CN102106918B - 一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药枳实中提取得到的挥发油、总黄酮和总生物碱提取物的制备方法。该方法主要利用水蒸气蒸馏、特定型号的离子交换树脂和大孔吸附树脂联用的方法，同时提取分离枳实中挥发油、总黄酮和总生物碱。所制得的枳实挥发油提取物中柠檬烯和β-芳樟醇的百分含量为5-100%（w/w）；所制得的枳实总黄酮提取物中各种黄酮类成分百分含量的总和为5-100%（w/w）,其中柚皮芸香苷，柚皮苷，橙皮苷、新橙皮苷四种成分含量占总黄酮含量的5-100%（w/w）；所制得的枳实生物碱提取物中各种生物碱成分百分含量的总和为5-100%（w/w）,其中辛弗林含量占总生物碱含量的5-100%（w/w）。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域，具体来说是涉及同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法。
背景技术
枳实始载于《神农本草经》，具有破气消积，化痰散痞的功效。主要有效成分为挥发油、黄酮类和生物碱类[1]，它们均对枳实的功效发挥一定作用。现代药理研究表明，挥发油对大鼠离体肠平滑肌的收缩呈先兴奋后抑制作用，并有一定程度的镇痛作用和中枢抑制作用[2]黄酮类对大鼠离体肠平滑肌具有收缩作用[3]；生物碱具有升压、抗休克的作用[4]。《中华人民共和国药典》2010版规定枳实来源于芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果[5]。另有香橙Citurs junos Sieb部分地区也作为枳实使用目前有关枳实黄酮、生物碱成分制备方法的专利有申请号为：200410042658.5，CN200410077903.6，200410070123.9，CN200910183265.9，CN200710163452.1，CN200710111229.2，CN200710099903.X，CN200710098445.8的专利等。但本发明专利公开的是一种同时提取分离来源于酸橙及其栽培变种、香橙或甜橙的枳实中挥发油、总黄酮和总生物碱的制备方法，采用该技术方法能使枳实中三类有效成分同时被提取，有效避免了单一提取所带来的资源浪费，提高了枳实的综合利用率，降低了成本，并且制备方法适宜工业化大生产。
参考文献
1 赵宇.枳实、枳壳色谱指纹图谱研究.中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士),2005:47-48
2 胡盛珊,王大元,邱萍,等.枳实、枳壳挥发油对动物胃肠道的作用.江西医药,1992,27(3):158-159
3 Benavente-Garca O.,Castillo J.Update on Uses and Properties of Citrus Flavonoids: New Findings in Anticancer,Cardiovascular,and Anti-inflammatory Activity.J Agric Food Chem,2008,56(15):6185-6205
4 陈廉,王殿俊,常复蓉,等.青皮、陈皮、枳实药理作用的比较.江苏中医杂志,1981,(3):60-61
5 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:化学工业出版社,2005:p172
6 王淳.不同品种产地枳实有效成分的对比分析.中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士),2009:33-42。
发明内容
[0004] 本发明的目的在于提供一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法。
本发明的技术方案如下：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实加5-12倍量水，浸泡0-4 h，水蒸汽蒸馏法提取2-12 h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计 6-12倍量(L/kg)的55-95%乙醇回流提取2-3次，每次0.5-1.5 h，滤过，合并各提取液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使以生药量计上样液浓度为0.4-0.8 g/ml；通过-阳离子交换树脂，吸附流速1-3 BV/h，树脂柱径高比为1∶5-8，以生药量计上样量为0.8-1.6 g/ml，先用30-80%乙醇洗脱2-4 BV，洗脱流速为1-4 BV/h，洗脱液待用；然后用0.8-2 mol/L 30-80%乙醇氨水洗脱3-5 BV，洗脱流速为2-4 BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使以生药量计上样液浓度为0.4-1.0g/ml，通过大孔吸附树脂,吸附流速1-3 BV/h，树脂柱径高比为1∶5-8，以生药量计上样量为0.3-0.6g/ml，先用0-20%乙醇洗脱2-3BV进行除杂，除杂流速为1-3 BV/h，然后用50-90%乙醇洗脱3-4 BV，洗脱流速为0.8-2 BV/h。此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
本发明所述原料枳实，来源于是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种黄皮酸橙Citrus aurantium‘Huangpi’、代代花 Citrus aurantium‘Daidai’、朱栾 Citrus aurantium‘Chuluan’、塘橙 Citrus aurantium‘Tangcheng’臭橙C. aurantium‘Xiucheng’、香橙C. aurantium ‘Xiangcheng’、枳橙C. aurantium ×P.trifoliata，甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果。
作为提取枳实挥发油、总生物碱和总黄酮的原材料，包括枳实市售饮片，也可以是这些植物的成熟果实、茎、叶、花穗、根茎及根等任一部位或全部植株，其中优选的药材部位为干燥根及根茎。上述所述的枳实包括未经任何炮制处理的原药材及饮片，还包括各种炮制品，如“炒枳实”、“麸炒枳实”等。
本发明利用离子交换树脂法进行制备时，所用的离子交换树脂可以是强酸性或弱酸性任意一种类型，如UBK530、WK40、SK1B、WK10、731等。
本发明利用大孔吸附树脂法进行制备时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性等任意一种类型，如SP825，HP20，HPD100A, D-101,NKAⅡ等。
本发明其中BV和BV/h的含义是：通常将树脂装于圆筒形的树脂柱中，溶液连续地通过。树脂柱内装载树脂的体积称为床容积(bed volume)，简写为BV。工业用的树脂柱的床容积通常由1-0m3，也有较小或较大的。这是树脂柱的基本单位，它工作时的各种物料量都以BV为单位。例如溶液通过树脂柱的流量速度为2-4BV/h，即每小时通过溶液的体积为树脂床容积的2-4倍。树脂的处理能力亦常以BV为单位计算。
本发明质量控制方法可以包括以下一种或几种含量测定方法：
