CN101062128A - 芍药总苷提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从中药白芍或赤芍中提取得到的芍药总苷提取物及其制备方法。该提取物主要包括芍药苷、白芍药苷、芍药新苷、芍药内酯A、B、C、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷及其衍生物等。该提取物可由溶剂提取法、大孔吸附树脂法、超临界流体萃取法、柱色谱法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法,或这些方法的任意组合制备获得。所制得的芍药总苷提取物中各种萜苷类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),其中芍药苷含量为5~100%(w/w)。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域,具体涉及一种中药白芍或赤芍的芍药总苷提取物及制备方法、质量控制方法及其在医药和保健食品领域的应用。
背景技术
白芍为常用中药,来源于毛茛科植物Paeonia lactiflora Pall及毛果白芍的干燥根。传统中医药理论认为:白芍,性微寒,味苦酸甘,具有平肝止痛,养血调经,敛阴止汗的功效,临床用于头痛眩晕,胁痛,腹痛,四肢挛痛,血虚萎黄,月经不调,自汗,盗汗。
赤芍亦为常用中药,来源于毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall,川赤芍药Paeonia veitchii Lynch,草芍药Paeonia obovert Maxim及毛叶草芍药Paeoniawillmottiae Stapf的干燥根。传统中医药理论认为:赤芍,性微寒,味苦、酸,入血分敛降而微散。具有清热凉血止血,活血散瘀止痛的功效,临床用于温毒发斑,吐血衄血,血痢便血,崩漏,淋证,带下,目赤肿疼,痈肿疮疡,头胸胁腹瘀血疼痛,痛经闭经,风湿痹痛,跌打损伤。还可用以治疗急性脑血栓,冠心病,肺心病,肝炎等疾病。
芍药总苷作为白芍或赤芍的有效成分之一,现代药理研究表明具有抑制自身免疫反应,抗炎,止痛,保肝,以及增加心排血量,改善心肺功能等药理作用。其主要成分包括芍药苷、白芍药苷、芍药新苷、芍药内酯A、B、C、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷等。有关白芍和赤芍化学成分的药理活性、应用及制备方法,目前公开的发明专利有“一种提取白芍总苷的新方法”(申请号97101960.6),涉及白芍总苷的制备方法。但该专利公开的方法系采用醇水溶液提取,醇酯溶液萃取方法制备白芍总苷,难以实现工业化生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种芍药总苷提取物。
本发明的另一个目的在于提供一种芍药总苷提取物的制备方法
本发明提出的芍药总苷提取物,是从中药白芍或赤芍中提取的含有多种萜苷类活性成分的组合,其中主要化合物结构如下:
芍药苷 R=H 苯甲酰芍药苷
氧化芍药苷R=OH
芍药新苷
本发明所述白芍或赤芍,为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall及其任意一种变种植物的全部植株或任何部位,如根、根茎、茎、叶、花穗、果实等,或市售白芍或赤芍饮片。其中优选的药材部位为这些植物的干燥根。上述所述的白芍或赤芍包括未经任何炮制处理的原药材及饮片,还包括各种炮制品,如炒白芍、酒白芍、炒赤芍、酒赤芍等。
本发明所述的芍药总苷提取物,是指从白芍或赤芍中提取得到的,包含多种萜苷类活性成分的组合物。作为芍药总苷提取物,其中各种萜苷类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),其中优选的为50~100%(w/w)。
本发明所述的芍药总苷提取物,包括了多种萜苷类活性成分,其中最主要的是芍药苷、白芍药苷、芍药新苷、芍药内酯A、B、C、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷及其衍生物等。作为芍药总苷提取物,芍药苷、芍药新苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷四种成分的含量占全部芍药总苷含量的5~100%(w/w)。
本发明所述的芍药总苷提取物,可以与铁、铝、锌、铜、钡、铬、锶等金属离子形成金属络合物。这些金属络合物不仅具有与上述芍药总苷提取物相同或相近的药理活性或用途,而且具有某些新用途,如铁络合物可以作为补铁剂,锌络合物可以作为补锌剂,铬络合物可以用于防治糖尿病等。
本发明还提出了所述芍药总苷提取物的制备工艺,它可以采用以下任意一种方法,或这些方法的任意组合进行制备:(1)溶剂提取法;(2)大孔吸附树脂法;(3)超临界流体萃取法;(4)柱色谱法;(5)液-液逆流分配色谱法。其中优选的方法为大孔吸附树脂法。
在使用这些方法进行制备时,一般包括以下几个步骤:
(1)提取:所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂,或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂,或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。
优选的提取工艺为:白芍或赤芍加30~90%乙醇,回流提取2~3次,每次提取1~2小时,溶剂用量为5~15倍量(L/kg)。
(2)过滤:包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法,使用或不使用以下任意一种澄清剂或其组合:醇沉剂,明胶,高岭土,各种树脂,聚乙二醇,聚乙三醇,壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄清剂等。
(3)浓缩:包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等。
(4)干燥:包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
当采用大孔吸附树脂法进行制备时,所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型,如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等,其中优选的为弱极性或中等极性的树脂,如AB-8、HPD400、D101等。所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等,其中优选的为0~100%的乙醇。
优选的芍药总苷提取物树脂纯化工艺为:选用AB-8、HPD400等中等极性或弱极性大孔吸附树脂作为纯化用树脂,白芍或赤芍乙醇提取物上样液浓度2~4mg/mL(以芍药苷量计),吸附流速3~9BV/h,树脂柱径高比1∶5~1∶10,上样量为10~20mg/mL(以芍药苷量计),0~20%乙醇洗脱1~4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3~8BV/h,用40~90%乙醇洗脱3~6倍树脂体积,洗脱流速为5~9BV/h。
当采用超临界流体萃取法进行制备时,可以对白芍或赤芍直接进行萃取,也可以对上述任一方法和步骤所获得的产物进行萃取。萃取时可以使用或不使用以下任一种类溶剂及溶剂混合物:水、醇类、酮类及酯类溶剂。
当采用柱色谱法进行制备时,其处理的对象可以是上述提取步骤所获得的产物,也可以是经上述溶剂提取法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex LH-20系列)、C-8、C-18、活性炭、纤维素等,所用的洗脱液因固定相的不同而不同,一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等组成的混合溶剂。
当采用液-液逆流萃取法进行制备时,其处理的对象可以是上述提取步骤的产物,也可以是经上述溶剂提取法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。一般先将提取物混悬于水中,然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质,然后用合适极性的溶剂,如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等,或是这些溶剂的混合物,萃取获得其中的芍药总苷成分,得芍药总苷的提取物。
该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品,所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。
本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种:
1.芍药总苷含量测定
精密称取芍药苷对照品适量(约2mg),置10mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密吸取芍药苷对照品溶液0.3,0.5,0.6,0.7,0.8,1.0mL,置具塞刻度试管中,分别加水0.7,0.5,0.4,0.3,0.2,0.0ml,加10%变色酸水溶液0.5ml,浓硫酸3.5ml,边加边摇,于沸水中加热20min,取出用流水冷却,加水3.0ml,于572nm波长处测定吸光度。以芍药苷对照品溶液浓度(X)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线,并进行线性回归,得回归方程A=17.462X+0.1122,r=0.9993。结果表明,芍药苷在0.0102~0.034mg/mL范围内线性关系良好。
取芍药总苷提取物3份,每份约5mg,精密称定,置25ml量瓶中,用50%乙醇溶解并稀释至刻度。每份精密移取0.5ml,依法测定,外标两点法计算含量。
2.芍药苷含量测定
色谱条件:色谱柱:Hypersil C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸(14∶86);流速:1.0ml/min;柱温:室温;检测波长:230nm。
标准曲线绘制:精密吸取芍药苷对照品溶液(浓度为0.2μg/μL)0、2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪,测定各色谱峰峰面积,以对照品进样量(μg)为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
含量测定:精密称取芍药总苷提取物各3份,每份约13mg,置10mL量瓶中,加70%乙醇超声溶解,并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,测定各色谱峰峰面积,计算含量。
具体实施方式
实施例1:芍药总苷提取物制备工艺
取白芍饮片10kg,70%乙醇10L回流提取3次,每次提取1小时,减压回收溶剂,得提取物,加水分散溶解,使水溶液浓度为2.84mg/mL(以芍药苷量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过5L AB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8,上样量为7.68mg/mL(以芍药苷量计),10%乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,70%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集70%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为芍药总苷提取物。测定芍药总苷提取物中芍药总苷含量为60%、芍药苷含量为25%。
实施例2:芍药总苷提取物制备工艺
取白芍饮片10kg,50%乙醇15L,回流提取3次,每次提取1.5小时,回收溶剂,提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为3.00mg/mL(以芍药苷量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过6L AB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶7,上样量为7.00mg/mL(以芍药苷计),10%乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,50%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集50%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为芍药总苷提取物。测定芍药总苷提取物中芍药总苷含量为58%、芍药苷含量为28%。
实施例3:芍药总苷提取物制备工艺
取赤芍饮片10kg,70%乙醇12L回流提取2次,每次提取2小时,回收溶剂,提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为2.00mg/mL(以芍药苷量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过7L AB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶9,上样量为8.00mg/mL(以芍药总苷量计),水洗脱4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为芍药总苷提取物。测定芍药总苷提取物中芍药总苷含量为65%、芍药苷含量为26%。
实施例4:芍药总苷提取物制备工艺
取赤芍饮片10kg,70%乙醇12L回流提取2次,每次提取2小时,回收溶剂,减压干燥,提取物加甲醇反复提取至无色,合并甲醇提取液,减压回收溶剂,得甲醇提取干浸膏,加水分散溶解,使上样液浓度为3.84mg/mL(以芍药苷量计),通过7L AB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶9,上样量为7.68mg/mL(以芍药苷量计),水洗脱4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为芍药总苷提取物。测定芍药总苷提取物中芍药总苷含量为70%、芍药苷含量为25%。
实施例5:芍药总苷片的制备
芍药总苷提取物 100g
淀粉 100g
上述组分混合均匀,加滑石粉适量,压制成1000片。
实施例6:芍药总苷复方制剂的制备
芍药总苷提取物 50g
当归提取物 50g
川芎提取物 100g
熟地黄提取物 300g
上述组分混合均匀,装入硬明胶胶囊中,共2000粒胶囊。
Claims (10)
1、一种芍药总苷提取物,其特征在于该提取物由中药白芍或赤芍中提取获得,该提取物主要包括芍药苷、白芍药苷、芍药新苷、芍药内酯A、B、C、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷及其衍生物等。
2、如权利要求1所述的芍药总苷提取物,其特征在于白芍或赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall及其任意一种变种植物的全部植株或任何部位,如根、根茎、茎、叶、花穗、果实等,或市售白芍或赤芍饮片,同时包括未经任何炮制处理的原药材及饮片和各种炮制品,如炒白芍、酒白芍、炒赤芍、酒赤芍等。
3、如权利要求1所述的芍药总苷提取物,其特征在于上述萜苷类成分含量总和以重量计为5~100%。
4、如权利要求3所述的芍药总苷提取物,其特征在于上述萜苷类成分中芍药苷含量以重量计为5~100%。
5、如权利要求1所述芍药总苷提取物,其特征在于上述各萜苷类成分,还包括与铁、铝、锌、铜、钡、铬、锶等金属离子形成的金属络合物。
6、如权利要求1~5所述的芍药总苷提取物,其特征在于采用溶剂提取法、大孔吸附树脂法、超临界流体萃取法、柱色谱法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法,或这些方法的任意组合进行制备。
7、如权利要求6所述的芍药总苷提取物制备方法,其特征在于,在使用这些方法进行制备时,包括以下一个或几个步骤:
提取:所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂,或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂,或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂;提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等;
过滤:包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法,使用或不使用以下任一种澄清剂或其组合:醇沉剂,明胶,高岭土,各种树脂,聚乙二醇,聚乙三醇,壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄清剂等;
浓缩:包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等;
干燥:包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
8、如权利要求6所述的芍药总苷提取物制备方法,其特征在于当使用大孔吸附树脂法时,所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任何一种类型,如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等,其中优选的为弱极性或中等极性的树脂,如AB-8、HPD400、D101等,所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等。
9、如权利要求8所述的芍药总苷提取物制备方法,其特征在于:选用AB-8、HPD400等中等极性或弱极性大孔吸附树脂作为纯化用树脂,白芍或赤芍乙醇提取物以芍药苷量计的上样液浓度2~4mg/mL,吸附流速3~9BV/h,树脂柱径高比1∶5~1∶10,以芍药苷量计的上样量为10~20mg/mL,0~20%乙醇洗脱1~4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3~8BV/h,用40~90%乙醇洗脱3~6倍树脂体积,洗脱流速为5~9BV/h。
10、如权利要求1、5所述的提取物的应用,其特征在于,该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品,所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。
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