CN101401850A - 一种山蒟总生物碱提取物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种山蒟总生物碱提取物及其用途。本发明属医药技术领域,具体涉及一种中药山蒟的总生物碱提取物及其用途。该提取物由中药山蒟中提取获得,并包括以下生物碱类成分:风藤酰胺、毛穗胡椒碱、假荜拨酰胺A、胡椒次碱、几内亚胡椒、胡椒碱、胡椒亭、卵形椒碱、N-p-香豆酰酪胺、N-反式-阿魏酰酪胺、马兜铃内酰胺AIIIa、马兜铃内酰胺II、及(2E,4E)-N-异丁基-7-(3,4-次甲二氧基苯基)-2,4-二烯庚酰胺、荜拨明宁碱及其衍生物,上述总生物碱类成分含量总和以重量计为5~100%。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域,具体涉及一种中药山蒟的总生物碱提取物及其用途。
背景技术
山蒟为胡椒科植物山蒟的茎叶或根,秋季采收,其性辛,性温。具有祛风除湿,活血消肿,行气止痛,化痰止咳之功效,主治风寒湿痹,胃痛,痛经,跌打损伤,风寒咳喘,疝气痛。现代药理研究表明山蒟具有抑制血小板活化因子(PAF)诱导的血小板聚集,及抑制PAF所致的炎症反应等作用。民间常用治跌打损伤、风湿痹痛等。山蒟中主要含有生物碱类,有机酸类,甾醇及其苷类等成分,迄今,未见涉及山蒟总生物碱提取物及其用途的专利。
发明内容
本发明的目的在于提供一种山蒟总生物碱提取物及其用途;一种山蒟总生物碱提取物与某些酸形成的盐;一种山蒟总生物碱提取物与某些金属离子形成的盐或络合物。
本发明提出的一种山蒟总生物碱提取物,是从中药山蒟中提取的含有多种生物碱类活性成分的组合,其中主要化合物结构如下:
(2E,4E)-N-异丁基-7-(3,4-次甲二氧基苯基)-2,4-二烯庚酰胺
N-p-香豆酰酪胺
本发明所述原料山蒟,来源于胡椒科胡椒属的任意一种植物。作为提取山蒟总生物碱的原材料,可以是市售山蒟药材,也可以是这些植物的茎、叶、花穗、果实、地下根茎及根等任一部位或全部植株,其中优选的药材部位为这些植物的藤茎。上述所述的山蒟包括未经任何炮制处理的原药材及饮片,还包括各种炮制品,如“炒山蒟”、“山蒟炭”等。
本发明所述的山蒟总生物碱提取物,是指从上述任一植物的任何部位提取得到的,包含多种山蒟生物碱类活性成分的组合物,其中优选的是从Piperhancei Maxim干燥藤茎中提取制备得到的,含有多种生物碱类活性成分的组合物。这些生物碱类成分主要包括风藤酰胺、毛穗胡椒碱、假荜拨酰胺A、胡椒次碱、几内亚胡椒、胡椒碱、胡椒亭、卵形椒碱、N-p-香豆酰酪胺、N-反式-阿魏酰酪胺、马兜铃内酰胺AIIIa、马兜铃内酰胺II、及(2E,4E)-N-异丁基-7-(3,4-次甲二氧基苯基)-2,4-二烯庚酰胺、荜拨明宁碱及其衍生物,上述总生物碱类成分含量总和以重量计为5~100%。上述山蒟为山蒟药材或胡椒科胡椒属任一种植物的全部植株或任何部位,以及包括经过炮制的各种炮制品。上述生物碱类成分,还包括与有机酸或无机酸形成的盐,以及与金属离子形成的金属盐或络合物。所述的有机酸包括盐酸、硫酸、硝酸、磷酸。所述的无机酸包括甲酸、醋酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸。所述的金属离子包括钠、钾、钙、铁、铝、锌、铜、铬、锶。
该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品,其剂型可以是任何一种药剂学上所说的剂型。
本发明所述的山蒟总生物碱提取物,可以与某些酸,如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸或甲酸、醋酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸等有机酸,形成盐类衍生物。这些衍生物具有与上述山蒟总生物碱提取物相同或相近的药理活性和用途。
本发明所述的山蒟总生物碱提取物,还可以与钠、钾、钙、铁、铝、锌、铜、铬、锶等金属离子形成的金属盐或络合物。这些金属盐或络合物具有与上述山蒟总生物碱提取物相同或相近的药理活性或用途。
本发明所述的山蒟总生物碱提取物所涵盖的各类生物碱类活性成分之中,最主要的是风藤酰胺、胡椒次碱、几内亚胡椒、胡椒碱、胡椒亭、荜拨明宁碱等成分。作为山蒟总生物碱提取物,风藤酰胺的含量占全部总生物碱含量的5~100%(w/w)。
所述山蒟总生物碱的制备工艺,它可以采用以下任意一种方法,或这些方法的任意组合进行制备:(1)溶剂提取法;(2)溶剂萃取法;(3)离子交换树脂法;(4)大孔吸附树脂法;(5)超临界流体萃取法;(6)柱色谱法;(7)液-液逆流分配色谱法。其中优选的方法为离子交换树脂法。
在使用这些方法进行制备时,一般包括以下几个步骤:
(1)提取:所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂,或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂,或由这些溶剂与酸、碱配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。
优选的提取工艺为:山蒟药材加30~90%乙醇,回流提取2~3次,每次提取1~2小时,溶剂用量为15~30倍量(L/kg)。
(2)过滤:包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法,使用或不使用以下任意一种澄清剂或其组合:醇沉剂,明胶,高岭土,各种树脂,聚乙二醇,聚乙三醇,壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄清剂等。
(3)浓缩:包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发以及煎煮浓缩等。
(4)干燥:包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
当采用溶剂萃取法进行制备时,一般先将提取物混悬于水中,然后用低剂型的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯)萃取出去脂溶性杂质,然后用合适极性的溶剂,如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等,或是这些溶剂的混合物,萃取或得其中的总生物碱成分,得到总生物碱提取物。
当使用离子交换树脂法时,所用的树脂可以是强酸性、弱酸性、大孔型、凝胶型等任何一种类型,这些树脂的代号由于生产厂家不同而不同,如732型、D001-CC、D001-SS、D061、D072等,其中优选的为强酸性阳离子树脂,如732型、D001-CC、D001-SS等,所用的洗脱剂为酸水和含氨的乙醇、甲醇等,其中优选的为0~100%的氨醇。
优选的山蒟生物碱提取物树脂纯化工艺为:选用732型、D001-CC、D001-SS、D061、D072等强酸性阳离子交换树脂作为纯化用树脂,山蒟乙醇提取物以总生物碱量计的上样液浓度为0.1~1mg/ml,吸附流速为3~15BV/h,树脂柱径高比为1∶5~1∶10,以总生物碱量计的上样量为5~10mg/ml,0~70%乙醇洗脱1~7倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3~10BV/h,用40~90%氨性乙醇(其中氨浓度为0.1%~5%)洗脱3~10倍树脂体积,洗脱流速为8~20BV/h。
当采用大孔吸附树脂法进行制备时,所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型,这些树脂的代号由于生产厂家不用而不同,如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等,其中优选的为弱极性或中等极性的树脂,如AB-8、HPD400、D101等,所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等。其中优选的为0~100%的乙醇。
当采用超临界CO2流体萃取法进行制备时,可以对山蒟原材料直接进行萃取,也可以对上述任一方法和步骤所获得的产物进行萃取。萃取时可以使用或不使用以下任一种类溶剂及溶剂混合物:水、醇类、酮类及酯类溶剂。
当采用柱层析进行制备时,其处理的对象可以是上述提取步骤所获得的产物,也可以是经上述溶剂萃取法、离子交换树脂法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物,所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(Sephadex系列或SephadexLH-20)、C-8、C-18、活性炭、纤维素等,所用的洗脱液因固定相的不同而不同,一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等组成的混合溶剂。
当采用液-液逆流分配色谱法进行制备时,其处理的对象可以是上述提取步骤的产物,也可以是经上述溶剂萃取法离子交换树脂法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。一般先将提取物混悬于水中,然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取出去脂溶性杂质,然后用合适极性的溶剂,如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等,或是这些溶剂的混合物,萃取获得其中的总生物碱成分,得总生物碱提取物。
该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品,所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。
本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种:
1、总生物碱
精密提取风藤酰胺对照品适量(约5mg),置100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密吸取风藤酰胺对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5ml,蒸干,加x溴甲酚绿缓冲溶液(pH5.6)4.0ml及氯仿6.0ml。剧烈震摇2min,于分液漏斗中静置分层2h,分取氯仿层,于413mg处测定吸光度。以风藤酰胺对照品浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
精密称取山蒟总生物碱提取物样品各3份,每份5mg,置25ml量瓶中,加甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀。分别吸取上述样品溶液0.5ml风藤酰胺对照品溶液0.5ml、1.0ml,蒸干,加溴甲酚绿缓冲液(pH5.6)4.0ml及氯仿6.0ml。剧烈震摇2min,于分液漏斗中静置分层2h,分取氯仿层,于413mg处测定吸光度。外标两点法计算含量。
2、风藤酰胺
色谱条件:色谱柱:Hypersil C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-水(43∶57);检测波长:280nm;柱温:30℃。
标准曲线绘制:分别精密吸取风藤酰胺对照品溶液(浓度为0.0515μg/uL)0、2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪,测定各色谱峰面积,以对照品进样量(μg)为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
含量测定:精密称取3批山蒟生物碱提取物样品各3份,每份约5mg,置25ml量瓶中,加甲醇超声溶解,并稀释至刻度,摇匀,作为风藤酰胺含量测定的供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,测定风藤酰胺峰面积,计算含量。
具体实施方式
实施例1:
取山蒟药材2kg,加90%乙醇3L,回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,提取物加0.5%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度为0.165mg/ml(以总生物碱量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过100mlD101-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为10BV/h,树脂柱径高比为1∶10,上样量为25.65mg/ml(以总生物碱量计),50%乙醇洗脱5倍树脂体积进行除杂,除杂流速为10BV/h,70%氨性乙醇(氨浓度为1%)洗脱7倍树脂体积,洗脱流速为10BV/h,收集70%氨性乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为山蒟总生物碱提取物。
测定山蒟总生物碱提取物中总生物碱含量为52%,风藤酰胺含量为20%。
实施例2:
取山蒟药材2kg,加70%乙醇4L,回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,提取物加1%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度为0.33mg/ml(以总生物碱量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过100mlD101-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为5BV/h,树脂柱径高比为1∶8,上样量为29.60mg/ml(以总生物碱量计),水洗脱10倍树脂体积进行除杂,除杂流速为10BV/h,90%氨性乙醇(氨浓度为0.5%)洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为10BV/h,收集90%氨性乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为山蒟总生物碱提取物。
测定山蒟总生物碱提取物中总生物碱含量为56%,风藤酰胺含量为22%。
实施例3:
取山蒟药材2kg,加50%乙醇5L,回流提取2次,每次提取2小时,减压回收溶剂,提取物加1.5%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度为0.495mg/ml(以总生物碱量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过100mlD101-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为3BV/h,树脂柱径高比为1∶6,上样量为22.45mg/ml(以总生物碱量计),10%乙醇洗脱6倍树脂体积进行除杂,除杂流速为5BV/h,50%氨性乙醇(氨浓度为0.3%)洗脱7倍树脂体积,洗脱流速为10BV/h,收集50%氨性乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为山蒟总生物碱提取物。
测定山蒟总生物碱提取物中总生物碱含量为51%,风藤酰胺含量为17%。
实施例4:
取山蒟药材2kg,加70%乙醇4.5L,回流提取2次,每次提取2小时,减压回收溶剂,提取物加水分散溶解,使酸水溶液浓度为0.165mg/ml(以总生物碱量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过2L D101大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为3BV/h,树脂柱径高比为1∶9,上样量为24.75mg/ml(以总生物碱量计),水洗脱5倍树脂体积进行除杂,除杂流速为5BV/h,90%乙乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为山蒟总生物碱提取物。
测定山蒟总生物碱提取物中总生物碱含量为55%,风藤酰胺含量为18%。
实施例5:
山蒟总生物碱提取物 100g
淀粉 100g
上述组分混合均匀,加滑石粉适量,压制成1000片。
实施例6:山蒟总生物碱复方制剂的制备
山蒟总生物碱提取物 50g
威灵仙提取物 50g
秦艽提取物 50g
桂枝提取物 50g
川芎提取物 50g
上述组分混合均匀,装入硬明胶胶囊中,共2000粒胶囊。
Claims (7)
1、一种山蒟总生物碱提取物,其特征在于:该提取物由中药山蒟中提取获得,并包括以下生物碱类成分:风藤酰胺、毛穗胡椒碱、假荜拨酰胺A、胡椒次碱、几内亚胡椒、胡椒碱、胡椒亭、卵形椒碱、N-p-香豆酰酪胺、N-反式-阿魏酰酪胺、马兜铃内酰胺AIIIa、马兜铃内酰胺II、及(2E,4E)-N-异丁基-7-(3,4-次甲二氧基苯基)-2,4-二烯庚酰胺、荜拨明宁碱及其衍生物,上述总生物碱类成分含量总和以重量计为5~100%。
2、根据权利要求1所述的山蒟总生物碱提取物,其特征在于:上述山蒟为山蒟药材或胡椒科胡椒属任一种植物的全部植株或任何部位,以及包括经过炮制的各种炮制品。
3、根据权利要求1所述的山蒟总生物碱提取物,其特征在于:上述生物碱类成分,还包括与有机酸或无机酸形成的盐,以及与金属离子形成的金属盐或络合物。
4、根据权利要求3所述的山蒟总生物碱提取物,其特征在于:所述的有机酸包括盐酸、硫酸、硝酸、磷酸。
5、根据权利要求3所述的山蒟总生物碱提取物,其特征在于:所述的无机酸包括甲酸、醋酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸。
6、根据权利要求3所述的山蒟总生物碱提取物,其特征在于:所述的金属离子包括钠、钾、钙、铁、铝、锌、铜、铬、锶。
7、根据权利要求1、3述的山蒟总生物碱提取物的用途,其特征在于:该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品,其剂型可以是任何一种药剂学上所说的剂型。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20090408 |