CN104398950A - 一种菖蒲四味抗癌提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种菖蒲四味抗癌提取物及其制备方法和应用，包括如下步骤：(1)取菖蒲四味复方药材，以醇类、酮类或酯类溶剂进行回流提取，减压回收溶剂，得粗提取物；(2)向所述粗提取物中加入水溶解，然后经大孔吸附树脂进行吸附处理，并用水洗脱除杂；(3)以第一洗脱溶液洗脱5-8倍树脂体积进行除杂，控制流速为4-9BV/h；(4)以第二洗脱溶液洗脱5-8倍树脂体积，控制流速为4-9BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，进而提供了一种菖蒲四味抗癌提取物及其制备方法和应用。

Description

一种菖蒲四味抗癌提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于药物提取物技术领域，具体涉及一种菖蒲四味抗癌提取物及其制备方法和应用。
背景技术
菖蒲四味由高良姜、紫硇砂、木香、石菖蒲四味中药组成,在蒙医临床较常用。传统蒙医药理论认为菖蒲四味具有消喘止痛、镇“巴达干赫依”的功能。用于治疗膈肌痉挛，胸闷气短，胸肋刺痛，消化不良。
菖蒲四味中，高良姜为姜科植物(Alpinia officinarum Hance)的干燥根茎，性味辛、热，归脾、胃经，具有温胃散寒，消食止痛功能，主治脘腹冷痛，胃寒呕吐，暖气吞酸。石菖蒲属于菖蒲科，为禾草状的多年生草本植物，根茎常作药用，性味辛、温，归心、胃经，主治痰蒙清窍，神志昏迷；湿阻中焦，脘腹痞满，胀闷疼痛。木香是菊科植物云木香和川木香的通称，云木香，又名广木香或青木香，属菊科风毛菊属，川木香是菊科川木香属的植物，这两种植物都以根茎入药，性味辛、苦、温，归脾、胃、杜、肺经，按功效分为理气药、行气药、温里药。紫硇砂蒙药名为乌莫黑达布斯(WuM heidabes),为卤化类矿物红盐的块状结晶体，主含氯化钠，性味咸、辛、温、重、油，具有祛巴达干赫依，调胃火，通便，止痛之功能；主治消化不良，赫依刺痛。
近年来，随着蒙医理论的不断发展和蒙药研究的不断深入，在引用现代理论和技术的基础上对蒙药复方菖蒲四味的物质基础进行了初步研究，菖蒲四味中的高良姜化学成分主要为黄酮类、二苯基庚烷类、挥发油类、糖苷类和苯丙素类等，另外还含有多种微量元素，黄酮类化合物有高良姜素、高良姜素-3-甲醚、山奈素-4-甲醚、山奈酚、槲皮素、乔松素、二氢高良姜醇、儿茶精等，二氢庚烷类化合物主要有二苯基庚烷A、二苯基庚烷B、二苯基庚烷C、二苯基庚烷D、苯基-4-烯-3庚酮等，其中高良姜素、山奈素等黄酮类化合物含量较高。石菖蒲根茎中主要含有挥发油，还含有氨基酸、苯丙素和糖类等。木香根中含挥发油0.3％-3％、木香碱0.05％、菊糖18％，其中挥发油中主要成分为木香内酯、二氢木香内酯、α-木香醇、α-木香酸、风毛菊内酯、去氢木香内酯、异去氢木香内酯、异土氢木香内酯、单紫杉烯、α及β木香烯和α及β-紫罗兰酮等，其中木香烃内酯和去氢木香内酯含量较高。由上述可知，菖蒲四味中主要含有黄酮类、苯丙素类、蒽醌类、生物碱、萜类等成分。但是目前对于菖蒲四味复方的物质基础和药理作用的研究并不深入，迄今为止未见涉及通过现代化手段将化学物质集群与药理作用相结合，明确化学物质集群的药理作用，然后富集有效的物质集群，为复方药理作用提供较为明确的药效物质基础，例如菖蒲四味中的抗癌活性化学物质集群。例如中国专利CN102058814中，虽然公开了一种从菖蒲四味中提取有效物质的方法，但其并未对菖蒲四味进行深度的研究，尤其并未公开任何相关的药理学研究。因此，本发明提供了一种菖蒲四味抗癌提取物及其制备方法和应用。
发明内容
为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种菖蒲四味抗癌提取物及其制备方法和应用。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材0.5-1.5重量份，加入5-15体积份的醇类、酮类或酯类溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:2.5-10，然后以占所述菖蒲四味生药量6-10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1-3BV/h，树脂柱径高比为1:4-13，随后用水洗脱1-5倍树脂体积进行除杂，控制流速为2-6BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱5-8倍树脂体积进行除杂，控制流速为4-9BV/h；所述第一洗脱溶剂为体积浓度30％-50％的甲醇、乙醇或丙酮溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱5-8倍树脂体积，控制流速为4-9BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物；所述第二洗脱液为体积浓度80％-95％的甲醇、乙醇或丙酮溶液；
所述重量份与所述体积份为g/mL的关系。
所述的菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材1重量份，加入10体积份的醇类、酮类或酯类溶剂进行回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:6，然后以占所述菖蒲四味生药量8体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，随后用水洗脱3倍树脂体积进行除杂，控制流速为4BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱7倍树脂体积除杂，控制流速为6BV/h；所述第一洗脱溶剂为体积浓度40％的甲醇、乙醇或丙酮溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱6倍树脂体积，控制流速为6BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物；所述第二洗脱液为体积浓度90％的甲醇、乙醇或丙酮溶液。
