CN101541784B

CN101541784B - 丙型肝炎病毒抑制剂

Info

Publication number: CN101541784B
Application number: CN2007800416231A
Authority: CN
Inventors: N·辛; B·L·温纳伯; L-Q·孙; S-Y·席特; Y·陈; P·M·史格拉
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2006-11-09
Filing date: 2007-11-08
Publication date: 2013-04-24
Anticipated expiration: 2027-11-08
Also published as: BRPI0718625A2; JP2010509359A; NO20091591L; TW200826938A; US20080119461A1; CL2007003250A1; US7772180B2; NZ576817A; EP2086963B1; EP2086963A2; MX2009004888A; CN101541784A; CA2669310A1; WO2008060927A3; AR063653A1; PE20081344A1; WO2008060927A2; KR20090082467A; EA200900676A1; IL198248A0

Abstract

公开了具有通式(I)之丙型肝炎病毒抑制剂。

Description

丙型肝炎病毒抑制剂

相关申请案的交叉引用

本申请系主张2006年11月9日提出申请之美国临时申请序号60/865,034之权益。

【技术领域】

本公开内容一般而言系涉及抗病毒化合物，且更具体地涉及抑制由丙型肝炎病毒(HCV)编码之NS3蛋白酶(于本文中亦称为″丝氨酸蛋白酶″)功能之化合物，包含此种化合物之组合物，及抑制NS3蛋白酶功能之方法。

【背景技术】

HCV为一种主要人类病原体，在全世界感染经估计1亿7千万人——约为1型人免疫缺陷病毒感染数目之五倍。实质部分之这些HCV感染个体发展严重进行性肝病，包括肝硬化与肝细胞癌。

目前，最有效之HCV疗法系采用α-干扰素与三唑核苷之组合，在40％患者中导致持续功效。最近的临床结果证实，作为单一疗法，经PEG化之α-干扰素系优于未改性之α-干扰素。但是，即使是使用涉及经PEG化α-干扰素与三唑核苷组合之实验治疗服用法，实质部分之患者在病毒量上并未具有持续降低。因此，对于发展有效治疗剂以治疗HCV感染有清楚且未满足之需求。

HCV为正链RNA病毒。以推导的氨基酸序列之比较及在5′-未翻译区中之广泛类似性为基础，HCV已在黄病毒科中被分类为单独的属。黄病毒科之所有成元已包封病毒粒体，其含有经由单一、不间断的开放阅读框之翻译，而使所有已知病毒特异性蛋白质进行编码之正链RNA基因组。

相当可观之异质性被发现于整个HCV基因组中之核苷酸及经编码之氨基酸序列内。六种主要基因型已被表征，且超过50种亚型已被描述。HCV之主要基因型在其全世界之分布上有差异，且HCV基因异质性之临床重要性仍然难以捉摸，尽管基因型对发病原理与疗法上之可能作用已作过许多研究。

单链HCV RNA基因组为大约9500个核苷酸长度，且具有编码约3000个氨基酸之单一大的多蛋白之单一开放阅读框(ORF)。在受感染细胞中，此多蛋白系在多个位置处被细胞与病毒蛋白酶切割，以产生结构性与非结构性(NS)蛋白质。在HCV之情况中，成熟非结构性蛋白质(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B)之产生系藉由两种病毒蛋白酶达成。第一种系在NS2-NS3接合处切割；第二种为被包含在NS3之N-末端区域内之丝氨酸蛋白酶，且介导NS3下游之所有后续切割，在NS3-NS4A切割位点以顺式，而对其余NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位置以反式进行切割。NS4A蛋白质显示充当多重功能，充作NS3蛋白酶之辅因子，且可能帮助NS3及其他病毒复制酶成分之膜定位。NS3蛋白质与NS4A之复合物形成系为有效多蛋白处理所必需，以提升所有位置上之蛋白酶水解效率。NS3蛋白质亦显示核苷三磷酸酶与RNA解旋酶活性。NS5B为RNA依赖性RNA聚合酶，其系涉及HCV之复制。

本发明公开内容系提供肽化合物，其可抑制NS3蛋白酶例如与NS4A蛋白酶联合之功能。再者，本发明公开内容系描述组合疗法对患者之施用，由此，根据本发明公开内容之化合物，其系有效抑制HCV NS3蛋白酶，可与一或两种具有抗-HCV活性之其他化合物一起施用。

【发明内容】

于第一方面，本公开内容系提供式(I)化合物

或其药学上可接受之盐，其中

m为1、2或3；

R¹系选自羟基与-NHSO₂R⁶；其中R⁶系选自烷基、芳基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基及-NR^aR^b，其中烷基、环烷基及(环烷基)烷基之环烷基部分任选地被一、二或三个取代基取代，取代基选自烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷基、芳烷基、芳基羰基、氰基、环烯基、(环烷基)烷基、卤基、卤烷氧基、卤烷基及(NR^eR^f)羰基；

R²系选自氢、烯基、烷基及环烷基，其中烯基、烷基及环烷基任选地被卤基取代；

R³系选自烯基、烷氧基烷基、烷氧羰基烷基、烷基、芳烷基、羧基烷基、氰基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤烷氧基、卤烷基、(杂环基)烷基、羟烷基、(NR^cR^d)烷基及(NR^eR^f)羰基烷基；

R⁴系选自苯基和五-或六-元部分或完全不饱和环，任选地含有一、二、三或四个选自氮、氧及硫之杂原子；其中各环任选地被一、二、三或四个取代基取代，取代基独立选自烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、烷硫基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤基、卤烷基、卤烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基及氧代基；其条件是，当R⁴为六元取代环时，在环上之所有取代基，惟氟基除外，必须在相对于该环对母分子部分连接点之间位和/或对位上；

R^5A、R^5B、R^5C、R^5D、R^5E及R^5F各独立选自氢、烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、芳基、羧基、氰基、氰基烷基、环烷基、卤基、卤烷基、卤烷氧基、杂环基、羟基、羟烷基、硝基-NR^cR^d、(NR^cR^d)烷基、(NR^cR^d)烷氧基、(NR^eR^f)羰基及(NR^eR^f)磺酰基；或

两个相邻R⁵基团和它们所连接之碳原子一起，形成四-至七-元部分-或完全-不饱和环，任选地含有一或两个独立选自氮、氧及硫之杂原子，其中该环任选地被一、二或三个基团取代，所述基团独立选自烷氧基、烷基、氰基、卤基、卤烷氧基及卤烷基；

R^a与R^b系独立选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基及杂环基烷基；或R^a与R^b和它们所连接之氮原子一起形成四至七-元单环杂环；

R^c与R^d系独立选自氢、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、芳烷基及卤烷基；且

R^e与R^f系独立选自氢、烷基、芳基、芳烷基及杂环基；其中芳基、芳烷基之芳基部分、及杂环基任选地被一或两个取代基取代，取代基独立选自烷氧基、烷基及卤基。

在第一方面之第一项具体实施例中，本公开内容系提供式(I)化合物，或其药学上可接受之盐，其中R¹为-NHSO₂R⁶。

在第一方面之第二项具体实施例中，本公开内容系提供式(I)化合物，或其药学上可接受之盐，其中

m为0、1或2；

R¹为-NHSO₂R⁶；其中R⁶系选自烷基、芳基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基及-NR^aR^b，其中烷基、环烷基及(环烷基)烷基之环烷基部分任选地被一、二或三个取代基取代，取代基选自烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷基、芳烷基、芳基羰基、氰基、环烯基、(环烷基)烷基、卤基、卤烷氧基、卤烷基及(NR^eR^f)羰基；

R²系选自烯基、烷基及环烷基，其中烯基、烷基及环烷基任选地被卤基取代；

R³系选自烯基与烷基；

R⁴系选自苯基和五-或六-元部分或完全不饱和环，任选地含有一、二、三或四个选自氮、氧及硫之杂原子；其中各环任选地被一、二、三或四个取代基取代，取代基独立选自烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、烷硫基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤基、卤烷基、卤烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基及氧代基；其条件是，当R⁴为六元经取代环时，在环上之所有取代基，惟氟基除外，必须在相对于该环对母分子部分连接点之间位和/或对位上；

R^5A、R^5B、R^5C、R^5D、R^5E及R^5F各独立选自氢、烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、芳基、羧基、氰基、氰基烷基、环烷基、卤基、卤烷基、卤烷氧基、杂环基、羟基、羟烷基、硝基、-NR^cR^d、(NR^cR^d)烷基、(NR^cR^d)烷氧基、(NR^eR^f)羰基及(NR^eR^f)磺酰基；或

R^a与R^b系独立选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基及杂环基烷基；或R^a与R^b和它们所连接之氮原子一起形成四-至七-元单环杂环；

在第一方面之第三项具体实施例中，本公开内容系提供式(I)化合物，或其药学上可接受之盐，其中R⁶系选自未取代之环烷基与-NR^aR^b。

在第一方面之第四项具体实施例中，本公开内容系提供式(I)化合物，或其药学上可接受之盐，其中

m为1；

R¹为-NHSO₂R⁶；其中R⁶为未取代之环烷基；

R²为烯基；

R³系选自烯基与烷基；

R⁴系选自苯基和五-或六-元部分或完全不饱和环，任选地含有一、二、三或四个选自氮、氧及硫之杂原子；其中各环任选地被一、二或三个取代基取代，取代基独立选自烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤基、卤烷基、卤烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基及氧代基；其条件是，当R⁴为六元经取代环时，在环上之所有取代基，惟氟基除外，必须在相对于该环对母分子部分连接点之间位和/或对位上；

R^5A、R^5B、R^5C、R^5D、R^5E及R^5F各独立选自氢、烷氧基、芳基及-NR^cR^d；或

两个相邻R⁵基团和它们所连接之碳原子一起，形成六元部分-或完全-不饱和环，任选地含有一或两个独立选自氮、氧及硫之杂原子，其中该环任选地被一、二或三个基团取代，取代基独立选自烷氧基、烷基、氰基、卤基、卤烷氧基及卤烷基；

R^c与R^d系独立选自氢、烷氧羰基、烷基、烷基羰基及芳烷基；且

R^e与R^f系独立选自氢、烷基、芳基及芳烷基。

在第一方面之第五项具体实施例中，本公开内容系提供式(I)化合物，或其药学上可接受之盐，其中

m为1；

R¹为-NHSO₂R⁶；其中R⁶为未取代之环烷基；

R²为烯基；

R³系选自烯基与烷基；

R⁴为苯基，任选地被一、二或三个取代基取代，取代基独立选自烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤基、卤烷基、卤烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基及氧代基；其条件是，在环上之所有取代基，惟氟基除外，必须在相对于该环对母分子部分连接点之间位和/或对位上；

两个相邻R5基团和它们所连接之碳原子一起，形成六元部分-或完全-不饱和环，任选地含有一或两个独立选自氮、氧及硫之杂原子，其中该环任选地被一、二或三个基团取代，取代基独立选自烷氧基、烷基、氰基、卤基、卤烷氧基及卤烷基；

R^e与R^f系独立选自氢、烷基、芳基及芳烷基。

在第一方面之第六项具体实施例中，本公开内容系提供式(I)化合物，或其药学上可接受之盐，其中

m为1；

R¹为-NHSO₂R⁶；其中R⁶为未取代之环烷基；

R²为烯基；

R³系选自烯基与烷基；

R⁴为含有一个氮原子之六元完全不饱和环；其中该环任选地被一、二或三个取代基取代，取代基独立选自烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤基、卤烷基、卤烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基及氧代基；其条件是，在环上之所有取代基，惟氟基除外，必须在相对于该环对母分子部分连接点之间位和/或对位上；

R^e与R^f系独立选自氢、烷基、芳基及芳烷基。

在第二方面，本公开内容系提供一种包含式(I)化合物或其药学上可接受盐及药学上可接受载体之组合物。在第二方面之第一项具体实施例中，此组合物进一步包含至少一种具有抗-HCV活性之其他化合物。在第二方面之第二项具体实施例中，至少一种其他化合物为干扰素或三唑核苷。在第二方面之第三项具体实施例中，干扰素系选自干扰素α2B、经PEG化之干扰素α、复合干扰素(consensusinterferon)、干扰素α2A及类淋巴母细胞干扰素τ。

在第二方面之第四项具体实施例中，本公开内容系提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受之盐、药学上可接受之载体及至少一种具有抗-HCV活性之其他化合物；其中至少一种其他化合物系选自白介素2、白介素6、白介素12、提高1型辅助T细胞应答发展之化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特(Imiqimod)、三唑核苷、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚胺及金刚烷乙胺。

在第二方面之第五项具体实施例中，本公开内容系提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受之盐、药学上可接受之载体及至少一种具有抗-HCV活性之其他化合物；其中至少一种其他化合物有效抑制靶标之功能，该靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入、HCV装配、HCV流出、HCV NS5A蛋白质及IMPDH，以治疗HCV感染。

于第三方面，本发明公开内容系提供一种在患者中治疗HCV感染之方法，其包括对该患者投予治疗上有效量之式(I)化合物，或其药学上可接受之盐。在第三方面之第一项具体实施例中，此方法进一步包括在式(I)化合物或其药学上可接受盐之前、之后或同时投予至少一种具有抗-HCV活性之其他化合物。在第三方面之第二项具体实施例中，至少一种其他化合物为干扰素或三唑核苷。在第三方面之第四项具体实施例中，干扰素系选自干扰素α2B、经PEG化之干扰素α、复合干扰素、干扰素α2A及类淋巴母细胞干扰素τ。

在第三方面之第五项具体实施例中，本发明公开内容系提供一种在患者中治疗HCV感染之方法，其包括对该患者投予治疗上有效量之式(I)化合物，或其药学上可接受之盐，及至少一种具有抗-HCV活性之其他化合物，在式(I)化合物或其药学上可接受盐之前、之后或同时投予，其中至少一种其他化合物系选自白介素2、白介素6、白介素12、提高1型辅助T细胞应答发展之化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特(Imiqimod)、三唑核苷、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚胺及金刚烷乙胺。

在第三方面之第六项具体实施例中，本发明公开内容系提供一种在患者中治疗HCV感染之方法，其包括对该患者投予治疗上有效量之式(I)化合物，或其药学上可接受之盐，及至少一种具有抗-HCV活性之其他化合物，在式(I)化合物或其药学上可接受盐之前、之后或同时投予，其中至少一种其他化合物有效抑制靶标之功能，该靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入、HCV装配、HCV流出、HCV NS5A蛋白质及IMPDH，以治疗HCV感染。

于第四方面，本发明公开内容系提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受之盐，一、二、三、四或五种具有抗-HCV活性之其他化合物，及药学上可接受之载体。在第四方面之第一项具体实施例中，此组合物包含三或四种具有抗-HCV活性之其他化合物。在第四方面之第二项具体实施例中，此组合物包含一或两种具有抗-HCV活性之其他化合物。

于第五方面，本发明公开内容系提供一种在患者中治疗HCV感染之方法，其包括对该患者投予治疗上有效量之式(I)化合物或其药学上可接受之盐，及一、二、三、四或五种具有抗-HCV活性之其他化合物，在式(I)化合物或其药学上可接受盐之前、之后或同时投予。在第一方面之第一项具体实施例中，此方法包括投予三或四种具有抗-HCV活性之其他化合物。在第一方面之第二项具体实施例中，此方法包括投予一或两种具有抗-HCV活性之其他化合物。

本发明公开内容之其他方面可包括本文中所公开具体实施例之适当组合。

又其他方面与具体实施例可在本文所提供之说明中发现。

于本文中，本公开内容之说明应与化学键合之定律与原理一致地解释。于一些情况中，可能必须移除氢原子，以顺应任何特定位置上之取代基。

应明了的是，被本公开内容所涵盖之化合物系为对于作为药剂使用稳定的那些化合物。

所意欲的是任何取代基或变数在分子中之特定位置处之定义，系与其在该分子中别处之定义无关。例如，当n为2时，两个R⁵基团之每一个可为相同或不同。

所有在本说明书中引述之专利、专利申请及文献参考资料，均通过引用以其全文并于本文。在不一致之情况中，本公开内容，包括定义，将占优势。

当于本说明书中使用时，下列术语具有所示之意义：

于本文中使用之单数形式″一个″、″一种″及″该″包括复数指称，除非上下文清楚地另有指述。

除非另有述及，否则本公开内容之所有芳基、环烷基及杂环基可如其各自定义之每一个中所述经取代。例如，芳烷基之芳基部分可如″芳基″术语之定义中所述经取代。

于一些情况中，在任何特定基团中之碳原子数系在该基团之叙述之前表示。例如，″C_1-2烷基″一词表示含有一或两个碳原子之烷基。于此等指称存在之情况下，其系先行于此处所含有之所有其他定义。

于本文中使用之单数形式″一个″、″一种″及″该″系包括复数指称，除非上下文清楚地另有指述。

于本文中使用之″烯基″一词，系指二至六个碳原子之直链或支链基团，含有至少一个碳-碳双键。

于本文中使用之″烷氧基″一词，系指经过氧原子连接至母分子部分之烷基。

于本文中使用之″烷氧基烷基″一词，系指被一、二或三个烷氧基取代之烷基。

于本文中使用之″烷氧羰基″一词，系指经过羰基连接至母分子部分之烷氧基。

于本文中使用之″烷氧羰基烷基″一词，系指被一、二或三个烷氧羰基取代之烷基。

于本文中使用之″烷基″一词，系指衍生自含有一至十个碳原子之直链或支链饱和烃之基团。

于本文中使用之″烷基羰基″一词，系指经过羰基连接至母分子部分之烷基。

于本文中使用之″烷硫基″一词，系指经过硫原子连接至母分子部分之烷基。

于本文中使用之″芳基″一词，系指苯基或双环稠环系统，其中此等环之一或两个为苯基。双环稠环系统由稠合至四-至六元芳族或非芳族碳环之苯基组成。本公开内容之芳基可经过此基团中之任何可取代碳原子连接至母分子部分。芳基之代表性实例包括但不限于2，3-二氢化茚基、茚基、萘基、苯基及四氢萘基。本公开内容之芳基可任选地被一、二、三、四或五个取代基取代，取代基独立选自烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、羧基、环烷基、环烷基氧基、氰基、卤基、卤烷氧基、卤烷基、硝基、-NR^cR^d、(NR^cR^d)羰基及氧代基。

于本文中使用之″芳烷基″一词，系指被一、二或三个芳基取代之烷基。

于本文中使用之″芳基羰基″一词，系指经过羰基连接至母分子部分之芳基。

于本文中使用之″羰基″一词，系指-C(O)-。

于本文中使用之″羧基″一词，系指-CO₂H。

于本文中使用之″羧基烷基″一词，系指被一、二或三个羧基取代之烷基。

于本文中使用之″氰基″一词，系指-CN。

于本文中使用之″氰基烷基″一词，系指被一、二、或三个氰基取代之烷基。

于本文中使用之″环烯基″一词，系指非芳族、部分不饱和单环状、双环状或三环状环系统，具有三至十四个碳原子与零个杂原子。环烯基之代表性实例，包括但不限于环己烯基、八氢萘基及降冰片烯基。

于本文中使用之″环烷基″一词，系指饱和单环状或双环状烃环系统，具有三至十个碳原子与零个杂原子。环烷基之代表性实例包括但不限于环丙基、环丁基及环戊基。

于本文中使用之″(环烷基)烷基″一词，系指被一、二或三个环烷基取代之烷基。

于本文中使用之″环烷基氧基″一词，系指经过氧原子连接至母分子部分之环烷基。

于本文中使用之″卤基″与″卤素″一词，系指F、Cl、Br及I。

于本文中使用之″卤烷氧基″一词，系指经过氧原子连接至母分子部分之卤烷基。

于本文中使用之″卤烷基″一词，系指被一、二、三或四个卤原子取代之烷基。

于本文中使用之″杂环基″一词，系指五-、六-或七-元环，含有一、二或三个独立选自氮、氧及硫之杂原子。五元环具有零至两个双键，而六-与七-元环具有零至三个双键。″杂环基″一词亦包括双环状基团，其中杂环基环被稠合至四-至六元芳族或非芳族碳环，或另一个单环状杂环基。本发明公开内容之杂环基可经过此基团中之碳原子或氮原子连接至母分子部分。杂环基之实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、哌嗪基、吡啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基及硫代吗啉基。本发明公开内容之杂环基可任选地被一、二、三、四或五个取代基取代，取代基独立选自烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、羧基、环烷基、环烷基氧基、氰基、卤基、卤烷氧基、卤烷基、硝基、-NR^cR^d、(NR^cR^d)羰基及氧代基。

于本文中使用之″杂环基烷基″一词，系指被一、二或三个杂环基取代之烷基。

于本文中使用之″羟基″一词，系指-OH。

于本文中使用之″羟烷基″一词，系指被一、二或三个羟基取代之烷基。

于本文中使用之″硝基″一词，系指-NO₂。

于本文中使用之″-NR^aR^b″一词，系指两个基团R^a与R^b，其系经过氮原子连接至母分子部分。R^a与R^b系独立选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基及杂环基烷基；或R^a与R^b和它们所连接之氮原子一起形成五或六元单环状杂环。

于本文中使用之″-NR^cR^d″一词，系指两个基团R^c与R^d，其系经过氮原子连接至母分子部分。R^c与R^d系独立选自氢、烷氧羰基、烷基及烷基羰基。

于本文中使用之″(NR^cR^d)烷氧基″一词，系指经过氧原子连接至母分子部分之(NR^cR^d)烷基。

于本文中使用之″(NR^cR^d)烷基″一词，系指被一、二或三个-NR^cR^d基团取代之烷基。

于本文中使用之″(NR^cR^d)羰基″一词，系指经过羰基连接至母分子部分之-NR^cR^d基团。

于本文中使用之″-NR^eR^f″一词，系指两个基团R^e与R^f，其系经过氮原子连接至母分子部分。R^e与R^f系独立选自氢、烷基、芳基及芳烷基。

于本文中使用之″(NR^eR^f)羰基″一词，系指经过羰基连接至母分子部分之-NR^eR^f基团。

于本文中使用之″(NR^eR^f)羰基烷基″一词，系指经过烷基连接至母分子部分之(NR^eR^f)羰基。

于本文中使用之″(NR^eR^f)磺酰基″一词，系指经过磺酰基连接至母分子部分之-NR^eR^f基团。

于本文中使用之″氧代基″一词，系指＝O。

于本文中使用之″磺酰基″一词，系指-SO₂-。

于本文中使用之″前药″一词表示会于体内经由在血液中水解，而迅速地转变成母体化合物之化合物。本发明公开内容之前药包括母分子上之羟基之酯类、母分子上之羧基之酯类及母分子上之胺类之酰胺类。

本公开内容之化合物可以药学上可接受之盐存在。于本文中使用之″药学上可接受之盐″一词，表示本公开内容之化合物之盐或两性离子形式，其系为水或油-可溶性的或可分散性的，其系在安全可靠医学判断之范围内，适用于与患者之组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏性反应或其他问题或并发症，伴随着合理利益/风险比，且对于其所意欲之用途为有效。此等盐可于化合物之最后分离与纯化期间，或个别地经由使适当碱性官能团与适当酸反应而制成。代表性酸加成盐包括醋酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、1，3，5-三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、亚萘基磺酸盐、烟碱酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯醋酸盐、三氟醋酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐及十一烷酸盐。可被采用以形成药学上可接受加成盐之酸类，其实例包括无机酸类，譬如盐酸、氢溴酸、硫酸及磷酸，与有机酸类，譬如草酸、顺丁烯二酸、琥珀酸及柠檬酸。

碱性加成盐可在化合物之最后分离与纯化期间制成，其方式是使羧基与适当碱，譬如金属阳离子之氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应。药学上可接受盐之阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁及铝，以及无毒性季胺阳离子，譬如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己基胺、普鲁卡因、二苄胺、N，N-二苄基苯乙胺及N，N′-二苄基乙二胺。其他可用于形成碱加成盐之代表性有机胺类，包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶及哌嗪。

于本文中使用之″抗-HCV活性″一词，是指化合物有效治疗HCV病毒。

″公开内容之化合物″一词，及相当措辞，系意欲包括式(I)化合物，及其药学上可接受之对映异构体、非对映异构体及盐。同样地，对中间体之指称，系意欲包括其盐，在本文如此允许之处。

″患者″一词包括人类及其他哺乳动物两者。

″药物组合物″一词系意谓一种组合物，其包含公开内容之化合物，且并用至少一种其他药物载体，意即佐剂、赋形剂或媒剂，譬如稀释剂、防腐剂、填料、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、增甜剂、调味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂及分散剂，依投药模式与剂型之性质而定。可使用列示于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA(1999)(Remington氏药物科学，第18版，Mack出版公司(Easton，PA)(1999))中之成分。

于本文中采用之″药学上可接受″措辞，系指此等化合物、物质、组合物和/或剂型，其系在安全可靠医学判断之范围内，适用于与患者之组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏性反应或其他问题或并发症，伴随着合理利益/风险比。

于本文中使用之″治疗上有效量″一词，系意谓各活性成分之总量，其系足以显示有意义之患者利益，例如持续降低病毒量。当应用至单独投予之个别活性成分时，此术语系单独指该成分。当应用至组合时，此术语系指产生治疗效果之活性成分之合并量，无论是合并、连续或同时投药。

″治疗″与″进行治疗″一词系指：(i)预防疾病、病症或症状发生在可能易罹患该疾病、病症和/或症状，但尚未被诊断为具有该疾病之患者中；(ii)抑制疾病、病症或症状，意即遏制其发展；和/或(iii)减轻该疾病、病症或症状，意即造成该疾病、病症和/或症状之退化。

在用于命名本发明公开内容化合物之情况下，于本文中使用之指称P1′、P1、P2、P2^*、P3及P4系将蛋白酶抑制剂结合相对于天然肽切割底物结合之氨基酸残基之相对位置定图谱。切割系发生在P1与P1′间之天然底物中，其中无撇号位置系指称氨基酸，从肽天然切割位点之C-末端开始，延伸朝向N-末端；然而有撇号位置系从切割位点指称之N-末端发出，且延伸朝向C-末端。例如，P1′系指远离切割位点C-末端之右边末端之第一个位置(即N-末端第一个位置)；而P1系从C-末端切割位点左侧之编号开始，P2：自C-末端之第二个位置等(参阅Berger A.& Schechter I.，Transactions of the Royal Society London series(伦敦皇家学会会报分卷)(1970)，B257，249-264]。

下图系说明本发明公开内容化合物之指称。

不对称中心系存在于本发明公开内容之化合物中。例如，化合物可包含下式之P1环丙基构件

其中C₁与C₂各表示在环丙基环之位置1与2处之不对称碳原子。

R²系对羰基为同侧 R²系对羰基为同侧

R²系对酰胺为同侧 R²系对酰胺为同侧

应明了的是，公开内容系涵盖所有立体化学形式或其混合物，其具有抑制HCV蛋白酶之能力。

本发明公开内容之某些化合物亦可以可分离之不同稳定构型之形式存在。由于环绕不对称单键之限制旋转，例如由于位阻或环的张力，所致之扭转不对称性，可允许不同构象异构体之分离。本发明公开内容包括此等化合物之各构象异构体，及其混合物。

本发明公开内容之某些化合物可以两性离子形式存在，且本发明公开内容包括此等化合物之各两性离子形式，及其混合物。

当可用于疗法上时，治疗上有效量之式(I)化合物，以及其药学上可接受之盐，可以原始化学品投予，活性成分可以药物组合物呈现。因此，公开内容进一步提供药物组合物，其包含治疗上有效量之式(I)化合物或其药学上可接受之盐，及一或多种药学上可接受之载体、稀释剂或赋形剂。式(I)化合物及其药学上可接受之盐均如上述。载体、稀释剂或赋形剂必须是可接受的，其意义是可与此配方之其他成分相容，且不会有害于其接受者。根据本公开内容之另一方面，亦提供一种制备药物制剂之方法，其包括将式(I)化合物或其药学上可接受之盐与一或多种药学上可接受之载体、稀释剂或赋形剂混合。

药物制剂可以单位剂型呈现，每单位剂量含有预定量之活性成分。在每天每千克体重约0.01与约250毫克(″毫克/千克″)间之剂量水平，优选系在每天约0.05与约100毫克/千克体重间之本公开内容之化合物，典型上系在单一疗法中，用于预防与治疗HCV所介导之疾病。典型上，此公开内容之药物组合物系每天投予约1至约5次，或者，以连续灌注投予。此种投药可作为慢性或急性疗法使用。可与载体物质合并以产生单一剂型之活性成分量，系依被治疗之症状、症状之严重性、投药时间、投药途径、所采用化合物之排泄速率、治疗延续时间，及患者之年龄、性别、体重及状态而改变。优选单位剂量配方系为含有活性成分之如前文列举之日服剂量或亚剂量或其适当比率者。一般而言，治疗系以实质上低于化合物之最适宜剂量之小剂量引发。然后，藉由小增量，增加此剂量，直到在此等状况下达到最适宜效果为止。一般而言，最期望在将一般性地提供抗病毒有效结果而不会造成任何伤害或有害副作用之浓度含量下，投予该化合物。

当此公开内容之组合物包含本公开内容之化合物与一或多种其他治疗或预防剂之组合时，化合物与另一种药剂两者通常系在单一治疗服用法中正常投予剂量之约10至150％间之剂量程度下存在，而更优选系在约10与80％之间。

药物制剂可适合藉任何适当途径投药，例如藉由口腔(包括面颊或舌下)、直肠、鼻、局部(包括面颊、舌下或经皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或皮内注射或灌注)途径。此种配方可藉制药学领域中已知之任何方法制成，例如经由使活性成分与载体或赋形剂产生结合。

适合口服投药之药物制剂，可呈现为不连续单位，譬如胶囊或片剂；粉末或颗粒；在水性或非水性液体中之溶液或悬浮液；可食用泡沫物或起泡奶油；或水包油型液体乳化液或油包水型乳化液。

例如，对于呈片剂或胶囊形式之口服投药而言，可将活性药物成分与口服、无毒性药学上可接受之惰性载体并用，譬如乙醇、甘油、水等。粉末系经由将化合物粉碎成适当微细大小，并与经类似方式粉碎之药物载体混合而制成，该载体譬如可食用之碳水化合物，例如淀粉或甘露醇。调味剂、防腐剂、分散剂及着色剂，亦可存在。

胶囊系经由制备如前述之粉末混合物，并装填已形成之明胶外壳而制成。助流剂与润滑剂，譬如胶态二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固态聚乙二醇，可在装填作业之前被添加至粉末混合物中。亦可添加崩解剂或促溶剂，譬如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以在胶囊被摄食时改良药剂之利用性。

再者，当想要或必要时，适当粘合剂、润滑剂、崩解剂及着色剂亦可被掺入混合物中。适当粘合剂包括淀粉，明胶，天然糖类，譬如葡萄糖或β-乳糖，玉米增甜剂，天然与合成胶质，譬如阿拉伯胶、西黄蓍树胶或海藻酸钠，羧甲基纤维素、聚乙二醇等。在此等剂型中使用之润滑剂，包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂系包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂系以例如下述方式调配而成：制备粉末混合物，粒化或结块，添加润滑剂与崩解剂，并压制成片剂。粉末混合物系以下述方式制成：将经适当地粉碎之化合物与如上述之稀释剂或基料混合，且任选地使用粘合剂，譬如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，溶解阻滞剂(solution retardant)，譬如石蜡，吸收加速剂，譬如季盐和/或吸收剂，譬如膨润土、高岭土或磷酸二钙。粉末混合物可经造粒，其方式是以粘合剂，譬如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶粘液，或纤维素或聚合物质之溶液湿化，并强制经过筛网。作为粒化之一种替代方式，可使粉末混合物流动经过片剂机，且其结果是不完全形成之结块被破碎成颗粒。此等颗粒可藉由添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油而被润滑，以防止粘附至片剂形成模。然后，将已润滑之混合物压缩成片剂。亦可将本公开内容之化合物与自由流动惰性载体合并，并直接压缩成片剂，而未进行经过粒化或结块步骤。可提供透明或不透明保护涂层，其由虫胶之密封涂层、糖或聚合物质之涂层及蜡之抛光涂层组成。可将染料添加至此等涂层中，以区别不同单位剂量。

口服流体，譬如溶液、糖浆及酏剂，可以剂量单位形式制成，以致特定量系含有预定量之化合物。糖浆可经由使化合物溶解于适当调味水溶液中而制成，而酏剂系经由利用无毒性媒剂而制成。增溶剂与乳化剂，譬如乙氧基化异硬脂基醇类与聚氧乙烯山梨糖醇醚类，防腐剂，调味添加剂，譬如薄荷油或天然增甜剂或糖精或其他人造增甜剂等，亦可添加。

在适当情况下，供口服投药用之剂量单位配方可经微胶囊化。亦可制成此配方以延长或持续释放，例如经由将粒子物质涂覆或包埋在聚合物、蜡或其类似物中。

式(I)化合物及其药学上可接受之盐亦可以脂质体传输系统的形式投药，譬如小单层状泡囊、大单层状泡囊及多层状泡囊。脂质体可制自多种磷脂类，譬如胆固醇、硬脂基胺或磷脂酰胆碱。

式(I)化合物及其药学上可接受之盐，亦可利用单克隆抗体，作为化合物分子所偶联合之个别载体，进行传输。化合物亦可与作为可成为靶标的药物载体之可溶性聚合物偶联。此种聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺酚、聚羟基乙基天门冬酰胺酚、或被棕榈酰基残基取代之聚氧乙烯聚赖氨酸。再者，此等化合物可偶联至可用于达成药物受控释出之生物可降解聚合物种类，例如聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、及水凝胶之经交联或两性嵌段共聚物。

适合经皮投药之药物制剂可以意欲保持与接受者之表皮密切接触历经长期时间之不连续贴剂呈现。例如，活性成分可藉由离子电渗疗法，自贴剂传输，如一般性地描述于Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中者。

适合局部投药之药物制剂，可被调配成软膏、乳膏、悬浮液、洗剂、粉末、溶液、糊剂、凝胶、喷雾剂、气溶胶或油类。

对眼睛或其他外部组织例如口腔与皮肤之治疗，优选系将此等配方以局部软膏或乳膏涂敷。当被调配在软膏中时，活性成分可与无论是石蜡或水可溶混软膏基料一起采用。或者，活性成分可与水包油型乳膏基料或油包水型基料一起调配在乳膏中。

适合局部投予眼睛之药物制剂包括眼滴剂，其中活性成分系被溶解或悬浮于适当载体中，尤其是水性溶剂。

适合局部投予口腔中之药物制剂包括锭剂、软锭剂及漱口水。

适合直肠投药之药物制剂可以栓剂或以灌肠剂呈现。

适合鼻投药之药物制剂，其中载体为固体，系包括具有粒子大小例如在20至500微米范围内之粗粉末，其系以其中服用鼻粉之方式投予，意即从被保持接近鼻子之粉末容器，藉由快速吸入经过鼻通路。其中载体为液体，以鼻喷雾剂或鼻滴剂投药之适当配方，包括活性成分之水性溶液或油溶液。

适合藉吸入投药之药物制剂包括微细粒子粉剂或雾剂，其可利用各种类型之经计量之剂量加压气溶胶、雾化罐或吹药器产生。

适合阴道投药之药物制剂可以阴道栓剂、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫物或喷雾制剂呈现。

适合肠胃外投药之药物制剂包括水性与非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂及使得制剂与所意欲接受者之血液等渗之溶质；及水性与非水性无菌悬浮液，其可包含悬浮剂与增稠剂。此等制剂可被呈现于单位剂量或多剂量容器中，例如密封安瓿瓶与小瓶，且可被储存于冷冻干燥(冻干)条件下，在即将使用之前，只需要添加无菌液体载体例如注射用水即可。临时注射溶液与悬浮液可制自无菌粉末、颗粒及片剂。

应明了的是，除了上文具体提及之成分以外，制剂可包含其他习用于本领域中的药剂，关于讨论中之制剂类型，例如，适于口服投药者可包含调味剂。

下表1列出可与此公开内容之化合物一起投予之化合物之一些说明例。公开内容之化合物可在组合疗法中与其他抗-HCV活性化合物一起投药，无论是共同地或个别地，或藉由将化合物合并成为组合物。

表1

商标名称	生理学种类	抑制剂或靶标之类型	来源公司
				NIM811		亲环蛋白(Cyclophilin)抑制剂	Novartis
日达仙(Zadaxin)		免疫调谐剂	Sciclone
				Suvus		亚甲蓝	Bioenvision
Actilon(CPG10101)		TLR9激动剂	Coley
				Batabulin(T67)	抗癌	β-微管蛋白抑制剂	Tularik公司，South SanFrancisco，CA
ISIS 14803	抗病毒	反义	ISIS PharmaceuticalsInc，Carlsbad，CA/ElanPhamaceuticals Inc.，，NewYork，NY
				Summetrel	抗病毒	抗病毒	Endo PharmaceuticalsHoldings Inc.，ChaddsFord，PA
GS-9132(ACH-806)	抗病毒	HCV抑制剂	Achillion/Gilead
				吡唑并嘧啶化合物与盐，得自2005年5月26日之WO-2005047288	抗病毒	HCV抑制剂	Arrow TherapeuticsLtd.
列弗维林(Levovirin)	抗病毒	IMPDH抑制剂	Ribapharm Inc.，Costa，Mesa，CA
				美利美波迪(Merimepodib)(VX-497)	抗病毒	IMPDH抑制剂	Vertex PharmaceuticalsInc.，Cambridge，MA
XTL-6865(XTL-002)	抗病毒	单克隆抗体	XTLBiopharmaceuticalsLtd.，Rehovot，Isreal

商标名称	生理学种类	抑制剂或靶标之类型	来源公司
				特拉普瑞伐(Telaprevir)(VX-950，LY-570310)	抗病毒	NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂	Vertex PharmaceuticalsInc.，CambridgeMA/Eli Lilly and Co.Inc.，Indianapolis，IN
HCV-796	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Wyeth/Viropharma
				NM-283	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Idenix/Novartis
GL-59728	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Gene Labs/Novartis
				GL-60667	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Gene Labs/Novartis
2’C MeA	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Gilead
				PSI 6130	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Roche
R1626	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Roche
				2′C甲基腺苷	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Merck
JTK-003	抗病毒	RdRp抑制剂	Japan Tobacco Inc.，Tokyo，Japan
				列弗维林(Levovirin)	抗病毒	三唑核苷	ICN Pharmaceuticals，Costa Mesa，CA
三唑核苷	抗病毒	三唑核苷	Schering-PloughCorporation，Kenilworth，NJ
				维拉嘧啶(Viramidine)	抗病毒	三唑核苷前药	Ribapharm Inc.，CostaMesa，CA
贺普塔酶Heptazyme)	抗病毒	核酶	RibozymePharmaceuticals Inc.，Boulder，CO
				BILN-2061	抗病毒	丝氨酸蛋白酶抑制剂	Boehringer IngelheimPharma KG，Ingelheim，Germany
SCH 503034	抗病毒	丝氨酸蛋白酶抑制剂	Schering Plough
				Zadazim	免疫调谐剂	免疫调谐剂	SciClonePharmaceuticals Inc.，San Mateo，CA
西普连(Ceplene)	免疫调谐剂	免疫调谐剂	MaximPharmaceuticals Inc.，San Diego，CA
				CellCept	免疫抑制剂	HCV IgG免疫抑制剂	F.Hoffmann-La RocheLTD，Basel，Switzerland

商标名称	生理学种类	抑制剂或靶标之类型	来源公司
				Civacir	免疫抑制剂	HCV IgG免疫抑制剂	NabiBiopharmaceuticalsInc.，Boca Raton，FL
阿布非隆(Albuferon)-α	干扰素	白蛋白IFN-α2b	Human GenomeSciences Inc.，Rockville，MD
				干复津(Infergen)A	干扰素	IFN alfacon-1	InterMunePharmaceuticals Inc.，Brisbane，CA
ωIFN	干扰素	IFN-ω	Intarcia Therapeutics
				IFN-β与EMZ701	干扰素	IFN-β与EMZ701	TransitionTherapeuticsInc.，Ontario，Canada
Rebif	干扰素	IFN-β1a	Serono，Geneva，Switzerland
				RoferonA	干扰素	IFN-α2a	F.Hoffmann-La Roche公司，Basel，Switzerland
IntronA	干扰素	IFN-α2b	Schering-PloughCorporation，Kenilworth，NJ
				Intron A与日达仙(Zadaxin)	干扰素	IFN-α2b/α1-胸腺素	RegeneRxBiopharmiceuticalsInc.，Bethesda，MD/SciClonePharmaceuticals Inc.，San Mateo，CA
Rebetron	干扰素	IFN-α2b/三唑核苷	Schering-PloughCorporation，Kenilworth，NJ
				Actimmune	干扰素	INF-γ	InterMune Inc.，Brisbane，CA
干扰素-β	干扰素	干扰素-β-	Serono
				Multiferon	干扰素	长效IFN	Viragen/Valentis
惠福仁(Wellferon)	干扰素	类淋巴母细胞IFN-αn1	GlaxoSmithKline plc，Uxbridge，UK
				Omniferon	干扰素	天然IFN-α	Viragen Inc.，Plantation，FL

商标名称	生理学种类	抑制剂或靶标之类型	来源公司
				Pegasys	干扰素	经PEG化之IFN-α2a	F.Hoffmann-La RocheLTD，Basel，Switzerland
Pegasys与西普连(Ceplene)	干扰素	经PEG化之IFN-α2a/免疫调谐剂	MaximPharmaceuticals Inc.，San Diego，CA
				Pegasys与三唑核苷	干扰素	经PEG化之IFN-α2a/三唑核苷	F.Hoffmann-La RocheLTD，Basel，Switzerland
PEG-Intron	干扰素	经PEG化之IFN-α2b	Schering-PloughCorporation，Kenilworth，NJ
				PEG-Intron/三唑核苷	干扰素	经PEG化之IFN-α2b/三唑核苷	Schering-PloughCorporation，Kenilworth，NJ
IP-501	肝脏保护	抗纤维化	IndevusPharmaceuticals Inc.，Lexington，MA
				IDN-6556	肝脏保护	胱天蛋白酶抑制剂	Idun PharmaceuticalsInc.，San Diego，CA
ITMN-191(R-7227)	抗病毒	丝氨酸蛋白酶抑制剂	InterMunePharmaceuticals Inc.，Brisbane，CA
				GL-59728	抗病毒	NS5B复制酶抑制剂	Genelabs
ANA-971	抗病毒	TLR-7激动剂	Anadys
				TMC-465350	抗病毒	丝氨酸蛋白酶抑制剂	Medivir/Tibotec

本公开内容之化合物亦可作为实验室试剂使用。化合物可有助于提供研究工具，供设计病毒复制测定、动物测定系统及结构生物学研究之确认，以进一步提升HCV疾病机制之了解。再者，本公开内容之化合物可用于建立或测定其他抗病毒化合物之结合位置，例如，藉由竞争性抑制。

本公开内容之化合物亦可用以治疗或预防材料之病毒污染，因此降低与此种材料接触之实验室人员或医疗人员或患者之病毒感染危险，该材料例如血液、组织、手术仪器与衣物、实验室仪器与衣物及血液收集或输血装置与材料。

本公开内容系意欲涵盖当藉由合成方法或藉由代谢过程制成时，具有式(I)之化合物，该代谢过程包括发生在人类或动物身体(体内)或于体外发生之过程中者。

于本申请中，包括特别是在下文说明性图式与实施例中所使用之缩写，系为本领域普通技术人员所习知。所使用之一些缩写如下：4-DMAP或DMAP表示4-N，N-二甲胺基吡啶；Boc或BOC表示叔丁氧羰基；Fmoc表示9-芴基甲基氧基羰基；CDI表示1，1′-羰基二咪唑；EDAC或EDC表示1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐；THF表示四氢呋喃；DBU表示1，8-二氮杂双环并[5.4.0]十一-7-烯；TFA表示三氟醋酸；HATU表示磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲；PyBOP表示六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷鏻；Me表示甲基；MeI表示碘化甲烷；MOtBu表示叔丁醇钾、钠或锂；TBME或MTBE表示叔丁基·甲基醚；DMF表示N，N-二甲基甲酰胺；DMSO表示二甲亚砜；Ph表示苯基；DEAD表示偶氮二羧酸二乙酯；POPd表示[(t-Bu)₂POH]₂PdCl₂；NaOBu表示叔丁醇钠；OAc表示醋酸盐；TBMDSCl表示叔丁基二甲基氯硅烷；1，2-DME表示1，2-二甲氧基乙烷；DMA表示N，N-二甲基乙酰胺；n-BuLi表示正-丁基锂；t-BuLi或tBuLi表示叔丁基锂；DPPA表示叠氮磷酸二苯酯；TBAF表示氟化四丁基铵；LiOt-Bu表示叔丁醇锂；MeOH表示甲醇；DCM表示二氯甲烷；t-BuOK表示叔丁醇钾；DIEA或DIPEA表示二异丙基乙胺；MeCN表示乙腈；NMM表示N-甲基吗啉；DCE表示1，2-二氯乙烷；LDA表示二异丙氨基锂；DMPU表示1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮；EtOAc表示醋酸乙酯；及TEA表示三乙胺。

可用于合成本发明公开内容之化合物之起始物质系为本领域普通技术人员所已知，且可容易地制造或为市购可得。

提供下文所提出之下述方法系为达说明目的，并非意欲限制权利要求之范围。应明了的是，可能必须制备此种化合物，其中官能团系使用常规保护基保护，然后移除保护基，以提供本发明公开内容之化合物。关于使用根据本发明公开内容之保护基之细节系为本领域普通技术人员所已知。

图式I系显示一般方法，其中式(I)化合物系经由三肽羧酸中间体(1)与P1`磺酰胺之偶联而构成。所述偶联反应需要羧酸(1)以偶联试剂，譬如羰基二咪唑，在溶剂譬如THF中处理，其可被加热至回流，接着将所形成之(1)衍生物添加至P1`磺酰胺中，在溶剂中，譬如THF或二氯甲烷，于碱存在下，譬如DBU。

图式I

方法

一种建构式(I)化合物之替代方法系示于图式II中。其中系使用图式1中所采用之方法，使P1`磺酰胺构件偶联至P1构件。然后，可使所形成之P1-P1`部分在其氨基末端处去除保护。在此一般实例中，系采用Boc保护基，但本领域普通技术人员明了许多适当氨基保护基可被采用于此方法中。Boc保护基可使用酸，譬如三氟醋酸，在溶剂譬如二氯乙烷中移除，以提供经去除保护之胺，成为TFA盐。该TFA胺盐可被直接采用于后续偶联反应中，或作为一种替代方式，TFA胺盐可首先被转化成HCl胺盐，并将此HCl胺盐使用于该偶联反应中，如图式II中所示。该HCl胺盐(3)与P4-P3-P2中间体之羧基末端之偶联，可使用偶联试剂，譬如HATU，在溶剂譬如二氯甲烷中达成，以提供式(I)化合物(4)。

图式II

方法

一种建构式(I)化合物之替代方法系示于图式III中。此处，P1-P1`末端胺(1)之盐酸盐系使用偶联剂，譬如PyBOP，于碱存在下，譬如二异丙基胺，及在溶剂中，譬如二氯甲烷，被偶联至P2构件之游离羧基。所形成之P2-P1-P1`中间体可在两步骤方法中被转化成式(I)化合物，其中第一个步骤为P2胺末端之去除保护，使用酸，譬如TFA，在溶剂中，譬如二氯甲烷。可使所形成之三氟醋酸盐与P4-P3构件之羧基末端偶联，使用标准偶联剂，譬如PyBop，于碱存在下，譬如二异丙基胺，及使用溶剂，譬如二氯甲烷，以提供式(I)化合物(4)。

