CN109517017B

CN109517017B - 黄酮对照提取物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN109517017B
Application number: CN201811480875.0A
Authority: CN
Inventors: 刘斌; 姜艳艳; 杨丽丽; 张永文
Original assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Current assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Priority date: 2018-12-05
Filing date: 2018-12-05
Publication date: 2020-11-06
Anticipated expiration: 2038-12-05
Also published as: CN109517017A

Abstract

本发明公开了一种黄酮对照提取物及其制备方法和用途。所述制备方法包括：(1)采用含氨的乙醇水溶液作为溶剂提取枳实或枳壳，得到醇提物；(2)将醇提物分散于水中，固液分离得到清液和不溶物；将所述不溶物干燥，得到第一黄酮提取物；(3)将清液上大孔吸附树脂柱进行纯化，得到第二黄酮提取物；(4)将第一黄酮提取物与第二黄酮提取物混合均匀，得到所述黄酮对照提取物。本发明的提取方法黄酮类成分损失小，转移率高。

Description

黄酮对照提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种黄酮对照提取物，特别是枳实或枳壳黄酮对照提取物，还涉及其制备方法和用途。

背景技术

中药对照提取物是指主要化学成分及含量明确、稳定性好、纯度较高的中药提取物，其各化学成分比例相对固定，指标性成分含量已标定，可以实现同时对多个组分进行定性和定量分析，其价格通常低于多个组分单体对照品的总和。因此，中药对照提取物的物质成本较低，检测程序简化，可大大节约检测成本。

枳实是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrussinensis Osbeck的干燥幼果。枳壳是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实。因此，枳实和枳壳中含有相同或类似的化学成分，特别是含有类似的黄酮类成分。目前对枳实或枳壳黄酮对照物的研究相对较少，但对其中黄酮类化合物的研究较多。

申请号为200410077903.6的中国专利申请公开了一种枳实总黄酮的制备方法，将枳实药材先经乙醇回流提取、减压干燥得干膏细粉后，再经水沉盐析工艺对黄酮类成分进行分离纯化，再用高浓度的乙醇净化、干燥得到枳实总黄酮。申请号为201010608298.6的中国专利申请公开了一种枳实或枳壳总黄酮提取物的制备方法，取枳实或枳壳，切成饮片或粉碎，加5～16倍体积的30％～90％乙醇回流提取1～3次，每次回流提取1～3小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液通过已处理好的非极性大孔树脂，依次用水、20％以下的乙醇洗脱除去杂质，再用25％～90％乙醇、0.5％～2％氢氧化钠洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度约1.20～1.40(50℃～70℃)的流浸膏，减压干燥，干燥的温度为60～80℃，粉碎，即得枳实或枳壳总黄酮提取物。申请号为201110372186.X的中国专利申请公开了一种枳实或枳壳总黄酮提取物，取枳实或枳壳，切成饮片或粉碎，加4～15倍量水，煎煮1～3次，每次煎煮提取1～3小时，合并煎煮液，滤过，滤液通过已处理好的非极性大孔树脂，依次用水、20％以下的乙醇洗脱除去杂质，再用25～90％乙醇、0.5～2％氢氧化钠洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度约1.20～1.40(50℃～70℃)的流浸膏，减压干燥，干燥的温度为60～80℃，粉碎，即得枳实或枳壳总黄酮提取物。上述方法黄酮类成分损失较大，转移率较低。

因此，需要建立一种黄酮类成分损失小，转移率高且含量高的枳实或枳壳黄酮对照提取物制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种枳实或枳壳黄酮对照提取物制备方法，该制备方法黄酮类成分损失小，转移率高。

本发明的另一目的在于提供所述枳实或枳壳黄酮对照提取物，其中含有至少四种黄酮类成分，且该四种黄酮类成分含量高。

本发明的再一目的在于提供所述枳实或枳壳黄酮对照提取物的用途。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的。

本发明提供一种枳实或枳壳黄酮对照提取物制备方法，包括如下步骤：

(1)采用含氨的乙醇水溶液作为溶剂提取枳实或枳壳，得到醇提液；将所述醇提液浓缩，干燥，得到醇提物；其中，所述含氨的乙醇水溶液的乙醇浓度为50～80vol％，氨的含量为0.07～0.2wt％；

(2)将所述醇提物分散于水中，固液分离，得到清液和不溶物；将所述不溶物干燥，得到第一黄酮提取物；

(3)将所述清液上大孔吸附树脂柱，静置吸附3～10小时；依次用第一洗脱剂和第二洗脱剂进行洗脱，分别得到第一洗脱液和第二洗脱液，收集所述第二洗脱液，浓缩，干燥，得到第二黄酮提取物；所述第一洗脱剂为水，第二洗脱剂为30～50vol％的乙醇水溶液；

(4)将所述第一黄酮提取物与所述第二黄酮提取物混合均匀，得到所述黄酮对照提取物。

根据本发明的制备方法，优选地，步骤(1)中，所述含氨的乙醇水溶液的乙醇浓度为70～75vol％，氨的含量为0.1～0.18wt％。

根据本发明的制备方法，优选地，步骤(1)中，提取方法为加热回流提取法，提取次数为1～4次，每次提取的溶剂用量为所述枳实或枳壳的重量的6～12倍量，每次提取的时间为0.5～2小时。

根据本发明的制备方法，优选地，步骤(2)中，水的用量为所述醇提物重量的8～12倍量。

根据本发明的制备方法，优选地，步骤(3)中，所述大孔吸附树脂柱为AB-8大孔吸附树脂柱；所述大孔吸附树脂柱的径高比为1:5～10；所述清液与大孔吸附树脂柱中大孔吸附树脂的体积比为1:1.2～2.2。

根据本发明的制备方法，优选地，步骤(3)中，第一洗脱剂的用量为所述大孔吸附树脂柱体积的3～6倍；第二洗脱剂的用量为所述大孔吸附树脂柱体积的3～6倍。

根据本发明的制备方法，优选地，步骤(3)中，第二洗脱剂为35～45vol％的乙醇水溶液。

本发明还提供一种枳实或枳壳黄酮对照提取物，其采用上述制备方法制备得到。

根据本发明的枳实黄酮对照提取物，其含有芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷，且该四种化合物的总含量高于60wt％，其中芸香柚皮苷的含量为1.4～1.9wt％，柚皮苷的含量为28～34wt％，橙皮苷的含量为2.0～2.6wt％，新橙皮苷的含量为28～36wt％。

本发明还提供所述枳实或枳壳黄酮对照提取物用于控制枳实或枳壳药材质量的用途。

本发明的枳实或枳壳黄酮对照提取物的制备方法，黄酮类成分损失小，转移率高。进一步地，本发明的制备方法稳定可靠，重现性好，适合大规模生产。本发明的枳实或枳壳对照提取物包含芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷这四种结构明确的黄酮类成分，含量较高且稳定，可以实现同时对上述四个组分进行定性和定量分析，且成本远低于上述四个组分单体对照品的总和。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。

本发明中，枳实是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果。枳壳是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实。枳实和枳壳中含有类似的黄酮类成分，因而可以采用相同的方法从中提取制备黄酮类组分。

本发明的枳实或枳壳黄酮对照提取物的制备方法包括如下步骤：1)提取步骤；2)分离步骤；3)大孔树脂纯化步骤；4)混合步骤。

＜提取步骤＞

本发明的提取步骤中，将枳实或枳壳采用含氨的乙醇水溶液作为溶剂来提取，得到醇提液；将所述醇提液浓缩，干燥，得到醇提物。所述含氨的乙醇水溶液的乙醇浓度为50～80vol％，优选为60～75vol％，更优选为70～75vol％；氨的含量为0.07～0.2wt％，优选为0.1～0.18wt％，更优选为0.12～0.15wt％。根据本发明一个优选的实施方式，所述含氨的乙醇水溶液的乙醇浓度为70～75vol％，氨的含量为0.12～0.15wt％。采用本发明的溶剂能够更有效地将枳实或枳壳中的黄酮类成分提取出来，获得较高的黄酮类成分转移率。

