CZ105396A3 - Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process - Google Patents

Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process Download PDF

Info

Publication number
CZ105396A3
CZ105396A3 CZ961053A CZ105396A CZ105396A3 CZ 105396 A3 CZ105396 A3 CZ 105396A3 CZ 961053 A CZ961053 A CZ 961053A CZ 105396 A CZ105396 A CZ 105396A CZ 105396 A3 CZ105396 A3 CZ 105396A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
subtilisin
protease
group
enzyme
protease enzyme
Prior art date
Application number
CZ961053A
Other languages
English (en)
Inventor
Andre Baeck
Chanchal Kumar Ghosh
Thomas Paul Graycar
Richard Ray Bott
Lori Jean Wilson
Philip Frederick Brode
Bobby Lee Barnett
Donn Nelton Rubingh
Original Assignee
Procter & Gamble
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Procter & Gamble filed Critical Procter & Gamble
Publication of CZ105396A3 publication Critical patent/CZ105396A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
    • A61K8/41—Amines
    • A61K8/416—Quaternary ammonium compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A61K8/22—Peroxides; Oxygen; Ozone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A61K8/23—Sulfur; Selenium; Tellurium; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A61K8/24—Phosphorous; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
    • A61K8/42—Amides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/46—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur
    • A61K8/463—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur containing sulfuric acid derivatives, e.g. sodium lauryl sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/46—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur
    • A61K8/466—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur containing sulfonic acid derivatives; Salts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4906—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/66—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • A61Q11/02—Preparations for deodorising, bleaching or disinfecting dentures
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/10—Washing or bathing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
    • G—PHYSICS
    • G06—COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
    • G06Q—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR ADMINISTRATIVE, COMMERCIAL, FINANCIAL, MANAGERIAL OR SUPERVISORY PURPOSES; SYSTEMS OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR ADMINISTRATIVE, COMMERCIAL, FINANCIAL, MANAGERIAL OR SUPERVISORY PURPOSES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • G06Q40/00—Finance; Insurance; Tax strategies; Processing of corporate or income taxes
    • G06Q40/04—Trading; Exchange, e.g. stocks, commodities, derivatives or currency exchange
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/20—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of the composition as a whole
    • A61K2800/22—Gas releasing
    • A61K2800/222—Effervescent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/86—Products or compounds obtained by genetic engineering

Description

Tento vynález se týká čistících prostředků, prostředků pro čištění látek, prostředků pro mytí nádobí, prostředků pro mytí, způsobu čištění látek, způsobu mytí nádobí a způsobu mytí. Tento vynález se tedy týká různých čistících prostředků, které obsahují nové proteasové enzymy, které jsou variantami karbony.u vé hydrolasy.
Dosavadní stav techniky
Tato přihláška je částečným pokračováním USA patentové přihlášky č. 08/136 797, podané 14. října 1993, a USA patentové přihlášky č. 08/237 938, podané 2. května 1994, které jsou zde celé uvedeny jako citace.
Enzymy tvoří největší skupinu přirozeně se vyskytujících proteinů. Každá skupina enzymů obvykle katalýzuje (urychluje reakce bez toho, aby byla spotřebovávána) jiný druh chemické reakce. Jedna skupina enzymů, známá jako proteasy, je známa pro svoji schopnost hydrolyzovat (rozkládat sloučeninu na dvě nebo více jednodušších sloučenin s tím, že se přijímá H a OH část molekuly vody na stranách chemické vazby, která je štěpena) ji-* né proteiny. Tato schopnost hydrolyzovat proteiny se s výhodou provádí zahrnutím přirozeně se vyskytujících a synteticky při- pravených proteás jako přísad do pracích detergentních prostředků. Mnoho skvrn na oděvech je proteinového původu a proteasy se širokou specifičností mohou podstatně zlepšit odstraňování těchto skvrn.
Naneštěstí hladina účinnosti těchto proteinů v jejich přirozeném bakteriálním prostředí se často nepřenáší na relativně nepřirozené prací prostředí. Konkrétně takové vlastnosti prote2 as, jako je tepelná stabilita, stabilita při různém pH, stabilita při oxidaci a substrátová specifičnost, nejsou nutně optimalizovány pro použití mimo přirozené prostředí enzymu.
Aminokyselinová sekvence proteasového enzymu určuje vlastnosti proteas. Změna aminokyselinové sekvence proteasy může měnit vlastnosti enzymu do různého stupně nebo dokonce může enzym deaktivovat, podle umístění, povahy a/nebo velikosti změny aminokyselinové sekvence. Existuje několik přístupů pro měnění přírodní aminokyselinové sekvence proteas při pokusech zlepšit jejich vlastnosti s cílem zvýšit účinnost proteas při čištění, jako je tomu v pracím prostředí. Mezi tyto přístupy patří měnění aminokyselinové sekvence tak, aby se zvýšila tepelná stabilita a aby se zlepšila stabilita vůči oxidaci za různých podmínek.
Přes různé přístupy popsané v oblasti techniky existuje stále ještě neustálá potřeba nových efektivních variant proteas užitečných pro čištění rozmanitých povrchů. Předmětem předloženého vynálezu je tedy získat čistící prostředky, které obsahují proteasové enzymy, které jsou variantami karbonylových hydrolas se zlepšenou proteolytickou aktivitou, substrátovou specifičností, stabilitou a/nebo zlepšenými vlastnostmi provedení. Tyto a další předměty budou zřejmé z podrobného popisu, který následuje.
Podstata vynálezu
Tento vynález se týká čistících prostředků, které obsahují:
a) efektivní množství proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje, která je odvozena náhradou více zbytků aminokyselin prekursorové karbonylové hydrolasy různými aminokyselinami, v nichž mnohé aminokyselinové zbytky nahrazené v prekursorovém enzymu odpovídají poloze +76 v kombinaci s jedním nebo více následujícími zbytky: +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/ /nebo +274, kde číslo polohy odpovídá přirozeně se vyskytující inu subtilisinu z Bacillus amyloliquefaciens nebo ekvivalentním aminokyselinovým zbytkům v jiných karbonylových hydrolasách nebo subtilisinech (jako je Bacillus lentus subtilisin) a
b) jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s proteasovým enzymem.
Předložený vynález se týká také způsobů čistění jednotlivých položek, které potřebují vyčistit, tak, že se tato položka uvede do kontaktu s proteasovým enzymem, kterým je zde popsaná varianta karbonylové hydrolasy. Tento vynález tedy zahrnuje způsob čištění látek tím, že se daná látka uvede do kontaktu, s výhodou mícháním, s vodným roztokem obsahujícím uvedený pro teasový enzym. Tento způsob se může provádět za teplot pod 60 °C, ale je ovšem zcela účinný při teplotách praní až do teploty varu. Předložený vynález se týká také způsobu mytí nádobí tak, že se nádobí, které je potřeba umýt, uvede do kontaktu se zde popsaným proteasovým enzymem. Předložený vynález se týká také způsobu osobního mytí, při čemž tento způsob zahrnuje uvedeni těla člověka nebo nižšího živočicha, kteří potřebují umýt, do kontaktu se zde popsaným proteasovým enzymem.
V další části popisu je uveden stručný popis obrázků.
Obrázky 1 A až C ukazují sekvenci DNA a aminokyselin Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu a částečnou restrikční mapu tohoto genu (sekvence id. č. 6).
Obrázek 2 ukazuje zachované zbytky aminokyselin subtilisinů z Bacillus amyloliquefaciens (BPN') a Bacillus lentus (přírodního typu).
Obrázek 3A a 3B ukazuje sekvenci aminokyselin tří subtilisnů. Horní řádka ukazuje sekvenci aminokyselin subtilisinu z
Bacillus amyloliquefaciens (někdy také nazývaného BPN') (sekv.
id. č. 7) . Druhá řádka ukazuje sekvenci aminokyselin subtilisinu z Bacillus subtilis (sekvence id. č. 8). Třetí řádka ukazuje sekvenci aminokyselin subtilisinu z B. licheniformis (sekvence id. č. 9) . Čtvrtá řádka ukazuje sekvenci aminokyselin subtilisinu z Bacillus lentus (v PCT WO 89/06276 také označovaný jako subtilisin 309) (sekvence id. č. 10) . Symbol * označuje nepřítomnost specifických zbytků aminokyselin při srovnání se subtilisinem BPN'.
Obrázek 4 ukazuje konstrukci plasmidu GGA274.
Obrázek 5 ukazuje konstrukci GGT274, který je meziproduktem některých expresních plasmidů použitých v této přihlášce.
Obrázky 6A a 6B ukazují sekvenci DNA a aminokyselin subtilisinu z Bacillus lentus (sekv. id. č. 11) . Maturovaný subtilisinový protein je kodován kodony začínajícími na kodonu GCG (334 až 336) odpovídajícího Ala.
Obrázky 7A a 7B ukazují sekvenci DNA a aminokyselin výhodného provedení podle vynálezu (N76D/S103A/V1041) (sekv. id. č. 12). DNA na tomto obrázku byla modifikována způsoby popsanými pro kódování aspartátu v poloze 76, alaninu v poloze 103 a isoleucinu v poloze 104. Maturovaný protein varianty subtilisinu je kodován kodony, které začínají kodonem GCG (334 až 336) odpovídajícím Ala.
Obrázek 8 ukazuje konstrukci vektoru pBCDAICAT.
Obrázek 9 popisuje konstrukci vektoru pUCCATFNA.
Obrázek 10 ukazuje stabilitu výhodného enzymového mutantu při srovnání s přírodním typem v kapalném detergentním prostředku .
V další části tohoto popisu jsou popsány proteasové enzymy.
Tento vynález zahrnuje proteasové enzymy, které jsou nepřirozeně se vyskytujícími variantami karbonylové hydrolasy s různými vlastnostmi týkajícími se proteolytické aktivity, stability, subtrátové specifičnosti, pH profilu a/nebo provedení, při srovnání s prekursorovou karbonylovou hydrolasou, od níž je odvozena varianta sekvence aminokyselin. Prekursorovou karbonylovou hydrolasou může být přirozeně se vyskytující karbonylová hydrolasa nebo rekombinantní hydrolasa. Takové varianty karbonylové hydrolasy mají sekvenci aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena nahrazením více zbytků aminokyselin prekursorové karbonylové hydrolasy různými aminokyselinami. Tyto mnohé aminokyselinové zbytky prekursorovéh© enzymu odpovídají poloze +76 v kombinaci s jedním nebo více následujícími zbytky: +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274, kde číslo polohy odpovídá přirozeně se vyskytujícímu subtilisinu z Bacillus amyloliquefaciens nebo ekvivalentním aminokyselinovým zbytkům v jiných karbonylových hydrolasách nebo subtilisinech, jako je Bacillus lentus subtilisin.
Varianty karbonylové hydrolasy, které jsou proteasovým enzymem užitečným v prostředcích podle předloženého vynálezu, zahrnují náhradu zbytky aminokyseliny v poloze +76 v kombinaci s jednou nebo více dalšími modifikacemi. Varianty proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu zahrnují substituci, deleci nebo inserci zbytků aminokyselin v následujících kombinacích: 76/99, 76/101, 76/103, 76/104, 76/107, 76/123, 76/99/101, 76/99/103, 76/99/104, 76/101/103, 76/101/104, 76/ /103/104, 76/104/107, 76/04/123, 76/107/123, 76/99/101/103, 76/99/101/104, 76/99/103/104, 76/101/103/104, 76/103/104/123, 76/104/107/123, 76/99/101/103/104, 76/99/103/104/123, 76/99/ /101/103/104/123, 76/103/104/128, 76/103/104/260, 76/103/104/ /265, 76/103/104/197, 76/103/104/105, 76/103/104/135, 76/103/ /104/126, 76/103/104/107, 76/103/104/210, 76/103/104/126/265 a 76/103/104/222. Nejvýhodnější enzymové varianty podle předloženého vynálezu zahrnují substituci, deleci nebo inserci zbytku aminokyseliny v následující kombinaci zbytků: 76/99, 76/104, 76/99/104, 76/103/104, 76/104/107, 76/101/103/104, 76/99/101/ /103/104 a 76/101/104 B. amyloliquefaciens subtilisinu.
Sekvence variantní DNA kóduj ící takovou karbonylovou hydrolasu nebo varianty subtilisinu jsou odvozeny od sekvence prekursorové DNA, která kóduje přirozeně se vyskytující nebo rekombinantní prekursorový enzym. Sekvence variantní DNA jsou odvozeny modifikováním sekvence prekursorové DNA, takže kódují substituci jednoho nebo více specifických zbytků aminokyselin kódovaných sekvencí prekursorové DNA odpovídající polohám 76, 99, 101, 103, 104, 107, 123, 27, 105, 109, 126, 128, 135, 156, 166, 195, 197, 204, 206, 210, 216, 217, 218, 222, 260, 265 a/nebo 274 v Bacillus amyloliquefaciens nebo jakoukoliv jejich kombinaci. I když zbytky aminokyselin zde uvedené modifikace jsou identifikovány podle očíslování aplikovatelného na Bacillus amyloliquefaciens (což je konvenční způsob identifikování poloh zbytků ve všech subtilisinech), výhodná sekvence prekursorové DNA užitečné v předloženém vynálezu znamená sekvenci DNA Bacillus lentus, jak je uvedena na obrázku 6 (sekvence id. č. 11) .
Tyto sekvence variant DNA kódují inserci nebo substituci zbytku aminokyseliny v poloze 76 v kombinaci s jednou nebo více dalšími modifikacemi. Sekvence variant DNA s výhodou kódují substituci nebo inserci zbytků aminokyselin v následujících kombinacích: 76/99, 76/101, 76/103, 76/104, 76/107, 76/123. 76/99/101, 76/99/103, 76/99/104, 76/101/103, 76/101/104, 76/ /103/104, 76/104/107, 76/104/123, 76/107/123, 76/99/101/103, 76/99/101/104, 76/99/103/104, 76/101/103/104, 76/103/104/123, 76/104/107/123, 76/99/101/103/104, 76/99/103/104/123, 76/99/ /101/103/104/123, 76/103/104/128, 76/103/104/260, 76/103/104/ /265, 76/103/104/197, 76/103/104/105, 76/103/104/135, 76/103/ /104/126, 76/103/104/107, 76/103/104/210, 76/103/104/126/265 a/nebo 76/103/104/222. Nejvýhodnější sekvence variant DNA kódují modifikaci následujících kombinací zbytků: 76/99, 76/104, 76/99/104, 76/103/104, 76/104/ /107, 76/101/103/104, 76/99/ /101/103/104 a 76/101/104. Tyto sekvence rekombinantní DNA kódují varianty karbonylové hydrolasy s novou sekvencí aminokyselin a obecně alespoň jednu vlastnost, která je podstatně odlišná od stejné vlastnosti enzymu kódovaného sekvencí DNA prekursorové karbonylové hydrolasy. Mezi tyto vlastnosti patří vlastnosti týkající se proteolytické aktivity, subtrátové specifičnosti, stability, zrněného pH profilu a/nebo zlepšeného provedení.
Proteasové enzymy, které jsou zde užitečné, zahrnují substituci kterékoliv z 19 přirozeně se vyskytujících L-aminokyselin v navržených polohách zbytků aminokyselin. Tyto substituce lze udělat v jakémkoliv prekursorovém subtilisinu (prokaryotický, eukaryotický, savčí atd.). V této přihlášce se na různé aminokyseliny odkazuje obvyklým jedno- nebo tří-písměnkovým kódem. Tyto kódy jsou identifikovány v knize Dále J.W.: Molecular Genetics of Bacteria”, John Wiley and Sons, Ltd., Appendix B (1989) .
Substituce se s výhodou provádí v každé z uvedených poloh zbytků aminokyselin, ale bez omezení jenom na tyto: substituce v poloze 76 zahrnující D, Η, E, G, F, K, P a N, substituce v poloze 99 zahrnující D, T, N, Q, G a S, substituce v poloze 101 zahrnující G, D, K, L, A, E, S a R, substituce v poloze 103 zahrnující Q, T, D, Ε, Y, K, G, R, S a A, substituce v poloze 104 zahrnující všech 19 přirozeně se vyskytujících aminokyselin, substituce v poloze 107 zahrnující V, L, Μ, Y, G, E, F, T, S, A, N a I, substituce v poloze 123 zahrnující N, T, I, G, A, C a S, substituce v poloze 27 zahrnující K, N, C, V a T, substituce v poloze 105 zahrnující A, D, G, R a N, substituce v poloze 107 zahrnující A, L, V, Y, G, F, T, S a A, substituce v poloze 109 zahrnující S, K, R, A, N a D, substituce v poloze 126 zahrnující A, F, I, V a G, substituce v poloze 128 zahrnující G, L a A, substituce v poloze 135 zahrnující A, F, I, S a V, substituce v poloze 156 zahrnující D, E, A, G, Q a K, substituce v poloze 166 zahrnující všech 19 přirozeně se vyskytujících aminokyselin, substituce v poloze 195 zahrnující E, sub8 stituce v póze 197 zahrnující E, substituce v poloze 204 zahrnující A, G, C, S a D, substituce v poloze 206 zahrnující L, Y, N, D a E, substituce v poloze 210 zahrnující L, I, S, C a
F, substituce v poloze 216 zahrnující V, Ε, T a K, substituce v poloze 217 zahrnující všech 19 přirozeně se vyskytujících aminokyselin, substituce v poloze 218 zahrnující S, A, G, Ta V, substituce v poloze 222 zahrnující všech 19 přirozeně se vyskytujících aminokyselin, substituce v poloze 260 zahrnující Ρ, N, G, A, S, C, K a D, substituce v poloze 265 zahrnující N,
G, A, S, C, K, Y a H a substituce v poloze 274 zahrnující A a S. Specificky výhodná (výhodné) aminokyselina (aminokyseliny) pro substituování v každé z těchto poloh je (jsou) navržena (navrženy) v tabulce I. I když jsou v tabulce I uvedeny specifické aminokyseliny, mělo by tomu být porozuměno tak, že uvedené zbytky lze substituovat jakoukoliv aminokyselinou.
Tabulka I
zbytek aminokyseliny výhodná aminokyselina, která se substituuje/vkládá
+76 D,H
+99 D,T,N,G
+101 R,G,D,K,L,A,E
• +103 A,Q,T,D,E,Y,K,G,R
+104 I,Y,S,L,A,T,G,F,M,W,D,V,N
+107 V,L,Y,G,F,T,S,A,N
+123 S,T,I
+27 K
+105 A,D
+109 S,K,R
+126 A,I,V,F
+128 G,L
+135 I,A,S
+ 156 E,D,Q
+166 D,G,Ε,Κ,N,A,F,I,V,L
+195 E
Tabulka I (pokračování)
zbytek aminokyseliny výhodná aminokyselina, která se substituuje/vkládá
+197 E
+204 A,G,C
+206 L
+210 I,S,C
+216 V
+217 H,I,Y,C,A,G,F,S,N,E,K
+218 S
+222 * A,Q,S,C,I,K
+260 P,A,S,N,G
+265 N,A,G,S
+274 A,S
Tyto proteasové enzymy obsahující in vitro mutace v B. lentus subtilisinu na zbytku aminokyselin ekvivalentní +76 v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu produkuje subtilisinové varianty vykazující změněnou stabilitu (např. modifikovanou autoproteolytickou stabilitu) proti prekursorovým subtilisinfim (viz tabulky IV a VI).
Také in vitro mutace na zbytcích ekvivalentních +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu samotném, ve vzájemné kombinaci nebo v jakékoliv kombinaci s +76 mutacemi, produkuje varianty subtilisinu vykazující změněné vlastnosti, jako změněnou proteolytickou aktivitu, změněnou tepelnou stabilitu, změněný pH profil, změněnou substrátovou specifičnost a/nebo změněné provedení.
Karbonylové hydrolasy znamenají proteasové enzymy, které hydrolyzují sloučeniny obsahující vazby obecného vzorce o
II c-x , v němž X znamená atom kyslíku nebo dusíku. Patří mezi ně přirozeně se vyskytující karbonylové hydrolasy a rekombinantní karbonylové hydrolasy. Mezi přirozeně se vyskytující karbonylové hydrolasy principielně patří hydrolasy, např. peptidové hydrolasy, jako jsou subtilisiny nebo metalloproteasy. Mezi peptidové hydrolasy patří α-aminoacetylpeptidová hydrolasa, peptidylaminokyselinová hydrolasa, acylaminová hydrolasa, serinová karboxypeptidasa, metallokarboxypeptidasa, thiolproteinasa, karboxylproteinasa a metalloproteinasa. Patří sem serinové, metallo-, thio- a kyselinové proteasy stejně jako endo- a exo-proteasy.
Rekombinantní karbonylové hydrolasa znamená takovou karbonylovou hydrolasu, v níž je sekvence DNA kódující přirozeně se vyskytující karbonylové hydrolasy modifikována tak, že produkuje sekvenci mutované DNA, která kóduje substituci, inserci nebo deleci jedné nebo více aminokyselin v sekvenci aminokyselin karbonylové hydrolasy. Vhodné způsoby modiikace jsou popsány zde a v USA patentu č. 4 760 025 (Re 34 606), USA patentu č. 5 204 015 a USA patentu č. 5 185 258, které jsou zde zahrnuty jako odkazy.
Subtilisiny jsou bakteriální nebo plísňové karbonylové hydrolasy, které obvykle štěpí peptidové vazby proteinů nebo peptidů. Pojem subtilisin tak, jak se zde používá, znamená přirozeně se vyskytující subtilisin nebo rekombinantní subtilisin. Je známo, že řady přirozeně se vyskytujících subtilisinů jsou produkovány a často sekretovány různými mikrobiálními druhy. Sekvence aminokyselin členů těchto sérií nejsou zcela homologní. Subtilisiny v těchto sériích však vykazují stejný nebo podobný typ proteolytické aktivity. Tyto skupiny serinových proteas sdílejí obvyklou sekvenci aminokyselin definující katalytickou triadu, která je odlišuje od skupiny serinových proteas souvisejících s chymotrypsinem. Jak subtilisiny tak serinové proteasy související s chymotrypsinem mají katalytickou triádu obsahující aspartát, histidin a serin. U proteás souvisejících se subtilisinem je relativní pořadí těchto aminokyselin, čteno • od aminového ke karboxylovému konci, aspartát-histidin-serin. U proteás souvisejících s chymotrypsinem je však relativní pořadí histidin-aspartát-serin. Subtilisin zde uvedený se tedy týká serinových proteás, které mají katalytickou triadu proteás souvisejících se subtilisinem. Mezi příklady patří, ale nejsou na ně omezeny, subtilisiny uvedené zde na obrázku 3.
Rekombinantní subtilisin znamená subtilisin, v němž sekvence DNA kódující subtilisin je modifikována tak, že produkuje sekvenci variantní (nebo mutantní) DNA, která kóduje substituci, deleci nebo inserci jedné nebo více aminokyselin v sekvenci aminokyselin přirozeně se vysytujícího subtilisinu. Mezi vhodné způsoby, kterými se tato modifikace připravuje a které mohou být kombinovány s těmi, které jsou zde popsány, patří způsoby popsané v USA patentu 4 760 025 (RE 34 606) , USA patentu číslo • 5 204 015 a USA patentu 5 185 258.
Nelidské karbonylové hydrolasy a DNA kódující tyto hydrolasy mohou být získány z mnoha prokaryotických a eukaryotických organismů. Mezi vhodné příklady prokaryotických organismů patří gramnegativní organismy, jako je E. coli nebo Pseudomonas, a grampositivní bakterie, jako je Micrococcus nebo Bacillus. Mezi příklady eukaryotických organismů, z nichž lze získat karbonylovou hydrolasu a její geny, patří kvasinky, jako jsou Saccharomyces cerevisiae, plísně, jako je Aspergillus sp., a nelidské savčí zdroje, jako je například hovězí, z nichž lze získat gen kódující karbonylovou hydrolasu chymosin. Jako u subtilisinů, lze řady kabonylových hydrolas získat z různých příbuzných druhů, které mají aminokyselinové sekvence ne zcela homologní se členy oněch sérií, ale které nicméně vykazují stejný nebo podobný typ biologické aktivity. Tak zde používaná nelidská karbonylová hydrolasa má funkční definici, která znamená karbonylové hydrolasy, které přímo nebo nepřímo souvisejí s prokaryotickými nebo eukaryotickými zdroji.
Varianta karbonylové hydrolasy má aminokyselinovou sekvenci odvozenou od aminokyselinové sekvence prekursorové karbonylové hydrolasy. Tato prekursorové karbonylové hydrolasa (jako je subtilisin) zahrnuje přirozeně se vyskytující karbonylové hydrolasy (subtilisin) a rekombinantní karbonylové hydrolasy (subtilisin) . Aminokyselinová sekvence varianty karbonylové hydrolasy je odvozena od aminokyselinové sekvence prekursorové hydrolasy substitucí, delecí nebo insercí jedné nebo více aminokyselin prekursorové aminokyselinové sekvence. Taková modifikace je prekursorové DNA sekvence, která kóduje aminokyselinovou sekvenci prekursorové karbonylové hydrolasy (subtilisinu) spíše než manipulace enzymu prekursorové karbonylové hydrolasy (subtilisinu) samotného. Mezi vhodné způsoby takové manipulace sekvence prekursorové DNA patří ty způsoby, které jsou zde popsány, stejně jako způsoby známé odborníkům z oblasti techniky (viz například evropský patent 0 328 199, WO 89/06279 a USA patenty a přihlášky již zde citované).
Pro mutace jsou vhodné specifické zbytky odpovídající poloze +76 v kombinaci s jednou nebo více z následujících poloh +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinů. Modifikované zbytky jsou s výhodou vybrány z následujících kombinací: 76/99, 76/101, 76/103, 76/104, 76/107, 76/123. 76/99/101, 76/99/103, 76/99/104, 76/101/103, 76/101/ /104, 76/103/104, 76/104/107, 76/04/123, 76/107/123, 76/99/ /101/103, 76/99/101/104, 76/99/103/104, 76/101/103/104, 76/ /103/104/123, 76/104/107/123, 76/99/101/103/104, 76/99/103/ /104/123, 76/99/101/103/104/123, 76/103/104/128, 76/103/104/ /260, 76/103/104/265, 76/103/104/197, 76/103/104/105, 76/103/ 104/135, 76/103/104/126, 76/103/104/107, 76/103/104/210, 76/ /103/104/126/265 a 76/103/104/222, nejvýhodnější jsou 76/99, 76/104, 76/99/10, 76/103/104, 76/104/107, 76/101/103/104, 76/ /99/101/103/104 a 76/101/104. Na tato čísla poloh aminokyselin se zde odkazuje jako na čísla sekvence maturovaného Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu uvedeného na obrázku 1. Proteaso13 vé enzymy užitečné podle předloženého vynálezu však nejsou omezeny na mutaci tohoto zvláštního subtilisinu, ale jsou rozšířeny na prekursorové karbonylové hydrolasy obsahuj ící zbytky aminokyselin v polohách, které jsou ekvivalentní příslušným identifikovaným zbytkům v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Prekursorový subtilisin s výhodou znamená Bacillus lentus subtilisin. Substituce, delece nebo inserce se provádějí na stejných zbytcích aminokyselin v B. lentus, které odpovídají shora uvedenému seznamu.