图式III

方法

于上文图式中所利用之P4-P3-P2中间体可如前文所述，使用一般图式IV中所示之此方法之进一步说明构成。可使P4-P3中间体(1)之游离羧基末端偶联至P2构件之氨基末端，以提供P4-P3-P2二肽(2)。可使P4-P3-P2中间体之羧基末端藉由酯基之皂化作用而去除保护，以提供P4-P3-P2，为游离羧酸(3)。中间体，例如(3)，可使用本文中所述之方法被转化成式(I)化合物。

图式IV

方法

在式(I)化合物之建构中，P1`末端系使用上文所概述及更详细地描述于下文之一般方法之一，被并入分子中。在一些实例中，P1`构件，其系为环烷基或烷基磺酰胺类，系为市购可得，或可经由以氨处理磺酰氯，制自其相应之烷基-或环烷基磺酰氯。或者，此等磺酰胺类可使用图式V中所概述之一般方法合成。市购可得之3-氯丙基磺酰氯(1)系被转化成经适当保护之磺酰胺，例如经由以叔丁基胺处理。然后，所获得之磺酰胺(2)系经由以二当量之碱，譬如丁基锂，在溶剂中，譬如THF，于低温下处理，而被转化成其相应之环烷基磺酰胺。所形成之环烷基磺酰胺可以酸处理而去除保护，以提供所要之未经保护之环烷基磺酰胺。

图式V

经取代之环烷基磺酰胺类亦可使用上文该程序之修正，被并入式(I)化合物中。例如，图式VI之中间体2可以二当量之碱，譬如丁基锂处理，且所形成之反应混合物可以亲电子试剂，譬如碘化甲烷处理，以提供经取代之环烷基磺酰胺(3)。此中间体(3)可在N-末端处去除保护，且所形成之化合物(4)系在式(I)化合物之制备上作为中间体使用。

图式VI

于产生式(I)化合物中所采用之P1`中间体，系在一些情况中衍生自磺酰胺衍生物。在此种情况中，磺酰胺中间体可藉由数种合成途径取得，例如藉由图式VII中所概述之途径。

图式VII

氨磺酰氯(2)可藉由添加水(例如1当量)至氯磺酰异氰酸酯1(例如1当量)中，在溶剂譬如THF中，同时保持在譬如-20℃之低温下，而原位制成。然后，使所形成之溶液温热至0℃。于此溶液中，添加碱，譬如无水三乙胺(例如1当量)，接着为胺(例如1当量)。接着，使反应混合物温热至室温，过滤，及使滤液浓缩，以提供所要之磺酰胺(3)。

磺酰胺可藉由数种方法，例如经由按照图式VIII中所定义之合成途径，而被并入式(I)化合物中。羧酸P1构件(1)系以活化剂处理，譬如CDI。在另一个烧瓶中，将强碱添加至上述磺酰胺之溶液中，且将所形成之反应混合物搅拌数小时，然后将此反应混合物添加至含有经活化羧酸之烧瓶中，以提供酰基磺酰胺衍生物(2)。中间体，例如2，可如本文中所述被转化成式(I)化合物。

图式VIII

在产生式(I)化合物中所利用之P1构件系在一些情况中为市购可得，但在其他情况下系使用本文中所述之方法合成，且随后系使用本文中所述之方法被并入式(I)化合物中。经取代之P1环丙基氨基酸类可按照图式IX中所概述之一般方法合成。

市购可得或易于合成之亚胺(1)，以1，4-二卤基丁烯(2)，于碱存在下之处理，系提供所形成之亚胺(3)。然后，3之酸水解系提供4，其具有对羧基为同侧之烯丙基取代基，作为主要产物。4之胺部分可使用Boc基团保护，以提供完全经保护之氨基酸5。此中间体为外消旋物，其可藉由酶促方法解析，其中5之酯部分系藉由蛋白酶切割，以提供其相应之羧酸。在不被任何特定理论束缚下，咸认此反应系为选择性，此系由于对映异构体之一系在比其镜像远为较大之速率下接受该反应，提供中间外消旋物之动力学解析。于本文中引用之实例中，关于整合至式(I)化合物中之更优选的立体异构体系为5a，其系嵌入(1R，2S)立体化学。于酶存在下，此对映异构体并未接受酯切割，于是此对映异构体5a系自反应混合物回收。但是，较不优选的对映异构体5b，其系嵌入(1S，2R)立体化学，系接受酯切割，即水解作用，以提供游离酸6。在此反应完成时，酯5a可藉由例行方法，例如水溶液萃取方法或层析，自酸产物6分离。

图式IX

制造P2中间体与式(I)化合物之程序系示于下文图式中。应注意的是，在许多情况中，反应系针对中间体之仅一个位置进行描述。但是，应明了的是，此种反应可用以对此中间体内之其他位置赋予修正。再者，特殊实施例中所给出的中间体、反应条件及方法，可广泛地应用于具有其他取代型式之化合物。一般与特殊实例两者系为非限制性。

图式X

图式X显示N-保护之C4-羟脯氨酸部分与杂环之偶联，以形成中间体(4)，及该中间体(4)之后续改性成式(I)化合物，藉由如本文中所述之肽延长方法。应注意的是，在第一个步骤中，意即C4-羟脯氨酸与杂芳基构件之偶联，系采用碱。本领域普通技术人员得以明了的是，此偶联可使用碱，譬如叔丁醇钾或氢化钠，在溶剂譬如DMF或DMSO或THF中进行。此对异喹啉环系统之偶联系发生在C1位置处(对于图式XI之中间体2中所示异喹啉环系统之编号)，且系藉由此方法中经置换之氯基所导引。应注意的是，可在此位置利用替代离去基团(例如氟基)，如此图式中所示。该氟代中间体(3)可使用本文中所述之文献程序，得自其相应之氯代化合物。

一种对于上文关于C4-羟脯氨酸偶联至异喹啉环所述方法之替代方式系提供于Mitsunobu反应中，如图式XI之步骤1中所描绘。在此一般反应图式中，系使C4-羟脯氨酸衍生物偶联至异喹啉环系统。此反应系利用试剂，譬如三苯膦与DEAD(偶氮二羧酸二乙酯)，在非质子溶剂中，譬如THF或二噁烷，且可用于形成杂芳基醚类。应注意的是，在此偶联反应之过程中，于C4-羟脯氨酸衍生物中C4手性中心之立体化学系被逆转，于是必须使用在C4位置处嵌入(S)立体化学之C4-羟脯氨酸衍生物作为起始物质(如图式XI中所示)。应注意的是，Mitsunobu反应之许多修正与改良已被描述于文献中，其教导并入本文。

图式XI

在此处之实例中，异喹啉类被并入最后化合物中，且特别是并入该化合物之P2区域中。本领域普通技术人员应明了的是，许多一般方法可用于合成异喹啉类。再者，藉由此等方法所产生之异喹啉类可容易地使用本文中所述之方法并入最后式(I)化合物中。关于合成异喹啉类之一种一般操作法系示于图式XII中，其中以一般形式显示为结构(2)之肉桂酸衍生物，系在四步骤方法中被转化成1-氯异喹啉类。氯异喹啉类可随后被使用于对如本文中所述C4-羟脯氨酸衍生物之偶联反应中。肉桂酸类之转化成氯喹啉类系于碱存在下以氯甲酸烷酯处理肉桂酸而开始。然后，以叠氮化钠处理所形成之酐，其会造成酰基叠氮化物(3)之形成，如此图式中所示。替代方法可用于从羧酸类形成酰基叠氮化物，例如该羧酸可以叠氮磷酸二苯酯(DPPA)，在非非质子溶剂中，譬如二氯甲烷，于碱存在下处理。在反应顺序之下一步骤中，系使酰基叠氮化物(3)转化成其相应之异喹啉酮(4)，同时加热至大约190℃之温度，在高沸点溶剂中，譬如二苯甲烷。此反应系为一般性，且自其相应肉桂酸衍生物，提供中等至良好产率之经取代异喹啉酮。应注意的是，该肉桂酸衍生物系为市购可得，或可得自其相应之苯甲醛(1)衍生物，其方式是与丙二酸或其衍生物之直接缩合，以及还藉由采用Wittig反应。图式XII之中间体异喹啉酮(4)可经由以三氯氧磷处理，而被转化成其相应之1-氯异喹啉。此反应系为一般性，且可被应用至本文中所示之异喹啉酮。

图式XII

参考资料：N.Briet等人，Tetrahedron，2002，5761

关于合成异喹啉环系统之一种替代方法为Pomeranz-Fritsh程序。此一般方法系概述于图式XIII中。此方法系以苯甲醛衍生物(1)转化成官能化亚胺(2)开始。然后，该亚胺系于高温下以酸处理，被转化成异喹啉环系统。图式XIII之此种异喹啉合成系为一般性，且应注意的是，此方法系特别可用于获得异喹啉中间体，其系在C8位置处经取代。中间体异喹啉类(3)可在如所示之两步骤方法中被转化成其相应之1-氯喹啉类(5)。在此顺序中之第一个步骤为异喹啉N-氧化物(4)之形成，其方式是异喹啉(3)以间-氯过苯甲酸，在非质子溶剂譬如二氯甲烷中处理。中间体(4)可经由以三氯氧磷在回流氯仿中处理，而被转化成其相应之1-氯喹啉。应注意的是，此两步骤方法对于自异喹啉酮形成氯异喹啉类系为一般性。

图式XIII

Pomeranz-Fritsch合成

K.Hirao，R.Tsuchiya，Y.Yano，H.Tsue，Heterocycles 42(1)1996，415-422

关于合成异喹啉环系统之另一种方法系示于图式XIV中。于此方法中，邻-烷基苯甲酰胺衍生物(1)系以强碱譬如叔丁基锂，在溶剂譬如THF中，于低温下处理。然后，于此反应混合物中添加腈衍生物，其系接受与衍生自(1)之去质子化作用之阴离子之加成反应，而造成(2)之形成。此反应系为一般性，且可用于形成经取代之异喹啉类。图式XIV之中间体(2)可藉由本文中所述之方法被转化成其相应之1-氯喹啉。

图式XIV

关于合成异喹啉类之另一种方法系示于图式XV中。中间体(1)使用叔丁基锂之去质子化作用系描述于上文。但是，在本发明方法中，中间体阴离子系被酯捕获，而造成中间体(2)之形成，如下文所示。在后续反应中，酮(2)系于高温下与醋酸铵缩合，提供喹啉酮(3)之形成。此反应系为一般性，且可被应用至经取代异喹啉酮之建构，其可接着被转化成其相应之1-氯异喹啉类，如本文中所述。

图式XV

关于建构异喹啉类之另一种方法系于图式XVI中发现。在此方法之第一个步骤中，系使邻-烷基芳基亚胺衍生物，譬如(1)，接受去质子化作用条件(仲丁基锂、THF)，且藉由添加经活化之羧酸衍生物，譬如Weinreb酰胺，使所形成之阴离子淬灭。所形成之酮亚胺(2)可经由与醋酸铵，在高温下缩合，被转化成其相应之异喹啉。此方法系为一般性，且可用于合成经取代之异喹啉类。异喹啉类可藉由本文中所述之方法被转化成其相应之1-氯喹啉。

图式XVI

L.Fippin，J.Muchowski，JOC，1993，2631-2632

本文中所述之异喹啉类，且其系被并入式(I)化合物中，可进一步被官能化。本领域普通技术人员所显而易见的是，该杂环之其他官能化作用可无论是在此等官能团并入式(I)化合物之前或之后达成。下文图式系说明此点。例如，图式XVII系显示1-氯-6-氟-异喹啉之转化成其相应之1-氯-6-烷氧基-异喹啉种类，其方式是(1)以醇钠或醇钾种类，在该醇盐系自其衍生之醇溶剂中，于室温下处理。在一些情况中，可能必须将反应加热，以使其驱动至完成。氯喹啉可使用本文中所述之技艺被并入式(I)化合物中。

图式XVII

图式XVIII系提供关于如本文所定义异喹啉类改性之一般实例，其方式是采用钯所介导之偶联反应。可采用此偶联，以在此环系统之各位置上使杂环官能化，其条件是该环系例如以如图式中所示之氯化物适当地经活化或官能化。此顺序系以1-氯异喹啉(1)开始，其在以间氯过苯甲酸处理时，可被转化成其相应之N-氧化物(2)。中间体(2)可经由以三氯氧磷，在回流氯仿中处理，而被转化成其相应之1，3-二氯异喹啉(3)。可使中间体(3)藉由本文中所述之方法与N-Boc-4-羟脯氨酸偶联，以提供如此图式中所示之中间体(5)。中间体(5)可接受与芳基硼酸，于钯试剂与碱存在下，且在溶剂譬如THF或甲苯或DMF中之Suzuki偶联，以提供C3-芳基异喹啉中间体(6)。杂芳基硼酸亦可被采用于此钯所介导之偶联方法中，以提供C3-杂芳基异喹啉类。中间体(6)可藉由本文中所述之方法被转化成最后式(I)化合物。

图式XVIII

异喹啉系统与芳基或杂芳基构件之钯所介导偶联亦可在稍后合成阶段下，于式(I)化合物之建构中采用，如图式XIX中所示。三肽酰基磺酰胺中间体(1)系使用前文所述之方法偶联至1-氯-3-溴异喹啉(2)，以提供中间体(3)。(1)与(2)之偶联系于催化剂譬如本文中所述之氯化镧存在下最有效。中间体(3)之异喹啉环系统可藉由采用无论是Suzuki偶联(方法1：使(3)接受杂芳基或芳基硼酸，于钯催化剂，譬如四(三苯膦)钯，与碱，譬如碳酸铯存在下，在溶剂中，譬如DMF)或Stille偶联(方法2：使(3)接受杂芳基或芳基锡衍生物，于钯催化剂存在下，譬如四(三苯膦)钯，在溶剂中，譬如甲苯)进一步被官能化。

图式XIX

本发明中所采用之P3氨基酸系为无论是市购可得，或可使用本领域普通技术人员已知之方法制成。关于制备P3氨基酸之非限制性途径包括：

途径1：足够亲电性芳族或杂芳族种类(1)以氨基酸酯(2)之亲核芳香族取代，如图式XX中所示。此反应接着为3之单纯酯切割，以提供所要之氨基酸(4)。

图式XX

途径2：Buchwald-Hartwig类型反应，其系涉及钯催化偶联芳基或杂芳基卤键与经适当保护之氨基氨基酸(1)，如图式XXI中所示。中间体2之单纯皂化作用系提供所要之氨基酸(3)(Shen，Q.；Shekhar，S；Stambuli，J.P.；Hartwig，J.F.Angew.Chem.Int.Ed.2005，44，1371-1375)：

图式XXI

途径3：一种偶联方法，由此方法，芳基或杂芳基卤化物与游离氨基酸系经由CuI所介导之方法偶联，直接获得芳氨基酸，如图式XXII中所示(Ma，D.；Zhang，Y.；Yao，J.；Wu，S.；Tao，F.J.Am.Chem.Soc.1998，120，12459-12467)。

图式XXII

途径4：一种方法，其系采用游离氨基酸之二价阴离子与芳基或杂芳基卤化物(典型上为氟化物)之亲核置换(类似Saitton，S.；Kihlberg，J.；Luthman，K.Tetrahedron2004，60，6113-6120)：

在一些情况中，如图式XXIII中所示，获取氨基芳基最后产物可藉由芳基环以完全装配的核心三肽之直接亲核芳香族取代而达成，该核心三肽具有游离氨基在P3亚区域之末端处。

图式XXIII

【具体实施方式】

实施例

本公开内容现在将伴随着某些具体实施例描述，此等实施例并非意欲限制其范围。反之，本公开内容涵盖所有替代方式、修正及等效事物，其可被包含在权利要求之范围内。因此，下述实施例，其包括特殊具体实施例，系说明本公开内容之一项实施，应明了的是，实施例系为达说明某些具体实施例之目的，且被提出以提供咸认系为最有用且易于了解其程序与概念方面之说明者。

溶液百分比系表示重量对体积关系，而溶液比例系表示体积对体积关系，除非另有述及。核磁共振(NMR)光谱系被记录于Bruker 300、400或500MHz光谱仪之任一个上；化学位移(δ)系以每百万份之份数报告。急骤层析系于硅胶(SiO₂)上，根据Still氏急骤层析技术进行(J.Org.Chem.1978，43，2923)。

I.P1′中间体之制备

1.环丙基磺酰胺之制备

方法1：

环丙基磺酰胺

图式1

步骤1：

使叔丁基胺(3.0摩尔，315毫升)溶于THF(2.5升)中。使溶液冷却至-20℃。慢慢添加3-氯丙烷磺酰氯(1.5摩尔，182毫升)。使反应混合物温热至室温，并搅拌24小时。过滤混合物，并使滤液在真空中浓缩。使残留物溶于CH₂Cl₂(2.0升)中。将所形成之溶液以1.0M HCl(1.0升)、水(1.0升)及盐水(1.0升)洗涤，以Na₂SO₄脱水干燥，过滤，及在真空中浓缩，获得微黄色固体，使其从己烷结晶，以提供产物，为白色固体(316.0克，99％)。¹HNMR(CDCl₃)δ1.38(s，9H)，2.30-2.27(m，2H)，3.22(t，J＝7.35Hz，2H)，3.68(t，J＝6.2Hz，2H)，4.35(b，1H).

步骤2：

在-78℃下，于步骤1之产物(2.14克，10.0毫摩尔)在THF(100毫升)中之溶液内，添加n-BuLi(2.5M，在己烷中，8.0毫升，20.0毫摩尔)。使反应混合物温热至室温，历经1小时期间，及在真空中浓缩。使残留物于醋酸乙酯与水(各200毫升)之间分配。以盐水洗涤已分离之有机相，以Na₂SO₄脱水干燥，过滤，及在真空中浓缩。使残留物从己烷再结晶，提供所要之产物，为白色固体(1.0克，56％)。¹H NMR(CDCl₃)δ0.98-1.00(m，2H)，1.18-1.19(m，2H)，1.39(s，9H)，2.48-2.51(m，1H)，4.19(b，1H).

步骤3：

将步骤2之产物(110克，0.62毫摩尔)在TFA(500毫升)中之溶液于室温下搅拌16小时。在真空中移除挥发性物质。使残留物自醋酸乙酯/己烷(60毫升/240毫升)再结晶，提供所要之产物，为白色固体(68.5克，91％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ0.84-0.88(m，2H)，0.95-0.98(m，2H)，2.41-2.58(m，1H)，6.56(b，2H).

方法2：

于已冷却至0℃之100毫升THF之溶液中，以气态氨起泡，直到达成饱和为止。于此溶液中添加5克(28.45毫摩尔)环丙基磺酰氯(购自Array Biopharma)在50毫升THF中之溶液。使溶液温热至室温过夜，并再搅拌一天。使混合物浓缩，直到1-2毫升溶剂留下为止，且倾倒在30克SiO₂填充柱上(以30％至60％醋酸乙酯/己烷洗脱)，提供3.45克(100％)环丙基磺酰胺，为白色固体。¹H NMR(甲醇-d₄)δ0.94-1.07(m，4H)，2.52-2.60(m，1H)；¹³C NMR(甲醇-d₄)δ5.92，33.01.

2.C1-取代之环丙基磺酰胺类之制备

2a.N-叔丁基-(1-甲基)环丙基-磺酰胺之制备

步骤1：N-叔丁基-(3-氯)丙基磺酰胺之制备

按上述制成。

步骤2：N-叔丁基-(1-甲基)环丙基-磺酰胺之制备

使步骤1产物(4.3克，20毫摩尔)之溶液溶于无水THF(100毫升)中，并冷却至-78℃。于此溶液中慢慢添加正-丁基锂(17.6毫升，44毫摩尔，2.5M，在己烷中)。移除干冰浴，并使反应混合物温热至室温，历经1.5小时期间。使此混合物冷却至-78℃，且添加正-丁基锂之溶液(20毫摩尔，8毫升，2.5M，在己烷中)。使反应混合物温热至室温，冷却至-78℃，历经2小时期间，并以碘化甲烷(5.68克，40毫摩尔)之纯溶液处理。使反应混合物温热至室温过夜，然后在室温下，以饱和NH₄Cl(100毫升)使反应淬灭，并以醋酸乙酯(100毫升)萃取。将有机相以盐水(100毫升)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，及在真空中浓缩，提供黄色油，使其从己烷结晶，提供所要之产物，为微黄色固体(3.1克，81％)：¹H NMR(CDCl₃)δ0.79(m，2H)，1.36(s，9H)，1.52(m，2H)，1.62(s，3H)，4.10(br s，1H).

步骤3：1-甲基环丙基磺酰胺之制备

使步骤2产物(1.91克，10毫摩尔)之溶液溶于TFA(30毫升)中，并将反应混合物于室温下搅拌16小时。于真空中移除溶剂，提供黄色油，使其自醋酸乙酯/己烷(1∶4，40毫升)结晶，提供所要之产物，为白色固体(1.25克，96％)：¹H NMR(CDCl₃)δ0.84(m，2H)，1.41(m，2H)，1.58(s，3H)，4.65(br s，2H).对C₄H₉NO₂S之分析计算值：C，35.54；H，6.71；N，10.36.实测值：C，35.67；H，6.80；N，10.40.

2b.1-丙基环丙基磺酰胺之制备

此化合物系使用关于1-甲基环丙基磺酰胺之制备所述之程序，在此方法之第二个步骤中，以丙基卤取代碘化甲烷而制成。

2c.1-烯丙基环丙基磺酰胺之制备

步骤1：N-叔丁基-(1-烯丙基)环丙基磺酰胺之制备

此化合物系根据N-叔丁基-(1-甲基)环丙基磺酰胺之合成中所述之程序，使用1.25当量之烯丙基溴作为亲电子试剂，以97％产率获得。将化合物使用于下一反应，无需进一步纯化：¹H NMR(CDCl₃)δ0.83(m，2H)，1.34(s，9H)，1.37(m，2H)，2.64(d，J＝7.3Hz，2H)，4.25(br s，1H)，5.07-5.10(m，2H)，6.70-6.85(m，1H).

步骤2：1-烯丙基环丙基磺酰胺之制备

此化合物系根据1-甲基环丙基磺酰胺之合成中所述之程序，以40％产率得自步骤1之产物。使化合物于SiO₂上通过柱层析纯化，使用二氯甲烷中之2％甲醇作为洗脱剂：¹H NMR(CDCl₃)δ0.88(m，2H)，1.37(m，2H)，2.66(d，J＝7.0Hz，2H)，4.80(s，2H)，5.16(m，2H)，5.82(m，1H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ11.2，35.6，40.7，119.0，133.6.

2d.1-苄基环丙基磺酰胺之制备

步骤1：N-叔丁基-(1-苄基)环丙基-磺酰胺之制备

此化合物系使用关于N-叔丁基-(1-甲基)环丙基磺酰胺之合成所述之程序，只是使用1.05当量之苄基溴，接着以己烷中之10％醋酸乙酯研制，以60％产率获得：¹HNMR(CDCl₃)δ0.92(m，2H)，1.36(m，2H)，1.43(s，9H)，3.25(s，2H)，4.62(br s，1H)，7.29-7.36(m，5H).

步骤2：1-苄基环丙基磺酰胺之制备

此化合物系使用关于1-甲基环丙基磺酰胺之合成所述之程序，接着自最少量之己烷中之10％醋酸乙酯再结晶，以66％产率得自N-叔丁基(1-苄基)环丙基磺酰胺：¹H NMR(CDCl₃)δ0.90(m，2H)，1.42(m，2H)，3.25(s，2H)，4.05(s，2H)，7.29(m，3H)，7.34(m，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ11.1，36.8，41.9，127.4，128.8，129.9，136.5.

2e.1-(1-环己烯基)环丙基-磺酰胺之制备

步骤1：N-叔丁基-[1-(1-羟基)环己基]-环丙基磺酰胺之制备

此化合物系使用关于N-叔丁基-(1-甲基)环丙基磺酰胺之合成所述之程序，只是使用1.30当量之环己酮，接着自最少量之己烷中之20％醋酸乙酯再结晶，以84％产率获得：¹HNMR(CDCl₃)δ1.05(m，4H)，1.26(m，2H)，1.37(s，9H)，1.57-1.59(m，6H)，1.97(m，2H)，2.87(br s，1H)，4.55(br s，1H).

步骤2：1-(1-环己烯基)环丙基-磺酰胺之制备

此化合物，1-(1-环己烯基)-环丙基磺酰胺系使用关于1-甲基环丙基磺酰胺之合成所述之程序，接着自最少量之醋酸乙酯与己烷再结晶，以85％产率得自N-叔丁基-[1-(1-羟基)环己基]-环丙基磺酰胺：¹H NMR(DMSO-d₆)δ0.82(m，2H)，1.28(m，2H)，1.51(m，2H)，1.55(m，2H)，2.01(s，2H)，2.16(s，2H)，5.89(s，1H)，6.46(s，2H)；¹³CNMR(DMSO-d₆)δ11.6，21.5，22.3，25.0，27.2，46.9，131.6，132.2；LR-MS(ESI)：200(M⁺-1).

2f.1-苯甲酰基环-丙基磺酰胺之制备

步骤1：N-叔丁基-(1-苯甲酰基)环丙基-磺酰胺之制备

此化合物系使用关于N-叔丁基-(1-甲基)环丙基磺酰胺之合成所述之程序，只是使用1.2当量之苯甲酸甲酯作为亲电子试剂，以66％产率获得。将化合物于SiO₂上通过柱层析，使用己烷中之30％至100％二氯甲烷纯化：¹H NMR(CDCl₃)δ1.31(s，9H)，1.52(m，2H)，1.81(m，2H)，4.16(br s，1H)，7.46(m，2H)，7.57(m，1H)，8.05(d，J＝8.5Hz，2H).

步骤2：1-苯甲酰基环-丙基磺酰胺之制备

此化合物系使用关于1-甲基环丙基磺酰胺之合成所述之程序，接着自最少量之己烷中之醋酸乙酯再结晶，以87％产率得自N-叔丁基(1-苯甲酰基)环丙基磺酰胺：¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.39(m，2H)，1.61(m，2H)，7.22(s，2H)，7.53(t，J＝7.6Hz，2H)，7.65(t，J＝7.6Hz，1H)，8.06(d，J＝8.2Hz，2H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ12.3，48.4，128.1，130.0，133.4，135.3，192.0.

2g.N-叔丁基-(1-苯基氨基羧基)-环丙基磺酰胺之制备

此化合物系使用关于N-叔丁基-(1-甲基)环丙基磺酰胺之合成所述之程序，使用1当量之异氰酸苯酯，接着自最少量之己烷中之醋酸乙酯再结晶，以42％产率获得：¹H NMR(CDCl₃)δ1.38(s，9H)，1.67-1.71(m，4H)，4.30(br s，1H)，7.10(t，J＝7.5Hz，1H)，7.34(t，J＝7.5Hz，2H)，7.53(t，J＝7.5Hz，2H).

3.C1-取代之环丙烷磺酰胺类之制备：N-Boc保护基之使用

3a.环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之制备，在C1-取代之环丙基磺酰胺类制备中之主要中间体

步骤1：3-氯丙基磺酰胺之制备

使3-氯丙烷磺酰氯(55克，310.7毫摩尔)之溶液溶于THF(200毫升)中，并于0℃下，在30分钟内，逐滴添加至NH₄OH之溶液(200毫升)中。使反应混合物温热至室温，搅拌1小时，并以二氯甲烷(4×500毫升)萃取水层。将合并之萃取液以1N HCl(150毫升)、水(150毫升)洗涤，以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩。使粗制固体自最少量之己烷中之二氯甲烷再结晶，提供所要之产物，为白色固体(45.3克，93％)。¹H NMR(CDCl₃)δ2.34(m，2H)，3.32(t，J＝7.3Hz，2H)，3.70(t，J＝6.2Hz，2H)，4.83(s，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ27.10，42.63，52.57.

步骤2：3-氯丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之制备

将步骤1之产物(30.2克，191.5毫摩尔)、三乙胺(30.2毫升，217.0毫摩尔)及4-DMAP(2.40克，19.6毫摩尔)在二氯甲烷(350毫升)中之溶液，在0℃下，以二碳酸二-叔丁酯(47.2克，216.9毫摩尔)在二氯甲烷(250毫升)中之溶液逐滴处理，历经30分钟。使反应混合物温热至室温，再搅拌3小时，并以1N HCl(300毫升)、水(300毫升)及盐水(300毫升)洗涤，以MgSO₄脱水干燥，过滤，及在真空中浓缩，以提供粗产物。将此物质以70毫升己烷中之5％二氯甲烷研制，提供所要之产物，为灰白色固体(47.2克，96％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.51(s，9H)，2.33(m，2H)，3.60(t，J＝7.3Hz，2H)，3.68(t，J＝6.21Hz，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ26.50，27.95，42.37，50.40，84.76，149.53.

步骤3：环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之制备

使正-丁基锂之溶液(74.7毫升，119.5毫摩尔，1.6M，在己烷中)溶于无水THF(105毫升)中，并在氩气氛下冷却至-78℃。于此溶液中，逐滴添加步骤2之产物(14克，54.3毫摩尔)在无水THF(105毫升)中之溶液，历经20-30分钟。移除干冰浴，并使反应混合物温热至室温，历经2小时期间。以冰醋酸(3.4毫升)使反应混合物淬灭，在真空中浓缩，并于二氯甲烷(100毫升)与水(100毫升)之间分配。将有机相以盐水(100毫升)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，及在真空中浓缩，提供所要之产物，为蜡状灰白色固体(12.08克，100％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.10(m，2H)，1.34(m，2H)，1.50(s，9H)，2.88(m，1H)，7.43(s，1H).¹³C NMR(CDCl₃)δ6.21，28.00，31.13，84.07，149.82.

3b.1-甲氧基-甲基环丙基磺酰胺之制备

步骤1：1-甲氧基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之制备

在已溶于THF(30毫升)中之环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之已冷却至-78℃之溶液(1.0克，4.5毫摩尔)内，添加正-丁基锂(6.4毫升，10.2毫摩尔，1.6M，在己烷中)，并将反应混合物搅拌1小时。于此溶液中，添加氯甲基甲基醚之纯溶液(0.40毫升，5.24毫摩尔)，并使混合物慢慢温热至室温过夜。将溶液使用1N HCl水溶液调整pH值至3，然后以醋酸乙酯(4×50毫升部分)萃取。使合并之萃取液干燥(MgSO₄)，过滤，及浓缩，而得1-甲氧基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯，为蜡状固体(1.20克，100％)，将其直接带至下一反应，无需进一步纯化：¹H NMR(CDCl₃)δ1.03(m，2H)，1.52(s，9H)，1.66(m，2H)，3.38(s，3H)，3.68(s，2H)，7.54(s，1H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ11.37，28.29，40.38，58.94，73.43，83.61，149.57.

步骤2：1-甲氧基甲基环丙基磺酰胺之制备

使1-甲氧基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯(1.14克，4.30毫摩尔)之溶液溶于50％TFA/二氯甲烷之溶液(30毫升)中，并于室温下搅拌16小时。于真空中移除溶剂，且使残留物于80克SiO₂上层析(以0％至60％醋酸乙酯/己烷洗脱)，获得1-甲氧基甲基环丙基磺酰胺，为白色固体(0.55克，77％整体历经两个步骤)：¹H NMR(CDCl₃)δ0.95(m，2H)，1.44(m，2H)，3.36(s，3H)，3.65(s，2H)，4.85(s，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ11.17，40.87，59.23，74.80；LRMS m/z 183(M⁺+NH₄).

3c.1-环丙基甲基环丙基磺酰胺之制备

步骤1：1-环丙基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之制备

1-环丙基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯系根据1-甲氧基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之合成中所述之程序，只是使用1.10当量之环丙基溴化甲烷作为亲电子试剂，以92％产率获得。将化合物直接带至下一反应，无需纯化：¹H NMR(CDCl₃)δ0.10(m，2H)，0.51(m，2H)，0.67(m，1H)，1.10(m，2H)，1.49(s，9H)，1.62(m，2H)，1.87(d，J＝7.0Hz，2H).

步骤2：1-环丙基甲基-环丙基磺酰胺之制备

此化合物系根据关于1-甲氧基甲基环丙基磺酰胺之合成所述之程序，以65％产率得自1-环丙基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯。使化合物于SiO₂上通过柱层析纯化，使用己烷中之0％至60％醋酸乙酯作为洗脱剂：¹H NMR(CDCl₃)δ0.15(m，2H)，0.51(m，2H)，1.01(m，2H)，1.34(m，3H)，1.86(d，J＝7.0Hz，2H)，4.83(s，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ4.65，7.74，11.26，35.62，41.21；LRMS m/z 193(M⁺+NH₄).

3d.1-丙基氨基甲酰基环丙烷-磺酰胺之制备

步骤1：1-丙基氨基甲酰基环丙烷磺酰胺氨基甲酸叔丁酯之制备

此化合物系根据关于1-甲氧基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之合成所述之程序，只是使用1.10当量之异氰酸正丙酯作为亲电子试剂，以粗制100％产率获得。将化合物直接带至下一反应，无需纯化：¹H NMR(CDCl₃)δ0.10(m，2H)，0.51(m，2H)，0.67(m，1H)，1.10(m，2H)，1.49(s，9H)，1.62(m，2H)，1.87(d，J＝7.0Hz，2H).

步骤2：1-丙基氨基甲酰基环丙烷-磺酰胺之制备

此化合物系根据关于1-甲氧基甲基环丙基磺酰胺之合成所述之程序，以50％产率得自1-丙基氨基甲酰基环丙烷磺酰胺氨基甲酸叔丁酯，只是当此物质自最少量之二氯甲烷/己烷再结晶时，未使用层析：¹H NMR(CDCl₃)δ0.15(m，2H)，0.51(m，2H)，1.01(m，2H)，1.34(m，3H)，1.86(d，J＝7.0Hz，2H)，4.83(s，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ4.65，7.74，11.26，35.62，41.21；LRMS m/z 193(M⁺+NH₄).

3e.1-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)氨基甲酰基环丙烷磺酰胺之制备

步骤1：1-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)氨基甲酰基环丙烷磺酰胺氨基甲酸叔丁酯之制备

此化合物系根据关于1-甲氧基甲基环丙基磺酰基胺氨基甲酸叔丁酯之合成所述之程序，只是使用1.20当量之3，5-二甲基异噁唑-4-异氰酸酯作为亲电子试剂，以粗制100％产率获得。将化合物直接带至下一反应，无需纯化。

步骤2：1-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)氨基甲酰基环丙烷磺酰胺之制备

此化合物系使用30毫升(120毫摩尔)4N HCl/二噁烷，搅拌过夜，浓缩，及于Biotage 40M柱上层析(以0％至5％甲醇/二氯甲烷洗脱)，以50％产率(580毫克)得自1.62克(4.52毫摩尔)1-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)氨基甲酰基环-丙烷磺酰胺氨基甲酸叔丁酯：¹H NMR(甲醇-d₄)δ1.57(m，2H)，1.61(m，2H)，2.15(s，3H)，2.30(s，3H)，4.84(s，3H)；¹³C NMR(甲醇-d₄)δ9.65，10.94，15.01，46.11，114.82，159.45，165.55，168.15；LRMS m/z 260(M⁺+H).

4.环烷基磺酰胺类自环烷基溴化物之制备

4a.环丁基磺酰胺自溴化环丁烷之制备

于5.0克(37.0毫摩尔)溴化环丁烷在30毫升无水乙醚(乙醚)中经冷却至-78℃之溶液内，添加44毫升(74.8毫摩尔)戊烷中之1.7M叔丁基锂。使溶液慢慢温热至-35℃，历经1.5小时。将此混合物慢慢以套管加入5.0克(37.0毫摩尔)刚蒸馏之硫酰氯在100毫升己烷中经冷却至-40℃之溶液内，于1小时内温热至0℃，并小心地在真空中浓缩。使此混合物再溶于乙醚中，以若干冰冷水洗涤一次，干燥(MgSO₄)，过滤，及小心地浓缩。使此混合物再溶于20毫升THF中，逐滴添加至500毫升THF中之饱和NH₃内，并将其搅拌过夜。使混合物在真空中浓缩成粗制黄色固体，且自最少量而具有1-2滴甲醇之己烷中之二氯甲烷再结晶，提供1.90克(38％)所要之产物，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ1.95-2.06(m，2H)，2.30-2.54(m，4H)，3.86(p，J＝8Hz，1H)，4.75(brs，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ16.43，23.93，56.29.对C₄H₈NSO₂之HRMS m/z(M-H)^-计算值：134.0276，实测值134.0282.

4b.环戊基磺酰胺之制备

将18.5毫升(37.0毫摩尔)2M环戊基氯化镁在醚中之溶液，逐滴添加至3.0毫升(37.0毫摩尔)刚蒸馏之硫酰氯(得自Aldrich)在100毫升己烷中经冷却至-78℃之溶液内。使混合物温热至0℃，历经1小时，然后小心地在真空中浓缩。使此混合物再溶于乙醚(200毫升)中，以若干冰冷水(200毫升)洗涤一次，干燥(MgSO₄)，过滤，及小心地浓缩。使此混合物再溶于35毫升THF中，逐滴添加至500毫升THF中之饱和NH₃内，并将其搅拌过夜。使混合物在真空中浓缩成粗制黄色固体，经过50克硅胶过滤残留物，使用70％醋酸乙酯-己烷作为洗脱剂，然后，浓缩溶液。使残留物自最少量而具有1-2滴甲醇之己烷中之二氯甲烷再结晶，提供2.49克(41％)所要之产物，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ1.58-1.72(m，2H)，1.74-1.88(m，2H)，1.94-2.14(m，4H)，3.48-3.59(m，1H)，4.80(br s，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ25.90，28.33，63.54；MS m/e 148(M-H)^-.

4c.环己基磺酰胺之制备

将18.5毫升(37.0毫摩尔)2M环己基氯化镁(TCI美国公司)在乙醚中之溶液逐滴添加至3.0毫升(37.0毫摩尔)刚蒸馏之硫酰氯在100毫升己烷中经冷却至-78℃之溶液内。使混合物温热至0℃，历经1小时，然后小心地在真空中浓缩。使此混合物再溶于乙醚(200毫升)中，以若干冰冷水(200毫升)洗涤一次，干燥(MgSO₄)，过滤，及小心地浓缩。使此混合物再溶于35毫升THF中，逐滴添加至500毫升THF中之饱和NH₃内，并将其搅拌过夜。使混合物在真空中浓缩成粗制黄色固体，经过50克硅胶过滤残留物，使用70％醋酸乙酯-己烷作为洗脱剂，及浓缩。使浓缩物自最少量而具有1-2滴甲醇之己烷中之二氯甲烷再结晶，提供1.66克(30％)所要之产物，为白色固体：¹H NMR(CDCl₃)δ1.11-1.37(m，3H)，1.43-1.56(m，2H)，1.67-1.76(m，1H)，1.86-1.96(m，2H)，2.18-2.28(m，2H)，2.91(tt，J＝12，3.5Hz，1H)，4.70(br s，2H)；¹³CNMR(CDCl₃)δ25.04，25.04，26.56，62.74；MS m/e 162(M-1)^-.

4d.新戊基磺酰胺之制备

按照关于环己基磺酰胺之制备之程序，使49毫升(37毫摩尔)在乙醚中之0.75M新戊基氯化镁(Alfa)转化成1.52克(27％)所要之产物，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ1.17(s，9H)，3.12(s，2H)，4.74(brs，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ29.46，31.51，67.38；MS m/e 150(M-1)^-.

4e.环丁基甲基磺酰胺之制备

将12.3克(83毫摩尔)环丁基甲基溴(Aldrich)与13.7克(91毫摩尔)碘化钠在150毫升丙酮中之溶液加热至回流过夜，然后冷却至室温。藉过滤移除无机固体，并将丙酮与环丙基甲基碘(8.41克，46％)藉由蒸馏移除(分别为环境温度，及150托，在80℃下)。

将4.0克(21.98毫摩尔)环丁基基醇碘在30毫升无水乙醚中经冷却至-78℃之溶液，以套管加入17毫升(21.98毫摩尔)1.3M仲丁基锂在环己烷中之溶液内，并将溶液搅拌5分钟。于此混合物中，以套管加入3.0克(21.98毫摩尔)刚蒸馏之硫酰氯在110毫升己烷中经冷却至-78℃之溶液，使混合物温热至室温，历经1小时，然后小心地在真空中浓缩。使此混合物再溶于乙醚中，以若干冰冷水洗涤一次，干燥(MgSO₄)，过滤，及小心地浓缩。使此混合物再溶于30毫升THF中，逐滴添加至500毫升THF中之饱和NH₃内，并将其搅拌过夜。使混合物在真空中浓缩成粗制黄色固体，并自最少量而具有1-2滴甲醇之己烷中之二氯甲烷再结晶，提供1.39克(42％)所要之产物，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ1.81-2.03(m，4H)，2.14-2.28(m，2H)，2.81-2.92(m，1H)，3.22(d，J＝7Hz，2H)，4.74(brs，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ19.10，28.21，30.64，60.93.MS m/e 148(M-H)^-.

4f.环丙基甲基磺酰胺之制备

使用关于环丁基甲基磺酰胺之制备所采用之程序，环丙基甲基磺酰胺系制自环丙基甲基溴(Aldrich)(亦参阅JACS 1981，p.442-445).¹H NMR(CDCl₃)δ0.39-0.44(m，2H)，0.67-0.76(m，2H)，1.13-1.27(m，1H)，3.03(d，J＝7.3Hz，2H)，4.74(brs，2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ4.33，5.61，59.93；MS m/e 134(M-1).

4g.2-噻吩磺酰胺之制备

所要之产物系使用Justus Liebigs Ann.Chem.1933，501，第174-182页中所述之方法，制自2-噻吩磺酰氯(购自Aldrich)

4h.4-溴苯磺酰胺之制备

4-溴苯基磺酰胺系经由市购可得之4-溴磺酰氯以THF中之饱和氨处理而制成。

5.关于磺酰胺制备之一般程序

中间体氨磺酰氯系以下述方式制成，添加THF中之水(1当量)至氯磺酰异氰酸酯(1当量)在THF中之冷(-20℃)搅拌溶液内，并使所形成之溶液温热至0℃。于此溶液中添加无水三乙胺(1当量)，接着为必要之仲胺(1当量)。使反应混合物温热至室温，然后过滤，且使滤液浓缩，而得所要之磺酰胺。

II P1中间体之制备

5.1-叔丁氧羰基氨基环丙烷羧酸为市购可得

6.1-氨基环丁烷羧酸甲酯·盐酸盐之制备

使1-氨基环丁烷羧酸(100毫克，0.869毫摩尔)(Tocris)溶于10毫升甲醇中。使HCl气体起泡2小时。将反应混合物搅拌18小时，然后在真空中浓缩，获得144毫克黄色油。以10毫升乙醚研制，提供100毫克所要之产物，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ2.10-2.25(m，1H)，2.28-2.42(m，1H)，2.64-2.82(m，4H)，3.87(s，3H)，9.21(br s，3H).

7a.(1R，2R)/(1S，2S)1-氨基-2-乙基环丙烷羧酸叔丁酯(外消旋混合物)之制备

对羧基为同侧之乙基

步骤1：下文所示2-乙基环丙烷-1，1-二羧酸二-叔丁酯之制备

于苄基三乙基氯化铵(21.0克，92.2毫摩尔)在50％NaOH水溶液(92.4克，在185毫升H₂O中)中之悬浮液内，添加1，2-二溴丁烷(30.0克，138.9毫摩尔)与丙二酸二叔丁酯(20.0克，92.5毫摩尔)。将反应混合物在室温下激烈搅拌18小时，并以冰与水之混合物处理。以二氯甲烷萃取(3x)粗产物，并连续以水(3x)与盐水洗涤。将有机萃取液合并，干燥(MgSO₄)，过滤，及在真空中浓缩。使所形成之残留物藉急骤柱层析纯化(100克SiO₂，在己烷中3％乙醚)，提供所要之产物(18.3克，67.8毫摩尔，73％产率)，将其直接使用于下一反应。

步骤2：下文所示外消旋2-乙基环丙烷-1，1-二羧酸叔丁酯之制备

将步骤1之产物(18.3克，67.8毫摩尔)添加至叔丁醇钾(33.55克，299.0毫摩尔)在无水乙醚(500毫升)中之悬浮液内，在0℃下，以H₂O(1.35毫升，75.0毫摩尔)处理，并于室温下激烈搅拌过夜。将反应混合物倾倒在冰与水之混合物中，并以乙醚洗涤(3x)。将水层在0℃下以10％柠檬酸水溶液调整至酸性pH，并以醋酸乙酯萃取(3x)。将合并之有机层以水(2x)、盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，及在真空中浓缩，提供所要之产物，为淡黄色油(10克，46.8毫摩尔，69％产率)。

步骤3：下文所示(1R，2R)/(1S，2S)2-乙基-1-(2-三甲基硅烷基乙氧羰基氨基)环丙烷-羧酸叔丁酯之制备

于步骤2之产物(10克，46.8毫摩尔)与3克刚活化之

分子筛在无水苯(160毫升)中之悬浮液内，添加三乙胺(7.50毫升，53.8毫摩尔)与DPPA(11毫升，10.21毫摩尔)。将反应混合物加热至回流，历经3.5小时，以2-三甲基甲硅烷基乙醇(13.5毫升，94.2毫摩尔)处理，并加热至回流过夜。过滤反应混合物，以乙醚稀释，相继以10％柠檬酸水溶液、水、饱和NaHCO₃水溶液、水(2x)及盐水(2x)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，及在真空中浓缩。使残留物与10克Aldrich聚异氰酸酯清除剂树脂一起悬浮于120毫升二氯甲烷中，在室温下搅拌过夜，及过滤，提供所要之产物(8克，24.3毫摩尔；52％)，为淡黄色油：¹H NMR(CDCl₃)δ0.03(s，9H)，0.97(m，5H)，1.20(br m，1H)，1.45(s，9H)，1.40-1.70(m，4H)，4.16(m，2H)，5.30(br s，1H).