1、挥发油
挥发油得率=挥发油量(ml)/生药量（g）×100%
柠檬烯和β-芳樟醇百分含量测定
色谱条件：Restek Rxi-5ms 石英毛细管柱(0.25 mm × 30 m，0.25 μm)；进样口温度250 ℃；程序升温：起始温度50 ℃，保持1 min，以5 ℃/min程序升温至140 ℃，保持1 min，再以10 ℃??min-1升温至200 ℃，保持3 min。进样量1μL；分流比1:60；载气氦气。质谱分析条件：电离方式为EI，离子源温度200 ℃，接口温度为250 ℃，电子能量70 eV，电离电压1760 V，质量扫描范围45-450 amu。
百分含量测定：取3批枳实挥发油样品各3份，精密吸取0.2 ml,加丙酮溶解并定容于5 ml量瓶中，摇匀，作为柠檬烯和β-芳樟醇百分含量测定的供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液2 μL，注入气相色谱仪，测定，记录三种成分百分含量。
2、总生物碱
精密称取辛弗林对照品适量，加甲醇溶解制成每1 ml含辛弗林0.831 mg的溶液。精密吸取辛弗林对照品溶液0.5 ml，1.0 ml，1.5 ml，2.0 ml，2.5 ml，置带刻度具塞试管中，分别加水至3 ml，加入pH5.0溴百里香草酚兰缓冲溶液4 ml，摇匀，放入37℃水浴中保温0.5小时，取出放冷，于420 nm处测定吸光度，以辛弗林浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制曲线。
精密称取3批枳实总生物碱提取物样品各3份，每份约8 mg,加甲醇溶解并定容于5 ml量瓶中，摇匀。精密吸取1.5 ml置带刻度具塞试管中，加水至3 ml，加入pH5.0溴百里香草酚兰缓冲溶液4 ml，摇匀，放入37℃水浴中保温0.5小时，取出放冷，于420 nm处测定吸光度，计算含量。
3、辛弗林
色谱条件：Zobax Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm) 色谱柱；流动相：乙腈-水-磷酸-十二烷基硫酸钠（24∶76∶0.1∶0.2）；流速：1.2 ml/min；检测波长：275 nm；柱温：30 ℃。
标准曲线：精密吸取辛弗林对照品溶液(浓度为0.36 mg/ml)1, 3, 5, 7，9 ml，加甲醇分别定容至10 ml。分别精密吸取各浓度对照品溶液5 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以辛弗林量(μg)为横坐标，色谱峰峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线
含量测定：精密称取3批枳实总生物碱提取物样品各3份，每份约5 mg,加甲醇溶解并定容于10 ml量瓶中，摇匀，作为辛弗林含量测定的供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10 μL, 注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量。
4、总黄酮
精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1 ml含橙皮苷0.22 mg的溶液。分别精密吸取橙皮苷对照品溶液1，2，3，4，5 ml，于5 ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液0.5 ml，置25 ml量瓶中，准确加入10% AlCl3溶液1.0 ml，再用蒸馏水定容至刻度，摇匀，室温放置15 min，于310 nm处测定吸光度，以橙皮苷浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制曲线。
精密称取3批枳实总黄酮提取物样品各3份，每份约5 mg,加甲醇溶解并定容于25 ml量瓶中，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液0.5 ml，置25 ml量瓶中，准确加入10% AlCl3溶液1.0 ml，再用蒸馏水定容至刻度，摇匀，室温放置15 min，于310 nm处测定吸光度，计算含量。
5、柚皮芸香苷，柚皮苷，橙皮苷和新橙皮苷
色谱条件：Agilent Zobax Extend-C18 (4.6 mm×50 mm，1.8μm)色谱柱，流动相为甲醇-2%醋酸(30:70)；检测波长：285 nm；流速：1 ml/min；柱温：30 ℃。
标准曲线：精密称取橙皮苷对照品、柚皮苷对照品适量，加甲醇溶解分别制成每1 ml含橙皮苷103.2 μg、柚皮苷87.2μg的溶液。精密吸取等体积的两种对照品溶液混匀，得到每1 ml含橙皮苷和柚皮苷各51.6μg、43.6μg的混合对照品溶液。精密吸取混合对照品溶液1, 3, 5, 7，9 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以测得的峰面积积分值为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。
含量测定：精密称取3批枳实总黄酮提取物样品各3份，每份约3 mg,加甲醇溶解并定容于25 ml量瓶中，摇匀，作为柚皮芸香苷，柚皮苷，橙皮苷和新橙皮苷含量测定的供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液2 μL, 注入液相色谱仪，测定峰面积。计算橙皮苷和柚皮苷含量。柚皮芸香苷与柚皮苷、新橙皮苷与橙皮苷分别为两对同分异构体，它们在紫外吸收光谱中的吸收系数相同。因此在缺少柚皮芸香苷和新橙皮苷对照品的情况下，根据DAD检测器测定的色谱峰紫外吸收光谱图，确认柚皮芸香苷和新橙皮苷色谱峰。并分别根据橙皮苷和柚皮苷对照品的峰面积和进样量计算样品中新橙皮苷和柚皮芸香苷的含量。
具体实施方式
实施例1：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实饮片2 kg，加8倍量水，浸泡2 h，水蒸汽蒸馏法提取7 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量75%乙醇回流提取3次，每次1.0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.6 g/ml；通过1.8 L UBK530阳离子交换树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为1.2 g/ml，先用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为3 BV/h，50%乙醇洗脱液待用；然后用1.4 mol/L 50%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱流速为3 BV/h，1.4 mol/L 50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述50%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.7 g/ml，通过SP-825大孔吸附树脂,吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为0.4 g/ml，先用10%乙醇洗脱2 BV进行除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用70%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1.4 BV/h。70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
实施例2：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实饮片5 kg，加5倍量水，浸泡4 h，水蒸汽蒸馏法提取12h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计12倍量95%乙醇回流提取3次，每次1.5 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.8 g/ml；通过WK40阳离子交换树脂，吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1∶8，以生药量计上样量为1.6 g/ml，先用80%乙醇洗脱4BV，洗脱流速为4 BV/h，80%乙醇洗脱液待用；然后用2 mol/L 80%乙醇氨水洗脱5 BV，洗脱流速为4 BV/h，2 mol/L 80%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述80%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为1.0 g/ml，通过HP20大孔吸附树脂,吸附流速3 BV/h，树脂柱径高比为1∶8，以生药量计上样量为0.6 g/ml，先用20%乙醇洗脱3 BV进行除杂，除杂流速为3 BV/h，然后用90%乙醇洗脱4 BV，洗脱流速为2 BV/h。90%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
实施例3：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片1 kg，加5倍量水，水蒸汽蒸馏法提取2 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计6倍量55%乙醇回流提取2次，每次0.5 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.4 g/ml；通过UBK530阳离子交换树脂，吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1∶5，以生药量计上样量为0.8 g/ml，先用30%乙醇洗脱2 BV，洗脱流速为1 BV/h，30%乙醇洗脱液待用；然后用0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脱3 BV，洗脱流速为2 BV/h，0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述30%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.4 g/ml，通过SP-825大孔吸附树脂,吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1∶5，以生药量计上样量为0.3 g/ml，先用水洗脱2 BV除杂，除杂流速为1 BV/h，然后用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为0.8 BV/h。50%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
实施例4：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片2 kg，加12倍量水，浸泡0 h，水蒸汽蒸馏法提取4 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入24L75%乙醇回流提取3次，每次1.0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.6 g/ml；通过731阳离子交换树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样量以生药量计为1.2 g/ml，先用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为3 BV/h，50%乙醇洗脱液待用；然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱流速为3 BV/h，1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述50%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.8 g/ml，通过D101大孔吸附树脂, 吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为0.4 g/ml，先用水洗脱2 BV进行除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用70%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1 BV/h。70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
实施例5：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片3 kg，加5倍量水，浸泡3 h，水蒸汽蒸馏法提取6 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入24L95%乙醇回流提取3次，每次1.5 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.8 g/ml；通过UBK530阳离子交换树脂，吸附流速3 BV/h，树脂柱径高比为1∶8，上以生药量计样量为1.6 g/ml，先用80%乙醇洗脱4BV，洗脱流速为4 BV/h，80%乙醇洗脱液待用；然后用2 mol/L 80%乙醇氨水洗脱5 BV，洗脱流速为4 BV/h，2 mol/L 80%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述80%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为1.0 g/ml，通过HPD100A大孔吸附树脂, 吸附流速3 BV/h，树脂柱径高比为1∶8，以生药量计上样量为0.6 g/ml，先用20%乙醇洗脱3 BV进行除杂，除杂流速为3 BV/h，然后用90%乙醇洗脱4 BV，洗脱流速为2 BV/h。90%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
实施例6：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片2 kg，加4倍量水，浸泡2 h，水蒸汽蒸馏法提取5 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入16L55%乙醇回流提取2次，每次0.5 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.4 g/ml；通过SK1B阳离子交换树脂，吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1∶5，以生药量计上样量为0.8 g/ml，先用30%乙醇洗脱2 BV，洗脱流速为1 BV/h，30%乙醇洗脱液待用；然后用0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脱3 BV，洗脱流速为2 BV/h，0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述30%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.4 g/ml，通过D-101大孔吸附树脂, 吸附流速1 BV/h，树脂柱径高比为1∶5，以生药量计上样量为0.3 g/ml，先用水洗脱2 BV除杂，除杂流速为1 BV/h，然后用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为0.8 BV/h。50%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
实施例7：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片2 kg，加4倍量水，浸泡2 h，水蒸汽蒸馏法提取6 h，得挥发油。提提取挥发油后药液留用，药渣加入20L70%乙醇回流提取3次，每次1.0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.5 g/ml；通过731阳离子交换树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为1.2 g/ml，先用60%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为3 BV/h，60%乙醇洗脱液待用；然后用1 mol/L 60%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱流速为3 BV/h，1 mol/L 60%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述60%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.8 g/ml，通过NKAⅡ大孔吸附树脂, 吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上以生药量计样量为0.4 g/ml，先用水洗脱2 BV进行除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用80%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1 BV/h。80%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
实施例8：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片3 kg，加6倍量水，水蒸汽蒸馏法提取 0.5 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入30L70%乙醇回流提取2次，每次1.0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.6 g/ml；通过SP-825大孔吸附树脂,吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上以生药量计样量为0.6 g/ml，先用水洗脱2 BV除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用30%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为2 BV/h，30%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物； 树脂柱继续用70%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1 BV/h，洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
实施例9：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片1 kg，加8倍量水，浸泡3 h，水蒸汽蒸馏法提取1 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入8L70%乙醇回流提取3次，每次1 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.6 g/ml；通过WK40阳离子交换树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为1.2 g/ml，先用水洗脱2 BV除杂，除杂流速为3 BV/h，再用50%乙醇洗脱，洗脱流速为3 BV/h，接收洗脱液3 BV，50%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物；树脂柱然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱流速为3 BV/h，1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物。
实施例10：
同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取酸橙枳实饮片2 kg，加6倍量水，浸泡2 h，水蒸汽蒸馏法提取1 h，得挥发油。提取挥发油后药液留用，药渣加入20L水提取3次，每次1.0 h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，以生药量计使上样液浓度为0.6 g/ml；通过UBK530阳离子交换树脂，吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为1.2 g/ml，先用50%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为3 BV/h，50%乙醇洗脱液待用；然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱4 BV，洗脱流速为3 BV/h，1 mol/L 50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述50%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.8 g/ml，通过SP-825大孔吸附树脂,吸附流速2 BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为0.4 g/ml，先用水洗脱2 BV进行除杂，除杂流速为2 BV/h，然后用70%乙醇洗脱3 BV，洗脱流速为1 BV/h。70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
以上实施例利用上述质量检测方法测得总黄酮和生物碱含量如下：
从实施例1的质量检测结果可以看出，此实施例是本发明的最优方案；从实施例4、5、6、7的质量检测结果可以看出，在工艺一定的情况下，离子交换树脂和大孔吸附树脂型号的选择会影响总黄酮和生物碱提取物的含量；从实施例8、9、10的质量检测结果可以看出，离子交换树脂和大孔树脂单独使用会减少总黄酮和生物碱提取物的含量。
从实施例6、7的质量检测结果可以看出，加水量太少会影响挥发油的得率；从实施例8、9、10的质量检测结果可以看出，提取时间影响挥发油的得率。
因此，本发明的创新性就在于采用了水蒸气蒸馏、特定型号的离子交换树脂和大孔吸附树脂联用的方法提取纯化枳实中挥发油、总黄酮和总生物碱，不仅提高了枳实的综合利用率，降低了成本，同时提取物中的挥发油、总黄酮和总生物碱也有较高的含量。
Claims (5)
1.一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实饮片加5-12倍量水，浸泡0-4h，水蒸汽蒸馏法提取2-12h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计6-12倍量55-95％乙醇回流提取2-3次，每次0.5-1.5h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.4-0.8g/ml；通过阳离子交换树脂，吸附流速1-3BV/h，树脂柱径高比为1∶5-8，以上生药量计样量为0.8-1.6g/ml，先用30-80％乙醇洗脱2-4BV，洗脱流速为1-4BV/h，洗脱液待用；然后用0.8-2mol/L 30-80％乙醇氨水洗脱3-5BV，洗脱流速为2-4BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使以生药量计上样液浓度为0.4-1.0g/ml，通过大孔吸附树脂，吸附流速1-3BV/h，树脂柱径高比为1∶5-8，以生药量计上样量为0.3-0.6g/ml，先用0-20％乙醇洗脱2-3BV进行除杂，除杂流速为1-3BV/h，然后用50-90％乙醇洗脱3-4BV，洗脱流速为0.8-2BV/h；此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
2.如权利要求1所述的一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，其特征在于原料枳实，来源是芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种黄皮酸橙Citrus aurantium‘Huangpi’、代代花Citrus aurantium‘Daidai’、朱栾Citrus aurantium‘Chuluan’、塘橙Citrus aurantium‘Tangcheng’、臭橙C.aurantium‘Xiucheng’、香橙C.aurantium‘Xiangcheng’、枳橙C.aurantium×P.trifoliata、甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果中的任意一种。
3.如权利要求1所述的一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，其特征在于所用的离子交换树脂型号是UBK530、WK40、SK1B、WK10或731中的任意一种。
4.如权利要求1所述的一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，其特征在于所用的大孔树脂型号是SP825，HP20，HPD100A，D-101，NKA II中的任意一种。
5.如权利要求1所述的一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，其特征在于：同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，取枳实饮片2kg，加8倍量水，浸泡2h，水蒸汽蒸馏法提取7h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量75％乙醇回流提取3次，每次1.0h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.6g/ml；通过1.8L UBK530阳离子交换树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为1.2g/ml，先用50％乙醇洗脱3BV，洗脱流速为3BV/h，50％乙醇洗脱液待用；然后用1.4mol/L 50％乙醇氨水洗脱4BV，洗脱流速为3BV/h，1.4mol/L 50％乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；上述50％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0.7g/ml，通过SP-825大孔吸附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1∶6，以生药量计上样量为0.4g/ml，先用10％乙醇洗脱2BV进行除杂，除杂流速为2BV/h，然后用70％乙醇洗脱3BV，洗脱流速为1.4BV/h；70％乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物。
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Citations (6)
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|---|---|---|---|---|
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| CN1318538A (zh) * | 2001-04-11 | 2001-10-24 | 侯团章 | 从中药枳实中提取辛弗林的方法 |
| CN1431216A (zh) * | 2003-01-21 | 2003-07-23 | 中山大学 | 柚皮苷的提取方法 |
| CN1552721A (zh) * | 2003-05-30 | 2004-12-08 | 江西中医学院 | 新橙皮苷的制备工艺及其在质量控制过程中的应用 |
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Non-Patent Citations (2)
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|---|
| 彭亮等.大孔吸附树脂分离枳实总黄酮工艺的优化研究.《安徽农业科学》.2010,第38卷(第15期), * |
| 蔡艳华等.枳实中辛弗林提取方法的选择和工艺优化.《枳实中生物碱辛弗林的提取分离研究》.2005, * |
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