CN102283920A - 一种治疗帕金森氏病的药物组合物，其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗帕金森氏病的药物组合物及其制备方法和应用，本发明的药物组合物是以刺五加总苷、钩藤总碱、芍药总苷为有效组分所制成的组合物。其制备方法是将三种药材分别用乙醇提取，得到的稠膏干燥粉碎后，按比例混合，得到的粉末经中药制剂常规制备方法即可制得临床上适宜的各种口服制剂，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸剂等。本发明治疗帕金森氏病中药制剂，无副作用，能有效治疗帕金森氏病，提高帕金森氏病患者的生活质量。

Description

一种治疗帕金森氏病的药物组合物,其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种以刺五加为主的中药组合物，尤其涉及一种治疗帕金森病的以刺五加为主的中药组合物及其制备方法，属于治疗帕金森病的中药组合物领域。

背景技术

帕金森病又称震颤麻痹，是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，临床上以锥体外系运动障碍为特征，表现为运动迟缓，静止震颤和强直，自主神经功能障碍和痴呆，其发病率随年龄增长而增加。目前的治疗方法以缓解症状为主，但复发率高预后并不理想，往往需要终身治疗，给人类带来了严重的社会和经济负担，所以迫切需求寻找预防和治疗帕金森氏病有效的中药。

目前，市场上尚无治疗帕金森病的有效中成药。帕金森病的治疗主要是手术治疗和药物治疗两大类。由于手术和多巴替代性治疗存在严重的破坏性和副作用，寻找能够预防和延缓疾病进程的治疗方法成为迫切需要。帕金森病是老年疾病，是人体老化状态下神经内分泌诸多因素失调共同作用的结果，中医药是通过调节机体整体状况而起作用，药性平和，毒副作用小。如果单纯用中医药能有效控制早期帕金森病症状，从而避免西药的毒副作用，大大增强患者服药的依从性，同时，中药在保护神经细胞，抑制氧化应激反应，抗兴奋性毒性等方面研究成果为长期治疗帕金森病，有效控制帕金森病进程奠定了良好的基础，这或许是中医药治疗帕金森病的发展方向。

中医对帕金森病的认识可追溯到《黄帝内经》。《素问至真要大论》说：“诸暴强直，皆属于风”，“诸风掉眩，皆属于肝”，“诸痉项强，皆属于湿”。《灵枢邪客篇》指出：“邪气恶血，固不得住留，住留则伤筋络骨机关，不得屈伸，故拘挛矣”。明代孙一奎《赤水玄珠》，首次把此病命名为“颤振症”，并说颤振“乃木火上盛，肾阴不充，下虚上实，实为痰火，虚则肾虚”。《医宗必读》说：“然木即无虚，言补肝者，肝气不可犯，肝血自养，血不足者濡之，水之属也，壮水之源，木赖以荣”。为“肝肾同源”之论。清代高鼓峰在《医宗已任编》谓：“大抵气血俱虚，不能荣养筋骨，故为之振摇，而不能主持也”。本病的病理基础是肝肾阴虚，气血两虚，也是形成风、火、痰、瘀的基本根源。中老年以后，肝肾脾渐衰，精气血渐亏，筋脉失于濡养，虚风内动，虚火内生，兼加痰湿内蕴，五志化火，形成风、火、痰、瘀进一步加重病情。因此，针对此病因病机，研究治疗帕金森病的中药治疗方式显得尤为重要。目前，刺五加复方和刺五加注射液已应用于帕金森病的治疗，并取得了一定疗效，但是迄今为止，以刺五加为主药配伍芍药、钩藤，提取精制三味中药的有效成分，以刺五加总苷、钩藤总碱、芍药总苷为药物组成治疗帕金森病的药物制剂未见报道。因此，以刺五加有效组分、钩藤总碱、芍药总苷为药物组成治疗帕金森病将有广阔的市场开发前景。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种对于帕金森氏病具有显著疗效的药物组合物。

本发明一种治疗帕金森病的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的有效组分为刺五加总苷、芍药总苷和钩藤总碱，所述药物组合物由刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物和钩藤总碱提取物制成，其中刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物和钩藤总碱提取物的重量比例为1-9∶2-6∶2-6。

在本发明的一个优选实施例中，上述各原料的最佳重量比例是：刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物和钩藤总碱提取物的重量比例为6∶3∶3。

本发明提供的配比充分利用了并综合各种材料的药理和性味功用，以获得具有显著疗效的药剂：

刺五加：Acanthopanax senticosus(Rupr.et MaXim.)Harms.