步骤4：下文所示(1R，2R)/(1S，2S)1-氨基-2-乙基环丙烷羧酸叔丁酯(外消旋混合物)之制备

对羧基为同侧之乙基

于步骤3之产物(3克，9毫摩尔)中，添加THF中之1.0M TBAF溶液(9.3毫升，9.3毫摩尔)。将混合物加热至回流，历经1.5小时，冷却至室温，并以500毫升醋酸乙酯稀释。将溶液连续以水(2×100毫升)与盐水(2×100毫升)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，及在真空中浓缩，提供所要之产物。

7b.如所示关于带有P1乙烯基P1取代基之式I化合物之转化成相应饱和P1类似物之一般方法

使化合物A(大约100毫克)与Pt(S)/C(5％，10毫克)在大约15毫升EtOAc中之悬浮液，以H₂(30PSI)氢化0.5小时。在经过硅藻土填充柱过滤后，使滤液浓缩，并纯化，而得所要之产物化合物B。

8.外消旋(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯之制备：

图式1

步骤1：

使甘氨酸乙酯盐酸盐(304克，2.16摩尔)悬浮于叔丁基甲基醚(1.6升)中。添加苯甲醛(231克，2.16摩尔)与无水硫酸钠(155克，1.09摩尔)，并将混合物使用冰水浴冷却至0℃。逐滴添加三乙胺(455毫升，3.26摩尔)，历经30分钟，并将混合物在室温下搅拌48小时。然后，藉由添加冰冷水(1升)使反应淬灭，并分离有机层。以叔丁基甲基醚(0.5升)萃取水相，且合并有机相，及以饱和NaHCO₃水溶液(1升)与盐水(1升)之混合物洗涤。使有机层以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩，提供392.4克N-苄基亚胺产物，为浓稠黄色油，将其直接使用于下一步骤。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ1.32(t，J＝7.1Hz，3H)，4.24(q，J＝7.1Hz，2H)，4.41(d，J＝1.1Hz，2H)，7.39-7.47(m，3H)，7.78-7.81(m，2H)，8.31(s，1H).

步骤2：

于叔丁醇锂(84.1克，1.05摩尔)在无水甲苯(1.2升)中之悬浮液内，逐滴添加甘氨酸乙酯之N-苄基亚胺(100克，0.526摩尔)与反式-1，4-二溴-2-丁烯(107克，0.500摩尔)在无水甲苯(0.6升)中之混合物，历经60分钟。于添加完成时，藉由添加水(1升)与叔丁基甲基醚(TBME，1升)使深红色混合物淬灭。分离水相，并以TBME(1升)萃取第二次。合并有机相，添加1.0M HCl(1升)，并将混合物于室温下搅拌2小时。分离有机相，且以水(0.8升)萃取。然后合并水相，以盐(700克)饱和，并添加TBME(1升)，且使混合物冷却至0℃。接着，使此经搅拌之混合物藉由逐滴添加10.0MNaOH呈碱性至pH＝14，分离有机层，及以TBME(2×500毫升)萃取水相。合并有机萃取液，以MgSO₄干燥，过滤，及浓缩至1升体积。于此游离胺之溶液中，添加Boc₂O或二碳酸二叔丁酯(131克，0.600摩尔)，并将混合物在室温下搅拌4天。将另外之二碳酸二叔丁酯(50克，0.23摩尔)添加至反应物中，并使混合物回流3小时，然后，使其冷却至室温过夜。使反应混合物以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩，提供80克粗制物质。使此残留物藉急骤层析纯化(2.5千克SiO₂，以1％至2％CH₃OH/CH₂Cl₂洗脱)，提供57克(53％)外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯，为黄色油，其系在冷藏室中静置时固化：¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.43-1.49(m，1H)，1.76-1.82(br m，1H)，2.14(q，J＝8.6Hz，1H)，4.18(q，J＝7.2Hz，2H)，5.12(dd，J＝10.3，1.7Hz，1H)，5.25(br s，1H)，5.29(dd，J＝17.6，1.7Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.6，10.3，8.9Hz，1H)；MS m/z 254.16(M-1).

9.N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯之解析

图式2

解析A

于被容纳在12升有夹套反应器中，经保持在39℃下，及于300rpm下搅拌之磷酸钠缓冲剂水溶液(0.1M，4.25升(″L″)，pH 8)内，添加511克Alcalase 2.4升(约425毫升)(Novozymes北美公司)。当混合物之温度达到39℃时，藉由添加水中之50％NaOH，调整pH值至8.0。然后，添加外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(85克)在850毫升DMSO中之溶液，历经40分钟期间。接着，使反应温度在40℃下保持24.5小时，于此段时间内，将混合物之pH值在1.5小时与19.5小时之时间点下，使用水中之50％NaOH调整至8.0。24.5小时后，酯之对映体过量值被测定为97.2％，并使反应物冷却至室温(26℃)，且搅拌过夜(16小时)，接着酯之对映体过量值被测定为100％。然后，将反应混合物之pH值以50％NaOH调整至8.5，及以MTBE(2×2升)萃取所形成之混合物。然后，将合并之MTBE萃取液以5％NaHCO₃(3×100毫升)、水(3×100毫升)洗涤，及在真空中浓缩，而得对映异构上纯N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯，为淡黄色固体(42.55克；纯度：97％210纳米，未含有酸；100％对映异构体过量(″ee″))。

接着，使得自萃取处理之水层以50％H₂SO₄酸化至pH 2，并以MTBE(2×2升)萃取。以水(3×100毫升)洗涤此MTBE萃取液，及浓缩，而得酸，为淡黄色固体(42.74克；纯度：99％210纳米，未含有酯)。

1R，2S-酯 1S，2R-酸

	酯	酸
			高分辨质谱	(+)ESI，C₁₃H₂₂NO₄，[M+H]⁺，计算值256.1549，实测值256.1542	(-)ESI，C₁₁H₁₆NO₄，[M-H]-，计算值226.1079，实测值226.1089

NMR发现之化学位移溶剂：CDCl₃(质子δ7.24ppm，C-13δ77.0ppm)

Bruker DRX-500C：质子500.032MHz，碳125.746MHz

解析B

于24孔板之孔(容量：10毫升/孔)中之0.5毫升100mM Heps·Na缓冲液(pH 8.5)内，添加0.1毫升赛威酶(Savinase)16.0升(得自克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)之蛋白酶)(Novozymes北美公司)与外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(10毫克)在0.1毫升DMSO中之溶液。将板密封，并在250rpm下，于40℃下培养。18小时后，对映过量酯系被测定为44.3％，如下述：移除0.1毫升反应混合物，并与1毫升乙醇充分混合；于离心分离后，10微升(″μL″)上层清液系以手性HPLC分析。于残留反应混合物中，添加0.1毫升DMSO，并使板在250rpm下，于40℃下再培养3天，接着，将四毫升乙醇添加至孔中。于离心分离后，10微升上层清液系以手性HPLC分析，且对映过量酯系被测定为100％。

解析C

于24孔板之孔(容量：10毫升/孔)中之0.5毫升100mM Heps·Na缓冲液(pH 8.5)内，添加0.1毫升Esperase 8.0升(得自嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)之蛋白酶)(Novozymes北美公司)与外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(10毫克)在0.1毫升DMSO中之溶液。将板密封，并在250rpm下，于40℃下培养。18小时后，对映过量酯系被测定为39.6％，如下述：移除0.1毫升反应混合物，并与1毫升乙醇充分混合；于离心分离后，10微升上层清液系以手性HPLC分析。于残留反应混合物中，添加0.1毫升DMSO，并使板在250rpm下，于40℃下再培养3天，接着，将4毫升乙醇添加至孔中。于离心分离后，10微升上层清液系以手性HPLC分析，且对映过量酯系被测定为100％。

试样分析系以下列方式进行：

1)试样制备：将约0.5毫升反应混合物与10体积之乙醇充分混合。于离心分离后，将10微升上层清液注射至HPLC柱上。

2)转化率测定：

柱：YMC ODSA，4.6×50毫米，S-5微米

溶剂：A，1mM HCl，在水中；B，CH₃CN

梯度：30％B，历经1分钟；30％至45％B，历经0.5分钟；45％B，历经1.5分钟；45％至30％B，历经0.5分钟

流动速率：2毫升/分钟

UV检测：210纳米

保留时间：酸，1.2分钟；酯，2.8分钟。

3)关于酯之对映过量测定：

柱：CHIRACEL OD-RH，4.6×150毫米，S-5微米

流动相：CH₃CN/50mM HClO₄，在水中(67/33)

流动速率：0.75毫升/分钟

UV检测：210纳米

保留时间：

(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸5.2分钟；

外消旋物(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯18.5分钟与20.0分钟；

(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯18.5分钟。

解析D

使5升0.3M磷酸钠缓冲液(pH 8)在20升有夹套反应器中，经保持于38℃下，在130rpm下搅拌。将四升Alcalase 2.4升(Novozymes北美公司)与1升DI水添加至反应器中。当混合物之温度接近38℃时，使用10N NaOH调整pH值至7.8。将外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(500克)在5升DMSO中之溶液经由添液漏斗添加至反应器中，历经1小时期间。然后，将反应温度调整至48℃。21小时后，对映过量酯达到99.3％。在24小时下停止加热，且使反应物慢慢冷却下降至室温(约25℃)，并搅拌过夜。将反应混合物之pH值以10NNaOH调整至8.5，且以MTBE(2×4升)萃取混合物。将合并之MTBE萃取液以5％NaHCO₃(3×400毫升)与水(3×400毫升)洗涤，及浓缩，而得对映异构上纯N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯，为淡黄色晶体(259克；纯度：96.9％210纳米，未含有酸；100％ee)。

解析E

使10升0.1M磷酸钠缓冲液(pH 8)在20升有夹套反应器中，经保持于40℃下，在360rpm下搅拌，将1.5升Alcalase 2.4升(Novozymes北美公司)添加至反应器中。当混合物之温度接近38℃时，使用10N NaOH调整pH值至8.0。将外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(200克)在2升DMSO中之溶液经由添液漏斗添加至反应器中，历经1小时期间。然后，将反应温度调整至40℃。3小时后，使用10NNaOH调整pH值至8.0。21小时后，使反应物冷却下降至25℃，将反应混合物之pH值以10N NaOH调整至8.5，并以MTBE(2×5升)萃取混合物。将合并之MTBE萃取液以5％NaHCO₃(3×500毫升)与水(3×200毫升)洗涤，及浓缩，而得110克黄色油。使此油在室温及罩框真空下凝固，并获得对映异构上纯N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯，为无色长棒晶体(101克；纯度：97.9％210纳米，未含有酸；100％ee)。

晶体结构对映异构上纯N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯已藉由单晶分析作特征鉴定(X-射线NB#：52795-093，参考代码：634592N1)。由于缺乏已知手性中心或重原子，故绝对构型并未建立。沿着结晶学a-轴之链结构系经由酰氨基与羰基氧原子间之分子间氢键(N...O)形成。

N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯之结构：

结晶数据：实验：

化学式：C13H21N1O4 结晶化作用

晶系：斜方结晶来源：MTBE

空间群：P2₁2₁2₁ 结晶描述：无色棒状物

α＝90° 晶体大小(毫米)：0.12×0.26×0.30

β＝90° 数据收集

γ＝90° 温度(K)：293

θ极大值(°)：65.2(CuKα)

Z＝4d_x＝1.155g cm^-3 所度量之反射数：7518

关于晶格参数之反射数：6817 独立反射数：2390(R_int＝0.0776)

关于晶格参数之θ范围(°)：2.2-65.2 所发现之反射数(I≥2σ：2284)

吸收系数(毫米-1)：0.700 吸收校正(T_极小值-T_极大值)：0.688-1.000

解析F

使5升0.2M硼酸钠缓冲剂(pH 9)在20升有夹套反应器中，经保持于45℃下，并于400rpm下搅拌。将三升DI水与四升赛威酶(Savinase)16升，类型EX(Novozymes北美公司)添加至反应器中。当混合物之温度接近45℃时，使用10N NaOH调整pH值至8.5。将外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(200克)在2升DMSO中之溶液，经由添液漏斗添加至反应器中，历经40分钟期间。然后，将反应温度调整至48℃。2小时后，使用10N NaOH调整pH值至pH 9.0。在18小时下，对映过量酯达到72％，使用10NNaOH调整pH值至9.0。在24小时下，使温度降低至35℃。在42小时下，使温度升高至48℃，并使用10N NaOH调整pH值至9.0。在48小时下停止加热，且使反应物慢慢冷却下降至室温(约25℃)，并搅拌过夜。在66小时下，反应混合物之pH值为8.6。以MTBE(2×4升)萃取混合物。将合并之MTBE萃取液以5％NaHCO₃(6×300毫升)与水(3×300毫升)洗涤，及浓缩，而得对映异构上纯N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯，为淡黄色晶体(101A克；纯度：95.9％210纳米，未含有酸；98.6％ee)。

10.手性(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯盐酸盐之制备

将(1R，2S)N-Boc-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(8，5克，33.3毫摩尔)与200毫升4N HCl/二噁烷(Aldrich)在氮气氛及室温下一起搅拌3小时。于减压下移除溶剂，保持温度低于40℃。这获得6.57克(～100％)(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯盐酸盐，为淡黄褐色固体。¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ1.31(t，J＝7.0Hz，3H)，1.69-1.82(m，2H)，2.38(q，J＝8.8Hz，1H)，4.29(q，J＝7.0Hz，2H)，5.22(d，J＝10.3Hz，1H)，5.40(d，J＝17.2Hz，1H)，5.69-5.81(m，1H).MS m/z 156(M⁺+1).

11.N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-环丙基环丙烷羧酸乙酯之制备

将N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸(255毫克，1.0毫摩尔)在乙醚(10毫升)中之溶液以醋酸钯(5毫克，0.022毫摩尔)处理。将橙色/红色溶液置于氮气氛下。逐滴添加过量乙醚中之重氮甲烷，历经1小时期间。将所形成之溶液于室温下搅拌18小时。使用氮气流移除过量重氮甲烷，并使所形成之溶液藉旋转蒸发浓缩，获得粗产物。急骤层析(10％醋酸乙酯/己烷)，提供210毫克(78％)(1R，2S)-N-Boc-1-氨基-2-环丙基环丙烷羧酸乙酯，为无色油。MS m/z 270(M⁺+H).

III.P1′-P1中间体之制备

12.P1P1′之制备：

图式1

步骤1：

于1(R)-叔丁氧羰基氨基-2(S)-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(3.28克，13.2毫摩尔)在THF(7毫升)与甲醇(7毫升)中之溶液内，添加LiOH(1.27克，53.0毫摩尔)在水(14毫升)中之悬浮液。将混合物于室温下搅拌过夜。于混合物中，添加1.0M NaOH(15毫升)、水(20毫升)及醋酸乙酯(20毫升)。使混合物振荡，分离液相，并以20毫升0.5MNaOH再一次萃取有机相。使合并之水相以1.0M HCl酸化，直到pH＝4为止，并以醋酸乙酯(3×40毫升)萃取。使合并之有机萃取液以盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，及过滤，提供所要之产物，为白色固体(2.62克，87％)。¹H NMR：(DMSO-d₆)δ1.22-1.26(m，1H)，1.37(s，9H)，1.50-1.52(m，1H)，2.05(q，J＝9Hz，1H)，5.04(d，J＝10Hz，1H)，5.22(d，J＝17Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，7.18，7.53(s，NH(旋转异构体)，12.4(br s，1H))；LC-MS MS m/z 228(M⁺+H).

步骤2：

将步骤1之产物(2.62克，11.5毫摩尔)与CDI(2.43克，15.0毫摩尔)在THF(40毫升)中之溶液于回流及氮气下加热50分钟。使溶液冷却至室温，并藉由套管转移至环丙基磺酰胺(1.82克，15.0毫摩尔)在THF(10毫升)中之溶液内。于所形成之溶液中，添加DBU(2.40毫升，16.1毫摩尔)，并持续搅拌20小时。以1.0M HCl使混合物淬灭至pH＝1，并在真空中蒸发THF。将此悬浮液以醋酸乙酯(2×50毫升)萃取，且合并有机萃取液，并干燥(Na₂SO₄)。过滤，浓缩，及从己烷-醋酸乙酯(1∶1)藉再结晶纯化，提供所要之产物(2.4克)，为白色固体。使母液藉Biotage 40S柱纯化(以二氯甲烷中之9％丙酮洗脱)，而得第二批次之所要产物(1.1克)。合并两批次(总产率92％)。¹H NMR：(DMSO-d₆)δ0.96-1.10(m，4H)，1.22(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.39(s，9H)，1.70(t，J＝5.5Hz，1H)，2.19-2.24(m，1H)，2.90(m，1H)，5.08(d，J＝10Hz，1H)，5.23(d，J＝17Hz，1H)，5.45(m，1H)，6.85，7.22(s，NH(旋转异构体))；LC-MS，MSm/z 331(M⁺+H).

步骤3：

将步骤2之产物(3.5克，10.6毫摩尔)在二氯甲烷(35毫升)与TFA(32毫升)中之溶液于室温下搅拌1.5小时。在真空中移除挥发性物质，且使残留物悬浮于乙醚中之1.0M HCl(20毫升)内，及在真空中浓缩。重复此程序一次。将所形成之混合物以戊烷研制，并过滤，而得标题化合物，为吸湿性灰白色固体(2.60克，92％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.01-1.15(m，4H)，1.69-1.73(m，1H)，1.99-2.02(m，1H)，2.38(q，J＝9Hz，1H)，2.92-2.97(m，1H)，5.20(d，J＝11Hz，1H)，5.33(d，J＝17Hz，1H)，5.52-5.59(m，1H)，9.17(br s，3H)；LC-MS，MS m/z 231(M⁺+H).

13.P1-P1′磺酰胺衍生物之制备

于(1R，2S)1-叔丁氧羰基氨基-2-乙烯基-环丙烷羧酸(217毫克，1.194毫摩尔)在THF(5毫升)中之溶液内，添加CDI(290毫克，1.791毫摩尔)，并将反应混合物加热至回流，历经45分钟。于另外之圆底烧瓶中，将LiHMDS(在己烷中之1.0M溶液，2.4毫升，2.4毫摩尔)添加至N-乙基甲基磺酰胺(330毫克，2.388毫摩尔)在THF(5毫升)中之溶液内，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。合并两种反应混合物，并于室温下搅拌2小时。添加水使反应淬灭，且以醋酸乙酯萃取反应溶液。分离有机层，并以MgSO₄干燥。过滤，及浓缩，获得粗产物，使其藉制备型HPLC纯化，以提供所要之N-Boc保护之N-酰基磺酰胺。当使化合物溶于二噁烷中之4N HCl溶液(2毫升)内时，接着移除Boc保护基，并于室温下搅拌4小时。浓缩提供褐色油，为HCl盐(112毫克，33％产率)。1H NMR(400Mz，CD3OD)δ1.16(t，J＝7.21Hz，3H)，1.68(dd，J＝10.03，7.83Hz，1H)，2.15(m，1H)，2.37(m，1H)，2.89(s，3H)，3.30(m，2H)，5.31(d，J＝10.27Hz，1H)，5.42(d，J＝17.12Hz，3H)，5.68(m，1H).LC-MS(保留时间：0.883分钟)，MS m/z 270(M+Na⁺).

化合物1异构体：

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺与

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例1：化合物1A与1B之制备

化合物1A与1B

图式1

步骤1：

于3-甲氧基肉桂酸(11.0克，62毫摩尔)与三乙胺(12.5克，124毫摩尔)在丙酮(80毫升)中之溶液内，在0℃下，逐滴添加氯甲酸乙酯(大约1.5当量)。在此温度下搅拌1小时后，逐滴添加NaN₃水溶液(6.40克，100毫摩尔，在35毫升H₂O中)，并将反应混合物于环境温度下搅拌16小时。将水(100毫升)添加至混合物中，且于真空中移除挥发性物质。将所形成之浆液以甲苯(3×50毫升)萃取，并合并有机层，以MgSO₄干燥，及过滤。于190℃下，将滤液逐滴添加至二苯甲烷(50毫升)与三丁胺(30毫升)之经加热溶液中。在添加期间，藉蒸馏移除甲苯。在添加完成后，使反应温度升高至210℃，历经2小时。在冷却时，藉过滤收集已沉淀之产物，以己烷(2×50毫升)洗涤，及干燥，提供所要之产物，为白色固体(5.53克，51％)(Nicolas Briet等人，Tetrahedron，2002，5761-5766).LC-MS，MS m/z 176(M⁺+H).

步骤2：

将POCl₃(10毫升)中之6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮(5.0克，28.4毫摩尔)加热至温和回流，历经3小时，然后在真空中浓缩混合物(Nicolas Briet等人，Tetrahedron，2002，5761-5766)。将残留物倒入冰水(20毫升)中，并藉由添加10.0M NaOH达到pH＝10。以CHCl₃萃取所形成之混合物。将有机层以盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤，及浓缩。使残留物藉急骤层析纯化(1∶1己烷-醋酸乙酯)，提供4.41克(80％)所要之产物，为白色固体。¹H NMR(CD₃OD)δppm 3.98(s，3H)，7.34-7.38(m，2H)，7.69(d，J＝5.5Hz，1H)，8.10(d，J＝6.0Hz，1H)，8.23(d，J＝9.5Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 194(M⁺+H).

图式2

步骤3：

于N-Boc-4-(R)-羟基-L-脯氨酸(0.892克，3.89毫摩尔)在DMSO(40毫升)中之溶液内，于环境温度下，以一份添加固体叔丁醇钾(1.34克，12.0毫摩尔)。将此悬浮液于室温下搅拌30分钟，然后冷却至10℃。以一份固体添加1-氯-6-甲氧基-异喹啉(实施例1步骤2之产物)(785毫克，4.05毫摩尔)，并将所形成之混合物于环境温度下搅拌12小时。以冰冷5％柠檬酸(水溶液)使混合物反应淬灭，然后以醋酸乙酯(100毫升)萃取。以醋酸乙酯再一次萃取水相。将合并之有机层分别以5％柠檬酸(水溶液)与盐水洗涤，以MgSO₄干燥，及过滤。使滤液在真空中浓缩至干燥，提供所要之产物，为灰白色泡沫物(1.49克，99％产率)。将此粗制物质使用于下一反应步骤，无需进一步纯化。¹H NMR(CD₃OD)δ1.42，1.44(旋转异构体，9H)，2.38-2.43(m，1H)，2.66-2.72(m，1H)，3.80-3.87(m，2H)，3.92(s，3H)，4.44-4.52(m，1H)，5.73(bs，1H)，7.16-7.18(m，2H)，7.24-7.25(m，1H)，7.87-7.88(m，1H)，8.07(d，J＝8.5Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 389(M⁺+H).

步骤4：

在0℃下，于实施例1步骤3之产物(1.49克，3.84毫摩尔)、HATU(2.19克，5.76毫摩尔)及环丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-环丙烷羰基)-酰胺HCl盐(1.12克，4.22毫摩尔)在CH₂Cl₂(50毫升)中之混合物内，添加DIPEA(1.29克，11.5毫摩尔)。于环境温度下搅拌12小时后，将所形成之溶液以CH₂Cl₂(50毫升)稀释，并以冰冷5％柠檬酸(水溶液)洗涤。将有机层分别以5％柠檬酸(水溶液)与盐水洗涤，以MgSO₄干燥，及过滤。使滤液在真空中浓缩至干燥。使残留物自甲醇再结晶，提供1.60克(70％)所要之产物，为白色固体。¹H NMR(CD₃OD)δ1.05-1.08(m，2H)，1.16-1.20(m，1H)，1.24-1.27(m，1H)，1.42-1.45(m，10H)，1.88(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.24-2.30(m，2H)，2.53-2.57(m，1H)，2.94-2.98(m，1H)，3.80(d，J＝12.5Hz，1H)，3.86-3.89(m，1H)，3.93(s，3H)，4.40-4.42(m，1H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.32(d，J＝18.0Hz，1H)，5.72-5.81(m，2H)，7.17-7.20(m，2H)，7.26(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.07(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 601(M⁺+H).

步骤5：

于实施例1步骤4之产物(1.50克，2.50毫摩尔)在CH₂Cl₂(10毫升)中之冰冷溶液内，添加TFA(10毫升)。使所形成之溶液温热至环境温度，并搅拌2小时。于真空中移除溶剂。将残留物在乙醚中以1M HCl研制，藉过滤收集。并以乙醚洗涤固体，提供所要之产物，为吸湿性白色固体(1.43克，99.8％)。¹H NMR(CD₃OD)δppm1.03-1.21(m，4H)，1.26-1.31(m，1H)，1.37-1.40(m，1H)，1.95-1.97(m，1H)，2.32-2.37(m，1H)，2.42-2.48(m，1H)，2.95-2.99(m，1H)，3.88(d，J＝12.5Hz，2H)，3.98(s，3H)，4.40-4.42(m，1H)，5.16(d，J＝10.5Hz，1H)，5.33(d，J＝18.0Hz，1H)，5.62-5.69(m，1H)，5.97(bs，1H)，7.30-7.34(m，2H)，7.47(d，J＝6.0Hz，1H)，7.90(d，J＝6.5Hz，1H)，8.34(d，J＝9.0Hz，1H)，9.14(bs，1H)；LC-MS，MS m/z 501(M⁺+H).

步骤6：

于实施例1步骤5之产物(0.350克，0.610毫摩尔)、HATU(0.302克，0.793毫摩尔)、DIEA (0.277克，2.14毫摩尔)及二氯甲烷(6毫升)之混合物中，添加(+/-)-2-(4，6-二甲基吡啶-2-基氨基)-3-甲基丁酸(0.135克，0.610毫摩尔，购自Specs，目录#AP-836/41220382)。将反应物在室温下搅拌14小时。添加另外之HATU(0.302克，0.793毫摩尔)、DIEA(0.079克，0.61毫摩尔)及(+/-)-2-(4，6-二甲基吡啶-2-基氨基)-3-甲基丁酸(0.135克，0.610毫摩尔)，并将所形成之混合物再搅拌6小时，以企图使反应进一步推进至完成。使混合物在真空中浓缩，溶于醋酸乙酯(75毫升)中，并以1.0M HCl水溶液(3×10毫升)洗涤。以醋酸乙酯(50毫升)萃取合并之HCl洗液。合并有机相，并以10％NaHCO₃水溶液(2×10毫升)，且以盐水洗涤，接着以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩成深褐色残留物。藉反相制备型HPLC纯化，藉LCMS获得具有相同m/z之两种产物。藉反相制备型HPLC洗脱之第一种异构体系经标识为化合物1A(47.7毫克，11.1％)，与洗脱之第二种异构体系经标识为化合物1B(16.9毫克，3.9％)。

化合物1A：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.01(d，J＝6.71Hz，3H)，1.10(d，J＝6.71Hz，3H)，1.12-1.17(m，2H)，1.26-1.30(m，2H)，1.47(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.85(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.17(s，3H)，2.31(q，J＝8.85Hz，2H)，2.36-2.40(m，2H)，2.41(s，3H)，2.65(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.97-3.03(m，1H)，3.95(s，3H)，4.16(dd，J＝12.05，3.51Hz，1H)，4.30(d，J＝11.60Hz，1H)，4.49(d，J＝7.02Hz，1H)，4.68(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)，5.17(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.35(dd，J＝17.24，1.07Hz，1H)，5.77-5.86(m，1H)，5.99(s，1H)，6.59(s，1H)，6.65(s，1H)，7.11(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.23(d，J＝2.44Hz，1H)，7.30(d，J＝5.80Hz，1H)，7.94(d，J＝5.80Hz，1H)，7.98(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS MS m/z 705(M⁺+H).

化合物1B：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，1.03-1.06(m，J＝2.1Hz，2H)，1.07(d，J＝6.7Hz，3H)，1.14-1.19(m，1H)，1.20-1.25(m，1H)，1.32(dd，J＝9.5，5.2Hz，1H)，1.81(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，2.14(q，J＝8.9Hz，1H)，2.25-2.39(m，2H)，2.55(dd，J＝13.9，6.9Hz，1H)，2.88-2.94(m，1H)，3.82(s，3H)，4.12(dd，J＝11.7，4.1Hz，1H)，4.43(dd，J＝10.4，7.0Hz，1H)，4.55(d，J＝11.9Hz，1H)，4.62(d，J＝9.2Hz，1H)，5.03(d，J＝10.4Hz，1H)，5.20(d，J＝17.1Hz，1H)，5.65-5.74(m，1H)，5.79(t，J＝3.5Hz，1H)，6.99(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.04(d，J＝2.1Hz，1H)，7.11(d，J＝6.1Hz，1H)，7.68(t，J＝7.6Hz，1H)，7.73(t，J＝7.3Hz，1H)，7.77(d，J＝6.1Hz，1H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，8.01(d，J＝7.6Hz，1H)，8.07(d，J＝9.2Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 705(M⁺+H).

实施例2：化合物2之制备：N-(5-(三氟甲基)-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物2

于实施例1步骤5之产物(0.350克，0.610毫摩尔)、HATU(0.464克，1.22毫摩尔)、DIEA(0.316克，2.44毫摩尔)及二氯甲烷(6毫升)之混合物中，添加N-[5-(三氟甲基)-吡啶-2-基]缬氨酸(0.320克，1.22毫摩尔)。将反应物在室温下搅拌72小时。使混合物在真空中浓缩，溶于醋酸乙酯(50毫升)中，并以1.0M HCl水溶液(3×5毫升)洗涤。合并HCl洗液，并以醋酸乙酯(25毫升)萃取。合并有机相，并以10％NaHCO₃水溶液(2×5毫升)，且以盐水洗涤，然后以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩成残留物。使粗制物质通过硅胶填充柱，使用95∶5二氯甲烷∶甲醇。藉反相制备型HPLC进一步纯化，获得化合物2(0.174克，38.3％)，为白色固体。化合物2为反应中已形成两种异构体之主要者。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.68(d，J＝5.5Hz，1H)，0.77-0.85(m，2H)，0.93(d，J＝6.7Hz，3H)，0.99(d，J＝6.4Hz，3H)，1.14(t，J＝7.2Hz，3H)，1.31(dd，J＝9.3，5.0Hz，1H)，1.74-1.81(m，1H)，2.02-2.12(m，1H)，2.28-2.41(m，1H)，2.48-2.61(m，1H)，3.83(s，2H)，3.84(s，1H)，3.99-4.03(m，1H)，4.29-4.40(m，1H)，4.50(q，J＝8.4Hz，1H)，4.98(d，J＝9.2Hz，1H)，5.17(d，J＝17.4Hz，1H)，5.60-5.72(m，1H)，5.76(s，1H)，6.35(d，J＝8.9Hz，1H)，6.95(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.04-7.12(m，2H)，7.15-7.23(m，2H)，7.79-7.84(m，2H)；LC-MS，MSm/z745(M⁺+H).

实施例3：化合物3之制备：N-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物3

图式1

步骤1：

将实施例1步骤5之产物(70.2克，122毫摩尔)、Boc-叔-亮氨酸(31.2克，135毫摩尔)、NMM(63.1克，624毫摩尔)及HATU(60.5克，159毫摩尔)在二氯甲烷(750毫升)中之混合物于室温下搅拌过夜。使混合物在真空中浓缩，并于此残留物中，添加醋酸乙酯(3升)与pH＝4缓冲剂(1升)。使混合物振荡，并分离液相。将有机相以pH＝4缓冲剂(2×1升)，且以盐水(300毫升)再一次洗涤。使有机相以MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成橙色泡沫物。使粗制固体藉硅胶层析纯化(以二氯甲烷，接着以10∶1二氯甲烷∶丙酮，然后以7∶1二氯甲烷∶丙酮阶层洗脱)。经浓缩物质自异丙醇之重复结晶化作用，获得纯产物，为大的无色薄片(58.3克，67％产率)。LC-MS，MS m/z 714(M⁺+H).

步骤2：

于实施例3步骤1之产物(15.0克，21.0毫摩尔)在无水二氯甲烷(200毫升)中之经搅拌溶液内，添加TFA(100毫升)。将混合物搅拌80分钟，然后在真空中浓缩成残留物。添加1，2-二氯乙烷(200毫升)，并使混合物在真空中再一次浓缩，而得白色泡沫物。使此物质溶于无水二氯甲烷(50毫升)中，并添加乙醚(50毫升)。接着，将经迅速搅拌之溶液以醚中之2.0M HCl(150毫升)与无水乙醚(250毫升)之混合物慢慢处理。将所形成之悬浮液于氮气下搅拌30分钟，然后过滤。将过滤之固体以乙醚冲洗，且使其风干。使固体在真空烘箱中，于40℃下干燥过夜，产生白色自由流动粉末产物，为双-HCl盐(13.9克，96.3％产率)。LC-MS，MS m/z 614(M⁺+H).

步骤3：

于实施例3步骤2之产物(0.253克，0.369毫摩尔)与DIEA(0.215克，1.66毫摩尔)在乙腈(4毫升)中之溶液内，添加2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三氮烯(0.100克，0.553毫摩尔)。将混合物在Chemglass压力容器中，加热至135℃，历经2小时。在真空中浓缩混合物，并使残留物溶于醋酸乙酯(50毫升)中，且以1.0M HCl水溶液(2×5毫升)，接着以10％碳酸钠水溶液，及盐水洗涤。使有机物质以MgSO₄干燥，过滤，及浓缩。藉硅胶急骤层析纯化(97∶3二氯甲烷∶甲醇)，获得纯化合物3(0.252克，91％产率)，为白色固体。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.07(s，9H)，1.09-1.14(m，2H)，1.25-1.33(m，2H)，1.48(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.93(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，2.24-2.39(m，2H)，2.94-3.03(m，1H)，3.55(s，3H)，3.83(s，3H)，3.95(s，3H)，4.04(dd，J＝4.9，3.1Hz，1H)，4.08(s，2H)，4.45(d，J＝11.9Hz，1H)，4.67(dd，J＝10.4，7.3Hz，1H)，4.91(s，1H)，5.16(d，J＝10.4Hz，1H)，5.34(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75-5.84(m，1H)，5.90-5.94(m，1H)，7.03(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.16(d，J＝2.1Hz，1H)，7.26(d，J＝5.8Hz，1H)，7.80(d，J＝8.9Hz，1H)，7.89(d，J＝5.8Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 753(M⁺+H).

实施例4：化合物4之制备：N-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物4

图式1

步骤1：

于缬氨酸叔丁酯盐酸盐(0.367克，1.75毫摩尔)与DIEA(0.567克，4.38毫摩尔)在乙腈(5毫升)中之混合物内，添加2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三氮烯(0.476克，2.63毫摩尔)。将混合物在微波反应器中加热至130℃，历经1小时。移除溶剂，并使粘稠褐色残留物溶于醋酸乙酯(75毫升)中，且以1.0M HCl水溶液(2×10毫升)洗涤溶液。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯(50毫升)反萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液(15毫升)，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成褐色油，将其藉急骤式硅胶层析纯化(97∶3二氯甲烷∶甲醇)，获得产物，为淡褐色粘稠油(0.521克，95％产率)。

步骤2：

使实施例4步骤1之产物(0.500克，1.60毫摩尔)溶于二氯甲烷(5毫升)中，并以TFA(5毫升)处理。将混合物于室温下搅拌3小时，然后在真空中浓缩。然后，使残留物溶于1，2-二氯乙烷(20毫升)中，且于真空中再一次浓缩。接着，使残留物溶于二氯甲烷(3毫升)中，并逐滴添加至2.0M HCl在醚中之经迅速搅拌溶液(10毫升)内。未发生沉淀作用。使溶液在真空中浓缩，获得微黄色固体，使其在真空中干燥。因此获得黄色固体(0.45克，96％产率)，接着，将其使用而无需进一步纯化。

步骤3：

于实施例1步骤5之产物(0.421克，0.734毫摩尔)与DIEA(0.428克，3.30毫摩尔)在二氯甲烷(7毫升)中之混合物内，添加实施例4步骤2之产物(0.215克，0.734毫摩尔)与HATU(0.335克，0.881毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌80分钟。移除溶剂，并使粘稠褐色残留物溶于醋酸乙酯(50毫升)中，且以1.0M HCl水溶液(2×10毫升)洗涤溶液。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯(50毫升)反萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液(15毫升)，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成褐色固体，将其藉急骤式硅胶层析纯化(97∶3二氯甲烷∶甲醇)，获得化合物4，为白色固体(0.243克，45％产率)。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.71(d，J＝6.4Hz，3H)，0.73-0.78(m，1H)，0.79-0.88(m，1H)，0.90-0.98(m，1H)，1.01-1.07(m，1H)，1.08(d，J＝6.7Hz，3H)，1.23(dd，J＝9.0，5.3Hz，1H)，1.90(q，J＝8.5Hz，1H)，1.99-2.06(m，1H)，2.09-2.20(m，1H)，2.22-2.33(m，1H)，2.33-2.41(m，1H)，2.47(dd，J＝13.4，6.1Hz，1H)，3.25(s，3H)，3.45(s，2H)，3.75(s，3H)，4.11(dd，J＝11.7，3.5Hz，1H)，4.41(d，J＝12.2Hz，1H)，4.52(dd，J＝11.9，6.4Hz，1H)，4.63-4.70(m，1H)，4.85(d，J＝10.7Hz，1H)，4.95(d，J＝17.4Hz，1H)，5.81(t，J＝3.2Hz，1H)，5.85-5.97(m，1H)，6.48(d，J＝9.2Hz，1H)，7.04(s，1H)，7.18(d，J＝5.8Hz，1H)，7.35(d，J＝8.9Hz，1H)，7.80(d，J＝6.1Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 739(M⁺+H).

实施例5：化合物5之制备：N-(4，6-二甲氧基-2-嘧啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物5

图式1

步骤1：

于缬氨酸叔丁酯盐酸盐(1.55克，7.39毫摩尔)与DIEA(2.01克，15.5毫摩尔)在乙腈(37毫升)中之混合物内，添加2-氯基-4，6-二甲氧基嘧啶(1.55克，8.87毫摩尔)。将混合物在Chemglass压力容器中，加热至130℃，历经48小时。移除溶剂，并使粘稠褐色残留物溶于醋酸乙酯(100毫升)中，并以1.0M HCl水溶液(2×25毫升)洗涤溶液。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯(50毫升)反萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成褐色油，将其藉急骤式硅胶层析纯化(阶层梯度液9∶1己烷∶醋酸乙酯，接着为1∶1己烷∶醋酸乙酯)，而得产物，为褐色粘稠油(1.02克，44％产率)。

步骤2：

使实施例5步骤1之产物(0.944克，3.03毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)中，并以TFA (10毫升)处理。将混合物于室温下搅拌4小时，然后在真空中浓缩。接着，使残留物溶于1，2-二氯乙烷(50毫升)中，且于真空中再一次浓缩。然后，使残留物溶于二氯甲烷(3毫升)中，并逐滴添加至1.0M HCl在醚与己烷中之经迅速搅拌溶液(100毫升)内。未发生沉淀物。使溶液在真空中浓缩，获得褐色泡沫状固体，接着，将其使用而无需进一步纯化。

步骤3：

于实施例1步骤5之产物(0.425克，0.741毫摩尔)与DIEA(0.432克，3.34毫摩尔)在二氯甲烷(7毫升)中之混合物内，添加实施例5步骤2之产物(0.259克，0.889毫摩尔)与HATU(0.366克，0.963毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌16小时。移除溶剂，并使粘稠褐色残留物溶于醋酸乙酯(50毫升)中，并以1.0M HCl水溶液(2×10毫升)洗涤溶液。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯(30毫升)萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液(15毫升)，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成粘稠褐色油，使其通过硅胶填充柱(95∶5二氯甲烷∶甲醇)。使产物藉反相制备型HPLC进一步纯化，获得白色固体化合物5(0.243克，45％产率)，为两种异构体以2对1比例之表观混合物。异构体系未被分离。LC-MS，MS m/z 738(M⁺+H).

化合物6异构体：

N-(4，6-二甲基-2-嘧啶基)-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

N-(4，6-二甲基-2-嘧啶基)-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例6：化合物6A与6B之制备

化合物6A与6B

图式1

步骤1：

于缬氨酸叔丁酯盐酸盐(3.09克，14.7毫摩尔)与DIEA(4.01克，31.0毫摩尔)在乙腈(50毫升)中之混合物内，添加2-氯-4，6-二甲基嘧啶(2.31克，16.2毫摩尔)。将混合物在Chemglass压力容器中，加热至135℃，历经72小时。移除溶剂，并使粘稠褐色残留物溶于醋酸乙酯(150毫升)中，且以1.0M HCl水溶液(2×50毫升)洗涤溶液。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯(2×50毫升)反萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成褐色油，将其藉急骤式硅胶层析纯化(4∶1己烷∶醋酸乙酯)，而得产物，将其直接使用于下一步骤。

步骤2：

使实施例6步骤1之产物(1.80克，6.44毫摩尔)溶于二氯甲烷(25毫升)中，并以TFA(25毫升)处理。将混合物于室温下搅拌3小时，然后在真空中浓缩。接着，使残留物溶于1，2-二氯乙烷(50毫升)中，且于真空中再一次浓缩。然后，使残留物溶于醋酸乙酯(50毫升)中，并以1N HCl水溶液(2×50)萃取。使合并之酸萃取液在真空中浓缩，而得黄色固体(1.23克)。LC-MS，MS m/z 224(M⁺+H).

步骤3：

于实施例1步骤5之产物(0.438克，0.764毫摩尔)与DIEA(0.495克，3.82毫摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中之混合物内，添加实施例6步骤2之产物(0.218克，0.840毫摩尔)与HATU(0.378克，0.993毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌15小时。移除溶剂，并使粘稠褐色残留物溶于醋酸乙酯(75毫升)中，且以1.0M HCl水溶液(2×10毫升)洗涤溶液。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯(50毫升)萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液(15毫升)，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成粘稠褐色油，将其藉急骤式硅胶层析纯化(梯度液97∶3二氯甲烷∶甲醇，接着为95∶5二氯甲烷∶甲醇)。藉LCMS具有相同m/z之两种不同化合物系被分离。洗脱之第一个产物为较少化合物，且经标识为化合物6A(淡黄色固体，0.0408克，7.6％产率)。主要产物自柱第二个洗脱出(黄色固体，0.280克)，并藉反相制备型HPLC进一步纯化，获得化合物6B(0.040克，7.4％产率)，为黄色固体双-HCl盐。

化合物6A：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.85(d，J＝7.0Hz，3H)，0.96(d，J＝6.7Hz，3H)，1.00(dd，J＝12.8，7.0Hz，1H)，1.05-1.14(m，2H)，1.23-1.29(m，1H)，1.37(dd，J＝9.6，5.3Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，1.99-2.05(m，1H)，2.25(q，J＝8.7Hz，1H)，2.30(d，J＝6.4Hz，1H)，2.36-2.47(m，5H)，2.60-2.66(m，1H)，2.83-2.85(m，1H)，2.87-2.93(m，1H)，3.96(s，3H)，4.28-4.32(m，1H)，4.37-4.42(m，1H)，4.57-4.62(m，1H)，4.72(d，J＝8.2Hz，1H)，5.14(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.33(dd，J＝17.1，1.5Hz，1H)，5.71-5.80(m，1H)，5.95(s，1H)，7.19(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.24(d，J＝2.4Hz，1H)，7.31(d，J＝6.1Hz，1H)，7.94(d，J＝6.1Hz，1H)，8.05(d，J＝9.2Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 706(M⁺+H).

化合物6B：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.17(d，J＝6.7Hz，1H)，1.28(d，J＝6.7Hz，1H)，1.31(d，J＝6.7Hz，3H)，1.39(d，J＝6.7Hz，3H)，1.43-1.56(m，2H)，1.69(dd，J＝9.5，5.2Hz，1H)，2.15-2.26(m，3H)，2.50-2.56(m，1H)，2.57-2.62(m，1H)，2.63-2.72(m，3H)，2.89(dd，J＝13.9，6.6Hz，1H)，3.20-3.27(m，1H)，4.22(s，3H)，4.48(dd，J＝12.2，3.7Hz，1H)，4.79(d，J＝11.9Hz，1H)，4.85-4.92(m，1H)，5.02(d，J＝7.9Hz，1H)，5.40(d，J＝11.6Hz，1H)，5.59(d，J＝16.8Hz，1H)，6.00-6.09(m，1H)，6.25(t，J＝3.2Hz，1H)，6.94(s，1H)，7.42(dd，J＝9.0，2.3Hz，1H)，7.54(d，J＝2.1Hz，1H)，7.64(d，J＝6.1Hz，1H)，8.19(d，J＝6.1Hz，1H)，8.23(d，J＝9.2Hz，1H)；LC-MS，MSm/z 706(M⁺+H).

实施例7：化合物7之制备：N-2-吡啶基缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物7

图式1

步骤1：

于2-氯吡啶(0.205克，1.80毫摩尔)与叔丁醇钠(0.590克，6.13毫摩尔)在无水1，2-二氯乙烷(1毫升)中之混合物内，添加Pd(OAc)₂(0.0405克，0.180毫摩尔)与(R)-(-)-1-[(S)-(二环己基膦基)三茂铁基]乙基二-叔丁基膦(0.100克，0.180毫摩尔，Strem Chemicals目录#26-0975，CAS#[158923-11-6])在无水1，2-二甲氧基乙烷(1毫升)中之预混合溶液。使混合物振荡，并以TBDMSCl(0.598克，3.97毫摩尔)迅速处理。将混合物短暂振荡，并迅速添加缬氨酸叔丁酯盐酸盐(0.454克，2.16毫摩尔)，且再一次振荡。立即造成温和放热。于搅拌10分钟后，将混合物迅速添加至经搅拌之pH＝7缓冲溶液(50毫升)中。添加醋酸乙酯(50毫升)，并振荡，且进行相分离。藉由添加NaCl使水溶液饱和，并以醋酸乙酯(2×50毫升)再一次萃取。合并有机萃取液，且以盐水(20毫升)洗涤，以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩成暗残留物。使粗产物藉急骤式硅胶层析纯化(8∶1己烷∶醋酸乙酯)，获得无色液体(0.365克)，其系被测定为包含所要之产物加上0.6当量之TBDMS副产物。将此物质带至下一步骤，无需进一步纯化。大约产率为61％。LC-MS，MS m/z 251(M⁺+H).

步骤2：

使实施例7步骤1之产物(0.944克，3.03毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)中，并以TFA(10毫升)处理。将混合物于室温下搅拌1.5小时，然后在真空中浓缩。接着，使残留物藉反相制备型HPLC纯化，然后藉急骤式硅胶层析进一步纯化(梯度，10∶1二氯甲烷∶甲醇至5∶1二氯甲烷∶甲醇)，获得无色蜡状固体(0.126克，59.0％产率)。LC-MS，MS m/z 195(M⁺+H).

步骤3：

于实施例1步骤5之产物(0.250克，0.436毫摩尔)与NMM(0.176克，1.74毫摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中之混合物内，添加实施例7步骤2之产物(0.085克，0.44毫摩尔)与HATU(0.199克，0.523毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌96小时。移除溶剂，使粘稠褐色残留物溶于醋酸乙酯(50毫升)中，并以1.0M HCl水溶液洗涤溶液。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成残留物，使其藉反相制备型HPLC纯化，而得化合物7(0.243克，45％产率)，为白色固体。化合物7为反应中所形成两种异构体之主要者，藉LCMS具有相同MS m/z。较少异构体(相较于主要异构体，较多被保留在反相制备型HPLC柱上)系未经分离。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.99(d，J＝6.71Hz，3H)1.12(d，J＝6.41Hz，3H)1.14-1.19(m，2H)1.24-1.31(m，1H)1.31-1.37(m，1H)1.48(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.95(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)2.32(q，J＝8.85Hz，1H)2.42(ddd，J＝13.96，10.15，4.27Hz，1H)2.47-2.55(m，1H)2.68(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)3.02(ddd，J＝12.59，8.16，4.88Hz，1H)3.37(s，1H)3.95(s，3H)4.22(dd，1H)4.31(d，J＝11.90Hz，1H)4.34(d，J＝8.54Hz，1H)4.70(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)5.17(d，J＝10.38Hz，1H)5.36(d，J＝17.09Hz，1H)5.82(ddd，J＝17.24，9.61，9.46Hz，1H)5.97(t，J＝3.20Hz，1H)6.93(t，J＝6.71Hz，1H)7.02(d，J＝9.16Hz，1H)7.14(dd，J＝9.00，2.29Hz，1H)7.23(d，J＝2.14Hz，1H)7.31(d，J＝6.10Hz，1H)7.83(t，J＝7.93Hz，1H)7.88(d，J＝6.41Hz，1H)7.93(d，J＝6.10Hz，1H)8.03(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 677(M⁺+H).

