BRPI0718625A2 - Inibidores do vírus da hepatite c - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORES DO VÍRUS DA HEPATITE C".

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS

Esse pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. No.

5 de Série 60/865.034, depositado em 9 de novembro de 2006.

A presente descoberta está direcionada, de um modo geral aos compostos antivirais, e mais especificamente direcionada aos compostos os quais inibem a função da NS3 protease (também referida aqui como "serina protease") codificada pelo vírus da hepatite C (HCV), composições compre- endendo tais compostos e métodos para inibir a função da NS3 protease.

HCV é um patógeno humano principal, infectando uma estimati- va de 170 milhões de pessoas em todo o mundo - aproximadamente cinco vezes a quantidade de pessoas infectadas pelo vírus da imunodeficiência humana tipo 1. Uma fração substancial desses indivíduos infectados por 15 HCV desenvolve sérias doenças hepáticas progressivas, incluindo cirrose e carcinoma hepatocelular.

Atualmente, a terapia contra HCV mais eficaz emprega uma combinação de alfa-interferon e ribavirina, levando a uma eficácia sustenta- da em 40% dos pacientes. Resultados clínicos recentes demonstram que o 20 interferon alfa peguilado é superior ao interferon alfa não-modificado como monoterapia. Entretanto, mesmo com regimes terapêuticos experimentais envolvendo combinações de alfa-interferon peguilado e ribavirina, uma fra- ção substancial de pacientes não tem uma redução sustentada na carga vi- ral. Deste modo, existe uma clara e não-atendida necessidade de desenvol- 25 ver terapias eficazes para o tratamento de infecção por HCV.

HCV é um vírus de RNA de fita positiva. Baseando-se em uma comparação da seqüência de aminoácido deduzida e na vasta similaridade na região 5’ não-traduzida, HCV tem sido classificado como um gênero se- parado na família Flaviviridae. Todos os membros da família Flaviviridae têm 30 vírions envelopados que contêm um genoma de RNA e fita positiva codifi- cando todas as proteínas vírus específicas conhecidas através da tradução de uma estrutura de leitura aberta única não-interrompida. 1 Heterogeneidade considerável é encontrada no nucleotídeo e na

seqüência de aminoácidos codificada por todo o genoma do HCV. Seis ge- nótipos principais foram caracterizados, e mais de 50 subtipos foram descri- tos. Os principais genótipos de HCV diferem nas suas distribuições ao redor 5 do mundo, e a significância clínica da heterogeneidade genética do HCV permanece evasiva apesar dos vários estudos dos efeitos possíveis dos ge- nótipos na patogênese e terapia.

O genoma de RNA de HCV de fita única é de aproximadamente 9500 nucleotídeos de comprimento e tem uma estrutura de leitura aberta (ORF) única codificando uma única poliproteína grande de cerca de 3000 aminoácidos. Nas células infectadas, essa poliproteína é clívada em vários sítios por proteases celulares e virais para produzir as proteínas estruturais e não-estruturais (NS). No caso do HCV, a geração de proteínas não- estruturais maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A e NS5B) é efetuada por duas proteases virais. A primeira cliva na junção NS2-NS3; a segunda é uma serina protease contida na região N-terminal de NS3 e medeia todas as cli- vagens subsequentes a jusante de NS3, tanto em cis, no sítio de clivagem NS3-NS4A, e em trans, para os sítios NS4A- NS4B, NS4B-NS5A, NS5A- NS5B remanescentes. A proteína NS4A aparenta estar servir a múltiplas funções, agindo como um co-fator para a NS3 protease e possivelmente au- xiliando na localização da membrana de NS3 e de outros componentes da replicase viral. A formação complexa da proteína NS3 com NS4A é essencial para o processamento eficiente da poliproteína, aumentando a clivagem pro- teolítica em todos os sítios. A proteína NS3 também exibe as atividades de nucleosídeo trifosfatase e da RNA helicase. NS5B é uma RNA polimerase dependente de RNA que está envolvida na replicação de HCV.

A presente descoberta fornece compostos peptídicos que po- dem inibir o funcionamento da NS3 protease, por exemplo, em combinação com a NS4A protease. Além disso, a presente descoberta descreve a admi- 30 nistração da terapia de combinação a um paciente, por meio do que um composto de acordo com a presente descoberta, o qual é eficaz para inibir a NS3 protease de HCV, pode ser administrado com um ou dois compostos adicionais com atividade anti-HCV.

Em um primeiro aspecto a presente descoberta fornece um composto de fórmula (I)

p^5C

R3

(I),

ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, em que

m é 1, 2 ou 3;

R1 é selecionado de hidróxi e -NHSO2R6; em que R6 é selecionado de alquila, arila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, heterociclila, e -NRaRb1 em que o alquila, a cicloalquila e a parte cicloalquila do (cicloalquila)alquila são 10 opcionalmente substituídas por um, dois ou três substituintes selecionados de alquenila, alcóxi, alcoxialquila, alquila, arilalquila, arilcarbonila, ciano, ci- cloalquenila, (cicloalquila)alquila, halo, haloalcóxi, haloalquila e (N- ReRf)carbonila;

R2 é selecionado de hidrogênio, alquenila, alquila e cicloalquila, em que a alquenila, alquila e cicloalquila são opcionalmente substituídas por halo;

R3 é selecionado de alquenila, alcoxialquila, alcoxicarbonilalquila, al- quila, arilalquila, carboxialquila, cianoalquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, haloalcóxi, haloalquila, (heterociclila)alquila, hidroxialquila, (NRcRd)alquila e (NReRf)carbonilalquila; 1 R4 é selecionado de fenila e um anel parcialmente ou completamente

insaturado de cinco ou seis membros opcionalmente contendo um, dois, três ou quatro heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre; em que cada um dos anéis é opcionalmente substituído por um, dois, três ou 5 quatro substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alcoxicar- bonila, alquila, alquilcarbonila, alquilsulfanila, carbóxi, ciano, cicloalquila, ci- cloalquilóxi, halo, haloalquila, haloalcóxi, -NRcRd, (NReRf)carbonila, (N- ReRf)sulfonila, e oxo; com a condição de que quando R4 é um anel substituí- do de seis membros, todos os substituintes no anel diferentes de flúor de- 10 vem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação no anel da porção molecular de origem;

p5B p5c p5E e p5F sg0 cacja um independentemente sele- cionados de hidrogênio, alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, arila, carbóxi, ciano, cianoalquila, cicloalquila, halo, haloalquila, haloalcóxi, hetero- ciclila, hidróxi, hidroxialquila, nitro,-NRcRd, (NRcRd)alquila, (NRcRd)alcóxi, (NReRf)carbonila e (NReRf)sulfonila; ou

dois grupos R5 adjacentes, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados, formam um anel parcialmente ou completa- mente insaturado de quatro a sete membros opcionalmente contendo um ou 20 dois heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três grupos independentemente selecionados de alcóxi, alquila, ciano, halo, ha- loalcóxi e haloalquila;

Ra e Rb são independentemente selecionados de hidrogênio, alcóxi, alquila, arila, arilalquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, heterociclila e hete- rociclilalquila; ou Ra e Rb juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados formam um anel monocíclico heterocíclico de quatro a sete membros;

Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, alcoxial- quila, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, arilalquila e haloalquila; e

Re e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, arila, arilalquila e heterociclila; em que o arila, a parte arila do arilalquila e o heterociclila são opcionalmente substituídas por um ou dois substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alquila e halo.

Em uma primeira modalidade do primeiro aspecto a presente descoberta fornece um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamen- te aceitável seu, em que R1 é -NHSO2R6.

Em uma segunda modalidade do primeiro aspecto a presente descoberta fornece um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamen- te aceitável seu, em que m é 1 ou 2;

R1 é -NHSO2R6; em que R6 é selecionado de alquila, arila, ci- 10 cloalquila, (cicloalquila)alquila, heterociclila, e -NRaRb, em que o alquila, a cicloalquila e o a parte cicloalquila do (cicloalquila)alquila são opcionalmente substituídas por um, dois ou três substituintes selecionados de alquenila, alcóxi, alcoxialquila, alquila, arilalquila, arilcarbonila, ciano, cicloalquenila, (cicloalquila)alquila, halo, haloalcóxi, haloalquila, e (NReRf)carbonila;

R2 é selecionado de alquenila, alquila e cicloalquila, em que a alqueni-

la, alquila e cicloalquila são opcionalmente substituídas por halo;

R3 é selecionado de alquenila e alquila;

R4 é selecionado de fenila e um anel parcialmente ou completamente insaturado de cinco ou seis membros opcionalmente contendo um, dois, três 20 ou quatro heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre; em que cada um dos anéis é opcionalmente substituído por um, dois, três ou quatro substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alcoxicar- bonila, alquila, alquilcarbonila, alquilsulfanila, carbóxi, ciano, cicloalquila, ci- cloalquilóxi, halo, haloalquila, haloalcóxi, -NRcRd1 (NReRf)carbonila, (N- 25 ReRf)sulfonila e oxo; com a condição de que quando R4 é um anel substituí- do de seis membros todos os substituintes do anel diferentes de flúor devem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação no anel à porção molecular de origem;

R5a1 R581 R5c, R5d, R5e e R5p são cada um independentemente sele- cionados de hidrogênio, alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, arila, carbóxi, ciano, cianoalquila, cicloalquila, halo, haloalquila, haloalcóxi, hetero- ciclila, hidróxi, hidroxialquila, nitro,-NRcRd, (NRcRd)alquila, (NRcRd)alcóxi, (NReRf)carbonila e (NReRf)sulfonila; ou

dois grupos R5 adjacentes, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados, formam um anel parcialmente ou completa- mente insaturado de quatro a sete membros opcionalmente contendo um ou dois heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três grupos independentemente selecionados de alcóxi, alquila, ciano, halo, ha- loalcóxi e haloalquila;

Ra e Rb são independentemente selecionados de hidrogênio, alcóxi, alquila, arila, arilalquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, heterociclila e hete- rociclilalquila; ou Ra e Rb juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados formam um anel monocíclico heterocíclico de quatro a sete membros;

Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, alcoxial- quila, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, arilalquila e haloalquila; e

Re e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, arila, arilalquila e heterociclila; em que o arila, a parte arila do arilalquila e o heterociclila são opcionalmente substituídas por um ou dois substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alquila e halo.

Em uma terceira modalidade do primeiro aspecto, a presente descoberta fornece um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamen- te aceitável seu, em que R6 é selecionado de cicloalquila não-substituída e - NRaRb.

Em uma quarta modalidade do primeiro aspecto, a presente descoberta fornece um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamen- te aceitável seu, em que

m é 1;

R1 é -NHSO2R6; em que R6 é cicloalquila não-substituída;

R2 é alquenila;

R3 é selecionado de alquenila e alquila; R4 é selecionado de fenila e um anel parcialmente ou completamente ín- saturado de cinco ou seis membros opcionalmente contendo um, dois, três ou quatro heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre; em que cada um dos anéis é opcionalmente substituído por um, dois ou três 5 substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, carbóxi, ciano, cicloalquila, cicloalquilóxi, halo, halo- alquila, haloalcóxi, -NRcRd, (NReRf)carbonila, (NReRf)sulfonila, e oxo; com a condição de que quando R4 é um anel substituído de seis membros todos os substituintes do anel diferentes de flúor devem estar nas posições meta e/ou 10 para em relação ao ponto de ligação do anel à porção molecular de origem;

r5b^ p5E e p5F S~Q um independentemente seleciona-

dos de hidrogênio, alcóxi, arila e -NRcRd; ou

dois grupos R5 adjacentes, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados, formam um anel parcialmente ou completamente 15 insaturado de seis membros opcionalmente contendo um ou dois heteroáto- mos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três grupos indepen- dentemente selecionados de alcóxi, alquila, ciano, halo, haloalcóxi e haloal- quila;

Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, alcoxialquila, alquila, alquilcarbonila e arilalquila; e

Re e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, arila e arilalquila.

Em uma quinta modalidade do primeiro aspecto a presente descober- ta fornece um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel seu,

em que m é 1;

R1 é -NHSO2R6; em que R6 é cicloalquila não-substituida;

R2 é alquenila;

R3 é selecionado de alquenila e alquila; R4 é fenila opcionalmente substituído por um, dois ou três substituin- tes independentemente selecionados de alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, al- quilcarbonila, carbóxi, ciano, cicloalquila, cicloalquilóxi, halo, haloalquila, ha- loalcóxi, -NRcRd, (NReRf)carbonila, (NReRf)sulfonila, e oxo; com a condição de que todos os substituintes no anel diferentes de flúor devem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação do anel à porção

molecular de origem;

rsa, R5b R5c R5d R5e e r5f são cada um jncjepenc|entemente sele- cionados de hidrogênio, alcóxi, arila e -NRcRd; ou

dois grupos R5 adjacentes, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados, formam um anel parcialmente ou completa- mente insaturado de seis membros opcionalmente contendo um ou dois he- teroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxo- fre, em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três grupos independentemente selecionados de alcóxi, alquila, ciano, halo, haloalcóxi e haloalquila;

Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, alcoxi- carbonila, alquila, alquilcarbonila e arilalquila; e

Re e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, arila e arilalquila.

Em uma sexta modalidade do primeiro aspecto, a presente descober- ta fornece um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel seu,

em que m é 1;

R1 é -NHSO2R6; em que R6 é cicloalquila não-substituída;

R2 é alquenila;

R3 é selecionado de alquenila e alquila;

R4 é um anel completamente insaturado de seis membros contendo um átomo de nitrogênio; em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alcoxi- carbonila, alquila, alquilcarbonila, carbóxi, ciano, cicloalquila, cicloalquilóxi, halo, haloalquila, haloalcóxi, -NRcRd, (NReRf)carbonila, (NReRf)sulfonila, e oxo; com a condição de que todos os substituintes no anel diferentes de flúor devem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação do anel à porção molecular de origem;

R5A, R5b, R5c, R5d, R5e e R5p são cada um independentemente sele-

cionados de hidrogênio, alcóxi, arila e -NRcRd; ou

dois grupos R5 adjacentes, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados, formam um anel parcialmente ou completa- mente insaturado de seis membros opcionalmente contendo um ou dois he- 10 teroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxo- fre, em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três grupos independentemente selecionados de alcóxi, alquila, ciano, halo, haloalcóxi e haloalquila;

Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, al- coxicarbonila, alquila, alquilcarbonila e arilalquila; e

Re e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quila, arila e arilalquila.

Em um segundo aspecto a presente descoberta fornece uma composição compreendendo um composto de fórmula (I), ou um sal farma- 20 ceuticamente aceitável seu, e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma primeira modalidade do segundo aspecto a composição ainda compre- ende pelo menos um composto adicional com atividade anti-HCV. Em uma segunda modalidade do segundo aspecto, pelo menos um dos compostos adicionais é um interferon ou ribavirina. Em uma terceira modalidade do se- 25 gundo aspecto o interferon é selecionado de interferon alfa 2B, interferon alfa peguilado, interferon de consenso, interferon alfa 2A e interferon tau Iin- foblastoide.

Em uma quarta modalidade do segundo aspecto a presente desco- berta fornece uma composição compreendendo um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, um veículo farmaceuticamente aceitável e pelo menos um composto adicional com atividade anti-HCV; em que pelo menos um dos compostos adicionais é selecionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que intensifica o desenvolvi- mento de uma resposta das células T helper tipo 1, RNA interferente, RNA anti-senso, Imiquimod, ribavirina, um inibidor da inosina-5’-monofosfato de- sidrogenase, amantadina e rimantadina.

5 Em uma quinta modalidade do segundo aspecto a presente

descoberta fornece uma composição compreendendo um composto de fór- mula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, um veículo farmaceuti- camente aceitável e pelo menos um composto adicional com atividade anti- HCV; em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a 10 função de um alvo selecionado de HCV metaloprotease, HCV serina protea- se, HCV polimerase, HCV helicase, proteína NS4B HCV, entrada HCV, mon- tagem HCV, saída HCV, proteína NS5A HCV e IMPDH para o tratamento de uma infecção por HCV.

Em um terceiro aspecto a presente descoberta fornece um mé- todo de tratamento de uma infecção por HCV em um paciente, compreen- dendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou de um sal farmaceuticamente acei- tável seu. Em uma primeira modalidade do terceiro aspecto o método com- preende ainda a administração de pelo menos um composto adicional com atividade anti-HCV antes de, depois ou simultaneamente com o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável seu. Em uma segunda modalidade do terceiro aspecto pelo menos um dos compostos adicionais é um interferon ou ribavirina. Em uma quarta modalidade do terceiro aspecto o interferon é selecionado de interferon alfa 2B, interferon alfa peguilado, inter- feron de consenso, interferon alfa 2A e interferon tau linfoblastoide.

Em uma quinta modalidade do terceiro aspecto a presente des- coberta fornece um método de tratamento de uma infecção por HCV em um paciente, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou de um sal farma- 30 ceuticamente aceitável seu, e pelo menos um composto adicional com ativi- dade anti-HCV antes de, depois ou simultaneamente com o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, em que pelo menos um dos compostos adicionais é selecionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que intensifica o desenvolvimento de uma res- posta das células T helper tipo 1, RNA interferente, RNA anti-senso, Imiqui- mod, ribavirina, um inibidor da inosina-5’-monofosfato desidrogenase, aman- 5 tadina e rimantadina.

Em uma sexta modalidade do terceiro aspecto a presente des- coberta fornece um método de tratamento de uma infecção por HCV em um paciente, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceu- 10 ticamente aceitável seu, e pelo menos um composto adicional com atividade anti-HCV antes de, depois ou simultaneamente com o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função de um alvo selecionado de HCV metaloprotease, HCV serina protease, HCV polimerase, HCV helicase, 15 proteína NS4B HCV, entrada HCV, montagem HCV, saída HCV, proteína NS5A HCV e IMPDH para o tratamento de uma infecção por HCV.

Em um quarto aspecto a presente descoberta fornece uma composição compreendendo um composto de fórmula (I), ou um sal farma- ceuticamente aceitável seu, um, dois, três, quatro ou cinco compostos adi- 20 cionais com atividade anti-HCV, e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma primeira modalidade do quarto aspecto a composição compreende três ou quatro compostos adicionais com atividade anti-HCV. Em uma se- gunda modalidade do quarto aspecto a composição compreende um ou dois compostos adicionais com atividade anti-HCV.

Em um quinto aspecto a presente descoberta fornece um méto-

do de tratamento de uma infecção por HCV em um paciente, compreenden- do a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou de um sal farmaceuticamente aceitável seu e um, dois, três, quatro ou cinco compostos adicionais com atividade anti-HCV antes de, depois ou simultaneamente com o composto de fórmula

(l), ou um sal farmaceuticamente aceitável seu. Em uma primeira modalida- de do primeiro aspecto o método compreende a administração de três ou quatro compostos adicionais com atividade anti-HCV. Em uma segunda mo- dalidade do primeiro aspecto o método compreende a administração de um ou dois compostos adicionais com atividade anti-HCV.

Outros aspectos da presente descoberta podem incluir combi- nações adequadas das modalidades aqui reveladas.

Ainda outros aspectos e modalidades podem ser encontrados na descrição fornecida aqui.

A descrição da presente descoberta aqui deveria ser construída em congruência com as leis e princípios das ligações químicas. Em alguns exemplos, pode ser necessário remover um átomo de hidrogênio para aco- modar um substituinte em qualquer dado local.

Deve ser entendido que os compostos englobados pela presen- te descoberta são aqueles que são adequadamente estáveis para uso como agente farmacêutico.

É tencionado que a definição de qualquer substituinte ou variá-

vel em um local particular em uma molécula pode ser independente das su- as definições em qualquer local naquela molécula. Por exemplo, quando n = 2, cada um dos dois grupos R5 podem ser os mesmos ou diferentes.

Todas as patentes, pedidos de patentes e referências literárias citadas no relatório descritivo são aqui incorporadas por referência na sua totalidade. No caso de inconsistências, a presente descoberta, incluindo de- finições, irá prevalecer.

Conforme utilizado no presente relatório descritivo, os seguintes termos têm os significados indicados:

Conforme aqui utilizadas, as formas singulares "um", "uma" e

"o" incluem referências no plural, a não ser que o contexto diga claramente o contrário.

A não ser que seja estabelecido de outra forma, todos os grupos arila, cicloalquila e heterocicila da presente descoberta podem ser substituí- dos conforme descrito em cada uma de suas respectivas definições. Por e- xemplo, a parte arila de um grupo arilalquila pode ser substituída conforme descrito na definição do termo "arila". Em alguns exemplos, a quantidade de átomos de carbono em qualquer grupo particular é denotada depois da citação do grupo. Por exem- plo, o termo "alquila C1-2" denota um grupo alquila contendo um ou dois áto- mos de carbono. Onde essas designações existem, elas ultrapassam todas as outras definições contidas ali.

Conforme aqui utilizadas, as formas singulares "um", "uma" e "o" incluem referências no plural, a não ser que o contexto diga claramente outra coisa.

O termo "alquenila", conforme aqui utilizado, se refere ao grupo

de cadeia linear ou ramificada de dois a seis átomos de carbono contendo pelo menos uma dupla ligação carbono-carbono.

O termo "alcóxi", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila ligado à porção molecular de origem através de um átomo de oxigê- nio.

O termo "alcoxialquila", conforme aqui utilizado, se refere a um

grupo alquila substituído por um, dois ou três grupos alcóxi.

O termo "alcoxicarbonila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alcóxi ligado à porção da molécula de origem através de um grupo carbonila.

O termo "alcoxicarbonilalquila", conforme aqui utilizado, se refe-

re a um grupo alquila substituído por um, dois ou três grupos alcoxicarbonila.

O termo "alquila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo derivado de um hidrocarboneto de cadeia saturada linear ou ramificado con- tendo de um a dez átomos de carbono.

O termo "alquilcarbonila", conforme aqui utilizado, se refere a

um grupo alquila ligado à porção molecular de origem através de um grupo carbonila.

O termo "alquilsulfanila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila ligado à porção molecular de origem através de um átomo de

enxofre.

O termo "arila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo fenila, ou a um sistema de anel bicíclico fundido em que um ou ambos dos anéis é um grupo fenila. Sistemas de anel bicíclico fundido consistem em um grupo fenila fundido a um anel carbocíclico aromático ou não-aromático de quatro a seis membros. Os grupos arila da presente descoberta podem estar ligados à porção molecular de origem através de qualquer átomo de carbono 5 substituível no grupo. Exemplos representativos de grupos arila incluem, po- rém não estão limitados, a indanila, indenila, naftila, fenila, e tetraidronaftila. Os grupos arila da presente descoberta podem ser opcionalmente substituí- dos por um, dois, três, quatro ou cinco substituintes independentemente se- lecionados de alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, carbóxi, cicloal- 10 quila, cicloalquilóxi, ciano, halo, haloalcóxi, haloalquila, nitro, -NRcRd, (NR- cRd)carbonila e oxo.

O termo "arilalquila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila substituído por um, dois, três ou quatro grupos arila.

O termo "arilcarbonila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo arila ligado à porção molecular de origem através de um grupo carbo- nila.

O termo "carbonila", conforme aqui utilizado, se refere a -C(O)-.

O termo "carbóxi", conforme aqui utilizado, se refere a -CO2H.

O termo "carboxialquíla", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila substituído por um, dois ou três grupos carbóxi.

O termo "ciano", conforme aqui utilizado, se refere a -CN.

O termo "cianoalquíla", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila substituído por um, dois ou três grupos ciano.

O termo "cicloalquenila", conforme aqui utilizado, se refere a um sistema de anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico não-aromático e parcial- mente insaturado com de três a catorze átomos de carbono e zero heteroá- tomos. Exemplos representativos de grupos cicloalquenila incluem, porém não estão limitados, a cicloexenila, octaidronaftalenila e norbornilenila.

O termo "cicloalquila", conforme aqui utilizado, se refere a um sistema de anel de hidrocarboneto monocíclico ou bicíclico saturado com de três a dez átomos de carbono e zero heteroátomos. Exemplos representati- vos de grupos cicloalquila incluem, porém não estão limitados, a ciclopropila, ciclobutila e ciclopentila.

O termo "(cicloalquila)alquila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila substituído por um, dois ou três grupos cicloalquila.

O termo "cicloalquilóxi", conforme aqui utilizado, se refere a um

grupa cicloalquila ligado à porção molecular de origem através de um átomo de oxigênio.

Os termos "halo" e "halogênio", conforme aqui utilizados, se re- ferem a F, Cl, Br e I.

O termo "haloalcóxi", conforme aqui utilizado, se refere a um

grupo haloalquila ligado à porção molecular de origem através de um átomo de oxigênio.

O termo "haloalquila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila substituído por um, dois, três ou quatro átomos de halogênio.

O termo "heterociclila", conforme aqui utilizado, se refere a um

anel de cinco, seis ou sete membros contendo um, dois ou três heteroáto- mos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre. O anel de cinco membros tem de zero a três duplas ligações. O termo "hetero- ciclila", também inclui grupos bicíclicos nos quais o anel heterociclila é fundi- 20 do a um anel carbocíclico aromático ou não-aromático de quatro a seis membros ou a outro grupo heterociclila monocíclico. Os grupos heterociclila da presente descoberta podem estar ligados à porção molecular de origem através de um átomo de carbono ou de um átomo de nitrogênio no grupo. Exemplos de grupos heterociclila incluem, porém não estão limitados, a ben- 25 zotienila, furila, imidazolila, indolinila, indolila, isotiazolila, isoxazolila, morfoli- nila, oxazolila, piperazinila, piperidinila, pirazolila, piridinila, pirrolidinila, pirro- lopiridinila, pirrolila, tiazolila, tienila e tiomorfolinila. Os grupos heterociclila da presente descoberta podem ser opcionalmente substituídos por um, dois, três, quatro ou cinco substituintes independentemente selecionados de alcó- 30 xi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, carbóxi, cicloalquila, cicloalquilóxi, ciano, halo, haloalcóxi, haloalquila, nitro, -NRcRd, (NRcRd)carbonila, e oxo. O termo "heterociclilalquila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila substituído por um, dois ou três grupos heterociclila.

O termo "hidróxi", conforme aqui utilizado, se refere a -OH.

O termo "hidroxialquila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila substituído por um, dois ou três grupos hidroxila.

O termo "nitro", conforme aqui utilizado, se refere a -NO2.

O termo "-NRaRb", conforme aqui utilizado, se refere a dois gru- pos, Ra e Rb, os quais são ligados à porção molecular de origem através de um átomo de nitrogênio. Ra e Rb são independentemente selecionados de 10 hidrogênio, alcóxi, alquila, arila, arilalquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, heterociclila e heterociclilalquila; ou Ra e Rb juntamente com o átomo de ni- trogênio ao qual eles estão ligados formam um anel heterocíclico monocícli- co de cinco a seis membros.

O termo "-NRcRd", conforme aqui utilizado, se refere a dois gru- pos, Rc e Rd, os quais estão ligados à porção molecular de origem através de um átomo de nitrogênio. Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, alcoxicarbonila, alquila e alquilcarbonila.

O termo "(NRcRd)alcóxi", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo (NRcRd)alquila ligado à porção molecular de origem através de um átomo de oxigênio.

O termo "(NRcRd)alquila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo alquila substituído por um, dois ou três grupos -NRcRd.

O termo "(NRcRd)carbonila", conforme aqui utilizado, se refere a um grupo -NRcRd ligado à porção molecular de origem através de um grupo carbonila.

O termo "-NReRf", conforme aqui utilizado, se refere a dois gru- pos, Re e Rf, os quais são ligados à porção da molécula de origem através de um átomo de nitrogênio. Re e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, arila e arilalquila.

O termo ”(NReRf)carbonila", conforme aqui utilizado, se refere a

um grupo -NReRfIigado à porção molecular de origem através de um grupo carbonila. O termo "(NReRf)carbonilalquila", conforme aqui utilizado, se re- fere a um grupo (NReRf)carbonila ligado à porção molecular de origem atra- vés de um grupo alquila.

O termo ”(NReRf)sulfonila", conforme aqui utilizado, se refere a 5 um grupo -NReRf ligado à porção molecular de origem através de um grupo sulfonila.

O termo "oxo", conforme aqui utilizado", se refere a =O.

O termo "sulfonila", conforme aqui utilizado, se refere a -SO2-.

O termo "pró-fármaco", conforme aqui utilizado, representa compostos os quais são rapidamente transformados in vivo aos compostos de origem por hidrólise no sangue. Pró-fármacos da presente descoberta incluem ésteres de grupos hidróxi na molécula de origem, ésteres de grupos carbóxi na molécula de origem e amidas das aminas na molécula de origem.

Os compostos da presente descoberta podem existir como sais farmaceuticamente aceitáveis. O termo "sal farmaceuticamente aceitável", conforme aqui utilizado, representa sais de formas zwitteriônicas dos com- postos da presente descoberta os quais são solúveis em água ou em óleo ou dispersáveis, os quais são, dentro do escopo do julgamento médico sen- sato, adequados para uso em contato com os tecidos dos pacientes sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou com- plicação comensurada com uma proporção beneficio/risco aceitável, e são eficazes para os seus usos tencionados. Os sais podem ser preparados du- rante o isolamento e purificação final dos compostos ou separadamente pela reação de uma funcionalidade básica adequada com um ácido adequado. Os sais de adição de ácido representativos incluem acetato, adipato, algina- to, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, can- forato, canforsulfonato; digluconato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, formiato, fumarato, cloridrato, bromidrato, iodidrato, 2- hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, mesitilenossulfonato, metanossul- fonato, naftilenossulfonato, nicotinato, 2-naftalenossulfonato, oxalato, palmo- ato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tricloroacetato, trifluoracetato, fosfato, glutamato, bicar- bonato, para-toluenossulfonato e undecanoato. Exemplos de ácidos os quais podem ser empregados para formar sais de adição de ácido farmaceutica- mente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos tais como os ácidos clorídrico, bromídríco, sulfúrico e fosfórico, e ácidos orgânicos tais como oxálico, malei- co, succínico e cítrico.

Sais de adição básicos podem ser preparados durante o isola- mento final e purificação dos compostos pela reação de um grupo ácido com uma base adequada, tal como o hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um cátion metálico ou com amônia ou uma amina primária, secundária ou terciá- 10 ria orgânica. Os cátions dos sais farmaceuticamente aceitáveis incluem lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio, assim como cátions de amina não-tóxicos quaternários tais como amônio, tetrametilamônio, tetraetilamô- nio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilami- na, tributilamina, piridina, /V,/V-dimetilanilina, /V-metilpiperidina, N- 15 metilmorfolina, dicicloexilamina, procaína, dibenzilamina, N,N- dibenzilfenotilamina, e Λ/,Λ/’-dibenziletilenodiamina. Outras aminas orgânicas representativas úteis para a formação de sais de adição de base incluem etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina e piperazina.

Conforme aqui utilizado, o termo "atividade anti-HCV" significa que o composto é eficaz para tratar o vírus HCV.

O termo "compostos da descoberta" e expressões equivalentes significam abarcar os compostos de fórmula (I), e enantiômeros, diastereoi- sômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis seus. Semelhantemente, refe- rências aos intermediários são tencionadas a abarcar os seus sais onde o contexto permite.

O termo "paciente"inclui tanto humanos quanto outros mamífe- ros.

O termo "composição farmacêutica" significa uma composição compreendendo um composto da descoberta juntamente com pelo menos um veículo farmacêutico adicional, isto é, um adjuvante, excipiente ou veícu- lo, tais como diluentes, agentes conservantes, agentes de enchimentos, a- gentes reguladores de fluxo, agentes desintegrantes, agentes umidificantes, agentes emulsificantes, agentes suspensores, agentes adoçantes, agentes flavorizantes, agentes perfumantes, agentes antibacterianos, agentes anti- fúngicos, agentes lubrificantes e agentes dispensadores, dependendo da natureza do modo de administração e das formas de dosagem. Ingredientes

5 listados em Remington1S Pharmaceutical Sciences, 18a edição, Mack Publi- shing Company, Easton, PA (1999), por exemplo, podem ser usados.

A frase "farmaceuticamente aceitável" é aqui empregada para se referir àqueles compostos, materiais, composições e/ou formas de dosa- gem os quais são, dentro do escopo do julgamento médico sensato, ade- 10 quados para uso em contato com os tecidos dos pacientes sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação comensurada co uma proporção risco/benefício aceitável.

O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa a quanti- dade total de cada componente ativo que é suficiente para mostrar um bene- 15 fício ao paciente significativo, por exemplo, uma redução sustentada na car- ga viral. Quando aplicado a um ingrediente ativo individual, administrado so- zinho, o termo se refere somente àquele ingrediente. Quando aplicado a uma combinação, o termo se refere às quantidades combinadas dos ingredi- entes ativos que resultam no efeito terapêutico, quer sejam administradas 20 em combinação, em série ou simultaneamente.

Os termos "tratar" e "tratando" se referem a: (i) prevenir uma doença, distúrbio ou condição da ocorrência em um paciente o qual pode ser predisposto à doença, distúrbio e/ou condição, porém que não tenha sido ainda diagnosticado como o possuindo; (ii) inibir a doença, distúrbio ou con- 25 dição, isto é, interrompendo o seu desenvolvimento; e/ou (iii) aliviando a do- ença, distúrbio ou condição, isto é, fazendo regredir a doença, distúrbio e/ou condição.

Onde usadas para nomear compostos da presente descoberta, as designações P1’, P1, P2, P2*, P3 e P4, conforme aqui utilizadas, mapei- am as posições relativas dos resíduos de aminoácidos de um aglutinante do inibidor da protease em relação à ligação do substrato de clivagem do peptí- deo natural. A clivagem ocorre no substrato natural entre P1 e P1 ’, onde as posições não-iniciadoras designam aminoácidos a partir da extremidade C- terminal do sítio de clivagem natural do peptídeo se estendendo para o N- terminal; enquanto que as posições do iniciador emanam da extremidade N- terminal da designação do sítio de clivagem e se estendem para o C- 5 terminal. Por exemplo, P1 ’ se refere à primeira posição distante da extremi- dade direita do C-terminal do sítio de clivagem (isto é, primeira posição N- terminal); enquanto P1 inicia a numeração do lado esquerdo do sítio de cli- vagem C-terminal, P2: segunda posição do C-terminal, etc.). (ver Berger A.

& Schechter I., Transaetions of the Royal Society London series (1970), B257,249-2641.

A figura a seguir mostra as designações para os compostos da presente descoberta.

R5C R5b R5^s Λ JL p5A R5E' KJ •v^N R5f O P2* Centros assimétricos existem nos compostos da presente des- coberta. Por exemplo, os compostos podem incluir o elemento ciclopropila P1 de fórmula R2

V/2

H O

Ρ1

em que Ci e C2 cada um representam um átomo de carbono assimétrico nas posições 1 e 2 do anel ciclopropila.

(IR, 2S)

R2 é sin ao carbonil

(1S.2R)

2

R é sin ao carbonila

(IR, 2R)

R2 é sin à amida

(IS, 2S)

2

R é sin à amida

Deve ser entendido que a descoberta engloba todas as formas estereoquímicas, ou suas misturas, as quais possuem a capacidade de inibir a HCV protease. Certos compostos da presente descoberta podem também exis- tir em diferentes formas conformacionais estáveis, as quais podem ser sepa- ráveis. A assimetria torsional devido à rotação restrita acerca de uma ligação única assimétrica, por exemplo, devido ao impedimento estéreo ou tensão 5 do anel, pode permitir a separação de diferentes confôrmeros. A presente descoberta inclui cada isômero conformacional desses compostos e suas misturas.

Certos compostos da presente descoberta podem existir na for- ma zwitteriônica e a presente descoberta inclui cada forma zwitteriônica des- ses compostos e suas misturas.

Quando é possível que, para uso em terapia, quantidades tera- peuticamente eficazes de um composto de fórmula (I), assim como seus sais farmaceuticamente aceitáveis, sejam administradas como os produtos quí- micos brutos, é possível apresentar o ingrediente ativo como uma composi- 15 ção farmacêutica. Concordantemente, a descoberta ainda fornece composi- ções farmacêuticas, as quais incluem quantidades terapeuticamente efica- zes dos compostos de fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitá- veis, e um ou mais veículos, diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Os compostos de fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente acei- 20 táveis são conforme descrito acima. O(s) veículo(s), diluente(s) ou excipien- te(s) devem ser aceitáveis no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não deletérios para o seu receptor. De acordo com outro aspecto da descoberta, também é fornecido um processo para a preparação de uma formulação farmacêutica incluindo a mistura de um 25 composto de fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável seu, com um ou mais veículos, diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

Formulações farmacêuticas podem ser apresentadas nas for- mas de dose unitária contendo uma quantidade predeterminada de ingredi- ente ativo por dose unitária. Os níveis de dosagem entre cerca de 0,01 e 30 cerca de 250 mg por quilo ("mg/Kg") de peso corporal por dia, preferivelmen- te entre cerca de 0,05 e cerca de 100 mg/Kg de peso corporal por dia dos compostos da descoberta são típicos em uma monoterapia para a preven- ção e tratamento de doenças mediadas por HCV. Tipicamente, as composi- ções farmacêuticas dessa descoberta será administradas de cerca de 1 até cerca de 5 vezes por dia ou, alternativamente, como uma infusão contínua. Tal administração pode ser usada como uma terapia aguda ou crônica. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais carreadores para produzir uma forma de dosagem única irá variar depen- dendo da condição a ser tratada, da severidade da condição, do tempo de administração, da via de administração, da taxa de excreção do composto empregado, da duração do tratamento e da idade, gênero, peso e condição do paciente. Formulações de dosagem unitária preferidas são aquelas con- tendo uma dose ou subdose diária, conforme aqui acima citado, ou uma fra- ção apropriada sua de um ingrediente ativo. Geralmente, o tratamento é ini- ciado com pequenas dosagens substancialmente menores do que a dose ótima do composto. A partir daí, a dosagem é aumentada por pequenos in- crementos até o efeito ótimo sob as circunstâncias ser alcançado. Em geral,

o composto é mais desejavelmente administrado em um nível de concentra- ção que irá geralmente produzir resultados antivirais efetivos sem causar quaisquer efeitos deletérios ou colaterais.

Quando as composições dessa descoberta compreendem uma 20 combinação de um composto da descoberta e um ou mais agentes terapêu- ticos ou profiláticos adicionais, tanto o composto quanto o agente adicional estão geralmente presentes em níveis de dosagem entre cerca de 10 a 150%, e mais preferivelmente entre cerca de 10 a 80% da dosagem nor- malmente administrada em um regime de monoterapia.

Formulações farmacêuticas podem ser adaptadas para a admi-

nistração por qualquer via apropriada, por exemplo, pela via oral (incluindo bucal ou sublingual), retal, nasal, tópica (incluindo bucal, sublingual ou transdérmica), vaginal ou parenteral (incluindo injeções ou infusões subcutâ- nea, intracutânea, intramuscular, intra-articular, intrassinovial, intra-esternal, 30 intratecal, intralesional, intravenosa ou intradérmica). Tais formulações po- dem ser preparadas por qualquer método conhecido na técnica farmacêuti- ca, por exemplo, através da associação do ingrediente ativo com o(s) veícu- lo(s) ou excipiente(s).

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas tais como cápsulas ou 5 comprimidos; pós ou grânulos; soluções ou suspensões em líquidos aquo- sos ou não-aquosos; espumas ou cremes comestíveis; ou emulsões líquidas óleo-em-água ou emulsões água-em-óleo.

Por exemplo, para administração oral na forma de um compri- mido ou cápsula, o componente do fármaco ativo pode ser combinado com 10 um veículo inerte farmaceuticamente aceitável não-tóxico oral, tal como eta- nol, glicerol, água e semelhantes. Pós são preparados pela trituração do composto até um tamanho fino adequado e pela mistura com um veículo farmacêutico semelhantemente triturado tal como um carboidrato comestível como, por exemplo, amido ou manitol. Agentes flavorizantes, conservantes, 15 dispersantes e corantes também podem estar presentes.

Cápsulas são feitas pela preparação de uma mistura em pó, conforme descrito acima, e preenchendo folhas de gelatina formadas. Desli- zantes e lubrificantes tais como sílica coloidal, talco, estearato de magnésio, estearato de cálcio ou polietilenoglicol sólido podem ser adicionados à mistu- 20 ra em pó antes da operação de enchimento. Um agente desintegrante ou solubilizante, tal como ágar-ágar, carbonato de cálcio ou carbonato de sódio também podem ser incluídos para melhorar a disponibilidade do medicamen- to quando a cápsula é ingerida.

Além disso, quando desejado ou necessário, aglutinantes ade- 25 quados, lubrificantes, agentes desintegrantes e agentes corantes podem também ser incorporados na mistura. Aglutinantes adequados incluem ami- do, gelatina, açúcares naturais tais como glicose ou beta-lactose, adoçantes de milho, gomas naturais e sintéticas tais como acácia, tragacanto ou algina- to de sódio, carboximetilcelulose, polietilenoglicol e semelhantes.

Lubrificantes usados nessas formas de dosagem incluem oleato

de sódio, cloreto de sódio e semelhantes. Desintegrantes incluem, sem limi- tação, amido, metilcelulose, ágar, bentonita, goma xantana e semelhantes. Comprimidos são formulados, por exemplo, pelo preparo de uma mistura em pó, granulação ou trituração, adicionando um lubrificante e desintegrante e pressionando em comprimidos. Uma mistura em pó é preparada pela mistu- ra do composto, adequadamente triturado, com um diluente ou base confor- 5 me descrito acima, e opcionalmente com um aglutinante tal como carboxi- metilcelulose, um alginato, gelatina ou polivinilpirrolidona, um retardador de solução tal como parafina, um acelerador de reabsorção tal como um sal quaternário e/ou um agente de absorção tal como bentonita, caulim ou fosfa- to de dicálcio. A mistura em pó pode ser granulada pela umdificação com um 10 aglutinante tal como xarope, pasta de amido, mucilagem de acádia ou solu- ções de materiais celulósicos ou poliméricos e forçando através de uma tela. Como uma alternativa à granulação, a mistura em pó pode ser passada por uma máquina de compressão e o resultado são balas imperfeitamente for- madas quebradas em grânulos. Os grânulos podem ser Iubrificados para 15 prevenir a aderência aos moldes formadores de comprimidos através da adi- ção de ácido esteárico, um sal de estearato, talco ou óleo mineral. A mistura Iubrificada é, a seguir, pressionada em comprimidos. Os compostos da pre- sente descoberta podem também ser combinados com um veículo inerte de fluxo livre e pressionados em comprimidos diretamente sem passar pelas 20 etapas de granulação ou batidas. Um revestimento protetor transparente ou opaco consistindo em uma camada vedante de laca, um revestimento de açúcar ou material polimérico e um revestimento lustrado de cera pode ser fornecido. Corantes podem ser adicionados a esses revestimentos para dis- tinguir diferentes dosagens unitárias.

Fluidos orais tais como solução, xaropes e elixires podem ser

preparados na forma de unidade de dosagem de modo que uma dada quan- tidade contenha uma quantidade predeterminada do composto. Xaropes po- dem ser preparados pela dissolução do composto em uma solução aquosa adequadamente flavorizada, enquanto elixires são preparados através do 30 uso de um veículo não-tóxico. Solubilizantes e emulsificantes, tais como ál- coois isoestearílicos etoxilados e éteres de polioxietilenossorbitol, conser- vantes, aditivos flavorizantes tais como óleo de hortelã-pimenta ou adoçan- tes naturais, ou sacarina ou outros adoçantes artificiais e semelhantes po- dem também ser adicionados.

Onde apropriado, as formulações de unidades de dosagem para administração oral podem ser microencapsuladas. A formulação também 5 pode ser preparada para prolongar ou sustentar a liberação, por exemplo, através do revestimento ou fixação de material particulado em polímeros, cera ou semelhante.

Os compostos de fórmula (I), e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem também ser administrados na forma de sistemas de dis- 10 tribuição de lipossomas, tais como pequenas vesículas unilamelares, vesícu- las unilamelares grandes e vesículas multilamelares. Lipossomas podem ser formados a partir de uma variedade de fosfolipídeos, tais como colesterol, estearilamina ou fosfatidilcolinas.

Os compostos de fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente a- ceitáveis também podem ser distribuídos através do uso de anticorpos mo- noclonais como veículos individuais aos quais as moléculas de composto estão acopladas. Os compostos também podem estar acoplados com polí- meros solúveis como veículos de fármacos alvejáveis. Tais polímeros podem incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, poli- hidroxipropilmetacrilamidofenol, poli-hidroxietilaspartamidofenol ou polietile- noxidopolilisina substituída com resíduos de palitoila. Além disso, os com- postos podem ser acoplados a uma classe de polímeros biodegradáveis ú- teis em conseguir a liberação controlada de um fármaco, por exemplo, ácido polilático, polepsílon caprolactona, ácido poli-hidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetais, polidi-hidropiranos, policianoacrilatos e copolímeros em bloco anfifáticos ou reticulados de hidrogéis.

Formulações farmacêuticas adaptadas para a administração transdérmica podem estar presentes como emplastros discretos tencionados a permanecer em contato íntimo com a epiderme do receptor por um período 30 de tempo prolongado. Por exemplo, o ingrediente ativo pode ser distribuído do emplastro por iontoforese conforme geralmente descrito em Pharmaceu- ticla Research, 3(6), 318 (1986). Formulações farmacêuticas adaptadas para a administração tópica podem ser formuladas como unguentos, cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, géis, sprays, aerossóis ou óleos.

Para tratamentos do olho ou outros tecidos externos, por exem- 5 pio, boca e pele, as formulações são preferivelmente aplicadas como um unguento ou creme tópico. Quando formuladas em um unguento, o ingredi- ente ativo pode ser empregado ou com uma base parafínica ou de unguento miscível em água. Alternativamente, o ingrediente ativo pode ser formulado em um creme com uma base de creme óleo-em-água ou uma base água- 10 em-óleo.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administrações tó- picas ao olho incluem gotas oftálmicas, em que o ingrediente ativo é dissol- vido ou suspenso em um veículo adequado, especialmente um solvente a- quoso.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração tópi-

ca na boca incluem pastilhas, trociscos e enxágues bucais.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração retal podem ser apresentadas como supositórios ou como enemas.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração na- 20 sal, em que o veículo é um sólido, incluem um pó grosso com um tamanho de partícula, por exemplo, na faixa de 20 a 500 mícrons, o qual é adminis- trado da maneira na qual rapé é consumido, isto é, por inalação rápida atra- vés da passagem nasal de um recipiente do pó mantido próximo do nariz. Formulações adequadas em que o veículo é um líquido, para administração 25 como um spray nasal ou gotas nasais, incluem soluções aquosas ou oleosas do ingrediente ativo.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração por inalação incluem pós ou névoas de partículas finas, as quais podem ser ge- radas através de vários tipos de aerossóis, nebulisadores ou insufladores pressurizados de dose medida. Formulações farmacêuticas adaptadas para administração vagi- nal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pas- tas, espumas ou formulações em spray.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração pa- renteral incluem soluções injetáveis estéreis aquosas e não-aquosas, as quais podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e "soutes", os quais tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor tencionado; e suspensões estéreis aquosas e não-aquosas as quais podem incluir agentes suspensores e agentes espessantes. As formulações podem ser apresenta- das em recipientes de dose unitária ou dose múltipla, por exemplo, ampolas e frascos lacrados, e podem ser armazenadas em uma condição Iiofilizada que requer somente a adição de veículo líquido estérila, por exemplo, água para injeções, imediatamente antes do uso. Soluções e soluções de injeção extemporânea podem ser preparadas a partir de pós estéreis, grânulos e comprimidos.

Deve ser entendido que além dos ingredientes particularmente mencionados acima, as formulações podem incluir outros agentes conven- cionais na técnica em relação ao tipo de formulação em questão, por exem- plo, aquelas adequadas para administração oral podem incluir agentes flavo- rizantes.

A Tabela 1 abaixo lista alguns exemplos ilustrativos dos com- postos que podem ser administrados com os compostos dessa descoberta. Os compostos da descoberta podem ser administrados com outros compos- tos com atividade anti-HCV em terapia de combinação, seja juntamente ou 25 separadamente, ou pela combinação dos compostos em uma composição. Tabela 1

Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor Companhia da ou alvo fonte NIM811 Inibidor da ciclo- Novartis filina Zadaxin Imunomodulador Sciclone Suvus Azul de metileno Bioenvision Actilon Agonista TLR9 Coley (CPG10101) Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor Companhia da ou alvo fonte Batabulin (T67) Anticancerígeno Inibidor da β- Tularik Inc., tubulina South San Fran¬ cisco, CA ISIS 14803 Antiviral Anti-sentido ISIS Pharmaceu- ticals Inc, Carls- bad, CA/Elan Phamaceuticals Inc., New York, NY Summetrel Antiviral Antiviral Endo Pharma- ceuticals Hold¬ ings Inc., Chadds Ford, PA GS-9132 (ACH- Antiviral Inibidor do HCV Achillion/Gilead 806) Compostos de Antiviral Inibidores do Arrow Therapeu- pirazolopirimidi- HCV tics Ltd. na e sais de WO- 2005047288 26 de maio de 2005 Levovirina Antiviral Inibidor de IMP- Ribapharm Inc., DH Costa Mesa, CA Merimepodib Antiviral Inibidor de IMP- Vertex Pharma- (VX-497) DH ceuticals Inc., Cambridge, MA XTL-6865 (XTL- Antiviral Anticorpo mono- XTL Biopharma- 002) clonal ceuticals Ltd., Rehovot, Isreal Telaprevir Antiviral Inibidor da NS3 Vertex Pharma- (VX-950, LY- serina protease ceuticals Inc., 570310) Cambridge, MA/ Eli Lilly and Co. Inc., Indianapo- lis, IN HCV-796 Antiviral Inibidor da NS5B Wye- Replicase th/Viropharma NM-283 Antiviral Inibidor da NS5B Idenix/Novartis Replicase GL-59728 Antiviral Inibidor da NS5B Gene Repliease Labs/Novartis «

Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor Companhia da ou alvo fonte GL-60667 Antiviral Inibidor da NS5B Gene Replicase La bs/Nova rtis 2’C MeA Antiviral Inibidor da NS5B Gilead Replicase PSI 6130 Antiviral Inibidor da NS5B Roehe Repliease R1626 Antiviral Inibidor da NS5B Roehe Repliease 2’C Metiladeno- Antiviral Inibidor da NS5B Merck sina Repliease JTK-003 Antiviral Inbidor da RdRp Japan Tobacco Inc., Tokyo, Ja- pan Levovirina Antiviral Ribavirina ICN Pharmaceu- ticals, Costa Me¬ sa, CA Ribavirina Antiviral Ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Viramidina Antiviral Pró-fármaco da Ribapharm Inc., ribavirina Costa Mesa, CA Heptazima Antiviral Ribozima Ribozyme Phar- maceuticals Inc., Boulder, CO BILN-2061 Antiviral Inibidor da seri- Boehringer na protease Ingelheim Pharma KG, Ingelheim, Germany SCH 503034 Antiviral Inibidor da seri- Schering Plough na protease Zadazim Imunomodulador Imunomodulador SciCIone Phar- maceuticals Inc., San Mateo, CA Ceplene Imunomodulador Imunomodulador Maxim Pharma- ceuticals Inc., San Diego, CA CeIICept Imunossupressor Imunossupres- F. Hoffmann-La sor da IgG de Roche LTD, HCV Basel, Switzerland Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor Companhia da ou alvo fonte Civacir Imunossupressor Imunossupres- Nabi Biopharma- sor da IgG de ceuticals Inc., HCV Boca Raton, FL Albuferon - α Interferon Albumina IFN- Human Genome a2b Sciences Inc., Rockville, MD Infergen A Interferon IFN alfacon-1 InterMune Phar- maceuticals Inc., Brisbane, CA Omega IFN Interferon IFN-co Intarcia Thera- peutics IFN-β e EMZ701 Interferon IFN-β e EMZ701 Transition The- rapeutics Inc., Ontario, Canada Rebif Interferon IFN^Ia Serono, Geneva, Switzerland Roferon A Interferon IFN-a2a F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Switzerland Intron A Interferon IFN-a2b Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Intron A e Zada- Interferon IFN-a2b/a1- RegeneRx Bio- xin timosina pharmiceuticals Inc., Bethesda, MD/ SciCIone Phar- maceuticals Inc, San Mateo, CA Rebetron Interferon IFN- Schering-Plough a2b/ribavirina Corporation, Kenilworth, NJ Actimmune Interferon INF-γ InterMune Inc., Brisbane, CA lnterferon-β Interferon Interferon^-Ia Serono Multiferon Interferon IFN de longa Viragen/Valentis duração Wellferon Interferon IFN-αηΙ Iinfo- GIaxoSmithKIine blastoide pie, Uxbridge, UK Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor Companhia da ou alvo fonte Omniferon Interferon IFN-α natural Viragen Inc., Plantation, FL Pegasys Interferon IFN-a2a PEGui- F. Hoffmann-La Iado Roche LTD, Basel, Switzerland Pegasys e Ce- Interferon IFN-a2a PEGui- Maxim Pharma- plene lado/imunomo- ceuticals Inc., dulador San Diego, CA Pegasys e Riba¬ Interferon IFN-a2a PEGui- F. Hoffmann-La virina Iado /ribavirina Roche LTD, Basel, Switzerland PEG-Intron Interferon IFN-a2b PEGui- Schering-Plough Iado Corporation, Kenilworth, NJ PEG- Interferon IFN-a2b PEGui- Schering-Plough Intron/Ribavirina Iado /ribavirina Corporation, Kenilworth, NJ IP-501 Protetor hepático Antifibrótico Indevus Pharmaceuticals Inc., Lexington, MA IDN-6556 Protetor hepático Inibidor da cas- Idun Pharmaceu- pase ticals Inc., San Diego, CA ITMN-191 (R- Antiviral Inibidor da seri- InterMune Phar- 7227) na protease maceuticals Inc., Brisbane, CA GL-59728 Antiviral Inibidor da NS5B Genelabs Replicase ANA-971 Antiviral Agonista TLR-7 Anadys TMC-465350 Antiviral Inibidor da seri- Medivir/ na protease Tibotec Os compostos da descoberta também podem ser usados como

reagentes de laboratório. Os compostos podem ser instrumentais fornecen- do certas ferramentas para a projeção de ensaios de replicação viral, valida- ção de sistemas de ensaio animal e estudos de biologia estrutural para au- mentar ainda mais o conhecimento dos mecanismos da doença por HCV. Além disso, os compostos da presente descoberta são úteis no estabeleci- mento ou determinação do sítio de ligação de outros compostos antivirais, por exemplo, por inibição competitiva.

Os compostos dessa descoberta podem também ser usados 5 para tratar ou prevenir a contaminação viral dos materiais e, consequente- mente, reduzir o risco de infecção viral do laboratório ou pessoal da equipe média ou pacientes os quais tenham entrado em contato com tais materiais, por exemplo, sangue, tecido, instrumentos cirúrgicos e artigos de vestuário, instrumentos laboratoriais e vestuários e aparelhos e materiais de transfusão 10 ou coleta de sangue.

A descoberta é tencionada a englobar os compostos com fórmu- la (I) quando preparados por processos sintéticos ou por processos metabó- Iicos incluindo aqueles de ocorrência no corpo humano ou animal (in vivo) ou processos ocorrendo in vitro.

As abreviações usadas no presente pedido, incluindo particu-

larmente nos exemplos e esquemas ilustrativos que se seguem, são bem conhecidas pelas pessoas versadas na técnica. Algumas das abreviações usadas são as seguintes: 4-DMAP ou DMAP para 4-N,N- dimetilaminopiridina; Boc ou BOC para terc-butoxicarbonila; Fmoc para 9- 20 fluorenilmetiloxicarbonila; CDI para 1,1’-carbonildiimidazol; EDAC ou EDC para cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropila)-3-etilcarbodiimida; THF para te- traidrofurano; DBU para 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno; TFA para ácido trifluoracético; HATU para fosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-ila)-N,N,N’-N’- tetrametilurônio; PyBOP para fluorfosfato de benzotriazol-1- 25 iloxitrispirrolidinofosfônio; Me para metila; Mel para iodeto de metila; MOtBu para potássio, sódio ou terc-butóxido de lítio; TBME ou MTBE para éterterc- butila-metílico; DMF para Ν,Ν-dimetilformamida; DMSO para dimetilsulfóxi- do; Ph para fenila; DEAD para dietilazodicarboxilato; POPd para [(t- Bu)2POH]2PdCl2; NaOBu para terc-butóxido de sódio; OAc para acetato; 30 TBMDSCI para cloreto de terc-butildimetilsilila; 1,2-DME para 1,2- dimetoxietano; DMA para Ν,Ν-dimetilacetamida; n-BuLi para n-butila-lítio; t- BuLi para tBuLi para terc-butila-lítio; DPPA para difenilfosforilazida; TBAF para fluoreto de tetrabutilamônio; LiOt-Bu para terc-butóxido de lítio; MeOH para metanol; DCM para diclorometano; t-BuOK para terc-butóxido de po- tássio; DIEA ou DIPEA para diisopropiletilamina; MeCN para acetonitrila; NMM para N-metilmorfolino; DCE para 1,2-dicloroetano; LDA para diisopro- 5 pilamida de lítio; DMPU para 1,3-dimetila-3,4,5,6-tetraidro-2(1H)- pirimidinona; EtOAc para acetato de etila; e TEA para trietilamina.

Os materiais de partida úteis para sintetizar os compostos da presente descoberta são conhecidos pelas pessoas versadas na técnica e podem ser prontamente produzidos ou são comercialmente disponibilizados. Os seguintes métodos estabelecidos abaixo são fornecidos com

propósitos ilustrativos e não são tencionados a limitar o escopo das reivindi- cações. Será reconhecido que pode ser necessário preparar tal composto no qual um grupo funcional está protegido usando um grupo protetor conven- cional, então para remover o grupo protetor para fornecer um composto da 15 presente descoberta. Os detalhes envolvendo o uso de grupos protetores de acordo com a presente descoberta são conhecidos pelas pessoas versadas na técnica.

O Esquema I mostra o processo geral, em que os compostos de Fórmula (I) são construídos através do acoplamento do intermediário do áci- 20 do carboxílico tripeptídico (1) com uma sulfonamida P1’. A referida reação de acoplamento requer o tratamento do ácido carboxílico (1) com um reagente de acoplamento, tal como carbonildiimizadol em um solvente tal como THF, o qual pode ser aquecido até o refluxo, seguido pela adição do derivado for- mado de (1) à sulfonamida P1’, em um solvente tal como THF ou cloreto de 25 metileno na presença de uma base, tal como DBU. Esquema I

Processo P4-P3-P2-PI P~* . Ρ4-Ρ3-Ρ2-Ρ1-ΡΓ

Um processo alternativo para a construção dos compostos de Fórmula (I) é apresentado no Esquema II. Ali, o elemento sulfonamida P1’ é acoplado ao elemento P1 usando o processo empregado no Esquema 1. A 5 porção P1-P1’ resultante pode ser, a seguir, desprotegida no seu amino ter- minal. Nesse exemplo geral, um grupo protetor Bco é empregado, porém uma pessoa versada na técnica poderia reconhecer que uma quantidade de grupos protetores amino adequadas poderia ser empregada nesse processo. O grupo protetor Boc pode ser removido usando ácido, tal como ácido trifluo- 10 racético em um solvente tal como dicloroetano para fornecer a amina des- protegida como o sal de TFA. O referido sal de amina TFA pode ser direta- mente empregado na reação de acoplamento subsequente ou como uma alternativa o sal de amina TFA pode ser primeiramente convertido no sal de amina HCI, e esse sal de amina HCI é usado na referida reação de acopla- 15 mento conforme mostrado no Esquema II. O acoplamento do referido sal de amina HCI (3) com o terminal carboxílico de um intermediário P4-P3-P2 po- de ser obtido usando reagentes de acoplamento, tais como HATU, em sol- ventes tais como diclorometano para fornecer os compostos de Fórmula (I) (4). 10

Esquema II

ProcessoPl P1 t ρι_ρ-\' P4-P3-P2t P4-P3-P2-P1-P1

H

H 0

Boc^ 'OH 1-CDI1 THF

-I

R2

(1)

2. Base 0 0 HN R6

Λ X V

800 Xjf Rí

R2

(2)

I. Aeido

2. Ácido

9 OwO h'n« Ã xs

—H H 6

R2

(3)

R5 R5

Compostos de Fórmula (I)

Um processo alternativo para a construção dos compostos de Fórmula (I) é mostrado no Esquema III. Aqui, o sal de cloridrato da amina terminal P1-P1’ (1) é acoplada ao grupo carboxila livre do elemento P2 u- sando agentes de acoplamento tais como PyBOP1 na presença de uma base tal como diisopropilamina, e em um solvente tal como cloreto de metileno. O intermediário P2-P1-P1’ resultante pode ser convertido nos compostos de Fórmula (I) em um processo de duas etapas, em que a primeira etapa é a desproteção do terminal amina P2 usando um ácido, tal como TFA em um solvente tal como cloreto de metileno. O sal do ácido trifluoracético resultan- te pode ser acoplado com o terminal de carboxila do elemento P4-P3 usando agentes de acoplamento padrões, tais como PyBop na presença de base, tal como diisopropilamina, e usando solventes tais como cloreto de metileno para fornecer os compostos de Fórmula (I) (4). Esquema Ill

Processo

P1-P1*

Cl <-> L

H-J

(1)

P2

P2-P1-P1' R5 R5

P4-P3

P4-P3-P2-P1-P1'

Desproteção

-Sx N R6 H

O intermediário P4-P3-P2 utilizado nos esquemas acima pode ser construído conforme anteriormente descrito com uma outra descrição desse processo mostrada no Esquema geral IV. O terminal de carboxila livre 5 do intermediário P4-P3 (I) pode ser acoplado ao amino terminal do elemento P2 para fornecer o dipeptídeo P4-P3-P2 (2). O terminal de carboxila do in- termediário P4-P3-P2 pode ser desprotegido por saponificação do grupo és- ter para fornecer P4-P3-P2 como o ácido carboxílico livre (3). Intermediários como (3) podem ser convertidos nos compostos de Fórmula (I) usando os 10 métodos aqui descritos. 10

15

Esquema IV

Processo

P4-P3

P2

P4-P3-P2

OH

,'"νΛ,

Base

Agente de aco- plamento P2

(1)

Saponificação

OMe

R4 : NV r4·

(2) 0)

Na construção dos compostos de Fórmula (I), o PY terminal é incorporado nas moléculas usando um dos processos gerais esboçado aci- ma e descritos em maiores detalhes abaixo. Em alguns exemplos, os ele- mentos PY, que são as cicloalquila ou alquilsulfonamidas, são comercial- mente disponíveis ou podem ser preparadas a partir do cloreto de alquila ou cicloalquilsulfonila correspondentes através do tratamento de cloreto de sul- fonila com amônia. Alternativamente, essas sulfonamidas podem ser sinteti- zadas usando o processo geral esboçado no Esquema V. Cloreto de 3- cloropropilsulfonila comercialmente disponível (1) é convertido em uma sul- fonamida adequadamente protegida, por exemplo, através do tratamento com terc-butilamina. A sulfonamida obtida (2) é, a seguir, convertida na ci- cloalquilsulfonamida correspondente pelo tratamento com dois equivalentes de uma base, tal como butila-lítio em um solvente tal como THF em baixas temperaturas. A cicloalquilsulfonamida resultante pode ser desprotegida por tratamento com um ácido para fornecer a cicloalquilsulfonamida desprotegi- da desejada.

Esquema V

-NH7

0V P

,x

Xl

Base

(2)

OwO

.:s'

Acido

0W0

Js'

Acoplamento ao ácido Pl seguido por alongainento

(3)

pr

V

Compostos de Fónnula (!) Cicloalquilsulfonamidas substituídas podem também ser incor- poradas nos compostos de Fórmula (I) usando uma modificação do dito pro- cedimento acima. Por exemplo, o intermediário 2 do Esquema Vl pode ser tratado com dois equivalentes de base, tais como butila-lítio e a mistura rea- cional resultante pode ser tratada com um eletrófilo, tal como iodeto de meti- la para fornecer uma cicloalquilsulfonamida substituída (3). Esse intermediá- rio (3) pode ser desprotegido no N-terminal e o composto resultante (4) utili- zado como um intermediário na preparação dos compostos de Fórmula (I). Esquema Vl

I OO..

1) Base _I 'V' .Me

2) Eletrófilo, por exemplo, Mel

M'S H

(3)

p. Acoplamento ao ácido Pl

° \W/ Me seguido por alongamento Compostos de Fónnula (!)

h2n'"S's^7

P1' (4)

Os intermediários P1 ’ empregados na geração dos compostos

de Fórmula (I) são, em alguns casos, derivados dos derivados de sulfonami- da. Em tais casos, os intermediários de sulfamida são disponíveis por várias vias sintéticas, tal como, por exemplo, pela via esboçada no Esquema VII. Esquema Vll

O P HoO O P base O P

1 2 s-yí' Da -V"

Cl NCO Cl NH2 Ra N NH2

(1) (2) HN-Rb Rb

(3)

Cloreto de sulfamoíla (2) pode ser preparado in situ pela adição

de água (por exemplo, 1 equivalente) em isocianato de clorossulfonila 1 (por exemplo, 1 equivalente) em um solvente tal como THF enquanto mantido em uma baixa temperatura, tal como -20°C. A solução resultante é, a seguir, deixada aquecer até O0C. A essa solução uma base, tal como trietilamina 20 anidra (por exemplo, 1 equivalente) é adicionada seguido por uma amina (por exemplo, 1 equivalente). A mistura reacional é, a seguir, aquecida até a temperatura ambiente, filtrada e o filtrado é concentrado para fornecer as sulfamidas desejadas (3).

mula (I) por vários processos como, por exemplo, seguindo a via sintética 5 definida no Esquema VIII. Um elemento P1 de ácido carboxílico (1) é tratado com um agente ativador tal como CDI. Em um frasco separado, uma base forte é adicionada a uma solução da sulfamida descrita acima e a mistura reacional resultante é agitada por várias horas depois do que essa mistura reacional é adicionada ao frasco contendo o ácido carboxílico ativado, para 10 fornecer derivados de acilsulfamida (2). Intermediários como 2 podem ser convertidos nos compostos de Fórmula (I) conforme aqui descritos.

Esquema Vlll

mula (I) são, em alguns casos, comercialmente disponíveis, porém são de outro modo sintetizados usando os métodos aqui descritos e são subse- quentemente incorporados nos compostos de Fórmula (I) usando os méto- dos aqui descritos. Os ciclopropilaminoácidos P1 podem ser sintetizados usando o esboço do processo geral no Esquema IX.

sintetizada (1) com 1,4-dialobuteno (2) na presença de uma base fornece a imina resultante (3). A hidrólise ácida de 3 então fornece 4, o qual tem um substituinte alila syn ao grupo carboxila, como um produto principal. A por- ção amina de 4 pode ser protegida usando um grupo Boc para fornecer o aminoácido totalmente protegido 5. Esse intermediário é um racemato o qual 25 pode ser separado por um processo enzimático em que a porção éster de 5

As sulfamidas podem ser incorporadas nos compostos de Fór-

H O

Compostos de Fónnula I

Base

Os elementos P1 utilizados na geração dos compostos de Fór-

O tratamento da imina comercialmente disponível ou facilmente 5

10

é clivada por uma protease para fornecer o ácido carboxílico corresponden- te. Sem estar ligado à qualquer teoria particular, acredita-se que essa reação seja seletiva pelo fato de que um dos enantiômeros sofre a reação em uma taxa muito maior do que sua imagem especular, proporcionando uma reso- lução cinética do racemato intermediário. Nos exemplos citados aqui, o este- reoisômeros mais preferido para integração nos compostos de Fórmula (I) é 5a, o qual abriga a estereoquímica (1R, 2S). Na presença da enzima, esse enantiômero não sofre clivagem éster e, deste modo, esse enantiômero, 5a, é recuperado da mistura reacional. Entretanto, o enantiômero menos preferi- do, 5b, o qual abriga a estereoquímica (1S, 2R), sofre clivagem éster, isto é, hidrólise, para fornecer o ácido livre 6. No completamento desta reação, o éster 5a pode ser separado do produto ácido 6 por métodos rotineiros tais como, por exemplo, métodos de extração aquosa ou cromatografia. Esquema IX

R

halo

halo

(2)

2) Extrato de TBME

3) HCl aquoso

(4)

(Boc)2O,

Base

(3)

(racemato)

Mistura 1:1 de 5a (IR, 2S) e 5b (IS, 2R).

5a

Separado

6

Procedimentos para fazer os intermediários P2 e os compostos

de Fórmula (I) estão mostrados nos esquemas abaixo. Deve ser notado que em muitos casos as reações são demonstradas para somente uma posição de um intermediário. Entretanto, é para ser entendido que tais reações pode- riam ser usadas para conferir modificações para outras posições neste in- termediário. Além disso, os referidos intermediários, condições reacionais e métodos dados nos exemplos específicos são amplamente aplicáveis aos compostos com outros padrões de substituição. Tanto os exemplos gerais quanto os específicos são não-limitativos.

Esquema X

(3)

O Esquema X mostra o acoplamento de uma porção C4- hidroxiprolina N-protegida com um heterociclo para formar o intermediário (4) e a subsequente modificação do referido intermediário (4) em um composto de fórmula (I) pelo processo de alongamento de peptídeo conforme aqui descrito. Deve ser notado que na primeira etapa, que é o acoplamento do grupo C4-hidroxiprolina com o elemento heteroarila, uma base é empregada. Uma pessoa versada na técnica poderia reconhecer que este acoplamento pode ser feito usando bases tais como terc-butóxido de potássio, ou hidreto de sódio, em um solvente tal como DMF ou DMSO ou THF. Esse acopla- mento com o sistema de anel isoquinolina ocorre na posição C1 (numeração para o sistema do anel isoquinolina mostrada no intermediário 2 do Esque- ma XI) e é direcionado ao grupo cloro, o qual é deslocado nesse processo. Deve ser notado que os grupos de saída alternativos podem ser utilizados nessa posição (por exemplo, flúor) conforme mostrado no esquema. Os refe- ridos intermediários flúor (3) são disponíveis a partir do composto cloro cor- respondente usando procedimentos da literatura aqui descritos.

Uma alternativa para o método descrito acima para o acopla- mento da C4-hidroxiprolina ao núcleo isoquinolina é fornecida na reação de Mitsunobu conforme demonstrado na etapa 1 do Esquema XI. Nesse es- quema reacional geral, um derivado da C4-hidroxiprolina é acoplado com um sistema do anel de isoquinolina. Essa reação faz uso dos reagentes, tais como THF em dioxano e pode ser usada para a formação dos éteres hete- roarílicos. Note que durante essa reação de acoplamento a estereoquímica do centro quiral C4 no derivado C4-hidroxiprolina é invertida e, deste modo, é necessário o uso do derivado C4-hidroxiprolina abrigando a estereoquími- ca (S) na posição C4 como material de partida (conforme mostrado no Es- quema XI). Deve ser notado que várias modificações e melhorias da reação de Mitsunobu foram descritas na literatura, os ensinamentos das quais sen- do aqui incorporados.

Esquema Xl

Nos exemplos daqui, as isoquinolinas são incorporadas nos compostos finais e especificamente na região P2 dos referidos compostos. Uma pessoa versada na técnica poderia reconhecer que uma variedade de 20 métodos gerais está disponível para a síntese das isoquinolinas. Além disso, as isoquinolinas geradas por esses métodos podem ser prontamente incor- poradas nos compostos finais de Fórmula (I) usando os processos aqui des- critos. Uma metodologia geral para a síntese das isoquinolinas é mostrada no Esquema XII, em que os derivados do ácido cinâmico, mostrados na fór- 25 mula geral como estrutura (2), são convertidos em 1-cloroisoquinolinas em um processo de quatro etapas. As cloroisoquinolinas podem ser subsequen- 5

10

15

20

temente usadas em reações de acoplamento aos derivados de C4- hidroxiprolina conforme aqui descrito. A conversão dos ácidos cinâmicos em cloroquinolinas começa com o tratamento de ácido cinâmico com um alquil- cloroformiato na presença de uma base. O anidrido resultante é, a seguir, tratado com azida de sódio, o que resulta na formação de uma acilazida (3) conforme mostrado no esquema. Métodos alternativos são disponíveis para a formação de acilazidas a partir dos ácidos carboxílicos como, por exemplo, o referido ácido carboxílico pode ser tratado com difenilfosforilazida (DPPA) em um solvente aprótico tal como cloreto de metileno na presença de uma base. Na próxima etapa da seqüência reacional a acilazida (3) é convertida na isoquinolina correspondente (4) enquanto aquece até a temperatura de aproximadamente 190°C em um solvente de alto ponto de ebulição, tal como difenilmetano. Essa reação é geral e fornece rendimentos de moderado a bom de isoquinolona substituída a partir dos derivados de ácido cinâmico correspondentes. Deve ser notado que os referidos derivados de ácido ci- nâmico são comercialmente disponíveis ou podem ser obtidos a partir do derivado benzaldeído (1) correspondente por condensação direta com ácido malônico ou derivados seus e também pelo emprego de uma reação de Wit- tig. O intermediário isoquinolonas (4) do Esquema Xll pode ser convertido na 1-cloroisoquinolina correspondente por tratamento com oxicloreto de fósforo. Essa reação é geral e pode ser aplicada nas isoquinolonas mostradas aqui. Esquema Xll

R5 O

Passo I

Passo 2

R5 R5

N-j

Passo 4

Referência: N. Briet et al., Tetrahedron, 2002, 5761. Um método alternativo para a síntese do sistema de anel iso- quínolina é o procedimento Pomeranz-Fritsh. Esse método geral é esboçado no Esquema XIII. O processo é iniciado com a conversão de um derivado benzaldeído (1) a uma imina funcionalizada (2). A imina é, a seguir, conver- 5 tida no sistema de anel isoquinolina por tratamento com ácido em temperatu- ras elevadas. Essa síntese de isoquinolina do Esquema Xlll é geral, e deve- ria ser notado que esse processo é particularmente útila na busca por inter- mediários isoquinolina que sejam substituídos na posição C8. As isoquinoli- nas intermediárias (3) podem ser convertidas nas 1-cloroquinolinas (5) cor- 10 respondentes em um processo de duas etapas, conforme mostrado. A pri- meira etapa nessa seqüência é a formação do N-óxido de isoquinolina (4) por tratamento da isoquinolina (3) com ácido meta-cloroperbenzoico em um solvente aprótico tal como diclorometano. O intermediário (4) pode ser con- vertido na 1-cloroquinolina correspondente por tratamento com oxicloreto de 15 fósforo em clorofórmio sob refluxo. Note que este processo de duas etapas é geral para a formação de cloroisoquinolinas a partir de isoquinolonas. Esquema Xlll

Síntese de Pomeranz-Fritsch

K. Hirao, R. Tsuchiya, Y. Yano, H. Tsue, Heterocycles 42 (1) 1996,415-422

Outro método para a síntese do sistema de anel isoquinolina é mostrado no Esquema XIV. Nesse processo, um derivado orto- alquilbenzamida (1) é tratado com uma base forte, tal como terc-butila-lítio em um solvente, tal como THF em baixa temperatura. A essa mistura rea- cional um derivado nitrila é a seguir adicionado, o qual sofre uma reação de adição com o ânion derivado da desprotonação de (1), resultando na forma- ção de (2). Essa reação é geral e pode ser usada para a formação das iso- quinolinas substituídas. O intermediário (2) do Esquema XIV pode ser con- vertido na 1-cloroquinolina correspondente pelos métodos aqui descritos. Esquema XIV

Um método adicional para a síntese das isoquinolinas é apre- sentado no Esquema XV. A desprotonação do intermediário (1) usando terc- butila-lítio é descrita acima. Entretanto, no método presente, o ânion inter- mediário é aprisionado por um éster, resultando na formação do intermediá- 10 rio (2) conforme mostrado abaixo. Em uma reação subsequente, a cetona (2) é condensada com acetato de amônio em temperatura elevada, proporcio- nando a formação da quinolona (3). Essa reação é geral e pode ser aplicada á construção de isoquinolonas substituídas as quais podem, a seguir, ser convertidas nas 1-cloroisoquinolinas correspondentes conforme aqui descri- 15 to.

Etapa 1 NRR Rsc°2Me O

Outro método para a construção das isoquinolinas é formado no Esquema XVI. Na primeira etapa desse processo, derivados de orto- alquilarilimina, tal como (1) são submetidos a condições de desprotonação 20 (sec-butila-lítio, THF) e o ânion resultante é interrompido pela adição de um derivado de ácido carboxílico ativado tal como uma amida de Weinreb. A cetoimina resultante (2) pode ser convertida na isoquinolina correspondente por condensação com acetato de amônio em temperaturas elevadas. Esse método é geral e pode ser usado para a síntese de isoquinolinas substituí- das. As isoquinolinas podem ser convertidas na 1-cloroquinolina correspon- dente pelos métodos aqui descritos.

Esquema XVI

compostos de Fórmula (I), podem ser adicionalmente funcionalizadas. É ób- vio para uma pessoa versada na técnica que a funcionalização adicional dos referidos heterociclos pode ser feita ou antes ou após a incorporação dessas funcionalidades nos compostos de Fórmula (I). Os esquemas a seguir ilus- 10 tram este ponto. Por exemplo, o Esquema XVII mostra a conversão de uma 1-cloro-6-fluorisoquinolina nas espécies 1-cloro-6-alcoxiisoquinolina, por tra- tamento de (1) com uma espécie de alcóxido de sódio ou potássio no sol- vente de álcool a partir do qual o alcóxido é derivado em temperatura ambi- ente. Em alguns casos, pode ser necessário aquecer a reação para direcio- 15 ná-la ao completamento. A cloroquinolina pode ser incorporada em um com- posto de Fórmula (I) usando a técnica aqui descrita.

Esquema XVII

O Esquema XVIII fornece um exemplo geral para a modificação das isoquinolinas conforme aqui definido pelo emprego de reações de aco- plamento mediadas por paládio. Os acoplamentos podem ser empregados para funcionalizar um heterociclo em cada posição do sistema de anel, com

R5 R5

; Etapa I Ri

R5 Rt r5

R5 R5

R

R

T 11

R5 N

R6CON(OMe)Me c R5

L. Flippin, J. Muchowski, JOC, 1993, 2631-2632

5

As isoquinolinas aqui descritas, e as quais são incorporadas nos

R5 R5

R5 R5

R5 Cl (1)

R-

M = Na ou K

MOR

R

R5 Cl

(2) 10

15

a condição de que o anel seja adequadamente ativado ou funcionalizado como, por exemplo, com um cloreto conforme mostrado no Esquema. Essa seqüência começa com 1-cloroisoquinolina (1), a qual no tratamento com ácido metacloroperbenzoico pode ser convertida no N-óxido correspondente

(2). O intermediário (2) pode ser convertido na 1,3-dicloroisoquinolina (3) correspondente por tratamento com oxicloreto de fósforo em clorofórmio sob refluxo. O intermediário (3) pode ser acoplado com N-Boc-4-hidroxiprolina pelos métodos aqui descritos para fornecer o intermediário (5), conforme mostrado no esquema. O intermediário (5) pode sofrer um acoplamento de Suzuki com um ácido arilborônico na presença de reagente de paládio e ba- se, e em um solvente tal como THF ou tolueno ou DMF para fornecer o in- termediário C3-arilisoquinolina (6).

Ácidos heteroarilborônicos podem também ser empregados nesse processo de acoplamento mediado por paládio para fornecer C3- heteroarilisoquinolinas. O intermediário (6) pode ser convertido nos compos- tos finais de Fórmula (I) pelos métodos aqui descritos.

Esquema XVIII

Acoplamentos mediados por paládio de sistemas de isoquinolina com elementos arila ou heteroarila podem também ser empregados em um estágio sintético posterior na construção de compostos de Fórmula (I) con- forme mostrado no Esquema XIX. O intermediário acilsulfonamida tripeptídi- co (1) é acoplado com 1-cloro-3-bromoisoquinolina (2) usando o processo anteriormente descrito para fornecer o intermediário (3). O acoplamento de (1) e (2) é mais eficiente na presença de um catalisador, tal como cloreto de lantânio conforme aqui descrito. O sistema de anel isoquinolina do interme- diário (3) pode ser adicionalmente funcionalizado empregando ou acopla- 5 mentos de Suzuki (processo 1: submetendo (3) aos ácidos heteroarila ou arilborônicos na presença de um catalisador de paládio, tal como tetraquistri- fenilfosfino paládio e uma base, tal como carbonato de césio em solventes tais como DMF) ou acoplamentos de Stille (Processo 2: submetendo (3) aos derivados de heteroarila ou arila estanho na presença de um catalisador de 10 paládio, tal como tetraquisfenilfosfino paládio em solventes, tais como tolue- no).

Esquema XIX

Os aminoácidos P3 empregados na presente invenção são ou comercialmente disponíveis ou podem ser preparados usando métodos co- nhecidos pelas pessoas versadas na técnica. Vias não-limitativas para a preparação do aminoácido P3 incluem:

Via 1: Substituição aromática nucleofílica de uma espécie aro- mática ou heteroaromática suficientemente eletrofílica (1) com um éster de aminoácido (2) conforme mostrado no Esquema XX. Essa reação é, a se- guir, seguida por uma clivagem de éster simples de 3 para fornecer o ami- noácido desejado (4). Esquema XX

HO HO H

I μ solvente I Il I

Ar-X + HNV^o'P -Ar"NV^o'P -w 'N

'o base

<1> (2) (3)

P = grupo protetor

aquecimento R R3

(4)

Via 2: Uma reação tipo Buchwald-Hartwig a qual envolve o aco- plamento catalisado por paládio de um haleto de heteroarila ligado com um aminoácido adequadamente protegido (1) como mostrado no Esquema XXI. A simples saponificação do intermediário 2 fornece o aminoácido desejado (3). (Shen, Q.; Shekhar, S; Stambuli, J. P.; Hartwig1 J. F. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 1371-1375.):

Esquema XXI

H2N

o Pd(OAc)2, NaOi-Bu η ο η o

p TBDMSCI. 1.2-DME .n. A .p n 1

O' -—-► Ar -► Ar

3 Ligante fosfino R3 R3

m ArX

(1) (2) (3)

P = Grupo protetor

Via 3: Um processo de acoplamento, por meio do qual um hale-

to de arila ou heteroarila e um aminoácido livre são acoplados via um pro- cesso mediado por Cul para fornecer o arilaminoácido diretamente conforme mostrado no Esquema XXII (Ma, D.; Zhang, Y.; Yao, J.; Wu1 S.; Tao, F. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 12459-12467.)

EsquemaXXII

HoN. JL Cul1 K2CO3 N

Ar-X + 2 OH -Ar' "τΤ OH

DMA, aquecimento ,

R3 R

Via 4: Um processo o qual emprega substituição nucleofílica do diânion de um aminoácido livre e de um haleto de arila ou heteroarila, tipi- camente um fluoreto (semelhante a Saitton, S.; Kihlberg, J.; Luthman, K. Te-

trahedron 2004, 60, 6113-6120.):

O HO

H9N^ A n-BuLi ^ ^

Rj

OH THF, -78 0C Ar °H

Ar-X Em alguns casos, conforme mostrado no Esquema XXIII, o a-

cesso aos produtos aminoarila finais podem ser conseguidos por substitui- ção aromática nucleofílica direta do anel arila com um tripeptídeo do núcleo totalmente montado com um grupo de aminoácido no terminal da subregião

tas modalidades as quais não são tencionadas a limitar o seu escopo. Pelo 10 contrário, a presente descoberta cobre todas as alternativas, modificações e equivalentes conforme podem ser incluídos dentro do escopo das reivindica- ções. Deste modo, os seguintes exemplos, os quais incluem modalidades específicas, irão ilustrar uma prática da presente descoberta, sendo entendi- do que os exemplos são para os propósitos de ilustração de certas modali- 15 dades e são apresentados para fornecer o que se acredita ser a descrição mais útila e prontamente entendida de seus procedimentos e aspectos con- ceituais.

volume, e proporções de solução expressam uma relação de volume a vo- lume, a não ser que seja estabelecido de outra forma. Os espectros de res- sonância magnética nuclear (RMN) foram registrados em um espectrômetro 300, 400 ou 500 MHz Bruker; os deslocamentos químicos (δ) são reportados em partes por milhão. Cromatografia flash foi executada em sílica-gel (SiO2) P3.

Esquema XXIII

R5 R5

R5 R5

R5 O

Base, aquecimento

Ar-X

Solvente

R2

EXEMPLOS

A presente descoberta será agora descrita juntamente com cer-

As porcentagens da solução expressam uma relação de peso a de acordo com a técnica de cromatografia flash de Still (J. Org. Chem. 1978, 43, 2923).

I. Preparação de intermediários P1’

1. Preparação de ciclopropilsulfonamida Método 1:

H2N

ciclopropilsulfonamida Esquema 1

/P Etapal

-s. -^

Cl η,ν^Ν c’

EtaDa 2 I Ov ,0 Etaca 3 O. .O _w NV" _w nV

n-BuLi W' 'v\7 TFA H2N" >^7

Etapa 1:

Terc-butilamina (3,0 mois, 315 ml_) foi dissolvida em THF (2,5 10 L). A solução foi esfriada a -20°C. Cloreto de 3-cloropropanossulfonila (1,5 mol, 182 ml_) foi lentamente adicionado. A mistura reacional foi deixada a- quecer até temperatura ambiente e agitada por 24 horas. A mistura foi filtra- da e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (2,0 L). A solução resultante foi lavada com HCI 1,0 M (1,0 L), água (1,0 L) e 15 salmoura (1,0 L), seca em Na2SO4, filtrada e concentrada in vacuo para pro- duzir um sólido levemente amarelo, o qual foi cristalizado a partir de hexano para fornecer o produto como um sólido branco (316,0 g, 99%). RMN 1H (CDCI3) δ 1,38 (s, 9H), 2,30-2,27 (m, 2H), 3,22 (t, J = 7,35 Hz, 2H), 3,68 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 4,35 (b, 1H).

Etapa 2:

A uma solução do produto da etapa 1 (2,14 g, 10,0 mmols) em THF (100 ml_) foi adicionado n-BuLi (2,5 m em hexano, 8,0 ml_, 20,0 mmols) a -78°C. A mistura reacional foi deixada aquecer até temperatura ambiente por um período de 1 hora e concentrada in vacuo. O resíduo foi dividido en- tre acetato de etila e água (200 mL cada). A fase orgânica separada foi lava- da com salmoura, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada in vacuo. O resí- 5 duo foi recristalizado a partir de hexano para fornecer o produto desejado como um sólido branco (1,0 g, 56%). RMN 1H (CDCI3) δ 0,98-1,00 (m, 2H), 1,18-1,19 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 2,48-2,51 (m, 1H), 4,19 (b, 1H).

Etapa 3:

Uma solução do produto da etapa 2 (110 g, 0,62 mmol) em TFA 10 (500 mL) foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. Os voláteis fo- ram removidos in vacuo. O resíduo foi recristalizado a partir de acetato de etila/hexano (60 mL/240 mL) para fornecer o produto desejado como um só- lido branco (68,5 g, 91%). RMN 1H (DMSO-d6) δ 0,84-0,88 (m, 2H), 0,95-0,98 (m, 2H), 2,41-2,58 (m, 1H), 6,56 (b, 2H).

Método 2:

o NH3(Sat)THF O

L>—S-Cl -► Γ>—S-NH2

ô 0°Ct. atért Ò

A uma solução de 100 mL de THF esfriada até O0C foi borbulha- da amônia gasosa até ser atingida a saturação. A essa solução foi adiciona- da uma solução de 5 g (28,45 mmols) de cloreto de ciclopropilsulfonila (comprado da Array Biopharma) em 50 mL de THF. A solução foi aquecida 20 até a temperatura ambiente de um dia para o outro e agitada por mais um dia. A mistura foi concentrada até 1-2 mL de solvente permanecer e vertida em um plugue de 30 g de SiO2 (eluída com de 30% a 60% de acetato de etila/hexanos) para fornecer 3,45 g (100%) da ciclopropilsulfonamida como um sólido branco. RMN 1H (metanol-d4) δ 0,94-1,07 (m, 4H), 2,52-2,60 (m, 25 1H); 13C NMR (metanol-d4) δ 5,92, 33,01.

2. Preparação de ciclopropilsulfonamidas C1-substituídas

2a. Preparação de N-terc-butila-(1-metila)ciclopropilsulfonamida Etapa 1: Preparação de N-terc-butila-(3-cloro)propilsulfonamida

Preparada conforme descrito acima.

Etapa 2: Preparação de A/-terc-butila-(1-metila)ciclopropilsulfonamida

Uma solução do produto da etapa 1 (4,3 g, 20 mmols) foi dissolvida

5 em THF seco (100 mL) e esfriada a -78°C. A essa solução foi adicionado n- butila-lítio (17,6 mL, 44 mmols, 2,5 M em hexano) lentamente. O banho de gelo seco foi removido e a mistura reacional foi aquecida até temperatura ambiente por um período de 1,5 hora. Essa mistura foi esfriada até -78°C e uma solução de n-butila-lítio (20 mmols, 8 mL, 2,5 M em hexano) foi adicio- 10 nada. A mistura reacional foi aquecida até a temperatura ambiente, esfriada até -78°C por um período de 2 horas e tratada com uma solução pura de iodeto de metila (5,68 g, 40 mmols). A mistura reacional foi aquecida até temperatura ambiente de um dia para o outro, a seguir interrompida com NH4CI saturado (100 mL) em temperatura ambiente e extraída com acetato 15 de etila (100 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (100 mL), seca (MgSO4), filtrada e concentrada in vacuo para fornecer um óleo amarelo o qual foi cristalizado a partir de hexano para fornecer o produto desejado co- mo um sólido levemente amarelo (3,1 g, 81%): RMN 1H (CDCI3) δ 0,79 (m,

20

2H), 1,36 (s, 9H), 1,52 (m, 2H), 1,62 (s, 3H), 4,10 (brs, 1H). Etapa 3: Preparação de 1-metilciclopropilsulfonamida

n Uma solução do produto da etapa 2 (1,91 g, 10 mmols) foi dissolvida em TFA (30 mL) e a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. O solvente foi removido in vacuo para fornecer um óleo amare- lo, o qual foi cristalizado a partir de acetato de etila/hexano (1:4, 40 mL) para fornecer o produto desejado como um sólido branco (1,25 g, 96%): RMN 1H

preparação de 1-metilciclopropilsulfonamida substituindo haleto de propila por iodeto de metila no segunda etapa desse processo.

2c. Preparação de 1-alilciclopropilsulfonamida

metila)ciclopropilsulfonamida usando 1,25 equivalentes de brometo de alila como o eletrófilo. O composto foi usado na próxima reação sem purificação

(CDCI3) δ 0,84 (m, 2H), 1,41 (m, 2H), 1,58 (s, 3H), 4,65 (br s, 2H), Anal. Calcd. Para C4H9NO2S: C, 35,54; H, 6,71; N, 10,36, Encontrado: C, 35,67; H, 6,80; N, 10,40.

2b. Preparação de 1-propilciclopropilsulfonamida

O

10

Esse composto foi preparado usando o procedimento descrito para a

O

Etapa 1: Preparação de /V-terc-butila-(1-alila)ciclopropilsulfonamida

w

15

Esse composto foi obtido com 97% de rendimento de acordo com o procedimento descrito na síntese de A/-terc-butila-(1-

adicional: RMN 1H (CDCI3) δ 0,83 (m, 2H), 1,34 (s, 9H), 1,37 (m, 2H), 2,64 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 4,25 (br s, 1H), 5,07-5,10 (m, 2H), 6,70-6,85 (m, 1H). Etapa 2: Preparação de 1-alilciclopropilsulfonamida

O Esse composto foi obtido com 40% de rendimento a partir do produto da etapa 1 de acordo com o procedimento descrito na síntese de 1- metilciclopropilsulfonamida. O composto foi purificado por cromatografia em coluna em S1O2 usando metanol 2% em diclorometano como o eluente: RMN 5 1H δ 0,88 (m, 2H), 1,37 (m, 2H), 2,66 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 4,80 (s, 2H), 5,16 (m, 2H), 5,82 (m, 1H); 13C NMR (CDCI3) δ 11,2, 35,6, 40,7, 119,0, 133,6.

2d. Preparação de 1-benzilciclopropilsulfonamida

VNH2 PhOí '0

Etapa 1: Preparação de A/-ferc-butila-(1-benzila)ciclopropilsulfonamida

O H

Vn-

ph^X sO

Esse composto foi obtido com 60% de rendimento usando o procedi- 10 mento descrito para a síntese de te/'c-butila-(1-metila)ciclopropilsulfonamida, exceto que 1,05 equivalentes de brometo de benzila foram usados, seguido por trituração com 10% de acetato de etila em hexano: RMN 1H (CDCI3) δ 0,92 (m, 2H), 1,36 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 3,25 (s, 2H), 4,62 (br s, 1H), 7,29- 7,36 (m, 5H).

Etapa 2. Preparação de 1-benzilciclopropilsulfonamida

°s NH2

Esse composto foi obtido com 66% de rendimento a partir de N- terc-butila(1-benzila)ciclopropilsulfonamida usando o procedimento descrito para a síntese de 1-metilciclopropilsulfonamida, seguido pela recristalização a partir da quantidade mínima de 10% de acetato de etila em hexano: RMN 20 1H (CDCI3) δ 0,90 (m, 2H), 1,42 (m, 2H), 3,25 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 7,29 (m, 3H), 7,34 (m, 2H); 13C NMR (CDCI3) δ 11,1, 36,8, 41,9, 127,4, 128,8, 129,9, 136,5.

2e. Preparação de 1-(1-cicloexenila)ciclopropilsulfonamida 10

15

0^m2 'o

Etapa 1: Preparação de N-terc-butila-[1-(1-hidróxQcicloexila1- ciclopropilsulfonamida

Esse composto foi obtido com 84% de rendimento usando o procedimento descrito para a síntese de /V-terc-butila-(1- metila)ciclopropilsulfonamida, exceto que 1,30 equivalentes de cicloexanona foram usados, seguido pela recristalização a partir da quantidade mínima de 20% de acetato de etila em hexano: RMN 1H (CDCI3) δ 1,05 (m, 4H), 1,26 (m, 2H), 1,37 (s, 9H), 1,57-1,59 (m, 6H), 1,97 (m, 2H), 2,87 (br s, 1H), 4,55 (br s, 1H).

Etapa 2: Preparação de 1-(1-cicloexenila)ciclopropilsulfonamida

Esse composto, 1-(1-cicloexenila)-ciclopropilsulfonamida foi ob- tido com 85% de rendimento a partir de A/-terc-butila-[1-(1-hidróxi)cicloexila]- ciclopropilsulfonamida usando o procedimento descrito para a síntese de 1- metilciclopropilsulfonamida, seguido pela recristalização a partir da quanti- dade mínima de acetato de etila e hexano: RMN 1H (DMSO-dô) δ 0,82 (m, 2H), 1,28 (m, 2H), 1,51 (m, 2H), 1,55 (m, 2H), 2,01 (s, 2H), 2,16 (s, 2H), 5,89 (s, 1H), 6,46 (s, 2H); 13C NMR (DMSO-d6) δ 11,6, 21,5, 22,3, 25,0, 27,2, 46,9, 131,6, 132,2; LR-MS (ESI): 200 (M+-1).

2f. Preparação de 1-benzoilciclopropilsulfonamida

P O

Ph

S^NH2

b

20

Etapa 1: Preparação de /V-ferc-butila-d-benzoila) ciclopropilsul- fonamida

0 O U

“Vi

Esse composto foi obtido com 66% de rendimento usando o procedimento descrito para a síntese de A/-ferc-butila-( 1 - metila)ciclopropilsulfonamida, exceto que 1,2 equivalentes de benzoato de metila foram usados como o eletrófilo. O composto foi purificado por croma- tografia em coluna em SiO2 usando 30% a 100% de diclorometano em he- xano: RMN 1H (CDCI3) δ 1,31 (s, 9H), 1,52 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 4,16 (br s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,57 (m, 1H), 8,05 (d, J = 8,5 Hz, 2H).

Etapa 2: Preparação de 1-benzoilciclopropilsulfonamida

° 0V^NH2

Ph \N

A o

Esse composto foi obtido com 87% de rendimento a partir de N-

terc-butila(1-benzoila)ciclopropilsulfonamida usando o processo descrito pa- ra a síntese de 1-metilciclopropilsulfonamida, seguido pela recristalização a partir da quantidade mínima de acetato de etila em hexano: RMN 1H (DM- SO-d6) δ 1,39 (m, 2H), 1,61 (m, 2H), 7,22 (s, 2H), 7,53 (t, J=7,6 Hz, 2H), 7,65 15 (t, J=7,6 Hz, 1H), 8,06 (d, J=8,2 Hz1 2H); 13C NMR (DMSOd6) δ 12,3, 48,4, 128,1, 130,0, 133,4, 135,3, 192,0.

2q._Preparação_de_/V-ferc-butila-(1-fenilaminocarbóxO-

ciclopropilsulfonamida

°0m

PhHN^\

Esse composto foi obtido com 42% de rendimento usando o procedi- 20 mento descrito para a síntese de /V-terc-butila-O-metilafciclopropil- sulfonamida usando 1 equivalente de fenilisocianato, seguido pela recristali- zação a partir da quantidade mínima de acetato de etila em hexano RMN 1H (CDCI3) δ 1,38 (s, 9H), 1,67-1,71 (m, 4H), 4,30 (br s, 1H), 7,10 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,34 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,53 (t, J = 7,5 Hz, 2H).

3. Preparação de ciclopropanossulfonamidas C1-substituídas: Q uso de um grupo protetor N-Boc

3a. Preparação de terc-butilcarbamato de ciclopropilsulfonamida, um intermediário chave na preparação de ciclopropilsulfonamidas C1- substituídas

Uma solução de cloreto de 3-cloropropanossulfonila (55 g, 310,7 mmols) foi dissolvida em THF e adicionada gota a gora durante 30 minutos a uma solução de NH4OH (200 mL) a O0C. A mistura reacional foi aquecida até a temperatura ambiente, agitada por 1 hora e a camada aquosa foi extraída 10 com diclorometano (4 x 500 mL). Os extratos combinados foram lavados com HCI 1 N (150 mL), água (150 mL), secos em MgSO4, filtrados e concen- trados in vacuo. O sólido bruto foi recristalizado a partir da quantidade míni- ma de diclorometano em hexanos para fornecer o produto desejado como um sólido branco (45,3 g, 93%). RMN 1H (CDCI3) δ 2,34 (m, 2H), 3,32 (t,

42,63, 52,57.

Etapa 2: Preparação de terc-butilcarbamato de 3-cloropropilsul- fonilamina

lamina (30,2 mL, 217,0 mmols) e 4-DMAP (2,40 g, 19,6 mmols) em dicloro- metano (350 mL) a O0C foi tratada gota a gota com uma solução de di-terc- butildicarbonato (47,2 g, 216,9 mmols) em diclorometano (250 mL) durante 30 min. A mistura reacional foi aquecida até a temperatura ambiente, agitada por mais 3 horas e foi lavada com HCI 1 N (300 mL), água (300 mL) e sal-

5

Etapa 1: Preparação de 3-cloropropilsulfonamida

J=7,3 Hz, 2H), 3,70 (t, J=6,2 Hz, 2H), 4,83 (s, 2H); 13C NMR (CDCI3) δ 27,10,

Uma solução do produto da etapa 1 (30,2 g, 191,5 mmols), trieti- moura (300 mL), seca em MgSO4, filtrada e concentrada in vacuo para for- necer o produto bruto. Esse material foi triturado com 70 mL de 5% de diclo- rometano em hexanos para fornecer o produto desejado como um sólido esbranquiçado (47,2 g, 96%). RMN 1H (CDCI3) δ 1,51 (s, 9H), 2,33 (m, 2H),

Uma solução de n-butila-lítio (74,7 mL, 119,5 mmols, 1,6 M em hexa- no) foi dissolvida em THF seco (105 mL) e esfriada até -78°C sob atmosfera 10 de argônio. A essa solução foi adicionada uma solução do produto da etapa 2 (14 g, 54,3 mmols) em THF seco (105 mL) gota a gota durante 20-30 mi- nutos. O banho de gelo seco foi removido e a mistura reacional foi deixada aquecer até a temperatura ambiente por um período de 2 horas. A mistura reacional foi interrompida com ácido acético glacial (3,4 mL), concentrada in

vacuo e dividida entre diclorometano (100 mL) e água (100 mL). A faze or- gânica foi lavada com salmoura (100 mL), seca (MgSO4), filtrada e concen- trada in vacuo para fornecer o produto desejado como um sólido esbranqui- çado ceroso (12,08 g, 100%): RMN 1H (CDCI3) δ 1,10 (m, 2H), 1,34 (m, 2H),

31,13,84,07,149,82.

3b. Preparação de 1-metoximetilciclopropilsulfonamida Etapa 1: Preparação de terc-butilcarbamato de 1-metoximetilciclo- propilsulfonamida

3,60 (t, J=7,3 Hz, 2H), 3,68 (t, J=6,21 Hz, 2H); RMN 13C (CDCI3) δ 26,50, 27,95, 42,37, 50,40, 84,76, 149,53.

Etapa 3. Preparação de terc-butilcarbamato de ciclopropilsulfonamida

1,50 (s, 9H), 2,88 (m, 1H), 7,43 (s, 1H), 13C NMR (CDCI3) δ 6,21, 28,00,

A uma solução de terc-butilcarbamato de ciclopropilsulfonilamina (1,0 g, 4,5 mmols) dissolvida em THF (30 mL), esfriada até -78°C foi adicionado n-butila-lítio (6,4 mL, 10,2 mmols, 1,6 M em hexano) e a mistura reacional foi agitada por 1 hora. A essa solução foi adicionada uma solução pura de éter clorometilmetílico (0,40 mL, 5,24 mmols) e a mistura foi lentamente deixada aquecer até a temperatura ambiente de um dia para o outro. O pH da solu- ção foi ajustado para 3 usando HCI 1N aquoso e foi, a seguir, extraído com 5 acetato de etila (porções de 4 x 50 mL). Os extratos combinados foram se- cos (MgSO4), filtrados e concentrados para produzir terc-butilcarbamato de 1-metoximetilciclopropilsulfonilamina, como um sólido ceroso (1,20 g, 100%), o qual foi tomado diretamente na próxima reação sem purificação adicional: RMN 1H (CDCI3) δ 1,03 (m, 2H), 1,52 (s, 9H), 1,66 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,68 10 (s, 2H), 7,54 (s, 1H); 13C NMR (CDCI3) δ 11,37, 28,29, 40,38, 58,94, 73,43, 83,61, 149,57.

Etapa 2: Preparação de 1-metoximetilciclopropilsulfonamida

VNH2

Uma solução de terc-butilcarbamato de 1-metoximetilciclo- propilsulfonilamina (1,14 g, 4,30 mmols) foi dissolvida em uma solução de TFA 50%/diclorometano (30 mL) e foi agitada em temperatura ambiente por

16 horas. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi cromatografado em 80 g de SiO2 (eluindo com de 0% a 60% de acetato de etila/hexanos pa- ra 1-metoximetilciclopropilsulfonamida como um sólido branco (0,55 g, 77% total em duas etapas): 1H NMR (CDCI3) δ 0,95 (m, 2H), 1,44 (m, 2H), 3,36 (s, 20 3H), 3,65 (s, 2H), 4,85 (s, 2H); 13C NMR (CDCI3) δ 11,17, 40,87, 59,23, 74,80; LRMS m/z 183 (M++NH4).

3c. Preparação de 1-ciclopropilmetilciclopropilsulfonamida

Vnh2

Etapa 1: Preparação de terc-butilcarbamato de 1-ciclopropilmetilciclo- propilsulfonilamina Terc-butilcarbamato de 1-ciclopropilmetilciclopropilsulfonilamina foi obtido com 92% de rendimento de acordo com o procedimento descrito na síntese de terc-butilcarbamato de 1-metoximetilciclopropilsulfonilamina, ex- ceto que 1,10 equivalentes de brometo de ciclopropilmetila foram usados 5 como eletrófilo. O composto foi tomado diretamente para a próxima reação sem purificação: RMN 1H (CDCI3) δ 0,10 (m, 2H), 0,51 (m, 2H), 0,67 (m, 1H),

1,10 (m, 2H), 1,49 (s, 9H), 1,62 (m, 2H), 1,87 (d, J=7,0 Hz, 2H).

butilcarbamato de 1-ciclopropilmetilciclopropilsulfonilamina de acordo com o procedimento descrito para a síntese de 1-metoximetilciclopropilsulfonamida. O composto foi purificado por cromatografia em coluna em SiO2 usando de 0% a 60% de acetato de etila em hexanos como o eluente: RMN 1H (CDCI3)

Etapa 1: Preparação de terc-butilcarbamato de 1- propilcarbamoilciclopropanossulfonamida

do com o procedimento descrito para a síntese de terc-butilcarbamato de 1- metoximetilciclopropilsulfonilamina, exceto que 1,10 equivalente de isociana- to de n-propila foi usado como o eletrófilo. O composto foi levado diretamen- te para a próxima reação sem purificação: RMN 1H: (CDCI3) δ 0,10 (m, 2H),

Etapa 2: Preparação de 1-ciclopropilmetilciclopropilsulfonamida

n

Esse composto foi obtido com 65% de rendimento a partir de terc-

δ 0,15 (m, 2H), 0,51 (m, 2H), 1,01 (m, 2H), 1,34 (m, 3H), 1,86 (d, J=7,0 Hz, 2H), 4,83 (s, 2H); 13C NMR (CDCI3) δ 4,65, 7,74, 11,26, 35,62, 41,21; LRMS m/z 193 (M++NH4).

3d. Preparação de 1-propilcarbamoilciclopropanossulfonamida

20

Esse composto foi obtido com um rendimento bruto de 100% de acor- 0,51 (m, 2Η), 0,67 (m, 1 Η), 1,10 (m, 2Η), 1,49 (s, 9Η), 1,62 (m, 2Η), 1,87 (d, J=7,0 Hz, 2Η).

Etapa 2: Preparação de 1-propilcarbamoilciclopropanossulfonamida

O n

Esse composto foi obtido com 50% de rendimento a partir de terc-

butilcarbamato de 1-propilcarbamoilciclopropanossulfonamida de acordo com o procedimento descrito para a síntese de 1- metoximetilciclopropilsulfonamida, exceto que nenhuma cromatografia foi usada, uma vez que o material foi recristalizado a partir da quantidade míni- ma de diclorometano/hexanos: RMN 1H (CDCI3) δ 0,15 (m, 2H), 0,51 (m,

3e. Preparação de 1-(3,5-dimetilisoxazol-4ila)carbamoilciclopro- panossulfonamida

Esse composto foi obtido com um rendimento bruto de 100% de acor- do com o procedimento descrito para a síntese de terc-butilcarbamato de 1- metoximetilciclopropilsulfonilamina, exceto que 1,20 equivalentes de 3,5- dimetilisoxazol-4-isocianato foi usado como o eletrófilo. O composto foi to- mado diretamente na próxima reação sem purificação.

2H), 1,01 (m, 2H), 1,34 (m, 3H), 1,86 (d, J=I,0 Hz, 2H), 4,83 (s, 2H); RMN

C (CDCI3) δ 4,65, 7,74, 11,26, 35,62, 41,21; LRMS m/z 193 (M++NH4).

Etapa 1: Preparação de terc-butilcarbamato de 1-(3,5-dimetilisoxazol- 4-ila)carbamoilciclopropanossulfonamida

Etapa 2: Preparação de 1-(3,5-dimetilisoxazol-4- ila)carbamoilciclopro-panossulfonamida ,Ν=Υ £ Vnh2

γ-κΥο

Esse composto foi obtido com 50% de rendimento (580 mg) a partir de 1,62 g (4,52 mmols) de terc-butilcarbamato de 1-(3,5-dimetilisoxazol-4- ila)carbamoilciclopropanossulfonamida usando 30 mL (120 mmols) de HCI 4 N/dioxanos, agitando de um dia para o outro, concentração e cromatografia 5 em uma coluna Biotage 40M (eluindo com de 0% a 5% de meta- nol/diclorometano: RMN 1H (metanol-d4) δ 1,57 (m, 2H), 1,61 (m 2H), 2,15 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 4,84 (s, 3H); RMN 13C (metanol-d4) δ 9,65, 10,94, 15,01, 46,11, 114,82, 159,45, 165,55, 168,15; LRMS m/z 260 (M++H).

4. Preparação de cicloalquilsulfonamidas a partir de cicloalguilbrometos

4a. Preparação de ciclobutilsulfonamida a partir de brometo de ciclobutila

i) fBuLi

ii) SO2CI2

iii) NH3 (sat) THF

O0C até ta O

O^Br -O-S-NH2

O

A uma solução de 5,0 g (37,0 mmols) de brometo de ciclobutila em 30 mL de éter dietílico anidro (éter dietílico) esfriada até -78°C foram adi- cionados 44 mL (74,8 mmols) de terc-butila-lítio 1,7 M em pentanos. A solu- ção foi lentamente aquecida até -35°C durante 1,5 hora. Essa mistura foi "canulada" lentamente em uma solução de 5,0 g (37,0 mmols) de cloreto de sulfurila recentemente destilado em 100 mL de hexanos esfriada até -40°C, aquecida até 0°C durante 1 hora e cuidadosamente concentrada in vacuo. Essa mistura foi redissolvida em éter dietílico, lavada uma vez com um pou- co de água gelada, seca (MgSO4), filtrada e cuidadosamente concentrada. Essa mistura foi redissolvida em 20 mL de THF, adicionada gota a gota a 500 mL de NH3 saturada em THF e foi deixada agitar de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo até um sólido amarelo bruto e foi recrista- Iizada a partir da quantidade mínima de diclorometano em hexanos com 1 a 2 gotas de metanol para fornecer 1,90 g (38%) do produto desejado como um sólido branco. RMN 1H (CDCI3) δ 1,95-2,06 (m, 2H), 2,30-2,54 (m, 4H), 3,86 (p, J=8 Hz, 1H), 4,75 (brs, 2H); RMN 13C (CDCI3) 6 16,43, 23,93, 56,29, HRMS m/z (M-H)' calc para C4H8NSO2: 134,0276, encontrado 134,0282.

4b. Preparação de ciclopentilsulfonamida

—V O

Vs-NH2

0

Uma solução de 18,5 mL (37,0 mmols) de cloreto de ciclopen- tilmagnésio 2 M em éter foi adicionada gota a gota a uma solução de 3,0 mL (37,0 mmols) de cloreto de sulfurila recentemente destilada (obtida da Aldri- ch) em 100 mL de hexanos, esfriada até -78°C.

A mistura foi aquecida até 0°C durante 1 hora e foi, a seguir, cuidadosamente concentrada in vacuo. Essa mistura foi redissolvida em éter dietílico (200 mL), lavada uma vez com um pouco de água gelada (200 mL), seca (MgSO4), filtrada e concentrada cuidadosamente. Essa mistura foi re- dissolvida em 35 mL de THF, adicionada gota a gota até 500 mL de NH3 sa- turada em THF e foi deixada agitar de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo até um sólido amarelo bruto, o resíduo foi filtrado atra- vés de 50 g de sílica-gel usando 70% de acetato de etila-hexanos como o eluente e a solução foi, a seguir, concentrada. O resíduo foi recristalizado a partir da quantidade mínima de diclorometano em hexanos com 1 a 2 gotas de metanol para fornecer 2,49 g (41%) do produto desejado como um sólido branco. RMN 1H (CDCI3) δ 1,58-1,72 (m, 2H), 1,74-1,88 (m, 2H), 1,94-2,14 (m, 4H), 3,48-3,59 (m, 1H), 4,80 (br s, 2H); RMN 13C NMR (CDCI3) δ 25,90, 28,33, 63,54; MS m/e 148 (M-H)-.

4c. Preparação de cicloexilsulfonamida

— O

S-NH2

1 í

O

Uma solução de 18,5 mL (37,0 mmols) de cloreto de cícloexil- magnésio 2 M (TCI Américas) em éter dietílico foi adicionada gota a gota a uma solução de 3,0 mL (37,0 mmols) de cloreto de sulfurila recentemente destilada em 100 mL de hexanos esfriada até -78°C. A mistura foi aquecida até 0°C durante 1 hora e foi, a seguir, cuidadosamente concentrada in vacu- o. Essa mistura foi redissolvida em éter dietílico (200 mL), lavada uma vez com um pouco de água gelada (200 mL), seca (MgSO4), filtrada e concen- trada cuidadosamente. Essa mistura foi redissolvida em 35 mL de THF, adi- cionada gota a gota a 500 mL de NH3 saturada em THF e foi deixada agitar 5 de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo até um sólido amarelo bruto, o resíduo foi filtrado através de 50 g de sílica-gel usando 70% de acetato de etila-hexanos como o eluente e foi concentrada. O concentra- do foi recristalizado a partir da quantidade mínima de diclorometano em he- xanos com 1 a 2 gotas de metanol para fornecer 1,66 g (30%) do produto 10 desejado como um sólido branco: RMN 1H (CDCI3) δ 1,11-1,37 (m, 3H),

namida, 49 mL (37 mmols) de cloreto de neopentilmagnésio 0,75 M (Alfa) em éter dietílico foram convertidos em 1,52 g (27%) do produto desejado como um sólido branco. RMN 1H (CDCI3) δ 1,17 (s, 9H), 3,12 (s, 2H), 4,74 (brs, 2H); RMN 13C (CDCI3) δ 29,46, 31,51, 67,38; MS m/e 150 (M-1 )\

binila (AIdrich) e 13,7 g (91 mmols) de iodeto de sódio em 150 mL de aceto- na foi aquecida até o refluxo de um dia para o outro e a seguir esfriada até a temperatura ambiente. Os sólidos inorgânicos foram removidos por filtração e a acetona e iodeto de ciclopropilcarbinila (8,41 g, 46%) foram removidos por destilação (temperatura ambiente e 150 torr a 80°C, respectivamente).

1,43-1,56 (m, 2H), 1,67-1,76 (m, 1H), 1,86-1,96 (m, 2H), 2,18-2,28 (m, 2H), 2,91 (tt, J=12, 3,5 Hz, 1H), 4,70 (br s, 2H); 13C NMR (CDCI3) δ 25,04, 25,04, 26,56, 62,74; MS m/e 162 (M-1)'.

4d. Preparação de neopentilsulfonamida

S-NH2

I I

I I

O

15

Seguindo o procedimento para a preparação de cicloexilsulfo-

20

4e. Preparação de ciclobutilcarbinilsulfonamida

Ii

O

Uma solução de 12,3 g (83 mmols) de brometo de ciclobutilcar- Uma solução de 4,0 g (21,98 mmols) de iodeto de ciclobutilcar- binila em 30 mL de éter dietílico anidro esfriado até -78°C foi "canulada" em uma solução de 17 mL (21,98 mmols) de sec-butila-lítio 1,3 M em cicloexa- nos e a solução foi agitada por 5 minutos. A essa mistura foi "canulada" uma 5 solução de 3,0 g (21,98 mmols) de cloreto de sulfurila recentemente destila- do em 110 mL de hexanos esfriada até -78°C, a mistura foi aquecida até temperatura ambiente por 1 hora e foi, a seguir, cuidadosamente concentra- da in vacuo. Essa mistura foi redissolvida em éter dietílico, lavada uma vez com um pouco de água gelada, seca (MgSO4), filtrada e concentrada cuida- 10 dosamente. Essa mistura foi redissolvida em 30 mL de THF, adicionada gora a gota a 500 mL de NH3 saturada em THF e foi deixada agitar de um dia pa- ra o outro. A mistura foi concentrada in vacuo até um sólido amarelo bruto e foi recristalizada a partir da quantidade mínima de diclorometano em hexa- nos com 1-2 gotas de metanol para fornecer 1,39 g (42%) do produto de- 15 sejado como um sólido branco. RMN 1H (CDCI3) δ 1,81-2,03 (m, 4H), 2,14- 2,28 (m, 2H), 2,81-2,92 (m, 1H), 3,22 (d, J=7 Hz, 2H), 4,74 (brs, 2H); RMN 13C (CDCI3) δ 19,10, 28,21, 30,64, 60,93, MS m/e 148 (M-H)'.

4f. Preparação de ciclopropilcarbinilsulfonamida

—\5?

^ S-NH2

I I

O

Usando o procedimento empregado para a preparação de ciclo- 20 butilcarbinilsulfonamida, ciclopropilcarbinilsulfonamida foi preparada a partir de brometo de ciclopropilcarbinila (AIdrich) (ver também JACS 1981, p. 442- 445). RMN 1H (CDCI3) δ 0,39-0,44 (m, 2H), 0,67-0,76 (m, 2H), 1,13-1,27 (m, 1H), 3,03 (d, J=7,3 Hz, 2H), 4,74 (brs, 2H); RMN 13C (CDCI3) δ 4,33, 5,61, 59,93; MS m/e 134 (M-1).

4g. Preparação de 2-tiofenossulfonamida

O produto desejado foi preparado a partir de cloreto de 2- tiofenossulfonila (comprado da Aldrich) usando o método descrito em Justus Liebigs Ann. Cem. 1933, 501, p.174-182.

4h. Preparação de 4-bromobenzenossulfonamida

\_/ Il

N—' O

4-bromofenilsulfonamida foi preparada pelo tratamento de clore- to de 4-bromossulfonila comercialmente disponível com amônia saturada em

de água (1 equiv.) em THF a uma solução agitada gelada (-20°C) de isocia- nato de clorossulfonila (1 equiv) em THF e a solução resultante foi deixada

aquecer até 0°C. A essa solução foi adicionada trietilamina anidra (1 equiv) seguido pela necessária amina secundária (1 equiv). A mistura reacional foi aquecida até a temperatura ambiente, a seguir filtrada e o filtrado foi concen- trado para produzir as sulfamidas desejadas.

6. Preparação do cloridrato do éster metílico do ácido 1- aminociclobutanocarboxílico

THF.

5. Procedimento geral para a preparação de sulfamidas

Cl

O cloreto de sulfamoíla intermediário foi preparado pela adição

15

Il Preparação de intermediários P1

5. Ácido 1-terc-butoxicarbonilaminociclopropanocarboxílico é comercialmente disponível

O

Ácido 1-aminociclobutanocarboxílico (100 mg, 0,869 mmol) (To- cris) foi dissolvido em 10 mL de metanol. Gás HCI foi borbulhado nisto por 2 horas. A mistura reacional foi agitada por 18 horas, e a seguir concentrada in vacuo para produzir 144 mg de um óleo amarelo. A trituração com 10 mL de éter dietílico forneceu 100 mg do produto desejado como um sólido branco. RMN 1H (CDCI3) δ 2,10-2,25 (m, 1H), 2,28-2,42 (m, 1H), 2,64-2,82 (m, 4H),

3,87 (s, 3H), 9,21 (brs, 3H).

7a. Preparação do éster terc-butílico do ácido (1 R,2RV(1S.2S)

1-amino-2-etilciclopropanocarboxílico (mistura racêmica)

H2N C02tBu

etila syn em relação ao carbóxi Etapa 1: Preparação de éster di-terc-butílico do ácido 2-

etilciclopropano-1,1-dicarboxílico mostrado abaixo

A uma suspensão de cloreto de benziltrietilamônio (21,0 g, 92,2 mmols) em uma solução de NaOH 50% aquosa (92,4 g em 185 mL de H2O) foi adicionado 1,2-dibromobutano (30,0 g, 138,9 mmols) e di-terc- 15 butilmalonato (20,0 g, 92,5 mmols). A mistura reacional foi vigorosamente agitada por 18 horas em temperatura ambiente e tratada com uma mistura de gelo e água. O produto bruto foi extraído com diclorometano (3x) e se- qüencialmente lavado com água (3x) e salmoura. Os extratos orgânicos fo- ram combinados, secos (MgSO4), filtrados e concentrados in vacuo. O resí- 20 duo resultante foi purificado por cromatografia em coluna flash (100 g de Si- O2, 3% de éter dietílico em hexano) para fornecer o produto desejado (18,3 g, 67,8 mmols, 73% de rendimento), o qual foi usado diretamente na próxima reação.

Etapa 2: Preparação de éster terc-butílico do ácido 2-etilciclopropano- 1.1-dicarboxílico racêmico, mostrado abaixo

O produto da etapa 1 (18,3 g, 67,8 mmols) foi adicionado a uma suspensão de terc-butóxido de potássio (33,55 g, 299,0 mmols) em éter die- tílico seco (500 mL) a 0°C, tratado com H2O (1,35 mL, 75,0 mmols) e foi vi- 5 gorosamente agitado de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura reacional foi vertida em uma mistura e gelo e água e lavado com éter dietílico (3x). A camada aquosa foi ajustada para pH ácido com uma solução de ácido cítrico 10% aquosa a 0°C e extraída com acetato de etila (3x). AS camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2x), salmoura, 10 secas (MgSO4), filtradas e concentradas in vacuo para fornecer o produto desejado como um óleo amarelo-pálido (10 g, 46,8 mmols, 69% de rendi- mento).

Etapa 3: Preparação de éster terc-butílico do ácido (1R,2R)/(1S.2S) 2-etila-1- (2-trimetilsilaniletoxicarbonilamino)ciclopropanocarboxílico. mostrado abaixo

A uma suspensão do produto da etapa 2 (10 g, 46,8 mmols) e 3

g de peneiras moleculares de 4Ã recentemente ativadas em benzeno seco (160 mL) foi adicionada trietilamina (7,50 mL, 53,8 mmols) e DPPA (11 mL, 10,21 mmols). A mistura reacional foi aquecido até o refluxo por 3,5 horas, tratada com 2-trimetilsililetanol (13,5 mL, 94,2 mmols) e aquecida até o reflu- 20 xo de um dia para o outro. A mistura reacional foi filtrada, diluída com éter dietílico, lavada seqüencialmente com solução de ácido cítrico 10% aquosa, água, NaHCO3 aquoso saturado, água (2x) e salmoura (2x), seca (MgSO4), filtrada e concentrada in vacuo. O resíduo foi suspenso com 10 g de resina Iimpadora de poliisocianato da Aldrich em 120 mL de diclorometano, agitado em temperatura ambiente de um dia para o outro e filtrado para fornecer o produto desejado (8 g, 24,3 mmols; 52%) como um óleo amarelo-pálido: RMN 1H (CDCI3) δ 0,03 (s, 9H), 0,97 (m, 5H), 1,20 (br m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,40-1,70 (m, 4H), 4,16 (m, 2H), 5,30 (brs, 1H).

Etapa 4: Preparação do éster terc-butílico do ácido (1 R,2R)/(1S,2S) 1-amino-

2-etilciclopropanocarboxílico (mistura racêmica), mostrado abaixo

H2N C02tBu

Ao produto da etapa 3 (3 g, 9 mmols) foi adicionada uma solu- ção de TBAF em THF (9,3 mL, 9,3 mmols). A mistura foi aquecida até o re- 10 fluxo por 1,5 hora, esfriada até a temperatura ambiente e diluída com 500 mL de acetato de etila. A solução foi sucessivamente lavada com água (2 x 100 mL) e salmoura (2 x 100 mL), seca (MgSO4), filtrada e concentrada in vacuo para fornecer o produto desejado.

7b. Um método geral para a conversão dos compostos de Fórmula I com um substituinte P1 vinila P1 no análogo P1 saturado correspondente conforme mostrado

p5C r5B

EtOAc

5% Pt(S)/C, H2 (30 PSI) N

R4'

30 minutos

OoO

f V

;v

Substituinte vinil Pl composto A

Substituinte etil Pl composto B

20

Uma suspensão do composto A (aproximadamente 100 mg) e Pt(S)/C (5%, 10 mg) em aproximadamente 15 mL de EtOAc foi hidrogenada, H2 (30 psi) por 0,5 h. Depois da filtração através de um plugue de celite, o filtrado foi concentrado e purificado para produzir o composto desejado, Composto B. 8. Preparação do éster etílico do ácido (1R.2SV(1S,2R)-1- amino-2-vinilciclopropanocarboxílico racêmico.

Esquema 1

Etapa 1

CIH3N CO2Et

Na2SO4, Et3N TBME

Etapa 2

CO2Et

1) LiOt-Bu, tolueno, RT

2) HCI 1,0 M

3) NaOH

4) BocjO

BocHN

Racemato: Mistura 1:1 de (1R,2S) e (1S,2R)

Etapa 1:

5 Cloridrato do éster glicinoetílico (304 g, 2,16 rnols) foi suspenso

em éter terc-butilmetílico (1,6 L). Benzaldeido (231 g, 2,16 rnols) e sulfato de sódio anidro (155 g, 1,09 mol) foram adicionados, e a mistura foi esfriada até O0C usando um banho em água gelada. Trietulamina (455 mL, 3,26 rnols) foi adicionada gota a gota durante 30 minutos e a mistura foi agitada por 48 ho- 10 ras em temperatura ambiente. A reação foi, a seguir, interrompida pela adi- ção de água gelada (1 L) e a camada orgânica foi separada. A fase aquosa foi extraída com éter terc-butilmetílico (0,5 L) e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com uma mistura de NaHCO3 aquoso saturado (1 L) e salmoura (1 L). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada, e concen- 15 trada in vacuo para fornecer 392,4 g do produto N-benzilimina como um óleo amarelo espesso que foi usado diretamente na próxima etapa. RMN 1H (CDCI3, 300 MHz)Ô 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 4,24 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 4,41 (d, J = 1,1 Hz, 2H), 7,39-7,47 (m, 3H), 7,78-7,81 (m, 2H), 8,31 (s, 1H).

Etapa 2:

A uma suspensão de terc-butóxido de lítio (84,1 g, 1,05 mol) em

tolueno seco (1,2 L) foi adicionada gota a gota uma mistura da N-benzilimina do éster glicinoetílico (100 g, 0,526 mmol) e trans-1,4-dibromo-2-buteno (107 g, 0,500 mol) em tolueno seco (0,6 L) em 60 minutos. No completamento da adição, a mistura vermelha intensa foi interrompida pela adição de água (1 25 L) e éter terc-butilmetílico (TBME, 1 L). A fase aquosa foi separada e extraí- da uma segunda vez com TBME (1 L). As fases orgânicas foram combina- das, HCI 1,0 M (1 L) foi adicionado e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A fase orgânica foi separada e extraída com água (0,8 L). As fases aquosas foram a seguir combinadas, saturadas com sal (700 g) e TBME (1 L) foi adicionado e a mistura foi esfriada até O0C. A mistura agita- da foi a seguir alcalinizada até pH 14 pela adição gota a gota de NaOH 10,0 5 M, a camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com TBME (2 x 500 mL). Os extratos orgânicos foram combinados, secos em MgSO4, filtrados e concentrados para produzir um volume de 1 L. A essa solução de amina livre foi adicionado Boc2O ou di-terc-butildicarbonato (131 g, 0,600 mol) e a mistura foi agitada por 4 dias em temperatura ambiente. Di-terc- 10 butildicarbonato adicional (50 g, 0,23 mol) foi adicionado à reação e a mistu- ra foi submetida a refluxo por 3 horas e foi, a seguir, deixada esfriar até a temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada in vacuo para fornecer 80 g de material bruto. Esse resíduo foi purificado por cromatografia flash (2,5 Kg de SiO2, 15 eluído com CH3OH de 1% a 2%/CH2CI2 para fornecer 57 g (53% de éster etílico do ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocar- boxílico como um óleo amarelo, o qual solidificou durante o repouso no refri- gerador: RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) δ 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,46 (s, 9H),

1,43-1,49 (m, 1H), 1,76-1,82 (br m, 1H), 2,14 (q, J =8,6 Hz, 1H), 4,18 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 5,12 (dd J = 10,3, 1,7 Hz, 1H), 5,25 (br s, 1H), 5,29 (dd, J = 17,6, 1,7 Hz1 1H), 5,77 (ddd, J = 17,6, 10,3, 8,9 Hz, 1H); MS m/z 254,16 (M- 1).

9. Resolução do éster etílico do ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S.2R)-1- amino-2-vinilciclopropanocarboxílico Esquema 2

o o

Enzima

BocHNL JJ

Tampão, DMSO ''1I/

Racemato: Mistura 1:1 de (1 R,2S) e (1S,2R)

Resolução A A uma solução aquosa de tampão fosfato de sódio (0,1 M1 4,25

litros ("L"), pH 8) dentro de um reator encamisado de 12 litros, mantida a 39°C, e agitada a 300 rpm, foram adicionados 511 gramas de alcalase 2,4 L (cerca de 425 mL) (Novozymes North America Inc.). Quando a temperatura da mistura alcançou 39°C, o pH foi ajustado para 8,0 pela adição de NaOH 50% em água. Uma solução do éster etílico do ácido N-Boc- (1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico (85 g) em 850 mL de DMSO foi a seguir adicionada em um período de 40 minutos. A temperatura reacional foi então mantida a 40°C por 24,5 horas durante cujo tempo o pH da mistura foi ajustado para 8,0 nos pontos de tempo de 1,5 hora e 19,5 ho- ras usando NaOH 50% em água. Depois de 24,5 horas, o excesso enantio- mérico do éster foi determinado como sendo 97,2%, e a reação foi esfriada até a temperatura ambiente (26°C) e agitada de um dia para o outro (16 ho- ras), depois do que o excesso enantiomérico do éster foi determinado como sendo de 100%. O pH da mistura reacional foi, a seguir, ajustado para 8,5 com NaOH 50% e a mistura resultante foi extraída com MTBE (2x2 L). O extrato MTBE combinado foi a seguir lavado com NaHCO3 5% (3 x 100 mL), água (3 x 100 mL) e concentrado in vacuo para produzir o éster etílico do ácido N-Boc-(1R,2S)/-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico como um sólido amarelo-claro (42,55 g/ pureza: 97% @210 nm, sem conter ácido; 100% de excesso enantiomérico ("ee").

cada até pH 2 com H2SO4 50% e extraída com MTBE (2x2 L). O extrato MTBE foi lavado com água (3 x 100 mL) e concentrado para produzir o ácido como um sólido amarelo-claro (42,74 g; pureza: 99% @210 nm, sem conter éster).

A camada aquosa do processo de extração foi, a seguir, acidifi-

5

5

Éster IR,2S

Ácido 1S,2R éster ácido Espectrometria de (+) ESI, C13H22NO4, (-) ESI, CiiH16NO4, [Μ¬ massa de alta [M+H]+, calc. 256,1549, Η]', calc. 226,1079, resolução encontrado 256,1542 encontrado 226,1089 Deslocamento químico observado por RMN Solvente: CDCI3 (próton δ 7,24 ppm, C-13 δ 77,0 ppm) Bruker DRX-500C: proton 500,032 MHz, carbono 125,746 MH Posição Próton (padrão) C-13 ppm Próton (padrão) C-13 ppm ppm ppm 1 ---- 40,9 40,7 2 2,10 (q, J = 9,0 Hz) 34,1 2,17 (q, J = 9,0 35,0 Hz) 3a 1,76 (br) 23,2 1,79 (br) 23,4 3b 1,46 (br) 1,51, (br) 4 ____ 170,8 ____ 175,8 5,74 (ddd, J = 9,0, 133,7 5,75 (m) 133,4 10,0, 17,0 Hz) 6a 5,25 (d, J = 17,0 Hz) 117,6 5,28 (d, J = 118,1 17,0 Hz) 6b 5,08 (dd, J = 10,0, 5,12 (d, J = 1,5 Hz) 10,5 Hz) 7 ____ 155,8 ____ 156,2 8 ____ 80,0 ____ 80,6 9 1,43 (s) 28,3 1,43 (s) 28,3 4,16 (m) 61,3 ____ 11 1,23 (t, J = 7,5 Hz) 14,2 ---- ____ Resolução B

A 0,5 mL de tampão Heps.Na 100 mM (pH 8,5) em um poço de uma placa de 24 poços (capacidade: 10 mL/poço), 0,1 mL de Savinase 16,0 L (protease de Bacillus clausii) (Novozymes North America Inc.) e uma solu- ção do éster etílico do ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2- vinilciclopropanocarboxílico (10 mg) em 0,1 mL de DMSO foram adiciona- dos. A placa foi vedada e incubada a 250 rpm a 40°C. Depois de 18 horas, o enantioexcesso do éster foi determinado como sendo de 44,3% como se segue: 0,1 mL da mistura reacional foi removido e misturado bem com 1 mL de etanol; depois da centrifugação, 10 microlitros ("μ*-") do sobrenadante foram analisados com HPLC quiral. À mistura reacional remanescente, 0,1 mL de DMSO foi adicionado, e a placa foi incubada por mais 3 dias a 250 rpm a 40°C, depois do que quatro mL de etanol foram adicionados ao poço. Depois da centrifugação, 10 μί do sobrenadante foram analisados co HPLC quiral e o enantioexcesso do éster foi determinado como sendo de 100%. Resolução C

A 0,5 mL de tampão Heps.Na 100 mM (pH 8,5) em um poço de uma placa de 24 poços (capacidade: 10 mL/poço), 0,1 mL de Esperase 8,0 L (protease de Bacillus halodurans) (Novozymes North America Inc.) e uma solução do éster etílico do ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2- vinilciclopropanocarboxílico (10 mg) em 0,1 mL de DMSO foram adiciona- dos. A placa foi vedada e incubada a 250 rpm a 40°C. Depois de 18 horas, o enantioexcesso do éster foi determinado como sendo de 39,6% como se segue: 0,1 mL da mistura reacional foi removido e misturado bem com 1 mL de etanol; depois da centrifugação, 10 μί do sobrenadante foram analisados com HPLC quiral. À mistura reacional remanescente, 0,1 mL de DMSO foi adicionado, e a placa foi incubada por mais 3 dias a 250 rpm a 40°C, depois do que 4 mL de etanol foram adicionados ao poço. Depois da centrifugação, μί do sobrenadante foram analisados com HPLC quiral e o enantioex- cesso do éster foi determinado como sendo de 100%.

As análises das amostras foram efetuadas da seguinte maneira: 1) Preparação da amostra: Cerca de 0,5 mL da mistura reacio- nal foi bem misturado com 10 volumes de etanol. Depois da centrifugação, 10 μί do sobrenadante foram injetados em coluna de HPLC.

2) Determinação da conversão:

Coluna: YMC ODS A, 4,6 x 50 mm, S-5 μιη Solvente: A, 1HCI 1 mM em água; B, CH3CN Gradiente: 30% de B por 1 min; de 30% a 45% de B em 0,5 min; 45% de B por 1,5 min; 45% a 30% de B em 0,5 minuto.

Taxa de fluxo: 2 mL/min.

Detecção por UV: 210 nm.

Tempo de retenção: ácido, 1,2 min; éster, 2,8 minutos.

3) Determinação do enantioexcesso para o éster:

Coluna: CHIRACEL OD-RH, 4,6 x 150 mm, S-5 μιη

Fase móvel: CH3CN/HCIO4 50 mM em água (67/33)

Taxa de fluxo: 0,75 mL/min.

Detecção por UV: 210 nm.

Tempo de retenção:

Ácido (1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico 5,2 min;

Racemato do éster etílico do ácido (1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2- vinilciclopropanocarboxílico 18,5 minutos e 20,0 min;

Éster etílico do ácido (1 R,2S)-1-amino-2-

vinilciclopropanocarboxílico 18,5 minutos.

Resolução D

5 L de tampão fosfato de sódio 0,3 M (pH 8) foram mantidos a 38°C em um reator encamisado de 20 litros, agitado a 130 rpm. Quatro litros de alcalase 2,4 L (Novozymes North America Inc.) e 1 litro de água Dl foram adicionados ao reator. Quando a temperatura da mistura se aproximou de 38°C, o pH foi ajustado para 7,8 com NaOH 10 N. Uma solução do éster etí- lico do ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico (500 gramas) em 5 litros de DMSO foi adicionada ao reator em um período de 1 hora através de um funila de adição. A temperatura reacional foi a se- guir ajustada para 48°C. Depois de 21 horas, o enantioexcesso do éster al- cançou 99,3%. O aquecimento foi interrompido em 24 horas e a reação foi lentamente esfriada até temperatura ambiente (cerca de 25°C) e agitada de um dia para o outro. O pH da mistura reacional foi ajustado para 8,5 com NaOH 10Nea mistura foi extraída com MTBE (2x4 L). O extrato de MTBE combinado foi lavado com NaHCO3 5% (3 x 400 mL) e água (3 x 400 mL), e concentrado para produzir o éster etílico do ácido N-Boc-(1 R,2S)/-1-amino-2- vinilciclopropanocarboxílico enantiomericamente puro como um cristal ama- relo-claro (259 g; pureza: 96,9% @210 nm, sem conter ácido; 100% de ee).

Resolução E

10 L de tampão fosfato de sódio 0,1 M (pH 8) foram mantidos a 40°C em um reator encamisado de 20 litros, agitado a 360 rpm. 1,5 litros de alcalase 2,4 L (Novozymes North America Inc.) foram adicionados ao reator. Quando a temperatura da mistura se aproximou de 38°C, o pH foi ajustado para 8,0 com NaOH 10 N. Uma solução do éster etílico do ácido N-Boc- (1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico racêmico (200 gra- mas) em 2 litros de DMSO foi adicionada ao reator em um período de 1 hora através de um funila de adição. A temperatura reacional foi a seguir ajustada para 40°C. Depois de 3 horas, o pH foi ajustado para 8,0 com NaOH 10 N. Depois de 21 horas, a reação foi esfriada até 25°C, o pH da mistura reacio- nal foi ajustado para 8,5 com NaOH 10Nea mistura foi extraída com MTBE (2 x 5 L). O extrato de MTBE combinado foi lavado com NaHCO3 5% (3 x 500 mL) e água (3 x 200 mL), e concentrado para produzir 110 g de óleo amarelo. O óleo foi deixado em temperatura ambiente sob vácuo na câmara e produziu éster etílico do ácido N-Boc-(1R,2S)/-1-amino-2- vinilciclopropanocarboxílico enantiomericamente puro como cristais em bas- tão longos pálidos (101 g; pureza; 97,9% @210 nm, sem conter ácido; 100% de ee).

A estrutura do cristal enantiomericamente puro de éster etílico do ácido N-Boc-(1 R,2S)/-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico foi caracteri- zada por análise de cristal individual (raio x NB#: 52795-093, refcode: 25 634592N1). A configuração absoluta não é estabelecida por falta de um cen- tro quiral ou átomos mais pesados. Uma estrutura em cadeia ao longo do eixo a de cristalografia é formada através da ligação de hidrogênio intermo- Iecular entre o grupo amida e o átomo de oxigênio carbonila (N...0 3,159 A).

Estrutura do éster etílico do ácido N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2- vinilciclopropanocarboxílico: YY

Dados do cristal:

Fórmula química: C13H21N104 Sistema do cristal: ortorrômbico Grupo do espaço: Ρ2-|2ι2-ι

a = 5,2902(1) Aa = 90°

b = 13,8946(2) Αβ = 90°

V= 1468,40(4) A3 Z = 4 dx = 1,155 g.cm'3 N0 de reflexões para os parâmetros da estrutura: 6817

Faixa de Θ para os parâmetros da estrutura (°): 2,2-65,2 Coeficiente de absorção (mm-1): 0,700

Experimental:

Cristalização Fonte do cristal: MTBE Descrição do cristal: bastões incolo- res

Tamanho do cristal (mm): 0,12 x 0,26 x 0,30

Coleção de dados Qmax (°): 65,2 (Cu Ka)

N0 de reflexões medidas: 7518 No. de reflexões independentes: 2390 (Rint = 0,0776)

N0 de reflexões observadas (I > 2σ: 2284)

Correção da absorção (Tmin - Tmax): 0,688-1,000

Resolução F

L de tampão borato de sódio 0,2 M (pH 9) foram mantidos a 45°C em um reator encamisado de 20 litros, agitado a 400 rpm. Três litros de água Dl e quatro litros de Savinase 16 L, tipo EX (Novozymes North America Inc.) foram adicionados ao reator. Quando a temperatura da mistura se a- proximou de 45°C, o pH foi ajustado para 8,5 com NaOH 10 N. Uma solução do éster etílico do ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropano- carboxílico racêmico (200 gramas) em 2 litros de DMSO foi adicionada ao reator em um período de 40 minutos através de um funila de adição. A tem- 5 peratura reacional foi a seguir ajustada para 48°C. Depois de 2 horas, o pH foi ajustado para 9,0 com NaOH 10 N. Em 18 horas, o enantioexcesso do éster alcançou 72%, o pH foi ajustado para 9,0 com NaOH 10 N. Em 24 ho- ras, a temperatura foi abaixada para 35°C. Em 42 horas, a temperatura foi elevada para 48°C e o pH foi ajustado para 9,0 com NaOH 10 N. O aqueci- 10 mento foi interrompido a 48 horas e a reação foi lentamente esfriada até temperatura ambiente (cerca de 25°C) e agitada de um dia para o outro. Em 66 horas, o pH da mistura reacional foi de 8,6. A mistura foi extraída com MTBE (2x4 L). O extrato de MTBE combinado foi lavado com NaHCO3 5% (6 x 300 mL) e água (3 x 300 mL), e concentrado para produzir éster etílico 15 do ácido N-Boc-(1 R,2S)/-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico enantiomeri- camente puro como cristal amarelo-claro (101A g; pureza: 95,9% @210 nm, sem conter ácido; 98,6% de ee).

10. Preparação de cloridrato do éster etílico do ácido (1R.2SV1-

amino-2-vinilciclopropanocarboxílico quiral

o

H A

O

O"

~rf 7» 0 ‘ HCKNem HC, H2N^ ,JÍ.

° "% I dio„„o Δ

I

Éster etílico do ácido (1R,2S) N-Boc-1-amino-2-

vinilciclopropanocarboxílico (8,5 g, 33,3 mmols) foi agitado sob uma atmosfe- ra de nitrogênio com 200 mL de HCI 4 N/dioxano (AIdrich) em temperatura ambiente por 3 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida, man- tendo-se a temperatura abaixo de 40°C. Isso produziu 6,57 g (~ 100%) do 25 éster etílico do cloridrato do ácido (1R,2S) 1-amino-2- vinilciclopropanocarboxílico como um sólido cor de bronze claro. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ 1,31 (t, J=I,0 Hz, 3H), 1,69-1,82 (m, 2H), 2,38 (q, J=8,8 Hz1 1 Η), 4,29 (q, J=7,0 Hz, 2Η), 5,22 (d, J=10,3 Hz, 1H), 5,40 (d, J=17,2 Hz:

1H), 5,69-5,81 (m, 1H), MS m/z 156 (M++1).

11. Preparação do éster etílico do ácido N-Boc-(1 R.2SV1- amino-2-ciclopropilciclopropanocarboxílico

vinilciclopropanocarboxílico (255 mg, 1,0 mmol) em éter dietílico (10 mL) foi tratada com acetato de paládio ()5 mg, 0,022 mmol). A solução laran- ja/vermelha foi colocada sob uma atmosfera de nitrogênio. Um excesso de diazometano em éter dietílico foi adicionado gora a gota durante 1 hora. A 10 solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. O ex- cesso de diazometano foi removido usando uma corrente de nitrogênio e a solução resultante foi concentrada por rotaevaporação para produzir o pro- duto bruto. Cromatografia flash (10% de acetato de etila/hexano) forneceu 210 mg (78%) de éster etílico do ácido (1R,2S)-N-Boc-1-amino-2- 15 ciclopropilciclopropanocarboxílico como um óleo incolor. MS m/z 270 (M+ +

5

Uma solução do ácido N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-

H).

III. Preparação dos intermediários P1’-P1

12. Preparação de P1P1 ’

Esquema 1 BocHN

0 I

iJy Etapa 1

Δ LiOH

v|| MeOH, THF

ο

CDI1 DBU1 THF

H2N

Etapa 2

Isômero individual enzimatica- mente separado

1) TFA, DCM

2) HCl em Et2O

Etapa 3

Etapa 1:

A uma solução de éster etílico do ácido 1(R)-terc-

butoxicarbonilamíno-2(S)-vinilciclopropanocarboxílico (3,28 g, 13,2 mmols) em THF (7 mL) e metanol (7 mL) foi adicionada uma suspensão de LiOH (1,27 g, 53,0 mmols) em água (14 mL). A mistura foi agitada de um dia para

o outro em temperatura ambiente. À mistura foi adicionado NaOH 1,0 M (15 mL), água (20 mL) e acetato de etila (20 mL). A mistura foi agitada, as fases foram separadas e a fase orgânica foi novamente extraída com 20 mL de NaOH 0,5 M. As fases aquosas combinadas foram acidificadas com HCI 1,0 10 N até pH - 4 e extraídas com acetato de etila (3 x 40 mL). Os extratos orgâ- nicos combinados foram lavados com salmoura, secos (MgSO4) e filtrados para fornecer o produto desejado como um sólido branco (2,62 g, 87%).

(2,43 g, 15,0 mmols) em THF (40 mL) foi aquecida em refluxo por 50 minu- tos sob nitrogênio. A solução foi esfriada até temperatura ambiente e transfe- rida por uma cânula para uma solução de ciclopropilsulfonamida (1,82 g,

15,0 mmols) em THF (10 mL). À solução resultante foi adicionado DBU (2,40

RMN 1H: (DMSO-d6) 51,22-1,26 (m, 1H), 1,37 (s, 9H), 1,50-1,52 (m, 1H), 2,05 (q, J = 9 Hz, 1H), 5,04 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,22 (d, J= 17 Hz, 1H), 5,64-

5,71 (m, 1H), 7,18, 7,53 (s, NH (rotâmeros), 12,4 (brs, 1H)); LC-MS MS m/z 228 (M++ H).

Etapa 2:

Uma solução do produto da etapa 1 (2,62 g, 11,5 mmols) e CDI mL, 16,1 mmols) e a agitação continuou por 20 horas. A mistura foi inter- rompida com HCI 1,0 M até pH = 1, e THF foi evaporado in vacuo. A sus- pensão foi extraída com acetato de etila (2 x 50 mL) e os extratos orgânicos foram combinados e secos (Na2SO4). A filtração, concentração e purificação 5 por recristalização a partir de hexanos-acetato de etila (1:1) forneceu o pro- duto desejado (2,4 g) como um sólido branco. O líquido-mãe foi purificado por uma coluna Biotage 40S (acetona 9% eluída em diclorometano) para produzir um segundo lote do produto desejado (1,1 g). Ambos os lotes foram combinados (rendimento total de 92%). RMN 1H: (DMSO-d6) δ 0,96-1,10 (m, 10 4H), 1,22 (dd, J = 5,5, 9,5 Hz, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,70 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 2,19-2,24 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 5,08 (d, J= 10 Hz, 1H), 5,23 (d, J= 17 Hz, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,85, 7,22 (s, NH (rotâmeros)); LC-MS, MS m/z 331 (M+ + H).

Etapa 3:

Uma solução do produto da etapa 2 (3,5 g, 10,6 mmols) em di-

clorometano (35 mL) e TFA (32 mL) foi agitada em temperatura ambiente por 1,5 horas. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi suspen- so em HCI 1,0 M em éter dietílico (20 mL) e concentrado in vacuo. Esse pro- cedimento foi repetido uma vez. A mistura resultante foi triturada com penta- 20 no e filtrada para produzir o composto título como um sólido esbranquiçado higroscópico (2,60 g, 92%). RMN 1H (DMSO-d6) δ 1,01-1,15 (m, 4H), 1,69- 1,73 (m, 1H), 1,99-2,02 (m, 1H), 2,38 (q, J = 9 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H),

5,20 (d, J= 11 Hz, 1H), 5,33 (d, J= 17 Hz, 1H), 5,52-5,59 (m, 1H), 9,17 (brs, 3H); LC-MS, MS m/z 231 (M+ + H).

13. Preparação do derivado P1-P1’ sulfamida

A uma solução de ácido (1 R,2S)-1-terc-butoxicarbonilamino-2- vinilciclopropanocarboxílico (217 mg, 1,194 mmol) em THF (5 mL) foi adicio- nado CDI (290 mg, 1,791 mmol) e a mistura reacional foi aquecida até o re- fluxo por 45 minutos. Em outro frasco de fundo redondo, LiHMDS (solução 1,0 M em hexanos, 2,4 mL, 2,4 mmols) foi adicionada a uma solução de N- etilmetilsulfamida (330 mg, 2,388 mmols) em THF (5 mL) e a mistura reacio- nal foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. As duas misturas rea- cionais foram combinadas e agitadas em temperatura ambiente por 2 horas.

Água foi adicionada para suprimir a reação e a solução reacional foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi separada e seca em MgSO4. A filtração e a concentração produziram um produto bruto, o qual foi purificado por HPLC preparativo para fornecer a N-acilsulfamida N-Boc protegida dese- jada. O grupo Boc protetor foi,a seguir, removido conforme o composto foi 10 dissolvido em solução de HCI 4 N em dioxano (2 mL) e agitado em tempera- tura ambiente por 4 horas. A concentração forneceu um óleo amarronzado como o sal de HCI (112 mg, 33% de rendimento). RMN 1H (400Mz, CD3OD)

J=17,12 Hz, 3H), 5,68 (m, 1H), LC-MS (tempo de retenção: 0,883 minutos), MS m/z 270 (M + Na+).

Isômeros do Composto 1:

N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-L-valila-(4R)-N-((1 R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila) carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxQ-L-prolina- mida e N-(4.6-dimetila-2-piridinila)-D-valila-(4R)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropil- sulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L- prolinamida

§1,16 (t, J=7,21 Hz, 3H), 1,68 (dd, J=10,03, 7,83 Hz, 1H), 2,15 (m, 1H), 2,37 (m, 1H), 2,89 (s, 3H), 3,30 (m, 2H), 5,31 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,42 (d,

Exemplo 1: Preparação dos compostos 1A e 1B

o

o N Compostos 1A e 1B

Esquema 1

O Cl

Etapa 1:

A uma solução de ácido 3-metoxicinâmico (11,0 g, 62 mmols) e

5 trietilamina (12,5 g, 124 mmols) em acetona (80 mL) foi adicionado clorofor- miato de etila (aproximadamente 1,5 equivalentes) gota a gota a O0C. Depois de agitar nesta temperatura por 1 hora, NaN3 aquoso (6,40 g, 100 mmols em 35 mL de H2O) foi adicionado gota a gota e a mistura reacional foi agitada por 16 horas em temperatura ambiente. Água (100 mL) foi adicionada à mis- 10 tura e os voláteis foram removidos in vacuo. A pasta fluida resultante foi ex- traída com tolueno (3 x 50 mL) e as camadas orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4 e filtradas. O filtrado foi adicionado gota a gota a uma so- lução aquecida de difenilmetano (50 mL) e tributilamina (30 mL) a 190°C. O tolueno foi removido por destilação durante a adição. Depois da adição com- 15 pleta, a temperatura reacional foi elevada para 210°C por 2 horas, no esfri- amento, o produto precipitado foi coletado por filtração, lavado com hexano (2 x 50 mL) e seco para fornecer o produto desejado como um sólido branco (5,53 g, 51%) (Nicolas Briet et ai, Tetrahedron, 2002, 5761-5766). LC-MS, MS m/z 176 (M+ + H).

Etapa 2:

6-metóxi-2/-/-isoquinolin-1-ona (5,0 g, 28,4 mmols) em POCI3 (10 mL) foi aquecido até refluxo branco por 3 horas e a mistura foi, a seguir, concentrada in vacuo (Nicolas Briet et al, Tetrahedron, 2002, 5761-5766). O resíduo foi vertido em água gelada (20 mL) e levado até pH = 10 pela adição 25 de NaOH 10,0 M. A mistura resultante foi extraída com CHCI3. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em MgSO4, filtrada e concentrada.

O resíduo foi purificado por cromatografia flash (1:1 de hexano-acetato de etila) para fornecer 4,41 g (80%) do produto desejado como um sólido bran- co. RMN 1H δ ppm 3,98 (s, 3H), 7,34-7,38 (m, 2H), 7,69 (d, J = 5,5Hz, 1H), 8,10 (d, J = 6,0 Hz, 1 Η), 8,23 (d, J = 9,5 Hz1 1H); LC-MS, MS m/z 194 (M+ + H).

Esquema 2

Compostos IAelB Mistura dos dois isômeros

Etapa 3:

A uma solução de N-Boc-4-(R)-hidróxi-L-prolina (0,892 g, 3,89 5 mmols) em DMSO (40 mL) em temperatura ambiente foi adicionado terc- butóxido de potássio sólido (1,34 g, 12,0 mmols) em uma porção. A suspen- são foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos antes de ser esfria- da até 10°C. 1-cloro-6-metoxiisoquinolina (o produto da etapa 2, Exemplo 1) (785 mg, 4,05 mmols) foi adicionado como um sólido em uma porção e a 10 mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 12 horas. A mis- tura foi suprimida com ácido cítrico 5% gelado (aq) e foi extraída com aceta- to de etila (100 mL). A fase aquosa foi extraída com acetato de etila mais uma vez. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com ácido cítri- co 5% (aq) e salmoura respectivamente, secas em MgSO4 e filtradas. O fil- trado foi concentrado in vacuo até a secura para fornecer o produto desejado como uma espuma branco-suja (1,49 g, 99% de rendimento). Esse material 5 bruto foi usado na próxima etapa reacional sem purificação adicional. RMN 1H (CD3OD) δ 1,42, 1,44 (rotâmeros, 9H), 2,38-2,43 (m, 1H), 2,66-2,72 (m, 1H), 3,80-3,87 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 4,44-4,52 (m, 1H), 5,73 (bs, 1H), 7,16- 7,18 (m, 2H), 7,24-7,25 (m, 1H), 7,87-7,88 (m, 1H), 8,07 (d, J = 8,5 Hz, 1H); LC-MS, MS m/z 389 (M+ + H).

Etapa 4:

A uma mistura do produto da etapa 3, o Exemplo 1 (1,49 g, 3,84 mmols), HATU (2,19 g, 5,76 mmols) e sal de cloridrato de (1-(R)-amino-2- (S)-vinilciclopropanocarbonila)-amida do ácido ciclopropanossulfônico (1,12 g, 4,22 mmols) em CH2CI2 (50 mL) foi adicionado DIPEA (1,29 g, 11,5 15 mmols) a 0°C. Depois de agitar em temperatura ambiente por 12 horas, a solução resultante foi diluída com CH2CI2 (50 mL) e foi lavada com ácido cí- trico 5% gelado (aq). A camada orgânica foi lavada com ácido cítrico 5% (aq) e salmoura respectivamente, seca em MgSO4 e filtrada. O filtrado foi con- centrado in vacuo até a secura. O resíduo foi recristalizado a partir de meta- 20 nol para fornecer 1,60 g (70%) do produto desejado como um sólido branco. RMN 1H (CD3OD) δ 1,05-1,08 (m, 2H), 1,16-1,20 (m, 1H), 1,24-1,27 (m, 1H),

1,42-1,45 (m, 10H), 1,88 (dd, J= 8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,24-2,30 (m, 2H), 2,53- 2,57 (m, 1H), 2,94-2,98 (m, 1H), 3,80 (d, J= 12,5 Hz, 1H), 3,86-3,89 (m, 1H),

3,93 (s, 3H), 4,40-4,42 (m, 1H), 5,13 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 5,72-5,81 (m, 2H), 7,17-7,20 (m, 2H), 7,26 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 9,0 Hz, 1H); LC-MS, MS m/z 601 (M+ + H). Etapa 5:

A uma solução gelada do produto da etapa 4, Exemplo 1 (1,50 g, 2,50 mmols) em CH2CI2 (10 mL) foi adicionado TFA (10 mL). A solução resultante foi deixada aquecer até temperatura ambiente e foi agitada por 2 horas. O solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi triturado com HCI 1 M em éter dietílico, coletado por filtração e o sólido foi lavado com éter dietílico para * fornecer o produto desejado como um sólido branco higroscópico (1,43 g, 99,8%). RMN 1H (CD3OD) δ ppm 1,03-1,21 (m, 4H), 1,26-1,31 (m, 1H), 1,37-

I,40 (m, 1H), 1,95-1,97 (m, 1H), 2,32-2,37 (m, 1H), 2,42-2,48 (m, 1H), 2,95- 2,99 (m, 1H), 3,88 (d, J= 12,5 Hz, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,40-4,42 (m, 1H), 5,16

5 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 5,62-5,69 (m, 1H), 5,97 (bs, 1H), 7,30-7,34 (m, 2H), 7,47 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 9,14 (bs, 1H); LC-MS, MS m/z 501 (M+ + H).

Etapa 6:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,350 g, 10 0,610 mmol), HATU (0,302 g, 0,793 mmol), DIEA (0,277 g, 2,14 mmols) e dicloroetano (6 mL) foi adicionado ácido (+/-)-2-(4,6-dimetilpiridin-2-ilamino)-

3-metilbutanoico (0,135 g, 0,610 mmol, comprado de Specs, # catálogo AP- 836/41220382). A reação foi agitada em temperatura ambiente por 14 horas. HATU adicional (0,302 g, 0,793 mmol), DIEA (0,079 g, 0,61 mmol) e ácido 15 (+/-)-2-(4,6-dimetilpiridin-2-ilamino)-3-metilbutanoico (0,135 g, 0,610 mmol) foram adicionados e a mistura resultante foi agitada por mais 6 horas em uma tentativa de "empurrar" a reação até o completamento. A mistura foi concentrada in vacuo, dissolvida em acetato de etila (75 mL) e lavada com HCI aquoso 1,0 M (3 x 10 mL). As lavagens de HCI combinadas foram extra- 20 idas com acetato de etila (50 mL). As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com NaHCO3 aquoso 10% (2x10 mL) e com salmoura, e foram a seguir secas em MgSO4, filtradas e concentradas in vacuo até um resíduo marrom escuro. A purificação por HPLC preparativo de fase reversa produ- ziu dois produtos com m/z idêntico por LCMS. O primeiro isômero a eluir por 25 HPLC preparativo de fase reversa foi rotulado como Composto 1A (47,7 mg,

II,1%) e o segundo isômero a eluir foi rotulado como Composto 1B (16,9 mg, 3,9%).

Composto 1A: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (d, J = 6,71 Hz, 3H), 1,10 (d, J = 6,71 Hz, 3H), 1,12-1,17 (m, 2H), 1,26-1,30 (m, 2H), 1,47 30 (dd, J = 9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,85 (dd, J = 8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,17 (s, 3H),

2,31 (q, J = 8,85 Hz, 2H), 2,36-2,40 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,65 (dd, J = 13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,97-3,03 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12,05, 3,51 Hz, 1 Η), 4,30 (d, J = 11,60 Hzl 1 Η), 4,49 (d,J = 7,02 Hz1 1 Η), 4,68 (dd, J = 10,22, 7,17 Hz, 1 Η), 5,17 (dd, J = 10,38, 1,53 Hz1 1 Η), 5,35 (dd, J = 17,24, 1,07 Hz, 1 Η). 5,77-5,86 (m, 1 Η), 5,99 (s, 1 Η), 6,59 (s, 1 Η), 6,65 (s,

1 Η), 7,11 (dd, J = 9,16, 2,44 Hz, 1 Η), 7,23 (d, J = 2,44 Hz, 1 Η), 7,30 (d, J = 5 5,80 Hz1 1 Η), 7,94 (d, J = 5,80 Hz, 1 Η), 7,98 (d, J = 9,16 Hz, 1H); LC-MS, MS m/z 705 (M+ + H),

Composto 1B: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,02 (d, J=6,7 Hz, 3 H), 1,03 - 1,06 (m, J=2,1 Hz, 2 H), 1,07 (d, J=6,7 Hz, 3 H), 1,14 - 1,19 (m, 1 H), 1,20 - 1,25 (m, 1 H), 1,32 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1 H), 1,81 (dd, J=8,1, 5,3 10 Hz, 1 H), 2,14 (q, J=8,9 Hz, 1 H), 2,25 - 2,39 (m, 2 H), 2,55 (dd, J=13,9, 6,9 Hz1 1 H), 2,88 - 2,94 (m, 1 H), 3,82 (s, 3 H), 4,12 (dd, J=11,7, 4,1 Hz, 1 H), 4,43 (dd, J=10,4, 7,0 Hz, 1 H), 4,55 (d, J=11,9 Hz, 1 H), 4,62 (d, J=9,2 Hz, 1 H), 5,03 (d, J=10,4 Hz1 1 H), 5,20 (d, J=17,1 Hz, 1 H), 5,65 - 5,74 (m, 1 H), 5,79 (t, J=3,5 Hz, 1 H), 6,99 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1 H), 7,04 (d, J=2,1 Hz1 1 H), 15 7,11 (d, J=6,1 Hz, 1 H), 7,68 (t, J=7,6 Hz, 1 H), 7,73 (t, J=I,2, Hz1 1 H), 7,77 (d, J=6,1 Hz1 1 H), 7,79 (d, J=7,6 Hz, 1 H), 8,01 (d, J=7,6 Hz, 1 H), 8,07 (d, J=9,2 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 705 (M++ H).

Exemplo 2: Preparação do composto 2:

N-(5-(trifluormetila)-2-piridinila)valila-(4R)-N-(( 1 R.2SV1 -((ciclopropil- sulfonila) carbamoíla)-2-vinilciclopropilaV4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L- prolinamida

M 0 °

V--'

Δ H o "''/,

V

Composto 2 A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,350 g, 0,610 mmol), HATU (0,464 g, 1,22 mmol), DIEA (0,316 g, 2,44 mmols) e di- clorometano (6 mL) foi adicionado N-[5-(trifluormetila)-piridin-2-ila]valina (0,320 g, 1,22 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente por 72 5 horas. A mistura foi concentrada in vacuo, dissolvida em acetato de etila (50 mL) e lavada com HCI aquoso 1,0 M (3 x 5 mL). As lavagens de HCI foram combinadas e extraídas com acetato de etila (25 mL). As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com NaHCO3 aquoso (2x5 mL) e com sal- moura, e foram a seguir secas em MgSO4, filtradas e concentradas in vacuo 10 até um resíduo. O material bruto foi passado através de um plugue de sílica- gel usando 95:5 de diclorometano:metanol. Purificação adicional por HPLC preparativo de fase reversa produziu o composto 2 (0,174 g, 38,3 %) como um sólido branco. O composto 2 foi o principal dos dois isômeros que foram formados na reação. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,68 (d, J=5,5 Hz, 1 15 H), 0,77 - 0,85 (m, 2 H), 0,93 (d, J=6,7 Hz1 3 H), 0,99 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,14 (t, J=7,2 Hz, 3 H), 1,31 (dd, J=9,3, 5,0 Hz, 1 H), 1,74 - 1,81 (m, 1 H), 2,02 - 2,12 (m, 1 H), 2,28 - 2,41 (m, 1 H), 2,48 - 2,61 (m, 1 H), 3,83 (s, 2 H), 3,84 (s,

1 H), 3,99 - 4,03 (m, 1 H), 4,29 - 4,40 (m, 1 H), 4,50 (q, J=8,4 Hz, 1 H), 4,98 (d, J=9,2 Hz, 1 H), 5,17 (d, J=17,4 Hz, 1 H), 5,60 - 5,72 (m, 1 H), 5,76 (s, 1 H), 6,35 (d, J=8,9 Hz, 1 H), 6,95 (dd, J= 9,2, 2,4 Hz, 1 H), 7,04 - 7,12 (m, 2 H), 7,15 - 7,23 (m, 2 H), 7,79 - 7,84 (m, 2 H); LC-MS, MS m/z 745 (M+ + H).

Exemplo 3: Preparação do composto 3:

N-(4.6-dimetóxi-1,3.5-triazin-2-ila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1 R.2SV1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-

isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida Composto 3 Esquema 1

Produto da etapa 5, ^ ^ exemplo 1

Composto 3

Etapa 1:

Uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (70,2 g, 122 mmols), Boc-terc-leucina (31,2 g, 135 mmols), NMM (63,1 g, 624 mmols) e HATU (60,5 g, 159 mmols) em diclorometano (750 mL) foi agitada em tem- peratura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in va- cuo e ao resíduo foi adicionado acetato de etila (3 L) e o pH = tampão 4 (1 L). A mistura foi agitada e as fases foram separadas. A fase orgânica foi no- vãmente lavada com pH = tampão 4 (2 x 1 L) e com salmoura (300 mL). A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada até uma espuma laranja. O sólido bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (etapa de eluição com diclorometano, seguido por 10:1 diclorometano:acetona, a se- 5 guircom 7:1 diclorometano:acetona). Cristalizações iterativas a partir do iso- propanol do material concentrado produziram um produto como flocos inco- lores grandes (58,3 g, 67% de rendimento). LC-MS, MS m/z 714 (M+ + H).

Etapa 2:

A uma solução agitada do produto da etapa 1, Exemplo 3 (15,0 g, 21,0 mmols) em diclorometano seco (200 mL) foi adicionado TFA (100 mL). A mistura foi agitada por 80 minutos e foi, a seguir, concentrada in va- cuo até um resíduo. 1 (2-diclorometano (200 mL) foi adicionado e a mistura foi novamente concentrada in vacuo para produzir uma espuma branca. O material foi dissolvido em diclorometano seco (50 mL) e éter dietílico (50 mL) foi adicionado. A solução rapidamente agitada foi a seguir lentamente trata- da com uma mistura de HCI 2,0 M em éter (150 mL) e éter dietílico seco (250 mL). A suspensão resultante foi agitada sob nitrogênio por 30 minutos, e foi a seguir filtrada. O sólido filtrante foi rinsado com éter dietílico e deixado secar ao ar. O sólido foi seco em um forno a vácuo a 40°C de um dia para o outro para produzir um produto de pó de fluxo livre como o sal bis-HCI (13,9 g, 96,3% de rendimento). LC-MS, MS m/z 614 (M+ + H).

Etapa 3:

A uma solução do produto da etapa 2, Exemplo 3 (0,253 g, 0,369 mmol) e DIEA (0,215 g, 1,66 mmol) em acetonitrila (4 mL) foi adicio- 25 nado 2-cloro-4,6-dimetóxi-1,3,5-triazeno (0,100 g, 0,553 mmol). A mistura foi aquecida até 135°C em um frasco de pressão Chemglass por 2 horas. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo foi dissolvido em acetato de etila (50 mL) e lavado com HCI 1,0 M aquoso (2x5 mL), seguido por carbo- nato de sódio 10% aquoso e salmoura. O orgânico foi seco em MgSO4, fil- 30 trado e concentrado. A purificação por cromatografia flash em sílica-gel (97:3 diclorometano:metanol) produziu o composto 3 puro (0,252 g, 91% de ren- dimento) como um sólido branco. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,07 (s, 9 Η), 1,09 - 1,14 (m. 2 Η), 1,25 - 1,33 (m, 2 Η), 1,48 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1 Η),

1.93 (dd, J=8,1, 5,3 Hz, 1 Η), 2,24 - 2,39 (m, 2 Η), 2,94 - 3,03 (m, 1 Η), 3,55 (s, 3 Η), 3,83 (s, 3 Η), 3,95 (s, 3 Η), 4,04 (dd, J=4,9, 3,1 Hz, 1 Η), 4,08 (s, 2 Η), 4,45 (d, J=11,9 Hz, 1 Η), 4,67 (dd, J=10,4, 7,3 Hz, 1 Η), 4,91 (s, 1 Η),

5,16 (d, J=10,4 Hz, 1 H), 5,34 (d, J=17,1 Hz, 1 H), 5,75 - 5,84 (m, 1 H), 5,90 -

5.94 (m, 1 H), 7,03 (dd, J=Q,2, 2,4 Hz, 1 H), 7,16 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 7,26 (d, J= 5,8 Hz, 1 H), 7,80 (d, J=8,9 Hz, 1 H), 7,89 (d, J= 5,8 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 753 (M++ H).

Exemplo 4: Preparação do composto 4:

N-(4.6-dimetóxi-1.3,5-triazin-2-ila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1-

((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

O

O O

Il

.S.

Composto 4

Esquema 1 HCI O

ηοι o I

h2nV^0Y

MeCN, DIEA, calor

Etapa I

TFA, DCM HCl 2,0 M em Ei

Etapa 2

O

O

2HC

Produto do passo 5, exemplo 1

Composto 4

Etapa 1:

A uma mistura do cloridrato do éster valina terc-butílico (0,367 g,

1,75 mmol) e DIEA (0,567 g, 4,38 mmols) em acetonitrila (5 mL) foi adicio- nado 2-cloro-4,6-dimetóxi-1,3,5-triazeno (0,476 g, 2,63 mmols). A mistura foi 5 aquecida até 130°C em um reator de micro-ondas por 1 hora. O solvente foi removido e o resíduo marrom viscoso foi dissolvido em acetato de etila (75 mL) e a solução foi lavada com HCI 1,0 M aquoso (2x10 mL). Os extratos aquosos foram combinados e extraídos reversamente com acetato de etila (50 mL), e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com carbonato 10 de sódio 10% aquoso (15 mL) e a seguir com salmoura. A fase orgânica foi seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada até um óleo marrom, o qual foi purificado por cromatografia em sílica-gel flash (97:3 diclorometa- no:metanol) para produzir o produto como um óleo viscoso marrom claro (0,521 g, 95% de rendimento).

Etapa 2:

solvido em diclorometano (5 mL) e tratado com TFA (5 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas e foi a seguir concentrada in vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em 1,2-diclorometano (20 mL) e no- vãmente concentrado in vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em dicloro- metano (3 mL) e foi adicionado gota a gota a uma solução rapidamente agi-

O produto da etapa 1, Exemplo 4 (0,500 g, 1,60 mmol) foi dis- tada e HC 2,0 M em éter (10 mL). Não ocorreu precipitação. A solução foi concentrada in vacuo para produzir um solido levemente amarelo o qual foi seco in vacuo. Desta forma foi obtido um sólido amarelo (0,45 g, 96% de rendimento) o qual foi subsequentemente usado sem purificação adicional.

Etapa 3:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,421 g, 0,734 mmol) e DIEA (0,428 g, 3,30 mmols) em diclorometano (7 mL) foi adi- cionado o produto da etapa 2, Exemplo 4 (0,215 g, 0,734 mmol) e HATU (0,335 g, 0,881 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 80 minutos. Solvente foi removido e o resíduo marrom viscoso foi dissolvido em acetato de etila (50 mL) a solução foi lavada com HCI aquoso 1,0 M (2 x mL). Os extratos aquosos foram combinados e extraídos de modo rever- so com acetato de etila (50 mL), e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com carbonato de sódio aquoso 10% (15 mL) e a seguir com sal- moura. A fase orgânica foi seca em MgSO4 anidro, filtrada concentrada até um sólido marrom, o qual foi purificado por cromatografia em sílica-gel flash (97:3 de diclorometano:metanol) para produzir o Composto 4 como um sóli- do branco (0,243 g, 45% de rendimento), RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,71 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 0,73 - 0,78 (m, 1 H), 0,79 - 0,88 (m, 1 H), 0,90 - 0,98 (m, 1 H), 1,01 - 1,07 (m, 1 H), 1,08 (d, J=6,7 Hz, 3 H), 1,23 (dd, J=9,0, 5,3 Hz, 1 H), 1,90 (q, J=8,5 Hz, 1 H), 1,99 - 2,06 (m, 1 H), 2,09 - 2,20 (m, 1 H), 2,22 - 2,33 (m, 1 H), 2,33 - 2,41 (m, 1 H), 2,47 (dd, J=13,4, 6,1 Hz1 1 H), 3,25 (s, 3 H), 3,45 (s, 2 H), 3,75 (s, 3 H), 4,11 (dd, J=11,7, 3,5 Hz, 1 H), 4,41 (d, J=12,2 Hz, 1 H), 4,52 (dd, J=11,9, 6,4 Hz, 1 H), 4,63 - 4,70 (m, 1 H), 4,85 (d, J=10,7 Hz, 1 H), 4,95 (d, J= 17,4 Hz, 1 H), 5,81 (t, J=3,2 Hz, 1 H), 5,85 - 5,97 (m, 1 H), 6,48 (d, J=9,2 Hz, 1 H), 7,04 (s, 1 H), 7,18 (d, J= 5,8 Hz, 1 H), 7,35 (d, J=8,9 Hz, 1 H), 7,80 (d, J=6,1 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 739 (M++ H). Exemplo 5: Preparação do composto 5: N-(4.6-dimetóxi-2-pirimidinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-

isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida 10

ν»·ί

Δ Η ο

Composto 5

Esquema 1

Etapa I

1 ° I

HCI

H2Nv

MeCN, DIEA, calor| MeO^^x^^OMe

Etapa 2

TFA, DCM HCl 2,0 M em Et2O

OH

N

T

Cl

N

Vn hc'

Produto da Etapa 5, Exemplo 1

Composto 5

Mistura 2:1 de isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de cloridrato do éster valina terc-butílico (1,55 g, 7,39 mmols) e DIEA (2,01 g, 15,5 mmols) em acetonitrila (37 mL) foi adicio- nado 2-cloro-4,6-dimetoxipirimidina (1,55 g, 8,87 mmols). A mistura foi aque- cida até 130°C em um frasco de pressão Chemglass por 48 horas. O solven- te foi removido e o resíduo marrom viscoso foi dissolvido em acetato de etila (100 mL) e a solução foi lavada com HCI 1,0 M aquoso (2 x 25 mL). Os ex- tratos aquosos foram combinados e extraídos reversamente com acetato de etila (50 mL), e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com carbo- nato de sódio 10% aquoso e a seguir com salmoura. A fase orgânica foi se- ca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada até um óleo marro, o qual foi purificado por cromatografia em sílica-gel flash (gradiente da etapa 9:1 de hexanos:acetato de etila, então 1:1 de hexanos.acetato de etila) para produ- zir o produto como um óleo viscoso marrom (1,02 g, 44% de rendimento).

Etapa 2:

O produto da etapa 1, Exemplo 5 (0,944 g, 3,03 mmols) foi dis- solvido em diclorometano (10 mL) e tratado com TFA (10 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 4 horas e foi a seguir concentrada in vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em 1,2-diclorometano (50 mL) e no- 10 vãmente concentrado in vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em dicloro- metano (3 mL) e foi adicionado gota a gota a uma solução rapidamente agi- tada de HCI 1,0 M em éter e hexanos (100 mL). Não ocorreu precipitação. A solução foi concentrada in vacuo para produzir um solido em espuma mar- rom o qual foi subsequentemente usado sem purificação adicional.

Etapa 3:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,425 g, 0,741 mmol) e DIEA (0,432 g, 3,34 mmols) em diclorometano (7 mL) foi adi- cionado o produto da etapa 2, Exemplo 5 (0,259 g, 0,889 mmol) e HATU (0,366 g, 0,963 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 20 16 horas. O solvente foi removido e o resíduo marrom viscoso foi dissolvido em acetato de etila (50 mL) e a solução foi lavada com HCI aquoso 1,0 M (2 x 10 mL). Os extratos aquosos foram combinados e extraídos com acetato de etila (30 mL), e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com car- bonato de sódio aquoso 10% (15 mL) e a seguir com salmoura. A fase orgâ- 25 nica foi seca em MgSO4 anidro, filtrada concentrada até um óleo marrom viscoso, o qual foi passado por um plugue de sílica-gel (95:5 de diclorometa- no:metanol). O produto foi ainda purificado por HPLC preparativo em fase reversa para produzir o Composto 5 como um sólido branco (0,243 g, 45% de rendimento) como uma mistura aparente dos dois isômeros em uma pro- 30 porção 2 para 1. Os isômeros não foram separados. LC-MS, MS m/z (M+ + H).

Isômeros do Composto 6: N-(4.6-dimetila-2-pirimidinila)-D-valila-(4R)-N-(( 1 R.2SV1 -((ciclopropilsulfo- nila) carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-pro- Iinamida N-(4.6-dimetila-2-pirimidinila)-L-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopro- pilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)- L-prolinamida

Exemplo 6: Preparação dos Compostos 6A e 6B ""O

Compostos 6A e 6B

Esquema 1

Etapa I

1 u I

HCl O H2N.

MeCN, DIEA, calor

ΝγΝ

Cl

O

Il

N"m H O

Vn

NH O

O

VA1

%

Produto da Etapa 5, Exemplo 1

Etapa 2

TFA, DCM HCl 2,0 M em Et2O

\__N HCI

( V-NH OH

Compostos 6A e 6B Mistura de isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de cloridrato de éster valina terc-butílico (3,09 g,

14,7 mmols) e DIEA (4,01 g, 31,0 mmols) em acetonitrila (50 mL) foi adicio- nado 2-cloro-4,6-dimetilpiridina (2,31 g, 16,2 mmols). A mistura foi aquecida até 135°C em um frasco de pressão Chemglass por 72 horas. O solvente foi removido e o resíduo marrom viscoso foi dissolvido em acetato de etila (150 mL) e a solução foi lavada com HCI 1,0 M aquoso (2 x 50 mL). Os extratos 5 aquosos foram combinados e extraídos reversamente com acetato de etila (2 x 50 mL), e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com carbona- to de sódio 10% aquoso e a seguir com salmoura. A fase orgânica foi seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada até um óleo marrom, o qual foi puri- ficado por cromatografia em sílica-gel flash (4:1 de hexanos:acetato de etila) 10 para produzir o produto o qual foi usado diretamente na próxima etapa.

Etapa 2:

O produto da etapa 1, Exemplo 6 (1,80 g, 6,44 mmols) foi dis- solvido em diclorometano (25 mL) e tratado com TFA (25 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas e foi a seguir concentrada in 15 vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em 1,2-dicloroetano (50 mL) e no- vamente concentrado in vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em acetato de etila (50 mL) e foi extraído com HCI 1 N (2 x 50 ). Os extratos ácidos combinados foram concentrados in vacuo para produzir um sólido amarelo (1,23 g). LC-MS, MS m/z 224 (M+ + H).

Etapa 3:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,438 g, 0,764 mmol) e DIEA (0,495 g, 3,82 mmols) em diclorometano (10 mL) foi adicionado o produto da etapa 2, Exemplo 6 (0,218 g, 0,840 mmol) e HATU (0,378 g, 0,993 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 25 15 horas. O solvente foi removido e o resíduo marrom viscoso foi dissolvido em acetato de etila (75 mL) e a solução foi lavada com HCI aquoso 1,0 M (2 x 10 mL). Os extratos aquosos foram combinados e extraídos com acetato de etila (30 mL), e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com car- bonato de sódio aquoso 10% (15 mL) e a seguir com salmoura. A fase orgâ- 30 nica foi seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada até um óleo marrom viscoso, o qual foi passado por cromatografia em sílica-gel flash (gradiente de 97:3 de diclorometano:metanol, a seguir 95:5 de diclorometano:metanol). * Dois compostos distintos com m/z idêntico por LCMS foram separados. O primeiro produto a eluir foi o composto secundário e foi chamado de Com- posto 6A (sólido amarelo-claro, 0,0408 g, 7,6 % de rendimento). O produto principal eluiu em segundo da coluna (sólido amarelo, 0,280 g) e foi adicio- 5 nalmente purificado por HPLC preparativo em fase reversa para produzir o Composto 6B (0,040 g, 7,4% de rendimento) como um sal bis-HCI sólido amarelo.

Composto 6A: RMN 1H: (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,85 (d, J=T,0 Hz, 3 H), 0,96 (d, J=QJ Hz, 3 H), 1,00 (dd, J=12,8, 7,0 Hz, 1 H), 1,05 - 1,14 10 (m, 2 H), 1,23 - 1,29 (m, 1 H), 1,37 (dd, J=9,6, 5,3 Hz, 1 H), 1,87 (dd, J=8,1,

5.3 Hz, 1 H), 1,99 - 2,05 (m, 1 H), 2,25 (q, J=QJ Hz, 1 H), 2,30 (d, J=6,4 Hz,

1 H), 2,36 - 2,47 (m, 5 H), 2,60 - 2,66 (m, 1 H), 2,83 - 2,85 (m, 1 H), 2,87 -

2,93 (m, 1 H), 3,96 (s, 3 H), 4,28 - 4,32 (m, 1 H), 4,37 - 4,42 (m, 1 H), 4,57 - 4,62 (m, 1 H), 4,72 (d, J=8,2 Hz, 1 H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1 H), 5,33

(dd, J=17,1, 1,5 Hz, 1 H), 5,71 - 5,80 (m, 1 H), 5,95 (s, 1 H), 7,19 (dd, J=9,2,

2.4 Hz, 1 H), 7,24 (d, J=2,4 Hz, 1 H), 7,31 (d, J=6,1 Hz, 1 H), 7,94 (d, J=6,1 Hz, 1 H), 8,05 (d, J=9,2 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 706 (M++ H).

Composto 6B: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,17 (d, J=QJ Hz, 1 H), 1,28 (d, J=QJ Hz, 1 H), 1,31 (d, J=QJ Hz, 3 H), 1,39 (d, J=QJ Hz, 20 3 H), 1,43 - 1,56 (m, 2 H), 1,69 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1 H), 2,15 - 2,26 (m, 3 H),

2,50 - 2,56 (m, 1 H), 2,57 - 2,62 (m, 1 H), 2,63 - 2,72 (m, 3 H), 2,89 (dd, J=13,9, 6,6 Hz, 1 H), 3,20 - 3,27 (m, 1 H), 4,22 (s, 3 H), 4,48 (dd, J=12,2, 3,7 Hz, 1 H), 4,79 (d, J=11,9 Hz, 1 H), 4,85 - 4,92 (m, 1 H), 5,02 (d, J=T,9 Hz, 1 H), 5,40 (d, J=11,6 Hz, 1 H), 5,59 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 6,00 - 6,09 (m, 1 H), 25 6,25 (t, J=3,2 Hz, 1 H), 6,94 (s, 1 H), 7,42 (dd, J=9,0, 2,3 Hz, 1 H), 7,54 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 7,64 (d, J=6,1 Hz, 1 H), 8,19 (d, J=6,1 Hz, 1 H), 8,23 (d, J=9,2 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 706 (M+ + H).

Exemplo 7: Preparação do Composto 7: N-2-piridinilvalila-(4R)- N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6- 30 metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida 10

XVrv

Composto 7

Esquema 1

Etapa I

HCl O I

h*n ^A0 J<

Pd(OAc)2, NaOt-Bu TBDMSCl, l,2-DME

I ίσαηίρ frwfino ^CI

α

' V-NH O

«q-i

Etapa 2

T FA1 DCM

/rX-NH OH \=N V-i

TFA —^ °

Etapa 3

HATU1 NMM, DCM

X. KoV

/r^-NH

N=^n

TFA

OH

Produto do Passo 5, Exemplo I

Composto 7 (isômero principal)

Δ. SüV

Etapa 1:

A uma mistura de 2-cloropiridina (0,205 g, 1,80 mmol) e terc- butóxido de sódio (0,590 g, 6,13 mmols) em 1,2-dicloroetano seco (1 mL) foi adicionada uma solução pré-misturada de Pd(OAc)2 (0,0405 g, 0,180 mmol) e (R)-(-)-1-[(S)-(dicicloexilfosfino)ferrocenila]etila-di-ferc-butilfosfino (0,100 g, 0,180 mmol, Strem Chemicals # catálogo 26-0975, CAS # [158923-11 -6]) em 1,2-dimetoxietano seco (1 mL). A mistura foi agitada e foi rapidamente trata- da co TBDMSCl (0,598 g, 3,97 mmols). A mistura foi rapidamente agitada, e cloridrato do éster valina-terc-butílico foi rapidamente adicionado (0,454 g,

2,16 mmols) e novamente agitada. Ocorreu como resultado imediato uma 1 exoterma moderada. Depois de 10 minutos de agitação, a mistura foi adicio- nada a uma solução tampão pH - 7 rapidamente agitada (50 mL). Acetato de etila foi adicionado (50 mL) e agitado e as fases foram separadas. A a- quosa foi saturada pela adição de NaCI e foi novamente extraída com aceta- 5 to de etila (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos foram combinados e lavados com salmoura (20 mL), secos em MgSO4, filtrados e concentrados in vacuo até um resíduo escuro. O produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel flash (8:1 de hexanos:acetato de etila) para produzir um líquido incolor (0,365 g) o qual foi determinado como contendo o produto desejado 10 mais 0,6 equivalentes de subproduto TBDMS. O material foi carregado para o próximo etapa sem purificação adicional. O rendimento aproximado foi de 61% LC-MS, MS m/z 251 (M+ + H).

Etapa 2:

O produto da etapa 1, Exemplo 7 (0,944 g, 3,03 mmols) foi dis- 15 solvido em diclorometano (10 mL) e tratado com TFA (10 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1,5 hora e foi a seguir concentrada in vacuo. O resíduo foi a seguir adicionalmente purificado por cromatografia em sílica-gel flash (gradiente, 10:1 diclorometano:metanol até 5:1 de diclorome- tano:metanol) para produzir um sólido ceroso incolor (0,126 g, 59,0 % de 20 rendimento). LC-MS, MS m/z 195 (M+ + H).

Etapa 3:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,250 g, 0,436 mmol) e NMM (0,176 g, 1,74 mmol) em diclorometano (2 mL) foi adi- cionado o produto da etapa 2, Exemplo 7 (0,085 g, 0,44 mmol) e HATU 25 (0,199 g, 0,523 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 96 horas. O solvente foi removido e o resíduo marrom viscoso foi dissolvido em acetato de etila (50 mL) e a solução foi lavada com HCI aquoso 1,0 M. Os extratos aquosos foram combinados e extraídos com acetato de etila e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com carbonato de sódio 30 aquoso 10% e a seguir com salmoura. A fase orgânica foi seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada até um resíduo, o qual purificado por HPLC preparativo em fase reversa para produzir o Composto 7 (0,243 g, 45% de 10

15

rendimento) como um sólido branco. O Composto 7 foi o principal dos dois isômeros formados na reação com MS m/z idêntico por LCMS. O isômero secundário (mais retido na coluna de HPLC preparativa de fase reversa do que o isômero principal) não foi isolado. RMN 1H (500 MHz1 MeOD) δ ppm 0,99 (d, J=6,71 Hz, 3 H) 1,12 (d, J=6,41 Hz, 3 H) 1,14 - 1,19 (m, 2 H) 1,24 -

1,31 (m, 1 H) 1,31 - 1,37 (m, 1 H) 1,48 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1 H) 1,95 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1 H) 2,32 (q, J=8,85 Hz, 1 H) 2,42 (ddd, J=13,96, 10,15, 4,27 Hz, 1 H) 2,47 - 2,55 (m, 1 H) 2,68 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1 H) 3,02 (ddd, J= 12,59, 8,16, 4,88 Hz, 1 H) 3,37 (s, 1 H) 3,95 (s, 3 H) 4,22 (dd, 1 H) 4,31 (d, J=11,90 Hz, 1 H) 4,34 (d, J=8,54 Hz, 1 H) 4,70 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1 H) 5,17 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,36 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,82 (ddd, J=17,24, 9,61, 9,46 Hz, 1 H) 5,97 (t, J=3,20 Hz, 1 H) 6,93 (t, J=6,71 Hz, 1 H) 7,02 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,14 (dd, J=9,00, 2,29 Hz, 1 H) 7,23 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 7,31 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 7,83 (t, J=7,93 Hz, 1 H) 7,88 (d, J=6,41 Hz, 1 H) 7,93 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 8,03 (d, J=9,16 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 677 (M++ H).

Exemplo 8: Preparação do Composto 8: N-(4-metóxi-2- piridinila)valila-(4R)-N-(( 1 R.2SV1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinil- ciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

Δ HSV

O

Il

.S,

Composto 8

O Composto 8 foi preparado pelo mesmo procedimento que o

descrito para a Preparação do Composto 7, exceto que 2-cloro-4- metoxipiridina (259 mg, 1,80 mmol) foi usada na etapa 1 no lugar de 2- cloropiridina, e HCI 2,0 M em éter foi usado no produto do Passi 1 concen- trado em diclorometano para produzir o sal de cloridrato na etapa 2. A escala das etapas 2 e 3 também foram ajustadas baseando-se nos rendimentos das etapas anteriores. O Composto 8 (0,0290 g, 11,6% de rendimento) foi obtido como um sal de bis-TFA em pó esbranquiçado a partir de HPLC pre- 5 parativo de fase reversa. Esse composto foi um isômero individual. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,00 (d, J=6,71 Hz, 3 H) 1,11 (d, J=6,71 Hz, 3 H)

1,16 (dd, J=7,63, 2,75 Hz, 2 H) 1,22 - 1,42 (m, 4 H) 1,48 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1 H) 1,93 - 1,97 (m, 1 H) 2,32 (q, J=8,85 Hz, 1 H) 2,36 - 2,50 (m, 2 H) 2,67 (dd, J=13,43, 7,02 Hz, 1 H) 2,89 (s, 1 H) 3,01 (ddd, J=12,82, 8,09, 4,73

Hz1 1 H) 3,17 - 3,27 (m, 1 H) 3,84 (s, 3 H) 3,95 (s, 3 H) 3,98 - 4,08 (m, 1 H)

4,20 (dd, 1 H) 4,26 - 4,33 (m, 2 H) 4,70 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1 H) 5,17 (dd, J=10,53, 1,37 Hz, 1 H) 5,36 (dd, J=17,09, 1,22 Hz, 1 H) 5,77 - 5,87 (m, J=17,17, 9,58, 9,58 Hz, 1 H) 5,97 (t, J=3,36 Hz, 1 H) 6,32 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 6,55 (dd, J=I,32, 2,14 Hz, 1 H) 7,14 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1 H) 7,22 (d, 15 J=2,44 Hz, 1 H) 7,30 (d, J=5,80 Hz, 1 H) 7,72 (d, J= 7,32 Hz, 1 H) 7,93 (d, J=5,80 Hz, 1 H) 8,01 (d, J=9,16 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 707 (M++ H).

Exemplo 9: Preparação do Composto 9: N-(4-(trifluormetila)-2- piridinila)valila-(4R)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

Composto 9

O Composto 9 foi preparado pelo mesmo procedimento que o descrito para a Preparação do Composto 7, exceto que 2-cloro-4- trifluormetilpiridina (0,328 g, 1,80 mmol) foi usada na etapa 1 no lugar de 2- cloropiridina, e HCI 2,0 M em éter foi usado no produto da etapa 1 concen- trado em diclorometano para produzir o sal de cloridrato na etapa 2. A escala das etapas 2 e 3 também foram ajustadas baseando-se nos rendimentos das etapas anteriores. O Composto 9 (0,0630 g, 12,6% de rendimento) foi 5 obtido como um sal de bis-TFA sólido azul turquesa intenso a partir de HPLC preparativo de fase reversa. Esse composto foi um isômero individual. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,04 (d, J=6,41 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,41 Hz, 3 H) 1,10 - 1,16 (m, 2 H) 1,18 - 1,38 (m, 3 H) 1,45 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1 H)

1,93 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1 H) 2,18 - 2,24 (m, 1 H) 2,29 (q, J=8,95 Hz, 1 H) 2,33 - 2,42 (m, 1 H) 2,58 (dd, J=12,97, 6,56 Hz, 1 H) 2,89 (s, 1 H) 2,96 - 3,05 (m, 1 H) 3,85 - 3,93 (m, 1 H) 3,96 (s, 3 H) 4,10 (dd, J=11,60, 2,75 Hz, 1 H)

4,49 (d, J=QJl Hz, 1 H) 4,57 (dd, J= 10,68, 6,71 Hz, 1 H) 4,92 (d, J=11,90 Hz, 1 H) 5,16 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,34 (d, J=17,40 Hz, 1 H) 5,75 - 5,86 (m, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 6,20 (d, J=4,58 Hz, 1 H) 6,69 (s, 1 H) 7,05 (dd, J=9,00, 2,29 Hz, 2 H) 7,25 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 7,86 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,96 (d, J=5,80 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 745 (M+ + H).

Exemplo 10: Preparação do Composto 10: N-(4-metila-2- piridinila)valila-(4R)-N-(( 1 R.2SV1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinil- ciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxO-L-prolinamida

o

Composto 10

O Composto 10 foi preparado pelo mesmo procedimento que o descrito para a Preparação do Composto 7, exceto que 2-bromo-4- metilpiridina (0,310 g, 1,80 mmol) foi usada na etapa 1 no lugar de 2- cloropiridina, e HCI 2,0 M em éter foi adicionado no produto da etapa 1 con- centrado em diclorometano para produzir o sal de cloridrato na etapa 2. A escala das etapas 2 e 3 também foram ajustadas baseando-se nos rendi- mentos das etapas anteriores. O Composto 10 (0,0110 g, 8,9% de rendimen- 5 to) foi obtido como um sal de bis-TFA em pó esbranquiçado a partir de HPLC preparativo de fase reversa. Esse composto foi um isômero individual. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,98 (d, J=6,41 Hz, 3 H) 1,11 (d, J=6,71 Hz, 3 H) 1,14 - 1,19 (m, 2 H) 1,23 - 1,38 (m, 4 H) 1,48 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1 H)

1.95 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1 H) 2,30 (s, 3 H) 2,31 - 2,36 (m, 1 H) 2,37 - 2,52 (m, 2 H) 2,67 (dd, J=14,04, 7,02 Hz, 1 H) 2,89 (s, 1 H) 2,98 - 3,05 (m, 1 H)

3.95 (s, 3 H) 3,96 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 4,21 (dd, 1 H) 4,26 - 4,33 (m, 2 H) 4,69 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1 H) 5,18 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,36 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,77 - 5,87 (m, J=17,17, 9,58, 9,58 Hz, 1 H) 5,97 (s, 1 H) 6,78 (d, J=6,41 Hz1 1 H) 6,81 (s, 1 H) 7,13 (dd, J=9,00, 2,29 Hz, 1 H) 7,22 (d, J=2,14 Hz, 1

H) 7,30 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 7,72 (d, J=6,41 Hz, 1 H) 7,93 (d, J=6,10 Hz, 1 H)

8,01 (d, J=9,16 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 691 (M++ H).

Exemplo 11: Preparação do Composto 11: N-(4-ciano-2- piridinila)valila-(4R)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

V

N^nV7

HoV

Composto 11

O Composto 11 foi preparado pelo mesmo procedimento que o descrito para a Preparação do Composto 7, exceto que 2-cloro-4- cianopiridina (0,328 g, 1,80 mmol) foi usada na etapa 1 no lugar de 2- cloropiridina, e HCI 2,0 M em éter foi adicionado no produto da etapa 1 con- centrado em diclorometano para produzir o sal de cloridrato na etapa 2. A escala das etapas 2 e 3 também foram ajustadas baseando-se nos rendi- mentos das etapas anteriores. O Composto 11 (0,0210 g, 6,0% de rendimen- 5 to) foi obtido como um sal de bis-TFA sólido púrpura a partir de HPLC prepa- rativo de fase reversa. Esse material foi uma mistura inseparável dos dois isômeros em uma proporção de aproximadamente 2 a 1. LC-MS, MS m/z 702 (M+ + H).

Isômeros do Composto 12:

3-metila-N-2-piridinila-L-valila-(4R)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila) car- bamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida 3-metila-N-2-piridinila-D-valila-(4R)-N-((1R, 2S)-1-((ciclopropilsulfonila) car- bamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

cedimento que o descrito para a Preparação do Composto 7, exceto que cloridrato de éster terc-leucina-terc-butílico (0,486 g, 2,16 mmols) foi usado na etapa 1 no lugar de cloridrato de éster valina terc-butílico, e HCI 2,0 M em 20 éter foi adicionado no produto da etapa 1 concentrado em diclorometano para produzir o sal de cloridrato na etapa 2. A escala das etapas 2 e 3 tam- bém foram ajustadas baseando-se nos rendimentos das etapas anteriores. A

Exemplo 12: Preparação dos Compostos 12A e 12B

O N

Compostos 12A e 12B

Os Compostos 12A e 12B foram preparados pelo mesmo pro- ‘ purificação do produto bruto da etapa 3 por HPLC preparativo em fase re- versa produziu dois compostos com boa pureza com MS m/z idênticos. O composto 12A (0,0772 g, 20,9% de rendimento) foi o primeiro dos dois isô- meros formados na reação para eluir de HPLC preparativo em fase reversa 5 e foi obtido como um sólido vítreo bege do sal bis-TFA. O Composto 12B (0,0204 g, 5,5% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros formados na reação para eluir do HPLC preparativo em fase reversa e foi obtido como um sólido bege de sal bis-TFA.

Composto 12A: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,09 - 1,14 10 (m, 2 H) 1,15 (s, 9 H) 1,28 (d, J=3,05 Hz, 2 H) 1,47 (dd, J=9,00, 5,04 Hz, 1 H) 1,91 - 1,97 (m, 1 H) 2,25 - 2,38 (m, 2 H) 2,66 (dd, J=13,28, 6,56 Hz, 1 H)

2,95 - 3,03 (m, 1 H) 3,95 (s, 3 H) 4,14 (d, J=11,60 Hz, 1 H) 4,39 (d, J=12,51 Hz, 1 H) 4,54 (s, 1 H) 4,65 - 4,71 (m, 1 H) 5,17 (d, J=10,68 Hz, 1 H) 5,34 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,74 - 5,84 (m, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 6,78 (t, J=6,71 Hz, 1 H) 15 6,96 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,07 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,22 (s, 1 H) 7,30 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 7,57 (t, J=8,09 Hz, 1 H) 7,75 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 7,92 (d, J=9,46 Hz, 1 H) 7,94 (d, J=6,10 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 691 (M++ H).

Composto 12B: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,91 (s, 9 H)

1,02 - 1,17 (m, 3 H) 1,20-1,31 (m, 2 H) 1,32 -1,38 (m, 1 H) 1,40 -1,46 (m, 1 20 H) 1,90 - 1,96 (m, 1 H) 2,30 - 2,37 (m, 1 H) 2,39 - 2,47 (m, 1 H) 2,69 (dd, J=15,11, 8,09 Hz, 1 H) 2,89 (s, 1 H) 2,91 - 2,99 (m, 1 H) 3,97 (s, 3 H) 4,21 (dd, J=12,05, 2,90 Hz, 1 H) 4,44 (d, J=12,21 Hz, 1 H) 4,66 (s, 1 H) 4,68 - 4,73 (m, 1 H) 5,18 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,38 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,77 - 5,86 (m, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 6,99 (t, J=6,56 Hz, 1 H) 7,21 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,24 - 25 7,29 (m, 2 H) 7,32 (d, J=6,41 Hz, 1 H) 7,95 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 7,97 - 8,02 (m, 1 H) 8,05 (d, J=8,85 Hz1 1 H); LC-MS, MS m/z 691 (M++ H).

Isômeros do Composto 13:

3-metila-N-3-piridinila-L-valila-(4R)-N-((1R.2S)-1-

((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-

30 isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida e 3-metila-N-3-piridinila-D-valila-(4R)-N-((1 R.2SV1 -

((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-

isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

Exemplo 13: Preparação dos Compostos 13A e 13B

O

Il ,s.

Compostos 13A e 13B Esquema 1

HCl

H2N

Etapa 1

PcKOAch, NaOt-Bu 1,2-DME

I ioantp fnçfínrt

cr

Q-NH '<> _ Etapa 2 ^

/O TFA, DCM /\ HCl 2,0 M em Et2O

LTnUoh

HCI ~~T\ °

10

Etapa 3

-OVitV

HATU, DIEA, DCM

—NH OH

Η,

HCI ~J\ °

Produto do Passo 5, Exemplo 1

//^\—NH JI S

'-ΟΛ ΓK sl^v

-A °

Compostos 13A e 13B Mistura dos isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 3-cloropiridina (0,410 g, 3,61 mmols) e terc- butóxido de sódio (1,18 g, 12,3 mmols) em 1,2-dicloroetano seco (5 mL) foi adicionada uma solução pré-misturada de Pd(OAc)2 (0,0405 g, 0,180 mmol) e (^?)-(-)-1-[(S)-(dicicloexilfosfino)ferrocenila]etila-di-ferc-butilfosfino (0,100 g, ‘ 0,180 mmol, Strem Chemicals # catálogo 26-0975, CAS # [158923-11-6]) em 1,2-dimetoxietano seco (2 mL). A mistura foi agitada e foi rapidamente trata- da com cloridrato do éster terc-butílico da terc-leucina (0,970 g, 4,33 mmols) e foi novamente agitada. A mistura foi aquecida até 100°C por 20 horas, adi- 5 cionada a uma mistura rapidamente agitada de solução tampão pH = 7 (100 mL) e HCI 1,0 M aquoso (12 mL), tratada com acetato de etila e agitada. As fases foram deixadas separar e o extrato orgânico foi lavado com salmoura, seco em MgS04, filtrado e concentrado in vacuo até um resíduo orgânico intenso. O produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel flash 10 (gradiente linear de 100% de hexanos para 1:1 de hexanos:acetato de etila) para produzir um sólido colorido vermelho brilhante (0,583 g, 61,1% de ren- dimento). LC-MS, MS m/z 265 (M+ + H).

Etapa 2:

O produto da etapa 1, Exemplo 13 (0,200 g, 0,756 mmol) foi dis- 15 solvido em diclorometano (5 mL) e tratado com TFA (5 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas e foi a seguir concentrada in vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em 1,2-dicloroetano (15 mL) e no- vamente concentrado in vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em dicloro- metano (3 mL) e foi adicionado gota a gota em HCI 2,0 M rapidamente agi- 20 tado em éter (40 mL). O precipitado bege resultante foi isolado por filtração e deixado secar ao ar. Pó bege (0,160 g, 86,4% de rendimento). LC-MS, MS m/z 209 (M+ + H).

Etapa 3:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,242 g, 25 0,422 mmol) e NMM (0,203 g, 2,01 mmols) em diclorometano (2 mL) foi adi- cionado o produto da etapa 2, Exemplo 13 (0,098 g, 0,40 mmol) e HATU (0,242 g, 0,422 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo marrom viscoso foi diretamente purificado por HPLC preparativo em fase reversa para produzir 30 dois compostos com boa pureza com MS m/z idênticos. O Composto 13A (0,154 g, 41,6% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir da coluna de HPLC de fase reversa e foi obtido como um sólido esbranquiçado de sal bis-TFA. O Composto 13B (0,118 g, 31,9% de rendimento) foi o se- gundo dos dois isômeros a eluir da coluna de HPLC de fase reversa e foi obtido como um pó bege de sal de bis-TFA.

Composto 13A: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,06 - 1,18 (m, 12 H) 1,24 - 1,36 (m, 2 H) 1,42 - 1,48 (m, 1 H) 1,93 (t, J=6,71 Hz, 1 H) 2,23 - 2,33 (m, 2 H) 2,61 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1 H) 2,96 - 3,05 (m, 1 H) 3,96 (s, 3 H) 3,98 -

4,04 (m, 1 H) 4,23 (s, 1 H) 4,38 (d, *7=12,21 Hz, 1 H) 4,66 (t, J=8,70 Hz, 1 H)

5,17 (dd, J=10,53, 0,76 Hz, 1 H) 5,34 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,74 - 5,83 (m, 1 H) 5,89 (s, 1 H) 7,08 (dd, J=9,16, 0,92 Hz, 1 H) 7,22 (s, 1 H) 7,23 - 7,28 (m, 1 H) 7,30 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 7,57 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 7,80 (d, J=5,49 Hz, 1 H)

7,86 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,94 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 8,09 (s, 1 H) 9,26 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 691 (M++ H).

Composto 13B: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,94 (s, 9 H) 1,10 (d, J=7,32 Hz, 2 H) 1,17 - 1,35 (m, 2 H) 1,41 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1 H) 1,87 - 1,94 (m, 1 H) 2,31 (q, J=8,65 Hz, 1 H) 2,35 - 2,43 (m, 1 H) 2,59 - 2,69 (m, 1 H) 2,92 - 3,01 (m, 1 H) 3,97 (s, 3 H) 4,12 (d, J=11,90 Hz, 1 H) 4,38 (s,

1 H) 4,49 (d, J=11,90 Hz, 1 H)4,67 (t, J=8,85 Hz, 1 H) 5,17 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,36 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,75 - 5,87 (m, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 7,20 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 7,25 (s, 1 H) 7,31 (d, J=5,80 Hz, 1 H) 7,71 - 7,78 (m, 1 H) 7,89 - 7,99 (m, 3 H) 8,04 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 8,22 (s, 1 H) 9,57 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 691 (M+ + H).

Isômeros do Composto 14:

N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1R.2S)-1-((ciclo- propilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinoli- nila)óxi)-L-prolinamida e N-(4.6-dimetila-2-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-N- ((1 R.2SV1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-

1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

Exemplo 14: Preparação dos Compostos 14A e 14B 10

O

Il

-S,

Compostos 14A e 14B Esquema 1

Etapa 1

HCI O I

Pd(OAc)2, NaOt-Bu TBDMSC1, 1,2-DME Ligante fosfino

\r^N. Etapa 2

// Vnh /°

\=/ )—TFA, DCM

/ —O HCl 2,0 M em Et3O

Vn hci

// 'V-NH OH K^.

Etapa 3

HATU1 DIEA, DCM

V« hci

(/ ^—NH OH

Il f / V

Hlv ^ °

NH N

H7^o r*Mv

Produto da etapa 5, Exemplo 1

Compostos 14Ae 14B Mistura de isômeros

Etapa 1:

2-bromo-4,6-dimetilpiridina (0,839 g, 4,51 mmols), terc-butóxido de sódio (1,47 g, 15,3 mmols), cloridrato do éster terc-leucina terc-butílico (1,21 g, 5,41 mmols) e TBDMSCI (1,5 g, 8,8 mmols) foram combinados e tratados com 1,2-dimetoxietano (6 mL). A mistura foi agitada e uma solução pré-misturada de Pd (OAc)2 (0,202 g, 0,902 mmol) e (R)-(-)-1-[(S)- (dicicloexilfosfino)ferrocenila]etildi-terc-butilfosfino (0,500 g, 0,902 mmol, S- trem Chemicals # catálogo 26-0975, # CAS [158923-11-6] em 1,2- dimetoxietano seco (2 mL) foi imediatamente adicionado. Uma exoterma moderada resultou e a mistura ficou com coloração marrom profunda. De- pois de 10 minutos, a mistura ficou com coloração laranja. A mistura foi agi- tada em temperatura ambiente por 72 horas. A mistura foi, a seguir, adicio- nada a uma mistura rapidamente agitada de solução tampão pH = 7 (75 mL) 5 e HCI 1,0 M aquoso (15 mL). Acetato de etila (40 mL) foi adicionado e a mis- tura foi agitada e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos foram combinados e la- vados com salmoura (40 mL), secos em MgS04, filtrados e concentrados in vacuo até um resíduo marrom. O produto bruto foi purificado por cromatogra- 10 fia em, sílica-gel flash (gradiente linear de 100% de hexanos até 10:1 de he- xanos.acetato de etila) para produzir um óleo amarelo (0,786 g) o qual foi determinado como contendo o produto desejado mais 1,9 equivalentes de subproduto TBDMS. O material foi carregado para o próximo etapa sem puri- ficação adicional. LC-MS, MS m/z 293 (M+ + H).

Etapa 2:

O produto da etapa 1, Exemplo 14 (0,750 g) foi dissolvido em diclorometano (10 mL) e tratado com TFA (10 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 7 horas e foi a seguir concentrada in vacuo. O resíduo foi então dissolvido em 1,2-dicloroetano (15 mL) e novamente con- 20 centrado in vacuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em diclorometano (3 mL) e foi adicionado gota a gota em HCI 2,0 M rapidamente agitado em éter dietí- Iico (40 mL). Não ocorreu nenhuma precipitação. Precipitações iterativas do material bruto a partir de diclorometano usando hexanos e acetato de etila como os contra-solventes produziu eventualmente um pó amarelo (0,286 g, 25 23% de rendimento em 2 etapas). LC-MS m/z 237 (M+ + H).

Etapa 3:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,189 g, 0,330 mmol) e NMM (0,167 g, 1,65 mmol) em diclorometano (2 mL) foi adi- cionado o produto da etapa 2, Exemplo 14 (0,090 g, 0,33 mmol) e HATU 30 (0,151 g, 0,396 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. O produto adicional da etapa 2, Exemplo 14 (0,049 g, 0,18 mmol), HATU (0,082 g, 0,216 mmol) e NMM (0,0381 g, 0,377 mmol) foram adicio- nados à mistura, e a solução foi agitada a 40°C de um dia para o outro. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi diretamente purificado por H- PLC preparativo de fase reversa para obter dois compostos separados com MS m/z idêntico. O Composto 14A (0,118 g, 37,8% de rendimento) foi o pri- 5 meiro dos dois isômeros a eluir da coluna de HPLC preparativa de fase re- versa e foi obtido como um pó esbranquiçado de sal de bis-TFA. O Compos- to 14B (0,044 g, 14,1% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a eluir a partir da coluna de HPLC preparativa de fase reversa e foi obtida co- mo um pó bege de sal bis-TFA.

Composto 14A: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,07-1,11

(m, 2 H) 1,13 (s, 9 H) 1,25 - 1,30 (m, 2 H) 1,46 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1 H) 2,25 - 2,37 (m, 2 H) 2,38 (s, 3 H) 2,65 (dd, J=13,58, 7,78 Hz, 1 H) 2,94 - 3,03 (m, 1 H) 3,95 (s, 3 H) 4,09 (dd, J=12,21, 2,75 Hz, 1 H) 4,36 (d, J=12,21 Hz1 1 H) 4,48 (s, 1 H) 4,69 - 4,75 (m, 1 H) 5,17 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,35 (d, J=17,40 Hz, 1 H) 5,72 - 5,83 (m, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,53 (s, 1 H) 6,60 (s, 1 H)

7,02 - 7,07 (m, 1 H) 7,19 - 7,22 (m, 1 H) 7,30 (d, J=6,10 Hz, 1 H) 7,87 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,94- 7,97 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 719 (M++H).

Composto 14B: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,92 (s, 9 H)

1,05 - 1,10 (m, 2 H) 1,13 - 1,19 (m, 1 H) 1,21 - 1,26 (m, 1 H) 1,41 (dd, 20 J=9,46, 5,19 Hz, 1 H) 1,89 - 1,94 (m, 1 H) 2,32 (q, J=8,75 Hz, 1 H) 2,40 - 2,44 (m, 1 H) 2,45 (s, 3 H) 2,48 (s, 3 H) 2,65 - 2,71 (m, 1 H) 2,90 - 2,96 (m, 1 H) 3,96 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 3,97 (d, J=1,53 Hz, 3 H) 4,20 (dd, J=12,36, 2,90 Hz, 1 H) 4,51 (d, ^/= 12,51 Hz, 1 H) 4,62 (s, 1 H) 4,69 (t, J=8,39 Hz, 1 H) 5,17 (d, J=10,07 Hz, 1 H) 5,36 (d, J=17,40 Hz, 1 H) 5,75 - 5,83 (m, 1 H) 5,97 (s, 1 25 H) 6,71 (s, 1 H) 6,88 (s, 1 H) 7,19 - 7,23 (m, 1 H) 7,25 (d, J=2,14 Hz, 1 H)

7,32 (d, J=5,80 Hz, 1 H) 7,95 (dd, J=5,95, 1,68 Hz, 1 H) 8,05 (d, J=9,16 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 719 (M+ + H).

Isômeros do Composto 15:

3-metila-N-fenila-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)- 2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxiVL-prolinamida e 3-metila-N-fenila-D-valila-(4R)-N-( (1 R,2S)-1 -

((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida Exemplo 15: Preparação dos Compostos 15A e 15B

Compostos 15A e 15B Esquema 1

O

hZnvA

OH +

Etapa I

Cul, K2CO3, DMA 130°C,3 d

/^NH .°H

O

Il

'íl

Produto do Passo 5, Exemplo 1

Etapa 2

HATU1 DIEA1 DCM

[l -NH OH

‘-''Η'·

O N

ÍV- >'VA I S

wIH r xViv

Compostos 15Ae 15B Mistura de isômeros

10

Etapa 1:

L-terc-leucina (0,840 g, 6,40 mmols), K2CO3 (1,33 g, 9,60 mmols) e Cul (0,122 g, 0,64 mmol) foram combinados em um frasco de pressão Chemglass de 35 mL. Bromobenzeno (1,01 g, 6,4 mmols) e DMA (8 mL) fo- ram adicionados, o espaço de cabeça do frasco foi preenchido com nitrogê- nio, o frasco foi lacrado e a mistura foi aquecida até 90°C de um dia para o outro. DMA adicional (8 mL) foi adicionado para facilitar a agitação e a mistu- ra foi aquecida até 130°C de um dia para o outro. Com somente uma pe- quena quantidade de formação de produtos, conforme determinado por LCMS, a mistura foi carregada com um excesso de Cul (aproximadamente 1 g(, a reação foi novamente lacrada e aquecida até 130°C por 2 dias. A mis- tura foi esfriada até a temperatura ambiente e tratada com HCI 1,0 M aquo- 5 so, até pH = 5 ser alcançado, a seguir tampão pH = 7 (50 mL) e acetato de etila (50 mL) foram adicionados e a mistura foi agitada e as fases foram se- paradas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 50 mL) e as camadas orgânicas foram combinadas e cavadas com salmoura, secas em MgSO4, filtradas e concentradas in vacuo até um resíduo sólido. Purificação 10 por cromatografia flash em sílica-gel (20:1 de diclorometano:metanol) produ- ziu um sólido de cor vermelho brilhante ceroso (0,286 g) o qual continha a- proximadamente 1,2 equivalentes de DMA arrastado por RMN 1H. LC-MS, MS m/z 208 (M+ + H).

Etapa 2:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (0,200 g,

0,349 mmol) e NMM (0,141 g, 1,40 mmol) em diclorometano (2 mL) foi adi- cionado o produto da etapa 1, Exemplo 15 (0,108 g, 0,35 mmol, 67% puro) e HATU (0,160 g, 0,418 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. O solvente foi removido in vacuo e ao resíduo foi adicionado 20 acetato de etila (30 mL) e água (30 mL). Nem todos os sólidos dissolveram. A mistura foi transferida para um frasco de fundo redondo de 250 mL com solvente 1:1 diclorometano:metanol e a mistura foi concentrada in vacuo até os solventes orgânicos serem removidos, deixando a fase aquosa e os sóli- dos não-dissolvidos. Foi determinado por LCMS que uma purificação bruta 25 ocorreu onde a fase aquosa reteu a maior parte dos subprodutos solúveis em água com pouco produto, e o sólido consistiu a maior parte de produto.

O sólido foi filtrado a partir do líquido para produzir um pó branco (0,225 g). Purificação adicional do pó branco por HPLC preparativo em fase reversa produziu dois compostos separados com MS m/z idênticos. O Composto 30 15A (0,124 g, 38,8% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir da coluna de HPLC preparativo de fase reversa e foi obtido como um pó marrom de sal bis-TFA. O Composto 15B (0,0633 g, 19,8% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a eluir da coluna de HPLC preparativo de fase reversa e foi obtido como um pó marrom de sal bis-TFA.

Composto 15A: RMN 1H (500 MHz1 MeOD) δ ppm 1,09-1,15 (m, 2 H) 1,19 (s, 9 H) 1,27- 1,33 (m, J=2,44 Hz, 2 H) 1,43 - 1,48 (m, 1 H) 1,89 - 1,94 (m, 1 H) 2,21 - 2,30 (m, 1 H) 2,57 (dd, J=13,58, 7,17 Hz, 1 H) 2,96 - 3,03 (m,

1 H) 3,99 (d, J=1,83 Hz1 3 H) 4,02 - 4,08 (m, 1 H) 4,14 (s, 1 H) 4,28 (d, J=12,21 Hz, 1 H) 4,44 - 4,51 (m, 1 H) 5,16 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,32 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,73 - 5,83 (m, 2 H) 6,41 (t, J=7,17 Hz, 1 H) 6,69 - 6,73 (m,

2 H) 6,76 (t, J= 7,02 Hz, 2 H) 7,10 (d, J=9,16 Hz1 1 H) 7,26 (s, 1 H) 7,30 - 7,34 (m, 1 H) 7,73 (dd, J=9,00, 1,37 Hz, 1 H) 7,92 (dd, J=5,80, 1,83 Hz, 1 H);

LC-MS, MS m/z 690 (M+ +H).

Composto 15B: RMN 1H (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 0,87 (s, 9 H) 0,94 - 1,00 (m, 1 H) 1,00 - 1,05 (m, J=6,41 Hz, 2 H) 1,10 - 1,19 (m, 1 H) 1,28 (dd, J=9,31, 5,04 Hz, 1 H) 1,72 (dd, J= 7,63, 5,19 Hz, 1 H) 2,05 - 2,13 (m, 1 15 H) 2,21 - 2,28 (m, 1 H) 2,40 - 2,48 (m, 1 H) 2,81 - 2,88 (m, 1 H) 3,91 (d, J=1,83 Hz, 3 H) 3,94 - 4,00 (m, 1 H) 4,19 (s, 1 H) 4,41 (d, J=11,90 Hz, 1 H) 4,43 - 4,49 (m, 1 H) 5,12 (d, J=10,07 Hz, 1 H) 5,27 (d, J=17,09 Hz1 1 H) 5,58

- 5,71 (m, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 6,55 (t, J=I,17 Hz, 1 H) 6,74 (d, J= 7,63 Hz, 2 H)

7,03 - 7,10 (m, 2 H) 7,22 - 7,27 (m, 1 H) 7,31 - 7,37 (m, 2 H) 7,88 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,97 (dd, J=5,80, 2,14 Hz, 1 H) 9,18 (s, 1 H) 10,74 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 690 (M+ + H).

Exemplo 16: Preparação do Composto 16: N-(4,6-dimetila-2- piridinila)valila-(4R)-N-((1R.2S)-1-((dimetilsulfamoíla)carbamoíla)-2-

vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida Composto 16

Esquema 1

Etapa I

BocHN^Jtv

X'

OH

O

Il

'VnvN^N-

Δ H O I

%

'O

CDI, THF, DBU

Vo

H2N N

BocHN

O O

JL,V

X 'S'

Etapa 2

TFA DCM1 DCE

"■vOv

tfaA h I

Etapa 1:

A uma solução de ácido N-Boc-vinilciclopropanocarboxílico 5 (1,83 g, 8,05 mmols) e THF (32 mL) foi adicionado 1,1’-carbonildiimidazol (1,44 g, 8,86 mmols). Depois de agitar em temperatura ambiente por 3 ho- ras, a mistura reacional foi tratada com N,N-dimetilsulfamida (1,0 g, 8,05 mmols) seguido por DBU (2,45 g, 16,1 mmols) e foi agitada em temperatura ambiente por mais 15 horas. A reação foi a seguir diluída com acetato de 10 etila (50 mL) e lavada com HCI aquoso 1,0 M (2 x 25 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 50 mL). A porção orgânica combinada foi lavada com H2O (25 mL) e salmoura, seca em MgSO4, filtrada e concen- trada até um sólido amarelo-claro (2,6 g, 97% de rendimento) o qual foi usa- do sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 356 (M+ + Na).

Etapa 2:

A uma solução do produto da etapa 2, Exemplo 16 (1,42 g, 4,26 mmols) em 1:1 diclorometano:1,2-dicloroetano (20 mL) foi adicionado TFA (10 mL). Depois de agitar em temperatura ambiente por 0,5 hora, o solvente e TFA em excesso foram removidos e o resíduo foi redissolvido em 1,2- dicloroetano (20 mL) e novamente concentrado para produzir um sólido a- marelo (1,46 g, 99% de rendimento). LC-MS, MS m/z 234 (M+ + H).

Esquema 2

rendimento a partir do produto da etapa 2, Exemplo 16, pelo mesmo proce- dimento que o descrito para a preparação do produto da etapa 4, Exemplo 1.

Etapa 4:

O produto da etapa 4, Exemplo 16, foi preparado com 95% de rendimento a partir do produto da etapa 3, Exemplo 16, pelo mesmo proce- dimento que o descrito para a preparação do produto da etapa 5, Exemplo 1. LC-MS, MS m/z 504 (M+ + H).

Etapa 5:

A uma mistura do produto da etapa 4, Exemplo 16 (0,200 g, 0,347 mmol) e DIEA (0,180 g, 1,39 mmol) em diclorometano (4 mL) foi adi- cionado ácido 2-(4,6-dimetilpiridina-2-ilamino)-3-metilbutanoico (0,092 g, 0,416 mmol) e HATU (0,198 g, 0,520 mmol). A mistura foi agitada em tempe- ratura ambiente por 8 horas. A reação foi incompleta por LCMS. Mais ácido

2-(4,6-dimetilpiridina-2-ilamino)-3-metilbutanoico (0,039 g, 0,174 mmol) e

o

o

2HI

Composto 16

5

Etapa 3:

O produto da etapa 3, Exemplo 16, foi preparado com 91% de HATU (0,066 g, 0,174 mmol) foram adicionados e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por mais 16 horas. A reação foi ainda incompleta por LCMS. Novamente, mais ácido 2-(4,6-dimetilpiridina-2-ilamino)-3- metilbutanoico (0,039 g, 0,174 mmol) e HATU (0,066 g, 0,174 mmol) foram adicionados e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por mais 16 horas. O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em acetato de etila (50 mL) e a solução foi lavada com HCI aquoso 1,0 M (2 x 5 mL). Os extra- tos aquosos foram combinados e extraídos reversamente com acetato de etila (50 mL), e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com carbo- nato de sódio aquoso 10% e a seguir com salmoura. A fase orgânica foi se- ca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada até um resíduo o qual foi purifi- cado por HPLC preparativa em fase reversa para produzir o Composto 16 (o principal dos dois isômeros formados) como um sal bis-HCI sólido amarelo (0,060 g, 22,1% de rendimento). RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,01 (d, J=6,7 Hz, 3 H), 1,10 (d, J=QJ Hz, 3 H), 1,43 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1 H), 1,88 -

1,95 (m, 1 H), 2,20 (s, 3 H), 2,23 - 2,32 (m, 1 H), 2,39 (s, 1 H), 2,43 (s, 3 H), 2,69 (dd, J=13,7, 7,0 Hz, 1 H), 2,77 - 2,80 (m, 1 H), 2,87 - 2,90 (m, 1 H), 2,93 (s, 6 H), 3,97 (s, 3 H), 4,18 (dd, J=12,2, 3,4 Hz, 1 H), 4,38 (d, J=12,2 Hz, 1 H), 4,57 (d, J=6,7 Hz, 1 H), 4,70 (dd, J=10,1, 7,0 Hz, 1 H), 5,18 (dd, J=10,4, 1,8 Hz, 1 H), 5,35 (d, J=17,1 Hz, 1 H), 5,72 - 5,83 (m, 1 H), 5,98 (d, J=2J Hz,

1 H), 6,60 (s, 1 H), 6,69 (s, 1 H), 7,17 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1 H), 7,28 (d, J=2,4 Hz, 1 H), 7,39 (d, J=6,1 Hz, 1 H), 7,94 (d, J=6,1 Hz, 1 H), 8,05 (d, J=9,2 Hz,

1 H); LC-MS, MS m/z 708 (M+ + H).

Exemplo 17: Preparação do Composto 17: N-(4,6-dimetila-2- piridinila)valila-(4R)-N-((1R,2Syi-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinil-

ciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida Composto 17

Esquema 1

,OH

LAf-

/

O

Il

-S-

Etapa 1

H Ti

Vrrv

'vZi

1) Cloreto de oxalila DCM. DMF

NH

2) ^ .Λ.

N

N

10

Etapa 2 LDA

Etapa 3

-—)

POCI3

Etapa 1:

Uma solução do ácido 4-metóxi-2-metilbenzoico (10,2 g, 61,4 mmols) em diclorometano (200 mL) foi tratada lentamente com cloreto de oxalila. Uma gota de DMF foi adicionada e a reação foi agitada em tempera- tura ambiente por 12 horas. A mistura foi, a seguir, tratada com 1,1,3,3- tetrametilguanidina (14,9 g, 128,9 mmols) e agitada em temperatura ambien- te por 4 horas. A mistura foi lavada com ácido cítrico aquoso 5% (2 x 100 mL). A fase aquosa foi extraída reversamente com diclorometano (2 x 100 mL) e as fases orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4 anidro, filtra- das e concentradas para fornecer uma quantidade mínima do produto dese- jado. A fase aquosa foi alcalinizada pela adição de NaOH aquoso 10,0 M até ser alcançado pH = 13 e foi, a seguir, extraída com diclorometano (4 x 200 mL). As fases orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4 anidro, filtra- das e concentradas. O óleo resultante foi combinado com o produto inicial- 5 mente obtido e a mistura foi tratada com éter dietílico para produzir um pre- cipitado branco o qual foi removido por filtração. O filtrado foi concentrado para produzir o produto desejado (11,3 g, 70% de rendimento), como um óleo amarelo viscoso. RMN 1H (CD3OD) δ 2,54 (s, 3H), 3,97 (s, 6H), 3,79 (s, 3H), 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,75 (s, 1H), 7,65 (d, J = 8,9 Hz, 1H), LC-MS, 10 MS m/z 264 (M+ + H).

Etapa 2:

Uma solução do produto da etapa 1, Exemplo 17 (0,461 g, 1,78 mmol) em THF (5 mL) a O0C foi tratada com solução LDA (1,8 M em THF/hexanos, 1,2 mL, 2,14 mmols). A reação foi agitada em temperatura 15 ambiente por 5 horas e foi, a seguir, tratada com LDA adicional (1 mL) e agi- tada em temperatura ambiente por 14 horas. A mistura foi interrompida com cloreto de amônio saturado (10 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 25 mL). As fases orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4 anidro, filtra- das e concentradas. O concentrado foi dissolvido em uma quantidade míni- 20 ma de diclorometano e éter dietílico foi adicionado. O precipitado resultante foi coletado por filtração para fornecer o produto desejado (0,312 g, 80% de rendimento como um sólido marrom. RMN 1H (CD3OD) δ 2,94 (s, 6H), 3,86 (s, 3H), 5,71 (s, 1H), 6,75 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 2,4 Hz, 1H),

7,97 (d, J = 9,2 Hz, 1H), LC-MS, MS m/z 219 (M+ + H).

Etapa 3:

O produto da etapa 2, Exemplo 17 (10,0 g, 45,8 mmols) foi tra- tado com POCI3 (43 mL) e a mistura foi aquecida até 1100C por 5 horas em um frasco de pressão Chemglass. No esfriamento até a temperatura ambi- ente, a massa resultante foi dissolvida em diclorometano (200 mL) e a solu- 30 ção foi suprimida pela lenta adição de bicarbonato de sódio aquoso satura- do. Isto resultou em uma vigorosa evolução de gás. Quando cessou a evolu- ção de gás, a mistura foi agitada em um funila de separação e as fases fo- ram separadas. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 200 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca em MgSO4 ani- dro, filtrada e concentrada. Éter dietílico foi adicionado ao resíduo para efe- tuar a precipitação de um sólido preto, o qual foi coletado por filtração e la- vado com éter. Deste modo, o produto desejado foi obtido (5,72 g, 53,0% de

rendimento). LC-MS, MS m/z 237 (M+ + H).

Esquema 2

HO

OH

10

Etapa 5

HATU, DIEA, DCM

o o

hci X n oV

\ j H o o

("ΛΑΑ..-!

\ I λ N!!

Composto 17

Etapa 4:

A uma solução de Boc-Ip-OH (5,60 g, 24,2 mmols) em THF (100 mL) foi adicionado ferc-butóxido de potássio (1,0M em THF, 53,2 mL, 53,2 mmols). A mistura ficou marrom e se tornou um gel, o qual quebrou com agi- tação vigorosa. Depois de 15 minutos, o produto da etapa 3, Exemplo 17 (5,72 g, 24,2 mmols) foi adicionado em porções. A mistura foi aquecida a 70°C por 48 horas. A mistura foi suprimida pela adição de HCI 1,0 M e foi, a seguir, extraída com acetato de etila. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila uma vez mais. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com 5 salmoura, secas em MgSO4 e filtradas. O filtrado foi evaporado in vacuo até a secura para produzir o produto desejado. LC-MS, MS m/z 430 (Μ - H).

Etapa 5:

Uma mistura do produto da etapa 4, Exemplo 17 (8,90 g, 20,6 mmols), DIEA (8,01 g, 61,9 mmols), e sal HCI de (1-(R)-amino-2-(S)- vinilciclopropanocarbonila)-amida do ácido ciclopropanossulfônico (6,60 g, 24,8 mmols) em diclorometano (150 mL) foi tratada com HATU (10,2 g, 26,8 mmols), e a solução marrom resultante foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. O solvente foi removido in vacuo, e o resíduo foi ressuspenso em acetato de etila (200 mL), e lavado com água (100 mL). As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída reversamente com acetato de etila (3 x 100 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com HCI aquoso 0,10 M (100 mL), a seguir com carbonato de sódio aquoso 10% (50 mL) e finalmen- te com salmoura. A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada para produzir um sólido espumoso marrom escuro. O produto foi purificado por cromatografia em sílica-gel flash (95:5 de diclorometano:metanol) para produzir um sólido marrom (12,9 g, 97% de rendimento). LC-MS, MS m/z 642 (Μ - H).

Etapa 6:

A uma solução do produto da etapa 5, Exemplo 17 (12,7 g, 19,6 25 mmols) em 1:1 diclorometano:1,2-dicloroetano (100 mL) foi adicionado TFA (50 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos e foi, a seguir, concentrada in vacuo. O resíduo foi redissolvido em 1,2- dicloroetano (100 mL) e novamente concentrado in vacuo. O resíduo foi, a seguir, dissolvido em diclorometano (50 mL) e foi adicionado em gotas a HCI 30 1,0 M vigorosamente agitado em éter dietílico (500 mL). O precipitado sólido marrom claro resultante foi isolado por filtração e lavado com HCI 1,0 M em * éter dietílico para produzir um pó marrom (10,2 g, 85,0% de rendimento). LC-MS, MS m/z 544 (M+ + H).

Etapa 7:

O produto da etapa 6, Exemplo 17 (0,258 g, 0,419 mmol), ácido

5 2-(4,6-dimetilpiridin-2-ilamino)-3-metilbutanoico (0,111 g, 0,503 mmol), DIEA (0,217 g, 1,68 mmol) e HATU (0,239 g, 0,629 mmol) foram combinados em diclorometano (4 mL) e a mistura foi agitada por 8 horas em temperatura ambiente. Mais ácido 2-(4,6-dimetilpiridin-2-ilamino)-3-metilbutanoico (0,0465 g, 0,210 mmol) e HATU (0,080 g, 0,21 mmol) foram adicionados e a 10 mistura foi agitada em temperatura ambiente por mais 14 horas. O solvente foi removido e o resíduo foi redissolvido em acetato de etila (50 mL) e lavado com HCI aquoso 1,0 M (2 x 5 mL). Os extratos aquosos foram combinados e extraídos reversamente com acetato de etila (50 mL), e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com carbonato de sódio 10% aquoso e a seguir 15 com salmoura. A fase orgânica foi seca em MgSO4 anidro, filtrada e concen- trada até um resíduo o qual foi purificado por HPLC preparativo em fase re- versa para produzir o Composto 17 (0,037 g, 10,8% de rendimento) como um sal bis-HCI de pó marrom. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,02 (d, J=6,7 Hz, 3 H), 1,10 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,12 -1,18 (m, 3 H), 1,22 - 1,30 (m, 2 20 H), 1,35 (t, J=7,3 Hz, 1 H), 1,46 (dd, J=9,6, 5,3 Hz, 1 H), 1,95 (dd, J= 7,9, 5,5 Hz, 1 H), 2,22 (s, 3 H), 2,28 - 2,36 (m, 2 H), 2,41 (s, 3 H), 2,52 (d, J=14,6 Hz,

1 H), 2,66 (dd, J=13,7, 7,3 Hz, 1 H), 2,96 - 3,03 (m, 2 H), 3,21 (s, 6 H), 3,91 (s, 3 H), 4,01 - 4,06 (m, 1 H), 4,18 (dd, J=11,9, 3,4 Hz, 1 H), 4,31 (d, J=11,9 Hz, 1 H), 4,56 (d, J=7,0 Hz, 1 H), 4,68 (dd, J=9,9, 7,2 Hzi 1 H), 5,14 - 5,19 25 (m, 1 H), 5,35 (d, J=17,1 Hz, 1 H), 5,75 - 5,85 (m, 1 H), 6,01 (s, 1 H), 6,60 (s,

1 H), 6,69 (s, 1 H), 6,83 (d, J=8,9 Hz, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 7,81 (d, J=9,2 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 748 (M+ + H).

Exemplo 18: Preparação do Composto 18: N-(4,6-dimetila-2- piridinila)-3-metilvalila-(4R)-N-((1 R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-

vinilciclopropila)-4-((3

prolinamida /

O

Il

.s.

VSlv

'vZ,

Composto 18

O Composto 18 foi preparado pelo mesmo método que o descri- to na etapa 3, Exemplo 14, exceto que o produto da etapa 6, Exemplo 17 (0,203 g, 0,330 mmol) foi usado no lugar do produto da etapa 5, Exemplo 1. 5 Dois produtos com LCMS idênticos m/z foram formados na reação, porém somente o único isômero Composto 18 foi isolado em quantidade aceitável. O Composto 18 foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparati- vo em fase reversa e foi obtido como um sal bis-TFA em pó marrom (0,102 g, 40,6% de rendimento). RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,08-1,11 (m, 10 J=3,05 Hz, 2 H) 1,13 (s, 9 H) 1,15 - 1,19 (m, J=1,83 Hz, 2 H) 1,25 - 1,30 (m,

2 H) 1,43 - 1,48 (m, 1 H) 1,92 - 1,97 (m, 1 H) 2,06 (s, 3 H) 2,26 - 2,35 (m, 2 H) 2,37 (s, 3 H) 2,61 - 2,67 (m, 1 H) 2,96 - 3,03 (m, 2 H) 3,13 (d, J=1,83 Hz,

6 H) 3,88 (d, J=1,83 Hz, 3 H) 4,06 (dd, J=12,21, 2,75 Hz, 1 H) 4,28 (d, J=12,51 Hz, 1 H) 4,47 (s, 1 H) 4,71 (t, J=8,70 Hz, 1 H) 5,17 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,35 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,73 - 5,82 (m, 1 H) 5,99 (s, 1 H) 6,52 (s, 1 H)

6,54 - 6,58 (m, 1 H) 6,61 (s, 1 H) 6,87 (t, J=1,98 Hz, 1 H) 7,56 (dd, J=9,00,

1,98 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 762 (M++ H).

Isômeros do Composto 19:

3-metila-N-fenila-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)- 2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L- prolinamida e 3-metila-N-fenila-D-valila-(4R)-N-(( 1 R.2S)-1 -

((ciclopropilsulfonila)carbarnoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-6-

metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

Exemplo 19: Preparação dos Compostos 19A e 19B

M 0 °

NxViv

1

Compostos 19A e 19B

O produto da etapa 6, Exemplo 17 (0,203 g, 0,330 mmol), NMM (0,134 g, 1,32 mmol), HATU (0,151 g, 0,396 mmol) e o produto da etapa 1, Exemplo 15 (0,102 g, 0,330 mmol) foram combinados em diclorometano (2 mL) e agitados por 72 horas. Dois produtos com LCMS idênticos m/z foram 10 gerados na reação. A mistura foi concentrada e purificada por HPLC prepa- rativo em fase reversa. O Composto 19A foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa e foi obtido um sal bis-TFA em pó marrom (0,0806 g, 33,3% de rendimento). O Composto 19B foi o segundo dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa e foi obtido 15 um sal bis-TFA em pó marrom (0,0573 g, 23,7% de rendimento).

Composto 19A: LC-MS, MS m/z 733 (M+ + H).

Composto 19B: LC-MS, MS m/z 733 (M+ + H).

Isômeros do Composto 20:

3-metila-N-fenila-L-valila-(4R)-N-((1R.2SV1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)- 2-vinilciclopropila)-4-((3,6-dimetóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida e 3- metila-N-fenila-D-valila-(4R)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-

2-vinilciclopropila)-4-((3,6-dimetóxi-1-ísoquinoliníla)óxi)-L-prolinamida Exemplo 20: Preparação dos Compostos 20A e 20B

I 0 °

Δ H O

''1L

Compostos 20A e 20B Esquema 1

^ov

Etapa I

CN

DMPU, THF LDA, -78°C, a seguir CO2

►

CO2H

CN DCM, SOCI2

Etapa 2 ^

►

COCI

CN

Etapa 1:

A uma solução de 1,3-dimetila-3,4,5,6-tetraidro-2(7/-/)-

pirimidinona (DMPU, 7,02 g, 55 mmols) em THF (100 mL) foi adicionado LDA (2,0 M em THF, 27,5 mL, 55 mmols) gota a gota a -78°C. A solução laranja resultante foi mantida nesta temperatura por 10 minutos com agita- ção, e a seguir 4-metóxi-2-metilbenzonitrila (7,36 g, 50 mmols em THF 5 mL) 10 foi adicionado gota a gota. A solução laranja escuro resultante foi mantida nesta temperatura por 30 minutos com agitação. Gás CO2 foi a seguir borbu- Ihado nesta solução a -78°C até esta ficar incolor. A solução final foi mantida nesta temperatura por mais 30 minutos com agitação antes de ser purgada com N2 por 5 minutos. A mistura foi interrompida com H2O (80 mL) a -78°C, 15 a seguir deixada aquecer até a temperatura ambiente. NaOH 10,0 M (aq, 20 mL, 200 mmols) foi adicionado, resultando em uma solução homogênea a qua! foi extraída com éter dietílico (100 mL). A camada aquosa foi acidificada por HCI concentrado até pH = 2, e o precipitado resultante foi coletado por filtração. A massa foi lavada completamente com H2O e seca in vacuo de um dia para o outro para produzir o produto desejado (7,90 g, 83,0% de rendi- 5 mento) como flocos brancos. RMN 1H (300 MHz1 CD3OD) δ ppm 3,83 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 6,99 (m, 2H), 7,64 (d, J = 8,42 Hz, 1H).

Etapa 2;

Uma pasta de ácido 2-(2-ciano-5-metoxifenila)acético em diclo- rometano (40 mL) e cloreto de tionila (40 mL) foi agitada em temperatura 10 ambiente de um dia para o outro. Os voláteis foram removidos e o resíduo foi triturado com diclorometano (50 mL) e filtrado. O filtrado foi concentrado in vacuo para produzir o produto desejado como um óleo viscoso amarron- zado (6,80 g, 97% de rendimento. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) δ ppm 3,86 (m, 3H), 4,35 (s, 2H), 6,92 (m, 2H), 7,63 (d, J = 8,78 Hz, 1H).

Etapa 3:

Uma solução de cloreto de 2-(2-ciano-5-metoxifenila)acetila (6,40 g, 30,6 mmols) em HCI 4,0 M em 1,4-dioxano (100 mL) foi aquecida em um frasco fechado a 60°C com agitação de um dia para o outro. Depois de esfriar até a temperatura ambiente, a mistura foi filtrada e a massa foi 20 lavada com acetato de etila completamente e seca in vacuo para fornecer o produto desejado como um pó amarelo-pálido fino (6,14 g, 96% de rendi- mento). RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 3,98 (s, 3H), 6,94 (s, 1H), 7,14 (m, 2H), 8,10 (d, J = 9,16 Hz, 1H); LC-MS MS m/z 210 (M++ H).

Etapa 4:

Uma pasta de 1-cloro-6-metoxiisoquinolin-3-ol (0,209 g, 1,0

mmol), Cs2CO3 (0,715 g, 2,2 mmols), e CH3I (0,284 g, 2,0 mmols) em DMF (2,5 mL) foi aquecida até 85°C em um tubo vedado por 3 horas. No esfria- mento até a temperatura ambiente, a camada superior da solução amarron- zada foi decantada em ácido cítrico 5% gelado. A mistura foi extraída com 30 acetato de etila (20 mL). A camada orgânica foi lavada com ácido cítrico 5%, NaOH 1,0 M (aq.) e salmoura seqüencialmente, seca em MgSO4 e filtrada. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica- gel de coluna flash. Eluição com diclorometano produziu o produto desejado

como um sólido esbranquiçado (0,152 g, 68,0% de rendimento), LC-MS MS

m/z 224 ÍM++ H).

Esquema 2

HO

OH

10

Etapa 6

EDC, HOBT, DIEA, EtOAc

o o

A _

HCIΛ N oV

■'v,

Etapa 7

TFA, DCM

HCl 1,0 M em Et2O

ji ü

2HCI Y 4K

Etapa 8

HATU, DIEA, DCM

0NvíVvlrt

o o

X' IfsV

Compostos 20A e 20B Mistura dos isômeros

Etapa 5:

O produto da etapa 5, Exemplo 20 foi obtido pelo mesmo proce- dimento que o descrito para a preparação do produto da etapa 3, Exemplo 1, exceto que o produto da etapa 4, Exemplo 20 (1,25 g, 5,60 mmols) foi usado como material de partida ao invés do produto da etapa 2, Exemplo 1. O pro- duto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (gradiente da etapa 3:1 hexanos:acetona, seguido por 2:1 e a seguir 1:1 do mesmo) para produzir uma espuma branco-suja (2,34 g, 91,6% de rendimento). LC-MS MS m/z 419 (M+ + H). Etapa 6:

A uma solução a O0C do produto da etapa 5, Exemplo 20 (1,94 g, 5,68 mmols) em acetato de etila (150 mL) foi adicionado sal de HCI da (1- (R)-amino-2-(S)-vinilciclopropanocarbonila)-amida do ácido ciclopropanos- sulfônico (2,29 g, 5,68 mmols) em uma porção. A mistura foi agitada por 15 minutos e, a seguir, DIPEA (1,91 g, 17,0 mmols) foi adicionado gota a gota e a suspensão foi agitada por 5 minutos. A mistura foi, a seguir, tratada com EDC (1,41 g, 7,38 mmols) e HOBT (0,767 g, 5,68 mmols) e foi agitada de um dia para o outro. A mistura foi vertida em ácido cítrico 5% aquoso gelado e a mistura resultante foi agitada e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com ácido cítrico 5% aquoso, citrato de sódio 5% aquoso e final- mente com salmoura. O orgânico foi seco em MgSO4, filtrado e concentrado. Purificação por cromatografia em sílica-gel de coluna flash (1:1 de hexa- nos:acetona) produziu o produto como uma espuma branca (2,50 g, 79% de rendimento). LC-MS MS m/z 631 (M+ + H).

Etapa 7:

O produto da etapa 6, Exemplo 20 (3,20 g, 5,08 mmols) foi dis- solvido em diclorometano (20 mL) e a solução foi tratada com TFA (20 mL) em temperatura ambiente por 1 hora. O solvente foi removido in vacuo, e o 20 resíduo foi combinado com HCI 1,0 M em éter e agitado de um dia para o outro. O sólido resultante foi isolado por filtração, rinsado cometer e seco in vacuo para produzir um sólido esbranquiçado (2,87 g, 95,0% de rendimen- to). LC-MS MS m/z 531 (M+ + H).

Etapa 8:

Os Compostos 20A e 20B foram preparados pelo mesmo pro-

cedimento que o descrito para a preparação dos Compostos 19A e 19B, ex- ceto o produto da etapa 7, Exemplo 20 (0,100 g, 0,166 mmol) foi usado no lugar do produto da etapa 6, Exemplo 17. O Composto 20A foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa e foi obtido 30 como um sal de bis-TFA em pó bege (0,0564 g, 35,9% de rendimento). O Composto 20B foi o segundo dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa e foi obtido como um sal de bis-TFA em pó bege (0,0367 g, 23,4% de rendimento).

Composto 20A: LC/MS. MS m/z 720 (M+ + H).

Composto 20B: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,98 (s, 9 H)

9,33 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 720 (M+ + H).

Exemplo 21: Preparação do Composto 21: N-(4,6-dimetila-2- piridinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-4-((3,6-dimetóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

""O

Composto 21

O Composto 21 foi preparado pelo mesmo procedimento que o descrito na etapa 7, Exemplo 17, exceto que o produto da etapa 7, Exemplo (0,253 g, 0,419 mmol) foi usado no lugar do produto da etapa 6, Exemplo 17. O Composto 21 (0,052 g, 15,3% de rendimento) foi obtido como um sal bis-HCI em pó marrom. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,01 (d, J=6,7 Hz,

1 H), 1,10 (d, J=6,7 Hz, 3 H), 1,12 - 1,16 (m, 2 H), 1,23- 1,29 (m, 2 H), 1,30- 1,37 (m, 1 H), 1,43 - 1,49 (m, 1 H), 1,91 - 1,97 (m, 1 H), 2,19 (s, 3 H), 2,26 -

1,00 - 1,09 (m, 2 H) 1,14 - 1,21 (m, 1 H) 1,28 - 1,41 (m, 3 H) 1,88 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1 H) 2,25 (q, J=9,05 Hz, 1 H) 2,31 - 2,39 (m, 1 H) 2,60 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1 H) 2,79 - 2,87 (m, 1 H) 3,92 (s, 3 H) 3,98 (d, J=1,53 Hz,

3 H) 4,08 (dd, J=12,21, 3,36 Hz, 1 H) 4,20 (s, 1 H) 4,45 (d, J=11,90 Hz, 1 H)

4,54 - 4,60 (m, 1 H) 5,15 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,34 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,76

- 5,86 (m, 1 H) 5,91 (s, 1 H) 6,57 - 6,63 (m, 2 H) 6,77 (d, J=8,54 Hz, 2 H)

6,93 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1 H) 7,05 - 7,13 (m, 3 H) 7,87 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 2,34 (m, 1 Η), 2,40 (s, 3 Η), 2,62 - 2,70 (m, 1 Η), 2,89 (s, 1 Η), 2,95 - 3,03 (m,

1 Η), 3,16 - 3,22 (m, 1 Η), 3,92 (s, 3 Η), 3,99 (s, 3 Η), 4,17 (dd, J=12,1, 3,5 Hz, 1 Η), 4,23 - 4,29 (m, 1 Η), 4,50 (d, J=J,0 Hz, 1 Η), 4,64 - 4,70 (m, 1 Η),

5,17 (d, ^7= 10,4 Hz, 1 Η), 5,35 (d, J=17,1 Hz, 1 Η), 5,75 - 5,86 (m, 1 Η), 5,98

(d, J=2,1 Hz, 1 Η), 6,60 (d, J=8,2 Hz, 1 Η), 6,66 (s, 1 Η), 6,87 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1 Η), 7,06 (t, J=2,1 Hz, 1 Η), 7,83 (d, J=9,2 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 748

(M++ H).

Isômeros do Composto 22:

N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida e

N-(4.6-dimetila-2-piridinilaV3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida Exemplo 22: Preparação dos Compostos 22A e 22B:

Cl

O N

Compostos 22A e 22B

Esquema 1 do Exemplo 22 Etapa 1:

Uma pasta de ácido 3-cloro-6-metilbenzoico (17,0 g, 0,10 mol) em cloreto de tionila (23,5 mL, 0,30 mol) foi aquecida lentamente até refluxo suave e mantida nesta temperatura por 2 h. A mistura reacional foi, a seguir, 5 esfriada até TA e o excesso de cloreto de tionila foi removido in vacuo. O resíduo foi ressuspenso em DCM (50 mL), e o solvente foi a seguir removido in vacuo. (ser notado que esse processo foi repetido várias vezes para as- segurar a remoção do cloreto de tionila residual e HCI). O produto resultante foi, a seguir, dissolvido em THF (80 mL), o qual foi usado diretamente na 10 próxima reação conforme descrito abaixo.

Etapa 2:

A uma solução de 30% de amônia (58 mL) em água (240 mL), esfriada por banho de gelo com sal (-10°C) foi adicionada gota a gota uma solução de THF do produto da etapa 1 acima. Depois de completada a adi- 15 ção, a mistura reacional resultante (pasta) foi agitada a -10°C por 1 h. A mis- tura reacional foi a seguir aquecida até a temperatura ambiente e decantada.

O sólido remanescente no frasco reacional foi, a seguir, triturado com água (50 mL). Esse processo de trituração e decantação foi então repetido. O só- lido remanescente foi então filtrado e a massa filtrada foi lavada com água. 20 O sólido foi, a seguir, seco in vacuo de um dia para o outro até rendimento de 13,8 g (82%) do produto desejado como um material cristalino branco. RMN 1H (DMSO-D6) δ ppm 2,33 (s, 3H), 7,24-7,27 (m, 1H), 7,35-7,38 (m , 2H), 7,44 (b, 1H), 7,80 (b, 1H); RMN 13C (100 MHz, DMSO-D6) δ ppm 18,87, 126,64, 128,86, 129,81, 132,31, 134,19, 138,65, 169,41; LC-MS, MS m/z 5 170.

Etapa 3:

Uma mistura do produto da etapa 2 (11,5 g, 68 mmols), DMF- acetal (10,9 mL, 82 mmols) e THF (150 mL) foi aquecida até o refluxo e mantida nesta temperatura por 2 h. A mistura reacional foi, a seguir, esfriada 10 até a temperatura ambiente e os voláteis foram removidos in vacuo. O resí- duo resultante foi recristalizado a partir de hexano (150 mL) para produzir 14,7 g (96%) do produto desejado como agulhas brancas. RMN 1H (DMSO- De) δ 2,49-2,51 (m, 3H), 3,09 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 7,24, 7,27 (d, J=13,5 Hz, 1H), 7,37-7,41 (dd, J1=14 Hz, J2=4,5 Hz, 1H), 7,91, 7,92 (d, J=4,0 Hz, 1H), 15 8,55 (s, 1H); RMN 13C (100 MHz, DMSO-D6) δ ppm 20,69, 35,09, 40,91, 129,50, 129,72, 132,98, 136,86, 138,87, 160,60, 177,04; LC-MS, MS m/z 225.

Etapa 4:

Uma mistura do produto da etapa 3 e KOtBu (14,7 g, 131 mmols) em THF (300 mL) foi aquecida até o refluxo e mantida nesta tempe- ratura por 2 h (mistura reacional se tornou uma solução escura durante o aquecimento). O volume da mistura reacional foi a seguir reduzido por remo- ção por destilação de aproximadamente 100 mL de solvente. A solução re- sultante foi então cuidadosamente vertida em água (1 L) e a mistura resul- tante foi acidificada com HC11 M até um pH final de 4. A mistura foi a seguir filtrada, e o sólido coletado foi lavado totalmente com água, a seguir seco in vacuo de um dia para o outro para produzir 7,0 g (60%) do produto desejado como um pó esbranquiçado. RMN 1H (400 Hz, CD3OD) δ ppm 6,66 (d, J=7,05 Hz, 1 H), 7,18 (d, J=7,05 Hz, 1 H), 7,66 (s, 1 H) 7,67 (d, J=2,01 Hz, 1 H), 8,24 (d, J=2,27 Hz, 1 H); RMN 13C (100 MHz, DMSO-D6) δ ppm 104,05, 125,62, 127,21, 128,54, 129,52, 130,77, 132,43, 136,55, 160,72; LC-MS, MS m/z 180. 1 Etapa 5:

Uma pasta fluida do produto da etapa 4 e NBS (39,747 g, 223,3 mmols) em MeCN (500 mL, anidro) foi lentamente aquecida até um refluxo suave em um período de aproximadamente 2 h e mantida em refluxo suave 5 por 1,5 h (Essa reação pode ser monitorada por LC/MS). A mistura reacional foi a seguir lentamente esfriada até temperatura ambiente por um período de

3 h e o sólido observado foi removido por filtração simples. O sólido coletado foi lavado com MeCN (100 mL x 3 ) para fornecer 47 g do produto desejado. Esse material foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. RMN 10 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,46(s, 1H), 7,81 (dd, J=8,40, 2,00 Hz, 1 H), 7,88 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 8,27(d, J=2,00 Hz, 1 H); RMN 13C (100 MHz, DMSO- De) δ ppm 96,68, 126,34, 127,58, 127,71, 130,73, 132,20, 133,47, 134,46, 159,88; LC-MS, MS m/z 258.

Etapa 6:

Uma solução heterogênea do produto da etapa 5 (47 g, 182

mmols) em POCI3 (200 mL, 2,15 mois) foi lentamente aquecida até o refluxo por um período de 1 h. A mistura reacional foi mantida em refluxo por 4 h. A mistura reacional foi então esfriada até a temperatura ambiente e concentra- da in vacuo para remover o excesso de POCI3. O resíduo resultante foi en- 20 tão ressuspenso em 600 mL de CH2CI2, esfriado até -35°C e, a seguir, neu- tralizado cuidadosamente com NaOH 1 N (400 mL) até a mistura ficar leve- mente básica (pH = 8). A camada orgânica resultante foi separada, lavada com água, seca em MgSO4 e concentrada in vacuo. O resíduo resultante foi cristalizado a partir de EtOAc (aproximadamente 50 mL) para produzir 32 g 25 do produto desejado. O sólido coletado foi lavado com EtOAc 10%/hexanos (3 x 50 mL).

O líquido-mãe foi concentrado e purificado por Biotage (eluição com EtOAc 16% em hexanos) para produzir 4 g do produto desejado como um sólido. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,80 (dd, J=8,81, 2,01 Hz, 1 H), 30 8,14 (d, J=9,06 Hz, 1 H), 8,34 (d, J=1,76 Hz, 1 H), 8,48 (s, 1 H); RMN 13C (100 MHz, DMSO-D6) δ ppm 118,39, 125,06, 127,59, 128,71, 133,89, 134,14, 134,93, 143,18, 148,98; LC-MS, MS m/z 275. Etapa 7:

A uma pasta fluida do produto da etapa 6 (22,16 g, 80 mmols) em THF (500 mL) a -78°C foram adicionados 100 mL de n-BuLi 1,6 M (em hexanos, 160 mmols) gota a gota através de uma cânula durante 15 min 5 (mantendo a temperatura interna < do que -65°C). A solução resultante foi agitada por 0,5 hora, depois de cujo tempo (I-Pro)3B (37 mL, 160 mmols) foi adicionado gota a gota através de uma seringa durante 10 min (mantendo a temperatura interna < do que -65°C). A mistura reacional resultante foi agita- da por 0,5 h. Depois de verificar a reação por LC/MS quanto ao completa- 10 mento, 80 mL de H2O2 30% (776 mmols) foi adicionado gota a gota através de um funila de adição durante 10 min (a temperatura interna foi elevada até -60°C durante a adição), seguido pela adição de 80 mL de NaOH 1 N (80 mmols). O banho de esfriamento foi removido e a mistura reacional foi dei- xada aquecer até a temperatura ambiente e agitada em temperatura ambien- 15 te por mais 1 h. Depois de conformar o completamento da reação por LC/MS, a mistura reacional foi a seguir esfriada até -40°C e uma solução de 100 g de Na2SO3 (0,793 mois) em 400 mL de água foi adicionada gota a go- ta através de um funila de adição como um meio de suprimir o excesso de H2O2 durante 30 min (mantendo a temperatura interna entre 5 e 10°C). A 20 pasta resultante foi a seguir neutralizada com HCI 6 N (aproximadamente 50 mL) a 0°C até pH ~ 6, a seguir foi diluída com 500 mL de EtOAc e decantada para um funila de separação de 2 L. Ao sólido remanescente no frasco rea- cional 500 mL de água foram adicionados e 300 mL de EtOAc, a seguir neu- tralizados com HCI 6 N (aproximadamente 20 mL). As camadas orgânicas 25 combinadas foram lavadas com salmoura (300 mL x 3) a seguir água (200 mL x 3), secas em MgSO4 e concentradas para produzir um produto bruto o qual foi triturado com 50 mL de EtOAc. O sólido foi coletado por filtração, rinsado com EtOAc (3 x 25 mL) e seco para produzir o produto desejado (2 corridas: 12,0 g, 70% e 13,8 g, 81%). Os filtrados foram combinados, con- 30 centrados e purificados por Biotage eluída com EtOAc 35% em hexanos pa- ra produzir 2,1 g do produto. No total, 44,4 g de brometo produziram 27,9 g (81%) do produto 4-OH. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4,05 (s, 3 H), 7,4 (s, 1 Η), 7,76 (dd, J=8,8, 2, Hz, 1 Η), 8,16 (d, J=2 Hz, 1 Η), 8,23 (d, J=8,8 Hz,

1 H); RMN 13C (100 MHz, DMSO-D6) δ ppm 123,78, 124,66, 125,62, 127,03, 127,71, 130,72, 133,80, 137,63; 148,88; LC-MS, MS m/z 213.

Etapa 8:

A uma pasta fluida do produto da etapa 7 (16 g, 75,5 mmols) em

MeOH-MeCN (30 mL/300 mL) a 0°C foi adicionado gota a gota 60 mL de solução 2 M de TMSCHN2 em hexanos (120 mmols). A mistura reacional foi deixada aquecer até a temperatura ambiente, a seguir foi agitada por 14 h. A solução foi, a seguir, concentrada e o sólido resultante foi recristalizado a 10 partir de EtOAc (cerca de 50 mL) para produzir 8,1 g do produto desejado o qual foi lavado com EtOAc 25% em hexanos; 20 x 3 vezes. O líquido-mãe foi concentrado e purificado por Biotage (eluição com EtOAc 16% em hexanos) para fornecer 3,2 g do produto desejado como um sólido. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 4,05 (s, 3 H), 7,67 (dd, J=9,06, 2,01 Hz, 1 H), 7,80 (s, 1 H), 15 8,16 (d, J=8,81 Hz, 1 H), 8,23 (d, J=2,01 Hz, 1 H); RMN 13C (100 MHz, DM- SO-D6) δ ppm 56,68, 122,70, 123,99, 124,14, 126,67, 127,83, 131,43, 134,10, 139,75, 149,94; LC-MS, MS m/z 229.

Esquema 2 do Exemplo 22 Compostos 22 A e 22 B Mistura de isômeros

Etapa 3:

O produto da etapa 2, Exemplo 22 (0,452 g, 1,98 mmol), Boc-IP- OH (0,508 g, 2,20 mmols), e terc-butóxido de potássio (0,672 g, 6,0 mmols) em DMSO (20 mL) foi agitado em temperatura ambiente por 4 horas. A mis- 5 tura foi resfriada bruscamente com água e neutralizada com HCI aquoso 1,0 M. A mistura foi extraída com acetato de etila e o orgânico foi lavado com salmoura, seco em MgSO4 anidro, filtrado e concentrado para produzir um sólido bruto (0,844 g, quantitativo) o qual foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.

Etapa 4:

O produto da etapa 3, Exemplo 22 (0,422 g, 1,00 mmol) foi dis- solvido em diclorometano (10 mL) e DIEA (2 mL). À solução foram adiciona- dos o sal do ácido p-toluenossulfônico da (1-(R)-amino-2-(S)- vinilciclopropanocarbonila)-amida do ácido ciclopropanossulfônico (0,402 g,

1,00 mmol) e HATU (0,600 g, 1,58 mmol) e a mistura foi agitada por 6 horas e concentrada. A purificação por cromatografia em sílica-gel de coluna flash ()1;1 de hexano:acetona) produziu o produto desejado sólido (0,600 g, 94,5% de rendimento). LC-MS, MS m/z 636 (M+ + H).

Etapa 5:

O produto da etapa 4, Exemplo 22 (6,34 g, 9,98 mmols) dissol- vido em metanol (50 mL) foi tratado com HCI 12 M (3 mL) e a mistura foi a- quecida até o refluxo por 2 horas e concentrada. O material bruto foi usado diretamente na etapa seguinte.

Etapa 6:

Uma solução do produto da etapa 5, Exemplo 22 (0,480 g, 0,790 mmol), DIEA (1 mL) e o produto da etapa 2, Exemplo 14 (0,240 g, 0,880 mmol) em DMF (5 mL) foi espargida com nitrogênio. A mistura foi esfriada 15 até 0°C, tratada com HATU (0,456 g, 1,12 mmol) e agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A reação foi, a seguir, aquecida até 46°C por 25 ho- ras. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC preparati- vo em fase reversa para produzir dois produtos separados com MS m/z idên- tico conforme observado por LCMS. O Composto 22A (0,045 g, 7,6% de 20 rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativo em fase reversa. O Composto 22B (0,050 g, 8,4% de rendimento) foi o se- gundo dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativo em fase reversa.

Composto 22A: LC-MS, MS m/z 754 (M+ + H).

Composto 22B: LC-MS, MS m/z 754 (M+ + H).

Exemplo 23: Preparação do Composto 23: 3-metila-N-(4-metila-

5-nitro-2-piridinila)valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N- ((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoílaV2-vinilciclopropila)-L-prolinamida U ° O

HvAnA

Δ SoV

',f(x

Esquema 1

10

Etapa 1:

Uma mistura de 2-bromo-5-nitro-4-picolina (2,00 g, 9,22 mmols), L-terc-leucina (1,27 g, 9,68 mmols) e carbonato de potássio (3,18 g, 23,0 mmols) em DMF anidro (50 mL) foi aquecida até 80°C por 20 h. A mistura foi concentrada in vacuo até o resíduo (aproximadamente 25 mL), a seguir DCM (200 mL) e água (100 mL) foram adicionados e a mistura resultante foi agitada e as duas fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 100 mL) e os extratos orgânicos foram combinados e secos em sulfato de magnésio anidro, filtrados e concentrados in vacuo até um sólido vermelho intenso. Purificação por HPLC preparativa em fase reversa produ- * ziu um sólido amarelo (0,66 g, 27% de rendimento). LC-MS, MS m/z 268 (M+ + H).

Etapa 2:

O produto da etapa 1, Exemplo 23 (0,145 g, 0,543 mmol) foi

5 combinado com o produto da etapa 5, Exemplo 22 (0,300 g, 0,493 mmol) e HATU (0,281 g, 0,740 mmol) em DCM (4 mL). À mistura foi adicionado N- metilmorfolina (0,250 g, 2,47 mmols) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente de um da para o outro, a seguir a 60°C por 3 d. O produto adicional da etapa 1, Exemplo 23 (0,145 g, 0,543 mmol) e HATU 10 (0,281 g, 0,740 mmol) foram adicionados, e a mistura foi agitada em TA de um dia para o outro. A purificação por HPLC preparativo em fase reversa produziu o composto 23 como um sólido laranja/marrom do sal bis-TFA (0,097 g, 19,4% de rendimento). RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,10 (s,

9 H) 1,11 - 1,15 (m, 2 H) 1,23- 1,32 (m, 2 H) 1,43 - 1,50 (m, 1 H) 1,93 (dd, 15 J=8,24, 5,49 Hz, 1 H) 2,24 - 2,32 (m, 2 H) 2,33 (s, 3 H) 2,60 (dd, J= 13,58,

6.87 Hz, 1 H) 2,96 - 3,03 (m, 1 H) 3,99 - 4,03 (m, 1 H) 4,05 (s, 3 H) 4,65 (dd, J=10,68, 7,02 Hz, 1 H) 4,78 - 4,83 (m, 1 H) 4,90 (s, 1 H) 5,16 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1 H) 5,31 - 5,37 (m, 1 H) 5,78 (ddd, J=17,17, 10,15, 9,00 Hz, 1 H)

5.87 (t, J=3,05 Hz, 1 H) 6,29 (s, 1 H) 7,57 - 7,64 (m, 2 H) 7,71 (s, 1 H) 7,76 20 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 8,03 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 9,22 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z

785 (M++ H).

Isômeros do Composto 24:

N-5-pirimidinila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoauinolinila)óxi)-N- ((1 R.2SV1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida 25 e N-5-pirimidinila-D-valila-(4RM-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxO-N- ((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 24: Preparação dos Compostos 24A e 24B Η μ

A

ΚΎΤν

'''A

Compostos 24Α e 24Β Esquema 1

Etapa 1

HCI O I

Pd(OAc)2, NaOt-Bu TBDMSC1, 1,2-DME Iigante fosfino

N

NH

Etapa 2

TFA, DCM

TFA NH

OH

Etapa 3

1

Produto da Etapa 5, Exemplo 22

HATU, DIEA, DCM

N TFA

// NH .OH

Compostos 24A e 24B Mistura de isômeros

10

Etapa 1:

5-bromopiridina (1,15 g, 7,21 mmols) e terc-butóxido de sódio (2,36 g, 24,5 mmols) foram combinados com 1,2-dimetoxietano anidro (15 mL) em um frasco de pressão Chemglass 75 mL. A mistura foi agitada, e uma solução pré-misturada de Pd(OAc)2 (0,0405 g, 0,180 mmol) e (/-?)-(-)-1- [(S)-(dicicloexilfosfino)ferrocenila]etila-di-íerc-butilfosfino (0,100 g, 0,180 mmol, Strem Chemicals # catálogo 26-0975, CAS # [158923-11-6]) em 1,2- dimetoxietano seco (2 mL) foi imediatamente adicionada. Cloridrato do éster L-valina terc-butílico (1,18 g, 5,62 mmols) foi a seguir rapidamente adiciona- do à mistura resultante. O frasco de pressão foi fechado e a mistura foi agi- tada a 110°C por 20 horas. O produto bruto passou por um plugue de sílica- gel (eluição com DCM 100%, a seguir EtOAc 100%) para remover os conta- minantes da linha de base. O solvente foi removido in vacuo e as 300 mg do 5 material bruto recuperado foi purificado por cromatografia em sílica-gel flash (gradiente 4:1 hexanos:EtOAc até 1:! de hexanos:EtOAc) para produzir um sólido amarelo (0,200 g, 14,2% de rendimento). RMN 1 H (500 MHz, cloro- fórmio-d) δ ppm 1,03 (t, J=6,87 Hz, 6 H) 1,45 (s, 9 H) 2,11 - 2,19 (m, 1 H) 3,75 (dd, J=9,16, 5,19 Hz, 1 H) 4,24 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 8,13 (s, 2 H) 8,60 (s, 10 1 H); LC-MS, MS m/z 252 (M++ H).

Etapa 2:

O produto da etapa 1, Exemplo 24 (0,200 g) foi dissolvido em diclorometano (10 mL) e tratado com TFA (10 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 3 h e foi a seguir concentrada in vacuo. O resíduo 15 foi a seguir dissolvido em 1,2-diclorometano (15 mL) e novamente concen- trado in vacuo. O resíduo verde escuro foi a seguir purificado por HPLC pre- parativa em fase reversa para produzir um sólido vítreo verde escuro como sal de HCI (0,091 g, 49% de rendimento). RMN 1H 0,99 (dd, J=9,16, 7,02 Hz,

6 H) 2,14 (td, J=13,28, 6,71 Hz, 1 H) 3,90 (d, J=5,80 Hz, 1 H) 6,32 (s, 1 H) 8,22 (s, 2 H) 8,44 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 196 (M+ + H).

Etapa 3:

Uma mistura do produto da etapa 2, Exemplo 24 (0,084 g, 0,362 mmol), o produto da etapa 5, Exemplo 22 (0,200 g, 0,329 mmol) e HATU (0,188 g, 0,493 mmol) suspensa em DCM (4 mL) foi tratada com NMM 25 (0,167 g, 1,65 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas. O solvente foi removido sob um jato de nitrogênio e a mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa para produzir dois compos- tos separados com MS m/z idênticos. O Composto 24A (0,0902 g, 29,2% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir da columa de HPLC pre- 30 parativa em fase reversa e foi obtido como um sal bis-TFA em pó bege. O Composto 24B (0,0957 g, 30,9% de rendimento) foi o segundo dos dois isô- meros a eluir da coluna de HPLC preparativa em fase reversa e foi obtida como um sal bis-TFA em pó bege.

Composto 24A: RMN 1H (300 MHz1 CD3OD) δ ppm 0,91 (dd, J=6,95, 3,29 Hz, 2 H) 1,04 (d, J=6,59 Hz, 3 H) 1,09 (d, J=6,59 Hz, 3 H) 1,19 - 1,38 (m, 8 H) 1,43 (dd, J=9,51, 5,12 Hz, 1 H) 1,91 (dd, J=8,23, 5,31 Hz, 1 H)

2,03 (s, 1 H) 2,19 - 2,38 (m, 3 H) 2,57 (dd, J=13,54, 7,32 Hz, 1 H) 2,94 - 3,06 (m, 1 H) 4,03 (s, 3 H) 4,06 - 4,21 (m, 2 H) 4,34 (d, J=12,08 Hz, 1 H) 4,57 (dd, J=10,25, 6,95 Hz, 1 H) 5,14 (dd, J=10,61, 1,10 Hz, 1 H) 5,32 (dd, J=17,20, 1,46 Hz, 1 H) 5,72 - 5,87 (m, 1 H) 5,89 (s, 1 H) 7,56 (s, 1 H) 7,70 (dd, J=8,78, 10 2,20 Hz, 1 H) 7,99 (d, J=2,20 Hz, 1 H) 8,07 - 8,16 (m, 3 H) 8,29 (s, 1 H); LC- MS, MS m/z 713 (M+ + H).

Composto 24B: RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ ppm 0,91 (d, J=6,95 Hz, 3 H) 0,95 (d, J=6,59 Hz, 3 H) 0,98 - 1,13 (m, 3 H) 1,20 - 1,31 (m,

2 H) 1,40 (dd, J=9,51, 5,12 Hz, 1 H) 1,90 (dd, J=8,23, 5,31 Hz, 1 H) 1,98 - 15 2,07 (m, 1 H) 2,22 - 2,41 (m, 2 H) 2,57 - 2,66 (m, 1 H) 2,82 - 2,93 (m, J= 7,82, 7,82, 5,12, 4,85 Hz, 1 H) 4,04 (s, 3 H) 4,05 - 4,16 (m, 1 H) 4,23 (d, J=6,95 Hz, 1 H) 4,41 (d, J=12,08 Hz, 1 H) 4,62 (dd, J=QJO, 7,14 Hz, 1 H) 5,15 (dd, J=10,43, 1,65 Hz, 1 H) 5,34 (dd, J=17,20, 1,46 Hz, 1 H) 5,78 (ddd, J=17,20, 10,25, 8,78 Hz, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 7,61 (s, 1 H) 7,73 (dd, J= 8,97, 2,01 Hz1 1 20 H) 7,96 (d, J= 1,83 Hz, 1 H) 8,13 (d, J=9,15 Hz, 1 H) 8,21 (s, 2 H) 8,33 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 713 (M+ + H).

Exemplo 25: Preparação do Composto 25: 3-metila-N-(5-metila-

3-piridinila)valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óx0-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida H

O O

Δ H ο

Composto 25

Esquema 1

Etapa I

HCI O I

H2NvA0J<

Pd(OAc)2, NaOt-Bu TBDMSCI, 1,2-DME Ligante fosfino

EtaPa2

TFA, DCM, a seguir HCl em Et2O

10

Etapa 3

HATU, DIEA, DCM

N HCI

μ O O If ^—NH OH

b^b-Iv

Produto da Etapa 5, Exemplo 22

5>k

Composto 25

Etapa 1:

5-bromo-3-picolina (1,00 g, 5,81 mmols), terc-butóxido de sódio (1,90 g, 19,8 mmols) e cloridrato do éster ferc-leucina ferc-butílico (1,665 g,

6,98 mmols) foram combinados em 1,2-dimetoxietano anidro (20 mL) em um frasco de pressão Chemglass de 75 mL. A mistura foi brevemente agitada, e uma solução pré-misturada de Pd(OAc)2 (0,0652 g, 0,291 mmol) e (ft)-(-)-1- [(S)-(dicicloexilfosfino)ferrocenila]etila-di-terc-butilfosfino (0,161 g, 0,291 mmol, Strem Chemicals # catálogo 26-0975, CAS # [158923-11-6]) em 1,2- dimetoxietano seco (2 mL) foi imediatamente adicionada. O frasco de pres- são foi fechado e a mistura foi agitada a 100°C por 20 horas. A mistura foi vertida em uma mistura rapidamente agitada de tampão pH = 7 (200 mL), HCI 1,0 M aquoso (25 mL) e acetato de etila (100 mL). As fases foram sepa- radas e a aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 50 mL). As fases or- gânicas foram combinadas, secas em sulfato de magnésio anidro, filtradas e 5 concentradas in vacuo até um resíduo. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel flash (gradiente de hexanos a 1:1 hexa- nos:EtOAc) para produzir um óleo vermelho (0,852 g, 52,6% de rendimento). RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,06 (s, 9 H) 1,40 (s, 9 H) 2,23 (s, 3 H) 3,63 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 4,11 (dd, J=8,55, 1,22 Hz, 1 H) 6,74 (s, 1 H) 10 7,81 (s, 1 H) 7,89 (d, J=2,75 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 279 (M+ + H).

Etapa 2:

O produto da etapa 1, Exemplo 25 (0,809 g, 2,91 mmols) foi dis- solvido em diclorometano (20 mL) e tratado com TFA (20 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 20 h e foi a seguir concentrada in va- 15 cuo. O resíduo foi a seguir dissolvido em 1,2-diclorometano (15 mL) e nova- mente concentrado in vacuo para produzir um óleo marrom. O resíduo foi a seguir dissolvido em DC Mínimo e adicionado gota a gota a uma mistura ra- pidamente agitada de HCI 2,0 M em éter (30 mL), éter dietílico (30 mL) e 1,2- DCE (50 mL). A mistura foi agitada por 10 min e foi a seguir concentrada in 20 vacuo. O sólido espumoso marrom resultante foi então ressuspenso em HCI

1,0 M aquoso e a solução foi concentrada in vacuo para produzir um sólido amarelo vítreo (0,600 g, 80% de rendimento). RMN 1H (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,05 (s, 9 H) 2,35 (s, 3 H) 4,02 (d, J=9,77 Hz, 1 H) 7,03 (d, J=9,77 Hz,

1 H) 7,68 (s, 1 H) 7,95 (s, 1 H)8,13(s, 1 H) LC-MS, MS m/z 223 (M+ + H).

Etapa 3:

Uma mistura do produto da etapa 2, Exemplo 25 (0,094 g, 0,362 mmol), o produto da etapa 5, Exemplo 22 (0,200 g, 0,329 mmol) e HATU (0,188 g, 0,493 mmol) suspensa em DCM (2 mL) foi tratada com NMM (0,167 g, 1,65 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 20 30 horas. O solvente foi removido in vacuo e a mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa para produzir o Composto 25 (0,1421 g, 44,7% de rendimento) como um sal bis-TFA de pó branco. RMN 1H (500 MHz1 CD3OD) δ ppm 1,07 - 1,21 (m, 11 Η) 1,23 - 1,34 (m, 2 Η) 1,45 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1 Η) 1,93 (dd, J=8,09, 5,65 Hz, 1 Η) 2,14 (s, 3 Η) 2,22 -

2,32 (m, 2 Η) 2,59 (dd, J=13,73, 7,32 Hz, 1 Η) 2,96 - 3,05 (m, 1 Η) 4,01 (dd, J=12,21, 3,05 Hz, 1 Η) 4,04 (s, 3 Η) 4,26 (s, 1 Η) 4,33 (d, J=12,21 Hz, 1 Η)

4,66 (dd, J=10,22, 7,48 Hz, 1 H) 5,16 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,34 (d, J=17,40 Hz, 1 H) 5,72 - 5,83 (m, 1 H) 5,89 (s, 1 H) 7,48 (s, 1 H) 7,59 (s, 1 H) 7,67 -

7,72 (m, 2 H) 7,81 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 7,96 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 8,11 (d,

J=8,85 Hz, 1 H) 9,27 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 740 (M++ H).

Isômeros do Composto 26:

3-metila-N-(6-metila-3-piridinila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida e 3-metila-N-(6-metila-3-piridinila)-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R.2S)-1 -((ciclopropilsul- fonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida 15 Exemplo 26: Preparação dos Compostos 26A e 26B

mento similar àquele descrito para a preparação do Composto 25, exceto que 5-bromo-2 metilpiridina foi usada no lugar de 5-bromo-3-picolina na eta- 20 pa 1, e as escalas reacionais foram alteradas para os Etapas 2 e 3. Dois compostos isoméricos foram isolados da etapa 3: o primeiro isômero a eluir de uma coluna de HPLC preparativa foi o Composto 26A (0,111 g) isolado como um sal bis-TFA sólido levemente esbranquiçado, e o segundo isômero

Cl

O N

Compostos 26A e 26B

Os Compostos 26A e 26B foram preparados por um procedi- a eluir da coluna de HPLC preparativa foi o Composto 26B (0,0944 g) isola- do como um sal de bis-TFA levemente amarelo. O rendimento combinado para ambos os compostos 26A e 26B foi de 12,2% nos três etapas.

Produto da etapa 1, Exemplo 26: Sólido ceroso vermelho bri- lhante: RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,06 (s, 9 H) 1,40 (s, 9 H) 2,42 (s, 3 H) 3,59 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 4,02 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 6,87 (dd, 1 H) 6,93 (d, 1 H) 7,99 (d, J=2,75 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 279 (M+ + H).

Produto da etapa 2, Exemplo 26: Sólido amarelo; RMN 1H (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,05 (s, 9 H) 2,52 (s, 3 H) 3,98 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 6,84 (d, J=9,77 Hz, 1 H) 7,59 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,81 (dd, J=9,00, 2,59 Hz, 1 H) 8,05 (d, J=2,75 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 223 (M++ H).

Composto 26A: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,07 - 1,18 (m, 11 H) 1,25 - 1,32 (m, 2 H) 1,45 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1 H) 1,93 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1 H) 2,22 - 2,31 (m, 4 H) 2,46 (s, 3 H) 2,60 (dd, J=13,43, 6,71 Hz, 1 H) 2,96 - 3,04 (m, 1 H) 4,00 (dd, J=12,36, 2,90 Hz, 1 H) 4,05 (s, 3 H) 4,23 (s, 1 H) 4,37 (d, J=12,21 Hz, 1 H) 4,65 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1 H) 5,14 - 5,19 (m,

1 H) 5,34 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,77 (ddd, J=17,17, 10,15, 9,00 Hz, 1 H) 5,88 (s, 1 H) 7,05 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 7,53 (dd, J=8,85, 2,75 Hz, 1 H) 7,62 (s, 1 H)

7,73 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,84 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 7,93 (d, J=2,75 Hz, 1 H) 8,14 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 9,25 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 740 (M+ + H).

Composto 26B: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 0,97 (s, 9 H) 1,07

- 1,14 (m, 2 H) 1,18 - 1,24 (m, 1 H) 1,28 - 1,34 (m, 1 H) 1,41 (dd, J=9,46,

5,49 Hz, 1 H) 1,90 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1 H) 2,30 (q, J=8,75 Hz, 1 H) 2,37 (ddd, J=13,89, 9,92, 4,27 Hz1 1 H) 2,58 (s, 3 H) 2,65 (dd, J=13,89, 7,48 Hz, 1 H) 2,93 - 3,00 (m, 1 H) 4,04 (s, 3 H) 4,09 (dd, J=12,21, 3,36 Hz, 1 H) 4,34 (s,

1 H) 4,50 (d, J=11,90 Hz, 1 H) 4,65 (dd, J=9,46, 7,32 Hz, 1 H) 5,16 (d, J=10,07 Hz, 1 H) 5,36 (d, J=17,40 Hz, 1 H) 5,75 - 5,86 (m, 1 H) 5,89 (s, 1 H) 7,57 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 7,62 (s, 1 H) 7,75 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,85 (dd, J=9,00, 2,90 Hz, 1 H) 8,05 (dd, J=4,12, 2,59 Hz, 2 H) 8,15 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 9,56 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 740 (M+ + H). Isômeros do Composto 27:

3-metila-N-(5-(trifluormetila)-3-piridinila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida e 5 3-metila-N-(5-(trifluormetila)-3-piridinila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida

milar àquele descrito para a preparação do Composto 25, exceto que 3- bromo-5-trifluormetilpiridina foi usada no lugar de 5-bromo-3-picolina na eta- pa 1, e as escalas reacionais foram diferentes. Também o produto da etapa

2 não foi isolado como o sal de HCI, ao invés disso foi carregado para o Eta- 15 pa 3 diretamente como um sal de TFA. Dois compostos isoméricos foram isolados da etapa 3: o primeiro isômero a eluir de uma coluna de HPLC pre- parativa foi o Composto 27A (0,128 g) isolado como um sal bis-TFA sólido levemente esbranquiçado, e o segundo isômero a eluir da coluna de HPLC preparativa foi o Composto 27B (0,0564 g) isolado como um sal de bis-TFA 20 levemente esbranquiçado. O rendimento combinado para ambos os compos- tos 27A e 27B foi de 17,9% nos três etapas.

Produto da etapa 1. Exemplo 27: Sólido ceroso laranja: RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,08 (s, 9 H) 1,43 (s, 9 H) 3,66 (d, J=10,07 Hz, 1

Exemplo 27: Preparação dos Compostos 27A e 27B

Cl

O N

F3C

10

Compostos 27A e 27B

Os Compostos 27A e 27B foram preparados por um procedimento si- Η) 4,45 (d, J=10,07 Hz, 1 Η) 7,06 (s, 1 Η) 8,22 (s, 1 Η) 8,24 (d, J=2,75 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 333 (M+ + H).

Produto da etapa 2, Exemplo 27: Sólido vítreo marrom; RMN 1H (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,06 (s, 9 H) 3,90 (s, 1 H) 3,92 (s, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 7,42 (s, 1 H) 8,16 (s, 1 H) 8,40 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 277 (M+ + H).

Composto 27A: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,10 - 1,13 (m, 2 H) 1,15 (s, 9 H) 1,27-1,31 (m, 2 H) 1,45 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1 H) 1,92 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1 H) 2,23 - 2,32 (m, 2 H) 2,57 (dd, J=13,58, 7,17 Hz, 1 H) 2,91 (d, J= 14,04 Hz, 1 H) 2,97 - 3,03 (m, 1 H) 4,02 (s, 3 H) 4,11 (dd, 10 J=12,21, 3,36 Hz, 1 H) 4,29 - 4,35 (m, 2 H) 4,60 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1 H) 5,15 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1 H) 5,33 (d, J=17,09 Hz, 1 H) 5,73 - 5,83 (m, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 7,54 (s, 1 H) 7,55 (s, 1 H) 7,66 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,82 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 8,04 (s, 1 H) 8,08 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 8,23 (s, 1 H) 9,23 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 794 (M+ + H).

Composto 27B: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 0,97 (s, 9 H) 1,04-

1,12 (m, 2 H) 1,21 - 1,28 (m, 2 H) 1,40 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1 H) 1,91 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1 H) 2,30 (q, J=8,65 Hz, 1 H) 2,38 (ddd, J=13,81, 9,84, 4,12 Hz, 1 H) 2,65 (dd, J=13,89, 7,17 Hz, 1 H) 2,87 - 2,98 (m, 1 H) 4,04 (s, 3 H)

4,09 (dd, J= 12,21, 3,36 Hz, 1 H) 4,46 (s, 1 H) 4,55 (d, J=12,21 Hz, 1 H) 4,65 (dd, J=9,46, 7,32 Hz, 1 H) 5,16 (d, J=10,38 Hz, 1 H) 5,36 (d, J=17,40 Hz, 1 H) 5,76 - 5,85 (m, 1 H) 5,89 (s, 1 H) 7,63 (s, 1 H) 7,75 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,78 (s, 1 H) 8,05 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 8,15 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 8,19 (s, 1 H) 8,37 (s, 1 H) 9,56 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 794 (M+ + H).

Isômeros do Composto 28:

3-metila-N-(6-metila-2-piridinila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida e 3-metila-N-(6-metila-2-piridinila)-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsul- fonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

30

Exemplo 28: Preparação dos Compostos 28A e 28B . O O

kVív

'''L

Compostos 28Α e 28B Esquema 1

-Γ-

ΟΗ

ryF

Etapa I

n-BuLi, 2,5 M em hexanos THF, -78°C até rt

10

Etapa 2

1

Produto da etapa 5, Exemplo 22

HATU, DIEA, DCM

TFA

Í~\— NH PH

O

Il

VSitv

Etapa 1:

L-terc-leucina (0,734 g, 5,60 mmols) foi suspensa com agitação em THF seco (10 mL). A suspensão foi esfriada a -78°C, e n-BuLi, 2,5 M em hexanos (4,48 mL, 11,2 mmols) foi adicionado em gotas. A mistura amarela foi agitada a -78°C por 30 min, a seguir o banho gelado foi removido e a suspensão foi deixada aquecer até a temperatura ambiente por 25 minutos. A mistura foi novamente esfriada até -78°C e 2-flúor-6-metilpiridina (0,311 g, 2,80 mmols) foi adicionada gota a gota. A cor mudou de amarelo para laran- ja intenso e finalmente para marrom no decorrer do tempo. O banho gelado foi removido e a mistura foi agitada em TA de um dia para o outro. A mistura bruta foi vertida em solução de cloreto de amônio aquosa rapidamente agi- tada (100 mL) e EtOAc (50 mL) foi adicionado. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 50 mL). A fase aquosa teve que ser saturada com NaCI e extraída com DCM (4 x 100 mL) para remover o produto. Os orgânicos foram combinados e concentrados in vacuo até um 5 resíduo. A purificação do resíduo por HPLC preparativa em fase reversa produziu o produto como um sal TFA óleo amarelo pegajoso (0,279 g, 44,8% de rendimento). RMN 1H (300 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,02 (s, 9 H) 2,49 (s, 3 H) 3,94 (s, 1 H) 3,96 - 4,16 (m, 1 H) 6,54 (d, J=7,32 Hz, 1 H) 6,70 (d, J=8,78 Hz, 1 H) 7,63 - 7,73 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 223 (M+ + H).

Etapa 2:

Uma mistura do produto da etapa 1, Exemplo 28, (0,111 g, 0,329 mmol), do produto da etapa 5, Exemplo 22, (0,200 g, 0,329 mmol) e HATU (0,163 g, 0,428 mmol) suspensa em DCM (2 mL) foi tratada com NMM (0,167 g, 1,65 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente 15 por 20 horas. O solvente foi removido através da concentração sob um jato de nitrogênio, e a mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 28A (0,0916 g, 28,8% de rendimento) foi o primeiro de dois isômeros a eluir da coluna de HPLC preparativa e foi isolado como um sal bis-TFA em pó esbranquiçado. O Composto 28B (0,0353 g, 11,1% de 20 rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a eluir da coluna de HPLC pre- parativa e também foi isolado como um sal bis-TFA em pó esbranquiçado.

Composto 28A: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,09 - 1,14 (m, 2 H) 1,15 (s, 9 H) 1,25 - 1,30 (m, 2 H) 1,46 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1 H)

1,94 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1 H) 2,25 - 2,37 (m, 2 H) 2,45 (s, 3 H) 2,66 (dd, J=13,89, 7,17 Hz, 1 H) 2,99 (ddd, J=12,82, 8,09, 4,73 Hz, 1 H) 4,05 (s, 3 H)

4,09 (dd, J= 12,21, 3,36 Hz, 1 H) 4,40 (d, J=11,90 Hz, 1 H) 4,53 (s, 1 H) 4,69 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1 H) 5,17 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1 H) 5,34 (dd, J=17,24, 1,37 Hz, 1 H) 5,77 (ddd, J=17,17, 10,15, 9,00 Hz, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 6,67 (d, J= 7,32 Hz, 1 H) 6,77 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 7,43 (dd, J=9,00, 7,48 Hz, 1 30 H) 7,64 (s, 1 H) 7,71 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,90 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 8,13 (d, J=8,85 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 740 (M++ H). Composto 28B: RMN 1H (500 MHz1 CD3OD) δ ppm 0,97 (s, 9 H)

1,03 - 1,12 (m, 2 H) 1,13 - 1,20 (m, 1 H) 1,22 - 1,29 (m, 1 H) 1,41 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1 H) 1,91 (dd, J=8,24, 5,19 Hz1 1 H) 2,31 (q, J=8,75 Hz, 1 H) 2,43 (ddd, J=13,96, 9,54, 4,27 Hz, 1 H) 2,54 (s, 3 H) 2,69 (dd, J=14,04,

7,32 Hz, 1 H) 2,86 - 2,96 (m, 2 H) 4,04 (s, 3 H) 4,20 (dd, J=12,21, 3,36 Hz, 1 H) 4,50 (d, J=11,90 Hz, 1 H) 4,65 - 4,71 (m, 2 H) 5,13 - 5,19 (m, 1 H) 5,36 (dd, J=17,24, 1,37 Hz, 1 H) 5,79 (ddd, J=17,24, 10,22, 8,85 Hz, 1 H) 5,92 (s,

1 H) 6,84 (d, J=7,32 Hz, 1 H) 7,06 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 7,63 (s, 1 H) 7,76 (dd, J=9,16, 2,14 Hz, 1 H) 7,96 (dd, J=8,85, 7,32 Hz, 1 H) 8,06 (d, J=2,14 Hz, 1

H) 8,16 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 9,56 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 740 (M+ + H).

Isômeros do Composto 29:

N-(2,6-dimetila-4-piridinila)-3-nrietila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxO-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida e N-(2.6-dimetila-4-piridinila)-3-metila-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopro- pilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

mento similar àquele descrito para a preparação do Composto 25, exceto que bromidrato de 4-bromo-2,6-dimetilpiridina 1.06 (0,980 g, 3,61 mmols) foi usado no lugar de 5-bromo-3-picolina na etapa 1, e as escalas reacionais foram diferentes. Também o produto da etapa 2 não foi isolado como o sal de HCI, ao invés disso foi carregado para o Etapa 3 diretamente como um

Exemplo 29: Preparação dos Compostos 29A e 29B Cl

O N

Compostos 29A e 29B

Os Compostos 29A e 29B foram preparados por um procedi- sal de TFA. Dois compostos isoméricos foram isolados da etapa 3: o primei- ro isômero a eluir de uma coluna de HPLC preparativa foi o Composto 29A (0,127 g) isolado como um sal bis-TFA sólido branco, e o segundo isômero a eluir da coluna de HPLC preparativa foi o Composto 29B (0,103 g) isolado 5 como um sal de bis-TFA sólido branco. O rendimento combinado para am- bos os compostos 29A e 29B foi de 47,8% nos três etapas.

Produto da etapa 1. Exemplo 29: Sólido ceroso marrom claro: RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,04 (s, 9 H) 1,43 (s, 9 H) 2,37 (s, 6 H) 3,71 (d, J=9,77 Hz, 1 H) 4,46 (d, J=9,77 Hz, 1 H) 6,20 (s, 2 H); LC-MS, MS m/z 293 (M+ + H).

Produto da etapa 2, Exemplo 29: Sólido vítreo marrom; RMN 1H (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,03 (s, 9 H) 2,38 (s, 3 H) 2,42 (s, 3 H) 4,17 (d, J=QJJ Hz, 1 H) 6,79 (s, 1 H) 6,88 (s, 1 H) 8,23 (d, J=QJl Hz, 1 H) 13,11 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 237 (M++ H).

Composto 29A: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 0,99 (s, 1 H) 1,05

(s, 9 H) 1,07 - 1,13 (m, 2 H) 1,21 - 1,27 (m, 2 H) 1,42 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1 H) 1,46 (s, 1 H) 1,90 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1 H) 2,12 (s, 3 H) 2,21 - 2,29 (m, 2 H) 2,31 (s, 3 H) 2,60 (dd, J=13,89, 7,48 Hz, 1 H) 2,92 - 3,00 (m, 1 H) 4,01 (s,

3 H) 4,24 (d, J=11,60 Hz1 1 H) 4,35 (d, J=QJT Hz, 1 H) 4,66 (dd, J=10,07, 20 7,32 Hz, 1 H) 5,13 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1 H) 5,31 (dd, J=17,09, 1,22 Hz, 1 H) 5,74 (ddd, J=17,17, 10,15, 9,00 Hz, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 6,49 (d, J=13,12 Hz, 2 H) 7,58 (s, 1 H) 7,66 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,80 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 7,92 (d, J=QJl Hz, 1 H) 8,07 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 9,22 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 754 (M+ + H).

Composto 29B: RMN 1H (500 MHz1 CD3OD) δ ppm 0,92 (s, 9 H)

1,03-1,11 (m, 2 H) 1,19-1,26 (m, 2 H) 1,39 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1 H)1,88 (dd, J=8,24, 5,19 Hz, 1 H) 2,28 (q, J=8,95 Hz, 1 H) 2,36 (ddd, J=14,04, 9,77, 4,27 Hz, 1 H) 2,44 (br s, 6 H) 2,63 (dd, J=14,04, 7,32 Hz, 1 H) 2,93 (ddd, J=12,74, 8,01, 4,58 Hz1 1 H) 4,01 (s, 3 H) 4,06 (dd, J=12,21, 3,36 Hz, 1 H) 30 4,47 (d, J=12,21 Hz1 1 H) 4,52 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 4,63 (dd, J=QJl, 7,32 Hz, 1 H) 5,13 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1 H) 5,33 (dd, J=17,09, 1,53 Hz, 1 H) 5,78 (ddd, J=17,09, 10,38, 8,85 Hz, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 6,71 (br s, 1 H) 6,87 (br s, 1 Η) 7,14 (d, J=9,16 Hz1 1 Η) 7,58 (s, 1 Η) 7,72 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 8,01 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 8,12 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 9,54 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z

754 (M+ + H).

Isômeros do Composto 32:

N-(4.6-dicloro-2-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R^SH-ffciclopropilsulfonilatoarbamoíla)^- vinilciclopropila)-L-prolinamida e

N-(4,6-dicloro-2-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida

mento similar àquele descrito para a preparação do Composto 7, exceto que 15 2,4,6-tricloropiridina (0,658 g, 3,61 mmols) foi usado no lugar de 2- cloropiridina na etapa 1, e as escalas reacionais foram diferentes. Também na etapa 3 o produto da etapa 5, Exemplo 22, foi usado no lugar do produto da etapa 5, Exemplo 1. Dois compostos isoméricos foram isolados da etapa 3: o primeiro isômero a eluir de uma coluna de HPLC preparativa foi o Com- 20 posto 32A (0,0783 g) isolado como um sal bis-TFA sólido esbranquiçado, e o segundo isômero a eluir da coluna de HPLC preparativa foi o Composto 32B (0,0207 g) isolado como um sal de bis-TFA sólido esbranquiçado. O rendi- mento combinado para ambos os compostos 32A e 32B foi de 5,8% nos três etapas.

Exemplo 32: Preparação dos Compostos 32A e 32B

Cl

o N

C

Compostos 32A e 32B

Os Compostos 32A e 32B foram preparados por um procedi- Produto da etapa 1. Exemplo 32: Óleo amarelo; RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,03 (s, 9 H) 1,46 (s, 9 H) 4,10 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 5,13 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 6,33 (d, J= 1,22 Hz, 1 H) 6,60 (d, J=1,22 Hz1 1 H); LC-MS, MS m/z 334 (M+ + H).

Produto da etapa 2. Exemplo 32: Óleo marrom pegajoso; LC-MS, MS

m/z 278 (M+ + H).

Composto 32A: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 - 1,08 (m, 2 H) 1,09 s, 9 H) 1,21 - 1,29 (m, 2 H) 1,41 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1 H) 2,19 - 2,31 (m, 2 H) 2,54 (dd, J=13,58, 6,87 Hz, 1 H) 2,92 - 2,98 (m, J=8,09, 8,09, 4,73, 4,73 Hz, 1 H) 4,00 (s, 3 H) 4,12 (dd, J= 11,75, 3,81 Hz, 1 H) 4,53 (dd, J=10,53, 6,87 Hz, 1 H) 4,68 (d, J= 11,60 Hz,

1 H) 4,72 (s, 1 H) 5,11 (dd, J=10,22, 1,68 Hz, 1 H) 5,28 (dd, J=17,24, 1,37 Hz, 1 H) 5,74 (ddd, J=17,09, 10,22, 9,00 Hz, 1 H) 5,88 (t, J=3,36 Hz, 1 H) 6,26 (d, J=1,22 Hz1 1 H) 6,48 (d, J=1,22 Hz, 1 H) 7,54 (s, 1 H) 7,64 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,82 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 8,05 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 9,14 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 795 (M+ + H).

Composto 32B: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 0,90 (s, 9 H) 0,97 -

1.11 (m, 3 H) 1,26 - 1,37 (m, 2 H) 1,85 (dd, J=8,24, 5,19 Hz, 1 H) 2,23 (q, J=8,95 Hz, 1 H) 2,35 (ddd, J=13,96, 9,84, 4,27 Hz, 1 H) 2,58 (dd, J=13,73,

7,32 Hz, 1 H) 2,81 - 2,88 (m, 1 H) 4,01 (s, 3 H) 4,23 (dd, J= 12,05, 3,51 Hz, 1 H) 4,38 (d, J=12,21 Hz, 1 H) 4,56 (dd, J=9,92, 7,17 Hz, 1 H) 4,90 (s, 1 H)

5.12 (dd, J=10,22, 1,68 Hz, 1 H) 5,31 (dd, J=17,24, 1,37 Hz, 1 H) 5,77 (ddd, J=17,09, 10,38, 8,85 Hz, 1 H) 5,83 (s, 1 H) 6,56 (d, J=1,53 Hz, 1 H) 6,58 (d, J=1,53 Hz, 1 H) 7,61 (s, 1 H) 7,71 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 8,02 (d, J=2,14

Hz, 1 H) 8,11 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 9,35 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 795 (M+ + H). Exemplo 33: Preparação do Composto 33: N-(5-cloro-3-piridinilaV3-

metilvalila-(4R)-4-((7-cloro-4-rnetóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-((1 R.2SV1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida H 0 °

"KlVihv

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Composto 33

O Composto 33 foi preparado por um procedimento similar à- quele descrito para a preparação do Composto 7, exceto que 3,5- dicloropiridina (0,534 g, 3,61 mmols) foi usado no lugar de 2-cloropiridina na 5 etapa 1, e as escalas reacionais foram diferentes. Também na etapa 3 o produto da etapa 5, Exemplo 22, foi usado no lugar do produto da etapa 5, Exemplo 1. O Composto 33 (0,187 g, 9,0% de rendimento nos três etapas) foi isolado como um sólido bege de sal bis-TFA.

Produto da etapa 1. Exemplo 33: Óleo amarelo: RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,06 (s, 9 H) 1,44 (s, 9 H) 3,61 (d, J=10,07 Hz, 1 H) 4,30 (d, J=10,07 Hz, 1 H) 6,91 (t, J=2,29 Hz, 1 H) 7,92 (d, J=1,83 Hz, 1 H)

7,95 (d, J=2,44 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 299 (M+ + H).

Produto da etapa 2, Exemplo 33: Óleo marrom pegajoso; LC- MS, MS m/z 243 (M+ + H).

Composto 33: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 - 1,08 (m,

2 H) 1,09 (s, 9 H) 1,22 - 1,27 (m, 2 H) 1,42 (ddd, J=9,54, 5,42, 0,92 Hz, 1 H)

1,89 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1 H) 2,19 - 2,29 (m, 2 H) 2,56 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1 H) 2,92 - 2,99 (m, 1 H) 3,96 - 4,05 (m, 4 H) 4,21 (s, 1 H) 4,29 (d, J=12,21 Hz, 1 H) 4,60 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1 H) 5,12 (dd, J=10,38, 1,53 20 Hz, 1 H) 5,30 (dd, J=17,09, 1,53 Hz, 1 H) 5,74 (ddd, J=17,09, 10,38, 8,85 Hz, 1 H) 5,84 (s, 1 H) 7,33 (s, 1 H) 7,54 (s, 1 H) 7,65 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,72 (s, 1 H) 7,81 (d, J=1,83 Hz, 1 H) 7,94 (s, 1 H) 8,07 (d, J=8,85 Hz, 1 H)

9,20 (s, 1 H); ; LC-MS, MS m/z 760 (M++ H). Exemplo 35: Preparação do Composto 35: N-(4-etila-1.3-tiazol-

2-ila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

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H°°

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Composto 35 Esquema 1

Etapa I

DIEA, DCM

FmocN=C=S

'“'/λ

Produto da Etapa 2, Exemplo 3

Etapa 2

1. Piperidina, DMF

2. I -bromo-2-butanona, DMF

Etapa 1:

A uma mistura da solução do produto da etapa 2, Exemplo 3 (1,5 g, 2,18 mmols) e DIEA (0,707 g, 5,46 mmols) em DCM (20 mL) foi adi- cionado Fmoc-tioisocianato (0,799, 2,84 mmols). A mistura reacional foi agi- tada por 48 h. A reação não foi completada conforme determinado por LC/MS, a seguir foi adicionado mais Fmoc-tioisocianato (0,307 g, 1,09 mmol). A mistura reacional foi deixada agitar em TA por mais 24 h. Um sub- 5 produto de precipitação sólido branco foi removido por filtração a vácuo e lavado com EtOAc. O filtrado líquido foi concentrado, o resíduo resultante redissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado com 2 x 25 mL H2O. As camadas aquosas foram combinadas e extraídas com EtOAc (50 mL). A camada or- gânica combinada foi lavada com salmoura, seca em MgS04, filtrada e con- 10 centrada até um sólido amarelo. Mais subprodutos não-identificados foram removidos por trituração com EtOAc, esfriados até 0°C; a precipitação sólida foi filtrada e descartada. A filtração do líquido foi concentrada e o resíduo foi purificado através de uma coluna SiO2, a qual foi eluída com 3:1, 1:1 e então 1>3 de hexanos:EtOAc para fornecer o produto da etapa 1, Exemplo 35 15 (0,798 g, 41% de rendimento) como um sólido espumoso amarelo-claro. LC- MS, MS M/Z 895 (M++ H).

Etapa 2:

A uma solução amarela do produto da etapa 1, Exemplo 35 (0,489 g, 0,546 mmol) em DMF (4 mL) foi adicionada piperidina (1 mL). A 20 reação foi agitada em TA. Depois de 5 h, o solvente foi removido sob vácuo e seco para produzir um produto bruto vítreo sólido o qual foi ressuspenso em DMF (5 mL) e tratado com 1-bromo-2-butanona (0,275 g, 1,64 mmol). A mistura reacional foi agitada em TA de um dia para o outro. Depois de 14 h,

o solvente foi removido sob vácuo para produzir um óleo vermelho viscoso, o 25 qual foi redissolvido em MeOH e filtrado para remover a substância tipo gel marrom. O líquido filtrado foi concentrado e o resíduo remanescente foi puri- ficado por HPLC em fase reversa para produzir o Exemplo 35 (139,7, 35% de rendimento) como um sólido amarelo-claro. RMN 1H (500 MHz) δ ppm 0,81 (t, J= 7,5 Hz, 3 H), 1,06 - 1,12 (m, 3 H), 1,14 (s, 9 H), 1,25 - 1,30 (m, 2 30 H), 1,46 (dd, J=9,6, 5,3 Hz, 1 H), 1,91 (dd, J=8,1, 5,3 Hz, 1 H), 1,93 - 1,97 (m, 1 H), 1,99 - 2,07 (m, 1 H), 2,23 - 2,29 (m, 1 H), 2,30 - 2,36 (m, 1 H), 2,59 (dd, J=13,4, 6,7 Hz, 1 H), 3,96 (s, 3 H), 4,15 (dd, J=11,7, 3,8 Hz, 1 H), 4,46 (s, 1 Η), 4,57 (dd, J=10,5, 6,9 Hz, 1 Η), 4,68 (d, J=11,6 Hz, 1 Η), 5,15 (d, J= 10,4 Hz, 1 Η), 5,32 (d, J=17,1 Hz, 1 H), 5,75 (s, 1 H), 5,76 - 5,82 (m, 1 H), 5,90 (s, 1 H), 7,09 (dd, J=8,9, 2,4 Hz, 1 H), 7,23 (d, J=2,4 Hz1 1 H), 7,29 (d, J=5,8 Hz, 1 H), 7,89 (d, J=9,2 Hz, 1 H), 7,93 (d, J=6,1 Hz, 1 H), LC-MS, MS m/z 725 (M+ + H).

Exemplo 36: Preparação do Composto 36: N-(5.6-di-hidro-4H-

1.3-tiazin-2-ila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1 R.2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

""o

O N

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Composto 36

Esquema 1

2HCI

cr N

Etapa I

\ A s —"""' ^ <TVnh / V-X 1

b o K «'üV dJ^dcm y-A T Ws'

cr

N=C=S

~A

Xhtv

Produto da etapa 2, Exemplo 3

Composto 36

Etapa 1:

A uma mistura da solução do produto da etapa 2, Exemplo 3 (0,267 g, 0,389 mmol) e DIEA (0,101 g, 0,778 mmol) em DCM (4 mL) foi adi- cionado Isocianato de 3-cloropropila (0,053 g, 0,389 mmol) e aquecido a 45°C. Depois de 3 h, solvente foi removido e o resíduo foi redissolvido em EtOAc quente com o mínimo de DCM, Et2O foi adicionado para efetuar a precipitação verde claro, o qual foi obtido por filtração. O produto foi purifica- 5 do por HPLC em fase reversa para produzir o Exemplo 36 (0,166 g, 54%) como um sólido de sal de bis-HCI amarelo-claro. RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,12 (s, 9 H), 1,24 - 1,28 (m, 3 H), 1,47 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1 H), 1,94 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1 H), 2,27 - 2,38 (m, 2 H), 2,70 (dd, J=13,7, 7,0 Hz, 1 H), 2,94 - 3,01 (m, 1 H), 3,97 (s, 3 H), 4,05 - 4,10 (m, 1 H), 4,12 (q,

J= 7,3 Hz, 1 H), 4,39 (d, J=11,9 Hz, 1 H), 4,73 (dd, J=10,2, 7,5 Hz, 1 H), 5,17 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1 H), 5,35 (d, J=17,1 Hz, 1 H), 5,74 - 5,83 (m, 1 H), 5,91 (s, 1 H), 7,26 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1 H), 7,30 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 7,35 (d, J=6,1 Hz, 1 H), 7,97 (d, J= 5,8 Hz, 1 H), 8,11 (d, J=9,2 Hz, 1 H), LC-MS, MS m/z 713 (M++ H).

Exemplo 37: Preparação do Composto 37: N-(5,6-di-hidro-4H-

1.3-tiazin-2-ila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-3-(4- (trifluormetóxi)fenila)-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida

O

Composto 37 Esquema 1 Etapa I

Etapa 2

1) Cloreto de oxalila DCM, DCE, cat. DMF

2) NHEt2

O

1) í-BuU

2) 4-OCF3PhCN

OCF3

OCF3

OH

Cl

Etapa 1:

Uma mistura de ácido 4-metóxi-2-metilbenzoico (25,3 g, 152

mmols) em 1:1 DCM:DCE foi tratada com cloreto de oxalila (38,6 g, 304 mmols), seguido pela adição da DMF (0,111 g, 1,50 mmol). Ocorreu uma vigorosa evolução de gás, e a reação ficou eventualmente límpida depois de

1 h. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo sólido branco foi colo- cado sob alto vácuo por 2 h. O material bruto foi redissolvido em DCM (200 mL) e a mistura foi esfriada até 0°C. Dietilamina (22,8 g, 312 mmols) foi adi- cionada gota a gota com agitação. A mistura foi deixada aquecer até a TA 10 por 1 h com agitação. A mistura foi concentrada in vacuo até aproximada- mente 1/3 do volume, e Et2O (300 mL) foi adicionado e a mistura foi esfriada.

O precipitado sólido o qual havia se formado foi removido por filtração. O filtrado foi concentrado para produzir um óleo marrom viscoso o qual foi re- dissolvido em DCM (200 mL) e lavado com HCI 0,1 M (2 x 50 mL). A fase 15 orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada in vacuo para produzir o produto desejado (33,1 g, 98% de rendimento). LC-MS, MS m/z 222 (M+ + H).

metilbenzamida (10,0 g, 45,2 mmols) em THF (150 mL) a -78 0C sob atmos- fera de nitrogênio foi adicionado t-BuLi (29,2 mL de 1,7 M em pentano, 49,7 mmols) gota a gota. A solução vermelha resultante foi mantida nesta tempe- ratura por mais 10 min antes da adição gota a gota de 4- (trifluormetóxi)benzonitrila (9,49 g, 49,7 mmols). A solução marrom foi agita-

Etapa 2:

A uma solução agitada de N,N-dietila-4-metóxi-2- da a -78°C por 2 h; testes por LCMS mostraram a reação incompleta. Desta forma, à mistura foi adicionada uma quantidade extra de 4-(trifluormetóxi)- benzonitrila (3,38 g, 18,1 mmols) e a mistura resultante foi agitada por mais

1 h. A mistura foi, então, deixada aquecer até TA e foi suprimida vertendo em HCI 1,0 M aquoso (50 mL). EtOAc (100 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada e as fases foram separadas. Um precipitado ocorreu na fase de E- tOAc, o qual foi isolado por filtração e deixado secar (3,0 g). Esses 3,0 g de sólido isolado foram determinadas como sendo produto impuro e foi separa- do para posterior purificação. O filtrado de EtOAc foi separado. As lavagens de ácido aquosas foram combinadas e extraídas com DCM (3 x 100 mL). Os extratos de DCM foram combinados, lavados com salmoura, secos em Mg- SO4, filtrados e concentrados in vacuo. Esse resíduo foi combinado com o filtrado de EtOac original e os orgânicos combinados foram concentrados até uma pasta. Um sólido foi isolado por filtração para produzir o produto dese- jado (8,84 g, 58,0% de rendimento). LC-MS, MS m/z 336 (M+ + H).

Etapa 3:

O produto sólido da etapa 2, Exemplo 37 (8,84 g, 26,4 mmols) foi dissolvido em POCI3 (100 mL) e a mistura foi aquecida até o refluxo por 3 h. A mistura foi concentrada in vacuo e ao resíduo resultante foi adicionada 20 água (100 mL) e EtOAc (100 mL). A mistura rapidamente agitada foi tratada lentamente com bicarbonato de sódio sólido até pH = 7 ser alcançado. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 40 mL). Os extratos orgânicos foram combinados e lavados co bicarbonato de sódio aquoso saturado (40 mL) e então com salmoura (40 mL), secos em MgSO4, 25 filtrados e concentrados in vacuo. O produto (9,21 g, 98,7% de rendimento) foi isolado sem cromatografia como um óleo viscoso levemente amarelo. RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 3,97 (s, 3 H) 7,11 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,26 (dd, J=9,46, 2,44 Hz, 1 H) 7,31 (d, J=8,85 Hz, 2 H) 7,84 (s, 1 H) 8,10 (d, J=8,85 Hz, 2 H) 8,20 (d, J=9,46 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 354 (M++H). Esquema 2

HO

O—^

OH

Etapa 4:

A uma solução mecanicamente agitada de Boc-Hyp-OH (6,31 g, 27,3 mmols) em DMSO (100 mL) foi adicionado terc-butóxido de potássio sólido (8,05 g, 68,2 mmols). A mistura foi agitada por 1,5 h, e o produto da 5 etapa 3, Exemplo 37 (20,0 g, 74,2 mmols) foi adicionado em duas porções durante 15 min. A suspensão resultante foi agitada por 3 h em TA. A sus- pensão foi então diluída com uma mistura de tampão pH = 4 (500 mL) e HCI

1,0 M (41 mL) e extraída com EtOAc (3 x 150 mL). Os extratos orgânicos foram combinados e lavados com tampão pH = 4 (75 mL) e a seguir com salmoura (50 mL). Os orgânicos foram, então extraídos co uma mistura de NaOH 1,0 M (30 mL) e água (50 mL) duas vezes, e os extratos básicos combinados foram lavados com EtOAc (30 mL). Os extratos básicos aquo- sos foram tratados com HCI 1,0 M (aproximadamente 60 mL) até ser alcan- çado pH = 4, e o produto desejado foi então extraído em EtOAc (3 x 100 mL). Os extratos foram combinados, secos em MgSO4 e filtrados. O filtrado foi evaporado in vacuo até a secura para produzir um sólido espumoso. O produto desejado (13,2 g, 92,7% de rendimento) foi isolado depois da purifi- cação por cromatografia em coluna de sílica-gel (gradiente da etapa DCM, a seguir 40:1 DCM.MeOH, a seguir 10:1 DCM:MeOH) como um sólido vítreo. LC-MS, MS m/z 549 (M+ + H). Etapa 5:

Uma mistura do produto da etapa 4, Exemplo 37 (12,3 g, 22,4 mmols), NMM (6,80 g, 67,3 mmols) e sal de HCI da (1-(R)-amino-2-(S)- vinilciclopropanocarbonila)-amida do ácido cloropropanossulfônico (6,28 g, 5 23,5 mmols) em DCM (250 mL) foi tratada com HATU (10,23 g, 26,9 mmols) e a solução resultante foi agitada em TA de um dia para o outro. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi ressuspenso em EtOAc (700 mL) e la- vado com tampão pH = 4 (4 x 200 mL) e com salmoura (75 mL). O orgânico foi seco em MgSO4, filtrado e concentrado in vacuo. O produto (13,5 g, 10 79,1% de rendimento) foi isolado após a purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel (1:1 de hexanos:EtOAc) como um sólido vítreo branco. LC-MS, MS m/z 761 (M+ + H).

Etapa 6:

A uma solução do produto da etapa 5, Exemplo 37 (15,0 g, 19,6 mmols) em uma mistura de DCM (50 mL) e 1,2-DCE (50 mL) foi adicionado TFA (100 mL). A mistura foi agitada em TA por 1,5 h e foi, a seguir, concen- trada in vacuo. O resíduo foi determinado como sendo menos do que 85% puro por LCMS. O produto bruto (15,1 g) foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (gradiente da etapa DCM + TEA 0,5% seguido por 50:1 DCM:MeOH + TEA 0,5% seguido por 40:1 DCM:MeOH + TEA 0,5%). As frações de produto puras foram combinadas para produzir o produto deseja- do (9,13 g, 54% de rendimento) a qual foi determinada como tendo 2,0 equi- valentes de TEA associados com ela. As frações misturadas foram combi- nadas e concentradas para produzir 5,27 g de material, o qual foi separado para purificação em um momento posterior. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,81 - 0,91 (m, 2 H) 1,02 - 1,13 (m, 2 H) 1,33 (t, J= 7,32 Hz, 18 H) 1,88 (dd, J=J,63, 4,88 Hz, 1 H) 2,11 (dd, 1 H) 2,48 (ddd, J=14,19, 9,31, 5,19 Hz, 1 H) 2,77 (dd, J=14,34, 7,63 Hz, 1 H) 2,88 (tt, J=8,24, 4,88 Hz, 1 H) 3,22 (q, J=J,32 Hz, 12 H) 3,66 (d, J= 13,12 Hz, 1 H) 3,79 (dd, J=12,97, 4,43 Hz, 1 H) 3,96 (s, 3 H) 4,44 (dd, J=9,31, 7,78 Hz, 1 H) 5,03 (dd, J=10,38, 1,83 Hz, 1 H)

5,24 (dd, J=17,09, 1,83 Hz, 1 H) 5,88 (ddd, J=17,17, 10,15, 9,31 Hz, 1 H) 5,99 (t, J=4,73 Hz, 1 H) 7,19 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1 H) 7,28 (d, J=2,44 Hz, 1 Η) 7,38 (d, J=8,24 Hz, 2 Η) 7,82 (s, 1 Η) 8,19 (d, J=9,16 Hz, 1 Η) 8,22 - 8,27 (m, 2 H); LC-MS, MS m/z 661 (M++H),

Esquema 3

"o

Pioduto do Passo 6, Exemplo 37

Etapa 7:

O produto da etapa 6, Exemplo 37 (6,00 g, 6,95 mmols) foi

combinado com N-Boc-terc-leucina (1,77 g, 7,65 mmols) e HATU (3,17 g,

8,34 mmols) em DCM (75 mL), e a suspensão resultante foi tratada com NMM (1,48 g, 14,6 mmols), e a mistura foi agitada em TA por 3 dias. A mis- tura reacional foi concentrada in vacuo até um resíduo, redissolvida em E- 10 tOAc (250 mL) e lavada com uma mistura 1:1 de tampão pH = 4 e salmoura (4 x 100 mL). Os orgânicos combinados foram secos em MgSO4 anidro, fil- trados e concentrados in vacuo até uma espuma bege. A purificação por cromatografia em coluna de sílica-gel (1:1 hexanos:EtOAc) produziu o pro- duto puro como uma espuma branco-suja (4,62 g, 76,1% de rendimento). 15 LC-MS, MS m/z 874 (M+ + H).

Etapa 8:

O produto da etapa 7, Exemplo 37 (4,61 g, 5,28 mmols) foi tra- tado com uma mistura de 1,4-dioxano (50 mL) e HCI 4,0 M em 1,4-dioxano (50 mL) por 2,5 h, resultando em um gel pegajoso depositado no fundo do frasco. A mistura foi concentrada in vacuo, a seguir o sólido espumoso resul- tante foi redissolvido com DCM (25 mL) e a solução foi adicionada gota a gota a uma mistura rapidamente agitada de éter dietílico (100 mL) e HCI 2,0 5 M em éter (100 mL). Um pó branco precipitou e foi isolado por filtração, rin- sado com éter e seco sob alto vácuo. A recuperação total foi de 3,95 g (88,4% de rendimento) do produto de sal de HCI bis em pó branco. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,09-1,15 (m, 2 H) 1,20 (s, 9 H) 1,23 - 1,32 (m, 2 H) 1,46 (dd, J=9,46, 5,49 Hz1 1 H) 1,94 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1 H) 2,31 (q, 10 J=8,75 Hz, 1 H) 2,42 (ddd, »7=13,96, 10,15, 4,27 Hz, 1 H) 2,77 (dd, J=13,89, 7,17 Hz, 1 H) 2,98 (ddd, J=12,67, 8,09, 4,88 Hz, 1 H) 3,99 (s, 3 H) 4,12 (s, 1 H) 4,25 (dd, 1 H) 4,32 (d, 1 H) 4,74 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1 H) 5,17 (dd, J=10,68, 1,22 Hz, 1 H) 5,33 (dd, J=16,94, 1,07 Hz, 1 H) 5,77 (ddd, J=17,17, 10,15, 9,00 Hz, 1 H) 6,15 (s, 1 H) 7,21 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1 H) 7,34 (d, 15 J=2,14 Hz, 1 H) 7,40 (d, J=8,24 Hz, 2 H) 7,88 (s, 1 H) 8,15 (d, J=9,16 Hz, 1 H) 8,29 (d, J=8,55 Hz, 2 H) 9,25 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 774 (M++H).

Etapa 9:

A uma mistura do produto da etapa 8, Exemplo 37 (0,271 g, 0,320 mmol) e DIEA (0,083 g, 0,641 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado 20 isocianato de 3-cloropropila (0,046 g, 0,336 mmol). A mistura foi aquecida até 45°C por 3 h, a seguir deixada em repouso em TA de um dia para o ou- tro. A mistura reacional foi diluída com DCM (50 mL) e lavada com HCI 0,1 N (3 mL). A camada aquosa foi extraída com DCM (25 mL) e as camadas or- gânicas combinadas foram lavadas com Na2CO3 10% aquoso (3 mL), sal- 25 moura, secas em MgSO4 e concentradas até um sólido espumoso amarelo.

O produto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para produzir

o Composto 37 como um sólido do sal de bis-HCI amarelo-claro. RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,11 (s, 9 H), 1,15 (d, J=1,8 Hz, 1 H), 1,22 - 1,29 (m, 2 H), 1,45 - 1,51 (m, 1 H), 1,78 - 1,87 (m, J=8,9 Hz, 1 H), 1,91 - 1,98 (m, 2 H), 2,31 (q, J=8,6 Hz1 1 H), 2,37 - 2,45 (m, 1 H), 2,70 - 2,84 (m, 2 H), 2,93 -

3,01 (m, 1 H), 3,98 - 4,02 (m, »7=1,5 Hz, 3 H), 4,18 (d, *7=11,3 Hz, 1 H), 4,28 (s, 1 H), 4,34 - 4,42 (m, 1 H), 4,71 - 4,78 (m, 1 H), 5,17 (d, J=10,4 Hz, 1 H), 5,35 (d, J= 17,1 Hz, 1 Η), 5,75 - 5,83 (m, 1 Η), 6,15 (s, 1 Η), 7,24 (d, J=9,2 Hz1 1 Η), 7,37 (s, 1 Η), 7,42 (d, J= 7,9 Hz, 1 Η), 7,91 (s, 1 Η), 8,10 (d, J=9,2 Hz, 1 Η), 8,31 (dd, J=8,9, 1,8 Hz, 2 H); LC-MS, MS m/z 873 (M+ + H).

Isômeros do Composto 38 5 3-metila-N-(6-metila-2-piridinila)-L-valila-(4R)-N-((1 R.2SV-1 -((ciclopropilsul- fonila) carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-5-metóxi-1-isoqui- nolinila)óxi)-L-prolinamida e 3-metila-N-(6-metila-2-piridinila)-D-valila-(4R)-N- ((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((3- (dimetilamino)-5-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida 10 Exemplo 38: Preparação dos Compostos 38A e 38B

mento similar àquele descrito para a preparação do Composto 17, porém com as seguintes exceções: Na etapa 1, ácido 3-metóxi-2-metilbenzoico foi 15 usado no lugar de ácido 4-metóxi-2-metilbenzoico. Na etapa 2, LDA foi subs- tituído por KHMDS. E na etapa 7, o produto da etapa 1, exemplo 28 foi usa- do no lugar do ácido 2-(4,6-dimetilpiridin-2-ilamino)-3-metilbutanoico comer- cialmente disponível. Dois compostos isoméricos foram isolados da etapa 7:

o primeiro isômero a eluir de uma coluna de HPLC preparativa foi o compos- to 38A, e o segundo isômero a eluir da coluna de HPLC preparativa foi o composto 38B.

(100% de rendimento). RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 2,42 (s, 3 H)

\

O

Compostos 38A e 38B

Os Compostos 38A e 38B foram preparados por um procedi-

Produto da etapa 1. Exemplo 38: Sólido levemente amarelo 2,96 (s, 12 Η) 3,80 (s, 3 Η) 6,81 (d, J=7,93 Hz, 1 Η) 7,11 (t, J= 7,93 Hz, 1 Η)

7,25 (d, J=6,71 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 264 (M++ H).

Produto da etapa 2. Exemplo 38: Sólido amarelo (89% de rendimen- to), RMN 1H (500 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 3,04 (s, 6 H) 3,92 (s, 3 H) 5,89 (s, 1 H) 6,92 (d, J=7,63 Hz, 1 H) 7,09 (t, J=7,93 Hz, 1 H) 7,82 (d, J=7,93 Hz,

1 H) 10,69 (s, 1 H); LC-MS, MS m/z 219 (M+ + H).

Produto da etapa 3. Exemplo 38: Sólido amarelo (95% de rendimen- to),RMN 1H (300 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 3,12 (s, 6 H) 3,93 (s, 3 H) 6,77 (d, J=7,32 Hz, 1 H) 6,83 (s, 1 H) 7,09 (dd, J=8,42, 7,68 Hz, 1 H) 7,62 (d, J=8,42 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 237 (M+ + H).

Produto da etapa 4. Exemplo 38: Sólido amarelo (92% de rendimen- to), LC-MS, MS m/z 432 (M++ H).

Produto da etapa 5, Exemplo 38: Sólido amarelo/verde (73% de ren- dimento), LC-MS, MS m/z 644 (M+ + H).

Produto da etapa 6. Exemplo 38: Sólido amarelo (95% de rendimen-

to), LC-MS, MS m/z 544 (M++ H).

Composto 38A (Produto da etapa 7, Exemplo 38,: RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,07 - 1,14 (m, 2 H), 1,15 (s, 9 H), 1,27 (dd, J=4,6, 2,7 Hz, 2 H), 1,43 - 1,49 (m, 1 H), 1,94 (dd, J=8,1, 5,3 Hz, 1 H), 2,25 - 2,36 (m, 2 H), 20 2,41 (s, 3 H), 2,67 (dd, J=13,9, 7,5 Hz, 2 H), 2,95 - 3,02 (m, 2 H), 3,16 (s, 6 H), 3,18 - 3,20 (m, 1 H), 3,99 (s, 3 H), 4,10 (dd, J=12,1, 3,2 Hz, 1 H), 4,38 (d, J=11,9 Hz, 1 H), 4,50 (s, 1 H), 4,69 (dd, J=10,1, 7,3 Hz, 1 H), 5,17 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1 H), 5,34 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1 H), 5,73 - 5,82 (m, 1 H), 5,98 (s, 1 H), 6,64 (dd, J=9,8, 7,3 Hz, 2 H), 6,90 (d, J=6,7 Hz, 1 H), 6,95 (t, 25 J=7,9 Hz, 1 H), 7,30 (dd, J=9,0, 7,5 Hz, 1 H), 7,33 (d, J=J,3 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 748 (M+ + H).

Composto 38B (Produto da etapa 7, Exemplo 38): RMN 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,98 (s, 9 H), 1,05 - 1,10 (m, 2 H), 1,15 (s, 1 H), 1,15 -

1.19 (m, 1 H), 1,23 - 1,28 (m, 1 H), 1,40 (dd, J= 9,6, 5,0 Hz, 1 H), 1,91 (dd, J=8,1, 5,3 Hz, 1 H), 2,31 (q, J=8,7 Hz, 1 H), 2,40 - 2,47 (m, 1 H), 2,54 (s, 3

H), 2,68 (dd, J= 13,9, 7,5 Hz, 2 H), 2,89 - 2,95 (m, 2 H), 3,15 (s, 6 H), 3,18 -

3.20 (m, 1 H), 3,98 (s, 3 H), 4,21 (dd, J=12,1, 3,5 Hz, 1 H), 4,44 (d, J=12,2 Hz1 1 Η), 4,65 (s, 1 Η), 4,66 - 4,69 (m, 1 Η), 5,16 (dd, J=10,4, 1,8 Hz, 1 Η), 5,36 (dd, J=17,2, 1,4 Hz, 1 Η), 5,74 - 5,83 (m, 1 Η), 6,02 (s, 1 Η), 6,84 (d, J= 7,3 Hz, 1 Η), 6,94 (d, J=7,3 Hz, 1 Η), 7,04 - 7,09 (m, 2 Η), 7,47 (dd, J=8,2, 0,9 Hz, 1 Η), 7,96 (dd, J=9,2, 7,3 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 748 (M++ H).

Isômeros do Composto 200:

N-(3-fluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-rnetóxi-1-isoqui- nolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclo- propila)-L-prolinamida e N-(3-fluorfenila)-3-metila-D-valila-(4RV4-((7-cloro-4- metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida

Exemplo 200: Preparação dos Compostos 200A e 200B

Compostos 200A e 200B Esquema 1

O

F.tana 1

1) Ti(O1Pr)4

2) NaB(CN)H3 EtOH

Produto do Exemplo 22, Passo 5

Compostos 200A e 200B Mistura de isômeros

Etapa 1: A uma mistura de 3-fluoranilina (160 mg, 1,299 mmol) e ácido

3,3-dimetila-2-oxobutanoico (220 mg, 1,690 mmol) em um rasco de fundo redondo de 100 mL (RBF) em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária caracte- 5 rística. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (136 mg,

2,16 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aqueci- mento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi mistu- 10 rada com 4 mL de água, formando uma suspensão. O PPT branco foi remo- vido por centrifugação, o resíduo orgânico foi extraído em acetato de etila e a fase orgânica foi seca em !\la2SO4. A evaporação até a secura sob alto vácuo (20 - 40 mícron Hg) em TA formou uma espuma branca a qual foi u- sada na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 226 (M+ + 15 H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(3-fluorfenilamino)-3,3- dimetilbutanoico (0,20 g, 0,888 mmol, da etapa 1, exemplo 200) e (2S,4R)-4- (7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1- (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,10 g, 0,187 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em THF (4 mL) a O0C foi adi- cionado HATU (0,175 g, 0,46 mmol) seguido por diisopropiletilamina (400 μί, excesso). Uma solução amarelo-pálida foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL), lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado e con- centrado, e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS idêntico (m/z 226 para [M + H]+) conforme observado por LCMS. O Composto 200A (0,022 g, 16% de rendimento, não-otimizado) foi 0 primeiro dos dois isômeros a sair por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 200B (0,010 g, 7% de rendimento, não otimizado) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC pre- parativa em fase reversa.

Composto 200A: RMN 1H (400 MHz1 CD3OD) δ ppm 1,12 (s, 9 H), 1,26 - 1,31 (m, 2 H), 1,39 (dd, J=6,71, 4,27 Hz, 2 H), 1,45 (dd, J=9,46, 5 5,49 Hz, 1 H), 1,90 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1 H), 2,19 - 2,32 (m, 2 H), 2,55 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1 H), 2,93 - 3,03 (m, 1 H), 3,69 - 3,78 (m, 1 H), 4,04 (s, 3 H), 4,05 (dd, J=8,85, 3,35 Hz, 1 H), 4,31 (d, J=12,21 Hz, 1 H), 4,55 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1 H), 5,14 (d, J=10,38 Hz, 1 H), 5,32 (d, J=17,09 Hz, 1 H),

5,71 - 5,83 (m, 2 H), 5,89 - 5,98 (m, 1 H), 6,21 (dd, J=8,09, 1,98 Hz, 1 H), 6,25 - 6,32 (m, 1 H), 6,42 - 6,50 (m, 1 H), 7,57 (s, 1 H), 7,70 (dd, J=8,85, 2,14 Hz, 1 H), 7,83 (d, J=1,83 Hz, 1 H), 8,11 (d, J=8,85 Hz, 1 H), 9,19 (br, s,

1 H); LC-MS, MS m/z 743 [M +Hf,

Composto 200B: LC-MS, MS m/z 743 [M +H]+.

Isômeros do Composto 201:

N-(3-metoxifenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinoli-

nila)óxi)-N-((1 R12S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida N-(3-metoxifenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclo- propila)-L-prolinamida Exemplo 201: Preparação dos Compostos 201A e 201B

Compostos 201A e 201B Esquema 1 ο

Etapa I

-»»

1) Ti(OiPr)4

2) NaB(CN)Η3 EtOH

ο

o' N

O

HATU, DIEA, DCM

Etapa 2

O N

0

NH Ph 0

O

Produto do Exemplo 22, Passo 5

Compostos 201A e 201B Mistura de isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 3-metoxianilina (160 mg, 1,299 mmol) e ácido

3,3-dimetila-2-oxobutanoico (220 mg, 1,690 mmol) em um RBF em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescen- te depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, formando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removido por centrifugação. O orgânico foi extraído em acetato de etila e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a secura para produzir uma espuma bran- ca. Esse material foi levado para o próximo etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 238 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(3-metoxifenilamino)-3,3- dimetilbutanoico (0,045 g, 0,189 mmol, da etapa 1, exemplo 201) e (2S,4R)- 4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1- (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida * (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicio- nado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g,

0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro.

5 A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e a seguir lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, concentrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- servado por LCMS. O Composto 201A (0,045 g, 32% de rendimento) foi o 10 primeiro dos dois isômeros a sair por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 201B (0,024 g, 16,2% de rendimento) foi o segundo dos dois isô- meros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 201A:: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 - 1,14 (m, 11 H) 1,21 - 1,32 (m, 2 H) 1,41 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,16 - 2,26 (m, 2 H) 2,48 (dd, J=13,60, 6,80 Hz, 1 H)

2,95 (ddd, J=12,78, 8,12, 4,78 Hz, 1 H) 3,95 - 4,07 (m, 5 H) 4,48 (dd, J=10,58, 7,05 Hz, 1 H) 5,11 (d, J=10,32 Hz1 1 H) 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1 H) 5,65 - 5,73 (m, 2 H) 5,73 - 5,79 (m, 1 H) 6,15 - 6,21 (m, 1 H) 6,27 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 6,36 - 6,42 (m, 1 H) 7,50 (s, 1 H) 7,68 (d, J=9,06 Hz, 1 H) 7,74 (s, 1 20 H) 8,08 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 753 (M+ +H).

Composto 201B: LC-MS, MS m/z 753 (M+ +H).

Isômeros do Composto 202:

3-metila-N-(3-(metilcarbamoíla)fenilaVL-valila-(4RV4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- 25 vinilciclopropila)-L-prolinamida e 3-metila-N-(3-(metilcarbamoíla)fenila)-D- valila-(4RV4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxiVN-((1 R.2SV1 -((ciclopro- pilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 202: Preparação dos Compostos 202A e 202B Produto do Exemplo 22, Passo 5

Compostos 202A e 202B Misturas de isômeros

10

Etapa 1:

A uma mistura de 3-amino-N-metilbenzamida (230 mg, 1,532 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (199 mg, 1,532 mmol) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi termi- nada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, formando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removi- do por centrifugação, o orgânico foi extraído em acetato de etila e seco em * Na2SO4. Evaporada até a secura, a espuma amarela foi obtida e usada na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 265 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido (S)-3,3-dimetila-2-(3- 5 (metilcarbamoíla)fenilamino)butanoico (0,050 g, 0,189 mmol, da etapa 1, exemplo 202) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1- (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicio- nado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 10 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e a seguir lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, a seguir concentrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase 15 reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico confor- me observado por LCMS. O Composto 202A (0,061 g, 41% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase rever- sa. O Composto 202B (0,015 g, 10,2% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

20 Composto 202A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02-1,13

(m, 11 H) 1,20 - 1,30 (m, 2 H) 1,42 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,14 - 2,25 (m, 2 H) 2,47 (dd, J=13,72, 6,92 Hz, 1 H) 2,77 (s, 3 H) 2,95 (ddd, J=12,65, 7,99, 4,78 Hz, 1 H) 3,94 (dd, J=12,21, 3,15 Hz, 1 H) 3,98 (s, 4 H) 4,22 (d, J=12,09 Hz, 1 H) 4,51 (dd, J=10,32, 7,05 Hz, 1 25 H) 5,11 (d, J=10,32 Hz1 1 H) 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1 H) 5,69 - 5,79 (m, 2 H) 6,63 - 6,73 (m, 3 H) 7,01 (s, 1 H) 7,48 (s, 1 H) 7,64 (dd, J=8,94, 2,14 Hz, 1 H)

7,71 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 8,05 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 781 (M+ +H).

Composto 202B: LC-MS, MS m/z 781 (M++H).

30 Isômeros do Composto 203: N-(3-cianofenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida e

N-(3-cianofenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 203: Preparação dos Compostos 203A e 203B

YA

''A

Compostos 203A e 203B Esquema 1

NH-j

Etapa I

OH

1) Ti(OlPr)4

2) NaB(CN)H3 EtOH

-Λ °

Etapa 5

Compostos 203A e 203B Mistura dos isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 3-aminobenzonitrila (180 mg, 1,524 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (198 mg, 1,524 mmol) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição 5 de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, for- mando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removido por centri- fugação, o orgânico foi extraído em acetato de etila e a fase orgânica foi se- 10 ca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a secura. Um óleo amarelo foi obtido e usado na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 233 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido (S)-2-(3-cianofenilamino)-3,3- 15 dimetilbutanoico (0,044 g, 0,189 mmol, Etapa 1, exemplo 203) e (2S,4R)-4- (7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-N-((1 R,2S)-1 -(ciclopropilsulfonilcarba- moíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicionado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução 20 amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e a seguir lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, concentrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer 25 dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme observado por LCMS. O Composto 203A (0,025 g, 17,7% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 203B (0,014 g, 10,0% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 203A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,07 (s, 11

H) 1,19 - 1,31 (m, 2 H) 1,41 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,17 - 2,26 (m, 2 H) 2,51 (dd, J=13,60, 6,80 Hz, 1 H) 2,88 - 2,98 (m, 1 Η) 3,95 - 4,02 (m, 4 Η) 4,02 - 4,05 (S, 1 Η) 4,21 (d, J=12,09 Hz, 1 Η) 4,53 (dd, J=10,32, 7,05 Hz, 1 Η) 5,11 (d, J=10,32 Hz, 1 Η) 5,28 (d, *7=17,12 Hz, 1 Η) 5,68 - 5,78 (m, 2 Η) 6,46 (d, J= 7,30 Hz, 1 Η) 6,57 (t, J=7,93 Hz, 1 Η) 6,63 - 6,68 (m, 1 Η) 6,86 (s, 1 Η) 7,50 (s, 1 Η) 7,64 (dd, J=8,94, 1,38 Hz, 1 H) 7,69

(s, 1 H) 8,05 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 749 (M+ +H).

Composto 203B: LC-MS, MS m/z 749 (M+ +H).

Isômero do Composto 204:

N-(4-(terc-butoxicarbonila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-

1 -isoquinolinila)óxO-N-((1 R.2SV1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinil- ciclopropilaVL-prolinamida N-(4-(terc-butoxicarbonila)fenila)-3-metila-D-vali- la-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopro- pilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 204: Preparação dos Compostos 204A e 204B

o N

Compostos 204A e 204B Esquemal O

Etapa I

1) Ti(OiPr)4

2) NaB(CN)H3 EtOH

OH

O

0

Produto do Exemplo 22, Passo 5

Compostos 204A e 204B Misturas dos isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 4-aminobenzoato de terc-butila (230 mg, 1,190 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (155 mg, 1,190 mmol) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com 5 uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característi- ca. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor perma- neceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmol) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento 10 foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com

4 mL de água, formando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removido por centrifugação. O orgânico foi extraído em acetato de etila e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a secura. Um óleo amarelo foi obtido e usado na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 308 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido (S)-2-(4-(terc- butoxicarbonila)fenilamino)-3,3-dimetilbutanoico (0,058 g, 0,189 mmol, Etapa

1, exemplo 204) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)- 1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicio- nado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro.

A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, concen- trado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme observado por LCMS. O Composto 204A (0,024 g, 15,4% de rendimento) foi o primeiro 10 dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Compos- to 204B (0,020 g, 12,8% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 204A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02-1,11 (m, 11 H) 1,19-1,30 (m, 2 H) 1,41 (dd, J=9,19, 5,41 Hz, 1 H) 1,46 - 1,54 (S, 9 H) 1,86 (dd, »7=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,17 - 2,27 (m, 2 H) 2,54 (dd, *7=13,60, 6,80 Hz, 1 H ) 2,95 (ddd, *7=12,65, 7,99, 4,78 Hz, 1 H) 3,96 - 4,04 (m, 4 H)

4,12 (s, 1 H) 4,37 (d, J=12,09, 1H) 4,55 (dd, *7=10,07, 7,30 Hz, 1 H) 5,10 (d, J=10,58 Hz, 1 H) 5,28 (d, *7=17,58 Hz, 1 H) 5,75 (m, 1H) 5,78 (S, 1 H) 6,42 (d, *7=8,81 Hz, 2 H) 7,28 (d, *7=8,56 Hz, 2 H) 7,52 (s, 1 H) 7,59 (dd, *7=8,94, 2,14 Hz, 1 H) 7,75 (d, »7=1,76 Hz, 1 H) 8,03 (d, »7=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 824 (M+ +H),

Composto 204B: LC-MS, MS m/z 824 (M+ +H).

Isômeros do Composto 205:

N-(4-cianofenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquino- linila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida e N-(4-cianofenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 - isoquinolinila)óxO-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila) carbamoílaV2-vinilciclo- propila)-L-prolinamida

Exemplo 205: Preparação dos Compostos 205A e 205B Compostos 205A e 205B Esquema 1

O

I2 O^A1

O

Il

8V

Etapa I

OH

1) Ti(OiPr)4

2) NaB(CN)H3 EtOH

Produto do Exemplo 22,

Etapa 5 Compostos 205A e 205B

Mistura dos isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 4-aminobenzonitrila (180 mg, 1,524 mmol) e 5 ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (198 mg, 1,524 mmol) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição 10 de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, for- mando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removido por centri- fugação. O orgânico foi extraído em acetato de etila e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a secura. Um óleo amarelo foi ob- tido e usado na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 5 233 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(4-cianofenilamino)-3,3- dimetilbutanoico (0,044 g, 0,189 mmol, etapa 1, exemplo 205) e (2S,4R)-4- (7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-N-((1 R,2S)-1 - 10 (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a 0°C foi adicio- nado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. 15 A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL), lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado e con- centrado, e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- servado por LCMS. O Composto 205A (0,052 g, 37% de rendimento) foi o 20 primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 205B (0,013 g, 9% de rendimento) foi o segundo dos dois isôme- ros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 205A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,99 - 1,09 (m, 11 H) 1,17 - 1,26 (m, 2 H) 1,35 - 1,45 (m, 1 H) 1,87 (dd, J=8,06, 5,29 Hz, 1 H) 2,17 - 2,28 (m, 2 H) 2,56 (dd, >13,85, 7,05 Hz, 1 H) 2,94 (ddd, >12,84, 8,06, 4,78 Hz, 1 H) 3,95 - 4,04 (m, 4 H) 4,08 (s, 1 H) 4,28 - 4,37 (m,

1 H) 4,56 (dd, >10,32, 7,05 Hz, 1 H) 5,05 - 5,13 (m, 1 H) 5,28 (d, >17,12 Hz, 1 H) 5,66 - 5,75 (m, 1 H) 5,78 (s, 1 H) 6,44 (d, >8,81 Hz, 2 H) 6,80 (d, >8,56 Hz, 2 H) 7,46 - 7,54 (s, 1 H) 7,63 - 7,73 (m, 1 H) 7,74 - 7,81 (s, 1 H) 8,02- 8,10 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 749 (M+ +H).

Composto 205B: LC-MS, MS m/z 749 (M+ +H).

Isômeros do Composto 206: N-(3-(terc-butilsulfamoíla)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilci- clopropilaVL-prolinamida e N-(3-(terc-butilsulfamoíla)fenila)-3-metila-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxO-N-((1 R.2SV1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 206: Preparação dos Compostos 206A e 206B

Compostos 206A e 206B Esquema 1

O

Etapa I

cV

HN

Xr

NH2 O- +

OH

1) Ti(OiPr)4

2) NaB(CN)H3 EtOII

HN

OH

Etapa 2

HATU, DlEA, DCM

V

HN

ir

I Δ κ oV

Λ

Produto do Exemplo 22, Passo 5

0^'

[/ NWNH OH hn'

A

Compostos 206A e 206B Mistura dos isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 3-amino-N-terc-butilbenzenossulfonamida

(180 mg, 0,788 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (308 mg, 2,365 mmols) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 5 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e a- quecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, formando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removido por centrifugação. O orgânico foi extraído em ace- tato de etila e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a 10 secura. Um óleo amarelo foi obtido e usado na próxima etapa sem purifica- ção adicional. LC-MS, MS m/z 343 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(3-(N-terc- butilsulfamoíla)fenilamino)-3,3-dimetilbutanoico (0,065 g, 0,189 mmol etapa 1, exemplo 206) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1 R,2S)-

1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a 0°C foi adicio- nado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da 20 base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL), lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, con- centrado, e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- 25 servado por LCMS. O Composto 206A (0,025 g, 15,4% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 206B (0,013 g, 8% de rendimento) foi o segundo dos dois isôme- ros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 206A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,97 - 1,06 (m, 9 H) 1,06 - 1,18 (m, 11 H) 1,18 - 1,29 (m, 2 H) 1,36 - 1,46 (m, 1 H) 1,86 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,18 - 2,29 (m, 2 H) 2,55 (m, 1H) 2,95 (ddd, J= 12,84, 8,06, 4,78 Hz, 1 H) 3,95 - 4,01 (s, 3 H) 4,02 - 4,12 (m, 2 H) 4,26 (d, J=12,09 Hz1 1 Η) 4,51 (dd, J=10,07, 7,05 Hz, 1 H) 5,10 (dd, J= 10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,24 - 5,32 (m, 1 H) 5,73 (m, 2 H) 6,52 (m, 1 H) 6,62 (m, 1 H) 6,86 (m, 1 H) 7,15 (d, J=2,01 Hz1 1 H) 7,50 - 7,56 (s, 1 H) 7,62 - 7,70 (m, 1 H) 7,83 (s, 1 H) 8,01 - 8,09 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 859 (M+ +H).

5

Composto 206B: LC-MS, MS m/z 859 (M+ +H).

Isômeros do Composto 207:

3-metila-N-(3-sulfamoilfenila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquino- linila)óxi)-N-((1 R.2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida e 3-metila-N-(3-sulfamoilfenila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metó- xi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila) carbamoíla)-2-vinil- ciclopropila)-L-prolinamida

dimetilbutanoila)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1-

(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (composto 206A) foi dissolvido em 1 mL de ácido 2,2,2-trifluoracético a 25°C. A mistura foi agitada de um dia para o outro. O TFA foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa. O Composto 207A foi obtido desta for-

Exemplo 207: Preparação dos Compostos 207A e 207B

Compostos 207A e 207B

(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(N-terc-butilsulfamoíla)fenilamino)-3,3- ma como um pó branco (0,012 g, 64% de rendimento). RMN 1H (400 MHz,

procedimento que o usado para a preparação do Composto 207A. LC-MS, MS m/s 803 (M+ + H).

Isômeros do Composto 208:

N-(2.3-difluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isso- quinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilci-

clopropila)-L-prolinamida e N-(2,3-difluorfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7- cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila) car- bamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

5

CD3OD) δ ppm 1,05 - 1,14 (m, 11 H) 1,19 - 1,29 (m, 2 H) 1,41 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 H) 2,17 - 2,26 (m, 2 H) 2,52 (dd, J=13,85, 7,05 Hz, 1 H) 2,95 (ddd, J=12,78, 8,12, 4,78 Hz, 1 H) 3,96 - 4,02 (s,

3 H) 4,02 - 4,10 (m, 2 H) 4,30 (d, J=12,09 Hz, 1 H) 4,52 (dd, J=10,07, 7,05 Hz, 1 H) 5,11 (dd, J=10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,24 - 5,32 (m, 1 H) 5,69 - 5,79 (m,

2 H) 6,49 - 6,55 (m, 1 H) 6,60 (t, J=7,81 Hz, 1 H) 6,87 (d, J=T,55 Hz, 1 H)

7,16 (s, 1 H) 7,51 - 7,55 (s, 1 H) 7,67 (dd, J=8,94, 2,14 Hz, 1 H) 7,85 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 8,07 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 803 (M+ +H).

10

O Composto 207B foi feito a partir do Composto 206B pelo mesmo

Exemplo 208: Preparação dos Compostos 208A e 208B

o N

Compostos 208A e 208B Esquema 1 F

O

Etapa I

F

F

F

NH2 CK. J-L 2+ OH

1) Ti(O1Pr)4

2) NaB(CN)H3 EtOH

Ά

Cl

2 h

O

O

HATU, DIEA, DCM

Etapa 2

F

Oh

O

Produto do Exemplo 22, Etapa 5

Compostos 208A e 208B Mistura dos isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 2,3-difluoranilina (180 mg, 1,394 mmol) e áci- do 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (500 mg, 3,84 mmols) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, for- mando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removido por centri- fugação. O orgânico foi extraído em acetato de etila e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a secura. Um óleo amarelo foi ob- tido e usado na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 244 (M++ H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(2,3-difluorfenilamino)-3,3- dimetilbutanoico (0,046 g, 0,189 mmol etapa 1, exemplo 208) e (2S,4R)-4-(7- cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1 R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)- 2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a 0°C foi adicionado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amare- lo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em tem- 5 peratura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL), e o orgânico foi lavado com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, concentrado e purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme observado por LCMS. O Compos- 10 to 208A (0,026 g, 18,4% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 208B (0,012 g, 9% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC pre- parativa em fase reversa.

Composto 208A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 - 1,12 15 (m, 11 H) 1,21 - 1,26 (m, 2 H) 1,41 (dd, >9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,86 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,17 - 2,28 (m, 2 H) 2,53 (dd, >13,60, 7,05 Hz, 1 H) 2,94 (ddd, >12,72, 8,06, 4,66 Hz, 1 H) 3,96 - 4,02 (m, 4 H) 4,02 - 4,07 (s, 1 H) 4,27 (d, >12,09 Hz, 1 H) 4,53 (dd, >10,45, 7,18 Hz, 1 H) 5,10 (d, >10,32 Hz, 1 H) 5,28 (d, >17,12 Hz, 1 H) 5,68 - 5,75 (m, 1 H) 5,77 (s, 1 H) 20 6,02 - 6,10 (m, 2 H) 6,21 - 6,28 (m, 1 H) 7,55 (s, 1 H) 7,68 (dd, >8,81, 2,01 Hz, 1 H) 7,76 (d, >2,01 Hz, 1 H) 8,09 (d, >8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 760 (M+ +H).

Composto 208B: LC-MS, MS m/z 760 (M+ +H).

Isômeros do Composto 209:

N-(4-carboxifenila)-3-metila-L-valila-(4RV4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquino-

linila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida N-(4-carboxifenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila) carbamoíla)-2-vinilciclo- propila)-L-prolinamida Exemplo 209: Preparação dos Compostos 209A e 209B hoN^TVnh ;ν\λ Ji I hoN^TVnh Pv-l· I I

Γ 2r»tv Γ XViv

Compostos 209A e 209B

TFA

CT N

°vjrVNH λ\-Α X I PvA Jl s

YVIM r K sInV T^-rH, r K »1v

Ί ^ 1

4-((S)-1 -((2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-2-((1 R,2S)-1 - (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropilcarbamoíla)pirrolidin-1-ila)-3,3- dimetila-1-oxobutan-2-ilamino)benzoato de terc-butila (20 mg, 0,024 mmol, composto 204A) foi dissolvido em CH2CI2 (2 mL) a 25 °C. TFA (0,019 mL, 0,243 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada de um dia para o outro. O TFA foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa. O Composto 209A foi obtido desta forma como um pó branco (0,018 g, 95% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 - 1,14 (m, 11 H) 1,18 - 1,29 (m, 2 H) 1,42 (dd, J=9,32, 5,29 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,19 - 2,28 (m, 2 H) 2,55 (dd, J=13,72, 7,18 Hz, 1 H) 2,95 (ddd, J=12,78, 8,12, 4,78 Hz, 1 H) 3,96 - 4,03 (m, 4 H) 4,06 - 4,10 (s, 1 H) 4,36 (d, J=12,34 Hz, 1 H) 4,58 (dd, J=10,32, 7,05 Hz, 1 H) 5,07 - 5,15 (m, 1 H) 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1 H) 5,68 - 5,78 (m, 2 H) 6,38 (d, J=8,81 Hz, 2 H) 7,22 (d, J=8,81 Hz, 2 H) 7,51 (s, 1 H) 7,61 (dd, J=8,81, 2,27 Hz, 1 H) 7,79 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 8,04 (d, J=9,06 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 768 (M+ +H).

O Composto 209B foi feito a partir do Composto 204B pelo mesmo procedimento que foi usado para a preparação do Composto 209A. LC-MS, MS m/z 768 (M+ + H). Isômeros do Composto 210:

N-(3-(terc-butoxicarbonila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-

1 -isoquinolinilatáxO-N-fd R.2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinil- ciclopropila)-L-prolinamida N-(3-(terc-butoxicarbonila)fenila)-3-metila-D-vali- la-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopro- pilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 210: Preparação do Compostos 21OA e 21OB

o

Il ,s.

Compostos 210A e 210B Esquema 1

O

íü"

O

°*A.

Etapa I

OH 1) Ti(OiPr)4

2) NaB(CN)H3 EtOH

NH PH

Produto do Exemplo 22, Etapa 5

O

Il

tv

Compostos 2IOA e 2IOB Mistura dos isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 3-amino-N-terc-butilbenzenossulfonamida (180 mg, 0,788 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (308 mg, 2,365 mmols) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 5 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e a- quecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, formando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removido por centrifugação. O orgânico foi extraído em ace- tato de etila e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a 10 secura. Um óleo amarelo foi obtido e usado na próxima etapa sem purifica- ção adicional. LC-MS, MS m/z 308 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(3-(N-terc- butilsulfamoíla)fenilamino)-3,3-dimetilbutanoico (0,065 g, 0,189 mmol etapa 15 1, exemplo 210) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)- 1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a 0°C foi adicio- nado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da 20 base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL), e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, concentrado e purificado por HPLC preparativa em fase reversa para forne- cer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme observado por 25 LCMS. O Composto 21OA (0,021 g, 13,5% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 21OB (0,020 g, 13,3% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 21 PA: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04-1,14 (m, 11 H) 1,19 - 1,31 (m, 2 H) 1,38 - 1,48 (m, 9 H) 1,50 - 1,60 (m, 1 H)) 1,86 (m, 1 H) 2,15 - 2,24 (m, 2 H) 2,47 (m, 1 H) 2,94 (m, 1 H) 3,92 - 4,04 (m, 4 H)

4,11 (s, 1 H) 4,18 (m, 1 H) 4,46 (m, 1 H) 5,06 - 5,15 (m, 1 H) 5,29 (m, 1 H) 5,67 - 5,77 (m, 2 Η) 6,54 (m, 1 Η) 6,75 (ddd, J=19,83, 7,62, 2,01 Hz, 1 Η)

6,89 (m, 1 Η) 7,31 (s, 1 Η) 7,49 (s, 1 Η) 7,59 - 7,68 (m, 2 Η) 8,04 (t, J=8,44 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 824 (M+ +H).

Composto 21 PB: LC-MS, MS m/z 824 (M+ +H).

Isômeros do Composto 211

N-(3-carboxifenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquino- linila)óxi)-N-(( 1 R.2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida e N-(3-carboxifenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-

1 -isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila) carbamoíla)-2-vinilci- 1P clopropila)-L-prolinamida

Exemplo 211: Preparação dos Compostos 211A e 211B

Compostos 211A e 211B

3-((S)-1 -((2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-2-(( 1 R,2S)-1 - (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropilcarbamoíla)pirrolidin-1-ila)-3,3- 15 dimetila-1-oxobutan-2-ilamino)benzoato de terc-butila (2P mg, 0,024 mmol, composto 210A) foi dissolvido em CH2CI2 (2 mL) a 25 °C, TFA (0,019 ml, 0,243 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada de um dia para o outro. O TFA foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativo. O Composto 211A foi obtido como um pó branco (0,005 g, 26,8% de rendi- mento. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 - 1,14 (m, 11 Η) 1,19 - 1,30 (m, 2 Η) 1,38 - 1,46 (m, 1 Η) 1,86 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 Η) 2,21 (ddd, J=13,91, 9,76, 3,78 Hz, 2 Η) 2,48 (dd, J=13,72, 6,92 Hz, 1 Η) 2,95 (ddd, J=12,84, 8,06, 4,78 Hz, 1 Η) 3,94 - 4,02 (m, 5 Η) 4,15 (d, J=12,09 Hz, 1 Η)

4,46 - 4,56 (m, 1 Η) 5,10 (dd, J=10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,28 (dd, J=17,25, 1,39 Hz, 1 H) 5,68 - 5,78 (m, 2 H) 6,48 - 6,56 (m, 1 H) 6,63 (dd, J=7,81, 2,01 Hz, 1 H) 6,84 (d, J=7,81 Hz, 1 H) 7,17 - 7,28 (m, 1 H) 7,42 - 7,49 (m, 1 H) 7,62 (td, J=8,56, 2,01 Hz, 2 H) 7,97 - 8,05 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 768 (M+ +H).

O Composto 211B foi feito a partir do Composto 21OB pelo

mesmo procedimento que foi usado para a preparação do Composto 211 A. LC-MS, MS m/z 768 (M+ + H).

Isômeros do Composto 212:

N-(3-(terc-butilcarbamoíla)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi- 1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida e

N-(3-(terc-butilcarbamoíla)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-

1-isoquinolinila)óxO-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-

vinilciclopropilaVL-prolinamida

Exemplo 212: Preparação dos Compostos 212A e 212B

Compostos 212A e 212B À solução de ácido 3-((S)-1-((2S,4R)-4-(7-cloro-4- metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-2-((1R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2- vinilciclopropilcarbamoíla)pirrolidin-1-ila)-3,3-dimetila-1-oxobutan-2- ilamino)benzoico (60 mg, 0,078 mmol, composto 211 A) e 2-metilpropan-2- 5 amina (11,42 mg, 0,156 mmol) em cloreto de metileno a O0C foi adicionado HATU (59,4 mg, 0,156 mmol) seguido por diisopropiletilamina (25,2 mg,

0,195 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por duas horas. A mis- tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL), lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado e concen- trado. Um óleo amarelo foi obtido. Purificação por HPLC preparativo forne- ceu o Composto 212A como um pó branco (0,036 g, 56% de rendimento), RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 - 1,14 (m, 11 H) 1,23 - 1,34 (m, 11 H) 1,41 (ddd, J=14,73, 5,29, 5,16 Hz, 1 H) 1,86 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 H) 2,16 - 2,25 (m, 2 H) 2,48 (dd, J= 13,72, 6,92 Hz, 1 H) 2,95 (ddd, J=12,84, 8,06, 4,78 Hz, 1 H) 3,97 - 4,00 (m, 3 H) 4,02 - 4,11 (m, 2 H) 4,26 (d, J=12,34 Hz, 1 H) 4,46 (dd, J=10,20, 6,92 Hz, 1 H) 5,10 (dd, J=10,20, 1,64 Hz, 1 H) 5,23 - 5,31 (m, 1 H) 5,68 - 5,78 (m, 2 H) 6,51 - 6,60 (m, 2 H) 6,69 - 6,78 (m, 1 H) 7,09 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 7,50 - 7,55 (m, 1 H) 7,63 - 7,73 (m, 2 H) 8,07 (d, J=9,06 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 823 (M+ +H).

O Composto 212B foi feito a partir do Composto 211B pelo mesmo procedimento usado para a preparação do Composto 212A. LC-MS, MS m/z 768 (M+ + H).

Isômeros do Composto 213:

3-metila-N-fenila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-

((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida e 3-metila-N-fenila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N- ((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida Exemplo 213: Preparação dos Compostos 213A e 213B

Cl-

Compostos 213A e 213B Esquema 1

NH2

Ί-

Etapa 1

O

Λ

''1L

1) Ti(OlPr)4

2) NaB(CN)H3 EtOH

O

- NH Ph

Etapa 1:

A uma mistura de anilina (180 mg, 1,94 mmol) e ácido 3,3- dimetila-2-oxobutanoico (500 mg, 3,84 mmols) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropoxititânio (2 mL), com uma pipeta. A cor da 10 mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aque- cida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A so- lução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade re- manescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, for- mando uma suspensão, enquanto que o PPT branco foi removido por centri- 5 fugação. O orgânico foi extraído em acetato de etila e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a secura. Um óleo amarelo foi ob- tido e usado na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 208 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-fenilamino-3,3-dimetilbutanoico

(0,039 g, 0,189 mmol etapa 1, exemplo 213) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4- metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2- vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicionado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amare- lo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em tem- peratura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL), lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgâ- nico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, concentrado e o resíduo foi purifi- cado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos se- parados com MS m/z idêntico conforme observado por LCMS. O Composto 213A (0,0032 g, 2,3% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 213B (0,0035 g, 2,3% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC pre- parativa em fase reversa.

Composto 213A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 - 1,10 (m, 2 H) 1,11 - 1,21 (m, 9 H) 1,21 - 1,32 (m, 2 H) 1,35 - 1,46 (m, 1 H) 1,87 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 H) 2,16 - 2,26 (m, 2 H) 2,49 (dd, J=13,85, 6,80 Hz, 1 H) 2,95 (ddd, J=12,84, 8,06, 4,78 Hz, 1 H) 3,94 - 4,02 (m, 4 H) 4,04 - 4,10 30 (m, 2 H) 4,46 (dd, >10,70, 6,92 Hz, 1 H) 5,11 (dd, >10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,29 (dd, >17,12, 1,26 Hz, 1 H) 5,67 - 5,78 (m, 2 H) 6,23 (t, >7,30 Hz, 1 H) 6,58 - 6,63 (m, 2 Η) 6,65 - 6,70 (m, 1 Η) 7,49 - 7,56 (m, 1 Η) 7,67 - 7,76 (m, 2

Η) 8,11 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 724 (M+ +H).

Composto 213B: LC-MS, MS m/z 724 (M+ +H).

Isômeros do Composto 214:

N-(4-(terc-butilsulfamoíla)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilci- clopropila)-L-prolinamida e N-(4-(terc-butilsulfamoíla)fenila)-3-metila-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R.2SV1 -((ciclopropilsul- fonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida 10 Exemplo 214: Preparação dos Compostos 214A e 214B

Cl

o N

Compostos 214A e 214B Esquema 1

Etapa 3

N \\ H O

OH

1) Ti(OiPr)4 \

H^1CW W0

2) NaB(CN)H3 EtOH

T NH_ OH

"A °

2Ί Etapa 5 Compostos de 214A e 214B

Mistura dos isômeros

Etapa 1:

Em cloreto de 4-nitrobenzeno-1-sulfonila (500 mg, 2,256 mmols) em CH2CI2 (20 mL) a 0 - 25°C foi adicionada 2-metilpropan-2-amina (825 5 mg, 11,28 mmols). A mistura foi agitada durante um fim de semana. Uma suspensão marrom clara foi formada. LC-MS, MS m/z 208 (M+ + H) mostrou que a reação foi completa. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (20 mL) e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca e concentrada até a secura. O resíduo foi usado na próxima etapa sem purifi- 10 cação adicional.

Etapa 2:

N-terc-butila-4-nitrobenzenossulfonamida (500 mg, 1,936 mmol) da etapa 1 foi dissolvido em metanol (30 mL). Pd-C foi adicionado sob nitro- gênio. O frasco foi pressurizado com gás hidrogênio até 275 Kpa (40 psi) e agitado em um amarelo Parr de um dia para o outro. Pd-C foi removido por filtração e o solvente foi evaporado até a secura. O resíduo foi usado direta- mente na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 299 (M+ + H).

Etapa 3

A uma mistura de 4-amino-N-terc-butilbenzenossulfonamida

(180 mg, 0,788 mmol, da etapa 2) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (308 mg, 2,4 mmols) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraisopropo- xititânio (2 mL) com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 mi- 10 nutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absolu- to (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de só- dio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulha- mento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A so- lução foi misturada com 4 mL de água, formando uma suspensão. O PPT 15 branco foi removido por centrifugação. O orgânico foi extraído em acetato de etila e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até a secu- ra. Um óleo amarelo foi obtido e foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 343 (M+ + H).

Etapa 4:

À solução amarela de ácido 2-(4-(N-terc-

butilsulfamoíla)fenilamino)-3,3-dimetilbutanoico (0,066 g, 0,189 mmol etapa

1, exemplo 214) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-

1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicionado 25 HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mis- tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, con- 30 centrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- servado por LCMS. O Composto 214A (0,021 g, 13,0% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 214B (0,0022 g, 13,50% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 214A: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 0,98 - 1,06 (m, 9 H) 1,08 - 1,16 (m, 12 H) 1,27 - 1,36 (m, 2 H) 1,46 (dd, >9,46, 5,49 Hz,

1 H) 1,91 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1 H) 2,24 - 2,33 (m, 2 H) 2,60 (d, >6,10 Hz,

1 H) 2,96 - 3,01 (m, 1 H) 4,03 (s, 3 H) 4,09 - 4,13 (m, 2 H) 4,47 (d, >11,90 Hz, 1 H) 4,63 (dd, >10,22, 7,17 Hz, 1 H) 5,15 (d, >10,38 Hz, 1 H) 5,30 -

5,35 (m, 1 H) 5,74 - 5,80 (m, 2 H) 6,52 (d, >8,85 Hz, 2 H) 7,16 (d, >8,85 Hz, 2 H) 7,60 (s, 1 H) 7,71 (dd, >8,85, 2,14 Hz, 1 H) 7,98 (d, >1,83 Hz, 1 H) 8,14 (d, >8,85 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 859 (M+ +H).

Composto 214B: LC-MS, MS m/z 859 (M++H).

Isômeros do Composto 215:

3-metila-N-(4-sulfamoilfenila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoqui- nolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopro-

pila)-L-prolinamida e 3-metila-N-(4-sulfamoilfenila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-

4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropil-sulfonila)carbamoíla)-

2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 215: Preparação dos Compostos 215A e 215B

H3N-

KVIv-nI

Compostos 215A e 215B μ ° °

χΜν

"ίι

(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(N-terc-butilsulfamoíla)fenilamino)-3,3- dimetilbutanoila)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-N-((1 R,2S)-1 - (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (20 mg, 0,024 mmol, composto 214A) foi dissolvido em TFA (2 ml) a 25 °C. A

mistura foi agitada de um dia para o outro. O TFA foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativo. O Composto 215A foi obtido desta for- ma como um pó branco (0,013 g, 69,5% de rendimento), RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ) 1,01 - 1,13 (m, 11 H) 1,27 - 1,37 (m, 2 H) 1,40 - 1,44 (m, 1 H) 1,87 (dd, «7=8,18, 5,41 Hz, 1 H) 2,20 - 2,28 (m, 2 H) 2,57 (dd, J=13,72, 7,18 10 Hz, 1H) 2,92 - 2,98 (m, 1 H) 3,98 - 4,06 (m, 4 H) 4,09 (s, 1 H) 4,37 (d, J=12,09 Hz, 1 H) 4,58 (dd, J=10,07, 7,05 Hz, 1 H) 5,11 (dd, J=10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,32 (m, 1 H) 5,69 - 5,78 (m, 2 H) 6,48 - 6,53 (m, 2 H) 7,19 - 7,26 (m, 2 H) 7,53 - 7,56 (s, 41H) 7,65 (dd, J=8,94, 2,14 Hz, 1 H) 7,90 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 8,07 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 803 (M+ +H).

O Composto 215B foi feito a partir do Composto 214B pelo mesmo

procedimento que aquele usado para a preparação do Composto 215A. LC- MS, MS m/z 803 (M+ + H).

Isômeros do Composto 216:

3-metila-N-(3-((1-metila-1-feniletila)carbamoíla)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7- cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R.2SV1 -((ciclopropilsulfonila)carba- moíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida e 3-metila-N-(3-((1-metila-1-feniletila) carbamoíla)fenila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N- ((1 R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida Exemplo 216: Preparação dos Compostos 216A e 216B Compostos 216A e 216B

A uma solução de ácido 3-((S)-1-((2S,4R)-4-(7-cloro-4- metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-2-((1 R,2S)-1 -(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2- vinilciclopropilcarbamoíla)pirrolidin-1-ila)-3,3-dimetila-1-oxobutan-2- ilamino)benzoico (60 mg, 0,078 mmol, composto 211 A) e 2-fenilpropan-2- amina (21,12 mg, 0,156 mmol) em cloreto de metileno a O0C foi adicionado HATU (59,4 mg, 0,156 mmol) seguido por diisopropiletilamina (25,2 mg, 0,195 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por duas horas. A mis- tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado e con- centrado para produzir um óleo amarelo. A purificação por preparativo forne- ceu o Composto 216A como um pó branco (0,056 g, 81% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 - 1,13 (m, 11 H) 1,19 - 1,30 (m, 2 H)

1,41 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,63 (d, J=5,79 Hz, 6 H) 1,85 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,16 - 2,25 (m, 2 H) 2,49 (dd, J=13,72, 6,92 Hz, 1 H) 2,91 -

2,98 (m, 1 H) 3,99 (s, 3 H) 4,06 (dd, J=12,09, 3,53 Hz, 1 H) 4,10 (s, 1 H) 4,30 (d, J=12,09 Hz, 1 H) 4,46 (dd, J=10,07, 7,05 Hz, 1 H) 5,10 (dd, J=10,45, 1,64 Hz, 1 H) 5,25-5,29 (dd, J=17,12, J=1,51 Hz, 1H) 5,68 - 5,79 (m, 2 H) 6,52 - 6,59 (m, 2H) 6,82 (dd, J=6,42, 1,89 Hz, 1 H) 7,10 - 7,13 (m, 2 H) 7,17 - 7,23 (m, 2 Η) 7,29 - 7,34 (m, 2 Η) 7,54 (s, 1 Η) 7,67 (dd, J=8,94, 2,14 Hz, 1 Η) 7,74 (d, J=2,01 Hz, 1 Η) 8,09 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 886 (M+ +H),

O Composto 216 foi feito a partir do Composto 211B pelo mes-

mo procedimento que foi usado para a preparação do Composto 216A. LC- MS, MS m/z 886 (M+ + H).

Isômeros do Composto 217 5 N-(3-carbamoilfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquino- linila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida e N-(3-carbamoilfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4- metóxi-1 -isoquinolinila)óxO-N-(( 1 R.2SV1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida 10 Exemplo 217: Preparação dos Compostos 217A e 217B

(2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1- (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)-1-((S)-3,3-dimetila-2-(3-(2- fenilpropan-2-ilcarbamoíla)fenilamino)butanoila)pirrolidina-2-carboxamida (50 mg, 0,056 mmol composto 216A) foi dissolvido em 1 ml de ácido 2,2,2- trifluoracético a 25 °C, A solução resultante foi agitada de um dia para o ou-

o

n

Compostos 217A e 217B

O

O tro. O TFA foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativo para produzir o Composto 217A como um pó branco (0023 g, 46% de rendimen- to). RMN 1H (400 MHz1 CD3OD) δ ppm 1,03 - 1,12 (m, 11 H) 1,19 - 1,30 (m,

mesmo procedimento usado para a preparação do Composto 217A. LC-MS, MS m/z 767 (M+ + H).

Isômeros do Composto 218:

N-(3-(dimetilcarbamoíla)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclo- propila)-L-prolinamida e N-(3-(dimetilcarbamoíla)fenila)-3-metila-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1 R.2S)-1-((ciclopropilsul- fonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida 20 Exemplo 218: Preparação dos Compostos 218A e 218B

2 H) 1,42 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,16 -

2,26 (m, 2 H) 2,49 (dd, J=13,72, 6,92 Hz, 1 H) 2,92 - 2,99 (m, 1 H) 3,96 - 4,05 (m, 5 H) 4,20 (t, J=11,83 Hz, 1 H) 4,51 (dd, J=10,58, 7,05 Hz, 1 H)5,11 (dd, J=10,32, 1,76 Hz, 1 H) 5,29 (dd, J=17,25, 1,39 Hz, 1 H) 5,69 - 5,79 (m, 2 H) 6,56 - 6,66 (m, 2 H) 6,76 (d, J= 7,55 Hz, 1 H) 7,11 (d, J= 1,76 Hz, 1 H) 7,47

- 7,52 (s, 1 H) 7,66 (dd, J=8,81, 2,27 Hz, 1 H) 7,74 (d, J=1,76 Hz, 1 H) 8,07

(d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 767 (M+ +H).

O Composto 211B foi feito a partir do Composto 216B pelo

/

N

Compostos 218A e 218B À solução de ácido 3-((S)-1-((2S,4R)-4-(7-cloro-4- metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-2-((1R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2- vinilciclopropilcarbamoíla)pirrolidin-1-ila)-3,3-dimetila-1-oxobutan-2-ilamino) benzoico (60 mg, 0,078 mmol, composto 211A) e cloridrato de dimetilamina 5 (12,6 mg, 0,156 mmol) em cloreto de metileno a O0C foi adicionado HATU (59,4 mg, 0,156 mmol) seguido por diisopropiletilamina (25,2 mg, 0,195 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por duas horas. A mistura rea- cional foi diluída com acetato de etila (25 ml_) e a seguir lavada com água 10 (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado e con- centrado até um óleo amarelo.Purificação por HPLC preparativa produziu o Composto 218A como um pó branco (0,035g, 58% de rendimento), RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 - 1,13 (m, 11 H) 1,16 - 1,28 (m, 2 H) 1,38 -

1,45 (m, 1 H) 1,86 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 H) 2,18 - 2,27 (m, 2 H) 2,51 (dd, 15 J=13,72, 6,92 Hz, 1 H) 2,77 - 2,87 (m, 3 H) 2,91 - 3,00 (m, 4 H) 3,96 - 4,07 (m, 5 H) 4,23 (d, J=12,34 Hz, 1 H) 4,48 (dd, J=10,32, 7,05 Hz, 1 H) 5,11 (dd, J=10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,28 (dd, J=17,12, 1,51 Hz, 1 H) 5,69 - 5,79 (m, 2 H) 6,30 - 6,36 (m, 1 H) 6,47 - 6,54 (m, 2 H) 6,76 (d, J=1,26 Hz, 1 H) 7,52 - 7,56 (m, 1 H) 7,68 (dd, J=8,94, 2,14 Hz, 1 H) 7,81 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 8,04 - 8,11 20 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 795 (M+ +H).

O Composto 218B foi feito a partir do Composto 217B pelo mesmo procedimento usado para a preparação do composto 218A. LC-MS, MS m,/z 795 (M+ + H).

Isômeros do Composto 219:

N-(3-(dimetilsulfamoíla)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-

isoquinolinila)óxO-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida e N-(3-(dimetilsulfamoíla)fenila)-3-metila-D- valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxO-N-((1 R.2SV1 -((ciclo- propilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 219: Preparação dos Compostos 219A e 219B Cl-

O

Il

■ S,

Ά 's'___

Δ SüV

Compostos 219A e 219B Esquema 1

oj

NH,

OH

Etapa 1

1) HOAc

2) NaB(CN)H3 MeOH

10

Etapa 2

vA

X TüV

HATU, DlEA, DCM

I

Produto do Exemplo 22, Etapa 5

Mistura de isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 3-amino-N,N-dimetilbenzenossulfonamida (203 mg, 1,014 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (264 mg, 2,027 mmols) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado ácido acético (2 ml_), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária caracte- rística. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 120 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com metanol (2 ml_) em TA, se- guido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. Foram adicionados 30 mL 5 de água à mistura, a seguir isso foi extraído com 10 mL de acetato de etila (ajustar o pH para 4). A seguir o orgânico foi lavado com bicarbonato de só- dio em pH = 8. A camada orgânica foi seca em Is^SO4, filtrada e concentra- da. O resíduo oleoso foi seco sob vácuo. Um óleo amarelo foi obtido e foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS 10 m/z 315 (M++ H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(3-(N,N-dimetilsulfa- moíla)fenilamino)-3,3-dimetilbutanoico (59,4 mg, 0,189 mmol, etapa 1, e- xemplo 219) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1 R,2S)-1- (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida

(0,150 g, 0,28 mmol, etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicionado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mis- 20 tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, con- centrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- servado por LCMS. O Composto 219A (0,062 g, 39,5% de rendimento) foi o 25 primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 219B (0,038 g, 24,2% de rendimento) foi o segundo dos dois isô- meros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 219A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02-1,12 (m, 9 H) 1,17 - 1,20 (m, 2 H) 1,22 - 1,29 (m, 2 H) 1,32 - 1,44 (m, 1 H) 1,87 (dt, J=8,25, 5,57 Hz, 1 H) 2,16 - 2,28 (m, 2 H) 2,46 - 2,57 (m, 7 H) 2,90 - 2,98 (m, 1 H) 3,96 - 4,00 (s, 3 H) 4,03 - 4,10 (m, 2 H) 4,30 (t, J= 11,96 Hz, 1 H) 4,47 - 4,58 (m, 1 H) 5,10 (dd, J=10,32, 1,76 Hz, 1 H) 5,29 (ddd, J=17,12, 7,93, 1,39 Hz, 1 Η) 5,68 - 5,79 (m, 2 Η) 6,55 - 6,67 (m, 3 Η) 7,02 (s, 1 Η) 7,50 - 7,55 (m, 1 Η) 7,63 - 7,69 (m, 1 Η) 7,81 (d, J=2,01 Hz, 1 Η) 8,02 - 8,09 (m, 1 H); LC-

MS, MS m/z 831 (M++H),

Composto 219B: LC-MS, MS m/z 831 (M++H),

Isômeros do Composto 220:

N-(3.4-difluorfenilaV3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinoli- nila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L- PiOlinamida e N-(3,4-difluorfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi- l-isoquinolinilatóxO-N-fnR^SH-ffciclopropilsulfonilatoarbamoílaKZ-vinilci- clopropila)-L-prolinamida

Exemplo 220: Preparação dos Compostos 220A e 220B

o N

Compostos 220A e 220B Esquema 1 ο

Etapa I

F

F

I

-►

1) HOAc ρ H

2) NaB(CN)H3

MeOH

Cl

O

-►

HATU, DIEA1 DCM

Etapa 2

Produto do Exemplo 22, Etapa 5

Compostos 220A e 220B Mistura de isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 3,4-difluoranilina (180 mg, 1,394 mmol) e áci- do 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (500 mg, 3,84 mmols) em um RBF de 25 mL

por cerca de 120 minutos. A solução foi diluída com metanol (2 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. Foram adicionados 30 mL de água à mistura, a seguir isso foi extraído com 10 mL de acetato de etila 10 (ajustar o pH para 4). A seguir o orgânico foi lavado com bicarbonato de só- dio em pH = 8. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentra- da. O resíduo oleoso resultante foi seco sob alto vácuo. Um óleo amarelo foi obtido e usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LC- MS, MS m/z 244 (M+ + H).

Etapa 2:

dimetilbutanoico (0,046 g, 0,189 mmol, etapa 1, exemplo 208) e (2S,4R)-4- (7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1-

(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicionado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A

em TA foi adicionado 2 mL de ácido acético. A solução foi aquecida até 75°C

À solução amarela de ácido 2-(3,4-difluorfenilamino)-3,3- mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mis- tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, con- centrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa 5 para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- servado por LCMS. O Composto 220A (0,033 g, 23,0% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 220B (0,026 g, 19% de rendimento) foi o segundo dos dois isôme- ros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 220A: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,07 - 1,16

(m, 11 H) 1,23 - 1,31 (m, 2 H) 1,41 - 1,49 (m, 1 H) 1,90 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1 H) 2,21 - 2,29 (m, 2 H) 2,55 (dd, J=13,58, 6,56 Hz, 2 H) 2,92 - 3,00 (m, 1 H) 3,88 - 3,95 (s, 1 H) 3,97 - 4,04 (m, 4 H) 4,27 (d, J=12,21 Hz, 1 H) 4,57 (dd, J= 10,53, 7,17 Hz, 1 H) 5,14 (d, J= 10,38 Hz, 1 H) 5,32 (d, J=17,40 Hz, 1 15 H) 5,73 - 5,81 (m, 2 H) 6,15 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 6,26 - 6,34 (m, 1 H) 6,44 (ddd, J=13,12, 6,71, 2,75 Hz, 1 H) 7,55 (s, 1 H) 7,66 - 7,73 (m, 1 H) 7,80 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 8,07 - 8,14 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 760 (M+ +H),

Composto 220B: LC-MS, MS m/z 760 (M+ +H).

Isômeros do Composto 221:

N-(4-(dimetilcarbamoíla)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilci- clopropilaVL-prolinamida e N-(4-(dimetilcarbamoíla)fenila)-3-metila-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropil- sulfonila)carbamoílaV2-vinilciclopropilaVL-prolinamida 25 Exemplo 221: Preparação dos Compostos 221A e 221B

Compostos 221A e 221B Λ\ι

O O

KJL

(I

A uma solução de ácido 4-((S)-1-((2S,4R)-4-(7-cloro-4- metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-2-((1R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2- vinilciclopropilcarbamoíla)pirrolidin-1-ila)-3,3-dimetila-1-oxobutan-2- ilamino)benzoico (20 mg, 0,026 mmol, composto 209A) e cloridrato de dime- tilamina (4,2 mg, 0,052 mmol) em cloreto de metileno a 0°C foi adicionado HATU (20 mg, 0,052 mmol) seguido por diisopropiletilamina (8,4 mg, 0,065 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por duas horas. A mistura rea- cional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado e concentrado até um óleo amarelo. A purificação por HPLC preparativo forneceu o Com- posto 221A como um pó branco (0,04 g, 19% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02 - 1,13 (m, 11 H) 1,20 - 1,33 (m, 2 H) 1,41 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,86 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,18 - 2,30 (m, 2 H) 2,57 (dd, J= 13,72, 7,18 Hz, 1H) 2,77 - 2,89 (s, 3 H) 2,89 - 3,00 (m, 4H) 3,99 -

4,09 (m, 5 H) 4,48 (d, J=12,84 Hz, 1 H) 4,55 (dd, J=10,58, 7,05 Hz, 1 H) 5,11 (dd, J= 10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,28 (dd, J=17,12, 1,26 Hz, 1 H) 5,68 - 5,80 (m, 2 H) 6,41 (d, J=8,81 Hz, 2 H) 6,66 (d, J=8,81 Hz, 2 H) 7,61 (s, 1 H) 7,69 (dd, J=8,94, 2,14 Hz, 1 H) 7,92 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 8,12 (d, J=9,07 Hz, 1 H); LC- MS, MS m/z 795 (M+ +H).

O Composto 221B foi feito a partir do Composto 209B pelo mesmo procedimento usado para a Preparação do Composto 221 A. LC-MS, MS m/z 795 (M+ + H).

Isômeros do Composto 222:

3-metila-N-(4-(( 1 -metila-1 -feniletila)carbamoíla)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7-

cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)c ar- bamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida e 3-metila-N-(4-((1-metila-1- feniletila)carbamoíla)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoauinolinila) óxi)-N-((1 R^SH-ffciclopropilsulfonila) carbamoíla)-2-vinilciclo-propila)-L- prolinamida

5 Exemplo 222: Preparação dos Compostos 222A e 222B

Compostos 222A e 222B

Compostos 222A e 222B Mistura de isômeros

À solução de ácido 4-((S)-1-((2S,4R)-4-(7-cloro-4- metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-2-((1 R,2S)-1 -(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2- vinilciclopropilcarbamoíla)pirrolidin-1-ila)-3,3-dimetila-1-oxobutan-2-ilamino) 10 benzoico (60 mg, 0,078 mmol, composto 209A) e 2-fenilpropano-2-amina (10,56mg, 0,078 mmol) em cloreto de metileno a O0C foi adicionado HATU (60 mg, 0,156 mmol) seguido por diisopropiletilamina (25 mg, 0,21 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por duas horas. A mistura reacional foi 15 diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e sal- moura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado e concentrado até um óleo amarelo. A purificação por HPLC preparativa forneceu dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme observado por LCMS. Composto 222A: Pó branco (0,01 g, 14,6% de rendimento) RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 - 1,12 (m, 11 H) 1,20 - 1,26 (m, 2 H) 1,41 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,70 (d, J= 3,02 Hz, 6 H) 1,87 (dd, J=8,18, 5,41 Hz,

1 H) 2,18 - 2,27 (m, 2 H) 2,54 (dd, J=13,72, 6,92 Hz, 1 H) 2,92 - 2,98 (m, 1

H) 3,95 - 4,06 (m, 4 H) 4,11 (s, 1 H) 4,38 (d, J=12,09 Hz, 1 H) 4,55 (dd, J=10,07, 7,05 Hz, 1 H) 5,11 (dd, J=10,45, 1,64 Hz, 1 H) 5,26 -5,30 (dd, J=17,12 , J=1,26 Hz, 1 H)) 5,69 - 5,80 (m, 2 H) 6,49 (d, J=8,81 Hz, 2 H) 7,12

- 7,17 (m, 1 H) 7,22 - 7,28 (m, 3 H) 7,33 - 7,40 (m, 2 H) 7,54 (s, 1 H) 7,60 (dd, J=8,94, 2,14 Hz, 1 H) 7,83 (d, J=2,27 Hz, 1 H) 8,04 (d, J=9,06 Hz, 1 H);

LC-MS, MS m/z 886 (M+ +H).

Composto 222B: LC-MS, MS m/z 886 (M+ +H).

Isômeros do Composto 223:

N-(4-(etilsulfamoíla)fenilaV3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxiV-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilci- clopropila)-L-prolinamida e N-(4-(etilsulfamoíla)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)- 4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopro-pilsulfonila) carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 223: Preparação dos Compostos 223A e 223B

o N

Compostos 223A e 223B Esquema 1 L

vO

NH2

Λ

N '' H 0

OH

Etapa I -*

1) HOAc

2) NaB(CN)H3 MeOH

Jf V-nh /OH

Produto do Exemplo Compostos 223A e 223B

22. Etapa 5 Mistura de isômeros

Etapa 1

A uma mistura de 4-amino-N-etilbenzenossulfonamida (203 mg, 1,014 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (264 mg, 2,027 mmols) em um RBF em TA foi adicionado ácido acético (2 mL), com uma pipeta. A cor da mistura mudou logo para uma cor canária característica. A solução foi aque- cida até 75°C por cerca de 120 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com metanol (2 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanes- cente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solu- ção ficou mais clara. 30 mL de água foram adicionados à mistura, a seguir extraída com 10 mL de acetato de etila (pH ajustado para 4). O orgânico foi lavado com bicarbonato de sódio em pH = 8. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até um resíduo oleoso, o qual foi seco sob alto vácuo. O óleo amarelo obtido dessa forma foi usado diretamente na pró- xima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 315 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(4-(N-etilsulfamoíla)fenilamino)-

3,3-dimetilbutanoico (0,059 g, 0,189 mmol, etapa 1, exemplo 223) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1- (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, da etapa 5, exemplo 22) a O0C foi adicionado HATU 1 (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mis- tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água 5 (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, con- centrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- servado por LCMS. O Composto 223A (0,033 g, 21,0% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O 10 Composto 223B (0,024 g, 15,30% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 223A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,92 (t, J= 7,30 Hz, 3 H) 1,02 - 1,11 (m, 11 H) 1,19 - 1,29 (m, 2 H) 1,42 (dd, J=9,44,

5,41 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 H) 2,20 - 2,29 (m, 2 H) 2,54 - 2,64 (m, 3 H) 2,95 (ddd, J=12,84, 8,06, 4,78 Hz, 1 H) 3,96 - 4,01 (s, 3 H) 4,01 -

4,09 (m, 2 H) 4,45 (d, J=12,09 Hz, 1 H) 4,59 (dd, J=10,07, 7,05 Hz, 1 H) 5,11 (dd, J=10,32, 1,76 Hz, 1 H) 5,29 (dd, J=17,25, 1,39 Hz, 1 H) 5,68 - 5,78 (m, 2 H) 6,45 - 6,50 (m, 2 H) 7,04 - 7,09 (m, 2 H) 7,55 (s, 1 H) 7,65 (dd, J=8,81,

2,27 Hz, 1 H) 7,90 (d, J= 1,76 Hz, 1 H) 8,08 (d, J=9,06 Hz, 1 H); LC-MS, MS

• 20 m/z 831 (M+ +H).

Composto 223B: LC-MS, MS m/z 831 (M++H).

Isômeros do Composto 224:

N-(4-(dimetilsulfamoíla)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilci- clopropila)-L-prolinamida e N-(4-(dimetilsulfamoíla)fenilaV3-metila-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinilatáxi V N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsul- fonila) carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 224: Preparação dos Compostos 224A e 224B Nn V=

Compostos 224A e 224B Esquema 1

0

\\ .

' N "

1 O

O

+

OH

Etapa 1

1) AcOH

2) NaB(CN)H3 MeOH

N^nV7 H O V

A

I O

OH

Etapa 2

Ll ° °

“va.j.

í Xys^

Produto de Exemplo 22, Etapa 5

Compostos 224A e 224 B Mistura dos isômeros

10

Etapa 1:

A uma mistura de 4-amino-N-etilbenzenossulfonamida (203 mg,

1,014 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (264 mg, 2,027 mmols) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado 2 mL de ácido acético. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 120 minutos. A solução foi diluída com metanol (2 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbu- Ihamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. 30 mL de água foram adicionados à mistura, a seguir extraída com 10 mL de acetato de etila (pH ajustado para 4). O orgânico foi lavado com bicarbonato de sódio em pH = 8. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e con- centrada até um óleo amarelo, o qual foi seco sob alto vácuo. Esse material foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 315 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(4-(N,N-dimetilsulfa- 5 moíla)fenilamino)-3,3-dimetilbutanoico (0,059 g, 0,189 mmol etapa 1, exem- plo 224) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1- (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicionado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 10 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mis- tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, con- centrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa 15 para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- servado por LCMS. O Composto 224A (0,020 g, 13,0% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 224B (0,014 g, 9,0% de rendimento) foi o segundo dos dois isô- meros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 224A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 - 1,12

(m, 11 H) 1,22 - 1,26 (m, 2 H) 1,42 (dd, J=9,32, 5,54 Hz, 1 H) 1,88 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 H) 2,20 - 2,31 (m, 2 H) 2,35 - 2,40 (m, 6 H) 2,53 - 2,64 (m,

1 H) 2,91 - 3,00 (m, 1 H) 3,95 - 4,00 (s, 3 H) 4,03 - 4,09 (m, 2 H) 4,51 (d, J=12,09 Hz, 1 H) 4,57 - 4,67 (m, 1 H) 5,11 (dd, J=10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,29 (dd, J=17,12, 1,26 Hz, 1 H) 5,68 - 5,79 (m, 2 H) 6,47 (d, J=9,06 Hz, 2 H) 6,93 (d, J=8,81 Hz, 2 H) 7,53 - 7,57 (s, 1 H) 7,63 - 7,69 (m, 1 H) 7,91 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 8,03-8,12 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 831 (M++H),

Composto 224B: LC-MS, MS m/z 831 (M+ +H).

Isômeros do Composto 226:

N-(4-carbamoilfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-

isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida e N-(4-carbamoilfenila)-3-metila-D-valila-(4R)- 4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila) carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Exemplo 226: Preparação dos Compostos 226A e 226B

(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)-1-((S)-3,3-dimetila-2-(4-(2- fenilpropan-2-ilcarbamoíla)fenilamino)butanoila)pirrolidina-2-carboxamida (8 mg, 0,009 mmol, composto 222A) foi dissolvido em 1 mL de ácido 2,2,2- trifluoracético a 25 °C. A mistura resultante foi agitada de um dia para o ou- 10 tro. O TFA foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativo para fornecer o Composto 226A como um pó branco (0,005 g, 81% de rendimen- to). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 - 1,12 (m, 11 H) 1,23 - 1,33 (m,

Compostos 226A e 226B

5

(2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-N-((1 R,2S)-1 -

2H) 1,42 (dd, J=9,57, 5,29 Hz1 1 H) 1,87 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 H) 2,19 -

2,27 (m, 2 H) 2,54 (dd, J=13,72, 7,43 Hz, 1 H) 2,92 - 2,98 (m, 1 H) 3,98 -

4,05 (m, 4 H) 4,12 (s, 1 H) 4,33 (d, J=12,59 Hz, 1 H) 4,55 (dd, J=10,32, 7,05 Hz, 1 H) 5,11 (dd, J=10,32, 1,76 Hz1 1 H) 5,27 (m, 2 H) 5,72 - 5,79 (m, 2 H)

6,45 - 6,49 (m, 2 H) 7,22 - 7,25 (2, 4 H) 7,52 (s, 1 H) 7,62 (dd, J=8,94, 2,14 Hz, 1 H) 7,79 (d, J=2,01 Hz1 1 H) 8,05 (d, J=8,81 Hz1 1 H); LC-MS, MS m/z 767 (M++H). Composto 226B foi feito a partir do Composto 222B pelo mesmo pro- cedimento que o usado para a preparação do Composto 226A. LC-MS, MS m/z 767 (M+ + H).

Isômeros do Composto 227:

3-metila-N-(3-(metilsulfamoíla)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxO-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinil- ciclopropila)-L-prolinamida e 3-metila-N-(3-(metilsulfamoíla)fenila)-D-valila- (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopro- pilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropilaVL-prolinamida 10 Exemplo 227: Preparação dos Compostos 227A e 227B

o N

Compostos 227A e 227B Esquema 1

Etapa I

HATU1 DIEA1 DCM

Etapa 2

2HCI

O

HN->

:i

Produto do Exemplo 22, Etapa 5

Compostos 227A e 227B Mistura de isômeros

Etapa 1 A uma mistura de 3-amino-N-metilbenzenossulfonamida (203 mg, 1,09 mmol) e ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (264 mg, 2,027 mmols) em um RBF de 25 mL em TA foi adicionado 2 mL de ácido acético. A solu- ção foi aquecida até 75°C por cerca de 120 minutos. A solução foi diluída 5 com metanol (2 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri- hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. 30 mL de água foram adicionados à mistura, a seguir extraída com 10 mL de acetato de etila (pH ajustado para 4). O orgânico foi lavado com bi- 10 carbonato de sódio em pH = 8. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, fil- trada e concentrada até um óleo amarelo, o qual foi seco sob alto vácuo. Esse material foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adi- cional. LC-MS, MS m/z 301 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(3-(N,-metilsulfamoíla)fenilamino)-

3,3-dimetilbutanoico (0,034 g, 0,114 mmol etapa 1, exemplo 227) e (2S,4R)- 4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-N-((1 R,2S)-1 - (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilcíclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicionado HATU (0,087 g, 0,228 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mis- tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, con- centrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- servado por LCMS. O Composto 227A (0,013 g, 14,0% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 227B (0,009 g, 9,0% de rendimento) foi o segundo dos dois isô- meros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 227A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 - 1,12 (m, 11 H) 1,17 - 1,27 (m, 2 H) 1,42 (dd, J=9,44, 5,41 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,18, 5,41 Hz, 1 Η) 2,18 - 2,27 (m, 2 Η) 2,38 (s, 3 Η) 2,52 (dd, J=13,47,

6,92 Hz, 1 Η) 2,95 (ddd, J=12,78, 8,12, 4,78 Hz, 1 Η) 3,97 - 4,01 (s, 3 Η) 4,03 - 4,11 (m, 2 Η) 4,30 (d, J=12,09 Hz, 1 Η) 4,52 (dd, J=10,07, 7,05 Hz, 1 Η) 5,11 (dd, J=10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,28 (dd, J=17,25, 1,38 Hz, 1 H) 5,69 - 5,79 (m, 2 H) 6,53 - 6,63 (m, 2 H) 6,77 (d, J= 7,55 Hz, 1 H) 7,08 (t, J= 1,89 Hz,

1 H) 7,53 - 7,57 (m, 1 H) 7,65 - 7,69 (m, 1 H) 7,84 (d, J=1,76 Hz, 1 H) 8,08 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 817 (M++H).

Composto 227B: LC-MS, MS m/z 817 (M+ +H).

Isômeros do Composto 231:

N-(3-(isopropoxicarbonila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi- 1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinil- ciclopropila)-L-prolinamida e N-(3-(isopropoxicarbonila)fenila)-3-metila-D- valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclo- propilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida

Compostos 231A e 231B Esquema 1 ο

ο

Etapa 1

O

1) Ti(O1Pr)4

2) NaB(CN)H3 EtOH

7\

OH

O

Produto do Exemplo 22, Etapa 5

Cl

2^

Compostos 231A e 231B Mistura de isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 3-benzoato de metila (230 mg, 1,52 mmol) e

ácido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (198 mg, 1,52 mmol) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado tetraidropropoxititânio (2 mL) com uma pipeta. A cor da mistura logo mudou para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 15 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com etanol absoluto (8 mL) em TA, seguido pela adição de 1,5 x de cianotri-hidroborato de sódio (245 mg, 3,90 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara. A solução foi misturada com 4 mL de água, for- mando uma suspensão, o PPT branco foi removido por centrifugação. O or- gânico foi extraído em acetato de etila, e a fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada até uma espuma branca. Esse material foi u- sado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS, MS m/z 294 (M++ H).

no)-3,3-dimetilbutanoico (0,055 g, 0,189 mmol, etapa 1, exemplo 231) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-N-((1 R,2S)-1 -

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(3-(isopropoxicarbonila) fenilami- (ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,101 g, 0,189 mmol, etapa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a O0C foi adicionado HATU (0,144 g, 0,378 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,061 g, 0,473 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A 5 mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mis- tura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, con- centrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme ob- 10 servado por LCMS. O Composto 231A (0,0235 g, 15,30% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 231B (0,0175 g, 11,6% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 231A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 - 1,14 (m, 11 H) 1,19 -1,29 (m, 6 H) 1,29 - 1,38 (m, 2 H) 1,38 - 1,43 (m, 1 H)1,81 - 1,89 (m, 1 H) 2,16 - 2,25 (m, 2 H) 2,47 (dd, J=13,60, 7,05 Hz, 1 H) 2,95 (ddd, J=12,78, 8,12, 4,78 Hz, 1 H) 3,96 - 4,02 (m, 4 H) 4,02 - 4,08 (m, 1 H) 4,14 -

4.24 (m, 1 H) 4,42 - 4,53 (m, 1 H) 4,93 - 5,03 (m, J=6,24, 6,24, 6,24, 6,24,

6.24 Hz, 1 H) 5,06 - 5,16 (m, 1 H) 5,20 - 5,32 (m, 1 H) 5,68 - 5,78 (m, 2 H) 6,54 (t, J=7,81 Hz, 1 H) 6,60 - 6,69 (m, 1 H) 6,87 (d, J=7,55 Hz, 1 H) 7,20 -

7,26 (m, 1 H) 7,45 - 7,52 (m, 1 H) 7,58 - 7,68 (m, 2 H) 7,97 - 8,06 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 810 (M+ +H).

Composto 231B: LC-MS, MS m/z 810 (M+ +H).

Isômeros do Composto 232:

N-(3-(metoxicarbonila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida e

N-(3-(metoxicarbonila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropilaVL-prolinamida

Exemplo 232: Preparação dos Compostos 232A e 232B 10

15

ο

Il -S.

χτκ'ν

O

Il ,s.

Compostos 232A e 232B

Composto 231A

3-((S)-1 -((2S,4R)-4-(7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-2- ((1 R,2S)-1 -(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropilcarbamoíla) pirroli- din-1-ila)-3,3-dimetila-1-oxobutan-2-ilamino)benzoato de isopropila (20 mg, 0,025 mmol, composto 231A) foi dissolvido em THF (0,200 ml) e MeOH (,2 mL) a 25 °C, hidróxido de lítio aquoso 1,0 M (0,049 mL, 0,049 mmol) foi adi- cionado gota a gota, e a mistura foi agitada por 4 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 4) e salmoura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado concentrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer o Composto 232A (0,005 g, 25,6%). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,89 - 1,02 (m, 2 H) 1,04 - 1,12 (m, 11 H) 1,29 - 1,36 (m, 2 H) 1,42 (dd, J=9,44,

5,41 Hz, 1 H) 1,87 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,16 - 2,25 (m, 2 H) 2,46 (d, J=6,55 Hz, 1 H) 2,91 - 2,99 (m, 1 H) 3,63 - 3,71 (m, 3 H) 3,93 - 4,03 (m, 4 H) 4,08 (m, 1 H) 4,21 (s, 1 H) 4,51 (dd, J=10,32, 7,05 Hz, 1 H) 5,06 - 5,16 (m, 1 H) 5,28 (d, J= 17,37 Hz, 1H) 5,70 - 5,79 (m, 2 H) 6,58 (t, J=7,81 Hz, 1 H) 6,69 (dd, J=8,06, 1,51 Hz, 1 H) 6,80 (d, J= 7,55 Hz, 1 H) 7,18 (s, 1 H) 7,50 (s, 1 H)

7,61 - 7,69 (m, 2 H) 8,04 - 8,11 (m, 1 H); LC-MS, MS m/z 782 (M+ +H). O Composto 232B foi feito a partir do Composto 231B pelo

mesmo método descrito para a preparação do Composto 232A. LC-MS, MS m/z 782 (M+ + H).

Isômeros do Composto 233:

(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxO-N-((1 R,2S)-1-((ciclopro-

pilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-1-((2S)-2-((4-etóxi-1.2.5-tiadiazol- 3-ila)amino)butanoila)-L-prolinamida e (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquino- linila) óxi)-N-((1R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2-vinilciclo-propila)-

1-((2R)-2-((4-etóxi-1,2,5-tiadiazol-3-ila)amino)butanoilaVL-prolina-mida Exemplo 233: Preparação dos Compostos 233A e 233B

mL) a 25°C foi adicionado 2-aminobutanoato de metila (0,070 g, 0,600 mmol) seguido por DIEA (0,210 mL, 1,200 mmol). A mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. Solvente foi removido, e o material foi seco sob alto vácuo. Esse material foi usado diretamente na pró- xima etapa sem purificação adicional.

Etapa 2

Compostos 233A e 233B

Etapa 1

Reagente 1

Sal de HCl

Etapa 1:

A uma solução do Reagente 1 (0,114 g, 0,6 mmol) em EtOH (5 J

rv

J

ο

O'

O

+

PI3

1)-78-0 Jp

CH2CI2 2) Na2S03

Etapa 2:

A solução amarela do produto do Exemplo 233, etapa 1 (0,157

g, ,6 mmols) em CH2CI2 (8 mL) a -78°C foi adicionada triiodofosfina (0,247 g, 0,600 mmol). Uma suspensão laranja foi obtida. A mistura foi deixada aque- 5 cer até 0°C durante 2 h. Uma solução marrom escura foi formada. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (15 mL) e lavada com bissulfito de sódio (2 g em 10 mL de água), H2O, e NaCI saturado. O orgânico foi seco em Na2S04, filtrado e concentrado. O produto bruto foi purificado por coluna em sílica-gel (eluição com 5 a 15% de acetato de etila em hexanos). Um ó- 10 Ieo incolor foi, deste modo, obtido.

Etapa 3

metila (57 mg, 0,232 mmol) em 4 mL de THF em TA foi adicionado hidróxido de lítio (6,68 mg, 0,279 mmol) e água (0,6 mL). A mistura foi agitada por 2 h. A mistura foi ajustada para pH 4 e foi extraída com acetato de etila (10 mL x

2). As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com água (1x10 mL). O orgânico foi seco em Na2SO4, filtrado e concentrado para fornecer um sólido branco.

Etapa 3:

À solução de 2-(4-etóxi-1,2,5-tiadiazol-3-ilamino)butanoato de HATU

DIEA

Cl

Composto 233A e composto 233B

Etapa 4:

À solução amarela de 2-(4-etóxi-1,2,5-tiadiazol-3- ilamino)butanoico (23,34 mg, 0,101 mmol) e (2S,4R)-4-(7-cloro-4- metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-N-((1R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2- vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (54 mg, 0,101 mmol a 0°C foi adi- cionado HATU (77 mg, 0,202 mmol) seguido por diisopropiletilamina (32,6 mg, 0,252 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada. A mistura foi agi- tada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (15 mL) e foi lavada com água (pH = 6) e salmoura. O orgânico foi seco em Na2SO4, filtrado e concentrado. O material bruto foi purificado por HPLC preparativo para fornecer dois produtos sepa- rados com MS m/z idêntico conforme observado por LCMS. O Composto 233A (0,046 g, 5,3% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativo em fase reversa. O Composto 233B (0,085 g, 10% de rendimento foi o segundo dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 233A: LC-MS. MS m/z 748 (M+ + H).

Composto 233B: LC-MS, MS m/z 748 (M+ + H).

Isômeros do Composto 234:

N-(2-fluorfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-í(7-cloro-4-metóxi-1-

isoquinolinila)óxi1-N-((1R.2S)-1-([(ciclopropilsulfonila)amino1carbonilaV2- vinilciclopropila)-L-prolinamida e N-(2-fluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-í(7- cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxil-N-((1 R,2S)-1 -(í(ciclopropilsulfonila) ami-

nolcarbonila)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida Exemplo 234: Preparação dos Compostos 234A e 234B ο

Il

.s.

Η Ti

X" κ'Γν

Compostos 234A e 234B Esquema 1

O

O^A

NH,

OH

Etapa I

1) HOAc

2) NaB(CN)H3 MeOH

Γ

NH_

-A °

10

Etapa 2

HATU, DIEA, DCM

HN^V-ÍL Jl g

2HCI ^X iüV

%

Produto do Exeinplo 22,

Etapa 5

Compostos 234A e 234B Mistura de isômeros

Etapa 1:

A uma mistura de 2-fluoranilina (230 mg, 1,827 mmol) e ácido

3,3-dimetila-2-oxobutanoico (476 mg, 3,65 mmols) em um RBF de 100 mL em TA foi adicionado ácido acético (2 mL) com uma pipeta. A cor da mistura logo mudou para uma cor canária característica. A solução foi aquecida até 75°C por cerca de 120 minutos e a cor permaneceu a mesma. A solução foi diluída com metanol (2 mL) em TA, seguido pela adição de 0,5 x de cianotri- hidroborato de sódio (230 mg, 3,65 mmols) e a metade remanescente depois do borbulhamento e aquecimento foi terminada. A cor da solução ficou mais clara, foram adicionados 30 mL de água à mistura, a seguir extraído com 10 mL de acetato de etila (pH ajustado para 4). A seguir o orgânico foi extraído com bicarbonato de sódio em pH = 8. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até um óleo amarelo. O material foi purificado por HPLC preparativa e carregado para o próximo etapa. LC/MS, MS m/z 226 (M+ + H).

Etapa 2:

À solução amarela de ácido 2-(2-fluorfenilamino)-3,3-

dimetilbutanoico (63,2 mg, 0,280 mmol, etapa 1, exemplo 234) e (2S,4R)-4- (7-cloro-4-metoxiisoquinolin-1 -ilóxi)-N-((1 R,2S)-1 -(ciclopropilsulfonilcarba- moíla)-2-vinilciclopropila)pirrolidina-2-carboxamida (0,150 g, 0,28 mmol, eta- pa 5, exemplo 22) em CH2CI2 a 0°C foi adicionado HATU (0,213 g, 0,561 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,091 g, 0,701 mmol). Uma solução amarelo-clara foi formada depois da adição da base. A mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (25 mL) e foi lavada com água (pH ~ 6) e sal- moura. O orgânico foi seco em sulfato de sódio, filtrado, concentrado e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme observado por LCMS. O Composto 234A (0,050 g, 24% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa. O Composto 234B (0,038 g, 18,2% de rendimento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa.

Composto 234A: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,99 - 1,08 (m, 2 H) 1,09 -1,17 (m, 9 H) 1,20 - 1,29 (m, 2 H) 1,40 (dd, J=9,44, 5,41 Hz1 1 H) 1,86 (dd, J=8,06, 5,54 Hz, 1 H) 2,17 - 2,27 (m, 2 H) 2,52 (dd, J=13,72,

6,92 Hz, 1 H) 2,94 (ddd, J=12,78, 8,12, 4,78 Hz, 1 H) 3,97 - 4,04 (m, 5 H) 4,27 (d, J= 12,09 Hz, 1 H) 4,50 (dd, J=10,45, 6,92 Hz, 1 H) 5,11 (dd, J=10,32, 1,51 Hz, 1 H) 5,28 (dd, J=17,12, 1,51 Hz, 1 H) 5,67 - 5,77 (m, 2 H) 6,08 -

6,14 (m, 1 H) 6,14 - 6,20 (m, 1 H) 6,40 - 6,47 (m, 1 H) 6,58 (ddd, J=11,96, 8,06, 1,39 Hz, 1 H) 7,56 (s, 1 H) 7,69 (dd, J=8,81, 2,01 Hz, 1 H) 7,77 (d, J=2,01 Hz, 1 H) 8,10 (d, J=8,81 Hz, 1 H); LC-MS, MS m/z 742 (M+ +H).

Composto 234B: LC-MS, MS m/z 742 (M+ +H).

Isômeros do Composto 235: N-(3.4-difluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1 R.2SV1-((ciclopropilsulfonila) carbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-((9-metóxi-4-metila-3.4-di-hidro-2H- Γ1,41oxazino[3.2-c1isoquinolin-6-ila)óxi)-L-prolinamida e N-(3,4-difluorfenila)-

3-metila-D-valila-(4R)-N-((1 R.2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoíla)-2- vinilciclopropila)-4-((9-metóxi-4-metila-3,4-di-hidro-2H-í1,41oxazinor3.2- c1isoquinolin-6-ila)óxi)-L-prolinamida

Exemplo 235: Preparação dos Compostos 235A e 235B

Compostos 235A e 235B Mistura de isômeros Esquemal

Etapa 1

4-metóxi-2-metilbenzonitrila (50 g, 340 mmols) e NBS (62 g, 350 mmols) foram suspensos em CCI4 (500 mL) e AIBN (5 g, 10% em peso) foi adicionado. A mistura foi aquecida em fluxo de um dia para o outro. O preci- pitado foi removido por filtração e o solvente foi removido. O óleo marrom foi purificado por coluna flash (2 a 5% de acetona:hexanos). Cristais brancos (36 g) foram obtidos.

Etapa 2

2-(bromometila)-4-metoxibenzonitrila (36 g, exemplo 235, etapa 5 1) foi suspenso em 200 mL de etanol, 200 mL de acetonitrila foram adiciona- dos seguido por KCN (8,3 g) e 150 mL de água. A mistura foi agitada e a solução incolor se tornou amarela. A reação foi completa depois de 4 horas de agitação. Os voláteis foram removidos sob vácuo, e o sólido residual foi redissolvido em acetato de etila (200 mL) e lavados com água (100 mL) e 10 salmoura (100 mL). Os orgânicos foram, a seguir, secos em sulfato de sódio. Acetato de etila foi removido e o resíduo foi recristalizado a partir de acetato de etila e dicloretometano para fornecer 17 g de 2-(cianometila)-4- metoxibenzonitrila.

3) foi dissolvido em HF-Py (12,5 mL) a -10°C e NaNO2 (600 mg) foi adicio- 20 nado. Foi observada a formação de um sólido amarelo. A mistura reacional foi suspensa em grande quantidade de água, teve o pH ajustado para 5, ex- traída foi acetato de etila (3 x 30 mL), foi lavada com água e salmoura, a se- guir seca em sulfato de sódio. O sólido amarelo-claro (1,2 g) foi obtido de- pois da purificação em coluna flash.

Esquema 2

15

Etapa 3

Ver J. Med. Chem. 1970, Vol. 13, No. 4, pp 613 para a prepara-

ção de 1-bromo-6-metoxiisoquinolin-3-amina.

Etapa 4

1-bromo-6-metoxiisoquinolin-3-amina (1,5 g, exemplo 235, etapa

OH

Cs2CO,

ACN,

Refluxo

H

N

O

^YfD LDA/THF, -78°C ° N Borate \ 2) H2O2, NaOH

F

O

Br

Br

etapa 5

etapa 6

Br

etapa 7

NaH/DMF

2) NaH, Mel, DMF

etapa 8

Br Etapa 5

1-bromo-3-flúor-6-metoxiisoquinolina (322 mg, 1,26 mmol, e- xemplo 235, etapa 4) foi dissolvido em THF (7 mL) a -78°C, LDA (1,5 M, 2,52 mL) foi adicionado gota a gota, agitado por 30 min, a seguir borato de iso-

propila (477 mg, 585 μί) foi adicionado. 30 minutos depois a reação foi su- primida por NH4CI Sat. e HCI 1 N, extraída com acetato de etila (3 x 30 mL).

O solvente foi removido até a secura. O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (8 mL), NaOH (1 N, 4 mL) foi adicionado seguido de H2O2 (1,2 mL, 50%). Foi observada evolução de gás e foi agitado por 30 min. Uma pasta amarela se 10 formou. A mistura foi ressuspensa em 50 mL de acetato de etila, a camada orgânica foi lavada com solução de bissulfito de sódio e salmoura, a seguir seca em sulfato de sódio. Foi purificada por sílica-gel (eluída com 5 a 10% de acetato de etila:hexano). 200 mg de sólido amarelo foram obtidos.

Etapa 6

1-bromo-3-flúor-6-metoxiisoquinolin-4-ol (160 mg, exemplo 235,

etapa 5) foi dissolvido em acetonitrila (10 mL) em TA, Cs2COa (215 mg) e 2- bromoetilcarbamato de terc-butila (60 μί) foram adicionados. A mistura re- sultante foi levada à refluxo por 2 horas. O solvente foi removido e o resíduo foi ressuspenso em 30 mL de acetato de etila, lavado com água e salmoura, 20 seca em sulfato de sódio. O resíduo foi purificado por coluna flash com 5% de acetona:hexanos. Sólido branco (169 mg) foi obtido.

Etapa 7

2-(1-bromo-3-flúor-6-metoxiisoquinolin-4-ilóxi)etilcarbamato de terc-butila (169 mg, exemplo 235, etapa 6) foi dissolvido em 10 mL de DMF a

0°C, 24 mg de hidreto de sódio (95%) foram adicionados e agitados de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com 50 mL de água, extraída com acetato de etila (3 x 20 mL). O orgânico foi combinado e lavado com água (2x10 mL), salmoura (20 mL) e seco em sulfato de sódio. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por coluna flash com 2,5 - 10% de 30 acetona:hexanos. Um sólido branco (100 mg) foi obtido.

Etapa 8 6-bromo-9-metóxi-2H-[1,4]oxazino[3,2-c]isoquinolino-4(3H)-

carboxilato de terc-butila (20 mg, exemplo 235, etapa 7) foi dissolvido em 5 mL de CH2CI2 a 0°C, 2 mL de TFA foram adicionados e agitado por 2 horas. A mistura reacional foi seca sob vácuo, o resíduo foi redissolvido em acetato 5 de etila e lavado com água (pH ~ 5), salmoura, seco em sulfato de sódio. O solvente foi removido até a secura e o sólido obtido foi dissolvido em DMF (5 mL) em temperatura ambiente, tratado com NaH (10 mg), seguido por Mel (10 uL). Agitado por 60 min. A mistura reacional foi diluída com 50 mL de água, extraída com acetato de etila (3 x 20 mL). Os orgânicos foram combi- 10 nados e lavados com água (2x10 mL), salmoura (20 mL) e secos em sulfa- to de sódio. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por coluna fla- sh com 5 a 15% de acetona:hexanos. Sólido branco (10 mg) foi obtido. RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 2,89 (s, 3 H) 3,16 - 3,21 (m, 2 H) 4,40 -

[1,4]oxazino[3,2-c]isoquinolina (62 mg, 0,2 mmol, exemplo 235, etapa 8), 20 Boc-L-Ip-OH (50,8 mg, 0,22 mmol), t-BuOU (82 mg, 0,60 mmol) em DMSO (2 mL) foi agitado por 3 h. A reação foi suprimida com água (5 mL) a O0C e neutralizada com HCI 1 N até pH 5, extraída com EtOAc (40 mL), lavada com salmoura (10 mL) e água (15 mL x 2), seca em MgSO4, concentrada para fornecer um produto bruto (90 mg) como um sólido, o qual foi usado na 25 próxima etapa sem purificação adicional.

4,44 (m, 2 H) 7,05 (dd, J=9,32, 2,52 Hz, 1 H) 7,20 (d, J=2,52 Hz, 1 H) 8,04 (d, J=9,32 Hz, 1 H).

Esquema 3

Boc

Etapa 9

Uma solução de 6-bromo-9-metóxi-4-metila-3,4-di-hidro-2H- Esquema 4

O

/

ΓΊ

N-^

+ TsOH-H2N"

y MM I U, I

' 0 CH2CI2

oo'V

HATU, I-Pr2EtN,

Q

Boc

Etapa 10

Etapa 10

A uma solução de ácido (2S,4R)-1-(terc-butoxicarbonila)-4-(9-

metóxi-4-metila-3,4-di-hidro-2H-[1,4]oxazino[3,2-c]isoquinolin-6- ilóxi)pirrolidina-2-carboxílico (90 mg, exemplo 235, etapa 9), (1R,2S)-1- 5 amino-N-(ciclopropilsulfonila)-2-vinilciclopropanocarboxamida ■ sal de TsOH (90 mg), I-Pr2EtN (0,5 mL) em CH2CI2 (5 mL) foi adicionado HATU (112 mg). A mistura resultante foi agitada por 16 h. Depois da concentração, o resíduo foi extraído com EtOAc (30 mL), lavada com HCI 1 N (10 mL x 3), água (10 mL x 2) e salmoura (10 mL x 2), seca em MgSO4, concentrada, purificada 10 por HPLC preparativa. 113 mg de sólido foram obtidos.

vinilciclopropilcarbamoíla)-4-(9-metóxi-4-metila-3,4-di-hidro-2H- [1,4]oxazino[3,2-c]isoquinolin-6-ilóxi)pirrolidino-1-carboxilato de (2S,4R)-terc- butila (50 mg, exemplo 235, etapa 10) foi dissolvido em 2 mL de HCI 4 N em dioxano, agitado por 2 horas. 0 solvente foi removido até a secura, o sólido marrom resultante foi usado como tal.

Esquema 5

Etapa 11

2-((1 R,2S)-1 -(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2- Etapa 12

À solução amarela de ácido 2-(3,4-difluorfenilamino)-3,3- dimetilbutanoico (0,043 g, 0,175 mmol, do exemplo 220, etapa 1 ) e (2S,4R)- 5 N-((1R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoíla)-2-vinilciclopropila)-4-(9-metóxi-4- metila-3,4-di-hidro-2H-[1,4]oxazino[3,2-c]isoquinolin-6-ilóxi)pirrolidina-2- carboxamida (20 mg exemplo 235, etapa 11) a O0C foi adicionado HATU (0,133 g, 0,350 mmol) seguido por diisopropiletilamina (0,057 g, 0,437 mmol). Uma solução marrom foi formada depois da adição da base. A mistu- 10 ra foi agitada em temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila. Lavada com água e salmoura. Seca em sulfato de sódio. Purificada por HPLC preparativa para fornecer dois produtos separados com MS m/z idêntico conforme observado por LCMS. O Composto 235A (0,0008

g, 3,0% de rendimento) foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC 15 preparativa em fase reversa. O Composto 235B (0,003 g, 11,0% de rendi- mento) foi o segundo dos dois isômeros a ser eluído por HPLC preparativa em fase reversa. Composto 235A: LC-MS1MS m/z 798 (M+ + H). (400 MHz, MeOD) δ ppm 1,01 - 1,10 (m, 11 H) 1,41 (m, 2 H) 1,86 (dd, J=8,18, 5,41 Hz,

1 H) 2,13 - 2,24 (m, 2 H) 2,50 (d, J=6,80 Hz, 1 H) 2,90 - 3,01 (m, 1 H) 3,02 - 20 3,09 (m, 3 H) 3,42 (d, J=2,52 Hz, 2 H) 3,91 - 4,01 (m, 5 H) 4,22 - 4,32 (m, 1 H) 4,42 - 4,48 (m, 1 H) 4,50 - 4,59 (m, 2 H) 5,11 (dd, J=10,32, 1,76 Hz, 1 H)

5,28 (dd, J=17,25, 1,39 Hz, 1 H) 5,67 - 5,78 (m, 2 H) 6,19 - 6,24 (m, 1 H) 6,35 - 6,40 (m, 1 H) 6,49 - 6,56 (m, 1 H) 6,87 (dd, J=9,07, 2,27 Hz1 1 H) 7,13

- 7,17 (m, 1 H) 7,60 (d, J=2,27 Hz, 1 H) Composto 235: LC-MS, MS m/z 798 25 (M++H). Os Compostos 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242 e 243 foram preparados usando os métodos aqui descritos.

Exemplo 236: Composto 236.

Exemplo 237: Composto 237.

Cl O,.

\

N==X H

Λ ) N

O^-5'N

v»

NH

Exemplo 238: Composto 238

cr o.

V

'r—Λ HN

Ns=\ H

<L>-N

N

N n

Vo

NH

Íh\?

\

Exemplo 239: Composto 239. Exemplo 240: Composto 240.

Exemplo 242: Composto 242. Exemplo 243: Composto 243. O

VN'h>

o ''OT ^

N &

:0

Exemplo 407: Preparação dos Compostos 407 Esquema 1

Rapa 1

o„ + ?ΛΓ -- Χ°-ΛF11S-Ih

v. A J NaBH(OAc)3, W )~\

CH2CICH2CI °

Etapa 2

CT N

HATU1DlEAf DCM

N-

2HCI II 'nV'^--s

O _

HN

Produto do Exemplo 1, Etapa 5

2raT4

.li s 1W Vn^oh \0_£yN„ \

-r°

O

Compostos 407

Etapa 1: Uma mistura de 6-metoxipiridin-3-amina (372 mg, 3 mmols), á-

cido 3,3-dimetila-2-oxobutanoico (781 mg, 6,00 mmols), e triacetoxi- hidroborato de sódio (1907 mg, 9,00 mmols) em CH2CICH2CI (5 ml) foi agi- tada por 24 h. A reação foi interrompida com NH4CI saturada (20 mL), diluída 5 com EtOAc (50 mL), lavada com salmoura (20 mL), seca em MgSO4, filtrada e concentrada. A concentração produziu 0,71 g (99%) de um produto dese- jado bruto, o qual foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. RMN 1H (400 MHz, CCI3D) δ ppm 1,09 (s, 9H), 3,63 (s, 1H), 3,85 (s, 3 H), 6,63 (d, J=8,81 Hz, 1 H), 7,07 (dd, J=8,81, 3,02 Hz, 1 H), 7,63 (d, J=3,02 Hz, 10 1 H); LC-MS, MS m/z 239 (M+ +H).

mmol) foi adicionado o produto da etapa 1, Exemplo 407 (71 mg, 0,3 mmol) e Base de Hunig (0,524 mL, 3 mmols) em CH2CI2 (5 mL) foi adicionado HA- 15 TU (171 mg, 0,45 mmol). Depois de agitar por 16 h e efetuar a concentração e purificação do resíduo por HPLC preparativa em fase reversa forneceu dois produtos com m/z por LCMS idênticos. O Composto 407A foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa e foi obtido como um sólido (37 mg, 18% de rendimento). O Composto 407B foi o se- 20 gundo dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa e foi obtido como um sólido (31 mg, 14% de rendimento). Composto 40: LC-MS, MS m/z 721 (M+ + H). Composto 407B: LC-MS, MS m/z 721 (M+ + H).

Etapa 2:

A uma mistura do produto da etapa 5, Exemplo 1 (150 mg, 0,3

Exemplo 408: Preparação dos Compostos 408A e 408B Cl

O N

Compostos 408A e 408B Os compostos 408 foram preparados pelo mesmo procedimento

que aquele descrito para a preparação do Composto 407, exceto que o pro- duto da etapa 5 do Esquema 2 no Exemplo 22 (182 mg, 0,299 mmol) foi u- sado na síntese do Composto 408. O Composto 408A foi o primeiro dos dois 5 isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa e foi obtido como um sólido (66 mg, 29% de rendimento). O Composto 408B foi o segundo dos dois isômeros a eluir por HPLC preparativa em fase reversa e foi obtido co- mo um sólido (46 mg, 20% de rendimento). Composto 408A: LC-MS, MS m/z 755 (M+ + H). Composto 408B: LC-MS, MS m/z 755 (M+ + H).

Exemplo 409: Preparação dos Compostos 409A e 409B

Compostos 409A e 409B

Os compostos 409 foram preparados pelo mesmo procedimento que aquele descrito para a preparação do Composto 407, exceto que 6- (difluormetóxi)piridin-3-amina foi usada na etapa 1 e o produto da etapa 5 do 15 Esquema 2 no Exemplo 22 (182 mg, 0,299 mmol) foi usado na etapa 2. O Composto 409A foi o primeiro dos dois isômeros a eluir por HPLC preparati- va em fase reversa e foi obtido como um sólido (45 mg, 33% de rendimento).

O Composto 409B foi o segundo dos dois isômeros a eluir por HPLC prepa- rativa em fase reversa e foi obtido como um sólido (50 mg, 37% de rendi- mento). Composto 409A: LC-MS, MS m/z 791 (M+ + H). Composto 409B: LC-MS, MS m/z 791 (M+ + H).

Os Compostos 410 e 411 foram preparados de acordo com os métodos aqui descritos.

Exemplo 410: Preparação dos Compostos 410

Cl

O N

F Cl

ο O

Il

Composto 410

Exemplo 411: Preparação dos Compostos 411

X PfsV

Composto 411

Exemplo 412: Preparação dos Intermediários Exemplos de preparações dos intermediários de isoquinolina P2 para incorporação nos compostos de Fórmula 1 Método A

,o.

co2h Etapal Etapa2 --

,O.

O

Cl

,O

Etapa 3

HQ

O-

BOC

CO2H

O

N OH O

Etapa 1 * A uma solução de ácido 3-metoxicinâmico (11,04 g, 62 mmols) e

trietilamina (12,52 g, 124 mmols) em acetona (80 mL) foi adicionado cloro- formiato de etila (aproximadamente 1,5 equivalentes) gota a gota a 0°C. De- pois de agitar sob esta temperatura NaN3 aquoso (6,40 g, 100 mmols em 35 5 mL de H2O; precauções apropriadas devem ser tomadas ao usar azida de sódio) foi adicionado gota a gota e a mistura reacional foi agitada por 16 h em temperatura ambiente. Água (100 mL) foi adicionada à mistura e o voláti- Ia foi removido in vacuo. A pasta resultante foi extraída com tolueno (3 x 50 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram secas em MgSO4. Essa so- 10 lução seca foi adicionada gota a gota a uma solução aquecida de difenilme- tano (50 mL) e tributilamina (30 mL) a 190°C. O tolueno foi removido por destilação conforme adicionado. Depois de completa a adição, a temperatu- ra reacional foi elevada para 210°C por 2 h. Depois do esfriamento, o produ- to precipitado foi coletado por filtração, lavado com hexano (2 x 50 mL) e 15 seco para produzir o produto desejado como um sólido branco (5,53 g, 51%) (Nicolas Briet et al, Tetrahedron, 2002, 5761-5766). MS m/z 176 (M++ H).

Um procedimento alternativo ao acima emprega difeniIfosforiIa- zida para a conversão do ácido carboxílico na correspondente acilazida. En- tão, em um procedimento em um frasco, o ácido é convertido na quinolona 20 correspondente. O processo é descrito abaixo para a preparação de 4- metila-2H-isoquinolin-1-ona do ácido 3-fenila-but-2-enoico:

Uma solução de ácido 3-fenilbut-2-enoico (16,2 g), difenilfosfori- Iazida (26,5 g) e trietilamina (10,1 g) em benzeno (100 mL) foi agitada por 1

h. Depois da filtração por um plugue de sílica-gel lavando com benzeno e 25 concentração, o resíduo foi dissolvido em difenilmetano (80 mL) e submetido a refluxo por 3 h. Depois de esfriar até a TA, os sólidos foram coletados a- través de uma lavagem de plugue com benzeno e seco para fornecer 10 g (63%) da 4-metila-2H-isoquinolin-1-ona desejada como um sólido. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2,30 (s, 3 H), 7,00 (s, 1 H), 7,54 (m, 1 H), 7,77 (m, 30 2 H), 8,33 (d, J=7,34 Hz, 1 H).

Etapa 2: 6-metóxi-2H-isoquinolin-1-ona (5,0 g, 28,4 mmols) em POCI3 foi aquecida em refluxo brando por 3 h o evaporado in vacuo (10 mL) %) (Nico- Ias Briet et al, Tetrahedron, 2002, 5761-5766). O resíduo foi vertido em água gelada (20 mL) e neutralizado até pH 10 com NaOH 10 M, extraído com 5 CHCI3. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em MgSO4, filtra- da e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (1:1 de he- xano-EtOAc) para produzir 4,41 g (80%) do produto desejado como um sóli- do branco.

RMN 1H (CD3OD) δ 3,98 (s, 3H), 7,34-7,38 (m, 2 H), 7,69 (d, J=5,5 Hz, 1H), 8,10 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,23 (d, J=9,5 Hz, 1H), MS m/z 194 (M++H).

Etapa 3:

A uma solução de N-BOC-3-(f?)-hidróxi-L-prolina (892 mg, 3,89 mmols) em DMSO (40 mL) na temperatura ambiente foi adicionado terc- 15 butóxido de potássio (1,34 g, 12,0 mmols) em uma porção. A suspensão formada foi agitada nesta temperatura por 30 min antes de ser esfriada até 10°C. 1-cloro-6-metoxiisoquinolina (exemplo 11, Etapa 2) (785 mg, 4,05 mmols) foi adicionada como um sólido em uma porção e a mistura final foi agitada em temperatura ambiente por 12 h. Foi interrompida com ácido cítri- 20 co 5% gelado (aq), extraída com EtOAc (100 mL). A fase aquosa foi extraída com EtOAc novamente. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com ácido cítrico 5% (aq) e salmoura, respectivamente, secas em MgSO4 e filtradas. O filtrado foi evaporado in vacuo até a secura para fornecer 1,49 g 999%) do produto desejado como uma espuma branco-suja. Esse material 25 foi usado na próxima etapa reacional como bruto, sem purificação adicional. RMN 1H (CD3OD) δ 1,42, 1,44 (rotâmeros, 9H), 2,38-2,43 (m, 1H), 2,66-2,72 (m, 1H), 3,80-3,87 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 4,44-4,52 (m, 1H), 5,73 (b, 1H), 7,16-7,18 (m, 2H), 7,24-7,25 (m, 1H), 7,87-7,88 (m, 1H), 8,07 (d, J=8,5 Hz, 1H), MS m/z 389 (M++H).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui

descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1 °Ό^°

— [SI OH \

Boc

Etapa 1:

Modificações: 15 g de ácido 3-metóxi-3-fenilacrílico usados, 250 mg do produto obtido (2% de rendimento).

Produto:

10

15

RMN 1H (400 MHz, CD3COCD3) δ ppm 3,85 (s, 3 H), 6,96 (s, 1 H), 7,54 (m, 1 H), 7,71 (m, 1 H), 7,86 (d, J=8,07 Hz, 1 H), 8,31 (d, J=8,07 Hz, 1 H).

Etapa 2:

Modificações: 200 mg de 4-metóxi-2H-isoquinolin-1-ona usada, 150 mg de produto obtido (68% de rendimento).

Produto:

RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 4,05 (s, 2 H), 7,71 (m, 1 H), 7,72 (m, 2 H), 7,80 (s, 1 H), 8,23 (dd, J=18,71, 7,70 Hz, 2 H).

Etapa 3:

Modificações: 122 mg de 1-cloro-4-metoxiisoquinolina usada, 218 mg de produto obtido (89% de rendimento).

Produto: -N ΟΗ

\

Boc

MS: (Μ + Na)+ 411.

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos Compostos de Fórmula 1

1

N 0H

\

Boc

Etapa 1:

Modificações: 20 g de ácido 2-metilcinâmico usados, 14,3 g de produto obtido (72% de rendimento).

Produto:

O

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2,54 (s, 1 H), 6,69 (d, J= 7,3 Hz, 1 H), 7,23 (d, J=7,3 Hz, 1 H), 7,39 (t, J= 7,8 Hz, 1 H), 7,50 (d, J=7,1 Hz, 1 H), 8,30 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 11,62 (s, 1 H); MS: (M+H)+160.

Etapa 2:

Modificações: 14,4 g de 5-metila-2H-isoquinolin-1-ona usada, 10,6 g de produto obtido (66% de rendimento). Produto:

Cl

Dados: RMN 1H (400 MHz1 CDCI3) δ ppm 2,67 (s, 3 Η), 7,55 (m,

2 Η), 7,70 (dd, J= 5,9, 1,0 Hz, 1 Η), 8,19 (m, 1 Η), 8,28 (d, J=5,9 Hz, 1 H); MS: (M+H)+ 178.

Etapa 3:

Modificações: 533 g de 1-cloro-5-metilisoquinolina usada, 1116 mg de produto obtido (100% de rendimento).

Produto:

O O

IM OH

\

Boc

Dados: MS: (M+H)+ 373.

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito

e podem ser incorporados nos Compostos de Fórmula 1

l^N OH

Boc

Etapa 1:

Modificações: 10 g de ácido 2-metoxicinâmico usado, 5,3 g de produto obtido (53% de rendimento).

Produto: OMe

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,95 (s, 3 H), 6,94 (d, J= 7,3 Hz, 1 H), 7,08 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 7,14 (d, J= 7,3 Hz, 1 H), 7,43 (t, J=8,1 Hz, 1 H), 7,99 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 10,92 (s, 1 H); MS: (M+H)+ 176.

Etapa 2:

Modificações: 5,3 g de 5-metóxi-2H-isoquinolin-1-ona usados, 5,38 g

de produto obtido (92% de rendimento).

Produto:

Dados: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 4,01 (s, 3 H), 7,04 (d, J= 7,8 Hz, 1 H), 7,57 (t, J=8,1 Hz, 1 H), 7,88 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 7,97 (d, J= 5,9 Hz, 1 H), 8,25 (d, J= 5,9 Hz, 1 H); MS: (M+H)+ 194.

Etapa 3:

Modificações: 581 mg de 1-cloro-5-metoxiquinolina usada, 1163 mg de produto obtido (100% de rendimento).

Produto:

N OH

\

Boc

15

Dados: MS: (M + H)+ 389. Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

N 0H

Boc

Etapa 1:

Modificações: 25 g de ácido 2-clorocinâmico usado, 14,6 g do produto obtido (59% de rendimento).

Produto:

Cl

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3OD ) δ ppm 7,22 (d, J= 7,3 Hz, 1 H), 7,42 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 7,73 (d, J= 7,8 Hz, 1 H), 8,34 (d, J=8,1 Hz, 1 H),

10,61 (s, 1 H); MS: (M+H)+180.

Etapa 2:

Modificações: 14,2 g de 5-cloro-2H-isoquinolin-1-ona usado,

8,28 g de produto obtido (53% de rendimento).

Produto:

Cl

Dados: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,60 (dd, J=8, 6, 7,6 Hz, 1 H), 7,83 (m, 1 H), 8,00 (d, J= 5,9 Hz, 1 H), 8,29 (dt, J=8,9, 1,0 Hz, 1 H), 8,38 (d, J=5,9 Hz, 1 H); MS: (M+H)+ 198.

Etapa 3: Modificações: 594 mg de 1,5-dicloroisoquinolina usada, 1174 mg de produto obtido (100% de rendimento).

Produto:

Cl

O

ry

-------O

•N OH

\

Boc

10

Dados: MS: (M+H)+ 393.

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1.

F

'"-N OH \

Boc

Etapa 1:

Modificações: 16,6 g de ácido 2-fluorcinâmico usado, 8,55 g de produ- to obtido (51% de rendimento).

Produto:

F

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3COCD3) δ ppm 6,62 (d, J= 7,3 Hz, 1 H), 7,32 (d, J= 7,3 Hz, 1 H), 7,47 (m, 2 H), 8,09 (m, 1 H).

Etapa 2: 10

15

Modificações: 8,4 g de 5-flúor-2H-isoquinolin-1-ona usado, 7,5 g de produto obtido (80% de rendimento).

Produto:

F

Dados: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,43 (ddd, J=9,7, 7,8, 0,9 Hz, 1 H), 7,62 (td, J=8,2, 5,4 Hz, 1 H), 7,84 (d, J= 5,6 Hz, 1 H), 8,14 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 8,33 (d, J=5,9 Hz, 1 H); MS: (M+H)+ 182.

Etapa 3:

Modificações: 203 mg de 1-cloro-5-fluorquinolina usada, 384 mg de produto obtido (90% de rendimento).

Produto:

O O

Yw

l^N OH

\

Boc

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3SOCD3) δ ppm 1,34, 1,36 (2s, 9 H, rotâmeros), 2,35 (m, 1 H), 2,61 (m, 1 H), 3,65 (d, J= 12,23 Hz, 1 H), 3,80 (m, 1 H), 4,35 (m, 1 H), 5,70 (s, 1 H), 7,48 (d, J=6,11 Hz, 1 H), 7,63 (m, 2 H),

7,99 (m, 1 H), 8,10 (d, J= 5,87 Hz, 1 H); MS: (M+Na)+ 399.

Os seguintes intermediários foram preparados conforme descri- to aqui e podem ser incorporados nos Compostos de Fórmula 1 10

15

0'Ο^°

— ISl OH \

Boc

Etapa 1:

Modificações: 16,6 g de ácido 4-fluorcinâmico usado, 8,2 g de produto obtido (49% de rendimento).

Produto:

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3COCD3) δ ppm 6,57 (d, J=J,09 Hz, 1 H), 7,21 (d, J= 7,09 Hz, 1 H), 7,50 (m, 1 H), 7,72 (dd, J=8,68, 5,26 Hz, 1 H), 7,90 (dd, J=9,54, 2,93 Hz, 1 H).

Etapa 2:

Modificações: 8,15 g de 7-flúor-2H-isoquinolin-1-ona usado, 7,6 g de produto obtido (84% de rendimento).

Produto:

Dados: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,52 (td, J=8,6, 2,6 Hz, 1 H), 7,59 (d, J=5,6 Hz, 1 H), 7,86 (dd, J=9,1, 5,4 Hz, 1 H), 7,95 (dd, J=9,5, 2,5 Hz, 1 H), 8,26 (d, J=5,6 Hz, 1 H); MS: (M+H)+ 182.

Etapa 3:

Modificações: 191 mg de 1-cloro-7-fluorisoquinolina usada, 350 mg de produto obtido (93% de rendimento).

Produto: ο ο —-Ν OH

Boc

Dados: MS: (M + Na)+ 399.

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos Compostos de Fórmula 1

~N

O

„

Boc

Etapa 1:

Modificações: 9,13 g de ácido 4-clorocinâmico usado, 4 g de produto obtido (44% de rendimento).

Produto:

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3SOCD3) δ ppm 6,58 (d, J=7,1 Hz, 1 H), 7,20 (dd, J=7,1, 5,9 Hz, 1 H), 7,72 (m, 2 H), 8,10 (m, 1 H).

Etapa 2:

Modificações: 3,5 g de 7-cloro-2H-isoquinolin-1-ona usada, 2,8 g de produto obtido (72% de rendimento).

Produto: 15

Dados: RMN 1H (500 MHz1 CDCI3) δ ppm 7,59 (d, J=5,5 Hz, 1 H), 7,69 (dd, J=8,9, 2,1 Hz, 1 H), 7,80 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 8,29 (d, J= 5,5 Hz1 1 H), 8,34 (s, 1 H); MS: (M+H)+ 198.

Etapa 3:

Modificações: 208 mg de 1,7-dicloroisoquinolina usada, 350 mg de produto obtido (89% de rendimento).

Produto:

O

ry

M O

-N OH

\

Boc

Dados: MS: (M + Na)+ 415.

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos Compostos de Fórmula I

O O

Vw

l^N OH

\

Boc

Etapa 1:

Modificações: 25 g de ácido 4-metilcinâmico usado, 15,3 g de produto obtido (62% de rendimento).

Produto:

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2,50 (s, 3 H), 6,54 (d, J= 7,1 Hz, 1 H), 7,13 (d, J= 7,1 Hz, 1 H), 7,49 (m, 2 H), 8,22 (s, 1 H), 11,49 (s,

1 H); MS: (M+H)+160. Etapa 2:

Modificações: 15,3 g de 7-metila-2H-isoquinolin-1-ona usada,

5,15 g de produto obtido (30% de rendimento).

Produto:

10

Dados: (400 MHz, CDCI3) δ ppm 2,58 (s, 3 H), 7,56 (m, 2 H), 7,73 (d, J= 8,3 Hz, 1 H), 8,09 (s, 1 H), 8,20 (d, J=5,6 Hz, 1 H); MS: (M+H)+ 178.

Etapa 3:

Modificações: 205 mg de 1-cloro-7-metilisoquinolina usada, 350 mg de produto obtido (89% de rendimento).

Produto:

O

Boc

Dados: MS: (M + Hf 373.

Os seguintes intermediários foram preparados como aqui descri- to e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

O

IV

M O

-N OH

\

Boc

Etapa 1:

Modificações: 33 g usando ácido 4-metoxicinâmico usado, 7 g de produto obtido (33% de rendimento). Produto:

Dados: RMN 1H (500 MHz1 CD3COCD3) δ ppm 3,90 (s, 3 H),

6,49 (d, J= 7,0 Hz, 1 H), 7,10 (d, J= 7,3 Hz, 1 H), 7,28 (dd, J=8,6, 2,8 Hz, 1 H), 7,57 (d, J=8,9 Hz, 1 H), 7,71 (d, J=2,8 Hz, 1 H).

Etapa 2:

Modificações: 4 g de 7-metóxi-2H-isoquinolin-1-ona usada, 3 g de produto obtido (68% de rendimento).

Produto:

Cl

Dados: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 3,98 (s, 3 H), 7,38 (dd, J=8,9, 2,6 Hz, 1 H), 7,52 (m, 2 H), 7,73 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 8,16 (d, J=5,4 Hz,

1 H).

Etapa 3:

Modificações: 533 mg de 1-clorometoxiisoquinolina usada, 1115 mg de produto obtido (100% de rendimento).

Produto:

OH

Boc

os seguintes intermediários foram preparados conforme descrito aqui e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1 Γ\Ρ

tf OH Boc

Etapa 1:

Modificações: 19,6 g de ácido 4-flúor-3-metoxicinâmico usado,

9,5 g de produto obtido (48% de rendimento).

Produto:

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3COCD3) δ ppm 4,00 (s, 1 H),

6,49 (d, J=7,34 Hz1 1 H), 7,19 (d, J= 7,09 Hz, 1 H), 7,29 (d, J=8,07 Hz, 1 H),

7,86 (d, J=11,74 Hz, 1 H).

Etapa 2:

Modificações: 9 g de 7-flúor-6-metóxi-2H-isoquinolin-1-ona usa- da, 7 g de produto obtido (70% de rendimento).

Produto:

Dados: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ ppm 4,04 (s, 3 H), 7,17 (d, J=8,07 Hz, 1 H), 7,48 (d, J= 5,62 Hz, 1 H), 7,94 (d, J=11,49 Hz, 1 H), 8,20 (d, J=5,62 Hz, 1 H).

Etapa 3:

Modificações: 222 mg de 1-cloro-7-flúor-6-metoxiisoquinolina usada, 406 mg de produto desejado obtido.

Produto desejado: V-C.

Boc

Os seguintes intermediários forma preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

O /r-o

N Boc

O

OH

9-C

Boc

Etapa 1:

Modificações: 3,8 g de ácido 3-(2,3-di-hidro-benzofuran-7-ila)- acrílico usado, 2 g de produto obtido (53% de rendimento).

Produto:

10

O

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,37 (t, J=9,05 Hz, 1 H), 4,73 (t, J=9,05 Hz, 2 H), 6,67 (d, J=7,09 Hz, 1 H), 7,10 (d, J=7,09 Hz, 1 H), 7,37 (d, J=8,07 Hz, 1 H), 7,81 (d, J=8,07 Hz, 1 H); MS: (M+H)+ 188.

Etapa 2:

Modificações: 1,87 g de 2,3-di-hidro-7H-furo[2,3-f]isoquinolin-6- ona usada, 1,84 g de produto obtido (90% de rendimento).

Produto: Dados: RMN 1H (400 Hz, CDCI3) δ ppm 3,43 (t, J=9,05 Hz, 2 H), 4,82 (t, J=9,05 Hz, 2 H), 7,52 (d, J=8,56 Hz, 1 H), 7,66 (d, J=5,62 Hz, 1 H),

7,84 (d, J=8,31 Hz, 1 H), 8,19 (d, J=5,62 Hz, 1 H); MS (M+H)+ 206.

Etapa 3:

Modificações: 206 mg de 6-cloro-2,3-di-hidro-furo[2,3- fjisoquinolina usada, 300 mg de mistura de produtos obtida.

Produtos:

N OH

Boc

Boc

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

N OH

Boc

Etapa 1:

Modificações: 1,14 g de ácido 3-(2,3-di-hidro-benzofuran-4-ila)- acrílico usado, 600 mg de produto obtido (52% de rendimento).

Produto: Dados: RMN 1H (400 MHz1 CD3OD) δ ppm 3,35 (t, J=8,93 Hz, 2 H), 4,74 (t, J=8,93 Hz, 2 H), 6,49 (d, J=7,09 Hz, 1 H), 6,95 (d, J=8,56 Hz, 1 H), 7,25 (d, J=7,09 Hz,, 1 H), 8,13 (d, J=8,80 Hz, 1 H); MS (M+H)+ 188.

Etapa 2:

Modificações: 560 mg, 1,7-di-hidro-2/-/-furo[3,2-f]isoquinolin-6-

ona usada, 380 mg de produto obtido (48% de rendimento).

Produto:

Dados: RMN 1H (400 Hz, CDCI3) δ ppm 3,47 (t, J=9,05 Hz, 2 H),

4,84 (t, J=9,05 Hz, 2 H), 7,24 (d, J=8,56 Hz, 1 H), 7,33 (d, J= 5,87 Hz, 1 H), 8,20 (m, 2 H); MS (M+H)+206.

Etapa 3:

Modificações: 105 mg de 6-cloro-1,2-di-hidro-furo[3,2- f]isoquinolina usada, 390 mg de mistura de produtos obtida.

Produtos:

ÇK, O-C

Boc Boc

Os seguintes intermediários foram preparados conforme descri-

to aqui e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1 Cl

Etapa 1:

Modificações: Uma mistura de 6-metóxi-2H-isoquinolin-1-ona (700 mg) e NCS (532 mg) em MeCN (10 ml_) foi submetida a refluxo por 3 h. A filtração produziu 600 mg (72%) do produto desejado como um sólido.

Produto:

Cl

Dados: RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,96 (s, 1 H), 7,19 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1 H), 7,28 (d, J=2,45 Hz, 1 H), 7,34 (s, 1 H), 8,25 (d, J=9,05 Hz, 1 H); MS: (M+H)+ 210.

Etapa 2:

Modificações: 500 mg de 4-cloro-6-metóxi-2H-isoquinolin-1-ona usa-

da, 400 mg de produto obtido.

Produto:

Cl

Dados: RMN 1H (400 Hz, CDCI3) δ ppm 4,01 (s, 3 H), 7,35 (d, J=2,45 Hz, 1 H), 7,41 (d, J=2,45 Hz, 1 H), 8,24 (d, J=9,29 Hz, 1 H), 8,27 (s, 1 H); MS: (M+H)+ 229.

Método B Etapa 1:

Uma mistura de ácido 4-metóxi-2-metilbenzoico (5,00 g, 1 mmol) e cloreto de tionila (20,0 g, 0,17 mmol) foi aquecida até o refluxo por 30 min. Os voláteis foram removidos em vácuo. Depois de bombear de um dia para o outro, o cloreto de ácido oleoso e viscoso foi usado bruto na próxima rea- ção sem qualquer purificação.

A uma solução de cloreto de 4-metóxi-2-metilbenzoila em CH2CI2 (60 ml_) a 0°C foi adicionado dietilamina gota a gota. A mistura for- mada foi deixada aquecer até a temperatura ambiente por 2 h com agitação.

Os voláteis foram removidos in vacuo. O resíduo foi triturado com EtOAc (100 mL) e foi filtrado. O filtrado foi lavado com HCI 1 M e salmoura, seco em MgSO4. A evaporação do solvente produziu 6,51 g (98%) do produto dese- jado como um óleo viscoso. MS m/z 222 (M+ + H).

Etapa 2:

A uma solução de N,N-dietila-4-metóxi-2-metilbenzamida (221

mg, 1,0 mmol) em THF (2 mL) a -78 0C foi adicionado n-BuLi (0,84 mL de

2,5 M em hexano, 2,10 mmols) gota a gota. A solução laranja formada foi mantida nesta temperatura por mais 30 min antes da adição gota a gota de benzonitrila (103 mg, 1,0 mmol). A solução final foi deixada aquecer até a

temperatura ambiente de um dia para o outro com agitação. Foi suprimida com ácido cítrico 5% gelado. Filtrada, lavada com água e seca. A trituração com 2:1 hexano-EtOAc (5 mL) produziu 205 mg (82%) do produto desejado como um sólido branco.

RMN 1H (d6-DMSO) δ 3,89 (s, 3H), 6,84 (s, 1H), 7,05-7,07 (m, 1H), 7,18 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,44-7,51 (m, 3H), 7,78 (d, J=I,Q Hz, 1H), 8,11 (d, J=9,0 Hz, 1H), MS m/z 252 (M++H).

Etapa 3:

Esse produto, 1-cloro-6-metóxi-3-fenilisoquinolina foi preparado pelo mesmo método descrito acima, exceto pelo uso de 6-metóxi-3-fenila-2H- isoquinolin-1-ona no lugar.

RMN 1H (CDCI3) δ 3,97 (s, 3H), 7,12 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,23-7,26 (m,

1H), 7,40-7,42 (m, 1H ), 7,46-7,50 (m, 2H), 7,89 (s, 1H), 8,08 (d, J=T,0 Hz, 2H), 8,21 (d, J=9,0 Hz, 1H), MS m/z 270, 271 (M++H).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos Compostos de Fórmula 1

O

A uma solução de N,N-dietila-4-metóxi-2-metilbenzamida (332

mg, 1,5 mmol) em THF (15 mL) a -78°C, t-BuLi (1,7 M solução em pentano,

1,3 mL, 2,25 mmols) foi adicionada. A solução vermelha resultante foi agita- da a -78°C por 10 min, a seguir cianopiridina (156 mg, 1,5 mmol) foi adicio- nada. A mistura reacional foi a seguir aquecida até TA e agitada de um dia 20 para o outro. A reação foi interrompida com solução de NH4CI saturada e extraída co acetato de etila duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas. O produto bruto foi purificado por H- PLC preparativa para fornecer o solido amarelado como sal de TFA. (85 mg, 15% de rendimento).

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 3,91 (m, 3 H), 7,09 (dd, J=9,05, 2,45 Hz, 1 H), 7,17 (d, J=2,45 Hz, 1 H), 7,37 (s, 1 H), 7,42 (m, 1 H), 7,92 (m, 1 H), 8,08 (d, J=8,07 Hz, 1 H), 8,18 (d, J=9,05 Hz, 1 H), 8,65 (d, J=4,89 Hz, 1 H), MS m/z 253 (MH+). Etapa 2 (Esquema 3, Etapa 1):

Sal de TFA de 6-metóxi-3-piridin-2-ila-2H-isoquinolin-1-ona (85 mg, 0,232 mmol) foi aquecido sob refluxo com POCI3 (3,0 mL) por 2 dias. A seguir POCI3 foi removido por destilação e o resíduo foi suprimido com gelo.

Ele foi a seguir neutralizado com solução de NaOH IONeo sólido marrom foi coletado como produto puro. (62 mg, 99% de rendimento). MS m/z 271 (MH+).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

A uma solução de N,N-dietila-4-metóxi-2-metilbenzamida (332

mg, 1,5 mmol) em THF (15 mL) a -78°C, t-BuLi (1,7 M solução em pentano,

1,3 mL, 2,25 mmols) foi adicionado. A solução vermelha resultante foi agita- da a -78°C por 10 min, a seguir 4-cianopiridina (164 mg, 1,575 mmol) foi adi- cionada. A mistura reacional foi a seguir aquecida até TA e agitada de um 15 dia para o outro. A reação foi interrompida com solução de NH4CI saturada e o precipitado amarelo foi coletado como um produto puro. (145 mg, 38% de rendimento).

RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) δ 3,91 (s, 3 H), 7,18 (dd, J=8,8 Hz, 2,8 Hz, 1 H), 7,26 (m, 2 H), 8,06 (d, J=6,0 Hz, 2H), 8,16 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,84 (d, J=6,0 Hz, 2H), MS m/z 253 (MH+).

Etapa 2 (Esquema 3, etapa 1): Sal de TFA de 6-metóxi-3-piridin-2-ila-2H-isoquinolin-1-ona (85 mg, 0,232 mmol) foi aquecido sob refluxo com POCI3 (3,0 mL) por 2 dias. A seguir PO- Cl3 foi removido por destilação e o resíduo foi suprimido com gelo. Ele foi a seguir neutralizado com solução de NaOH IONeo sólido marrom foi cole- 5 tado como produto puro. (62 mg, 99% de rendimento). MS m/z 271 (MH+).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

6-metóxi-3-piridin-4-ila-2H-isoquinolin-1-ona (134 mg, 0,531 mmol) foi aquecido sob refluxo com POCI3 (6,0 mL) por 5 dias. A seguir PO- 10 Cl3 foi removido por destilação e o resíduo foi suprimido com gelo. Ele foi, a seguir, neutralizado com solução de NaHCO3 saturada e o sólido marrom foi coletado como produto puro. (125 mg, 87% de rendimento). RMN 1H (DM- SO-d6, 400 MHz) δ 3,99 (s, 3 H), 7,53 (dd, J=9,04 Hz, 2,44 Hz, 1 H), 7,59 (d, J=2,69 Hz, 1 H), 8,26 (d, J=9,05 Hz, 1 H), 8,30 (d, J=5,38 Hz, 2 H), 8,73 (s, 1 15 H), 8,85 (d, J=6,36 Hz, 2 H), MS m/z 271 (MH+).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1 A uma solução de N,N-dietila-4-metóxi-2-metilbenzamida (332 mg, 1,5 mmol) em THF (15 mL) a -78°C, t-BuLi (solução 1,7 M em pentano,

1,3 mL, 2,25 mmols) foi adicionado. A solução vermelha resultante foi agita- da a -78°C por 10 min, a seguir 4-dimetilaminobenzonitrila (219 mg, 1,5 5 mmol) foi adicionada. A mistura reacional foi a seguir aquecida até TA e agi- tada de um dia para o outro. A reação foi interrompida com solução de NH4CI saturada e o precipitado amarelo foi coletado e triturado com éter pa- ra produzir um sólido esbranquiçado como produto puro (247 mg, 56% de rendimento).

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2,97 (s, 6 H), 3,87 (s, 3 H), 6,72 (s, 1

H), 6,78 (d, J=8,80 Hz, 2 H), 6,97 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1 H), 7,10 (d, J=2,45 Hz, 1 H), 7,65 (d, J=8,80 Hz, 2 H), 8,05 (d, J=8,80 Hz, 1 H), 11,11 (s, 1 H), MS m/z 295 (MH+).

3-(4-Dimetilamino-fenila)-6-metóxi-2H-isoquinolin-1 -ona (245 15 mg, 0,83 mmol) foi aquecida sob refluxo com POCI3 (10,0 mL) por 2 dias. A seguir POCI3 foi removido por destilação e o resíduo foi suprimido com gelo. Ele foi, a seguir, neutralizado com solução de NaOH 10 N e extraído com acetato de etila duas vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e se- cas (MgSO4). A evaporação do solvente forneceu um sólido laranja como 20 produto (215 mg, 83% de rendimento).

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 3,01 (s, 6 H), 3,96 (s, 3 H), 6,88 (d, J=9,05 Hz, 2 H), 7,20 (dd, J=9,17, 2,57 Hz, 1 H), 7,28 (d, J=2,45 Hz, 1 H),

7,94 (s, 1 H), 7,96 (d, J=9,05 Hz, 2 H), 8,13 (d, J=9,29 Hz, 1 H), MS m/z 313 (MH+). Uma mistura de [4-(1-Cloro-6-metoxiisoquinolin-3-ila)-fenila]- dimetilamina (110 mg, 0,35 mmol) e hidrogenodifluoreto de tetrabutilfosfônio (0,5 g) foi aquecida a 140°C no reator de micro-ondas de Smith por 20 min. A seguir, foi adicionada água e extraída com acetato de etila. A camada or- 5 gânica foi separada, lavada com água e seca (MgSO4). A evaporação do solvente proporcionou um sólido marrom como subproduto. (85 mg, 82% de rendimento). MS m/z 297 (MH+).

Método C

Etapa 1:

A uma solução de N-BOC-3-(R)-hidróxi-L-prolina (6,22 g, 26,9

mmols) em DMF (250 mL) a O0C foi adicionado NaH (60%, 3,23 g, 80,8 mmols) em várias porções. A suspensão formada foi agitada nesta tempera- tura por 30 min. 1,3-dicloroisoquinolina (5,33 g, 26,9 mmols) foi adicionada como sólido em uma porção e a mistura final foi agitada em temperatura 15 ambiente por 12 h. Foi suprimida com ácido cítrico 5% gelado (aq), extraída com EtOAc (300 mL). A fase aquosa foi extraída com EtOAc novamente. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com ácido cítrico 5% (aq) e salmoura respectivamente, secas em MgSO4 e filtradas. O filtrado foi evapo- rado in vacuo até a secura para produzir 10,53 g (99,8%) de éster 1-terc- 20 butílico do ácido 4-(6-metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico 5

10

15

20

como uma espuma branco-suja. Esse material foi usado na próxima etapa reacional da forma bruta, sem purificação adicional.

RMN 1H (CD3OD) δ 1,43, 1,44 (rotâmeros, 9H), 2,39-2,44 (m, 1H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,80-3,90 (m, 2H), 4,44-4,52 (m, 1H), 5,77 (b, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,58 (t, J= 7,3 Hz, 1H), 7,71-7,78 (m, 2H), 8,16 (d, J=7,5 Hz, 1H), MS m/z 392 (M++H).

Etapa 2:

Uma mistura do éster 1-terc-butílico do ácido 4-(6- metoxiisoquinolin-1-ilóxi)-pirrolidino-1,2-dicarboxílico (39 mg, 0,10 mmol), ácido fenilborônico (14,6 mg, 0,12 mmol), terc-butóxido de sódio (38 mg, 0,40 mmol) e ((t-Bu)2POH)2PdCI2 (POPd) (5 mg, 0,01 mmol) em THF (2 mL) foi aquecido até o refluxo por 4 h. Depois de esfriar, a mistura formada foi suprimida com ácido cítrico 5% (aq) e extraída com EtOAc (20 mL). A cama- da orgânica foi lavada com salmoura, seca em MgSO4, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para produzir 36 mg (83%) do produto desejado como uma espuma branco-suja.

RMN 1H (CD3OD) δ 1,43, 1,45 (rotâmeros, 9H), 2,51-2,56 (m, 1H), 2,74-2,82 (m, 1H), 3,88-3,92 (m, 1H), 3,98-4,01 (m, 1H), 4,50-4,57 (m, 1H),

5,95 (b, 1H), 7,36-7,39 (m, 1H), 7,45-7,48 (m, 2H), 7,55 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,70 (t, J= 7,5 Hz, 1H), 7,84-7,89 (m, 2H), 8,14-8,17 (m, 3H), 9,05 (b, 1H), MS m/z 435 (M++H).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1 Preparado usando ácido 4-metoxifenilborônico

RMN 1H (CD3OD) δ 1,40, 1,45 (rotâmeros, 9H), 2,50-2,55 (m, 1H), 2,73-2,81 (m, 1H), 3,81-3,89 (m, 4H), 3,98-4,01 (m, 1H), 4,50-4,57 (m, 1H), 5,93 (b, 1H), 7,02 (d, J=9,0 Hz, 2H), 7,50 (t, J= 7,3 Hz1 1H), 7,67 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,83 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,5 Hz, 2H),

8,15 (d, J=8,0 Hz, 1H), MS m/z 465 (M++H).

O seguinte intermediário foi preparado conforme descrito acima:

Preparado usando ácido 4-piridilborônico

RMN 1H (CD3OD) δ 1,43, 1,46 (rotâmeros, 9H), 2,53-2,56 (m, 1H), 2,80-2,89 (m, 1H), 3,90-3,93 (m, 1H), 4,00-4,05 (m, 1H), 4,50-4,57 (m, 1H), 6,00, 6,05(rotâmeros, 1H), 7,80 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,87 (t, J=7,5 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,32 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,84 (d, J=6,0 Hz, 2H), 8,84 (d, J=6,5 Hz1 2H, MS m/z 436 (M++H).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme descri- to aqui e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1 Q

CM

,ο

N OH

Preparado usando ácido 4-N,N-dimetilamino-fenilborônico, MS m/z 478 (M++H).

Método D

mg, 2,9 mmols) em THF (15 mL) a -78°C foi adicionado n-BuLi (2,3 mL de

2,5 M em hexano, 5,74 mmols) gota a gota. A solução vermelha formada foi mantida nesta temperatura por mais 30 min antes de ser "canulada" para uma solução de éster etílico do ácido tiazol-2-carboxílico (A. Mediei et al, 10 Tetrahedron Lett. 1983, p2901) (450 mg, 2,9 mmols) em THF (5 mL) a -78 c. A solução verde escura final foi mantida nesta temperatura por 2 h com agi- tação. Foi suprimida com NH4CI (aq) Sat. e extraída com EtOAc (50 mL). A camada orgânica foi lavada com NH4CI Sat. (aq) e salmoura, seca, purifica-

Etapa 2

NH4OAc

O

5

Etapa 1:

A uma solução de N,N-dietila-4-metóxi-2-metilbenzamida (633 da por cromatografia em coluna flash, eluindo com 2:1 de EtOAc:hexano para fornecer 405 mg (45%) do produto desejado como um óleo viscoso es- branquiçado.

RMN 1H (CDCI3) δ 1,08 (t, J= 7,0 Hz, 6H), 3,22 (b, 2H), 3,44 (b, 2H), 3,79 (s, 3H), 4,59 (s, 2H), 6,79-6,81 (m, 1H), 6,86 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,16 (d, J=8,5 Hz1 1H), 7,66 (d, J=3,0 Hz, 1H), 8,00 (d, J=3,0 Hz, 1H).

MS m/z 333 (M++H).

Etapa 2:

Uma mistura de N,N-dietila-4-metóxi-2-(2-oxo-2-tiazol-2-iletila)- 10 benzamida (405 mg, 1,22 mmol) e NH4OAc (3,0 g, 38,9 mmols) foi aquecida até 140°C em um tubo fechado por 1 h. A solução fundida foi vertida em á- gua gelada, filtrada, e a massa foi lavada totalmente com água. O sólido amarronzado seco (240 mg, 76%) foi usado bruto para a próxima reação sem purificação adicional. MS m/z 259 (M+ + H).

Etapa 3:

Esse produto, 1-cloro-6-metóxi-3-triazol-2-isoquinolina foi prepa- rado conforme descrito acima, exceto usando no lugar 6-metóxi-3-tiazol-2- ila-2H-isoquinolin-1 -ona,

RMN 1H (CDCI3) δ 3,97 (s, 3H), 7,16 (d, J=4,0 Hz, 1H), 7,27-7,31 (m, 1H), 7,46 (d, J= 5,0 Hz, 1H ), 7,93 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 8,22 (d, J=15,5 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), MS m/z 277 (M++H).

Etapa 4:

Esse produto foi preparado pelo mesmo método descrito acima, exceto pelo uso no Iugarde 1-cloro-6-metóxi-3-tiazol-2-ilisoquinolina:

RMN 1H (CD3OD) δ 0,97-1,09 (m, 12H), 1,24-1,29 (m, 10H),

1,44-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,20-2,26 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,65-2,71 (m, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,12-4,27 (m, 2H), 4,38- 4,52 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,69-5,74 (m, 1H), 5,99 (b, 1H), 7,14 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,66 (d, J=3,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J=3,0 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,11 (d, J=9,0 Hz, 1H), 9,14 (b, 1H). MS m/z 797 (M++H).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito, e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

O^.

O

6-metóxi-3-(3-metoxiisoxazol-5-ila)-2H-isoquinolin-1 -ona foi preparada usando N,N-dietila-4-metóxi-2-[2-(3-metoxiisoxazol-5-ila)-2-oxo-etila]-benza- mida.

RMN 1H (DMSO-de) δ 3,89 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 7,01 (s, 1H), 7,14-7,16 (m, 2H), 7,43 (s, 1H), 8,13 (d, J=8,5 Hz1 1H),

MS m/z 273 (M++H).

O

Cl

10

1 -cloro-6-metóxi-3-(3-metoxiisoxazol-5-ila)-isoquinolina foi preparada usando 6-metóxi-3-(3-metoxiisoxazol-5-ila)-2H-isoquinolin-1-ona RMN 1H (CDCI3) δ 3,97 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 6,60 (s, 1H), 7,17 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,31-7,33 (m, 1H), 8,02 (s, 1H), 8,23 (d, J=9,0 Hz, 1H).

MS m/z 291, 293 (M++H).

15

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui

descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1 —Ο

N,N-dietila-4-metóxi-2-[2-(5-metoxioxazol-2-ila)-2-oxo-etila]- benzamida, foi preparada usando éster etílico do ácido 5-metoxioxazol-2- carboxílico.

MS m/z 347 (M++H).

6-metóxi-3-(5-metoxioxazol-2-ila)-2H-isoquinolin-1-ona foi preparada

usando N,N-dietila-4-metóxi-2-[2-(5-metoxioxazol-2-ila)-2-oxo-etila]-benzami- da.

RMN 1H (DMSO-d6) δ 3,94 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 6,34 (s, 1H), 6,99 (d, J=2,0 Hz1 1H), 7,12-7,14 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 8,32 (d, J=9,0 Hz, 1H).

MS m/z 274 (M++H).

1 -cloro-6-metóxi-3-(5-metoxioxazol-2-ila)-isoquinolina foi preparada usando 6-metóxi-3-(5-metoxioxazol-2-ila)-2H-isoquinolin-1-ona.

RMN 1H (CDCI3) δ 3,96 (s, 3H), 4,00 (s, 3H), 6,34 (s, 1H), 7,12 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,28-7,31 (m, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,23 (d, J=9,0 Hz, 1H).

MS m/z 291, 293 (M++H).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme descri- to aqui e podem ser incorporados nos Compostos de Fórmula 1 10

15

20

A uma solução de N,N-dietila-4-metóxi-2-metilbenzamida (332 mg, 1,5 mmol) em THF (15 mL) a -78°C foi adicionado t-BuLi (solução 1,7 M em pentano, 2,12 mL, 3,6 mmols). A solução vermelha resultante foi agitada a -78°C por 10 min, a seguir nicotinato de metila (206 mg, 1,5 mmol) foi adi- cionado. A mistura reacional foi agitada a -78°C por 2 h. A seguir a reação foi interrompida com solução de NH4CI saturada e extraída com acetato de etila duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa para pro- duzir um óleo amarelado espesso como sal de TFA (124 mg, 19% de rendi- mento).

MS m/z 349 (M + Na+).

N,N-dietila-4-metóxi-2-(2-oxo-2-piridin-3-iletila)-benzamida (120 mg, 0,272 mmol) foi aquecida com acetato de amônio (1 g) por 3 h. A seguir, ela foi esfriada e água foi adicionada. Foi extraída com acetato de etila e a camada orgânica foi separada. Foi, a seguir, seca (MgSO4) e concentrada para pro- duzir um sólido amarronzado como produto (65 mg, 95% de rendimento).

RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,89 (s, 3 H), 6,93 (s, 1 H), 7,10 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1 H), 7,19 (d, J=2,45 Hz, 1 H), 7,52 (dd, J=7,46, 4,77 Hz, 1 H), 8,15 (m, 2 H), 8,64 (dd, J=4,89, 1,47 Hz, 1 H), 8,96 (d, J=1,71 Hz, 1 H),

11,51 (s, 1 H).

MS m/z 253 (MH+). 6-metóxi-3-piridin-3-ila-2H-isoquinolin-1-ona (65 mg, 0,258 mmol) foi aqueci- da sob refluxo com POCI3 (2,5 mL) por 7 dias. A seguir POCI3 foi removido por destilação e o resíduo foi suprimido com gelo. ele foi a seguir neutraliza- do com solução de NaOH 10 N e extraído com acetato de etila duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas para produzir o sólido amarelo como produto. (27 mg, 39% de rendimento).

MS m/z 271 (MH+).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

A uma solução de N,N-dietila-4-metóxi-2-metilbenzamida (332

mg, 1,5 mmol) em THF (15 mL) a -1Q°C foi adicionado t-BuLi (solução 1,7 M em pentano, 2,2 mL, 3,75 mmols). A solução vermelha resultante foi agitada a -78°C por 10 min, a seguir éster metílico do ácido N,N-dimetilantranílico (269 mg, 1,5 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada a -78°C 15 por 2 h. A seguir a reação foi interrompida com solução de NH4CI saturada e extraída com acetato de etila duas vezes. As camadas orgânicas combina- das foram secas (MgSO4) e concentradas. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa para produzir um óleo amarelado espesso como produto (256 mg, 46% de rendimento).

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 0,99-1,13 (m, 6 H), 3,23-3,31 (m,

8 H), 3,39 (m, 2 H), 3,82 (s, 3 H), 4,35 (s, 2 H), 6,91 (dd, J=8,44, 2,57 Hz, 1 Η), 6,99 (d, J= 2,45 Hz1 1 Η), 7,22 (d, J=8,56 Hz, 1 Η), 7,69 (t, J=7,70 Hz, 1 H), 7,84 (m, 1 H), 7,96 (d, J=8,31 Hz, 1 H), 8,18 (d, J= 7,83 Hz, 1 H).

MS m/z 369(MH+).

2-[2-(2-Dimetilamino-fenila)-2-oxoetila]-N,N-dietila-4-metoxibenzamida 5 (250 mg, 0,678 mmol) foi aquecida com acetato de amônio (1,5 g) por 2 h. A seguir ela foi esfriada e água foi adicionada. Foi extraída com acetato de etila e a camada orgânica foi separada. Ela foi a seguir seca (MgSO4) e con- centrada para produzir um sólido amarelado como produto (125 mg, 63% de rendimento).

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 2,95 (s, 6 H), 3,92 (s, 3 H), 6,92

(s, 1 H), 7,12 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1 H), 7,16 (d, J=2,45 Hz, 1 H), 7,35 (m, 1 H), 7,55 (m, 2 H), 7,63 (d, J=7,83 Hz, 1 H), 8,20 (d, J=9,05 Hz, 1 H).

MS m/z 295 (MH+).

3-(2-dimetilamino-fenila)-6-metóxi-2H-isoquinolin-1 -ona (125 mg, 15 0,425 mmol) foi aquecida sob refluxo com POCI3 (4,0 mL) por um dia. A se- guir POCI3 foi removido por destilação e o resíduo foi suprimido com gelo. Ele foi a seguir neutralizado com solução de NaOH 10 N e extraído com ace- tato de etila duas vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e secas (MgSO4). A evaporação do solvente produziu um sólido amarronzado como 20 produto (82 mg, 62% de rendimento).

MS m/z 313 (MH+). F

Uma mistura de [2-(1-Cloro-6-metoxiisoquinolin-3-ila)-fenila]-

dimetilamina (82 mg, 0,262 mmol) e hidrogenodifluoreto de tetrabutilfosfônio (1,0 g) foi aquecida a 140°C no reator de micro-ondas de Smith por 20 min. A seguir, foi adicionada água e extraída com acetato de etila. A camada or- 5 gânica foi separada, lavada com água e seca (MgSO4). A evaporação do solvente proporcionou um produto bruto o qual foi purificado por HPLC pre- parativa para produzir um óleo amarelado como produto. (85 mg).

mg, 1,5 mmol) em THF (15 mL) a -78°C foi adicionado t-BuLi (solução 1,7 M em pentano, 2,2 mL, 3,75 mmols). A solução vermelha resultante foi agitada a -78°C por 10 min, a seguir éster metílico do ácido (3-dimetilamino)benzoico (269 mg, 1,5 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada a -78°C por 2 h. A seguir a reação foi interrompida com solução de NH4CI saturada e 20 extraída com acetato de etila duas vezes. As camadas orgânicas combina- das foram secas (MgSO4) e concentradas. O produto bruto foi purificado por

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 3,41 (s, 6 H), 4,00 (s, 3 H), 7,42 (dd, J=9,05, 2,45 Hz, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 7,71 (m, 2 H), 7,99 (m, 1 H), 8,16

(m, 2 H), 8,31 (s, 1 H),

MS m/z 297 (MH+).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

O

A uma solução de N,N-dietila-4-metóxi-2-metilbenzamida (332 HPLC preparativa para produzir um óleo amarelado espesso como sal de TFA (245 mg, 33% de rendimento).

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 1,01 (t, J=6,85 Hz, 3 H), 1,09 (m,

3 H), 3,11 (s, 6H), 3,21 (m, 2 H), 3,40 (m, 2 H), 3,79 (s, 3 H), 4,39 (s, 2 H), 6,84-6,91 (m, 2 H), 7,19 (d, J=8,32 Hz, 1 H), 7,35 (m, 1 H), 7,49 (t, J=8,07 Hz, 1 H), 7,66-7,71 (m, 2 H).

MS m/z 369(MH+).

2-[2-(3-dimetilamino-fenila)-2-oxo-etila]-N,N-dietila-4- metoxibenzamida (240 mg, 0,497 mmol) foi aquecida com acetato de amônio (2,0 g) por 2,5 h. A seguir, ela foi esfriada e água foi adicionada, um sólido amarronzado foi coletado como produto puro (95 mg, 65% de rendimento).

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 2,98 (s, 6 H), 3,88 (s, 3 H), 6,74-

6,87 (m, 2 H), 7,01-7,07 (m, 3 H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1 H), 7,28 (t, J= 7,82 Hz, 1 H), 8,10 (d, J=8,80 Hz, 1 H), MS m/z 295 (MH+).

3-(3-dimetilamino-fenila)-6-metóxi-2H-isoquinolin-1-ona (92 mg, 0,312

mmol) foi aquecida sob refluxo com POCI3 (3,0 mL) por 2 fias; A seguir PO- Cl3 foi removido por destilação e o resíduo foi suprimido com gelo. Ele foi a seguir neutralizado com solução de NaHCO3 saturada e extraída com aceta- to de etila duas vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e secas 20 (MgSO4). A evaporação do solvente forneceu um óleo espesso amarronzado como produto. (72 mg, 74% de rendimento). MS m/z 313 (MH+). F

Uma mistura de [3-(1-Cloro-6-metoxiisoquinolin-3-ila)-fenila]-

dimetilamina (72 mg, 0,23 mmol) e hidrogenodifluoreto de tetrabutilfosfônio (0,5 g) foi aquecida a 140°C no reator de micro-ondas de Smith por 20 min. A seguir, foi adicionada água e extraída com acetato de etila. A camada or- 5 gânica foi separada, lavada com água e seca (MgSO4). A evaporação do solvente forneceu um óleo amarronzado como produto (58 mg, 85% de ren- dimento).

dioxano sob refluxo produziu o monoalquilaminotiazol como sal de HBr com rendimento quantitativo. A alquilação do éster etílico do ácido 2- etilaminotiazol-4-carboxílico com Etl em DMF forneceu o éster etílico do áci- do 2-dietilaminotiazol-4-carboxílico.

MS m/z 297 (MH+).

Os seguintes intermediários foram preparados conforme aqui

descrito e podem ser incorporados nos compostos de Fórmula 1

o

O

S

O

Cl

A condensação do bromopiruvato de etila com etiltiouréia em

Método E Etapa 3

Bu4P HF2

140°C, micro-ondas

Etapa 1:

Uma suspensão de éster metílico do ácido 2-cianometila-4- metoxibenzoico (1,9 g e TsOH-H2O (0,15 g, mmol) em morfolino 5 mL) foi submetida a refluxo por 4 h e o solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi recristalizado a partir de EtOAc/hexanos com gotas de MeOH para fornecer o produto (0,43 g, 17%). MS m/z 266 (M+ + 1).

Etapa 2:

Uma mistura de 6-metóxi-3-morfolin-4-ilisoquinolin-1-ol (0,298 g,

1,15 mmol) em POCI3 (20 mL)foi submetido a refluxo por 2 h, o solvente foi removido in vacuo e água elada foi adicionada. O pH foi ajustável para > que

11 pela adição de NaOH 1,0 N. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. O extrato foi seco (MgSO4), o solvente foi removido in vacuo para fornecer o produto (0,299 g, 94%). MS m/z 279 (M+ + 1).

Etapa 3:

Uma mistura de 1-cloro-6-metóxi-3-morfolin-4-ilisoquinolina

(0,050 g, 0,18 mmol) e hidrogenofluoreto de tetrabutilfosfônio (0,8 g, 2,8 mmol) [Sinlett 1992, (4), 345-6] foi aquecida até 140°C em micro-ondas por 10 min. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e filtrada através de uma pré-coluna ISCO 25g com uma camada de gel de silício no topo e o solvente 20 foi removido para fornecer o produto (0,037 mg, 77%). RMN 1H (clorofórmio- d) δ ppm 3,48 (m, 4 H), 3,84 (m, 4 H), 3,89 (s, 3 H), 6,46 (d, J=1,22 Hz, 1 H),

6,85 (s, 1 H), 6,90 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1 H), 7,82 (d, J=8,85 Hz, 1 H), MS m/z 263 (M++1).

Método F 6-flúor e 6-alquilisoquinolinas usados na preparação dos com- postos de Fórmula 1 foram preparados através da síntese de Pomeranz- Fritsch (Typical procedure: Preparation of optically active 8,8-disubstituted 1,1-biisoquinoline, K. Hirao1 R. Tsuchiya, Y. Yano, H. Tsue, Heterocycles 5 42(1) 1996, 415-422), conforme esboçado abaixo. Os produtos foram con- vertidos nos derivados de 1-cloro através dos intermediários N-óxido.

Esquema Sintético Geral:

Cl

Reagentes e condições reacionais: (a) refluxo em benzeno, re- moção azeotrópica de água; (b) primeiro etapa: cloroformiato de etila, trime- tilfosfita em THF, segunda etapa: tetracloreto de titânio em clorofórmio; (c)

MCPBA em CH2CI2; (d) POCI3 em benzeno.

R Isoquinolina, Rendimento 1-cloreto, rendimento combinado F 20 43 Et 76 65 i-Pr 14 18 t-Bu 47 55 A preparação dos intermediários de 6-isopropoxila e 6-terc- butoxilisoquinolina:

Algumas 6-alcóxi-1-cloroisoquinolinas foram preparadas por um deslocamento isso direto da 6-flúor-1-cloroisoquinolina com os íons metáli- cos correspondentes, tais como terc-butóxido de potássio (53%) e isopropó- xido de sódio (54%).

Esquema Sintético Geral RONa

10

R = ânions alcóxidos tais como terc-Bu, iso-Pr

A 6-flúor-1-cloroisoquinolina foi submetida a um deslocamento nucleofílico aromático com isopropóxido de sódio e terc-butóxido de potássio em DMF para produzir o correspondente 6-isopropoxila (54%): RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,43 (d, J=6,11 Hz, 6 H) 4,76 (m, «7=6,11 Hz, 1 H) 7,08 (d, J=2,45 Hz, 1 H) 7,29 (dd, J=9,29, 2,45 Hz, 1 H) 7,50 (d, J=5,62 Hz, 1 H) 8,18 (d, J= 5,87 Hz, 1 H) 8,24 (d, J=9,29 Hz, 1 H) e 6-terc-butoxila-1- cloroisoquinolines (55%): RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 1,48 (s, 9 H) 7,31 (m, 2 H) 7,47 (d, J=5,62 Hz, 1 H) 8,18 (d, J=5,62 Hz, 1 H) 8,21 (d, J=9,78 Hz, 1 H) como o principal produto, respectivamente. Essas 6-alcoxila- 1-cloroisoquinolinas foram incorporadas nos compostos de Fórmula 1 como aqui descrito.

Método G

Esquema Sintético Geral

O

POCI3

TFAA, Pyr. CHCI3, RT

Tolueno

@refluxo

refluxo

Incorporação nos compostos de Fórmula 1

Incorporação nos compostos de Fórmula 1 A síntese feita usa as tecnologias descritas, em parte, nas se- guintes referências:

(1) Hojo, Masaru; Masuda, Ryoichi; Sakaguchi, Syuhei; Takagawa, Makoto, Synthesis (1986), (12), 1016-17 5 (2) Rigby, James H.; Holsworth, Daniel D.; James, Kelly. Vinyl Isocyanates In Synthesis. [4 + 2] Cycloaddition Reactions With Benzyne Addends. Journal Of Organic Chemistry (1989), 54(17), 4019-20

(3) Uchibori, Y.; Umeno, M.; Yoshiokai, H.; Heterocycles, 1992, 34 (8), 150 Estudos Biológicos

Ensaios enzimáticos do complexo da protease NS3/4A HCV e

ensaios de replicon HCV baseados em células foram utilizados na presente descoberta, e foram preparados, efetuados e validados da seguinte forma: Geração de complexo NS3/4A protease recombinante

Complexos NS3 protease da HCV, derivados da cepa BMS, ce- 15 pa H77 ou cepa J4L6S foram gerados conforme descrito abaixo. Essas pro- teínas recombinantes purificadas foram geradas para uso em um ensaio homogêneo (ver abaixo) para fornecer uma indicação do quão eficazes os compostos da presente descoberta serão na inibição da atividade proteolíti- ca da NS3 de HCV.

Soro de um paciente infectado com HIV foi obtido do Dr. T. Wri-

ght, Hospital de São Francisco. Um molde de DNAc de comprimento total projetado (cumprimento ao ácido desoxirribonucleico) do genoma HCV (cepa BMS) foi construído a partir de fragmentos de DNA obtidos por PCR de transcrição reversa (TA-PCR) do RNA do soro (ácido ribonucléico) e usando 25 iniciadores selecionados com base a homologia entre outras cepas de genó- tipo 1a. A partir da determinação de toda a seqüência de genoma, um genó- tipo 1a foi atribuído ao isolado de HCV de acordo com a classificação de Simmonds et al. (ver P Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McO- mish, BC Dow, EA Follett, PL Yap e H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 30 1493-1503 (1993)). A seqüência de aminoácidos da região não-estrutural, NS2-5B, foi demonstrado como sendo > de 97% idêntica ao genótipo 1a de HCV (H77) e 87% idêntica ao genótipo 1b (J4L6S). Os clones infecciosos, * Η77 (genótipo 1a) e J4L6S (genótipo 1b) foram obtidos de R. Purcell (NIH) e as seqüências estão publicadas no Genbank (AAB67036, ver Yanagi1M., Purcell,R.H., Emerson1S.U. e Bukh1J. Proc. NatL Acad. Sei. U.S.A. 94(16), 8738-8743 (1997); AF054247, ver Yanagi1M., St CIaire1M., Shapiro1M., Em- erson,S.U., Purcell,R.H. e Bukh1J. Virology 244(1), 161-172. (1998)).

As cepas H77 e J4L6S foram usadas para a produção dos com- plexos de protease NS3/4A recombinantes. O DNA codificando o complexo NS3/4A protease de HCV recombinante (aminoácidos 1027 a 1711) para essas cepas foi manipulado conforme descrito por P. Gallinari et al. (ver 10 Gallinari P, Paolini C, Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry 38(17):5620-32, (1999)). Resumidamente, um final solubiliza- dor de três Iisinas foi adicionado na extremidade 3’ da região codificadora de NS4A. A cisteína na posição P1 do sítio de clivagem NS4A-NS4B (aminoá- cido 1711) foi alterada para uma glicina para evitar a clivagem proteolítica da 15 etiqueta da lisina. Além disso, uma mutação de cisteína para serina foi intro- duzida por PCR na posição de aminoácidos 1454 para prevenir a clivagem autolítica no domínio da NS3 helicase. O fragmento de DNA variante foi clo- nado no vetor de expressão bacteriano pET21b (Novagen) e o complexo NS3/4A foi expresso na cepa de Escherichia coli BL21 (DE3) (Invitrogen) 20 seguindo o protocolo descrito por P. Gallinari et al. (ver Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R., J ViroL 72(8):6758-69 (1998)) com modificações. Resumidamente, a expressão do complexo NS3/4A protease foi induzida com isopropila-p-D-1- tiogalactopiranosídeo (IPTG) 0,5 milimolar por 22 horas (h) a 20°C. Uma 25 fermentação típica (1 litro (L)) produziu aproximadamente 10 gramas (g) da pasta de células úmidas. As células foram ressuspensas em tampão de Iise (10 mL/g) consistindo em ácido N-(2-hidroxietila)piperazino-N’-(2- etanossulfônico) (HEPES) 25 mM, pH 7,5, glicerol 20%, cloreto de sódio 500 mM (NaCI), Triton X-100 0,5%, 1 micrograma/mililitro ('Vg/mL") de lisozima, 30 cloreto de magnésio 5 mM (MgCI2)1 1 μg/mL de Dnasel, 5 mM de β- mercaptoetanol (βΜΕ), inibidor da protease-ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) livre (Roche), homogeneizadas e incubadas por 20 minutos (min) a 4°C. O homogenato foi submetido ao ultra-som e clarificado por ultracentri- fugação a 235000 g por 1 hora a 4°C. Imidazol foi adicionado ao sobrena- dante até uma concentração final de 15 mM e o pH foi ajustado para 8,0. O extrato de proteína bruto foi carregado em uma coluna de níquel-ácido nitri- 5 oltriacético (Ni-NTA) pré-equilibrada com tampão B (HEPES 25 mM, pH 8,0, glicerol 20%, NaCI 500 nMm Triton X-100 0,5%, imidazol 15 mM, βΜΕ 5 mM). A amostra foi carregada em uma taxa de fluxo de 1 mL/min. A coluna foi lavada com 15 volumes de coluna de tampão C (igual ao tampão B, exce- to com Triton X-100 0,2%). A proteína foi eluída com imidazol 200 mM).

As frações contendo complexo NS3/4A protease foram reunidas

e carregadas em uma coluna dessalinizadora Superdex-S200 pré- equilibrada com tampão D (HEPES 25 mM, pH 7,5, 20% de glicerol, NaCI 300 mM, Triton X-100 0,2%, βΜΕ 10 mM). A amostra foi carregada em uma taxa de fluxo de 1 mL/min. As frações contendo o complexo NS3/A4 protea- 15 se foram reunidas e condensadas até aproximadamente 0,5 mg/mL. A pure- za dos complexos NS3/4A protease derivados das cepas BMS, H77 e J4L6S foram consideradas como sendo maiores do que 90% por SDS-PAGE e aná- lises de espectrometria de massa. A enzima foi armazenada a -80°C, des- congelada em gelo e diluída antes do uso em um tampão de ensaio.

Ensaio do peptídeo FRET para monitorar a atividade proteolítica da NS3/4A HCV

O propósito deste ensaio in vitro foi medir a inibição dos com- plexos da NS3 protease de HCV, derivados da cepa BMS, da cepa H77 ou da cepa J4L6S, conforme descrito acima, pelos compostos da presente des- 25 crição. Esse ensaio fornece uma indicação do quanto os compostos eficazes da presente descrição seriam na inibição da atividade proteolítica de NS3 de HCV.

Para monitorar a atividade da NS3/4A protease de HCV, um substrato de peptídeo NS3/4A foi usado. O substrato foi RET S1 (Substrato Depsipeptídeo de Transferência de Energia por Ressonância; AnaSpec, Inc. cat # 22991) (peptídeo FRET), descrito por Taliani et al. em Anal. Biochem. 240(2):60-67 (1996). A seqüência deste peptídeo é vagamente baseada no sítio de clivagem natural NS4A/NS4B para a NS3 protease de HCV, exceto que existe uma ligação éster ao invés de uma ligação amida no sítio de cli- vagem. O peptídeo também contém um doador de fluorescência, EDANS, próximo de uma extremidade do peptídeo e um aceptor, DABCYL, próximo 5 da outra extremidade. A fluorescência do peptídeo é suprimida pela transfe- rência de energia de ressonância intermolecular (RET) entre o doador e ao aceptor, porém conforme a NS3 protease cliva o peptídeo os produtos são liberados do supressor RET e a fluorescência do doador fica aparente.

O substrato peptídico foi incubado com um dos três complexos NS3/4A protease recombinantes, na ausência ou presença de um composto da presente descoberta. Os efeitos inibitórios de um composto foram deter- minados pelo monitoramento da formação do produto de reação fluorescente em temo real usando Cytofluor Série 4000.

Os reagentes foram os seguintes: HEPES e glicerol (UItrapure) foram obtidos da GIBCO-BRL. Dimetilsulfóxido (DMSO) foi obtido da Sigma. α-mercaptoetanol foi obtido da Bio Rad.

Tampão de ensaio: HEPES 50 mM, pH 7,5; NaCI 0,15 M; Triton

0,1%; Glicerol 15%; βΜΕ 10 mM; Substrato: concentração final de 2 μΜ (de uma solução estoque 2 mM em DMSO armazenada a -20°C). NS3/4A prote- 20 ase tipo 1a de HCV (1b), concentração final de 2-3 nM (de uma solução es- toque 5 μΜ em HEPES 25 mM, pH 7,5, glicerol 20%, NaCI 300 mM, Triton- X100 0,2%, βΜΕ 10 mM). Para os compostos com potências que se aproxi- mam do limite de ensaio , o ensaio se tornou mais sensível pela adição de 50 μg/mL de albumina de soro bovino (Sigma) ao tampão de ensaio e redu- 25 zindo a concentração de protease final até 300 pM.

O ensaio foi feito em uma placa preta de poliestireno com 96 poços da Falcon. Cada poço continha 25 μΙ_ do complexo NS3/4A protease em tampão de ensaio, 50 μΙ_ de um composto da presente descoberta em DMSO 10%/tampão de ensaio e 25 μΙ_ de substrato em tampão de ensaio. 30 Um controle (sem composto) também foi preparado na mesma placa de en- saio. O complexo enzimático foi misturado com o composto ou com a solu- ção de controle por 1 min antes de iniciar a reação enzimática pela adição do substrato. A placa de ensaio foi lida imediatamente usando Cytofluor Sé- rie 4000 (Perspective Biosystems). O instrumento foi ajustado para Ier uma emissão de 340 nm e excitação de 490 nm a 25°C. As reações foram geral- mente seguidas por aproximadamente 15 minutos.

5 A inibição porcentual foi calculada com a seguinte equação:

1 — [(ôFin/ôFCon) x 100]

onde ôF é a alteração na fluorescência na faixa linear da curva. Um ajuste de curva não-linear foi aplicado aos dados de inibição- concentração, e a concentração 50% eficaz (IC50) foi calculada pelo uso do software Excel XLift usando a equação y = A+(B-A)/(1 +((c/x)AD))).

Os compostos da presente descoberta, os quais foram testados contra mais de um tipo de complexo NS3/4A, foram considerados como a- presentando propriedades inibitórias similares através dos compostos que demonstraram uniformemente maior potência contra as cepas 1b em compa- ração com as cepas 1a.

Ensaios de especificidade

Os ensaios de especificidade foram efetuados para demonstrar a seletividade in vitro dos compostos da presente descoberta pela inibição do complexo NS3/4A protease de HCV em comparação com outras serina ou cisteína proteases. As especificidades dos compostos da presente des- coberta foram determinadas contra uma variedade de serina proteases elas- tase de neutrófilo humano (HNE), elastase pancreática suína (PPE) e quimo- tripsina pancreática humana e uma cisteína protease: catepsina B hepática humana. Em todos os casos, um protocolo no formiato de uma placa de 96 poços usando ou substrato de p-nitroanilina colorimétrica (pNA) ou amino- metilcumarina (AMC) fluorimétrica específica para cada enzima foi usada conforme descrito anteriormente (Pedido de Patente PCT No; WO 00/09543) com algumas modificações em relação aos ensaios de serina protease. To- da as enzimas foram compradas da Sigma, EMDbiosciences, enquanto que os substratos foram da Bachem, Sigma e EMDbiosciences.

O ensaio de pNA para a quimotripsina incluiu uma pré- incubação do inibidor da enzima por 1 h em temperatura ambiente seguido pela adição de substrato e hidrólise até ~ 15% de conversão conforme me- dido em um leitor de microplacas Spectramax Pro. As concentrações do composto variaram de 100 a 0,4 μΜ, dependendo da sua potência. Cada um dos ensaios de catepsina B, HNE e PPE foi iniciado pela adição do substrato 5 ao inibidor da enzima pré-incubado por 10 min em temperatura ambiente e a hidrólise até 15% da conversão conforme medido no citoflúor.

As condições finais para cada ensaio foram as seguintes: Cloridrato de Tris(hidroximetila) aminometano (Tris-HCI) 50 mM pH 8, sulfato de sódio 0,5 M (Na2SO4), NaCI 50 mM, EDTA 0,1 mM, DMSO 3%, Tween-20 0,01% com succ-AAPF-pNA 100 μΜ e quimotripsina 250 pM.

Tris-HCI 50 mM, pH 8,0, NaCI 50 mM, EDTA 0,1 mM, DMSO 3%, Tween-20 0,02%, succOAAPV-AMC 5 μΜ e HNE 20 nM ou PPE 8 nM;

NaOAc (acetato de sódio) 100 mM pH 5,5, DMSO 3%, (cloridra- to de tris(2-carboxietila)fosfino) TCEP 1 mM, catepsina B 5 nM (enzima es- toque ativada em tampão contendo TCEP 20 mM antes do uso) e Z-FR-AMC

2 μΜ diluído em H2O.

A porcentagem de inibição foi calculada usando a fórmula:

[1 -(UVini-UVbranCo);(UVcont-UVbranco))] x 100

Um ajuste de curva não-linear foi aplicado aos dados de inibi- ção-concentração, e a concentração 50% eficaz (IC50) foi calculada pelo uso do software Excel XLift.

Geração do REpIicon do HCV

Um sistema de células inteiras de replicon HCV foi estabelecido conforme descrito por Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, 25 Bartenschlager R., Science 285(5424): 110-3 (1999). Esse sistema nos per- mitiu avaliar os efeitos dos compostos de HCV protease na replicação do RNA de HCV. Resumidamente, pelo uso da seqüência 1b da cepa de HCV descrita na publicação de Lohmann (número de acesso: AJ238799), um DNAc de HCV foi sintetizado por Operon Technologies, Inc. (Alameda, CA) e 30 o replicon de comprimento total foi então montado no plasmídeo pGem9zf(+) (Promega, Madison, Wl) usando técnicas de biologia molecular padrões. O replicon consiste de (i) UTR 5’ de HCV fundido com os primeiros 12 aminoá- cidos da proteína de capsídeo, (ii) do gene da fosfotransferase de neomicina (neo), (iii), de IRES do vírus da encefalomiocardite (EMCV) e (iv) dos genes NS3 ao NS5B de HCV e do UTR 3’ de HCV. Os DNAs de plasmídeo foram Iinearizados com Seal e os transcritos de RNA foram sintetizados in vitro 5 usando o kit de transcrição T7 da MegaScript (Ambion, Austin1 TX) de acor- do com as orientações do fabricante. Os transcritos in vitro do DNAc foram transfectados na linhagem celular de hepatoma humano, HUH-7. A seleção pelas células expressando constitutivamente o replicon de HCV foi efetuada na presença do marcador selecionável, neomicina (G418). As linhagens ce- 10 Iulares resultantes foram caracterizadas para a produção de RNA de fitas positivas e negativas e para a produção de proteínas com o passar do tem- po.

Ensaio FRET do Replicon de HCV

O ensaio FRET do Replicon de HCV foi desenvolvido para moni- torar os efeitos inibitórios dos compostos descritos na descoberta da replica- ção viral do HCV. Células HUH-7, constitutivamente expressando o replicon HCV, cresceram em Meio Eagle Modificado da Dulbecco (DMEM) (Gibco- BRL) contendo 10% de soro de bezerro fetal (FCS) (Sigma) e 1 mg/mL de G418 (Gibco-BRL). As células foram semeadas na noite anterior (1,5 x 104 células/poço) em placas estéreis de cultura tecidual de 96 poços. Os contro- les com e sem composto foram preparados em DMEM contendo FCS 4%, Penicilina/Estreptomicina 1:100 (Gibco-BRL), 1:100 L-glutamina e DMSO 5% na placa de diluição (concentração final de DMSO 0,5% no ensaio). As mis- turas de composto/DMSO foram adicionadas às células e incubadas por 4 dias a 37°C. Depois de 4 dias, as células foram primeiramente avaliadas u- sando alamar Blue (Trek Diagnostic Systems) para uma leitura de CC50- A toxicidade do composto (CC50) foi determinada pela adição de 1/10° de vo- lume de alamarBIue ao meio incubando as células. Depois de 4 horas, o si- nal de fluorescência de cada célula foi lido, com um comprimento de onda de excitação a 530 nm e um comprimento de onda de emissão de 580 nm, u- sando o Cytofluor Série 4000 (Perspective Biosystems). As placas foram a seguir rinsadas totalmente com solução salina tamponada com fosfato (PBS) < (3 vezes de 150 μΙ_). As células foram Iisadas com 25 μΙ de um reagente de ensaio de Iise contendo um substrato da HCV protease (reagente de Iise de cultura de células Luciferase 5x cell (Promega #E153A) diluído para 1X com água destilada, NaCI adicionado aos 150 mM final, o substrato do peptídeo 5 FRET (conforme descrito para o ensaio enzimático acima) diluído para uma concentração final de 10 μΜ a partir de um estoque de 2 mM em DMSO 100%. A placa foi a seguir colocada no instrumento Cytofluor 4000, o qual foi ajustado para excitação de 340 nm/emissões de 490 nm, modo automático para 21 ciclos e a leitura da placa em modo cinético. As determinações de 10 EC50 foram efetuadas conforme descrito para as determinações de IC50. Ensaio Repórter da Luciferase do Replicon de HCV

Como ensaio secundário, as determinações de EC50 a partir do ensaio FRET do replicon foram confirmadas em um ensaio repórter da Iucife- rase de replicon. O uso de um ensaio repórter da Iuciferase de replicon foi 15 primeiramente descrito por Krieger et al (Krieger N, Lohmann V, e Bartensc- hlager R, J. ViroL 75(10):4614-4624 (2001)). O constructo de replicon descri- to para o ensaio FRET foi modificado pela inserção de DNAc codificando uma forma humanizada do gene da Renilla Iuciferase e uma seqüência aglu- tinante fundida diretamente à extremidade 3’ do gene da luciferase. Essa 20 inserção foi introduzida no constructo do replicon usando um sítio de restri- ção Ascl localizado no núcleo, diretamente à montante do gene marcador de neomicina. A mutação adaptativa na posição 1179 (serina para isoleucina) também foi introduzida (Blight KJ, Kolykhalov, AA, Rice, CM, Science 290(5498):1972-1974). Uma linhagem celular estável expressando constitu- 25 tivamente esse constructo do replicon de HCV foi gerado conforme descrito acima. Esse ensaio repórter da luciferase foi estabelecido conforme descrito para o ensaio FRET do replicon de HCV co as seguintes modificações: Após

4 dias em uma incubadora a 37°C/5% de CO2, as células foram analisadas para a atividade da Renilla luciferase usando o Sistema de Ensaio Dual-Glo 30 Luciferase da Promega. Meio (100 μί) foi removido de cada poço contendo células. Aos 50 μί restantes de meio, 50 μί do reagente Dual-Glo luciferase foram adicionados, e as placas foram agitadas por 10 min a 2 h em tempera- tura ambiente. O Reagente Dual-Glo Stopo & Glo (50 μΙ_) foi então adiciona- do a cada poço, e as placas foram novamente agitadas por mais 10 min a 2 h em temperatura ambiente. As placas foram lidas em um TopCount NXT PAckard usando um programa de luminescência.

A inibição da porcentagem foi calculada usando a fórmula abai-

xo:

^ ^ sinal médio da luciferase nos poços experimentais (+composto)

sinal da luciferase médio nos poços de controle DMSO (- composto)

Os valores foral plotados e analisador usando XLfit para obter o valor de EC50.

Compostos representativos da descoberta foram avaliados nos 10 ensaios de enzima HCV, no ensaio de célula de replicon HCV e/ou em vá- rios dos ensaios de especificidade esboçados. Por exemplo, o Composto 18 foi descoberto como apresentando uma IC50 de 3,4 nanomolar (nM) contra a cepa NS3/4A BMS no ensaio enzimático. Valores de potência similares fo- ram obtidos com as cepas Hll (lc5o de 1,2 nM) e J4L6S (IC5o de 0,9 nM) 15 publicados. O valor de EC5O no ensaio FRET do replicon foi de 9 nM e 1,1 nM no ensaio da replicon luciferase.

Nos ensaios de especificidade, o mesmo composto foi desco- berto como tendo a seguinte atividade: HLE > 1,56 μΜ; PPE > 1,56 μΜ; quimotripsina > 50 μΜ; catepsina B > 50 μΜ. Esses resultados indicam que esta família de compostos é altamente específica para a NS3 protease e muitos desses membros inibem a replicação do replicon de HCV.

Deve ser entendido que os compostos da presente descoberta podem inibir todos os genótipos de HCV.

Os compostos da atual descoberta foram testados e descober- tos apresentando atividades nas faixas que seguem:

Faixa de atividade de IC50 (cepa NS3/4A BMS): a É > 0,2 μητ, B é de 0,02 a 0,2 μΜ; C é de 0,6 a 20 nM.

Faixas de Atividades EC50 (para os compostos testados): A é >

1 μΜ; B é de 0,1 a 1 μΜ; C é de 3 a 100 nM.

Tabela 2 Número do composto HCV Protease (IC50) HCV Pro Replicon (EC50) 409 - primeiro isômero B 409 - segundo isômero A 201A 4,00 4,23 201B B C 202A C C 202B 660,00 1298,00 203A 4,00 1,54 203B B C 204 primeiro isômero C C 204 segundo isômero A A 205 primeiro isômero C C 205 segundo isômero A C 206 primeiro isômero C C 206 segundo isômero A A 207 primeiro isômero C C 207 segundo isômero A A 208 primeiro isômero C C 208 segundo isômero A 209 primeiro isômero C C 209 segundo isômero A A 210 primeiro isômero C C 210 segundo isômero B B 211 primeiro isômero C C 211 segundo isômero A C 212 primeiro isômero A B 212 segundo isômero C C 213 primeiro isômero A B 213 segundo isômero C C 214 primeiro isômero C B 214 segundo isômero A 215Β 830,00 5494,00 215Α C C 216 primeiro isômero C C 216 segundo isômero A 217 primeiro isômero C C 217 segundo isômero A 218 primeiro isômero C C 218 segundo isômero A A 219 primeiro isômero A A 219 segundo isômero C C 220 primeiro isômero C C 220 segundo isômero A B 221 primeiro isômero C B 221 segundo isômero B A 222 C C 223 primeiro isômero C B 223 segundo isômero A A 224 primeiro isômero C B 224 segundo isômero A B 226 primeiro isômero C C 226 segundo isômero A 227 primeiro isômero C C 227 segundo isômero A A 231 primeiro isômero C C 231 segundo isômero A A 232 primeiro isômero C C 232 segundo isômero B C 233A B B 233B 1300,00 2628,00 234 primeiro isômero B B 234 segundo isômero A A 235 primeiro isômero A 235 segundo isômero C C 236 A A 237 A A 238 B B 239 A B 240 C B 241 A A 1B 289,00 1639,00 1A C C 2 B B 3 C A 4 B A B B 6 primeiro isômero B A 6 segundo isômero C B 16 C C 17 C C 21 C C C C 36 73,00 1424,00 37 C C 38A C C 38B 5000,00 7712,00 200A C C 200B 160,00 195,40 242 C C 243 C C 22 primeiro isômero C C 22 segundo isômero C B 407 primeiro isômero C B 407 segundo isômero C B 408 primeiro isômero C C 408 segundo isômero A B 410 A C 411 A B 7 B C 8 B C 9 C C C C 11 C C 12 primeiro isômero C C 12 segundo isômero B B 13 primeiro isômero B C 13B 1200,00 5740,00 14 primeiro isômero C C 14 segundo isômero A B primeiro isômero C C 15B 1900,00 3376,00 18 C C 19 primeiro isômero C C 19B 1000,00 1850,00 primeiro isômero C C segundo isômero B B 23 C C 24A 26,00 593,20 24 segundo isômero A A C C 26 primeiro isômero C C 26B 1300,00 3189,00 27A 3,00 4,09 27 segundo isômero B C 28 primeiro isômero C C 28 segundo isômero B B 29A C B 29B 249,00 14890,00 32A 1,00 3,59 32 B A A 33 2,00 8,19 Será evidente para as pessoas versadas na técnica que a pre-

sente descoberta não está limitada aos exemplos ilustrativos precedentes, e que ela pode ser modalizada em outras formas específicas sem se afastar dos seus atributos essenciais. É, consequentemente, desejável que os e- 5 xemplos sejam considerados em todos os aspectos como ilustrativos e não restritivos, sendo feita referência às reivindicações em anexo, antes aos e- xemplos precedentes, e toda as alterações as quais estão dentro do signifi- cado e faixa de equivalência das reivindicações são consequentemente ten- cioadas a serem englobadas nesse sentido.

Claims (20)

1. Composto, de acordo com a Fórmula (I) <formula>formula see original document page 299</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, em que m é 1, 2 ou 3; R1 é selecionado de hidróxi e -NHSO2R6; em que R6 é selecionado de alquila, arila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, heterociclila, e -NRaRb1 em que o alquila, o cicloalquila e a parte cicloalquila do (cicloalquila)alquila são opcionalmente substituídas com um, dois ou três substituintes selecionados de alquenila, alcóxi, alcoxialquila, alquila, arilalquila, arilcarbonila, ciano, ci- cloalquenila, (cicloalquila)alquila, halo, haloalcóxi, haloalquila e (N- ReRf)carbonila; R2 é selecionado de hidrogênio, alquenila, alquila e cicloalquila, em que o alquenila, alquila e cicloalquila são opcionalmente substituídos com halo; R3 é selecionado de alquenila, alcoxialquila, alcoxicarbonilalquila, al- quila, arilalquila, carboxialquila, cianoalquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, haloalcóxi, haloalquila, (heterociclila)alquila, hidroxialquila, (NRcRd)alquila e (NReRf)CafboniIaIquiIa; R4 é selecionado de fenila e um anel parcialmente ou completamente insaturado de cinco ou seis membros opcionalmente contendo um, dois, três ou quatro heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre; em que cada um dos anéis é opcionalmente substituído por um, dois, três ou quatro substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alcoxicar- bonila, alquila, alquilcarbonila, alquilsulfanila, carbóxi, ciano, cicloalquila, ci- cloalquilóxi, halo, haloalquila, haloalcóxi, -NRcRd, (NReRf)carbonila, (N- ReRf)sulfonila, e oxo; com a condição de que quando R4 é um anel substituí- do de seis membros, todos os substituintes no anel diferentes de flúor de- vem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação no anel da porção molecular de origem; rõa, rõb p5c p5D p5E Q rõf sgQ cac|a um jncjepenc]entemente sele- cionados de hidrogênio, alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, arila, carbóxi, ciano, cianoalquila, cicloalquila, halo, haloalquila, haloalcóxi, hetero- ciclila, hidróxi, hidroxialquila, nitro,-NR0Rd, (NRcRd)alquila, (NRcRd)alcóxi, (NReRf)carbonila e (NReRf)sulfonila; ou dois grupos R5 adjacentes, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados, formam um anel parcialmente ou completa- mente insaturado de quatro a sete membros opcionalmente contendo um ou dois heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três grupos independentemente selecionados de alcóxi, alquila, ciano, halo, ha- loalcóxi e haloalquila; Ra e Rb são independentemente selecionados de hidrogênio, alcóxi, alquila, arila, arilalquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, heterociclila e hete- rociclilalquila; ou Ra e Rb juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados formam um anel monocíclico heterocíclico de quatro a sete membros; Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, alcoxial- quila, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, arilalquila e haloalquila; e R6 e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, arila, arilalquila e heterociclila; em que o arila, a parte arila do arilalquila e o heterociclila são opcionalmente substituídos com um ou dois substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alquila e halo.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal far- maceuticamente aceitável seu, em que R1 é -NHSO2R6.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal far- maceuticamente aceitável seu, em que m é 1 ou 2; R1 é -NHSO2R6; em que R6 é selecionado de alquila, arila, cicloalqui- la, (cicloalquila)alquila, heterociclila, e -NRaRb, em que o alquila, o ciclo- alquila e o a parte cicloalquila do (cicloalquila)alquila são opcionalmente substituídas com um, dois ou três substituintes selecionados de alqueni- la, alcóxi, alcoxialquila, alquila, arilalquila, arilcarbonila, ciano, cicloal- quenila, (cicloalquila)alquila, halo, haloalcóxi, haloalquila, e (N- ReRf)carbonila; R2 é selecionado de alquenila, alquila e cicloalquila, em que o alquenila, alquila e cicloalquila são opcionalmente substituídos com halo; R3 é selecionado de alquenila e alquila; R4 é selecionado de fenila e um anel parcialmente ou comple- tamente insaturado de cinco a seis membros opcionalmente contendo um, dois, três ou quatro heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxi- gênio e enxofre; em que cada um dos anéis é opcionalmente substituído por um, dois, três ou quatro substituintes independentemente seleciona- dos de alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, alquilsulfanila, car- bóxi, ciano, cicloalquila, cicloalquilóxi, halo, haloalquila, haloalcóxi, - NRcRd, (NReRf)carbonila, (NReRf)sulfonila e oxo; com a condição de que quando R4 é um anel substituído de seis membros todos os substituintes do anel diferentes de flúor devem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação no anel à porção molecular de origem; R5A, R5b, R5c, R5d, R5e e R5f são cada um independentemente sele- cionados de hidrogênio, alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, arila, carbóxi, ciano, cianoalquila, cicloalquila, halo, haloalquila, haloalcó- xi, heterociclila, hidróxi, hidroxialquila, nitro,-NRcRd1 (NRcRd)alquila, (NR- cRd)alcóxi, (NReRf)carbonila e (NReRf)sulfonila; ou dois grupos R5 adjacentes, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados, formam um anel parcialmente ou comple- tamente insaturado de quatro a sete membros opcionalmente contendo um ou dois heteroátomos independentemente selecionados de nitrogê- nio, oxigênio e enxofre, em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três grupos independentemente selecionados de alcóxi, al- quila, ciano, halo, haloalcóxi e haloalquila; Ra e Rb são independentemente selecionados de hidrogênio, alcóxi, alquila, arila, arilalquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, heterociclila e heterociclilalquila; ou Ra e Rb juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados formam um anel monocíclico heterocíclico de quatro a sete membros; Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, alcoxial- quila, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, arilalquila e haloalquila; e R0 e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, arila, arilalquila e heterociclila; em que o arila, a parte arila do arilalquila e o heterociclila são opcionalmente substituídos com um ou dois substi- tuintes independentemente selecionados de alcóxi, alquila e halo.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 3, ou um sal far- maceuticamente aceitável seu, em que R6 é selecionado de cicloalquila não-substituído e -NRaRb.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal far- maceuticamente aceitável seu, em que m é 1; R1 é -NHSO2R6; em que R6 é cicloalquila não-substituído; R2 é alquenila; R3 é selecionado de alquenila e alquila; R4 é selecionado de fenila e um anel parcialmente ou completamente insa- turado de cinco ou seis membros opcionalmente contendo um, dois, três ou quatro heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre; em que cada um dos anéis é opcionalmente substituído por um, dois ou três substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, carbóxi, ciano, cicloalquila, cicloalquilóxi, halo, halo- alquila, haloalcóxi, -NRcRd, (NReRf)carbonila, (NReRf)sulfonila, e oxo; com a condição de que quando R4 é um anel substituído de seis membros todos os substituintes do anel diferentes de flúor devem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação do anel à porção molecular de o- rigem; r5a p5B^ p5c rõd rõe q p5F sgQ cacja üm jnc|epenc|entemente selecionados de hidrogênio, alcóxi, arila e -NRcRd; ou dois grupos R5 adjacentes, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados, formam um anel parcialmente ou completamente insaturado de seis membros opcionalmente contendo um ou dois heteroá- tomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, em que o anel é opcionalmente substituído por um, dois ou três grupos in- dependentemente selecionados de alcóxi, alquila, ciano, halo, haloalcóxi e haloalquila; Rc e Rd são independentemente selecionados de hidrogênio, alcoxialquila, alquila, alquilcarbonila e arilalquila; e Re e Rf são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, arila e arilalquila.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, ou um sal far- maceuticamente aceitável seu, em que R4 é fenila opcionalmente substituído por um, dois ou três substituintes independentemente selecionados de alcó- xi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, carbóxi, ciano, cicloalquila, ciclo- alquilóxi, halo, haloalquila, haloalcóxi, -NRcRd, (NReRf)carbonila, (N- ReRf)sulfonila, e oxo; com a condição de que todos os substituintes no anel diferentes de flúor devem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação do anel à porção molecular de origem.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 5, ou um sal far- maceutícamente aceitável seu, em que R4 é um anel totalmente insaturado de seis membros contendo um átomo de nitrogênio; em que o anel é opcio- nalmente substituído por um, dois ou três substituintes independentemente selecionados de alcóxi, alcoxicarbonila, alquila, alquilcarbonila, carbóxi, cia- no, cicloalquila, cicloalquilóxi, halo, haloalquila, haloalcóxi, -NRcRd, (N- ReRf)carbonila, (NReRf)sulfonila, e oxo; com a condição de que todos os substituintes no anel diferentes de flúor devem estar nas posições meta e/ou para em relação ao ponto de ligação do anel à porção molecular de origem.

8. Composto selecionado de N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-L-valila- (4R)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6- metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-D-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(5-(trifluormetila)-2-piridinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetóxi-1,3,5-triazin-2-ila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetóxi-1,3,5-triazin-2-ila)valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetóxi-2-pirimidinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-pirimidinila)-D-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-pirimidinila)-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-2-piridinilvalila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4-metóxi-2-piridinila)valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4-(trifluormetila)-2-piridinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4-metila-2-piridinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4-ciano-2-piridinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-2-piridinila-L-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - (ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; 3-metila-N-2-piridinila-D-valila-(4R)-N-((1 R,2S )-1 - (ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1 - isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-3-piridinila-L-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-3-piridinila-D-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4>6-dimetila-2-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-fenila-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-fenila-D-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-piridinila)ialila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((dimetilsulfamoila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; j N-(4,6-dimetila-2-piridinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-6- metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-3-metilvalila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-6- metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; 3-metila-N-fenila-L-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-6-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L- prolinamida;3-metila-N-fenila-D-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-6- metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-fenila-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)2-vinilciclopropila)-4-((3,6-dimetóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-fenila-D-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((3,6-dimetóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-piridinila)valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((3,6-dimetóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4,6-dimetila-2-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3'metila-N-(4-metila-5-nitro-2-piridinila)valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-5-pirimidinila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N- ((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida; N-5-pirimidinila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N- ((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida;3-metila-N-(5-metila-3-piridinila)valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(6-metila-3-piridinila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(6-metila-3-piridinila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 - isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(5-(trifluormetila)-3-piridinila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(5-(trifluormetila)-3-piridinila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(6-metila-2-piridinila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(6-metila-2-piridinila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(2,6-dimetila-4-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(2,6-dimetila-4-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4,6-dicloro-2-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4,6-dicloro-2-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(5-cloro-3-piridinila)-3-metilvalila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-etila-1,3-tiazol-2-ila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(5,6-diidro-4H-1,3-tiazin-2-ila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(5,6-diidro-4H-1,3-tiazin-2-ila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-3-(4- (trifluormetóxi)fenila)-1 -isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-(6-metila-2-piridinila)-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-5- metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida;3-metila-N-(6-metila-2-piridinila)-D-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((3-(dimetilamino)-5- metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(3-fluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-fluorfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-metoxifenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-metoxifenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; . 3-metila-N-(3-(metilcarbamoila)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; 3-metila-N-(3-(metilcarbamoila)fenila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-cianofenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-cianofenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 - isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-(terc-butoxicarbonila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-(terc-butoxicarbonila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi- 1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-cianofenila)-3-metila-L-vali!a-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-cianofenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(terc-butilsulfamoila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1· isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(terc-butilsulfamoila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(3-sulfamoilfenila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; . 3-metila-N-(3-sulfamoilfenila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(2,3-difluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(2,3-difluorfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-carboxifenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 - isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropi!sulfonila)carbarnoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-carboxifenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(terc-butoxicarbonila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(terc-butoxicarbonila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-carboxifenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-carboxifenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(terc-butilcarbamoila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(terc-butilcarbamoila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; . 3-metila-N-fenila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N- ((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida; 3-metila-N-fenila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N- ((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-L- prolinamida; N-(4-(terc-butilsulfamoila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-(terc-butilsulfamoila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; 3-metila-N-(4-sulfamoilfenila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; 3-metila-N-(4-sulfamoilfenila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro -4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; 3-metila-N-(3-((1-metila-1-feniletila)carbamoila)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7- cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 - ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida; 3-metila-N-(3-((1-metila-1-feniletila)carbamoila)fenila)-D-valila-(4R)-4-((7- cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-carbamoilfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-carbamoilfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(dimetilcarbamoila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(dimetilcarbamoila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(dimetilsulfamoila)fenila)-3-rnetila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-rnetóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(dimetilsulfamoila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3,4-difluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 - isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3,4-difluorfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-(dimetilcarbamoila)feni(a)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-(dimetilcarbamoila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(4-((1-metila-1-feniletila)carbamoila)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7- cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida;3-metila-N-(4-((1-rnetila-1-feniletila)carbamoila)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7- cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-(etilsulfamoila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-(etilsulfamoila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-(dimetilsulfamoila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropi!a)-L-prolinamida; N-(4-(dimetilsulfamoila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-carbamoilfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(4-carbamoilfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 - isoquinolinila)óxi)-N-(( 1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; 3-meti!a-N-(3-(metilsulfamoila)fenila)-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; 3-metila-N-(3-(metilsulfamoila)fenila)-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(isopropoxicarbonila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 -isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(isopropoxicarbonila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi- 1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(metoxicarbonila)fenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3-(metoxicarbonila)fenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-1-((2S)-2-((4-etóxi-1,2,5- tiadiazol-3-ila)amino)butanoila)-L-prolinamida; (4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1-isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-1-((2R)-2-((4-etóxi-1,2,5 tiadiazol-3-ila)amino)butanoila)-L-prolinamida; N-(2-fluorfenila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-[(7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi]-N-((1R,2S)-1-{[(ciclopropilsulfonila)amino]carbonila}-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(2-fluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-[(7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi]-N-((1R,2S)-1-{[(ciclopropilsulfonila)amino]carbonila}-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(3,4-difluorfenila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1 R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((9-metóxi-4-metila- 3,4-diidro-2H-[1,4]oxazino[3,2-c]isoquinolin-6-ila)óxi)-L-prolinamida; N-(3,4-difluorfenila)-3-metila-D-vali!a-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((9-metóxi-4-metila-3,4-diidro-2H-[1,4]oxazino[3,2-c]isoquinolin-6-ila)óxi)-L-prolinamida; N-(6-metóxi-3-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(6-metóxi-3-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-N-((1R,2S)-1- ((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2-vinilciclopropila)-4-((6-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-L-prolinamida; N-(6-metóxi-3-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(6-metóxi-3-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1- isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; N-(6-(difluormetóxi)-3-piridinila)-3-metila-L-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 isoquinolinila)óxi)-N-((1 R,2S)-1 -((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; e N-(6-(difluormetóxi)-3-piridinila)-3-metila-D-valila-(4R)-4-((7-cloro-4-metóxi-1 isoquinolinila)óxi)-N-((1R,2S)-1-((ciclopropilsulfonila)carbamoila)-2- vinilciclopropila)-L-prolinamida; ou um sal farmaceuticamente aceitável seu.

9. Composição compreendendo o composto como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu e um veículo farmaceuticamente aceitável.

10. Composição, de acordo com a reivindicação 9, compreen- dendo ainda pelo menos um composto adicional com atividade anti-HCV.

11. Composição, de acordo com a reivindicação 10, em que pe- lo menos um dos compostos adicionais é um interferon ou ribavirina.

12. Composição, de acordo com a reivindicação 11, em que o interferon é selecionado de interferon alfa 2B, interferon alfa peguilado, inter- feron de consenso, interferon alfa 2A e interferon tau linfoblastóide.

13. Composição, de acordo com a reivindicação 10, em que pe- lo menos um dos compostos adicionais é selecionado de interleucina 2, in- terleucina 6, interleucina 12, um composto que intensifica o desenvolvimento de uma resposta das células T helper tipo 1, interferente do RNA, RNA anti- sentido, Imiquimod, ribavirina, um inibidor da inosina-5’-monofosfato desi- drogenase, amantadina e rimantadina.

14. Composição, de acordo com a reivindicação 10, em que pe- lo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função de um alvo selecionado de HCV metaloprotease, HCV serina protease, HCV poli- merase, HCV helicase, proteína NS4B HCV1 entrada HCV, montagem HCV, saída HCV, proteína NS5A HCV e IMPDH para o tratamento de uma infec- ção por HCV.

15. Método de tratamento de uma infecção por HCV em um pa- ciente, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade te- rapeuticamente eficaz de um composto de fórmula 1, ou de um sal farma- ceuticamente aceitável seu.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, compreendendo ainda a administração de pelo menos um composto adicional com atividade anti-HCV antes de, depois ou simultaneamente com o composto como defi- nido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, em que pelo menos um dos compostos adicionais é um interferon ou uma ribavirina.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, em que o interfe- ron é selecionado de interferon alfa 2B, interferon alfa peguilado, interferon de consenso, interferon alfa 2A e interferon tau linfoblastóide.

19. Método, de acordo com a reivindicação 16, em que pelo menos um dos compostos adicionais é selecionado de interleucina 2, inter- leucina 6, interleucina 12, um composto que intensifica o desenvolvimento de uma resposta de célula T helper tipo 1, interferente do RNA, RNA anti- sentido, Imiquimod, ribavirina, um inibidor da inosina-5’-monofosfato desi- drogenase, amantadina e rimantadina.

20. Método, de acordo com a reivindicação 16, em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função de um alvo selecionado de HCV metaloprotease, HCV serina protease, HCV polimerase, HCV helicase, proteína NS4B HCV, entrada HCV, montagem HCV, saída HCV, proteína NS5A HCV e IMPDH para o tratamento de uma infecção por HCV.