CN103191198A - 元胡提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及元胡提取物及其制备方法和用途。具体而言，本发明涉及含有至少40%总生物碱的元胡提取物，制备该提取物的提取分离方法，包含该提取物的药物组合物以及该提取物或药物组合物在制备用于预防和/或治疗抑郁症的药物中的用途。

Description

元胡提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域。具体而言，本发明涉及一种元胡总生物碱提取物及其制备方法和抗抑郁用途。

背景技术

抑郁性障碍是一类以抑郁心境为主要特点的心境障碍，其表现为长时间持续的抑郁情绪，并且这种情绪明显超过必要的限度，缺乏自信，感到身体能量的明显降低，无法在任何有趣的活动中体会到快乐。这类障碍还会造成患者的躯体功能失调，如睡眠紊乱或食欲减退。

抑郁性障碍在世界范围内的发病率很高，几乎每10个成年人中就有2个存在相应症状，并且呈现出发病年龄日趋提早，发病率逐年增加的趋势，因此抑郁性障碍也被称为“心灵感冒”。该疾病的终身患病率在不同国家中也不尽相同，有调查显示中国的终身患病率约为7%。其中，重性抑郁障碍最为常见，因此也将重性抑郁障碍称为“抑郁症”。

抑郁症目前已成为全球疾病中给人类造成严重负担的第二位重要疾病，对患者及其家属造成的痛苦，对社会造成的损失是其他疾病所无法比拟的。究其原因，造成上述局面的首要因素是社会对抑郁症缺乏正确的认识，对出现抑郁症状者误认为是闹情绪，不能给予应有的理解和情感支持；其次，社会偏见对患者造成更大的心理压力，使得患者不愿接受相应的诊疗，使病情进一步恶化。因此，针对抑郁症的防治工作已经迫在眉睫，刻不容缓。

目前，除了氟西汀、舍曲林等为数不多的化学合成药以外，现有的其他抗抑郁症化药的临床应用均受其易耐药和副作用多等缺点的限制。相反，传统中医药在治疗抑郁症方面有着丰富的经验和大量的文献记载。中医学虽无“抑郁症”之名，但从其发病特点和临床变现看，与中医学的“郁病”、“百合病”、“脏躁”、“癫症”、“惊悸”等神志病有一定联系。鉴于中医理论在实际治疗过程中的指导意义，大多数情况下均采用基本方剂加减治疗的方式来进行。然而，以单味药治疗抑郁症却仅仅停留在科研水平，例如姜建章等采用银杏叶片治疗血管性抑郁症与阳性对照药阿米替林无显著性差异，但是需要较长的治疗时间（姜建章等,银杏叶片治疗血管性抑郁症的临床观察[J],中国中西医结合杂志,2003,23(5):388-399）；又如，梁建辉等采用巴戟天制成的巴戟乐胶囊来治疗抑郁症，虽然其总有效率高于国产氯丙咪嗪片，但却低于作用迅速、副作用少的四环类抗抑郁药麦普替林和米安舍林（梁建辉等,巴戟天水提物治疗抑郁症临床疗效初探[J],中国中药杂志,2002,27(1):75-79）。

元胡（Corydalis yahusuo W.T.Wang）又名延胡索、玄胡，为罂粟科紫堇属多年生草本植物，为大宗常用中药。陈卫垠等观察了中药复方郁乐疏（由柴胡、郁金、丹参、元胡等中药组成）与氟西汀对卒中后抑郁症状和神经功能康复的影响，由实验得出结论，中药制剂郁乐疏与氟西汀均能有效治疗卒中后抑郁症，促进神经功能恢复（陈卫垠等,中药复方与氟西汀对卒中后抑郁神经功能康复影响的研究[J],成都中医药大学学报,2001,24(4):20-23,41）。发明专利《一种治疗抑郁症的内服药剂》（CN101085306A）公开了一种治疗抑郁症的内服药剂，该药剂由柴胡、钩藤、天麻、酸枣仁、郁金、元胡等配制而成。由此可见，中药元胡已被用于与其他中药组方来治疗抑郁症，然而有关元胡单味药材用于治疗抑郁症的研究却未见报道。

发明内容

针对上述情况，本申请旨在提供一种元胡提取物、其制备方法及其在治疗抑郁症方面的医药用途。

一方面，本发明旨在提供一种元胡提取物，其特征在于该元胡提取物包含至少40重量%的总生物碱，由包括如下步骤的方法制备：

1）提取步骤：将元胡药材粉碎，过10目筛，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，减压回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液；

2）吸附步骤：将步骤1）中得到的元胡提取液经大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液的重量比为1:1；

3）洗脱步骤：将步骤2）中吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，合并所需的洗脱部分，减压回收溶剂，干燥，得元胡提取物；

在本发明中，提取步骤1）中的乙醇-水溶液为15体积%-95体积%的乙醇-水溶液。

在本发明中，吸附步骤2）中的大孔树脂选自AB-8、X-5、D101中的任意一种，优选AB-8。在该吸附步骤中，待提取液全部进入树脂床之后，静置1-2小时（视元胡提取液的上样体积酌情而定），以便使大孔树脂充分吸附元胡活性部位。

本发明中的术语“活性部位”指的是药材中含量较高的，起主导作用的活性成分的混合物，例如总生物碱、总黄酮或总皂苷等。

在本发明中，洗脱步骤3）中的梯度洗脱程序为：先用水洗脱5BV，再用70体积%乙醇-水溶液洗脱5BV，洗脱速度为2BV/h，所需的洗脱部分为70体积%乙醇-水溶液洗脱部分。

本发明中的术语“梯度洗脱”（又称为梯度淋洗或程序洗脱）指的是在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的种类或浓度配比，以便使复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子而达到良好的分离目的的洗脱方法。

上述方法的收率范围以及总生物碱的含量范围均比较恒定，可适用于工业化大生产，具有可操作性强、方法稳定、结果可控等特点。

另一方面，本发明旨在提供一种制备如上所述的元胡提取物的方法，按照所述方法制备的元胡提取物的收率为12-15%，且元胡提取物中的总生物碱含量至少为40重量%。

另一方面，本发明旨在提供一种药物组合物，其包含上述元胡提取物和任选的药学上可接受的赋形剂。所述药学上可接受的赋形剂选自稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、矫味剂、包衣剂、防腐剂或稳定剂。

另一方面，本发明旨在提供如上所述的元胡提取物或者包含所述元胡提取物的药物组合物在制备用于治疗和/或预防抑郁症的药物中的用途。这些药物可以为制剂领域中的常规口服制剂，优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂，其使用方法和使用剂量取决于多种因素，如患者的年龄、体重、性别、健康状况、饮食以及病征的持续时间和严重程度等。本领域技术人员根据上述因素可以容易地决定其使用方法和使用剂量。

此外，发明人对本发明的元胡提取物进行了长期毒性试验，其结果证明口服给药安全。同时，由于本发明的提取物或包含该提取物的药物组合物是由单味药材经特殊的提取分离过程制备而成，相较于传统成方制剂具有更高的可控性，为今后的生产标准化以及疗效可控性奠定了物质基础。

具体实施方式

下面将结合具体的实施例进一步阐述本发明。下列实施例仅为说明本发明，而不应将其理解为对本发明的限制。

实施例一、元胡提取物的制备

1.材料：

元胡药材购自河北省安国中药材有限公司，产自河北省，符合中华人民共和国药典2005年版一部正文各药材项下的有关规定，样品保存于中国中医科学院中药研究所，批号为yp0033。经鉴定，各药材名称与实物相符，质量均符合药典标准。乙醇（济南汇丰达化工开发有限公司）；纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；AB-8型大孔树脂（天津南开大学化工厂）；X-5型大孔树脂（天津南开大学化工厂）；D101-1型大孔树脂（安徽三星树脂科技有限公司）。

2.方法：

元胡提取物1的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的15体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液1；

将上述元胡提取液1经AB-8型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液1的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序为：先用水洗脱5BV，再用70体积%乙醇-水溶液洗脱5BV，洗脱速度为2BV/h；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为12.52%。

元胡提取物2的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的35体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液2；

将上述元胡提取液2经AB-8型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液2的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为14.28%。

元胡提取物3的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的95体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液3；

将上述元胡提取液3经AB-8型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液3的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为13.23%。

元胡提取物4的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的15体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液4；

将上述元胡提取液4经X-5型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液4的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为13.17%。

元胡提取物5的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的55体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液5；

将上述元胡提取液5经X-5型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液5的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为14.25%。

元胡提取物6的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的95体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液6；

将上述元胡提取液6经X-5型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液6的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为14.65%。

元胡提取物7的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的15体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液7；

将上述元胡提取液4经D101型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液7的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为13.35%。

元胡提取物8的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的75体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液8；

将上述元胡提取液8经D101型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液8的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为14.41%。

元胡提取物9的制备：

将元胡药材1kg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的95体积%乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液9；

将上述元胡提取液9经D101型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液9的重量比为1:1；

将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为12.18%。

实施例二、元胡提取物中总生物碱的含量测定及其方法学考察

现代药理学研究表明，元胡中的主要有效组分为元胡总生物碱。而在多种四氢异喹啉类生物碱中，尤以延胡索乙素所表现出的生理活性最强。因此，参照相关文献资料（王绪颖等，延胡索总生物碱的提取纯化工艺研究[J]，中成药，2010，32（11）：1899-1903），本发明选用溴甲酚绿酸性染料比色法测定元胡提取物中总生物碱的含量。该方法的原理是，在一定的pH介质中，有机生物碱类可与某些酸性染料定量结合成有色络合物。该有色络合物可定量被提取到有机溶剂中，进而可以用比色法测量有机碱的量。

1.材料：

1.1仪器：

十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；T6新世纪紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；KQ-100B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

1.2试剂

醋酸（北京化工厂，分析纯）；醋酸钠（北京化工厂，分析纯）；去离子水（中国中医科学院中药研究所自制）；溴甲酚绿（北京化工厂，分析纯）；邻苯二甲酸氢钾（北京化工厂，分析纯）；盐酸（北京化工厂，分析纯）；氢氧化钠（北京化工厂，分析纯）；氨水（北京化工厂，分析纯）；甲醇（北京化工厂，分析纯）；三氯甲烷（北京化工厂，分析纯）。

1.3待测样品及对照品

待测样品：按照实施例一所述的方法制备的元胡提取物。

对照品：延胡索乙素（批号：110726，中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。

2.方法和结果：

2.1试液配制

醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH4.5）的配制：称取无水醋酸钠18.092g，量取醋酸9.8ml，加去离子水定容至1000mL，即得pH4.5的缓冲溶液。

溴甲酚绿溶液的配制：精密称取溴甲酚绿0.0504g，邻苯二甲酸氢钾1.2005g，加0.1mol/L盐酸3ml溶解，加去离子水定容至100mL，采用氢氧化钠调节pH至4.5。

对照品溶液的制备：精密称取延胡索乙素2.50mg，用醋酸-醋酸钠缓冲液定容至10mL，配成每1mL含有0.25mg延胡索乙素对照品的溶液。

供试品溶液的制备：以元胡提取物1为例，精密称取提取物0.05g，加入70体积%甲醇超声溶解并定容至100mL，配成0.5mg/mL的样品溶液。精密量取样品溶液5.0mL,蒸干，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）将残渣溶解，定容至10mL，即得供试品溶液。