基源：为五加科刺五加的干燥根、根茎。

成分和药理：内含多种糖苷、维生素、芝麻素及多糖等，能增强机体的抵抗能力，延长寿命，抗毒素，增强大脑皮层的抑制作用，增强体力、智力。

性味功用：辛、微苦、性温、无毒，归肝、肾经，具有益肾健脾、补肾安神等功效。

钩藤：Uncaria rhynchophylla(Miq，)ex Havil.

基源：为为茜草科植物钩藤或华钩藤及其同属多种植物的带钩枝条。

成分和药理：内含多种生物碱类，具有降压、镇静、抗惊厥作用，提高智力，防治老年痴呆。

性味功用：甘、微寒，归肝、心包经，具有息风止痉，清热平肝等功效。

白芍：paeonia lactiflora(p.albiflora)

基源：为双子叶植物药毛茛科植物芍药的根。

成分和药理：内含以芍药苷为主的多种糖苷，没食子鞣质，没食子酸等，具有解痉、扩张血管、抗炎、护肝等作用。

性味功用：苦、酸、甘，微寒。归肝、脾经。具有养血调经，平肝止痛，敛阴止汗等功效。

本发明的第二个目的是提供一种本发明的药物组合物的制备方法。

本发明的治疗帕金森氏病的药物组合物可采用如下方法制得，包括如下步骤：

a、取刺五加原料加质量分数为50％-90％(w/w)的乙醇加热回流提取2-3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的3-10倍，提取时间为0.5-5小时，合并醇提液；采用大孔吸附树脂富集纯化，用原料用量2-10倍量的质量分数为20％-80％(w/w)乙醇洗脱，洗脱速度1-2BV/h；洗脱液减压浓缩至相对密度在50-95℃为1.1-1.9的稠膏，在40-80℃，-0.02～-0.12Mpa下真空干燥，粉碎，得到刺五加总苷提取物粉末，备用；

b、取钩藤原料加质量分数为50％-90％(w/w)的乙醇50-85℃条件下加热回流提取2-3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的2-10倍，提取时间为0.5-5小时，减压浓缩至相对密度在50-95℃为1.1-1.9的稠膏，在40-80℃，-0.02～-0.12Mpa下真空干燥，粉碎，得到钩藤总碱提取物粉末，备用；

c、取白芍原料加质量分数为50％-90％(w/w)乙醇加热回流提取2-3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的2-10倍，提取时间为0.5-5小时，合并醇提液；采用大孔吸附树脂富集纯化，用原料用量2-10倍量的质量分数为20％-80％(w/w)乙醇洗脱，洗脱速度1-2BV/h；洗脱液减压浓缩至相对密度在50-95℃为1.1-1.9的稠膏，在40-80℃，-0.02～-0.12Mpa下真空干燥，粉碎，得到芍药总苷提取物粉末，备用；

d、按本发明所述的药物组合物的重量比例混合上述得到的三种细粉，干燥保存。

本发明中的所有原料药材，即刺五加原料、钩藤原料以及白芍原料均可从市场上购得。

本发明中，优选的，步骤(a)、(c)中的大孔吸附树脂选自AB-8大孔吸附树脂、X-5大孔吸附树脂、DM-301大孔吸附树脂或NKA-9大孔吸附树脂其中至少一种，优选的所述的大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂。

