CN103857699A - 多价和单价多特异性复合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

描述了含有多价和单价多特异性复合物的组合物，所述复合物具有支持这类结合功能性的支架，如抗体。还描述了含有多价和单价多特异性复合物的组合物的用途和方法，所述复合物具有支持这类结合功能性的支架，如抗体。

Description

多价和单价多特异性复合物及其用途
发明背景 
发明领域
本发明一般地涉及含有多价多特异性复合物的组合物以及含有多价和单价多特异性复合物的组合物，所述复合物具有支持这类结合功能性的支架，如抗体。本发明总体上也涉及制备这些多特异性组合物的方法和这些组合物的诊断性用途和治疗性用途。 
背景 
近年来，药物发现工作已经主要致力于鉴定调节预选择的各个靶的药物。然而，针对各个靶的药物经常显示有限的功效和不良的安全谱和抗性谱，原因在于与治疗靶相关的稳健性、冗余性、串扰、代偿性信号传导网络和抗-或对抗-信号传导网络活动。因此，药物发现工作已经日益涉及基于疗法发现的多重组分。 
开发同时靶向两种或更多种靶的双特异性或多特异性分子为发现面向系统的多靶向新药物提供新的和有前景的解决方案，所述新药物显示胜过常规单药疗法的改进功效和药理学特性。开发多特异性分子的许多尝试基于免疫球蛋白样结构域或亚结构域。例如，传统上，已经通过化学地连接两种不同单克隆抗体或通过融合两个杂交瘤细胞系以产生杂合杂交瘤，制备双特异性抗体。已经产生多特异性和/或多价分子的基于免疫球蛋白样结构域的其他技术包括dAb、双抗体、TandAb、纳米体、BiTE、SMIP、DNL、亲和体、Fynomer、Kunitz结构域、Albu-dab、DART、DVD-IG，Covx体、肽体(peptibody)，scFv-Ig、SVD-Ig、dAb-Ig、Knobs-in-Hole、DuoBodiesTM和三功能抗体（triomAb）。虽然这些分子的每一种均可以结合一种或多种靶，但是就保留常见Ig功能(例如，半寿期、效应子功能)、生产(例如，产量、纯度)、价态、同时识别靶和生物利用率而言，它们各自存在挑战。 
产生多特异性和多价分子的其他尝试依赖于替代性支架，基于VASP多肽、禽类胰腺多肽(aPP)、四连接素(基于CTLD3)、Affilin(基于γB-晶体蛋白/遍在蛋白)、打结素(knottin)、SH3结构域、PDZ结构域、Tendamistat、转铁蛋白、锚蛋白共有重复结构域(例如，DARPin(设计的锚蛋白重复序列蛋白))、脂笼蛋白折叠(例如，Duocalin)、纤连蛋白(见例如，美国专利申请号2003/0170753和20090155275，所述文献通过引用的方式并入本文)、蛋白A的结构域(例如，亲和体)、硫氧还蛋白。其他尝试依赖于替代性支架，使目的多肽与白蛋白融合物或缔合(例如，ALBUdAb(Domantis/GSK)和ALB-Kunitz(Dyax))、3个或6个氨基酸的非结构化重复序列(例如，
Figure BDA0000457457350000021
技术和
Figure BDA0000457457350000022
技术)和含有弹性蛋白样重复结构域的序列(见例如，美国专利申请号61/442,106，所述文献通过引用的方式并入本文)。迄今，这些技术已经作为开发多样性多特异性和多价治疗性组合物的稳健平台展示出有限的临床潜力。 
大多数人恶性肿瘤和其他病症的遗传复杂性强烈地提示干扰与这些病症相关的单一靶或途径不可能产生最佳或持久的治疗益处。因此迫切需要开发多特异性和多价治疗药，如多特异性抗体，所述治疗药能够干扰多个靶和/或信号传导机制的活性以优化针对这些病症的治疗的治疗益处。 
发明简述 
本发明涉及含有多价以及多价和单价多特异性复合物的组合物，所述复合物具有支持这类结合功能性的支架如抗体。本发明部分地基于以下令人惊讶的发现：与常规单药疗法组合相比，多特异性和多价结合性组合物，如利用ZYBODYTM平台产生的那些(Zyngenia,Inc.；见，例如国际公开号WO2009/088805，所述文献通过引用的方式并入本文)，显示巨大的协同生物活性。这种协同活性预期扩展至新疗法，用于治疗或预防癌症、免疫系统(例如，自身免疫疾病，如类风湿性关节炎和IBD)、骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统(例如，中风、 心脏病)、神经系统(例如，阿尔茨海默病)的疾病或病症、传染病(例如，HIV)和本文所述或本领域已知的其他疾病或病症。 
在一个实施方案中，本发明涉及通过向有需要的患者施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物治疗疾病或病症。在又一个实施方案中，本发明涉及通过向有需要的患者施用治疗有效量的多价和多特异性含有MRD的抗体治疗疾病或病症。 
在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对3种或更多种靶的2个结合位点。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对4种或更多种靶的2个结合位点。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对5种或更多种靶的2个结合位点。根据一些实施方案，至少1、2、3、4种或更多种靶位于细胞表面上。根据一些实施方案，至少1、2、3、4种或更多种靶是可溶性靶(例如，趋化因子、细胞因子和生长因子)。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合本文所述的1、2、3、4种或更多种靶。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与癌症相关。在又一个实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与癌症相关的1、2、3、4个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与免疫系统疾病或病症相关。在又一个实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与免疫系统疾病或病症相关的1、2、3、4个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统，神经系统的疾病或病症或传染病相关。在又一个实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关的1、2、3、4、5个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。在又一个实施方案中，该多价和单价多特异性 组合物结合至少1、2、3、4、5种或更多种本文所述的靶。 
在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对3种或更多种靶的2个结合位点。在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对4种或更多种靶的2个结合位点。在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对5种或更多种靶的2个结合位点。 
在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对3种或更多种靶的2个结合位点。在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对4种或更多种靶的2个结合位点。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对5种或更多种靶的2个结合位点。根据一些实施方案，至少1、2、3、4种或更多种靶与细胞膜结合。根据一些实施方案，至少1、2、3、4种或更多种靶是可溶性靶(例如，趋化因子、细胞因子和生长因子)。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合1、2、3、4种或更多种本文所述的靶。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与癌症相关。在又一个实施方案中,由多价和单价多特异性组合物结合的靶与癌症相关的1、2、3、4个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与免疫系统疾病或病症相关。在又一个实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与免疫系统疾病或病症相关的1、2、3、4个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合(1)目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原、免疫细胞、患病细胞或传染因子(infectious agent))和(2)效应细胞上的靶。根据一个实施方案，该多价和单价多特异性组合物对一种或多种靶的结合在患者中指导针对细胞、组织、传染因子或其他目的位置的免疫反应。在一些实施方案中，效应细胞是白细胞，如T细胞或天然杀伤细胞。在 其他实施方案中，效应细胞是辅助细胞，如髓样细胞或树突细胞。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合(1)目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原、免疫细胞、患病细胞或传染因子)和(2)白细胞上的靶，如T-细胞受体分子。根据一个实施方案，该多价和单价多特异性组合物对一种或多种靶的结合在患者中指导针对传染因子、细胞、组织或其他目的位置的免疫反应。例如，在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合T细胞表面上的靶。在具体的实施方案中，该组合物结合选自CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、TCRα、TCRβ和CD3(TCR)复合物中蛋白质多聚体的CD3靶。在特定的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合CD3。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合CD2。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在天然杀伤细胞上表达的靶。因而，在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合选自CD2、CD56和CD161的靶。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在附属细胞(例如，髓样细胞)上表达的靶。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合选自CD64(即，FcγRI)、MHC II类及其不变链、TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR6的靶。 
在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对靶的单结合位点(即，为单价)。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对白细胞(如T-细胞)上的靶(例如，CD3)的单结合位点和针对目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原，如本文中公开的靶)的多结合位点(即，为多价)。在其他实施方案中，多特异性组合物含有针对2个不同靶的单结合位点(即，单价结合多于一个不同靶)。在具体的实施方案中，目的细胞或组织是癌细胞、免疫细胞、患病细胞或传染因子。 
在一些实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对CD3的单结合位点。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对CD3的单结合位点和针对1、2、3、4、 5种或更多种不同靶(例如，本文中公开的肿瘤抗原或其他靶)的多结合位点。在另外的实施方案中，多特异性组合物具有针对CD3的单结合位点和针对不同靶的单结合位点(即，单价结合CD3和不同的靶)。在其他实施方案中，多价和单价多特异性组合物具有针对CD3ε的单结合位点。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对CD3ε的单结合位点和针对1、2、3、4、5种或更多种不同靶(例如，本文中公开的肿瘤抗原或其他靶)的多结合位点。在其他实施方案中，该多特异性组合物具有针对CD3ε的单结合位点和针对不同靶的单结合位点(即，单价结合CD3ε和不同的靶)。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对癌细胞上的靶的多结合位点，所述癌细胞选自乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾(肾细胞)癌症、肺癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、白血病、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和甲状腺癌。 
在其他实施方案中，本发明涉及通过向有需要的患者施用治疗有效量的对靶具有单结合位点(即，单价结合靶)的多价和单价多特异性组合物治疗疾病或病症。在一些实施方案中，施用的多价和单价多特异性组合物具有针对白细胞(如T-细胞)上的靶(例如，CD3)的单结合位点)。在一些实施方案中，施用的多价和单价多特异性组合物具有针对白细胞(如T-细胞)上的靶(例如，CD3)的单结合位点和针对位于目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)的多结合位点(即，能够多价结合)。在其他实施方案中，多特异性组合物具有针对白细胞上的靶(例如，CD3)的单结合位点和针对不同靶的单结合位点。在一些实施方案中，目的细胞是来自癌的肿瘤细胞，所述癌选自乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾(肾细胞)癌症、肺癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、白血病、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和甲状腺癌。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对神经肿瘤上的靶的多结合位点。在具体的实施方案中，神经肿瘤是胶质瘤(例如，胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GBM)和星形细胞瘤)、室管膜瘤、少突胶质细胞瘤、神经纤维瘤、肉瘤、髓母细胞瘤、原始神经外胚层肿 瘤、垂体腺瘤、神经母细胞瘤或脑膜的癌症(例如，脑膜瘤、脑膜肉瘤(meningiosarcoma)和胶质瘤(gliomatosis))。 
在其他实施方案中，本发明涉及通过向有需要的患者施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗疾病或病症，所述组合物具有针对靶的单结合位点(即，单价结合靶)和针对1、2、3、4、5种或更多种不同靶的多结合位点。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对2种不同靶的单结合位点。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对癌细胞上的靶的多结合位点，所述癌细胞选自乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾(肾细胞)癌症、肺癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、白血病、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和甲状腺癌。 
在另外的实施方案中，本发明涉及通过向有需要的患者施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗疾病或病症，所述组合物具有针对CD3(例如，CD3ε)的单价结合CD3的单结合位点(即，单价结合靶)和针对1、2、3、4、5种或更多种位于目的细胞或组织上的不同靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)的多结合位点。在一些实施方案中，施用的多价和单价多特异性组合物具有针对CD3(例如，CD3ε)的单结合位点和针对不同靶的单结合位点，并且还具有针对位于目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)的多结合位点。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对癌细胞上的靶的多结合位点，所述癌细胞选自乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾(肾细胞)癌症、肺癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、白血病、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和甲状腺癌。 
在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对需要多聚化用于信号传导的细胞表面靶的单结合位点(即，单价结合)。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对生长因子受体的单结合位点。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对TNF受体超家族成员的单结合位点。在另外的实施方案中，该多特异性组合物另外地具有针对不同 靶的单结合位点(即，单价结合多于一种不同的靶)。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合与内源血脑屏障(BBB)受体介导的转运系统相关的靶并且能够跨越到达BBB的脑(脑脊液)侧。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对与内源BBB受体介导的转运系统相关的靶抗原的两个或更多结合位点。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对与内源BBB受体介导的转运系统(例如，胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦蛋白受体、脂蛋白受体和IGF受体介导的转运系统)相关的靶的单结合位点。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物另外地结合位于BBB的脑侧上的1、2、3、4、5种或更多种靶。在具体的实施方案中，含有MRD的抗体结合与神经疾病或病症相关的1、2、3、4、5种或更多种靶。在另一个实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗脑癌、脑的转移性癌症或脑的原发性癌症。在又一个实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗脑损伤、中风、脊髓损伤或控制疼痛。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合的靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。在又一个实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与一种或多种以上疾病或病症相关的1、2、3、4、5个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。在又一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合1、2、3、4、5种或更多种本文所述的靶。 
在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物是ZYBODYTM(在本文中称作“含有MRD的抗体”等)。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体含有针对3种或更多种靶的结合位点。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体含有针对4种或更多种靶的2个结合位点。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体含有针对5种或更多种靶的2个结合位点。 
在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有针对3种或更多种靶的2个结合位点。在一个另外的实施方案中，多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有针对4种或更多种靶的2个结合位点。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有针对5种或更多种靶的2个结合位点。根据一些实施方案，至少1、2、3、4种或更多种靶位于细胞表面上。根据一些实施方案，至少1、2、3、4种或更多种靶是可溶性靶(例如，趋化因子、细胞因子和生长因子)。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合至少1、2、3、4、5种或更多种本文所述的靶。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合的靶与癌症相关。在又一个实施方案中，由含有MRD的抗体结合的靶与癌症相关的1、2、3、4个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合的靶与免疫系统疾病或病症相关。在又一个实施方案中，由含有MRD的抗体结合的靶与免疫系统疾病或病症相关的1、2、3、4、5个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。 
在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合的靶与骨骼系统、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。在又一个实施方案中，由含有MRD的抗体结合的靶与一种或多种以上疾病或病症相关的1、2、3、4个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合1、2、3、4种或更多种本文所述的靶。 
本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)提供选择性靶向多个靶(例如，受体和微环境相关的靶)的能力，所述靶具有例如与疾病或病症的病因学或病理生理学相关的不同、重叠或冗余作用机制。 
在另外的实施方案中，本发明涵盖共价或以另外方式与细胞毒剂 连接的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。根据一些实施方案，细胞毒剂通过接头与含有MRD的抗体共价连接。根据一些实施方案，细胞毒剂是化疗药、生长抑制剂、毒素(例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)和/或放射性同位素(即，放射缀合物)或前药。本发明的组合物是任选地通过接头与细胞毒剂连接。在具体的实施方案中，连接多价和单价多特异性组合物和细胞毒剂的接头是蛋白酶可切割的。在具体的实施方案中，连接多价和单价多特异性组合物和细胞毒剂的接头是在低pH或还原条件下可切割的。本发明还涵盖了使用本发明的组合物-细胞毒剂组合物(例如，含有MRD的抗体药物缀合物)的方法。 
在另外的实施方案中，该多价和多特异性组合物共价或以另外方式与细胞毒剂连接，所述细胞毒剂选自例如毒素、化疗药、药物部分(例如，化疗药或前药)、抗生素、放射性同位素、螯合配体(例如，DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA和TETA)和溶核酶。在具体的实施方案中，细胞毒剂选自澳瑞司他汀(auristatin)和海兔毒素(dolostantin)、MMAE、MMAF和类美登素(maytansinoid)衍生物(例如，DM1(N(2')-去乙酰-N(2')-(3-巯基-1-氧代丙基)-美坦辛)、DM3(N(2')-去乙酰-N2-(4-巯基-1-氧代戊基)-美坦辛)和DM4(N(2')-去乙酰-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美坦辛)。 
在其他实施方案中，本发明的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与多靶向性治疗药组合施用。在一个实施方案中，多价和单价多特异性组合物与多靶向性蛋白激酶抑制剂组合施用。在另一个实施方案中，多价和单价多特异性组合物与NFKB抑制剂组合施用。在一个另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物与HDAC抑制剂组合施用。在又一个实施方案中，多价和单价多特异性组合物与HSP70或HSP90抑制剂组合施用。在又一个实施方案中，多价和单价多特异性组合物与化疗组合施用。 
在一些实施方案中，本发明的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与单特异性治疗药(例如，单克隆抗体)组合施用。 
在一些实施方案中，本发明的多价和单价多特异性组合物是包含至少一个模块识别结构域(MRD)的全长抗体。在一些实施方案中，该全长抗体包含多个MRD。在另外的实施方案中，该全长抗体包含多于一个类型的MRD(即，具有相同或不同特异性的多个MRD)。本发明中还体现这类抗体复合物的变体和衍生物。 
含有MRD的抗体的MRD可以在抗体上的任何位置处(例如，重链或轻链的氨基端或重链或轻链的羧基端)与抗体有效连接，可以在相同或不同的末端连接并且任选地通过接头彼此或与抗体有效连接。 
含有MRD的抗体的抗体可以是与抗原结合的任何免疫球蛋白分子并且可以是任何类型、类别或亚类。在一些实施方案中，抗体是人源化或人的。在其他实施方案中，抗体也包括不干扰它们结合抗原的能力的修饰。在具体的实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)包括与不含修饰的抗体相比，增加ADCC、减少ADCC、增加CDC或减少CDC、增加抗体半寿期或缩减抗体半寿期的修饰。 
本发明多价和多特异性组合物的抗体(例如，含有MRD的抗体)可以是与具有治疗或诊断价值的靶结合的任何抗体。在优选的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与验证的靶结合。在一些实施方案中，与含有MRD的抗体相对应的抗体处于临床试验中用于管理机关批准。在一些实施方案中，销售与含有MRD的抗体相对应的抗体。 
在一个实施方案中，该抗体与细胞表面抗原结合。在另一个实施方案中，该抗体与血管生成性因子结合。在又一个实施方案中，该抗体与血管生成性受体结合。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与选自以下的靶结合：EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4、CD20、胰岛素样生长因子-I受体、VEGF、VEGF-R和前列腺特异性膜抗原。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与VEGF、VEGFR1、EGFR、ErbB2、IGF-IR、cMET、FGFR1、FGFR2和CD20结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与EGFR结合。在 另一个具体实施方案中，该抗体是爱必妥
Figure BDA0000457457350000122
尼妥珠单抗或扎鲁木单抗(zalutumumab)(例如，Genmab)。在另一个实施方案中，该抗体与爱必妥抗体结合相同的表位并且竞争性抑制爱必妥抗体与EGFR的结合。在又一个具体的实施方案中，该抗体是爱必妥
Figure BDA0000457457350000125
抗体。在一个具体的实施方案中，该抗体与爱必妥
Figure BDA0000457457350000126
尼妥珠单抗、扎鲁木单抗(例如，Genmab)抗体结合相同的表位。在另一个具体实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体竞争性抑制爱必妥
Figure BDA0000457457350000127
尼妥珠单抗，扎鲁木单抗抗体与EGFR的结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合EGFR和选自以下的靶：HGF、CD64、CDCP1、RON、cMET、ErbB2、ErbB3、IGF1R、PLGF、RGMa、PDGFRa、PDGFRb、VEGFRl、VEGFR2、TNFRSF10A(DR4)、TNFRSF10B(DR5)、IGF1,2、IGF2、CD3、CD4、NKG2D和破伤风类毒素。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合至少1、2、3、4、5种或更多种的这些靶。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合EGFR。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是尼妥珠单抗、扎鲁木单抗。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是爱必妥
Figure BDA0000457457350000128
在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与ErbB2结合。在一个实施方案中，抗体是赫赛汀
Figure BDA00004574573500001210
曲妥珠单抗)抗体或竞争性抑制赫赛汀(曲妥珠单抗)抗体与ErbB2结合。 
在另一个具体实施方案中，该抗体与VEGF结合。在另一个具体实施方案中，该抗体与阿瓦斯汀
Figure BDA00004574573500001212
(贝伐珠单抗)抗体结合相同的表位或竞争性抑制阿瓦斯汀
Figure BDA00004574573500001213
抗体。在又一个具体的实施方案中，该抗体是阿瓦斯汀抗体。 
在一些实施方案中，该抗体与免疫系统疾病或病症相关的靶结合。在一个实施方案中，该抗体与TNF结合。在另一个具体实施方案中，该抗体与修美乐
Figure BDA00004574573500001215
Figure BDA00004574573500001216
阿达木单抗(adalimumab))抗体结合相同的表位或竞争性抑制修美乐
Figure BDA00004574573500001217
抗体。在又一个具体的实施方案中，抗 体是修美乐
Figure BDA0000457457350000131
抗体。在一个实施方案中，该抗体与TNF结合。在另一个具体实施方案中，该抗体与SIMPONITM(戈利木单抗(golimumab))抗体结合相同的表位或竞争性抑制SIMPONITM抗体。在又一个具体的实施方案中，抗体是SIMPONITM抗体。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与代谢系统、心血管系统、骨骼肌系统、神经系统或骨骼系统疾病或病症相关的靶结合。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与酵母、真菌、病毒或细菌感染或疾病相关的靶结合。 
在一个实施方案中，MRD具有约2至150个氨基酸。在另一个实施方案中，MRD具有约2至60个氨基酸。MRD可以直接或通过接头与抗体或其他MRD连接。MRD可以是任何结合靶的肽。在一些实施方案中，MRD靶是可溶性因子。在其他实施方案中，MRD靶是跨膜蛋白如细胞表面受体。在另一个实施方案中，MRD的靶是细胞抗原。在一个具体实施方案中，MRD的靶是CD20。 
在另一个实施方案中，MRD的靶是整联蛋白。在一个方面，靶向整联蛋白的MRD的肽序列是YCRGDCT(SEQ ID NO:3)。在另一个方面，靶向整联蛋白的MRD的肽序列是PCRGDCL(SEQ ID NO:4)。在又一个方面，靶向整联蛋白的MRD的肽序列是TCRGDCY(SEQ ID NO:5)。在另一个方面，靶向整联蛋白的MRD的肽序列是LCRGDCF(SEQ ID NO:6)。 
在一个另外的实施方案中，MRD的靶是血管生成性细胞因子。在一个方面，靶向(即，结合)血管生成性细胞因子的MRD的肽序列是MGAQTNFMPMDDLEQRLYEQFILQQGLE(SEQ ID NO:7)。 
在一个实施方案中，MRD的靶是ErbB2。在另一个实施方案中，与MRD结合的靶是ErbB3。在一个另外的实施方案中，与MRD结合的靶是肿瘤相关表面抗原或上皮细胞黏附分子(Ep-CAM)。 
在一个实施方案中，与MRD结合的靶是VEGF。在一个方面，靶向VEGF的MRD的肽序列是VEPNCDIHVMWEWECFERL(SEQ ID NO:13)。 
在一个实施方案中，与MRD结合的靶是胰岛素样生长因子-I受体(IGF1R)。说明性的靶向IGF1R的MRD例如包括具有以下式的肽序列：NFYQCIDLLMAYPAEKSRGQWQECRTGG(SEQ ID NO:37)。 
在一个实施方案中，MRD的靶是肿瘤抗原。如本文所用的“肿瘤抗原”可以理解为仅在肿瘤细胞上表达的那些抗原(包括突变)(即，肿瘤特异性抗原)和在肿瘤细胞和正常细胞上表达的那些抗原(例如，在肿瘤细胞上过量表达的抗原)。 
在一个实施方案中，MRD的靶是表皮生长因子受体(EGFR)。在本发明的另一个实施方案中，MRD的靶是血管生成性因子。在一个另外的实施方案中，MRD的靶是血管生成性受体。 
在另一个实施方案中，MRD是血管归巢肽。 
在一个实施方案中，MRD的靶是神经生长因子。 
在另一个实施方案中，该抗体和/或MRD与EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4、CD20、胰岛素样生长因子-I受体或前列腺特异性膜抗原结合。 
本发明也涉及分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码含有MRD的抗体的核苷酸序列。在一个方面，载体包含编码含有MRD的抗体的多核苷酸序列。在另一个方面，编码含有MRD的抗体的多核苷酸序列与控制该多核苷酸表达的调节序列有效连接。在另一个方面，宿主细胞包含编码含有MRD的抗体的多核苷酸序列。 
也提供制备多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的方法，还提供这些MRD-抗体融合物在诊断应用和治疗应用中的用途。本发明也涉及设计和制备多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的方法，所述组合物具有包含MRD的全长抗体。在一个方面，MRD源自噬菌体展示文库。在另一个方面，MRD源自天然配体。在另一个方面，MRD源自酵母展示技术或RNA展示技术。 
本发明也涉及一种在有需求的受试者(患者)中治疗或预防疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者(患者)施用包含MRD的抗 体。在一个方面，疾病是癌症。在另一个方面，抑制不想要的血管生成。在另一个方面，调节血管生成。在又一个方面，抑制肿瘤生长。 
某些实施方案提供用于治疗或预防疾病、病症或损伤的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在一些实施方案中，该疾病、病症或损伤是癌症。在其他实施方案中，所述疾病、病症或损伤是免疫系统疾病。在一个实施方案中，免疫系统疾病是炎症。在另一个实施方案中，免疫系统疾病是自身免疫性疾病。在一个另外的实施方案中，免疫系统疾病选自：类风湿性关节炎、Crohn病、系统性红斑狼疮、炎性肠病、银屑病、糖尿病、溃疡性结肠炎和多发性硬化。在一个实施方案中，该疾病、病症或损伤是代谢性疾病。在另一个实施方案中，该疾病、病症或损伤是传染病。在特定的实施方案中，传染病是人免疫缺损病毒(HIV)感染或AIDS、肉毒杆菌中毒、炭疽病或艰难梭状芽孢杆菌病。在其他实施方案中，该疾病、病症或损伤是神经学的。在一个具体实施方案中，该神经疾病、病症或损伤是疼痛。在一个更具体的实施方案中，疼痛是急性疼痛或慢性疼痛。 
在另一个实施方案中，提供了包括施用另外治疗药连同包含MRD的抗体的治疗或预防方法。在其他实施方案中，治疗或预防方法包括施用包含多于一个类型MRD的抗体。 
附图简述 
图1显示多特异性分子和多价分子的不同设计的示意图。将MRD描绘成三角形、菱形和正方形。 
图2A显示作为Fc重链的C端融合物的常见肽体。 
图2B显示C端MRD与抗体轻链融合的含有MRD的抗体。 
图2C显示N端MRD与抗体轻链融合的含有MRD的抗体。 
图2D显示独特MRD肽与抗体的每个末端融合的含有MRD的抗体。 
图3描述酶联免疫吸附测定(ELISA)的结果，其中整联蛋白和 Ang2由抗整联蛋白抗体(JC7U)结合，所述抗整联蛋白抗体与靶向Ang2的MRD(2xCon4)融合。 
图4描述ELISA的结果，其中整联蛋白和Ang2由抗整联蛋白抗体(JC7U)结合，所述抗整联蛋白抗体与靶向Ang2的MRD(2xCon4)融合。 
图5描述ELISA的结果，其中抗ErbB2抗体与靶向Ang2的MRD融合。 
图6描述ELISA的结果，其中靶向Ang2的MRD与结合肝细胞生长因子受体(cMET)的抗体融合。 
图7描述ELISA的结果，其中靶向整联蛋白的MRD与结合ErbB2的抗体融合。 
图8描述ELISA的结果，其中靶向整联蛋白的MRD与结合肝细胞生长因子受体的抗体融合。 
图9描述ELISA的结果，其中靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与结合ErbB2的抗体融合。 
图10描述ELISA的结果，其中靶向VEGF的MRD与结合ErbB2的抗体融合。 
图11描述ELISA的结果，其中靶向整联蛋白的MRD与催化性抗体融合。 
图12描述ELISA的结果，其中靶向Ang2的MRD与催化性抗体融合。 
图13描述ELISA的结果，其中靶向整联蛋白的MRD和靶向Ang2的MRD与结合ErbB2的抗体融合。 
图14描述ELISA的结果，其中靶向整联蛋白的MRD与结合ErbB2的抗体融合。 
图15描述ELISA的结果，其中靶向整联蛋白、Ang2或胰岛素样生长因子-I受体的MRD借助短接头肽与结合ErbB2或肝细胞生长因子受体的抗体融合。 
图16描述ELISA的结果，其中靶向整联蛋白、Ang2或胰岛素样 生长因子-I受体的MRD借助长接头肽与结合ErbB2或肝细胞生长因子受体的抗体融合。 
图17A描述针对与Ang2直接结合所分析的MRD-麦芽糖结合蛋白(MBP)融合物的剂量反应曲线。 
图17B指示测试的MRD-MBP融合蛋白、MRD的氨基酸序列和EC50值(使用4参数拟合法计算)。MRD-MBP融合物的MRD组分中的MXD序列基序加下划线显示并且突变的残基以粗体和斜体显示 
图18A描述在生物素酰化Ang2存在下针对Her2(ErbB2)Fc的基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350000171
的zybody(即含有赫赛汀
Figure BDA0000457457350000172
抗体序列的MRD)、抗体-MRD和赫赛汀
Figure BDA0000457457350000173
抗体的直接结合作用的测定法的结果。用HRP缀合的抗人κ链mAb检测结合作用。 
图18B描述在生物素酰化Ang2存在下针对Her2Fc的基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350000174
的zybody(即，含有赫赛汀
Figure BDA0000457457350000175
抗体序列的MRD)和赫赛汀
Figure BDA0000457457350000176
抗体的直接结合作用的测定法的结果。用辣根过氧化物酶(HRP)缀合的链霉亲和素检测结合作用。 
图19A描述在生物素酰化Ang2存在下针对VEGF的抗体-MRD和阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350000177
抗体的直接结合作用的测定法的结果。用HRP缀合的抗人κ链mAb检测结合作用。 
图19B描述在生物素酰化Ang2存在下针对VEGF的抗体-MRD和阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350000178
抗体的直接结合作用的测定法的结果。用HRP缀合的链霉亲和素检测结合作用。 
图20A描述显示抗体-MRD在BT-474乳腺癌细胞上同时结合Her2和Ang2的流式细胞测定法的结果。 
图20B描述抗体-MRD与BT-474乳腺癌细胞上HER2的结合。 
图21描述ELISA测定的结果，所述ELISA测定显示抗体-MRD对TIE-2与平板固定Ang2结合的抑制性作用。 
图22描述竞争性结合测定法的结果，所述竞争性结合测定法显示抗体-MRD和未标记的抗体抑制生物素酰化的抗体的结合。 
图23描述竞争性结合测定法的结果，所述竞争性结合测定法显示 抗体-MRD和未标记的抗体抑制标记的抗体与BT-474细胞结合。 
图24A描述了说明lm32MRD(SEQ ID NO:8)与重链融合的赫赛汀
Figure BDA0000457457350000181
和赫赛汀抑制BT-474细胞增殖的拟合剂量曲线。 
图24B描述了说明lm32MRD与轻链融合的赫赛汀
Figure BDA0000457457350000183
和赫赛汀
Figure BDA0000457457350000184
抑制BT-474细胞增殖的拟合剂量曲线。 
图24C描述了说明2xcon4MRD与重链融合的赫赛汀
Figure BDA0000457457350000185
和赫赛汀抑制BT-474细胞增殖的拟合剂量曲线。 
图25A描述细胞毒性测定法的结果，所述细胞毒性测定法说明lm32MRD与重链融合的赫赛汀
Figure BDA0000457457350000187
lm32MRD与轻链融合的赫赛汀和赫赛汀
Figure BDA0000457457350000189
所致的ADCC介导的BT-474细胞杀伤。 
图25B描述细胞毒性测定法的结果，所述细胞毒性测定法说明2xcon4MRD与重链融合的赫赛汀
Figure BDA00004574573500001810
和赫赛汀
Figure BDA00004574573500001811
所致的ADCC介导的BT-474细胞杀伤。 
图26A描述了使用从GlycoTech(Gaithersburg,MD)获得的HUVEC时，lm32MRD与重链融合的阿瓦斯汀
Figure BDA00004574573500001812
和阿瓦斯汀
Figure BDA00004574573500001813
抑制HUVEC增殖。 
图26B描述了使用从Lonza获得的HUVEC时，lm32MRD与重链融合的阿瓦斯汀和阿瓦斯汀抑制HUVEC增殖。 
图27描述利妥昔单抗赫赛汀
Figure BDA00004574573500001817
和含有MRD的抗体对体内肿瘤体积的影响。 
图28描述含有MRD的抗体与该抗体联合MRD的作用相比，对受体磷酸化和AKT激活的作用增加。 
图29A描述含有MRD的双特异性抗体与该抗体或该抗体联合MRD的作用相比，对细胞增殖的作用增加。 
图29B描述含有MRD的双特异性抗体与该抗体或该抗体联合MRD的作用相比，对细胞增殖的作用增加。 
图30描述在关节炎模型中与修美乐相比，含有结合Ang2的MRD的修美乐抗体的功效增加。 
图31显示zybody抑制SK-BR3细胞中EGF诱导的信号传导。 
图32显示zybody抑制SK-BR3中调蛋白(Heregulin)诱导的信号传导。 
图33显示zybody抑制SK-BR3细胞中EGF和调蛋白诱导的信号传导。 
图34显示了描述zybody下调SK-BR3细胞上EGFR表达的柱状图(A)流式细胞术结果(B)。 
图35显示zybody下调SKBR3细胞中的EGFR。 
发明详述 
下文提供含有至少一个模块识别结构域(MRD)的抗体的描述。一个或多个MRD与抗体的连接产生本发明的多特异性分子，所述多特异性分子保留传统抗体或Fc优化抗体的结构特征和功能特征并且可以使用常规的抗体表达系统和技术容易地合成。该抗体可以是任何合适的结合抗原的免疫球蛋白并且MRD可以是任何合适的结合靶的肽。MRD可以与抗体上的任何位置有效连接并且这种连接可以是直接或间接的(例如，通过化学接头或多肽接头)。以下节段中还描述包含MRD的抗体的组合物、制备包含MRD的抗体的方法和使用包含MRD的抗体的方法。 
本文所用的节段标题仅出于组织目的并且不得以任何方式解释为限制所描述的主题。 
标准技术可以用于重组DNA分子、蛋白质和抗体生产以及用于组织培养和细胞转化。酶促反应和纯化技术一般根据制备商的说明书进行，或使用常规方法，如Harlow等人，Antibodies:A Laboratory Manual，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版，1988)和Sambrook等人(Molecular Cloning,A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989))(所述两份文献均通过引用的方式并入本文)中所述的那些方法，如本领域通常所完成那样或如本文所述那样进行。除非提供专门定义，否则与本文所述的分析化学、合成有机化学和医学和药物化学相联系所 使用的命名以及实验室方法和技术是本领域已知和使用的那些。标准技术可以用于化学合成、化学分析、药物制备、配制、递送及治疗患者。 
I.定义 
术语“多价和单价多特异性复合物”、“多价和多特异性复合物”、“含有MRD的抗体”、“抗体-MRD分子”、“MRD-抗体分子”、“包含MRD的抗体”和“Zybody”在本文中可互换地使用并且不涵盖肽体。这些术语的每一个也可以在本文中用来指本发明的“复合物”。除了与一种或多种靶结合的MRD之外，多价和单价多特异性复合物可以含有MRD、抗体、细胞毒剂和结合基序。例如，多价和单价多特异性复合物(例如，含有MRD的抗体)可以含有抗体中所含的结合序列(例如，单一结合结构域、scFv、CDR区)的一部分或衍生物和/或也可以包含细胞毒剂(例如，治疗药)。这类分子也在美国临时申请号61/481,063中描述，所述文献通过引用的方式完整并入本文。如本文所用的术语“多价和单价多特异性复合物”因此指能够结合2种或更多种靶并且含有一个结合位点和/或针对不同表位的多结合位点的组合物。因而，这种术语意在包括含有多结合位点的复合物，所述结合位点针对由该复合物所结合的每个不同表位，或可选地，含有针对一个不同表位的至少一个单结合位点的复合物。不同表位可以处在相同或不同的靶上。多价和单价多特异性复合物可以是多价和多特异的，并且可以因此结合两种或更多种靶并且针对该复合物所结合的每个靶具有两个或更多结合位点。多价和单价多特异性复合物也可以具有一个(或多个)针对一个(或多个)靶的单结合位点和针对其他靶的多结合位点，并且因此，这些复合物是单价的(就单结合位点而言)、多价的和多特异的。另外，多价和单价多特异性复合物可以是单价和多特异的，并且因此，仅含有针对两种或更多种不同靶的单结合位点。 
如本文所用，术语“多价和单价多特异性复合物-药物复合物”或“含有MRD的抗体-细胞毒剂”指含有一种或多种细胞毒剂的多价和单价多特异性复合物。 
如本文所用，术语“细胞毒剂”包括有害于细胞的任何物质，例如包括抑制或阻碍细胞功能和/或造成细胞破坏的物质。该术语意在包括化疗药、药物部分(例如，细胞因子或前药)、抗生素、放射性同位素、螯合配体(例如，DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA和TETA)、溶核酶、毒素如小分子毒素或细菌源、真菌源、植物源或动物源的酶活性毒素，包括这些毒素的片段和/或变体。在具体的实施方案中，细胞毒剂是选自以下的成员：澳瑞司他汀、海兔毒素、MMAE、MMAF、类美登素(maytansinoid)衍生物(例如，DM1(N(2')-去乙酰-N(2')-(3-巯基-1-氧代丙基)-美坦辛)、DM3(N(2')-去乙酰-N2-(4-巯基-1-氧代戊基)-美坦辛)和DM4(N(2')-去乙酰-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美坦辛)。 
术语“抗体”在本文中用来指能够通过抗原结合结构域(即，抗体结合位点)结合抗原的免疫球蛋白分子。术语“抗体”包括多克隆、寡克隆(抗体的混合物)和单克隆抗体、嵌合、单链和人源化抗体。术语“抗体”也包括人抗体。在一些实施方案中，“抗体”包含由二硫键相互连接的至少两条重链(H)和两条轻链(L)。每条重链由重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定域由一个结构域CL组成。VH区和VL区可以进一步再划分为超变区，名为互补性决定区(CDR)，其间插有更保守的区域，名为框架区(FR)。每个VH和VL由从氨基端至羧基端按以下顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4排列的3个CDR和4个FR组成。在其他实施方案中，抗体是缺少第一恒定区结构域(CH1)但是保留完整的重链并能够通过抗原结合结构域结合抗原的同聚重链抗体(例如，骆驼抗体)。在本发明的抗体-MRD融合物中的重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的功能性结合结构域。 
术语“单克隆抗体”一般涉及含有仅一个种类的能够与特定表位发生免疫反应的抗体结合位点的抗体分子群体。单克隆抗体因此一般针对与它发生免疫反应的任何表位显示单一结合亲和力。如本文所用，“单克隆抗体”也可以含有具有多个抗体结合位点(即，多个可变域)的 抗体分子，每种抗体结合位点对不同表位具有免疫特异性，例如，双特异性单克隆抗体。因而，如本文所用，“单克隆抗体”指参与高度地特异性识别和结合一个或两个(在双特异性单克隆抗体的情况下)抗原决定簇或表位的同质抗体群体。这与一般包含针对不同抗原决定簇的不同抗体的多克隆抗体相反。术语“单克隆抗体”指以任何种类的方式产生的这类抗体，所述方式包括但不限于通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、酵母和转基因动物。 
“双特异性抗体”在本文中用来指含有双可变结构域免疫球蛋白的免疫球蛋白分子，其中所述双可变结构域可以从任意两种单克隆抗体工程化而来。 
术语“嵌合抗体”指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列是源自两个或更多个物种的抗体。一般，轻链和重链的可变区均对应于具有所需特异性和/或亲和力的源自一个哺乳动物物种(例如，小鼠、大鼠、兔等)的抗体的可变区，而恒定区与源自另一个物种(通常是人)的抗体中的序列同源以避免在该物种中激发免疫反应。 
术语“人源化抗体”指多种形式的非人(例如，鼠)抗体形式，它们是特定免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其含有最少非人(例如，鼠)序列的片段。一般，人源化抗体是具有所需特异性和/或亲和力的其中来自互补决定区(CDR)的残基由来自非人类物种(例如，小鼠、大鼠、兔、仓鼠)的CDR的残基替换的人免疫球蛋白(Jones等人,Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science239:1534-1536(1988))。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基替换为具有所需特异性和/或亲和力的来自非人物种的抗体中的相应残基。人源化抗体可以在Fv框架区中和/或在替换的非人类残基内部通过置换的另外的残基进一步修饰，以精炼和优化抗体特异性、亲和力和/或能力。通常，人源化抗体将基本上包含至少1个、并且一般2个或3个可变域的全部，所述可变域含有全部或基本上全部的与非人类免疫球蛋白对应的CDR区，其中全部或基本上全部的FR区是具有人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。 人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)，一般具有人免疫球蛋白共有序列的恒定区或结构域。用来产生人源化抗体的方法的例子在以下文献中描述：美国专利号5,225,539，美国专利号4,816,567，Morrison,Science229:1202(1985)；Oi等人,BioTechniques4:214(1986)；Cabilly等人,Taniguchi等人,EP171496；Morrison等人,EP173494,WO86/01533；WO8702671；Boulianne等人,Nature312:643(1984)；和Neuberger等人,Nature314:268(1985)，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。 
如本文所用，“人”抗体包括具有人免疫球蛋白或一个或多个人种系的氨基酸序列的抗体并且包括从人免疫球蛋白文库或从下述动物中分离的抗体，所述动物针对一种或多种人免疫球蛋白进行转基因并且不表达内源免疫球蛋白，如下文并且例如Kucherlapati等人的美国专利号5,939,598中所述，即便在抗体中进行氨基酸置换，仍可以将人抗体视为“人的”。用来产生人抗体的方法的例子在以下文献中描述：国际申请公开号WO98/24893、WO92/01047、WO96/34096和WO96/33735；欧洲专利号0598877；美国专利号5,413,923、5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318、5,885,793、5,916,771和5,939,598；以及Lonberg和Huszar,Int.Rev.Immunol.13:65-93(1995)，所述文献通过引用的方式并入本文。 
“抗体结合位点”是抗体分子的由特异性结合抗原(与之发生免疫反应)的重链和轻链可变区和高变区组成的结构部分。术语“发生免疫反应”在其多种形式下意指含有抗原决定簇的分子和含有抗体结合位点的分子如完整抗体分子或其部分之间的特异性结合。 
在天然存在的抗体中，每抗原结合结构域中存在的六个“互补决定区”或“CDR”是短的不连续的氨基酸序列，其中当抗体假定采取其在含水环境中的三维构型时，所述氨基酸序列特异性安置以形成抗原结合结构域。抗原结合结构域中的剩余氨基酸称作“框架区”，显示较小的分子间变异性。框架区主要采取β-折叠构象并且CDR形成连接β-折叠结构并其在一些情况下形成其部分的环。因而，框架区发挥作用 以形成支架，所述支架通过链间非共价相互作用使得CDR以正确取向定位。由定位的CDR形成的抗原结合结构域(即，抗体结合位点)限定与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。这种互补表面促进抗体与其同族表位的非共价结合。对于任何给出的重链或轻链可变区，可以由本领域普通技术人容易地鉴定分别构成CDR和框架区的氨基酸，因为它们已经精确地定义(见，"Sequences of Proteins of Immunological Interest,"Kabat,E.等人,美国卫生和公众服务部，(1983)；和Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)，所述文献通过引用的方式并入本文)。“人源化抗体”或“嵌合抗体”包括其中从另一个哺乳动物物种(如小鼠)的种系所衍生的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。 
术语“T淋巴细胞”、“T细胞”、“多个T细胞”和“T细胞群体”在本文中可互换地用来指在它们的表面上展示作为T细胞特征的一种或多种抗原(例如，CD3和CD11b)的一个细胞或多个细胞。该术语包括T细胞或T细胞群体的子代。“T淋巴细胞”或“T细胞”包括在其细胞表面上表达CD3和能够识别抗原(展示在自体细胞表面上时)的T细胞抗原受体(TCR)或任何呈递抗原基质，连同一种或多种MHC分子和一种或多种非经典MHC分子的细胞。术语“T细胞”可以指任何T细胞，包括例如，在表型上为CD3+即在细胞表面上表达CD3的淋巴细胞。 
如本文所用，CD3用来单独或总体上指作为T细胞受体的部分表达并具有如本领域一般赋予它的含义的分子。在人类，术语CD3涵盖全部已知的CD3亚基，例如处于单独或各自组合形式下的CD3δ、CD3ε、CD3γ和CD3ζ(TCRζ)以及CD3α(TCRα)和CD3β(TCRβ)。 
术语“肽体”指构成小于完全的无损抗体的肽或多肽。肽体可以是与至少一种肽连接的抗体Fc结构域。肽体不包括抗体可变区、抗体结合位点、CH1结构域或Ig轻链恒定区结构域。 
与生物材料如核酸分子、多肽、宿主细胞等相联系使用时，术语“天然存在的”指在自然界中存在并且未被人类修饰的那些生物物质。 
如本文所用的术语“结构域”指分子的部分或结构，其享有共同的物理或化学特征，例如疏水性，极性，球状、螺旋结构域或特性，例如，蛋白质结合结构域、DNA结合结构域或ATP结合结构域。结构域可以通过它们与保守结构基序或功能基序的同源性来鉴定。 
“保守性氨基酸置换”是其中一个氨基酸残基由具有相似侧链的另一个氨基酸残基替换的一种氨基酸替换。本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸家族，所述侧链包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、β分枝侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，苯丙氨酸置换成酪氨酸是保守性置换。在一些实施方案中，本发明多肽和抗体的序列中的保守性置换不消除含有该氨基酸序列的多肽或抗体与结合至该多肽或抗体的抗原结合。鉴定不消除多肽或抗原结合作用的核苷酸及氨基酸保守性置换和非保守性置换的方法是本领域熟知的(见，例如Brummell等人,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人,Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:412-417(1997))。 
“模块识别结构域”(MRD)或“结合靶的肽”是可以与靶分子特异性(非随机)结合的分子，如蛋白质、糖蛋白等。MRD的氨基酸序列一般可以忍受一些程度的可变性并仍保留结合靶分子的能力的程度。另外，序列的变化可以导致结合特异性的变化并且导致预选择的靶分子和结合位点之间结合常数的变化。在一个实施方案中，MRD是与之结合的靶的激动剂。MRD激动剂指这样的MRD，它以某种方式增加或增强MRD的靶蛋白的生物活性或具有与MRD的靶蛋白的已知激动剂类似的生物活性。在另一个实施方案中，MRD是与之结合的靶的拮抗剂。MRD拮抗剂指这样的MRD，它阻断或以某种方式干扰MRD的靶蛋白的生物活性或具有与MRD的靶蛋白的已知拮抗剂或抑制剂 类似的生物活性。 
“细胞表面受体”指能够接收信号和跨细胞质膜传播这种信号的分子和分子复合物。本发明的细胞表面受体的例子是激活的整联蛋白受体，例如，转移性细胞上的激活的αvβ3整联蛋白受体。如本文所用，“细胞表面受体”也包括在细胞表面上表达的能够被本发明的含有MRD的抗体结合的分子。 
如本文所用，“靶结合位点”或“靶位点”是任何已知的或尚待限定的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有选择性地结合预选择的物质的能力。示例性参比靶位点源自RGD依赖性整联蛋白配体，即纤连蛋白、纤维蛋白原、玻连蛋白、血管性血友病因子等，源自细胞受体如ErbB2、VEGF、血管归巢肽或血管生成性细胞因子、源自蛋白质激素受体如胰岛素样生长因子-I受体、表皮生长因子受体等并源自肿瘤抗原。 
术语“表位”或“抗原决定簇”在本文中可互换地使用并且指任何分子的能够由特定结合物(例如，抗体或MRD)识别并特异性结合的部分。当识别的分子是多肽时，表位可以从连续氨基酸和由蛋白质的立体折叠而靠近的非连续氨基酸和/或分子(如糖)的其他化学活性表面基团形成。从连续氨基酸形成的表位一般在蛋白质变性时保留，而因立体折叠形成的表位在蛋白质变性时丧失。表位一般包含至少3个并且更常见地至少5个或8-10个处于独特空间构象的氨基酸。 
将抗体、MRD、含有MRD的抗体或其他分子称作“竞争性抑制”参考分子与给定表位的结合，如果它与该表位结合至这样的程度，从而非它某种程度地阻断参考分子与该表位的结合。可以通过本领域已知的任何方法(例如，竞争ELISA测定)确定竞争性抑制。如本文所用，可以将抗体、MRD、含有MRD的抗体或其他分子称作竞争性抑制参考分子与给定表位的结合，例如，意指至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50%。 
术语“蛋白质”定义为生物聚合物，其包含源自氨基酸的经肽键连接的单位；蛋白质可以由两条或更多条链组成。 
“融合多肽”是由至少两种多肽和任选地将这两种多肽有效连接成 一条连续多肽的连接序列组成的多肽。融合多肽中连接的两种多肽一般源自两个独立来源，并且因此，融合多肽包含正常情况下在自然界中不存在的两条连接的多肽。这两种多肽可以由肽键直接有效地连接或可以通过本文所述或否则本领域已知的接头间接连接。 
如本文所用，术语“有效连接”表示两个分子如此连接，从而各自保留功能活性。两个分子是“有效连接”，无论它们是直接连接(例如，融合蛋白)或是间接(例如，经接头)连接。 
术语“接头”指位于抗体和MRD之间或两个MRD之间的肽。接头可以具有约1个至20个氨基酸，约2个至20个氨基酸，或约个4至15个氨基酸。这些氨基酸中的一个或多个可以糖基化，如本领域技术人员充分理解。在一个实施方案中，1个至20个氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸。在另一个实施方案中，接头由空间上不形成位阻的大部分氨基酸如甘氨酸和丙氨酸组成。因而，在一些实施方案中，接头选自聚甘氨酸(如(Gly)5和(Gly)8)、聚(Gly-Ala)和聚丙氨酸。接头也可以是非肽接头如烷基接头或PEG接头。例如，可以使用烷基接头如--NH--(CH2)s-C(O)--，其中s=2-20。这些烷基接头还可以由任何空间上不形成位阻的基团如低级烷基(例如，C1-C6)、低级酰基、卤素(例如，Cl、Br)，CN、NH2、苯基等取代。示例性非肽接头是PEG接头。在某些实施方案中，PEG接头具有约100至5000kDa、或约100至500kDa的分子量。可以改变肽接头以形成衍生物。在一些实施方案中，接头是非肽接头如烷基接头或PEG接头。在其他实施方案中，接头是促进MRD或细胞毒剂在细胞内部或靠近细胞释放的“可切割接头”。 
“靶细胞”指受试者(例如，人或动物)中可以由本发明的多特异性和多价组合物(例如，含有MRD的抗体)或MRD靶向的任何细胞。靶细胞可以是表达或过量表达靶结合位点(如激活的整联蛋白受体)的细胞。 
术语“免疫反应”指例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和由上述细胞或肝脏产生的可溶解大分子(包括抗体、细胞因子和 补体)的作用，所述作用导致选择性损伤、破坏或从人体中消除正在入侵的病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌细胞或在自身免疫性或病理炎症的情况下正常的人细胞或组织。 
如本文所用，术语“效应细胞”指与免疫反应的认知期和活化期对比，参与免疫反应的效应子期的免疫细胞。示例性免疫细胞包括髓样或淋巴样来源的细胞、例如，淋巴细胞(例如，B细胞和T细胞，包括溶细胞性T细胞(CTL))、杀伤细胞、天然杀伤细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、多形核细胞、粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞)。一些效应细胞表达特异性Fc受体并实施特定免疫功能。在某些实施方案中，效应细胞能够诱导抗体依赖的细胞介导细胞毒性(ADCC)，例如，嗜中性粒细胞能够诱导ADCC。例如，表达FcR的单核细胞和巨噬细胞参与靶细胞的特异性杀伤和呈递抗原至免疫系统的其他组分或与呈递抗原的细胞结合。在其他实施方案中，效应细胞可以吞噬靶抗原或靶细胞。可以通过体液因子如细胞因子调节特定FcR在效应细胞上的表达。例如，已经发现FcαRI的表达由G-CSF或GM-CSF上调。这种增强的表达增加携带FcαRI的细胞针对靶的效应子功能。效应细胞示例性功能包括吞噬或溶解靶抗原或靶细胞。 
“靶细胞”指其消除将在患者中有益并可以由本发明组合物(例如，抗体)靶向的任何细胞或病原体。 
“患者”、“受试者”、“动物”或“哺乳动物”互换使用并且指哺乳动物如人类患者和非人类灵长类，以及实验动物如兔、大鼠和小鼠和其他动物。动物包括全部脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物，如羊、犬、牛、鸡、两栖类和爬行类。在一些实施方案中，患者是人。 
“治疗”或“疗法”包括施用本发明的包含MRD的抗体以阻止或延迟疾病、病状或病症的症状、并发症或生物化学指标的发作、减轻症状或停滞或抑制疾病、病状或病症的进一步发展。治疗可以是预防性的(以阻止或延迟的疾病，或以阻止其临床或亚临床症状表现)或治疗性的(在疾病、病状或病症表现后抑制或减轻症状)。治疗可以采用单 独的抗体-MRD组合物、单独或与一种或多种另外治疗药组合的MRD进行。 
如本文所用，术语“可药用的”或“生理可耐受的”和其语法变型，在它们指组合物、载体、稀释剂和试剂时，互换地使用并且表示所述物质能够施用至或到人上，而不产生治疗上禁忌的不利生理效应如恶心、头晕、反胃等。 
“调节”意指调正或调节幅度、频率、程度或活性。在另一个相关方面，这类调节可以是正向调节(例如，频率、程度或活性的增加)或负向调节(例如，频率、程度或活性下降)。 
“癌症”、“肿瘤”或“恶性肿瘤”作为同义术语使并且指许多疾病的任一种疾病，所述疾病以细胞失控异常增殖、受累细胞局部扩散或穿过血流和淋巴系统扩散至身体其他部分(转移)的能力以及许多特征性结构特征和/或分子特征中任一者为特征。“癌性肿瘤”或“恶性细胞”理解为具有特定结构特性、缺少分化和能够侵入和转移的细胞。可以使用本发明的抗体-MRD融合物治疗的癌症的例子包括实体瘤和血液癌。可以使用本发明的抗体-MRD融合物治疗的癌症的另外的例子包括乳腺癌、肺癌、脑癌、骨癌、肝癌、肾癌、结肠癌、头颈癌、卵巢癌、造血癌(例如白血病)和前列腺癌。可以使用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗的癌症的其他例子包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。这类癌的更具体例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌。可以使用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗的其他类型的癌和肿瘤在本文中描述或是本领域已知的。 
如本文中公开的抗体、MRD或含有MRD的抗体的“有效量”是足以实施具体所述目的如引起与靶相关的一种或多种生物学活性的水平可观察改变的量，其中所述靶与该抗体、MRD或含有MRD的抗体结 合。在某些实施方案中，该改变增加靶活性的水平。在其他实施方案中，该改变减少靶活性的水平。“有效量”可以相对于所述目的，经验地和按例行方式确定。 
术语“治疗有效量”指本发明的抗体、MRD、含有MRD的抗体、其他多价和多特异性药物或其他药物在患者或哺乳动物中有效“治疗”疾病或病症的量。在癌症的例子中，药物的治疗有效量可以减少血管生成和血管新生；减少癌细胞的数目；减少肿瘤尺寸；抑制(即，减缓至某种程度或终止)癌细胞浸润入外周器官；抑制(即，减缓至某种程度或终止)肿瘤转移；某种程度地抑制肿瘤生长或肿瘤发生；刺激针对癌细胞的免疫反应和/或减轻一种或多种与该癌症相关的症状至某种程度。见本文中“治疗”的定义。“治疗有效量”还可以指在需要的剂量上和持续需要的时间段以有效实现所需治疗结果的量。本发明组合物的治疗有效量可以根据多种因素如疾病状态、个体的年龄、性别和重量和该组合物在个体中激发所需反应的能力而变动。治疗有效量也是这样的一个量，其中治疗性组合物的任何有毒或有害作用被治疗有益作用超过。 
就药物可以阻止生长和/或杀死现存癌细胞的程度，它可以是抑制细胞的和/或对细胞有毒的。“预防有效量”指在需要的剂量上和持续需要的时间段以有效实现所需预防结果的量。一般但不是必然地，由于预防性剂量在受试者(患者)中在疾病较早阶段之前或在疾病较早阶段使用，故预防有效量将小于治疗有效量。 
在本发明的实施方案以马库什群组或其他替代性分组描述的情况下，本发明不仅涵盖作为一个整体列出的整个群组，还单独涵盖该群组和主要群组的全部可能亚组的每个成员，并且也涵盖缺少一个或多个群组成员的主要群组。本发明也构思明确排除在公开和/或要求保护的发明中的一个或多个任何群组成员。 
II.模块识别结构域(MRD) 
本发明描述这样的方法，其基于改造结合靶的肽或模块识别结构域(MRD)作为与催化性或非催化性抗体的融合物。 
在某些实施方案中，其中MRD-抗体融合物的抗体组分是催化性抗体的情况下，MRD-抗体融合物提供针对肿瘤细胞或可溶性分子有效靶向，同时完整留下催化性抗体的前药活化能力。MRD也可以扩展非催化性抗体的结合容量，从而提供有效方案以扩展抗体的结合功能，特别对于治疗目的而言。 
本发明的一个方面涉及开发包含至少一个模块识别结构域(MRD)的全长抗体。在另一个非排他性实施方案中，全长抗体包含多于一个MRD，其中所述MRD具有相同或不同的特异性。此外，单一MRD可以由具有相同或不同氨基酸序列的串联重复组成，可以允许单一MRD与多个靶和/或与给定靶上的重复表位结合。 
蛋白质配体和其靶受体位点之间的相互作用经常在相对大的界面发生。然而，仅一些关键残基在该界面处对结合做出大部分贡献。MRD可以模拟配体结合作用。在某些实施方案中，MRD可以模拟配体的生物活性(MRD激动剂)或通过竞争性结合，抑制配体的生物活性(MRD拮抗剂)。在多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)中的MRD也可能以其他方式影响靶，例如，通过中和、阻断、稳定、聚集或交联MRD靶。 
构思了本发明的MRD通常将含有与目的靶位点结合并且具有约2至150个氨基酸、约2至125个氨基酸、约2至100个氨基酸、约2至90个氨基酸、约2至80个氨基酸、约2至70个氨基酸、约2至60个氨基酸、约2至50个氨基酸、约2至40个氨基酸、约2至30个氨基酸或约2至20个氨基酸长度的肽序列。也构思MRD具有约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至90个氨基酸、约10至80个氨基酸、约10至70个氨基酸、约10至60个氨基酸、约10至50个氨基酸、约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸或约10至20个氨基酸的长度。也构思MRD具有约20至150个氨基酸、约20至125个氨基酸、约20至100个氨基酸、约20至90个氨基酸、约20至80个氨基酸、约20至70个氨基酸、约20至60个氨基酸、约20至50个氨基酸、约20至40个氨基 酸或约20至30个氨基酸的长度。在某些实施方案中，MRD具有约2至60个氨基酸的长度。在其他实施方案中，MRD具有约10至60个氨基酸的长度。在其他实施方案中，MRD具有约10至50个氨基酸的长度。在另外的实施方案中，MRD具有约10至40个氨基酸的长度。在另外的实施方案中，MRD具有约10至30个氨基酸的长度。 
在一些实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分具有小于5X10-3M、10-3M、5X10-4M、10-4M、5X10-5M、10-5M、5X10-6M、10-6M、5X10-7M、10-7M、5X10-8M、10-8M、5X10-9M、10-9M、5X10-10M、10-10M、5X10-11M、10-11M、5X10-12M、10-12M、5X10-13M、10-13M、5X10-14M、10-14M、5X10-15M或10-15M的解离常数或Kd。在一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分具有小于5X10-5M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分具有小于5X10-8M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分具有小于5X10-9M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分具有小于5X10-10M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分具有小于5X10-11M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分具有小于5X10-12M的解离常数或Kd。 
在特定的实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分以小于5X10-2秒-1、10-2秒-1、5X10-3秒-1或10-3秒-1的离去速率(koff)结合它们的靶。更优选地，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分以小于5X10-4秒-1、10-4秒-1、5X10-5秒-1或10-5秒-1、5X10-6秒-1、10-6秒-1、5X10-7秒-1或10-7秒-1的离去速率(koff)结合它们的靶。 
在其他的具体实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分以大于103M-1秒-1、5X103M-1秒-1、104M-1秒-1或5X104M-1秒-1的结合速率(kon)结合它们的靶。更优选地，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的一种或多种MRD组分以大于105M-1秒-1、5X105M-1秒-1、106M-1秒-1或5X106M-1秒-1或107M-1秒-1的结合速率(kon)结合它们的靶。 
在一些实施方案中，MRD是亲和体。亲和体代表一类基于58氨基酸残基蛋白质结构域的亲和蛋白，所述58氨基酸残基蛋白质结构域源自葡萄球菌蛋白A的结合IgG的结构域之一。这种三螺旋束结构域已经用作构建组合噬菌体文库的支架，其中可以使用噬菌体展示技术从所述噬菌体文库常规地选出结合所需靶分子(如本文中公开的一种或多种靶)的亲和体变体(见，例如Nord等人,Nat.Biotechnol.15:772-7(1997)和Ronmark等人,A,Eur.J.Biochem.2002;269:2647-55)。亲和体和其产生方法的进一步细节由美国专利号5,831,012提供，所述文献通过引用方式完整并入本文。 
在其他实施方案中，本发明的MRD(例如，在含有MRD的抗体上的MRD)含有一个或多个氨基酸残基或氨基酸残基序列(包括衍生物、类似物和其模拟物)，与偏好靶向的序列的MRD或含有MRD的抗体的抗体组分相比，所述氨基酸残基因化学处理或其他处理被偏好地靶向，使分子实体共价地或非共价地连接至MRD。例如，在一些实施方案中，该MRD的氨基酸序列含有一种或多种具有反应性侧链的残基(例如，半胱氨酸或赖氨酸)，所述残基允许MRD选择性或偏好性与细胞毒剂(例如，药物和前药缀合物、毒素和生物活性配体)或成像剂键合。 
应用这些“连接性”MRD以“酬载”武装含有MRD的抗体克服了使用常规方法产生免疫毒素时经常观察到的与抗体去稳定化和抗体活性降低相关的许多问题。本发明的含有MRD的抗体复合物“酬载”组分可以是赋予有益治疗、诊断或预后作用或在制备、纯化或配制含有MRD的抗体方面提供优点的任何组合物。在一些实施方案中，酬载 是化疗药物或前药，如，多柔比星或类美登素样药物。在另外的实施方案中，酬载是另一种MRD、毒素、化疗药物、催化酶、前药、放射性核素、螯合剂(例如，用于连接至镧系元素)或如本文所述的本发明多价和多特异性组合物的另一个组分。 
在非排他性实施方案中，MRD不含抗原结合结构域，或另一个抗体结构域如恒定区、可变区、互补决定区(CDR)、框架区、Fc结构域或铰链区。在一个非排他性实施方案中，MRD不含抗原结合结构域。在另一个非排他性实施方案中，MRD不含3个CDR。在另一个非排他性实施方案中，MRD不含CDR1和CDR2。在又一个非排他性实施方案中，MRD不含CDR1。在一个非排他性实施方案中，MRD不源自天然细胞配体。在另一个非排他性实施方案中，MRD不是放射性同位素。在另一个非排他性实施方案中，MRD不是蛋白质表达标记如谷胱甘肽S-转移酶(GST)、His标签、Flag、血凝素(HA)、MYC或荧光蛋白(例如，GFP或RFP)。在另一个非排他性实施方案中，MRD不结合血清白蛋白。在另外的非排他性实施方案中，MRD不是作为细胞毒素的小分子。在又一个非排他性实施方案中，MRD不具有酶活性。在另一个非排他性实施方案中，在单独施用时和/或当与Fc融合时，MRD在患者或动物模型中具有治疗效果。在另一个非排他性实施方案中，在反复单独施用(例如，至少6个月时间范围内3次或更多次)时和/或当与Fc融合时，MRD在患者或动物模型中具有治疗效果。 
在一些实施方案中，MRD是构象约束的。在其他实施方案中，MRD不是构象约束的。在一些实施方案中，MRD含有1个半胱氨酸残基。MRD中的半胱氨酸残基可以形成链间键(例如，在相同MRD、不同的肽连接的MRD和MRD和肽连接的免疫球蛋白内部的半胱氨酸之间)。在一些实施方案中，参与链间键的MRD与单一核心靶结合结构域缔合。在其他实施方案中，参与链间键的MRD与多个核心靶结合结构域缔合。在一个可选实施方案中，MRD中的半胱氨酸残基可以形成链间键(例如，在非肽连接的MRD或未通过肽结合所连接的 MRD和免疫球蛋白的半胱氨酸之间)。在一些实施方案中，与链间键缔合的MRD与单一核心靶结合结构域缔合(即，位于不同多肽链上的2个MRD形成一个或多个链间键并且共同形成一个靶结合位点)。因而，例如，本发明涵盖含有MRD的抗体其中位于重链的羧基末端上的MRD(例如，通过二硫键)相互作用从而形成单一靶结合位点。在其他实施方案中，参与链间键缔合的MRD与多个核心靶结合结构域缔合。可选地，如本文中讨论，MRD可以含有一个或多个半胱氨酸残基(或具有反应性侧链的其他残基(例如，赖氨酸))，所述残基允许MRD选择性或偏好性与细胞毒剂键合。 
在一些实施方案中，MRD含有在核心靶结合结构域外部的两个半胱氨酸残基。在一些实施方案中，MRD含有在核心靶结合结构域内部位于靶结合结构域的每种末端处的两个半胱氨酸残基。在一些实施方案中，第一半胱氨酸位于分子的末端附近(即在接头或抗体链的C端上的MRD的C端处或在接头或抗体链的N末端上的MRD的N末端处)。因此，在一些实施方案中，第一半胱氨酸位于分子末端的1个氨基酸范围内、2个氨基酸范围内、3个氨基酸范围内、4个氨基酸范围内、5个氨基酸范围内或6个氨基酸范围内。在一些实施方案中，第二半胱氨酸位于MRD融合位置附近(即在接头或抗体链的C端上的MRD的N末端处或在接头或抗体链的N末端上的MRD的C端处)。因此，在一些实施方案中，第二半胱氨酸位于距MRD融合处的1个氨基酸范围内、2个氨基酸范围内、3个氨基酸范围内、4个氨基酸范围内、5个氨基酸范围内、10个氨基酸范围内或15个氨基酸范围内。 
在一些实施方案中，MRD用稳定残基封端。在一些实施方案中，MRD是二硫化物封端的。在一些实施方案中，MRD不含切割位点。 
在一些实施方案中，已经选择MRD以不含有已知的潜在人T-细胞表位。 
在一些具体实施方案中，MRD具有特别的疏水性。例如，可以基于使用疏水相互作用层析或反相液相色谱确定的停留时间，比较MRD的疏水性。 
MRD靶可以是含有MRD的抗体需要与之相互作用的任何分子。例如，MRD靶可以是可溶性因子或跨膜蛋白，如细胞表面受体。MRD靶也可以胞外组分或胞内组分。在某些非排他性实施方案中，MRD靶是调节细胞增殖、分化或存活的因子。在其他非排他性实施方案中，MRD靶是细胞因子。在另一个非排他性实施方案中，MRD靶是调节血管生成的因子。在另一个非排他性实施方案中，MRD靶是调节细胞黏附和/或细胞-细胞相互作用的因子。在某些非排他性实施方案中，MRD靶是细胞信号传导分子。在另一个非排他性实施方案中，MRD靶是调节一个或多个免疫反应如自身免疫性、炎症和针对癌细胞的免疫反应的因子。在另一个非排他性实施方案中，MRD靶是调节细胞黏附和/或细胞-细胞相互作用的因子。在一个另外的非排他性实施方案中，MRD靶是细胞信号传导分子。在另一个实施方案中，MRD可以结合本身是MRD的靶。使用或常规修改本领域已知用于评价这类活性的测定法、生物测定法和/或动物模型，可以确定MRD结合靶并阻断、增加或干扰MRD靶的生物活性的能力。 
当MRD与抗体连接时，MRD能够结合它们的相应靶。在一些实施方案中，与抗体不连接时，MRD能够结合其靶。在一些实施方案中，MRD是靶激动剂。在其他实施方案中，MRD是靶拮抗剂。在某些实施方案中，MRD可以用来将含有MRD的抗体局限至其中MRD靶存在的区域。 
可以通过几种方式测定MRD的序列。例如，MRD序列可以从与特定靶结合位点结合的天然配体或已知序列推导出来。另外，作为鉴定与靶受体和配体结合的肽的强有力方法，噬菌体展示技术已经出现。在肽噬菌体展示文库中，天然存在的和非天然存在的(例如，随机肽)序列可以通过与丝状噬菌体的外壳蛋白融合来展示。先前已经描述了使用噬菌体展示载体阐明多肽上结合位点的方法，特别地在WO94/18221中，所述文献通过引用的方式并入本文。该方法总体上涉及使用丝状噬菌体(噬菌粒)表面表达载体系统以克隆和表达与预先选择的目的靶位点结合的多肽。 
用于制备MRD的本发明方法包括使用噬菌体展示载体，原因它们具有以下特殊优点：提供手段以筛选非常庞大的已表达的展示蛋白质的群体，并且因而将编码所需的靶结合反应性的一个或多个特定克隆定位。使用或常规修改本文所述的或否则本领域已知的测定法和其他方法学，可以确定由该克隆编码的多肽结合靶和/或改变该靶的生物活性的能力。例如，噬菌体展示技术可以用来鉴定和改善MRD的结合特性。见，例如Scott等人,Science249:386(1990)；Devlin等人,Science249:404(1990)；美国专利号5,223,409、5,733,731、5,498,530、5,432,018、5,338,665、5,922,545；和国际申请公开号WO96/40987和WO98/15833；所述文献通过引用的方式并入本文。在肽噬菌体展示文库中，天然的和非天然存在的肽序列可以通过与丝状噬菌体的外壳蛋白融合来展示。如果需要可以针对目的靶亲和洗脱展示的肽。可以通过连续轮次的亲和纯化和再增殖，富集留下的噬菌体。可以将结合最好的肽测序以鉴定在一种或多种结构上相关的肽家族内部的关键残基。见，例如，Cwirla等人,Science276:1696-9(1997)，其中鉴定出两个不同的家族。肽序列也可以提示可以通过丙氨酸扫描法或通过在DNA水平诱变安全地替换哪个残基。可以产生并筛选诱变文库以进一步优化最佳结合物的序列。Lowman,Ann.Rev.Biophys.Biomol.Struct.26:401-424(1997)。 
蛋白质-蛋白质相互作用的结构性分析也可以用来提示模拟大蛋白质配体的结合活性的肽。在这种分析中，晶体结构可以提示大蛋白质配体的关键残基的身份和相对取向，从中可以设计肽如MRD。见，例如，Takasaki等人,Nature Biotech.15:1266-1270(1997)。这些分析方法也可以用来研究靶和噬菌体展示选择的MRD之间的相互作用，这可以提示对MRD的进一步修饰以增加结合亲和力。 
本领域已知的其他方法可以用来鉴定MRD。例如，肽文库可以与lac阻遏蛋白的羧基末端融合并且在大肠杆菌(E.coli)中表达。另一种基于大肠杆菌的方法允许通过与肽聚糖相关的脂蛋白(PAL)融合，在细胞的外膜上展示。这些方法和相关方法统称为“大肠杆菌展示法”。 在另一种方法中，在核糖体释放之前停顿随机RNA的翻译，这导致其中所结合的RNA仍连接的多肽文库。这种方法和相关方法统称为“核糖体展示法”。其他已知的方法利用肽与RNA的化学连接。见，例如Roberts和Szostak,Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:12297-12303(1997)。这种方法和相关方法统称为“RNA-肽筛选法、RNA展示法和mRNA展示法”。已经开发了化学衍生的肽文库，其中肽固定在稳定的非生物材料(如聚乙烯杆)或溶剂可透过的树脂上。另一种化学衍生的肽文库使用照相平版印刷术以扫描固定在玻璃载片上的肽。这些方法和相关方法统称为“化学-肽筛选法”。化学-肽筛选法可能是有利的，在于允许使用D-氨基酸和其他的非天然类似物，以及非肽元件。生物学方法和化学方法均在Wells和Lowman,Curr.Opin.Biotechnol.3:355-362(1992)中综述。另外，约束文库、线性文库和/或聚焦文库(由结构上相关的共有明显一级序列同源性的结构域组成)可以用来鉴定、表征和修饰MRD。 
也可以基于已知的MRD序列制备特异性结合所需靶的改良MRD。例如，至少1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸突变(例如，保守性或非保守性置换)、缺失或插入可以引入已知的MRD序列中并且可以对所得到的MRD筛选与所需靶的结合作用和生物活性，如拮抗靶生物活性或激动靶生物活性的能力。在另一个实施方案中，使用本领域已知的噬菌体展示技术，将为修饰所选择的位点进行亲和力成熟。见，例如，Lowman,Ann.Rev.Biophys.Biomol.Struct.26:401-424(1997)。 
本领域已知的任何诱变技术可以用来修饰DNA序列中的各个核苷酸，旨在抗体序列中产生氨基酸添加、置换或缺失或旨在产生/缺失限制性位点和编码所需氨基酸(例如，半胱氨酸)的序列以促进进一步操作。这类技术包括但不限于化学诱变、体外位点定向诱变(Kunkel,Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:488(1985)；Hutchinson等人,J.Biol.Chem.253:6551(1978))、寡核苷酸定向诱变(Smith,Ann.Rev.Genet.19:423-463(1985)；Hill等人,Methods Enzymol.155:558-568(1987))、 基于PCR的重叠延长(Ho等人,Gene77:51-59(1989))、基于PCR的巨引物诱变(Sarkar等人,Biotechniques8:404-407(1990))等。可以通过DNA测序证实修饰。 
另外的融合蛋白可以通过基因改组、基序改组、外显子改组和/或密码子改组技术(统称为“DNA改组”)产生。DNA改组可以用来改变 或其片段(例如，具有较高亲和力和较低解离速率的抗体或其片段)的活性。总体上见美国专利号5,605,793、5,811,238、5,830,721、5,834,252和5,837,458和Patten等人,Curr.Opinion Biotechnol.8:724-33(1997)；Harayama等人,Trends Biotechnol.16(2):76-82(1998)；Hansson等人,J.Mol.Biol.287:265-76(1999)；Lorenzo等人,Biotechniques24(2):308-313(1998)；美国申请公开号20030118592和200330133939；和国际申请公开号WO02/056910；所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。 
另外，MRD可以基于它们在测量特定途径或活性的测定法中的作用进行鉴定。例如，测量信号传导途径(例如，磷酸化研究或多聚化)、离子通道通量、胞内cAMP水平、细胞活动如迁移、粘附、增殖或凋亡以及病毒进入、复制、出芽或整合的测定法可以用来鉴定、表征并改进MRD。 
本发明的范围内包括MRD的保留结合靶抗原的能力的变体和衍生物。在变体范围内，包括插入、缺失和置换变体，以及包含本文所述MRD的变体，所述变体在N末端和/或C末端具有另外的氨基酸，包括约0至50个、0至40个、0至30个、0至20个氨基酸等。可以理解，本发明的特定MRD可以经修饰含有1个、2个或全部3个类型的变体。插入变体和置换变体可以含有天然氨基酸、非常规氨基酸或这两者。在一些实施方案中，MRD含有与本文所述的MRD序列相比时具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20个氨基酸差异的序列。在一些实施方案中，所述氨基酸差异是置换。这些置换可以在性质上是保守或非保守的并且可以包含非常规或非天然氨基酸。在其他实施方案中，MRD含有下述序列，所述序列竞争性抑制 本文所述的含有MRD的序列与靶分子结合的能力。使用本领域已知的技术，包括ELISA和BIAcore分析，可以确定MRD竞争性抑制另一个含有MRD的序列的能力。 
