CZ20013077A3 - Kamptothecinové deriváty mající protinádorové účinky - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká sloučenin majících protinádorové účinky, zvláště se pak týká derivátů kamptothecinů, postupů pro jejich přípravu, jejich využití jako proti nádorových léčiv a farmaceutických přípravků, které je obsahují jako účinnou složku.

Dosavadní stav

Kamptothecin je alkaloid, který byl izolován Wallem, et al. (J. Am. Chem. Soc., 88, 3888-3890, (1966)) poprvé ze stromu Camptoteca acuminata, rodu Nyssaceae - rostliny pocházející z Číny.

Molekula má pentacyklickou strukturu s laktonem v kruhu E, která je pro cytotoxicitu nezbytná.

Léčivo vykázalo široké spektrum protinádorových účinků, zvláště proti střevním nádorům, dalším tuhým nádorům a leukémiím; první klinické zkoušky byly provedeny na počátku 70. let. Jelikož je kamptothecin (dále uváděný zkráceně jako CPT) málo rozpustný ve vodě, připravil National Cancer Institute (NCI) za účelem provádění klinických zkoušek jeho sodnou sůl (NSC100880), která je rozpustná ve vodě. Klinické zkoušky ve fázi I a II nebyly ukončeny, pro vysokou toxicitu, kterou sloučenina vykazovala (hemorrhagická cystitis, gastrointestinální toxicita jako je nausea, zvracení, diarrhoea a myelosuprese, zvláště leukopenie a trombocytopenie.

-2• · ·· · ·· ·· ···· · · · · · · e

Sodná sůl v každém případě vykázala nižší účinnost než CPT, protože při pH 7,4 nad laktonaktivní (uzavřený kruh) převažuje inaktivní forma (otevřený kruh), která je převažující při pH < 4,0.

Za účelem získání sloučenin o nižší toxicitě a vyšší rozpustnosti ve vodě bylo následně syntetizováno mnoho analogů CPT. Distribuována jsou dvě léčiva - Irinotecan (CPT-11) distribuovaný pod ochrannou známkou Camptosar® společností Upjohn a Topotecan, distribuovaný pod ochrannou známkou Hymcamptamin® nebo Thycantin® společností Smith Kline & Beecham. Další deriváty jsou v různém stadiu klinického vývoje ve fázi II, jako například NSC-603071 (9-aminokamptothecin), 9-NC nebo 9-nitrokamptothecin, orální prekurzor konvertovaný na 9aminokamptothecin, GG-211 (Gl 147211) a DX-8591f, který je ve vodě rozpustný. Všechny dosud identifikované deriváty mají matečnou strukturu s 5 kruhy nezbytnou pro cytotoxicitu. Bylo prokázáno, že úpravy na prvním kruhu jako v případě výše zmíněných léčiv zvyšují rozpustnost ve vodě a způsobují vyšší tolerovatelnost léčiva.

Ve vodě rozpustný Irinotecan byl schválen pro léčbu mnoha tuhých nádorů a ascitů (rakovina střevně-rektální, kožní, žaludeční, prsní, malobuněčné a velkobuněčné plicní nádory, rakovina cervixu a vaječníků a nehodgkinovský lymfom). Navíc je Irinotecan aktivní u tuhých nádorů odolávajících Topotecanu, vincristinu nebo melphalanu a u vzniklých MDR-1 buněk s nízkou odolností na • · léčivo. Jako aktivní metabolity byly identifikovány 10-hydroxyderiváty (SN-38), produkované působením karboxylesteráz. CPT-11 vykazuje dobrou účinnost při různých způsobech podávání, jako například intraperitoneálním, intravenozním i orálním podávání (Costin, D., Potmhexyl M. Advances in Pharmacol., 29B, 51-72, 1994).

CPT-11 byl podáván také s cisplatinem nebo etoposidem, kdy vykazoval synergický účinek díky schopnosti bránit v opravách DNA. Také v tomto případě vznikl 3. a 4. stupeň leukopenie a vystupňovala se diarrhoea (Sinha, Β. K., (1995), Topoisomerase inhibitors. Drugs, 49, 11-19, 1995).

Topotecan je při orálním podávání významně biologicky účinný. Orální podávání prokázalo, že je vhodný pro dosahování protrahovaného působení tohoto léčiva bez nutnosti použití dočasných katetrú (Rothenberg, M. L., Annals of Oncology, 8, 837855, 1997).

Také tento ve vodě rozpustný analog CPT vykazuje účinnost proti různým typům nádorů při různých cestách podávání, například při intraperitoneální, intravenozní, subkutální a orální aplikaci. Nejslibnějších výsledků bylo dosaženo u různých nádorů jako například u malobuněčných a velkobuněčných plicních nádorů, nádorů vaječníkú, prsů, žaludku, jater, prostaty, měkkých sarkomů tkání, hlavy a krku, jícnu, odolných střevních a rektálních nádorů, multiformních glioblastomú, chronických a akutních myelocytických leukémií, s Topotecanhydrochloridem při intravenozních infuzích po • · • · * · it » · ·· · ···· ····«· • · · · · · · ···* · • · · « · · · ·v · • · · · · ® ♦ · · · · · · ·

-4dobu 5 dnů. Přesto se i v těchto případech projevily některé vedlejší účinky jako je neutropenie a thrombocytopenie, zatímco gastrointestinální toxicita jako nausea, zvracení a diarrhoea byly mírnější.

Bylo prokázáno, že mezi hlavní transformační a eliminační cesty léčiva patří hydrolýza laktonu a vylučování močí; ve skutečnosti je lakton z 50 % hydrolyzován a tím kruh otevřen 30 minut po infuzi. Topotecan prochází hematoencefalickou barierou 10 minut po infuzi (30 % v cerebrospinální tekutině vztaženo na plazmu). Na druhé straně kamptothecin neprochází ve významném množství hematoencefalickou barierou patrně pro vazbu s proteiny.

Klinickému výzkumu 9-aminokamptothecinu zabránila jeho omezená rozpustnost ve vodě. Dříve byly připravovány koloidní disperze, které umožňovaly jeho vstup do II. fáze klinických zkoušek.

Ukázalo se, že pro jeho krátký poločas rozpadu je nutné protrahované podávání (od 72 hodin do 21 dnů), aby se mohlo prokázat jeho protinádorové působení (Dahut, et al., 1994). U pacientů trpících neléčenou střevně-rektální a prsní rakovinou a odolnými lymfomy byla zaznamenána odezva. Působení zkoušené na Pgp-pozitivních nádorech inspirovalo k předpokladu o nedostatečné křížové odolnosti proti odolným buňkám MDR-1. Opětně byla pozorována toxicita na kostní dřeň a gastrointestinální toxicita.

Lurtotecan je analogem s největší rozpustností ve vodě s účinky in vitro srovnatelnými s Topotecanem. Byly použity dva režimy: jeden s jednou 30 minutovou infuzí denně po dobu 5 dnů v každém ze 3 týdnů a jeden se 72 hodinovou infuzí jednou za 3 týdny. Byla pozorována odezva u pacientů trpících krčními, vaječníkovými, prsními a jaterními nádory. Také v tomto případě byla zjištěna hematická toxicita.

Molekula vypadá takto:

9-nitrokamptothecin je orální prekurzor léčiva, který se rychle po jeho podání konvertuje na 9-aminokamptothecin. Odezvy byly pozorovány u pacientů postižených rakovinou pankreasu, vaječníků a prsů.

Neodolná hlavní část nádorových buněk je velice citlivá na inhibitory topoisomerazy I a pro vysokou hladinu enzymu se pak některé nádorové linie stávají odolné. To je způsobeno spíše jiným mechanismem než převažujícím působením MDR1 a MRP (proteiny ·· · ♦·· · ♦ ··· • · · · · · · *»· • · · · ··· ·· · •· ·· ··♦ « · ·> ···

-6s odolností proti mnoha léčivům) genů a jejich produktů, P (Pgp) glykoproteinu a MRP proteinu, pro které není Topotecan nebo CPT11 dobrým substrátem (Kawato Y., et al., J. Pharm. Pharmacol., 45, 444-418, 1993).

Ve skutečnosti bylo pozorováno, že některé odolné nádorové buňky obsahují mutantní formy topo I, a proto je zamezeno vytváření komplexu topo l-DNA či některé buňky postrádají karboxylesterázovou účinnost nezbytnou pro konverzi CTP-11 v aktivním metabolitu SN-38 a jsou tudíž odolné tomuto léčivu (Rothenberg, 1997, ibid.).

U léčiv používaných v nádorové terapii se zájem o inhibitory topoisomerazy I připisuje těmto předpokladům: a) účinku proti nádorům přirozeně odolným běžným léčivům včetně inhibitorů topoisomerázy II; b) hladině enzymu topo I, která zůstává zvýšená ve všech fázích cyklu; c) mnoho nádorů vykazuje vysokou hladinu cílového enzymu; d) nedostatečnému poznávání proteiny zúčastněnými na jevu odolnosti proti mnoha léčivům (Pgp nebo MRP) a nepřítomnost detoxikačního metabolizmu zprostředkovaného enzymy, který je ve vazbě na systém závislý na glutathionu (glutathion peroxidaza a glutathion S-transferáza) (Gerrits, C. J. H., et al., Brit. J. Cancer, 76, 952-962).

• ······ ··· · · ·· * · ·

-7 Pokud se již jednou vezmou v úvahu potenciální klinické výhody inhibitorů topoisomerazy I, a to jak ve smyslu protinádorového působení vyzkoušeného na širokém okruhu nádorů, tak malého vyvolání odolnosti vůči farmakům, je současný výzkum zaměřen na identifikaci inhibitorů topo I o nízké toxicitě v porovnání s léčivy, která jsou na trhu či v klinické fázi zkoušek. Mezi faktory určující relativní potenci kamptothecinových analogů patří: a) vlastní působení inhibice topoisomerazy I; b) střední doba života léčiva; c) interakce s plazmovými proteiny; d) poměr mezi cirkulující účinnou formou (laktonem) a neúčinnou formou (karboxylát); e) citlivost léčiva na únik buněk způsobený glykoproteinem P nebo MRP; f) vazebná stabilita s topoisomerazou I (Rothengerg, 1997, ibid.).

Mezi hlavními nepříznivými účinky Irinotecanu a dalších kamptothecinových derivátů, byly pozorovány myelosuprese a gastrointestinální toxicita jako je diarrhoea a zvracení.

Diarrhoea může začít dříve nebo později a může být faktorem omezujícím dávkování. Zvracení a pozdější diarrhoea jsou vyvolávány mnoha protinádorovými léčivy, zatímco časná diarrhoea nastávající během nebo bezprostředně po infuzi je téměř specifickou pro Irinotecan a některé kamptothecinové deriváty.

Toxické účinky nastávají hlavně ve střevním traktu.

-8• 4 4 4 4 4 4 • 44 4 4 · · ···

Za účelem omezení diarhoey byl CPT-11 při některých klinických zkouškách podáván v kombinaci s loperamidem - syntetickým opiátem - agonistou mu-opiátových střevních receptorú (Abigerges, 1994; Abigerges, 1995), rovněž tak jako s inhibitorem enkephalináz (acetorfan) nebo s ondansetronem, antagonistou receptorú 5-HT3, nebo s difenidraminem, antagonistou receptorú H1.

