CN112007058A - 木蝴蝶作为抗氧化应激损伤剂的应用 - Google Patents
木蝴蝶作为抗氧化应激损伤剂的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112007058A CN112007058A CN202010896707.0A CN202010896707A CN112007058A CN 112007058 A CN112007058 A CN 112007058A CN 202010896707 A CN202010896707 A CN 202010896707A CN 112007058 A CN112007058 A CN 112007058A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- oroxylum indicum
- oxidative stress
- oroxylum
- indicum
- vascular endothelial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及木蝴蝶作为体内抗氧化应激损伤剂在药物中的应用,涉及木蝴蝶的医药新用途,属于医药技术领域。具体地,木蝴蝶可用于保护血管内皮细胞免受氧化应激损伤。本发明的研究表明,木蝴蝶可明显升高H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞的细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)活力,降低丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)释放及细胞凋亡,同时增强Nrf2、HO‑1、NQO‑1蛋白的表达,具有明显的保护体内细胞免受氧化应激损伤的作用。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,本发明涉及木蝴蝶作为抗氧化应激损伤剂在药物中的应用,涉及木蝴蝶的医药新用途。
背景技术
氧化应激是活性氧水平和内源性抗氧化能力之间的细胞氧化还原失去平衡,抗氧化能力相对不足,细胞内活性氧相对增加,部分毒性活性氧增加引起生物大分子受到攻击引起的细胞和组织损伤。由于自由基和活性氧导致的氧化应激损伤在许多疾病的发生发展中发挥着十分重要的作用。
其中,血管内皮细胞氧化应激损伤与多种疾病密切相关。内皮细胞位于血管壁的内表面,是血液与血管壁之间的生理屏障。由于内皮细胞与血液直接接触,其具有重要的功能,如在调节血压,炎性细胞的黏附、迁移,凝血和纤溶,以及血管形成等方面发挥着极其重要的作用。此外,动脉粥样硬化相关心脑血管疾病、慢性病代谢综合症、肿瘤等疾病的发生发展均与血管内皮细胞的增殖或抑制有着密切关系。因此,能够有效的治疗血管内皮细胞氧化应激损伤对减少血管内皮细胞细胞破坏,延缓各种疾病的发展具有重要的意义。
有研究表明,左旋氨氯地平、右美托咪定等药物可以改善血管内皮细胞氧化应激损伤,然而这些药物长期服用会对人体产生一定的副作用(张园,海荣,陆欣.左旋氨氯地平对血管内皮细胞氧化应激损伤的影响[J].中国临床药理学杂志,2016(2):159-162;苏玲,屠伟峰,陈茜,等.右美托咪定对血管内皮细胞氧化应激损伤的影响[J].实用医学杂志,2013,29(009):1397-1399.)。
天然药物对人体的副作用小并且具有多成分、多靶点、多种作用机制的优点,在疾病治疗中具有不可替代的作用。因此,开发天然药物作为抗氧化应激损伤剂,具有重要的意义。
发明内容
本发明旨在提供木蝴蝶的医药新用途,开发木蝴蝶作为体内抗氧化应激损伤剂,为木蝴蝶的临床应用开辟了新的道路。
本发明的目的在于提供木蝴蝶作为体内抗氧化应激损伤剂的应用。
本发明的另一目的在于提供一种用于治疗和/或预防氧化应激损伤的药物,所述药物中含有木蝴蝶。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
中药木蝴蝶为紫葳科木蝴蝶属木蝴蝶Oroxylum indicum(L.)Vent.的成熟种子,10-12月采摘成熟果实,取出种子,晒干或烘干。本品始载于《滇南本草》,原名千张纸,《纲目拾遗》用木蝴蝶之名,《中国药典》2005年版将其收录其中。木蝴蝶性味苦、甘、凉,有清肺、利咽、止咳、舒肝、和胃之功效。现代药理实验证明其具有止咳、抗炎抗菌、抗氧化等作用。
发明人通过创造性劳动发现,木蝴蝶可用于治疗和/或预防氧化应激损伤,对保护体内细胞免受氧化损失具有明显的作用。
据此,本发明提供了木蝴蝶在制备体内抗氧化应激损伤剂中的应用。
本发明中,所述木蝴蝶为紫葳科木蝴蝶属木蝴蝶的干燥成熟的种子;所述木蝴蝶记载于《中华人民共和国药典》2015版一部;所述木蝴蝶的重金属残留量小于5ppm,农药残留量小于10ppm,符合《中华人民共和国药典》2015版一部对木蝴蝶的质量要求。
优选地,所述木蝴蝶为木蝴蝶提取物。
更优选地,所述木蝴蝶提取物的提取方法:将木蝴蝶用60%-80%的乙醇回流提取后,采用树脂纯化富集。
进一步更优选地,所述树脂为大孔吸附树脂。
进一步更优选地,所述木蝴蝶提取物的提取方法:将木蝴蝶用70%的乙醇回流提取后,采用AB-8大孔吸附树脂纯化富集。
在本发明优选的实施例中,所述木蝴蝶可用于保护血管内皮细胞免受氧化应激损伤。
本发明还提供了一种用于治疗和/或预防体内氧化应激损伤的药物,所述药物中含有木蝴蝶。
优选地,所述木蝴蝶为木蝴蝶提取物。
优选地,所述药物用于保护血管内皮细胞免受氧化应激损伤。
本文使用的术语“治疗”是指减轻或改善病症,即延缓或抑制病症或至少一种临床症状的发展。
本文使用的术语“预防”是指所述病症的症状出现之前向受试者施用本发明所述药物。
本发明所述受试者可以指任何动物,包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、马、猪、猴等哺乳动物。
本发明所述药物可经由任何生理上可接受途径给药,给药途径例如口服、注射等。
本发明所述药物可制成药学上可接受的剂型。一般来说,制剂中有效成分的量为制剂总重量的1%-95%。用于口服时,可制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊剂等;用于注射时,可制成注射用的溶液或悬浮剂等。
本发明所述药物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。
本发明所述药物还可以含有药学上允许的辅料或载体,例如:粘合剂、稀释剂、赋形剂、填充剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稳定剂、悬浮剂、吸收促进剂、表面活性剂、色素、矫味剂、防腐剂、吸附载体等。
本发明所述药物的剂量可根据给药途径、患者年龄、体重、所治疗的疾病种类调整,可以一次或多次给药。
本发明具有以下有益效果:
本发明的研究显示,木蝴蝶具有明显的保护体内细胞免受氧化应激损伤的作用,特别是具有保护血管内皮细胞免受氧化应激损伤的作用。发明人通过研究发现,在细胞水平上,木蝴蝶可明显升高H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)氧化应激损伤模型的细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力以及Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白的表达;明显降低H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的释放以及细胞凋亡。
本发明开发了木蝴蝶作为体内抗氧化应激损伤剂的新用途,为木蝴蝶临床应用开辟了新的道路。
附图说明
图1为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型细胞活力(cell viability)的影响。
图2为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型细胞形态的影响。
图3为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型SOD(超氧化物歧化酶)水平的影响。
图4为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型CAT(过氧化氢酶)水平的影响。
图5为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型MDA(丙二醛)水平的影响。
图6为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型LDH(乳酸脱氢酶)水平的影响。
图7为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型细胞内活性氧(ROS)的影响;图中Fluorescence intensity为荧光强度。
图8为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型凋亡的影响,图中FITC为异硫氰酸荧光素,PI为碘化丙啶;其中,图A至图F分别为正常组、模型组、0.2μg/mL木蝴蝶给药组、0.4μg/mL木蝴蝶给药组、0.8μg/mL木蝴蝶给药组、1.6μg/mL木蝴蝶给药组的荧光染色流式细胞仪检测图。
图9为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型细胞核的影响。
图10为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型线粒体膜电位的影响。
