CN101804083B - 松花粉及其提取物在治疗炎症性肠病中的用途及该提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了松花粉、松花粉提取物以及包含该松花粉提取物的药物组合物在治疗炎症性肠病中的用途以及包含该松花粉提取物的药物组合物的制备方法。该制备方法为松花粉使用水、醇类、或水与醇类的混合物提取。优选的醇类包括甲醇、乙醇,醇浓度优选为40%-99%,进一步优选为80%。提取时溶剂量为原药重量的5~15倍(体积/重量,ml/g),优选体积为10倍量。提取的温度是从室温(例如20℃)到溶剂回流温度的范围内,优选在回流温度。提取时可重复1~4次,每次提取时间为0.5h~2h,优选时间为1h。上步结束后,合并滤液,滤去药渣,减压浓缩蒸干或喷雾干燥,即为松花粉提取物。
Description
技术领域
本发明涉及医药用途领域,具体涉及松花粉、松花粉提取物以及包含该松花粉提取物的药物组合物在治疗炎症性肠病中的用途及该包含松花粉提取物的药物组合物的其制备方法。
背景技术
炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一组病因不明的慢性肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克隆氏病(Crohn’s disease,CD)。近年来国内外IBD的发病率呈上升趋势,其病因和发病机制是多方面因素引起的,即在遗传物质基础上,由于抗原刺激和体内免疫系统的激活,各种环境因素相互作用而引起的慢性肠道炎症。目前确切病因和发病机制仍不甚清楚,其发病机制的复杂性给临床根治造成了一定的困难,被世界卫生组织列为现代难治病之一。目前用于治疗IBD的药物有传统的水杨酸类制剂、皮质激素、免疫抑制剂和新兴的生物制剂,因长期服用的不良反应和价格因素,寻找IBD新的治疗方法和药物已经逐渐成为一种热点。
松花粉药名松花、松黄,是我国松科植物马尾松Pinus massoniana Lam b.、油松Pinustabulaeform is Carr.或同属数种植物的干燥花粉,为鲜黄色或淡黄色细粉,其性味甘平无毒。松花粉药食兼用的历史已逾千年,是中医古藉中收载的两种花粉之一,是祖国医药学宝库中仅有的食、药兼用花粉品种,我国第一部药典《神农本草经》中就有“松黄”的记载,将其列为上品;唐代官颁药典《新修本草》也将其收录其中;明朝李时珍在《本草纲目》中更称:“松花、甘、温、无毒。润心肺、益气,除风止血,亦可酿酒。”作为古老的药源和营养源,近年国家卫生部已确认松花粉为新资源食品,并列为普通食品管理,现已收入2005版《中国药典》。
松花粉含有松树植株所具有的一切营养成分和生命活性物质,其中有多种蛋白质、20余种氨基酸(包括人体必须的8种)、15种维生素、30多种矿物质元素、11%的脂肪、近百种酶和辅酶,以及核酸、不饱和脂肪酸、卵磷脂、类黄酮、单糖、多糖、纤维素等,总量达到200余种,且搭配合理能够全部补充、均衡人体所需的营养,具有提高免疫力、抗衰老、抗疲劳、调整机体代谢、降血脂和养颜等功效,在国内外已被广泛地应用于保健品、药品、化妆品和饲料添加剂等领域。
炎症性肠病的发生原因和致病机制迄今尚未完全阐明,多年研究证实该病与自身免疫反应有关,异常的免疫反应或正常免疫调节的破坏是其发病的重要环节。松花粉中所含多糖具有免疫调节功能,能改善由免疫功能异常;其中所含有效成分多糖及多种营养成分(氨基酸、微量元素及维生素C等),对受损组织有修复和营养作用。松花粉中的纤维素能够可以减少胆汁酸的吸收量,改变食物的消化速度和消化液的分泌量。
但是松花粉及松花粉提取物用于炎性肠病的治疗未见报道。
发明内容
为了克服现有技术中存在的问题,本发明提供了松花粉及其提取物在制备治疗炎症性肠病的药物中的用途。
本发明的另一目的是提供松花粉提取物的制备方法。
本发明的再一目的是提供含有松花粉提取物的药物组合物。
为了解决本发明的技术问题,本发明采取如下的技术方案:
本发明提供了松花粉提取物的制备方法。
松花粉使用水、醇类、或水与醇类的混合物提取。优选的醇类包括甲醇、乙醇,醇浓度优选为40%-99%,进一步优选为80%。提取时溶剂量为原药重量的5~15倍(体积/重量,ml/g),优选体积为10倍量。提取的温度是从室温(例如20℃)到溶剂回流温度的范围内,优选在回流温度。提取时可重复1~4次,每次提取时间为0.5h~2h,优选时间为1h。上步结束后,合并滤液,滤去药渣,减压浓缩蒸干或喷雾干燥,即为松花粉提取物。
本发明还涉及松花粉提取物作为活性成分的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将松花粉提取物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合,制成适于人或动物使用的任何剂型。松花粉提取物在其药物组合物中的含量通常为0.1~95%(重量)。
本发明了还提供了松花粉及其提取物在制备治疗炎症性肠病药物中的用途。