实施例8：化合物8之制备：N-(4-甲氧基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物8

化合物8系经由如关于化合物7之制备所述之相同程序制成，只是于步骤1中，使用2-氯-4-甲氧基吡啶(259毫克，1.80毫摩尔)替代2-氯吡啶，并于步骤2中，将醚中之2.0M HCl添加至二氯甲烷中之经浓缩步骤1产物内，获得其盐酸盐。步骤2与3之规模亦以先前步骤之产率为基准作调整。自反相制备型HPLC获得化合物8(0.0290克，11.6％产率)，为灰白色粉末双-TFA盐。此化合物为单一异构体。¹HNMR(500MHz，MeOD)δppm 1.00(d，J＝6.71Hz，3H)1.11(d，J＝6.71Hz，3H)1.16(dd，J＝7.63，2.75Hz，2H)1.22-1.42(m，4H)1.48(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)1.93-1.97(m，1H)2.32(q，J＝8.85Hz，1H)2.36-2.50(m，2H)2.67(dd，J＝13.43，7.02Hz，1H)2.89(s，1H)3.01(ddd，J＝12.82，8.09，4.73Hz，1H)3.17-3.27(m，1H)3.84(s，3H)3.95(s，3H)3.98-4.08(m，1H)4.20(dd，1H)4.26-4.33(m，2H)4.70(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)5.17(dd，J＝10.53，1.37Hz，1H)5.36(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)5.77-5.87(m，J＝17.17，9.58，9.58Hz，1H)5.97(t，J＝3.36Hz，1H)6.32(d，J＝2.44Hz，1H)6.55(dd，J＝7.32，2.14Hz，1H)7.14(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)7.22(d，J＝2.44Hz，1H)7.30(d，J＝5.80Hz，1H)7.72(d，J＝7.32Hz，1H)7.93(d，J＝5.g0Hz，1H)8.01(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS MS m/z 707(M⁺+H).

实施例9：化合物9之制备：N-(4-(三氟甲基)-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物9

化合物9系经由如关于化合物7之制备所述之相同程序制成，只是于步骤1中，使用2-氯-4-三氟甲基吡啶(0.328克，1.80毫摩尔)替代2-氯吡啶，并于步骤2中，将醚中之2.0M HCl添加至二氯甲烷中之经浓缩步骤1产物内，获得其盐酸盐。步骤2与3之规模亦以先前步骤之产率为基准作调整。自反相制备型HPLC获得化合物9(0.0630克，12.6％产率)，为深蓝绿色固体双-TFA盐。此化合物为单一异构体。¹HNMR(500MHz，MeOD)δppm 1.04(d，J＝6.41Hz，3H)1.08(d，J＝6.41Hz，3H)1.10-1.16(m，2H)1.18-1.38(m，3H)1.45(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)1.93(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)2.18-2.24(m，1H)2.29(q，J＝8.95Hz，1H)2.33-2.42(m，1H)2.58(dd，J＝12.97，6.56Hz，1H)2.89(s，1H)2.96-3.05(m，1H)3.85-3.93(m，1H)3.96(s，3H)4.10(dd，J＝11.60，2.75Hz，1H)4.49(d，J＝9.77Hz，1H)4.57(dd，J＝10.68，6.71Hz，1H)4.92(d，J＝11.90Hz，1H)5.16(d，J＝10.38Hz，1H)5.34(d，J＝17.40Hz，1H)5.75-5.86(m，1H)5.94(s，1H)6.20(d，J＝4.58Hz，1H)6.69(s，1H)7.05(dd，J＝9.00，2.29Hz，2H)7.25(d，J＝2.14Hz，1H)7.86(d，J＝9.16Hz，1H)7.96(d，J＝5.80Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 745(M⁺+H).

实施例10：化合物10之制备：N-(4-甲基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物10

化合物10系经由如关于化合物7之制备所述之相同程序制成，只是于步骤1中，使用2-溴-4-甲基吡啶(0.310克，1.80毫摩尔)替代2-氯吡啶，并于步骤2中，将醚中之2.0M HCl添加至二氯甲烷中之经浓缩步骤1产物内，获得其盐酸盐。步骤2与3之规模亦以先前步骤之产率为基准作调整。自反相制备型HPLC获得化合物10(0.0110克，8.9％产率)，为灰白色粉末双-TFA盐。此化合物为单一异构体。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.98(d，J＝6.41Hz，3H)1.11(d，J＝6.71Hz，3H)1.14-1.19(m，2H)1.23-1.38(m，4H)1.48(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.95(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)2.30(s，3H)2.31-2.36(m，1H)2.37-2.52(m，2H)2.67(dd，J＝14.04，7.02Hz，1H)2.89(s，1H)2.98-3.05(m，1H)3.95(s，3H)3.96(d，J＝1.83Hz，1H)4.21(dd，1H)4.26-4.33(m，2H)4.69(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)5.18(d，J＝10.38Hz，1H)5.36(d，J＝17.09Hz，1H)5.77-5.87(m，J＝17.17，9.58，9.58Hz，1H)5.97(s，1H)6.78(d，J＝6.41Hz，1H)6.81(s，1H)7.13(dd，J＝9.00，2.29Hz，1H)7.22(d，J＝2.14Hz，1H)7.30(d，J＝6.10Hz，1H)7.72(d，J＝6.41Hz，1H)7.93(d，J＝6.10Hz，1H)8.01(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 691(M⁺+H).

实施例11：化合物11之制备：N-(4-氰基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物11

化合物11系经由如关于化合物7之制备所述之相同程序制成，只是于步骤1中，使用2-氯-4-氰基吡啶(0.328毫克，1.80毫摩尔)替代2-氯吡啶，并于步骤2中，将醚中之2.0M HCl添加至二氯甲烷中之经浓缩步骤1产物内，获得其盐酸盐。步骤2与3之规模亦以先前步骤之产率为基准作调整。自反相制备型HPLC获得化合物11(0.0210克，6.0％产率)，为紫色固体双-TFA盐。此物质为两种异构体之不可分离混合物，其比例为大约2比1。LC-MS，MS m/z 702(M⁺+H).

化合物12异构体：

3-甲基-N-2-吡啶基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

3-甲基-N-2-吡啶基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例12：化合物12A与12B之制备

化合物12A和12B

化合物12A与12B系经由如关于化合物7之制备所述之相同程序制成，只是于步骤1中，使用叔-亮氨酸叔丁酯盐酸盐(0.486克，2.16毫摩尔)替代缬氨酸叔丁酯盐酸盐，并于步骤2中，将醚中之2.0M HCl添加至二氯甲烷中之经浓缩步骤1产物内，获得其盐酸盐。步骤2与3之规模亦以先前步骤之产率为基准作调整。步骤3之粗产物藉反相制备型HPLC纯化，以良好纯度获得具有相同MS m/z之两种化合物。化合物12A(0.0772克，20.9％产率)为在反应中形成之两种异构体而自反相制备型HPLC洗脱之第一个，且以米黄色玻璃态固体双-TFA盐获得。化合物12B(0.0204克，5.5％产率)为在反应中形成之两种异构体而自反相制备型HPLC洗脱之第二个，且以米黄色固体双-TFA盐获得。

化合物12A：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.09-1.14(m，2H)1.15(s，9H)1.28(d，J＝3.05Hz，2H)1.47(dd，J＝9.00，5.04Hz，1H)1.91-1.97(m，1H)2.25-2.38(m，2H)2.66(dd，J＝13.28，6.56Hz，1H)2.95-3.03(m，1H)3.95(s，3H)4.14(d，J＝11.60Hz，1H)4.39(d，J＝12.51Hz，1H)4.54(s，1H)4.65-4.71(m，1H)5.17(d，J＝10.68Hz，1H)5.34(d，J＝17.09Hz，1H)5.74-5.84(m，1H)5.94(s，1H)6.78(t，J＝6.71Hz，1H)6.96(d，J＝9.16Hz，1H)7.07(d，J＝9.16Hz，1H)7.22(s，1H)7.30(d，J＝6.10Hz，1H)7.57(t，J＝8.09Hz，1H)7.75(d，J＝6.10Hz，1H)7.92(d，J＝9.46Hz，1H)7.94(d，J＝6.10Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 691(M⁺+H).

化合物12B：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.91(s，9H)1.02-1.17(m，3H)1.20-1.31(m，2H)1.32-1.38(m，1H)1.40-1.46(m，1H)1.90-1.96(m，1H)2.30-2.37(m，1H)2.39-2.47(m，1H)2.69(dd，J＝15.11，8.09Hz，1H)2.89(s，1H)2.91-2.99(m，1H)3.97(s，3H)4.21(dd，J＝12.05，2.90Hz，1H)4.44(d，J＝12.21Hz，1H)4.66(s，1H)4.68-4.73(m，1H)5.18(d，J＝10.38Hz，1H)5.38(d，J＝17.09Hz，1H)5.77-5.86(m，1H)5.95(s，1H)6.99(t，J＝6.56Hz，1H)7.21(d，J＝9.16Hz，1H)7.24-7.29(m，2H)7.32(d，J＝6.41Hz，1H)7.95(d，J＝6.10Hz，1H)7.97-8.02(m，1H)8.05(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 691(M⁺+H).

化合物13异构体：

3-甲基-N-3-吡啶基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺与3-甲基-N-3-吡啶基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例13：化合物13A与13B之制备

化合物13A和13B

图式1

步骤1：

于3-氯吡啶(0.410克，3.61毫摩尔)与叔丁醇钠(1.18克，12.3毫摩尔)在无水1，2-二氯乙烷(5毫升)中之混合物内，添加Pd(OAc)₂(0.0405克，0.180毫摩尔)与(R)-(-)-1-[(S)-(二环己基膦基)三茂铁基]乙基二叔丁基膦(0.100克，0.180毫摩尔，Strem Chemicals目录#26-0975，CAS#[158923-11-6])在无水1，2-二甲氧基乙烷(2毫升)中之预混合溶液。使混合物短暂振荡，以叔-亮氨酸叔丁酯盐酸盐(0.970克，4.33毫摩尔)迅速处理，并再一次振荡。将混合物加热至100℃，历经20小时，添加至pH＝7缓冲溶液(100毫升)与1.0M HCl水溶液(12毫升)之经迅速搅拌混合物中，以醋酸乙酯处理，并振荡。允许进行相分离，且以盐水洗涤有机萃取液，以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩成深橙色残留物。使粗产物藉急骤式硅胶层析纯化(线性梯度100％己烷至1∶1己烷∶醋酸乙酯)，获得肉色固体(0.583克，61.1％产率)。LC-MS，MS m/z 265(M⁺+H).

步骤2：

使实施例13步骤1之产物(0.200克，0.756毫摩尔)溶于二氯甲烷(5毫升)中，并以TFA(5毫升)处理。将混合物于室温下搅拌5小时，然后在真空中浓缩。接着，使残留物溶于1，2-二氯乙烷(15毫升)中，且于真空中再一次浓缩。然后，使残留物溶于二氯甲烷(3毫升)中，并逐滴添加至醚中之经迅速搅拌之2.0M HCl(40毫升)内。藉过滤分离所形成之米黄色沉淀物，及使其风干。米黄色粉末(0.160克，86.4％产率)。LC-MS，MS m/z 209(M⁺+H).

步骤3：

于实施例1步骤5之产物(0.242克，0.422毫摩尔)与NMM(0.203克，2.01毫摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中之混合物内，添加实施例13步骤2之产物(0.098克，0.40毫摩尔)与HATU(0.242克，0.422毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌18小时。于真空中移除溶剂，并使粘稠褐色残留物藉反相制备型HPLC直接纯化，以良好纯度获得具有相同MS m/z之两种化合物。化合物13A(0.154克，41.6％产率)为自反相制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第一个，且以灰白色固体双-TFA盐获得。化合物13B(0.118克，31.9％产率)为自反相制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第二个，且以米黄色粉末双-TFA盐获得。

化合物13A：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.06-1.18(m，12H)1.24-1.36(m，2H)1.42-1.48(m，1H)1.93(t，J＝6.71Hz，1H)2.23-2.33(m，2H)2.61(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)2.96-3.05(m，1H)3.96(s，3H)3.98-4.04(m，1H)4.23(s，1H)4.38(d，J＝12.21Hz，1H)4.66(t，J＝8.70Hz，1H)5.17(dd，J＝10.53，0.76Hz，1H)5.34(d，J＝17.09Hz，1H)5.74-5.83(m，1H)5.89(s，1H)7.08(dd，J＝9.16，0.92Hz，1H)7.22(s，1H)7.23-7.28(m，1H)7.30(d，J＝6.10Hz，1H)7.57(d，J＝8.85Hz，1H)7.80(d，J＝5.49Hz，1H)7.86(d，J＝9.16Hz，1H)7.94(d，J＝6.10Hz，1H)8.09(s，1H)9.26(s，1H)；LC-MS，MS m/z 691(M⁺+H).

化合物13B：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.94(s，9H)1.10(d，J＝7.32Hz，2H)1.17-1.35(m，2H)1.41(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)1.87-1.94(m，1H)2.31(q，J＝8.65Hz，1H)2.35-2.43(m，1H)2.59-2.69(m，1H)2.92-3.01(m，1H)3.97(s，3H)4.12(d，J＝11.90Hz，1H)4.38(s，1H)4.49(d，J＝11.90Hz，1H)4.67(t，J＝8.85Hz，1H)5.17(d，J＝10.38Hz，1H)5.36(d，J＝17.09Hz，1H)5.75-5.87(m，1H)5.94(s，1H)7.20(d，J＝8.85Hz，1H)7.25(s，1H)7.31(d，J＝5.80Hz，1H)7.71-7.78(m，1H)7.89-7.99(m，3H)8.04(d，J＝8.85Hz，1H)8.22(s，1H)9.57(s，1H)；LC-MS，MS m/z691(M⁺+H).

化合物14异构体：

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺与N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例14：化合物14A与14B之制备

化合物14A和14B

图式1

步骤1：

将2-溴-4，6-二甲基吡啶(0.839克，4.51毫摩尔)、叔丁醇钠(1.47克，15.3毫摩尔)、叔-亮氨酸叔丁酯盐酸盐(1.21克，5.41毫摩尔)及TBDMSCl(1.5克，9.9毫摩尔)合并，并以1，2-二甲氧基乙烷(6毫升)处理。使混合物振荡，且立即添加Pd(OAc)₂(0.202克，0.902毫摩尔)与(R)-(-)-1-[(S)-(二环己基膦基)三茂铁基]乙基二叔丁基膦(0.500克，0.902毫摩尔，Strem Chemicals目录#26-0975，CAS#[158923-11-6])在无水1，2-二甲氧基乙烷(2毫升)中之预混合溶液。造成温和放热，且混合物于颜色上变成深褐色。10分钟后，混合物于颜色上为橙色。将混合物于室温下搅拌72小时。接着，将混合物添加至pH＝7缓冲溶液(75毫升)与1.0M HCl水溶液(15毫升)之经迅速搅拌混合物中。添加醋酸乙酯(40毫升)，并使混合物振荡，且进行相分离。以醋酸乙酯(2×50毫升)萃取水相。合并有机萃取液，并以盐水(40毫升)洗涤，以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩成褐色残留物。使粗产物藉急骤式硅胶层析纯化(线性梯度100％己烷至10∶1己烷∶醋酸乙酯)，获得黄色油(0.786克)，其系被测定为包含所要之产物加上1.9当量之TBDMS副产物。将此物质带至下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 293(M⁺+H).

步骤2：

使实施例14步骤1之产物(0.750克)溶于二氯甲烷(10毫升)中，并以TFA(10毫升)处理。将混合物于室温下搅拌7小时，然后在真空中浓缩。接着，使残留物溶于1，2-二氯乙烷(15毫升)中，且于真空中再一次浓缩。然后，使残留物溶于二氯甲烷(3毫升)中，并逐滴添加至乙醚中之经迅速搅拌之2M HCl(40毫升)内。未发生沉淀作用。得自二氯甲烷之粗制物质之重复沉淀作用，使用己烷与醋酸乙酯作为反萃溶剂，最后产生黄色粉末(0.286克，23％产率，历经2个步骤)。LC-MS，MS m/z 237(M⁺+H).

步骤3：

于实施例1步骤5之产物(0.189克，0.330毫摩尔)与NMM(0.167克，1.65毫摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中之混合物内，添加实施例14步骤2之产物(0.090克，0.33毫摩尔)与HATU(0.151克，0.396毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌18小时。将另外之实施例14步骤2产物(0.049克，0.18毫摩尔)、HATU(0.082克，0.216毫摩尔)及NMM(0.0381克，0.377毫摩尔)添加至混合物中，并将溶液在40℃下搅拌过夜。于真空中移除溶剂，且使残留物藉反相制备型HPLC直接纯化，而得具有相同MS m/z之两种个别化合物。化合物14A(0.118克，37.8％产率)为自反相制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第一个，且以灰白色粉末双-TFA盐获得。化合物14B(0.044克，14.1％产率)为自反相制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第二个，且以米黄色粉末双-TFA盐获得。

化合物14A：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.07-1.11(m，2H)1.13(s，9H)1.25-1.30(m，2H)1.46(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)2.25-2.37(m，2H)2.38(s，3H)2.65(dd，J＝13.58，7.78Hz，1H)2.94-3.03(m，1H)3.95(s，3H)4.09(dd，J＝12.21，2.75Hz，1H)4.36(d，J＝12.21Hz，1H)4.48(s，1H)4.69-4.75(m，1H)5.17(d，J＝10.38Hz，1H)5.35(d，J＝17.40Hz，1H)5.72-5.83(m，1H)5.96(s，1H)6.53(s，1H)6.60(s，1H)7.02-7.07(m，1H)7.19-7.22(m，1H)7.30(d，J＝6.10Hz，1H)7.87(d，J＝9.16Hz，1H)7.94-7.97(m，1H)；LC-MS，MS m/z 719(M⁺+H).

化合物14B：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.92(s，9H)1.05-1.10(m，2H)1.13-1.19(m，1H)1.21-1.26(m，1H)1.41(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)1.89-1.94(m，1H)2.32(q，J＝8.75Hz，1H)2.40-2.44(m，1H)2.45(s，3H)2.48(s，3H)2.65-2.71(m，1H)2.90-2.96(m，1H)3.96(d，J＝1.83Hz，1H)3.97(d，J＝1.53Hz，3H)4.20(dd，J＝12.36，2.90Hz，1H)4.51(d，J＝12.51Hz，1H)4.62(s，1H)4.69(t，J＝8.39Hz，1H)5.17(d，J＝10.07Hz，1H)5.36(d，J＝17.40Hz，1H)5.75-5.83(m，1H)5.97(s，1H)6.71(s，1H)6.88(s，1H)7.19-7.23(m，1H)7.25(d，J＝2.14Hz，1H)7.32(d，J＝5.80Hz，1H)7.95(dd，J＝5.95，1.68Hz，1H)8.05(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS，MS m/z719(M⁺+H).

化合物15异构体：

3-甲基-N-苯基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-苯基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例15：化合物15A与15B之制备

化合物15A和15B

图式1

步骤1：

将L-叔-亮氨酸(0.840克，6.40毫摩尔)、K₂CO₃(1.33克，9.60毫摩尔)及CuI(0.122克，0.64毫摩尔)在35毫升Chemglass压力容器中合并。添加溴苯(1.01克，6.4毫摩尔)与DMA(8毫升)，容器液面上空间系具有氮，将容器密封，并将混合物加热至90℃过夜。添加另外之DMA(8毫升)以帮助搅拌，并将混合物加热至130℃过夜。当藉LCMS测定时，其中仅少量产物形成，于混合物中装填过量CuI(大约1克)，使反应物再密封，并加热至130℃，历经2天。使混合物冷却至室温，且以1.0M HCl水溶液处理，直到达成pH＝5为止，然后添加pH＝7缓冲剂(50毫升)与醋酸乙酯(50毫升)，及使混合物振荡，并进行相分离。以醋酸乙酯(2×50毫升)萃取水相，且合并有机物质，并以盐水洗涤。以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩成固体残留物。藉硅胶急骤层析纯化(20∶1二氯甲烷∶甲醇)，获得蜡状肉色固体(0.286克)，藉¹H NMR，其含有大约1.2当量之夹带DMA。LC-MS，MS m/z 208(M⁺+H).

步骤2：

于实施例1步骤5之产物(0.200克，0.349毫摩尔)与NMM(0.141克，1.40毫摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中之混合物内，添加实施例15步骤1之产物(0.108克，0.35毫摩尔，67％纯)与HATU(0.160克，0.418毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌18小时。于真空中移除溶剂，并于残留物中，添加醋酸乙酯(30毫升)与水(30毫升)。并非所有固体均溶解。将混合物转移至具有1∶1二氯甲烷∶甲醇溶剂之250毫升圆底烧瓶，且在真空中浓缩混合物，直到移除有机溶剂为止，留下水相与未溶解固体。藉LCMS测定，粗制物纯化已发生，其中水相保持具有极少产物之大部分水溶性副产物，而固体大部分由产物所组成。将固体自液体过滤，而得白色粉末(0.225克)。白色粉末藉反相制备型HPLC之进一步纯化，获得具有相同MS m/z之两种个别化合物。化合物15A(0.124克，38.8％产率)为自反相制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第一个，且以褐色粉末双-TFA盐获得。化合物15B(0.0633克，19.8％产率)为自反相制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第二个，且以褐色粉末双-TFA盐获得。

化合物15A：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.09-1.15(m，2H)1.19(s，9H)1.27-1.33(m，J＝2.44Hz，2H)1.43-1.48(m，1H)1.89-1.94(m，1H)2.21-2.30(m，1H)2.57(dd，J＝13.58，7.17Hz，1H)2.96-3.03(m，1H)3.99(d，J＝1.83Hz，3H)4.02-4.08(m，1H)4.14(s，1H)4.28(d，J＝12.21Hz，1H)4.44-4.51(m，1H)5.16(d，J＝10.38Hz，1H)5.32(d，J＝17.09Hz，1H)5.73-5.83(m，2H)6.41(t，J＝7.17Hz，1H)6.69-6.73(m，2H)6.76(t，J＝7.02Hz，2H)7.10(d，J＝9.16Hz，1H)7.26(s，1H)7.30-7.34(m，1H)7.73(dd，J＝9.00，1.37Hz，1H)7.92(dd，J＝5.80，1.83Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 690(M⁺+H).

化合物15B：¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 0.87(s，9H)0.94-1.00(m，1H)1.00-1.05(m，J＝6.41Hz，2H)1.10-1.19(m，1H)1.28(dd，J＝9.31，5.04Hz，1H)1.72(dd，J＝7.63，5.19Hz，1H)2.05-2.13(m，1H)2.21-2.28(m，1H)2.40-2.48(m，1H)2.81-2.88(m，1H)3.91(d，J＝1.83Hz，3H)3.94-4.00(m，1H)4.19(s，1H)4.41(d，J＝11.90Hz，1H)4.43-4.49(m，1H)5.12(d，J＝10.07Hz，1H)5.27(d，J＝17.09Hz，1H)5.58-5.71(m，1H)5.87(s，1H)6.55(t，J＝7.17Hz，1H)6.74(d，J＝7.63Hz，2H)7.03-7.10(m，2H)7.22-7.27(m，1H)7.31-7.37(m，2H)7.88(d，J＝9.16Hz，1H)7.97(dd，J＝5.80，2.14Hz，1H)9.18(s，1H)10.74(s，1H)；LC-MS，MS m/z 690(M⁺+H).

实施例16：化合物16之制备：N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((二甲基氨磺酰)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物16

图式1

步骤1：

于N-Boc-乙烯基环丙烷羧酸(1.83克，8.05毫摩尔)与THF(32毫升)之溶液中，添加1，1′-羰基二咪唑(1.44克，8.86毫摩尔)。在室温下搅拌3小时后，将反应混合物以N，N-二甲基磺酰胺(1.0克，8.05毫摩尔)，接着以DBU(2.45克，16.1毫摩尔)处理，并于室温下再搅拌15小时。然后，将反应物以醋酸乙酯(50毫升)稀释，并以1.0M HCl水溶液(2×25毫升)洗涤。将水层以醋酸乙酯(2×50毫升)萃取。以H₂O(25毫升)与盐水洗涤合并之有机部分，以MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成淡黄色固体(2.6克，97％产率)，使用之而无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 356(M⁺+Na).

步骤2：

于实施例16步骤2之产物(1.42克，4.26毫摩尔)在1∶1二氯甲烷∶1，2-二氯乙烷(20毫升)中之溶液内，添加TFA(10毫升)。在室温下搅拌0.5小时后，移除溶剂与过量TFA，并使残留物再溶于1，2-二氯乙烷(20毫升)中，及再一次浓缩，获得黄色固体(1.46克，99％产率)。LC-MS，MS m/z 234(M⁺+H).

图式2

步骤3：

实施例16步骤3之产物系经由如关于实施例1步骤4产物之制备所述之相同程序，以91％产率制自实施例16步骤2之产物。

步骤4：

实施例16步骤4之产物系经由如关于实施例1步骤5产物之制备所述之相同程序，以95％产率制自实施例16步骤3之产物。LC-MS，MS m/z 504(M⁺+H).

步骤5：

于实施例16步骤4之产物(0.200克，0.347毫摩尔)与DIEA(0.180克，1.39毫摩尔)在二氯甲烷(4毫升)中之混合物内，添加2-(4，6-二甲基吡啶-2-基氨基)-3-甲基丁酸(0.092克，0.416毫摩尔)与HATU(0.198克，0.520毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌8小时。藉LCMS，反应系未完成。添加另外之2-(4，6-二甲基吡啶-2-基氨基)-3-甲基丁酸(0.039克，0.174毫摩尔)与HATU(0.066克，0.174亳摩尔)，并将混合物于室温下再搅拌16小时。藉LCMS，反应仍未完成。再一次添加另外之2-(4，6-二甲基吡啶-2-基氨基)-3-甲基丁酸(0.039克，0.174毫摩尔)与HATU(0.066克，0.174毫摩尔)，并将混合物于室温下再搅拌16小时。移除溶剂，并使残留物溶于醋酸乙酯(50毫升)中，且以1.0M HCl水溶液(2×5毫升)洗涤溶液。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯(50毫升)反萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成残留物，使其藉反相制备型HPLC纯化，而得化合物16(所形成两种异构体之主要者)，为黄色固体双-HCl盐(0.060克，22.1％产率)。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.01(d，J＝6.7Hz，3H)，1.10(d，J＝6.7Hz，3H)，1.43(dd，J＝9.5，5.2Hz，1H)，1.88-1.95(m，1H)，2.20(s，3H)，2.23-2.32(m，1H)，2.39(s，1H)，2.43(s，3H)，2.69(dd，J＝13.7，7.0Hz，1H)，2.77-2.80(m，1H)，2.87-2.90(m，1H)，2.93(s，6H)，3.97(s，3H)，4.18(dd，J＝12.2，3.4Hz，1H)，4.38(d，J＝12.2Hz，1H)，4.57(d，J＝6.7Hz，1H)，4.70(dd，J＝10.1，7.0Hz，1H)，5.18(dd，J＝10.4，1.8Hz，1H)，5.35(d，J＝17.1Hz，1H)，5.72-5.83(m，1H)，5.98(d，J＝2.7Hz，1H)，6.60(s，1H)，6.69(s，1H)，7.17(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.28(d，J＝2.4Hz，1H)，7.39(d，J＝6.1Hz，1H)，7.94(d，J＝6.1Hz，1H)，8.05(d，J＝9.2Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 708(M⁺+H).

实施例17：化合物17之制备：N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物17

图式1

步骤1：

将4-甲氧基-2-甲基苯甲酸(10.2克，61.4毫摩尔)在二氯甲烷(200毫升)中之溶液以草酰氯慢慢地处理。添加一滴DMF，并将反应物在室温下搅拌12小时。然后，将混合物以1，1，3，3-四甲基胍(14.9克，128.9毫摩尔)处理，并于室温下搅拌4小时。以5％柠檬酸水溶液(2×100毫升)洗涤混合物。将水相以二氯甲烷(2×100毫升)反萃取，且合并有机相，以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩，以提供最少量所要之产物。藉由添加10.0MNaOH水溶液使水相呈碱性，直到达成pH＝13为止，接着以二氯甲烷(4×200毫升)萃取。合并有机相，以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩。将所形成之油与前文所获得之产物合并，并以乙醚处理混合物，而得白色沉淀物，将其藉过滤移除。使滤液浓缩，而得所要之产物(11.3克，70％产率)，为粘稠黄色油。¹H NMR(CD₃OD)δ2.54(s，3H)，3.97(s，6H)，3.79(s，3H)，6.60(d，J＝9.2Hz，1H)，6.75(s，1H)，7.65(d，J＝8.9Hz，1H).LC-MS，MS m/z 264(M⁺+H).

步骤2：

将实施例17步骤1之产物(0.461克，1.78毫摩尔)在THF(5毫升)中之溶液，在0℃下，以LDA溶液(1.8M，在THF/己烷中，1.2毫升，2.14毫摩尔)处理。将反应物在室温下搅拌5小时，然后以另外之LDA(1毫升)处理，并于室温下搅拌14小时。以饱和氯化铵(10毫升)使混合物反应淬灭，并以醋酸乙酯(3×25毫升)萃取。合并有机相，以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩。使浓缩物溶于最少二氯甲烷中，并添加乙醚。藉过滤收集所形成之沉淀物，提供所要之产物(0.312克，80％产率)，为褐色固体。¹H NMR(CD₃OD)δ2.94(s，6H)，3.86(s，3H)，5.71(s，1H)，6.75(dd，J＝8.9，2.4Hz，1H)，6.83(d，J＝2.4Hz，1H).7.97(d，J＝9.2Hz，1H).LC-MS，MS m/z 219(M⁺+H).

步骤3：

将实施例17步骤2之产物(10.0克，45.8毫摩尔)以POCl₃(43毫升)处理，并将混合物在Chemglass压力容器中，加热至110℃，历经5小时。于冷却至室温时，使所形成之滤饼溶于二氯甲烷(200毫升)中，并藉由缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液使溶液淬灭。因而发生激烈气体释出。当气体释出停止时，使混合物在分液漏斗中振荡，并分离液相。以二氯甲烷(3×200毫升)萃取水相。以盐水洗涤合并之有机相，以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩。将乙醚添加至残留物中，以达成黑色固体之沉淀作用，将其藉过滤收集，并以醚洗涤。因此获得所要之产物(5.72克，53.0％产率)。LC-MS，MS m/z 237(M⁺+H).

图式2

步骤4：

于Boc-Hyp-OH(5.60克，24.2毫摩尔)在THF(100毫升)中之溶液内，添加叔丁醇钾(1.0M，在THF中，53.2毫升，53.2毫摩尔)。混合物转变成褐色，并变成凝胶，其系以激烈搅拌破碎。15分钟后，分次添加实施例17步骤3之产物(5.72克，24.2毫摩尔)。将混合物加热至70℃，历经48小时。藉由添加1.0M HCl使混合物淬灭，然后以醋酸乙酯萃取。以醋酸乙酯再一次萃取水相。合并有机相，并以盐水洗涤，以MgSO₄干燥，及过滤。使滤液在真空中蒸发至干燥，而得所要之产物。LC-MS，MSm/z 430(M-H).

步骤5：

将实施例17步骤4之产物(8.90克，20.6毫摩尔)、DIEA(8.01克，61.9毫摩尔)及环丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-环丙烷羰基)-酰胺HCl盐(6.60克，24.8亳摩尔)在二氯甲烷(150毫升)中之混合物以HATU(10.2克，26.8毫摩尔)处理，并将所形成之褐色溶液于室温下搅拌18小时。于真空中移除溶剂，并使残留物溶于醋酸乙酯(200毫升)中，且以水(100毫升)洗涤。进行相分离，及以醋酸乙酯(3×100毫升)反萃取水相。将合并之有机相以0.10M HCl水溶液(100毫升)，接着以10％碳酸钠水溶液(50毫升)，及最后以盐水洗涤。使有机相以MgSO₄干燥，过滤，及浓缩，而得深褐色泡沫状固体。使产物藉急骤式硅胶层析纯化(95∶5二氯甲烷∶甲醇)，获得褐色固体(12.9克，97％产率)。LC-MS，MS m/z 642(M-H).

步骤6：

于实施例17步骤5之产物(12.7克，19.6毫摩尔)在1∶1二氯甲烷∶1，2-二氯乙烷(100毫升)中之溶液内，添加TFA(50毫升)。将混合物于室温下搅拌30分钟，然后在真空中浓缩。使残留物再溶于1，2-二氯乙烷(100毫升)中，且于真空中再一次浓缩。接着，使残留物溶于二氯甲烷(50毫升)中，并逐滴添加至乙醚中之经激烈搅拌之1.0M HCl(500毫升)内。将所形成之淡褐色固体沉淀物藉过滤分离，并以乙醚中之1.0M HCl洗涤，获得褐色粉末(10.2克，85.0％产率)。LC-MS MS m/z 544(M⁺+H).

步骤7：

将实施例17步骤6之产物(0.258克，0.419毫摩尔)、2-(4，6-二甲基吡啶-2-基氨基)-3-甲基丁酸(0.111克，0.503毫摩尔)、DIEA(0.217克，1.68毫摩尔)及HATU(0.239克，0.629毫摩尔)在二氯甲烷(4毫升)中合并，并将混合物在室温下搅拌8小时。添加另外之2-(4，6-二甲基吡啶-2-基氨基)-3-甲基丁酸(0.0465克，0.210毫摩尔)与HATU(0.080克，0.21毫摩尔)，并将混合物于室温下再搅拌14小时。移除溶剂。并使残留物再溶于醋酸乙酯(50毫升)中，且以1.0M HCl水溶液(2×5毫升)洗涤。合并含水萃取液，并以醋酸乙酯(50毫升)反萃取，且合并有机相，及以10％碳酸钠水溶液，接着以盐水洗涤。使有机相以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成残留物，使其藉反相制备型HPLC纯化，获得化合物17(0.037克，10.8％产率)，为褐色粉末双-HCl盐。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，1.10(d，J＝6.4Hz，3H)，1.12-1.18(m，3H)，1.22-1.30(m，2H)，1.35(t，J＝7.3Hz，1H)，1.46(dd，J＝9.6，5.3Hz，1H)，1.95(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.22(s，3H)，2.28-2.36(m，2H)，2.41(s，3H)，2.52(d，J＝14.6Hz，1H)，2.66(dd，J＝13.7，7.3Hz，1H)，2.96-3.03(m，2H)，3.21(s，6H)，3.91(s，3H)，4.01-4.06(m，1H)，4.18(dd，J＝11.9，3.4Hz，1H)，4.31(d，J＝11.9Hz，1H)，4.56(d，J＝7.0Hz，1H)，4.68(dd，J＝9.9，7.2Hz，1H)，5.14-5.19(m，1H)，5.35(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75-5.85(m，1H)，6.01(s，1H)，6.60(s，1H)，6.69(s，1H)，6.83(d，J＝8.9Hz，1H)，7.05(s，1H)，7.81(d，J＝9.2Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 748(M⁺+H).

实施例18：化合物18之制备：N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物18

化合物18系经由如实施例14步骤3中所述之相同方法制成，只是使用实施例17步骤6之产物(0.203克，0.330毫摩尔)代替实施例1步骤5之产物。在反应中形成具有相同LCMS m/z之两种产物，但仅单一异构体化合物18系以合理之纯度分离。化合物18为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个，且以褐色粉末双-TFA盐获得(0.102克，40.6％产率)。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.08-1.11(m，J＝3.05Hz，2H)1.13(s，9H)1.15-1.19(m，J＝1.83Hz，2H)1.25-1.30(m，2H)1.43-1.48(m，1H)1.92-1.97(m，1H)2.06(s，3H)2.26-2.35(m，2H)2.37(s，3H)2.61-2.67(m，1H)2.96-3.03(m，2H)3.13(d，J＝1.83Hz，6H)3.88(d，J＝1.83Hz，3H)4.06(dd，J＝12.21，2.75Hz，1H)4.28(d，J＝12.51Hz，1H)4.47(s，1H)4.71(t，J＝8.70Hz，1H)5.17(d，J＝10.38Hz，1H)5.35(d，J＝17.09Hz，1H)5.73-5.82(m，1H)5.99(s，1H)6.52(s，1H)6.54-6.58(m，1H)6.61(s，1H)6.87(t，J＝1.98Hz，1H)7.56(dd，J＝9.00，1.98Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 762(M⁺+H).

化合物19异构体：

3-甲基-N-苯基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-苯基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例19：化合物19A与19B之制备

化合物19A和19B

将实施例17步骤6之产物(0.203克，0.330毫摩尔)、NMM(0.134克，1.32毫摩尔)、HATU(0.151克，0.396毫摩尔)及实施例15步骤1之产物(0.102克，0.330毫摩尔)在二氯甲烷(2毫升)中合并，并搅拌72小时。在反应中形成具有相同LCMS m/z之两种产物。使混合物浓缩，并藉反相制备型HPLC纯化。化合物19A为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个，且以褐色粉末双-TFA盐获得(0.0806克，33.3％产率)。化合物19B为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个，且以褐色粉末双-TFA盐获得(0.0573克，23.7％产率)。

化合物19A：LC-MS，MS m/z 733(M⁺+H).

化合物19B：LC-MS，MS m/z 733(M⁺+H).

化合物20异构体：

3-甲基-N-苯基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3，6-二甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-苯基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3，6-二甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例20：化合物20A与20B之制备

化合物20A和20B

图式1

步骤1：

在-78℃下，于1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮(DMPU，7.02克，55毫摩尔)在THF(100毫升)中之溶液内，逐滴添加LDA(2.0M，在THF中，27.5毫升，55毫摩尔)。使所形成之橙色溶液在此温度下保持10分钟，并搅拌，然后逐滴添加4-甲氧基-2-甲基苯甲腈(7.36克，50毫摩尔，在5毫升THF中)。使所形成之暗橙色溶液在此温度下保持30分钟，并搅拌。接着，使CO₂气体在-78℃下起泡进入此溶液中，直到其变成无色为止。使最后溶液在此温度下再保持30分钟，并搅拌，然后以N₂吹扫5分钟。在-78℃下，以H₂O(80毫升)使混合物淬灭，接着，使其温热至室温。添加10.0M NaOH(水溶液，20毫升，200毫摩尔)，造成均匀溶液，将其以乙醚(100毫升)萃取。使水层藉由浓HCl酸化至pH＝2，并藉过滤收集所形成之沉淀物。以H₂O充分洗涤滤饼，及在真空中干燥过夜，提供所要之产物(7.90克，83.0％产率)，为白色薄片。¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δppm 3.83(s，2H)，3.86(s，3H)，6.99(m，2H)，7.64(d，J＝8.42Hz，1H).

步骤2：

将2-(2-氰基-5-甲氧苯基)醋酸在二氯甲烷(40毫升)与亚硫酰二氯(40毫升)中之浆液于室温下搅拌过夜。移除挥发性物质，并以二氯甲烷(50毫升)研制残留物，且过滤。使滤液在真空中浓缩，而产生所要之产物，为褐色粘稠油(6.80克，97％产率)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm 3.86(m，3H)，4.35(s，2H)，6.92(m，2H)，7.63(d，J＝8.78Hz，1H).

步骤3：

将2-(2-氰基-5-甲氧苯基)乙酰氯(6.40克，30.6毫摩尔)在1，4-二噁烷中之4.0MHCl(100毫升)内之溶液在密封容器中，于60℃下加热，并搅拌过夜。于冷却至室温后，过滤混合物，且以醋酸乙酯充分洗涤滤饼，及在真空中干燥，提供所要之产物，为微细淡黄色粉末(6.14克，96％产率)。¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 3.98(s，3H)，6.94(s，1H)，7.14(m，2H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS MS m/z 210(M⁺+H).

步骤4：

将1-氯-6-甲氧基异喹啉-3-醇(0.209克，1.0毫摩尔)、Cs₂CO₃(0.715克，2.2毫摩尔)及CH₃I(0.284克，2.0毫摩尔)在DMF(2.5毫升)中之浆液在密封管中加热至85℃，历经3小时。于冷却至室温后，将上层之褐色溶液倾析至冰5％柠檬酸中。将混合物以醋酸乙酯(20毫升)萃取。将有机层相继以5％柠檬酸、1.0M NaOH(水溶液)及盐水洗涤，以MgSO₄干燥，及过滤。浓缩滤液，并使残留物藉急骤式柱硅胶层析纯化。以二氯甲烷洗脱，获得所要之产物，为灰白色固体(0.152克，68.0％产率)。LC-MSMS m/z 224(M⁺+H).

图式2

步骤5：

实施例20步骤5之产物系经由如关于实施例1步骤3产物之制备所述之相同程序获得，只是使用实施例20步骤4之产物(1.25克，5.60毫摩尔)作为起始物质代替实施例1步骤2之产物。使粗产物藉硅胶急骤层析纯化(阶层梯度3∶1己烷∶丙酮，接着为相同之2∶1，然后是1∶1)，获得灰白色泡沫物(2.34克，91.6％产率)。LC-MS MSm/z 419(M⁺+H).

步骤6：

于实施例20步骤5之产物(1.94克，5.68毫摩尔)在醋酸乙酯(150毫升)中之0℃溶液内，以一份添加环丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-环丙烷基羰基)-酰胺HCl盐(2.29克，5.68毫摩尔)。将混合物搅拌15分钟，然后逐滴添加DIPEA(1.91克，17.0毫摩尔)，并将此悬浮液搅拌5分钟。接着，将混合物以EDC(1.41克，7.38毫摩尔)与HOBt(0.767克，5.68毫摩尔)处理，并搅拌过夜。将混合物倒入冰冷5％柠檬酸水溶液中，且使所形成之混合物振荡，并分离液相。将有机相以5％柠檬酸水溶液，5％柠檬酸钠水溶液，及最后以盐水洗涤。使有机物质以MgSO₄干燥，过滤，及浓缩。藉急骤式柱硅胶层析纯化(1∶1己烷∶丙酮)，获得产物，为白色泡沫物(2.50克，79％产率)。LC-MS MS m/z 631(M⁺+H).

步骤7：

使实施例20步骤6之产物(3.20克，5.08毫摩尔)溶于二氯甲烷(20毫升)中，并将溶液以TFA(20毫升)在室温下处理1小时。于真空中移除溶剂，且将残留物与1.0MHCl在醚中合并，并搅拌过夜。将所形成之固体藉过滤分离，以醚冲洗，及在真空中干燥，而得灰白色固体(2.97克，95.0％产率)。LC-MS MS m/z 531(M⁺+H).

步骤8：

化合物20A与20B系经由如关于化合物19A与19B之制备所述之相同程序制成，只是使用实施例20步骤7之产物(0.100克，0.166毫摩尔)代替实施例17步骤6之产物。化合物20A为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个，且以米黄色粉末双-TFA盐获得(0.0564克，35.9％产率)。化合物20B为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个，且以米黄色粉末双-TFA盐获得(0.0367克，23.4％产率)。

化合物20A：LC-MS，MS m/z 720(M⁺+H).

化合物20B：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.98(s，9H)1.00-1.09(m，2H)1.14-1.21(m，1H)1.28-1.41(m，3H)1.88(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)2.25(q，J＝9.05Hz，1H)2.31-2.39(m，1H)2.60(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)2.79-2.87(m，1H)3.92(s，3H)3.98(d，J＝1.53Hz，3H)4.08(dd，J＝12.21，3.36Hz，1H)4.20(s，1H)4.45(d，J＝11.90Hz，1H)4.54-4.60(m，1H)5.15(d，J＝10.38Hz，1H)5.34(d，J＝17.09Hz，1H)5.76-5.86(m，1H)5.91(s，1H)6.57-6.63(m，2H)6.77(d，J＝8.54Hz，2H)6.93(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)7.05-7.13(m，3H)7.87(d，J＝9.16Hz，1H)9.33(s，1H)；LC-MS，MS m/z 720(M⁺+H).

实施例21：化合物21之制备：N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3，6-二甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物21

化合物21系经由如实施例17步骤7中所述之相同程序制成，只是使用实施例20步骤7之产物(0.253克，0.419毫摩尔)代替实施例17步骤6之产物。获得化合物21(0.052克，15.3％产率)，为褐色粉末双-HCl盐。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.01(d，J＝6.7Hz，1H)，1.10(d，J＝6.7Hz，3H)，1.12-1.16(m，2H)，1.23-1.29(m，2H)，1.30-1.37(m，1H)，1.43-1.49(m，1H)，1.91-1.97(m，1H)，2.19(s，3H)，2.26-2.34(m，1H)，2.40(s，3H)，2.62-2.70(m，1H)，2.89(s，1H)，2.95-3.03(m，1H)，3.16-3.22(m，1H)，3.92(s，3H)，3.99(s，3H)，4.17(dd，J＝12.1，3.5Hz，1H)，4.23-4.29(m，1H)，4.50(d，J＝7.0Hz，1H)，4.64-4.70(m，1H)，5.17(d，J＝10.4Hz，1H)，5.35(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75-5.86(m，1H)，5.98(d，J＝2.1Hz，1H)，6.60(d，J＝8.2Hz，1H)，6.66(s，1H)，6.87(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.06(t，J＝2.1Hz，1H)，7.83(d，J＝9.2Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 748(M⁺+H).

化合物22异构体：

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

与

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例22：化合物22A与22B之制备：

化合物22A和22B

实施例22之图式1

步骤1：

将3-氯-6-甲基苯甲酸(17.0克，0.10摩尔)在亚硫酰二氯(23.5毫升，0.30摩尔)中之浆液慢慢加热至温和回流，并在此温度下保持2小时。然后，使反应混合物冷却至室温，且于真空中移除过量亚硫酰二氯。使残留物溶于DCM(50毫升)中，接着于真空中移除溶剂(应注意的是，重复此方法数次，以确保残留亚硫酰二氯与HCl之移除)。然后，使所形成之产物溶于THF(80毫升)中，将其如下文所述直接使用于下一反应。

步骤2：

于30％氨(58毫升)在水(240毫升)中，藉由盐-冰浴(-10℃)冷却之溶液内，逐滴添加上述步骤1产物之THF溶液。在添加完成后。将所形成之反应混合物(浆液)在-10℃下搅拌1小时。然后，使反应混合物温热至室温，并倾析。接着，将在反应容器中之残留固体以水(50毫升)研制。然后，将此研制与倾析之方法重复。接着过滤残留固体，并以水洗涤滤饼。然后，使固体在真空中干燥过夜，而产生13.8克(82％)所要之产物，为白色晶体物质。¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 2.33(s，3H)，7.24-7.27(m，1H)，7.35-7.38(m，2H)，7.44(b，1H)，7.80(b，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 18.87，126.64，128.86，129.81，132.31，134.19，138.65，169.41；LC-MS，MS m/z 170.