图11为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型氧化应激蛋白的影响;图中为正常组、模型组、0.2μg/mL木蝴蝶给药组、0.4μg/mL木蝴蝶给药组、0.8μg/mL木蝴蝶给药组、1.6μg/mL木蝴蝶给药组的Western Blot的结果;其中,β-actin(β肌动蛋白)为Western Blot的内参。
图12为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型Nrf2蛋白表达的影响。
图13为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型HO-1蛋白表达的影响。
图14为木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型NQO-1蛋白表达的影响。
附图中,TFO指木蝴蝶提取物。
附图中的柱状图上方的标记表示:#:正常组与模型组相比,P<0.05;##:正常组与模型组相比,P<0.01;###:正常组与模型组相比,P<0.001;*:模型组与木蝴蝶给药组相比,P<0.05;**:模型组与木蝴蝶给药组相比,P<0.01;***:模型组与木蝴蝶给药组相比,P<0.001。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明,以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1 H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的建立
1.人脐静脉血管内皮细胞的获得
取对数期生长的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),胰酶消化后,以1000r/min离心5min,去除上清液后,加入完全培养液吹打至单个细胞状态,调整细胞密度为5×107/L。
2.细胞氧化应激损伤模型的建立
96孔板内,每孔加入100μL HUVEC,在37℃、5%CO2的培养条件下贴壁培养24h后,吸除上清,分别加入用DMEM培养液配成的2mmol/L、1mmol/L、800μmol/L、600μmol/L、400μmol/L、200μmol/L、100μmol/L的H2O2100μL,分别作用2h、4h、6h后,吸除上清,每孔加入90μLDMEM培养液、10μL MTT(5mg/mL)作用4h后吸除上清,每孔加入180μL的DMSO,置于振荡器上充分震荡10min,在570nm处测定吸光度。空白组中为不加细胞的DMEM培养基100μL。每组设6个复孔。
综合考虑选用200μmol/L的H2O2作用4h作为最佳建模条件。
实施例2木蝴蝶对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的细胞活力和细胞形态的影响
1.实验分组:分为6组,即正常组、模型组、不同剂量的木蝴蝶给药组(木蝴蝶剂量分别为0.2、0.4、0.8、1.6μg/mL)。
所用木蝴蝶为:将木蝴蝶干燥成熟种子用70%的乙醇回流提取后,采用AB-8大孔吸附树脂纯化富集所得的木蝴蝶提取物。
木蝴蝶提取物的制备方法如下:
(1)70%乙醇回流提取:将木蝴蝶干燥成熟种子打粉后,称取粉末,先加入10倍粉末质量的70%乙醇,浸泡过夜。80℃水浴回流提取90min,趁热过滤,向滤渣中再加入8倍滤渣质量的70%乙醇,继续回流提取60min,过滤合并两次提取液,旋蒸浓缩回收乙醇后,烘干,得木蝴蝶总提取物。
(2)AB-8大孔吸附树脂纯化富集:采用AB-8大孔吸附树脂,湿法装柱,将木蝴蝶总提取物用水混悬并稀释成6mg/mL,pH值为4~6,室温下以3~4BV/h的体积流量进行上样,上样至21个BV时达吸附饱和,静置过夜。先以6BV的水洗脱后弃去,再用6BV 70%乙醇解吸,得到70%乙醇的解析液,旋蒸浓缩回收乙醇,冷冻干燥得到木蝴蝶提取物,测得其收率为59%。
2.细胞活力的测定和细胞形态的观测:取实施例1步骤1中获得的HUVEC细胞种于96孔板内,每孔100μL,在37℃、5%CO2的培养条件下贴壁培养24h后,吸除上清,正常组和模型组加入100μL DMEM培养液,木蝴蝶给药组分别加入用DMEM培养液配成的不同浓度木蝴蝶提取物100μL,预培养24h后,吸除上清,除正常组外其他组再加入用DMEM培养液配成的200μmol/L的H2O2100μL,作用4h后,吸除上清,每孔加入90μL DMEM培养液、10μL MTT(5mg/mL),作用4h后吸除上清,每孔加入180μL的DMSO,置于振荡器上充分震荡10min,在570nm处测定吸光度。设空白组,空白组中为不加细胞的DMEM培养基100μL。每组设6个复孔。细胞活力(%)=各组吸光度值/空白组吸光度值×100%。
细胞活力测定结果如图1所示,根据SPSS20.0方差分析(one way ANOVA)的结果,与正常组相比,模型组的细胞活力明显下降;同时与模型组相比,木蝴蝶给药组的细胞活力明显升高,且随着木蝴蝶提取物剂量升高,细胞活力逐渐增强,结果有显著性差异。实验结果表明给药木蝴蝶提取物可明显升高模型细胞的细胞活力。