2.2标准曲线及线性范围

分别精密吸取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mL，置于预先精密加入三氯甲烷10mL的分液漏斗中，再分别补加1.0、0.8、0.6、0.4、0.2和0mL醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）。精密加入4mL溴甲酚绿溶液，振摇3分钟，静置40分钟，分取三氯甲烷层。按照《中国药典》（2010年版）第一部附录VA中记载的紫外-可见分光光度法在411nm波长处测定吸光度，标准曲线为Y=54.72x-0.004，r=0.998，结果表明在5.0μg/ml-25.0μg/ml之间的质量浓度与吸光度呈良好线性关系。

2.3稳定性试验

精密吸取供试品溶液1.0mL，置于预先精密加入三氯甲烷10mL的分液漏斗中。按照上述2.2项下的方法，分别于0、10、20、30、40、50和60分钟时，在411nm波长处测定吸光度。测量结果的RSD为0.8723%，说明样品溶液在60分钟内稳定。

2.4精密度试验

精密吸取供试品溶液1.0mL，置于预先精密加入三氯甲烷10mL的分液漏斗中。按上述2.2项下的方法，在411nm波长处连续测定6次。测量结果的RSD为0.2%，说明本方法的精密度良好，所测数据准确可靠。

2.5重现性试验

以元胡提取物1为例，精密称取6份，每份各0.5g，按2.1项下的方法制备供试品溶液。取供试品溶液1mL，置于预先精密加入三氯甲烷10mL的分液漏斗中。按2.2项下的方法，在411nm波长处测定吸光度。测量结果的RSD为1.60%，说明本方法的重现性良好，符合含量测定的检测要求。

2.6加样回收率试验

以元胡提取物1为例，精密称取0.025g，置于100mL量瓶中。加入对照品10.5mg,加70体积%甲醇超声溶解,配制成0.5mg/mL样品溶液。精密量取样品溶液5.0mL，蒸干，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）将残渣溶解，定容至10mL，即得供试品溶液。精密吸取加样供试品溶液1.0mL，置于预先精密加入三氯甲烷10mL的分液漏斗中。按照2.2项下的方法操作，在411nm波长处测定吸光度。结果平均回收率为100.2%，RSD为1.56%，说明本方法的回收率良好。

2.7元胡提取物的含量测定

分别精密称取元胡提取物1-9，各0.05g，按2.1项下的方法平行制备供试品溶液1-9。在411nm波长处测定元胡中总生物碱的含量，结果见表1。

表1.元胡提取物中总生物碱的含量测定结果

实施例三、元胡提取物的抗抑郁作用的药效学实验

小鼠悬尾实验（tail suspension test，TST）和强迫游泳（forcedswimming test，FST）实验均是验证药物是否具有抗抑郁活性的常用动物实验方法，因此本发明采用上述两项实验来考察本发明的元胡提取物对小鼠抑郁模型的影响。然而，在TST和FST实验中，某些特定药物（特别是精神性运动兴奋剂）可能导致假阳性结果，这些药物通过刺激自发活性来缩短不动时间。因此需要通过自发活动实验（locomotoractivity test，LAT）来观察给药前后小鼠自发活动的次数变化，借此排除实验结果为假阳性的可能。

1.材料：

1.1实验动物：

健康的C57BL/6小鼠，雄性，体重为18～22g。由北京海淀兴旺实验动物养殖场提供，许可证号：SCXK-(军)2007-004。

1.2实验药物：

受试药物：按照实施例一的方法制备的元胡提取物1-9。

阳性对照药：盐酸氟西汀胶囊（百忧解），规格：20mg/粒，生产商：Patheon France，分包装厂：礼来苏州制药有限公司，生产批号1022A，生产日期为2011-07，有效期至2014-06，分装批号为L02456。

2.方法：

2.1药液配制：

配药体积：在下面三项实验中，计划每组16只小鼠，体重以22g计，连续给药6天，给药体积为20mL/kg，共需药液体积为42.24mL（16只×0.022kg/只×20mL/kg×6天），将阳性药及受试药物1-9各配药50mL。

盐酸氟西汀：将4粒胶囊去皮后，加水至50mL（其中阳性药浓度约为4粒×20mg/粒÷50mL=1.6mg/mL），超声10分钟，4℃保存，用前放至室温并充分混匀。

元胡提取物：通过给药剂量方面的考察，分别称取9种元胡提取物的最优化剂量，各0.462g，加水至50mL（其中总生物碱浓度约为0.462g×40%÷50mL=3.696mg/mL，以提取物中总生物碱含量为40%计），超声10分钟，4℃保存，用前放至室温并充分混匀。

2.2分组及给药：

在下面三项实验中，均将小鼠随机分为11组，每组16只，分别为空白对照组、盐酸氟西汀组和元胡提取物第1-9组。空白对照组每天灌胃给予蒸馏水，盐酸氟西汀组灌胃相应药物的试液，元胡提取物组分别灌胃9种元胡提取物的试液。小鼠灌胃体积为20mL/kg，每天1次，连续6天。在实验期间，动物可自由取食和饮水。

2.3小鼠自发活动实验（LAT）

将小鼠放入YLS-1A型小鼠自发活动仪（山东省医学科学院设备站）中，仪器参数：电压20V；电流11.0mA；波宽10.0ms；周期20.0ms。自发活动室中垫放卫生纸，在两只小鼠的测量间隙，将自发活动室打扫干净，记录6分钟内小鼠的自发活动次数。分别测定小鼠给药前和末次给药1小时后的小鼠自发活动次数。

2.4小鼠悬尾实验

悬尾实验所用装置为自制，将长玻璃棒插入纸箱中，使玻璃棒距纸箱底部35cm，玻璃棒中心距纸箱两边的垂直距离为13cm，测定时将单个小鼠尾部（在距离尾尖2cm处）粘在玻璃棒中心处，使小鼠呈倒挂状态，且头部距离箱底5cm。小鼠为了克服不正常体位而挣扎，但活动一段时间后出现间断性不动，显示出无助与失望状态。小鼠悬挂时间为6分钟，记录并统计后4分钟内累计不动的时间（不动状态即小鼠停止挣扎不动或无任何活动）。悬尾实验环境应当昏暗、安静，分别于给药前和末次给药1小时后进行测定。

2.5小鼠强迫游泳实验

实验装置为一个高20cm，直径14cm的圆柱形玻璃缸。实验时，将小鼠单独放入缸中，缸中水深10cm，水温25℃。观察6分钟，小鼠游泳2分钟后，统计后4分钟的累计不动时间（指小鼠在水中停止挣扎，或显漂浮状态，仅有微小的肢体运动以保持头部浮出水面）。实验环境应当昏暗、安静，分别于给药前和末次给药1h后进行测定。

3.结果：

比较各给药组与空白组中小鼠给药前后自发活动次数、悬尾不动时间（秒）和强迫游泳不动时间（秒），各项实验结果均以平均数±标准差的方式来表示，结果数据采用SPSS18.0软件进行t检验统计分析（如下表2所示）。

表2.元胡提取物对小鼠LAT中自发活动次数以及TST/FST中累计不动时间的影响（

n=16）

给药组和空白组比***P<0.01；**P<0.05；*P<0.1

如表2所示，与空白对照组相比，各给药组小鼠TST不动时间均有所降低，且各给药组小鼠FST不动时间也不同程度地降低，其中尤以提取物1组效果最强，与阳性药盐酸氟西汀相比没有明显差异。结果表明，含有至少40重量%的总生物碱的本发明的元胡提取物均有防治抑郁症的作用。另外，通过比较给药前后的LAT中自发活动次数可知，本发明的元胡提取物并无潜在的精神性激动作用，排除了可能因中枢神经兴奋所带来的TST和/或FST中假阳性结果的情况，表明本发明的各种元胡提取物的防治实验性抑郁症的作用的结果真实、可靠。

实施例四、元胡提取物的长期毒性实验

本发明的发明人还对本发明的元胡提取物进行了长期毒性实验研究。结果表明：对9周龄大鼠连续180天灌服（试验共设四组：高、中、低（给药量分别为55.44g/kg、27.72g/kg、13.86g/kg，分别相当于临床成人日用量的120、60、30倍）三个剂量组和空白对照组，在给药90天、180天及停药30天后，分别处死大鼠，检查各组动物血液指标和血液生化学指标。对所有动物心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺等脏器进行肉眼观察，并称重计算脏器指数，同时对空白对照和高剂量组动物心、肝、脾、肺、肾、脑（大脑、小脑、脑干）、垂体、坐骨神经、脊髓（颈段、胸段、腰段）、甲状腺、胸腺、胰腺、肾上腺、唾液腺、食道、胃、十二指肠、回肠、结肠、膀胱、淋巴结、气管、主动脉进行病理形态检查。与空白对照组相比，不同给药周期的各给药组动物的上述指标均未发现明显异常，血液学和生化学指标均在正常值范围内。因此，本发明的各组提取物采用口服途径给药是安全的。

实施例五、包含元胡总生物碱提取物的口服制剂的制备

1、包含元胡总生物碱提取物的片剂的制备

称取46g元胡提取物，粉碎，研细。与80g淀粉、60g糊精和10g蔗糖混匀后制成颗粒。60℃以下干燥，加入5g滑石粉和1g硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，包糖衣或薄膜衣，包装即得。

2、包含元胡总生物碱提取物的胶囊剂的制备

称取46g元胡提取物，粉碎，研细，过80目筛。加入适量10%淀粉浆，搅拌并混匀，制成软材后，过14目尼龙筛制粒。于60℃以下干燥至水分在3%以下，填入空胶囊壳中，共制成1000粒，包装即得。

3、包含元胡总生物碱提取物的颗粒剂的制备

称取46g元胡提取物，粉碎，研细。加入5倍量糖粉，混合均匀，加入适量70%乙醇，制成软材，过14目尼龙筛制粒，湿颗粒于60℃干燥，干颗粒过14目尼龙筛整粒，再过65目筛筛去细粉，分装，密封，包装即得，共制成1000剂。

4、包含元胡总生物碱提取物的散剂的制备

称取46g元胡提取物，与80g淀粉、10g蔗糖混匀后，研磨成极细粉，过100目尼龙筛，分装，密封，包装即得，共制成1000剂。

Claims (7)

1.元胡提取物，其特征在于所述元胡提取物包含至少40重量%的总生物碱，由包括如下步骤的方法制备：

1）将元胡药材粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和1h，合并三次提取液，减压回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液；

2）将步骤1）中得到的元胡提取液经大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为1BV/h，且大孔树脂与元胡提取液的重量比为1:1；

3）将步骤2）中吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序为：先用水洗脱5BV，再用70体积%乙醇-水溶液洗脱5BV，洗脱速度为2BV/h；合并70体积%乙醇-水溶液洗脱部分，减压回收溶剂，干燥，得元胡提取物。

2.根据权利要求1所述的元胡提取物，其特征在于步骤1）的所述乙醇-水溶液为15体积%-95体积%的乙醇-水溶液。

3.根据权利要求1或2所述的元胡提取物，其特征在于步骤2）中的所述大孔树脂选自AB-8、X-5、D101中的任意一种，优选AB-8。

4.制备根据权利要求1-3中任一项所述的元胡提取物的方法，其特征在于按照所述方法制备的元胡提取物的收率为12-15%，且所述元胡提取物中的总生物碱含量至少为40重量%。

5.药物组合物，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的元胡提取物和任选的药学上可接受的赋形剂。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述药学上可接受的赋形剂选自稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、矫味剂、包衣剂、防腐剂或稳定剂。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的元胡提取物，或者根据权利要求5或6所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防抑郁症的药物中的用途，其特征在于所述药物为制剂领域中的常规口服制剂，优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂。