CN101062165B

CN101062165B - 枳实总黄酮提取物及其制备方法

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Publication number: CN101062165B
Application number: CN2007101112292A
Authority: CN
Inventors: 石任兵; 刘斌; 李军; 董志滨
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2007-06-18
Filing date: 2007-06-18
Publication date: 2010-06-16
Anticipated expiration: 2027-06-18
Also published as: CN101062165A

Abstract

本发明公开了一种从中药枳实中提取得到的总黄酮提取物及其制备方法。该提取物主要包括柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮芸香苷及其衍生物等。该提取物可由溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、铅盐沉淀法、超临界流体萃取法、柱色谱法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法，或这些方法的任意组合制备获得。所制得的枳实总黄酮提取物中各种黄酮类成分百分含量的总和为5～100％(w/w)，其中柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷三种成分的含量占总黄酮含量的5～100％(w/w)。

Description

枳实总黄酮提取物及其制备方法

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及一种中药枳实的总黄酮提取物及制备方法、质量控制方法及其在医药和保健食品领域的应用。

背景技术

枳实为常用中药，来源于芸香科酸橙Citrus aurantium L.及其变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果。传统中医药理论认为枳实具有破气消积，化痰散痞的功效，用于积滞内停，痞满胀痛，泻痢后重，大便不通，痰滞气阻胸痹，结胸，胃下垂，脱肛，子宫脱垂。现代药理研究表明枳实具有增强心肌收缩力，减慢心率和增加心血输出量，增加冠脉流量，增加肾血流量，改善末梢微循环，加强平滑肌的收缩强度和收缩持续时间，诱发肌条的节律性收缩活动或加强原有自发性收缩肌条的收缩力及收缩频率，以及一定程度的镇痛和中枢抑制作用，临床广泛应用于胃肠道疾病及心血管疾患方面的治疗。枳实中主要含有黄酮类、生物碱类、挥发油类成分，药理研究表明黄酮类成分为其主要活性成分。目前，仅见在发明专利号为200410077903.6的专利文献中公开了枳实黄酮类有效部位的制备方法，但是该专利所公开的制备方法较为复杂，不利用工业化大规模生产。本发明专利采用大孔吸附树脂分离富集技术制备枳实总黄酮提取物，方法简单，操作简便，利于工业生产，且枳实总黄酮提取物中黄酮含量较高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种枳实总黄酮提取物及其制备方法。

本发明提出的枳实总黄酮提取物，是从中药枳实中提取的含有多种黄酮类活性成分的组合，其中主要化合物结构如下：

本发明所述原料枳实，来源于芸香科植物酸橙及其变种或甜橙。作为提取枳实总黄酮的原材料，可以是这些植物的茎、叶、花穗、果实、地下根茎及根等任一部位或全部植株，其中优选的药材部位为这些植物的干燥幼果。上述所述的枳实包括未经处理任何炮制的原药材及饮片，还包括经过各种炮制品，如麸炒枳实、烫枳实等。

本发明所述的枳实总黄酮提取物，是指从上述任一植物的任何部位提取得到的，包含多种黄酮类活性成分的组合物，其中优选的是从Citrus aurantium L.干燥幼果中提取制备得到的，含有多种黄酮类活性成分的组合物。这些黄酮类成分主要包括柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷及其衍生物等。

作为枳实总黄酮提取物，其中各种黄酮类成分百分含量的总和为5～100％(w/w)，其中优选的为50～100％(w/w)。

在本发明所述的枳实总黄酮提取物所涵盖的各种黄酮类活性成分之中，最主要的是柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮芸香苷等成分。作为枳实总黄酮提取物，柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷三种成分的含量占全部总黄酮含量的5～100％(w/w)。

本发明所述的枳实总黄酮提取物，可以与某些碱(如氢氧化钠、氢氧化钾等)以及金属盐(如碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙、醋酸钠、醋酸锌等)，形成金属盐类衍生物。这些衍生物具有与上述枳实总黄酮提取物相同或相近的药理活性和用途。

本发明所述的枳实总黄酮提取物，还可以与铁、铝、锌、铜、钡、铬、锶等金属离子形成金属络合物。这些金属络合物不仅具有与上述枳实总黄酮提取物相同或相近的药理活性或用途，而且具有某些新用途。

本发明还提出了所述枳实总黄酮提取物的制备工艺，它可以采用以下任意一种方法，或这些方法的任意组合进行制备：(1)溶剂提取法；(2)溶剂萃取法；(3)大孔吸附树脂法；(4)铅盐沉淀法；(5)超临界流体萃取法；(6)柱色谱法；(7)液-液逆流分配色谱法。其中优选的方法为大孔吸附树脂法。

在使用这些方法进行制备时，一般包括以下几个步骤：

(1)提取：所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。

优选的提取工艺为：枳实药材加0～90％乙醇，回流提取2～3次，每次提取1～2小时，溶剂用量为5～20倍量(L/kg)。

(2)过滤：包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任意一种澄清剂或其组合：醇沉剂，明胶，高岭土，各种树脂，聚乙二醇，聚乙三醇，壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄清剂等。

(3)浓缩：包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等。

(4)干燥：包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。

当采用溶剂萃取法进行制备时，一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获得其中的总黄酮类成分，得到总黄酮提取物。

当采用大孔吸附树脂法进行制备时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如AB-8、HPD400、D101等。所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中优选的为0～100％的乙醇。

优选的枳实黄酮提取物树脂纯化工艺为：选用AB-8、HPD400等中等极性或弱极性大孔吸附树脂作为纯化用树脂，枳实提取物上样液稀释倍数1∶5～15(以生药量计)，吸附流速2～5BV/h，树脂柱径高比1∶5～1∶10，上样量为0.10～0.50g/mL(以生药量计)，0～20％乙醇洗脱1～4倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2～5BV/h，用40～90％乙醇洗脱3～8倍树脂体积，洗脱流速为3～9BV/h。

当采用铅盐沉淀法进行制备时，所用的铅盐试剂为醋酸铅或碱式醋酸铅，所用的脱铅剂为H₂S、磷酸盐及硫酸盐等。

当采用超临界流体萃取法进行制备时，可以对枳实原材料直接进行萃取，也可以对上述任一方法和步骤所获得的产物进行萃取。萃取时可以使用或不使用以下任一种类溶剂及溶剂混合物：水、醇类、酮类及酯类溶剂。

当采用柱色谱法进行制备时，其处理的对象可以是上述提取步骤所获得的产物，也可以是经上述溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、铅盐沉淀法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex LH-20系列)、C-8、C-18、活性炭、纤维素等，所用的洗脱液因固定相的不同而不同，一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等组成的混合溶剂。

当采用液-液逆流萃取法进行制备时，其处理的对象可以是上述提取步骤的产物，也可以是经上述溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、铅盐沉淀法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获得其中的总黄酮成分，得总黄酮提取物。

该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍，用于制备药物或功能性食品，所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。

本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种：

1.总黄酮

精密称取新橙皮苷对照品适量(约3mg)，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取新橙皮苷对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置具塞、带刻度、装有250mg镁粉的试管中，加50％乙醇至4.5mL，将试管置于15℃水浴中，每隔两分钟滴加浓盐酸0.2mL，并轻轻振摇，直至镁粉完全反应，用浓盐酸定容至7mL，摇匀，放入37℃水浴中保温一小时，取出冷却。于564nm波长处测定吸光度。以新橙皮苷对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

精密称取枳实总黄酮提取物样品各3份，每份3mg，置10mL量瓶中，加50％乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述样品溶液2.0mL，新橙皮苷对照品溶液0.2mL、0.8mL，置具塞、带刻度、装有250mg镁粉的试管中，加50％乙醇至4.5mL，将试管置于15℃水浴中，每隔两分钟滴加浓盐酸0.2mL，并轻轻振摇，直至镁粉完全反应，用浓盐酸定容至7mL，摇匀，放入37℃水浴中保温一小时，取出冷却。于564nm波长处测定吸光度，外标两点法计算含量。

2.柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷

色谱条件：色谱柱：Hypersil C₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液(18∶82)；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；柱温：室温。

标准曲线绘制：分别精密吸取柚皮苷对照品溶液(浓度为0.291μg/μL)、橙皮苷对照品溶液(浓度为0.0136μg/μL)、新橙皮苷对照品溶液(浓度为0.238μg/μL)0、2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，以对照品进样量(μg)为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

含量测定：精密称取3批枳实总黄酮提取物样品各3份，每份约6mg，置10mL量瓶中，加70％乙醇超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，外标一点法计算含量。

具体实施方式

实施例1：枳实总黄酮提取物制备工艺

取枳实饮片1kg，加水10L回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂。上样稀释倍数为1∶10(以生药量计)，通过5L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶8，上样量为0.2g/mL(以生药量计)，水洗脱3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为3BV/h，50％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为5BV/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为枳实总黄酮提取物。测定枳实总黄酮提取物中总黄酮含量为74％，其中柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷三种成分的含量占总黄酮含量的63％。

实施例2：枳实总黄酮提取物制备工艺

取枳实饮片5kg，30％乙醇15L，回流提取2次，每次提取2小时，回收溶剂，提取物加水分散溶解，使上样液稀释倍数为1∶8(以生药量计)，通过5L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1∶7，上样量为0.1g/mL(以生药量计)，10％乙醇洗脱3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2BV/h，70％乙醇洗脱7倍树脂体积，洗脱流速为5BV/h，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为枳实总黄酮提取物。测定枳实总黄酮提取物中总黄酮含量为70％，其中柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷三种成分的含量占总黄酮含量的60％。

实施例3：枳实总黄酮提取物制备工艺

取枳实饮片10kg，加50％乙醇12L回流提取3次，每次提取1.5小时，回收溶剂，提取物加水分散溶解，使上样液稀释倍数为1∶6(以生药量计)，通过7L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速4BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样量为0.3g/mL(以生药量计)，20％乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为4BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为枳实总黄酮提取物。测定枳实总黄酮提取物中总黄酮含量为80％，其中柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷三种成分的含量占总黄酮含量的72％。

实施例4：枳实总黄酮提取物制备工艺

取枳实饮片10kg，加70％乙醇20L回流提取2次，每次提取2小时，回收溶剂至无醇味，加水稀释，使上样液稀释倍数为1∶5(以总色原酮量计)，通过4L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1∶9，上样量为0.4g/mL(以生药量计)，水洗脱4倍树脂体积进行除杂，除杂流速为4BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为枳实总黄酮提取物，测定枳实总黄酮提取物中总黄酮含量为70％，其中柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷三种成分的含量占总黄酮含量的55％。

实施例5：枳实总黄酮片的制备

枳实总黄酮提取物 100g

淀粉 100g

上述组分混合均匀，加滑石粉适量，压制成1000片。

实施例6：枳实总黄酮复方制剂的制备

枳实总黄酮提取物 50g

防风醇提取物 50g

白芍总苷提取物 100g

白术细粉(100目) 300g

上述组分混合均匀，装入硬明胶胶囊中，共2000粒胶囊。

Claims

1.一种枳实总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：选用AB-8、HPD400中等极性或弱极性大孔吸附树脂作为纯化用树脂，以生药量计枳实提取物上样液稀释倍数1∶5～15，吸附流速2～5BV/h，树脂柱径高比1∶5～1∶10，以生药量计上样量为0.1～0.5g/mL，0～20％乙醇洗脱1～4倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2～5BV/h，用40～90％乙醇洗脱3～8倍树脂体积，洗脱流速为3～9BV/h；

所述枳实提取物的提取方法为：枳实药材加0～90％乙醇，回流提取2～3次，每次提取1～2小时，溶剂用量为5～20倍量。

2.一种枳实总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：取枳实饮片1kg，加水10L回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂；上样稀释倍数以生药量计为1∶10，通过5L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶8，上样量以生药量计为0.2g/mL，水洗脱3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为3BV/h，50％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为5BV/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为枳实总黄酮提取物。

3.一种枳实总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：取枳实饮片5kg，30％乙醇15L，回流提取2次，每次提取2小时，回收溶剂，提取物加水分散溶解，使上样液稀释倍数以生药量计为1∶8，通过5L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1∶7，上样量以生药量计为0.1g/mL，10％乙醇洗脱3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2BV/h，70％乙醇洗脱7倍树脂体积，洗脱流速为5BV/h，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为枳实总黄酮提取物。

4.一种枳实总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：取枳实饮片10kg，加50％乙醇12L回流提取3次，每次提取1.5小时，回收溶剂，提取物加水分散溶解，使上样液稀释倍数以生药量计为1∶6，通过7L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速4BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样量以生药量计为0.3g/mL，20％乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为4BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为枳实总黄酮提取物。

5.一种枳实总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：取枳实饮片10kg，加70％乙醇20L回流提取2次，每次提取2小时，回收溶剂至无醇味，加水稀释，使上样液稀释倍数以总色原酮量计为1∶5，通过4L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1∶9，上样量以生药量计为0.4g/mL，水洗脱4倍树脂体积进行除杂，除杂流速为4BV/h，90％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为3BV/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为枳实总黄酮提取物。