步骤3：

将步骤2之产物(11.5克，68毫摩尔)、DMF-缩醛(10.9毫升，82毫摩尔)及THF(150毫升)之混合物加热至回流，并在此温度下保持2小时。然后，使反应混合物冷却至室温，及在真空中移除挥发性物质。使所形成之残留物从己烷(150毫升)再结晶，而产生14.7克(96％)所要之产物，为白色针状物。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ2.49-2.51(m，3H)，3.09(s，3H)，3.20(s，3H)，7.24，7.27(d，J＝13.5Hz，1H)，7.37-7.41(dd，J1＝14Hz，J2＝4.5Hz，1H)，7.91，7.92(d，J＝4.0Hz，1H)，8.55(s，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 20.69，35.09，40.91，129.50，129.72，132.98，136.86，138.87，160.60，177.04；LC-MS，MS m/z 225.

步骤4：

将步骤3之产物与KOtBu(14.7克，131毫摩尔)在THF(300毫升)中之混合物加热至回流，并在此温度下保持2小时(于加热时，反应混合物变成暗色溶液)。然后，藉由馏出大约100毫升溶剂使反应混合物之体积减少。接着，将所形成之溶液小心地倒入水(1升)中，并使所形成之混合物以1M HCl酸化，以造成pH值为4。然后过滤混合物，且以水充分洗涤所收集之固体，接着在真空中干燥过夜，而产生7.0克(60％)所要之产物，为灰白色粉末。

¹H NMR(400Hz，CD₃OD)δppm 6.66(d，J＝7.05Hz，1H)，7.18(d，J＝7.05Hz，1H)，7.66(s，1H)7.67(d，J＝2.01Hz，1H)，8.24(d，J＝2.27Hz，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 104.05，125.62，127.21，128.54，129.52，130.77，132.43，136.55，160.72；LC-MS，MS m/z 180.

步骤5：

将步骤4之产物与NBS(39.747克，223.3毫摩尔)在MeCN(500毫升，无水)中之浆液慢慢加热至温和回流，历经大约2小时期间，并在温和回流下保持1.5小时(此反应可藉LC/MS监控)。然后，使反应混合物慢慢冷却至室温，历经3小时期间，并藉简单过滤移除所发现之固体。以MeCN(100毫升×3)洗涤所收集之固体，提供47克所要之产物。将此物质使用于下一步骤，无需进一步纯化。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 7.46(s，1H)，7.81(dd，J＝8.40，2.00Hz，1H)，7.88(d，J＝8.8Hz，1H)，8.27(d，J＝2.00Hz，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 96.68，126.34，127.58，127.71，130.73，132.20，133.47，134.46，159.88；LC-MS，MS m/z 258.

步骤6：

将步骤5之产物(47克，182毫摩尔)在POCl₃(200毫升，2.15摩尔)中之非均质溶液慢慢加热至回流，历经1小时期间。使反应混合物于回流下保持4小时。然后，使反应混合物冷却至室温，及在真空中浓缩，以移除过量POCl₃。接着，使所形成之残留物溶于600毫升CH₂Cl₂中，冷却至-35℃，然后以1N NaOH(400毫升)小心地中和，直到混合物稍微碱性(pH＝8)为止。分离所形成之有机层，以水洗涤，以MgSO₄干燥，及在真空中浓缩。使所形成之残留物自EtOAc(大约50毫升)结晶，而得32克所要之产物。将所收集之固体以10％EtOAc/己烷(3×50毫升)洗涤。

浓缩母液，并藉Biotage纯化(以己烷中之16％EtOAc洗脱)，获得4克所要之产物，为固体。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 7.80(dd，J＝8.81，2.01Hz，1H)，8.14(d，J＝9.06Hz，1H)，8.34(d，J＝1.76Hz，1H)，8.48(s，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 118.39，125.06，127.59，128.71，133.89，134.14，134.93，143.18，148.98；LC-MS，MS m/z 275.

步骤7：

于步骤6之产物(22.16克，80毫摩尔)在THF(500毫升)中之浆液内，在-78℃下，经由套管逐滴添加100毫升1.6M n-BuLi(在己烷中，160毫摩尔)，历经15分钟(保持内部温度＜-65℃)。将所形成之溶液搅拌0.5小时，在此段时间后，经由注射器逐滴添加(i-PrO)₃B(37毫升，160毫摩尔)，历经10分钟(保持内部温度＜-65℃)。将所形成之反应混合物搅拌0.5小时。藉LC/MS确认反应完成后，经由添液漏斗逐滴添加80毫升30％H₂O₂(776毫摩尔)，历经10分钟(在添加期间内部温度上升至-60℃)，接着添加80毫升1N NaOH(80毫摩尔)。移除冷却浴，并使反应混合物温热至室温，且于室温下再搅拌1小时。藉LC/MS确认反应完成后，接着使反应混合物冷却至-40℃，且经由添液漏斗作为一种装置，逐滴添加100克Na₂SO₃(0.793摩尔)在400毫升水中之溶液，以使过量H₂O₂淬灭，历经30分钟(保持内部温度5-10℃)。然后，使所形成之浆液在0℃下以6N HCl(大约50毫升)中和，直到pH～6为止，接着以500毫升EtOAc稀释，并倾析至2升分液漏斗。于反应容器中之残留固体内，添加500毫升水与300毫升EtOAc，然后以6N HCl(大约20毫升)中和。将合并之有机层以盐水(300毫升×3)，接着以水(200毫升×3)洗涤，以MgSO₄干燥，及浓缩，而得粗产物，将其以50毫升EtOAc研制。藉过滤收集固体，以EtOAc(3×25毫升)冲洗，并干燥，而得所要之产物(2次操作：12.0克，70％，与13.8克，81％)。合并滤液，浓缩，及藉Biotage纯化，以己烷中之35％EtOAc洗脱，而得2.1克产物。全部44.4克溴化物系获得27.9克(81％)4-OH产物。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 4.05(s，3H)，7.4(s，1H)，7.76(dd，J＝8.8，2，Hz，1H)，8.16(d，J＝2Hz，1H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 123.78，124.66，125.62，127.03，127.71，130.72，133.80，137.63；148.88；LC-MS，MS m/z 213.

步骤8：

于步骤7之产物(16克，75.5毫摩尔)在MeOH-MeCN(30毫升/300毫升)中之浆液内，在0℃下逐滴添加60毫升TMSCHN₂在己烷中之2M溶液(120毫摩尔)。使反应混合物温热至室温，然后搅拌14小时。接着浓缩溶液，并使所形成之固体自EtOAc(约50毫升)再结晶，而得8.1克所要之产物，将其以己烷中之25％EtOAc洗涤；20×3次。浓缩母液，并藉Biotage纯化(以己烷中之16％EtOAc洗脱)，提供3.2克所要之产物，为固体。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 4.05(s，3H)，7.67(dd，J＝9.06，2.01Hz，1H)，7.80(s，1H)，8.16(d，J＝8.81Hz，1H)，8.23(d，J＝2.01Hz，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 56.68，122.70，123.99，124.14，126.67，127.83，131.43，134.10，139.75，149.94；LC-MS，MS m/z 229.

实施例22之图式2

步骤3：

将DMSO(20毫升)中之实施例22步骤2之产物(0.452克，1.98毫摩尔)、Boc-HYP-OH(0.508克，2.20毫摩尔)及叔丁醇钾(0.672克，6.0毫摩尔)于室温下搅拌4小时。以水使混合物淬灭，并以1.0M HCl水溶液中和。将混合物以醋酸乙酯萃取，且以盐水洗涤有机物质，以无水MgSO₄干燥，过滤，及浓缩，而得粗制固体(0.844克，定量)，将其使用于下一步骤，无需进一步纯化。

步骤4：

使实施例22步骤3之产物(0.422克，1.00毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)与DIEA(2毫升)中。于溶液中添加环丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-环丙烷羰基)-酰胺对-甲苯磺酸盐(0.402克，1.00毫摩尔)与HATU(0.600克，1.58毫摩尔)，并将混合物搅拌6小时，且浓缩。藉急骤式柱硅胶层析纯化(1∶1己烷∶丙酮)，获得固体所要之产物(0.600克，94.5％产率)。LC-MS，MS m/z 636(M⁺+H).

步骤5：

使实施例22步骤4之产物(6.34克，9.98毫摩尔)溶于甲醇(50毫升)中，以12M HCl(3毫升)处理，并将混合物加热至回流，历经2小时，且浓缩。将粗制物质直接使用于下一步骤。

步骤6：

使实施例22步骤5之产物(0.480克，0.790毫摩尔)、DIEA(1毫升)及实施例14步骤2之产物(0.240克，0.880毫摩尔)在DMF(5毫升)中之溶液以氮喷射。使混合物冷却至0℃，以HATU (0.456克，1.12毫摩尔)处理，并于室温下搅拌5小时。然后，将反应物加热至46℃，历经25小时。使混合物浓缩，并使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物22A(0.045克，7.6％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物22B(0.050克，8.4％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物22A：LC-MS，MS m/z 754(M⁺+H).

化合物22B：LC-MS，MS m/z 754(M⁺+H).

实施例23：化合物23之制备：3-甲基-N-(4-甲基-5-硝基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

化合物23

图式1

步骤1：

将2-溴-5-硝基-4-甲基吡啶(2.00克，9.22毫摩尔)、L-叔-亮氨酸(1.27克，9.68毫摩尔)及碳酸钾(3.18克，23.0毫摩尔)在无水DMF(50毫升)中之混合物加热至80℃，历经20小时。使混合物在真空中浓缩成残留物(约25毫升)，然后添加DCM(200毫升)与水(100毫升)，并使所形成之混合物振荡，且分离两液相。以DCM(3×100毫升)萃取水相，及合并有机萃取液，并以无水硫酸镁干燥，过滤，及在真空中浓缩成深红色固体。藉反相制备型HPLC纯化，获得黄色固体(0.66克，27％产率)。LC-MS，MS m/z 268(M⁺+H).

步骤2：

将实施例23步骤1之产物(0.145克，0.543毫摩尔)与实施例22步骤5之产物(0.300克，0.493毫摩尔)及HATU(0.281克，0.740毫摩尔)在DCM(4毫升)中合并。于混合物中添加N-甲基吗啉(0.250克，2.47毫摩尔)，并将所形成之混合物在室温下搅拌过夜，接着在60℃下3天。添加另外之实施例23步骤1之产物(0.145克，0.543毫摩尔)与HATU(0.281克，0.740毫摩尔)，并将混合物在室温下搅拌过夜。藉反相制备型HPLC纯化，获得化合物23，为橙色/褐色固体双-TFA盐(0.097克，19.4％产率)。¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.10(s，9H)1.11-1.15(m，2H)1.23-1.32(m，2H)1.43-1.50(m，1H)1.93(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.24-2.32(m，2H)2.33(s，3H)2.60(dd，J＝13.58，6.87Hz，1H)2.96-3.03(m，1H)3.99-4.03(m，1H)4.05(s，3H)4.65(dd，J＝10.68，7.02Hz，1H)4.78-4.83(m，1H)4.90(s，1H)5.16(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)5.31-5.37(m，1H)5.78(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)5.87(t，J＝3.05Hz，1H)6.29(s，1H)7.57-7.64(m，2H)7.71(s，1H)7.76(d，J＝2.14Hz，1H)8.03(d，J＝8.85Hz，1H)9.22(s，1H)；LC-MS，MS m/z 785(M⁺+H).

化合物24异构体：

N-5-嘧啶基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-5-嘧啶基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例24：化合物24A与24B之制备

化合物24A和24B

图式1

步骤1：

将5-溴嘧啶(1.15克，7.21毫摩尔)和叔丁醇钠(2.36克，24.5毫摩尔)与无水1，2-二甲氧基乙烷(15毫升)在75毫升Chemglass压力容器中合并。使混合物振荡，并立即添加Pd(OAc)₂(0.0405克，0.180毫摩尔)与(R)-(-)-1-[(S)-(二环己基膦基)三茂铁基]乙基二叔丁基膦(0.100克，0.180毫摩尔，Strem Chemicals目录#26-0975，CAS#[158923-11-6])在无水1，2-二甲氧基乙烷(2毫升)中之预混合溶液。然后，将L-缬氨酸叔丁酯盐酸盐(1.18克，5.62毫摩尔)迅速添加至所形成之混合物中。将压力容器密封，并将混合物在110℃下搅拌20小时。使粗产物通过硅胶填充柱(以100％DCM，接着100％EtOAc洗脱)，以移除基线污染物。于真空中移除溶剂，并使300毫克已回收之粗制物质藉急骤式硅胶层析纯化(梯度4∶1己烷∶EtOAc至1∶1己烷∶EtOAc)，获得黄色固体(0.200克，14.2％产率)。¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm1.03(t，J＝6.87Hz 6H)1.45(s，9H)2.11-2.19(m，1H)3.75(dd，J＝9.16，5.19Hz，1H)4.24(d，J＝9.16Hz，1H)8.13(s，2H)8.60(s，1H)；LC-MS，MS m/z 252(M⁺+H).

步骤2：

使实施例24步骤1之产物(0.200克)溶于二氯甲烷(10毫升)中，并以TFA(10毫升)处理。将混合物于室温下搅拌3小时，然后在真空中浓缩。接着，使残留物溶于1，2-二氯乙烷(15毫升)中，且于真空中再一次浓缩。然后，使深绿色残留物藉反相制备型HPLC纯化，而产生深绿色玻璃态固体，为HCl盐(0.091克，49％产率)。¹HNMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 0.99(dd，J＝9.16，7.02Hz，6H)2.14(td，J＝13.28，6.71Hz，1H)3.90(d，J＝5.80Hz，1H)6.32(s，1H)8.22(s，2H)8.44(s，1H)；LC-MS，MSm/z 196(M⁺+H).

步骤3：

将已悬浮于DCM(4毫升)中之实施例24步骤2之产物(0.084克，0.362毫摩尔)、实施例22步骤5之产物(0.200克，0.329毫摩尔)及HATU(0.188克，0.493毫摩尔)之混合物以NMM(0.167克，1.65毫摩尔)处理。将混合物于室温下搅拌3小时。在氮气流下移除溶剂，并使粗制混合物藉反相制备型HPLC纯化，而得具有相同MS m/z之两种个别化合物。化合物24A(0.0902克，29.2％产率)为自反相制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第一个，且以米黄色粉末双-TFA盐获得。化合物24B(0.0957克，30.9％产率)为自反相制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第二个，且以米黄色粉末双-TFA盐获得。

化合物24A：¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δppm 0.91(dd，J＝6.95，3.29Hz，2H)1.04(d，J＝6.59Hz，3H)1.09(d，J＝6.59Hz，3H)1.19-1.38(m，8H)1.43(dd，J＝9.51，5.12Hz，1H)1.91(dd，J＝8.23，5.31Hz，1H)2.03(s，1H)2.19-2.38(m，3H)2.57(dd，J＝13.54，7.32Hz，1H)2.94-3.06(m，1H)4.03(s，3H)4.06-4.21(m，2H)4.34(d，J＝12.08Hz，1H)4.57(dd，J＝10.25，6.95Hz，1H)5.14(dd，J＝10.61，1.10Hz，1H)5.32(dd，J＝17.20，1.46Hz，1H)5.72-5.87(m，1H)5.89(s，1H)7.56(s，1H)7.70(dd，J＝8.78，2.20Hz，1H)7.99(d，J＝2.20Hz，1H)8.07-8.16(m，3H)8.29(s，1H)；LC-MS，MS m/z 713(M⁺+H).

化合物24B：¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δppm 0.91(d，J＝6.95Hz，3H)0.95(d，J＝6.59Hz，3H)0.98-1.13(m，3H)1.20-1.31(m，2H)1.40(dd，J＝9.51，5.12Hz，1H)1.90(dd，J＝8.23，5.31Hz，1H)1.98-2.07(m，1H)2.22-2.41(m，2H)2.57-2.66(m，1H)2.82-2.93(m，J＝7.82，7.82，5.12，4.85Hz，1H)4.04(s，3H)4.05-4.16(m，1H)4.23(d，J＝6.95Hz，1H)4.41(d，J＝12.08Hz，1H)4.62(dd，J＝9.70，7.14Hz，1H)5.15(dd，J＝10.43，1.65Hz，1H)5.34(dd，J＝17.20，1.46Hz，1H)5.78(ddd，J＝17.20，10.25，8.78Hz，1H)5.87(s，1H)7.61(s，1H)7.73(dd，J＝8.97，2.01Hz，1H)7.96(d，J＝1.83Hz，1H)8.13(d，J＝9.15Hz，1H)8.21(s，2H)8.33(s，1H)；LC-MS，MS m/z 713(M⁺+H).

实施例25：化合物25之制备：3-甲基-N-(5-甲基-3-吡啶基)缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

化合物25

图式1

步骤1：

在75毫升Chemglass压力容器中，将5-溴-3-甲基吡啶(1.00克，5.81毫摩尔)、叔丁醇钠(1.90克，19.8毫摩尔)及叔-亮氨酸叔丁酯盐酸盐(1.665克，6.98毫摩尔)在无水1，2-二甲氧基乙烷(20毫升)中合并。将混合物短暂搅拌，并立即添加Pd(OAc)₂(0.0652克，0.291毫摩尔)与(R)-(-)-1-[(S)-(二环己基膦基)三茂铁基]乙基二叔丁基膦(0.161克，0.291毫摩尔，Strem Chemicals目录#26-0975，CAS#[158923-11-6])在无水1，2-二甲氧基乙烷(2毫升)中之预混合溶液。将压力容器密封，并将混合物在100℃下搅拌20小时。将混合物倒入pH＝7缓冲剂(200毫升)、1.0M HCl水溶液(25毫升)及醋酸乙酯(100毫升)之经迅速搅拌混合物中。进行相分离，并以醋酸乙酯(2×50毫升)萃取水溶液。合并有机相，以无水硫酸镁干燥，过滤，及在真空中浓缩成残留物。使粗制物质藉急骤式硅胶层析纯化(梯度，己烷至1∶1己烷∶EtOAc)，获得红色油(0.852克，52.6％产率)。¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm 1.06(s，9H)1.40(s，9H)2.23(s，3H)3.63(d，J＝10.38Hz，1H)4.11(dd，J＝8.55，1.22Hz，1H)6.74(s，1H)7.81(s，1H)7.89(d，J＝2.75Hz，1H)；LC-MS，MS m/z279(M⁺+H).

步骤2：

使实施例25步骤1之产物(0.809克，2.91毫摩尔)溶于二氯甲烷(20毫升)中，并以TFA(20毫升)处理。将混合物于室温下搅拌20小时，然后在真空中浓缩。接着，使残留物溶于1，2-二氯乙烷(15毫升)中，且再一次在真空中浓缩，而得褐色油。然后，使残留物溶于最少DCM中，并逐滴添加至醚中之2.0M HCl(30毫升)、乙醚(30毫升)及1，2-DCE(50毫升)之经迅速搅拌混合物中。将混合物搅拌10分钟，接着在真空中浓缩。然后，使所形成之褐色泡沫状固体溶于1.0M HCl水溶液中，并使溶液在真空中浓缩，获得玻璃态黄色固体(0.600克，80％产率)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 1.05(s，9H)2.35(s，3H)4.02(d，J＝9.77Hz，1H)7.03(d，J＝9.77Hz，1H)7.68(s，1H)7.95(s，1H)8.13(s，1H)LC-MS MS m/z 223(M⁺+H).

步骤3：

将已悬浮于DCM(2毫升)中之实施例25步骤2之产物(0.094克，0.362毫摩尔)、实施例22步骤5之产物(0.200克，0.329毫摩尔)及HATU(0.188克，0.493毫摩尔)之混合物以NMM(0.167克，1.65毫摩尔)处理。将混合物于室温下搅拌20小时。于真空中移除溶剂，并使粗制混合物藉反相制备型HPLC纯化，而得化合物25(0.1421克，44.7％产率)，为白色粉末双-TFA盐。¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.07-1.21(m，11H)1.23-1.34(m，2H)1.45(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)1.93(dd，J＝8.09，5.65Hz，1H)2.14(s，3H)2.22-2.32(m，2H)2.59(dd，J＝13.73，7.32Hz，1H)2.96-3.05(m，1H)4.01(dd，J＝12.21，3.05Hz，1H)4.04(s，3H)4.26(s，1H)4.33(d，J＝12.21Hz，1H)4.66(dd，J＝10.22，7.48Hz，1H)5.16(d，J＝10.38Hz，1H)5.34(d，J＝17.40Hz，1H)5.72-5.83(m，1H)5.89(s，1H)7.48(s，1H)7.59(s，1H)7.67-7.72(m，2H)7.81(d，J＝2.14Hz，1H)7.96(d，J＝1.83Hz，1H)8.11(d，J＝8.85Hz，1H)9.27(s，1H)；LC-MS，MS m/z 740(M⁺+H).

化合物26异构体：

3-甲基-N-(6-甲基-3-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(6-甲基-3-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例26：化合物26A与26B之制备

化合物26A和26B

化合物26A与26B系经由如关于化合物25之制备所述之类似程序制成，只是于步骤1中，使用5-溴-2-甲基吡啶代替5-溴-3-甲基吡啶，且将反应规模对步骤2与3改变。两种异构化合物系自步骤3分离：自制备型HPLC柱洗脱之第一种异构体为化合物26A(0.111克)，经分离成稍微灰白色固体双-TFA盐，而自制备型HPLC柱洗脱之第二种异构体为化合物26B(0.0944克)，经分离成微黄色固体双TFA盐。关于两种化合物26A与26B之合并产率为12.2％，历经三个步骤。

实施例26步骤1之产物：肉色蜡状固体；¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm 1.06(s，9H)1.40(s，9H)2.42(s，3H)3.59(d，J＝10.38Hz，1H)4.02(d，J＝10.38Hz，1H)6.87(dd，1H)6.93(d，1H)7.99(d，J＝2.75Hz，1H)；LC-MS，MS m/z279(M⁺+H).

实施例26步骤2之产物：黄色固体；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 1.05(s，9H)2.52(s，3H)3.98(d，J＝9.16Hz，1H)6.84(d，J＝9.77Hz，1H)7.59(d，J＝9.16Hz，1H)7.81(dd，J＝9.00，2.59Hz，1H)8.05(d，J＝2.75Hz，1H)；LC-MS，MS m/z223(M⁺+H).

化合物26A：¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.07-1.18(m，11H)1.25-1.32(m，2H)1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.93(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)2.22-2.31(m，4H)2.46(s，3H)2.60(dd，J＝13.43，6.71Hz，1H)2.96-3.04(m，1H)4.00(dd，J＝12.36，2.90Hz，1H)4.05(s，3H)4.23(s，1H)4.37(d，J＝12.21Hz，1H)4.65(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)5.14-5.19(m，1H)5.34(d，J＝17.09Hz，1H)5.77(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)5.88(s，1H)7.05(d，J＝8.85Hz，1H)7.53(dd，J＝8.85，2.75Hz，1H)7.62(s，1H)7.73(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.84(d，J＝1.83Hz，1H)7.93(d，J＝2.75Hz，1H)8.14(d，J＝8.85Hz，1H)9.25(s，1H)；LC-MS，MS m/z740(M⁺+H).

化合物26B：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 0.97(s，9H)1.07-1.14(m，2H)1.18-1.24(m，1H)1.28-1.34(m，1H)1.41(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.90(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)2.30(q，J＝8.75Hz，1H)2.37(ddd，J＝13.89，9.92，4.27Hz，1H)2.58(s，3H)2.65(dd，J＝13.89，7.48Hz，1H)2.93-3.00(m，1H)4.04(s，3H)4.09(dd，J＝12.21，3.36Hz，1H)4.34(s，1H)4.50(d，J＝11.90Hz，1H)4.65(dd，J＝9.46，7.32Hz，1H)5.16(d，J＝10.07Hz，1H)5.36(d，J＝17.40Hz，1H)5.75-5.86(m，1H)5.89(s，1H)7.57(d，J＝9.16Hz，1H)7.62(s，1H)7.75(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.85(dd，J＝9.00，2.90Hz，1H)8.05(dd，J＝4.12，2.59Hz，2H)8.15(d，J＝9.16Hz，1H)9.56(s，1H)；LC-MS，MS m/z740(M⁺+H).

化合物27异构体：

3-甲基-N-(5-(三氟甲基)-3-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

与

3-甲基-N-(5-(三氟甲基)-3-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例27：化合物27A与27B之制备

化合物27A和27B

化合物27A与27B系经由如关于化合物25之制备所述之类似程序制成，只是于步骤1中，使用3-溴-5-三氟甲基吡啶代替5-溴-3-甲基吡啶，且反应规模为不同。而且得自步骤2之产物并未以HCl盐分离，反而以TFA盐直接带至步骤3。两种异构化合物系自步骤3分离：自制备型HPLC柱洗脱之第一种异构体为化合物27A(0.128克)，经分离成稍微灰白色固体双-TFA盐，而自制备型HPLC柱洗脱之第二种异构体为化合物27B(0.0564克)，经分离成稍微灰白色固体双TFA盐。关于两种化合物27A与27B之合并产率为17.9％，历经三个步骤。

实施例27步骤1之产物：橙色蜡状固体；¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm 1.08(s，9H)1.43(s，9H)3.66(d，J＝10.07Hz，1H)4.45(d，J＝10.07Hz，1H)7.06(s，1H)8.22(s，1H)8.24(d，J＝2.75Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 333(M⁺+H).

实施例27步骤2之产物：褐色玻璃态固体；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm1.06(s，9H)3.90(s，1H)3.92(s，1H)6.56(s，1H)7.42(s，1H)8.16(s，1H)8.40(s，1H)；LC-MS，MS m/z 277(M⁺+H).

化合物27A：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.10-1.13(m，2H)1.15(s，9H)1.27-1.31(m，2H)1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.92(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)2.23-2.32(m，2H)2.57(dd，J＝13.58，7.17Hz，1H)2.91(d，J＝14.04Hz，1H)2.97-3.03(m，1H)4.02(s，3H)4.11(dd，J＝12.21，3.36Hz，1H)4.29-4.35(m，2H)4.60(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)5.15(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)5.33(d，J＝17.09Hz，1H)5.73-5.83(m，1H)5.87(s，1H)7.54(s，1H)7.55(s，1H)7.66(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.82(d，J＝1.83Hz，1H)8.04(s，1H)8.08(d，J＝8.85Hz，1H)8.23(s，1H)9.23(s，1H)；LC-MS，MS m/z 794(M⁺+H).

化合物27B：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 0.97(s，9H)1.04-1.12(m，2H)1.21-1.28(m，2H)1.40(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)1.91(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)2.30(q，J＝8.65Hz，1H)2.38(ddd，J＝13.81，9.84，4.12Hz，1H)2.65(dd，J＝13.89，7.17Hz，1H)2.87-2.98(m，1H)4.04(s，3H)4.09(dd，J＝12.21，3.36Hz，1H)4.46(s，1H)4.55(d，J＝12.21Hz，1H)4.65(dd，J＝9.46，7.32Hz，1H)5.16(d，J＝10.38Hz，1H)5.36(d，J＝17.40Hz，1H)5.76-5.85(m，1H)5.89(s，1H)7.63(s，1H)7.75(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.78(s，1H)8.05(d，J＝1.83Hz，1H)8.15(d，J＝9.16Hz，1H)8.19(s，1H)8.37(s，1H)9.56(s，1H)；LC-MS，MS m/z 794(M⁺+H).

化合物28异构体：

3-甲基-N-(6-甲基-2-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(6-甲基-2-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例28：化合物28A与28B之制备

化合物28A和28B

图式1

步骤1：

使L-叔-亮氨酸(0.734克，5.60毫摩尔)悬浮于干燥THF(10毫升)中，并搅拌。使此悬浮液冷却至-78℃，且逐滴添加己烷中之n-buLi 2.5M(4.48毫升，11.2毫摩尔)。将黄色混合物于-78℃下搅拌30分钟，然后移除冷浴，并使此悬浮液温热至室温，历经25分钟。使混合物再一次冷却至-78℃，并逐滴添加2-氟-6-甲基吡啶(0.311克，2.80毫摩尔)。颜色从黄色改变成深橙色，且随着时间最后为褐色。移除冷浴，并将混合物在室温下搅拌过夜。将粗制混合物倒入经迅速搅拌之饱和氯化铵水溶液(100毫升)中，并添加EtOAc(50毫升)。进行相分离，且以EtOAc(2×50毫升)萃取水相。水相必须以NaCl饱和，并以DCM(4×100毫升)萃取，以移除产物。合并有机物质，及在真空中浓缩成残留物。残留物藉反相制备型HPLC纯化，获得产物，为粘性黄色油(0.279克，44.8％产率)TFA盐。1H NMR(300MHz，氯仿-D)δppm 1.02(s，9H)2.49(s，3H)3.94(s，1H)3.96-4.16(m，1H)6.54(d，J＝7.32Hz，1H)6.70(d，J＝8.78Hz，1H)7.63-7.73(m，1H)；LC-MS，MS m/z 223(M⁺+H).

步骤2：

将已悬浮于DCM(2毫升)中之实施例28步骤1之产物(0.111克，0.329毫摩尔)、实施例22步骤5之产物(0.200克，0.329毫摩尔)及HATU(0.163克，0.428毫摩尔)之混合物以NMM(0.167克，1.65毫摩尔)处理。将混合物于室温下搅拌20小时。在氮气流下，藉由浓缩移除溶剂，并使粗制混合物藉反相制备型HPLC纯化。化合物28A(0.0916克，28.8％产率)为自制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第一个，且被分离成灰白色粉末双-TFA盐。化合物28B(0.0353克，11.1％产率)为自制备型HPLC柱洗脱之两种异构体之第二个，且亦被分离成灰白色粉末双-TFA盐。

化合物28A：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.09-1.14(m，2H)1.15(s，9H)1.25-1.30(m，2H)1.46(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.94(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.25-2.37(m，2H)2.45(s，3H)2.66(dd，J＝13.89，7.17Hz，1H)2.99(ddd，J＝12.82，8.09，4.73Hz，1H)4.05(s，3H)4.09(dd，J＝12.21，3.36Hz，1H)4.40(d，J＝11.90Hz，1H)4.53(s，1H)4.69(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)5.17(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)5.34(dd，J＝17.24，1.37Hz，1H)5.77(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)5.92(s，1H)6.67(d，J＝7.32Hz，1H)6.77(d，J＝8.85Hz，1H)7.43(dd，J＝9.00，7.48Hz，1H)7.64(s，1H)7.71(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.90(d，J＝1.83Hz，1H)8.13(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 740(M⁺+H).

化合物28B：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 0.97(s，9H)1.03-1.12(m，2H)1.13-1.20(m，1H)1.22-1.29(m，1H)1.41(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)1.91(dd，J＝8.24，5.19Hz，1H)2.31(q，J＝8.75Hz，1H)2.43(ddd，J＝13.96，9.54，4.27Hz，1H)2.54(s，3H)2.69(dd，J＝14.04，7.32Hz，1H)2.86-2.96(m，2H)4.04(s，3H)4.20(dd，J＝12.21，3.36Hz，1H)4.50(d，J＝11.90Hz，1H)4.65-4.71(m，2H)5.13-5.19(m，1H)5.36(dd，J＝17.24，1.37Hz，1H)5.79(ddd，J＝17.24，10.22，8.85Hz，1H)5.92(s，1H)6.84(d，J＝7.32Hz，1H)7.06(d，J＝8.85Hz，1H)7.63(s，1H)7.76(dd，J＝9.16，2.14Hz，1H)7.96(dd，J＝8.85，7.32Hz，1H)8.06(d，J＝2.14Hz，1H)8.16(d，J＝8.85Hz，1H)9.56(s，1H)；LC-MS，MS m/z 740(M⁺+H).

化合物29异构体：

N-(2，6-二甲基-4-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

与

N-(2，6-二甲基-4-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例29：化合物29A与29B之制备

化合物29A和29B

化合物29A与29B系经由如关于化合物25之制备所述之类似程序制成，只是于步骤1中，使用4-溴-2，6-二甲基吡啶1.06氢溴酸盐(0.980克，3.61毫摩尔)代替5-溴-3-甲基吡啶，且反应规模为不同。而且，得自步骤2之产物并未以HCl盐分离，而是以TFA盐直接带至步骤3。两种异构化合物系自步骤3分离：自制备型HPLC柱洗脱之第一种异构体为化合物29A(0.127克)，经分离成白色固体双-TFA盐，而自制备型HPLC柱洗脱之第二种异构体为化合物29B(0.103克)，经分离成白色固体双TFA盐。关于两种化合物29A与29B之合并产率为47.8％，历经三个步骤。

实施例29步骤1之产物：淡褐色蜡状固体；¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm1.04(s，9H)1.43(s，9H)2.37(s，6H)3.71(d，J＝9.77Hz，1H)4.46(d，J＝9.77Hz，1H)6.20(s，2H)；LC-MS，MS m/z 293(M⁺+H).

实施例29步骤2之产物：褐色玻璃态固体；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm1.03(s，9H)2.38(s，3H)2.42(s，3H)4.17(d，J＝9.77Hz，1H)6.79(s，1H)6.88(s，1H)8.23(d，J＝9.77Hz，1H)13.11(s，1H)；LC-MS，MS m/z 237(M⁺+H).

化合物29A：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 0.99(s，1H)1.05(s，9H)1.07-1.13(m，2H)1.21-1.27(m，2H)1.42(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)1.46(s，1H)1.90(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)2.12(s，3H)2.21-2.29(m，2H)2.31(s，3H)2.60(dd，J＝13.89，7.48Hz，1H)2.92-3.00(m，1H)4.01(s，3H)4.24(d，J＝11.60Hz，1H)4.35(d，J＝9.77Hz，1H)4.66(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)5.13(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)5.31(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)5.74(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)5.87(s，1H)6.49(d，J＝13.12Hz，2H)7.58(s，1H)7.66(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.80(d，J＝1.83Hz，1H)7.92(d，J＝9.77Hz，1H)8.07(d，J＝8.85Hz，1H)9.22(s，1H)；LC-MS，MS m/z754(M⁺+H).

化合物29B：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 0.92(s，9H)1.03-1.11(m，2H)1.19-1.26(m，2H)1.39(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.88(dd，J＝8.24，5.19Hz，1H)2.28(q，J＝8.95Hz，1H)2.36(ddd，J＝14.04，9.77，4.27Hz，1H)2.44(br s，6H)2.63(dd，J＝14.04，7.32Hz，1H)2.93(ddd，J＝12.74，8.01，4.58Hz，1H)4.01(s，3H)4.06(dd，J＝12.21，3.36Hz，1H)4.47(d，J＝12.21Hz，1H)4.52(d，J＝9.16Hz，1H)4.63(dd，J＝9.77，7.32Hz，1H)5.13(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)5.33(dd，J＝17.09，1.53Hz，1H)5.78(ddd，J＝17.09，10.38，8.85Hz，1H)5.87(s，1H)6.71(br s，1H)6.87(br s，1H)7.14(d，J＝9.16Hz，1H)7.58(s，1H)7.72(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)8.01(d，J＝2.14Hz，1H)8.12(d，J＝9.16Hz，1H)9.54(s，1H)；LC-MS，MS m/z 754(M⁺+H).

化合物32异构体：

N-(4，6-二氯-2-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(4，6-二氯-2-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例32：化合物32A与32B之制备

化合物32A和32B

化合物32A与32B系经由如关于化合物7之制备所述之类似程序制成，只是于步骤1中，使用2，4，6-三氯吡啶(0.658克，3.61毫摩尔)代替2-氯吡啶，且反应规模为不同。而且，于步骤3中，使用得自实施例22步骤5之产物代替实施例1步骤5之产物。两种异构化合物系自步骤3分离：自制备型HPLC柱洗脱之第一种异构体为化合物32A(0.0783克)，经分离成灰白色固体双-TFA盐，而自制备型HPLC柱洗脱之第二种异构体为化合物32B(0.0207克)，经分离成灰白色固体双TFA盐。关于两种化合物32A与32B之合并产率为5.8％，历经三个步骤。

实施例32步骤1之产物：黄色油；¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm 1.03(s，9H)1.46(s，9H)4.10(d，J＝8.85Hz，1H)5.13(d，J＝9.16Hz，1H)6.33(d，J＝1.22Hz，1H)6.60(d，J＝1.22Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 334(M⁺+H).

实施例32步骤2之产物：粘性褐色油；LC-MS，MS m/z 278(M⁺+H).

化合物32A：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.04-1.08(m，2H)1.09(s，9H)1.21-1.29(m，2H)1.41(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)1.87(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)2.19-2.31(m，2H)2.54(dd，J＝13.58，6.87Hz，1H)2.92-2.98(m，J＝8.09，8.09，4.73，4.73Hz，1H)4.00(s，3H)4.12(dd，J＝11.75，3.81Hz，1H)4.53(dd，J＝10.53，6.87Hz，1H)4.68(d，J＝11.60Hz，1H)4.72(s，1H)5.11(dd，J＝10.22，1.68Hz，1H)5.28(dd，J＝17.24，1.37Hz，1H)5.74(ddd，J＝17.09，10.22，9.00Hz，1H)5.88(t，J＝3.36Hz，1H)6.26(d，J＝1.22Hz，1H)6.48(d，J＝1.22Hz，1H)7.54(s，1H)7.64(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.82(d，J＝2.14Hz，1H)8.05(d，J＝8.85Hz，1H)9.14(s，1H)；LC-MS，MS m/z 795(M⁺+H).

化合物32B：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 0.90(s，9H)0.97-1.11(m，3H)1.26-1.37(m，2H)1.85(dd，J＝8.24，5.19Hz，1H)2.23(q，J＝8.95Hz，1H)2.35(ddd，J＝13.96，9.84，4.27Hz，1H)2.58(dd，J＝13.73，7.32Hz，1H)2.81-2.88(m，1H)4.01(s，3H)4.23(dd，J＝12.05，3.51Hz，1H)4.38(d，J＝12.21Hz，1H)4.56(dd，J＝9.92，7.17Hz，1H)4.90(s，1H)5.12(dd，J＝10.22，1.68Hz，1H)5.31(dd，J＝17.24，1.37Hz，1H)5.77(ddd，J＝17.09，10.38，8.85Hz，1H)5.83(s，1H)6.56(d，J＝1.53Hz，1H)6.58(d，J＝1.53Hz，1H)7.61(s，1H)7.71(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)8.02(d，J＝2.14Hz，1H)8.11(d，J＝8.85Hz，1H)9.35(s，1H)；LC-MS，MS m/z 795(M⁺+H).

实施例33：化合物33之制备：N-(5-氯-3-吡啶基)-3-甲基缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

化合物33

化合物33系经由如关于化合物7之制备所述之类似程序制成，只是于步骤1中，使用3，5-二氯吡啶(0.534克，3.61毫摩尔)代替2-氯吡啶，且反应规模为不同。而且，于步骤3中，使用得自实施例22步骤5之产物代替实施例1步骤5之产物。化合物33(0.187克，9.0％产率，历经3个步骤)系被分离成米黄色固体双TFA盐。

实施例33步骤1之产物：黄色油；¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm 1.06(s，9H)1.44(s，9H)3.61(d，J＝10.07Hz，1H)4.30(d，J＝10.07Hz，1H)6.91(t，J＝2.29Hz，1H)7.92(d，J＝1.83Hz，1H)7.95(d，J＝2.44Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 299(M⁺+H).

实施例33步骤2之产物：粘性褐色油；LC-MS，MS m/z 243(M⁺+H).

化合物33：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.03-1.08(m，2H)1.09(s，9H)1.22-1.27(m，2H)1.42(ddd，J＝9.54，5.42，0.92Hz，1H)1.89(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.19-2.29(m，2H)2.56(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)2.92-2.99(m，1H)3.96-4.05(m，4H)4.21(s，1H)4.29(d，J＝12.21Hz，1H)4.60(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)5.12(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)5.30(dd，J＝17.09，1.53Hz，1H)5.74(ddd，J＝17.09，10.38，8.85Hz，1H)5.84(s，1H)7.33(s，1H)7.54(s，1H)7.65(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.72(s，1H)7.81(d，J＝1.83Hz，1H)7.94(s，1H)8.07(d，J＝8.85Hz，1H)9.20(s，1H)；LC-MS，MS m/z 760(M⁺+H).

实施例35：化合物35之制备：N-(4-乙基-1，3-噻唑-2-基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物35

图式1

步骤1：

于实施例3步骤2之产物(1.5克，2.18毫摩尔)与DIEA(0.707克，5.46毫摩尔)在DCM(20毫升)中之溶液混合物内，添加Fmoc-硫代异氰酸酯(0.799，2.84毫摩尔)。将反应混合物搅拌48小时。当藉LC/MS测定时，反应并未完成，然后添加更多Fmoc-硫代异氰酸酯(0.307克，1.09毫摩尔)。将反应混合物在室温下再搅拌24小时。藉由真空过滤，移除白色固体沉淀物副产物，并以EtOAc洗涤。浓缩液体过滤物，使所形成之残留物再溶于EtOAc(100毫升)中，且以2×25毫升H₂O洗涤。将水层合并，并以EtOAc(50毫升)萃取。将合并之有机层以盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤，及浓缩成黄色固体。藉由以EtOAc研制，移除更多未鉴定之副产物，急冷至0℃；过滤固体沉淀物，并抛弃。浓缩液体过滤物，且使残留物经过SiO₂柱纯化，使其以3∶1、1∶1接着1∶3之己烷∶EtOAc洗脱，而得实施例35步骤1之产物(0.798克，41％产率)为淡黄色泡沫状固体。LC-MS，MS m/z 895(M⁺+H).

步骤2：

于得自实施例35步骤1之产物(0.489克，0.546毫摩尔)在DMF(4毫升)中之黄色溶液内，添加哌啶(1毫升)。将反应物在室温下搅拌。5小时后，在真空下移除溶剂，并干燥，而得固体玻璃态粗产物，使其溶于DMF(5毫升)中，且以1-溴-2-丁酮(0.275克，1.64毫摩尔)处理。将反应混合物在室温下搅拌过夜。14小时后，在真空下移除溶剂，而得粘稠红色油，使其再溶于MeOH中，并过滤，以移除褐色凝胶状物质。浓缩液体过滤物，且使其余残留物藉逆相HPLC纯化，而得实施例35(139.7，35％产率)，为淡黄色固体。1HNMR(500MHz)δppm 0.81(t，J＝7.5Hz，3H)，1.06-1.12(m，3H)，1.14(s，9H)，1.25-1.30(m，2H)，1.46(dd，J＝9.6，5.3Hz，1H)，1.91(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，1.93-1.97(m，1H)，1.99-2.07(m，1H)，2.23-2.29(m，1H)，2.30-2.36(m，1H)，2.59(dd，J＝13.4，6.7Hz，1H)，3.96(s，3H)，4.15(dd，J＝11.7，3.8Hz，1H)，4.46(s，1H)，4.57(dd，J＝10.5，6.9Hz，1H)，4.68(d，J＝11.6Hz，1H)，5.15(d，J＝10.4Hz，1H)，5.32(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75(s，1H)，5.76-5.82(m，1H)，5.90(s，1H)，7.09(dd，J＝8.9，2.4Hz，1H)，7.23(d，J＝2.4Hz，1H)，7.29(d，J＝5.8Hz，1H)，7.89(d，J＝9.2Hz，1H)，7.93(d，J＝6.1Hz，1H).LC-MS，MS m/z 725(M⁺+H).

实施例36：化合物36之制备：N-(5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物36

图式1

步骤1：

于实施例3步骤2之产物(0.267克，0.389毫摩尔)与DIEA(0.101克，0.778毫摩尔)在DCM(4毫升)中之溶液混合物内，添加异硫氰酸3-氯丙酯(0.053克，0.389毫摩尔)，并加热至45℃。3小时后，移除溶剂，并使残留物以最少DCM再溶于热EtOAc中，添加Et₂O，以达成浅绿色沉淀物，其系藉过滤获得。使产物藉逆相HPLC纯化，而得实施例36(0.166克，54％)，为淡黄色双-HCl盐固体。¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.12(s，9H)，1.24-1.28(m，3H)，1.47(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.94(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.27-2.38(m，2H)，2.70(dd，J＝13.7，7.0Hz，1H)，2.94-3.01(m，1H)，3.97(s，3H)，4.05-4.10(m，1H)，4.12(q，J＝7.3Hz，1H)，4.39(d，J＝11.9Hz，1H)，4.73(dd，J＝10.2，7.5Hz，1H)，5.17(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.35(d，J＝17.1Hz，1H)，5.74-5.83(m，1H)，5.91(s，1H)，7.26(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.30(d，J＝2.1Hz，1H)，7.35(d，J＝6.1Hz，1H)，7.97(d，J＝5.8Hz，1H)，8.11(d，J＝9.2Hz，1H).LC-MS，MS m/z 713(M⁺+H).

实施例37：化合物37之制备：N-(5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

化合物37

图式1

步骤1：

将4-甲氧基-2-甲基-苯甲酸(25.3克，152毫摩尔)在1∶1DCM∶DCE中之混合物以草酰氯(38.6克，304毫摩尔)处理，接着添加DMF(0.111克，1.50毫摩尔)。因而发生激烈气体，并于1小时后，反应物最后变成透明。在真空中移除挥发性物质，且将白色固体残留物在高真空下放置2小时。使粗制物质再溶于DCM(200毫升)中，并使混合物冷却至0℃。逐滴添加二乙胺(22.8克，312毫摩尔)，并搅拌。使混合物温热至室温，历经1小时，并搅拌。使混合物在真空中浓缩至大约1/3体积，且添加Et₂O(300毫升)，及使混合物急冷。将已形成之固体沉淀物藉过滤移除。使滤液浓缩，获得粘稠褐色油，使其再溶于DCM(200毫升)中，并以0.1M HCl(2×50毫升)洗涤。使有机相以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩，而得所要之产物(33.1克，98％产率)。LC-MS，MS m/z 222(M⁺+H).

步骤2：

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(10.0克，45.2毫摩尔)在THF(150毫升)中之经搅拌溶液内，于-78℃及氮气氛下，逐滴添加t-BuLi(29.2毫升，1.7M，在戊烷中，49.7毫摩尔)。使所形成之红色溶液在此温度下再保持10分钟，然后逐滴添加4-(三氟甲氧基)-苯甲腈(9.49克，49.7毫摩尔)。将褐色溶液于-78℃下搅拌2小时；藉LCMS测试显示反应未完成。因此，于混合物中，添加另外量之4-(三氟甲氧基)-苯甲腈(3.38克，18.1毫摩尔)，并将所形成之混合物再搅拌1小时。然后，使混合物温热至室温，且藉由倒入1.0M HCl水溶液(50毫升)中使反应淬灭。添加EtOAc(100毫升)，并使混合物振荡，且进行相分离。在EtOAc相内发生沉淀物，将其藉过滤分离，并使其干燥(3.0克)。此3.0克经分离之固体系被测定为不纯产物，且放在一旁供稍后纯化。将EtOAc滤液放在一旁。合并含水酸洗液，及以DCM(3×100毫升)萃取。合并DCM萃取液，以盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩。将此残留物与最初EtOAc滤液合并，并使合并之有机物质浓缩成浆液。将固体藉过滤分离，而得所要之产物(8.84克，58.0％产率)。LC-MS，MS m/z 336(M⁺+H).

