CZ105396A3 - Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process - Google Patents
Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process Download PDFInfo
- Publication number
- CZ105396A3 CZ105396A3 CZ961053A CZ105396A CZ105396A3 CZ 105396 A3 CZ105396 A3 CZ 105396A3 CZ 961053 A CZ961053 A CZ 961053A CZ 105396 A CZ105396 A CZ 105396A CZ 105396 A3 CZ105396 A3 CZ 105396A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- subtilisin
- protease
- group
- enzyme
- protease enzyme
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
- A61K8/41—Amines
- A61K8/416—Quaternary ammonium compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
- A61K8/22—Peroxides; Oxygen; Ozone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
- A61K8/23—Sulfur; Selenium; Tellurium; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
- A61K8/24—Phosphorous; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
- A61K8/42—Amides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/46—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur
- A61K8/463—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur containing sulfuric acid derivatives, e.g. sodium lauryl sulfate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/46—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur
- A61K8/466—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur containing sulfonic acid derivatives; Salts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
- A61K8/4906—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/66—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
- A61Q11/02—Preparations for deodorising, bleaching or disinfecting dentures
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/10—Washing or bathing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
- C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
- G06Q—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR ADMINISTRATIVE, COMMERCIAL, FINANCIAL, MANAGERIAL OR SUPERVISORY PURPOSES; SYSTEMS OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR ADMINISTRATIVE, COMMERCIAL, FINANCIAL, MANAGERIAL OR SUPERVISORY PURPOSES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- G06Q40/00—Finance; Insurance; Tax strategies; Processing of corporate or income taxes
- G06Q40/04—Trading; Exchange, e.g. stocks, commodities, derivatives or currency exchange
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/20—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of the composition as a whole
- A61K2800/22—Gas releasing
- A61K2800/222—Effervescent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/86—Products or compounds obtained by genetic engineering
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Business, Economics & Management (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Finance (AREA)
- Accounting & Taxation (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Economics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Development Economics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Marketing (AREA)
- Strategic Management (AREA)
- Technology Law (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Business, Economics & Management (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
Description
Tento vynález se týká čistících prostředků, prostředků pro čištění látek, prostředků pro mytí nádobí, prostředků pro mytí, způsobu čištění látek, způsobu mytí nádobí a způsobu mytí. Tento vynález se tedy týká různých čistících prostředků, které obsahují nové proteasové enzymy, které jsou variantami karbony.u vé hydrolasy.
Dosavadní stav techniky
Tato přihláška je částečným pokračováním USA patentové přihlášky č. 08/136 797, podané 14. října 1993, a USA patentové přihlášky č. 08/237 938, podané 2. května 1994, které jsou zde celé uvedeny jako citace.
Enzymy tvoří největší skupinu přirozeně se vyskytujících proteinů. Každá skupina enzymů obvykle katalýzuje (urychluje reakce bez toho, aby byla spotřebovávána) jiný druh chemické reakce. Jedna skupina enzymů, známá jako proteasy, je známa pro svoji schopnost hydrolyzovat (rozkládat sloučeninu na dvě nebo více jednodušších sloučenin s tím, že se přijímá H a OH část molekuly vody na stranách chemické vazby, která je štěpena) ji-* né proteiny. Tato schopnost hydrolyzovat proteiny se s výhodou provádí zahrnutím přirozeně se vyskytujících a synteticky při- pravených proteás jako přísad do pracích detergentních prostředků. Mnoho skvrn na oděvech je proteinového původu a proteasy se širokou specifičností mohou podstatně zlepšit odstraňování těchto skvrn.
Naneštěstí hladina účinnosti těchto proteinů v jejich přirozeném bakteriálním prostředí se často nepřenáší na relativně nepřirozené prací prostředí. Konkrétně takové vlastnosti prote2 as, jako je tepelná stabilita, stabilita při různém pH, stabilita při oxidaci a substrátová specifičnost, nejsou nutně optimalizovány pro použití mimo přirozené prostředí enzymu.
Aminokyselinová sekvence proteasového enzymu určuje vlastnosti proteas. Změna aminokyselinové sekvence proteasy může měnit vlastnosti enzymu do různého stupně nebo dokonce může enzym deaktivovat, podle umístění, povahy a/nebo velikosti změny aminokyselinové sekvence. Existuje několik přístupů pro měnění přírodní aminokyselinové sekvence proteas při pokusech zlepšit jejich vlastnosti s cílem zvýšit účinnost proteas při čištění, jako je tomu v pracím prostředí. Mezi tyto přístupy patří měnění aminokyselinové sekvence tak, aby se zvýšila tepelná stabilita a aby se zlepšila stabilita vůči oxidaci za různých podmínek.
Přes různé přístupy popsané v oblasti techniky existuje stále ještě neustálá potřeba nových efektivních variant proteas užitečných pro čištění rozmanitých povrchů. Předmětem předloženého vynálezu je tedy získat čistící prostředky, které obsahují proteasové enzymy, které jsou variantami karbonylových hydrolas se zlepšenou proteolytickou aktivitou, substrátovou specifičností, stabilitou a/nebo zlepšenými vlastnostmi provedení. Tyto a další předměty budou zřejmé z podrobného popisu, který následuje.
Podstata vynálezu
Tento vynález se týká čistících prostředků, které obsahují:
a) efektivní množství proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje, která je odvozena náhradou více zbytků aminokyselin prekursorové karbonylové hydrolasy různými aminokyselinami, v nichž mnohé aminokyselinové zbytky nahrazené v prekursorovém enzymu odpovídají poloze +76 v kombinaci s jedním nebo více následujícími zbytky: +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/ /nebo +274, kde číslo polohy odpovídá přirozeně se vyskytující inu subtilisinu z Bacillus amyloliquefaciens nebo ekvivalentním aminokyselinovým zbytkům v jiných karbonylových hydrolasách nebo subtilisinech (jako je Bacillus lentus subtilisin) a
b) jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s proteasovým enzymem.
Předložený vynález se týká také způsobů čistění jednotlivých položek, které potřebují vyčistit, tak, že se tato položka uvede do kontaktu s proteasovým enzymem, kterým je zde popsaná varianta karbonylové hydrolasy. Tento vynález tedy zahrnuje způsob čištění látek tím, že se daná látka uvede do kontaktu, s výhodou mícháním, s vodným roztokem obsahujícím uvedený pro teasový enzym. Tento způsob se může provádět za teplot pod 60 °C, ale je ovšem zcela účinný při teplotách praní až do teploty varu. Předložený vynález se týká také způsobu mytí nádobí tak, že se nádobí, které je potřeba umýt, uvede do kontaktu se zde popsaným proteasovým enzymem. Předložený vynález se týká také způsobu osobního mytí, při čemž tento způsob zahrnuje uvedeni těla člověka nebo nižšího živočicha, kteří potřebují umýt, do kontaktu se zde popsaným proteasovým enzymem.
V další části popisu je uveden stručný popis obrázků.
Obrázky 1 A až C ukazují sekvenci DNA a aminokyselin Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu a částečnou restrikční mapu tohoto genu (sekvence id. č. 6).
Obrázek 2 ukazuje zachované zbytky aminokyselin subtilisinů z Bacillus amyloliquefaciens (BPN') a Bacillus lentus (přírodního typu).
Obrázek 3A a 3B ukazuje sekvenci aminokyselin tří subtilisnů. Horní řádka ukazuje sekvenci aminokyselin subtilisinu z
Bacillus amyloliquefaciens (někdy také nazývaného BPN') (sekv.
id. č. 7) . Druhá řádka ukazuje sekvenci aminokyselin subtilisinu z Bacillus subtilis (sekvence id. č. 8). Třetí řádka ukazuje sekvenci aminokyselin subtilisinu z B. licheniformis (sekvence id. č. 9) . Čtvrtá řádka ukazuje sekvenci aminokyselin subtilisinu z Bacillus lentus (v PCT WO 89/06276 také označovaný jako subtilisin 309) (sekvence id. č. 10) . Symbol * označuje nepřítomnost specifických zbytků aminokyselin při srovnání se subtilisinem BPN'.
Obrázek 4 ukazuje konstrukci plasmidu GGA274.
Obrázek 5 ukazuje konstrukci GGT274, který je meziproduktem některých expresních plasmidů použitých v této přihlášce.
Obrázky 6A a 6B ukazují sekvenci DNA a aminokyselin subtilisinu z Bacillus lentus (sekv. id. č. 11) . Maturovaný subtilisinový protein je kodován kodony začínajícími na kodonu GCG (334 až 336) odpovídajícího Ala.
Obrázky 7A a 7B ukazují sekvenci DNA a aminokyselin výhodného provedení podle vynálezu (N76D/S103A/V1041) (sekv. id. č. 12). DNA na tomto obrázku byla modifikována způsoby popsanými pro kódování aspartátu v poloze 76, alaninu v poloze 103 a isoleucinu v poloze 104. Maturovaný protein varianty subtilisinu je kodován kodony, které začínají kodonem GCG (334 až 336) odpovídajícím Ala.
Obrázek 8 ukazuje konstrukci vektoru pBCDAICAT.
Obrázek 9 popisuje konstrukci vektoru pUCCATFNA.
Obrázek 10 ukazuje stabilitu výhodného enzymového mutantu při srovnání s přírodním typem v kapalném detergentním prostředku .
V další části tohoto popisu jsou popsány proteasové enzymy.
Tento vynález zahrnuje proteasové enzymy, které jsou nepřirozeně se vyskytujícími variantami karbonylové hydrolasy s různými vlastnostmi týkajícími se proteolytické aktivity, stability, subtrátové specifičnosti, pH profilu a/nebo provedení, při srovnání s prekursorovou karbonylovou hydrolasou, od níž je odvozena varianta sekvence aminokyselin. Prekursorovou karbonylovou hydrolasou může být přirozeně se vyskytující karbonylová hydrolasa nebo rekombinantní hydrolasa. Takové varianty karbonylové hydrolasy mají sekvenci aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena nahrazením více zbytků aminokyselin prekursorové karbonylové hydrolasy různými aminokyselinami. Tyto mnohé aminokyselinové zbytky prekursorovéh© enzymu odpovídají poloze +76 v kombinaci s jedním nebo více následujícími zbytky: +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274, kde číslo polohy odpovídá přirozeně se vyskytujícímu subtilisinu z Bacillus amyloliquefaciens nebo ekvivalentním aminokyselinovým zbytkům v jiných karbonylových hydrolasách nebo subtilisinech, jako je Bacillus lentus subtilisin.
Varianty karbonylové hydrolasy, které jsou proteasovým enzymem užitečným v prostředcích podle předloženého vynálezu, zahrnují náhradu zbytky aminokyseliny v poloze +76 v kombinaci s jednou nebo více dalšími modifikacemi. Varianty proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu zahrnují substituci, deleci nebo inserci zbytků aminokyselin v následujících kombinacích: 76/99, 76/101, 76/103, 76/104, 76/107, 76/123, 76/99/101, 76/99/103, 76/99/104, 76/101/103, 76/101/104, 76/ /103/104, 76/104/107, 76/04/123, 76/107/123, 76/99/101/103, 76/99/101/104, 76/99/103/104, 76/101/103/104, 76/103/104/123, 76/104/107/123, 76/99/101/103/104, 76/99/103/104/123, 76/99/ /101/103/104/123, 76/103/104/128, 76/103/104/260, 76/103/104/ /265, 76/103/104/197, 76/103/104/105, 76/103/104/135, 76/103/ /104/126, 76/103/104/107, 76/103/104/210, 76/103/104/126/265 a 76/103/104/222. Nejvýhodnější enzymové varianty podle předloženého vynálezu zahrnují substituci, deleci nebo inserci zbytku aminokyseliny v následující kombinaci zbytků: 76/99, 76/104, 76/99/104, 76/103/104, 76/104/107, 76/101/103/104, 76/99/101/ /103/104 a 76/101/104 B. amyloliquefaciens subtilisinu.
Sekvence variantní DNA kóduj ící takovou karbonylovou hydrolasu nebo varianty subtilisinu jsou odvozeny od sekvence prekursorové DNA, která kóduje přirozeně se vyskytující nebo rekombinantní prekursorový enzym. Sekvence variantní DNA jsou odvozeny modifikováním sekvence prekursorové DNA, takže kódují substituci jednoho nebo více specifických zbytků aminokyselin kódovaných sekvencí prekursorové DNA odpovídající polohám 76, 99, 101, 103, 104, 107, 123, 27, 105, 109, 126, 128, 135, 156, 166, 195, 197, 204, 206, 210, 216, 217, 218, 222, 260, 265 a/nebo 274 v Bacillus amyloliquefaciens nebo jakoukoliv jejich kombinaci. I když zbytky aminokyselin zde uvedené modifikace jsou identifikovány podle očíslování aplikovatelného na Bacillus amyloliquefaciens (což je konvenční způsob identifikování poloh zbytků ve všech subtilisinech), výhodná sekvence prekursorové DNA užitečné v předloženém vynálezu znamená sekvenci DNA Bacillus lentus, jak je uvedena na obrázku 6 (sekvence id. č. 11) .
Tyto sekvence variant DNA kódují inserci nebo substituci zbytku aminokyseliny v poloze 76 v kombinaci s jednou nebo více dalšími modifikacemi. Sekvence variant DNA s výhodou kódují substituci nebo inserci zbytků aminokyselin v následujících kombinacích: 76/99, 76/101, 76/103, 76/104, 76/107, 76/123. 76/99/101, 76/99/103, 76/99/104, 76/101/103, 76/101/104, 76/ /103/104, 76/104/107, 76/104/123, 76/107/123, 76/99/101/103, 76/99/101/104, 76/99/103/104, 76/101/103/104, 76/103/104/123, 76/104/107/123, 76/99/101/103/104, 76/99/103/104/123, 76/99/ /101/103/104/123, 76/103/104/128, 76/103/104/260, 76/103/104/ /265, 76/103/104/197, 76/103/104/105, 76/103/104/135, 76/103/ /104/126, 76/103/104/107, 76/103/104/210, 76/103/104/126/265 a/nebo 76/103/104/222. Nejvýhodnější sekvence variant DNA kódují modifikaci následujících kombinací zbytků: 76/99, 76/104, 76/99/104, 76/103/104, 76/104/ /107, 76/101/103/104, 76/99/ /101/103/104 a 76/101/104. Tyto sekvence rekombinantní DNA kódují varianty karbonylové hydrolasy s novou sekvencí aminokyselin a obecně alespoň jednu vlastnost, která je podstatně odlišná od stejné vlastnosti enzymu kódovaného sekvencí DNA prekursorové karbonylové hydrolasy. Mezi tyto vlastnosti patří vlastnosti týkající se proteolytické aktivity, subtrátové specifičnosti, stability, zrněného pH profilu a/nebo zlepšeného provedení.
Proteasové enzymy, které jsou zde užitečné, zahrnují substituci kterékoliv z 19 přirozeně se vyskytujících L-aminokyselin v navržených polohách zbytků aminokyselin. Tyto substituce lze udělat v jakémkoliv prekursorovém subtilisinu (prokaryotický, eukaryotický, savčí atd.). V této přihlášce se na různé aminokyseliny odkazuje obvyklým jedno- nebo tří-písměnkovým kódem. Tyto kódy jsou identifikovány v knize Dále J.W.: Molecular Genetics of Bacteria”, John Wiley and Sons, Ltd., Appendix B (1989) .
Substituce se s výhodou provádí v každé z uvedených poloh zbytků aminokyselin, ale bez omezení jenom na tyto: substituce v poloze 76 zahrnující D, Η, E, G, F, K, P a N, substituce v poloze 99 zahrnující D, T, N, Q, G a S, substituce v poloze 101 zahrnující G, D, K, L, A, E, S a R, substituce v poloze 103 zahrnující Q, T, D, Ε, Y, K, G, R, S a A, substituce v poloze 104 zahrnující všech 19 přirozeně se vyskytujících aminokyselin, substituce v poloze 107 zahrnující V, L, Μ, Y, G, E, F, T, S, A, N a I, substituce v poloze 123 zahrnující N, T, I, G, A, C a S, substituce v poloze 27 zahrnující K, N, C, V a T, substituce v poloze 105 zahrnující A, D, G, R a N, substituce v poloze 107 zahrnující A, L, V, Y, G, F, T, S a A, substituce v poloze 109 zahrnující S, K, R, A, N a D, substituce v poloze 126 zahrnující A, F, I, V a G, substituce v poloze 128 zahrnující G, L a A, substituce v poloze 135 zahrnující A, F, I, S a V, substituce v poloze 156 zahrnující D, E, A, G, Q a K, substituce v poloze 166 zahrnující všech 19 přirozeně se vyskytujících aminokyselin, substituce v poloze 195 zahrnující E, sub8 stituce v póze 197 zahrnující E, substituce v poloze 204 zahrnující A, G, C, S a D, substituce v poloze 206 zahrnující L, Y, N, D a E, substituce v poloze 210 zahrnující L, I, S, C a
F, substituce v poloze 216 zahrnující V, Ε, T a K, substituce v poloze 217 zahrnující všech 19 přirozeně se vyskytujících aminokyselin, substituce v poloze 218 zahrnující S, A, G, Ta V, substituce v poloze 222 zahrnující všech 19 přirozeně se vyskytujících aminokyselin, substituce v poloze 260 zahrnující Ρ, N, G, A, S, C, K a D, substituce v poloze 265 zahrnující N,
G, A, S, C, K, Y a H a substituce v poloze 274 zahrnující A a S. Specificky výhodná (výhodné) aminokyselina (aminokyseliny) pro substituování v každé z těchto poloh je (jsou) navržena (navrženy) v tabulce I. I když jsou v tabulce I uvedeny specifické aminokyseliny, mělo by tomu být porozuměno tak, že uvedené zbytky lze substituovat jakoukoliv aminokyselinou.
Tabulka I
| zbytek aminokyseliny | výhodná aminokyselina, která se substituuje/vkládá |
| +76 | D,H |
| +99 | D,T,N,G |
| +101 | R,G,D,K,L,A,E |
| • +103 | A,Q,T,D,E,Y,K,G,R |
| +104 | I,Y,S,L,A,T,G,F,M,W,D,V,N |
| +107 | V,L,Y,G,F,T,S,A,N |
| +123 | S,T,I |
| +27 | K |
| +105 | A,D |
| +109 | S,K,R |
| +126 | A,I,V,F |
| +128 | G,L |
| +135 | I,A,S |
| + 156 | E,D,Q |
| +166 | D,G,Ε,Κ,N,A,F,I,V,L |
| +195 | E |
Tabulka I (pokračování)
| zbytek aminokyseliny | výhodná aminokyselina, která se substituuje/vkládá |
| +197 | E |
| +204 | A,G,C |
| +206 | L |
| +210 | I,S,C |
| +216 | V |
| +217 | H,I,Y,C,A,G,F,S,N,E,K |
| +218 | S |
| +222 | * A,Q,S,C,I,K |
| +260 | P,A,S,N,G |
| +265 | N,A,G,S |
| +274 | A,S |
Tyto proteasové enzymy obsahující in vitro mutace v B. lentus subtilisinu na zbytku aminokyselin ekvivalentní +76 v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu produkuje subtilisinové varianty vykazující změněnou stabilitu (např. modifikovanou autoproteolytickou stabilitu) proti prekursorovým subtilisinfim (viz tabulky IV a VI).
Také in vitro mutace na zbytcích ekvivalentních +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu samotném, ve vzájemné kombinaci nebo v jakékoliv kombinaci s +76 mutacemi, produkuje varianty subtilisinu vykazující změněné vlastnosti, jako změněnou proteolytickou aktivitu, změněnou tepelnou stabilitu, změněný pH profil, změněnou substrátovou specifičnost a/nebo změněné provedení.
Karbonylové hydrolasy znamenají proteasové enzymy, které hydrolyzují sloučeniny obsahující vazby obecného vzorce o
II c-x , v němž X znamená atom kyslíku nebo dusíku. Patří mezi ně přirozeně se vyskytující karbonylové hydrolasy a rekombinantní karbonylové hydrolasy. Mezi přirozeně se vyskytující karbonylové hydrolasy principielně patří hydrolasy, např. peptidové hydrolasy, jako jsou subtilisiny nebo metalloproteasy. Mezi peptidové hydrolasy patří α-aminoacetylpeptidová hydrolasa, peptidylaminokyselinová hydrolasa, acylaminová hydrolasa, serinová karboxypeptidasa, metallokarboxypeptidasa, thiolproteinasa, karboxylproteinasa a metalloproteinasa. Patří sem serinové, metallo-, thio- a kyselinové proteasy stejně jako endo- a exo-proteasy.
Rekombinantní karbonylové hydrolasa znamená takovou karbonylovou hydrolasu, v níž je sekvence DNA kódující přirozeně se vyskytující karbonylové hydrolasy modifikována tak, že produkuje sekvenci mutované DNA, která kóduje substituci, inserci nebo deleci jedné nebo více aminokyselin v sekvenci aminokyselin karbonylové hydrolasy. Vhodné způsoby modiikace jsou popsány zde a v USA patentu č. 4 760 025 (Re 34 606), USA patentu č. 5 204 015 a USA patentu č. 5 185 258, které jsou zde zahrnuty jako odkazy.
Subtilisiny jsou bakteriální nebo plísňové karbonylové hydrolasy, které obvykle štěpí peptidové vazby proteinů nebo peptidů. Pojem subtilisin tak, jak se zde používá, znamená přirozeně se vyskytující subtilisin nebo rekombinantní subtilisin. Je známo, že řady přirozeně se vyskytujících subtilisinů jsou produkovány a často sekretovány různými mikrobiálními druhy. Sekvence aminokyselin členů těchto sérií nejsou zcela homologní. Subtilisiny v těchto sériích však vykazují stejný nebo podobný typ proteolytické aktivity. Tyto skupiny serinových proteas sdílejí obvyklou sekvenci aminokyselin definující katalytickou triadu, která je odlišuje od skupiny serinových proteas souvisejících s chymotrypsinem. Jak subtilisiny tak serinové proteasy související s chymotrypsinem mají katalytickou triádu obsahující aspartát, histidin a serin. U proteás souvisejících se subtilisinem je relativní pořadí těchto aminokyselin, čteno • od aminového ke karboxylovému konci, aspartát-histidin-serin. U proteás souvisejících s chymotrypsinem je však relativní pořadí histidin-aspartát-serin. Subtilisin zde uvedený se tedy týká serinových proteás, které mají katalytickou triadu proteás souvisejících se subtilisinem. Mezi příklady patří, ale nejsou na ně omezeny, subtilisiny uvedené zde na obrázku 3.
Rekombinantní subtilisin znamená subtilisin, v němž sekvence DNA kódující subtilisin je modifikována tak, že produkuje sekvenci variantní (nebo mutantní) DNA, která kóduje substituci, deleci nebo inserci jedné nebo více aminokyselin v sekvenci aminokyselin přirozeně se vysytujícího subtilisinu. Mezi vhodné způsoby, kterými se tato modifikace připravuje a které mohou být kombinovány s těmi, které jsou zde popsány, patří způsoby popsané v USA patentu 4 760 025 (RE 34 606) , USA patentu číslo • 5 204 015 a USA patentu 5 185 258.
Nelidské karbonylové hydrolasy a DNA kódující tyto hydrolasy mohou být získány z mnoha prokaryotických a eukaryotických organismů. Mezi vhodné příklady prokaryotických organismů patří gramnegativní organismy, jako je E. coli nebo Pseudomonas, a grampositivní bakterie, jako je Micrococcus nebo Bacillus. Mezi příklady eukaryotických organismů, z nichž lze získat karbonylovou hydrolasu a její geny, patří kvasinky, jako jsou Saccharomyces cerevisiae, plísně, jako je Aspergillus sp., a nelidské savčí zdroje, jako je například hovězí, z nichž lze získat gen kódující karbonylovou hydrolasu chymosin. Jako u subtilisinů, lze řady kabonylových hydrolas získat z různých příbuzných druhů, které mají aminokyselinové sekvence ne zcela homologní se členy oněch sérií, ale které nicméně vykazují stejný nebo podobný typ biologické aktivity. Tak zde používaná nelidská karbonylová hydrolasa má funkční definici, která znamená karbonylové hydrolasy, které přímo nebo nepřímo souvisejí s prokaryotickými nebo eukaryotickými zdroji.
Varianta karbonylové hydrolasy má aminokyselinovou sekvenci odvozenou od aminokyselinové sekvence prekursorové karbonylové hydrolasy. Tato prekursorové karbonylové hydrolasa (jako je subtilisin) zahrnuje přirozeně se vyskytující karbonylové hydrolasy (subtilisin) a rekombinantní karbonylové hydrolasy (subtilisin) . Aminokyselinová sekvence varianty karbonylové hydrolasy je odvozena od aminokyselinové sekvence prekursorové hydrolasy substitucí, delecí nebo insercí jedné nebo více aminokyselin prekursorové aminokyselinové sekvence. Taková modifikace je prekursorové DNA sekvence, která kóduje aminokyselinovou sekvenci prekursorové karbonylové hydrolasy (subtilisinu) spíše než manipulace enzymu prekursorové karbonylové hydrolasy (subtilisinu) samotného. Mezi vhodné způsoby takové manipulace sekvence prekursorové DNA patří ty způsoby, které jsou zde popsány, stejně jako způsoby známé odborníkům z oblasti techniky (viz například evropský patent 0 328 199, WO 89/06279 a USA patenty a přihlášky již zde citované).
Pro mutace jsou vhodné specifické zbytky odpovídající poloze +76 v kombinaci s jednou nebo více z následujících poloh +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinů. Modifikované zbytky jsou s výhodou vybrány z následujících kombinací: 76/99, 76/101, 76/103, 76/104, 76/107, 76/123. 76/99/101, 76/99/103, 76/99/104, 76/101/103, 76/101/ /104, 76/103/104, 76/104/107, 76/04/123, 76/107/123, 76/99/ /101/103, 76/99/101/104, 76/99/103/104, 76/101/103/104, 76/ /103/104/123, 76/104/107/123, 76/99/101/103/104, 76/99/103/ /104/123, 76/99/101/103/104/123, 76/103/104/128, 76/103/104/ /260, 76/103/104/265, 76/103/104/197, 76/103/104/105, 76/103/ 104/135, 76/103/104/126, 76/103/104/107, 76/103/104/210, 76/ /103/104/126/265 a 76/103/104/222, nejvýhodnější jsou 76/99, 76/104, 76/99/10, 76/103/104, 76/104/107, 76/101/103/104, 76/ /99/101/103/104 a 76/101/104. Na tato čísla poloh aminokyselin se zde odkazuje jako na čísla sekvence maturovaného Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu uvedeného na obrázku 1. Proteaso13 vé enzymy užitečné podle předloženého vynálezu však nejsou omezeny na mutaci tohoto zvláštního subtilisinu, ale jsou rozšířeny na prekursorové karbonylové hydrolasy obsahuj ící zbytky aminokyselin v polohách, které jsou ekvivalentní příslušným identifikovaným zbytkům v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Prekursorový subtilisin s výhodou znamená Bacillus lentus subtilisin. Substituce, delece nebo inserce se provádějí na stejných zbytcích aminokyselin v B. lentus, které odpovídají shora uvedenému seznamu.
Zbytek (aminokyselina) prekursorové karbonylové hydrolasy je stejný jako zbytek Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu, jestliže buď je homologní (tj. odpovídající polohou buď primární nebo terciární struktuře) nebo analogický specifickému zbytku nebo části tohoto zbytku v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu (tj. má stejnou nebo podobnou funkční kapacitu kombinovat, reagovat nebo vzájemně chemicky působit).
Pro zajištění homologie primární struktury se aminokyselinová sekvence prekursorové karbonylové hydrolasy přímo srovnává s primární sekvenví Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu a zvláště s řadou zbytků, o nichž je známo, že v subtilisinu, pro který je známa sekvence, jsou invariantní. Obrázek 2 ukazuje zachované zbytky mezi amyloliquefaciens subtilisinem a B. lentus subtilisinem. Po spojení zachovaných zbytků, umožnění nutných inserci a delecí, aby se zachovalo seřazení (tj. vyhnutí se eliminaci zachovaných zbytků delecí a inserci), jsou definovány zbytky odpovídající příslušným aminokyselinám v primární sekvenci Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Seřazení zachovaných zbytků by mělo s výhodou zachovat 100 % těchto zbytků. Avšak i seřazení větší než 75 % nebo tak malé jako 50 % zachovaných zbytků je také adekvátní pro definování odpovídajících zbytků. Zachování katalytické triady Asp32/His64/Ser221 by mělo být uchováno.
Například na obrázku 3 jsou seřazeny sekvence aminokyselin subtilisinu z Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis,
Bacillus licheniformis (carlsbergensis) a Bacillus lentus tak, aby poskytly maximální homologii mezi sekvencemi aminokyselin. Srovnání těchto sekvencí ukazuje, že v každé sekvenci existují četné zachované zbytky. Tyto zachované zbytky (jako mezi BPN' a B.lentus) jsou uvedeny na obrázku 2.
Zachované zbytky se tedy mohou použít pro definování odpovídajících ekvivalentních zbytků aminokyselin Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu v jiných karbonylových hydrolasách, jako je subtilisin z Bacillus lentus (PCT spis č. WO 89/06279, publikovaný 13. července 1989) , výhodný enzym subtilisinového prekursoru podle vynálezu, nebo subtilisin označovaný PB92 (evropský patent 0 328 299) , který je vysoce homologní s výhodným Bacillus lentus subtilisinem. Sekvence aminokyselin některých těchto subtilisinů jsou seřazeny na obrázcích 3A a 3B se sekvencí Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu tak, aby se dosáhla maximální homologie zachovaných zbytků. Jak lze vidět, v sekvenci Bacillus lentus existují četné delece při srovnání s Bacillus amyloliquefaciens subtilisinem. Tak například ekvivalentní aminokyselinou pro Vall65 v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu je u jiných subtilisinů isoleucin pro B. lentus a B. licheniformis.
Tak například aminokyselina v poloze +76 znamená asparagin (N) jak u B. amyloliquefaciens tak u B. lentus subtilisinu. Ve výhodné variantě subtilisinu podle vynálezu je však aminokyselina ekvivalentní poloze +76 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu substituována aspartátem (D) . Srovnání všech zbytků aminokyselin identifikovaných v tomto vynálezu pro substituci a výhodné substituce pro každou polohu jsou pro ilustraci uvedeny v tabulce II.
Tabulka II
| +76 | +99 | +101 | +103 | +104 | +107 | +123 | |
| B. amyloliquefaciens | N | D | S | Q | Y | I | N |
| (přírodní | |||||||
| B. lentus (přírodní) | N | S | S | S | V | I | N |
| nejvýhodnější substituce | D | D | R | A | I/Y | v | S |
Ekvivalentní zbytky mohou být definovány také stanovením homologie na úrovni terciární struktury prekursorové karbonylové hydrolasy, jejíž terciární struktura byla stanovena rentgenovou krystalografií. Ekvivalentní zbytky jsou definovány jako takové zbytky, u nichž atomové souřadnice dvou nebo více hlavních řetězců atomů příslušného zbytku aminokyseliny prekusorové karbonylové hydrolasy a Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu (N na N, CA na CA, C na C a 0 na O) jsou do 0,13 nm a s výhodou 0,1 nm po seřazení. Seřazení se dosáhne tím, že se nej lepší model orientuje a umístí se tak, aby poskytl maximální překryv atomových souřadnic nevodíkových proteinových atomů příslušné karbonylové hydrolasy vzhledem k Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Nejlepší model je takový krystalografický model, který dává nejnižší faktor R pro experimentální difrakční data při nejvyšším dostupném rozlišení.
R faktor = Sh |Fo(h)|-1Fc(h)|/ 2h|Fo(h)|
Ekvivalentní zbytky, které jsou funkčně analogické specifickým zbytkům Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu, jsou definovány jako takové aminokyseliny prekursorových karbony lových hydrolas, které mohou přijmout takovou konformaci, že buď mění, modifikují nebo přispívají k proteinové struktuře, navázání substrátu nebo katalýze definovaným způsobem a jsou přisuzovány specifickým zbytkům Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Dále jsou to takové zbytky prekursorové karbonylové hydrolasy (pro kterou byla terciární struktura získána z rentgenových dat), které zaujímají analogickou polohu v tom rozsahu že, i když hlavní řetězce atomů daného zbytku nemusí uspokojovat kriteria ekvivalence na základě zaujetí homologní polohy, atomové souřadnice alespoň dvou atomů vedlejšího řetězce zbytku leží do 0,13 nm od odpovídajících atomů vedlejšího řetězce Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu. Souřadnice trojrozměrné struktury Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu je uvedena ve spisu Evropského patentového úřadu č. 0 251 446 (ekvivalentního USA patentové přihlášce SN 08/212 291, jejíž popis je zde zahrnut jako citace) a může být použit, jak shora uvedeno, ke stanovení ekvivalentních zbytků na úrovni terciární struktury.
Některé zbytky identifikované pro substituci, inserci nebo deleci, jsou zachované zbytky, zatímco některé nikoliv. V případě zbytků, které nejsou zachovány, je náhrada jedné nebo více aminokyselin omezena na substituce, které poskytují variantu, která má takovou sekvenci aminokyselin, která neodpovídá sekvenci nacházející se v přírodě. V případě zachovaných zbytků by taková náhrada neměla vést k přirozeně se vyskytující sekvenci. Varianty karbonylové hydrolasy použitelné v předloženém vynálezu zahrnují maturované formy variant karbonylové hydrolasy stejně jako pro- a prepro-formy těchto variant hydrolasy. Prepro-formy jsou výhodnou konstrukcí, jelikož usnadňují expresi, sekreci a maturaci variant karbonylových hydrolas.
Prosekvence znamená sekvenci aminokyselin navázaných na N-konec maturované formy karbonylové hydrolasy, která po odstranění vede k maturované” formě karbonylové hydrolasy. V přírodě se mnoho proteolytických enzymů vyskytuje jako translační proenzymové produkty. V nepřítomnosti posttranslačního opracování dochází k jejich exprimaci v tomto stavu. Výhodnou prosekvenci pro výrobu variant karbonylové hydrolasy, zvláště subtilisinových variant, je domnělá prosekvence Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu, i když se mohou použít i jiné prosekvence subtilisinu. V příkladech se používá domnělá prosekvence subtilisinu z Bacillus lentus (ATCC 21536) .
Signální sekvence nebo prosekvence znamená jakoukoliv sekvenci aminokyselin navázanou na N-koncoVou část karbonylové hydrolasy nebo na N-koncovou část prohydrolasy, která může participovat při sekreci maturované nebo pro-formy hydrolasy. Tato definice signální sekvence je funkční a to znamená, že zahrnuje všechny ty sekvence aminokyselin, které jsou kódovány N-koncovou částí genu subtilisinu nebo jiných sekretovaných karbonylových hydrolas, které se účastní uskutečnění sekrece subtilisinu nebo jiných karbonylových hydrolas za přírodních podmínek. Proteasové enzymy užitečné pro předložený vynález využívají tyto sekvence pro uskutečnění sekrece variant karbonylové hydrolasy, jak je to zde popsáno. Výhodná signální sekvence použitá v příkladech obsahuje prvních sedm zbytků aminokyselin signální sekvence Bacillus subtilis subtilisinu napojených na zbytek signální sekvence substilisinu z Bacillus lentus (ATCC 21356).
Prepro- forma varianta karbonylové hydrolasy sestává z maturované formy hydrolasy, která má prosekvenci odštěpitelně napojenou na aminový konec hydrolasy a pre nebo signální sekvenci odštěpitelně napojitelnou na aminový konec prosekvence.
Expresní vektor znamená takovou DNA konstrukci obsahující sekvenci DNA, která je odštěpitelně napojena na vhodnou kontrolní sekvenci schopnou uskutečnit expresi uvedené DNA ve vhodném hostiteli. Mezi tyto kontrolní sekvence patří promotor pro uskutečnění transkripce, případná operátorová sekvence pro regulaci takové transkripce, sekvence kódující vhodná mRNA ribosomová vazebná místa a sekvence, které regulují ukončení transkripce a translace. Vektor může znamenat plasmid, fágovou částici nebo jednoduše potenciální genomový insert. Jakmile je jednou transformován do hostitele, vektor může replikovat a fungovat nezávisle na hostitelském genomu nebo může, v některých případech, integrovat do samotného genomu. V této přihlášce jsou pojmy plasmid a vektor někdy používány vzájemně zaměnitelně, jelikož plasmid je dnes nejobvyklejší formou vektoru. Jsou sem však zahrnuty takové jiné formy expresních vek18 torů, které slouží jako ekvivalentní funkce a které jsou známy odborníkům z oblasti techniky.
Hostitelskými buňkami používanými podle předloženého vynálezu jsou obvykle prokaryotičtí nebo eukaryotičtí hostitelé, kteří jsou s výhodou manipulováni způsoby popsanými v USA patentu S. 4 760 025 (RE 34 606) a nejsou schopni sekretovat enzymaticky aktivní endoproteasu. Výhodnou hostitelskou buňkou pro expresi subtilisinu je Bacillus kmen BG2036, který je deficitní na enzymaticky aktivní neutrální proteasu a alkalickou proteasu (subtilisin). Konstrukce kmene BG2036 je podrobně popsána v USA patentu 5 264 366. Mezi další hostitelské buňky pro exprimování subtilisinu patří Bacillus subtilis 1168 (také popsaný v USA patentu č. 4 760 025 (RE 34 606) a USA patentu č. 5 264 366, jejichž popisy jsou zde zahrnuty jako odkaz), stejně jako jakýkoliv vhodný kmen Bacillus, jako je B. licheniformis, B. lentus atd.
Hostitelské buňky jsou trasformovány nebo transfektovány vektory zkonstruovanými technikami rekombinantní DNA. Takové transformované hostitelské buňky jsou schopny buď replikovat vektory kódující varianty karbonylové hydrolasy nebo exprimovat žádanou variantu karbonylové hydrolasy. V případě vektorů, které kódují pre- nebo prepro-formu varianty karbonylové hydrolasy, jako jsou varianty, jsou po expresi typicky sekretovány z , hostitelské buňky do media hostitelské buňky.
Pojem odštěpitelné napojen, jestliže tento pojem popisuje vzájemný vztah mezi DNA oblastmi, jednoduše znamená, že jsou funkčně spolu spojeny. Například presekvence je odštěpitelné napojena na peptid, jestliže funguje jako signální sekvence ůčastnící se sekrece maturované formy proteinu nej pravděpodobněji obsahující štěpení signální sekvence. Promotor je odštěpitelně napojen na kódující sekvenci, jestliže reguluje transkripci sekvence. Ribosomové vazebné místo je odštěpitelné napojeno na kódující sekvenci, jestliže je umístěno tak, aby umožňovalo translaci.
Geny kódující přirozeně se vyskytující prekursorovou karbonylovou hydrolasu lze získat podle obecných způsobů známých odborníkům z oblasti techniky. Tyto způsoby obecně zahrnují syntetizování značených sond s domnělými sekvencemi kódujícími oblasti hydrolasy, o kterou se jedná, přípravu genomových knihoven z organismů exprimujících hydrolasu a prohledávání knihoven na gen, o který se jedná, hybridizací sond. Positivně hybridizované klony se pak mapují a sekvenují. B.lentus gen použitý v příkladech se klonuje, jak je popsáno v příkladu 1 USA patentu č. 5 185 258, jehož popis je zde zahrnut. BPN' gen použitý v příkladech se klonuje jak popsáno v příkladu 1 v RE C. 34 606, jehož popis je zde zahrnut.
Klonovaná karbonylová hydrolasa se pak používá pro transformování hostitelské buňky, aby došlo k expresi hydrolasy. Gen hydrolasy se pak liguje do plasmidu s vysokým počtem kopií. Plasmid replikuje v hostitelích v tom smyslu, že obsahuje dobře známé prvky nutné pro replikaci plasmidu: promotor odštěpitelně napojený na gen, o který se jedná (který může být dodáván jako vlastní homologní promotor genu, jestliže je rozpoznáván, tj. transkribován, hostitelem), terminaci transkripce a polyadenylační oblast (nutnou pro stabilitu mRNA transkribovanou hostitelem z genu hydrolasy v některých eukarytoických hostitelských buňkách), která je endogenní nebo je dodávána endogenní terminační oblastí genu hydrolasy, a je žádoucí selekční gen, jako je gen antibotické resistence, který umožňuje kontinuální kultivační uchovávání hostitelských buněk infikovaných plasmidem růstem v mediu, které obsahuje antibiotika. Plasmidy s vysokým počtem kopií obsahují také počátek replikace pro hostitele, čímž umožňují aby se v cytoplasmě, bez chromosomového omezení, generovalo velké množství plasmidů. V rozsahu vynálezu je však integrovat násobné kopie hydrolasového genu do genomu hostitele. To je usnadněno prokaryotickými a eukaryotickými organismy, které jsou zvláště citlivé na homologní rekombinaci.
Geny uvedené v předložených příkladech jsou přírodní B. lentus gen a přírodní Bacillus amyloliquefaciens gen. Může se vyrábět také syntetický gen kódující přirozeně se vyskytujíc! nebo mutovanou prekursorovou karbonylovou hydrolasu (subtilisin) . Při tomto postupu se stanoví sekvence DNA a/nebo aminokyselin prekursorové hydrolasy (subtilisinu). Pak se syntetizují násobné, překrývající se jednovláknové fragmenty DNA, které po hybridizaci a ligaci produkují syntetickou DNA kódující prekursorovou hydrolasu. Příklad konstrukce syntetického genu je uveden v příkladu 3 USA patentu 5 204 015, jehož popis je zde zahrnut jako citace.
Jakmile je jednou přirozeně se vyskytující nebo syntetická prekursorové karbonylové hydrolasa klonována, lze získat četné modifikace, kterými se zvýší použití genu po syntéze přirozeně se vyskytující prekursorové karbonylové hydrolasy. Mezi tyto modifikace patří výroba rekombinantní karbonylové hydrolasy podle toho, jak je to popsáno v USA patentu 4 760 025 (RE 34 606) a ve spisu Evropského patentového úřadu č. 0 251 446, a zde popsaná výroba variant karbonylové hydrolasy.
Následující způsob mutagenese kazety lze použít pro usnadnění konstrukce a identifikace variant karbonylové hydrolasy užitečných v předloženém vynálezu, i když se mohou použít i jiné způsoby včetně místně řízené mutagenese. Nejdříve se ziská přirozeně se vyskytující gen kódující hydrolasu a celý nebo zčásti se sekvenuje. Potom se tato sekvence skanuje na bod, v němž je žádoucí provést mutaci (deleci, inserci nebo substituci) jedné nebo více aminokyselin v kódovaném enzymu. Sekvence obklopující tento bod se vyhodnotí na přítomnost restrikčních míst pro umístění krátkého segmentu genu se sestavou oligonukleotidů, které expresí kódují různé mutanty. Tato restrikční místa znamenají s výhodou jedinečná místa uvnitř hydrolasového genu, takže se usnadní náhrada segmentu genu. Může se však použít jakékoliv vhodné restrikční místo, které není v hydrolasovém genu příliš hojné s tím, že se genové fragmenty, které se generují restrikčním štěpením, znovu uspořádají do patřičné sekvence. Jestliže restrikční místa nejsou umístěna ve vhodných vzdálenostech od vybraného bodu (od 10 do 15 nukleotidů), tato místa se generují substituováním nukleotidů v genu tak, že ani čtecí oblast ani kódované aminokyseliny nejsou v konečné konstrukci změněny. Mutace genu, pro změnu jeho sekvence tak, aby se potvrdila žádaná sekvence, se dosáhne rozšířením M13 primeru obecně známými způsoby. Úkol umístění vhodných obklopujících oblastí a vyhodnocení potřebných změn tak, aby se získaly sekvence dvou vhodných restrikčních míst, se provede rutinním využitím nadbytečného genetického kódu, mapováním genu restrikčními enzymy a velkým počtem různých restrikčních enzymů. Všimněte si, že jestliže je dostupné vhodné obklopující restrikční místo, shora uvedený způsob je potřeba provést pouze v souvislos ti s obklopující oblastí, která neobsahuje toto místo.
Jakmile je jednou přirozeně se vyskytující DNA nebo syntetická DNA klonována, restrikční místa obklopující ty polohy, které mají být mutovány, se rozštěpí rozpoznávacími restrikčními enzymy a kazety s komplementárními oligonukleotidy na koncích se ligují do tohoto genu. Tímto způsobem se mutagenese zjednoduší, protože mohou být syntetizovány všechny oligonukleotidy tak, aby měly stejná restrikční místa. K vytvoření restrikčních míst nejsou nutné žádné syntetické linkery.
Proteolytická aktivita je zde definována jako rychlost hydro lysy peptidových vazeb na miligram aktivního enzymu. Pro měření proteolytické aktivity existuje mnoho dobře známých postupů (K.M.Kalisz: Microbial Proteinases, Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology, A. Fiechter, red., 1988.). Vedle nich nebo jako alternativa k modifikované proteolytické aktivitě, mohou mít enzymy podle předloženého vynálezu mohou mít další modifikované vlastnosti, jako je ΐς,, Kkat, poměr Kkat/Km a/nebo modifikovaná substrátová specifičnost a/nebo modifikovaný profil pH aktivity. Tyto enzymy mohou být upraveny pro příslušný substrát, o kterém se předpokládá, že bude přítomen, například pro hydrolytický proces, jako je praní.
Jedním předmětem může být zajištění takové varianty karbonylové hydrolasy, která má změněnou proteolytickou aktivitu při srovnání s prekursorovou karbonylovou hydrolasou, jelikož zvýšení této aktivity (numericky větší) umožňuje použití enzymu k účinnějšímu působení na cílový substrát. Našim zájmem jsou také varianty enzymů, které mají změněnou tepelnou stabilitu a/nebo změněnou subtrátovou specifičnost při srovnání s prekursorem. Výhodnou karbonylovou hydrolasou, která má být mutována, je subtilisin. Specifické aminokyseliny, které jsou užitečné pro získání těchto výsledků v karbonylových hydrolasách subtilisinového typu, zbytků pro +76, +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 nebo jakákoliv jejich kombinace v Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu jsou uvedeny v příkladech. V některých případech může být žádoucí nižší proteolytická aktivita. A naopak, v některých případech může být žádoucí zvýšit proteolytickou aktivitu varianty enzymu proti jeho prekursoru. Dále může být žádoucí zvýšení nebo snížení (změna) stability varianty, ať alkalické nebo tepelné. Zvýšení nebo snížení Km, Kkat nebo Kkat/Km 3SOU specifická pro substrát použitý pro stanovení těchto kinetických parametrů.
Bylo také ukázáno, že zbytky ekvivalentní +76 v kombinaci s četnými jinými modifikacemi v subtilisinu jsou důležité při modulování celkové stability a/nebo proteolytické aktivity enzymu. Tak, jak je uvedeno v příkladech, asparagin (N) v Bacillus lentus subtilisinu v ekvivalentní poloze +76 může být substituován aspartátem (D) ve výhodných proteasových enzymech v kombinaci s modifikací jednoho nebo více následujících aminokyselinových zbytků: +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 pro získání zvýšené stability a/nebo zvýšené aktivity výsledného mutovaného enzymu.
Nejvýhodnější proteasové enzymy užitečné podle tohoto vynálezu jsou uvedeny v příkladech. Patří mezi ně následující specifické kombinace substituovaných zbytků: N76D/S99D, N76D/ /V104I, N76D/S99D/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/V104Y/I107V a N76D/S101R/S103A/V104I. Tyto substituce se s výhodou provádějí v Bacillus lentus (rekombinantním nebo přírodním) subtilisinu, i když tyto substituce se mohou provádět v jakémkoliv Bacillus subtilisinu.
Na základě výsledků získaných s touto a dalšími variantami substilisinů je zřejmé, že zbytky v karbonylových hydrolasách (s výhodou substilisinu) ekvivalentní polohám +76, +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 v Bacillus amyloliquefaciens jsou důležitými pro proteolytickou aktivitu, provedení a/nebo stabilitu těchto enzymů a pro postupy čištění nebo mytí pomocí těchto variantních enzymů.
Dále jsou uvedeny příklady výroby proteasových enzymů užitečných v prostředcích podle předloženého vynálezu.
Příklady provedeni vynálezu
Příklad výroby proteasy
Konstrukce pro expresi genu GG36 v B. subtilis
Klonování a konstrukce pro expresi genu subtilisinu z B. lentus se provádí v podstatě stejným způsobem, jako je to popsáno v USA patentu č. 5 185 258. Plasmid GGA274 (popsaný zde v příkladu 4) se dále modifikuje následujícím způsobem, jak je uvedeno na obrázku 5. Pstl místo, které se zavede během konstrukce plasmidu GGA274, se odstraní níže popsanou oligonukleotidem řízenou mutagenesí oligonukletidem následující sekvence identifikační číslo 1
5' GAGCTGCAACTCGTTAAA 3' (sekv. id. č. 1) . Podtržený zbytek A eliminuje rozpoznávací sekvenci restrikčního enzymu Pstl a mění odpovídající zbytek aminokyseliny z alaninu na threonin v poloze 274. Threonin v poloze 274 je zbytek pří24 rodního typu původně se nalézající v klonovaných sekvencích genu B. lentus subtilisinu. DNA segment kódující subtilisin se vyštípne z plasmidu GGA274 nebo jeho derivátů (GGT274 uvedeném na obrázku 5) štěpením EcoRI a BamHI. DNA fragment je subklonován zpět do vektorů na bázi bakteriofágu M-13, jako je MP19, pro mutagenesi. Po mutagenesi se provede štěpení EcoRI a HindlII s následujícím klonováním, aby se mutovaný gen subtilisinu přesunul zpět do expresního plasmidu, jako je GGA274, pro expresi a isolování mutovaných subtilisinových proteinů.
Oligonukleotidem řízená mutagenese
Oligonukleotidem řízená mutagenese se provádí podle Zollera M. a spol.: Methods Enzymol. 100. 468 (1983). Jako příklad, syntetický oligonukleotid sekvence identifikační číslo 2
5' GCTGCTCTAGACAATTCG 3' (sekv. id. č. 2) se použije pro změnu zbytku aminokyseliny v poloze 76 z asparaginu (N) na kyselinu asparagovou (D) neboli N76D. Podtržené ”Gn a C zbytky označují změny proti sekvenci genu přírodního typu. CA zachovává leucin v poloze +75 a mění sekvenci aminokyselin zavedením Xbal rozpoznávacícho místa restrikčního enzymu Xbal (TCTAGA), zatímco změna na GAC mění asparagin v poloze +76 na aspartát.
Pro mutagenesi v polohách 99, 101, 103 a 104 se mohou používat různé oligonukleotidy podle kombiance žádaných mutací. Například oligonukleotid sekvence identifikační číslo 3 5' GTATTAGGGGCGGACGGTCGAGGCGCCATCAGCTCGATT 3' (sekv. id. č. 3) se používá současně pro následující změny: S99D, S101R, S103A a V104I v jediné molekule subtilisinu. Podobně se používají oligonukleotidy sekvence identifikační číslo 4
5' TCAGGTTCGGTCTCGAGCGTTGCCCAAGGATTG 3' (sekv. id. Č. 4) a sekvence identifikační číslo 5
5' CACGTTGCTAGCTTGAGTTTAG 3' (sekv. id. č. 5) pro generaci I107V, respektive N123S. Podtržené zbytky označují změny proti sekvencím přírodního typu, které poskytují žádané změny buď v sekvencích aminokyselin nebo rozpoznávacích sekven25 cích restrikčnich enzymů.
Proteolytická aktivita variant subtilisinu
Podle způsobů shora uvedené oligonukleotidem řízené mutagenese se vyrobí varianty, jejichž seznam je uveden v tabulce
III. Proteolytická aktivita každé této varianty subtilisinu je uvedena v tabulce III. Kinetické parametry Km, kkat a Kkat/Km jsou měřeny pro hydrolýzu subtrátu syntetického peptidu sukcinyl-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-nitroanilidu způsobem popsaným P. Bonneauem a spol.: J. Amer. Chem. Soc. 113 f3) . 1030 (1991). Ve strufinosti - malý podíl zásobního roztoku varianty subtilisinu se přidá do lem kyvety obsahující substrát rozpuštěný v 0,lM Tris-HCl pufru, pH 8,6, a udržuje se na teplotě 25 °C v termostatu. Postup reakce se sleduje spektrofotometricky sledováním absorbance reakčního produktu p-nitroanilinu při 410 nm. Použitím nelineárního regresního algoritmu tak, aby reakční rychlost a koncentrace produktu každé reakce odpovídaly Michaelis-Mentenově reakci, se získají kinetické parametry.
Tabulka III
Kinetické parametry kkat, Km,nebo kkat/Km měřeny pro Bacillus lentus subtilisin a varianty
| protea- varianta enzymu | kkat | Kn, | WKm | |
| sa | č. | (s'1) | (M) | (S'1M'1) |
| - | B.lentus subtilisin | 170 | 0,00078 | 2,18.105 |
| - | N76D | 219 | 0,0008 | 2,74.105 |
| 1 | N76D/S99D | 88 | 0,00061 | 1,44.105 |
| 2 | N76D/S101R | 371 | 0,0013 | 2,85.105 |
| 3 | N76D/S103A | 400 | 0,0014 | 2,86.105 |
| 4 | N76D/V104I | 459 | 0,0011 | 4,17.105 |
| 5 | N76D/I107V | 219 | 0,0011 | 1,99.105 |
| 6 | N76D/N123S | 115 | 0,0018 | 6,40.104 |
| 7 | N76D/S99D/S101R | 146 | 0,00038 | 3,84.105 |
| 8 | N76D/S99D/S103A | 157 | 0,0012 | 1,31.105 |
| 9 | N76D/S99D/V104I | 247 | 0,00097 | 2,55.105 |
| 10 | N76D/S101R/S103A | 405 | 0,00069 | 5,90.105 |
| 11 | N76D/S101R/V104I | 540 | 0,00049 | 1,10.106 |
| 12 | N76D/S103A/V104I | 832 | 0,0016 | 5,20:105 |
| 13 | N76D/V104I/I107V | 497 | 0,00045 | 1,10.106 |
| 14 | N76D/V104Y/I123V | 330 | 0,00017 | 1,90.106 |
| 15 | N76D/V107I/N123S | 251 | 0,0026 | 9,65.104 |
| 16 | N76D/I107V/N123S | 147 | 0,0035 | 4,20.104 |
| 17 | N76D/S99D/S101R/S103A | 242 | 0,00074 | 3,27.105 |
| 18 | N76D/S99D/S101R/V104I | 403 | 0,00072 | 5,60.105 |
| 19 | N76D/S99D/S103A/V104I | 420 | 0,0016 | 2,62.105 |
| 20 | N76D/S101R/S103A/V104I | 731 | 0,00065 | 1,12.106 |
| 21 | N76D/S103A/V104I/N123S | 321 | 0,0026 | 1,23.105 |
| 22 | N76D/V104I/I107V/N123S | 231 | 0,003 | 7,70.104 |
| 23 | N76D/S99D/S101R/S103A/V104I | 624 | 0,00098 | 6,37.105 |
| 24 | N76D/S99D/S103A/V104I/N123S | 194 | 0,0043 | 4,51.104 |
| 25 | N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/N123S | 311 | 0,0023 | 1,35.105 |
Výsledky uvedené v tabulce III ukazují, Že všechny testované varianty subtilisinu si zachovávají proteolytickou aktivi27 tu. Podrobná analýza dat dále ukázala, že proteolytická aktivita je významně změněna u Bacillus lentus subtilisinu různými kombinacemi substitucí zbytků aminokyselin ekvivalentních polohám 76, 99, 101, 103, 104, 107 a 123 u Bacillus amyloliquefaciens.
Tepelná stabilita variant subtilisinu
Srovnání tepelné stability pozorované pro Bacillus lentus subtilisin a varianty podle předloženého vynálezu vyrobené způsobem shora uvedené oligonukleotidem řízené mutaganese je uvedeno v tabulce IV. Vyčištěný enzym, 15 gg/ml v ),1M glycinu a 0,01% Tweenu 80, pH 10,0, s nebo bez 50mM CaCl2, se rozdělí do malých zkumavek a inkubuje se 5 minut při 10 °C, 1 minutu při 10 až 60 °c a 20 minut při 60 °C. Zkumavky se pak na 10 minut dají do ledu. části ze zkumavek se testují na aktivitu enzymu přidáním do lem kyvety obsahující 1,2 mM syntetického peptidového substrátu, sukcinyl-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-nitroanilidu, rozpuštěného v 0,lM Tris-HCl pufru, pH 8,6, udržovaným na 25 °C. Počáteční lineární reakční rychlost se sleduje spektrofotometricky sledováním absorbance reakčního produktu p-nitroanilinu při 410 nm jako funkce času. Data se uvádějí jako procento aktivity před zahřátím. Výsledky uvedené v tabulce IV ukazují, že obrovská převaha variant vykazuje tepelnou stabilitu srovnatelnou s Bacillus lentus subtilisinem (24 z 26) v testu s přidaným 50mM CaCl2. V testu bez přidání 50mM CaCl2 byla velká většina variant (19 z 26) významně stabilnější než Bacillus lentus subtilisin. Dále pak varianty N76D/S99D, N76D/V104I, N76D/S99D/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/ /V104Y/I107V a N76D/S101R/S103A/V104I jsou významně stabilnější než jediná substituční varianta N76D v testu bez přidání 50mM CaCl2.
Tabulka IV
Tepelná stabilita měřená pro Bacillus lentus subtilisin a va rianty při pH 10, 60 °c, s přidáním +/- 50mM CaCl2
| enzym | % zbývající původní aktivity | ||
| - CaCl2 | + | CaCl2 | |
| B. lentus subtilisin | 2 | 96 | |
| N76D | 34 | 97 | |
| N76D/S99D | 49 | 98 | |
| N76D/S101R | 0 | 82 | |
| N76D/S103A | 26 | 92 | |
| N76D/V104I | 58 | 98 | |
| N76D/I107V | 32 | 96 | |
| N76D/N123S | 0 | 97 | |
| N76D/S99D/S101R | 30 | 100 | |
| N76D/S99D/S103A | 36 | 100 | |
| N76D/S99D/V104I | 48 | 97 | |
| N76D/S101R/S103A | 26 | 100 | |
| N76D/S101R/V104I | 38 | 100 | |
| N76D/S103A/V104Í | 58 | 100 | |
| N76D/V104I/I107V | 60 | 97 | |
| N76D/V104Y/I123V | 48 | 74 | |
| N76D/V107I/N123S | 0 | 98 | |
| N76D/I107V/N123S | 16 | 100 | |
| N76D/S99D/S101R/S103A | 38 | 100 | |
| N76D/S99D/S101R/V104I | 33 | 100 | |
| N76D/S99D/S103A/V104I | 38 | 98 | |
| N76D/S101R/S103A/V104I | 40 | 99 | |
| N76D/S103A/V104I/N123S | 1 | 98 | |
| N76D/V104I/I107V/N123S | 3 | 99 | |
| N76D/S99D/S101R/S103A/V104I | 36 | 99 | |
| N76D/S99D/S103A/V104I/N123S | 2 | 95 | |
| N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/N123S 0 | 100 |
Oligonukleotidem řízená mutagenese templátem jednovláknové DNA generované z fagemidu
A. Konstrukce B. lentus variant
Postup mutagenese je v podstatě stejný jak shora popsáno při oligonukleotidem řízené mutagenesi. Templát jednovláknové DNA se generuje způsobem fagemidu. Pro zkonstruování fagemidového vektoru pro generaci templátu jednovláknové DNA se nejdří ve zkonstruuje vektor pBCDAICAT. Nákres konstrukce vektoru je uveden na obrázku 8. Nejdříve se klonuje fragment Clal-Clal kódující CAT gen z plasmidů pV194 (Horinouchi A. a Wesiblum Β»g J. Bacteriol 150. 8 (1982) .) do AccI místa polylinkerové oblasti pUC19 (New England BioLabs, Beverly, Ma.). Získá se plasmid pUCCHL a EcoRI-Dral fragment o 600 párech nukleotidů (p.n.) z 5' konce GG36DAI kódující DNA se klonuje do EcoRI a EcoRV míst plasmidů pBSKS (Stratagene, lne., San Diego, Ka.). Získá se pBC2SK5. Jediné místo EcoRI plasmidů pBC2SK5 se odstraní štěpením EcoRI, následuje doplnění katalyzované T4 DNA polymerasou a religace za vzniku plasmidů pBC2SK-5R, který nemá místo EcoRI. EcoRI-Dral fragment, který se klonuje do pBCSK-5R, se isoluje jako Pstl-HindlII fragment a klonuje se do místa Pst.).·’ -HindlII plasmidů pUCCHL (část polylinkeru pUC19). Získá se plasmid pUCCHL5R. Kódující sekvence GG36DAI genu se vyštípne jako EcoRI-BamHI fragment a klonuje se do EcoRI-BamHI míst plasmidů pUCCHLSR za vzniku pUCCAT. Velký EcoRI-HindlII fragment pUCCAT se pak klonuje do EcoRI a HindlII míst BS2KS+. Získá se plasmid pBCDAICAT.
Pro generaci jednovláknové DNA se E.coli-obsahující plasmid pBCDAICAT infikuje fágem R408 (získaným od Stratagene, San Diego, Ka.) podle postupu popsaného Russelem Μ., Kiddem S. a Kelleym M.R.: Gene 45. 333 (1986). Jakmile je jednou templát jednovláknové DNA dostupný, provedou se standardní mutagenační způsoby tak, jak je to popsáno v oligonukleotidem řízené mutagenesi. Konstrukce některých mutantů je zde podrobně uvedena z ilustračních důvodů.
Při konstrukci B.lentus (GG36) N76D/S103A/V104I/L217H, se EcoRI-BamHI DNA fragment kódující GG36 N76D/S103A/V104I použije pro konstrukci pUCCAT (viz obr. 8) . Získá se plasmid pBCDAICAT. Po tom, co se podle shora popsaného postupu připraví templát jednovláknové DNA, se pro získání L217H použije primer mutagenese sekvence identifikační číslo 13 * WWW w* _ x Clal
5' TAT GCC AGC CAC AAC GGT ACT TCG ATG GCT 3' (sekv. id. č. 13) .
Stejně jako před tím podtržené zbytky znamenají změny nukleotidů, ke kterým došlo, a x Clal znamená, že existující Clal místo je po mutagenesi odstraněno. Postup mutagenese je shora popsán v oligonukleotidem řízené mutagenesi. Po mutagenesi se plasmidová DNA nejdříve testuje na eliminaci Clal místa a ty klony, kterým chybí Clal místo, se podrobí analýze DNA sekvence pro ověření DNA sekvence, u které existuje změna L na H v poloze 217 zbytků aminokyselin.
B. Konstrukce BPN' variant a jejich exprese v B. subtilis
Konstrukce Bacillus amyloliquefaciens (BPN') N76D/Q103A/ /Y104I/Y217L se provádí podobným způsobem až na dva následující stupně. N76D se nejdříve zavede do BPN' Y217L. Získá se BPN' N76D/Y217L. Druhou mutagenesi se převede BPN' N76D/Y217L na BPN' N76D/Q103A/Y104I/Y217L. Pro získání templátu jednovláknové DNA pro první mutagenesi se EcoRI-BamHI fragment kódující BPN' Y217L subtilisin (odvozený od plasmidu Y217L popsaného Wellsem J. a spol.: PNAS 84, 5167, 1087) použije pro zkonstruování plasmidu pUCCATFNA (viz obr. 9) . Plasmid pUCCATFNA obsahující BPN' Y217L se použije pro zkonstruování pBCFNACAT plasmidu (obr. 9) . Jednovláknová DNA se generuje jak shora popsáno. Pro získání BPN' N76D/Y217L se oligonukoeotidový primer sekvence identifikační číslo
Ur **
Xbal
5' C ACA GTT GCG GCT CTA GAT AAC TCA ATC GGT G 3' (sekv. id. č. 14) použije pro generaci změny N76D. Potom se připraví jednovláknová DNA z plasmidu pBCFNACAT obsahujícího BPN' N76D/Y217L (plasmid pBCFNACAT po mutagenesi N76D) a mutagenizuje se jiným oligonukleotidem sekvence identifikační číslo 15 x PvuII
5' GCT GAC GGT TCC GGC GCT ATT AGT TGG ATC ATT 3' (sekv. id. č. 15) , čímž se získá BPN' N76D/Q103A/Y104I/Y217L. Všechny stupně včetně klonování, přípravy jednovláknové DNA, mutagenese a testování mutantů se provádějjak shora popsáno. Exprese genu BPN' a jeho variant se dosáhne integrováním plasmidové DNA (pBCFNACAT obsahující různé varianty genu BPN') přímo do kmenu Bacillus subtilis deficitního na proteasu, jak je popsáno v RE 34 606.
Podle těchto příkladů výroby proteas se mohou vyrobit četné varianty, pro tyto varianty byla stanovena kinetická data a data stability. Kinetická data se získají shora zde popsanými způsoby a jsou uvedena v tabulce V. Data stability se získávají jak zde uvedeno. Výsledky jsou uvedeny v tabulce VI.
Postup testování tepelné stability
Vyčištěný enzym se podrobí výměně s pufrem v O,1M glycinu, pH 10,00, 0,01% Tween-80, nanesením tohoto enzymu na kolonu se Sephadexem G-25, ekvilibrovanou tímto pufrem, a eluováním enzymu z kolony stejným pufrem.
Do zkumavky obsahující 0,lM glycin, 0,01% Tween-80, pH 10,0, udržovaný v termostatu na 60 °C, se přidá enzym na konečnou koncentraci 15 μg/ml.
Z inkubace při 60 °C se v různých dobách odebírají jednotlivé podíly bezprostředně testované na enzymovou aktivitu přidáním do lem kyvety obsahující 1,2 mM syntetického peptidového substrátu, sukcinyl-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-nitroanilidu, rozpuštěného v 0,lM Tris-HCl pufru, pH 8,6, udržovaného na 25 °C. Počáteční lineární reakční rychlost se sleduje fotometricky sledováním absorbance reakčního produktu p-nitroanilinu při 410 nm jako funkce času.
Poločas, který znamená délku doby, které je potřeba pro deaktivaci 50 % hmotn. enzymu, se stanovuje z reakční rychlosti prvního řádu jako funkce doby inkubace při 60 °C.
Tato data jsou uvedena v tabulce VI jako procenta poločasu stanovená pro Bacillus lentus subtilisin (GG36) za stejných podmínek.
Tabulka V
| enzym | ^kat | K m | |
| • | (S'1) | (mM) | (s'1M_1) |
| B.lentus subtilisin | 170 | 0,78 | 2,20E+05 |
| N76D/S103G/V104I* | 380 | 1.4 | 2,70E+05 |
| N76D/S103A/V104F | 730 | 0,33 | 2,20E+06 |
| N76D/S103A/V104N | 790 | 2,8 | 2,80E+05 |
| N76D/S103A/V104S | 170 | 0,83 | 2,00E+05 |
| N76D/S103A/V104T | 370 | 1/9 | 2,00E+05 |
| N76D/S103A/V104W | 880 | 0,31 | 2,80E+06 |
| N76D/S103A/V104Y | 690 | 0,5 | l,40E+06 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S | 500 | 1,2 | 4,20E+05 |
| N76D/S101G/S103A/V104I* | 620 | 1/3 | 4,80E+05 |
| N76D/S103A/V104I/S105A* | 550 | 1,3 | 4,20E+05 |
| N76D/S103A/V104I/S105D* | 440 | 1,7 | 2,60E+05 |
| N76D/S103A/V104T/I107A* | 120 | 5,7 | 2,10E+04 |
| N76D/S103A/V104T/I107L* | 310 | 3,2 | 9,70E+04 |
| ' N76D/S103A/V104I/L126A | 90 | 2,2 | 4,10E+04 |
| N76D/S103A/V104I/L126F | 180 | 1,9 | 9,50E+04 |
| N76D/S103A/V104I/L126I | 100 | 2,4 | 4,20E+04 |
| N76D/S103A/V104I/L126V | 64 | 3,2 | 2,00E+O4 |
| N76D/S103A/V104I/S128G* | 560 | 1/7 | 3,30E+05 |
| N76D/S103A/V104I/S128L* | 430 | 3,8 | l,10E+05 |
| N76D/S103A/V104I/L135A | 140 | 0,76 | l,80E+05 |
| N76D/S103A/V104I/L135F | 390 | 0,69 | 5,70E+05 |
| N76D/S103A/V104I/L135I | 110 | 0,73 | l,50E+05 |
Tabulka V (pokračování)
| enzym | kkat ís’1) | K m (mM) | w*. |
| N76D/S103A/V104I/L135V | 140 | 0,86 | 1,60E+05 |
| N76D/S103A/V104I/S156E* | 170 | 2,6 | 6,50E+04 |
| N76D/S103A/V104I/S166D* | 160 | 3,5 | 4,60E+04 |
| N76D/S103A/V104I/D197E | 510 | 1,4 | 3,60E+05 |
| N76D/S103A/V104I/N204A* | 530 | 1,1 | 4,80E+05 |
| N76D/S103A/V104I/N204G* | 580 | 1,4 | 4,10E+05 |
| N76D/S103A/V104I/N204C* | 370 | 1,3 | 2,90E+05 |
| N76D/S103A/V104I/P210I* | 500 | 1,2 | 4,20E+05 |
| N76D/S103A/V104I/L217H* | 80 | 0,63 | l,30E+05 |
| N76D/S103A/V104I/M222A | 70 | 3,1 | 2,30E+04 |
| N76D/S103A/V104I/M222S | 80 | 3,1 | 2,60E+04 |
| N76D/S103A/V104I/T260P | 660 | 1,5 | 4,40E+05 |
| N76D/S103A/V104I/S265N | 590 | 1,3 | 4,50E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/I107V/N123S | 220 | 1,4 | l,60E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/D197E | 430 | 1,1 | 3,90E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/N204C | 400 | 1,1 | 3,60E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/Q206L | 440 | 1,2 | 3,70E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/I123S/S216V | 440 | 1,2 | 3,70E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S | 760 | 0,98 | 7,80E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/T260P | 410 | 1,2 | 3,40E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/T274A | 390 | 1 | 3,90E+05 |
| N76D/S103A/V104I/L126F/S265N | 170 | 2,1 | 8,10E+04 |
| N76D/S103A/V104I/S156E/S166D* | 40 | 6,3 | 6,40E+03 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/G197E | 410 | 0,98 | 4,20E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123G/G195E/N218S | 540 | 0,66 | 8,20E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/D197E/N218S | 770 | 0,79 | 9,80E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/N204C/N218S | 610 | 0,99 | 6,20E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/Q206L/N218S | 580 | 0,78 | 7,40E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S/T260P | 660 | 1 | 6,60E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S/T274A | 590 | 0,89 | 6,60E+05 |
| K27R/N76D/V104Y/Q109S/N123S/N218S/T274A 520 | 1 | 5,20E+05 | |
| K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/D197E/N218S 460 | 0,65 | 7,10E+05 | |
| B. amyloliquefaciens subtilisin (BPN') | 50 | 0,14 | 3,60E+05 |
Tabulka V (dokončení)
| enzym | Ir ^kat (s1) | K m (mM) | WKm (s’1M1) |
| BPN'-N76D/Y217L* | 380 | 0,46 | 8,30E+05 |
Tyto mutanty byly připraveny oligonukleotidem řízenou mutagenesi templátem jednovláknové DNA generované z fagemidu, všechny ostatní shora uvedenou oligonukleotidem řízenou mutagenesi.
Tabulka VI enzym tepelná stabilita (% poločasu přírodního enzymu)
| B.lentus subtilisin | 100 |
| N76D | 590 |
| N76D/S99D | 840 |
| N76D/S103A | 390 |
| N76D/V104I | 660 |
| N76D/I107V | 710 |
| N76D/N123S | 70 |
| N76D/S9.9D/S101R | 610 |
| N76D/S99D/S103A | 590 |
| N76D/S99D/V104I | 910 |
| N76D/S101R/S103A | 930 |
| N76D/S101R/V104I | 500 |
| N76D/S103A/V104I | 460 |
| N76D/S103G/V104I* | 370 |
| N76D/S103A/V104F | 480 |
| N76D/S103A/V104N | 230 |
| N76D/S103A/V104S | 230 |
| N76D/S103A/V104T | 370 |
| N76D/S103A/V104W | 280 |
| N76D/S103A/V104Y | 400 |
| N76D/V104I/I107V | 940 |
Tabulka VI (pokračování)
| enzym | tepelná stabilita (% poločasu přírodního enzymu) |
| N76D/V104Y/I107V | 820 |
| N76D/V104I/N123S | 80 |
| N76D/I107V/N123S | 150 |
| K27R/N76D/V104Y/N123S | 100 |
| N76D/S99D/S101R/S103A | 570 |
| N76D/S99D/S101R/V104I | 1000 |
| N76D/S99D/S103A/V104I | 680 |
| N76D/S101G/S103A/V104I* | 390 |
| N76D/S101R/S103A/V104I | 470 |
| N76D/S103A/V104I/S105A* | 360 |
| N76D/S103A/V104I/S105D* | 370 |
| N76D/S103A/V104T/I107A* | 270 |
| N76D/S103A/V104T/I107L* | 230 |
| N76D/S103A/V104I/N123S | 110 |
| N76D/V104I/I107V/N123S | 220 |
| N76D/S103A/V104I/L126A | 270 |
| N76D/S103A/V104I/L126F | 950 |
| N76D/S103A/V104I/L126I | 410 |
| N76D/S103A/V104I/L126V | 320 |
| N76D/S103A/V104I/S128G* | 640 |
| N76D/S103A/V104I/S128L* | 760 |
| N76D/S103A/V104I/L135A | 230 |
| N76D/S103A/V104I/L135F | 200 |
| N76D/S103A/V104I/L135I | 510 |
| N76D/S103A/V104I/L135V | 500 |
| N76D/S103A/V104I/S156E* | 120 |
| N76D/S103A/V104I/S166D* | 590 |
| N76D/S103A/V104I/D197E | 460 |
| N76D/S103A/V104I/N204A* | 230 |
| N76D/S103A/V104I/N204G* | 240 |
| . N76D/S103A/V104I/N204C* | 500 |
| N76D/S103A/V104I/P210I* | 1370 |
Tabulka VI (dokončení) enzym tepelná stabilita (% poločasu přírodního enzymu)
N76D/S103A/V104I/L217H* 60
N76D/S103A/V104I/M222A 520
N76D/S103A/V104I/M222S 490 • N76D/S103A/V104I/T260P 490
N76D/S103A/V104I/S265N 360
K27R/N76D/V104Y/I107V/N123S 210
K27R/N76D/V104Y/N123S/D197E 120
K27R/N76D/V104Y/N123S/N204C 110
K27R/N76D/V104Y/N123S/Q206L 380
K27R/N76D/V104Y/N123S/S216V 140
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S 270
K27R/N76D/V104Y/N123S/T260P 40
K27R/N76D/V104Y/N123S/T274A 60
N76D/S99D/S101R/S103A/V104I 590
N76D/S99D/S103A/V104I/N123S 110
N76D/S103A/V104I/L126F/S265N 810
N76D/S103A/V104I/S156E/S166D* 220
K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/G197E 90 ' K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/N218S 250
K27R/N76D/V104Y/N123S/D197E/N218S 270
K27R/N76D/V104Y/N123S/N204C/N218S 460
K27R/N76D/V104Y/N123S/Q206L/N218S 1400
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S/T260P 310
K27R/N76D/V104Y/N123S/N218S/T274A 180
N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/N123S 90
K27R/N76D/V104Y/Q109S/N123S/N218S/T274A 230
K27R/N76D/V104Y/N123S/G195E/D197E/N218S 240
B. amyloliquefaciens subtilisin (BPN') 100
BPN'-N76D/Y217L* 420
Tyto mutanty byly připraveny oligonukleotidem řízenou mutagenesi templátem jednovláknové DNA generované z fa37 gemidu, všechny ostatní shora uvedenou oligonukleotidem řízenou mutagenesí.
2. Materiály čistících prostředků čistící prostředky podle předloženého vynálezu obsahují také, vedle shora popsaného proteasového enzymu, jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s proteasovým enzymem. Pojem materiály čistícího prostředku tak, jak se zde používají, znamenají jakýkoliv kapalný, pevný nebo plynný materiál vybraný pro příslušný typ žádaného čistícího prostředku a formy produktu (např. kapalný prostředek, prostředek v granulích, ve spreji), při čemž tyto materiály jsou také slučitelné s proteasovým enzymem použitým v prostředku. Specifický výběr materiálů čistícího prostředku se snadno provede tak, že se vezme v úvahu povrch, položka nebo látka, která má být čištěna, a žádaná forma prostředku pro dané podmínky během použití (např. během použití detergentu pro mytí). Pojem slučitelný tak, jak se zde používá, znamená, že materiály čistících prostředků nesnižují proteolytickou aktivitu proteasového enzymu do takové rozsahu, aby proteasa nebyla účinná během normálního použití tak, jak je potřeba. Dále jsou zde uvedeny specifické materiály čistících prostředků.
V prostředcích pro čištění rozmanitých povrchů, kdy je potřeba odstranit proteinové skvrny, je zahrnuto efektivní množství jednoho nebo více shora popsaných proteasových enzymů. Mezi tyto čistící prostředky patří detergentní prostředky pro čištění tvrdých povrchů neomezené formou (např. kapalné nebo granulované), detergentní prostředky pro čištění látek neomezené formou (např. granulované, kapalné nebo ve formě kostek), prostředky pro mytí nádobí (neomezené formou), orální čistící prostředky neomezené formou (např. zubní prášek, zubní pasty a ústní vody) a čistící prostředky zubních protéz neomezené formou (např. kapalné, tablety). Pojem efektivní množství proteasového enzymu tak, jak se zde tento pojem používá, znamená takové množství shora popsaného proteasového enzymu, které je nutné pro dosažení enzymatické aktivity pro specifický čistící prostředek. Takové efektivní množství snadno odhadne odborník z oblasti techniky a je dáno mnoha faktory, jako je příslušná použitá varianta enzymu, čistící aplikace, specifické složení čistícího prostředku, na tom, jestli je žádoucí kapalný nebo suchý (např. granulovaný, kostka) prostředek a podobně.
Čistící prostředky podle předloženého vynálezu s výhodou obsahují od 0,0001 % hmotn. do 10 % hmotn. jednoho nebo více proteasových enzymů, výhodněji od 0,001 do 1 % hmotn., ještě výhodněji od 0,001 do 0,1 % hmotn. Některé příklady různých čistících prostředků, v nichž se mohou používat proteasové enzymy, jsou diskutovány níže podrobněji. Všechny díly, procenta a poměry jsou hmotnostní, pokud není uvedeno jinak.
Pojem čistící prostředky neurčené pro látky tak, jak se zde používá, znamená čistící prostředky pro tvrdé povrchy, čistící prostředky pro mytí nádobí, orální čistící prostředky, prostředky pro čištění zubních protéz a prostředky pro mytí osob.
A. čistící prostředky pro tvrdé povrchy, nádobí a látky
Proteasový enzym se může používat v jakémkoliv detergentním prostředku, kde je žádoucí vysoké pěnění a/nebo dobré odstraňování nerozpustného substrátu. Proteasový enzym se tedy může používat s různými konvenčními složkami, takže se získají úplné čistící prostředky pro tvrdé povrchy, prostředky pro mytí nádobí, prostředky pro praní látek a podobné. Tyto prostředky mohou být ve formě kapalin, granulí, kostek a podobně. Tyto prostředky se mohou vyrábět jako moderní koncentrované detergenty, které obsahují až 30 až 60 % hmotn. povrchově aktivních činidel.
čistící prostředky podle vynálezu mohou popřípadě, a s výhodou, obsahovat různá aniontová, neiontová, obojetná atd. povrchově aktivní činidla. Tato povrchově aktivní činidla jsou • typicky v prostředcích přítomna v množství od 0,1 do 60, s výhodou od od 1 do 35 % hmotn. z hmotnosti prostředků.
Mezi neomezující příklady povrchově aktivních činidel užitečných podle vynálezu patří konvenční alkyl(s 11 až 18 atomy uhlíku)benzensulfonáty a primární a náhodné alkylsulfáty, sekundární (2,3) alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)sulfáty obecných vzorců CH3 (CH2) X (CHOSOj) M*) CH3 a CH3(CH2)y(CHOSO3)'M*)CH2CH3, v nichž x a (y+1) znamenají alespoň číslo 7, s výhodou alespoň číslo 9, a M znamená ve vodě rozpustný kation, s výhodou sodný kation, alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)alkoxysulfáty (zvláště EO 1-7 ethoxysulfáty), alkyl (s 10 až 18 atomy uhlíku) alkylalkoxykarboxyláty (zvláště EO 1-7 ethoxykarboxyláty), alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)polyglykosidy a jejich odpovídající sulfatované polyglykosidy, estery α-sulfonovaných mastných kyselin s 12 až 18 atomy uhlíku, alkyl(s 12 až 18 atomy uhlíku) a alkylfenolalkoxyláty (zvláště ethoxyláty a směsné ethoxy/propoxy), betainy s 12 až 18 atomy uhlíku a sulfobetainy (sultainy), aminoxidy s 10 až 18 atomy uhlíku, sarkosináty s 8 až 24 atomy uhlíku (zvláště oleoylsarkosinát) a podobné. Výhodnými jsou alkylalkoxysulfáty (AES) a alkylalkoxykarboxyláty (AEC) (Použití těchto povrchově aktivních činidel je také výhodné v kom- j binaci se shora uvedenými aminoxidovými a/nebo betainovými nebo sultainovými povrchově aktivními činidly, závisí to však na potřebách toho, kdo prostředek vyrábí.). Seznam dalších konvenčních užitečných povrchově aktivních činidel je uveden ve standardních textech. Mezi zvláště užitečná povrchově aktivní činidla patří N-methylglukamidy s 10 až 18 atomy uhlíku, které jsou popsány v USA patentu 5 194 639 Connora a spol., vydaného
16. března 1993, který je zde zahrnut jako citace.
Zvláště užitečnou je ta skupina neiontových povrchově aktivních činidel, která je kondenzátem ethylenoxidu s hydrofobní částí. Získá se tak povrchově aktivní činidlo s průměrným poměrem hydrofilní k lipofilní části (HLB) od 5 do 17> s výhodou od 6 do 14, výhodněji od 7 do 12. Hydrofobní (hydrofilní) část může být svoji povahou alifatická nebo aromatická. Délka póly40 oxyethylenové skupiny, která je kondenzována s jakoukoliv hydrofobní skupinou, se může snadno upravit tak, aby se získala . ve vodě rozpustná sloučenina se žádoucí rovnováhou mezi hydrofilními a hydrofobními prvky. Zvláště výhodné jsou ethoxyláty primárních alkoholů s 9 až 15 atomy uhlíku (nebo smíšené ethoxy/propoxy) se 3 až 8 moly ethylenoxidu na mol alkoholu, zvláště primární alkoholy se 14 až 15 atomy uhlíku obshaující 6 až 8 molů ethylenoxidu na mol alkoholu, primární alkoholy s 12 až 15 atomy uhlíku obsahující 3 až 5 molů ethylenoxidu na mol alkoholu a jejich směsi.
V prostředcích podle vynálezu mohou být zahrnuty různé jiné složky, které jsou užitečné v detergentních čistících prostředcích, včetně jiných aktivních složek, nosičů, hydrotropů, pomocných činidel pro zpracování, barviv a pigmentů, rozpouštědel pro kapalné prostředky atd. Jestliže je žádoucí jakýkoliv další inkrement pěnění, mohou se tyto složky podporující pěně• ní, jako jsou alkolamidy s 10 až 16 atomy uhlíku, zahrnout do prostředků, typicky v množství od 1 do 10 % hmotn. Typickými příklady těchto prostředků podporujících pěnění jsou monoethanol a diethanolaminy s 10 až 14 atomy uhlíku. Výhodné je také použití těchto složek podporujících pěnění s vysoce pěnivými povrchově aktivními činidly, jako jsou shora uvedené aminoxidy, betainy a sultainy. Jestliže je to žádoucí, mohou se pro další pěnění přidat rozpustné hořečnaté soli, jako je MgCl2, MgSO4 a podobné, typicky v množstvích od 0,1 do 2 % hmotn.
Kapalné detergentní prostředky podle vynálezu mohou obsahovat vodu a další rozpouštědla a nosiče. Vhodné jsou primární nebo sekundární alkoholy s nízkou molekulovou hmotností, jako jsou například methanol, ethanol, propanol a isopropanol. Pr© rozpouštění povrchově aktivních činidel jsou výhodné monohydro‘ xyalkoholy, mohou se ale používat také polyoly, jako jsou pólyoly s 2 až 6 atomy uhlíku a s 2 až 6 hydroxylovými skupinami (např. 1,3-propandiol, ethylenglykol, glycerin a 1,2-propandiol). Tyto prostředky mohou obsahovat od 5 do 90 % hmotn., typicky od 10 do 50 % hmotn. těchto nosičů.
Detergentní prostředky podle vynálezu se budou výhodně připravovat tak, aby během použití ve vodných čistících postupech měla prací voda pH mezi 6,8 a 11,0. Konečné produkty se tedy připravují typicky s tímto rozmezím pH. Mezi způsoby, kterými se reguluje pH na doporučenou hodnotu, patří použití pufrů, alkalií, kyselin atd. Tyto způsoby jsou dobře známy odborníkům z oblasti techniky.
Jestliže se vyrábějí prostředky pro čištění tvrdých povrchů a prostředky pro čištění látek podle předloženého vynálezu, výrobce si může přát používat různé stavební složky v množství od 5 do 50 % hmotn. Mezi typické stavební složky patří 1 až 10gm zeolity, polykarboxyláty, jako jsou citráty a oxydisukcináty, vrstvené křemičitany, fosforečnany a podobné. Další konvenční složky jsou uvedeny ve standardních předpisech pro výrobu.
Podobně si může výrobce přát používat v těchto prostředcích různé další enzymy, jako jsou celulasy, lipasy, amylasy, peroxidasy a proteasy, typicky v množstvích od 0,001 do 1 % hmotn. V oblasti detergentních pracích prostředků jsou dobře známy různé detergentní složky a enzymy pečující o látky.
V těchto prostředcích se mohou používat také různá bělící činidla, jako jsou peruhličitany, perboritany a podobné, typicky v množstvích od 1 do 15 % hmotn. Jestliže je to žádoucí, tyto prostředky mohou obsahovat také bělící aktivátory, jako je tetraacetylethylendiamin, nonanoyloxybenzensulfonát a podobné, které jsou také známy v oblasti techniky. Používá se množství typicky od 1 do 10 % hmotn.
V těchto prostředcích se mohou používat také různá činidla uvolňující ušpinění, zvláště typu aniontových oligoesterů, různá chelatační činidla, zvláště aminofosfonáty a ethylediamindisukcináty, různá činidla odstraňující ušpinění hlinkami, zvláště ethoxylovaný tetraethylenpentamin, různá dispergační činidla, zvláště polyakryláty a polyaspartáty, různá zjasňovací či42 nidla, zvláště aniontová zjasňovací činidla, různá činidla zabraňující přenosu barviv, jako je polyvinylpyrrolidon, různá činidla potlačující pěnění, zvláště silikony a sekundární alkoholy, různá avivážní činidla látek, zvláště smektitové hlinky a polymery srážející hlinky ve formě vloček (např. poly(oxyethylen)) a podobná činidla, v množství od 1 do 35 % hmotn. Standardní předpisy a publikované patenty obsahují mnoho podrobných popisů těchto konvenčních materiálů.
V čistících prostředcích podle předloženého vynálezu se mohou používat také stabilizátory enzymů. Mezi tyto stabilizátory enzymů patří propylenglykol (s výhodou od 1 do 10 % hmotn.) , mravenčan sodný (s výhodou od 0,1 do 1 % hmotn.) a mravenčan vápenatý (s výhodou od 0,1 do 1 % hmotn.).
1. Prostředky pro čištění tvrdých povrchů
Pojem prostředek pro čištění tvrdých povrchů tak, jak se zde tento pojem používá, znamená kapalné a granulované detergentní prostředky pro čištění tvrdých povrchů, jako jsou podlahy, stěny, koupelny a podobné. Prostředky pro čištění tvrdých povrchů podle předloženého vynálezu obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou od 0,0001 do 10 % hmotn., výhodněji od 0,001 do 5, ještě výhodněji od 0,001 do 1 % hmotn. aktivního proteasového enzymu z hmotnosti prostředku. Vedle jednoho nebo více proteasových enzymů tyto prostředky pro čištění tvrdých povrchů typicky obsahují povrchově aktivní čindilo a ve vodě rozpustnou maskovací složku. V některých specializovaných produktech, jako jsou čistící prostředky na okna ve spreji, však někdy nejsou povrchově aktivní činidla používána, protože mohou způsobit filmové/šmouhovité zbytky na povrchu skla.
Povrchově aktivní složka, jestliže je přítomna, může být obsažena v tak malém množství, jako je 0,1 % hmotn. z hmotnosti prostředků podle vynálezu, typicky však tyto prostředky obsahují od 0,25 do 10, výhodněji od 1 do 5 % hmotn. povrchově aktiv43 ního činidla.
Prostředky budou typicky obsahovat od 0,5 do 50, s výhodou od 1 do 10 % hmotn. detergentní složky. Výhodné pH by mělo být v rozmezí od 8 do 12. Jestliže je nutné upravovat pH, mohou se pro úpravu pH používat konvenční činidla, jako je hydroxid sodný, uhličitan sodný nebo kyselina chlorovodíková.
V prostředcích mohou být zahrnuta rozpouštědla. Mezi užitečná rozpouštědla patří, ale nejsou na ně omezena, glykolethery, jako je monohexylether diethylenglykolu, monobutylether diethylenglykolu, monobutylether ethylengylkolu, monohexylether ethyienglykolu, monobutylether propylenglykolu, monobutylether dipropylenglykolu a dioly, jako je 2,2,4-trimethyl-l,3-pentandiol a 2-ethyl-l,3-hexandiol. Jestliže se používají, pak jsou tato rozpouštědla typicky přítomna v množství od 0,5 do 15, s výhodou od 3 do 11 % hmotn.
Pro usnadnění rychlejšího odpařování prostředku z povrchů, jestliže tento povrch není opláchnut po plné’' aplikaci prostředku na povrch, se mohou v předložených prostředcích používat vysoce těkavá rozpouštědla, jako je isopropanol nebo ethanol. Jestliže se používají, pak jsou těkavá rozpouštědla v prostředcích typicky přítomna v množství od 2 do 12 % hmotn.
Provedení prostředku pro čištění tvrdých povrchů podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími neomezujícími příklady (V následujících příkladech odkaz na proteasa č. v příkladech znamená tu variantu použitou v prostředcích podle předloženého vynálezu, která má číslo shora uvedené v tabulce
III.).
Příklady 1 až 6
Kapalné prostředky pro čištění tvrdých povrchů složka příklad č.:
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| proteasa č. 12 | 0,05 | 0,20 | 0,02 | 0,03 | 0,10 | 0,03 |
| proteasa č. 4 | - | - | - | - | 0/20 | 0,02 |
| EDTA** | - | - | 2,90 | 2,90 | - | - |
| citrát sodný alkyl(s 12 at. uhlíku)benzen- sulfonát sod- | 2,90 | 2,90 | ||||
| ný alkyl(s 12 at. uhlíku)sulfát | 1,95 | 1,95 | 1,95 | |||
| sodný (ethoxy)sulfát (s 12 at. uhlí- | 2,20 | 2,20 | 2,20 | |||
| ku) sodný*** dimethylamin- oxid (s 12 at. | 2,20 | 2,20 | 2,20 | |||
| uhlíku) kumensu1fonát | 0,50 | — | 0,50 | — | 0,50 | |
| sodný | 1,30 | - | 1,30 | - | 1,30 | - |
| hexylkarbitol*** _ ***** voda | 6,30 | 6,30 6,30 doplnit do | 6,30 100 % hmotn | 6,30 • | 6,30 |
tetrasodná sůl ethylendiamindioctové kyselina
WWW monohexylether diethylenglykolu všechny prostředky mají pH upraveno na hodnotu 7
V příkladech 1 až 4 proteasy č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 5 a 6 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 7 až 12
Sprej ové prostředky pro čištění tvrdých povrchů a pro odstraňování plísní v domácnosti
| složka | příklad č.: | |||||
| 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| proteasa č. 12 | 0,20 | 0,05 | 0,10 | 0,30 | 0,20 | 0,30 |
| proteasa č. 4 | - | - | - | - | 0,30 | 0,10 |
| oktylsulfát | ||||||
| sodný | 2,00 | 2,00 | 2,00 | 2,00 | 2,00 | 2,00 |
| dodecylsulfát | ||||||
| sodný | 4,00 | 4,00 | 4,00 | 4,00 | 4,00 | 4,00 |
| hydroxid sodný | 0,80 | 0,80 | 0,80 | 0,80 | 0,80 | 0,80 |
| křemičitan (Na) | 0,04 | 0,04 | 0,04 | 0,04 | 0,04 | 0,04 |
| parfém | 0,35 | 0,35 | 0,35 | 0,35 | 0,35 | 0,35 |
| voda | doplnit | do 100 % hmotn. |
Produkt má pH kolem 7.
V příkladech 7 až 10 proteasy č. l až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 11 a 12 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
2. Prostředky pro mytí nádobí
V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro mytí nádobí obsahují jeden nebo více proteasových enzymů. Pojem prostředek pro mytí nádobí tak, jak se zde používá, znamená všechny formy prostředků pro čištění nádobí včetně, ale bez omezení na ně, granulovaných a kapalných forem. Provedení prostředku pro mytí nádobí podle přeloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 13 až 18
Prostředky pro mytí nádobí
| složka | příklad č.: | |||||
| 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | |
| proteasa č. 12 | 0,05 | 0,50 | 0,02 | 0,40 | 0,10 | 0,03 |
| proteasa č. 4 N-methylgluka- mid s 12 až 14 | 0,40 | 0,02 | ||||
| atomy uhlíku ethoxy(1)sul- fát s 12 | 0,90 | 0,90 | 0,90 | 0,90 | 0,90 | 0,90 |
| atomy uhlíku 2-methylundě- | 12,00 | 12,00 | 12,00 | 12,00 | 12,00 | 12,00 |
| kanová kys. ethoxy(2)kar- boxylát s 12 | 4,50 | 4,50 | 4,50 | 4,50 | ||
| atomy uhlíku alkohol(s 12 atomy uhlíku)- | 4,50 | 4,50 | 4,50 | 4,50 | 4,50 | 4,50 |
| ethoxylát aminoxid s 12 | 3,00 | 3,00 | 3,00 | 3,00 | 3,00 | 3,00 |
| atomy uhlíku kumensulfonát | 3,00 | 3,00 | 3,00 | 3,00 | 3,00 | 3,00 |
| sodný | 2,00 | 2,00 | 2,00 | 2,00 | 2,00 | 2,00 |
| ethanol | 4,00 | 4,00 | 4,00 | 4,00 | 4,00 | 4,00 |
| hořečnaté ionty | 0,20 | 0,20 | 0,20 | 0,20 | 0,20 | 0,20 |
| (jako MgCl2) | ||||||
| vápenaté ionty | 0,40 | 0,40 | 0,40 | 0,40 | 0,40 | 0,40 |
(jako CaCl2) voda doplnit do 100 % hmotn.
Produkt má pH upraveno na hodnotu 7.
V příkladech 13 až 16 proteasy č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 17 a 18 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklad 19
Granulovaný prostředek pro mytí v automatické myčce nádobí
| složka | A | B | C |
| kyselina citrónová | 15,0 | - | - |
| citrát | 4,0 | 29,0 | 15,0 |
| kopolymer akrylát/methakrylát | 6,0 | - | 6,0 |
| kopolymer kyseliny akrylové a maleinové | - | 3,7 | - |
| suchý přidaný uhličitan | 9,0 | - | 20,0 |
| křemičitan alkalického kovu | 8,5 | 17,0 | 9,0 |
| parafin | - | 0,5 | - |
| benzotriazol | - | 0,3 | - |
| Termamyl 60T | 1,5 | 1,5 | 1,0 |
| proteasa č. 12 (4,6% kousky) | 1,6 | 1,6 | 1,6 |
| peruhličitan (AvO) | 1,5 | - | - |
| monohydrát perboritanu | - | 0,3 | 1,5 |
| tetrahydrát perboritanu | - | 0,9 | - |
| tetraacetylethylendiamin | 3,8 | 4,4 | - |
| diethylentriaminpentamethylenfosfonová | |||
| kyselina (hořečnatá sůl) | 0,13 | 0,13 | 0,13 |
| 3krát ethoxylovaný alkylethoxysulfát | 3,0 | - | - |
| alkylethoxypropoxyneiontové povrchově | |||
| aktivní činidlo | - | 1,5 | - |
| potlačovatel pěnění | 2,0 | - | - |
| neiontové povrchově aktivní činidlo | |||
| Olin SLF18 | - | - | 2,0 |
| síran doplnit do | 100 | % hmotn«, |
V příkladech 19 A až C proteasy č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 19 A až C se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
3. Prostředky pro čištění látek
V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro čištění látek obsahují jeden nebo více proteasových enzymů. Pojem prostředek pro čištění látek tak, jak se zde používá, se týká všech forem detergentních prostředků pro čištění látek, včetně, ale bez omezení na ně, granulovaných a kapalných pro-= středků a prostředků ve formě kostek.
a. Granulované prostředky pro čištění látek
Granulované prostředky pro čištění látek podle předložené” ho vynálezu obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou 0,001 až 10, výhodněji 0,005 až 5, výhodněji 0,01 až 1 % hmotn. aktivního proteasového enzymu z hmotnosti prostředku. Vedle jednoho nebo více proteasových enzymů granulované prostředky pro čištění látek typicky obsahují alespoň jedno povrchově aktivní činidlo, jednu nebo více stavebních složek a v některých případech bělící činidlo.
Provedení granulovaných prostředků pro čištění látek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 20 až 23
Granulovaný prostředek pro čištění látek příklad č.:
| 20 | 21 | 22 | 23 |
| proteasa č. 12 (4% kousky) | 0,10 | 0,20 | 0,03 | 0,05 |
| proteasa č. 4 (4% kousky) | - | - | 0,02 | 0,05 |
| lineární alkyl(se 13 atomy uhlíku)- | ||||
| benzensulfonát | 22,00 | 22,00 | 22,00 | 22,00 |
| fosfát (jako sodná sůl trifosfo- | ||||
| rečnanu | 23,00 | 23,00 | 23,00 | 23,00 |
| uhličitan sodný | 23,00 | 23,00 | 23,00 | 23,00 |
| křemičitan sodný | 14,00 | 14,00 | 14,00 | 14,00 |
| zeolit | 8,20 | 8,20 | 8,20 | 8,20 |
| chelatační činidlo (diethylentri- | ||||
| aminpentaoctová kyselina) | 0,40 | 0,40 | 0,40 | 0,40 |
| síran sodný | 5,50 | 5,50 | 5,50 | 5,50 |
| voda | doplnit do | 100 % ] | tirootn. | |
| V příkladech 20 až 21 proteasy | č. 1 | až 11 a | 13 až : | 25 uve- |
děné v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a
VI, lze substituovat za proteasu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 22 a 23 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 24 až 27
Granulovaný prostředek pro čištění látek
| složka | příklad δ.: | |||
| 24 | 25 | 26 | 27 | |
| proteasa č. 12 (4% kousky) | 0,10 | 0,20 | 0,03 | 0,05 |
| proteasa č. 4 (4% kousky) | - | - | 0,02 | 0,05 |
| alkyl(se 13 atomy uhlíku)- | ||||
| benzensulfonát | 12,00 | 12,00 | 12,00 | 12,00 |
| zeolit A (1 až 10 μπι) | 26,00 | 26,00 | 26,00 | 26,00 |
| 2-butyloktanová kyselina | 4,00 | 4,00 | 4,00 | 4,00 |
| sodná sůl sekundárního (2,3)alkyl- | ||||
| (s 12 až 14 atomy uhlíku)sulfátu | 5,00 | 5,00 | 5,00 | 5,00 |
| citrát sodný | 5,00 | 5,00 | 5,00 | 5,00 |
| optické zjasňovadlo | 0,10 | 0,10 | 0,10 | 0,10 |
| síran sodný | 17,00 | 17,00 | 17,00 | 17,00 |
| plnidla, voda, minoritní složky | doplnit do | 100 % hmotn. | ||
| V příkladech 24 a 25 proteasy | č. l až | 11 a | 13 až 25 | uve- |
děné v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, lze substituovat za proteásu č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 26 a 27 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 28 a 29
Granulované prostředky pro čištění látek
| složka | příklad č.: | |
| 28 | 29 | |
| lineární alkylbenzensulfonát | 11,4 | 10,70 |
| lojový alkylsulfát | 1,80 | 2,40 |
| alkylsulfát se 14 až 15 atomy uhlíku | 3,00 | 3,10 |
| 7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15 atomy | ||
| uhlíku | 4,00 | 4,00 |
| llkrát ethoxylovaný lojový alkohol | 1,80 | 1,80 |
| dispergační činidlo | 0,07 | 0,1 |
| silikonová kapalina | 0,80 | 0,80 |
| citrát trojsodný | 14,00 | 15,00 |
| kyselina citrónová | 3,00 | 2,50 |
| zeolit | 32,50 | 32,10 |
| kopolymer kyseliny maleinové s kys. akrylovou | 5,00 | 5,00 |
| diethylentriaminpentamethylenfosfonová kys. | 1,00 | 0,20 |
| proteasa č. 12 (4% kousky) | 0,30 | 0,30 |
| lipasa | 0,36 | 0,40 |
| amylasa | 0,30 | 0,30 |
| křemičitan sodný | 2,00 | 2,50 |
| síran sodný | 3,50 | 5,20 |
| polyvinylpyrrolidon | 0,30 | 0,50 |
| perboritan | 0,5 | 1 |
| fenolsulfonát | 0,1 | 0,2 |
| peroxidasa | 0,1 | 0,1 |
| minoritní složky | doplnit | do 100 |
Příklady 30 a 31
Granulované prostředky pro čištění látek
| složka | příklad Č.: | |
| 30 | 31 | |
| lineární alkyl(s 12 at. uhlíku)benzensulfonát | 6,5 | 8,0 |
| síran sodný | 15,0 | 18,0 |
| zeolit A | 26,0 | 22,0 |
| nitriltriacetát sodný | 5,0 | 5,0 |
| polyvinylpyrro1idon | 0,5 | 0,7 |
| tetraacetylethylediamin | 3,0 | 3,0 |
| kyselina boritá | 4,0 | - |
| perboritan | 0,5 | 1 |
| fenolsulfonát | 0,1 | 0,2 |
| proteasa č. 12 (4% kousky) | 0,4 | 0,4 |
| plnidla (např. křemičitany, uhličitany, | ||
| parfémy, voda) | doplnit | do 100 |
Příklad 32
Kompaktní granulovaný prostředek pro čištění látek složky % hmotn.
alkylsulfát 8,0 alkylethoxysulfát 2,0 směs 3krát a 7krát ethoxylovaných alkoholů s a 45 atomy uhlíku 6,0 amid mastné polyhydroxykyseliny 2,5 zeolit 17,0 vrstevnatý křemičitan/citrát 16,0 uhličitan 7,0 kopolymer kyseliny maleinové s kyselinou akrylovou 5,0 polymer uvolňující ušpinění 0,4 karboxymethylcelulosa 0,4 póly(4-vinylpyridin)-N-oxid 0,1 kopolymer vinylimidazolu a vinylpyrrolidonu 0,1 PEG2000 0,2 proteasa č. 12 (4% kousky) 0,5 lipasa 0,2 celulasa 0,2 tetraacetylethylendiamin 6,0 peruhličitan 22,0 ethylendiamindijantarová kyselina 0,3 potlačovatel pěnění 3,5 dvojsodná sůl 4,4'-bis(2-morfolino-4-anilino-l,3,5triazin-6-ylamino)stilben-2,2'-disulfonové kyseliny 0,25 disodium-4,4'-bis(2-sulfostyryl)bifenyl 0,05 voda, parfém a minoritní složky do 100
Příklad 33
Granulovaný prostředek pro čištění látek složka % hinotn.
lineární alkylbenzensulfonát alkylsuflát se 16 až 18 atomy uhlíku
7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15 atomy uhlíku kokosový alky1-dimethyl-hydroxyethy1-amoniumchlorid dispergační činidlo silikonová kapalina citrát trojsodný zeolit 4A kopolymer kyseliny maleinové a kyseliny akrylové diethylentriaminpentamethylenfosfonová kyselina perboritan tetraacetylethylendiamin smektitová hlinka póly(oxyethylen) (mol. hmotn. 300 000) proteasa č. 12 (4% kousky) lipasa amylasa celulasa křemičitan sodný uhličitan sodný karboxymethylcelulosa zjasňovací činidla voda, parfém, a minoritní složky do
7,6
1,3
4,0 lr4
0,07
0,8
5,0
15,0
4,0
0,4
15,0
5,0
10,0
0,3
0,4
0,2
0,3
0,2
3,0
10,0
0,2
0,2
100
Příklad 34
Granulovaný prostředek pro čištění látek složka % hmotn.
lineární alkylbenzensulfonát 6,92 lojový alkylsulfát 2,05
7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15 atomy uhlíku 4,4 3krát ethoxylovaný alkyl(s 12 až 15 atomy uhlíku)ethoxysulfát 0,16 zeolit 20,2 citrát 5,5 uhličitan 15,4 křemičitan 3,0 kopolymer kyseliny maleinové s kyselinou akrylovou 4,0 karboxymethylcelulasa 0,31 polymer uvolňující ušpinění 0,30 proteasa č. 12 (4% kousky) 0,2 lipasa 0,36 celulasa 0,13 tetrahydrát perboritanu 11,64 monohydrát perboritanu 8,7 tetraacetylethylendiamin 5,0 diethylentriaminpentamethylfosfonová kyselina 0,38 síran hořečnatý 0,40 zjasňovací činidlo 0,19 parfém, silikon, potlačovatelé pěnění 0,85 minoritní složky do 100
V příkladech 28 až 34 se proteásami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 28 až 34 se substitucí proteasy č.
jakoukoliv kombinací proteas užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
b. Kapalné prostředky pro čištění látek
Kapalné prostředky pro čištění látek podle předloženého vynálezu obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou od 0,0001 do 10, výhodněji od 0,001 do 1 a nejvýhodněji od 0,001 do 0,1 % hmotn. aktivního proteasového enzymu z hmotnosti prostředku. Tyto kapalné prostředky pro čištění látek dále typicky obsahují aniontové povrchově aktivní činidlo, mastnou kyselinu, ve vodě rozpustnou detergentní stavební složku a vodu.
Provedení kapalného prostředku pro čištění látek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 35 až 39
Kapalné prostředky pro čištění látek příklad č.:
složka
| 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | |
| proteasa č. 12 | 0,05 | 0,03 | 0,30 | 0,03 | 0,10 |
| proteasa č. 4 | - | - | - | 0,01 | 0,20 |
| sodná sůl alkyl(s 12 až 14 atomy uhlíku)sulfátu sod- | |||||
| ného | 20,00 | 20,00 | 20,00 | 20,00 | 20,00 |
| 2-butyloktanová kyselina | 5,00 | 5,00 | 5,00 | 5,00 | 5,00 |
| citrát sodný | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 |
| alkohol(s 10 atomy uhlíku)- | |||||
| ethoxylát (3) | 13,00 | 13,00 | 13,00 | 13,00 | 13,00 |
| monoethanolamin | 2,50 | 2,50 | 2,50 | 2,50 | 2,50 |
| voda, propylenglýko1/ethano1 | |||||
| (100:1:1) | doplnit | do 100 | % hmotn. |
V příkladech 35 až 37 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteásy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 38 a 39 se substitucí proteásy č. 12 a Č. 4 jakoukoliv kombinaci proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 40 a 41
Kapalný prostředek pro čištění látek příklad č.:
složka _
41
| alkenyl(s 12 až 14 atomy uhlíku)jantarová | kys. | 3,0 | 8,0 |
| monohydrát kyseliny citrónové | 10,0 | 15,0 | |
| alkylsulfát s 12 až 15 atomy uhlíku sodný 2krát ethoxylovaný sulfát sodný alkoholu | 8,0 | 8,0 | |
| s 12 až 15 atomy uhlíku | - | 3,0 | |
| 7krát ethoxylovaný alkohol s 12 až 15 at. | uhlíku | • | 8,0 |
| 5krát ethoxylovaný alkohol s 12 až 15 at. | uhlíku | 8,0 | - |
| diethylentriaminpenta(methylenfosfonová) kys. | 0,2 | - | |
| kyselina olejová | 1,8 | - | |
| ethanol | 4,0 | 4,0 | |
| propandiol | 2,0 | 2,0 | |
| proteasa č. 12 | 0,2 | 0,2 | |
| polyvinylpyrrolidon | 1,0 | 2,0 | |
| potlačovatel pěnění | 0,15 | 0,15 | |
| NaOH | do pH | 7,5 | |
| perboritan | 0,5 | 1 | |
| fenolsulfonát | 0,1 | 0,2 | |
| peroxidasa | 0,4 | 0,1 | |
| voda a minoritní složky | doplnit do | 100 |
V příkladech 40 a 41 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 40 a 41 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteas užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získá59 jí v podstatě podobné výsledky.
c. Prostředky pro čištění látek ve formě kostek
Prostředky pro čištění látek ve formě kostek podle předloženého vynálezu vhodné pro ruční praní látek obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou od 0,001 do 10, výhodněji od 0,01 do 1 % hmotn. proteásového enzymu z hmotnosti prostředku.
Provedení prostředku pro čištění látek ve formě kostek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 42 až 45
Prostředky pro čištění látek ve formě kostek
| složka | příklad č.: | |||
| 42 | 43 | 44 | 45 | |
| proteasa č. 12 | 0,3 | - | 0,1 | 0,02 |
| proteasa δ. 4 | - | - | 0,4 | 0,03 |
| sodná sůl alkyl(s 12 až 16 | ||||
| atomy uhlíku)sulfátu sodného | 20,00 | 20,00 | 20,00 | 20,00 |
| N-methylglukamid s 12 až 14 atomy | ||||
| uhlíku | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,00 |
| alkyl(s li až 13 atomy uhlíku)- | ||||
| benzensulfonát sodný | 10,0 | 10,0 | 10,0 | 10,00 |
| uhličitan sodný | 25,0 | 25,0 | 25,0 | 25,00 |
| difosforečnan sodný | 7,0 | 7,0 | 7,0 | 7,00 |
| trifosforečnan sodný | 7,0 | 7,0 | 7,0 | 7,00 |
| zeolit A (0,1 až 10 μα) | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,00 |
| karboxymethylcelulosa | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,20 |
| polyakrylát (mol. hmotn. 1400) | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,20 |
| kokosový monoethanolamid | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,00 |
| zjasňovací činidlo, parfém | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,20 |
| síran vápenatý | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,00 |
| síran hořečnatý | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,00 |
| voda | 4,0 | 4,0 | 4,0 | 4,00 |
| plnidlo* | doplnit do | 100 % | hmotn. |
* Vybere se z vhodných materiálů, jako je CaC03, talek, hlinka, křemičitany a podobné.
V příkladech 42 a 43 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky.
V příkladech 44 a 45 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
B. Další čistící prostředky
Vedle shora uvedených prostředků pro čištění tvrdých povrchů, pro mytí nádobí a pro čištění látek může být do různých čistících prostředků, kde je žádoucí hydrolýza nerozpustného substrátu, zahrnut jeden nebo více proteasových enzymů. Mezi takové další čistící prostředky patří, ale nejsou omezeny jenom na tyto, orální čistící prostředky, prostředky pro čištění zubních protéz a prostředky pro čištění kontaktních čoček.
1. Orální čistící prostředky
V jiném provedení podle předloženého vynálezu se do prostředků užitečných pro odstraňování proteinových znečištěnin ze zubů nebo zubních protéz zahrne farmaceuticky přijatelné množství jednoho nebo více proteasových enzymů. Pojem orální čistící prostředky tak, jak je zde používán, znamená prostředky pro čištění zubů, zubní pasty, zubní gely, zubní prášky, ústní vody, ústní spreje, ústní gely, žvýkací gumy, pastilky, sáčky, tablety, biogely, profylaktické pasty, zubní léčivé roztoky a podobné. Orální čistící prostředky podle předloženého vynálezu s výhodou obsahují od 0,0001 do 20 % hmotn. jednoho nebo více proteasových enzymů podle předloženého vynálezu, výhodněji od 0,001 do 10 % hmotn., ještě výhodněji od 0,01 % do 5 % hmotn. z hmotnosti prostředku, a famaceuticky přijatelný nosič. Pojem farmaceuticky přijatelný tak, jak se zde používá, znamená, že léčivá látka, léčivý přípravek nebo inertní složky, které tento pojem popisuje, jsou vhodné pro použití v kontaktu s tkáněmi člověka a nižších živočichů bez nepatřičné toxicity, neslučitelnosti, nestability, dráždění, alergické odpovědi a podobných, při odůvodněném poměru prospěch/riziko.
Farmaceuticky přijatelné orální čistící nosné složky orálních čistících složek budou v orálních čistících prostředcích typicky obvykle obsaženy v množství od 50 do 99,99 % hmotn., s výhodou 65 až 99,99, výhodněji 65 až 99 % hmotn. z celkové hmotnosti prostředku.
Farmaceuticky přijatelné nosné složky a případné složky, které mohou být zahrnuty v orálních čistících prostředcích podle předloženého vynálezu, jsou dobře známy odborníkům z oblasti techniky. Rozmanité typy prostředků, nosných složek a případných složek užitečných pro orální čistící prostředky jsou popsány v USA patentu 5 096 700 Seibela, vydaném 17. března 1992, v USA patentu 5 028 414 Sampathkumara, vydaném 2. července 1991, a v USA patentu 5 028 415 Benedicta, Bushe a Sunberga, vydaném 2. července 1991. Všechny jsou zde uvedeny jako citace.
Provedení orálního čistícího prostředku podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 46 až 49
Prostředek pro čištění zubů
| složka | příklad číslo: | |||
| 46 | 47 | 48 | 49 | |
| proteasa č. 12 | 2,000 | 3,500 | 1,500 | 2,000 |
| sorbitol (70% (hmotn.) | ||||
| vodný roztok | 35,000 | 35,000 | 35,000 | 35,000 |
| PEG-6* | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 |
| křemičitanové dentální** | ||||
| abrasivo | 20,000 | 20,000 | 20,000 | 20,000 |
| fluorid sodný | 0,243 | 0,243 | 0,243 | 0,243 |
| oxid titaničitý | 0,500 | 0,500 | 0,500 | 0,500 |
| sodná sůl sacharinu | 0,286 | 0,286 | 0,286 | 0,286 |
| alkylsulfát sodný (27,9% | ||||
| (hmotn.) vodný roztok) | 4,000 | 4,000 | 4,000 | 4,000 |
| ochucovací činidlo | 1,040 | 1,040 | 1,040 | 1,040 |
| karboxyvinylový*** po- | ||||
| lymer | 0,300 | 0,300 | 0,300 | 0,300 |
| karegenan | 0,800 | 0,800 | 0,800 | 0,800 |
| voda | doplnit do | 100 % | hmotn. |
PEG-6 znamená polyethylenglykol s mol. hmotn. 600. Vysrážený oxid křemičitý identifikovaný jako Zeodent 119 od
J.M.Hubera.
Carbopol od B.F.Goodrich Chemical Company.
**** Karagenan lota od Hercules Chemical Company.
V příkladech 46 až 49 se proteasami č. l až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 46 až 49 se substitucí proteasy č. 12 a č. 4 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a
VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 50 až 53
Prostředek ústní vody
| složka | 50 | příklad 51 | Číslo 52 | • • 53 |
| protesá č. 12 | 3,00 | 7,50 | 1,00 | 5,00 |
| SDA 40 alkohol | 8,00 | 8,00 | 8,00 | 8,00 |
| ochucovací činidlo | 0,08 | 0,08 | 0,08 | 0,08 |
| emulgační čindilo | 0,08 | 0,08 | 0,08 | 0,08 |
| fluorid sodný | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 |
| glycerin | 10,00 | 10,00 | 10,00 | 10,00 |
| sladidlo | 0,02 | 0,02 | 0,02 | 0,02 |
| kyselina benzoová | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 |
| hydroxid sodný | 0,20 | 0,20 | 0,20 | 0,20 |
| barvivo | 0,04 | 0,04 | 0,04 | 0,04 |
| voda | doplnit do | 100 % | hmotn. | |
| V příkladech 50 až | 53 se proteasami č | . 1 až | 11 a 13 až 25 |
uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 50 až 53 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 54 až 57
Prostředek ve formě pastilky
| složka | 54 | příklad číslo: | 57 | |
| 55 | 56 | |||
| proteasa č. 12 | 0,01 | 0,03 | 0,10 | 0,02 |
| sorbitol | 17,50 | 17,50 | 17,50 | 17,50 |
| manitol | 17,50 | 17,50 | 17,50 | 17,50 |
| škrob | 13,60 | 13,60 | 13,60 | 13,60 |
| sladidlo | 1,20 | 1,20 | 1,20 | 1,20 |
| ochucovací činidlo | 11,70 | 11,70 | 11,70 | 11,70 |
| barvivo | 0,10 | 0,10 | 0,10 | 0,10 |
| kukuřičný sirup | doplnit do | 100 % hmotn. |
V příkladech 54 až 57 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 54 až 57 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklady 58 až 61
Prostředek ve formě Žvýkačky složka příklad číslo:
| 58 | 59 | 60 | 61 | |
| proteasa č. 12 | 0,03 | 0,02 | 0,10 | 0,05 |
| krystaly sorbitolu | 38,44 | 38,40 | 38,40 | 38,40 |
| základ přírodní gumy* | ||||
| Paloja-T | 20,00 | 20,00 | 20,00 | 20,00 |
| sorbitol (70% vodný roztok) | 22,00 | 22,00 | 22,00 | 22,00 |
| manitol | 10,00 | 10,00 | 10,00 | 10,00 |
| glycerin | 7,56 | 7,56 | 7,56 | 7,56 |
| ochucovací činidlo | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 |
* dodáván L.A.Dreyfus Company
V příkladech 58 až 61 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteásy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 58 až 61 se substitucí proteásy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
2. Prostředky pro čištění zubních protéz
V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro čištění zubních protéz mimo ústní dutinu obsahují jeden nebo více proteasových enzymů. Tyto prostředky pro čištění zubních protéz obsahují efektivní množství jednoho nebo více proteasových enzymů, s výhodou od 0,0001 do 50 % hmotn. jednoho nebo více proteasových enzymů, výhodněji od 0,001 % do 35 %, ještě výhodněji od 0,01 % do 20 % hmotn. z hmotnosti prostředku, a nosič pro čištění zubní protézy. V oblasti techniky jsou dobře známy různé formy prostředků pro čištění zubních protéz, jako jsou efervescentní tablety a podobné (viz například USA patent 5 055 305 Younga, který je zde zahrnut jako citace) . Obvykle obsahují jeden nebo více proteasových enzymů pro odstraňování proteinových skvrn ze zubních protéz.
Provedení prostředku pro čištění zubních protéz podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.
Příklady 62 až 65
Dvouvrstvá efervescentní tableta pro čištění zubních protéz ‘ složka příklad číslo:
| 62 | 63 | 64 | 65 | |
| kyselá vrstva: | ||||
| proteasa č. 12 | 1,0 | 1,5 | 0,01 | 0,05 |
| kyselina vinná | 24,0 | 24,0 | 24,00 | 24,00 |
| uhličitan sodný | 4,0 | 4,0 | 4,00 | 4,00 |
| kyselina sulfamová | 10,0 | 10,0 | 10,00 | 10,00 |
| PEG 20,000 | 4,0 | 4,0 | 4,00 | 4,00 |
| hydrogenuhličitan sodný | 24,5 | 24,5 | 24,50 | 24,50 |
| persíran draselný | 15,0 | 15,0 | 15,00 | 15,00 |
| pyrofosforečnan sodný | 7,0 | 7,0 | 7,00 | 7,00 |
| pyrogenní oxid křemičitý | 2,0 | 2,0 | 2,00 | 2,00 |
| TAED* | 7,0 | 7,0 | 7,00 | 7,00 |
| ricinoleylsulfosukcinát | 0,5 | 0,5 | 0,50 | 0,50 |
| ochucovací činidlo | 1,0 | 1,0 | 1,00 | 1,00 |
| alkalická vrstva: | ||||
| monohydrát perboritanu | ||||
| sodného | 32,0 | 32,0 | 32,00 | 32,00 |
| hydrogenuhličitan sodný | 19,0 | 19,0 | 19,00 | 19,00 |
| tetraacetylethylendiamin | 3,0 | 3,0 | 3,00 | 3,00 |
| trifosforečnan sodný | 12,0 | 12,0 | 12,00 | 12,00 |
| PEG 20,000 | 2,0 | 2,0 | 2,00 | 2,00 |
| persíran draselný | 26,0 | 26,0 | 26,00 | 26,00 |
| uhličitan sodný | 2,0 | 2,0 | 2,00 | 2,00 |
| pyrogenní oxid křemičitý | 2,0 | 2,0 | 2,00 | 2,00 |
| barvivo/ochucovací činidlo | 2,0 | 2,0 | 2,00 | 2,00 |
| V příkladech 62 až 65 | se proteasami č | . 1 až | 11 a 13 |
uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách
V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 62 až 65 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
3. Osobní čistící prostředky
Podle jiného provedení předloženého vynálezu osobní čistící prostředky pro čištění kůže (v kapalné formě nebo ve formě kostky) obsahují jeden nebo více proteasových enzymů. Tyto prostředky typicky obsahují od 0,001 do 5 % hmotn. proteasového enzymu, s výhodou od 0,005 do 2 a nejvýhodněji od 0,01 do 0,8 % hmotn. z hmotnosti prostředku. Výhodné osobní čistící prostředky, v nichž jsou obsaženy zde popsané proteasové enzymy, jsou popsány v USA patentových přihláškách SN 08/121 623 a SN 08/121 624, obě Visschera a spol., podané 14. září 1993, jejich celé popisy jsou zde zahrnuty jako odkazy. Tyto prostředky jsou ilustrovány následujícími příklady.
Příklad 66
Kapalné osobní čistící prostředky obsahující mýdlo
| složka | % hmotn. | |
| mýdlo (draselné nebo sodné) 30 % hmotn. laurátu 30 % hmotn. myristátu 25 % hmotn. palmitátu 15 % hmotn. stearátu | 15,00 | |
| mastné kyseliny (shora uvedené poměry) | 4,50 | |
| laurylsarkosinát sodný | 6,00 | |
| laureth-3-sulfát sodný | 0,66 | |
| kokosový amidopropylbetain | 1,33 | |
| glycerin | 15,00 | |
| propylenglykol | 9,00 | |
| Polyquaternium 10 | 0,80 | |
| distearát ethylenglykolu (EDTA) | 1,50 | |
| propylparaben | 0,10 | |
| methylparaben | 0,20 | |
| proteasa č. 12 | 0,10 | |
| KOH nebo NaOH podle potřeby pro úpravu pH | ||
| síran vápenatý | 3 | |
| kyselina octová | 3 | |
| voda doplnit do | 100 |
Příklad 67
Osobní čistící prostředek ve formě kostky
| složka | % hmotn. |
| kokosový isethionát sodný | 47,20 |
| cetearylsulfát sodný | 9,14 |
| parafin | 9,05 |
| sodné mýdlo (in šitu) | 3,67 |
| isethionát sodný | 5,51 |
| chlorid sodný | 0,45 |
| oxid titaničitý | 0,4 |
| trojsodná sůl EDTA | 0,1 |
| etidronát trojsodný | 0,1 |
| parfém | 1,20 |
| síran sodný | 0,87 |
| proteasa č. 12 | 0,10 |
| voda, minoritní složky | doplnit do 100 |
V příkladech 66 až 67 se proteasami č. 1 až 11 a 13 až 25 uvedené v tabulce III, zahrnující mimo jiné další proteasy, které jsou užitečné v předloženém vynálezu popsané v tabulkách V a VI, substituuje protesá č. 12 s v podstatě podobnými výsledky. Také v příkladech 66 až 67 se substitucí proteasy č. 12 jakoukoliv kombinací proteasových enzymů užitečných podle předloženého vynálezu a uvedených v tabulkách III, V a VI, mimo jiné, získají v podstatě podobné výsledky.
Příklad 68
Test účinnosti praní
Účinnost praní variant užitečných v prostředcích podle předloženého vynálezu se vyhodnocuje měření odstranění barev z EMPA 116 (krev, mléko, uhelná čerň na bavlně) kousků látek (Testfabrics, Inc., Middleses, N.J. 07030, USA).
Šest EMPA 116 kousků rozstříhaných na velikost 7,5 krát
11,2 cm s perforovaným okrajem se umístí do kelímků zařízení Model 7243S Terg-O-Tometer (United States Testing Co., Inc., Hoboken, N.J., USA) obsahujících 1000 ml vody o tvrdosti 15 gpg (poměr hmotností vápenatých k hořečnatým iontům 3:1), 7 g pracího činidla a příslušné množství enzymu. Podstatou detergentního činidla je WFK1 od wfk-Testgewebe GmbH, Adlerstrasse 42, Postfach 13 07 62, D-47759 Krefeld, Německo:
| složka | % hmotn. v konečném produktu |
| zeolit A | 25 |
| síran sodný | 25 |
| uhličitan sodný | 10 |
| lineární alkylbenzensulfonát | 8,8 |
| alkoholethoxylát (7-8 EO) | 4,5 |
| sodné mýdlo | 3 |
| křemičitan sodný (SiO2:Na2O v poměru 3 | ,3:1) 3 |
| K tomuto základu detegentu se přidají | následující složky; |
| složka | % hmotn. v konečném produktu |
| monohydrát perboritanu sodného | 13 |
| kopolymer (Sokalan CP5) | 4 |
| TAED (Mykon ATC Green) | 3 |
| enzym | 0,5 |
| zjasňovací činidlo (Tinopal AMS-GX) | 0,2 |
Monohydrát perboritanu sodného se získá od Degussa Corpo ration, Ridgefield-Park, N.J. 07660, USA. Sokalan CP5 se získá od BASF Corporation, Parsippany, N.J. 07054. Mykon ATC Green (TAED, tetracetylethylendiamin) se získá od Warwick International, Limited, Mostyn, Holywell, Clwyd CH8 9HE, Anglie. Tinopal AMS GX se získá od Ciba-Geigy Corporation, Greensboro, N.C. 27419, USA).
Šest EMPA 116 kousků se pere v detergentu s enzymem 30 minut při 60 °C, potom se máchá dvakrát 5 minut v 1000 ml vody. Enzymy se přidávají na konečnou koncentraci od 0,05 do 1 ppm podle standardních křivek a 0,25 ppm pro rutinní analýzu. Kousky se vysuší a vyždímají a odrazivost od kousků se měří hodnotou L na L*a*b* stupnicepřístroje Minolta Chromá Meter, Model CR-200 (Minolta Corporation, Ramsey, N.J. 07446, USA) . Účinnost se popisuje jako procento účinnosti B. lentus (GG36) proteasy a vypočte se podělením množství B. lentus (GG36) proteasy množstvím variantní proteasy, kterého je potřeba k dosažení stejného odstranění zabarvení krát 100. Data jsou uvedena v tabulce VII.
Tabulka VII
| enzym | účinnost praní |
| B. lentus subtilisin | 100 |
| N76D | 301 |
| N76D/S103A | 230 |
| N76D/V104I | 130 |
| N76D/I107V | 160 |
| N76D/S99D/S101R | 370 |
| N76D/S99D/S103A | 290 |
| N76D/S101R/S103A | 130 |
| N76D/S101R/V104I | 300 |
| N76D/S103A/V104I | 320 |
| N76D/S103G/V104I | 160 |
| N76D/S103A/V104F | 210 |
| N76D/S103A/V104N | 110 |
Tabulka VII (pokračování)
| enzym | účinnost praní |
| N76D/S103A/V104T | 170 |
| N76D/V104I/I107V | 210 |
| N76D/S99D/S101R/S103A | 220 |
| N76D/S99D/S101R/V104I | 140 |
| N76D/S101G/S103A/V104I | 170 |
| N76D/S101R/S103A/V104I | 150 |
| N76D/S103A/V104I/S105A | 170 |
| N76D/S103A/V104T/I107A | 120 |
| N76D/S103A/V104T/I107L | 110 |
| N76D/S103A/V104I/L126F | 110 |
| N76D/S103A/V104I/S128G | 280 |
| N76D/S103A/V104I/L135I | 160 |
| N76D/S103A/V104I/L135V | 160 |
| N76D/S103A/V104I/D197E | 170 |
| N76D/S103A/V104I/N204A | 160 |
| N76D/S103A/V104I/N204G | 150 |
| N76D/S103A/V104I/P210I | 470 |
| N76D/S103A/V104I/M222A | 100 |
| N76D/S103A/V104I/T260P | 280 |
| N76D/S103A/V104I/S265N | 190 |
Příklad 69
Stabilita proteasy v kapalném detergentním prostředku
Srovnání stability proteasy, pokud jde o inaktivaci v kapalném detergentním prostředku, se provádí pro Bacillus lentus subtilisin a jeho variantní enzym N76D/S103A/V104I podle zde uvedeného postupu. Detergentním prostředkem pro toto studium je komerčně zakoupená láhev kapalného pracího prostředku Tide Ultra vyrobeného v USA firmou The Procter and Gamble Company. Pro deaktivaci in šitu proteasy je nutné tepelné zpracování de75 tergentního prostředku. Toho se dosáhne inkubováním detergentu
4,5 hodiny při 96 °C. Koncentrované přípravky B. lentus subtilisinu a varianty N76D/S103A/V104I se pak v množství 20 g enzymu na litr přidají k tepelně zpracovanému Tide Ultra za teploty místnosti na konečnou koncentraci 0,3 g enzymu v litru detergentního přípravku. Teplem zpracovaný detergent s proteasou se pak inkubuje ve vodní lázni v termostatu při 50 °C. V intervalu 0, 24, 46, 76 a 112 h se odebírají vzorky a vyhodnocují se na aktivitu enzymu přidáním do lem kyvety, která obsahuje l,2mM substrát, syntetický peptid suc-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilid rozpuštěný v O,1M tris-HCl pufru, pH 8,6, udržované v termostatu na 25 °C. Původní lineární reakční rychlost se sleduje spektrofotometricky sledováním absorbance reakčního produktu p-nitroanilinu při 410 nm jako funkce času. Jak je uvedeno na obrázku 10, u varianty N76D/S103A/V104I je pozorována významná větší stabilita vůči deaktivaci než u přírodního B. lentus enzymu. Vyhodnocený poločas deaktivace těchto dvou enzymů v degetergentním prostředku Tide Ultra za daných testovaných podmínek byl 45 h pro B. lentus subtilisin a 125 h pro variantu N76D/S103A/V104I .
I když je tento vynález popsán příslušnými provedeními, odborníkům v oblasti techniky bude zřejmé, že lze udělat různé změny a modifikace tohoto vynálezu, aniž by se tyto odchýlily od duchu a rozsahu tohoto vynálezu. Připojené nároky jsou myšleny tak, že pokrývají všechny takové modifikace, které jsou v rozsahu tohoto vynálezu.
se zdá, že zbývající nárokovaný předmět nezahrnujeí stupeň vynálezecké činnosti, odobně specifická provedení zbývajících nárokovaných předmětů podobně nejsou považována za vynálezy, které samy o sobě mají nějakou vlastnost, která by umožnila uznat vynálezeckou činnost, článek 33 (1)(3) PCT.
2. Nárok 37 se týká způsobu osobního čištění, v rozsahu tohoto způsobu je zahrnuto mytí částí těla člověka. Kdyby byl tento nárok zkoumán v Evropské regionální fázi, byl by považován za nárok, jemuž jemuž chybí průmyslová použitelnost, protože rozsah tohoto nároku je aplikovatelný také na situce, které se týkají privátní sféry jednotlivce.
Claims (36)
1. Čistící prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje:
a) efektivní množství proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena náhradou různých aminokyselin prekursorové karbonylové hydrolasy různými zbytky aminokyselin, v takové poloze prekursorové karbonylové hydrolasy, která odpovídá poloze +76 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu v kombinaci s jednou nebo více polohami zbytků aminokyselin, které odpovídají polohám vybraným ze skupiny sestávající z +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a +274 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu, a
b) jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s tímto proteasovým enzymem.
2. Čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku jsou vybrány ze skupiny, která sestává z povrchově aktivních činidel, rozpouštědel, pufrů, enzymů, činidel uvolňujících ušpinění, činidel uvolňujících ušpinění hlinkami, dispergačních činidel, zjasňovacích činidel, potlačovatelů pěnění, avivážních činidel, podněcovatelů pěnění, stabilizátorů énzymů, stavebních složek, bělících činidel, barviv, parfémů a jejích směsí.
3. Čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku obsahují alespoň 1 % hmotn. povrchově aktivního činidla z hmotnosti prostředku, toto povrchově aktivní činidlo obsahuje materiály, které jsou vybrány ze skupiny sestávající z alkylbenzensulfonátů, primárních alkylsulfátů, sekundárních alky lsulf átů, alkylalkoxysulfátů, alkylalkoxykarboxylátů, alkylpolyglykosidů a jejich odpovídajících sulfatovaných polyglykosidů, esterů α-sulfonovaných mastných kyselin, alkyl a alkylfenolalkoxylátů, betainů a sulfobetainů, aminoxidů, N-methylglukamidů, neiontových primárních alkoholethoxylátů, směsných ethoxy/propoxylátů neiontových primárních alkoholů a jejich směsí.
4. čistící prostředek podle nároku 3,vyznačuj ící se t í m, že obsahuje alespoň 5 % hmotn. stavební složky, která je vybrána se skupiny sestávající ze zeolitů, polykarboxylátů, vrstevnatých fcřemičitanů, fosforečnanů a jejich směsí.
5. čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku obsahují alespoň jedno bělící činidlo.
6. Čistící prostředek podle nároku 5, vyznačuj ící se t í m, že bělící činidlo je vybráno ze skupiny sestávající z peruhličitanů, perboritanů a jejich směsí a popřípadě dále obsahující alespoň jeden bělící aktivátor.
7. Čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku obsahují alespoň jeden enzym, který je vybrán ze skupiny sestávající z celulas, lipas, amylas, proteás, peroxidas a jejich směsí.
8. čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že materiály čistícího prostředku obsahují alespoň jedno avivážní činidlo.
9. čistící prostředek podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že prekursorem karbonylové hydrolasy proteasového enzymu je subtilisin a proteasový enzym znamená variantu subtilisinu s kombinací substitucí provedených v polohách ekvivalentních polohám 76/99, 76/101, 76/103,
76/104, 76/107, 76/123, 76/99/101, 76/99/103, 76/99/104, 76/101/103, 76/101/104, 76/103/104, 76/104/107, 76/104/ /123, 76/107/123, 76/99/101/103, 76/99/101/104, 76/99/103/ /104, 76/101/103/104, 76/103/104/123, 76/104/107/123, 76/ /99/101/103/104, 76/99/103/104/123, 76/99/101/103/104/123, 76/103/104/126, 76/103/104/135, 76/103/104/197, 76/103/ /104/222, 76/103/104/260, 76/103/104/265, 76/103/104/ /126/265, 27/76/104/123/274, 27/76/104/109/123/274, 27/ /76/104/123/218/274, 27/76/104/123, 27/76/104/107/123,
27/76/104/109/123, 27/76/104/123/218/274, 27/76/104/123/ 197, 27/76/104/123/204, 27/76/104/123/206, 27/76/104/123/ /216, 27/76/104/123/218,27/76/104/123/260,27/76/104/123/ /195/197, 27/76/104/123/195/218, 27/76/104/123/197/218,
27/76/104/123/204/218, 27/76/104/123/206/218, 27/76/104/ /123/218/260, 27/76/104/123/195/197/218, 76/103/104/217, 76/103/104/156, 76/103/104/166, 76/103/104/105, 76/101/ /103/104, 76/103/104/128, 76/103/104/210, 76/103/104/107, 76/103/104/204, 76/217, 76/103/104/156/166 a 76/103/104/ /128.
10. Čistící prostředek podle nároku 9, vyznačuj ící se t í m, že proteasový enzym znamená variantu subtilisinu vybranou ze skupiny sestávající z 76/99, 76/101, 76/ /103, 76/104, 76/107, 76/123, 76/99/101, 76/99/103, 76/99/ /104, 76/101/103, 76/101/104, 76/103/104, 76/104/107, 76/ /104/123, 76/107/123, 76/99/101/103, 76/99/101/104, 76/99/ /103/104, 76/101/103/104, 76/103/104/123, 76/104/107/123, 76/99/101/103/104, 76/99/103/104/123, 76/99/101/103/104/ /123, 76/103/104/128, 76/103/104/260, 76/103/104/265, 76/ /103/104/197, 76/103/104/105, 76/103/104/135, 76/103/104/ /126, 76/103/104/107, 76/103/104/210, 76/103/104/126/265 a 76/103/104/222.
11. Prostředek pro čištění látek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje:
a) efektivní množství proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od subtilisinové prekursorové karbonylové hydrolasy, kde proteas ový enzym znamená subtilisovanou variantu vybranou ze skupiny sestávající z N76D/S99D, N76D/S101R, N76D/S103A, N76D/V104I, N76D/I107V, N76D/N123S, N76D/S99D/S101R, N76D/ /S99D/S103A, N76D/S99D/V104I, N76D/S101R/S103A, N76D/ /S101R/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/ /V104Y/I107V, N76D/V104I/N123S, N76D/I107V/N123S, N76D/ /S99D/S101R/S103A, N76D/S99D/S101R/V104I, N76D/S99D/S103A/ /V104I, N76D/S101R/S103A/V104I, N76D/S103A/V104I/N123S,
N76D/V104I/I107V/N123S, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I, N76D/ /S99D/S103A/V104I/N123S, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/ /N123S, N76D/S103A/V104I/S128G, N76D/S103A/V104I/T260P,
N76D/S103A/V104I/S265N, N76D/S103A//V104I/D197E, N76D/ /S103A/V104I/S105A, N76D/S103A/V104I/L135I, N76D/S103A/
V104I/L126F, N76D/S103A/V104T/L107T, N76D/S103A/V104I/ /L126F/S265N a N76D/S103A/V104I/M222A a jejich směsí, a
b) jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s tímto proteasovým enzymem, který obsahuje alespoň 5 % hmotn. povrchově aktivního činidla a alespoň 5 % hmotn. stavební složky z hmotnosti prostředku.
12. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že dále obsahuje materiály čistícího prostředku, které jsou vybrány ze skupiny, která sestává z rozpouštědel, pufrů, enzymů, činidel uvolňujících ušpinění, činidel uvolňujících ušpinění hlinkami, dispergačních činidel, zjasňovacích činidel, potlačovatelů pěnění, avivážních činidel, podněcovatelů pěnění, stabili zátorů enzymů, stavebních složek, bělících činidel, barviv, parfémů a jejich směsí.
13. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že dále obsahuje alespoň jedno bělící činidlo.
14. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vy80 značující se tím, že dále obsahuje alespoň jeden enzym, který je vybrán ze skupiny sestávající z celulas, lipas, amylas, proteas, peroxidas a jejich směsí.
15. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že je ve formě kapaliny, granulí nebo kostek.
.
16. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že proteasový enzym zna» mená variantu subtilisinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z N76D/S99D, N76D/V104I, N76D/S99D/V104I,
N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/V104Y/I107V,
N76D/S101R/S103A/V104I, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I, N76D/ /S101R/V104I a jejich směsí.
17. Prostředek pro čištění látek podle nároku 11, vyznačující se tím, že proteasový enzym znamená variantu Bacillus subtilisinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z N76D/V104I, N76D/S103A/V104I a jejich směsí.
18. Prostředek pro čištění látek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje:
a) od 0,0001 do 10 % hmotn. proteasového enzymu, kterým je N76D/S103A/V104I varianta subtilisinu odvozená od Bacillus lentus subtilisinu, < b) alespoň 5 % hmotn. povrchově aktivního činidla,
c) alespoň 5 % hmotn. stavební složky a * d) popřípadě jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s proteasovým enzymem, které jsou vybrány ze skupiny, která sestává z rozpouštědel, pufrů, enzymů, činidel uvolňujících ušpinění, činidel uvolňujících ušpinění hlinkami, dispergačních činidel, zjasňovacích činidel, potlačovatelů pěnění, avivážních činidel, podněcovatelů pěnění, stabilizátorů enzymů, bělících činidel, barviv, parfémů a jejich směsí.
19. Prostředek pro čištění látek podle nároku 18, vyznačující se tím, Se povrchově aktivní či“ nidlo je vybráno ze skupiny, která sestává z alkylbenzensulfonáta, primárních alkylsulfáta, sekundárních alkylsulfátů, alkylalkoxysulfátů, alkylalkoxykarboxylátů, alkylpolyglykosidů a jejich odpovídajících sulfatovaných polyglykosida, esterů α-sulfonovaných mastných kyselin, alkyl a alkylfenolalkoxylátá, betainů a sulfobetainů, aminoxidů, N-methylglukamidů, neiontových primárních alkoholethoxylá tů, směsných ethoxy/propoxylátů neiontových primárních al“ koholů a jejich směsí, při čemž další stavební složka je vybrána ze skupiny sestávající ze zeolitů, polykarboxylá tů, vrstvených křemičitanů, fosfátů a jejich směsí.
20. Prostředek pro čištění látek podle nároku 19, vyznačující se tím, že dále obsahuje jeden nebo více materiálů čistícího prostředku, které jsou vybrány ze skupiny sestávající z bělících činidel, avivážních činidel a enzymů.
21. Prostředek pro čištění látek podle nároku 18, vyznačující se tím, že je ve formě koncentrovaného granulovaného prostředku pro čištění látek, který obsahuje alespoň 30 % hmotn. povrchově aktivního činidla.
22. Prostředek pro mytí nádobí, vyznačující se tím, že obsahuje:
a) od 0,0001 % do 10 % hmotn. proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od subtilisinové prekursorové karbonylové hydrolasy, při čemž proteasový enzym znamená subtilisovanou variantu vybranou ze skupiny sestávající z N76D/S99D, N76D/S101R, N76D/S103A, N76D/V104I, N76D/I107V, N76D/N123S, N76D/S99D/ /S101R, N76D/S99D/S103A, N76D/S99D/V104I, N76D/S101R/ /S103A, N76D/S101R/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/ /I107V, N76D/V104Y/I107V, N76D/V104I/N123S, N76D/I107V/ /N123S, N76D/S99D/S101R/S103A, N76D/S99D/S101R/V104I,
N76D/S99D/S103A/V104I, N76D/S101R/S103A/V104I, N76D/S103A/ /V104I/N123S, N76D/V104I/I107V/N123S, N76D/S99D/S101R/ /S103A/V104I, N76D/S99D/S103A/V104I/N123S, N76D/S99D/ /S101R/S103A/V104I/N123S, N76D/S103A/V104I/S128G, N76D/ /S103A/V104I/T260P, N76D/S103A/V104I/S265N, N76D/S103A/ /V104I/D197E, N76D/S103A/V104I/S105A, N76D/S103A/V104I/ /L135I, N76D/S103A/V104I/L126F, N76D/S103A/V104T/L107T,
N76D/S103A/V104I/L126F/S265N a N76D/S103A/V104I/M222A a jejich směsí,
b) od 0,1 do 10 % hmotn. povrchově aktivního činidla a
c) popřípadě jeden nebo více materiálů čistícího prostředku slučitelných s tímto proteasovým enzymem, který je vybrán ze skupiny sestávající z rozpouštědel, pufrů, enzymů, dispergačních činidel, potlačovatelů pěnění, stabilizátorů enzymů, bělících činidel, barviv, parfémů a jejich směsí.
23. Prostředek pro mytí nádobí podle nároků 22, vyznačující se tím, že proteasový enzym znamená N76D/S103A/V104I subtilisinovou variantu odvozenou od Bacillus lentus subtilisinu.
24. Prostředek pro osobní čištění, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje:
a) od 0,001 do 5 % hmotn. proteasového enzymu, kterým je varianta karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od prekursorové karbonylové hydrolasy obsahuj ící substituce aminokyselin za více zbytků aminokyselin v takové poloze prekursorového karbonylové hydrolasy, která odpovídá poloze +76 Bacillus amyloliquefaciens subtilisinu v kombinaci s jednou nebo více polohami zbytků aminokyselin, které odpovídají polohám vybraným ze skupiny sestávající z +99, +101, +103, +104, +107, +123, +27, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a +274 Bacillus amyl©” liquefaciens subtilisinu,
b) od 0,01 do 95 % hmotn. povrchově aktivního činidla a
c) popřípadě od 0,05 do 50 % hmotn. stabilizátoru en zymu.
25. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 24, v y značující se tím, že obsahuje proteasový enzym v množství od 0,001 do 2 % hmotn.
26. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 25, vy-značující se tím, že obsahuje proteasový enzym v množství od 0,01 do 0,8 % hmotn.
27. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 24, vyznačující se tím, že povrchově aktivní systém obsahuje povrchově aktivní činidlo, které je vybráno ze skupiny sestávající z aniontových karboxylátů, aminoxidů, alkylglukosidů, glukosamidů, alkylsulfátů, alkyle thersulfátů, acylisethionátů, alkylsulfosukcinátů, alkylfosfátových esterů, ethoxylovaných fosfátových esterů, alky lglycerylethersulfonátů nebo jejich směsí.
28. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 24, vyznačující se tím, že povrchově aktivní systém obsahuje povrchově aktivní činidlo, které je vybráno ze skupiny sestávající z mýdel, acylglutamátů, alkylsarkosinátů, lauraminoxidů, kokosových aminoxidů, kokosových amidopropylaminoxidů, decylglukosidů, laurylsulfátů, laurethsulfátů, acyl(s 12 až 18 atomy uhlíku) isethionátů nebo jejich směsi.
29. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 28, vyznačující se tím, že povrchově aktivní činidlo znamená mýdlo v množství alespoň 2 % hmotn. z hmot” nosti prostředku.
30. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 29, vyznačující se t í m, že obsahuje mýdlo v množství alespoň 10 % hmotn. z hmotnosti prostředku.
31. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 30, vyznačující se tím, že obsahuje mýdlo v množství alespoň 25 % hmotn. z hmotnosti prostředku.
32. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 28, vyznačující se tím, že poměr hmotností mýdla k proteasovému enzymu je od 2,000:1 do 8:1.
33. Prostředek pro osobní čištění podle nároku 32, vyznačující se tím, že poměr hmotností mýdla k proteasovému enzymu je od 400:1 do 40:1.
Prostředek pro osobní čištění podle nároku 28, vyznačující se tím, že proteasový enzym znamená variantu karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od subtilisinové prekursorové karbonylové hydrolasy, při čemž proteasový enzym znamená subtilisovanou variantu vybranou ze skupiny sestávající z N76D/S99D, N76D/S101R, N76D/S103A, N76D/V104I, N76D/I107V, N76D/N123S, N76D/S99D/ /S101R, N76D/S99D/S103A, N76D/S99D/V104I, N76D/S101R/ /S103A, N76D/S101R/V104I, N76D/S103A/V104I, N76D/V104I/ /I107V, N76D/V104Y/I107V, N76D/V104I/N123S, N76D/I107V/ /N123S, N76D/S99D/S101R/S103A, N76D/S99D/S101R/V104I, N76D/S99D/S103A/V104I, N76D/S101R/S103A/V104I, N76D/S103A/ /V104I/N123S, N76D/V104I/I107V/N123S, N76D/S99D/S101R/ /S103A/V104I, N76D/S99D/S103A/V104I/N123S, N76D/S99D/ /S101R/S103A/V104I/N123S, N76D/S103A/V104I/S128G, N76D/ /S103A/V104I/T260P, N76D/S103A/V104I/S265N, N76D/S103A/ /V104I/D197E, N76D/S103A/V104I/S105A, N76D/S103A/V104I/ /L135I, N76D/S103A/V104I/L126F, N76D/S103A/V104T/L107T,
N76D/S103A/V104I/L126F/S265N a N76D/S103A/V104I/M222A a jejich směsí.
35. Způsob čištění látek, vyznačující se tím, že se látka, která potřebuje vyčistit, uvede do kontaktu s proteasovým enzymem, kterým je N76D/S103A/V104I subtilisinová varianta odvozená od Bacillus lentus subtilisinu.
36. Způsob mytí nádobí, vyznačující se tím, že se nádobí, které potřebuje umýt, uvede do kontaktu s proteasovým enzymem, kterým je N76D/S103A/V104I subtilisi nová varianta odvozená od Bacillus lentus subtilisinu.
37. Způsob osobního čištění, vyznačující se tím, že se ta část těla člověka nebo živočicha, která potřebuje vyčistit, uvede do kontaktu s variantou karbonylové hydrolasy se sekvencí aminokyselin, která se v přírodě nevyskytuje a která je odvozena od subtilisinové prekursorové karbonylové hydrolasy, při čemž proteasový enzym znamená subt i lisovanou variantu vybranou ze skupiny sestávající Z N76D/S99D, N76D/S101R, N76D/S103A, N76D/V104If N76D/I107V, N76D/N123S, N76D/S99D/S101R, N76D/S99D/S103A, N76D/S99D/V104I, N76D/S101R/S103A, N76D/S101R/V104I, N76D/ /S103A/V104I, N76D/V104I/I107V, N76D/V104Y/I107V, N76D/ /V104I/N123S, N76D/I107V/N123S, N76D/S99D/S101R/S103A,
N76D/S99D/S101R/V104I,N76D/S99D/S103A/V104I, N76D/S101R/ /S103A/V104I, N76D/S103A/V104I/N123S, N76D/V104I/I107V/ /N123S, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I, N76D/S99D/S103A/ /V104I/N123S, N76D/S99D/S101R/S103A/V104I/N123S, N76D/ /S103A/V104I/S128G, N76D/S103A/V104I/T260P, N76D/S103A/ /V104I/S265N, N76D/S103A/V104I/D197E, N76D/S103A/V104I/ /S105A, N76D/S103A/V104I/L135I, N76D/S103A/V104I/L126F, N76D/S103A/V104T/L107T, N76D/S103A/V104I/L126F/S265N a
N76D/S103A/V104I/M222A a jejich směsí.
ZSSfcupsóe:
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13679793A | 1993-10-14 | 1993-10-14 | |
| US23793894A | 1994-05-02 | 1994-05-02 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ105396A3 true CZ105396A3 (en) | 1996-09-11 |
Family
ID=26834646
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ961053A CZ105396A3 (en) | 1993-10-14 | 1994-10-13 | Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5679630A (cs) |
| EP (1) | EP0723579B1 (cs) |
| JP (2) | JP2888985B2 (cs) |
| CN (1) | CN1082999C (cs) |
| AT (1) | ATE361355T1 (cs) |
| AU (1) | AU8079794A (cs) |
| BR (1) | BR9407834A (cs) |
| CA (1) | CA2173105C (cs) |
| CZ (1) | CZ105396A3 (cs) |
| DE (1) | DE69434962T2 (cs) |
| ES (1) | ES2287931T3 (cs) |
| HU (1) | HU219851B (cs) |
| TW (1) | TW306931B (cs) |
| WO (1) | WO1995010591A1 (cs) |
Families Citing this family (501)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK39093D0 (da) * | 1993-04-01 | 1993-04-01 | Novo Nordisk As | Enzym |
| US6436690B1 (en) * | 1993-09-15 | 2002-08-20 | The Procter & Gamble Company | BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted |
| US6440717B1 (en) * | 1993-09-15 | 2002-08-27 | The Procter & Gamble Company | BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis |
| CZ105296A3 (en) * | 1993-10-14 | 1996-09-11 | Procter & Gamble | Bleaching agent containing protease enzymes, cleansing agents, agent for cleaning fabrics and fabric cleaning method |
| MA23346A1 (fr) * | 1993-10-14 | 1995-04-01 | Genencor Int | Variantes de la subtilisine |
| US5679630A (en) * | 1993-10-14 | 1997-10-21 | The Procter & Gamble Company | Protease-containing cleaning compositions |
| EP0741770A1 (en) * | 1994-01-25 | 1996-11-13 | The Procter & Gamble Company | Low sudsing detergent compositions containing long chain amine oxide and branched alkyl carboxylates |
| US6599730B1 (en) * | 1994-05-02 | 2003-07-29 | Procter & Gamble Company | Subtilisin 309 variants having decreased adsorption and increased hydrolysis |
| US5922082A (en) | 1994-06-16 | 1999-07-13 | Procter & Gamble Company | Detergent composition containing wool compatible high alkaline proteases |
| EP0687733A1 (en) * | 1994-06-16 | 1995-12-20 | The Procter & Gamble Company | Detergent composition containing wool compatible high alkaline proteases |
| US6066611A (en) * | 1994-10-13 | 2000-05-23 | The Procter & Gamble Company | Bleaching compositions comprising protease enzymes |
| ES2144649T3 (es) * | 1994-11-18 | 2000-06-16 | Procter & Gamble | Composiciones detergentes que contienen lipasa y proteasa. |
| US6455295B1 (en) * | 1995-03-08 | 2002-09-24 | The Procter & Gamble Company | Subtilisin Carlsberg variants having decreased adsorption and increased hydrolysis |
| US6475765B1 (en) * | 1995-03-09 | 2002-11-05 | Procter & Gamble Company | Subtilisin DY variants having decreased adsorption and increased hydrolysis |
| IL117350A0 (en) * | 1995-03-09 | 1996-07-23 | Procter & Gamble | Proteinase k variants having decreased adsorption and increased hydrolysis |
| DE19530816A1 (de) | 1995-08-23 | 1997-02-27 | Cognis Bio Umwelt | Verwendung von mutierter Subtilisin-Protease in kosmetischen Produkten |
| US5858948A (en) * | 1996-05-03 | 1999-01-12 | Procter & Gamble Company | Liquid laundry detergent compositions comprising cotton soil release polymers and protease enzymes |
| WO1997042282A1 (en) | 1996-05-03 | 1997-11-13 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising polyamine polymers with improved soil dispersancy |
| AR007837A1 (es) * | 1996-07-08 | 1999-11-24 | Procter & Gamble | Composicion detergente para lavado que comprende una combinacion de surfactantes |
| US6313086B1 (en) * | 1996-07-31 | 2001-11-06 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions containing and effervescent |
| JP2000504067A (ja) * | 1996-10-18 | 2000-04-04 | ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー | 陽イオン、陰イオンおよび非イオン界面活性剤の混合物を含む洗浄剤組成物 |
| EP0839905A1 (en) * | 1996-11-05 | 1998-05-06 | The Procter & Gamble Company | Foam detergent composition with enzymes |
| DK0958342T3 (da) | 1996-12-31 | 2003-10-27 | Procter & Gamble | Fortykkede stærkt vandige væskeformige detergentsammensætninger |
| EP0958341A1 (en) | 1996-12-31 | 1999-11-24 | The Procter & Gamble Company | Thickened, highly aqueous, low cost liquid detergent compositions with aromatic surfactants |
| WO1998029529A1 (en) * | 1996-12-31 | 1998-07-09 | The Procter & Gamble Company | Laundry detergent compositions comprising dye fixatives |
| JP2001507733A (ja) * | 1996-12-31 | 2001-06-12 | ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー | 洗濯済みの布地に良好な外観を与えるポリアミド−ポリアミンを含有する洗濯洗剤組成物 |
| JP2002502460A (ja) * | 1997-06-04 | 2002-01-22 | ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー | タンパク質主体の汚れをクリーニングするための混合プロテアーゼ酵素系及びそれを含む組成物 |
| DK0985042T3 (da) * | 1997-06-04 | 2007-01-15 | Genencor Int | Proteaseenzymer til vanskelig rengöring og/eller plet- og filmreduktion samt præparater, der inkorporerer disse |
| EP0913458B1 (en) * | 1997-10-22 | 2004-06-16 | The Procter & Gamble Company | Liquid hard-surface cleaning compositions |
| ES2367505T3 (es) * | 1997-10-23 | 2011-11-04 | Danisco Us Inc. | Variantes de proteasa con sustituciones múltiples con carga neta alterada para usar en detergentes. |
| MA25044A1 (fr) * | 1997-10-23 | 2000-10-01 | Procter & Gamble | Compositions de lavage contenant des variants de proteases multisubstituees. |
| EP1082442A1 (en) * | 1998-03-26 | 2001-03-14 | The Procter & Gamble Company | Serine protease variants having amino acid substitutions |
| US6420331B1 (en) | 1998-06-10 | 2002-07-16 | Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising a mannanase and a bleach system |
| JP4047545B2 (ja) | 1998-06-10 | 2008-02-13 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 新規マンナナーゼ |
| US6376450B1 (en) * | 1998-10-23 | 2002-04-23 | Chanchal Kumar Ghosh | Cleaning compositions containing multiply-substituted protease variants |
| US6831053B1 (en) * | 1998-10-23 | 2004-12-14 | The Procter & Gamble Company | Bleaching compositions comprising multiply-substituted protease variants |
| DE19942595C2 (de) * | 1998-11-18 | 2002-01-31 | Linders Werner | Reinigungsmittel für Zahnprothesen |
| US20050124738A1 (en) * | 1999-05-26 | 2005-06-09 | The Procter & Gamble Company | Compositions and methods for using zwitterionic polymeric suds enhancers |
| WO2000071591A1 (en) * | 1999-05-26 | 2000-11-30 | Rhodia Inc. | Block polymers, compositions and methods of use for foams, laundry detergents, shower rinses and coagulants |
| US7939601B1 (en) | 1999-05-26 | 2011-05-10 | Rhodia Inc. | Polymers, compositions and methods of use for foams, laundry detergents, shower rinses, and coagulants |
| US7241729B2 (en) * | 1999-05-26 | 2007-07-10 | Rhodia Inc. | Compositions and methods for using polymeric suds enhancers |
| US6764986B1 (en) | 1999-07-08 | 2004-07-20 | Procter & Gamble Company | Process for producing particles of amine reaction products |
| US6740713B1 (en) | 1999-07-08 | 2004-05-25 | Procter & Gamble Company | Process for producing particles of amine reaction products |
| US6972276B1 (en) | 1999-07-09 | 2005-12-06 | Procter & Gamble Company | Process for making amine compounds |
| EP1754774B1 (en) | 1999-08-10 | 2012-09-19 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising hydrotropes |
| EP1248736A1 (en) | 1999-09-22 | 2002-10-16 | The Procter & Gamble Company | Hand-held liquid container |
| WO2001060157A2 (en) * | 2000-02-18 | 2001-08-23 | The Procter & Gamble Company | Antibacterial agents and compositions |
| WO2001064180A1 (en) * | 2000-02-29 | 2001-09-07 | Clariant S.A. | Cosmetic compositions comprising anionic and cationic surfactants |
| US6777218B1 (en) * | 2000-03-14 | 2004-08-17 | Novozymes A/S | Subtilase enzymes having an improved wash performance on egg stains |
| ATE500323T1 (de) * | 2000-04-03 | 2011-03-15 | Maxygen Inc | Subtilisin-variante |
| US7319112B2 (en) * | 2000-07-14 | 2008-01-15 | The Procter & Gamble Co. | Non-halogenated antibacterial agents and processes for making same |
| US7109016B2 (en) | 2000-08-21 | 2006-09-19 | Novozymes A/S | Subtilase enzymes |
| AR030462A1 (es) * | 2000-08-21 | 2003-08-20 | Novozymes As | Novedosas enzimas subtilasas que tienen una reducida tendencia hacia su inhibicion por las sustancias presentes en los huevos |
| US6541234B1 (en) * | 2000-09-11 | 2003-04-01 | University Of Maryland Biotechnology Institute | Calcium free subtilisin mutants |
| GB2367065B (en) * | 2000-09-20 | 2002-11-20 | Reckitt Benckiser Inc | Enzyme containing laundry booster compositions |
| US6541235B1 (en) * | 2000-09-29 | 2003-04-01 | University Of Maryland Biotechnology Institute | Calcium free subtilisin mutants |
| DE10104479C1 (de) * | 2001-01-31 | 2002-09-12 | Gerhard Knapp | Verwendung eines Mittels zur Inhibierung von Milbenkot |
| US20030040459A1 (en) * | 2001-02-05 | 2003-02-27 | Unilever Home & Pesonal Care Usa | Cleaning compositions |
| EP1241112A3 (en) | 2001-03-15 | 2003-02-26 | The Procter & Gamble Company | Flexible multiple compartment pouch |
| RU2311458C2 (ru) * | 2001-03-23 | 2007-11-27 | Джененкор Интернэшнл, Инк. | Белки, вызывающие измененную иммуногенную реакцию, и способы их получения и использования |
| DE10121463A1 (de) * | 2001-05-02 | 2003-02-27 | Henkel Kgaa | Neue Alkalische Protease-Varianten und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neuen Alkalischen Protease-Varianten |
| US7157416B2 (en) * | 2001-07-20 | 2007-01-02 | Genencor International, Inc. | Stabilization of enzymes |
| GB0118932D0 (en) * | 2001-08-02 | 2001-09-26 | Unilever Plc | Improvements relating to laundry compositions |
| JP2004537627A (ja) * | 2001-08-03 | 2004-12-16 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | 洗剤組成物に使用するためのポリアスパルテート誘導体 |
| US7153820B2 (en) | 2001-08-13 | 2006-12-26 | Ecolab Inc. | Solid detergent composition and method for solidifying a detergent composition |
| US6544941B1 (en) * | 2001-08-27 | 2003-04-08 | Unilever Home & Personal Care Usa, Division Of Conopco, Inc. | Dishwashing composition |
| DE10153792A1 (de) * | 2001-10-31 | 2003-05-22 | Henkel Kgaa | Neue Alkalische Protease-Varianten und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neuen Alkalischen Protease-Varianten |
| WO2003041667A2 (en) * | 2001-11-13 | 2003-05-22 | The Procter & Gamble Company | Compositions containing enzymes stabilized with certain osmo-protectants and methods for using such compositions in personal care |
| AU2003210552A1 (en) * | 2002-01-16 | 2003-09-02 | Genencor International, Inc. | Multiply-substituted protease variants |
| AU2003210551A1 (en) * | 2002-01-16 | 2003-09-02 | Genencor International, Inc. | Multiply-substituted protease variants |
| AU2002368193A1 (en) | 2002-08-28 | 2004-03-19 | Carl-Heinz Kapitz | Use of proteases for decomposing allergens |
| BR0303954A (pt) | 2002-10-10 | 2004-09-08 | Int Flavors & Fragrances Inc | Composição, fragrância, método para divisão de uma quantidade efetiva olfativa de fragrância em um produto sem enxague e produto sem enxague |
| US7585824B2 (en) | 2002-10-10 | 2009-09-08 | International Flavors & Fragrances Inc. | Encapsulated fragrance chemicals |
| BR0314558A (pt) * | 2002-10-10 | 2005-08-09 | Diversa Corp | Proteases, ácidos nucléicos codificando as mesmas e processos para preparar e usar as mesmas |
| US20040097385A1 (en) * | 2002-11-18 | 2004-05-20 | Unilever Home & Personal Products Usa, Division Of Conopco, Inc. | Viscoelastic cleansing gel with surfactant solutions containing polysaccharides and their derivatives polysaccharide hydrocolloids |
| US7651992B2 (en) * | 2003-02-28 | 2010-01-26 | The Procter & Gamble Company | Foam-generating kit containing a foam-generating dispenser and a composition containing a high level of surfactant |
| US7402554B2 (en) * | 2003-02-28 | 2008-07-22 | The Procter & Gamble Company | Foam-generating kit containing a foam-generating dispenser and a composition containing a high level of surfactant |
| US20040229763A1 (en) * | 2003-02-28 | 2004-11-18 | The Procter & Gamble Company | Cleaning kit and/or a dishwashing kit containing a foam-generating dispenser and a cleaning and/or dishwashing composition |
| US7507569B2 (en) * | 2003-05-07 | 2009-03-24 | Novozymes A/S | Variant subtilisin enzymes (subtilases) |
| US20050113282A1 (en) * | 2003-11-20 | 2005-05-26 | Parekh Prabodh P. | Melamine-formaldehyde microcapsule slurries for fabric article freshening |
| US20050112152A1 (en) | 2003-11-20 | 2005-05-26 | Popplewell Lewis M. | Encapsulated materials |
| US7105064B2 (en) | 2003-11-20 | 2006-09-12 | International Flavors & Fragrances Inc. | Particulate fragrance deposition on surfaces and malodour elimination from surfaces |
| DE10360805A1 (de) | 2003-12-23 | 2005-07-28 | Henkel Kgaa | Neue Alkalische Protease und Wasch- und Reinigungsmittel, enthaltend diese neue Alkalische Protease |
| US20050226900A1 (en) * | 2004-04-13 | 2005-10-13 | Winton Brooks Clint D | Skin and hair treatment composition and process for using same resulting in controllably-releasable fragrance and/or malodour counteractant evolution |
| US20050227907A1 (en) * | 2004-04-13 | 2005-10-13 | Kaiping Lee | Stable fragrance microcapsule suspension and process for using same |
| DE102004019751A1 (de) | 2004-04-23 | 2005-11-17 | Henkel Kgaa | Neue Alkalische Proteasen und Wasch- und Reinigungsmittel, enthaltend diese neuen Alkalischen Proteasen |
| DE602005018767D1 (de) | 2004-05-17 | 2010-02-25 | Procter & Gamble | Bleichmittel mit carbohydratoxidase |
| DE102004029475A1 (de) * | 2004-06-18 | 2006-01-26 | Henkel Kgaa | Neues enzymatisches Bleichsystem |
| US7419943B2 (en) | 2004-08-20 | 2008-09-02 | International Flavors & Fragrances Inc. | Methanoazuenofurans and methanoazulenone compounds and uses of these compounds as fragrance materials |
| US7594594B2 (en) * | 2004-11-17 | 2009-09-29 | International Flavors & Fragrances Inc. | Multi-compartment storage and delivery containers and delivery system for microencapsulated fragrances |
| US7686892B2 (en) | 2004-11-19 | 2010-03-30 | The Procter & Gamble Company | Whiteness perception compositions |
| US7888306B2 (en) | 2007-05-14 | 2011-02-15 | Amcol International Corporation | Compositions containing benefit agent composites pre-emulsified using colloidal cationic particles |
| US7569533B2 (en) | 2005-01-12 | 2009-08-04 | Amcol International Corporation | Detersive compositions containing hydrophobic benefit agents pre-emulsified using sub-micrometer-sized insoluble cationic particles |
| US7871972B2 (en) | 2005-01-12 | 2011-01-18 | Amcol International Corporation | Compositions containing benefit agents pre-emulsified using colloidal cationic particles |
| US7977288B2 (en) | 2005-01-12 | 2011-07-12 | Amcol International Corporation | Compositions containing cationically surface-modified microparticulate carrier for benefit agents |
| EP1700904A1 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-13 | Unilever N.V. | Liquid detergent composition |
| EP1700907A1 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-13 | Unilever N.V. | Liquid bleaching composition |
| US20070207174A1 (en) * | 2005-05-06 | 2007-09-06 | Pluyter Johan G L | Encapsulated fragrance materials and methods for making same |
| US9109068B2 (en) | 2005-07-21 | 2015-08-18 | Akzo Nobel N.V. | Hybrid copolymer compositions |
| US20090306227A1 (en) * | 2005-08-31 | 2009-12-10 | Toshiyuki Ioka | Tablet for removing tongue coating |
| EP1948775B1 (en) | 2005-09-27 | 2017-01-11 | The Procter & Gamble Company | Microcapsule and method of producing same |
| KR20140027423A (ko) * | 2005-10-12 | 2014-03-06 | 다니스코 유에스 인크. | 저장-안정성 중성 메탈로프로테아제의 용도 및 제조 |
| US20070138673A1 (en) | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Kaiping Lee | Process for Preparing a High Stability Microcapsule Product and Method for Using Same |
| US20070138674A1 (en) | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Theodore James Anastasiou | Encapsulated active material with reduced formaldehyde potential |
| US7838481B2 (en) * | 2006-04-07 | 2010-11-23 | Beckman Coulter, Inc. | Formaldehyde-free cleaner composition for cleaning blood analyzers and method of use |
| JP2009534022A (ja) | 2006-04-20 | 2009-09-24 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 卵のシミに対する洗浄能力が向上したサビナーゼ変異体 |
| US7629158B2 (en) * | 2006-06-16 | 2009-12-08 | The Procter & Gamble Company | Cleaning and/or treatment compositions |
| EP2059591B1 (en) * | 2006-07-18 | 2012-09-05 | Danisco US Inc. | Dishwashing composition that contains a protease variant |
| US20080027505A1 (en) * | 2006-07-26 | 2008-01-31 | G&L Consulting, Llc | System and method for treatment of headaches |
| EP2301517A1 (en) | 2006-08-01 | 2011-03-30 | The Procter & Gamble Company | Benefit agent containing delivery particle |
| DE102007029643A1 (de) | 2006-09-08 | 2009-01-15 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungsmittel |
| US7833960B2 (en) | 2006-12-15 | 2010-11-16 | International Flavors & Fragrances Inc. | Encapsulated active material containing nanoscaled material |
| US8093200B2 (en) | 2007-02-15 | 2012-01-10 | Ecolab Usa Inc. | Fast dissolving solid detergent |
| US7709436B2 (en) * | 2007-05-09 | 2010-05-04 | The Dial Corporation | Low carbon footprint compositions for use in laundry applications |
| US7648953B2 (en) * | 2008-05-08 | 2010-01-19 | The Dial Corporation | Eco-friendly laundry detergent compositions comprising natural essence |
| US20080311064A1 (en) * | 2007-06-12 | 2008-12-18 | Yabin Lei | Higher Performance Capsule Particles |
| ES1065735Y (es) * | 2007-06-19 | 2008-01-16 | Sensient Fragances S A | Pastilla de jabon con nucleo activo |
| MX2010003721A (es) | 2007-10-18 | 2010-05-17 | Ecolab Inc | Composiciones limpiadoras solidas, cerosas, comprimidas y metodos para elaborarlas. |
| US7879790B2 (en) * | 2008-01-22 | 2011-02-01 | Stepan Company | Mixed salts of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids, and methods of making them |
| US7666828B2 (en) | 2008-01-22 | 2010-02-23 | Stepan Company | Sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids, methods of making them, and compositions and processes employing them |
| US7998920B2 (en) * | 2008-01-22 | 2011-08-16 | Stepan Company | Sulfonated estolide compositions containing magnesium sulfate and processes employing them |
| PL2380966T5 (pl) * | 2008-02-08 | 2022-05-30 | The Procter And Gamble Company | Sposób wytwarzania rozpuszczalnej w wodzie saszetki |
| US8066818B2 (en) * | 2008-02-08 | 2011-11-29 | The Procter & Gamble Company | Water-soluble pouch |
| WO2009100306A1 (en) * | 2008-02-08 | 2009-08-13 | Method Products, Inc. | Consumer product packets with enhanced performance |
| EP2265702A1 (en) | 2008-02-08 | 2010-12-29 | Amcol International Corporation | Compositions containing cationically surface-modified microparticulate carrier for benefit agents |
| US20090209447A1 (en) * | 2008-02-15 | 2009-08-20 | Michelle Meek | Cleaning compositions |
| US20090233830A1 (en) | 2008-03-14 | 2009-09-17 | Penny Sue Dirr | Automatic detergent dishwashing composition |
| EP2100947A1 (en) | 2008-03-14 | 2009-09-16 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| EP2100948A1 (en) * | 2008-03-14 | 2009-09-16 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| US8097047B2 (en) * | 2008-04-02 | 2012-01-17 | The Procter & Gamble Company | Fabric color rejuvenation composition |
| US8188022B2 (en) | 2008-04-11 | 2012-05-29 | Amcol International Corporation | Multilayer fragrance encapsulation comprising kappa carrageenan |
| CA2721086A1 (en) | 2008-04-11 | 2009-10-15 | Amcol International Corporation | Multilayer fragrance encapsulation |
| EP2578680B1 (en) | 2008-06-06 | 2016-04-27 | Danisco US Inc. | Compositions and methods comprising variant microbial proteases |
| US8601526B2 (en) | 2008-06-13 | 2013-12-03 | United Video Properties, Inc. | Systems and methods for displaying media content and media guidance information |
| EP2166092A1 (en) | 2008-09-18 | 2010-03-24 | The Procter and Gamble Company | Detergent composition |
| EP2166073A1 (en) * | 2008-09-23 | 2010-03-24 | The Procter & Gamble Company | Cleaning composition |
| EP2166076A1 (en) * | 2008-09-23 | 2010-03-24 | The Procter & Gamble Company | Cleaning composition |
| EP2166075A1 (en) * | 2008-09-23 | 2010-03-24 | The Procter and Gamble Company | Cleaning composition |
| US7915215B2 (en) * | 2008-10-17 | 2011-03-29 | Appleton Papers Inc. | Fragrance-delivery composition comprising boron and persulfate ion-crosslinked polyvinyl alcohol microcapsules and method of use thereof |
| EP2362902B1 (en) * | 2008-11-11 | 2012-10-24 | Danisco US, Inc., Genencor Division | Compositions and methods comprising a subtilisin variant |
| US20100267304A1 (en) * | 2008-11-14 | 2010-10-21 | Gregory Fowler | Polyurethane foam pad and methods of making and using same |
| US20100125046A1 (en) * | 2008-11-20 | 2010-05-20 | Denome Frank William | Cleaning products |
| US10099194B2 (en) | 2011-03-18 | 2018-10-16 | International Flavors & Fragrances Inc. | Microcapsules produced from blended sol-gel precursors and method for producing the same |
| US7884064B2 (en) * | 2009-01-21 | 2011-02-08 | Stepan Company | Light duty liquid detergent compositions of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids |
| WO2010085247A1 (en) | 2009-01-21 | 2010-07-29 | Stepan Company | Sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids and uses thereof |
| US8058223B2 (en) * | 2009-01-21 | 2011-11-15 | Stepan Company | Automatic or machine dishwashing compositions of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids and uses thereof |
| US8119588B2 (en) * | 2009-01-21 | 2012-02-21 | Stepan Company | Hard surface cleaner compositions of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids and uses thereof |
| US8124577B2 (en) * | 2009-01-21 | 2012-02-28 | Stepan Company | Personal care compositions of sulfonated estolides and other derivatives of fatty acids and uses thereof |
| PL2213713T3 (pl) | 2009-02-02 | 2014-07-31 | Procter & Gamble | Płynna kompozycja środka czyszczącego do ręcznego mycia naczyń |
| ES2488117T3 (es) | 2009-02-02 | 2014-08-26 | The Procter & Gamble Company | Composición detergente líquida para lavado de vajillas a mano |
| EP3023483A1 (en) | 2009-02-02 | 2016-05-25 | The Procter and Gamble Company | Liquid hand diswashing detergent composition |
| EP2216390B1 (en) | 2009-02-02 | 2013-11-27 | The Procter and Gamble Company | Hand dishwashing method |
| EP2216391A1 (en) | 2009-02-02 | 2010-08-11 | The Procter & Gamble Company | Liquid hand dishwashing detergent composition |
| EP2216392B1 (en) | 2009-02-02 | 2013-11-13 | The Procter and Gamble Company | Liquid hand dishwashing detergent composition |
| EP3998328A1 (en) | 2009-02-09 | 2022-05-18 | The Procter & Gamble Company | Detergent composition |
| US8293697B2 (en) | 2009-03-18 | 2012-10-23 | The Procter & Gamble Company | Structured fluid detergent compositions comprising dibenzylidene sorbitol acetal derivatives |
| US8153574B2 (en) | 2009-03-18 | 2012-04-10 | The Procter & Gamble Company | Structured fluid detergent compositions comprising dibenzylidene polyol acetal derivatives and detersive enzymes |
| WO2010138347A1 (en) | 2009-05-26 | 2010-12-02 | The Procter & Gamble Company | Aqueous liquid composition for pre-treating soiled dishware |
| WO2011005913A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | The Procter & Gamble Company | A catalytic laundry detergent composition comprising relatively low levels of water-soluble electrolyte |
| WO2011005623A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | The Procter & Gamble Company | Laundry detergent composition comprising low level of bleach |
| CN102471738B (zh) | 2009-07-09 | 2015-11-25 | 宝洁公司 | 包含苯二甲酰亚氨基过氧己酸的轻度碱性低复配固体织物处理洗涤剂组合物 |
| EP2451915A1 (en) | 2009-07-09 | 2012-05-16 | The Procter & Gamble Company | A catalytic laundry detergent composition comprising relatively low levels of water-soluble electrolyte |
| WO2011005917A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | The Procter & Gamble Company | Method of laundering fabric using a liquid laundry detergent composition |
| US20110009307A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | Alan Thomas Brooker | Laundry Detergent Composition Comprising Low Level of Sulphate |
| WO2011005911A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | The Procter & Gamble Company | Method of laundering fabric using a compacted liquid laundry detergent composition |
| US20110005004A1 (en) * | 2009-07-09 | 2011-01-13 | The Procter & Gamble Company | Method of laundering fabric using a compacted liquid laundry detergent composition |
| EP2451919A1 (en) | 2009-07-09 | 2012-05-16 | The Procter & Gamble Company | Method of laundering fabric using a liquid laundry detergent composition |
| EP2277860B1 (en) | 2009-07-22 | 2015-08-19 | Stepan Company | Compositions comprising sulfonated estolides and alkyl ester sulfonates, methods of making them, and compositions and processes employing them |
| HUE029942T2 (en) | 2009-08-13 | 2017-04-28 | Procter & Gamble | Method for washing low temperature fabrics |
| DE102009029513A1 (de) * | 2009-09-16 | 2011-03-24 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Lagerstabiles flüssiges Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend Proteasen |
| CN102120167B (zh) | 2009-09-18 | 2014-10-29 | 国际香料和香精公司 | 胶囊封装的活性材料 |
| EP2322593A1 (en) | 2009-11-12 | 2011-05-18 | The Procter & Gamble Company | Liquid laundry detergent composition |
| EP2322595A1 (en) | 2009-11-12 | 2011-05-18 | The Procter & Gamble Company | Solid laundry detergent composition |
| EP4159833A3 (en) | 2009-12-09 | 2023-07-26 | The Procter & Gamble Company | Fabric and home care products |
| EP2333040B2 (en) | 2009-12-10 | 2019-11-13 | The Procter & Gamble Company | Detergent composition |
| EP2333039B2 (en) | 2009-12-10 | 2020-11-11 | The Procter & Gamble Company | Method and use of a dishwasher composition |
| EP2333041B1 (en) | 2009-12-10 | 2013-05-15 | The Procter & Gamble Company | Method and use of a dishwasher composition |
| EP2333042B1 (en) | 2009-12-10 | 2015-07-01 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing product and use thereof |
| CN113186178A (zh) | 2010-02-10 | 2021-07-30 | 诺维信公司 | 在螯合剂存在下具有高稳定性的变体和包含变体的组合物 |
| EP2357220A1 (en) | 2010-02-10 | 2011-08-17 | The Procter & Gamble Company | Cleaning composition comprising amylase variants with high stability in the presence of a chelating agent |
| EP2361964B1 (en) | 2010-02-25 | 2012-12-12 | The Procter & Gamble Company | Detergent composition |
| EP2365059A1 (en) | 2010-03-01 | 2011-09-14 | The Procter & Gamble Company | Solid laundry detergent composition comprising C.I. fluorescent brightener 260 in alpha-crystalline form |
| EP2377914B1 (en) | 2010-04-19 | 2016-11-09 | The Procter & Gamble Company | Mildly alkaline, low-built, solid fabric treatment detergent composition comprising perhydrolase |
| EP2365054A1 (en) | 2010-03-01 | 2011-09-14 | The Procter & Gamble Company | Solid laundry detergent composition comprising secondary alcohol-based detersive surfactant |
| EP2380957A1 (en) | 2010-04-19 | 2011-10-26 | The Procter & Gamble Company | Solid laundry detergent composition having a dynamic in-wash ph profile |
| EP2365058A1 (en) | 2010-03-01 | 2011-09-14 | The Procter & Gamble Company | Solid laundry detergent composition having an excellent anti-encrustation profile |
| EP2363456A1 (en) | 2010-03-01 | 2011-09-07 | The Procter & Gamble Company | Solid laundry detergent composition comprising brightener in micronized particulate form |
| PL2558573T3 (pl) * | 2010-04-15 | 2017-08-31 | Danisco Us Inc. | Kompozycje i sposoby obejmujące warianty proteazy |
| US20120067373A1 (en) | 2010-04-15 | 2012-03-22 | Philip Frank Souter | Automatic Dishwashing Detergent Composition |
| US20110257060A1 (en) | 2010-04-19 | 2011-10-20 | Robert Richard Dykstra | Laundry detergent composition comprising bleach particles that are suspended within a continuous liquid phase |
| US20110257069A1 (en) | 2010-04-19 | 2011-10-20 | Stephen Joseph Hodson | Detergent composition |
| US20110257062A1 (en) | 2010-04-19 | 2011-10-20 | Robert Richard Dykstra | Liquid laundry detergent composition comprising a source of peracid and having a ph profile that is controlled with respect to the pka of the source of peracid |
| US8889612B2 (en) | 2010-04-19 | 2014-11-18 | The Procter & Gamble Company | Method of laundering fabric using a compacted liquid laundry detergent composition |
| ES2533368T3 (es) | 2010-04-23 | 2015-04-09 | The Procter & Gamble Company | Producto para lavavajillas |
| ES2565192T3 (es) | 2010-04-23 | 2016-04-01 | The Procter & Gamble Company | Método para perfumar |
| EP2380961B1 (en) | 2010-04-23 | 2018-05-23 | The Procter and Gamble Company | Detergent composition |
| EP2383329A1 (en) | 2010-04-23 | 2011-11-02 | The Procter & Gamble Company | Particle |
| EP2380962B1 (en) | 2010-04-23 | 2016-03-30 | The Procter and Gamble Company | Particle |
| EP2380478A1 (en) | 2010-04-23 | 2011-10-26 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing product |
| US20130260438A1 (en) | 2010-05-06 | 2013-10-03 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods comprising serine protease variants (as amended) |
| EP2395071A1 (en) | 2010-06-10 | 2011-12-14 | The Procter & Gamble Company | Solid detergent composition comprising lipase of bacterial origin |
| EP2395070A1 (en) | 2010-06-10 | 2011-12-14 | The Procter & Gamble Company | Liquid laundry detergent composition comprising lipase of bacterial origin |
| JP5710756B2 (ja) | 2010-06-23 | 2015-04-30 | ザ プロクター アンド ギャンブルカンパニー | 汚れた布地の前処理及び洗濯方法並びに洗濯用製品 |
| US20130166040A1 (en) * | 2010-06-24 | 2013-06-27 | The Board Of Trustee Of The University Of Illinois | Reagents and methods for preparing teeth for implantation |
| RU2553295C2 (ru) | 2010-07-02 | 2015-06-10 | Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани | Моющий продукт и способы его изготовления |
| JP5759544B2 (ja) | 2010-07-02 | 2015-08-05 | ザ プロクター アンド ギャンブルカンパニー | 活性剤を送達する方法 |
| CN102971453B (zh) | 2010-07-02 | 2015-08-12 | 宝洁公司 | 包含非香料活性剂的长丝、非织造纤维网和制备它们的方法 |
| RU2543892C2 (ru) | 2010-07-02 | 2015-03-10 | Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани | Способ получения пленок из нетканых полотен |
| CA2803629C (en) | 2010-07-02 | 2015-04-28 | The Procter & Gamble Company | Filaments comprising an active agent nonwoven webs and methods for making same |
| EP2596088B1 (en) | 2010-07-22 | 2016-09-28 | Unilever PLC | Detergent compositions comprising biosurfactant and enzyme |
| CN103052703A (zh) | 2010-07-22 | 2013-04-17 | 荷兰联合利华有限公司 | 包含生物表面活性剂和脂肪酶的洗涤剂组合物 |
| EP2412792A1 (en) | 2010-07-29 | 2012-02-01 | The Procter & Gamble Company | Liquid detergent composition |
| US8685171B2 (en) | 2010-07-29 | 2014-04-01 | The Procter & Gamble Company | Liquid detergent composition |
| WO2011026154A2 (en) | 2010-10-29 | 2011-03-03 | The Procter & Gamble Company | Cleaning and/or treatment compositions |
| WO2012057781A1 (en) | 2010-10-29 | 2012-05-03 | The Procter & Gamble Company | Cleaning and/or treatment compositions comprising a fungal serine protease |
| DE102010063457A1 (de) * | 2010-12-17 | 2012-06-21 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Lagerstabiles flüssiges Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend Protease und Cellulase |
| BR112013027963A2 (pt) | 2011-05-05 | 2016-11-29 | Danisco Us Inc | "variante de subtilisina com atividade proteolítica, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, composição e método de limpeza". |
| MX357386B (es) | 2011-05-05 | 2018-07-06 | Procter & Gamble | Composiciones y metodos que comprenden variantes de proteasa serina. |
| KR101890147B1 (ko) | 2011-05-20 | 2018-08-21 | 에코랍 유에스에이 인코퍼레이티드 | 식기세척을 위한 교대 알칼리/산 시스템에서의 비-포스페이트 세제 및 비-인산 |
| EP2766462B1 (en) | 2011-05-20 | 2019-08-28 | Ecolab USA Inc. | Acid formulations for use in a system for warewashing |
| US20140371435A9 (en) | 2011-06-03 | 2014-12-18 | Eduardo Torres | Laundry Care Compositions Containing Thiophene Azo Dyes |
| EP2537918A1 (en) | 2011-06-20 | 2012-12-26 | The Procter & Gamble Company | Consumer products with lipase comprising coated particles |
| US8828920B2 (en) | 2011-06-23 | 2014-09-09 | The Procter & Gamble Company | Product for pre-treatment and laundering of stained fabric |
| US20120324655A1 (en) | 2011-06-23 | 2012-12-27 | Nalini Chawla | Product for pre-treatment and laundering of stained fabric |
| EP2725912A4 (en) | 2011-06-29 | 2015-03-04 | Solae Llc | BAKERY COMPOSITIONS WITH SOYAMOL PROTEINS ISOLATED FROM PROCESSING STREAMS |
| CN103649307B (zh) | 2011-06-30 | 2020-03-27 | 诺维信公司 | α-淀粉酶变体 |
| EP2540824A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-02 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions comprising amylase variants reference to a sequence listing |
| EP2551335A1 (en) | 2011-07-25 | 2013-01-30 | The Procter & Gamble Company | Enzyme stabilized liquid detergent composition |
| US20130029895A1 (en) | 2011-07-27 | 2013-01-31 | Jean-Luc Phillippe Bettiol | Multiphase liquid detergent composition |
| US8679366B2 (en) | 2011-08-05 | 2014-03-25 | Ecolab Usa Inc. | Cleaning composition containing a polysaccharide graft polymer composition and methods of controlling hard water scale |
| US8841246B2 (en) | 2011-08-05 | 2014-09-23 | Ecolab Usa Inc. | Cleaning composition containing a polysaccharide hybrid polymer composition and methods of improving drainage |
| US8636918B2 (en) | 2011-08-05 | 2014-01-28 | Ecolab Usa Inc. | Cleaning composition containing a polysaccharide hybrid polymer composition and methods of controlling hard water scale |
| US8853144B2 (en) | 2011-08-05 | 2014-10-07 | Ecolab Usa Inc. | Cleaning composition containing a polysaccharide graft polymer composition and methods of improving drainage |
| US10246668B2 (en) * | 2011-08-24 | 2019-04-02 | Illinois Tool Works, Inc. | Proportioner-ready bioenzymatic concentrated cleaning product |
| EP2584028B1 (en) | 2011-10-19 | 2017-05-10 | The Procter & Gamble Company | Particle |
| WO2013064647A1 (en) | 2011-11-04 | 2013-05-10 | Akzo Nobel Chemicals International B.V. | Hybrid dendrite copolymers, compositions thereof and methods for producing the same |
| EP2773321B1 (en) | 2011-11-04 | 2015-09-09 | Akzo Nobel Chemicals International B.V. | Graft dendrite copolymers, and methods for producing the same |
| US20130123162A1 (en) * | 2011-11-10 | 2013-05-16 | The Procter & Gamble Company | Consumer products |
| WO2013088266A1 (en) | 2011-12-13 | 2013-06-20 | Ecolab Usa Inc. | Concentrated warewashing compositions and methods |
| RU2655288C1 (ru) | 2012-01-04 | 2018-05-24 | Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани | Волокнистые структуры, содержащие частицы, и способы их изготовления |
| CN104080902B (zh) | 2012-02-03 | 2018-08-03 | 宝洁公司 | 具有脂肪酶的用于表面处理的组合物和方法 |
| WO2013142486A1 (en) | 2012-03-19 | 2013-09-26 | The Procter & Gamble Company | Laundry care compositions containing dyes |
| CN104204198B (zh) | 2012-04-02 | 2018-09-25 | 诺维信公司 | 脂肪酶变体以及编码其的多核苷酸 |
| EP2674475A1 (en) | 2012-06-11 | 2013-12-18 | The Procter & Gamble Company | Detergent composition |
| US10246692B2 (en) | 2012-07-12 | 2019-04-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same |
| CN104508103A (zh) | 2012-07-26 | 2015-04-08 | 宝洁公司 | 含酶的低ph液体清洁组合物 |
| US8945314B2 (en) | 2012-07-30 | 2015-02-03 | Ecolab Usa Inc. | Biodegradable stability binding agent for a solid detergent |
| DE102012215107A1 (de) * | 2012-08-24 | 2014-02-27 | Basf Se | Festes Geschirrspülmittel mit verbesserter Proteaseleistung |
| US9745543B2 (en) | 2012-09-10 | 2017-08-29 | Ecolab Usa Inc. | Stable liquid manual dishwashing compositions containing enzymes |
| EP2712915A1 (en) | 2012-10-01 | 2014-04-02 | The Procter and Gamble Company | Methods of treating a surface and compositions for use therein |
| US8753453B2 (en) | 2012-10-04 | 2014-06-17 | Ecolab Usa Inc. | Pre-soak technology for laundry and other hard surface cleaning |
| MX2015007802A (es) | 2012-12-20 | 2015-09-04 | Procter & Gamble | Composiciones de detergente con blanqueador recubierto con silicato. |
| MX2015011690A (es) | 2013-03-05 | 2015-12-07 | Procter & Gamble | Composiciones de azucares mezclados. |
| EP2970542B1 (en) | 2013-03-15 | 2019-07-24 | Lubrizol Advanced Materials, Inc. | Itaconic acid copolymers |
| US9631164B2 (en) | 2013-03-21 | 2017-04-25 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
| CN105073966B (zh) | 2013-03-28 | 2018-03-23 | 宝洁公司 | 包含聚醚胺的清洁组合物 |
| JP6188199B2 (ja) * | 2013-05-20 | 2017-08-30 | ライオン株式会社 | 食器洗い機用洗浄剤 |
| EP3699256A1 (en) | 2013-05-28 | 2020-08-26 | The Procter & Gamble Company | Surface treatment compositions comprising photochromic dyes |
| CN105722495B (zh) | 2013-08-15 | 2020-02-28 | 国际香料和香精公司 | 聚脲或聚氨酯胶囊 |
| WO2015032447A1 (en) | 2013-09-09 | 2015-03-12 | Ecolab Usa Inc. | Synergistic stain removal through novel chelator combination |
| WO2015032451A1 (en) | 2013-09-09 | 2015-03-12 | Ecolab Usa Inc. | Synergistic stain removal through novel chelator combination |
| WO2015042013A1 (en) | 2013-09-18 | 2015-03-26 | Lubrizol Advanced Materials, Inc. | Stable linear polymers |
| WO2015042086A1 (en) | 2013-09-18 | 2015-03-26 | The Procter & Gamble Company | Laundry care composition comprising carboxylate dye |
| MX2016003538A (es) | 2013-09-18 | 2016-06-28 | Procter & Gamble | Composiciones para el cuidado de la ropa que contienen colorantes azoicos de tiofeno y carboxilato. |
| US9834682B2 (en) | 2013-09-18 | 2017-12-05 | Milliken & Company | Laundry care composition comprising carboxylate dye |
| CA2921433A1 (en) | 2013-09-18 | 2015-03-26 | The Procter & Gamble Company | Laundry care composition comprising carboxylate dye |
| EP2857486A1 (en) | 2013-10-07 | 2015-04-08 | WeylChem Switzerland AG | Multi-compartment pouch comprising cleaning compositions, washing process and use for washing and cleaning of textiles and dishes |
| EP2857487A1 (en) | 2013-10-07 | 2015-04-08 | WeylChem Switzerland AG | Multi-compartment pouch comprising cleaning compositions, washing process and use for washing and cleaning of textiles and dishes |
| EP2857485A1 (en) | 2013-10-07 | 2015-04-08 | WeylChem Switzerland AG | Multi-compartment pouch comprising alkanolamine-free cleaning compositions, washing process and use for washing and cleaning of textiles and dishes |
| US9610228B2 (en) | 2013-10-11 | 2017-04-04 | International Flavors & Fragrances Inc. | Terpolymer-coated polymer encapsulated active material |
| ES2658226T3 (es) | 2013-10-18 | 2018-03-08 | International Flavors & Fragrances Inc. | Formulación fluida y estable de cápsulas de sílice |
| MX2016004990A (es) | 2013-10-24 | 2016-07-06 | Ecolab Usa Inc | Composiciones y metodos para eliminar suciedades de las superficies. |
| MX353557B (es) | 2013-11-11 | 2018-01-17 | Int Flavors & Fragrances Inc | Composiciones multicápsulas. |
| ES2759066T3 (es) | 2013-12-19 | 2020-05-07 | Nestle Sa | Usos de composiciones y métodos para reducir los alérgenos de gato en el ambiente |
| WO2015112338A1 (en) | 2014-01-22 | 2015-07-30 | The Procter & Gamble Company | Method of treating textile fabrics |
| EP3097173B1 (en) | 2014-01-22 | 2020-12-23 | The Procter and Gamble Company | Fabric treatment composition |
| WO2015112340A1 (en) | 2014-01-22 | 2015-07-30 | The Procter & Gamble Company | Method of treating textile fabrics |
| WO2015112341A1 (en) | 2014-01-22 | 2015-07-30 | The Procter & Gamble Company | Fabric treatment composition |
| CA2841024C (en) | 2014-01-30 | 2017-03-07 | The Procter & Gamble Company | Unit dose article |
| US9994497B2 (en) | 2014-02-25 | 2018-06-12 | The Procter & Gamble Company | Process for making renewable surfactant intermediates and surfactants from fats and oils and products thereof |
| WO2015130653A1 (en) | 2014-02-25 | 2015-09-03 | The Procter & Gamble Company | A process for making renewable surfactant intermediates and surfactants from fats and oils and products thereof |
| WO2015127891A1 (en) | 2014-02-26 | 2015-09-03 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions comprising alkoxylated polyalkyleneimine, organomodified silicone and silixane-based diluent |
| CN106574018A (zh) | 2014-03-14 | 2017-04-19 | 路博润先进材料公司 | 衣康酸聚合物和共聚物 |
| US20150275143A1 (en) | 2014-03-27 | 2015-10-01 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions containing a polyetheramine |
| US9719052B2 (en) | 2014-03-27 | 2017-08-01 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions containing a polyetheramine |
| EP2924105A1 (en) | 2014-03-28 | 2015-09-30 | The Procter and Gamble Company | Water soluble unit dose article |
| EP2924106A1 (en) | 2014-03-28 | 2015-09-30 | The Procter and Gamble Company | Water soluble unit dose article |
| WO2015171592A1 (en) | 2014-05-06 | 2015-11-12 | Milliken & Company | Laundry care compositions |
| US9365805B2 (en) | 2014-05-15 | 2016-06-14 | Ecolab Usa Inc. | Bio-based pot and pan pre-soak |
| WO2015187757A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-10 | The Procter & Gamble Company | Detergent composition comprising polyalkyleneimine polymers |
| WO2015191434A2 (en) | 2014-06-09 | 2015-12-17 | Stepan Company | Detergents for cold-water cleaning |
| EP3878960A1 (en) | 2014-07-04 | 2021-09-15 | Novozymes A/S | Subtilase variants and polynucleotides encoding same |
| EP3739029A1 (en) | 2014-07-04 | 2020-11-18 | Novozymes A/S | Subtilase variants and polynucleotides encoding same |
| CN106793912A (zh) | 2014-08-01 | 2017-05-31 | 艺康美国股份有限公司 | 使用清洁织物的人工表面清洁和洗涤所述清洁织物的方法 |
| US20170283748A1 (en) | 2014-09-10 | 2017-10-05 | Basf Se | Encapsulated cleaning composition |
| US9617502B2 (en) | 2014-09-15 | 2017-04-11 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions containing salts of polyetheramines and polymeric acid |
| US20160090552A1 (en) | 2014-09-25 | 2016-03-31 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions containing a polyetheramine and an anionic soil release polymer |
| EP3197988B1 (en) | 2014-09-25 | 2018-08-01 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions containing a polyetheramine |
| US9388368B2 (en) | 2014-09-26 | 2016-07-12 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions containing a polyetheramine |
| EP3212782B1 (en) * | 2014-10-27 | 2019-04-17 | Danisco US Inc. | Serine proteases |
| EP3256563A1 (en) | 2014-11-17 | 2017-12-20 | The Procter and Gamble Company | Benefit agent delivery compositions |
| US10570352B2 (en) | 2015-01-08 | 2020-02-25 | Stepan Company | Cold-water laundry detergents |
| WO2016160407A1 (en) | 2015-03-31 | 2016-10-06 | Stepan Company | Detergents based on alpha-sulfonated fatty ester surfactants |
| US10280386B2 (en) | 2015-04-03 | 2019-05-07 | Ecolab Usa Inc. | Enhanced peroxygen stability in multi-dispense TAED-containing peroxygen solid |
| US9783766B2 (en) | 2015-04-03 | 2017-10-10 | Ecolab Usa Inc. | Enhanced peroxygen stability using anionic surfactant in TAED-containing peroxygen solid |
| ES2869275T3 (es) | 2015-04-24 | 2021-10-25 | Int Flavors & Fragrances Inc | Sistemas de suministro y procedimientos de preparación del mismo |
| DK3088503T3 (en) | 2015-04-29 | 2018-08-20 | Procter & Gamble | PROCEDURE FOR TREATING A TEXTILE SUBSTANCE |
| EP3088506B1 (en) | 2015-04-29 | 2018-05-23 | The Procter and Gamble Company | Detergent composition |
| WO2016176296A1 (en) | 2015-04-29 | 2016-11-03 | The Procter & Gamble Company | Method of laundering a fabric |
| WO2016176280A1 (en) | 2015-04-29 | 2016-11-03 | The Procter & Gamble Company | Method of treating a fabric |
| CN112143591A (zh) | 2015-04-29 | 2020-12-29 | 宝洁公司 | 处理织物的方法 |
| CN111718806B (zh) | 2015-05-04 | 2022-01-04 | 美利肯公司 | 在洗衣护理组合物中作为上蓝剂的隐色三苯甲烷着色剂 |
| TR201906836T4 (tr) | 2015-06-02 | 2019-05-21 | Unilever Nv | Çamaşır deterjan bileşimi. |
| WO2016196555A1 (en) | 2015-06-02 | 2016-12-08 | Stepan Company | Cold-water cleaning method |
| US10226544B2 (en) | 2015-06-05 | 2019-03-12 | International Flavors & Fragrances Inc. | Malodor counteracting compositions |
| US10941372B2 (en) | 2015-06-11 | 2021-03-09 | Conopco, Inc. | Laundry detergent composition |
| WO2016206837A1 (en) | 2015-06-26 | 2016-12-29 | Unilever Plc | Laundry detergent composition |
| JP6997082B2 (ja) * | 2015-10-28 | 2022-02-03 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | プロテアーゼおよびアミラーゼ変異体を含む洗剤組成物 |
| US10183087B2 (en) * | 2015-11-10 | 2019-01-22 | American Sterilizer Company | Cleaning and disinfecting composition |
| BR112018010475B1 (pt) | 2015-11-25 | 2023-02-14 | Unilever Ip Holdings B.V. | Composição de detergente líquido e método de lavagem de roupas utilizando uma composição de detergente líquido para lavar roupas |
| WO2017100051A2 (en) | 2015-12-07 | 2017-06-15 | Stepan Comapny | Cold-water cleaning compositions and methods |
| US20170204223A1 (en) | 2016-01-15 | 2017-07-20 | International Flavors & Fragrances Inc. | Polyalkoxy-polyimine adducts for use in delayed release of fragrance ingredients |
| EP3205392A1 (en) | 2016-02-12 | 2017-08-16 | Basf Se | Microcapsules and process for preparation of microcapsules |
| EP3205393A1 (en) | 2016-02-12 | 2017-08-16 | Basf Se | Process for preparation of microcapsules |
| EP3417039B1 (en) | 2016-02-17 | 2019-07-10 | Unilever PLC | Whitening composition |
| CN108603140B (zh) | 2016-02-17 | 2020-09-08 | 荷兰联合利华有限公司 | 增白组合物 |
| CN115089512B (zh) | 2016-02-18 | 2024-08-27 | 国际香料和香精公司 | 聚脲胶囊组合物 |
| KR20180117701A (ko) | 2016-03-09 | 2018-10-29 | 바스프 에스이 | 캡슐형 세탁용 세정 조성물 |
| WO2017162378A1 (en) | 2016-03-21 | 2017-09-28 | Unilever Plc | Laundry detergent composition |
| US10119100B2 (en) * | 2016-04-07 | 2018-11-06 | The Honest Company, Inc. | Laundry detergent compositions |
| BR112018070468B1 (pt) | 2016-04-08 | 2022-07-12 | Unilever Ip Holdings B.V | Composição de detergente líquida aquosa para lavagem de roupas e método doméstico de tratamento de um tecido |
| WO2017182295A1 (en) | 2016-04-18 | 2017-10-26 | Basf Se | Liquid cleaning compositions |
| CN105820888A (zh) * | 2016-04-21 | 2016-08-03 | 刘爱华 | 一种去污除菌的衣物洗涤剂 |
| JP2019523311A (ja) | 2016-05-20 | 2019-08-22 | ステパン カンパニー | 洗濯洗剤のためのポリエーテルアミン組成物 |
| BR112018076803B1 (pt) | 2016-07-01 | 2022-05-03 | International Flavors & Fragrances Inc | Composição estável de microcápsula, e, produto de consumo |
| EP3275985A1 (en) | 2016-07-26 | 2018-01-31 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| EP3275986B1 (en) | 2016-07-26 | 2020-07-08 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| EP3275989A1 (en) | 2016-07-26 | 2018-01-31 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| EP3275988B1 (en) | 2016-07-26 | 2020-07-08 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| EP3275987A1 (en) | 2016-07-26 | 2018-01-31 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| ES2950434T3 (es) | 2016-09-16 | 2023-10-10 | Int Flavors & Fragrances Inc | Composiciones de microcápsula estabilizadas con agentes de control de la viscosidad |
| US20180085291A1 (en) | 2016-09-28 | 2018-03-29 | International Flavors & Fragrances Inc. | Microcapsule compositions containing amino silicone |
| JP6790257B2 (ja) | 2016-11-01 | 2020-11-25 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニーＴｈｅ Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ | 洗濯ケア組成物における青味剤としてのロイコ着色剤、その包装、キット及び方法 |
| US10851329B2 (en) | 2016-11-01 | 2020-12-01 | Milliken & Company | Leuco colorants as bluing agents in laundry care compositions |
| CN109890950A (zh) | 2016-11-01 | 2019-06-14 | 宝洁公司 | 衣物洗涤护理组合物中作为上蓝剂的隐色着色剂 |
| US20180119056A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-03 | Milliken & Company | Leuco Triphenylmethane Colorants As Bluing Agents in Laundry Care Compositions |
| US10577571B2 (en) | 2016-11-08 | 2020-03-03 | Ecolab Usa Inc. | Non-aqueous cleaner for vegetable oil soils |
| US10758462B2 (en) | 2016-11-16 | 2020-09-01 | Colgate-Palmolive Company | Oral care composition |
| EP3532168A1 (en) * | 2016-11-16 | 2019-09-04 | Colgate-Palmolive Company | Oral care composition |
| CN110088261B (zh) | 2016-12-02 | 2022-05-06 | 宝洁公司 | 包含酶的清洁组合物 |
| US10550443B2 (en) | 2016-12-02 | 2020-02-04 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions including enzymes |
| CN110023476B (zh) | 2016-12-02 | 2021-07-06 | 宝洁公司 | 包含酶的清洁组合物 |
| BR112019011999B1 (pt) | 2016-12-15 | 2022-11-08 | Unilever Ip Holdings B.V | Composição de detergente líquida aquosa para lavagem de roupas e método doméstico de tratamento de um tecido |
| EP3339423A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-27 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| US11697906B2 (en) | 2017-01-27 | 2023-07-11 | The Procter & Gamble Company | Active agent-containing articles and product-shipping assemblies for containing the same |
| US11697905B2 (en) | 2017-01-27 | 2023-07-11 | The Procter & Gamble Company | Active agent-containing articles that exhibit consumer acceptable article in-use properties |
| US11697904B2 (en) | 2017-01-27 | 2023-07-11 | The Procter & Gamble Company | Active agent-containing articles that exhibit consumer acceptable article in-use properties |
| WO2018140472A1 (en) | 2017-01-27 | 2018-08-02 | The Procter & Gamble Company | Active agent-containing articles that exhibit consumer acceptable article in-use properties |
| EP3357994B1 (en) | 2017-02-01 | 2023-11-01 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions comprising amylase variants |
| US20180346648A1 (en) | 2017-05-30 | 2018-12-06 | International Flavors & Fragrances Inc. | Branched polyethyleneimine microcapsules |
| WO2019008036A1 (en) | 2017-07-07 | 2019-01-10 | Unilever Plc | WHITENING COMPOSITION |
| EP3649221B8 (en) | 2017-07-07 | 2024-05-29 | Unilever IP Holdings B.V. | Laundry cleaning composition |
| US10717950B2 (en) | 2017-10-12 | 2020-07-21 | The Procter & Gamble Company | Leuco colorants as bluing agents in laundry care composition |
| CA3075090A1 (en) | 2017-10-12 | 2019-04-18 | The Procter & Gamble Company | Leuco colorants as bluing agents in laundry care compositions |
| TWI715878B (zh) | 2017-10-12 | 2021-01-11 | 美商美力肯及公司 | 隱色著色劑及組成物 |
| US10731112B2 (en) | 2017-10-12 | 2020-08-04 | The Procter & Gamble Company | Leuco colorants in combination with a second whitening agent as bluing agents in laundry care compositions |
| US11053392B2 (en) | 2017-11-01 | 2021-07-06 | Milliken & Company | Leuco compounds, colorant compounds, and compositions containing the same |
| BR112020010648A2 (pt) | 2017-11-30 | 2021-02-02 | Unilever N.V. | composição detergente, composição detergente de lavanderia, método para aprimorar limpeza enzimática em água e uso de uma enzima protease |
| EP3502246A1 (en) | 2017-12-19 | 2019-06-26 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| EP3502244A1 (en) | 2017-12-19 | 2019-06-26 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| EP3502245A1 (en) | 2017-12-19 | 2019-06-26 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| EP3502227B1 (en) | 2017-12-19 | 2024-09-04 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| CN111556891B (zh) | 2018-01-26 | 2021-11-05 | 宝洁公司 | 包含酶的水溶性单位剂量制品 |
| EP3533859A1 (en) | 2018-02-28 | 2019-09-04 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions |
| CA3089284A1 (en) | 2018-02-28 | 2019-09-06 | The Procter & Gamble Company | Methods of cleaning using a glycogen debranching enzyme |
| WO2019219531A1 (en) | 2018-05-17 | 2019-11-21 | Unilever Plc | Cleaning composition |
| EP3810743B1 (en) | 2018-06-15 | 2024-03-13 | Ecolab USA Inc. | Enhanced peroxygen stability using fatty acid in bleach activating agent containing peroxygen solid |
| EP3810769A1 (en) | 2018-06-19 | 2021-04-28 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| WO2019245838A1 (en) | 2018-06-19 | 2019-12-26 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| CN110713866B (zh) * | 2018-07-13 | 2022-05-03 | 花王株式会社 | 衣料用液体洗涤剂组合物 |
| US20200032178A1 (en) | 2018-07-27 | 2020-01-30 | The Procter & Gamble Company | Water-soluble unit dose articles comprising water-soluble fibrous structures and particles |
| BR112021004507A2 (pt) | 2018-09-17 | 2021-06-08 | Unilever Ip Holdings B.V. | composição detergente, método de tratamento de um substrato com uma composição detergente e uso de uma enzima lipase bacteriana |
| CN113015781B (zh) | 2018-11-20 | 2022-09-13 | 联合利华知识产权控股有限公司 | 洗涤剂组合物 |
| BR112021009828A2 (pt) | 2018-11-20 | 2021-08-17 | Unilever Ip Holdings B.V. | composição detergente líquida, método de tratamento de um substrato de tecido e uso de uma enzima esterol esterase |
| BR112021009789A2 (pt) | 2018-11-20 | 2021-08-17 | Unilever Ip Holdings B.V. | composição detergente, método de tratamento de um substrato de tecido e uso de uma enzima esterase |
| CN113166689A (zh) | 2018-11-20 | 2021-07-23 | 联合利华知识产权控股有限公司 | 洗涤剂组合物 |
| CN113056549B (zh) | 2018-11-20 | 2023-03-10 | 联合利华知识产权控股有限公司 | 洗涤剂组合物 |
| CN113166680A (zh) | 2018-12-14 | 2021-07-23 | 宝洁公司 | 包含颗粒的发泡纤维结构及其制备方法 |
| WO2020131855A1 (en) | 2018-12-18 | 2020-06-25 | International Flavors & Fragrances Inc. | Guar gum microcapsules |
| CA3127167A1 (en) | 2019-03-14 | 2020-09-17 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions comprising enzymes |
| JP7275298B2 (ja) | 2019-03-14 | 2023-05-17 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | 酵素を含むクリーニング組成物 |
| EP3938503A1 (en) | 2019-03-14 | 2022-01-19 | The Procter & Gamble Company | Method for treating cotton |
| WO2020229535A1 (en) | 2019-05-16 | 2020-11-19 | Unilever Plc | Laundry composition |
| EP3741283A1 (en) | 2019-05-22 | 2020-11-25 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing method |
| EP3976775A1 (en) | 2019-05-24 | 2022-04-06 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
| WO2020264552A1 (en) | 2019-06-24 | 2020-12-30 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions comprising amylase variants |
| CN113891930A (zh) | 2019-06-28 | 2022-01-04 | 联合利华知识产权控股有限公司 | 洗涤剂组合物 |
| US20220372397A1 (en) | 2019-06-28 | 2022-11-24 | Conopco, Inc., D/B/A Unilever | Detergent composition |
| CN113906124B (zh) | 2019-06-28 | 2024-08-02 | 联合利华知识产权控股有限公司 | 洗涤剂组合物 |
| EP3990604B1 (en) | 2019-06-28 | 2022-12-14 | Unilever Global IP Limited | Detergent composition |
| EP3990603B1 (en) | 2019-06-28 | 2022-12-07 | Unilever Global Ip Limited | Detergent composition |
| WO2020260006A1 (en) | 2019-06-28 | 2020-12-30 | Unilever Plc | Detergent compositions |
| US11891588B2 (en) | 2019-07-31 | 2024-02-06 | Ecolab Usa Inc. | Personal protective equipment free delimer compositions o |
| US11873465B2 (en) | 2019-08-14 | 2024-01-16 | Ecolab Usa Inc. | Methods of cleaning and soil release of highly oil absorbing substrates employing optimized extended chain nonionic surfactants |
| BR112022003050A2 (pt) | 2019-09-02 | 2022-05-17 | Unilever Ip Holdings B V | Composição detergente de lavagem de roupas aquosa e método doméstico para tratar um tecido |
| CN114423851A (zh) | 2019-09-19 | 2022-04-29 | 联合利华知识产权控股有限公司 | 洗涤剂组合物 |
| AR120142A1 (es) | 2019-10-07 | 2022-02-02 | Unilever Nv | Composición detergente |
| US11492571B2 (en) | 2019-10-24 | 2022-11-08 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition comprising a protease |
| US20210122998A1 (en) | 2019-10-24 | 2021-04-29 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition comprising an amylase |
| US20210148044A1 (en) | 2019-11-15 | 2021-05-20 | The Procter & Gamble Company | Graphic-Containing Soluble Articles and Methods for Making Same |
| EP3835396A1 (en) | 2019-12-09 | 2021-06-16 | The Procter & Gamble Company | A detergent composition comprising a polymer |
| WO2021151536A1 (en) | 2020-01-29 | 2021-08-05 | Unilever Ip Holdings B.V. | Laundry detergent product |
| EP3862412A1 (en) | 2020-02-04 | 2021-08-11 | The Procter & Gamble Company | Detergent composition |
| EP4162016A1 (en) | 2020-06-05 | 2023-04-12 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions containing a branched surfactant |
| BR112022024537A2 (pt) | 2020-06-08 | 2022-12-27 | Unilever Ip Holdings B V | Método de aprimoramento da atividade de protease em uma composição detergente e uso de saponina |
| US20220000757A1 (en) | 2020-07-06 | 2022-01-06 | Ecolab Usa Inc. | Foaming mixed alcohol/water compositions comprising a combination of alkyl siloxane and a hydrotrope/solubilizer |
| WO2022010906A1 (en) | 2020-07-06 | 2022-01-13 | Ecolab Usa Inc. | Peg-modified castor oil based compositions for microemulsifying and removing multiple oily soils |
| JP2023534927A (ja) | 2020-07-06 | 2023-08-15 | エコラボ ユーエスエー インコーポレイティド | 構造化アルコキシル化シロキサンを含む起泡性アルコール／水混合組成物 |
| JP2023536081A (ja) | 2020-08-04 | 2023-08-23 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | 自動食器洗浄方法 |
| CN116096846A (zh) | 2020-08-04 | 2023-05-09 | 宝洁公司 | 自动盘碟洗涤方法 |
| CA3187735A1 (en) | 2020-08-04 | 2022-02-10 | Nina Elizabeth GRAY | Automatic dishwashing method and pack |
| WO2022031309A1 (en) | 2020-08-04 | 2022-02-10 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing method |
| WO2022043042A1 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-03 | Unilever Ip Holdings B.V. | Detergent composition |
| US20230287300A1 (en) | 2020-08-28 | 2023-09-14 | Conopco, Inc., D/B/A Unilever | Surfactant and detergent composition |
| CN116018396A (zh) | 2020-08-28 | 2023-04-25 | 联合利华知识产权控股有限公司 | 洗涤剂组合物 |
| EP4204526B1 (en) | 2020-08-28 | 2024-04-24 | Unilever IP Holdings B.V. | Surfactant and detergent composition |
| WO2022042977A1 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-03 | Unilever Ip Holdings B.V. | Detergent composition |
| US20230392018A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-12-07 | Milliken & Company | Compositions comprising leuco compounds and colorants |
| JP7568839B2 (ja) | 2020-10-29 | 2024-10-16 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | アルギナーゼ酵素を含有する洗浄組成物 |
| EP4001388A1 (en) | 2020-11-17 | 2022-05-25 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing method with amphiphilic graft polymer in the rinse |
| WO2022108766A1 (en) | 2020-11-17 | 2022-05-27 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing composition comprising amphiphilic graft polymer |
| JP2023547853A (ja) | 2020-11-17 | 2023-11-14 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | アルカリ性すすぎによる自動食器洗浄方法 |
| EP4006131A1 (en) | 2020-11-30 | 2022-06-01 | The Procter & Gamble Company | Method of laundering fabric |
| US20240010951A1 (en) | 2020-12-07 | 2024-01-11 | Conopco Inc., D/B/A Unilever | Detergent compositions |
| EP4256020A1 (en) | 2020-12-07 | 2023-10-11 | Unilever IP Holdings B.V. | Detergent compositions |
| WO2023225459A2 (en) | 2022-05-14 | 2023-11-23 | Novozymes A/S | Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections |
| JP2023551014A (ja) | 2020-12-23 | 2023-12-06 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 両親媒性アルコキシル化ポリアミン及びそれらの使用 |
| JP2023548846A (ja) | 2021-03-15 | 2023-11-21 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | ポリペプチドバリアントを含有する洗浄組成物 |
| MX2023012548A (es) | 2021-05-05 | 2023-11-03 | Procter & Gamble | Metodos para elaborar composiciones de limpieza y detectar suciedades. |
| EP4086330A1 (en) | 2021-05-06 | 2022-11-09 | The Procter & Gamble Company | Surface treatment |
| US20240247209A1 (en) | 2021-05-18 | 2024-07-25 | Nouryon Chemicals International B.V. | Polyester polyquats in cleaning applications |
| US20240158557A1 (en) | 2021-05-20 | 2024-05-16 | Nouryon Chemicals International B.V. | Manufactured polymers having altered oligosaccharide or polysaccharide functionality or narrowed oligosaccharide distribution, processes for preparing them, compositions containing them, and methods of using them |
| EP4108767A1 (en) | 2021-06-22 | 2022-12-28 | The Procter & Gamble Company | Cleaning or treatment compositions containing nuclease enzymes |
| WO2023275269A1 (en) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Nouryon Chemicals International B.V. | Chelate-amphoteric surfactant liquid concentrates and use thereof in cleaning applications |
| EP4123006A1 (en) | 2021-07-19 | 2023-01-25 | The Procter & Gamble Company | Composition comprising spores and pro-perfume materials |
| EP4123007A1 (en) | 2021-07-19 | 2023-01-25 | The Procter & Gamble Company | Fabric treatment using bacterial spores |
| EP4124383A1 (en) | 2021-07-27 | 2023-02-01 | International Flavors & Fragrances Inc. | Biodegradable microcapsules |
| CA3228918A1 (en) | 2021-08-10 | 2023-02-16 | Nippon Shokubai Co., Ltd. | Polyalkylene-oxide-containing compound |
| WO2023041694A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-23 | Unilever Ip Holdings B.V. | Detergent composition |
| EP4154974A1 (en) | 2021-09-23 | 2023-03-29 | International Flavors & Fragrances Inc. | Biodegradable microcapsules |
| WO2023057367A1 (en) | 2021-10-08 | 2023-04-13 | Unilever Ip Holdings B.V. | Laundry composition |
| EP4416255A1 (en) | 2021-10-14 | 2024-08-21 | The Procter & Gamble Company | A fabric and home care product comprising cationic soil release polymer and lipase enzyme |
| EP4194536A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | The Procter & Gamble Company | Laundry treatment cartridge |
| EP4194537A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | The Procter & Gamble Company | Laundry treatment cartridge |
| WO2023114794A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | The Procter & Gamble Company | Fabric and home care composition comprising a protease |
| EP4448707A1 (en) | 2021-12-16 | 2024-10-23 | The Procter & Gamble Company | Home care composition |
| US20240166973A1 (en) | 2021-12-16 | 2024-05-23 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing composition comprising a protease |
| CN118369413A (zh) | 2021-12-16 | 2024-07-19 | 宝洁公司 | 包含淀粉酶的家庭护理组合物 |
| EP4212239A1 (en) | 2022-01-14 | 2023-07-19 | International Flavors & Fragrances Inc. | Biodegradable prepolymer microcapsules |
| EP4273210A1 (en) | 2022-05-04 | 2023-11-08 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions containing enzymes |
| EP4273209A1 (en) | 2022-05-04 | 2023-11-08 | The Procter & Gamble Company | Machine-cleaning compositions containing enzymes |
| EP4279571A1 (en) | 2022-05-19 | 2023-11-22 | The Procter & Gamble Company | Laundry composition comprising spores |
| WO2023227421A1 (en) | 2022-05-27 | 2023-11-30 | Unilever Ip Holdings B.V. | Laundry liquid composition comprising a surfactant, an alkoxylated zwitterionic polyamine polymer, and a fragrance |
| WO2023227332A1 (en) | 2022-05-27 | 2023-11-30 | Unilever Ip Holdings B.V. | Laundry liquid composition comprising a surfactant, an alkoxylated zwitterionic polyamine polymer and a protease |
| WO2023227335A1 (en) | 2022-05-27 | 2023-11-30 | Unilever Ip Holdings B.V. | Liquid composition comprising linear alkyl benzene sulphonate, methyl ester ethoxylate and alkoxylated zwitterionic polyamine polymer |
| WO2023227356A1 (en) | 2022-05-27 | 2023-11-30 | Unilever Ip Holdings B.V. | Composition containing enzyme |
| WO2023227331A1 (en) | 2022-05-27 | 2023-11-30 | Unilever Ip Holdings B.V. | Composition comprising a specific methyl ester ethoxylate surfactant and a lipase |
| WO2023227375A1 (en) | 2022-05-27 | 2023-11-30 | Unilever Ip Holdings B.V. | Laundry liquid composition comprising a surfactant, an aminocarboxylate, an organic acid and a fragrance |
| WO2023233025A1 (en) | 2022-06-03 | 2023-12-07 | Unilever Ip Holdings B.V. | Liquid detergent product |
| US20240026248A1 (en) | 2022-07-20 | 2024-01-25 | Ecolab Usa Inc. | Novel nonionic extended surfactants, compositions and methods of use thereof |
| EP4321604A1 (en) | 2022-08-08 | 2024-02-14 | The Procter & Gamble Company | A fabric and home care composition comprising surfactant and a polyester |
| WO2024056333A1 (en) | 2022-09-13 | 2024-03-21 | Unilever Ip Holdings B.V. | Washing machine and washing method |
| WO2024056332A1 (en) | 2022-09-13 | 2024-03-21 | Unilever Ip Holdings B.V. | Washing machine and washing method |
| WO2024056278A1 (en) | 2022-09-13 | 2024-03-21 | Unilever Ip Holdings B.V. | Washing machine and washing method |
| WO2024056334A1 (en) | 2022-09-13 | 2024-03-21 | Unilever Ip Holdings B.V. | Washing machine and washing method |
| EP4349943A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-10 | Unilever IP Holdings B.V. | Laundry liquid composition |
| EP4349947A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-10 | Unilever IP Holdings B.V. | Laundry liquid composition |
| EP4349946A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-10 | Unilever IP Holdings B.V. | Unit dose fabric treatment product |
| EP4349948A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-10 | Unilever IP Holdings B.V. | Laundry liquid composition |
| EP4349945A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-10 | Unilever IP Holdings B.V. | Laundry liquid composition |
| EP4349944A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-10 | Unilever IP Holdings B.V. | Laundry liquid composition |
| EP4349942A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-10 | Unilever IP Holdings B.V. | Laundry liquid composition |
| EP4361239A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-01 | Unilever IP Holdings B.V. | Laundry liquid composition |
| WO2024088716A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Unilever Ip Holdings B.V. | Composition |
| WO2024088706A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Unilever Ip Holdings B.V. | Composition |
| WO2024094802A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | The Procter & Gamble Company | Fabric and home care composition |
| WO2024094803A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | The Procter & Gamble Company | Fabric and home care composition |
| WO2024094790A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Clariant International Ltd | Polyesters |
| WO2024115106A1 (en) | 2022-11-29 | 2024-06-06 | Unilever Ip Holdings B.V. | Composition |
| WO2024119298A1 (en) | 2022-12-05 | 2024-06-13 | The Procter & Gamble Company | Fabric and home care composition comprising a polyalkylenecarbonate compound |
| WO2024129520A1 (en) | 2022-12-12 | 2024-06-20 | The Procter & Gamble Company | Fabric and home care composition |
| EP4386074A1 (en) | 2022-12-16 | 2024-06-19 | The Procter & Gamble Company | Fabric and home care composition |
| EP4388967A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-26 | The Procter & Gamble Company | Dishwashing method |
| EP4406641A1 (en) | 2023-01-26 | 2024-07-31 | International Flavors & Fragrances Inc. | Biodegradable microcapsules containing low log p fragrance |
| US20240263162A1 (en) | 2023-02-01 | 2024-08-08 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions containing enzymes |
| WO2024183958A1 (en) | 2023-03-09 | 2024-09-12 | Norfalk Aps | Use of mono-ester glycolipids in laundry detergents |
| WO2024194190A1 (en) | 2023-03-17 | 2024-09-26 | Unilever Ip Holdings B.V. | Composition |
| WO2024193937A1 (en) | 2023-03-17 | 2024-09-26 | Unilever Ip Holdings B.V. | Machine dishwash filter cleaner |
| WO2024194098A1 (en) | 2023-03-21 | 2024-09-26 | Unilever Ip Holdings B.V. | Detergent unit dose |
| EP4446411A1 (en) | 2023-04-14 | 2024-10-16 | Peaccel | Variant subtilisin proteases |
| CN118530926A (zh) * | 2024-02-05 | 2024-08-23 | 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 | 一种提高淀粉酶活性的解淀粉芽孢杆菌工程菌及其应用 |
Family Cites Families (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US34606A (en) * | 1862-03-04 | Improvement in machines for combing cotton | ||
| US4760025A (en) * | 1984-05-29 | 1988-07-26 | Genencor, Inc. | Modified enzymes and methods for making same |
| US5155033A (en) * | 1989-01-06 | 1992-10-13 | Genencor, Inc. | Subtilisins modified at position 225 resulting in a shift in catalytic activity |
| US5185258A (en) * | 1984-05-29 | 1993-02-09 | Genencor International, Inc. | Subtilisin mutants |
| US5182204A (en) * | 1984-05-29 | 1993-01-26 | Genencor International, Inc. | Non-human carbonyl hydrolase mutants, vectors encoding same and hosts transformed with said vectors |
| US5204015A (en) * | 1984-05-29 | 1993-04-20 | Genencor International, Inc. | Subtilisin mutants |
| US4634551A (en) * | 1985-06-03 | 1987-01-06 | Procter & Gamble Company | Bleaching compounds and compositions comprising fatty peroxyacids salts thereof and precursors therefor having amide moieties in the fatty chain |
| US4990452A (en) * | 1986-02-12 | 1991-02-05 | Genex Corporation | Combining mutations for stabilization of subtilisin |
| US5013657A (en) * | 1988-04-12 | 1991-05-07 | Bryan Philip N | Subtilisin mutations |
| EP0251446B1 (en) * | 1986-04-30 | 1994-12-28 | Genencor International, Inc. | Non-human Carbonyl hydrolase mutants, DNA sequences and vectors encoding same and hosts transformed with said vectors |
| US4686063A (en) * | 1986-09-12 | 1987-08-11 | The Procter & Gamble Company | Fatty peroxyacids or salts thereof having amide moieties in the fatty chain and low levels of exotherm control agents |
| US5260207A (en) * | 1987-04-06 | 1993-11-09 | Enzon Labs Inc. | Engineering of electrostatic interactions at metal ion binding sites for the stabilization of proteins |
| ATE371029T1 (de) * | 1987-04-06 | 2007-09-15 | Novozymes As | Regelung von elektrostatischen interaktionen an metallionen-bindungsstellen zur stabilisierung von proteinen |
| US4914031A (en) * | 1987-04-10 | 1990-04-03 | Amgen, Inc. | Subtilisin analogs |
| DK571587D0 (da) * | 1987-11-02 | 1987-11-02 | Novo Industri As | Enzymatisk detergentsammensaetning |
| DK6488D0 (da) * | 1988-01-07 | 1988-01-07 | Novo Industri As | Enzymer |
| US4844821A (en) * | 1988-02-10 | 1989-07-04 | The Procter & Gamble Company | Stable liquid laundry detergent/fabric conditioning composition |
| PT89702B (pt) * | 1988-02-11 | 1994-04-29 | Gist Brocades Nv | Processo para a preparacao de novos enzimas proteoliticos e de detergentes que os contem |
| GB8803114D0 (en) * | 1988-02-11 | 1988-03-09 | Bp Chem Int Ltd | Bleach activators in detergent compositions |
| US5324653A (en) * | 1988-02-11 | 1994-06-28 | Gist-Brocades N.V. | Recombinant genetic means for the production of serine protease muteins |
| US5116741A (en) * | 1988-04-12 | 1992-05-26 | Genex Corporation | Biosynthetic uses of thermostable proteases |
| GB8810954D0 (en) * | 1988-05-09 | 1988-06-15 | Unilever Plc | Enzymatic detergent & bleaching composition |
| US5118623A (en) * | 1988-05-27 | 1992-06-02 | Solvay Enzymes, Inc. | Bleach stable enzymes |
| AU618675B2 (en) * | 1989-05-17 | 1992-01-02 | Amgen, Inc. | Multiply mutated subtilisins |
| EP0405902A1 (en) * | 1989-06-26 | 1991-01-02 | Unilever Plc | Enymatic detergent compositions |
| JPH04500385A (ja) * | 1989-06-26 | 1992-01-23 | ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシヤープ | 酵素洗剤組成物 |
| DK316989D0 (da) * | 1989-06-26 | 1989-06-26 | Novo Nordisk As | Enzymer |
| JPH0372876A (ja) * | 1989-08-11 | 1991-03-28 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 新規アルカリ性プロテアーゼ |
| DK271490D0 (da) * | 1990-11-14 | 1990-11-14 | Novo Nordisk As | Detergentkomposition |
| EP0563169B2 (en) * | 1990-12-21 | 2006-04-12 | Novozymes A/S | ENZYME MUTANTS HAVING A LOW DEGREE OF VARIATION OF THE MOLECULAR CHARGE OVER A pH RANGE |
| DE69226182T2 (de) * | 1991-05-01 | 1999-01-21 | Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd | Stabilisierte enzyme und waschmittelzusammensetzungen |
| DE69212390T2 (de) * | 1991-05-01 | 1997-01-09 | Unilever Nv | Stabilisierte Enzyme enthaltende Waschmittelzusammensetzungen |
| US5340735A (en) * | 1991-05-29 | 1994-08-23 | Cognis, Inc. | Bacillus lentus alkaline protease variants with increased stability |
| AU682314B2 (en) * | 1992-07-17 | 1997-10-02 | Genencor International, Inc. | High alkaline serine proteases |
| BR9307300A (pt) * | 1992-10-23 | 1999-06-01 | Procter & Gamble | Detergentes granulares com enzima protease e alvejante |
| DK39093D0 (da) * | 1993-04-01 | 1993-04-01 | Novo Nordisk As | Enzym |
| US5505938A (en) * | 1993-09-30 | 1996-04-09 | Lever Brothers Company, Division Of Conopco, Inc. | Straight chain saturated or unsaturated C8 -C18 alkyl aldonolactone esters and an enzymatic process for their preparation |
| US5679630A (en) * | 1993-10-14 | 1997-10-21 | The Procter & Gamble Company | Protease-containing cleaning compositions |
| MA23346A1 (fr) * | 1993-10-14 | 1995-04-01 | Genencor Int | Variantes de la subtilisine |
| CZ105296A3 (en) * | 1993-10-14 | 1996-09-11 | Procter & Gamble | Bleaching agent containing protease enzymes, cleansing agents, agent for cleaning fabrics and fabric cleaning method |
| ATE170550T1 (de) * | 1993-11-03 | 1998-09-15 | Procter & Gamble | Kalziumkarbonatabsetzungskontrolle in geschirrspuelmaschinen |
| EP0726935B1 (en) * | 1993-11-03 | 2000-08-30 | The Procter & Gamble Company | Control of calcium carbonate precipitation in automatic dishwashing |
| US5686015A (en) * | 1994-08-31 | 1997-11-11 | The Procter & Gamble Company | Quaternary substituted bleach activators |
| US5578136A (en) * | 1994-08-31 | 1996-11-26 | The Procter & Gamble Company | Automatic dishwashing compositions comprising quaternary substituted bleach activators |
| US5460747A (en) * | 1994-08-31 | 1995-10-24 | The Procter & Gamble Co. | Multiple-substituted bleach activators |
| ES2144649T3 (es) * | 1994-11-18 | 2000-06-16 | Procter & Gamble | Composiciones detergentes que contienen lipasa y proteasa. |
| DE69739020D1 (de) * | 1996-11-04 | 2008-11-13 | Novozymes As | Subtilase varianten und verbindungen |
| KR100561826B1 (ko) * | 1996-11-04 | 2006-03-16 | 노보자임스 에이/에스 | 섭틸라제 변종과 조성물 |
-
1994
- 1994-10-13 US US08/322,676 patent/US5679630A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-13 CA CA002173105A patent/CA2173105C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-13 DE DE69434962T patent/DE69434962T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-13 JP JP7512131A patent/JP2888985B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-13 CZ CZ961053A patent/CZ105396A3/cs unknown
- 1994-10-13 WO PCT/US1994/011776 patent/WO1995010591A1/en active IP Right Grant
- 1994-10-13 HU HU9600960A patent/HU219851B/hu unknown
- 1994-10-13 AU AU80797/94A patent/AU8079794A/en not_active Abandoned
- 1994-10-13 BR BR9407834A patent/BR9407834A/pt not_active IP Right Cessation
- 1994-10-13 EP EP94931872A patent/EP0723579B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-13 AT AT94931872T patent/ATE361355T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-10-13 ES ES94931872T patent/ES2287931T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-13 CN CN94194485A patent/CN1082999C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-01-18 TW TW084100416A patent/TW306931B/zh active
-
1997
- 1997-07-22 US US08/898,218 patent/US6017871A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-10-27 JP JP30591498A patent/JP3776244B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69434962T2 (de) | 2008-01-17 |
| JP3776244B2 (ja) | 2006-05-17 |
| BR9407834A (pt) | 1997-05-13 |
| HUT75984A (en) | 1997-05-28 |
| US5679630A (en) | 1997-10-21 |
| CN1137289A (zh) | 1996-12-04 |
| ES2287931T3 (es) | 2007-12-16 |
| JP2888985B2 (ja) | 1999-05-10 |
| WO1995010591A1 (en) | 1995-04-20 |
| US6017871A (en) | 2000-01-25 |
| JPH09505841A (ja) | 1997-06-10 |
| HU9600960D0 (en) | 1996-06-28 |
| EP0723579A1 (en) | 1996-07-31 |
| JPH11246895A (ja) | 1999-09-14 |
| CN1082999C (zh) | 2002-04-17 |
| AU8079794A (en) | 1995-05-04 |
| TW306931B (cs) | 1997-06-01 |
| CA2173105C (en) | 2003-05-27 |
| EP0723579B1 (en) | 2007-05-02 |
| CA2173105A1 (en) | 1995-04-20 |
| DE69434962D1 (de) | 2007-06-14 |
| ATE361355T1 (de) | 2007-05-15 |
| HU219851B (hu) | 2001-08-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ105396A3 (en) | Cleaning agent, agent for cleaning fabrics, agent for washing dishes, washing agent, method of cleaning fabrics, method of washing dishes and washing process | |
| JP2888986B2 (ja) | プロテアーゼ酵素を含んでなる漂白組成物 | |
| CA2189427C (en) | Subtilisin 309 variants having decreased adsorption and increased hydrolysis | |
| US6436690B1 (en) | BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted | |
| US6455295B1 (en) | Subtilisin Carlsberg variants having decreased adsorption and increased hydrolysis | |
| KR100344976B1 (ko) | 서브틸리신변종 | |
| ES2310014T5 (es) | Composiciones de limpieza que contienen variantes de proteasas multiplemente substituidas. | |
| CA2170491C (en) | Subtilisin bpn' variants with decreased adsorption and increased hydrolysis | |
| US6451574B1 (en) | Proteinase K variants having decreased adsorption and increased hydrolysis | |
| US6475765B1 (en) | Subtilisin DY variants having decreased adsorption and increased hydrolysis | |
| WO1996028558A9 (en) | Thermitase variants having decreased adsorption and increased hydrolysis | |
| CA2214578A1 (en) | Thermitase variants having decreased adsorption and increased hydrolysis | |
| US6440717B1 (en) | BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |