TWI442920B

TWI442920B - 香椿萃取物於減少體重或以降低體脂肪之藥物上之用途

Info

Publication number: TWI442920B
Application number: TW100102714A
Authority: TW
Inventors: Sue Joan Chang; Wen Cheng Huang
Original assignee: Univ Nat Cheng Kung
Priority date: 2011-01-25
Filing date: 2011-01-25
Publication date: 2014-07-01
Also published as: TW201231046A

Description

香椿萃取物於減少體重或以降低體脂肪之藥物上之用途

本發明係關於一種用於治療代謝症候群之醫藥組成物或香椿萃取物，尤指一種用於減少體重或降低體脂肪之醫藥組成物或香椿萃取物。

隨著經濟蓬勃發展，人類的飲食習慣逐漸趨向精緻化，導致現代人攝取過多的醣類與脂肪而導致肥胖。肥胖的問題往往衍生出多種疾病，如心血管疾病、第二類型糖尿病、肝膽疾病、癌症等。在此，所謂的肥胖症主要是指體內累積過多的脂肪，而過多的脂肪會影響身體的正常代謝機制。

據統計研究顯示，下腹部肥胖者是罹患心血管疾病的高危險群，且肥胖也是造成高血壓及糖尿病之因素之一。因此，肥胖確實是造成罹患心血管疾病的高危險因子。此外，根據國際癌症研究組織之研究顯示，部分之停經後乳癌、大腸直腸癌、腎臟癌、食道癌、及子宮內膜癌之發生因素，與體重過重及肥胖有極大的關係。

肥胖除了導致上述之心血管疾病及癌症外，更是誘發脂肪肝產生的因素之一，且尤以腹部肥胖者最易罹患脂肪肝。其原因在於，腹部之脂肪細胞易受到刺激而將脂肪酸釋放於血液中，透過循環系統送至肝臟。肝臟係將脂肪酸轉化成三酸甘油酯，而新合成之三酸甘油酯在肝臟細胞內與極低密度脂蛋白結合並轉運至血液。當合成速率大於轉運速率時、或無法與極低密度脂蛋白進行結合轉運時，將增加脂肪肝的風險。

由於肥胖症所引起的疾病相當的多，目前肥胖症已被世界衛生組織列為二十一世紀首要關注的議題。據此，若能減少體重或降低體脂肪，勢必可以達到降低罹患上述疾病之風險。因此，目前極需發展一種可減少體重或降低體脂肪之醫藥組成物，以達到治療肥胖症之目的。

本發明之主要目的係在提供一種用以降低體脂肪之醫藥組成物或香椿萃取物，俾能減少體內之體脂肪合成。

本發明之另一目的係在提供一種用以減少體重之醫藥組成物或香椿萃取物，俾能減少體重而降低代謝症候群之發生率。

本發明之另一目的係在提供一種降低體脂肪或減少體重之香椿萃取物之製備方法，俾能以簡單的製程萃取出香椿中可降低體脂肪或減少體重之活性成分。

為達成上述目的，本發明係提供一種用以降低體脂肪或減少體重之醫藥組成物，包括：40至75重量份之沒食子酸；15至40重量份之沒食子酸乙酯；以及10至30重量份之沒食子酸甲酯。

此外，本發明亦提供一種用以降低體脂肪或減少體重之香椿萃取物，係透過下列步驟製得：(A)提供一香椿葉，並使用水加熱萃取香椿葉，以得到一香椿初萃液，並過濾香椿初萃液以取得一第一固相萃取物； (B)使用醇水溶液萃取第一固相萃取物，以取得一第二固相萃取物；(C)使用醇水溶液萃取第二固相萃取物，以取得一第三固相萃取物；(D)使用醇水溶液萃取第三固相萃取物，以取得一第四固相萃取物；(E)使用醇水溶液萃取第四固相萃取物，以取得一第五固相萃取物；以及(F)使用醇水溶液萃取第五固相萃取物，以取得一香椿萃取物。透過上述製程所萃取出之香椿萃取物，經分析後，係具有如上述之醫藥組成物之組成份。

據此，本發明之用以降低體脂肪或減少體重之醫藥組成物中，係包括有一香椿萃取物，此香椿萃取物係包括：40至75重量份之沒食子酸；15至40重量份之沒食子酸乙酯；以及10至30重量份之沒食子酸甲酯。

於本發明所提供之醫藥組成物中，組成物之組成份相當的簡單，其主要成分為沒食子酸及其酯類。於本發明中，藉由使用此組成份簡單之醫藥組成物，可達到減少體重或降低體脂肪之功效。此外，本發明所提供之香椿萃取物，係透過簡單的醇水萃取製程，則可將香椿萃取物中之沒食子酸及其酯類等成分萃取出來。藉由使用本發明所萃取出之香椿萃取物，可達到減少體重或降低體脂肪之功效。由於本發明之香椿萃取物係為一天然物之萃取物，故除了可作為醫藥用途外，更可做為日常保健食品，以達到控制體重或體脂肪之功效。

於本發明之醫藥組成物中，較佳為，沒食子酸之含量為45至65重量份，沒食子酸乙酯之含量為20至30重量份，且沒食子酸甲酯之含量為15至25重量份。更佳為，沒食子酸之含量為50至60重量份，沒食子酸乙酯之含量為20至30重量份，且沒食子酸甲酯之含量為15至25重量份。

此外，本發明之醫藥組成物可更包括：1至10重量份之芸香素。

再者，本發明所提供之降低體脂肪或減少體重之香椿萃取物之製備方法，係包括下列步驟：(A)提供一香椿葉，並使用水加熱萃取香椿葉，以得到一香椿初萃液，並過濾香椿初萃液以取得一第一固相萃取物；(B)使用醇水溶液萃取第一固相萃取物，以取得一第二固相萃取物；(C)使用醇水溶液萃取第二固相萃取物，以取得一第三固相萃取物；(D)使用醇水溶液萃取第三固相萃取物，以取得一第四固相萃取物；(E)使用醇水溶液萃取第四固相萃取物，以取得一第五固相萃取物；以及(F)使用醇水溶液萃取第五固相萃取物，以取得一香椿萃取物。

於本發明之香椿萃取物及其製備方法中，步驟(B)、步驟(C)、步驟(D)、步驟(E)、及步驟(F)中所使用之醇水溶液可分別獨立選自由甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、第三丁醇及其混合所組成之群組之水溶液。較佳為，步驟(B)、步驟(C)、步驟(D)、步驟(E)、及步驟(F)中所使用之該醇水溶液係分別獨立為一乙醇水溶液。

此外，於本發明之香椿萃取物及其製備方法中，係使用不同濃度之醇水溶液進行萃取；且較佳係使用濃度由低至高之醇水溶液進行萃取。較佳為，步驟(B)所使用之醇水溶液濃度係為5wt%至30wt%，步驟(C)所使用之醇水溶液濃度係為15wt%至50wt%，步驟(D)所使用之醇水溶液濃度係為30wt%至70wt%，步驟(E)所使用之醇水溶液濃度係為50wt%至85wt%，且步驟(F)所使用之醇水溶液濃度係為70wt%至100wt%。更佳為，步驟(B)所使用之醇水溶液濃度係為5wt%至15wt%，步驟(C)所使用之醇水溶液濃度係為25wt%至35wt%，步驟(D)所使用之醇水溶液濃度係為45wt%至 55wt%，步驟(E)所使用之醇水溶液濃度係為65wt%至75wt%，且步驟(F)所使用之醇水溶液濃度係為90wt%至100wt%。

再者，於本發明之香椿萃取物及其製備方法中，於步驟(F)後可更包括一步驟(G)：乾燥香椿萃取物。

於本發明之香椿萃取物及其製備方法中，各固相萃取物及香椿萃取物係經乾燥後取得。其中，乾燥製程可採用冷凍乾燥處理(lyophilization)、低溫噴霧乾燥處理(spray-drying)、低溫蒸發處理(evaporation)。較佳為，係採用冷凍乾燥處理。

此外，本發明之醫藥組成物可更包括：一醫藥上可接受之載體。在此，本發明醫藥組成物中之香椿萃取物含量較佳為0.5mg/ml至5mg/ml，更佳為0.5mg/ml至3mg/ml。此外，本發明之醫藥組成物或香椿萃取物之使用量，較佳為每公斤之待治療主體係使用0.5g至10g之醫藥組成物或香椿萃取物，更佳係使用0.5g至5g之醫藥組成物或香椿萃取物。

在此，醫藥組成物所使用之載體必須為「醫藥上可接受之載體」，即其必須與組成物之活性主成分相容(較佳係能穩定活性主成分)，且不能對主體造成傷害。

圖1係本發明之油滴堆積實驗結果圖。

圖2係本發明之小鼠體重變化實驗結果圖。

圖3係本發明之小鼠體重變化實驗體重增加趨勢圖。

本實施例所使用之香椿第一固相萃取物係購自台灣香椿公司(高雄，台灣)，其製備方法係如下所述。

以水清洗香椿幼嫩葉，並以每公斤香椿葉使用4L的逆滲透水(RO water)之用量，將水與香椿葉相混合，煮沸並持續30分鐘，則得一香椿初萃液。之後，取出香椿葉，並加熱將香椿初萃液濃縮，再以濾網(70mesh)過濾，則到一香椿葉粗萃取物。

接著，將此香椿葉粗萃取物於121℃溫度及1.2kgw/cm²壓力下，反應20分鐘，再經冷凍乾燥處理後，則可取得一第一固相萃取物。

以每克萃取物使用10ml萃取液之比例，將此第一固相萃取物溶於萃取液中，並於室溫下搖晃12小時進行萃取。經離心後，可得到一上清液及一沉澱部分。在此，萃取液係為10%之乙醇水溶液。將此沉澱部分經冷凍乾燥處理後，則可取得一第二固相萃取物。

而後，以與萃取第一固相萃取物之相同製程萃取第二固相萃取物，則可取得一第三固相萃取物。在此，萃取液係為30%之乙醇水溶液。

接著，再以與萃取第一固相萃取物之相同製程萃取第三固相萃取物，則可取得一第四固相萃取物。在此，萃取液係為50%之乙醇水溶液。

以與萃取第一固相萃取物之相同製程萃取第四固相萃取物，則可取得一第五固相萃取物。在此，萃取液係為70%之乙醇水溶液。

最後，以與萃取第一固相萃取物之相同製程萃取第五固相萃取物，則可取得一第六固相萃取物，即所謂之香椿萃取物。在此，萃取液係為95%之乙醇水溶液。

取20μl的1mg/ml香椿萃取物水溶液，注入HPLC進行劃分。HPLC分析系統是使用Hitachi pump L7100幫浦及Jasco UV1575 UV可見光偵測器。管柱則採用Ascentis 18,15cm×4.6mm I.D.,5μm particles。移動相的條件為20分鐘內，甲醇濃度從20%提升至100%，且流速為1ml/min。以OD 280nm進行偵測以初步分析其活性成分。並與已知標準品沒食子酸(gallic acid)、槲黃素(quercetin)、沒食子酸甲酯(methyl gallate)、沒食子酸乙酯(ethyl gallate)、芸香素(rutin)兒茶素(atechin、epicatechin)波峰比對。

此外，更取20μl的1mg/ml香椿萃取物水溶液進行LC-MS分析。在此，係使用4000 Q Trap LC-MS串聯式液相層析質譜儀(成功大學儀器中心)進行分析，離子源為奈米電灑質譜儀(nano ESI)，流速為1ml/min。並與已知標準品沒食子酸(gallic acid)、槲黃素(quercetin)、沒食子酸甲酯(methyl gallate)、沒食子酸乙酯(ethyl gallate)、芸香素(rutin)、兒茶素(catechin、epicatechin)之波峰比對。

上述HPLC及LC-MS分析結果係如下表1所示。

總量為HPLC之初步鑑定成分中確實含有其成分之比例。如：HPLC之沒食子酸比例為21%，初步結果乘以LC-MS鑑定後之比例41%，所含的比例為8.5%。

如表1總量所示，所分析之香椿萃取物水溶液中，係含有8.5%之沒食子酸、3.7%之沒食子酸乙酯、2.6%之沒食子酸甲酯、及0.5%之芸香素。

因此，經換算後，固態香椿萃取物中係包括57重量份之沒食子酸、25重量份之沒食子酸乙酯、20重量份之沒食子酸甲酯、及4重量份之芸香素。

在此，係使用前驅脂肪細胞株3T3-L1進行油滴堆積實驗。將3T3-L1細胞株培養於含10%小牛血清與10U/ml盤尼西林/鏈酶素之DMEM培養基中，於37℃、5% CO₂培養箱中進行培養，每兩至三天更換培養液。當細胞至7到8成滿時進行繼代培養。首先，去除培養液並以PBS緩衝溶液清洗後，加入胰蛋白酵素(trypsin)-EDTA於培養箱中作用5分鐘，待細胞完全脫落後，以DMEM培養液充分打散細胞，依1：4至1：6(細胞：培養液)之比例分盤繼續培養。

將3T3-L1細胞株以8 x 10⁴個細胞在含10%小牛血清(BCS)的DMEM培養液中培養至平面(confluence)，再更換成DMI分化誘導培養基(含10%胎牛血清DMEM、1μM皮質類固醇(dexamethasone)、0.5mM 3-異丁基-甲基黃嘌呤(3-isobutyl-methylxanthine)、及1.7μM胰島素(insulin))。

誘導分化48小時後更換為原培養基，分別加入均含有1.7μmol/L胰島素之香椿萃取液(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)、誘導分化試劑DMI、或10μM之PPARγ表現促進劑(PIO)，再於48小時後更換成含 1.7μmol/L胰島素之原培養基。持續培養4天後，進行油紅(Oil red O)染色。油紅染色之步驟係如下所述：倒掉培養基以PBS緩衝溶液清洗細胞，以10%福馬林之固定液進行細胞固定1小時，以60%異丙醇清洗，待乾後以油紅染色溶液(Oil red O working solution)浸泡10分中，再以清水清洗，於顯微鏡下觀察紅色油滴之形成。此外，更將水分移除，待乾後以100%異丙醇回溶，測量OD 500nm之吸光值。

結果係如圖1所示，處理DMI及PIO之細胞型態由紡錘狀轉變成球狀，可明顯看出細胞內油滴的堆積。而相較於處理DMI之脂肪細胞，處理香椿萃取物之脂肪細胞未有油滴堆積現象。

由本發明之香椿萃取物可減少油滴堆積之實驗證實，香椿萃取物可達到脂肪分解的作用(lipolysis)，進而達到減少體脂肪之目的。

本發明使用之實驗動物為6週大之雄性C57BL/6小鼠，購自國家實驗研究院實驗動物中心。動物房溫度維持於20±2℃，相對溼度則維持在50±20%，配合通風與冷氣設備，以自動定時器設定7：00~19：00為光照期，實驗動物隨機分為6組，每組10隻：在訓養一週後，分成控制組(n=10)及誘導組(n=50)，開始餵食高脂飼料，其熱量來源為54%脂肪、23%為蛋白質及碳水化合物。

實驗動物訓養一週後測定小鼠體重，依據小鼠體重進行亂數分配，各籠小鼠體重平均需相近，5隻為一籠，每週測量飼料、飲水重量及動物體重。

實驗結果係如圖2及圖3所示，其中CD表示未餵食高脂飼料之正常飲食組，HFD表示餵食高脂飼料組，而PIO表示餵食PPARγ表現促進劑及高脂飼料組。此外，更有一組係餵食本發明之香椿萃取物及高脂飼料。

如圖2所示，各組別之體重每週的變化皆呈現正相關的增加，特別是相較於HFD組，餵食2g/kg之本發明之香椿萃取物於第八週時，小鼠體重上升幅度明顯減緩。此外，若觀察給予香椿萃取物八週後體重再扣除給予前的體重發現，相較於HFD組，餵食2g/kg之本發明之香椿萃取物明顯減緩體重增加，如圖3所示。

由小鼠體重變化實驗顯示，本發明之香椿萃取物確實可達到與PIO相同之減少體重之功效。此外，本發明之香椿萃取物係為一種天然物，故可視為一種天然的保健食品之一。

上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。

Claims

一種香椿萃取物於製備用以降低體脂肪之藥物上之用途，該香椿萃取物包括：40至75重量份之沒食子酸；15至40重量份之沒食子酸乙酯；以及10至30重量份之沒食子酸甲酯；其中該香椿萃取物係透過下列步驟製得：(A)提供一香椿葉，並使用水加熱萃取香椿葉，以得到一香椿初萃液，並過濾該香椿初萃液以取得一第一固相萃取物；(B)使用醇水溶液萃取該第一固相萃取物，以取得一第二固相萃取物；(C)使用醇水溶液萃取該第二固相萃取物，以取得一第三固相萃取物；(D)使用醇水溶液萃取該第三固相萃取物，以取得一第四固相萃取物；(E)使用醇水溶液萃取該第四固相萃取物，以取得一第五固相萃取物；以及(F)使用醇水溶液萃取該第五固相萃取物，以取得一香椿萃取物；其中該步驟(B)所使用之醇水溶液濃度係為5wt%至30wt%，該步驟(C)所使用之醇水溶液濃度係為15wt%至50wt%，該步驟(D)所使用之醇水溶液濃度係為30wt%至70wt%，該步驟(E)所使用之醇水溶液濃度係為50wt%至85wt%，且該步驟(F)所使用之醇水溶液濃度係為70wt%至100wt%；於施予每公斤之治療主體0.5g至5g之香椿萃取物，以脂肪分解作用達到減少體脂肪。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該沒食子酸之含量為45至65 重量份，該沒食子酸乙酯之含量為20至30重量份，且該沒食子酸甲酯之含量為15至25重量份。
如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該沒食子酸之含量為50至60重量份，該沒食子酸乙酯之含量為20至30重量份，且該沒食子酸甲酯之含量為15至25重量份。
如申請專利範圍第3項所述之用途，更包括：1至10重量份之芸香素。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該步驟(B)、該步驟(C)、該步驟(D)、該步驟(E)、及該步驟(F)中所使用之該醇水溶液係分別獨立選自由甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、第三丁醇及其混合所組成之群組之水溶液。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該步驟(B)所使用之醇水溶液濃度係為5wt%至15wt%，該步驟(C)所使用之醇水溶液濃度係為25wt%至35wt%，該步驟(D)所使用之醇水溶液濃度係為45wt%至55wt%，該步驟(E)所使用之醇水溶液濃度係為65wt%至75wt%，且該步驟(F)所使用之醇水溶液濃度係為90wt%至100wt%。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該步驟(B)、該步驟(C)、該步驟(D)、該步驟(E)、及該步驟(F)中所使用之該醇水溶液係分別獨立為一乙醇水溶液。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中於於該步驟(F)後更包括一步驟(G)：乾燥該香椿萃取物。
一種香椿萃取物於製備用以減少體重之藥物上之用途，該香椿萃取物包括： 40至75重量份之沒食子酸；15至40重量份之沒食子酸乙酯；以及10至30重量份之沒食子酸甲酯；其中該香椿萃取物係透過下列步驟製得：(A)提供一香椿葉，並使用水加熱萃取香椿葉，以得到一香椿初萃液，並過濾該香椿初萃液以取得一第一固相萃取物；(B)使用醇水溶液萃取該第一固相萃取物，以取得一第二固相萃取物；(C)使用醇水溶液萃取該第二固相萃取物，以取得一第三固相萃取物；(D)使用醇水溶液萃取該第三固相萃取物，以取得一第四固相萃取物；(E)使用醇水溶液萃取該第四固相萃取物，以取得一第五固相萃取物；以及(F)使用醇水溶液萃取該第五固相萃取物，以取得一香椿萃取物；其中該步驟(B)所使用之醇水溶液濃度係為5wt%至30wt%，該步驟(C)所使用之醇水溶液濃度係為15wt%至50wt%，該步驟(D)所使用之醇水溶液濃度係為30wt%至70wt%，該步驟(E)所使用之醇水溶液濃度係為50wt%至85wt%，且該步驟(F)所使用之醇水溶液濃度係為70wt%至100wt%；於施予每公斤之治療主體0.5g至5g之香椿萃取物，以脂肪分解作用減少體脂肪，達到減少體重。
如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該沒食子酸之含量為45至65重量份，該沒食子酸乙酯之含量為20至30重量份，且該沒食子酸甲酯之含量為15至25重量份。
如申請專利範圍第10項所述之用途，其中該沒食子酸之含量為50至 60重量份，該沒食子酸乙酯之含量為20至30重量份，且該沒食子酸甲酯之含量為15至25重量份。
如申請專利範圍第11項所述之用途，香椿萃取物更包括：1至10重量份之芸香素。
如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該步驟(B)、該步驟(C)、該步驟(D)、該步驟(E)、及該步驟(F)中所使用之該醇水溶液係分別獨立選自由甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、第三丁醇及其混合所組成之群組之水溶液。
如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該步驟(B)所使用之醇水溶液濃度係為5wt%至15wt%，該步驟(C)所使用之醇水溶液濃度係為25wt%至35wt%，該步驟(D)所使用之醇水溶液濃度係為45wt%至55wt%，該步驟(E)所使用之醇水溶液濃度係為65wt%至75wt%，且該步驟(F)所使用之醇水溶液濃度係為90wt%至100wt%。
如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該步驟(B)、該步驟(C)、該步驟(D)、該步驟(E)、及該步驟(F)中所使用之該醇水溶液係分別獨立為一乙醇水溶液。
如申請專利範圍第9項所述之用途，其中於該步驟(F)後更包括一步驟(G)：乾燥該香椿萃取物。