我们采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)法造模建立了大鼠实验性炎症性肠病模型,考察了松花粉及其提取物对炎症性肠病的治疗作用。
有关炎症性肠病的临床和实验研究均发现自由基及其触发的脂质过氧化反应在其发生、发展中有重要作用。而SOD能有效地清除氧自由基,催化超氧化自由基分解成H2O2,进而在过氧化氢酶的作用下分解成H2O和氧分子,从而抑制肠组织中的脂质过氧化反应。SOD活性可间接反映机体的脂质过氧化反应和抗脂质过氧化反应的能力。
机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基,后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸,引发脂质过氧化作用,并因此形成脂质过氧化物以及新的氧自由基等。因而测试MDA的量常常可以反映机体内脂质过氧化的程度,间接地反映细胞损伤的程度。
通过对SOD值和MAD值的测定,我们发现:
模型组的SOD活力与正常组比较有显著性降低(P<0.001);阳性药物组的SOD活力与正常组比较有降低(P<0.05),与模型组比较有显著性升高(P<0.001);松花粉组的SOD活力与正常组比较有降低(P<0.05),但与模型组比较则有升高(P<0.05);低剂量组的SOD活力与正常组比较有降低(P<0.05),但与模型组比较则有升高(P<0.05),中、高剂量组的SOD活力与正常组比较无显著性差异(P>0.05),与模型组比较则有显著性升高(P<0.01)。
模型组的MDA含量与正常组比较有显著性升高(P<0.001);阳性药物组的MAD含量与正常组比较无显著性差异(P>0.05),但与模型组比较则有显著性降低(P<0.01);松花粉组的MDA含量与正常组比较无显著性差异(P>0.05),与模型组比较则有显著性降低(P<0.01);低剂量组的MDA含量与正常组比较有升高(P<0.05),与模型组比较则有降低(P<0.05),中、高剂量组的MDA含量与正常组比较无显著性差异(P>0.05),与模型组比较则有显著性降低(P<0.01)。
通过实验发现,松花粉及其提取物对大鼠病变结肠黏膜有一定的修复作用,能有效改善炎症性肠病的症状。
本发明的松花粉及其提取物可单独服用,或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的松花粉或其提取物与其它治疗药物存在协同作用时,应根据实际情况调整它的剂量。
具体实施方式
实施例1:
松花粉1公斤用5倍量40%乙醇20℃提取1次,提取0.5h,合并提取液,滤去药渣,得乙醇提取物,减压浓缩回收乙醇溶液至干,即得松花粉提取物48g。
实施例2:
松花粉1公斤用15倍量99%乙醇回流提取4次,每次提取2h,合并提取液,滤去药渣,得乙醇提取物,喷雾干燥即得松花粉提取物91g。
实施例3:
松花粉1公斤用10倍量80%乙醇回流提取3次,每次提取1h,合并提取液,滤去药渣,得乙醇提取物,减压浓缩回收乙醇溶液至干,即得松花粉提取物105g。
实施例4:
松花粉1公斤用10倍量80%甲醇回流提取3次,每次提取1h,合并提取液,滤去药渣,得甲醇提取物,减压浓缩回收甲醇溶液至干,即得松花粉提取物103g。
实施例5:
松花粉1公斤用15倍量水回流提取4次,每次提取1.5h,合并提取液,滤去药渣,得水提取物,喷雾干燥回收水溶液至干,即得松花粉提取物39g。
实施例6:
松花粉1公斤用10倍量无水乙醇回流提取3次,每次提取0.5h,合并提取液,滤去药渣,得乙醇提取物,减压浓缩回收乙醇溶液至干,即得松花粉提取物88g。
实施例7:
称取松花粉提取物(按上述实施例3制备)100g,混匀,过80目筛,加入微晶纤维素200g、淀粉90g作为稀释剂组成制剂配方,混匀,喷入75%乙醇为粘合剂制软材,用24目筛制粒,干燥后整粒,混匀,压片,制成1000片,包衣,即得,每片含松花粉提取物100mg。
实施例8:
称取松花粉提取物(按上述实施例3制备)100g,混匀,过80目筛,加入预胶化淀粉280g,微晶纤维素80g,作为稀释剂组成制剂配方,混匀,喷入75%乙醇为粘合剂制软材,用24目筛制粒,干燥后整粒,混匀,装胶囊,制成1000粒,即得,每粒含松花粉提取物100mg。
实验例9:
松花粉提取物(按上述实施例3制备)缓释包衣微丸的制备。
丸心处方:
松花粉提取物 20mg
维性素C 1mg
氯化钠 8mg
羧甲基淀粉钠 25mg
乳糖 42mg
包衣液处方(每100ml用量):
乙基纤维素 3g
PEG400 2g
邻苯二甲酸二乙酯 0.6g
乙醇 至100ml
按丸心处方所列的比例称取原料及辅料,混合均匀,过80目筛,以3%HPMC水溶液离心造粒,颗粒过18目筛,整粒,60℃下1小时,得丸心。取上述处方的包衣液包衣,得包衣微丸。
试验例1
1.材料
实验动物:健康3级SD大鼠,雌雄各半,体重200~220g。
实验药物:柳氮磺胺吡啶;松花粉;松花粉提取物(按上述实施例3制备)
试剂与器材:无水乙醇(分析纯),三硝基苯磺酸(美国,Sigma公司);SOD、MDA检测试剂盒(北京邦定生物医学公司)。TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司),Aglient1200高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司),TDL-5-A离心机(上海安亭科学仪器厂)。
大鼠实验性炎症性肠病模型的建立:
采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)法造模:将大鼠禁食24h后麻醉,一次性将TNBS(100mg/kg)和50%乙醇溶液0.25ml用橡胶输液管缓慢注入距肛门约8cm处的肠腔内。造模后第3天治疗组开始给药。
实验分组及给药:
正常组及模型对照组,予以生理盐水灌胃,1次/天,共5周;阳性药物对照组(以下称阳性药物组)选用柳氮磺胺吡啶(SASP)按相当于人的中等治疗剂量,灌胃给予0.3g/kg SASP混悬液,1次/天,共治疗5周;松花粉组(150mg/kg)灌胃,1次/天,共治疗5周。松花粉提取物分别按低剂量组(7.5mg/kg)、中剂量组(15mg/kg)和高剂量组(30mg/kg)灌胃,1次/天,共治疗5周。
观察指标及测定方法:
5周后各组大鼠经10%水合氯醛(400mg/kg)麻醉,立即开腹分离结肠,沿肠系膜缘剪开肠腔,取病变处结肠1~2cm速冻于液氮中,后转至-70℃保存,留待测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),以两者含量作为观察指标。结肠组织匀浆SOD含量测定,采用黄嘌呤氧化酶法测定,结果用U/mg表示。MDA含量采用硫代巴比妥酸反应产物比色法测定,结果用μmol/g表示。
统计学处理:
实验数据用x±s表示,各组间进行t检验。
2.结果
表1各组结肠组织中SOD和MDA含量变化(n=10,x±s)
注:△P<0.05,△△△P<0.001,与正常组比较;*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,与模型组比较。
表2各组大鼠结肠大体形态和组织学损伤评分比较(n=10,x±s,分)
注:**P<0.01,与模型组比较。
(肠组织损伤大体形态和组织学形态评分方法【朱峰,钱家鸣,潘国宗.细胞免疫反应性炎症性肠病动物模型的建立[J].中国医学科学院学报,1998,20(4):271.】大体形态损伤评分指标包括粘连、局部充血、溃疡及炎症。粘连及充血按有无及轻重分别计0,1,2分,出现炎症、溃疡数目增加1个、溃疡面>2cm时,范围每增加1cm,计分均加1。组织学指标包括溃疡、炎症、肉芽肿、纤维化及病变深度,按有无及轻重分别计0,1,2分,病变深度达黏膜下层肌层、浆膜层分别计1,2,3分。各项相加得总分。)
3.结论
综上所述,本实验证明:①松花粉对大鼠病变结肠黏膜有一定的修复作用;②炎症性肠病大鼠经松花粉提取物治疗后MAD含量降低,SOD的活力增加;③松花粉提取物对大鼠病变结肠黏膜有一定的修复作用;④炎症性肠病大鼠经松花粉提取物治疗后MAD含量降低,SOD的活力增加,以中、高剂量组的治疗效果为佳。
Claims (8)
1.松花粉提取物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途;其中松花粉提取物的制备方法包含下列步骤:
1)取松花粉,用水或醇类或水醇混合溶液作溶剂提取药材,按照g/ml,松花粉与所述溶剂的比例为1∶5~1∶15;提取温度在室温到溶剂回流温度范围之内,重复1~4次,每次提取时间为0.5h~2h;
2)合并滤液,滤去药渣,减压浓缩或喷雾干燥,即得松花粉提取物。
2.权利要求1所述的松花粉提取物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途,其特征在于步骤1)中的醇指甲醇或乙醇。
3.权利要求1所述的松花粉提取物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途,其特征在于步骤1)中,醇浓度为40%-99%。
4.权利要求3所述的松花粉提取物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途,其特征在于醇浓度为80%。
5.权利要求1所述的松花粉提取物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途,其特征在于步骤1)中,按照g/ml,松花粉与溶剂的比例为1∶10。
6.权利要求1所述的松花粉提取物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途,其特征在于步骤1)中,提取温度为回流温度。
7.权利要求1所述的松花粉提取物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途,其特征在于步骤1)中,提取时间为1h。
8.松花粉在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途。
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