CN101721531B - 森登四味汤有效部位及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种森登四味汤有效部位及其制备方法，包括沉淀法、液-液逆流分配色谱法、大孔吸附树脂法中的一种或几种，通过对森登四味汤的原料药提取物进行纯化、富集，使其有效成分的含量大大提高；同时本发明还公开了森登四味汤有效部位的检测方法，对森登四味汤有效部位中总黄酮、槲皮素、总萜、栀子苷进行了含量测定，有利于提高产品的稳定性，对蒙药森登四味汤的开发具有现实意义。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种森登四味汤有效部位及其制备方法、检测方法，以及在医药和保健食品领域的应用。
背景技术
森登四味汤由文冠木(蒙古名为森登)、栀子、诃子、川楝子等4味药材组成，蒙医临床较常用，具有清热燥湿的功能，用于治疗各类关节炎、水肿。传统蒙医药理论认为森登四味汤具有清热、燥“协日乌素”、消肿，主治痛风、痹病、关节黄水病、水肿，用于关节炎、水肿。森登四味汤中主要含有黄酮类、萜类、蒽醌类、生物碱类等成分，但是迄今未见涉及森登四味汤有效部位及其制备方法和用途的专利。
发明内容
本发明的目的在于提供一种森登四味汤有效部位及其制备方法，还提供一种森登四味汤有效部位的检测方法，还提供一种涉及以森登四味汤有效部位为活性成分的药物或功能性食品。
本发明森登四味汤有效部位的原料药组成为：
文冠木8-20重量份 川楝子6-12重量份 诃子1-5重量份 栀子1-5重量份；
本发明森登四味汤有效部位的原料药组成优选为：
文冠木15重量份 川楝子9重量份 诃子3重量份 栀子3重量份；
本发明森登四味汤有效部位的原料药组成优选为：
文冠木10重量份 川楝子12重量份 诃子4.5重量份 栀子1.5重量份；
本发明森登四味汤有效部位的原料药组成优选为：
文冠木18重量份 川楝子7重量份 诃子2重量份 栀子4.5重量份。
本发明森登四味汤有效部位的原料药，可以是市售森登四味汤各味药材的饮片，也可以是这些植物的茎、叶、花穗、果实、地下根茎及根等任一部位或全部植株，其中优选的药材部位分别为来源于无患子科文冠果属文冠果(Xanthocer as sorbifolia Bunge)的干燥茎枝，(文冠木)、茜草科植物(Gardeniajasminoides Eills)的干燥成熟果实(栀子)、使君子科植物诃子(Terminaliachebula Retz.)的干燥成熟果实(诃子)、楝科植物川楝Meliatoosendan Sieb.et Zucc.的果实(川楝子)。其中所述的森登四味汤各味药材包括未经任何炮制处理的原药材及饮片，还包括各种炮制品。
本发明森登四味汤有效部位的制备方法包括如下方法中的一种或几种：
1、沉淀法：取森登四味汤药材0.5-1.5重量份，加30～90％乙醇，回流提取2～3次，每次提取1～2小时，溶剂用量为5～15体积倍，将乙醇提取物加入一定体积的蒸馏水，使得药材量与分散后溶液体积比为1∶6～1∶10，再分别以3000～5000转/分钟的速度离心30～60分钟，倾出上清液，将沉淀物用乙醇以生药量计2～5BV回流2～3次，每次1.0～2.0小时，合并乙醇提取液，回收溶剂，残留物即为森登四味汤有效部位。
2、液-液逆流分配色谱法：取森登四味汤药材0.5-1.5重量份，加30～90％乙醇，回流提取2～3次，每次提取1～2小时，溶剂用量为5～15体积倍，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的专用溶剂萃取获得其中的总黄酮成分和总萜成分，得森登四味汤有效部位。
其中所述的专用溶剂是酯类、烷烃类、醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯、氯仿等)中的一种或几种。
3、大孔吸附树脂法：取森登四味汤复方药材饮片0.5-1.5重量份，40％-80％乙醇回流提取2-4次，溶剂用量为5～15体积倍，每次提取1-3小时，减压回收溶剂，得提取物，加一定体积的水分散溶解，使得药材量与分散后溶液体积比为1∶10-1∶2.5。通过生药量的6-10体积倍AB-8大孔吸附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1∶4～1∶13，水洗脱1-2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2～6BV/h，40％-90％乙醇洗脱5-8倍树脂体积，洗脱流速为4～9BV/h，收集40％-90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为森登四味汤有效部位；
其中所用的大孔树脂是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性任意一种类型，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如AB-8、HPD400、D101等。其中所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中优选的为0～100％的乙醇。
上述方法中所用的溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，提取方法可以是超声提取、微波提取、超临界流体萃取等常规提取方法。
本发明所述的重量份与体积份的关系为g/ml的关系。
本发明所述的森登四味汤有效部位，其中总黄酮类、总萜类成分百分含量的总和为5～100％(w/w)，其中优选的为50～100％(w/w)。
本发明所述的森登四味汤有效部位中黄酮类活性成分最主要的是杨梅素、2α，3β-双氢杨梅树皮素、(-)-表儿茶素、(-)-表没食子儿茶素、dl-白蔹素、槲皮素、2α，3β-双氢槲皮素等成分。
本发明所述的森登四味汤有效部位中主要的黄酮类化合物结构如下：
本发明所述的森登四味汤有效部位中萜类活性成分最主要的是栀子苷、京尼平、京尼平-1-O-龙胆双糖苷、川楝素等成分。
本发明所述的森登四味汤有效部位中其中主要的萜类化合物结构如下：
本发明所述的森登四味汤有效部位可以单独、组合或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍，制成胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等药物或功能性食品。
本发明所述的森登四味汤有效部位的检测方法包括如下含量测定方法中的一种或几种：
1、森登四味汤有效部位中总黄酮的含量测定
精密称取槲皮素对照品5mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密吸取槲皮素对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mL，置加有镁粉300mg的具塞刻度试管中；将试管置15℃左右的冷水浴中，缓慢滴加浓HCl3mL，并不时振摇试管；最后加70％乙醇补足至10mL，摇匀，置沸水浴中加热60分钟，取出，迅速冷却至室温，于525nm处测定吸光度；以槲皮素对照品取样量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；
精密称取森登四味汤有效部位样品各3份，每份15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1.0mL于10mL量瓶，加无水甲醇至刻度，摇匀，作为样品溶液；分别精密吸取上述样品溶液0.5mL置加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，再分别精密吸取槲皮素对照品溶液2.0、4.0mL，置加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，将试管置15℃左右的冷水浴中，缓慢滴加浓HCl3mL，并不时振摇试管；最后加70％乙醇补足至10mL，摇匀，置沸水浴中加热60min，取出，迅速冷却至室温，于525nm处测定吸光度；外标两点法计算含量，即得本发明森登四味汤有效部位中总黄酮以槲皮素计为25％～30％。
2.森登四味汤有效部位中槲皮素的含量测定
色谱条件：色谱柱：依利特ODS C18柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：60∶40的甲醇-0.7％磷酸水溶液；流速：1.0mL/min；检测波长：371nm；柱温：30℃；
标准曲线绘制：
取槲皮素对照品5mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得槲皮素对照品溶液，其中每1mL含槲皮素0.1mg；
分别精密吸取上述槲皮素对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，按上述色谱条件，测定峰面积；以色谱峰峰面积为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线；
含量测定：精密称取3批森登四味汤有效部位样品各3份，每份约15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为槲皮素含量测定的供试品溶液；精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量，即得本发明森登四味汤有效部位中含槲皮素为0.03％～0.06％。
3.森登四味汤有效部位中总萜的含量测定
精密称取栀子苷对照品5mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
香草醛-浓硫酸溶液的配制：精密称取香草醛50mg，以浓硫酸定容至50mL量瓶中，即得浓度为1mg/mL的香草醛-浓硫酸溶液；
精密吸取栀子苷对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6mL，分别置10mL比色管中，各比色管加入香草醛-浓硫酸溶液至5.0mL，室温放置10分钟，在446nm波长处测定吸光度；以栀子苷对照品取样量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；
精密称取森登四味汤有效部位样品各3份，每份15mg，置100mL量瓶中，加70％乙醇溶液适量，超声处理5分钟，用70％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0mL于25mL量瓶中，加70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；分别精密吸取上述样品溶液1.0mL，栀子苷对照品溶液0.5mL、1.0mL，置10mL比色管中，各比色管加入香草醛-浓硫酸溶液至5.0mL，室温放置10min，在446nm波长处测定吸光度；外标两点法计算含量，即得，本发明森登四味汤有效部位中总萜以栀子苷计含量为30％～35％。