使用评估分子相互作用的任何技术，可以评估MRD结合其靶的能力。例如，MRD-靶相互作用可以如下文实施例中所述确定或可选地，使用体外或体内结合测定法如蛋白质印迹法，放射免疫测定、ELISA(酶联免疫吸附测定)、“夹心”免疫测定法、免疫沉淀测定法、荧光免疫测定法、蛋白A免疫测定法和免疫组织化学(IHC)来确定。评价MRD功能性影响其靶的能力的测定法(例如，测量信号传导、增殖、迁移等的测定法)也可以用来间接地评估MRD-靶相互作用。 
也可以基于已知的MRD序列制备具有特殊体内半寿期的改良MRD。例如，至少1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸突变(例如，保守性或非保守性置换)、缺失或插入可以引入已知的MRD序列中并且可以对所得到的MRD筛选增加的半寿期。因此，可以在多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)中包括MRD的变体和衍生物，所述变体和衍生物保留结合靶的能力并具有增加的半寿期。因而，在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的MRD具有至少约5、至少约10、至少约15、至少约20、至少约25、至少约30、至少约35、至少约40、至少约45、至少约50、至少约55、至少约60、至少约65、至少约70、至少约75、至少约80、至少约85、至少约90、至少约95、至少约100、至少约110、至少约120、至少约130、至少约140或至少约150小时的半寿期。在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的MRD具有至少约5、至少约10、至少约15、至少约20、至少约25、至少约30、至少约35、至少约40、至少约45、至少约50、至少约55、至少约60、至少约65、至少约70、至少约75、至少约80、至少约85、至少约90、至少约95、至少约100、至少约110、至少约120、至少约130、至少约140或至少约150小时的半寿期。 
一旦已经阐明MRD的序列，则可以通过本领域已知的任何方法制备所述肽。例如，MRD肽可以化学合成并且有效地与抗体连接或 可以使用重组技术合成。例如，使用已知的技术，可以在溶液中或在固相支持物上合成MRD。各种自动合成仪是可商业获得的并且可以根据已知的方案使用。见，例如Tam等人,J.Am.Chem.Soc.105:6442(1983)；Merrifield,Science232:341-347(1986)；Barany和Merrifield,The Peptides,Gross和Meienhofer(编著),Academic Press,New York,1-284；Barany等人,Int.J.Pep.Protein Res.,30:705-739(1987)；和美国专利号5,424,398，所述文献的每一篇通过引用的方式完整地并入本文。 
MRD可以用共价连接的分子合成，所述分子不是氨基酸但是有助于纯化、鉴定和/或跟踪体外或体内的MRD(例如，与抗生物素蛋白反应的生物素或抗生物素蛋白标记的分子)。 
仅以举例方式更详细地描述以下MRD靶。 
在本文所述的一些实施方案中，MRD靶整联蛋白。已经充分记录整联蛋白如αvβ3和αvβ5作为肿瘤相关标记的作用。一项对从晚期卵巢癌建立的25个永久人细胞系的最近研究显示全部细胞性呈αvβ5表达阳性并且许多呈αvβ3表达阳性。研究也已经显示αvβ3和αvβ5在人恶性子宫颈肿瘤组织上高度表达。整联蛋白也已经在卡波西肉瘤、黑色素瘤和乳腺癌的动物模型中显示治疗作用。 
许多整联蛋白αvβ3和αvβ5拮抗剂正处于临床开发状态。这些包括环状RGD肽和合成性小分子RGD模拟物。两种基于抗体的整联蛋白拮抗剂目前处于治疗癌症的临床试验。第一种是 
Figure BDA0000457457350000411
(MEDI-522，Abegrein)(鼠抗人αvβ3抗体LM609的人源化形式)。在癌症患者中的剂量递增I期研究展示
Figure BDA0000457457350000412
安全用于人类中。处于临床试验的另一种抗体是CNT095(识别αv整联蛋白的全人Ab)。CNT095在患有多种实体瘤的患者中的一项I期研究已经显示它良好耐受。αvβ3和αvβ5的肽拮抗剂Cliengitide(EMD121974)也已经在I期试验中证明是安全的。另外，存在基于利用这些受体的配体的许多药物靶向和成像研究。这些临床前观察结果和临床观察结果显示了靶向αvβ3和αvβ5的重要性，并且涉及以这种策略使用抗体的 研究始终报道借助这些整联蛋白的靶向是安全的。 
还正在对靶向α5vβ1以治疗转移性黑色素瘤、肾细胞癌和非小细胞肺癌(M200(伏洛西单抗(volociximab))和恶性胶质瘤(ATN-161)的拮抗剂继续进行临床试验。 
含有一个或多个RGD三肽序列基序的结合整联蛋白的MRD代表本发明MRD的例子。具有RGD基序作为最小识别结构域并且从中可以衍生本发明MRD的配体是熟知的，其部分名单包括(相应的整联蛋白靶在括号中)纤连蛋白(α3β1、α5β1、αvβ1、α11bβ3、αvβ3和α3β1)、纤维蛋白原(αMβ2和α11bβ1)、血管性血友病因子(α11bβ3和αvβ3)和玻连蛋白(α11bβ3、αvβ3和αvβ5)。 
在一个实施方案中，含有RGD的靶向性MRD是选自以下的成员：YCRGDCT(SEQ ID NO:3)；PCRGDCL(SEQ ID NO:4)；TCRGDCY(SEQ ID NO:5)；和LCRGDCF(SEQ ID NO:6)。 
本发明中也构思一种MRD，它模拟整联蛋白受体上的非RGD依赖性结合位点并且具有识别选择的整联蛋白的高亲和力配体的靶结合特异性。也构思了与整联蛋白受体结合并破坏整联蛋白的结合和/或信号传导活性的MRD。 
在一些实施方案中，MRD靶向血管生成性分子。血管生成是对许多生理学和病理过程必需的。已经显示Ang2充当促血管生成分子。Ang2-选择性抑制剂的施用足以抑制肿瘤血管生成和角膜血管生成。因此，单独或与抑制其他血管生成性因子(如VEGF)组合的Ang2抑制可以代表疗实体瘤患者的有效抗血管生成策略。 
构思了可用于本发明中的MRD包括与血管生成性受体、血管生成性因子和/或Ang2结合的那些。在一个具体实施方案中，本发明的MRD结合Ang2。在其他实施方案中，结合TIE2的组分包括结合TIE2的ANG2片段。在具体的实施方案中，本发明的组合物结合TIE2并包含在NCBI参考序列号NP_001138.1中公开的人ANG2的第283-449位氨基酸。 
在一个实施方案中，MRD和/或含有MRD的抗体结合Ang2并且 含有选自以下的序列：GAQTNFMPMDDLEQRLYEQFILQQGLE(SEQ ID NO:9)(ANGa)；LWDDCYFFPNPPHCYNSP(SEQ ID NO:11)(ANGb)；LWDDC YSYPNPPHCYNSP(SEQ ID NO:12)(ANGc)；LWDDCYSFPNPPHCYNSP(SEQ ID NO:15)(ANGd)；DCAVYPNPPWCYKMEFGK(SEQ ID NO:16)(ANGe)；PHEECYFYPNPPHCYT MS(SEQ ID NO:17)(ANGf)和PHEECYSYPNPPHCYTMS(SEQ ID NO:18)(ANGg)。 
在一个另外的实施方案中，MRD和/或含有MRD的抗体结合Ang2并且含有选自以下的序列：GAQTNFMPMDDLEQRLYEQFILQ QGLE(SEQ ID NO:9)(ANGa)；LWDDCYFFPNPPHCYNSP(SEQ ID NO:11)(ANGb)；LWDDCYSYPNPPHCYNSP(SEQ ID NO:12)(ANGc)；LWDDCYSFPNPPHCYNSP(SEQ ID NO:15)(ANGd)；DCAVYPNPPWCYKMEFGK(SEQ ID NO:16)(ANGe)；PHEECYFYPNPP HCYTMS(SEQ ID NO:17)(ANGf)和PHEECYSYPNPPHCYTMS(SEQ ID NO:18)(ANGg)。 
结合ANG-2的肽在美国专利号7,309,483、7,205,275、7,138,3707,063,965、7,063,840、7,045,302、7,008,781、6,825,008、6,645,484、6,627,415、6,455,035、6,441,137、6,433,143、6,265,564、6,166,185、5,879,672、5,814,464、5,681,714、5,650,490、5,643,755和5,521,073；和美国申请公开号2007/0225221、2007/0093419、2007/0093418、2007/0072801、2007/0025993、2006/0122370、2005/0186665、2005/0175617、2005/0106099、2005/0100906、2003/0236193、2003/0229023、2003/0166858、2003/0166857、2003/0162712、2003/0109677、2003/0092891、2003/0040463、2002/0173627和2002/0039992和国际申请公开号WO2006/005361、WO/2006/002854、WO2004/092215、WO/2004/076650、WO2003/057134、WO/2000/075323、WO2000/065085、WO/1998/018914和WO1995/021866中公开，所述文献的每一篇的公开内容通过引用的方 式完整并入本文。 
在一些实施方案中，MRD靶向血管内皮生长因子(VEGF)。在一个实施方案中，抗体-MRD融合物包含具有序列ATWLPPP(SEQ ID NO:71)的MRD，所述MRD抑制VEGF介导的血管生成。Binetruy-Tournaire等人,EMBO J.19:1525-1533(2000)。在另外的实施方案中，本发明中构思了含有靶向VEGF的MRD的抗VEGF抗体。抗VEGF抗体可以例如在Presta等人,Cancer Research57:4593-4599(1997)；和Fuh等人,J.Biol.Chem.281:106625(2006)中找到，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。 
胰岛素样生长因子-I受体特异性MRD也可以在本发明中使用。 
也构思血管归巢特异性MRD用于本发明中。许多研究已经表征了连接血管归巢肽至其他蛋白质如IL12或药物以指导它们在活体动物中递送的功效。 
构思了许多其他靶结合位点作为本发明的抗体-MRD融合物的靶，包括例如FGFR1、FGFR2、EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4、CD20、胰岛素样生长因子-I受体和肝细胞生长因子受体。MRD可以涉及这些靶结合位点或相应的配体。 
在一个实施方案中，MRD与IL6结合。在一个实施方案中，MRD与IL6R结合。 
在一个实施方案中，MRD与HER2/3结合。 
在另一个实施方案中，MRD结合ErbB2。 
在一些实施方案中，MRD与人蛋白质结合。在一些实施方案中，MRD与人蛋白质及其在小鼠、大鼠、兔或仓鼠中的直向同源物结合。 
III.抗体 
在本文所述的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)中的抗体可以是任何合适的抗原结合性免疫球蛋白。在某些实施方案中，本文所述的含有MRD的抗体分子保留传统单克隆抗体的结构特性及功能特性。因而，抗体保留它们的表位结合特性，但是有利地也整合一种或多种另外的靶结合特异性。 
可以在多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)中使用的抗体包括但不限于单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、灵长类化抗体和嵌合抗体。本发明的免疫球蛋白或抗体分子可以属于任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。在特定的实施方案中，抗体是IgG1。在其他的具体实施方案中，抗体是IgG3。 
可以作为多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的部分使用的抗体可以天然来源或是重组工程(例如，噬菌体展示、xenomouse和合成)的结果。抗体可以包括修饰，例如，以增强半寿期或以增加或减少抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒性(CDC)活性。抗体可以来自或源自任何动物源，包括鸟和哺乳动物，或合成地生成。在一些实施方案中，抗体是人抗体、鼠抗体、驴抗体、兔抗体、山羊抗体、豚鼠抗体、骆驼抗体、羊驼抗体、马抗体或鸡抗体。在特定的实施方案中，抗体是人抗体。 
在某些实施方案中，多聚体的一条多肽链的重链部分与该多聚体的第二多肽链上那些相同。在可选实施方案中，含有重链部分的本发明的单体不是相同的。例如，每个单体可以包含不同的靶结合位点，从而形成例如双特异性抗体。 
双特异性、双价抗体及其制备方法例如在美国专利号5,731,168、5,807,706、5,821,333和美国申请公开号2003/020734和2002/0155537中描述；所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。双特异性四价抗体和制备它们的方法例如在国际申请公开号WO02/096948和WO00/44788中描述，所述两篇文献的公开内容通过引用的方式完整并入本文。总体上见国际申请公开号号WO93/17715、WO92/08802、WO91/00360和WO92/05793；Tutt等人,J.Immunol.147:60-69(1991)；美国专利号4,474,893；4,714,681；4,925,648；5,573,920和5,601,819；和Kostelny等人,J.Immunol.148:1547-1553(1992)。 
在本文所公开方法中使用的MRD-抗体融合物的抗体组分的重链 部分可以源自不同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的重链部分可以包含源自IgG1分子的CH1结构域和源自IgG3分子的铰链区。在另一个例子中，重链部分可以包含部分地源自IgG1分子和部分源自IgG3分子的铰链区。在另一个例子中，重链部分可以包含部分地源自IgG1分子和部分源自IgG4分子的嵌合铰链区。 
在一些实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分的抗原结合结构域以小于5X10-3M、10-3M、5X10-4M、10-4M、5X10-5M、10-5M、5X10-6M、10-6M、5X10-7M、10-7M、5X10-8M、10-8M、5X10-9M、10-9M、5X10-10M、10-10M、5X10-11M、10-11M、5X10-12M、10-12M、5X10-13M、10-13M、5X10-14M、10-14M、5X10-15M或10-15M的解离常数或Kd与它们的靶结合。在一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分具有小于5X10-5M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分的抗原结合过程具有小于5X10-8M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分的抗原结合过程具有小于5X10-9M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分具有小于5X10-10M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分具有小于5X10-11M的解离常数或Kd。在另一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分具有小于5X10-12M的解离常数或Kd。 
在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分以小于5X10-2秒-1、10-2秒-1、5X10-3秒-1或10-3秒-1的离去速率(koff)结合其靶。更优选地，含有MRD的抗体的抗体组分以小于5X10-4秒-1、10-4秒-1、5X10-5秒-1或10-5秒-1、5X10-6秒-1、10-6秒-1、5X10-7秒-1或10-7秒-1的离去速率(koff)结合其靶。 
在其他的具体实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分以大于 103M-1秒-1、5X103M-1秒-1、104M-1秒-1或5X104M-1秒-1的结合速率(kon)结合其靶。更优选地，含有MRD的抗体的抗体组分以大于105M-1秒 -1、5X105M-1秒-1、106M-1秒-1或5X106M-1秒-1或107M-1秒-1的结合速率(kon)结合其靶。 
亲和力成熟策略和链改组策略(例如，基因改组、基序改组、外显子改组和/或密码子改组(统称为“DNA改组”)是本领域已知的并且可以用来产生高亲和力和/或用来改变多价和多特异性组合物(例如，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体))的活性(例如，ADCC和CDC)。见美国专利号5,605,793、5,811,238、5,830,721、5,834,252和5,837,458；和Patten等人,Curr.Opinion Biotechnol.8:724-733(1997)；Harayama,Trends Biotechnol.16(2):76-82(1998)；Hansson等人,J.Mol.Biol.287:265-276(1999)；Lorenzo和Blasco,Biotechniques24(2):308-313(1998)；所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。有利地，亲和力成熟策略和链改组策略可以常规地用来产生多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，也可以包括改善抗体功能和/或所需药效动力学特性的变体和衍生物。 
因此，本发明的某些实施方案包括抗体-MRD融合物，其中已经改变一个或多个恒定区结构域的至少一部分，从而提供所需的生物化学特征，如与具有大致相同免疫反应性的未改变的抗体相比时，降低或增加的效应子功能，其非共价二聚化的能力、局限在肿瘤部位处的能力增加、血清半寿期缩减或血清半寿期增加。恒定区结构域的改变可以是氨基酸置换、插入或缺失。 
“抗体依赖的细胞介导细胞毒性”或“ADCC”指一种形式的细胞毒性，其中结合到某些细胞毒性细胞(例如，天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上表达的Fc受体(FcRs)上的分泌型Ig使得这些细胞毒效应细胞定位至携带抗原的靶细胞并随后用细胞毒素杀伤靶细胞成为可能。针对靶细胞表面的特定高亲和力IgG抗体“武装”细胞毒性细胞并且是这类杀伤作用所需要的。靶细胞的溶解是细胞外的，需要细胞毒性细胞和靶细胞接触或紧密靠近并且不涉及补体。 
如本文所用，术语“增强ADCC”(例如，指细胞)意在包括与未经如此方式修饰的含有MRD的抗体接触的相同细胞的细胞杀伤作用相比，当接触于含有MRD的变体抗体时，细胞溶解的任何可度量增加，从而在效应细胞存在下(例如，以靶细胞:效应细胞的比率1:50)改变ADCC，例如，细胞溶解增加至少约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、300%或325%。 
在某些实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体组分以增加抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)(见，例如Bruhns等人,Blood113:3716-3725(2009)；Shields等人,J.Biol.Chem.276:6591-6604(2001)；Lazar等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA103:4005-4010(2006)；Stavenhagen等人,Cancer Res.,67:8882-8890(2007)；Horton等人,Cancer Res.68:8049-8057(2008)；Zalevsky等人,Blood113:3735-3743(2009)；Bruckheimer等人,Neoplasia11:509-517(2009)；Allan等人,WO2006/020114；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Watkins等人,WO2004/074455，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的增加ADCC的Fc序列工程化修饰的例子包括与以下相对应的一个或多个修饰：IgG1-S298A、E333A、K334A；IgG1-S239D、I332E；IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG1-P247I、A339D或Q；IgG1-D280H、在具有或没有S298D或V的情况下的K290S；IgG1-F243L、R292P、Y300L；IgG1-F243L、R292P、Y300L、P396L；和IgG1-F243L、R292P、Y300L、V305I、P396L；其中Fc区中残基的编号是如Kabat中的EU标准（EU index）。 
在一个实施方案中，相对于类似的分子，Fc变体蛋白具有增强的ADCC活性。在一个具体实施方案中，Fc变体蛋白具有大于类似分子至少2倍、或至少3倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍、或至少100倍的ADCC活性。在另一个具体实施方案中，相对于类似的分子，Fc变体蛋白具有增强的Fc受体FcγRIIIA结合作用并具有增强的ADCC活性。在其他实施方案中，相对于类似的分子，Fc变体 蛋白具有增强的ADCC活性和增加的血清半寿期。 
使用本领域已知的技术，可以测定任何特定Fc变体蛋白通过ADCC介导靶细胞溶解的能力。例如，为了评估ADCC活性，可以将多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)添加至与免疫效应细胞组合的靶细胞，所述免疫效应细胞可以由抗原抗体复合物活化，导致靶细胞的细胞溶解。通常通过标记物(例如，放射性底物、荧光染料或天然胞内蛋白)从溶解的细胞释放，检测细胞溶解。用于此类测定法的效应细胞括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。体外ADCC测定法的具体例子在Wisecarver等人,J Immunol Methods79:277-282(1985)；Bruggemann等人,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987)；Wilkinson等人,J.Immunol.Methods258:183-191(2001)；Patel等人,J.Immunol.Methods184:29-38(1995)中描述。在某些实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的ADCC活性可以在体内评估，例如，在动物模型中，如在Clynes等人,PNAS USA95:652-656(1998)和美国专利号7,662,925公开中的那种模型中。 
在某些实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体组分以降低ADCC(见，例如Idusogie等人,J.Immunol.166:2571-2575(2001)；Sazinsky等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA105:20167-20172(2008)；Davis等人,J.Rheumatol.34:2204-2210(2007)；Bolt等人,Eur.J.Immunol.23:403-411(1993)；Alegre等人,Transplantation57:1537-1543(1994)；Xu等人,Cell Immunol.200:16-26(2000)；Cole等人,Transplantation68:563-571(1999)；Hutchins等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:11980-11984(1995)；Reddy等人,J.Immunol.164:1925-1933(2000)；国际专利公开号WO1997/11971和WO2007/106585；美国申请公开2007/0148167A1；McEarchern等人,Blood109:1185-1192(2007)；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Kumagai等人,J.Clin.Pharmacol.47:1489-1497(2007)，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本 文)。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的减低ADCC的Fc序列工程化修饰的例子包括与以下相对应的一个或多个修饰：IgG1-K326W、E333S；IgG2-E333S；IgG1-N297A；IgG1-L234A、L235A；IgG2-V234A、G237A；IgG4-L235A、G237A、E318A；IgG4-S228P、L236E；IgG2-EU序列118-260；IgG4-EU序列261-447；IgG2-H268Q、V309L、A330S、A331S；IgG1-C220S、C226S、C229S、P238S；IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；和IgG1-L234F、L235E、P331S。 
在某些实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体组分以增加抗体依赖的细胞吞噬(ADCP)(见，例如Shields等人,J.Biol.Chem.276:6591-6604(2001)；Lazar等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA103:4005-4010(2006)；Stavenhagen等人,Cancer Res.,67:8882-8890(2007)；Richards等人,Mol.Cancer Ther.7:2517-2527(2008)；Horton等人,Cancer Res.68:8049-8057(2008),Zalevsky等人,Blood113:3735-3743(2009)；Bruckheimer等人,Neoplasia11:509-517(2009)；Allan等人,WO2006/020114；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Watkins等人,WO2004/074455，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的增加ADCP的Fc序列工程化修饰的例子包括与以下相对应的一个或多个修饰：IgG1-S298A、E333A、K334A；IgG1-S239D、I332E；IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG1-P247I、A339D或Q；IgG1-D280H、在具有或没有S298D或V的情况下的K290S；IgG1-F243L、R292P、Y300L；IgG1-F243L、R292P、Y300L、P396L；IgG1-F243L、R292P、Y300L、V305I、P396L；IgG1-G236A、S239D、I332E。 
在某些实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体组分以减低ADCP(见，例如，Sazinsky等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA105:20167-20172(2008)；Davis等人,J.Rheumatol.34:2204-2210(2007)；Bolt等人,Eur.J.Immunol.23:403-411(1993)；Alegre等人, Transplantation57:1537-1543(1994)；Xu等人,Cell Immunol.200:16-20(2000)；Cole等人,Transplantation68:563-571(1999)；Hutchins等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:11980-11984(1995)；Reddy等人,J.Immunol.164:1925-1933(2000)；国际专利公开号WO1997/11971和WO2007/106585；美国申请公开2007/0148167；McEarchern等人,Blood109:1185-1192(2007)；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Kumagai等人,J.Clin.Pharmacol.47:1489-1497(2007)，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的减低ADCC的Fc序列工程化修饰的例子包括与以下相对应的一个或多个修饰：IgG1-N297A；IgG1-L234A、L235A；IgG2-V234A、G237A；IgG4-L235A、G237A、E318A；IgG4-S228P、L236E；IgG2EU序列118-260；IgG4-EU序列261-447；IgG2-H268Q、V309L、A330S、A331S；IgG1-C220S、C226S、C229S、P238S；IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；和IgG1-L234F、L235E、P331S。 
“补体依赖的细胞毒性”和“CDC”指在补体存在下溶解靶细胞。补体激活途径始于补体系统的第一组分(C1q)与复合于同族抗原的分子(例如，抗体)的结合。为评估补体激活，可以进行CDC测定法，例如，如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods202:163(1996)中所述。在一个实施方案中，相对于类似的分子，Fc变体蛋白具有增强的CDC活性。在一个具体实施方案中，Fc变体蛋白具有大于类似分子至少2倍、或至少3倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少50倍、或至少100倍的CDC活性。在其他实施方案中，相对于类似的分子，Fc变体蛋白具有增强的CDC活性和增强的血清半寿期。 
在某些实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体组分以增加补体依赖的细胞毒性(CDC)(见，例如(见，例如Idusogie等人,J.Immunol.166:2571-2575(2001)；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Natsume等人,Cancer Res.68:3863-3872 (2008)，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的增加CDC的Fc序列工程化修饰的例子包括与以下相对应的一个或多个修饰：IgG1-K326A、E333A；和IgG1-K326W、E333S、IgG2-E333S。 
在一个实施方案中，本发明提供制剂，其中Fc区在选自以下的一个或多个位置处包含非天然存在的氨基酸残基：234、235、236、239、240、241、243、244、245、247、252、254、256、262、263、264、265、266、267、269、296、297、298、299、313、325、326、327、328、329、330、332、333和334，如Kabat中所述的EU index编号。任选地，Fc区可以在本领域技术人员已知的另外和/或替代性位置包含非天然存在的氨基酸残基(见，例如美国专利号5,624,821、6,277,375和6,737,056；和国际申请公开号WO01/58957、WO02/06919、WO04/016750、WO04/029207、WO04/035752和WO05/040217)。 
在特定的实施方案中，本发明的含有MRD的抗体含有Fc变体，所述Fc变体包含选自以下的至少一个非天然存在的氨基酸残基：234D、234E、234N、234Q、234T、234H、234Y、234I、234V、234F、235A、235D、235R、235W、235P、235S、235N、235Q、235T、235H、235Y、2351、235V、235F、236E、239D、239E、239N、239Q、239F、239T、239H、239Y、240I、240A、240T、240M、241W、241L、241Y、241E、241R.243W、243L243Y、243R、243Q、244H、245A、247V、247G、252Y、254T、256E、262I、262A、262T、262E、263I、263A、263T、263M、264L、264I、264W、264T、264R、264F、264M、264Y、264E、265G、265N、265Q、265Y、265F、265V、265I、265L、265H、265T、266I、266A、266T、266M、267Q、267L、269H、269Y、269F、269R、296E、296Q、296D、296N、296S、296T、296L、296I、296H、269G、297S、297D、297E、298H、298I、298T、298F、299I、299L、299A、299S、299V、200H、299F、299E、313F、325Q、325L、325I、325D、325E、325A、325T、325V、325H、 327G、327W、327N、327L、328S、328M、328D、328E、328N、328Q、328F、328I、328V、328T、328H、328A、329F、329H、329Q、330K、330G、330T、330C、330L、330Y、330V、330I、330F、330R、330H、332D、332S、332W、332F、332E、332N、332Q、332T、332H、332Y和332A，如Kabat中所述的EU标准编号。任选地，Fc区可以包含本领域技术人员已知的另外的和/或替代性的非天然存在的氨基酸残基(见，例如美国专利号5,624,821、6,277,375和6,737,056；和国际申请公开号WO01/58957、WO02/06919、WO04/016750、WO04/029207、WO04/035752和WO05/040217)。 
在某些实施方案中，所述多价和单价多特异性组合物是其中已经修饰抗体组分以增加与FcγRIIb受体的抑制性结合的抗体-MRD融合物(见，例如Chu等人,Mol.Immunol.45:3926-3933(2008))。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的增加与抑制性FcγRIIb受体结合的Fc序列工程化修饰的例子是IgG1-S267E、L328F。 
在某些实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体组分以减低CDC(见，例如国际申请公开号WO1997/11971和WO2007/106585；美国申请公开号2007/0148167A1；McEarchern等人,Blood109:1185-1192(2007)；Hayden-Ledbetter等人,Clin.Cancer15:2739-2746(2009)；Lazar等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA103:4005-4010(2006)；Bruckheimer等人,Neoplasia11:509-517(2009)；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Sazinsky等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA105:20167-20172(2008)；所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的减低CDC的Fc序列工程化修饰的例子包括与以下相对应的一个或多个修饰：IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG2EU序列118-260；IgG4-EU序列261-447；IgG2-H268Q、V309L、A330S、A331S；IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；IgG1-L234F、L235E、P331S；和IgG1-C226S、P230S。 
IgG的半寿期由其与新生儿受体FcRn的pH依赖性结合介导。在 某些实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体组分以增强与FcRn的结合(见，例如，Petkova等人,Int.Immunol.18:1759-1769(2006)；Dall'Acqua等人,J.Immunol.169:5171-5180(2002)；Oganesyan等人,Mol.Immunol.46:1750-1755(2009)；Dall'Acqua等人,J.Biol.Chem.281:23514-23524(2006),Hinton等人,J.Immunol.176:346-356(2006)；Datta-Mannan等人,Drug Metab.Dispos.35:86-94(2007)；Datta-Mannan等人,J.Biol.Chem.282:1709-1717(2007)；国际申请公开号WO2006/130834；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Yeung等人,J.Immunol.182:7663-7671(2009)；所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。 
在另外的实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体以在pH6.0而不在pH7.4选择性结合FcRn。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的增加半寿期的Fc序列工程化修饰的例子包括与以下相对应的一个或多个修饰：IgG1-M252Y、S254T、T256E；IgG1-T250Q、M428L；IgG1-H433K、N434Y；IgG1-N434A；和IgG1-T307A、E380A、N434A。 
在其他实施方案中，已经修饰抗体-MRD融合物的抗体组分以减少与FcRn的结合(见，例如Petkova等人,Int.Immunol.18:1759-1769(2006)；Datta-Mannan等人,Drug Metab.Dispos.35:86-94(2007)；Datta-Mannan等人,J.Biol.Chem.282:1709-1717(2007)；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Vaccaro等人,Nat.Biotechnol.23:1283-1288(2005)，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。在抗体-MRD融合物的抗体组分中所含的缩减半寿期的Fc序列工程化修饰的例子包括与以下相对应的一个或多个修饰：IgG1-M252Y、S254T、T256E；H433K、N434F、436H；IgG1-I253A；和IgG1-P257I、N434H或D376V、N434H。 
在一些实施方案中，使用本领域已知的技术，抗体-MRD融合物已经进行糖工程化或含有MRD的抗体的Fc部分已经突变以增加效应 子功能。例如，恒定区结构域的失活(通过点突变或其他手段)可以减少循环型修饰的抗体的Fc受体结合，因而增加肿瘤定位。在其他情况下，与本发明一致的恒定区修饰可调节补体结合作用并因此减少缀合的细胞毒素的血清半寿期和非特异性缔合。恒定区的另外其他修饰可以用来修饰二硫键或低聚糖部分，这允许增强的定位，原因在于增加的抗原特异性或抗体柔性。在无需过多实验的情况下，使用熟知免疫技术，可以容易地测量并且定量修饰所得到的生理谱、生物利用率和其他生物化学作用，如肿瘤定位、生物分布和血清半寿期。 
用于产生含有非天然存在的Fc区的抗体的方法是本领域已知的。例如，氨基酸置换和/或缺失可以通过诱变方法产生，所述诱变方法包括但不限于位点定向诱变(Kunkel,Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:488-492(1985))、PCR诱变(Higuchi，引自"PCR Protocols:A Guide to Methods and Applications",Academic Press，San Diego，第177-183页(1990))和盒诱变(Wells等人,Gene34:315-323(1985))。位点定向诱变可以通过重叠延伸PCR方法进行(Higuchi，引自"PCRTechnology:Principles and Applications for DNA Amplification",Stockton Press,New York,第61-70页(1989))。可选地，重叠延伸PCR技术(Higuchi，出处同上)可以用来向靶序列(起始DNA)引入任何所需的突变。可用于产生含有非天然存在的Fc区的抗体的其他方法是本领域已知的(见，例如美国专利号5,624,821、5,885,573、5,677,425、6,165,745、6,277,375、5,869,046、6,121,022、5,624,821、5,648,260、6,528,624、6,194,551、6,737,056、6,821,505和6,277,375；美国申请公开号2004/0002587和国际申请公开号WO94/29351、WO99/58572、WO00/42072、WO02/060919、WO04/029207、WO04/099249和WO04/063351)。 
根据本发明方法使用的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)也包括衍生物，所述衍生物例如通过任何类型的分子与抗体共价接合进行修饰，从而共价结合不妨碍抗体与其同族表的位特异性结合。例如，但不作为限制，抗体衍生物包括已例如通过糖基化、乙酰 化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/封闭基团衍生化进行修饰的抗体。可以通过已知的技术实施众多化学修饰的任一者，包括但不限于乙酰化、甲酰化等。另外，衍生物可以含有一个或多个非经典氨基酸。 
根据一些实施方案，本发明组合物的抗体组分经工程化以含有一个或多个游离半胱氨酸氨基酸，所述游离半胱氨酸具有所需范围(例如，0.6至1.0)内的巯基反应性，其中通过下述方法制备半胱氨酸工程化抗体，所述方法包含将亲本抗体的一个或多个氨基酸残基替换为半胱氨酸。在一些实施方案中，一个或多个游离半胱氨酸氨基酸残基位于轻链中。在另外的实施方案中，一个或多个游离半胱氨酸氨基酸残基位于重链中。在另外的实施方案中，一个或多个游离半胱氨酸氨基酸残基同时位于重链和轻链中。在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的含有MRD的抗体含有具有0.6至1.0范围内巯基反应性值的游离半胱氨酸氨基酸和在美国专利号7,855,275中公开的在轻链或重链中的序列修饰。在其他实施方案中，半胱氨酸工程化的抗体含有具有0.6至1.0范围内巯基反应性值的游离半胱氨酸氨基酸和在美国专利号7,855,275中未公开的在轻链或重链中的序列修饰，所述文献的内容通过引用的方式完整并入本文。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体经工程化以含有一个或多个游离硒代半胱氨酸氨基酸或另一个能够形成二硫键的非天然氨基酸。含有这种氨基酸的抗体和用于制备这类抗体的方法是本领域已知的。见，例如，Hofer等人,Proc.Natl.Acad.Sci.105(34):12451-12456(2008)；和Hofer等人,Biochem.48(50):12047-12057(2009))，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。在一些实施方案中，一个或多个游离硒代半胱氨酸氨基酸残基位于轻链中。在另外的实施方案中，一个或多个游离游离硒代半胱氨酸氨基酸残基位于重链中。在另外的实施方案中，一个或多个游离硒代半胱氨酸氨氨基酸残基同时位于重链和轻链中。 
在某些实施方案中，已经修饰该多价和多特异性组合物(例如，含 有MRD的抗体)从而在待治疗的动物中(例如，在人中)不激发有害免疫反应。在一个实施方案中，使用本领域认可的技术修饰抗体以减少免疫原性。例如，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分可以人源化、灵长类化、去免疫化或嵌合化。这些类型的抗体衍生自保留或基本上保留亲本抗体的抗原结合特性但是在人中具有较小免疫原性的非人抗体，一般是鼠抗体或灵长类抗体。这种可以由各种方法实现，所述方法包括(a)将整个非人可变域移植到人恒定区上以产生嵌合抗体；(b)在保留或不保留关键框架残基的情况下将一个或多个非人互补决定区(CDR)的至少一部分移植至人框架和恒定区中；或(c)植入整个非人可变域非人类可变域，但是通过替换表面残基用人样部分(human-like section)“掩蔽”它们。这类方法在Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.81:6851-6855(1984)；Morrison等人,Adv.Immunol.44:65-92(1988)；Verhoeyen等人,Science239:1534-1536(1988)；Padlan,Molec.Immun.28:489-498(1991)；Padlan,Molec.Immun.31:169-217(1994)和美国专利号5,585,089，5,693,761，5,693,762和6,190,370中公开，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。 
去免疫化也可以用来减少含有MRD的抗体的免疫原性。如本文所用，术语“去免疫化”包括改变含有MRD的抗体以修饰T细胞表位(见，例如国际申请公开WO9852976A1和WO0034317A2，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。例如，分析来自起始抗体的VH和VL序列并且从每个V区产生人T细胞表位“图”，所述图相对于序列内部的互补性决定区(CDR)和其他关键残基显示表位的位置。分析来自T细胞表位图的各个T细胞表位以在改变最终抗体活性的低风险情况下鉴定替代性氨基酸置换。设计一系列包含氨基酸置换组合的替代性VH和VL序列并且随后将这些序列并入一系列用于本文所公开的诊断方法和治疗中的抗体，随后测试所述抗体的功能。一般，生成并测试12至24种变体抗体。随后将包含修饰的V区和人C区的完整重链和轻链基因克隆至表达载体中并将后续质粒引入细胞系中以产生 完整抗体。随后在适宜的生物化学测定法和生物测定法中比较抗体并且鉴定最佳变体。 
可以在本文所述的方法中使用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的许多不同抗体组分。构思可以在本发明中使用催化性和非催化性抗体。例如，抗体38C2是分泌抗体的杂交瘤并且先前已经在国际申请公开WO97/21803中描述。38C2含有在脂族供体和醛接纳体之间催化醛酮加成反应的抗体结合位点。在神经母细胞瘤的同基因小鼠模型中，依托泊苷前药的全身性施用和肿瘤内注射Ab38C2抑制肿瘤生长。 
含有MRD的抗体的抗体靶(即，抗原性结合结构域的靶)可以是含有MRD的抗体需要与之相互作用的任何分子。例如，抗体靶可以是可溶性因子或抗体靶可以是跨膜蛋白，如细胞表面受体。该抗体靶也可以是胞外组分或胞内组分。在某些实施方案中，抗体靶是调节细胞增殖、分化或存活的因子。在其他实施方案中，抗体靶是细胞因子。在另一个非排他性实施方案中，抗体靶是调节血管生成的因子。在另一个非排他性实施方案中，抗体靶是调节一个或多个免疫反应如自身免疫性、炎症和针对癌细胞的免疫反应的因子。在另一个非排他性实施方案中，抗体靶是调节细胞黏附和/或细胞-细胞相互作用的因子。在某些非排他性实施方案中，抗体靶是细胞信号传导分子。使用或常规修改本领域已知用于评价这类活性的测定法、生物测定法和/或动物模型，可以确定抗体结合至靶并阻断、增加或干扰抗体靶的生物活性的能力。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是疾病相关抗原。该抗原可以是作为特定癌症和/或特定细胞类型(例如，过度增殖性细胞)和/或特定病原体(例如，细菌细胞(例如，结核病、天花、炭疽)、病毒(例如，HIV)、寄生虫(例如，疟疾、利什曼原虫病)、真菌性感染、霉菌、支原体、朊病毒抗原之特征的抗原或与免疫系统疾病相关的抗原。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是已经在动物模 型或临床环境中验证过的靶。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是癌抗原。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是：PDGFRA、PDGFRB、PDGF-A、PDGF-B、PDGF-CC、PDGF-C、PDGF-D、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、VEGFC、VEGFD、神经纤毛蛋白2(NRP2)、β细胞素(betacellulin)、PLGF、RET(转染期间重排)、TIE1、TIE2(TEK)、CA125、CD3、CD4、CD7、CD10、CD13、CD25、CD32、CD32b、CD44、CD49e(整联蛋白α5)、CD55、CD64、CD90(THY1)、CD133(prominin1)、CD147、CD166、CD200、ALDH1、ESA、SHH、DHH、IHH、patched1(PTCH1)、smoothened(SMO)、WNT1、WNT2B、WNT3A、WNT4、WNT4A、WNT5A、WNT5B、WNT7B、WNT8A、WNT10A、WNT10B、WNT16B、LRP5、LRP6、FZD1、FZD2、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、Notch、Notch1、Notch3、Notch4、DLL4、Jagged、Jagged1、Jagged2、Jagged3、TNFSF1(TNFb、LTa)、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFSF6(Fas配体)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF6B(DcR3)、TNFSF7(CD27配体、CD70)、TNFRSF7(CD27)、TNFSF8(CD30配体)、TNFRSF8(CD30)、TNFSF11(RANKL)、TNFRSF11A(RANK)、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF12(TWEAKR)、TNFSF13(APRIL)、TNFSF13B(BLYS)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFSF15(TL1A)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF19(TROY)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF25(DR3)、ANG1(ANGPT1)、ANG3(ANGPTL1)、ANG4(ANGPT4)、IL1α、IL1β、IL1R1、IL1R2、IL2、IL2R、IL5、IL5R、IL6、IL6R、IL8、IL8R、IL10、IL10R、IL12、IL12R、IL13、IL13R、IL15、IL15R、IL18、IL18R、IL19、IL19R、IL21R、IL23、IL23R、mif、XAG1、XAG3、REGIV、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGFR1、FGFR2、FGFR3、ALK、 ALK1、ALK7、ALCAM、Artemin、Axl、TGFb、TGFb2、TGFb3、TGFBR1、IGFIIR、BMP2、BMP5、BMP6、BMPRI、GDF3、GDF8、GDF9、N-钙黏着蛋白、E-钙黏着蛋白、VE-钙黏着蛋白、NCAM、L1CAM(CD171)、神经节苷脂GM2、神经节苷脂GD2、降钙素、PSGR、DCC、CDCP1、CXCR2、CXCR7、CCR3、CCR5、CCR7、CCR10、CXCL1、CXCL5、CXCL6、CXCL8、CXCL12、CCL3、CCL4、CCL5、CCL11、紧密连接蛋白1、紧密连接蛋白2、紧密连接蛋白3、紧密连接蛋白4、TMEFF2、神经调节蛋白、MCSF、CSF、CSFR(fms)、GCSF、GCSFR、BCAM、HPV、hCG、SR1F、PSA、FOLR2(叶酸受体β)、BRCA1、BRCA2、HLA-DR、ABCC3、ABCB5、HM1.24、LFA1、LYNX、S100A8、S100A9、SCF、血管性血友病因子、Lewis Y6受体、Lewis Y、CA G250(CA9)、整联蛋白αvb3(CNTO95)、整联蛋白αvb5、活化素B1α、白三烯B4受体(LTB4R)、神经降压肽NT受体(NTR)、5T4oncofetal抗原、生肌蛋白C、MMP、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、MMP14、MMP26、组织蛋白酶G、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、SULF1、SULF2、MET、UPA、MHC1、MN(CA9)、TAG-72、TM4SF1、类肝素酶(HPSE)、多配体聚糖(SDC1)、Ephrin B2、Ephrin B4或松弛素2。本发明涵盖与上述靶之一结合的MRD。本发明还涵盖了具有与1、2、3、4、5、6或更多个上述靶结合的1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。以上抗体和MRD靶和本文所述的那些意在是示意性的而不是限制的。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是CD19、CD22、CD30、CD33、CD38、CD44v6、TNFSF5(CD40配体)、TNFRSF5(CD40)、CD52、CD54(ICAM)、CD74、CD80、CD200、EPCAM(EGP2)、神经纤毛蛋白1(NRP1)、TEM1、间皮素、TGFβ1、TGFBRII、磷脂酰丝氨酸、叶酸受体α(FOLR1)、TNFRSF10A(TRAIL R1DR4)、TNFRSF10B(TRAIL R2DR5)、CXCR4、CCR4、CCL2、 HGF、陷凹、VLA5、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF9(41BB)、CTLA4、HLA-DR、IL6、TNFSF4(OX40配体)、TNFRSF4(OX40)、MUC1、MUC18、黏蛋白CanAg、神经节苷脂GD3、EGFL7、PDGFRa、IL21、IGF1、IGF2、CD117(cKit)、PSMA、SLAMF7、癌胚抗原(CEA)、FAP、整联蛋白avb3或整联蛋白α5β3。本发明涵盖与上述靶之一结合的MRD。本发明还涵盖了具有与1、2、3、4、5、6或更多个上述靶结合的1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。 
在具体的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与选自以下的抗体竞争结合靶：希普利珠单抗(siplizumab)CD2(例如，MEDI-507，MedImmune)、兰妥莫单抗(blinatumomab)CD19CD3(例如，MT103，Micromet/MedImmune)；5574CD19(Xencor)、SGN-19A CD19(Seattle Genetics)、ASG-5ME(Agenesys and Seattle Genetics)、MEDI-551CD19(MedImmune)、依帕珠单抗CD22(例如，hLL2，Immunomedics/UCB)、伊珠单抗(inotuzumab)奥加米星CD22(Pfizer)、伊妥木单抗(iratumumab)CD30(例如，SGN-30(Seattle Genetics)和MDX-060(Medarex))、
Figure BDA0000457457350000612
2513CD30(Xencor)、贝伦妥单抗-维多汀(brentuximab vedotin)CD30(例如，SGN-35，Seattle Genetics)、吉妥珠单抗奥加米星CD33(例如， 
Figure BDA0000457457350000613
Pfizer)、林妥珠单抗(lintuzumab)CD33(例如，Seattle Genetics的抗体)、MOR202CD38(MorphoSys)、达雷木单抗(daratumumab)CD38(例如，Genmab antibody)、CP870893CD40(Pfizer)、达西珠单抗(dacetuzumab)CD40(例如，SGN40，Seattle Genetics)、
Figure BDA0000457457350000614
CD40(Biogen Idec)、鲁卡木单抗(lucatumumab)CD40(例如，HCD122，Novartis)
Figure BDA0000457457350000615
5485CD40(Xencor)、替奈昔单抗(teneliximub)、卢利珠单抗(ruplizumab)CD40L(例如，
Figure BDA0000457457350000616
比伐珠单抗(bivatuzumab)mertansine CD44v6、阿伦珠单抗(alemtuzumab)CD52(例如， 
Figure BDA0000457457350000617
Genzyme/Bayer)、BI505 ICAM1(Bioinvent)、米拉珠单抗(milatuzumab)CD74(例如，Immunomedics的抗体)、加利昔单抗(galiximab)CD80(Biogen Idec)、BMS6635134-1BB(Bristol-Myers Squibb)、Alexion CD200抗体(Alexion)、依决洛单抗EPCAM(例如，MAb17-1A，
Figure BDA0000457457350000621
(GlaxoSmithKline)、AT003EPCAM(Affitech))、阿德木单抗EPCAM(例如，MT201，Micromet)、莫奥珠单抗(oportuzumab monatox)EPCAM、Genentech抗NRP1抗体、MORAB004TEM1(Morphotek)、MORAB009间皮素(Morphotek)、乐德木单抗(lerdelimumab)TGFb1(例如，CAT-152，Cambridge Antibody Technology)、美替木单抗(metelimumab)TGFb1(例如，CAT-192，Cambridge Antibody Technology)、ImClone抗TGFBRII抗体，巴维昔单抗磷脂酰丝氨酸(例如，Peregrine抗体(Peregrine Pharmaceuticals))、AT004磷脂酰丝氨酸(Affitech)、AT005磷脂酰丝氨酸(Affitech)、MORAB03叶酸受体α(Morphotek)、法利珠单抗(farletuzumab)叶酸受体α癌(例如，MORAB003，Morphotek)、CS1008DR4(Sankyo)、马帕木单抗(mapatumumab)DR4(例如，HGS-ETR1，Human Genome Sciences)、LBY135DR5(Novartis)、AMG66DR5(Amgen)、Apomab DR5(Genentech)、PRO95780(Genentech)、来沙木单抗DR5(例如，HGS-ETR2，Human Genome Sciences)、可那木单抗(conatumumab)DR5(例如，AMG655，Amgen)、替加珠单抗(tigatuzumab)DR5(例如，CS-1008)、AT009CXCR4(Affitech)、AT008CCR4(Affitech)、CNTO-888CCL2(Centocor)、AMG102HGF(Amgen)、CRYPTO抗体(Biogen Idec)、M200抗体VLA5(Biogen Idec)、伊匹木单抗CTLA4(例如，MDX-010，Bristol-Myers Squibb/Medarex)、贝拉西普(belatacept)CTLA4ECD(例如，CP-675,206，Pfizer)、IMMU114HLA-DR(Immunomedics)、阿泊珠单抗HLA-DR，妥昔丽珠单抗(toclizumab)IL6R(例如，
Figure BDA0000457457350000623
Hoffman-La Roche)、OX86OX40，pemtumomab  PEM/MUC1(Theragyn)、ABX-MA1MUC-18(Abgenix)、clivatuzumab MUC-18(例如，hPAM4，Immunomedics)、莫坎妥珠单抗(cantuzumab mertansine)黏蛋白CanAg、依美昔单抗(ecromeximab)(Ludwig Institute)、Genentech抗EGFL7抗体、AMG820CSFR(Amgen)、olaratumab PDGFRa(例如，Imclone抗体(Imclone))、IL21抗体Zymogenetics(Zymogenetics)、MEDI-573IGF1/IGF2(MedImmune)、AMG191cKit(Amgen)、埃达珠单抗(etaracizumab)(例如，MEDI-522，MedImune)和MLN591PSMA(Millennium Pharmaceuticals)、依洛珠单抗(elotuzumab)SLAMF7(例如，HuLuc63，BMS)、拉贝珠单抗(labetuzumab)CEA 
Figure BDA0000457457350000631
Immunomedics)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)FAP、CNTO95整联蛋白avb3(Centocor)、
Figure BDA0000457457350000632
整联蛋白avb3(MedImmune)和伏洛昔单抗(voloximab)α5β1(抗体靶以斜体显示)。本发明涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4、5、6种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与选自以下的抗体竞争靶结合：MDX-1342CD19(BMS)、SGN-CD19A CD19(Seattle Genetics)、美国专利号5,500,362中描述的抗CD20抗体、奥法木单抗(ofatumumab)CD20(例如，
Figure BDA0000457457350000633
GENMAB)、维妥珠单抗CD20(hA20，Takeda和Nycomed)、PRO70769CD20(Genentech；见例如，国际申请号PCT/US2003/040426)、AMG780Tie2/Ang1(Amgen)、REGN910ANG2(Regeneron)和美国专利号5,789,554中描述的抗CD22抗体(Immunomedics)、鲁西单抗CD23(例如，IDEC152，Biogen)、IDEC-152CD23(Biogen)、MDX-1401CD30(BMS)、HeFi-1CD30(NCI)、达雷木单抗(daratumumab)CD38、国际申请公开号WO2007124299中描述的抗CD-40抗体(Novartis)、IDEC-131CD40L(Biogen)、MDX-1411CD70(BMS)、 SGN-75CD70ADC(Seattle Genetics)、HuMax-CD74TM CD74ADC(Genmab)、IDEC-114CD80(Biogen)、TRC105CD105/内皮糖蛋白(Tracon)、ABX-CBL CD147(Amgen)、RG1HuMax-TFTM组织因子(TF)(Genmab)、HuMax-Her2TM ErbB2(Genmab)、曲妥珠单抗DM1ErbB2-DM1(Genentech)、AMG888HER3(Amgen和Daiichi Sankyo)、HuMV833VEGF(Tsukuba Research Lab，见，例如国际申请公开号WO/2000/034337)、IMC-18F1VEGFR1(Imclone)、IMC-1C11VEGFR(Imclone)、DC101VEGFR2(Imclone)、KSB-102EGFR(KS Biomedix)、mAb-806EGFR(路德维希癌症研究所)、MR1-1EGFRvIII毒素(IVAX，国家癌症研究所)、HuMax-EGFR EGFR(Genmab，见，例如美国申请号10/172,317)、IMC-11F8EGFR(Imclone)、CDX-110EGFRvIII(AVANT Immunotherapeutics)、扎鲁木单抗(zalumumab)EGFR(Genmab)、425、EMD55900和EMD62000EGFR(Merck KGaA，见，例如美国专利号5,558,864)、ICR62EGFR(癌症研究所，见，例如国际申请公开号WO95/20045)、SC100EGFR(Scancell and ISU Chemical)、MOR201FGFR-3(Morphosys)、ARGX-111c-Met(arGEN-X)、HuMax-cMetTM cMet(Genmab)、GC-1008TGFb1(Genzyme)、MDX-070PMSA(BMS)、huJ591PSMA(康奈尔研究基金会)、muJ591PSMA(康奈尔研究基金会)、GC1008TGFb(Genzyme)、NG-1Ep-CAM(Xoma)、MOR101ICAM-1(CD54)(Morphosys)、MOR102ICAM-1(CD54)(Morphosys)、ABX-MA1MUC18(Abgenix)、HumaLYM(Intracel)、HumaRAD-HN(Intracel)、HumaRAD-OV(Intracel)、ARGX-110和ARGX-111(arGEN-X)、HuMax-淋巴瘤(Genmab和Amgen)、米拉珠单抗(milatuzumab)CD74(例如，IMMU-115，IMMU-110；Immunomedics)、HuMax-癌症类肝素酶I(Genmab)、Hu3S193Lewis(y)(Wyeth，路德维希癌症研究所)、RAV12N联糖表位(Raven)、尼妥珠单抗(TheraCIM，hR3；YM Biosciences，见，例如美国专利号 5,891,996和6,506,883)、BEC2GD3(Imclone)、90Y他珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)α胎蛋白(例如，
Figure BDA0000457457350000651
Immunomedics)、KRN330(Kirin)、huA33A33(路德维希癌症研究所)、mAb216B细胞糖基化表位(NCI)、REGN421DLL4(Regeneron)、ASG-5ME SLC44A4ADC(AGS-5)、ASG-22ME结合素-4ADC、CDX-1307(MDX-1307)、hCGb(Celldex)甲状旁腺激素释放蛋白(PTH-rP)(UCB)、MT293切割的胶原蛋白(TRC093/D93，Tracon)、KW-2871GD3(Kyowa)、KIR(1-7F9)KIR(Novo)、A27.15转铁蛋白受体(Salk Institute，见，例如国际申请公开号WO2005/111082)和E2.3转铁蛋白受体(Salk Institute)。本发明涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4、5、6种或更多种上述抗体竞争靶结合。在另外的实施方案中，上述抗体之一是含有MRD的抗体的抗体。 
在具体的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是选自以下的抗体：希普利珠单抗(siplizumab)CD2(例如，MEDI-507，MedImmune)、兰妥莫单抗(blinatumomab)CD19CD3(例如，MT103，Micromet/MedImmune)；
Figure BDA0000457457350000652
5574CD19(Xencor)、SGN-19A CD19(Seattle Genetics)、ASG-5ME(Agenesys and Seattle Genetics)、MEDI-551CD19(MedImmune)、依帕珠单抗CD22(例如，hLL2，Immunomedics/UCB)、伊珠单抗(inotuzumab)奥加米星CD22、伊妥木单抗(iratumumab)CD30(例如，SGN-30(Seattle Genetics)和MDX-060(Medarex))、
Figure BDA0000457457350000653
2513CD30(Xencor)、贝伦妥单抗-维多汀(brentuximab vedotin)CD30(例如，SGN-35，Seattle Genetics)、吉妥珠单抗奥加米星CD33(例如， 
Figure BDA0000457457350000654
Pfizer)、林妥珠单抗(lintuzumab)CD33(例如，Seattle Genetics的抗体)、MOR202、CD38(MorphoSys)、达雷木单抗(daratumumab)CD38(例如，Genmab antibody)、CP870893CD40 (Pfizer)、达西珠单抗(dacetuzumab)CD40(例如，SGN40，Seattle Genetics)、
Figure BDA0000457457350000661
CD40(Biogen Idec)、鲁卡木单抗(lucatumumab)CD40(例如，HCD122，Novartis)
Figure BDA0000457457350000662
5485CD40(Xencor)、替奈昔单抗(teneliximab)、卢利珠单抗(ruplizumab)CD40L(例如，
Figure BDA0000457457350000663
比伐珠单抗(bivatuzumab)mertansine CD44v6，阿伦珠单抗(alemtuzumab)CD52(例如， 
Figure BDA0000457457350000664
Genzyme/Bayer)、BI505ICAM1(Bioinvent)、米拉珠单抗(milatuzumab)CD74(例如，Immunomedics的抗体)、加利昔单抗(galiximab)CD80(Biogen Idec)、BMS6635134-1BB(Bristol-Myers Squibb)、Alexion CD200抗体(Alexion)、依决洛单抗EPCAM(例如，MAb17-1A，
Figure BDA0000457457350000665
(GlaxoSmithKline)、AT003EPCAM(Affitech))、阿德木单抗EPCAM(例如，MT201，Micromet)、莫奥珠单抗(oportuzumab monatox)EPCAM、Genentech抗NRP1抗体、MORAB004TEM1(Morphotek)、MORAB009间皮素(Morphotek)、乐德木单抗(lerdelimumab)TGFb1(例如，CAT-152，Cambridge Antibody Technology)、美替木单抗(metelimumab)TGFb1(例如，CAT-192，Cambridge Antibody Technology)、ImClone抗TGFBRII抗体，巴维昔单抗磷脂酰丝氨酸(例如，Peregrine抗体(Peregrine Pharmaceuticals))、AT004磷脂酰丝氨酸(Affitech)、AT005磷脂酰丝氨酸(Affitech)、MORAB03叶酸受体α(Morphotek)、法利珠单抗(farletuzumab)叶酸受体α癌(例如，MORAB003，Morphotek)、CS1008DR4(Sankyo)、马帕木单抗(mapatumumab)DR4(例如，HGS-ETR1，Human Genome Sciences)、LBY135DR5(Novartis)、AMG66DR5(Amgen)、Apomab DR5(Genentech)、PRO95780(Genentech)、来沙木单抗DR5(例如，HGS-ETR2，Human Genome Sciences)、可那木单抗(conatumumab)DR5(例如，AMG655，Amgen)、替加珠单抗(tigatuzumab)(例如，CS-1008)、AT009CXCR4(Affitech)、AT008CCR4(Affitech)、CNTO-888CCL2 (Centocor)、AMG102HGF(Amgen)、CRYPTO抗体(Biogen Idec)、M200抗体VLA5(Biogen Idec)、伊匹木单抗CTLA4(例如，MDX-010，Bristol-Myers Squibb/Medarex)、贝拉西普(belatacept)CTLA4ECD(例如，CP-675,206，Pfizer)、IMMU114HLA-DR(Immunomedics)、阿泊珠单抗HLA-DR，妥昔丽珠单抗(toclizumab)IL6R(例如，
Figure BDA0000457457350000671
Hoffman-La Roche)、OX86OX40，pemtumomab PEM/MUC1(Theragyn)、ABX-MA1MUC-18(Abgenix)、莫坎妥珠单抗(cantuzumab mertansine)黏蛋白CanAg、依美昔单抗(ecromeximab)(Ludwig Institute)、Genentech抗EGFL7抗体、AMG820CSFR(Amgen)、olaratumab PDGFRa(例如，Imclone抗体(Imclone))、IL21抗体Zymogenetics(Zymogenetics)、MEDI-573IGF1/IGF2(MedImmune)、AMG191cKit(Amgen)、埃达珠单抗(etaracizumab)(例如，MEDI-522，MedImmuune)和MLN591PSMA(Millennium Pharmaceuticals)、依洛珠单抗(elotuzumab)SLAMF7(例如，HuLuc63，PDL)、拉贝珠单抗(labetuzumab)CEA
Figure BDA0000457457350000672
Immunomedics)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)FAP、CNTO95整联蛋白avb3(Centocor)、 
Figure BDA0000457457350000673
整联蛋白avb3(MedImmune)和伏洛昔单抗(voloximab)α5β1(例如，M200，PDL和Biogen Idec)。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是ALK1。在一个实施方案中，该抗体是PF-3,446,962(Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与PF-3,446,962结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制PF-3,446,962与ALK1的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与PF-3,446,962竞争结合ALK1。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是CD22。在一个实施方案中，该抗体是伊珠单抗(例如，伊珠单抗(inotuzumab)奥加米星CMC-544，PF-5,208,773；Pfizer)。在一个实施方案中，该抗体与伊珠单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，抗体竞争性 抑制伊珠单抗与CD22的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与伊珠单抗竞争结合CD22。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是CRYPTO。在一个实施方案中，该抗体是已经推进至I期临床试验的Biogen CRYPTO抗体(Biogen Idec)。在另一个实施方案中，该抗体与Biogen CRYPTO抗体结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制Biogen CRYPTO抗体与CRYPTO的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与Biogen CRYPTO抗体竞争结合CRYPTO。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是TNFSF5(CD40配体)。在一个实施方案中，该抗体是已经推进至I期临床试验的Biogen CD40L抗体(Biogen Idec)。在另一个实施方案中，该抗体与Biogen CD40L抗体结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制Biogen CD40L抗体与CD40L的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与Biogen CD40L抗体竞争结合CD40L。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是CD80。在一个实施方案中，抗体是加利昔单抗(Biogen Idec)。在另一个实施方案中，该抗体与加利昔单抗结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制加利昔单抗与CD80的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与加利昔单抗竞争结合CD80。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD80和选自以下的靶：CD2、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23、CD30、CD33、TNFRSF5(CD40)、CD52、CD74、TNFRSF10A(DR4)、TNFRSF10B(DR5)、VEGFR1、VEGFR2和VEGF。在另外的实施 方案中，含有MRD的抗体结合CD80和选自以下的靶：CD3、CD4和NKG2D。本发明还涵盖了结合CD80并且还至少结合2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD80。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是加利昔单抗。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是MCSF。在一个实施方案中，抗体是PD-360,324(Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与PD-360,324结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制PD-360,324与MCSF的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与PD-360,324竞争结合MCSF。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是CD44。在一个实施方案中，该抗体是PF-3,475,952(Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与PF-3,475,952结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制PF-3,475,952与CD44的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与PF-3,475,952竞争结合CD44。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是p-钙黏着蛋白(CDH3)。在一个实施方案中，该抗体是PF-3,732,010(Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与PF-3,732,010结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制PF-3,732,010与p-钙黏着蛋白的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与PF-3,732,010竞争结合p-钙黏着蛋白。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是ANG2(ANGPT2)。在一个实施方案中，该抗体是MEDI3617(MedImmune)。在一个实施方案中，该抗体与MEDI3617结合相同的表位。在另一个实施方案中，抗体竞争性抑制MEDI3617与ANG2的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个 MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与MEDI3617竞争结合ANG2。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是结合ANG-2的抗体，所述抗体在以下文献中公开：美国专利号7,063,965、7,063,840、6,645,484、6,627,415、6,455,035、6,433,143、6,376,653、6,166,185、5,879,672、5,814,464、5,650,490、5,643,755、5,521,073；美国申请公开号2011/0158978(例如，H4L4)，2006/0246071、2006/0057138、2006/0024297、2006/0018909、2005/0100906、2003/0166858、2003/0166857、2003/0124129、2003/0109677、2003/0040463和2002/0173627；或国际申请公开号WO2006/020706、WO2006/045049、WO2006/068953或WO2003/030833(所述文献的每一篇的公开内容通过引用的方式完整并入本文)。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与这些抗体竞争结合ANG2。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合ANG2并且另外地结合选自以下的靶：VEGF(即VEGFA)、VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TNF、FGFR3、EFNa1、EFNa2、ANG1、ANG2、IL1、IL1β、IL6、IL8、IL18、HGF、PDGFA、PLGF、PDGFB、CXCL12、KIT、GCSF、CXCR4、PTPRC、TIE2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、Notch1、DLL4、EGFL7、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、VCAM1、PDGFRA和PDGFRB。本发明还涵盖了结合ANG2和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是MEDI3617、AMG780或REGN910。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是H4L4。 
在具体的实施方案中，含有MRD的抗体结合ANG2和TNF。在 另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合ANG2和IL6。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合ANG2和IL1。在其他实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合ANG2、IL6和TNF。在其他实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合ANG2、IL1和TNF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合ANG2、IL1、IL6和TNF。 
在具体的实施方案中，含有MRD的抗体结合ANG2和TNF并且含有MRD的抗体的抗体组分是阿达木单抗。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体同阿达木单抗竞争与TNF的结合。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合ANG2。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是选自SAITAng-2-1、SAITAng-2-2、SAITAng-2-3、SAITAng-2-4的结合ANG2的抗体或在国际申请公开号WO2009/142460中公开的另一种抗体。本发明还涵盖了具有一种抗体和/或1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与这些抗体的一种或多种竞争结合ANG2。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TIE2。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是结合TIE2的抗体，所述结合TIE2的抗体在美国专利号6,365,154和6,376,653；美国申请公开号2007/0025993、2006/0057138和2006/0024297；或国际申请公开号WO2006/020706，WO2000/018437和WO2000/018804中公开(所述文献的每一篇的公开内容通过引用的方式完整并入本文)。本发明还涵盖了具有一种抗体和/或1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与这些抗体的一种或多种竞争结合TIE。 
在某些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是EGFR(ErbB1)、ErbB2、ErbB3、ErbB4、CD20、胰岛素样生长因子-I受体，前列腺特异性膜抗原、整联蛋白或cMet。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合EGFR(ErbB1)。在一个具体实施方案中，该抗体是爱必妥 (IMC-C225)。在一个实施方案中，该抗体与爱必妥
Figure BDA0000457457350000722
