CN105796530A

CN105796530A - 用于降低甲状旁腺水平的方法和组合物

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Publication number: CN105796530A
Application number: CN201610091288.7A
Authority: CN
Inventors: 萨米尔·P·塔巴什; 查理斯·W·比绍夫; 乔尔·Z·梅尔尼克; 埃里克·J·梅斯纳; 马丁·P·佩特科维奇; 杰伊·A·怀特
Original assignee: Cytochroma Inc; Opko Renal LLC
Current assignee: Cytochroma Inc; Opko Renal LLC
Priority date: 2010-03-29
Filing date: 2011-03-29
Publication date: 2016-07-27
Also published as: LT2552484T; EP2552484A1; KR102125424B1; EP3636280A1; US20130137663A1; PL2552484T3; WO2011123476A1; CY1123095T1; KR20130038253A; US20230346804A1; HK1222132A1; SI2552484T1; CN103037902A; CA2797537A1; HUE048464T2; RS60087B1; EP2552484A4; ES2783980T3; HRP20200577T1; CA2797537C

Abstract

公开了在例如慢性肾病患者中，用于降低血清甲状旁腺水平的方法和组合物。在这些方法中，有效量的25?羟基维生素D的缓释制剂口服给药给患继发性甲状旁腺功能亢进的患者，以在避免血清总25?羟基维生素D的激增同时，降低患者的血清全段甲状旁腺激素(iPTH)的水平。

Description

用于降低甲状旁腺水平的方法和组合物

本申请是优先权日为2010年3月29日，国际申请日为2011年3月29日，国际申请号为PCT/US2011/030404，进入中国国家阶段日期为2012年11月15日，国家申请号为201180024227.4，发明名称为“用于降低甲状旁腺水平的方法和组合物”的发明专利申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

根据35 U.S.C.§119(e)，特此要求于2010年3月29日递交的美国临时专利申请61/318,741号和2010年10月20日递交61/405,196号的权益，其公开通过引用合并于此。

技术领域

本公开广泛地涉及用于降低例如慢性肾病患者的血清甲状旁腺水平的方法和组合物。更具体地，本发明涉及包含用于口服给药的25-羟基维生素D的控释制剂的方法和组合物。

背景技术

维生素D₃和维生素D₂(共同称作“维生素D”)为维生素D激素原的脂溶性开环甾体前体。被称为25-羟基维生素D₂和25-羟基维生素D₃(此处共同称为“25-羟基维生素D”)的维生素D的代谢物为维生素D激素的脂溶性类固醇前体，它们有助于维持血流中钙和磷的正常水平。

维生素D₃和维生素D₂通常在人类血液中稳定并以低浓度存在。由于未作补充的饮食，即使包含了补充维生素D的食物，都具有低维生素D含量，因此饭后维生素D的血液水平如果增加也只有轻微的增加。几乎所有的人类的维生素D供给都来自增富食品、暴露于阳光下或来自膳食补充品，其中后面的来源变得日益重要。由于皮肤的7-脱氢胆固醇被紫外(UV)辐射改性为前维生素D₃，而前维生素D₃在血液中循环前要在皮肤中经历几天的周期以被热转变成维生素D₃，所以暴露于阳光后血液维生素D的水平如果上升，也仅仅会逐渐上升。相反，例如目前可得到的补品确实导致管腔内、血液和细胞内维生素D水平与给药剂量成比例的迅速和显著的增加。

维生素D₃和维生素D₂都通过主要位于人体的肝脏中的酶代谢成激素原。维生素D₃代谢成激素原25-羟基维生素D₃，而维生素D₂代谢成两个激素原，25-羟基维生素D₂和24(S)-羟基维生素D₂。维生素D₃和维生素D₂还可在肝脏外部的某些细胞，例如肠上皮细胞中，被与在肝脏中发现的酶相同或相似的酶代谢成激素原。任一前体上升的浓度都增加了激素原生成；相似地，降低的前体浓度减少了激素的生成。维生素D₃和/或维生素D₂(“维生素D₃/维生素D₂”)血液水平的激增可暂时提高细胞内的维生素D浓度，加速激素原的产生并提高细胞内和血液的激素原浓度。维生素D₃和/或维生素D₂血液水平的激增还可使生产激素原的酶饱和，造成过量的维生素D被分解代谢或分流到脂肪组织中的长期储存。由于局部的分解代谢，脂肪组织储存的维生素D不太可能用于在将来被转化成激素原。摄食目前的口服补品后维生素D在肠内水平的激增直接提高维生素D和激素原在局部肠上皮细胞中的浓度，从而在小肠中对钙和磷的代谢发挥“第一通道”的作用。

维生素D激素原在肾中被进一步代谢成有效的激素。激素原25-羟基维生素D₃被代谢成激素1α,25-二羟基维生素D₃(或骨化三醇)；同样，25-羟基维生素D₂和24(S)-羟基维生素D₂分别代谢成被称为1α,25-二羟基维生素D₂和1α,24(S)-二羟基维生素D₂的激素。由激素原产生这些激素同样可发生在肾脏外部包含所需的酶的细胞中。

血液或细胞内激素原浓度的激增可促进过量肾外激素产生，导致钙和磷代谢的局部不利效果。这样的激增同样可抑制由后来补充维生素D产生肝脏激素原，并促进肾和其它组织中维生素D和25-羟基维生素D的分解代谢。

健康人在一天中的血液维生素D激素浓度通常保持不变，但是相应于阳光暴露随季节的变化或持续的维生素D摄入的变化，在较长的时间周期内可显著地变化。通常，假定有持续地、充足的来自阳光暴露和未补充的膳食的维生素D供应，维生素D₃、维生素D₂和三种维生素D激素原的血液水平一天中也保持不变。然而，摄服目前可得到的维生素D补品后，尤其是以大大超过预防维生素D缺乏、佝偻病或骨软化所需的剂量时，维生素D₃和维生素D₂的血液水平可显著增加。

被细胞内维生素D受体(VDR)调节的维生素D激素在人类健康中起重要的作用。尤其是，维生素D激素通过控制小肠对饮食钙的吸收和肾对钙的再吸收，调节血液钙水平。过量的激素水平可导致反常的提高的尿钙(高钙尿症)、血钙(高血钙症)和血磷(高磷血症)。维生素D激素还参与调节细胞分化和生长、由甲状旁腺分泌甲状旁腺激素(PTH)和正常骨形成和代谢。此外，维生素D激素对肌骨骼、免疫和肾素-血管紧缩素系统的正常功能来说必需。维生素D激素的许多其它功能基于文献记载的在几乎所有人类组织中的细胞内VDR存在而被假定和说明。

继发性甲状旁腺功能亢进症是主要由于维生素D不足而产生的失调。其以反常提高的血液PTH水平为特征，且在没有早期的诊断和治疗时，它变得与甲状旁腺增生和代谢性骨病的簇聚现象相关。其为慢性肾病(CKD)的常见并发症，随CKD的发展，其发生率上升。由于妨碍充足的维生素D供应的环境的、文化和饮食因素，继发性甲状旁腺功能亢进还可发生在具有健康肾的个体中。

关于继发性甲状旁腺功能亢进和其在CKD中的发生，存在近端肾单位细胞的持续损失，这是由25-羟基维生素D₃和25-羟基维生素D₂合成维生素D激素(统称“1,25-二羟维生素D”)的主要场所。此外，功能肾单位的丧失导致过量磷的滞留，这降低了肾25-羟基维生素D-1α-羟化酶的活性，该酶催化产生D激素的反应。这两个事件引起，通常在患有中等至严重CDK的患者中发现的，当维生素D供应充足时，1,25-二羟维生素D的低血清水平。

减小的1,25-二羟维生素D的血清水平通过直接或间接的机制引起PTH的分泌的增加及最终的过量。所导致的甲状旁腺功能亢进引起骨周肉变色及其后遗症肾性骨营养不良的显著增加，这可包含多种其它疾病，例如，纤维囊性骨炎、骨软化、骨质疏松症、骨骼外钙化和相关的紊乱，例如，骨疼，关节炎和Mockerberg硬化症。1,25-二羟维生素D血清水平的降低还引起肌无力和具有骨骼畸形的生长迟缓(多数常见于小儿科患者)。

1,25-二羟维生素D的血液水平通过包含PTH和维生素D激素的反馈机制精确地调节。肾1α-羟化酶(或CYP27B1)被PTH刺激和被1,25-二羟维生素D抑制。当1,25-二羟维生素D的血液水平下降时，甲状旁腺通过细胞内维生素D受体感知这个变化，并分泌PTH。分泌的PTH刺激肾CYP27B1的表达，因此，增加维生素D激素的生成。当1,25-二羟维生素D的血浓度再次上升时，甲状旁腺消弱进一步的PTH分泌。当血液PTH水平下降时，维生素D激素的肾生成下降。1,25-二羟维生素D的血液水平的上升还直接抑制了CYP27B1进一步产生维生素D激素。

在1,25-二羟维生素D的血液浓度变得过高的情况下，可能会不正常和过度地抑制PTH分泌，这可在某些紊乱中发生，例如肉瘤状病，或作为注射剂量的维生素D激素的替代治疗的结果。PTH分泌的过分抑制可引起或恶化钙动态平衡的紊乱。甲状旁腺和肾CYP27B1对维生素D激素血液浓度异常敏感，因此血清1,25-二羟维生素D被严格控制，在任何24小时的周期内上下变动小于20％。与维生素D激素的肾生成相反，肾外生成并未被精确的反馈控制。

1,25-二羟维生素D和底物25-羟基维生素D激素原的血液水平和其调节也受维生素D激素类似物，例如1α-羟基维生素D₂和19-nor-1,25二羟维生素D₂的影响。

维生素D激素对具体组织的作用依赖于它们结合(或占据)这些组织中细胞内VDR的程度。估计维生素D₃和维生素D₂对VDR的亲和力比维生素D激素小至少100倍。结果，没有先代谢成维生素D激素的话，生理浓度的维生素D₃和维生素D₂发挥很小的生物作用，如果有的话。然而，在比正常高10至1,000倍范围内的超生理水平的维生素D₃和维生素D₂可充分地占据VDR，并发挥类似于维生素D激素的作用。相似地，25-羟基维生素D₂和25-羟基维生素D₃的激素原具有基本相同的对VDR的亲和力，估计也比维生素D激素小至少100倍。结果，没有先代谢为维生素D激素的话，生理浓度的25-羟基维生素D₂和25-羟基维生素D₃发挥很小的生物作用，如果有的话。然而，在比正常高10至1,000倍范围内的超生理水平的25-羟基维生素D₂和25-羟基维生素D₃可充分地占据VDR，并发挥类似于维生素D激素的作用。

当维生素D供应短缺时，如维生素D缺乏或维生素D不足(或者，维生素D缺乏症)，维生素D激素原的产生降低。低的维生素D激素原的生成导致25-羟基维生素D的低血液水平。维生素D供应不足经常发生在不经常暴露于阳光、长期维生素D摄取不足或具有脂溶性维生素(例如维生素D)肠内吸收减少的状况的的人类中发展。近期已报道多数生活在北方纬度的人的维生素D供给不足。如果不治疗，维生素D供应不足可引起严重的包括佝偻病和骨软化的骨紊乱。

国立科学研究院的卫生研究所(IOM)已经做出结论，取决于个体的年龄和性别，健康个体的维生素D的每天的充足摄入量(AI)为从200至600IU(参考关于膳食参考摄入量的科学评估的常务委员会，膳食参考摄入量：钙、磷、镁、维生素D和氟化物，Washington,DC：National Academy Press 1997，通过引用合并于此)。维生素D的AI主要基于足以防止维生素D缺乏、佝偻病或骨软化(或至少11ng/mL)的25-羟基维生素D的血清水平而定。基于更高剂量与高钙尿症、高血钙症和相关后遗症，包括心律失常、癫痫和广义的动脉和其它软组织钙化相关的证据，IOM还建立了每天2,000IU的维生素D的容许摄入上限(UL)。

目前可用的口服维生素D补品对于达到并保持25-羟基维生素D的最佳血液水平远非理想。这些制剂通常包含400IU至5,000IU的维生素D₃或50,000IU的维生素D₂，并被制成在胃肠道中快速或立即释放的制剂。当高剂量长期给药时，而这是补充维生素D所经常必需的，这些产品具有显著的、经常的、严重的下面总结的限制性。

高剂量速释维生素D的补品使得维生素D的血液水平的显著激增，从而促进：(a)在脂肪组织中维生素D的储存，由于储存的维生素D不易在之后经肝脏转化成25-羟基维生素D，所以不期望出现该情况；(b)维生素D通过24-和/或26-羟基化作用被肝脏分解代谢为代谢物，这对提高血液25-羟基维生素D水平较少或不再有用；和(c)过量的维生素D的细胞内24-或25-羟基化作用，导致高钙尿症、高血钙症和高磷血症风险的增加。

高剂量速释维生素D补充还产生血液和细胞内25-羟基维生素D水平的激增或剧增，从而促进：(a)过量肾外维生素D激素的产生，并导致钙和磷动态平衡的局部失常，和增加的高钙尿症、高血钙症和高磷血症风险；(b)在肾和其它组织中，通过24-和/或26-羟基化作用加速维生素D和25-羟基维生素D的分解代谢；(c)下调维生素D激素原的肝脏生成，不必要地防碍维生素D不足或缺乏的有效补充；和(d)通过直接结合到VDR介导钙和磷动态平衡的局部失常。

此外，高剂量速释维生素D补充产生维生素D的超生理的药理学浓度，例如，在十二指肠的内腔中，促进(a)在肠上皮细胞中的25-羟基化作用和钙和磷的肠内吸收的局部刺激，导致增加的高钙尿症、高血钙症和高磷血症风险；(b)在局部肠上皮细胞中，通过24-和/或26-羟基化作用的维生素D的分解代谢，引起减小的系统生物有效性，和(c)主要通过乳糜微滴的吸收，导致增加的肝脏分解代谢。

在某些个体中经常需要超过UL的维生素D补充，然而，考虑速释维生素D化合物的高剂量给药问题，目前可利用的口服维生素D补充不能很好地适于将25-羟基维生素D血液水平保持在最佳水平。

维生素D激素血液浓度同样通常在健康个体中整天保持不变，但是相应于暴露阳光的季节变化或持续的维生素D摄入的变化，在较长的周期可显著地变化。在健康个体中经常观察到正常维生素D激素水平的显著差异，一些个体具有低至大约20pg/mL的稳定浓度，另一些具有高至大约70pg/mL的稳定浓度。由于这个宽的正常范围，医学专业人员难于解释单独的1,25-二羟维生素D的实验确定；25pg/mL的值可代表一个个体的正常值或另一个的相对缺乏。

1,25-二羟维生素D的短暂低血液水平刺激甲状旁腺分泌一段短时间，直至恢复正常血液维生素D激素水平。相反，1,25-二羟维生素D的长期低血液水平连续刺激甲状旁腺分泌PTH，导致被称为继发性甲状旁腺功能亢进的紊乱。长期低激素水平还减少了肠内钙吸收，导致血钙浓度减小(低血钙症)，其进一步刺激PTH分泌。持续被刺激的甲状旁腺变得日益增生和最终发展成抗维生素D激素调节。没有早期诊断和治疗，继发性甲状旁腺功能亢进严重增大，引起减弱代谢的骨疾病，包括骨质疏松症和肾性骨营养不良。

产生必需的激素维生素D供应的肾CYP27B1不足时，发生1,25-二羟维生素D的长期低血液水平，而这在CKD中经常出现。由于功能性肾单元的损失，当肾小球滤过率(GFR)下降时，肾CYP27B1的活性降至约60ml/min/1.73m²以下。在末期阶段肾疾病(ESRD)中，当肾完全失效后，并且生存必需血液透析时，肾CYP27B1通常完全缺失。任何剩余的CYP27B1被由饮食磷的不当肾排泄引起的提高的血清磷(高磷血症)显著抑制。

由于肾激素生成在没有必需的前体时不能进行，还由于维生素D激素原的不足也会发生长期的低1,25-二羟维生素D水平。当维生素D₃和维生素D₂供应不足时，激素原的生成显著下降，这种情况通常用术语例如“维生素D不足”、“维生素D缺乏”或“维生素D缺乏症”来说明。因此，血液中25-羟基维生素D水平的测定在卫生保健职业中变成监控维生素D状况的公认的方法。近来的研究已近记载绝大多数CKD患者具有低的血液25-羟基维生素D水平，并且随着CKD的发展维生素D不足和缺乏的流行增加。

接着，最易患慢性低血液1,25-二羟维生素D水平的个体为患有CKD的那些。大多数CKD患者通常具有减小的肾CYP27B1水平和25-羟基维生素D激素原的不足。不令人惊讶地，大多数CKD患者发展为继发性甲状旁腺功能亢进。不幸地，CKD中继发性甲状旁腺功能亢进的早期诊断和治疗很少，更不要说预防。

国家肾脏基金会(NKF)通过出版肾脏病预后质量倡议(K/DOQI)的骨代谢和慢性肾病中的疾病临床操作指南(Am.J.Kidney Dis.42：S1-S202，2003)，和接下来的改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)的慢性肾病-矿物质和骨代谢异常(CKD-MBD)的诊断、评估、预防和治疗的临床操作指南(Kidney InternationalSuppl.113:S1至130，2009)，将医学团体的注意力集中在继发性甲状旁腺功能亢进的早期诊断和治疗的需要上。两个指南中，前者为医生提供最详细的指南。K/DOQI指南鉴定继发性甲状旁腺功能亢进主要病因为长期的低血液1,25-二羟维生素D水平，并建议在CKD 3至5阶段经常筛选相对于具体阶段的PTH的目标范围的提高的血液PTH水平，在3期为35-70pg/mL(相当于3.85至7.7pmol/L)，对于4期为70至110pg/mLc(相当于7.7至12.1pmol/L)，对于5期为150至300pg/mL(相当于16.5至33.0pmol/L)(在K/DOQI指南编号1中定义)。在筛选显示iPTH值大于CKD3期和4的目标范围的情况下，该指南建议后续评估血清总25-羟基维生素D，以诊断可能的维生素D缺乏或不足。如果观察到25-羟基维生素D低于30ng/mL，建议的调节为用口服给药维生素D₂的维生素D充足治疗。如果观察到25-羟基维生素D大于30ng/mL，建议的调节为用已知的口服或静脉内维生素D激素或类似物的维生素D激素替代治疗。该指南没有建议补充维生素D和维生素D激素复位治疗的共同使用，与食品和药物管理局在维生素D激素替代产品的包装插入的警告一致。

NKF K/DOQI指南定义维生素D充足为血清25-羟基维生素D水平≥30ng/mL。对定义为16-30ng/mL的血清总25-羟基维生素D的“维生素D不足”患者，推荐的维生素D补足治疗每月50,000IU口服维生素D₂6个月，以单个的月剂量提供，或按每天大约1,600IU的分开剂量提供。推荐的对“维生素D缺乏”患者的补足治疗更积极：对定义为5-15ng/mL的25-羟基维生素D的“轻微”缺乏，该指南建议每周50,000IU口服维生素D₂4周，然后每月50,000IU维持另外5个月；对于定义为小于5ng/mL的血清25-羟基维生素D的“严重”缺乏，该指南建议50,000IU/周的口服维生素D₂12周，然后50,000IU/月维持另外3个月。每周50,000IU的剂量大约相当于每天7,000IU。

发明内容

本公开的第一个方面为治疗继发性甲状旁腺功能亢进的方法，包含以有效量的包含如此处所述的25-羟基维生素D的缓释制剂向患继发性甲状旁腺功能亢进的患者口服给药，以在给药后第一个24小时内使血清总25-羟基维生素D上升，所述上升为至少7ng/ml且不大于30ng/ml，并降低所述患者的血清全段甲状旁腺激素(iPTH)水平。

可选地，给药的缓释制剂的量有效地提供在给药后第一个24小时内血清总25-羟基维生素D的至少8ng/ml且不大于16ng/ml的上升。可选地，缓释制剂的给药量有效使得在给药后第一个24小时内血清总25-羟基维生素D上升，所述上升为至少10ng/ml且不大于14ng/ml。

上述方法的任何一个中，可选地，所述患者的血清总25-羟基维生素D可被提高至少30ng/ml。

上述方法的任何一个中，可选地，所述患者的iPTH水平与基线相比可降低至少10％，或与基线相比可降低至少15％。

上述方法的任何一个中，可选地，所述患者的iPTH水平保持降低至少48小时。

上述方法的任何一个中，可选地，所述患者的iPTH水平保持降低至少7天。

上述方法的任何一个中，可选地，所述治疗方法进一步包含以二天一次或更小的频率进行给药的步骤。上述方法的任何一个中，可选地，所述频率为每周一次。上述方法的任何一个中，可选地，所述频率为每月一次。

上述方法的任何一个中，可选地，给药的25-羟基维生素D的生物有效量大于45μg，可选地，在70至110μg的范围内。

上述方法的任何一个中，可选地，所述患者患慢性肾病(CKD)致甲状旁腺功能亢进。上述方法的任何一个中，可选地，所述CKD为2期、3期、4期或5期CKD。上述方法的任何一个中，可选地，所述CDK为3期或4期。

上述方法的任何一个中，可选地，给药的所述缓释制剂的量可进一步有效使得在给药后第一个24小时内血清总1,25-二羟基维生素D上升，所述上升为大于3pg/ml且小于10pg/ml。上述方法的任何一个中，可选地，在给药后第一个48小时内，血清总1,25-二羟基维生素D可上升，所述上升为至少7pg/ml且小于10pg/ml。

上述方法的任何一个中，可选地，给药步骤后血清总25-羟基维生素D的T_max可为至少4小时。上述方法的任何一个中，可选地，给药步骤后血清总25-羟基维生素D的T_max可为至少12小时。

上述方法的任何一个中，可选地，所述患者可同时患有，根据小于30ng/ml的血清总25-羟基维生素D定义的维生素D不足或缺乏。

上述方法的任何一个中，可选地，缓释制剂可由25-羟基维生素D₃组成，或主要由25-羟基维生素D₃组成。

对于此处所述的组合物和方法，其优选步骤，优选化合物，优选的组合物范围，和上述优选的组合，可选自这里提供的各种实施例中。

结合附图，通过下面的详细说明的评论将使进一步的方面和优点将对本领域普通技术人员来变得显而易见。

附图说明

为进一步促进对本发明的理解，附加31个附图。

图1至图8显示了服用了根据实施例1的包含的25-羟基维生素D₃的口服给药制剂的检测受试者组在第一个24小时内的血清25-羟基维生素D₃水平的变化的图。此外，图7显示了速释制剂和缓控释制剂的对比数据的重叠。

图9至图11显示了在实施例1的研究期间缓控释制剂组7、根据现有技术的速释制剂组9和静脉内给药的组10中血清25-羟基维生素D₃水平变化的图。

图12显示了实施例1中分别对应于组7和组9的图9和图10数据重叠图。

图13至图18显示了服用了根据实施例2的25-羟基维生素D₃的缓释和速释口服制剂的的微型猪的平均药物动力学图。图19显示了根据实施例2的250μg的25-羟基维生素D₃的MR和IR制剂的药物动力学图的比较。

图20显示了服用根据实施例3的25-羟基维生素D₃后，组1至组3的微型猪的平均未校正的血清25-羟基维生素D₃浓度随时间变化的图。

图21至图23显示了服用根据实施例3的25-羟基维生素D₃的组1至组3的平均基线校正的血清25-羟基维生素D₃浓度根据时间变化的图。

图24显示了从初始剂量到21天内的组1动物的甲状旁腺激素水平的平均变化，图25显示了由实施例3的从初始剂量到21天内的组2动物的甲状旁腺激素水平的平均变化。

图26显示了服用根据实施例4的给药25-羟基维生素D₃的缓释胶囊的组1至组5的小猎犬的平均血清25-羟基维生素D₃浓度随时间变化的图。

图27显示根据实施例2的250μg胶囊的溶解释放谱，其显示约72％的25-羟基维生素D₃在24小时的平均释放。

图28显示了患有维生素D不足和继发性甲状旁腺功能亢进的3期和4期慢性肾病受试者在96小时内血清25-羟基维生素D₃水平的变化的图，所述受试者以约450μg(具体地448μg)的25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量静脉内给药，或以在此处所述的缓释制剂中约450μg 25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量口服给药，或以在此处所述的缓释制剂中900μg 25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量口服给药。25-羟基维生素D₃的缓控释制剂的口服给药逐渐增加了血清25-羟基维生素D₃的水平，使其在96个小时内保持增长，并避免了25-羟基维生素D₃血清水平的激增。

图29显示了患有维生素D不足和继发性甲状旁腺功能亢进的3期和4期慢性肾病受试者在96小时内血清1,25-羟基维生素D₃水平的变化的图，所述受试者以约450μg(具体地448μg)的25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量静脉内给药，或以在此处所述的缓释制剂中约450μg 25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量口服给药，或以在此处所述的缓释制剂中900μg 25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量口服给药。25-羟基维生素D₃的缓控释制剂的口服给药逐渐增加了血清25-羟基维生素D₃的水平，使其在96个小时内保持增长，并避免了25-羟基维生素D₃血清水平的激增。具有900μg的25-羟基维生素D₃的口服给药剂量使血清1,25-羟基维生素D₃水平增加到大于口服给药包含450μg的25-羟基维生素D₃的剂量范围，其仅增加了约2.5pg/mL的1,25-羟基维生素D₃。

图30显示了患有维生素D不足和继发性甲状旁腺功能亢进的3期和4期慢性肾病受试者的甲状旁腺激素水平的平均变化百分比，所述受试者以以在此处所述的缓释制剂中900μg 25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量口服给药，或约450μg(具体地448μg)的25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量静脉内给药。25-羟基维生素D₃的口服给药单剂量引起平均血浆iPTH立即和持续的降低，在静脉给药后达到最大约65％的降低，而25-羟基维生素D₃的单剂量静脉内给药对血浆iPTH具有最小至没有影响。尽管在静脉内给药25-羟基维生素D₃的受试者中25-羟基维生素D₃和1,25-羟基维生素D₃的水平更高，但在口服给药以此处所述的25-羟基维生素D₃的缓释制剂的受试者中出现平均iPTH的降低更大。

图31显示了患有维生素D不足和继发性甲状旁腺功能亢进的3期和4期慢性肾病受试者的iPTH水平的平均变化百分比，所述受试者以在此处所述的缓释制剂中900μg 25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量口服给药，以在此处所述的缓释制剂中约450μg 25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量口服给药，以约450μg(具体地448μg)的25-羟基维生素D₃(N＝8)的单剂量静脉内给药。图28至图31表明在整个研究中血清钙水平保持在正常范围内。此外，未报道严重无益的结果。图28至图31显示的数据中该研究中使用的所述缓释剂量制剂与这里表2中的制剂7相同，除了下面例外：(1)使用植物类胶囊代替明胶胶囊；(2)将硬石蜡成分减少至20％；和(3)将液态石蜡(轻矿物油)含量增至30％。每个胶囊的25-羟基维生素D₃的量为90μg。剂量后第一个24小时期间测量的估计的生物药效率为约7％。

具体实施方式

虽然这里说明和主张的组合物和方法可以有各种形式的实施方式，但应理解本公开是说明性的，下文中的说明包含各种实施方式的方面，并非旨在限制本发明到此处所述的实施方式。本领域普通技术人员理解此处所述的各个方面和实施方式为非排斥性，因此一个实施方式的特征可选地可与另一个实施方式的特征结合，并且所有这样的结合都被考虑用在本公开的方法和组合物中。

如此处所用，术语“维生素D毒性”是指过分提高的维生素D血液水平带来的副作用，包含恶心、呕吐、多尿、高钙尿症、高血钙症和高磷血症的一种或多种。

“维生素D不足和缺乏”通常定义为具有低于30ng/mL的血清25-羟基维生素D水平(参考国家肾脏基金会指南，NKF，Am.J.Kidney Dis.42：S1至S202(2003)，通过引用合并于此)。

如此处所用，术语“高血钙症”是指在患者中，该患者具有高于10.2mg/dL的修正的血清钙水平的情况。人类正常修正的血清钙水平在约8.6mg/dL至10.2mg/dL之间。

如此处所用，术语“高磷血症”是指在具有正常肾功能或3至4期的CKD的患者中，该患者具有高于4.6mg/dL的血清磷水平的情况。在患有5期CKD的患者中，当该患者具有高于5.5mg/dL的血清水平时，出现高磷血症。人类血清磷正常值为2.5mg/dL至4.5mg/dL。

如此处所用，术语“血浆iPTH过表达”是指在具有正常肾功能或1至3期CKD的患者中，该患者具有低于15pg/mL血浆iPTH水平的情况。在患有4期CKD的患者中，当该患者具有低于30pg/mL的血清水平时，出现血浆iPTH过表达。在患有5期CKD的患者中，当患该者具有低于100pg/mL的血清水平时，出现血浆iPTH过表达。

如此处所用，术语“维生素D激素替代治疗”是指对患者给药有效量的活性维生素D激素，例如1,25-二羟基维生素D₃和/或1,25-二羟基维生素D₂，可选地，与可基本占据细胞内VDR的维生素D的其它代谢物和类似物一起给药。

与25-羟基维生素D激素原的血清或血液水平相关的术语“基本恒定”是指下文详述的给药的任何制剂的释放谱不应包括在单位剂量给药后的3小时内25-羟基维生素D总的血清或血液水平内大于约3ng/mL的瞬时提高，可选地，给药单位剂量后，在第一个4小时内不大于约4ng/ml，或在第一个4小时内不大于约4.4ng/ml，或在第一个4小时内不大于约5ng/ml，或在第一个4小时内不大于约6ng/ml。关于活性维生素D激素的血清或血液水平的术语“基本恒定”是指缓控释制剂的释放谱不应包括在每次单位剂量给药后1,25-二羟基维生素D总的血清或血液水平的提高大于约10pg/ml，可选地，不大于8pg/mL，可选地，给药后最初4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9或10小时的期间。

如此处所用，术语“缓控释”、“持续释放”和“缓释”可互换使用。该制剂以不同于速释的方式释放所给药的维生素D化合物。持续释放制剂随时间由制剂释放25-羟基维生素D，以使其在胃肠道中以不同水平吸收。例如，25-羟基维生素D化合物的释放优选在这样的速率：在延长的时间周期内，例如24、48或96小时，或更长，25-羟基维生素D的总血清或血液水平保持或提高到大于前剂量水平。可选地，所述术语还包含延迟释放特性。例如，制剂的延迟的、持续的释放类型可包含包衣，例如肠溶包衣，以使该制剂在肠中或肠的相对具体的位置而非在胃中持续地释放25-羟基维生素D。

关于维生素D的管腔内、细胞内和血液水平的“超生理的”是指维生素D化合物的总浓度显著地大于在停止维生素D的补充至少30天时在维生素D充足的受试者、动物或患者中通过实验室测量观察到的任何24小时周期的过程中通常的稳定水平。“不良超生理激增”是指维生素D化合物的局部或血清浓度导致不良效果，例如过量肾外激素的产生，导致对钙和磷代谢的局部不良效果，维生素D的肝脏25-羟基化的抑制，维生素D和25-羟基维生素D的分解代谢的增加，高钙尿症，高血钙症和/或高磷血症，同时可能的心血管后遗症。

如此处所用，术语“甲状旁腺功能亢进”是指原发性甲状旁腺功能亢进、继发性甲状旁腺功能亢进和慢性肾病致甲状旁腺功能亢进(3期，4期或5期)。

如此处所用的术语“受试者”通常包括人、哺乳动物(例如狗、猫、啮齿类、绵羊、马、母牛、山羊)，兽医动物和动物园动物。

还应具体地理解此处引用的任何数值包括由低数值到高数值的所有数值，即，所列举的最低数值和最高数值之间数值的全部可能组合都被认为在本发明中被明确的表述。例如，如果浓度范围或有益效果范围被表述为1％至50％，旨在表明例如2％至40％、10％至30％、或1％至3％等数值在说明书中被明确列举。它们仅为具体目的的示例。

25-羟基维生素D₃在速释口服制剂中的给药已经作为维生素D补充的替代方法被试验。这个基本被抛弃的方法如目前使用的维生素D补充一样，引起问题。具体地，它产生血液和细胞内25-羟基维生素D水平的激增或剧增。不旨在与任何具体理论联系，认为血液和细胞内25-羟基维生素D水平中的激增或剧增促进了(a)血清维生素D结合蛋白(DBP)中维生素D激素的竞争性取代，且被取代的激素过量转移到包含VDR的组织，和(b)瞬间的过量肾和肾外维生素D激素的产生，其共同导致钙和磷代谢的局部失常。此外，认为血液25-羟基维生素D水平的激增促进了通过在肾和其它组织中24-和/或26-羟基化作用的维生素D和25-羟基维生素D的分解代谢，下调了维生素D激素原的肝脏生成，不必要地阻止了对维生素D不足或缺乏的有效补充的，和通过直接与VDR结合而调节的钙和磷动态平衡中额外的局部失常。重要的是，认为25-羟基维生素D₃的速释，通过实质上包含在乳糜微滴中传输到肝脏，而非结合到血清DBP的机制，促进其肠内吸收。认为通过乳糜微滴传输25-羟基维生素D到肝脏可显著地增加其分解代谢的可能性。

本公开的一个方面提供了用于25-羟基维生素D在摄食所述制剂的受试者的胃肠道中的缓控释的固体或半固体、蜡药物制剂。所述制剂包括蜡缓控释载剂、类脂制剂、25-羟基维生素D的油载剂和25-羟基维生素D。提供所述制剂用于控制这里整合的25-羟基维生素D的释放。所述制剂可不含有或基本不含分解质。

所述蜡缓控释载剂为室温为固体或者半固体的制剂而提供。所述制剂在体温下可为固体、半固体或液体。在一个实施方式中，所述制剂在体温下将为半固体。在另一个实施方式中，所述制剂在体温下将为固体。适合使用的载体的实例包含蜡，例如合成蜡、微晶蜡、石蜡、巴西棕榈蜡和蜂蜡；聚乙氧基化蓖麻油衍生物，氢化植物油，甘油基单山嵛酸酯、甘油基二山嵛酸酯或甘油基三山嵛酸酯；长链醇，例如硬脂醇、十六烷醇和聚乙二醇；和上述任何的混合物。优选不易消化的蜡物质，例如硬石蜡。

基于不包含任何附加的包衣或壳的制剂的总重，蜡载剂优选含量大于所述制剂的约5％。例如，所述蜡载剂可包含大于所述制剂的5wt％，大于所述制剂的10wt％，大于所述制剂的15wt％，大于所述制剂的20wt％，大于所述制剂的，大于所述制剂的25wt％。优选所述蜡载剂含量小于50wt％，小于40wt％，小于35wt％，或小于30wt.％。合适的范围包含5wt％至35wt％，15wt％至35wt％和20至30wt％。实例包含15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％和30wt％。

提供类脂剂用于在治疗的受试者的胃肠道内从所述制剂释放25-羟基维生素D。不旨在结合任何具体的操作理论，认为类脂剂可适合一种或多种优选的功能，例如在胃肠液中产生油载剂的微乳液，提供延长的胃潴留，例如通过生物粘合性质，以便所述制剂与胃和/或肠的粘液层相互作用；和增强25-羟基维生素D的吸收。然而，不考虑作用的机制，本发明不限于任何具体的作用模式。

优选类脂制剂成分为双性，其中，分子或离子同时包含亲水性和亲脂性部分。这些成分可由基于亲水性/亲脂性平衡系统(“HLB系统”)的数字的值定义。HLB刻度为数字刻度，从0延伸至大约20，其中，较低的数值表示更亲脂性和疏水物质，并且更高数值表示更亲水和疏脂物质。用实验方法赋值化合物对水或油类物质的亲和性和其HLB值。这里使用的疏水载体的HLB优选在约13至约18的范围。

各种药学可接受类脂制剂可整合进所述制剂。类脂制剂在所述制剂中的含量优选至少5wt％、至少15wt％、至少35wt％、至少40wt％或至少45wt％。合适的范围包含约5wt％至约60wt％，约20wt％至约60wt％，和约40wt％至约50wt％。

在一个实施方式中，所述类脂制剂为具有小于7的HLB的亲脂乳化制剂，并包括选自由混合的脂肪酸单甘油酯；混合的脂肪酸二甘油酯；脂肪酸单甘油酯和脂肪酸双甘油酯的混合物；亲脂性聚甘油酯；包含单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬酸酸甘油酯、二硬酯酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸酯的甘油酯；脂肪酸的甘油乳酯；包含丙二醇单棕榈酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯的丙二醇酯；包含山梨醇单硬脂酸酯和山梨醇倍半油酸酯的山梨醇酯；包含硬脂酸、棕榈酸和油酸的脂肪酸和它们的皂；和单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬酸酸甘油酯、二硬酯酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯它们的混合物；脂肪酸的甘油乳酯；包含丙二醇单棕榈酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯的丙二醇酯；包含山梨醇单硬脂酸酯和山梨醇倍半油酸酯的山梨醇酯；包含硬脂酸、棕榈酸和油酸的脂肪酸和它们的皂；和它们的混合物组成的组的成员。

优选的类脂制剂选自甘油酯和它的衍生物。优选的甘油酯选自由中碳链或长碳链甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和它们的混合物组成的组。

优选中碳链甘油酯包含，但不限于，中碳链单甘油酯、中碳链二甘油酯、辛酸/癸酸甘油三酯、甘油单月桂酸酯、单硬脂酸甘油酯、辛酸/辛酸/癸酸甘油酯、甘油单辛酸酯、甘油单二辛酸酯、辛酸/癸酸亚油酸甘油三酯和辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯.

优选具有低熔点的单甘油酯制造所述制剂。优选的单甘油酯包含但不限于单硬酸酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯、单油酸甘油酯、单辛酸甘油酯、单癸酸甘油酯、单月桂酸甘油酯等，优选单硬酸酸甘油酯(GMS)。GMS为天然的乳化剂；其油溶，但难溶于水。GMS具有3.8的HLB值。另一个优选的单甘油酯为单油酸甘油酯(GMO)。GMO也是天然的乳化剂；其也油溶，但难溶于水，并具有3.8的HLB值。

在另一个实施方式中，所述甘油酯为选自辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的吸收增强剂。可使用的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯包含但不限于聚乙烯糖化甘油酯，也称作聚乙二醇化甘油酯或聚乙二醇化(PEGylated)甘油酯。可用于所述化合物的聚乙二醇化甘油酯包含，但不限于，单甘油酯、甘油二酯和甘油三酯的混合物；和聚乙二醇、聚乙烯糖基化杏仁甘油脂、聚乙烯糖基化玉米甘油脂和聚乙烯糖基化辛酸/癸酸甘油三酯的单酯和二酯。吸收增强剂优选具有13至18、更优选13至15的HLB值。

一种已知的优选的吸收增强剂商品名称为GELUCIRE，并可商购自位于美国新泽西Paramus的Gattefossé公司。GELUCIRE是一种众所周知的赋形剂，其是甘油脂肪酸酯和PEG酯的家族，也被称为聚乙醇甘油酯。GELUCIRE用在包含制备持续释放药物组合物的各种应用中。GELUCIRE化合物为惰性、半固体蜡材料，其为两性分子，并可具有各种物理特性，例如熔点、HLB和在各种溶剂中的溶解度。它们本质上表面活性的，并分散或溶解于水媒介形成的微团、微珠或小泡。它们通过它们的熔点/HLB值被鉴别。所述熔点以摄氏度表示。可选择不同等级的GELUCIRE赋形剂的一种或混合物以达到熔点和/或HLB值的期望的特性。优选的GELUCIRE组合物为具有44℃熔点和14的HLB的半固态蜡材料GELUCIRE 44/14。

另一个优选的聚乙二醇化甘油酯吸收增强剂为辛酸癸酸聚乙二醇-8-甘油酯(CAS登记号：85536-07-8和84963-88-2)。其为甘油单、二和三酯和具有中型链脂肪酸(C8-C10)的PEG 400的混合物，PEG 400被例如位于美国新泽西Paramus的Gattefossé公司以商品名称LABRASOL销售。LABRASOL具有14的HLB值，并具有以重量计的下列成分：C₈至C₁₀单甘油酯大约4％；C₈至C₁₀甘油二酯，大约17％；C₈至C₁₀甘油三脂，大约6％；C₈至C₁₀PEG 400的单酯，大约14％；C₈至C₁₀PEG 400二酯，大约36％；自由PEG 400，大约20％；自由甘油，大约3％。

优选地，类脂剂包含具有小于7的HLB的亲脂性乳化剂和优选具有13至18HLB值的吸收增强剂的混合物。亲脂性乳化剂含量优选为约20wt％至约50wt％，优选约30wt％至约40wt％；并且吸收增强剂含量优选约5至约20wt％，优选约8至约15wt％。

多个固体类脂组合物的低熔点提供了在高于它们各自的熔点的约0℃至约50℃的温度整合药物活性成分到其中，然后填充熔融物(溶液和/或分散)到动物或植物胶囊中的手段。在冷却至室温时，熔融物在胶囊内部固化。

油成分用作载剂，优选地25-羟基维生素D的主要载剂。可使用任何药物可接受油。实例包含动物(例如鱼)，植物(例如大豆)和矿物油。优选地油易溶解25-羟基维生素D。优选油组分包含非-可消化油，例如矿物油，特别是液体石蜡和鲨烯。油载剂优选包括所述制剂的约10wt％至约50wt％，更优选地约15wt％至约45wt％，约20wt％至约40wt％，或约15wt％至约25wt％。在一个实施方式中，液体石蜡可由下面的一种或多种参数表征：约0.88至0.89的比重；约64cSt至约70cSt的运动粘度(40℃)；424的分子量；约59％的石蜡烃；和-24℃的倾点。可优化蜡成分和油成分之间的比例以达到期望的25-羟基维生素D的释放率。因此，如果使用更重的油成分，可使用相对较少的蜡成分；并且如果使用更轻的油成分，然后可使用相对更多的蜡成分。

如此处所述使用的适合预防疾病和治疗的25-羟基维生素D化合物包含25-羟基维生素D₃、25-羟基维生素D、它们的类似物，和任意上述的组合。这些化合物和组合这里通常为术语25-羟基维生素D所指。在一类实施方式中，25-羟基维生素D包含一种或多种羟基形式，例如25-羟基维生素D₃和25-羟基维生素D₂的组合。实施方式中，25-羟基维生素D可以治疗有效量给药(例如有效防止或治疗此处所述的症状，例如维生素D缺乏症和/或甲状旁腺功能亢进，的量)。

本发明还包含含25-羟基维生素D的口服制剂的缓释组合物和给药这样的制剂以治疗甲状旁腺功能亢进的方法。可选地，所述方法将具有一个或多个益处：包含避免腔内、细胞内和血液25-羟基维生素D水平的超生理的激增和它们的结果，避免给药的25-羟基维生素D分解代谢的巨大增加，并避免与维生素D补充，即维生素D毒性相关的严重的副作用。

此处所述的根据该方法的用于口服给药的缓控释组合物优选设计包含每单位剂量1至1000μg的25-羟基维生素D浓度，并以有效控制或充分持续地释放25-羟基维生素D这样的方式制备和输送,可选地，在延长的时间周期到在人或动物的胃肠道的回肠内。优选的剂量包含1至1000μg/单位剂量、1至600μg、1至400μg、1至200μg、1至100μg、5至90μg、30至80μg、20至60μg、30至60μg、35至50μg、5至50μg和10至25μg，例如20μg、25μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg和100μg。所述组合物和方法可通过在DBP上的传输提供充分增加的25-羟基维生素D的吸收，并通过在乳糜微滴的运输减小吸收。所述组合物和方法可提供在给药后24小时的周期、优选给药后18小时和更优选给药后720小时，维持基本恒定的25-羟基维生素D的血液水平。通过提供逐渐的、持续的和直接的25-羟基维生素D的释放和吸收，到优选的循环的DBP(而非乳糜微滴)、血液、管腔内，并且可减轻或消除细胞内25-羟基维生素D浓度激增，即超生理水平，和相关的不需要的分解代谢。

此外，通过提供逐渐的和持续的释放，可比给药速释口服制剂更可预测和可靠地提高并维持25-羟基维生素D的血清水平，允许一致的剂量或减少时常监控患者的需要。

认为这样的制剂可具有小于100％的生物药效率。因此，一方面看，剂量为不针对生物药效率的正常剂量；另一反面看，剂量为针对生物药效率的有效剂量。

在实施方式的优选的类别中，在给药后第一个24小时内，25-羟基维生素D的所述缓释制剂释放至少5-80％，例如至少10％，例如至少15％，例如至少20％，例如至少25％，例如至少30％，例如至少35％，例如至少40％，例如至少45％，例如至少50％，例如至少55％，例如至少60％，例如至少65％，例如至少70％，例如至少72％。

本发明还认为25-羟基维生素D的剂量可以小于1天1次的频率给予，例如，以隔一天一次、一周三次、一周二次、每周一次、每二周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次或每六周一次的频率，例如，其中，更高有效剂量通常允许更低频率给药，并且更低有效剂量通常允许更高频率给药。

有益地，根据上述实施方式，25-羟基维生素D可与其他可选择的治疗剂，以等于每天1至180μg的正常剂量，优选每天30至120μg的剂量，例如约60至90μg，共同口服给药。考虑的实例包含每天30μg、每天60μg、每天90μg、每天120μg和每天150μg。由有效剂量的角度，考虑生物药效率，预期一种优选类型的剂量在约每天2μg至约每天8μg，或约每天4μg至约每天7μg，例如每天约2μg、约4μg、约6μg、8.5μg或10.5μg有效剂量，基于在给药后第一个24小时内7％的生物药效率。对于给药后42天的范围计算的具有10％的生物药效率的制剂，优选有效剂量在每天3至12μg，例如约6至9μg的范围。预期的例子包含每天3μg、每天6μg、每天9μg、每天12μg和每天15μg。

一个方面中，所述25-羟基维生素D可根据上述的实施方式，以至少30μg、或至少300μg、或至少350μg、或至少400μg，例如30μg至1800μg、或450μg至1800μg、或30μg至1000μg的范围的正常剂量，并以小于1天1次的频率给予，例如，以隔一天一次、三天一次、四天一次、每周一次、每二周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每五周一次或每六周一次的频率频率口服给药。从有效剂量的观点看，对于生物药效率，预期约20μg至400μg的范围可以小于一天一次的频率输送，例如，二天一次、三天一次、四天一次、每周一次、每二周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每五周一次或每六周一次。从有效剂量的观点看，对于生物药效率，预期基于给药后第一个24小时内的生物药效率，一种优选类型的用于更小频率给药的剂量为约30μg至约130μg。对于具有在给药后在42天的范围计算的10％生物药效率的制剂，优选优选剂量将大于45μg，至少50μg，至少60μg，至少70，至少80μg或至少90μg，例如50μg至180μg或70μg至110μg。优选的给药方案(量和频率)将在给药后30天提供血清25-羟基维生素D₃的约1ng/mL至20ng/mL的平均上升。应理解在每天等效量中说明的上述剂量将根据此处所述的方法以长于两天一次的时间间隔给药，因此，例如，每天100μg的名义剂量当量可以每两天200μg或每周700μg给药。

上述方法的任何一个中，说明的每日剂量可以较小的频率给药方案输送，以产生上述的每日剂量。

在一个类型的实施方式中，优选的剂量在剂量间隔，剂量后24小时内，可提供血清总25-羟基维生素D大于6ng/mL、或最小7ng/mL、或最小8ng/mL、或最小9ng/mL、或最小10ng/mL、或最小11ng/mL、或最小12ng/mL、或最小14ng/mL、或最小16ng/mL、和最多30ng/mL、或25ng/mL、或20ng/mL、或15ng/mL，例如7至30ng/mL或8至16ng/mL、或10至14ng/mL范围内，例如12ng/mL的最大上升。可选地，刚说明的最大上升可在剂量后12个小时内测量。更进一步可选项则地，该方法获得的血清总25-羟基维生素D上升的极限在剂量周期后48小时，也可在剂量周期后96小时确认。

在另一个类型的实施方式中，优选的剂量在剂量间隔，剂量后48小时内，可提供血清25-羟基维生素D至少约6ng/mL、或在7至14ng/mL范围内的平均上升。在再一个类型的实施方式中，优选的剂量在剂量间隔，剂量后48小时内，可提供血清总25-羟基维生素D在7至30ng/mL范围内的平均上升。

在实施方式中，预期所述方法包含给药此处所述的制剂，以在延长的期限，例如至少一个月、至少三个月、至少六个月或更长内，提高并还优选保持血液1,25-二羟维生素D水平在25pg/mL、30pg/mL或更高，例如25至65pg/mL。在另一个类型的实施方式中，优选的剂量在剂量间隔，剂量后第一个48小时内，可提供血清总25-羟基维生素D在3pg/mL并小于约10pg/mL、或小于约7pg/mL和小于约10pg/mL的平均上升。

在一个方面，用于降低或维持患者中较低血清甲状旁腺激素的方法包含给药给所述患者有效量的包括25-羟基维生素D的缓释制剂，以降低或维持较低血清甲状旁腺激素水平，优选与基线相比，降低iPTH水平至少10％、15％、20％、25％或30％的量，或者减小血清PTH水平到CKD阶段(例如，3期为35至70pg/mL(相当于3.85至7.7pmol/L)，对与4期为70至110pg/mL(相当于7.7至12.1pmol/L)，对于5期为150至300pg/mL(相当于16.5至33.0pmol/L)(K/DOQI指南编号1中定义))的目标范围需要的量。在实施方式中，在剂量间隔，剂量后7天内，所述患者的iPTH维持较低至少48小时、至少60小时、至少72小时、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天。

在另一个方面，用于降低或维持患者中较低血清甲状旁腺激素的方法包含给药给所述患者有效量的这里公开的包括25-羟基维生素D的缓释制剂，以降低或维持较低血清甲状旁腺激素水平，至K-DIGO指南(即，对3期、4或5CKD没有透析的患者，对于分析使用的正常的上限一次；对于5期CKD透析患者，约两次至约九次分析正常的上限，或约130pg/mL至600pg/mL)，或者65pg/mL iPTH或更少。

如上述，本发明的一个方面为给药给患者许多一种或多种25-羟基维生素D化合物的方法，以便给药后在一个剂量间隔血浆总25-羟基维生素D浓度达到其最大(T_max)的时间与通过药丸IV注射给药25-羟基维生素D相当量的T_max相比增加。在另一个实施方式中，所述方法包含为给药给患者许多一种或多种25-羟基维生素D化合物的方法，以便给药后在一个剂量间隔血浆总25-羟基维生素D浓度达到其最大(T_max)的时间与相当的速释口服制剂的T_max相比增加。此处所述的用包括25-羟基维生素D的缓释制剂的方法的应用将产生给药后至少4小时、至少6小时、至少8小时、至少10小时、至少12小时、至少134小时、或大于4小时并直至48小时，例如在6至24小时、8至20小时、10至18小时、12至16小时的范围内，例如至少13或14小时，血清25-羟基维生素D的T_max。

相似地，本发明的另一个方面为给药给患者许多一种或多种25-羟基维生素D化合物的方法，以便给药后在一个剂量间隔血浆总25-羟基维生素D浓度达到其最大(T_max)的时间与通过药丸IV注射给药25-羟基维生素D相当量的T_max相比增加。在一个选择实施方式中，所述方法将包括为给药给患者许多一种或多种25-羟基维生素D化合物的方法，以便给药后在一个剂量间隔血清总1,25-羟基维生素D的血浆浓度达到其最大(T_max)的时间与相当的速释口服制剂的相比增加。

此处所述的用包括25-羟基维生素D的缓释制剂的方法的应用将产生给药后至少100小时、或至少110小时、或至少120小时、或至少130小时、或至少140小时、或给药后至少150小时、或给药后大于160小时、或给药后大于170小时、或给药后大于180小时、或给药后大于190小时、或大于100小时并直至300小时，例如在120至240小时、或140至220小时、或160至200小时，例如约180或190小时，血清1,25-羟基维生素D的T_max。

此处所述的剂量预期用于此处所述的任何治疗方法。应理解在具体的例子中25-羟基维生素D实际的优选剂量将根据具体制定的组合物、应用的模式和治疗的具体位置而变化。可用常规的考虑，例如所述激素和已知制剂不同活性的惯常比较，例如通过合适的常规的药理学方法，来确定剂量。

每个特定患者的具体记录可依赖于宽的多种因素，例如，年龄、体重、总的健康状况、性别、饮食、给药的时间和模式、排泄的频率、联合使用的药物，和治疗应用于的具体的紊乱的严重性。

需要维生素D补充的患者包含健康受试者和具有维生素D不足或缺乏的危险的受试者，例如阶段1、2、3、4或5的CKD的受试者；婴儿；不喝维生素D加强奶(例如，乳糖不耐受试者、牛奶敏感受试者、不喝奶的素食者和人乳哺育的婴儿)的儿童和成人；深色皮肤受试者(例如，在美国，42％的年龄在15至49岁之间的非洲裔美国妇女维生素D缺乏，而白人妇女为4％)；年老者(具有减少的合成维生素D的能力，并更可能待在室内)；专门机构的成人(其可能待在室内，包含具老年痴呆病或患精神病的受试者)；覆盖所有暴露皮肤的受试者(例如一些宗教或文化的成员)；经常使用防晒霜的受试者(例如具有防晒系数(SPF)8的数值的防晒霜的使用减少95％的维生素D产生，并且更高SPF值可进一步减少维生素D)；具有脂肪吸收不良综合病症的受试者(包含但不限于囊性纤维化、胆汁淤积性病和其它肝脏病，胆囊疾病、胰腺酶缺乏、克隆氏病、炎性肠病、口炎性腹泻或腹腔疾病、或胃和/或肠的部分或全部手术去除)；炎性肠病的受试者；克隆氏病的受试者；小肠切除的受试者；牙龈疾病的受试者；服用提高维生素D的分解代谢的药物，包含苯妥英、磷苯妥英、苯巴比妥、卡马西平和利福平的受试者；服用减小维生素D的吸收的药物，包含消胆胺、降脂树脂Ⅱ号、奥利斯特、矿物油和脂肪替代品的受试者；服用抑制维生素D的活化的药物，包含苯妥英、磷苯妥英、苯巴比妥、卡马西平和利福平的受试者；服用减小维生素D的吸收的药物，包含酮康唑的受试者；服用减小钙的吸收的药物，包含皮质类固醇的受试者；肥胖的受试者(沉积于身体脂肪储藏的维生素D生物可利用较小)；骨质疏松症的患者；和/或绝经后妇女。根据医学学会关于维生素D饮食参考摄入的报道，食物消费数据指出年轻和年长妇女的平均维生素D摄入小于目前建议；数据建议超过50％的年轻和年长妇女未消耗建议量的维生素D。

可选地，从此处所述的本发明的方法中排除患肾骨营养不良(包含骨软化和纤维囊性骨炎)的受试者的治疗处理。

在其它方面，本发明的组合物和方法对于预防和治疗维生素D-应答疾病，即，维生素D、25-羟基维生素D或活性维生素D(例如1,25-二羟维生素D)防止疾病的发作或进展，或减小疾病的信号和症状，很有用。这样的维生素D应答疾病包含癌症(例如乳房、肺、皮肤、黑素瘤、结肠、直肠、前列腺和骨癌症)。已观察到1,25-二羟维生素D体外诱导多种细胞细胞分化和/或防止多种细胞细胞增殖。维生素D-应答疾病还包含自体免疫疾病，例如I型糖尿病、多多发性硬化、风湿性关节炎、多肌炎、皮肌炎、硬皮病、纤维化、格氏病、桥本氏病、急性或慢性移植排斥、急性或慢性移植物抗宿主反应、炎症性肠病、节段性肠炎、系统性红斑狼疮、干燥综合病症、湿疹和牛皮癣、皮炎，包含特异反应性皮炎、接触性皮肤炎、过敏性皮炎和/或慢性皮炎。维生素D-应答疾病还包含其它炎性疾病，例如哮喘、慢性阻塞性疾病、多囊肾病、多囊性卵巢综合病症、胰腺炎、肾炎、肝脏炎和/或感染。已报道维生素D应答疾病还包含高血压和心血管疾病。因此，本发明认为有心血管疾病和危险和患心血管疾病的受试者，例如动脉硬化、冠心病、脑血管疾病、外周血管的疾病、心肌梗塞、心肌缺血、中风、充血性心力衰竭、心肌病、肥胖或其它体重紊乱、脂质紊乱(例如高血脂、包含相关的糖尿病血脂异常和混合的血脂异常低α脂蛋白血症、高甘油三酯血症、高血胆脂醇和低HDL(高密度脂蛋白)的血脂异常)、代谢紊乱(例如代谢综合病症、类型II糖尿病、类型I糖尿病、高胰岛素血症、糖耐量减低、胰岛素抗性、包含神经病、肾病、视网膜病、糖尿病足溃疡和白内障的糖尿病并发症)、和/或血栓症的受试者的预防和治疗。

受益于维生素D化合物水平缓释的疾病包含，但不限于：(i)甲状旁腺中：甲状旁腺功能减退症、假甲状旁腺功能减退症和继发性甲状旁腺功能亢进；(ii)在胰腺中—糖尿病；(iii)甲状腺中-髓样癌；(iv)皮肤中—牛皮癣，伤口康复；(v)肺中-肉状瘤和肺结核；(vi)肾中—慢性肾病，低血磷VDRR，维生素D依赖的佝偻病；(vii)骨中—抗痉挛治疗，骨纤维生成不良，纤维囊性骨炎，骨软化，骨质疏松症，骨质减少，骨硬化，肾骨营养不良，软骨病；(viii)肠中—糖皮质激素拮抗作用，突发性的高血钙症，吸收不良综合病症，脂肪泻，热带口炎性腹泻；和(ix)自体免疫紊乱。

在本方面的实施方式中，受益于维生素D化合物水平缓释的疾病选自癌症、皮肤病紊乱(例如牛皮癣)、甲状旁腺紊乱(例如甲状旁腺功能亢进和继发性甲状旁腺功能亢进)、骨紊乱(例如骨质疏松症)和自体免疫紊乱。

可通过本领域普通技术人员熟知的工艺制备缓释制剂。可融化药学上可接受蜡、类脂剂和油，如果必要，提供可流动液体从而使更易于获得均匀的混合物。可加入25-羟基维生素D到这样的液体载剂，例如溶于例如无水乙醇的乙醇，并且可混合所述成分以提供均与的混合物。冷却所述混合物，并在后来分成单元剂量形式，例如填充胶囊，前储藏。

在一个优选的方法中，加热油载剂、固体蜡和亲脂性乳化剂的一部分至相对高的温度(例如65℃)，并在加入吸收增强剂之前混合，然后另外混合直至均匀，然后冷却至中间的提高的温度(例如50℃至55℃)。在一个单独的容器中，混合抗氧化剂防腐剂和油载剂的剩余物并加热到中间的提高的温度(例如50℃)，然后结合，并与蜡混合物混合直至获得均匀溶液。接着，乙醇中的25-羟基维生素D溶液与均匀蜡溶液结合，混合的直至获得均匀溶液，优选填入胶囊中，然后冷却至室温。在另一个优选方法中，在55℃至60℃的温度加热油载剂、固体蜡和亲脂性乳化剂的一部分，并在加入吸收增强剂之前混合，然后另外混合直至均匀，在一个单独的容器中，混合抗氧化剂防腐剂和油载剂的剩余物并加热到55℃至60℃的温度，然后结合，并与蜡混合物混合直至获得均匀溶液。接着，乙醇中的25-羟基维生素D溶液与均匀蜡溶液结合，混合的直至获得均匀溶液，优选填入胶囊中，然后冷却至室温。

在给药需要治疗的患者之前，优选所述制剂放入胶囊。这样的胶囊可为硬或软，优选软胶囊。可用标准胶囊填充机器填充所述制剂到胶囊，例如通过熔融所述制剂并注入软胶囊壳中。

除非另外说明，预期所述制剂和使用方法和制造包含含另外可选择的下面说明的元件、特征和步骤的一种或多种的任意组合的实施方式。

因此，在一类实施方式中，所述制剂进一步包含防腐剂，例如抗氧化剂。优选丁基化羟基甲苯(BHT)。

在另一类实施方式中，25-羟基维生素D与一种或多种治疗剂联合用药。

如果25-羟基维生素D与一种或多种其它治疗剂联合用药，联合用药中每个化合物的比例将由处理的具体疾病的状态决定。例如，可选择25-羟基维生素D与钙盐(作为钙补充或饮食磷酸盐粘合剂)、双磷酸盐、拟钙剂、烟酸、铁、磷酸酯粘合剂、维生素D3、钙化醇、活性维生素D固醇、血糖和高血压控制剂、各种抗肿瘤剂和CYP24抑制剂，及其它可降解维生素D剂的细胞色素P450酶的一种或多种口服联合用药。此外，可选择25-羟基维生素D₂和/或25-羟基维生素D₃与维生素D3、钙化醇、活性维生素D固醇、血糖和高血压控制剂、各种抗肿瘤剂和CYP24抑制剂，及其它可降解维生素D剂的细胞色素P450酶的联合静脉内给药。实践中，当最终期望疾病的治疗处理状态时，使用本发明化合物的更高剂量；而较低剂量用于预防的目的；应理解如本领域普通技术人员所熟知，在任何情况下给药的具体剂量将根据给药的具体化合物、治疗的疾病、受试者的状况，和其它可改变药物的活性或受试者的反应的医学情况而调整。

如上述，所述制剂优选填入胶囊，但是其可以纯净的形式给药，或具有一个或多个外部的包衣，例如肠溶包衣。还预期所述制剂可压制成药片，并且在这样的情况下，可包含一种或多种药片压制赋形剂。

在此处所述的组合物和方法中，优选步骤，优选化合物，其优选组成范围和优选的上述组合可选自这里提供的各种具体实例中。例如优选的制剂包含25-羟基维生素D(例如25-羟基维生素D3，例如约0.1wt％(例如12wt％))，约2wt％(例如2.32wt％)乙醇，约10wt％(例如9.75wt％)GELUCIRE 44/14，约27wt％(例如27.51wt.％)硬石蜡，约38wt％(例如37.85wt％)GMS，约22wt％(例如22.43wt％)矿物油，和可选地，小量的防腐剂(例如0.02wt％BHT)。这个制剂的变化可包含约20％硬石蜡和约29％矿物油。

下表1显示了胶囊的另一个优选的实施方式和50μg实施方式的详情。

表1

实施例

下面的实施例说明了具体的制剂及其制造方法。提供这些实施例仅用于说明的目的，不旨在限制本发明的范围。

实施例1–缓释制剂

根据下表2，通过均匀地混合所示量的确定的组分，并填充所述混合物到硬明胶胶囊中，制备9个口服的维生素D制剂。制剂9为根据现有技术的速释制剂，其中MIGLYOL 812N为辛酸/癸酸甘油三酯的商品名称，可购自美国新泽西Cranford的CONDEA Chemie GmbH。所述制剂以250μg的25-羟基维生素D₃的单剂量当量给药给Yucatan微型猪(约10kg)组。每组包含5只动物。250μg当量的25-羟基维生素D₃通过静脉注射给药给Yucatan微型猪的第十组。

收集在给药前，给药后0.5、1、2、4、6、8、12、24、48、96、168、240、336、432、504、576和672小时的血液。用液相色谱质谱/质谱联用(LC MS/MS)分析血清25-羟基维生素D₃的水平。

图1至图8显示了组1至组8在第一个24小时内的血清25-羟基维生素D₃水平的变化的图。此外，图7绘制了速释对照组9和组7数据。浓度图显示根据本发明的组7的制剂(a)在第一个24小时内血清25-羟基维生素D₃水平产生逐渐增加并保持上升，和(b)避免25-羟基维生素D₃水平的激增。

图9至图11显示了组7、组9和组10在研究期间中血清25-羟基维生素D3水平变化的图。图12显示了实施例1中组7和组9分别的图9和图10数据重叠图。

浓度图显示：根据本发明的组7制剂产生了血清25-羟基维生素D₃水平的逐渐上升，避免25-羟基维生素D₃水平的激增，并在长时间周期内产生血清25-羟基维生素D₃的持续增加。

在120分钟的周期内相同制剂的体外溶解检验(溶解介质：0.056脂肪酶在Ctab/NaH₂PO₄缓冲液中，pH 6.8)显示结果与体内数据(例如，制剂2和制剂7显示％溶解的更渐进的和不完整的上升，而速释对照显示在30分钟内100％释放)基本一致。

下表3的数据显示了与现有技术的速释制剂组9和注射给药的组10IV相比，根据本发明的制剂给药给检测的受试者中产生的各种药物动力学参数。数据说明根据本发明的制剂的组7避免了浓度激增，在比速释制剂和静脉内注射晚很多时间提供了最大浓度，并提供了比可比较的速释制剂更长的清除半衰期。根据本发明的组7制剂与组9相比导致给药的25-羟基维生素D₃更慢的从系统循环中去除。

以250μg 25-羟基维生素D₃的单剂量将根据本发明的组7制剂给药给微型猪(约10kg)导致血清25-羟基维生素D₃上升大约40ng/ml。给予人(约60kg)50μg 25-羟基维生素D₃的单剂量预期增加血清25-羟基维生素D3水平约1.4ng/ml。

表3

下表4显示了组1至6和8的制剂比较的C_max、T_max和生物可用性数据。

表4

实施例2–口服胶囊剂的微型猪的药物动力学研究

研究的目的为评估在连续给药3天：a)1×250μg 25-羟基维生素D₃改变的释放(MR)胶囊，b)2×250μg MR胶囊，c)4×250μg MR胶囊,d)1×1000μgMR胶囊,e)1×250μg速释(IR)25-羟基维生素D₃胶囊和f)1×250μg MR胶囊后，在雄性Yucatan猪(约45kg体重)中25-羟基维生素D₃的系统吸收。

根据上面的实施例1，组7的制剂，制备MR制剂。在1000μg MR胶囊的情况下，25-羟基维生素D₃的最高浓度被乙醇中的相对减小抵消。

为制备IR制剂，将25-羟基维生素D3(0.12％wt/wt；每个胶囊250μg)溶于乙醇USP(2.32％wt/wt；增溶剂)并与玉米油USP(97.54％wt/wt；主要载剂)和丁基化的羟基甲苯(0.02％wt/wt；抗氧化剂)混合。所述玉米油溶液(205mg)填入尺寸0的两片硬胶囊中。

每组的8个雄性Yucatan微型猪的每个根据下表5的剂量时间表的剂量给药。采集第一次剂量前和第一次剂量后0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、48、72和96小时的血液。分别在24和48小时采集血样后对6组中的动物立即进行第二次和第三次给药。分析所有收集的样品的25-羟基维生素D₃。确定从1组和5组动物中收集的样品在下面的时间点的离子化钙和总钙：给药前和第一次给药后0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、48、72和96小时。

表5

用高性能液相色谱质谱/质谱联用(LC MS/MS)检测的固相萃取分析猪血清中的25-羟基维生素D₃。基线校正血清样品以从药品动力性分析中去除25-羟基维生素D₃的内源浓度。为获得该浓度，从每个动物的剂量后浓度中减去每个动物的给药前25-羟基维生素D₃的浓度。小于1ng/ml的猪样品(定量的下限)被赋值0。

表6报告了药物动力参数。

表6

表7报告了组1至组3的剂量标准化药物动力参数。

表7

对于给药组1、2和4的胶囊(250μg MR胶囊)，由于剂量而导致暴露的增加。与剂量成比例的暴露出现在1×250μg和2×250μg剂量处，稍微小于0在2×250μg和4×250μg剂量之间观察到成比例的暴露。获得最大浓度的平均时间(T_max)为25.5至30.5小时。

单胶囊(1×1000μg)与四个胶囊(4×250μg)的暴露比较显示在被给药多个胶囊的动物中更高的暴露。两个给药方案的剂量独立参数，例如平均T_max相似。

25-羟基维生素D₃的缓释制剂(MR)(组1)与IR制剂(组5)的比较表明MR制剂避免了血清25-羟基维生素D₃浓度的激增。与IR制剂相比，MR制剂的相对生物药效率为约77％。接受MR制剂的动物呈现26.5小时的平均T_max，其表明与接受IR制剂(T_max＝5.75小时)相比显著的延迟。

评估接受1×250μg MR胶囊的动物在1、2和3天的暴露。给药后24小时分别第一次给药、第二次给药和第三次给药后，25-羟基维生素D₃浓度超过基线的平均增加分别为17.3、31.5和43.9ng/mL。

图13至图18分别组1至6的动物的平均药物动力学图。图19显示了250μg的25-羟基维生素D₃的MR和IR制剂的药物动力学图的比较。

实施例3–口服胶囊的微型猪中系统性暴露的研究

本研究的目的是评估在健康正常雄性Yucatan猪(至50-60kg体重)中系统性25-羟基维生素D₃浓度的增加，对所述猪维持包含充足维生素D摄入的饮食，然后每日如下给药21天：a)25μg速释(IR)25-羟基维生素D₃胶囊(组1)，b)25μg改变的释放(MR)25-羟基维生素D₃胶囊(组2)，和c)125μg MR 25-羟基维生素D₃胶囊(组3)。

基于上面的组7，实施例1的制剂制备MR制剂。25-羟基维生素D₃浓度中的差异由乙醇的相对变化抵消。

为制备IR制剂，将25-羟基维生素D₃(0.12％wt/wt，250μg每个胶囊)溶于乙醇USP(2.32％wt/wt，增溶剂)，并与玉米油USP(97.54％wt/wt，主要载剂)和丁基化羟基甲苯(0.02％wt/wt，抗氧化剂)。将所述玉米油溶液(205mg)填入尺寸0两片硬胶囊。

每天对每组8个雄性Yucatan微型猪以基于表8中说明的剂量给药。

表8

在第一次给药之前、每日给药后24小时、先于后来给药前，采集动物的血液。用高性能液相色谱质谱/质谱联(LC MS/MS)检测的固相萃取分析血清25-羟基维生素D₃的浓度。检测在下面的时间点采集的样品中总血清钙：给药前(0天)和最后给药后(21天)24小时。

在所有3个组中，给药前意味着血清25-羟基维生素D₃浓度大约26ng/mL。21剂量后，在所有动物中观察到血清25-羟基维生素D₃的增加。重复给药25μg MR或IR胶囊后，血清25-羟基维生素D₃的浓度增加到约30ng/mL的水平，并在分别在大约17至18天时达到大约45和55ng/mL的稳定水平。在给药单剂量时，两种计划之间血清25-羟基维生素D₃的增加可比(3.84比4.18ng/mL)。另一方面，在给药结束的增加比给药IR制剂的动物大大约60％。这个发现说明MR胶囊的生物药效率与单次给药后的IR可比，但是MR胶囊提出了一个重复给药25-羟基维生素D₃的方法，其中，全身的25-羟基维生素D₃可逐渐增加。

给药125μg MR胶囊的动物呈现更高水平的血清25-羟基维生素D₃。给药5倍剂量(125μg比25μg MR胶囊)导致单次和重复给药后25-羟基维生素D₃大约5倍的增加。该发现意味着在25至125μg下MR胶囊的暴露与剂量成比例。

研究了给药IR和MR胶囊对血清钙浓度的作用。给药21个剂量IR或MR后，血清中钙的水平相对于给药前基线水平无变化。该发现表明可利用25-羟基维生素D₃的MR胶囊使血清25-羟基维生素D₃增加到大于100ng/mL而不会引起血清钙的增加。

组1至组3的平均未校正血清25-羟基维生素D₃浓度比时间图说明于图20中。组1至组3的平均基线校正血清25-羟基维生素D₃浓度比时间图分别说明于图22和图23中。

图24显示了从给药前到21天的组1动物的甲状旁腺激素水平的平均变化，图25显示了从给药前到21天的组2动物的甲状旁腺激素水平的平均变化。这个研究中给药的速释和缓释制剂都提高了血清25-羟基维生素D₃；然而，速释制剂导致这些受试者中PTH的非期望的药理减少。给药的缓释制剂未影响PTH的急剧超生理减少，并允许PTH的逐渐减少，相信与对25-羟基维生素D₃水平的显著上升的生理适应有关。所述MR制剂允许达到更高血清25-羟基维生素D₃水平，而没有与非期望的PTH的药理减小相关的安全顾虑。

实施例4口服胶囊的小猎犬中药物动力学研究

每天给药缓释25-羟基维生素D₃的胶囊给小猎犬(10公斤)13个连续的周。根据上面的实施例1，组7制备MR制剂。25-羟基维生素D₃的浓度差异被乙醇的相对变化抵消。

如下表9所示，口服给药所述胶囊。

表9

第一次给药前和在第一次给药后的具体时间点，最多到13周(92天)给狗放血。产生血清，并用液相色谱质谱联用方法分析血清中的25-羟基维生素D₃。

图26说明了组1至组5的平均血清25-羟基维生素D₃浓度比时间的图。

实施例5溶解释放

图27显示根据上面实施例2的250μg胶囊的溶解释放谱，其显示在24小时，约72％的25-羟基维生素D₃的平均释放。如上所述，优选地，缓释制剂在第一个24小时，释放约80％的药物。

实施例6-维生素D不足的健康成年男性志愿者中的功效研究

在被诊断为维生素D不足的健康非肥胖男性的23天的研究中，检查维生素D的三种不同制剂在恢复血清25-羟基维生素D至最佳水平(>30ng/mL)中的效力。第一种制剂(制剂#1)为按照在实施例1，上述组7中的说明制备的包含30μg的25-羟基维生素D₃的软明胶胶囊。第二种制剂(制剂#2)为包含溶于中型甘油三酸酯油的50,000IU的维生素D₂的相同外观的速释胶囊。第三种制剂(制剂#3)为包含溶于中型甘油三酸酯油的50,000IU的维生素D₃的同样相同外观的速释软胶囊。总共100个健康的白人和非洲裔美国男性参与这个研究，其全部年龄都在30至45岁，并具有15和29ng/mL(包含)血清25-羟基维生素D水平。所有受试者研究开始前戒绝食用其它维生素D补充60天，并持续至研究结束，并避免大量的阳光暴露。研究的第一天和第二天，提供所有受试者禁食上午血样品，以建立血清25-羟基维生素D的预处理基线值。第三天上午，提供受试者另外的禁食上午血样品(t＝0)，随即指定4个处理组中的一个，并在吃早餐前给药单测试胶囊：组#1中的每个受试者接受制剂#1的单个胶囊，并且组#2和组#3中的每个受试者分别接受制剂#2或制剂#3的单个胶囊。组#4中的受试者接受匹配的安慰剂胶囊。组#1中的每个受试者第4天至地22天的早餐前接受额外的制剂#1的胶囊，但是组#2、#3和#4中的受试者不接受额外的胶囊。在第4、5、6、10、17和23天(或开始给药后的1、2、3、7、14和20天)，从每个受试者取禁食早餐血。分析所有收集的血液包含的25-羟基维生素D和PTH的水平，并且在校正基线值后，通过治疗组分析数据。基于第一天至第三天取的禁食血样品的分析，全部4个组的受试者呈现大约16至18ng/mL的平均基线血清25-羟基维生素D水平。组#4(对照组)中的受试者在整个研究中未呈现平均血清25-羟基维生素D的显著变化。组#1中的受试者显示稳定增加的平均血清25-羟基维生素D，在第23天达到至少30ng/mL，并且减少血浆PTH。显著对比的是，组#2中的受试者给药后的最初的几天显示显著增加的平均血清25-羟基维生素D，达到最大29ng/ml，然后此后下降。在研究末期，血清25-羟基维生素D比组#2中的基线显著低，并且血浆PTH未减小。组#3中的受试者给药后的最初两周，显示持续的平均血清25-羟基维生素D的减小，其后出现逐渐，但是持续的减少。在研究末期，平均血清25-羟基维生素D低于30ng/mL，仅比预处理基线高大约11ng/mL，并且血浆PTH仅略微减少。该研究的数据证明如此处所述的600μg的25-羟基维生素D₃的给药，并且每天给药30μg剂量20天，在恢复低血清25-羟基维生素D至最佳水平中比单剂量形式的维生素D₂或维生素D₃的50,000IU的速释制剂显著地更有效，所述速释制剂目前被NKF和其它口服维生素D替代治疗的主要专家推荐。

实施例7与维生素D不足相关的4期CKD和继发性甲状旁腺功能亢进的患者中的效率研究。

在与维生素D不足相关的4期CKD和继发性甲状旁腺功能亢进的男患者和女患者的6个月的研究中，检查在恢复血清总25-羟基维生素D至最佳水平(>30ng/mL)中口服迅释和缓释25-羟基维生素D₃的效力。该研究中使用两种制剂。一个制剂(制剂#1)为包含40μg的25-羟基维生素D₃的缓释制剂的软明胶胶囊。第二个制剂(制剂#2)为包含40μg的25-羟基维生素D₃的迅速释放制剂的软明胶胶囊。总共100个受试者参与这个研究，在登记时，其全部年龄都在30至70岁，并具有15和29ng/mL(包含)血清25-羟基维生素D水平，并且血清全段甲状旁腺激素(iPTH)水平在最近的K/DOQI指南中公开的目标水平之上。所有受试者研究开始前戒绝食用其它维生素D补充60天，并持续至研究结束，并避免大量的阳光暴露。所有受试者开始每天给药制剂#1或制剂#2的胶囊。以两周的时间间隔测量血清总25-羟基维生素D，以一季的时间间隔测量血清iPTH。一个月后，在血清总25-羟基维生素D为50至90ng/mL的患者中，保持两种制剂的每日剂量不变；在血清总25-羟基维生素D小于50ng/mL的患者中，增加1个胶囊；在血清总25-羟基维生素D大于90ng/mL的患者中，减少1个胶囊。进一步调节每日剂量，以保持血清总25-羟基维生素D在50至90ng/mL。如果没有产生高血钙症、高钙尿症和高磷血症，持续不确定地同时给药制剂#1和#2，在这种情况下，做出合适的剂量调节。6个月后，发现制剂#1治疗的受试者的血清总25-羟基维生素D水平在50至90ng/mL保持稳定，并发现血清iPTH在与K/DOQI指南中公开的目标一致或接近的水平保持稳定。一旦获得稳定的给药，高血钙症、高钙尿症和高磷血症的发生稀少。相反，6个月后，未发现制剂#2治疗的受试者的血清总25-羟基维生素D水平在50至90ng/mL保持稳定，并且血清iPTH未达到与K/DOQI指南中公开的目标一致或接近的水平。高血钙症、高钙尿症和高磷血症大量发生。

这个研究的数据证明所述25-羟基维生素D₃的缓释制剂有效地增加血清25-羟基维生素D，而不会引起与钙和PTH代谢相关的无法接受的副作用。

实施例8 3期和4CKD中用于继发性甲状旁腺功能亢进的改变的释放胶囊和静脉内骨化二醇的药效和药动图

在这个随机的公开标记的单剂量研究中，具有16ng/mL和29ng/mL之间的基线血清总25-羟基维生素和血清iPTH上述K/DOQI靶子的27受试者给药用根据这里公开的缓释口服制剂(450或900μg)或IV骨化二醇(25-羟基维生素D₃)(448μg)以评估生物药效率、药物动力学、药效学、安全性和毒性。所述缓释剂量制剂与这里表2中制剂7相同，除了以下区别：(1)植物类胶囊用于代替明胶胶囊，(2)硬石蜡含量减小至20％，并且(3)液态石蜡(轻矿物油)含量增加到30％。每个胶囊的25-羟基维生素D₃的量为90μg。在给药后第一个24小时测量，评估所述生物药效率为约7％，接下来的期间总共42天，为约10％。

监控血6周清钙(Ca)、磷(P)、iPTH、25-羟基维生素D₃和总1,25-二羟维生素D。平均数(±SD)基线25-羟基维生素D₃和iPTH本别为20±10ng/mL和197±146pg/mL。骨化二醇IV迅速提高平均25-羟基维生素D₃至134±19ng/mL。所述缓释胶囊产生25-羟基维生素D₃逐渐增加到平均25±10ng/mL(450μg)和32±16ng/mL(900μg)。骨化二醇IV的血清25-羟基维生素D₃Tmax为0.5±0.6小时，而缓释制剂的T_max为13.1±9.6小时(450μg)和13.6±10小时(900μg)。在该研究的持续期间(42天)测量，缓释制剂的生物药效率为约10％。在任何处理组中，观察到未确认的高血钙症(>10.3mg/dL)。

在骨化二醇IV后90小时，血清总1,25-二羟维生素D达到18pg/mL的增加；和在450μg和900μg的所述缓释胶囊后在100至200小时，分别增加15pg/mL和9pg/mL。骨化二醇IV和450μg的所述缓释胶囊对平均iPTH没有临床意义的影响。在24小时，900μg剂量的所述缓释胶囊减小iPTH从基线的平均19％。骨化二醇IV后血清总1,25-二羟维生素D中的速释在甲状旁腺中可具有触发维生素D分解酶CYP24过量表达，导致局部激素抵抗和限制的iPTH抑制。

与下面的IV骨化二醇(1776小时)相比，在给药所述缓释胶囊后，绝对25-羟基维生素D₃水平的消除半衰期(t_1/2)巨大地增加(2478和3229小时)。与下面的IV骨化二醇(2216小时)相比，在给药所述缓释胶囊后，绝对1,25-羟基维生素D水平的消除半衰期(t_1/2)也巨大地增加(3975和3833小时)。

表10和表11显示了观测到的基线调整的处理组的25-羟基维生素D₃药物动力学参数的概要。表12和表13显示了观测到的基线调整的处理组的25-羟基维生素D₃药物动力学参数的概要。

这些发现证明缓释胶囊逐渐使25-羟基维生素D₃的水平正常并防止患者群体中iPTH的提高，并且减低iPTH的机制可比简单的促进血清总25-羟基维生素D更复杂。

图28显示了维生素D不足或继发性甲状旁腺功能亢进的3期和4期慢性肾病受试者静脉内(N＝8)或口服(N＝8)给药450μg单剂量的此处所述的缓释制剂的25-羟基维生素D₃或口服给药900μg单剂量的此处所述的缓释制剂的25-羟基维生素D₃(N＝8)中，96小时内血清25-羟基维生素D₃水平的变化的图。25-羟基维生素D₃的口服给药制剂逐渐增加了血清25-羟基维生素D₃的水平，在96个小时内保持增长，并避免了25-羟基维生素D₃血清水平的激增。具有900μg的25-羟基维生素D₃的口服给药制剂在96小时，增加血清25-羟基维生素D₃的水平大约10ng/ml，而具有450μg of 25-羟基维生素D₃的制剂仅增加5ng/ml。

图29显示了维生素D不足或继发性甲状旁腺功能亢进的3期和4期慢性肾病受试者静脉内给药(N＝8)或口服给药(N＝8)单剂量的450μg 25-羟基维生素D₃的此处所述的缓释制剂(N＝8)，或口服给药单剂量的900μg的25-羟基维生素D₃的此处所述的缓释制剂的(N＝8)中，96小时内血清1,25-羟基维生素D₃水平的变化的图。25-羟基维生素D₃的口服给药制剂逐渐增加了血清1,25-羟基维生素D₃的水平，在96个小时内保持增长，并避免了1,25-羟基维生素D₃血清水平的激增。具有900μg的25-羟基维生素D₃的口服给药增加了血清1,25-羟基维生素D₃水平至大于具有450μg的25-羟基维生素D₃的口服给药的剂量，其仅增加了1,25-羟基维生素D₃约2.5pg/mL。

图30显示了维生素D不足或继发性甲状旁腺功能亢进的3期和4期慢性肾病受试者口服给药单剂量的900μg 25-羟基维生素D₃的此处所述的缓释制剂(N＝8)与静脉内给药单剂量的约448μg(具体地448μg)25-羟基维生素D₃(N＝8)比较，甲状旁腺激素水平的平均％变化的图。后面的组用作对照(100％基线)。

图31显示了iPTH水平中的平均％变化，具有维生素D缺乏和继发性甲状旁腺功能亢进的3期或4期慢性肾病受试者以缓释制剂静脉内给药单剂量的448μg 25-羟基维生素D3(N＝8)或口服给药单剂量450μg(N＝8)或900μg(N＝8)的25-羟基维生素D₃。口服给药单剂量900μg产生iPTH中持续减少的稳定下降，16.8％的最终平均％下降。

图28至图31说明，整个研究中，所述血清钙水平保持在正常范围内。此外，没有报道严重不良事件。

提供上述说明仅用于清楚地理解，由于在本发明范围内的修改对本领域普通技术人员来说显而易见，应理解从中没有不必要的限制。

整个说明书中，除非另外说明，当说明组合物包含组分和材料时，预期组合物主要由任何引用的组分或材料组成，或由任何引用的组分或材料组成。

这里公开的方法及其各个步骤的实践可用手和/或在电子装置的帮助下进行。虽然已经参照具体的实施方式说明了方法，本领域普通技术人员易于理解可使用与所述方法相关的其它的进行操作的方法。例如，除非另外说明，在不背离所述方法的范围和精神的情况下，可改变各种步骤的次序。此外，各个步骤的一些可被组合、省略或进一步分成额外的步骤。

Claims

1.包括25-羟基维生素D₂、25-羟基维生素D₃或其组合的缓释剂型，其中所述缓释剂型含有至少为15μg/kg的剂量的25-羟基维生素D₂、25-羟基维生素D₃或其组合，所述剂量能够有效地在用于治疗人类患者的继发性甲状腺功能亢进的口服给药后的第一个24小时内使血清总25-羟基维生素D上升，所述上升为至少7ng/ml且不大于30ng/ml，并降低所述患者的血清总甲状旁腺激素(iPTH)水平。

2.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述缓释剂型在给药后第一个24小时内使血清总25-羟基维生素D上升，所述上升为至少8ng/ml且不大于16ng/ml。

3.如权利要求2所述的缓释剂型，其中，所述缓释剂型在给药后第一个24小时内使血清总25-羟基维生素D上升，所述上升为至少10ng/ml且不大于14ng/ml。

4.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述患者的血清总25-羟基维生素D提高到至少30ng/ml。

5.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，与基线相比，所述患者的iPTH水平降低至少10％。

6.如权利要求5所述的缓释剂型，其中，与基线相比，所述患者的iPTH水平降低至少15％。

7.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述患者的iPTH水平保持降低至少48小时。

8.如权利要求7所述的缓释剂型，其中，所述患者的iPTH水平保持降低至少7天。

9.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述缓释剂型用于以每两天一次或更低的频率给药。

10.如权利要求9所述的缓释剂型，其中，所述频率为每周一次。

11.如权利要求10所述的缓释剂型，其中，所述频率为每月一次。

12.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，给药的所述25-羟基维生素D₂、25-羟基维生素D₃或其组合的生物有效量大于45μg。

13.如权利要求12所述的缓释剂型，其中，给药的所述25-羟基维生素D₂、25-羟基维生素D₃或其组合的生物有效量在70至110μg的范围。

14.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述患者患慢性肾病(CKD)致甲状旁腺功能亢进。

15.如权利要求14所述的缓释剂型，其中，所述CKD为2期、3期、4期或5期CKD。

16.如权利要求15所述的缓释剂型，其中，所述CKD为3期或4期。

17.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述缓释剂型在给药后第一个24小时内使血清总1,25-二羟基维生素D上升，所述上升为大于3pg/ml且小于10pg/ml。

18.如权利要求17所述的缓释剂型，其中，在给药后第一个48小时内血清总1,25-二羟基维生素D的上升，所述上升为至少7pg/ml且小于10pg/ml。

19.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述给药步骤后血清总1,25-二羟基维生素D的T_max为至少4小时。

20.如权利要求19所述的缓释剂型，其中，所述给药步骤后血清总1,25-二羟基维生素D的T_max为至少12小时。

21.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述患者还患有由小于30ng/ml的血清总25-羟基维生素D所定义的维生素D不足或缺乏。

22.如权利要求1所述的缓释剂型，其中，所述缓释剂型包含25-羟基维生素D₃。

23.如权利要求1所述的缓释剂型，进一步包括约20wt％的硬石蜡和约10wt％的聚乙二醇甘油酯。

24.包括25-羟基维生素D₂、25-羟基维生素D₃或其组合的缓释剂型，其中所述缓释剂型含有至少为15μg/kg的剂量的25-羟基维生素D₂、25-羟基维生素D₃或其组合，约20wt％的硬石蜡和约10wt％的聚乙二醇甘油酯。

25.如权利要求24或25所述的缓释剂型，包括约900μg的25-羟基维生素D₂、25-羟基维生素D₃或其组合。