4.森登四味汤有效部位中栀子苷的含量测定
色谱条件：
色谱柱：依利特ODS C18柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：20∶80的甲醇-0.4％醋酸水溶液；流速：1.0mL/min；检测波长：238nm；柱温：30℃；
标准曲线绘制：
取栀子苷对照品5mg，精密称定，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得栀子苷对照品溶液，其中每1mL含栀子苷1mg)；
精密吸取上述对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，16.0，20.0μL，注入高效液相色谱仪；按照上述色谱条件测定各色谱峰峰面积，以对照品的进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
含量测定：
精密称取3批森登四味汤有效部位样品各3份，每份约15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为栀子苷含量测定的供试品溶液；精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量，即得本发明森登四味汤有效部位中含栀子苷2.0％～3.8％。
本发明对森登四味汤的原料药提取物进行纯化、富集，得到森登四味汤有效部位，使其有效成分的含量大大提高，克服了汤剂、胶囊剂服用剂量大的缺陷；同时，以前的森登四味汤缺乏具体的质量标准控制指标，未形成系统的质量标准体系，本发明通过纯化得到森登四味汤有效部位，进行了森登四味汤有效部位中总黄酮、总萜、槲皮素、栀子苷的含量测定，有利于提高产品的稳定性，对蒙药森登四味汤的开发具有现实意义。
下面实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。
实验例1复方森登四味有效部位制备方法的筛选
取森登四味汤复方药材饮片4份，每份30g，50％乙醇回流提取3次，溶剂用量为10体积倍，每次提取2小时，减压回收溶剂，得提取物，加一定体积的水分散溶解，使得药材量与分散后溶液体积比为1∶6。选择AB-8型大孔吸附树脂(生药量的10体积倍)、聚酰胺(生药量的10体积倍)、反相硅胶(生药量的6体积倍)、活性炭(生药量的10体积倍)方法处理森登四味汤复方提取物，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1∶10，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为6BV/h，50％乙醇洗脱5-8倍树脂体积，洗脱流速为4～9BV/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为森登四味汤有效部位。(见表1)
表1
由上表可看出，大孔吸附树脂对于总黄酮、总萜的富集能力(有效部位的含量及吸附-解吸附率)强于聚酰胺、反相硅胶、活性炭，据此，本发明选择大孔吸附树脂为载体富集森登四味汤的总黄酮、总萜有效部位。
实验例2森登四味汤有效部位中总黄酮的含量测定
1.1仪器与测定条件：
760CRT型紫外可见分光光度计(上海)
SARTORIUS-BS224S型电子分析天平(北京塞多利斯仪器系统公司)
KQ-250DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。
测定波长：525nm
1.2对照品与试剂：
槲皮素对照品(批号：100081-200406购于中国药品生物制品检定所)
试剂：水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯
1.3对照品溶液的制备：
精密称取槲皮素对照品5.06mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作得浓度为0.1012mg/mL的对照品溶液。
1.4样品溶液的制备
精密称取实施1制备的森登四味汤有效部位样品各3份，每份15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1.0mL于10mL量瓶，加无水甲醇至刻度，摇匀，作为样品溶液。
1.5森登四味汤有效部位中总黄酮的含量测定
分别精密吸取上述样品溶液0.5mL置加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，再分别精密吸取槲皮素对照品溶液2.0、4.0mL，置加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，将试管置冷水浴(15℃左右)中，缓慢滴加浓HCl3mL，并不时振摇试管；最后加70％乙醇补足至10mL，摇匀，置沸水浴中加热60min，取出，迅速冷却至室温，于525nm处测定吸光度；外标两点法计算含量，即得。(见表2)
表2
实验例3森登四味汤有效部位中槲皮素的含量测定
1.1仪器与测定条件：
HITACHI L2000高效液相色谱仪，Ezchrom EliteTM Client/Server forHitachi软件系统，AT-830型色谱柱恒温箱(北京奥特赛恩斯仪器有限公司)；电子分析天平(瑞典)。
色谱条件：色谱柱：依利特ODS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.7％磷酸水溶液(60∶40)；流速：1.0mL/min；检测波长：371nm；柱温：30℃；
1.2对照品与试剂：
槲皮素对照品(批号：100081-200406购于中国药品生物制品检定所)
色谱甲醇(Fischer)，纯净水(娃哈哈)。
1.3对照品溶液的制备：
精密称取槲皮素对照品4.88mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作得浓度为0.0976mg/mL的对照品溶液。
1.4样品溶液的制备
精密称取实施例2制备的3批森登四味汤有效部位样品各3份，每份约15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为槲皮素含量测定的供试品溶液；
1.5森登四味汤有效部位中槲皮素的含量测定
精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量。(见表3)
表3
实验例4森登四味汤有效部位中总萜的含量测定
1.1仪器与测定条件：
760CRT型紫外可见分光光度计(上海)
SARTORIUS-BS224S型电子分析天平(北京塞多利斯仪器系统公司)
KQ-250DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。
测定波长：446nm
1.2对照品与试剂：
栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号；110749-200613)
试剂：水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯
1.3对照品溶液的制备：
精密称取栀子苷对照品4.62mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
香草醛-浓硫酸溶液的配制：精密称取香草醛50mg，以浓硫酸定容至50mL量瓶中，即得浓度为1mg/mL的香草醛-浓硫酸溶液；
1.4样品溶液的制备
精密称取实施例1制备的森登四味汤有效部位样品各3份，每份15mg，置100mL量瓶中，加70％乙醇溶液适量，超声处理5分钟，用70％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0mL于25mL量瓶中，加70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；
1.5森登四味汤有效部位中总萜的含量测定
分别精密吸取上述样品溶液1.0mL，栀子苷对照品溶液0.5mL、1.0mL，置10mL比色管中，各比色管加入香草醛-浓硫酸溶液至5.0mL，室温放置10min，在446nm波长处测定吸光度；外标两点法计算含量，即得。(见表4)
表4
实验例5森登四味汤有效部位中栀子苷的含量测定
1.1仪器与测定条件：
美国Agilent1100高效液相色谱仪。AT-830型色谱柱恒温箱(北京奥特赛恩斯仪器有限公司)；电子分析天平(瑞典)。
色谱条件：色谱柱：依利特ODS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.4％醋酸水溶液(20∶80)；流速：1.0mL/min；检测波长：238nm；柱温：30℃；
1.2对照品与试剂：
栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号；110749-200613)
试剂：水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯
1.3对照品溶液的制备：
取栀子苷对照品5.23mg，精密称定，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得栀子苷对照品溶液。
1.4样品溶液的制备
精密称取实施例2制备的3批森登四味汤有效部位样品各3份，每份约15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为栀子苷含量测定的供试品溶液；
1.5森登四味汤有效部位中栀子苷的含量测定
精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量，即得。(见表5)
表5
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1：森登四味汤有效部位的制备
取森登四味汤复方药材饮片1kg，70％乙醇10L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得提取物，加一定体积的水分散溶解，使得药材量与分散后溶液体积比为1∶3.5。通过7.5LAB-8大孔吸附树脂，吸附流速2Bv/h，树脂柱径高比为1∶10，水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为4Bv/h，50％乙醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速为4Bv/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为森登四味汤有效部位。
实施例2：森登四味汤有效部位的制备
取森登四味汤复方药材饮片1kg，加50％乙醇15L超声提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得提取物，加一定体积的水分散溶解，使得药材量与分散后溶液体积比为1∶5。通过10L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速2Bv/h，树脂柱径高比为1∶12，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为4Bv/h，50％乙醇洗脱7倍树脂体积，洗脱流速为4Bv/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为森登四味汤有效部位。
实施例3：森登四味汤有效部位的制备
森登四味汤复方药材1kg，加50％甲醇，微波提取3次，每次提取1小时，溶剂用量为10L，将提取物加入一定体积的蒸馏水，使得药材量与分散后溶液体积比为1∶8，再分别以4000转/分钟的速度离心35分钟，倾出上清液，将沉淀物用乙醇以生药量计为3BV回流2次，每次1.5小时，合并乙醇提取液，回收溶剂，残留物即为森登四味汤有效部位。
实施例4：森登四味汤有效部位的制备
取森登四味汤药材1kg，加70％甲醇，超临界流体萃取2次，每次提取2小时，溶剂用量为8L，将所得的提取物混悬于水中，然后用低极性的乙酸乙酯，萃取获得其中的总黄酮成分和总萜成分，得森登四味汤有效部位。
实施例5：森登四味汤有效部位中总黄酮的含量测定
精密称取槲皮素对照品5mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密吸取槲皮素对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mL，置加有镁粉300mg的具塞刻度试管中；将试管置冷水浴(15℃左右)中，缓慢滴加浓HCl3mL，并不时振摇试管；最后加70％乙醇补足至10mL，摇匀，置沸水浴中加热60分钟，取出，迅速冷却至室温，于525nm处测定吸光度；以槲皮素对照品取样量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；
精密称取实施例1制备的森登四味汤有效部位样品各3份，每份15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1.0mL于10mL量瓶，加无水甲醇至刻度，摇匀，作为样品溶液；分别精密吸取上述样品溶液0.5mL置加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，再分别精密吸取槲皮素对照品溶液2.0、4.0mL，置加有镁粉300mg的具塞刻度试管中，将试管置冷水浴(15℃左右)中，缓慢滴加浓HCl3mL，并不时振摇试管；最后加70％乙醇补足至10mL，摇匀，置沸水浴中加热60min，取出，迅速冷却至室温，于525nm处测定吸光度；外标两点法计算含量，即得本发明森登四味汤有效部位中总黄酮以槲皮素计为27％。
实施例6：森登四味汤有效部位中槲皮素的含量测定
色谱条件：色谱柱：依利特ODS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.7％磷酸水溶液(60∶40)；流速：1.0mL/min；检测波长：371nm；柱温：30℃；
标准曲线绘制：
取槲皮素对照品5mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得槲皮素对照品溶液(每1mL含槲皮素0.1mg)；
分别精密吸取上述槲皮素对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，按上述色谱条件，测定峰面积；以色谱峰峰面积为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线；
含量测定：精密称取实施例3制备的3批森登四味汤有效部位样品各3份，每份约15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为槲皮素含量测定的供试品溶液；精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量，即得本发明森登四味汤有效部位中含槲皮素为0.045％。
实施例7：森登四味汤有效部位中总萜的含量测定
精密称取栀子苷对照品5mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
香草醛-浓硫酸溶液的配制：精密称取香草醛50mg，以浓硫酸定容至50mL量瓶中，即得浓度为1mg/mL的香草醛-浓硫酸溶液；
精密吸取栀子苷对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6mL，分别置10mL比色管中，各比色管加入香草醛-浓硫酸溶液至5.0mL，室温放置10分钟，在446nm波长处测定吸光度；以栀子苷对照品取样量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；
精密称取实施例2制备的森登四味汤有效部位样品各3份，每份15mg，置100mL量瓶中，加70％乙醇溶液适量，超声处理5分钟，用70％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0mL于25mL量瓶中，加70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；分别精密吸取上述样品溶液1.0mL，栀子苷对照品溶液0.5mL、1.0mL，置10mL比色管中，各比色管加入香草醛-浓硫酸溶液至5.0mL，室温放置10min，在446nm波长处测定吸光度；外标两点法计算含量，即得，本发明森登四味汤有效部位中总萜以栀子苷计含量为31％。
实施例8：森登四味汤有效部位中栀子苷的含量测定
色谱条件：
色谱柱：依利特ODS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.4％醋酸水溶液(20∶80)；流速：1.0mL/min；检测波长：238nm；柱温：30℃；
标准曲线绘制：
取栀子苷对照品5mg，精密称定，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得栀子苷对照品溶液(每1mL含栀子苷1mg)；
精密吸取上述对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，16.0，20.0μL，注入高效液相色谱仪；按照上述色谱条件测定各色谱峰峰面积，以对照品的进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
含量测定：
精密称取实施例4制备的3批森登四味汤有效部位样品各3份，每份约15mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为栀子苷含量测定的供试品溶液；精密吸取上述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量，即得本发明森登四味汤有效部位中含栀子苷2.2％。
实施例9：片剂的制备
取实施例1制备的森登四味汤有效部位，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。
实施例10：胶囊剂的制备
取实施例2制备的森登四味汤有效部位，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。
实施例11：口服液体制剂的制备
取实施例3制备的森登四味汤有效部位，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液体制剂。
Claims (4)
1.一种森登四味汤有效部位的制备方法，其特征在于该方法为如下方法：
取森登四味汤复方药材饮片1kg，70％乙醇10L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得提取物，加一定体积的水分散溶解，使得药材量与分散后溶液体积比为1∶3.5，通过7.5LAB-8大孔吸附树脂，吸附流速2Bv/h，树脂柱径高比为1∶10，水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为4Bv/h，50％乙醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速为4Bv/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为森登四味汤有效部位；
其中森登四味汤有效部位的原料药组成为：
文冠木8-20重量份 川楝子6-12重量份 诃子1-5重量份 栀子1-5重量份。
2.一种森登四味汤有效部位的制备方法，其特征在于该方法为如下方法：
取森登四味汤复方药材饮片1kg，加50％乙醇15L超声提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得提取物，加一定体积的水分散溶解，使得药材量与分散后溶液体积比为1∶5，通过10L AB-8大孔吸附树脂，吸附流速2Bv/h，树脂柱径高比为1∶12，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为4Bv/h，50％乙醇洗脱7倍树脂体积，洗脱流速为4Bv/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为森登四味汤有效部位；
其中森登四味汤有效部位的原料药组成为：
文冠木8-20重量份 川楝子6-12重量份 诃子1-5重量份 栀子1-5重量份。
3.如权利要求1或2所述的一种森登四味汤有效部位的制备方法，其特征在于该方法中原料药组成为：
文冠木10重量份 川楝子12重量份 诃子4.5重量份 栀子1.5重量份。
4.如权利要求1或2所述的一种森登四味汤有效部位的制备方法，其特征在于该方法中原料药组成为：
文冠木18重量份 川楝子7重量份 诃子2重量份 栀子4.5重量份。
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| 中华人民共和国卫生部药典委员会编.森登四味汤散.《卫生部颁蒙药标准（分册）》.2008, * |
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