结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制爱必妥
Figure BDA0000457457350000723
与EGFR的结合。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体抑制EGFR二聚化。在另一个具体实施方案中，该抗体是马妥珠单抗(例如，EMD72000、Merck Serono)或帕尼单抗(例如，Amgen)。在另一个实施方案中，该抗体与马妥珠单抗或帕尼单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制马妥珠单抗或帕尼单抗与EGFR的结合。在另一个实施方案中，该抗体是ABX-EGF(Immunex)或MEDX-214(Medarex)。在另一个实施方案中，该抗体与ABX-EGF或MEDX-214结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制ABX-EGF或MEDX-214与EGFR的结合。在另一个具体实施方案中，该抗体是扎鲁木单抗(Genmab)或尼妥珠单抗(Biocon)。在一个另外的实施方案中，该抗体与扎鲁木单抗(Genmab)或尼妥珠单抗(Biocon)结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制扎鲁木单抗(Genmab)或尼妥珠单抗(Biocon)与EGFR的结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合EGFR(ErbB1)和选自以下的靶：HGF、CD64、CDCP1、RON、cMET、ErbB2、ErbB3、IGF1R、PLGF、RGMa、PDGFRa、PDGFRb、VEGFRl、VEGFR2、TNFRSF10A(DR4)、TNFRSF10B(DR5)、IGF1,2、IGF2、CD3、CD4、NKG2D和破伤风类毒素。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合至少1、2、3、4、5种或更多种的这些靶。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合EGFR。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是马妥珠单抗、帕尼单抗、MEDX-214或ABX-EGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是尼妥珠单抗(Biocon)或扎鲁木单抗。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是爱必妥
Figure BDA0000457457350000725
在特定的实施方案中，含有MRD的抗体结合ErbB1并且另外地结合ErbB3。在一些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合 ErbB1并且含有MRD的抗体的MRD结合ErbB3。在一个特定实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是西妥昔单抗。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与西妥昔单抗竞争结合ErbB1。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是选自尼妥珠单抗(Biocon)、马妥珠单抗(Merck KGaA)、帕尼单抗(Amgen)、扎鲁木单抗(Genmab)、MEDX-214和ABX-EGF的结合ErbB1的抗体。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与选自尼妥珠单抗、马妥珠单抗、帕尼单抗和扎鲁木单抗的抗体竞争结合ErbB1。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合ErbB3并且含有MRD的抗体的MRD结合ErbB1。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是选自MM121(Merrimack)、8B8(Genentech)、AV203(Aveo)和AMG888(Amgen)的结合ErbB3的抗体。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与选自MM121、8B8、AV203和AMG888的抗体竞争结合ErbB3。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体特异性结合ErbB2(Her2)。在一个具体实施方案中，该抗体是曲妥珠单抗(例如，赫赛汀Genentech/Roche)。在一个实施方案中，该抗体与曲妥珠单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制曲妥珠单抗与ErbB2的结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4、5、6种或更多种上述抗体竞争靶结合。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3、4、5、6种上述抗体竞争靶结合。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体与ErbB2特异性结合。在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是与抗ErbB2抗体曲妥珠单抗(例如，赫赛汀
Figure BDA0000457457350000732
Genentech)特异性结合相同的表位的抗体。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是通过抗 ErbB2抗体曲妥珠单抗竞争性抑制ErbB2结合作用的抗体。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是抗ErbB2抗体曲妥珠单抗。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体抑制HER2二聚化。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体用HER3(ErbB3)抑制HER2异二聚化。在一个具体实施方案中，该抗体是培妥珠单抗(例如， 和phrMab2C4，Genentech)。在另一个实施方案中，该抗体与培妥珠单抗特异性结合相同的表位。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是通过培妥珠单抗竞争性抑制ErbB2结合作用的抗体。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。因此，在一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是曲妥珠单抗并且含有MRD的抗体中的1、2、3、4、5、6或更多个MRD通过培妥珠单抗竞争性抑制ErbB2结合作用。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是选自以下的结合ErbB2的抗体：MDX-210(Medarex)、tgDCC-E1A(Targeted Genetics),MGAH22(MacroGenics)和培妥珠单抗(OMNITARGTM，2C4；Genentech)。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3或4种上述抗体竞争靶结合。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3或4种上述抗体竞争靶结合。 
在特定的实施方案中，含有MRD的抗体结合ErbB2并且另外地结合ErbB3。在一些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合ErbB2并且含有MRD的抗体的MRD结合ErbB3。在一个特定实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是曲妥珠单抗。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与曲妥珠单抗竞争结合ErbB2。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗 体是选自以下的结合ErbB2的抗体：MDX-210(Medarex)、tgDCC-E1A(Targeted Genetics)、MGAH22(MacroGenics)和培妥珠单抗(OMNITARGTM)。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与选自以下的抗体竞争结合ErbB2：MDX-210、tgDCC-E1A、MGAH22和培妥珠单抗。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合ErbB3和含有MRD的抗体的MRD结合ErbB2。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体包含抗ErbB2抗体曲妥珠单抗的CDR。表1中提供曲妥珠单抗的CDR序列、VH序列和VL序列。 
表1 
Figure BDA0000457457350000751
在一个实施方案中，含有MRD的抗体特异性结合ErbB3(Her3)。在一个具体实施方案中，该抗体是MM121(Merrimack Pharmaceuticals)或AMG888(Amgen)。在一个实施方案中，该抗体与MM121或AMG888结合相同的表位。在另一个 实施方案中，抗体竞争性抑制MM121或AMG888与ErbB3的结合。在另一个具体实施方案中，该抗体是AV-203(AVEO)。在一个实施方案中，该抗体与AV-203结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制AV-203的结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1或2种上述抗体竞争靶结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体特异性结合VEGF(VEGFA)。在一个具体实施方案中，该抗体是贝伐珠单抗(例如，阿瓦斯汀Genentech/Roche)。在一个实施方案中，该抗体与贝伐珠单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制贝伐珠单抗与VEGFA的结合。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体是AT001(Affitech)。在一个实施方案中，该抗体与AT001结合相同的表位。在另一个实施方案中，抗体竞争性抑制AT001与VEGFA的结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1或2种上述抗体竞争靶结合。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体包含抗VEGF抗体贝伐珠单抗的CDR。表2中提供贝伐珠单抗的CDR序列、VH序列和VL序列。 
表2 
Figure BDA0000457457350000762
在其他的具体实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合VEGF。在一个具体实施方案中，该抗体是贝伐珠单抗(例如，阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350000772
Genentech)。在一个实施方案中，该抗体与贝伐珠单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制贝伐珠单抗与VEGF的结合。在另一个具体实施方案中，该抗体是r84(Peregrine)或2C3(Peregrine)。在另一个实施方案中，该抗体与r84或2C3结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体通过r84或2C3竞争性抑制VEGF结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2或3种上述抗体竞争靶结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合VEGF并且另外地结合选自以下的血管生成靶：VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TNFSF2(TNFa)、FGFR3、EFNa1、EFNa2、ANG1、ANG2、IL6、IL8、IL18、HGF、TIE2、PDGFA、PLGF、PDGFB、CXCL12、KIT、GCSF、CXCR4、PTPRC、TIE2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、Notch1、DLL4、EGFL7、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、VCAM1、PDGFRA和PDGFRB。本发明还涵盖了结合VEGF和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价 和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合VEGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是r85、2C3或AT001。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是贝伐珠单抗。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合VEGF并且另外地结合选自以下的靶：IL1β、磷脂酰丝氨酸、TNFSF11(RANKL)、TNFSF12(TWEAK)、IGF1,2、IGF2、IGF1、DKK1、SDF2、CXC3CL1(fractalkine)、硬骨素(sclerostin)和破伤风类毒素和HGF。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合VEGF并且另外地结合选自以下的靶：ErbB3、EGFR、cMet、VEGF、RON(MST1R)、DLL4、CDCP1CD318)、NRP1、ROBO4、CD13、CTLA4(CD152)、ICOS(CD278)、CD20、CD22、CD30、CD33、CD80和IL6R。本发明还涵盖了结合VEGF和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合VEGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是r85、2C3或AT001。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是贝伐珠单抗。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体特异性结合VEGFR1。在一个实施方案中，该抗体竞争性抑制阿柏西普(Aflibercept)(Regeneron)与VEGFR1的结合。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体抑制VEGFR1二聚化。本发明还涵盖与阿柏西普竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与阿柏西普竞争结合靶。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体特异性结合VEGFR2。在一个具体实施方案中，该抗体是雷莫芦单抗(ramucirumab)(例如，IMC1121B和IMC1C11，ImClone)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体抑制VEGFR2二聚化。在一个实施方案中，该抗体与雷莫芦单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑 制雷莫芦单抗与VEGFR2的结合。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制阿柏西普与VEGFR2的结合。本发明还涵盖与雷莫芦单抗竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与雷莫芦单抗或阿柏西普竞争结合靶。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体与FGF受体(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3或FGFR4)特异性结合。在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是与FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)特异性结合的抗体。在一个具体实施方案中，该抗体是IMC-A1(Imclone)。在一个实施方案中，该抗体与IMC-A1结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制IMC-A1与FGFR1的结合。在一个另外的实施方案中，该抗体竞争性抑制FP-1039(5Prime)与FGFR1的FGF配体的结合。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是与FGFR2(例如，FGFR2-IIIB和FGFR2-IIIC)特异性结合的抗体。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是与FGFR3特异性结合的抗体。在一个具体实施方案中，该抗体是IMC-A1(Imclone)。在一个实施方案中，该抗体与PRO-001(ProChon Biotech)、R3Mab(Genentech)或1A6(Genentech)结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制PRO-001(ProChon Biotech)、R3Mab(Genentech)或1A6(Genentech)的结合。本发明还涵盖与以上抗体或配体诱捕器(ligand trap)之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1种或更多种上述抗体或配体诱捕器竞争靶结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合CD20。在一个具体实施方案中，该抗体是利妥昔单抗(例如， 
Figure BDA0000457457350000791
Genentech/Roche/Biogen Idec)。在一个实施方案中，该抗体与结合相同的表位利妥昔单抗。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制利妥昔单抗与CD20的结合。在一个另外的 实施方案中，该抗体是GA101(Biogen Idec/Roche/Glycart)。在一个实施方案中，该抗体与GA101结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制GA101与CD20的结合。在一个另外的实施方案中，该抗体是PF-5,230,895(SBI-087；Pfizer)。在一个实施方案中，该抗体与PF-5,230,895结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制PF-5,230,895与CD20的结合。在另一个具体实施方案中，该抗体是奥瑞珠单抗(ocrelizumab)(例如，2H7；Genentech/Roche/Biogen Idec)。在一个实施方案中，该抗体与奥瑞珠单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制奥瑞珠单抗与CD20的结合。在另一个具体实施方案中，含有MRD的抗体选自：obinutuzumab(例如，GA101；Biogen Idec/Roche/Glycart)、奥法木单抗(ofatumumab)(例如，和HuMax-CD20Genmab)、维妥珠单抗(例如，IMMU-160，Immunomedics)、AME-133(Applied Molecular Evolution)、SGN35(Millennium)、TG-20(GTC Biotherapeutics)、阿夫土珠单抗(afutuzumab)(Hoffman-La Roche)和PRO131921(Genentech)。在另一个实施方案中，该抗体与选自obinutuzumab、奥法木单、维妥珠单抗、AME-133、SGN35、TG-20和PRO131921的抗体结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体通过选自obinutuzumab、奥法木单抗、维妥珠单抗、AME-133、SGN35、TG-20、阿夫土珠单抗和PRO131921的抗体竞争性抑制CD20结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4、5、6种或更多种上述抗体竞争靶结合。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3、4、5、6种上述抗体竞争靶结合。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD20和选自以下的靶：CD19、CD22、CD30、TNFRSF5(CD40)、CD52、CD74、CD80、CD138、VEGFR1、VEGFR2、EGFR、TNFRSF10A (DR4)、TNFRSF10B(DR5)、TNF、NGF、VEGF、IGF1.2、IGF2、IGF1和RANKL。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD20和选自以下的靶：CD3、CD4和NKG2D。本发明还涵盖了结合CD20并且还结合2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD20。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是选自利妥昔单抗、GA101、PF-5,230,895、奥瑞珠单抗、阿托珠单抗、奥法木单抗、维妥珠单抗、AME-133、SGN35、TG-20、阿夫土珠单抗和PRO131921的抗体。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体特异性结合IGF1R。在一个具体实施方案中，该抗体选自：西妥木单抗(cixutumumab)(例如，IMC-A12，Imclone)、芬妥木单抗(figitumumab)(例如，CP-751,871，Pfizer)、AMG479(Amgen)、BIIB022(Biogen Idec)、SCH717454(Schering-Plough)和R1507(Hoffman La-Roche)。在一个实施方案中，该抗体与选自西妥木单抗、芬妥木单抗、AMG479、BIIB022、SCH717454和R1507的抗体结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体通过选自西妥木单抗、芬妥木单抗、AMG479、BIIB022、SCH717454和R1507的抗体竞争性抑制IGF1R结合。在一个具体实施方案中，该抗体是芬妥木单抗。在另一个具体实施方案中，该抗体与芬妥木单抗结合相同的表位。在又一个具体的实施方案中，该抗体通过芬妥木单抗竞争性抑制IGF1R结合。在一个另外的具体实施方案中，该抗体是BIIB022。在另一个具体实施方案中，该抗体与BIIB022结合相同的表位。在又一个具体的实施方案中，该抗体通过BIIB022竞争性抑制IGF1R结合。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体抑制IGF1R二聚化。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4、5、6种或更多种上述抗体竞争IGF1R结合。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所 述MRD与至少1、2、3、4、5、6种上述抗体竞争IGF1R结合。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合IGF1R和选自以下的靶：EGFR、ErbB2、ErbB3、PDGFRa、PDGFRb、cMet、TNFRSF10A(DR4)、TNFRSF10B(DR5)、CD20、NKG2D、VEGF、PGE2、IGF1、IGF2和IGF1,2。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合IGF1R和选自以下的靶：CD3、CD4和NKG2D。本发明还涵盖了结合IGF1R并且至少结合1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合IGF1R。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分选自：西妥木单抗、芬妥木单抗、AMG479、BIIB022、SCH717454和R1507。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合与内源血脑屏障(BBB)受体介导的转运系统(例如，胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦蛋白受体、脂蛋白受体和IGF受体介导的转运系统)相关的靶(例如，配体、受体或辅助蛋白)并且能够跨越到达BBB的脑侧。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有靶抗原(例如，配体、受体或辅助蛋白)的2、3、4、5个或更多结合位点(即，能够多价结合)，所述靶抗原与内源血脑屏障(BBB)受体介导的转运系统(例如，胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦蛋白受体、脂蛋白受体和IGF受体介导的转运系统)相关。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有与内源BBB受体介导的转运系统相关的靶的单结合位点。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对与内源BBB受体介导的转运系统相关的靶的2、3、4、5或更多个单结合位点。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合位于BBB的脑(脑脊液)侧上的1、2、3、4、5种或更多种靶。在其他实施方案中，含有MRD的抗体另外地结合位于BBB的脑(脑脊液)侧上的1、2、3、4、5种或更多种靶。在具体的实施方案中，含有MRD的抗体结合与神经疾病或病症相关的1、2、3、4、5种或更多种靶。在具体的实施方案 中，神经疾病或病症选自脑癌、神经变性病、精神分裂症、癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病病、ALS、多发性硬化、视神经脊髓炎和Neuro-AIDS(例如，HIV相关性痴呆)。因此，本发明涵盖通过施用治疗有效量的治疗神经疾病或病症的多价和单价多特异性组合物治疗患者的方法，所述神经疾病或病症选自脑癌、神经变性病、精神分裂症、癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病病、ALS、多发性硬化、视神经脊髓炎和Neuro-AIDS(例如，HIV相关性痴呆)。在另一个实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗脑癌、脑的转移性癌症或脑的原发性癌症。在另外的实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施至患者以治疗神经肿瘤如胶质瘤(例如，胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GBM)和星形细胞瘤)、室管膜瘤、少突胶质细胞瘤、神经纤维瘤、肉瘤、髓母细胞瘤、原始神经外胚层肿瘤、垂体腺瘤、神经母细胞瘤或脑膜的癌症(例如，脑膜瘤、脑膜肉瘤和胶质瘤)。在具体的实施方案中，本发明涵盖通过施用治疗有效量的治疗神经变性病的多价和单价多特异性组合物治疗患者的方法。 
在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合内源BBB受体介导的转运系统，其选自胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦蛋白受体、脂蛋白受体和IGF受体介导的转运系统。 
在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合转铁蛋白受体。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合选自以下的靶：低密度脂蛋白受体1(LRP-1)、LRP-1配体或其结合LRP-1的功能性片段或变体、低密度脂蛋白受体2(LRP-2)、LRP-2配体或其结合LRP-1的功能性片段或变体、转铁蛋白蛋白质或其功能性片段或变体、胰岛素受体、TMEM30A、瘦蛋白受体、IGF受体、IGFR配体或其功能性片段或变体、白喉毒素受体、白喉毒素受体配体或其功能性片段或变体、胆碱转运蛋白、结合胆碱受体的复合物、氨基酸转运蛋白(例如，LAT1/CD98、SLC3A2和SLC7A5)、氨基酸转运蛋白配体或其功能性片段或变体、RAGE、RAGE配体或其功能性片段或变体、SLC2A1和SLC2A1配体或其功能性片段或变体。 
在另外的实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合RAGE。在其他实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合RAGE和选自以下的靶：Abeta、内皮素1、TNF、IL6、MCSF，AGE、S100成员、HMGB1、LPS和TLR2。本发明还涵盖了结合RAGE并且还结合2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合RAGE。 
在另外的实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合与内源血脑屏障(BBB)受体介导的转运系统相关的靶抗原并且还结合选自以下的靶抗原：α-突触核蛋白、RGM A、NOGO A、NgR、OMGp MAG、CSPG、神经突抑制性脑信号蛋白(semaphorin)(例如，脑信号蛋白3A和脑信号蛋白4)、肝配蛋白(ephrin)、A-β、AGE(S100A、两性蛋白(amphoterin))、NGF、可溶性A-B、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、中期因子、神经蛋白聚糖(neurocan)、多功能蛋白聚糖(versican)、磷酸蛋白聚糖(phosphacan)、Te38和PGE2、IL1、IL1R、IL6、IL6R、IL12、IL18、IL23、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、CD45RB、CD52、CD200、VEGF、VLA4、TNFα、干扰素γ、GMCSF、FGF、C5、CXCL13、CCR2、CB2、MIP1a和MCP-1。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体具有针对与内源血脑屏障(BBB)受体介导的转运系统相关的靶的单结合位点并且还结合选自以下的靶：α-突触核蛋白、RGM A、NOGO A、NgR、OMGp MAG、CSPG、神经突抑制性脑信号蛋白(例如，脑信号蛋白3A和脑信号蛋白4)、肝配蛋白、A-β、AGE(S100A，两性蛋白)、NGF、可溶性A-B、聚集蛋白聚糖、中期因子、神经蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、磷酸蛋白聚糖、Te38、PGE2、IL1、IL1R、IL6、IL6R、IL12、IL18、IL23、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、CD45RB、CD52、CD200、VEGF、VLA4、TNFα、干扰素γ、GMCSF、FGF、C5、 CXCL13、CCR2、CB2、MIP1a和MCP-1. 
在另外的实施方案中，将含有MRD的抗体施用至患者以治疗选自脑癌、神经变性病、精神分裂症、癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病病、ALS、多发性硬化、视神经脊髓炎和Neuro-AIDS(例如，HIV相关性痴呆)的神经疾病或病症。在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对2个或更多个以上的靶的2个结合位点。在又一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有针对3种或更多种靶的2个结合位点。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与癌症相关。在又一个实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的靶与癌症相关的1、2、3、4、5个或更多个不同信号传导途径或作用模式相关。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合整联蛋白。在一个具体实施方案中，该抗体选自：MEDI-522avb3 
Figure BDA0000457457350000851
MedImmune)、CNTO95a5b3(Centocor)、JC7Uαvβ3和伏洛西单抗a5b1(例如，M200,PDL和Biogen Idec)。在另一个实施方案中，该抗体与选自以下的抗体结合相同的表位：MEDI-522、CNTO95、JC7Uαvβ3和伏洛西单抗(volociximab)。在另一个实施方案中，该抗体通过选自以下的抗体竞争性抑制整联蛋白结合：MEDI-522、CNTO95、JC7U和M200。在一个具体实施方案中，该抗体是那他珠单抗(例如，
Figure BDA0000457457350000852
Biogen Idec)。在一个实施方案中，该抗体与那他珠单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体通过那他珠单抗竞争性抑制整联蛋白结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4、5、6种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合cMet。在一个具体实施方案中，该抗体选自：MetMab(OA-5D5,Genentech)、AMG-102(Amgen)和DN30。在另一个实施方案中，该抗体与选自以下的抗体结合相同的表位：MetMab)、AMG-102和DN30。在另一个 实施方案中，该抗体通过选自以下的抗体竞争性抑制cMET结合：MetMab(OA-5D5)、AMG-102和DN30。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2或3种上述抗体竞争靶结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合cMet并且该抗体选自：11E1、CE-355621、LA480和LMH87。在另一个实施方案中，该抗体与选自以下的抗体结合相同的表位：MetMab)、AMG-102和DN30。在另一个实施方案中，该抗体通过选自以下的抗体竞争性抑制cMET结合：11E1、CE-355621、LA480和LMH87。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3或4种上述抗体竞争靶结合。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合cMET和选自以下的靶：ErbB2、ErbB3、EGFR、IGF1R、NRP1、RON、PDGFRa、PDGFRb、VEGF、VEGFR1、VEGFR2、TGFβ、TGFβR2、CD82、CD152、NGF、BMP2、BMP4、BMP5、BMP9、BMP10、BMPR-IA、ALK1、a3b1整联蛋白和HGF。本发明还涵盖了结合cMET并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合cMET。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是选自以下的抗体：MetMab、AMG-102和DN30。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是选自以下的抗体：11E1、CE-355621、LA480和LMH87。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合MST1R(RON)。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体结合RON和选自以下的靶：EGFR、ErbB2、ErbB3、VEGFRl、VEGFR2、cMET、CXCR4、VEGF、MST、MTSPl、CDCP1、EPHB2、NGF、 CXCL12和HGF(SF)。本发明还涵盖了结合MST1R并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合MST1R。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合HGF(SF)。在一个具体实施方案中，该抗体是AMG-102(Amgen)或SCH900105(AV-229，AVEO)。在另一个实施方案中，该抗体与AMG-102(Amgen)或SCH900105(AV-229，AVEO)结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体通过AMG-102(Amgen)或SCH900105(AV-229，AVEO)竞争性抑制HGF结合。本发明还涵盖与AMG-102(Amgen)或SCH900105(AV-229，AVEO)竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2或3种上述抗体竞争靶结合。 
在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体结合HGF和选自以下的靶：ErbB2、ErbB3、EGFR、IGF1R、NRP1、RON，PDGFRa，PDGFRb、VEGF、VEGFR1、VEGFR2、TGFβ、TGFβR2、CD82、CD152、NGF、BMP2、BMP4、BMP5、BMP9、BMP10、BMPR-IA、ALK1、a3b1整联蛋白、cMET、MST1R(RON)、CXCR4、MST、MTSPl、CDCP1、EPHB2、NGF、CXCL12NRP1和磷脂酰丝氨酸。本发明还涵盖了结合HGF并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合HGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是AMG-102或SCH900105。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合a5b1整联蛋白(VLA5)。在一个具体实施方案中，该抗体是伏洛西单抗(例如，M200Biogen Idec)。在另一个实施方案中，该抗体与伏洛西单抗结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体通过伏洛西单 抗竞争性抑制a5b1整联蛋白。本发明还涵盖与伏洛西单抗竞争a5b1整联蛋白结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与伏洛西单抗竞争结合a5b1整联蛋白。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是与自身免疫疾病、炎性疾病或其他免疫系统疾病相关的抗原或与调节免疫反应相关。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体改善抗原呈递细胞(例如，树突细胞)的性能。在一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是选自以下的成员：CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD27、CD28、CD30、CD30L、TNFSF14(LIGHT、HVEM配体)、CD70、ICOS、ICOSL(B7-H2)、CTLA4、PD-1、PDL1(B7-H1)、B7-H4、B7-H3、PDL2(B7-DC)、BTLA、CD46、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、HLA-DR、CD74、PD1、TNFRSF4(OX40)、TNFRSF9(41BB)、TNFSF4(OX40配体)、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF18(GITR)、MHC-1、TNFRSF5(CD40)、TLR4、TNFRSF14(HVEM)、FcγRIIB和IL4R。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是选自以下的免疫抑制性靶：IL1、IL1β、IL1Ra、L-5、IL6、IL6R、CD26L、CD28、CD80、FcRn和FcγRIIB。本发明涵盖与上述靶之一结合的MRD。本发明还涵盖了具有与1、2、3、4、5、6或更多个上述靶结合的1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合前列腺素E2(PGE2)。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体结合IL6R和选自以下的靶：EGFR、IGF1R、IL6R、TNF、NGF、IL1β、IL6、IL17A、VEGF、IL15、IL18、S1P和Aβ。本发明还涵盖了结合PGE2并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含 有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合PGE2。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是免疫刺激性靶(例如，靶相关的免疫细胞活化的激动剂(如TNFRSF9(41BB)或TNFRSF5(CD40))或抑制性免疫检查点的拮抗剂(如CTLA-4))。在一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是选自以下的免疫刺激性靶：CD25、CD28、CTLA-4、PD1、PDL1、B7-H1、B7-H4、IL10、TGFβ、TNFSF4(OX40配体)、TNFRSF4(OX40)、TNFSF5(CD40配体)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF9(41BB)、TNFSF14(LIGHT，HVEM配体)、TNFRSF14(HVEM)、TNFSF15(TL1A)、TNFRSF25(DR3)、TNFSF18(GITR配体)和TNFRSF18(GITR)。本发明涵盖与上述靶之一结合的MRD。本发明还涵盖了具有与1、2、3、4、5、6或更多个上述靶结合的1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体结合选自CTLA-4、TNFRSF18(GITR)、4-1BB和TNFRSF5(CD40)的2、3种或全部4种靶。在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合CTLA-4和TNFRSF9(41BB)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合CTLA-4和TNFRSF18(GITR)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合CTLA-4和TNFRSF5(CD40)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFRSF5(CD40)和TNFRSF9(41BB)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFRSF4(OX40)和TNFRSF9(41BB)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合PD1和B7-H1。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体增强免疫反应，如免疫系统的抗肿瘤反应或针对疫苗的免疫反应。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是选自以下的细胞因子：IL1α、IL1β、IL18、TNFSF2(TNFa)、LTα、LTβ、TNFSF11(RANKL)、TNFSF13B(BLYS)、TNFSF13(APRIL)、IL6、IL7、IL10、IL12、IL15、IL17A、IL23、抑瘤素M、TGFβ、 BMP2-15、PDGF(例如，PDGF-A、PDGF-B、PDGF-CC、PDGF-C、PDGF-D)、FGF家族成员(例如，FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b和FGF19)、VEGF(例如，VEGFA和VEGFB)、MIF和I型干扰素。本发明涵盖与上述靶之一结合的MRD。本发明还涵盖了具有与1、2、3、4、5、6或更多个上述靶结合的1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3、4、5、6种上述靶结合。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是选自以下的细胞因子：TNF、CD25、CD28、CTLA-4、PD1、PDL1、B7-H1、B7-H4、IL10、TGFβ、TNFSF4(OX40配体)、TNFRSF4(OX40)、TNFSF5(CD40配体)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF9(41BB)、TNFSF14(LIGHT，HVEM配体)、TNFRSF14(HVEM)、TNFSF15(TL1A)、TNFRSF25(DR3)、TNFSF18(GITR配体)和TNFRSF18(GITR)。本发明涵盖与上述靶之一结合的MRD。本发明还涵盖了具有与1、2、3、4、5、6或更多个上述靶结合的1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3、4、5、6种上述靶结合。 
在一个实施方案中、含有MRD的抗体的抗体靶是IL1Ra、IL1Rb、IL2、IL3、IL4、IL7、IL10、IL11、IL15、IL16、IL17、IL17A、IL17F、IL18、IL19、IL25、IL32、IL33、干扰素β、SCF、BCA1/CXCL13、CXCL1、CXCL2、CXCL6、CXCL13、CXCL16、C3AR、C5AR、CXCR1、CXCR2、CCR1、CCR3、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、ChemR23、CCL3、CCL5、CCL11、CCL13、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、MPL、GP130、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9、TREM1、 TREM2、FcRn、FcγRIIB、抑瘤素M、淋巴毒素α(LTa)、整联蛋白β7亚基、CD49a(整联蛋白α1)、整联蛋白a5b3、MIF、ESM1、WIF1、组织蛋白酶B、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、TNFSF2(TNFa)、TNFSF3(LTb)、TNFRSF3(LTBR)、TNFSF6(Fas配体)、TNFRSF6(Fas，CD95)、TNFRSF6B(DcR3)、TNFSF8(CD30配体)、TNFRSF8(CD30)、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF9(41BB)、TNFSF11(RANKL)、TNFRSF11A(RANK)、TNFSF14(LIGHT，HVEM配体)、TNFRSF14(HVEM)、TNFRSF16(NGFR)、TNFSF18(GITR配体)、TNFRSF18(GITR)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF19(TROY)、TNFRSF21(DR6)、CD14、CD23CD25、CD28、CD36、CD36L、CD39、CD52、CD91、CD153、CD164、CD200、CD200R、BTLA、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、B7h、ICOS、ICOSL(B7-H2)、MHC、CD、B7-H3、B7-H4、B7x、SLAM、KIM-1、SLAMF2、SLAMF3、SLAMF4、SLAMF5、SLAMF6或SLAMF7。本发明包括与上述靶之一结合的MRD。本发明还涵盖了具有与1、2、3、4、5、6或更多个上述靶结合的1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3、4、5、6种上述靶结合。以上抗体和MRD靶和本文所述的那些意在是示意性的并且不是限制的。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是TNFSF1A(TNF/TNF-α)、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFSF7(CD27配体、CD70)、TNFRSF7(CD27)、TNFSF13B(BLYS)、TNFSF13(APRIL)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFRSF17(BCMA)、TNFSF15(TL1A)、TNFRSF25(DR3)、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF12(TWEAKR)、TNFSF4(OX40配体)、TNFRSF4(OX40)、TNFSF5(CD40配体)、TNFRSF5(CD40)、IL1、IL1β、IL1R、IL2R、IL4-Ra、IL5、IL5R、IL6、IL6R、IL9、IL12、IL13、IL14、 IL15、IL15R、IL17f、IL17R、IL17Rb、IL17RC、IL20、IL21、IL22RA、IL23、IL23R、IL31、TSLP、TSLPR、干扰素α、干扰素γ、B7RP-1、cKit、GMCSF、GMCSFR、CTLA-4、CD2、CD3、CD4、CD11a、CD18、CD20、CD22、CD26L、CD30、TNFRSF5(CD40)、CD80、CD86、CXCR3、CXCR4、CCR2、CCR4、CCR5、CCR8、CCL2、CXCL10、PLGF、PD1、B7-DC(PDL2)、B7-H1(PDL1)、α4整联蛋白、A4B7整联蛋白、C5、RhD、IgE或Rh。本发明包括与上述靶之一结合的MRD。本发明还涵盖了具有与1、2、3、4、5、6或更多个上述靶结合的1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3、4、5、6种上述靶结合。 
在具体的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶与选自以下的抗体竞争靶结合：SGN-70CD70(Seattle Genetics)、SGN-75CD70(Seattle Genetics)、贝利木单抗(Belimumab)BLYS(例如， 
Figure BDA0000457457350000921
Human Genome Sciences/GlaxoSmithKline)、Atacicept BLYS/APRIL(Merck/Serono)、TWEAK(例如，Biogen mAb)、CoGenesys/Teva的TL1A抗体(例如，hum11D8、hum25B9和hum1B4(美国申请公开号2009/0280116)、OX40单抗、humAb OX40L(Genentech)、列洛西普(rilonacept)IL1trap(例如， 
Figure BDA0000457457350000922
Regeneron)、卡妥索单抗(catumaxomab)IL1β(例如，
Figure BDA0000457457350000923
Fresenius Biotech GmbH)、Xoma052IL1β(Lilly)、卡那单抗(canakinumab)IL1β(例如，
Figure BDA0000457457350000924
(Novartis)和ACZ885(Novartis))、AMG108IL1R(Amgen)、达克珠单抗IL2Ra(例如，
Figure BDA0000457457350000925
Hoffman-La Roche)、巴利昔单抗(basiliximab)IL2Ra(例如，
Figure BDA0000457457350000926
Novartis)、AMGN-317IL4a(Amgen)、帕考珠单抗(pascolizumab)IL4(PDL)、美泊利单抗(mepolizumab)IL5(例如，
Figure BDA0000457457350000927
GlaxoSmithKline)、瑞利珠单抗(reslizumab)IL5(例如，SCH55700，Ception Therapeutics)、 benralizumab IL5R(例如，MEDI-563MedImmune)、BIW-8405、IL5R(BioWa)、依那西普TNFR2-fc(例如，
Figure BDA0000457457350000931
Amgen)、siltuximab IL6(例如，CNTO328，Centocor)、CNTO136IL6(Centocor)、CDP-6038IL6(UCB)、AMGN-220IL6(Amgen)、REGN-88IL6R(Regeneron)、托珠单抗(tocilizumab)IL6R(例如，ACTEMRATM/ROACTEMRATM，Chugai/Roche)、MEDI-528IL9(MedImmune)、布雷奴单抗(briakinumab)IL12/13(例如，ABT-874，Abbott)、优特克单抗(ustekinumab)IL12、IL23(例如， 
Figure BDA0000457457350000932
和CNTO1275，Centocor)、TNX-650IL13(Tanox)、来金珠单抗(lebrikizumab)IL13(Genentech)、tralokinumab IL13(例如，CAT354，例如，Cambridge Antibody Technology)、AMG714IL15(Amgen)、CRB-15IL15R(Hoffman La-Roche)、AMG827IL17R(Amgen)、Zymogenetics/Merck Serono的IL17RC抗体Zymogenetics的IL20抗体、Novo Nordisk的IL20抗体、Novo Nordisk的IL21抗体(例如，NCT01038674)、IL21抗体Zymogenetics(Zymogenetics)、Zymogenetics的IL22RA抗体、Zymogenetics的IL31抗体、AMG157TSLP(Amgen)、MEDI-545干扰素α(MedImmune)、MEDI-546干扰素α受体(MedImmune)、AMG811干扰素γ(Amgen)、INNO202干扰素γ(Innogenetics/Advanced Biotherapy)、HuZAF干扰素-γ(PDL)、AMG557B7RP1(Amgen)、AMG191cKit(Amgen)、MOR103GMCSF(MorphoSys)、mavrilimumab GMCSFR(例如CAM-3001，MedImmune)、曲美木单抗(tremelimumab)CTLA4(例如CP-675,206，Pfizer)、易普利单抗(iplimumab)CTLA4(例如MDX-010，BMS/Medarex)、阿法赛特(alefacept)CD2(例如 
Figure BDA0000457457350000933
Astellas)、希普利珠单抗(siplizumab)CD2(例如MEDI-507，MedImmune)、otelixizumab CD3(例如TRX4，Tolerx/GlaxoSmithKline)、替利珠单抗(teplizumab)CD3(例如MGA031，MacroGenics/Eli Lilly)、维西珠单抗(visilizumab)CD3(例如
Figure BDA0000457457350000934
PDL)、莫罗单抗-CD3CD3(Ortho)、伊巴珠单抗 (ibalizumab)(例如TMB-355和TNX-355，TaiMed Biologics)、扎木单抗(zanolimumab)CD4(例如
Figure BDA0000457457350000941
Genmab)、西利珠单抗(cedelizumab)CD4(Euroasian Chemicals)、凯利昔单抗(keliximab)CD4，普立昔单抗(priliximab)CD4(例如cMT412，Centocor)、BT-061CD4(BioTest AG)、依法珠单抗CD11a(例如 
Figure BDA0000457457350000942
/XANELIMTM，Genentech/Roche/Merck-Serono)、MLN01CD18(Millennium Pharmaceuticals)、依帕珠单抗CD22(例如Amgen antibody)和hLL2；(Immunomedics/UCB))、阿塞珠单抗(aselizumab)CD26L、伊妥木单抗(iratumumab)CD30(例如SGN30(Seattle Genetics)和MDX-060(Medarex)、SGN40CD40(Seattle Genetics)、
Figure BDA0000457457350000943
CD40配体(Biogen Idec)、阿巴西普(abatacept)CD80CD86(例如Bristol-Myers Squibb)、CT-011PD1(Cure Tech)、GITR(例如TRX518，(Tolerx)、AT010CXCR3(Affitech)、MLN1202CCR2(Millennium Pharmaceuticals)、AMG-761CCR4(Amgen)、HGS004CCR5(Human Genome Sciences)、PRO140(Progenics)、MDX-1338CXCR4(Medarex)、CNTO-888CCL2(Centocor)、ABN912CCL2(Novartis)、MDX-1100CXCL10(Medarex)、TB-403PLGF(BioInvent)、那他珠单抗整联蛋白α4亚基(例如
Figure BDA0000457457350000945
Biogen Idec/Elan)、vedolizumab整联蛋白A4B7(例如MLN2，Millennium Pharmaceuticals/Takeda)、依库珠单抗(eculizumab)C5补体(例如
Figure BDA0000457457350000946
Alexion)、培克珠单抗(pexelizumab)C5补体(Alexion)、奥马珠单抗(omalizumab)IgE(例如
Figure BDA0000457457350000947
Genentech/Roche/Novartis)、他利珠单抗(talizumab)(例如TNX-901，Tanox)、托利珠单抗(toralizumab)(IDEC131，IDEC)、柏替木单抗(bertilimumab)嗜酸性粒细胞趋化因子(例如iCo-008，iCos Therapeutics Inc.)、ozrolimupab RhD(例如Sym001，Symphogen A/S)、阿托木单抗(atorolimumab)或莫罗木单抗(morolimumab)(Rh因子)。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD 的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4、5、6种或更多种上述抗体竞争靶结合。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3、4、5或6种上述抗体竞争靶结合。 
在具体的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是：SGN-70CD70(Seattle Genetics)、SGN-75CD70(Seattle Genetics)、贝利木单抗(Belimumab)BLYS(例如，
Figure BDA0000457457350000951
Human Genome Sciences/GlaxoSmithKline)、BIIB023TWEAK(Biogen Idec)、CoGenesys/Teva的TL1A抗体(例如，11D8，25B9和1B4(美国申请公开2009/0280116)、OX40单抗、humAb OX40L(Genentech)、卡妥索单抗(catumaxomab)IL1β(例如，
Figure BDA0000457457350000952
Fresenius Biotech GmbH)、卡那单抗(canakinumab)IL1β(例如，
Figure BDA0000457457350000953
(Novartis)和ACZ885(Novartis))、AMG108IL1R(Amgen)、达克珠单抗IL2Ra(例如，
Figure BDA0000457457350000954
Hoffman-La Roche)、巴利昔单抗(basiliximab)IL2Ra(例如，
Figure BDA0000457457350000955
Novartis)、AMGN-317IL4a(Amgen)、帕考珠单抗(pascolizumab)IL4(PDL)、美泊利单抗(mepolizumab)IL5(例如，
Figure BDA0000457457350000956
GlaxoSmithKline)、瑞利珠单抗(reslizumab)IL5(例如，SCH55700，Ception Therapeutics)、benralizumab IL5R(例如，MEDI-563，MedImmune)、BIW-8405，IL5R(BioWa)、siltuximab IL6(例如，CNTO328，Centocor)、CNTO-136IL6(Centocor)、CDP-6038IL6(UCB)、AMGN-220IL6(Amgen)、REGN-88IL6R(Regeneron)、托珠单抗(tocilizumab)IL6R(例如，ACTEMRATM/ROACTEMRATM，Chugai/Roche)、MEDI-528IL9(MedImmune)、布雷奴单抗(briakinumab)IL12/13(例如，ABT-874，Abbott)、优特克单抗(ustekinumab)IL12，IL23(例如，CNTO1275，Centocor)、来金珠单抗(lebrikizumab)IL13(Genentech)、TNX-650IL13(Tanox)、CAT354IL13(Cambridge Antibody Technology)、AMG714IL15(Amgen)、CRB-15IL15R(Hoffman La-Roche)、AMG827IL17R(Amgen)、 Zymogenetics/Merck Serono的IL17RC抗体、Zymogenetics的IL20抗体、Novo Nordisk的IL20抗体、Novo Nordisk的IL21抗体、Zymogenetics的IL21抗体(Zymogenetics)、Zymogenetics的IL22RA抗体，Zymogenetics的IL31抗体，AMG157TSLP(Amgen)、MEDI-545干扰素α(MedImmune)、MEDI-546干扰素α受体(MedImmune)、AMG811干扰素γ(Amgen)、INNO202干扰素γ(Innogenetics/Advanced Biotherapy)、HuZAF干扰素-γ(PDL)、AMG557B7RP1(Amgen)、AMG191cKit(Amgen)、MOR103GMCSF(MorphoSys)、CAM-3001GMCSFR(MedImmune)、曲美木单抗(tremelimumab)CTLA4(例如，CP-675'206，Pfizer)、易普利单抗(iplimumab)CTLA4(例如，MDX-010，BMS/Medarex)、希普利珠单抗(siplizumab)CD2(例如，MEDI-507，MedImmune)、奥昔珠单抗(otelixizumab)CD3(例如，TRX4，Tolerx/GlaxoSmithKline)、莫罗单抗-CD3CD3(Ortho)、替利珠单抗(teplizumab)CD3(例如，MGA031，MacroGenics/Eli Lilly)、维西珠单抗(visilizumab)CD3(例如，
Figure BDA0000457457350000961
PDL)、扎木单抗(zanolimumab)CD4(例如， 
Figure BDA0000457457350000962
Genmab)、西利珠单抗(cedelizumab)CD4(Euroasian Chemicals)、凯利昔单抗(keliximab)CD4，普立昔单抗(priliximab)CD4(例如，cMT412，Centocor)、BT-061CD4(BioTest AG)、伊巴珠单抗(ibalizumab)(例如，TMB-355和TNX-355，TaiMed Biologics)、依法珠单抗CD11a(例如， /XANELIMTM，Genentech/Roche/Merck-Serono)、MLN01CD18(Millennium Pharmaceuticals)、依帕珠单抗CD22(例如，Amgen antibody)和hLL2(Immunomedics/UCB))、阿塞珠单抗(aselizumab)CD26L、伊妥木单抗(iratumumab)CD30(例如，SGN30(Seattle Genetics)和MDX-060(Medarex)、SGN40CD40(SeattleGenetics)、
Figure BDA0000457457350000964
CD40配体(Biogen Idec)、CT-011PD1(CureTech)、AT010CXCR3(Affitech)、MLN3897CCR1(Millennium Pharmaceuticals)、MLN1202CCR2(Millennium  Pharmaceuticals)、AMG-761CCR4(Amgen)、HGS004CCR5(Human Genome Sciences)、PRO140(Progenics)、MDX-1338CXCR4(Medarex)、CNTO-888CCL2(Centocor)、ABN912CCL2(Novartis)、MDX-1100CXCL10(Medarex)、TB-403PLGF(BioInvent)、那他珠单抗整联蛋白α4亚基(例如，
Figure BDA0000457457350000971
Biogen Idec/Elan)、vedolizumab整联蛋白A4B7(例如，MLN02，Millennium Pharmaceuticals/Takeda)、依库珠单抗(eculizumab)C5补体(例如，
Figure BDA0000457457350000972
Alexion pharmaceuticals)、奥马珠单抗IgE(例如，
Figure BDA0000457457350000973
Genentech/Roche/Novartis)、他利珠单抗(talizumab)(例如，TNX-901，Tanox)、托利珠单抗(toralizumab)(IDEC131，IDEC)、柏替木单抗(bertilimumab)嗜酸性粒细胞趋化因子(例如，iCo-008，iCo Therapeutics Inc.)、ozrolimupab RhD(例如，Sym001，Symphogen A/S)、阿托木单抗(atorolimumab)或罗木单抗(morolimumab)(Rh因子)。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶与选自以下的抗体竞争靶结合：oxelumab(例如，RG4930；Genmab)、AMG139(Amgen)、AMG181(Amgen)、CNTO148TNF(Medarex)、美国专利号6,258,562(BASF)中描述的抗TNF抗体，
Figure BDA0000457457350000974
TNF(Celltech)、HuM291CD3fc受体(PDL)、Mik-β-1IL-2Rb(CD122)(Hoffman LaRoche)、REGN668IL-4R(Regeneron)、sarilumab IL-6R(例如，REGN88，Regeneron)、HuMax-Inflam IL-8(例如，HuMax-InflamTM/MDX-018；Genmab和Medarex)、美国专利号6,914,128(Abbott)中公开的抗IL-12和/或抗IL-12p40抗体，HuMax-IL15IL15(Medarex和Genmab)、ABX-IL8IL8(Abgenix)、US申请公开No.2005/0147610中公开的抗IL-18抗体(Abbott)、hCBE-11LTBR(Biogen)、HuMax-TAC IL-2Rα(CD25)(Genmab，见，例如国际申请公开号WO2004045512、MLN01β2整联蛋白(Xoma)、D3H44ATF(Genentech)、MT203GMCSF(Micromet和Takeda)、IFX1/CaCP29(InflaRx GmbH)、CAT-213嗜酸性粒细胞 趋化因子l(Cambridge Antibody Technologies)、MDX-018IL-8(例如，HuMax-InflamTM；Medarex)、REGN846IL-4R(Regeneron，见，例如美国申请公开号20100291107)、REGN728(Regeneron)、RGN846(Regeneron)、T2-18C3IL1A(MABp1；XBiotech)、RA-18C3IL1A(XBiotech)和CV-18C3IL1A(XBiotech)。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4、5、6种或更多种上述抗体竞争靶结合。因此，本发明涵盖了包含1、2、3、4、5、6或更多个MRD的含有MRD的抗体，所述MRD与至少1、2、3、4、5或6种上述抗体竞争靶结合。 
在另外的实施方案中，上述抗体之一是含有MRD的抗体的抗体。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合CTLA4。在一个具体实施方案中，该抗体是曲美木单抗(例如，CP-675,206，Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与曲美木单抗结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制曲美木单抗与CTLA4的结合。在一个另外的具体实施方案中，抗体是伊匹木单抗(例如，MDX-010，Bristol-Myers Squibb/Medarex)。在一个实施方案中，该抗体与伊匹木单抗结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制伊匹木单抗与CTLA4的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与曲美木单抗或伊匹木单抗竞争结合CTLA4。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合TNFSF12(TWEAK)。在一个具体实施方案中，该抗体是已经推进至I期临床试验的Biogen的TWEAK抗体。在另一个实施方案中，该抗体与Biogen TWEAK抗体结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制Biogen TWEAK抗体与TWEAK的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异 性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与Biogen TWEAK抗体竞争结合TWEAK。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合IL2Ra(CD25)。在一个具体实施方案中，该抗体是达克珠单抗(例如， 
Figure BDA0000457457350000991
在另一个实施方案中，该抗体与达克珠单抗结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制达克珠单抗与IL2Ra(CD25)的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与达克珠单抗竞争结合IL2Ra(CD25)。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合CD40(TNFRSF5)。在一个具体实施方案中，该抗体是CP-870893CD40(Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与CP-870893结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制CP-870893与CD40的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与CP-870893竞争结合CD40。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合α4整联蛋白。在一个具体实施方案中，该抗体是那他珠单抗(例如， 
Figure BDA0000457457350000992
Biogen Idec/Elan)。在一个实施方案中，该抗体与那他珠单抗结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制那他珠单抗与α4整联蛋白的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与那他珠单抗竞争结合α4整联蛋白。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合IL22。在一个具体实施方案中，该抗体是PF-5,212,367(ILV-094)(Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与PF-5,212,367结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制PF-5,212,367与IL22的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与 PF-5,212,367竞争结合IL22。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合MAdCAM。在一个具体实施方案中，抗体是PF-547,659(Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与PF-547,659结合相同的表位。在又一个实施方案中，该抗体竞争性抑制PF-547,659与MAdCAM的结合。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与PF-547,659竞争结合MAdCAM。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体特异性结合TNF。在一个具体实施方案中，该抗体是阿达木单抗(例如，修美乐 
Figure BDA0000457457350001001
Abbott)。在一个实施方案中，该抗体与阿达木单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制阿达木单抗与TNF的结合。在另一个具体实施方案中，该抗体是ATN-103(Pfizer)。在一个实施方案中，该抗体与ATN-103结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制ATN-103与TNF的结合。在另一个具体实施方案中，该抗体是英夫单抗。在一个实施方案中，该抗体与英夫单抗结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制英夫单抗与TNF的结合。在另一个具体实施方案中，该抗体选自：赛妥珠单抗(例如，
Figure BDA0000457457350001002
UCB)、戈利木单抗(例如，SIMPONITM，Centocor)和AME-527(Applied Molecular Evolution)。在一个实施方案中，该抗体与赛妥珠单抗、戈利木单抗或AME-527结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制赛妥珠单抗、戈利木单抗或AME-527与TNF的结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2、3、4或5种上述抗体竞争靶结合。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体包含抗TNF抗体阿达木单抗的CDR。表3中提供阿达木单抗的CDR序列、VH序列和VL序列。 
表3 
Figure BDA0000457457350001011
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNF(即TNFα)并且另外地结合选自以下的靶：Te38、IL12、IL12p40、IL13、IL15、IL17、IL18、IL1β、IL23、MIF、PGE2、PGE4、VEGF、TNFSF11(RANKL)、TNFSF13B(BLYS)、GP130、CD22和CTLA-4。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFα、IL6和TNFSF13B(BLYS)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFα和TNFSF12(TWEAK)。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合TNF和TNFSF15(TL1A)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNF并且另外地结合选自NGF、SOST(硬骨素)、LPA、IL17A、DKK、αVβ3、IL23p19、IL2、IL2RA(CD25)、IL6、IL6R、IL12p40、IL6、IL10、IL21、IL22和CD20的靶。本发明还涵盖了结合TNFα和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TNFα。在其他实施方案中，含有MRD 的抗体的抗体组分是阿达木单抗、英夫单抗、赛妥珠单抗、戈利木单抗、CNTO148、AME-527或ATN-103。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是IL6。在一些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是siltuximab(CNTO328、Centocor)、CNTO-136(Centocor)、CDP-6038(UCB)或AMGN-220(Amgen)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与siltuximab(CNTO328、Centocor)、CNTO-136(Centocor)、CDP-6038(UCB)或AMGN-220(Amgen)竞争结合IL6。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合IL6。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体结合IL6和选自以下的靶：IL1、IL1β、IL1Ra、IL5、CD8、TNFRSF5(CD40)、PDL1、IL6R、IL17A、TNF、VEGF、TNFSF11(RANKL)和PGE2。本发明还涵盖了结合IL6并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合IL6。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是siltuximab、CNTO136、CDP-6038或AMGN-220。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是IL6R。在一些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是REGN-88(Regeneron)或托珠单抗(ACTEMRATM/ROACTEMRATM，Chugai/Roche)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与siltuximab，REGN-88(Regeneron)或托珠单抗(ACTEMRATM/ROACTEMRATM，Chugai/Roche)竞争结合IL6R。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1或2种上述抗体竞争靶结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合IL6R。在一个具体实 施方案中，含有MRD的抗体结合IL6R和选自以下的靶：CD8、TNFRSF5(CD40)、PDL1、IL6、IL17A、TNF、VEGF、TNFSF11(RANKL)和PGE2。本发明还涵盖了结合IL6R并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合IL6R。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是REGN-88或托珠单抗。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFSF15(TL1A)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合TL1A和选自以下的靶：TNF、IFNα、IFNγ、IL1、IL1β、IL6、IL8、IL12、IL15、IL17、IL18、IL23和IL32。本发明还涵盖了结合TL1A并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。这些组合物用于治疗疾病和病症，包括炎性肠病和自身免疫疾病如类风湿性关节炎。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TL1a。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合干扰素α。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合干扰素α和TNFSF13B(BLYS)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合干扰素α、TNFSF13B(BLYS)和嗜中性粒细胞细胞外trap(NET)。这些组合物用于治疗疾病和病症，包括自身免疫疾病如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合干扰素α。 
本发明的多价和多特异性组合物也用于治疗神经病疾病或病症，包括神经变性病、疼痛和神经损伤或创伤。在具体的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是：淀粉样蛋白β(Aβ)、β淀粉样蛋白、补体因子D、PLP、ROBO4、ROBO、GDNF、NGF、LINGO或肌肉生长抑制素。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是更汀芦单抗(gantenerumab)(例如R1450，Hoffman La-Roche)、巴匹珠单抗(bapineuzumab)β淀粉样蛋白9(Elan和Pfizer)、苏兰珠单抗(solanezumab)β淀粉样蛋白9(Eli Lilly)、他尼珠单抗(tanezumab) NGF(例如，RN624，Pfizer)、BIIB033LINGO(Biogen Idec)、PF-3,446,879肌肉生长抑制素(Pfizer)或者司他莫单抗(stamulumab)肌肉生长抑制素(Wyeth)。在另一个实施方案中，该抗体与更汀芦单抗、巴匹珠单抗、苏兰珠单抗、他尼珠单抗、Biogen LINGO抗体或司他莫单抗特异性结合相同的表位。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是通过更汀芦单抗、巴匹珠单抗、苏兰珠单抗、他尼珠单抗、BIIB033或司他莫单抗竞争性抑制靶结合的抗体。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是β淀粉样蛋白。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是RN1219(PF-4,360,365；Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与RN1219特异性结合相同的表位。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是通过RN1219竞争性抑制β淀粉样蛋白结合的抗体。本发明还涵盖与RN1219竞争β淀粉样蛋白结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与RN1219竞争结合β淀粉样蛋白。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是NGF。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是他尼珠单抗(例如，RN624，Pfizer)。在另一个实施方案中，该抗体与他尼珠单抗特异性结合相同的表位。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是通过他尼珠单抗竞争性抑制NGF结合的抗体。本发明还涵盖与他尼珠单抗竞争NGF结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与他尼珠单抗竞争结合NGF。 
