CN108503674A - 一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法 - Google Patents

一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法，采用超声波提取法进行提取，并采用大孔树脂吸附分离法对得到的提取液进行吸附，采用溶剂萃取法对吸附后的大孔树脂进行萃取解吸，三种方法的结合最终提高了柚皮苷的提取率(0.615％)和提取纯度(80.1％)，同时也能放大提取，便于工业化的应用。

Description

一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法
技术领域
本发明涉及分离纯化技术领域，尤其涉及一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法。
背景技术
柚皮苷，全称为柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，又称柚甙、柑桔甙或异橙皮甙，是一种双氢黄酮类化合物，主要存在于芸香科植物，如柚(Pummelo)、葡萄柚(Grapefruit)和酸橙(Sourorange)果实的果皮及果肉中，在柚皮中含量丰富，占柚皮总黄酮含量的80％以上。普通柚果中柚皮苷含量明显低于葡萄柚，前者仅为后者的50％～70％。果皮中柚皮苷的含量大约占全果柚皮苷含量的70％，而果皮中的柚皮苷含量最高，果汁中的柚皮苷含量最低，果皮中的柚皮苷含量是果汁中柚皮苷含量的26～40倍。
现有研究表明，柚皮苷具有多种生物学活性，包括抗过敏反应、抗氧化、降脂、降胆固醇、抑制杂环胺类物质等的致突变性、抗癌、防治胃溃疡、抑菌(金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、埃氏大肠杆菌及某些真菌)、抗炎、对某些毒物的拮抗作用、解痉、镇痛、改善微循环和软骨组织细胞功能、促进成骨细胞增殖和分化、降低毛细血管通透性和骨关节病变率、促进一些药物在人体内的吸收和代谢等多种药理活性。因此，天然柚皮苷的研究与开发受到研究者们的高度关注，其在药物原料、保健食品以及生态学等领域的应用开发展现出广阔的发展前景。
柚皮苷的提取方法有诸多文献报道，如Zhao JY等[Zhao JY,LI L,Jiao FP,etal.Human plasma protein binding ofwater soluble flavonoids extracted fromcitrus peels[J].J.Cent.South Univ,2014,21(7):2645-2651]对已处理好的柚子皮粉用乙醇沉淀法去除蛋白及多糖，然后通过减压法浓缩，再尝试用超滤的方式除去蛋白质，然后检测其多酚含量，最后柚皮苷含量可达303.28μmol/L；樊荣[樊荣，柚皮精油的提取分析及活性研究[D].广州：华南理工大学,2012]对比超临界法、有机溶剂法以及热水法三种方法提取柚皮精油，结果表明综合评价最好的是水热法，其次是有机溶剂萃取法，超临界二氧化碳萃取评价值最低。
然而，现有技术中柚皮苷的提取纯化方法较为复杂，难以实现工业化提取，而且柚皮苷的提取率和纯度有待提高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法，本发明提供的方法操作简单，且柚皮苷的提取率和纯度高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法，包括以下步骤：
(1)将井冈蜜柚的柚皮进行粉碎，将所得柚皮粉与乙醇溶液混合，进行超声处理，得到柚皮苷粗提取液；
(2)采用大孔树脂对所述柚皮苷粗提取液进行吸附，采用乙醇溶液对吸附后的大孔树脂进行解吸，去除所得解吸液中的溶剂，得到柚皮苷粗提物。
优选的，所述步骤(1)中乙醇溶液的体积百分比为95～100％。
优选的，所述步骤(1)中柚皮粉的质量与乙醇溶液的体积比为1g:8～12mL。
优选的，所述步骤(1)中超声处理的时间为35～45min，功率为150～160W。
优选的，所述步骤(2)中大孔树脂的质量与柚皮苷粗提取液的体积比为20g：95～105mL。
优选的，所述步骤(2)中吸附的时间为55～65min。
优选的，所述步骤(2)中乙醇溶液的体积百分比为20～30％。
优选的，所述步骤(2)中解吸的时间为110～120min。
优选的，所述步骤(2)中解吸的温度为30～40℃。
优选的，所述大孔树脂的种类为LSA-40、D101、XDA-1或XDA。
本发明提供了一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法，采用超声波提取法进行提取，采用大孔树脂吸附分离法进行吸附，采用溶剂萃取法进行萃取解吸，本发明将超声波提取法、大孔树脂吸附分离法和溶剂萃取法结合，既有超声波提取法所具有的效率高、温度低、时间短、适用广、杂质少、易操作的特点，又具有溶剂萃取法的溶剂可重复利用降低成本、操作简便的特点；同时又结合了大孔树脂吸附分离纯化具有的针对性强、提取效率高、耗能低、环保等优点，三种方法的结合最终提高了柚皮苷的提取率(0.615％)和提取纯度(80.1％)，柚皮苷样品中总黄酮的百分含量为89.2％，同时也能放大提取，便于工业化的应用。
附图说明
图1为本发明中柚皮苷的标准曲线图。
具体实施方式
本发明提供了一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法，包括以下步骤：
(1)将井冈蜜柚的柚皮进行粉碎，将所得柚皮粉与乙醇溶液混合，进行超声处理，得到柚皮苷粗提取液；
(2)采用大孔树脂对所述柚皮苷粗提取液进行吸附，采用乙醇溶液对吸附后的大孔树脂进行解吸，去除所得解吸液中的溶剂，得到柚皮苷粗提物。
本发明将井冈蜜柚的柚皮进行粉碎，将所得柚皮粉与乙醇溶液混合，进行超声处理，得到柚皮苷粗提取液。在本发明中，所述乙醇溶液的体积百分比优选为95～100％，更优选为96～99％，当所述乙醇溶液的体积百分比为100％时，所述乙醇溶液即为无水乙醇。在本发明中，所述柚皮粉的质量与乙醇溶液的体积比优选为1g:8～12mL。在本发明中，所述超声处理的时间优选为35～45min，功率优选为150～160W。在将井冈蜜柚的柚皮进行粉碎前，本发明优选将井冈蜜柚洗净、削皮、将所得柚皮自然风干，然后置于50℃真空烘箱中干燥24h。在本发明中，所述柚皮粉的粒度优选≤0.45mm。本发明对所述粉碎的方式没有特殊的限制，选用本领域技术人员熟知的方式进行粉碎、能够得到所需粒度的柚皮粉即可。本发明优选使用粉碎机进行所述粉碎。在本发明的实施例中，具体是柚皮粉碎后过40目(孔径0.45mm)筛网，取筛下部分用自封袋装好放在4℃冰箱保存待用。
得到柚皮苷粗提取液后，本发明采用大孔树脂对所述柚皮苷粗提取液进行吸附，采用乙醇溶液对吸附后的大孔树脂进行解吸，去除所得解吸液中的溶剂，得到柚皮苷粗提物。在本发明中，所述大孔树脂的质量与柚皮苷粗提取液的体积比优选为20g：95～105mL；所述大孔树脂的种类优选为LSA-40、D101、XDA-1或XDA。在采用大孔树脂对所述柚皮苷粗提取液进行吸附前，本发明优选对所述大孔树脂进行预处理，所述预处理的步骤优选为先将大孔树脂用体积百分比为95％的乙醇水溶液浸泡过夜，将所得浸泡产物用去离子水清洗，然后将清洗产物用体积百分比为95％的乙醇水溶液浸泡120min，将所得浸泡产物用去离子水洗至无醇味。本发明通过预处理能够避免吸附时气泡对大孔树脂吸附效果的影响，而且经过预处理能够去除脂溶性杂质以及未聚合的物质，增强其与被吸附的分子(吸附质)之间的范德华引力，从而达到更好的分离纯化目的。
在本发明中，所述吸附的时间优选为55～65min；吸附的温度优选为25～35℃。在本发明中，所述吸附在振荡条件下进行，所述振荡的速率优选为100～150r/min。
在本发明中，所述解吸所采用的乙醇溶液的体积百分比优选为20～30％；所述解吸的时间优选为110～120min；所述解吸的温度优选为30～40℃。
完成所述解吸后，本发明优选将所得物料进行真空抽滤，以去除解吸后的大孔树脂，所得滤液即为解吸液。
本发明对于去除解吸液中的溶剂所采用的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的去除溶剂的技术方案即可。本发明优选对所述解吸液进行旋蒸，以去除溶剂，得到柚皮苷。
在本发明中，所述柚皮苷含量的定量测定方法参照文献(闻永举,申秀丽,易艳萍.柚皮中柚皮苷提取工艺研究[J].2008,4:257-258)，采用的色谱条件为：色谱柱:waterssunfireTM C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相：甲醇-冰醋酸-水＝(35：4：61)，流速：l.0mol·min-1；检测波长：283nm；温度:20℃；进样量20μL。
在本发明中，所述柚皮苷的标准曲线的建立方法优选为：
称取柚皮苷对照品20.0mg，置于100mL容量瓶中，用体积分数100％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成0.2mg/mL的储备液；
将上述储备液用甲醇分别稀释成0μg/mL，20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL的五个不同浓度的对照品溶液，用LC-20A岛津高效液相色谱仪检测，每个对照品溶液的进样量为20μL，以对照品溶液的进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标计算回归方程。
结果表明，柚皮苷在0.1μg～8μg范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为：y＝2159.9x-4486.3(R2＝0.9927)(图1)。
将上述得到的柚皮苷样品，用体积分数为60％甲醇水溶液定容，进行HPLC检测，并根据回归方程计算得到柚皮苷含量，按下式计算柚皮苷纯度：
柚皮苷纯度＝柚皮苷样品中柚皮苷的质量/柚皮苷样品的质量×100％。
因柚皮苷属于黄酮类化合物，为了进一步确定其中总黄酮类物质含量，本发明优选按照三氯化铝比色法[C.C.Chang,M.H.Yang,H.M.Wen,J.C.Chern,J.Food DrugAnal.10,178(2002)]测定柚皮苷样品中的总黄酮，具体是用1.5mL甲醇稀释0.5mL柚皮苷样品，加入0.1mL 10％氯化铝、0.1mL1mol/L乙酸钾和2.8mL去离子水，在室温下孵育30min，再在415nm下检测其紫外吸收值，利用上述柚皮苷的标准曲线，计算柚皮苷样品中总黄酮的百分含量。
下面结合实施例对本发明提供的从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将新鲜井冈蜜柚洗净，削皮，将所得柚皮自然风干，置于50℃真空烘箱中干燥24h，用粉碎机打碎并过40目(孔径0.45mm)筛网，取筛下部分，得到柚皮粉；
称取1g柚皮粉，将其与10mL无水乙醇混合，在功率为150W的条件下进行超声处理40min，得到柚皮苷粗提取液；
将大孔树脂LSA-40用体积百分比为95％的乙醇水溶液浸泡过夜，去离子水清洗后，再换用体积百分比为95％的乙醇水溶液浸泡120min，然后用去离子水洗至无醇味，得到预处理后的大孔树脂；
在30℃、120r/min条件下，采用20g预处理后的大孔树脂LSA-40对100mL柚皮苷粗提取液进行振荡吸附60min，得到吸附后的大孔树脂；在吸附后的大孔树脂中加入体积百分比为20％的乙醇水溶液50mL，在30℃、120r/min条件下进行振荡解吸120min，真空抽滤，使用旋转蒸发仪去除所得解吸液中的溶剂，得到柚皮苷粗提物。
通过计算，本实施例得到的提取率为0.615％，柚皮苷纯度为80.1％，柚皮苷样品中总黄酮的百分含量为89.2％。
实施例2
将新鲜井冈蜜柚洗净，削皮，将所得柚皮自然风干，置于50℃真空烘箱中干燥24h，用粉碎机打碎并过40目(孔径0.45mm)筛网，取筛下部分，得到柚皮粉；
称取1g柚皮粉，将其与10mL体积百分比为95％的乙醇混合，在功率为150W的条件下进行超声处理40min，得到柚皮苷粗提取液；
将大孔树脂LSA-40用体积百分比为95％的乙醇水溶液浸泡过夜，去离子水清洗后，再换用体积百分比为95％的乙醇水溶液浸泡120min，然后用去离子水洗至无醇味，得到预处理后的大孔树脂；
在35℃、120r/min条件下，采用20g预处理后的大孔树脂LSA-40对100mL柚皮苷粗提取液进行振荡吸附55min，得到吸附后的大孔树脂；在吸附后的大孔树脂中加入体积百分比为25％的乙醇水溶液50mL，在35℃、120r/min条件下进行振荡解吸120min，真空抽滤，使用旋转蒸发仪去除所得解吸液中的溶剂，得到柚皮苷粗提物。
通过计算，本实施例得到的提取率为0.612％，柚皮苷纯度为80.05％，柚皮苷样品中总黄酮的百分含量为89.15％。
实施例3
将新鲜井冈蜜柚洗净，削皮，将所得柚皮自然风干，置于50℃真空烘箱中干燥24h，用粉碎机打碎并过40目(孔径0.45mm)筛网，取筛下部分，得到柚皮粉；
称取1g柚皮粉，将其与10mL无水乙醇混合，在功率为150W的条件下进行超声处理40min，得到柚皮苷粗提取液；
将大孔树脂LSA-40用体积百分比为95％的乙醇水溶液浸泡过夜，去离子水清洗后，再换用体积百分比为95％的乙醇水溶液浸泡120min，然后用去离子水洗至无醇味，得到预处理后的大孔树脂；
在30℃、120r/min条件下，采用20g预处理后的大孔树脂LSA-40对100mL柚皮苷粗提取液进行振荡吸附65min，得到吸附后的大孔树脂；在吸附后的大孔树脂中加入体积百分比为30％的乙醇水溶液50mL，在30℃、120r/min条件下进行振荡解吸120min，真空抽滤，使用旋转蒸发仪去除所得解吸液中的溶剂，得到柚皮苷粗提物。
通过计算，本实施例得到的提取率为0.611％，柚皮苷纯度为80.08％，柚皮苷样品中总黄酮的百分含量为89.18％。
由以上实施例可知，本发明提供了一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法，采用超声波提取法进行提取，采用大孔树脂吸附分离法进行吸附，采用溶剂萃取法进行萃取解吸，三种方法的结合最终提高了柚皮苷的提取率(0.615％)和提取纯度(80.1％)，同时也能放大提取，便于工业化的应用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种从井冈蜜柚中提取柚皮苷的方法，包括以下步骤：
(1)将井冈蜜柚的柚皮进行粉碎，将所得柚皮粉与乙醇溶液混合，进行超声处理，得到柚皮苷粗提取液；
(2)采用大孔树脂对所述柚皮苷粗提取液进行吸附，采用乙醇溶液对吸附后的大孔树脂进行解吸，去除所得解吸液中的溶剂，得到柚皮苷粗提物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中乙醇溶液的体积百分比为95～100％。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中柚皮粉的质量与乙醇溶液的体积比为1g:8～12mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中超声处理的时间为35～45min，功率为150～160W。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中大孔树脂的质量与柚皮苷粗提取液的体积比为20g：95～105mL。
6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中吸附的时间为55～65min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中乙醇溶液的体积百分比为20～30％。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中解吸的时间为110～120min。
9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中解吸的温度为30～40℃。
10.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述大孔树脂的种类为LSA-40、D101、XDA-1或XDA。
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