Zbytek (aminokyselina) prekursorové karbonylové hydrolasy je stejný jako zbytek Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu, jestliže buď je homologní (tj. odpovídající polohou buď primární nebo terciární struktuře) nebo analogický specifickému zbytku nebo části tohoto zbytku v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu (tj. má stejnou nebo podobnou funkční kapacitu kombinovat, reagovat nebo vzájemně chemicky působit).
Pro zajištění homologie primární struktury se aminokyselinová sekvence prekursorové karbonylové hydrolasy přímo srovnává s primární sekvenví Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu a zvláště s řadou zbytků, o nichž je známo, že v subtilisinu, pro který je známa sekvence, jsou invariantní. Obrázek 2 ukazuje zachované zbytky mezi amyloliquefaciens subtilisinem a B. lentus subtilisinem. Po spojení zachovaných zbytků, umožnění nutných inserci a delecí, aby se zachovalo seřazení (tj. vyhnutí se eliminaci zachovaných zbytků delecí a inserci), jsou definovány zbytky odpovídající příslušným aminokyselinám v primární sekvenci Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Seřazení zachovaných zbytků by mělo s výhodou zachovat 100 % těchto zbytků. Avšak i seřazení větší než 75 % nebo tak malé jako 50 % zachovaných zbytků je také adekvátní pro definování odpovídajících zbytků. Zachování katalytické triady Asp32/His64/Ser221 by mělo být uchováno.
Například na obrázku 3 jsou seřazeny sekvence aminokyselin subtilisinu z Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis,
Bacillus licheniformis (carlsbergensis) a Bacillus lentus tak, aby poskytly maximální homologii mezi sekvencemi aminokyselin. Srovnání těchto sekvencí ukazuje, že v každé sekvenci existují četné zachované zbytky. Tyto zachované zbytky (jako mezi BPN' a B.lentus) jsou uvedeny na obrázku 2.
Zachované zbytky se tedy mohou použít pro definování odpovídajících ekvivalentních zbytků aminokyselin Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu v jiných karbonylových hydrolasách, jako je subtilisin z Bacillus lentus (PCT spis č. WO 89/06279, publikovaný 13. července 1989) , výhodný enzym subtilisinového prekursoru podle vynálezu, nebo subtilisin označovaný PB92 (evropský patent 0 328 299) , který je vysoce homologní s výhodným Bacillus lentus subtilisinem. Sekvence aminokyselin některých těchto subtilisinů jsou seřazeny na obrázcích 3A a 3B se sekvencí Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu tak, aby se dosáhla maximální homologie zachovaných zbytků. Jak lze vidět, v sekvenci Bacillus lentus existují četné delece při srovnání s Bacillus amyloliquefaciens subtilisinem. Tak například ekvivalentní aminokyselinou pro Vall65 v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu je u jiných subtilisinů isoleucin pro B. lentus a B. licheniformis.
Tak například aminokyselina v poloze +76 znamená asparagin (N) jak u B. amyloliquefaciens tak u B. lentus subtilisinu. Ve výhodné variantě subtilisinu podle vynálezu je však aminokyselina ekvivalentní poloze +76 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu substituována aspartátem (D) . Srovnání všech zbytků aminokyselin identifikovaných v tomto vynálezu pro substituci a výhodné substituce pro každou polohu jsou pro ilustraci uvedeny v tabulce II.
Tabulka II
+76 +99 +101 +103 +104 +107 +123
B. amyloliquefaciens N D S Q Y I N
(přírodní
B. lentus (přírodní) N S S S V I N
nejvýhodnější substituce D D R A I/Y v S
Ekvivalentní zbytky mohou být definovány také stanovením homologie na úrovni terciární struktury prekursorové karbonylové hydrolasy, jejíž terciární struktura byla stanovena rentgenovou krystalografií. Ekvivalentní zbytky jsou definovány jako takové zbytky, u nichž atomové souřadnice dvou nebo více hlavních řetězců atomů příslušného zbytku aminokyseliny prekusorové karbonylové hydrolasy a Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu (N na N, CA na CA, C na C a 0 na O) jsou do 0,13 nm a s výhodou 0,1 nm po seřazení. Seřazení se dosáhne tím, že se nej lepší model orientuje a umístí se tak, aby poskytl maximální překryv atomových souřadnic nevodíkových proteinových atomů příslušné karbonylové hydrolasy vzhledem k Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Nejlepší model je takový krystalografický model, který dává nejnižší faktor R pro experimentální difrakční data při nejvyšším dostupném rozlišení.
R faktor = Sh |Fo(h)|-1Fc(h)|/ 2h|Fo(h)|
Ekvivalentní zbytky, které jsou funkčně analogické specifickým zbytkům Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu, jsou definovány jako takové aminokyseliny prekursorových karbony lových hydrolas, které mohou přijmout takovou konformaci, že buď mění, modifikují nebo přispívají k proteinové struktuře, navázání substrátu nebo katalýze definovaným způsobem a jsou přisuzovány specifickým zbytkům Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Dále jsou to takové zbytky prekursorové karbonylové hydrolasy (pro kterou byla terciární struktura získána z rentgenových dat), které zaujímají analogickou polohu v tom rozsahu že, i když hlavní řetězce atomů daného zbytku nemusí uspokojovat kriteria ekvivalence na základě zaujetí homologní polohy, atomové souřadnice alespoň dvou atomů vedlejšího řetězce zbytku leží do 0,13 nm od odpovídajících atomů vedlejšího řetězce Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Souřadnice trojrozměrné struktury Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu je uvedena ve spisu Evropského patentového úřadu č. 0 251 446 (ekvivalentního USA patentové přihlášce SN 08/212 291, jejíž popis je zde zahrnut jako citace) a může být použit, jak shora uvedeno, ke stanovení ekvivalentních zbytků na úrovni terciární struktury.
Některé zbytky identifikované pro substituci, inserci nebo deleci, jsou zachované zbytky, zatímco některé nikoliv. V případě zbytků, které nejsou zachovány, je náhrada jedné nebo více aminokyselin omezena na substituce, které poskytují variantu, která má takovou sekvenci aminokyselin, která neodpovídá sekvenci nacházející se v přírodě. V případě zachovaných zbytků by taková náhrada neměla vést k přirozeně se vyskytující sekvenci. Varianty karbonylové hydrolasy použitelné v předloženém vynálezu zahrnují maturované formy variant karbonylové hydrolasy stejně jako pro- a prepro-formy těchto variant hydrolasy. Prepro-formy jsou výhodnou konstrukcí, jelikož usnadňují expresi, sekreci a maturaci variant karbonylových hydrolas.
Prosekvence znamená sekvenci aminokyselin navázaných na N-konec maturované formy karbonylové hydrolasy, která po odstranění vede k maturované” formě karbonylové hydrolasy. V přírodě se mnoho proteolytických enzymů vyskytuje jako translační proenzymové produkty. V nepřítomnosti posttranslačního opracování dochází k jejich exprimaci v tomto stavu. Výhodnou prosekvenci pro výrobu variant karbonylové hydrolasy, zvláště subtilisinových variant, je domnělá prosekvence Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu, i když se mohou použít i jiné prosekvence subtilisinu. V příkladech se používá domnělá prosekvence subtilisinu z Bacillus lentus (ATCC 21536) .
Signální sekvence nebo prosekvence znamená jakoukoliv sekvenci aminokyselin navázanou na N-koncoVou část karbonylové hydrolasy nebo na N-koncovou část prohydrolasy, která může participovat při sekreci maturované nebo pro-formy hydrolasy. Tato definice signální sekvence je funkční a to znamená, že zahrnuje všechny ty sekvence aminokyselin, které jsou kódovány N-koncovou částí genu subtilisinu nebo jiných sekretovaných karbonylových hydrolas, které se účastní uskutečnění sekrece subtilisinu nebo jiných karbonylových hydrolas za přírodních podmínek. Proteasové enzymy užitečné pro předložený vynález využívají tyto sekvence pro uskutečnění sekrece variant karbonylové hydrolasy, jak je to zde popsáno. Výhodná signální sekvence použitá v příkladech obsahuje prvních sedm zbytků aminokyselin signální sekvence Bacillus subtilis subtilisinu napojených na zbytek signální sekvence substilisinu z Bacillus lentus (ATCC 21356).
Prepro- forma varianta karbonylové hydrolasy sestává z maturované formy hydrolasy, která má prosekvenci odštěpitelně napojenou na aminový konec hydrolasy a pre nebo signální sekvenci odštěpitelně napojitelnou na aminový konec prosekvence.
Expresní vektor znamená takovou DNA konstrukci obsahující sekvenci DNA, která je odštěpitelně napojena na vhodnou kontrolní sekvenci schopnou uskutečnit expresi uvedené DNA ve vhodném hostiteli. Mezi tyto kontrolní sekvence patří promotor pro uskutečnění transkripce, případná operátorová sekvence pro regulaci takové transkripce, sekvence kódující vhodná mRNA ribosomová vazebná místa a sekvence, které regulují ukončení transkripce a translace. Vektor může znamenat plasmid, fágovou částici nebo jednoduše potenciální genomový insert. Jakmile je jednou transformován do hostitele, vektor může replikovat a fungovat nezávisle na hostitelském genomu nebo může, v některých případech, integrovat do samotného genomu. V této přihlášce jsou pojmy plasmid a vektor někdy používány vzájemně zaměnitelně, jelikož plasmid je dnes nejobvyklejší formou vektoru. Jsou sem však zahrnuty takové jiné formy expresních vek18 torů, které slouží jako ekvivalentní funkce a které jsou známy odborníkům z oblasti techniky.
Hostitelskými buňkami používanými podle předloženého vynálezu jsou obvykle prokaryotičtí nebo eukaryotičtí hostitelé, kteří jsou s výhodou manipulováni způsoby popsanými v USA patentu S. 4 760 025 (RE 34 606) a nejsou schopni sekretovat enzymaticky aktivní endoproteasu. Výhodnou hostitelskou buňkou pro expresi subtilisinu je Bacillus kmen BG2036, který je deficitní na enzymaticky aktivní neutrální proteasu a alkalickou proteasu (subtilisin). Konstrukce kmene BG2036 je podrobně popsána v USA patentu 5 264 366. Mezi další hostitelské buňky pro exprimování subtilisinu patří Bacillus subtilis 1168 (také popsaný v USA patentu č. 4 760 025 (RE 34 606) a USA patentu č. 5 264 366, jejichž popisy jsou zde zahrnuty jako odkaz), stejně jako jakýkoliv vhodný kmen Bacillus, jako je B. licheniformis, B. lentus atd.
Hostitelské buňky jsou trasformovány nebo transfektovány vektory zkonstruovanými technikami rekombinantní DNA. Takové transformované hostitelské buňky jsou schopny buď replikovat vektory kódující varianty karbonylové hydrolasy nebo exprimovat žádanou variantu karbonylové hydrolasy. V případě vektorů, které kódují pre- nebo prepro-formu varianty karbonylové hydrolasy, jako jsou varianty, jsou po expresi typicky sekretovány z , hostitelské buňky do media hostitelské buňky.
Pojem odštěpitelné napojen, jestliže tento pojem popisuje vzájemný vztah mezi DNA oblastmi, jednoduše znamená, že jsou funkčně spolu spojeny. Například presekvence je odštěpitelné napojena na peptid, jestliže funguje jako signální sekvence ůčastnící se sekrece maturované formy proteinu nej pravděpodobněji obsahující štěpení signální sekvence. Promotor je odštěpitelně napojen na kódující sekvenci, jestliže reguluje transkripci sekvence. Ribosomové vazebné místo je odštěpitelné napojeno na kódující sekvenci, jestliže je umístěno tak, aby umožňovalo translaci.
Geny kódující přirozeně se vyskytující prekursorovou karbonylovou hydrolasu lze získat podle obecných způsobů známých odborníkům z oblasti techniky. Tyto způsoby obecně zahrnují syntetizování značených sond s domnělými sekvencemi kódujícími oblasti hydrolasy, o kterou se jedná, přípravu genomových knihoven z organismů exprimujících hydrolasu a prohledávání knihoven na gen, o který se jedná, hybridizací sond. Positivně hybridizované klony se pak mapují a sekvenují. B.lentus gen použitý v příkladech se klonuje, jak je popsáno v příkladu 1 USA patentu č. 5 185 258, jehož popis je zde zahrnut. BPN' gen použitý v příkladech se klonuje jak popsáno v příkladu 1 v RE C. 34 606, jehož popis je zde zahrnut.
Klonovaná karbonylová hydrolasa se pak používá pro transformování hostitelské buňky, aby došlo k expresi hydrolasy. Gen hydrolasy se pak liguje do plasmidu s vysokým počtem kopií. Plasmid replikuje v hostitelích v tom smyslu, že obsahuje dobře známé prvky nutné pro replikaci plasmidu: promotor odštěpitelně napojený na gen, o který se jedná (který může být dodáván jako vlastní homologní promotor genu, jestliže je rozpoznáván, tj. transkribován, hostitelem), terminaci transkripce a polyadenylační oblast (nutnou pro stabilitu mRNA transkribovanou hostitelem z genu hydrolasy v některých eukarytoických hostitelských buňkách), která je endogenní nebo je dodávána endogenní terminační oblastí genu hydrolasy, a je žádoucí selekční gen, jako je gen antibotické resistence, který umožňuje kontinuální kultivační uchovávání hostitelských buněk infikovaných plasmidem růstem v mediu, které obsahuje antibiotika. Plasmidy s vysokým počtem kopií obsahují také počátek replikace pro hostitele, čímž umožňují aby se v cytoplasmě, bez chromosomového omezení, generovalo velké množství plasmidů. V rozsahu vynálezu je však integrovat násobné kopie hydrolasového genu do genomu hostitele. To je usnadněno prokaryotickými a eukaryotickými organismy, které jsou zvláště citlivé na homologní rekombinaci.
Geny uvedené v předložených příkladech jsou přírodní B. lentus gen a přírodní Bacillus amyloliquefaciens gen. Může se vyrábět také syntetický gen kódující přirozeně se vyskytujíc! nebo mutovanou prekursorovou karbonylovou hydrolasu (subtilisin) . Při tomto postupu se stanoví sekvence DNA a/nebo aminokyselin prekursorové hydrolasy (subtilisinu). Pak se syntetizují násobné, překrývající se jednovláknové fragmenty DNA, které po hybridizaci a ligaci produkují syntetickou DNA kódující prekursorovou hydrolasu. Příklad konstrukce syntetického genu je uveden v příkladu 3 USA patentu 5 204 015, jehož popis je zde zahrnut jako citace.
Jakmile je jednou přirozeně se vyskytující nebo syntetická prekursorové karbonylové hydrolasa klonována, lze získat četné modifikace, kterými se zvýší použití genu po syntéze přirozeně se vyskytující prekursorové karbonylové hydrolasy. Mezi tyto modifikace patří výroba rekombinantní karbonylové hydrolasy podle toho, jak je to popsáno v USA patentu 4 760 025 (RE 34 606) a ve spisu Evropského patentového úřadu č. 0 251 446, a zde popsaná výroba variant karbonylové hydrolasy.
Následující způsob mutagenese kazety lze použít pro usnadnění konstrukce a identifikace variant karbonylové hydrolasy užitečných v předloženém vynálezu, i když se mohou použít i jiné způsoby včetně místně řízené mutagenese. Nejdříve se ziská přirozeně se vyskytující gen kódující hydrolasu a celý nebo zčásti se sekvenuje. Potom se tato sekvence skanuje na bod, v němž je žádoucí provést mutaci (deleci, inserci nebo substituci) jedné nebo více aminokyselin v kódovaném enzymu. Sekvence obklopující tento bod se vyhodnotí na přítomnost restrikčních míst pro umístění krátkého segmentu genu se sestavou oligonukleotidů, které expresí kódují různé mutanty. Tato restrikční místa znamenají s výhodou jedinečná místa uvnitř hydrolasového genu, takže se usnadní náhrada segmentu genu. Může se však použít jakékoliv vhodné restrikční místo, které není v hydrolasovém genu příliš hojné s tím, že se genové fragmenty, které se generují restrikčním štěpením, znovu uspořádají do patřičné sekvence. Jestliže restrikční místa nejsou umístěna ve vhodných vzdálenostech od vybraného bodu (od 10 do 15 nukleotidů), tato místa se generují substituováním nukleotidů v genu tak, že ani čtecí oblast ani kódované aminokyseliny nejsou v konečné konstrukci změněny. Mutace genu, pro změnu jeho sekvence tak, aby se potvrdila žádaná sekvence, se dosáhne rozšířením M13 primeru obecně známými způsoby. Úkol umístění vhodných obklopujících oblastí a vyhodnocení potřebných změn tak, aby se získaly sekvence dvou vhodných restrikčních míst, se provede rutinním využitím nadbytečného genetického kódu, mapováním genu restrikčními enzymy a velkým počtem různých restrikčních enzymů. Všimněte si, že jestliže je dostupné vhodné obklopující restrikční místo, shora uvedený způsob je potřeba provést pouze v souvislos ti s obklopující oblastí, která neobsahuje toto místo.
Jakmile je jednou přirozeně se vyskytující DNA nebo syntetická DNA klonována, restrikční místa obklopující ty polohy, které mají být mutovány, se rozštěpí rozpoznávacími restrikčními enzymy a kazety s komplementárními oligonukleotidy na koncích se ligují do tohoto genu. Tímto způsobem se mutagenese zjednoduší, protože mohou být syntetizovány všechny oligonukleotidy tak, aby měly stejná restrikční místa. K vytvoření restrikčních míst nejsou nutné žádné syntetické linkery.
Proteolytická aktivita je zde definována jako rychlost hydro lysy peptidových vazeb na miligram aktivního enzymu. Pro měření proteolytické aktivity existuje mnoho dobře známých postupů (K.M.Kalisz: Microbial Proteinases, Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology, A. Fiechter, red., 1988.). Vedle nich nebo jako alternativa k modifikované proteolytické aktivitě, mohou mít enzymy podle předloženého vynálezu mohou mít další modifikované vlastnosti, jako je ΐς,, Kkat, poměr Kkat/Km a/nebo modifikovaná substrátová specifičnost a/nebo modifikovaný profil pH aktivity. Tyto enzymy mohou být upraveny pro příslušný substrát, o kterém se předpokládá, že bude přítomen, například pro hydrolytický proces, jako je praní.
Jedním předmětem může být zajištění takové varianty karbonylové hydrolasy, která má změněnou proteolytickou aktivitu při srovnání s prekursorovou karbonylovou hydrolasou, jelikož zvýšení této aktivity (numericky větší) umožňuje použití enzymu k účinnějšímu působení na cílový substrát. Našim zájmem jsou také varianty enzymů, které mají změněnou tepelnou stabilitu a/nebo změněnou subtrátovou specifičnost při srovnání s prekursorem. Výhodnou karbonylovou hydrolasou, která má být mutována, je subtilisin. Specifické aminokyseliny, které jsou užitečné pro získání těchto výsledků v karbonylových hydrolasách subtilisinového typu, zbytků pro +76, +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 nebo jakákoliv jejich kombinace v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu jsou uvedeny v příkladech. V některých případech může být žádoucí nižší proteolytická aktivita. A naopak, v některých případech může být žádoucí zvýšit proteolytickou aktivitu varianty enzymu proti jeho prekursoru. Dále může být žádoucí zvýšení nebo snížení (změna) stability varianty, ať alkalické nebo tepelné. Zvýšení nebo snížení Km, Kkat nebo Kkat/Km 3SOU specifická pro substrát použitý pro stanovení těchto kinetických parametrů.
Bylo také ukázáno, že zbytky ekvivalentní +76 v kombinaci s četnými jinými modifikacemi v subtilisinu jsou důležité při modulování celkové stability a/nebo proteolytické aktivity enzymu. Tak, jak je uvedeno v příkladech, asparagin (N) v Bacillus lentus subtilisinu v ekvivalentní poloze +76 může být substituován aspartátem (D) ve výhodných proteasových enzymech v kombinaci s modifikací jednoho nebo více následujících aminokyselinových zbytků: +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 pro získání zvýšené stability a/nebo zvýšené aktivity výsledného mutovaného enzymu.
Nejvýhodnější proteasové enzymy užitečné podle tohoto vynálezu jsou uvedeny v příkladech. Patří mezi ně následující specifické kombinace substituovaných zbytků: N76D/S99D, N76D/ /V104I, N76D/S99D/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/V104Y/I107V a N76D/S101R/S103A/V104I. Tyto substituce se s výhodou provádějí v Bacillus lentus (rekombinantním nebo přírodním) subtilisinu, i když tyto substituce se mohou provádět v jakémkoliv Bacillus subtilisinu.
Na základě výsledků získaných s touto a dalšími variantami substilisinů je zřejmé, že zbytky v karbonylových hydrolasách (s výhodou substilisinu) ekvivalentní polohám +76, +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 v Bacillus amyloliquefaciens jsou důležitými pro proteolytickou aktivitu, provedení a/nebo stabilitu těchto enzymů a pro postupy čištění nebo mytí pomocí těchto variantních enzymů.
Dále jsou uvedeny příklady výroby proteasových enzymů užitečných v prostředcích podle předloženého vynálezu.
Příklady provedeni vynálezu
Příklad výroby proteasy
Konstrukce pro expresi genu GG36 v B. subtilis
Klonování a konstrukce pro expresi genu subtilisinu z B. lentus se provádí v podstatě stejným způsobem, jako je to popsáno v USA patentu č. 5 185 258. Plasmid GGA274 (popsaný zde v příkladu 4) se dále modifikuje následujícím způsobem, jak je uvedeno na obrázku 5. Pstl místo, které se zavede během konstrukce plasmidu GGA274, se odstraní níže popsanou oligonukleotidem řízenou mutagenesí oligonukletidem následující sekvence identifikační číslo 1
5' GAGCTGCAACTCGTTAAA 3' (sekv. id. č. 1) . Podtržený zbytek A eliminuje rozpoznávací sekvenci restrikčního enzymu Pstl a mění odpovídající zbytek aminokyseliny z alaninu na threonin v poloze 274. Threonin v poloze 274 je zbytek pří24 rodního typu původně se nalézající v klonovaných sekvencích genu B. lentus subtilisinu. DNA segment kódující subtilisin se vyštípne z plasmidu GGA274 nebo jeho derivátů (GGT274 uvedeném na obrázku 5) štěpením EcoRI a BamHI. DNA fragment je subklonován zpět do vektorů na bázi bakteriofágu M-13, jako je MP19, pro mutagenesi. Po mutagenesi se provede štěpení EcoRI a HindlII s následujícím klonováním, aby se mutovaný gen subtilisinu přesunul zpět do expresního plasmidu, jako je GGA274, pro expresi a isolování mutovaných subtilisinových proteinů.
Oligonukleotidem řízená mutagenese
Oligonukleotidem řízená mutagenese se provádí podle Zollera M. a spol.: Methods Enzymol. 100. 468 (1983). Jako příklad, syntetický oligonukleotid sekvence identifikační číslo 2
5' GCTGCTCTAGACAATTCG 3' (sekv. id. č. 2) se použije pro změnu zbytku aminokyseliny v poloze 76 z asparaginu (N) na kyselinu asparagovou (D) neboli N76D. Podtržené ”Gn a C zbytky označují změny proti sekvenci genu přírodního typu. CA zachovává leucin v poloze +75 a mění sekvenci aminokyselin zavedením Xbal rozpoznávacícho místa restrikčního enzymu Xbal (TCTAGA), zatímco změna na GAC mění asparagin v poloze +76 na aspartát.
Pro mutagenesi v polohách 99, 101, 103 a 104 se mohou používat různé oligonukleotidy podle kombiance žádaných mutací. Například oligonukleotid sekvence identifikační číslo 3 5' GTATTAGGGGCGGACGGTCGAGGCGCCATCAGCTCGATT 3' (sekv. id. č. 3) se používá současně pro následující změny: S99D, S101R, S103A a V104I v jediné molekule subtilisinu. Podobně se používají oligonukleotidy sekvence identifikační číslo 4
5' TCAGGTTCGGTCTCGAGCGTTGCCCAAGGATTG 3' (sekv. id. Č. 4) a sekvence identifikační číslo 5
5' CACGTTGCTAGCTTGAGTTTAG 3' (sekv. id. č. 5) pro generaci I107V, respektive N123S. Podtržené zbytky označují změny proti sekvencím přírodního typu, které poskytují žádané změny buď v sekvencích aminokyselin nebo rozpoznávacích sekven25 cích restrikčnich enzymů.
Proteolytická aktivita variant subtilisinu
Podle způsobů shora uvedené oligonukleotidem řízené mutagenese se vyrobí varianty, jejichž seznam je uveden v tabulce
III. Proteolytická aktivita každé této varianty subtilisinu je uvedena v tabulce III. Kinetické parametry Km, kkat a Kkat/Km jsou měřeny pro hydrolýzu subtrátu syntetického peptidu sukcinyl-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-nitroanilidu způsobem popsaným P. Bonneauem a spol.: J. Amer. Chem. Soc. 113 f3) . 1030 (1991). Ve strufinosti - malý podíl zásobního roztoku varianty subtilisinu se přidá do lem kyvety obsahující substrát rozpuštěný v 0,lM Tris-HCl pufru, pH 8,6, a udržuje se na teplotě 25 °C v termostatu. Postup reakce se sleduje spektrofotometricky sledováním absorbance reakčního produktu p-nitroanilinu při 410 nm. Použitím nelineárního regresního algoritmu tak, aby reakční rychlost a koncentrace produktu každé reakce odpovídaly Michaelis-Mentenově reakci, se získají kinetické parametry.
Tabulka III
Kinetické parametry kkat, Km,nebo kkat/Km měřeny pro Bacillus lentus subtilisin a varianty
protea- varianta enzymu kkat Kn, WKm
sa č. (s'1) (M) (S'1M'1)
- B.lentus subtilisin 170 0,00078 2,18.105
- N76D 219 0,0008 2,74.105
1 N76D/S99D 88 0,00061 1,44.105
2 N76D/S101R 371 0,0013 2,85.105
3 N76D/S103A 400 0,0014 2,86.105
4 N76D/V104I 459 0,0011 4,17.105
5 N76D/I107V 219 0,0011 1,99.105
6 N76D/N123S 115 0,0018 6,40.104
7 N76D/S99D/S101R 146 0,00038 3,84.105
8 N76D/S99D/S103A 157 0,0012 1,31.105
9 N76D/S99D/V104I 247 0,00097 2,55.105
10 N76D/S101R/S103A 405 0,00069 5,90.105
11 N76D/S101R/V104I 540 0,00049 1,10.106
12 N76D/S103A/V104I 832 0,0016 5,20:105
13 N76D/V104I/I107V 497 0,00045 1,10.106
14 N76D/V104Y/I123V 330 0,00017 1,90.106
15 N76D/V107I/N123S 251 0,0026 9,65.104
16 N76D/I107V/N123S 147 0,0035 4,20.104
17 N76D/S99D/S101R/S103A 242 0,00074 3,27.105
18 N76D/S99D/S101R/V104I 403 0,00072 5,60.105
19 N76D/S99D/S103A/V104I 420 0,0016 2,62.105
20 N76D/S101R/S103A/V104I 731 0,00065 1,12.106
21 N76D/S103A/V104I/N123S 321 0,0026 1,23.105
22 N76D/V104I/I107V/N123S 231 0,003 7,70.104
23 N76D/S99D/S101R/S103A/V104I 624 0,00098 6,37.105
24 N76D/S99D/S103A/V104I/N123S 194 0,0043 4,51.104
25 N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/N123S 311 0,0023 1,35.105
Výsledky uvedené v tabulce III ukazují, Že všechny testované varianty subtilisinu si zachovávají proteolytickou aktivi27 tu. Podrobná analýza dat dále ukázala, že proteolytická aktivita je významně změněna u Bacillus lentus subtilisinu různými kombinacemi substitucí zbytků aminokyselin ekvivalentních polohám 76, 99, 101, 103, 104, 107 a 123 u Bacillus amyloliquefaciens.
Tepelná stabilita variant subtilisinu
Srovnání tepelné stability pozorované pro Bacillus lentus subtilisin a varianty podle předloženého vynálezu vyrobené způsobem shora uvedené oligonukleotidem řízené mutaganese je uvedeno v tabulce IV. Vyčištěný enzym, 15 gg/ml v ),1M glycinu a 0,01% Tweenu 80, pH 10,0, s nebo bez 50mM CaCl2, se rozdělí do malých zkumavek a inkubuje se 5 minut při 10 °C, 1 minutu při 10 až 60 °c a 20 minut při 60 °C. Zkumavky se pak na 10 minut dají do ledu. části ze zkumavek se testují na aktivitu enzymu přidáním do lem kyvety obsahující 1,2 mM syntetického peptidového substrátu, sukcinyl-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-nitroanilidu, rozpuštěného v 0,lM Tris-HCl pufru, pH 8,6, udržovaným na 25 °C. Počáteční lineární reakční rychlost se sleduje spektrofotometricky sledováním absorbance reakčního produktu p-nitroanilinu při 410 nm jako funkce času. Data se uvádějí jako procento aktivity před zahřátím. Výsledky uvedené v tabulce IV ukazují, že obrovská převaha variant vykazuje tepelnou stabilitu srovnatelnou s Bacillus lentus subtilisinem (24 z 26) v testu s přidaným 50mM CaCl2. V testu bez přidání 50mM CaCl2 byla velká většina variant (19 z 26) významně stabilnější než Bacillus lentus subtilisin. Dále pak varianty N76D/S99D, N76D/V104I, N76D/S99D/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/ /V104Y/I107V a N76D/S101R/S103A/V104I jsou významně stabilnější než jediná substituční varianta N76D v testu bez přidání 50mM CaCl2.
Tabulka IV
Tepelná stabilita měřená pro Bacillus lentus subtilisin a va rianty při pH 10, 60 °c, s přidáním +/- 50mM CaCl2
enzym % zbývající původní aktivity
- CaCl2 + CaCl2
B. lentus subtilisin 2 96
N76D 34 97
N76D/S99D 49 98
N76D/S101R 0 82
N76D/S103A 26 92
N76D/V104I 58 98
N76D/I107V 32 96
N76D/N123S 0 97
N76D/S99D/S101R 30 100
N76D/S99D/S103A 36 100
N76D/S99D/V104I 48 97
N76D/S101R/S103A 26 100
N76D/S101R/V104I 38 100
N76D/S103A/V104Í 58 100
N76D/V104I/I107V 60 97
N76D/V104Y/I123V 48 74
N76D/V107I/N123S 0 98
N76D/I107V/N123S 16 100
N76D/S99D/S101R/S103A 38 100
N76D/S99D/S101R/V104I 33 100
N76D/S99D/S103A/V104I 38 98
N76D/S101R/S103A/V104I 40 99
N76D/S103A/V104I/N123S 1 98
N76D/V104I/I107V/N123S 3 99
N76D/S99D/S101R/S103A/V104I 36 99
N76D/S99D/S103A/V104I/N123S 2 95
N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/N123S 0 100
Oligonukleotidem řízená mutagenese templátem jednovláknové DNA generované z fagemidu
A. Konstrukce B. lentus variant
Postup mutagenese je v podstatě stejný jak shora popsáno při oligonukleotidem řízené mutagenesi. Templát jednovláknové DNA se generuje způsobem fagemidu. Pro zkonstruování fagemidového vektoru pro generaci templátu jednovláknové DNA se nejdří ve zkonstruuje vektor pBCDAICAT. Nákres konstrukce vektoru je uveden na obrázku 8. Nejdříve se klonuje fragment Clal-Clal kódující CAT gen z plasmidů pV194 (Horinouchi A. a Wesiblum Β»g J. Bacteriol 150. 8 (1982) .) do AccI místa polylinkerové oblasti pUC19 (New England BioLabs, Beverly, Ma.). Získá se plasmid pUCCHL a EcoRI-Dral fragment o 600 párech nukleotidů (p.n.) z 5' konce GG36DAI kódující DNA se klonuje do EcoRI a EcoRV míst plasmidů pBSKS (Stratagene, lne., San Diego, Ka.). Získá se pBC2SK5. Jediné místo EcoRI plasmidů pBC2SK5 se odstraní štěpením EcoRI, následuje doplnění katalyzované T4 DNA polymerasou a religace za vzniku plasmidů pBC2SK-5R, který nemá místo EcoRI. EcoRI-Dral fragment, který se klonuje do pBCSK-5R, se isoluje jako Pstl-HindlII fragment a klonuje se do místa Pst.).·’ -HindlII plasmidů pUCCHL (část polylinkeru pUC19). Získá se plasmid pUCCHL5R. Kódující sekvence GG36DAI genu se vyštípne jako EcoRI-BamHI fragment a klonuje se do EcoRI-BamHI míst plasmidů pUCCHLSR za vzniku pUCCAT. Velký EcoRI-HindlII fragment pUCCAT se pak klonuje do EcoRI a HindlII míst BS2KS+. Získá se plasmid pBCDAICAT.
Pro generaci jednovláknové DNA se E.coli-obsahující plasmid pBCDAICAT infikuje fágem R408 (získaným od Stratagene, San Diego, Ka.) podle postupu popsaného Russelem Μ., Kiddem S. a Kelleym M.R.: Gene 45. 333 (1986). Jakmile je jednou templát jednovláknové DNA dostupný, provedou se standardní mutagenační způsoby tak, jak je to popsáno v oligonukleotidem řízené mutagenesi. Konstrukce některých mutantů je zde podrobně uvedena z ilustračních důvodů.
Při konstrukci B.lentus (GG36) N76D/S103A/V104I/L217H, se EcoRI-BamHI DNA fragment kódující GG36 N76D/S103A/V104I použije pro konstrukci pUCCAT (viz obr. 8) . Získá se plasmid pBCDAICAT. Po tom, co se podle shora popsaného postupu připraví templát jednovláknové DNA, se pro získání L217H použije primer mutagenese sekvence identifikační číslo 13 * WWW w* _ x Clal
5' TAT GCC AGC CAC AAC GGT ACT TCG ATG GCT 3' (sekv. id. č. 13) .
Stejně jako před tím podtržené zbytky znamenají změny nukleotidů, ke kterým došlo, a x Clal znamená, že existující Clal místo je po mutagenesi odstraněno. Postup mutagenese je shora popsán v oligonukleotidem řízené mutagenesi. Po mutagenesi se plasmidová DNA nejdříve testuje na eliminaci Clal místa a ty klony, kterým chybí Clal místo, se podrobí analýze DNA sekvence pro ověření DNA sekvence, u které existuje změna L na H v poloze 217 zbytků aminokyselin.
B. Konstrukce BPN' variant a jejich exprese v B. subtilis
Konstrukce Bacillus amyloliquefaciens (BPN') N76D/Q103A/ /Y104I/Y217L se provádí podobným způsobem až na dva následující stupně. N76D se nejdříve zavede do BPN' Y217L. Získá se BPN' N76D/Y217L. Druhou mutagenesi se převede BPN' N76D/Y217L na BPN' N76D/Q103A/Y104I/Y217L. Pro získání templátu jednovláknové DNA pro první mutagenesi se EcoRI-BamHI fragment kódující BPN' Y217L subtilisin (odvozený od plasmidu Y217L popsaného Wellsem J. a spol.: PNAS 84, 5167, 1087) použije pro zkonstruování plasmidu pUCCATFNA (viz obr. 9) . Plasmid pUCCATFNA obsahující BPN' Y217L se použije pro zkonstruování pBCFNACAT plasmidu (obr. 9) . Jednovláknová DNA se generuje jak shora popsáno. Pro získání BPN' N76D/Y217L se oligonukoeotidový primer sekvence identifikační číslo
Ur **
Xbal
5' C ACA GTT GCG GCT CTA GAT AAC TCA ATC GGT G 3' (sekv. id. č. 14) použije pro generaci změny N76D. Potom se připraví jednovláknová DNA z plasmidu pBCFNACAT obsahujícího BPN' N76D/Y217L (plasmid pBCFNACAT po mutagenesi N76D) a mutagenizuje se jiným oligonukleotidem sekvence identifikační číslo 15 x PvuII
5' GCT GAC GGT TCC GGC GCT ATT AGT TGG ATC ATT 3' (sekv. id. č. 15) , čímž se získá BPN' N76D/Q103A/Y104I/Y217L. Všechny stupně včetně klonování, přípravy jednovláknové DNA, mutagenese a testování mutantů se provádějjak shora popsáno. Exprese genu BPN' a jeho variant se dosáhne integrováním plasmidové DNA (pBCFNACAT obsahující různé varianty genu BPN') přímo do kmenu Bacillus subtilis deficitního na proteasu, jak je popsáno v RE 34 606.
Podle těchto příkladů výroby proteas se mohou vyrobit četné varianty, pro tyto varianty byla stanovena kinetická data a data stability. Kinetická data se získají shora zde popsanými způsoby a jsou uvedena v tabulce V. Data stability se získávají jak zde uvedeno. Výsledky jsou uvedeny v tabulce VI.
Postup testování tepelné stability
Vyčištěný enzym se podrobí výměně s pufrem v O,1M glycinu, pH 10,00, 0,01% Tween-80, nanesením tohoto enzymu na kolonu se Sephadexem G-25, ekvilibrovanou tímto pufrem, a eluováním enzymu z kolony stejným pufrem.
Do zkumavky obsahující 0,lM glycin, 0,01% Tween-80, pH 10,0, udržovaný v termostatu na 60 °C, se přidá enzym na konečnou koncentraci 15 μg/ml.
Z inkubace při 60 °C se v různých dobách odebírají jednotlivé podíly bezprostředně testované na enzymovou aktivitu přidáním do lem kyvety obsahující 1,2 mM syntetického peptidového substrátu, sukcinyl-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-nitroanilidu, rozpuštěného v 0,lM Tris-HCl pufru, pH 8,6, udržovaného na 25 °C. Počáteční lineární reakční rychlost se sleduje fotometricky sledováním absorbance reakčního produktu p-nitroanilinu při 410 nm jako funkce času.
Poločas, který znamená délku doby, které je potřeba pro deaktivaci 50 % hmotn. enzymu, se stanovuje z reakční rychlosti prvního řádu jako funkce doby inkubace při 60 °C.
Tato data jsou uvedena v tabulce VI jako procenta poločasu stanovená pro Bacillus lentus subtilisin (GG36) za stejných podmínek.
Tabulka V
enzym ^kat K m
• (S'1) (mM) (s'1M_1)
B.lentus subtilisin 170 0,78 2,20E+05
N76D/S103G/V104I* 380 1.4 2,70E+05
N76D/S103A/V104F 730 0,33 2,20E+06
N76D/S103A/V104N 790 2,8 2,80E+05
N76D/S103A/V104S 170 0,83 2,00E+05
N76D/S103A/V104T 370 1/9 2,00E+05
N76D/S103A/V104W 880 0,31 2,80E+06
N76D/S103A/V104Y 690 0,5 l,40E+06
K27R/N76D/V104Y/N123S 500 1,2 4,20E+05
N76D/S101G/S103A/V104I* 620 1/3 4,80E+05
N76D/S103A/V104I/S105A* 550 1,3 4,20E+05
N76D/S103A/V104I/S105D* 440 1,7 2,60E+05
N76D/S103A/V104T/I107A* 120 5,7 2,10E+04
N76D/S103A/V104T/I107L* 310 3,2 9,70E+04
' N76D/S103A/V104I/L126A 90 2,2 4,10E+04
N76D/S103A/V104I/L126F 180 1,9 9,50E+04
N76D/S103A/V104I/L126I 100 2,4 4,20E+04
N76D/S103A/V104I/L126V 64 3,2 2,00E+O4
N76D/S103A/V104I/S128G* 560 1/7 3,30E+05
N76D/S103A/V104I/S128L* 430 3,8 l,10E+05
N76D/S103A/V104I/L135A 140 0,76 l,80E+05
N76D/S103A/V104I/L135F 390 0,69 5,70E+05
N76D/S103A/V104I/L135I 110 0,73 l,50E+05
Tabulka V (pokračování)
enzym kkat ís’1) K m (mM) w*.
N76D/S103A/V104I/L135V 140 0,86 1,60E+05
N76D/S103A/V104I/S156E* 170 2,6 6,50E+04
N76D/S103A/V104I/S166D* 160 3,5 4,60E+04
N76D/S103A/V104I/D197E 510 1,4 3,60E+05
N76D/S103A/V104I/N204A* 530 1,1 4,80E+05
N76D/S103A/V104I/N204G* 580 1,4 4,10E+05
N76D/S103A/V104I/N204C* 370 1,3 2,90E+05
N76D/S103A/V104I/P210I* 500 1,2 4,20E+05
N76D/S103A/V104I/L217H* 80 0,63 l,30E+05
N76D/S103A/V104I/M222A 70 3,1 2,30E+04
N76D/S103A/V104I/M222S 80 3,1 2,60E+04
N76D/S103A/V104I/T260P 660 1,5 4,40E+05
N76D/S103A/V104I/S265N 590 1,3 4,50E+05
K27R/N76D/V104Y/I107V/N123S 220 1,4 l,60E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/D197E 430 1,1 3,90E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/N204C 400 1,1 3,60E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/Q206L 440 1,2 3,70E+05
K27R/N76D/V104Y/I123S/S216V 440 1,2 3,70E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S 760 0,98 7,80E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/T260P 410 1,2 3,40E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/T274A 390 1 3,90E+05
N76D/S103A/V104I/L126F/S265N 170 2,1 8,10E+04
N76D/S103A/V104I/S156E/S166D* 40 6,3 6,40E+03
K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/G197E 410 0,98 4,20E+05
K27R/N76D/V104Y/N123G/G195E/N218S 540 0,66 8,20E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/D197E/N218S 770 0,79 9,80E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/N204C/N218S 610 0,99 6,20E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/Q206L/N218S 580 0,78 7,40E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S/T260P 660 1 6,60E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S/T274A 590 0,89 6,60E+05
K27R/N76D/V104Y/Q109S/N123S/N218S/T274A 520 1 5,20E+05
K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/D197E/N218S 460 0,65 7,10E+05
B. amyloliquefaciens subtilisin (BPN') 50 0,14 3,60E+05
Tabulka V (dokončení)
enzym Ir ^kat (s1) K m (mM) WKm (s’1M1)
BPN'-N76D/Y217L* 380 0,46 8,30E+05
Tyto mutanty byly připraveny oligonukleotidem řízenou mutagenesi templátem jednovláknové DNA generované z fagemidu, všechny ostatní shora uvedenou oligonukleotidem řízenou mutagenesi.
Tabulka VI enzym tepelná stabilita (% poločasu přírodního enzymu)
B.lentus subtilisin 100
N76D 590
N76D/S99D 840
N76D/S103A 390
N76D/V104I 660
N76D/I107V 710
N76D/N123S 70
N76D/S9.9D/S101R 610
N76D/S99D/S103A 590
N76D/S99D/V104I 910
N76D/S101R/S103A 930
N76D/S101R/V104I 500
N76D/S103A/V104I 460
N76D/S103G/V104I* 370
N76D/S103A/V104F 480
N76D/S103A/V104N 230
N76D/S103A/V104S 230
N76D/S103A/V104T 370
N76D/S103A/V104W 280
N76D/S103A/V104Y 400
N76D/V104I/I107V 940
Tabulka VI (pokračování)
enzym tepelná stabilita (% poločasu přírodního enzymu)
N76D/V104Y/I107V 820
N76D/V104I/N123S 80
N76D/I107V/N123S 150
K27R/N76D/V104Y/N123S 100
N76D/S99D/S101R/S103A 570
N76D/S99D/S101R/V104I 1000
N76D/S99D/S103A/V104I 680
N76D/S101G/S103A/V104I* 390
N76D/S101R/S103A/V104I 470
N76D/S103A/V104I/S105A* 360
N76D/S103A/V104I/S105D* 370
N76D/S103A/V104T/I107A* 270
N76D/S103A/V104T/I107L* 230
N76D/S103A/V104I/N123S 110
N76D/V104I/I107V/N123S 220
N76D/S103A/V104I/L126A 270
N76D/S103A/V104I/L126F 950
N76D/S103A/V104I/L126I 410
N76D/S103A/V104I/L126V 320
N76D/S103A/V104I/S128G* 640
N76D/S103A/V104I/S128L* 760
N76D/S103A/V104I/L135A 230
N76D/S103A/V104I/L135F 200
N76D/S103A/V104I/L135I 510
N76D/S103A/V104I/L135V 500
N76D/S103A/V104I/S156E* 120
N76D/S103A/V104I/S166D* 590
N76D/S103A/V104I/D197E 460
N76D/S103A/V104I/N204A* 230
N76D/S103A/V104I/N204G* 240
. N76D/S103A/V104I/N204C* 500
N76D/S103A/V104I/P210I* 1370
Tabulka VI (dokončení) enzym tepelná stabilita (% poločasu přírodního enzymu)
N76D/S103A/V104I/L217H* 60
N76D/S103A/V104I/M222A 520
N76D/S103A/V104I/M222S 490 • N76D/S103A/V104I/T260P 490
N76D/S103A/V104I/S265N 360
K27R/N76D/V104Y/I107V/N123S 210
K27R/N76D/V104Y/N123S/D197E 120
K27R/N76D/V104Y/N123S/N204C 110
K27R/N76D/V104Y/N123S/Q206L 380
K27R/N76D/V104Y/N123S/S216V 140
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S 270
K27R/N76D/V104Y/N123S/T260P 40
K27R/N76D/V104Y/N123S/T274A 60
N76D/S99D/S101R/S103A/V104I 590
N76D/S99D/S103A/V104I/N123S 110
N76D/S103A/V104I/L126F/S265N 810
N76D/S103A/V104I/S156E/S166D* 220
K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/G197E 90 ' K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/N218S 250
K27R/N76D/V104Y/N123S/D197E/N218S 270
K27R/N76D/V104Y/N123S/N204C/N218S 460
K27R/N76D/V104Y/N123S/Q206L/N218S 1400
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S/T260P 310
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S/T274A 180
N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/N123S 90
K27R/N76D/V104Y/Q109S/N123S/N218S/T274A 230
K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/D197E/N218S 240
B. amyloliquefaciens subtilisin (BPN') 100
BPN'-N76D/Y217L* 420
Tyto mutanty byly připraveny oligonukleotidem řízenou mutagenesi templátem jednovláknové DNA generované z fa37 gemidu, všechny ostatní shora uvedenou oligonukleotidem řízenou mutagenesí.
2. Materiály čistících prostředků čistící prostředky podle předloženého vynálezu obsahují také, vedle shora popsaného proteasového enzymu, jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s proteasovým enzymem. Pojem materiály čistícího prostředku tak, jak se zde používají, znamenají jakýkoliv kapalný, pevný nebo plynný materiál vybraný pro příslušný typ žádaného čistícího prostředku a formy produktu (např. kapalný prostředek, prostředek v granulích, ve spreji), při čemž tyto materiály jsou také slučitelné s proteasovým enzymem použitým v prostředku. Specifický výběr materiálů čistícího prostředku se snadno provede tak, že se vezme v úvahu povrch, položka nebo látka, která má být čištěna, a žádaná forma prostředku pro dané podmínky během použití (např. během použití detergentu pro mytí). Pojem slučitelný tak, jak se zde používá, znamená, že materiály čistících prostředků nesnižují proteolytickou aktivitu proteasového enzymu do takové rozsahu, aby proteasa nebyla účinná během normálního použití tak, jak je potřeba. Dále jsou zde uvedeny specifické materiály čistících prostředků.
V prostředcích pro čištění rozmanitých povrchů, kdy je potřeba odstranit proteinové skvrny, je zahrnuto efektivní množství jednoho nebo více shora popsaných proteasových enzymů. Mezi tyto čistící prostředky patří detergentní prostředky pro čištění tvrdých povrchů neomezené formou (např. kapalné nebo granulované), detergentní prostředky pro čištění látek neomezené formou (např. granulované, kapalné nebo ve formě kostek), prostředky pro mytí nádobí (neomezené formou), orální čistící prostředky neomezené formou (např. zubní prášek, zubní pasty a ústní vody) a čistící prostředky zubních protéz neomezené formou (např. kapalné, tablety). Pojem efektivní množství proteasového enzymu tak, jak se zde tento pojem používá, znamená takové množství shora popsaného proteasového enzymu, které je nutné pro dosažení enzymatické aktivity pro specifický čistící prostředek. Takové efektivní množství snadno odhadne odborník z oblasti techniky a je dáno mnoha faktory, jako je příslušná použitá varianta enzymu, čistící aplikace, specifické složení čistícího prostředku, na tom, jestli je žádoucí kapalný nebo suchý (např. granulovaný, kostka) prostředek a podobně.
Čistící prostředky podle předloženého vynálezu s výhodou obsahují od 0,0001 % hmotn. do 10 % hmotn. jednoho nebo více proteasových enzymů, výhodněji od 0,001 do 1 % hmotn., ještě výhodněji od 0,001 do 0,1 % hmotn. Některé příklady různých čistících prostředků, v nichž se mohou používat proteasové enzymy, jsou diskutovány níže podrobněji. Všechny díly, procenta a poměry jsou hmotnostní, pokud není uvedeno jinak.
Pojem čistící prostředky neurčené pro látky tak, jak se zde používá, znamená čistící prostředky pro tvrdé povrchy, čistící prostředky pro mytí nádobí, orální čistící prostředky, prostředky pro čištění zubních protéz a prostředky pro mytí osob.
A. čistící prostředky pro tvrdé povrchy, nádobí a látky
Proteasový enzym se může používat v jakémkoliv detergentním prostředku, kde je žádoucí vysoké pěnění a/nebo dobré odstraňování nerozpustného substrátu. Proteasový enzym se tedy může používat s různými konvenčními složkami, takže se získají úplné čistící prostředky pro tvrdé povrchy, prostředky pro mytí nádobí, prostředky pro praní látek a podobné. Tyto prostředky mohou být ve formě kapalin, granulí, kostek a podobně. Tyto prostředky se mohou vyrábět jako moderní koncentrované detergenty, které obsahují až 30 až 60 % hmotn. povrchově aktivních činidel.
čistící prostředky podle vynálezu mohou popřípadě, a s výhodou, obsahovat různá aniontová, neiontová, obojetná atd. povrchově aktivní činidla. Tato povrchově aktivní činidla jsou • typicky v prostředcích přítomna v množství od 0,1 do 60, s výhodou od od 1 do 35 % hmotn. z hmotnosti prostředků.
Mezi neomezující příklady povrchově aktivních činidel užitečných podle vynálezu patří konvenční alkyl(s 11 až 18 atomy uhlíku)benzensulfonáty a primární a náhodné alkylsulfáty, sekundární (2,3) alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)sulfáty obecných vzorců CH3 (CH2) X (CHOSOj) M*) CH3 a CH3(CH2)y(CHOSO3)'M*)CH2CH3, v nichž x a (y+1) znamenají alespoň číslo 7, s výhodou alespoň číslo 9, a M znamená ve vodě rozpustný kation, s výhodou sodný kation, alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)alkoxysulfáty (zvláště EO 1-7 ethoxysulfáty), alkyl (s 10 až 18 atomy uhlíku) alkylalkoxykarboxyláty (zvláště EO 1-7 ethoxykarboxyláty), alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)polyglykosidy a jejich odpovídající sulfatované polyglykosidy, estery α-sulfonovaných mastných kyselin s 12 až 18 atomy uhlíku, alkyl(s 12 až 18 atomy uhlíku) a alkylfenolalkoxyláty (zvláště ethoxyláty a směsné ethoxy/propoxy), betainy s 12 až 18 atomy uhlíku a sulfobetainy (sultainy), aminoxidy s 10 až 18 atomy uhlíku, sarkosináty s 8 až 24 atomy uhlíku (zvláště oleoylsarkosinát) a podobné. Výhodnými jsou alkylalkoxysulfáty (AES) a alkylalkoxykarboxyláty (AEC) (Použití těchto povrchově aktivních činidel je také výhodné v kom- j binaci se shora uvedenými aminoxidovými a/nebo betainovými nebo sultainovými povrchově aktivními činidly, závisí to však na potřebách toho, kdo prostředek vyrábí.). Seznam dalších konvenčních užitečných povrchově aktivních činidel je uveden ve standardních textech. Mezi zvláště užitečná povrchově aktivní činidla patří N-methylglukamidy s 10 až 18 atomy uhlíku, které jsou popsány v USA patentu 5 194 639 Connora a spol., vydaného
16. března 1993, který je zde zahrnut jako citace.
Zvláště užitečnou je ta skupina neiontových povrchově aktivních činidel, která je kondenzátem ethylenoxidu s hydrofobní částí. Získá se tak povrchově aktivní činidlo s průměrným poměrem hydrofilní k lipofilní části (HLB) od 5 do 17> s výhodou od 6 do 14, výhodněji od 7 do 12. Hydrofobní (hydrofilní) část může být svoji povahou alifatická nebo aromatická. Délka póly40 oxyethylenové skupiny, která je kondenzována s jakoukoliv hydrofobní skupinou, se může snadno upravit tak, aby se získala . ve vodě rozpustná sloučenina se žádoucí rovnováhou mezi hydrofilními a hydrofobními prvky. Zvláště výhodné jsou ethoxyláty primárních alkoholů s 9 až 15 atomy uhlíku (nebo smíšené ethoxy/propoxy) se 3 až 8 moly ethylenoxidu na mol alkoholu, zvláště primární alkoholy se 14 až 15 atomy uhlíku obshaující 6 až 8 molů ethylenoxidu na mol alkoholu, primární alkoholy s 12 až 15 atomy uhlíku obsahující 3 až 5 molů ethylenoxidu na mol alkoholu a jejich směsi.
V prostředcích podle vynálezu mohou být zahrnuty různé jiné složky, které jsou užitečné v detergentních čistících prostředcích, včetně jiných aktivních složek, nosičů, hydrotropů, pomocných činidel pro zpracování, barviv a pigmentů, rozpouštědel pro kapalné prostředky atd. Jestliže je žádoucí jakýkoliv další inkrement pěnění, mohou se tyto složky podporující pěně• ní, jako jsou alkolamidy s 10 až 16 atomy uhlíku, zahrnout do prostředků, typicky v množství od 1 do 10 % hmotn. Typickými příklady těchto prostředků podporujících pěnění jsou monoethanol a diethanolaminy s 10 až 14 atomy uhlíku. Výhodné je také použití těchto složek podporujících pěnění s vysoce pěnivými povrchově aktivními činidly, jako jsou shora uvedené aminoxidy, betainy a sultainy. Jestliže je to žádoucí, mohou se pro další pěnění přidat rozpustné hořečnaté soli, jako je MgCl2, MgSO4 a podobné, typicky v množstvích od 0,1 do 2 % hmotn.
Kapalné detergentní prostředky podle vynálezu mohou obsahovat vodu a další rozpouštědla a nosiče. Vhodné jsou primární nebo sekundární alkoholy s nízkou molekulovou hmotností, jako jsou například methanol, ethanol, propanol a isopropanol. Pr© rozpouštění povrchově aktivních činidel jsou výhodné monohydro‘ xyalkoholy, mohou se ale používat také polyoly, jako jsou pólyoly s 2 až 6 atomy uhlíku a s 2 až 6 hydroxylovými skupinami (např. 1,3-propandiol, ethylenglykol, glycerin a 1,2-propandiol). Tyto prostředky mohou obsahovat od 5 do 90 % hmotn., typicky od 10 do 50 % hmotn. těchto nosičů.
Detergentní prostředky podle vynálezu se budou výhodně připravovat tak, aby během použití ve vodných čistících postupech měla prací voda pH mezi 6,8 a 11,0. Konečné produkty se tedy připravují typicky s tímto rozmezím pH. Mezi způsoby, kterými se reguluje pH na doporučenou hodnotu, patří použití pufrů, alkalií, kyselin atd. Tyto způsoby jsou dobře známy odborníkům z oblasti techniky.
Jestliže se vyrábějí prostředky pro čištění tvrdých povrchů a prostředky pro čištění látek podle předloženého vynálezu, výrobce si může přát používat různé stavební složky v množství od 5 do 50 % hmotn. Mezi typické stavební složky patří 1 až 10gm zeolity, polykarboxyláty, jako jsou citráty a oxydisukcináty, vrstvené křemičitany, fosforečnany a podobné. Další konvenční složky jsou uvedeny ve standardních předpisech pro výrobu.
Podobně si může výrobce přát používat v těchto prostředcích různé další enzymy, jako jsou celulasy, lipasy, amylasy, peroxidasy a proteasy, typicky v množstvích od 0,001 do 1 % hmotn. V oblasti detergentních pracích prostředků jsou dobře známy různé detergentní složky a enzymy pečující o látky.
V těchto prostředcích se mohou používat také různá bělící činidla, jako jsou peruhličitany, perboritany a podobné, typicky v množstvích od 1 do 15 % hmotn. Jestliže je to žádoucí, tyto prostředky mohou obsahovat také bělící aktivátory, jako je tetraacetylethylendiamin, nonanoyloxybenzensulfonát a podobné, které jsou také známy v oblasti techniky. Používá se množství typicky od 1 do 10 % hmotn.
V těchto prostředcích se mohou používat také různá činidla uvolňující ušpinění, zvláště typu aniontových oligoesterů, různá chelatační činidla, zvláště aminofosfonáty a ethylediamindisukcináty, různá činidla odstraňující ušpinění hlinkami, zvláště ethoxylovaný tetraethylenpentamin, různá dispergační činidla, zvláště polyakryláty a polyaspartáty, různá zjasňovací či42 nidla, zvláště aniontová zjasňovací činidla, různá činidla zabraňující přenosu barviv, jako je polyvinylpyrrolidon, různá činidla potlačující pěnění, zvláště silikony a sekundární alkoholy, různá avivážní činidla látek, zvláště smektitové hlinky a polymery srážející hlinky ve formě vloček (např. poly(oxyethylen)) a podobná činidla, v množství od 1 do 35 % hmotn. Standardní předpisy a publikované patenty obsahují mnoho podrobných popisů těchto konvenčních materiálů.
V čistících prostředcích podle předloženého vynálezu se mohou používat také stabilizátory enzymů. Mezi tyto stabilizátory enzymů patří propylenglykol (s výhodou od 1 do 10 % hmotn.) , mravenčan sodný (s výhodou od 0,1 do 1 % hmotn.) a mravenčan vápenatý (s výhodou od 0,1 do 1 % hmotn.).
1. Prostředky pro čištění tvrdých povrchů
Pojem prostředek pro čištění tvrdých povrchů tak, jak se zde tento pojem používá, znamená kapalné a granulované detergentní prostředky pro čištění tvrdých povrchů, jako jsou podlahy, stěny, koupelny a podobné. Prostředky pro čištění tvrdých povrchů podle předloženého vynálezu obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou od 0,0001 do 10 % hmotn., výhodněji od 0,001 do 5, ještě výhodněji od 0,001 do 1 % hmotn. aktivního proteasového enzymu z hmotnosti prostředku. Vedle jednoho nebo více proteasových enzymů tyto prostředky pro čištění tvrdých povrchů typicky obsahují povrchově aktivní čindilo a ve vodě rozpustnou maskovací složku. V některých specializovaných produktech, jako jsou čistící prostředky na okna ve spreji, však někdy nejsou povrchově aktivní činidla používána, protože mohou způsobit filmové/šmouhovité zbytky na povrchu skla.
Povrchově aktivní složka, jestliže je přítomna, může být obsažena v tak malém množství, jako je 0,1 % hmotn. z hmotnosti prostředků podle vynálezu, typicky však tyto prostředky obsahují od 0,25 do 10, výhodněji od 1 do 5 % hmotn. povrchově aktiv43 ního činidla.
Prostředky budou typicky obsahovat od 0,5 do 50, s výhodou od 1 do 10 % hmotn. detergentní složky. Výhodné pH by mělo být v rozmezí od 8 do 12. Jestliže je nutné upravovat pH, mohou se pro úpravu pH používat konvenční činidla, jako je hydroxid sodný, uhličitan sodný nebo kyselina chlorovodíková.
V prostředcích mohou být zahrnuta rozpouštědla. Mezi užitečná rozpouštědla patří, ale nejsou na ně omezena, glykolethery, jako je monohexylether diethylenglykolu, monobutylether diethylenglykolu, monobutylether ethylengylkolu, monohexylether ethyienglykolu, monobutylether propylenglykolu, monobutylether dipropylenglykolu a dioly, jako je 2,2,4-trimethyl-l,3-pentandiol a 2-ethyl-l,3-hexandiol. Jestliže se používají, pak jsou tato rozpouštědla typicky přítomna v množství od 0,5 do 15, s výhodou od 3 do 11 % hmotn.
Pro usnadnění rychlejšího odpařování prostředku z povrchů, jestliže tento povrch není opláchnut po plné’' aplikaci prostředku na povrch, se mohou v předložených prostředcích používat vysoce těkavá rozpouštědla, jako je isopropanol nebo ethanol. Jestliže se používají, pak jsou těkavá rozpouštědla v prostředcích typicky přítomna v množství od 2 do 12 % hmotn.
Provedení prostředku pro čištění tvrdých povrchů podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími neomezujícími příklady (V následujících příkladech odkaz na proteasa č. v příkladech znamená tu variantu použitou v prostředcích podle předloženého vynálezu, která má číslo shora uvedené v tabulce
III.).
Příklady 1 až 6
Kapalné prostředky pro čištění tvrdých povrchů složka příklad č.:
1 2 3 4 5 6
proteasa č. 12 0,05 0,20 0,02 0,03 0,10 0,03
proteasa č. 4 - - - - 0/20 0,02
EDTA** - - 2,90 2,90 - -
citrát sodný alkyl(s 12 at. uhlíku)benzen- sulfonát sod- 2,90 2,90
ný alkyl(s 12 at. uhlíku)sulfát 1,95 1,95 1,95
sodný (ethoxy)sulfát (s 12 at. uhlí- 2,20 2,20 2,20
ku) sodný*** dimethylamin- oxid (s 12 at. 2,20 2,20 2,20
uhlíku) kumensu1fonát 0,50 — 0,50 — 0,50
sodný 1,30 - 1,30 - 1,30 -
hexylkarbitol*** _ ***** voda 6,30 6,30 6,30 doplnit do 6,30 100 % hmotn 6,30 • 6,30
tetrasodná sůl ethylendiamindioctové kyselina
WWW monohexylether diethylenglykolu všechny prostředky mají pH upraveno na hodnotu 7
V příkladech 1 až 4 proteasy č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 5 a 6 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 7 až 12
Sprej ové prostředky pro čištění tvrdých povrchů a pro odstraňování plísní v domácnosti
složka příklad č.:
7 8 9 10 11 12
proteasa č. 12 0,20 0,05 0,10 0,30 0,20 0,30
proteasa č. 4 - - - - 0,30 0,10
oktylsulfát
sodný 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00
dodecylsulfát
sodný 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00
hydroxid sodný 0,80 0,80 0,80 0,80 0,80 0,80
křemičitan (Na) 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04
parfém 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35
voda doplnit do 100 % hmotn.
Produkt má pH kolem 7.
V příkladech 7 až 10 proteasy č. l až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 11 a 12 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
2. Prostředky pro mytí nádobí
V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro mytí nádobí obsahují jeden nebo více proteasových enzymů. Pojem prostředek pro mytí nádobí tak, jak se zde používá, znamená všechny formy prostředků pro čištění nádobí včetně, ale bez omezení na ně, granulovaných a kapalných forem. Provedení prostředku pro mytí nádobí podle přeloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 13 až 18
Prostředky pro mytí nádobí
složka příklad č.:
13 14 15 16 17 18
proteasa č. 12 0,05 0,50 0,02 0,40 0,10 0,03
proteasa č. 4 N-methylgluka- mid s 12 až 14 0,40 0,02
atomy uhlíku ethoxy(1)sul- fát s 12 0,90 0,90 0,90 0,90 0,90 0,90
atomy uhlíku 2-methylundě- 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00
kanová kys. ethoxy(2)kar- boxylát s 12 4,50 4,50 4,50 4,50
atomy uhlíku alkohol(s 12 atomy uhlíku)- 4,50 4,50 4,50 4,50 4,50 4,50
ethoxylát aminoxid s 12 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00
atomy uhlíku kumensulfonát 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00
sodný 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00
ethanol 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00
hořečnaté ionty 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20
(jako MgCl2)
vápenaté ionty 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40
(jako CaCl2) voda doplnit do 100 % hmotn.
Produkt má pH upraveno na hodnotu 7.
V příkladech 13 až 16 proteasy č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 17 a 18 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklad 19
Granulovaný prostředek pro mytí v automatické myčce nádobí
složka A B C
kyselina citrónová 15,0 - -
citrát 4,0 29,0 15,0
kopolymer akrylát/methakrylát 6,0 - 6,0
kopolymer kyseliny akrylové a maleinové - 3,7 -
suchý přidaný uhličitan 9,0 - 20,0
křemičitan alkalického kovu 8,5 17,0 9,0
parafin - 0,5 -
benzotriazol - 0,3 -
Termamyl 60T 1,5 1,5 1,0
proteasa č. 12 (4,6% kousky) 1,6 1,6 1,6
peruhličitan (AvO) 1,5 - -
monohydrát perboritanu - 0,3 1,5
tetrahydrát perboritanu - 0,9 -
tetraacetylethylendiamin 3,8 4,4 -
diethylentriaminpentamethylenfosfonová
kyselina (hořečnatá sůl) 0,13 0,13 0,13
3krát ethoxylovaný alkylethoxysulfát 3,0 - -
alkylethoxypropoxyneiontové povrchově
aktivní činidlo - 1,5 -
potlačovatel pěnění 2,0 - -
neiontové povrchově aktivní činidlo
Olin SLF18 - - 2,0
síran doplnit do 100 % hmotn«,
V příkladech 19 A až C proteasy č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 19 A až C se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
3. Prostředky pro čištění látek
V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro čištění látek obsahují jeden nebo více proteasových enzymů. Pojem prostředek pro čištění látek tak, jak se zde používá, se týká všech forem detergentních prostředků pro čištění látek, včetně, ale bez omezení na ně, granulovaných a kapalných pro-= středků a prostředků ve formě kostek.
a. Granulované prostředky pro čištění látek
Granulované prostředky pro čištění látek podle předložené” ho vynálezu obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou 0,001 až 10, výhodněji 0,005 až 5, výhodněji 0,01 až 1 % hmotn. aktivního proteasového enzymu z hmotnosti prostředku. Vedle jednoho nebo více proteasových enzymů granulované prostředky pro čištění látek typicky obsahují alespoň jedno povrchově aktivní činidlo, jednu nebo více stavebních složek a v některých případech bělící činidlo.
Provedení granulovaných prostředků pro čištění látek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 20 až 23
Granulovaný prostředek pro čištění látek příklad č.:
20 21 22 23
proteasa č. 12 (4% kousky) 0,10 0,20 0,03 0,05
proteasa č. 4 (4% kousky) - - 0,02 0,05
lineární alkyl(se 13 atomy uhlíku)-
benzensulfonát 22,00 22,00 22,00 22,00
fosfát (jako sodná sůl trifosfo-
rečnanu 23,00 23,00 23,00 23,00
uhličitan sodný 23,00 23,00 23,00 23,00
křemičitan sodný 14,00 14,00 14,00 14,00
zeolit 8,20 8,20 8,20 8,20
chelatační činidlo (diethylentri-
aminpentaoctová kyselina) 0,40 0,40 0,40 0,40
síran sodný 5,50 5,50 5,50 5,50
voda doplnit do 100 % ] tirootn.
V příkladech 20 až 21 proteasy č. 1 až 11 a 13 až : 25 uve-
děné v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a
VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 22 a 23 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 24 až 27
Granulovaný prostředek pro čištění látek
složka příklad δ.:
24 25 26 27
proteasa č. 12 (4% kousky) 0,10 0,20 0,03 0,05
proteasa č. 4 (4% kousky) - - 0,02 0,05
alkyl(se 13 atomy uhlíku)-
benzensulfonát 12,00 12,00 12,00 12,00
zeolit A (1 až 10 μπι) 26,00 26,00 26,00 26,00
2-butyloktanová kyselina 4,00 4,00 4,00 4,00
sodná sůl sekundárního (2,3)alkyl-
(s 12 až 14 atomy uhlíku)sulfátu 5,00 5,00 5,00 5,00
citrát sodný 5,00 5,00 5,00 5,00
optické zjasňovadlo 0,10 0,10 0,10 0,10
síran sodný 17,00 17,00 17,00 17,00
plnidla, voda, minoritní složky doplnit do 100 % hmotn.
V příkladech 24 a 25 proteasy č. l až 11 a 13 až 25 uve-
děné v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteásu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 26 a 27 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 28 a 29
Granulované prostředky pro čištění látek
složka příklad č.:
28 29
lineární alkylbenzensulfonát 11,4 10,70
lojový alkylsulfát 1,80 2,40
alkylsulfát se 14 až 15 atomy uhlíku 3,00 3,10
7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15 atomy
uhlíku 4,00 4,00
llkrát ethoxylovaný lojový alkohol 1,80 1,80
dispergační činidlo 0,07 0,1
silikonová kapalina 0,80 0,80
citrát trojsodný 14,00 15,00
kyselina citrónová 3,00 2,50
zeolit 32,50 32,10
kopolymer kyseliny maleinové s kys. akrylovou 5,00 5,00
diethylentriaminpentamethylenfosfonová kys. 1,00 0,20
proteasa č. 12 (4% kousky) 0,30 0,30
lipasa 0,36 0,40
amylasa 0,30 0,30
křemičitan sodný 2,00 2,50
síran sodný 3,50 5,20
polyvinylpyrrolidon 0,30 0,50
perboritan 0,5 1
fenolsulfonát 0,1 0,2
peroxidasa 0,1 0,1
minoritní složky doplnit do 100
Příklady 30 a 31
Granulované prostředky pro čištění látek
složka příklad Č.:
30 31
lineární alkyl(s 12 at. uhlíku)benzensulfonát 6,5 8,0
síran sodný 15,0 18,0
zeolit A 26,0 22,0
nitriltriacetát sodný 5,0 5,0
polyvinylpyrro1idon 0,5 0,7
tetraacetylethylediamin 3,0 3,0
kyselina boritá 4,0 -
perboritan 0,5 1
fenolsulfonát 0,1 0,2
proteasa č. 12 (4% kousky) 0,4 0,4
plnidla (např. křemičitany, uhličitany,
parfémy, voda) doplnit do 100
Příklad 32
Kompaktní granulovaný prostředek pro čištění látek složky % hmotn.
alkylsulfát 8,0 alkylethoxysulfát 2,0 směs 3krát a 7krát ethoxylovaných alkoholů s a 45 atomy uhlíku 6,0 amid mastné polyhydroxykyseliny 2,5 zeolit 17,0 vrstevnatý křemičitan/citrát 16,0 uhličitan 7,0 kopolymer kyseliny maleinové s kyselinou akrylovou 5,0 polymer uvolňující ušpinění 0,4 karboxymethylcelulosa 0,4 póly(4-vinylpyridin)-N-oxid 0,1 kopolymer vinylimidazolu a vinylpyrrolidonu 0,1 PEG2000 0,2 proteasa č. 12 (4% kousky) 0,5 lipasa 0,2 celulasa 0,2 tetraacetylethylendiamin 6,0 peruhličitan 22,0 ethylendiamindijantarová kyselina 0,3 potlačovatel pěnění 3,5 dvojsodná sůl 4,4'-bis(2-morfolino-4-anilino-l,3,5triazin-6-ylamino)stilben-2,2'-disulfonové kyseliny 0,25 disodium-4,4'-bis(2-sulfostyryl)bifenyl 0,05 voda, parfém a minoritní složky do 100
Příklad 33
Granulovaný prostředek pro čištění látek složka % hinotn.
lineární alkylbenzensulfonát alkylsuflát se 16 až 18 atomy uhlíku
7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15 atomy uhlíku kokosový alky1-dimethyl-hydroxyethy1-amoniumchlorid dispergační činidlo silikonová kapalina citrát trojsodný zeolit 4A kopolymer kyseliny maleinové a kyseliny akrylové diethylentriaminpentamethylenfosfonová kyselina perboritan tetraacetylethylendiamin smektitová hlinka póly(oxyethylen) (mol. hmotn. 300 000) proteasa č. 12 (4% kousky) lipasa amylasa celulasa křemičitan sodný uhličitan sodný karboxymethylcelulosa zjasňovací činidla voda, parfém, a minoritní složky do
7,6
1,3
4,0 lr4
0,07
0,8
5,0
15,0
4,0
0,4
15,0
5,0
10,0
0,3
0,4
0,2
0,3
0,2
3,0
10,0
0,2
0,2
100
Příklad 34
Granulovaný prostředek pro čištění látek složka % hmotn.
lineární alkylbenzensulfonát 6,92 lojový alkylsulfát 2,05
7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15 atomy uhlíku 4,4 3krát ethoxylovaný alkyl(s 12 až 15 atomy uhlíku)ethoxysulfát 0,16 zeolit 20,2 citrát 5,5 uhličitan 15,4 křemičitan 3,0 kopolymer kyseliny maleinové s kyselinou akrylovou 4,0 karboxymethylcelulasa 0,31 polymer uvolňující ušpinění 0,30 proteasa č. 12 (4% kousky) 0,2 lipasa 0,36 celulasa 0,13 tetrahydrát perboritanu 11,64 monohydrát perboritanu 8,7 tetraacetylethylendiamin 5,0 diethylentriaminpentamethylfosfonová kyselina 0,38 síran hořečnatý 0,40 zjasňovací činidlo 0,19 parfém, silikon, potlačovatelé pěnění 0,85 minoritní složky do 100
V příkladech 28 až 34 se proteásami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 28 až 34 se substitucí proteasy č.
jakoukoliv kombinací proteas užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
b. Kapalné prostředky pro čištění látek
Kapalné prostředky pro čištění látek podle předloženého vynálezu obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou od 0,0001 do 10, výhodněji od 0,001 do 1 a nejvýhodněji od 0,001 do 0,1 % hmotn. aktivního proteasového enzymu z hmotnosti prostředku. Tyto kapalné prostředky pro čištění látek dále typicky obsahují aniontové povrchově aktivní činidlo, mastnou kyselinu, ve vodě rozpustnou detergentní stavební složku a vodu.
Provedení kapalného prostředku pro čištění látek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 35 až 39
Kapalné prostředky pro čištění látek příklad č.:
složka
35 36 37 38 39
proteasa č. 12 0,05 0,03 0,30 0,03 0,10
proteasa č. 4 - - - 0,01 0,20
sodná sůl alkyl(s 12 až 14 atomy uhlíku)sulfátu sod-
ného 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00
2-butyloktanová kyselina 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00
citrát sodný 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00
alkohol(s 10 atomy uhlíku)-
ethoxylát (3) 13,00 13,00 13,00 13,00 13,00
monoethanolamin 2,50 2,50 2,50 2,50 2,50
voda, propylenglýko1/ethano1
(100:1:1) doplnit do 100 % hmotn.
V příkladech 35 až 37 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteásy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 38 a 39 se substitucí proteásy č. 12 a Č. 4 jakoukoliv kombinaci proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 40 a 41
Kapalný prostředek pro čištění látek příklad č.:
složka _
41
alkenyl(s 12 až 14 atomy uhlíku)jantarová kys. 3,0 8,0
monohydrát kyseliny citrónové 10,0 15,0
alkylsulfát s 12 až 15 atomy uhlíku sodný 2krát ethoxylovaný sulfát sodný alkoholu 8,0 8,0
s 12 až 15 atomy uhlíku - 3,0
7krát ethoxylovaný alkohol s 12 až 15 at. uhlíku • 8,0
5krát ethoxylovaný alkohol s 12 až 15 at. uhlíku 8,0 -
diethylentriaminpenta(methylenfosfonová) kys. 0,2 -
kyselina olejová 1,8 -
ethanol 4,0 4,0
propandiol 2,0 2,0
proteasa č. 12 0,2 0,2
polyvinylpyrrolidon 1,0 2,0
potlačovatel pěnění 0,15 0,15
NaOH do pH 7,5
perboritan 0,5 1
fenolsulfonát 0,1 0,2
peroxidasa 0,4 0,1
voda a minoritní složky doplnit do 100
V příkladech 40 a 41 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 40 a 41 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteas užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získá59 jí v podstatě podobné výsledky.
c. Prostředky pro čištění látek ve formě kostek
Prostředky pro čištění látek ve formě kostek podle předloženého vynálezu vhodné pro ruční praní látek obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou od 0,001 do 10, výhodněji od 0,01 do 1 % hmotn. proteásového enzymu z hmotnosti prostředku.
Provedení prostředku pro čištění látek ve formě kostek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 42 až 45
Prostředky pro čištění látek ve formě kostek
složka příklad č.:
42 43 44 45
proteasa č. 12 0,3 - 0,1 0,02
proteasa δ. 4 - - 0,4 0,03
sodná sůl alkyl(s 12 až 16
atomy uhlíku)sulfátu sodného 20,00 20,00 20,00 20,00
N-methylglukamid s 12 až 14 atomy
uhlíku 5,0 5,0 5,0 5,00
alkyl(s li až 13 atomy uhlíku)-
benzensulfonát sodný 10,0 10,0 10,0 10,00
uhličitan sodný 25,0 25,0 25,0 25,00
difosforečnan sodný 7,0 7,0 7,0 7,00
trifosforečnan sodný 7,0 7,0 7,0 7,00
zeolit A (0,1 až 10 μα) 5,0 5,0 5,0 5,00
karboxymethylcelulosa 0,2 0,2 0,2 0,20
polyakrylát (mol. hmotn. 1400) 0,2 0,2 0,2 0,20
kokosový monoethanolamid 5,0 5,0 5,0 5,00
zjasňovací činidlo, parfém 0,2 0,2 0,2 0,20
síran vápenatý 1,0 1,0 1,0 1,00
síran hořečnatý 1,0 1,0 1,0 1,00
voda 4,0 4,0 4,0 4,00
plnidlo* doplnit do 100 % hmotn.
* Vybere se z vhodných materiálů, jako je CaC03, talek, hlinka, křemičitany a podobné.
V příkladech 42 a 43 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 44 a 45 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
B. Další čistící prostředky
Vedle shora uvedených prostředků pro čištění tvrdých povrchů, pro mytí nádobí a pro čištění látek může být do různých čistících prostředků, kde je žádoucí hydrolýza nerozpustného substrátu, zahrnut jeden nebo více proteasových enzymů. Mezi takové další čistící prostředky patří, ale nejsou omezeny jenom na tyto, orální čistící prostředky, prostředky pro čištění zubních protéz a prostředky pro čištění kontaktních čoček.
1. Orální čistící prostředky
V jiném provedení podle předloženého vynálezu se do prostředků užitečných pro odstraňování proteinových znečištěnin ze zubů nebo zubních protéz zahrne farmaceuticky přijatelné množství jednoho nebo více proteasových enzymů. Pojem orální čistící prostředky tak, jak je zde používán, znamená prostředky pro čištění zubů, zubní pasty, zubní gely, zubní prášky, ústní vody, ústní spreje, ústní gely, žvýkací gumy, pastilky, sáčky, tablety, biogely, profylaktické pasty, zubní léčivé roztoky a podobné. Orální čistící prostředky podle předloženého vynálezu s výhodou obsahují od 0,0001 do 20 % hmotn. jednoho nebo více proteasových enzymů podle předloženého vynálezu, výhodněji od 0,001 do 10 % hmotn., ještě výhodněji od 0,01 % do 5 % hmotn. z hmotnosti prostředku, a famaceuticky přijatelný nosič. Pojem farmaceuticky přijatelný tak, jak se zde používá, znamená, že léčivá látka, léčivý přípravek nebo inertní složky, které tento pojem popisuje, jsou vhodné pro použití v kontaktu s tkáněmi člověka a nižších živočichů bez nepatřičné toxicity, neslučitelnosti, nestability, dráždění, alergické odpovědi a podobných, při odůvodněném poměru prospěch/riziko.
