TWI598104B - Use of Antrodia cinnamomea extract to improve side effects of chemotherapy - Google Patents

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Description

牛樟芝子實體萃取物用於改善化療副作用之用途
本發明係有關於一種牛樟芝萃取物及其應用，特別是指一種牛樟芝子實體萃取物用於製備改善化療副作用之醫藥組合物之用途。
牛樟芝(或稱牛樟菇；Antrodia cinnamomea)為台灣特有種菇菌類，僅生長於台灣中高海拔(400~2000公尺)山區特有之牛樟樹上，為原住民習知具保肝與解酒等用途之珍貴菇類。西元1995年迄今的研究結果顯示牛樟芝子實體具有抗發炎、增強免疫力與體力、抗病毒、抗氧化、抗癌與保肝等多種功效，並有多篇文獻直接以動物模式(in vivo)進行抗癌研究，包括肝癌、肺癌、大腸癌及卵巢癌等證實牛樟芝子實體乙醇萃取物具顯著抗癌效果。然而牛樟椴木取得不易，導致子實體原料成本太高，此外，仍存在無法穩定大量供貨、易有雜菌與重金屬污染等疑慮考量，因此尚缺乏藥物開發誘因，致使台灣特有牛樟芝開發為植物新藥之進程遲遲無法推展。因此，可大量、穩定、無雜菌與重金屬污染之高質量牛樟芝子實體原料量產技術開發是目前迫切的議題。
正常身體組織，以醣類、蛋白質、脂肪來作為能量的需求；然而，癌細胞/組織生長迅速且單純以葡萄糖作為熱量的唯一來源，因此癌細胞生長將會消耗大量葡萄糖，所以在癌症患者體內會大量將蛋白質及脂 肪被轉換為葡萄糖，以提供癌細胞生長所需的能量。此外，癌組織會影響人體內蛋白質的生合成，致肌肉組織降解流失，病人的味覺、嗅覺和胃口會大幅降低。最終，則會造成大部份癌患者出現嚴重營養不良，器官功能受損與免疫功能低下等惡病質病徵。
肺癌是目前全球盛行率與死亡率最高的癌種之一。主要可區分為「小細胞肺癌」(發生率約16.8%)和「非小細胞肺癌」(發生率約80.4%)二種。治療肺癌最常採用手術治療、放射線治療與藥物治療(含化療與標靶藥物)等；其中，化療藥已是醫生治療肺癌的首要選擇之一，目前第一線治療的藥物是健擇(gemcitabine)及順鉑(cisplatin)，第一線化療組合的效果平均可維持半年以上，之後腫瘤如果無法控制，須改用第二線化療藥物(單一種藥物)，例如注射型的健澤或紫杉醇，或有口服及靜脈注射的溫諾平等，皆是肺癌患者可選擇的第二線用藥。化療法雖然可以成功殺死癌細胞，但卻會沒有選擇性地一併殺死正常細胞，通常會對病人的免疫、造血系統造成嚴重損傷，致使好的細胞和壞的細胞“同歸於盡”，此外，化療對一般增殖也較快的正常細胞包括口腔和胃腸道的表層上皮、骨髓的造血細胞以及產生毛髮的毛囊細胞等亦造成影響，因此，常有乏力、噁心、嘔吐、血細胞減少、脫髮、口腔潰瘍和疼痛等嚴重副作用。
鑑於化療副作用的產生會造成癌症患者身體不適，進而影響癌症患者是否能持續完成整個療程，因此在進行化療同時，搭配輔助治療的介入，可以讓癌症患者在進行化療的同時，可以減輕及改善化療所造成的身體不適，進而順利完成整個療程。近來以西藥為主的開發不斷遭遇瓶頸，甚至部份在臨床使用上常見嚴重的副作用，因此逐漸轉往以天然植物 藥為主的研發。而利用牛樟芝為輔助治療改善化療所產生的不適應性，也有包括減緩小鼠由順鉑產生肝毒性、小鼠發炎性腸病及腸癌惡病質減緩作用及輔助乳癌用藥等研究報導，證實牛樟芝可能具有輔助化療藥物進而達到增效減毒之效果。
有鑒於此，本發明的主要目的是提供一種牛樟芝子實體萃取物用於改善化療副作用之用途，將牛樟芝子實體萃取物用來輔助化療藥物順鉑及健擇提高治療癌症之效果，並且，可有效減輕化學治療癌症後之掉毛髮、肌肉降解與萎縮、腸胃道與腎發炎損傷等副作用。
為實現上述目的，本發明提供一種用於輔助化療藥物之醫藥組合物，其包含有效劑量之牛樟芝子實體萃取物和醫藥學上可接受之載劑，以藉由牛樟芝子實體萃取物達到輔助化療藥物治療癌症及改善癌症副作用，化療藥物為順鉑及健擇。
本發明所採用之牛樟芝子實體萃取物的主要成份包含具有結構式(I)之樟菇酸K(antcin K)、樟菇酸C(antcin C)、樟菇酸H(antcin H)及其化學衍生物： 其中，R1為-OH、=O或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；R2為-H、-OH或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基； R3為-OH、=O或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；R4為-H、-OH或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；及R5為C1-3羧基或C1-3酯基。
又者，牛樟芝子實體萃取物的成份也包含具有結構式(II)之去氫硫色多孔菌酸(dehydrosulphurenic acid)與去氫齒孔酸(Dehydroeburicoic acid)及其化學衍生物： 其中，R1為-H、-OH或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；R2係為-OH或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；及R3係為C1-3羧基或C1-3酯基。
再者，牛樟芝子實體萃取物的成份還包含具有結構式(III)之樟菇酸B(antcin B)與樟菇酸A(antcin A)及其化學衍生物： 其中，R1為-H或=O；及R2為C1-3羧基或C1-3酯基。
另外，牛樟芝子實體萃取物的成份更包含具有結構式(IV)之單酚類化合物(4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole，DMB)及其化 學衍生物： 其中，R1為-OH、=O或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；R2為-H、-OH、=O或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；R3為-H、-OH或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；R4為-H或甲基；R5為-H、-OH、甲基或-O-糖基(可為單糖或雙糖或多糖類)或C1-3酯基；及R6為-H或甲基。
另一方面，本發明也提供一種醫藥組合物之用途，此醫藥組合物包含有效劑量之牛樟芝子實體萃取物及醫藥學上可接受之載劑，其用途乃是用以輔助化療藥物治療癌症及改善癌症副作用。其中，化療藥物為順鉑及健擇。較佳地，牛樟芝子實體萃取物的有效劑量為5.06~18.75毫克/公斤(mg/kg)。
動物模式結果證實，本發明之牛樟芝子實體萃取物合併化療藥物(順鉑及健擇)治療組可顯著降低肺癌組肺重量達69.4%(p<0.005)，並較單獨化療藥物組肺重量顯著降低30.6%(p<0.01)；肺腫瘤結節數方面，牛樟芝子實體萃取物合併化療藥物(順鉑及健擇)治療組較肺癌組降低55.4%；改善肌肉降解與萎縮方面，牛樟芝子實體萃取物合併化療藥物(順 鉑及健擇)治療組較單獨化療藥物組試驗鼠大腿肌肉肌肉重量增加42%(p<0.01)，且明顯抑制化療藥物(順鉑及健擇)試驗鼠肌肉中蛋白酶(proteasome)酵素活性，包括糜蛋白酶(chymotrypsin)、胰蛋白酶(trypsin)與半胱氨酸蛋白酶(caspase)等，分別達28%(p<0.01)、26.1%(p<0.01)與11.1%。改善腸胃道損傷方面，牛樟芝子實體萃取物可大幅改善化療藥物(順鉑及健擇)造成的腸絨毛破壞與胃部潰瘍等副作用，且可明顯改善小腸中白胺酸胺基酵素(LAP)、脂解酵素(LIP)與澱粉分解酵素(amylase)等酵素活性；改善腎發炎與損傷方面，牛樟芝子實體萃取物可有效降低化療後腎炎指數，如肌酐(creatinine)、尿素氮(BUN)與血清白蛋白(serum albumin)等。
因此，本發明已經證實利用此牛樟芝子實體萃取物可應用於輔助化療藥物，並可進一步調製為各種不同劑型的醫藥組成物，來提高癌症治療效果及減輕化療副作用。
底下藉由具體實施例詳加說明，當更容易瞭解本發明之目的、技術內容、特點及其所達成之功效。
第1圖，為本發明所提供之用於輔助化療藥物之牛樟芝子實體萃取物的製作方法之步驟流程圖。
第2圖，為本發明之牛樟芝子實體萃取物之HPLC分析圖譜。
第3圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物改善化療藥物造成小鼠體重下降之效果。
第4圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物改善化療藥物造成小鼠進食量下降之效果；其中(a)為Normal組，(b)為Cancer組，(c)為CGC組，(d)為CGCA組，而(e)為CA組。
第5圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物降低肺癌鼠肺重量之效果；其中(a)為Normal組，(b)為Cancer組，(c)為CGC組，(d)為CGCA組，而(e)為CA組。
第6圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物降低肺癌鼠肺腫瘤結節數之效果；其中(a)為Normal組，(b)為Cancer組，(c)為CGC組，(d)為CGCA組，而(e)為CA組。
第7圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物改善化療藥物造成試驗鼠肌肉降解與萎縮之效果；其中(a)為Normal組，(b)為Cancer組，(c)為CGC組，(d)為CGCA組，而(e)為CA組。
第8圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物抑制化療藥物試驗鼠肌肉中蛋白酶酵素活性之效果。
第9a~9b圖，分別顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物可抑制肌肉降解因子表現及促進肌肉生成因子表現之效果；其中(a)為Normal組，(b)為Cancer組，(c)為CGC組，(d)為CGCA組，而(e)為CA組。
第10a~10c圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物抑制癌症化療藥物造成血液發炎因子上升之效果；其中(a)為Normal組，(b)為Cancer組，(c)為CGC組，(d)為CGCA組，而(e)為CA組。
第11a~11c圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物改善使用癌症化療 藥物後小腸中酵素表現之效果；其中(a)為Normal組，(b)為Cancer組，(c)為CGC組，(d)為CGCA組，而(e)為CA組。
第12a~12c圖，顯示本發明之牛樟芝子實體萃取物改善使用癌症化療藥物造成腎發炎損傷之效果；其中(a)為Normal組，(b)為Cancer組，(c)為CGC組，(d)為CGCA組，而(e)為CA組。
第13圖，顯示不同劑量之牛樟芝子實體萃取物合併癌症化療藥物對試驗鼠體重之影響。
以下數個實施例將進一步說明本發明如何製備牛樟芝子實體萃取物及其動物試驗方法和流程，並同時用以驗證本發明之功效和目的。
實施例1：牛樟芝子實體萃取物的製備方式與高效液相層析分析
1、本發明所採用之牛樟芝子實體符合CNS15654草案之規格標準，菇體直徑約達13公分，以解剖顯微鏡觀察表面可清楚分辨具牛樟芝子實體特有之多孔化特徵，且單片菇體乾重約6~15公克。
2、牛樟芝子實體萃取物的製備
請參照第1圖，說明牛樟芝子實體萃取物的萃取分離製程，其步驟包含：首先，如步驟S10，取牛樟芝子實體乾燥粉末，如步驟S20，第一道萃取過程是以30倍體積的80~100℃熱水浸泡1~3小時，如步驟S30，以1號濾紙(ADVANTEC® #1)抽氣過濾後，去除浸泡液，如步驟S40，在進行第二道萃取過程，以低極性溶劑，如5倍95%乙醇溶液，萃取8小時共3次，如步驟S50，收集萃取液，將所得萃取液經減壓濃縮乾燥後，即得牛 樟芝子實體萃取物。
其中低極性溶劑可選自石油醚、正己烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇及其組合所組成之群組；以乙醇為例，其可為25~100重量%乙醇溶液。
3、高效液相色層析分析
以高效液相色層析分析儀分析牛樟芝子實體萃取物之成分。高效液相層析的條件如下：高效液相層析儀幫浦為Spectra SYSTEM P1000；自動取樣器為Spectra SYSTEM AS3000；偵測器為Surveyor PDA Plus；高效液相層析管柱為Thermo,BDS HYPERSIL C18,4.6*250mm；流速為1.0mL/min；管柱溫度為室溫；偵測波長為254nm。溶媒系統條件如下表一：
第2圖為本發明之牛樟芝子實體萃取物之HPLC分析圖譜。結果顯示本發明所使用之牛樟芝子實體具有與原生牛樟芝子實體相符之8個化學指標成份：樟菇酸A((R,S)Antcin A)、樟菇酸B((R,S)Antcin B； Zhankuic acid A)、樟菇酸C((R,S)Antcin C)、樟菇酸K((R,S)Antcin K)、樟菇酸H((R,S)Antcin H)、單酚類化合物(4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole，DMB)、去氫硫色多孔菌酸(Dehydrosulphurenic acid)與去氫齒孔酸(Dehydroeburicoic acid)。
實施例2：本發明之牛樟芝子實體萃取物輔助化療藥物(順鉑及健擇)提昇肺癌治療效果之動物試驗
本試驗採用LLC(Lewis Lung Carcinoma)/C57BL/6肺癌動物模式，試驗中所使用動物為male C57BL/6 mice 8週大，體重約為25克。飼養環境提供12小時光照週期(AM 7：00-PM 7：00)，並有適當溫度及濕度控管，並充份供應飼料與飲水。所使用之癌細胞株為小鼠肺癌细胞LLC，培養在含有10% heat-inactivated fetal bovine serium(FBS)、100unit/mL Penicillin-Streptomycin(P/S)的Dulbecco's Modified eagle medium(DMEM medium)環境中。將LLC細胞，利用0.05% Trypsin-EDTA將細胞收下。使用FBS稀釋調整細胞濃度到2×107cells/mL，將調整好濃度的細胞利用軟針將癌細胞原位注射0.1mL到8週大的C57BL/6 mice氣管內，並沿氣管滑落肺腔內(即每隻小鼠轉植2×106cells)。
於接種完腫瘤後一週，小鼠以5隻為一組，隨機分籠，共區分為5組：1.正常組(代號Normal組)：正常小鼠，餵食生理食鹽水；2.腫瘤組(代號Cancer組)：接種癌細胞小鼠，餵食生理食鹽水；3.腫瘤+化療藥物組(代號CGC組)：接種癌細胞小鼠：施打順鉑與健擇之臨床化療藥物； 4.腫瘤+牛樟芝子實體萃取物+化療藥物組(代號CGCA組)：接種癌細胞小鼠：施打順鉑與健擇之臨床化療藥物，合併餵食牛樟芝子實體萃取物300mg/kg/day；及5.腫瘤+牛樟芝子實體萃取物(代號CA組)：餵食牛樟芝子實體萃取物300mg/kg/day。
於腫瘤接種誘發後十天，開始予以待測藥物。於實驗中每天觀察小鼠存活及生理狀況(體重及進食量)。連續給藥三周(或四周，依實.驗設計)後終止實驗，並犧牲動物，取出各器官後秤重、拍照記錄並進行病理分析；將剩餘各器官放置1.5mL離心管中，置於-80℃冰箱保存進行後續分析。試驗結果展示於第3~6圖。
體重觀察方面，請參照第3圖，試驗結果顯示連續三個星期的餵食牛樟芝子實體萃取物後，Normal組試驗鼠體重平均為25.43克；Cancer組試驗鼠體重僅19.03克，較Normal組體重減輕約25.2%；CGC組試驗鼠體重最輕僅17.82克，較Cancer組體重再減輕約6.4%；而CGCA組試驗鼠體重因餵食牛樟芝子實體萃取物平均體重達20.01克，較Cancer組體重增加約5.1%；CA組因餵食牛樟芝子實體萃取物平均體重達22.21克，較Cancer組體重增加約16.7%。
進食量觀察方面，請參照第4圖，試驗結果顯示Normal組試驗鼠每日進食量約3.55±0.24克，Cancer組試驗鼠每日進食量約2.59±0.60克，較Normal組試驗鼠進食量下降約27%，CGC組試驗鼠每日進食量僅2.51±0.76克，較Cancer組試驗鼠進食量再下降約3.0%，而餵食牛樟芝子實體萃取物之CGCA組與CA組之進食量分別為2.65±0.64克及3.02±0.38克，較 Cancer組試驗鼠進食量分別提昇了2.3%與16.6%，具有明顯改善化療藥物造成試驗進食量下降之效果。
降低試驗鼠原位肺癌生長方面，由外觀觀察結果顯示CGCA組明顯較CGC組具降低肺癌生長效果；再由肺重量分析結果，請參照第5圖，其顯示Normal組試驗鼠肺重量約為0.16±0.01克，Cancer組肺重量明顯變重達1.11±0.14克，較Normal組試驗鼠肺重量增加約593.8%，CGC組肺重量降低至0.49±0.07克，較Cancer組試驗鼠肺重量減少約55.9%，而化療藥物加牛樟芝子實體萃取物之CGCA組肺重量僅約0.34±0.05克，較Cancer組試驗鼠肺重量減少約69.4%，與CGC組具顯著差異(p<0.01)；此外，餵食牛樟芝子實體萃取物的CA組，較Cancer組試驗鼠肺重量減少約42.3%，明顯較具降低肺癌鼠肺重量之效果(p<0.005)。
第6圖為肺癌鼠肺腫瘤結節數結果，Cancer組肺癌結節數達53.4±3.39顆，而餵食牛樟芝子實體萃取物的CA肺癌結節數為38.2±3.48顆，較Cancer組試驗鼠肺結節數減少約28.5%，與Cancer組具明顯差異(p<0.005)。此外，CGCA組肺癌結節數僅為23.8±3.68顆，較Cancer組試驗鼠肺結節數減少約55.4%，亦比單純CGC組為31.4±4.13顆為低。
實施例3：牛樟芝子實體萃取物改善化療藥物(順鉑及健擇)造成掉毛髮之效果
試驗方法同實施例2，試驗鼠於連續給藥三周後終止實驗，觀察並拍照各組試驗鼠之掉毛髮情形，此試驗結果顯示CGC組明顯較Normal組產生掉毛髮現象，此外，CGC組掉毛髮情形嚴重，餵食牛樟芝子實體萃取物之CGCA組可明顯改善CGC組掉毛髮情形。
實施例4：牛樟芝子實體萃取物改善癌症化療藥物(順鉑及健擇)造成肌肉降解與萎縮之效果
試驗方法同實施例2。試驗鼠於連續給藥三周後終止實驗並犧牲動物，以統計分析各組腓腸肌(Gastrocnemius muscle)及比目魚肌(Soleus muscle)重量變化，並利用病理組織切片染色觀察肌肉組織atrophy改善情況，此外，分析肌肉中主要蛋白酶(proteasome)包括糜蛋白酶(chymotrypsin)、胰蛋白酶(trypsin)與半胱氨酸蛋白酶(caspase)等活性變化。由各組試驗犧牲後大腿肌肉比較結果，其顯示Cancer組與CGC組明顯較Normal組細小，餵食牛樟芝子實體萃取物之CGCA組與CA組具可明顯改善大腿肌肉降解與萎縮情形。
肌肉外觀與重量分析方面，請參照第7圖，結果顯示Normal組腓腸肌(Gastrocnemius muscle)及比目魚肌(Soleus muscle)重量約為1.28±0.07克，Cancer與CGC組重量分別降低至0.6±0.03克(較Normal組降低53.1%)與0.57±0.05克(較Normal組降低55.5%)，明顯較其他各組萎縮；然而，餵食牛樟芝子實體萃取物之CGCA組及CA組其肌肉重量分別可達0.81±0.11(較Cancer組增加35%)及0.90±0.04克(較Cancer組增加50%)，可明顯改善CGC組肌肉降解與萎縮現象(p<0.01)。由肌肉病理組織切片H&E染色結果，其顯示餵食牛樟芝子實體萃取物之CGCA組與CA組可明顯改善化療藥物造成肌肉降解之效果。第8圖之試驗結果顯示化療藥物組(CGC組)肌肉中之糜蛋白酶與胰蛋白酶等蛋白酶酵素活性為所有試驗組中最高，餵食牛樟芝子實體萃取物之CGC組可明顯降低其活性(p<0.01)；而執行細胞凋亡機制之半胱氨酸蛋白酶酵素活性於CGC組最高，餵食牛樟芝子實體萃 取物有助於降低肌肉中因化療藥物處理後蛋白酶酵素活性。其作用機制推測可能是透過抑制肌肉降解因子(myostatin)與促進肌肉生成因子(IGF-1)表現來達成(第9a~9b圖)。
實施例5：牛樟芝子實體萃取物抑制癌症化療藥物(順鉑及健擇)造成血液發炎因子上升之效果
試驗方法同實施例2。試驗鼠於連續給藥三周(或四周，依實驗設計)後終止實驗並犧牲動物，抽取血液並分析各組血液中介白素6(IL-6)、介白素1β(IL-1β)及腫瘤壞死因子α(TNF-α)之變化。第10a~10c圖之試驗結果顯示各組血液中IL-6、IL-1β及TNF-α等發炎因子濃度以CGC組最高，而餵食牛樟芝子實體萃取物之CGCA組則可明顯降低血液中IL-6、IL-1β及TNF-α等發炎因子濃度(p<0.01)。
實施例6：牛樟芝子實體萃取物改善癌症化療藥物(順鉑及健擇)造成腸胃道損傷之效果
試驗方法同實施例2。試驗鼠於連續給藥三周(或四周，依實驗設計)後終止實驗並犧牲動物，以製作小腸絨毛病理切片並以H&E染色觀察絨毛破壞情形，結果顯示牛樟芝子實體萃取物可大幅改善化療藥物(順鉑及健擇)造成的腸絨毛破壞與胃部潰瘍等副作用，且可明顯改善小腸中白胺酸胺基酵素(LAP)、脂解酵素(LIP)與澱粉分解酵素(amylase)等酵素活性(第11a~11c圖)。
實施例7：牛樟芝子實體萃取物改善癌症化療藥物(順鉑及健擇)造成腎發炎損傷之效果
試驗方法同實施例2。試驗鼠於連續給藥三周(或四周，依 實驗設計)後終止實驗並犧牲動物，抽取血液並分析各組血液中肌酐(creatinine)、尿素氮(BUN)及血清白蛋白(serum albumin)等濃度，結果顯示牛樟芝子實體萃取物可顯著降低化療藥物(順鉑及健擇)試驗鼠血中腎炎指數之肌酐(creatinine)、尿素氮(BUN)及血清白蛋白(serum albumin)(第12a~12c圖)。
實施例8：牛樟芝子實體萃取物輔助化療藥物(順鉑及健擇)治療肺癌之劑量試驗
本試驗藉由皮下癌細胞注射模式評估腫瘤生長惡化情況。實驗中所使用動物為male C57BL/6 mice 8週大，體重約為25克。飼養環境提供12小時光照週期(AM 7：00-PM 7：00)，並有適當溫度及濕度控管，並充份供應飼料與飲水。所使用之癌細胞株為小鼠肺癌细胞LLC。
鼠肺癌細胞株(LLC)培養在含有10% heat-inactivated fetal bovine serium(FBS)、100unit/ml Penicillin-Streptomycin(P/S)的Dulbecco's Modified eagle medium(DMEM medium)環境中，並將細胞培養於5% CO2，37℃及溼度90%恆溫的二氧化碳培養箱內，使細胞密度維持在2×105~1×106(八至九分滿)。每二至三天固定更換一次新鮮培養基。
將LLC細胞，利用0.05% Trypsin-EDTA將細胞收下。使用FBS稀釋調整細胞濃度到1×107cells/mL，取用調整好濃度的細胞利用胰島針將癌細胞皮下注射0.1mL到8週大的C57BL/6 mice右背側皮下內(即每隻小鼠轉植1×106cells)。
於種完腫瘤後一週，小鼠以5隻為一組，隨機分籠，組別分為5組： 1.腫瘤組(代號Cancer組)：接種癌細胞；2.腫瘤+化療藥物組(代號CGC組)：接種癌細胞，施打順鉑與健擇之臨床化療藥物；3.腫瘤+牛樟芝子實體萃取物+化療藥物組(代號CGCA300組)：接種癌細胞，施打順鉑與健擇之臨床化療藥物，合併餵食牛樟芝子實體萃取物300mg/kg/day；4.腫瘤+牛樟芝子實體萃取物+化療藥物組(代號CGCA150組)：接種癌細胞，施打順鉑與健擇之臨床化療藥物，合併餵食牛樟芝子實體萃取物150mg/kg/day；及5.腫瘤+牛樟芝子實體萃取物+化療藥物組(代號CGCA75組)：接種癌細胞接種癌細胞，施打順鉑與健擇之臨床化療藥物，合併餵食牛樟芝子實體萃取物75mg/kg/day。
於腫瘤種植誘發後十天，開始予以待測藥物。每三天觀察腫瘤之生長情形，並測量腫瘤大小(體積)，計算腫瘤大小之計算公式：0.53 x 長x寬2。投藥兩周後停止給予藥物，隔天犧牲老鼠，並於實驗過程中評估觀察腫瘤大小、掉毛髮體重改善及餵食量等。資料的表示方法為mean±SEM。使用SigmaPlot來進行數據處理、分析及繪圖。
體重與掉毛髮觀察方面，請參照第13圖，結果顯示試驗結束後Cancer組試驗鼠體重可達26.2克，化療藥物組(CGC組)試驗鼠體重僅18.3克(較Cancer組體重減輕30%)，而不同劑量之牛樟芝子實體萃取物的CGCA75組、CGCA150組及CGCA300組之試驗鼠體重分別為21.7、21.9與22.1克，即較CGC組體重分別增加18.6%、19.6%與20.8%。結果顯示只要使 用75mg/kg牛樟芝子實體萃取物即可顯著改善化療藥物(順鉑及健擇)造成之體重減輕現象。由各組試驗鼠掉毛髮情形之觀察，結果顯示牛樟芝子實體萃取物之使用劑量為75mg/kg以上時，即可顯著改善化療藥物(順鉑及健擇)造成試驗鼠毛色偏灰與掉毛現象。
降低試驗鼠肺癌生長方面，由外觀觀察結果顯示Cancer組腫瘤最重，與CGC組具極顯著差異(p<0.001)，而CGCA150組與CGCA300組相對於CGC組亦達極顯著差異(p<0.001)，結果顯示牛樟芝子實體萃取物可顯著提昇化療藥物(順鉑及健擇)對肺癌之治療效果。
根據上述實施例，本發明所提供之牛樟芝子實體萃取物能夠有效用於輔助化療藥物(如順鉑及健擇)提高抑制肺癌效果並可改善化學治療後之掉毛髮、肌肉降解與萎縮、腸胃道與腎發炎損傷等用途，將可進一步調製為各種不同劑型的醫藥組合物，以應用於輔助化療藥物之治療。
此醫藥組合物至少包含有效劑量之牛樟芝子實體萃取物及醫藥學上可接受之載劑，且可製作成口服藥劑型式，包含但不限定於藥錠、膠囊、滴丸、乳劑、沖劑、水性懸浮液、分散液與其他溶液，可應用於輔助化療藥物治療癌症及改善癌症副作用。再者，基於本發明之實施例中，牛樟芝子實體萃取物所使用的劑量範圍為75~300毫克/公斤(mg/kg)，但考量含水率約25%，則其小鼠動物模式有效劑量較佳為56~225mg/kg。
簡而言之，根據本發明所揭露的用於輔助化療藥物之醫藥組合物及其用途，確實非常適合搭配化療藥物一併投予癌症患者來提高治療效果及減輕化療副作用，對於未來臨床上癌症治療將提供實質上的幫助。
唯以上所述者，僅為本發明之較佳實施例而已，並非用來限 定本發明實施之範圍。故即凡依本發明申請範圍所述之特徵及精神所為之均等變化或修飾，均應包括於本發明之申請專利範圍內。

Claims (6)

  1. 一種牛樟芝子實體萃取物之用途，其係用於製備改善化療副作用之醫藥組合物，該醫藥組合物係與一化療藥物結合使用，該化療副作用係為使用該化療藥物治療癌症過程中所導致之肌肉降解與萎縮、腸胃道損傷、血液發炎因子表現或腎發炎損傷，該化療藥物為順鉑(cisplatin)或健擇(gemcitabine)；其中，該牛樟芝子實體萃取物係由下列步驟所製得：將牛樟芝子實體以80~100℃熱水浸泡1~3小時，去除浸泡液後，再將該牛樟芝子實體以低極性溶劑萃取，而獲得該牛樟芝子實體萃取物，該低極性的溶劑係選自石油醚、正己烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇及其組合所組成之群組；該肌肉降解與萎縮之改善，係指增加四肢肌肉重量、抑制肌肉降解因子之表現、促進肌肉生成因子之表現量或抑制肌肉蛋白酶酵素活性，該蛋白酶酵素為糜蛋白酶、胰蛋白酶或半胱氨酸蛋白酶；該腸胃道損傷之改善，係指改善腸絨毛破壞與胃部潰瘍或增加小腸中酵素的表現量，該小腸中酵素為白胺酸胺基酵素、脂解酵素或澱粉分解酵素；該血液發炎因子表現量之改善，係指降低血液中發炎因子之表現量，該血液中發炎因子為介白素6(IL-6)或介白素1β(IL-1β)或腫瘤壞死因子α(TNF-α)；及該腎發炎損傷之改善，係指降低腎發炎指數，該腎發炎指數為肌酐(creatinine)、尿素氮(BUN)或血清白蛋白(serum albumin)。
  2. 如請求項1所述之用途，其中該癌症為肺癌。
  3. 如請求項1所述之用途，其中該牛樟芝子實體萃取物的小鼠動物模式有效劑量為56~225毫克/公斤(mg/kg)。
  4. 如請求項1所述之用途，其中該牛樟芝子實體萃取物之活性成份包含樟菇酸K、樟菇酸C、樟菇酸H、去氫硫色多孔菌酸、去氫齒孔酸、樟菇酸B、樟菇酸A或單酚類化合物。
  5. 如請求項1所述之用途，其中該醫藥組合物係為藥錠、膠囊、滴丸、乳劑、沖劑、水性懸浮液或分散液之口服藥物劑型。
  6. 如請求項1所述之用途，其中該牛樟芝子實體萃取物的人體有效劑量為5.06~18.75毫克/公斤。
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