CN1431216A - 柚皮苷的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从含柚皮苷的各种药材中提取柚皮苷单体的方法。该方法是：将药材粉碎，经过一至多次水提取，滤过，合并滤液；滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；洗脱液挥干溶剂，得粗品；再经多次重结晶，得柚皮苷晶体。采用本发明方法，从不同的含柚皮苷药材中提取柚皮苷，提取得率均在85％以上，所得柚皮苷样品中柚皮苷单体的含量达到95％以上。因此，本发明方法具有提取工艺简单，提取率高，提取得到的柚皮苷单体纯度高等特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种从含柚皮苷的各种药材中提取柚皮苷单体的方法。
背景技术
柚皮苷是一种黄酮类化合物，广泛存在于各种中药材中，例如枳壳，枳实，柑橘，柠檬，葡萄柚，橘红，橙等。柚皮苷是多种药材的主要有效成份之一。已经有研究证明，柚皮苷具有抗菌消炎，止咳化痰，降低血浆胆固醇浓度，改善血管循环等作用。已被用于作苦味剂、发汗剂、还有降胆固醇等方面。
柚皮苷的获得途径，除了Rosenmund(Rosenmund，Ber.，61，2608(1958))和Zemlen，Bognar(Ber.，75，648(1942))描述的方法以及其它化学方法进行合成得到外，还可通过从药材中提取获得。很多药材例如柚，枳实等，其药材中柚皮苷含量均很高。枳实药材中的柚皮苷含量就有10％左右。但由于药材中含有各种黄酮类，多糖类，鞣质，生物碱类，蒽醌类等物质，而且黄酮类物质中也含有多种结构相近的物质。要得到柚皮苷单体，需要把柚皮苷与其它各种物质分离开来。以往的研究，未能提供一种获得柚皮苷单体的可行的提取方法。从药材中提取柚皮苷单体的方法，尚没有报道。
柚皮苷的结构式：
发明内容
本发明的目的是提供一种从中药材中提取柚皮苷单体的方法。
本发明的柚皮苷提取方法的步骤包括：
①将含柚皮苷的药材粉碎，经过水提取，滤过，合并滤液；
②滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；
③洗脱液挥干溶剂，得柚皮苷粗品；再经多次重结晶，得柚皮苷单体(纯品)。
上述本发明方法所说的含柚皮苷的药材可以是枳壳、枳实、柑橘、柠檬、葡萄柚、橘红、橙等各种含柚皮苷的中药材。
本发明方法中的水提取可以采用在室温～100℃条件下或/和超声波条件下进行；提取次数一般为一至三次，次数增加不限。水的用量为水至少能没过药材，水用量过多不限。提取时间一般为0.1-24小时，时间延长不限。加温或/和超声波条件下提取可缩短提取时间。
本发明方法中的浸膏醇沉所用的乙醇可以是无水乙醇或者各种浓度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液体的乙醇最终浓度可以是5％至95％的各种浓度。
本发明方法中的柱分离，采用的柱填料可以为硅胶，氧化铝，聚酰胺，大孔树脂，葡聚糖凝胶等各种填料。
本发明方法中的有机溶剂洗脱，有机溶剂可以采用乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯，石油醚等各种常用有机溶剂。有机溶剂的浓度可以采用各种浓度，包括浓度为100％的有机溶剂。
本发明方法中的重结晶，溶剂可以采用水或者有机溶剂，有机溶剂可以采用乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯，石油醚等各种常用有机溶剂。重结晶的次数可以为一次至十次，次数增加不限。
采用本发明的柚皮苷提取方法，从不同的含柚皮苷药材中提取柚皮苷(纯品)，提取得率均在85％以上，提取得率高。
采用本发明方法所得到的柚皮苷单体(纯品)，经过《中华人们共和国药典》2000版一部高效液相色谱法测定，以中国药品生物制品检定所提供的柚皮苷对照品进行外标法定量，得提取所得柚皮苷样品中柚皮苷单体的含量。结果表明，样品中柚皮苷单体的含量高于95％。表明本发明工艺可行。
本发明的柚皮苷提取方法，具有提取工艺简单，提取率高，提取得到的柚皮苷单体纯度高等特点。
具体实施发式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
各实施例所涉及到的固体混合物中之固体，液体中之液体，以及液体中之固体的百分比分别是以wt/wt，vol/vol，wt/vol计算，除非另有说明。
实施例1
枳壳药材切成饮片，加100℃水没过药材，水提取三次，每次一小时，滤过；滤液浓缩成浸膏，过大孔树脂柱，用水洗脱后，再用70％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀，沉淀用水重结晶三次，喷雾干燥，得柚皮苷单体。得率为90.7％。
实施例2
柑橘药材粉碎，不过筛，加100℃水没过药材，提取三次，每次1小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩，加入无水乙醇至乙醇浓度为30％，放置过夜，滤过，上清液回收乙醇。浸膏过硅胶柱，先用水洗脱，再用80％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀，沉淀干燥，用无水乙醇重结晶五次后，得柚皮苷单体。得率为87.4％。
实施例3
橘红药材切成饮片，经70℃水浸提两次，每次3小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩成浸膏，浸膏加入95％乙醇至乙醇浓度为60％，静置过夜，产生沉淀，滤过，去沉淀，滤液回收乙醇，所得液体过氧化铝柱，先用水洗脱，再用95％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，回收浓缩，得沉淀，沉淀用乙酸乙酯重结晶四次，得柚皮苷单体。得率为89.7％。
实施例4
柠檬药材不粉碎，经超声波用水提取4次，每次1小时，滤过，合并滤液；浓缩，得浸膏，浸膏直接过聚酰胺柱，用水洗脱后，再用95％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀，滤过，沉淀用乙酸乙酯重结晶二次，用水溶解，直接喷雾干燥成粉末，得柚皮苷单体。得率为85.3％。
实施例5
枳实药材粉碎，过20目筛，室温下水提取三次，每次两天，滤过，合并滤液；滤液加入95％乙醇至乙醇浓度为50％，静置，液体产生沉淀，得水层和沉淀，去沉淀，得水层，水层回收乙醇，得沉淀，沉淀过葡聚糖凝胶柱，先用水洗脱，再用40％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀，沉淀用乙酸乙酯重结晶六次，得柚皮苷单体。得率为92.1％。
实施例6
葡萄柚药材切成饮片，加100℃水没过药材，提取二次，每次2小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩，得浸膏，浸膏过大孔树脂柱，先用水洗脱，再用60％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，所得液体放置过夜，滤过，得沉淀，沉淀用水重结晶三次，得柚皮苷单体。得率为87.6％。
实施例7
柚皮苷单体纯度测定实验
取上述提取方法制备得到的柚皮苷单体适量，甲醇溶解定容于容量瓶中，再用微孔滤膜(0.45um)过滤后，注入高效液相色谱仪中，以中国药品生物制品检定所提供的柚皮苷对照品进行外标法定量，得提取所得柚皮苷样品中柚皮苷单体的含量。结果见表1。
色谱条件：Agilent1100高效液相色谱仪(自动进样器，真空脱气机，四元泵，柱温箱，二极管阵列检测器)；色谱柱：MARKER ODS柱(5um，4.0×250mm)；流动相：乙腈-0.05M KH2PO4缓冲液(20∶80)；检测波长：283nm；柱温30℃；流速：1ml/min；进样量：5μl。
表1：样品含量测定试验结果
样品浓度 进样量 测得柚皮苷 柚皮苷含量样品号
峰面积
(mg/ml) (μl) 浓度(mg/ml) (％)柚皮苷
0.400 5 2743.35889 0.400 100对照品样品1 0.396 5 2626.76614 0.383 96.7样品2 0.424 5 2853.09325 0.416 98.2样品3 0.385 5 2571.89896 0.375 97.4样品4 0.417 5 2798.22607 0.408 97.9
从表1结果看出，提取所得样品中柚皮苷单体的含量均高于95％。说明本发明的提取方法所得到的柚皮苷样品纯度高。
综上所述，说明本发明的柚皮苷提取方法，能有效地从含柚皮苷药材中提取得到柚皮苷单体，所得柚皮苷样品纯度高，含量均高于95％以上。工艺简单可行。
Claims (8)
1.一种柚皮苷的提取方法，依次包括以下步骤：
①将含柚皮苷的药材粉碎，经过水提取，滤过，合并滤液；
②滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；
③洗脱液挥干溶剂，得柚皮苷粗品；再经多次重结晶，得柚皮苷单体。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的水提取是在室温至100℃条件下或/和超声波条件下进行；提取次数为一至三次。
3.按照权利要求2所述的方法，其特征是所说水提取的提取时间为0.1-24小时。
4.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的浸膏醇沉所用的乙醇是无水乙醇或者各种浓度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液体的乙醇最终浓度为5％至95％的各种浓度。
5.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的柱分离采用的柱填料为硅胶，氧化铝，聚酰胺，大孔树脂或葡聚糖凝胶填料。
6.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的有机溶剂洗脱所用的有机溶剂为包括浓度为100％的各种浓度的乙醇或甲醇，或者氯仿、乙酸乙酯或石油醚。
7.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的重结晶所用的溶剂为水或常用有机溶剂，常用有机溶剂为乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯或石油醚；重结晶的次数为一次至十次。
8.按照权利要求1至7之一所述的方法，其特征是所用的含柚皮苷的药材为枳壳、枳实、柑橘、柠檬、葡萄柚、橘红、橙的中药材。
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