CN107955013B - 一种苯并吡喃酮类化合物亥茅酚的制备方法和检测其中光学异构体的方法 - Google Patents

一种苯并吡喃酮类化合物亥茅酚的制备方法和检测其中光学异构体的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种苯并吡喃酮类化合物亥茅酚的制备方法和检测其中光学异构体的方法，包括：步骤S1，将防风粉碎，喷洒pH值为5.5‑6.5的酸水过夜，90‑110℃蒸制；步骤S2，蒸制品用醇水提取，收集提取液，过滤，收集滤液；步骤S3，滤液上AB‑8大孔树脂柱，先用45％乙醇洗脱8个柱体积，再用55％乙醇洗脱，收集第4、5个柱体积，浓缩得粗品；步骤S4，粗品用pH为7.6‑7.8的碱水搅拌混悬，过滤，滤液调节pH至6.4‑6.6后过滤得二滤液，二滤液低温过夜；步骤S5，过夜溶液过滤，收集滤饼，甲醇‑丙酮重结晶。本发明以防风为原料，仅用一次大孔树脂结合两次精制，即得纯度95％以上的亥茅酚，易于产业化。

Description

一种苯并吡喃酮类化合物亥茅酚的制备方法和检测其中光学 异构体的方法
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一种苯并吡喃酮类化合物亥茅酚的制备方法和检测其中光学异构体的方法。
背景技术
亥茅酚是一种苯并吡喃酮类化合物，目前常作为合成其它活性物质的原料，具有很高的经济价值(参考文献：中国专利公开号CN104072510A)。
申请人研究发现，如下结构的亥茅酚及其衍生物具有为马兜铃酸及含马兜铃酸的中药减毒的作用，可以降低马兜铃酸的肾毒性。其中，亥茅酚-3’-乙酸酯、3’-O-当归酰基亥茅酚、防风色原酮、防风色酮醇都可以以亥茅酚作为原料经过简单的步骤即可合成制备。
因此，亥茅酚的制备工艺具有很高的产业价值。公开号为CN104072510A的中国专利提供了一种从胀果芹中提取亥茅酚的方法，但是该方法反复使用多种柱层析，无法工业化生产。防风是为伞形科植物防风的干燥根，其中含有如下化学结构的亥茅酚苷，可以以防风为原料先炮制使亥茅酚苷水解成亥茅酚，再提取分离纯化得到亥茅酚。
另外，亥茅酚还存在如下化学结构的光学异构体R-亥茅酚(CAS号204779-06-6)。
申请人研究发现，R-亥茅酚对马兜铃酸肾毒性的拮抗作用不明显。因此，在制备亥茅酚时，还需控制R-亥茅酚杂质。
发明内容
本发明的目的在于扩充现有技术，提供一种苯并吡喃酮类化合物亥茅酚的制备方法和检测其中光学异构体的方法。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种亥茅酚的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，将防风粉碎成粗粉，喷洒pH值为5.5-6.5的酸水过夜，90-110℃高温蒸制；
步骤S2，将蒸制品用醇水溶液提取，收集提取液，过滤，收集滤液；
步骤S3，滤液上大孔树脂柱富集，大孔树脂型号为AB-8，先用45％乙醇水溶液洗脱8个柱体积，再用55％乙醇水溶液洗脱，收集第4和第5个柱体积洗脱液，浓缩得亥茅酚粗品；
步骤S4，第一次精制：将粗品用pH为7.6-7.8的碱水搅拌混悬，过滤，滤液调节pH至6.4-6.6后立即过滤得二滤液，将该二滤液置于4℃低温过夜；
步骤S5，第二次精制：将低温过夜的溶液过滤，收集滤饼，甲醇-丙酮溶液重结晶即得。
优选地，步骤S1中所述酸水优选盐酸水溶液；1kg粗粉均匀喷洒10-20mLpH值为5.5-6.5的盐酸水溶液。
优选地，步骤S1中高温蒸制2-4h。
优选地，步骤S2提取溶剂优选75％乙醇溶液。
优选地，步骤S4所述碱水为氢氧化钠水溶液。
优选地，重结晶溶剂为体积比3:2的甲醇-丙酮溶液，先用甲醇-丙酮溶液将滤饼超声溶解，再于通风橱中静置析晶，收集析出物。
一种检测亥茅酚中光学异构体R-亥茅酚的方法，包括如下参数：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱；
流动相A相：15％乙腈水溶液中添加体积百分含量为5‰的四氢呋喃；
流动相B相：55％乙腈水溶液中添加体积百分含量为5‰的四氢呋喃；
洗脱程序：0-5min，0％B相；5-20min，0％→60％B相；20-23min，60％→0％B相；23-25min，0％B相；流速：0.8-1.2mL/min；
柱温：30±5℃；
检测波长：254±2nm。
优选地，色谱柱优选Agilent ZORBAX Extend-C18，规格为长度250mm、内径4.6mm、粒径5μm。
优选地，流速优选1.0mL/min。
优选地，检测波长优选254nm。
本发明的优点：
1、本发明提供的制备方法以防风为原料，仅使用一次大孔树脂柱层析，结合两次精制，即可制备得到纯度95％以上的亥茅酚；该方法不需要使用硅胶柱层析或反相硅胶柱层析这种无法工业化应用的分离手段；因此，本发明方法可操作性强，易于产业化；
2、本发明制备的亥茅酚中含有少量的光学异构体R-亥茅酚(产生途径可能如下所示)，由于R-亥茅酚不具备亥茅酚对马兜铃酸的减毒作用，需要加以控制；本发明提供的HPLC方法基于常规的十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱即可有效分离亥茅酚和R-亥茅酚，不必依赖成本高昂、重复性低的手性填料色谱柱，可谓经济实用。
附图说明
图1为流动相中是否添加四氢呋喃对亥茅酚和R-亥茅酚分离效果的影响(A为添加四氢呋喃，B为不添加四氢呋喃，供试品溶液为实施例4析晶的R-亥茅酚含量测定溶液)。
具体实施方式
下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
实施例1：亥茅酚的制备
一种亥茅酚的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，将防风粉碎成粗粉，喷洒pH值为6.0的酸水过夜(不少于8h，下同)，105℃高温蒸制3h；酸水为盐酸水溶液；1kg粗粉均匀喷洒15mLpH值为6.0的盐酸水溶液；
步骤S2，将蒸制品用75％乙醇溶液提取，收集提取液，过滤，收集滤液；
步骤S3，滤液上大孔树脂柱富集，大孔树脂型号为AB-8，先用45％乙醇水溶液洗脱8个柱体积，再用55％乙醇水溶液洗脱，收集第4和第5个柱体积洗脱液，浓缩得亥茅酚粗品；
步骤S4，第一次精制：将粗品用pH为7.7的氢氧化钠水溶液搅拌混悬，过滤，滤液调节pH至6.5后立即过滤得二滤液，将该二滤液置于4℃低温过夜(不少于8h，下同)；
步骤S5，第二次精制：将低温过夜的溶液过滤，收集滤饼，用体积比3:2的甲醇-丙酮溶液重结晶，先用甲醇-丙酮溶液将滤饼超声溶解，再于通风橱静置析晶，析出物洗涤干燥即得。
实施例2：亥茅酚的制备
一种亥茅酚的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，将防风粉碎成粗粉，喷洒pH值为5.5的酸水过夜，90℃高温蒸制4h；酸水为盐酸水溶液；1kg粗粉均匀喷洒10-20mLpH值为5.5的盐酸水溶液；
步骤S2，将蒸制品用75％乙醇溶液提取，收集提取液，过滤，收集滤液；
步骤S3，滤液上大孔树脂柱富集，大孔树脂型号为AB-8，先用45％乙醇水溶液洗脱8个柱体积，再用55％乙醇水溶液洗脱，收集第4和第5个柱体积洗脱液，浓缩得亥茅酚粗品；
步骤S4，第一次精制：将粗品用pH为7.6的氢氧化钠水溶液搅拌混悬，过滤，滤液调节pH至6.4后立即过滤得二滤液，将该二滤液置于4℃低温过夜；
步骤S5，第二次精制：将低温过夜的溶液过滤，收集滤饼，用体积比3:2的甲醇-丙酮溶液重结晶，先用甲醇-丙酮溶液将滤饼超声溶解，再于通风橱静置析晶，析出物洗涤干燥即得。
实施例3：亥茅酚的制备
一种亥茅酚的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，将防风粉碎成粗粉，喷洒pH值为6.5的酸水过夜，110℃高温蒸制2h；酸水为盐酸水溶液；1kg粗粉均匀喷洒10-20mLpH值为6.5的盐酸水溶液；
步骤S2，将蒸制品用75％乙醇溶液提取，收集提取液，过滤，收集滤液；
步骤S3，滤液上大孔树脂柱富集，大孔树脂型号为AB-8，先用45％乙醇水溶液洗脱8个柱体积，再用55％乙醇水溶液洗脱，收集第4和第5个柱体积洗脱液，浓缩得亥茅酚粗品；
步骤S4，第一次精制：将粗品用pH为7.8的氢氧化钠水溶液搅拌混悬，过滤，滤液调节pH至6.6后立即过滤得二滤液，将该二滤液置于4℃低温过夜；
步骤S5，第二次精制：将低温过夜的溶液过滤，收集滤饼，用体积比3:2的甲醇-丙酮溶液重结晶，先用甲醇-丙酮溶液将滤饼超声溶解，再于通风橱静置析晶，析出物洗涤干燥即得。
实施例4：温度过高导致R-亥茅酚含量升高(与实施例1对比)
一种亥茅酚的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，将防风粉碎成粗粉，喷洒pH值为6.0的酸水过夜，120℃高温蒸制1h；酸水为盐酸水溶液；1kg粗粉均匀喷洒15mLpH值为6.0的盐酸水溶液；
步骤S2，将蒸制品用75％乙醇溶液提取，收集提取液，过滤，收集滤液；
步骤S3，滤液上大孔树脂柱富集，大孔树脂型号为AB-8，先用45％乙醇水溶液洗脱8个柱体积，再用55％乙醇水溶液洗脱，收集第4和第5个柱体积洗脱液，浓缩得亥茅酚粗品；
步骤S4，第一次精制：将粗品用pH为7.7的氢氧化钠水溶液搅拌混悬，过滤，滤液调节pH至6.5后立即过滤得二滤液，将该二滤液置于4℃低温过夜；
步骤S5，第二次精制：将低温过夜的溶液过滤，收集滤饼，用体积比3:2的甲醇-丙酮溶液重结晶，先用甲醇-丙酮溶液将滤饼超声溶解，再于通风橱静置析晶，析出物洗涤干燥即得。
实施例5：HPLC法测定实施例1-4析晶中亥茅酚和R-亥茅酚的含量
色谱仪配制：LC-20ADXR高压泵；SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器；CTO-20AC柱温箱；CBM-20A系统控制器；SIL-20ACXR自动进样器；
色谱柱：Agilent ZORBAX Extend-C18(长度250mm、内径4.6mm、粒径5μm)；
流动相A相：15％乙腈水溶液中添加体积百分含量为5‰的四氢呋喃；
流动相B相：55％乙腈水溶液中添加体积百分含量为5‰的四氢呋喃；
洗脱程序：0-5min，0％B相；5-20min，0％→60％B相；20-23min，60％→0％B相；23-25min，0％B相；流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
进样量：5μL。
亥茅酚含量测定溶液：分别取实施例1-4制备的析晶用15％乙腈水溶液溶解，配制成浓度为0.1mg/L的溶液，精密量取5μL注入液相色谱仪，外标法计算亥茅酚含量。
R-亥茅酚含量测定溶液：分别取实施例1-4制备的析晶用15％乙腈水溶液溶解，配制成浓度为1mg/L的溶液，精密量取5μL注入液相色谱仪，外标法计算R-亥茅酚含量。
实施例1-4析晶中亥茅酚、R-亥茅酚含量如表1所示。
表1实施例1-4析晶中亥茅酚、R-亥茅酚含量(％)
亥茅酚和R-亥茅酚为一对手性异构体，对于这种手性异构体，本领域通常采用手性填料的色谱柱进行分离，但是，手性色谱柱成本高、使用寿命短、重复性低。上述HPLC方法基于常规的十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱即可有效分离亥茅酚和R-亥茅酚，这与流动相中四氢呋喃具有重大关系。若不添加四氢呋喃，在本上述洗脱程序下，亥茅酚和R-亥茅酚共洗脱，难以分离，如图1所示(A为添加四氢呋喃，B为不添加四氢呋喃，供试品溶液为实施例4析晶的R-亥茅酚含量测定溶液)。
综上可见，本发明提供的制备方法以防风为原料，仅使用一次大孔树脂柱层析，结合两次精制，即可制备得到纯度95％以上的亥茅酚；该方法不需要使用硅胶柱层析或反相硅胶柱层析这种无法工业化应用的分离手段；因此，本发明方法可操作性强，易于产业化；本发明制备的亥茅酚中含有少量的光学异构体R-亥茅酚(产生途径可能如下所示)，由于R-亥茅酚不具备亥茅酚对马兜铃酸的减毒作用，需要加以控制；本发明提供的HPLC方法基于常规的十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱即可有效分离亥茅酚和R-亥茅酚，不必依赖成本高昂、重复性低的手性填料色谱柱，可谓经济实用。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

Claims (3)

1.一种亥茅酚的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1，将防风粉碎成粗粉，喷洒pH值为5.5-6.5的盐酸水溶液过夜，90-110℃高温蒸制2-4h；其中，1kg粗粉均匀喷洒10-20mL的盐酸水溶液，过夜代表的时间不少于8h；
步骤S2，将蒸制品用体积百分浓度为75%的乙醇水溶液提取，收集提取液，过滤，收集滤液；
步骤S3，滤液上大孔树脂柱富集，大孔树脂型号为AB-8，先用45%乙醇水溶液洗脱8个柱体积，再用55%乙醇水溶液洗脱，收集第4和第5个柱体积洗脱液，浓缩得亥茅酚粗品；
步骤S4，第一次精制：将粗品用pH为7.6-7.8的碱水搅拌混悬，过滤，滤液调节pH至6.4-6.6后立即过滤得二滤液，将该二滤液4℃低温过夜，过夜代表的时间不少于8h；
步骤S5，第二次精制：将低温过夜的溶液过滤，收集滤饼，用体积比为3:2的甲醇-丙酮溶液重结晶即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S4中所述碱水为氢氧化钠水溶液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S5中先用甲醇-丙酮溶液将滤饼超声溶解，再于通风橱中静置析晶，收集析出物。
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