prostředek ze všech isoflavonoidních prostředků“.

JP 62-106016; Yamanouchi Pharmaceuticals co Ltd; „Terapeutické požadavky na isoflavonoidy jako imunosupresiva“

US 5516528; Hughes a spol.; „Dietní íytoestrogen v terapii nahrazující estrogen“. (Vlastník: Wake Forest Uni and PTI).

• · · · · · • · · · · · • · · • · *·· · · · · · « · · « · · · · · · ·· · · * · · · · ·· ··· ··· ··· ·· ·*

JP 62-106016A2; Imunosupresor; Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd; „Isoflavony pro remediaci a prevenci návratu autoimunního onemocnění jako je revmatická arthritida, SLE atd.

WO 01/17986; Novogen Research; Přípravky a terapeutické metody zahrnující isoflavony“.

JP 62-106017A2; Protirakovinný prostředek; Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd; „Původem onkogenní inhibiční aktivita spefícké fosforylasy tyrosinem“.

JP 61-246124; Kancerostatický prostředek; Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd;

„Kancerostatický prostředek obsahující genistein“.

WO 98/50026; Kelly GE; „Léčení a prevence menopauzálních symptomů nebo osteoporózy včetně aplikace isoflavonů formononetinu nebo daidzeinu.“

WO 99/43335; Huang LJ a Thurn MJ; „Rostlinné extrakty z jetele“

WO 00/49009; Heaton A a Kumar N; „Výroba isoflavonových derivátů“

WO 00/644438; Husband AJ a Kelly GE; „Přípravek pro léčení kardiovaskulárních chorob a osteoporózy s vysokým poměrem mezi formononetinem a biochaninem, genisteinem a/nebo genisteinem.

WO 99/48496; Husband AJ a Kelly GE; „Léčení potíží spojených s vysokou steroidní aktivitou estrogenu, např. děložních nádorů“.

Články:

Alley MC, Scudiero DA, Monks A., Hursey ML, Czerwinski MJ Fine DL, Abbott BJ, Mayo JG, Shoemaker RH, a Boyd MR. 1988. Proveditelnost testování léků výborem typů lidských rakovinných buněk při použití zkoušky tetrazoliem v mikrokulturách. Cancer Res. 48, 589601.

Al-Maharik NI, Kaltia SAA Mutikainen I, Wahala K. Synthesa C-C Přemostěných isoflavonů. Journal of Organic Chemisíry 65, 2305-2308, 2000.

• · · · · · • « • ···

Bingham SA, Atkinson C, Liggins J, Bluck L, Coward A. Fytoestrogeny: Kde jsme teď? British Journal ofNutrition 79(5): 393-406 1998

Bolger R, Wiese TE, Ervin K, Nestich S, Checovich W (1998) Rychlé testování ekologických chemikálií na estrogenovou vázací schopnost receptorů. Environ. Health Perspecť, 106, 5517.

Chang Y-C, Nair MG, Santell RC a Helferich WG. Synthesa antikancerogenních isoflavonů z sojových bobů pomocí mikrovlnného záření. J. Agric. Food Chem. 1994, 42, 1869-1871. Goodman a Gilman, Farmakologický základ terapeutík, 1299, 7. vydání, 1985.

Moss RW, Terapie rakoviny: Nezávislý průvodce pro netoxické léčení a prevenci pro pacienty (New York: Equinox Press, 1992)

Panchagnula a spol. (2000). Znovuoživení transdermální iontoforézy. Current Opinion in Chemical Biology 4: 468-473.

Scudiero DA, Shoemaker RH, Paull KD, Monks A, Tierney S, Nofziger TH, Currens MJ, Seniff D, Boyd MR (1988). Vyhodnocení zkoušky tetrazoliem / formazanem na buněčný růst a citlivost k lékům v kultuře při použití lidských a jiných typů buněk. CancerR.es. 48 (17);

4827-33.

Shen F, Xue X, Weber G: Tamoxifen a genistein synergicky potlačují signál transdukce a proliferace v estrogenním receptorů negativně ovlivněném buňkami lidského karcinomu MDA-MB-435 na prsou. Anticancer Research 1657-1662 (1999).