所述的菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，所述步骤(1)中，所述溶剂为体积浓度为40％-80％的乙醇。
所述的菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，在所述步骤(2)中，所述的大孔树脂的为非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性中的任意一种。
所述的菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，所述的大孔树脂为AB-8型、HPD400型、D101型、D4020型、S-8型或HZ-806型之一。
本发明提供了一种由上述方法制备得到的菖蒲四味抗癌提取物。
所述的菖蒲四味抗癌提取物或所述的方法制备而成的菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为50-100％,优选的为60-100％。
在所述的菖蒲四味抗癌提取物中，所述总苯丙素包括β-细辛醚、α-细辛醚、桉脂素、二苯基四氢呋喃衍生物(galgravin)、蔚瑞昆森(veraguensin)；所述总内酯包括异土木香内酯、1，13-二氢异土木香内酯、木香烯内酯、土木香内酯、裂叶苣荚莱内酯(Santamarine)。
本发明所述的菖蒲四味抗癌提取物中主要的总苯丙素类、总内酯类化合物结构见表1：
表1主要的总苯丙素类、总内酯类化合物结构
本发明提供了一种所述的菖蒲四味抗癌提取物在制备抗癌药物中的用途。
所述抗癌药物为抗肝癌、肺癌、胃癌药物。
本发明提供了一种以所述的菖蒲四味抗癌提取物为有效成分的抗癌药物。
本发明提供了一种由所述的菖蒲四味抗癌提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成临床上可接受的药物制剂或功能性食品。
所述的药物制剂或功能性食品包括胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂或饮料。
本发明中所述菖蒲四味复方药材组成为：
高良姜200-600重量份、紫硇砂100-300重量份、木香50-150重量份和石菖蒲50-150重量份。
优选的，所述菖蒲四味复方药材组成为：
高良姜400重量份、紫硇砂200重量份、木香100重量份和石菖蒲100重量份。
本发明所述菖蒲四味复方药材(菖蒲四味抗癌提取物的原料药)，可以是市售菖蒲四味中各味药材的饮片，也可以是这些植物的茎、叶、花穗、果实、地下根茎及根等任一部位或全部植株，优选的药材来源为：姜科山姜属植物高良姜(Alpinia officinarum Hance)的干燥根茎,紫硇砂(蒙名：乌莫黑达布素，卡如萨。本品为紫色石盐(Halitum violaceum)的块状结晶体。菊科植物木香(Aucklandia lappa Decne.)干燥根、天南星科植物石菖蒲(Acorus tatarinowii Schott)的干燥根茎。其中所述的菖蒲四味各味药材包括未经任何炮制处理的原药材、饮片以及炮制品。
本发明中所述生物蒙药复方菖蒲四味中各味药材均由安国市康达中药材有限公司提供。
本发明对菖蒲四味复方药材进行提取和纯化得到所述菖蒲四味抗癌提取物，使其具有抗癌作用的有效成分的含量大大提高，同时，通过对纯化得到的菖蒲四味抗癌提取物进行总苯丙素、β-细辛醚、α-细辛醚、总内酯的含量测定以及肝癌Bel-7402细胞的毒性试验，发现所得菖蒲四味抗癌提取物对体外培养的肝癌Bel-7402细胞的抑制作用显著，进一步证明了本发明制备的所述菖蒲四味抗癌提取物中富集了具有抗癌活性的化学物质，该具有抗癌活性的化学物质为总苯丙素、β-细辛醚、α-细辛醚、总内酯类化学物质，并且通过对所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、β-细辛醚、α-细辛醚、总内酯进行含量测定，形成了系统的质量标准体系，有利于提高产品质量的可控性和稳定性，对蒙药菖蒲四味的开发具有现实意义。
实验例
下面实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。
实验例1：复方菖蒲四味抗癌提取物制备方法的筛选
取菖蒲四味复方药材饮片4份，每份5g，50％乙醇回流提取3次，溶剂用量为50mL，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加一定体积的水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:5。分别选择AB-8型大孔吸附树脂(占所述菖蒲四味生药量的10体积倍量)、聚酰胺(占所述菖蒲四味生药量的10体积倍量)、反相硅胶(占所述菖蒲四味生药量的6体积倍量)、活性炭(占所述菖蒲四味生药量的10体积倍量)等处理菖蒲四味复方药材的粗提取物，控制吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1:8，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为6BV/h，以体积浓度为50％乙醇洗脱8倍树脂体积除杂，除杂流速为4～9BV/h，然后以体积浓度为95％乙醇洗脱8倍树脂体积，流速为4～9BV/h，收集体积浓度为95％乙醇洗脱后的洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得菖蒲四味抗癌提取物。