Podle současných poznatků lze problémy spojené s používáním kamptothecinových derivátů jako protinádorových léčiv shrnout do těchto položek:

• kamptothecin (CPT) a mnoho jeho účinných derivátů má nízkou rozpustnost ve vodě;

• řada derivátů je obdařena závažnými vedlejšími účinky na gastrointestinální úrovni a na kostní dřeň;

• některé nádorové linie si vyvinuly odolnost proti inhibitorům topoisomerazy I;

• probíhá trvalé vyhledávání lepších terapeutických indexů.

Patentová přihláška W097/31003 zde uvedená jako odkaz popisuje deriváty kamptothecinů substituovaných v polohách 7, 9 a 10. Poloha 7 se týká těchto substituentů: -CN, -CH(CN)-R₄, , CH=C(CN)-R₄, -CH₂-CH=C(CN)-R₄, C(=NOH)-NH₂, -CH=C(NO₂)R₄, -CH(CN)-R₅, -CH(CH₂NO₂)-R₅, 5-tetrazolylu, 2-(4,5-

-9dihydroxazolylu), 1,2,4-oxadiazolidin-3-yl-5-onu, kde R₄ je vodík, lineární nebo rozvětvený alkyl obsahující od 1 do 6 uhlíkových atomů, nitrilu a karboxyalkoxylu. Z těchto možných sloučenin umožňuje W097/31003 popsat pouze kamptothecinové deriváty mající v poloze 7 skupinu -CN a -CH=C(CN)₂ s nesubstituovanými polohami 9 a 10.

Z těchto sloučenin se ukázala jako nejlepší 7-nitril sloučenina (R₄ = CN) zde pojmenovaná jako CPT 83 s cytotoxickými účinky na velkobuněčné plicní nádory (non-SCLC, H-460). Tato nádorová linie je skutečně odolná cytotoxické terapii a pouze mírně reaguje na inhibitory topoisomerazy I, neoddávající předávkování cílového enzymu. CPT 83 je účinnější než Topotecan, který je brán jako referenční sloučenina a celkově nabízí lepší farmakologický profil, a ti i co se týká tolerovatelnosti a lepšího terapeutického indexu.

CPT 83 se připravuje syntetickou cestou sestávající z oxidace 7hydroxymethylkamptothecinu na kamptothecin-7-aldehyd, převedení tohoto na oxim a závěrečné konverze na nitril.

Výchozí sloučenina a meziprodukty jsou popsány Sawadou, et al., Chem. Pharm. Bull., 39, (10), 2574, (1991). Toto sdělení odkazuje na řadu patentů s prioritou od roku 1981, například na přihlášku evropského patentu EP 0056692, publikovanou v roce 1982, zde uvedenou jako odkaz. V těchto publikacích jsou mezi jinými popsány i sloučeniny kamptothecin-7-aldehyd a jeho oxim. Výhodnost těchto derivátů spočívá v tom, že tyto sloučeniny s protinádorovým

-10působením mají nízkou toxicitu již od 7hydroxymethylkamptothecinu. Ve sdělení popsaném vChem. Pharm. Bull., 39, (10), 2574, (1991) autoři dokládají, že co se týká kamptothecinu, jsou 7-alkyl a 7-acyloxymethyl deriváty, které nebyly v předešlé patentové přihlášce zmiňovány, účinnějšími sloučeninami na linie myší leukemie L1210, zatímco nižší účinnost, opět ve vztahu ke kamptothecinu byla pozorována u sloučenin majících 7substituenty vysoce polárního charakteru, jako jsou hydrazony a oxim -CH(=NOH).

Podstata vynálezu

Nyní bylo překvapivě zjištěno, že kamprotheciny mající alkoxim-Osubstituenty v poloze 7 mají protinádorové účinky větší, než sloučenina referenčního Topotecanu. Ještě překvapivějším zjištěním bylo, že kamptotheciny mající enamino skupinu v poloze 7 mají také protinádorové účinky. Jmenované sloučeniny mají lepší terapeutický index.

-11 Předmětem předloženého vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce (I):

kde: R-ι je skupina -C(R₅)=N-O_(n)R₄, kde R₄ je vodík nebo C-ι - C₈ lineární nebo rozvětvená alkylová nebo C-i - C₈ lineární nebo rozvětvená alkenylová skupina nebo C₃ - C₁₀ cykloalkylová nebo (C₃ - C₁₀ cykloalkyl - (Ci - C₈) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina, nebo C₆-C₁₄ arylová, nebo (C₆-Ci₄) aryl-(C-i-C₈) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina nebo heterocyklická nebo heterocyklo-(C_rC₈) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina, kde jmenované heterocyklické sloučeniny obsahují alespoň jeden heteroatom vybíraný ze skupiny sestávající z dusíkového atomu případně substituovaného (Ci-Cs) alkylovou skupinou a/nebo kyslíku a/nebo síry; jmenované alkylové, alkenylové, cykloalkylové, cykloalkylalkylové, arylové, aryl-arylové, heterocyklické nebo heterocykloalkylové skupiny jsou případně substituovány jednou nebo více skupinami vybíranými ze skupiny sestávající z: halogenu, hydroxylu, ketoskupiny, C^-Cs alkylu, C_rC₈ alkoxylu, fenylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, -NR₆R₇, kde R₆ a R₇ jsou stejné nebo různé skupiny, a to vodík, (Ci-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl;

-12COOH skupina nebo jejich farmaceuticky přijatelné estery; nebo CONR₈R₉ skupina, kde R₈ a R₉ jsou stejné nebo různé skupiny, a to: vodík, (Ci-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl, fenyl; nebo

R₄ je (C₆-C₁₀) aroylová nebo (C₆-C₁₀) arylsulfonylová skupina, případně substituovaná jednou nebo více skupinami vybíranými ze skupiny sestávající z: halogenu, hydroxylu, Ci-C₈ lineárního nebo rozvětveného alkylu, C-|-C₈ lineárního nebo rozvětveného alkoxylu, fenylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, -NR₁₀Rn, kde R₁₀ a Rn jsou stejné nebo různé, mezi které patří vodík, Ci-C₈ lineární nebo rozvětvený alkyl; nebo

R₄ je polyaminoalkylová skupina; nebo

R₄ je glykosylová skupina;

n je číslice 0 nebo 1;

R₅ je vodík, Ci-C₈ lineární nebo rozvětvený alkyl C-i-C₈ lineární nebo rozvětvený alkenyl, C3-C10 cykloalkyl, (C₃-C₁₀) cykloalkyl - (Ci-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl , C₆-Ci₄ aryl, (C₆-Ci₄) aryl - (C_rC₈) lineární nebo rozvětvený alkyl;

R₂ a R₃ jsou stejné nebo různé a jsou vodík, hydroxyl, C_rC₈ lineární nebo rozvětvený alkoxyl;

jejich Νϊ-oxidy, jejich jednoduché izomery, zvláště syn a anti izomery -C(R₅)=N-O₍n)R₄ skupina, jejich možné enantiomery, diastereoizomery a odpovídající směsi, jejich farmaceuticky přijatelné sole a jejich aktivní metabolity;

- 13s tou výjimkou, že pokud R₅, R₂ a R₃ je vodík a n je 1, je potom R₄ jiný než vodík.

Předložený vynález se týká využití sloučenin výše uvedeného obecného vzorce (I) jako účinné složky medikamentů, zvláště medikamentů vhodných pro léčbu nádorů. Dalším předmětem předloženého vynálezu je také využití sloučeniny obecného vzorce (I) jako účinné složky medikamentů vhodných pro léčbu virových infekcí. Jiným předmětem předloženého vynálezu je také využití sloučenin obecného vzorce (I) jako účinných složek medikamentů působících proti plasmodium falciparum.

Předložený vynález obsahuje farmaceutické přípravky obsahující sloučeniny obecného vzorce (I) jako účinné složky ve směsi s farmaceuticky přijatelnými vehikuly a excipienty.

Předložený vynález obsahuje také postupy přípravy sloučenin obecného vzorce (I) a odpovídajících klíčových meziproduktů.

9

99 9 99

9999 99 9 9 · • 9 99 9 9 · · · · ♦ · * ♦ ♦ · • · 99 ♦·· 99 99 989

- 14Podrobný popis vynálezu

Příklady CpCg lineární nebo rozvětvené alkylové skupiny jsou methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, oktyl a jejich možné izomery, jako například isopropyl, isobutyl a tercbutyl.

Příkladem Ci-C₈ lineární nebo rozvětvené alkenylové skupiny je methylen, ethyliden, vinyl, allyl, propargyl, butylen, pentylen, kde dvojná vazba mezi uhlíky, případně v přítomnosti jiných nenasycených vazeb mezi uhlíky, může být situována v různých možných polohách alkylového řetězce, který může být také rozvětvený v mezích možné izomerie.

Příklady C3-C10 cykloalkylové skupiny jsou cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cyklooktyl, polycyklické skupiny jako například adamantyl.

Příkladem (C3-C10) cykloalkyl - (CrCs) lineární nebo rozvětvené alkylové skupiny je cyklopropylmethyl, 2-cyklopropylethyl, 1cyklopropylethyl, 3-cyklopropylpropyl,

2-cyklopropylpropyl, 1cyklopropylpropyl, cyklobutylmethyl,

2-cyklobutylethyl,

1cyklobutylethyl, 3-cyklobutylpropyl,

2-cyklobutyl propyl, 1cyklobutylpropyl, cyklohexylmethyl,

2-cyklohexylethyl,

1cyklohexylethyl, 3-cyklohexylpropyl,

2-cyklohexylpropyl,

12-cyklohexylbutyl,

1-adamantylethyl,

2-adamantylethyl, adamantylmethyl.

cyklohexylpropyl, 5-cyklohexylpentyl, 3-cyklohexylpentyl, 3-methyl- 15Příkladem (C₆-C₁₄) arylové nebo (C₆-C₁₄) aryl - (C^Cs) lineární nebo rozvětvené alkylové skupiny je fenyl, 1- nebo 2-naftyl, anthryl, benzyl, 2-fenylethyl, 1-fenylethyl, 3-fenylpropyl, 2-anthrylpropyl, 1anthrylpropyl, naftylmethyl, 2-naftylethyl, 1-naftylethyl, 3-naftylpropyl, 2-naftylpropyl, 1-naftylpropyl, cyklohexylmethyl, 5-fenylpentyl, 3fenylpentyl, 2-fenyl-3-methylbutyl.

Příkladem heterocyklické nebo heterocyklo - (Ci-C₈) lineární nebo rozvětvené alkylové skupiny je thienyl, chinolyl, pyridyl, Nmethylpiperidinyl, 5-tetrazolyl, 2-(4,5-dihydroxazolyl), 1,2,4oxadiazolidin-3-yl-5-on, purin a pyrimidinové báze, například uracyl, případně substituovaný tak, jak to je znázorněno výše uvedenými obecnými definicemi.

Příklady (C₆-C₁₀) aroyl skupin jsou benzoyl, naftoyl.

Příklady (C₆-C₁₀) arylsulfonylových skupin případně substituovaných alkylovou skupinou jsou tosyl a benzensulfonyl.

Jako halogen má smysl fluor, chlor, brom a jod.

Příklady substituovaných skupin jsou pentafluorfenyl, 4-fenylbenzyl,

2,4-difluorbenzyl, 4-aminobutyl, 4-hydroxybutyl, dimethylaminoethyl, p-nitrobenzoyl, p-kyanobenzoyl.

φ φ

-16Příkladem polyaminoalkylové skupiny je -(CH₂)_m-NR₁₂-(CH₂)_p-NR₁₃(CH₂)_q-NH₂, kde map jsou celá čísla od 2 do 6 a q je celé číslo od 0 do 6 včetně těchto mezí a R₁₂ a R₁₃ je (Cj-Cs) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina, například N-(4-aminobutyl)-2aminoethyl, N-(3-aminopropyl)-4-aminobutyl, N-[N-(3-aminopropyl)N-(4-aminobutyl)]-3-aminopropyl.