显微镜下细胞形态的观测结果如图2所示,与正常组比较,模型组HUVEC细胞数量减少,细胞形态皱缩或变圆;与模型组相比,随着木蝴蝶提取物剂量升高,木蝴蝶给药组HUVEC细胞数量逐渐增多,细胞形态也逐渐趋于正常。实验结果表明木蝴蝶可以减少暴露于H2O2的HUVEC中的细胞损伤。
实施例3木蝴蝶对H2O2的诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的SOD、CAT、MDA、LDH水平的影响
1.实验分组:与实施例2步骤1中的实验分组相同。
2.SOD、CAT、MDA、LDH水平测定:取实施例1步骤1中获得的HUVEC细胞种于100mm培养皿中,每皿10mL,在37℃、5%CO2的培养条件下贴壁培养24h后,吸除上清,正常组和模型组加入10mL DMEM培养液,木蝴蝶给药组分别加入用DMEM培养液配成的不同浓度木蝴蝶提取物10mL,预孵育24h后,吸除上清,除正常组外其他组加入200μmol/L的H2O2 10mL,作用4h后,收集上清液测LDH释放,收集细胞测SOD、CAT、MDA水平。
细胞SOD、CAT、MDA、LDH的水平测定结果如图3至图6所示,根据SPSS20.0方差分析(one way ANOVA)的结果,与正常组相比,模型组的SOD和CAT的活力明显下降,MDA和LDH的释放明显增加;同时与模型组相比,木蝴蝶给药组的模型细胞SOD和CAT的活力明显升高,MDA和LDH的释放明显减低,且随着木蝴蝶提取物剂量升高,对SOD、CAT活力的升高和对MDA、LDH释放的降低的影响逐渐增强,结果有显著性差异。实验结果表明给药木蝴蝶提取物能够明显提高H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的SOD和CAT水平,明显降低MDA和LDH释放。
实施例4木蝴蝶对H2O2的诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的细胞内活性氧的影响
1.实验分组:与实施例2步骤1中的实验分组相同。
2.细胞内活性氧(ROS)的产生:取实施例1步骤1中获得的HUVEC细胞种于12孔板内,每孔1mL,在37℃、5%CO2的培养条件下贴壁培养24h后,吸除上清,正常组和模型组加入1mL DMEM,木蝴蝶给药组分别加入用DMEM培养液配成的不同浓度木蝴蝶提取物1mL,预孵育24h后,吸除上清,除正常组外其他组加入200μmol/L的H2O21 mL,作用4h后吸除上清。用PBS洗涤三次后,加入500μL的DCFH-DA(用DMEM以1:1000的比例稀释),37℃恒温细胞培养箱内孵育20min,用DMEM洗涤细胞三次,用长时间实时动态成像仪检测荧光强度。
各组荧光强度检测结果如图7所示,荧光强度越高表明细胞内ROS水平越高,与正常组比较,模型组的细胞内ROS水平显著性升高(P=0.000<0.001);与模型组比较,剂量为0.8μg/mL、1.6μg/mL的木蝴蝶给药组的细胞内ROS水平极显著性降低(P=0.000<0.001)。实验结果表明木蝴蝶可以通过抑制细胞内ROS的产生而对细胞起到保护作用。
实施例5木蝴蝶对H2O2的诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的凋亡的影响
1.实验分组:与实施例2步骤1中的实验分组相同。
2.细胞凋亡的测定:取对数期生长的细胞种于100mm培养皿中,每皿10mL,在37℃、5%CO2的培养条件下贴壁培养24h后,吸除上清,正常组和模型组加入10mL DMEM培养液,木蝴蝶给药组分别加入用DMEM培养液配成的不同浓度木蝴蝶提取物10mL,预孵育24h后,吸除上清,除正常组外其他组加入200μmol/L的H2O210 mL,作用4h后,收集细胞,分别采用V-FITV/PI荧光双染试剂盒染色,采用流式细胞仪检测。细胞凋亡率为FITV+PI-(Q2象限)的凋亡细胞比例和FITV+PI+(Q3象限)的凋亡细胞比例的加和。
流式细胞仪检测结果如图8所示,与正常组相比,模型组的细胞凋亡率从2.24%明显增加到12.41%,0.2μg/mL木蝴蝶给药组、0.4μg/mL木蝴蝶给药组、0.8μg/mL木蝴蝶给药组、1.6μg/mL木蝴蝶给药组的细胞凋亡率分别降为5.2%、5.43%、2.78%和2.24%,细胞凋亡率逐渐回落到正常组的水平。实验结果表明给药木蝴蝶提取物能够减轻H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的凋亡。
实施例6木蝴蝶对H2O2的诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的细胞核的影响
1.实验分组:与实施例2步骤1中的实验分组相同。
2.细胞核的染色观察:取对数期生长的细胞种于100mm培养皿中,每皿10mL,在37℃、5%CO2的培养条件下贴壁培养24h后,吸除上清,正常组和模型组加入10mL DMEM,木蝴蝶给药组分别加入用DMEM培养液配成的不同浓度木蝴蝶提取物10mL,预孵育24h后,吸除上清,除正常组外其他组加入200μmol/的H2O210 mL,作用4h后,收集细胞,采用Hoechst 33258试剂盒进行荧光染色,使用荧光显微镜观察细胞核。
细胞核观察结果如图9所示,与正常组相比,模型组细胞核颜色发白,出现明显的核皱缩;与模型组相比,木蝴蝶给药组的细胞核皱缩明显改善。实验结果表明给药木蝴蝶提取物能够减轻H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的细胞核损伤。
实施例7木蝴蝶对H2O2的诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的线粒体膜电位的影响
1.实验分组:与实施例2步骤1中的实验分组相同。
2.线粒体膜电位的检测:取对数期生长的细胞种于100mm培养皿中,每皿10mL,在37℃、5%CO2的培养条件下贴壁培养24h后,吸除上清,正常组和模型组加入10mL DMEM,木蝴蝶给药组分别加入用DMEM培养液配成的不同浓度木蝴蝶提取物10mL,预孵育24h后,吸除上清,除正常组外其他组加入200μmol/的H2O210 mL,作用4h后,收集细胞,分别采用Hoechst33258试剂盒和JC-1试剂盒进行荧光染色,其中阳性组添加有10mM的CCCP(Carbonylcyanide 3-chlorophenylhydrazone,羰基氰化物3-氯苯腙),使用荧光显微镜对线粒体膜电位进行检测。
Hoechst 33258为特异性的DNA染料,可以染色活细胞和凋亡细胞的细胞核,根据核浓染程度可以判断细胞凋亡的情况,核浓染程度越高表明细胞凋亡程度越严重。JC-1有单聚体和多聚体两种存在形式,当线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,此时JC-1为单体(Monomer),可以产生绿色荧光,当线粒体膜电位较高时,JC-1聚集在线粒体的基质中形成聚合物(J-aggregates),可以产生红色荧光。
图10中,Merge图为Hoechst图、Monomer图和J-aggregates图的合并。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降。
线粒体膜电位检测结果如图10所示,与正常组相比,模型组的绿色荧光明显增强,表明线粒体膜电位明显降低,给药木蝴蝶提取物干预后,绿色荧光减弱,红色荧光增强,表明细胞线粒体膜电位明显改善。实验结果表明木蝴蝶提取物能够影响H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型中线粒体膜电位的变化。
实施例8木蝴蝶对H2O2的诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的氧化应激蛋白的影响
1.实验分组:与实施例2步骤1中的实验分组相同。
2.氧化应激蛋白的检测:取对数期生长的细胞种于100mm培养皿中,每皿10mL,在37℃、5%CO2的培养条件下贴壁培养24h后,吸除上清,正常组和模型组加入10mL DMEM,木蝴蝶给药组分别加入用DMEM培养液配成的不同浓度木蝴蝶提取物10mL,预孵育24h后,吸除上清,除正常组外其他组加入200μmol/L的H2O2 10mL,作用4h后,收集细胞,用RIPA强裂解液裂解细胞,用BCA法定量蛋白浓度,用Western Blot分析测定氧化应激蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白的表达。
图11为各组Nrf2、HO-1、NQO-1及β-actin(β肌动蛋白)的蛋白条带。采用Image J软件检测蛋白表达灰度值,以β-actin(β肌动蛋白)表达为内参计算蛋白相对表达,并采用SPSS20.0软件进行方差分析(one way ANOVA)得到图12至图14。
结果如图12至图14所示,与正常组相比,模型组氧化应激蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1的表达明显下降;与模型组相比,木蝴蝶给药组的氧化应激蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1的表达明显上升。实验结果表明,给药木蝴蝶提取物可明显提高H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的氧化应激蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1的表达。
在上述实施例2至实施例8中,通过研究不同剂量木蝴蝶提取物对H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤模型的影响,表明木蝴蝶具有保护血管内皮细胞免受氧化应激损伤的作用,提示了木蝴蝶在临床上作为体内抗氧化应激损伤剂的新用途。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.木蝴蝶在制备体内抗氧化应激损伤剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述木蝴蝶为紫葳科木蝴蝶属木蝴蝶的干燥成熟的种子。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述木蝴蝶为木蝴蝶提取物。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述木蝴蝶提取物的提取方法:将木蝴蝶用60%-80%的乙醇回流提取后,采用树脂纯化富集。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述树脂为大孔吸附树脂。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述木蝴蝶提取物的提取方法:将木蝴蝶用70%的乙醇回流提取后,采用AB-8大孔吸附树脂纯化富集。
7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述木蝴蝶可用于保护血管内皮细胞免受氧化应激损伤。
8.一种用于治疗和/或预防体内氧化应激损伤的药物,其特征在于,所述药物中含有木蝴蝶。
9.根据权利要求8所述的药物,其特征在于,所述木蝴蝶为木蝴蝶提取物。
10.根据权利要求8所述的药物,其特征在于,所述药物用于保护血管内皮细胞免受氧化应激损伤。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010896707.0A CN112007058A (zh) | 2020-08-31 | 2020-08-31 | 木蝴蝶作为抗氧化应激损伤剂的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010896707.0A CN112007058A (zh) | 2020-08-31 | 2020-08-31 | 木蝴蝶作为抗氧化应激损伤剂的应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112007058A true CN112007058A (zh) | 2020-12-01 |
Family
ID=73503912
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010896707.0A Pending CN112007058A (zh) | 2020-08-31 | 2020-08-31 | 木蝴蝶作为抗氧化应激损伤剂的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112007058A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114404561A (zh) * | 2022-03-18 | 2022-04-29 | 山东大学齐鲁医院(青岛) | 一种用于降低血管内皮功能损伤的保护剂 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104958330A (zh) * | 2015-06-05 | 2015-10-07 | 辽宁中医药大学 | 一种木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法及其应用 |
CN109602787A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-04-12 | 山西大学 | 连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物或食品中的应用 |
CN111588772A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-08-28 | 南方医科大学 | 一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物及其制备方法和应用 |
-
2020
- 2020-08-31 CN CN202010896707.0A patent/CN112007058A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104958330A (zh) * | 2015-06-05 | 2015-10-07 | 辽宁中医药大学 | 一种木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法及其应用 |
CN109602787A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-04-12 | 山西大学 | 连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物或食品中的应用 |
CN111588772A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-08-28 | 南方医科大学 | 一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
李云贵 等: "木蝴蝶黄酮粗提物体外抗氧化活性研究", 《广州化工》 * |
王岚等: "5种中药醇提物对ox-LDL损伤心肌微血管内皮细胞的保护作用研究", 《中国实验方剂学杂志》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114404561A (zh) * | 2022-03-18 | 2022-04-29 | 山东大学齐鲁医院(青岛) | 一种用于降低血管内皮功能损伤的保护剂 |
CN114404561B (zh) * | 2022-03-18 | 2022-11-01 | 山东大学齐鲁医院(青岛) | 一种用于降低血管内皮功能损伤的保护剂 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Geng et al. | Preventive and therapeutic effect of Ganoderma lucidum on kidney injuries and diseases | |
TWI598104B (zh) | Use of Antrodia cinnamomea extract to improve side effects of chemotherapy | |
KR20150083467A (ko) | 과민성 방광 및 방광의 염증 치료 또는 예방용 조성물 | |
WO2021104213A1 (zh) | 一种茯茶提取物在制备抗真菌药物中的应用 | |
CN104688760B (zh) | 一种由柴胡皂苷a和牛磺酸组成的药物组合物及其用途 | |
CN100569234C (zh) | 具有神经保护作用的银杏总内酯组合物 | |
CN112007058A (zh) | 木蝴蝶作为抗氧化应激损伤剂的应用 | |
CN107158008B (zh) | 一种治疗心肌梗死的药物组合物 | |
WO2021142920A1 (zh) | 一种治疗肺癌的中药组合物及其制剂和应用 | |
CN104027428B (zh) | 一种中药复方的制备方法及在防治老年痴呆症中的应用 | |
CN101856350A (zh) | 黄芩素在制备预防和治疗帕金森病药物中的应用 | |
US11638736B2 (en) | Compositions for preventing or treating diseases or disorders associated with neuro-inflammation, neuro-apoptosis, or neuro- oxidative damage and uses thereof | |
CN103285022B (zh) | 用于制备治疗多囊卵巢综合征的中药单体组合物及其制备方法 | |
CN110859849A (zh) | 薯蓣皂苷在制备帕金森病保护药物中的应用 | |
CN104069194B (zh) | 一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法和用途 | |
CN111228323A (zh) | 鹿草醇提物在制备预防和/或治疗心肌缺血性疾病药物中的应用 | |
CN115919850B (zh) | 一种抗阿霉素心脏毒性的中药单体组合物及其制备方法和应用 | |
CN104435067B (zh) | 一种具有心肌保护作用的杜仲组分组合物及其制剂 | |
CN108743654B (zh) | 一种用于治疗缺血性心脏病的中药组合物及其制备方法和应用 | |
CN110051671B (zh) | 马齿苋酰胺e用于制备治疗缺血性心脏病的药物的用途 | |
CN107496390A (zh) | 原苏木素a衍生物在保护化疗药物所致心脏损伤中的应用 | |
CN1692916A (zh) | 复方甘露醇的药物制剂及其制备方法 | |
CN115844933A (zh) | 忧遁草总黄酮在制备抗心力衰竭药物中的应用 | |
CN113041275A (zh) | 用于治疗前列腺炎或前列腺增生的组合物及其制剂 | |
CN117398433A (zh) | 一种丹参保心茶在制备防治认知功能障碍药物中的新应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201201 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |