CN105535219A - 文冠木黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种文冠木黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法和应用，所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为10～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素和儿茶精，使得文冠木中有效成分的含量大大提高，解决了现有技术中制备的文冠木总黄酮提取物有效成分含量较低，杂质多，没有达到有效活性成分富集的缺陷。
Description
技术领域
本发明药物提取物技术领域领域，具体涉及一种文冠木黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法和应用。
背景技术
文冠木为无患子科植物文冠木(XanthoceressorbifoliaBunge)的茎杆或枝条的干燥木部,文冠木属蒙医常用药材，蒙药名称为西拉森登。灌木或乔木,生于山坡、沟谷间,分布于我国辽宁、河北、陕西等省,主产于内蒙古，为我国特有的珍稀木本油料作物。作为蒙医用药,始载于《四部医典》第二部理论药物篇,在以后的蒙医本草、方剂等有关著作中均有记述。《蒙药学》中这样描述文冠木:“味微苦、甘,性凉,清热燥湿,祛瘀生新。治风湿内热,皮肤风湿、疥癣、瘰疬痈肿,瘀血紫斑、关节疼痛,布氏杆菌病等”。
近年来，随着蒙医理论的不断发展和蒙药研究的不断深入，在引用现代理论和技术的基础上对文冠木的物质基础进行了初步研究，文冠木中含有多种化学成分,主要有三萜皂苷类、黄酮类、香豆素类等成分。此外,还含有多糖、挥发油、油脂、鞣质以及一些具有还原性的物质。在木质中主要含有黄酮甙类(杨梅树皮甙、皮甙)、黄酮醇、三萜皂甙、羟基香豆精、挥发油、油脂、糖、鞣质、少量甾醇及强心甙，并认为皮中含有黄酮甙类比木部少,但所含三萜皂甙比木部高2～3倍,而嫩枝中黄酮甙类的含量少于枝中。
目前,国内外对文冠木的研究和报道都甚少,迄今涉及文冠木中的黄酮提取及其制备方法和用途的文献很少，例如文献《蒙药文冠木总黄酮提取方法研究》(内蒙古民族大学学报，20卷5期，2005年10月，宋玲，郭忠祥)公开的蒙药文冠木总黄酮提取方法研究，其中建立蒙药文冠木中总黄酮成分的提取方法:采用乙醇加热回流提取法.结果:乙醇提取方法与其它提取法相比较有显著差异,增加文冠木总黄酮溶出量可达到94.53％，结论:方法简便可靠,为进一步研究文冠木化学成分奠定了可靠依据。然而上述方案中获得的文冠木黄酮提取物仅是通过乙醇进行提取的粗提物，其中杂质较多，而有效成分含量较低，不能达到有效活性成分的富集，而且其中对文冠木提取的质量检测仅检测芦丁的含量，未对文冠木黄酮提取物中的其他有效成分进行含量测定，对文冠木黄酮提取物的质量检测不全面，不利于提高文冠木黄酮提取物质量的可控性。因此，本发明提供了一种文冠木黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法和应用。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于现有技术中的方法制备的文冠木总黄酮提取物有效成分含量较低，杂质多，没有达到有效活性成分的富集，进而提供一种文冠木黄酮提取物及其制备方法和应用。
本发明要解决的第二个技术问题在于现有技术中对文冠木黄酮提取物的质量检测不全面，不利于提高文冠木黄酮提取物质量的稳定性、一致性和可控性，进而提供一种检测全面、准确的文冠木黄酮提取物的质量检测方法，进而全面、准确的控制文冠木黄酮提取物的质量。
为此，本发明提供了一种文冠木总黄酮提取物，所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为10～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素和儿茶精。
所述的文冠木总黄酮提取物，所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为50～99％；所述文冠木总黄酮提取物采用溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、超临界C02流体萃取法或聚酰胺法中的任意一种或几种制备而成。其中优选的方法为大孔吸附树脂法和聚酰胺色谱法。
在使用上述方法进行制备时，一般包括以下几个步骤:
(l)提取:所用溶剂可以是水或醇类、酮类及脂类溶剂，或这些溶剂组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮法、冷浸法、渗漉法、加热回流法、超声提取法、微波提取法、高压提取法等。优选的提取工艺为：文冠木药材加30％-90％乙醇，回流提取2-3次，每次1-2小时，溶剂用量为5-15L/Kg。
(2)过滤:包括离心法、抽滤法、超滤法、压滤法等方法，可使用以下任意一种澄清剂或其组合:醇沉剂，高岭土，明胶，各种树脂，聚乙二醇，聚乙三醇，壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄清剂等。
(3)浓缩:包括常压或减压条件下的薄膜蒸发法、旋转蒸发及减压法、煎煮浓缩法等。
(4)干燥:包括真空干燥法、喷雾干燥法、冷冻干燥法等。
所述的文冠木总黄酮提取物，所述文冠木总黄酮提取物由如下方法中任意一种或几种制备而成：
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3-10，然后用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂进行萃取2-4次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的中等极性的溶剂萃取2-5次，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3-10，然后以占所述文冠木生药量6-10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1-3BV/h，树脂柱径高比为1:4-10，用水洗脱1-4倍树脂体积进行除杂，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度30％-100％的甲醇、乙醇或丙酮溶液洗脱5-10倍树脂体积，控制流速为4～9BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3-10，然后以占所述文冠木生药量6-10体积倍量的30-90目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为1-3BV/h，聚酰胺柱径高比为1:4-10，用水洗脱1-5倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为50％-90％乙醇溶液洗脱5-10倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为4～9BV/h，收集50％-90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，采用超临界流体萃取，加体积浓度为60％-80％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为40-45℃，压力为20-30MPa，静态浸泡2-4h，动态循环2-4h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得所述文冠木黄酮提取物；
所述重量份与所述体积份为g/mL的关系。
本发明提供了一种制备所述的文冠木总黄酮提取物的方法，所述文冠木总黄酮提取物由如下方法中任意一种或几种制备而成：
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-10，然后用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂进行萃取2-4次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的中等极性的溶剂萃取2-5次，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-10，然后以占所述文冠木生药量6-10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1-3BV/h，树脂柱径高比为1:4-10，用水洗脱1-4倍树脂体积进行除杂，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度30％-100％的甲醇、乙醇或丙酮溶液洗脱5-10倍树脂体积，控制流速为4～9BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-10，然后以占所述文冠木生药量6-10体积倍量的30-90目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为1-3BV/h，聚酰胺柱径高比为1:4-10，用水洗脱1-5倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为50％-90％乙醇溶液洗脱5-10倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为4～9BV/h，收集50％-90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，采用超临界流体萃取，加体积浓度为60％-80％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为40-45℃，压力为20-30MPa，静态浸泡2-4h，动态循环2-4h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得所述文冠木黄酮提取物；
所述重量份与所述体积份为g/mL的关系。
所述的冠木总黄酮提取物的制备方法，所述文冠木总黄酮提取物由如下方法中任意一种或几种制备而成：
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的体积浓度为50％-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-8，然后用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂进行萃取2-4次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的中等极性的溶剂萃取2-5次，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的体积浓度为50％-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-8，然后以占所述文冠木生药量8-10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1-3BV/h，树脂柱径高比为1:7-9，用水洗脱1-4倍树脂体积进行除杂，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度40％-80％的甲醇、乙醇或丙酮溶液洗脱7-9倍树脂体积，控制流速为4～9BV/h，收集体积浓度40％-80％的甲醇、乙醇或丙酮洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的体积浓度为50％-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-8，然后以占所述文冠木生药量8-10体积倍量的60-80目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为1-3BV/h，聚酰胺柱径高比为1:8-10，用水洗脱1-5倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为60％-80％乙醇溶液洗脱5-10倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为4～9BV/h，收集体积浓度为60％-80％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，采用超临界流体萃取，加体积浓度为65％-75％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为42-44℃，压力为23-27MPa，静态浸泡2-4h，动态循环2-4h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得文冠木黄酮提取物。
所述的冠木总黄酮提取物的制备方法，所述文冠木总黄酮提取物由如下方法中任意一种或几种制备而成：
取文冠木药材饮片1重量份，加入10体积份的体积浓度为50％乙醇回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：6，然后用为粗提取物水溶液2体积倍量的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂进行萃取3次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液2体积倍量的中等极性的溶剂萃取4次，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片1重量份，加入10体积份的体积浓度为70％乙醇回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3，然后以占所述文冠木生药量10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，用水洗脱2倍树脂体积进行除杂，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度50％的乙醇溶液洗脱8倍树脂体积，控制流速为4～9BV/h，收集体积浓度50％的乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片1重量份，加入10体积份的体积浓度为70％乙醇回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：5，然后以占所述文冠木生药量8体积倍量的70目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为2BV/h，聚酰胺柱径高比为1:9，用水洗脱3倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为70％乙醇溶液洗脱8倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为4～9BV/h，收集体积浓度为70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5重量份，采用超临界流体萃取，加体积浓度为70％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为43℃，压力为25MPa，静态浸泡3h，动态循环3h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得文冠木黄酮提取物。
所述的冠木总黄酮提取物的制备方法，所述的大孔树脂为非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性中的任意一种，如AB-8、D101、D4020、HPD400、S-8、HZ-806等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如AB-8、HPD400、D101等；所述低极性的酯类、烷烃类、醚类溶剂包括石油醚、乙醚、己烷或汽油中的任意一种或几种；所述中等极性溶剂包括氯仿、乙酸乙醋、丙酮或正丁醇中的任意一种或几种。其中优选的为30～100％的乙醇。
所述的文冠木总黄酮提取物质量检测方法，包括如下含量测定方法中的至少一种：
A、所述文冠木黄酮提取物中槲皮素的含量测定：
供试品溶液的制备：精密称取所述文冠木黄酮提取物样品3份，每份500mg，置25mL量瓶中，加体积浓度为60-80％乙醇溶液适量，超声处理3-7分钟，用体积浓度为60-80％乙醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1.0mL置于25mL量瓶，加体积浓度为60-80％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量,加无水甲醇制备成0.05-0.15mg/mL的对照品溶液；
标准曲线绘制：精密吸取所述槲皮素对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mL,分别置于加有镁粉290-310mg的具塞刻度试管中，将所述试管置于13-17℃水中水浴,缓慢滴加浓HCl1-5mL,并振摇试管，最后加体积浓度为60-80％乙醇溶液补足至7mL，摇匀,置沸水浴中加热0.5-1.5h，取出,迅速冷却至室温,于523-527nm处测定吸光度，以所述槲皮素对照品取样量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线；
含量测定：分别精密吸取所述供试品溶液0.5mL置于加有镁粉290-310mg的具塞刻度试管中，再分别精密吸取所述槲皮素对照品溶液2.0、4.0mL，置于加有镁粉290-310mg的具塞刻度试管中，将所述试管置于13-17℃水中进行水浴，缓慢滴加浓HCl1-5mL,并振摇试管，最后加体积浓度60-80％乙醇溶液补足至10mL,摇匀,置沸水浴中加热0.5-1.5h，取出，迅速冷却至室温,于523-527nm处测定吸光度；采用外标两点法计算含量；
B、所述文冠木黄酮提取物中芦丁、杨梅素的含量测定
