CN1895367A - 一种治疗冠心病心绞痛的中药制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种治疗冠心病心绞痛的中药制剂及其制备方法，按照重量组份计算：它是由荭草1～10份和灯盏细辛1～10份制备而成的；与现有技术相比，本发明组方精简，工艺先进，剂型新颖，效果明显；本发明还在于从提取工艺上逐步就验证了其的药效，依照本发明提取工艺所得的水针剂能够明显增加心肌营养性血流量，改善心肌缺血、减少心肌梗塞，具有抗心肌缺血和改善缺血性心肌心电图作用，明显增加冠脉流量，降低心肌耗氧量。本发明水针剂具有活血化瘀、通脉止痛之功效，能迅速缓解心血瘀阻等心绞痛的症状，，其临床应用安全有效，质量可控。
Description
技术领域：本发明涉及一种治疗冠心病心绞痛的中药制剂及其制备方法，属于中药制药的技术领域。
背景技术：冠心病心绞痛是指由于冠状动脉硬化或痉挛导致心肌缺血、缺氧所引起的心绞痛，约占心绞痛患者的90％。它属于人类重大疾病之一，其死亡率一直是重大疾病之首。冠心病心绞痛以前多发于中老年患者，随着社会的发展，生活水平的提高，其发病年龄趋于年轻化。因此，冠心病的发病率趋向提高之势，防治任务十分沉重，已引起国内外关注。随着现代科学技术的发展，人们对冠心病的诊断和防治也取得了一些进展，如在检查方面，由原来的常规心电图、负荷心电图检查，更新到动态心电图、超声心动检查术、冠脉造影、电子束CT机的应用、生化检查和心功能测定方法也在不断改进，为早期诊断提供了良好的手段，在防治方面，建立了包括冠脉侧支循环和冠状动脉搭桥术等，药物治疗方面，在扩张冠脉的基础上(硝酸酯、亚硝酸酯类)，出现了钙离子拮抗剂、β-受体阻滞剂、溶栓药物的应用，为治疗冠心病心绞痛提供了多种手段。然而临床实践表明，单纯西药治疗只治标不治本，尤其是药物的副作用，使患者难以接受和长期服用。当代人类回归大自然的愿望日益强烈，普遍希望接受天然无公害的中药治疗，从而为中医药的发展提供了良好的契机。冠心病心绞痛在中医中称之为胸痹心痛，开发一种高效、低毒、质量稳定、剂型先进的治疗冠心病心绞痛的纯中药制剂是本发明的目的。冠心病心绞痛病情来势凶猛，对病人身心造成极大的伤害，因此，临床上常常需要一种能够迅速缓解症状、解除病人痛苦、起效迅速、效果明显的药物。
中国专利02128066.5报道了荭草1-50、灯盏细辛50-0制作而成的一种中药制剂，该制剂的制备采用以下工艺：将荭草、灯盏细辛加水煎煮、滤过，滤液减压浓缩成浸膏，用乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，调PH值至中性，放置，取上清液用乙酸乙酯提取，水层液调PH值酸性，用正丁醇提取，减压回收正丁醇，残留物用乙醇溶解，聚酞胺柱分离，用50-95％的乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥得提取物。由于上述工艺中将荭草和灯盏细辛共同提取，灯盏细辛在其中也采用乙酸乙酯提取和正丁醇提取，造成该药物有效成分的损失，本发明对此进行了工艺改进，将荭草和灯盏细辛分别提取，采用不同的步骤进行，分别得到提取物，再将它们合并，进一步制成新的药物制剂。
发明内容：
本发明的目的在于：提供一种治疗冠心病心绞痛的中药制剂及其制备方法，该制剂以软注射液剂为主：本发明在民间验方的基础上，对本方的临床应用、组方及药材资源进行了调查研究，在大量的药学和药理试验研究基础上，利用现代技术对制剂中药材的质量、药理学、毒理学、天然药物化学、制剂工艺、质量标准等进行了研究，具有组方精简，工艺先进，剂型新颖，临床应用安全有效，质量可控，崩解快，吸收、显效快，生物利用度高，疗效确切，稳定性好等优点。
本发明的中药制剂是这样构成的：按照重量组份计算：它由荭草1～10份和灯盏细辛1～10份制备而成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、液体制剂、粉末剂、丸剂、软胶囊剂、悬浮剂、喷雾剂、气雾剂、水针剂、粉针剂、输液剂及其它药剂学上可以接受的剂型。
具体的说，按照重量组份计算：它由荭草5份和灯盏细辛1份制备而成注射液剂。
本发明的中药制剂，是经过对荭草和灯盏细辛分别提取的步骤制备的，所述步骤进一步包括将分别提取后得到的提取物合并，以该合并的提取物为药物活性成分，按照制剂学常规技术制备成制剂。
所述分别提取，步骤如下：
步骤1)荭草水煮，醇沉，调PH值，上清液用醋酸乙酯萃取，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH，用正丁醇萃取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上层析柱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；
步骤2)灯盏细辛水煮，醇沉，调PH，弃上清液，沉淀用水洗，干燥，得灯盏细辛提取物。
所述上层析柱可为单独的聚酰胺、单独的大孔树脂柱或两者同时使用。
以上步骤进一步包括将荭草提取物和灯盏细辛提取物合并，按照制剂学常规技术，制成所述中药制剂的步骤。
本发明的中药制剂，制备方法为：步骤1)荭草加水煎煮，滤液浓缩，醇沉，静置，滤液回收乙醇并浓缩，用饱和碳酸钠调PH值，充分搅拌，静置，取上清液滤过，滤液先用醋酸乙酯萃取，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，再用盐酸调PH，最后用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；步骤2)灯盏细辛加水煎煮滤液浓缩，醇沉搅拌，静置，滤液回收乙醇并浓缩，用盐酸调PH，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗，干燥，得灯盏细辛提取物。上述两种提取物，加注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水，混匀，用微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，灭菌，即得注射液。
优选的步骤1)为：荭草加4～20倍水煎煮1～5次，每次0.5～5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达20～95％，搅拌均匀，静置6～48小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04～1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至4.7～10，充分搅拌，静置1～12小时，取上清液滤过，滤液用1/4～1倍量的醋酸乙酯萃取1～5次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH1～4.5，用1/4～1倍量水饱和的正丁醇提取2-6次，合并正丁醇液，用1/16～1/2倍量水洗1～3次，减压回收正丁醇，残留物加45～98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(10～1000g，Φ4～10cm，径高比1∶2～10，吸附流速：0.5～4.0BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；
优选的步骤2)为：灯盏细辛加4～20倍水煎煮1～5次，每次0.2～1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达20～90％，不断搅拌，静置6～48小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH1～4.5，55℃保温2～10小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH2～5，真空干燥，得灯盏细辛提取物。
进一步包括步骤3)，步骤3)为：将荭草提取物和灯盏细辛提取物合并，加注射用水，搅拌使溶，再加入甘油，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水，混匀，用微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，灭菌，即得注射液。