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Látka, vyznačující se t í m, že je obecného vzorce (I) nebo (II)

0) (D) • · · · · · ·· ···· « • · · ·· • · · · · · • · · « · • · · · «· ··· ··· ve kterém

Ri, R2, R3, R4, R5, Ró, R7 a Rg jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, OR9, OC(O)H, OC(O)R₉, OS(O)R₉, OSí(Rio)3, C(O)Rn, CO₂Ri₂, alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino, nitro nebo halo,

R₉ je alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl nebo alkylaryl,

R10 je nezávisle vodík, alkyl nebo aryl,

R11 je vodík, alkyl, aryl, alkylaryl nebo aminokyselina a

Ri2 je vodík, alkyl, haloalkyl, aryl nebo arylalkyl,

Xje O, NR4 nebo S, a kreslený symbol „===“ je buď jednoduchá nebo dvojná vazba, kterážto sloučenina zahrnuje její farmaceuticky použitelné soli, s podmínkou, že vzorci (I) je alespoň jeden ze substituentů R5, R^, R7 a Rg vodík, a s podmínkou, že látky vzorce • · · • · * « · · · • · · · ·· ve kterém, když , ,===“ je jednoduchá vazba nebo dvojná vazba a R_a a Rb jsou vodík nebo methyl, pak Rc a Rd jsou vodík a ·· ···· • · · · · ·· ··· ··· ··· když ,,==-¹ je jednoduchá vazba a Ra je vodík, pak buď R_B je vodík nebo methyl, R_c je hydroxy a Roje vodík nebo

Rb a Rc jsou vodík a Roje methoxy, jsou zvláště vyloučeny a s podmínkou, že látky vzorce:

ve kterém, když „===“ je jednoduchá vazba nebo dvojná vazba, pak Rg a Rh jsou vodík nebo methyl a když, ===“ je jednoduchá vazba a Rg je methoxy, pak Rh je hydroxy nebo benzyl, jsou zvláště vyloučeny.
2. Sloučenina podle nároku 1,vyznačující se tím, že je vybrána ze sloučenin obecného vzorce (Ia) a (Ha):

·· ···♦ • · · • · · · · « · · • · · ·· ·*♦ ·· ·· • · • Λ • · ··« ··· ·· ···· ♦ · · • · · • · · • · · · ·· ·· ve kterém

Ri, R₂, R3, R4, R5, R5, R7 a Rgjsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, OR₉, OC(O)H, OC(O)Rs>, OS(O)R$>, 0Si(Rw)3, C(O)Rn, CO2R12, alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino, nitro nebo halo,

Rs> je alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl nebo alkylaryl, ·· ···· • · · ·« ·· * · · • · ··· · · · · · • · ·· · ···· · • ♦ · · · ···· ·· ··· ··· ··· ·· *· 36

Rio je nezávisle vodík, alkyl nebo aryl,

Rn je vodík, alkyl, aryl, alkylaryl nebo aminokyselina a R12 je vodík, alkyl, haloalkyl, aryl nebo arylalkyl,

Xje O, NR4 nebo S, a kreslený symbol „===“ je buď jednoduchá nebo dvojná vazba, kterážto sloučenina zahrnuje její farmaceuticky použitelné soli, s podmínkou, že vzorci (I) je alespoň jeden ze substituentů R₅, Ró, R₇ a Rg vodík.
3. Sloučenina podle nároku 2, vyznačujícísetím, ževní

R_b R₂, R3, R4, R5, Ró, R7 a Rg jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, OR9, 0C(0)R9,

OS(O)R9, alkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, brom, chlor nebo fluor,

Ró je vodík,

R9 je alkyl, fluoralkyl nebo arylalkyl a

Xje O.
4. Sloučenina podle nároku 3,vyznačující se tím, že v ní

Ri a Ró jsou vodík,

R₂, R3, R5 a Rg jsou vodík, hydroxy, OR9, 0C(0)R9, alkyl, aryl nebo arylalkyl,

R4 a R₇ jsou hydroxy, OR9 nebo 0C(0)R9,

R9 je methyl, ethyl, propyl, isopropyl nebo trifluormethyl a

Xje O.
5. Sloučenina podle nároku 4, vyznačující se tím, že v ní

Ri a Ró jsou vodík,

R₂, R3, R5 a Rg jsou vodík, hydroxy, OR9, OC(O)R₉ nebo methyl,

R4 a R7 jsou hydroxy, OR9 nebo 0C(0)R9, ·· ···· • · ·· ···· · • · · ·· · • ···· · « · ♦ * · • · · · »· ··♦ *·· · • · · ··

Rs> je methyl a XjeO.
6. Sloučenina podle nároku 5, vyznačující se tím, že jde o: Tetraacetoxy-6-(4-(isoflavan-4’,7-diol))-isoflav-3-en-4’,7-diol (2) 6-(4-(Isoflavan-4’,7-diol))-isoflav-3-en-4’,7-diol (3) Tetraacetoxy-6-(4-(isoflavan-4’,7-diol))-isoflavan-4’,7-diol (4) 6-(4-(Isoflavan-4’,7-diol))-isoflavan-4’,7-diol (5)

6-(4-(4’,7-Dimethoxyisoflavan))-4’,7-dimethoxyisoflav-3-en (6)

6-(4~(4’,7-Dimethoxyisoflavan))-4’,7-dimethoxyisoflavan (7)

Tetraacetoxy-3’-(4-(isoflavan-4’,7-diol))-isoflav-3-en-4’,7-diol (8)

3 ’-(4-(Isoflavan-4’,7-diol))-isoflav-3-en-4’,7-diol (9)

Tetraacetoxy-3 ’ -(4-(isoflavan-4 ’, 7-diol))-isoflavan-4 ’, 7-diol (10)

3’-(4-(Isoflavan-4’,7-diol))-isoflavan-4’,7-diol (11).
7. Způsob výroby sloučeniny vzorce (I) nebo (II), vyznačující se tím, že sloučenina vzorce (III) (DO) ·· ··♦· • · · • · ··· • · · • · · • · ······ ·· ·· · · · • · · · · • · · · · · · • · · ♦ · · ··· ··· ·· ·· ve kterém

Ri, R2, R3, &», R5, Rs, R7 a Rg jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, OR₉, OC(O)H,

OC(O)R₉, OS(O)R9, OSí(Rio)3, C(O)Rn, CO2R12, alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino, nitro nebo halo,

R9 je alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl nebo alkylaryl,

R10 je nezávisle vodík, alkyl nebo aryl,

R11 je vodík, alkyl, aryl, alkylaryl nebo aminokyselina a

R12 je vodík, alkyl, haloalkyl, aryl nebo arylalkyl,

OR13 je hydroxy, jiná odstupující skupina nebo skupina přitahující elektrony,

X je O, NR4 nebo S, a kreslený symbol „==“ je buď jednoduchá nebo dvojná vazba, kterážto sloučenina zahrnuje její farmaceuticky použitelné soli, s podmínkou, že ve vzorci (Ia) je alespoň jeden ze substituentů R₅, Rr„ R7 a R₈ vodík;

se nechá reagovat s kondenzačním činidlem.
8. Způsob výroby podle nároku 7, vyznačující se tím, že v něm je sloučenina vzorce (I) nebo (II) definována kterýmkoli z nároků 2 až 6.
9. Způsob výroby podle nároků 7a 8, vyznačující se tím, že spojovacím činidlem je oxid fosforečný, peroxid vodíku, manganistan nebo Lewisova kyserlina.
10. Způsob léčení, profylaxe a zlepšení onemocnění či potíží, vyznačující se tím, že zahrnuje krok aplikace terapeuticky účinného množství jedné či více sloučenin vzorce (I) a (II) subjektu, u něhož se onemocnění či potíže řadí do skupin vybraných z ·· ···· • · · · · · · • · · ♦· · • · ··· · • · 9 9 9

9 9 9 9

99 999 999 9 < · · • · · • · · · • · · · • ·· ·· 39 (a) všech forem rakoviny (pre-maligni, nádorové a maligní) ve všech tělních tkáních.

V tomto ohledu mohou být látky použity jako takové v protirakovinné terapii nebo v kombinaci s jinými formami protirakovinné terapie včetně radioterapie a chemoterapie, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(b) nemocí a potíží souvisejících se zánětlivými reakcemi abnormální či prodloužené povahy v jakékoli z tělních tkání, včetně revmatické arthritidy, zánětu šlach, zánětu střeva, vředového zánětu tlustého střeva, Crohnovy nemoci, sklerotizující cholangitidy, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(c) puchýřovité poranění kůže včetně sarkoidózy, angiosarkomu, Kaposiho sarkomu,

Fabryho nemoci, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(d) šupinatě puchýřovité poranění kůže včetně psoriasy, Bowenovy nemoci a Reiterovy nemoci, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(e) poranění zářením charakterizované degenerativními změnami kůže včetně sluneční keratosy, fotosensitivních onemocnění a svrašťování, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(f) nemoci a poranění spojené s abnormální angiogenesí ovlivňující jakoukoli tkáň uvnitř těla včetně hemangiomu a teleangiektázie, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(g) bujením způsobené poruchy tvorby kostní dřeně včetně megaloblastové nemoci, myelodysplastického syndromu, pravé polycythemie, thrombocytosy a myelofibrosy, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(h) autoimunitní onemocnění abnormální imunologickou odezvou včetně roztroušené sklerózy, diabetes typu 1, systemická vředová erythematosa a žlučová cirrhosa, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