供试品溶液的制备：精密称取所述文冠木黄酮提取物样品30mg于50ml容量瓶中，用体积浓度60-80％乙醇定容至50mL，摇匀后用直径为0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：分别精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的精密芦丁对照品8.50mg、杨梅素3.35mg用体积浓度60-80％乙醇稀释定容至10mL，分别配制成芦丁对照品溶液浓度为0.850mg/mL、杨梅素对照品溶液浓度为0.335mg/mL；
色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.4％醋酸溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，流动相A：流动相B体积比为14％：86％→17％：83％；5～20min，流动相A：流动相B体积比为17％：83％→17.5％：82.5％；20～30min，流动相A：流动相B体积比为17.5％：82.5％→20％：80％；30～35min，流动相A：流动相B体积比为20％：80％→30％：70％；35～36min，流动相A：流动相B体积比为30％：70％→100％：0：36～46min，流动相A：流动相B体积比为100％：0→100％：0；控制流速为0.5-1.5mL/min；检测波长为298-302nm；柱温30℃；
标准曲线绘制：分别精密吸取各对照品溶液1.0μL，2.0μL，4.0μL，8.0μL，12.0μL，16.0ul，20.0μL，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，测定峰面积，以色谱峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得到芦丁、杨梅素的回归方程；
含量测定：精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量。
本发明提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物在制备药物或功能性食品中的用途。优选的，所述的文冠木总黄酮提取物在制备具有抗炎、镇痛作用的药物或功能性食品中的用途。
本发明提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品。优选的，所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分在制备具有抗炎、镇痛作用的药物或功能性食品中的用途。
本发明提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的药物制剂或功能性食品，如胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等药物或功能性食品。优选的，所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的具有抗炎、镇痛作用的药物制剂或功能性食品。
本发明文冠木黄酮提取物的原料药，可以是市售文冠木药材的饮片，也可以是文冠木的茎枝、叶及根等任一部位或全部植株，优选的药材来源为：为无患子科植物文冠木XanthocerassorbifoliaBunge的干燥茎干。其中所述的文冠木药材包括未经任何炮制处理的原药材、饮片以及炮制品。
本发明所述的文冠木黄酮提取物中活性成分最主要的是二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精等成分。
本发明所述的文冠木黄酮提取物中主要的化合物结构见表1：
表1主要的化合物结构
本发明的上述方案相比现有技术具有以下优点：
(1)本发明所述的文冠木总黄酮提取物，所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为10～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精，其他黄酮类成分余量，使得文冠木中有效成分的含量大大提高，可以将所述文冠木总黄酮提取物制备成药物或功能性食品，或以所述文冠木总黄酮提取物为活性成分的药物或功能性食品，或所述文冠木总黄酮提取物添加常规辅料制备成的药物或功能性食品，在小鼠肉芽肿实验、耳肿胀实验、醋酸扭体实验中，发现所述文冠木总黄酮提取物中富集了具有抗炎止痛作用的化学物质，该具有活性作用的化学物质为二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精；
(2)本发明所述的文冠木总黄酮提取物制备方法，制备得到的所述文冠木总黄酮提取物有效成分的含量大大提高，尤其是二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精的富集，方法简单，易操作；
(3)本发明所述的文冠木总黄酮提取物质量检测方法，以前的文冠木缺乏具体的质量标准控制指标，未形成系统的质量标准体系，本发明通过纯化得到文冠木黄酮提取物，对文冠木黄酮提取物中总黄酮槲皮素、芦丁、杨梅素的含量测定，对文冠木黄酮提取物的质量检测全面，有利于提高产品质量的可控性，对蒙药文冠木的开发具有现实意义。
实验例
下面实验例进一步说明但不限于本发明。
实验例1复方文冠木黄酮提取物制备方法的筛选
取所述文冠木药材饮片4份，每份5g，以体积浓度为70％乙醇溶液回流提取3次，溶剂用量为50mL，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加一定体积的水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1:4，选择AB-8型大孔吸附树脂(占所述文冠木生药量的10体积倍量)、聚酰胺(占所述文冠木生药量的10体积倍量)、反相硅胶(占所述文冠木生药量的6体积倍量)、活性炭(占所述文冠木生药量的10体积倍量)等处理所述文冠木提取物，控制吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1:10，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，控制除杂流速为6BV/h，以体积浓度50％乙醇溶液洗脱5-8倍树脂体积，洗脱流速为4～9BV/h，收集体积浓度50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物。
表2提取物含量
由表2可看出，大孔吸附树脂对于总黄酮的富集能力(黄酮部位的含量及吸附-解吸附率)强于聚酰胺、反相硅胶、活性炭，据此，本发明选择大孔吸附树脂为载体富集所述文冠木的黄酮部位。
实验例2所述文冠木黄酮部位富集所用树脂工艺的筛选
2.1.1因素水平
经查阅文献资料和实际结合，采用4因素3水平正交实验，考察因素：上样量，上样浓度，径高比，流速。以总黄酮提取量为考察指标。具体见下表。
表3因素水平表
2.1.2样品的制备
称取所述文冠木药材共18份，按L9(3)4正交实验表，分别制备各样品(重复一份,共18次)，过滤，回收溶剂，真空干燥，称重，见下表。
表4样品制备表
2.1.3样品溶液的制备
将上述18份样品分别置于25mL量瓶，以体积浓度50％乙醇溶液溶解，超声处理，分别吸取一定量的待测液，平行操作两份，以槲皮素为对照品，按照本发明实施例文冠木黄酮部位中总黄酮的含量测定，测定总黄酮的量。因素A、B、C、D均有显著性差异，即提取溶剂、提取次数及提取时间及溶剂倍数均有显著性差异。用SAS软件(Copyright(c)1999-2001bySASInstituteInc.,Cary,NC,USA.SAS(r)ProprietarySoftwareRelease8.2(TS2M0))比较因素A、B、C、D中各水平之间的差异，进行水平相关性分析，结果显示因素A中水平1、2明显优于3；因素B中2、3水平明显优于1水平，而2、3水平没有明显差异；因素C中3、2水平明显优于1水平，而3、2水平没有明显差异；因素D中1、2水平明显优于3水平，而1、2水平没有明显差异。所以最优工艺为A2B2C2D2。
实验例3所述文冠木黄酮提取物中总黄酮的含量测定
3.1仪器与测定条件：
760CRT型紫外可见分光光度计(上海)；
SARTORIUS-BS224S型电子分析天平(北京塞多利斯仪器系统公司)；
KQ-250DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。
测定波长：525nm
3.2对照品与试剂：
槲皮素对照品(批号：100081-200406购于中国药品生物制品检定所)
试剂:水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯
3.3对照品溶液的制备：
精密称取槲皮素对照品适量,加无水甲醇制备成0.1mg/mL的对照品溶液。
3.4样品溶液的制备
精密称取实施1制备的文冠木黄酮提取物样品各3份，每份250mg，置25mL量瓶中，加体积浓度为70％乙醇溶液适量，超声处理5分钟，用体积浓度为70％乙醇溶液溶解并稀释至25mL，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0mL于50mL量瓶，加体积浓度为70％乙醇溶液稀释至50mL，摇匀，作为样品溶液。
3.5文冠木黄酮提取物中总黄酮的含量测定
分别精密吸取上述样品溶液1.0mL置于加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，再分别精密吸取所述槲皮素对照品溶液2.0mL、4.0mL，置于加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，将所述试管置15℃水中水浴,缓慢滴加浓HCl3mL,并不时振摇试管，最后加体积浓度70％乙醇补足至10mL,摇匀,置沸水浴中加热60min,取出,迅速冷却至室温,于525nm处测定吸光度；外标两点法计算含量,即得，结果见下表5。
表5黄酮提取物总黄酮含量
实验例4所述文冠木黄酮提取物中芦丁、杨梅素的含量测定
4.1仪器与测定条件：
Agilent1100高效液相色谱仪，EzchromEliteTMClient/ServerforHitachi软件系统；SARTORIUS-BS224S型电子分析天平(北京塞多利斯仪器系统公司)；KQ-250DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。
色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，色谱柱:Elite-C18(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.4％醋酸溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，流动相A：流动相B为14％：86％→17％：83％；5～20min，流动相A：流动相B为17％：83％→17.5％：82.5％；20～30min，流动相A：流动相B为17.5％：82.5％→20％：80％；30～35min，流动相A：流动相B为20％：80％→30％：70％；35～36min，流动相A：流动相B为30％：70％→100％：0：36～46min，流动相A：流动相B为100％：0→100％：0；控制流速为1.0mL/min；检测波长为300nm；柱温30℃；。
4.2对照品与试剂：
芦丁标准品(北京恒元启天化工技术研究院、北京世纪奥科生物技术有限公司联合研制，批号:MUST-12040302)；杨梅素(实验室自制，纯度98％)；三批文冠木药材饮片(由内蒙古天力药业有限责任公司提供，产地：内蒙，生产批号：20060915，20070803,20071012,经内蒙古医学院药学院乔俊缠教授鉴定为文冠木XanthocerassorbifoliaBunge.的干燥茎)。
色谱甲醇(SIGMA-ALDRICH)，蒸馏水(屈臣氏)，其它试剂均为分析纯。
4.3对照品溶液的制备：
精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的精密芦丁对照品8.50mg、杨梅素3.35mg用体积浓度70％乙醇稀释定容至10mL容量瓶中，配制成含芦丁对照品溶液浓度为0.850mg/mL、杨梅素对照品溶液浓度为0.335mg/mL的混合溶液。
4.4供试品溶液的制备
精密称取实施例2制备的3批所述文冠木黄酮提取物样品各3份，每份30mg于50ml容量瓶中，用体积浓度60-80％乙醇定容至50mL，摇匀后用直径为0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液。
4.5标准曲线绘制
分别精密吸取各对照品溶液1.0μL，2.0μL，4.0μL，8.0μL，12.0μL，16.0ul，20.0μL，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，测定峰面积，以色谱峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得到芦丁、杨梅素的回归方程；
4.6含量测定
精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量，结果见表6。
表6杨梅素含量
实验例5所述文冠木黄酮提取物小鼠抗炎、镇痛实验
5.1实验材料与仪器
实验动物：昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，体重18g-22g，购自内蒙古大学实验动物中心。许可证编号：SCXK(蒙)2002-0001；
受试药物：本发明实施例1制备的提取物干粉；所述经大孔吸附树脂得到的文冠木黄酮有效部位干粉；雷公藤片(三九黄石制药厂，081001)；西乐葆胶囊(辉瑞制药有限公司进口分包装；产品批号：BK09CCEE141)；
所述经大孔吸附树脂得到的文冠木黄酮有效部位干粉由如下方法制备：取文冠木药材饮片500g，加入10L的体积浓度为70％乙醇回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3，然后以占所述文冠木生药量8体积倍量的AB-8大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，用水洗脱2倍树脂体积进行除杂，控制流速为3BV/h，然后以体积浓度50％的乙醇溶液洗脱8倍树脂体积，控制流速为4BV/h，收集体积浓度50％的乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物。
试剂：0.5％羧甲基纤维素钠溶液、0.7％醋酸溶液、二甲苯、
仪器：灌胃器、剪刀、直径8mm的打孔器、电子天平，GB204型精密电子称、恒温干燥箱(均由上海仪器厂制)。
5.2小鼠肉芽肿实验
5.2.1给药剂量
给药剂量设置：根据人临床用量进行剂量设定。临床用药量为4g/人/日，口服。提取物生药含量为13.72g生药/g黄酮提取物。
本实验设定小鼠生物等效给药量为人临床用药量的11倍，人标准体重拟定为60kg，因此豚鼠的等效给药剂量为4g生药÷60kg×11＝0.73g生药/kg，折算成提取物剂量为0.053g/kg，此为人临床等效剂量。
药物配制：按照上述小鼠剂量和小鼠灌胃体积进行配置，小鼠灌胃体积为20ml/kg体重，溶媒为水。
5.2.2实验动物分组
取体重18-22g50只小鼠,雌雄各半,按体重随机分为5组，每组10只小鼠：(1)空白组；(2)实施例1制备的文冠木提取物组；(3)经大孔吸附树脂得到的文冠木黄酮有效部位；(4)阳性雷公藤组；(5)阳性西乐葆组。
5.2.3实验方法
用乙醚将小鼠麻醉后,分别于小鼠背部与前肢平行处皮下植入高压灭菌棉球两个(注：两棉球植入时应分置与脊椎两侧，且每个棉球均为精密称定10mg)。手术后第2天开始灌胃给药，空白对照组给予蒸馏水，其余各组灌胃等体积蒸馏水的药物溶液，按1次/天给药,连续给药7天。于末次给药1h后脱臼颈椎处死小鼠,手术取出棉球肉芽肿,剥尽脂肪组织,然后将其置于60℃烘干箱中,干燥至恒重,取出称重,其重量减去棉球重量即为肉芽肿干重，实验结果见下表7。
5.3小鼠耳肿胀实验
5.3.1给药剂量
给药剂量设置：与上述5.2小鼠肉芽肿实验中的5.2.1给药剂量设置相同。
药物配制：按照上述小鼠剂量和小鼠灌胃体积进行配置，小鼠灌胃体积为20ml/kg体重，溶媒为水。
5.3.2实验动物分组
取体重18g-22g小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，即(1)空白组；(2)提取物组；(3)经大孔吸附树脂得到的文冠木黄酮有效部位；(4)阳性雷公藤组(5)阳性西乐葆组。
5.3.2实验方法
分别灌胃给药，空白对照组给予蒸馏水，其余各组灌胃等体积蒸馏水的药物溶液，每天一次，共给7天。末次给药30分钟后，取0.lml二甲苯涂于各鼠右耳前后两面致炎。1小时后，将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm的打孔器分别在两耳同一部位打下圆耳片，迅速用电子天平称重，每鼠右耳片减去左耳片重量即为耳片炎症肿胀度。各组与空白组比较，进行t检验，实验结果见下表8。
5.4小鼠醋酸扭体实验
5.4.1给药剂量
给药剂量设置：与上述5.2小鼠肉芽肿实验中的5.2.1给药剂量设置相同。
药物配制：按照上述小鼠剂量和小鼠灌胃体积进行配置，小鼠灌胃体积为0.2ml/l0g体重，溶媒为水。
5.4.2实验动物分组
取体重18g-20g小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组10只，(1)空白组；(2)提取物组；(3)经大孔吸附树脂得到的文冠木黄酮有效部位；(4)阳性雷公藤组(5)阳性西乐葆组。
5.4.3实验方法
各给药组灌胃相应药的蒸馏水溶液，空白对照组灌胃给予等体积的蒸馏水，给药体积均为0.2ml/l0g体重。给药7天。末次给药30分钟后，给每只鼠腹腔注射0.7％醋酸溶液0.2ml，观察并记录40分钟内各小鼠的扭体次数。各组与空自组比较，进行t检验，实验结果见下表9。
5.5.实验数据与结果
表7小鼠肉芽肿实验结果
与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01；n＝10
表8小鼠二甲苯实验结果
*P<0.05，**P<0.01；n＝10.
表9小鼠醋酸扭体实验结果
*P<0.05，**P<0.01；n＝10.
实验结果与讨论：
本实验选择抗炎、镇痛2个药理指标，比较了文冠木提取物、文冠木黄酮有效部位、阳性对照药(雷公藤、西乐葆)的药效。实验结果表明，在抗炎实验中，肉芽肿实验结果中，文冠木有效部位具有非常显著性差异(P<0.01)；小鼠耳肿胀实验结果中文冠木有效部位具有非常显著性差异(P<0.01)；在镇痛实验中，文冠木有效部位具有非常显著性差异(P<0.01)。
因此，通过以上实验设计模型，均证明文冠木黄酮有效部位具有明显的抗炎镇痛作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例25所述对照品溶液的HPLC色谱图；
图2是本发明实施例25所述供试品溶液的HPLC色谱图。
具体实施方式
实施例1
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.0kg，加入体积浓度为50％、pH值为2.5乙醇溶液10L回流提取3次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加一定体积的水分散溶解，使得所述粗提取物重量与分散后溶液体积比为1：3.5，通过7.5L的S-8大孔吸附树脂，吸附流速2Bv/h，树脂柱径高比为1:10，水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2Bv/h，用体积浓度50％乙醇溶液洗脱8倍树脂体积，洗脱流速为2Bv/h，收集体积浓度50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为10～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的胶囊剂。
实施例2
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片0.5kg，加体积浓度为70％、pH值为10的乙醇溶液15L，超声提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加一定体积的水分散溶解，使得所述粗提取物重量与分散后溶液体积比为1：5，通过10L的D4020大孔吸附树脂，吸附流速2Bv/h，树脂柱径高比为1：6，用水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为4Bv/h，用体积浓度50％乙醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速为1Bv/h，收集体积浓度50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的片剂。
实施例3
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.5kg，加入体积浓度为80％乙醇溶液6L回流提取2次，每次提取3小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加一定体积的水分散溶解，使得所述粗提取物重量与分散后溶液体积比为1：8，通过8L的HPD400大孔吸附树脂，吸附流速1Bv/h，树脂柱径高比为1:7，水洗脱4倍树脂体积进行除杂，除杂流速为6Bv/h，用体积浓度80％甲醇溶液洗脱7倍树脂体积，洗脱流速为9Bv/h，收集体积浓度80％甲醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为10～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的丸剂。
实施例4
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片0.5kg，加体积浓度为60％乙醇溶液8L，回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加一定体积的水分散溶解，使得所述粗提取物重量与分散后溶液体积比为1：2.5，通过9L的D101大孔吸附树脂，吸附流速3Bv/h，树脂柱径高比为1：9，用水洗脱1倍树脂体积进行除杂，除杂流速为9Bv/h，用体积浓度40％丙酮洗脱8倍树脂体积，洗脱流速为4Bv/h，收集体积浓度40％丙酮洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的颗粒剂。
实施例5
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1kg，加入10L的体积浓度为70％乙醇回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3，然后以占所述文冠木生药量10体积倍量的AB-8大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，用水洗脱2倍树脂体积进行除杂，控制流速为4BV/h，然后以体积浓度50％的乙醇溶液洗脱8倍树脂体积，控制流速为6BV/h，收集体积浓度50％的乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物。所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为50～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的口服液。
实施例6
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片0.5kg，加入6L的水进行进行煎煮提取2次，每次提取3小时，合并提取液，浓缩成浸膏，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量与所述分散后溶液的体积比为1：3，然后以占所述文冠木生药量10体积倍量的S-8大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1BV/h，树脂柱径高比为1:4，用水洗脱4倍树脂体积进行除杂，控制流速为2BV/h，然后以体积浓度100％甲醇洗脱10倍树脂体积，控制流速为4BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的糖浆。
实施例7
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.5kg，加入15L的丙酮进行超声提取2次，频率为40KHZ,功率为0.4W/cm2，每次提取0.5小时，合并提取液，浓缩成浸膏，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：10，然后以占所述文冠木生药量6体积倍量的HZ-806大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为3BV/h，树脂柱径高比为1:10，用水洗脱1倍树脂体积进行除杂，控制流速为6BV/h，然后以体积浓度100％丙酮洗脱5倍树脂体积，控制流速为9BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的冲剂。
实施例8
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.0kg，用体积浓度70％乙醇回流提取2次，溶剂用量为10L，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加水分散溶解，使得所述粗提取物重量与分散后溶液体积比为1:10，通过以占所述文冠木生药量6体积倍量的90目聚酰胺，吸附流速1BV/h，聚酰胺柱径高比为1:10，水洗脱5倍聚酰胺体积，流速为2BV/h，体积浓度50％乙醇溶液洗脱7倍聚酰胺体积，洗脱流速为4BV/h，收集体积浓度50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的酒剂。
实施例9
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.0kg，用体积浓度40％、pH值为8的甲醇溶液微波提取4次，每次溶剂用量为5L，控制微波功率为900W，照射40秒，取出后迅速冷却至室温，再照射40秒，合并提取液，浓缩成浸膏，得粗提取物，加水分散溶解，使得所述粗提取物与分散后溶液体积比为1:2.5，通过占所述文冠木生药量10体积倍量的30目聚酰胺，吸附流速2BV/h，聚酰胺柱径高比为1:4，用水洗脱4倍聚酰胺体积，流速为6BV/h，用体积浓度90％乙醇洗脱10倍聚酰胺体积，洗脱流速为9BV/h，收集体积浓度90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为10～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的注射剂。
实施例10
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.0kg，用体积浓度40％、pH值为3的乙酸乙醋溶液回流提取4次，溶剂用量为5L，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加水分散溶解，使得所述粗提取物与分散后溶液体积比为1:8，通过占所述文冠木生药量8体积倍量的60目聚酰胺，吸附流速3BV/h，聚酰胺柱径高比为1:8，用水洗脱1倍聚酰胺体积，流速为4BV/h，用体积浓度80％乙醇洗脱8倍聚酰胺体积，洗脱流速为6BV/h，收集体积浓度80％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的膏剂。
