CN1706860A - 一种用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，是一种用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，包括用水或乙醇水溶液浸泡或回流制备栀子果实粗提物，再采用大孔吸附树脂分别以少量水和低浓度乙醇水溶液洗脱纯化，减压浓缩后得高纯度总环烯醚萜苷。本发明制备方法操作简单，成本低廉，产品纯度高、得率高，不污染环境，适于工业化生产。

Description

一种用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法

                        技术领域

本发明涉及医药技术领域，是一种从栀子果实中提取总环烯醚萜苷的方法。

                        背景技术

栀子又名山栀子，是茜草科植物山栀Gardenia jasminoides Ellis.的果实。栀子属植物全国大部分地区有栽培。南方各地有野生，主要分布于江西、湖南、浙江、福建、四川等地。早在《神农本草经》中就有记载，此后在历代本草、医方中均有论述和补充，如《名医别录》、陶弘景的《本草经集注》等。栀子性寒，味苦，归心、肝、肺、胃、三焦经。常用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮疡、扭伤等。

栀子属植物化学成分的研究始于20世纪20年代，到目前为止已从该植物中分离鉴定出的化合物约有几十种之多，其中具有特征性的化合物约有40余种，包括黄酮类17种，环烯醚萜类11种，三萜类6种，有机酸酯类6种，此外还有d-甘露醇、甾醇类及色素等。其中栀子果实的有效成分为环烯醚萜苷类化合物，具有保肝利胆、促胰腺分泌、降压、镇静、降温、抗菌抗炎作用。其主要成分为栀子苷(geniposide)、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷(genipin-1-β-D-geniobioside)、羟异栀子苷(gardenoside)、栀子新苷(gardoside)、鸡矢藤次苷甲酯(scandosidemethyl ester)、去乙酰基车前草酸甲酯(deacetyl-asperulosidic acid methyl ester)、栀子苷酸(geniposidicacid)、栀子素(gardenin)等[王钢力，陈德昌等.栀子属植物化学成分研究进展.中国中药杂志，1996，21(2)：67；黄胜阳.中国栀子属植物的研究概况.江西中医学院学报，1991，3(1)：59；刘净，梁敬钰等.环烯醚萜类化合物近年研究进展.海峡药学，2004，16(1)：14]。

对于栀子总环烯醚萜苷的制备多采用醇渗漉、醇回流等水醇法提取再进一步纯化[CN 1517326A栀子环烯醚萜总提物及其制备方法和用途]。常用的纯化方法有正丁醇萃取、中性氧化铝柱层析、硅胶柱层析等，这类方法或需使用有毒有机溶剂，如正丁醇，会造成环境污染；或成本高且操作繁琐，如中性氧化铝填料，价格昂贵。采用大孔吸附树脂纯化栀子果实提取物[CN 1193766C“治疗肝炎的栀子总甙组合物及其制备方法”；CN1546507A“一种栀子提取物及其制备工艺和它的应用”]可降低成本且对环境不产生污染，但目前常用的洗脱方式通常为先以大量水充分洗脱再以高浓度乙醇洗脱，由于水洗量过大使强极性的有效环烯醚萜苷类成分大量流失而降低得率；又由于用高浓度乙醇洗脱容易将许多弱极性杂质洗脱下来而影响纯度，因此提取物中环烯醚萜苷有效成分单一，主要成分为栀子苷，约占总环烯醚萜苷90％以上；并且还需要借助上述有机溶剂萃取或柱层析等进一步纯化去除杂质，故仍存在污染环境或成本高等缺陷。

                        发明内容

本发明提供一种操作简便、成本低廉、得率和纯度高且不污染环境的从栀子果实中制备总环烯醚萜苷的方法。

本发明采用大孔吸附树脂纯化栀子果实粗提物，改进之处在于：1.先用少量水洗脱，既去除了杂质，又可减少强极性环烯醚萜苷类成分流失，从而提高得率；2.根据环烯醚萜苷类成分的极性特点用低浓度乙醇洗脱有效成分，可减少弱极性杂质被洗脱，从而提高纯度。

本发明方法包括如下步骤：

(1)制备栀子果实粗提物：按常规将干燥栀子果实粗粉以水或乙醇水溶液浸泡或回流提取1～3次，过滤，将滤液减压浓缩至稀浸膏，再真空干燥得栀子果实粗提物，得率为25～30％。

(2)纯化：将上述制得的栀子果实粗提物加适量水混悬后，过大孔吸附树脂柱。先以少量水洗脱至洗脱液不浑浊，通常水的洗脱体积不超过1倍树脂量，弃去，再用10％～30％低浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得总环烯醚萜苷粉末。将所得粉末按紫外分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)在238nm波长处进行检测，测得总环烯醚萜苷纯度不低于85％，得率为8～10％，其中栀子苷含量为55～65％。

本发明采用大孔吸附树脂纯化仅以水和低浓度乙醇洗脱，成本低廉，对环境不造成污染，在洗脱过程中严格控制水洗脱体积及乙醇洗脱浓度，不仅可以减少强极性环烯醚萜苷类成分的流失，而且可减少弱极性杂质的洗脱，故无需进一步纯化。本发明制备工艺简单，总环烯醚萜苷得率高纯度也高，适合工业化生产。

                        附图说明

图1为本发明总环烯醚萜苷及栀子苷标准品紫外吸收图谱

图2为本发明总环烯醚萜苷高效液相色谱(HPLC)的色谱图

                     具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明进行详细描述。

实施例1：

1.制备栀子果实粗提物：取干燥栀子果实药材粗粉500g，用10倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，60℃减压浓缩至稀浸膏，真空干燥得栀子果实粗提物，得率为26.6％。

2.纯化：取上述栀子果实粗提物，加水混悬后总体积为2000ml。加入到装有1500g经预处理过的1300大孔吸附树脂层析柱上，上样完毕后吸附2小时。用1500ml水洗脱(弃去)。再用6000ml 20％乙醇洗脱，乙醇洗脱流份减压浓缩后，真空干燥(60℃)，得总环烯醚萜苷粉末46.59g，得率为9.3％。将所得粉末按紫外分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)在238nm波长处检测，测得总环烯醚萜苷纯度为85.7％，紫外吸收图谱与栀子苷相似，见图1，其中曲线1为总环烯醚萜苷提取物紫外吸收曲线，曲线2为栀子苷标准品紫外吸收曲线。对该提取物进行高效液相分析表明，其主要成分为羟异栀子苷、栀子苷酸、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷、栀子苷等环烯醚萜苷类化合物，其中栀子苷含量为60.1％。HPLC分析条件：色谱柱Diamonsil C₁₈(4.6×200mm i.d.5μm)；流动相为甲醇∶1％醋酸水溶液＝30∶70；流速0.8ml/min；柱温25℃，检测波长238nm。在此条件下总环烯醚萜苷色谱图见图2，其中峰1为京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷，峰2为栀子苷。

实施例2：

1.制备栀子果实粗提物：取干燥栀子果实药材粗粉500g，用10倍量水回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，60℃减压浓缩至稀浸膏，真空干燥得栀子果实粗提物，得率为28.7％。

2.纯化：取上述栀子果实粗提物，加水混悬后总体积为2000ml。加入到装有1500g经预处理过的1300大孔吸附树脂层析柱上，上样完毕后吸附2小时。用1500ml水洗脱(弃去)。再用4000ml 30％乙醇洗脱，乙醇洗脱流份减压浓缩后，真空干燥(60℃)，得总环烯醚萜苷粉末49.30g，测得总环烯醚萜苷纯度为80.8％，得率为9.9％，其中栀子苷含量为64.8％。检测方法同实施例1。

实施例3：

1.制备栀子果实粗提物：取干燥栀子果实药材粗粉500g，用10倍量50％乙醇浸泡提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，60℃减压浓缩至稀浸膏，真空干燥得栀子果实粗提物，得率为20.3％。

2.纯化：取上述栀子果实粗提物，加水混悬后总体积为2000ml。加入到装有1500g经预处理过的AB-8大孔吸附树脂层析柱上，上样完毕后吸附2小时。用1500ml水洗脱(弃去)。再用8000ml 10％乙醇洗脱，乙醇洗脱流份减压浓缩后，真空干燥(60℃)，得总环烯醚萜苷粉末40.62g，测得总环烯醚萜苷纯度为89.2％，得率为8.1％，其中栀子苷含量为55.2％。检测方法同实施例1。

实施例4：

1.制备栀子果实粗提物：取干燥栀子果实药材粗粉500g，用10倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，60℃减压浓缩至稀浸膏，真空干燥得栀子果实粗提物，得率为29.8％。

2.纯化：取上述栀子果实粗提物，加水混悬后总体积为2000ml。加入到装有1500g经预处理过的D101大孔吸附树脂层析柱上，上样完毕后吸附2小时。用1500ml水洗脱(弃去)。再用5000ml 20％乙醇洗脱，乙醇洗脱流份减压浓缩后，真空干燥(60℃)，得总环烯醚萜苷粉末45.18g，测得总环烯醚萜苷纯度为85.1％，得率为9.0％，其中栀子苷含量为60.7％。检测方法同实施例1。

Claims (8)

1.一种用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，包括如下步骤：

(1)制备栀子果实粗提物：按常规将干燥栀子果实粗粉以水或乙醇水溶液浸泡或回流提取1～3次，过滤，将滤液减压浓缩至稀浸膏，再真空干燥得栀子果实粗提物；

(2)纯化：将上述制得的栀子果实粗提物加适量水混悬后，过大孔吸附树脂，先用少量水洗脱至洗脱液不浑浊，弃去，再用10％～30％低浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥，得总环烯醚萜苷。

2.按权利要求1所述的用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，其特征在于制备栀子果实粗提物时，用50％乙醇回流提取。

3.按权利要求1或2所述的用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，其特征在于纯化时，所说的少量水体积为不超过1倍树脂量。

4.按权利要求1或2所述的用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，其特征在于纯化时，所说的低浓度乙醇为20％乙醇。

5.按权利要求3所述的用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，其特征在于纯化时，所说的低浓度乙醇为20％乙醇。

6.按权利要求1或2或5所述的用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，其特征在于所说的大孔吸附树脂为1300或D101或AB-8型大孔吸附树脂。

7.按权利要求3所述的用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，其特征在于所说的大孔吸附树脂为1300或D101或AB-8型大孔吸附树脂。

8.按权利要求4所述的用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，其特征在于所说的大孔吸附树脂为1300或D101或AB-8型大孔吸附树脂。