表2所述菖蒲四味抗癌提取物含量
由表2可看出，大孔吸附树脂对于总苯丙素、总内酯的富集能力(有效部位的含量及得量)强于聚酰胺、反相硅胶、活性炭，据此，本发明选择大孔吸附树脂为载体可以富集菖蒲四味的抗癌(总苯丙素、总内酯)提取物。
实验例2：蒙药复方菖蒲四味四种制备方法制得的抗癌提取物样品对肝癌Bel-7402细胞的毒性：
取实验例1中四种制备方法制得的菖蒲四味抗癌提取物样品，用含10％灭活的胎牛血清(FBS)RPMI-1640培养液配制成12.5、25、50、100、150、200μg·mL-1的受试药物溶液，所有样品均用0.22微米微孔滤膜过滤除菌备用，得实验例1中四种制备方法制得的菖蒲四味抗癌提取物样品组。
收集对数期细胞，用0.25％胰蛋白酶消化后，用含10％FBS的RPMI-1640培养液配制成4～5×104个/ml单细胞悬液，接种于96孔培养板，设为阴性对照组，取实验例1中四种制备方法制得的菖蒲四味抗癌提取物为样品组，设环磷酰胺为阳性对照组，每孔接种细胞100μL，向阴性对照补加培养液(灭活的胎牛血清(FBS)RPMI-1640培养液)100μL，分别向实验例1中四种制备方法制得的菖蒲四味抗癌提取物样品组和阳性对照组每孔加培养液(灭活的胎牛血清(FBS)RPMI-1640培养液)稀释至规定浓度，
取实验例1中四种制备方法制得的菖蒲四味抗癌提取物样品和环磷酰胺100μL，以200μL培养液作为空白调零组。取实验例1中四种制备方法制得的菖蒲四味抗癌提取物样品组，每个浓度设4个平行孔，37℃，5％CO2培养48h后，每孔加入MTT溶液20μL，CO2培养箱孵育4h。弃细胞培养液，加DMSO 150μL/每孔，37℃孵育15～30min，用酶标仪在570nm处测定各孔OD值；平行实验3次，计算生长抑制率。
生长抑制率IR(％)＝(1-A菖蒲四味抗癌提取物样品组/A阴性对照组)×100％
取实验例1中四种制备方法制得的菖蒲四味抗癌提取物样品对肝癌Bel-7402细胞作用48h后，发现通过大孔吸附树脂处理所得的菖蒲四味抗癌提取物对体外培养的肝癌Bel-7402细胞的抑制作用显著，与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01)，四种制备方法制得的菖蒲四味抗癌提取物样品不同浓度的抑制率呈量效关系，其抑制作用呈较明显的剂量依赖性与阳性对照组环磷酰胺的作用相近。
表3所得菖蒲四味抗癌提取物对肝癌Bel-7402细胞的增殖抑制作用率(％)
实验例3：蒙药复方菖蒲四味抗癌提取物样品对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用：
供试品：本发明实施例1制备的菖蒲四味抗癌提取物；
对照样品：按照本发明实施例1的方法制备菖蒲四味抗癌提取物，区别仅在于在所述方法中的步骤(3)是以体积浓度为50％的乙醇溶液洗脱8倍树脂体积，流速为4BV/h，收集洗脱液，回收所述洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，省略步骤(4)；
分别取供试品和对照品0.5g用少量酒精加热助溶，加入900ml纯水中，高压后待水温降至37℃左右加入DMEM粉剂，定容至1L并调节pH值，配制成含1mmol·L-1(0.5g·L-1)的DMEM，0.22μm微孔滤器过滤除菌，分装，避光保存。使用时用含10％新生牛血清的DMEM培养液稀释至所需浓度。
实验中将细胞分为10组，分别为正常对照组，阳性对照(顺铂，2.5mg·L-1)组1、供试品的(20，50，100，200μmol·L-1)4个剂量组(试验组)以及对照样品的(20，50，100，200μmol·L-1)4个剂量组。
MTT法检测菖蒲四味抗癌提取物对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用
取对数生长期细胞，消化吹匀后计数并调整细胞密度至每升1×108个，以每孔100μL细胞悬液接种于96孔培养板中，于培养箱中培养12h后，吸弃孔内旧培养液，按组别分别加入含10％新生牛血清的DMEM培养液或含相应药物及浓度的10％新生牛血清的DMEM培养液各200μL，同时设不加细胞只加含10％新生牛血清的DMEM培养液的正常对照孔，每组分别设10个平行复孔，每24h换液一次，培养72h后，充分吸净上清液，向各孔加入质量浓度为5g·L-1的MTT20μL，继续培养4h后，每孔加150μL的DMSO，放于摇床上摇动10min，使结晶充分溶解，随后在酶标仪上波长570nm处测定各孔吸光度OD值(各孔实际吸光度值－正常对照孔吸光度值)，计算菖蒲四味抗癌提取物各剂量组分别作用72h的增殖抑制率(IR)。
增殖抑制率(％)＝(1-菖蒲四味抗癌提取物剂量组OD值/正常对照组OD值)×100％。
实验结果显示，与正常对照组比较，菖蒲四味抗癌提取物100μmol·L-1和200μmol·L-1剂量在72h均可显著抑制胃癌BGC-823细胞对MTT的摄取能力(P＜0.05或P＜0.01)，并呈现一定的时间依耐性；菖蒲四味抗癌提取物20μmol·L-1和50μmol·L-1剂量在短时间内对胃癌BGC-823细胞摄取MTT的能力无显著作用，但随作用时间的增长，也表现出显著的抑制作用(P＜0.05)。结果表明，菖蒲四味抗癌提取物对胃癌BGC-823细胞有明显的增殖抑制作用，并呈现一定的时间和剂量依赖性。比较供试品和对照样品对胃癌BGC-823细胞抑制率发现，本发明实施例1制备的菖蒲四味抗癌提取物对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用显著。
表4所得菖蒲四味抗癌提取物对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用率(％)
Dose/μg.ml-1 对照样品抑制率 供试品抑制率
200 31.29±1.85 55.29±2.12
100 17.69±0.96 37.69±1.85
50 13.22±1.58 26.22±2.05
20 8.05±1.12 19.05±1.36
实验例4：菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素类的含量测定
4.1仪器与测定条件：
760CRT型紫外可见分光光度计，测定波长：260nm；
SARTORIUS-BS224S型电子分析天平(北京塞多利斯仪器系统公司)；
KQ-250DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。
4.2对照品与试剂：
α-细辛醚对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110861-200808)。
试剂:水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯
4.3对照品溶液的制备及标准曲线的绘制：
精密称取α-细辛醚对照品适量(约5.12mg)，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密取2.0mL到25mL容量瓶，加无水甲醇使其完全溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
精密吸取α-细辛醚对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置10mL量瓶中，各量瓶加无水甲醇定容,于260nm处测定吸光度。以α-细辛醚对照品取样量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4.4样品溶液的制备
精密称取实施1制备的菖蒲四味抗癌提取物样品各3份，每份25mg，置100mL量瓶中，加氯仿适量，超声处理5分钟，用氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10.0mL于25mL量瓶，加无水甲醇至刻度，摇匀，作为样品溶液。
4.5总苯丙素的含量测定
分别精密吸取上述样品溶液2.0mL置25mL量瓶中，再分别精密吸取α-细辛醚对照品溶液2.0mL、4.0mL，置10mL量瓶中，各量瓶加无水甲醇定容,于260nm处测定吸光度。外标两点法计算含量。
表4所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素含量
实验例5：所述菖蒲四味抗癌提取物中β-细辛醚、α-细辛醚的含量测定
5.1仪器与测定条件：
日本日立公司LC-2000全自动进样高效液相色谱仪；
L-2455紫外检测器，Agilent Chemstation；
AB135-S型超声清洗仪；
AB135-S电子天平(Mettler Toledo公司)电子天平；
3mL(200mg)ODS固相萃取柱。
色谱条件：色谱柱：伊利特ODS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水(56∶44)；流速：1.0mL/min；检测波长：257nm；柱温：30℃。
在上述色谱条件下,β-细辛醚、α-细辛醚与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论板数均大于7000，对称因子在0.95～1.05之间。
5.2对照品与试剂：
β-细辛醚对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：111699-200501)；
α-细辛醚(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110861-200808)；
蒙药复方菖蒲四味中各味药材均由安国市康达中药材有限公司提供；
乙腈为Fisher色谱纯试剂，水为娃哈哈纯净水，其它试剂均为分析纯。
5.3对照品溶液的制备：
精密称取经减压干燥至恒重的对照品β-细辛醚、α-细辛醚适量,用甲醇分别配制成浓度为0.21mg·mL-1，0.082mg·mL-1的混合对照品溶液。
5.4样品溶液的制备
精密称取实施例1制备的3批菖蒲四味抗癌提取物样品各3份，每份约30mg，于50ml容量瓶中，70％乙醇定容，摇匀后用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得β-细辛醚及α-细辛醚含量测定的供试品溶液。
5.5菖蒲四味抗癌提取物中β-细辛醚、α-细辛醚的含量测定
精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量。
表5抗癌提取物中β-细辛醚、α-细辛醚的含量
实验例6菖蒲四味抗癌有效部位中总内酯的含量测定
6.1仪器与测定条件：
760CRT型紫外可见分光光度计，测定波长：490nm；
SARTORIUS-BS224S型电子分析天平(北京塞多利斯仪器系统公司)。
6.2对照品与试剂：
异土木香内酯对照品(由本实验室自制，纯度99.21％)；
蒙药复方菖蒲四味中各味药材均由安国市康达中药材有限公司提供；