更优选的步骤1)为：荭草加10倍水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05-1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达65％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04-1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至7，充分搅拌，静置3小时，取上清液滤过，滤液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH3，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，减压回收正丁醇，残留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，径高比1∶6，吸附流速：1.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；
更优选的步骤2)为：灯盏细辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得灯盏细辛提取物；步骤3)为，将荭草提取物和灯盏细辛提取物合并，加1800毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
以上步骤中，所述的干燥可以采用微波真空干燥、减压真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，优选为微波真空干燥。
所用的附加剂可以是甘油、土温、司盘、磷脂一种或几种。优选为甘油。
本发明的功能主治：具有活血化瘀、通脉止痛功能。用于冠心病心绞痛心血瘀阻证，症见胸闷、胸部刺痛，固定不移，心悸不宁，唇舌暗紫，脉细涩等冠心病心绞痛见上述证候者。
本发明的方解：冠心病心绞痛属于中医的“胸痹心痛”范畴。中医认为，其主要病机为心脉痹阻，病位以心为主。心主血脉，为气血运行的动力。心脉痹阻，血瘀气滞，故出现胸闷、心痛等症，《素问.痹论》说：“心痹者，脉不通。”即心脉运化失常，气血运行受阻，致使气结血凝而发生胸痛。因此，瘀阻心脉是冠心病心绞痛的基本病机，治宜活血化瘀，通脉止痛。方以荭草活血、散血、止痛为主药，灯盏细辛增强主药通络止痛之功为辅。二药为伍，共奏活血化瘀，通脉止痛之功，与适应病症病机吻合。组方有用药精简力专，作用途径直接之长，无偏温偏凉之弊，特色较为明显辛散温通，甘补苦泻，散瘀和血，针对“胸痹心痛”之实邪遣方用药，无偏温偏凉之弊，符合中医组方理论，效果显著。
本发明的应用范围：本药剂用于冠心病心绞痛心血瘀阻证，症见胸部刺痛、胸闷，固定不移，心悸不宁，唇舌暗紫，脉细涩等冠心病心绞痛见上述证候者。
与现有技术相比，本发明注射液制剂具有活血化瘀、通脉止痛之功效，能够迅速缓解心血瘀阻等心绞痛的症状，起效迅速，效果明显；其组方精简，工艺先进，剂型新颖，临床应用安全有效，质量可控：并具有崩解快，吸收、显效快，生物利用度高，疗效确切，稳定性好等优点。本发明注射液具有方精力专、药源丰富、药用成分及药理作用基本清楚、临床应用安全有效、质量迅速等特点。
本申请人进行了一系列实验研究，以筛选本发明的制备工艺并证明药效作用。
一、本发明工艺的选择
1.对于本制剂工艺中的荭草化学成分主要是极性较大的黄酮类和酚酸类，可溶于水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯等极性较大的溶剂。经过水和不同浓度的乙醇进行提取试验比较，以异荭草素和荭草素的提取率为考察指标，试验结果以提取率最高的70％乙醇为100％计，水煎煮提取的相对提取率为95.13％，说明水和醇提取没有显著性差异，所以，本发明选择廉价的水为提取溶媒，并利用该类化合物在不同的的PH条件下正丁醇和乙酸乙酯溶解度的差异下进行纯化。
2.对于本制剂工艺中的灯盏细辛为药用全草，含有黄酮、内酯、挥发油、氨基酸等，主要成份为4′-羟基黄芩素、4′-羟基黄芩素-7-β葡萄糖醛酸甲酯甙等黄酮类化合物，该类化合物为多元酚类，可溶于水和乙醇等极性溶剂。本申请人分别用水和不同浓度的乙醇进行提取试验比较，以野黄芩甙的提取率为考察指标，试验结果以提取率最高的50％乙醇为100％计，水煎煮提取的相对提取率为95.36％，说明水和醇提取没有显著性差异，所以，本发明选择廉价的水为提取溶媒，并利用黄酮类化合物在酸性条件下析出沉淀，不溶于水，在中性和弱碱性条件下溶解的性质纯化精制。
3.本发明在制剂中所使用的注射剂附加剂可以是甘油、土温、司盘、磷脂一种或几种。但通过试验发现，如果采用其他附加剂有以下弊端：由于个体差异，土温容易产生溶血性反应，司盘和磷脂容易降低制剂的澄明度，引起浑浊。而甘油没有以上不足，因此，本发明优选甘油为附加剂。
4.本发明在制剂中所使用的所用的层析柱可为单独的聚酰胺、单独的大孔树脂柱或两者同时使用，优选为聚酰胺柱，所用聚酰胺粉80～100目，用量10-1000g。由于聚酰胺的目数对结果影响较大，商品聚酰胺的目数和实际目数有时相差较大，必要时应过筛。
所述的干燥可以采用微波真空干燥、减压真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，优选为微波真空干燥。
5、药效学试验研究
根据本发明的临床用途，选用抗实验性心肌缺血作用试验为评价指标，对该方的工艺路线进行筛选。
5.1提取溶剂和提取方法的选择
5.1.1样品制备 按处方比例分别称取荭草和灯盏细辛药材，采用系统溶剂法，分别用醋酸乙酯、正丁醇、乙醇和水依次提取，分段制样，得样品1(A)、1(B)、1(C)、1(D)、2(A)、2(B)、2(C)、2(D)、3(A)、3(B)、3(C)、3(D)、4(A)、4(B)、4(C)、4(D)提取物，上述样品，于水浴上进一步除去残留溶剂，加适量水微热溶解，调PH值至6，充分搅拌，滴加5％明胶溶液至沉淀产生，再加乙醇使含醇量为75％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，加水稀释至相应浓度，调PH值至7.5，滤过，冷藏24小时，取上清液用0.45um微孔滤膜滤过，分装，灭菌，备用(样品1每1ml含2g生药，样品2每1ml含0.4g生药，样品3每1ml含2.5g生药，样品4每1ml含2.5g生药)。对上述样品进行药效学试验比较，考察该方法基本提取方法、提取溶媒，两味药材是分煎还是合煎等，结果见表1、表2。
5.1.2实验方法及结果
取SD雄性大鼠，随机分为18组，按照表1剂量分租给药。试验前动物麻醉、固定，记录正常心电图。打开胸腔前接上人工呼吸机，结扎左冠状动脉降支后，迅速关闭胸腔，恢复呼吸，记录心电图，有明显ST段抬高者为手术成功征象(剔除未出现明显心肌梗死心电图波形者)。各组分别股静脉给药3.0ml/kg，生理盐水对照组给同体积生理盐水。记录结扎喉10、30、120min各时间点心电图，计算各时间ST段上下偏移总mv数，并进行统计处理，结果见表2。试验结束后，立即取出心脏，用生理盐水洗余血，剪心房及各大血管、筋膜、心耳，称取心室重量，然后将心肌切成等厚度的5片，置于37℃0.5％N-BT染色体液中染色10min，取出剪去被染色的非梗塞心肌，称重未染色的梗塞心肌，按式子：心肌缺血百分比＝缺血区重量÷心室重量×100％，计算心肌缺血区百分率，进行统计处理，结果见表2。
表1对大鼠结扎左冠状动脉前降支后ECG的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 结扎前 | 结扎后∑-ST(mv) | |||
| 10min | 30min | 60min | 120min | ||||
| N.S对照组 | - | 10 | 0.42±0.07 | 0.56±0.11 | 0.62±0.10 | 0.67±0.09 | 0.69±0.11 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 10 | 0.43±0.05 | 0.47±0.05* | 0.51±0.07** | 0.59±0.08* | 0.63±0.10 |
| 1(A) | 6.0 | 9 | 0.40±0.07 | 0.53±0.09 | 0.63±0.10 | 0.59±0.08* | 0.65±0.08 |
| 1(B) | 10 | 0.40±0.05 | 0.46±0.09* | 0.53±0.06* | 0.58±0.10* | 0.65±0.10 | |
| 1(C) | 9 | 0.43±0.07 | 0.46±0.08* | 0.56±0.07 | 0.57±0.09* | 0.64±0.11 | |
| 1(D) | 10 | 0.42±0.07 | 0.49±0.09 | 0.57±0.10 | 0.57±0.11* | 0.64±0.12 | |
| 2(A) | 1.2 | 7 | 0.41±0.06 | 0.46±0.05* | 0.54±0.08 | 0.57±0.10* | 0.61±0.10 |
| 2(B) | 10 | 0.44±0.05 | 0.52±0.06 | 0.60±0.11 | 0.63±0.11 | 0.68±0.10 | |
| 2(C) | 8 | 0.40±0.07 | 0.44±0.11* | 0.56±0.10 | 0.61±0.08 | 0.64±0.07 | |
| 2(D) | 10 | 0.40±0.05 | 0.51±0.07 | 0.60±0.08 | 0.62±0.11 | 0.62±0.10 | |
| 3(A) | 7.5 | 10 | 0.42±0.04 | 0.50±0.08 | 0.55±0.07 | 0.60±0.10 | 0.64±0.11 |
| 3(B) | 7 | 0.40±0.04 | 0.46±0.07 | 0.52±0.08* | 0.60±0.08 | 0.62±0.10 | |
| 3(C) | 8 | 0.40±0.04 | 0.46±0.07* | 0.52±0.08* | 0.58±0.11 | 0.60±0.11 | |
| 3(D) | 9 | 0.41±0.05 | 0.50±0.07 | 0.62±0.06 | 0.63±0.08 | 0.65±0.11 | |
| 4(A) | 7.5 | 10 | 0.41±0.05 | 0.47±0.06* | 0.54±0.06* | 0.60±0.10 | 0.65±0.12 |
| 4(B) | 8 | 0.39±0.06 | 0.44±0.05** | 0.50±0.07** | 0.58±0.11* | 0.64±0.10 | |
| 4(C) | 10 | 0.41±0.04 | 0.47±0.06* | 0.50±0.08** | 0.55±0.10* | 0.61±0.12 | |
| 4(D) | 10 | 0.40±0.04 | 0.46±0.06 | 0.53±0.08* | 0.57±0.11* | 0.63±0.11 | |
表2对大鼠急性心肌梗塞范围的影响(X±SD)
| 样品 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 心室重(g) | 梗死重(g) | 心肌缺血区百分比(％) |
| N.S对照组 | - | 10 | 0.74±0.15 | 0.19±0.05 | 26.16±6.17 |
| 复方丹参注射液 | 6.0 | 10 | 0.81±0.14 | 0.13±0.06 | 16.48±8.96* |
| 1(A) | 6.0 | 9 | 0.76±0.20 | 0.14±0.05 | 19.12±8.52 |
| 1(B) | 10 | 0.74±0.19 | 0.12±0.06 | 16.10±7.16** | |
| 1(C) | 9 | 0.73±0.13 | 0.14±0.05 | 18.96±6.18* | |
| 1(D) | 10 | 0.78±0.24 | 0.14±0.05 | 19.67±7.18* | |
| 2(A) | 1.2 | 7 | 0.75±0.24 | 0.13±0.06 | 17.62±7.16* |
| 2(B) | 10 | 0.77±0.21 | 0.15±0.04 | 20.00±3.11* | |
| 2(C) | 8 | 0.83±0.17 | 0.16±0.05 | 19.29±4.09* | |
| 2(D) | 10 | 0.72±0.18 | 0.18±0.11 | 23.82±11.10 | |
| 3(A) | 7.5 | 10 | 0.73±0.24 | 0.17±0.06 | 26.21±15.03 |
| 3(B) | 7 | 0.77±0.22 | 0.15±0.08 | 18.18±7.19* |
| 3(C) | 8 | 0.78±0.19 | 0.14±0.06 | 17.52±7.32* | |
| 3(D) | 9 | 0.76±0.21 | 0.16±0.06 | 21.92±7.50 | |
| 4(A) | 7.5 | 10 | 0.75±0.16 | 0.12±0.07 | 16.74±11.22* |
| 4(B) | 8 | 0.70±0.12 | 0.12±0.04 | 17.59±5.89** | |
| 4(C) | 10 | 0.76±0.16 | 0.11±0.04 | 15.59±6.27** | |
| 4(D) | 10 | 0.72±0.14 | 0.10±0.06 | 15.70±9.83* |
与N.S对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
注：样品1为荭草药材单独提取，样品2为灯盏细辛药材单独提取。样品3为两味药材混合提取。样品4为分别单独提取后，提取物混合制样。A-醋酸乙酯，B-为正丁醇提取，C-为乙醇，D为水煮提取，阳性对照药：复方丹参注射液，批号0410418援生医药集团生产。
试验结果表明，除样品1(A)、2(D)、3(A)、3(D)外，各给药组均能不同程度改善缺血性心及心电图，使心肌缺血区的百分率降低，对急性心肌梗死具有保护作用，其中正丁醇和乙醇水提取液作用比较明显，与N.S对照组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)，而醋酸乙酯和水提液的作用较差。试验结果提示：第一，该方中有效成分主要为极性较大的物质，同时说明有机溶剂提取后，水提液中仍有活性成分，为排除溶剂使用先后对药理作用的影响，荭草药材应选择水、乙醇、正丁醇分别进行比较。灯盏细辛药草应应选择乙醇、正丁醇、醋酸乙酯分别进行比较：第二，样品4的作用明显比样品3强，说明两药分开提取比合并提取效果好，理化性质研究的结果也表明，两药合并提取，由于提取液PH值较低，有效成分提取率不高。
5.2荭草提取工艺的选择
根据上述试验结果，分别选用正丁醇、乙醇和水进行提取，并对试验结果进行药效学试验比较。
5.2.1样品制备 取荭草加正丁醇回流提取，回收正丁醇，浓缩，于水浴上进一步除去残留溶剂，加适量水微热溶解，调PH值至6，滴加5％明胶溶液至沉淀产生，再加乙醇使含醇量为75％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，加水稀释至相应浓度，调PH值至7.5，滤过，冷藏24小时，取上清液用0.45um微孔滤膜滤过，分装，灭菌，备用(每1ml含2g生药)。
乙醇提取样品制备 取荭草加60％乙醇回流提取，回收乙醇，同法制备样品。
水煮煎液制备 取荭草加水煎煮，合并滤液，浓缩至相对密度1.06(50℃)，加2倍乙醇处理，回收乙醇，同法制备样品。
5.2.2试验方法及结果：试验方法同前，结果见表3、表4。
表3对大鼠结扎左冠状动脉前降支后ECG的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量 | 动物数 | 结扎前 | 结扎后∑-ST(mv) |
| g/kg | (只) | 5min | 15min | 30min | 60min | 120min | ||
| N.S对照组 | - | 10 | 0.41±0.06 | 0.50±0.05 | 0.55±0.06 | 0.63±0.10 | 0.65±0.09 | 0.67±0.11 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 10 | 0.43±0.07 | 0.43±0.06** | 0.48±0.07* | 0.51±0.07** | 0.56±0.08* | 0.59±0.10 |
| 正丁醇提取 | 6.0 | 8 | 0.42±0.07 | 0.44±0.08* | 0.47±0.07* | 0.56±0.06 | 0.59±0.09 | 0.61±0.09 |
| 乙醇提取 | 6.0 | 10 | 0.41±0.05 | 0.44±0.05** | 0.48±0.06** | 0.52±0.08* | 0.56±0.08* | 0.62±0.12 |
| 水煎煮提取 | 6.0 | 8 | 0.40±0.07 | 0.42±0.08* | 0.47±0.09* | 0.50±0.07** | 0.54±0.09* | 0.54±0.12 |
与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
表4对大鼠急性心肌梗塞范围的影响(X±SD)
| 样品 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 心室重(g) | 梗死重(g) | 心肌缺血区百分比(％) |
| N.S对照组 | - | 10 | 0.80±0.24 | 0.18±0.09 | 23.02±10.29 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 10 | 0.68±0.13 | 0.09±0.04 | 14.11±6.65* |
| 正丁醇提取 | 6.0 | 8 | 0.65±0.10 | 0.08±0.03 | 13.01±6.59* |
| 乙醇提取 | 6.0 | 10 | 067±0.16 | 0.10±0.02 | 15.75±3.10* |
| 水煎煮提取 | 6.0 | 8 | 0.80±0.23 | 0.10±0.07 | 12.58±8.07* |
与N.S对照组比较*P＜0.05
阳性对照：香丹注射液 批号040706 华西医科大学制药厂
试验结果表明，各给药组均能改善缺血性心及心电图，使心肌缺血区的百分率降低，对急性心肌梗死有明显保护作用，与生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)，组间比较无显著性差异(P＞0.05)。制备工艺研究的结果表明，有机溶剂提取的样品在后续工艺处理中有效成分的损失较大，制剂的色泽在加热灭菌时变深，水煮提取制备的样品制剂中有效成分得提取率高，制剂质量易于控制，故本品以廉价的水为溶剂煎煮提取。
5.3灯盏细辛提取工艺的选择
根据试验结果，分别选用醋酸乙酯、正丁醇、乙醇和水进行提取，并根据灯盏细辛所含化学成分的理化性质，为提高制剂中有效成分的含量，同时制备酸化精制样品进行药效学试验比较。
5.3.1样品制备
有机溶剂提取 取灯盏细辛，分别用醋酸乙酯、正丁醇、60％乙醇回流提取，回收溶剂，得提取物。
水为煎煮提取 取灯盏细辛加水煎煮，合并滤液，浓缩至每ml含生药2g，加乙醇沉淀处理，回收乙醇，得提取物。
酸化精制样品的制备 取灯盏细辛加水煎煮，合并滤液，浓缩至每ml含生药2g，加乙醇沉淀处理，回收乙醇并并浓缩至每ml含生药1g，用盐酸调PH值至2，55℃保温8h倾弃上清液，抽滤，沉淀真空干燥，得提取物。
上述提取物，加适量水微热熔解，调PH值至7，再加水稀释至相对的浓度，冷藏24小时，用0.45um微孔滤膜滤过，分装，灭菌，每支2ml含0.4g生药/ml)。
5.3.2试验方法及结果：试验方法同前，结果见表5、表6。
表5对大鼠结扎左冠状动脉前降支后ECG的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 结扎前 | 结扎后∑-ST(mv) | ||||
| 5min | 15min | 30min | 60min | 120min | ||||
| N.S对照组 | - | 10 | 0.41±0.06 | 0.50±0.05 | 0.55±0.06 | 0.63±0.10 | 0.65±0.09 | 0.67±0.11 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 10 | 0.43±0.07 | 0.43±0.06** | 0.48±0.07* | 0.51±0.07** | 0.56±0.08* | 0.59±0.10 |
| 醋酸乙酯提取 | 1.2 | 10 | 0.40±0.04 | 0.46±0.06 | 0.49±0.07* | 0.52±0.09** | 0.56±0.10 | 0.60±0.13 |
| 正丁醇提取 | 1.2 | 10 | 0.42±0.05 | 0.48±0.05 | 0.49±0.07* | 0.52±0.11* | 0.59±0.10 | 0.64±0.11 |
| 乙醇提取 | 1.2 | 10 | 039±0.04 | 0.45±0.05* | 0.47±0.06* | 0.51±0.09* | 0.56±0.09 | 0.58±0.14 |
| 水煎煮提取 | 1.2 | 10 | 0.41±0.04 | 0.45±0.08* | 0.46±0.08* | 0.50±0.09* | 0.54±0.12* | 0.57±0.12* |
| 酸化精制 | 1.2 | 10 | 0.39±0.05 | 0.42±0.09 | 0.47±0.09* | 0.50±0.11* | 0.54±0.12* | 0.59±0.13 |
与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
表6对大鼠急性心肌梗塞范围的影响(X±SD)
| 样品 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 心室重(g) | 梗死重(g) | 心肌缺血区百分比(％) |
| N.S对照组 | - | 10 | 0.80±0.24 | 0.18±0.09 | 23.02±10.29 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 10 | 0.68±0.13 | 0.09±0.04 | 14.11±6.65* |
| 醋酸乙酯提取 | 1.2 | 10 | 0.73±0.20 | 0.12±0.06 | 17.35±8.05 |
| 正丁醇提取 | 1.2 | 10 | 0.69±0.15 | 0.10±0.06 | 15.31±8.88 |
| 乙醇提取 | 1.2 | 10 | 0.70±0.16 | 0.10±0.04 | 14.48±6.58* |
| 水煎煮提取 | 1.2 | 10 | 0.68±0.15 | 0.09±0.05 | 13.56±6.17* |
| 酸化精制 | 1.2 | 10 | 0.67±0.18 | 0.09±0.08 | 12.62±10.28* |
与N.S对照组比较*P＜0.05
阳性对照：香丹注射液 批号040706 华西医科大学制药厂
试验结果表明，各给药组均有不同程度改善缺血性心及心电图，使心肌缺血区的百分率降低，对急性心肌梗死有明显保护作用。极性较大的溶剂水、乙醇提取的样品和酸化精制样品作用较明显，与生理盐水组比较均有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)，各组间比较无显著性差异(P＞0.05)。制备工艺研究的结果表明，有机溶剂提取的样品，色素较重，后续工艺处理中测定有效成分的损失率较大，水煮提取制备的样品制剂中有效成分得提取率高，制剂质量易于控制，酸化精致工艺可将灯盏细辛中主要有效成分野黄芩甙有效提取，半成品中野黄芩甙转移率达55％，纯度达60％以上，工艺具有生产成本低，安全等优点，故灯盏细辛采用水煎煮，乙醇沉淀除杂，酸化精致的工艺提取较合理。
5.4药材单独提取或合并提取工艺选择
为进一步确定本发明方中的提取工艺，通过药效学试验，对方中两味药材单独提取或合并提取工艺进行试验。
5.4.1样品制备
样品1(单独水煎煮提取)取荭草加水煎煮，合并滤液，浓缩，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置12小时，滤过，浓缩，滴加5％明胶溶液至沉淀产生，再加乙醇使含醇量为80％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得荭草提取物。取灯盏细辛加水煎煮，合并滤液，浓缩，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，滤过，浓缩，再加乙醇使含醇量为80％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得灯盏细辛提取物；取荭草和灯盏细辛提取物加注射用水420ml微热溶解，调PH值至7.5，补加注射用水至450ml滤过，置冰箱中静置24小时，用0.45um微孔滤膜滤过，分装(每支21ml，每1ml含2g生药)灭菌，即得。
样品2(混合水煎煮提取)取荭草、灯盏细辛加水煎煮，合并滤液，浓缩，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置12小时，滤过，浓缩，滤液回收乙醇，滴加5％明胶溶液至沉淀产生，再加乙醇使含醇量为80％，静置24小时，滤过，浓缩近干，得提取物。取提取物，加适量水微热熔解，调PH值至7，再加水稀释至相对的浓度，冷藏24小时，用0.45um微孔滤膜滤过，分装，灭菌，每支2ml含0.4g生药/ml)。
5.4.2试验方法及结果：试验方法同前，结果见表7、表8。
表7对大鼠结扎左冠状动脉前降支后ECG的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 结扎前 | 结扎后∑-ST(mv) | ||||
| 5min | 15min | 30min | 60min | 120min | ||||
| N.S对照组 | - | 10 | 0.42±0.06 | 0.50±0.08 | 0.54±0.09 | 0.60±0.10 | 0.66±0.09 | 0.68±0.12 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 10 | 0.40±0.07 | 0.43±0.06* | 0.44±0.05* | 0.47±0.09** | 0.56±0.11 | 0.60±0.08 |
| 单独提取 | 6.0 | 10 | 0.41±0.06 | 0.41±0.06* | 0.44±0.07** | 0.50±0.10* | 0.54±0.14* | 0.58±0.11 |
| 混合提取 | 6.0 | 10 | 0.41±0.06 | 0.43±0.08 | 0.45±0.08* | 0.48±0.07** | 0.57±0.11 | 0.64±0.12 |
与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
表8对大鼠急性心肌梗塞范围的影响(X±SD)
| 样品 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 心室重(g) | 梗死重(g) | 心肌缺血区百分比(％) |
| N.S对照组 | - | 10 | 0.78±0.16 | 0.16±0.08 | 19.38±7.47 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 10 | 0.80±0.11 | 0.08±0.05 | 10.48±6.51* |
| 单独提取 | 6.0 | 10 | 0.74±0.13 | 0.09±0.03 | 11.82±3.68* |
| 混合提取 | 6.0 | 10 | 0.76±0.10 | 0.10±0.02 | 13.73±3.72* |
与N.S对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
阳性对照：香丹注射液 批号040706 华西医科大学制药厂
试验结果表明，各给药组均能改善缺血性心及心电图，使心肌缺血区的百分率降低，对急性心肌梗死有明显保护作用。与生理盐水组比较均有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)，尽管组间比较无显著性差异(P＞0.05)。但单独提取样品的作用趋势优于合并提取样品，结合理化性质研究的结果，本发明中两味药材不宜混合提取，故采用单独提取工艺路线。
鉴于荭草提取涉及吸附分离，增加对聚酰胺和大孔树脂树脂的选择。
5.5吸附分离技术的应用
根据荭草所含化学成分的性质，我们应用聚酰胺和大孔树脂D101进行分离纯化，对样品进行抗试验性心肌缺血和耐缺氧试验，以考察吸附分离工艺是否可行。
5.5.1样品制备
荭草依法加水煎煮，醇沉处理，合并滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.03(50℃)，置冰箱放置24h，滤过，滤液上聚酰胺柱(25g，4×50cm)，先用水洗，继用85％乙醇洗脱，收集乙醇液，得样品A。流穿液和水洗液上D101树脂柱(250g，5×70cm)，用250ml水洗，继用500ml85％乙醇洗脱，收集乙醇液，得样品B。水洗液为得样品C。上聚酰胺柱和大孔树脂柱的乙醇洗脱液合并，得样品D。
上述样品A、B、D回收乙醇，水浴上进一步除去残留溶剂，加水微热熔解，调PH值至7.5，滤过，滤液冷藏24小时，用0.45um微孔滤膜滤过，分装(每1ml含2g生药)灭菌。样品C适当浓缩、加乙醇使含醇量达60％，静置12小时，抽滤，滤液回收乙醇，浓缩，滴加5％明胶溶液至淀产生，再加乙醇使含醇量为80％，静置24小时，滤液回收乙醇，浓缩近干，以下同上操作。
5.5.2试验方法及结果：
5.5.2.1对大鼠急性心肌梗塞范围的影响 试验方法同前，结果见表9、表10。
表9对大鼠结扎左冠状动脉前降支后ECG的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 结扎前 | 结扎后∑-ST(mv) | ||||
| 5min | 15min | 30min | 60min | 120min | ||||
| N.S对照组 | - | 9 | 0.41±0.05 | 0.54±0.07 | 0.58±0.09 | 0.61±0.09 | 0.64±0.12 | 0.70±0.12 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 9 | 0.40±0.06 | 0.45±0.06** | 0.48±0.07* | 0.51±0.10 | 0.53±0.11* | 0.61±0.10 |
| 样品A) | 6.0 | 9 | 0.41±0.05 | 0.45±0.04** | 0.49±0.07* | 0.52±0.09 | 0.57±0.08 | 0.62±0.09 |
| 样品(B) | 6.0 | 9 | 0.40±0.05 | 0.47±0.08* | 0.53±0.10 | 0.57±0.10 | 0.58±0.17 | 0.64±0.11 |
| 样品(C) | 6.0 | 10 | 0.40±0.05 | 0.45±0.08* | 0.45±0.09* | 0.51±0.09* | 0.53±0.11 | 0.59±0.12 |
| 样品(D) | 6.0 | 9 | 0.42±0.07 | 0.46±0.09* | 0.48±0.10* | 0.51±0.10* | 0.52±0.12* | 0.58±0.14 |
与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
表10注射液对大鼠急性心肌梗塞重量的影响(X±SD)
| 样品 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 心室重(g) | 梗死重(g) | 梗死重/心室重(％) |
| N.S对照组 | - | 9 | 0.84±0.19 | 0.16±0.07 | 19.84±10.57 |
| 阳性对照组 | 6.0 | 9 | 0.73±0.16 | 0.07±0.04 | 10.16±7.20* |
| 样品A) | 6.0 | 9 | 0.66±0.15 | 0.07±0.05 | 10.80±6.49* |
| 样品(B) | 6.0 | 9 | 0.69±0.14 | 0.09±0.06 | 14.58±10.23 |
| 样品(C) | 6.0 | 10 | 0.68±0.14 | 0.08±0.07 | 10.75±6.38 |
| 样品(D) | 6.0 | 9 | 0.69±0.12 | 0.08±0.05 | 10.88±6.00* |
与N.S对照组比较*P＜0.05
阳性对照：香丹注射液 批号040706 华西医科大学制药厂
试验结果表明，除大孔树脂吸附组分样品B外，各给药组对大鼠急性心肌梗塞均有明显保护作用，与生理盐水组比较均有显著性差异(P＜0.05)。
5.5.2.2对小鼠常压耐缺氧实验 取小鼠按表11分组及剂量给药，各给药组给药0.1ml/只，对照组给等量N.S，10min后，放入预先放15g钠石灰的广口瓶内，记录小鼠死亡时间，进行统计学处理，结果见表11。
表11对小鼠常压耐缺氧时间的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量g/kg | 动物数(只) | 死亡时间(min) |
| N.S对照组 | - | 10 | 39.1±11.09 |
| 阳性对照组 | 10 | 10 | 49.1±14.23 |
| 样品A) | 10 | 10 | 48.6±11.45 |
| 样品(B) | 10 | 10 | 51.5±14.89* |
| 样品(C) | 10 | 10 | 54.3±10.79** |
| 样品(D) | 10 | 10 | 43.8±10.62 |
与N.S对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
试验结果表明，样品B和样品B有明显耐缺氧作用，与生理盐水组比较均有显著性差异(P＜0.05、**P＜0.01)，其余各给药组与生理盐水组比较无显著性差异(P＞0.05)，各给药组间比较无显著性差异(P＞0.05)。
试验结果表明，荭草经聚酰胺吸附分离部分具有一定的生理活性，能明显改善缺血性心肌心电图，对大鼠急性心肌梗塞有明显保护作用。同时提示经经聚酰胺吸附处理后的大孔树脂D101吸附部分和水洗液仍然具有一定的活性，尤其是对小鼠常压耐缺氧作用较为明显。
实验表明，本发明工艺得到的产品比现有技术疗效好，稳定性高，副作用少，成本低，产量高，相互协同作用强，产生了良好的效果。
具体实施方式：
实施例1：
荭草5份和灯盏细辛1份(份为重量份，以下实施例均为重量份)
以上二味，荭草加10倍水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05-1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达65％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04-1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至7，充分搅拌，静置3小时，取上清液滤过，滤液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH3，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，减压回收正丁醇，残留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，径高比1∶6，吸附流速：1.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物：灯盏细辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加1800毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例2：
荭草1份和灯盏细辛1份
以上二味，荭草加4倍水煎煮1次，煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05(50℃)，加乙醇使含醇量达20％，搅拌均匀，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至4.7，充分搅拌，静置1小时，取上清液滤过，滤液用1/4倍量的醋酸乙酯萃取1次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH1，用1/4倍量水饱和的正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用1/16倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(10g，Φ4cm，径高比1∶2，吸附流速：0.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加4倍水煎煮1次，每次0.2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09(50℃)，加乙醇使含醇量达20％，不断搅拌，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10(50℃)，用盐酸调PH1，55℃保温2小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH2，真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加1500毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例3：
荭草10份和灯盏细辛10份
以上二味，荭草加20倍水煎煮5次，每次5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达95％，搅拌均匀，静置48小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至10，充分搅拌，静置12小时，取上清液滤过，滤液用1倍量的醋酸乙酯萃取5次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH4.5，用1倍量水饱和的正丁醇提取6次，合并正丁醇液，用1/2倍量水洗3次，减压回收正丁醇，残留物加98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(1000g，Φ10cm，径高比1∶10，吸附流速：4.0BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加20倍水煎煮5次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达90％，不断搅拌，静置48小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.12(50℃)，用盐酸调PH4.5，55℃保温10小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH5，真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加2500毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例4：
荭革6份和灯盏细辛1.2份
以上二味，荭草加12倍水煎煮3次，每次1.2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达78％，搅拌均匀，静置14小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04～1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至8.4，充分搅拌，静置3.6小时，取上清液滤过，滤液用0.6倍量的醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH3.6，用0.6倍量水饱和的正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用1/3倍量水洗2次，减压回收正丁醇，残留物加95％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(600g，Φ9.6cm，径高比1∶5，吸附流速：1.6BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加12倍水煎煮3次，每次0.6小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达65％，不断搅拌，静置16小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH2.2，55℃保温7小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH3.5，真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加2160毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油和司盘适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例5：
荭草7份和灯盏细辛1.4份
以上二味，荭草加14倍水煎煮4次，每次1.4小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达90％，搅拌均匀，静置16小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04～1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至4.9，充分搅拌，静置4小时，取上清液滤过，滤液用0.7倍量的醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH4.2，用0.7倍量水饱和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用1/6倍量水洗2次，减压回收正丁醇，残留物加96％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(700g，Φ10cm，径高比1∶5，吸附流速：1.7BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加14倍水煎煮4次，每次0.7小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达75％，不断搅拌，静置20小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH2.4，55℃保温7小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH4，真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加2500毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油和土温适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例6：
荭草8份和灯盏细辛1.6份
以上二味，荭草加16倍水煎煮4次，每次4.8小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达95％，搅拌均匀，静置20小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04～1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至10，充分搅拌，静置4.4小时，取上清液滤过，滤液用4/5倍量的醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH4.4，用4/5倍量水饱和的正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用1/5倍量水洗2次，减压回收正丁醇，残留物加98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(800g，Φ10cm，径高比1∶4，吸附流速：1.8BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加16倍水煎煮4次，每次0.8小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达85％，不断搅拌，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH2.6，55℃保温8小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH5，真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加2500毫升注射用水，搅拌使溶，再加入磷脂适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例7：
荭草9份和灯盏细辛1.8份
以上二味，荭草加18倍水煎煮5次，每次1.8小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达20～95％，搅拌均匀，静置6～48小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04～1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至10，充分搅拌，静置5.4小时，取上清液滤过，滤液用0.9倍量的醋酸乙酯萃取5次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH4.5，用0.9倍量水饱和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用1/5倍量水洗3次，减压回收正丁醇，残留物加98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(900g，Φ10cm，径高比1∶3，吸附流速：1.9BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加18倍水煎煮3次，每次0.9小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达90％，不断搅拌，静置28小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH3，55℃保温8小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH4.5，真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加2500毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例8：
荭草10份和灯盏细辛2份
以上二味，荭草加20倍水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达95％，搅拌均匀，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04～1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至10，充分搅拌，静置6小时，取上清液滤过，滤液用1倍量的醋酸乙酯萃取5次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH4.5，用1倍量水饱和的正丁醇提取6次，合并正丁醇液，用1/4倍量水洗3次，减压回收正丁醇，残留物加98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(1000g，Φ10cm，径高比1∶3，吸附流速：2.0BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加20倍水煎煮5次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达90％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH4.5，55℃保温4小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH5，真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加2500毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例9：
荭草4份和灯盏细辛1份
以上二味，荭草加8倍水煎煮2次，每次2.4小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达55％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04～1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至6，充分搅拌，静置6小时，取上清液滤过，滤液用2/5倍量的醋酸乙酯萃取1～5次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH2.4，用2/5倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/10倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加70％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(400g，Φ6.4cm，径高比1∶7，吸附流速：0.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加8倍水煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH3.5，55℃保温8小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH3，真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加1500毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
实施例10：
荭草5份和灯盏细辛1份
以上二味，荭草加10倍水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05-1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达65％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04-1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至7，充分搅拌，静置3小时，取上清液滤过，滤液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH3，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，减压回收正丁醇，残留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，径高比1∶6，吸附流速：1.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，再加入甘露醇及阿司帕坦，混匀，制成颗粒，干燥，即得颗粒剂。
实施例11：
荭草5份和灯盏细辛1份
以上二味，荭草加10倍水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05-1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达65％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.04-1.06(50℃)，用饱和碳酸钠调PH值至7，充分搅拌，静置3小时，取上清液滤过，滤液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH3，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，减压回收正丁醇，残留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，径高比1∶6，吸附流速：1.5BV/h)，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；灯盏细辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10-1.12(50℃)，用盐酸调PH2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得灯盏细辛提取物。取上述两种提取物，加入淀粉适量混匀，制粒，干燥，整粒，装入胶囊，即得胶囊剂。
Claims (10)
1.一种治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：按照重量组份计算：它由荭草1～10份和灯盏细辛1～10份制备而成。
2.如权利要求1所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：按照重量组份计算：它由荭草5份和灯盏细辛1份制备而成。
3.如权利要求1或2所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：是经过对荭草和灯盏细辛分别提取的步骤制备的，所述步骤进一步包括将分别提取后得到的荭草和灯盏细辛提取物合并，以该合并的提取物为药物活性成分，按照制剂学常规技术制备成制剂。
4、如权利要求3所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：所述分别提取，步骤如下：
步骤一、荭草水煮，醇沉，调PH值，上清液用醋酸乙酯萃取，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH，用正丁醇萃取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上层析柱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物：
步骤二、灯盏细辛水煮，醇沉，调PH，弃上清液，沉淀用水洗，干燥，得灯盏细辛提取物。
5、如权利要求4所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：进一步包括将荭草提取物和灯盏细辛提取物合并，按照制剂学常规技术，制成所述中药制剂的步骤。
6、如权利要求4所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：
其中所述步骤一为：荭草加4～20倍水煎煮1～5次，每次0.5～5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至50℃时相对密度为1.05～1.07，加乙醇使含醇量达20～95％，搅拌均匀，静置6～48小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度1.04～1.06，用饱和碳酸钠调PH值至4.7～10，充分搅拌，静置1～12小时，取上清液滤过，滤液用1/4～1倍量的醋酸乙酯萃取1～5次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH1～4.5，用1/4～1倍量水饱和的正丁醇提取2-6次，合并正丁醇液，用1/16～1/2倍量水洗1～3次，减压回收正丁醇，残留物加45～98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，设定聚酰胺柱参数为10～1000g，Φ4～10cm，径高比1∶2～10，吸附流速：0.5～4.0BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；
其中所述步骤二为：灯盏细辛加4～20倍水煎煮1～5次，每次0.2～1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至50℃时相对密度为1.09-1.11，加乙醇使含醇量达20～90％，不断搅拌，静置6～48小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度1.10-1.12，用盐酸调PH1～4.5，55℃保温2～10小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH2～5，真空干燥，得灯盏细辛提取物。
7、如权利要求6所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：进一步包括步骤三为：将荭草提取物和灯盏细辛提取物合并，加注射用水，搅拌使溶，再加入甘油，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水，混匀，用微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，灭菌，即得注射液。
8、如权利要求6所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：
其中所述步骤一为：荭草加10倍水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至50℃时相对密度为1.05-1.07，加乙醇使含醇量达65％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度1.04-1.06，用饱和碳酸钠调PH值至7，充分搅拌，静置3小时，取上清液滤过，滤液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，弃去醋酸乙酯液，合并水层液，用盐酸调PH3，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，减压回收正丁醇，残留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，设定聚酰胺柱参数为500g，Φ8cm，径高比1∶6，吸附流速：1.5BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得荭草提取物；
其中所述步骤二为：灯盏细辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至50℃时相对密度为1.09-1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至50℃时相对密度1.10-1.12，用盐酸调PH2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得灯盏细辛提取物。
9、如权利要求7所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：其中所述步骤三为，将荭草提取物和灯盏细辛提取物合并，加1800毫升注射用水，搅拌使溶，再加入甘油适量，混匀，用饱和碳酸钠调PH6.8-7.8，补加注射用水至10000毫升，混匀，用0.45um和0.22um微孔滤膜滤过，滤液无菌灌装，每支10ml，105℃下灭菌60分钟，即得1000支注射液。
10.按照权利要求4所述治疗冠心病心绞痛的中药制剂，其特征在于：所用上层析柱可为单独的聚酰胺、单独的大孔树脂柱或两者同时使用。
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Legal Events
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090916 Termination date: 20140418 |