CN111743927B - 一种用于治疗肝硬化的中药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于治疗肝硬化的中药组合物,包括α细辛醚、银杏内酯B、人参皂苷、表儿茶素以及冬凌草甲素。优点在于,本发明组合物各组分相互之间起到协同作用,显著改善肝硬化,其中,最佳药物配伍组为第四组即A1B1C1D1E2能够明显延缓肝硬化程度。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及一种用于治疗肝硬化的中药组合物。
背景技术
肝硬化是一种或多种原因引起的、以肝组织细胞弥漫性纤维化、假小叶和再生结节为组织学特征的进行性慢性肝病。一连串的反应刺激静止的肝星状细胞(HSCs)进入激活状态,导致胶原和其他细胞外基质(ECM)成分的积累。这些物质的持续刺激和堆积会导致肝脏结构和肝神经的破坏,并降低肝功能,进一步造成肝纤维化并发展成肝硬化。
发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一种用于治疗肝硬化的中药组合物。
本发明的目的通过下述技术方案实现:一种用于治疗肝硬化的中药组合物,包括α细辛醚、银杏内酯B、人参皂苷、表儿茶素以及冬凌草甲素。
进一步地,各组分含量为α细辛醚20~80份、银杏内酯B15~60份、人参皂苷10~40份、表儿茶素50~100份、冬凌草甲素5~25份。
进一步地,α细辛醚20份、银杏内酯B60份、人参皂苷40份、表儿茶素100份、冬凌草甲素25份。
本发明具有如下有益效果:
1.本发明组合物各组分相互之间起到协同作用,显著改善肝硬化。
2.本发明实验数据数据表明肝硬化回归或甚至逆转是可能的,对今后治疗肝硬化的进一步研究提供支持。
附图说明
图1为肝硬化正常组小鼠肝脏组织HE染色图。
图2为肝硬化模型组小鼠肝脏组织HE染色图。
图3为肝硬化治疗组小鼠肝脏组织HE染色图。
图4为肝硬化正常组小鼠肝脏组织天狼星红染色图。
图5为肝硬化模型组小鼠肝脏组织天狼星红染色图。
图6为肝硬化治疗组小鼠肝脏组织天狼星红染色图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图1~6,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
银杏内酯是银杏中的一种活性成分,是常用的血小板活化因子受体拮抗剂,对中枢神经系统、心血管系统均有一定的保护作用。α细辛醚是中药石菖蒲的提取物,石菖蒲是我国传统中药,有治疗精神和心脑血管疾病的作用。α-细辛醚被报道可以抑制HMG-COA还原酶并治疗高脂血症。人参皂甙是人参中的一种活性成分,具有抗炎抗氧化等作用,近年来有研究发现,其对认知功能也有一定的改善作用,并且对肝脏类疾病有一定的治愈效果。
表儿茶素是一种天然植物黄烷醇化合物,多存在于茶叶类植物中,也是一些常用中药的活性成分,如何首乌。研究表明,表儿茶素具有极好的神经保护作用,并具有保护肝脏的能力。冬凌草甲素是一种具有抗氧化、抗炎等功能的二萜类化合物。研究表明,冬凌草甲素对于神经系统中的小胶质细胞炎症激活有很好的抑制作用,并对NLRP3和NFκB介导的炎症通路有直接抑制作用。
本发明中硫代乙酰胺购自上海璞帝生物科技有限公司(批号:CAS:62-55-5)。
1.造模与分组
共60只ICR雄性小鼠(来自温州医科大学实验动物中心)重18-20g,所有的实验中照料和使用老鼠程序是与温州医科大学附属第一医院道德伦理委员会主张的一致。小鼠分为对照组、模型组,治疗组。小鼠腹腔注射硫代乙酰胺(Thioacetamid,TAA)(200 mg/kg/只),每周注射2 次,给药11 周诱发肝硬化,对照组注射相同量的生理水。
2. 指标测定方法
2.1肝功能检测
我们将每组小鼠经过最后一次给药后取材。小鼠通过乙醚浅度麻醉进行眼球取血。所取血液静置30min后按照5000r/min的速度离心5 min,收集血清,分装,-80 ℃保存。检测谷草转氨酶(AsT)、谷丙转氨酶(ALT),将结果汇总至SPSSl7.0统计软件进行数据处理。
2.2 HE染色
将动物放血处死,取出肝脏,4%多聚甲醛固定,乙醇脱水,二甲苯透明,浸蜡,最后用熔点为56℃蜡包埋制成石蜡组织。常规切片(厚3.5 cm)脱蜡至水,苏木精染色5~10min,水洗后1%盐酸酒精分化数秒,返蓝,伊红染色数秒,脱水,二甲苯透明,中性树脂胶封片。显微镜下观察组织形态。
2.3天狼星染色
将肝脏组织制作厚度约为 5μm 石蜡切片,常规脱蜡;将切片放入天青石蓝液中,染色 10 min;后将切片放入天狼星红-苦味酸液中,染色 20 min;放入苏木精染液中,染核10 min;用蒸馏水清洗苏木素; 脱水(无水酒精),透明(二甲苯),封固(中性树胶)。
2.4给药方法及分组
按照L8(27)正交设计表设计的组别随机组合8个组别,分别配制不同比例的α细辛醚、银杏内酯B、人参皂苷、表儿茶素和冬凌草甲素的混合物溶液.根据文献查找结果确定5种有效组分的剂量水平。以实际误差进行全面分析的正交实验,确定5者防治肝硬化小鼠记忆力减退的最佳疗效比例。给药4周后进行指标检测。5种有效组分剂量水平见表1,5种有效组分剂量分组见表2。
表1.药物配伍:浓度水平(mg/kg/d)
药物 | 低剂量 | 高剂量 |
α细辛醚 | 20 | 80 |
银杏内酯B | 15 | 60 |
人参皂苷 | 10 | 40 |
表儿茶素 | 50 | 100 |
冬凌草甲素 | 5 | 25 |
表2 5种有效组分剂量分组(mg/kg/d)
组别 | α细辛醚 | 银杏内酯B | 人参皂苷 | 表儿茶素 | 冬凌草甲素 |
1 | 20 | 15 | 10 | 50 | 5 |
2 | 20 | 15 | 10 | 100 | 25 |
3 | 20 | 60 | 40 | 50 | 5 |
4 | 20 | 60 | 40 | 100 | 25 |
5 | 80 | 15 | 40 | 50 | 25 |
6 | 80 | 15 | 40 | 100 | 5 |
7 | 80 | 60 | 10 | 50 | 25 |
8 | 80 | 60 | 10 | 100 | 5 |
3. 统计学分析
采用SPSS.22软件进行分析, 数据以×±s表示。Morris水迷宫中大鼠逃避潜伏期的比较采用重复测量的单因素方差分析,其余变量的组间比较采用student’s t检验,以P<0.05为差异学有统计意义。
4.结果
4.1肝硬化小鼠肝功检测结果
经过造模第8周后,我们发现模型组小鼠的ALT、AST较空白组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);在8个药物组别分别干预肝硬化小鼠后,我们发现最佳药物配伍组为第四组即A1B1C1D1E2能够明显延缓肝硬化程度(P<0.05)。
4.2肝硬化小鼠HE结果
小鼠表明:在正常组小鼠中,肝脏病理表现正常,没有发现明显的肝细胞变性坏死、炎性细胞浸润和纤维沉淀等情况。而模型组小鼠肝小叶出现结构紊乱,肝细胞形态不规则,汇管区及肝小叶内有明显炎性细胞浸润,并且这种病变随时间延长逐渐加重并且管区结构破坏。A1B1C1D1E2组小鼠肝脏病理病变明显弱于模型组小鼠,肝脏表现为肝细胞形态正常,顺序排列,细胞核形态呈圆形,胞浆充盈,汇管区见数个淋巴细胞浸润,无胆管破坏及肝小叶破坏,没有发现纤维间隔形成。结果如图1至图3所示。
4.3肝硬化小鼠天狼星染色结果
天狼星红和其衬染液都是强酸性染料,易与胶原分子中的碱性基团结合,吸附牢靠。偏振光镜检查,胶原纤维有正的单轴双折射光的属性,与天狼星红染色液结合后,可增强双折射,提高分辨率,从而区分两型胶原纤维。胶原纤维(Collagen Fiber)是结缔组织中分布最广含量最多的一种纤维,广泛分布于各种脏器,其中皮肤、巩膜、肌腱最丰富。天狼星红染色液的溶剂为衬染PA饱和溶液,主要用于各种组织病变时对胶原纤维异常或纤维增生的研究中,管等组织的胶原纤维被染成红色。如图100倍镜观察所示,MHE模型组大鼠的肝脏胶原纤维较对照组大鼠的显著增加,在汇管区周围、和小叶间动、静脉壁都有明显的胶原染色,而治疗组明显延缓了小鼠的肝硬化程度。结果如图4至图6所示。
4.4各组疗程中治疗效果对比
组别 | n | 治疗时间 | 肝硬化程度 |
对照组 | 6 | 4周 | 正常 |
模型组 | 6 | 4周 | 加重 |
治疗组 | 6 | 4周 | 减轻 |
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明,因此无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
Claims (2)
1.一种用于治疗肝硬化的中药组合物,其特征在于,组合物由α细辛醚、银杏内酯B、人参皂苷、表儿茶素以及冬凌草甲素制成,其中α细辛醚20~80份、银杏内酯B15~60份、人参皂苷10~40份、表儿茶素50~100份、冬凌草甲素5~25份。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗肝硬化的中药组合物,其特征在于,α细辛醚20份、银杏内酯B60份、人参皂苷40份、表儿茶素100份、冬凌草甲素25份。
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