BR112020022164A2 - métodos de tratamento de hemofilia a - Google Patents

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Alison INNES
Suresh KATRAGADDA
Kara RICE
Dan RUDIN
Ekta Seth Chhabra
Nancy Wong
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Bioverativ Therapeutics Inc.
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Abstract

  MÉTODOS DE TRATAMENTO DE HEMOFILIA A. A presente descrição refere-se a um método de tratamento de hemofilia A em um ser humano que precisa que compreende administrar ao indivíduo um polipeptídeo quimérico que compreende (i) uma proteína fator VIII (FVIII) e (ii) um fragmento do fator de von Willebrand (VWF) que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um intervalo de dosagem.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTO- DOS DE TRATAMENTO DE HEMOFILIA A".
REFERÊNCIA A PEDIDOS DE PRIORIDADE
[0001] O presente pedido reivindica o benefício de prioridade do Pe- dido Provisório Norte-Americano N° 62/673.670, depositado em 18 de maio de 2018, Pedido Provisório Norte-Americano N° 62/712.880, de- positado em 31 de julho de 2018, Pedido Provisório Norte-Americano N° 62/773.785, depositado em 30 de novembro de 2018 e Pedido Pro- visório Norte-Americano N° 62/801.576, depositado em 5 de fevereiro de 2019, cada um dos quais é incorporado aqui por referência na ínte- gra. REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS ENVIADA ELETRONI-
CAMENTE
[0002] O conteúdo da listagem de sequência enviada eletronica- mente em arquivo de texto ASCII (Nome: SA9-461PC_SeqListing.txt; Tamanho: 922 kilobytes; Data de Criação: 14 de maio de 2019) é incor- porado aqui por referência na íntegra.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0003] A hemofilia A é um transtorno hemorrágico causado por de- feitos no gene que codifica o fator de coagulação VIII (FVIII) e afeta 1-2 em 10.000 nascimentos do sexo masculino. Graw et al., Nat. Rev. Ge- net. 6 (6): 488-501 (2005). Pacientes afetados com hemofilia A podem ser tratados com infusões de FVIII purificado ou produzido de forma re- combinante. Muitos produtos de FVIII comercialmente disponíveis são conhecidos por terem uma meia-vida de cerca de 8-12 horas, reque- rendo administração intravenosa frequente aos pacientes. Consulte Weiner M.A. e Cairo, M.S., Pediatric Hematology Secrets, Lee, M.T., 12. Disorders of Coagulation, Elsevier Health Sciences, 2001; Lillicrap, D. Thromb. Res. 122, Suplemento 4: S2-8 (2008). Além disso, várias abor- dagens foram tentadas a fim de estender a meia-vida do FVIII. Por exemplo, abordagens em desenvolvimento para estender a meia-vida dos fatores de coagulação incluem peguilação, glicopeguilação e conju- gação com albumina. Consulte Dumont et al., Blood. 119 (13): 3024- 3030 (2012). Resultados consistentes foram demonstrados em seres humanos, por exemplo, foi relatado que o rFVIIIFc melhora a meia-vida em até ~ 1,7 vezes comparado com ADVATE em pacientes com he- mofilia A. Consulte Powell et al., Blood. 119 (13): 3031-3037 (2012). Portanto, o aumento da meia-vida, apesar de pequenas melhorias, in- dica a presença de outros fatores limitantes da meia-vida. Consulte Liu, T. et al., 2007 ISTH Meeting, Abstract #P-M-035; Henrik, A. et al., 2011 ISTH Meeting, Abstract #P-MO-181; Liu, T. et al., 2011 ISTH Meeting Abstract #P-WE-131.
[0004] O padrão de cuidados recomendado atual envolve a admi- nistração regular (profilaxia de rotina) de FVIII para minimizar o número de episódios de sangramento. A profilaxia de rotina tem sido associada a melhorias nos resultados de longo prazo, mas é um regime exigente, limitado pela necessidade de administração intravenosa frequente (IV). Consulte Manco-Johnson et al., N Engl J Med. 357 (6): 535-44 (2007). Os produtos de FVIII com meia-vida estendida reduziram a frequência de administração do FVIII para profilaxia; no entanto, todos interagem com o fator de von Willebrand (VWF) e têm uma meia-vida em circula- ção comparável, consistente com um limite máximo da meia-vida das variantes rFVIII em virtude da meia-vida do VWF endógeno. Consulte, por exemplo, Pipe et al., Blood. 128 (16): 2007-16 (2016). A dosagem profilática para estes produtos FVIII é a cada 3 a 5 dias.
[0005] Produtos de FVIII de meia-vida estendida de próxima gera- ção que previnem e controlam episódios de sangramento por períodos mais longos, resultando em administração menos frequente, aborda- riam potencialmente os desafios de adesão a regimes profiláticos exi- gentes o que, por sua vez, poderia melhorar a qualidade de vida para pacientes com hemofilia.
BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0006] Determinados aspectos da presente invenção são dirigidos a um método de tratamento de hemofilia A em um ser humano que precisa do mesmo que compreende administrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptídeo quimérico que compreende (i) uma proteína fator VIII (FVIII) e (ii) um fragmento de fator de von Willebrand (VWF) que com- preende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um inter- valo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg e o intervalo entre as doses é de pelo menos a cada 7 dias.
[0007] Em algumas modalidades, as doses múltiplas compreendem pelo menos duas doses, pelo menos três doses, pelo menos quatro do- ses, pelo menos cinco doses, pelo menos seis doses, pelo menos sete doses, pelo menos oito doses, pelo menos nove doses, pelo menos dez doses, pelo menos onze doses, pelo menos doze doses, pelo menos treze doses, pelo menos catorze doses, pelo menos quinze doses, pelo menos dezesseis doses, pelo menos dezessete doses, pelo menos de- zoito doses, pelo menos dezenove doses, pelo menos vinte doses ou more.
[0008] Em algumas modalidades, o tratamento de hemofilia A com- preende controlar ou diminuir a incidência ou frequência de um episódio de sangramento em um ser humano que precisa do mesmo. Em algu- mas modalidades, o tratamento de hemofilia A compreende prevenir ou tratar um episódio de sangramento em um ser humano que precisa do mesmo.
[0009] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 95 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 90 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 85 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 80 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 75 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 70 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 65 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 60 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 55 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 50 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 45 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 40 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 35 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 30 IU/kg ou a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 25 IU/kg. Em algumas mo- dalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 30 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 35 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 40 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 45 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 55 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 70 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 75 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 80 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 85 IU/kg a cerca de 100 IU/kg ou a partir de cerca de 90 IU/kg a cerca de 100 IU/kg.
[0010] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 80 IU/kg, a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 75 IU/kg, a partir de cerca de 30 IU/kg a cerca de 70 IU/kg, a partir de cerca de 35 IU/kg a cerca de 65 IU/kg, a partir de cerca de 40 IU/kg a cerca de 60 IU/kg ou a partir de cerca de 45 IU/kg a cerca de 55 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg.
[0011] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 20 IU/kg, cerca de 25 IU/kg, cerca de 30 IU/kg, cerca de 35 IU/kg, cerca de 40 IU/kg, cerca de 45 IU/kg, cerca de 50 IU/kg, cerca de 55 IU/kg, cerca de 60 IU/kg, cerca de 65 IU/kg, cerca de 70 IU/kg, cerca de 75 IU/kg, cerca de 80 IU/kg, cerca de 85 IU/kg, cerca de 90 IU/kg, cerca de 95 IU/kg ou cerca de 100 IU/kg. Em algumas moda- lidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é cerca de 65 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg.
[0012] Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias, pelo menos cerca de 6 dias, pelo menos cerca de 7 dias, pelo menos cerca de 8 dias, pelo menos cerca de 9 dias, pelo menos cerca de 10 dias, pelo menos cerca de 11 dias, pelo menos cerca de 12 dias, pelo menos cerca de 13 dias, pelo menos cerca de 14 dias, pelo menos cerca de 15 dias, pelo menos cerca de 16 dias, pelo menos cerca de 17 dias, pelo menos cerca de 18 dias, pelo menos cerca de 19 dias, pelo menos cerca de 20 dias, pelo menos cerca de 21 dias, pelo menos cerca de 22 dias, pelo menos cerca de 23 dias, pelo menos cerca de 24 dias, pelo menos cerca de 25 dias, pelo menos cerca de 26 dias, pelo menos cerca de 27 dias, pelo menos cerca de 28 dias, pelo menos cerca de 29 dias, pelo menos cerca de 30 dias ou pelo menos cerca de 31 dias.
[0013] Em algumas modalidades, a frequência de dosagem é pelo menos uma vez por semana, pelo menos uma vez a cada 2 semanas, pelo menos uma vez a cada 3 semanas ou pelo menos uma vez a cada 4 semanas. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é pelo menos uma vez por semana. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é pelo menos uma vez a cada duas semanas.
[0014] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico é admi- nistrado para tratamento profilático.
[0015] Em algumas modalidades, a proteína FVIII está associada ao fragmento de VWF através de uma ligação covalente. Em algumas mo- dalidades, a ligação covalente é uma ligação peptídica ou uma ligação de dissulfeto.
[0016] Em algumas modalidades, a proteína FVIII compreende um polipeptídeo de FVIII e uma primeira porção de extensão de meia-vida. Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão de meia-vida é fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão de meia-vida é inserida dentro do polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão de meia-vida é inserida dentro do domínio B do polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão de meia-vida é inserida dentro do polipeptídeo de FVIII ime- diatamente a jusante de um aminoácido que corresponde ao resíduo de aminoácido 745 de SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, a pri- meira porção de extensão de meia-vida é fundida ao polipeptídeo de FVIII através de um ligante.
[0017] Em algumas modalidades, o fragmento de VWF compreende uma segunda porção de extensão de meia-vida. Em algumas modalida- des, a segunda porção de extensão de meia-vida é fundida ao Terminal- C ou ao Terminal-N do fragmento de VWF. Em algumas modalidades, a segunda porção de extensão de meia-vida é inserida dentro do frag- mento de VWF. Em algumas modalidades, a segunda porção de exten- são de meia-vida é fundida ao Terminal-C do fragmento de VWF. Em algumas modalidades, a segunda porção de extensão de meia-vida é fundida ao fragmento de VWF através de um ligante.
[0018] Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão de meia-vida, a segunda porção de extensão de meia-vida ou ambas, é selecionada a partir do grupo que consiste em uma albumina, uma re- gião Fc de imunoglobulina, uma sequência XTEN, o peptídeo C-terminal
(CTP) da subunidade β de gonadotropina coriônica humana, uma se- quência PAS, uma sequência HAP, uma transferrina, porções de liga- ção à albumina ou quaisquer fragmentos, derivados, variantes e qual- quer combinação dos mesmos.
[0019] Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão de meia-vida compreende um primeiro XTEN.
[0020] Em algumas modalidades, o primeiro XTEN é inserido dentro do polipeptídeo de FVIII imediatamente a jusante de um aminoácido que corresponde ao resíduo de aminoácido 745 de SEQ ID NO: 65.
[0021] Em algumas modalidades, a segunda porção de extensão de meia-vida compreende um segundo XTEN. Em algumas modalidades, o segundo XTEN é fundido ao Terminal-C do fragmento de VWF.
[0022] Em algumas modalidades, a proteína FVIII compreende uma primeira região constante de imunoglobulina (Ig) ou uma porção da mesma. Em algumas modalidades, a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do poli- peptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira região cons- tante de Ig ou a porção da mesma é inserida dentro do polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao Terminal-C do polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao polipeptídeo de FVIII através de um ligante. Em algumas modalidades, a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma compreende um primeiro domínio Fc ou uma porção do mesmo.
[0023] Em algumas modalidades, o fragmento de VWF compreende uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma. Em algumas modalidades, a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do fragmento de VWF. Em algumas modalidades, a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma é inserida dentro do fragmento de VWF. Em algumas modalidades, a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao Terminal-C do fragmento de VWF. Em algumas modalida- des, a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao fragmento de VWF através de um ligante. Em algumas modalidades, o ligante é um ligante clivável. Em algumas modalidades, a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma compreende um segundo domínio Fc ou uma porção do mesmo.
[0024] Em algumas modalidades, a proteína FVIII e o fragmento de VWF estão associados entre si através de uma ligação covalente entre o primeiro domínio Fc e o segundo domínio Fc. Em algumas modalida- des, a proteína FVIII e o fragmento de VWF estão ainda associados en- tre si através de uma interação não covalente entre a proteína FVIII e o fragmento de VWF.
[0025] Em um aspecto, é descrito aqui um método de tratamento de hemofilia A em um ser humano que compreende administrar ao indiví- duo que precisa do mesmo múltiplas doses de um polipeptídeo quimé- rico em um intervalo de dosagem, em que o polipeptídeo quimérico com- preende: (i) uma proteína FVIII que compreende um primeiro fragmento polipeptídico de FVIII que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215; uma primeira sequência XTEN que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 (AE288); um segundo frag- mento polipeptídico de FVIII que compreende a sequência de aminoá- cidos de SEQ ID NO: 216; e uma primeira região Fc que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217; e (ii) uma proteína VWF que compreende: um domínio D' de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 210; um domínio D3 de VWF que com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 214; uma segunda sequência XTEN que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 58 (AE144_5A); um ligante a2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 88; e uma segunda região Fc que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217 e em que a pri- meira região Fc é covalentemente ligada à segunda região Fc através de uma ligação de dissulfeto.
[0026] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico compre- ende uma proteína FVIII que compreende um polipeptídeo de FVIII, uma primeira sequência XTEN, uma primeira região Fc e uma proteína VWF que compreende um domínio D' de VWF, um domínio D3 de VWF, uma segunda sequência XTEN, um ligante a2 de FVIII e uma segunda região Fc, em que o polipeptídeo de FVIII compreende a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NO: 215, a primeira sequência XTEN compreende a sequência de aminoácidos de AE288 (SEQ ID NO: 8) e é fundida ao Terminal-C de SEQ ID NO: 215, o polipeptídeo de FVIII compreende ainda a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 216, a primeira re- gião Fc compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217 e é fundida ao Terminal-C de SEQ ID NO: 216; o domínio D' de VWF compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 210; o domí- nio D3 de VWF compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 214, a segunda sequência XTEN compreende a sequência de ami- noácidos de AE144_5A (SEQ ID NO: 58) e é fundida ao Terminal-C de o domínio D3 de VWF; o ligante a2 compreende a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NO: 88 e é fundida ao Terminal-C da segunda se- quência XTEN; a segunda região Fc compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 217 e é fundida ao Terminal-C de o ligante a2; e em que a primeira região Fc é covalentemente ligada à segunda re- gião Fc através de uma ligação de dissulfeto.
[0027] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico compre- ende uma proteína FVIII que compreende um peptídeo sinalizador de que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico compreende uma pro- teína VWF que compreende um peptídeo sinalizador de VWF que com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 208. Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico compreende uma proteína VWF que compreende um domínio D1D2 de VWF que compreende a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 209.
[0028] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico compre- ende uma proteína FVIII que compreende uma sequência de aminoáci- dos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203 ou SEQ ID NO: 207; e uma proteína VWF que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 202 ou SEQ ID NO:
205.
[0029] Em uma modalidade, o polipeptídeo quimérico compreende uma proteína FVIII que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 203 e uma proteína VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 205. Em outra modalidade, o polipeptídeo quimérico compreende uma proteína FVIII que compreende a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 201 e uma proteína VWF que com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 202. Em outra modalidade, o polipeptídeo quimérico compreende uma proteína FVIII que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 207 e uma proteína VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 202.
[0030] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico compre- ende uma proteína FVIII que compreende uma sequência de aminoáci- dos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica a uma sequência selecionada a partir de FVIII-161 (SEQ ID NO: 69), FVIII-169 (SEQ ID NO: 70), FVIII-170 (SEQ ID NO: 71), FVIII-173 (SEQ ID NO: 72); FVIII-195 (SEQ ID NO: 73); FVIII-196 (SEQ ID NO: 74), FVIII199
(SEQ ID NO: 75), FVIII-201 (SEQ ID NO: 76); FVIII-203 (SEQ ID NO: 77), FVIII-204 (SEQ ID NO: 78), FVIII-205 (SEQ ID NO: 79), FVIII-266 (SEQ ID NO: 80), FVIII-267 (SEQ ID NO: 81), FVIII-268 (SEQ ID NO: 82), FVIII-269 (SEQ ID NO: 83), FVIII-271 (SEQ ID NO: 84), FVIII-272 (SEQ ID NO: 85), FVIII-312 (SEQ ID NO: 173) ou FVIII-312A (SEQ ID NO: 203); e uma proteína VWF que compreende uma sequência de ami- noácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica a uma sequência selecionada a partir de VWF031 (SEQ ID NO: 86), VWF034 (SEQ ID NO: 87), VWF059 (SEQ ID NO: 197), VWF059A (SEQ ID NO: 202) ou VWF036.
[0031] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico é admi- nistrado através de uma via selecionada a partir do grupo que consiste em injeção intravenosa, infusão intravenosa, administração subcutânea, administração intramuscular, administração oral, administração nasal e administração pulmonar.
[0032] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico, após a administração, resulta em um nível de atividade plasmática de FVIII de pelo menos cerca de 1 %, pelo menos cerca de 2 %, pelo menos cerca de 3 %, pelo menos cerca de 4 %, pelo menos cerca de 5 %, pelo menos cerca de 6 %, pelo menos cerca de 7 %, pelo menos cerca de 8 %, pelo menos cerca de 9 % ou pelo menos cerca de 10 %. Em algumas moda- lidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 3 %. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 5 %.
[0033] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico, após a administração, resulta em um nível de atividade plasmática de FVIII de pelo menos cerca de 1 IU/dL, pelo menos cerca de 2 IU/dL, pelo menos cerca de 3 IU/dL, pelo menos cerca de 4 IU/dL, pelo menos cerca de 5 IU/dL, pelo menos cerca de 6 IU/dL, pelo menos cerca de 7 IU/dL, pelo menos cerca de 8 IU/dL, pelo menos cerca de 9 IU/dL ou pelo menos cerca de 10 IU/dL. Em algumas modalidades, o nível de atividade plas- mática de FVIII é pelo menos cerca de 3 IU/dL. Em algumas modalida- des, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 5 IU/dL.
[0034] Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 10 IU/dL pelo menos cerca de 5 dias após a administração do polipeptídeo quimérico. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 5 IU/dL pelo menos cerca de 7 dias após a administração do polipeptídeo qui- mérico. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 3 IU/dL pelo menos cerca de 8 dias após a administração do polipeptídeo quimérico. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 1 IU/dL pelo menos cerca de 10 dias após a administração do polipeptídeo qui- mérico.
[0035] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias.
[0036] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 50 IU/kg. Em algumas modalidades, as doses múltiplas are cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é cerca de 5 dias. Em algumas modalidades, as doses múltiplas are cerca de 50 IU/kg e o in- tervalo de dosagem é cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, as doses múltiplas são cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é cerca de 14 dias.
[0037] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias.
[0038] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosa- gem é pelo menos cerca de 10 dias.
[0039] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosa- gem é pelo menos cerca de 14 dias.
[0040] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 1 semana. Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 1 semana. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 1 semana.
[0041] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 2 semanas. Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 2 semanas. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 2 semanas.
[0042] Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosa- gem é pelo menos cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, o inter- valo de dosagem é cerca de 5 dias a cerca de 14 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é cerca de 7 dias a cerca de 14 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é cerca de 10 dias a cerca de 21 dias. Em algumas modalidades, o inter- valo de dosagem é cerca de 14 dias a cerca de 21 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é cerca de 14 dias.
[0043] Em algumas modalidades, o ser humano é uma mulher. Em algumas modalidades, o ser humano é uma criança. Em algumas mo- dalidades, o ser humano é uma criança de menos de ou igual a cerca de 12 anos de idade, menos de cerca de 11 anos de idade, menos de cerca de 10 anos de idade, menos de cerca de 9 anos de idade, menos de cerca de 8 anos de idade, menos de cerca de 7 anos de idade, menos de cerca de 6 anos de idade, menos de cerca de 5 anos de idade, menos de cerca de 4 anos de idade, menos de cerca de 3 anos de idade, menos de cerca de 2 anos de idade ou menos de cerca de 1 ano de idade.
[0044] Em algumas modalidades, a administração induz à tolerância imune ao FVIII no ser humano. Em algumas modalidades, a administra- ção reduz uma resposta imune inibidora ao FVIII no ser humano. Em algumas modalidades, a resposta imune inibidora ao FVIII compreende uma elevada titulação de anticorpos anti-FVIII no ser humano.
[0045] Em algumas modalidades, a administração do polipeptídeo quimérico não induz a um inibidor de FVIII após cerca de 7 dias, cerca de 10 dias, cerca de 11 dias, cerca de 12 dias, cerca de 13 dias, cerca de 14 dias, cerca de 15 dias, cerca de 20 dias, cerca de 24 dias, cerca de 25 dias, cerca de 28 dias, cerca de 30 dias ou cerca de 35 dias da administração. Em algumas modalidades, a administração do polipeptí- deo quimérico não induz a um inibidor de FVIII após cerca de 28 dias da administração. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS/FIGURAS
[0046] A Figura 1 é uma representação esquemática de rFVIIIFc- VWF-XTEN. FVIII: fator VIII; VWF: Fator de von Willebrand; A1, A2, A3, C1, C2: domínios de FVIII; D'D3: domínios de VWF; Fc: região Fc da região constante de imunoglobulina.
[0047] As Figuras 2A e 2B mostram o protocolo para testar a segu- rança e eficácia de rFVIIIFc-VWF-XTEN em pacientes humanos em uma coorte com baixa dose que recebeu 25 IU/kg de rFVIIIFc-VWF-
XTEN (Figura 2A) e uma coorte com alta dose que recebeu 65 IU/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 2B).
[0048] As Figuras 3A-3B são representações gráficas dos níveis de atividade de FVIII corrigidos para a linha de base com base em um teste de tempo de tromboplastina parcial ativada (activated Partial Thrombo- plastin Time, aPTT) em seres humanos com hemofilia A grave que re- ceberam com 25 IU/kg de rFVIII, seguido por um período de suspensão da medicação e depois 25 IU/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 3A; co- orte com baixa dose) ou 65 IU/kg de rFVIII, seguido por um período de suspensão da medicação e, em seguida, 65 IU/kg de rFVIIIFc-VWF- XTEN (Figura 3B; coorte com alta dose). As linhas tracejadas horizon- tais indicam 3 %, 5 %, 10 % e 20 % da atividade de FVIII.
[0049] A Figura 4 é uma representação esquemática do design de um estudo clínico para avaliar a segurança e tolerabilidade de um total de quatro doses uma vez por semana de rFVIIIFc-VWF-XTEN em uma dose de 50 IU/kg ou 65 IU/kg em pacientes homens adultos previamente tratados (Previously Treated Patients, PTPs), de 18 a 65 anos de idade (inclusive), com hemofilia A grave. EOS = Fim do Estudo; ET = Término antecipado; PK = Farmacocinética.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0050] A presente invenção é dirigida a um método de tratamento de uma doença ou condição hemorrágica, por exemplo, hemofilia A, em um ser humano que precisa do mesmo que compreende administrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptídeo quimérico que compre- ende (i) um polipeptídeo de fator VIII (FVIII) e (ii) um fragmento de fator de von Willebrand (VWF) que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um intervalo de dosagem. Em algumas moda- lidades, pelo menos uma das doses múltiplas é de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é de pelo menos a cada 5 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é de pelo menos a cada 7 dias. I. Definições
[0051] Deverá ser observado que os termos "um" ou "uma" entidade se refere a uma ou mais de tais entidades; por exemplo, "uma sequência de nucleotídeos" deve ser entendida como representando uma ou mais sequências de nucleotídeos. Como tal, os termos "um" (ou "uma"), "um(a) ou mais" e "pelo menos um(a)" podem ser usados indistinta- mente aqui.
[0052] Além disso, "e/ou", onde usado aqui, deve ser considerado como uma descrição específica de cada um dos dois elementos ou com- ponentes especificados com ou sem o outro. Assim, o termo "e/ou", con- forme usado em uma frase tal como "A e/ou B" aqui, se destina a incluir "A e B", "A ou B", "A" (apenas) e "B" (apenas). Da mesma forma, o termo "e/ou", conforme usado em uma frase tal como "A, B e/ou C", se destina a abranger cada um dos seguintes aspectos: A, B e C; A, B ou C; A ou C; A ou B; B ou C; A e C; A e B; B e C; A (apenas); B (apenas); e C (apenas).
[0053] Deve ser entendido que, sempre que os aspectos são des- critos aqui com a linguagem "que compreende(m)", aspectos de outra forma análogos descritos em termos de "que consiste(m) em" e/ou "que consiste(m) essencialmente em" também são fornecidos.
[0054] A menos que definido de outra forma, todos os termos técni- cos e científicos usados aqui têm o mesmo significado conforme comu- mente entendido por aqueles versados na técnica à qual a presente in- venção está relacionada. Por exemplo, o Concise Dictionary of Biomed- icine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2ª ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3ª ed., 1999, Academic Press; e o Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology, Re- visado, 2000, Oxford University Press, fornecem um dicionário geral de muitos dos termos usados na presente invenção.
[0055] Unidades, prefixos e símbolos são denotados em sua forma aceita do Système International de Unites (SI). As faixas numéricas in- cluem os números que definem a faixa. Salvo indicação em contrário, as sequências de aminoácidos são escritas da esquerda para a direita na orientação amino para carbóxi. Os cabeçalhos fornecidos aqui não são limitações dos vários aspectos da invenção. Consequentemente, os termos definidos imediatamente abaixo são definidos de forma mais completa por meio de referência ao relatório descritivo na íntegra.
[0056] O termo "cerca de" é usado aqui para significar aproximada- mente, na proximidade, em torno ou nas regiões de. Quando o termo "cerca de" é usado em conjunto com uma faixa numérica, ele modifica esta faixa ao estender os limites acima e abaixo dos valores numéricos apresentados. Em geral, o termo "cerca de" pode modificar um valor numérico acima e abaixo do valor apresentado por uma variação, por exemplo, de 10 por cento, para cima ou para baixo (maior ou menor).
[0057] O termo "polinucleotídeo" ou "nucleotídeo" se destina a abranger um único ácido nucleico, bem como múltiplos ácidos nuclei- cos, e se refere a uma molécula ou construção de ácidos nucleicos iso- lada, por exemplo, RNA mensageiro (mRNA) ou DNA de plasmídeo (pDNA). Em determinadas modalidades, um polinucleotídeo compre- ende uma ligação de fosfodiéster convencional ou uma ligação não con- vencional (por exemplo, uma ligação de amida, conforme encontrado em ácidos nucleicos peptídicos (Peptide Nucleic Acids, PNAs)). O termo "ácido nucleico" se refere a qualquer um ou mais segmentos de um ácido nucleico, por exemplo, fragmentos de DNA ou RNA, presentes em um polinucleotídeo. Por ácido nucleico ou polinucleotídeo "isolado" en- tenda-se uma molécula de ácidos nucleicos, DNA ou RNA que foi remo- vida de seu ambiente nativo. Por exemplo, um polinucleotídeo recombi- nante que codifica um polipeptídeo do Fator VIII contido em um vetor é considerado isolado para fins da presente invenção. Outros exemplos de um polinucleotídeo isolado incluem polinucleotídeos recombinantes mantidos em células hospedeiras heterólogas ou purificados (parcial ou substancialmente) de outros polinucleotídeos em uma solução. Molécu- las de RNA isoladas incluem transcritos de RNA in vivo ou in vitro de polinucleotídeos da presente invenção. Os polinucleotídeos ou ácidos nucleicos isolados de acordo com a presente invenção incluem ainda tais moléculas produzidas sinteticamente. Além disso, um polinucleotí- deo ou ácido nucleico pode incluir elementos reguladores, tais como promotores, intensificadores, sítios de ligação ribossômica ou sinais de término de transcrição.
[0058] Determinadas proteínas secretadas por células de mamífe- ros estão associadas a um peptídeo sinalizador secretor que é clivado da proteína madura uma vez que a exportação da cadeia proteica em crescimento através do retículo endoplasmático rugoso tenha sido inici- ada. Aqueles versados na técnica estão cientes de que os peptídeos sinalizadores são, em geral, fundidos ao Terminal-N do polipeptídeo e são clivados do polipeptídeo completo ou "de comprimento completo" para produzir uma forma secretada ou "madura" do polipeptídeo.
[0059] Conforme usado aqui, o termo "polipeptídeo" se destina a abranger um único "polipeptídeo", bem como uma pluralidade de "poli- peptídeos" e se refere a uma molécula composta de monômeros (ami- noácidos) ligados linearmente através de ligações de amida (também conhecidas como ligações peptídicas). O termo "polipeptídeo" se refere a qualquer cadeia ou cadeias de dois ou mais aminoácidos e não se refere a um comprimento específico do produto. Assim, peptídeos, di- peptídeos, tripeptídeos, oligopeptídeos, "proteína", "cadeia de aminoá- cidos" ou qualquer outro termo usado para se referir a uma cadeia ou cadeias de dois ou mais aminoácidos, estão incluídos na definição de "polipeptídeo" e o termo "polipeptídeo" pode ser usado em vez de, ou indistintamente com, qualquer um destes termos. O termo "polipeptídeo"
também se destina a referir-se aos produtos de modificações pós-ex- pressão do polipeptídeo incluindo, sem limitação, glicosilação, acetila- ção, fosforilação, amidação, derivatização através de grupos de prote- ção/bloqueio conhecidos, clivagem proteolítica ou modificação por ami- noácidos que não ocorrem naturalmente. Um polipeptídeo pode ser de- rivado de uma fonte biológica natural ou produzido através da tecnologia recombinante, mas não é necessariamente traduzido a partir de uma sequência de ácidos nucleicos designada. Ele pode ser gerado de qual- quer maneira, inclusive por meio de síntese química.
[0060] Um polipeptídeo "isolado" ou um fragmento, variante ou de- rivado do mesmo se refere a um polipeptídeo que não está em seu meio natural. Nenhum nível particular de purificação é necessário. Por exem- plo, um polipeptídeo isolado pode simplesmente ser removido de seu ambiente nativo ou natural. Polipeptídeos e proteínas produzidos de forma recombinante expressos em células hospedeiras são considera- dos isolados para fins da invenção, assim como polipeptídeos nativos ou recombinantes que foram separados, fracionados ou parcial ou subs- tancialmente purificados através de qualquer técnica adequada.
[0061] Também estão incluídos na presente invenção fragmentos ou variantes polipeptídicas e qualquer combinação dos mesmos. O termo "fragmento" ou "variante", quando se refere a domínios de ligação ou moléculas de ligação polipeptídicas da presente invenção, incluem quaisquer polipeptídeos que retêm pelo menos algumas das proprieda- des (por exemplo, afinidade de ligação ao FcRn para um domínio de ligação ao FcRn ou variante Fc, atividade de coagulação para uma va- riante de FVIII ou atividade de ligação de FVIII para o fragmento de VWF) do polipeptídeo de referência. Fragmentos polipeptídicos incluem fragmentos proteolíticos, bem como fragmentos com exclusão, além de fragmentos de anticorpos específicos discutidos em outra parte aqui,
mas não incluem o polipeptídeo de comprimento completo de ocorrên- cia natural (ou polipeptídeo maduro). Variantes de domínios de ligação ou moléculas de ligação polipeptídicas da presente invenção incluem fragmentos conforme descrito acima, e também polipeptídeos que têm sequências de aminoácidos alteradas em virtude de substituições, ex- clusões ou inserções de aminoácidos. As variantes podem ocorrer na- turalmente ou não. Variantes de ocorrência não natural podem ser pro- duzidas usando técnicas de mutagênese conhecidas. Os polipeptídeos variantes podem compreender substituições, exclusões ou adições con- servativas ou não conservativas de aminoácidos.
[0062] Os termos "proteína VWF" ou "proteínas VWF" usados aqui significam quaisquer fragmentos de VWF que interagem com o FVIII e retêm pelo menos uma ou mais propriedades que são normalmente con- feridas ao FVIII pelo VWF de comprimento completo, por exemplo, evitar a ativação prematura em FVIIIa, evitar a proteólise prematura, evitar a associação com membranas fosfolipídicas que poderiam levar à depu- ração prematura, evitar a ligação aos receptores de depuração do FVIII que podem se ligar ao FVIII nu, mas não ao FVIII ligado ao VWF, e/ou estabilizar as interações das cadeias pesada e leve do FVIII. Um frag- mento de VWF citado aqui é um polipeptídeo de VWF que é menor do que a proteína VWF de comprimento completo, em que o fragmento de VWF retém a capacidade de interagir e/ou se ligar ao FVIII.
[0063] Uma "substituição conservativa de aminoácido" é aquela na qual o resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoá- cido que tem uma cadeia lateral similar. Famílias de resíduos de amino- ácidos com cadeias laterais similares foram definidas na técnica, inclu- indo cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares sem carga (por exemplo, glicina, asparagina,
glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais não pola- res (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilala- nina, metionina, triptofano), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Assim, se um ami- noácido em um polipeptídeo for substituído por outro aminoácido da mesma família da cadeia lateral, a substituição é considerada conser- vativa. Em outras modalidades, uma cadeia de aminoácidos pode ser substituída de forma conservativa por uma cadeia estruturalmente simi- lar que difere quanto à ordem e/ou composição dos membros da família da cadeia lateral.
[0064] Conforme conhecido na técnica, a "identidade de sequência" entre dois polipeptídeos é determinada ao comparar a sequência de aminoácidos de um polipeptídeo com a sequência de um segundo poli- peptídeo. Conforme discutido aqui, se qualquer polipeptídeo particular é pelo menos cerca de 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 99 % ou 100 % idêntico a outro polipeptídeo pode ser determinado usandos métodos e programas de computador/software conhecidos na técnica tais como, porém sem limitações, o programa BESTFIT (Wis- consin Sequence Analysis Package, Versão 8 para Unix, Genetics Com- puter Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, WI 53711). O BESTFIT usa o algoritmo de homologia sítio de Smith e Wa- terman, Advances in Applied Mathematics 2: 482-489 (1981), para en- contrar o melhor segmento de homologia entre duas sequências. Ao usar BESTFIT ou qualquer outro programa de alinhamento de sequên- cias para determinar se uma sequência particular é, por exemplo, 95 % idêntica a uma sequência de referência de acordo com a presente in- venção, os parâmetros são definidos, evidentemente, de modo que a porcentagem de identidade seja calculada sobre o comprimento com- pleto da sequência polipeptídica de referência e lacunas na homologia de até 5 % do número total de aminoácidos na sequência de referência são permitidas.
[0065] Conforme usado aqui, um "aminoácido que corresponde a" ou um "aminoácido equivalente" a uma sequência de VWF ou uma se- quência de proteína FVIII é identificado por meio de alinhamento para maximizar a identidade ou similaridade entre uma primeira sequência de VWF ou FVIII e uma segunda sequência de VWF ou FVIII. O número usado para identificar um aminoácido equivalente em uma segunda se- quência de VWF ou FVIII é com base no número usado para identificar o aminoácido correspondente na primeira sequência de VWF ou FVIII.
[0066] Conforme usado aqui, o termo "sítio de inserção" se refere a uma posição em um polipeptídeo de FVIII, ou fragmento, variante ou derivado do mesmo, que está imediatamente a jusante da posição na qual uma porção de extensão de meia-vida ou porção heteróloga pode ser inserida. Um "sítio de inserção" é especificado como um número, o número sendo o número do aminoácido no FVIII nativo maduro (SEQ ID NO: 65) ao qual corresponde o sítio de inserção, o qual é imediatamente C-terminal à posição da inserção. Por exemplo, a frase "a3 compreende um XTEN em um sítio de inserção que corresponde ao aminoácido 1656 de SEQ ID NO: 65" indica que a porção heteróloga está sítioizada entre dois aminoácidos que correspondem ao aminoácido 1656 e ao aminoá- cido 1657 de SEQ ID NO: 65.
[0067] A frase "imediatamente a jusante de um aminoácido", con- forme usado aqui, se refere à posição ao lado do grupo carboxila termi- nal do aminoácido. Por exemplo, um sítio de inserção imediatamente a jusante do aminoácido 745 que corresponde à proteína FVIII de tipo sel- vagem maduro significa que o sítio de inserção está entre o aminoácido 745 e o aminoácido 746 que corresponde à proteína FVIII de tipo selva- gem maduro. Da mesma forma, a frase "imediatamente a montante de um aminoácido" se refere à posição logo ao lado do grupo amino termi- nal do aminoácido.
[0068] A frase "entre dois aminoácidos de um sítio de inserção", conforme usado aqui, se refere a uma posição na qual um XTEN ou qualquer outro polipeptídeo é inserido entre dois aminoácidos adjacen- tes. Assim, as frases "inserido imediatamente a jusante de um aminoá- cido" e "inserido entre dois aminoácidos de um sítio de inserção" são usadas como sinônimos de "inserido em um sítio de inserção".
[0069] Os termos "inserido", "é inserido", "inserido em" ou termos gramaticalmente relacionados conforme usado aqui, se referem à posi- ção de um XTEN em um polipeptídeo quimérico em relação à posição análoga no FVIII humano maduro nativo. Conforme usado aqui, os ter- mos se referem às características do polipeptídeo de FVIII recombinante em relação ao FVIII humano maduro nativo e não indicam, implicam ou inferem quaisquer métodos ou processos pelos quais o polipeptídeo qui- mérico foi feito. Por exemplo, em referência a um polipeptídeo quimérico fornecido aqui, a frase "um XTEN é inserido imediatamente a jusante do resíduo 745 do polipeptídeo de FVIII" significa que o polipeptídeo qui- mérico compreende um XTEN imediatamente a jusante de um aminoá- cido que corresponde ao aminoácido 745 no FVIII humano maduro na- tivo, por exemplo, limitado por aminoácidos que correspondem aos ami- noácidos 745 e 746 do FVIII humano maduro nativo.
[0070] Uma proteína de "fusão" ou "quimérica" compreende uma pri- meira sequência de aminoácidos ligada a uma segunda sequência de aminoácidos com a qual ela não está naturalmente ligada na natureza. Sequências de aminoácidos que normalmente existem em proteínas se- paradas podem ser reunidas no polipeptídeo de fusão, ou sequências de aminoácidos que normalmente existem na mesma proteína podem ser colocadas em um novo arranjo no polipeptídeo de fusão, por exem- plo, a fusão de um domínio de Fator VIII da invenção com um domínio
Fc de Ig. Uma proteína de fusão é criada, por exemplo, por meio de síntese química ou ao criar e traduzir um polinucleotídeo no qual as re- giões peptídicas são codificadas na relação desejada. Um polipeptídeo quimérico pode compreender ainda uma segunda sequência de amino- ácidos associada à primeira sequência de aminoácidos através de uma ligação covalente, não peptídica ou não covalente.
[0071] O termo "ligado", conforme usado aqui, se refere a uma pri- meira sequência de aminoácidos ou sequência de nucleotídeos cova- lente ou não covalentemente unida a uma segunda sequência de ami- noácidos ou sequência de nucleotídeos, respectivamente. A primeira sequência de aminoácidos ou nucleotídeos pode ser diretamente unida ou justaposta à segunda sequência de aminoácidos ou nucleotídeos ou, alternativamente, uma sequência interveniente pode ligar covalente- mente a primeira sequência à segunda sequência. O termo "ligado" sig- nifica não apenas uma fusão de uma primeira sequência de aminoáci- dos com uma segunda sequência de aminoácidos no Terminal-C ou Terminal-N, mas também inclui a inserção de toda a primeira sequência de aminoácidos (ou da segunda sequência de aminoácidos) em quais- quer dois aminoácidos na segunda sequência de aminoácidos (ou na primeira sequência de aminoácidos, respectivamente). Em algumas mo- dalidades, a primeira sequência de aminoácidos pode ser ligada a uma segunda sequência de aminoácidos através de uma ligação peptídica ou um ligante. A primeira sequência de nucleotídeos pode ser ligada a uma segunda sequência de nucleotídeos através de uma ligação de fos- fodiéster ou um ligante. O ligante pode ser um peptídeo ou um polipep- tídeo (para cadeias polipeptídicas) ou um nucleotídeo ou uma cadeia nucleotídica (para cadeias nucleotídicas) ou qualquer porção química (para cadeias polipeptídicas e polinucleotídicas). O termo "ligado" tam- bém é indicado por um hífen (-).
[0072] Conforme usado aqui, o termo "associado com" se refere a uma ligação covalente ou não covalente formada entre uma primeira cadeia de aminoácidos e uma segunda cadeia de aminoácidos. Em al- gumas modalidades, o termo "associado com" significa uma ligação co- valente, não peptídica ou não covalente. Esta associação pode ser indi- cada por dois pontos, ou seja, (:). Em outras modalidades, ele significa uma ligação covalente, exceto uma ligação peptídica. Por exemplo, o aminoácido cisteína compreende um grupo tiol que pode formar uma ligação de dissulfeto ou ponte com um grupo tiol em um segundo resí- duo de cisteína. Na maioria das moléculas de IgG de ocorrência natural, as regiões CH1 e CL estão associadas por uma ligação de dissulfeto e as duas cadeias pesadas estão associadas por duas ligações de dissul- feto nas posições que correspondem a 239 e 242 usando o sistema de numeração de Kabat (posição 226 ou 229, sistema de numeração EU). Exemplos de ligações covalentes incluem, porém sem limitações, uma ligação peptídica, uma ligação metálica, uma ligação de hidrogênio, uma ligação de dissulfeto, uma ligação sigma, uma ligação pi, uma ligação delta, uma ligação glicosídica, uma ligação agnóstica, uma ligação cur- vada, uma ligação dipolar, uma ligação posterior Pi, uma ligação dupla, uma ligação tripla, uma ligação quádrupla, uma ligação quíntupla, uma ligação sêxtupla, conjugação, hiperconjugação, aromaticidade, haptici- dade ou anti-ligação. Exemplos não limitativos de ligação não covalente incluem uma ligação iônica (por exemplo, ligação cátion-pi ou ligação salina), uma ligação de metal, uma ligação de hidrogênio (por exemplo, ligação de di-hidrogênio, complexo de di-hidrogênio, ligação de hidrogê- nio de baixa barreira ou ligação de hidrogênio simétrica), força de van der Walls, força de dispersão de London, uma ligação mecânica, uma ligação de halogênio, aurofilia, intercalação, empilhamento, força entró- pica ou polaridade química.
[0073] Conforme usado aqui, o termo "sítio de clivagem" ou "sítio de clivagem enzimática" se refere a um sítio reconhecido por uma enzima.
Determinados sítios de clivagem enzimática compreendem um sítio de processamento intracelular. Em algumas modalidades, um polipeptídeo tem um sítio de clivagem enzimática clivado por uma enzima que é ati- vada durante a cascata de coagulação, de modo que a clivagem de tais sítios ocorra no sítio de formação do coágulo. Exemplos de tais sítios incluem, por exemplo, aqueles reconhecidos pela trombina, Fator XIa ou Fator Xa. Sítios de clivagem de FXIa exemplificativos incluem, por exemplo, TQSFNDFTR (SEQ ID NO: 1) e SVSQTSKLTR (SEQ ID NO: 3). Sítios de clivagem de trombina exemplificativos incluem, por exem- plo, DFLAEGGGVR (SEQ ID NO: 4), TTKIKPR (SEQ ID NO: 5), LVPRG (SEQ ID NO: 6), ALRPR (SEQ ID NO: 7), ISDKNTGDYYEDSYEDISAY- LLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 106), DKNTGDYYEDSYEDISAY- LLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 88) e IEPRSFS (SEQ ID NO: 194). Outros sítios de clivagem enzimática são conhecidos na técnica e des- critos em outra parte aqui.
[0074] Conforme usado aqui, o termo "sítio de processamento" ou "sítio de processamento intracelular" se refere a um tipo de sítio de cli- vagem enzimática em um polipeptídeo que é um alvo para enzimas que funcionam após tradução do polipeptídeo. Em algumas modalidades, tais enzimas funcionam durante o transporte do lúmen de Golgi para o compartimento trans-Golgi. As enzimas de processamento intracelular clivam os polipeptídeos antes de secreção da proteína pela célula. Exemplos de tais sítios de processamento incluem, por exemplo, aque- les direcionados pela família de endopeptidases PACE/furina (onde PACE é um acrônimo para Paired basic Amino acid Cleaving Enzyme). Estas enzimas estão localizadas na membrana de Golgi e clivam prote- ínas no lado carbóxi terminal do motivo da sequência Arg-[qualquer re- síduo]-(Lys ou Arg)-Arg. Conforme usado aqui, a família "furina" de en- zimas inclui, por exemplo, PCSK1 (também conhecida como PC1/PC3), PCSK2 (também conhecida como PC2), PCSK3 (também conhecida como furina ou PACE), PCSK4 (também conhecida como PC4), PCSK5 (também conhecida como PC5 ou PC6), PCSK6 (também conhecida como PACE4) ou PCSK7 (também conhecida como PC7/LPC, PC8 ou SPC7). Outros sítios de processamento são conhecidos na técnica.
[0075] Em construções que incluem mais de um sítio de processa- mento ou clivagem, será entendido que tais sítios podem ser iguais ou diferentes.
[0076] Um "ligante processável", conforme usado aqui, se refere a um ligante que compreende pelo menos um sítio de processamento in- tracelular, o qual é descrito em outra parte aqui.
[0077] Conforme usado aqui, o termo "meia-vida" se refere a uma meia-vida biológica de um polipeptídeo particular in vivo. A meia-vida pode ser representada pelo tempo necessário para que metade da quantidade administrada a um indivíduo seja eliminada da circulação e/ou de outros tecidos do animal. Quando uma curva de depuração de um determinado polipeptídeo é construída em função do tempo, a curva geralmente é bifásica, com uma fase α rápida e uma fase β mais longa. A fase α representa, tipicamente, um equilíbrio do polipeptídeo Fc ad- ministrado entre o espaço intra- e extravascular e é, em parte, determi- nada pelo tamanho do polipeptídeo. A fase β normalmente representa o catabolismo do polipeptídeo no espaço intravascular. Em algumas mo- dalidades, o FVIII e os polipeptídeos quiméricos que compreendem o FVIII são monofásicos e, portanto, não têm uma fase alfa, mas apenas uma fase beta única. Portanto, em determinadas modalidades, o termo meia-vida, conforme usado aqui, se refere à meia-vida do polipeptídeo na fase β. A meia-vida típica da fase beta de um anticorpo humano em seres humanos é de 21 dias. Em determinadas modalidades, a meia- vida é expressa como a meia-vida da fase terminal.
[0078] Transtorno hemostático, conforme usado aqui, significa uma condição geneticamente herdada ou adquirida caracterizada por uma tendência à hemorragia, espontaneamente ou como um resultado de trauma, em virtude de uma capacidade prejudicada ou incapacidade de formar um coágulo de fibrina. Exemplos de tais transtornos incluem as hemofilias. As três formas principais são hemofilia A (deficiência de Fa- tor VIII), hemofilia B (deficiência de Fator IX ou "doença de Christmas") e hemofilia C (deficiência de Fator XI, tendência a sangramento leve). Outros transtornos hemostáticos incluem, por exemplo, doença de Von Willebrand, deficiência de Fator XI (deficiência de PTA), deficiência de Fator XII, deficiências ou anormalidades estruturais em fibrinogênio, protrombina, Fator V, Fator VII, Fator X ou Fator XIII, síndrome de Ber- nard-Soulier, o qual é um defeito ou deficiência no GPIb. GPIb, o recep- tor de VWF, pode ser defeituoso e levar à falta de formação de coágulo primário (hemostasia primária) e aumento da tendência ao sangra- mento) e trombastenia de Glanzman e Naegeli (trombastenia de Glanz- mann). Na insuficiência hepática (formas agudas e crônicas), há produ- ção insuficiente de fatores de coagulação pelo fígado; isto pode aumen- tar o risco de sangramento.
[0079] "Administrar" ou "administração", conforme usado aqui, se refere a distribuição a um indivíduo uma composição descrita aqui, por exemplo, um polipeptídeo quimérico. A composição, por exemplo, o po- lipeptídeo quimérico, pode ser administrada a um indivíduo usandos mé- todos conhecidos na técnica. Em particular, a composição pode ser ad- ministrada através da via intravenosa, subcutânea, intramuscular, intra- dérmica ou por meio de qualquer superfície mucosal, por exemplo, atra- vés da via oral, sublingual, bucal, nasal, retal, vaginal ou pulmonar do polipeptídeo quimérico. Em algumas modalidades, a administração é autoadministração. Em algumas modalidades, um pai administra o poli- peptídeo quimérico a uma criança. Em algumas modalidades, o polipep- tídeo quimérico é administrado a um indivíduo por um profissional de saúde, tal como um médico, um profissional de saúde ou uma enfer- meira.
[0080] Conforme usado aqui, o termo "dose" se refere a uma única administração de uma composição a um indivíduo. Uma dose única pode ser administrada de uma só vez, por exemplo, como um bolus ou durante um período de tempo, por exemplo, por meio de uma infusão intravenosa. O termo "doses múltiplas" significa mais de uma dose, por exemplo, mais de uma administração.
[0081] Quando de referência à coadministração de mais de uma composição, uma dose da composição A pode ser administrada conco- mitantemente com uma dose da composição B. Alternativamente, uma dose da composição A pode ser administrada antes ou após uma dose da composição B. Em algumas modalidades, a composição A e a com- posição B são combinadas em uma única formulação.
[0082] Conforme usado aqui, o termo "intervalo" ou "intervalo de do- sagem" se refere à quantidade de tempo que decorre entre uma primeira dose da composição A e uma dose subsequente da mesma composição administrada a um indivíduo. Um intervalo de dosagem pode se referir ao tempo que decorre entre uma primeira dose e uma segunda dose ou um intervalo de dosagem pode se referir à quantidade de tempo que decorre entre várias doses.
[0083] O termo "frequência de dosagem", conforme usado aqui, se refere ao número de doses administradas por um intervalo de dosagem específico. Por exemplo, uma frequência de dosagem pode ser escrita como uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, etc. Por- tanto, um intervalo de dosagem de 7 dias também pode ser escrito como um intervalo de dosagem de uma vez a cada 7 dias ou uma vez por semana ou uma vez a cada semana.
[0084] Conforme usado aqui, o termo "tratamento profilático" se re- fere à administração de uma terapia para o tratamento de hemofilia,
onde tal tratamento se destina a prevenir ou reduzir a gravidade de um ou mais sintomas de hemofilia, por exemplo, episódios de sangramento, por exemplo, um ou mais episódios de sangramento espontâneo e/ou dano articular. Consulte Jimenez-Yuste et al., Blood Transfus. 12 (3): 314-19 (2014). Para prevenir ou reduzir a gravidade de tais sintomas, por exemplo, episódios de sangramento e a progressão da doença arti- cular, os pacientes com hemofilia A podem receber infusões regulares de fator de coagulação como parte de um regime de tratamento profilá- tico. A base deste tratamento profilático é a observação de que pacien- tes com hemofilia com um nível de fator de coagulação, por exemplo, FVIII, de 1 % ou mais raramente apresentam episódios de sangramento espontâneo e têm menos comorbidades relacionadas à hemofilia com- parado com pacientes com hemofilia grave. Consulte, por exemplo, Co- ppola A. et al, Semin. Thromb. Hemost. 38 (1): 79-94 (2012). Os profis- sionais de saúde que tratam destes pacientes com hemofilia presumi- ram que manter os níveis de fator em cerca de 1 % com infusões regu- lares poderia reduzir o risco de sintomas de hemofilia, incluindo episó- dios de sangramento e danos nas articulações. Consulte id. Pesquisas subsequentes confirmaram estes benefícios em pacientes pediátricos com hemofilia que receberam tratamento profilático com fator de coagu- lação, tornando o tratamento profilático a meta para pessoas com he- mofilia grave. Consulte id.
[0085] Um tratamento "profilático" também pode se referir à admi- nistração preventiva da composição descrita aqui, por exemplo, um po- lipeptídeo quimérico, a um indivíduo a fim de controlar, gerenciar, pre- venir ou reduzir a ocorrência ou gravidade de um ou mais sintomas de hemofilia A, por exemplo, episódios de sangramento. O tratamento pro- filático com um fator de coagulação, por exemplo, FVIII, é o padrão de tratamento para indivíduos com hemofilia A grave. Consulte, por exem- plo, Oldenburg, Blood 125: 2038-44 (2015). Em algumas modalidades,
o tratamento profilático se refere à administração de uma composição descrita aqui a um indivíduo que precisa para reduzir a ocorrência de um ou mais sintomas de hemofilia A. Um tratamento profilático pode incluir a administração de doses múltiplas. As doses múltiplas usadas no tratamento profilático são, tipicamente, administradas em intervalos de dosagem específicos. Em determinadas modalidades, a taxa de san- gramento anual pode ser reduzida para menos de 10, menos de 9, me- nos de 8, menos de 7, menos de 6, menos de 5, menos de 4, menos de 3, menos de 2 ou menos de 1.
[0086] O termo "tratamento sob demanda" ou "tratamento episó- dico" se refere à administração "conforme necessário" de uma molécula quimérica em resposta aos sintomas de hemofilia A, por exemplo, um episódio de sangramento ou antes de uma atividade que possa causar sangramento. Em um aspecto, o tratamento sob demanda pode ser dado a um indivíduo quando o sangramento começa, tal como após uma lesão ou quando o sangramento é esperado, tal como antes da cirurgia. Em outro aspecto, o tratamento sob demanda pode ser dado antes das atividades que aumentam o risco de sangramento, tais como esportes de contato. Em algumas modalidades, o tratamento sob demanda é dado como uma dose única. Em outras modalidades, o tratamento sob demanda é dado como uma primeira dose, seguido por uma ou mais doses adicionais. Quando o polipeptídeo quimérico é administrado sob demanda, uma ou mais doses adicionais podem ser administradas pelo menos cerca de 12 horas, pelo menos cerca de 24 horas, pelo menos cerca de 36 horas, pelo menos cerca de 48 horas, pelo menos cerca de 60 horas, pelo menos cerca de 72 horas, pelo menos cerca de 84 horas, pelo menos cerca de 96 horas, pelo menos cerca de 108 horas ou pelo menos pelo menos cerca de 120 horas após a primeira dose. Deve ser observado, entretanto, que o intervalo entre as doses associado ao tra- tamento sob demanda não é o mesmo que o intervalo entre as doses usado para o tratamento profilático.
[0087] Em algumas modalidades, o indivíduo que precisa de um agente hemostático geral está passando por ou está prestes a passar por, uma cirurgia. O polipeptídeo quimérico da invenção pode ser admi- nistrado antes ou após a cirurgia. O polipeptídeo quimérico da invenção também pode ser administrado durante ou após a cirurgia para controlar um episódio de sangramento agudo. Quando o polipeptídeo quimérico é administrado antes da cirurgia, a administração pode ser de pelo me- nos cerca de 1 hora, pelo menos cerca de 2 horas, pelo menos cerca de 4 horas, pelo menos cerca de 8 horas, pelo menos cerca de 12 horas, pelo menos cerca de 24 horas, pelo menos cerca de 36 horas, pelo me- nos cerca de 48 horas ou pelo menos cerca de 72 horas antes da cirur- gia. Quando o polipeptídeo quimérico é administrado após a cirurgia, a administração pode ser de pelo menos cerca de 1 hora, pelo menos cerca de 2 horas, pelo menos cerca de 4 horas, pelo menos cerca de 8 horas, pelo menos cerca de 12 horas, pelo menos cerca de 24 horas, pelo menos cerca de 36 horas, pelo menos cerca de 48 horas ou pelo menos cerca de 72 horas após a cirurgia. A cirurgia pode incluir, porém sem limitações, transplante de fígado, ressecção de fígado, procedi- mentos odontológicos ou transplante de células-tronco.
[0088] Conforme usado aqui, o termo "sangramento agudo" se re- fere a um episódio de sangramento independentemente da causa sub- jacente. Por exemplo, um indivíduo pode ter trauma, uremia, um trans- torno hemorrágico hereditário (por exemplo, deficiência de Fator VII), um transtorno plaquetário ou resistência em virtude do desenvolvimento de anticorpos para fatores de coagulação.
[0089] "Tratar", "tratamento", "tratado", conforme usado aqui se re- fere, por exemplo, à redução da gravidade de uma doença ou condição; redução na duração do curso de uma doença; melhora de um ou mais sintomas associados a uma doença ou condição; fornecimento de efei- tos benéficos a um indivíduo que tem uma doença ou condição, sem necessariamente curar a doença ou condição ou profilaxia de um ou mais sintomas associados a uma doença ou condição. Em algumas mo- dalidades, o termo "tratar" ou "tratamento" significa manter um nível mí- nimo de FVIII de pelo menos cerca de 1 IU/dL, 2 IU/dL, 3 IU/dL, 4 IU/dL, 5 IU/dL, 6 IU/dL, 7 IU/dL, 8 IU/dL, 9 IU/dL, 10 IU/dL, 11 IU/dL, 12 IU/dL, 13 IU/dL, 14 IU/dL, 15 IU/dL, 16 IU/dL, 17 IU/dL, 18 IU/dL, 19 IU/dL ou 20 IU/dL em um indivíduo através da administração de um polipeptídeo quimérico ou um fragmento de VWF da invenção. Conforme usado aqui, um "nível mínimo" em um paciente com hemofilia é a medição da con- centração mais baixa alcançada por uma terapia com fator, por exem- plo, uma terapia com FVIII, antes que a próxima dose seja administrada. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível mínimo de FVIII de pelo menos cerca de 1 IU/dL entre o intervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível mínimo de FVIII de pelo menos cerca de 3 IU/dL entre o inter- valo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível mínimo de FVIII de pelo menos cerca de 5 IU/dL entre o intervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível mínimo de FVIII entre cerca de 1 e cerca de 20 IU/dL, cerca de 2 e cerca de 20 IU/dL, cerca de 3 e cerca de 20 IU/dL, cerca de 4 e cerca de 20 IU/dL, cerca de 5 e cerca de 20 IU/dL, cerca de 6 e cerca de 20 IU/dL, cerca de 7 e cerca de 20 IU/dL, cerca de 8 e cerca de 20 IU/dL, cerca de 9 e cerca de 20 IU/dL ou cerca de 10 e cerca de 20 IU/dL durante o intervalo de dosagem.
[0090] "Tratar" ou "tratamento" de uma doença ou condição também pode incluir a manutenção da atividade de FVIII em um indivíduo em um nível comparável a pelo menos cerca de 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %,
19 % ou 20 % da atividade do FVIII em um indivíduo não hemofílico entre o intervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou trata- mento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 1 % entre o intervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 2 % entre o intervalo de dosagem. Em outras mo- dalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 3 % entre o intervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 4 % entre o intervalo de do- sagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 5 % entre o in- tervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento signi- fica manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 6 % entre o intervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou trata- mento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 7 % entre o intervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 8 % entre o intervalo de dosagem. Em outras mo- dalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 9 % entre o intervalo de dosagem. Em outras modalidades, tratar ou tratamento significa manter um nível de atividade de FVIII de pelo menos cerca de 10 % entre o intervalo de dosagem. O nível mínimo necessário para o tratamento pode ser me- dido por meio de um ou mais métodos conhecidos (por exemplo, en- saios de aPTT ou ensaios cromogênicos descritos aqui) e pode ser ajus- tado (aumentado ou diminuído) para cada pessoa. II. Métodos da Invenção
[0091] Determinados aspectos da presente invenção são dirigidos a métodos de tratamento de hemofilia A em um indivíduo que precisa do mesmo que compreendem administrar ao indivíduo um polipeptídeo qui- mérico que compreende uma proteína FVIII e um fragmento de VWF em um intervalo de dosagem. Em algumas modalidades, o método compre- ende administrar ao indivíduo múltiplas doses de um polipeptídeo qui- mérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um fragmento de VWF que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um intervalo de dosagem. Em outros aspectos, a presente invenção é dirigida a métodos de trata- mento de uma doença ou condição hemorrágica, por exemplo, hemofilia A, em um indivíduo que precisa do mesmo que compreende administrar ao indivíduo múltiplas doses de uma proteína FVIII e múltiplas doses de um fragmento de VWF em um intervalo de dosagem.
[0092] Em algumas modalidades, as doses múltiplas compreendem pelo menos duas doses, pelo menos três doses, pelo menos quatro do- ses, pelo menos cinco doses, pelo menos seis doses, pelo menos sete doses, pelo menos oito doses, pelo menos nove doses, pelo menos dez doses, pelo menos onze doses, pelo menos doze doses, pelo menos treze doses, pelo menos catorze doses, pelo menos quinze doses, pelo menos dezesseis doses, pelo menos dezessete doses, pelo menos de- zoito doses, pelo menos dezenove doses, pelo menos vinte doses ou more. Em algumas modalidades, as doses múltiplas são administrado for pelo menos cerca de 1 mês, pelo menos cerca de 2 meses, pelo menos cerca de 3 meses, pelo menos cerca de 4 meses, pelo menos cerca de 5 meses, pelo menos cerca de 6 meses, pelo menos cerca de 12 meses, pelo menos cerca de 18 meses, pelo menos cerca de 2 anos, pelo menos cerca de 3 anos, pelo menos cerca de 4 anos, pelo menos cerca de 5 anos, pelo menos cerca de 10 anos, pelo menos cerca de 15 anos, pelo menos cerca de 20 anos ou for pelo menos cerca de 25 anos.
[0093] Em determinadas modalidades, os métodos da presente in-
venção são dirigidos ao tratamento de hemofilia A. Em algumas moda- lidades, o tratamento de hemofilia A compreende prevenir um episódio de sangramento em um ser humano que precisa do mesmo. Em algu- mas modalidades, o tratamento de hemofilia A compreende tratamento de um episódio de sangramento em um ser humano que precisa do mesmo. Em algumas modalidades, o tratamento de hemofilia A compre- ende controlar a incidência ou frequência de um episódio de sangra- mento em um ser humano que precisa do mesmo. Em algumas modali- dades, o tratamento de hemofilia A compreende diminuir a incidência ou frequência de um episódio de sangramento em um ser humano que pre- cisa do mesmo. A. Doses
[0094] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é administrado como uma única dose ou como doses múltiplas. Em algumas modalidades, as quantidades de cada uma das doses múltiplas são as mesmas. Em outras modalidades, uma ou mais das doses múltiplas são diferentes de uma ou mais das outras doses múltiplas. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas do polipeptídeo quimérico é a partir de cerca de 5 IU/kg a cerca de 200 IU/kg ou a partir de cerca de 10 IU/kg a cerca de 150 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 95 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 90 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 85 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 80 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 75 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 70 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 65 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 60 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 55 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 50 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 45 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 40 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 35 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 30 IU/kg ou a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 25 IU/kg.
[0095] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 30 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 35 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 40 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 45 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 55 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 70 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 75 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 80 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, a partir de cerca de 85 IU/kg a cerca de 100 IU/kg ou a partir de cerca de 90 IU/kg a cerca de 100 IU/kg. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg.
[0096] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas do polipeptídeo quimérico é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 150 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 140 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 130 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 120 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 110 IU/kg ou a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 100 IU/kg. Em algumas mo- dalidades, pelo menos uma das doses múltiplas do polipeptídeo quimé- rico é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 95 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 90 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 85 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 75 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 70 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 60 IU/kg, a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 55 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas do polipeptídeo quimérico é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas do polipeptídeo quimérico é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg.
[0097] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas do polipeptídeo quimérico é a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 150 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 140 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 130 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 120 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 110 IU/kg ou a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 100 IU/kg. Em algumas mo- dalidades, pelo menos uma das doses múltiplas do polipeptídeo quimé- rico é a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 95 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 90 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 85 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 80 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 75 IU/kg, a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 70 IU/kg ou a partir de cerca de 60 IU/kg a cerca de 65 IU/kg.
[0098] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas do polipeptídeo quimérico é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 150 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 140 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 130 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 120 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 110 IU/kg ou a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 100 IU/kg. Em algumas mo- dalidades, pelo menos uma das doses múltiplas do polipeptídeo quimé- rico é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 95 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 90 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 85 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg, a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 75 IU/kg ou a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 70 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas do polipeptídeo quimérico é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg.
[0099] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 5 IU/kg, cerca de 10 IU/kg, cerca de 15 IU/kg, cerca de 20 IU/kg, cerca de 25 IU/kg, cerca de 30 IU/kg, cerca de 35 IU/kg, cerca de 40 IU/kg, cerca de 45 IU/kg, cerca de 50 IU/kg, cerca de 55 IU/kg, cerca de 60 IU/kg, cerca de 65 IU/kg, cerca de 70 IU/kg, cerca de 75 IU/kg, cerca de 80 IU/kg, cerca de 85 IU/kg, cerca de 90 IU/kg, cerca de 95 IU/kg, cerca de 100 IU/kg, cerca de 125 IU/kg, cerca de 150 IU/kg, cerca de 175 IU/kg ou cerca de 200 IU/kg. Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg. Em de- terminadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 30 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 35 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo me- nos uma das doses múltiplas é cerca de 40 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 45 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 55 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 60 IU/kg. Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 70 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 75 IU/kg. Em determinadas moda- lidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 85 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 90 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 95 IU/kg. Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de
100 IU/kg.
[0100] Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múl- tiplas é cerca de 30 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 35 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 40 IU/kg. Em algumas modalida- des, cada dose das doses múltiplas é cerca de 45 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 55 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 60 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 70 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 75 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg. Em algumas modalida- des, cada dose das doses múltiplas é cerca de 85 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 90 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 95 IU/kg. Em algumas modalidades, cada dose das doses múltiplas é cerca de 100 IU/kg.
[0101] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é administrado profilaticamente. Quando administrado profilaticamente, pelo menos uma das doses múl- tiplas pode ser a partir de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas admi- nistrada profilaticamente é cerca de 25 IU/kg, cerca de 30 IU/kg, cerca de 35 IU/kg, cerca de 40 IU/kg, cerca de 45 IU/kg, cerca de 50 IU/kg, cerca de 55 IU/kg, cerca de 60 IU/kg, cerca de 65 IU/kg, cerca de 70 IU/kg, cerca de 75 IU/kg, cerca de 80 IU/kg, cerca de 85 IU/kg, cerca de
90 IU/kg, cerca de 95 IU/kg ou cerca de 100 IU/kg. Em algumas moda- lidades, pelo menos uma das doses múltiplas administrada profilatica- mente é cerca de 25 IU/kg. Em outras modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas administrada profilaticamente é cerca de 50 IU/kg. Em outras modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas adminis- trada profilaticamente é cerca de 65 IU/kg. Em outras modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas administrada profilaticamente é cerca de 80 IU/kg.
[0102] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é administrado sob demanda. Quando administrado sob demanda, o polipeptídeo quimérico pode ser adminis- trado como uma única dose ou como doses múltiplas. Em algumas mo- dalidades, o polipeptídeo quimérico é administrado como uma ou mais doses de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo quimérico é administrado sob demanda como uma ou mais doses de cerca de 25 IU/kg, cerca de 30 IU/kg, cerca de 35 IU/kg, cerca de 40 IU/kg, cerca de 45 IU/kg, cerca de 50 IU/kg, cerca de 55 IU/kg, cerca de 60 IU/kg, cerca de 65 IU/kg, cerca de 70 IU/kg, cerca de 75 IU/kg, cerca de 80 IU/kg, cerca de 85 IU/kg, cerca de 90 IU/kg, cerca de 95 IU/kg ou cerca de 100 IU/kg. Em algumas moda- lidades, o polipeptídeo quimérico é administrado sob demanda como uma ou mais doses de cerca de 25 IU/kg. Em outras modalidades, o polipeptídeo quimérico é administrado sob demanda como uma ou mais doses de cerca de 50 IU/kg. Em outras modalidades, o polipeptídeo qui- mérico é administrado sob demanda como uma ou mais doses de cerca de 65 IU/kg. Em outras modalidades, o polipeptídeo quimérico é admi- nistrado sob demanda como uma ou mais doses de cerca de 80 IU/kg.
[0103] Em algumas modalidades, a administração do polipeptídeo quimérico de acordo com os presentes métodos não induz a um inibidor de FVIII após cerca de 7 dias, cerca de 10 dias, cerca de 11 dias, cerca de 12 dias, cerca de 13 dias, cerca de 14 dias, cerca de 15 dias, cerca de 20 dias, cerca de 24 dias, cerca de 25 dias, cerca de 28 dias, cerca de 30 dias ou cerca de 35 dias da administração. Em algumas modali- dades, a administração do polipeptídeo quimérico não induz a um inibi- dor de FVIII após cerca de 28 dias da administração. B. Intervalo de Dosagem
[0104] Em determinadas modalidades, especialmente para trata- mento profilático, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF- XTEN, é administrado como doses múltiplas em um intervalo de dosa- gem. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 3 dias, pelo menos cerca de 4 dias, pelo menos cerca de 5 dias, pelo menos cerca de 6 dias, pelo menos cerca de 7 dias, pelo me- nos cerca de 8 dias, pelo menos cerca de 9 dias, pelo menos cerca de 10 dias, pelo menos cerca de 11 dias, pelo menos cerca de 12 dias, pelo menos cerca de 13 dias, pelo menos cerca de 14 dias, pelo menos cerca de 15 dias, pelo menos cerca de 16 dias, pelo menos cerca de 17 dias, pelo menos cerca de 18 dias, pelo menos cerca de 19 dias, pelo menos cerca de 20 dias, pelo menos cerca de 21 dias, pelo menos cerca de 22 dias, pelo menos cerca de 23 dias, pelo menos cerca de 24 dias, pelo menos cerca de 25 dias, pelo menos cerca de 26 dias, pelo menos cerca de 27 dias, pelo menos cerca de 28 dias, pelo menos cerca de 29 dias, pelo menos cerca de 30 dias ou pelo menos cerca de 31 dias.
[0105] Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 5 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 6 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 7 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 8 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 9 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 11 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 12 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 13 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 14 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 21 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 27 dias. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 30 dias.
[0106] Em algumas modalidades, a frequência de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos duas vezes por semana, pelo menos uma vez por semana, pelo menos uma vez a cada 2 semanas, pelo menos uma vez a cada 3 semanas, pelo menos uma vez a cada 4 semanas, pelo menos uma vez a cada 5 se- manas ou pelo menos uma vez a cada 6 semanas. Em determinadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos uma vez por semana. Em de- terminadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos 2 semanas. Em de- terminadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos 3 semanas. Em de- terminadas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos 4 semanas.
[0107] Em algumas modalidades, a frequência de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é cerca de 2 vezes a cada três meses, cerca de 1 vez a cada , cerca de 2 vezes a cada mês, cerca de 3 vezes a cada mês, cerca de 4 vezes a cada mês, cerca de 5 vezes a cada mês, cerca de 6 vezes a cada mês, cerca de 7 vezes a cada mês ou cerca de 8 vezes a cada mês. Em determinadas moda- lidades, a frequência de dosagem é cerca de 1 vez a cada . Em deter- minadas modalidades, a frequência de dosagem é cerca de 2 vezes a cada mês. Em determinadas modalidades, a frequência de dosagem é cerca de 3 vezes a cada mês. Em determinadas modalidades, a fre- quência de dosagem é cerca de 4 vezes a cada mês. Em determinadas modalidades, a frequência de dosagem é cerca de 5 vezes a cada mês. Em determinadas modalidades, a frequência de dosagem é cerca de 6 vezes a cada mês.
[0108] Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 3 a 5 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 4 a 6 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 4 a 7 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 4 a 8 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 4 a 9 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 4 a 10 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 5 a 7 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 5 a 8 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 5 a 9 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 5 a 10 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 6 a 8 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 6 a 9 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 6 a 10 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 7 a 9 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 8 a 14 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 9 a 14 dias.
Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 10 a 14 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 11 a 14 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 10 a 21 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 12 a 14 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 12 a 15 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia A, é pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0109] Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada de acordo com uma dose e frequência de dosagem descritas na Tabela 1. Tabela 1A: Quantidades de dosagem e frequência de dosagem corres- pondente, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 5 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 6 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 7 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 8 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 9 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 10 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 11 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias
5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 12 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 13 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 14 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 15 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 16 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 17 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 18 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 19 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 20 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 5 IU/kg 10 IU/kg 15 IU/kg 20 IU/kg 25 IU/kg 30 IU/kg 35 IU/kg 40 IU/kg 45 IU/kg 50 IU/kg 21 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 5 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 6 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 7 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 8 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 9 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 10 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 11 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 12 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 13 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 14 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias
55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 15 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 16 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 17 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 18 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 19 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 20 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 21 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias
Tabela 1B: Quantidades de dosagem e intervalos de dosagem corres- pondentes, por exemplo, para tratamento profilático de hemofilia 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 5 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 6 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 7 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 8 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 9 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 10 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 11 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 12 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 13 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 14 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 15 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 16 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias
55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 17 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 18 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 19 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 20 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 21 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 5 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 5 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 6 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 6 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 7 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 7 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 8 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 8 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 9 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 9 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 10 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 10 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 11 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 11 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 12 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 12 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 13 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 13 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 14 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 14 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 15 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 15 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 16 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 16 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 17 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 17 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 18 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 18 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 19 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias 19 dias
55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 20 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 20 dias 55 IU/kg 60 IU/kg 65 IU/kg 70 IU/kg 75 IU/kg 80 IU/kg 85 IU/kg 90 IU/kg 95 IU/kg 100 IU/kg 21 dias A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada A cada 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias 21 dias
[0110] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias. Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 8 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 9 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 11 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 12 dias. Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 13 dias. Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 7 a 9 dias. Em algumas modalidades,
pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 9 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo me- nos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo me- nos cerca de 10 a 21 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de
65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0111] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 8 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 9 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 11 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 12 dias. Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 9 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um in- tervalo de dosagem de pelo menos cerca de 9 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 21 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 a 14 dias. Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um in- tervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 25 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0112] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 diasEm algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 8 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 9 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 11 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 12 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 9 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um in- tervalo de dosagem de pelo menos cerca de 9 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 21 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 a 14 dias. Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um in- tervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0113] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 8 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 9 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de
6 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 12 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 9 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um in- tervalo de dosagem de pelo menos cerca de 9 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65
IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 21 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 a 14 dias. Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um in- tervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0114] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 8 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 9 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 12 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 9 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um in- tervalo de dosagem de pelo menos cerca de 9 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 21 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 a 14 dias. Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um in- tervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0115] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias. Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 8 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 9 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 12 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 13 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 7 a 9 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias. Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 9 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo me- nos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo me- nos cerca de 10 a 21 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0116] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias. Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 8 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 9 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 12 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 13 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 7 a 9 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de
7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 9 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo me- nos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo me- nos cerca de 10 a 21 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 15 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0117] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias. Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 8 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 9 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 11 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 12 dias. Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 13 dias. Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 7 a 9 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 10 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 11 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 9 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo me- nos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo me- nos cerca de 10 a 21 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0118] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 2 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 2 a 10 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 2 a 8 dias. Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 2 a 9 dias. Em algumas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 2 a 11 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 2 a 12 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 2 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 4 a 9 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 4 a 10 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 4 a 11 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 4 a 12 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 4 a 13 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 4 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múl- tiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 a 14 dias.
Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é ad- ministrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 a 14 dias.
Em algu- mas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 a 14 dias.
Em algumas modali- dades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de do- sagem de pelo menos cerca de 8 a 14 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo me- nos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo me- nos cerca de 10 a 21 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 a 21 dias.
[0119] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 dias. Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de he- mofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múlti- plas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 6 dias. Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 5 dias. Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 4 dias.
Em algumas mo- dalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 3 dias.
Em algumas mo- dalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 2 dias.
Em algumas mo- dalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 8 dias.
Em algumas mo- dalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 9 dias.
Em algumas mo- dalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 10 dias.
Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 11 dias.
Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 12 dias. Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 13 dias. Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 14 dias. Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é adminis- trada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 21 dias.
[0120] Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em um intervalo de dosagem de pelo menos cerca de 1 semana. Em algumas modalidades, tal como para tratamento profilá- tico de hemofilia A em um indivíduo pediátrico, pelo menos uma das doses múltiplas é administrada em uma dose de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg em uma frequência de dosagem de pelo menos duas vezes cerca de a cada 1 semana.
[0121] Em determinadas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A, o método compreende administrar ao indiví- duo doses múltiplas de um polipeptídeo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um fragmento de VWF que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF, por exemplo, rFVIIIFc- VWF-XTEN, em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias.
Em determinadas modalidades, tal como para tratamento profilático de hemofilia A, o mé- todo compreende administrar ao indivíduo doses múltiplas de um poli- peptídeo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um fra- gmento de VWF que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 8 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 9 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 11 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 12 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 13 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 14 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 15 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 16 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 17 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 18 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 19 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 20 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 21 dias.
[0122] Em determinadas modalidades, o método compreende admi- nistrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptídeo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um fragmento de VWF que com- preende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias. Em determinadas modalidades, o método compreende administrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptí- deo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um frag- mento de VWF que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 6 dias. Em algumas modalidades, o método é para o tratamento profilático de hemofilia A. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias.
Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o inter- valo de dosagem é pelo menos cerca de 8 dias.
Em determinadas mo- dalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 9 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias.
Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 11 dias.
Em de- terminadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 12 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 13 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 14 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 15 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 16 dias.
Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 17 dias.
Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 18 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é a partir de cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 19 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 20 dias.
Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 21 dias.
[0123] Em determinadas modalidades, o método compreende admi- nistrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptídeo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um fragmento de VWF que com- preende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias. Em determinadas modalidades, o método compreende administrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptí- deo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um frag- mento de VWF que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 6 dias. Em algumas modalidades, o método é para o tratamento profilático de hemofilia A. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias. Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o inter- valo de dosagem é pelo menos cerca de 8 dias. Em determinadas mo- dalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 9 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias. Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 11 dias. Em de- terminadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 12 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 13 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 14 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 15 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 16 dias. Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 17 dias. Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 18 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é a partir de cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 19 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 20 dias. Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 21 dias.
[0124] Em determinadas modalidades, o método compreende admi- nistrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptídeo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um fragmento de VWF que com- preende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias. Em determinadas modalidades, o método compreende administrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptí- deo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um frag- mento de VWF que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 6 dias.
Em algumas modalidades, o método é para o tratamento profilático de hemofilia A.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias.
Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o inter- valo de dosagem é pelo menos cerca de 8 dias.
Em determinadas mo- dalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 9 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias.
Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 11 dias.
Em de- terminadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 12 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 13 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 14 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 15 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 16 dias.
Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 17 dias.
Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 18 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é a partir de cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 19 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 20 dias. Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 21 dias.
[0125] Em determinadas modalidades, o método compreende admi- nistrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptídeo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um fragmento de VWF que com- preende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias. Em determinadas modalidades, o método compreende administrar ao indivíduo doses múltiplas de um polipeptí- deo quimérico que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um frag- mento de VWF que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 6 dias. Em algumas modalidades, o método é para o tratamento profilático de hemofilia A. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias. Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o inter- valo de dosagem é pelo menos cerca de 8 dias. Em determinadas mo- dalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 9 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 10 dias. Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 11 dias. Em de- terminadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 12 dias.
Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 13 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 14 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 15 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 16 dias. Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 17 dias. Em determi- nadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 18 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múlti- plas é a partir de cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 19 dias. Em determinadas modalidades, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 20 dias. Em determinadas modalida- des, pelo menos uma das doses múltiplas é a partir de cerca de 80 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 21 dias.
[0126] Em algumas modalidades, o indivíduo foi anteriormente tra- tado com uma ou mais terapias de reposição de FVIII. Em determinadas modalidades, o indivíduo falhou em responder a uma terapia de reposi- ção de FVIII anterior. Em determinadas modalidades, a terapia de repo- sição de FVIII é ELOCTATE ou ADVATE. Em algumas modalidades, o indivíduo é um adulto. Em algumas modalidades, o indivíduo é um homem adulto. Em outras modalidades, o indivíduo é uma mulher adulta. Em outras modalidades, o indivíduo é uma criança, por exemplo, menos de ou igual a cerca de 12 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 11 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 10 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 9 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 8 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 7 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 6 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 5 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 4 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 3 anos de idade, menos de ou igual a cerca de 2 anos de idade ou menos de ou igual a cerca de 1 ano de idade). Em algumas modalidades, o indivíduo é uma mulher. Em algu- mas modalidades, o indivíduo é a male. Em algumas modalidades, o indivíduo é uma mulher menos de ou igual a cerca de 12 anos de idade. Em algumas modalidades, o indivíduo é uma mulher menos de ou igual a cerca de 11 anos de idade. Em algumas modalidades, o indivíduo é uma mulher menos de ou igual a cerca de 10 anos de idade.
[0127] Um polipeptídeo quimérico descrito aqui pode ser adminis- trado através de qualquer meio conhecido na técnica. Em algumas mo- dalidades, o polipeptídeo quimérico é administrado através de uma via selecionada a partir do grupo que consiste em injeção intravenosa, in- fusão intravenosa, administração subcutânea, administração intramus- cular, administração oral, administração nasal e administração pulmo- nar. Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico é administrado intravenosamente. Em outras modalidades, o polipeptídeo quimérico é administrado subcutaneamente.
[0128] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, após administração, resulta em um nível de atividade plasmática de FVIII de pelo menos cerca de 1 %, pelo me- nos cerca de 2 %, pelo menos cerca de 3 %, pelo menos cerca de 4 %, pelo menos cerca de 5 %, pelo menos cerca de 6 %, pelo menos cerca de 7 %, pelo menos cerca de 8 %, pelo menos cerca de 9 % ou pelo menos cerca de 10 %. Em determinadas modalidades, o nível de ativi- dade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 3 %. Em algumas mo- dalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 4 %. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 5 %. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 4 %. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 5 %. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 5.6 %. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 7 %. Em algu- mas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 10 %. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmá- tica de FVIII é pelo menos cerca de 12 %. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 12.95 %. Conforme usado aqui, o nível de atividade plasmática é expresso como uma percentagem (%). Alternativamente, a atividade plasmática pode ser expressaem unidades IU/dL, em que 1 % é igual a 1 IU/dL
[0129] Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 10 % pelo menos cerca de 5 dias após administração do polipeptídeo quimérico, por exemplo, em uma dose de 25 IU/kg. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 12 % pelo menos cerca de 5 dias após administração do polipeptídeo quimérico, por exemplo, em uma dose de 25 IU/kg. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 12,95 % pelo menos cerca de 5 dias após administração do polipeptídeo quimérico, por exemplo, em uma dose de 25 IU/kg. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 5 % pelo menos cerca de 7 dias após ad- ministração do polipeptídeo quimérico, por exemplo, em uma dose de 25 IU/kg. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 5,6 % pelo menos cerca de 7 dias após administração do polipeptídeo quimérico, por exemplo, em uma dose de 25 IU/kg. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de
FVIII é pelo menos cerca de 3 % pelo menos cerca de 8 dias após ad- ministração do polipeptídeo quimérico, por exemplo, em uma dose de 25 IU/kg. Em algumas modalidades, o nível de atividade plasmática de FVIII é pelo menos cerca de 1 % pelo menos cerca de 10 dias após administração do polipeptídeo quimérico, por exemplo, em uma dose de 25 IU/kg.
[0130] A presente invenção também inclui um método de tratamento de hemofilia A que compreende administrar a um indivíduo uma compo- sição que compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) um fragmento de VWF. Em algumas modalidades, a proteína FVIII está presente em uma primeira formulação e o fragmento de VWF está presente em uma se- gunda formulação. Em outras modalidades, a proteína FVIII e o frag- mento de VWF estão presentes na mesma formulação. Em modalidades particulares, a proteína FVIII e o fragmento de VWF são componentes separados de uma única formulação. Em determinadas modalidades, a proteína FVIII, por exemplo, FVIII com uma única cadeia, FVIII-Fc, FVIII peguilado, FVIII maduro de comprimento completo ou FVIII com domí- nio B excluído, é administrado em uma dose descrita aqui, por exemplo, 25 IU/kg, 30 IU/kg, 35 IU/kg, 40 IU/kg, 45 IU/kg, 50 IU/kg, 55 IU/kg, 60 IU/kg ou 65 IU/kg e em um intervalo de dosagem de pelo menos 6 dias, pelo menos 7 dias, pelo menos 8 dias, pelo menos 9 dias, pelo menos 10 dias, pelo menos 11 dias, pelo menos 12 dias, pelo menos 13 dias ou pelo menos 14 dias e o fragmento de VWF é administrado em uma dose de pelo menos cerca de 0,25:1, 0,5:1, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 100:1, 200:1, 300:1, 400:1, 500:1, 1000:1, 2000:1, 3000:1, 4000:1, 5000:1, 10.000:1, 50.000:1,
100.000:1 ou 500.000:1 de fragmento de VWF para molécula de FVIII administrados. Em outras modalidades, o fragmento de VWF é adminis- trado ao indivíduo concorrentemente com, logo após ou logo antes da proteína FVIII. Em determinadas modalidades, o fragmento de VWF é administrado cerca de 0,5 horas, cerca de 1 hora, cerca de 1,5 horas, cerca de 2 horas, cerca de 2,5 horas, cerca de 3 horas, cerca de 3,5 horas, cerca de 4 horas, cerca de 4,5 horas, cerca de 5 horas, cerca de 5,5 horas ou cerca de 6 horas antes da proteína FVIII. Em outras moda- lidades, a proteína FVIII é administrada cerca de 0,5 horas, cerca de 1 hora, cerca de 1,5 horas, cerca de 2 horas, cerca de 2,5 horas, cerca de 3 horas, cerca de 3,5 horas, cerca de 4 horas, cerca de 4,5 horas, cerca de 5 horas, cerca de 5,5 horas ou cerca de 6 horas antes do fragmento de VWF. C. Indução de Tolerância Imune
[0131] Determinados aspectos da presente invenção são dirigidos a métodos de tratamento de hemofilia A em um indivíduo que precisa que compreendem administrar ao indivíduo um polipeptídeo quimérico que compreende uma proteína FVIII e um fragmento de VWF em um inter- valo de dosagem, em que o polipeptídeo quimérico induz à tolerância imune ao FVIII no indivíduo. Alguns aspectos da presente invenção são dirigidos a métodos de tratamento de hemofilia A em um indivíduo que precisa que compreendem administrar ao indivíduo um polipeptídeo qui- mérico que compreende uma proteína FVIII e um fragmento de VWF em um intervalo de dosagem, em que o polipeptídeo quimérico reduz uma resposta inibidora a FVIII no indivíduo. Alguns aspectos da presente in- venção são dirigidos a métodos de tratamento de hemofilia A em um indivíduo que precisa que compreendem administrar ao indivíduo um polipeptídeo quimérico que compreende uma proteína FVIII e um frag- mento de VWF em um intervalo de dosagem, em que o polipeptídeo quimérico não induz a uma resposta imune ao polipeptídeo quimérico após administração. Outro aspecto da presente invenção é dirigido a um método de indução de tolerância imune em um ser humano que tem hemofilia que compreende (1) administrar ao ser humano uma quanti- dade eficaz de um polipeptídeo quimérico descrito aqui, por exemplo,
rFVIIIFc-VWF-XTEN, em que a quantidade do polipeptídeo quimérico induz à tolerância imune no ser humano. Vários métodos de indução de tolerância imune usando polipeptídeos quiméricos que compreendem um FVIII e um Fc são descritos na Publicação Internacional N° WO 2018/102760 A1, a qual é aqui incorporada a título de referência na ín- tegra.
[0132] Em determinadas modalidades, o método compreende ainda (2) após a indução de tolerância imune, administrar ao ser humano um regime de redução gradual da composição ou do polipeptídeo quimé- rico. Em determinadas modalidades, a indução de tolerância imune ocorre quando a titulação dos anticorpos inibidores no ser humano é menor do que cerca de 0,6 BU. Em determinadas modalidades, a indu- ção de tolerância imune ocorre quando a titulação dos anticorpos inibi- dores no ser humano é menor do que cerca de 0,6 BU e 60 % de recu- peração de atividade plasmática do fator de coagulação monitorado. Em algumas modalidades da presente invenção, o método compreende ainda (3) após o regime de redução gradual, administrar ao ser humano uma dose profilática do fator de coagulação, por exemplo, um polipeptí- deo quimérico descrito aqui, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN.
[0133] Em determinados aspectos, o ser humano não foi tratado com uma terapia de tolerância imune anterior contra o fator de coagula- ção, por exemplo, contra um FVIII. O polipeptídeo quimérico, por exem- plo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, pode ser administrado ao ser humano em qualquer momento que tenha sido determinado que o ser humano de- senvolveu uma resposta imune inibidora, por exemplo, após medir o ní- vel de uma resposta imune inibidora no ser humano. Em outras modali- dades, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, pode ser administrado ao ser humano que ainda não desenvolveu um ou mais inibidores de resposta imune para prevenir o desenvolvimento de um inibidor de resposta imune. Em algumas modalidades, o polipep- tídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é administrado ao ser humano que tem uma alta probabilidade (por exemplo, histórico fa- miliar, predisposição genética ou apresentação de um biomarcador) de desenvolver uma resposta imune inibidora. Em algumas modalidades, o método compreende ainda medir o nível de uma resposta imune inibi- dora ou a probabilidade de desenvolver uma resposta imune inibidora antes da administração.
[0134] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é administrado ao ser humano menos de cerca de 1 dia, menos de cerca de 2 dias, menos de cerca de 3 dias, menos de cerca de 4 dias, menos de cerca de 5 dias, menos de cerca de 6 dias, menos de cerca de 7 dias, menos de cerca de 2 semanas, menos de cerca de 3 semanas, menos de cerca de 4 semanas, menos de cerca de 2 meses, menos de cerca de 3 meses, menos de cerca de 4 meses, menos de cerca de 5 meses, menos de cerca de 6 meses, menos de cerca de 1 ano, menos de cerca de 2 anos, menos de cerca de 3 anos, menos de cerca de 4 anos ou menos de cerca de 5 anos após ter sido determinado que o ser humano desenvolveu uma resposta imune inibidora ou que o ser humano tem uma probabilidade de desen- volver uma resposta imune inibidora, por exemplo, após medir o nível de uma resposta imune inibidora ou a probabilidade de desenvolver uma resposta imune inibidora no ser humano. Em determinadas modalida- des, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é ad- ministrado ao ser humano imediatamente após ter sido determinado que o ser humano desenvolveu uma resposta imune inibidora ou que o ser humano tem probabilidade de desenvolver uma resposta imune inibi- dora, por exemplo, após medir o nível de uma resposta imune inibidora ou a probabilidade de desenvolver uma resposta imune inibidora no ser humano. Em modalidades particulares, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é administrado ao ser humano menos de cerca de 5 minutos, menos de cerca de 10 minutos, menos de cerca de 15 minutos, menos de cerca de 20 minutos, menos de cerca de 30 minutos, menos de cerca de 45 minutos, menos de cerca de 1 hora, menos de cerca de 2 horas, menos de cerca de 3 horas, menos de cerca de 4 horas, menos de cerca de 5 horas, menos de cerca de 6 horas, menos de cerca de 7 horas, menos de cerca de 8 horas, menos de cerca de 9 horas, menos de cerca de 10 horas, menos de cerca de 11 horas, menos de cerca de 12 horas, cerca de 18 horas ou menos de cerca de 24 horas após ter sido determinado que o ser humano desenvolveu um resposta imune inibidora ou que o ser humano tem uma probabilidade de desenvolver uma resposta imune inibidora, por exemplo, após medir o nível de uma resposta imune inibidora ou a probabilidade de desen- volver uma resposta imune inibidora no ser humano.
Em modalidades particulares, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF- XTEN, é administrado ao ser humano por cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 mi- nutos, cerca de 45 minutos, cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 18 horas ou cerca de 24 horas após ter sido determinado que o ser humano desenvolveu uma resposta imune inibidora ou que o ser humano tem uma probabilidade de desen- volver uma resposta imune inibidora, por exemplo, após medir o nível de uma resposta imune inibidora ou a probabilidade de desenvolver uma resposta imune inibidora em o ser humano.
Em determinadas modali- dades, o polipeptídeo quimérico, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é administrado a menos de cerca de 1 dia após ter sido determinado que o ser humano desenvolveu uma resposta imune inibidora ou que o ser humano tem uma probabilidade de desenvolver uma resposta imune ini- bidora, por exemplo, após medir o nível de uma resposta imune inibidora ou a probabilidade de desenvolver uma resposta imune inibidora no ser humano.
[0135] A indução de uma resposta imune pode ser continuada até que o nível de inibidor esteja abaixo de um determinado nível ou até que os inibidores não sejam detectáveis. Em determinadas modalidades, o período de indução pode continuar durante pelo menos cerca de 24 se- manas, pelo menos cerca de 26 semanas, pelo menos cerca de 28 se- manas, pelo menos cerca de 30 semanas, pelo menos cerca de 32 se- manas, pelo menos cerca de 34 semanas, pelo menos cerca de 36 se- manas, pelo menos cerca de 38 semanas, pelo menos cerca de 40 se- manas, pelo menos cerca de 42 semanas, pelo menos cerca de 44 se- manas, pelo menos cerca de 46 semanas, pelo menos cerca de 48 se- manas, pelo menos cerca de 50 semanas, pelo menos cerca de 52 se- manas, pelo menos cerca de 54 semanas, pelo menos cerca de 56 se- manas, pelo menos cerca de 58 semanas, pelo menos cerca de 60 se- manas, pelo menos cerca de 62 semanas, pelo menos cerca de 64 se- manas, pelo menos cerca de 66 semanas, pelo menos cerca de 68 se- manas, pelo menos cerca de 70 semanas. Em uma modalidade particu- lar, o período de indução é menos de 60 semanas.
[0136] A resposta imune inibidora tratada pelos métodos da pre- sente invenção pode incluir qualquer resposta dentro do ser humano que impacta negativamente um ou mais efeitos de um tratamento com fator de coagulação. Em algumas modalidades, a resposta imune inibi- dora compreende a produção de anticorpos inibidores contra o fator de coagulação, por exemplo, anticorpos anti-FVIII inibidores. Em determi- nadas modalidades, o método da presente invenção compreende ainda medir a titulação de um ou mais anticorpos inibidores no ser humano antes (por exemplo, na linha de base) e após administração de uma quantidade eficaz de um polipeptídeo quimérico descrito aqui, por exem- plo, rFVIIIFc-VWF-XTEN ou um polinucleotídeo que codifica o mesmo. Em algumas modalidades, a titulação dos anticorpos inibidores antes da administração (por exemplo, na linha de base) é de pelo menos cerca de 0,6 unidades Bethesda (BU). Em determinadas modalidades, a titu- lação dos anticorpos inibidores antes da administração (por exemplo, na linha de base) é pelo menos cerca de 1 BU, pelo menos cerca de 2 BU, pelo menos cerca de 3 BU, pelo menos cerca de 4 BU, pelo menos cerca de 5 BU, pelo menos cerca de 6 BU, pelo menos cerca de 7 BU, pelo menos cerca de 10 BU, pelo menos cerca de 20 BU, pelo menos cerca de 30 BU, pelo menos cerca de 40 BU, pelo menos cerca de 50 BU, pelo menos cerca de 100 BU, em pelo menos cerca de 150 BU ou pelo menos cerca de 200 BU. Em uma modalidade particular, a titulação dos anticorpos inibidores antes da administração (por exemplo, na linha de base) é de pelo menos cerca de 5 BU.
[0137] Em algumas modalidades, os métodos da presente invenção reduzem a titulação de anticorpos inibidores em um ser humano em re- lação à titulação dos anticorpos inibidores antes da administração. Em determinadas modalidades, a titulação dos anticorpos inibidores após administração é menor do que cerca de 0,6 BU. Em algumas modalida- des, a titulação dos anticorpos inibidores após administração é menor do que cerca de 0,5 BU, menor do que cerca de 0,4 BU, menor do que cerca de 0,3 BU, menor do que cerca de 0,2 BU ou menor do que cerca de 0,1 BU. Em uma modalidade particular, a titulação dos anticorpos inibidores após administração é 0 BU. Em outras modalidades, a titula- ção dos anticorpos inibidores após administração é menor do que 5 BU, menor do que 4 BU, menor do que 3 BU, menor do que 2 BU, menor do que 1 BU, menor do que 0,9 BU, menor do que 0,8 BU, menor do que 0,7 BU ou menor do que 0,6 BU.
[0138] Em algumas modalidades, a administração de um polipeptí- deo quimérico descrito aqui, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, au- menta a diferenciação de macrófagos no ser humano para um fenótipo de tipo M2 comparado com a diferenciação de macrófagos em controles não tratados e seres humanos tratados com fator de coagulação ape- nas. Em algumas modalidades, o fenótipo de tipo M2 compreende a re- gulação positiva da via de NRF2, da via de PPAR gama ou tanto a via de NRF2 como a via de PPAR gama. Em algumas modalidades, o fe- nótipo de tipo M2 compreende a regulação positiva de CD206 (MRC1). Em algumas modalidades, o fenótipo de tipo M2 compreende a regula- ção positiva de ARG1. Em algumas modalidades, o fenótipo de tipo M2 compreende a regulação positiva de CD206 (MRC1) e ARG1.
[0139] Em algumas modalidades, a administração de um polipeptí- deo quimérico descrito aqui, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, resulta em maior expressão de um ou mais genes no ser humano em relação à expressão de um ou mais genes em um indivíduo não tratado ou em um indivíduo tratado com fator de coagulação apenas. Em algumas moda- lidades, a administração resulta em maior expressão de um ou mais ge- nes selecionados a partir do grupo que consiste em Hmox1, PPAR gama, LPL, EGR2, SLCO4A1, heme oxigenase 1 (HO-1), inibidor de crescimento induzido por estresse oxidativo 1 (OSGIN1), superóxido dismutase 1 (SOD1), glutationa-dissulfeto redutase (GSR), subunidade catalítica de glutamato-cisteína ligase (GCLC), subunidade modifica- dora de glutamato-cisteína ligase (GCLM), NAD(P)H quinona desidro- genase 1 (NQO1), proteína 5 de ligação a ácido graxo (FABP5), B7-H3 (CD276), membro da família SLAM 3 (SLAMF3; antígeno linfocitário 9; LY9), membro da família SLAM 7 (SLAMF7), receptor de manose C-tipo 1 (MRC1), família do transportador de soluto 12, membro 4 (SLC12A), neuropilina 1 (NRP1) e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a administração resulta em maior expressão de um ou mais genes da via de NRF2. Em determinadas modalidades, um ou mais genes da via de NRF2 são selecionados a partir do grupo que con- siste em HO-1, OSGIN1, SOD1, GSR, GCLC, GCLM, NQO1 e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a administração resulta em maior expressão de um ou mais genes da via de PPAR gama. Em algumas modalidades, um ou mais genes da via de PPAR gama são selecionados a partir do grupo que consiste em PPAR gama, LPL, FABP5, EGR2 e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a administração resulta em maior expressão de um ou mais genes selecionados a partir do grupo que consiste em B7-H3 (CD276), SLAMF3, SLAMF7, MRC1, SLC12A, NRP1 e qualquer combi- nação dos mesmos. Em modalidades particulares, a administração re- sulta em maior expressão de um ou mais genes em relação à expressão de um ou mais genes em um ser humano não tratado ou um ser humano que recebeu fator de coagulação apenas, em que a expressão é pelo menos cerca de 1,5 vezes maior, pelo menos cerca de 2 vezes maior, pelo menos cerca de 2,5 vezes maior, pelo menos cerca de 3 vezes maior, pelo menos cerca de 3,5 vezes maior, pelo menos cerca de 4 vezes maior, pelo menos cerca de 4,5 vezes maior ou pelo menos cerca de 5 vezes maior.
[0140] Em algumas modalidades, a expressão diferencial de um ou mais genes é observada menos de 6 horas após administração de um polipeptídeo quimérico descrito aqui, por exemplo, rFVIIIFc-VWF-XTEN. Em algumas modalidades, a expressão diferencial é observada menos de 12 horas após administração. Em algumas modalidades, a expres- são diferencial é observada menos de 18 horas após administração. Em algumas modalidades, a expressão diferencial é observada menos de 24 horas após administração.
[0141] Em algumas modalidades, a resposta imune inibidora com- preende uma resposta imune mediada por células. Em determinadas modalidades, a resposta imune mediada por células compreende a libe- ração de uma citocina. Em algumas modalidades, a citocina é qualquer citocina associada a uma resposta imune aumentada. Em algumas mo- dalidades, a citocina é selecionada a partir do grupo que consiste em IL- 1, IL-6, IL-16, IL-12, IL-4, IL-17, fator de necrose tumoral α (TNF-α), in- terferon α, interferon γ e qualquer combinação dos mesmos. Em uma modalidade, a resposta imune mediada por células compreende níveis séricos aumentados de IL-12. Em outra modalidade, a resposta imune mediada por células compreende níveis séricos aumentados de IL-4. Em outra modalidade, a resposta imune mediada por células compre- ende níveis séricos aumentados de IL-17. Em outra modalidade, a res- posta imune mediada por células compreende níveis séricos aumenta- dos de TNF-α.
[0142] Várias mutações gênicas foram associadas a um risco au- mentado de desenvolver uma resposta imune inibidora. Por exemplo, o polimorfismo TNF-α -308G>A em Hap2, o qual está associado a níveis aumentados de transcrição constitutiva e indutível de TNF, foi associado a um risco aumentado de desenvolver uma resposta imune inibidora. Consulte Astermark et al., Blood 108: 3739-3745 (2006), o qual é incor- porado aqui a título de referência na íntegra. Assim, em algumas moda- lidades, o ser humano tem um polimorfismo genético associado ao TNF- α aumentado. Em algumas modalidades, o polimorfismo é o polimor- fismo TNF-α -308G>A. Em algumas modalidades, o ser humano tem um polimorfismo em um gene de IL10, por exemplo, um polimorfismo asso- ciado ao aumento da secreção de IL10. Em algumas modalidades, o FVIII-Fc é administrado a um indivíduo com o alelo 134 do microssatélite IL10G na região de promoção do gene de IL10. Consulte Astermark et al. Hemostatis, Thrombosis and Vascular Biology 108: 3739-3745 (2006), o qual é incorporado aqui a título de referência na íntegra.
[0143] Em algumas modalidades, o ser humano tem um polimor- fismo genético associado à expressão diminuída de CTLA-4 (Antígeno 4 de Linfócito T Citotóxico). Em algumas modalidades, o ser humano tem uma mutação nas moléculas do Principal Complexo de Histocom- patibilidade (Major Histocompatibility Complex, MHC) de Classe II DR15 (HLA-DR15) ou DQB0602. Outras moléculas do MHC de Classe II as- sociadas ao desenvolvimento de uma resposta imune inibidora em indi- víduos que têm hemofilia são A3, B7, C7, DQA0102, C2, DQA0103, DQB0603 e DR13 (consulte Inhibitors in Patients com Hemophilia, E.C. Rodriguez-Merchan & C.A. Lee, Eds., Blackwell Science, Ltda., 2002).
[0144] Em algumas modalidades, os métodos da presente invenção reduzem o nível de uma ou mais citocinas no indivíduo comparado com o nível de uma ou mais citocinas no indivíduo após um tratamento an- terior com um polipeptídeo que consiste em uma proteína FVIII. Em ou- tra modalidade, os métodos da presente invenção reduzem o nível de uma ou mais citocinas no indivíduo comparado com o nível de uma ou mais citocinas no indivíduo antes da administração. Em outras modali- dades, a expressão de uma ou mais moléculas tolerogênicas é aumen- tada após administração dos métodos da presente invenção em relação ao nível de expressão de uma ou mais moléculas tolerogênicas antes da administração. Em determinadas modalidades, uma ou mais molé- culas tolerogênicas são selecionadas a partir de IL-10, TGF-β, IL-35, IDO-1 e qualquer combinação dos mesmos.
[0145] Em outras modalidades, a resposta imune compreende um sintoma clínico selecionado a partir do grupo que consiste em: aumento da tendência de sangramento, alto consumo de fator de coagulação, falta de resposta à terapia com fator de coagulação, eficácia diminuída da terapia com fator de coagulação, meia-vida reduzida do fator de co- agulação e qualquer combinação dos mesmos. Em determinadas mo-
dalidades, a resposta imune compreende um sintoma clínico selecio- nado a partir do grupo que consiste em: aumento da tendência de san- gramento, alto consumo de fator de coagulação, falta de resposta à te- rapia com fator de coagulação, eficácia diminuída da terapia com fator de coagulação, recuperação reduzida de atividade do fator de coagula- ção conforme monitorado no plasma, meia-vida reduzida do fator de co- agulação e qualquer combinação dos mesmos.
[0146] Em determinadas modalidades, o ser humano foi previa- mente diagnosticado como tendo uma resposta imune inibidora. Tal di- agnóstico pode ser feito usando quaisquer métodos conhecidos na téc- nica. Por exemplo, um ser humano pode ser caracterizado como tendo uma resposta imune a um fator de coagulação, por exemplo, um FVIII, se o ser humano tiver um ou mais dos seguintes: (a) uma titulação de anticorpos inibidores para o fator de coagulação maior do que ou igual a 0,6 BU; (b) aumento dos níveis séricos de uma ou mais citocinas se- lecionadas a partir do grupo que consiste em IL-12, IL-4, IL-17 e TNF-α; (c) tendência aumentada para sangramento; (d) alto consumo de fator de coagulação; (e) uma falta de resposta à terapia com fator de coagu- lação; (f) diminuição de eficácia da terapia com fator de coagulação; (g) meia-vida reduzida do fator de coagulação e qualquer combinação dos mesmos. Em uma modalidade particular, o ser humano é caracterizado como tendo uma resposta imune a um fator de coagulação se o ser hu- mano tiver uma titulação de anticorpos inibidores para o fator de coagu- lação maior do que ou igual a 0,6 BU.
[0147] Em algumas modalidades, o ser humano foi previamente di- agnosticado como tendo desenvolvido uma resposta imune inibidora ao fator de coagulação pelo menos cerca de 1 mês, pelo menos cerca de 2 meses, pelo menos cerca de 3 meses, pelo menos cerca de 4 meses, pelo menos cerca de 5 meses, pelo menos cerca de 6 meses, pelo me- nos cerca de 7 meses, pelo menos cerca de 8 meses, pelo menos cerca de 9 meses, pelo menos cerca de 10 meses, pelo menos cerca de 11 meses, pelo menos cerca de 12 meses, pelo menos cerca de 13 meses, pelo menos cerca de 14 meses, pelo menos cerca de 15 meses, pelo menos cerca de 16 meses, pelo menos cerca de 17 meses, pelo menos cerca de 18 meses, pelo menos cerca de 19 meses, pelo menos cerca de 20 meses, pelo menos cerca de 21 meses, em pelo menos cerca de 22 meses, pelo menos cerca de 23 meses, pelo menos cerca de 24 meses, pelo menos cerca de 27 meses, pelo menos cerca de 30 meses, pelo menos cerca de 33 meses, pelo menos cerca de 36 meses, pelo menos cerca de 39 meses, pelo menos cerca de 42 meses, pelo menos cerca de 45 meses, pelo menos cerca de 48 anos, pelo menos cerca de 51 meses, pelo menos cerca de 54 meses, pelo menos cerca de 57 meses, pelo menos cerca de 60 meses, pelo menos cerca de 6 anos, pelo menos cerca de 7 anos, pelo menos cerca de 8 anos, pelo menos cerca de 10 anos, pelo menos cerca de 15 anos ou pelo menos cerca de 20 anos antes da administração. Em uma modalidade, o ser humano foi previamente diagnosticado como tendo desenvolvido uma resposta imune inibidora ao fator de coagulação pelo menos cerca de 5 anos an- tes da administração.
[0148] Em algumas modalidades, os métodos da presente invenção fornecem um tempo para tolerância aprimorado comparado com os mé- todos padrão de tratamento de indução de tolerância imune. O termo "tempo para tolerância", conforme usado aqui, se refere à quantidade de tempo entre a administração da primeira dose da composição ou da proteína quimérica que compreende um fator de coagulação e uma re- gião Fc e o desenvolvimento de tolerância imune no ser humano. Dimi- nuir o tempo de tolerância pode ter benefícios significativos para o ser humano incluindo, porém sem limitações, reduzir a carga total necessá- ria para atingir a tolerância. Em algumas modalidades, o tempo para tolerância é cerca de 1 a cerca de 24 semanas, cerca de 1 a cerca de
23 semanas, cerca de 1 a cerca de 22 semanas, cerca de 1 a cerca de 21 semanas, cerca de 2 a cerca de 20 semanas, cerca de 2 a cerca de 19 semanas, cerca de 2 a cerca de 18 semanas, cerca de 2 a cerca de 17 semanas, cerca de 3 a cerca de 16 semanas, cerca de 3 a cerca de 15 semanas, cerca de 3 a cerca de 14 semanas, cerca de 3 a cerca de 13 semanas, cerca de 4 a cerca de 12 semanas, cerca de 4 a cerca de 11 semanas, cerca de 4 a cerca de 10 semanas, cerca de 4 a cerca de 9 semanas, cerca de 5 a cerca de 8 semanas, cerca de 5 a cerca de 7 semanas, cerca de 5 a cerca de 6 semanas, cerca de 1 a cerca de 12 semanas, cerca de 1 a cerca de 11 semanas, cerca de 1 a cerca de 10 semanas, cerca de 1 a cerca de 9 semanas, cerca de 1 a cerca de 8 semanas, cerca de 1 a cerca de 7 semanas, cerca de 1 a cerca de 6 semanas, cerca de 1 a cerca de 5 semanas ou cerca de 1 a cerca de 4 semanas.
Em algumas modalidades, o tempo para tolerância é menos de cerca de 70 semanas, menos de cerca de 65 semanas, menos de cerca de 60 semanas, menos de cerca de 58 semanas, menos de cerca de 56 semanas, menos de cerca de 54 semanas, menos de cerca de 52 semanas, menos de cerca de 50 semanas, menos de cerca de 48 se- manas, menos de cerca de 46 semanas, menos de cerca de 44 sema- nas, menos de cerca de 42 semanas, menos de cerca de 40 semanas, menos de cerca de 38 semanas, menos de cerca de 36 semanas, me- nos de cerca de 34 semanas, menos de cerca de 32 semanas, menos de cerca de 30 semanas, menos de cerca de 28 semanas, menos de cerca de 26 semanas, menos de cerca de 24 semanas, menos de cerca de 23 semanas, menos de cerca de 22 semanas, menos de cerca de 21 semanas, menos de cerca de 20 semanas, menos de cerca de 19 se- manas, menos de cerca de 18 semanas, menos de cerca de 17 sema- nas, menos de cerca de 16 semanas, menos de cerca de 15 semanas, menos de cerca de 14 semanas, menos de cerca de 13 semanas, me- nos de cerca de 12 semanas, menos de cerca de 11 semanas, menos de cerca de 10 semanas, menos de cerca de 9 semanas, menos de cerca de 8 semanas, menos de cerca de 7 semanas, menos de cerca de 6 semanas, menos de cerca de 5 semanas, menos de cerca de 4 semanas, menos de cerca de 3 semanas, menos de cerca de 2 sema- nas ou menos de cerca de 1 semana. Em determinadas modalidades, o tempo para tolerância é cerca de 4 a cerca de 12 semanas. Em uma modalidade, o tempo para tolerância é cerca de 4 semanas. Em outra modalidade, o tempo para tolerância é cerca de 12 semanas. Em algu- mas modalidades, o tempo para tolerância é menos de cerca de 10 me- ses. Em algumas modalidades, o tempo para tolerância é menos de cerca de 9 meses. Em algumas modalidades, o tempo para tolerância é menos de cerca de 8 meses. Em algumas modalidades, o tempo para tolerância é menos de cerca de 7 meses. Em algumas modalidades, o tempo para tolerância é menos de cerca de 6 meses. Em algumas mo- dalidades, o tempo para tolerância é menos de cerca de 5 meses. Em algumas modalidades, o tempo para tolerância é menos de cerca de 4 meses. Em algumas modalidades, os métodos da presente invenção resultam em um tempo mais curto para tolerância no ser humano após o tratamento com uma composição ou a proteína quimérica que com- preende um fator de coagulação e uma região Fc comparado com o tempo para tolerância após o tratamento com fator de coagulação ape- nas.
[0149] Em algumas modalidades, o desenvolvimento de tolerância imune é caracterizado por uma titulação de um anticorpo inibidor ao fa- tor de coagulação menor do que cerca de 0,6 BU. Em algumas modali- dades, o desenvolvimento de tolerância imune é caracterizado por uma titulação de um anticorpo inibidor ao fator de coagulação de cerca de 0,5 BU. Em algumas modalidades, o desenvolvimento de tolerância imune é caracterizado por uma titulação de um anticorpo inibidor ao fa-
tor de coagulação menor do que cerca de 0,4 BU. Em algumas modali- dades, o desenvolvimento de tolerância imune é caracterizado por uma titulação de um anticorpo inibidor ao fator de coagulação menor do que cerca de 0,3 BU. Em algumas modalidades, o desenvolvimento de tole- rância imune é caracterizado por uma titulação de um anticorpo inibidor ao fator de coagulação menor do que cerca de 0,2 BU. Em algumas modalidades, o desenvolvimento de tolerância imune é caracterizado por uma titulação de um anticorpo inibidor ao fator de coagulação menor do que cerca de 0,1 BU. Em algumas modalidades, o desenvolvimento de tolerância imune é caracterizado por uma titulação de um anticorpo inibidor ao fator de coagulação de 0,0 BU. Em determinadas modalida- des, a titulação de anticorpos imunes inibidores é observada em duas medições consecutivas, por exemplo, em duas semanas consecutivas dentro de um período de quatro semanas.
[0150] Em algumas modalidades, o desenvolvimento de tolerância imune é caracterizado por recuperação incremental > 66 % (por exem- plo, recuperação incremental de cerca de 67 %, cerca de 68 %, cerca de 69 %, cerca de 70 %, cerca de 71 %, cerca de 72 %, cerca de 73 %, cerca de 74 %, cerca de 75 %, cerca de 76 %, cerca de 77 %, cerca de 78 %, cerca de 79 %, cerca de 80 %, cerca de 81 %, cerca de 82 %, cerca de 83 %, cerca de 84 %, cerca de 85 %, cerca de 86 %, cerca de 87 %, cerca de 88 %, cerca de 89 %, cerca de 90 %, cerca de 91 %, cerca de 92 %, cerca de 93 %, cerca de 94 %, cerca de 95 %, cerca de 96 %, cerca de 97 %, cerca de 98 %, cerca de 99 % ou cerca de 100 %). Conforme usado aqui, "recuperação incremental" se refere aos ní- veis máximos de FVIII 15-30 minutos após a infusão.
[0151] Após o período de indução e o período de redução gradual serem concluídos, o indivíduo pode, então, entrar em tratamento profi- lático com a proteína quimérica. O regime de dosagem profilático pode ser qualquer regime de dosagem descrito aqui.
[0152] Em algumas modalidades, o ser humano tratado usando os métodos da presente invenção está recebendo ou recebeu recente- mente uma terapia imunoestimuladora. Por exemplo, também foram re- latados inibidores em pacientes com hemofilia A positivos para HCV sob tratamento com interferon, bem como em pacientes com hemofilia A po- sitivos para HIV com uma síndrome inflamatória de reconstituição imune associada à terapia antirretroviral. Consulte o Report of Expert Meeting on FVIII Products and Inhibitor Development, European Medicines Agency (28 de fevereiro de 2006 a 2 de março de 2006). Assim, em algumas modalidades, o ser humano está recebendo terapia com inter- feron. Em algumas modalidades, o ser humano está recebendo terapia antiviral. Em algumas modalidades, o ser humano está recebendo uma terapia antirretroviral e tem uma síndrome inflamatória de reconstituição imune.
[0153] Em determinadas modalidades, o ser humano teve menos de 150 dias de exposição (Exposure Day, ED) ao fator de coagulação, por exemplo, FVIII. Em uma modalidade, o ser humano teve menos de 50 ED. Em outra modalidade, o ser humano teve menos de 20 ED.
[0154] Alguns aspectos da presente invenção são dirigidos a méto- dos de redução da gravidade ou ocorrência de uma reação alérgica ou anafilática a um fator de coagulação em um indivíduo que precisa que compreende administrar ao indivíduo uma composição ou proteína qui- mérica que compreende o coagulação fator e uma região Fc. Em algu- mas modalidades, a administração da composição ou da proteína qui- mérica reduz a gravidade de uma reação anafilática ao fator de coagu- lação. Em algumas modalidades, a administração da composição ou da proteína quimérica reduz a gravidade de uma reação alérgica ao fator de coagulação. III. Polipeptídeos Quiméricos
[0155] Os polipeptídeos quiméricos úteis para a presente invenção compreendem uma proteína FVIII que compreende um polipeptídeo de FVIII e um fragmento VWF que compreende um domínio D' e um domí- nio D3 de VWF. O fragmento de VWF é usado para evitar ou impedir que a proteína FVIII interaja com o VWF endógeno, deste modo, evi- tando que a proteína FVIII seja depurada através de uma via de elimi- nação de VWF. A fim de evitar a dissociação da proteína FVIII do frag- mento VWF, em algumas modalidades, a proteína FVIII e o fragmento VWF estão associados direta ou indiretamente entre si por meio de uma associação mais forte do que a interação natural entre FVIII e VWF.
[0156] Em determinadas modalidades, a proteína FVIII está associ- ada ao fragmento de VWF através de uma ligação covalente. A ligação covalente pode ser qualquer ligação covalente conhecida na técnica. Em algumas modalidades, a ligação covalente é uma ligação de dissul- feto. Em algumas modalidades, a ligação covalente é uma ligação pep- tídica. Em outras modalidades, a proteína FVIII é modificada para au- mentar a força da interação entre a proteína FVIII e o fragmento de VWF. Em outras modalidades, o fragmento de VWF é modificado para aumentar a força da interação entre a proteína FVIII e o fragmento de VWF. Em ainda outras modalidades, a proteína FVIII e a proteína VWF são modificadas para aumentar a força da interação entre a proteína FVIII e o fragmento de VWF.
[0157] Em modalidades particulares, a proteína FVIII que compre- ende um polipeptídeo de FVIII e o fragmento de VWF que compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF se associam diretamente atra- vés de pelo menos uma ligação covalente entre pelo menos um amino- ácido na sequência do polipeptídeo de FVIII e pelo menos um aminoá- cido nos domínios D' e D3 de VWF. Em outras modalidades, a proteína FVIII e o fragmento de VWF se associam indiretamente através de pelo menos uma ligação covalente entre pelo menos um aminoácido na se- quência do polipeptídeo de FVIII e pelo menos um aminoácido em uma sequência heteróloga fundida direta ou indiretamente aos domínios D' e D3 do VWF. Em outras modalidades, a proteína FVIII e o fragmento de VWF se associam indiretamente através de pelo menos uma ligação covalente entre pelo menos um aminoácido na sequência do fragmento de VWF e pelo menos um aminoácido em uma sequência heteróloga fundida direta ou indiretamente com o polipeptídeo de FVIII. Em ainda outras modalidades, a proteína FVIII e o fragmento de VWF se associam indiretamente através de pelo menos uma ligação covalente entre pelo menos um aminoácido em uma sequência heteróloga fundida direta ou indiretamente com os domínios D' e D3 de VWF e pelo menos um ami- noácido em uma sequência heteróloga fundida direta ou indiretamente com o polipeptídeo de FVIII.
[0158] A proteína FVIII da presente invenção pode compreender um polipeptídeo de FVIII e uma ou mais porções heterólogas, por exemplo, porções que prolongam a meia-vida, fundidas direta ou indiretamente com o polipeptídeo de FVIII. O fragmento de VWF da presente invenção também pode compreender um domínio D' e um domínio D3 de VWF e uma ou mais porções heterólogas, por exemplo, porções de extensão de meia-vida, fundidas direta ou indiretamente com os domínios D' e D3 de VWF. Em algumas modalidades, a proteína FVIII útil para a presente invenção consiste essencialmente em ou consiste em um polipeptídeo de FVIII e o fragmento de VWF útil para a invenção compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF e uma ou mais porções heterólo- gas, por exemplo, porções de extensão de meia-vida, fundidas direta ou indiretamente com os domínios D' e D3 de VWF. Em algumas modali- dades, a proteína FVIII compreende um polipeptídeo de FVIII e uma ou mais porções heterólogas, por exemplo, porções de extensão de meia- vida, fundidas direta ou indiretamente com o polipeptídeo de FVIII e o fragmento de VWF útil para a presente invenção consiste essencial- mente em ou consiste em um domínio D' e um domínio D3 de VWF. Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico compreende uma pro- teína FVIII que consiste essencialmente em ou consiste em um polipep- tídeo de FVIII e um fragmento de VWF consiste essencialmente em ou consiste em um domínio D' e um domínio D3 de VWF.
[0159] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico ou pro- teína descrita aqui é um heterodímero de FVIII-XTEN-Fc/D’D3-XTEN- Fc. Em uma modalidade, o polipeptídeo quimérico de heterodímero de FVIII-XTEN-Fc/D'D3-XTEN-Fc compreende: (i) uma proteína FVIII que compreende um polipeptídeo de FVIII, uma sequência XTEN inserida no domínio B do polipeptídeo de FVIII e uma primeira região Fc; e (ii) uma proteína VWF que compreende um fragmento de VWF, uma se- gunda sequência XTEN, um ligante a2 e uma segunda região Fc. Uma representação esquemática de um heterodímero de FVIII-XTEN- Fc/D’D3-XTEN-Fc exemplificativo, rFVIIIFc-VWF-XTEN, é apresentada na Figura 1.
[0160] Em uma modalidade específica, o polipeptídeo quimérico é rFVIIIFc-VWF-XTEN. Em outra modalidade específica, rFVIIIFc-VWF- XTEN compreende (i) uma proteína FVIII que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 203 e (ii) uma proteína VWF que com- preende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 205. Em ainda outra modalidade específica, rFVIIIFc-VWF-XTEN compreende (i) uma proteína FVIII e (ii) uma proteína VWF que estão covalentemente liga- das através de uma ligação de dissulfeto. III.A. Polipeptídeos de Fator VIII
[0161] "Fator VIII", abreviado ao longo do presente pedido como "FVIII", conforme usado aqui, significa polipeptídeo de FVIII funcional em seu papel normal na coagulação, a menos que especificado de outra forma. Assim, o termo FVIII inclui polipeptídeos variantes que são funci- onais. "Uma proteína FVIII" é usada para se referir a um polipeptídeo de
FVIII (ou proteína) apenas, um polipeptídeo de FVIII fundido a polipep- tídeos adicionais e um polipeptídeo de FVIII associado a um ou mais polipeptídeos adicionais, desde que a proteína FVIII exiba uma fun- ção/atividade de FVIII. Os termos "polipeptídeo de FVIII", "porção FVIII" e "FVIII" se referem apenas à sequência do polipeptídeo de FVIII. Exem- plos de funções/atividades do FVIII incluem, porém sem limitações, uma capacidade de ativar a coagulação, uma capacidade de atuar como um cofator para o Fator IX ou uma capacidade de formar um complexo de tenase com o Fator IX na presença de Ca2+ e fosfolipídios o que, então, converte o Fator X na forma ativada Xa. O polipeptídeo de FVIII pode ser o polipeptídeo de FVIII humano, suíno, canino, de rato ou murino. Além disso, comparações entre o FVIII humano e outras espécies iden- tificaram resíduos conservados que provavelmente são necessários para a função (Cameron et al., Thromb. Haemost. 79: 317-22 (1998); documento US 6.251.632). Sequências polipeptídicas e polinucleotídi- cas de comprimento completo são conhecidas, assim como muitos fra- gmentos funcionais, mutantes e versões modificadas. Várias sequên- cias de aminoácidos e nucleotídeos de FVIII são descritas, por exemplo, nas Publicações Norte-Americanas Nos 2015/0158929 A1, 2014/0308280 A1 e 2014/0370035 A1 e na Publicação Internacional N° WO 2015/106052 A1. Os polipeptídeos de FVIII incluem, por exemplo, FVIII de comprimento completo, FVIII de comprimento completo menos Met no Terminal-N, polipeptídeo de FVIII maduro (menos a sequência sinalizadora), polipeptídeo de FVIII maduro com um Met adicional no Terminal-N e/ou polipeptídeo de FVIII com uma exclusão total ou parcial do domínio B. As variantes de FVIII incluem exclusões do domínio B, sejam exclusões parciais ou totais.
[0162] O polipeptídeo de FVIII do polipeptídeo quimérico usado aqui tem atividade de FVIII no plasma. A atividade de FVIII pode ser medida por meio de quaisquer métodos conhecidos na técnica. Uma série de ensaios estão disponíveis para avaliar a função do sistema de coagula- ção: ensaio do tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT), ensaio cromogênico, ensaio ROTEM, ensaio do tempo de protrombina (PT) (também usado para determinar INR), ensaio de fibrinogênio (muitas vezes através do Método de Clauss), contagem de plaquetas, ensaio de função plaquetária (frequentemente por PFA-100), TCT, tempo de san- gramento, ensaio de mistura (se uma anormalidade é corrigida se o plasma do paciente for misturado com plasma normal), ensaios de fator de coagulação, anticorpos antifosfolipídios, D-dímero, ensaios genéti- cos (por exemplo, Fator V de Leiden, mutação de protrombina G20210A), tempo de veneno de víbora de Russell diluído (dRVVT), en- saios de função plaquetária diversos, tromboelastografia (TEG ou So- noclot), tromboelastometria (TEM, por exemplo, ROTEM) ou tempo de lise de euglobulina (ELT).
[0163] O ensaio aPTT é um indicador de desempenho que mede a eficácia tanto da via "intrínseca" (também denominada via de ativação por contato) quanto das vias de coagulação comuns. Este ensaio é co- mumente usado para medir a atividade de coagulação de fatores de co- agulação recombinantes comercialmente disponíveis, por exemplo, FVIII. Normalmente, ele usado em conjunto com o tempo de protrom- bina (TP), o qual mede a via extrínseca. (Consulte, por exemplo, Kamal et al., Mayo Clin Proc., 82 (7): 864-873 (2007)). Em uma modalidade, o aPTT é testado usando um ensaio no qual a atividade de FVIII é medida usando o Dade Actin FSL Activated PTT Reagent (Siemens Health Care Diagnostics) em um analisador BCS XP (Siemens Healthcare Diagnostics). Em determinadas modalidades, o polipeptídeo quimérico tem uma atividade de FVIII no plasma de pelo menos cerca de 1%, pelo menos cerca de 2%, pelo menos cerca de 3%, pelo menos cerca de 4%, pelo menos cerca de 5 %, pelo menos cerca de 6%, em pelo menos cerca de 7%, pelo menos cerca de 8%, pelo menos cerca de 9%, pelo menos cerca de 10 %, pelo menos cerca de 11 %, pelo menos cerca de 12 %, pelo menos cerca de 13 %, pelo menos cerca de 14 %, pelo me- nos cerca de 15 %, pelo menos cerca de 15 %, pelo menos cerca de 16%, pelo menos cerca de 17%, pelo menos cerca de 18%, pelo menos cerca de 19% ou pelo menos cerca de 20%, conforme medido pelo en- saio aPTT.
[0164] O ensaio aPTT também pode ser usado para avaliar a potên- cia de um polipeptídeo quimérico antes da administração a um paciente ou indivíduo. (Hubbard A.R. et al., J Thromb Haemost 11: 988–9 (2013)). O ensaio aPTT pode ainda ser usado em conjunto com qualquer um dos ensaios descritos aqui antes da administração ou após administração a um paciente ou indivíduo.
[0165] A análise ROTEM fornece informações sobre toda a cinética da hemostasia: tempo de coagulação, formação do coágulo, estabili- dade do coágulo e lise. Os diferentes parâmetros da tromboelastometria dependem da atividade do sistema de coagulação plasmática, da fun- ção plaquetária, da fibrinólise ou de muitos fatores que influenciam tais interações. Este ensaio pode fornecer uma visão completa da hemosta- sia secundária.
[0166] O mecanismo de ensaio cromogênico é com base nos prin- cípios da cascata de coagulação sanguínea, onde o FVIII ativado ace- lera a conversão do Fator X em Fator Xa na presença do Fator IX ati- vado, fosfolipídios e íons de cálcio. A atividade do Fator Xa é avaliada pela hidrólise de um substrato p-nitroanilida (pNA) específico para o Fa- tor Xa. A taxa inicial de liberação de p-nitroanilina medida a 405 nM é diretamente proporcional à atividade do Fator Xa e, portanto, à atividade de FVIII na amostra. Em uma modalidade, o ensaio cromogênico é o ensaio BIOPHEN FVIII: C (Hyphen Biomed, Neurville sur Oise, França).
[0167] O ensaio cromogênico é recomendado pelo FVIII and Factor IX Subcommittee of the Scientific and Standardization Committee (SSC)
da International Society on Thrombosis and Hemostatsis (ISTH). Desde 1994, o ensaio cromogênico também tem sido o método de referência da Farmacopeia Europeia para a atribuição da potência do concentrado de FVIII. Assim, em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico que compreende um polipeptídeo de FVIII tem atividade de FVIII comparável a um polipeptídeo quimérico que compreende polipeptídeo de FVIII ma- duro ou um polipeptídeo de BDD FVIII (por exemplo, RECOMBINATE, KOGENATE FS, HELIXATE FS, XYNTHA/REFACTO AB, HEMO- FIL-M, MONARC M, MONOCLATE-P, HUMATE-P, ALPHA- NATE, KOATE-DVI, AFSTYLA e HYATE:C).
[0168] O ensaio cromogênico também pode ser usado para avaliar a potência de um polipeptídeo quimérico antes de administração a um paciente ou indivíduo. (Hubbard A.R. et al., J Thromb Haemost 11: 988– 9 (2013)). O ensaio cromogênico pode ainda ser usado em conjunto com qualquer um dos ensaios descritos aqui, antes de administração ou após administração a um paciente ou indivíduo.
[0169] Em outras modalidades, o polipeptídeo quimérico que com- preende um polipeptídeo de FVIII da presente invenção tem uma taxa de geração de Fator Xa comparável a um polipeptídeo quimérico que compreende um polipeptídeo de FVIII maduro ou um polipeptídeo de BDD FVIII (por exemplo, ADVATE, REFACTO ou ELOCTATE).
[0170] A fim de ativar o Fator X em Fator Xa, o Fator IX ativado (Fa- tor IXa) hidrolisa uma ligação de arginina-isoleucina no Fator X para for- mar o Fator Xa na presença de Ca2+, fosfolipídios da membrana e um cofator FVIII. Portanto, a interação do FVIII com o Fator IX é crítica na via de coagulação. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo qui- mérico que compreende um polipeptídeo de FVIII pode interagir com o Fator IXa em uma taxa comparável a um polipeptídeo quimérico que compreende uma sequência polipeptídica de FVIII maduro ou um poli- peptídeo de BDD FVIII (por exemplo, ADVATE, REFACTO ou
ELOCTATE).
[0171] Além disso, o FVIII está ligado ao Fator de von Willebrand enquanto inativo na circulação. O FVIII degrada rapidamente quando não está ligado ao VWF e é liberado do VWF pela ação da trombina. Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico que compreende um polipeptídeo de FVIII se liga ao Fator de von Willebrand, por exem- plo, um fragmento de VWF descrito aqui, em um nível comparável a um polipeptídeo quimérico que compreende uma sequência polipeptídica de FVIII maduro ou um polipeptídeo de BDD FVIII (por exemplo, AD- VATE, REFACTO ou ELOCTATE).
[0172] O FVIII pode ser inativado pela proteína C ativada na pre- sença de cálcio e fosfolipídios. A proteína C ativada cliva a cadeia pe- sada de FVIII após a arginina 336 no domínio A1, o que rompe um sítio de interação do substrato Fator X, e cliva após a arginina 562 no domí- nio A2, o que aumenta a dissociação do domínio A2, bem como rompe um sítio de interação com o Fator IXa. Esta clivagem também corta o domínio A2 (43 kDa) e gera os domínios A2-N (18 kDa) e A2-C (25 kDa). Assim, a proteína C ativada pode catalisar vários sítios de clivagem na cadeia pesada. Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico que compreende um polipeptídeo de FVIII é inativado pela Proteína C ati- vada em um nível comparável a um polipeptídeo quimérico que compre- ende uma sequência polipeptídica de FVIII maduro ou um polipeptídeo de BDD FVIII (por exemplo, ADVATE, REFACTO ou ELOCTATE).
[0173] Em outras modalidades, o polipeptídeo quimérico que com- preende um polipeptídeo de FVIII tem atividade de FVIII in vivo compa- rável a um polipeptídeo quimérico que compreende uma sequência po- lipeptídica de FVIII maduro ou um polipeptídeo de BDD FVIII (por exem- plo, ADVATE, REFACTO ou ELOCTATE). Em uma modalidade particular, o polipeptídeo quimérico que compreende um polipeptídeo de FVIII é capaz de proteger um camundongo HemA em um nível com- parável a um polipeptídeo quimérico que compreende uma sequência polipeptídica de FVIII maduro ou um polipeptídeo de BDD FVIII (por exemplo, ADVATE, REFACTO ou ELOCTATE) em um modelo de transecção da veia da cauda de camundongo HemA.
[0174] Exemplos de sequências de FVIII humano (de comprimento completo) são mostrados abaixo. Tabela 2: Sequência de Aminoácidos do Fator VIII Humano de Compri- mento Completo (FVIII de comprimento completo: peptídeo sinalizador de FVIII subli- nhado; cadeia pesada de FVIII está com sublinhado duplo; domínio B está em itálico; e cadeia leve de FVIII está em texto regular) _______________________________________________________ Peptídeo Sinalizador: (SEQ ID NO: 64)
MQIELSTCFFLCLLRFCFS _______________________________________________________ Fator VIII Maduro (SEQ ID NO: 65)* ATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKS- FPFNTSVVYK-
KTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASH PVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTY- VWQVLKENGPMASDPL- CLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFA VFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSL- PGLIGCHRKSVYWHVIGMG- TTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLF CHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAE- DYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFI- QIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNN GPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILG- PLLYGEVGDTLLIIFKNQAS- RPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTV EDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVD- QRGNQIMSDKRN- VILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSING YVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHK- MVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALL KVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNS- RHPSTRQKQFNATTIPENDI- EKTDPWFAHRTPMPKIQNVSSSDLLMLLRQSPTPHGLSLSDLQEA KYETFSDDPSPGAIDSNNSLSEMTHFRPQLHHSGDMVFTPES- GLQLRLNEKLGTTAATELK- KLDFKVSSTSNNLISTIPSDNLAAGTDNTSSLGPPSMPVHYDSQLDT TLFGKKSSPLTESGGPLSLSEENNDSKLLESGLMNSQESSWGKN- VSSTESGRLFKGKRAHG- PALLTKDNALFKVSISLLKTNKTSNNSATNRKTHIDGPSLLIENSPSV WQNILESDTEFKKVTPLIHDRMLMDKNATALRLNHMSNKTTSSKN- MEMVQQKKEGPIPP- DAQNPDMSFFKMLFLPESARWIQRTHGKNSLNSGQGPSPKQLVSL GPEKSVEGQNFLSEKNKVVVGKGEFTKDVGLKEMVFPSSRN- LFLTNLDNLHENNTHNQEK- KIQEEIEKKETLIQENVVLPQIHTVTGTKNFMKNLFLLSTRQNVEGSY DGAYAPVLQDFRSLNDSTNRTKKHTAHFSKKGEEENLEGLGNQT- KQIVEKYACTTRIS- PNTSQQNFVTQRSKRALKQFRLPLEETELEKRIIVDDTSTQWSKNM KHLTPSTLTQIDYNEKEKGAITQSPLSDCLTRSHSIPQANRSPLPI- AKVSSFPSIRPIYL- TRVLFQDNSSHLPAASYRKKDSGVQESSHFLQGAKKNNLSLAILTL EMTGDQREVGSLGTSATNSVTYKKVENTVLPKPDLPKTSGKVELL- PKVHIYQKDLFPTE- TSNGSPGHLDLVEGSLLQGTEGAIKWNEANRPGKVPFLRVATESS AKTPSKLLDPLAWDNHYGTQIPKEEWKSQEKSPEKTAFKKKDTILS- LNACESNHAIAAINE- GQNKPEIEVTWAKQGRTERLCSQNPPVLKRHQREITRTTLQSDQE EIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVER- LWDYGMSSSPHVLRN- RAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAE VEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVK- PNETKTYFWKVQHHMAPTK- DEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVT VQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTF- KENYRFHAINGYIMDTL- PGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMAL YNLYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNK- CQTPLGMASGHIRDFQI- TASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGI KTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGN- VDSSGIKHNIFN- PPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDA QITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQV- DFQKTMKVTGVTTQGVKS- LLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVN
SLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY Tabela 3. Sequência de nucleotídeos que codifica FVIII de comprimento completo (SEQ ID NO: 66)*
*Os ácidos nucleicos sublinhados codificam um peptídeo sinalizador. 661 ATG CAAATAGAGC TCTCCACCTG 721 CTTCTTTCTG TGCCTTTTGC GATTCTGCTT TAGTGCCACC
AGAAGATACT ACCTGGGTGC 781 AGTGGAACTG TCATGGGACT ATATGCAAAG
TGATCTCGGT GAGCTGCCTG TGGACGCAAG 841 ATTTCCTCCT AGAGTGCCAA AATCTTTTCC ATTCAACACC
TCAGTCGTGT ACAAAAAGAC 901 TCTGTTTGTA GAATTCACGG ATCACCTTTT CAACATCGCT
AAGCCAAGGC CACCCTGGAT 961 GGGTCTGCTA GGTCCTACCA TCCAGGCTGA GGTTTA-
TGAT ACAGTGGTCA TTACACTTAA 1021 GAACATGGCT TCCCATCCTG TCAGTCTTCA TGCTG-
TTGGT GTATCCTACT GGAAAGCTTC 1081 TGAGGGAGCT GAATATGATG ATCAGACCAG TCAAAGG-
GAG AAAGAAGATG ATAAAGTCTT 1141 CCCTGGTGGA AGCCATACAT ATGTCTGGCA
GGTCCTGAAA GAGAATGGTC CAATGGCCTC 1201 TGACCCACTG TGCCTTACCT ACTCATATCT TTCTCATGTG
GACCTGGTAA AAGACTTGAA 1261 TTCAGGCCTC ATTGGAGCCC TACTAGTATG
TAGAGAAGGG AGTCTGGCCA AGGAAAAGAC 1321 ACAGACCTTG CACAAATTTA TACTACTTTT TGCTGTATTT
GATGAAGGGA AAAGTTGGCA 1381 CTCAGAAACA AAGAACTCCT TGATGCAGGA TAGGGA-
TGCT GCATCTGCTC GGGCCTGGCC 1441 TAAAATGCAC ACAGTCAATG GTTATGTAAA CAGG-
TCTCTG CCAGGTCTGA TTGGATGCCA 1501 CAGGAAATCA GTCTATTGGC ATGTGATTGG AATGGG-
CACC ACTCCTGAAG TGCACTCAAT
1561 ATTCCTCGAA GGTCACACAT TTCTTGTGAG GAAC-
CATCGC CAGGCGTCCT TGGAAATCTC 1621 GCCAATAACT TTCCTTACTG CTCAAACACT CTTGATGGAC
CTTGGACAGT TTCTACTGTT 1681 TTGTCATATC TCTTCCCACC AACATGATGG CATGGA-
AGCT TATGTCAAAG TAGACAGCTG 1741 TCCAGAGGAA CCCCAACTAC GAATGAAAAA TAA-
TGAAGAA GCGGAAGACT ATGATGATGA 1801 TCTTACTGAT TCTGAAATGG ATGTGGTCAG GTTTGATGAT
GACAACTCTC CTTCCTTTAT 1861 CCAAATTCGC TCAGTTGCCA AGAAGCATCC TAAAAC-
TTGG GTACATTACA TTGCTGCTGA 1921 AGAGGAGGAC TGGGACTATG CTCCCTTAGT CCTCG-
CCCCC GATGACAGAA GTTATAAAAG 1981 TCAATATTTG AACAATGGCC CTCAGCGGAT TGGTAG-
GAAG TACAAAAAAG TCCGATTTAT 2041 GGCATACACA GATGAAACCT TTAAGACTCG TGAAGC-
TATT CAGCATGAAT CAGGAATCTT 2101 GGGACCTTTA CTTTATGGGG AAGTTGGAGA CACACTG-
TTG ATTATATTTA AGAATCAAGC 2161 AAGCAGACCA TATAACATCT ACCCTCACGG AATCAC-
TGAT GTCCGTCCTT TGTATTCAAG 2221 GAGATTACCA AAAGGTGTAA AACATTTGAA GGATTTTCCA
ATTCTGCCAG GAGAAATATT 2281 CAAATATAAA TGGACAGTGA CTGTAGAAGA TGGG-
CCAACT AAATCAGATC CTCGGTGCCT 2341 GACCCGCTAT TACTCTAGTT TCGTTAATAT GGAGAGA-
GAT CTAGCTTCAG GACTCATTGG 2401 CCCTCTCCTC ATCTGCTACA AAGAATCTGT AGAT-
CAAAGA GGAAACCAGA TAATGTCAGA
2461 CAAGAGGAAT GTCATCCTGT TTTCTGTATT TGATGAGAAC
CGAAGCTGGT ACCTCACAGA 2521 GAATATACAA CGCTTTCTCC CCAATCCAGC TGGAGTG-
CAG CTTGAGGATC CAGAGTTCCA 2581 AGCCTCCAAC ATCATGCACA GCATCAATGG CTATGTTTTT
GATAGTTTGC AGTTGTCAGT 2641 TTGTTTGCAT GAGGTGGCAT ACTGGTACAT TCTAAGCATT
GGAGCACAGA CTGACTTCCT 2701 TTCTGTCTTC TTCTCTGGAT ATACCTTCAA ACACAAAATG
GTCTATGAAG ACACACTCAC 2761 CCTATTCCCA TTCTCAGGAG AAACTGTCTT CATG-
TCGATG GAAAACCCAG GTCTATGGAT 2821 TCTGGGGTGC CACAACTCAG ACTTTCGGAA CAGAGG-
CATG ACCGCCTTAC TGAAGGTTTC 2881 TAGTTGTGAC AAGAACACTG GTGATTATTA CGAGGA-
CAGT TATGAAGATA TTTCAGCATA 2941 CTTGCTGAGT AAAAACAATG CCATTGAACC AAGAAG-
CTTC TCCCAGAATT CAAGACACCC 3001 TAGCACTAGG CAAAAGCAAT TTAATGCCAC CACAATT-
CCA GAAAATGACA TAGAGAAGAC 3061 TGACCCTTGG TTTGCACACA GAACACCTAT GCCTAAA-
ATA CAAAATGTCT CCTCTAGTGA 3121 TTTGTTGATG CTCTTGCGAC AGAGTCCTAC TCCACA-
TGGG CTATCCTTAT CTGATCTCCA 3181 AGAAGCCAAA TATGAGACTT TTTCTGATGA TCCATCACCT
GGAGCAATAG ACAGTAATAA 3241 CAGCCTGTCT GAAATGACAC ACTTCAGGCC ACAG-
CTCCAT CACAGTGGGG ACATGGTATT 3301 TACCCCTGAG TCAGGCCTCC AATTAAGATT AAA-
TGAGAAA CTGGGGACAA CTGCAGCAAC
3361 AGAGTTGAAG AAACTTGATT TCAAAGTTTC TAGTACATCA
AATAATCTGA TTTCAACAAT 3421 TCCATCAGAC AATTTGGCAG CAGGTACTGA TAATA-
CAAGT TCCTTAGGAC CCCCAAGTAT 3481 GCCAGTTCAT TATGATAGTC AATTAGATAC CACTCTATTT
GGCAAAAAGT CATCTCCCCT 3541 TACTGAGTCT GGTGGACCTC TGAGCTTGAG
TGAAGAAAAT AATGATTCAA AGTTGTTAGA 3601 ATCAGGTTTA ATGAATAGCC AAGAAAGTTC ATGGGGA-
AAA AATGTATCGT CAACAGAGAG 3661 TGGTAGGTTA TTTAAAGGGA AAAGAGCTCA TGGAC-
CTGCT TTGTTGACTA AAGATAATGC 3721 CTTATTCAAA GTTAGCATCT CTTTGTTAAA GACAAACAAA
ACTTCCAATA ATTCAGCAAC 3781 TAATAGAAAG ACTCACATTG ATGGCCCATC ATTATTAATT
GAGAATAGTC CATCAGTCTG 3841 GCAAAATATA TTAGAAAGTG ACACTGAGTT TAAAAAAGTG
ACACCTTTGA TTCATGACAG 3901 AATGCTTATG GACAAAAATG CTACAGCTTT GAGGCTAAAT
CATATGTCAA ATAAAACTAC 3961 TTCATCAAAA AACATGGAAA TGGTCCAACA
GAAAAAAGAG GGCCCCATTC CACCAGATGC 4021 ACAAAATCCA GATATGTCGT TCTTTAAGAT GCTATTCTTG
CCAGAATCAG CAAGGTGGAT 4081 ACAAAGGACT CATGGAAAGA ACTCTCTGAA CTCTGGG-
CAA GGCCCCAGTC CAAAGCAATT 4141 AGTATCCTTA GGACCAGAAA AATCTGTGGA AGGTCA-
GAAT TTCTTGTCTG AGAAAAACAA 4201 AGTGGTAGTA GGAAAGGGTG AATTTACAAA GGACG-
TAGGA CTCAAAGAGA TGGTTTTTCC
4261 AAGCAGCAGA AACCTATTTC TTACTAACTT GGATAATTTA
CATGAAAATA ATACACACAA 4321 TCAAGAAAAA AAAATTCAGG AAGAAATAGA AAAGAAG-
GAA ACATTAATCC AAGAGAATGT 4381 AGTTTTGCCT CAGATACATA CAGTGACTGG CAC-
TAAGAAT TTCATGAAGA ACCTTTTCTT 4441 ACTGAGCACT AGGCAAAATG TAGAAGGTTC ATATGA-
CGGG GCATATGCTC CAGTACTTCA 4501 AGATTTTAGG TCATTAAATG ATTCAACAAA TAGAACAAAG
AAACACACAG CTCATTTCTC 4561 AAAAAAAGGG GAGGAAGAAA ACTTGGAAGG CTTGGGA-
AAT CAAACCAAGC AAATTGTAGA 4621 GAAATATGCA TGCACCACAA GGATATCTCC TAATA-
CAAGC CAGCAGAATT TTGTCACGCA 4681 ACGTAGTAAG AGAGCTTTGA AACAATTCAG AC-
TCCCACTA GAAGAAACAG AACTTGAAAA 4741 AAGGATAATT GTGGATGACA CCTCAACCCA GTGG-
TCCAAA AACATGAAAC ATTTGACCCC 4801 GAGCACCCTC ACACAGATAG ACTACAATGA GAAGGA-
GAAA GGGGCCATTA CTCAGTCTCC 4861 CTTATCAGAT TGCCTTACGA GGAGTCATAG CATCCCT-
CAA GCAAATAGAT CTCCATTACC 4921 CATTGCAAAG GTATCATCAT TTCCATCTAT TAGACCTATA
TATCTGACCA GGGTCCTATT 4981 CCAAGACAAC TCTTCTCATC TTCCAGCAGC ATCTTATAGA
AAGAAAGATT CTGGGGTCCA 5041 AGAAAGCAGT CATTTCTTAC AAGGAGCCAA AAAAAA-
TAAC CTTTCTTTAG CCATTCTAAC 5101 CTTGGAGATG ACTGGTGATC AAAGAGAGGT TGG-
CTCCCTG GGGACAAGTG CCACAAATTC
5161 AGTCACATAC AAGAAAGTTG AGAACACTGT
TCTCCCGAAA CCAGACTTGC CCAAAACATC 5221 TGGCAAAGTT GAATTGCTTC CAAAAGTTCA CATTTATCAG
AAGGACCTAT TCCCTACGGA 5281 AACTAGCAAT GGGTCTCCTG GCCATCTGGA TCTCGTG-
GAA GGGAGCCTTC TTCAGGGAAC 5341 AGAGGGAGCG ATTAAGTGGA ATGAAGCAAA CAGAC-
CTGGA AAAGTTCCCT TTCTGAGAGT 5401 AGCAACAGAA AGCTCTGCAA AGACTCCCTC CAAGCTA-
TTG GATCCTCTTG CTTGGGATAA 5461 CCACTATGGT ACTCAGATAC CAAAAGAAGA GTGGAAA-
TCC CAAGAGAAGT CACCAGAAAA 5521 AACAGCTTTT AAGAAAAAGG ATACCATTTT GTCCCTGAAC
GCTTGTGAAA GCAATCATGC 5581 AATAGCAGCA ATAAATGAGG GACAAAATAA GCCCGAA-
ATA GAAGTCACCT GGGCAAAGCA 5641 AGGTAGGACT GAAAGGCTGT GCTCTCAAAA CCCACCA-
GTC TTGAAACGCC ATCAACGGGA 5701 AATAACTCGT ACTACTCTTC AGTCAGATCA AGAGGAAATT
GACTATGATG ATACCATATC 5761 AGTTGAAATG AAGAAGGAAG ATTTTGACAT TTATGATGAG
GATGAAAATC AGAGCCCCCG 5821 CAGCTTTCAA AAGAAAACAC GACACTATTT TATTGCTGCA
GTGGAGAGGC TCTGGGATTA 5881 TGGGATGAGT AGCTCCCCAC ATGTTCTAAG AAACA-
GGGCT CAGAGTGGCA GTGTCCCTCA 5941 GTTCAAGAAA GTTGTTTTCC AGGAATTTAC TGATGGCTCC
TTTACTCAGC CCTTATACCG 6001 TGGAGAACTA AATGAACATT TGGGACTCCT GGGGCCA-
TAT ATAAGAGCAG AAGTTGAAGA
6061 TAATATCATG GTAACTTTCA GAAATCAGGC CTCTCGTCCC
TATTCCTTCT ATTCTAGCCT 6121 TATTTCTTAT GAGGAAGATC AGAGGCAAGG AGCA-
GAACCT AGAAAAAACT TTGTCAAGCC 6181 TAATGAAACC AAAACTTACT TTTGGAAAGT GCAACATCAT
ATGGCACCCA CTAAAGATGA 6241 GTTTGACTGC AAAGCCTGGG CTTATTTCTC TGATG-
TTGAC CTGGAAAAAG ATGTGCACTC 6301 AGGCCTGATT GGACCCCTTC TGGTCTGCCA CACTAA-
CACA CTGAACCCTG CTCATGGGAG 6361 ACAAGTGACA GTACAGGAAT TTGCTCTGTT TTTCACCATC
TTTGATGAGA CCAAAAGCTG 6421 GTACTTCACT GAAAATATGG AAAGAAACTG CAGGG-
CTCCC TGCAATATCC AGATGGAAGA 6481 TCCCACTTTT AAAGAGAATT ATCGCTTCCA TGCAATCAAT
GGCTACATAA TGGATACACT 6541 ACCTGGCTTA GTAATGGCTC AGGATCAAAG GATT-
CGATGG TATCTGCTCA GCATGGGCAG 6601 CAATGAAAAC ATCCATTCTA TTCATTTCAG TGGACATGTG
TTCACTGTAC GAAAAAAAGA 6661 GGAGTATAAA ATGGCACTGT ACAATCTCTA TCCAGG-
TGTT TTTGAGACAG TGGAAATGTT 6721 ACCATCCAAA GCTGGAATTT GGCGGGTGGA ATGCCT-
TATT GGCGAGCATC TACATGCTGG 6781 GATGAGCACA CTTTTTCTGG TGTACAGCAA TAAGTGT-
CAG ACTCCCCTGG GAATGGCTTC 6841 TGGACACATT AGAGATTTTC AGATTACAGC TTCAGGA-
CAA TATGGACAGT GGGCCCCAAA 6901 GCTGGCCAGA CTTCATTATT CCGGATCAAT CAATG-
CCTGG AGCACCAAGG AGCCCTTTTC
6961 TTGGATCAAG GTGGATCTGT TGGCACCAAT GATTATT-
CAC GGCATCAAGA CCCAGGGTGC 7021 CCGTCAGAAG TTCTCCAGCC TCTACATCTC TCAGTTTATC
ATCATGTATA GTCTTGATGG 7081 GAAGAAGTGG CAGACTTATC GAGGAAATTC CACTGGA-
ACC TTAATGGTCT TCTTTGGCAA 7141 TGTGGATTCA TCTGGGATAA AACACAATAT TTTTAACCCT
CCAATTATTG CTCGATACAT 7201 CCGTTTGCAC CCAACTCATT ATAGCATTCG CAGCAC-
TCTT CGCATGGAGT TGATGGGCTG 7261 TGATTTAAAT AGTTGCAGCA TGCCATTGGG AATGGA-
GAGT AAAGCAATAT CAGATGCACA 7321 GATTACTGCT TCATCCTACT TTACCAATAT GTTTGCCACC
TGGTCTCCTT CAAAAGCTCG 7381 ACTTCACCTC CAAGGGAGGA GTAATGCCTG GAGACCT-
CAG GTGAATAATC CAAAAGAGTG 7441 GCTGCAAGTG GACTTCCAGA AGACAATGAA AGTCACA-
GGA GTAACTACTC AGGGAGTAAA 7501 ATCTCTGCTT ACCAGCATGT ATGTGAAGGA GTTCCT-
CATC TCCAGCAGTC AAGATGGCCA 7561 TCAGTGGACT CTCTTTTTTC AGAATGGCAA AGTAAAGGTT
TTTCAGGGAA ATCAAGACTC 7621 CTTCACACCT GTGGTGAACT CTCTAGACCC ACCGT-
TACTG ACTCGCTACC TTCGAATTCA 7681 CCCCCAGAGT TGGGTGCACC AGATTGCCCT GAGGATG-
GAG GTTCTGGGCT GCGAGGCACA 7741 GGACCTCTAC
[0175] Os polipeptídeos FVIII incluem FVIII de comprimento com- pleto, FVIII de comprimento completo menos Met no Terminal-N, FVIII maduro (menos a sequência sinalizadora), FVIII maduro com um Met adicional no Terminal-N e/ou FVIII com um exclusão total ou parcial do domínio B. Em determinadas modalidades, as variantes de FVIII in- cluem exclusões de domínio B, sejam exclusões parciais ou totais.
[0176] A sequência do polipeptídeo de FVIII humano maduro nativo é apresentada como SEQ ID NO: 65. Um polipeptídeo de FVIII nativo tem a seguinte fórmula: A1-a1-A2-a2-B-a3-A3-C1-C2, onde A1, A2 e A3 são os "domínios A" estruturalmente relacionados, B é o "domínio B", C1 e C2 são os "domínios C" estruturalmente relacionados, e a1, a2 e a3 são regiões espaçadoras ácidas. Com referência à posição da se- quência de aminoácidos primária na SEQ ID NO: 65, o domínio A1 do FVIII humano se estende de Ala1 a cerca de Arg336, a região espaça- dora a1 se estende de cerca de Met337 a cerca de Val374, o domínio A2 se estende de cerca de Ala375 a cerca de Tyr719, a região espaça- dora a2 se estende de cerca de Glu720 a cerca de Arg740, o domínio B se estende de cerca de Ser741 a cerca de Arg 1648, a região espaça- dora a3 se estende de cerca de Glu1649 a cerca de Arg1689, o domínio A3 se estende de cerca de Ser1690 a cerca de Leu2025, o C1 o domínio se estende de cerca de Gly2026 a cerca de Asn2072, e o domínio C2 se estende de cerca de Ser2073 a Tyr2332. Além dos sítios de clivagem proteolítica específicos, a designação das localizações dos limites entre os domínios e regiões do FVIII pode variar em diferentes referências da literatura. Os limites observados aqui são, portanto, designados como aproximados pelo uso do termo "cerca de".
[0177] O gene de FVIII humano foi isolado e expresso em células de mamíferos (Toole, J.J. et al., Nature 312: 342-347 (1984); Gitschier, J., et al., Nature 312: 326-330 (1984); Wood, W.I. et al., Nature 312: 330- 337 (1984); Vehar, G.A. et al., Nature 312: 337-342 (1984); documentos WO 87/04187; WO 88/08035; WO 88/03558; e Patente Norte-Ameri- cana N° 4.757.006). A sequência de aminoácidos do FVIII foi deduzida a partir do cDNA, conforme mostrado na Patente Norte-Americana N°
4.965.199. Além disso, FVIII com domínio B parcial ou totalmente elimi- nado é mostrado nas Patentes Norte-Americanas Nos 4.994.371 e
4.868.112. Em algumas modalidades, o domínio B do FVIII humano é substituído pelo domínio B do Fator V humano, conforme mostrado na Patente Norte-Americana N° 5.004.803. A sequência de cDNA e a se- quência de aminoácidos que codifica o Fator VIII humano são mostra- das em SEQ ID NOs: 1 e 2, respectivamente, da Publicação do Pedido Norte-Americano N° 2005/0100990.
[0178] A sequência do FVIII suíno é publicada em Toole, J. J., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 5939-5942 (1986). Além disso, a sequên- cia de cDNA de suíno completa obtida da amplificação por PCR de se- quências de FVIII de uma biblioteca de cDNA de baço de porco foi rela- tada em Healey, J. F., et al., Blood 88: 4209-4214 (1996). O FVIII hu- mano/suíno híbrido com substituições de todos os domínios, todas as subunidades e sequências de aminoácidos específicas foram descritos na Patente Norte-Americana N° 5.364.771 por Lollar e Runge, e no do- cumento WO 93/20093. Mais recentemente, as sequências de nucleotí- deos e aminoácidos que correspondem aos domínios A1 e A2 de FVIII suíno e um FVIII quimérico com domínios A1 e/ou A2 suínos substituí- dos pelos domínios humanos correspondentes foram relatados no do- cumento WO 94/11503. Patente Norte-Americana N° 5.859.204. Lollar, J. S., também descreve o cDNA suíno e sequências de aminoácidos deduzidas. A Patente Norte-Americana N° 6.458.563 descreve um FVIII suíno com o domínio B excluído.
[0179] A Patente Norte-Americana N° 5.859.204 para Lollar, J. S. relata mutantes funcionais de FVIII que têm antigenicidade reduzida e imunorreatividade reduzida. A Patente Norte-Americana N° 6.376.463 para Lollar, J. S. também relata mutantes de FVIII com imunorreativi- dade reduzida. A Publicação de Pedido Norte-Americano N° 2005/0100990 para Saenko et al. relata mutações funcionais no domínio
A2 de FVIII.
[0180] Em algumas modalidades, o polipeptídeo de FVIII (ou porção FVIII de um polipeptídeo quimérico) pode ser pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos de FVIII dos aminoácidos 1 a 1438 de SEQ ID NO: 67 ou aminoácidos 1 a 2332 de SEQ ID NO: 65 (sem uma se- quência sinalizadora) ou uma sequência de aminoácidos de FVIII de aminoácidos 1 a 19 de SEQ ID NO: 64 e 1 a 1438 de SEQ ID NO: 67 ou aminoácidos 1 a 19 de SEQ ID NO: 64 e aminoácidos 1 a 2332 de SEQ ID NO: 65 (com uma sequência sinalizadora), em que o FVIII tem uma atividade de coagulação, por exemplo, ativa o Fator IX como um cofator para converter o Fator X em Fator X ativado. O polipeptídeo de FVIII (ou porção FVIII de um polipeptídeo quimérico) pode ser idêntico a uma se- quência de aminoácidos de FVIII dos aminoácidos 1 a 1438 de SEQ ID NO: 67 ou aminoácidos 1 a 2332 de SEQ ID NO: 65 (sem uma sequên- cia sinalizadora). O polipeptídeo de FVIII pode ainda compreender uma sequência sinalizadora.
[0181] O "domínio B" de FVIII, conforme usado aqui, é o mesmo que o domínio B conhecido na técnica que é definido pela identidade de se- quência de aminoácidos interna e sítios de clivagem proteolítica, por exemplo, resíduos Ser741-Arg1648 do FVIII humano de comprimento completo. Os outros domínios do FVIII humano são definidos pelos se- guintes resíduos de aminoácidos: A1, resíduos Ala1-Arg372; A2, resí- duos Ser373-Arg740; A3, resíduos Ser1690-Asn2019; C1, resíduos Lys2020-Asn2172; C2, resíduos Ser2173-Tyr2332. A sequência A3-C1- C2 inclui os resíduos Ser1690-Tyr2332. A sequência restante, resíduos Glu1649-Arg1689, geralmente é denominada como a região ácida a3. As localizações dos limites para todos os domínios, incluindo os domí- nios B, para o FVIII suíno, de camundongo e canino também são co- nhecidas na técnica. Em algumas modalidades, o domínio B de FVIII é excluído ("Fator VIII com domínio B excluído" ou "BDD FVIII"). Um exemplo de um BDD FVIII é REFACTO (BDD FVIII recombinante), o qual tem a mesma sequência que a porção do Fator VIII da sequência na Tabela 4. (A cadeia pesada de FVIII de BDD está duplamente subli- nhada; o domínio B está em itálico; e a cadeia leve de BDD FVIII está em texto regular). Em algumas modalidades, o domínio B do FVIII tem uma exclusão do domínio B completo, exceto 5 aminoácidos, conforme mostrado na Tabela 5 (SEQ ID NO: 68) (o domínio B está em itálico). Tabela 4. Sequência de aminoácidos do Fator VIII com domínio B ex- cluído (exclusão do domínio B, exceto 14 resíduos de aminoácidos) (SEQ ID NO: 67) ATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKS- FPFNTSVVYK-
KTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASH PVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTY- VWQVLKENGPMASDPL- CLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFA VFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSL- PGLIGCHRKSVYWHVIGMG- TTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLF CHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAE- DYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFI- QIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNN GPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILG- PLLYGEVGDTLLIIFKNQAS- RPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTV EDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVD- QRGNQIMSDKRN- VILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSING YVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHK- MVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALL KVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQN- PPVLKRHQREITRTTLQSDQE- EIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLW DYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYR- GELNEHLGLLGPYIRAEVED- NIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTY FWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIG- PLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQE- FALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAI NGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSI- HFSGHVFTVRKKEEYKMALYN- LYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQT PLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWST- KEPFSWIKVDLLAPMII- HGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFF GNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNS- CSMPLGMESKAIS- DAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWL QVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQW- TLFFQNGKVKVFQGNQDS-
FTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY Tabela 5. Sequência de aminoácidos do Fator VIII com domínio B ex- cluído (exclusão do domínio B, exceto 5 resíduos de aminoácidos) (SEQ ID NO: 68) ATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKS- FPFNTSVVYK-
KTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASH PVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTY- VWQVLKENGPMASDPL- CLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFA VFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSL- PGLIGCHRKSVYWHVIGMG- TTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLF CHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAE- DYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFI- QIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNN GPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILG- PLLYGEVGDTLLIIFKNQAS- RPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTV EDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVD- QRGNQIMSDKRN- VILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSING YVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHK- MVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALL KVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNEITRT- TLQSDQE- EIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLW DYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYR- GELNEHLGLLGPYIRAEVED- NIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTY FWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIG- PLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQE- FALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAI NGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSI- HFSGHVFTVRKKEEYKMALYN- LYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQT PLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWST- KEPFSWIKVDLLAPMII- HGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFF GNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNS- CSMPLGMESKAIS- DAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWL QVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQW- TLFFQNGKVKVFQGNQDS- FTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY
[0182] Um "FVIII com domínio B excluído" pode ter as exclusões totais ou parciais descritas nas Patentes Norte-Americanas Nos
6.316.226, 6.346.513, 7.041.635, 5.789.203, 6.060.447, 5.595.886,
6.228.620, 5.972.885, 6.048.720, 5.543.502, 5.610.278, 5.171.844,
5.122.950, 4.868.112 e 6.458.563, Publicações Nos US 2017/0073393 A1 e US 2012/308641 A1, e Publicações Internacionais Nos WO 2011/041770 A1, WO 2015/106052 A1 (PCT/US2015/010738) e WO 2016/025764. Em algumas modalidades, uma sequência de FVIII com domínio B excluído usada nos métodos da presente invenção compre- ende qualquer uma das exclusões descritas na col. 4, linha 4 à col. 5, linha 28 e Exemplos 1-5 da Patente Norte-Americana N° 6.316.226 (também no documento US 6.346.513). Em outras modalidades, um Fa- tor VIII com domínio B excluído é o Fator VIII com domínio B excluído S743/Q1638 (SQ BDD FVIII) (por exemplo, Fator VIII que tem uma ex- clusão do aminoácido 744 ao aminoácido 1637, por exemplo, Fator VIII que tem aminoácidos 1-743 e aminoácidos 1638-2332 de FVIII maduro). Em algumas modalidades, um FVIII com domínio B excluído usado nos métodos da presente invenção tem uma exclusão descrita na col. 2, li- nhas 26-51 e exemplos 5-8 da Patente Norte-Americana N° 5.789.203 (também documentos US 6.060.447, US 5.595.886 e US 6.228.620).
Em algumas modalidades, um Fator VIII com domínio B excluído tem uma exclusão descrita na col. 1, linhas 25 a col. 2, linha 40 da Patente Norte-Americana N° 5.972.885; col. 6, linhas 1-22 e Exemplo 1 da Pa- tente Norte-Americana N° 6.048.720; col. 2, linhas 17-46 da Patente Norte-Americana N° 5.543.502; col. 4, linha 22 à col. 5, linha 36 da Pa- tente Norte-Americana N° 5.171.844; col. 2, linhas 55-68, Figura 2 e Exemplo 1 da Patente Norte-Americana N° 5.112.950; col. 2, linha 2 à col. 19, linha 21 e tabela 2 da Patente Norte-Americana N° 4.868.112; col. 2, linha 1 à col. 3, linha 19, col. 3, linha 40 à col. 4, linha 67, col. 7, linha 43 à col. 8, linha 26 e col. 11, linha 5 à col. 13, linha 39 da Patente Norte-Americana N° 7.041.635; ou col. 4, linhas 25-53, da Patente Norte-Americana N° 6.458.563. Em algumas modalidades, um polipep- tídeo de FVIII com domínio B excluído tem uma exclusão da maior parte do domínio B, mas ainda contém sequências amino-terminais do domí- nio B que são essenciais para o processamento proteolítico in vivo do produto da tradução primário em duas cadeias polipeptídicas, conforme descrito no documento WO 91/09122. Em algumas modalidades, um polipeptídeo de FVIII com domínio B excluído é construído com uma exclusão dos aminoácidos 747-1638, isto é, virtualmente uma exclusão completa do domínio B.
Hoeben R.C., et al.
J.
Biol.
Chem. 265 (13): 7318-7323 (1990). Um polipeptídeo de Fator VIII com domínio B exclu- ído também pode conter uma exclusão de aminoácidos 771-1666 ou aminoácidos 868-1562 de FVIII.
Meulien P., et al.
Protein Eng. 2 (4): 301-6 (1988). Exclusões de domínio B adicionais que fazem parte da invenção incluem: exclusão de aminoácidos 982 a 1562 ou 760 a 1639 (Toole et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA (1986) 83, 5939-5942)), 797 até 1562 (Eaton, et al.
Biochemistry (1986) 25: 8343-8347)), 741 até 1646 (Kaufman (pedido PCT publicado N° WO 87/04187)), 747-1560 (Sarver, et al., DNA (1987) 6: 553-564)), 741 a 1648 (Pasek (pedido PCT N° 88/00831)) ou 816 a 1598 ou 741 a 1648 (Lagner (Behring Inst.
Mitt.
(1988) N° 82: 16- 25, EP 295597)). Em modalidades particulares, o po- lipeptídeo de FVIII com domínio B excluído compreende uma exclusão dos resíduos de aminoácidos 746 a 1648 do FVIII maduro (corresponde a uma exclusão de 765 a 1665 do FVIII de comprimento completo). Em outras modalidades, o polipeptídeo de FVIII com domínio B excluído compreende uma exclusão dos resíduos de aminoácidos 745 a 1648 do FVIII maduro (corresponde uma exclusão de 764 a 1665 do FVIII de comprimento completo).
[0183] Em outras modalidades, o BDD FVIII inclui um polipeptídeo de FVIII que contém fragmentos do domínio B que retêm um ou mais sítios de glicosilação N-ligados, por exemplo, resíduos 757, 784, 828, 900, 963 ou, opcionalmente, 943, que correspondem à sequência de aminoácidos da sequência de FVIII de comprimento completo. Exem- plos de fragmentos de domínio B incluem 226 aminoácidos ou 163 ami- noácidos do domínio B, conforme descrito em Miao, H.Z. et al., Blood 103 (a): 3412-3419 (2004), Kasuda, A. et al., J. Thromb. Haemost. 6: 1352-1359 (2008) e Pipe, S.W. et al., J. Thromb. Haemost. 9: 2235-2242 (2011) (isto é, os primeiros 226 aminoácidos ou 163 aminoácidos do domínio B são retidos). Em ainda outras modalidades, o BDD FVIII com- preende ainda uma mutação pontual no resíduo 309 (de Phe para Ser) para melhorar a expressão do polipeptídeo BDD FVIII. Consulte Miao, H.Z. et al., Blood 103 (a): 3412-3419 (2004). Em ainda outras modalida- des, o BDD FVIII inclui um polipeptídeo de FVIII que contém uma porção do domínio B, mas não contém um ou mais sítios de clivagem de furina (por exemplo, Arg1313 e Arg 1648). Consulte Pipe, S.W. et al., J. Thromb. Haemost. 9: 2235-2242 (2011). Em algumas modalidades, o BDD FVIII compreende FVIII com uma única cadeia que contém uma exclusão nos aminoácidos 765 a 1652 que corresponde ao FVIII de comprimento completo maduro (também conhecido como rFVIII-Single- Chain e AFSTYLA). Consulte Patente Norte-Americana N° 7.041.635.
Cada uma das exclusões anteriores pode ser feita em qualquer sequên- cia de FVIII.
[0184] Em algumas modalidades, o FVIII tem um domínio B parcial. Em algumas modalidades, o polipeptídeo de FVIII com um domínio B parcial é FVIII198. FVIII198 é um domínio B parcial que contém a molé- cula FVIIIFc-226N6 com uma única cadeia. O número 226 representa o 226 aminoácido N-terminal do domínio B de FVIII e N6 representa seis sítios de N-glicosilação no domínio B.
[0185] Em determinadas modalidades, o polipeptídeo de FVIII é se- lecionado a partir de um polipeptídeo de FVIII descrito nas Publicações Nos WO 2017/117630 A1, WO 2018/087271 A1, US 9.878.017 B2, US
8.575.104 B2, US 8.754.194 B2, US 7.939.632 B2, US 2018/0161402 A1, US 9.956.269 B2, US 9.107.902 B2, US 2017/209546 A1.
[0186] Em algumas modalidades, o FVIII é clivado logo após a argi- nina no aminoácido 1648 (no Fator VIII completo ou SEQ ID NO: 65), aminoácido 754 (no Fator VIII ou SEQ ID com domínio B excluído S743/Q1638 NO: 67) ou o resíduo de arginina que corresponde (em ou- tras variantes), deste modo, resultando em uma cadeia pesada e uma cadeia leve. Em outras modalidades, um polipeptídeo de FVIII compre- ende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, as quais estão ligadas ou associadas através de uma ligação não covalente mediada por íons de metal.
[0187] Em outras modalidades, o FVIII é um FVIII com uma única cadeia que não foi clivado logo após a arginina no aminoácido 1648 (no FVIII de comprimento completo ou SEQ ID NO: 65), aminoácido 754 (no S743/Q1638 B- FVIII com domínio B excluído ou SEQ ID NO: 67) ou o resíduo de arginina que corresponde (em outras variantes). Um FVIII com uma única cadeia pode compreender uma ou mais substituições de aminoácidos. Em algumas modalidades, a substituição de aminoá- cido está em um resíduo que corresponde ao resíduo 1648, resíduo
1645 ou ambos do polipeptídeo de Fator VIII maduro de comprimento completo (SEQ ID NO: 65) ou resíduo 754, resíduo 751 ou ambos do Fator SQ BDD VIII (SEQ ID NO: 67). A substituição de aminoácidos pode ser qualquer aminoácido diferente de arginina, por exemplo, iso- leucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofano, va- lina, alanina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glu- tamina, glicina, prolina, selenocisteína, serina, tirosina, histidina, orni- tina, pirrolisina ou taurina.
[0188] O FVIII pode ainda ser clivado pela trombina e, então, ativado como FVIIIa, servindo como um cofator para o Fator IX ativado (FIXa). E o FIX ativado, juntamente com o FVIII ativado, formam um complexo Xase e converte o Fator X em Fator X ativado (FXa). Para ativação, o FVIII é clivado pela trombina após três resíduos de arginina, nos amino- ácidos 372, 740 e 1689 (corresponde aos aminoácidos 372, 740 e 795 na sequência de FVIII com domínio B excluído), a clivagem gerando FVIIIa que tem Cadeias A1 de 50 kDa, A2 de 43 kDa e A3-C1-C2 de 73 kDa. Em algumas modalidades, o polipeptídeo de FVIII útil para a pre- sente invenção é FVIII não ativo. Em outras modalidades, o polipeptídeo de FVIII é um FVIII ativado.
[0189] A proteína com o polipeptídeo de FVIII ligado ou associado à proteína VWF pode compreender uma sequência de pelo menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 65 ou 67, em que a sequência tem a atividade de coagulação do FVIII, por exemplo, ao ativar o Fator IX como um co- fator para converter o Fator X em Fator X ativado (FXa).
[0190] Polipeptídeos e proteínas "híbridos" ou "quiméricos", con- forme usado aqui, incluem uma combinação de um primeiro polipeptí- deo e um segundo polipeptídeo. Em algumas modalidades, o polipeptí- deo híbrido ou quimérico compreende uma única cadeia polipeptídica,
por exemplo, um polipeptídeo quimérico que compreende um polipeptí- deo de FVIII e um XTEN. Consulte, por exemplo, documento US 2015/0158929 A1, o qual é incorporado aqui a título de referência na íntegra. Em algumas modalidades, o polipeptídeo híbrido ou quimérico compreende uma combinação de uma primeira cadeia polipeptídica, por exemplo, um fragmento de VWF, fundido a uma sequência XTEN e uma primeira região constante de Ig ou uma porção da mesma, com uma segunda cadeia polipeptídica, por exemplo, um polipeptídeo de FVIII fundido a uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma, deste modo, formando um heterodímero. Consulte, por exem- plo, documentos US 2015/0266943 A1, US 2016/0251408 A1, US 2017/0073393 A1, cada um dos quais é incorporado aqui a título de re- ferência na íntegra. Em algumas modalidades, o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo em um híbrido estão associados entre sio por meio de interações proteína-proteína, tais como carga-carga ou intera- ções hidrofóbicas. Em outras modalidades, um primeiro polipeptídeo compreende uma proteína de fusão VWF-XTEN-Fc e um segundo poli- peptídeo compreende a proteína de fusão FVIII-Fc, tornando o híbrido um heterodímero, em que a sequência XTEN contém menos de 288 aminoácidos. Em outras modalidades, o primeiro polipeptídeo compre- ende uma proteína de fusão VWF-XTEN-Fc e o segundo polipeptídeo compreende a proteína de fusão FVIII(X)-Fc, tornando o híbrido um he- terodímero, em que a sequência XTEN contém menos de 288 aminoá- cidos. O primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo podem ser as- sociados através de uma ligação covalente, por exemplo, uma ligação de dissulfeto, entre a primeira região Fc e a segunda região Fc. O pri- meiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo podem ainda ser associa- dos entre si pela ligação entre o fragmento de VWF e o polipeptídeo de FVIII.
[0191] Em determinadas modalidades, o polipeptídeo quimérico descrito aqui compreende uma proteína FVIII que compreende um pri- meiro fragmento polipeptídico de FVIII, uma sequência XTEN, um se- gundo fragmento polipeptídico de FVIII e uma região Fc. Em algumas modalidades, a proteína FVIII compreende, conforme ordenado a partir do Terminal-N para o Terminal-C, um primeiro fragmento polipeptídico de FVIII, fundido a uma sequência XTEN, fundido a um segundo frag- mento polipeptídico de FVIII, fundido a uma região Fc. Em uma modali- dade específica, a proteína FVIII compreende um primeiro fragmento polipeptídico de FVIII que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215, uma sequência XTEN que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8, um segundo polipeptídeo de FVIII que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 216 e/ou uma primeira região Fc que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217.
[0192] Em uma modalidade específica, o polipeptídeo quimérico é rFVIIIFc-VWF-XTEN e compreende uma proteína FVIII que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 201. Em outra moda- lidade específica, rFVIIIFc-VWF-XTEN compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 207.
[0193] Em algumas modalidades, a proteína FVIII compreende ainda uma sequência de peptídeo sinalizador de FVIII. Em uma modali- dade específica, a proteína FVIII compreende um peptídeo sinalizador de FVIII que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64, um primeiro fragmento polipeptídico de FVIII que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215, uma sequência XTEN que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8, um se- gundo polipeptídeo de FVIII que compreende a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 216 e/ou uma primeira região Fc que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217.
[0194] Em uma modalidade específica, o polipeptídeo quimérico é rFVIIIFc-VWF-XTEN e compreende uma proteína FVIII que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 203. Em outra moda- lidade específica, rFVIIIFc-VWF-XTEN compreende uma proteína FVIII codificada pela sequência de ácidos nucleicos de SEQ ID NO: 204 ou um fragmento da mesma. Sequências polipeptídicas exemplificativas adicionais relacionadas às proteínas FVIII dos polipeptídeos quiméricos descritos aqui são fornecidas nas Tabelas 18-19.
[0195] Muitas variantes funcionais de FVIII são conhecidas, con- forme é discutido acima e abaixo. Além disso, centenas de mutações não funcionais no FVIII foram identificadas em pacientes com hemofilia, e foi determinado que o efeito de tais mutações na função do FVIII se deve mais ao sítio onde estão dentro da estrutura tridimensional do FVIII do que à natureza da substituição (Cutler et al., Hum. Mutat. 19: 274-8 (2002)), incorporado aqui a título de referência na íntegra. Além disso, comparações entre FVIII de humanos e outras espécies identificaram resíduos conservados que provavelmente são necessários para a fun- ção (Cameron et al., Thromb. Haemost. 79: 317-22 (1998); documento US 6.251.632), incorporado aqui a título de referência na íntegra. III.B. Fragmentos de Fator de Von Willebrand (VWF)
[0196] O VWF (também conhecido como F8VWF) é uma grande gli- coproteína multimérica presente no plasma sanguíneo e produzida constitutivamente no endotélio (nos corpos de Weibel-Palade), megaca- riócitos (α-grânulos de plaquetas) e tecido conjuntivo subendoteliano. O monômero básico do VWF é uma proteína de 2813 aminoácidos. Cada monômero contém um número de domínios específicos com uma fun- ção específica, o domínio D'/D3 (que se liga ao Fator VIII), o domínio A1 (que se liga ao receptor GPIb plaquetário, heparina e/ou possivelmente colágeno), o domínio A3 (que se liga ao colágeno), o domínio C1 (no qual o domínio RGD se liga à integrina plaquetária αIIbβ3 quando a mesma é ativada) e o domínio de "nó de cisteína" na extremidade C-
terminal da proteína (que o VWF compartilha com fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), fator de crescimento transformador-β (TGFβ) e β-gonadotrofina coriônica humana (βHCG)).
[0197] O termo "um fragmento de VWF", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, fragmentos de VWF funcionais que compreen- dem um domínio D' e um domínio D3, os quais são capazes de inibir a ligação de VWF endógeno ao FVIII. Em algumas modalidades, o frag- mento de VWF se liga à proteína FVIII. Em outras modalidades, o frag- mento de VWF bloqueia o sítio de ligação de VWF na proteína FVIII, deste modo, inibindo a interação da proteína FVIII com VWF endógeno. Em outras modalidades, o fragmento de VWF bloqueia a ligação de FVIII ao VWF endógeno, deste modo, evitando a eliminação da proteína FVIII através de uma via de eliminação de VWF. Os fragmentos de VWF incluem derivados, variantes, mutantes ou análogos que retêm tais ati- vidades de VWF.
[0198] A sequência de aminoácidos do monômero 2813 para VWF humano é relatada como Número de Acesso NP000543.2 no Genbank. A sequência de nucleotídeos que codifica o VWF humano é relatada como Número de Acesso NM000552.3 no Genbank. Uma sequência de nucleotídeos de VWF humano é designada como SEQ ID NO: 20. SEQ ID NO: 21 é a sequência de aminoácidos de VWF de comprimento com- pleto. Cada domínio do VWF está listado na Tabela 6. Tabela 6. Sequências de VWF (humano) Domínios de VWF Sequência de aminoácidos Peptídeo sinalizador de VWF SEQ ID NO: 208 1 MIPARFAGVL LALALILPGT LC 22 (Aminoácidos 1 a 22 de SEQ ID NO: 21) Domínio D1D2 de VWF 23 AEGTRGRS STARCSLFGS DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE FFDI- SEQ ID NO: 209 HLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI (Aminoácidos 23 a 763 de SEQ ID NO: DGSGNFQVLL 21)
151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS WAL-
SSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL
VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGWTDHSA
CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLLDEG
LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN QGDDFLTPSG LA-
EPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACAVLTSP
TFCADARAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACAGRGVRV
AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEGCFCP
PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM SGV-
PGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKR 763 Domínio D' de VWF 764 SLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF HQGKEYAPGE SEQ ID NO: 210 TVKIGCNTCV (Aminoácidos 764 a 866 de SEQ ID 851 CRDRKWNCTD HVCDAT 866 NO: 21) 867 CSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE Domínio D3 de VWF KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD SEQ ID NO: 211 SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS CE- (Aminoácidos 867 a 1240 de SEQ ID SIGDCACF NO: 21) 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY
ECEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC
VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP 1240 1241 GGLVVPPTDA 1251 PVSPTTLYVE DISEPPLHDF YCSRLLDLVF LLDGSSRLSE AEFEVL- Domínio A1 de VWF KAFV 1301 VDMMERLRIS QKWVRVAVVE YHDGSHAYIG LKDRKRPSEL RRI- SEQ ID NO: 212 ASQVKYA 1351 GSQVASTSEV LKYTLFQIFS KIDRPEASRI ALLLMASQEP QRMS- (Aminoácidos 1241 a 1479 de SEQ ID RNFVRY NO: 21) 1401 VQGLKKKKVI VIPVGIGPHA NLKQIRLIEK QAPENKAFVL SSVDE-
LEQQR 1451 DEIVSYLCDL APEAPPPTLP PDMAQVTVG 1479 Domínio A2 de VWF ao 1480 PGLLGVSTLGP KRNSMVLDVA
Terminal-C 1501 FVLEGSDKIG EADFNRSKEF MEEVIQRMDV GQDSIHVTVL
QYSYMVTVEY SEQ ID NO: 213 1551 PFSEAQSKGD ILQRVREIRY QGGNRTNTGL ALRYLSDHSF
LVSQGDREQA (Aminoácidos 1480 a 2813 de SEQ ID 1601 PNLVYMVTGN PASDEIKRLP GDIQVVPIGV GPNANVQELE RIGW- NO: 21) PNAPIL 1651 IQDFETLPRE APDLVLQRCC SGEGLQIPTL SPAPDCSQPL
DVILLLDGSS 1701 SFPASYFDEM KSFAKAFISK ANIGPRLTQV SVLQYGSITT IDV-
PWNVVPE 1751 KAHLLSLVDV MQREGGPSQI GDALGFAVRY LTSEMHGARP
GASKAVVILV 1801 TDVSVDSVDA AADAARSNRV TVFPIGIGDR YDAAQLRILA GPAG-
DSNVVK 1851 LQRIEDLPTM VTLGNSFLHK LCSGFVRICM DEDGNEKRPG DVW-
TLPDQCH 1901 TVTCQPDGQT LLKSHRVNCD RGLRPSCPNS QSPVKVEETC GCR-
WTCPCVC 1951 TGSSTRHIVT FDGQNFKLTG SCSYVLFQNK EQDLEVILHN GA-
CSPGARQG 2001 CMKSIEVKHS ALSVEXHSDM EVTVNGRLVS VPYVGGNMEV
NVYGAIMHEV 2051 RFNHLGHIFT FTPQNNEFQL QLSPKTFASK TYGLCGICDE NGAN-
DFMLRD 2101 GTVTTDWKTL VQEWTVQRPG QTCQPILEEQ CLVPDSSHCQ
VLLLPLFAEC 2151 HKVLAPATFY AICQQDSCHQ EQVCEVIASY AHLCRTNGVC
VDWRTPDFCA 2201 MSCPPSLVYN HCEHGCPRHC DGNVSSCGDH PSEGCFCPPD
KVMLEGSCVP 2251 EEACTQCIGE DGVQHQFLEA WVPDHQPCQI CTCLSGRKVN CTT-
QPCPTAK 2301 APTCGLCEVA RLRQNADQCC PEYECVCDPV SCDLPPVPHC ER-
GLQPTLTN 2351 PGECRPNFTC ACRKEECKRV SPPSCPPHRL PTLRKTQCCD EYE-
CACNCVN 2401 STVSCPLGYL ASTATNDCGC TTTTCLPDKV CVHRSTIYPV
GQFWEEGCDV 2451 CTCTDMEDAV MGLRVAQCSQ KPCEDSCRSG FTYVLHEGEC
CGRCLPSACE 2501 VVTGSPRGDS QSSWKSVGSQ WASPENPCLI NECVRVKEEV FI-
QQRNVSCP 2551 QLEVPVCPSG FQLSCKTSAC CPSCRCERME ACMLNGTVIG
PGKTVMIDVC 2601 TTCRCMVQVG VISGFKLECR KTTCNPCPLG YKEENNTGEC
CGRCLPTACT 2651 IQLRGGQIMT LKRDETLQDG CDTHFCKVNE RGEYFWEKRV
TGCPPFDEHK 2701 CLAEGGKIMK IPGTCCDTCE EPECNDITAR LQYVKVGSCK SE-
VEVDIHYC 2751 QGKCASKAMY SIDINDVQDQ CSCCSPTRTE PMQVALHCTN
GSVVYHEVLN 2801 AMECKCSPRK CSK 2813
[0199] A proteína VWF, conforme usado aqui, pode ser um frag- mento de VWF que compreende um domínio D' e um domínio D3 de
VWF, em que o fragmento de VWF se liga ao Fator VIII (FVIII) e inibe a ligação de VWF endógeno (VWF de comprimento completo) ao FVIII. O fragmento de VWF que compreende o domínio D' e o domínio D3 pode ainda compreender um domínio VWF selecionado a partir do grupo que consiste em um domínio A1, um domínio A2, um domínio A3, um domí- nio D1, um domínio D2, um domínio D4, um domínio B1 domínio, um domínio B2, um domínio B3, um domínio C1, um domínio C2, um domí- nio CK, um ou mais fragmentos dos mesmos e quaisquer combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, um fragmento de VWF com- preende, consiste essencialmente em ou consiste em: (1) os domínios D' e D3 de VWF ou fragmentos dos mesmos; (2) os domínios D1, D' e D3 do VWF ou fragmentos dos mesmos; (3) os domínios D2, D' e D3 do VWF ou fragmentos dos mesmos; (4) os domínios D1, D2, D' e D3 de VWF ou fragmentos dos mesmos; ou (5) os domínios D1, D2, D', D3 e A1 de VWF ou fragmentos dos mesmos. O fragmento de VWF descrito aqui não contém um sítio de ligação a um receptor de eliminação de VWF. Em outras modalidades, o fragmento de VWF descrito aqui não são os aminoácidos 764 a 1274 de SEQ ID NO: 21. O fragmento de VWF da presente invenção pode compreender quaisquer outras se- quências ligadas ou fundidas ao fragmento de VWF. Por exemplo, um fragmento de VWF descrito aqui pode compreender ainda um peptídeo sinalizador.
[0200] Em algumas modalidades, o fragmento de VWF que compre- ende um domínio D' e um domínio D3 se liga a ou está associado a uma proteína FVIII. Consulte, por exemplo, documentos US 2015/0023959 A1, US 2015/0266943 A1, US 2016/0251408 A1, US 2017/0073393 A1, US 2018/185455 A1, US 2018/0051067 A1, US 2017/0152300 A1, US
9.878.017 B2, US 9.458.223 B2, US 8.575.104 B2, WO 2017/117630 A1, US 2018/0161402 A1, WO 2017/117631 A1, WO 2018/087271 A1, US 9.107.902 B2, WO 2017/222337 A1, WO 2015/185758 A1, cada um dos que é incorporado a título de referência aqui na íntegra. Ao se ligar ou se associar a uma proteína FVIII, um fragmento de VWF da invenção protege o FVIII da clivagem pela protease e ativação do FVIII, estabiliza a cadeia pesada e a cadeia leve do FVIII e evita a eliminação do FVIII pelos receptores eliminadores. Em outras modalidades, o fragmento de VWF se liga a ou se associa a uma proteína FVIII e bloqueia ou impede a ligação da proteína FVIII ao fosfolipídio e à proteína C ativada. Ao prevenir ou inibir a ligação da proteína FVIII com o VWF endógeno de comprimento completo, o VWF fragmento da invenção reduz a depura- ção de FVIII por receptores de depuração de VWF e, assim, estende a meia-vida do polipeptídeo quimérico. A extensão da meia-vida de um polipeptídeo quimérico é, portanto, em virtude da ligação ou associação com o fragmento de VWF sem um sítio de ligação do receptor de depu- ração de VWF à proteína FVIII e protege a proteína FVIII pelo fragmento de VWF de VWF endógeno que contém o sítio de ligação do receptor de depuração do VWF. A proteína FVIII ligada ou protegida pelo frag- mento de VWF também pode permitir a reciclagem de uma proteína FVIII. Ao eliminar os sítios de ligação do receptor da via de eliminação de VWF contidos na molécula de VWF de comprimento completo, os heterodímeros de FVIII/VWF da invenção são protegidos da via de eli- minação de VWF, estendendo ainda mais a meia-vida do FVIII.
[0201] Em algumas modalidades, uma proteína VWF útil para a pre- sente invenção compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF, em que o domínio D' é pelo menos 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntico aos aminoácidos 764 a 866 de SEQ ID NO: 21, em que a proteína VWF impede ou inibe a ligação do VWF endógeno ao FVIII. Em outras modalidades, uma proteína VWF compreende o domínio D' e o domínio D3 de VWF, em que o domínio D3 é pelo menos 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntico aos aminoácidos 867 a 1240 de SEQ ID NO: 21,
em que a proteína VWF previne ou inibe a ligação do VWF endógeno ao FVIII. Em algumas modalidades, uma proteína VWF descrita aqui compreende, consiste essencialmente em ou consiste no domínio D' e domínio D3 de VWF, que são pelo menos 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntico aos aminoácidos 764 a 1240 de SEQ ID NO: 21, em que a proteína VWF previne ou inibe a ligação do VWF endógeno ao FVIII. Em outras modalidades, uma pro- teína VWF compreende, consiste essencialmente em ou consiste nos domínios D1, D2, D' e D3 pelo menos 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntico aos aminoácidos 23 a 1240 de SEQ ID NO: 21, em que a proteína VWF impede ou inibe a ligação do VWF endógeno ao FVIII. Em ainda outras modalidades, a proteína VWF compreende ainda um peptídeo sinalizador operativa- mente ligado ao mesmo.
[0202] Em algumas modalidades, uma proteína VWF útil para a in- venção consiste essencialmente em ou consiste em (1) o domínio D'D3, o domínio D1D'D3, o domínio D2D'D3 ou o domínio D1D2D'D3 e (2) um sequência de VWF adicional de até cerca de 10 aminoácidos (por exem- plo, quaisquer sequências de aminoácidos 764 a 1240 de SEQ ID NO: 21 a aminoácidos 764 a 1250 de SEQ ID NO: 21), até cerca de 15 ami- noácidos (por exemplo, quaisquer sequências de aminoácidos 764 a 1240 de SEQ ID NO: 21 a aminoácidos 764 a 1255 de SEQ ID NO: 21), até cerca de 20 aminoácidos (por exemplo, quaisquer sequências de aminoácidos 764 a 1240 de SEQ ID NO: 21 aos aminoácidos 764 a 1260 de SEQ ID NO: 21), até cerca de 25 aminoácidos (por exemplo, quais- quer sequências dos aminoácidos 764 a 1240 de SEQ ID NO: 21 aos aminoácidos 764 a 1265 de SEQ ID NO: 21) ou até cerca de 30 amino- ácidos (por exemplo, quaisquer sequências dos aminoácidos 764 a 1240 de SEQ ID NO: 21 aos aminoácidos 764 a 1260 de SEQ ID NO: 21). Em algumas modalidades, a proteína VWF que compreende ou consiste essencialmente no domínio D' e no domínio D3 não é nem os aminoácidos 764 a 1274 de SEQ ID NO: 21 nem o VWF maduro de comprimento completo. Em algumas modalidades, o domínio D1D2 é expresso em trans com o domínio D'D3. Em algumas modalidades, o domínio D1D2 é expresso em cis com o domínio D'D3.
[0203] Em outras modalidades, a proteína VWF que compreende os domínios D'D3 ligados aos domínios D1D2 compreende ainda um sítio de clivagem intracelular, por exemplo, (um sítio de clivagem por PACE (furina) ou PC5), permitindo a clivagem dos domínios D1D2 dos domí- nios D'D3 após expressão. Exemplos não limitativos do sítio de cliva- gem intracelular são descritos em outra parte aqui.
[0204] Em ainda outras modalidades, uma proteína VWF compre- ende um domínio D' e um domínio D3, mas não compreende uma se- quência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em (1) aminoácidos 1241 a 2813 que corresponde à SEQ ID NO: 21, (2) aminoácidos 1270 a aminoácidos 2813 que corresponde à SEQ ID NO: 21, (3) aminoácidos 1271 a aminoácidos 2813 que corresponde à SEQ ID NO: 21, (4) aminoácidos 1272 a aminoácidos 2813 que corresponde à SEQ ID NO: 21, (5) aminoácidos 1273 a aminoácidos 2813 que cor- responde à SEQ ID NO: 21, (6) aminoácidos 1274 a aminoácidos 2813 que corresponde à SEQ ID NO: 21, e quaisquer combinações das mes- mas.
[0205] Em ainda outras modalidades, uma proteína VWF da pre- sente invenção compreende, consiste essencialmente em ou consiste em uma sequência de aminoácidos que corresponde ao domínio D', do- mínio D3 e domínio A1, em que a sequência de aminoácidos é pelo menos 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica ao aminoácido 764 a 1479 de SEQ ID NO: 21, em que a proteína VWF evita a ligação de VWF endógeno ao FVIII. Em modalidades particulares, a proteína VWF não é os aminoácidos 764 a
1274 de SEQ ID NO: 21.
[0206] Em algumas modalidades, uma proteína VWF da invenção compreende um domínio D' e um domínio D3, mas não compreende pelo menos um domínio VWF selecionado a partir do grupo que consiste em (1) um domínio A1, (2) um domínio A2, (3) um domínio A3, (4) um domínio D4, (5) um domínio B1, (6) um domínio B2, (7) um domínio B3, (8) um domínio C1, (9) um domínio C2, (10) um domínio CK, (11) um domínio CK e um domínio C2, (12) um domínio CK, um domínio C2 e um domínio C1, (13) um domínio CK, um domínio C2, um domínio C1, um domínio B3, (14) um domínio CK, um domínio C2, um domínio C1, um domínio B3, um domínio B2, (15) um domínio CK, um domínio C2, um domínio C1, um domínio B3, um domínio B2 e um domínio B1, (16) um domínio CK, um domínio C2, um domínio C1, um domínio B3, um domínio B2, um domínio B1 e um domínio D4, (17) um domínio CK, um domínio C2, um domínio C1, um domínio B3, um domínio B2, um domí- nio B1, um domínio D4 e um domínio A3, (18) um domínio CK, um do- mínio C2, um domínio C1, um domínio B3, um domínio B2, um domínio B1, um domínio D4, um domínio A3 e domínio A2, (19) um domínio CK, domínio C2, domínio C1, domínio B3, domínio B2, domínio B1, domínio D4, domínio A3, domínio A2 e domínio A1 e (20) quaisquer combina- ções dos mesmos.
[0207] Em ainda outras modalidades, a proteína VWF compreende os domínios D'D3 e um ou mais domínios ou módulos. Exemplos de tais domínios ou módulos incluem, porém sem limitações, os domínios e módulos descritos em Zhour et al., Blood, publicado online em 6 de abril de 2012: DOI 10.1182/blood-2012-01-405134, o qual é incorporado aqui por referência na íntegra. Por exemplo, a proteína VWF pode compre- ender o domínio D'D3 e um ou mais domínios ou módulos selecionados a partir do grupo que consiste em domínio A1, domínio A2, domínio A3, módulo D4N, módulo VWD4, módulo C8-4, módulo TIL-4, módulo C1,
módulo C2, módulo C3, módulo C4, módulo C5, módulo C5, módulo C6 e quaisquer combinações dos mesmos.
[0208] Em ainda outras modalidades, a proteína VWF está ligada a uma porção heteróloga, em que a porção heteróloga está ligada ao Ter- minal-N ou ao Terminal-C da proteína VWF ou inserida imediatamente a jusante de um ou mais aminoácidos (por exemplo, um ou mais sítios de inserção XTEN) na proteína VWF. Por exemplo, os sítios de inserção para a porção heteróloga na proteína VWF podem estar no domínio D', no domínio D3 ou em ambos. A porção heteróloga pode ser um extensor de meia-vida.
[0209] Em determinadas modalidades, uma proteína VWF útil para a invenção forma um multímero, por exemplo, dímero, trímero, tetrâ- mero, pentâmero, hexâmero, heptâmero ou os multímeros de ordem su- perior. Em outras modalidades, a proteína VWF é um monômero apenas com uma proteína VWF. Em algumas modalidades, a proteína VWF da presente invenção pode ter uma ou mais substituições, exclusões, adi- ções ou modificações de aminoácidos. Em algumas modalidades, a pro- teína VWF pode incluir substituições, exclusões, adições ou modifica- ções de aminoácidos de modo que a proteína VWF não seja capaz de formar uma ligação de dissulfeto ou formar um dímero ou multímero. Em outras modalidades, a substituição de aminoácido está dentro do domí- nio D' e do domínio D3. Em uma modalidade particular, uma proteína VWF útil para a invenção contém pelo menos uma substituição de ami- noácido em um resíduo que corresponde ao resíduo 1099, resíduo 1142 ou ambos os resíduos 1099 e 1142 que corresponde à SEQ ID NO: 21. A pelo menos uma substituição de aminoácidos pode ser qualquer ami- noácido que não ocorre naturalmente no VWF de tipo selvagem. Por exemplo, a substituição de aminoácidos pode ser qualquer aminoácido diferente de cisteína, por exemplo, isoleucina, alanina, leucina, aspara-
gina, lisina, ácido aspártico, metionina, fenilalanina, ácido glutâmico, tre- onina, glutamina, triptofano, glicina, valina, prolina, serina, tirosina, argi- nina ou histidina. Em outro exemplo, a substituição de aminoácidos tem um ou mais aminoácidos que evitam ou impedem que as proteínas VWF formem multímeros.
[0210] Em determinadas modalidades, a proteína VWF útil aqui pode ser ainda modificada para melhorar sua interação com o FVIII, por exemplo, para melhorar a afinidade de ligação ao FVIII. Como um exem- plo não limitativo, a proteína VWF compreende um resíduo de serina no resíduo que corresponde ao aminoácido 764 de SEQ ID NO: 21 e um resíduo de lisina no resíduo que corresponde ao aminoácido 773 de SEQ ID NO: 21. Os resíduos 764 e/ou 773 podem contribuir para a afi- nidade de ligação das proteínas VWF ao FVIII. Em outras modalidades, as proteínas VWF úteis para a invenção podem ter outras modificações, por exemplo, a proteína pode ser peguilada, glicosilada, hesilada ou po- lissialilada.
[0211] Em determinadas modalidades, o polipeptídeo quimérico descrito aqui compreende uma proteína VWF que compreende um fra- gmento de VWF, uma sequência XTEN, um ligante a2 de FVIII e uma região Fc. Em algumas modalidades, a proteína VWF compreende, con- forme ordenado a partir do Terminal-N para o Terminal-C, um fragmento de VWF, fundido a uma sequência XTEN, fundido a um ligante a2, fun- dido a uma região Fc. Em determinadas modalidades, a proteína VWF compreende um domínio D' de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 210, um domínio D3 de VWF que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 214, uma sequência de XTEN que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 58 (AE144_5A), um ligante a2 que compreende a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NO: 88 e/ou uma região Fc que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217.
[0212] Em uma modalidade específica, o polipeptídeo quimérico é rFVIIIFc-VWF-XTEN e compreende uma proteína VWF que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 202.
[0213] Em algumas modalidades, a proteína VWF compreende um fragmento de VWF que compreende um domínio D1, D2, D' e/ou D3 de VWF. Em uma modalidade, o fragmento de VWF compreende um do- mínio D1D2 de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 209. Em algumas modalidades, a proteína VWF compre- ende ainda uma sequência de peptídeo sinalizador de VWF. Em uma modalidade, o peptídeo sinalizador de VWF compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 208. Em uma modalidade específica, a proteína VWF compreende um peptídeo sinalizador de VWF que com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 208, uma região D1D2 de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 209, um domínio D' de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 210, um domínio D3 de VWF que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 214, uma sequência XTEN que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 58 (AE144_5A), um ligante a2 que compreende a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 88 e/ou uma região Fc que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217.
[0214] Em uma modalidade específica, o polipeptídeo quimérico é rFVIIIFc-VWF-XTEN e compreende uma proteína VWF que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 205. Em outra moda- lidade específica, rFVIIIFc-VWF-XTEN compreende uma proteína VWF codificada por a sequência de ácidos nucleicos de SEQ ID NO: 206 ou um fragmento da mesma. Sequências polipeptídicas exemplificativas adicionais relacionadas às proteínas VWF dos polipeptídeos quiméricos descritos aqui são fornecidas nas Tabelas 18-19. III.C. Porções de Extensão de Meia-Vida
[0215] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico da in- venção compreende uma ou mais porções que estendem a meia-vida. Em algumas modalidades, o polipeptídeo de FVIII do polipeptídeo qui- mérico é fundido ou associado a uma ou mais porções que estendem a meia-vida (isto é, proteína FVIII). Em outras modalidades, o polipeptídeo quimérico compreende pelo menos duas porções de extensão de meia- vida, uma primeira porção de extensão de meia-vida fundida a um poli- peptídeo de FVIII e uma segunda porção de extensão de meia-vida fun- dida aos domínios D'D3 de VWF. Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão da meia-vida é fundida ao Terminal-C ou ao Termi- nal-N do polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão da meia-vida é inserida no polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão da meia-vida é inserida dentro do domínio B do polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, a primeira porção de extensão da meia-vida é inserida no polipeptídeo de FVIII imediatamente a jusante de um aminoácido que corresponde ao resíduo de aminoácido 745 de SEQ ID NO: 65. Em al- gumas modalidades, a primeira porção heteróloga é fundida ao polipep- tídeo de FVIII através de um ligante.
[0216] Em determinadas modalidades, os domínios D'D3 de VWF no fragmento de VWF podem ser fundidos ou associados a uma se- gunda porção de extensão de meia-vida. Em algumas modalidades, a segunda porção de extensão da meia-vida é fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do fragmento de VWF. Em algumas modalidades, a se- gunda porção de extensão da meia-vida é inserida no fragmento de VWF. Em algumas modalidades, a segunda porção de extensão da meia-vida é fundida ao Terminal-C do fragmento de VWF. Em determi- nadas modalidades, em que a segunda porção de extensão da meia- vida é fundida ao fragmento de VWF através de um ligante.
[0217] Em outras modalidades, o polipeptídeo quimérico compre- ende um polipeptídeo de FVIII e um fragmento de VWF que compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF, em que o domínio D'D3 de VWF é fundido a uma ou mais porções que estendem a meia-vida e em que o domínio D'D3 de VWF e o polipeptídeo de FVIII estão associados a uma ligação mais forte do que a ligação natural entre o FVIII e o VWF.
[0218] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico compre- ende um polipeptídeo de FVIII e um fragmento de VWF que compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF, em que o domínio D'D3 de VWF é fundido ao polipeptídeo de FVIII através de um ligante. Em algu- mas modalidades, o ligante é um ligante clivável. Em algumas modali- dades, o domínio D' e o domínio D3 de VWF estão ainda associados ao polipeptídeo de FVIII através de pelo menos uma ligação não covalente. Em determinadas modalidades, o domínio D' e o domínio D3 de VWF são ainda fundidos a uma Fc. Em algumas modalidades, o domínio D' e o domínio D3 de VWF são fundidos a uma Fc através de um ligante. Em algumas modalidades, a Fc é fundida a uma segunda Fc através de um ligante adicional. Em determinadas modalidades, a Fc e a segunda Fc estão associadas entre si através de uma ligação covalente, por exem- plo, uma ligação de dissulfeto. Em modalidades particulares, o polipep- tídeo quimérico compreende um polipeptídeo de FVIII e um fragmento de VWF que compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF, conforme descrito na Publicação Internacional N° WO 2017/222337 A1, a qual é incorporada aqui por referência na íntegra.
[0219] A primeira porção de extensão de meia-vida, a segunda por- ção de extensão de meia-vida ou ambas podem ser selecionadas a par- tir do grupo que consiste em um parceiro de ligação ao FcRn, por exem- plo, uma albumina ou uma região Fc de imunoglobulina, uma sequência XTEN, o peptídeo C-terminal (CTP) da subunidade β de gonadotrofina coriônica humana, uma sequência PAS, uma sequência HAP, uma transferrina, porções de ligação à albumina ou quaisquer fragmentos, derivados, variantes e qualquer combinação dos mesmos. III.C.1. Região Constante de Ig ou uma Porção da Mesma
[0220] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico da in- venção também inclui uma primeira região constante de Ig ou uma por- ção da mesma fundida a um polipeptídeo de FVIII através de um ligante opcional. A primeira região constante de Ig ou a porção da mesma pode ser inserida dentro do polipeptídeo de FVIII ou fundida ao Terminal-C ou Terminal-N do polipeptídeo de FVIII. Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico inclui ainda uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma fundida a uma proteína VWF. A primeira re- gião constante de Ig ou a porção da mesma pode ser inserida dentro do fragmento de VWF ou fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do frag- mento de VWF. Em modalidades particulares, a primeira região cons- tante de Ig está ligada ou associada à segunda região constante de Ig através de uma ligação covalente, por exemplo, uma ligação de dissul- feto.
[0221] A região constante de Ig ou uma porção da mesma pode me- lhorar as propriedades farmacocinéticas ou farmacodinâmicas do poli- peptídeo quimérico em combinação com uma porção heteróloga adicio- nal, por exemplo, uma sequência XTEN e a proteína VWF. Em determi- nadas modalidades, a região constante de Ig ou uma porção da mesma estende a meia-vida de uma molécula fundida à região constante de Ig ou uma porção da mesma.
[0222] Uma região constante de Ig é composta por domínios deno- tados como domínios CH (constante pesado) (CH1, CH2, etc.). Depen- dendo do isotipo (ou seja, IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE), a região constante pode ser composta por três ou quatro domínios CH. Algumas regiões constantes de isotipos (por exemplo, IgG) também contêm uma região de dobradiça. Consulte Janeway et al. 2001, Immunobiology, Garland
Publishing, N.Y., N.Y.
[0223] Uma região constante de Ig ou uma porção da mesma para produzir o polipeptídeo quimérico da presente invenção pode ser obtida a partir de uma série de fontes diferentes. Em algumas modalidades, uma região constante de Ig ou uma porção da mesma é derivada de uma Ig humana. Deve ser entendido, no entanto, que a região constante de Ig ou uma porção da mesma pode ser derivada de uma Ig de outra espécie de mamífero incluindo, por exemplo, um roedor (por exemplo, um camundongo, rato, coelho, porquinho-da-índia) ou primata não ser humano (por exemplo, espécies de chimpanzés, macacos). Além disso, a região constante de Ig ou uma porção da mesma pode ser derivada de qualquer classe de Ig, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, e qualquer isotipo de Ig, incluindo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Em algumas modalida- des, o isotipo IgG1 humana é usado.
[0224] Uma variedade de sequências do gene da região constante de Ig (por exemplo, sequências do gene da região constante humana) estão disponíveis na forma de depósitos acessíveis ao público. Pode ser selecionada uma sequência de domínios de região constante que tem uma função efetora particular (ou sem uma função efetora particu- lar) ou com uma modificação particular para reduzir a imunogenicidade. Muitas sequências de anticorpos e genes que codificam anticorpos fo- ram publicadas e as sequências da região constante de Ig adequadas (por exemplo, sequências de dobradiça, CH2 e/ou CH3 ou porções das mesmas) podem ser derivadas a partir destas sequências usando mé- todos reconhecidos na técnica. O material genético obtido usando qual- quer um dos métodos anteriores pode, então, ser alterado ou sintetizado para obter os polipeptídeos da presente invenção. Será ainda apreciado que o escopo da presente invenção abrange alelos, variantes e muta- ções de sequências de DNA de região constante.
[0225] As sequências da região constante de Ig ou uma porção da mesma podem ser clonadas, por exemplo, usando reação em cadeia de polimerase e iniciadores que são selecionados para amplificar o domí- nio de interesse. Para clonar uma sequência da região constante de Ig ou uma porção da mesma de um anticorpo, o mRNA pode ser isolado a partir de um hibridoma, baço ou células linfáticas, transcrito reversa- mente em DNA e genes de anticorpos amplificados por PCR. Métodos de amplificação por PCR são descritos em detalhes nas Patentes Norte- Americanas Nos 4.683.195; 4.683.202; 4.800.159; 4.965.188; e, por exemplo, em "PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications" In- nis et al. eds., Academic Press, San Diego, CA (1990); Ho et al. 1989. Gene 77:51; Horton et al. 1993. Methods Enzymol. 217: 270). A PCR pode ser iniciada por iniciadores de região constante de consenso ou por iniciadores mais específicos com base nas sequências de aminoá- cidos e de DNA de cadeias pesada e leve publicadas. Conforme discu- tido acima, PCR também pode ser usada para isolar clones de DNA que codificam as cadeias leve e pesada do anticorpo. Neste caso, as biblio- tecas podem ser rastreadas por iniciadores de consenso ou sondas ho- mólogas maiores, tais como sondas de região constante de camun- dongo. Numerosos conjuntos de iniciadores adequados para a amplifi- cação de genes de anticorpos são conhecidos na técnica (por exemplo, iniciadores 5' com base na sequência N-terminal de anticorpos purifica- dos (Benhar e Pastan. 1994. Protein Engineering 7: 1509); amplificação rápida de extremidades de cDNA (Ruberti, F. et al. 1994. J. Immunol. Methods 173: 33); sequências líderes de anticorpos (Larrick et al. 1989 Biochem. Biophys. Res. Commun. 160: 1250)). A clonagem de sequên- cias de anticorpos é ainda descrita em Newman et al., Patente Norte- Americana N° 5.658.570, depositada em 25 de janeiro de 1995, o qual é incorporado aqui a título de referência.
[0226] Uma região constante de Ig usada aqui pode incluir todos os domínios e a região de dobradiça ou porções da mesma. Em algumas modalidades, a região constante de Ig ou uma porção da mesma com- preende o domínio CH2, o domínio CH3 e uma região de dobradiça ou seja, uma região Fc ou um parceiro de ligação ao FcRn.
[0227] Conforme usado aqui, o termo "região Fc" é definido como a porção de um polipeptídeo que corresponde à região Fc de Ig nativa, isto é, como formada pela associação dimérica dos respectivos domí- nios Fc de suas duas cadeias pesadas. Uma região Fc nativa forma um homodímero com outra região Fc. Em contraste, o termo "região Fc fun- dida geneticamente" ou "região Fc com uma única cadeia" (região scFc), conforme usado aqui, se refere a uma região Fc dimérica sintética com- posta por domínios Fc geneticamente ligados dentro de uma única ca- deia polipeptídica (ou seja, codificados em uma única sequência gené- tica contígua).
[0228] Em algumas modalidades, a "região Fc" se refere à porção de uma única cadeia pesada de Ig que começa na região de dobradiça logo a montante do sítio de clivagem de papaína (isto é, resíduo 216 em IgG, tomando o primeiro resíduo da região constante de cadeia pesada como 114) e terminando no Terminal-C do anticorpo. Consequente- mente, um domínio Fc completo compreende pelo menos um domínio de dobradiça, um domínio CH2 e um domínio CH3.
[0229] A região Fc de uma região constante de Ig, dependendo do isotipo de Ig, pode incluir os domínios CH2, CH3 e CH4, bem como a região de dobradiça. Os polipeptídeos quiméricos que compreendem uma região Fc de uma Ig conferem várias propriedades desejáveis a um polipeptídeo quimérico, incluindo estabilidade aumentada, meia-vida sé- rica aumentada (consulte Capon et al., 1989, Nature 337: 525), bem como ligação a receptores Fc, tal como o receptor Fc neonatal (FcRn) (Patentes Norte-Americanas Nos 6.086.875, 6.485.726, 6.030.613; do- cumentos WO 03/077834; US2003-0235536A1), os quais são incorpo- rados aqui a título de referência na íntegra.
[0230] Uma região constante de Ig ou uma porção da mesma pode ser um parceiro de ligação ao FcRn. O FcRn é ativo em tecidos epiteliais adultos e expresso no lúmen dos intestinos, vias respiratórias pulmona- res, superfícies nasais, superfícies vaginais, cólon e superfícies retais (Patente Norte-Americana N° 6.485.726). Um parceiro de ligação ao FcRn é uma porção de uma Ig que se liga ao FcRn. Outro exemplo de um parceiro de ligação ao FcRn é a albumina, descrita mais detalhada- mente abaixo.
[0231] O receptor FcRn foi isolado de várias espécies de mamíferos, incluindo seres humanos. As sequências do FcRn humano, FcRn de macaco, FcRn de rato e FcRn de camundongo são conhecidas (Story et al. 1994, J. Exp. Med. 180: 2377). O receptor de FcRn se liga à IgG (mas não a outras classes de Ig, tais como IgA, IgM, IgD e IgE) em um pH relativamente baixo, transporta ativamente a IgG transcelularmente em uma direção luminal para serosa e, em seguida, libera a IgG em um pH relativamente mais alto encontrado nos fluidos intersticiais. Ele é ex- presso em tecido epitelial adulto (Patentes Norte-Americanas Nos
6.485.726, 6.030.613, 6.086.875; documentos WO 03/077834; US2003- 0235536A1) incluindo pulmão e epitélio intestinal (Israel et al. 1997, Immunology 92:69), epitélio tubular proximal renal (Kobayashi et al. 2002, Am. J. Physiol. Renal Physiol. 282: F358), bem como epitélio na- sal, superfícies vaginais e superfícies de árvores biliares.
[0232] Os parceiros de ligação ao FcRn úteis na presente invenção abrangem moléculas que podem ser especificamente ligadas pelo re- ceptor de FcRn, incluindo IgG inteira, o fragmento Fc de IgG e outros fragmentos que incluem a região de ligação completa do receptor FcRn. A região da porção Fc de IgG que se liga ao receptor FcRn foi descrita com base em cristalografia de raios X (Burmeister et al. 1994, Nature 372: 379). A principal área de contato do Fc com o FcRn está próximo da junção dos domínios CH2 e CH3. Os contatos Fc-FcRn estão todos dentro de uma única cadeia pesada de Ig. Os parceiros de ligação ao FcRn incluem IgG completa, o fragmento Fc de IgG e outros fragmentos de IgG que incluem a região de ligação completa de FcRn. Os principais sítios de contato incluem resíduos de aminoácidos 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 e 314 do domínio CH2 e resíduos de ami- noácidos 385-387, 428 e 433-436 do domínio CH3. Referências feitas à numeração de aminoácidos de Igs ou fragmentos ou regiões de Ig são todas com base em Kabat et al. 1991, Sequences of Proteins of Immu- nological Interest, U.S. Department of Public Health, Bethesda, Md.
[0233] As regiões Fc ou parceiros de ligação ao FcRn ligados ao FcRn podem ser efetivamente transportados através de barreiras epite- liais pelo FcRn, deste modo, constituindo um meio não invasivo para administrar sistemicamente uma molécula terapêutica desejada. Além disso, as proteínas de fusão que compreendem uma região Fc ou um parceiro de ligação ao FcRn são endocitadas por células que expressam o FcRn. Mas, em vez de serem marcadas para degradação, tais proteí- nas de fusão são recicladas para a circulação novamente, assim, au- mentando a meia-vida in vivo destas proteínas. Em determinadas mo- dalidades, as porções das regiões constantes de Ig são uma região Fc ou um parceiro de ligação ao FcRn que normalmente se associa, atra- vés de ligações de dissulfeto e outras interações não específicas, com outra região Fc ou outro parceiro de ligação ao FcRn para formar díme- ros e multímeros de ordem superior.
[0234] Dois receptores de FcRn podem se ligar a uma única molé- cula Fc. Os dados cristalográficos sugerem que cada molécula de FcRn se liga a um único polipeptídeo do homodímeros de Fc. Em algumas modalidades, a ligação do parceiro de ligação ao FcRn, por exemplo, um fragmento Fc de uma IgG, a uma molécula biologicamente ativa constitui um meio de distribuir a molécula biologicamente ativa por via oral, bucal, sublingual, retal, vaginal, tal como um aerossol administrado por via nasal ou uma via pulmonar ou via ocular. Em outras modalida- des, o polipeptídeo quimérico pode ser administrado invasivamente, por exemplo, através das vias subcutânea, intravenosa.
