CN1559469A - 一种治疗心血管疾病的冻干粉针剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗心血管疾病的冻干粉针剂的制备方法，其特征是由降香提取的挥发油水饱和溶液和丹参精制液经冷冻干燥法制成。其制备方法如下：降香经水蒸气蒸馏法提取降香挥发油水饱和液；丹参药材经水提取，浓缩，加入澄清剂预处理剂和ZTC1+1天然澄清剂除去鞣质及其它大分子杂质，药渣经乙醇提取得醇提取浸膏，二者与降香挥发油水饱和液混合，加入赋形剂，经冷冻干燥法制成香丹冻干粉针。本发明用ZTC1+1天然澄清剂代替乙醇用于提取纯化工艺，可降低成本，缩短生产周期，操作简单，而且该制剂稳定性好，杂质少，无临床不良反应，疗效确切，适于进一步推广应用。

Description

一种治疗心血管疾病的冻干粉针剂的制备方法

所属技术领域

本发明技术属中药制药领域，更具体涉及了一种由中药降香和丹参的有效部位组成的冻干粉针，用于心血管疾病治疗，并涉及到制备方法中提取纯化工艺的改进。

背景技术

中药降香具有抗凝、抗血栓形成的作用，丹参具有活血化淤之功效，其水溶性成份丹参素和原儿茶醛均具较强的抗心肌缺血作用。其脂溶性成份丹参酮II_A对实验性心肌缺血和在再灌注性损伤具有改善作用，对心肌电生理的影响实验显示有钙拮抗作用，抗血小板聚集和抗血栓作用。隐丹参酮具有抗炎抑菌作用及雌激素样作用。这种以降香和丹参组方的制剂称为香丹制剂。在传统香丹注射液制备中，丹参的提取多采用传统的水提醇沉法除去水煎液中的淀粉、树胶、果胶、粘液质、色素、鞣质和无机盐等水溶性杂质，有资料表明在丹参提取液中有效成份在第一次醇沉中就损失了50％，此外，该工艺生产周期长，成本较高，耗用大量酒精，带来不安全隐患。

ZTC1+1天然澄清剂应用于中药粉针剂制备中，以吸附和絮凝的方式除去水煎液中的粗粒子以及淀粉、鞣质、胶质蛋白质和多糖等无效成分，具有有效性、专属性的特点，因其来源于自然界生物(甲壳类动物)所含的多糖经处理得到的物质，本身无毒，而且成本较低，易得，可代替乙醇作为澄清剂应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题，是对香丹冻干粉针剂制备工艺的改进，尤其是对丹参提取工艺的改进，采用ZTC1+1天然澄清剂代替乙醇除去水煎液中的粗粒子以及淀粉、鞣质、胶质蛋白质和多糖等无效成分；而且从药渣中提取了丹参的脂溶性成份，不仅有利于药材的综合利用，提高了药材利用率，并且增强了疗效。其具体制备方法如下：

降香挥发油水饱和液的制备降香加水浸润后，加水蒸馏，收集蒸馏液适量，冷藏24小时，分去油层，滤过，收集水溶液备用。

丹参精制液的制备丹参药材加水煎煮三次，煎液合并，浓缩至与生药量1∶1，冷却至35-40℃，按药液体积的0.5％加入0.1％的澄清剂预处理剂和0.1％的ZTC1+1天然澄清剂A组分和B组分，充分搅拌，冷藏24小时，取上清液，离心，加注射用水至适量，用10％的氢氧化钠溶液调PH6.0-6.8，灭菌，冷藏24小时，滤过，得滤液A。滤液A用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过，得滤液B。丹参药渣加入8倍量60％的乙醇，70℃时回流提取120分钟，滤过，回收乙醇至比重1.08～1.10(80℃时测)，得醇提浸膏C。醇提浸膏C加滤液B，滤液用10％的氢氧化钠溶液调PH6.0-6.8，用0.22um-0.45um的微孔滤膜过滤，加入降香的挥发油水饱和溶液，加赋形剂和注射用水至规定量，超滤，冷冻干燥，制成香丹冻干粉针。

澄清剂预处理剂的配制取澄清剂预处理剂适量，加注射用水，搅拌，充分溶胀，放置24小时，得0.1％的溶液。

ZTC1+1天然澄清剂A组分的配制取A组分适量，加注射用水，搅拌，充分溶胀，放置24小时，得0.1％的A组分。

ZTC1+1天然澄清剂B组分的配制取B组分适量，加0.1％的醋酸溶液，搅拌，充分溶胀，放置24小时，得0.1％的B组分。

以上述制备工艺制得香丹冻干粉针三批，结果见表1：

            表1香丹冻干粉针含量检测结果(mg/支)

样品号        021201         021202         021203

丹参素        37.235         36.030         38.425

原儿茶醛        7.655         7.540         7.465

丹参酮II_A      59.230        58.475        60.120

隐丹参酮        48.420        46.575        45.155

其它检测项目及结果如下：

性状；本品为黄棕色粉末

鉴别：呈正反应

PH：5.0-7.0

澄明度：符合要求

不溶性微粒(≥0.25um，≥0.5um)：符合要求

其他：均符合粉针剂的要求

无菌检查：合格

热原：合格

含量(HPLC法，本品每只含丹参以丹参素计不得少于30mg，以原儿茶醛计不得少于6.5mg，以丹参酮II_A计不得少于52mg，以隐丹参酮计不得少于43mg)：合格

目前国家标准香丹注射液为原儿茶醛不少于0.17mg/ml.

试验一：香丹冻干粉针的致敏试验

试验目的：通过动物试验观察香丹冻干粉针是否存在致敏现象。

实验方法如下：取健康的豚鼠18只，体重250-300g，随机分为三组，分别为阳性对照组、样品组和阴性对照组。隔日腹腔注射阳性对照品2％的新鲜鸡蛋清0.5ml，样品0.5ml(样品1支，加注射用水配制成10ml的溶液)，阴性对照品5％的葡萄糖注射液0.5ml，连续三次，分别与第一次给药后的第14天、21天再注射上述样品1ml，观察，若有竖毛、昏倒则有不良反应，为轻度过敏；若兴奋不安、呼吸困难、窒息死亡为严重的过敏反应，结果见表2：

        表2香丹冻干粉针的致敏试验结果

组别                                  结果

阳性对照组                            严重过敏反应

样品组                                无过敏反应

阴性对照组                            无过敏反应

结果显示：样品组和阴性对照组均无过敏反应，而阳性对照组有严重的过敏反应。

结论：香丹冻干粉针无致敏作用。

试验二：香丹冻干粉针的致痛试验

试验目的：通过动物试验观察香丹冻干粉针是否存在刺激肌肉现象。

实验方法如下：取18-25g的健康小白鼠20只(雌雄均可)，每组10只，分别为对照组与药物组。向每只小白鼠的一侧后趾皮内注射0.03ml的药液(样品1支，加注射用水配制成10ml的溶液)，注射后立即放入鼠笼中，并立即观察2分钟内的舔足、提足和踢足反应，作统计，统计时舔足每一次计2分，提足和踢足以每一次相当于舔足50次，每只小白鼠反应统计之和即为该小白鼠的反应得分。将组内各只小白鼠的反应得分相加，再除以小白鼠数，即得小白鼠对该药的疼痛反应的平均得分。

对照组注射等渗的生理盐水溶液，给药方法与统计方法与给药组一致。

结果显示：药物组与对照组的小白鼠的疼痛平均得分均在60分以下。

结论：香丹冻干粉针无致痛作用。

试验三：香丹冻干粉针抗急性脑缺血细胞间粘附作用试验

试验目的：通过动物试验比较观察香丹冻干粉针在抗急性脑缺血细胞间粘附作用方面与香丹注射液的比较。

实验方法如下：成年雄性Wistar大鼠40只，体重250-320g，随机分为正常对照组、伪手术组、脑缺血-再灌注损伤(脑缺血组)、脑缺血-再灌注损伤组加香丹冻干粉针组，脑缺血-再灌注损伤组加香丹注射液组，每组8个样本。用巴比妥钠腹腔注射麻醉(40mg/ml体重)，切开颈部，实验组暴露一侧颈内动脉，用尼龙线阻塞大脑中动脉，12小时后放开，再灌注损伤加香丹冻干粉针组立即腹腔注射香丹冻干粉针(5mg/kg)。实验组及对照组在缺血再灌注后4、12、24小时抽取静脉血2-4ml，用右旋糖苷沉降及Percoll梯度法分离出多形核粒细胞PMN备用，离心条件为1500r/min，15min。大鼠脑毛细血管内皮细胞(CCEC)的制备采用0.01％弹性蛋白酶灌注脑30min，取软脑膜及脑表面组织剪碎后以2000目滤网过滤，用Percoll密度梯度离心分离出CCEC用形态上及凝血因子VIII相关抗原免疫荧光法鉴定。CCEC取自正常大鼠，培养72-97小时，分别加入各组不同时相点的血清，再培养1-6小时，再分别加入各组不同时相点的PMN；静置1小时后，进行微管吸吮试验。计算粘附力和粘附应力，进行统计学处理，结果见表3和表4：

表3  四组大鼠伪手术后或脑缺血-再灌注不同时间点PMN与CCEC粘附力(N)的变

                                    化

组别            动物数(只)        4h              12h             24h

伪手术组            8        4.02±0.32**     4.96±0.52**    3.89±0.31**

脑缺血加香丹注      8        16.48±0.39*     19.56±2.16*    15.18±0.63*

射液组

脑缺血组            8        18.72±1.92      25.66±2.04     16.12±1.43

脑缺血加香丹        8        15.23±0.16**    17.62±1.82**   14.24±0.25*

冻干粉针组

注：与脑缺血组比较.*＜0.05，**＜0.01

表4  四组大鼠伪手术后或脑缺血-再灌注不同时间点PMN与CCEC粘附应力(Pa)的变化

组别        动物数(只)        4h                12h                24h

伪手术组        8        10.26±11.62**    11.08±14.18**    8.58±13.28**

脑缺血组        8        47.32±40.82      60.79±40.16      40.28±33.47

脑缺血加香丹    8        40.64±38.12**    42.48±36.28**    35.57±34.72*

注射液组

脑缺血加香丹    8        37.86±36.06**    39.67±34.24**    33.32±36.65*

冻干粉针组

注：与脑缺血组比较.*＜0.05，**＜0.01

结果显示：正常对照组大鼠PMN和CCEC粘附力平均为(3.26±0.18)N，粘附应力平均为(0.75±0.05)Pa；脑缺血组和脑缺血加香丹冻干粉针组、脑缺血加香丹注射液组PMN和CCEC粘附力在脑缺血-再灌注损伤后4小时均明显升高，与正常对照组和伪手术组比较均有显著性差异(P＜0.01)，而脑缺血加香丹冻干粉针组、脑缺血加香丹注射液组CCEC粘附力各时间点均明显低于脑缺血组(P＜0.01)。脑缺血组和脑缺血加香丹冻干粉针组、脑缺血加香丹注射液组PMN和CCEC粘附力变化与粘附应力变化基本一致，脑缺血-再灌注损伤后4小时明显升高，与正常对照组和伪手术组比较均有显著性下降(P＜0.01)。而脑缺血加香丹冻干粉针组、脑缺血加香丹注射液组CCEC粘附应力各时间点均明显下降(P＜0.01或P＜0.05)。冻干粉针组、注射液组之间有差异，但未达显著水平。

结论：香丹冻干粉针有抗急性脑缺血细胞间粘附作用，并优于香丹注射液。

具体实施方式

实施例一：

降香挥发油水饱和液的制备取降香10kg，刨成薄片，加10倍量的去离子水浸润后，蒸馏，收集蒸馏液约7000ml，冷藏24小时，分去油层，滤过，水溶液另器收集。

丹参精制液的制备取丹参药材10kg，去除杂质，打成粗粉，分别加14倍、12倍和10倍量的去离子水煎煮，每次煎煮2小时，共三次，合并煎液，浓缩至与生药量1∶1，冷却至35-40℃，按药液体积的0.5％加入0.1％的澄清剂预处理剂和0.1％的ZTC1+1天然澄清剂B组分和A组分，充分搅拌，冷藏24小时，取上清液，离心，得滤液A。滤液A用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过，得滤液B。丹参药渣加入8倍量60％的乙醇，70℃时回流提取120分钟，滤过，回收乙醇至比重1.08～1.10(80℃时测)，得醇提浸膏C。醇提浸膏C加滤液B，加注射用水至10000ml，用10％的氢氧化钠溶液调PH6.0-6.8，灭菌，冷藏24小时，滤过，得滤液A。滤液A用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过，得滤液B。丹参药渣加入8倍量60％的乙醇，70℃时回流提取120分钟，滤过，回收乙醇至比重1.08～1.10(80℃时测)，得醇提浸膏C。醇提浸膏C加滤液B，滤液用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过。按滤液体积的0.5％加入针剂用活性炭，煮沸15分钟，放冷，滤过。滤液用10％的氢氧化钠溶液调PH6.0-6.8，用0.45um的微孔滤膜过滤，备用。

加入降香的挥发油水饱和溶液，加赋形剂磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和注射用水至规定量，超滤，冷冻干燥法制成香丹冻干粉针。

用法用量：静脉滴注，600mg香丹粉针用5％的葡萄糖注射液100-500ml稀释后使用，一日一次。

实施例二：

降香挥发油水饱和液的制备取降香10kg，刨成薄片，加10倍量的去离子水浸润后，蒸馏，收集蒸馏液约7000ml，冷藏24小时，分去油层，滤过，水溶液另器收集。

丹参精制液的制备取丹参药材10kg，去除杂质，切成饮片，分别加10倍、8倍和6倍量的去离子水煎煮，每次煎煮2小时，共三次，合并煎液，浓缩至与生药量1∶1，冷却至35-40℃，按药液体积的0.5％加入0.1％的澄清剂预处理剂和0.1％的ZTC1+1天然澄清剂B组分和A组分，充分搅拌，冷藏24小时，取上清液，离心，得滤液A。滤液A用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过，得滤液B。丹参药渣加入10倍量60％的乙醇，70℃时回流提取120分钟，滤过，回收乙醇至比重1.08～1.10(80℃时测)，得醇提浸膏C。醇提浸膏C加滤液B，滤液用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过。按滤液体积的0.5％加入针剂用活性炭，煮沸15分钟，放冷，滤过。滤液用10％的氢氧化钠溶液调PH6.0-6.8，用0.45um的微孔滤膜过滤，备用。

加入降香的挥发油水饱和溶液，加赋形剂乳糖、甘露醇、乳糖甘露醇的混合物和注射用水至规定量，超滤，冷冻干燥法制成香丹冻干粉针。

用法用量：静脉滴注，600mg香丹粉针用5％的葡萄糖注射液100-500ml稀释后使用，一日一次。

实施例三：

降香挥发油水饱和液的制备取降香10kg，刨成薄片，加10倍量的去离子水浸润后，蒸馏，收集蒸馏液约7000ml，冷藏24小时，分去油层，滤过，水溶液另器收集。

丹参精制液的制备取丹参药材10kg，去除杂质，切成饮片，分别加12倍、10倍和8倍量的去离子水煎煮，每次煎煮2小时，共三次，合并煎液，浓缩至与生药量1∶1，冷却至35-40℃，按药液体积的0.5％加入0.1％的澄清剂预处理剂和0.1％的ZTC1+1天然澄清剂B组分和A组分，充分搅拌，冷藏24小时，取上清液，离心，得滤液A。滤液A用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过，得滤液B。丹参药渣加入10倍量60％的乙醇，70℃时回流提取120分钟，滤过，回收乙醇至比重1.10～1.12(80℃时测)，得醇提浸膏C。醇提浸膏C加滤液B，滤液用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过。按滤液体积的0.5％加入针剂用活性炭，煮沸15分钟，放冷，滤过。滤液用10％的氢氧化钠溶液调PH6.0-6.8，用0.22um的微孔滤膜过滤，备用。

加入降香的挥发油水饱和溶液，加赋形剂磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乳糖、甘露醇、乳糖甘露醇的混合物和注射用水至规定量，超滤，冷冻干燥法制成香丹冻干粉针。

用法用量：静脉滴注，600mg香丹粉针用5％的葡萄糖注射液100-500ml稀释后使用，一日一次。

Claims (6)

1.一种治疗心血管疾病的冻干粉针剂的制备方法，其特征在于具体步骤如下：

(1)降香加水浸润后，加水蒸馏，收集蒸馏液约适量，冷藏24小时，分去油层，滤过，水溶液另器收集；

(2)丹参药材加水煎煮三次，煎液合并，药渣另存。煎液浓缩至与生药量1∶1，冷却，加入澄清剂预处理剂和ZTC 1+1天然澄清剂，充分搅拌，冷藏24小时，取上清液，离心，加注射用水至适量，用10％的氢氧化钠溶液调PH：6.0-6.8，灭菌，冷藏24小时，滤过，得滤液A。滤液A用盐酸调PH至4.0，冷藏24小时，滤过，得滤液B；

(3)丹参药渣加入8倍量60％的乙醇，70℃时回流提取120分钟，滤过，回收乙醇在80℃时测得比重为1.08～1.10，得醇提浸膏C；

(4)醇提取膏C加滤液B，用10％的氢氧化钠溶液调PH：6.0-6.8，用0.22um-0.45um的微孔滤膜过滤，加入降香的挥发油水饱和溶液，加入赋形剂和注射用水至规定量，超滤，冷冻干燥制成香丹冻干粉针剂。

2.根据权利要求1所述的采用澄清剂预处理剂和ZTC 1+1天然澄清剂除去鞣质及其它大分子杂质，ZTC1+1天然澄清剂的浓度为0.1％，加入量为药液体积的0.5％，加入顺序为先B组分，后A组分。

3.根据权利要求1所述的丹参浓缩液的冷却温度为35-40℃。

4.根据权利要求1所述的浓缩是采用离心过滤的方法。

5.根据权利要求1所述的采用超滤方法，用于除热原和细小的不溶性微粒。

6.根据权利要求1所述的赋形剂为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乳糖、甘露醇、乳糖甘露醇中的两种或多种混合物。