Příkladem glykosylové skupiny je 6-D-galaktosyl, 6-D-glukosyl, Dgalaktopyranosyl, kde je případně glykosylová skupina chráněná vhodnou ketalovou skupinou, například isopropylidenem.

Příklady farmaceuticky přijatelných solí jsou v případě dusíkových atomů majících bazický charakter sole farmaceuticky přijatelných solí, a to jak anorganických, tak organických kyselin jako například kyseliny chlorovodíkové, kyseliny sírové kyseliny octové, nebo v případě kyselých skupin jako je karboxyl sole s farmaceuticky přijatelnými bázemi, a to jak anorganickými, tak organickými, jako jsou například hydroxidy alkalických kovů, kovů žíravých zemin, hydroxid amonný, amin a též heterocyklické.

Do první skupiny sloučenin, kterým se dává přednost náleží sloučeniny obecného vzorce (I), kde n je rovno 1.

Do druhé skupiny sloučenin, kterým se dává přednost náleží sloučeniny obecného vzorce (I), kde n je rovno 0.

Do dvou výše uvedených skupin, kterým se dává přednost patří takové sloučeniny obecného vzorce (I), kde R₄ není vodík, a je to zvláště C-i-Cs lineární nebo rozvětvený alkyl nebo CpCs lineární nebo rozvětvená alkenylová skupina nebo C₃-C₁₀ cykloalkyl nebo

- 17·· ··· ♦· ·♦ ♦♦· (C3-C10) cykloalkyl - (C-|-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl nebo C₆C₁₄ aryl, nebo (C₆-C₁₄) aryl - (Ci-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl, nebo heterocyklický nebo heterocyklo - (Ci-C₈) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina, kde jmenovaná heterocyklická skupina obsahuje alespoň heteroatom vybíraný ze skupiny sestávající z dusíkového atomu, případně substituovaného (Ci-C₈) alkylovou skupinou, a/nebo kyslíku, a/nebo síry; jmenovaný alkyl, alkenyl, cykloalkyl, aryl, aryl-alkyl, heterocyklické nebo heterocyklo-alkylové skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více skupinami vybíranými ze skupiny sestávající z: halogenu, hydroxylu, Ci-C₈ alkylu, C_rC₈ alkoxylu, fenylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, -NR₆R₇, kde R₆ a R₇ jsou stejné nebo různé, a to vodík, (Ci-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl; skupina -COOH, nebo jejich farmaceuticky přijatelný ester; nebo -CONR₈R₉ skupina, kde R₈ a R_g jsou stejné nebo různé, a to vodík, (C_rC₈) lineární nebo rozvětvený alkyl podle definice uvedené výše jako příklad.

Do první skupiny sloučenin, kterým se dává přednost patří:

• 7-methoxyiminomethylkamptothecin (CPT 179);

• 7-methoxyiminomethyl-10-hydroxykamptothecin (CPT 211);

• 7-(tercbutoxykarbonyl-2-propoxy)iminomethylkamptothecin (CPT 224);

• 7-ethoxyiminomethylkamptothecin;

• 7-isopropoxyiminomethylkamptothecin;

• 7-(2-methylbutoxy)iminomethylkamptothecin;

• 7-t-butoxyiminomethylkamptothecin (CPT 184);

• 7-t-butoxyiminomethyl-10-hydroxykamptothecin (CPT 212);

• 7-t-butoxyiminomethyl-10-methoxykamptothecin (CPT 220);

• 7-(4-hydroxybutoxy)iminomethylkamptothecin;

• 7-trifenylmethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 192);

• 7-karboxymethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 183);

• 7-(2-amino)ethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 188);

• 7-(2-N,N-dimethylamino)ethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 197);

• 7-allyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 195);

• 7-cyklohexyloxyiminomethylkamptothecin;

• 7-cyklohexylmethoxyiminomethylkamptothecin;

• 7-cyklooktyloxyiminomethylkamptothecin;

• 7-cyklooktylmethoxyiminomethylkamptothecin;

• 7-benzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 172);

• 7-[( 1 -benzyloxyimino)-2-fenylethyl]kamptothecin;

• 7-(1-benzyloxyimino)ethylkamptothecin (CPT 186);

• 7-fenoxyiminomethylkamptothecin (CPT 223);

• 7-(1-t-butoxyimino)ethylkamptothecin;

• 7-p-nitrobenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 177);

• 7-p-methylbenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 178);

• 7-pentafluorbenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 182);

• 7-p-fenylbenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 187);

• 7-[2-(2,4-difluorfenyl)etoxy]iminomethylkamptothecin;

• 7-(4-t-butylbenzyloxy)iminomethylkamptothecin;

• 7-(1 -adamantyloxy)iminomethylkamptothecin;

• 7-(1 -adamantylmethoxy)iminomethylkamptothecin;

• 7-(2-naftyloxy)iminomethylkamptothecin;

• 7-(9-anthrylmethoxy)iminomethylkamptothecin;

• 7-oxiranylmethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 213);

• 7-(6-uracyl)methoxyiminomethylkamptothecin;

• 7-(2-(1-uracyl)ethoxy]iminomethylkamptothecin (CPT 199);

• 7-(4-pyridyl)methoxyiminomethylkamptothecin (CPT 189);

• 7-(2-thienyl)methoxyiminomethylkamptothecin;

• 7-[(N-methyl)-4-piperidinyl]methoxyiminomethylkamptothecin (CPT 190);

• 7-[2-(4-morfolinyl]ethoxy)iminomethylkamptothecin (CPT 210);

• 7-(benzoyloxyiminomethyl)kamptothecin (CPT 191);

·♦ ·· · ·♦ *·* • · · « ♦· · · ···· ···· · · ♦ · ·· !··· ♦»*·*· ·* ·· ·*· ♦♦ *··*· • 7-[(1-hydroxyimino)-2-fenylethyl]kamptothecin (CPT 185);

• 7-t-butyloxyiminomethylkamptothecin N-oxid (CPT 198);

• 7-methoxyiminomethylkamptothecin N-oxid (CPT 208).

Do druhé skupiny sloučenin, kterým se dává přednost patří sloučeniny:

• 7-[N-(4-aminobutyl)-2-aminoethoxy]iminomethylkamptothecin;

• 7-[N-[N-(3-amino-1 -propyl)-4-amino-1 -butyl]-3- aminopropoxyjiminomethylkamptothecin;

• 7-(6-D-galaktosyloxy)iminomethylkamptothecin;

• 7-(1,2:3,4-di-O-isopropyliden-D- galaktopyranosyloxy)iminomethylkamptothecin (CPT 215);

• 7-(6-D-glukosyloxy)iminomethylkamptothecin (CPT 216);

Do třetí skupiny sloučenin, kterým se dává přednost patří sloučeniny:

• 7-t-butyliminomethylkamptothecin;

• 7-(4-amino)butyliminomethylkamptothecin;

• 7-(4-hydroxy)butyliminomethylkamptothecin (CPT 169);

• 7-(2-N,N-dimethylamino)ethyliminomethylkamptothecin (CPT

171);

• 7-allyliminomethylkamptothecin;

φφ * «φ φφ · • φφ φ φφφ « φ φφφ φ φ φφ φ φ φ φ ♦ · φφφφ φφ* · « · φφ ·Φ φφφ φφ φ· φ*· • 7-cyklohexyliminomethylkamptothecin (CPT 156);

• 7-fenyliminomethylkamptothecin (CPT 154);

• 7-p-nitrofenyliminomethylkamptothecin (CPT 160);

• 7-benzyliminomethylkamptothecin (CPT 175);

• 7-(2-anthrylmethyl)iminomethylkamptothecin;

• 7-(2-chinolylmethyl)iminomethylkamptothecin;

• 7-(2-thienyl)iminomethylkamptothecin;

• 7-[N-[N-(3-amino-1 -propyl)-4-amino-1 -butyl]-3aminopropyljiminomethylkamptothecin;

• 7-(6-D-galaktosyl)iminomethylkamptothecin.

U prvého řešení vynálezu, kterému se dává přednost se používají sloučeniny obecného vzorce (I), kde n je 1, tedy kamptothecin-7oximy, a R₄ je alkylová nebo arylalkylová skupina tak, jak jsou výše definovány.

Mezi tyto sloučeniny, kterým se dává nejvyšší přednost patří:

7-(t-butoxy)iminomethylkamptothecin (CPT 184) vzorce

o

-22«9

• 99	• 9 9
9 9 9 ·	9	9	9 9
9 9·	•	•
• 9 ·	• 9	9
9 9 ·	•	9
	9·

7-benzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 172)

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být připraveny různými způsoby podle povahy skupiny R₄ a podle toho, zda je přítomem kyslíkový atom vázaný na dusík 7-iminomethylové skupiny.

Sloučeniny obecného vzorce (I), kde n je 1 a má vpředu uvedený význam, s výjimkou aroylu a arylsulfonylu mohou být připravovány z výchozího kamptothecin-7-aldehydu obecného vzorce Ia, kde R₅ je vodík nebo 7-ketokamptothecinu obecného vzorce Ia, kde R₅ není vodík a kde R! je skupina -C(R₅)=O a R₅ je definován u obecného vzorce (I), R₂ a R₃ jsou definovány ve vzorci (I).

			··
•	•	•		«	•
•	•
•	•	•		• ·
•	•	•		9
··			• 9		•

··	·· • ·	9 ··
•	•
•	•	9 ·	•
•	•	• · ·	•
•	•	• ·	•
• ··		··

Sloučenina obecného vzorce (Ia) reaguje se sloučeninou obecného vzorce (lla) R₄O-NH₂, kde R₄ má vpředu uvedený význam a dá sloučeninu obecného vzorce (I), kde Ri je skupina -C(R₅)=N-OR₄, R₄ je definován jako u obecného vzorce (I) vyjma aroylu a arylsulfonylu. Reakci lze provádět běžnými způsoby pro normální vznik oximu odborníkům dobře známými. Molární poměr mezi 7aldehydem nebo 7-ketokamptothecinem a hydroxylaminem má být přednostně v mezích od 1 : 3 do 3 : 1. Lze také použít příslušné sole hydroxylaminu. Reakce se provádí v přítomnosti báze, například anorganické báze jako je uhličitan draselný nebo organické báze, jako je například triethylamin nebo diazabicyklononen za použití polárních rozpouštědel, přednostně methanolu nebo ethanolu a tato reakce se provádí při teplotách pohybujících se mezi laboratorní teplotou a bodem varu použitého rozpouštědla, případně v přítomnosti dehydratačních činidel, jako například síranu sodného nebo hořečnatého či molekulárních sít. Pokud to je požadováno, je také možno reakci provádět v přítomnosti katalyzátoru, například Lewisovy kyseliny.

-24·· ·· · ·· ·· • ·· · ··· · · ·· • · ·· ··· · ·

Výše uvedené sloučeniny lze také alternativně připravovat z oximu kamptothecin-7-aldehydu (získaného podle popisu ve sdělení Sawada, et al., Chem. Pharm. Bull., 39, (10), 2574, (1991)), nebo 7ketonu reakcí s halogenidem R₄-X, kde X je přednostně jod v polárním rozpouštědle, například tetrahydrofuranu nebo alkoholech a v přítomnosti báze, například hydridu sodného nebo uhličitanu draselného.

Sloučeniny obecného vzorce (I), kde n je 1 a R₄ je aroyl nebo arylsulfonyl, jak jsou vpředu definovány pro obecný vzorec (I), mohou být připraveny z výchozího kamptothecin-7-oximu, jehož příprava je popsána v předešlém odstavci, s acylchloridy R₄-COCI v polárních rozpouštědlech a v přítomnosti báze, přednostně pyridinu nebo přímo v pyridinu, jak to popisuje Cho, et al., J. Org. Chem., 62, 2230, (1997).

Sloučeniny obecného vzorce (I), kde n je 0 a má vpředu uvedený význam, s výjimkou aroylu, mohou být připravovány z výchozího kamptothecin-7-aldehydu obecného vzorce Ia, kde R₅ je vodík nebo 7-ketokamptothecinu obecného vzorce Ia, kde R₅ není vodík) kde Rj je skupina -C(R₅)=O a R₅ je podle definice pro obecný vzorec (I), R₂ a R₃ jsou definovány ve vzorci (I).

-25·· ·· φ ·· φφ • « · · φ φ φ φ · · φ * · · · φ · · φφ φφφφ · φ φ φφ • Φ φφ φφ φ φ φ φφ

la

Sloučenina obecného vzorce (Ia) reaguje se sloučeninou obecného vzorce (lib) R₄-NH₂, kde R₄ má vpředu uvedený význam a vznikne sloučenina obecného vzorce (I), kde Ri je skupina -C(R₅)=N-OR₄, R₄ má vpředu uvedený význam jako u obecného vzorce (I) vyjma aroylu. Reakci lze provádět běžnými způsoby pro normální vznik iminu odborníkům dobře známými. Molární poměr mezi 7-aldehydnebo 7-ketokamptothecinem a aminem má být přednostně v mezích od 1 : 3 do 3 : 1. Lze také použít příslušné sole aminu. Reakce se provádí v přítomnosti báze, například anorganické báze jako je uhličitan draselný nebo organické báze, jako je například triethylamin nebo diazabicyklononen za použití polárních rozpouštědel, přednostně methanolu nebo ethanolu a reakce se provádí při teplotách pohybujících se mezi laboratorní teplotou a

-264 4 ·· · «4 ·4 ···· · · · · · · · • · 4 4 4 4 4 · * bodem varu použitého rozpouštědla, případně v přítomnosti dehydratačních činidel, například síranu sodného nebo hořečnatého či molekulárních sít. Pokud to je požadováno, je také možno reakci provádět v přítomnosti katalyzátoru, například Lewisovy kyseliny (jak to například popisuje Moretti a Torre, Synthesis, 141, (1970); nebo Kobayashi, et al., Synlett, 115, (1977).

Kamptothecin-7-aldehyd a kamptothecin-7-oxim jsou popsány v patentové přihlášce EP 0056692 a ve zmíněném sdělení Sawady, et al., Chem. Pharm. Bull., 39, (10), 2574, (1991).

Nj oxidy sloučenin obecného vzorce (I) se připravují podle dobře známých způsobů oxidace heteroaromatického dusíku, přednostně oxidací kyselinou octovou nebo trifluoroctovou a peroxidem vodíku, nebo reakcí s organickými peroxokyselinami (Albíni, A., Pietra, S., Heterocyclic N-oxides, CRC, 1991).

Co se týká různých skupin R₄ přítomných v různých reagenciích obecného vzorce (II), jsou tyto reagencie dostupné na trhu, nebo mohou být připravovány podle dobře známých způsobů popsaných v literatuře, které mohou odborníci v tomto oboru spolu se svými zkušenostmi použít.

Farmaceuticky přijatelné sole se získají běžnými způsoby, které lze nalézt v literatuře a není nutný jejich další popis.

• · ·· · »t· · ···· · · · ··«« • · · · ♦ · ··· • · · · * ····« · • · · · · · *«Μ • · · · ··· ® Λ· · ·

-27Sloučeniny uváděné v předloženém vynálezu vykazují antiproliferativní účinky a jsou tudíž pro svoji terapeutickou účinnost vhodné a mají takové fyzikálně-chemické vlastnosti, které je předurčují jako vhodné při přípravě farmaceutických přípravků.

Farmaceutické přípravky obsahují alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce (I), a to v takovém množství, aby vznikl významný terapeutický účinek, zvláště protinádorový účinek. Přípravky obsažené v předloženém vynálezu jsou běžné a získají se způsoby obecně používanými ve farmaceutickém průmyslu. Podle požadovaného způsobu podávání mohou být tyto přípravky v tuhé nebo kapalné formě, vhodné k orálnímu, parenterálnímu či intravenoznímu podávání. Přípravky podle předloženého vynálezu obsahují společně s účinnou složkou alespoň farmaceuticky přijatelné vehikulum nebo excipient. Zvláště vhodný může být přídavek koadjuvantů, například rozpouštějících, dispergujících, suspendujících a emulgačních činidel.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být také používány v kombinaci s dalšími účinnými složkami, například dalšími protinádorovými léčivy, a to jak odděleně, tak v jedné dávkové formě.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou vhodnými medikamenty s protinádorovým působením, například na plicní

-28nádory, jako je velkobuněčný plicní nádor, nádory střevně-rektální, prostaty a gliomy.

Cytotoxické účinky sloučenin podle předloženého vynálezu byly zkoušeny na buněčných systémech lidských nádorových buněk za použití zkoušky na antiproliferativní účinky jako metody hodnocení cytotoxického potenciálu.

Použitými buněčnými liniemi byly plicní velkobuněčné nádory, které náležely k velkobuněčnému hystotypu NCI H460.

Zkoušenými sloučeninami, kterým se dávala přednost, byly 7-(tbutoxy)iminomethylkamptothecin (CPT 184) a 7benzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 172) a ty byly porovnávány s Topotecanem (TPT), referenčním standardem přijatým odborníky v oboru a se 7hydroxyiminomethylkamptothecinem (CT 181) popsaným Sawadou, et al., vChem. Pharm. Bul., 39, (10), 2574-2580, (1991), který je nejbližším strukturním analogem sloučenin obecného vzorce (I) podle předloženého vynálezu.

Pro studie in vivo bylo provedeno rozpouštění v 10 % DMSO v redestilované vodě, protože nebylo možno rozpouštět ve fyziologickém roztoku a orální cestou se podávalo množství 10 ml.kg'¹.

Protinádorové účinky

Ke zkoušce byly použity atimické myši nu-nu (holé) (Charles River, Calco, Itálie) ve stáří 10 až 12 týdnů. Zvířata byla chována v boxech s laminárním prouděním podle směrnice United Kingdom Coordination Committee Cancer Research. Pokusné postupy byly schváleny Ethical Committee for experimentation Instituto Nazionale per lo Studio e Cura dei Tumori.

Části nádorů o velikosti 2x2x2 mm z myší, kterým bylo subkutálně injikováno 10⁶ buněk NCI H460/topo byly implantovány subkutálně bilaterálně skupinám vždy po 5 myších.

Na zvířata se působilo sloučeninami v okamžiku, kdy začal být nádor hmatný podle následujícího schématu:

• CPT172 (8 mg.kg'¹, po) q4dx4 • CPT172 (16 mg.kg¹, po) q4dx4 • CPT172 (24 mg.kg'¹, po) q4dx4 • CPT172 (2 mg.kg'¹, po) qdx5dx10w • CPT181 (15 mg.kg'¹, po) q4dx4 • CPT181 (25 mg.kg'¹, po) q4dx4 • CPT184 (2 mg.kg'¹, po) q4dx4 • CPT184 (5 mg.kg'¹, po) q10dx6 • Topotecan (15 mg.kg'¹, po) q4dx4 • Topotecan (10 mg.kg'¹, po) q4dx4

Dvakrát týdně s použitím Vernierova kalibru byla měřena tloušťka, minimální průměr (I), délka a maximální průměr (L) nádorů v mm. Objem nádoru (mm³) byl počítán podle vzorce I² x L/2. Účinnost látky byla hodnocena jako procento TVI zkoušené skupiny proti kontrolní skupině podle vzorce TVI % = 100 - (T/C x 100), kde T je

střední hodnota objemu nádoru zkoumané skupiny a C kontrolní skupiny. Sloučenina je považována za účinnou, pokud TVI % > 50.

Následující tabulka uvádí výsledky pokusů.

Tabulka 1

Protinádorová účinnost kamptothecinových analogů při zkoušení plicních karcinomů NCI H460

Sloučenina Dávka (mg.kg’1, p.o.)	Způsob aplikace	Účinnost (TVI %)	Toxicita
			Mortalita Ztráta

tělesné hmotnosti (%)

CPT172	8	q4dx4	77
	16	q4dx4	88
	24	q4dx4	97	0/4	6
	2	qdx5x10w	90	0/3	0
CPT181	15	q4dx4	40	0/4	0
	25	q4dx4	70	0/4	0
CPT184	2	q4dx4	100	0/5	0
	5	q10dx6	99	0/4	9
TPT	15	q4dx4	94	0/4	0
	15	q4dx4	89	0/5	10
	10	q4dx4	64	0/5	0

TVI % bylo vyhodnoceno 5 až 10 dnů po poslední dávce * · · · e · · · e · · · • · · · · · ♦ «v · «<· «· «· · · · · · · · ·

CPT172 prokázalo protinádorovou účinnost v různých dávkách a za různých způsobů aplikace; CPT184 se ukazuje jako velmi účinná sloučenina v nízkých dávkách a při různých způsobech aplikace, avšak obě látky jsou zvláště slibné pro klinické aplikace.

Další výhody těchto látek lze spatřovat ve velmi širokém intervalu účinných dávek vykazujících zvyšující se terapeutický index a lepší manipulovatelnost při terapeutickém využívání, a to zvláště v případě, že se podávají po delší dobu, a to nejlépe v injikovatelných přípravcích a měněných způsobech aplikace a dávek. Vzhledem ke snížené toxicitě se pro taková použití jeví sloučenina CPT 172 jako nejvýhodnější.

Vážnou nevýhodou běžných kamptothecinú je reverzibilita jejich vazby vternárních komplexech (léčivo-DNA-enzym). Tato reverzibilita ovlivňuje účinnost léčiva, protože mu během syntézy DNA nedovolí převádět rozštěpení jediného řetězce DNA na rozštěpení dvojitého řetězce DNA.

Tabulka 2 uvedená níže ukazuje odolnost štěpení DNA na zvoleném počtu štěpných míst in vitro. Po 20 minutách inkubace léčiva v reakční směsi obsahující značenou DNA a přečištěný enzym byl přidán chlorid sodný (0,6 M) za účelem pomoci dissociaci ternárního komplexu.

Výsledek uvedený v tabulce jako procento odolnosti proti štěpení DNA zkoušené přibližně po 10 minutách je znamením téměř úplné reverzibility rozštěpení v případě kamptothecinu a Topotecanu a významné odolnosti v případě CPT 172 a CPT 184.

Tabulka 2

Odolnost vůči štěpení DNA stimulovaná kamptothecinem a zprostředkovaná topoizomerázou I na vybraných místech

Léčivo (10 min.)	Odolnost (%)
Kamptothecin	16
Topotecan	16
CPT 181	28
CPT 184	72
CPT 172	80

Výhoda nabízená sloučeninami podle předloženého vynálezu při překonávání meze reverzibility ternárního komplexu je s ohledem na současný stav vědění zřejmá.

Při předklinických zkoumáních vykazoval CPT 184 cytotoxickou účinnost u různých nádorových buněčných liniích.

Toto široké spektrum protirakovinného působení bylo ověřeno na myších s transplantovanými lidskými nádorovými transplantáty včetně NSCLC (H460, A549), karcinomu prostaty (JCA-1), glioblastomu (GBM/7), gastrického karcinomu (MKN28), osteosarkomu (U20S), vaječníkového karcinomu (A2780/Dx,

A2780/DDP) a karcinomu střev (HT29, CoBA), rovněž tak jako plicního nádoru myší (M109) a leukemického modelu (L1210).

Předklinické hodnoty inspirují k tomu, že CPT 184 může být účinnou protirakovinovou látkou proti lidské rakovině a zvláště proti velkobuněčným plicním nádorům (NSCLC), glioblastomu a karcinomu prostaty (Tabulka 3).

Tabulka 3

Protinádorové účinky CPT 172, CPT 184 vzhledem k TPT na různých nádorových modelech

CPT 184

CPT 172 TPT mg.kg'¹ 3 mg. kg'¹ 20 mg,kg'¹ 25 mg .kg'¹ 15 mg .kg'¹

H460	99	-	-	97	98
	(5/8*)
HT29	92	-	-	88	65
CoBA	84	87	84	93	85
GBM/7	97	98	93	98	96
	(3/10*)	(2/8*)	(3/11*)	(9/12*)	(1/10*)
U87	80	87	-	-	82
A2780	100	-	-	-	96
	(1/8*)
A2780/DX	92	100	-	-	92
	(1/8*)	(8/8*)	-	-	(2/10*)
A2780/DDP	77	90	-	-	92
IGROV-1	93	96	-	-	89
JCA-1	98	-	98	-	95
	(5/8*)
DU145	95	-			77

L1210 >400*** >400**

-35Výsledky jsou vyjádřeny pro tuhé nádory jako TVI % = objemová inhibice nádoru (tumor volume inhibition) = 100 - (hmotnost nádoru zkoumané skupiny/střední hmotnost nádoru kontrolní skupiny x 100) a pro L1210 jako ILS % = procentní zvýšení životnosti [(MST zkoumané skupiny(MST kontrolní skupiny) x 100] - 100.

* nejsou známky nádoru na konci 10. dne po posledním podání.

** >50 % a *** > 80 % ošetřených myší naživu po 120 dnech po injikování leukemie.

H460 =NSCLC

HT29 a CoBA = karcinom střeva

IGROV-1, A2780, A2780/Dx a A2780/DDP = karcinom vaječníkú

GBM/7 a U87 = glioblastom

JCA-1 a DU145 = karcinom prostaty

L1210 = myší leukemie

Vysoká cytotoxická potence sloučenin podle předloženého vynálezu zde představená příkladem jedné ze sloučenin, kterým se dává přednost, tedy CPT 184, ukazuje také na silné protinádorové působení. S využitím souboru cizích nádorových transplantátů charakterizovaných významnou reakcí na Topotecan (TPT) (tj. TVI > 80 %), a sloučenin podle předloženého vynálezu v širším smyslu se významně zvýšilo spektrum protinádorových účinků CPT 184 o značný počet modelů lidských nádorů. Zvláště byla zjištěna silná • * « · · ·· ΦΦ • « · « · · · · φ ·· • Φ ·φ · · · φφ • · ♦ · ♦ · · ·»·« • Φ Φ · · Φ · Φ« • · · · « · ♦ · ·* · Φ

-36 protinádorová účinnost při léčbě mnoha nádorových modelů, kde bylo dosaženo jejich úplného ústupu u velkého počtu zvířat. Sloučeniny podle předloženého vynálezu, a to zvláště CPT 184, jsou navíc schopny vyvolat 100 % CR u nádoru A2780/DX charakterizovaného MDR fenotypem. Toto pozorování má vysokou důležitost, protože poukazuje na to, že sloučeniny podle předloženého vynálezu nejsou substrátem pro P-glykoprotein.

Další terapeutické výhody sloučenin podle předloženého vynálezu se vztahují na a) zlepšení terapeutického indexu, b) účinnost léčiva ve velkém rozsahu dávek, c) průkaznost účinků při použití zcela odlišných způsobů aplikace, protože sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou méně závislé na léčebném plánu než tomu je u Topotecanu.

Příklady provedeni

Následující příklady dále objasňují vynález.

Příklad 1

7-benzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 172)

500 mg (1,33 mmol) 7-formylkamptothecinu bylo rozpuštěno ve 100 ml ethanolu. Přidáno bylo 15 ml pyridinu a 638 mg (4 mmol) Obenzylhydroxylamin hydrochloridu a ponecháno 5 hodin pod refluxem. Rozpouštědlo bylo odpařeno pod vakuem a takto získaný zbytek přečištěn flash chromatografií na silikagelu za použití eluční směsi hexanu s ethylacetátem v poměru 4:6.

-3744 44 4 44 4«4

4444 44 44 4444 • 4 4« 444444

44 44 44 444 44

4444 444 444

4 4 4 444 4'4 4 4444

Výtěžek byl 65 %

b.t.: 200° - 205°C

Získaný produkt se skládá ze směsi izomerů syn a anti v poměru přibližně 8 : 2 (izomer A: Rf 0,32; izomer B: Rf 0,19 na silikagelu Měrek 60 F254, eluční činidlo hexan a ethylacetát v poměru 3 : 7).

HPLC: analýzy byly provedeny na přístroji vybaveném čtyřstupňovým čerpadlem (HP 1050) s injektorem Rheodyn (smyčka 20 μΙ) a diodovým detektorem (HP 1050) řízeném softwarem HPLCChemStation. Spektra byla snímána od 200 do 600 nm a chromatogramy byly registrovány při 360 a 400 nm.

Byla použita reverzní kolona s fází C18 (Rainin C18; 25 x 0,4 cm, Varian) s představenou kolonou RP18. Analýza byla provedena při lineárním elučním gradientu počínajíc od směsi acetonitril : vodě v poměru 30 : 70 ke 100 % acetonitrilu ve 20. minutě s průtokem 1 ml.min¹. Retenční časy byly: 12,51 min. pro izomer B a 14,48 min. pro izomer A.

¹H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆): δ: 0,88 (t, H3-18A+H3-18B), 1,87 (m, H2-19A+H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,21 (s, H2-PhB), 5,30 (H2PhA), 5,40 (s, H2-5A), 5,45 (s, H2-17A+H2-17B), 6,53 (s, OHA+OHB), 7,3-7,6 (m, ArA+ArB+H-14A+H-14B), 7,75 (m, H11A+H-11B), 7,85-7,95 (m, H10A+H-10B), 7,98 (dd, H-12B), 8,188,27 (m, H-12A+H9-B), 8,45 (s, CH=NB), 8,59 (dd,H-9A), 9,38 (s, CH=NA).

φ ♦ «	φφ φ	φ	• φ · • · ·	ΦΦ
4	Φ	Φ Φ
Φ	φ	• φ	• ·	4	Φ 4	Φ
Φ	φ	•	• φ	4	Φ	Φ
φφ	• ·		ΦΦΦ 9 ·		ΦΦ	Φ

Hmotnostní spektrum (m/z): 481 (M⁺100), 374 (30), 330 (70), 300 (30), 273 (20), 243 (20), 91 (34).

Příklad 2

7-t-butoxyiminomethylkamptothecin (CPT 184)

400 mg (1,06 mmol) 7-formylkamptothecinu bylo rozpuštěno v 80 ml ethanolu. Přidáno bylo 12 ml pyridinu a 400 mg (3,18 mmol) O-tbutylhydroxylamin hydrochloridu a ponecháno 4 hodiny pod refluxem. Rozpouštědlo bylo odpařeno pod vakuem a takto získaný zbytek přečištěn flash chromatografií na silikagelu za použití eluční směsi hexanu s ethylacetátem v poměru 4 : 6. Bylo získáno 322 mg (0,72 mmol) žluté tuhé látky.

Výtěžek byl 68 %.

b.t.: 250°C

Získaný produkt se skládá ze směsi syn a anti izomerů v poměru přibližně 8 : 2 (izomer A: Rf 0,31; izomer B: Rf 0,24 na silikagelu Měrek 60 F254, eluční činidlo hehan a ethylacetát v poměru 3 : 7).

HPLC: analýzy byly provedeny na přístroji vybaveném čtyřstupňovým čerpadlem (HP 1050) s injektorem Rheodyn (smyčka μΙ) a diodovým detektorem (HP 1050) řízeném softwarem HPLC•9 99 · «9·♦ · « * · 9 9 · 999

9*9994*

99 ·· 99 99»9 • • 9 9 999 99 ·♦ ·· ·9· 99 ♦♦9

-39ChemStation. Spektra byla snímána od 200 do 600 nm a chromatogramy byly registrovány ph 360 a 400 nm.

Byla použita reverzní kolona s fází C18 (Rainin C18; 25 x 0,4 cm, Varian) s představenou kolonou RP18. Analýza byla provedena při lineárním elučním gradientu počínajíc od směsi acetonitril : vodě v poměru 30 : 70 ke100 % acetonitrilu ve 20. minutě s průtokem 1 ml.min'¹. Retenční časy byly: 12,92 min. pro izomer B a 14,61 min. pro izomer A.

¹H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆):

δ: 0,88 (t, H3-18A+H3-18B), 1,30 (s, t-but.B), 1,47 (s, t-but.A), 1,87 (m, H2-19A+H2-19B), 5,18 (s, H2-5B), 5,37 (H2-5A), 5,42 (s, H217A+H2-17B), 6,54 (s, OHA+OHB), 7,35 (s, H-14A), 7,36 (s, H14B), 7,69-7,83 (m, H-11A+H-11B), 7,85-7,98 (m, H-10A+H-10B), 8,07 (dd, H-9B), 8,16-8,27 (m, H-9A+H-12B), 8,40 (s, CHB), 8,62 (dd,H-12A), 9,31 (s, CHA).

Hmotnostní spektrum (m/z): 448 (M⁺28), 391 (40), 374 (100), 362 (40), 330 (34), 57 (17).

Stejným způsobem byly připraveny následující sloučeniny:

7-t-butoxyiminomethyl-10-hydroxykamptothecin (CTP 212);

b.t. 195 °C

-40¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,88 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,45 (s, 3-CH₃),

1.80- 1,90 (m, H₂-19), 5,12 (s, H₂-5 anti), 5,33 (s, H₂-5 syn), 5,45 (m. H₂-17 syn; H₂-17 anti), 6,50 (s, -OH), 7,25 (d, J=2,57 Hz, H-9 anti), 7,30 (s, H-14 syn; H-14 anti), 7,43-7,50 (m, H-11 syn; H-11 anti), 7,70 (d, J=2,57 Hz, H-9 syn), 8,15 (d, J=9,19 Hz; H-12 syn, H-12 anti), 8,25 (s, -CH=N anti), 9,00 (s, -CH=N syn).

Hmotnostní spektrum (m/z): 463 (M⁺16), 419 (15), 407 (25), 390 (43), 346 (100),318(10).

7-t-butoxyiminomethyl-10-methoxykamptothecin (CPT 220);

b.t. 250 °C ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,88 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,47 (s, 3-CH₃),

1.80- 1,93 (m, H₂-19), 3,95 (s, -OCH₃ anti), 3,98 (s, -OCH₃ syn), 5,17 (s, H₂-5 anti), 5,30-5,45 (m, H₂-5 syn; H₂-17 syn; H₂-17 anti), 6,50 (s, -OH), 7,29 (s, H-14),7,56 (dd, J=9,19 Hz; J=2,57 Hz; H-11), 7,90 (d, J=2,57 Hz, H-9), 8,12 (d, J=9,19 Hz; H-12), 8,39 (s, -CH=N anti), 9,33 (s, -CH=N syn).

Hmotnostní spektrum (m/z): 477 (M 56, M), 421 (74), 404 (100), 392 (66), 360 (18,5), 303 (6), 274 (7,5).

7-p-nitrobenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 177);

7-p-methylbenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 178);

b.t. 203 °C

7-methoxyiminomethylkamptothecin (CPT 179); b.t. 230 °C

7-methoxyiminomethyl-10-hydroxykamptothecin (CPT 211);

-41 b.t. 268 °C ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,87 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,80-1,90 (m, H₂19), 4,13 (s, -OCH₃), 5,32 (s, H₂-5), 5,41 (s, H₂-17), 6,50 (s, -OH), 7,26 (s, H-14), 7,47 (dd, J=9,19 Hz; J=2,56 Hz; H-11), 7,75 (d, J=2,56 Hz, H-9), 8,08 (d, J=9,19 Hz; H-12), 9,04 (s, -CH=N).

7-pentafluorbenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 182);

b.t. 200 °C

7-karboxymethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 183);

7-(karboxydimethylmethoxy)iminomethylkamptothecin ;

b.t. 193 °C ¹H-NMR (CDCI₃) δ = 1,02 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,69 (s, -CH₃), 1,72 (s, -CH₃), 1,81-1,95 (m, H₂-19), 3,60 (s, -OH), 5,24 (d, J=16,55 Hz, H-17A), 5,32 (s, H₂-5), 5,65 (d, J=16,55 Hz, H-17B), 7,64 (s, H-14), 7,67 (ddd, J=6,99 Hz; J=8,47 Hz; H-11), 7,80 (ddd, H=6,99 Hz; J=8,47 Hz; J=1,47 Hz, H-10), 8,10-8,16 (m, H-9; H-12), 9,10 (s, CH=N).

7-(t-butoxykarbonyl-2-propoxy)iminomethylkamptothecin (CPT 224);

b.t. 180 °C

Ή-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,88 (t, J=7 Hz, H₃-18), 1,44 (s, 3-CH₃),

1,60 (s, 2-CH3), 1,80-1,92 (m, H₂-19), 5,27 (s, H₂-5) 5,43 (s, H₂-17), 6,53 (s, -OH), 7,35 (s, H-14),7,76 (ddd, J=8,46; J=8,46 Hz; J=1,47 ···* ·♦ · · ·· · • · ·· 9 9 9 ··

9 9 9 9 9 9 9 9 99

9 9 9 9 9 9 99

9 9 9 9 99 9999 9

Hz; H-11), 7,92 (ddd, J=8,46 Hz; J=1,47, H-10), 8,23 (dd, J=8,46 Hz; J=1,47 Hz, H-12), 8,65 (dd, J=8,46 Hz; J=1,47 Hz; H-9), 9,20 (s, -CH=N).

Hmotnostní spektrum (m/z): 534 (M⁺ 13), 477 (29), 374 (55), 273 (10), 57(100),41 (57).

7-p-fenylbenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 187);

b.t. 200-202 °C

7-oxiranylmethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 213);

1H-NMR (CDCIa) δ = 0,87 (t, J=7 Hz, H₃-18), 0,80-2,00 (m, J=7 Hz, H₂-19), 2,80 (1H, m, -CH₂-O), 3,05 (1H, m, -CH₂-O), 3,40 (m, CH-O), 3,75 (s, -OH), 4,30 (1H, m, -CH₂-O-N), 4,73 (1H, m, -CH₂-O-N), 5,33 (d, J=16 Hz, H-17A), 5,45 (s, H₂-5), 5,75 (d, J=16 Hz, H-17B), 7,70 (s, H-14), 7,75 (m, H-11), 7,85 (m, H-10), 8,15-8,35 (m, H-9; H-12), 9,12 (s, - CH=N).

7-(2-amino)ethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 188);

b.t. 220 °C;

7-(4-pyridyl)methoxyiminomethylkamptothecin (CPT 189);

b.t. 220 °C; Hmotnostní spektrum (m/z): (M⁺) 482

7-[(N-methyl)-4-piperidinyl]methoxyiminomethylkamptothecin (CPT 190);

b.t. 185-190 °C; Hmotnostní spektrum (m/z): (M⁺) 502

7-ethoxyiminomethylkamptothecin;

-437-isopropyloxyiminomethylkamptothecin;

7-(2-methylbutoxy)iminomethylkamptothecin;

7-cyklohexyloxyiminomethylkamptothecin;

7-cyklohexylmethoxyiminomethylkamptothecin;

7-cyklooktyloxyiminomethylkamptothecin;

7-cyklooktylmethoxyiminomethylkamptothecin;

7-(1-adamantyloxy)iminomethylkamptothecin;

7-(1-adamantylmethoxy)iminomethylkamptothecin;

7-fenoxyiminomethylkamptothecin (CPT 223);

¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,89 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,81-1,95 (m, H₂19), 5,25 (s, H₂-5 anti) 5,42 (s, H₂-17 anti), 5,45 (s, H₂-5 syn), 5,52 (s, H₂-17 syn), 6,56 (s, -OH), 7,15-7,55 (m, 5Ar; H-14), 7,83 (m, H11), 7,96 (m, H-10), 8,28 (dd, J=8,09 Hz; J=1,10 Hz; H-12), 8,73 (dd, J=8,09 Hz; J=1,10,H₂ H-9), 8,92 (s, -CH=N anti), 9,84 (s, CH=N syn).

Hmotnostní spektrum (m/z): 467 (M⁺ 33), 373 (100), 329 (62), 314 (72), 273 (62), 244 (52), 135 (38), 57 (25), 43 (39).

7-(2-naftyloxy)iminomethylkamptothecin;

7-(9-anthrylmethoxy)iminomethylkamptothecin ;

7-(2-(2,4-difluorfenyl)ethoxy]iminomethylkamptothecin ;

7-(4-t-butylbenzyloxy)iminomethylkamptothecin ;

·· 9 ·· ·· • 999 ·· · ««99

9 99 99999

99 99 99 » * ·9 • 999 9 9» ··

99 9·9 9··· 9

-447-trifenylmethoxyiminomethylkamptothecin (CPT 192);

b.t. 140 °C;

7-(2-N,N-dimethylaminoethoxy)iminomethylkamptothecin (CPT 197);

7-[N-(4-aminobutyl)-2-aminoethoxy]iminomethylkamptothecin ;

7-[N-[N-(3-amino-1 -propyl )-4-amino-1 -butyl]-3aminopropoxyjiminomethylkamptothecin ;

7-(2-(1-uracyl)ethoxy]iminomethylkamptothecin (CPT 199);

b.t. 197-200 °C ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,88 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,80-1,95 (m, H₂19), 3,90 (t, J= 6 Hz, -CH₂N anti), 4,15 (t, J=6 Hz, -CH₂N syn), 4,35 (t, J=6 Hz, -CH₂O anti), 4,58 (t, J=6 Hz, -CH₂O syn), 5,00 (d, J=8 Hz, H-5 U anti), 5,35-5,50 (m, H₂-5 anti; H₂-5 syn; H₂-17 anti; H₂17syn), 5,55 (d, J=8 Hz, H-5 U syn), 6,55 (s, -OH), 7,15 (d, J=8 Hz, H-6 U anti), 7,40 (s, H-14), 7,64 (d, J=8 Hz; H-6 U syn), 7,70-7,82 (m, H-10 syn; H-10 anti), 7,85-8,00 (m, H-11 syn; H-11 anti; H-12 anti), 8,23 (m, H-12 syn; H-9 anti), 8,48 (s, -CH=N anti), 8,60 (dd, J=8,46 Hz; J=1,47 Hz, H-9 syn), 9,35 (s, -CH=N syn), 11,3 (brs, NH U).

7-[2-(4-morfolinyl)ethoxy]iminomethylkamptothecin (CPT 210);

b.t 158- 160 °C.

« 4	9«	• 4«	• 4
• 4	•	4	• 4 4	4	•	4 4
• ·	4 ·	• 4	•	4	4
• ·	•	4	• ·	•	4	4
44	• 4	• * 4 4 4		• 4	4

-451 H-NMR (CDCh) δ = 1,06 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,84-2,00 (m, H₂19), 2,62 (t, J=4,78 Hz, -CH₂N morf), 2,87 (t, J=5,52 Hz, -CH₂N),

3,60 (s, -OH), 3,79 (t, J=4,78 Hz, -CH₂-0 morf), 4,59 (t, J=5,52 Hz, CH₂-O), 5,33 (d, J=16,18 Hz, H-17A), 5,45 (s, H₂-5) 5,77 (d, J=16,18 Hz; H-17B), 7,69 (s, H-14), 7,73 (ddd, J=1,47 Hz; J=8,46 Hz; H-11), 7,87 (ddd, J=1,47 Hz; J=8,46 Hz; J=8,46 Hz, H-10), 8,19-8,31 (m, H-9; H-12), 9,12 (s, - CH=N).

Hmotnostní spektrum (m/z): 504 (M⁺ 4), 373 (23), 329 (26), 272 (18), 244 (20), 216 (13), 100 (100).

7-(6-uracyl)methoxyiminomethylkamptothecin;

7-(4-hydroxybutoxy)iminomethylkamptothecin ;

7-(2-thienyl)methoxyiminomethylkamptothecin ;

7-(4-thiazolyl)methoxyiminomethylkamptothecin ;

7-(6-D-galaktosyloxy)iminomethylkamptothecin ;

7-(6-D-glukosyloxy)iminomethylkamptothecin ;

7-(6-D-glukosyloxy)iminomethylkamptothecin (CPT 216);

b.t. 210 °C.

¹H-NMR (DMSO-ds) δ = 0,85 (t, J=7,3 Hz, H₃-18), 1,75-1,95 (m, H₂19), 3,50-5,00 (m, 10H galakt), 5,35 (s, H₂-5), 5,45 (s, H₂-17), 6,25 (d, -OH galakt), 6,55 (s, -OH), 6,65 (d, -OH galakt), 7,35 (s, H-14), 7,80 (m, H10), 7,98 (m, H-11), 8,25 (dd, J=8,47 Hz; J=1,46 Hz, H12), 8,60 (dd, J=8,47 Hz; J=1,46 Hz, H-9), 9,35 (s, -CH=N).

««	9·	• ··	9· 9
•	•		*	99 9 9	9	9	99
•	•	• 9	9 9 9	9	9
• ·	9	9	9 9·	9	9
··	··	• 99 99	99		99

7-(1,2:3,4-di-O-isopropyliden-Dgalaktopyranosyloxy)iminomethylkamptothecin (CPT 215);

¹H-NMR (DMSO-de) δ = 0,87 (t, J=7,30 Hz, H₃-18), 1,30-1,45 (m, 4CH₃), 3,90 (m, H₂-6'; H-5'; H-4'; H-3'; H-2'), 1,80-1,93 (m, H₂-19), 5,35 s, H₂-5), 5,45 (s, H₂-17), 5,60 (d, J=5,52 Hz, Η-Γ), 6,52 (s, OH), 7,35 (s, H-14), 7,75 (m, H-10 syn, H-10 anti), 7,90 (m, H-11 syn; H-11 anti), 8,05 (dd, J=8,47 Hz; J=1,47 Hz, H-12 anti), 8,20 (m, H-12 syn; H-9 anti), 8,50 (s, -CH=N anti), 8,65 (dd, J= 8,47 Hz; J=1,47 Hz; H-9 syn), 9,40 (s, -CH=N syn).

Hmotnostní spektrum (m/z): 634 (M+1 13), 576 (10), 486 (18), 347 (35), 329 (45), 314 (49), 302 (28), 246 (100), 242 (55), 187 (26).

7-(1-benzyloxyimino)ethylkamptothecin (CPT 186);

7-[ 1 (t-butoxyi m i no)ethyl] kam ptotheci n.

Příklad 3

7-benzoylkamptothecin (CPT 170)

Do suspenze kamptothecinu (200 mg, 0,57 mmol) v CH₃COOH (0,8 ml) a vody (0,8 ml) byla přikapávána koncentrovaní kyselina sírová 0,17 ml) a benzaldehyd (304 mg, 2,87 mmol). Reakční směs byla ochlazena až k 0 °C a postupně přidávány 80 % t-butylperoxid (128 mg, 1,14 mmol) a roztok FeSO₄ (317 mg, 1,14 mmol) ve vodě (0,56 ml).

• ·

-47Po míchání při laboratorní teplotě přes noc byla přidána voda, získána sraženina, která byla pod vakuem odfiltrována. Matečný louh byl extrahován methylenchloridem (třikrát); organické fáze byly vysušeny nad Na₂SO₄, odfiltrovány a odpařeny ve vakuu. Takto získaná tuhá látka byla spojena se sraženinou, která byla již dříve oddělena. Produkt byl přečištěn flash chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla, kterou byla směs methylenchloridu a methanolu v poměru 98:2. Bylo získáno 2,9 mg (0,2 mmol) produktu.

Výtěžek: 35 %.

¹H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆) δ = 0,9 (t, 3H H3-18), 1,85 (m, 2-H, H2-19), 5 (2H, H2-5), 5,4 (2H, H2-5), 5,4 (s, 2H, H2-17), 6,6 (s, -1H OH), 7,4 (s,1H, H14), 7,55-7,85 (m, 5H, H1-10, H-11, 3Ar), 7,95-8 (m, 3H-H12 2Ar), 8,3 (dd, 1H-H-9).

Příklad 4

7-[a(hydroxyimino)benzyl]kamptothecin (CPT 185);

Byl připraven roztok 7-benzoylkamptothecinu (50 mg, 0,11 mmol), hydroxylaminhydrochloridu (24 mg, 0,33 mmol), pyridinu (1,4 ml) v 10 ml ethanolu a ponechán 24 hodin pod refluxem. Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Produkt byl přečištěn flash chromatografií na silikagelu za použití směsi methylenchoridu s methanolem v poměru 98:2 jako elučního činidla. Bylo získáno 25 mg žluté tuhé látky.

-48Výtěžek 48 %.

Získaný produkt se skládá ze směsi dvou izomerú syn a anti (izomer A: Rf 0,35; izomer B: Rf 0,31 na silikagelu Měrek 60 F254, eluční činidlo methylenchlorid s methanolem v poměru 95:5).

¹H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆) δ = 0,9 (t, H3-18A + H3-18B), 1,86 (m, H2-19A + H2-19B), 4,8 (m, H2-5A + H2-5B), 5,85 (s, H2-17A + H2-17B), 6,55 (s, OH B), 7,60 (s OH A), 7,35-7,55 (m, Ar A + Ar B + H-10A + H-10B + H-11A + H-11B + H-14A + H-14B), 7,6-7,7 (m, H12A + H-12B).

Příklad 5

7-fenyliminomethylkamptothecin (CPT 154)

100 mg (0,26 mmol) 7-formylkamptothecinu rozpuštěného ve 20 ml methylenchloridu a 25 μΙ (0,26 mmol) anilinu rozpuštěného v 0,5 ml methylenchloridu bylo přidáno do suspenze ytterbium triphlatu (?) (16,5 mg, 0,026 mmol), 10 % mol) v 5 ml methylenchloridu obsahujícího molekulární síto 4A a ponecháno po dobu 3,5 hodiny za laboratorní teploty míchat a potom bylo rozpouštědlo ve vakuu odpařeno. Produkt byl přečištěn flash chromatografií na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 98:2 jako elučního činidla. Bylo získáno 60 mg žluté tuhé látky.

• · • · · · φφφφ φ · φ φ φ · · φφ*·· • ·· φφ ·· ···· • · · · φφφ·· • · · · ···«· ·· ·

-49Výtěžek 51 %.

b.t. 255 - 258 °C.

¹H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆) δ = 0,8 (t, 3H H3-18), 1,75 (m, 2H H2-19), 5,35 (s, 2H, H2-5), 5,5 (s, 2H H2-17), 6,45 (s, -1H OH), 7,25-7,35 (m, 2H H1-Ar + H-14), 7,4-7,5 (m, 4H Ar), 7,75 (1H, ddd, H-11), 7,85 (ddd, 1H-H10), 8,2 (dd, 1H-H-12) 8,9 (dd, 1H, H-9), 9,6 (s, 1H, CH=N).

Za použití stejného postupu byly připraveny tyto sloučeniny:

7-cyklohexyliminomethylkamptothecin (CPT 156);

7-p-nitrofenyliminomethylkamptothecin (CPT 160), b.t. 260-265°C;

7-(4-hydroxy)butyliminomethylkamptothecin (CPT 169), b.t. 140°C;

7-dimethylaminoethyliminomethylkamptothecin (CPT 171);

7-benzyliminomethylkamptothecin (CPT 175);

7-t-butyliminomethylkamptothecin;

7-allyliminomethylkamptothecin;

7-(2-thienyl)iminomethylkamptothecin;

7-(4-amino)butyliminomethylkamptothecin;

7-(3-aminopropyl-4-aminobutyl-3aminopropyl)iminomethylkamptothecin;

• · • · · · ··· • · · · · · · · ·· · • · ·· ··· 99 *· 9 · · 9 9 9 99

9 9 9 9 9 9 99

9 9 9 9 9 9 99 9 ·9

-507-(2-anthrylmethyl)iminomethylkamptothecin;

7-(6-D-galaktosyl)iminomethylkamptothecin;

7-(2-chinolylmethyl)iminomethylkamptothecin.

Příklad 6

7-(benzoyloxyiminomethylmethyl)kamptothecin (CPT 191)

Byl připraven roztok benzoylchloridu (0,16 ml, 1,4 mmol) v 5 ml pyridinu a k němu přidán roztok 500 mg (1,3 mmol) 7hydroxyiminomethylkamptothecinu a ponecháno přes noc míchat za laboratorní teploty. Po odpaření pyridinu pod vakuem byl přidán roztok bikarbonátu sodného a třikrát extrahováno methylenchloridem. Po vysušení síranem sodným a odfiltrování bylo rozpouštědlo odpařeno. Produkt byl přečištěn flash chromatografií na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 98:2 jako elučním činidlem. Bylo získáno 200 mg (0,04 mmol) žluté tuhé látky.

Výtěžek 32 %.

b.t. 210 °C.

¹H-NMR (300 MHz; DMSO-d₆) δ = 0,8 (t, H3-), 1,8 (m, H2), 5,45 (s, H2-5), 5,55 (s, H2-17), 6,6 (s, 1H -OH), 7,3 (s, 1H, H-14), 7,75-8 (m, 5H H-10 + H-11 + 3 Ar), 8,25 (m, 2H, 2Ar), 8,3 (dd, 1H, H-12), 8,75 (dd, 1H, H-9) 10,05 (s, 1H, CH=N).

Za použití stejného postupu byly připraveny tyto sloučeniny:

• · • · · ··· · · »· • ·· · · · · · • · · · · * · · · «

-51 7-p-kyanobenzoyloxyiminomethylkamptothecin;

7-p-nitrobenzoyloxyiminomethylkamptothecin;

7-p-tolylsulfonyloxyiminomethylkamptothecin.

Příklad 7

7-t-butoxyiminomethylkamptothecin N-oxid (CPT 198)

7-t-butoxyiminomethylkamptothecin (30 mg, 0,067 mmol) byl rozpuštěn v kyselině octové (5,2 ml) a přidán 30 % peroxid vodíku. Směs byla zahřívána při 70 - 80 °C po dobu 9 hodin tak, aby se její objem zmenšil přibližně na třetinu a zbytek byl nalit do ledové vody. Vzniklá sraženina byla odsáta a přečištěna flash chromatografií za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 1:1 jako elučního činidla a získán tak 7-t-butoxyiminomethylkamptothecin N-oxid jako žlutý prášek (15,5 mg). Výtěžek 50 %.

b.t. 185- 190°C.

¹H-NMR (DMSO-de) δ = 0,87 (t, J=7 Hz, H₃-18), 1,48 (s, 3 - CH₃), 1,76-1,95 (m, H₂-19), 5,37 (s, H₂-5), 5,42 (s, H₂ -17), 6,60 (s, -OH), 7,85-8,00 (m, H10; H-11), 8,15 (s, H-14), 8,65-8,75 (m, H-9; H-12),

9,2 (s, CH=N).

<· · ·· · ·· ·· • ♦ · · · · · · · · · • · ·· ··· ·· • ·· · · ·· · · · · ···· ··· · · • · · · ···♦· ·· ·

Za použití stejného postupu byly připraveny tyto sloučeniny:

7-methoxyiminomethylkamptothecin N-oxid (CPT 208) ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0,87 (t, J=7,35 Hz, H₃-18), 1,78-1,93 (m. H₂19), 4,12 (s, -OCH₃), 5,35 (s, H₂-5), 5,43 (s, H₂ -17), 6,54 (s, -OH), 7,84-8,00 (m, H10; H-11), 8,11 (s, H-14), 8,68-8,73 (m, H-9; H-12), 9,21 (s, CH=N).

7-(karboxydimethylmethoxy)iminomethylkamptothecin N-oxid

7-(hydroxymethyldimethylmethoxy)iminomethylkamptothecin N-oxid.

Příklad 8

7-p-nitrobenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 177)

K suspenzi 7-hydroxyiminomethylkamptothecinu (40 mg, 0,102 mmol) a uhličitanu sodného (10,9 mg, 0,102 mmol) v ethanolu (4 ml) byl přidán 4-nitrobenzylbromid (22 mg, 0,102 mmol) a směs byla refluxována po dobu 2,5 hodiny. Rozpouštědlo bylo za sníženého tlaku odpařeno a zbytek přečištěn flash chromatografií za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 3:7 jako elučního činidla a získáno 10,5 mg 7-p-nitrobenzyloxyiminomethylkamptothecinu.

Výtěžek 20 %.

• · • · · · · · · • · · · · · ♦ · 4» > «

-53¹H-NMR (DMSO-de) δ = 0,88 (t, J=7 Hz, H₃-18), 1,80-1,92 (m, H₂19), 5,23 (s, CH₂O), 5,45 (s, H₂-5), 5,57 (s, H₂ -17), 6,55 (s, -OH), 7,35 (s, H-14), 7,75-7,95 (m, 2Ar; H-10; H-11), 8,2-8,4 (m, 2Ar; H12), 8,65 (dd, J=8,46 Hz; J=1,47 Hz, H-9), 9,50 (s, -CH=N).

Za použití stejného postupu byly připraveny tyto sloučeniny:

7-p-methylbenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 178)

b.t. 203 °C

7-pentafluorbenzyloxyiminomethylkamptothecin (CPT 182)

b.t. 200 °C.

Claims (16)

1. Patentové nároky

   1. Sloučeniny obecného vzorce (I):

   kde: R1 je skupina -C(R₅)=N-O(_n)R₄, kde R₄ je C₁ - C₈ lineární nebo rozvětvená alkylová nebo Cí - C₈ lineární nebo rozvětvená alkenylová skupina nebo C₃ - C₁₀ cykloalkylová nebo (C₃ - C₁₀) cykloalkyl - (Cí - C₈) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina, nebo C₆-Ci₄ arylová, nebo (C₆-C₁₄) aryl - (Ci-C₈) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina nebo heterocyklická nebo heterocyklo-ÍCrCs) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina, kde jmenovaná heterocyklická skupina obsahuje alespoň jeden heteroatom vybíraný ze skupiny sestávající z dusíkového atomu případně substituovaného (Ci-C₈) alkylovou skupinou a/nebo kyslíku a/nebo síry; jmenované alkylové, alkenylové, cykloalkylové, cykloalkylal kýlové, arylové, aryl-arylové, heterocyklické nebo heterocykloalkýlové skupiny jsou případně substituovány jednou nebo více skupinami vybíranými ze skupiny sestávající z: halogenu, hydroxylu, ketoskupiny, C_rC₈ alkylu, C_r C₈ alkoxylu, fenylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, -NR₆R₇, kde R₆ a R₇ jsou stejné nebo různé skupiny, a to vodík, (Cj-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl; -COOH skupina nebo jejich farmaceuticky

   -55přijatelný ester; nebo -CONR₈R₉ skupina, kde R₈ a R₉ jsou stejné nebo různé skupiny, a to vodík, (C_rC₈) lineární nebo rozvětvený alkyl, fenyl; nebo

   R₄ je (C₆.Cio) aroylová nebo (C₆-C₁₀) arylsulfonylová skupina, případně substituovaná jednou nebo více skupinami vybíranými ze skupiny sestávající z: halogenu, hydroxylu, Cj-C₈ lineárního nebo rozvětvěného alkylu, CpCg lineárního nebo rozvětveného alkoxylu, fenylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, -NR₁₀Rn, kde R₁₀ a Rn jsou stejné nebo různé, a to vodík, CrC₈ lineární nebo rozvětvený alkyl; nebo

   R₄ je polyaminoalkylová skupina obecného vzorce -(CH₂)_m-NR₁₂(CH₂)p-NR₁₃-(CH2)q-NH2, kde map jsou celá čísla od 2 do 6 a q je celé číslo od 0 do 6 včetně těchto mezí a R₁₂ a R₁₃ je (C_rC₈) lineární nebo rozvětvená alkylová skupina; nebo

   R₄ je glykosylová skupina vybíraná ze skupiny sestávající ze 6-Dgalaktosylu, 6-D-glukosylu, D-galaktopyranosylu, a kde je glykosylová skupina případně chráněna vhodnou ketalovou skupinou;

   n je číslo 1;

   R₅ je vodík, Ci-C₈ lineární nebo rozvětvený alkyl C_rC₈ lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₁₀ cykloalkyl, (C₃-C₁₀) cykloalkyl(C-|-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl, C₆-C₁₄ aryl-, C₆-C₁₄ aryl(C-i-C₈) lineární nebo rozvětvený alkyl;

   R₂ a R₃ jsou stejné nebo různé a to vodík, hydroxyl, Cj-Cs lineární nebo rozvětvený alkoxyl;

   jejich Nj-oxidy, jejich jednotlivé izomery, zvláště syn a anti izomery skupiny -C(R₅)=N-O(_n)R₄, jejich možné enantiomery,

   -56* ♦ · ♦ · · · » ·· · • · «· · · · ·« • · · ·· · · · · ·9

   9 9 9 9 9 9 9 99

   9· · · · · · 9 *9 9 · diastereoizomery a odpovídající směsi a jejich farmaceuticky přijatelné sole.
2. 2. Sloučeniny podle nároku 1 vybírané ze skupiny sestávající z:

   • 7-methoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-methoxyiminomethyl-10-hydroxykamptothecinu;

   • 7-(tercbutoxykarbonyl-2-propoxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-ethoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-isopropoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-(2-methylbutoxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-t-butoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-t-butoxyiminomethyl-10-hydroxykamptothecinu;

   • 7-t-butoxyiminomethyl-10-methoxykamptothecinu;

   • 7-(4-hydroxybutoxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-trifenylmethoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-karboxymethoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-(2-amino)ethoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-(2-N,N-dimethylamino)ethoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-allyloxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-cyklohexyloxyiminomethylkamptothecinu ·· ·· · ·· ·· • 4 · · · · · ·φ·· • · ·· · · · 09

   9 9 9 · 9 9 9·9 ·· 9 9 99 9 99« 9 • 7-cyklohexylmethoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-cyklooktyloxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-cyklooktylmethoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-benzyloxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-[(1-benzyloxyimino)-2-fenylethyl]kamptothecinu;

   • 7-(1-benzyloxyimino)ethylkamptothecinu;

   • 7-fenoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-(1-t-butoxyimino)ethylkamptothecinu;

   • 7-p-nitrobenzyloxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-p-methylbenzyloxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-pentafluorbenzyloxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-p-fenylbenzyloxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-(2-(2,4-difluorfenyl)etoxy]iminomethylkamptothecinu;

   • 7-(4-t-butylbenzyloxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-(1-adamantyloxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-(1-adamantylmethoxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-(2-naftyloxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-(9-anthrylmethoxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-oxiranylmethoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-(6-uracyl)methoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-[2-(1-uracyl)ethoxy]iminomethylkamptothecinu;

   • 7-(4-pyridyl)methoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-(2-thienyl)methoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-[(N-methyl)-4-piperidinyl]methoxyiminomethylkamptothecinu;

   • 7-[2-(4-morfolinyl]ethoxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-(benzoyloxyiminomethyl)kamptothecinu;

   • 7-[(1-hydroxyimino)-2-fenylethyl]kamptothecinu;

   • 7-t-butyloxyiminomethylkamptothecin N-oxidu;

   • 7-methoxyiminomethylkamptothecin N-oxidu.
3. 3. Sloučeniny podle nároku 1 vybírané ze skupiny sestávající ze:

   • 7-[N-(4-aminobutyl)-2aminoethoxyjiminomethylkamptothecinu;

   • 7-[N-[N-(3-amino-1 -propyl)-4-amino-1 -butyl]-3aminopropyljiminomethylkamptothecinu;
4. 4. Sloučeniny podle nároku 1 vybírané ze skupiny sestávající ze:

   • 7-(1,2:3,4-di-O-isopropyliden-Dgalaktopyranosyloxy)iminomethylkamptothecinu;

   • 7-(6-D-galaktosyloxy)iminomethylkamptothecinu;

   ·· ·♦ a a a a a a a · • a 99 ·· 9 9

   -59• 7-(6-D-glukosyloxy)iminomethylkamptothecinu.
5. 5.
6. 6.
7. 7.

   • · · 9 • a 9· • ·99 • · 9a

   9 9 9a

   Sloučenina podle nároku 2, kterou je iminomethylkamptothecin.

   Sloučenina podle nároku 2, kterou je iminomethylkamptothecin.

   7-(t-butoxy)

   7-benzyloxy

   Postup přípravy sloučenin podle nároku 1 vyznačující se tím, že n je 1 a R₄ arylsulfonylu, vzorce (la) má vpředu uvedený význam s výjimkou aroylu a vyznačující se tím, že se na sloučeniny obecného kde R! je skupina -C(R₅)=OR a R₅ má vpředu uvedený význam, a kde R₂ a R₃ mají vpředu uvedený význam, působí sloučeninou obecného vzorce (lla) R₄O-NH₂,kde R₄ má vpředu uvedený význam, za vzniku sloučenin obecného vzorce (I), kde R·, je skupina -C(R₅)=N-OR₄, kde R₄ má vpředu uvedený význam s výjimkou aroylu a arylsulfonylu.
8. 8. Postup podle nároku 7 vyznačující se tím, že molární poměr mezi sloučeninou obecného vzorce (la) a sloučeninou obecného vzorce (lla) je mezi 1:3 a 3:1.
9. 9. Postup přípravy sloučenin podle nároku 1, kde n je 1 a R₄ má vpředu uvedený význam s výjimkou aroylu a arylsulfonylu vyznačující se tím, že se na sloučeniny obecného vzorce (Ia) kde R-ι je skupina -C(R₅)=N-OH a R₅ má vpředu uvedený význam, a kde R₂ a R₃ mají vpředu uvedený význam, působí halogenidem R₄-X, kde X je halogen a kde R₄ má vpředu uvedený význam, za vzniku sloučenin obecného vzorce (I), kde Ri je skupina -C(R₅)=N-OR₄, přičemž R₄ má vpředu uvedený význam s výjimkou aroylu a arylsulfonylu.
10. 10. Postup přípravy sloučenin podle nároku 1, kde n je 1 a R₄ je aroyl nebo arylsulfonyl vyznačující se tím, že se na sloučeniny obecného vzorce (Ia) ι· o · r*·· ···· · · · · ·* · • · ·· ··« 99

    9 9 9 9 9 9 9 9 9 99

    9 9 9 9 9 9. 9 99

    99 99 999 9999 9 kde Ri je skupina -C(R₅)=N-OH a R₅ má vpředu uvedený význam, a kde R₂ a R₃ mají vpředu uvedený význam působí acylchloridem R₄-COCI, kde R₄ je aroyl nebo arylsulfonyl vpředu uvedeného významu za vzniku sloučenin obecného vzorce (I), kde R-ι je skupina -C(R₅)=N-OR₄ , kde R₄ je aroyl nebo arylsulfonyl.
11. 11. Sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 jsou léčiva.
12. 12. Farmaceutické přípravky vyznačující se tím, že obsahují terapeuticky účinná množství alespoň jedné ze sloučenin podle nároků 1 až 6 ve směsi s farmaceuticky přijatelnými vehikuly nebo excipienty.
13. 13. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství alespoň jedné sloučeniny podle nároků 1 až 6 s přimíšenými farmaceuticky přijatelnými vehikuly nebo excipienty, případně v kombinaci s dalšími účinnými složkami.
14. 14. Farmaceutický přípravek podle nároku 13 vyznačující se tím, že jmenovaná další účinná složka je protinádorová.

    15. Použití sloučeniny podle nároků 1 v az 6 k přípravě léčiva vhodného k léčbě nádorů. 16. Použití sloučeniny podle nároků 1 až 6 k přípravě léčiva vhodného k léčbě virových infekcí. 17. Použití sloučeniny podle nároků 1 až 6 k přípravě léčiva

    majícího účinky proti plasmodium falciparum.
15. 18. Použití sloučenin obecného vzorce (Ia) « · *♦*· « 9 ·9 • 999 • · 99 • · ·9 «9·· kde: R1 je skupina -C(R₅)=N-OR₄, kde R₄ je vodík nebo (C₆-C₁₀) aroylová či arylsulfonylová skupina substituovaná případně jednou nebo více skupinami vybíranými ze skupiny sestávající z: halogenu, hydroxylu, C_rC₈ lineárního nebo rozvětveného alkylu, CrC₈ lineárního nebo rozvětveného alkoxylu, fenylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, -NR₁₀Rn, kde R₁₀ a Rn jsou stejné nebo různé skupiny, mezi něž patří vodík, (C^-Cs) lineární nebo rozvětvený alkyl;

    R₂ a R₃ jsou stejné nebo různé skupiny, mezi něž patří: vodík, hydroxyl, C_rC₈ lineární nebo rozvětvený alkoxyl;

    jako meziproduktů postupu podle nároku 10.
16. 19. Využití sloučenin obecného vzorce (Ia) kde Ri je skupina -C(R₅)=O a R₅ má vpředu uvedený význam, a kde R₂ a R₃ mají vpředu uvedený význam jako meziprodukty postupu podle nároku 7.