JPH0267218A - ウイルス・ゲノム不活化剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野コ この発明は、ウィルス・ゲノム不活化剤に関するもので
ある。このような薬剤は、発癌プロモーター阻害剤とし
て癌の治療に、およびウィルス病の治療に有用である。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題］発癌
には刺激または炎症としての現象が必然的に伴うもので
あるという考え方に基づいて、発癌二段階実験が行われ
た。それ以来、発癌機構において、長期間の作用を要す
る二段階目のプロモーション（促進効果）が重要な過程
として取上げられ、現在、その研究が巾広く進められて
いる。ヒトの生活に関与する物質中には、さまざまな発
癌プロモーター物質が存在するとともに、さまざまな抗
発癌プロモーター物質も存在し、これらの物質はヒトの
発癌に関連する重要な要因となっている。

抗発癌プロモーターとしては、生薬中に活性成分の存在
が認められることが次第に明らかになってきているか、
まだその有効性を分析した例は少なく、その解析および
それに基づく新たな薬剤の開発が望まれている。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、発癌プロモーターがウィルス活性化剤と
重なるところから、アフリカに多発するパーキット（Ｂ
　ｕｒｋｉｔｔ）・リンパ腫由来のエプスタイン・バー
ル・ウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ　Ｂａｒｒ　ｖｉｒｕｓ
。

以下ＥＢウィルスと略称）を含むが、ＥＢウィルス非産
生のリンパ芽球様培養細胞であるラジ（ｎ　ａｊ　ｉ）
細胞にプロモーターとしてテトラデカノイルホルボール
アセテート（以下、ＴＰＡと略称）を作用させることに
よりＥＢウィルスを活性化する系を用いて、薬用植物中
に含まれるＥＩ３ウィルス活性化抑制物質を検索したと
ころ、フジ属に属する植物の抽出物から得られるアフロ
モシン、フォルモノネチン、オノニン、ウィスチン、ソ
ヤサポゲノールＢおよびツヤサポニン１ｈ（ＴＰＡによ
りＥＢウィルス活性化を顕著に抑制することを見出した
。さらに、本発明者等は、これらに類縁する化合物につ
いて同様な検索を行ったところ、７０−アセチルーフォ
ルモノネチンおよび７−０−アセチルーアフロモシンが
同様な抑制作用を有することを見出した。

［発明の構成コ 本発明は、アフロモシン、フォルモノネチン、オノニン
、ウィスチン、ソヤサポゲノールＢ１ツヤサポニンＩ、
７−０−アセチル〜フォルモノネチン、および７−０−
アセチルーアフロモシンの一種または二種以上を有効成
分として含有するウィルス・ゲノム不活化剤を提供する
ものである。

本発明の有効成分であるアフロモシン（＋）、フォルモ
ノネヂン（２）、オノニン（３）、ウィスチン（４）、
７−０−アセチルーフォルモノネヂン（５）、７−Ｏ−
アセチル−アフロモシン（６）、ソヤザボゲノールＢ（
７）、ツヤサポニン！（８）は後記の式に示した構造を
有する公知の化合物であり、文献ケミカル・アンド・フ
ァーマシューティカル・ブレタン（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　
ａｎｄ　Ｐｈａｒａ＋ａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｂｕｌｌｅ
ｔｉｎ）１１巻３８２頁（１９６３年）、薬学雑誌９５
巻１３８８頁（１９７５年）、ケミカル・アンド・ファ
ーマシューティカル・ブレタン（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａ
ｎｄＰｈａｒａａｃｅｕＬｉｃａｌ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ
）２４巻１２１頁（１９７６年）およびケミカル・アン
ド・ファーマシューテイカル・ブレタン（Ｃｈｅａ＋１
ｃａｌ　ａｎｄ　ＰｈａｒｍａｃｅｕＬｉｃａｌ　Ｂｕ
ｌｌｅｔｉｎ）３０巻２２９４頁（＋９８２年）に記載
されている。

（１）アフロモシン （２）フォルモノネチン （３）オノニン （４）ウィスチン （５）７−０−アセチル− フォルモノネチン （６）７−０−アセチル− Ｒ，Ｒ。

−０１１−０Ｃ１１゜ 一〇−り゛ルコース　−■ −０−り１ルコーλ　−０Ｃ１１゜ −叶アセチル　　　−ＩＩ −〇−７セチル　　　−０Ｃ１ｌｔ これらの有効成分を含有する植物としては、フジ（Ｗｉ
ｓｔｅｒｉａ　Ｎｏｒｉｂｕｎｄａ）、ヤマフジ（Ｗｉ
ｓｔｅｒｉａｂｒａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ）、シナフジ（
Ｗｉｓｔｅｒｉａ　５ｉｎｅｎｓｉｓ）等が知られてい
る。これらの有効成分の上記植物からの抽出製造は公知
の溶剤抽出法や転溶、濃縮、再結晶、再沈澱、各種クロ
マトグラフィー等の組み合わせによって達成することが
できる。その−例を示すと次の通りである。

例えば、ヤマフジ（Ｗｉｓｔｅｒｉａ　ｂｒａｃｈｙｂ
ｏｔｒｙｓ）の瘤および蔓をメタノールで加温（６０〜
７０℃）抽出し、得られる抽出液をクロロホルムと水、
ｎ　−ＢｕＯＨと水で順次分配し、クロロホルム抽出液
をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロ
ホルム／メタノールの混合溶媒で溶出してくるフラクシ
ョンの濃縮物をメタノール／水から分別再結晶すると、
アフロモシン、ソヤサポゲノールＢ１フォルモノネチン
、ウィスチンが得られる。さらに、ｎ−ＢｕＯＨ抽出物
をカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフ
ィーに付すと、オノニン、ツヤサポニン■が得られる。

このようにして得られる上記成分の物性値を下記に示す
。

アフロモシンの物性値 分子式：　Ｃ，７１−１，、Ｃ６ Ｅ　Ｉ　−ＭＳ：　２９８（Ｍ”　） ＵＶ（Ｅｔｏｌ−１）：　λ３１９．２５９．２０６ｎ
ｍ’　ＣＮ　Ｍ　Ｒ（Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ＝ｄａ）δ１７３
．９、Ｉ　５８．５．１５２．６．１５２．５、＋５１
．４．１４６．６．１２９．７．１２４．２．１２２．
３、ｌ　１６．０、＋１３．３．１０４．４．１０２．
６．５５．６．５５．０ｐｐｍ。

フォルモノネヂンの物性値 分子式：Ｃ１＠Ｈ１２０４ Ｅ　Ｉ−ＭＳ：　２６８（Ｍ”　） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：　λ３０１，２４９．２０７ｎｍ”
Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ＝ｄ、＋）： δ１７４．８．１５８．５．１６２．７．１５９．１．
１５７．６、＋５３．１．１３０．２．１２７．５．１
２４．４．１２３．４．１１６．９．１１５．３．１１
３．７、Ｉ　０２．２．５５．３ｐｐｍ。

ウィスチンの物性値 分子式：　Ｃ！３１（＋４０　、。

ＵＶ（ＥｔＯＨ）：　　　λ　３２０　、　２６０ｎｍ
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ＝ｄＪ： δ１７３．９．１５８．６、＋５３．０、＋５１．２．
１５０．９．１４７．２、ｌ　２９．８．１２４．０、
＋２２．５．１１７．５、＋１３．４、＋０４．５、ｌ
　０３．２．９９．４．７７．０．７２８．６９．４．
７６．５．６０．５．５５．７．５５゜ＯｐｐＩｌｌ。

オノニンの物性値 分子式：　Ｃｔ　ｔ　Ｈ２！　Ｏｅ ＵＶ（ＥｔＯＨ）：　λ３０１，２５９．２３３．２ｌ
ｎｍ １３ＣＮＭｒｔ（ＤＭＳＯ＝ｄａ）： δ１７４．３、＋６１．１．１５８．７．１５６．７、
ｌ　５３．３、＋２９．８．１２６．７、＋２３．７、
＋２３．１，１１８．２．１１５．３、＋１３．３．１
０３．２．９９．７．７７．０．７２．９．６９．４．
７６．３．６０．５．５５．０ｐ１ＴＩ０ ソヤサポゲノールＢの物性値 分子式：Ｃ３０Ｈ５゜Ｏｌ Ｅ　Ｉ　−ＭＳ：　　４５８（Ｍ”″）、４４０．２３
８１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−Ｄｓ）δ１４４
．６．１２２．２．８０．０．７５，４．６４．５．５
６．３．４８．１，４６．８．４５．３．４３．１．４
２．３．４０，０．３８．９．３８．０．３７．０．３
３．５．３３．２．３０．９．２８．６．２８．４．２
６．４．２５．７．２４．１１２３．６．２１．２、Ｉ
　９．１．　　ｌ　７．１．　１６．３ｐｐｍ。

ツヤサポニンＩの物性値 分子式：　Ｃ４１１８？１１０１１１ ％式％） ）： また、７−０−アセチルーアフロモンンおよび７−０−
アセチルーフォルモノネチンは、各々アフロモシンなら
びにフォルモノネチンを慣用されるアセチル化剤、例え
ば無水酢酸またはアセチルクロリド、好ましくは無水酢
酸／ピリジン混液で処理することによって得られ、その
物性値は下記の通りである。

７−０−アセチルーアフロモシンの物性値分子式：　Ｃ
＋ｓＨ＋ａＯａ Ｅｌ−ＭＳ：（Ｍ“）、２９８ １１−　ＮＭＲ（ＣＤ　ＣＱ３）： ６２．３７（３Ｈ，ｓ）、　　３．８５（３Ｈ，ｓ）、
　　３．９４（３Ｈ，ｓ）、６．９９（２Ｈ，ｄ）、７
．２４（ＩＨ，ｓ）、７．５０（２１−１，ｄ）、７．
７６（ＩＨ，ｓ）、７．７９（ＩＨ，ｓ）。

７−〇−アセチルーフォルモノネチンの物性値分子式：
　Ｃ３ｓｌ（＋−０ｓ Ｅ　Ｔ−ＭＳ：　３１６（Ｍ＋）、２６８’■−１−Ｎ
ＭＲ（ＣＤ　ＣＱｓ”）：δ２．３６　（３Ｈ，ｓ）、
３．８６（３Ｈ，ｓ）、６．９８（２）１．ｄ）、７．
１６（ｌＨ，ｄｄ）、７．２９（ＩＨ，ｄ）、７．５０
（２Ｈ，ａ）、７．９８（ＩＨ，ｓ）、８．３１（ＩＨ
，ｄ）。

この発明において、有効成分アフロモシン、フオルモノ
ネチン、オノニン、ウィスチン、ソヤサポゲノールＢ、
ソヤサポニンＩ、７−０−アセチルーフォルモノネチン
および７−０−アセチルーアフロモシンは、これを単独
で使用することもでき、また二種以上を併用することも
できる。併用する場合、相乗作用が見られることがある
。併用に際しては、植物から抽出単離した個々の化合物
または個々のアセチル化物を混合してもよく、抽出精製
過程で得られた二種以上の化合物の混合物、アフロモシ
ンとフォルモノネチンの混合アセチル化物、またはこれ
らの混合物を用いてもよい。

ウィルス・ゲノム不活化およびそれに基づく抗癌、抗ウ
ィルス作用を目的とする上記化合物の投与１は、勿論投
与の目的、患者の年令、状態、症状の重さ等によって異
なるが、一般に目的とする作用を発揮するに充分な有効
成分の濃度をもたらす量であり、これは通常１０〜１０
００μｙ／ｄである。哺乳動物に投与する場合、通常２
０〜５０００Ｒｇを１日２〜４回の分割投与または持効
性製剤として投与する。なお、上記化合物をマウスに投
与した場合顕著な毒性が見られなかった。

投与に際しては、アフロモシン、フオルモノネヂン、オ
ノニン、ウィスチン、ソヤサポゲノールＢ１ツヤサポニ
ンＩ、７−０−アセチルーアフロモシン、７−Ｏ−アセ
チルーフオルモノネチンの有効型かつ非毒性量を含有す
る組成物（製剤）の形で医薬として用いることができる
。このような製剤には、例えば経口剤として、錠剤、カ
プセル剤、トローチ剤、顆粒剤、散剤等の固体製剤また
は水剤、シロップ等の液剤製剤が含まれる。これら各種
の製剤は慣用の無機もしくは有機のまたは固体もしくは
液体の医薬製剤用担体を用いて公知の方法で製造するこ
とができる。担体としては、例えばでんぷん、乳糖、ぶ
どう糖、しよ糖、デキストリン、セルロースおよびその
誘導体、パラフィン、脂肪酸グリセリド、水、アルコー
ル等が用いられる。また、製剤には他の有効成分、補佐
剤、安定剤、乳化剤、けんだく化剤、結合剤、滑沢剤等
の常用添加剤を含ませることができる。

上記のように、本発明で用いるアフロモシン、フォルモ
ノネチン、オノニン、ウィスチン、ソヤサポゲノールＢ
１ツヤサポニンＩ、７−０−アセチルーアフロモシンお
よび７−０−アセチルーフォルモノネチンは、ＥＢウィ
ルス・ゲノムの発現を阻害することから、抗ウィルス剤
および制がん剤としての利用が考えられる。

さらに、ＴＰＡのような発癌プロモーターの作用を阻害
する働きは癌の予防にも効果が期待できることを示して
おり、アフロモシン、フオルモノネチン、オノニン、ウ
ィスチン、ソヤサポゲノールＢ１ツヤサポニンＩ、７−
０−アセチルーアフロモシンおよび７−０−アセチル−
フオルモノネヂンを有効成分とする癌予防薬や健康食品
としての応用ら可能である。

上記Ｅ［（ウィルス・ゲノムの発現阻害作用は、例えば
、前述のラジ（Ｒａｊｉ）細胞培養系に発癌プロモータ
ーであるＴＰＡと活性発現のために相乗作用として動く
ｎ−酪酸、それに被験物質を加え培養し、ＴＰＡにより
活性化されて細胞表面上に発現にされるＥＢＶ−ＥＡ（
ＥＢウィルス−早期抗原）を上咽頭癌患者由来の抗体を
用いろ間接蛍光抗体法で検出することからなる方法によ
り、観察することができる。また、この発明で用いる化
合物はパピロマウィルスに対しても効果を示す。

次に、この発明で用いる化合物のＥＢウィルス・ゲノム
発現阻害活性について実施例により説明する。

［実施例１コ 細胞を継代、維持するための培養液として、ＲＰＭｒ１
６４０の溶液に仔牛血清とペニシリン、ストレプトマイ
シンの抗生物質を加えたものを使用し、その培養液にて
ラジ（Ｒａｊｉ）細胞を３７℃の条件で培養した細胞を
検索用の指示細胞とした。

この細胞を基礎培地中でｌＸｌ０６細胞／πＱの濃度に
した後、４ｍＭのｎ−酪酸、２０ｎｇ／ｍＱのＴＰＡを
加え、それに被験物質を反応させて、３１℃で４８時間
、炭酸ガス下で培養を行った。反応後、上咽頭癌患者血
清を使用した抗原抗体反応によりＥＢＶ−ＥＡを間接蛍
光抗体法により検出し、その陽性細胞の発現をＴＰＡの
みを加えた対照と比較し、その割合について検討したと
ころ、アフロモシン、フォルモノネチン、オノニン、ウ
ィスチン、ソヤサポゲノールＢ１ツヤサポニンＩはそれ
ぞれ抑制率が、６６．７％、３９．７％、２９．８％、
２１，５％、７５．２％、６２．５％であった。

また同時に行った細胞生存率は７０％以上で、細胞毒性
は認められない。この結果を第１図に示す。

さらに、７−０−アセチルーアフロモシンおよび７−０
−アセチルーフォルモノネチンについても同様に試験し
たところ、その抑制率が、７３゜０％、６６．６％また
細胞生存率については、７０％以上であった。この結果
を第２図に示す。

さらに、これら化合物を、任意の割合で混ぜ合わせるこ
とによる、相乗効果の有意性についての評価を行ったと
ころ、その−例として、フォルモノネチンのみでは抑制
率が３９．７％であったが、フォルモノネチンにアフロ
モシンを混合した場合、それに、オノニン、ウィスチン
を等モルで混合した試料での抑制率はそれぞれ３９．７
％、６９４％、７４．０％、９５．１％の値を示し、各
試料を同時に使用することの有用性が認められた。この
結果を第３図に示す。

［発明の効果］ 以上のように本発明で用いるアフロモシン、フ矛ルモノ
ネチン、オノニン、ウィスチン、ソヤサポゲノールＢ１
ツヤサポニン■ならびに７−Ｏ−アセチルーフォルモノ
ネチン、７−０−アセチルアフロモシンの一種または二
種以上の混合物は、１”　Ｐ　ＡによるＥＢＶ−ＥＡの
発現を顕著に阻害することから、ウィルス・ゲノムの不
活化剤として使用することができ、抗ウィルス、制がん
、がん予防の目的で医薬製剤としてまたは食品に混合し
て使用することが可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１において、アフロモシン、フォルモ
ノネチン、オノニン、ウィスチン、ソヤサポゲノールＢ
およびツヤサポニンＩの濃度に対するＥＢウィルス・ゲ
ノムの発現阻害活性を示すグラフであり、横軸はＴＰＡ
に対するアフロモシン、フォルモノネチン、オノニン、
ウィスチン、ソヤサポゲノールＢまたはツヤサポニンＩ
のモル比を、縦軸は発現阻害率と細胞生存率を示す。 第２図は、実施例１において、７−０−アセチルーアフ
ロモシンおよび７−０−アセチルーフォルモノネチンの
濃度に対するＥＢウィルス・ゲノムの発現活性を示すグ
ラフであり、横軸はＴＰＡに対する７−０−アセチルー
アフロモシンまたは７−０−アセチルーフォルモノネチ
ンのモル比を、縦軸は発現阻害率と細胞生存率を示す。 第３図は、実施例１において、二種以上の化合物を併用
した場合の結果を示すグラフであり、横軸はＴＰＡに対
する化合物のモル比、縦軸は発現阻害率と細胞生存率を
示す。 特許出顆人　長倉製薬株式会社 代理　人　弁理士　青　山　葆　ほか！名第１図 アフロモシン ロー０ウイスチン フォルモノネチン オノニン シー４ツヤサポニン　エ か−屹ソヤサポゲノール モル比（試ｆ４／ＴＰＡ） 第２図 ７−０−アセチルーアフロモシン ７−０−アセチル−フオルモノネチン モル比（試料／ＴＰＡ）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. アフロモシン、フォルモノネチン、オノニン、ウィスチ
   ン、ソヤサポゲノールＢ、ソヤサポニンＩ、７−Ｏ−ア
   セチル−フォルモノネチンおよび７−Ｏ−アセチル−ア
   フロモシンの一種または二種以上を有効成分とする、ウ
   ィルス・ゲノム不活化剤。