步骤3：

使得自实施例37步骤2之固体产物(8.84克，26.4毫摩尔)溶于POCl₃(100毫升)中，并将混合物加热至回流，历经3小时。在真空中浓缩混合物，并于所形成之残留物中，添加水(100毫升)与EtOAc(100毫升)。将经迅速搅拌之混合物以固态碳酸氢钠慢慢处理，直到达成pH＝7为止。进行相分离，并将水相以EtOAc(2×40毫升)萃取。合并有机萃取液，且以饱和碳酸氢钠水溶液(40毫升)，接着以盐水(40毫升)洗涤，以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩。将产物(9.21克，98.7％产率)分离而无需层析，为微黄色粘稠油。¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm 3.97(s，3H)7.11(d，J＝2.44Hz，1H)7.26(dd，J＝9.46，2.44Hz，1H)7.31(d，J＝8.85Hz，2H)7.84(s，1H)8.10(d，J＝8.85Hz，2H)8.20(d，J＝9.46Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 354(M⁺+H).

图式2

步骤4：

于Boc-HYP-OH(6.31克，27.3毫摩尔)在DMSO(100毫升)中以机械方式搅拌之溶液内，添加固体叔丁醇钾(8.05克，68.2毫摩尔)。将混合物搅拌1.5小时，并以两份添加实施例37步骤3之产物(20.0克，74.2毫摩尔)，历经15分钟。将所形成之悬浮液在室温下搅拌3小时。然后，将此悬浮液以pH＝4缓冲剂(500毫升)与1.0M HCl(41毫升)之混合物稀释，并以EtOAc(3×150毫升)萃取。合并有机萃取液，且以pH＝4缓冲剂(75毫升)，接着以盐水(50毫升)洗涤。然后，将有机物以1.0M NaOH(30毫升)与水(50毫升)之混合物萃取两次，并将合并之碱性萃取液以EtOAc(30毫升)洗涤。将含水碱性萃取液以1.0M HCl(大约60毫升)处理，直到达成pH＝4为止，接着将所要之产物于EtOAc(3×100毫升)中萃取。合并萃取液，以MgSO₄干燥，及过滤。使滤液在真空中蒸发至干燥，而得泡沫状固体。在藉硅胶柱层析纯化后，分离所要之产物(13.2克，92.7％产率)(分段梯度，DCM，接着40∶1DCM∶MeOH，然后10∶1DCM∶MeOH)，为玻璃态固体。LC-MS，MS m/z 549(M⁺+H).

步骤5：

将实施例37步骤4之产物(12.3克，22.4毫摩尔)、NMM(6.80克，67.3毫摩尔)及环丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-环丙烷羰基)-酰胺HCl盐(6.28克，23.5毫摩尔)在DCM(250毫升)中之混合物以HATU(10.23克，26.9毫摩尔)处理，并将所形成之溶液在室温下搅拌过夜。于真空中移除溶剂，且使残留物溶于EtOAc(700毫升)中，并以pH＝4缓冲剂(4×200毫升)，且以盐水(75毫升)洗涤。使有机物质以MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩。在藉硅胶柱层析纯化后，分离产物(13.5克，79.1％产率)(1∶1己烷∶EtOAc)，为白色玻璃态固体。LC-MS，MS m/z 761(M⁺+H).

步骤6：

于实施例37步骤5之产物(15.0克，19.6毫摩尔)在DCM(50毫升)与1，2-DCE(50毫升)之混合物中之溶液内，添加TFA(100毫升)。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后在真空中浓缩。藉LCMS，残留物系被测定为低于85％纯。使粗产物(15.1克)藉硅胶柱层析纯化(分段梯度，DCM+0.5％TEA，接着50∶1DCM∶MeOH+0.5％TEA，接着40∶1DCM∶MeOH+0.5％TEA)。合并纯产物级份，而得所要之产物(9.13克，54％产率)，其系被测定为具有2.0当量与其结合之TEA。合并已混合之级份，及浓缩，而得5.27克物质，将其放在一旁供以后纯化。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.81-0.91(m，2H)1.02-1.13(m，2H)1.33(t，J＝7.32Hz，18H)1.88(dd，J＝7.63，4.88Hz，1H)2.11(dd，1H)2.48(ddd，J＝14.19，9.31，5.19Hz，1H)2.77(dd，J＝14.34，7.63Hz，1H)2.88(tt，J＝8.24，4.88Hz，1H)3.22(q，J＝7.32Hz，12H)3.66(d，J＝13.12Hz，1H)3.79(dd，J＝12.97，4.43Hz，1H)3.96(s，3H)4.44(dd，J＝9.31，7.78Hz，1H)5.03(dd，J＝10.38，1.83Hz，1H)5.24(dd，J＝17.09，1.83Hz，1H)5.88(ddd，J＝17.17，10.15，9.31Hz，1H)5.99(t，J＝4.73Hz，1H)7.19(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)7.28(d，J＝2.44Hz，1H)7.38(d，J＝8.24Hz，2H)7.82(s，1H)8.19(d，J＝9.16Hz，1H)8.22-8.27(m，2H)；LC-MS，MS m/z 661(M⁺+H).

图式3

步骤7：

将实施例37步骤6之产物(6.00克，6.95毫摩尔)与N-Boc-叔-亮氨酸(1.77克，7.65毫摩尔)及HATU(3.17克，8.34毫摩尔)在DCM(75毫升)中合并，并将所形成之悬浮液以NMM(1.48克，14.6毫摩尔)处理，且将混合物在室温下搅拌3天。使反应混合物在真空中浓缩成残留物，再溶于EtOAc(250毫升)中，并以pH＝4缓冲剂与盐水1∶1之混合物(4×100毫升)洗涤。使合并之有机物质以无水MgSO₄干燥，过滤，及在真空中浓缩成米黄色泡沫物。藉硅胶柱层析纯化(1∶1己烷∶EtOAc)，获得纯产物，为灰白色泡沫物(4.62克，76.1％产率)。LC-MS，MS m/z 874(M⁺+H).

步骤8：

将实施例37步骤7之产物(4.61克，5.28毫摩尔)以1，4-二噁烷(50毫升)与1，4-二噁烷中之4.0M HCl(50毫升)之混合物处理2.5小时，而造成粘性凝胶，静置于烧瓶底部。在真空中浓缩混合物，然后，使所形成之泡沫状固体以DCM(25毫升)再溶解，并将溶液逐滴添加至乙醚(100毫升)与醚中之2.0M HCl(100毫升)之经迅速搅拌混合物中。白色粉末系沉淀，并藉过滤分离，以醚冲洗，及在高真空下干燥。总计回收为3.95克(88.4％产率)白色粉末双HCl盐产物。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.09-1.15(m，2H)1.20(s，9H)1.23-1.32(m，2H)1.46(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.94(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.31(q，J＝8.75Hz，1H)2.42(ddd，J＝13.96，10.15，4.27Hz，1H)2.77(dd，J＝13.89，7.17Hz，1H)2.98(ddd，J＝12.67，8.09，4.88Hz，1H)3.99(s，3H)4.12(s，1H)4.25(dd，1H)4.32(d，1H)4.74(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)5.17(dd，J＝10.68，1.22Hz，1H)5.33(dd，J＝16.94，1.07Hz，1H)5.77(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)6.15(s，1H)7.21(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)7.34(d，J＝2.14Hz，1H)7.40(d，J＝8.24Hz，2H)7.88(s，1H)8.15(d，J＝9.16Hz，1H)8.29(d，J＝8.55Hz，2H)9.25(s，1H)；LC-MS，MS m/z 774(M⁺+H).

步骤9：

于实施例37步骤8之产物(0.271克，0.320毫摩尔)与DIEA(0.083克，0.641毫摩尔)在DCM(5毫升)中之混合物内，添加异硫氰酸3-氯丙酯(0.046克，0.336毫摩尔)。将混合物加热至45℃，历经3小时，然后在室温下留置过夜。将反应混合物以DCM(50毫升)稀释，并以0.1N HCl(3毫升)洗涤。以DCM(25毫升)萃取水层，且将合并之有机层以10％Na₂CO₃水溶液(3毫升)、盐水洗涤，以MgSO₄干燥，及浓缩成黄色泡沫物固体。使产物藉反相制备型HPLC纯化，而得化合物37，为淡黄色双-HCl盐固体。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 1.11(s，9H)，1.15(d，J＝1.8Hz，1H)，1.22-1.29(m，2H)，1.45-1.51(m，1H)，1.78-1.87(m，J＝8.9Hz，1H)，1.91-1.98(m，2H)，2.31(q，J＝8.6Hz，1H)，2.37-2.45(m，1H)，2.70-2.84(m，2H)，2.93-3.01(m，1H)，3.98-4.02(m，J＝1.5Hz，3H)，4.18(d，J＝11.3Hz，1H)，4.28(s，1H)，4.34-4.42(m，1H)，4.71-4.78(m，1H)，5.17(d，J＝10.4Hz，1H)，5.35(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75-5.83(m，1H)，6.15(s，1H)，7.24(d，J＝9.2Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.42(d，J＝7.9Hz，1H)，7.91(s，1H)，8.10(d，J＝9.2Hz，1H)，8.31(dd，J＝8.9，1.8Hz，2H)；LC-MS，MS m/z873(M⁺+H).

化合物38异构体：

3-甲基-N-(6-甲基-2-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-5-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(6-甲基-2-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-5-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例38：化合物38A与38B之制备

化合物38A和38B

化合物38A与38B系经由如关于化合物17之制备所述之类似程序制成，但具有下列例外：于步骤1中，使用3-甲氧基-2-甲基苯甲酸代替4-甲氧基-2-甲基苯甲酸。于步骤2中，以KHMDS置换LDA。且于步骤7中，使用实施例28步骤1之产物代替市购可得之2-(4，6-二甲基吡啶-2-基氨基)-3-甲基丁酸。两种异构化合物系自步骤7分离：自制备型HPLC柱洗脱之第一种异构体为化合物38A，而自制备型HPLC柱洗脱之第二种异构体为化合物38B。

实施例38步骤1之产物：微黄色固体(100％产率)。¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm 2.42(s，3H)2.96(s，12H)3.80(s，3H)6.81(d，J＝7.93Hz，1H)7.11(t，J＝7.93Hz，1H)7.25(d，J＝6.71Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 264(M⁺+H).

实施例38步骤2之产物：黄色固体(89％产率)。¹H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm3.04(s，6H)3.92(s，3H)5.89(s，1H)6.92(d，J＝7.63Hz，1H)7.09(t，J＝7.93Hz，1H)7.82(d，J＝7.93Hz，1H)10.69(s，1H)；LC-MS，MS m/z 219(M⁺+H).

实施例38步骤3之产物：黄色固体(95％产率)。1H NMR(300MHz，氯仿-D)δppm 3.12(s，6H)3.93(s，3H)6.77(d，J＝7.32Hz，1H)6.83(s，1H)7.09(dd，J＝8.42，7.68Hz，1H)7.62(d，J＝8.42Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 237(M⁺+H).

实施例38步骤4之产物：黄色固体(92％产率)。LC-MS，MS m/z 432(M⁺+H).

实施例38步骤5之产物：黄色/绿色固体(73％产率)。LC-MS，MS m/z 644(M⁺+H).

实施例38步骤6之产物：黄色固体(95％产率)。LC-MS，MS m/z 544(M⁺+H).

化合物38A(实施例38步骤7之产物)：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.07-1.14(m，2H)，1.15(s，9H)，1.27(dd，J＝4.6，2.7Hz，2H)，1.43-1.49(m，1H)，1.94(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，2.25-2.36(m，2H)，2.41(s，3H)，2.67(dd，J＝13.9，7.5Hz，2H)，2.95-3.02(m，2H)，3.16(s，6H)，3.18-3.20(m，1H)，3.99(s，3H)，4.10(dd，J＝12.1，3.2Hz，1H)，4.38(d，J＝11.9Hz，1H)，4.50(s，1H)，4.69(dd，J＝10.1，7.3Hz，1H)，5.17(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.34(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.73-5.82(m，1H)，5.98(s，1H)，6.64(dd，J＝9.8，7.3Hz，2H)，6.90(d，J＝6.7Hz，1H)，6.95(t，J＝7.9Hz，1H)，7.30(dd，J＝9.0，7.5Hz，1H)，7.33(d，J＝7.3Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 748(M⁺+H).

化合物38B(实施例38步骤7之产物)：¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 0.98(s，9H)，1.05-1.10(m，2H)，1.15(s，1H)，1.15-1.19(m，1H)，1.23-1.28(m，1H)，1.40(dd，J＝9.6，5.0Hz，1H)，1.91(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，2.31(q，J＝8.7Hz，1H)，2.40-2.47(m，1H)，2.54(s，3H)，2.68(dd，J＝13.9，7.5Hz，2H)，2.89-2.95(m，2H)，3.15(s，6H)，3.18-3.20(m，1H)，3.98(s，3H)，4.21(dd，J＝12.1，3.5Hz，1H)，4.44(d，J＝12.2Hz，1H)，4.65(s，1H)，4.66-4.69(m，1H)，5.16(dd，J＝10.4，1.8Hz，1H)，5.36(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.74-5.83(m，1H)，6.02(s，1H)，6.84(d，J＝7.3Hz，1H)，6.94(d，J＝7.3Hz，1H)，7.04-7.09(m，2H)，7.47(dd，J＝8.2，0.9Hz，1H)，7.96(dd，J＝9.2，7.3Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 748(M⁺+H).

化合物200异构体：

N-(3-氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例200：化合物200A与200B之制备

化合物200A和200B

图式1

步骤1：

于3-氟苯胺(160毫克，1.299毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(220毫克，1.690毫摩尔)在100毫升圆底烧瓶(RBF)中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5x氰基三氢硼酸钠(136毫克，2.16毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液。藉由离心机移除白色沉淀物，将有机残留物于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥。在高真空下蒸干(20-40微米汞柱)，在室温下获得白色泡沫物，将其使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 226(M⁺+H).

步骤2：

于2-(3-氟苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.20克，0.888毫摩尔，得自实施例200步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.10克，0.187毫摩尔，得自实施例22步骤5)在THF(4毫升)中之黄色溶液，在0℃下，添加HATU(0.175克，0.46毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(400微升，过量)。于添加碱后，形成淡黄色溶液，将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，及浓缩，并使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS(对[M+H]⁺之m/z 226)之两种个别产物。化合物200A(0.022克，16％产率，并非最佳化)为藉反相制备型HPLC洗脱出之两种异构体之第一个。化合物200B(0.010克，7％产率，并非最佳化)为藉反相制备型HPLC被洗脱出之两种异构体之第二个。

化合物200A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.12(s，9H)，1.26-1.31(m，2H)，1.39(dd，J＝6.71，4.27Hz，2H)，1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.90(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.19-2.32(m，2H)，2.55(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.93-3.03(m，1H)，3.69-3.78(m，1H)，4.04(s，3H)，4.05(dd，J＝8.85，3.35Hz，1H)，4.31(d，J＝12.21Hz，1H)，4.55(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，5.14(d，J＝10.38Hz，1H)，5.32(d，J＝17.09Hz，1H)，5.71-5.83(m，2H)，5.89-5.98(m，1H)，6.21(dd，J＝8.09，1.98Hz，1H)，6.25-6.32(m，1H)，6.42-6.50(m，1H)，7.57(s，1H)，7.70(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.83(d，J＝1.83Hz，1H)，8.11(d，J＝8.85Hz，1H)，9.19(br.s，1H)；LC-MS，MS m/z743[M+H]⁺.

化合物200B：LC-MS，MS m/z 743[M+H]⁺.

化合物201异构体：

N-(3-甲氧苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

N-(3-甲氧苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例201：化合物201A与201B之制备

化合物201A和201B

图式1

步骤1：

于3-甲氧基苯胺(160毫克，1.299毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(220毫克，1.690毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5x氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥，而得白色泡沫物。将此物质带至下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 238(M⁺+H).

步骤2：

于2-(3-甲氧苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.045克，0.189毫摩尔，实施例201步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，然后以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物201A(0.045克，32％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物201B(0.024克，16.2％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物201A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.03-1.14(m，11H)1.21-1.32(m，2H)1.41(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.87(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.16-2.26(m，2H)2.48(dd，J＝13.60，6.80Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.78，8.12，4.78Hz，1H)3.95-4.07(m，5H)4.48(dd，J＝10.58，7.05Hz，1H)5.11(d，J＝10.32Hz，1H)5.29(d，J＝17.12Hz，1H)5.65-5.73(m，2H)5.73-5.79(m，1H)6.15-6.21(m，1H)6.27(d，J＝2.01Hz，1H)6.36-6.42(m，1H)7.50(s，1H)7.68(d，J＝9.06Hz，1H)7.74(s，1H)8.08(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 753(M⁺+H).

化合物201B：LC-MS，MS m/z 753(M⁺+H).

化合物202异构体：

3-甲基-N-(3-(甲基氨基甲酰基)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(3-(甲基氨基甲酰基)苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例202：化合物202A与202B之制备

化合物202A和202B

图式1

步骤1：

于3-氨基-N-甲基苯甲酰胺(230毫克，1.532毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(199毫克，1.532毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)，混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，藉由离心机移除白色沉淀物，将有机物质于醋酸乙酯中萃取，以Na₂SO₄干燥。蒸发至干燥，获得白色泡沫物，并使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z265(M⁺+H).

步骤2：

于(S)-3，3-二甲基-2-(3-(甲基氨基甲酰基)苯基氨基)丁酸(0.050克，0.189毫摩尔，实施例202步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，然后浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物202A(0.061克，41％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物202B(0.015克，10.2％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物202A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.02-1.13(m，11H)1.20-1.30(m，2H)1.42(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.87(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.14-2.25(m，2H)2.47(dd，J＝13.72，6.92Hz，1H)2.77(s，3H)2.95(ddd，J＝12.65，7.99，4.78Hz，1H)3.94(dd，J＝12.21，3.15Hz，1H)3.98(s，4H)4.22(d，J＝12.09Hz，1H)4.51(dd，J＝10.32，7.05Hz，1H)5.11(d，J＝10.32Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.69-5.79(m，2H)6.63-6.73(m，3H)7.01(s，1H)7.48(s，1H)7.64(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.71(d，J＝2.01Hz，1H)8.05(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 781(M⁺+H).

化合物202B：LC-MS，MS m/z 781(M⁺+H).

化合物203异构体：

N-(3-氰基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-氰基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例203：化合物203A与203B之制备

化合物203A和203B

图式1

步骤1：

于3-氨基苯甲腈(180毫克，1.524毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(198毫克，1.524毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，藉由离心机移除白色沉淀物，将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥。获得黄色油，并使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 233(M⁺+H).

步骤2：

于(S)-2-(3-氰基苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.044克，0.189毫摩尔，实施例203步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，然后以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物203A(0.025克，17.7％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物203B(0.014克，10.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物203A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.07(s，11H)1.19-1.31(m，2H)1.41(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.87(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.17-2.26(m，2H)2.51(dd，J＝13.60，6.80Hz，1H)2.88-2.98(m，1H)3.95-4.02(m，4H)4.02-4.05(s，1H)4.21(d，J＝12.09Hz，1H)4.53(dd，J＝10.32，7.05Hz，1H)5.11(d，J＝10.32Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.68-5.78(m，2H)6.46(d，J＝7.30Hz，1H)6.57(t，J＝7.93Hz，1H)6.63-6.68(m，1H)6.86(s，1H)7.50(s，1H)7.64(dd，J＝8.94，1.38Hz，1H)7.69(s，1H)8.05(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 749(M⁺+H).

化合物203B：LC-MS，MS m/z 749(M⁺+H).

化合物204异构体：

N-(4-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

N-(4-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例204：化合物204A与204B之制备

化合物204A和204B

图式1

步骤1：

于4-氨基苯甲酸叔丁酯(230毫克，1.190毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(155毫克，1.190毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥。获得黄色油，并使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 308(M⁺+H).

步骤2：

于(S)-2-(4-(叔丁氧羰基)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.058克，0.189毫摩尔，实施例204步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物204A(0.024克，15.4％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物204B(0.020克，12.8％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物204A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.02-1.11(m，11H)1.19-1.30(m，2H)1.41(dd，J＝9.19，5.41Hz，1H)1.46-1.54(s，9H)1.86(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.17-2.27(m，2H)2.54(dd，J＝13.60，6.80Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.65，7.99，4.78Hz，1H)3.96-4.04(m，4H)4.12(s，1H)4.37(d，J＝12.09，1H)4.55(dd，J＝10.07，7.30Hz，1H)5.10(d，J＝10.58Hz，1H)5.28(d，J＝17.58Hz，1H)5.75(m，1H)5.78(s，1H)6.42(d，J＝8.81Hz，2H)7.28(d，J＝8.56Hz，2H)7.52(s，1H)7.59(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.75(d，J＝1.76Hz，1H)8.03(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z824(M⁺+H).

化合物204B：LC-MS，MS m/z 824(M⁺+H).

化合物205异构体：

N-(4-氰基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(4-氰基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例205：化合物205A与205B之制备

化合物205A和205B

图式1

步骤1：

于4-氨基苯甲腈(180毫克，1.524毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(198毫克，1.524毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥。获得黄色油，并使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 233(M⁺+H).

步骤2：

于2-(4-氰基苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.044克，0.189毫摩尔，实施例205步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，及浓缩，并使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物205A(0.052克，37％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物205B(0.013克，9％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物205A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 0.99-1.09(m，11H)1.17-1.26(m，2H)1.35-1.45(m，1H)1.87(dd，J＝8.06，5.29Hz，1H)2.17-2.28(m，2H)2.56(dd，J＝13.85，7.05Hz，1H)2.94(ddd，J＝12.84，8.06，4.78Hz，1H)3.95-4.04(m，4H)4.08(s，1H)4.28-4.37(m，1H)4.56(dd，J＝10.32，7.05Hz，1H)5.05-5.13(m，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.66-5.75(m，1H)5.78(s，1H)6.44(d，J＝8.81Hz，2H)6.80(d，J＝8.56Hz，2H)7.46-7.54(s，1H)7.63-7.73(m，1H)7.74-7.81(s，1H)8.02-8.10(m，1H)；LC-MS，MS m/z 749(M⁺+H).

化合物205B：LC-MS，MS m/z 749(M⁺+H).

化合物206异构体：

N-(3-(叔丁基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-(叔丁基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例206：化合物206A与206B之制备

化合物206A和206B

图式1

步骤1：

于3-氨基-N-叔丁基苯磺酰胺(180毫克，0.788毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(308毫克，2.365毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥。获得黄色油，并使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 343(M⁺+H).

步骤2：

于2-(3-(N-叔丁基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.065克，0.189毫摩尔，实施例206步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物206A(0.025克，15.4％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物206B (0.013克，8％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物206A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 0.97-1.06(m，9H)1.06-1.18(m，11H)1.18-1.29(m，2H)1.36-1.46(m，1H)1.86(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.18-2.29(m，2H)2.55(m，1H)2.95(ddd，J＝12.84，8.06，4.78Hz，1H)3.95-4.01(s，3H)4.02-4.12(m，2H)4.26(d，J＝12.09Hz，1H)4.51(dd，J＝10.07，7.05Hz，1H)5.10(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.24-5.32(m，1H)5.73(m，2H)6.52(m，1H)6.62(m，1H)6.86(m，1H)7.15(d，J＝2.01Hz，1H)7.50-7.56(s，1H)7.62-7.70(m，1H)7.83(s，1H)8.01-8.09(m，1H)；LC-MS，MS m/z 859(M⁺+H).

化合物206B：LC-MS，MS m/z 859(M⁺+H).

化合物207异构体：

3-甲基-N-(3-氨磺酰苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(3-氨磺酰苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例207：化合物207A与207B之制备

化合物207A和207B

于25℃下，使(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(N-叔丁基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(化合物206A)溶于1毫升2，2，2-三氟醋酸中。将混合物搅拌过夜。移除TFA，并使残留物藉制备型HPLC纯化。如此获得化合物207A，为白色粉末(0.012克，64％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.05-1.14(m，11H)1.19-1.29(m，2H)1.41(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.87(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.17-2.26(m，2H)2.52(dd，J＝13.85，7.05Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.78，8.12，4.78Hz，1H)3.96-4.02(s，3H)4.02-4.10(m，2H)4.30(d，J＝12.09Hz，1H)4.52(dd，J＝10.07，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.24-5.32(m，1H)5.69-5.79(m，2H)6.49-6.55(m，1H)6.60(t，J＝7.81Hz，1H)6.87(d，J＝7.55Hz，1H)7.16(s，1H)7.51-7.55(s，1H)7.67(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.85(d，J＝2.01Hz，1H)8.07(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 803(M⁺+H).

化合物207B系经由如用于化合物207A制备之相同程序，制自化合物206B。LC-MS，MS m/z 803(M⁺+H).

化合物208异构体：

N-(2，3-二氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(2，3-二氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例208：化合物208A与208B之制备

化合物208A和208B

图式1

步骤1：

于2，3-二氟苯胺(180毫克，1.394毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(500毫克，3.84毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥。获得黄色油，并使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z244(M⁺+H).

步骤2：

于2-(2，3-二氟苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.046克，0.189毫摩尔，实施例208步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂C1₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并将有机物质以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS时观察，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物208A(0.026克，18.4％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物208B(0.012克，9％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物208A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.03-1.12(m，11H)1.21-1.26(m，2H)1.41(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.86(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.17-2.28(m，2H)2.53(dd，J＝13.60，7.05Hz，1H)2.94(ddd，J＝12.72，8.06，4.66Hz，1H)3.96-4.02(m，4H)4.02-4.07(s，1H)4.27(d，J＝12.09Hz，1H)4.53(dd，J＝10.45，7.18Hz，1H)5.10(d，J＝10.32Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.68-5.75(m，1H)5.77(s，1H)6.02-6.10(m，2H)6.21-6.28(m，1H)7.55(s，1H)7.68(dd，J＝8.81，2.01Hz，1H)7.76(d，J＝2.01Hz，1H)8.09(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 760(M⁺+H).

化合物208B：LC-MS，MS m/z 760(M⁺+H).

化合物209异构体：

N-(4-羧基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

N-(4-羧基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例209：化合物209A与209B之制备

化合物209A和209B

于25℃下，使4-((S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基)苯甲酸叔丁酯(20毫克，0.024毫摩尔，化合物204A)溶于CH₂Cl₂(2毫升)中。逐滴添加TFA(0.019毫升，0.243毫摩尔)。将混合物搅拌过夜。移除TFA，并使残留物藉制备型HPLC纯化。如此获得化合物209A，为白色粉末(0.018克，95％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.05-1.14(m，11H)1.18-1.29(m，2H)1.42(dd，J＝9.32，5.29Hz，1H)1.87(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.19-2.28(m，2H)2.55(dd，J＝13.72，7.18Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.78，8.12，4.78Hz，1H)3.96-4.03(m，4H)4.06-4.10(s，1H)4.36(d，J＝12.34Hz，1H)4.58(dd，J＝10.32，7.05Hz，1H)5.07-5.15(m，1H)5.29(d，J＝17.12Hz，1H)5.68-5.78(m，2H)6.38(d，J＝8.81Hz，2H)7.22(d，J＝8.81Hz，2H)7.51(s，1H)7.61(dd，J＝8.81，2.27Hz，1H)7.79(d，J＝2.01Hz，1H)8.04(d，J＝9.06Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 768(M⁺+H).

化合物209B系经由如用于化合物209A制备之相同程序，制自化合物204B。LC-MS，MS m/z 768(M⁺+H).

化合物210异构体：

N-(3-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

N-(3-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例210：化合物210A与210B之制备

化合物210A和210B

图式1

步骤1：

于3-氨基-N-叔丁基苯磺酰胺(180毫克，0.788毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(308毫克，2.365毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，及藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥。获得黄色油，并使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 308(M⁺+H).

步骤2：

于2-(3-(N-叔丁基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.065克，0.189毫摩尔，实施例210步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物210A(0.021克，13.5％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物210B(0.020克，13.3％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物210A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.04-1.14(m，11H)1.19-1.31(m，2H)1.38-1.48(m，9H)1.50-1.60(m，1H))1.86(m，1H)2.15-2.24(m，2H)2.47(m，1H)2.94(m，1H)3.92-4.04(m，4H)4.11(s，1H)4.18(m，1H)4.46(m，1H)5.06-5.15(m，1H)5.29(m，1H)5.67-5.77(m，2H)6.54(m，1H)6.75(ddd，J＝19.83，7.62，2.01Hz，1H)6.89(m，1H)7.31(s，1H)7.49(s，1H)7.59-7.68(m，2H)8.04(t，J＝8.44Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 824(M⁺+H).

化合物210B：LC-MS，MS m/z 824(M⁺+H).

化合物211异构体：

N-(3-羧基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-羧基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例211：化合物211A与211B之制备

化合物211A和211B

于25℃下，使3-((S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基)苯甲酸叔丁酯(20毫克，0.024毫摩尔，化合物210A)溶于CH₂Cl₂(2毫升)中。逐滴添加TFA(0.019毫升，0.243毫摩尔)。将混合物搅拌过夜。移除TFA，并使残留物藉制备型HPLC纯化。获得化合物211A，为白色粉末(0.005克，26.8％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.04-1.14(m，11H)1.19-1.30(m，2H)1.38-1.46(m，1H)1.86(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.21(ddd，J＝13.91，9.76，3.78Hz，2H)2.48(dd，J＝13.72，6.92Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.84，8.06，4.78Hz，1H)3.94-4.02(m，5H)4.15(d，J＝12.09Hz，1H)4.46-4.56(m，1H)5.10(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.28(dd，J＝17.25，1.39Hz，1H)5.68-5.78(m，2H)6.48-6.56(m，1H)6.63(dd，J＝7.81，2.01Hz，1H)6.84(d，J＝7.81Hz，1H)7.17-7.28(m，1H)7.42-7.49(m，1H)7.62(td，J＝8.56，2.01Hz，2H)7.97-8.05(m，1H)；LC-MS，MS m/z768(M⁺+H).

化合物211B系经由如用于化合物211A制备之相同程序，制自化合物210B。LC-MS，MS m/z 768(M⁺+H).

化合物212异构体：

N-(3-(叔丁基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-(叔丁基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例212：化合物212A与212B之制备

化合物212A和212B

于3-((S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基)苯甲酸(60毫克，0.078毫摩尔，化合物211A)与2-甲基丙-2-胺(11.42毫克，0.156毫摩尔)在二氯甲烷中之溶液内，在0℃下，添加HATU(59.4毫克，0.156毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(25.2毫克，0.195毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌两小时。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，及浓缩。获得黄色油。藉制备型HPLC纯化，获得化合物212A，为白色粉末(0.036克，56％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.04-1.14(m，11H)1.23-1.34(m，11H)1.41(ddd，J＝14.73，5.29，5.16Hz，1H)1.86(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.16-2.25(m，2H)2.48(dd，J＝13.72，6.92Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.84，8.06，4.78Hz，1H)3.97-4.00(m，3H)4.02-4.11(m，2H)4.26(d，J＝12.34Hz，1H)4.46(dd，J＝10.20，6.92Hz，1H)5.10(dd，J＝10.20，1.64Hz，1H)5.23-5.31(m，1H)5.68-5.78(m，2H)6.51-6.60(m，2H)6.69-6.78(m，1H)7.09(d，J＝2.01Hz，1H)7.50-7.55(m，1H)7.63-7.73(m，2H)8.07(d，J＝9.06Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 823(M⁺+H).

化合物212B系经由用于化合物212A制备之相同程序，制自化合物211B。LC-MS，MS m/z 768(M⁺+H).

化合物213异构体：

3-甲基-N-苯基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-苯基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例213：化合物213A与213B之制备

化合物213A和213B

图式1

步骤1：

于苯胺(180毫克，1.94毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(500毫克，3.84毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，及藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥。获得黄色油，并使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z208(M⁺+H).

步骤2：

于2-苯基氨基-3，3-二甲基丁酸(0.039克，0.189毫摩尔，实施例213步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物213A(0.0032克，2.3％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物213B(0.0035克，2.3％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物213A：¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.01-1.10(m，2H)1.11-1.21(m，9H)1.21-1.32(m，2H)1.35-1.46(m，1H)1.87(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.16-2.26(m，2H)2.49(dd，J＝13.85，6.80Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.84，8.06，4.78Hz，1H)3.94-4.02(m，4H)4.04-4.10(m，2H)4.46(dd，J＝10.70，6.92Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.29(dd，J＝17.12，1.26Hz，1H)5.67-5.78(m，2H)6.23(t，J＝7.30Hz，1H)6.58-6.63(m，2H)6.65-6.70(m，1H)7.49-7.56(m，1H)7.67-7.76(m，2H)8.11(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 724(M⁺+H).

化合物213B：LC-MS，MS m/z 724(M⁺+H).

化合物214异构体：

N-(4-(叔丁基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(4-(叔丁基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例214：化合物214A与214B之制备

化合物214A和214B

图式1

步骤1：

于CH₂Cl₂(20毫升)中之4-硝基苯-1-磺酰氯(500毫克，2.256毫摩尔)内，在0-25℃下，添加2-甲基丙-2-胺(825毫克，11.28毫摩尔)。将混合物搅拌度过周末。形成淡褐色悬浮液。LC-MS，MS m/z 208(M⁺+H)。显示反应已完成。以醋酸乙酯(20毫升)稀释反应混合物，以水、盐水洗涤。使有机层干燥，及浓缩至干燥。将残留物使用于下一步骤，无需进一步纯化。

步骤2：

使得自步骤1之N-叔丁基-4-硝基苯磺酰胺(500毫克，1.936毫摩尔)溶于甲醇(30毫升)中。于氮气下添加Pd-C。将烧瓶以氢气加压至40PSI，并于帕尔装置(Parrapparatus)上振荡过夜。滤出Pd-C，蒸发溶剂至干燥。将残留物直接使用于下一步骤中，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 229(M⁺+H).

步骤3

于4-氨基-N-叔丁基苯磺酰胺(180毫克，0.788毫摩尔，得自步骤2)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(308毫克，2.4毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，及藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发至干燥。获得黄色油，并直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 343(M⁺+H).

步骤4：

于2-(4-(N-叔丁基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.066克，0.189毫摩尔，实施例214步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物214A(0.021克，13.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物214B(0.0022克，13.5.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物214A：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 0.98-1.06(m，9H)1.08-1.16(m，12H)1.27-1.36(m，2H)1.46(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.91(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)2.24-2.33(m，2H)2.60(d，J＝6.10Hz，1H)2.96-3.01(m，1H)4.03(s，3H)4.09-4.13(m，2H)4.47(d，J＝11.90Hz，1H)4.63(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)5.15(d，J＝10.38Hz，1H)5.30-5.35(m，1H)5.74-5.80(m，2H)6.52(d，J＝8.85Hz，2H)7.16(d，J＝8.85Hz，2H)7.60(s，1H)7.71(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)7.98(d，J＝1.83Hz，1H)8.14(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 859(M⁺+H).

化合物214B：LC-MS，MS m/z 859(M⁺+H).

化合物215异构体：

3-甲基-N-(4-氨磺酰苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(4-氨磺酰苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例215：化合物215A与215B之制备

化合物215A和215B

于25℃下，使(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(N-叔丁基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(20毫克，0.024毫摩尔，化合物214A)溶于TFA(2毫升)中。将混合物搅拌过夜。移除TFA，并使残留物藉制备型HPLC纯化。如此获得化合物215A，为白色粉末(0.013克，69.5％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ)1.01-1.13(m，11H)1.27-1.37(m，2H)1.40-1.44(m，1H)1.87(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.20-2.28(m，2H)2.57(dd，J＝13.72，7.18Hz，1H)2.92-2.98(m，1H)3.98-4.06(m，4H)4.09(s，1H)4.37(d，J＝12.09Hz，1H)4.58(dd，J＝10.07，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.32(m，1H)5.69-5.78(m，2H)6.48-6.53(m，2H)7.19-7.26(m，2H)7.53-7.56(s，41H)7.65(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.90(d，J＝2.01Hz，1H)8.07(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 803(M⁺+H).

化合物215B系经由如用于化合物215A制备之相同程序，制自化合物214B。LC-MS，MS m/z 803(M⁺+H).

化合物216异构体：

3-甲基-N-(3-((1-甲基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(3-((1-甲基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例216：化合物216A与216B之制备

化合物216A和216B

于3-((S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基)苯甲酸(60毫克，0.078毫摩尔，化合物211A)与2-苯基丙-2-胺(21.12毫克，0.156毫摩尔)在二氯甲烷中之溶液内，在0℃下，添加HATU(59.4毫克，0.156毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(25.2毫克，0.195毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌两小时。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，及浓缩成黄色油。通过制备型HPLC纯化，获得化合物216A，为白色粉末(0.056克，81％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.03-1.13(m，11H)1.19-1.30(m，2H)1.41(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.63(d，J＝5.79Hz，6H)1.85(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.16-2.25(m，2H)2.49(dd，J＝13.72，6.92Hz，1H)2.91-2.98(m，1H)3.99(s，3H)4.06(dd，J＝12.09，3.53Hz，1H)4.10(s，1H)4.30(d，J＝12.09Hz，1H)4.46(dd，J＝10.07，7.05Hz，1H)5.10(dd，J＝10.45，1.64Hz，1H)5.25-5.29(dd，J＝17.12，J＝1.51Hz，1H)5.68-5.79(m，2H)6.52-6.59(m，2H)6.82(dd，J＝6.42，1.89Hz，1H)7.10-7.13(m，2H)7.17-7.23(m，2H)7.29-7.34(m，2H)7.54(s，1H)7.67(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.74(d，J＝2.01Hz，1H)8.09(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 886(M⁺+H).

化合物216B系经由如用于化合物216A制备之相同程序，制自化合物211B。LC-MS，MS m/z 886(M⁺+H).

化合物217异构体：

N-(3-氨基甲酰基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-氨基甲酰基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例217：化合物217A与217B之制备

化合物217A和217B

于25℃下，使(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-(3-(2-苯基丙-2-基氨基甲酰基)苯基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(50毫克，0.056毫摩尔，化合物216A)溶于1毫升2，2，2-三氟醋酸中。将所形成之溶液搅拌过夜。移除TFA，并使残留物藉制备型HPLC纯化，而得化合物217A，为白色粉末(0.023克，46％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.03-1.12(m，11H)1.19-1.30(m，2H)1.42(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.87(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.16-2.26(m，2H)2.49(dd，J＝13.72，6.92Hz，1H)2.92-2.99(m，1H)3.96-4.05(m，5H)4.20(t，J＝11.83Hz，1H)4.51(dd，J＝10.58，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.76Hz，1H)5.29(dd，J＝17.25，1.39Hz，1H)5.69-5.79(m，2H)6.56-6.66(m，2H)6.76(d，J＝7.55Hz，1H)7.11(d，J＝1.76Hz，1H)7.47-7.52(s，1H)7.66(dd，J＝8.81，2.27Hz，1H)7.74(d，J＝1.76Hz，1H)8.07(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 767(M⁺+H).

化合物217B系经由如用于化合物217A制备之相同程序，制自化合物216B。LC-MS，MS m/z 767(M⁺+H).

化合物218异构体：

N-(3-(二甲基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-(二甲基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例218：化合物218A与218B之制备

化合物218A和218B

于3-((S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基)苯甲酸(60毫克，0.078毫摩尔，化合物211A)与二甲胺盐酸盐(12.6毫克，0.156毫摩尔)在二氯甲烷中之溶液内，在0℃下，添加HATU(59.4毫克，0.156毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(25.2毫克，0.195毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌两小时。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，及浓缩成黄色油。藉制备型HPLC纯化，获得化合物218A，为白色粉末(0.035克，58％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.03-1.13(m，11H)1.16-1.28(m，2H)1.38-1.45(m，1H)1.86(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.18-2.27(m，2H)2.51(dd，J＝13.72，6.92Hz，1H)2.77-2.87(m，3H)2.91-3.00(m，4H)3.96-4.07(m，5H)4.23(d，J＝12.34Hz，1H)4.48(dd，J＝10.32，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.28(dd，J＝17.12，1.51Hz，1H)5.69-5.79(m，2H)6.30-6.36(m，1H)6.47-6.54(m，2H)6.76(d，J＝1.26Hz，1H)7.52-7.56(m，1H)7.68(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.81(d，J＝2.01Hz，1H)8.04-8.11(m，1H)；LC-MS，MS m/z 795(M⁺+H).

化合物218B系经由如用于化合物218A制备之相同程序，制自化合物211B。LC-MS，MS m/z 795(M⁺+H).

化合物219异构体：

N-(3-(二甲基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-(二甲基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例219：化合物219A与219B之制备

化合物219A和219B

图式1

步骤1：

于3-氨基-N，N-二甲苯磺酰胺(203毫克，1.014毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(264毫克，2.027毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加醋酸(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约120分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以甲醇(2毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将30毫升水添加至混合物中，然后，将其以10毫升醋酸乙酯萃取(调整pH至4)。接着，将有机物质藉由在pH＝8下之碳酸氢钠洗涤。使有机层以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩。使油状残留物在高真空下干燥。获得黄色油，并直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 315(M⁺+H).

步骤2：

于2-(3-(N，N-二甲基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(59.4毫克，0.189毫摩尔，实施例219步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.150克，0.28毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物219A(0.062克，39.5％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物219B(0.038克，24.2％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物219A.¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.02-1.12(m，9H)1.17-1.20(m，2H)1.22-1.29(m，2H)1.32-1.44(m，1H)1.87(dt，J＝8.25，5.57Hz，1H)2.16-2.28(m，2H)2.46-2.57(m，7H)2.90-2.98(m，1H)3.96-4.00(s，3H)4.03-4.10(m，2H)4.30(t，J＝11.96Hz，1H)4.47-4.58(m，1H)5.10(dd，J＝10.32，1.76Hz，1H)5.29(ddd，J＝17.12，7.93，1.39Hz，1H)5.68-5.79(m，2H)6.55-6.67(m，3H)7.02(s，1H)7.50-7.55(m，1H)7.63-7.69(m，1H)7.81(d，J＝2.01Hz，1H)8.02-8.09(m，1H)；LC-MS，MSm/z 831(M⁺+H).

化合物219B：LC-MS，MS m/z 831(M⁺+H).

化合物220异构体：

N-(3，4-二氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3，4-二氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例220：化合物220A与220B之制备

化合物220A和220B

图式1

步骤1：

于3，4-二氟苯胺(180毫克，1.394毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(500毫克，3.84毫摩尔)在25毫升RBF中之混合物内，在室温下，添加2毫升醋酸。使溶液温热至75℃，历经约120分钟。将溶液在室温下以甲醇(2毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将30毫升水添加至混合物中，然后，将其以10毫升醋酸乙酯萃取(调整pH至4)。将有机物质以在pH＝8下之碳酸氢钠洗涤，使有机层以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩。使所形成之油状残留物在高真空下干燥。如此获得黄色油，并直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 244(M⁺+H).

步骤2：

于2-(3，4-二氟苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.046克，0.189毫摩尔，实施例208步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物220A(0.033克，23.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物220B(0.026克，19％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物220A：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm 1.07-1.16(m，11H)1.23-1.31(m，2H)1.41-1.49(m，1H)1.90(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.21-2.29(m，2H)2.55(dd，J＝13.58，6.56Hz，2H)2.92-3.00(m，1H)3.88-3.95(s，1H)3.97-4.04(m，4H)4.27(d，J＝12.21Hz，1H)4.57(dd，J＝10.53，7.17Hz，1H)5.14(d，J＝10.38Hz，1H)5.32(d，J＝17.40Hz，1H)5.73-5.81(m，2H)6.15(d，J＝8.85Hz，1H)6.26-6.34(m，1H)6.44(ddd，J＝13.12，6.71，2.75Hz，1H)7.55(s，1H)7.66-7.73(m，1H)7.80(d，J＝2.14Hz，1H)8.07-8.14(m，1H)；LC-MS，MS m/z 760(M⁺+H).

化合物220B：LC-MS，MS m/z 760(M⁺+H).

化合物221异构体：

N-(4-(二甲基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(4-(二甲基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例221：化合物221A与221B之制备

化合物221A和221B

于4-((S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基)苯甲酸(20毫克，0.026毫摩尔，化合物209A)与二甲胺盐酸盐(4.2毫克，0.052毫摩尔)在二氯甲烷中之溶液内，在0℃下，添加HATU(20毫克，0.052毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(8.4毫克，0.065毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌两小时。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，及浓缩成黄色油。藉制备型HPLC纯化，获得化合物221A，为白色粉末(0.04克，19％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.02-1.13(m，11H)1.20-1.33(m，2H)1.41(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.86(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.18-2.30(m，2H)2.57(dd，J＝13.72，7.18Hz，1H)2.77-2.89(s，3H)2.89-3.00(m，4H)3.99-4.09(m，5H)4.48(d，J＝12.84Hz，1H)4.55(dd，J＝10.58，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.28(dd，J＝17.12，1.26Hz，1H)5.68-5.80(m，2H)6.41(d，J＝8.81Hz，2H)6.66(d，J＝8.81Hz，2H)7.61(s，1H)7.69(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.92(d，J＝2.01Hz，1H)8.12(d，J＝9.07Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 795(M⁺+H).

化合物221B系经由如用于化合物221A制备之相同程序，制自化合物209B。LC-MS，MS m/z 795(M⁺+H).

化合物222异构体：

3-甲基-N-(4-((1-甲基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(4-((1-甲基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例222：化合物222A与222B之制备

化合物222A和222B

于4-((S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基)苯甲酸(60毫克，0.078毫摩尔，化合物209A)与2-苯基丙烷-2-胺(10.56毫克，0.078毫摩尔)在二氯甲烷中之溶液内，在0℃下，添加HATU(60毫克，0.156毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(25毫克，0.21毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌两小时。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物。并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，及浓缩成黄色油。藉制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。

化合物222A：白色粉末(0.01克，14.6％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm1.03-1.12(m，11H)1.20-1.26(m，2H)1.41(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.70(d，J＝3.02Hz，6H)1.87(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.18-2.27(m，2H)2.54(dd，J＝13.72，6.92Hz，1H)2.92-2.98(m，1H)3.95-4.06(m，4H)4.11(s，1H)4.38(d，J＝12.09Hz，1H)4.55(dd，J＝10.07，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.45，1.64Hz，1H)5.26-5.30(dd，J＝17.12，J＝1.26Hz，1H))5.69-5.80(m，2H)6.49(d，J＝8.81Hz，2H)7.12-7.17(m，1H)7.22-7.28(m，3H)7.33-7.40(m，2H)7.54(s，1H)7.60(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.83(d，J＝2.27Hz，1H)8.04(d，J＝9.06Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 886(M⁺+H).

化合物222B：LC-MS，MS m/z 886(M⁺+H).

化合物223异构体：

N-(4-(乙基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(4-(乙基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例223：化合物223A与223B之制备

化合物223A和223B

图式1

步骤1

于4-氨基-N-乙苯磺酰胺(203毫克，1.014毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(264毫克，2.027毫摩尔)在25毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加醋酸(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约120分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以甲醇(2毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将30毫升水添加至混合物中，然后，将其以10毫升醋酸乙酯萃取(调整pH至4)。将有机物质以在pH＝8下之碳酸氢钠洗涤，使有机层以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩成油状残留物，使其在高真空下干燥。如此获得黄色油，直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 315(M⁺+H).