水为娃哈哈纯净水，其它试剂均为分析纯。
6.3对照品溶液的制备以及标准曲线的绘制：
精密称取异土木香内酯对照品适量，加甲醇制备成1.704mg/mL的对照品溶液。
精密吸取异土木香内酯对照品溶液1、1.5、2、2.5、3和4mL置10mL具塞刻度试管中.向试管中加入0.75mL碱性羟胺溶液(10％的盐酸羟胺甲醇溶液与10％的氢氧化钠甲醇溶液1：1混匀临用现配并过滤除去混合后的不溶物)振摇试管使两者混匀。置70摄氏度水浴上加热30分钟，取出冷却至室温后加入30％的盐酸0.25mL混匀后加入2％的氯化铁0.2mL，于490nm处测定吸光度值。以异土木香内酯对照品取样量(mg)为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
6.4样品溶液的制备
精密称取实施例1制备的菖蒲四味抗癌提取物样品各3份，每份100mg，95％乙醇溶解并定容至25mL容量瓶刻度，即得菖蒲四味抗癌有效部位供试品溶液。
6.5菖蒲四味抗癌提取物中总内酯的含量测定
分别精密吸取上述样品溶液1.0mL置10mL具塞刻度试管中，再分别精密吸取异土木香内酯对照品溶液1.0mL、2.5mL，置10mL具塞刻度试管，向试管中加入0.75mL碱性羟胺溶液(10％的盐酸羟胺甲醇溶液与10％的氢氧化钠甲醇溶液以1：1混匀，临用现配并过滤除去混合后的不溶物)振摇试管使两者混匀。置70摄氏度水浴上加热30分钟，取出冷却至室温后，加入30％的盐酸0.25mL混匀后，加入2％的氯化铁0.2mL，于490nm处测定吸光度值。外标两点法计算含量。
表6抗癌提取物中总内酯的含量
具体实施方式
实施例1
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取菖蒲四味复方药材饮片1kg，加入体积浓度为50％乙醇10L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
(2)向所述粗提取物中加一定体积的水分散溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3.5，然后以以占所述菖蒲四味生药量7.5体积倍量的AB-8大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速2Bv/h，树脂柱径高比为1:10，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2BV/h；
(3)以第一洗脱溶液洗脱8倍树脂体积除杂，除杂流速为4BV/h；所述第一洗脱溶液为体积浓度的50％乙醇溶液；
(4)以第二洗脱溶液洗脱8倍树脂体积，流速为4BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即为所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为50-100％。所述第二洗脱溶液为体积浓度的95％乙醇溶液。
实施例2
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取菖蒲四味复方药材饮片0.5kg，加体积浓度为80％乙醇15L超声提取3次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
(2)加一定体积的水分散溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：10，通过以以占所述菖蒲四味生药量10体积倍量的AB-8大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1Bv/h，树脂柱径高比为1：4，然后用水洗脱1倍树脂体积进行除杂，除杂流速为4BV/h；
(3)以第一洗脱溶液洗脱8倍树脂体积除杂，除杂流速为9BV/h；所述第一洗脱溶液为体积浓度40％的乙醇溶液；
(4)以第二洗脱溶液洗脱5倍树脂体积，流速为9BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为50-100％；所述第二洗脱溶液为体积浓度80％的乙醇溶液。
实施例3
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取菖蒲四味复方药材饮片1.5kg，加入体积浓度为40％乙醇5L回流提取4次，每次提取3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
(2)向所述粗提取物中加一定体积的水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5，然后以占所述菖蒲四味生药量6体积倍量的D101大孔吸附树脂行吸附处理，控制吸附流速为3Bv/h，树脂柱径高比为1:13，水洗脱5倍树脂体积进行除杂，控制除杂流速为6BV/h；
(3)以第一洗脱溶液洗脱5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为6BV/h；所述第一洗脱溶液为体积浓度30％的乙醇溶液；
(4)以第二洗脱溶液洗脱6倍树脂体积，流速为6BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为50-100％；所述第二洗脱溶液为体积浓度90％的乙醇溶液。
实施例4
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材1kg，加入10L的50％乙醇回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:6，然后以占所述菖蒲四味生药量8体积倍量的HZ-806大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，随后用水洗脱3倍树脂体积进行除杂，控制流速为4BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱7倍树脂体积除杂，控制流速为6BV/h；所述第一洗脱溶液为体积浓度40％的甲醇溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱6倍树脂体积，控制流速为6BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为60-100％；所述第二洗脱液为体积浓度90％的甲醇溶液。
实施例5
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材1kg，加入10L的丙酮回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:6，然后以占所述菖蒲四味生药量8体积倍量的S-8型大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，随后用水洗脱3倍树脂体积进行除杂，控制流速为4BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱7倍树脂体积除杂，控制流速为6BV/h；所述第一洗脱溶液为体积浓度40％的丙酮溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱6倍树脂体积，控制流速为6BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为60-100％；所述第二洗脱液为体积浓度90％的丙酮溶液。
实施例6
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材1.5kg，加入5L的丙酮回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:2.5，然后以占所述菖蒲四味生药量10体积倍量的S-8型大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1BV/h，树脂柱径高比为1:4，随后用水洗脱5倍树脂体积进行除杂，控制流速为2BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱5倍树脂体积除杂，控制流速为9BV/h；所述第一洗脱溶液为体积浓度30％的丙酮溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱8倍树脂体积，控制流速为4BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为55-100％；所述第二洗脱液为体积浓度95％的丙酮溶液。
实施例7
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材1kg，加入10L的醋酸甲酯回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:6，然后以占所述菖蒲四味生药量8体积倍量的D4020型大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，随后用水洗脱3倍树脂体积进行除杂，控制流速为4BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱7倍树脂体积除杂，控制流速为6BV/h；所述第一洗脱溶液为体积浓度40％的乙醇溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱6倍树脂体积，控制流速为6BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为60-100％；所述第二洗脱液为体积浓度90％的乙醇溶液。
实施例8
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材0.5kg，加入15L的醋酸丙酯回流提取2次，每次提取3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:4，然后以占所述菖蒲四味生药量8体积倍量的D101型大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:13，随后用水洗脱1倍树脂体积进行除杂，控制流速为6BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱5倍树脂体积除杂，控制流速为9BV/h；所述第一洗脱溶剂为体积浓度30％的丙酮溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱5倍树脂体积，控制流速为9BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为50-100％；所述第二洗脱液为体积浓度80％的丙酮溶液。
实施例9
本实施例所述的一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材1.5kg，加入5L的醋酸乙酯回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:10，然后以占所述菖蒲四味生药量6体积倍量的HPD400型大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为3BV/h，树脂柱径高比为1:4，随后用水洗脱5倍树脂体积进行除杂，控制流速为2BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱8倍树脂体积除杂，控制流速为4BV/h；所述第一洗脱溶剂为体积浓度50％的甲醇溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱8倍树脂体积，控制流速为5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为50-100％；所述第二洗脱液为体积浓度95％的甲醇溶液。
实施例10片剂的制备
取实施例1制备的所述菖蒲四味抗癌提取物，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。
实施例11胶囊剂的制备
取实施例2制备的所述菖蒲四味抗癌提取物，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。
实施例12口服液的制备
取实施例3制备的所述菖蒲四味抗癌提取物，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液。
实施例13饮料的制备
取实施例4制备的所述菖蒲四味抗癌提取物，加入常规辅料，按照常规工艺，制成饮料。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材0.5-1.5重量份，加入5-15体积份的醇类、酮类或酯类溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:2.5-10，然后以占所述菖蒲四味生药量6-10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1-3BV/h，树脂柱径高比为1:4-13，随后用水洗脱1-5倍树脂体积进行除杂，控制流速为2-6BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱5-8倍树脂体积进行除杂，控制流速为4-9BV/h；所述第一洗脱溶剂为体积浓度30％-50％的甲醇、乙醇或丙酮溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱5-8倍树脂体积，控制流速为4-9BV/h，收集洗脱液，回收所述第二洗脱溶液，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物；所述第二洗脱液为体积浓度80％-95％的甲醇、乙醇或丙酮溶液；
所述重量份与所述体积份为g/mL的关系。
2.根据权利要求1所述的菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)取菖蒲四味复方药材1重量份，加入10体积份的醇类、酮类或酯类溶剂进行回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；
2)将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:6，然后以占所述菖蒲四味生药量8体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，随后用水洗脱3倍树脂体积进行除杂，控制流速为4BV/h；
3)以第一洗脱溶液洗脱7倍树脂体积除杂，控制流速为6BV/h；所述第一洗脱溶剂为体积浓度40％的甲醇、乙醇或丙酮溶液；
4)以第二洗脱溶液洗脱6倍树脂体积，控制流速为6BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述菖蒲四味抗癌提取物；所述第二洗脱液为体积浓度90％的甲醇、乙醇或丙酮溶液。
3.根据权利要求1-2任一所述的菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述溶剂为体积浓度为40％-80％的乙醇。
4.根据权利要求1-3任一所述的菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述的大孔树脂的为非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性中的任意一种。
5.根据权利要求1-4任一所述的菖蒲四味抗癌提取物的制备方法，其特征在于，所述的大孔树脂为AB-8型、HPD400型、D101型、D4020型、S-8型或HZ-806型之一。
6.由权利要求1-5任一所述方法制备得到的菖蒲四味抗癌提取物，所述菖蒲四味抗癌提取物中总苯丙素、总内酯类成分含量的总和以重量计为50-100％，其中，所述总苯丙素包括β-细辛醚、α-细辛醚、桉脂素、二苯基四氢呋喃衍生物、蔚瑞昆森；所述总内酯包括异土木香内酯、1，13-二氢异土木香内酯、木香烯内酯、土木香内酯、裂叶苣荚莱内酯。
7.权利要求6所述的菖蒲四味抗癌提取物在制备抗癌药物中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述抗癌药物为抗肝癌、肺癌、胃癌药物。
9.以权利要求7或8所述的菖蒲四味抗癌提取物为有效成分的抗癌药物。
10.由权利要求6所述的菖蒲四味抗癌提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的药物制剂。
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