TW202415397A - 一種菊花萃取物及其用於製備抑制發炎反應和促進傷口癒合的醫藥組合物之用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種菊花萃取物及其用於製備抑制發炎反應和促進傷口癒合的醫藥組合物之用途，其中該菊花萃取物係以亞臨界水萃取法，於一高溫及一高壓下對菊花樣品進行萃取而獲得之；其中該傷口癒合包括慢性傷口癒合及糖尿病傷口癒合。
Description
本發明涉及一種菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat)萃取物及其用於製備抑制發炎反應和促進傷口癒合的醫藥組合物之用途，尤指一種以亞臨界水萃取法，於一高溫及一高壓下對菊花樣品進行萃取而獲得之菊花萃取物及其用於製備抑制發炎反應和促進傷口癒合的醫藥組合物之用途。
發炎係健康宿主對有毒化學物質、死細胞、病原體、刺激物或過敏原引起的損傷或感染的反應，嗜中性白血球在各種傳染性和發炎性疾病中扮演的重要作用使它們成為具有吸引力的治療介入的靶標。
嗜中性白血球被活化時會產生許多發炎反應，包括進行呼吸爆破產生超氧化陰離子(O2 ．－)和活性氧物質(Reactive oxygen species,ROS)、去顆粒化作用釋放彈性酶(elastase)、趨化轉移到發炎區域、釋放細胞激素以及形成嗜中性白血球胞外陷阱(neutrophils extracellular traps,NETs)，因此，抑制嗜中性白血球的發炎反應，是治療嗜中性白血球發炎疾
病的有效策略。
傷口癒合係皮膚經創傷後表皮組織再生的過程，其一般來說包含止血、炎症、增殖和組織重塑或消退(Gosain and DiPietro,2004)四個階段。然而，影響傷口癒合的因子很多，例如傷口的照護、傷口的糖分等。糖尿病傷口癒合障礙與血管、神經病變、免疫和生化成分等多種因素有關。高血糖會使血管硬化，進而導致循環減慢和微血管功能障礙，並導致組織氧合減少；高血糖還會減少白血球遷移到傷口，以致於患者更容易受到感染。而糖尿病(diabetes mellitus,DM)中的周圍神經病變可能會導致該區域的麻木以及感覺疼痛的能力降低，這可能導致傷口未立即被注意到而採取適當的治療(Spampinato SF,Caruso GI,De Pasquale R,Sortino MA,Merlo S.The Treatment of Impaired Wound Healing in Diabetes：Looking among Old Drugs.Pharmaceuticals(Basel).2020；13(4)：60.)。特別注意的是，糖尿病足潰瘍(DFU)是DM的主要併發症，其發生在15%的糖尿病患者中。與DFU有關的危險因子被認為是神經病變、血管疾病和感染。過去研究也發現，糖尿病患者下肢截肢的風險是非糖尿病患者的15至46倍。
天然化合物具備豐富來源與多樣化骨架優勢，是藥物開發重要依據。從1981年到2019年，美國食品藥物管理局新批准的藥物中有近一半來自天然物或是其衍生物，如可卡因(cocaine)衍生的麻醉藥品，由嗎啡(morphine)衍生的止痛劑，文克斯汀(vincristine)、艾黴素(doxorubicin)與紫杉醇(paclitaxel)用來治療癌症，源自真菌的盤尼西林(penicillin)用來作為抗生素等，因此，本發明積極研究哪些天然化合物具有發展成抑制嗜中性白血球引起的發炎反應暨促進傷口癒合的新型藥物的潛力。
本發明選用菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat)作為研究標的。
本發明係一種菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat)萃取物，該菊花萃取物係以亞臨界水萃取法，於一高溫及一高壓下，對一菊花樣品進行萃取，以得到一亞臨界水萃取物。
於本發明中，其中該菊花樣品為新鮮或乾燥之菊花。
於本發明中，較佳地，其中該高溫係介於120~250℃。
於本發明中，較佳地，其中該高壓係介於5~20MPa。
於本發明中，較佳地，其中該亞臨界水萃取法的時間係萃取5~60分鐘。
更佳地，本發明進一步包括步驟c：將該亞臨界水萃取物再以純水溶解後放置入一管柱，並以純水及不同比例之酒精水溶液作為移動相進行分層；及步驟d：收集產量最大之酒精水溶液的分層，並進行冷凍乾燥以獲得本發明之菊花萃取物。
於本發明中，較佳地，步驟c中之該不同比例之酒精水溶液係選自於由20%酒精水溶液、40%酒精水溶液、60%酒精水溶液及95%酒精水溶液所組成之群組。
於本發明中，更佳地，步驟c中之該分層係依序以純水、20%酒精水溶液、40%酒精水溶液、60%酒精水溶液及95%酒精水溶液作為移動相進行分層。
本發明還係一種菊花萃取物的用於製備抑制一嗜中性白血
球引起的發炎反應的醫藥組合物之用途，其包括一有效劑量之菊花萃取物及其醫學上可接受之載體。
較佳地，本發明還係一種菊花萃取物的用於製備清除一個體內自由基的醫藥組合物之用途，其包括一有效劑量之菊花萃取物及其醫學上可接受之載體。
較佳地，本發明還係一種菊花萃取物的用於製備促進一個體傷口癒合的醫藥組合物之用途，其包括一有效劑量之菊花萃取物及其醫學上可接受之載體。
較佳地，其中該傷口癒合包括慢性傷口癒合。
更佳地，其中該傷口癒合包括糖尿病傷口癒合或糖尿病足。
於本發明之各用途中，其中該有效劑量為0.1mg/kg體重至50mg/kg體重。
於本發明中，本發明所稱個體為人類或哺乳動物。
圖1為菊花樣品BQ01不同萃取方式的示意圖。
圖2A至圖2B顯示索式萃取、水萃取、酒精萃取、乙酸乙酯萃取及亞臨界水萃取條件下的菊花粗萃取物的自由基清除的效果。圖2A顯示在200℃亞臨界水萃取條件下的菊花粗萃取物均有較佳的DPPH及ABTS的清除率；圖2B顯示200℃亞臨界水萃取條件下的菊花粗萃取物的自由基清除率具有劑量依賴性。
圖3所示為BQ01以不同萃取方式萃取的粗萃取物的UPLC成分分析。
圖4顯示BQ01-(200)_30各分層萃取物的DPPH及ABTS的清除率。
圖5顯示BQ01-(200)_30各分層萃取物對嗜中性白血球細胞沒有細胞毒性。
圖6顯示BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH有效刺激人類正常成纖維細胞株Hs68的細胞遷移。
圖7A至圖7E所示為BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH對糖尿病傷口癒合的功效。圖7A為糖尿病傷口癒合動物模型的傷口癒合時程及照片；圖7B及圖7C為經低、高劑量BQ01-(200)_30處理後的糖尿病傷口癒合結果；圖7D及圖7E為經低、高劑量BQ01-(200)_30-60%EtOH處理後的糖尿病傷口癒合結果。*表示P<0.05、**表示P<0.01，其顯示為與未處理組相比具有顯著差異；而@表示P<0.05、@@表示P<0.01，其顯示為與控制組(Pluronic acid組)相比具有顯著差異。
圖8顯示於本發明糖尿病傷口癒合實驗過程中，所有的糖尿病動物均處於糖尿病狀態。
應理解的是，實施例的詳細描述是為了說明本發明的較佳實施例，而非欲將本發明限制於某些實施例。應注意的是，本發明意在涵蓋所有在本發明相同精神和範圍內的替代實施例。其他人根據本發明理念所做出的一些非本質的修改和調整仍屬於本發明的保護範圍。
菊花粗萃取物製備
本發明取用新鮮或乾燥之菊花(Chrysanthemum morifolium
Ramat)作為萃取樣品，尤其以花做為萃取樣品，並將菊花樣品磨成粉末，命名為BQ01。
於本發明中，該菊花樣品BQ01分別以索氏萃取法(Soxhlet extraction)、水萃取法、酒精萃取法、乙酸乙酯(ethyl acetate；EA)萃取法以及亞臨界水萃取法(subcritical water extraction)進行萃取，其流程示意圖如圖1所示。
其中，索氏萃取法係將5g的BQ01與70mL的水混合後，在100℃下進行索氏萃取60分鐘，然後用濾紙過濾懸浮液，得到粗萃取物BQ01-S。
水萃取法、酒精萃取法及乙酸乙酯萃取法係於Dionex ASE 350系統(ThermoFisher Scientific,US)上進行加速溶劑萃取。將5g的BQ01置於66mL的不銹鋼萃取槽中，其底部裝有濾紙，將不銹鋼萃取池置於烘箱中，於池中充滿溶劑30秒，該溶劑分別為水、50%乙醇、95%乙醇及乙酸乙酯，然後在高壓(約1500psi)下加熱至所需的萃取時間(水萃取條件為100℃萃取15分鐘；乙醇萃取及乙酸乙酯萃取的條件均為50℃萃取15分鐘)，萃取結束，萃取液自萃取槽中注入收集瓶，並將殘留物在約10MPa的壓力下吹掃1分鐘(通常使用氮氣)，然後釋放殘餘壓力，將最終萃取液收集在收集瓶中，有機溶劑部分，在35℃的旋轉真空蒸發器中除去溶劑，再置入冷凍乾燥機乾燥，水萃取部分冷凍後以冷凍乾燥機進行乾燥，分別得到粗萃取物BQ01-H2O、BQ01-50%E、BQ01-95%E及BQ01-EA。
於亞臨界水萃取法係於Dionex ASE 350系統(ThermoFisher Scientific,US)上進行亞臨界水萃取。將5g的BQ01置於66mL且底部裝有濾
紙的不銹鋼萃取槽中用純水進行萃取，其係將不銹鋼萃取池置於烘箱中，於池中加水30秒，然後在高壓(約1500psi)下分別進行25種不同條件的萃取，其組合了5個不同萃取溫度(120℃、140℃、160℃、180℃和200℃)和5個不同萃取時間(5、10、15、30和60分鐘)，之後，將殘留物在約10MPa的壓力下吹掃1分鐘(通常使用氮氣)，然後釋放殘餘壓力，將最終萃取物收集在收集瓶中，萃取液冷凍後在冷凍乾燥器中乾燥24小時，最後得到25種粗萃取物BQ01-(120)_5、BQ01-(120)_10、BQ01-(120)_15、BQ01-(120)_30、BQ01-(120)_60、BQ01-(140)_5、BQ01-(140)_10、BQ01-(140)_15、BQ01-(140)_30、BQ01-(140)_60、BQ01-(160)_5、BQ01-(160)_10、BQ01-(160)_15、BQ01-(160)_30、BQ01-(160)_60、BQ01-(180)_5、BQ01-(180)_10、BQ01-(180)_15、BQ01-(180)_30、BQ01-(180)_60、BQ01-(200)_5、BQ01-(200)_10、BQ01-(200)_15、BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_60。
自由基清除能力測試
1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(Diphenyl-p-picrylhydrazyl,DPPH)以及2,2'-偶氮基-雙(3-乙基苯並噻唑啉-6-磺酸)(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)為與發炎有關之穩定自由基，於本發明中，進一步測試10μg/mL的各菊花粗萃取物清除自由基的能力，其中以DMSO作為對照組，當各菊花粗萃取物具有自由基清除能力時，與乙醇配置的DPPH(100μM)或是ABTS(7mM)反應液混合30分鐘後，其ΔA517或是ΔA734會明顯下降，作為清除自由基的活性指標。
如圖2A所示，結果顯示在200℃亞臨界水萃取條件下的菊花
粗萃取物均有較佳的DPPH及ABTS的清除率。
此外，如圖2B所示，200℃亞臨界水萃取條件下的菊花粗萃取物的自由基清除率也具有劑量依賴性，且可達到與維他命E(Vit E)相當的自由基清除能力。
超氧化陰離子與彈性酶抑制測試
本發明藉由超氧化陰離子與彈性酶的抑制測試，進行上述各種菊花粗萃取物抗發炎能力的評估。
首先，進行嗜中性白血球的製備。
取自願協助或對本計畫有興趣的健康捐血者(20-35歲；作息正常且禁服藥物一週以上)，以真空無菌採血管於手肘靜脈採血約50mL，將其加入等體積的3%右旋糖酐溶液(Dextran)中混合均勻，靜置以沉降紅血球。取含有嗜中性白血球的上清液，覆蓋於含有Ficoll-Paque溶液之離心管中離心，利用密度梯度將不同的血球分離，得到沉澱於底部之嗜中性白血球及少許紅血球。以不同濃度的NaCl溶液脹破殘餘之紅血球，利用二者滲透壓耐受性差異，保留所需之嗜中性白血球。
本發明上述各種菊花粗萃取物抗嗜中性白血球的發炎反應評估則以呼吸爆破實驗及去顆粒化功能評估進行之。
呼吸爆破主要會產生超氧化陰離子(O2 ．－)和活性氧物質(Reactive oxygen species,ROS)，其中，超氧化陰離子(O2 ．－)的偵測係以含有0.6mg/mL亞鐵細胞色素c(ferricytochrome c)的嗜中性白血球懸浮液(6×105cells/mL)在37℃下加入上述各種菊花粗萃取物作用2分鐘，再以1μg/mL的細胞鬆弛素B(cytochalasin B,CB)處理細胞約3分鐘。接著以N-
甲醯基-L-甲硫胺醯-L-白胺醯-L-苯丙胺酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine，fMLF)做為刺激劑，活化細胞約10-30分鐘。再使用紫外光分光光度計，於波長550nm下測量其吸光值。
在彈性酶(elastase)釋放的實驗中，將含有100μM彈性酶受質甲氧琥珀醯基-丙胺酸-丙胺酸-脯胺酸-纈胺酸-對-硝基苯胺(MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide)的嗜中性白血球懸浮液(6×105個細胞/毫升)預熱5分鐘使其達到37℃，接著加入上述各種菊花粗萃取物作用2分鐘，在0.5μg/mL的細胞鬆弛素B(cytochalasin B,CB)處理細胞約3分鐘，再以0.1μM的fMLF刺激嗜中性白血球活化約10-30分鐘，最後，使用紫外光分光光度計，於波長405nm下測量其吸光值。實驗結果以彈性酶釋出百分比來表示。
其結果如表1所示。
表1
由圖2A至圖2B及表1的結果可以發現，BQ01-(200)_30具有最佳的表現。
BQ01(200)30濃縮餾分製備
本發明進一步將BQ01-(200)_30與其他萃取法所獲得之菊花粗萃取物透過UPLC進行粗萃取物成分分析，其結果如圖3所示，可以看出BQ01-(200)_30相較於其他粗萃取物似乎含有更多值得探究的成分，因此，本發明將BQ01-(200)_30進行濃縮餾分的製備。
BQ01-(200)_30累計共11.4498克，以多孔性苯乙烯的吸附樹脂(Diaion HP-20，三菱化學股份有限公司，日本)為固定相填充為管柱，管柱高度42公分，直徑為3.5公分。將BQ01-(200)_30以純水溶解後放置入管柱，使用純水、20%酒精、40%酒精、60%酒精、95%酒精作為移動相進行冲滌分層，每個移動相冲滌體積為2000mL，每個分層回收後，於38℃條件下，以減壓濃縮機(Buchi Rotary Evaporator：Interface I-300,Vacuum pump V-300,Rotavapor R-210,Heating Bath B-491)將分層進行濃縮，再以冷凍乾燥機進行乾燥。
乾燥後分別得到H2O層萃取物5.3721克(46.9%)、20%酒精層萃取物1.6554克(14.5%)、40%酒精層萃取物1.0693克(9.3%)、60%酒精層萃取物2.0332克(17.8%)及95%酒精層萃取物0.6617克(5.8%)，總回收率為94.3%。分別命名為BQ01-(200)_30-H2O、BQ01-(200)_30-20%EtOH、BQ01-(200)_30-40%EtOH、BQ01-(200)_30-60%EtOH及、BQ01-(200)_30-95%EtOH。
各分層萃取物的抗發炎能力及細胞毒性測試
有關各分層萃取物的超氧化陰離子與彈性酶抑制測試均與前述步驟相同，其結果如表2所呈。
表2
IC50：半數最大抑制濃度；統計結果以平均值±標準誤差顯示；統計結果是否具有顯著差異係以各菊花粗萃取物的實驗結果與對照組(DMSO)的實驗結果進行比較，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.005。
從表2顯示的數據可以發現，BQ01-(200)_30-60%EtOH與BQ01-(200)_30-95%EtOH兩組對於超氧化陰離子與彈性酶抑制能力最佳。
在自由基清除能力的試驗，其試驗步驟與前述相同，其結果如圖4所示BQ01-(200)_30-40%EtOH、BQ01-(200)_30-60%EtOH與BQ01-(200)_30-95%EtOH三組的自由基清除率表現較佳，其中又以BQ01-(200)_30-60%EtOH的自由基清除率有最佳的表現。
進一步測試各分層對於嗜中性白血球的毒性。
由於乳酸脫氫酶(LDH)存在於各種細胞中，當細胞膜破裂時，LDH會釋出於環境中，因此，利用測量細胞釋出LDH的量做為評估藥物是否對細胞產生毒性的依據。
將分離之嗜中性白血球細胞懸浮液以BQ01-(200)_30各分層萃取物處理後，離心取得之上清液，上清液LDH含量以CytoTox 96 non-radioactive cytotoxicity assay(Promega)來偵測，其結果如圖5所示，各分
層萃取物對於細胞均沒有毒性。
基於效益考量，因BQ01-(200)_30-60%EtOH的產率高於BQ01-(200)_30-95%EtOH，後續將以BQ01-(200)_30-60%EtOH進行實驗。
體外傷口癒合試驗
本發明進一步測試BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH的傷口癒合能力。
取人類正常成纖維細胞株Hs68(購自Bioresource Collection and Research Center)在含有10%胎牛血清和1%青黴素/鏈黴素的Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)中，培養於37℃、5% CO2的培養箱中。
將細胞培養於24孔盤中，並分為四組，分別為控制組(Basal)、BQ01-(200)_30組(給予0.1μg/mL的BQ01-(200)_30)、BQ01-(200)_30-60%EtOH組(給予0.1μg/mL的BQ01-(200)_30-60%EtOH)及正向對照組(給予20ng/mL的PDGF-AA)，接著以IBIDI Culture-Inserts(購自GmbH,Germany)，根據製造商的說明書進行體外傷口癒合試驗。
將IBIDI Culture-Inserts放入24孔細胞培養盤的孔洞中，並在頂部輕輕按壓以確保緊密貼附。IBIDI Culture-Inserts係由一個500μm厚的壁隔開的兩個池所組成，將等量的Hs68細胞(4.5×105cells/mL)分配到IBIDI Culture-Inserts的兩個池中，培養24小時後，更換為沒有胎牛血清的培養基(FBS-free medium)，將IBIDI Culture-Inserts輕輕移除，以形成500μm的間隙，並用PBS進行清洗。
細胞核用2μg/mL的Hoechst 33342進行染色10分鐘，並以PBS洗滌，然後依據組別分別用0.1μg/mL的BQ01-(200)_30、0.1μg/mL的
BQ01-(200)_30-60%EtOH及20ng/mL的PDGF-AA處理細胞，並在第0、6、9、12和24小時後，利用Citation 5成像系統(Biotek，England)觀察細胞遷移並拍照。
如圖6所示，BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH產生了顯著的細胞遷移效果，證實BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH可以有效促進傷口癒合。
糖尿病傷口癒合試驗
本發明之所有動物實驗均經長庚大學機構動物護理和使用委員會(IACUC)批准。
首先建立糖尿病動物模型，本發明選用體重20-25g重的8週齡C57BL/6雄性小鼠，將小鼠禁食4小時後連續五天以腹膜內注射55mg/kg-體重的溶解在pH4.5檸檬酸鹽緩衝液中的鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)，並在前4天注射STZ後，給予正常食物和3%葡萄糖水，以誘導糖尿病，最後一天則不再給予葡萄糖水，改成給予一般的飲用水。
於上述時程中，STZ注射後72小時，將小鼠禁食4小時，用Contour Plus便攜式血糖儀(Ascensia，英國)刺穿小鼠尾巴並放血以測量空腹血糖值。空腹血糖值為150-250mg/dL的動物被認為是糖尿病前期，而>250mg/dL則被認為是糖尿病並用於後續實驗。所有的小鼠空腹血糖值均>250mg/dL。
糖尿病動物模型建立後，接著建立糖尿病傷口癒合動物模型。
實驗共使用48隻C57BL/6雄性糖尿病小鼠，並隨機分為5
組：控制組13隻(給予25%的Pluronic acid)，BQ01-(200)_30低劑量組8隻(給予10mg/kg的BQ01-(200)_30)、BQ01-(200)_30-60%EtOH低劑量組10隻(給予10mg/kg的BQ01-(200)_30-60%EtOH)、BQ01-(200)_30高劑量組7隻(給予25mg/kg的BQ01-(200)_30)及BQ01-(200)_30-60%EtOH高劑量組10隻(給予25mg/kg的BQ01-(200)_30-60%EtOH)。
每隻糖尿病小鼠的毛髮均在麻醉下透過剃刀和使用脫毛膏去除，以醫用膠帶固定背部皮膚防止皮膚拉伸，並使用無菌活檢穿孔器造成一左一右的兩個直徑6mm的全皮層傷口。
實驗過程中，所有傷口均以開有圓形缺口的醫用膠帶固定，使傷口維持在缺口處，醫用膠帶則將傷口周圍皮膚固定，以避免傷口癒合時的皮膚皺縮影響傷口面積計算，左側傷口未進行任何處理，而右側傷口則依據組別，分別給予25%的Pluronic acid、10mg/kg的BQ01-(200)_30、10mg/kg的BQ01-(200)_30-60%EtOH、25mg/kg的BQ01-(200)_30及25mg/kg的BQ01-(200)_30-60%EtOH進行每日局部治療，持續2週，並每日對傷口進行拍照。
傷口面積係使用Image J分析軟體根據每天拍攝的照片進行計算，並表示為與第0天相比的傷口癒合百分比。
傷口癒合的結果如圖7A到圖7E所示，圖7A顯示未處理組、控制組、低劑量及高劑量組(包含BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH)的傷口癒合照片，圖7B到圖7E則將傷口面積量化後以折線圖顯示，結果可以發現，相較於未處理組，BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH低劑量及高劑量組處理的小鼠傷口可以看到顯著
的傷口癒合。
上述劑量經換算為人類使用劑量為0.8mg/kg體重及2mg/kg體重。
為了進一步確認BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH只促進糖尿病的傷口癒合，而並非是治療糖尿病，因此每隻小鼠於第一週及第二週測量空腹血糖值，結果如圖7所示，每隻小鼠的空腹血糖值持續升高，證明BQ01-(200)_30及BQ01-(200)_30-60%EtOH只促進糖尿病的傷口癒合，而非係治療了糖尿病。
儘管本發明已經被足夠詳細的描述和示例，以供所屬技術領域中具通常知識者可以製作和實施，但在不脫離本發明的精神和範圍的情況下，各種替代、修改和改進應該是顯而易見的。
所屬技術領域中具通常知識者容易理解，本發明很好地適用於實現所述目的並獲得所提及的目的和優點以及其中固有的那些目的和優點。細胞、動物以及產生它們的過程和方法僅代表最佳實施方式，是例示性的，並不意在限制本發明的範圍。所屬技術領域中具通常知識者能想到其中的修改和其他用途，這些修改包含在本發明的精神內並且由申請專利範圍的範圍所限定。
Claims (15)
- 一種菊花萃取物的製造方法，包括以下步驟：a.取一菊花樣品；以及b.將該樣品以亞臨界水萃取法，於一高溫及一高壓下進行萃取，以得到一亞臨界水萃取物。
- 如請求項1所述之方法，其中該步驟b之該高溫係介於120~250℃。
- 如請求項1所述之方法，其中該步驟b之該高壓係介於5~20MPa。
- 如請求項1所述之方法，其中該亞臨界水萃取法係萃取5~60分鐘。
- 如請求項1所述之方法，其進一步包括以下步驟：c.將該亞臨界水萃取物以純水溶解後放置入一管柱，並以純水及不同比例之酒精水溶液作為移動相進行分層；及d.收集產量最大之酒精水溶液的分層，並進行冷凍乾燥以獲得一菊花萃取物。
- 如請求項5所述之方法，其中該步驟c之不同比例之酒精水溶液係選自於由20%酒精水溶液、40%酒精水溶液、60%酒精水溶液及95%酒精水溶液所組成之群組。
- 如請求項5所述之方法，其中該步驟c之分層係依序以純水、20%酒精水溶液、40%酒精水溶液、60%酒精水溶液及95%酒精水溶液作為移動相進行分層。
- 一種菊花萃取物，其係藉由如請求項1到7中任一項所述之製造方法所製得。
- 一種菊花萃取物的用於製備抑制一個體內嗜中性白血球引起的發炎反應的醫藥組合物之用途，其包括一有效劑量之菊花萃取物及其醫學上可接受之載體，其中該菊花萃取物係藉由如請求項1到7中任一項所述之製造方法所製得。
- 一種菊花萃取物的用於製備清除一個體內自由基的醫藥組合物之用途，其包括一有效劑量之菊花萃取物及其醫學上可接受之載體，其中該菊花萃取物係藉由如請求項1到7中任一項所述之製造方法所製得。
- 一種菊花萃取物的用於製備促進一個體傷口癒合的醫藥組合物之用途，其包括一有效劑量之菊花萃取物及其醫學上可接受之載體，其中該菊花萃取物係藉由如請求項1到7中任一項所述之製造方法所製得。
- 如請求項11所述之用途，其中該傷口癒合包括慢性傷口癒合。
- 如請求項11所述之用途，其中該傷口癒合包括糖尿病傷口癒合或糖尿病足。
- 如請求項9到13之任一項所述之用途，其中該有效劑量為0.1mg/kg體重至50mg/kg體重。
- 如請求項9到13之任一項所述之用途，其中該個體為人類或哺乳動物。
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| TW111139118A TWI842129B (zh) | 2022-10-14 | 2022-10-14 | 一種菊花萃取物及其用於製備抑制發炎反應和促進傷口癒合的醫藥組合物之用途 |
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ID=91622453
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-
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