Farmaceuticky přijatelné orální čistící nosné složky orálních čistících složek budou v orálních čistících prostředcích typicky obvykle obsaženy v množství od 50 do 99,99 % hmotn., s výhodou 65 až 99,99, výhodněji 65 až 99 % hmotn. z celkové hmotnosti prostředku.
Farmaceuticky přijatelné nosné složky a případné složky, které mohou být zahrnuty v orálních čistících prostředcích podle předloženého vynálezu, jsou dobře známy odborníkům z oblasti techniky. Rozmanité typy prostředků, nosných složek a případných složek užitečných pro orální čistící prostředky jsou popsány v USA patentu 5 096 700 Seibela, vydaném 17. března 1992, v USA patentu 5 028 414 Sampathkumara, vydaném 2. července 1991, a v USA patentu 5 028 415 Benedicta, Bushe a Sunberga, vydaném 2. července 1991. Všechny jsou zde uvedeny jako citace.
Provedení orálního čistícího prostředku podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 46 až 49
Prostředek pro čištění zubů
složka příklad číslo:
46 47 48 49
proteasa č. 12 2,000 3,500 1,500 2,000
sorbitol (70% (hmotn.)
vodný roztok 35,000 35,000 35,000 35,000
PEG-6* 1,000 1,000 1,000 1,000
křemičitanové dentální**
abrasivo 20,000 20,000 20,000 20,000
fluorid sodný 0,243 0,243 0,243 0,243
oxid titaničitý 0,500 0,500 0,500 0,500
sodná sůl sacharinu 0,286 0,286 0,286 0,286
alkylsulfát sodný (27,9%
(hmotn.) vodný roztok) 4,000 4,000 4,000 4,000
ochucovací činidlo 1,040 1,040 1,040 1,040
karboxyvinylový*** po-
lymer 0,300 0,300 0,300 0,300
karegenan 0,800 0,800 0,800 0,800
voda doplnit do 100 % hmotn.
PEG-6 znamená polyethylenglykol s mol. hmotn. 600. Vysrážený oxid křemičitý identifikovaný jako Zeodent 119 od
J.M.Hubera.
Carbopol od B.F.Goodrich Chemical Company.
**** Karagenan lota od Hercules Chemical Company.
V příkladech 46 až 49 se proteasami č. l až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 46 až 49 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a
VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 50 až 53
Prostředek ústní vody
složka 50 příklad 51 Číslo 52 • • 53
protesá č. 12 3,00 7,50 1,00 5,00
SDA 40 alkohol 8,00 8,00 8,00 8,00
ochucovací činidlo 0,08 0,08 0,08 0,08
emulgační čindilo 0,08 0,08 0,08 0,08
fluorid sodný 0,05 0,05 0,05 0,05
glycerin 10,00 10,00 10,00 10,00
sladidlo 0,02 0,02 0,02 0,02
kyselina benzoová 0,05 0,05 0,05 0,05
hydroxid sodný 0,20 0,20 0,20 0,20
barvivo 0,04 0,04 0,04 0,04
voda doplnit do 100 % hmotn.
V příkladech 50 až 53 se proteasami č . 1 až 11 a 13 až 25
uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 50 až 53 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 54 až 57
Prostředek ve formě pastilky
složka 54 příklad číslo: 57
55 56
proteasa č. 12 0,01 0,03 0,10 0,02
sorbitol 17,50 17,50 17,50 17,50
manitol 17,50 17,50 17,50 17,50
škrob 13,60 13,60 13,60 13,60
sladidlo 1,20 1,20 1,20 1,20
ochucovací činidlo 11,70 11,70 11,70 11,70
barvivo 0,10 0,10 0,10 0,10
kukuřičný sirup doplnit do 100 % hmotn.
V příkladech 54 až 57 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 54 až 57 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 58 až 61
Prostředek ve formě Žvýkačky složka příklad číslo:
58 59 60 61
proteasa č. 12 0,03 0,02 0,10 0,05
krystaly sorbitolu 38,44 38,40 38,40 38,40
základ přírodní gumy*
Paloja-T 20,00 20,00 20,00 20,00
sorbitol (70% vodný roztok) 22,00 22,00 22,00 22,00
manitol 10,00 10,00 10,00 10,00
glycerin 7,56 7,56 7,56 7,56
ochucovací činidlo 1,00 1,00 1,00 1,00
* dodáván L.A.Dreyfus Company
V příkladech 58 až 61 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteásy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 58 až 61 se substitucí proteásy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
2. Prostředky pro čištění zubních protéz
V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro čištění zubních protéz mimo ústní dutinu obsahují jeden nebo více proteasových enzymů. Tyto prostředky pro čištění zubních protéz obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou od 0,0001 do 50 % hmotn. jednoho nebo více proteasových enzymů, výhodněji od 0,001 % do 35 %, ještě výhodněji od 0,01 % do 20 % hmotn. z hmotnosti prostředku, a nosič pro čištění zubní protézy. V oblasti techniky jsou dobře známy různé formy prostředků pro čištění zubních protéz, jako jsou efervescentní tablety a podobné (viz například USA patent 5 055 305 Younga, který je zde zahrnut jako citace) . Obvykle obsahují jeden nebo více proteasových enzymů pro odstraňování proteinových skvrn ze zubních protéz.
Provedení prostředku pro čištění zubních protéz podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 62 až 65
Dvouvrstvá efervescentní tableta pro čištění zubních protéz ‘ složka příklad číslo:
62 63 64 65
kyselá vrstva:
proteasa č. 12 1,0 1,5 0,01 0,05
kyselina vinná 24,0 24,0 24,00 24,00
uhličitan sodný 4,0 4,0 4,00 4,00
kyselina sulfamová 10,0 10,0 10,00 10,00
PEG 20,000 4,0 4,0 4,00 4,00
hydrogenuhličitan sodný 24,5 24,5 24,50 24,50
persíran draselný 15,0 15,0 15,00 15,00
pyrofosforečnan sodný 7,0 7,0 7,00 7,00
pyrogenní oxid křemičitý 2,0 2,0 2,00 2,00
TAED* 7,0 7,0 7,00 7,00
ricinoleylsulfosukcinát 0,5 0,5 0,50 0,50
ochucovací činidlo 1,0 1,0 1,00 1,00
alkalická vrstva:
monohydrát perboritanu
sodného 32,0 32,0 32,00 32,00
hydrogenuhličitan sodný 19,0 19,0 19,00 19,00
tetraacetylethylendiamin 3,0 3,0 3,00 3,00
trifosforečnan sodný 12,0 12,0 12,00 12,00
PEG 20,000 2,0 2,0 2,00 2,00
persíran draselný 26,0 26,0 26,00 26,00
uhličitan sodný 2,0 2,0 2,00 2,00
pyrogenní oxid křemičitý 2,0 2,0 2,00 2,00
barvivo/ochucovací činidlo 2,0 2,0 2,00 2,00
V příkladech 62 až 65 se proteasami č . 1 až 11 a 13
uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách
V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 62 až 65 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
3. Osobní čistící prostředky
Podle jiného provedení předloženého vynálezu osobní čistící prostředky pro čištění kůže (v kapalné formě nebo ve formě kostky) obsahují jeden nebo více proteasových enzymů. Tyto prostředky typicky obsahují od 0,001 do 5 % hmotn. proteasového enzymu, s výhodou od 0,005 do 2 a nejvýhodněji od 0,01 do 0,8 % hmotn. z hmotnosti prostředku. Výhodné osobní čistící prostředky, v nichž jsou obsaženy zde popsané proteasové enzymy, jsou popsány v USA patentových přihláškách SN 08/121 623 a SN 08/121 624, obě Visschera a spol., podané 14. září 1993, jejich celé popisy jsou zde zahrnuty jako odkazy. Tyto prostředky jsou ilustrovány následujícími příklady.
Příklad 66
Kapalné osobní čistící prostředky obsahující mýdlo
složka % hmotn.
mýdlo (draselné nebo sodné) 30 % hmotn. laurátu 30 % hmotn. myristátu 25 % hmotn. palmitátu 15 % hmotn. stearátu 15,00
mastné kyseliny (shora uvedené poměry) 4,50
laurylsarkosinát sodný 6,00
laureth-3-sulfát sodný 0,66
kokosový amidopropylbetain 1,33
glycerin 15,00
propylenglykol 9,00
Polyquaternium 10 0,80
distearát ethylenglykolu (EDTA) 1,50
propylparaben 0,10
methylparaben 0,20
proteasa č. 12 0,10
KOH nebo NaOH podle potřeby pro úpravu pH
síran vápenatý 3
kyselina octová 3
voda doplnit do 100
Příklad 67
Osobní čistící prostředek ve formě kostky
složka % hmotn.
kokosový isethionát sodný 47,20
cetearylsulfát sodný 9,14
parafin 9,05
sodné mýdlo (in šitu) 3,67
isethionát sodný 5,51
chlorid sodný 0,45
oxid titaničitý 0,4
trojsodná sůl EDTA 0,1
etidronát trojsodný 0,1
parfém 1,20
síran sodný 0,87
proteasa č. 12 0,10
voda, minoritní složky doplnit do 100
V příkladech 66 až 67 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 66 až 67 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklad 68
Test účinnosti praní
Účinnost praní variant užitečných v prostředcích podle předloženého vynálezu se vyhodnocuje měření odstranění barev z EMPA 116 (krev, mléko, uhelná čerň na bavlně) kousků látek (Testfabrics, Inc., Middleses, N.J. 07030, USA).
Šest EMPA 116 kousků rozstříhaných na velikost 7,5 krát
11,2 cm s perforovaným okrajem se umístí do kelímků zařízení Model 7243S Terg-O-Tometer (United States Testing Co., Inc., Hoboken, N.J., USA) obsahujících 1000 ml vody o tvrdosti 15 gpg (poměr hmotností vápenatých k hořečnatým iontům 3:1), 7 g pracího činidla a příslušné množství enzymu. Podstatou detergentního činidla je WFK1 od wfk-Testgewebe GmbH, Adlerstrasse 42, Postfach 13 07 62, D-47759 Krefeld, Německo:
složka % hmotn. v konečném produktu
zeolit A 25
síran sodný 25
uhličitan sodný 10
lineární alkylbenzensulfonát 8,8
alkoholethoxylát (7-8 EO) 4,5
sodné mýdlo 3
křemičitan sodný (SiO2:Na2O v poměru 3 ,3:1) 3
K tomuto základu detegentu se přidají následující složky;
složka % hmotn. v konečném produktu
monohydrát perboritanu sodného 13
kopolymer (Sokalan CP5) 4
TAED (Mykon ATC Green) 3
enzym 0,5
zjasňovací činidlo (Tinopal AMS-GX) 0,2
Monohydrát perboritanu sodného se získá od Degussa Corpo ration, Ridgefield-Park, N.J. 07660, USA. Sokalan CP5 se získá od BASF Corporation, Parsippany, N.J. 07054. Mykon ATC Green (TAED, tetracetylethylendiamin) se získá od Warwick International, Limited, Mostyn, Holywell, Clwyd CH8 9HE, Anglie. Tinopal AMS GX se získá od Ciba-Geigy Corporation, Greensboro, N.C. 27419, USA).
Šest EMPA 116 kousků se pere v detergentu s enzymem 30 minut při 60 °C, potom se máchá dvakrát 5 minut v 1000 ml vody. Enzymy se přidávají na konečnou koncentraci od 0,05 do 1 ppm podle standardních křivek a 0,25 ppm pro rutinní analýzu. Kousky se vysuší a vyždímají a odrazivost od kousků se měří hodnotou L na L*a*b* stupnicepřístroje Minolta Chromá Meter, Model CR-200 (Minolta Corporation, Ramsey, N.J. 07446, USA) . Účinnost se popisuje jako procento účinnosti B. lentus (GG36) proteasy a vypočte se podělením množství B. lentus (GG36) proteasy množstvím variantní proteasy, kterého je potřeba k dosažení stejného odstranění zabarvení krát 100. Data jsou uvedena v tabulce VII.
Tabulka VII
enzym účinnost praní
B. lentus subtilisin 100
N76D 301
N76D/S103A 230
N76D/V104I 130
N76D/I107V 160
N76D/S99D/S101R 370
N76D/S99D/S103A 290
N76D/S101R/S103A 130
N76D/S101R/V104I 300
N76D/S103A/V104I 320
N76D/S103G/V104I 160
N76D/S103A/V104F 210
N76D/S103A/V104N 110
Tabulka VII (pokračování)
enzym účinnost praní
N76D/S103A/V104T 170
N76D/V104I/I107V 210
N76D/S99D/S101R/S103A 220
N76D/S99D/S101R/V104I 140
N76D/S101G/S103A/V104I 170
N76D/S101R/S103A/V104I 150
N76D/S103A/V104I/S105A 170
N76D/S103A/V104T/I107A 120
N76D/S103A/V104T/I107L 110
N76D/S103A/V104I/L126F 110
N76D/S103A/V104I/S128G 280
N76D/S103A/V104I/L135I 160
N76D/S103A/V104I/L135V 160
N76D/S103A/V104I/D197E 170
N76D/S103A/V104I/N204A 160
N76D/S103A/V104I/N204G 150
N76D/S103A/V104I/P210I 470
N76D/S103A/V104I/M222A 100
N76D/S103A/V104I/T260P 280
N76D/S103A/V104I/S265N 190
Příklad 69
Stabilita proteasy v kapalném detergentním prostředku
Srovnání stability proteasy, pokud jde o inaktivaci v kapalném detergentním prostředku, se provádí pro Bacillus lentus subtilisin a jeho variantní enzym N76D/S103A/V104I podle zde uvedeného postupu. Detergentním prostředkem pro toto studium je komerčně zakoupená láhev kapalného pracího prostředku Tide Ultra vyrobeného v USA firmou The Procter and Gamble Company. Pro deaktivaci in šitu proteasy je nutné tepelné zpracování de75 tergentního prostředku. Toho se dosáhne inkubováním detergentu
4,5 hodiny při 96 °C. Koncentrované přípravky B. lentus subtilisinu a varianty N76D/S103A/V104I se pak v množství 20 g enzymu na litr přidají k tepelně zpracovanému Tide Ultra za teploty místnosti na konečnou koncentraci 0,3 g enzymu v litru detergentního přípravku. Teplem zpracovaný detergent s proteasou se pak inkubuje ve vodní lázni v termostatu při 50 °C. V intervalu 0, 24, 46, 76 a 112 h se odebírají vzorky a vyhodnocují se na aktivitu enzymu přidáním do lem kyvety, která obsahuje l,2mM substrát, syntetický peptid suc-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilid rozpuštěný v O,1M tris-HCl pufru, pH 8,6, udržované v termostatu na 25 °C. Původní lineární reakční rychlost se sleduje spektrofotometricky sledováním absorbance reakčního produktu p-nitroanilinu při 410 nm jako funkce času. Jak je uvedeno na obrázku 10, u varianty N76D/S103A/V104I je pozorována významná větší stabilita vůči deaktivaci než u přírodního B. lentus enzymu. Vyhodnocený poločas deaktivace těchto dvou enzymů v degetergentním prostředku Tide Ultra za daných testovaných podmínek byl 45 h pro B. lentus subtilisin a 125 h pro variantu N76D/S103A/V104I .
I když je tento vynález popsán příslušnými provedeními, odborníkům v oblasti techniky bude zřejmé, že lze udělat různé změny a modifikace tohoto vynálezu, aniž by se tyto odchýlily od duchu a rozsahu tohoto vynálezu. Připojené nároky jsou myšleny tak, že pokrývají všechny takové modifikace, které jsou v rozsahu tohoto vynálezu.
se zdá, že zbývající nárokovaný předmět nezahrnujeí stupeň vynálezecké činnosti, odobně specifická provedení zbývajících nárokovaných předmětů podobně nejsou považována za vynálezy, které samy o sobě mají nějakou vlastnost, která by umožnila uznat vynálezeckou činnost, článek 33 (1)(3) PCT.
2. Nárok 37 se týká způsobu osobního čištění, v rozsahu tohoto způsobu je zahrnuto mytí částí těla člověka. Kdyby byl tento nárok zkoumán v Evropské regionální fázi, byl by považován za nárok, jemuž jemuž chybí průmyslová použitelnost, protože rozsah tohoto nároku je aplikovatelný také na situce, které se týkají privátní sféry jednotlivce.

Claims (36)

1. Čistící prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje:
a) efektivní množství proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena náhradou různých aminokyselin prekursorové karbonylové hydrolasy různými zbytky aminokyselin, v takové poloze prekursorové karbonylové hydrolasy, která odpovídá poloze +76 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu v kombinaci s jednou nebo více polohami zbytků aminokyselin, které odpovídají polohám vybraným ze skupiny sestávající z +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a +274 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu, a
b) jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s tímto proteasovým enzymem.
2. Čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku jsou vybrány ze skupiny, která sestává z povrchově aktivních činidel, rozpouštědel, pufrů, enzymů, činidel uvolňujících ušpinění, činidel uvolňujících ušpinění hlinkami, dispergačních činidel, zjasňovacích činidel, potlačovatelů pěnění, avivážních činidel, podněcovatelů pěnění, stabilizátorů énzymů, stavebních složek, bělících činidel, barviv, parfémů a jejích směsí.
3. Čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku obsahují alespoň 1 % hmotn. povrchově aktivního činidla z hmotnosti prostředku, toto povrchově aktivní činidlo obsahuje materiály, které jsou vybrány ze skupiny sestávající z alkylbenzensulfonátů, primárních alkylsulfátů, sekundárních alky lsulf átů, alkylalkoxysulfátů, alkylalkoxykarboxylátů, alkylpolyglykosidů a jejich odpovídajících sulfatovaných polyglykosidů, esterů α-sulfonovaných mastných kyselin, alkyl a alkylfenolalkoxylátů, betainů a sulfobetainů, aminoxidů, N-methylglukamidů, neiontových primárních alkoholethoxylátů, směsných ethoxy/propoxylátů neiontových primárních alkoholů a jejich směsí.
4. čistící prostředek podle nároku 3,vyznačuj ící se t í m, že obsahuje alespoň 5 % hmotn. stavební složky, která je vybrána se skupiny sestávající ze zeolitů, polykarboxylátů, vrstevnatých fcřemičitanů, fosforečnanů a jejich směsí.
5. čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku obsahují alespoň jedno bělící činidlo.
6. Čistící prostředek podle nároku 5, vyznačuj ící se t í m, že bělící činidlo je vybráno ze skupiny sestávající z peruhličitanů, perboritanů a jejich směsí a popřípadě dále obsahující alespoň jeden bělící aktivátor.
7. Čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku obsahují alespoň jeden enzym, který je vybrán ze skupiny sestávající z celulas, lipas, amylas, proteás, peroxidas a jejich směsí.
8. čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku obsahují alespoň jedno avivážní činidlo.
9. čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že prekursorem karbonylové hydrolasy proteasového enzymu je subtilisin a proteasový enzym znamená variantu subtilisinu s kombinací substitucí provedených v polohách ekvivalentních polohám 76/99, 76/101, 76/103,
76/104, 76/107, 76/123, 76/99/101, 76/99/103, 76/99/104, 76/101/103, 76/101/104, 76/103/104, 76/104/107, 76/104/ /123, 76/107/123, 76/99/101/103, 76/99/101/104, 76/99/103/ /104, 76/101/103/104, 76/103/104/123, 76/104/107/123, 76/ /99/101/103/104, 76/99/103/104/123, 76/99/101/103/104/123, 76/103/104/126, 76/103/104/135, 76/103/104/197, 76/103/ /104/222, 76/103/104/260, 76/103/104/265, 76/103/104/ /126/265, 27/76/104/123/274, 27/76/104/109/123/274, 27/ /76/104/123/218/274, 27/76/104/123, 27/76/104/107/123,
27/76/104/109/123, 27/76/104/123/218/274, 27/76/104/123/ 197, 27/76/104/123/204, 27/76/104/123/206, 27/76/104/123/ /216, 27/76/104/123/218,27/76/104/123/260,27/76/104/123/ /195/197, 27/76/104/123/195/218, 27/76/104/123/197/218,
27/76/104/123/204/218, 27/76/104/123/206/218, 27/76/104/ /123/218/260, 27/76/104/123/195/197/218, 76/103/104/217, 76/103/104/156, 76/103/104/166, 76/103/104/105, 76/101/ /103/104, 76/103/104/128, 76/103/104/210, 76/103/104/107, 76/103/104/204, 76/217, 76/103/104/156/166 a 76/103/104/ /128.
10. Čistící prostředek podle nároku 9, vyznačuj ící se t í m, že proteasový enzym znamená variantu subtilisinu vybranou ze skupiny sestávající z 76/99, 76/101, 76/ /103, 76/104, 76/107, 76/123, 76/99/101, 76/99/103, 76/99/ /104, 76/101/103, 76/101/104, 76/103/104, 76/104/107, 76/ /104/123, 76/107/123, 76/99/101/103, 76/99/101/104, 76/99/ /103/104, 76/101/103/104, 76/103/104/123, 76/104/107/123, 76/99/101/103/104, 76/99/103/104/123, 76/99/101/103/104/ /123, 76/103/104/128, 76/103/104/260, 76/103/104/265, 76/ /103/104/197, 76/103/104/105, 76/103/104/135, 76/103/104/ /126, 76/103/104/107, 76/103/104/210, 76/103/104/126/265 a 76/103/104/222.
11. Prostředek pro čištění látek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje:
a) efektivní množství proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od subtilisinové prekursorové karbonylové hydrolasy, kde proteas ový enzym znamená subtilisovanou variantu vybranou ze skupiny sestávající z N76D/S99D, N76D/S101R, N76D/S103A, N76D/V104I, N76D/I107V, N76D/N123S, N76D/S99D/S101R, N76D/ /S99D/S103A, N76D/S99D/V104I, N76D/S101R/S103A, N76D/ /S101R/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/ /V104Y/I107V, N76D/V104I/N123S, N76D/I107V/N123S, N76D/ /S99D/S101R/S103A, N76D/S99D/S101R/V104I, N76D/S99D/S103A/ /V104I, N76D/S101R/S103A/V104I, N76D/S103A/V104I/N123S,
N76D/V104I/I107V/N123S, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I, N76D/ /S99D/S103A/V104I/N123S, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/ /N123S, N76D/S103A/V104I/S128G, N76D/S103A/V104I/T260P,
N76D/S103A/V104I/S265N, N76D/S103A//V104I/D197E, N76D/ /S103A/V104I/S105A, N76D/S103A/V104I/L135I, N76D/S103A/
V104I/L126F, N76D/S103A/V104T/L107T, N76D/S103A/V104I/ /L126F/S265N a N76D/S103A/V104I/M222A a jejich směsí, a
b) jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s tímto proteasovým enzymem, který obsahuje alespoň 5 % hmotn. povrchově aktivního činidla a alespoň 5 % hmotn. stavební složky z hmotnosti prostředku.
12. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že dále obsahuje materiály čistícího prostředku, které jsou vybrány ze skupiny, která sestává z rozpouštědel, pufrů, enzymů, činidel uvolňujících ušpinění, činidel uvolňujících ušpinění hlinkami, dispergačních činidel, zjasňovacích činidel, potlačovatelů pěnění, avivážních činidel, podněcovatelů pěnění, stabili zátorů enzymů, stavebních složek, bělících činidel, barviv, parfémů a jejich směsí.
13. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že dále obsahuje alespoň jedno bělící činidlo.
14. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vy80 značující se tím, že dále obsahuje alespoň jeden enzym, který je vybrán ze skupiny sestávající z celulas, lipas, amylas, proteas, peroxidas a jejich směsí.
15. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že je ve formě kapaliny, granulí nebo kostek.
.
16. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že proteasový enzym zna» mená variantu subtilisinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z N76D/S99D, N76D/V104I, N76D/S99D/V104I,
N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/V104Y/I107V,
N76D/S101R/S103A/V104I, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I, N76D/ /S101R/V104I a jejich směsí.
17. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že proteasový enzym znamená variantu Bacillus subtilisinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z N76D/V104I, N76D/S103A/V104I a jejich směsí.
18. Prostředek pro čištění látek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje:
a) od 0,0001 do 10 % hmotn. proteasového enzymu, kterým je N76D/S103A/V104I varianta subtilisinu odvozená od Bacillus lentus subtilisinu, < b) alespoň 5 % hmotn. povrchově aktivního činidla,
c) alespoň 5 % hmotn. stavební složky a * d) popřípadě jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s proteasovým enzymem, které jsou vybrány ze skupiny, která sestává z rozpouštědel, pufrů, enzymů, činidel uvolňujících ušpinění, činidel uvolňujících ušpinění hlinkami, dispergačních činidel, zjasňovacích činidel, potlačovatelů pěnění, avivážních činidel, podněcovatelů pěnění, stabilizátorů enzymů, bělících činidel, barviv, parfémů a jejich směsí.
19. Prostředek pro čištění látek podle nároku 18, vyznačující se tím, Se povrchově aktivní či“ nidlo je vybráno ze skupiny, která sestává z alkylbenzensulfonáta, primárních alkylsulfáta, sekundárních alkylsulfátů, alkylalkoxysulfátů, alkylalkoxykarboxylátů, alkylpolyglykosidů a jejich odpovídajících sulfatovaných polyglykosida, esterů α-sulfonovaných mastných kyselin, alkyl a alkylfenolalkoxylátá, betainů a sulfobetainů, aminoxidů, N-methylglukamidů, neiontových primárních alkoholethoxylá tů, směsných ethoxy/propoxylátů neiontových primárních al“ koholů a jejich směsí, při čemž další stavební složka je vybrána ze skupiny sestávající ze zeolitů, polykarboxylá tů, vrstvených křemičitanů, fosfátů a jejich směsí.
20. Prostředek pro čištění látek podle nároku 19, vyznačující se tím, že dále obsahuje jeden nebo více materiálů čistícího prostředku, které jsou vybrány ze skupiny sestávající z bělících činidel, avivážních činidel a enzymů.
21. Prostředek pro čištění látek podle nároku 18, vyznačující se tím, že je ve formě koncentrovaného granulovaného prostředku pro čištění látek, který obsahuje alespoň 30 % hmotn. povrchově aktivního činidla.
22. Prostředek pro mytí nádobí, vyznačující se tím, že obsahuje:
a) od 0,0001 % do 10 % hmotn. proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od subtilisinové prekursorové karbonylové hydrolasy, při čemž proteasový enzym znamená subtilisovanou variantu vybranou ze skupiny sestávající z N76D/S99D, N76D/S101R, N76D/S103A, N76D/V104I, N76D/I107V, N76D/N123S, N76D/S99D/ /S101R, N76D/S99D/S103A, N76D/S99D/V104I, N76D/S101R/ /S103A, N76D/S101R/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/ /I107V, N76D/V104Y/I107V, N76D/V104I/N123S, N76D/I107V/ /N123S, N76D/S99D/S101R/S103A, N76D/S99D/S101R/V104I,
N76D/S99D/S103A/V104I, N76D/S101R/S103A/V104I, N76D/S103A/ /V104I/N123S, N76D/V104I/I107V/N123S, N76D/S99D/S101R/ /S103A/V104I, N76D/S99D/S103A/V104I/N123S, N76D/S99D/ /S101R/S103A/V104I/N123S, N76D/S103A/V104I/S128G, N76D/ /S103A/V104I/T260P, N76D/S103A/V104I/S265N, N76D/S103A/ /V104I/D197E, N76D/S103A/V104I/S105A, N76D/S103A/V104I/ /L135I, N76D/S103A/V104I/L126F, N76D/S103A/V104T/L107T,
N76D/S103A/V104I/L126F/S265N a N76D/S103A/V104I/M222A a jejich směsí,
b) od 0,1 do 10 % hmotn. povrchově aktivního činidla a
c) popřípadě jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s tímto proteasovým enzymem, který je vybrán ze skupiny sestávající z rozpouštědel, pufrů, enzymů, dispergačních činidel, potlačovatelů pěnění, stabilizátorů enzymů, bělících činidel, barviv, parfémů a jejich směsí.
23. Prostředek pro mytí nádobí podle nároků 22, vyznačující se tím, že proteasový enzym znamená N76D/S103A/V104I subtilisinovou variantu odvozenou od Bacillus lentus subtilisinu.
24. Prostředek pro osobní čištění, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje:
a) od 0,001 do 5 % hmotn. proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od prekursorové karbonylové hydrolasy obsahuj ící substituce aminokyselin za více zbytků aminokyselin v takové poloze prekursorového karbonylové hydrolasy, která odpovídá poloze +76 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu v kombinaci s jednou nebo více polohami zbytků aminokyselin, které odpovídají polohám vybraným ze skupiny sestávající z +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a +274 Bacillus amyl©” liquefaciens subtilisinu,
b) od 0,01 do 95 % hmotn. povrchově aktivního činidla a
c) popřípadě od 0,05 do 50 % hmotn. stabilizátoru en zymu.
25. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 24, v y značující se tím, že obsahuje proteasový enzym v množství od 0,001 do 2 % hmotn.
26. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 25, vy-značující se tím, že obsahuje proteasový enzym v množství od 0,01 do 0,8 % hmotn.
27. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 24, vyznačující se tím, že povrchově aktivní systém obsahuje povrchově aktivní činidlo, které je vybráno ze skupiny sestávající z aniontových karboxylátů, aminoxidů, alkylglukosidů, glukosamidů, alkylsulfátů, alkyle thersulfátů, acylisethionátů, alkylsulfosukcinátů, alkylfosfátových esterů, ethoxylovaných fosfátových esterů, alky lglycerylethersulfonátů nebo jejich směsí.
28. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 24, vyznačující se tím, že povrchově aktivní systém obsahuje povrchově aktivní činidlo, které je vybráno ze skupiny sestávající z mýdel, acylglutamátů, alkylsarkosinátů, lauraminoxidů, kokosových aminoxidů, kokosových amidopropylaminoxidů, decylglukosidů, laurylsulfátů, laurethsulfátů, acyl(s 12 až 18 atomy uhlíku) isethionátů nebo jejich směsi.
29. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 28, vyznačující se tím, že povrchově aktivní činidlo znamená mýdlo v množství alespoň 2 % hmotn. z hmot” nosti prostředku.
30. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 29, vyznačující se t í m, že obsahuje mýdlo v množství alespoň 10 % hmotn. z hmotnosti prostředku.
31. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 30, vyznačující se tím, že obsahuje mýdlo v množství alespoň 25 % hmotn. z hmotnosti prostředku.
32. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 28, vyznačující se tím, že poměr hmotností mýdla k proteasovému enzymu je od 2,000:1 do 8:1.
33. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 32, vyznačující se tím, že poměr hmotností mýdla k proteasovému enzymu je od 400:1 do 40:1.
Prostředek pro osobní čištění podle nároku 28, vyznačující se tím, že proteasový enzym znamená variantu karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od subtilisinové prekursorové karbonylové hydrolasy, při čemž proteasový enzym znamená subtilisovanou variantu vybranou ze skupiny sestávající z N76D/S99D, N76D/S101R, N76D/S103A, N76D/V104I, N76D/I107V, N76D/N123S, N76D/S99D/ /S101R, N76D/S99D/S103A, N76D/S99D/V104I, N76D/S101R/ /S103A, N76D/S101R/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/ /I107V, N76D/V104Y/I107V, N76D/V104I/N123S, N76D/I107V/ /N123S, N76D/S99D/S101R/S103A, N76D/S99D/S101R/V104I, N76D/S99D/S103A/V104I, N76D/S101R/S103A/V104I, N76D/S103A/ /V104I/N123S, N76D/V104I/I107V/N123S, N76D/S99D/S101R/ /S103A/V104I, N76D/S99D/S103A/V104I/N123S, N76D/S99D/ /S101R/S103A/V104I/N123S, N76D/S103A/V104I/S128G, N76D/ /S103A/V104I/T260P, N76D/S103A/V104I/S265N, N76D/S103A/ /V104I/D197E, N76D/S103A/V104I/S105A, N76D/S103A/V104I/ /L135I, N76D/S103A/V104I/L126F, N76D/S103A/V104T/L107T,
N76D/S103A/V104I/L126F/S265N a N76D/S103A/V104I/M222A a jejich směsí.
35. Způsob čištění látek, vyznačující se tím, že se látka, která potřebuje vyčistit, uvede do kontaktu s proteasovým enzymem, kterým je N76D/S103A/V104I subtilisinová varianta odvozená od Bacillus lentus subtilisinu.
36. Způsob mytí nádobí, vyznačující se tím, že se nádobí, které potřebuje umýt, uvede do kontaktu s proteasovým enzymem, kterým je N76D/S103A/V104I subtilisi nová varianta odvozená od Bacillus lentus subtilisinu.
37. Způsob osobního čištění, vyznačující se tím, že se ta část těla člověka nebo živočicha, která potřebuje vyčistit, uvede do kontaktu s variantou karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od subtilisinové prekursorové karbonylové hydrolasy, při čemž proteasový enzym znamená subt i lisovanou variantu vybranou ze skupiny sestávající Z N76D/S99D, N76D/S101R, N76D/S103A, N76D/V104If N76D/I107V, N76D/N123S, N76D/S99D/S101R, N76D/S99D/S103A, N76D/S99D/V104I, N76D/S101R/S103A, N76D/S101R/V104I, N76D/ /S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/V104Y/I107V, N76D/ /V104I/N123S, N76D/I107V/N123S, N76D/S99D/S101R/S103A,
N76D/S99D/S101R/V104I,N76D/S99D/S103A/V104I, N76D/S101R/ /S103A/V104I, N76D/S103A/V104I/N123S, N76D/V104I/I107V/ /N123S, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I, N76D/S99D/S103A/ /V104I/N123S, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/N123S, N76D/ /S103A/V104I/S128G, N76D/S103A/V104I/T260P, N76D/S103A/ /V104I/S265N, N76D/S103A/V104I/D197E, N76D/S103A/V104I/ /S105A, N76D/S103A/V104I/L135I, N76D/S103A/V104I/L126F, N76D/S103A/V104T/L107T, N76D/S103A/V104I/L126F/S265N a
N76D/S103A/V104I/M222A a jejich směsí.
ZSSfcupsóe:
CZ961053A 1993-10-14 1994-10-13 Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process CZ105396A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US13679793A 1993-10-14 1993-10-14
US23793894A 1994-05-02 1994-05-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ105396A3 true CZ105396A3 (en) 1996-09-11

Family

ID=26834646

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ961053A CZ105396A3 (en) 1993-10-14 1994-10-13 Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process

Country Status (14)

Country Link
US (2) US5679630A (cs)
EP (1) EP0723579B1 (cs)
JP (2) JP2888985B2 (cs)
CN (1) CN1082999C (cs)
AT (1) ATE361355T1 (cs)
AU (1) AU8079794A (cs)
BR (1) BR9407834A (cs)
CA (1) CA2173105C (cs)
CZ (1) CZ105396A3 (cs)
DE (1) DE69434962T2 (cs)
ES (1) ES2287931T3 (cs)
HU (1) HU219851B (cs)
TW (1) TW306931B (cs)
WO (1) WO1995010591A1 (cs)

Families Citing this family (479)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK39093D0 (da) * 1993-04-01 1993-04-01 Novo Nordisk As Enzym
US6440717B1 (en) * 1993-09-15 2002-08-27 The Procter & Gamble Company BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6436690B1 (en) * 1993-09-15 2002-08-20 The Procter & Gamble Company BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted
BR9407834A (pt) * 1993-10-14 1997-05-13 Procter & Gamble Composições de limpeza contendo protease
CZ105296A3 (en) * 1993-10-14 1996-09-11 Procter & Gamble Bleaching agent containing protease enzymes, cleansing agents, agent for cleaning fabrics and fabric cleaning method
MA23346A1 (fr) * 1993-10-14 1995-04-01 Genencor Int Variantes de la subtilisine
EP0741770A1 (en) * 1994-01-25 1996-11-13 The Procter & Gamble Company Low sudsing detergent compositions containing long chain amine oxide and branched alkyl carboxylates
US6599730B1 (en) * 1994-05-02 2003-07-29 Procter & Gamble Company Subtilisin 309 variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US5922082A (en) 1994-06-16 1999-07-13 Procter & Gamble Company Detergent composition containing wool compatible high alkaline proteases
US6066611A (en) * 1994-10-13 2000-05-23 The Procter & Gamble Company Bleaching compositions comprising protease enzymes
ATE191497T1 (de) * 1994-11-18 2000-04-15 Procter & Gamble Lipase- und proteasehaltige waschmittelzusammensetzungen
US6455295B1 (en) * 1995-03-08 2002-09-24 The Procter & Gamble Company Subtilisin Carlsberg variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
IL117350A0 (en) * 1995-03-09 1996-07-23 Procter & Gamble Proteinase k variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6475765B1 (en) * 1995-03-09 2002-11-05 Procter & Gamble Company Subtilisin DY variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
DE19530816A1 (de) 1995-08-23 1997-02-27 Cognis Bio Umwelt Verwendung von mutierter Subtilisin-Protease in kosmetischen Produkten
EP0927240A1 (en) 1996-05-03 1999-07-07 The Procter & Gamble Company Detergent compositions comprising polyamine polymers with improved soil dispersancy
US5858948A (en) * 1996-05-03 1999-01-12 Procter & Gamble Company Liquid laundry detergent compositions comprising cotton soil release polymers and protease enzymes
US6165967A (en) * 1996-07-08 2000-12-26 The Procter & Gamble Company Hand wash laundry detergent compositions containing a combination of surfactants
US6313086B1 (en) * 1996-07-31 2001-11-06 The Procter & Gamble Company Detergent compositions containing and effervescent
ATE242797T1 (de) * 1996-10-18 2003-06-15 Procter & Gamble Waschmittel enthaltend ein gemisch aus kationischen, anionischen und nichtionischen tensiden
EP0839905A1 (en) * 1996-11-05 1998-05-06 The Procter & Gamble Company Foam detergent composition with enzymes
BR9714454A (pt) * 1996-12-31 2000-03-21 Procter & Gamble endo fixadores de corante
ATE244750T1 (de) 1996-12-31 2003-07-15 Procter & Gamble Verdickte flüssigwaschmittel mit hohem wassergehalt
WO1998029526A1 (en) 1996-12-31 1998-07-09 The Procter & Gamble Company Thickened, highly aqueous, low cost liquid detergent compositions with aromatic surfactants
WO1998029530A2 (en) * 1996-12-31 1998-07-09 The Procter & Gamble Company Laundry detergent compositions with polyamide-polyamines
DK0985042T3 (da) * 1997-06-04 2007-01-15 Genencor Int Proteaseenzymer til vanskelig rengöring og/eller plet- og filmreduktion samt præparater, der inkorporerer disse
CA2291646A1 (en) * 1997-06-04 1998-12-10 Saroj Rai Mixed protease enzyme systems for cleaning protein based soils and compositions incorporating same
EP0913458B1 (en) * 1997-10-22 2004-06-16 The Procter & Gamble Company Liquid hard-surface cleaning compositions
ES2368718T3 (es) * 1997-10-23 2011-11-21 Danisco Us Inc. Variantes de subtilisina con múltiples sustituciones.
AR015977A1 (es) * 1997-10-23 2001-05-30 Genencor Int Variantes de proteasa multiplemente substituida con carga neta alterada para su empleo en detergentes
CN1301305A (zh) * 1998-03-26 2001-06-27 宝洁公司 具有氨基酸取代的丝氨酸蛋白酶变体
AU755850B2 (en) 1998-06-10 2002-12-19 Novozymes A/S Novel mannanases
US6420331B1 (en) 1998-06-10 2002-07-16 Procter & Gamble Company Detergent compositions comprising a mannanase and a bleach system
US6831053B1 (en) * 1998-10-23 2004-12-14 The Procter & Gamble Company Bleaching compositions comprising multiply-substituted protease variants
US6376450B1 (en) * 1998-10-23 2002-04-23 Chanchal Kumar Ghosh Cleaning compositions containing multiply-substituted protease variants
DE19942595C2 (de) * 1998-11-18 2002-01-31 Linders Werner Reinigungsmittel für Zahnprothesen
US20050124738A1 (en) * 1999-05-26 2005-06-09 The Procter & Gamble Company Compositions and methods for using zwitterionic polymeric suds enhancers
US7241729B2 (en) * 1999-05-26 2007-07-10 Rhodia Inc. Compositions and methods for using polymeric suds enhancers
US7939601B1 (en) 1999-05-26 2011-05-10 Rhodia Inc. Polymers, compositions and methods of use for foams, laundry detergents, shower rinses, and coagulants
ES2317838T3 (es) * 1999-05-26 2009-05-01 Rhodia Inc. Polimeros en bloque, composiciones y metodos de utilizacion de espumas, detergentes para la lavanderia, agentes de aclarado para ducha y coagulantes.
US6740713B1 (en) 1999-07-08 2004-05-25 Procter & Gamble Company Process for producing particles of amine reaction products
US6764986B1 (en) 1999-07-08 2004-07-20 Procter & Gamble Company Process for producing particles of amine reaction products
US6972276B1 (en) 1999-07-09 2005-12-06 Procter & Gamble Company Process for making amine compounds
EP1754774B1 (en) 1999-08-10 2012-09-19 The Procter & Gamble Company Detergent compositions comprising hydrotropes
WO2001021499A1 (en) 1999-09-22 2001-03-29 The Procter & Gamble Company A hand-held liquid container
AU2001239774A1 (en) * 2000-02-18 2001-08-27 The Procter And Gamble Company Antibacterial agents and compositions, methods and systems employing same
WO2001064180A1 (en) * 2000-02-29 2001-09-07 Clariant S.A. Cosmetic compositions comprising anionic and cationic surfactants
US6777218B1 (en) * 2000-03-14 2004-08-17 Novozymes A/S Subtilase enzymes having an improved wash performance on egg stains
CA2405063C (en) 2000-04-03 2013-06-04 Maxygen, Inc. Subtilisin variants
US7319112B2 (en) * 2000-07-14 2008-01-15 The Procter & Gamble Co. Non-halogenated antibacterial agents and processes for making same
WO2002016547A2 (en) * 2000-08-21 2002-02-28 Novozymes A/S Subtilase enzymes
US7109016B2 (en) 2000-08-21 2006-09-19 Novozymes A/S Subtilase enzymes
US6541234B1 (en) * 2000-09-11 2003-04-01 University Of Maryland Biotechnology Institute Calcium free subtilisin mutants
GB2367065B (en) * 2000-09-20 2002-11-20 Reckitt Benckiser Inc Enzyme containing laundry booster compositions
US6541235B1 (en) * 2000-09-29 2003-04-01 University Of Maryland Biotechnology Institute Calcium free subtilisin mutants
DE10104479C1 (de) * 2001-01-31 2002-09-12 Gerhard Knapp Verwendung eines Mittels zur Inhibierung von Milbenkot
US20030040459A1 (en) * 2001-02-05 2003-02-27 Unilever Home & Pesonal Care Usa Cleaning compositions
EP1241112A3 (en) 2001-03-15 2003-02-26 The Procter & Gamble Company Flexible multiple compartment pouch
CN100489094C (zh) * 2001-03-23 2009-05-20 金克克国际有限公司 具有改变的免疫原性反应的蛋白质及制备和使用该蛋白质的方法
DE10121463A1 (de) * 2001-05-02 2003-02-27 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease-Varianten und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neuen Alkalischen Protease-Varianten
US7157416B2 (en) * 2001-07-20 2007-01-02 Genencor International, Inc. Stabilization of enzymes
GB0118932D0 (en) * 2001-08-02 2001-09-26 Unilever Plc Improvements relating to laundry compositions
JP2004537627A (ja) * 2001-08-03 2004-12-16 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー 洗剤組成物に使用するためのポリアスパルテート誘導体
US7153820B2 (en) 2001-08-13 2006-12-26 Ecolab Inc. Solid detergent composition and method for solidifying a detergent composition
US6544941B1 (en) * 2001-08-27 2003-04-08 Unilever Home & Personal Care Usa, Division Of Conopco, Inc. Dishwashing composition
DE10153792A1 (de) * 2001-10-31 2003-05-22 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease-Varianten und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neuen Alkalischen Protease-Varianten
JP2005513007A (ja) * 2001-11-13 2005-05-12 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー 特定の浸透圧保護剤によって安定化させた酵素を含有する組成物、及びパーソナルケアにおける前記組成物の使用方法
CA2472723C (en) * 2002-01-16 2013-12-17 Genencor International, Inc. Multiply-substituted protease variants
DE60330346D1 (de) * 2002-01-16 2010-01-14 Genencor Int Mehrfachsubstituierte proteasevarianten
US20060142394A1 (en) * 2002-08-28 2006-06-29 Carl-Heinz Kapitz Use of proteases for decomposing allergens
BR0303954A (pt) 2002-10-10 2004-09-08 Int Flavors & Fragrances Inc Composição, fragrância, método para divisão de uma quantidade efetiva olfativa de fragrância em um produto sem enxague e produto sem enxague
EP1578935A2 (en) * 2002-10-10 2005-09-28 Diversa Corporation Proteases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
US7585824B2 (en) 2002-10-10 2009-09-08 International Flavors & Fragrances Inc. Encapsulated fragrance chemicals
US20040097385A1 (en) * 2002-11-18 2004-05-20 Unilever Home & Personal Products Usa, Division Of Conopco, Inc. Viscoelastic cleansing gel with surfactant solutions containing polysaccharides and their derivatives polysaccharide hydrocolloids
US7651992B2 (en) * 2003-02-28 2010-01-26 The Procter & Gamble Company Foam-generating kit containing a foam-generating dispenser and a composition containing a high level of surfactant
US20040229763A1 (en) * 2003-02-28 2004-11-18 The Procter & Gamble Company Cleaning kit and/or a dishwashing kit containing a foam-generating dispenser and a cleaning and/or dishwashing composition
US7402554B2 (en) * 2003-02-28 2008-07-22 The Procter & Gamble Company Foam-generating kit containing a foam-generating dispenser and a composition containing a high level of surfactant
CN102766545B (zh) * 2003-05-07 2014-08-06 诺维信公司 变体枯草杆菌蛋白酶（枯草杆菌酶）
US20050112152A1 (en) 2003-11-20 2005-05-26 Popplewell Lewis M. Encapsulated materials
US20050113282A1 (en) * 2003-11-20 2005-05-26 Parekh Prabodh P. Melamine-formaldehyde microcapsule slurries for fabric article freshening
US7105064B2 (en) 2003-11-20 2006-09-12 International Flavors & Fragrances Inc. Particulate fragrance deposition on surfaces and malodour elimination from surfaces
DE10360805A1 (de) 2003-12-23 2005-07-28 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease und Wasch- und Reinigungsmittel, enthaltend diese neue Alkalische Protease
US20050227907A1 (en) * 2004-04-13 2005-10-13 Kaiping Lee Stable fragrance microcapsule suspension and process for using same
US20050226900A1 (en) * 2004-04-13 2005-10-13 Winton Brooks Clint D Skin and hair treatment composition and process for using same resulting in controllably-releasable fragrance and/or malodour counteractant evolution
DE102004019751A1 (de) 2004-04-23 2005-11-17 Henkel Kgaa Neue Alkalische Proteasen und Wasch- und Reinigungsmittel, enthaltend diese neuen Alkalischen Proteasen
BRPI0511171A (pt) 2004-05-17 2007-12-04 Procter & Gamble composição de alvejamento compreendendo um carboidrato oxidase
DE102004029475A1 (de) * 2004-06-18 2006-01-26 Henkel Kgaa Neues enzymatisches Bleichsystem
US7419943B2 (en) 2004-08-20 2008-09-02 International Flavors & Fragrances Inc. Methanoazuenofurans and methanoazulenone compounds and uses of these compounds as fragrance materials
US7594594B2 (en) * 2004-11-17 2009-09-29 International Flavors & Fragrances Inc. Multi-compartment storage and delivery containers and delivery system for microencapsulated fragrances
US7686892B2 (en) 2004-11-19 2010-03-30 The Procter & Gamble Company Whiteness perception compositions
US7871972B2 (en) 2005-01-12 2011-01-18 Amcol International Corporation Compositions containing benefit agents pre-emulsified using colloidal cationic particles
US7888306B2 (en) 2007-05-14 2011-02-15 Amcol International Corporation Compositions containing benefit agent composites pre-emulsified using colloidal cationic particles
US7977288B2 (en) 2005-01-12 2011-07-12 Amcol International Corporation Compositions containing cationically surface-modified microparticulate carrier for benefit agents
WO2006076454A1 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Amcol International Corporation Detersive compositions containing hydrophobic benefit agents pre-emulsified using colloidal cationic particles
EP1700907A1 (en) 2005-03-11 2006-09-13 Unilever N.V. Liquid bleaching composition
EP1700904A1 (en) 2005-03-11 2006-09-13 Unilever N.V. Liquid detergent composition
US20070207174A1 (en) * 2005-05-06 2007-09-06 Pluyter Johan G L Encapsulated fragrance materials and methods for making same
US9321873B2 (en) 2005-07-21 2016-04-26 Akzo Nobel N.V. Hybrid copolymer compositions for personal care applications
EP1941862A1 (en) * 2005-08-31 2008-07-09 Ezaki Glico Co., Ltd. Tablet for removal of tongue coating
EP1948775B1 (en) 2005-09-27 2017-01-11 The Procter & Gamble Company Microcapsule and method of producing same
AU2006299783B2 (en) * 2005-10-12 2012-06-14 Danisco Us Inc. Use and production of storage-stable neutral metalloprotease
US20070138674A1 (en) 2005-12-15 2007-06-21 Theodore James Anastasiou Encapsulated active material with reduced formaldehyde potential
US20070138673A1 (en) 2005-12-15 2007-06-21 Kaiping Lee Process for Preparing a High Stability Microcapsule Product and Method for Using Same
US7838481B2 (en) * 2006-04-07 2010-11-23 Beckman Coulter, Inc. Formaldehyde-free cleaner composition for cleaning blood analyzers and method of use
JP2009534022A (ja) * 2006-04-20 2009-09-24 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 卵のシミに対する洗浄能力が向上したサビナーゼ変異体
US7629158B2 (en) 2006-06-16 2009-12-08 The Procter & Gamble Company Cleaning and/or treatment compositions
US20080090747A1 (en) * 2006-07-18 2008-04-17 Pieter Augustinus Protease variants active over a broad temperature range
US20080027505A1 (en) * 2006-07-26 2008-01-31 G&L Consulting, Llc System and method for treatment of headaches
EP2046269B1 (en) 2006-08-01 2010-12-15 The Procter & Gamble Company Benefit agent containing delivery particle
DE102007029643A1 (de) 2006-09-08 2009-01-15 Henkel Ag & Co. Kgaa Reinigungsmittel
US7833960B2 (en) 2006-12-15 2010-11-16 International Flavors & Fragrances Inc. Encapsulated active material containing nanoscaled material
US8093200B2 (en) 2007-02-15 2012-01-10 Ecolab Usa Inc. Fast dissolving solid detergent
US7709436B2 (en) * 2007-05-09 2010-05-04 The Dial Corporation Low carbon footprint compositions for use in laundry applications
US7648953B2 (en) * 2008-05-08 2010-01-19 The Dial Corporation Eco-friendly laundry detergent compositions comprising natural essence
US20080311064A1 (en) * 2007-06-12 2008-12-18 Yabin Lei Higher Performance Capsule Particles
ES1065735Y (es) * 2007-06-19 2008-01-16 Sensient Fragances S A Pastilla de jabon con nucleo activo
AU2008313267B2 (en) 2007-10-18 2013-09-19 Ecolab Inc. Pressed, waxy, solid cleaning compositions and methods of making them
US7998920B2 (en) * 2008-01-22 2011-08-16 Stepan Company Sulfonated estolide compositions containing magnesium sulfate and processes employing them
US7879790B2 (en) * 2008-01-22 2011-02-01 Stepan Company Mixed salts of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids, and methods of making them
US7666828B2 (en) 2008-01-22 2010-02-23 Stepan Company Sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids, methods of making them, and compositions and processes employing them
US8236747B2 (en) * 2008-02-08 2012-08-07 Method Products, Inc. Consumer product packets with enhanced performance
EP2265702A1 (en) 2008-02-08 2010-12-29 Amcol International Corporation Compositions containing cationically surface-modified microparticulate carrier for benefit agents
US8066818B2 (en) * 2008-02-08 2011-11-29 The Procter & Gamble Company Water-soluble pouch
ES2393224T5 (es) * 2008-02-08 2020-09-14 Procter & Gamble Proceso para fabricar una bolsa soluble en agua
US20090209447A1 (en) 2008-02-15 2009-08-20 Michelle Meek Cleaning compositions
US20090233830A1 (en) * 2008-03-14 2009-09-17 Penny Sue Dirr Automatic detergent dishwashing composition
EP2100948A1 (en) * 2008-03-14 2009-09-16 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP2100947A1 (en) 2008-03-14 2009-09-16 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
US8097047B2 (en) * 2008-04-02 2012-01-17 The Procter & Gamble Company Fabric color rejuvenation composition
CA2721086A1 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Amcol International Corporation Multilayer fragrance encapsulation
US8188022B2 (en) 2008-04-11 2012-05-29 Amcol International Corporation Multilayer fragrance encapsulation comprising kappa carrageenan
BRPI0913623A8 (pt) * 2008-06-06 2017-10-03 Danisco Us Inc Composições e métodos compreendendo variantes de proteases microbianas
US8601526B2 (en) 2008-06-13 2013-12-03 United Video Properties, Inc. Systems and methods for displaying media content and media guidance information
EP2166092A1 (en) 2008-09-18 2010-03-24 The Procter and Gamble Company Detergent composition
EP2166073A1 (en) 2008-09-23 2010-03-24 The Procter & Gamble Company Cleaning composition
EP2166076A1 (en) * 2008-09-23 2010-03-24 The Procter & Gamble Company Cleaning composition
EP2166075A1 (en) * 2008-09-23 2010-03-24 The Procter and Gamble Company Cleaning composition
US7915215B2 (en) * 2008-10-17 2011-03-29 Appleton Papers Inc. Fragrance-delivery composition comprising boron and persulfate ion-crosslinked polyvinyl alcohol microcapsules and method of use thereof
JP5508431B2 (ja) * 2008-11-11 2014-05-28 ダニスコ・ユーエス・インク スブチリシン変異体を含む組成物及び方法
US20100267304A1 (en) * 2008-11-14 2010-10-21 Gregory Fowler Polyurethane foam pad and methods of making and using same
US20100125046A1 (en) * 2008-11-20 2010-05-20 Denome Frank William Cleaning products
WO2010085247A1 (en) 2009-01-21 2010-07-29 Stepan Company Sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids and uses thereof
US8058223B2 (en) * 2009-01-21 2011-11-15 Stepan Company Automatic or machine dishwashing compositions of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids and uses thereof
US8124577B2 (en) * 2009-01-21 2012-02-28 Stepan Company Personal care compositions of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids and uses thereof
US8119588B2 (en) * 2009-01-21 2012-02-21 Stepan Company Hard surface cleaner compositions of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids and uses thereof
US7884064B2 (en) * 2009-01-21 2011-02-08 Stepan Company Light duty liquid detergent compositions of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids
EP2216391A1 (en) 2009-02-02 2010-08-11 The Procter & Gamble Company Liquid hand dishwashing detergent composition
EP2213714B1 (en) 2009-02-02 2014-06-11 The Procter and Gamble Company Liquid hand dishwashing detergent composition
EP2216392B1 (en) 2009-02-02 2013-11-13 The Procter and Gamble Company Liquid hand dishwashing detergent composition
EP2213715A1 (en) 2009-02-02 2010-08-04 The Procter & Gamble Company Liquid hand dishwashing detergent composition
PL2213713T3 (pl) 2009-02-02 2014-07-31 Procter & Gamble Płynna kompozycja środka czyszczącego do ręcznego mycia naczyń
EP2216390B1 (en) 2009-02-02 2013-11-27 The Procter and Gamble Company Hand dishwashing method
EP3998328A1 (en) 2009-02-09 2022-05-18 The Procter & Gamble Company Detergent composition
US8153574B2 (en) 2009-03-18 2012-04-10 The Procter & Gamble Company Structured fluid detergent compositions comprising dibenzylidene polyol acetal derivatives and detersive enzymes
US8293697B2 (en) 2009-03-18 2012-10-23 The Procter & Gamble Company Structured fluid detergent compositions comprising dibenzylidene sorbitol acetal derivatives
WO2010138347A1 (en) 2009-05-26 2010-12-02 The Procter & Gamble Company Aqueous liquid composition for pre-treating soiled dishware
WO2011005905A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 The Procter & Gamble Company A mildly alkaline, low-built, solid fabric treatment detergent composition comprising phthalimido peroxy caproic acid
US20110005004A1 (en) * 2009-07-09 2011-01-13 The Procter & Gamble Company Method of laundering fabric using a compacted liquid laundry detergent composition
BR112012000531A2 (pt) 2009-07-09 2019-09-24 Procter & Gamble composição detergente para lavagem de roupas catalítica que compreende teores relativamente baixos de eletrólito solúvel em água
WO2011005623A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 The Procter & Gamble Company Laundry detergent composition comprising low level of bleach
WO2011005804A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 The Procter & Gamble Company Method of laundering fabric using a liquid laundry detergent composition
WO2011005911A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 The Procter & Gamble Company Method of laundering fabric using a compacted liquid laundry detergent composition
EP2451923A1 (en) * 2009-07-09 2012-05-16 The Procter & Gamble Company Method of laundering fabric using a liquid laundry detergent composition
EP2451915A1 (en) 2009-07-09 2012-05-16 The Procter & Gamble Company A catalytic laundry detergent composition comprising relatively low levels of water-soluble electrolyte
US20110009307A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 Alan Thomas Brooker Laundry Detergent Composition Comprising Low Level of Sulphate
EP2277860B1 (en) 2009-07-22 2015-08-19 Stepan Company Compositions comprising sulfonated estolides and alkyl ester sulfonates, methods of making them, and compositions and processes employing them
EP2292725B2 (en) 2009-08-13 2022-08-24 The Procter & Gamble Company Method of laundering fabrics at low temperature
DE102009029513A1 (de) * 2009-09-16 2011-03-24 Henkel Ag & Co. Kgaa Lagerstabiles flüssiges Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend Proteasen
CN102120167B (zh) 2009-09-18 2014-10-29 国际香料和香精公司 胶囊封装的活性材料
EP2322593A1 (en) 2009-11-12 2011-05-18 The Procter & Gamble Company Liquid laundry detergent composition
EP2322595A1 (en) 2009-11-12 2011-05-18 The Procter & Gamble Company Solid laundry detergent composition
EP3434764A3 (en) 2009-12-09 2019-04-03 The Procter & Gamble Company Fabric and home care products
ES2548772T3 (es) 2009-12-10 2015-10-20 The Procter & Gamble Company Producto para lavavajillas y uso del mismo
ES2423580T5 (es) 2009-12-10 2021-06-17 Procter & Gamble Método y uso de una composición para lavado de vajillas
EP2333041B1 (en) 2009-12-10 2013-05-15 The Procter & Gamble Company Method and use of a dishwasher composition
ES2399311T5 (es) 2009-12-10 2020-06-19 Procter & Gamble Composición detergente
EP2357220A1 (en) 2010-02-10 2011-08-17 The Procter & Gamble Company Cleaning composition comprising amylase variants with high stability in the presence of a chelating agent
CN113186178A (zh) 2010-02-10 2021-07-30 诺维信公司 在螯合剂存在下具有高稳定性的变体和包含变体的组合物
PL2361964T3 (pl) 2010-02-25 2013-05-31 Procter & Gamble Kompozycja detergentu
EP2365059A1 (en) 2010-03-01 2011-09-14 The Procter & Gamble Company Solid laundry detergent composition comprising C.I. fluorescent brightener 260 in alpha-crystalline form
EP2365058A1 (en) 2010-03-01 2011-09-14 The Procter & Gamble Company Solid laundry detergent composition having an excellent anti-encrustation profile
EP2365054A1 (en) 2010-03-01 2011-09-14 The Procter & Gamble Company Solid laundry detergent composition comprising secondary alcohol-based detersive surfactant
EP2363456A1 (en) 2010-03-01 2011-09-07 The Procter & Gamble Company Solid laundry detergent composition comprising brightener in micronized particulate form
EP2380957A1 (en) 2010-04-19 2011-10-26 The Procter & Gamble Company Solid laundry detergent composition having a dynamic in-wash ph profile
EP2377914B1 (en) 2010-04-19 2016-11-09 The Procter & Gamble Company Mildly alkaline, low-built, solid fabric treatment detergent composition comprising perhydrolase
EP2558573B1 (en) * 2010-04-15 2017-02-22 Danisco US Inc. Compositions and methods comprising variant proteases
US20120067373A1 (en) 2010-04-15 2012-03-22 Philip Frank Souter Automatic Dishwashing Detergent Composition
US8889612B2 (en) 2010-04-19 2014-11-18 The Procter & Gamble Company Method of laundering fabric using a compacted liquid laundry detergent composition
US20110257060A1 (en) 2010-04-19 2011-10-20 Robert Richard Dykstra Laundry detergent composition comprising bleach particles that are suspended within a continuous liquid phase
US20110257062A1 (en) 2010-04-19 2011-10-20 Robert Richard Dykstra Liquid laundry detergent composition comprising a source of peracid and having a ph profile that is controlled with respect to the pka of the source of peracid
US20110257069A1 (en) 2010-04-19 2011-10-20 Stephen Joseph Hodson Detergent composition
EP2380481B1 (en) 2010-04-23 2014-12-31 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing product
PL2380963T3 (pl) 2010-04-23 2016-07-29 Procter & Gamble Sposób perfumowania
ES2579217T3 (es) 2010-04-23 2016-08-08 The Procter & Gamble Company Partícula
PL2380961T3 (pl) 2010-04-23 2018-10-31 The Procter & Gamble Company Kompozycja detergentu
EP2383329A1 (en) 2010-04-23 2011-11-02 The Procter & Gamble Company Particle
EP2380478A1 (en) 2010-04-23 2011-10-26 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing product
DK2566960T3 (da) * 2010-05-06 2017-05-22 Procter & Gamble Forbrugerprodukter med proteasevarianter
EP2395070A1 (en) 2010-06-10 2011-12-14 The Procter & Gamble Company Liquid laundry detergent composition comprising lipase of bacterial origin
EP2395071A1 (en) 2010-06-10 2011-12-14 The Procter & Gamble Company Solid detergent composition comprising lipase of bacterial origin
EP2585573A1 (en) 2010-06-23 2013-05-01 The Procter and Gamble Company Product for pre-treatment and laundering of stained fabric
WO2011163577A1 (en) * 2010-06-24 2011-12-29 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Reagents and methods for preparing teeth for implantation
JP5859526B2 (ja) 2010-07-02 2016-02-10 ザ プロクター アンド ギャンブルカンパニー 活性剤不織布ウェブを含むフィラメント及びその製造方法
CN103003476B (zh) 2010-07-02 2016-02-10 宝洁公司 纤维网材料以及用于制造纤维网材料的方法
WO2012003367A2 (en) 2010-07-02 2012-01-05 The Procter & Gamble Company Method for delivering an active agent
WO2012003300A2 (en) 2010-07-02 2012-01-05 The Procter & Gamble Company Filaments comprising a non-perfume active agent nonwoven webs and methods for making same
RU2543892C2 (ru) 2010-07-02 2015-03-10 Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани Способ получения пленок из нетканых полотен
ES2532537T3 (es) 2010-07-22 2015-03-27 Unilever N.V. Composiciones de detergentes que comprenden un biotensioactivo y lipasa
WO2012010405A1 (en) 2010-07-22 2012-01-26 Unilever Plc Detergent compositions comprising biosurfactant and enzyme
US8685171B2 (en) 2010-07-29 2014-04-01 The Procter & Gamble Company Liquid detergent composition
EP2412792A1 (en) 2010-07-29 2012-02-01 The Procter & Gamble Company Liquid detergent composition
WO2011026154A2 (en) 2010-10-29 2011-03-03 The Procter & Gamble Company Cleaning and/or treatment compositions
WO2012057781A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 The Procter & Gamble Company Cleaning and/or treatment compositions comprising a fungal serine protease
DE102010063457A1 (de) * 2010-12-17 2012-06-21 Henkel Ag & Co. Kgaa Lagerstabiles flüssiges Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend Protease und Cellulase
ES2919933T3 (es) 2011-03-18 2022-07-29 Int Flavors & Fragrances Inc Microcápsulas producidas a partir de precursores de sol-gel combinados y método de producción de las mismas
MX357386B (es) 2011-05-05 2018-07-06 Procter & Gamble Composiciones y metodos que comprenden variantes de proteasa serina.
AR086281A1 (es) 2011-05-05 2013-12-04 Danisco Us Inc Composiciones y metodos que comprenden variantes de serina proteasas
US8758520B2 (en) 2011-05-20 2014-06-24 Ecolab Usa Inc. Acid formulations for use in a system for warewashing
BR112013028007A2 (pt) 2011-05-20 2017-01-10 Ecolab Usa Inc detergentes não-fosfato e ácidos não-fosfóricos em um sistema alternado alcalinidade/acidez para a lavagem de louça
US20140371435A9 (en) 2011-06-03 2014-12-18 Eduardo Torres Laundry Care Compositions Containing Thiophene Azo Dyes
EP2537918A1 (en) 2011-06-20 2012-12-26 The Procter & Gamble Company Consumer products with lipase comprising coated particles
US20120324655A1 (en) 2011-06-23 2012-12-27 Nalini Chawla Product for pre-treatment and laundering of stained fabric
US8828920B2 (en) 2011-06-23 2014-09-09 The Procter & Gamble Company Product for pre-treatment and laundering of stained fabric
WO2013002786A1 (en) 2011-06-29 2013-01-03 Solae Baked food compositions comprising soy whey proteins that have been isolated from processing streams
JP6204352B2 (ja) 2011-06-30 2017-09-27 ノボザイムス アクティーゼルスカブ α−アミラーゼ変異体
EP2540824A1 (en) 2011-06-30 2013-01-02 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising amylase variants reference to a sequence listing
EP2551335A1 (en) 2011-07-25 2013-01-30 The Procter & Gamble Company Enzyme stabilized liquid detergent composition
EP2737045A1 (en) 2011-07-27 2014-06-04 The Procter and Gamble Company Multiphase liquid detergent composition
US8679366B2 (en) 2011-08-05 2014-03-25 Ecolab Usa Inc. Cleaning composition containing a polysaccharide graft polymer composition and methods of controlling hard water scale
US8853144B2 (en) 2011-08-05 2014-10-07 Ecolab Usa Inc. Cleaning composition containing a polysaccharide graft polymer composition and methods of improving drainage
US8636918B2 (en) 2011-08-05 2014-01-28 Ecolab Usa Inc. Cleaning composition containing a polysaccharide hybrid polymer composition and methods of controlling hard water scale
US8841246B2 (en) 2011-08-05 2014-09-23 Ecolab Usa Inc. Cleaning composition containing a polysaccharide hybrid polymer composition and methods of improving drainage
US10246668B2 (en) * 2011-08-24 2019-04-02 Illinois Tool Works, Inc. Proportioner-ready bioenzymatic concentrated cleaning product
ES2633292T3 (es) 2011-10-19 2017-09-20 The Procter & Gamble Company Partícula
WO2013064648A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Akzo Nobel Chemicals International B.V. Graft dendrite copolymers, and methods for producing the same
JP2014532791A (ja) 2011-11-04 2014-12-08 アクゾ ノーベル ケミカルズ インターナショナル ベスローテン フエンノートシャップＡｋｚｏ Ｎｏｂｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂ．Ｖ． ハイブリッド樹状コポリマー、その組成物及びそれを製造する方法
US20130123162A1 (en) * 2011-11-10 2013-05-16 The Procter & Gamble Company Consumer products
WO2013088266A1 (en) 2011-12-13 2013-06-20 Ecolab Usa Inc. Concentrated warewashing compositions and methods
CN104040061B (zh) 2012-01-04 2019-11-08 宝洁公司 包含颗粒的纤维结构及其制造方法
MX353896B (es) 2012-02-03 2018-02-01 Procter & Gamble Composiciones y metodos para el tratamiento de superficies con lipasas.
CA2867361C (en) 2012-03-19 2017-07-25 Milliken & Company Carboxylate dyes
WO2013149858A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Novozymes A/S Lipase variants and polynucleotides encoding same
EP2674475A1 (en) 2012-06-11 2013-12-18 The Procter & Gamble Company Detergent composition
CN104471048B (zh) 2012-07-12 2018-11-16 诺维信公司 具有脂肪酶活性的多肽及编码它的多核苷酸
EP2877562B1 (en) 2012-07-26 2018-04-25 The Procter and Gamble Company Low ph liquid cleaning compositions with enzymes
US8945314B2 (en) 2012-07-30 2015-02-03 Ecolab Usa Inc. Biodegradable stability binding agent for a solid detergent
DE102012215107A1 (de) * 2012-08-24 2014-02-27 Basf Se Festes Geschirrspülmittel mit verbesserter Proteaseleistung
US9745543B2 (en) 2012-09-10 2017-08-29 Ecolab Usa Inc. Stable liquid manual dishwashing compositions containing enzymes
EP2712915A1 (en) 2012-10-01 2014-04-02 The Procter and Gamble Company Methods of treating a surface and compositions for use therein
CN105026541A (zh) 2012-10-04 2015-11-04 艺康美国股份有限公司 用于洗衣和其他硬表面清洁的预浸泡工艺
US20140179585A1 (en) 2012-12-20 2014-06-26 The Procter & Gamble Company Detergent composition with silicate coated bleach
JP6251296B2 (ja) 2013-03-05 2017-12-20 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー 混合糖組成物
US20160068620A1 (en) 2013-03-15 2016-03-10 Lubrizol Advanced Materials, Inc. Itaconic Acid Polymers
MX360759B (es) 2013-03-21 2018-11-15 Novozymes As Polipeptidos con actividades lipasa y polinucleotidos que los codifican.
AU2014241193B2 (en) 2013-03-28 2016-10-20 The Procter And Gamble Company Cleaning compositions containing a polyetheramine
JP6188199B2 (ja) * 2013-05-20 2017-08-30 ライオン株式会社 食器洗い機用洗浄剤
EP3699256A1 (en) 2013-05-28 2020-08-26 The Procter & Gamble Company Surface treatment compositions comprising photochromic dyes
BR112016003137B1 (pt) 2013-08-15 2020-10-27 International Flavors & Fragrances Inc composição de cápsula de poliureia, método para preparação de uma composição de cápsula de poliureia e, produto de consumidor
WO2015032447A1 (en) 2013-09-09 2015-03-12 Ecolab Usa Inc. Synergistic stain removal through novel chelator combination
EP3044301B1 (en) 2013-09-09 2017-10-25 Ecolab USA Inc. Synergistic stain removal through novel chelator combination
CN105555936A (zh) 2013-09-18 2016-05-04 宝洁公司 包含羧化物染料的衣物洗涤护理组合物
US9834682B2 (en) 2013-09-18 2017-12-05 Milliken & Company Laundry care composition comprising carboxylate dye
CN105555935A (zh) 2013-09-18 2016-05-04 宝洁公司 包含羧化物染料的衣物洗涤护理组合物
WO2015042013A1 (en) 2013-09-18 2015-03-26 Lubrizol Advanced Materials, Inc. Stable linear polymers
JP6185182B2 (ja) 2013-09-18 2017-08-23 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー チオフェンアゾカルボキシレート染料を含有する洗濯ケア組成物
EP2857485A1 (en) 2013-10-07 2015-04-08 WeylChem Switzerland AG Multi-compartment pouch comprising alkanolamine-free cleaning compositions, washing process and use for washing and cleaning of textiles and dishes
EP2857487A1 (en) 2013-10-07 2015-04-08 WeylChem Switzerland AG Multi-compartment pouch comprising cleaning compositions, washing process and use for washing and cleaning of textiles and dishes
EP2857486A1 (en) 2013-10-07 2015-04-08 WeylChem Switzerland AG Multi-compartment pouch comprising cleaning compositions, washing process and use for washing and cleaning of textiles and dishes
US9610228B2 (en) 2013-10-11 2017-04-04 International Flavors & Fragrances Inc. Terpolymer-coated polymer encapsulated active material
EP2862597B1 (en) 2013-10-18 2018-01-03 International Flavors & Fragrances Inc. Stable, flowable silica capsule formulation
MX2016004990A (es) 2013-10-24 2016-07-06 Ecolab Usa Inc Composiciones y metodos para eliminar suciedades de las superficies.
CN109536316A (zh) 2013-11-11 2019-03-29 国际香料和香精公司 多胶囊组合物
EP3082849B1 (en) * 2013-12-19 2019-11-06 Société des Produits Nestlé S.A. Uses of compositions and methods for reducing cat allergens in the environment
EP3097172A1 (en) 2014-01-22 2016-11-30 The Procter & Gamble Company Method of treating textile fabrics
EP3097174A1 (en) 2014-01-22 2016-11-30 The Procter & Gamble Company Method of treating textile fabrics
WO2015112339A1 (en) 2014-01-22 2015-07-30 The Procter & Gamble Company Fabric treatment composition
EP3097175B1 (en) 2014-01-22 2018-10-17 The Procter and Gamble Company Fabric treatment composition
CA2841024C (en) 2014-01-30 2017-03-07 The Procter & Gamble Company Unit dose article
US10752562B2 (en) 2014-02-25 2020-08-25 The Procter & Gamble Company Process for making renewable surfactant intermediates and surfactants from fats and oils and products thereof
US9994497B2 (en) 2014-02-25 2018-06-12 The Procter & Gamble Company Process for making renewable surfactant intermediates and surfactants from fats and oils and products thereof
CN106232791B (zh) 2014-02-26 2019-12-10 宝洁公司 包含烷氧基化的聚亚烷基亚胺、有机改性的硅氧烷和基于硅氧烷的稀释剂的清洁组合物
US11214758B2 (en) 2014-03-14 2022-01-04 Lubrizol Advanced Materials, Inc. Itaconic acid polymers and copolymers
JP6275864B2 (ja) 2014-03-27 2018-02-07 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー ポリエーテルアミンを含有する洗浄組成物
EP3122850A1 (en) 2014-03-27 2017-02-01 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions containing a polyetheramine
EP2924108A1 (en) 2014-03-28 2015-09-30 The Procter and Gamble Company Water soluble unit dose article
EP2924105A1 (en) 2014-03-28 2015-09-30 The Procter and Gamble Company Water soluble unit dose article
EP3140384B1 (en) 2014-05-06 2024-02-14 Milliken & Company Laundry care compositions
US9365805B2 (en) 2014-05-15 2016-06-14 Ecolab Usa Inc. Bio-based pot and pan pre-soak
EP3152288A1 (en) 2014-06-06 2017-04-12 The Procter & Gamble Company Detergent composition comprising polyalkyleneimine polymers
EP3152286B1 (en) 2014-06-09 2020-01-22 Stepan Company Detergents for cold-water cleaning
EP3739029A1 (en) 2014-07-04 2020-11-18 Novozymes A/S Subtilase variants and polynucleotides encoding same
CN106661566A (zh) 2014-07-04 2017-05-10 诺维信公司 枯草杆菌酶变体以及编码它们的多核苷酸
US11103118B2 (en) 2014-08-01 2021-08-31 Ecolab Usa Inc. Method of manual surface cleaning using cleaning textiles and of washing said cleaning textiles
JP2017528569A (ja) 2014-09-10 2017-09-28 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ 封入型洗浄性組成物
US9617502B2 (en) 2014-09-15 2017-04-11 The Procter & Gamble Company Detergent compositions containing salts of polyetheramines and polymeric acid
US9487739B2 (en) 2014-09-25 2016-11-08 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions containing a polyetheramine
US20160090552A1 (en) 2014-09-25 2016-03-31 The Procter & Gamble Company Detergent compositions containing a polyetheramine and an anionic soil release polymer
US9388368B2 (en) 2014-09-26 2016-07-12 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions containing a polyetheramine
EP3212782B1 (en) * 2014-10-27 2019-04-17 Danisco US Inc. Serine proteases
WO2016081437A1 (en) 2014-11-17 2016-05-26 The Procter & Gamble Company Benefit agent delivery compositions
EP3242925A2 (en) 2015-01-08 2017-11-15 Stepan Company Cold-water laundry detergents
WO2016160407A1 (en) 2015-03-31 2016-10-06 Stepan Company Detergents based on alpha-sulfonated fatty ester surfactants
US9783766B2 (en) 2015-04-03 2017-10-10 Ecolab Usa Inc. Enhanced peroxygen stability using anionic surfactant in TAED-containing peroxygen solid
US10280386B2 (en) 2015-04-03 2019-05-07 Ecolab Usa Inc. Enhanced peroxygen stability in multi-dispense TAED-containing peroxygen solid
WO2016172699A1 (en) 2015-04-24 2016-10-27 International Flavors & Fragrances Inc. Delivery systems and methods of preparing the same
CN107548415A (zh) 2015-04-29 2018-01-05 宝洁公司 洗涤织物的方法
DK3088503T3 (en) 2015-04-29 2018-08-20 Procter & Gamble PROCEDURE FOR TREATING A TEXTILE SUBSTANCE
DK3088506T3 (en) 2015-04-29 2018-08-13 Procter & Gamble detergent
CN107624127A (zh) 2015-04-29 2018-01-23 宝洁公司 处理织物的方法
DK3088502T3 (en) 2015-04-29 2018-08-13 Procter & Gamble PROCEDURE FOR TREATING A TEXTILE SUBSTANCE
JP6866302B2 (ja) 2015-05-04 2021-04-28 ミリケン・アンド・カンパニーＭｉｌｌｉｋｅｎ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ ランドリーケア組成物中の青味剤としてのロイコトリフェニルメタン色素
WO2016196555A1 (en) 2015-06-02 2016-12-08 Stepan Company Cold-water cleaning method
BR112017025607B1 (pt) 2015-06-02 2022-08-30 Unilever Ip Holdings B.V. Composição de detergente para lavagem de roupas e método doméstico de tratamento de um tecido
US10226544B2 (en) 2015-06-05 2019-03-12 International Flavors & Fragrances Inc. Malodor counteracting compositions
TR201906232T4 (tr) 2015-06-11 2019-05-21 Unilever Nv Çamaşır için deterjan bileşimi.
WO2016206837A1 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Unilever Plc Laundry detergent composition
MX2018004683A (es) * 2015-10-28 2018-07-06 Novozymes As Composicion detergente que comprende variantes de amilasa y proteasa.
US10183087B2 (en) * 2015-11-10 2019-01-22 American Sterilizer Company Cleaning and disinfecting composition
US10731111B2 (en) 2015-11-25 2020-08-04 Conopco, Inc. Liquid laundry detergent composition
WO2017100051A2 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Stepan Comapny Cold-water cleaning compositions and methods
US20170204223A1 (en) 2016-01-15 2017-07-20 International Flavors & Fragrances Inc. Polyalkoxy-polyimine adducts for use in delayed release of fragrance ingredients
EP3205392A1 (en) 2016-02-12 2017-08-16 Basf Se Microcapsules and process for preparation of microcapsules
EP3205393A1 (en) 2016-02-12 2017-08-16 Basf Se Process for preparation of microcapsules
BR112018016129B1 (pt) 2016-02-17 2022-06-07 Unilever Ip Holdings B.V. Composição de detergente para lavagem de roupas e método doméstico de tratamento de um tecido
WO2017140392A1 (en) 2016-02-17 2017-08-24 Unilever Plc Whitening composition
WO2017143174A1 (en) 2016-02-18 2017-08-24 International Flavors & Fragrances Inc. Polyurea capsule compositions
CA3016373A1 (en) 2016-03-09 2017-09-14 Basf Se Encapsulated laundry cleaning composition
CN108884415A (zh) 2016-03-21 2018-11-23 荷兰联合利华有限公司 洗衣洗涤剂组合物
US10119100B2 (en) * 2016-04-07 2018-11-06 The Honest Company, Inc. Laundry detergent compositions
WO2017174251A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Unilever Plc Laundry detergent composition
WO2017182295A1 (en) 2016-04-18 2017-10-26 Basf Se Liquid cleaning compositions
CN105820888A (zh) * 2016-04-21 2016-08-03 刘爱华 一种去污除菌的衣物洗涤剂
EP3458567A1 (en) 2016-05-20 2019-03-27 Stepan Company Polyetheramine compositions for laundry detergents
EP3275988B1 (en) 2016-07-26 2020-07-08 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP3275989A1 (en) 2016-07-26 2018-01-31 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP3275985A1 (en) 2016-07-26 2018-01-31 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP3275986B1 (en) 2016-07-26 2020-07-08 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP3275987A1 (en) 2016-07-26 2018-01-31 The Procter and Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP4209264A1 (en) 2016-09-16 2023-07-12 International Flavors & Fragrances Inc. Microcapsule compositions stabilized with viscosity control agents
US20180085291A1 (en) 2016-09-28 2018-03-29 International Flavors & Fragrances Inc. Microcapsule compositions containing amino silicone
CA3038855A1 (en) 2016-11-01 2018-05-11 The Procter & Gamble Company Leuco colorants as bluing agents in laundry care compositions
WO2018085390A1 (en) 2016-11-01 2018-05-11 Milliken & Company Leuco colorants as bluing agents in laundry care compositions
JP6790257B2 (ja) 2016-11-01 2020-11-25 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニーＴｈｅ Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ 洗濯ケア組成物における青味剤としてのロイコ着色剤、その包装、キット及び方法
US20180119056A1 (en) 2016-11-03 2018-05-03 Milliken & Company Leuco Triphenylmethane Colorants As Bluing Agents in Laundry Care Compositions
US10577571B2 (en) 2016-11-08 2020-03-03 Ecolab Usa Inc. Non-aqueous cleaner for vegetable oil soils
CA3040066C (en) * 2016-11-16 2024-02-06 Colgate-Palmolive Company Oral care composition comprising potassium peroxymonosulfate and polyvinylpyrrolidone
US10758462B2 (en) 2016-11-16 2020-09-01 Colgate-Palmolive Company Oral care composition
CA3044420C (en) 2016-12-02 2022-03-22 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions including enzymes
CN110088261B (zh) 2016-12-02 2022-05-06 宝洁公司 包含酶的清洁组合物
US10550443B2 (en) 2016-12-02 2020-02-04 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions including enzymes
WO2018108382A1 (en) 2016-12-15 2018-06-21 Unilever Plc Laundry detergent composition
EP3339423A1 (en) 2016-12-22 2018-06-27 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
US11697906B2 (en) 2017-01-27 2023-07-11 The Procter & Gamble Company Active agent-containing articles and product-shipping assemblies for containing the same
US11697904B2 (en) 2017-01-27 2023-07-11 The Procter & Gamble Company Active agent-containing articles that exhibit consumer acceptable article in-use properties
CA3046690A1 (en) 2017-01-27 2018-08-02 The Procter & Gamble Company Active agent-containing articles that exhibit consumer acceptable article in-use properties
US11697905B2 (en) 2017-01-27 2023-07-11 The Procter & Gamble Company Active agent-containing articles that exhibit consumer acceptable article in-use properties
CA3051426C (en) 2017-02-01 2023-10-17 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising amylase variants
US20180346648A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 International Flavors & Fragrances Inc. Branched polyethyleneimine microcapsules
WO2019008035A1 (en) 2017-07-07 2019-01-10 Unilever Plc LAUNDRY COMPOSITION FOR LAUNDRY
WO2019008036A1 (en) 2017-07-07 2019-01-10 Unilever Plc WHITENING COMPOSITION
TWI715878B (zh) 2017-10-12 2021-01-11 美商美力肯及公司 隱色著色劑及組成物
MX2020003103A (es) 2017-10-12 2020-07-28 Procter & Gamble Colorantes leuco como agentes de azulado en composicion para el cuidado de la ropa.
WO2019075148A1 (en) 2017-10-12 2019-04-18 The Procter & Gamble Company LEUCO-COLORANTS AS AZURING AGENTS IN LAUNDRY CARE COMPOSITIONS
BR112020006988A2 (pt) 2017-10-12 2020-10-06 The Procter & Gamble Company colorantes leucos em combinação com um segundo agente branqueador como agentes de azulamento em composições para cuidado na lavagem de roupas
EP3704193A1 (en) 2017-11-01 2020-09-09 Milliken & Company Leuco compounds, colorant compounds, and compositions containing the same
CN111479912B (zh) 2017-11-30 2021-08-10 联合利华知识产权控股有限公司 包含蛋白酶的洗涤剂组合物
EP3502245A1 (en) 2017-12-19 2019-06-26 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP3502244A1 (en) 2017-12-19 2019-06-26 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP3502227A1 (en) 2017-12-19 2019-06-26 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP3502246A1 (en) 2017-12-19 2019-06-26 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
KR20200086739A (ko) 2018-01-26 2020-07-17 더 프록터 앤드 갬블 캄파니 효소를 포함하는 수용성 단위 용량 물품
US20190264140A1 (en) 2018-02-28 2019-08-29 The Procter & Gamble Company Methods of cleaning
CN111801409A (zh) 2018-02-28 2020-10-20 宝洁公司 清洁组合物
EP3775127B1 (en) 2018-05-17 2022-07-20 Unilever IP Holdings B.V. Cleaning composition
EP4349951A2 (en) 2018-06-15 2024-04-10 Ecolab USA Inc. Enhanced peroxygen stability using fatty acid in bleach activating agent containing peroxygen solid
CN112189052A (zh) 2018-06-19 2021-01-05 宝洁公司 自动盘碟洗涤剂组合物
EP3810769A1 (en) 2018-06-19 2021-04-28 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
CN110713866B (zh) * 2018-07-13 2022-05-03 花王株式会社 衣料用液体洗涤剂组合物
US20200032178A1 (en) 2018-07-27 2020-01-30 The Procter & Gamble Company Water-soluble unit dose articles comprising water-soluble fibrous structures and particles
CN112703246A (zh) 2018-09-17 2021-04-23 联合利华知识产权控股有限公司 洗涤剂组合物
EP3884022A1 (en) 2018-11-20 2021-09-29 Unilever Global Ip Limited Detergent composition
CN113056550B (zh) 2018-11-20 2022-10-28 联合利华知识产权控股有限公司 洗涤剂组合物
EP3884023A1 (en) 2018-11-20 2021-09-29 Unilever Global Ip Limited Detergent composition
WO2020104159A1 (en) 2018-11-20 2020-05-28 Unilever Plc Detergent composition
CN113056548B (zh) 2018-11-20 2023-05-02 联合利华知识产权控股有限公司 洗涤剂组合物
WO2020123889A1 (en) 2018-12-14 2020-06-18 The Procter & Gamble Company Foaming fibrous structures comprising particles and methods for making same
EP3897522A4 (en) 2018-12-18 2023-03-22 International Flavors & Fragrances Inc. MICROCAPSULE COMPOSITION
WO2020186052A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 The Procter & Gamble Company Method for treating cotton
MX2021011104A (es) 2019-03-14 2021-10-22 Procter & Gamble Composiciones de limpieza que comprenden enzimas.
CN113439116B (zh) 2019-03-14 2023-11-28 宝洁公司 包含酶的清洁组合物
WO2020229535A1 (en) 2019-05-16 2020-11-19 Unilever Plc Laundry composition
EP3741283A1 (en) 2019-05-22 2020-11-25 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing method
EP3976775A1 (en) 2019-05-24 2022-04-06 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition
EP3986996A1 (en) 2019-06-24 2022-04-27 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising amylase variants
BR112021025399A2 (pt) 2019-06-28 2022-04-26 Unilever Ip Holdings B V Composição detergente e método doméstico para tratar um tecido
WO2020259947A1 (en) 2019-06-28 2020-12-30 Unilever Plc Detergent composition
WO2020259949A1 (en) 2019-06-28 2020-12-30 Unilever Plc Detergent composition
EP3990602A1 (en) 2019-06-28 2022-05-04 Unilever Global IP Limited Detergent composition
WO2020260006A1 (en) 2019-06-28 2020-12-30 Unilever Plc Detergent compositions
BR112021025430A2 (pt) 2019-06-28 2022-02-01 Unilever Ip Holdings B V Composição de tensoativos, composição detergente para uso de cuidado doméstico e pessoal e método doméstico para tratar um tecido
US11891588B2 (en) 2019-07-31 2024-02-06 Ecolab Usa Inc. Personal protective equipment free delimer compositions o
US11873465B2 (en) 2019-08-14 2024-01-16 Ecolab Usa Inc. Methods of cleaning and soil release of highly oil absorbing substrates employing optimized extended chain nonionic surfactants
US20220333038A1 (en) 2019-09-02 2022-10-20 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Detergent composition
WO2021053122A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Unilever Ip Holdings B.V. Detergent compositions
AR120142A1 (es) 2019-10-07 2022-02-02 Unilever Nv Composición detergente
US20210122998A1 (en) 2019-10-24 2021-04-29 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition comprising an amylase
US11492571B2 (en) * 2019-10-24 2022-11-08 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing detergent composition comprising a protease
US20210148044A1 (en) 2019-11-15 2021-05-20 The Procter & Gamble Company Graphic-Containing Soluble Articles and Methods for Making Same
EP3835396A1 (en) 2019-12-09 2021-06-16 The Procter & Gamble Company A detergent composition comprising a polymer
BR112022015120A2 (pt) 2020-01-29 2022-12-13 Unilever Ip Holdings B V Recipiente plástico transparente e processo de fabricação de recipiente plástico transparente
EP3862412A1 (en) 2020-02-04 2021-08-11 The Procter & Gamble Company Detergent composition
CA3173147A1 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Phillip Kyle Vinson Detergent compositions containing a branched surfactant
WO2021249927A1 (en) 2020-06-08 2021-12-16 Unilever Ip Holdings B.V. Method of improving protease activity
AU2021306707A1 (en) 2020-07-06 2023-02-09 Ecolab Usa Inc. Foaming mixed alcohol/water compositions comprising a structured alkoxylated siloxane
US20220000757A1 (en) 2020-07-06 2022-01-06 Ecolab Usa Inc. Foaming mixed alcohol/water compositions comprising a combination of alkyl siloxane and a hydrotrope/solubilizer
US20220002636A1 (en) 2020-07-06 2022-01-06 Ecolab Usa Inc. Peg-modified castor oil based compositions for microemulsifying and removing multiple oily soils
JP2023536081A (ja) 2020-08-04 2023-08-23 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー 自動食器洗浄方法
WO2022031312A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing method and pack
WO2022031309A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing method
WO2022031311A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing method
WO2022043042A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Unilever Ip Holdings B.V. Detergent composition
WO2022042989A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Unilever Ip Holdings B.V. Surfactant and detergent composition
US20230287300A1 (en) 2020-08-28 2023-09-14 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Surfactant and detergent composition
WO2022042977A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Unilever Ip Holdings B.V. Detergent composition
EP4204531A1 (en) 2020-08-28 2023-07-05 Unilever IP Holdings B.V. Detergent composition
EP4237498A1 (en) 2020-10-27 2023-09-06 Milliken & Company Compositions comprising leuco compounds and colorants
JP2023547843A (ja) 2020-10-29 2023-11-14 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー アルギン酸リアーゼ酵素を含有するクリーニング組成物
EP4001388A1 (en) 2020-11-17 2022-05-25 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing method with amphiphilic graft polymer in the rinse
WO2022108766A1 (en) 2020-11-17 2022-05-27 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing composition comprising amphiphilic graft polymer
CA3197110A1 (en) 2020-11-17 2022-05-27 Patrick Firmin August Delplancke Automatic dishwashing method with alkaline rinse
EP4006131A1 (en) 2020-11-30 2022-06-01 The Procter & Gamble Company Method of laundering fabric
AU2021394636A1 (en) 2020-12-07 2023-06-08 Unilever Global Ip Limited Detergent compositions
EP4256020A1 (en) 2020-12-07 2023-10-11 Unilever IP Holdings B.V. Detergent compositions
CA3201033A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Basf Se Amphiphilic alkoxylated polyamines and their uses
CA3199985A1 (en) 2021-03-15 2022-09-22 Lars Lehmann Hylling Christensen Cleaning compositions containing polypeptide variants
WO2022235720A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 The Procter & Gamble Company Methods for making cleaning compositions and detecting soils
EP4086330A1 (en) 2021-05-06 2022-11-09 The Procter & Gamble Company Surface treatment
EP4341371A1 (en) 2021-05-18 2024-03-27 Nouryon Chemicals International B.V. Polyester polyquats in cleaning applications
EP4341317A1 (en) 2021-05-20 2024-03-27 Nouryon Chemicals International B.V. Manufactured polymers having altered oligosaccharide or polysaccharide functionality or narrowed oligosaccharide distribution, processes for preparing them, compositions containing them, and methods of using them
EP4108767A1 (en) 2021-06-22 2022-12-28 The Procter & Gamble Company Cleaning or treatment compositions containing nuclease enzymes
WO2023275269A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Nouryon Chemicals International B.V. Chelate-amphoteric surfactant liquid concentrates and use thereof in cleaning applications
EP4123006A1 (en) 2021-07-19 2023-01-25 The Procter & Gamble Company Composition comprising spores and pro-perfume materials
EP4123007A1 (en) 2021-07-19 2023-01-25 The Procter & Gamble Company Fabric treatment using bacterial spores
EP4124383A1 (en) 2021-07-27 2023-02-01 International Flavors & Fragrances Inc. Biodegradable microcapsules
WO2023041694A1 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Unilever Ip Holdings B.V. Detergent composition
EP4154974A1 (en) 2021-09-23 2023-03-29 International Flavors & Fragrances Inc. Biodegradable microcapsules
WO2023057367A1 (en) 2021-10-08 2023-04-13 Unilever Ip Holdings B.V. Laundry composition
WO2023064749A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 The Procter & Gamble Company A fabric and home care product comprising cationic soil release polymer and lipase enzyme
EP4194536A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 The Procter & Gamble Company Laundry treatment cartridge
EP4194537A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 The Procter & Gamble Company Laundry treatment cartridge
US20230265358A1 (en) 2021-12-16 2023-08-24 The Procter & Gamble Company Home care composition comprising an amylase
US20230272310A1 (en) 2021-12-16 2023-08-31 The Procter & Gamble Company Home care composition
WO2023114795A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing composition comprising a protease
US20230365897A1 (en) 2021-12-16 2023-11-16 The Procter & Gamble Company Fabric and home care composition including a protease
EP4212239A1 (en) 2022-01-14 2023-07-19 International Flavors & Fragrances Inc. Biodegradable prepolymer microcapsules
EP4273210A1 (en) 2022-05-04 2023-11-08 The Procter & Gamble Company Detergent compositions containing enzymes
EP4273209A1 (en) 2022-05-04 2023-11-08 The Procter & Gamble Company Machine-cleaning compositions containing enzymes
WO2023225459A2 (en) 2022-05-14 2023-11-23 Novozymes A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections
EP4279571A1 (en) 2022-05-19 2023-11-22 The Procter & Gamble Company Laundry composition comprising spores
WO2023227356A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Unilever Ip Holdings B.V. Composition containing enzyme
WO2023227421A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Unilever Ip Holdings B.V. Laundry liquid composition comprising a surfactant, an alkoxylated zwitterionic polyamine polymer, and a fragrance
WO2023227332A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Unilever Ip Holdings B.V. Laundry liquid composition comprising a surfactant, an alkoxylated zwitterionic polyamine polymer and a protease
WO2023227331A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Unilever Ip Holdings B.V. Composition comprising a specific methyl ester ethoxylate surfactant and a lipase
WO2023227335A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Unilever Ip Holdings B.V. Liquid composition comprising linear alkyl benzene sulphonate, methyl ester ethoxylate and alkoxylated zwitterionic polyamine polymer
WO2023227375A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Unilever Ip Holdings B.V. Laundry liquid composition comprising a surfactant, an aminocarboxylate, an organic acid and a fragrance
WO2023233026A1 (en) 2022-06-03 2023-12-07 Unilever Ip Holdings B.V. Laundry detergent product
WO2024020445A1 (en) 2022-07-20 2024-01-25 Ecolab Usa Inc. Novel nonionic extended surfactants, compositions and methods of use thereof
EP4321604A1 (en) 2022-08-08 2024-02-14 The Procter & Gamble Company A fabric and home care composition comprising surfactant and a polyester
WO2024056333A1 (en) 2022-09-13 2024-03-21 Unilever Ip Holdings B.V. Washing machine and washing method
WO2024056332A1 (en) 2022-09-13 2024-03-21 Unilever Ip Holdings B.V. Washing machine and washing method
WO2024056278A1 (en) 2022-09-13 2024-03-21 Unilever Ip Holdings B.V. Washing machine and washing method
WO2024056334A1 (en) 2022-09-13 2024-03-21 Unilever Ip Holdings B.V. Washing machine and washing method
EP4349946A1 (en) 2022-10-05 2024-04-10 Unilever IP Holdings B.V. Unit dose fabric treatment product
EP4349948A1 (en) 2022-10-05 2024-04-10 Unilever IP Holdings B.V. Laundry liquid composition
EP4349945A1 (en) 2022-10-05 2024-04-10 Unilever IP Holdings B.V. Laundry liquid composition
EP4349942A1 (en) 2022-10-05 2024-04-10 Unilever IP Holdings B.V. Laundry liquid composition
EP4349947A1 (en) 2022-10-05 2024-04-10 Unilever IP Holdings B.V. Laundry liquid composition
EP4349944A1 (en) 2022-10-05 2024-04-10 Unilever IP Holdings B.V. Laundry liquid composition
EP4349943A1 (en) 2022-10-05 2024-04-10 Unilever IP Holdings B.V. Laundry liquid composition

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US34606A (en) * 1862-03-04 Improvement in machines for combing cotton
US4760025A (en) * 1984-05-29 1988-07-26 Genencor, Inc. Modified enzymes and methods for making same
US5182204A (en) * 1984-05-29 1993-01-26 Genencor International, Inc. Non-human carbonyl hydrolase mutants, vectors encoding same and hosts transformed with said vectors
US5155033A (en) * 1989-01-06 1992-10-13 Genencor, Inc. Subtilisins modified at position 225 resulting in a shift in catalytic activity
US5204015A (en) * 1984-05-29 1993-04-20 Genencor International, Inc. Subtilisin mutants
US5185258A (en) * 1984-05-29 1993-02-09 Genencor International, Inc. Subtilisin mutants
US4634551A (en) * 1985-06-03 1987-01-06 Procter & Gamble Company Bleaching compounds and compositions comprising fatty peroxyacids salts thereof and precursors therefor having amide moieties in the fatty chain
US4990452A (en) * 1986-02-12 1991-02-05 Genex Corporation Combining mutations for stabilization of subtilisin
US5013657A (en) * 1988-04-12 1991-05-07 Bryan Philip N Subtilisin mutations
SG30639G (en) * 1986-04-30 1995-09-01 Genencor Int Non-human carbonyl hydrolase mutants DNA sequences and vectors encoding same and hosts transformed with said vectors
US4686063A (en) * 1986-09-12 1987-08-11 The Procter & Gamble Company Fatty peroxyacids or salts thereof having amide moieties in the fatty chain and low levels of exotherm control agents
US5260207A (en) * 1987-04-06 1993-11-09 Enzon Labs Inc. Engineering of electrostatic interactions at metal ion binding sites for the stabilization of proteins
JP3155984B2 (ja) * 1987-04-06 2001-04-16 ノヴォザイムズ・アクティーゼルスカブ タンパク質の安定化のための金属イオン結合部位における静電的相互作用の操作
US4914031A (en) * 1987-04-10 1990-04-03 Amgen, Inc. Subtilisin analogs
DK571587D0 (da) * 1987-11-02 1987-11-02 Novo Industri As Enzymatisk detergentsammensaetning
DK6488D0 (da) * 1988-01-07 1988-01-07 Novo Industri As Enzymer
US4844821A (en) * 1988-02-10 1989-07-04 The Procter & Gamble Company Stable liquid laundry detergent/fabric conditioning composition
CN1056187C (zh) * 1988-02-11 2000-09-06 金克克国际有限公司 新的蛋白水解酶及其在洗涤剂中的应用
US5324653A (en) * 1988-02-11 1994-06-28 Gist-Brocades N.V. Recombinant genetic means for the production of serine protease muteins
GB8803114D0 (en) * 1988-02-11 1988-03-09 Bp Chem Int Ltd Bleach activators in detergent compositions
US5116741A (en) * 1988-04-12 1992-05-26 Genex Corporation Biosynthetic uses of thermostable proteases
GB8810954D0 (en) * 1988-05-09 1988-06-15 Unilever Plc Enzymatic detergent & bleaching composition
US5118623A (en) * 1988-05-27 1992-06-02 Solvay Enzymes, Inc. Bleach stable enzymes
WO1990014420A1 (en) * 1989-05-17 1990-11-29 Amgen Inc. Multiply mutated subtilisins
BR9006827A (pt) * 1989-06-26 1991-08-06 Unilever Nv Composicoes detergentes enzimaticas
DK316989D0 (da) * 1989-06-26 1989-06-26 Novo Nordisk As Enzymer
BR9006832A (pt) * 1989-06-26 1991-08-06 Unilever Nv Composicao detergente enzimatica
JPH0372876A (ja) * 1989-08-11 1991-03-28 Mitsubishi Gas Chem Co Inc 新規アルカリ性プロテアーゼ
DK271490D0 (da) * 1990-11-14 1990-11-14 Novo Nordisk As Detergentkomposition
JPH06504199A (ja) * 1990-12-21 1994-05-19 ノボザイムス アクティーゼルスカブ ｐＨ範囲にわたり分子荷電が低度に異なる突然変異体酵素
EP0583339B1 (en) * 1991-05-01 1998-07-08 Novo Nordisk A/S Stabilized enzymes and detergent compositions
DE69212390T2 (de) * 1991-05-01 1997-01-09 Unilever Nv Stabilisierte Enzyme enthaltende Waschmittelzusammensetzungen
US5340735A (en) * 1991-05-29 1994-08-23 Cognis, Inc. Bacillus lentus alkaline protease variants with increased stability
PL178045B1 (pl) * 1992-07-17 2000-02-29 Genencor Int Mutant proteazy do stosowania w detergentach, sekwencja DNA kodująca mutanta proteazy, sposób otrzymywania mutanta proteazy oraz kompozycja detergentowa
JPH08502546A (ja) * 1992-10-23 1996-03-19 ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー プロテアーゼ酵素と漂白剤とを有する粒状洗剤
DK39093D0 (da) * 1993-04-01 1993-04-01 Novo Nordisk As Enzym
US5505938A (en) * 1993-09-30 1996-04-09 Lever Brothers Company, Division Of Conopco, Inc. Straight chain saturated or unsaturated C8 -C18 alkyl aldonolactone esters and an enzymatic process for their preparation
MA23346A1 (fr) * 1993-10-14 1995-04-01 Genencor Int Variantes de la subtilisine
BR9407834A (pt) * 1993-10-14 1997-05-13 Procter & Gamble Composições de limpeza contendo protease
CZ105296A3 (en) * 1993-10-14 1996-09-11 Procter & Gamble Bleaching agent containing protease enzymes, cleansing agents, agent for cleaning fabrics and fabric cleaning method
AU8015094A (en) * 1993-11-03 1995-05-23 Procter & Gamble Company, The Control of calcium carbonate precipitation in automatic dishwashing
CA2175329C (en) * 1993-11-03 2000-01-18 Eugene Steven Sadlowski Control of calcium carbonate precipitation in automatic dishwashing
US5578136A (en) * 1994-08-31 1996-11-26 The Procter & Gamble Company Automatic dishwashing compositions comprising quaternary substituted bleach activators
US5460747A (en) * 1994-08-31 1995-10-24 The Procter & Gamble Co. Multiple-substituted bleach activators
US5686015A (en) * 1994-08-31 1997-11-11 The Procter & Gamble Company Quaternary substituted bleach activators
ATE191497T1 (de) * 1994-11-18 2000-04-15 Procter & Gamble Lipase- und proteasehaltige waschmittelzusammensetzungen
JP4044143B2 (ja) * 1996-11-04 2008-02-06 ノボザイムス アクティーゼルスカブ ズブチラーゼ変異体及び組成物
KR100591553B1 (ko) * 1996-11-04 2006-06-19 노보자임스 에이/에스 섭틸라제 변종과 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
ES2287931T3 (es) 2007-12-16
JPH11246895A (ja) 1999-09-14
JP3776244B2 (ja) 2006-05-17
US6017871A (en) 2000-01-25
DE69434962T2 (de) 2008-01-17
CN1137289A (zh) 1996-12-04
DE69434962D1 (de) 2007-06-14
CN1082999C (zh) 2002-04-17
JPH09505841A (ja) 1997-06-10
HUT75984A (en) 1997-05-28
ATE361355T1 (de) 2007-05-15
TW306931B (cs) 1997-06-01
BR9407834A (pt) 1997-05-13
CA2173105C (en) 2003-05-27
US5679630A (en) 1997-10-21
HU9600960D0 (en) 1996-06-28
HU219851B (hu) 2001-08-28
CA2173105A1 (en) 1995-04-20
EP0723579B1 (en) 2007-05-02
AU8079794A (en) 1995-05-04
JP2888985B2 (ja) 1999-05-10
WO1995010591A1 (en) 1995-04-20
EP0723579A1 (en) 1996-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ105396A3 (en) Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process
JP2888986B2 (ja) プロテアーゼ酵素を含んでなる漂白組成物
CA2189427C (en) Subtilisin 309 variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6436690B1 (en) BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted
US6455295B1 (en) Subtilisin Carlsberg variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
KR100344976B1 (ko) 서브틸리신변종
ES2310014T5 (es) Composiciones de limpieza que contienen variantes de proteasas multiplemente substituidas.
CA2170491C (en) Subtilisin bpn&#39; variants with decreased adsorption and increased hydrolysis
US6451574B1 (en) Proteinase K variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6475765B1 (en) Subtilisin DY variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
WO1996028558A9 (en) Thermitase variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
CA2214578A1 (en) Thermitase variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6440717B1 (en) BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic