CN100447148C - 栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种栀子提取物，它是以中药栀子为原料制备的含有环烯醚萜苷的提取物。所得栀子提取物中栀子苷重量百分含量可达到30%以上。该栀子提取物具有治疗心脑血管病的生物活性，用其制成的治疗心脑血管病的药物，有效成分明确，副作用小，服用量小，具有较高的安全性和有效性。本发明还公开了上述栀子提取物的制备方法及其应用。

Description

栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用

所属技术领域

本发明涉及一种中药提取物在制药领域中的应用，更具体地说，本发明涉及一种从中药栀子中制备的提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用。

背景技术

冠心病及脑血管如脑梗塞等是中老年人中常见病、多发病，在发达国家，在我国，其发病率和死亡率都呈逐年增加的趋势。我国心血管病的患病率、发病率、死亡率三十年来持续上升。近年统计心脑血管病死亡在人口总死亡中约40％，每年全国死于心脑血管病者约有200万人，死亡率约为200/10万，高于美、加、法、日、瑞典、瑞士等国。我国已是心血管病高发国，现在全球有近四分之一人口为心血管及相关疾病所威胁，而且终其一生，可能有三分之一人的人生为心血管疾病阴影所笼罩，最后有五分之一的人口死于心血管相关疾病。

目前治疗心血管疾病的药物品种较多，有中药，也有化学药，其中化学药如硝酸甘油等制剂虽然疗效确切，但有各种严重的副作用，亦容易产生耐药性；中药口服制剂如丹参片、丹七片等，由于没有经过提纯及精制，有效成分含量较低，并且不太明确，药效作用不显著；注射剂如复方丹参注射液，杂质多，有效成分含量太低，临床上存在较大的安全隐患，其应用受到了一定的限制。

中药栀子，为茜草科植物栀子Gardenia jasminoodes Ellis的干燥成熟果实。中国药典及许多中药书籍中均记载栀子具有泻火除烦，清热利尿，凉血解毒的作用，可用于热病心烦，黄胆尿赤，血淋涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡等，也可外用治疗扭挫伤痛等。

发明内容

本发明的目的就是提供一种具有治疗心脑血管病活性的，有效成分明确，副作用低的中药栀子提取物。

本发明的另一个目的是提供一种上述栀子提取物的制备方法。

本发明还有一个目的是提供上述栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用，其中：所述的栀子提取物是从中药栀子中提取的含环烯醚萜苷的提取物，其中含有重量百分含量30％以上的栀子苷。

上述栀子提取物中除含有栀子苷外，还含有羟异栀子苷和京尼平苷等。

所述的栀子提取物中栀子苷含量优选是在50％以上，更优选是在80％以上，以在90％以上为最好。

上述栀子提取物的制备方法包括如下步骤：

(1)制备栀子粗提物：取栀子或粉碎后的栀子，加水或1％-95％的乙醇进行提取，得提取液，将此提取液浓缩成稀浸膏，即得栀子粗提物；

(2)精制：将所述(1)步制得的栀子粗提物过中低极性的大孔吸附树脂，先用水或1％-30％的低浓度乙醇洗脱，将该水或低浓度乙醇的洗脱液弃去不用，除去溶于极性溶剂的杂质，再用40％-95％的较高浓度乙醇洗脱，收集此较高浓度乙醇洗脱液，将回收乙醇后的较高浓度乙醇洗脱液干燥，再用正丁醇或醋酸乙酯或通过硅胶柱或氧化铝柱层析进一步纯化处理，即得含栀子苷的栀子提取物，即得具有治疗心脑血管病活性的中药提取物。

其中，上述所述(1)步中用水提取制备的栀子粗提物，在进行所述(2)步过大孔吸附树脂前，可进一步浓缩成相对密度为1.05-1.35的稠浸膏，再在所述稠浸膏中加入乙醇至乙醇浓度为40-95％，静置，取上层清液浓缩成稀浸膏作为栀子粗提物。

其中所述(2)步精制中所述的中低极性的大孔吸附树脂，如D101、D201、D301、AB-8、X-5等。

其中所述(2)步中所述的干燥方法可以为低温烘干或减压干燥或喷雾干燥或冷冻干燥等。

上述栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用，所述的治疗心脑血管病的药物中含有有效剂量的上述栀子提取物。

所述的治疗心脑血管病的药物，它的剂型可以是注射液、输液、粉针、滴丸、片剂、缓释片、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂中的任何一种。

所述的心脑血管病包括：脑血栓、脑缺血、冠心病、心绞痛、心肌缺血、心衰、心律失常等中的任何一种或几种病症。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：经药效学试验证明，该栀子提取物具有较好的治疗心脑血管病的作用，副作用较小；其有效成分明确，即其中所含的环烯醚萜苷类成分，主要是栀子苷，且提取物中以栀子苷为代表的环烯醚萜苷含量越高，其他杂质成分则越少，可减少服用量，在一定程度上也可减小毒副作用，更有利于保证药物的安全性和有效性。

本发明对栀子的有效部位进行了追踪，以不同栀子苷含量的栀子提取物作为药物进行试验，结果证实了其中的以栀子苷为代表的环烯醚萜苷为栀子提取物中治疗心脑血管病的有效成分。本发明药物的有效部位筛选及疗效由以下药效学试验证明：

试验一：对老年大鼠在体血栓形成的影响

原理：用直流电连续刺激颈总动脉7分钟，引起血管内膜损伤，激活血小板和凝血系统，同时损伤血管内皮细胞，使PGI₂的合成和释放减少，致使颈动脉血管内逐渐形成混合血栓。当颈动脉血管内因血栓形成而堵塞血流时，则血管远端温度突降。用温度传感器监测血管表面温度变化，通过仪器自动报警，记录从刺激开始到温度突降所需时间，称堵塞时间OT，即血栓形成时间。时间越短，表示越易形成血栓；反之，时间越长，表示越不易形成血栓。

老年大鼠可自然形成血瘀体质，易形成体内血栓。而青年大鼠则不易形成血栓。故试验中以老年大鼠为阳性对照，以青年大鼠为阴性对照。

材料：雄性大鼠。青年组鼠龄3-4月，体重250g左右。老年组鼠龄24-27月，体生500g左右。器材：大鼠手术台、手术剪、眼科镊、止血钳、蚊嘴钳、大鼠灌胃针头、实验性体内血栓形成测定仪。药品及试剂：栀子提取物(分别含栀子苷为0、30％、50％、80％、90％)，均配制成50mg/ml；20mg/ml戊巴比妥钠溶液；生理盐水。

方法：实验组每天以50mg/ml药物给老年组大鼠灌胃2ml/只，阳性对照组老年大鼠及阴性对照组青年大鼠灌胃蒸馏水2ml/只，连续14日。停药当日禁食。次日腹腔注射20mg/ml戊巴比妥钠0.2ml/100g(体重)。切开颈部皮肤，分离右侧颈动脉，在颈动脉近端下放刺激电极，远端下放连接仪器之温度测头。开仪器开关，通过刺激电极给予1.5mV直流电刺激7分钟以损伤颈动脉内皮细胞，随着颈动脉管腔内血栓逐渐形成，血流逐渐被阻断，颈动脉远端的温度逐渐下降。当血流完全阻断时，温度突降，仪器报警，显示堵塞时间OT，OT时间越短，越易形成血栓；OT时间越长，越不易形成血栓。

对实验结果进行统计学检验。具体数值及结果见表1。

表1：对老年大鼠在体血栓形成的影响

由表1试验结果可知，老年大鼠OT明显较青年大鼠短，说明易形成血栓。不含栀子苷的栀子提取物几乎不能使OT延长。随着栀子提取物中栀子苷含量的提高，OT显著延长，栀子苷含量越高，OT延长越明显。

以上结果表明，含栀子苷的栀子提取物有明显的抗血栓形成作用，并且证实以栀子苷为主的环烯醚萜苷是栀子中的有效成分。

试验二：对大鼠“兔脑粉-高分子葡聚糖”造成脑梗塞的治疗作用

原理：因为心脑血管疾病均可导致血液流变学的改变，所以可设计栀子提取物对大鼠“兔脑粉-高分子葡聚糖”造成脑梗塞的治疗作用的药效学试验，以测定不同切变率下的全血粘度考察脑梗塞后血液流变性的改变，以红细胞蛋白任氏液粘度考察红细胞的变形能力，从而考察栀子提取物对心脑血管疾病的治疗作用。

材料：动物：大鼠，体重250-350g，雌雄不拘。器材：锥板粘度计(国产NZ-6型)、离心机、刻度离心试管、眼科剪、眼科镊及常用手术器械、0号手术丝线、血管夹等。药品及试剂：栀子提取物(分别含栀子苷为0、30％、50％、80％、90％)；以市售丹参注射液为阳性药对照；兔脑粉(兔脑粉凝血活酶粉)，上海科化生化试剂实验所生产。取分样筛120-150目之间的兔脑粉，颗粒为100-120μm。高分子葡聚糖：分子量500万。栓塞剂的配制：将25mg兔脑粉混于10％高分子葡聚糖溶液100ml中，置于37℃水浴中40分钟。然后，放于-18℃冰箱备用。快速医用ZT胶(西安化工研究所生产)。小牛血清白蛋白、任氏液。肝素钠：按20u/ml血剂量加入试管，40℃以下烘干备用。

试验方法：1、大鼠脑梗塞模型制备：大鼠乙醚麻醉，仰卧固定，皮肤剪毛消毒，颈部切开，分离左侧颈总动脑、颈内、颈外动脉。分别夹闭颈外动脉、颈总动脉近心端。在远心端处再夹一血管夹。将栓塞剂摇匀后，用0.25ml注射器按0.03ml/100g大鼠剂量刺进颈总动脉，打开远心端血管夹，将栓塞剂注入。然后，夹闭颈总动脉远心端，拔出针头，用医用胶粘合针孔。1分钟后依次放开颈总动脉远心端、近心端、颈外动脉的血管夹，恢复血流，清理创口，缝合皮肤。

栀子提取物对脑梗塞后不同时间的血液流变学影响：将大鼠分为2小时组、3天组、9天组，每组再分为给药组(栀子提取物+动物模型组)、生理盐水组(生理盐水+动物模型组)、假手术组(对照组)。给药组、生理盐水组均按上述方法施以手术操作，假手术组手术操作完全相同，但不注射栓塞剂，以生理盐水代替栓塞剂，注射于颈内动脉。

给药组于手术前1小时腹腔注射药物(栀子提取物、阳性药)1.0mg/Kg。生理盐水组注射同量生理盐水。假手术组不注射任何药物。3天组及9天组以后每天上午给药1次，连续3天或9天。

分别在术后2小时、第3天、第9天，将大鼠麻醉(25％乌拉坦0.3ml/100g体重，腹腔注射)，右颈总动脉放血于肝素试管中，在2小时内用锥板粘度计测定不同切变率下的全血粘度。再将全血以1500rpm离心，吸去上层血浆。然后用0.25％牛血清白蛋白-任氏液漂洗红细胞三次，每次1500rpm离心10分钟。最后，在刻度试管内配制成红细胞：蛋白任液＝6∶4的红细胞蛋白任氏液，在20秒-1切变率下测定其粘度。以红细胞蛋白任氏液粘度作为红细胞变形能力。所有实验均在25℃恒温下进行，对实验结果进行统计学检验。具体数值及结果见表2、表3。

由表2试验结果可知，梗塞后2小时后，全血粘度各组均无明显差异。梗塞3天时，生理盐水组与假手术组相比，全血粘度上升(P＜0.05)，说明动物模型造模成功，各给药组均可不同程度地降低全血粘度，随着栀子提取物中栀子苷含量的提高，效果越来越好(P＜0.01)。梗塞9天后时，生理盐水组与假手术组比，血液流变学仍为异常状态，全血粘度进一步加重。各给药组与生理盐水组比，全血粘度下降，统计学处理有显著性意义，并随着栀子提取物中栀子苷含量的提高，效果越来越好，并且效果优于丹参注射液。

由表3试验结果可知，梗塞后2小时后，生理盐水组与给药组红细胞变形能力下降，各给药组比生理盐水组数值稍低，但效果不甚明显。梗塞3天时，生理盐水组与假手术组相比，红细胞变形能力进一步下降，除不含栀子苷的栀子提取物外，其余各给药组中均可在一定程度上阻止红细胞变形能力下降。梗塞9天后时，生理盐水组与假手术组比，红细胞变形能力更进一步下降。除不含栀子苷的栀子提取物外，各给药组与生理盐水组比，均可改善并阻止红细胞变形能力的下降，统计学处理有显著性意义(P＜0.01)，且随着栀子提取物中栀子苷含量的提高，效果越来越好(P＜0.01)。并优于丹参注射液。

综上所述，手术2小时后，大鼠已有血液流变学的异常。梗塞3-9天，血液流变学异常进一步加重，表现为全血粘度升高，红细胞变形能力下降等。含有栀子苷的栀子提取物可起到改善脑梗塞后血液流变性作用，且随着栀子提取物中栀子苷含量的提高，效果越来越好。在第3天以后，则可明显地纠正异常的血液流变学变化。且效果明显好于丹参注射液。试验证实了以栀子苷为主的环烯醚萜苷是栀子中的有效成分。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。

实施例一

取栀子100kg，加水800kg，煮沸提取1小时，滤过，滤液备用，药渣再加水700kg，煮沸提取1小时，滤过，合并两次滤液，将合并后的滤液浓缩成相对密度为1.08的稀浸膏，将此稀浸膏过D101大孔吸附树脂，先用水洗脱至无色，将此水洗脱液弃去，再用85％乙醇洗脱至无色，收集此85％乙醇洗脱液，将回收乙醇后的85％乙醇洗脱液浓缩成相对密度为1.11的稠浸膏，将此稠浸膏喷雾干燥，得到含栀子苷50％的栀子提取物，即得栀子苷含量为50％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。

实施例二

取栀子100kg，加水900kg，煮沸提取2小时，滤过，滤液备用，药渣再加水900kg，煮沸提取1小时，滤过，合并两次滤液，浓缩至相对密度1.05，加入乙醇至乙醇含量为40％，静置18小时，取上层清液，将此上层清液回收乙醇成相对密度为1.02的稀浸膏，将此稀浸膏过D201大孔吸附树脂，先用15％乙醇洗脱至无色，将此15％乙醇洗脱液弃去，再用60％乙醇洗脱至无色，收集此60％乙醇洗脱液，将回收乙醇后的60％乙醇洗脱液浓缩成相对密度为1.10的稠浸膏，将此稠浸膏减压干燥，得到含栀子苷40％的栀子提取物，即得栀子苷含量为40％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。在此栀子苷含量为40％的栀子提取物中，加入5倍量的水，加热使溶解，再加入正丁醇萃取3次，每次正丁醇用量与水量相等，合并萃取液，将合并后的萃取液回收正丁醇后干燥，可得含栀子苷为90％的栀子提取物，即得栀子苷含量为90％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。

实施例三

取栀子100kg，加水1000kg，煮沸提取2小时，滤过，滤液备用，药渣再加水900kg，煮沸提取1小时，滤过，滤液备用，药渣再加水900kg，煮沸提取1小时，滤过，合并三次滤液，浓缩至相对密度1.05，加入乙醇至乙醇含量为95％，静置24小时，取上层清液，将此上层清液回收乙醇成相对密度为1.05的稀浸膏，将此稀浸膏过D201大孔吸附树脂，先用20％乙醇洗脱至无色，将此20％乙醇洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱至无色，收集此50％乙醇洗脱液，将回收乙醇后的50％乙醇洗脱液浓缩成相对密度为1.09的稠浸膏，将此稠浸膏减压干燥，得到含栀子苷60％的栀子提取物，即得栀子苷含量为60％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。

实施例四

取栀子100kg，加1％乙醇700kg，回流提取1.5小时，滤过，滤液备用，药渣再加1％乙醇700kg，回流提取1.5小时，滤过，合并两次滤液，将合并后的滤液浓缩在相对密度为1.05的稀浸膏，将此稀浸膏过AB-8大孔吸附树脂，先用10％乙醇洗脱至无色，将此10％乙醇洗脱液弃去，再用70％乙醇洗脱至无色，收集此70％乙醇洗脱液，将回收乙醇后的70％乙醇洗脱液浓缩成相对密度为1.10的稠浸膏，将此稠浸膏喷雾干燥，得到含栀子苷30％的栀子提取物，即得栀子苷含量为30％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。在此栀子苷含量为30％的栀子提取物中，加入0.5倍的乙醇，加热使溶解，再通过氧化铝柱(氧化铝用量为提取物用量的10倍)，用醋酸乙酯-丙酮-水(5∶5∶2)洗脱，收集含栀子苷的组分，回收溶剂，干燥，得到含栀子苷为95％的栀子提取物，即得栀子苷含量为95％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。

实施例五

取栀子100kg，加95％乙醇800kg，回流提取1.5小时，滤过，将滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释成相对密度为1.06的稀浸膏，将此稀浸膏过D301大孔吸附树脂，先用30％乙醇洗脱至无色，将此30％乙醇洗脱液弃去，再用95％乙醇洗脱至无色，收集此95％乙醇洗脱液，将回收乙醇后的95％乙醇洗脱液浓缩成相对密度为1.35的稠浸膏，将此稠浸膏烘干，得到含栀子苷80％的栀子提取物，即得栀子苷含量为80％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。

实施例六

取栀子100kg，加50％乙醇700kg，回流提取1.5小时，滤过，滤液备用，药渣再加50％乙醇700kg，回流提取1.5小时，滤过，合并两次滤液，将合并后的滤液回收乙醇成相对密度为1.08的稀浸膏，将此稀浸膏过X-5大孔吸附树脂，先用1％乙醇洗脱至无色，将此1％乙醇洗脱液弃去，再用40％乙醇洗脱至无色，收集此40％乙醇洗脱液，将回收乙醇后的40％乙醇洗脱液浓缩成相对密度为1.13的稠浸膏，将此稠浸膏喷雾干燥，得到含栀子苷35％的栀子提取物，即得栀子苷含量为35％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。在此栀子苷含量为35％的栀子提取物中，加入5倍量的水，加热使溶解，再加入醋酸乙酯萃取3次，每次醋酸乙酯用量与水量相等，合并萃取液，将合并后的萃取液回收醋酸乙酯后干燥，得到含栀子苷为70％的栀子提取物，即得栀子苷含量为70％的具有治疗心脑血管病作用的中药提取物。

实施例七

取所述的含有栀子苷的栀子提取物3kg，植物油7kg，混匀，用明胶作囊壳材料，压制成软胶囊，即制得含有30％栀子提取物的软胶囊剂型的药物组合物。

实施例九

取所述的含有栀子苷的栀子提取物300g，溶于10000ml注射用水中，采用现有粉针剂冻干制备工艺，即制得含有栀子提取物的粉针剂型的药物组合物。

实施例十

取所述的含有栀子苷的栀子提取物300g，淀粉700g，混合均匀，采用现有胶囊制备工艺，即制得含有栀子提取物的胶囊剂型的药物组合物。

实施例十一

取所述的含有栀子苷的栀子提取物300g，采用滴丸制备工艺，即制得含有栀子提取物的滴丸剂型的药物组合物。

实施例十二

取所述的含有栀子苷的栀子提取物300g，蔗糖800g，混合均匀，制粒，过筛，干燥，即制得含有栀子提取物的颗粒剂型的药物组合物；或将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即制得含有栀子提取物的片剂剂型的药物组合物。

实施例十三

取所述的含有栀子苷的栀子提取物300g，聚乙烯60g，混合均匀，制粒，压片，干燥，即制得含有栀子提取物的缓释片剂型的药物组合物。

实施例十四

取所述的含有栀子苷的栀子提取物50g，溶于10000ml注射用水中，采用注射剂制备工艺，即制得5mg/ml的注射液(含输液)。

实施例十五

取所述的含有栀子苷的栀子提取物300g，另取人参皂苷100g，蔗糖600g，混合均匀，制粒，过筛，干燥，压片，即制得含有栀子提取物和人参皂苷的片剂剂型的药物组合物。

Claims (6)

1、栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用，其特征在于：所述的栀子提取物是以中药栀子为原料制备的含环烯醚萜苷的提取物，其中含有重量百分含量30％以上的栀子苷。

2、根据权利要求1所述的栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用，其特征在于：所述的栀子提取物中含有重量百分含量50％以上的栀子苷。

3、根据权利要求1所述的栀子提取物，其特征在于：所述的栀子提取物中含有重量百分含量80％以上的栀子苷。

4、根据权利要求1或2或3所述的栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用，其特征在于：所述的治疗心脑血管病的药物中含有有效剂量的所述栀子提取物。

5、根据权利要求4所述的栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用，其特征在于：所述药物的剂型可以是注射液、输液、粉针、滴丸、片剂、缓释片、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂中的任何一种。

6、根据权利要求4所述的栀子提取物在制备治疗心脑血管病的药物中的应用，其特征在于：所述的心脑血管病包括：脑血栓、脑缺血、冠心病、心绞痛、心肌缺血、心衰、心律失常中的任何一种或几种病症。