提取的方法可以采用加热回流提取法或超声提取法，并优选为加热回流提取法。提取次数可以为1～4次，优选为1～3次，更优选为2～3次，再优选为2次。每次提取的溶剂用量为枳实或枳壳的重量的6～12倍量，优选为7～10倍量，更优选为8～9倍量。每次提取的时间为0.5～2小时，优选为1～1.5小时。

根据本发明一个优选的实施方式，将枳实或枳壳采用含氨的乙醇水溶液作为溶剂提取，提取方法为加热回流提取法，提取次数为2～3次，每次提取的溶剂用量为枳实或枳壳的重量的8～9倍量，每次提取的时间为1～1.5小时；其中所述含氨的乙醇水溶液的乙醇浓度为70～75vol％，氨的含量为0.12～0.15wt％。

本发明的干燥处理的方法可以为常压干燥、真空干燥、喷雾干燥、微波干燥或冷冻干燥，并优选为真空干燥。

采用本发明的提取方法，枳实或枳壳中的黄酮类成分被更充分地提取出来，转移率较高。对于枳实来说，采用本发明的提取方法得到的醇提物，四种黄酮类成分柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的转移率达90％以上，优选为95％以上，更优选为97％以上。

＜分离步骤＞

本发明的分离步骤中，将所述醇提物分散于水中，固液分离，得到清液和不溶物。水的用量可以为所述醇提物重量的8～12倍量，优选为9～11倍量，更优选为10倍量。分散的方法优选为超声分散法。本发明的分散方法中，水的用量较大，并通过超声处理，使所述醇提物中的水溶性成分充分溶解于水中，避免过多的水溶性杂质残留在不溶物部分。所述固液分离方法可以为过滤法或离心法，并优选为离心法。离心操作的转速为2500～3500r/min，优选为2700～3200r/min。离心操作的时间为15～50min，优选为20～40min。经过所述离心操作，能够将清液和不溶物有效分离开来。

所述清液用于进行进一步纯化处理；所述不溶物进行干燥处理，作为第一黄酮提取物。所述干燥处理的方法可以为常压干燥、真空干燥、喷雾干燥、微波干燥或冷冻干燥，并优选为冷冻干燥。

采用本发明的分离步骤，能够将一部分黄酮类成分分离出来。在枳实第一黄酮提取物中，柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷四种成分的转移率达到28％以上，优选为30％以上，更优选为32％以上。

本发明中，所述第一黄酮提取物中柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷四种成分的含量较高。在枳实第一黄酮提取物中，柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷四种成分的总含量可达60wt％以上，优选为62wt％以上，更优选为65wt％以上。

＜大孔树脂纯化步骤＞

本发明的大孔树脂纯化步骤是将分离步骤所得清液用大孔树脂进行纯化，具体包括如下步骤：

(3-1)上样：将所述清液上大孔吸附树脂柱，静置吸附3～10小时；

(3-2)洗脱：依次用第一洗脱剂和第二洗脱剂进行洗脱，分别得到第一洗脱液和第二洗脱液，收集所述第二洗脱液，浓缩，干燥，得到第二黄酮提取物；所述第一洗脱剂为水，第二洗脱剂为30～50vol％的乙醇水溶液。

在本发明的上样步骤中，所述大孔吸附树脂柱优选为AB-8大孔吸附树脂柱。所述大孔吸附树脂柱的径高比可以为1:5～10，优选为1:6～9，更优选为1:7～8。所述清液与大孔吸附树脂柱中大孔吸附树脂的体积比可以为1:1.2～2.2，优选为1:1.4～2.0，更优选为1:1.5～1.8。所述清液上样的流速为0.2～0.8BV/h，优选为0.3～0.7BV/h，更优选为0.4～0.6BV/h。将所述清液上大孔吸附树脂柱，静置吸附的时间为3～10小时，优选为4～8小时，更优选为5～6小时。采用本发明的上样步骤，直接采用清液上样，上样均匀，有利于后续洗脱过程对黄酮类化合物的洗脱，并避免组分积聚在大孔吸附树脂柱的头部造成组分损失。

在本发明的洗脱步骤中，第一洗脱剂水的用量为所述大孔吸附树脂柱体积的3～6倍，优选为4～5倍。第一洗脱剂的流速可以为0.6～1.6BV/h，优选为0.8～1.4BV/h，更优选为1.0～1.2BV/h。采用水作为第一洗脱剂，并采用上述用量和流速进行洗脱时，能够将杂质组分充分洗脱下来，同时黄酮类成分损失少。在本发明的洗脱步骤中，第二洗脱剂为30～50％的乙醇水溶液，优选为35～45％的乙醇水溶液，更优选为40％的乙醇水溶液。本发明的第二洗脱剂不仅能够得到较高的转移率，而且洗脱下来的成分中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量较高，杂质较少。第二洗脱剂的用量为所述大孔吸附树脂柱体积的3～6倍，优选为3.5～5.5倍，更优选为4～5倍。第二洗脱剂的流速可以为0.6～1.6BV/h，优选为0.8～1.4BV/h，更优选为1.0～1.2BV/h。采用本发明的第二洗脱剂及洗脱方法，能够将黄酮类成分有效洗脱下来，并富集在第二洗脱液中，且具有较高的转移率。

根据本发明的一个实施方式，第一洗脱剂水的用量为所述大孔吸附树脂柱体积的4～5倍，流速为0.6～1.6BV/h；第二洗脱剂为30～50％的乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的3～6倍，流速为0.6～1.6BV/h。优选地，第一洗脱剂水的用量为所述大孔吸附树脂柱体积的4～5倍，流速为1.0～1.2BV/h；第二洗脱剂为35～45％的乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的4～5倍，流速为1.0～1.2BV/h。

在本发明的洗脱步骤中，所述干燥处理的方法可以为常压干燥、真空干燥、喷雾干燥、微波干燥或冷冻干燥，并优选为冷冻干燥。

采用本发明的纯化步骤，特别是优选的实施方式中，能够将清液中黄酮类成分有效洗脱下来，且芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷富集在第二黄酮提取物中，转移率较高。另外，本发明的纯化步骤得到的对照提取物中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷这四种成分的总含量高，杂质较少。对于枳实第二黄酮提取物，芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的转移率达到55％以上，优选为58％以上，更优选为60％以上。在枳实第二黄酮提取物中，芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的总含量高于60wt％，优选高于65wt％，更优选高于70wt％。

＜混合步骤＞

本发明的大孔树脂纯化步骤是将所述分离步骤中得到的第一黄酮提取物和第二黄酮提取物混合均匀，得到黄酮对照提取物。混合操作可以采用领域内常规的混合方法，不再赘述。

采用本发明的制备方法中，黄酮对照提取物由两部分构成，黄酮类成分损失少，转移率高。本发明的枳实黄酮对照提取物中，柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷四种成分的转移率高达80％以上，优选为85％以上，更优选为88％以上，再优选为90wt％以上。对于枳实黄酮对照提取物，作为标定成分的柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷四种成分的总含量达到60％以上，优选65wt％以上，更优选为68wt％以上。

＜黄酮对照提取物＞

本发明还提供采用上述制备方法制得的枳实或枳壳黄酮对照提取物。该对照提取物含有较高含量的柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷。在枳实黄酮对照提取物中，所述四种化合物的总含量在60wt％以上，优选为65wt％以上，更优选为68wt％以上。

根据本发明的枳实黄酮对照提取物，其中芸香柚皮苷的含量为1.4～1.9wt％，优选为1.5～1.8wt％，更优选为1.6～1.8wt％；柚皮苷的含量为28～34wt％，优选为30～33wt％，更优选为31～32wt％；橙皮苷的含量为2.0～2.6wt％，优选为2.2～2.5wt％，更优选为2.3～2.5wt％；新橙皮苷的含量为28～36wt％，优选为30～35wt％，更优选为32～34wt％。根据本发明的实施方式，所述枳实黄酮对照提取物含有28～34wt％的柚皮苷、1.4～1.9wt％的芸香柚皮苷、2.0～2.6wt％的橙皮苷和28～36wt％的新橙皮苷，且所述柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的总含量高于60wt％。

本发明的枳实或枳壳黄酮对照提取物包含上述四种结构明确且含量确切的黄酮类成分，纯度较高，指标成分含量稳定，可以实现同时对四个组分进行定性和定量分析，且制备成本远低于上述四个指标成分单体对照品的总和。

＜黄酮对照提取物的用途＞

本发明还提供所述枳实或枳壳黄酮对照提取物用于控制枳实或枳壳药材质量的用途。所述用途包括以柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷这四种含量已知的黄酮对照提取物为对照，对枳实或枳壳药材中柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量进行测定。

所述枳实或枳壳黄酮对照提取物可以预先以柚皮苷对照品、芸香柚皮苷对照品、橙皮苷对照品和新橙皮苷对照品为对照进行含量标定，以确定所述黄酮对照提取物中柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量。可以同时对多个批次的黄酮对照提取物进行标定。

以下通过具体实施例对本发明进行详细说明。

以下实施例和对比例中，药材(枳实药材)、中间品(醇提物、第一黄酮提取物、第二黄酮提取物)和终产品(黄酮对照提取物)等供试品中的芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量测定方法如下：

1.对照品溶液的制备

取芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含有芸香柚皮苷0.02064mg、柚皮苷0.02059mg、橙皮苷0.02144mg、新橙皮苷0.02072mg的溶液。

2.供试品溶液制备

精密称取50mg供试品，按液料比250:1加入70vol％乙醇，超声30min，即得。

3.色谱条件

色谱柱Sunfire C18色谱柱(4.6×150mm，5μm)；流动相甲醇-水-乙酸(38:58:4)；流速：1ml/min；检测波长283nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

本发明中，得率用于表征药材经过处理后，所得中间品/终产品的质量占药材质量的百分比。

m₁指中间品/终产品质量，m₂指药材质量

本发明中，转移率用于表征药材经过处理后，所得中间品/终产品中某类(个)成分的质量占药材中该类(个)成分的质量的百分比。

n₁指中间品/终产品中某类(个)成分的质量，n₂指药材中该类(个)成分的质量。

实施例1-醇提物的制备

采用含氨的乙醇水溶液作为溶剂，加热回流提取法提取枳实，提取次数为2次，每次提取的溶剂用量为枳实重量的8倍，每次提取时间为1.5小时，得到醇提液；将所述醇提液减压浓缩，真空干燥，得到醇提物。其中所述含氨的乙醇水溶液中氨的含量为0.14wt％，乙醇浓度为70vol％。

实施例2-醇提物的制备

采用含氨的乙醇水溶液作为溶剂，加热回流提取法提取枳实，提取次数为2次，每次提取的溶剂用量为枳实重量的8倍，每次提取时间为1.5小时，得到醇提液；将所述醇提液减压浓缩，真空干燥，得到醇提物。其中所述含氨的乙醇水溶液中氨的含量为0.14wt％，乙醇浓度为50vol％。

对比例1

采用含氨的乙醇水溶液作为溶剂，加热回流提取法提取枳实，提取次数为2次，每次提取的溶剂用量为枳实重量的8倍，每次提取时间为1.5小时，得到醇提液；将所述醇提液减压浓缩，真空干燥，得到醇提物。其中所述含氨的乙醇水溶液中氨的含量为0.14wt％，乙醇浓度为90vol％。

对比例2

采用乙醇水溶液作为溶剂，加热回流提取法提取枳实，提取次数为2次，每次提取的溶剂用量为枳实重量的8倍，每次提取时间为1.5小时，得到醇提液；将所述醇提液减压浓缩，真空干燥，得到醇提物。其中所述乙醇水溶液的乙醇浓度为70vol％。

实施例3-第一黄酮提取物的制备

将制备例1的醇提物分散于水中，水的用量为醇提物重量的10倍量，超声处理；然后于3000r/min下离心30min，得到清液和不溶物；将所述不溶物冷冻干燥，得到第一黄酮提取物。

实施例4-第二黄酮提取物

将制备例3得到的清液上AB-8大孔吸附树脂柱，AB-8大孔吸附树脂柱的径高比为1:7，清液体积与AB-8大孔吸附树脂柱的体积比为1:1.7，上样流速为0.5BV/h，上样后静置吸附6小时；用水作为第一洗脱剂进行洗脱，流速为1BV/h，洗脱体积为5倍柱体积，得到第一洗脱液，弃去；再用40％的乙醇水溶液作为第二洗脱剂，流速为1BV/h，洗脱体积为4倍柱体积，收集所述第二洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到第二黄酮提取物。

对比例3

除了将第二洗脱剂替换为20％的乙醇水溶液，其他条件与实施例4相同，得到第二黄酮提取物。

对比例4

除了将第二洗脱剂替换为60％的乙醇水溶液，其他条件与实施例4相同，得到第二黄酮提取物。

实施例5-黄酮对照提取物A

将实施例3的第一黄酮提取物与实施例4的第二黄酮提取物混合均匀，得到黄酮对照提取物A。

分别计算实施例1～2、对比例1～2的各醇提物中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量，并计算芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的总含量和转移率。结果见表1。

表1实验结果

分别计算实施例4、对比例3～4的第二黄酮提取物中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量，并计算芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的总含量和转移率。结果见表2。

表2实验结果

取枳实药材，采用实施例5的方法制备黄酮对照提取物A。分别测定各中间品的得率，分别测定枳实药材、醇提物、第一黄酮提取物、第二黄酮提取物和黄酮对照提取物A中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量，并计算芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的总含量和转移率。实验结果见表3。

表3实验结果

本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。

Claims

1.一种黄酮对照提取物制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)采用含氨的乙醇水溶液作为溶剂提取枳实或枳壳，得到醇提液；将所述醇提液浓缩，干燥，得到醇提物；其中，所述含氨的乙醇水溶液的乙醇浓度为60～75vol％，氨的含量为0.1～0.18wt％；

(2)将所述醇提物分散于水中，固液分离，得到清液和不溶物；将所述不溶物干燥，得到第一黄酮提取物；水的用量为所述醇提取物重量的8～12倍，所述分散采用超声分散法；

(3)将所述清液上大孔吸附树脂柱，静置吸附3～10小时；依次用第一洗脱剂和第二洗脱剂进行洗脱，分别得到第一洗脱液和第二洗脱液，收集所述第二洗脱液，浓缩，干燥，得到第二黄酮提取物；所述第一洗脱剂为水，第二洗脱剂为35～45vol％的乙醇水溶液；第一洗脱剂的用量为所述大孔树脂柱体积的4～5倍，第一洗脱剂的流速为1.0～1.2BV/h，第二洗脱剂的用量为所述大孔树脂柱体积的4～5倍，第二洗脱剂的流速为1.0～1.2BV/h；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述含氨的乙醇水溶液的乙醇浓度为70～75vol％，氨的含量为0.1～0.18wt％。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，提取方法为加热回流提取法，提取次数为1～4次，每次提取的溶剂用量为所述枳实或枳壳的重量的6～12倍量，每次提取的时间为0.5～2小时。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述大孔吸附树脂柱为AB-8大孔吸附树脂柱；所述大孔吸附树脂柱的径高比为1:5～10；所述清液与大孔吸附树脂柱中大孔吸附树脂的体积比为1:1.2～2.2。