实施例11
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.0kg，用体积浓度50％乙醚溶液回流提取4次，溶剂用量为5L，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加水分散溶解，使得所述粗提取物与分散后溶液体积比为1:7，通过占所述文冠木生药量7体积倍量的80目聚酰胺，吸附流速3BV/h，聚酰胺柱径高比为1:8，用水洗脱2倍聚酰胺体积，流速为4BV/h，用体积浓度60％乙醇洗脱8倍聚酰胺体积，洗脱流速为6BV/h，收集体积浓度60％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物。
实施例12
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1kg，加入10L的体积浓度为70％乙醇回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：5，然后以占所述文冠木生药量8体积倍量的70目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为2BV/h，聚酰胺柱径高比为1:9，用水洗脱3倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为70％乙醇溶液洗脱8倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为6BV/h，收集体积浓度为70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的散剂。
实施例13
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.0kg，体积浓度80％乙醇回流提取3次，溶剂用量为10L，每次提取1小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加水溶解，使粗提取物的重量与分散后溶液体积比为1：10，然后用低极性的乙醚溶剂，溶剂用量为粗提取物水溶液的1体积倍量，进行萃取2次，除去脂溶性杂质；再用中等极性的乙酸乙醋溶剂提取，溶剂用量为粗提取物水溶液的3体积倍量，经2次萃取获得其中的总黄酮成分，得到文冠木黄酮提取物。
实施例14
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.0kg，用体积浓度为40％氯仿溶液回流提取2次，溶剂用量为8L，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加水溶解，使所述粗提取物与分散后溶液体积比为1：2.5，然后用低极性的己烷溶剂，溶剂用量为提取物的水溶液的3体积倍量，进行萃取4次，除去脂溶性杂质，再用中等极性的正丁醇溶剂，溶剂用量为提取物的水溶液的1体积倍量，经5次萃取获得其中的总黄酮成分，得到所述文冠木黄酮提取物。
实施例15
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.0kg，用体积浓度为80％正丁醇溶液回流提取2次，溶剂用量为8L，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物，加水溶解，使所述粗提取物与分散后溶液体积比为1：2.5，然后用低极性的石油醚溶剂，溶剂用量为提取物的水溶液的2体积倍量，进行萃取3次，除去脂溶性杂质，再用中等极性的丙酮溶剂，溶剂用量为提取物的水溶液的2体积倍量，经4次萃取获得其中的总黄酮成分，得到所述文冠木黄酮提取物。
实施例16
取文冠木药材饮片1kg，加入10L的体积浓度为50％乙醇回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：6，然后用为粗提取物水溶液2体积倍量的低极性的汽油溶剂进行萃取3次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液2体积倍量的中等极性氯仿溶剂萃取4次，即得文冠木黄酮提取物。所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为10～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素、儿茶精。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的饮料。
实施例17
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片0.5kg，采用超临界流体萃取，加体积浓度80％乙醇溶液作夹带剂，萃取温度为40℃，压力为30MPa，静态浸泡时间为2h，动态循环2h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的石油醚溶剂萃取，除去脂溶性杂质，得到所述文冠木黄酮提取物。
实施例18
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.5kg，采用超临界流体萃取，加体积浓度60％乙醇溶液作夹带剂，萃取温度为45℃，压力为20MPa，静态浸泡时间为4h，动态循环4h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的汽油溶剂萃取除去脂溶性杂质，得到所述文冠木黄酮提取物。
实施例19
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片0.5kg，采用超临界流体萃取，加体积浓度为65％-75％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为44℃，压力为23MPa，静态浸泡4h，动态循环2h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的乙醚溶剂萃取,除去脂溶性杂质，即得文冠木黄酮提取物。
实施例20
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片1.5kg，采用超临界流体萃取，加体积浓度为75％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为42℃，压力为27MPa，静态浸泡2h，动态循环4h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的石油醚溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得文冠木黄酮提取物。
实施例21
本实施例所述的文冠木黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
取文冠木药材饮片0.5kg，采用超临界流体萃取，加体积浓度为70％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为43℃，压力为25MPa，静态浸泡2-4h，动态循环3h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的己烷溶剂萃取,除去脂溶性杂质，即得文冠木黄酮提取物。
本实施例还提供了一种由上述制备的所述的文冠木黄酮提取物制备成药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品，或是以所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品，尤其是具有抗炎止痛作用的药物或功能性食品。本实施例还提供了一种由所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的胶囊剂。
实施例22
对实施例1制备的所述文冠木黄酮提取物的质量检测方法，包括如下步骤：
供试品溶液的制备：精密称取所述文冠木黄酮提取物样品3份，每份500mg，置25mL量瓶中，加体积浓度为70％乙醇溶液适量，超声处理5分钟，用体积浓度为70％乙醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1.0mL置于25mL量瓶，加体积浓度为70％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量,加无水甲醇制备成0.1mg/mL的对照品溶液；精密吸取所述槲皮素对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mL,分别置于加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，将所述试管置于15℃水中水浴,缓慢滴加浓HCl3mL,并振摇试管，最后加体积浓度为70％乙醇溶液补足至7mL，摇匀,置沸水浴中加热60min，取出,迅速冷却至室温,于525nm处测定吸光度，以所述槲皮素对照品取样量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线；
含量测定：分别精密吸取所述供试品溶液0.5mL置于加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，再分别精密吸取所述槲皮素对照品溶液2.0、4.0mL，置于加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，将所述试管置于15℃水中进行水浴，缓慢滴加浓HCl3mL,并振摇试管，最后加体积浓度70％乙醇溶液补足至10mL,摇匀,置沸水浴中加热60min，取出，迅速冷却至室温,于525nm处测定吸光度；采用外标两点法计算含量；即得所述文冠木黄酮提取物中总黄酮以槲皮素计为56.3％。
实施例25
对实施例1制备的所述文冠木黄酮提取物的质量检测方法，包括如下步骤：
供试品溶液的制备：精密称取所述文冠木黄酮提取物样品30mg于50ml容量瓶中，用体积浓度70％乙醇定容至50mL，摇匀后用直径为0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：分别精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的精密芦丁对照品8.50mg、杨梅素3.35mg用体积浓度70％乙醇稀释定容至10mL，分别配制成含芦丁对照品溶液浓度为0.850mg/mL和杨梅素对照品溶液浓度为0.335mg/mL的混合溶液；
色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，色谱柱:Elite-C18(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.4％醋酸溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，流动相A：流动相B为14％：86％→17％：83％；5～20min，流动相A：流动相B为17％：83％→17.5％：82.5％；20～30min，流动相A：流动相B为17.5％：82.5％→20％：80％；30～35min，流动相A：流动相B为20％：80％→30％：70％；35～36min，流动相A：流动相B为30％：70％→100％：0：36～46min，流动相A：流动相B为100％：0→100％：0；控制流速为1.0mL/min；检测波长为300nm；柱温30℃；
标准曲线绘制：分别精密吸取各对照品溶液1.0μL，2.0μL，4.0μL，8.0μL，12.0μL，16.0ul，20.0μL，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，测定峰面积，以色谱峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得到芦丁、杨梅素的回归方程；
含量测定：精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，结果见图1和图2，其中图1、图2中的1峰为芦丁，2峰为杨梅素，计算含量，即得所述文冠木黄酮提取物中含杨梅素1.77％，芦丁0.66％。
显然，上述实施例仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。由此所引伸出的显而易见变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (11)
1.一种文冠木总黄酮提取物，其特征在于，所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为10～99％，其中所含总黄酮成分包括：二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、芦丁、二氢槲皮素、文冠木素和儿茶精。
2.根据权利要求1所述的文冠木总黄酮提取物，其特征在于，所述文冠木总黄酮提取物中总黄酮类成分百分含量的总和为50～99％；所述文冠木总黄酮提取物采用溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、超临界C02流体萃取法或聚酰胺法中的任意一种或几种制备而成。
3.根据权利要求1所述的文冠木总黄酮提取物，其特征在于，所述文冠木总黄酮提取物由如下方法中任意一种或几种制备而成：
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3-10，然后用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂进行萃取2-4次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的中等极性的溶剂萃取2-5次，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3-10，然后以占所述文冠木生药量6-10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1-3BV/h，树脂柱径高比为1:4-10，用水洗脱1-4倍树脂体积进行除杂，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度30％-100％的甲醇、乙醇或丙酮溶液洗脱5-10倍树脂体积，控制流速为4～9BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3-10，然后以占所述文冠木生药量6-10体积倍量的30-90目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为1-3BV/h，聚酰胺柱径高比为1:4-10，用水洗脱1-5倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为50％-90％乙醇溶液洗脱5-10倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为4～9BV/h，收集50％-90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，采用超临界流体萃取，加体积浓度为60％-80％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为40-45℃，压力为20-30MPa，静态浸泡2-4h，动态循环2-4h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得所述文冠木黄酮提取物；
所述重量份与所述体积份为g/mL的关系。
4.一种制备权利要求1-3任一项所述的文冠木总黄酮提取物的方法，其特征在于，所述文冠木总黄酮提取物由如下方法中任意一种或几种制备而成：
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-10，然后用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂进行萃取2-4次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的中等极性的溶剂萃取2-5次，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-10，然后以占所述文冠木生药量6-10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1-3BV/h，树脂柱径高比为1:4-10，用水洗脱1-4倍树脂体积进行除杂，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度30％-100％的甲醇、乙醇或丙酮溶液洗脱5-10倍树脂体积，控制流速为4～9BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的水、醇类、酮类、酯类溶剂或由水、醇类、酮类或酯类溶剂与酸、碱或盐配制成的酸性或碱性溶剂进行回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-10，然后以占所述文冠木生药量6-10体积倍量的30-90目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为1-3BV/h，聚酰胺柱径高比为1:4-10，用水洗脱1-5倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为50％-90％乙醇溶液洗脱5-10倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为4～9BV/h，收集50％-90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得所述文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，采用超临界流体萃取，加体积浓度为60％-80％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为40-45℃，压力为20-30MPa，静态浸泡2-4h，动态循环2-4h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得所述文冠木黄酮提取物；
所述重量份与所述体积份为g/mL的关系。
5.根据权利要求4所述的冠木总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，所述文冠木总黄酮提取物由如下方法中任意一种或几种制备而成：
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的体积浓度为50％-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-8，然后用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂进行萃取2-4次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液1-3体积倍量的中等极性的溶剂萃取2-5次，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的体积浓度为50％-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-8，然后以占所述文冠木生药量8-10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为1-3BV/h，树脂柱径高比为1:7-9，用水洗脱1-4倍树脂体积进行除杂，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度40％-80％的甲醇、乙醇或丙酮溶液洗脱7-9倍树脂体积，控制流速为4～9BV/h，收集体积浓度40％-80％的甲醇、乙醇或丙酮洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，加入6-15体积份的体积浓度为50％-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：2.5-8，然后以占所述文冠木生药量8-10体积倍量的60-80目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为1-3BV/h，聚酰胺柱径高比为1:8-10，用水洗脱1-5倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为60％-80％乙醇溶液洗脱5-10倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为4～9BV/h，收集体积浓度为60％-80％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5-1.5重量份，采用超临界流体萃取，加体积浓度为65％-75％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为42-44℃，压力为23-27MPa，静态浸泡2-4h，动态循环2-4h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得文冠木黄酮提取物。
6.根据权利要求4或5所述的冠木总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，所述文冠木总黄酮提取物由如下方法中任意一种或几种制备而成：
取文冠木药材饮片1重量份，加入10体积份的体积浓度为50％乙醇回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：6，然后用为粗提取物水溶液2体积倍量的低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂进行萃取3次，除去脂溶性杂质，再用为粗提取物水溶液2体积倍量的中等极性的溶剂萃取4次，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片1重量份，加入10体积份的体积浓度为70％乙醇回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：3，然后以占所述文冠木生药量10体积倍量的大孔吸附树脂进行吸附处理，控制吸附流速为2BV/h，树脂柱径高比为1:8，用水洗脱2倍树脂体积进行除杂，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度50％的乙醇溶液洗脱8倍树脂体积，控制流速为4～9BV/h，收集体积浓度50％的乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片1重量份，加入10体积份的体积浓度为70％乙醇回流提取3次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得粗提取物；将所述粗提取物加水溶解，所述粗提取物的重量份与所述分散后溶液的体积份比为1：5，然后以占所述文冠木生药量8体积倍量的70目聚酰胺进行吸附，控制吸附流速为2BV/h，聚酰胺柱径高比为1:9，用水洗脱3倍聚酰胺体积，控制流速为2～6BV/h，然后以体积浓度为70％乙醇溶液洗脱8倍聚酰胺体积，控制洗脱流速为4～9BV/h，收集体积浓度为70％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得文冠木黄酮提取物；或
取文冠木药材饮片0.5重量份，采用超临界流体萃取，加体积浓度为70％乙醇溶液作夹带剂，控制萃取温度为43℃，压力为25MPa，静态浸泡3h，动态循环3h，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取除去脂溶性杂质，即得文冠木黄酮提取物。
7.根据权利要求4-6任一项所述的冠木总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，所述的大孔树脂为非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性中的任意一种；所述低极性的酯类、烷烃类、醚类溶剂包括石油醚、乙醚、己烷或汽油中的任意一种或几种；所述中等极性溶剂包括氯仿、乙酸乙醋、丙酮或正丁醇中的任意一种或几种。
8.一种如权利要求1-3任一项所述的文冠木总黄酮提取物质量检测方法，其特征在于，包括如下含量测定方法中的至少一种：
A、所述文冠木黄酮提取物中槲皮素的含量测定：
供试品溶液的制备：精密称取所述文冠木黄酮提取物样品3份，每份500mg，置25mL量瓶中，加体积浓度为60-80％乙醇溶液适量，超声处理3-7分钟，用体积浓度为60-80％乙醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1.0mL置于25mL量瓶，加体积浓度为60-80％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量,加无水甲醇制备成0.05-0.15mg/mL的对照品溶液；
标准曲线绘制：精密吸取所述槲皮素对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mL,分别置于加有镁粉290-310mg的具塞刻度试管中，将所述试管置于13-17℃水中水浴,缓慢滴加浓HCl1-5mL,并振摇试管，最后加体积浓度为60-80％乙醇溶液补足至7mL，摇匀,置沸水浴中加热0.5-1.5h，取出,迅速冷却至室温,于523-527nm处测定吸光度，以所述槲皮素对照品取样量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线；
含量测定：分别精密吸取所述供试品溶液0.5mL置于加有镁粉290-310mg的具塞刻度试管中，再分别精密吸取所述槲皮素对照品溶液2.0、4.0mL，置于加有镁粉290-310mg的具塞刻度试管中，将所述试管置于13-17℃水中进行水浴，缓慢滴加浓HCl1-5mL,并振摇试管，最后加体积浓度60-80％乙醇溶液补足至10mL,摇匀,置沸水浴中加热0.5-1.5h，取出，迅速冷却至室温,于523-527nm处测定吸光度；采用外标两点法计算含量；
B、所述文冠木黄酮提取物中芦丁、杨梅素的含量测定
供试品溶液的制备：精密称取所述文冠木黄酮提取物样品30mg于50ml容量瓶中，用体积浓度60-80％乙醇定容至50mL，摇匀后用直径为0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：分别精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的精密芦丁对照品8.50mg、杨梅素3.35mg用体积浓度60-80％乙醇稀释定容至10mL，配制成含芦丁对照品溶液浓度为0.850mg/mL、杨梅素对照品溶液浓度为0.335mg/mL的混合溶液；
色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.4％醋酸溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，流动相A：流动相B体积比为14％：86％→17％：83％；5～20min，流动相A：流动相B体积比为17％：83％→17.5％：82.5％；20～30min，流动相A：流动相B体积比为17.5％：82.5％→20％：80％；30～35min，流动相A：流动相B体积比为20％：80％→30％：70％；35～36min，流动相A：流动相B体积比为30％：70％→100％：0：36～46min，流动相A：流动相B体积比为100％：0→100％：0；控制流速为0.5-1.5mL/min；检测波长为298-302nm；柱温30℃；
标准曲线绘制：分别精密吸取各对照品溶液1.0μL，2.0μL，4.0μL，8.0μL，12.0μL，16.0ul，20.0μL，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，测定峰面积，以色谱峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得到芦丁、杨梅素的回归方程；
含量测定：精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量。
9.由权利要求1-3任一项所述的文冠木总黄酮提取物在制备药物或功能性食品中的用途。
10.以权利要求1-3任一项所述的文冠木总黄酮提取物为有效成分的药物或功能性食品。
11.由权利要求1-3任一项所述的文冠木总黄酮提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床上可接受的药物制剂或功能性食品。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160504 |