在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体结合NGF和选自以下的靶：MTX、NKG2D、RON、IL6R、ErbB3、TNFRSF21(DR6)、 CD3、IGFR、DLL4、P1GF、CD20、EGFR、HER2、CD19、CD22、TNFRSF5(CD40)、CD80、cMET、NRP1、TNF、LINGO、HGF、IGF1、IGF1,2、IGF2、NGF、Te38、NogoA、RGM A、MAG、OMGp、NgR、TNFSF12(TWEAK)、PGE2、IL1β、脑信号蛋白3A和脑信号蛋白4。本发明还涵盖了结合NGF并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合NGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是他尼珠单抗(tanezumab)。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与他尼珠单抗竞争结合NGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是MEDI-578。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与MEDI-578竞争结合NGF。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是LINGO(例如，LINGO1)。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是BIIB033(Biogen Idec)。在另一个实施方案中，该抗体与BIIB033特异性结合相同的表位。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是通过BIIB033竞争性抑制LINGO结合的抗体。本发明还涵盖与BIIB033竞争LINGO结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与BIIB033竞争结合LINGO。 
在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体结合LINGO和选自以下的靶：MTX、NKG2D、RON、IL6R、ErbB3、TNFRSF21(DR6)、CD3、IGFR、DLL4、P1GF、CD20、EGFR、HER2、CD19、CD22、TNFRSF5(CD40)、CD80、cMET、NRP1、TNF、TNFSF12(TWEAK)、HGF、IGF1、IGF1,2、IGF2、NGF、Te38、NogoA、RGM A、MAG、OMGp、NgR、NGF、PGE2、IL1β、脑信号蛋白3A和脑信号蛋白4。本发明还涵盖了结合LINGO并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD 的抗体的抗体组分结合LINGO。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是BIIB033。 
在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是TNFSF12(TWEAK)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体结合TNFSF12(TWEAK)和选自以下的靶：MTX、NKG2D、RON、IL6R、ErbB3、TNFRSF21(DR6)、CD3、IGFR、DLL4、P1GF、CD20、EGFR、HER2、CD19、CD22、TNFRSF5(CD40)、CD80、cMET、NRP1、TNF、LINGO、HGF、IGF1、IGF1,2、IGF2、NGF、Te38、NogoA、RGM A、MAG、OMGp、NgR、NGF、PGE2、IL1β、脑信号蛋白3A和脑信号蛋白4。本发明还涵盖了结合TNFSF12(TWEAK)并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TNFSF12(TWEAK)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是BIIB023。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是氧化型LDL、gpIIB、gpIIIa、PCSK9、因子VIII、整联蛋白a2bB3、AOC3或间皮素。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是BI-204氧化型LDL(BioInvent)、阿昔单抗(abciximab)gpIIB，gpIIIa(例如，REOPRO，Eli Lilly)、AMG-145PCSK9(Amgen)、TB-402因子VIII(BioInvent)、伐利昔单抗(vapaliximab)或他度珠单抗整联蛋白a2bB3(Yamonochi Pharma)。在另一个实施方案中，该抗体与BI-204、阿昔单抗、AMG-145、TB-402或他度珠单抗特异性结合相同的表位。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是竞争性抑制BI-204、阿昔单抗、AMG-145、TB-402、伐利昔单抗或他度珠单抗结合作用的抗体。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与骨生长和/或代谢相关。在某些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是TNFSF11(RANKL)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是：DKK1、骨桥蛋白、组织蛋白酶K、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF19(TROY)或硬骨素(CDP-7851UCB Celltech)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是TNFSF11(RANKL)。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是地诺单抗(denosumab)(例如，AMG-162，Amgen)。在另一个实施方案中，该抗体与地诺单抗特异性结合相同的表位。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是通过地诺单抗竞争性抑制TNFSF11(RANKL)结合作用的抗体。在另一个具体实施方案中，该抗体是AMG617或AMG785(例如，CDP7851，Amgen)。在另一个实施方案中，该抗体与AMG617或AMG785特异性结合相同的表位。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是通过AMG617或AMG785竞争性抑制硬骨素结合作用的抗体。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFSF11(RANKL)。在一个具体实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFSF11和选自以下的靶：硬骨素(SOST)、内皮素-1、DKK1、IL1、IL6、IL7、IL8、IL11、IL17A、MCSF、IGF1、IGF2、IGF1,2、IGF1R、TNF、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8a、FGF8b、FGF18、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TGFβ、TGFβR2、BMP2、BMP4、BMP5、BMP9、BMP10、BMPR-IA、PDGF、PDGFRa、PDGFRb PTH、PTH相关蛋白(PTHrP)和PGE2。本发明还涵盖了结合TNFSF11并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗 体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TNFSF11。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是地诺单抗、AMG617或AMG785。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体靶是细菌抗原、病毒抗原、支原体抗原、朊病毒抗原或(例如，感染哺乳动物的一种)寄生虫抗原。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是病毒抗原。在一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是炭疽、乙型肝炎病毒、狂犬病病毒、尼帕病毒，西尼罗河病毒、脑膜炎病毒或CMV。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与
Figure BDA0000457457350001081
(Human Genome Sciences)、艾韦单抗(exbivirumab)、福拉韦单抗(foravirumab)、利韦单抗(libivirumab)、雷韦单抗(rafivirumab)、瑞加韦单抗(regavirumab)、司韦单抗(sevirumab)(例如，MSL-109，Protovir)、妥韦单抗(tuvirumab)、雷昔库单抗(raxibacumab)、尼帕病毒M102.4、或
Figure BDA0000457457350001082
(MacroGenics)竞争结合靶。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是RSV。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是莫维珠单抗(motavizumab)(例如，MEDI-577；MedImmune)或帕利珠单抗RSV融合f蛋白(例如，
Figure BDA0000457457350001084
MedImmune)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与莫维珠单抗或帕利珠单抗RSV融合f蛋白竞争靶结合。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是泛维珠单抗(felvizumab)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与泛维珠单抗竞争靶结合。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争 靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体的靶是细菌的或真菌的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体与奈巴库单抗(nebacumab)、埃巴单抗(edobacomab)(例如，E5)、替非珠单抗(tefibazumab)(Inhibitex)、帕诺库单抗(panobacumab)(例如，KBPA101，Kenta)、帕吉昔单抗(pagibaximab)(例如，BSYX-A110，Biosynexus)、乌珠单抗(urtoxazumab)或依芬古单抗(efungumab)(例如，
Figure BDA0000457457350001091
Novartis)竞争抗原结合。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体奈巴库单抗、埃巴单抗、替非珠单抗(Inhibitex)、帕诺库单抗、帕吉昔单抗、乌珠单抗或依芬古单抗。本发明还涵盖与以上抗体之一竞争靶结合的MRD。本发明还涵盖了具有1、2、3、4、5、6或更多个MRD的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述MRD与1、2种或更多种上述抗体竞争靶结合。 
在另一个具体实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体是催化性抗体38C2。在另一个实施方案中，该抗体与38C2结合相同的表位。在另一个实施方案中，该抗体竞争性抑制38C2。 
其他目的抗体包括结合A33的抗体。人A33抗原是Ig超家族跨膜糖蛋白。人A33抗原在正常结肠组织和恶性结肠组织中的功能仍不是已知的。然而，A33抗原的几种特性表明施用它是结肠癌免疫疗法的有前景的靶。这些特性包括(i)高度限制的A33抗原表达模式，(ii)大量A33抗原在结肠癌细胞上表达，(iii)不存在分泌型或散播的A33抗原，(iv)以下事实：一旦抗体A33与A33抗原结合，则抗体A33内化并阻隔于小泡中和(v)在初步临床研究中抗体A33靶向表达A33抗原的结肠癌。针对A33的MRD与催化性或非催化性抗体的融合将增加靶向A33的抗体的治疗功效。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的抗体与人靶蛋白结合。在一些实施方案中，MRD与人蛋白质及其在小鼠、大鼠、兔或仓鼠 中的直向同源物结合。 
多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)中的抗体能够在MRD与抗体连接时结合它们的相应靶。在某些实施方案中，该抗体独立地结合其靶。在一些实施方案中，该抗体是靶激动剂。在其他实施方案中，该抗体是靶拮抗剂。在某些实施方案中，该抗体可以用来将含有MRD的抗体局限至其中抗体靶存在的区域。 
构思可以通过本领域已知的任何方法制备本发明中使用的抗体。例如，抗体分子和多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以是“重组地产生”，即，使用重组DNA技术产生。 
可以作为多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的抗体组分使用的单克隆抗体可以使用杂交瘤方法(如Kohler和Milstein,Nature256:495(1975)描述的那些方法)制备。使用杂交瘤方法时，将小鼠、仓鼠或其他适宜的宿主动物如上所述免疫以激发淋巴细胞产生将与免疫用抗原特异性结合的抗体。也可以免疫体外淋巴细胞。在后免疫，将淋巴细胞分离并且例如使用聚乙二醇，与合适的骨髓瘤细胞系融合，以形成杂交瘤细胞，随后可以将所述杂交瘤细胞与未融合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞分选开。杂交瘤随后可以(例如，使用已知的方法(见，例如,Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,Academic Press,1986))体外增殖或(例如，作为动物中的腹水肿瘤)体内增殖，其中所述杂交瘤产生特异性针对选择的抗原的单克隆抗体，如通过免疫沉淀法、免疫印迹法或通过体外结合测定法(例如，放射免疫测定(RIA)；酶联免疫吸附测定(ELISA))测定。随后可以从培养基或腹水，如上文对多克隆抗体所述那样纯化单克隆抗体。 
可选地，也可以例如使用重组DNA方法产生单克隆抗体，如美国专利号4,816,567中所述。例如，在一个方案中，编码单克隆抗体的多核苷酸从成熟的B细胞或杂交瘤细胞分离，如通过RT-PCR，使用特异性扩增编码抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸引物来分离，并且使用常规方法测定它们的序列。随后将编码重链和轻链的分离的多核苷酸克隆至合适的表达载体中，其中将所述表达载体转染入不产生免 疫球蛋白的宿主细胞(如大肠杆菌细胞、猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)时，单克隆抗体由所述宿主细胞产生。在其他方案中，使用本领域已知的技术，可以从表达所需物种的CDR的噬菌体展示文库分离具有所需免疫反应性的重组单克隆抗体或抗体片段(McCafferty等人,Nature348:552-554(1990)；Clackson等人,Nature352:624-628(1991)；和Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1991))。 
使用产生替代性抗体的重组DNA技术，可以进一步以多种不同方式修饰编码单克隆抗体的多核苷酸。例如，编码一个或多个MRD和任选地接头的多核苷酸序列可以例如有效地融合至编码单克隆抗体序列的序列的5'或3'末端。在一些实施方案中，可以将例如小鼠单克隆抗体的轻链和重链恒定域置换为(1)例如人抗体的那些区域以产生嵌合抗体或置换为(2)非免疫球蛋白多肽以产生融合抗体。用于位点定向及高密度可变区诱变的技术是本领域已知的并且可以用来优化单克隆抗体的特异性、亲和性等。 
在某些实施方案中，含有MRD的抗体的抗体是人抗体。例如，可以使用本领域已知的多种技术直接制备人抗体。可以产生体外免疫或从免疫个体分离的永生化人B淋巴细胞，所述永生化人B淋巴细胞产生针对靶抗原的抗体(见，例如，Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,第77页(1985)；Boemer等人,J.Immunol.147(1):86-95(1991)；和美国专利号5,750,373和6,787,637)。在一个实施方案中，人抗体可以源自“微小基因座方案”，其中通过纳入来自Ig基因座的各个基因模拟外源Ig基因座(见例如，美国专利号5,545,807)。从噬菌体文库制备人抗体并任选地优化结合亲和力的方法是本领域已知的并且例如在Vaughan等人,Nat.Biotech.14:309-314(1996)；Sheets等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.95:6157-6162(1998)；Hoogenboom等人,Nat.Biotechnology23:1105-1116(2005)；Hoogenboom等人,J.Mol.Biol.227:381(1991)；Persic等人,Gene187:9-18(1997)；Jostock等人,J.Immunol.Methods289:65-80 (2004)；Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581(1991))；等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:7978-7982(1991)；等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:3809-3813(1994)；Yang等人,J.Mol.Biol.254:392-403(1995)；和Barbas等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4457-4461(1992)中描述。用于产生和使用抗体噬菌体文库的技术也在以下文献中描述：美国专利号5,545,807、5,969,108、6,172,197、5,885,793、6,521,404、6,544,731、6,555,313、6,582,915、6,593,081、6,300,064、6,653,068、6,706,484和7,264,963；和Rothe等人,J.Mol.Bio.130:448-54(2007)(所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。亲和力成熟策略和链改组策略(Marks等人,Bio/Technology10:779-783(1992)(所述文献通过引用的方式完整并入本文)是本领域已知的并且可以用来产生高亲和力人抗体。 
也可以在相对于人免疫球蛋白基因或这些基因的片段为转基因的小鼠中产生抗体，所述小鼠一旦免疫就能够在不存在内源免疫球蛋白生产的情况下产生宽泛人抗体库。这种方案在以下文献中描述：Lonberg,Nat.Biotechnol23:1117-1125(2005),Green等人,Nature Genet.7:13-21(1994)和Lonberg等人,Nature368:856-859(1994)；美国专利号5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016,6,596,541,7,105,348和7,368,334(所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文)。 
IV.接头 
本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以含有单个接头、多个接头或无接头。因而，MRD可以有效地与抗体直接接合(连接)，或有效地经任选的接头肽接合。类似地，MRD可以有效地与一个或多个MRD直接接合，或有效地经一个或多个任选的接头肽与一个或多个MRD接合。接头可以具有任何尺寸或组成，只要它们能够有效地接合MRD和抗体，从而所述MRD使得含有MRD的抗体结合MRD靶成为可能。 
在一些实施方案中，接头具有约1至20个氨基酸、约1至15个 氨基酸、约1至10个氨基酸、约1至5个氨基酸、约2至20个氨基酸、约2至15个氨基酸、约2至10个氨基酸或约2至5氨基酸。接头也可以具有约4至15个氨基酸。在某些实施方案中，接头肽含有序列为GGGS(SEQ ID NO:1)的短接头肽、序列为SSGGGGSGGGGGGSS(SEQ ID NO:2)的中等接头肽或序列为SSGGGG SGGGGGGSSRSS(SEQ ID NO:19)的长接头肽。在另一个实施方案中，将MRD插入轻链恒定区内的第四环中。例如，可以将MRD插在以下氨基酸序列中加下划线的字母之间：RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVV CLLNNFYPREAKVQWKVDKLGTNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSLPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:102)。 
接头也可以是非肽接头如烷基接头或PEG接头。例如，可以使用烷基接头如--NH--(CH2)s-C(O)--，其中s=2-20。这些烷基接头还可以由任何空间上不形成位阻的基团如低级烷基(例如，C1-C6)、低级酰基、卤素(例如，Cl、Br)、CN、NH2、苯基等取代。示例性非肽接头是PEG接头。在某些实施方案中，PEG接头具有约100至5000kDa，或约100至500kDa的分子量。 
在一些实施方案中，接头是促进MRD或细胞毒剂在细胞内释放的“可切割接头”。例如，在需要MRD或细胞毒剂和多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)之间的共价接合在组合物内化至细胞中时被胞内切割的情况下，可以使用酸不稳定接头(例如，腙)，蛋白酶敏感(例如，肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头或含有二硫键的接头(Chari等人,Cancer Research52:127-131(1992)；美国专利号5,208,020；美国申请公开号20090110753)。术语“胞内切割”和“胞内裂解”指细胞内部针对抗体-药物缀合物(ADC)的代谢过程或反应，据此破坏共价接合，即，在MRD和细胞毒剂、MRD和抗体、抗体和细胞毒剂之间或在两个MRD之间经接头连接的接合，从而导致游离MRD和/或细胞毒剂在细胞内部从抗体解离。zybody-ADC的 切割部分因此是胞内代谢物。 
接头优化可以使用实施例1-18中描述的技术和本领域已知的其他技术评价。接头优选地不应当破坏MRD和/或抗体结合靶分子的能力。 
V.含有MRD的抗体 
使用本文所述的方法，可以通过MRD与抗体融合实现多特异性和更大的多价态。 
根据本发明制备的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的MRD可以通过肽的N末端或C末端与抗体有效连接。MRD可以与在抗体重链的C末端、在抗体重链的N末端、在抗体轻链的C末端、在抗体轻链的N末端与抗体有效连接。使用实施例1-18中描述的结合测定法和本领域已知用于适宜的靶相关生物活性的生物测定法和其他测定法，可以进行MRD组成、MRD-抗体接合位置和接头组成的优化。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体是在2011年5月24日提交的美国申请号61/489,249中描述的含有MRD的抗体，所述文献通过引用的方式完整并入本文。 
在一个实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有与抗体重链、抗体轻链或重链和轻链有效连接的MRD。在一个实施方案中，含有MRD的抗体含有与抗体链末端之一连接的至少一个MRD。在另一个实施方案中，本发明的含有MRD的抗体含有与两个抗体链末端有效连接的至少一个MRD。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体含有与三个抗体链末端有效连接的至少一个MRD。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体含有与4个抗体链末端(即，轻链的N和C端和重链的N和C端)的每一个末端有效连接的至少一个MRD。 
在某些具体实施方案中，含有MRD的抗体具有与轻链的N末端有效地连接的至少一个MRD。在另一个具体实施方案中，含有MRD的抗体具有与重链的N末端有效地连接的至少一个MRD。在另一个 具体实施方案中，含有MRD的抗体具有与轻链的C端有效地连接的至少一个MRD。在另一个具体实施方案中，含有MRD的抗体具有与重链的C端有效地连接的至少一个MRD。 
含有MRD的抗体可以是“多特异的”(例如，双特异、三特异、四特异、五特异的或更大多特异的)，这意指它识别一个或多个不同抗原(例如，蛋白质)上存在的两个或更多个不同表位并与之结合。因而，含有MRD的抗体是“单特异性”或是“多特异的”(例如，双特异、三特异和四特异的)指含有MRD的抗体结合的不同表位的数目。多特异性抗体可以是对(例如，如本文所述)靶多肽的不同表位特异的或可以是对靶多肽以及对异源表位(如异源多肽靶或固相支持材料)特异的。本发明构思了单特异性、双特异性、三特异性、四特异性和五特异性抗体的制备物以及具有更大多特异性的抗体的制备物。在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合两个不同表位。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体同时结合两个不同表位。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合三个不同表位。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体同时结合三个不同表位。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合四个不同表位。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体同时结合四个不同表位。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合五个不同表位(见，例如图2D)。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体同时结合五个不同表位。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的两个MRD结合相同的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的3、4、5、6、7、8、9或10个MRD结合相同的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的至少两个MRD结合相同的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的至少3、4、5、6、7、8、9或10个MRD结合相同的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的两个MRD结合相同的表位。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的3、4、5、6、7、8、9或10个MRD结合相同的表位。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的至少两个MRD结合相同的表位。在其他实施方案中，含有 MRD的抗体的至少3、4、5、6、7、8、9或10个MRD结合相同的表位。 
在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体和一个MRD结合相同的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体和2、3、4、5，6、7、8、9或10个MRD结合相同的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体和至少一个MRD结合相同的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体和至少2、3、4、5，6、7、8、9或10个MRD结合相同的抗原。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体和一个MRD结合相同的表位。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体和2、3、4、5，6、7、8、9或10个MRD结合相同的表位。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体和至少一个MRD结合相同的表位。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体和至少2、3、4、5，6、7、8、9或10个MRD结合相同的表位。 
本发明也提供与抗体的任何末端连接的两个或更多个MRD。因此，在一个非排他性实施方案中，2、3、4个或更多个MRD与重链的N末端有效连接。在另一个非排他性实施方案中，2、3、4个或更多个MRD与轻链的N末端有效连接。在另一个非排他性实施方案中，2、3、4个或更多个MRD与重链的C末端有效连接。在另一个非排他性实施方案中，2、3、4个或更多个MRD与轻链的C末端有效连接。构思这些MRD可以是相同或不同的。此外，可以使用MRD数目和连接的任何组合。例如，两个MRD可以与抗体的重链的N末端有效连接，所述抗体含有与轻链的C末端连接的1个MRD。例如，三个MRD可以与轻链的C末端有效连接，并且两个MRD可以与轻链的N末端有效连接。 
多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或多于10个MRD。 
在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有1个MRD(见，例如图2B和图2C)。在另一个实施 方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有2个MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有3个MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有4个MRD(见，例如图2B和图2C)。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有5个MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有6个MRD。在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有在2个和10个之间的MRD。 
在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少一个MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少两个MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少三个MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少四个MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少五个MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少六个MRD。 
在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有两个不同MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有三个不同MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有四个不同MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有五个不同MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有六不同MRD。在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有在之间两个至十个不同MRD。 
在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有 MRD的抗体)含有至少两个不同MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少三个不同MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少四个不同MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少五个不同MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有至少六个不同MRD。 
因而，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以是MRD单聚的(即，在肽链的末端含有一个MRD，任选地由接头连接)或是MRD多聚的(即，含有多于一个处于串联的MRD，任选地由接头连接)。多聚体的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以是同型多聚的(即，含有多于一个相同的处于串联的MRD，任选地由接头连接)(例如，同型二聚体、同型三聚体、同型四聚体等))或异聚的(即，含有其中存在至少两个不同MRD的两个或更多个MRD，任选地由接头连接)，其中全部或一些与特定末端连接的MRD是不同的(例如，异二聚体、异三聚体、异四聚体等))。在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的两个不同单聚MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的三个不同单聚MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的四个不同单聚MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的五个不同单聚MRD。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的六个不同单聚MRD。 
在一个可选实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个二聚MRD和一个单聚MRD。在另一个可选实施方案中，多价和单价多特 异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个同型二聚MRD和一个单聚MRD。在另一个可选实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个异二聚MRD和一个单聚MRD。 
在一个可选实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个多聚MRD和一个单聚MRD。在另一个可选实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个同型多聚MRD和一个单聚MRD。在另一个可选实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个异源多聚MRD和一个单聚MRD。 
在一个可选实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)含有与至少两个不同的免疫球蛋白末端有效连接的MRD。在一个具体实施方案中，与至少一种免疫球蛋白融合的MRD是多聚体。在一个实施方案中，与至少一种免疫球蛋白融合的MRD是同型多聚体(即，多于一个相同的MRD以串联方式有效连接，任选地通过接头连接)。在另一个实施方案中，与至少一种免疫球蛋白融合的MRD是异源多聚体(即，两个或更多个不同MRD以串联方式有效连接，任选地通过接头连接)。在一个另外的实施方案中，与至少一种免疫球蛋白融合的MRD是二聚体。在另一个实施方案中，与至少一种免疫球蛋白融合的MRD是同型二聚体。在另一个实施方案中，与至少一种免疫球蛋白融合的MRD是异二聚体。 
多个MRD可以靶向相同的靶结合位点，或两个或更多个不同的靶结合位点。在MRD与不同的靶结合位点结合的情况下，结合位点可以处在相同或不同的靶分子上。 
类似地，在多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)中的抗体和MRD可以与相同的靶分子结合或与不同的靶分子结合。 
在一些实施方案中，在多价和单价多特异性组合物(例如，含有 MRD的抗体)中的至少一个MRD和抗体可以同时与它们的靶结合。在一个实施方案中，在多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)中的每个MRD和抗体可以同时与其靶结合。因此，在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)同时结合1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种靶。 
使用本领域已知的方法，包括例如以下实施例中描述的那些方法，可以确定多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与多个靶同时结合的能力。 
具有单价特异性的多价和多特异性组合物 
在另外的实施方案中，本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对靶的单结合位点(即，单价结合)。 
在一些实施方案中，本发明的多价和单价多特异性组合物的抗体组分的抗原结合结构域与不同靶表位结合(即，抗体是双特异的)。术语“双特异性抗体”意在包括具有两种不同结合特异性的任何抗体，即，抗体结合两个不同的表位，所述表位可以位于相同的靶抗原上或更常见地位于不同的靶抗原上。用于产生双特异性抗体的方法是本领域已知的。(见，例如Millstein等人,Nature,305:537-539(1983)；Traunecker等人,EMBO J.10:3655-3659(1991)；Suresh等人,Methods in Enzymology121:210(1986)；Kostelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553(1992)；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)；Gruber等人,J.Immunol.152:5368(1994)；Tutt等人,J.Immunol.147:60-69(1991)；美国专利号4,474,893、4,676,980、4,714,681、4,925,648,5,573,920,5,601,819,5,731,168,5,807,706和5,821,333；国际专利公开号WO94/04690、WO91/00360、WO92/05793、WO92/08802、WO92/200373、WO93/17715、WO00/44788和WO02/096948；EP1870459A1和EP03089，所述文献每一篇的内容通过引用的方式完整并入本文)。 
一种用于产生双特异性抗体的方法已经称作“钮-入-扣(knob-into-hole)”策略(见，例如国际公开WO2006/028936)。在这项技 术中通过突变形成IgG中CH3结构域的界面的所选择氨基酸，降低Ig重链的错误配对。在eCH3结构域内部两条重链直接相互作用的位置，将带小侧链的氨基酸(扣)引入一条重链的序列并将带有大侧链的氨基酸(钮)引入另一条重链上对应相互作用的残基位置。在一些实施方案中，本发明的组合物具有其中CH3结构域已经通过突变选择的氨基酸而修饰的免疫球蛋白链，所述氨基酸在两个多肽之间的界面处相互作用，从而偏好地形成双特异性抗体。双特异性抗体可以由相同亚类(例如，IgG1或IgG3)或不同亚类(例如，IgG1和IgG3，或IgG3和IgG4)的免疫球蛋白链组成。 
在一个实施方案中，多特异性和多价组合物(例如，含有MRD的抗体)的双特异性抗体组分包含在“钮链”中的T366W突变和在“扣链”中的T366S、L368A、Y407V突变和任选地在CH3结构域之间的另外链间二硫键，例如通过将Y349C突变引入“钮链”中和将E356C突变或S354C突变引入“扣链中”所致；在“钮链”中的R409D、K370E突变和在“扣链”中的D399K、E357K突变；在“钮链”中的R409D、K370E突变和在“扣链”中的”D399K、E357K突变；在“钮链”中的T366W突变和在“扣链”中的T366S、L368A、Y407V突变；在“钮链”中的R409D、K370E突变和在“扣链”中的D399K、E357K突变；在一条链中的Y349C、T366W突变和在对应链中的E356C、T366S、L368A、Y407V突变；在一条链中的Y349C、T366W突变和在对应链中的S354C、T366S、L368A、Y407V突变；在一条链中的Y349C、T366W突变和在一对应链中的S354C、T366S、L368A、Y407V；和在一条链中的Y349C、T366W突变和在一对应链中的S354C、T366S、L368A、Y407V突变(根据Kabat的EU标准编号)。 
在一些实施方案中，本发明组合物(例如，含有MRD的抗体)的双特异性抗体组分是IgG4抗体或修饰的IgG4抗体，或含有IgG4重链或修饰的IgG4重链。IgG4抗体是动态分子，所述动态分子通过将IgG4重链和连接的轻链交换为来自另一个IgG4分子的重链-轻链对而发生Fab臂交换，因此产生双特异性抗体。因此，通过在生理条件下交换 含有MRD的IgG4抗体所致(无论是否在体内或体外造成)的Fab臂交换将导致双特异性抗体组合物。在具体的实施方案中，本发明组合物的IgG4重链含有S228P置换。已经显示这种置换在所得到的突变IgG4抗体中显著抑制Fab臂交换并且因而降低重组抗体和内源IgG4之间Fab臂交换的可能性。(见，例如，Labrijn等人,Nat.Biotechnol.27(8):767-71(2009))。在另外的实施方案中，本发明组合物的IgG4重链含有在位置409的Arg置换(例如，置换为Lys、Ala、Thr、Met或Leu)、在位置405的Phe置换(例如，置换为Lys、Ala、Thr、Met或Leu)或在位置370的Lys置换。在其他实施方案中，本发明组合物的IgG4重链的CH3区域已经替换为IgG1、IgG2或IgG3的CH3区域。在另外的实施方案中，位于不同重链(例如，IgG4或IgG4和IgG3)的C末端处的一个或多个MRD之间的相互作用有利于和/或稳定重链之间的异二聚体，或否则减少异二聚体的Fab臂交换。 
本发明的多价和多特异性组合物的示例性双特异性抗体组分包括IgG4和IgG1、IgG4和IgG2、IgG4和IgG2、IgG4和IgG3、IgG1和IgG3链异二聚体。这类异二聚体重链抗体可以例如通过以下方式常规地工程化：修饰人IgG4和IgG1或IgG3中形成CH3结构域的界面的所选择氨基酸，从而有利于异二聚体重链形成。在另外的实施方案中，位于异聚重链的C末端处的一个或多个MRD之间的相互作用分别有利于异源多聚体形成或结构。 
已知与其他免疫球蛋白亚类如IgG1和IgG3相比，IgG4抗体具有减低的ADCC活性和半寿期。因此，基于的IgG4亚类样式为开发结合至并阻断细胞受体、但不耗尽靶细胞的治疗药提供了有吸引力的形式。可选地，在需要增加效应子活性的那些实施方案中，本发明组合物的IgG4重链可以如本文所述或本领域已知的那样进行修饰，从而增加效应子功能(例如，修饰在位置327、330和331处的残基；根据Kabat的EU标准编号)。类似地，在需要半寿期增加的情况下，本发明组合物的IgG4重链可以如本文所述或本领域已知那样进行工程化，以更有选择性地在pH6.0，而不是在pH7.4结合FcRn，例如通 过位于CH2和CH3结构域之间的界面处并入突变，如在T250Q/M428L以及M252Y/S254T/T256E和H433K/N434F处的置换(根据Kabat的EU标准编号)。 
如上文例举，构思在一些实施方案中，本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对靶的单结合位点(即，单价结合)。在一些实施方案中，该单结合位点(即，单价结合位点)是抗体的抗原结合结构域。在其他实施方案中，该单结合位点是MRD。因此，本发明的多价和多特异性组合物涵盖(并且可以常规地进行工程化以包含)含有MRD的抗体，所述含有MRD的抗体含有针对靶的1、2、3、4个或更多个单结合位点。单结合位点可以由位于4个免疫球蛋白重链末端或4个免疫球蛋白轻链末端的任一个或多个末端处的一个或多个MRD提供。另外，单结合位点可以由抗体的抗原结合结构域之一提供(其中含有MRD的抗体的MRD结合该抗体的其他抗原结合结构域的相同靶表位)。另外，在一个具体实施方案中，本发明的多价和多特异性组合物涵盖(并且可以常规地进行工程化以包含)含有MRD的抗体，所述含有MRD的抗体含有针对靶的1、2、3、4个或更多个单结合位点并且不双价地结合另一个靶。 
在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对形成多聚体(例如，同聚体或异聚体)的细胞表面靶的单结合位点(即，单价结合)。在一些实施方案中，单结合位点结合需要多聚化以便信号传导的细胞表面靶。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有结合细胞表面靶和抑制另一个分子(如配体)与该细胞表面靶结合的单结合位点。在其他实施方案中，单结合位点的结合作用抑制靶的多聚化(例如，同聚和异聚多聚化)。在另外的实施方案中，组合物具有针对不同靶的单结合位点(即，单价结合多于一个不同靶)。在一些实施方案中，组合物的多个单结合位点结合相同细胞上的靶。在另外的实施方案中，组合物的多个单结合位点结合不同细胞上的靶。本领域已知需要多聚化以实现其正常功能的许多受体。构思这类受体成为本发明的多价和多 特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)中的单结合位点的靶。在一些实施方案中，该组合物具有针对受体酪氨酸激酶的单结合位点。在一些实施方案中，该组合物具有针对生长因子受体的单结合位点。在另外的实施方案中，该组合物具有针对G蛋白偶联受体的单结合位点。在另外的实施方案中，该组合物具有针对趋化因子受体的单结合位点。在其他实施方案中，该组合物具有针对TNF受体超家族成员的单结合位点。在具体的实施方案中，该组合物具有选自以下的受体的单结合位点：RAGE、c-Met、ErbB2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、PDGFRA、PDGFRB、神经轴突导向因子(Netrin)、CD28、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFSF6(Fas配体)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF21或TNFRSF25、TNFRSF7(CD27)、TNFSF8(CD30配体)、TNFRSF8(CD30)、TNFSF11(RANKL)、TNFRSF11A(RANKL)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF25(DR3)和LRP6。 
在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对形成多聚体的细胞表面靶的单结合位点(即，单价结合)和针对两种或更多种不同靶的多个位点(即，多价结合)。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对细胞表面靶的单结合位点和针对1、2、3、4、5种或更多种不同靶的多结合位点。在其他实施方案中，至少由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶位于细胞表面上。在其他实施方案中，至少由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶是可溶性靶(例如，趋化因子、细胞因子和生长因子)。在另外的实施方案中，该组合物结合1、2、3、4、5种或更多种本文所述的靶。在其他实施方案中，由组合物结合的靶是肿瘤抗原(包括肿瘤抗原和肿瘤相关抗原)。在另外的实施方案中，由组合物结合的靶与免疫系统疾病或病症相关。在其他实施方案中，由组合物结合的靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体具有针对TNFRSF21(DR6)的单结合位点。在其他实施方案中，含有MRD的抗体具有针对DR6的单结合位点并且结合选自以下的靶：AGE(S100A，两性蛋白)、IL1、IL6、IL18、IL12、IL23、TNFSF12(TWEAK)、TNFα、VEGF、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、干扰素γ、GMCSF、FGF、CXCL13、MCP1、CCR2、NogoA、RGM A、OMgp MAG、CPSG、LINGO、α-突触核蛋白、脑信号蛋白(例如，脑信号蛋白3A、脑信号蛋白4)、肝配蛋白、VLA4、CD45、RB、C5、CD52和CD200。本发明还涵盖了结合DR6并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。这些组合物用于治疗疾病和病症，包括神经疾病和病症如多发性硬化和其他神经变性病。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合DR6。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体具有针对TNFRSF25(DR3)的单结合位点。在其他实施方案中，含有MRD的抗体具有针对DR3的单结合位点并且结合选自以下的靶：TNF、IFNα、IFNγ、IL1、IL1β、IL6、IL8、IL12、IL15、IL17、IL18、IL23和IL32。本发明还涵盖了结合DR3并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。这些组合物用于治疗疾病和病症，包括炎性肠病和自身免疫疾病如类风湿性关节炎。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合DR3。 
在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对形成多聚体(例如，同聚体或异聚体)的细胞表面靶的多结合位点(即，多价结合)。在一些实施方案中，多结合位点结合需要多聚化以便信号传导的细胞表面靶。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对细胞表面靶的多结合位点。在其他实施方案中，多结合位点的结合作用导致靶的多聚化(例如，同聚和异聚多聚化)。在另外的实施方案中，组合物具有针对不同靶的多结合位点(即，多结合多于一个不同靶)。在一些实施方案中，组合物的多个单结合位点结合相同细胞上的靶。在另 外的实施方案中，组合物的多个单结合位点结合不同细胞上的靶。本领域已知需要多聚化以实现其正常功能的许多受体。构思这类受体成为多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的靶。在一些实施方案中，该组合物具有针对受体酪氨酸激酶的多结合位点。在一些实施方案中，该组合物具有针对生长因子受体的多结合位点。在另外的实施方案中，该组合物具有针对G蛋白偶联受体的多结合位点。在另外的实施方案中，该组合物具有针对趋化因子受体的多结合位点。在其他实施方案中，该组合物具有针对TNF受体超家族成员的多结合位点。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFRSF10A(DR4)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合DR4和选自以下的靶：ErbB2、EGFR、IGF1R、TNFRSF10b(DR5)、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF9(41BB)、IL6和IGF1,2。本发明还涵盖了结合DR4并且还结合至少2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。这些组合物用于治疗疾病和病症，包括癌症如乳腺癌、结直肠癌、头颈癌、B-细胞淋巴瘤、多毛细胞白血病、B细胞慢性淋巴细胞白血病和黑色素瘤。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合DR4。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是CS1008或马帕木单抗(mapatumumab)。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFRSF10B(DR5)。在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合DR5和选自以下的靶：ErbB2、EGFR、IGF1R、TNFRSF10A(DR4)、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF9(41BB)、IL6和IGF1,2。本发明还涵盖了结合DR5并且还结合至少2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。这些组合物用于治疗疾病和病症，包括癌症如乳腺癌、结直肠癌、头颈癌、B-细胞淋巴瘤、多毛细胞白血病、B细胞慢性淋巴细胞白血病和黑色素瘤。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合DR5。在其 他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是LBY135、AMG66、Apomab、PRO95780、来沙木单抗、可那木单抗(conatumumab)或替加珠单抗(tigatuzumab). 
重定向效应细胞功能的组合物
本发明也涵盖多价和多特异性组合物，如，能够使宿主效应细胞靠近需要消除的细胞(例如，免疫细胞、癌细胞、患病细胞、传染因子和被传染因子感染的细胞)的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。本发明的组合物的多价和多特异性功能性特别适合于重定向宿主免疫反应并且提供比正在开发的其他多特异性组合物平台更胜一筹的许多优点。在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合(1)目的细胞、组织或传染因子的靶(例如，免疫细胞或在肿瘤细胞上的肿瘤抗原)和(2)效应细胞上的靶，从而将免疫反应引导至目的细胞、组织或传染因子。与多价和单价多特异性组合物结合的靶可以是单体的或多聚体的。另外，与多价和单价多特异性组合物结合的多聚体靶可以是同型多聚体或异源多聚体。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在目的细胞、组织或传染因子上的至少2、3、4或5个。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的一种或多种靶是肿瘤抗原(例如，肿瘤抗原和肿瘤/癌相关抗原)。多价和多特异性组合物也用于治疗疾病和病症，包括但不限于，免疫系统、骨骼系统、心血管系统和神经系统的疾病以及传染病。因此，在一些实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与免疫系统疾病或病症(例如，本文中公开的免疫系统疾病或病症，如炎症或自身免疫性疾病(例如，类风湿性关节炎))相关。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与相关骨骼系统的疾病或病症(例如，如本文中公开的骨质疏松症或骨骼系统的另一种疾病或病症)。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与心血管系统的疾病或病症(例如，本文中公开的心血管系统的疾病或病症)相关。在另外的实施方案中，由多价 和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与神经系统的疾病或病症(例如，本文中公开的神经系统的疾病或病症)相关。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与传染因子或传染病(例如，本文中公开的传染病或传染因子)相关。 
可以由本发明的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合的效应细胞包括但不限于T细胞、单核细胞/巨噬细胞和天然杀伤细胞。 
在一个实施方案中，细胞上多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)将免疫反应向其引导的靶是肿瘤抗原。构思本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)能够结合实际上任何类型的肿瘤和任何类型的肿瘤抗原。可以被靶向的肿瘤的示例性类型包括但不限于选自以下的一种或多种癌：结直肠癌、食管癌、胃癌、头颈癌、甲状腺癌、多发性骨髓瘤、肾癌，胰腺癌、肺癌、胆管癌、胶质瘤、黑色素瘤、肝癌、前列腺癌和膀胱癌症乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌和子宫内膜癌。可以被靶向的肿瘤的示例性类型包括血液癌。可以被靶向的血液癌症包括但不限于选自以下的一种或多种癌：霍奇金淋巴瘤、髓样非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、淋巴细胞白血病和慢性髓性白血病、急性髓细胞白血病。 
示例性肿瘤抗原包括ErbB1、ErbB2、ErbB3、VEGFR1、VEGFR2、EGFRvIII、CD16、CD19、CD20、抑瘤素M、PSA、PSMA、整联蛋白avb6、ADAM9、CD22、CD23、CD25、CD28、CD36、CD45、CD46、CD56、CD79a/CD79b、CD103、JAM-3、gp100、ALCAM、PIPA、A33、羧肽酶M、E-钙黏着蛋白、CA125、CDK4、CEA、CTLA-4、RAAG10、转铁蛋白受体、p-15、GD2、MUM-1、MAGE-1、MAGE-3、KSA、MOC31、MIC-1、EphA2、GAGE-1、GAGE-2、MART、KID31、CD44v3、CD44v6和ROR1。另外的示例性肿瘤抗原是本文所述的和/或本领域已知的。 
在一个实施方案中，细胞上多价和单价多特异性组合物(例如，含 有MRD的抗体)将免疫反应向其引导的靶是免疫细胞或炎性细胞。 
在一些实施方案中，本发明涵盖多价和单价多特异性组合物，所述组合物结合在肿瘤细胞上本身不表达、而在周围反应性和支持肿瘤的非恶性细胞(包括肿瘤基质)上表达的肿瘤抗原(即，肿瘤相关抗原)。肿瘤基质包含形成新血管的内皮细胞和围绕肿瘤血管系统的间质性成纤维细胞。在一个实施方案中，多价和单价多特异性组合物结合内皮细胞上的肿瘤相关抗原。在一个另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物结合肿瘤抗原并且也结合成纤维细胞细胞上的肿瘤相关抗原。在又一个实施方案中，多价和单价多特异性组合物结合肿瘤抗原并且也结合成纤维细胞活化蛋白(FAP)。 
多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以向其引导免疫反应的传染因子包括但不限于，如本文所述的原核和真核细胞、病毒(包括噬菌体)、异物(例如，毒素)和感染性生物如真菌和寄生虫(例如，哺乳动物寄生虫)和本文所述的与传染病相关的传染因子。术语“传染因子”也意在涵盖本领域已知的原核和真核细胞、病毒(包括噬菌体)、异物(例如，毒素)和感染性生物如真菌和寄生虫。 
在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合(1)目的细胞、组织或传染因子的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)和(2)具有针对效应细胞上的靶的单结合位点，从而将免疫反应引导至目的细胞、组织或传染因子。在一些实施方案中，单结合位点是MRD。在其他实施方案中，单结合位点是抗体的抗原结合结构域。在其他实施方案中，在多价和单价多特异性组合物结合效应细胞上的靶时，组合物的结合不激发信号。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在目的细胞、组织或传染因子上的至少2、3、4或5种靶。根据一些实施方案，多价和单价多特异性组合物的至少1、2、3、4、5种或更多种靶位于细胞表面上。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶是肿瘤抗原(例如，肿瘤抗原和肿瘤/癌相关抗原)。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的一种或多种靶与免 疫系统疾病或病症相关。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的一种或多种靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合(1)目的细胞、组织或传染因子的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)和(2)白细胞上的靶，从而将免疫反应引导至目的细胞、组织或传染因子。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在目的细胞、组织或传染因子上的至少2、3、4或5种靶。根据一些实施方案，多价和单价多特异性组合物的至少1、2、3、4、5种或更多种靶位于细胞表面上。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合1、2、3、4、5种或更多种本文所述的靶。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶是肿瘤抗原(例如，肿瘤抗原和肿瘤/癌相关抗原)。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的一种或多种靶与免疫系统疾病或病症相关。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的一种或多种靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。 
本发明也涵盖结合白细胞上表达的靶的多价和多特异性组合物。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合(1)目的细胞、组织或传染因子的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)和(2)具有针对白细胞上的靶的单结合位点，从而将免疫反应引导至目的细胞、组织或传染因子。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在目的细胞、组织或传染因子上的至少2、3、4或5种靶。根据一些实施方案，多价和单价多特异性组合物的至少1、2、3、4、5种或更多种靶位于细胞表面上。在另外的实施方案中，1、2、3、4、5种或更多种抗原和肿瘤/癌相关抗原)。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与免疫系统疾病或病症相关。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与骨骼系统(例如， 骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。 
在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在T细胞上表达的靶。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合(1)目的细胞、组织或传染因子的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)和(2)T细胞上的靶，从而使髓样细胞靠近目的细胞、组织或传染因子。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对T细胞上的靶的多结合位点(即，多价结合)。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对T细胞上的靶的单结合位点(即，单价结合)。在一些实施方案中，单结合位点是MRD。在其他实施方案中，单结合位点是抗体的抗原结合结构域。在其他实施方案中，在多价和单价多特异性组合物结合T细胞上的靶时，组合物的结合不激发信号。在其他实施方案中，多价和单价多特异性组合物的结合不导致表达靶的T细胞溶解。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合选自以下的靶：CD2、CD3、CD4、CD8、CD161、趋化因子受体、CD95和CCR5。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在目的细胞、组织或传染因子上的至少2、3、4或5种靶。根据一些实施方案，多价和单价多特异性组合物的至少1、2、3、4、5种或更多种靶位于细胞表面上。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶是肿瘤抗原(例如，肿瘤抗原和肿瘤/癌相关抗原)。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与免疫系统疾病或病症相关。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。 
在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有融合蛋白，所述含有与细胞(如T细胞)表面上的蛋白质结合的一种或多种肽。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合细胞上的靶近膜蛋白质序列并且抑制靶蛋白或其相关蛋白的交联(例如，多聚化)。 在一个特定实施方案中，该多价和单价多特异性组合物与T细胞结合并抑制细胞蛋白质或其相关蛋白的交联。例如，在一个实施方案中，多价和多特异性抗体包含成熟CD3ε的氨基端27个氨基酸。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物包含融合蛋白，所述融合蛋白含有与CD3蛋白(例如，CD3ε、CD3γ、CD3α(TCRA)或CD3β(TCRB))的G结构域相对应的一种或多种蛋白质。因此，在一些实施方案中，融合蛋白包含多肽，所述多肽具有选自以下的氨基酸序列：GYYVCYPRGSKPEDANFYLYLR ARVC(SEQ ID NO:21)、 YLYLRAR(SEQ ID NO:22)、YRCNGTDIYKDKESTVQ VHYRMC(SEQ ID NO:23)和DKESTVQVH(SEQ ID NO:24)。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物包含能够结合CD3或CD3多聚体的融合蛋白，所述融合蛋白含有与CD3蛋白(例如，CD3ε、CD3γ、CD3α(TCRA)或CD3β(TCRB))的胞外结构域的一部分相对应的一种或多种蛋白质。因而，在一些实施方案中，融合蛋白包含CD3蛋白的能够结合CD3或CD3多聚体的一部分，其中所述部分包含多肽的CD3结合片段，所述多肽具有选自以下的氨基酸序列：KIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMCQSCVELD(人CD3δ成熟ECD，SEQ ID NO:25)、QSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAKNITWFKDGKMIGFL TEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRMCQN CIELN(人CD3γ成熟ECD，SEQ ID NO:26)、GNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIG GDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFY LYLRARVCENCMEMDVM(人CD3ε成熟ECD，SEQ ID NO:27)和QSFGLLDPK(人CD3ζ成熟ECD，SEQ ID NO:28)。在可选实施方案中，融合蛋白包含结合细胞表面上的靶的趋化因子片段。在一些实施方案中，趋化因子片段是选自以下的趋化因子部分：CCL20(LARC/Ckβ4)、CCL25(TECK/Ckβ15)、CXCL12(SDF-1)、 CXCL13(BCA-1)、CXCL16(SRPSOX)和CX3CL1(分形素)。在一些实施方案中，趋化因子片段是选自以下的趋化因子部分：CCL5(RANTES)、CCL8(MCP-2)、CXCL9(MIG/CRG-10)、CXCL10(IP-10/CRG-2)和CXCL11(TAC/IP-9)。在一些实施方案中，趋化因子片段是选自CCL3(MIP-1a)和CCL4(MIP-1β)的趋化因子部分。 
在特定的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合CD3。在具体的实施方案中，组合物结合选自CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、TCRα、TCRβ、TCR复合物或其异聚或同型多聚体组合的CD3靶。在又一个实施方案中，组合物结合CD3ε。在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物结合CD3和针对1、2、3、4、5种或更多种不同靶(例如，如本文中公开或否则本领域已知的肿瘤抗原)的多结合位点。在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物具有针对CD3的单结合位点(即，单价结合)。在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物具有结合CD3的单个MRD和针对1、2、3、4、5种或更多种不同靶(例如，如本文中公开或否则本领域已知的肿瘤抗原)的多结合位点。在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物具有结合CD3的单一抗体抗原结合结构域和针对1、2、3、4、5种或更多种不同靶(例如，如本文中公开或否则本领域已知的肿瘤抗原)的多结合位点。在具体的实施方案中，本发明的结合CD3的组合物不是单链抗体。 
在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合人CD3和来自另一种生物的CD3直向同源物。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合人CD3和来自另一种灵长类的CD3直向同源物。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合人CD3和来自食蟹猴猴或恒河猴猴的CD3直向同源物。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合人CD3和来自灵长类的CD3直向同源物，所述灵长类选自棉顶狨(Saguinus Oedipus)和普通狨(Callithrix jacchus))。在一个另外的实施方案中，该 多价和单价多特异性组合物结合人CD3和来自食蟹猴猴的CD3直向同源物和来自小鼠或大鼠的CD3直向同源物。在具体的实施方案中，本发明的结合人CD3ε的组合物不是单链抗体。在另外的具体实施方案中，本发明的结合CD3的组合物不是单链抗体。 
根据一个实施方案，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合人CD3ε。在一个特定实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合具有在NCBI参考序列号NP_000724中所述的第23-207位氨基酸序列的人CD3ε蛋白。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合具有氨基酸序列QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTT VILT(SEQ ID NO:29)的多肽。在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合具有氨基酸序列QDGNEEMGGI(SEQ ID NO:30)的多肽。在又一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合具有氨基酸序列QDGNEEMGG(SEQ ID NO:31)的多肽。在具体的实施方案中，本发明的结合人CD3ε的组合物不是单链抗体。 
在一些实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有针对CD3ε的单结合位点(即，单价的结合CD3ε)和针对1、2、3、4、5种或更多种不同靶(例如，本文中公开的B细胞或其他靶)的多结合位点。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与选自以下的抗体竞争结合CD3：OKT-3、奥昔珠单抗、替利珠单抗、维西珠单抗、莫罗单抗、X35-3、VIT3、BMA030(BW264/56)、CLB-T3/3、CRIS7、YTH12.5、F111409、CLB-T3.4.2、TR-66、WT31、WT32、SPv-T3b、11D8、XIII-141、XIII46、XIII-87、12F6、T3/RW2-8C8、T3/RW24B6、OKT3D、M-T301、SMC2和F101.01。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的MRD与选自以下的抗体竞争结合CD3：OKT-3、奥昔珠单抗、替利珠单抗、维西珠单抗、莫罗单抗、X35-3、VIT3、BMA030(BW264/56)、CLB-T3/3、CRIS7、YTH12.5、F111409、CLB-T3.4.2、TR-66、WT31、WT32、SPv-T3b、11D8、XIII-141、XIII46、XIII-87、12F6、T3/RW2-8C8、 T3/RW24B6、OKT3D、M-T301、SMC2和F101.01。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与结合的CD3的组合物竞争结合CD3，所述结合的CD3的组合物在开国际申请公开号WO2004/106380和WO99/54440；Tunnacliffe等人,Int.Immunol.1:546-550(1989)；Kjer-Nielsen,PNAS101:7675-7680(2004)；或Salmeron等人,J.Immunol.147:3047-3052(1991)中公开。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合人CD3ε和来自另一种生物的CD3ε直向同源物。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合人CD3ε和来自另一种灵长类的CD3ε直向同源物。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合人CD3ε和来自食蟹猴猴或恒河猴猴的CD3ε直向同源物。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合人CD3ε和来自灵长类的CD3ε直向同源物，所述灵长类选自棉顶狨和普通狨)。在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合人CD3ε和来自食蟹猴猴的CD3ε直向同源物和来自小鼠或大鼠的CD3ε直向同源物。在具体的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物的MRD结合CD3ε。 
在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合人CD3δ。在一个特定实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合具有在NCBI参考序列号NP_000723中所述的第22-171位氨基酸序列的人CD3δ。在具体的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物的MRD结合CD3δ。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物的抗体抗原结合结构域结合CD3δ。在具体的实施方案中，本发明的结合人CD3ε的组合物不是单链抗体。 
在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合具有在NCBI参考序列号NP_000064中所述的第23-182位氨基酸序列的人CD3γ蛋白。在具体的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物的MRD结合γ。在具体的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物的MRD结合CD3γ。在其他实施方案中， 该多价和单价多特异性组合物的抗体抗原结合结构域结合CD3γ。在具体的实施方案中，本发明的结合人CD3γ的组合物不是单链抗体。 
在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合具有在NCBI参考序列号NP_932170中所述的第22-164位氨基酸序列的人CD3ζ蛋白。在具体的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物的MRD结合CD3ζ。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物的抗体抗原结合结构域结合CD3ζ。在具体的实施方案中，本发明的结合人CD3ζ的组合物不是单链抗体。 
本发明也涵盖结合天然杀伤细胞上表达的靶的多价和多特异性组合物。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合(1)目的细胞、组织或传染因子的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)和(2)天然杀伤细胞上的靶。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对天然杀伤细胞上的靶的多结合位点(即，多价结合)。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对天然杀伤细胞上的靶的单结合位点(即，单价结合)。在一些实施方案中，单结合位点是MRD。在其他实施方案中，单结合位点是抗体的抗原结合结构域。在其他实施方案中，在多价和单价多特异性组合物结合天然杀伤细胞上的靶时，组合物的结合不激发信号。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合选自以下的靶：KLRD1、KLRK1、KLRB1、2B4(CD244)、KIR2D4、KIR2D5和KIR3DL1。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合选自以下的靶：CD56、CD2和CD161。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在目的细胞、组织或传染因子上的至少2、3、4或5种靶。根据一些实施方案，多价和单价多特异性组合物的至少1、2、3、4、5种或更多种靶位于细胞表面上。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶是肿瘤抗原(例如，肿瘤抗原和肿瘤/癌相关抗原)。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与免疫系统疾病或病症相关。在另外的实施方案中，由多价和单 价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。 
在特定的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合CD2。根据一个实施方案，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合人CD2。在一个特定实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合具有在NCBI参考序列号NP_001758中所述的第25-209位氨基酸序列的人CD2蛋白。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对CD2的多结合位点(即，多价结合)。在一些实施方案中，单结合位点是MRD。在其他实施方案中，单结合位点是抗体的抗原结合结构域。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对CD2的单结合位点。在其他实施方案中，多价和单价多特异性组合物与CD2的结合不激发在其上表达CD2的细胞的信号。在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物结合CD2和1、2、3、4、5种或更多种不同靶(例如，如本文中公开或否则本领域已知的肿瘤抗原)。在具体的实施方案中，本发明的结合CD2的组合物不是单链抗体。 
在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合人CD2和来自另一种生物的CD2直向同源物。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合人CD2和来自另一种灵长类的CD2直向同源物。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合人CD2和来自食蟹猴或恒河猴的CD2直向同源物。 
在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合髓样细胞。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合(1)目的细胞、组织或传染因子的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)和(2)免疫辅助细胞(例如，髓样细胞)上的靶，从而使髓样细胞靠近目的细胞、组织或传染因子。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对髓样细胞上的靶的多结合位点(即，多价结合)。在其他实施方案中，该多价和单 价多特异性组合物具有针对辅助细胞(例如，髓样细胞)上的靶的单结合位点(即，单价结合)。在一些实施方案中，单结合位点是MRD。在其他实施方案中，单结合位点是抗体的抗原结合结构域。在其他实施方案中，在多价和单价多特异性组合物结合髓样细胞上的靶时，组合物的结合不激发信号。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合选自CD16(即，FcγRIII)、CD64(即，FcγRI)和CD32(即，FcγRII)的Fcγ受体。在具体的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合CD64(即，FcγRI)。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合选自MHC II类及其不变链、TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR6的靶。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合在目的细胞、组织或传染因子上的至少2、3、4或5种靶。根据一些实施方案，多价和单价多特异性组合物的至少1、2、3、4、5种或更多种靶位于细胞表面上。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶是肿瘤抗原(例如，肿瘤抗原和肿瘤/癌相关抗原)。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与免疫系统疾病或病症相关。在另外的实施方案中，由多价和单价多特异性组合物结合的1、2、3、4、5种或更多种靶与骨骼系统(例如，骨质疏松症)、心血管系统、神经系统的疾病或病症或传染病相关。 
在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合癌细胞上目的靶。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合免疫细胞上的目的靶。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合患病细胞上的目的靶。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合传染因子(例如，细菌细胞或病毒)上的目的靶。 
在其他实施方案中，本发明涵盖通过向有需要的患者施用治疗有效量的本发明多价和单价多特异性组合物治疗疾病或病症的方法。具体实施方案涉及通过向有需要的患者施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗疾病或病症的方法，所述 组合物具有针对靶的单结合位点(即，单价结合靶)。在一些实施方案中，施用的多价和单价多特异性组合物具有针对白细胞(如T-细胞)上的靶(例如，CD3)的单结合位点。在另外的实施方案中，施用的多价和单价多特异性组合物具有针对白细胞(如T-细胞)上的靶(例如，CD3)的单结合位点和针对位于目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)的多结合位点(即，能够多价结合)。 
在其他实施方案中，本发明涉及通过向患者施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗疾病或病症，所述组合物具有针对靶的单结合位点(即，单价结合靶)和针对1、2、3、4、5种或更多种不同靶的多结合位点。 
在另外的实施方案中，本发明涉及通过向有需要的患者施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗疾病或病症，所述组合物具有针对CD3(例如，CD3ε)的单价结合CD3的单结合位点(即，单价结合靶)和针对1、2、3、4、5种或更多种的不同靶的多结合位点。 
根据一些实施方案，肿瘤细胞来自癌，所述癌选自乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾(肾细胞)癌症、肺癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、白血病、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和甲状腺癌。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的MRD和抗体是它们的相应靶的拮抗剂。在其他实施方案中，含有MRD的抗体中的MRD和抗体是它们的相应靶的激动剂。在另外的其他实施方案中，含有MRD的抗体中的至少一个MRD是其靶分子的拮抗剂并且抗体是其靶分子的激动剂。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体中的至少一个MRD是其靶分子的激动剂并且抗体是其靶分子的拮抗剂。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的MRD和抗体均与可溶性因子结合。在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的MRD和抗体均与细胞表面分子结合。在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的至少一个MRD与细胞表面分子结合并且含有MRD的抗体中的抗体与可溶性因子结合。在一些实施方案中，含有MRD的抗体中的 至少一个MRD与可溶性因子结合并且含有MRD的抗体中的抗体与细胞表面分子结合。 
特异性结合一个所需靶或多个靶的改进的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)也可以基于先前已知的MRD或多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)制备。例如，如实施例中所述或使用本领域已知的技术，可以将1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-20、20-30、30-50、50-100、100-150或多于150个氨基酸置换、缺失或插入向MRD或多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)序列中引入，并且可以对所产生的MRD或多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)筛选与所需靶或多个靶的结合、拮抗靶活性或激动靶活性。 
可以添加另外的肽序列，例如以增强MRD的体内稳定性或MRD对其靶的亲和力。 
在某些实施方案中，与单独MRD、单独抗体和/或MRD和抗体组合的结合作用相比，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与其靶(例如，细胞)的结合作用增强。在一些实施方案中，该结合作用改进至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约75倍、至少约100倍、至少约500倍或至少约1000倍。 
此外，在一些实施方案中，与多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与仅表达MRD靶或仅表达抗体靶的靶(例如，含有多个表位的细胞或分子)的结合作用相比，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与表达MRD靶和抗体靶的靶(例如，含有多个表位的细胞或分子)的结合作用增强。在一些实施方案中，该结合作用改进至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约75倍、至少约100倍、至少约500倍或至少约1000倍。这种增加的亲合力可以使得多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与先前难以靶向的靶(例如，G-蛋白偶联受体和糖分子)的结合成为可能。 
此外，在一些实施方案中，与其中抗体靶不表达或以较低水平表达的区域相比，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与MRD靶的结合作用在抗体靶局限于其中的(例如，身体)区域内增强。在一些实施方案中，与其中MRD靶不表达或以较低水平表达的区域相比，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与抗体靶的结合作用在MRD靶局限于其中的(例如，身体)区域内增强。在一些实施方案中，该结合作用改进至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约75倍、至少约100倍、至少约500倍或至少约1000倍。 
在优选的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)保留亲本抗体的特定活性。因而，在某些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)能够诱导补体依赖的细胞毒性。在某些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)能够诱导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)能够诱导凋亡。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)能够缩减肿瘤体积。在另外的实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)能够抑制肿瘤生长。 
在一些实施方案中，与不连接MRD的相应抗体相比，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)显示改进的活性或药效动力学特性。因而，在某些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)比不连接MRD的相应抗体具有更大的亲合力。在其他实施方案中，与不连接MRD的相应抗体相比，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)导致增加的受体聚集。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)比不连接MRD的相应抗体更大程度地拮抗靶活性。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)比不连接MRD的相应抗体更大程度地激动靶活性。在另一个 实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)比不连接MRD的相应抗体具有改进的药效动力学谱。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体比不连接MRD的相应抗体具有更大的治疗功效。 
在其他实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有以下一项或多项作用：抑制肿瘤细胞增殖、减少肿瘤的致瘤性、抑制肿瘤生长、增加患者存活、触发肿瘤细胞的细胞死亡、使致瘤细胞分化成非致肿瘤状态或防止肿瘤细胞转移。 
在某些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)至少与不连接MRD的相应抗体同样稳定。在某些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)比不连接MRD的相应抗体更稳定。使用本领域技术人员已知的方法，包括例如ELISA技术，可以测量MRD-抗体稳定性。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)在全血中在37℃稳定至少约10小时、至少约15小时、至少约20小时、至少约24小时、至少约25小时、至少约30小时、至少约35小时、至少约40小时、至少约45小时、至少约48小时、至少约50小时、至少约55小时、至少约60小时、至少约65小时、至少约70小时、至少约72小时、至少约75小时、至少约80小时、至少约85小时、至少约90小时、至少约95小时或至少约100小时。 
在某些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有至少与相应亲本抗体相同的Fc受体亲和力。在其他非排他性实施方案案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有至少与相应亲本抗体相同的补体受体亲和力。在其他非排他性实施方案案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有至少与相应亲本抗体相同的半寿期。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以按照与相应亲本抗体相称的水平表达。 
在另外的实施方案中，与相应亲本抗体相比，该多价和单价多特 异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有增加的Fc受体亲和力。在其他非排他性实施方案中，与相应亲本抗体相比，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有增加的补体受体亲和力。在其他非排他性实施方案中，与相应亲本抗体相比，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)具有增加的半寿期。在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以按照与相应亲本抗体相比增加的水平表达。 
免疫缀合物(含有MRD的抗体药物缀合物) 
抗体-药物缀合物用于局部递送细胞毒剂的用途允许定向递送药物至肿瘤和在其中胞内积累，其中全身性施用这些未缀合的药剂可能导致对正常细胞以及力图消除的肿瘤细胞而言不可接受的毒性水平(Baldwin等人,Lancet pages603-05(1986)；Thorpe,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review,"引自Monoclonal Antibodies'84:Biological And Clinical Applications,A.Pinchera等人，(编著)，第475-506页)(1985))。 
在另外的实施方案中，本发明涵盖共价或以另外方式与细胞毒剂(酬载)连接的多价和单价多特异性组合物(即，多价和单价多特异性细胞毒剂复合物(例如，含有MRD的抗体-细胞毒剂复合物)。根据一些实施方案，细胞毒剂通过接头与多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)连接。根据一些实施方案，连接多价和单价多特异性组合物和细胞毒剂的接头是蛋白酶可切割的。在另外的实施方案中，细胞毒剂是化疗药、生长抑制剂、毒素(例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)和/或放射性同位素(即，放射缀合物)或前药。本发明也涵盖使用免疫缀合物(含有MRD的抗体药物缀合物)的方法。 
可以共价或以另外方式与多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)连接的细胞毒剂包括但不限于有害于(例如，杀伤)细胞的任何物质。可用于本发明的组合物和方法中的细胞毒素尤其包括烷基化剂、嵌入剂、抗增殖剂、抗有丝分裂剂、微管蛋白结合剂、长春 碱类生物碱、烯二炔、单端孢霉烯族化合物、鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物、蝶啶家族药物、紫杉烷、蒽环类(例如，佐柔比星(以前柔红霉素)和多柔比星)、抗生素(例如，更生霉素(以前放线菌素D、海兔毒素(例如，海兔毒素10、海兔毒素11和海兔毒素15))、拓扑异构酶抑制剂和铂络合物化疗药(例如，顺-铂)。 
在一些实施方案中，本发明的组合物包含作为微管蛋白解聚剂的细胞毒剂。因此，在一些实施方案中，本发明的组合物包含澳瑞司他汀或澳瑞司他汀衍生物或类似物。在一个实施方案中，本发明的组合物含有单甲基澳瑞司他汀E(MMAE)。在另一个实施方案中，本发明的组合物含有单甲基澳瑞司他汀F(MMAF)。在另外的实施方案中，本发明的免疫缀合物组合物含有海兔毒素或海兔毒素肽类似物或衍生物，例如，澳瑞司他汀(见，例如美国专利号5,635,483、5,780,588和5,663,149)。 
在另外的实施方案中，本发明的组合物包括类美登素分子。类美登素是通过抑制微管蛋白聚合发挥作用的有丝分裂抑制剂。制备类美登素的方法和它们的治疗性用途例如，在美国专利号5,208,020、5,416,064、6,441,163和欧洲专利EP0425235B1中公开；所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。 
因而，在一些实施方案中，细胞毒素是类美登素或类美登素衍生物或类似物。类美登素药物部分是抗体-药物缀合物中有吸引力的药物部分，因为它们：(i)相对容易通过发酵或化学修饰或衍生化发酵产物来制备，(ii)适合于采用适合经非二硫键接头与抗体缀合的官能团衍生化，(iii)在血浆中稳定，和(iv)有效对抗多个肿瘤细胞系。适合用作类美登素药物部分的美坦辛化合物是本领域熟知的，并且可以根据已知的方法从天然来源分离，使用基因工程技术产生(见Yu等人,PNAS99:7968-7973(2002))，或可以根据已知方法合成地制备美登醇和美登醇类似物。 
在具体的实施方案中，本发明的组合物包含类美登素DM1(N(2')-去乙酰-N(2')-(3-巯基-1-氧代丙基)-美坦辛)。在其他的具体实施方案 中，本发明的组合物包含类美登素DM2。在另外的实施方案中，本发明的组合物包含类美登素DM3(N(2')-去乙酰-N2-(4-巯基-1-氧代戊基)-美坦辛)或DM4(N(2')-去乙酰-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美坦辛)。 
在一些实施方案中，本发明的组合物包含作为烷基化剂的细胞毒剂。在具体的实施方案中，细胞毒剂选自氮芥、塞替派、硫代苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、BCNU罗莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇和链脲佐菌素。 
在其他实施方案中，本发明的组合物包含作为抗代谢物的细胞毒剂。在具体的实施方案中，细胞毒剂选自甲氨蝶呤、二氯甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶和5-氟尿嘧啶达卡巴嗪。 
在另外的实施方案中，该多价和多特异性组合物-药物缀合物(例如，含有MRD的抗体-药物缀合物)能够导致双链DNA断裂。在其他实施方案中，含有MRD的抗体-药物缀合物含有能够在亚皮摩尔浓度导致DNA断裂的抗生素的刺孢霉素家族成员。在其他实施方案中，多价和多特异性组合物-药物缀合物(例如，含有MRD的抗体-药物缀合物)含有刺孢霉。关于制备刺孢霉素家族的缀合物，见例如美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296(均授予American Cyanamid Company)。可以在本发明的多价和多特异性组合物-药物缀合物(例如，含有MRD的抗体-药物缀合物)中含有的刺孢霉素的结构类似物包括但不限于γ1 I、α2 I、α3 I、N-乙酰γ1 I、PSAG和θ1 I(Hinman等人,Cancer Research53:3336-3342(1993)和Lode等人,Cancer Research58:2925-2928(1998))。 
在其他实施方案中，本发明的多价和多特异性组合物-药物缀合物(例如，含有MRD的抗体-药物缀合物)组合物包含选自以下的细胞毒剂：阿霉素、多柔比星、丝裂霉素C、白消安、细胞毒素、苯丁酸氮芥、依托泊苷、磷酸依托泊苷、CC-1065、倍癌霉素(duocarmycin)、 KW-2189、CC1065、泰索帝(多西紫杉醇)、甲蝶呤、氨基蝶呤、拓扑替康、喜树碱(camptothecin)、泊非霉素、博来霉素、替尼泊苷、埃斯波霉素、光神霉素、安曲霉素(AMC)、氟达拉滨、他莫昔芬、泰索帝(多西紫杉醇)、嘧啶阿糖甙(Ara-C)、腺苷阿拉伯糖苷、顺铂、卡铂、顺-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂、氯喹、环孢菌素A、多西紫杉醇、紫杉醇、紫杉酚、长春瑞滨、长春地辛、松胞菌素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、依米丁、丝裂霉素、异环磷酰胺、环磷酰胺、替尼泊苷、洋红霉素、泊非霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、更生霉素、放线菌素D、嘌呤霉素1-脱氢睾酮、阿霉素、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、环氧噻唑酮(epothiolone)、QFA、考布他汀、磷酸考布他汀A4、长春碱、长春新碱、秋水仙碱、格尔德霉素、多柔比星、苯丁酸氮芥、澳瑞司他汀F苯二胺(AFP))、单甲基澳瑞司他汀、在美国专利号5,053,394、5,770,710中描述的统称为LL-E33288复合物的药物家族以及埃斯波霉素(美国专利号5,877,296)或其衍生物或类似物以及其衍生物和类似物。 
另外的合适的毒素和化疗药在Remington's Pharmaceutical Sciences,第19版(Mack Publishing Co.1995)和在Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics,第7版(MacMillan Publishing Co.1985)中描述。另外，为了进一步讨论细胞毒素类型、可以用来或常规地改造以缀合治疗剂至含有MRD的抗体复合物的接头和其他方法，见例如，国际申请公开号WO2007/059404；Saito等人,Adv.Drug Deliv.Rev.55:199-215(2003)；Trail等人,Cancer Immunol Immunother.52:328-337(2003)；Payne,Cancer Cell3:207-212(2003)；Allen,Nat.Rev.Cancer2:750-763(2002)；Pastan等人,Curr.Opin.Investig.Drugs3:1089-1091(2002)；和Senter等人,Adv.Drug Deliv.Rev.53:247-264(2001)，所述文献的每一篇因而通过引用的方式完整并入。 
可以在本发明的免疫缀合物(例如，多价和多特异性组合物-药物缀合物，如含有MRD的抗体-药物缀合物)中使用的细胞毒素化疗药包 括毒性凝集素和植物毒素或其他毒素(例如，蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、蒴莲根毒蛋白、肉毒杆菌毒素(botulina)和白喉毒素)。构思了多个拷贝的毒素或多种毒素的组合可以任选地与本发明的多特异性和多价组合物(例如，含有MRD的抗体)连接，因而提供另外的细胞毒性。可以在本发明的组合物中使用的酶活性毒素或其片段包括，包括但不限于白喉A链、白喉毒素的无结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、假单胞菌外毒素、假单胞菌内毒素，蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒蛋白A链、α-帚曲菌素、油桐(Aleurites fordii)蛋白、核糖核酸酶，DNA酶I、葡萄球菌肠毒素-A，香石竹毒蛋白、垂序商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制蛋白、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(Sapaonaria officinalis)抑制蛋白、多花白树毒蛋白、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素和单端孢霉烯族类化合物。见，例如Pastan等人,Cell47:641(1986)、Goldenberg等人,Cancer Journal for Clinicians44:43(1994)和国际申请公开号WO93/21232和WO93/21232，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。 
一般而言，基于肽的药物部分可以通过在两个或更多个氨基酸和/或肽片段之间形成肽键而制备。此类肽键可以例如根据肽化学领域熟知的液相合成方法制备(见E.Schroder和K.Lubke，“The Peptides”，第1卷，第76-136页，1965，Academic Press)。澳瑞司他汀/海兔毒素药物部分可以根据以下文献的方法制备：美国专利号5,635,483和5,780,588；Pettit等人,J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465(1989)；Pettit等人,Anti-Cancer Drug Design13:243-277(1998)；Pettit等人,Synthesis719-725(1996)；Pettit等人,J.Chem.Soc.Perkin Trans.15:859-863(1996)；和Doronina等人,Nat.Biotechnol21(7):778-784(2003)。 
根据一些实施方案，本发明的组合物包含高度放射的原子。多种放射性同位素可用于放射缀合的多价和多特异性组合物(例如，含有 MRD的抗体)的产生。例子包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。当该缀合物用于检测时，它可以包含用于闪烁法研究的放射性原子，例如tc99m或I123，或核磁共振(NMR)成像的自旋标记物(也称作磁共振成像，mri)，如再次碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。 
使用本领域已知的技术，可以将放射标记物或其他标记物掺入缀合物中。例如，肽可以生物合成或可以使用合适的氨基酸前体(包括例如替换氢的氟-19)通过化学氨基酸合成法合成。可以通过肽中的半胱氨酸残基连接标记物如tc99m或I123、Re186、Re188和In111。钇-90可以通过赖氨酸残基连接。IODOGEN法(Fraker等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.80:49-57(1978))可以用来掺入碘-123。“Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy”(Chatal,CRC Press1989)详细描述了可以常规地用来标记本发明组合物的其他方法。 
接头可以是促进药物在细胞中释放的“可切割接头”。例如，可以使用酸不稳定接头(例如，腙)、蛋白酶敏感(例如，肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头或含有二硫键的接头(Chari等人,Cancer Research52:127-131(1992)；美国专利号5,208,020，美国专利申请公开号20110293513)。因而，本发明涵盖含有一个或多个接头的多价和多特异性组合物，所述接头可以含有多种基团中任一种作为其链的部分，所述基团将在体内(例如在细胞中)以相对于缺少这类基团的构建体而言增进的速率被切割。还提供接头臂与治疗剂和诊断剂的缀合物。接头可用于形成治疗剂的前药类似物并用来将治疗剂或诊断剂(例如，细胞毒素或MRD)可逆地连接至导引剂、可检测标记物或固相支持物。接头可以在血浆中是如此稳定的，从而不释放MRD或细胞毒剂。在细胞毒素情况下，接头可以可以在血浆中是稳定并且一旦内化则是如此易变的，从而以活性形式释放细胞毒素。 
MRD和/或细胞毒剂任选地彼此连接或借助如本文所述的或否则本领域已知的接头与本发明的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)连接。可以使用本领域已知的多种双官能蛋白质偶联剂 产生含有MRD的抗体与MRD或细胞毒剂的缀合物，所述偶联剂包括但不限于含有选自以下基团的偶联剂：6-马来酰亚胺己酰基(MC)、马来酰亚胺己酰基-聚乙二醇(“MC(PEG)6-OH”(可操作用于连接至抗体半胱氨酸))、马来酰亚胺丙酰基(MP)、MPBH、缬氨酸-瓜氨酸(val-cit(蛋白酶可切割接头中的示例性二肽))、甲基-缬氨酸-瓜氨酸(“Me-Val-CitN”、其中肽键已经被修饰以防止遭受组织蛋白酶B裂解的接头)、丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)、对-氨基苯甲氧基羰基(PAB(“自毁性”接头组件的例子))、缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苯甲氧基羰基(“vc-PAB”)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)、N-琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1羧化物(SMCC)、LC-SMCC、N-琥珀酰亚胺基(4-碘-乙酰)氨基苯甲酸酯(SIAB)、IT(亚氨基硫烷)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基)丙酸酯)、6-马来酰亚胺己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苯甲氧基羰基(MC-vc-PAB)、乙烯氧基-CH2CH2O-(作为一个或多个重复单元(“EO”或“PEO”))、BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、MBS、SBAP、SIA、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SMCC、磺基-SIAB、磺基-SMPB、SVSB(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯砜)苯甲酸盐)、亚氨酯的双官能衍生物(如己二亚氨盐酸二甲酯)、活性酯(如辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(如戊二醛)、双-叠氮化合物(如双(对-重氮盐苯甲酰基)己二胺)、双-重氮盐衍生物(如双-(对-重氮盐苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。另外的接头组分是本领域已知的并且一些在本文中描述。 
在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物经接头在多价和多特异性组合物上的1-5，5-10，1-10或1-20位点处与细胞毒剂共价连接。根据另外的实施方案，该多价和单价多特异性组合物经接头在多价和多特异性组合物上的2、5或10个位点处与细胞毒剂共价连接。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)复合物与前药连接。前药合成、与抗体的化学连接和药 效动力学特性是本领域已知的并且可以常规地用来产生并使用含有前药的本发明多价和多价组合物，如，含有MRD的抗体-前药组合物。见，例如，国际公开号WO96/05863和美国专利号5,962,216中，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。 
可选地，例如，通过重组技术或肽合成，可以产生包含抗体和细胞毒剂的融合蛋白。重组DNA分子可以包含编码该缀合物的抗体部分和细胞毒部分的区域，所述抗体部分和细胞毒部分毗邻彼此或由编码不破坏该缀合物所需特性的接头肽的区域分隔。 
本发明的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)组也可以与放射性同位素缀合产生细胞毒性放射药物，也称作放射免疫缀合物。可以与多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)缀合的用于诊断性或治疗性使用的放射性同位素的例子包括，但不限于碘131、铟111、钇90和镥177。本领域中建立了用于制备放射性免疫缀合物的方法。放射性免疫缀合物的实例是可商业获得的，包括ZevalinTM(IDEC Pharmaceuticals)和BexxarTM(Corixa Pharmaceuticals)，并且相似的方法可以用来使用本发明的含有MRD的抗体制备放射免疫缀合物。 
用于将接头-药物部分缀合至靶向细胞的蛋白质如抗体的方法是本领域已知的并且包括例如在美国专利号5,208,020和6,441,163；国际申请公开号WO2005037992、WO2005081711和WO2006/034488中描述的那些，所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。例如，还见Arnon等人,"Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy",引自Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Reisfeld等人(编著),第243-56页(Alan R.Liss,Inc.1985)；Hellstrom等人,"Antibodies For Drug Delivery",引自Controlled Drug Delivery(第2版),Robinson等人(编著),第623-53页(Marcel Dekker,Inc.1987)；Saito等人,Adv.Drug Deliv.Rev.55:199-215(2003)；Trail等人,Cancer Immunol.Immunother.52:328-337(2003)；Payne,Cancer Cell3:207-212(2003)；Allen等人, Nat.Rev.Cancer2:750-763(2002)；Pastan等人,Curr.Opin.Investig.Drugs3:1089-1091(2002)；和Senter等人,Adv.Drug Deliv Rev.53:247-264(2001)，所述文献每一篇的内容通过引用的方式完整并入本文。 
在一些实施方案中，包含细胞毒剂的本发明多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体-细胞毒剂缀合物)可以在本文中一般地称作免疫缀合物。在一些实施方案中，本发明的免疫缀合物结合内化至细胞中的细胞表面靶。在其他实施方案中，本发明的免疫缀合物(例如，含有MRD的抗体-细胞毒剂缀合物)与细胞表面靶的结合在体外导致免疫缀合物内化至细胞中。在其他实施方案中，本发明的免疫缀合物与细胞表面靶的结合在体内导致该组合物内化至细胞中。本文所述的用于治疗患者的方法可以包含向患者施用治疗有效量的免疫缀合物(例如，包含细胞毒剂的本发明多价和单价多特异性组合物，如含有MRD的抗体-细胞毒剂缀合物)，所述免疫缀合物包含细胞毒剂和结合内化至细胞中的靶。在一些实施方案中，免疫缀合物包含本文中公开的细胞毒剂。在另外的实施方案中，免疫缀合物包含选自以下的细胞毒剂：烷基化剂、抗增殖剂质、微管蛋白结合剂、长春碱类生物碱、烯二炔、鬼臼毒素、鬼臼毒素衍生物、蝶啶药物家族成员、紫杉烷、海兔毒素、拓扑异构酶抑制剂或铂络合物化疗药。在其他实施方案中，细胞毒剂是类美登素或类美登素衍生物或类似物。在特定的实施方案中，细胞毒剂是类美登素DM1、DM2或DM3。在另外的实施方案中，细胞毒剂是澳瑞司他汀或澳瑞司他汀衍生物或类似物。在特定的实施方案中，细胞毒剂是MMAE或MMAF。细胞毒剂任选地通过接头与免疫缀合物的其他组分连接。在一些实施方案中，细胞毒剂通过酶可切割接头与免疫缀合物的其他组分连接。在另外的实施方案中，细胞毒剂通过酸不稳定接头与免疫缀合物的其他组分连接。 
在其他实施方案中，本发明的免疫缀合物的细胞毒剂具有小于10-7M、10-8M或10-9M的游离药物效力。在另外的实施方案中，细胞毒素具有10-8至10-11M的游离药物效力。 
在一些实施方案中，由免疫缀合物结合的靶选自CD19、CD22、CD30、CD33、CD56、CD70、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138，PSMA、EphA2、ErbB2(CD340)、SLC44A4、MN(碳酸酐酶IX)，GPNMB(糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白)、Cripto和αV整联蛋白。在另外的实施方案中、由免疫缀合物结合的靶选自CD1、CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD25、TNFRSF5(CD40)、CD64、CD74、CD79、CD105、CD174、CD205、CD227、CD326、CD340、MUC16、EGP-1、EGP-2、EGF受体(ErbB1)、ErbB2、ErbB3、因子H、FHL-1、Flt-3、叶酸受体、Ga733、GROB、HMGB-1、低氧诱导因子(HIF)、HM1.24、HER-2/neu、胰岛素样生长因子(ILGF)、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、IL2R、IL4R、IL6R、IL13R、IL15R、IL17R、IL18R、IL2、IL6、IL8、IL12、IL15、IL17、IL18、IL25、IP-10、IGF-1R、Ia、HM1.24、HCG、HLA-DR、ED-B、TMEFF2、EphB2、FAP(成纤维细胞活化蛋白)、间皮素、EGFR、TAG-72、GD2(由B4GALNT1基因编码)和5T4。 
在另外的实施方案中，由免疫缀合物结合的靶是选自CD33、CD64、TNFRSF5(CD40)、CD56和CD138的髓样靶和造血靶。在其他实施方案中，由免疫缀合物结合的靶是选自EpCam、GD2、EGFR、CD74、CD227、CD340、MUC16、GD2、GPNMB、PSMA、crypto、TMEFF2、EphB2、5t4、间皮素、TAG-72和MN的癌靶。 
在其他实施方案中，由免疫缀合物结合的靶是选自CD19/CD21、CD20、CD22、TNFRSF5(CD40)、CD70、CD79a、CD79b和CD205的B细胞靶。在另外的实施方案中，由免疫缀合物结合的靶是选自CD25、CD30、TNFRSF5(CD40)、CD70和CD205的T细胞靶。在其他实施方案中，由免疫缀合物结合的靶是选自CD105内皮细胞靶、选自FAP的间质细胞靶和选自ED-B的血管靶。 
可选地，例如，通过重组技术或肽合成，可以产生包含抗体和细 胞毒剂的融合蛋白。DNA的长度可以包含编码该缀合物的两个部分的各自区域，所述两个部分毗邻彼此或由编码不破坏该缀合物所需特性的接头肽的区域分隔。 
为上述任一种免疫缀合物进一步提供以下实施方案。在一个实施方案中，免疫缀合物具有体外或体内细胞杀伤活性。在一个实施方案中，接头通过抗体上的巯基与抗体连接。在一个实施方案中，接头是蛋白酶可切割的。在一个实施方案中，接头包含val-cit二肽。在一个实施方案中，接头包含对氨基苄基单位。在一个实施方案中，对氨基苄基单位位于药物与接头中的蛋白酶切割位点之间。在一个实施方案中，对氨基苄基单位是对-氨基苯甲氧基羰基(PAB)。在一个实施方案中，接头包含6-马来酰亚胺己酰基。在一个实施方案中，6-马来酰亚胺己酰基位于抗体与接头中的蛋白酶切割位点之间。以上实施方案可以单独存在或彼此以任何组合存在。 
本发明的含有MRD的抗体也可以与转化前药(例如，肽酰基化疗药，见例如，WO81/01145)为活性抗癌药物的前药活化酶缀合。见，例如WO88/07378和美国专利号4,975,278，所述文献的内容通过引用的方式完整并入本文。免疫缀合物的酶组分优选地能够以如此方式作用于前药，从而将它转化成更有活性的细胞毒形式。见，例如Pastan等人,Cell,47:641(1986)和Goldenberg等人,Cancer Journal for Clinicians,44:43(1994)。可以使用的酶活性毒素或其片段包括白喉A链、白喉毒素的无结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒蛋白A链、α-帚曲菌素、油桐蛋白、香石竹毒蛋白、垂序商陆蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制蛋白、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制蛋白、多花白树毒蛋白、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素和单端孢霉烯族类化合物。见，例如WO93/21232。 
在一些实施方案中，使用许多熟知螯合剂的任一种或直接标记法，将本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与放射性同位素缀合，如90Y、125I、131I、123I、111In、105Rh、153Sm、67Cu、67Ga、 166Ho、177Lu、186Re和188Re。在其他实施方案中，含有MRD的抗体与药物、前药或淋巴因子如干扰素连接。使用本领域已知的技术，如Current Protocols in Immunology,第1和第2卷,Coligen等人编著,Wiley-Interscience,New York,N.Y.,Pubs(1991)中所述的那些技术，可以用结合、螯合或否则络合放射性同位素金属的配体试剂标记本发明的组合物，其中所述试剂与抗体的工程化的半胱氨酸巯基反应。可以络合金属离子并且可以用于本发明组合物和方法中的螯合配体包括DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA和TETA(Macrocyclics,Dallas,Tex.)。放射性核素可以通过与本发明的抗体-药物缀合物络合靶向(Wu等人,Nature Biotechnology23(9):1137-1146(2005))。接头试剂如DOTA-马来酰亚胺(4-马来酰亚胺丁酰胺基苄基-DOTA)可以通过氨基苄基-DOTA与氯甲酸异丙酯(Aldrich)活化的4-马来酰亚胺丁酸(Fluka)的反应，遵循Axworthy等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA97(4):1802-1807(2000))的方法来制备。DOTA-马来酰亚胺试剂与半胱氨酸工程化抗体的游离半胱氨酸氨基酸反应并且在抗体上提供金属络合配体(Lewis等人,Bioconj.Chem.9:72-86(1998))。螯合接头标记试剂如DOTA-NHS(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸单(N-羟琥珀酰亚胺酯)是市售的(大环类，Dallas，Tex)。 
本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)和细胞毒素的缀合物可以使用多种双官能性蛋白质偶联剂如N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酯的双官能衍生物(如，己二亚氨盐酸二甲酯)、活性酯(如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(如，戊二醛)、双-叠氮化合物(如，双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双-重氮盐衍生物(如，双-(对-重氮盐苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如，2,6-二异氰酸甲苯酯)和双活性氟化合物(如，1,5-二氟-2,4-二硝基苯)常规地来产生。在特定的实施方案中，毒素与缀合含有MRD的抗体通过酶可切割的接头系统(例如，如，SGN-35中存在的那种)。也可以使用含有MRD的抗体和一种或多种小分子毒素如刺孢霉素、类美登素、单端孢霉烯和CC1065和这些毒素的具有毒素活性的衍生 物的缀合物。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体可以与其他免疫活性配体(例如，趋化因子、细胞因子和抗体或其片段)复合或具有与其他免疫活性配体结合的MRD，其中所产生的分子与肿瘤细胞或其他靶以及趋化因子、细胞因子或效应细胞(如T细胞)结合。在某些实施方案中，这些缀合物可以作为融合蛋白产生。本发明的酶可以通过本领域熟知的技术如利用上文讨论的异双官能交联试剂与抗体共价结合。可选地，可以使用本领域已知的重组DNA技术构建包含本发明抗体的至少抗原结合区域的融合蛋白，所述抗原结合区域与本发明酶的至少有功能活性的部分连接。 
在一些实施方案中，在MRD-抗体融合物中与MRD有效连接的抗体的N末端或C末端被截短。在优选的实施方案中，这种截短不妨碍或减低抗体通过其抗原结合结构域与其靶抗原结合的能力。在其他实施方案中，该截短作用不妨碍或减低Fc效应子功能、半寿期和/或ADCC活性。在其他实施方案中，MRD在抗体链的末端区域内连接。更具体地，在某些实施方案中，MRD在重链的C端氨基酸的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个残基范围内连接。在其他实施方案中，MRD在轻链的C端氨基酸的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个残基范围内连接。在另外的实施方案中，MRD在重链的N端氨基酸的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个残基范围内连接。在其他实施方案中，MRD在轻链的N端氨基酸的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个残基范围内连接。因而，例如，与重链N末端连接的MRD可以与重链的N端链的第一、第二、第三、第四、第五或第十氨基酸连接。例如，含有与重链N末端连接的MRD的MRD-抗体融合物可以含有与MRD连接的重链序列的第1-3位氨基酸，所述MRD与重链序列的第4位氨基酸连接。 
在某些实施方案中，一个或多个MRD在除抗体轻链和重链末端之外的位置处与抗体连接。MRD可以与抗体的任何部分连接，所述 任何部分不妨碍该抗体结合其靶的能力。因而，在一些实施方案中，MRD位于抗体结合位点外部。例如，MRD可以位于重链序列内部或位于轻链序列内部。仅以举例方式、MRD可以位于Fc结构域和铰链区之间、铰链区和重链CH1结构域之间、CH1结构域和重链可变区之间或恒定区和轻链可变区之间。 
已经观察到靶向血管内皮生长因子(VEGF)信号传导途径的血管生成抑制剂最多提供暂时治疗益处，随后肿瘤生长和进展恢复，原因在于血管生成性肿瘤适应于这些抑制剂存在的明显能力。不受理论约束，认为通过结合多个不同的血管生成相关靶并且因而破坏生血管性肿瘤可利用的抗性机制，结合血管生成靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的多价和多特异性特性为这些化合物提供具有下述能力，所述能力使得抗血管生成治疗益处超过从例如常规单克隆抗体疗法所观察到的那些抗血管生成治疗益处。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合选自以下的2种或更多种靶：VEGF(即，VEGFA)、VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TIE2、TNFSF2(TNFa)、FGFR3、EFNa1、EFNa2、ANG1、ANG2、IL6、IL8、IL18、HGF、PDGFA、PLGF、PDGFB、CXCL12、KIT、GCSF、CXCR4、PTPRC、TIE2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、Notch1、DLL4、EGFL7、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、VCAM1、PDGFRA和PDGFRB。本发明还涵盖了结合VEGF和2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合VEGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是贝伐珠单抗。本发明还涵盖了结合VEGF和2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合 VEGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是贝伐珠单抗。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合VEGF(即，VEGFA)并且另外地结合选自以下的血管生成性靶：VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TNFSF2(TNFa)、FGFR3、EFNa1、EFNa2、ANG1、ANG2、IL-6、IL-8、IL-18、HGF、TIE2、PDGFA、PlGF、PDGFB、CXCL12、KIT、GCSF、CXCR4、PTPRC、TIE2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、Notch1、DLL4、EGFL7、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、VCAM1、PDGFRA和PDGFRB。本发明还涵盖了结合VEGF和2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合VEGF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是贝伐珠单抗。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与贝伐珠单抗竞争结合VEGF。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFα并且另外地结合选自以下的靶：Te38、IL-12、IL-12p40、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-1β、IL-23、MIF、PEG2、PGE4、VEGF、TNFSF11(RANKL)、TNFSF13B(BLYS)、GP130、CD-22和CTLA-4。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFα、IL6和TNFSF13B(BLYS)。本发明还涵盖了结合TNF和2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TNF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是阿达木单抗、赛妥珠单抗、戈利木单抗或AME-527。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与阿达木单抗、赛妥珠单抗、戈利木单抗或AME-527 竞争结合TNF。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合IL1α和IL1β。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合IL1β和TNFSF11(RANKL)。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合IL1β和选自IL13、IL17A、TNF、VEGF、PGE2、VEGFR1、VEGFR2、TNFSF12(TWEAK)和TNF的靶。本发明还涵盖了结合IL1β和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合IL1β。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是卡妥索单抗(catumaxomab)、Xoma052、卡那单抗(canakinumab)或ACZ885。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与卡妥索单抗、Xoma052、卡那单抗或ACZ885竞争结合IL1α或IL1β。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合IL12。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体结合IL12并且另外地结合IL18或TNFSF12(TWEAK)。本发明还涵盖了结合CTLA-4和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CTLA-4。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是布雷奴单抗或优特克单抗。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与布雷奴单抗或优特克单抗竞争结合IL12。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合CTLA-4。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体结合CTLA4并且另外地结合PDL-1或BTNO2。本发明还涵盖了结合CTLA-4和1个或2个这些靶多价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CTLA-4。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是曲美木单抗或易普利单抗。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与曲美木单抗或易普利单抗竞争结合CTLA-4。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合IL13。在又一个实 施方案中，含有MRD的抗体结合IL13并且另外地结合选自以下的靶：IL1β、IL4、IL9、IL13、IL25、LHR激动剂、MDC、MIF、PED2、SPRR2a、SPRR2b；TARC、TGF-β和IL25。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合IL13和选自IL5、ADAM8、LHR(激动剂)、IL23p19和IgE的靶。本发明还涵盖了结合IL13和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合IL13。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是TNX-650、来金珠单抗或CAT354。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与TNX-650、来金珠单抗或CAT354竞争结合IL13。 
在又一个实施方案中，含有MRD的抗体结合RGM A。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体结合RGM A并且另外地结合选自以下的靶：RGM B、MAG、NgR、NogoA、OMGp和CSPGs。本发明还涵盖了结合RGM A和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合RGM A。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合CD38并且另外地结合选自CD20、TNFRSF5(CD40)ALK1、TNF、VEGF、VEGFA、VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TNFSF2(TNFa)、FGFR3、VEGFR1、VEGFR2和CD138的靶。本发明还涵盖了结合CD38和至少1、2或全部3个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD38。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合MOR202或达雷木单抗。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分与MOR202或达雷木单抗竞争结合CD38。 
在一些实施方案中含有MRD的抗体结合ErbB1(EGFR)并且另外地结合ErbB3。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分 结合ErbB1。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是爱必妥
Figure BDA0000457457350001601
在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与爱必妥
Figure BDA0000457457350001602
竞争结合ErbB1。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是选自尼妥珠单抗、扎鲁木单抗、马妥珠单抗、帕尼单抗、MEDX-214和ABX-EGF的结合ErbB1的抗体。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体竞争与尼妥珠单抗、扎鲁木单抗、马妥珠单抗、帕尼单抗、MEDX-214和ABX-EGF竞争结合ErbB1。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合ErbB2和IGF1R。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合ErbB2、Ang2和IGF1R。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合ErbB2。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是HuMax-Her2TM或曲妥珠单抗DM1。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是曲妥珠单抗。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与曲妥珠单抗竞争结合ErbB2。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体结合ErbB2并且另外地结合选自以下的靶：ErbB3、EGFR、IGF1R，cMet、VEGF，RON(MST1R)、DLL4、PLGF、CDCP1(CD318)、NRP1、TNFRSF10A(DR4)和TNFRSF10B(DR5)。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合ErbB2并且另外地结合选自以下的靶：CD2、CD3、CD4和NKG2D。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合ErbB2和IGF1、IGF2或IGF1,2。本发明还涵盖了结合ErbB2并且另外地结合1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合ErbB2。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是HuMax-Her2TM或曲妥珠单抗DM1。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是曲妥珠单抗。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与曲妥珠单抗竞争结合ErbB2。 
在一些实施方案中含有MRD的抗体结合ErbB2并且另外地结合ErbB3。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合ErbB2。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是HuMax-Her2TM或曲妥珠单抗DM1。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是曲妥珠单抗。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与曲妥珠单抗竞争结合ErbB2。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是选自以下的结合ErbB2的抗体：MDX-210(Medarex)、tgDCC-E1A(Targeted Genetics)、MGAH22(MacroGenics)和培妥珠单抗(OMNITARGTM)。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与选自以下的抗体竞争结合ErbB2：MDX-210、tgDCC-E1A、MGAH22和培妥珠单抗。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合ErbB2和HER2/3。在其他实施方案中，含有MRD的抗体同时结合ErbB2和HER2/3。 
已经观察到靶向血管内皮生长因子(VEGF)信号传导途径的血管生成抑制剂最多提供暂时治疗益处，随后肿瘤生长和进展恢复，原因在于血管生成性肿瘤适应这些抑制剂存在的明显能力。不受理论约束，认为通过结合多个不同的血管生成相关靶并且因而破坏生血管性肿瘤可利用的抗性机制，结合血管生成靶的含有MRD的抗体的多价和多特异性特性为这些化合物提供具有下述能力，所述能力使得抗血管生成治疗益处超过从例如常规单克隆抗体疗法所观察到的那些抗血管生成治疗益处。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合PDGFRA并且另外地结合选自以下的靶：VEGFA、VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TNFSF2(TNFa)、FGFR3、EFNa1、EFNa2、ANG1、ANG2、IL6、IL8、IL18、IGF1、IGF2、IGF1,2、HGF、TIE2、PDGFA、PLGF、PDGFB、CXCL12、KIT、GCSF、CXCR4、PTPRC、 TIE2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、EGFR、cMET、Notch1、DLL4、EGFL7、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、VCAM1和PDGFRB。本发明还涵盖了结合PDGFRA并且结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合PDGFRA。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是olaratumab。在其他实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与olaratumab竞争结合PDGFRA。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是MEDI-575。在其他实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与MEDI-575竞争结合PDGFRA。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合PDGFRB并且另外地结合选自以下的靶：VEGFA、VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TNFSF2(TNFa)、FGFR3、EFNa1、EFNa2、ANG1、ANG2、IL6、IL8、IL18、IGF1、IGF2、IGF1,2、HGF、TIE2、PDGFA、PLGF、PDGFB、CXCL12、KIT、GCSF、CXCR4、PTPRC、TIE2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、EGFR、cMET、Notch1、DLL4、EGFL7、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、VCAM1和PDGFRA。本发明还涵盖了结合PDGFRB并且还结合至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合PDGFRB。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合VEGFR1并且另外地结合选自以下的血管生成性靶：VEGF(即，VEGFA)、VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如， FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TNFSF2(TNFa)、FGFR3、EFNa1、EFNa2、ANG1、ANG2、IL6、IL8、IL18、HGF、PDGFA、PLGF、PDGFB、CXCL12、KIT、GCSF、CXCR4、PTPRC、TIE2、VEGFR2、VEGFR3、Notch1、DLL4、EGFL7、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、VCAM1、PDGFRA和PDGFRB。本发明还涵盖了结合VEGFR1并且另外地结合1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合VEGFR1。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是IMC-18F1。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与IMC-18F1竞争结合VEGFR1。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合VEGFR2并且另外地结合选自以下的靶：VEGF(即，VEGFA)、VEGFB、FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8b、FGF19、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIc)、FGFR3、TNFSF2(TNFa)、FGFR3、NRP1、ROBO4、CD30、CD33、CD55CD80、KIT、CXCL12、Notch1、EFNa1、EFNa2、ANG1、ANG2、IL6、IL8、IL18、HGF、PDGFA、PLGF、PDGFB、CXCL12、KIT、GCSF、CXCR4、PTPRC、TIE2、VEGFR1、VEGFR3、Notch1、DLL4、EGFL7、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、VCAM1、PDGFRA和PDGFRB。本发明还涵盖了结合VEGFR2并且另外地结合1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合VEGFR2。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是IMC-1C11或DC101。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD 组分和/或含有MRD的抗体与IMC-1C11或DC101竞争结合VEGFR2。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合VEGFR2并且另外地结合ANG2或TIE2。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合VEGFR2。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是IMC-1C11、DC101或TTAC-0001。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与IMC-1C11、DC101或TTAC-0001竞争结合VEGFR2。在其他实施方案中，结合TIE2的组分包括结合TIE2的ANG2片段。在具体的实施方案中，结合TIE2的组分包含在NCBI参考序列号NP_001138.1中公开的人ANG2的第283-449位氨基酸。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体结合DLL4并且另外地结合选自以下的靶：EGFR、PLGF、VEGFR1、VEGFR2和VEGF。本发明还涵盖了结合DLL4和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是REGN421。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与REGN421竞争结合DLL4。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体与抗血管生成药和转移性或侵入癌靶结合。在一个实施方案中，含有MRD的抗体与血管生成靶结合并且也结合选自以下的转移性或侵入癌靶：CXCL12、CXCR4(例如，CXCR4b)、CCR7(例如，CXCR7b)、CD44(例如，CD44v3和CD44v6)、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、αvβ1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、TGFb、αvβ5整联蛋白、α9β1整联蛋白、α6β4整联蛋白、αMβ2整联蛋白、PD-1、HGF、cMET、MMP2、MMP-7、MMP-9、MMP-12、VEGFA、VEGFB和IGF1。本发明还涵盖了结合血管生成靶并且还结合2、3、4、5个或更多个这些转移性或侵入癌靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合VEGF。在其他实施方案 中，含有MRD的抗体的抗体组分是贝伐珠单抗。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与贝伐珠单抗竞争结合VEGF。 
在一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与不同细胞信号传导途径相关的靶结合。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与冗余性、重叠性或串扰性传导途径相关的靶结合。例如，在一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与PI3K/AKT/mTOR信号传导相关的靶(例如，ErbB2、EGFR、IGF1R、Notch、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIb)、FGFR3、FGFR4、GPCR和/或c-MET)结合。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与受体酪氨酸Raf/MEK/MAPK信号传导相关的靶(例如，VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIb)、FGFR3、FGFR4、CD28、RET、cMET、EGFR、ErbB2、Notch、Notch1、Notch3,Notch4、DLL1、DLL4、Jagged、Jagged1、Jagged2和Jagged3)结合。在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合1、2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与SMAD信号传导相关的靶(例如，Notch、TGFβ、TGFβR1、TGFβR2和BMP)结合。在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与JAK/STAT信号传导相关的靶(例如，IFNgR1、IFNgR3、IFNG、IFN-AR2、IFN-AR1、IFNα、IFNβ、IL6a受体(GP130)、IL6、IL12RB1、IL12和EGFR)结合。因而，本发明涵盖含有MRD的抗体，所述抗体与选自以下的2种或更多种靶结合：WNT1、WNT2、 WNT2b、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、FZD1、FZD2、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、Notch、Notch1、Notch3、Notch4、DLL1、DLL4、Jagged、Jagged1、Jagged2和Jagged3。在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与NFkB信号传导相关的靶(例如，BCR、TCR、IL1R、IL1、FZD1、FZD2、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、Notch、Notch1、Notch3、Notch4、DLL4、Jagged、Jagged1、Jagged2、Jagged3、TNFSF1(TNFb，LTa)、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFSF6(Fas配体)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF6B(DcR3)、TNFSF7(CD27配体、CD70)、TNFRSF7(CD27)、TNFSF8(CD30配体)、TNFRSF8(CD30)、TNFSF11(RANKL)、TNFRSF11A(RANK)、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF12(TWEAKR)、TNFSF13(APRIL)、TNFSF13B(BLYS)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFSF15(TL1A)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF19(TROY)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF25(DR3)、TNFSF5(CD40配体)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF2(TNFa)、TNFSF3(LTb)、TNFRSF3(LTBR)、TNFSF14(LIGHT，HVEM配体)、TNFRSF14(HVEM)、TNFSF18(GITR配体)、TNFRSF18(GITR)、TNFSF4(OX40配体)、TNFRSF4(OX40)、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF9(41BB)、BMP、NGF和TGFα)结合。在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与细胞增殖相关的靶(例如，FGF1、FGF2、FGF7、FGF4、FGF10、 FGF18b、FGF19、FGF23、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFRIIIB和FGFR-IIIC)、FGFR3、FGFR4、TCR、TNFRSF5(CD40)、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR6)结合。在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与相关的靶toll样受体信号传导(例如，TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR6)结合。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与B细胞信号传导相关的靶(例如，mIg、Igα/Igβ(CD79a/CD79b)异二聚体(α/β)、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD27、CD30、CD46、CD80、CD86、ICOSL(B7-H2)，HLA-DR(CD74)、PD1、PDL1、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFRSF17(BCMA)，BTLA、TNFRSF5(CD40)、TLR4、TNFRSF14(HVEM)、FcγRIIB、IL4R和CRAC结合。在一个特定实施方案中，含有MRD的抗体与CD19和CD20结合。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD19、CD20和CD22。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在又一个实施方案中，含有MRD的抗体与一或多个选自以下的B细胞表面标记结合：CD10、CD24、CD37、CD53、CD72、CD75、CD77、CD79a、CD79b、CD81、CD82、CD83、CD84(SLAM5)和CD85。在又一个实施方案中，含有MRD的抗体与1或多个选自以下的B细胞表面标记结合：CD10、CD24、CD37、CD53、CD72、CD75、CD77、CD79a、CD79b、CD81、CD82、CD83、CD84(SLAM5)和CD85。在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5个或更多个的这些B细胞表面标记。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD19和选自以下的靶：CD20、CD22、CD30、CD33、TNFRSF5(CD40)、CD52、CD74、CD80、CD138、VEGFR1、VEGFR2、EGFR、TNFRSF10A(DR4)、TNFRSF10B(DR5)、TNF、NGF、VEGF、IGF1,2、IGF2、IGF1和TNFSF11(RANKL)。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD20和选自以下的靶：CD3、CD4和NKG2D。本发明还涵盖了结合CD19并且还结合至少2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD19。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是MDX-1342、SGN-CD19A、
Figure BDA0000457457350001681
5574、SGN-19A、ASG-5ME或MEDI-551。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与MDX-1342、SGN-CD19A、 5574、SGN-19A、ASG-5ME或MEDI-551竞争结合CD19。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD22和选自以下的靶：CD19、CD20、CD23、CD30、CD33、TNFRSF5(CD40)、CD52、CD74、CD80、TNFRSF10A(DR4)、TNFRSF10B(DR5)、VEGF、TNF和NGF。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD22和选自以下的靶：CD3、CD4和NKG2D。本发明还涵盖了结合CD22并且还结合2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD22。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是依帕珠单抗或伊珠单抗。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与依帕珠单抗或伊珠单抗竞争结合CD22。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是moxetumomab(CAT-8015，Cambridge Antibody Technology)。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与moxetumomab竞争结合CD22。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合TNFRSF5(CD40) 和选自以下的靶：BCMA、TNFSF11(RANKL)、VEGFR1、VEGFR2、TNFRSF10A(DR4)、TNFRSF10B(DR5)、CD22、CD30、CD38、CD56(NCAM)、CD70、CD80、CD138、IL6、IGF1、IGF2、IGF1,2，BLyS，APRIL和NGF。在另外的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD40和选自以下的靶：CD3、CD4和NKG2D。本发明还涵盖了结合CD40并且还结合2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD40。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是CP870893、达西珠单抗、 
Figure BDA0000457457350001691
鲁卡木单抗(lucatumumab)、
Figure BDA0000457457350001692
5485或替奈昔单抗(teneliximab)。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与CP870893、达西珠单抗、
Figure BDA0000457457350001693
鲁卡木单抗、
Figure BDA0000457457350001694
5485或替奈昔单抗竞争结合CD40。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合CD33和选自以下的靶：FLT3、CD44、TNFRSF10A(DR4)、TNFRSF10B(DR5)、CD80、MGC、VEGFR1、VEGFR2、IL1、IL6、TNF和VEGF。本发明还涵盖了结合TNFRSF10B并且还结合至少2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD33。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是吉妥珠单抗或林妥珠单抗。在另外的实施方案中，该抗体组分、MRD组分和/或含有MRD的抗体与吉妥珠单抗或林妥珠单抗竞争结合CD33。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与抗原呈递细胞信号传导相关的靶(例如，mIg、Igα/Igβ(CD79a/CD79b)异二聚体(α/β)、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD27、CD28、CD30、CD30L、TNFSF14(LIGHT、HVEM配体)、CD70、ICOS、ICOSL(B7-H2)、CTLA4、PD-1、PDL1(B7-H1)、B7-H4、B7-H3、PDL2(B7-DC)、BTLA、CD46、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、HLA-DR、CD74、PD1、TNFRSF4(OX40)、TNFRSF9(41BB)、 TNFSF4(OX40配体)、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF9(41BB)、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFRSF17(BCMA)、BTLA、TNFRSF18(GITR)、MHC-1、TNFRSF5(CD40)、TLR4、TNFRSF14(HVEM)、FcγRIIB、IL4R和CRAC)结合。在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在另一个实施方案中，含有MRD的抗体与2个或更多个与T细胞受体信号传导相关的靶(例如，CD3、CD4、CD27、CD28、CD70、IL2R、LFA-1、C4、ICOS、CTLA-4、CD45、CD80、CD86、PG-1、TIM1、TIM2、TIM3、TIM4、半乳糖凝集素9、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF25(DR3)、TNFRSF14(HVEM)、TNFSF18、TNFRSF18(GITR)、TNFRSF4(OX40)、TNFSF4(OX40配体)、PD1、PDL1、CTLA4、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF9(41BB)、TNFSF14(LIGHT，HVEM配体)、TNFSF5(CD40配体)、BTLA和CRAC)结合。在一些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在另外的实施方案中，含有MRD的抗体与治疗靶和与抵抗因靶向治疗靶产生的治疗效果的逃逸途径相关的第二靶结合。例如，在一个实施方案中，含有MRD的抗体与EGFR和选自MDR1、cMET、Notch、Notch1、Notch3、Notch4、DLL1、DLL4、Jagged、Jagged1、Jagged2和Jagged3的靶结合。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合2、3、4、5种或更多种的这些靶。 
在特定的实施方案中，含有MRD的抗体靶向向ErbB2和血管生成性因子。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体靶向向ErbB2和IGF1R。在另一个实施方案中，该抗体靶向ErbB2并且至少一个 MRD靶向血管生成性因子和/或IGF1R。在一个实施方案中，与曲妥珠单抗相同的ErbB2表位结合的抗体与靶向血管生成性因子和/或IGF1R的至少一个MRD有效连接。在一个另外的实施方案中，竞争性抑制曲妥珠单抗结合作用的抗体与靶向血管生成性因子和/或IGF1R的至少一个MRD有效连接。在另外的实施方案中，包含SEQ ID NOS:59-64的序列的抗体与靶向血管生成性因子和/或IGF1R的至少一个MRD有效连接。在另外的实施方案中，曲妥珠单抗抗体与靶向血管生成性因子和/或IGF1R的至少一个MRD有效连接。 
在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD。在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体连接至结合Ang2的MRD，所述MRD与包含序列MGAQTNFMPMDNDELLLYEQFILQQGLE SEQ ID NO:8的MRD相同的Ang2表位结合。在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体连接至结合Ang2的MRD，所述MRD竞争性抑制包含SEQ ID NO:8的序列的MRD。在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体连接至包含SEQ ID NO:8的序列的MRD。 
在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至ErbB2的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至ErbB2的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至ErbB2的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至ErbB2的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD直接与结合至ErbB2的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD经接头与结合至ErbB2的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体有效连接至靶向IGF1R的MRD。在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体连接至结合IGF1R的MRD，所述MRD与包含SEQ ID NO:14的序列的MRD相同的IGF1R表位结合。在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体连接至结 合IGF1R的MRD，所述MRD竞争性抑制包含SEQ ID NO:14的序列的MRD。在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体连接至包含SEQ ID NO:14的序列的MRD。在一些实施方案中，结合ErbB2的抗体与编码以下序列SLFVPRPERK(SEQ ID NO:103)的MRD连接。在一些实施方案中，结合ErbB2的抗体与编码以下序列ESDVLHFTST(SEQ ID NO:104)的MRD连接。在一些实施方案中，结合ErbB2的抗体与编码以下序列LRKYADGTL(SEQ ID NO:105)的MRD连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD与结合至ErbB2的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD与结合至ErbB2的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD与结合至ErbB2的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD与结合至ErbB2的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD直接与结合至ErbB2的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD经接头与结合至ErbB2的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向ErbB2和HER2/3。在一些实施方案中，含有MRD的抗体可以与ErbB2和HER2/3同时结合。在一些实施方案中，与ErbB2结合的抗体有效连接至靶向HER2/3的MRD。在另外的实施方案中，至少一个结合HER2/3的MRD与结合至ErbB2的抗体的重链的C末端有效连接。在其他实施方案中，至少一个结合HER2/3的MRD与结合至ErbB2的抗体的重链的N末端有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合HER2/3的MRD与结合至ErbB2的抗体的轻链的C末端有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合HER2/3的MRD与结合至ErbB2的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合HER2/3的MRD直接与结合至ErbB2的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合 HER2/3的MRD经接头与结合至ErbB2的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向ErbB2和HER2/3。在一些实施方案中，含有MRD的抗体可以与ErbB2和HER2/3同时结合。在一些实施方案中，与HER2/3结合的抗体有效连接至靶向ErbB2的MRD。在另外的实施方案中，至少一个结合ErbB2的MRD与结合至HER2/3的抗体的重链的C末端有效连接。在其他实施方案中，至少一个结合ErbB2的MRD与结合至HER2/3的抗体的重链的N末端有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合ErbB2的MRD与结合至HER2/3的抗体的轻链的C末端有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合ErbB2的MRD与结合至HER2/3的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合ErbB2的MRD直接与结合至HER2/3的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合ErbB2的MRD经接头与结合至HER2/3的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向ErbB2、Ang2和IGF1R。在一些实施方案中，含有MRD的抗体包含靶向ErbB2的抗体、靶向Ang2的MRD和靶向IGF1R的MRD。在一些实施方案中，Ang2MRD和IGF1R MRD与抗ErbB2抗体上的相同位置连接。在一些实施方案中，Ang2MRD和IGF1R MRD与抗ErbB2抗体上的不同位置连接。在一些实施方案中，Ang2MRD和IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上。在一些实施方案中，Ang2MRD和IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的重链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上并且IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的重链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗ErbB2抗体的重链上并且IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗ErbB2抗体的重链的N末端上并且IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的轻链的C末端上。在一些实施方案中，IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的重链的N末端上并且Ang2MRD处在抗ErbB2抗体的轻链的C末端上。本发明也涵盖多价和多特异性组合物 (例如，含有MRD的抗体)，所述组合物包含靶向Ang2的抗体、靶向ErbB2的MRD和靶向IGF1R的MRD；和多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述组合物包含靶向IGF1R的抗体、靶向ErbB2的MRD和靶向Ang2的MRD。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向ErbB2、Ang2和HER2/3。在一些实施方案中，含有MRD的抗体包含靶向ErbB2的抗体、靶向Ang2的MRD和靶向HER2/3的MRD。在一些实施方案中，Ang2MRD和HER2/3MRD与抗ErbB2抗体上的相同位置连接。在一些实施方案中，Ang2MRD和HER2/3MRD与抗ErbB2抗体上的不同位置连接。在一些实施方案中，Ang2MRD和HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上。在一些实施方案中，Ang2MRD和HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的重链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上并且HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的重链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗ErbB2抗体的重链上并且HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗ErbB2抗体的重链的N末端上并且HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的轻链的C末端上。在一些实施方案中，HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的重链的N末端上并且Ang2MRD处在抗ErbB2抗体的轻链的C末端上。本发明也涵盖多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述组合物包含靶向HER2/3的抗体、靶向ErbB2的MRD和靶向Ang2的MRD；和多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述组合物包含靶向Ang2的抗体、靶向ErbB2的MRD和靶向HER2/3的MRD。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向ErbB2、HER2/3和IGF1R。在一些实施方案中，含有MRD的抗体包含靶向ErbB2的抗体、靶向HER2/3的MRD和靶向IGF1R的MRD。在一些实施方案中，HER2/3MRD和IGF1R MRD与抗ErbB2抗体上的相同位置连接。在一些实施方案中，HER2/3MRD和IGF1R MRD与抗ErbB2抗体上的不同位置连接。在一些实施方案中，HER2/3MRD和 IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上。在一些实施方案中，HER2/3MRD和IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的重链上。在一些实施方案中，HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上并且IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的重链上。在一些实施方案中，HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的重链上并且IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上。在一些实施方案中，HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的重链的N末端上并且IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的轻链的C末端上。在一些实施方案中，IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的重链的N末端上并且HER2/3MRD处在抗ErbB2抗体的轻链的C末端上。本发明也涵盖多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述组合物包含靶向HER2/3的抗体、靶向ErbB2的MRD和靶向IGF1R的MRD；和多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，所述组合物包含靶向IGF1R的抗体、靶向ErbB2的MRD和靶向HER2/3的MRD。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向ErbB2、Ang2、HER2/3和IGF1R。在一些实施方案中，含有MRD的抗体包含靶向ErbB2的抗体、靶向Ang2的MRD、靶向HER2/3的MRD和靶向IGF1R的MRD。在一些实施方案中，Ang2MRD、HER2/3MRD和IGF1R MRD与抗ErbB2抗体的相同链连接。在一些实施方案中，Ang2MRD、HER2/3MRD和IGF1R MRD与抗ErbB2抗体的不同链连接。在一些实施方案中，Ang2MRD、HER2/3MRD和IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的轻链上。在一些实施方案中，Ang2MRD、HER2/3MRD和IGF1R MRD处在抗ErbB2抗体的重链上。在一些实施方案中，Ang2MRD、HER2/3MRD和IGF1R MRD与抗ErbB2抗体的相同末端连接。在一些实施方案中，Ang2MRD、HER2/3MRD和IGF1R MRD与抗ErbB2抗体的不同末端连接。本发明也涵盖多价和多特异性组合物(例如，含有MRD)，所述组合物包含靶向HER2/3的抗体、靶向ErbB2的MRD、靶向Ang2的MRD和靶向IGF1R的MRD；多价和多特异性组合物(例如，含有 MRD))，所述组合物包含靶向Ang2的抗体、靶向ErbB2的MRD、靶向HER2/3的MRD和靶向IGF1R的MRD；和多价和多特异性组合物(例如，含有MRD))，所述组合物包含靶向IGF1R的抗体、靶向ErbB2的MRD、靶向HER2/3的MRD和靶向Ang2的MRD。 
在一些实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗ErbB2抗体同时结合至ErbB2和Ang2。在一些实施方案中，与结合IGF1R的MRD有效连接的抗ErbB2抗体同时结合至ErbB2和IGF1R。在一些实施方案中，与结合HER2/3的MRD有效连接的抗ErbB2抗体同时结合至ErbB2和HER2/3。在一些实施方案中，与Ang2MRD、IGF1R MRD和/或HER2/3MRD有效连接的抗ErbB2抗体同时结合至ErbB2、Ang2、IGF1R和/或HER2/3。在一些实施方案中，与结合Ang2、IGF1R和/或HER2/3的MRD有效连接的抗ErbB2抗体显示出ADCC活性。在另外的实施方案中，与结合Ang2、IGF1R和/或HER2/3的MRD有效连接的抗ErbB2抗体下调Akt信号传导。在另外的实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗ErbB2抗体抑制Ang2与TIE2结合。在另外的实施方案中，与结合IGF1R的MRD有效连接的抗-ErbB2抗体下调IGF1R信号传导。在另外的实施方案中，与结合Ang2、IGF1R和/或HER2/3的MRD有效连接的抗ErbB2抗体抑制细胞增殖。在另外的实施方案中，与结合Ang2、IGF1R和/或HER2/3的MRD有效连接的抗ErbB2抗体抑制肿瘤生长。 
在特定的实施方案中，含有MRD的抗体靶向VEGF和血管生成性因子。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体靶向VEGF和IGF1R。在另一个实施方案中，该抗体靶向VEGF并且至少一个MRD靶向血管生成性因子和/或IGF1R。在一个实施方案中，与贝伐珠单抗相同的VEGF表位结合的抗体与靶向血管生成性因子和/或IGF1R的至少一个MRD有效连接。在一个另外的实施方案中，竞争性抑制贝伐珠单抗结合作用的抗体与靶向血管生成性因子和/或IGF1R的至少一个MRD有效连接。在另外的实施方案中，包含SEQID NOS:78-79的序列的抗体与靶向血管生成性因子和/或IGF1R的至 少一个MRD有效连接。在另外的实施方案中，贝伐珠单抗抗体与靶向血管生成性因子和/或IGF1R的至少一个MRD有效连接。 
在一些实施方案中，与VEGF结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD。在一些实施方案中，与VEGF结合的抗体连接至结合Ang2的MRD，所述MRD与包含SEQ ID NO:8的MRD相同的Ang2表位结合。在一些实施方案中，与VEGF结合的抗体连接至结合Ang2的MRD，所述MRD竞争性抑制包含SEQ ID NO:8的序列的MRD。在一些实施方案中，与VEGF结合的抗体连接至包含SEQ ID NO:8的序列的MRD。 
在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至VEGF的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至VEGF的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至VEGF的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至VEGF的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD直接与结合至VEGF的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD经接头与结合至VEGF的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，与VEGF结合的抗体有效连接至靶向IGF1R的MRD。在一些实施方案中，与VEGF结合的抗体连接至结合IGF1R的MRD，所述MRD与包含SEQ ID NO:14的序列的MRD相同的IGF1R表位结合。在一些实施方案中，与VEGF结合的抗体连接至结合IGF1R的MRD，所述MRD竞争性抑制包含SEQ ID NO:14的序列的MRD。在一些实施方案中，在一些实施方案中，与VEGF结合的抗体连接至包含SEQ ID NO:14的序列的MRD。在一些实施方案中，结合ErbB2的抗体与编码以下序列SLFVPRPERK(SEQ ID NO:103)的MRD连接。在一些实施方案中，结合ErbB2的抗体与编码以下序列ESDVLHFTST(SEQ ID NO:104)的MRD连接。在一些实施方案中，结合ErbB2的抗体与编码以下序列LRKYADGTL(SEQ ID  NO:105)的MRD连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD与结合至VEGF的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD与结合至VEGF的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD与结合至VEGF的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD与结合至VEGF的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD直接与结合至VEGF的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合IGF1R的MRD经接头与结合至VEGF的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向VEGF、Ang2和IGF1R。在一些实施方案中，含有MRD的抗体包含靶向VEGF的抗体、靶向Ang2的MRD和靶向IGF1R的MRD。在一些实施方案中，Ang2MRD和IGF1R MRD与抗VEGF抗体上的相同位置连接。在一些实施方案中，Ang2MRD和IGF1R MRD与抗VEGF抗体上的不同位置连接。在一些实施方案中，Ang2MRD和IGF1R MRD处在抗VEGF抗体的轻链上。在一些实施方案中，Ang2MRD和IGF1R MRD处在抗VEGF抗体的重链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗VEGF抗体的轻链上并且IGF1R MRD处在抗VEGF抗体的重链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗VEGF抗体的重链上并且IGF1R MRD处在抗VEGF抗体的轻链上。在一些实施方案中，Ang2MRD处在抗VEGF抗体的重链的N末端上并且IGF1R MRD处在抗VEGF抗体的轻链的C末端上。在一些实施方案中，IGF1R MRD处在抗VEGF抗体的重链的N末端上并且Ang2MRD处在抗VEGF抗体的轻链的C末端上。 
在一些实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗VEGF抗体同时结合至抗VEGF和Ang2。在一些实施方案中，与结合IGF1R的MRD有效连接的抗VEGF抗体同时结合至抗VEGF和IGF1R。在 一些实施方案中，与结合Ang2的MRD和结合IGF1R的MRD有效连接的抗VEGF抗体同时结合至VEGF、Ang2和IGF1R。在一些实施方案中，与结合Ang2和/或IGF1R的MRD有效连接抗VEGF抗体显示出ADCC活性。在另外的实施方案中，与结合Ang2和/或IGF1R的MRD有效连接抗VEGF抗体下调VEGF信号传导。在另外的实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗VEGF抗体抑制Ang2与TIE2结合。在另外的实施方案中，与结合IGF1R的MRD有效连接的抗VEGF抗体抑制IGF1R信号传导。在另外的实施方案中，与结合Ang2和/或IGF1R的MRD有效连接抗VEGF抗体抑制细胞增殖。在另外的实施方案中，与结合Ang2和/或IGF1R的MRD有效连接抗VEGF抗体抑制肿瘤生长。 
在一些实施方案中，抗ErbB2抗体或VEGF抗体含有抑制培妥珠单抗与ErbB2结合的MRD。在一些实施方案中，抗ErbB2抗体含有至少一个与Ang2或IGF1R结合的MRD和抑制培妥珠单抗与ErbB2结合的MRD的一个MRD。在一些实施方案中，抗VEGF抗体含有至少一个与Ang2或IGF1R结合的MRD和抑制培妥珠单抗与ErbB2结合的MRD的一个MRD。在一些实施方案中，抗ErbB2抗体含有结合Ang2的MRD、结合IGF1R的MRD和抑制培妥珠单抗与ErbB2结合的MRD。在一些实施方案中，抗VEGF抗体含有结合Ang2的MRD、结合IGF1R的MRD和抑制培妥珠单抗与ErbB2结合的MRD。 
在特定的实施方案中，含有MRD的抗体靶向TNF和血管生成性因子。在另一个实施方案中，该抗体靶向TNF，并且至少一个MRD靶向血管生成性因子。在一个实施方案中，与阿达木单抗相同的TNF表位结合的抗体与靶向血管生成性因子的至少一个MRD有效连接。在在一个另外的实施方案中，竞争性抑制阿达木单抗结合作用的抗体与靶向血管生成性因子的至少一个MRD有效连接。在另外的实施方案中，包含SEQ ID NOS:80-85的序列的抗体与靶向血管生成性因子的至少一个MRD有效连接。在另外的实施方案中，阿达木单抗抗体 与靶向血管生成性因子的至少一个MRD有效连接。在一个实施方案中，与戈利木单抗相同的TNF表位结合的抗体与靶向血管生成性因子的至少一个MRD有效连接。在在一个另外的实施方案中，竞争性抑制戈利木单抗结合作用的抗体与靶向血管生成性因子的至少一个MRD有效连接。在另外的实施方案中，戈利木单抗抗体与靶向血管生成性因子的至少一个MRD有效连接。 
在一些实施方案中，与TNF结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD。在一些实施方案中，与TNF结合的抗体连接至结合Ang2的MRD，所述MRD与包含SEQ ID NO:8的MRD相同的Ang2表位结合。在一些实施方案中，与TNF结合的抗体连接至结合Ang2的MRD，所述MRD竞争性抑制包含SEQ ID NO:8的序列的MRD。在一些实施方案中，与TNF结合的抗体连接至包含SEQ ID NO:8的序列的MRD。 
在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至TNF的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至TNF的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至TNF的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD与结合至TNF的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD直接与结合至TNF的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合Ang2的MRD经接头与结合至TNF的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗TNF抗体同时结合至TNF和Ang2。在一些实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗TNF抗体显示出ADCC活性。在另外的实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗TNF抗体抑制TNF与p55和p75细胞表面结合。在另外的实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗TNF抗体在体外于补体存在的情况下裂解表面表达TNF的细胞。在另外的实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗TNF 抗体抑制Ang2与TIE2结合。在另外的实施方案中，与结合Ang2的MRD有效连接的抗TNF抗体减少关节炎的体征和症状。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向TNF和IL6。在一些实施方案中，含有MRD的抗体能够同时结合TNF和IL6。因此，在一些实施方案中，与TNF结合的抗体有效连接至靶向IL6的MRD。在其他实施方案中，与IL6结合的抗体有效连接至靶向TNF的MRD。 
在一些实施方案中，至少一个结合IL6的MRD与结合TNF的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IL6的MRD与结合至TNF的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IL6的MRD与结合至TNF的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合IL6的MRD与结合至TNF的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD与结合IL6的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD与结合至IL6的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD与结合至IL6的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD与结合至IL6的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合IL6的MRD直接与结合至TNF的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合IL6的MRD经接头与结合至TNF的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD直接与结合至IL6的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合TNF的MRD经接头与结合至IL6的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向TNF和BLyS。在一些实施方案中，含有MRD的抗体能够同时结合TNF和BLyS。在一些实施方案中，与TNF结合的抗体有效连接至靶向BLyS的MRD。在其他实施方案中，与BLyS结合的抗体有效连接至靶向TNF的MRD。 
在一些实施方案中，至少一个结合BLyS的MRD与结合TNF的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合BLyS的MRD与结合至TNF的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合BLyS的MRD与结合至TNF的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合BLyS的MRD与结合至TNF的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD与结合BLyS的抗体的重链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD与结合至BLyS的抗体的重链的N末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD与结合至BLyS的抗体的轻链的C末端有效连接。在一些实施方案中，至少一个结合TNF的MRD与结合至BLyS的抗体的轻链的N末端有效连接。 
在一些实施方案中，至少一个结合BLyS的MRD直接与结合至TNF的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合BLyS的MRD经接头与结合至TNF的抗体有效连接。 
在其他实施方案中，至少一个结合TNF的MRD直接与结合至BLyS的抗体有效连接。在另外的实施方案中，至少一个结合TNF的MRD经接头与结合至BLyS的抗体有效连接。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向Ang2、TNF和IL6。在一些实施方案中，含有MRD的抗体能够同时结合Ang2、TNF和IL6。在一些实施方案中，与TNF结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD和靶向IL6的MRD。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD和结合IL6的MRD位于相同的抗体链上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD和结合IL6的MRD位相同抗体的末端上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD和结合IL6的MRD位于不同的抗体链上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD和结合IL6的MRD位于不同抗体的末端上。 
在一些实施方案中，与Ang2结合的抗体有效连接至靶向TNF的MRD和靶向IL6的MRD。在一些实施方案中，结合TNF的MRD 和结合IL6的MRD位于相同的抗体链上。在一些实施方案中，结合TNF的MRD和结合IL6的MRD位于相同的抗体末端上。在一些实施方案中，结合TNF的MRD和结合IL6的MRD位于不同的抗体链上。在一些实施方案中，结合TNF的MRD和结合IL6的MRD位于不同抗体的末端上。 
在一些实施方案中，与IL6结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD和靶向TNF的MRD。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD和结合TNF的MRD位于相同的抗体链上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD和结合TNF的MRD位相同抗体的末端上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD和结合TNF的MRD位于不同的抗体链上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD和结合TNF的MRD位于不同抗体的末端上。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向Ang2、TNF和BLyS。在一些实施方案中，含有MRD的抗体能够同时结合Ang2、TNF和BLyS。在一些实施方案中，与TNF结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD和靶向BLyS的MRD。在其他实施方案中，与BLyS结合的抗体有效连接至靶向TNF的MRD和靶向Ang2的MRD。在其他实施方案中，与Ang2结合的抗体有效连接至靶向TNF的MRD和靶向BLyS的MRD。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD、结合BLyS的MRD和/或结合TNF的MRD位于相同的抗体链上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD、结合BLyS的MRD和/或结合TNF的MRD位于相同的抗体末端上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD、结合BLyS的MRD和/或结合TNF的MRD位于不同的抗体链上。在一些实施方案中，结合Ang2的MRD、结合BLyS的MRD和/或结合TNF的MRD是位于不同抗体的末端上。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体靶向Ang2、TNF、IL6、和BLyS。在一些实施方案中，含有MRD的抗体能够同时结合Ang2、TNF、IL6和BLyS。在一些实施方案中，与TNF结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD、靶向IL6的MRD和靶向BLyS的 MRD。在一些实施方案中，与Ang2结合的抗体有效连接至靶向TNF的MRD、靶向IL6的MRD和靶向BLyS的MRD。在一些实施方案中，与IL6结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD、靶向TNF的MRD和靶向BLyS的MRD。在一些实施方案中，与BLyS结合的抗体有效连接至靶向Ang2的MRD、靶向IL6的MRD和靶向TNF的MRD。在一些实施方案中，结合TNF的MRD、结合Ang2的MRD、结合IL6和/或结合BLyS的MRD位于相同的抗体链上。在一些实施方案中，结合TNF的MRD、结合Ang2的MRD、结合IL6和/或结合BLyS的MRD位于相同的抗体末端上。在一些实施方案中，结合TNF的MRD、结合Ang2的MRD、结合IL6和/或结合BLyS的MRD位于不同的抗体链上。在一些实施方案中，结合TNF的MRD、结合Ang2的MRD、结合IL6和/或结合BLyS的MRD位于不同抗体的末端上。 
VI.制备抗体-MRD融合物的方法 
本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)和MRD可以通过本领域已知用于合成抗体、多肽、免疫缀合物和细胞毒素的任何方法产生，特别地通过化学合成或通过重组表达技术产生。多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的优点是，可以使用本领域已知的用于产生抗体的方案产生它们。抗体-MRD融合分子可以由包含核苷酸序列的多核苷酸编码。因而，本文所述的多核苷酸可以编码MRD、抗体重链、抗体轻链、包含抗体重链和至少一个MRD的融合蛋白和/或包含抗体轻链和至少一个MRD的融合蛋白。 
因此，本发明提供了包含编码多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的多核苷酸序列的载体构建体)和包含这些载体构建体的宿主细胞。用于克隆和转化的标准技术可以用于制备表达本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的细胞系。 
可以使用熟知的技术制备重组表达载体，所述重组表达载体含有编码本发明多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的多核苷酸序列。表达载体包含与合适的转录或翻译性调节核苷酸序列(如源自 哺乳动物基因、微生物基因、病毒基因或昆虫基因的那些)有效连接的多核苷酸编码序列。在表达载体构建体中存在的示例性调节序列包括启动子(如转录启动子、组成型启动子，诱导型启动子)、操纵基因或增强子、mRNA核糖体结合位点和/或控制转录及翻译起始与终止的适宜序列。当调节序列功能地与适宜多肽的核苷酸序列相关时，核苷酸序列“有效地连接”。因此，例如，如果某启动子核苷酸序列控制适宜核苷酸序列的转录，则该启动子与抗体重链-MRD序列有效连接。 
表达载体中的多核苷酸编码序列可以包括另外的异源序列，所述异源序列编码不与抗体重链和/或轻链序列天然连接的多肽，如信号肽。例如，信号肽(分泌前导序列)的核苷酸序列可以符合可读框地与多肽序列融合，从而含有MRD的抗体分泌至周质间隙中或分泌至培养基中。在预期宿主细胞中有功能的信号肽增强适宜抗体的胞外分泌。一旦抗体从细胞分泌，信号肽可以从多肽中切除。可以在表达载体中包括的编码分泌信号的序列的例子包括例如在美国专利号5,698,435、5,698,417和6,204,023中描述的那些。 
多种宿主-表达载体体系可以用来达含有MRD的抗体的编码序列。 
可用于本发明中的宿主细胞包括包括但不限于用含有抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的微生物如细菌(例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia))；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染或用重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞系统，其中所述表达载体包含了含有MRD的抗体的编码序列。在具体的实施方案中，哺乳动物细胞系统用来产生本发明的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。哺乳动物细胞体系一般利用含有源自哺乳动物细胞基因组的启动子(例如，金属硫蛋白启动子)或源自哺乳动物病毒的启动子(例如，腺病毒晚期启 动子；痘苗病毒7.5K启动子)的重组表达构建体。可用于产生本发明的多价和多特异性组合物的哺乳动物宿主细胞的例子包括CHO细胞、BHK细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、YO骨髓瘤细胞、P3X63小鼠骨髓瘤细胞、PER细胞、PER.C6细胞、COS细胞、293细胞、3T3细胞和杂交瘤细胞。 
含有编码本发明多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)或其部分或片段的多核苷酸的载体包括质粒载体、单链和双链噬菌体载体，以及单链和双链RNA病毒载体或DNA病毒载体。使用将DNA和RNA引入细胞的已知技术，可以将载体常规地引入宿主细胞中。噬菌体和病毒载体也可以使用已知感染和转导技术，将噬菌体载体和病毒载体以包装或衣壳化的病毒形式引入宿主细胞中。另外，病毒载体可以是能够复制的或可选地是复制缺陷的。可选地，利用源自本发明的DNA表达构建体的RNA，无细胞翻译系统也可以用来产生蛋白质(见，例如国际申请公开号WO86/05807和WO89/01036；和美国专利号5,122,464)。 
本文中还提供产生含有MRD的抗体的方法，所述方法包括：将包含一个或多个多核苷酸或表达载体的宿主细胞在培养基中，在允许表达所述一个或多个多核苷酸的条件下培养，所述多核苷酸或表达载体包含一个或多个分离的多核苷酸，其中所述一个或多个多核苷酸编码一种或多种多肽，所述形成形成含有MRD的抗体的部分；并且回收所述含有MRD的抗体。 
可用作产生本发明组合物(例如，MRD)的宿主细胞的原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物，如大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。用于原核宿主细胞中的表达载体通常含有一个或多个表型选择标记基因(例如，编码赋予抗生素耐药性或供应自养要求的蛋白质的基因)。可用的原核宿主表达载体的例子包括pKK223-3(Pharmacia,Uppsala,瑞典),pGEM1(Promega,Wis.,USA)、pET(Novagen,Wis.,USA)和pRSET(Invitrogen,Calif.,USA)系列载体(见，例如，Studier,J.Mol.Biol.219:37(1991)和Schoepfer,Gene124:83(1993))。原核宿主细胞 表达载体中频繁使用的示例性启动子序列包括T7(Rosenberg等人,Gene56:125-135(1987))、β-内酰胺酶(青霉素酶)、乳糖启动子系统(Chang等人,Nature275:615(1978))；和Goeddel等人,Nature281:544(1979))、色氨酸(trp)启动子系统(Goeddel等人,Nucl.Acids Res.8:4057,(1980))和tac启动子(Sambrook等人,1990,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,第2版,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.)。 
在可选实施方案中，可以使用真核宿主细胞系统，包括用重组酵母表达载体(如，在美国专利申请号60/344,169和WO03/056914(用于在非人类真核宿主细胞中产生人样糖蛋白的方法)中教导的表达系统)转化的酵母细胞，所述重组酵母表达载体含有本发明的含有MRD的抗体的编码序列(所述文献的每一篇的内容通过引的用方式完整并入本文)。可以用来产生本发明组合物(如，MRD)的示例性酵母包括来自酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、放线菌属(Actinomycetes)和克鲁维酵母属(Kluyveromyces)的酵母。酵母载体一般含有来自2μ酵母质粒的复制起点序列、自主复制序列(ARS)、启动子区、多聚腺苷化序列、转录终止序列和择标记基因。酵母表达构建体中的启动子序列的例子包括来自金属硫蛋白、3-磷酸甘油酸激酶(Hitzeman等人,J.Biol.Chem.255:2073,(1980))和其他糖酵解酶如烯醇化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖激酶基因的启动子。在酵母表达以及酵母转化操作方案中使用的另外的合适载体和启动子是本领域已知的。见，例如，Fleer等人,Gene,107:285-195(1991)和Hinnen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,75:1929(1978)。 
昆虫和植物宿主细胞培养物系统也可用于产生本发明的组合物。这类宿主细胞系统包括例如，用包含了含有MRD的抗体的编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒、CaMV；烟草花叶病毒、TMV) 感染或用重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化的植物细胞体系，所述表达载体包含了含有MRD的抗体的编码序列，包括但不限于在美国专利号6,815,184、WO2004/057002、WO2004/024927、美国专利申请号60/365,769、60/368,047和WO2003/078614中教导的表达系统，所述文献每一篇的内容通过引用的方式完整并入本文。 
在替代实施方案中，可以使用其他的真核宿主细胞系统，包括用重组病毒表达载体(例如，腺病毒，痘苗病毒)感染的动物细胞体系，包括经工程化以含有多个拷贝的编码含有MRD的抗体的DNA的细胞系，所述DNA在双微染色体中稳定扩增(CHO/dhfr)或不稳定扩增(例如，鼠细胞系)。在一个实施方案中，包含编码本发明的含有MRD的抗体的多核苷酸的载体是多顺反子的。 
可用于产生这些组合物的示例性哺乳动物细胞包括293细胞(例如，293T和293F)、CHO细胞、BHK细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、YO骨髓瘤细胞、P3X63小鼠骨髓瘤细胞、PER细胞、PER.C6(Crucell，荷兰)细胞或杂交瘤细胞、其他哺乳动物细胞。可用于实施本发明的另外的示例性哺乳动物宿主细胞包括但不限于VERY、Hela、COS、MDCK、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20和T47D、CRL7O3O和HsS78Bst细胞。表达系统和选择方法的一些例子在以下文献和其中引用的参考文献中描述：Borth等人,Biotechnol.Bioen.71(4):266-73(2000-2001),in Werner等人,Arzneimittelforschung/Drug Res.48(8):870-80(1998),引自Andersen和Krummen,Curr.Op.Biotechnol.13:117-123(2002),引自Chadd和Chamow,Curr.Op.Biotechnol.12:188-194(2001),并且引自Giddings,Curr.Op.Biotechnol.12:450-454(2001)。表达系统和选择方法的另外例子在Logan和Shenk,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:355-359(1984),Bittner等人,Methods in Enzymol.153:51-544(1987))中描述。用于哺乳动物宿主细胞表达载体的转录和翻译控制序列经常源自病毒基因组。在哺乳动物表达载体中常使用的启动子序列和增强子序列包括源自多瘤病毒、腺病毒2、猴病毒40(SV40)和人巨细胞病毒(CMV)的序 列。用于哺乳动物宿主细胞中的示例性市售表达载包括pCEP4和pcDNA3
Figure BDA0000457457350001892
许多选择体系可以用于哺乳动物宿主-载体表达系统中，包括但不限于可以分别用于tk、hgprt-或aprt-细胞中的单纯疱疹病毒胸苷激酶、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy等人,Cell22:817(1980))基因。另外，抗代谢物抗性可以用作选择例如dhfr、gpt、neo、hygro、trpB、hisD、ODC(鸟氨酸脱羧酶)和谷氨酰胺合酶系统的基础。 
本领域技术人员熟知的方法可以用来构建体表达载体，所述表达载体含有含有MRD的抗体的编码序列，连同适宜的转录/翻译控制信号。这些方法包括体外重组DNA技术，合成技术和体内重组/遗传重组。见，例如在中描述的技术Maniatis等人,MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL,Cold Spring Harbor Laboratory,N.Y.(1989)和Ausubel等人,CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,Greene Publishing Associates and Wiley Interscience,N.Y(1989)。 
多种宿主-表达载体体系可以用来达含有MRD的抗体的编码序列。可以选择宿主细胞株系，所述宿主细胞株系以所需的特定方式调节插入的抗体序列表达或者修饰及加工抗体基因产物。蛋白质产物的这类修饰(例如，糖基化)和加工(例如，裂解)可能对蛋白质的功能是重要的。不同宿主细胞具有用于翻译后加工和修饰蛋白质和基因产物的特征性和特定机制。可以选择适宜的细胞系或宿主体系以确保正确修饰和加工表达的抗体或其部分。为此目的，可以使用拥有正确加工初级转录物、糖基化和磷酸化基因产物的细胞装置的真核宿主细胞。 
稳定表达一般比瞬时表达实现更可重复的结果并且也更可操作用于大规模生产；然而，确定瞬时表达在特定情况下是否更好处于本领域技术人员能力范围内。不使用含有病毒复制起点的表达载体的情况下，宿主细胞可以用相应的编码核酸和选择标记转化，所述编码核酸受适宜的表达控制元件(例如，启动子、增强子、序列、转录终止子、 多聚腺苷化位点等)控制。在引入外来DNA后，可以允许工程化的细胞在丰富培养基中生长1-2日并随后转换成选择性培养基。重组质粒中的选择标记赋予针对选择作用的抗性并且允许选择已经使质粒稳定集成至它们的染色体中并且生长以形成灶团的细胞，所述细胞转而可以克隆并扩充成细胞系。 
在一些实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以与抗体可比的水平(滴度)表达。在一些实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以至少约10μg/ml、至少约20μg/ml或至少约30μg/mL表达。在一些实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以至少约40μg/ml或至少约50μg/ml表达。在一些实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以至少约60μg/ml、至少约70μg/mL、至少约80μg/mL、至少约90μg/ml、至少约95μg/ml、至少约100μg/ml、至少约110μg/mL、至少约120μg/mL、至少约130μg/mL、至少约140μg/ml、至少约150μg/ml、至少约160μg/ml、至少约170μg/ml、至少约180μg/mL、至少约190μg/ml，或至少约200μg/ml表达。可以通过载体扩增和使用本领域已知的重组方法和工具，包括增强转基因表达的染色质重塑策略，增加抗体分子的表达水平。 
本发明进一步涉及用于调节由宿主细胞产生的含有MRD的抗体的糖基化谱的方法，包括在所述宿主细胞中表达编码含有MRD的抗体的核酸和编码具有糖基转移酶活性的多肽的核酸或包含这类核酸的载体。具有糖基转移酶活性的基因包括β(1,4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTII)、α-甘露糖苷酶II(ManII)、β(1,4)-半乳糖基转移酶(GalT)、β(1,2)-N-乙酰葡糖胺基转移酶I(GnTI)和β(1,2)-N-乙酰葡糖胺基转移酶II(GnTII)。在一个实施方案中，基因与糖基转移酶活性的组合在宿主细胞中表达(例如，GnTIII和Man II)。同样地，该方法也涵盖在其中糖基转移酶基因已经被破坏或否则失活的宿主细胞(例如，其中已经敲除编码α1-6核芯岩藻糖基转移酶的基因的活性的宿主细胞)中表达编码含有MRD的抗体的一个或多个多核苷酸。在另一个实施方案 中，可以在还表达编码具有GnTIII活性的多肽的多核苷酸的宿主细胞中产生含有MRD的抗体以调节糖基化模式。在一个具体实施方案中，具有GnTIII活性的多肽是包含高尔基体驻留多肽的高尔基体定位结构域的融合多肽。在另一个实施方案中，含有MRD的抗体在表达编码具有GnTIII活性的多肽的多核苷酸的宿主细胞中的表达导致Fc受体结合亲和力增加和效应子功能增加的含有MRD的抗体。因此，在一个实施方案中，本发明涉及宿主细胞，所述宿主细胞包含(a)分离的核酸，其包含编码具有GnTIII活性的多肽的序列；和(b)分离的多核苷酸，其编码本发明的含有MRD的抗体，如，嵌合抗体、灵长类化抗体或人源化抗体。在另一个实施方案中，具有GnTIII活性的多肽是包含GnTIII催化结构域的融合多肽并且高尔基体定位结构域是甘露糖苷酶II的定位结构域。用于产生这类融合多肽和使用它们以产生效应子功能增加的抗体的方法在美国临时专利申请号60/495,142和美国专利申请公开号2004/0241817中公开，所述文献的每一篇通过引用的方式并入本文。 
具有由本发明宿主细胞导致的改变的糖基化的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)一般显示出增加的Fc受体结合亲和力和/或增加的效应子功能，原因在于宿主细胞的修饰(例如，因糖基转移酶基因的表达)。增加的Fc受体结合亲和力可以增加与Fcγ活化受体(如，FcγRIIIa受体)的结合。增加的效应子功能可以是以下一项或多项的增加：增加的抗体依赖的细胞毒性、抗体依赖的细胞的吞噬(ADCP)增加、细胞因子分泌增加、免疫复合物介导的抗原呈递细胞摄入抗原增加、Fc-介导的细胞性细胞毒性增加、与NK细胞的结合增加、与巨噬细胞的结合增加、与多形核细胞(PMN)的结合增加、与单核细胞的结合增加、靶结合的抗体的交联增加、诱导凋亡的直接信号传导增加、树突细胞成熟增加和T细胞致敏增加。 
一旦已经通过重组表达产生了一旦本发明的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，则它可以通过本领域已知用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法来纯化，例如通过层析(例如离子交换层 析、亲和层析（尤其借助在蛋白A之后针对特异性抗原的亲和层析)和筛分柱层析(sizing column chromatography)、离心、差异性溶解，或通过用于纯化蛋白质的任意其他标准技术。在另外的实施方案中，本发明的多价和多特异性组合物或其片段任选地与本文所述的或否则本领域已知的异源多肽序列融合以促进纯化。在另外的实施方案中，多价和多特异性组合物或其片段任选地与本文所述的或否则本领域已知的异源多肽序列融合以促进纯化。更具体地，构思了多价和多特异性组合物的MRD或其他组分的配体(例如，抗体和其他亲和基质)可以用于亲和柱中以便亲和纯化，并且任选地，在最终制备多价和多特异性组合物之前，使用本领域已知的技术从组合物中移除由这些配体结合的多价和单价多特异性组合物的MRD或其他组分。 
VII.抗体-MRD融合物的用途 
本文所述的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可用于多种应用中，包括但不限于治疗性治疗方法，如，癌症治疗。在某些实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可用于抑制肿瘤生长、减少血管新生、减少血管生成、诱导分化、缩减肿瘤体积和/或减少肿瘤的致瘤性。使用方法可以是体外、离体或体内方法。癌症疗法和它们的剂量、施用途径和推荐用法是本领域已知的并且已经在这类文献如Physician's Desk Reference(PDR)中描述。 
PDR公开已经用于治疗各种癌症中的药物的剂量。治疗有效的前述那些化疗药物的给药方案和剂量将取决于正在治疗的特定癌症、疾病程度和本领域熟练医师熟悉的其他因素并且可以由医师决定。PDR的内容明确地通过引用的方式完整地并入本文。2006版Physician's Desk Reference(PDR)公开了沙立度胺(p979-983)、
Figure BDA0000457457350001921
(p2102-2106)和美法仑(p976-979)的作用机制和优选的治疗剂量和给药方案。 
多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以符合良好医学规范的方式配制。在这种情况下考虑的因素包括正在治疗的具体病症、正在治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床状况、病症原因、送递药 物的部位、施用方法、施用计划和医疗执业者已知的其他因素。用于施用本发明多价和多特异性组合物的剂量范围是大到足以产生所需作用的那些范围，其中由靶分子介导的疾病症状得以改善。剂量不应当如此大，以至于造成不良副作用，如高粘滞综合征、肺水肿、充血性心力衰竭等。总体上，剂量将随变动其中：年龄、状况、性别和患者中疾病的程度且可以由决定本领域技术人员。在任何并发症的情况下，可以由个人医师调节剂量。 
含有溶解或分散于其中的有效成分的药物组合物的制备物是本领域中充分理解的。一般，将这类组合物制备为作为水质或非水质液态溶液或悬液的无菌注射剂。然而，也可以制备在使用之前处于液体中的适用于溶液剂或混悬剂的固态形式。制备物也可以乳化。因而，含有抗体-MRD的组合物可以采取溶液剂、混悬剂，片剂、胶囊剂、持续释放制剂或散剂形式或其他组合物形式。 
在一些实施方案中，配制本发明的组合物(例如，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以确保或优化体内分布。例如，血脑屏障(BBB)排除许多高度地亲水的化合物并且如果需要，则如此制备组合物，从而增加跨BBB转移，例如通过在脂质体中配制。对于制备脂质体的方法，见，例如美国专利号4,522,811；5,374,548；和5,399,331。脂质体可以包含一个或多个被选择性转运至特定细胞或器官中的部分，因而增强靶向的药物递送(见，例如Ranade Clin.Pharmacol.29:685(1989))。 
有效成分可以与赋形剂混合，所述赋形剂是可药用的并且与有效成分相容以及处在适用于本文所述的治疗方法中的量。合适的赋形剂例如是水、盐水、右旋糖、甘油、乙醇等及它们的组合。生理可耐受的运载体是本领域熟知的。同样地，本发明的组合物可以包括其中组分的可药用盐。可药用盐包括与无机酸例如氢氯酸或磷酸或这类有机酸如乙酸、酒石酸、扁桃酸等形成的酸性加成盐(用多肽的游离氨基形成)。与游离羧基形成的盐也可以源自无机碱例如，氢氧化钠、钾、铵、钙或铁和这类有机碱如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普 鲁卡因等。 
液体组合物也可以含有除了水之外并逐出水的液相。这类另外液相的示例性是丙三醇、植物油，如棉籽油、有机酯，如油酸乙酯和水-油乳状液。 
在一个实施方案中，治疗性组合物含有本发明的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)，一般以至少0.1重量%含有MRD的抗体融合物/总治疗性组合物重量的量含有。重量%是含有MRD的抗体/总组合物的比率。因而，例如，0.1重量%是每100克总组合物0.1克含有MRD的抗体。 
含有MRD的抗体以符合良好医学规范的方式配制。在这种情况下考虑的因素包括正在治疗的具体病症、正在治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床状况、病症原因、送递药物的部位、施用方法、施用计划和医疗执业者已知的其他因素。 
有效用于治疗用途和预防用途的剂量方案和量，即，“给药方案”，将取决于多种因素，包含疾病或病症的病因、分期和严重性、正在治疗的哺乳动物的健康、身体状况、年龄和递送含有MRD的抗体的部位和模式。可以通过标准药学、药理学和毒理学方法在细胞培养物或实验动物中确定复合物和制剂的治疗功效和毒性。从这些方法中获得的数据可以同样地用于配制人类使用的剂量范围。另外，使用已知的方法，可以容易地确定治疗指数(即，在50%群体中治疗有效的剂量除以对50%群体致死的剂量(ED50/LD50))。剂量优选地处于毒性低或无毒性情况下包括ED50的浓度范围内，并且可以根据所用的剂型、患者敏感性和施用途径变动。 
剂量方案也考虑本领域已知的药物代谢动力学参数，如，药物吸收速率、生物利用率、代谢和清除率(见，例如Hidalgo-Aragones,J.Steroid Biochem.Mol.Biol.58:611-617(1996)；Groning等人,Pharmazie51:337-341(1996)；Fotherby Contraception54:59-69(1996)；和Johnson等人,J.Pharm.Sci.84:1144-1146(1995))。对于临床医生而言完全在现有技术内部的是为正在治疗的每位受试者确定剂 量方案。另外，单次或多次施用含有组合物的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以实施根据如受试者要求和耐受的剂量和频率。预防性和治疗性治疗的持续时间将根据正在治疗的具体疾病或病状变动。一些疾病可采用急性治疗，而其他需要长期慢性疗法。当采用另外的治疗药治疗时，含有MRD的抗体可以接续施用或与另外的治疗药同时施用。 
治疗有效量的本发明的含有MRD的抗体例如根据含有MRD的抗体的靶和由本发明的多种实施方案涵盖的缀合的细胞毒剂的效力变动。因此，例如，“扫除”可溶性配体(如，TNFα)的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的治疗有效剂量预期高于使T细胞效应子功能重定向至血液恶性肿瘤上的靶的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。同样地，包含类美登素细胞毒剂的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的治疗有效量可能低于包含效力较低的化疗药(如，紫杉酚)的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)或不含细胞毒剂的多价和单价多特异性组合物的对应物的剂量。 
根据一个实施方案，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的治疗有效剂量是选自以下的量：约0.00001mg/kg至约20mg/kg、约0.00001mg/kg至约10mg/kg、约0.00001mg/kg至约5mg/kg、约0.0001mg/kg至约20mg/kg、约0.0001mg/kg至约10mg/kg、约0.0001mg/kg至约5mg/kg、约0.001mg/kg至约20mg/kg、约0.001mg/kg至约10mg/kg和约0.001mg/kg至约5mg/kg患者体重，每日以一个或多个剂量施用，持续一日或几日。 
根据另一个实施方案，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的治疗有效量是这样的量，从而在生理可耐受的组合物中施用时，所述量足以实现约0.1微克(μg)/毫升(ml)至约100μg/ml、约1μg/ml至约5μg/ml和通常约5μg/ml的血浆浓度。换句话说，在另一个实施方案中，该剂量可以从约0.1mg/kg至约300mg/kg、从约0.2mg/kg至约200mg/kg、从约0.5mg/kg至约20mg/kg变动，每日 以一个或多个剂量施用，持续一日或几日。 
在一些实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以约1mg/kg至约50mg/kg、约1mg/kg至约25mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约15mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg或约1mg/kg至约5mg/kg施用。 
在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的剂量施用之间的间隔时间是约每日、一周约2次、约每周、约每隔一周或约每3周。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物首先较高的负荷剂量以施用并随后以较低的维持剂量施用。 
在其他实施方案中，治疗性组合物以至少0.1重量%抗体/治疗性组合物总重量的量包含多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。重量%是抗体/总组合物的比率。因而，例如，0.1重量%是每100克总组合物0.1克抗体-MRD。根据一些实施方案，包含多价和单价多特异性组合物的治疗性组合物含有约10微克(μg)/毫升(ml)至约100毫克(mg)每ml抗体作为每体积组合物的有效成分。在另外的实施方案中，包含多价和单价多特异性组合物的治疗性组合物含有约1mg/ml至约10mg/ml(即，约0.1至1重量%)的抗体作为每体积组合物的有效成分。 
如本文的实施例中所显示，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可以具有与相应抗体相似的PK谱。因而，在一些实施方案中，抗体-MRD以与单独抗体-MRD分子的抗体组分(例如，商业抗体，或其所谓“生物仿制药(biosimilar)”或“完胜生物仿制药(biobetter)”)相同的给药浓度和方案施用。同样地，多价和多特异性组合物可以具有与相应抗体不同的PK谱。例如，在多价和多特异性组合物重定向T细胞反应和/或包含细胞毒剂的实施方案中，给药浓度预期小于相应抗体的给药浓度。在这些情况下，利用本领域已知的因素和标准可以常规地确定用于这些组合物的治疗有效的给药浓度和方案。 
多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)不需要但是任选地随目前用来预防或治疗所讨论病症的一种或多种药物一起配制。此类的其他药物的有效量取决于该制剂中存在的多价和单价多特异性组合物的量、病症类型或疗法和上文讨论的其他因素。 
如上文讨论，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的适宜剂量将取决于如上文定义的待治疗疾病的类型、疾病的严重性和过程、先前治疗、患者的临床史和主治医师的决定。将多价和单价多特异性组合物适当地按一次或经过一系列治疗施用至患者。优选地，通过静脉内输注或通过皮下注射施用多价和单价多特异性组合物。根据一些实施方案，通过注射以肠胃外方式或通过逐步输注随时间推移施用多价和单价多特异性组合物。虽然靶分子一般可以通过全身性施用在身体中获得并且因此最经常通过静脉内施用治疗性组合物进行治疗，但是构思了其他组织和递送装置，其中存在靶向的组织含有靶分子的可能性。因而，多价和单价多特异性组合物可以静脉内、腹内、肌内、皮下、腔内、经皮施用，并且可以通过蠕动装置递送。多价和多特异性组合物也可以通过气溶胶递送至气道和肺。在一些实施方案中，通过静脉内输注施用抗体-MRD分子。在一些实施方案中，通过皮下注射施用抗体-MRD分子。 
可以常规地静脉内施用含有多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的治疗性组合物，例如，如通过注射单位剂量。如本文所用的单位剂量形式指适合作为单一剂量用于患者的物理分立单元；每个单元含有预定量的活性物质，所述的预定量经计算与所要求的稀释剂(即，运载体或溶媒)结合时产生所需的治疗效果。在一个具体实施方案中，皮下施用含有人单克隆抗体或多肽的治疗性组合物。 
本发明的组合物以相容于剂型的方式并以治疗有效量施用待施用的量取决于待治疗的患者、患者的系统用利用有效成分的能力和所需治疗作用程度。要求施用的有效成分的精确量取决于执业者的判断并且对每位个体是特定的。然而，用于全身性应用的合适剂量范围在本文中公开并取决于施用途径。合适施用方案也是可变的，但是一般为 初始施用，随后以一小时或多小时间隔时间通过后续注射重复给药或其他施用。可选地，构思了连续静脉内输注，其足以在血液中的浓度维持处于体内疗法所规定的范围内。 
某些实施方案提供用于治疗或预防疾病、病症或损伤的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量或预防有效量的抗体-MRD分子。在一些实施方案中，该疾病、病症或损伤是癌症。在其他实施方案中，疾病、病症或损伤是免疫系统疾病或病症，如，炎症或自身免疫性疾病。 
多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)预期具有与含有MRD的抗体中所含有的抗体在单独施用时至少相同的治疗功效。因此，构思可以将多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者以治疗或预防疾病、病症或损伤，其中对于所述疾病、病症或损伤，含有MRD的抗体中所含有的抗体或按照与含有MRD的抗体中所含抗体相同的方式发挥作用的抗体在治疗或预防这类疾病、病症或损伤中显示合理相关的有益活性。这种有益活性可以在体外、在体内动物模型中或在人临床试验中展示。在一个实施方案中，将含有MRD的抗体施用至患者以治疗或预防疾病、病症或损伤，其中对于所述疾病、病症或损伤，含有MRD的抗体的抗体组分或按照与含有MRD的抗体中所含抗体相同的方式发挥作用的抗体在体外或在动物模型中显示治疗功效或预防功效。在另一个实施方案中，将含有MRD的抗体施用至患者以治疗或预防疾病、病症或损伤，其中对于所述疾病、病症或损伤，含有MRD的抗体的抗体组分或按照与含有MRD的抗体中所含抗体相同的方式发挥作用的抗体在人类中显示治疗功效或预防功效。在一个实施方案中，将含有MRD的抗体施用至患者以治疗或预防疾病、病症或损伤，其中对于所述疾病、病症或损伤，含有MRD的抗体的抗体组分或按照与含有MRD的抗体中所含抗体相同的方式发挥作用的抗体已经由管理机关批准用于这类治疗或预防中。 
在一个实施方案中，将含有MRD的抗体与另一种治疗药组合施 用至患者以治疗或预防疾病、病症或损伤，其中对于所述疾病、病症或损伤，含有MRD的抗体的抗体组分或按照与含有MRD的抗体中所含抗体相同的方式发挥作用的抗体，与该治疗药或按照与联合治疗药相同的方式发挥作用的不同治疗药组合时，在体外或在动物模型中显示治疗功效或预防功效。在一个实施方案中，将含有MRD的抗体与另一种治疗药组合施用至患者以治疗或预防疾病、病症或损伤，其中对于所述疾病、病症或损伤，含有MRD的抗体的抗体组分或按照与含有MRD的抗体中所含抗体相同的方式发挥作用的抗体，与该治疗药或按照与联合治疗药相同的方式发挥作用的不同治疗药组合时，在人类中显示治疗功效或预防功效。在一个实施方案中，将含有MRD的抗体与另一种治疗药组合施用至患者以治疗或预防疾病、病症或损伤，其中对于所述疾病、病症或损伤，含有MRD的抗体的抗体组分或按照与含有MRD的抗体中所含抗体相同的方式发挥作用的抗体，与该治疗药或按照与联合治疗药相同的方式发挥作用的不同治疗药组合时，已经由管理机关批准用于这类治疗或预防中。本发明也涵盖含有MRD的抗体与如上文所述的多于一种治疗药组合的施用。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物促进凋亡、抑制凋亡、促进细胞存活、抑制细胞存活、促进患病或异常细胞的衰老、抑制细胞衰老、促进细胞增殖、抑制细胞增殖、促进细胞区分、抑制细胞分化、促进细胞活化、抑制细胞活化、促进细胞代谢、抑制细胞代谢、促进细胞黏附、抑制细胞黏附、促进细胞细胞周期蛋白或细胞分裂、抑制细胞细胞周期蛋白或细胞分裂、促进DNA复制或修复、抑制DNA复制或修复、促进转录或翻译或抑制转录或翻译。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合，所述组合物施用促进患病或异常的细胞凋亡或衰老。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物激动、拮抗或降低以下项的活性：EGFR、ErbB2、cMET、TNFa、TGFb、整联蛋白αvβ3、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9、TNFR1、 TNFRSF10A(TRAIL R1DR4)、TNFRSF10B(TRAIL R2DR5)、TNF、TRAIL、IFNβ、MYC、Ras、BCR、ABL、JNK、CKH2、CHK1、CDK1、RAC1、MEK、MOS、mTOR、AKT、NFkB、Ikk、IAP1、IAP2、XIAP、b-联蛋白、存活素、HDAC、HSP70、HSP90、蛋白酶体20S、拓扑异构酶1、MDM2、E2F或E2F1。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物抑制细胞存活。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物拮抗或降低以下项的活性：VEGF、VEGFR1、VEGFR2、IGF1R、IGF1、IGF2、PDGF-A、PDGF-B、PDGF-CC、PDGF-C、PDGF-D、PDGFRA、PDGFRB、TFGa、TGFB3、PI3K、TNFSF13B(BLYS)、TNFRSF13C(BAFFR)、JNK、NFKB、SIP、整联蛋白αvβ3或存活素。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物调节细胞增殖。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物拮抗或降低以下项的活性：VEGF、VEGFR、EGFR、ErbB2、NFKB、HIF、MUC1、MUC2或HDAC。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物调节细胞黏附。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物抑制或降低以下项的活性：MMP1、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、PLAU、αvβ1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、αvβ5整联蛋白、TGFb、EPCAM、α1β1整联蛋白、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α2β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、α9β1整联蛋白、α6β4整联蛋白、αMβ2整联蛋白、CEA、L1、Mel-CAM或HIF1。在一个实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物抑制或降低αvβ3整联蛋白、αvβ5整联蛋白或α5β1整联蛋白的活性。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体与MEDI-522(VITAXIN，Abegrin；MedImmune)、ATN-161(Attenuon)、EMD121974(Merck KGaA)、CNTO95(Cenotocor)或伏洛昔单抗(velociximab)(M200，Protein Design Labs)组合施用。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物调节细胞活化。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物促进、抑制降低以下项的活性：CD80、CD86、MHC、PDL2(B7-DC)、B7-H1、B7-H2(ICOSL)、B7-H3、B7-H4、CD28、CTLA4、TCR、PD1、CD80或ICOS。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物调节细胞周期、细胞分裂或有丝分裂。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物拮抗或降低以下项的活性：PI3K、SMO、Ptch、HH、SHH、plk1、plk2、plk3、plk4、aurora A、aurora B、aurora C、CDK1、CDK2、CDK4、CHK1、CHK2、GSK3B、PAK、NEK2A、ROCK2、MDM2、EGF(KSP)、蛋白酶体20S、HDAC或存活素。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物调节DNA复制或修复。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物拮抗或降低以下项的活性：BRCA1、CHK1、CHK2、E2F、E2FL、MDM2、MDM4或PARP1。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物调节转录或翻译。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物拮抗或降低以下项的活性：IGF1R、IGF1、IGF2、PDGFRA、PDGFRB、PDGF-A、PDGF-B、PDGF-CC、PDGF-C、PDGF-D、KIT、MYC、CD28、CDK4、CDK6、mTOR、MDM2、HDAC、E2F、E2F1或HIF1。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物调节移行、侵入或转移。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物抑制或降低以下项的活性：c-MET、RON、CXCR4、PI3K、AKT、MMP2、FN1、CATHD、AMF、αvβ1整联蛋白、αvβ3整联蛋白、αvβ5整联蛋白、TGFb、α1β1整联蛋白、α2β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、α2β1整联蛋白、α5β1整联蛋白、α9β1整联蛋白、α6β4整联蛋白、αMβ2整联蛋白或HIF1。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述组合物调节代谢。在一些实施方案中，含有MRD的抗体与一种化合物组合施用，所述化合物抑制或降低以下项的活性：ErbB2、EGFR、IGF1R、IGF1、IGF2、TGFa、ICOS，PI3K、VEGFR1、VEGFR2，mTOR、HIF1或HDAC。 
根据一个实施方案，含有MRD的抗体与一种或多种蛋白激酶的抑制剂组合施用。在一个实施方案中，该蛋白激酶抑制剂抑制含有MRD的抗体的靶(例如，通过含有MRD的抗体的一个或多个MRD或抗体)。在一个可选实施方案中，该蛋白激酶抑制剂抑制不是含有MRD的抗体的靶的蛋白激酶。在一些实施方案中，该蛋白激酶抑制剂抑制一种蛋白激酶。在其他实施方案中，该蛋白激酶抑制剂抑制多于一种蛋白激酶。 
在一些实施方案中，含有MRD的抗体与蛋白激酶的抑制剂(例如，小分子、抗体等)组合施用，所述蛋白激酶选自：EGFR、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIb)、FGFR3、ErbB2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、Tie-2、PDGFR、PDGFRB、RON和c-Met。在其他实施方案中，该抑制剂抑制不被含有MRD的抗体靶向的蛋白激酶。在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体与一种或多种蛋白激酶的抑制剂组合施用，所述蛋白激酶选自：EGFR、FGFR1(例如，FGFR1-IIIC)、FGFR2(例如，FGFR2-IIIa、FGFR2-IIIb和FGFR2-IIIb)、FGFR3、ErbB2、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、Tie-2、PDGFRA、PDGFRB、FIT3、ALK、RET、Kit、raf、p38、RON、c-Met、PI3K、ERK、FAK、AKT、SYK、JAK1、JAK2、JAK3、TYK2、S1P、FAK、PTK7、PKD1、PKA、PKC、PKG、PRKDC、Pim、CDK、plk、p38MAPK、SRC、ABL、FGR、FYN、HCK、LCK、LYN、YES、EPH4、BMK1、ERK5、mTOR、CHK1、CHK2、CSNK1G1、CSNK1G2、CSNK1G3、GSK3、BTK、JNK、极光激酶、极光激酶A、极光激酶B和极光激酶C。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体与一种蛋白激酶抑制剂组合施用，所述蛋白激酶抑制剂选自甲磺酸伊马替尼(例如，GLEEVECTM)、吉非替尼(例如，IRESSATM，Astra Zeneca)、凡德他尼(例如，ZACTIMATM，Astra Zeneca)、厄洛替尼(例如，TARCEVATM，Genentech/OSI)、舒尼替尼(例如，SUTENTTM，Pfizer)、拉帕替尼(GSK)和索拉非尼(例如，NEXAVARTM，Bayer)。 
在又一个实施方案中，含有MRD的抗体与一种蛋白激酶抑制剂组合施用，所述蛋白激酶抑制剂选自：尼洛替尼(例如，AMN107，Novartis)、达沙替尼(例如，BMS354825，BMS)、ABT-869、博舒替尼(botsutinib)(例如，SKI-606，Wyeth)、西地尼布(cediranib)、多吉美(recentib)、captastatin、AEE788(Novartis)、AZD0530(AstraZeneca)Exel7646/Exel0999Exelixis)、卡博替尼(cabozantinib)(例如，XL184；Exelixis)、XL880/GSK1363089(Exelixis/GSK)、ARQ-197(Arqule和Daiichi Sankyo)、Inno-406(Innovive)、SGS523(SGX)、PF-2341066(Pfizer)、CI-1033(Pfizer)、莫特塞尼(motesanib)(例如，AMG-706，Amgen)、AG-013736(Axitinib)、AMG-705(Amgen)、哌加他尼(OSI/Pfizer)、来他替尼、鲁索利替尼、SB1518、CYT387、LY3009104、TG101348JANEX-1、托法替尼(tofacitinib)(Pfizer)、INCB18424、LFM-A13、帕唑帕尼(例如，GW786034B，GlaxoSmithKline)、GW-572016、EKB-569(Wyeth-Ayerst)、瓦他拉尼(vatalanib)(例如，PTK787/ZK)、AZD2171、MK-0457(VX-680，MERCK)、PHA739358(Nerviano)、木利替尼(mubritinib)(Takeda)、E7080(Eisai)、福他替尼(fostamatinib)(Rigel/AstraZeneca)、SGX523、SNS-032(Sunesis)、XL143、SNS-314(Sunesis)、SU6668(Pfizer)、AV-951(AVEO)、AV-412(AVEO)、tivizanib(AVEO)、PX-866(Oncothyreon)、卡纽替尼(CI-1033)、NSC109555、VRX0466617、UCN-01、CHK2抑制剂II、EXEL-9844、XL844、CBP501、PF-004777736、debromohymerialdisine、Go6976、 AEG3482、西地尼布(cediranib)(例如，RECENTINTM，AstraZeneca)、司马沙尼(semaxanib)(SU5416)、SU5616、CGP、53716、马赛替尼(mastinib)和ZD6474(AstraZeneca)。 
在又一个实施方案中，含有MRD的抗体与一种FGFR蛋白激酶抑制剂组合施用，所述FGFR蛋白激酶抑制剂选自：舒尼替尼、SU5402、PD173074、TKI258(Novartis)、BIBF1120(Boehringer Ingelheim)、布立尼布(brivanib)(BMS-582,664)、E7080(Eisai)和TSU-68(Taiho)。 
在一个另外的实施方案中，含有MRD的抗体与JAK1、JAK2、JAK3或SYK的蛋白激酶抑制剂组合施用。在又一个实施方案中，该蛋白激酶抑制剂选自：来他替尼、托法替尼(tofacitinib)、鲁索利替尼、SB1518、CYT387、LY3009104、TG101348、福他替尼(fostamatinib)、BAY61-3606和舒尼替尼。 
在一个实施方案中，结合ErbB2(HER2)的含有MRD的抗体(例如，通过含有MRD的抗体的一种或多种MRD或抗体结合ErbB2的结合MRD的抗体)与ErbB2的蛋白激酶抑制剂组合施用。在另一个具体实施方案中，基于曲妥珠单抗抗体的含有MRD的抗体与ErbB2的蛋白激酶抑制剂组合施用。在一个实施方案中，结合ErbB2的含有MRD的抗体与拉帕替尼组合施用。在一个具体实施方案中，基于曲妥珠单抗抗体的含有MRD的抗体与拉帕替尼组合施用。在一个实施方案中，结合ErbB2的含有MRD的抗体与舒尼替尼组合施用。在一个具体实施方案中，基于曲妥珠单抗抗体的含有MRD的抗体与舒尼替尼组合施用。在一个实施方案中，结合ErbB2的含有MRD的抗体与来那替尼(neratinib)组合施用。在一个具体实施方案中，基于曲妥珠单抗抗体的含有MRD的抗体与来那替尼组合施用。在一个实施方案中，结合ErbB2的含有MRD的抗体与拉帕替尼组合施用。在一个具体实施方案中，基于曲妥珠单抗抗体的含有MRD的抗体与拉帕替尼组合施用。在一个另外的实施方案中，结合ErbB2(HER2)的含有MRD的抗体与一种蛋白激酶抑制剂组合施用，所述一种蛋白激酶抑 制剂选自：卡纽替尼(GW-572016)、AV-412(AVEO)、替沃扎尼(tivozanib)(AVEO)、凡德他尼(例如，ZACTIMATM，AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、Exel7646/Exel0999(Exelixis)、CI-1033(Pfizer)和EKB-569(Wyeth-Ayerst)。在一个另外的实施方案中，基于曲妥珠单抗抗体的含有MRD的抗体与一种蛋白激酶抑制剂组合施用，所述一种蛋白激酶抑制剂选自：卡纽替尼(GW-572016)、AV-412(AVEO)、替沃扎尼(AVEO)、凡德他尼(例如，ZACTIMATM，AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、Exel7646/Exel0999(Exelixis)、CI-1033(Pfizer)、PX-866(Oncothyreon)和EKB-569(Wyeth-Ayerst)。 
在另一个实施方案中，结合EGFR的含有MRD的抗体(例如，通过含有MRD的抗体的一种或多种MRD或抗体结合EGFR的结合MRD的抗体)与EGFR的蛋白激酶抑制剂组合施用。在另一个具体实施方案中，基于西妥昔单抗抗体的含有MRD的抗体与EGFR的蛋白激酶抑制剂组合施用。在一个实施方案中，结合EGFR的含有MRD的抗体与吉非替尼(例如，IRESSATM，AstraZeneca)组合施用。在一个具体实施方案中，基于西妥昔单抗抗体的含有MRD的抗体与吉非替尼(例如，IRESSATM，AstraZeneca)组合施用。在一个实施方案中，结合EGFR的含有MRD的抗体与厄洛替尼(例如，TARCEVATM，Genentech/OSI)组合施用。在一个具体实施方案中，基于西妥昔单抗抗体的含有MRD的抗体与厄洛替尼(例如，TARCEVATM，Genentech/OSI)组合施用。在一个实施方案中，结合EGFR的含有MRD的抗体与拉帕替尼组合施用。在一个具体实施方案中，基于西妥昔单抗抗体的含有MRD的抗体与拉帕替尼组合施用。在一个实施方案中，结合EGFR的含有MRD的抗体与索拉非尼(例如，NEXAVARTM，Bayer)组合施用。在一个具体实施方案中，基于西妥昔单抗抗体的含有MRD的抗体与索拉非尼(例如，NEXAVARTM，Bayer)组合施用。在另一个实施方案中，结合EGFR的含有MRD的抗体与一种蛋白激酶抑制剂组合施用，所述一种蛋白激酶抑制剂选自：卡纽替尼(GW-572016)、ZD6474、AV-412(AVEO)、替沃扎尼 (tivozanib)(AVEO)、凡德他尼(ZACTIMA，AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、Exel7646/Exel0999(Exelixis)、CI-1033(Pfizer)和EKB-569(Wyeth-Ayerst)。在一个具体实施方案中，基于西妥昔单抗抗体的含有MRD的抗体与一种蛋白激酶抑制剂组合施用，所述一种蛋白激酶抑制剂选自：卡纽替尼(GW-572016)、ZD6474、AV-412(AVEO)、替沃扎尼(AVEO)、凡德他尼(ZACTIMA，AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、Exel7646/Exel0999(Exelixis)、CI-1033(Pfizer)、PX-866(Oncothyreon)和EKB-569(Wyeth-Ayerst)。 
在一个实施方案中，结合VEGFA、VEGFR1或VEGFR2的含有MRD的抗体(例如，通过含有MRD的抗体的一种或多种MRD或抗体结合VEGFR1的结合MRD的抗体)与VEGR1、VEGFR2或VEGFR3的蛋白激酶抑制剂组合施用。在一个实施方案中，结合VEGFA、VEGFR1或VEGFR2的含有MRD的抗体与舒尼替尼、索拉非尼、帕唑帕尼(例如，GW786034B)、AZD2171、瓦他拉尼(vatalanib)、ZD6474、AMG-706或AC013736组合施用。 
在又一个实施方案中，含有MRD的抗体与一种蛋白酶体抑制剂组合施用。在一个具体实施方案中，该抑制剂是硼替佐米(例如，VELCADETM)。在另一个具体实施方案中，该抑制剂是PR-171(Proteolix)。 
在又一个实施方案中，含有MRD的抗体与HDAC抑制剂组合施用。 
在又一个实施方案中，含有MRD的抗体与mTOR抑制剂组合施用。 
在又一个实施方案中，含有MRD的抗体与NFKB抑制剂组合施用。 
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合VEGFA或VEGFR的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一 个MRD的贝伐珠单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗结直肠癌的方法：向患有结直肠癌的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗乳腺癌的方法：向患有乳腺癌的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗非小细胞肺癌的方法：向患有非小细胞肺癌的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗。在其他实施方案中，将治疗有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗施用至患者以治疗转移性结直肠癌、转移性乳腺癌、转移性胰腺癌或转移性非小细胞肺癌。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗癌症的方法：向患有肾细胞癌、多形性胶质母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、肝癌或胰腺癌的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗。 
也涵盖了包含本发明多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)和本发明的另一种治疗药的联合疗法和组合物，以及涵盖使用这些组合物的治疗方法。在其他实施方案中，将本发明的组合物单独或与一种或多种另外的治疗药中组合施用。组合可以同时施用，例如，作为混合物，分别但是同时或并行或依次地施用。这包括其中将组合的药物作为治疗性混合物一起施用的呈递并且也包括其中将组合的药物分别但同时施用(例如，通过进入相同个体的独立静脉内导管(intravenous line))的方法。“组合”施用进一步包括分别施用首先给出的一种治疗性化合物或药物，随后施用第二种。因此，在一个实施方案中，结合VEGFA或VEGFR结合的含有MRD的抗体与5-氟尿嘧啶、卡铂、紫杉醇或干扰素α组合施用。在另一个实施方案中，包含至少一个MRD的贝伐珠单抗与5-氟尿嘧啶、卡铂、紫杉醇或干扰素α组合。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合VEGFA或VEGFR的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一 种治疗黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的来尼珠单抗。 
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合ErbB2(HER2)的含有MRD的抗体。在多种实施方案中，将结合ErbB2的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者，所述患者先前已经显示响应于另一种基于ErbB2的疗法(例如，赫赛汀、化疗和/或放疗法)或据预测响应于另一种基于ErbB2的疗法。在其他实施方案中，将结合ErbB2的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者，所述患者先前已经无法响应于另一种基于ErbB2的疗法或据预测无法响应于另一种基于ErbB2的疗法。 
在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的曲妥珠单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗乳腺癌的方法：向患有乳腺癌的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的曲妥珠单抗。在其他实施方案中，将治疗有效量的包含至少一个MRD的曲妥珠单抗施用至患者以治疗转移性乳腺癌。 
在另一个实施方案中，结合ErbB2(HER2)的含有MRD的抗体与环磷酰胺、紫杉醇、多西紫杉醇、卡铂、蒽环类或类美登素组合施用。在一个具体实施方案中，包含至少一个MRD的曲妥珠单抗与环磷酰胺、紫杉醇、多西紫杉醇、卡铂、蒽环类或类美登素组合施用。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合CD20的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗血液癌的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的利妥昔单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗CD20阳性NHL的方法：向患有CD20阳性NHL的患者施用治疗 有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗CD20阳性CLL的方法：向患有CD20阳性CLL的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗。 
在另一个实施方案中，将治疗有效量的结合CD20的含有MRD的抗体与氟达拉滨、环磷酰胺、FC(氟达拉滨和环磷酰胺)、基于蒽环类的化疗方案(例如，CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松))或CVP(环磷酰胺、泼尼松和长春新碱)化疗组合施用。在另一个实施方案中，将治疗有效量的包含至少一个MRD的贝伐珠单抗与氟达拉滨、环磷酰胺、FC(氟达拉滨和环磷酰胺)、基于蒽环类的化疗方案(例如，CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松))或CVP(环磷酰胺、泼尼松和长春新碱)化疗组合施用。 
含有结合CD20的抗体和/或MRD的任何抗体-MRD融合物可以根据治疗病症的方法使用，所述病症与CD20相关或可以通过靶向表达CD20的细胞予以治疗(例如，血液癌和自身免疫性疾病)。在一些实施方案中，该抗体-MRD-融合物的抗体组分选自利妥昔单抗、奥瑞珠单抗、GA101和PF-5,230,895。 
本发明也提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的含有MRD的抗体。在一些实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合选自以下的靶：CD20、TNFRSF5(CD40)、CD45RB、CD52、CD200、CCR2、PAFR、IL6R、TNFRSF1A、VLA4、CSF2、TNFSF5(CD40配体)、TLR2、TLR4、GPR44、FASL、TREM1、IL1、IL1β、IL1RN、组织因子、MIF、MIP2、IL6、IL8、IL10、IL12、IL13、IL15、IL17、IL18、IL23、TNF、TNFSF12(TWEAK)、LPS、CXCL13、VEGF、IFNα、IFNγ、GMCSF、FGF、TGFb、C5和CCR3。本发明还涵盖了结合2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。 
在具体的实施方案中，本发明也提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的结合TNF和ANG2的含有MRD 的抗体。 
在另外的实施方案中，本发明也提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的结合IL1、IL12和TNF的含有MRD的抗体。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合IL1、IL12、TNF和ANG2。 
在另外的实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合IL1、IL6和TNF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合IL1、IL6、TNF和ANG2。 
靶选自：CD20、TNFRSF5(CD40)、CD45RB、CD52、CD200、CCR2、PAFR、IL6R、TNFRSF1A、VLA4、CSF2、TNFSF5(CD40配体)、TLR2、TLR4、GPR44、FASL、TREM1、IL1、IL1β、IL1RN、组织因子、MIF、MIP2、IL6、IL8、IL10、IL12、IL13、IL15、IL17、IL18、IL23、TNF、TNFSF12(TWEAK)、LPS、CXCL13、VEGF、IFNα、IFNγ、GMCSF、FGF、TGFb、C5和CCR3。本发明还涵盖了结合2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。 
在另外的实施方案中，本发明也提供一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合选自以下的靶：CD1C、CD3、CD4、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD28、CD37、CD38、CD45RB、CD52、CD69、CD72、CD74、CD75、CD79A、CD79B、CD80、CD81、CD83、CD86、CD200、IL2RA、IL1R2、IL6R、VLA4、HLA-DRA、HLA-A、ITGA2、ITGA3、CSF2、TLR2、TLR4、GPR44、TREM1、TIE2、TNF、FASL、组织因子、MIF、MIP2、IL1、IL1β、IL1RN、IL2、IL4、IL6、IL8、IL10、IL11、IL12、IL13、IL15、IL17、IL18、IL23、TNFRSF1A、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF6(Fas，CD95)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF6(Fas配体)、TNFSF8(CD30配体)、TNFSF12(TWEAK)、TNFSF13B(BLyS)、ANG2、ICOSL(B7-H2)、 MS4A1、IFNα、IFNβ1、IFNγ、TNFSF7(CD27配体、CD70)、PAFR、INHA、INHBA、DPP4、NT5E、CTLA4、B7.1/B7.2、LPS、VEGF、GMCSF、FGF、C5、CXCL13、CXCR4、CCR2和CCR3。在其他实施方案中，施用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以治疗类风湿性关节炎并且所述多价和多特异性组合物结合选自以下的靶：CD19、CD20、CD45RB、CD52、CD200、IL1、IL6、IL12、IL15、IL17、IL18、IL23、TNF、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF13B(BLyS)、VEGF、VLA4、IFNγ、IFNα、GMCSF、FGF、C5、CXCL13和CCR2。在另外的实施方案中，施用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以治疗系统性红斑狼疮并且所述多价和多特异性组合物结合IFNα和TNFSF13B(BLyS)。在其他实施方案中，施用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以治疗多发性硬化并且所述多价和多特异性组合物结合选自以下的靶：ANG2、IL1、IL12、IL18、IL23、CXCL13、TNF、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、VEGF、VLA4、TNF、CD45RB、CD200、IFNγ、GM-CSF、FGF、C5、CD52、TNFRSF1A、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF6(Fas配体)、TNFSF8(CD30配体)、TNFRSF21(DR6)、TNFSF12(TWEAK)、TNFSF13B(BLyS)、ANG2、AGE(S100A，amphoterin)、ICOSL(B7-H2)、MS4A1、IFNα、IFNβ1、IFNγ、TNFSF7(CD27配体，CD70)、MCP1、CCR2和CXCL13。本发明还涵盖了结合2、3、4、5种或更多种这些靶的多价和多特异性组合物。 
在又一个实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合CD20的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合CD20的含有MRD的抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种 治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的利妥昔单抗-含有MRD的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的利妥昔单抗-含有MRD的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的利妥昔单抗-含有MRD的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗多发性硬化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的利妥昔单抗-含有MRD的抗体。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的奥瑞珠单抗-含有MRD的抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的奥瑞珠单抗-含有MRD的抗体。在又一个实施方案中，本发明提供一种治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的奥瑞珠单抗-含有MRD的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗多发性硬化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的奥瑞珠单抗-含有MRD的抗体。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的PF5,230,895-含有MRD的抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的PF5,230,895-含有MRD的抗体。在又一个实施方案中，本发明提供一种治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的PF5,230,895-含有MRD的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗多发性硬化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的PF5,230,895-含有MRD的抗体。 
在一些实施方案中，本发明也提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的结合CD20的含有MRD的抗体。在 其他实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合CD20和选自以下的靶：TNF、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF1A、CD45、RB、CD52、CD200、CCR2、PAFR、IL6R、VLA4、CSF2，RAGE、TLR2、TLR4、GPR44、FASL、TREM1、TIE2、组织因子、MIF、MIP2、LPS、IL1、IL1β、IL1RN、IL6、IL6R、IL8、IL10、IL12、IL13、IL15、IL17、IL18、IL23、CXCL13、VEGF，IFNα、IFNγ，GMCSF、FGF、C5和CCR3。本发明还涵盖了结合CD20并且还结合至少1、2、3、4、5种或更多种这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD20。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分是利妥昔单抗、奥瑞珠单抗、GA101或PF-5,230,895。 
在一些实施方案中，本发明也提供一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的结合CD20的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合CD20和选自以下的靶：CD1C、CD3、CD4、CD19、CD21、CD22、CD23、CD24、CD28、CD37、CD38、CD45RB、CD52、CD69、CD72、CD74、CD75、CD79A、CD79B、CD80、CD81、CD83、CD86、CD200、IL2RA、IL1R2、IL6R、VLA4、HLA-DRA、HLA-A、ITGA2、ITGA3、CSF2、TLR2、TLR4、GPR44、TREM1、TIE2、TNF、FASL、组织因子、MIF、MIP2、IL1、IL1β、IL1RN、IL2、IL4、IL6、IL8、IL10、IL11、IL12、IL13、IL15、IL17、IL18、IL23、TIE2、TNFRSF1A、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF6(Fas配体)、TNFSF8(CD30配体)、TNFSF12(TWEAK)、TNFSF13B(BLyS)、ANG2、ICOSL(B7-H2)、MS4A1、IFNα、IFNβ1、IFNγ、TNFSF7(CD27配体、CD70)、PAFR、INHA、INHBA、DPP4、NT5E、CTLA4、B7.1/B7.2、LPS、VEGF、GMCSF、FGF、C5、CXCL13、CXCR4、CCR2和CCR3。在其他实施方案中，施用多价和多特异性 组合物(例如，含有MRD的抗体)以治疗类风湿性关节炎并且所述多价和多特异性组合物结合CD20和选自以下的靶：CD19、CD45RB、CD52、CD200、IL12、IL15、IL17、IL18、IL23、TNF、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、VEGF、VLA4、IFNγ、干扰素α、GMCSF、FGF、C5、CXCL13和CCR2。在其他实施方案中，施用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以治疗多发性硬化并且所述多价和多特异性组合物结合CD20和选自以下的靶：ANG2、IL12、IL18、IL23、CXCL13、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、VEGF、VLA4、TNF、CD45RB、CD200、IFNγ、GM-CSF、FGF、C5、CD52、TIE2、TNFRSF1A、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF6(Fas配体)、TNFSF8(CD30配体)、TNFRSF21(DR6)、TNFSF12(TWEAK)、TNFSF13B(BLyS)、ICOSL(B7-H2)、MS4A1、IFNα、IFNβ1、IFNγ、TNFSF7(CD27配体，CD70)、CCR2和CXCL13。本发明还涵盖了结合1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TNF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分选自利妥昔单抗、奥瑞珠单抗、GA101和PF-5,230,895。 
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合TNF的含有MRD的抗体。在多种实施方案中，将结合TNF的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者，所述患者先前已经显示响应于另一种基于TNF的疗法或据预测响应于另一种基于TNF的疗法(例如，TNF拮抗剂如抗TNF(例如，HUMIRA)、EMBREL、CD28拮抗剂、CD20拮抗剂和IL6/IL6R拮抗剂)。在其他实施方案中，将结合TNF的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者，所述患者先前已经无法响应于另一种基于TNF的疗法或据预测无法响应于另一种基于TNF的疗法。 
在一些实施方案中，本发明也提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的结合TNF的含有MRD的抗体。 
在其他实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合TNF和选自以下的靶：CD20、TNFRSF5(CD40)、CD45RB、CD52、CD200、CCR2、PAFR、IL6R、TNFRSF1A、VLA4、CSF2、TNFSF5(CD40配体)、TLR2、TLR4、GPR44、FASL、TREM1、IL1、IL1β、IL1RN、组织因子、MIF、MIP2、IL6、IL8、IL10、IL12、IL13、IL15、IL17、IL18、IL23、TNFSF12(TWEAK)、LPS、CXCL13、VEGF、IFNγ、GMCSF、FGF、C5和CCR3。本发明还涵盖了结合TNF和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TNF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分选自阿达木单抗、赛妥珠单抗、戈利木单抗和AME-527。 
在一些实施方案中，本发明也提供一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的结合TNF的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合TNF和选自以下的靶：CD1C、CD3、CD4、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD28、CD37、CD38、CD45RB、CD52、CD69、CD72、CD74、CD75、CD79A、CD79B、CD80、CD81、CD83、CD86、CD200、IL2RA、IL1R2、IL6R、VLA4、HLA-DRA、HLA-A、ITGA2、ITGA3、CSF2、TLR2、TLR4、GPR44、TREM1、TIE2、FASL、组织因子、MIF、MIP2、IL1、IL1β、IL1RN、IL2、IL4、IL6、IL8、IL10、IL11、IL12、IL13、IL15、IL17、IL18、IL23、TIE2、TNFRSF1A、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF6(Fas配体)、TNFSF8(CD30配体)、TNFSF12(TWEAK)、TNFSF13B(BLyS)、ANG2、ICOSL(B7-H2)、MS4A1、IFNα、IFNβ1、IFNγ、TNFSF7(CD27配体、CD70)、PAFR、INHA、INHBA、DPP4、NT5E、CTLA4、B7.1/B7.2、LPS、VEGF、GMCSF、FGF、C5、CXCL13、CXCR4、CCR2和 CCR3。在其他实施方案中，施用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以治疗类风湿性关节炎并且所述多价和多特异性组合物结合TNF和选自以下的靶：CD19、CD20、CD45RB、CD52、CD200、IL12、IL15、IL17、IL18、IL23、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF13B(BLyS)、VEGF、VLA4、IFNγ、干扰素α、GMCSF、FGF、C5、CXCL13和CCR2。在其他实施方案中，施用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)以治疗多发性硬化并且所述多价和多特异性组合物结合TNF和选自以下的靶：ANG2、IL12、IL18、IL23、CXCL13、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、VEGF、VLA4、TNF、CD45RB、CD200、IFNγ、GM-CSF、FGF、C5、CD52、TNFRSF1A、TNFRSF5(CD40)、TIE2、TNFRSF6(Fas，CD95)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFSF5(CD40配体)、TNFSF6(Fas配体)、TNFSF8(CD30配体)、TNFRSF21(DR6)、TNFSF12(TWEAK)、TNFSF13B(BLyS)、ICOSL(B7-H2)、MS4A1、IFNα、IFNβ1、IFNγ、TNFSF7(CD27配体、CD70)、CCR2和CXCL13。本发明还涵盖了结合1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TNF。在其他实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分选自阿达木单抗、赛妥珠单抗、戈利木单抗和AME-527。 
在其他实施方案中，将结合TNF的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者，所述患者先前已经显示响应于基于自身免疫性疾病的疗法或据预测响应于自身免疫性疾病的疗法(例如，TNF拮抗剂如抗TNF(例如，
Figure BDA0000457457350002161
Figure BDA0000457457350002162
CD28拮抗剂、CD20拮抗剂、BLyS拮抗剂和IL6/IL6R拮抗剂)。在其他实施方案中，将结合TNF的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者，所述患者先前已经无法响应于另一种基于自身免疫性疾病的疗法或据预测无法响应于另一种基于自身免疫性疾病的疗法。 
在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方 法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的阿达木单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的阿达木单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的阿达木单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的阿达木单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的阿达木单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的阿达木单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的阿达木单抗。 
在一个另外的实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的ATN-103。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的ATN-103。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的ATN-103。在又一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的ATN-103。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个ATN-103的阿达木单抗。在一个另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的 ATN-103。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的ATN-103。 
在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的英夫单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的英夫单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的英夫单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的英夫单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的英夫单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的英夫单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的英夫单抗。 
在一些实施方案中，本发明也提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的结合TNFSF15(TL1A)的含有MRD的抗体。 
在其他实施方案中，施用的含有MRD的抗体结合TL1A和选自以下的靶：TNF、IFNγ、IL1、IL1β、IL6、IL8、IL12、IL15、IL17、IL18、IL23和IL32。本发明还涵盖了结合TL1A和至少1、2、3、4、5个或更多个这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合TL1A。 
在一个另外的实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的 方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合IL22的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的PF5,212,367(ILV-094)。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的PF5,212,367。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的PF5,212,367。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的PF5,212,367。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的PF5,212,367。在又一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的PF5,212,367。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的PF5,212,367。 
在一个另外的实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合α4整联蛋白的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的那他珠单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的那他珠单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的那他珠单抗。在又一个实施方案中，本发明提供一种治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的那他珠单抗-含有 MRD的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗多发性硬化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的那他珠单抗-含有MRD的抗体。在又一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的那他珠单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的那他珠单抗。在一个另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的那他珠单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的那他珠单抗。在一个另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的那他珠单抗。 
在一个另外的实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合TNFSF5(CD40配体)的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的CDP7657。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的CDP7657。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的CDP7657。在又一个实施方案中，本发明提供一种治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的CDP7657-含有MRD的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗多发性硬化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的CDP7657-含有MRD的抗体。在一个实施方案中，本发明提供一 种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的CDP7657。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的CDP7657。在又一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的CDP7657。在一个另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的CDP7657。 
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合TNFSF12(TWEAK)的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体(其已经进入I期临床试验)。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体。在又一个实施方案中，本发明提供一种治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗多发性硬化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体。在一个另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效 量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体。在又一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的Biogen TNFSF12(TWEAK)抗体。 
在一个另外的实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合CD25的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗免疫系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的达克珠单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的达克珠单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的达克珠单抗。在又一个实施方案中，本发明提供一种治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的达克珠单抗-含有MRD的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗多发性硬化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的达克珠单抗-含有MRD的抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的达克珠单抗。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的达克珠单抗。在又一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的达克珠单抗。在一个另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效 量的包含至少一个MRD的达克珠单抗。 
具有结合癌抗原或与癌建立、进展和/或转移相关的其他靶的抗体和/或MRD的抗体-MRD融合蛋白在本文中描述或否则是本领域已知的，并且可以根据本发明的方法用来治疗癌症。在特定的实施方案中，抗体-MRD融合蛋白包含与本文中鉴定的靶结合的抗体和/或MRD。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合EGFR的含有MRD的抗体。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的西妥昔单抗。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗癌症的方法：向患有结直肠癌的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的西妥昔单抗。在其他实施方案中，将治疗有效量的包含至少一个MRD的西妥昔单抗施用至患者以治疗转移性结直肠癌、转移性乳腺癌、转移性胰腺癌或转移性非小细胞肺癌。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗癌症的方法：向患有头部和颈部鳞状细胞癌的患者施用治疗有效量的包含至少一个MRD的西妥昔单抗。 
在另一个实施方案中，治疗有效量的结合EGFR的含有MRD的抗体与依立替康、FOLFIRI、铂基化疗或放射疗法组合施用。在一个具体实施方案中，治疗有效量的包含至少一个MRD的西妥昔单抗与依立替康、FOLFIRI、铂基化疗或放射疗法组合施用。 
在某些实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的本文所述的MRD-抗体。 
在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗实体癌的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的本文所述的结合实体癌的MRD-抗体(例如，结合如本文所述的验证的实体瘤相关靶的MRD-抗体)。 
在一些实施方案中，本发明也提供一种通过以下方式治疗实体癌的方法，施用治疗有效量的MRD-抗体，所述MRD-抗体与选自以下 的成员结合：IGFR1、ALK1、p-钙黏着蛋白，CRYPTO和α5b1整联蛋白。在其他实施方案中，施用的MRD-抗体的抗体组分是选自以下的成员：芬妥木单抗、CP-870893、PF-3,732,010、PF-3,446,962、伏洛西单抗(volociximab)、BIIB022和Biogen CRYPTO抗体。 
在一些实施方案中，本文所述的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可用于治疗癌症。此，在一些实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，所述方法包括向患者患者(例如，要治疗的患者(受试者))施用治疗有效量的含有MRD的抗体。在某些实施方案中，癌症是选自结直肠癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、乳腺癌、脑癌、肾癌、前列腺癌、胃肠道癌、黑色素瘤、宫颈癌、膀胱癌、胶质母细胞瘤和头颈癌的癌。在某些实施方案中，癌症是乳腺癌。在某些实施方案中，患者是人。 
可以用含有MRD的抗体和MRD治疗的癌症或恶性肿瘤的其他例子包括但不限于：儿童急性淋巴性白血病、急性淋巴性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓样白血病、肾上腺皮质癌、成人(原发性)肝细胞癌、成人(原发性)肝癌、成人急性淋巴细胞白血病、成人急性髓样白血病、成人霍奇金病、成人霍奇金淋巴瘤、成人淋巴细胞白血病、成人非霍奇金淋巴瘤、成人原发性肝癌、成人软组织肉瘤、AIDS相关淋巴瘤、AIDS相关恶性肿瘤、直肠癌、星形细胞瘤、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干胶质瘤、脑肿瘤、乳腺癌、肾盂和输尿管癌、中枢神经系统(原发性)淋巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、宫颈癌、儿童(原发性)肝细胞癌、儿童(原发性)肝癌、儿童急性淋巴性白血病、儿童急性髓样白血病、儿童脑干胶质瘤、儿童小脑星形细胞瘤、儿童大脑星形细胞瘤、儿童颅外生殖细胞肿瘤、儿童霍奇金病、儿童霍奇金淋巴瘤、儿童下丘脑和视路胶质瘤、儿童淋巴性白血病、儿童髓母细胞瘤、儿童非霍奇金淋巴瘤、儿童松果体和幕上原发性神经外胚瘤、儿童原发性肝癌、儿童横纹肌肉瘤、儿童软组织肉瘤、儿童视路和下丘脑胶质瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、内分泌胰岛细胞癌、子宫 内膜癌、室管膜瘤、上皮癌、食管癌、Ewing肉瘤和相关的肿瘤、外分泌胰腺癌、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌、女性乳腺癌、Gaucher病、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道肿瘤、生殖细胞肿瘤、卵巢妊娠滋养细胞肿瘤、多毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞癌、霍奇金病、霍奇金淋巴瘤、高丙种球蛋白血症、下咽癌、肠癌、眼球内黑色素瘤、胰岛细胞癌、胰岛细胞胰腺癌、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴细胞增生性疾病、巨球蛋白血症、雄性乳腺癌、恶性间皮瘤、恶性胸腺瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤、转移性隐匿性原发性鳞状颈癌、转移性原发性鳞状颈癌、转移性鳞状颈癌、多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤/浆细胞瘤、骨髓增生异常综合征、髓性白血病、髓样白血病、骨髓增生病、鼻腔及鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤妊娠期间、非黑色素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌、隐匿性原发性转移性鳞状颈癌、口咽癌、骨肉瘤/恶性纤维肉瘤、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤、骨的骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低度潜在恶性肿瘤、胰腺癌、异型蛋白血症、紫癜、甲状旁腺癌、阴茎癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、浆细胞瘤/多发性骨髓瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性肝癌、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌症、肾盂和输尿管癌症、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌症、肉瘤样病肉瘤、Sezary综合征、皮肤癌、小细胞肝癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状颈癌、胃癌、幕上原始神经外胚层和松果体肿瘤、T-细胞淋巴瘤、睾丸癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂及输尿管移行细胞癌、肾盂和输尿管移行癌、滋养细胞瘤、输尿管及肾盂细胞癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、视路和下丘脑胶质瘤、外阴癌、Waldenstrom巨球蛋白血症和Wilm肿瘤。 
在一些实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可用于抑制肿瘤生长。在某些实施方案中，抑制肿瘤生长的方法包括使细胞与含有MRD的抗体在体外接触。例如，将表达MRD靶和/或抗体靶的永生化细胞系或癌细胞系在向其添加含有MRD的抗体 以抑制肿瘤生长的培养基中培养。在一些实施方案中，将肿瘤细胞从患者样品(例如，组织活组织检查样品、胸腔积液或血液样品)分离并且在向其添加含有MRD的抗体以抑制肿瘤生长的培养基中培养。 
在一些实施方案中，抑制肿瘤生长的方法包括使肿瘤或肿瘤细胞与治疗有效量的含有MRD的抗体在体内接触。在某些实施方案中，在动物模型中进行肿瘤或肿瘤细胞接触。例如，可以将多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至免疫受损小鼠(例如，NOD/SCID小鼠)中的异体移植物以抑制肿瘤生长。在一些实施方案中，将癌干细胞从患者样品例如，组织活组织检查样品、胸腔积液或血液样品分离并且注射至免疫受损小鼠中，其中随后向所述免疫受损小鼠施用含有MRD的抗体以抑制肿瘤细胞生长。在一些实施方案中，将含有MRD的抗体在将致瘤细胞引入动物的相同时间或紧随其后施用以阻止肿瘤生长。在一些实施方案中，在致瘤细胞已经生长至指定的尺寸后，将含有MRD的抗体作为治疗药施用。 
在某些实施方案中，抑制肿瘤生长的方法包括向患者(受试者)施用治疗有效量的含有MRD的抗体。在某些实施方案中，患者是人。在某些实施方案中，患者具有肿瘤或已经摘除肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤表达抗体靶。在某些实施方案中，肿瘤过量表达MRD靶和/或抗体靶。 
在某些实施方案中，受抑制的肿瘤生长选自脑肿瘤、结直肠肿瘤、胰肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤、肝脏肿瘤、乳腺肿瘤、肾肿瘤、前列腺肿瘤、胃肠道肿瘤、黑色素瘤、颈部的肿瘤、膀胱肿瘤、胶质母细胞瘤和头颈肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤是乳腺肿瘤。 
在另外的实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可用于减少致瘤性。因而，在一些实施方案中，减少患者中肿瘤的致瘤性的方法包括向患者施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在某些实施方案中，肿瘤包含癌干细胞。在某些实施方案中，癌干细胞在肿瘤中的频率因施用多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)而降低。 
在其他实施方案中，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可用于诊断、治疗或预防免疫系统疾病。在一个实施方案中，免疫系统疾病是炎症或炎性疾病。在一个更具体的实施方案中，炎性疾病选自哮喘、过敏性疾病和类风湿性关节炎。在其他实施方案中，免疫系统疾病是自身免疫性疾病。可以使用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)诊断、治疗或预防的自身免疫病症、疾病或病状包括但不限于自身免疫溶血性贫血、自身免疫新生血小板减少症、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫中性粒细胞减少症、自身免疫性细胞减少症、溶血性贫血、抗磷脂综合征、皮炎、谷蛋白敏感性肠病、变应性脑脊髓炎、心肌炎、复发性多软骨炎、风湿性心脏病、肾小球肾炎(例如，IgA肾病)、多发性硬化、神经炎、葡萄膜炎眼炎、多发内分泌病、紫癜(例如，Henloch-scoenlein紫癜)、莱特尔病、僵人综合征、自身免疫性肺部炎症、心肌炎、IgA肾小球肾炎、致密沉积物病、风湿性心脏病、Guillain-Barre综合征、胰岛素依赖性糖尿病和自身免疫炎性眼、自身免疫性甲状腺炎、甲状腺功能减退症(即，桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、系统性红斑狼疮、盘狼疮、肺出血肾炎综合征、天疱疮、受体自身免疫病例如，(a)Graves病、(b)重症肌无力和(c)胰岛素抵抗、自身免疫溶血性贫血、自身免疫血小板减少性紫癜、类风湿性关节炎、具有抗胶原蛋白抗体的硬皮病、混合型结缔组织病、多发性肌炎/皮肌炎、恶性贫血、特发性阿狄森病、不育、肾小球肾炎，如原发性肾小球肾炎和IgA肾病、大疱性类天疱疮、Sjogren综合征、糖尿病和肾上腺素能耐药(包括肾上腺素能的耐药合并哮喘或囊性纤维化)、慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、其他内分泌腺衰竭、白斑症、血管炎、心肌梗死后、心切开术综合征、荨麻疹、异位性皮炎、哮喘、炎性肌病和其他炎性、肉芽肿、变性病症和萎缩性病症。 
在另一个实施方案中，使用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)诊断、治疗或预防的免疫系统疾病选自：Crohn病、系统性红斑狼疮(SLE)、炎性肠病、银屑病、糖尿病、溃疡性结肠炎、多 发性硬化和类风湿性关节炎。在一个优选实施方案中，自身免疫性疾病是类风湿性关节炎。 
在其他实施方案中，将治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者以治疗代谢性疾病或病症。 
在其他实施方案中，将治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者以治疗心血管疾病或病症。在一个实施方案中，将多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者以治疗血栓形成、动脉粥样硬化、心脏病发作或中风。 
在另一个实施方案中，将治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者以治疗肌肉骨骼疾病或病症。 
在其他实施方案中，将治疗有效量的多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者以治疗骨骼疾病或病症。在一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者以治疗骨质疏松症。 
在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合(1)目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原)和(2)白细胞上的靶，如T-细胞受体分子。根据一个实施方案，该多价和单价多特异性组合物对一种或多种靶的结合在患者中用来指导针对传染因子、细胞、组织或其他目的位置的免疫反应。例如，在一些实施方案中，多价和单价多特异性组合物的MRD结合效应细胞表面上的靶。因而，在一些实施方案中，多价和单价多特异性组合物的MRD结合T细胞表面上的靶。在特定的实施方案中，多价和单价多特异性组合物的MRD结合CD3。在其他实施方案中，多价和单价多特异性组合物的MRD结合CD2。在其他实施方案中，多价和单价多特异性组合物的MRD结合T-细胞受体(TCR)。根据另外的实施方案，多价和单价多特异性组合物的MRD结合天然杀伤细胞上的靶。因而，在一些实施方案中，多价和单价多特异性组合物的MRD结合NKG2D(天然杀伤组2D)受体。在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物的MRD结合CD16(即，FcγRIII)、CD64(即，FcγRI)或CD32(即，FcγRII)。在另 外的实施方案中，多特异性组合物含有针对不同靶的多于一个单特异性结合位点。 
因而，在一些实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合白细胞上的靶和肿瘤细胞上的肿瘤抗原。在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合NKG2D。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合NKG2D和选自ErbB2、EGFR、IGF1R、CD19、CD20、CD80和EPCAM的靶。在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合CD3。在具体的实施方案中，含有MRD的抗体结合CD3ε。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合CD3和选自ErbB2、EGFR、IGF1R、CD19、CD20、CD80和EPCAM的靶。在一些实施方案中，含有MRD的抗体结合CD4。在其他实施方案中，含有MRD的抗体结合CD4和选自ErbB2、EGFR、IGF1R、CD19、CD20、CD80和EPCAM的靶。 
在其他实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对靶的单结合位点(即，是单特异性的)。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有针对白细胞(如T-细胞)上的靶(例如，CD3)的单结合位点(即，是单特异性的)并且结合目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤抗原，如本文中公开的靶)。 
在其他实施方案中，本发明涉及通过向有需要的患者施用治疗有效量的对靶具有单结合位点(即，是单特异性的)的多价和单价多特异性组合物治疗疾病或病症。在一些实施方案中，施用的多价和单价多特异性组合物具有针对白细胞(如T-细胞)上的靶(例如，CD3)的单结合位点(即，是单特异性的)并且结合目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原)。在一些实施方案中，肿瘤细胞来自癌，所述癌选自乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾(肾细胞)癌症、肺癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、白血病、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和甲状腺癌。 
另外的实施方案涉及施用治疗有效量的多价和单价多特异性组合物以治疗选自脑癌、神经变性病、精神分裂症、癫痫、阿尔茨海默病、 帕金森病、亨廷顿病病、ALS、多发性硬化、视神经脊髓炎和Neuro-AIDS(例如，HIV相关性痴呆)的神经疾病或病症。在另一个实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗脑癌、脑的转移性癌症或脑的原发性癌症。在又一个实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗脑损伤、中风、脊髓损伤或疼痛管理。在其他实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗脑损伤、中风或脊髓损伤或用于疼痛控制。 
在一个实施方案中，将治疗有效量的多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗感染或与传染因子引起的感染相关的症状。在一些实施方案中，感染由选自乳多空病毒(例如，JC多瘤病毒)、锥虫、西尼罗病毒、HIV、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、牛海绵状脑病、脑膜炎、进行性多灶性白质脑病(PML)、晚期神经性锥虫病、脑炎和狂犬病的成员引起。 
根据一些实施方案，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)能够跨过血脑屏障(BBB)并结合位于BBB的脑侧上的靶。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物具有结合与内源BBB受体介导的转运系统相关的靶(例如，配体、受体或辅助蛋白)的单结合位点。在一些实施方案中，组合物的单结合位点是MRD。在其他实施方案中，组合物的单结合位点是抗体的抗原结合结构域。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有与内源BBB受体介导的转运系统相关的靶的1、2、3、4、5或更多个单结合位点(即，单价结合)，并且组合物能够跨越到达BBB的脑脊液。在另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物含有与内源BBB受体介导的转运系统相关的靶的1、2、3、4、5个或更多个多结合位点(即，多价结合)，并且组合物能够跨越到达BBB的脑脊液。在另外的实施方案中，将治疗有效量的含有MRD的抗体施用至患者以治疗选自脑癌、神经变性病、精神分裂症、癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病病、ALS、多发性硬化、视神经脊髓炎和beuro-AIDS(例如，HIV相关性痴呆)的神经疾病或病症。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合 物具有针对选自下述靶的单结合位点(即，对于结合特定靶抗原是单价的)或两个或更多结合位点(即，对于结合特定特定是多价的)，所述靶选自α-突触核蛋白、RGM A、NOGO A、NgR、OMGp MAG、CSPG、神经突抑制性脑信号蛋白(例如，脑信号蛋白3A和脑信号蛋白4)、肝配蛋白、A-β、AGE(S100A，两性蛋白)、NGF、可溶性A-B、聚集蛋白聚糖、中期因子、神经蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、磷酸蛋白聚糖、Te38和PGE2。在一些实施方案中，该多价和单价多特异性组合物另外地具有针对选自以下靶的单结合位点或多结合位点：IL1、IL1R、IL6、IL6R、IL12、IL18、IL23、TNFSF12(TWEAK)、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、CD45RB、CD52、CD200、VEGF、VLA4、TNFα、干扰素γ、GMCSF、FGF、C5、CXCL13、CCR2、CB2、MIP1a和MCP-1。 
在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物能够转至BBB的脑脊液侧并且将其施用至患者以治疗选自脑癌、神经变性病、精神分裂症、癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病病、ALS、多发性硬化、视神经脊髓炎和Neuro-AIDS(例如，HIV相关性痴呆)的神经疾病或病症。在其他实施方案中，本发明涉及通过向有需要的患者施用对靶具有单结合位点(即，是单特异性的)的含有MRD的抗体治疗疾病或病症。在一些实施方案中，施用的含有MRD的抗体具有针对白细胞(如T-细胞)上的靶(例如，CD3)的单结合位点(即，是单特异性的)并且结合目的细胞或组织上的靶(例如，肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原)。 
在一些实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者施用至患者以治疗选自脑癌、神经变性病、精神分裂症、癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病病、ALS、多发性硬化、视神经脊髓炎和Neuro-AIDS(例如，HIV相关性痴呆)的神经疾病或病症。在另外的实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗脑癌、脑的转移性癌症或脑的原发性癌症。在另外的实施方案中，将多价和单价多特异性组合物施用至患者以治疗疗脑损伤、中风、脊髓损伤或疼痛。因而，根据一些实施方案，用本发明的含有MRD的抗体或MRD 治疗或预防的疾病、病症或损伤是神经学的。在一个实施方案中，神经疾病、病症或损伤与疼痛如急性疼痛或慢性疼痛相关。 
在一些实施方案中，多价和单价多特异性组合物结合至少1、2、3、4或5种与神经疾病或病症相关的靶。在一个实施方案中，多价和单价多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)结合靶RGM A、NgR和NogoA的1种、2种或全部3种。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合RGM A、RGM B和脑信号蛋白3A或脑信号蛋白4的1种、2种、3种或全部4种。在又一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合至少1、2、3、4或5种选自聚集蛋白聚糖、中期因子、神经蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、磷酸蛋白聚糖、Te38、TNFα、NogoA、RGM A、MAG和OMGp的靶。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合至少1、2、3、4或5种选自聚集蛋白聚糖、中期因子、神经蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、磷酸蛋白聚糖、Te38和TNFα的靶。在一个可选实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合至少1、2、3、4或5种选自NgR-p75、NgR-Troy、NgR-Nogo66(Nogo)、NgR-Lingo、Lingo-Troy、Lingo-p75、MAG和Omgp的靶。在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合至少1、2、3、4或5种选自NGF、前列腺素E2(PGE2)、TNF-α、IL1β和IL6R的靶。 
在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合至少1、2、3、4或5种选自α-突触核蛋白、RGM A和一种或多种促炎性介质(例如，TNFα、IL1和MCP-1)的靶。这类组合物例如用于治疗神经变性病如帕金森病。 
在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合并拮抗1、2、3、4或5种选自以下的靶(即，是其拮抗剂，例如，抑制其活性)：RGM A、NOGO A、神经突抑制性脑信号蛋白(例如，脑信号蛋白3A和脑信号蛋白4)、肝配蛋白和促炎靶(例如，IL12、TNFSF12(TWEAK)、IL23、CXCL13、TNFRSF5(CD40)、TNFSF5(CD40配体)、IL18、VEGF、VLA4、TNFα、CD45RB、 CD200、干扰素γ、GMCSF、FGF、C5、CD52和CCR2)。在一个另外的实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合并拮抗1、2、3、4或5种选自CD3、IL2、IL2R、IL6、IL6R、IL10、IL12p40、IL23、TGFβ、TNFRSF21(DR6)、fn14、CD20、LINGO、CXCL13和CCL2的靶。组合物用于治疗例如炎症、神经变性和神经变性病如MS)。本发明还涵盖了结合至少1、2、3、4、5种或更多种这些靶的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。在特定的实施方案中，含有MRD的抗体的抗体组分结合CD3、CD20、CD52、VLA4、TNF、TNFRSF21(DR6)、LINGO、CD3、干扰素γ或IL6。 
在另一个实施方案中，该多价和单价多特异性组合物结合并拮抗1、2、3、4或5种选自以下的靶(即，是其拮抗剂)：AGE(S100A，两性蛋白)、促炎细胞因子(例如，IL1、IL6和TNF)、趋化因子(例如，MCP1)和抑制神经再生的分子(例如，Nogo和RGM A)。这些组合物用于治疗例如慢性神经变性病，如阿尔茨海默病。在一个另外的实施方案中，本发明的组合物结合至少1、2、3、4或5个影响神经生成和存活的靶，所述靶包括例如NGF激动剂、IL1或IL1R拮抗剂和A-β。这些组合物用于治疗例如慢性神经变性病，如阿尔茨海默病。 
在一个另外的实施方案中，本发明的组合物结合至并拮抗1、2、3、4或5个干扰神经再生或恢复的靶，所述靶包括NogoA、OMgp MAG、RGM A、CSPG、一种或多种星形细胞抑制性脑信号蛋白(例如，脑信号蛋白3A和脑信号蛋白4)、肝配蛋白和促炎细胞因子(例如，IL1、IL6和TNF)。这些组合物用于治疗神经变性病和神经损伤或创伤。 
在另外的实施方案中，多价和单价多特异性组合物结合并拮抗1、2、3、4或5种与疼痛相关的靶(即，是其拮抗剂)，包括但不限于NGF和SCN9A/NAV1.7。这类组合物用于例如治疗或减轻疼痛和疼痛相关的条病状。 
在另外的实施方案中，由本发明组合物结合的靶结合并拮抗1、2、3、4、5种或更多种参与抑制神经突生长或恢复的介体和/或可溶性靶 或细胞表面靶。在特定的实施方案中，本发明的组合物结合至并且拮抗1、2、3、4、5种或更多种选自Nogo、Ompg、MAG、RGM A、脑信号蛋白、肝配蛋白、可溶解性A-b、促炎细胞因子(例如，IL1和TNFα)、趋化因子(例如，MIP1a)的靶。 
在一些实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解疼痛的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的结合疼痛靶的含有MRD的抗体。在另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解疼痛的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的结合NGF的含有MRD的抗体。在其他实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解疼痛的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含MRD的他尼珠单抗(例如，Pfizer)。 
在另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解阿尔茨海默病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的结合阿尔茨海默病靶的含有MRD的抗体。在另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解阿尔茨海默病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的结合β淀粉样蛋白的MRD-抗体。在另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解阿尔茨海默病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含MRD的RN1219(PF-4,360,365；Pfizer)。 
在另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的结合多发性硬化靶的MRD-抗体。在另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的结合LINGO的MRD-抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的结合LINGO和TNFRSF21(DR6)的MRD-抗体。在另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含MRD的Biogen LINGO抗体。在其他实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗 或缓解多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含MRD的那他珠单抗(例如，
Figure BDA0000457457350002351
Biogen)。在一个另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含MRD的Biogen LINGO抗体。 
在一个另外的实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的结合CD20的MRD-抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗或缓解多发性硬化的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的包含MRD的奥瑞珠单抗(Biogen Idec)。 
在其他实施方案中，该多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)可用于治疗或预防传染病。可以用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗或预防的传染病包括但不限于与酵母感染、真菌感染、病毒感染和细菌性感染相关的疾病。可以用多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)治疗或预防的造成病毒性感染的病毒包括但不限于逆转录病毒(例如，嗜人T淋巴细胞病毒(HTLV)I型和II型以及人免疫缺损病毒(HIV))，疱疹病毒(例如，单纯疱疹病毒(HSV)I型和II型、Epstein-Barr病毒、HHV6-HHV8和巨细胞病毒)、腺病毒(例如，拉萨热病毒)、副粘病毒(例如，麻疹病毒、人呼吸道合胞体病毒、腮腺炎和肺病毒)、腺病毒、布尼亚病毒(例如，汉坦病毒)、冠状病毒、丝状病毒(例如，Ebola病毒)、黄病毒(例如，丙型肝炎病毒(HCV)、黄热病毒和乙型脑炎病毒)、嗜肝DNA病毒(例如，乙型肝炎病毒(HBV))、正粘病毒(例如，甲型、乙型和丙型感病毒(包括禽流感，例如，H5N1亚型))、乳多空病毒(例如，乳头瘤病毒)、小RNA病毒(例如，鼻病毒、肠病毒和甲型肝炎病毒)、痘病毒、呼肠孤病毒(例如，轮状病毒)、披膜病毒(例如，风疹病毒)、弹状病毒(例如，狂犬病病毒)。造成细菌性感染的微生物的病原体包括但不限于化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoea)、脑膜炎奈瑟菌(Neissetia meningitidis)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、肉毒梭 状芽孢杆菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridium pefringens)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、臭鼻克雷伯氏菌(Klebsiella ozaenae)、鼻硬结克雷伯氏菌(Klebsiella rhinoscleromotis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、大肠杆菌、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、胎儿弯曲杆菌(Campylobacter fetus)(胎儿弧菌属(Vibrio fetus))、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)、痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)、福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)、索氏志贺菌(Shigella sonnei)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、苍白密螺旋体(Treponema pallidum)、细弱密螺旋体(Treponema pertenue)、斑点病密螺旋体(Treponema carateneum)、奋森氏包柔氏螺旋体(Borrelia vincentii)、伯氏包柔氏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、出血黄疸性钩端螺旋体(Leptospira icterohemorrhagiae)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)、流产布氏杆菌(Brucella abortus)、猪布氏杆菌(Brucella suis)、马尔他布氏杆菌(Brucella melitensis)、支原体(Mycoplasma spp.)、普氏立克次氏体(Rickettsia prowazeki)、恙虫病立克次体(Rickettsia Lsutsugumushi)、衣原体(Chlamydia spp.)和幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)。 
在一个优选实施方案中，将多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)施用至患者以治疗或预防人免疫缺损病毒(HIV)感染或AIDS、肉毒杆菌中毒、炭疽病或艰难梭状芽孢杆菌病。 
VIII不是抗体的MRD连接的化合物 
在不同的实施方案组中，本发明的一个或多个MRD与免疫球蛋白片段(如Fab、Fab'、F(ab')2、pFc'或Fc)的氨基端和/或羧基端有效连接。在一些实施方案中，MRD与含有另外Ig结构域的Fab或Fc多肽有效连接。在一些实施方案中，MRD与免疫球蛋白片段的氨基端和/或羧基端有效连接，所述免疫球蛋白片段也与scFv有效连接。在其他实施方案中，本发明的MRD与Fc-融合蛋白有效连接。 
根据这组实施方案，将1、2、3、4、5、6、7至10个或多于10个MRD与免疫球蛋白片段的氨基端和/或羧基端有效连接。这些MRD任选地彼此连接或经接头与免疫球蛋白片段连接。在一个实施方案中，与免疫球蛋白片段的氨基端和/或羧基端有效连接的1、2、3、4、5、6、7至10个或多于10个的MRD是相同的。在另一个实施方案中，与免疫球蛋白片段的氨基端和/或羧基端有效连接的1、2、3、4、5、6、7至10个或多于10个的MRD是不同的。 
与免疫球蛋白片段有效连接的MRD可以是单聚的(即，在肽链的末端含有一个MRD，任选地由接头连接)或是多聚的(即，含有多于一个处于串联的MRD，任选地由接头连接)。这些MRD可以是同型多聚的(即，含有多于一个相同的处于串联的MRD，任选地由接头连接)(例如，同型二聚体、同型三聚体、同型四聚体等))或异聚的(即，含有其中存在至少两个不同MRD的两个或更多个MRD，任选地由接头连接)，其中全部或一些与特定末端连接的MRD是不同的(例如，异二聚体))。在一个实施方案中，两个不同的单聚MRD位于免疫球蛋白片段的不同末端处。在另一个实施方案中，3、4、5、6或更多个不同的单聚MRD位于免疫球蛋白片段的不同末端处。 
在一个可选实施方案中，含有MRD的抗体含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个二聚MRD和一个单聚MRD。在另一个可选实施方案中，含有MRD的抗体含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个同型二聚MRD和一个单聚MRD。在另一个可选实施方案中，含有MRD的抗体含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个 异二聚MRD和一个单聚MRD。 
在一个可选实施方案中，含有MRD的抗体含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个多聚MRD和一个单聚MRD。在另一个可选实施方案中，含有MRD的抗体含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个同型多聚MRD和一个单聚MRD。在另一个可选实施方案中，含有MRD的抗体含有位于免疫球蛋白的不同末端处的至少一个异源多聚MRD和一个单聚MRD。 
与免疫球蛋白片段有效连接的多个MRD可以靶向相同的靶结合位点或两个或更多个不同的靶结合位点。在MRD与不同的靶结合位点结合的情况下，结合位点可以处在相同或不同的靶上。类似地，一个或多个MRD可以结合至与免疫球蛋白片段相同的靶。 
在一些实施方案中，至少一个MRD并且如果适用，免疫球蛋白片段(例如，其中所述免疫球蛋白片段是Fab的情况下)，同时与它们的靶结合。在另外的实施方案中，2、3、4、5、6、7、8、9、10个或多于10个MRD和(如果适用)免疫球蛋白片段同时与它们的靶结合。 
可以使用本文所公开或否则本领域已知的方法，常规地完成与免疫球蛋白片段有效连接的MRD的合成和测定这些MRD和免疫球蛋白片段同时结合一种或多种靶或竞争与所述靶结合的能力。 
在一个具体实施方案中，一种或多种有效连接的MRD或免疫球蛋白片段与VEGF结合。在另一个具体实施方案中，一种或多种有效连接的MRD或免疫球蛋白片段与来尼珠单抗(ranibizumab)Genentech)结合相同的表位。在另一个具体实施方案中，一种或多种有效连接的MRD或免疫球蛋白片段竞争性抑制来尼珠单抗(ranibizumab)与VEGF结合。在一个另外的实施方案中，免疫球蛋白片段是Fab。在又一个具体的实施方案中，免疫球蛋白片段是来尼珠单抗(ranibizumab)。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合VEGFA或VEGFR的MRD-免疫球蛋白片段融合物。在一个具体实施方案中， 本发明提供一种治疗黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合VEGFA或VEGFR的MRD-Fab融合物。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-来尼珠单抗。 
在其他实施方案中，本发明的一个或多个MRD与Fc融合蛋白的氨基末端和/或羧基末端有效连接。该Fc融合蛋白可以含有与具有治疗价值的任何蛋白质或多肽序列(例如，本文所述的任何靶或靶的受体)的融合物。例如，所述融合物可以含有一般以多聚体形式发挥作用或显示改进的同族-配偶物结合作用的受体或配体的胞外结构域，所述受体或配体包括例如与以下超家族对应的受体：TNF-R超家族(例如，TNFR2、TACI、BCMA、HVEM等)、IL受体超家族(例如，IL1-R-IL6R)、VEGFR超家族(例如，VEGFR1-VEGR3)，FGRFR超家族(例如，FGFR1-FGFR4)和B7超家族(例如，CTLA))。 
在一个具体实施方案中，1、2、3、4、5、6或更多个MRD与VEGR1/VEGFR2-Fc融合蛋白有效连接。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD与阿柏西普(Regeneron)结合相同的表位。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD竞争性抑制阿柏西普与VEGFA或PLGF的结合。在又一个具体的实施方案中，所述MRD与阿柏西普有效连接。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-VEGFR1/VEGFR2-Fc融合蛋白。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗结直肠癌、前列腺癌或非小细胞肺癌的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合VEGFA或PLGF的MRD-Fc融合蛋白。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的结合VEGFA或PLGF的MRD-Fc融合蛋白和依立替康、5FU、奥沙利铂、多西他赛(doxetaxel)或FOLFOX6。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，所述方 法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿柏西普。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗结直肠癌、前列腺癌或非小细胞肺癌的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿柏西普。在一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿柏西普和依立替康、5FU、奥沙利铂、多西他赛或FOLFOX6。 
在一个具体实施方案中，1、2、3、4、5、6或更多个MRD与CTLA4-Fc融合蛋白有效连接。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD与阿巴西普结合相同的表位。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD竞争性抑制阿巴西普与CD80(B7-1)或CD86(B7-2)的结合。在又一个具体的实施方案中，所述MRD与阿巴西普有效连接。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD与贝拉西普(Bristol Myers Squibb)结合相同的表位。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD竞争性抑制贝拉西普与CD80(B7-1)或CD86(B7-2)的结合。在一个另外的实施方案中，免疫球蛋白片段是Fab。在又一个具体的实施方案中，所述MRD与贝拉西普有效连接。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种抑制免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-CTLA4-Fc融合蛋白。在一个具体实施方案中，本发明提供一种抑制免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿巴西普。在另一个具体实施方案中，本发明提供一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿巴西普。在另一个具体实施方案中，本发明提供一种抑制针对移植排斥的免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿巴西普。 
在一个具体实施方案中，本发明提供一种抑制免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-贝拉西普。在另一个具体实施方案中，本发明提供一种抑制针对移植排斥的免疫反 应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-贝拉西普。 
在另一个具体实施方案中，1、2、3、4、5、6或更多个MRD与TNFR2-Fc融合蛋白有效连接。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD与依那西普
Figure BDA0000457457350002411
结合相同的表位。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD竞争性抑制依那西普与TNFα的结合。在另一个实施方案中，一个或多个有效连接的MRD结合ANG2。在又一个具体的实施方案中，MRD与依那西普有效连接。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种抑制免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TNFR2-Fc融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TNFR2-Fc融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TNFR2-Fc融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TNFR2-Fc融合蛋白。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TNFR2-Fc融合蛋白。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TNFR2-Fc融合蛋白。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TNFR2-Fc融合蛋白。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种抑制免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-依那西普-Fc融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-依那西 普。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-依那西普。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗炎性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-依那西普。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗Crohn病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-依那西普。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗溃疡性结肠炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-依那西普。在另一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗银屑病关节炎、强直性脊柱炎、银屑病或青少年特发性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-依那西普。 
在另一个具体实施方案中，1、2、3、4、5、6或更多个MRD与TACI-Fc融合蛋白有效连接。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD与阿塞西普(Merck/Serono)结合相同的表位。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD竞争性抑制阿塞西普(atacicept)与BLyS或APRIL结合。在又一个具体的实施方案中，MRD与阿塞西普有效连接。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种抑制免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TACI-Fc融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TACI-Fc融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗类风湿性关节炎的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TACI-Fc融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗系统性红斑狼疮的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-TACI-Fc融合蛋白。在另一个实施方案中，本发明提供一种抑制免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿塞西普融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗 有效量的MRD-阿塞西普融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗自身免疫性疾病的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿塞西普融合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种通过以下方式治疗系统性红斑狼疮的方法：向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-阿塞西普融合蛋白。 
在另一个具体实施方案中，1、2、3、4、5、6或更多个MRD与IL1R-Fc融合蛋白有效连接。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD与列洛西普(Regeneron)结合相同的表位。在另一个具体实施方案中，一个或多个有效连接的MRD竞争性抑制列洛西普与IL1R的结合。在又一个具体的实施方案中，MRD与列洛西普有效连接。 
在另一个实施方案中，本发明提供一种预防痛风的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-IL1R-Fc融合蛋白。在一个具体实施方案中，本发明提供一种预防痛风的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的MRD-列洛西普-Fc融合蛋白。 
在一些实施方案中，本发明涵盖一种复合物，所述复合物包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)，其中所述MRD包含至少两个半胱氨酸，其中第一半胱氨酸位于MRD的前十个氨基酸内部，第二半胱氨酸位于MRD的最后十个氨基酸内部并且其中所述MRD在所述第一半胱氨酸和所述第二半胱氨酸之间包含至少5个氨基酸。在另外的实施方案中，MRD在第一半胱氨酸和第二半胱氨酸之间包含至少10、15、20或25个氨基酸。在一些实施方案中，MRD在第一半胱氨酸和第二半胱氨酸之间包含至少一个氨基酸。在其他实施方案中，MRD在第一半胱氨酸和第二半胱氨酸之间包含至少两个脯氨酸。在一些实施方案中，第一半胱氨酸距该复合物的N末端不超过5、3、3、2或1个氨基酸。在一些实施方案中，第二半胱氨酸距该复合物的C末端不超过5、3、3、2或1个氨基酸。在一些实施方案中，与MRD在其中突变或缺失至少一个半胱氨酸的相应复合物中的半寿期相比，MRD在本发明复合物中的体内半寿期增加。在一些实施方案中，该 MRD的结合亲和力至少等于MRD在其中突变或缺失至少一个半胱氨酸的相应复合物中的结合亲和力。 
在一些实施方案中，本发明涵盖一种包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的复合物，其中所述抗体和MRD与相同细胞或分子上的不同靶或表位结合，其中MRD结合作用在生理条件下激动或拮抗MRD靶，并且其中所述MRD在生理条件下所述抗体不存在时不结合至并激动或拮抗所述MRD靶。在一些实施方案中，在抗体不存在的情况下，本发明复合物中的MRD在生理条件下以大于0.01nM、0.1nM、0.5nM或0.7nM的EC50结合MRD靶。 
在一些实施方案中，本发明涵盖一种包含抗体和至少一个MRD的复合物，其中所述抗体和MRD与异聚或同聚蛋白上的不同靶或表位结合，其中MRD结合作用在生理条件下激动或拮抗MRD靶，并且其中所述MRD在生理条件下抗体不存在时不结合至并激动或拮抗所述MRD靶。在一些实施方案中，本发明复合物中的MRD在生理条件下以大于0.01nM、0.1nM、0.5nM或0.7nM的EC50结合MRD靶。 
在一些实施方案中，本发明涵盖一种用于抑制细胞生长的方法，包括使细胞与包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多特异性和多价复合物及蛋白激酶抑制剂接触。在一些实施方案中，该抗体与选自以下的靶结合：VEGF、VEGFR1、EGFR、ErbB2、IGF-IR、cMET、FGFR1和FGFR2。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂抑制含有MRD的抗体的靶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂与含有MRD的抗体抑制不同靶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂抑制多于一种蛋白激酶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂是选自以下的成员：伊马替尼、吉非替尼、凡德他尼、厄洛替尼、舒尼替尼、拉帕替尼和索拉非尼。 
在一些实施方案中，本发明涵盖一种用于抑制患者中血管生成的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多特异性和多价复合物及蛋白激酶抑制剂。在一些 实施方案中，该抗体与选自以下的靶结合：VEGF、VEGFR1、EGFR、ErbB2、IGF-IR、cMET、FGFR1和FGFR2。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂抑制含有MRD的抗体的靶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂与含有MRD的抗体抑制不同靶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂抑制多于一种蛋白激酶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂是选自以下的成员：伊马替尼、吉非替尼、凡德他尼、厄洛替尼、舒尼替尼、拉帕替尼和索拉非尼。 
在一些实施方案中，本发明涵盖一种用于治疗患有癌症的患者的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多特异性和多价复合物及蛋白激酶抑制剂。在一些实施方案中，该抗体与选自以下的靶结合：VEGF、VEGFR1、EGFR、ErbB2、IGF-IR、cMET、FGFR1和FGFR2。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂抑制含有MRD的抗体的靶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂与含有MRD的抗体抑制不同靶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂抑制多于一种蛋白激酶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂是选自以下的成员：伊马替尼、吉非替尼、凡德他尼、厄洛替尼、舒尼替尼、拉帕替尼和索拉非尼。 
在一些实施方案中，本发明涵盖一种用于治疗患有免疫系统疾病或病症的患者的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多特异性和多价复合物及蛋白激酶抑制剂。在一些实施方案中，免疫系统疾病或病症是炎症或自身免疫性疾病。在其他实施方案中，自身免疫性疾病是类风湿性关节炎、Crohn病、系统性红斑狼疮、炎性肠病、银屑病、糖尿病、溃疡性结肠炎或多发性硬化。在另外的实施方案中，该抗体结合TNF。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂抑制一种靶，所述靶不是含有MRD的抗体的靶。在一些实施方案中，蛋白激酶抑制剂抑制多于一种蛋白激酶。其他实施方案中，蛋白激酶抑制剂是选自以下的成员：来他替尼、托法替尼(tofacitinib)、鲁索利替尼、SB1518、CYT387、LY3009104、TG101348、福他替尼(fostamatinib)、BAY61-3606和舒尼替尼。 
在一些实施方案中，本发明涵盖一种包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多价和多特异性复合物，其中所述复合物具有针对细胞表面靶的单结合位点。在一些实施方案中，该多价和多特异性复合物包针对相同靶上不同表位的2个单结合位点。在一些实施方案中，该多价和多特异性复合物具有针对不同靶的2、3、4、5个或更多个单结合位点。在一些实施方案中，该多价和多特异性复合物具有针对白细胞上的靶的单结合位点。在一些实施方案中，该多价和多特异性复合物具有针对T细胞上的靶的单结合位点。在一些实施方案中，该多价和多特异性复合物具有针对CD3的单结合位点。在其他实施方案中，该复合物具有针对CD3ε的单结合位点。在另外的实施方案中，该复合物具有针对天然杀伤细胞上的靶的单结合位点。在另外的实施方案中，该复合物具有针对患病细胞上的靶的多结合位点。在一些实施方案中，该复合物具有针对患病细胞上2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。在另外的实施方案中，该复合物具有针对肿瘤细胞上的靶的多结合位点。在其他实施方案中，该复合物具有针对肿瘤细胞上2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。在一些实施方案中，该复合物具有针对免疫细胞上的靶的多结合位点。在其他实施方案中，该复合物具有针对免疫细胞上2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。在一些实施方案中，该复合物具有针对天然杀伤细胞上的靶的单结合位点。在一些实施方案中，该复合物结合白细胞上的靶和肿瘤细胞上的靶。在一些实施方案中，该复合物结合CD3和CD19。在其他实施方案中，该复合物具有针对传染因子或被传染因子感染的细胞上的靶的多个多结合位点。在其他实施方案中，该复合物具有针对传染因子或被传染因子感染的细胞上2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。在一些实施方案中，该复合物具有针对与内源血脑屏障(BBB)受体介导的转运系统相关的靶的单结合位点。在其他实施方案中，该复合物具有针对与内源BBB受体介导的转运系统相关的靶的多结合位点。在一些实施方案中，该复合物具有针对与内源BBB受体介导的转运系统相关的2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。在一些实施方案中，单 结合位点是MRD。在一些实施方案中，单结合位点是抗原结合结构域。 
在一些实施方案中，本发明的复合物包含细胞毒剂。 
本发明还涵盖了编码本发明的含有MRD的抗体的重链或轻链的多核苷酸、包含这些多核苷酸的载体和含有这些载体和/或多核苷酸的宿主细胞。 
以下实施例意在说明但不限制本发明。 
实施例
实施例1.靶向整联蛋白的抗体-MRD分子
通过靶向整联蛋白αvβ3的肽与催化性抗体38C2融合制备新的抗体-MRD融合分子。在轻链N末端和C末端及重链C末端处的融合是最有效的。使用流式细胞术，显示抗体缀合物与表达整联蛋白αvβ3-的人乳腺癌细胞高效结合。该抗体缀合物也保留其亲本催化性抗体38C2的逆醇醛缩合活性，如通过methodol和多柔比星前药活化所测量。这显示细胞靶向和催化性抗体能力可以有效地组合用于选择性化疗。 
实施例2.靶向血管生成性细胞因子的抗体-MRD分子
构建靶向血管生成性细胞因子的抗体-MRD融合分子。使用的抗体是38C2，其与含有MRD的2xCon4肽(AQQEECEWD PWTCEHMGSGSATGGSGSTASSGSGSATHQEECEWDPWTCEH MLE(SEQ ID NO:10))融合。所述含有MRD的肽与轻链N末端或C末端和重链的C末端融合。发现与其他Ang2MRD肽相似的结果。另外的Ang2MRD肽包括：MGAQTNFMPMDNDELLL YEQFILQQGLEGGSGSTASSGSGSSLGAQTNFMPMDNDELLLY(SEQ ID NO:20)(LM-2x-32)；和AQQEECEWDPWTCEHMGSGSA TGGSGSTASSGSGSATHQEECEWDPWTCEH MLE(SEQ ID NO:10)(2xCon4)。 
鉴于本文中的教导内容，本领域技术人员，将理解其他这类组合将产生如本文所述的有功能的结合Ang2的MRD。 
实施例3.与非催化性抗体的抗体-MRD融合物
先前已经描述针对人整联蛋白αvβ3的人源化小鼠单克隆抗体LM609(Rader,C.等人,PNAS95:8910-5(1998))。 
人非催化性单克隆抗体JC7U与含有抗Ang2MRD的2xCon4(AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGSGSTASSGSGSAT HQEECEWDPWTCEH MLE(SEQ ID NO:10))在轻链的N末端或C末端融合。将2xCon4(AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGS GSTASSGSGSATHQEECEWDPWTCEHMLE(SEQ ID NO:10))作为与该抗体的κ链的N端融合物(2xCon4-JC7U)和作为C端融合物(JC7U-2xCon4)研究。两种融合物均维持整联蛋白结合作用和Ang2结合作用。如图3的左小图中所示，两种抗体构建体(2xCon4-JC7U和JC7U-2xCon4)均与重组Ang2特异性结合，如通过ELISA研究所展示。然而，对于JC7U-2xCon4，与Ang2的结合显著地较高，所述JC7U-2xCon4在抗体轻链的C末端具有2xCon4(SEQ ID NO:10)融合。图3的右小图显示Ang2-JC7U和JC7U-Ang2与整联蛋白αvβ3结合。结果显示2xCon4(SEQ ID NO:10)与轻链N末端或C末端的融合不影响mAb JC7U与整联蛋白αvβ3的结合。图4描述了使用相同抗体-MRD融合构建体的另一个ELISA研究。 
实施例4.赫赛汀
Figure BDA0000457457350002486
-MRD融合分子
MRD与非催化性抗体的融合物的另一个例子是赫赛汀-MRD融合构建体。赫赛汀
Figure BDA0000457457350002482
-MRD融合物是多功能的，小分子αv整联蛋白拮抗剂和化学编程的靶向整联蛋白的抗体均在通过干扰αv-介导的细胞粘附和增殖防止乳腺癌转移方面显示突出功效。含有赫赛汀 -2xCon4(其靶向ErbB2和Ang2)和赫赛汀
Figure BDA0000457457350002484
-Vl14(其靶向ErbB2和VEGF)和赫赛汀-RGD-4C-2xCon4(其靶ErbB2、ang2和向整联蛋白)的MRD融合物是有效的。 
实施例5.靶向VEGF的抗体-MRD分子
构建了靶向VEGF的含有MRD的抗体。使用接头，将靶向vl14的MRD(SEQ ID NO:13)在38C2和赫赛汀
Figure BDA0000457457350002491
的κ链的N末端处融合。所产生的抗体-MRD融合构建体的表达和测试展示强的VEGF结合作用。 
实施例6.靶向IGF1R的抗体-MRD分子
使用长接头序列作为连接物，研究了靶向IGF1R的MRD(SFYSCLESLVNGPAEKSRG QWDGCRKK(SEQ ID NO:14))与38C2和赫赛汀
Figure BDA0000457457350002492
的κ链N末端融合。所产生的抗体-MRD融合构建体的表达和测试展示强的IGF1R结合作用。对表4中描述的区域进行几轮诱变和筛选后，鉴定到显示与IGR1R高度结合的另外克隆。表5中列出的优选序列结合IGF1R并且对胰岛素受体不显示明显的结合亲和力或不显示结合亲和力，因而提示针对IGF1R的特异性。 
表4：用于进一步诱变的模板 
Figure BDA0000457457350002493
表5： 
突变体 氨基酸序列 模板 SEQ ID NO
Rm4-31 NFYQCIEMLASHPAEKSRGQWQECRTGG Rm2-2-319 35
Rm4-33 NFYQCIEQLALRPAEKSRGQWQECRTGG Rm2-2-319 36
Rm4-39 NFYQCIDLLMAYPAEKSRGQWQECRTGG Rm2-2-319 37
Rm4-310 NFYQCIERLVTGPAEKSRGQWQECRTGG Rm2-2-319 38
Rm4-314 NFYQCIEYLAMKPAEKSRGQWQECRTGG Rm2-2-319 39
Rm4-316 NFYQCIEALQSRPAEKSRGQWQECRTGG Rm2-2-319 40
Rm4-319 NFYQCIEALSRSPAEKSRGQWQECRTGG Rm2-2-319 41
Rm4-44 NFYQCIEHLSGSPAEKSRGQWQECRTG Rm2-2-319 42
Rm4-45 NFYQCIESLAGGPAEKSRGQWQECRTG Rm2-2-319 43
Rm4-46 NFYQCIEALVGVPAEKSRGQWQECRTG Rm2-2-319 44
Rm4-49 NFYQCIEMLSLPPAEKSRGQWQECRTG Rm2-2-319 45
Rm4-410 NFYQCIEVFWGRPAEKSRGQWQECRTG Rm2-2-319 46
Rm4-411 NFYQCIEQLSSGPAEKSRGQWQECRTG Rm2-2-319 47
Rm4-415 NFYQCIELLSARPAEKSRGQ WAECRAG Rm2-2-316 48
Rm4-417 NFYQCIEALARTPAEKSRGQWVECRAP Rm2-2-218 49
实施例7.结合ErbB2的靶向Ang2的抗体-MRD分子
构建了含有靶向Ang2的MRD(L17)(SEQ ID NO:7)的抗体，所述MRD与结合ErbB2的抗体的轻链融合。使用短接头序列、长接头序列或轻链恒定区中的第四环作为接头。图5描述使用下述构建体的ELISA的结果，所述构建体含有靶向Ang2的MRD与ErbB2抗体连同短接头肽(GGGS(SEQ ID NO:1))的N端融合物(L17-sL-Her)、靶向Ang2的MRD与ErbB2抗体连同短接头肽的C端融合物(Her-sL-L17)、靶向Ang2的MRD与ErbB2抗体连同轻链恒定区中第四环的C端融合物(Her-lo-L17)或靶向Ang2的MRD与ErbB2抗体连同长接头肽(SSGGGGSGGGGGGSSRSS(SEQ ID NO:19))的N端融合物(L17-lL-Her)。ErbB2由全部构建体以不同程度结合。然而， Ang2仅由Her-sL-L17和L17-lL-Her结合。 
实施例8.结合肝细胞生长因子受体的靶向Ang2的抗体-MRD分子
使得靶向Ang2的MRD(L17)(SEQ ID NO:7)与Met抗体的轻链的N末端或C末端融合，其与肝细胞生长因子受体结合。使用短接头序列或长接头序列作为连接物。图6描述使用下述构建体的ELISA的结果，所述构建体含有靶向Ang2的MRD与Met抗体连同短接头肽(GGGS(SEQ ID NO:1))的N端融合物(L17-sL-Met)、靶向Ang2的MRD与Met抗体连同长接头肽(SSGGGGSGGGGGGSSRSS(SEQ ID NO:19))的N端融合物(L17-lL-Met)以及靶向Ang2的MRD与Met抗体连同长接头肽的C端融合物(Met-lL-L17)。当使用长接头肽时，所产生的抗体-MRD融合构建体的表达和测试展示强的Ang2结合作用。靶向Ang2的MRD与该抗体轻链C末端的融合导致与Ang2略微较高的结合，随后是靶向Ang2的MRD与该抗体轻链N末端的融合。 
实施例9.结合ErbB2的靶向整联蛋白的抗体-MRD分子
构建了含有靶向整联蛋白αvβ3的MRD(RGD4C)的抗体，所述MRD具有序列CDCRGDCFC(SEQ ID NO:106)，其与结合ErbB2的抗体赫赛汀
Figure BDA0000457457350002511
(Her)的轻链融合。使用短接头序列、长接头序列或轻链恒定区中的第四环作为接头。图7描述使用下述构建体的ELISA的结果，所述构建体含有靶向整联蛋白αvβ3的MRD与ErbB2抗体连同短接头肽(GGGS(SEQ ID NO:1))的N端融合物(RGD4C-sL-Her)、靶向整联蛋白αvβ3的MRD与ErbB2抗体连同短接头肽的C端融合物(Her-sL-RGD4C)、靶向整联蛋白αvβ3的MRD与ErbB2抗体连同轻链恒定区中第四环的C端融合物(Her-lo-RGD4C)或靶向整联蛋白αvβ3的MRD与ErbB2抗体连同长接头肽(SSGGGGSGGGGGGSSRSS(SEQ ID NO:19))的N端融合物(RGD4C-lL-Her)。ErbB2由全部构建体以不同程度结合。然而，整联蛋白αvβ3仅由RGD4C-lL-Her结合。 
实施例10.结合肝细胞生长因子受体的靶向整联蛋白的抗体-MRD分子
构建了含有靶向整联蛋白αvβ3的MRD(RGD4C)(SEQ ID NO:106)的抗体，所述MRD与结合肝细胞生长因子受体的抗体(Met)的轻链融合。使用含有长接头序列的抗体-MRD构建体。图8描述使用下述构建体的ELISA的结果，所述述构建体含有靶向整联蛋白αvβ3的MRD与肝细胞生长因子受体抗体的N端融合物of(RGD4C-lL-Met)或靶向整联蛋白αvβ3的MRD与肝细胞生长因子受体抗体的C端融合物(Met-lL-RGD4C)。RGD4C-lL-Met展示强的整联蛋白αvβ3结合作用。 
实施例11.结合ErbB2的靶向胰岛素样生长因子-I受体的抗体-MRD分子
构建了含有靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD(RP)(SEQ ID NO:14)的抗体，所述MRD与结合ErbB2的抗体(Her)的轻链融合。使用短接头肽、长接头肽或轻链恒定区中的第四环作为接头(Carter等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285-4289(1992)；美国专利号5,677,171；和ATCC保藏物10463，所述文献的每一篇通过引用的方式并入本文)。图9描述使用下述构建体的ELISA的结果，所述构建体含有靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与ErbB2抗体连同短接头肽的N端融合物(RP-sL-Her)、靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与ErbB2抗体和短接头肽的C端融合物(Her-sL-RP)、靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与ErbB2抗体连同轻链恒定区中第四环的C端融合物(Her-lo-RP)、靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与ErbB2抗体连同长接头肽的N端融合物(RP-lL-Her)或者靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与ErbB2抗体连同长接头肽的C端融合物(Her-lL-RP)。ErbB2由全部构建体以不同程度结合。胰岛素样生长因子-I受体由RP-lL-Her结合。 
实施例12.结合ErbB2的靶向VEGF的抗体-MRD分子
使靶向VEGF的MRD(Vl14)(SEQ ID NO:13)(Fairbrother W.J.等人,Biochemistry37:177754-177764(1998))与结合ErbB2的抗体(Her)的轻链的N末端融合。使用中等接头肽(SSGGGGSGGGGGGSS(SEQ ID NO:2))作为连接物。图10描述使用下述构建体的ELISA的结果，所述构建体含有靶向VEGF的MRD与结合ErbB2的抗体连同中等接头肽(Vl14-mL-Her)的N端融合物。所产生的抗体-MRD融合构建体的表达和测试展示强的VEGF和ErbB2结合作用。 
实施例13.靶向整联蛋白的抗体-MRD分子
使用中等接头肽作为连接物，研究靶向整联蛋白αvβ3的MRD(RGD)(SEQ ID NO:106)与38C2的轻链的N末端融合。图11表明所产生的抗体-MRD融合构建体的表达和测试具有强的整联蛋白αvβ3结合。 
实施例14.靶向Ang2的抗体-MRD分子
使用短接头序列作为连接物，研究了靶向Ang2(L17)的MRD(SEQ ID NO:7)与38C2的轻链的C末端的融合。图12表明所产生的抗体-MRD融合构建体的表达和测试具有强的Ang2结合作用。 
实施例15.结合ErbB2的靶向整联蛋白和Ang2的抗体-MRD分子
将靶向整联蛋白αvβ3的MRD(RGD4C)用中等接头与靶向ErbB2的抗体(Her)的轻链的N末端连接，并且靶向Ang2(L17)的MRD由短接头连接至靶向ErbB2的相同抗体的C末端(RGD4C-mL-Her-sL-L17)。图13表明所产生的抗体-MRD融合构建体与整联蛋白、Ang2和ErbB2结合。 
类似地，IGF-1R MRD与重链C末端或轻链N末端融合的靶向ErbB2的抗体(例如，Her)以类似的速率与固定的IGF-1R结合。此外，含有与轻链N末端融合的IGF-1R MRD和与重链C末端融合的Ang2MRD的靶向ErbB2的抗体以类似的速率与固定的IGF-1R结合。这 三种多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的每一者也抑制IGF-1与固定的IGF-1R的结合。所述三特异性分子(赫赛汀连同IGF-1R MRD和Ang2MRD)同时与细胞表面ErbB2和可溶性Ang2结合。 
实施例16.结合ErbB2的靶向整联蛋白的抗体-MRD分子
使用中等长度接头作为连接物，构建了含有靶向整联蛋白αvβ3的MRD(RGD4C)的抗体，所述MRD与结合ErbB2的抗体(Her)的重链的N末端融合(RGD4C-mL-her-重链)。图14描述了使用该构建体的ELISA的结果。整联蛋白和ErbB2均由该构建体结合。 
实施例17.带有短接头肽的结合ErbB2或肝细胞生长因子受体和靶向整联蛋白、Ang2或胰岛素样生长因子-I受体的抗体-MRD分子
构建抗体-MRD分子，所述分子含有结合ErbB2或肝细胞生长因子受体的抗体，并且将靶向整联蛋白αvβ3、Ang2或胰岛素样生长因子-I受体的MRD区域用短接头肽连接至该抗体的轻链。图15描述使用下述构建体的ELISA的结果，所述构建体含有靶向Ang2的MRD与ErbB2抗体融合的N端融合物(L17-sL-Her)、靶向整联蛋白的MRD与ErbB2抗体的N端融合物(RGD4C-sL-Her)、靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与结合ErbB2的抗体的N端融合物(RP-sL-Her)、靶向Ang2的MRD与结合肝细胞生长因子受体的抗体的C端融合物(L17-sL-Met)、靶向Ang2的MRD与结合ErbB2的抗体的C端融合物(Her-sL-L17)、靶向整联蛋白的MRD与结合ErbB2的抗体的C端融合物(Her-sL-RGD4C)或靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与结合ErbB2的抗体的C端融合物(Her-sL-RP)。ErbB2由抗体-MRD构建体以不同程度结合，例外是含有肝细胞生长因子受体结合抗体的构建体。抗原仅由Her-sL-L17构建体结合。 
实施例18.带有长接头肽的结合ErbB2或肝细胞生长因子受体和靶向整联蛋白、Ang2或胰岛素样生长因子-I受体的抗体-MRD分子
构建抗体-MRD分子，所述分子含有结合ErbB2或肝细胞生长因子受体的抗体，并且将靶向整联蛋白αvβ3、Ang2或胰岛素样生长因子-I受体的MRD区域用长接头肽连接至该抗体的轻链。图16描述使用下述构建体的ELISA的结果，所述构建体含有靶向Ang2的MRD与ErbB2抗体融合的N端融合物(L17-lL-Her)、靶向整联蛋白的MRD与ErbB2抗体的N端融合物(RGD4C-lL-Her)、靶向胰岛素样生长因子-I受体的MRD与结合ErbB2的抗体的N端融合物(RP-lL-Her)、靶向Ang2的MRD与结合肝细胞生长因子受体的抗体的C端融合物(L17-lL-Met)、靶向整联蛋白的MRD与结合肝细胞生长因子受体的抗体的C端融合物(RGD4C-lL-Met)、靶向Ang2的MRD与结合胰岛素样生长因子-I受体的抗体(Her-lL-RP)的C端融合物、靶向Ang2的MRD与结合肝细胞生长因子受体的抗体(Met-lL-L17)的C端融合物或靶向整联蛋白的MRD与结合肝细胞生长因子受体的抗体的C端融合物(Met-lL-RGD4C)。如图中所示16，抗体-MRD融合物有效结合抗原和ErbB2。Lu等人,J.Biol.Chem.20:280(20):19665-19672(2005)；Lu等人,J.Biol.Chem.2004Jan23:279(4):2856-65。 
实施例19.克隆和表达与麦芽糖结合蛋白融合的Ang2MRD
A.MBP融合物的克隆 
使用来自New England Biolabs的修饰形式的pMAL-p2载体和表达系统(NEB；Beverly,Mass.)，将单体和二聚体肽表达为与麦芽糖结合蛋白(MBP)的蛋白质融合物。将PCR生成的MRD序列插入pMAL载体中，位于编码MBP的malE基因下游。这产生编码MRD-MBP-融合蛋白的载体。pMAL载体含有Ptac强启动子并且是IPTG可诱导的。pMAL-p2系列含有指导融合蛋白穿过胞质膜的正常malE信号序列。可以通过渗透休克从周质纯化能够输出的pMAL-p2融合蛋白。可以进行进一步纯化，例如通过结合于直链淀粉树脂。 
B.MBP融合蛋白的表达和渗透休克分级 
为表达融合蛋白，将培育过夜的细菌培养物再稀释于新鲜培养基中至ODA600大约0.1。将培养物培育至OD为大致0.8并用0.3mM浓 度的IPTG诱导。将培养物温育大约4小时，伴随振摇，随后将细菌以4700g离心15分钟。将沉淀的细菌重悬于30mM Tris-HCL pH7.4，20%蔗糖，1mM EDTA中。将细胞在室温(RT)温育20分钟，之后以4700g离心15分钟。将沉淀的细菌随后重悬于冰冷的MgSO4中并在冰上温育20分钟，伴以定期混合。将细胞悬液超声处理(Misonix XL2020)90秒。将细胞在4℃以4700g离心20分钟。使用10x PBS(Quality Biologics，目录号119-069-131)将上清液(“渗透休克部分”)调节至1XPBS并经0.2微米滤器过滤。直接测定这些渗透休克部分与Ang2的结合。 
C.MBP融合蛋白的直接结合 
为检测MRD-MBP融合物与Ang2的直接结合，进行以下ELISA。96孔平板用320ng/ml(100μl/孔)的rhAng2(R&D目录号623-AN)包被过夜。将孔用250μl封闭缓冲液(Thermo目录号N502)封闭3.25小时，随后用300μl洗涤缓冲液(PBS，0.1%Tween)洗涤4次。将MBP融合蛋白在封闭缓冲液中连续稀释并添加至各孔在室温持续2小时。在洗涤(8x300μl洗涤缓冲液)后，样品用1:4000稀释于封闭缓冲液中的HRP-小鼠抗MBP mAb(NEB，目录号E8038S)处理。在室温温育1小时后，将孔洗涤(8x300μl洗涤缓冲液)，之后接收100μl TMB底物(KPL Laboratories)。用100μl H2SO4终止显色并且在450nm读出吸光度。 
D.结果 
对MRD-MBP融合物测定与Ang2的直接结合。将诱导的细菌培养物的渗透休克部分连续稀释并添加至Ang2包被的孔。用抗MBP mAb检测结合的融合蛋白。图17A中展示剂量反应曲线。测定的蛋白质代表序列MGAQTNFMPMDDDE LLLYEQFILQQGLE的突变变体(L17D)(SEQ ID NO:107)。在这个系列中，L17D内部的基序MDD在第一D处突变成全部其他可能的氨基酸(半胱氨酸除外)。测试的其他MRD是“Lm32K至S”和Lm32的二聚体(2xLm32)。如图17B中展示，几个MXD突变体显示0.1至100nm范围内的结合作用。Lm32 二聚体(2XLm32)显示比L17D或“Lm32K至S”大于10倍的针对Ang2的更高亲和力。 
实施例21.表达和纯化含有MRD的抗体
将分子识别结构域在pcDNA3.3载体中作为与抗体重链或轻链的融合蛋白构建并且表达。为产生蛋白质，首先将编码含有MRD的抗体的重链和轻链的质粒DNA转化至化学感受态细菌中，以产生用于瞬时转染的大量DNA。在LB培养基中增殖单个转化体并且使用Qiagen无内毒素质粒试剂盒纯化。简而言之，裂解来自过夜培养物的细胞；将裂解物澄清并施加至阴离子交换柱并随后经历洗涤步骤并且用高盐洗脱。将质粒沉淀、洗涤并重悬于无菌水中。 
在转染之前，扩充HEK293T细胞至所需最终的批次规模(约5L)。将纯化的质粒(1mg每升产物)与聚乙烯亚胺(PEI)转染试剂复合，添加至摇瓶培养物并在37℃温育。每日监测培养物的细胞计数、细胞直径和生存力。收获条件培养基并贮存在-80℃直至纯化。 
使用亲和层析从条件培养基纯化含有MRD的抗体。将培养上清液用滤器澄清并直接施加至含有重组蛋白A琼脂糖凝胶的层析柱(GE Healthcare)。洗涤该柱，并且通过降低缓冲液pH洗脱结合的含有MRD的抗体。在洗脱后，立即地调节洗脱物级分至生理pH。在蛋白A亲和纯化后，根据需要，可以进行另外的任选的精制层析步骤。 
将纯化的蛋白质透析入PBS中，浓缩至约1-4mg/ml，无菌过滤，无菌等分和冷冻贮存在-80℃。通过SDS-PAGE-考马斯蓝监测全部纯化步骤，并且纯化期间留意保持内毒素水平尽可能低。 
分析终产物的内毒素水平(EndoSafe)、纯度(SDS-PAGE-考马斯蓝，分析性SEC-HPLC)、蛋白质身份(蛋白质印迹法)和产率(Bradford测定法)。进行另外的大小排阻HPLC分析以评估聚集物的水平。 
表6中呈现的数据表明使用常规技术，可以表达并纯化含有MRD的抗体。 
表6 
Zybody 产率(mg) 纯度 聚集物(%) 内毒素(EU/ml)
HER2xCon4(H) 36 >90% 4.6 <1
HER-lm32(H) 57 >90% 1 2.02
HER-lm32(L) 98 >90% 2 3.26
AVA-lm32(H) 12 >90% 0 <1
实施例22.HER Lm32(H)和HER Lm32(L)与Her2和Ang2的同时结合
A.方法 
96孔平板用20ng/ml(100μl/孔)的rHER2-Fc(R&D目录号1129-ER-050)包被过夜。将孔用250μl封闭缓冲液(Thermo目录号N502)封闭3.25小时，随后用300μl洗涤缓冲液(PBS，0.1%Tween)洗涤4次。将含有MRD的抗体(HER-lm32(H)、HER-lm32(L)和AVA-lm32(H))和抗体(赫赛汀
Figure BDA0000457457350002581
在含有1.94μg/ml生物素酰化Ang2(R&D目录号BT633)的封闭缓冲液中连续稀释并添加至各孔在室温持续2小时。在洗涤(8x300μl洗涤缓冲液)后，平行样品接受1:1000稀释于封闭缓冲液中的HRP缀合的抗人κ链mAb(Abcam，目录号ab79115-1)或1:4000稀释于封闭缓冲液中的HRP缀合的链霉亲和素(Thermo Scientific目录号N100)。在室温温育1小时后，将孔洗涤(8x300μl洗涤缓冲液)，之后接收100μl TMB底物(KPL Laboratories)。用100μl H2SO4终止显色并且在450nm读出吸光度。 
B.结果 
如用抗人κ链mAb检测那样，基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002582
的抗体或基于赫赛汀 的含有MRD的抗体在Ang2存在下以剂量依赖性方式与Her2Fc结合(图18A)。仅基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002584
的含有MRD的抗体(HER-lm32(H)和HER-lm32(L))显示出同时与Her2Fc和Ang2结合，如通过HRP缀合的链霉亲和素所检测(图18B)。 
实施例23：AVA-lm32(H)与VEGF和Ang2的同时结合
A.方法： 
96孔平板用30ng/mL(100μl/孔)的人VEGF(PeproTech，Inc.目录号100-20)包被过夜。将孔用250μl封闭缓冲液(Thermo目录号N502)封闭3.25小时，随后用300μl洗涤缓冲液(PBS，0.1%Tween)洗涤4次。将含有MRD的抗体(HER-lm32(H)和AVA-lm32(H))和抗体(阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002591
在含有3.876μg/ml生物素酰化Ang2(R&D目录号BT633)的封闭缓冲液中连续稀释并添加至各孔在室温持续2小时。在洗涤后(8x300μl洗涤缓冲液)，平行样品接受1:1000稀释于封闭缓冲液中的HRP缀合的抗人κ链mAb(Abcam,目录号ab79115)或1:4000稀释于封闭缓冲液中的HRP缀合的链霉亲和素(Thermo Scientific目录号N100)。在室温温育1小时后，将孔洗涤(8x300μl洗涤缓冲液)，之后接收100μl TMB底物(KPL Laboratories)。用100μl H2SO4终止显色并且在450nm读出吸光度。 
B.结果 
如用抗人κ链mAb检测那样，阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002592
和基于阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002593
的含有MRD的抗体在Ang2存在下以剂量依赖性方式与VEGF结合(图19A)。仅基于阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002594
的含有MRD的抗体(AVA-lm32(H))显示出同时与VEGF和Ang2结合，如通过HRP缀合的链霉亲和素所检测(图19B)。 
实施例24.HER-lm32(H)和HER-lm32(L)与HER2和血管生成素-2的同时结合
通过流式细胞术确定HER-lm32(H)和HER-lm32(L)同时与乳腺癌细胞BT-474表面上表达的Her2和溶液中的Ang2结合的能力。将小鼠抗人Ig-FITC用于检测含有MRD的抗体的重链，并且将Ang2-生物素/链霉亲和素-PE用于lm32MRD的检测。预期将同时结合Her2和Ang2的细胞检测为FITC和PE荧光双阳性。 
将一百万个HER2阳性乳腺癌细胞BT-474与1μg HER-lm32(H) 或HER-lm32(L)在室温温育25分钟。在洗涤后，将细胞与200ng/ml Ang2生物素(R&D Systems)在室温温育25分钟，并且随后与20μL小鼠抗人Ig-FITC和链霉亲和素-PE温育15分钟。在用2mL缓冲液洗涤后，通过流式细胞术分析细胞(FACS Canto II,BD)。 
为了证实HER-lm32(H)和HER-lm32(L)与BT-474细胞上HER2结合的特异性，在10倍过量的赫赛汀
Figure BDA0000457457350002601
存在下测定结合作用。在这些实验中，将含有MRD的抗体(1μg)在室温与一百万个BT-474细胞在10μg赫赛汀不存在或存在时温育25分钟。通过与200ng/ml Ang2生物素温育，随后用链霉亲和素-PE检测，测定含有MRD的抗体与HER2的结合作用。 
图20A中提供的数据显示HER-lm32(H)和HER-lm32(L)均与HER2和Ang2同时结合。在这两种情况下，细胞在FITC荧光通道和PE荧光通道中均显示出明亮的双重荧光。HER-lm32(H)和HER-lm32(L)与HER2结合被赫赛汀完全抑制的事实(图20B)表示结合作用是特异性的。 
此外，使用含有两个不同MRD的抗体展示了三特异性结合。将结合EGFR的亲和体和结合Ang2的肽(LM32)分别与赫赛汀的轻链和重链的C末端融合。将含有MRD的抗体与EGFR+、Her2-A431人上皮细胞系温育。用生物素酰化Ang2/链霉抗生物素蛋白-PE、alexafluor标记的ErbB2-Fc或Ang2/链霉抗生物素蛋白-PE和alexafluor标记的ErbB2-Fc的组合检测结合细胞的含有MRD的抗体。结果表明，含有MRD的抗体同时结合EGFR细胞表面受体和两种可溶性配体(ErbB2和Ang2)。 
另外的实验显示lm32与赫赛汀的重链的C末端融合保留赫赛汀的结合特异性和Fc功能。赫赛汀和赫赛汀-lm32融合物以相似的亲和力与FcRn结合(赫赛汀和赫赛汀-lm32的EC50分别是2.17μg/ml和2.84μg/ml)。赫赛汀和赫赛汀-lm32融合物在SK-BR-3细胞上显示类似的ADCC活性。赫赛汀-lm32融合物和赫赛汀以相似的亲和力与Fcγ-RI和Fcγ-RIII结合。赫赛汀-lm32融合物和赫赛汀以相似的亲和 力与补体受体C1q结合。此外，赫赛汀-lm32融合物以亚纳摩尔亲和力结合Ang2并且拮抗Ang2与Tie-2受体的结合。赫赛汀-lm32融合物结合ErbB2的胞外结构域并且也抑制Ang2诱导的原代牛淋巴内皮细胞增殖。赫赛汀-lm32融合物和赫赛汀以相似的动力学参数与Her2的胞外结构域结合。另外的实验显示，赫赛汀-lm32融合物在几种培养的乳腺癌细胞系(BT-474、MDA-MB-361和SK-BR-3)增殖方面与赫赛汀同样有效。赫赛汀-lm32融合物在SK-BR-3细胞上的抗增殖作用不受培养物中Ang2(2μg/mL)的存在影响。 
已经对其他多价和多特异性组合物(例如，多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体))观察到同时靶结合作用。例如，lm32与修美乐重链的C末端的融合物(HUM-lm32(H))能够同时与Ang2和TNFα结合。相同的融合物能够以与修美乐抗体相似的亲和力结合用全长人TNFα瞬时转染的293细胞。HUM-lm32(H)也能够抑制TNF与其受体的相互作用。HUM-lm32(H)也结合于细胞表面表达的和平板结合的FcRn以及结合至Fcγ-RI和Fcγ-RIII。 
实施例25：含有重链融合物的抗体-MRD与靶结合
为评估含有lm32的抗体阻断Ang2与其受体TIE2相互作用的能力，通过ELISA测定它们对可溶解性TIE2与平板结合的Ang2结合的影响。 
将Ang2(R&D Systems，目录号623-AN)在4℃以PBS中的200ng/ml包被在96孔板(Thermo Electron，目录号3855)上过夜。平板随后在室温与100μL封闭液(Thermo Scientific，目录号N502)温育1小时。用PBS中的0.1%Tween-20洗涤平板4次后，将平板结合的Ang2在室温与0.5μg/mL可溶性TIE2(R&D Systems，目录号313-TI)在多种浓度的连续稀释的含有MRD的抗体不存在或存在下温育1小时。在洗涤4次后，添加100μL0.5μg/mL抗TIE2抗体(目录号BAM3313，R&D Systems)和在室温温育1小时。通过在室温与与1:1000稀释的山羊抗小鼠-HRP(BD Pharmingen，目录号554002)温育1小时检测TIE2与Ang2的结合。将平板洗涤4次并且在室温与100μL TMB试剂温育10分钟。用100μL0.36N H2SO4终止反应后，使用分光光度计在450nm读取平板。 
如图21A中呈现，HER-lm32(H)、HER-lm32(L)和AVA-lm32(H)以剂量依赖性方式抑制TIE2与平板结合的Ang2的结合。全部测试的含有lm32的抗体均展示类似的抑制作用，HER-lm32(H)的IC50值是4nM，HER-lm32(L)的IC50值是8nM并且AVA-lm32(H)的IC50值是3.3nM。 
实施例26.含有重链融合物的抗体-MRD与靶结合
为确定AVA-lm32(H)与VEGF结合的特异性和相对亲和力，使用生物素标记的阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002621
进行竞争性结合测定法。 
使用EZ-连接NHS-LC-生物素(Pierce，目录号21336)，将阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002622
用生物素标记。将VEGF(Peprotech，目录号100-20)在4℃以PBS中的100ng/mL包被在96孔板(Thermo Electron，目录号3855)上过夜。平板随后在室温与100μL封闭液(Thermo Scientific，目录号N502)温育1小时。用PBS中的0.1%Tween20后洗涤平板4次，添加50μL150ng/mL的阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002623
-生物素和50μL各种浓度的AVA-lm32(H)或未标记的阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002624
并且在室温温育1小时。将平板洗涤4次并且在室温与1:1000稀释的链霉亲和素-HRP(Thermo，目录号N100)温育1小时。将平板洗涤4次并且添加100μL TMB试剂。在室温温育10分钟后，添加100μL0.36N H2SO4以终止反应，并且在450nm读取平板。 
图22中呈现的数据显示AVA-lm32(H)与VEGF-2特异性结合。它以剂量依赖性方式抑制生物素酰化的阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002625
与VEGF的结合。由AVA-lm32(H)和未标记的阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002626
生成的剂量反应曲线是可重叠的并且指示相似的结合亲和力。 
实施例27.HER-lm32(H)和HER-lm32(L)与乳腺癌细胞上表达的HER2的结合
为了与赫赛汀
Figure BDA0000457457350002627
相比确定基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002628
的含有MRD的抗体与细胞表面HER2的相对结合亲和力，用Eu-标记的赫赛汀
Figure BDA0000457457350002629
进行竞争性结合 测定法。 
使用解离增强的镧系元素荧光免疫测定法(DELFIA)铕标记试剂盒(Perkin Elmer Life Sciences，目录号1244-302)遵循的制备商的说明书，用Eu3+标记赫赛汀
Figure BDA0000457457350002631
标记试剂是N1-(对异硫氰酸基苄基)二亚乙基三胺N1,N2,N3,N3-四乙酸(DTTA)的Eu-螯合物。DTTA基与Eu3+形成稳定络合物，并且异硫氰酸基与蛋白质上的氨基在碱性pH反应以形成稳定的共价硫代-脲键。将赫赛汀
Figure BDA0000457457350002632
(200mL碳酸氢钠缓冲液pH9.3中的0.2mg)在4℃用0.2mg标记试剂标记过夜。使用50mmol/L tris-HCl pH7.5和0.9%NaCl水溶液洗涤洗脱缓冲液，通过离心柱纯化Eu-标记的赫赛汀
Figure BDA0000457457350002633
通过将96孔板中的0.5-1百万个BT-474或SK-BR3乳腺癌细胞/板孔与2-5nM Eu-HERCEPTIN
Figure BDA0000457457350002634
在室温在各种浓度的未标记的基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002635
的含有MRD的抗体或赫赛汀
Figure BDA0000457457350002636
存在下温育1小时，进行Eu-赫赛汀
Figure BDA0000457457350002637
结合测定法。通过使用200μL完全培养基洗涤移除未结合的Eu-赫赛汀
Figure BDA0000457457350002638
将细胞随后重悬于100μL完全培养基中并将80μL细胞悬液转移至96孔板中。细胞与100μL Delfia增强剂溶液在室温温育10分钟并且通过Envison(Perkin Elmer)检测细胞结合的Eu-赫赛汀
Figure BDA0000457457350002639
在图23中展示使用BT-474细胞所获得的结合曲线的抑制作用。Eu-赫赛汀
Figure BDA00004574573500026310
与BT-474的结合以剂量依赖性方式被赫赛汀
Figure BDA00004574573500026311
和基于赫赛汀
Figure BDA00004574573500026312
的含有MRD的抗体抑制。观察到类似的IC50值：对于HER-lm32(H)为4.7nM，对于HER-lm32(L)为5.7nM，对于未标记的赫赛汀
Figure BDA00004574573500026313
为3.7nM。 
实施例28.通过基于赫赛汀
Figure BDA00004574573500026314
的含有MRD的抗体抑制乳腺癌细胞增殖
在生物测定法中还测试了表达HER2neo受体的赫赛汀敏感性乳腺癌细胞SK-BR-3。将SK-BR-3细胞(2000个细胞/孔)铺种在含有2mM谷氨酰胺、青/链霉素(Invitrogen)和10%FBS(HyClone)的完全McCoy's生长培养基中的96孔板(Costar)内。将细胞在37℃，5%CO2，85%湿度培养24小时。在次日，将生长培养基替换为饥饿培养基(含 有2mM谷氨酰胺，青/链霉素，0.5%FBS的McCoy's培养基)。在完全生长培养基中制备赫赛汀
Figure BDA0000457457350002641
和基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002642
的含有MRD的抗体的9份连续稀释物(浓度范围5000-7.8ng/mL)。在24小时温育后，移除禁绝培养基并将赫赛汀和基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002644
的含有MRD的抗体的连续稀释物一式三份转移至平板。将细胞培养6日。使用CellTiter Glo发光法将增殖定量。 
使用四参数逻辑模型所确定的IC50值如下：HER-lm32(H)为0.49+/-0.17nm，HER-lm32(L)为0.81+/-0.19nm，并且HER-con4(H)为0.67+/-0.15nm。全部测试的基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002645
的含有MRD的抗体能够以亚纳摩尔IC50值抑制SK-BR-3乳腺癌细胞的增殖。24A-C图中显示的拟合的代表性剂量反应曲线表明基于赫赛汀的含有MRD的抗体以类似于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002649
的效力抑制细胞增殖。 
实施例29：基于赫赛汀
Figure BDA00004574573500026410
的含有MRD的抗体的抗体依赖的细胞毒性
为评估含有MRD的抗体体外介导ADCC的能力，使用基于“DELFIA EUTDA细胞毒性试剂AD0116”试剂盒(Perkin Elmer)的细胞毒性测定法。在这种测定法中，将靶细胞用疏水性荧光增强配体(BADTA，双(乙酰氧甲基)2,2':6',2''-三联吡啶-6,6''-二羧酸酯)标记。一旦进入细胞，BADTA通过胞质酯酶介导的切割转换成亲水化合物(TDA，2,2':6',2''-三联吡啶-6,6''-二羧酸)并且不再可以穿过膜。在细胞裂解后，TDA释放至含有Eu3+溶液的培养基中以形成荧光螯合物(EuTDA)。荧光强度与裂解的细胞的数目完全成正比。 
赫赛汀
Figure BDA0000457457350002647
和基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002648
的含有MRD的抗体可以通过与靶细胞表面上的HER2受体结合并且通过与它们的FcγRIII受体相互作用活化人PBMC中存在的效应细胞，介导对Her2阳性乳腺癌细胞的ADCC。使用HER2阳性人乳腺癌细胞系SK-BR-3作为ADCC测定法中的靶细胞系以显示这一点。 
将SK-BR-3细胞用0.05%胰蛋白酶-维尔烯脱离并且以1x106个细胞/ml重悬在含有2mM谷氨酰胺、青/链霉素和10%FBS的RPMI1640 培养基(完全生长培养基)中。将2mL培养基中的2x106个细胞转移至15mL管中并添加10μl BADTA试剂。将细胞悬液温和地混合并在37℃，5%CO2和85%湿度置于培养箱中持续15分钟。在细胞标记期间制备7份10x连续稀释物，始于5μg/mL赫赛汀或基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002652
的含有MRD的抗体。 
与BADTA温育后，将细胞在含有2.5mM丙磺舒的完全生长培养基中洗涤4次。在洗涤之间，通过1000转/分钟离心3分钟将细胞离心下来。在终末洗涤后，将标记的SK-BR-3细胞重悬于10mL完全生长培养基中，并且将50μl细胞添加至96孔板的每个孔，背景孔例外。将赫赛汀
Figure BDA0000457457350002653
或基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002654
的含有MRD的抗体的50μl连续稀释物添加至指定的孔。将平板转移至37℃，5%CO2和85%湿度的培养箱中持续30分钟。 
将ADCC测定法前一日从人外周血纯化的PBMC在含2mM谷氨酰胺、青/链霉素、10%FBS的RPMI1640中洗涤1次。制备10mL的2.5x106个细胞/ml的PBMC悬液。将100μl PBMC悬液一式三份转移至含有靶细胞和赫赛汀
Figure BDA0000457457350002655
或基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002656
的含有MRD的抗体的孔中。将以下对照置于指定的孔中：自发释放(无效应细胞下的靶细胞)、最大释放(裂解的靶细胞)和背景(无细胞的培养基)。将平板在37℃，5%CO2和85%湿度的培养箱中温育2.5小时。 
在温育后，将20μl上清液转移至另一块平板并且添加200μl铕溶液。将平板在平板摇床上在室温温育15分钟。使用PerkinElmer EnVision2104多标记读数仪测量时间分辨荧光。 
以下式用来计算特异性释放%： 
Figure BDA0000457457350002657
由四参数逻辑模型所计算的IC50值如下：HER-lm32(H)为0.213+/-0.077nM，HER-lm32(L)为0.204+/-0.036nM并且HER-con4(H)为0.067+/-0.015nM。全部测试的含有MRD的抗体均一亚纳摩尔IC50值展示稳健的ADCC活性。25A和25B图中显示的拟 合的代表性剂量反应曲线表明基于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002661
的含有MRD的抗体能够以可比于赫赛汀
Figure BDA0000457457350002662
的效力介导细胞依赖的细胞毒性。 
在Ang2存在下实施相似的实验。将人PBMC用20ng/mL IL2过夜活化并添加至新鲜铺种的(10,000个细胞/孔)BADTA标记的SK-BR-3细胞。效应子/靶比率是25/1。与HER-lm32(H)或修美乐的连续稀释物在2μg/ml Ang2存在下温育4小时后，将Eu添加至培养基并且在Envision读数仪(Perkin-Elmer)上测量TRFI。HER-lm32在Ang2存在下更有力地介导ADCC。 
实施例30.通过AVA-lm32(H)抑制内皮细胞增殖
测试基于阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002663
的含有MRD的抗体AVA-lm32(H)的生物学活性以确定它们是否可以抑制VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖。 
HUVEC分别从GlycoTech(Gaithersburg，MD)和Lonza以第1传代和第3传代获得。在添加2%胎牛血清(FBS)和单一quotes(Lonza)的内皮细胞基础培养基(EBM-2)上在37℃，5%CO2，85%湿度培育细胞。对于增殖实验的抑制，将细胞以2000个细胞/板孔铺种在96孔板(Costar)中的含有2%FBS的EBM-2培养基内并培育24小时。在含有2%FBS的EBM-2培养基中制备阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002664
或AVA-lm32(H)的9份连续稀释物，始于5μg/ml。将VEGF(R&D Systems)以终浓度10ng/ml添加至全部连续稀释物。在37℃，5%CO2，85%湿度温育15分钟后，将连续稀释物添加至细胞。在96小时后，将CellTiter Glo添加至细胞。在室温温育15分钟后，将细胞悬液转移至96孔白色不透明平板中并且使用Perkin Elmer EnVision2104多标记读数仪测量发光。 
如26A和26B图中所示，AVA-lm32(H)对两个来源的HUVEC显示剂量依赖性抗增殖活性。从4PL拟合曲线中计算的IC50值显示AVA-lm32(H)和阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002665
的相似效力(IC50值分别是0.36+/-0.42nM和0.33+/-0.38nM)。 
实施例31.含有MRD的抗体在体内抑制肿瘤增殖
为了确定多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的体内有效性，评估它们在小鼠Colo5肿瘤模型中的功效。在这些实验中，通过注射悬浮于100μL PBS中的5X106个Colo205细胞，将肿瘤植入六周龄雌性无胸腺裸鼠的右腹侧中。三组8只动物各自每隔2日接受腹膜内注射100μL PBS中5mg/kg抗体(赫赛汀，Rituxan)或含有MRD的抗体(HER-2xCon4；“H2xCon4”)，始于肿瘤植入后第6日。图27中显示的结果表明含有MRD的抗体比利妥昔单抗或赫赛汀在抑制肿瘤生长方面更高效。 
Lm32与重链C末端融合的赫赛汀也在Her2依赖的和血管生成依赖的异体移植物肿瘤模型中均抑制肿瘤生长。在单剂量注射后，赫赛汀-lm32融合物在小鼠和猴中均具有与赫赛汀相似的PK。另外，赫赛汀-lm32融合物在37℃在全血中稳定至多到72小时。 
实施例32.评价含有MRD的抗体的分子测定
通过改变MRD和/或抗体的序列、通过改变抗体与MRD连接的位置和/或通过改变MRD借以与抗体连接的接头，生成新的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。使用测量蛋白质结合和功能的已知技术，评价多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的结合潜力、结构和功能特征。将所述多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与单独的MRD、单独的抗体和其他多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)比较。 
使用固相测定法，测试含有MRD的抗体，其中MRD和/或抗体的靶固定在固体表面上并随后暴露于渐增浓度的荧光标记的含有MRD的抗体。洗涤固体表面以移走未结合的含有MRD的抗体，并且通过将荧光定量，直接确定结合了靶的含有MRD的抗体的量。在另一个实验中，固定的靶暴露于渐增浓度的未标记的含有MRD的抗体，并且使用与含有MRD的抗体结合的标记试剂，间接地确定结合了靶的含有MRD的抗体的量。 
使用液相测定法，测试含有MRD的抗体，其中将所述MRD和/或抗体的靶添加至多种浓度的含有MRD的抗体。通过由靶和含有MRD的抗体组成的分子复合物的出现，检测靶与含有MRD的抗体相互作用，其中所述靶和含有MRD的抗体在分子质量(和迁移率)方面不同于未结合的靶和未结合的含有MRD的抗体。 
也在基于细胞的测定法中测定含有MRD的抗体，在所述测定法中，将表达靶的细胞在渐增浓度的含有MRD的抗体存在下温育。通过荧光激活细胞分选法检测含有MRD的抗体的结合。此外，评估细胞增殖、细胞分化、蛋白质磷酸化、蛋白质表达、mRNA表达、膜组成、信号传导途径活动和细胞生存力。 
可用的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)既与MRD靶结合，又与抗体靶结合。此外，可用的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)影响至少一个细胞过程。 
实施例33.鉴定具有改进特征的MRD
在LM32中鉴定到两个潜在的T细胞表位。为了鉴定不含有T细胞表位并且因此较不可能产生免疫原性反应的LM32变体，产生LM32肽的突变变体和缺失变体。表7中列出LM32变体将MRD表达为MBP融合蛋白并测试结合Ang2的能力。 
表7. 
随后测试LM32变体诱导增殖和/或细胞因子释放的能力。鉴定到具有功能活性并且免疫原性潜力降低的LM32变体。产生了包含与赫赛汀
Figure BDA0000457457350002692
的轻链融合的LM32变体的含有MRD的抗体、包含与赫赛汀的重链融合的LM32变体的含有MRD的抗体、包含与修美乐
Figure BDA0000457457350002694
的轻链融合的LM32变体的含有MRD的抗体、包含与修美乐
Figure BDA0000457457350002695
的重链融合的LM32变体的含有MRD的抗体、包含与阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002696
的轻链融合的LM32变体的含有MRD的抗体、包含与阿瓦斯汀的重链融合的LM32变体的含有MRD的抗体。将含有LM32变体的抗体施用至动物模型，并且测量血浆蛋白呈现和血浆和组织停留，并与赫赛汀
Figure BDA0000457457350002698
修美乐
Figure BDA0000457457350002699
和阿瓦斯汀
Figure BDA00004574573500026910
比较。此外，将含有LM32变体的抗体对细胞增殖、血管生成、 致瘤性、关节炎指示物的影响与赫赛汀
Figure BDA0000457457350002701
修美乐
Figure BDA0000457457350002702
和阿瓦斯汀
Figure BDA0000457457350002703
比较。 
实施例34.评价含有MRD的抗体的体内测定
为了确定多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的体内功效，将动物模型用抗体和含有MRD的抗体处理并且比较结果。 
在以下体内模型中测试含有MRD的抗HER2抗体。将以HER2表达质粒转染的NIH3T3细胞以0.1ml磷酸盐缓冲盐水中106个细胞的剂量皮下注射至nu/nu无胸腺小鼠中，在如美国专利号6,399,063中描述，所述文献通过引用的方式完整并入本文。在第0、1、5日和此后每隔4日，腹内注射100μg HER2抗体、含有ang2的HER2抗体、含有igf1r的HER2抗体和含有ang2-igf1r的HER2抗体。监测肿瘤出现和尺寸持续1个月。与抗体相比，观察到多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的功效增加。 
在以下体内模型中测试含有MRD的抗VEGF抗体。向RIP-TβAg小鼠提供高糖饲料和5%糖水，如美国公开申请号2008/0248033中所述，所述文献通过引用的方式完整并入本文。在9-9.5周龄或11-12周龄，将小鼠每周用腹内注射5mg/kg的抗VEGF抗体、含有ang2的VEGF抗体、含有ifg1r的VEGF抗体或含有ang2-和igf1r的抗体治疗2次。将9-9.5周龄小鼠处理14日并随后检查。在处理后7、14和21日检查11-12周龄小鼠。摘除小鼠的胰和脾并分析。通过剖取每个球状肿瘤并计数确定肿瘤数目。通过计算小鼠胰脏内部全部肿瘤体积的总和确定肿瘤负荷。通过计算观察到的血管生成性胰岛的平均数目测定对血管生成的影响。与抗体相比，观察到多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的功效增加。 
在以下体内模型中测试含有MRD的抗TNF抗体。转基因小鼠(Tg197)用三次腹内注射1.5μg/g、15μg/g或30μg/g的抗TNF抗体或含有ang2的TNF抗体处理，如美国专利号6,258,562中所述，所述文献通过引用的方式完整并入本文。注射继续约10周并且每周记录关节形态的宏观变化。在第10周，处死小鼠并且进行组织的显微镜检验。使用微米装置，将关节尺寸确立为右后踝的平均量值，并且关节炎评 分如下记录：1=无关节炎；+/-=轻微(关节畸变)；++=中等关节炎(肿胀，关节变形)；和+++=重度关节炎(检测到屈折强直和运动严重受损)。基于关节切片的苏木精伊红染色的组织病理评定如下：0=无可检测到的病情；1=滑膜增生；2=严重滑膜增厚；3=软骨破坏和骨侵蚀。与抗体相比，观察到多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的功效增加。 
实施例35.含有MRD的抗体优于抗体和MRD的组合
为了比较多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)与抗体和MRD的组合的功效，研究它们对EGF处理的SK-BR-3细胞的影响。 
将SK-BR-3细胞用赫赛汀、含有EGFR-MRD的赫赛汀、含有EGFR-MRD的修美乐(“单独MRD”)或与含有EGFR-MRD的修美乐组合的赫赛汀(“抗体外加单独的MRD”)处理10分钟或3小时并且用EGF刺激5分钟。收集细胞裂解物并且将蛋白质印迹法用来确定磷酸酪氨酸水平或磷酰-Akt水平。在28图中显示结果。含有EGFR-MRD的赫赛汀完全抑制EGF诱导的受体磷酸化和Akt活化，而赫赛汀、单独MRD和赫赛汀抗体外加单独MRD具有微小影响或没有影响。 
此外，将多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)对细胞增殖的影响与抗体和MRD的组合的影响比较。在这些实验中，将MCF-7衍生的乳腺癌细胞用含有与轻链C末端融合的靶向igf1r的MRD的赫赛汀抗体、单独赫赛汀或的修美乐抗体含有相同的靶向igf1r的MRD(“单独MRD”)处理。如图29A中所示，含有MRD的抗体比单独的赫赛汀或单独的MRD更好地抑制细胞增殖。 
MCF-7细胞也用含有MRD的五特异性抗体处理。首先，这些五特异性多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)显示与5种靶结合。靶向Ang2的MRD(lm32)和靶向EGFR的MRD分别与赫赛汀抗体的N末端和C末端融合。此外，靶向αvβ3的MRD(eeti)和靶向igf1r的MRD分别与相同赫赛汀抗体的N末端和C末端融合。将Ang2、ErbB2、EGFR、IGF1R和αvβ3包被在96孔板的独立孔上并 且与含有MRD的抗体的连续稀释物温育。使用抗人IgG-κ检测器检测结合的含有MRD的抗体。结果表明，含有MRD的抗体以低纳摩尔或亚纳摩尔亲和力与Ang2、ErbB2、EGFR、IGF1R和αvβ3结合，所述的低纳摩尔或亚纳摩尔亲和力与单独MRD或抗体的结合亲和力类似。 
随后，如上文所述测试这些五特异性多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)抑制MCF-7细胞增殖的能力。图29B中显示的结果表明，赫赛汀五特异性多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)比赫赛汀抗体更高效地减少增殖。 
实施例36：含有MRD的抗TNF抗体
通过结合Ang2的MRD(lm32)与修美乐重链的C末端融合，产生靶向TNF的含有MRD的抗体并且所述抗体在瞬时和稳定表达系统中表达。含有MRD的抗体同时与TNFα和Ang2结合。含有MRD的抗体结合可溶性和细胞表面TNFα并且保留修美乐的结合特异性和Fc功能(例如，FcRn、FcγR1和FcγR3结合作用)并且还通过Tie-2受体以亚纳摩尔亲和力按剂量依赖性方式抑制Ang2介导的信号传导。 
修美乐-lm32融合物也抑制L929细胞中TNFα介导的细胞毒性。将细胞在96孔板中培养过夜并在37℃用1ng/ml TNF外加1μg/mL放线菌素D在修美乐或修美乐-lm32存在下处理24小时。在温育后，添加100μL细胞Titer-Glow试剂并且在室温15分钟后，使用InVision(Perkin-Elmer)测量发光。结果表明修美乐和修美乐-lm32在抑制L929细胞中TNFα-介导的细胞毒性方面显示相等效力(修美乐IC50=19.0ng/ml；修美乐-lm32IC50=18.9ng/ml)。 
另外，修美乐-lm32融合物显示在充分建立的小鼠模型中剂量依赖性地保护hTNF-转基因小鼠免于出现关节炎临床体征。见，例如，Keffer等人,EMBO J.10:4025-4031(1991)。小鼠中的单次剂量PK研究表明修美乐-lm32融合物和修美乐具有相似的PK谱和免疫原性谱。然而，当二者均通过临床症状或通过组织学类型测量时，与单独的修美乐相比，修美乐-lm32融合物在这个模型中显示增加的功效。见图 30。 
实施例37.Zybody抑制EGF诱导的信号传导
将SK-BR3细胞以0.5X106个细胞/孔铺种在6孔板中并温育(37℃，5%CO2)24小时，在此时，将细胞用含有10%FBS的1mL完全DMEM培养基中的10μg/ml双特异性和三特异性zybody或赫赛汀在37℃处理24小时。细胞随后用100ng/mL EGF刺激5分钟。在刺激后，在200μL细胞裂解缓冲剂(10mM Tris-HCl(pH7.5)、1%Triton X-100、150mM NaCl水溶液洗涤、10%丙三醇、1mM钒酸钠、5mM EDTA和蛋白酶抑制剂)中破碎细胞。将细胞裂解物在4℃以14000转/分钟离心10分钟以移除细胞残片。将等体积的2X样品缓冲剂和细胞裂解物混合并且在100℃煮沸5分钟，将蛋白质在10%SDS-PAGE上解析并转移至PVDF(目录号LC2005，Invitrogen)膜。膜用3%BSA，0.1%Tween20封闭过夜并与针对磷酰-AKT(目录号AF887，R&D Systems)、磷酰-ERK(目录号AF1018，R&D Systems)和总ERK(MAB1576，R&D System)的抗体温育。分别使用化学发光或AP检测试剂，使用辣根过氧化物酶或AP缀合的抗兔和抗小鼠第二抗体(Invitrogen)来可视化免疫反应性蛋白。 
该实施例中使用的一种双特异性抗体包含赫赛汀和结合EGFR的MRD(Her-egfr)。另一种双特异性抗体包含赫赛汀连同重链C末端上的培妥珠单抗scfv(其与赫赛汀靶向不同的HER2表位)(Her-培妥珠单抗(H))。一种三双特异性抗体包含赫赛汀连同重链C末端上的结合EGFR的MRD和轻链C末端上的培妥珠单抗scfv。另一种三双特异性抗体包含赫赛汀连同轻链C末端上的结合EGFR的MRD和重链C末端上的培妥珠单抗scfv(Her-zEGFR(L)-Pert(H))。另一种三特异性抗体包含结合EGFR的MRD和与赫赛汀靶向不同的HER2表位的培妥珠单抗scfv(Her-Pert(L)zEGFR(H)和Her-zEGFR(L)-Pert(H)。 
SK-BR3细胞表达极高水平的HER2并且对赫赛汀的抗增殖作用敏感。抑制组成型激活的AKT是赫赛汀在HER2过量表达的细胞中的抗增殖作用的机制之一。这种抑制可以通过添加生长因子如EGF、 IGF-1和调蛋白(HRG)通过诱导胞内促有丝分裂信号传导来克服。如图31中所示，SK-BR3细胞中EGF诱导的AKT途径和ERK途径活化，如磷酸化的AKT水平和ERK水平增加所显示。赫赛汀对SK-BR3细胞中EGF诱导的信号传导途径活化没有影响，而Her-egfr和具有EGFR靶向肽的两种三特异性zybody抑制EGF作用。与仅抑制EGF诱导的信号传导的双特异性抗体相比，三特异性抗体还抑制SK-BR3细胞中组成型活性水平的Akt和ERK。 
实施例38.Zybody抑制调蛋白诱导的信号传导
将SK-BR3细胞以0.5X106个细胞/孔铺种在6孔板中并培养过夜。次日，将细胞用含有10%FBS的1mL完全DMEM培养基中的10μg/ml双特异性和三特异性zybody或赫赛汀在37℃处理24小时。细胞随后用200ng/mL调蛋白刺激10分钟。如实施例37中所述，进行蛋白质印迹分析以检测磷酸化的Akt及ERK水平和总Akt及ERK水平。 
调蛋白与HER3结合并且通过HER2-HER3异二聚体形成，诱导信号传导途径的激活。如图32中所示，调蛋白诱导SK-BR3细胞中Akt和ERK的激活。赫赛汀和HER-egfr对调蛋白诱导的Akt激活没有影响。培妥珠单抗阻断调蛋白介导的HER2-HER3异二聚体形成和信号传导，但是赫赛汀不阻断。图32显示包含培妥珠单抗scfv的双特异性和三特异性zybody完全抑制SK-BR3细胞中调蛋白诱导的Akt激活。 
实施例39.Zybody抑制EGF诱导的和调蛋白诱导的信号传导
将SK-BR3细胞以0.5X106个细胞/孔铺种在6孔板中并培养过夜。次日，将细胞用含有10%FBS的1mL完全DMEM培养基中的10μg/ml双特异性和三特异性zybody或赫赛汀在37℃处理24小时。细胞随后用100ng/mL EGF和200ng/mL调蛋白刺激10分钟。如实施例37中所述，进行蛋白质印迹分析以检测磷酸化的Akt及ERK水平和总Akt及ERK水平。 
用EGF和调蛋白对SK-BR3细胞的联合刺激导致AKT和ERK 激活(图33)。赫赛汀、HER-efgr和HER-培妥珠单抗Scfv无法阻断EGF和调蛋白的联合作用。含有EGFR靶向肽和培妥珠单抗scfv的三特异性zybody完全抑制SK-BR3细胞中EGF和调蛋白诱导的Akt和ERK活化。 
实施例40.Zybody下调细胞表面EGFR
将SK-BR3细胞以0.5X106个细胞/孔铺种在6孔板中并培养过夜。次日，如所示，将细胞用含有10%FBS的1mL完全DMEM培养基中的10μg/ml双特异性和三特异性zybody、赫赛汀、爱必妥、EGF及其组合在37℃处理24小时。使细胞脱离并且通过流式细胞术使用PE缀合的抗EGFR抗体确定细胞上EGFR的水平。 
这个实验中使用的zybody是在重链C末端上具有结合EGFR的MRD的赫赛汀抗体(HER-egfr(H))；在重链C末端上具有结合EGFR的MRD的修美乐抗体(HUM-egfr(H))；在重链C末端上具有培妥珠单抗scfv的赫赛汀(HER-perscfv(H))；在重链C末端上具有培妥珠单抗scfv的修美乐(HUM-perscfv(H))；在轻链C末端上具有培妥珠单抗scfv和在重链C末端上具有结合EGFR的MRD的赫赛汀(HER-perscfv(L)-egfr(H))；在重链C末端上具有培妥珠单抗scfv和在轻链C末端上具有结合EGFR的MRD的赫赛汀(HER-perscfv(H)-egfr(L))；和具有结合EGFR的MRD的修美乐抗体(HUM-egfr)。 
爱必妥、EGF和含有egfr靶向肽的双特异性和三特异性zybody下调细胞表面上的EGFR受体水平。图34A和图34B。用HER-egfr处理24小时比单独的HUM(27%)或HUM-egfr外加赫赛汀(41%)和爱必妥外加赫赛汀(51%)的组合更有效(61%)(图34A和图34B)。这表明，zybody形式中EGFR和HER2的同时靶向作用比两种独立抗体的组合更有效下调EGFR。另外，用靶向EGFR并靶向HER2的两个不同表位的三特异性抗体处理完全下调(99%)SK-BR3细胞上的EGFR水平。 
实施例41.Zybody下调EGFR表达
将SK-BR3细胞以0.5X106个细胞/孔铺种在6孔板中并培养过夜。次日，将细胞用含有10%FBS的1mL完全DMEM培养基中的10μg/ml双特异性和三特异性zybody或赫赛汀在37℃处理24小时。制备细胞裂解物，并且如实施例37中所述，进行蛋白质印迹分析以使用EGFR抗体(目录号：MAB10951，R&D System)检测EGFR抗体水平并检测总ERK水平。 
用赫赛汀和Her-培妥珠单抗scFv处理对SK-BR3细胞中的EGFR水平没有影响。HER-egfr部分地下调EGFR蛋白，并且在三特异性zybody处理的细胞中观察到EGFR几乎完全降解。 
实施例42：Zybody增加MRD效力
进行以下实验以检验抗体融合物对MRD效力的影响。96孔板的各孔用不同比率的IGF1R和ErbB2-Fc(HER2)(1μg/mL)包被。洗涤各孔并且随后在生物素标记的IGF-1存在下添加zybody的连续稀释物。使用的zybody是在重链的C末端上含有靶向IGFR的MRD的赫赛汀抗体(HER-igfr(H))和在重链的C末端上含有靶向IGFR的MRD的修美乐抗体(HUM-igfr(H))。通过添加链霉亲和素-HRP将结合的IGF-1定量。下表中显示结果。 
表8：对IGF-1结合作用的抑制，IC50(nM) 
Figure BDA0000457457350002761
当平板不含有ErbB2-Fc(HER2)时，就两种测试的zybody而言，对IGF-1结合作用的抑制是相似的(IC50HER-igfr(H)=220nM；IC50HUM-igfr(H)=240nM)。当平板含有抗体靶和MRD靶时，与MRD靶的结合大幅度减少。例如，使用HER-igfr(H)zybody，对IGF-1 结合作用的抑制从抗体靶不在平板上时(IGFR1R:HER2的比率=1:0)的IC50=220nm降至抗体靶和MRD靶在平板上以相等量(IGFR1R:HER2的比率=1:1)存在时的IC50=1.44。数据显示抗体靶和MRD靶与HER-igf1r(H)的结合增强低亲和力IGF-1R MRD的效力大于1000倍。相比之下，当使用含有修美乐抗体的zybody进行相同实验时，未观察到这种明显作用，所述zybody不与HER2结合，即便该zybody含有靶向IGF1R的相同MRD也是如此。因而，通过异型亲合力驱动的结合作用，双特异性zybody显示增强的MRD效力。 
实施例43.构象约束可以增加MRD结合作用和稳定性
为了确定构象约束在含有MRD的抗体背景下对MRD的影响，开发了几种在各种位置含有半胱氨酸的修饰的MRD构建体。半胱氨酸形成分子间二硫键并且因此构成蛋白质的三维构象。在这个实验中改变的MRD是MPM。下表中显示的MPM的序列类似于(上文描述的)lm32的序列，但是含有以下4个氨基酸变化：M5G、N16Q、L19A和Q24E。在MPM中的位置5处的G最小化甲硫氨酸残基的潜在氧化作用，并且L19A和Q24E消除潜在有免疫原性的序列。在这些实验中，全部MRD均与赫赛汀重链的C末端融合。 
随后测试所产生的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)的靶结合作用和稳定性。通过以下方式确定稳定性：向小鼠IV注射施用含有MRD的抗体并且将注射后15分钟的血浆中MRD的水平与注射后2、3或4日的血浆中MRD的水平比较。下文表9中显示结果。 
表9：受约束的MRD的结合作用和稳定性 
Figure BDA0000457457350002781
Figure BDA0000457457350002791
结果表明，在MRD的核心靶结合结构域(例如，MPM中的PMDQDEALLY外部添加两个半胱氨酸残基可以增加MRD半寿期，而基本上不减少结合亲和力。 
下述构建体可以显示增加的MRD半寿期而基本上不减少结合亲和力，所述构建体含有位于近分子末端的一个半胱氨酸(例如，距离该末端约两个氨基酸)和位于靶结合结构域的对侧末端上(例如，在核芯 结合结构域外部至少约3个或约4-7个氨基酸)和近蛋白质融合处(例如，距接头或抗体序列约4-6个氨基酸)的一个半胱氨酸。另外，在靶结合位点内部、尤其在靶结合位点的任一末端上包含半胱氨酸的MRD可以是具有高度稳定性和有效靶结合作用的MRD。 
可以通过改变MRD的序列以包含至少两个半胱氨酸，鉴定其中MRD具有长体内半寿期和高效靶结合作用的新多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。所述半胱氨酸可以彼此相距至少约6个、约7个、约8个、约9个、约10个、约11个、约12个、约13个、约14个、约15个、约16个、约17个、约18个、约19个或约20个氨基酸。使用已知的技术和本文所述的方法评价含有MRD的抗体中的MRD的结合潜力和半寿期。将含有MRD的抗体静脉内施用至小鼠。在施用后不久(例如，在施用后15分钟)和在稍后时间点(例如，在施用后2、3或4日)从小鼠采集血浆。鉴定到与MRD靶高效结合并且在体内稳定(例如，至少约50%的MRD在施用后48小时存在)的可用的多价和多特异性组合物(例如，含有MRD的抗体)。 
实施例44.用于重定向的T-细胞杀伤作用的含有MRD的抗体
通过靶向CD3的肽与抗CD19抗体融合并通过靶向CD19的肽与抗CD3抗体融合物，制备抗体MRD-融合分子。通过对CD3阳性Jurkat细胞、人PBMC和许多种不同CD19阳性B细胞淋巴瘤细胞系(例如，SKW6.4、Blin I、BJAB、Daudi和Raji)流式细胞分析，分析所得到的含有MRD的抗体以确定它们与每种靶的特异性结合亲和力。由于BL60和浆细胞瘤细胞系NCI和L363就CD3和CD19而言均为阴性，因此使用它们作为阴性对照细胞以确定含有MRD的抗体的特异性。CD3阴性Jurkat细胞也可以用作阴性对照细胞群。细胞系在含有10%FCS(GIBCO)的完全RPMI1640(Invitrogen)中培养。 
将细胞用PBS洗涤并通过在4℃重悬于含有10%人IgG(Innovative Research)和0.1%NaN3的PBS(封闭缓冲液)中30分钟进行封闭。随后通过离心(100×g持续5分钟)沉淀细胞，随后使其与封闭缓冲液中的含有MRD的抗体在4℃温育30分钟。用PBS洗涤细 胞3次并且检测细胞表面结合的含有MRD的抗体。可以用BDFACScan进行流式细胞术。 
实施例45.用于重定向的T-细胞杀伤作用的含有MRD的抗体的体外细胞毒性
将含有双特异性CD19/CD3MRD的抗体就它们诱导重定向的T-细胞杀伤CD19阳性淋巴瘤细胞的能力测定。使用LymphoprepTM(Nycomed/Axis-Shield PoC)梯度离心，随后以100×g离心以除去血小板，从随机供体的新鲜暗黄层分离人外周血单核细胞(PBMC)作为效应细胞。使用Dyna珠CD19Pan B(Life Technologies)耗尽CD19阳性B细胞。在CD19阳性B细胞耗尽之前和之后，通过用FITC缀合的抗人CD19的小鼠抗体和反向标记的PE-缀合的抗CD45抗体标记，以流式细胞术分析PBMC群。PBMC在37℃在5%CO2下温育过夜。使用CD19阳性B细胞系(例如，SKW6.4、Blin I、BJAB、Daudi和Raji)作为靶细胞。 
在96孔板中使用含10%FCS(GIBCO)的RPMI1640完全培养基(Invitrogen)以不同密度温育靶细胞，从而添加相同数目的未刺激的PBMC导致不同的效应子对靶细胞(E:T)比率。随后将多种浓度的CD19/CD3双特异性的含有MRD的抗体添加至每个孔，随后添加未刺激的PBMC。平板在37℃在5%CO2下温育3小时。可以使用 
Figure BDA0000457457350002812
细胞毒性测定法(PerkinElmer)在圆底96孔板中，遵循制备商的说明书测量细胞毒性。通过在无效应细胞或含有MRD的抗体的情况下温育靶细胞测量自发性细胞死亡，并且通过靶细胞与10%Triton X-100温育确定最大细胞死亡。将特异性细胞裂解的分数计算为效应子介导的细胞毒性([实验性细胞死亡]-[自发性细胞死亡])和最大预期的细胞毒性([最大细胞死亡]-[自发性细胞死亡])之间的比率。 
实施例45：用于重定向的T-细胞杀伤作用的含有MRD的抗体的体内功效
Raji B淋巴瘤细胞从例行细胞培养物取出，在PBS中洗涤，并制备为1×107个细胞/ml。随后在50%Matrigel溶液中具有或没有5×106个PBMC(如上制备)的情况下用1×106个Raji细胞皮下接种NOD/SCID小鼠。在淋巴瘤细胞接种后，将CD19/CD3双特异性的含有MRD的抗体静脉内施用1小时。作为阴性对照，在淋巴瘤细胞接种后1小时，还静脉内施用针对HER2和CD3(即，与抗HER2抗体融合的结合CD3的MRD和与抗CD3抗体融合的结合HER2的MRD)和HER2和CD19((即，与抗HER2抗体融合的结合CD19的MRD和与抗CD19抗体融合的结合HER2的MRD)的双特异性含有MRD的抗体和PBS。在起始剂量后，每日一次使用含有MRD的抗体或PBS，持续4日。通过卡尺测量皮下肿瘤以确定每个处理组的生长速率。此外每周2次测量小鼠体重作为治疗可耐受性的指标。 
虽然已经参考以上实施例描述本发明，但是应当理解本发明的精神和范围内涵盖修改和变化。因此，本发明仅由以下权利要求限定。 
*************** 
本申请以35U.S.C.§119(e)的名义要求以下申请的权益：2011年5月24日提交的临时申请号61/489,249；2012年2月10日提交的61/597,714；和2012年3月14日提交的61/610,831；所述文献的每一篇通过引用的方式完整并入本文。另外，美国申请公开号2012/0100166的公开内容通过引用的方式完整并入本文。 
将引用的全部出版物、专利、专利申请、互联网网址和登录号/数据库序列(包含多核苷酸序列和多肽序列)通过引用的方式完整并入本文，相同程度地用于全部目的，如同专门且个别地说明通过引用方式如此并入每份单独的出版物、专利、专利申请、互联网网址和登录号/数据库序列。 

Claims (53)

1.一种包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的复合物，其中所述抗体和MRD与相同细胞或分子上的不同靶或表位结合，其中MRD结合作用在生理条件下激动或拮抗MRD靶，并且其中所述MRD在生理条件下在所述抗体不存在时不结合至并激动或拮抗所述MRD靶。
2.根据权利要求1所述的复合物，其中在所述抗体不存在时，MRD在生理条件下以大于0.01、0.1、0.5或0.7nM的EC50结合MRD靶。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的复合物，其中所述抗体和MRD与异聚或同聚蛋白上的不同靶或表位结合。
4.一种用于抑制细胞生长的方法，包括使细胞与包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多特异性和多价复合物及蛋白激酶抑制剂接触。
5.一种用于抑制患者中血管生成的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多特异性和多价复合物及蛋白激酶抑制剂。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述抗体结合选自以下的靶：VEGF、VEGFR1、EGFR、ErbB2、IGF-IR、cMET、FGFR1和FGFR2。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其中所述蛋白激酶抑制剂抑制含有MRD的抗体的靶。
8.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其中所述蛋白激酶抑制剂抑制与含有MRD的抗体不同的靶。
9.根据权利要求4-8中任一项所述的方法，其中所述蛋白激酶抑制剂抑制多于一种蛋白激酶。
10.根据权利要求4-9中任一项所述的方法，其中所述蛋白激酶抑制剂是选自以下的成员：伊马替尼、吉非替尼、凡德他尼、厄洛替尼、舒尼替尼、拉帕替尼和索拉非尼。
11.一种用于治疗患有疾病或病症的患者的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多特异性和多价复合物及蛋白激酶抑制剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述疾病或病症是免疫系统的疾病或病症。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述免疫系统的疾病或病症是炎症或自身免疫性疾病。
15.根据权利要求14所述的方法、其中所述自身免疫性疾病是类风湿性关节炎、Crohn病、系统性红斑狼疮、炎性肠病、银屑病、糖尿病、溃疡性结肠炎或多发性硬化。
16.根据权利要求11-15中任一项所述的方法，其中所述抗体与选自以下的靶结合：TNF，VEGF、VEGFR1、EGFR、ErbB2、IGF-IR、cMET、FGFR1、FGFR2和CD20。
17.根据权利要求11-16中任一项所述的方法，其中所述蛋白激酶抑制剂抑制含有MRD的抗体的靶。
18.根据权利要求11-16中任一项所述的方法，其中所述蛋白激酶抑制剂抑制与含有MRD的抗体不同的靶。
19.根据权利要求11-18中任一项所述的方法，其中所述蛋白激酶抑制剂抑制多于一种蛋白激酶。
20.根据权利要求11-19中任一项所述的方法、其中所述蛋白激酶抑制剂是选自以下的成员：伊马替尼、吉非替尼、凡德他尼、厄洛替尼、舒尼替尼、拉帕替尼和索拉非尼。
21.根据权利要求11-19中任一项所述的方法，其中所述蛋白激酶抑制剂是选自以下的成员：来他替尼、托法替尼、鲁索利替尼、SB1518、CYT387、LY3009104、TG101348、福他替尼、BAY61-3606和舒尼替尼。
22.一种包含抗体和至少一个模块识别结构域(MRD)的多价和多特异性复合物，其中所述复合物具有针对细胞表面靶的单结合位点。
23.根据权利要求22所述的复合物，其包含针对相同靶上不同表位的2个单结合位点。
24.根据权利要求22或23所述的复合物，其中所述复合物具有针对不同靶的2、3、4、5个或更多个单结合位点。
25.根据权利要求22-24中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对白细胞上的靶的单结合位点。
26.根据权利要求22-25中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对T细胞上的靶的单结合位点。
27.根据权利要求22-26中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对CD3的单结合位点。
28.根据权利要求27所述的复合物，其中所述复合物具有针对CD3ε的单结合位点。
29.根据权利要求22-28中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对天然杀伤细胞上的靶的单结合位点。
30.根据权利要求22-29中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对患病细胞上的靶的多结合位点。
31.根据权利要求30所述的复合物，其中所述复合物具有针对患病细胞上2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。
32.根据权利要求22-31中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对肿瘤细胞上的靶的多结合位点。
33.根据权利要求32所述的复合物，其中所述复合物具有针对肿瘤细胞上2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。
34.根据权利要求22-33中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对免疫细胞上的靶的多结合位点。
35.根据权利要求34所述的复合物，其中所述复合物具有针对免疫细胞上2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。
36.根据权利要求22-35中任一项所述的复合物，其中所述复合物结合白细胞上的靶和肿瘤细胞上的靶。
37.根据权利要求22-36中任一项所述的复合物，其中所述复合物结合CD3和CD19。
38.根据权利要求22-37中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对传染因子或被传染因子感染的细胞上的靶的多结合位点。
39.根据权利要求38所述的复合物，其中所述复合物具有针对传染因子或被传染因子感染的细胞上2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。
40.根据权利要求22-39中任一项所述的复合物，其中所述复合物具有针对与内源血脑屏障(BBB)受体介导的转运系统相关的靶的单结合位点。
41.根据权利要求40所述的复合物，其中所述复合物具有针对与内源BBB受体介导的转运系统相关的靶的多结合位点。
42.根据权利要求41所述的复合物，其中所述复合物具有针对与内源BBB受体介导的转运系统相关的2、3、4、5种或更多种靶的多结合位点。
43.根据权利要求22所述的复合物，其中所述单结合位点是MRD。
44.根据权利要求22所述的复合物，其中所述单结合位点是抗原结合结构域。
45.根据权利要求22-44中任一项所述的复合物，其中所述复合物还包含细胞毒剂。
46.多核苷酸，其编码在根据权利要求22-45中任一项所述的复合物中的含有MRD的抗体的重链或轻链。
47.载体，其包含根据权利要求46所述的多核苷酸。
48.宿主细胞，其包含根据权利要求46所述的多核苷酸或根据权利要求47所述的载体。
49.药物组合物，其包含根据权利要求22-45中任一项所述的复合物。
50.用于抑制细胞生长的方法，包括使细胞与根据权利要求22-45中任一项所述的复合物接触。
51.用于抑制患者中血管生成的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求22-45中任一项所述的复合物。
52.用于治疗具有癌症的患者的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求22-45中任一项所述的复合物。
53.用于治疗患有免疫系统疾病或病症的患者的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求22-45中任一项所述的复合物。
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