• · ··· · ·· ·*·· • · · • · ··· • · » * ·· ··· • · · · · • · · · · · • · · · · * ··· ··· ·· ·· (i) neurodegenerativní onemocnění a potíže charakterizované degenerativními změnami ve struktuře neurologického systému včetně Parkinsonovy nemoci, Alzheimerovy nemoci, svalové dystrofie, Lou-Gehrigovy nemoci, onemocnění motorneurone, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(j) onemocnění a potíže spojené s degenerativními změnami uvnitř stěn krevních buněk včetně atherosklerosy, atheromy, onemocnění srdeční tepny, mrtvice, infarktu ► myokardu, hypertenzní cévní onemocnění, nádorová hypertenze thromboangiítis «

obliterans, fibromuskulární dysplasie, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(k) onemocnění a potíže spojené s abnormálními imunologickými odezvami včetně dermatomyosy a sklerodermy, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo;

(l) onemocnění a potíže spojené s degenerativními změnami oka včetně šedého zákalu, makulární degenerace, atrofie sítnice, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo, a v němž jedna nebo více látek vzorce (I) a (II) jsou:

• · • ··· (Π) ve kterém

R_b R₂, R3, R4, R5, R<5, R7 a Rg jsou nezávisle na sobě vodík, hydroxy, ORg, OC(O)H, 0C(0)R9, OS(O)R₉, OSí(Rio)₃, C(O)Ru, CO2R12, alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, thio, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino, nitro nebo halo,

Rg je alkyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl nebo alkylaryl,

R10 je nezávisle vodík, alkyl nebo aryl,

R11 je vodík, alkyl, aryl, alkylaryl nebo aminokyselina a

R12 je vodík, alkyl, haloalkyl, aryl nebo arylalkyl,

X je O, NR4 nebo S, a kreslený symbol „==“ je buď jednoduchá nebo dvojná vazba, kterážto sloučenina zahrnuje její farmaceuticky použitelné soli, s podmínkou, že vzorci (I) je alespoň jeden ze substituentů R5, R<5, R7 a R₈ vodík.
11. Způsob léčení, profylaxe nebo zlepšení onemocnění nebo potíží, vyznačující se ·· ···· • a · • · ··· • · · • · · ·· ·· · t í m, že zahrnuje krok aplikace terapeuticky účinného množství jedné nebo více sloučenin vzorce (I) nebo (II), definovaných podle nároku 10, subjektu, u něhož se onemocnění nebo potíže řadí do skupin vybraných z:

(i) podmínky u žen spojené s abnormálním obsahem estrogenu/androgenu, včetně cyklické mastalgie, akné, bolestivé menstruace, děložní benigní nádor, endometriózy, vaječníkové cysty, prementruálního syndromu, symptomu akutní menopausy, osteoporózy, senilní a

• demence, neplodnosti, aniž by to patentové nároky jakkoli omezovalo; a i

(ii) podmínky u mužů spojené s abnormálním obsahem estrogenu/androgenu, včetně benigní prostatické hypertrofie, neplodnosti, gynekomastie, ztráty vlasů, dědičnosti a různých dalších forem holohlavosti.
12. Použití jedné nebo více sloučenin vzorce (I) a (II) podle nároku 10, vyznačující se t i m, že se sloučeniny použijí při výrobě léku pro léčení potíží či onemocnění.
13. Použití jedné nebo více sloučenin vzorce (I) a (II) podle nároku 10, vyznačující se t í m, že se sloučeniny použijí jako anti-estrogenní či selektivní modulátory estrogenního receptoru (ŠERM).

a *
14. Prostředek pro léčení, profylaxi nebo zlepšení onemocnění nebo potíží, vyznačující

I se t í m, že prostředek obsahuje jednu nebo více sloučenin vzorce (I) nebo (II) definovaných podle nároku 10.
15. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje jednu nebo více sloučenin vzorce (I) nebo (II) definovaných podle nároku 10 ve spojení s jedním nebo více farmaceutickými nosiči nebo inertními přísadami.

«· · · · • · a a · « · · · · · a · · · · · ·»· ··· ·# ·· ·· ···· • v · • · ··· • · · • · · ·· ·· · • · ·» ·· • · • · · • · ··· ··· ·· ···· • · · • · 9 • · · · • · · · ··
16. Nápoj nebo potravina, vyznačující setím, že obsahuje jednu nebo více sloučenin vzorce (I) nebo (II) definovaných podle nároku 10.
17. Přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje jednu nebo více sloučenin vzorce (I) nebo (II) definovaných podle nároku 10, vitamin E a s výhodou farmaceuticky, veterinárně nebo kosmeticky přijatelný nosič a/nebo inertní přísadu.