本发明的第三个目的是提供本发明的药物组合物在制备治疗帕金森氏病药物中的用途。

本发明的第四个目的是提供一种由本发明的药物组合物所制成的中药制剂。所述的中药制剂由有效剂量以上所述的药物组合物和药学上接受的辅料组成，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种口服制剂；

上述步骤d中所述的细粉经常规中药制剂的制备方法，可得滴丸剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂；

其中辅料包括填充剂，润滑剂，粘合剂，崩解剂，稀释剂等。

辅料可以选择羧甲基纤维素、硬脂酸镁、PEG-8000、乳糖、糊精、微晶纤维素或淀粉等其中至少一种。

本发明的中药制剂可用于治疗帕金森氏病药物的制备中。

本发明中药制剂为使中药有效成分更加富集，并且配比更加得当，故采用三味中药分别提取的提取方法。

为了使药效成分高度富集，杂质去除得更彻底，有效降低服用剂量，提高原料药的利用率，本发明采用了大孔吸附树脂吸附技术。大孔吸附树脂是一类新型的高分子分离材料，具有化学性质稳定、选择性吸附、再生简便等许多优点，在天然产物的分离纯化方面其应用日趋广泛。本发明选用AB-8、X-5、DM-301、NKA-9四种大孔吸附树脂对药效成分进行吸附特性的研究，通过4种树脂对药效成分水溶液的静态和动态吸附，比较4种树脂的吸附特性，从而为刺五加、芍药、钩藤有效成分的分离提纯提供依据。实验结果表明，在4种大孔吸附树脂中，AB-8型树脂对药效成分的吸附性能优于其他参比树脂，饱和吸附量有明显的差异，故AB-8型树脂是4种树脂中的首选吸附树脂载体。在4种大孔吸附树脂中，AB-8型树脂对药效成分的吸附性能较好，饱和吸附量有明显的差异，洗脱率较高，故选择AB-8型树脂作为4种树脂中首选吸附树脂载体。

根据所述药物制剂的成型工艺要求，辅料可以选择羧甲基纤维素、硬脂酸镁、PEG-8000、乳糖，糊精或微晶纤维素、淀粉等。

本发明的制备工艺注重药效成分先进提取纯化技术的应用，如：采用正交设计确定最佳的工艺条件，采用大孔树脂吸附纯化工艺和解析物质的真空干燥工艺。本发明的制剂成型工艺采用挤缩制粒技术。挤缩制粒技术可增大颗粒堆密度，在不改变单服剂量的同时提高制剂的装量。

本发明药效成分经过提取纯化后高度富集，经过真空干燥、挤出制粒等技术处理，解决内容物易吸潮变质等问题，以保证药物的流动性、色泽的一致性、装量差异的稳定性。且本发明制剂不含生药粉，防止了霉变的发生。因此，与常规技术相比，本发明所制备的固体制剂具有疗效好，崩解时间短，溶出和吸收快，生物利用度高且不宜吸潮变质，质量稳定的优点。

经动物试验和细胞试验证明，本发明中药组合物对治疗帕金森病具有较好的临床疗效。治疗过程中未发现其对心、肝、肾功能及血液系统有损害，本发明中药组合物临床应用安全。

本发明提供的中药组合物由常见、价格低廉的中药组成，由于充分利用并综合了各种材料的药理和性味作用，尤其是将其制备成口服固体制剂——滴丸剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂，发挥这几种制剂起效快，患者服用量小，服用方便，生物利用度高等优点。本发明的中药制剂能够治疗震颤，对帕金森氏病的疗效稳定，见效迅速，可达到标本兼治的效果。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1胶囊剂的制备

a、取刺五加原料加质量分数为60％的乙醇加热回流提取2次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的10倍，提取时间为2小时，合并醇提液。采用AB-8大孔树脂富集纯化，用原料用量的10倍量的质量分数为30％乙醇洗脱，洗脱速度1BV/h。洗脱液减压浓缩至相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在40-50℃，-0.08～-0.10Mpa下真空干燥，粉碎，得到刺五加总苷提取物粉末，备用。

b、取钩藤原料加质量分数为80％的乙醇65℃条件下加热回流提取3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的10倍，提取时间为2小时，减压浓缩至相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在40-50℃，-0.08～-0.10Mpa下真空干燥，粉碎，得到钩藤总苷提取物粉末，备用。

c、取白芍原料加质量分数为70％乙醇加热回流提取3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的10倍，提取时间为2小时。采用AB-8大孔树脂富集纯化，用原料用量的10倍量的质量分数为20％乙醇洗脱，洗脱速度1.2BV/h。洗脱液减压浓缩至相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在40-50℃，-0.08～-0.10Mpa下真空干燥，粉碎，得到芍药总苷提取物粉末，备用。

d、按刺五加总苷提取物粉末、芍药总苷提取物粉末、钩藤总碱提取物粉末的重量比为9∶6∶6的比例混合三种细粉，干燥保存。

e、细粉加入羧甲基纤维素混匀，用质量分数为60％的乙醇溶液制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁混匀，使用常规加工设备制成胶囊，胶囊每粒装0.35g。

实施例2滴丸剂的制备

a、取刺五加原料加质量分数为80％的乙醇加热回流提取3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的8倍，提取时间为2小时，合并醇提液。采用AB-8大孔树脂富集纯化，用原料用量8倍量的的质量分数为70％乙醇洗脱，洗脱速度1.2BV/h。洗脱液减压浓缩至相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在50-60℃，-0.06～-0.08Mpa下真空干燥，粉碎，得到刺五加总苷提取物粉末，备用。

b、取钩藤原料加质量分数为50％的乙醇75℃条件下加热回流提取3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的5倍，提取时间为1小时，减压浓缩至相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在50-60℃，-0.06～-0.08Mpa下真空干燥，粉碎，得到钩藤总苷提取物粉末，备用。

c、取白芍原料加质量分数为95％乙醇加热回流提取2次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的8倍，提取时间为3小时。采用AB-8大孔树脂富集纯化，用原料用量8倍量的质量分数为40％乙醇洗脱，洗脱速度1BV/h。洗脱液减压浓缩只相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在50-60℃，-0.06～-0.08Mpa下真空干燥，粉碎，得到芍药总苷提取物粉末，备用。

d、按刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物、钩藤总碱提取物的重量比为3∶2∶2的比例混合三种细粉，干燥保存。

e、细粉按1∶1比例置入胶体磨粉碎剂并混匀，将PEG-8000送入90℃水浴锅内熔融，按照样品：PEG-8000＝1∶0.6-0.8比例，充分搅拌混匀，在86-92℃保温存放。

f、置入滴丸机滴液室内，滴头孔径30-40mm，滴头至冷却液高度10-20cm，滴液滴制速度为25-36滴/分钟，冷却液为石蜡油，冷却温度为10-12℃，每滴丸重0.03g。

g、滤除冷却液，离心机甩干，-15～-10℃冷却处理12小时后，得成品。

实施例3片剂的制备

a、取刺五加原料加质量分数为95％的乙醇加热回流提取3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的5倍，提取时间为3小时，合并醇提液。采用AB-8大孔树脂富集纯化，用原料用量5倍量的质量分数为80％乙醇洗脱，洗脱速度1BV/h。洗脱液减压浓缩至相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在40-50℃，-0.04～-0.06Mpa下真空干燥，粉碎，得到刺五加总苷提取物粉末，备用。

b、取钩藤原料加质量分数为60％的乙醇50℃条件下加热回流提取3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的5倍，提取时间为2小时，减压浓缩至相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在40-50℃，-0.04～-0.06Mpa下真空干燥，粉碎，得到钩藤总苷提取物粉末，备用。

c、取白芍原料加质量分数为50％乙醇加热回流提取3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的5倍，提取时间为2小时。采用AB-8大孔树脂富集纯化，用原料用量5倍量的的质量分数为20％乙醇洗脱，洗脱速度1.2BV/h。洗脱液减压浓缩只相对密度在65℃为1.2-1.3的稠膏，在40-50℃，-0.04～-0.06Mpa下真空干燥，粉碎，得到芍药总苷提取物粉末，备用。

d、按刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物、钩藤总碱提取物的重量比为6∶2∶2的比例混合三种细粉，干燥保存。

e、细粉加入羧甲基纤维素混匀，用的质量分数为80％的乙醇溶液制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁混匀，使用常规加工设备制成片剂，每片重0.35g。

实施例4颗粒剂的制备

a、取刺五加原料加质量分数为50％的乙醇加热回流提取3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的8倍，提取时间为1小时，合并醇提液。采用AB-8大孔树脂富集纯化，用原料用量10倍量的质量分数70％乙醇洗脱，洗脱速度1BV/h。洗脱液减压浓缩至相对密度在65℃为1.7-1.8的稠膏，在60-70℃，-0.02～-0.04Mpa下真空干燥，粉碎，得到刺五加总苷提取物粉末，备用。

b、取钩藤原料加质量分数为95％的乙醇80℃条件下加热回流提取2次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的10倍，提取时间为1小时，减压浓缩至相对密度在65℃为1.7-1.8的稠膏，在60-70℃，-0.02～-0.04Mpa下真空干燥，粉碎，得到钩藤总苷提取物粉末，备用。

c、取白芍原料加质量分数为70％乙醇加热回流提取2次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的10倍，提取时间为1小时。采用AB-8大孔树脂富集纯化，用原料用量10倍量的质量分数为50％乙醇洗脱，洗脱速度1.2BV/h。洗脱液减压浓缩只相对密度在65℃为1.7-1.8的稠膏，在60-70℃，-0.02～-0.04Mpa下真空干燥，粉碎，得到芍药总苷提取物粉末，备用。

d、按刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物、钩藤总碱提取物的重量比为6∶3∶3的比例混合三种细粉，干燥保存。

e、细粉加入羧甲基纤维素混匀，用质量分数为60％的乙醇溶液制粒，干燥，整粒，装袋，每袋重5g。

实验例1：细胞实验

1、实验细胞株：PC12细胞购自中科院上海细胞所

2、实验药物：MPP+购自SIGMA-RBI公司、本发明药物组合物粉末(按照实施例4提取方法提取的刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物以及钩藤总碱提取物，按刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物、钩藤总碱提取物的重量比为6∶3∶3的重量比例混合三种细粉。)

3、实验方法：将PC12细胞配成单细胞悬液，以5×10⁴/ML接种于96孔培养板，连续培养24小时后换液，在每孔中分别加入不同浓度的本发明药物组合物粉末稀释液，使其终浓度分别为2.5、5、10、20、40、80μg/ml，同时加入终浓度300μmol/LMPP+溶液。再继续培养48小时后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20μl，37℃孵育4小时。终止培养后小心吸空培养基，每孔加入150μl DMSO，振荡10分钟，使结晶充分溶解。酶标仪检测每孔在490nm处吸收值，计算细胞存活率，实验结果见表1、表2。统计学处理数据以均数±标准差(x±s)表示，用t检验进行统计学处理。

表1不同浓度的本发明药物组合物对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响

注：与模型组比较，^*p＜0.05

表2不同浓度的本发明药物组合物对MPP+诱导的PC12细胞损伤的影响

注：与模型组比较，^*p＜0.05

从实验结果可以看出，不同浓度的本发明药物组合物对MPP+诱导的细胞损伤的影响存在着明显的差异，与模型组相比，20、40μg/ml本发明药物组合物组细胞存活率明显高于模型组(P＜0.05，有统计学意义)，说明20、40μg/ml本发明药物组合物能显著减少MPP+的损伤效应，从而使细胞存活率有较大幅度的提高。

实验例2：药效学实验

1、动物分组及造模方法：88只小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2006-0009)，随机分成低剂量组、高剂量组、模型组、空白组，每组22只。模型组及高、低剂量组每天腹腔注射MPTP-HCl(四氢吡啶盐酸盐，美国Sigma公司)30mg/(kg·bw)(相当于25mg/kg MPTP)，连续注射5天，造成PD模型。空白组腹腔注射等量的生理盐水。第6天开始高、低剂量组给予本发明药物组合物的量分别为182mg/(kg·bw)/d、45.5mg/(kg·bw)/d，模型组和空白组给予等量的生理盐水，连续给药20天。

2、一般行为学观察：观察小鼠在腹腔给予MPTP造模后的一般行为表现，有无异常反应。

结果：腹腔给予MPTP(25mg/(kg·bw))数分钟后，与对照组相比MPTP模型组小鼠的一般行为表现异常，大多数出现下列变化：震颤、步长缩短、动作迟缓、竖毛、对外界刺激反应低等。震颤表现为局部性的，如下颌、四肢或者尾部。

3、爬杆实验：将一直径为2cm的泡沫塑料小球固定于一根长50cm粗1cm的木杆顶端，木杆上缠2层纱布以防打滑。持小鼠尾部将其头向下置于竿顶(以小鼠双后肢至于球上为准)，让其自然爬下，小鼠自站于竿顶至双前肢接触竿底平台为爬完全长，记录爬竿时间。在开始给药后第5天、第10天、第15天和第20天进行。

结果：从给药的第15天开始，模型组爬杆时间明显多于空白组(P＜0.05)，从第5天开始，高、低剂量组的爬杆时间都少于模型组，但无显著性差异。

4、纹状体DA及HVA含量测定

(1)取材及样品处理：每组选择10只小鼠，断头取脑，剥离双侧纹状体，称重，液氮保存。取各组小鼠纹状体，加入600μL 0.4mol·L^-1高氯酸除蛋白，制备匀浆，15000rpm，4℃离心15min，取上清液于-70℃保存。

(2)DA含量测定：

色谱条件：色谱柱ACQUITY UPLC TM BEH C18 column(50mm×2.1mm id，1.7μm，Waters Corp，Milford，USA)，流动相0.1％甲酸乙腈∶水＝3∶97，流速0.3mL/min，柱温30℃，进样量为10μL。

质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，采用正离子扫描检测；毛细管电压为1500V；样本锥孔电压为40V；离子源温度为100℃；脱溶剂温度为350℃；脱溶剂气流量为700L/h，锥孔气流量为20L/h。

选择m/z为154.8(M+H+)、137.08(M-OH-)的ES+色谱图共同进行定量。采用Micromass Marker Lynx软件进行色谱峰识别及峰面积计算

(3)HVA含量测定

色谱条件：色谱柱ACQUITY UPLC TM BEH C18 column(50mm×2.1mm id，1.7μm，Waters Corp，Milford，USA)，流动相0.1％甲酸乙腈∶水＝12∶88，流速0.3mL/min，柱温30℃，进样量为10μL。

质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，采用负离子扫描检测；毛细管电压为1500V；样本锥孔电压为40V；离子源温度为100℃；脱溶剂温度为350℃；脱溶剂气流量为700L/h，锥孔气流量为20L/h

选择m/z为181.04(M-H+)、227.05(M+HCOO-)、363.09(M+M-H+)的ES-色谱图共同进行定量。采用Micromass Marker Lynx软件进行色谱峰识别及峰面积计算

结果：模型组纹状体DA及其代谢产物HVA含量明显少于空白组(P＜0.05)，低剂量组纹状体DA含量明显多于模型组(P＜0.05)，高剂量组纹状体DA含量也多于模型组，但无显著性差异。模型组、空白组、高剂量组、低剂量组纹状HVA/DA比值依次减小，但各组均没有显著性差异。

从上述实验可以看出，MPTP诱发小鼠出现帕金森病症状的表现非常明显，在行为学方面，其肌肉震颤，随意运动减少，运动协调能力下降可从一般行为学表现、爬行实验中得到观察。在此基础上，给予了本发明药物组合物进行干预，与模型组相比，给药组爬杆时间都有所缩短，这表明了，本发明药物组合物对PD小鼠的爬杆行为有一定程度的改善作用。低剂量组纹状体DA含量明显高于模型组，说明本发明药物组合物可以增加PD模型中纹状体DA的含量。

实验例3本发明中药组合物胶囊的动物急性毒性研究

选择健康昆明种小白鼠，以灌胃方法给药，分别观察实施例中所制备的胶囊剂、片剂、颗粒剂和滴丸剂的急性毒性反应，结果给药的最大耐受量＞15g/kg，相当于临床用药量的300倍。对照组给同等剂量的蒸馏水，连续服药7d。结果表明小白鼠的一般健康状况良好，毛色光滑，食欲正常，大便无异常，整个给药期间未出现动物死亡现象，实验结束后，给药组小白鼠平均体重增长率与对照组相同。

Claims (10)

1.一种治疗帕金森病的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的有效组分为刺五加总苷、芍药总苷和钩藤总碱，所述药物组合物由刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物和钩藤总碱提取物制成，其中刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物和钩藤总碱提取物的重量比例为1-9∶2-6∶2-6。

2.根据权利要求1所述的治疗帕金森氏病的药物组合物，其特征在于所述的刺五加总苷提取物、芍药总苷提取物和钩藤总碱提取物的重量比例为6∶3∶3。

3.制备权利要求1或2所述的药物组合物的方法，其特征在于包括如下步骤：

a、取刺五加原料加质量分数为50％-90％的乙醇加热回流提取2-3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的3-10倍，提取时间为0.5-5小时，合并醇提液；采用大孔吸附树脂富集纯化，用原料用量2-10倍量的质量分数为20％-80％乙醇洗脱，洗脱速度1-2BV/h；洗脱液减压浓缩至相对密度在50-95℃为1.1-1.9的稠膏，在40-80℃，-0.02～-0.12Mpa下真空干燥，粉碎，得到刺五加总苷提取物粉末，备用；

b、取钩藤原料加质量分数为50％-90％的乙醇50-85℃条件下加热回流提取2-3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的2-10倍，提取时间为0.5-5小时，减压浓缩至相对密度在50-95℃为1.1-1.9的稠膏，在40-80℃，-0.02～-0.12Mpa下真空干燥，粉碎，得到钩藤总碱提取物粉末，备用；

c、取白芍原料加质量分数为50％-90％乙醇加热回流提取2-3次，按重量计，每次乙醇溶液的用量为原料用量的2-10倍，提取时间为0.5-5小时，合并醇提液；采用大孔吸附树脂富集纯化，用原料用量2-10倍量的质量分数为20％-80％乙醇洗脱，洗脱速度1-2BV/h；洗脱液减压浓缩至相对密度在50-95℃为1.1-1.9的稠膏，在40-80℃，-0.02～-0.12Mpa下真空干燥，粉碎，得到芍药总苷提取物粉末，备用；

d、按权利要求1或2所述的比例混合步骤a、b、c分别得到的三种细粉，干燥保存。

4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(a)、(c)中所述的大孔吸附树脂选自AB-8大孔吸附树脂、X-5大孔吸附树脂、DM-301大孔吸附树脂或NKA-9大孔吸附树脂其中至少一种。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂。

6.权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗帕金森氏病药物中的用途。

7.一种治疗帕金森氏病的中药制剂，其特征在于由有效剂量权利要求1或2所述的药物组合物和药学上接受的辅料组成，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种中药口服制剂。

8.根据权利要求7所述的中药制剂，其特征在于，所述中药口服制剂为滴丸剂、胶囊剂、片剂或颗粒剂。

9.根据权利要求7所述的中药制剂，其特征在于，所述辅料选自羧甲基纤维素、硬脂酸镁、PEG-8000、乳糖、糊精、微晶纤维素或淀粉其中至少一种。

10.权利要求7-9任一项所述的中药制剂在制备治疗帕金森氏病药物中的用途。