CN100998621B - 防风总色原酮提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从中药防风中提取得到的总色原酮提取物及其制备方法。该提取物主要包括升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇、亥茅酚以及以其为母核的糖苷类化合物和其它衍生物,可由溶剂萃取法、大孔吸附树脂法等多种方法制备获得。所制得的防风总色原酮提取物中各种色原酮类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),其中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、升麻素四种成分的含量占全部总色原酮含量的5~100%(w/w)。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域,具体涉及一种中药防风的总色原酮提取物及制备方法、质量控制方法及其在医药和保健食品领域的应用。
背景技术
防风为常用中药,来源于Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.及同属其它植物的干燥根。传统中医药理论认为防风具有解表散风、胜湿止痛、祛风止痉的功效,主治外感风寒、头痛目眩、周身尽痛、风寒湿痹、骨节疼痛、四肢挛急等证,现代药理研究表明防风具有解热、镇痛、抗炎、抗肿瘤、抗血小板聚集等多种功效,临床广泛应用于治疗脑振荡之头痛、小儿呼吸道感染、过敏性鼻炎、面神经炎、牙痛等症。防风中主要含有色原酮类、香豆素类、多糖类等成分,药理研究表明色原酮类成分为其主要活性成分。但有关防风化学成分的药理活性、应用及制备方法,仅见有一项公开的发明专利95104920.8,涉及防风中多糖类成分的制备方法。迄今,未见涉及防风总色原酮提取物及其制备方法和用途的专利。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防风总色原酮提取物及其制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种防风总色原酮提取物与某些碱或金属盐形成的金属盐类衍生物。
本发明的再一个目的在于提供一种防风总色原酮提取物与某些金属离子形成的金属络合物。
本发明的再一个目的在于提供防风总色原酮提取物及其某些降解产物、某些金属盐类衍生物和某些金属络合物的用途。
本发明提出的防风总色原酮提取物,是从中药防风中提取的含有多种色原酮类活性成分的组合,其中主要化合物结构如下:
本发明所述原料防风,来源于伞形科防风属的任意一种植物。作为提取防风总色原酮的原材料,可以是市售防风饮片,也可以是这些植物的茎、叶、花穗、果实、地下根茎及根等任一部位或全部植株,其中优选的药材部位为这些植物未抽花茎的干燥根。上述所述的防风包括未经任何炮制处理的原药材及饮片,还包括各种炮制品,如“炒防风”、“麸炒防风”、“防风炭”等。
本发明所述的防风总色原酮提取物,是指从上述任一植物的任何部位提取得到的,包含多种色原酮类活性成分的组合物,其中优选的是从Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.未抽花茎的干燥根中提取制备得到的,含有多种色原酮类活性成分的组合物。这些色原酮类成分主要包括升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇、亥茅酚以及以其为母核的糖苷类化合物和其它衍生物。
作为防风总色原酮提取物,其中各种色原酮类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),其中优选的为50~100%(w/w)。
本发明所述的防风总色原酮提取物,可以与某些碱如氢氧化钠、氢氧化钾等以及钠盐、钾盐、钙盐、锌盐等金属盐如碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙、醋酸钠、醋酸锌等,形成金属盐类衍生物。这些衍生物具有与上述防风总色原酮提取物相同或相近的药理活性和用途。
本发明所述的防风总色原酮提取物,还可以与钠、钾、钙、铁、铝、锌、铜、钡、铬、锶等金属离子形成金属络合物。这些金属络合物不仅具有与上述防风总色原酮提取物相同或相近的药理活性或用途,而且具有某些新用途,如铁络合物可以作为补铁剂,锌络合物可以作为补锌剂,铬络合物可以用于防治糖尿病等。
在本发明所述的防风总色原酮提取物所涵盖的各种色原酮类活性成分之中,最主要的是升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、升麻素、亥茅酚、5-O-甲基维斯阿米醇、3’-O-乙酰亥茅酚、3’-O-当归酰亥茅酚等成分。作为防风总色原酮提取物,升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、升麻素四种成分的含量占全部总色原酮含量的5~100%(w/w)。
本发明还提出了所述防风总色原酮提取物的制备工艺,它可以采用以下任意一种方法,或这些方法的任意组合进行制备:(1)溶剂萃取法;(2)大孔吸附树脂法;(3)铅盐沉淀法;(4)超临界CO2流体萃取法;(5)柱层析法;(6)液-液逆流分配色谱法。其中优选的方法为大孔吸附树脂法。
在使用这些方法进行制备时,一般包括以下几个步骤:
(1)提取:所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及脂类溶剂,或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂,或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。
优选的提取工艺为:防风药材加30~90%乙醇,回流提取2~3次,每次提取1~2小时,溶剂用量为5~15倍量(L/kg)。
(2)过滤:包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法,使用或不使用以下任意一种澄清剂或其组合:醇沉剂,明胶,高岭土,各种树脂,聚乙二醇,聚乙三醇,壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄清剂等。
(3)浓缩:包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等。
(4)干燥:包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
当采用溶剂萃取法进行制备时,一般先将提取物混悬于水中,然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质,然后用合适极性的溶剂,如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等,或是这些溶剂的混合物,萃取获得其中的总色原酮成分,得到总色原酮提取物。
当采用大孔吸附树脂法进行制备时,所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型,这些树脂的代号由于生产厂家不同而不同,如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等,其中优选的为弱极性或中等极性的树脂,如AB-8、HPD400、D 101等。所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等,其中优选的为0~100%的乙醇。
优选的防风色原酮提取物树脂纯化工艺为:选用AB-8、HPD400等中等极性或弱极性大孔吸附树脂作为纯化用树脂,防风乙醇提取物上样液浓度2~4mg/mL(以总色原酮量计),吸附流速3~9BV/h,树脂柱径高比1∶5~1∶10,上样量为5~10mg/mL(以总色原酮量计),0~20%乙醇洗脱1~4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3~8BV/h,用40~90%乙醇洗脱3~6倍树脂体积,洗脱流速为5~9BV/h。
当采用铅盐沉淀法进行制备时,所用的铅盐试剂为醋酸铅或碱式醋酸铅,所用的脱铅剂为H2S、磷酸盐及硫酸盐等。
当采用超临界CO2流体萃取法进行制备时,可以对防风原材料直接进行萃取,也可以对上述任一方法和步骤所获得的产物进行萃取。萃取时可以使用或不使用以下任一种类溶剂及溶剂混合物:水、醇类、酮类及酯类溶剂。
当采用柱层析法进行制备时,其处理的对象可以是上述提取步骤所获得的产物,也可以是经上述溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、铅盐沉淀法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex LH-20系列)、C-8、C-18、活性炭、纤维素等,所用的洗脱液因固定相的不同而不同,一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等组成的混合溶剂。
当采用液-液逆流萃取法进行制备时,其处理的对象可以是上述提取步骤的产物,也可以是经上述溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、铅盐沉淀法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。一般先将提取物混悬于水中,然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质,然后用合适极性的溶剂,如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等,或是这些溶剂的混合物,萃取获得其中的总色原酮成分,得总色原酮提取物。
该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品,所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。
本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种:
1.总色原酮
精密称取亥茅酚对照品适量(约4mg),置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密吸取亥茅酚对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5mL,蒸干,加水1.0mL及pH10.6碳酸钠-碳酸氢钠溶液2.0mL,放置30min,加磷钨酸钼-硫酸锂显色剂0.7mL,放置5min,加入5%碳酸钠溶液2.0mL,放置10min后于70℃水浴中加热15min,取出,用冷水冷却10min,于760nm处测定吸光度。以亥茅酚对照品取样量为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
精密称取干燥防风总色原酮提取物样品各3份,每份3mg,置25mL量瓶中,加70%乙醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取上述样品溶液0.5mL,亥茅酚对照品溶液0.6mL、1.2mL,蒸干,分别加水1.0mL和pH10.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液2.0mL,放置30min,加磷钨酸钼-硫酸锂显色剂0.7mL,放置5min,加入5%碳酸钠溶液2.0mL,放置10min后于70℃水浴中加热15min,取出,用冷水冷却10min,于760nm处测定吸光度。外标两点法计算含量。防风总色原酮提取物中总色原酮含量以亥茅酚(C15H16O5)计,不得少于50%。
2.升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷及亥茅酚苷
色谱条件:色谱柱:Agilent Zorbax C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水梯度洗脱,33%甲醇(0~10min),33%甲醇~50%甲醇(11~40min);流速:1.0mL/min;检测波长:254nm;柱温:室温。
标准曲线的绘制:分别精密吸取升麻素苷对照品溶液(浓度为0.0996μg/μL)、升麻素对照品溶液(浓度为0.074μg/μL)、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液(浓度为0.040μg/μL)、亥茅酚苷对照品溶液(浓度为0.0848μg/μL)0、2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪,测定各色谱峰峰面积,以对照品进样量(μg)为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
含量测定:精密称取3批防风色原酮提取物样品各3份,每份约13mg,置10mL量瓶中,加70%乙醇超声溶解,并稀释至刻度,摇匀,作为升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷含量测定的供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,测定各色谱峰峰面积,计算含量。防风色原酮提取物中上述四种成分的总和不低于10%。
具体实施方式
实施例1:防风总色原酮制备工艺
取防风饮片1kg,70%乙醇10L回流提取3次,每次提取1小时,减压回收溶剂,得提取物,加水分散溶解,使水溶液浓度为3.84mg/mL(以总色原酮量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过5L AB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8,上样量为7.68mg/mL(以总色原酮量计),10%乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,70%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集70%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为防风总色原酮提取物。经测定总色原酮含量为62%,其中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、升麻素四种成分的含量占全部总色原酮含量的22%。
实施例2:防风总色原酮制备工艺
防风饮片1kg,50%乙醇15L,回流提取3次,每次提取1.5小时,回收溶剂,提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为3.00mg/mL(以总色原酮量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过6L AB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶7,上样量为7.00mg/mL(以总色原酮量计),10%乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,50%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集50%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为防风总色原酮提取物。经测定总色原酮含量为65%。其中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、升麻素四种成分的含量占全部总色原酮含量的25%。
实施例3:防风总色原酮制备工艺
防风饮片1kg,70%乙醇12L回流提取2次,每次提取2小时,回收溶剂,提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为4.00mg/mL(以总色原酮量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过7L AB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶9,上样量为8.00mg/mL(以总色原酮量计),水洗脱4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为防风总色原酮提取物。经测定总色原酮含量为65%,其中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、升麻素四种成分的含量占全部总色原酮含量的28%。
实施例4:防风总色原酮制备工艺
防风饮片1kg,70%乙醇12L回流提取2次,每次提取2小时,回收溶剂,减压干燥,提取物加甲醇反复提取至无色,合并甲醇提取液,减压回收溶剂,得甲醇提取干浸膏,加水分散溶解,使上样液浓度为3.84mg/mL(以总色原酮量计),通过7L AB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶9,上样量为7.68mg/mL(以总色原酮量计),水洗脱4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为防风总色原酮提取物。经测定总色原酮含量为70%。其中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、升麻素四种成分的含量占全部总色原酮含量的25%。
实施例5:防风总色原酮片的制备
防风总色原酮提取物 100g
淀粉 100g
上述组分混合均匀,加滑石粉适量,压制成1000片。
实施例6:防风总色原酮复方制剂的制备
防风总色原酮提取物 50g
陈皮总黄酮提取物 50g
白芍醇提取物 100g
白术细粉(100目) 300g
上述组分混合均匀,装入硬明胶胶囊中,共2000粒胶囊。
Claims (4)
1.一种防风总色原酮提取物的制备方法,其特征在于:防风饮片1kg,70%乙醇12L回流提取2次,每次提取2小时,回收溶剂,提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为4.00mg/mL,以总色原酮量计,以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过7LAB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶9,上样量为8.00mg/mL,以总色原酮量计,水洗脱4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为防风总色原酮提取物。
2.一种防风总色原酮提取物的制备方法,其特征在于:取防风饮片1kg,70%乙醇10L回流提取3次,每次提取1小时,减压回收溶剂,得提取物,加水分散溶解,使水溶液浓度为3.84mg/mL,以总色原酮量计,以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过5LAB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶8,上样量为7.68mg/mL,以总色原酮量计,10%乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,70%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集70%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为防风总色原酮提取物。
3.一种防风总色原酮提取物的制备方法,其特征在于:防风饮片1kg,50%乙醇15L,回流提取3次,每次提取1.5小时,回收溶剂,提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为3.00mg/mL,以总色原酮量计,以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过6LAB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶7,上样量为7.00mg/mL,以总色原酮量计,10%乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,50%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集50%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为防风总色原酮提取物。
4.一种防风总色原酮提取物的制备方法,其特征在于:防风饮片1kg,70%乙醇12L回流提取2次,每次提取2小时,回收溶剂,减压干燥,提取物加甲醇反复提取至无色,合并甲醇提取液,减压回收溶剂,得甲醇提取干浸膏,加水分散溶解,使上样液浓度为3.84mg/mL,以总色原酮量计,通过7LAB-8大孔吸附树脂,吸附流速1.0mL/min,树脂柱径高比为1∶9,上样量为7.68mg/mL,以总色原酮量计,水洗脱4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为1.0mL/min,90%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为防风总色原酮提取物。
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