步骤2：

于2-(4-(N-乙基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.059克，0.189毫摩尔，实施例223步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物223A(0.033克，21.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物223B(0.024克，15.3.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物223A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 0.92(t，J＝7.30Hz，3H)1.02-1.11(m，11H)1.19-1.29(m，2H)1.42(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.87(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.20-2.29(m，2H)2.54-2.64(m，3H)2.95(ddd，J＝12.84，8.06，4.78Hz，1H)3.96-4.01(s，3H)4.01-4.09(m，2H)4.45(d，J＝12.09Hz，1H)4.59(dd，J＝10.07，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.76Hz，1H)5.29(dd，J＝17.25，1.39Hz，1H)5.68-5.78(m，2H)6.45-6.50(m，2H)7.04-7.09(m，2H)7.55(s，1H)7.65(dd，J＝8.81，2.27Hz，1H)7.90(d，J＝1.76Hz，1H)8.08(d，J＝9.06Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 831(M⁺+H).

化合物223B：LC-MS，MS m/z 831(M⁺+H).

化合物224异构体：

N-(4-(二甲基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(4-(二甲基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例224：化合物224A与224B之制备

化合物224A和224B

图式1

步骤1

于4-氨基-N-乙苯磺酰胺(203毫克，1.014毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(264毫克，2.027毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，添加2毫升醋酸。使溶液温热至75℃，历经约120分钟。将溶液在室温下以甲醇(2毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将30毫升水添加至混合物中，然后，将其以10毫升醋酸乙酯萃取(调整pH至4)。将有机物质以在pH＝8下之碳酸氢钠洗涤，使有机层以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩成黄色油，使其在高真空下干燥。将此物质直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 315(M⁺+H).

步骤2：

于2-(4-(N，N-二甲基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.059克，0.189毫摩尔，实施例224步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物224A(0.020克，13.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物224B(0.014克，9.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物224A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.03-1.12(m，11H)1.22-1.26(m，2H)1.42(dd，J＝9.32，5.54Hz，1H)1.88(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.20-2.31(m，2H)2.35-2.40(m，6H)2.53-2.64(m，1H)2.91-3.00(m，1H)3.95-4.00(s，3H)4.03-4.09(m，2H)4.51(d，J＝12.09Hz，1H)4.57-4.67(m，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.29(dd，J＝17.12，1.26Hz，1H)5.68-5.79(m，2H)6.47(d，J＝9.06Hz，2H)6.93(d，J＝8.81Hz，2H)7.53-7.57(s，1H)7.63-7.69(m，1H)7.91(d，J＝2.01Hz，1H)8.03-8.12(m，1H)；LC-MS，MS m/z 831(M⁺+H).

化合物224B：LC-MS，MS m/z 831(M⁺+H).

化合物226异构体：

N-(4-氨基甲酰基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(4-氨基甲酰基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例226：化合物226A与226B之制备

化合物226A和226B

于25℃下，使(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-(4-(2-苯基丙-2-基氨基甲酰基)苯基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(8毫克，0.009毫摩尔，化合物222A)溶于1毫升2，2，2-三氟醋酸中。将所形成之混合物搅拌过夜。移除TFA，并使残留物藉制备型HPLC纯化，而得化合物226A，为白色粉末(0.005克，81％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.04-1.12(m，11H)1.23-1.33(m，2H)1.42(dd，J＝9.57，5.29Hz，1H)1.87(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.19-2.27(m，2H)2.54(dd，J＝13.72，7.43Hz，1H)2.92-2.98(m，1H)3.98-4.05(m，4H)4.12(s，1H)4.33(d，J＝12.59Hz，1H)4.55(dd，J＝10.32，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.76Hz，1H)5.27(m，2H)5.72-5.79(m，2H)6.45-6.49(m，2H)7.22-7.25(2，4H)7.52(s，1H)7.62(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)7.79(d，J＝2.01Hz，1H)8.05(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 767(M⁺+H).

化合物226B系经由如用于化合物226A制备之相同程序，制自化合物222B。LC-MS，MS m/z 767(M⁺+H).

化合物227异构体：

3-甲基-N-(3-(甲基氨磺酰)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

3-甲基-N-(3-(甲基氨磺酰)苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例227：化合物227A与227B之制备

化合物227A和227B

图式1

步骤1

于3-氨基-N-甲苯磺酰胺(203毫克，1.09毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(264毫克，2.027毫摩尔)在25毫升RBF中之混合物内，在室温下，添加2毫升醋酸。使溶液温热至75℃，历经约120分钟。将溶液在室温下以甲醇(2毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将30毫升水添加至混合物中，然后，将其以10毫升醋酸乙酯萃取(调整pH至4)。将有机物质以在pH＝8下之碳酸氢钠洗涤，使有机层以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩成黄色油，使其在高真空下干燥。将此物质直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 301(M⁺+H).

步骤2：

于2-(3-(N-甲基氨磺酰)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.034克，0.114毫摩尔，实施例227步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.087克，0.228毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物227A(0.013克，14.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物227B(0.009克，9.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物227A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.04-1.12(m，11H)1.17-1.27(m，2H)1.42(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.87(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.18-2.27(m，2H)2.38(s，3H)2.52(dd，J＝13.47，6.92Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.78，8.12，4.78Hz，1H)3.97-4.01(s，3H)4.03-4.11(m，2H)4.30(d，J＝12.09Hz，1H)4.52(dd，J＝10.07，7.05Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.28(dd，J＝17.25，1.38Hz，1H)5.69-5.79(m，2H)6.53-6.63(m，2H)6.77(d，J＝7.55Hz，1H)7.08(t，J＝1.89Hz，1H)7.53-7.57(m，1H)7.65-7.69(m，1H)7.84(d，J＝1.76Hz，1H)8.08(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 817(M⁺+H).

化合物227B：LC-MS，MS m/z 817(M⁺+H).

化合物231异构体：

N-(3-(异丙氧羰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-(异丙氧羰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例231：化合物231A与231B之制备

化合物231A和231B

图式1

步骤1：

于3-苯甲酸甲酯(230毫克，1.52毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(198毫克，1.52毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加四异丙氧基钛(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约15分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以无水乙醇(8毫升)稀释，接着添加1.5X氰基三氢硼酸钠(245毫克，3.90毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将溶液与4毫升水混合，形成悬浮液，藉由离心机移除白色沉淀物。将有机物质于醋酸乙酯中萃取，且使有机相以Na₂SO₄干燥，过滤，及蒸发成白色泡沫物。将此物质直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。LC-MS，MS m/z 294(M⁺+H)

步骤2：

于2-(3-(异丙氧羰基)苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.055克，0.189毫摩尔，实施例231步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.101克，0.189毫摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.144克，0.378毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.061克，0.473毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物231A(0.0235克，15.3.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物231B(0.0175克，11.6％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物231A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 1.04-1.14(m，11H)1.19-1.29(m，6H)1.29-1.38(m，2H)1.38-1.43(m，1H)1.81-1.89(m，1H)2.16-2.25(m，2H)2.47(dd，J＝13.60，7.05Hz，1H)2.95(ddd，J＝12.78，8.12，4.78Hz，1H)3.96-4.02(m，4H)4.02-4.08(m，1H)4.14-4.24(m，1H)4.42-4.53(m，1H)4.93-5.03(m，J＝6.24，6.24，6.24，6.24，6.24Hz，1H)5.06-5.16(m，1H)5.20-5.32(m，1H)5.68-5.78(m，2H)6.54(t，J＝7.81Hz，1H)6.60-6.69(m，1H)6.87(d，J＝7.55Hz，1H)7.20-7.26(m，1H)7.45-7.52(m，1H)7.58-7.68(m，2H)7.97-8.06(m，1H)；LC-MS，MS m/z 810(M⁺+H).

化合物231B：LC-MS，MS m/z 810(M⁺+H).

化合物232异构体：

N-(3-(甲氧羰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(3-(甲氧羰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例232：化合物232A与232B之制备

化合物232A和232B

于25℃下，使3-((S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基)苯甲酸异丙酯(20毫克，0.025毫摩尔，化合物231A)溶于THF(0.200毫升)与MeOH(0.2毫升)中。逐滴添加1.0M氢氧化锂水溶液(0.049毫升，0.049毫摩尔)，并将混合物搅拌4小时。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～4)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，而得化合物232A(0.005克，25.6％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 0.89-1.02(m，2H)1.04-1.12(m，11H)1.29-1.36(m，2H)1.42(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.87(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.16-2.25(m，2H)2.46(d，J＝6.55Hz，1H)2.91-2.99(m，1H)3.63-3.71(m，3H)3.93-4.03(m，4H)4.08(m，1H)4.21(s，1H)4.51(dd，J＝10.32，7.05Hz，1H)5.06-5.16(m，1H)5.28(d，J＝17.37Hz，1H)5.70-5.79(m，2H)6.58(t，J＝7.81Hz，1H)6.69(dd，J＝8.06，1.51Hz，1H)6.80(d，J＝7.55Hz，1H)7.18(s，1H)7.50(s，1H)7.61-7.69(m，2H)8.04-8.11(m，1H)；LC-MS，MS m/z 782(M⁺+H).

化合物232B系经由如关于化合物232A制备所述之相同方法，制自化合物231B。LC-MS，MS m/z 782(M⁺+H).

化合物233异构体：

(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((2S)-2-((4-乙氧基-1，2，5-噻二唑-3-基)氨基)丁酰基)-L-脯氨酰胺与

(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((2R)-2-((4-乙氧基-1，2，5-噻二唑-3-基)氨基)丁酰基)-L-脯氨酰胺

实施例233：化合物233A与233B之制备

化合物233A和233B

步骤1

步骤1：

于反应物1(0.114克，0.6毫摩尔)在EtOH(5毫升)中之溶液内，于25℃下，添加2-氨基丁酸甲酯(0.070克，0.600毫摩尔)，接着为DIEA(0.210毫升，1.200毫摩尔)。将混合物于室温下搅拌过夜。移除溶剂，并使此物质在高真空下干燥。将此物质直接使用于下一步骤，无需进一步纯化。

步骤2

步骤2：

于实施例233步骤1之产物(0.157克，6毫摩尔)在CH₂Cl₂(8毫升)中之黄色溶液内，在-78℃下，添加三碘膦(0.247克，0.600毫摩尔)。获得橙色悬浮液。使混合物温热至0℃，历经2小时。形成深褐色溶液。以醋酸乙酯(15毫升)稀释反应混合物，并以亚硫酸氢钠(2克，在10毫升水中)、H₂O及饱和NaCl洗涤。使有机物质以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩。使粗产物藉硅胶柱纯化(以己烷中之5-15％醋酸乙酯洗脱)。如此获得无色油。

步骤3

步骤3：

于2-(4-乙氧基-1，2，5-噻二唑-3-基氨基)丁酸甲酯(57毫克，0.232毫摩尔)在4毫升THF中之溶液内，在室温下，添加氢氧化锂(6.68毫克，0.279毫摩尔)与水(0.6毫升)。将混合物搅拌2小时。将混合物调整至pH 4，并以醋酸乙酯(10毫升×2)萃取。合并有机层，且以水(1×10毫升)洗涤。使有机物质以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩，而得白色固体。

步骤4：

于2-(4-乙氧基-1，2，5-噻二唑-3-基氨基)丁酸(23.34毫克，0.101毫摩尔)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(54毫克，0.101毫摩尔)之黄色溶液中，在0℃下，添加HATU(77毫克，0.202毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(32.6毫克，0.252毫摩尔)。形成黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(15毫升)稀释反应混合物，并以H₂O(pH＝6)与盐水洗涤。使有机物质以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩。使粗制物质藉制备型HPLC纯化，当观察藉LCMS时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物233A(0.046克，5.3％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物233B(0.085克，10％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物233A：LC-MS，MS m/z 748(M⁺+H).

化合物233B：LC-MS，MS m/z 748(M⁺+H).

化合物234异构体：

N-(2-氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-[(7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基]-N-((1R，2S)-1-{[(环丙基磺酰基)氨基]羰基}-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺与

N-(2-氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-[(7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基]-N-((1R，2S)-1-{[(环丙基磺酰基)氨基]羰基}-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺

实施例234：化合物234A与234B之制备

化合物234A和234B

图式1

步骤1：

于2-氟苯胺(203毫克，1.827毫摩尔)与3，3-二甲基-2-氧代丁酸(476毫克，3.65毫摩尔)在100毫升RBF中之混合物内，在室温下，经由吸量管添加醋酸(2毫升)。混合物之颜色立即改变成特征之金丝雀色。使溶液温热至75℃，历经约120分钟，且颜色仍然保持相同。将溶液在室温下以甲醇(2毫升)稀释，接着添加0.5X氰基三氢硼酸钠(230毫克，3.65毫摩尔)，并于起泡与嘶嘶声结束后，添加其余一半。溶液之颜色变得较浅。将30毫升水添加至混合物中，然后，将其以10毫升醋酸乙酯萃取(调整pH至4)。接着，将有机物质以在pH＝8下之碳酸氢钠洗涤，使有机层以Na₂SO₄干燥，过滤，及浓缩成黄色油。使此物质藉制备型HPLC纯化，并带至下一步骤。LC-MS，MS m/z 226(M⁺+H).

步骤2：

于2-(2-氟苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(63.2毫克，0.280毫摩尔，实施例234步骤1)与(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(0.150克，0.28亳摩尔，实施例22步骤5)在CH₂Cl₂中之黄色溶液内，在0℃下，添加HATU(0.213克，0.561毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.091克，0.701毫摩尔)。于添加碱后，形成淡黄色溶液。将混合物于室温下搅拌过夜。以醋酸乙酯(25毫升)稀释反应混合物，并以水(pH～6)与盐水洗涤。使有机物质以硫酸钠干燥，过滤，浓缩，及使残留物藉反相制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物234A(0.050克，24％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物234B(0.038克，18.2％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。

化合物234A：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 0.99-1.08(m，2H)1.09-1.17(m，9H)1.20-1.29(m，2H)1.40(dd，J＝9.44，5.41Hz，1H)1.86(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)2.17-2.27(m，2H)2.52(dd，J＝13.72，6.92Hz，1H)2.94(ddd，J＝12.78，8.12，4.78Hz，1H)3.97-4.04(m，5H)4.27(d，J＝12.09Hz，1H)4.50(dd，J＝10.45，6.92Hz，1H)5.11(dd，J＝10.32，1.51Hz，1H)5.28(dd，J＝17.12，1.51Hz，1H)5.67-5.77(m，2H)6.08-6.14(m，1H)6.14-6.20(m，1H)6.40-6.47(m，1H)6.58(ddd，J＝11.96，8.06，1.39Hz，1H)7.56(s，1H)7.69(dd，J＝8.81，2.01Hz，1H)7.77(d，J＝2.01Hz，1H)8.10(d，J＝8.81Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 742(M⁺+H).

化合物234B：LC-MS，MS m/z 742(M⁺+H).

化合物235异构体：

N-(3，4-二氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((9-甲氧基-4-甲基-3，4-二氢-2H-[1，4]噁嗪并[3，2-c]异喹啉-6-基)氧基)-L-脯氨酰胺与

N-(3，4-二氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((9-甲氧基-4-甲基-3，4-二氢-2H-[1，4]噁嗪并[3，2-c]异喹啉-6-基)氧基)-L-脯氨酰胺

实施例235：化合物235A与235B之制备

化合物235A和235B

异构体之混合物

图式1

步骤1

使4-甲氧基-2-甲基苯甲腈(50克，340毫摩尔)与NBS(62克，350毫摩尔)悬浮于CCl₄(500毫升)中，并添加AIBN(5克，10重量％)。将混合物在回流下加热过夜。滤出沉淀物，并移除溶剂。使褐色油藉急骤式柱纯化(2-5％丙酮∶己烷)。获得白色晶体(36克)。

步骤2

使2-(溴甲基)-4-甲氧基苯甲腈(36克，实施例235步骤1)悬浮于200毫升乙醇中，添加200毫升乙腈，接着为KCN(8.3克)与150毫升水。将混合物搅拌，且无色溶液转变成黄色。于搅拌4小时后，反应已完成。在真空下移除挥发性物质，并使残留固体再溶于醋酸乙酯(200毫升)中，且以水(100毫升)与盐水(100毫升)洗涤。然后，使有机物质以硫酸钠干燥。移除醋酸乙酯，并使残留物自醋酸乙酯与二氯甲烷再结晶，提供17克2-(氰基甲基)-4-甲氧基苯甲腈。

步骤3

参阅J.Med.Chem.，1970，第13卷，第4期，第613页，关于1-溴-6-甲氧基异喹啉-3-胺之制备。

步骤4

于-10℃下，使1-溴-6-甲氧基异喹啉-3-胺(1.5克，实施例235步骤3)溶于HF-Py(12.5毫升)中，并添加NaNO₂(600毫克)。发现黄色固体形成。使反应混合物悬浮于大量水中，调整pH至5，以醋酸乙酯(3×30毫升)萃取，以水与盐水洗涤，然后以硫酸钠干燥。于急骤式柱纯化后，获得淡黄色固体(1.2克)。

图式2

步骤5

于-78℃下，使1-溴-3-氟-6-甲氧基异喹啉(322毫克，1.26毫摩尔，实施例235步骤4)溶于THF(7毫升)中，逐滴添加LDA(1.5M，2.52毫升)，搅拌30分钟，然后添加硼酸异丙酯(477毫克，585微升)。30分钟后，藉由饱和NH₄Cl与1N HCl使反应淬灭，以醋酸乙酯(3× 30毫升)萃取。移除溶剂至干燥。使残留物溶于CH₂Cl₂(8毫升)中，添加NaOH(1N，4毫升)，接着为H₂O₂(1.2毫升，50％)。发现气体释出。搅拌30分钟。形成黄色糊状物。使混合物溶于50毫升醋酸乙酯中，将有机层以亚硫酸氢钠溶液与盐水洗涤，接着以硫酸钠干燥。藉硅胶纯化(以5-10％醋酸乙酯∶己烷洗脱)。获得200毫克黄色固体。

步骤6

于室温下，使1-溴-3-氟-6-甲氧基异喹啉-4-醇(160毫克，实施例235步骤5)溶于乙腈(10毫升)中，添加Cs₂CO₃(215毫克)与2-溴乙基氨基甲酸叔丁酯(60微升)。使所形成之混合物升温至回流，历经2小时。移除溶剂，并使残留物溶于30毫升醋酸乙酯中，以水与盐水洗涤，以硫酸钠干燥。使残留物藉急骤式柱，以5％丙酮∶己烷纯化。获得白色固体(169毫克)。

步骤7

于0℃下，使2-(1-溴-3-氟-6-甲氧基异喹啉-4-基氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(169毫克，实施例235步骤6)溶于10毫升DMF中，添加24毫克氢化钠(95％)，搅拌过夜。将反应混合物以50毫升水稀释，以醋酸乙酯(3×20毫升)萃取。合并有机物质，并以水(2×10毫升)，盐水(20毫升)洗涤，以硫酸钠干燥。移除溶剂，且使残留物藉急骤式柱，以2.5-10％丙酮∶己烷纯化。获得白色固体(100毫克)。

步骤8

于0℃下，使6-溴-9-甲氧基-2H-[1，4]噁嗪并[3，2-c]异喹啉-4(3H)-羧酸叔丁酯(20毫克，实施例235步骤7)溶于5毫升CH₂Cl₂中，添加2毫升TFA，搅拌2小时。使反应混合物在真空下干燥，使残留物再溶于醋酸乙酯中，并以水(PH～5)、盐水洗涤，以硫酸钠干燥。移除溶剂至干燥，并使所获得之固体在室温下溶于DMF(5毫升)中，以NaH(10毫克)，接着以MeI(10微升)处理。搅拌60分钟。将反应混合物以50毫升水稀释，以醋酸乙酯(3×20毫升)萃取。合并有机物质，且以水(2×10毫升)、盐水(20毫升)洗涤，以硫酸钠干燥。移除溶剂，及使残留物藉急骤式柱，以5-15％丙酮∶己烷纯化。获得白色固体(10毫克)。NMR ¹H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 2.89(s，3H)3.16-3.21(m，2H)4.40-4.44(m，2H)7.05(dd，J＝9.32，2.52Hz，1H)7.20(d，J＝2.52Hz，1H)8.04(d，J＝9.32Hz，1H)

图式3

步骤9

将6-溴-9-甲氧基-4-甲基-3，4-二氢-2H-[1，4]噁嗪并[3，2-c]异喹啉(62毫克，0.2毫摩尔，实施例235步骤8)、Boc-L-HYP-OH(50.8毫克，0.22毫摩尔)、t-BuOK(82毫克，0.60毫摩尔)在DMSO(2毫升)中之溶液搅拌3小时。在0℃下，以水(5毫升)使反应淬灭，并以1N HCl中和至pH 5，以EtOAc(40毫升)萃取，以盐水(10毫升)与水(15毫升×2)洗涤，以MgSO₄干燥，浓缩，而得粗产物(90毫克)，为固体，将其使用于下一步骤，无需进一步纯化。

步骤10

于(2S，4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-(9-甲氧基-4-甲基-3，4-二氢-2H-[1，4]噁嗪并[3，2-c]异喹啉-6-基氧基)吡咯烷-2-羧酸(90毫克，实施例235步骤9)、(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷羧酰胺·TsOH盐(90毫克)、i-Pr₂EtN(0.5毫升)在CH₂Cl₂(5毫升)中之溶液内，添加HATU(112毫克)。将所形成之混合物搅拌16小时。于浓缩后，以EtOAc(30毫升)萃取残留物，以1N HCl(10毫升×3)、水(10毫升×2)及盐水(10毫升×2)洗涤，以MgSO₄干燥，浓缩，藉制备型HPLC纯化。获得113毫克固体。

图式5

步骤11

使(2S，4R)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)-4-(9-甲氧基-4-甲基-3，4-二氢-2H-[1，4]噁嗪并[3，2-c]异喹啉-6-基氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(50毫克，实施例235步骤10)溶于2毫升二噁烷中之4N HCl内，搅拌2小时。移除溶剂至干燥，将所形成之褐色固体以本身使用。

图式6

步骤12

于2-(3，4-二氟苯基氨基)-3，3-二甲基丁酸(0.043克，0.175毫摩尔，得自实施例220步骤1)与(2S，4R)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-(9-甲氧基-4-甲基-3，4-二氢-2H-[1，4]噁嗪并[3，2-c]异喹啉-6-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(20毫克，实施例235步骤11)之黄色溶液中，在0℃下，添加HATU(0.133克，0.350毫摩尔)，接着为二异丙基乙胺(0.057克，0.437毫摩尔)。于添加碱后，形成褐色溶液。将混合物于室温下搅拌。以醋酸乙酯稀释反应混合物。以水与盐水洗涤。以硫酸钠干燥。藉制备型HPLC纯化，当藉LCMS观察时，获得具有相同MS m/z之两种个别产物。化合物235A(0.0008克，3.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个。化合物235B(0.003克，11.0％产率)为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个。化合物235A：LC-MS，MS m/z 798(M⁺+H)¹H NMR(400MHz，MeOD)δppm 1.01-1.10(m，11H)1.41(m，2H)1.86(dd，J＝8.18，5.41Hz，1H)2.13-2.24(m，2H)2.50(d，J＝6.80Hz，1H)2.90-3.01(m，1H)3.02-3.09(m，3H)3.42(d，J＝2.52Hz，2H)3.91-4.01(m，5H)4.22-4.32(m，1H)4.42-4.48(m，1H)4.50-4.59(m，2H)5.11(dd，J＝10.32，1.76Hz，1H)5.28(dd，J＝17.25，1.39Hz，1H)5.67-5.78(m，2H)6.19-6.24(m，1H)6.35-6.40(m，1H)6.49-6.56(m，1H)6.87(dd，J＝9.07，2.27Hz，1H)7.13-7.17(m，1H)7.60(d，J＝2.27Hz，1H)化合物235B：LC-MS，MS m/z798(M⁺+H)

化合物236、237、238、239、240、241、242、243系使用本文中所述之方法制成。

实施例236：化合物236

实施例237：化合物237

实施例238：化合物238

实施例239：化合物239

实施例240：化合物240

实施例241：化合物241

实施例242：化合物242

实施例243：化合物243

实施例407：化合物407之制备

图式1

步骤1：

将6-甲氧基吡啶-3-胺(372毫克，3毫摩尔)、3，3-二甲基-2-氧代丁酸(781毫克，6.00毫摩尔)及三乙酰氧基氢硼酸钠(1907毫克，9.00毫摩尔)在CH₂ClCH₂Cl(5毫升)中之混合物搅拌24小时。以饱和NH₄Cl(20毫升)使反应淬灭，以EtOAc(50毫升)稀释，以盐水(20毫升)洗涤，以MgSO₄干燥，过滤，浓缩。浓缩获得0.71克(99％)粗制所要之产物，将其使用于下一步骤，无需进一步纯化。1H NMR(400MHz，CCl3D)δppm 1.09(s，9H)，3.63(s，1H)，3.85(s，3H)，6.63(d，J＝8.81Hz，1H)，7.07(dd，J＝8.81，3.02Hz，1H)，7.63(d，J＝3.02Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 239(M⁺+H).

步骤2：

于实施例1步骤5产物(150毫克，0.3毫摩尔)之混合物中，添加实施例407步骤1之产物(71毫克，0.3毫摩尔)，并于CH₂Cl₂(5毫升)中之Hunig氏碱(0.524毫升，3毫摩尔)内，添加HATU(171毫克，0.45毫摩尔)。在搅拌16小时并浓缩后，残留物藉反相制备型HPLC之纯化，获得具有相同m/z之两种产物，藉LCMS。化合物407A为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个，并以固体获得(37毫克，18％产率)。化合物407B为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个，并以固体获得(31毫克，14％产率)。化合物407A：LC-MS，MS m/z 721(M⁺+H).化合物407B：LC-MS，MS m/z 721(M⁺+H).

实施例408：化合物408A与408B之制备

化合物408A和408B

化合物408系经由如关于化合物407制备所述之相同程序制成，只是将实施例22中之图式2步骤5之产物(182毫克，0.299毫摩尔)使用于化合物408之合成。化合物408A为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个，并以固体获得(66毫克，29％产率)。化合物408B为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个，并以固体获得(46毫克，20％产率)。化合物408A：LC-MS，MS m/z 755(M⁺+H).化合物408B：LC-MS，MS m/z 755(M⁺+H).

实施例409：化合物409A与409B之制备

化合物409系经由如关于化合物407制备所述之相同程序制成，只是于步骤1中，使用6-(二氟甲氧基)吡啶-3-胺，且于步骤2中，使用实施例22中图式2步骤5之产物(182毫克，0.299毫摩尔)。化合物409A为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第一个，并以固体获得(45毫克，33％产率)。化合物409B为藉反相制备型HPLC洗脱之两种异构体之第二个，并以固体获得(50毫克，37％产率)。化合物409A：LC-MS，MS m/z 791(M⁺+H).化合物409B：LC-MS，MS m/z 791(M⁺+H).

化合物410与411系根据本文所述之方法制成。

实施例410：化合物410之制备

化合物410

实施例411：化合物411之制备

化合物411

实施例412中间体之制备

关于并入式1化合物中之P2异喹啉中间体制备之实施例

方法A

步骤1：

在0℃下，于3-甲氧基肉桂酸(11.04克，62毫摩尔)与三乙胺(12.52克，124毫摩尔)在丙酮(80毫升)中之溶液内，逐滴添加氯甲酸乙酯(大约1.5当量)。在此温度下搅拌1小时后，逐滴添加NaN₃水溶液(6.40克，100毫摩尔，在35毫升H₂O中；当使用叠氮化钠时，必须采取适当注意事项)，并将反应混合物于环境温度下搅拌16小时。将水(100毫升)添加至混合物中，且于真空中移除挥发性物质。将所形成之浆液以甲苯(3×50毫升)萃取，及使合并之有机层以MgSO₄干燥。在190℃下，将此已干燥之溶液逐滴添加至二苯甲烷(50毫升)与三丁胺(30毫升)之经加热溶液中。当添加时，蒸馏出甲苯。在添加完成后，使反应温度升高至210℃，历经2小时。于冷却后，藉过滤收集已沉淀之产物，以己烷(2×50毫升)洗涤，及干燥，产生所要之产物，为白色固体(5.53克，51％)(Nicolas Briet等人，Tetrahedron，2002，5761-5766).MS m/z176(M⁺+H).

对上述之替代程序，系采用叠氮磷酸二苯酯，供羧酸转化成相应之酰基叠氮化物。在单锅反应程序中，系接着使酸转化成相应之喹啉酮。此方法系描述于下文，用于4-甲基-2H-异喹啉-1-酮自3-苯基-丁-2-烯酸之制备：

将3-苯基-丁-2-烯酸(16.2克)、叠氮磷酸二苯酯(27.5克)及三乙胺(10.1克)在苯(100毫升)中之溶液搅拌1小时。在经过硅胶填充柱过滤后，以苯洗涤，并浓缩，使残留物溶于二苯甲烷(80毫升)中，并回流3小时。于冷却至室温后，经过填充柱收集固体，以苯洗涤，并干燥，而得10克(63％)所要之4-甲基-2H-异喹啉-1-酮，为固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 2.30(s，3H)，7.00(s，1H)，7.54(m，1H)，7.77(m，2H)，8.33(d，J＝7.34Hz，1H).

步骤2：

将POCl₃(10毫升)中之6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮(5.0克，28.4毫摩尔)加热至温和回流，历经3小时，在真空中蒸发(Nicolas Briet等人，Tetrahedron，2002，5761-5766)。将残留物倒入冰水(20毫升)中，并使用10M NaOH中和至pH 10。以CHCl₃萃取。以盐水洗涤有机层，以MgSO₄干燥，过滤，蒸发。使残留物藉急骤层析纯化(1∶1己烷-EtOAc)，而得4.41克(80％)所要之产物，为白色固体。

¹H NMR(CD₃OD)δ3.98(s，3H)，7.34-7.38(m，2H)，7.69(d，J＝5.5Hz，1H)，8.10(d，J＝6.0Hz，1H)，8.23(d，J＝9.5Hz，1H).MS m/z 194(M⁺+H).

步骤3：

于N-BOC-3-(R)-羟基-L-脯氨酸(892毫克，3.89毫摩尔)在DMSO(40毫升)中之溶液内，在环境温度下，以一份添加叔丁醇钾(1.34克，12.0毫摩尔)。将所形成之悬浮液在此温度下搅拌30分钟，然后冷却至10℃。以一份固体添加1-氯-6-甲氧基-异喹啉(实施例11步骤2)(785毫克，4.05毫摩尔)，并将最后混合物在环境温度下搅拌12小时。以冰5％柠檬酸(水溶液)使反应淬灭，以EtOAc(100毫升)萃取。以EtOAc再一次萃取水相。将合并之有机层分别以5％柠檬酸(水溶液)与盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤。使滤液在真空中蒸发至干燥，而产生1.49克(99％)所要之产物，为灰白色泡沫物。将此物质以粗制物使用于下一步骤反应，无需进一步纯化。¹H NMR(CD₃OD)δ1.42，1.44(旋转异构体，9H)，2.38-2.43(m，1H)，2.66-2.72(m，1H)，3.80-3.87(m，2H)，3.92(s，3H)，4.44-4.52(m，1H)，5.73(b，1H)，7.16-7.18(m，2H)，7.24-7.25(m，1H)，7.87-7.88(m，1H)，8.07(d，J＝8.5Hz，1H).MS m/z 389(M⁺+H).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用15克3-甲氧基-3-苯基-丙烯酸，获得250毫克产物(2％产率)。

产物：

¹H NMR(400MHz，CD₃COCD₃)δppm 3.85(s，3H)，6.96(s，1H)，7.54(m，1H)，7.71(m，1H)，7.86(d，J＝8.07Hz，1H)，8.31(d，J＝8.07Hz，1H).

步骤2：

修正：使用200毫克4-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮，获得150毫克产物(68％产率)。

产物：

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 4.05(s，2H)，7.71(m，1H)，7.72(m，2H)，7.80(s，1H)，8.23(dd，J＝18.71，7.70Hz，2H).

步骤3：

修正：使用122毫克1-氯-4-甲氧基-异喹啉，获得218毫克产物(89％产率)。

产物：

MS：(M+Na)⁺411.

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中1

步骤1：

修正：使用20克2-甲基肉桂酸，获得14.3克产物(72％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 2.54(s，1H)，6.69(d，J＝7.3Hz，1H)，7.23(d，J＝7.3Hz，1H)，7.39(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(d，J＝7.1Hz，1H)，8.30(d，J＝8.1Hz，1H)，11.62(s，1H)；MS：(M+H)⁺160.

步骤2：

修正：使用14.4克5-甲基-2H-异喹啉-1-酮，获得10.6克产物(66％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 2.67(s，3H)，7.55(m，2H)，7.70(dd，J＝5.9，1.0Hz，1H)，8.19(m，1H)，8.28(d，J＝5.9Hz，1H)；MS：(M+H)⁺178.

步骤3：

修正：使用533毫克1-氯-5-甲基-异喹啉，获得1116毫克产物(100％产率)。

产物：

数据：MS：(M+H)⁺373.

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用10克2-甲氧基肉桂酸，获得5.3克产物(53％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 3.95(s，3H)，6.94(d，J＝7.3Hz，1H)，7.08(d，J＝8.1Hz，1H)，7.14(d，J＝7.3Hz，1H)，7.43(t，J＝8.1Hz，1H)，7.99(d，J＝8.1Hz，1H)，10.92(s，1H)；MS：(M+H)⁺176.

步骤2：

修正：使用5.3克5-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮，获得5.38克产物(92％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 4.01(s，3H)，7.04(d，J＝7.8Hz，1H)，7.57(t，J＝8.1Hz，1H)，7.88(d，J＝8.6Hz，1H)，7.97(d，J＝5.9Hz，1H)，8.25(d，J＝5.9Hz，1H)；MS：(M+H)⁺194.

步骤3：

修正：使用581毫克1-氯-5-甲氧基-异喹啉，获得1163毫克产物(100％产率)。

产物：

数据：MS：(M+H)⁺389.

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用25克2-氯肉桂酸，获得14.6克产物(59％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 7.22(d，J＝7.3Hz，1H)，7.42(t，J＝7.8Hz，1H)，7.73(d，J＝7.8Hz，1H)，8.34(d，J＝8.1Hz，1H)，10.61(s，1H)；MS：(M+H)⁺180.

步骤2：

修正：使用14.2克5-氯-2H-异喹啉-1-酮，获得8.28克产物(53％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 7.60(dd，J＝8.6，7.6Hz，1H)，7.83(m，1H)，8.00(d，J＝5.9Hz，1H)，8.29(dt，J＝8.9，1.0Hz，1H)，8.38(d，J＝5.9Hz，1H)；MS：(M+H)⁺198.

步骤3：

修正：使用594毫克1，5-二氯-异喹啉，获得1174毫克产物(100％产率)。

产物：

数据：MS：(M+H)⁺393.

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用16.6克2-氟肉桂酸，获得8.55克产物(51％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃COCD₃)δppm 6.62(d，J＝7.3Hz，1H)，7.32(d，J＝7.3Hz，1H)，7.47(m，2H)，8.09(m，1H).

步骤2：

修正：使用8.4克5-氟-2H-异喹啉-1-酮，获得7.5克产物(80％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 7.43(ddd，J＝9.7，7.8，0.9Hz，1H)，7.62(td，J＝8.2，5.4Hz，1H)，7.84(d，J＝5.6Hz，1H)，8.14(d，J＝8.6Hz，1H)，8.33(d，J＝5.9Hz，1H)；MS：(M+H)⁺182.

步骤3：

修正：使用203毫克1-氯-5-氟-异喹啉，获得384毫克产物(90％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃SOCD₃)δppm 1.34，1.36(2s，9H，旋转异构体)，2.35(m，1H)，2.61(m，1H)，3.65(d，J＝12.23Hz，1H)，3.80(m，1H)，4.35(m，1H)，5.70(s，1H)，7.48(d，J＝6.11Hz，1H)，7.63(m，2H)，7.99(m，1H)，8.10(d，J＝5.87Hz，1H)；MS：(M+Na)⁺399.

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用16.6克4-氟肉桂酸，获得8.2克产物(49％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃COCD₃)δppm 6.57(d，J＝7.09Hz，1H)，7.21(d，J＝7.09Hz，1H)，7.50(m，1H)，7.72(dd，J＝8.68，5.26Hz，1H)，7.90(dd，J＝9.54，2.93Hz，1H).

步骤2：

修正：使用8.15克7-氟-2H-异喹啉-1-酮，获得7.6克产物(84％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 7.52(td，J＝8.6，2.6Hz，1H)，7.59(d，J＝5.6Hz，1H)，7.86(dd，J＝9.1，5.4Hz，1H)，7.95(dd，J＝9.5，2.5Hz，1H)，8.26(d，J＝5.6Hz，1H)；MS：(M+H)⁺182.

步骤3：

修正：使用191毫克1-氯-7-氟-异喹啉，获得350毫克产物(93％产率)。

产物：

数据：MS：(M+Na)⁺399.

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用9.13克4-氯肉桂酸，获得4克产物(44％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃SOCD₃)δppm 6.58(d，J＝7.1Hz，1H)，7.20(dd，J＝7.1，5.9Hz，1H)，7.72(m，2H)，8.10(m，1H).

步骤2：

修正：使用3.5克7-氯-2H-异喹啉-1-酮，获得2.8克产物(72％产率)。

产物：

数据：1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 7.59(d，J＝5.5Hz，1H)，7.69(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.80(d，J＝8.6Hz，1H)，8.29(d，J＝5.5Hz，1H)，8.34(s，1H)；MS：(M+H)⁺198.

步骤3：

修正：使用208毫克1，7-二氯-异喹啉，获得350毫克产物(89％产率)。

产物：

数据：MS：(M+Na)⁺415.

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用25克4-甲基肉桂酸，获得15.3克产物(62％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 2.50(s，3H)，6.54(d，J＝7.1Hz，1H)，7.13(d，J＝7.1Hz，1H)，7.49(m，2H)，8.22(s，1H)，11.49(s，1H)；MS：(M+H)⁺160.

步骤2：

修正：使用15.3克7-甲基-2H-异喹啉-1-酮，获得5.15克产物(30％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 2.58(s，3H)，7.56(m，2H)，7.73(d，J＝8.3Hz，1H)，8.09(s，1H)，8.20(d，J＝5.6Hz，1H)；MS：(M+H)⁺178.

步骤3：

修正：使用205毫克1-氯-7-甲基-异喹啉，获得350毫克产物(89％产率)。

产物：

数据：MS：(M+H)⁺373.

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用33克4-甲氧基肉桂酸，获得7克产物(33％产率)。产物：

数据：¹H NMR(500MHz，CD₃COCD₃)δppm 3.90(s，3H)，6.49(d，J＝7.0Hz，1H)，7.10(d，J＝7.3Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.6，2.8Hz，1H)，7.57(d，J＝8.9Hz，1H)，7.71(d，J＝2.8Hz，1H).

步骤2：

修正：使用4克7-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮，获得3克产物(68％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 3.98(s，3H)，7.38(dd，J＝8.9，2.6Hz，1H)，7.52(m，2H)，7.73(d，J＝8.8Hz，1H)，8.16(d，J＝5.4Hz，1H).

步骤3：

修正：使用533毫克1-氯-7-甲氧基-异喹啉，获得1115毫克产物(100％产率)。

产物：

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用19.6克4-氟-3-甲氧基肉桂酸，获得9.5克产物(48％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃COCD₃)δppm 4.00(s，1H)，6.49(d，J＝7.34Hz，1H)，7.19(d，J＝7.09Hz，1H)，7.29(d，J＝8.07Hz，1H)，7.86(d，J＝11.74Hz，1H).

步骤2：

修正：使用9克7-氟-6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮，获得7克产物(70％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 4.04(s，3H)，7.17(d，J＝8.07Hz，1H)，7.48(d，J＝5.62Hz，1H)，7.94(d，J＝11.49Hz，1H)，8.20(d，J＝5.62Hz，1H).

步骤3：

修正：使用222毫克1-氯-7-氟-6-甲氧基-异喹啉，获得406毫克所要之产物。

所要之产物：

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用3.8克3-(2，3-二氢-苯并呋喃-7-基)-丙烯酸，获得2克产物(53％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 3.37(t，J＝9.05Hz，1H)，4.73(t，J＝9.05Hz，2H)，6.67(d，J＝7.09Hz，1H)，7.10(d，J＝7.09Hz，1H)，7.37(d，J＝8.07Hz，1H)，7.81(d，J＝8.07Hz，1H)；MS：(M+H)⁺188.

步骤2：

修正：使用1.87克2，3-二氢-7H-呋喃并[2，3-f]异喹啉-6-酮，获得1.84克产物(90％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400Hz，CDCl₃)δppm 3.43(t，J＝9.05Hz，2H)，4.82(t，J＝9.05Hz，2H)，7.52(d，J＝8.56Hz，1H)，7.66(d，J＝5.62Hz，1H)，7.84(d，J＝8.31Hz，1H)，8.19(d，J＝5.62Hz，1H)；MS(M+H)⁺206.

步骤3：

修正：使用206毫克6-氯-2，3-二氢-呋喃并[2，3-f]异喹啉，获得300毫克产物混合物。

产物：

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使用1.14克3-(2，3-二氢-苯并呋喃-4-基)-丙烯酸，获得600毫克产物(52％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 3.35(t，J＝8.93Hz，2H)，4.74(t，J＝8.93Hz，2H)，6.49(d，J＝7.09Hz，1H)，6.95(d，J＝8.56Hz，1H)，7.25(d，J＝7.09Hz，1H)，8.13(d，J＝8.80Hz，1H)；MS(M+H)⁺188.

步骤2：

修正：使用560毫克1，7-二氢-2H-呋喃并[3，2-f]异喹啉-6-酮，获得380毫克产物(48％产率)。

产物：

数据：¹H NMR(400Hz，CDCl₃)δppm 3.47(t，J＝9.05Hz，2H)，4.84(t，J＝9.05Hz，2H)，7.24(d，J＝8.56Hz，1H)，7.33(d，J＝5.87Hz，1H)，8.20(m，2H)；MS(M+H)⁺206.

步骤3：

修正：使用105毫克6-氯-1，2-二氢-呋喃并[3，2-f]异喹啉，获得390毫克产物混合物。

产物：

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

步骤1：

修正：使6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮(700毫克)与NCS(532毫克)在MeCN(10毫升)中之混合物回流3小时。过滤获得600毫克(72％)所要之产物，为固体。

产物：

数据：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 3.96(s，1H)，7.19(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.28(d，J＝2.45Hz，1H)，7.34(s，1H)，8.25(d，J＝9.05Hz，1H)；MS：(M+H)⁺210.

步骤2：

修正：使用500毫克4-氯-6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮，获得400毫克产物。

产物：

数据：¹H NMR(400Hz，CDCl₃)δppm 4.01(s，3H)，7.35(d，J＝2.45Hz，1H)，7.41(d，J＝2.45Hz，1H)，8.24(d，J＝9.29Hz，1H)，8.27(s，1H)；MS：(M+H)⁺229.

方法B

步骤1：

将4-甲氧基-2-甲基-苯甲酸(5.00克，30.1毫摩尔)与亚硫酰二氯(20.0克，0.17摩尔)之混合物加热至回流，历经30分钟。在真空中移除挥发性物质。于泵送过夜后，将粘稠油状酰基氯以粗制物使用于下一反应，而无需任何纯化。

于4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰氯在CH₂Cl₂(60毫升)中之溶液内，在0℃下，逐滴添加二乙胺。使所形成之混合物温热至环境温度，历经2小时，并搅拌。在真空中移除挥发性物质。以EtOAc(100毫升)研制残留物，及过滤。将滤液以1M HCl、1MNaOH及盐水洗涤，以MgSO₄干燥。溶剂之蒸发，产生6.51克(98％)所要之产物，为粘稠油。MS m/z 222(M⁺+H).

步骤2：

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(221毫克，1.0毫摩尔)在THF(2毫升)中之溶液内，在-78℃下，逐滴添加n-BuLi(0.84毫升，2.5M，在己烷中，2.10毫摩尔)。使所形成之橙色溶液在此温度下再保持30分钟，然后逐滴添加苯甲腈(103毫克，1.0毫摩尔)。使最后溶液温热至环境温度过夜，并搅拌。以冰5％柠檬酸使反应淬灭。过滤，以水洗涤，干燥。以2∶1己烷-EtOAc(5毫升)研制，产生205毫克(82％)所要之产物，为白色固体。

¹H NMR(d₆-DMSO)δ3.89(s，3H)，6.84(s，1H)，7.05-7.07(m，1H)，7.18(d，J＝2.5Hz，1H)，7.44-7.51(m，3H)，7.78(d，J＝7.0Hz，1H)，8.11(d，J＝9.0Hz，1H).MS m/z252(M⁺+H).

步骤3：

此产物1-氯-6-甲氧基-3-苯基-异喹啉系经由如上文所述之相同方法制成，只是使用6-甲氧基-3-苯基-2H-异喹啉-1-酮替代。

¹H NMR(CDCl₃)δ3.97(s，3H)，7.12(d，J＝2.5Hz，1H)，7.23-7.26(m，1H)，7.40-7.42(m，1H)，7.46-7.50(m，2H)，7.89(s，1H)，8.08(d，J＝7.0Hz，2H)，8.21(d，J＝9.0Hz，1H).MS m/z 270，271(M⁺+H).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332毫克，1.5毫摩尔)在THF(15毫升)中之溶液内，在-78℃下，添加t-BuLi(在戊烷中之1.7M溶液，1.3毫升，2.25毫摩尔)。将所形成之红色溶液于-78℃下搅拌10分钟，然后添加2-氰基吡啶(156毫克，1.5毫摩尔)。接着，使反应混合物温热至室温，并搅拌过夜。以饱和NH4Cl溶液使反应淬灭，并以醋酸乙酯萃取两次。使合并之有机层干燥(MgSO₄)，及浓缩。使粗产物通过制备型HPLC纯化，获得带黄色固体，为TFA盐(85毫克，15％产率)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ3.91(m，3H)，7.09(dd，J＝9.05，2.45Hz，1H)，7.17(d，J＝2.45Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.42(m，1H)，7.92(m，1H)，8.08(d，J＝8.07Hz，1H)，8.18(d，J＝9.05Hz，1H)，8.65(d，J＝4.89Hz，1H).MS m/z 253(MH⁺).

步骤2(图式3，步骤1)：

将6-甲氧基-3-吡啶-2-基-2H-异喹啉-1-酮TFA盐(85毫克，0.232毫摩尔)与POCl₃(3.0毫升)于回流下一起加热2天。然后蒸馏出POCl₃，并以冰使残留物淬灭。接着，使其以10NNaOH溶液中和，并收集褐色固体，为纯产物(62毫克，99％产率)。MS m/z 271(MH⁺).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332毫克，1.5毫摩尔)在THF(15毫升)中之溶液内，在-78℃下，添加t-BuLi(在戊烷中之1.7M溶液，1.3毫升，2.25毫摩尔)。将所形成之红色溶液于-78℃下搅拌10分钟，然后添加4-氰基吡啶(164毫克，1.575毫摩尔)。接着，使反应混合物温热至室温，并搅拌过夜。以饱和NH₄Cl溶液使反应淬灭，并收集黄色沉淀物，为纯产物(145毫克，38％产率)。

¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ3.91(s，3H)，7.18(dd，J＝8.8Hz，2.8Hz，1H)，7.26(m，2H)，8.06(d，J＝6.0Hz，2H)，8.16(d，J＝8.8Hz，1H)，8.84(d，J＝6.0Hz，2H).MSm/z 253(MH⁺).

步骤2(图式3步骤1)：

将6-甲氧基-3-吡啶-4-基-2H-异喹啉-1-酮(134毫克，0.531毫摩尔)与POCl₃(6.0毫升)于回流下一起加热5天。然后蒸馏出POCl₃，并以冰使残留物淬灭。然后，使其以饱和NaHCO₃溶液中和，并收集褐色固体，为纯产物(125毫克，87％产率)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ3.99(s，3H)，7.53(dd，J＝9.04Hz，2.44Hz，1H)，7.59(d，J＝2.69Hz，1H)，8.26(d，J＝9.05Hz，1H)，8.30(d，J＝5.38Hz，2H)，8.73(s，1H)，8.85(d，J＝6.36Hz，2H).MS m/z 271(MH⁺).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332毫克，1.5毫摩尔)在THF(15毫升)中之溶液内，在-78℃下，添加t-BuLi(在戊烷中之1.7M溶液，1.3毫升，2.25毫摩尔)。将所形成之红色溶液于-78℃下搅拌10分钟，然后添加4-二甲氨基苯甲腈(219毫克，1.5毫摩尔)。接着，使反应混合物温热至室温，并搅拌过夜。以饱和NH₄Cl溶液使反应淬灭，并收集黄色沉淀物，且以醚研制，而得灰白色固体，为纯产物(247毫克，56％产率)。

¹H NMR (DMSO-d₆，400MHz)δ2.97(s，6H)，3.87(s，3H)，6.72(s，1H)，6.78(d，J＝8.80Hz，2H)，6.97(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.10(d，J＝2.45Hz，1H)，7.65(d，J＝8.80Hz，2H)，8.05(d，J＝8.80Hz，1H)，11.11(s，1H).MS m/z 295(MH⁺).

将3-(4-二甲氨基-苯基)-6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮(245毫克，0.83毫摩尔)与POCl₃(10.0毫升)于回流下一起加热2天。然后蒸馏出POCl₃，并以冰使残留物淬灭。接着，使其以10NNaOH溶液中和，并以醋酸乙酯萃取两次。合并有机层，及干燥(MgSO₄)。蒸发溶剂，获得橙色固体，为产物(215毫克，83％产率)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ3.01(s，6H)，3.96(s，3H)，6.88(d，J＝9.05Hz，2H)，7.20(dd，J＝9.17，2.57Hz，1H)，7.28(d，J＝2.45Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.96(d，J＝9.05Hz，2H)，8.13(d，J＝9.29Hz，1H).MS m/z 313(MH⁺).

将[4-(1-氯-6-甲氧基-异喹啉-3-基)-苯基]-二甲基-胺(110毫克，0.35毫摩尔)与二氟化氢四丁基鏻(tetrabutyl phosphonium hydrogen difluoride)(0.5克)之混合物在140℃下，于Smith微波反应器中加热20分钟。然后，于其中添加水，并以醋酸乙酯萃取。分离有机层，以水洗涤，及干燥(MgSO₄)。蒸发溶剂，获得褐色固体，为产物。(85毫克，82％产率)。MS m/z 297(MH⁺).

方法C

步骤1：

于N-BOC-3-(R)-羟基-L-脯氨酸(6.22克，26.9毫摩尔)在DMF(250毫升)中之溶液内，在0℃下，经由数份添加NaH(60％，3.23克，80.8毫摩尔)。将所形成之悬浮液在此温度下搅拌30分钟。以一份固体添加1，3-二氯-异喹啉(5.33克，26.9毫摩尔)，并将最后混合物在环境温度下搅拌12小时。以冰5％柠檬酸(水溶液)使反应淬灭，以EtOAc(300毫升)萃取。以EtOAc再一次萃取水相。将合并之有机层分别以5％柠檬酸(水溶液)与盐水洗涤，以MgSO₄干燥，过滤。使滤液在真空中蒸发至干燥，而产生10.53克(99.8％)4-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯，为灰白色泡沫物。将此物质以粗制物使用于下一步骤反应，无需进一步纯化。

¹H NMR(CD₃OD)δ1.43，1.44(旋转异构体，9H)，2.39-2.44(m，1H)，2.68-2.72(m，1H)，3.80-3.90(m，2H)，4.44-4.52(m，1H)，5.77(b，1H)，7.39(s，1H)，7.58(t，J＝7.3Hz，1H)，7.71-7.78(m，2H)，8.16(d，J＝7.5Hz，1H).MS m/z 392(M⁺+H).

步骤2：

将4-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯(39毫克，0.10毫摩尔)、苯基硼酸(14.6毫克，0.12毫摩尔)、叔丁醇钠(38毫克，0.40毫摩尔)及((t-Bu)₂POH)₂PdCl₂(POPd)(5毫克，0.01毫摩尔)在THF(2毫升)中之混合物加热至回流，历经4小时。于冷却下来后，以5％柠檬酸(水溶液)使所形成之混合物淬灭，并以EtOAc(20毫升)萃取。以盐水洗涤有机层，以MgSO₄干燥，过滤，蒸发。使残留物藉制备型HPLC纯化，而产生36毫克(83％)所要之产物，为灰白色泡沫物。

¹H NMR(CD₃OD)δ1.43，1.45(旋转异构体，9H)，2.51-2.56(m，1H)，2.74-2.82(m，1H)，3.88-3.92(m，1H)，3.98-4.01(m，1H)，4.50-4.57(m，1H)，5.95(b，1H)，7.36-7.39(m，1H)，7.45-7.48(m，2H)，7.55(t，J＝7.3Hz，1H)，7.70(t，J＝7.5Hz，1H)，7.84-7.89(m，2H)，8.14-8.17(m，3H)，9.05(b，1H).MS m/z 435(M⁺+H).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

使用4-甲氧苯基硼酸制成

¹H NMR(CD₃OD)δ1.40，1.45(旋转异构体，9H)，2.50-2.55(m，1H)，2.73-2.81(m，1H)，3.81-3.89(m，4H)，3.98-4.01(m，1H)，4.50-4.57(m，1H)，5.93(b，1H)，7.02(d，J＝9.0Hz，2H)，7.50(t，J＝7.3Hz，1H)，7.67(t，J＝7.5Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.83(d，J＝8.5Hz，1H)，8.09(d，J＝8.5Hz，2H)，8.15(d，J＝8.0Hz，1H).MS m/z 465(M⁺+H).

下列中间体系按上述制成：

使用4-吡啶基硼酸制成

¹H NMR(CD₃OD)δ1.43，1.46(旋转异构体，9H)，2.53-2.56(m，1H)，2.80-2.89(m，1H)，3.90-3.93(m，1H)，4.00-4.05(m，1H)，4.50-4.57(m，1H)，6.00，6.05(旋转异构体1H)，7.80(t，J＝7.3Hz，1H)，7.87(t，J＝7.5Hz，1H)，8.08(d，J＝8.5Hz，1H)，8.32(d，J＝8.0Hz，1H)，8.49(s，1H)，8.84(d，J＝6.0Hz，2H)，8.84(d，J＝6.5Hz，2H.MS m/z436(M⁺+H).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

使用4-N，N-二甲氨基-苯基硼酸制成。MS m/z 478(M⁺+H).

方法D

步骤1：

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(633毫克，2.9毫摩尔)在THF(15毫升)中之溶液内，在-78℃下，逐滴添加n-BuLi(2.3毫升，2.5M，在己烷中，5.74毫摩尔)。使所形成之红色溶液在此温度下再保持30分钟，然后在-78℃下，以套管加入噻唑-2-羧酸乙酯(A.Medici等人，Tetrahedron Lett.1983，第2901页)(450毫克，2.9毫摩尔)在THF(5毫升)中之溶液内。使最后深绿色溶液保持至此温度，历经2小时，并搅拌。以饱和NH₄Cl(水溶液)使反应淬灭，并以EtOAc(50毫升)萃取。将有机层以饱和NH₄Cl(水溶液)与盐水洗涤，干燥，藉急骤柱层析纯化，以2∶1EtOAc∶己烷洗脱，提供405毫克(45％)所要之产物，为灰白色粘稠油。

¹H NMR(CDCl₃)δ1.08(t，J＝7.0Hz，6H)，3.22(b，2H)，3.44(b，2H)，3.79(s，3H)，4.59(s，2H)，6.79-6.81(m，1H)，6.86(d，J＝2.5Hz，1H)，7.16(d，J＝8.5Hz，1H)，7.66(d，J＝3.0Hz，1H)，8.00(d，J＝3.0Hz，1H).MS m/z 333(M⁺+H).

步骤2：

将N，N-二乙基-4-甲氧基-2-(2-氧代-2-噻唑-2-基-乙基)-苯甲酰胺(405毫克，1.22毫摩尔)与NH₄OAc(3.0克，38.9毫摩尔)之混合物在密封管中，加热至140℃，历经1小时。将经熔解之溶液倒入冰水中，过滤，以水充分洗涤滤饼。将已干燥之褐色固体(240毫克，76％)以粗品使用于下一反应，无需进一步纯化。MS m/z 259(M⁺+H).

步骤3：

此产物1-氯-6-甲氧基-3-噻唑-2-基-异喹啉系按上述制成，只是使用6-甲氧基-3-噻唑-2-基-2H-异喹啉-1-酮替代。

¹H NMR(CDCl₃)δ3.97(s，3H)，7.16(d，J＝4.0Hz，1H)，7.27-7.31(m，1H)，7.46(d，J＝5.0Hz，1H)，7.93(d，J＝5.5Hz，1H)，8.22(d，J＝15.5Hz，1H)，8.39(s，1H).MSm/z 277(M⁺+H).

步骤4：

此产物系经由如上文所述之相同方法制成，只是使用1-氯-6-甲氧基-3-噻唑-2-基-异喹啉替代。

¹H NMR(CD₃OD)δ0.97-1.09(m，12H)，1.24-1.29(m，10H)，1.44-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.20-2.26(m，1H)，2.30-2.36(m.1H)，2.65-2.71(m，1H)，2.93-2.96(m，1H)，3.96(s，3H)，4.12-4.27(m，2H)，4.38-4.52(m，2H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.5Hz，1H)，5.69-5.74(m，1H)，5.99(b，1H)，7.14(d，J＝9.0Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.66(d，J＝3.5Hz，1H)，7.93(d，J＝3.0Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.11(d，J＝9.0Hz，1H)，9.14(b，1H).

MS m/z 797(M⁺+H).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

6-甲氧基-3-(3-甲氧基-异噁唑-5-基)-2H-异喹啉-1-酮系使用N，N-二乙基-4-甲氧基-2-[2-(3-甲氧基-异噁唑-5-基)-2-氧代-乙基]-苯甲酰胺制成。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.89(s，3H)，3.97(s，3H)，7.01(s，1H)，7.14-7.16(m，2H)，7.43(s，1H)，8.13(d，J＝8.5Hz，1H).

MS m/z 273(M⁺+H).

1-氯-6-甲氧基-3-(3-甲氧基-异噁唑-5-基)-异喹啉系使用6-甲氧基-3-(3-甲氧基-异噁唑-5-基)-2H-异喹啉-1-酮制成。

¹H NMR(CDCl₃)δ3.97(s，3H)，4.04(s，3H)，6.60(s，1H)，7.17(d，J＝2.5Hz，1H)，7.31-7.33(m，1H)，8.02(s，1H)，8.23(d，J＝9.0Hz，1H).

MS m/z 291，293(M⁺+H)

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

N，N-二乙基-4-甲氧基-2-[2-(5-甲氧基-噁唑-2-基)-2-氧代-乙基]-苯甲酰胺系使用5-甲氧基-噁唑-2-羧酸乙酯制成。

MS m/z 347(M₊+H).

6-甲氧基-3-(5-甲氧基-噁唑-2-基)-2H-异喹啉-1-酮系使用N，N-二乙基-4-甲氧基-2-[2-(5-甲氧基-噁唑-2-基)-2-氧代-乙基]-苯甲酰胺制成。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.94(s，3H)，4.01(s，3H)，6.34(s，1H)，6.99(d，J＝2.0Hz，1H)，7.12-7.14(m，1H)，7.25(s，1H)，8.32(d，J＝9.0Hz，1H).

MS m/z 274(M⁺+H).

1-氯-6-甲氧基-3-(5-甲氧基-噁唑-2-基)-异喹啉系使用6-甲氧基-3-(5-甲氧基-噁唑-2-基)-2H-异喹啉-1-酮制成。

¹H NMR(CDCl₃)δ3.96(s，3H)，4.00(s，3H)，6.34(s，1H)，7.12(d，J＝2.5Hz，1H)，7.28-7.31(m，1H)，8.13(s，1H)，8.23(d，J＝9.0Hz，1H).

MS m/z 291，293(M⁺+H).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332毫克，1.5毫摩尔)在THF(15毫升)中之溶液内，在-78℃下，添加t-BuLi(在戊烷中之1.7M溶液，2.12毫升，3.6毫摩尔)。将所形成之红色溶液于-78℃下搅拌10分钟，然后添加烟碱酸甲酯(206毫克，1.5毫摩尔)。将反应混合物于-78℃下搅拌2小时。接着，以饱和NH₄Cl溶液使反应淬灭，并以醋酸乙酯萃取两次。使合并之有机层干燥(MgSO₄)，及浓缩。使粗产物藉制备型HPLC纯化，而得带黄色浓稠油，为TFA盐(124毫克，19％产率)。

MS m/z 349(M+Na⁺).

将N，N-二乙基-4-甲氧基-2-(2-氧代-2-吡啶-3-基-乙基)-苯甲酰胺(120毫克，0.272毫摩尔)与醋酸铵(1克)一起加热3小时。然后，使其冷却下来，并添加水。以醋酸乙酯萃取，并分离有机层。接着，使其干燥(MgSO₄)，及浓缩，而得褐色固体，为产物(65毫克，95％产率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ3.89(s，3H)，6.93(s，1H)，7.10(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.19(d，J＝2.45Hz，1H)，7.52(dd，J＝7.46，4.77Hz，1H)，8.15(m，2H)，8.64(dd，J＝4.89，1.47Hz，1H)，8.96(d，J＝1.71Hz，1H)，11.51(s，1H).

MS m/z 253(MH⁺).

将6-甲氧基-3-吡啶-3-基-2H-异喹啉-1-酮(65毫克，0.258毫摩尔)与POCl₃(2.5毫升)于回流下一起加热7天。然后蒸馏出POCl₃，并以冰使残留物淬灭。接着，将其以10N NaOH溶液中和，并以醋酸乙酯萃取两次。使合并之有机层干燥(MgSO₄)，及浓缩，而得黄色固体为产物(27毫克，39％产率)。

MS m/z 271(MH⁺).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332毫克，1.5毫摩尔)在THF(15毫升)中之溶液内，在-78℃下，添加t-BuLi(在戊烷中之1.7M溶液，2.2毫升，3.75毫摩尔)。将所形成之红色溶液于-78℃下搅拌10分钟，然后添加N，N-二甲基邻氨基苯甲酸甲酯(269毫克，1.5毫摩尔)。将反应混合物于-78℃下搅拌2小时。接着以饱和NH₄Cl溶液使反应淬灭，并以醋酸乙酯萃取两次。使合并之有机层干燥(MgSO₄)，及浓缩。使粗产物藉制备型HPLC纯化，而得带黄色浓稠油，为产物(256毫克，46％产率)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ0.99-1.13(m，6H)，3.23-3.31(m，8H)，3.39(m，2H)，3.82(s，3H)，4.35(s，2H)，6.91(dd，J＝8.44，2.57Hz，1H)，6.99(d，J＝2.45Hz，1H)，7.22(d，J＝8.56Hz，1H)，7.69(t，J＝7.70Hz，1H)，7.84(m，1H)，7.96(d，J＝8.31Hz，1H)，8.18(d，J＝7.83Hz，1H).

MS m/z 369(MH⁺).

将2-[2-(2-二甲氨基-苯基)-2-氧代-乙基]-N，N-二乙基-4-甲氧基-苯甲酰胺(250毫克，0.678毫摩尔)与醋酸铵(1.5克)一起加热2小时。然后，使其冷却下来，并添加水。以醋酸乙酯萃取，并分离有机层。接着，使其干燥(MgSO₄)，及浓缩，而得带黄色固体，为产物(125毫克，63％产率)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ2.95(s，6H)，3.92(s，3H)，6.92(s，1H)，7.12(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.16(d，J＝2.45Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.55(m，2H)，7.63(d，J＝7.83Hz，1H)，8.20(d，J＝9.05Hz，1H).

MS m/z 295(MH⁺).

将3-(2-二甲氨基-苯基)-6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮(125毫克，0.425毫摩尔)与POCl₃(4.0毫升)于回流下一起加热一天。然后蒸馏出POCl₃，并以冰使残留物淬灭。接着，将其以10N NaOH溶液中和，并以醋酸乙酯萃取两次。合并有机层，及干燥(MgSO₄)。蒸发溶剂，获得褐色固体，为产物(82毫克，62％产率)。

MS m/z 313(MH⁺).

将[2-(1-氯-6-甲氧基-异喹啉-3-基)-苯基]-二甲基-胺(82毫克，0.262毫摩尔)与二氟化氢四丁基鏻(1.0克)之混合物在140℃下，于Smith微波反应器中加热20分钟。然后，于其中添加水，并以醋酸乙酯萃取。分离有机层，以水洗涤，及干燥(MgSO₄)。蒸发溶剂，获得粗产物，使其藉制备型HPLC纯化，而得带黄色油，为产物(85毫克)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ3.41(s，6H)，4.00(s，3H)，7.42(dd，J＝9.05，2.45Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.71(m，2H)，7.99(m，1H)，8.16(m，2H)，8.31(s，1H).

MS m/z 297(MH⁺).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

于N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332毫克，1.5毫摩尔)在THF(15毫升)中之溶液内，在-78℃下，添加t-BuLi(在戊烷中之1.7M溶液，2.2毫升，3.75毫摩尔)。将所形成之红色溶液于-78℃下搅拌10分钟，然后添加(3-二甲氨基)苯甲酸甲酯(269毫克，1.5毫摩尔)。将反应混合物于-78℃下搅拌2小时。接着，以饱和NH₄Cl溶液使反应淬灭，并以醋酸乙酯萃取两次。使合并之有机层干燥(MgSO₄)，及浓缩。使粗产物藉制备型HPLC纯化，而得带黄色浓稠油，为TFA盐(245毫克，33％产率)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ1.01(t，J＝6.85Hz，3H)，1.09(m，3H)，3.11(s，6H)，3.21(m，2H)，3.40(m，2H)，3.79(s，3H)，4.39(s，2H)，6.84-6.91(m，2H)，7.19(d，J＝8.32Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.49(t，J＝8.07Hz，1H)，7.66-7.71(m，2H).

MS m/z 369(MH⁺).

将2-[2-(3-二甲氨基-苯基)-2-氧代-乙基]-N，N-二乙基-4-甲氧基-苯甲酰胺(240毫克，0.497毫摩尔)与醋酸铵(2.0克)一起加热2.5小时。然后，使其冷却下来，并添加水。收集褐色固体，为纯产物(95毫克，65％产率)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ2.98(s，6H)，3.88(s，3H)，6.74-6.87(m，2H)，7.01-7.07(m，3H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.28(t，J＝7.82Hz，1H)，8.10(d，J＝8.80Hz，1H).MS m/z 295(MH⁺).

将3-(3-二甲氨基-苯基)-6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮(92毫克，0.312毫摩尔)与POCl₃(3.0毫升)于回流下一起加热2天。然后蒸馏出POCl₃，并以冰使残留物淬灭。然后，将其以饱和NaHCO₃溶液中和，并以醋酸乙酯萃取两次。合并有机层，及干燥(MgSO₄)。蒸发溶剂，获得褐色浓稠油，为产物(72毫克，74％产率)。MS m/z 313(MH⁺).

将[3-(1-氯-6-甲氧基-异喹啉-3-基)-苯基]-二甲胺(72毫克，0.23毫摩尔)与二氟化氢四丁基鏻(0.5克)之混合物在140℃下，于Smith微波反应器中加热20分钟。然后，于其中添加水，并以醋酸乙酯萃取。分离有机层，以水洗涤，及干燥(MgSO₄)。蒸发溶剂，获得褐色油，为产物(58毫克，85％产率)。

MS m/z 297(MH⁺).

下列中间体系如本文中所述制成，且可并入式1化合物中

溴丙酮酸乙酯与乙硫脲在回流二噁烷中之缩合，系以定量产率获得单烷氨基噻唑，为HBr盐。2-乙氨基-噻唑-4-羧酸乙酯与EtI在DMF中之烷基化作用，提供2-二乙氨基-噻唑-4-羧酸乙酯。

方法E

步骤1：

使2-氰基甲基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯(1.9克)与TsOH.H2O(0.15克，毫摩尔)在吗啉(5毫升)中之悬浮液回流4小时，并在真空中移除溶剂。使残留物自具有数滴MeOH之EtOAc/己烷再结晶，提供产物(0.43克，17％)。MS m/z 266(M⁺+1).

步骤2：

使6-甲氧基-3-吗啉-4-基-异喹啉-1-醇(0.298克，1.15毫摩尔)在POCl₃(20毫升)中之混合物回流2小时，在真空中移除溶剂，并添加冷水。藉由添加1.0N NaOH，将pH调整至＞11。以EtOAc萃取水层。使萃取液干燥(MgSO₄)，在真空中移除溶剂，提供产物(0.299克，94％)。MS m/z 279(M⁺+1).

步骤3：

将1-氯-6-甲氧基-3-吗啉-4-基-异喹啉(0.050克，0.18毫摩尔)与二氟化氢四丁基鏻(0.8克，2.8毫摩尔)[Synlett 1992，(4)，345-6]之混合物在140℃下，于微波中加热10分钟。以EtOAc稀释反应混合物，并经过于顶部具有一层硅胶之ISCO 25克前置柱过滤，移除溶剂，提供产物(0.037毫克，77％)：1H NMR(氯仿-D)δppm 3.48(m，4H)，3.84(m，4H)，3.89(s，3H)，6.46(d，J＝1.22Hz，1H)，6.85(s，1H)，6.90(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.82(d，J＝8.85Hz，1H).MS m/z 263(M⁺+1).

方法F

于式1化合物之制备中所使用之6-氟与6-烷基异喹啉类系如下述，经由Pomeranz-Fritsch合成(典型程序：光学活性8，8-二取代1，1-双异喹啉之制备，K.Hirao，R.Tsuchiya，Y.Yano，H.Tsue，Heterocycles 42(1)1996，415-422)制成。使此产物经由N-氧化物中间体转化成1-氯衍生物。

一般合成图式

试剂与反应条件：(a)在苯中回流，水之共沸移除；(b)第一个步骤：氯甲酸乙酯，在THF中之亚磷酸三甲酯，第二个步骤：在氯仿中之四氯化钛；(c)在CH₂Cl₂中之MCPBA；(d)在苯中之POCl₃

R	异喹啉，产率	1-氯化物，合并产率
			F	20	43
Et	76	65
			i-Pr	14	18
t-Bu	47	55

6-异丙氧基与6-叔丁氧基异喹啉中间体之制备：一些6-烷氧基-1-氯异喹啉类系经由6-氟-1-氯异喹啉之直接ipso置换，使用相应之烷醇金属离子，譬如叔丁醇钾(53％)与异丙醇钠(54％)制成。

一般合成图式

R＝烷氧根阴离子，譬如叔-Bu，异-Pr

使6-氟-1-氯异喹啉接受以DMF中之异丙醇钠与叔丁醇钾之芳族亲核置换，而得其相应之6-异丙氧基-1-氯异喹啉类(54％)：1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm1.43(d，J＝6.11Hz，6H)4.76(m，J＝6.11Hz，1H)7.08(d，J＝2.45Hz，1H)7.29(dd，J＝9.29，2.45Hz，1H)7.50(d，J＝5.62Hz，1H)8.18(d，J＝5.87Hz，1H)8.24(d，J＝9.29Hz，1H)与6-叔丁氧基-1-氯异喹啉类(55％)：1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm1.48(s，9H)7.31(m，2H)7.47(d，J＝5.62Hz，1H)8.18(d，J＝5.62Hz，1H)8.21(d，J＝9.78Hz，1H)，作为分别之主要产物。此等6-烷氧基-1-氯异喹啉类系如本文中所述并入式1化合物中。

方法G

一般合成图式

此合成系部分利用下列参考资料中所述之技术：

(1)Hojo，Masaru；Masuda，Ryoichi；Sakaguchi，Syuhei；Takagawa，Makoto，synthesis(1986)，(12)，1016-17

(2)Rigby，James H.；Holsworth，Daniel D.；James，Kelly.Vinyl Isocyanates InSynthesis.[4+2]Cycloaddition Reactions With Benzyne Addends.Journal Of OrganicChemistry(1989)，54(17)，4019-20

(3)Uchibori，Y.；Umeno，M.；Yoshiokai，H.；Heterocycles，1992，34(8)，1507-1510

生物学研究

于本发明公开内容中系利用HCV NS3/4A蛋白酶复合酶测定与基于细胞之HCV复制子测定，并按下述制备、进行及确认有效：

重组HCV NS3/4A蛋白酶复合物之产生

衍生自BMS菌株、H77菌株或J4L6S菌株之HCV NS3蛋白酶复合物系按下文所述产生。此等经纯化之重组蛋白质系被产生，供使用于匀相测定(参阅下文)中，以提供本发明公开内容之化合物于抑制HCV NS3蛋白分解活性上系为如何有效之一种指标。

来自HCV感染患者之血清系得自Dr.T.Wright，San Francisco医院。HCV基因组(BMS菌株)之经设计全长cDNA(互补脱氧核糖核酸)模板，系自藉由血清RNA(核糖核酸)之反转录-PCR(RT-PCR)所获得之DNA片段，且使用以其他基因型1a菌株间之同源性为基础所选择之引物进行构建。自全部基因组序列之测定，基因型1a系被指定为HCV隔离群，根据Simmonds等人之分类(参阅P Simmonds，KA Rose，SGraham，SW Chan，F McOmish，BC Dow，EA Follett，PL Yap及H Marsden，J.Clin.Microbiol.，31(6)，1493-1503(1993))。非结构性区域NS2-5B之氨基酸序列系经显示为＞97％相同于HCV基因型1a(H77)，而87％相同于基因型1b(J4L6S)。感染无性繁殖系，H77(1a基因型)与J4L6S(1b基因型)，系得自R.Purcell(NIH)，且此等序列系发表于GenBank中(AAB67036，参阅Yanagi，M.，Purcell，R.H.，Emerson，S.U.及Bukh，J.Proc.Natl.Acad.Sci.U.SA.94(16)，8738-8743(1997)；AF054247，参阅Yanagi，M.，St Claire，M.，Shapiro，M.，Emerson，S.U.，Purcell，R.H.及Bukh，J.Virology 244(1)，161-172.(1998))。

H77与J4L6S菌株系用于产生重组NS3/4A蛋白酶复合物。编码使供此等菌株用之重组HCV NS3/4A蛋白酶复合物(氨基酸1027至1711)之DNA，系按由P.Gallinari等人所述操作(参阅Gallinari P，Paolini C，Brennan D，Nardi C，Steinkuhler C，DeFrancesco R.Biochemistry 38(17)：5620-32，(1999))。简言之，三赖氨酸促溶尾部系在NS4A编码区之3′-末端处加入。使NS4A-NS4B切割位点(氨基酸1711)之P1位置中之半胱氨酸改变成甘氨酸，以避免赖氨酸标记之蛋白水解切割。再者，半胱氨酸对丝氨酸突变系藉由PCR在氨基酸位置1454处引进，以防止NS3解旋酶结构域中之自溶切割。使变体DNA片段在pET21b细菌表达载体(Novagen)中克隆，且NS3/4A复合物系在大肠杆菌菌株BL21(DE3)(Invitrogen)中表达，按照由P.Gallinari等人所述之方案(参阅Gallinari，P Brennan D，Nardi C，Brinetti M，Tomei L，Steinkuhler C，De Francesco R.，J Virol.72(8)：6758-69(1998))，伴随着修正。简言之，NS3/4A蛋白酶复合物表达系以0.5毫摩尔浓度(mM)之异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)，于20℃下诱导22小时。典型发酵(1升(L))系产生大约10克(g)潮湿细胞糊。使细胞再悬浮于由25mM N-(2-羟乙基)哌嗪N′-(2-乙磺酸)(HEPES)，pH 7.5，20％甘油，500mM氯化钠(NaCl)，0.5％Triton X-100，1微克/毫升(″μg/mL″)溶菌酶，5mM氯化镁(MgCl₂)，1微克/毫升DnaseI，5mMβ-巯基乙醇(βME)，蛋白酶抑制剂-不含乙二胺四乙酸(EDTA)(Roche)组成之裂解缓冲液(10毫升/克)中，均化，及在4℃下温育20分钟。使匀浆进行超声处理，且于4℃下，藉由在235000克下超离心分离1小时而澄清。将咪唑添加至上清液中，达最后浓度为15mM，并调整pH至8.0。将粗制蛋白质萃取物装填于已使用缓冲液B(25mM HEPES，pH 8.0，20％甘油，500mMNaCl，0.5％Triton X-100，15mM咪唑，5mMβME)预平衡之镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱上。试样系在1毫升/分钟之流动速率下装填。将柱以15个柱体积之缓冲液C(与缓冲液B相同，只是使用0.2％Triton X-100)洗涤。将蛋白质以5个柱体积之缓冲液D(与缓冲液C相同，只是使用200mM咪唑)洗脱。

汇集含有NS3/4A蛋白酶复合物之级分，并装填于已使用缓冲液D(25mMHEPES，pH 7.5，20％甘油，300mM NaCl，0.2％Triton X-100，10mMβME)预平衡之脱盐柱Superdex-S200上。试样系于1毫升/分钟之流动速率下装填。汇集含有NS3/4A蛋白酶复合物之级分，及浓缩至大约0.5毫克/毫升。衍生自BMS、H77及J4L6S菌株之NS3/4A蛋白酶复合物之纯度系藉由SDS-PAGE与质谱法分析，被判断为大于90％。将酶储存于-80℃下，在冰上融解，及在使用之前，于测定缓冲液中稀释。

监测HCV NS3/4A蛋白水解活性之FRET肽测定

此体外测定之目的系为藉由本发明公开内容之化合物，测量衍生自如上述BMS菌株、H77菌株或J4L6S菌株之HCV NS3蛋白酶复合物之抑制。此项测定系提供本发明公开内容之化合物于抑制HCV NS3蛋白水解活性上系为如何有效之一种指标。

为监测HCV NS3/4A蛋白酶活性，系使用NS3/4A肽底物。此底物为RET S1(共振能量转移酯肽底物(Resonance Energy Transfer Depsipeptide Substrate)；AnaSpec公司目录#22991)(FRET肽)，由Taliani等人描述于Anal.Biochem.240(2)：60-67(1996)中。此肽之序列系宽松地以关于HCV NS3蛋白酶之NS4A/NS4B天然切割位点为基础，只是有酯间而非酰胺键在切割位点处。此肽亦含有荧光供体EDANS，接近此肽之一端，与受体DABCYL，接近另一端。此肽之荧光系藉由供体与受体间之分子间共振能量转移(RET)而被淬灭，但当NS3蛋白酶切割此肽时，产物系自RET淬灭作用而释出，且供体之荧光系变得显而易见。

将肽底物与三种重组NS3/4A蛋白酶复合物之一，于本发明公开内容之化合物不存在或存在下一起温育。化合物之抑制作用系藉由监测荧光反应产物之形成，使用Cytofluor系列4000下实时测得。

试剂如下：HEPES与甘油(超纯)系得自GIBCO-BRL。二甲亚砜(DMSO)系得自Sigma公司。β-巯基乙醇系得自Bio Rad。

测定缓冲液：50mM HEPES，pH 7.5；0.15M NaCl；0.1％Triton；15％甘油；10mM βME。底物：2μM最后浓度(得自DMSO中之2mM储液，被储存在-20℃下)。HCV NS3/4A蛋白酶类型1a(1b)，2-3nM最后浓度(得自25mM HEPES，pH 7.5，20％甘油，300mM NaCl，0.2％Triton-X100，10mM βME中之5μM储液)。对于具有趋近测定极限之功效之化合物而言，系藉由添加50微克/毫升牛血清白蛋白(Sigma)至测定缓冲液中，且降低最终蛋白酶浓度至300pM，使得测定更敏感。

测定系在得自Falcon之96-孔聚苯乙烯黑色板中进行。各孔含有测定缓冲液中之25微升NS3/4A蛋白酶复合物、10％DMSO/测定缓冲液中之50微升本发明公开内容之化合物及测定缓冲液中之25微升底物。对照组(没有化合物)亦在相同测定板上制备。在藉由添加底物引发酶反应之前，将酶复合物与化合物或对照溶液混合1分钟。将测定板立即使用Cytofluor系列4000(Perspective Biosystems)读取。仪器系被设定成于25℃下读取340纳米之发射与490纳米之激发。反应通常系被追踪大约15分钟。

抑制百分比系以下列方程式计算而得：

100-[(δF_抑制/δF_浓度)×100]

其中δF为于曲线之线性范围上，在荧光上之变化。将非线性曲线拟合应用至抑制-浓度数据，且50％有效浓度(IC₅₀)系利用Excel XLfit软件，使用方程式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))计算。

本发明公开内容之化合物，其系针对超过一种类型之NS3/4A复合物测试，系发现具有类似抑制性质，尽管当与1a菌株比较时，此等化合物系一致地展现抵抗1b菌株之较大功效。

特异性测定

进行特异性测定，以证实本发明公开内容之化合物在抑制HCV NS3/4A蛋白酶复合物上之体外选择性，当与其他丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶比较时。

本发明公开内容之化合物之特异性系针对多种丝氨酸蛋白酶：人嗜中性白细胞弹性蛋白酶(HNE)、猪胰弹性蛋白酶(PPE)及人胰凝乳蛋白酶，与一种半胱氨酸蛋白酶：人肝组织蛋白酶B，进行测定。在所有情况中，96-孔板格式方案，使用无论是比色对-硝基苯胺(pNA)底物或对各酶特异性之荧光测定氨基-甲基-香豆素(AMC)，系如以前(PCT专利申请WO 00/09543)所述使用，伴随着对丝氨酸蛋白酶测定之一些修正。所有酶均购自Sigma，EMDbiosciences，然而底物系得自Bachem、Sigma及EMDbiosciences。

关于胰凝乳蛋白酶之pNA测定系包括在室温下之1小时酶-抑制剂预温育，接着添加底物，及水解至～15％转化率，如在Spectramax Pro微量培养板读数器上所测量者。化合物浓度系从100改变成0.4μM，依其功效而定。组织蛋白酶B、HNE及PPE测定，每一个系以下述方式引发：添加底物至经室温下预温育10分钟之酶-抑制剂中，及水解至15％转化率，如在Cytofluor上所测量者。

关于各测定之最后条件如下：

50mM三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)pH 8，0.5M硫酸钠(Na₂SO₄)，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.01％Tween-20，具有100μM succ-AAPF-pNA与250pM胰凝乳蛋白酶。

50mM Tris-HCl，pH 8.0，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.02％Tween-20，5μM succ-AAPV-AMC及20nM HNE或8nM PPE；

100mM NaOAc(醋酸钠)pH 5.5，3％DMSO，1mM TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐)，5nM组织蛋白酶B(于使用之前，在含有20mM TCEP之缓冲液中经活化之酶储液)及在H₂O中稀释之2μM Z-FR-AMC。

抑制之百分比系使用下式计算：

[1-((UV_抑制-UV_空白试验)/(UV_对照-UV_空白试验))]×100

将非线性曲线拟合应用至抑制-浓度数据，且使用Excel XLfit软件计算50％有效浓度(IC₅₀)。

HCV复制子之产生

HCV复制子全细胞系统系按由Lohmann V，Korner F，Koch J，Herian U，Theilmann L，Bartenschlager R.，Science 285(5424)：110-3(1999)所述建构。此系统使得我们能够评估本发明之HCV蛋白酶化合物对于HCV RNA复制之作用。简言之，使用Lohmann论文中所述之HCV菌株1b序列(收受编号：AJ238799)，HCV cDNA系由Operon Technologies公司(Alameda，CA)合成，然后，使用标准分子生物学技术，将全长复制子装配在质粒pGem9zf(+)(Promega，Madison，WI)中。该复制子由(i)经融合至衣壳蛋白之前12个氨基酸之HCV 5′UTR，(ii)新霉素磷酸转移酶基因(neo)，(iii)得自脑心肌炎病毒(EMCV)之IRES，及(iv)HCV NS3至NS5B基因与HCV 3′UTR组成。使质粒DNA以ScaI线性化，且使RNA转录本于体外使用T7MegaScript转录试剂盒(Ambion，Austin，TX)，根据制造者说明进行合成。使cDNA之体外转录本转染至人肝细胞瘤细胞系HUH-7中。关于组成型表达HCV复制子之细胞之选择系于选择标记物新霉素(G418)存在下达成。所形成之细胞系系针对随着时间之正与负链RNA生产与蛋白质生产作特征鉴定。

HCV复制子FRET测定

发展HCV复制子FRET测定，以监测公开内容中所述化合物对于HCV病毒复制之抑制作用。使组成型表达HCV复制子之HUH-7细胞在含有10％胎牛血清(FCS)(Sigma)与1毫克/毫升G418(Gibco-BRL)之Dulbecco′s Modified Eagle Media(DMEM)(Gibco-BRL)中生长。将细胞在前一晚接种(1.5×104个细胞/孔)于96-孔组织培养无菌板中。化合物与无化合物对照组系在含有4％FCS、1∶100青霉素/链霉素(Gibco-BRL)、1：100L-谷氨酰胺及5％DMSO之DMEM中，于稀释板(0.5％DMSO最后浓度，在测定中)中预备好。将化合物/DMSO混合物添加至细胞中，并在37℃下培养4天。于4天后，首先评估细胞关于细胞毒性，使用alamar Blue(TrekDiagnotstic系统)供进行CC₅₀读数。化合物之毒性(CC₅₀)系藉由添加1/10体积之alamarBlue至培养细胞之培养基中而测得。4小时后，将得自各孔之荧光信号以530纳米下之激发波长与580纳米之发射波长，使用Cytofluor系列4000(PerspectiveBiosystems)读取。然后，将板以磷酸盐缓冲盐水(PBS)(3次150微升)充分地冲洗。使细胞以25微升含有HCV蛋白酶底物(5X细胞萤光素酶细胞培养物裂解试剂(Promega#E153A))之裂解测定试剂裂解，以蒸馏水稀释至1X，添加NaCl至150mM最后浓度，将FRET肽底物(如关于上文酶测定所述)自2mM储液在100％DMSO中稀释至10μM最后浓度。接着，将板放置在Cytofluor 4000仪器中，其已被设定成340纳米激发/490纳米发射，21个循环之自动模式，且将板在动力学模式中读取。EC₅₀测定系如关于IC₅₀测定所述进行。

HCV复制子萤光素酶报道分子测定

作为二级测定，将得自复制子FRET测定之EC₅₀测定值在复制子萤光素酶报道分子测定中确认。复制子萤光素酶报道分子测定之利用，最初系由Krieger等人(KriegerN，Lohmann V及Bartenschlager R，J.Virol.75(10)：4614-4624(2001))描述。关于本发明FRET测定所述之复制子构建体系改质，其方式是插入编码使Renilla萤光素酶基因之人源化形式之cDNA，与直接融合至萤光素酶基因之3′-末端之连接体序列。此插入系使用位于核心中之Asc1限制位点，而被引进复制子构建体中，直接在新霉素标记基因之上游。亦引进位置1179处之适应突变(丝氨酸成为异亮氨酸)(Blight KJ，Kolykhalov，AA Rice，CM，Science 290(5498)：1972-1974)。组成型表达此HCV复制子构建体之稳定细胞系系按上述产生。萤光素酶报道分子测定系按关于HCV复制子FRET测定所述设立，具有下述修正。于37℃/5％CO₂培养箱中4天后，分析细胞关于Renilla萤光素酶活性，使用Promega Dual-Glo萤光素酶测定系统。将培养基(100微升)自含有细胞之各孔移除。在其余50微升培养基中，添加50微升Dual-Glo萤光素酶试剂，并将板在室温下振动10分钟至2小时。然后，添加Dual-GloStop&Glo试剂(50微升)至各孔中，并将板于室温下再一次振动另外10分钟至2小时。将板在Packard TopCount NXT上，使用发光程式读取。

百分比抑制系使用以下公式计算：

将数值作图，并使用XLfit分析，以获得EC₅₀值。

将公开内容之代表性化合物在HCV酶测定、HCV复制子细胞测定中，和/或在数种所概述之特异性测定中评估。例如，已发现化合物18在酶测定中，针对NS3/4ABMS菌株，具有IC₅₀为3.4纳摩尔浓度(nM)。类似功效数值系以所发表之H77(IC₅₀为1.2nM)与J4L6S(IC₅₀为0.9nM)菌株获得。在复制子FRET测定中之EC₅₀值为9nM，而在复制子萤光素酶测定中为1.1nM。

于特异性测定中，已发现相同化合物具有下列活性：HLE＞1.56μM；PPE＞1.56μM；胰凝乳蛋白酶＞50μM；组织蛋白酶B＞50μM。此等结果表示此族群之化合物系对NS3蛋白酶是高度特异性的，且许多此等成员可抑制HCV复制子复制。

应明了的是，本发明公开内容之化合物可抑制HCV之所有基因型。

测试本公开内容之化合物，且发现具有如下述范围中之活性：

IC₅₀活性范围(NS3/4A BMS菌株)：A为＞0.2μM；B为0.02-0.2μM；C为0.6-20nM。

EC₅₀活性范围(对于所测试之化合物)：A为＞1μM；B为0.1-1μM；C为3-100nM。

表2

本领域普通技术人员将明白的是，本公开内容并不限于前文实施例，且其可以其他特定形式，在未偏离其基本特质下具体表现。因此所想要的是，实施例应于所有方面被认为是说明性而非限制性，参考随文所附之权利要求而非前文实施例，且在权利要求等效性之意义与范围内之所有变化系因此意欲被包含于其中。

Claims

1.一种化合物，其选自

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(5-(三氟甲基)-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲氧基-2-嘧啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-嘧啶基)-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-嘧啶基)-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-2-吡啶基缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-甲氧基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(三氟甲基)-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-甲基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-氰基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-2-吡啶基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-2-吡啶基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-3-吡啶基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-3-吡啶基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-苯基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-苯基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((二甲基氨磺酰)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-苯基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-苯基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-苯基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3，6-二甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-苯基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3，6-二甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3，6-二甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二甲基-2-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(4-甲基-5-硝基-2-吡啶基)缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-5-嘧啶基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-5-嘧啶基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(5-甲基-3-吡啶基)缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(6-甲基-3-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(6-甲基-3-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(5-(三氟甲基)-3-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(5-(三氟甲基)-3-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(6-甲基-2-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(6-甲基-2-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(2，6-二甲基-4-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(2，6-二甲基-4-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二氯-2-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4，6-二氯-2-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(5-氯-3-吡啶基)-3-甲基缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-乙基-1，3-噻唑-2-基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(5，6-二氢-4H-1，3-噻嗪-2-基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(6-甲基-2-吡啶基)-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-5-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(6-甲基-2-吡啶基)-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((3-(二甲氨基)-5-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-甲氧苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-甲氧苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(3-(甲基氨基甲酰基)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(3-(甲基氨基甲酰基)苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-氰基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-氰基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-氰基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-氰基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(叔丁基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(叔丁基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(3-氨磺酰苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(3-氨磺酰苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(2，3-二氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(2，3-二氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-羧基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-羧基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-羧基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-羧基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(叔丁基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(叔丁基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-苯基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-苯基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(叔丁基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(叔丁基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(4-氨磺酰苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(4-氨磺酰苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(3-((1-甲基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(3-((1-甲基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-氨基甲酰基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-氨基甲酰基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(二甲基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(二甲基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(二甲基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(二甲基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3，4-二氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3，4-二氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(二甲基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(二甲基氨基甲酰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(4-((1-甲基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(乙基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(乙基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(二甲基氨磺酰)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-(二甲基氨磺酰)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-氨基甲酰基苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(4-氨基甲酰基苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(3-(甲基氨磺酰)苯基)-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

3-甲基-N-(3-(甲基氨磺酰)苯基)-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(异丙氧羰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(异丙氧羰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(甲氧羰基)苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3-(甲氧羰基)苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((2S)-2-((4-乙氧基-1，2，5-噻二唑-3-基)氨基)丁酰基)-L-脯氨酰胺；

(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((2R)-2-((4-乙氧基-1，2，5-噻二唑-3-基)氨基)丁酰基)-L-脯氨酰胺；

N-(2-氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-[(7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基]-N-((1R，2S)-1-{[(环丙基磺酰基)氨基]羰基}-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(2-氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-[(7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基]-N-((1R，2S)-1-{[(环丙基磺酰基)氨基]羰基}-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(3，4-二氟苯基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((9-甲氧基-4-甲基-3，4-二氢-2H-[1，4]

嗪并[3，2-c]异喹啉-6-基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(3，4-二氟苯基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((9-甲氧基-4-甲基-3，4-二氢-2H-[1，4]嗪并[3，2-c]异喹啉-6-基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(6-甲氧基-3-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(6-甲氧基-3-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-((6-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-L-脯氨酰胺；

N-(6-甲氧基-3-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(6-甲氧基-3-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

N-(6-(二氟甲氧基)-3-吡啶基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；及

N-(6-(二氟甲氧基)-3-吡啶基)-3-甲基-D-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺；

或其药学上可接受之盐。

2.一种组合物，其包含如权利要求1所述之化合物，或其药学上可接受之盐，及药学上可接受之载体。

3.如权利要求2之组合物，其进一步包含至少一种具有抗-HCV活性之其他化合物。

4.如权利要求3之组合物，其中至少一种其他化合物为干扰素或三唑核苷。

5.如权利要求4之组合物，其中干扰素系选自干扰素α2B、经PEG化之干扰素α、复合干扰素、干扰素α2A及类淋巴母细胞干扰素τ。

6.如权利要求3之组合物，其中至少一种其他化合物系选自白介素2、白介素6、白介素12、提高1型辅助T细胞应答发展之化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、三唑核苷、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚胺及金刚烷乙胺。

7.如权利要求3之组合物，其中至少一种其他化合物系有效抑制靶标之功能，该靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCVNS4B蛋白质、HCV进入、HCV装配、HCV流出、HCV NS5A蛋白质及IMPDH，以治疗HCV感染。

8.一种如权利要求1所述之化合物或其药学上可接受之盐于药剂制造上之用途，该药剂系用于治疗HCV感染。

9.如权利要求8之用途，其中至少一种具有抗-HCV活性之其他化合物系在该药剂之前、之后或同时投予。

10.如权利要求9之用途，其中至少一种其他化合物为干扰素或三唑核苷。

11.如权利要求10之用途，其中所述干扰素系选自干扰素α2B、经PEG化之干扰素α、复合干扰素、干扰素α2A及类淋巴母细胞干扰素τ。

12.如权利要求9之用途，其中至少一种其他化合物系选自白介素2、白介素6、白介素12、提高1型辅助T细胞应答发展之化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、三唑核苷、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚胺及金刚烷乙胺。

13.如权利要求9之用途，其中至少一种其他化合物系有效抑制靶标之功能，该靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCVNS4B蛋白质、HCV进入、HCV装配、HCV流出、HCVNS5A蛋白质及IMPDH，以治疗HCV感染。