[0235] Uma região parceira de ligação de FcRn é uma molécula ou uma porção da mesma que pode ser especificamente ligada pelo recep- tor de FcRn com o consequente transporte ativo pelo receptor de FcRn da região Fc. Ligado especificamente se refere a duas moléculas que formam um complexo que é relativamente estável sob condições fisio- lógicas. A ligação específica é caracterizada por uma alta afinidade e uma capacidade baixa a moderada, distinta da ligação não específica a qual tem, em geral, uma afinidade baixa com uma capacidade mode- rada a alta. Normalmente, a ligação é considerada específica quando a constante de afinidade KA é maior do que 106 M-1 ou maior do que 108 M-1. Se necessário, a ligação não específica pode ser reduzida sem afe- tar substancialmente a ligação específica ao variar as condições de li- gação. Condições de ligação adequadas, tais como concentração das moléculas, força iônica da solução, temperatura, tempo permitido para a ligação, concentração de um agente de bloqueio (por exemplo, albu- mina sérica, caseína de leite), etc., podem ser otimizadas por aqueles versados na técnica usando métodos de rotina.
[0236] Em determinadas modalidades, um polipeptídeo quimérico da invenção compreende uma ou mais regiões Fc truncadas as quais, no entanto, são suficientes para conferir propriedades de ligação do re- ceptor Fc (FcR) à região Fc. Por exemplo, a porção de uma região Fc que se liga ao FcRn (ou seja, a porção de ligação ao FcRn) compreende cerca de aminoácidos 282-438 de IgG1, numeração EU (com os sítios de contato primários sendo os aminoácidos 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 e 314 do domínio CH2 e resíduos de aminoáci- dos 385-387, 428 e 433-436 do domínio CH3. Assim, uma região Fc da invenção pode compreender ou consistir em uma porção de ligação ao
FcRn. As porções de ligação ao FcRn podem ser derivadas de cadeias pesadas de qualquer isotipo, incluindo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Em al- gumas modalidades, é usada uma porção de ligação ao FcRn de um anticorpo de isotipo IgG1 humana. Em outras modalidades, é usada uma porção de ligação ao FcRn de um anticorpo de isotipo IgG4 hu- mana.
[0237] Em outras modalidades, a "região Fc" inclui uma sequência de aminoácidos de um domínio Fc ou derivada de um domínio Fc. Em determinadas modalidades, uma região Fc compreende pelo menos um de: um domínio de dobradiça (por exemplo, região de dobradiça supe- rior, média e/ou inferior) (sobre os aminoácidos 216-230 de uma região Fc de anticorpo de acordo com a numeração EU), um domínio CH2 (em torno dos aminoácidos 231-340 de uma região Fc de anticorpo de acordo com a numeração EU), um domínio CH3 (em torno dos aminoá- cidos 341-438 de uma região Fc de anticorpo de acordo com a numera- ção EU), um domínio CH4 ou uma variante, porção ou fragmento do mesmo. Em outras modalidades, uma região Fc compreende um domí- nio Fc completo (ou seja, um domínio de dobradiça, um domínio CH2 e um domínio CH3). Em algumas modalidades, uma região Fc compre- ende, consiste essencialmente em ou consiste em um domínio de do- bradiça (ou uma parte do mesmo) fundido a um domínio CH3 (ou uma parte do mesmo), um domínio de dobradiça (ou uma parte do mesmo) fundido a um domínio CH2 (ou uma parte do mesmo), um domínio CH2 (ou uma parte do mesmo) fundido a um domínio CH3 (ou uma parte do mesmo), um domínio CH2 (ou uma parte do mesmo) fundido a um do- mínio de dobradiça (ou uma parte do mesmo) e um domínio CH3 (ou uma porção dele). Em ainda outras modalidades, uma região Fc carece de pelo menos uma porção de um domínio CH2 (por exemplo, todo ou parte de um domínio CH2). Em uma modalidade particular, uma região
Fc compreende ou consiste em aminoácidos que correspondem à nu- meração EU 221 a 447.
[0238] As regiões Fc denotadas como F, F1 ou F2 aqui podem ser obtidas a partir de uma série de fontes diferentes. Em algumas modali- dades, uma região Fc do polipeptídeo é derivada de uma Ig humana. Deve ser entendido, no entanto, que uma região Fc pode ser derivada de uma Ig de outra espécie de mamífero incluindo, por exemplo, uma espécie de roedor (por exemplo, um camundongo, rato, coelho ou por- quinho-da-índia) ou primata não ser humano (por exemplo, chimpanzé, macaco). Além disso, o polipeptídeo dos domínios Fc ou porções dos mesmos pode ser derivado de qualquer classe de Ig, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, e qualquer isotipo Ig, incluindo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Em outras modalidades, o isotipo IgG1 humana é usado.
[0239] Em determinadas modalidades, a variante Fc confere uma alteração em pelo menos uma função efetora transmitida por uma região Fc que compreende o dito domínio Fc de tipo selvagem (por exemplo, uma melhoria ou redução na capacidade da região Fc de se ligar aos receptores Fc (por exemplo, FcγRI, FcγRII ou FcγRIII) ou proteínas do complemento (por exemplo, C1q) ou desencadear citotoxicidade depen- dente de anticorpos (ADCC), fagocitose ou citotoxicidade dependente de complemento (CDCC)). Em outras modalidades, a variante Fc for- nece um resíduo de cisteína manipulado.
[0240] As regiões Fc da invenção podem empregar variantes Fc re- conhecidas na técnica que são conhecidas por conferir uma alteração (por exemplo, um aumento ou redução) na função efetora e/ou ligação ao FcR ou FcRn. Especificamente, uma molécula de ligação da inven- ção pode incluir, por exemplo, uma alteração (por exemplo, uma subs- tituição) em uma ou mais das posições de aminoácidos descritas nas Publicações Internacionais PCT WO88/07089A1, WO96/14339A1, WO98/05787A1, WO98/23289A1, WO99/51642A1, WO99/58572A1,
WO00/09560A2, WO00/32767A1, WO00/42072A2, WO02/44215A2, WO02/060919A2, WO03/074569A2, WO00/016750A2, WO04/07504A0293351 WO04/074455A2, WO04/099249A2, WO05/040217A2, WO04/044859, WO05/070963A1, WO05/077981A2, WO05/092925A2, WO05/123780A2, WO06/019447A1, WO06/047350A2, e WO06/047350A2, e WO06/047350A2, e Publica- ção de Patentes Norte-Americanas Nos US2007/0231329, US2007/0231329, US2007/0237765, US2007/0237766, US2007/0237767, US2007/0243188, US20070248603, US20070286859, US20080057056; ou Patentes Norte-Americanas Nos
5.648.260; 5,739,277; 5.834.250; 5.869.046; 6.096.871; 6.121.022;
6.194.551; 6.242.195; 6.277.375; 6.528.624; 6.538.124; 6.737.056;
6.821.505; 6.998.253; 7.083.784; 7.404.956 e 7.317.091, cada uma das quais é aqui incorporada a título de referência. Em algumas modalida- des, a alteração específica (por exemplo, a substituição específica de um ou mais aminoácidos descritos na técnica) pode ser feita em uma ou mais das posições de aminoácidos descritas. Em outras modalida- des, uma alteração diferente em uma ou mais das posições de aminoá- cidos descritas (por exemplo, a substituição diferente de uma ou mais posições de aminoácidos descritas na técnica) pode ser feita.
[0241] A região Fc ou parceiro de ligação de FcRn de IgG pode ser modificada de acordo com procedimentos bem reconhecidos, tais como mutagênese sítio dirigida e assim por diante para produzir IgG modifi- cada ou fragmentos Fc ou porções dos mesmos que serão ligados pelo FcRn. Tais modificações incluem modificações remotas dos sítios de contato de FcRn, bem como modificações dentro dos sítios de contato que preservam ou mesmo aumentam a ligação ao FcRn. Por exemplo, os seguintes resíduos de aminoácidos únicos na Fc de IgG1 humana (Fc 1) podem ser substituídos sem perda significativa de afinidade de ligação de Fc ao FcRn: P238A, S239A, K246A, K248A, D249A, M252A,
T256A, E258A, T260A, D265A, S267A, H268A, E269A, D270A, E272A, L274A, N276A, Y278A, D280A, V282A, E283A, H285A, N286A, T289A, K290A, R292A, E293A, E294A, Q292296A, E294A, Q292296A, E294A, Q292296A, R298A300, YA29295A, R298F, YA29295A, R298A, YA296A, YA296A, YA298F, N289A, K290F, R298A30295A, 30295A, 303A, 296F, R298F, R298F, R298F, R298F, R298F, R298F, R298A., V305A, T307A, L309A, Q311A, D312A, N315A, K317A, E318A, K320A, K322A, S324A, K326A, A327Q, P329A, A330Q, P331A, E333A, K334A, T335A, S337A, K338A, K340A, Q342A, R344A, E345A, Q347A, R355A, E356A, M358A, T359A, K360A, N361A, Q362A, Y373A, S375A, D376A, A378Q, E380A, E382A, S383A, N384A, Q386A, E388A, N389A, N390A, Y391F, K392A, L398A, S400A, D401A, D413A, K414A, R416A, Q418A, Q419A, N421A, V422A, S424A, E430A, N434A, T437A, Q438A, K439A, S440A, S444A e K447A onde, por exemplo, a posição P238A repre- senta a prolina de tipo selvagem de número 238. Como exemplo, algu- mas modalidades incorporam a mutação N297A ao remover um sítio de N-glicosilação altamente conservado. Além da alanina, outros aminoá- cidos podem ser substituídos pelos aminoácidos de tipo selvagem nas posições especificadas acima. As mutações podem ser introduzidas in- dividualmente na Fc dando origem a mais de cem regiões Fc distintas da Fc nativa. Além disso, combinações de duas, três ou mais de tais mutações individuais podem ser introduzidas juntas, dando origem a mais de centenas de regiões Fc. Além disso, uma das regiões Fc de uma construção da invenção pode sofrer mutação e a outra região Fc da construção não sofre mutação ou ambas podem sofrer mutação, mas com mutações diferentes.
[0242] Algumas das mutações acima podem conferir nova funciona- lidade à região Fc ou parceiro de ligação ao FcRn. Por exemplo, algu- mas modalidades incorporam N297A ao remover um sítio de N-glicosi-
lação altamente conservado. O efeito desta mutação é reduzir a imuno- genicidade, deste modo, aumentando a meia-vida em circulação da re- gião Fc e tornar a região Fc incapaz de se ligar ao FcgamaRI, Fcgama- RIIA, FcgamaRIIB e FcgamaRIIIA, sem comprometer a afinidade pelo FcRn (Routledge et al. 1995, Transplantation 60: 847; Friend et al. 1999, Transplantation 68: 1632; Shields et al. 1995, J. Biol. Chem. 276: 6591). Como mais um exemplo de nova funcionalidade decorrente de muta- ções descritas acima, a afinidade pelo FcRn pode ser aumentada além daquela de tipo selvagem em alguns casos. Tal afinidade aumentada pode refletir uma taxa "de ativação" aumentada, uma taxa "de desativa- ção" diminuída ou tanto uma taxa "de ativação" aumentada quanto uma taxa "de desativação" diminuída. Exemplos de mutações que se acre- dita conferir uma afinidade aumentada pelo FcRn incluem, porém sem limitações, T256A, T307A, E380A e N434A (Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 276: 6591).
[0243] Além disso, pelo menos três receptores de Fc gama huma- nos parecem reconhecer um sítio de ligação na IgG dentro da região de dobradiça inferior, geralmente os aminoácidos 234-237. Portanto, outro exemplo de nova funcionalidade e potencial diminuição da imunogenici- dade podem surgir a partir de mutações desta região tal como, por exemplo, ao substituir os aminoácidos 233-236 de IgG1 humana "ELLG" pela sequência correspondente de IgG2 "PVA" (com uma exclusão de aminoácido). Foi demonstrado que Fcγ RI, Fcγ RII e Fc RIII, os quais mediam várias funções efetoras, não se ligam à IgG1 quando tais mu- tações foram introduzidas. Ward e Ghetie 1995, Therapeutic Immunol- ogy 2:77 e Armor et al. 1999, Eur. J. Immunol. 29: 2613.
[0244] Em algumas modalidades, a região constante de Ig ou uma porção da mesma, por exemplo, uma região Fc, é um polipeptídeo que inclui a sequência PKNSSMISNTP (SEQ ID NO: 89 ou SEQ ID NO: 3 da Patente Norte-Americana N° 5.739.277) e inclui opcionalmente ainda uma sequência selecionada a partir de HQSLGTQ (SEQ ID NO: 90), HQNLSDGK (SEQ ID NO: 91), HQNISDGK (SEQ ID NO: 92) ou VIS- SHLGQ (SEQ ID NO: 93) (ou SEQ ID NOs: 11, 1, 2 e 31, respectiva- mente, da Patente Norte-Americana N° 5.739.277).
[0245] Em outras modalidades, a região constante de imunoglobu- lina ou uma porção da mesma compreende uma sequência de aminoá- cidos na região de dobradiça ou uma porção da mesma que forma uma ou mais ligações de dissulfeto com outra região constante de imunoglo- bulina ou uma porção da mesma. A ligação de dissulfeto pela região constante de imunoglobulina ou uma porção da mesma coloca o pri- meiro polipeptídeo que compreende um polipeptídeo de FVIII e o se- gundo polipeptídeo que compreende o fragmento de VWF juntos de modo que o VWF endógeno não substitua o fragmento de VWF e não se ligue ao polipeptídeo de FVIII. Portanto, a ligação de dissulfeto entre a primeira região constante de imunoglobulina ou uma porção da mesma e uma segunda região constante de imunoglobulina ou uma por- ção da mesma evita a interação entre o VWF endógeno e o polipeptídeo de FVIII. Esta inibição da interação entre o VWF e o polipeptídeo de FVIII permite que a meia-vida do polipeptídeo quimérico ultrapasse o limite de duas vezes. A região de dobradiça ou uma porção da mesma pode ainda ser ligada a um ou mais domínios de CH1, CH2, CH3, um fragmento dos mesmos e quaisquer combinações dos mesmos. Em uma modalidade particular, a região constante de imunoglobulina ou uma porção da mesma é uma região de dobradiça e CH2.
[0246] Em determinadas modalidades, a região constante de Ig ou uma porção da mesma é hemi-glicosilada. Por exemplo, o polipeptídeo quimérico que compreende duas regiões Fc ou parceiros de ligação ao FcRn pode conter uma primeira região Fc glicosilada (por exemplo, uma região CH2 glicosilada) ou parceiro de ligação ao FcRn e uma segunda região Fc aglicosilada (por exemplo, uma região CH2 aglicosilada) ou parceiro de ligação ao FcRn. Em algumas modalidades, um ligante pode ser interposto entre as regiões Fc glicosiladas e aglicosiladas. Em outras modalidades, a região Fc ou parceiro de ligação ao FcRn é totalmente glicosilada, isto é, todas as regiões Fc são glicosiladas. Em outras mo- dalidades, a região Fc pode ser aglicosilada, isto é, nenhuma das por- ções Fc é glicosilada.
[0247] Em determinadas modalidades, um polipeptídeo quimérico da invenção compreende uma substituição de aminoácido para uma re- gião constante de Ig ou uma porção da mesma (por exemplo, variantes Fc) que altera as funções efetoras independentes de antígeno da região constante de Ig, em particular a meia-vida em circulação da proteína.
[0248] Tais proteínas exibem ligação aumentada ou diminuída ao FcRn quando comparado com proteínas sem tais substituições e, por- tanto, têm meia-vida aumentada ou diminuída no soro, respectivamente. Espera-se que variantes de Fc com afinidade aprimorada pelo FcRn te- nham meias-vidas séricas mais longas, e tais moléculas têm aplicações úteis em métodos de tratamento de mamíferos onde meia-vida longa do polipeptídeo administrado é desejada, por exemplo, para tratar uma do- ença ou transtorno crônico (consulte, por exemplo, Patentes Norte- Americanas Nos 7.348.004, 7.404.956 e 7.862.820). Em contraste, es- pera-se que variantes de Fc com afinidade de ligação pelo FcRn dimi- nuída tenham meias-vidas mais curtas, e tais moléculas também são úteis, por exemplo, para administração a um mamífero onde um tempo de circulação reduzido pode ser vantajoso, por exemplo, para imagiolo- gia diagnóstica in vivo ou em situações nas quais o polipeptídeo inicial tem efeitos colaterais tóxicos quando presente na circulação por perío- dos prolongados. Variantes de Fc com afinidade de ligação pelo FcRn diminuída também têm menos probabilidade de atravessar a placenta e, portanto, também são úteis no tratamento de doenças ou transtornos em mulheres grávidas.
Além disso, outras aplicações nas quais a afini- dade de ligação pelo FcRn reduzida pode ser desejada incluem aquelas aplicações nas quais a localização no cérebro, rim e/ou fígado é dese- jada.
Em uma modalidade exemplificativa, os polipeptídeos quiméricos da invenção exibem transporte reduzido através do epitélio dos glomé- rulos renais da vasculatura.
Em outras modalidades, os polipeptídeos quiméricos da invenção exibem transporte reduzido através da barreira hematoencefálica (BBB) do cérebro para o espaço vascular.
Em algu- mas modalidades, uma proteína com ligação ao FcRn alterada compre- ende pelo menos uma região Fc ou parceiro de ligação ao FcRn (por exemplo, uma ou duas regiões Fc ou parceiros de ligação ao FcRn) que tem uma ou mais substituições de aminoácidos dentro do "loop de liga- ção ao FcRn" de uma região constante de Ig.
O loop de ligação ao FcRn é composto por resíduos de aminoácidos 280-299 (de acordo com a numeração EU) de uma região Fc de tipo selvagem de comprimento completo.
Em outras modalidades, uma região constante de Ig ou uma porção da mesma em um polipeptídeo quimérico da invenção com afi- nidade de ligação pelo FcRn alterada compreende pelo menos uma re- gião Fc ou parceiro de ligação ao FcRn que tem uma ou mais substitui- ções de aminoácidos dentro da "zona de contato" de FcRn de 15 Ǻ.
Conforme usado aqui, o termo "zona de contato" de FcRn de 15 Ǻ inclui resíduos nas seguintes posições de uma porção Fc de tipo selvagem de comprimento completo: 243-261, 275-280, 282-293, 302-319, 336- 348, 367, 369, 372-389, 391, 393, 408, 424, 425-440 (numeração EU). Em outras modalidades, uma região constante de Ig ou uma porção da mesma da invenção com afinidade de ligação pelo FcRn alterada com- preende pelo menos uma região Fc ou parceiro de ligação ao FcRn que tem uma ou mais substituições de aminoácidos em uma posição de ami- noácido que corresponde a qualquer uma das seguintes posições EU: 256, 277-281, 283-288, 303-309, 313, 338, 342, 376, 381, 384, 385,
387, 434 (por exemplo, N434A ou N434K) e 438. Substituições de ami- noácidos exemplificativas que alteraram a atividade de ligação ao FcRn são descritas na Publicação PCT Internacional N° WO05/047327, a qual é incorporada aqui a título de referência.
[0249] Uma região Fc ou parceiro de ligação ao FcRn usado na in- venção também pode compreender uma substituição de aminoácido re- conhecida na técnica que altera a glicosilação do polipeptídeo quimé- rico. Por exemplo, a região Fc ou parceiro de ligação ao FcRn do poli- peptídeo quimérico ligado ao domínio D'D3 de VWF ou um polipeptídeo de FVIII pode compreender uma região Fc com uma mutação que leva à glicosilação reduzida (por exemplo, glicosilação N- ou O-ligada) ou pode compreender uma glicoforma alterada da porção Fc de tipo selva- gem (por exemplo, uma glicana com baixo teor de fucose ou sem fu- cose).
[0250] Em algumas modalidades, um polipeptídeo quimérico não processado da invenção pode compreender uma região Fc genetica- mente fundida (isto é, região scFc) que tem duas ou mais de sua região constante de Ig constituinte ou uma porção da mesma independente- mente selecionadas a partir da região constante de Ig ou uma porção da mesma descrita aqui. Em algumas modalidades, as regiões Fc de uma região Fc dimérica são as mesmas. Em outras modalidades, pelo menos duas das regiões Fc são diferentes. Por exemplo, as regiões Fc ou parceiros de ligação ao FcRn das proteínas da invenção compreen- dem o mesmo número de resíduos de aminoácidos ou podem diferir, quanto ao comprimento, por um ou mais resíduos de aminoácidos (por exemplo, cerca de 5 resíduos de aminoácidos (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou 5 resíduos de aminoácidos), cerca de 10 resíduos, cerca de 15 resí- duos, cerca de 20 resíduos, cerca de 30 resíduos, cerca de 40 resíduos ou cerca de 50 resíduos). Em ainda outras modalidades, as regiões Fc ou parceiros de ligação ao FcRn da proteína da invenção podem diferir quanto à sequência em uma ou mais posições de aminoácidos. Por exemplo, pelo menos duas das regiões Fc ou parceiros de ligação ao FcRn podem diferir em cerca de 5 posições de aminoácidos (por exem- plo, 1, 2, 3, 4 ou 5 posições de aminoácidos), cerca de 10 posições, cerca de 15 posições, cerca de 20 posições, cerca de 30 posições, cerca de 40 posições ou cerca de 50 posições). III.C.2. Sequências XTEN
[0251] Conforme usado aqui, "sequência XTEN" se refere a polipep- tídeos de comprimento estendido com sequências de ocorrência não natural substancialmente não repetitivas que são compostas principal- mente por pequenos aminoácidos hidrofílicos, com a sequência tendo um baixo grau ou nenhuma estrutura secundária ou terciária sob condi- ções fisiológicas. Como um parceiro polipeptídico quimérico, os XTENs podem servir como um transportador, conferindo determinadas proprie- dades farmacocinéticas, físico-químicas e farmacêuticas desejáveis quando ligados a uma sequência da proteína VWF ou FVIII da invenção para criar um polipeptídeo quimérico. Tais propriedades desejáveis in- cluem, porém sem limitações, parâmetros farmacocinéticos e caracte- rísticas de solubilidade aumentados. Conforme usado aqui, "XTEN" ex- clui especificamente anticorpos ou fragmentos de anticorpos, tais como anticorpos com uma única cadeia ou fragmentos Fc de uma cadeia leve ou uma cadeia pesada.
[0252] Em algumas modalidades, uma sequência XTEN mais curta confere uma propriedade de extensão de meia-vida aprimorada compa- rado com uma sequência XTEN mais longa quando a sequência XTEN é fundida a uma proteína VWF e/ou uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma. Portanto, em algumas modalidades, a se- quência XTEN fundida a uma proteína VWF e/ou à segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma contém menos de 288 ami-
noácidos de comprimento, isto é, é menos de 288 aminoácidos. Em al- gumas modalidades, a sequência XTEN fundida a uma proteína VWF e/ou segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma consiste em uma sequência de aminoácidos com um comprimento entre 12 ami- noácidos e 287 aminoácidos. Em outras modalidades, a sequência XTEN fundida a uma proteína VWF e/ou segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma compreende pelo menos cerca de 36 ami- noácidos, pelo menos cerca de 42 aminoácidos, pelo menos cerca de 72 aminoácidos ou pelo menos cerca de 144 aminoácidos, mas menos de 288 aminoácidos. Em outras modalidades, a sequência XTEN fun- dida a uma proteína VWF e/ou segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma é selecionada a partir de AE36, AG36, AE42, AG42, AE72, AG72, AE144 ou AG144. Em algumas modalidades, a sequência XTEN fundida a uma proteína VWF e/ou a segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma é uma sequência de aminoácidos pelo me- nos 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 14, em que o polipeptídeo quimérico exibe uma meia-vida aprimorada com- parado com um polipeptídeo quimérico sem a sequência XTEN.
[0253] O polipeptídeo quimérico da invenção pode compreender ainda uma (segunda, terceira ou mais) sequências XTEN adicionais. A sequência XTEN adicional pode ainda ser fundida ao polipeptídeo de FVIII ou à primeira região constante de Ig ou uma porção da mesma. As sequências XTEN adicionais podem ter qualquer comprimento. Por exemplo, a sequência XTEN adicional fundida com o polipeptídeo de FVIII ou primeira região constante de Ig ou uma porção da mesma é um peptídeo ou um polipeptídeo que tem mais do que cerca de 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 900, 950, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800 ou 2000 resíduos de aminoácidos. Em determinadas modalidades,
a sequência XTEN adicional é um peptídeo ou polipeptídeo com mais de cerca de 20 a cerca de 3000 resíduos de aminoácidos, mais de cerca de 30 a cerca de 2500 resíduos, mais de cerca de 40 a cerca de 2000 resíduos, mais de cerca de 50 a cerca de 1500 resíduos, mais de cerca de 60 a cerca de 1000 resíduos, mais de cerca de 70 a cerca de 900 resíduos, mais de cerca de 80 a cerca de 800 resíduos, mais de cerca de 90 a cerca de 700 resíduos, mais de cerca de 100 a cerca de 600 resíduos, mais de cerca de 110 a cerca de 500 resíduos ou mais de cerca de 120 a cerca de 400 resíduos. Em determinadas modalidades, o XTEN adicional que é fundido ao polipeptídeo de FVIII compreende pelo menos cerca de 288 aminoácidos. Em modalidades particulares, o XTEN adicional que é fundido ao polipeptídeo de FVIII compreende cerca de 288 aminoácidos. Em modalidades particulares, o XTEN adici- onal que é fundido ao polipeptídeo de FVIII compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 70 %, pelo menos cerca de 75 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 85 %, pelo menos cerca de 90 %, em pelo menos cerca de 95 %, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98 %, pelo menos cerca de 99 % ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos de AE288 (SEQ ID NO: 8).
[0254] As sequências XTEN (ou seja, a sequência XTEN fundida com a proteína VWF e/ou segunda região constante de Ig ou uma por- ção da mesma ou a sequência XTEN fundida com o polipeptídeo de FVIII e/ou primeira região constante de Ig ou uma porção da mesma ou inserida em um ou mais sítios de inserção dentro do polipeptídeo de FVIII) pode compreender um ou mais motivos de sequência de 9 a 14 resíduos de aminoácidos ou uma sequência de aminoácidos de pelo menos 80 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntica ao motivo da sequência, em que o motivo compreende, consiste essencialmente em ou consiste em 4 a 6 tipos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em glicina (G), alanina (A), serina (S), treonina (T), glutamato (E) e prolina (P). Consulte documento US 2010-0239554 A1.
[0255] Em algumas modalidades, a sequência XTEN compreende motivos de sequência não sobrepostos em que pelo menos cerca de 80% ou pelo menos cerca de 85 % ou pelo menos cerca de 90 % ou pelo menos cerca de 91 % ou pelo menos cerca de 92 % ou pelo menos cerca de 93 % ou pelo menos cerca de 94 % ou pelo menos cerca de 95 % ou pelo menos cerca de 96 % ou pelo menos cerca de 97 % ou pelo menos cerca de 98 % ou pelo menos cerca de 99 % ou cerca de 100 % da sequência consiste em várias unidades de sequências não sobrepostas selecionadas a partir de uma única família de motivos se- lecionada a partir da Tabela 7, resultando em uma sequência de família. Conforme usado aqui, "família" significa que o XTEN tem motivos sele- cionados apenas a partir de uma única categoria de motivos da Tabela 7; ou seja, AD, AE, AF, AG, AM, AQ, BC ou BD XTEN, e que quaisquer outros aminoácidos no XTEN que não sejam de um motivo de família são selecionados para atingir uma propriedade necessária, de modo a permitir a incorporação de um sítio de restrição pelos nucleotídeos co- dificadores, incorporação de uma sequência de clivagem ou conseguir uma melhor ligação ao FVIII ou VWF. Em algumas modalidades de fa- mílias XTEN, uma sequência XTEN compreende várias unidades de motivos de sequência não sobrepostos da família de motivos AD ou da família de motivos AE ou da família de motivos AF ou da família de mo- tivos AG ou da família de motivos AM ou da família de motivos AQ ou da família BC ou da família BD, com o XTEN resultante exibindo a faixa de homologia descrita acima. Em outras modalidades, o XTEN compre- ende várias unidades de sequências de motivos de duas ou mais famí- lias de motivos da Tabela 7. Tais sequências podem ser selecionadas para atingir as características físicas/químicas desejadas, incluindo pro- priedades tais como carga líquida, hidrofilicidade, falta de estrutura se- cundária ou falta de repetitividade que é conferida pela composição de aminoácidos dos motivos, descrita mais detalhadamente abaixo.
Nas modalidades descritas acima neste parágrafo, os motivos incorporados no XTEN podem ser selecionados e montados usando os métodos des- critos aqui para atingir um XTEN de cerca de 36 a cerca de 3000 resí- duos de aminoácidos.
Tabela 7. Motivos de sequência XTEN de 12 aminoácidos e famílias de motivos Família de motivo* SEQUÊNCIA DE MOTIVO AD GESPGGSSGSES (SEQ ID NO: 24) AD GSEGSSGPGESS (SEQ ID NO: 25) AD GSSESGSSEGGP (SEQ ID NO: 26) AD GSGGEPSESGSS (SEQ ID NO: 27) AE, AM GSPAGSPTSTEE (SEQ ID NO: 28) AE, AM, AQ GSEPATSGSETP (SEQ ID NO: 29) AE, AM, AQ GTSESATPESGP (SEQ ID NO: 30) AE, AM, AQ GTSTEPSEGSAP (SEQ ID NO: 31) AF, AM GSTSESPSGTAP (SEQ ID NO: 32) AF, AM GTSTPESGSASP (SEQ ID NO: 33) AF, AM GTSPSGESSTAP (SEQ ID NO: 34) AF, AM GSTSSTAESPGP (SEQ ID NO: 35) AG, AM GTPGSGTASSSP (SEQ ID NO: 36) AG, AM GSSTPSGATGSP (SEQ ID NO: 37) AG, AM GSSPSASTGTGP (SEQ ID NO: 38) AG, AM GASPGTSSTGSP (SEQ ID NO: 39) AQ GEPAGSPTSTSE (SEQ ID NO: 40) AQ GTGEPSSTPASE (SEQ ID NO: 41) AQ GSGPSTESAPTE (SEQ ID NO: 42)
Família de motivo* SEQUÊNCIA DE MOTIVO AQ GSETPSGPSETA (SEQ ID NO: 43) AQ GPSETSTSEPGA (SEQ ID NO: 44) AQ GSPSEPTEGTSA (SEQ ID NO: 45) BC GSGASEPTSTEP (SEQ ID NO: 46) BC GSEPATSGTEPS (SEQ ID NO: 47) BC GTSEPSTSEPGA (SEQ ID NO: 48) BC GTSTEPSEPGSA (SEQ ID NO: 49) BD GSTAGSETSTEA (SEQ ID NO: 50) BD GSETATSGSETA (SEQ ID NO: 51) BD GTSESATSESGA (SEQ ID NO: 52) BD GTSTEASEGSAS (SEQ ID NO: 53) * Denota sequências de motivos individuais os quais, quando usados juntos em várias permutações, resultam em uma "sequência de família"
[0256] Em algumas modalidades, a sequência XTEN usada na in- venção é de pelo menos 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em AE42, AG42, AE48, AM48, AE72, AG72, AE108, AG108, AE144, AF144, AG144, AE180, AG180, AE216, AG216, AE252, AG252, AE288, AG288, AE324, AG324, AE360, AG360, AE396, AG396, AE432, AG432, AE468, AG468, AE504, AG504, AF504, AE540, AG540, AF540, AD576, AE576, AF576, AD576, AE576, AF576 AE612, AG612, AE624, AE648, AG648, AG684, AE720, AG720, AE756, AG756, AE792, AG792, AE828, AG828, AD836, AE864, AF864, AG864, AM875, AE912, AM923, AM1348D, BC864, B648 AE1044, AE1140, AE1236, AE1332, AE1428, AE1524, AE1620, AE1716, AE1812, AE1908, AE2004A, AG948, AG1044, AG1140, AG1236, AG1332, AG1428, AG1524, AG1620, AG1716, AG1812, AG1908 e AG2004. Consulte US 2010- 0239554 A1.
[0257] Em algumas modalidades, a sequência XTEN é pelo menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em AE42 (SEQ ID NO: 9), AE72 (SEQ ID NO: 10), AE144_2A (SEQ IDNO: 55), AE144_3B (SEQ ID NO: 56), AE144_4A (SEQ ID NO: 57), AE144_5A (SEQ ID NO: 58), AE144_6B (SEQ ID NO: 59), AG144_A (SEQ ID NO: 60), AG144_B (SEQ ID NO: 61), AG144_C (SEQ ID NO: 62), AG144_F (SEQ IDNO: 63), AE864 (SEQ ID NO: 15), AE576 (SEQ ID NO: 16), AE288 (SEQ ID NO: 8), AE288_2 (SEQ ID NO: 54), AE144 (SEQ ID NO: 11), AG864 (SEQ ID NO: 17), AG576 (SEQ ID NO: 18), AG288 (SEQ ID NO: 19), AG144 (SEQ ID NO: 14) e quaisquer combinações das mesmas. Em outras modalidades, a sequência XTEN é selecionada a partir do grupo que consiste em AE42 (SEQ ID NO: 9), AE72 (SEQ ID NO: 10), AE144_2A (SEQ IDNO: 55), AE144_3B (SEQ ID NO: 56), AE144_4A (SEQ ID NO: 57), AE144_5A (SEQ IDNO: 58), AE144_6B (SEQ ID NO: 59), AG144_A (SEQ ID NO: 60), AG144_B (SEQ ID NO: 61), AG144_C (SEQ ID NO: 62), AG144_F (SEQ IDNO: 63), AE864 (SEQ ID NO: 15), AE576 (SEQ ID NO: 16), AE288 (SEQ ID NO: 8), AE288_2 (SEQ ID NO: 54), AE144 (SEQ ID NO: 11), AG864 (SEQ ID NO: 17), AG576 (SEQ ID NO: 18), AG288 (SEQ ID NO: 19), AG144 (SEQ ID NO: 14) e quaisquer combinações das mesmas. Em algumas modalidades, a sequência XTEN é AE288. As sequências de aminoácidos para determinadas sequências de XTEN da invenção são mostradas na Tabela 8. Tabela 8. Sequências XTEN XTEN Sequência de aminoácidos GAPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESG- AE42
PGSEPATSGSETPASS SEQ ID NO: 9 AE72 GAP TSESATPESG PGSEPATSGS
(SEQ ID NO: 10) ETPGTSESAT PESGPGSEPA
TSGSETPGTS ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASS GSEPATSGSETPGTSESATPESGPGSE- PATSGSETPGSPAGSPTSTEEGTS-
TEPSEG SAPGSEPATSGSETPGSEPAT- AE144 SGSETPGSEPATSGSETPGTS- (SEQ ID NO:11)
TEPSEGSAPGTSESA PESGPGSEPATSGSETPGTS-
TEPSEGSAP TSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTS- TEPSEGSAPGTSTEPSEGSAPGTSESA- TPESGPGTS- AE144_2A
TEPSEGSAPGTSESATPESGPGSEPAT (SEQ ID NO: 55) SGSETPGTSTEPSEGSAPGTS- TEPSEGSAPGTSESATPESGPGTSESA-
TPESGPG SPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSE- PATSGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPGTS- AE144_3B
TEPSEGSAPGTSTEPSEGSAPGTSTEP (SEQ ID NO: 56) SEGSAPGTSTEPSEGSAPGTS- TEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTS-
TEPSEGSAPG AE144_4A TSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSE- (SEQ ID NO: 57) SATPESGPGSEPATSGSETPGTSESA-
TPESGPGTS- TEPSEGSAPGTSESATPESGPGSPAGS PTSTEEGSPAGSPTSTEEGSPAGSPTS- TEEGTSESATPESGPGTS-
TEPSEGSAPG TSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSE- SATPESGPGSEPATSGSETPGTSESA- TPESGPGTS- AE144_5A
TEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSESA (SEQ ID NO: 58) TPESGPGSEPATSGSETPGTSESA- TPESGPGSPAGSPTSTEEGSPAGSPTS-
TEEG TSTEPSEGSAPGTSESATPESGPGTSE- SATPESGPGTSESATPESGPGSEPAT- SGSETPGSE- AE144_6B
PATSGSETPGSPAGSPTSTEEGTSTEPS (SEQ ID NO: 59) EGSAPGTSTEPSEGSAPGSEPAT- SGSETPGTSESATPESGPGTS-
TEPSEGSAPG GTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGSSPSASTGTGPGSSP-
SASTGTGPGASPGTSST GSPGASPGTSSTGSPGSSTPS- AG144 GATGSPGSSPSASTGTGPGASPG- SEQ ID NO:14
TSSTGSPGSSPSA STGTGPGTPGSGTASSSPGSSTPS-
GATGSP AG144_A GASPGTSSTGSPGSSPSASTGTG- (SEQ ID NO: 60)
PGSSPSASTGTGPGTPGSGTAS- SSPGSSTPS- GATGSPGSSPSASTGTGPGASPGTSST GSPGTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGTPGSGTASSSPGASPG-
TSSTGSPGASPGTSSTGSP GTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGASPGTSSTGSPGTPGSG- TASSSPGSSTPS- AG144_B
GATGSPGSSPSASTGTGPGSSPSASTG (SEQ ID NO: 61) TGPGSSTPSGATGSPGSSTPS- GATGSPGASPGTSSTGSPGASPG-
TSSTGSPGASPGTSSTGSP GTPGSGTASSSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGSSPSASTGTGPG- AG144_C
TPGSGTASSSPGASPGTSSTGSPGASP (SEQ ID NO: 62) GTSSTGSPGASPGTSSTGSPGSSTPS- GATGSPGSSTPSGATGSPGASPG-
TSSTGSP GSSPSASTGTGPGSSPSASTGTG- PGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGSSTPS- AG144_F
GATGSPGSSPSASTGTGPGASPGTSST (SEQ ID NO: 63) GSPGSSPSASTGTGPGTPGSGTAS- SSPGSSTPSGATGSPGSSTPS-
GATGSPGASPGTSSTGSP GTSESATPESGPGSEPATSGSETPG- AE288 TSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSE- SEQ ID NO: 8
SATPESG PGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEG- TSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSE- SATPES GPGSPAGSPTSTEEGSPAGSPTSTEEG- TSTEPSEGSAPGTSESATPESGPGTSE- SATPE SGPGTSESATPESGPGSEPAT- SGSETPGSEPATSGSETPGSPAGSPTS- TEEGTSTEPSE GSAPGTSTEPSEGSAPGSEPAT- SGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAP GSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSE- PATSGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPG-
TSTEPSEGSAPGTSTEPSEGSAPGTSTE PSEGSAPGTSTEPSEGSAPGTS- AE288_2 TEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTS- (SEQ ID NO: 54) TEPSEGSAPGTSESA-
TPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPE SGPGSEPATSGSETPGTSESATPESG- PGTSTEPSEGSAPGTSESATPESG- PGSPAGSPTS- TEEGSPAGSPTSTEEGSPAGSPTSTEE
GTSESATPESGPGTSTEPSEGSAP PGASPGTSSTGSPGASPGTSSTGSPG- AG288 TPGSGTASSSPGSSTPSGATGSPG- SEQ ID NO:19
TPGSGTASS SPGSSTPSGATGSPGTPGSGTAS- SSPGSSTPSGATGSPGSSTPS- GATGSPGSSPSASTG TGPGSSPSASTGTGPGASPG- TSSTGSPGTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGSSPSAST GTGPGSSPSASTGTGPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGSSTPS- GATGSPGSSPSAS TGTGPGASPGTSSTGSPGSSPSASTG- TGPGTPGSGTASSSPGSSTPSGATGS GSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTS- TEPSEGSA PGTSTEPSEGSAPGTSESATPESG- PGSEPATSGSETPGSEPAT-
SGSETPGSPAGSPTST EEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPG- TSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTS- AE576 TEPSEG SEQ ID NO:16 SAPGTSTEPSEGSAPGTSESATPESG- PGTSTEPSEGSAPGTSESATPESG-
PGSEPATSG SETPGTSTEPSEGSAPGTS- TEPSEGSAPGTSESATPESGPGTSESA- TPESGPGSPAGSP TSTEEGTSESATPESGPGSEPAT- SGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPGTSTEP SEGSAPGTSTEPSEGSAPGTS- TEPSEGSAPGTSTEPSEGSAPGTS- TEPSEGSAPGSPAG SPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSESA- TPESGPGSEPATSGSETPGTSESA- TPESGPGSEP ATSGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPGTSESATPESG- PGSPAGSPTSTEEGSP AGSPTSTEEGSPAGSPTSTEEGTSESA- TPESGPGTSTEPSEGSAP PGTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGSSPSASTGTGPGSSP- SASTGTGPGSSTPSGATG SPGSSTPSGATGSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGASPG-
TSSTGSPGTPGSGTAS SSPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGSSP- AG576 SASTGTGPGTPGSGTA SEQ ID NO:18 SSSPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGSSTPS-
GATGSPGSSTPSG ATGSPGASPGTSSTGSPGTPGSGTAS- SSPGSSTPSGATGSPGSSTPS- GATGSPGSSTPS GATGSPGSSPSASTGTGPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGTPGSG- TASSSPGASPG TSSTGSPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGTPGSG- TASSSPGSST PSGATGSPGTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGSS TPSGATGSPGSSPSASTGTGPGSSP- SASTGTGPGASPGTSSTGSPGTPGSG- TASSSPGS STPSGATGSPGSSPSASTGTGPGSSP- SASTGTGPGASPGTSSTGS GSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTS- TEPSEGSA PGTSTEPSEGSAPGTSESATPESG- PGSEPATSGSETPGSEPAT-
SGSETPGSPAGSPTST EEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPG- TSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTS- AE864 TEPSEG SEQ ID NO:15 SAPGTSTEPSEGSAPGTSESATPESG- PGTSTEPSEGSAPGTSESATPESG-
PGSEPATSG SETPGTSTEPSEGSAPGTS- TEPSEGSAPGTSESATPESGPGTSESA- TPESGPGSPAGSP TSTEEGTSESATPESGPGSEPAT- SGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPGTSTEP SEGSAPGTSTEPSEGSAPGTS- TEPSEGSAPGTSTEPSEGSAPGTS- TEPSEGSAPGSPAG SPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSESA- TPESGPGSEPATSGSETPGTSESA- TPESGPGSEP ATSGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPGTSESATPESG- PGSPAGSPTSTEEGSP AGSPTSTEEGSPAGSPTSTEEGTSESA- TPESGPGTSTEPSEGSAPGTSESA- TPESGPGS EPATSGSETPGTSESATPESGPGSE- PATSGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPG SPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSE- PATSGSETPGTSESATPESG- PGSPAGSPTSTEE GSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPG- TSESATPESGPGTSESATPESGPGTSE- SATPESG PGSEPATSGSETPGSEPAT- SGSETPGSPAGSPTSTEEGTS- TEPSEGSAPGTSTEPSEGS APGSEPATSGSETPGTSESATPESGPG-
TSTEPSEGSAP GASPGTSSTGSPGSSPSASTGTG- AG864 PGSSPSASTGTGPGTPGSGTAS- SEQ ID NO:17
SSPGSSTPSGATGS PGSSPSASTGTGPGASPGTSSTGSPG- TPGSGTASSSPGSSTPSGATGSPG- TPGSGTASS SPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGASPGTSST GSPGTPGSGTASSSPGSSTPS- GATGSPGSSPSASTGTGPGSSP- SASTGTGPGSSTPSGA TGSPGSSTPSGATGSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGTPGSGT ASSSPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGSSP- SASTGTGPGTPGSG TASSSPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGSSTPS- GATGSPGSSTP SGATGSPGASPGTSSTGSPGTPGSG- TASSSPGSSTPSGATGSPGSSTPS- GATGSPGSST PSGATGSPGSSPSASTGTGPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGTPGSG- TASSSPGAS PGTSSTGSPGASPGTSSTGSPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGSPGTPGSG- TASSSPGS STPSGATGSPGTPGSGTAS- SSPGSSTPSGATGSPGTPGSGTAS- SSPGSSTPSGATGSPG SSTPSGATGSPGSSPSASTGTGPGSSP- SASTGTGPGASPGTSSTGSPGTPGSG- TASSSP GSSTPSGATGSPGSSPSASTGTG- PGSSPSASTGTGPGASPG- TSSTGSPGASPGTSSTGS PGSSTPSGATGSPGSSPSASTGTG- PGASPGTSSTGSPGSSPSASTGTGPG- TPGSGTASS SPGSSTPSGATGSPGSSTPS- GATGSPGASPGTSSTGSP
[0258] Nas modalidades nas quais o(s) componente(s) XTEN têm menos de 100% de seus aminoácidos consistindo em 4, 5 ou 6 tipos de aminoácidos selecionados a partir de glicina (G), alanina (A), serina (S), treonina (T), glutamato (E) e prolina (P) ou menos de 100 % da sequên- cia consiste nos motivos da sequência da Tabela 7 ou as sequências de XTEN da Tabela 8, os outros resíduos de aminoácidos do XTEN são selecionados a partir de qualquer um dos outros 14 L-aminoácidos na- turais, mas são, de preferência, selecionados a partir de aminoácidos hidrofílicos, de modo que a sequência XTEN contenha pelo menos cerca de 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou pelo menos cerca de 99 % de aminoácidos hidrofílicos. Os aminoácidos XTEN que não são glicina (G), alanina (A), serina (S), treonina (T), glu- tamato (E) e prolina (P) são intercalados em toda a sequência XTEN, estão localizados dentro ou entre os motivos de sequência ou estão concentrados em um ou mais trechos curtos da sequência XTEN, por exemplo, para criar um ligante entre o XTEN e os componentes FVIII ou VWF. Naqueles casos onde o componente XTEN compreende aminoá-
cidos diferentes de glicina (G), alanina (A), serina (S), treonina (T), glu- tamato (E) e prolina (P), é preferido que menos de cerca de 2 % ou menos de cerca de 1 % dos aminoácidos sejam resíduos hidrofóbicos, de modo que as sequências resultantes geralmente careçam de estru- tura secundária, por exemplo, não têm mais do que 2 % de alfa hélices ou 2 % de beta folhas, conforme determinado por meio dos métodos descritos aqui. Os resíduos hidrofóbicos que são menos favorecidos na construção de XTEN incluem triptofano, fenilalanina, tirosina, leucina, isoleucina, valina e metionina. Além disso, pode-se projetar sequências XTEN para conter menos de 5 % ou menos de 4 % ou menos de 3 % ou menos de 2 % ou menos de 1 % ou nenhum dos seguintes aminoá- cidos: cisteína (para evitar a formação de dissulfeto e oxidação), metio- nina (para evitar a oxidação), asparagina e glutamina (para evitar a de- samidação). Assim, em algumas modalidades, o componente XTEN que compreende outros aminoácidos além de glicina (G), alanina (A), serina (S), treonina (T), glutamato (E) e prolina (P) tem uma sequência com menos de 5 % dos resíduos que contribuem para alfa hélices e beta folhas, conforme medido pelo algoritmo de Chou-Fasman e têm pelo menos 90 % ou pelo menos cerca de 95 % ou mais formação de espiral aleatória, conforme medido pelo algoritmo GOR.
[0259] Em outras modalidades, a sequência XTEN usada na inven- ção afeta a propriedade física ou química, por exemplo, farmacocinética, do polipeptídeo quimérico da presente invenção. A sequência XTEN usada na presente invenção pode exibir uma ou mais das seguintes pro- priedades vantajosas: flexibilidade conformacional, solubilidade aquosa aumentada, alto grau de resistência à protease, baixa imunogenicidade, baixa ligação a receptores de mamíferos ou raios hidrodinâmicos (ou de Stokes) aumentados. Em algumas modalidades, a sequência XTEN li- gada a uma proteína FVIII na presente invenção aumenta as proprieda- des farmacocinéticas, tal como meia-vida terminal mais longa ou maior área sob a curva (AUC), de modo que o polipeptídeo quimérico descrito aqui permaneça in vivo por um período maior de tempo comparado com o FVIII de tipo selvagem. Em outras modalidades, a sequência XTEN usada na presente invenção aumenta as propriedades farmacocinéti- cas, tal como meia-vida terminal mais longa ou área sob a curva aumen- tada (AUC), de modo que a proteína FVIII permaneça in vivo por um período de tempo maior comparado com o FVIII de tipo selvagem.
[0260] Uma variedade de métodos e ensaios podem ser emprega- dos para determinar as propriedades físicas/químicas de proteínas que compreendem a sequência XTEN. Tais métodos incluem, porém sem limitações, centrifugação analítica, EPR, HPLC-troca iônica, HPLC-ex- clusão por tamanho, HPLC-fase reversa, dispersão de luz, eletroforese capilar, dicroísmo circular, calorimetria de varredura diferencial, fluores- cência, HPLC-troca iônica, HPLC-exclusão por tamanho, IV, NMR, es- pectroscopia Raman, refratometria e espectroscopia UV/Visível. Méto- dos adicionais são descritos em Amau et al., Prot Expr and Purif 48, 1- 13 (2006).
[0261] Exemplos adicionais de sequências XTEN que podem ser usadas de acordo com a presente invenção são descritos nas Publica- ções de Patentes Norte-Americanas Nos 2010/0239554 A1, 2010/0323956 A1, 2011/0046060 A1, 2011/0046061 A1, 2011/0077199 A1 ou 2011/0172146 A1 ou Publicação de Patente Internacional N° WO 2010091122 A1, WO 2010144502 A2, WO 2010144508 A1, WO 2011028228 A1, WO 2011028229 A1, WO 2011028344 A2 ou WO 20130122617 A1. III.C.2. Albuminas
[0262] Uma albumina ou uma porção da mesma pode ser um par- ceiro de ligação ao FcRn. Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um polipeptídeo de albumina ou fragmento, variante ou derivado da mesma. A albumina sérica humana (HSA ou HA), uma proteína de 609 aminoácidos em sua forma completa, é responsável por uma pro- porção significativa da pressão osmótica do soro e também funciona como transportadora de ligantes endógenos e exógenos. O termo "al- bumina", conforme usado aqui, inclui albumina de comprimento com- pleto ou um fragmento funcional, variante, derivado ou análogo da mesma. Exemplos de albumina ou fragmentos ou variantes da mesma são descritos nas Publicações de Patentes Norte-Americanas Nos 2008/0194481A1, 2008/0004206 A1, 2008/0161243 A1, 2008/0261877 A1 ou 2008/0153751 A1 ou Publicações de Pedido PCT Nos 2008/033413 A2, 2009/058322 A1 ou 2007/021494 A2, os quais são incorporados aqui a título de referência na íntegra.
[0263] Os polipeptídeos de ligação à albumina (ABPs) podem com- prometer, sem limitação, os domínios de ligação da albumina bacteri- ana, peptídeos de ligação à albumina ou fragmentos de anticorpo de ligação à albumina que podem se ligar à albumina. Domínio 3 da prote- ína G estreptocócica, conforme descrito por Kraulis et al., FEBS Lett. 378: 190-194 (1996) e Linhult et al., Protein Sci. 11: 206-213 (2002) é um exemplo de um domínio de ligação à albumina bacteriana. Exemplos de peptídeos de ligação à albumina são descritos em Dennis et al., J. Biol. Chem. 2002, 277: 35035-35043 (2002). Exemplos de fragmentos de anticorpos de ligação à albumina são descritos em Muller e Konter- mann, Curr. Opin. Mol. Ther. 9: 319-326 (2007); Roovers et al., Cancer Immunol. Immunother. 56: 303-317 (2007) e Holt et al., Prot. Eng. De- sign Sci., 21: 283-288 (2008), os quais são incorporados aqui a título de referência na íntegra.
[0264] Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um sítio de ligação para uma pequena molécula não polipeptídica, variante ou derivado que pode se ligar à albumina. Por exemplo, o polipeptídeo quimérico pode incluir uma ou mais porções de ligação à albumina or- gânica. Um exemplo de tais porções de ligação à albumina é 2-(3-ma- leimidopropanamido)-6-(4- (4-iodofenil)butanamido)hexanoato (etiqueta "Albu"), conforme descrito por Trussel et al., Bioconjugate Chem. 20: 2286-2292 (2009).
[0265] Em determinadas modalidades, o fragmento de VWF des- crito aqui é fundido a uma albumina. Em algumas modalidades, os cons- trutos de fragmento de albumina de VWF formam homodímeros. Em al- gumas modalidades, o domínio D'D3 de VWF que é fundido à albumina se associa a um polipeptídeo de FVIII. Em determinadas modalidades, o domínio D'D3 de VWF fundido à albumina associada ao polipeptídeo de FVIII através de uma interação mais forte do que as interações não covalentes naturais entre o FVIII de tipo selvagem e o VWF. Em moda- lidades particulares, o domínio D'D3 de VWF e/ou o polipeptídeo de FVIII compreende uma ou mais mutações que aumentam a afinidade entre o domínio D'D3 de VWF e o polipeptídeo de FVIII. Em determina- das modalidades, o domínio D'D3 de VWF e/ou o polipeptídeo de FVIII compreende uma ou mais mutações que permitem que uma ligação de dissulfeto se forme entre o domínio D'D3 de VWF e/ou o polipeptídeo de FVIII. III.C.3. CTP
[0266] Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um peptídeo C-terminal (CTP) da subunidade β de gonadotrofina coriônica humana ou fragmento, variante ou derivado da mesma. Os peptídeos CTP são conhecidos por aumentar a meia-vida desta proteína. Con- sulte, por exemplo, Patente Norte-Americana N° 5.712.122, incorporada aqui a título de referência na íntegra. Peptídeos CTP exemplificativos não limitativos são descritos na Publicação de Pedido de Patente Norte- Americana N° 2009/0087411 A1, incorporado a título de referência.
III.C.4. PAS
[0267] Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um peptídeo PAS ou fragmento, variante ou derivado do mesmo. Um pep- tídeo PAS ou sequência PAS, conforme usado aqui, significa uma se- quência de aminoácidos que compreende principalmente resíduos de alanina e serina ou que compreende principalmente resíduos de ala- nina, serina e prolina, a sequência de aminoácidos formando uma con- formação espiral aleatória sob condições fisiológicas. Consequente- mente, a sequência PAS é um bloco de construção, um polímero de aminoácidos ou um cassete de sequência que compreende, consiste essencialmente em ou consiste em alanina, serina e prolina que pode ser usada como uma parte da porção heteróloga no polipeptídeo quimé- rico. Um polímero de aminoácidos também pode formar uma conforma- ção espiral aleatória quando outros resíduos além de alanina, serina e prolina são adicionados como um constituinte secundário na sequência PAS. Por "constituinte secundário" entenda-se que aminoácidos dife- rentes de alanina, serina e prolina podem ser adicionados na sequência PAS até um determinado grau, por exemplo, até cerca de 12 %, isto é, cerca de 12 de 100 aminoácidos da sequência PAS, até cerca de 10 %, até cerca de 9 %, até cerca de 8 %, cerca de 6 %, cerca de 5 %, cerca de 4 %, cerca de 3 % ou seja, cerca de 2 % ou cerca de 1 %, dos ami- noácidos. Os aminoácidos diferentes de alanina, serina e prolina podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, e Val. Sob con- dições fisiológicas, um peptídeo PAS forma uma conformação de espiral aleatória e, assim, pode mediar uma estabilidade aumentada in vivo e/ou in vitro para uma proteína recombinante da invenção e tem ativi- dade pró-coagulante.
[0268] Exemplos não limitativos dos peptídeos PAS são descritos,
por exemplo, na Publicação de Patente Norte-Americana N° 2010/0292130 A1; Publicação de Pedido PCT No WO 2008/155134 A1; e a Patente Europeia EP2173890. III.C.5. HAP
[0269] Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um peptídeo de polímero de homoaminoácidos (HAP) ou fragmento, vari- ante ou derivado do mesmo. Um peptídeo HAP pode compreender uma sequência repetitiva de glicina, a qual tem pelo menos 50 aminoácidos, pelo menos 100 aminoácidos, 120 aminoácidos, 140 aminoácidos, 160 aminoácidos, 180 aminoácidos, 200 aminoácidos, 250 aminoácidos, 300 aminoácidos, 350 aminoácidos, 400 aminoácidos, 450 aminoácidos ou 500 aminoácidos de comprimento. Uma sequência HAP é capaz de estender a meia-vida de uma porção fundida ou ligada à sequência HAP. Exemplos não limitativos da sequência HAP incluem, porém sem limitações, (Gly)n, (Gly4Ser)n ou S(Gly4Ser)n, em que n é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20. Em algumas moda- lidades, n é 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 26, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 ou 40. Em outras modalidades, n é 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 ou 200. Consulte, por exemplo, Schlapschy M. et al., Protein Eng. Design Selection, 20: 273- 284 (2007). III.C.6. Transferrina
[0270] Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um peptídeo de transferrina ou fragmento, variante ou derivado da mesma. Qualquer transferrina pode se fundir com o polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção. Como um exemplo, a Tf (Tf) humana de tipo selvagem é uma proteína de 679 aminoácidos, de apro-
ximadamente 75 kDa (não contabilizando a glicosilação), com dois do- mínios principais, N (cerca de 330 aminoácidos) e C (cerca de 340 ami- noácidos) que parecem se originar de uma duplicação gênica. Consulte os números de acesso GenBank NM001063, XM002793, M12530, XM039845, XM 039847 e S95936 (www.ncbi.nlm.nih.gov), todos incor- porados aqui por referência na íntegra.
[0271] A transferrina transporta ferro através da endocitose mediada pelo receptor de transferrina (TfR). Depois que o ferro é liberado em um compartimento endossômico e o complexo Tf-TfR é reciclado para a su- perfície da célula, a Tf é liberada de volta ao espaço extracelular para o próximo ciclo de transporte de ferro. Tf possui uma meia-vida longa que é superior a 14-17 dias (Li et al., Trends Pharmacol. Sci. 23: 206-209 (2002)). Proteínas de fusão de transferrina foram estudadas para exten- são de meia-vida, distribuição direcionada em terapias para câncer, dis- tribuição oral e ativação sustentada de pró-insulina (Brandsma et al., Biotechnol. Adv., 29: 230-238 (2011); Bai et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 7292-7296 (2005); Kim et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 334: 682-692 (2010); Wang et al., J. Controlled Release 155: 386-392 (2011)). III.C.7. PEG
[0272] Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um sítio de ligação para uma porção heteróloga não polipeptídica ou frag- mento, variante ou derivado da mesma. Por exemplo, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção pode incluir uma ou mais porções de polietileno glicol (PEG) ligadas a um ou mais resí- duos de aminoácidos no fator de coagulação e/ou na região Fc.
[0273] PEGuilação de uma proteína pode se referir a um conjugado formado entre a proteína e pelo menos uma molécula de polietileno gli-
col (PEG). O PEG está comercialmente disponível em uma grande va- riedade de pesos moleculares e faixas de peso molecular médio. Exem- plos típicos de faixas de peso molecular médio de PEG incluem, porém sem limitações, cerca de 200, cerca de 300, cerca de 400, cerca de 600, cerca de 1000, cerca de 1300-1600, cerca de 1450, cerca de 2000, cerca de 3000, cerca de 3000-3750, cerca de 3350, cerca de 3000- 7000, cerca de 3500-4500, cerca de 5000-7000, cerca de 7000-9000, cerca de 8000, cerca de 10000, cerca de 8500-11500, cerca de 16000- 24000, cerca de 35000, cerca de 40000, cerca de 60000 e cerca de 80000 Daltons. Estes pesos moleculares médios são fornecidos mera- mente como exemplos e não se destinam a ser limitativos de qualquer forma.
[0274] Um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção pode ser PEGuilado para incluir porções mono- ou poli (por exemplo, 2-4) PEG. A PEGuilação pode ser realizada por meio de qual- quer uma das reações de PEGilação conhecidas na técnica. Métodos para a preparação de um produto de proteína PEGuilado geralmente incluirão (i) a reação de um polipeptídeo com polietileno glicol (tal como um éster reativo ou derivado de aldeído de PEG) sob condições nas quais o peptídeo da invenção se torna ligado a um ou mais grupos de PEG; e (ii) obtenção do(s) produto(s) da reação. Em geral, as condições ideais de reação para as reações serão determinadas caso a caso com base em parâmetros conhecidos e no resultado desejado.
[0275] Há uma série de métodos de ligação de PEG disponíveis para aqueles versados na técnica, por exemplo, Malik F. et al., Exp. He- matol. 20: 1028-35 (1992); Francis, Focus on Growth Factors 3 (2): 4- 10 (1992); Publicações de Patente Europeia Nos EP0401384, EP0154316 e EP0401384; e Publicações de Pedido de Patente Interna- cional Nos WO92/16221 e WO95/34326. Como um exemplo não limita- tivo, as variantes de FVIII podem conter substituições de cisteína e as cisteínas podem ser ainda conjugadas com o polímero de PEG. Con- sulte Mei et al., Blood 116: 270-279 (2010) e Patente Norte-Americana N° 7.632.921, os quais são aqui incorporados a título de referência na íntegra.
[0276] Em determinadas modalidades, o polipeptídeo quimérico compreende um polipeptídeo de FVIII com uma única cadeia covalen- temente ligado a um fragmento de VWF que compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF, em que o polipeptídeo de FVIII compre- ende uma exclusão de todo ou uma parte do domínio B, em que o poli- peptídeo de FVIII é peguilado e em que o fragmento de VWF é fundido direta ou indiretamente ao Terminal-N do polipeptídeo de FVIII (por exemplo, PEG-scFVIII-D'D3, "MG1121" ou LAFATE). Em outras moda- lidades, o polipeptídeo quimérico compreende um polipeptídeo de FVIII com uma única cadeia covalentemente ligado a um fragmento de VWF que compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF, em que o polipeptídeo de FVIII compreende uma exclusão de todo ou uma parte do domínio B, em que o fragmento de VWF é peguilado, e em que o fragmento de VWF é fundido direta ou indiretamente ao Terminal-N do polipeptídeo de FVIII (por exemplo, scFVIII-D'D3-PEG). Em outras mo- dalidades, o polipeptídeo quimérico compreende um polipeptídeo de FVIII com uma única cadeia covalentemente ligado a um fragmento de VWF que compreende um domínio D' e um domínio D3 de VWF, em que o polipeptídeo de FVIII compreende uma exclusão de todo ou uma parte do domínio B, em que o polipeptídeo de FVIII e o fragmento de VWF são peguilados, e em que o fragmento de VWF é fundido direta ou indiretamente ao Terminal-N do polipeptídeo de FVIII (por exemplo, scFVIII-D'D3-PEG). III.C.8. HES
[0277] Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um polímero de hidroxietilamido (HES). HES é um derivado de amilopectina que ocorre naturalmente e é degradado pela alfa-amilase no corpo. O HES exibe propriedades biológicas vantajosas e é usado como agente de reposição do volume sanguíneo e na terapia de hemodiluição nas clínicas. Consulte, por exemplo, Sommermeyer et al., Krankenhaus- pharmazie 8: 271-278 (1987); e Weidler et al., Arzneim.-Forschung/Drug Res. 41: 494-498 (1991).
[0278] O HES é caracterizado principalmente pela distribuição do peso molecular e pelo grau de substituição. HES tem um peso molecular médio (peso médio) de 1 a 300 kD, de 2 a 200 kD, de 3 a 100 kD ou de 4 a 70 kD. Hidroxietilamido pode ainda exibir um grau molar de substi- tuição de 0,1 a 3, de 0,1 a 2, de 0,1 a 0,9 ou de 0,1 a 0,8, e uma propor- ção entre a substituição C2:C6 na faixa de 2 a 20 em relação aos grupos hidroxietila. Um HES com um peso molecular médio de cerca de 130 kD é o VOLUVEN da Fresenius. O VOLUVEN é um coloide artificial em- pregado, por exemplo, para reposição de volume usado na indicação terapêutica para terapia e profilaxia de hipovolemia. Há vários métodos de ligação de HES disponíveis para aqueles versados na técnica, por exemplo, os mesmos métodos de ligação de PEG descritos acima. III.C.9. PSA
[0279] Em determinados aspectos, um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção compreende pelo menos um polímero de ácido polissiálico (PSA). PSAs são polímeros não ramifica- dos de ocorrência natural de ácido siálico produzidos por determinadas cepas bacterianas e em mamíferos em determinadas células. Consulte, por exemplo, Roth J. et al. (1993) em Polysialic Acid: From Microbes to Man, eds. Roth J., Rutishauser U., Troy F. A. (BirkhäuserVerlag, Basel, Suíça), páginas 335-348. PSAs podem ser produzidos em vários graus de polimerização de n = cerca de 80 ou mais resíduos de ácido siálico até n = 2 através de hidrólise ácida limitada ou digestão com neuramini- dases ou por meio de fracionamento das formas naturais derivadas de bactérias do polímero. Há vários métodos de ligação de PSA disponíveis para aqueles versados na técnica, por exemplo, os mesmos métodos de ligação de PEG descritos acima. Em determinados aspectos, um PSA ativado também pode ser ligado a um resíduo de aminoácido cis- teína dentro do fator de coagulação, por exemplo, no FVIII ou na região Fc. Consulte, por exemplo, Patente Norte-Americana N° 5.846.951. III.C.10. Receptores de Liberação
[0280] Em determinados aspectos, a meia-vida de um polipeptídeo quimérico usado nos métodos da presente invenção pode ser estendida onde o fator de coagulação do polipeptídeo quimérico compreende um polipeptídeo de FVIII e pelo menos um fragmento de um receptor de depuração de FVIII ou fragmento de ligação de FVIII, variante ou deri- vado do mesmo. A inserção de formas solúveis de receptores de depu- ração, tal como o receptor de proteína relacionada à lipoproteína de baixa densidade LRP1 ou fragmentos do mesmo, pode bloquear a liga- ção de FVIII aos receptores de depuração e, assim, estender sua meia- vida, por exemplo, meia-vida in vivo. LRP1 é uma proteína da mem- brana integral de 600 kDa que está implicada na depuração mediada por receptor de uma variedade de proteínas, incluindo FVIII. Consulte, por exemplo, Lenting et al., Haemophilia 16: 6-16 (2010). Outros recep- tores de eliminação de FVIII adequados são, por exemplo, LDLR (re- ceptor de lipoproteína de baixa densidade), VLDLR (receptor de lipopro- teína de densidade muito baixa) e megalina (LRP-2) ou fragmentos dos mesmos. Consulte, por exemplo, Bovenschen et al., Blood 106: 906-912 (2005); Bovenschen, Blood 116: 5439-5440 (2010); Martinelli et al., Blood 116: 5688-5697 (2010). III.D. Sítios de Inserção
[0281] Em alguns aspectos, o sítio de inserção no polipeptídeo de
FVIII está localizado em um ou mais domínios do polipeptídeo de FVIII, o qual é o Terminal-N, o domínio A1, o domínio A2, o domínio A3, o domínio B, o domínio C1, domínio C2, Terminal-C ou duas ou mais com- binações dos mesmos ou entre dois domínios do polipeptídeo de FVIII, os quais são o domínio A1 e a região ácida a1, e a região ácida a1 e o domínio A2, o domínio A2 e a2 região ácida, a região a2 ácida e domínio B, o domínio B e domínio A3, e o domínio A3 e domínio C1, o domínio C1 e domínio C2 ou quaisquer combinações dos mesmos. Por exemplo, os sítios de inserção nos quais a sequência XTEN pode ser inserida são selecionados a partir do grupo que consiste no Terminal-N e domínio A1, Terminal-N e domínio A2, Terminal-N e domínio A3, Terminal-N e domínio B, o Terminal-N e o domínio C1, o Terminal-N e o domínio C2, o Terminal-N e o Terminal-C, os domínios A1 e A2, os domínios A1 e A3, os domínios A1 e B, os domínios A1 e C1, os domínios A1 e C2, o domínio A1 e o Terminal-C, os domínios A2 e A3, os domínios A2 e B, os domínios A2 e C1, os domínios A2 e C2, o domínio A2 e o Terminal- C, os domínios A3 e B, os domínios A3 e C1, os domínios A3 e C2, o domínio A3 e o Terminal-C, os domínios B e C1, os domínios B e C2, o domínio B e o Terminal-C, os domínios C1 e C2, o C1 e o Terminal-C, o domínio C2 e o Terminal-C e duas ou mais combinações dos mesmos.
[0282] O polipeptídeo de FVIII, no qual a sequência XTEN é inserida imediatamente a jusante de um ou mais aminoácidos (por exemplo, um ou mais sítios de inserção XTEN) no polipeptídeo de FVIII ou ligado no Terminal-C ou no Terminal-N, retém a atividade de FVIII após a ligação ou inserção pela sequência XTEN. A sequência XTEN pode ser inserida no polipeptídeo de FVIII uma ou mais de uma, duas, três vezes, quatro vezes, cinco vezes ou seis vezes, de modo que as inserções não afetem a atividade de FVIII (ou seja, a proteína FVIII ainda retém a propriedade de coagulação).
[0283] O polipeptídeo de FVIII útil na presente invenção pode ser ligado a um ou mais polipeptídeos XTEN no Terminal-N ou Terminal-C do polipeptídeo de FVIII através de um ligante opcional ou inserido ime- diatamente a jusante de um ou mais aminoácidos (por exemplo, um ou mais sítios de inserção XTEN) no polipeptídeo de FVIII através de um ou mais ligantes opcionais.
[0284] Em ainda outras modalidades, um ou mais XTENs são inse- ridos no domínio B de FVIII. Em um exemplo, um XTEN é inserido entre os aminoácidos 740 e 1640 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a sequência de FVIII entre os aminoácidos 740 e 1640 opcionalmente não está presente. Em outro exemplo, um XTEN é inserido entre os aminoácidos 741 e 1690 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a sequência de FVIII entre os aminoácidos 740 e 1690 opcionalmente não está presente. Em outros exemplos, um XTEN é inserido entre os ami- noácidos 741 e 1648 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a se- quência de FVIII entre os aminoácidos 741 e 1648 opcionalmente não está presente. Em ainda outros exemplos, um XTEN é inserido entre os aminoácidos 743 e 1638 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a sequência de FVIII entre os aminoácidos 743 e 1638 opcionalmente não está presente. Em ainda outros exemplos, um XTEN é inserido entre os aminoácidos 745 e 1656 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a sequência de FVIII entre os aminoácidos 745 e 1656 opcionalmente não está presente. Em alguns exemplos, um XTEN é inserido entre os ami- noácidos 745 e 1657 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a se- quência de FVIII entre os aminoácidos 745 e 1657 opcionalmente não está presente. Em determinados exemplos, um XTEN é inserido entre os aminoácidos 745 e 1667 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a sequência de FVIII entre os aminoácidos 745 e 1667 opcionalmente não está presente. Em ainda outros exemplos, um XTEN é inserido en- tre os aminoácidos 745 e 1686 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a sequência de FVIII entre os aminoácidos 745 e 1686 opcional- mente não está presente. Em alguns outros exemplos, um XTEN é in- serido entre os aminoácidos 747 e 1642 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a sequência de FVIII entre os aminoácidos 747 e 1642 op- cionalmente não está presente. Em ainda outros exemplos, um XTEN é inserido entre os aminoácidos 751 e 1667 que corresponde à SEQ ID NO: 65, em que a sequência de FVIII entre os aminoácidos 751 e 1667 opcionalmente não está presente. Em algumas modalidades, uma se- quência XTEN é inserida entre os aminoácidos 745 e 746 de um poli- peptídeo de FVIII maduro ou o sítio de inserção que corresponde do polipeptídeo de FVIII com domínio B excluído. Em uma modalidade par- ticular, uma sequência XTEN que compreende uma sequência de ami- noácidos que tem pelo menos cerca de 70 %, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 %, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97 %, pelo menos cerca de 98 %, pelo menos cerca de 99 % ou cerca de 100 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de AE288 (SEQ ID NO: 8) é inserida entre os aminoá- cidos 745 e 746 de um FVIII maduro, em que o FVIII maduro tem uma exclusão dos resíduos de aminoácidos 746-1648. Em modalidades par- ticulares, o XTEN é inserido imediatamente a jusante do aminoácido 745 do FVIII com domínio B excluído da Tabela 5 (SEQ ID NO: 68). III.E. Ligantes
[0285] Em determinadas modalidades, o polipeptídeo quimérico da presente invenção compreende ainda um ou mais ligantes na proteína FVIII e/ou no fragmento de VWF. Um tipo de ligante é um ligante clivá- vel, o qual pode ser clivado por várias proteases quando administrado a um indivíduo in vivo, por exemplo, em um local de coagulação. Em al- gumas modalidades, o ligante clivável permite a clivagem da porção,
por exemplo, uma proteína VWF, da sequência XTEN, portanto, do po- lipeptídeo quimérico no local da cascata de coagulação, deste modo, permitindo que o FVIII ativado (FVIIIa) retenha sua atividade de FVIIIa. Outro tipo de ligante é um ligante processável, o qual contém um sítio de clivagem intracelular e, portanto, pode ser clivado por uma enzima de processamento intracelular em uma célula hospedeira, permitindo a expressão conveniente de um polipeptídeo e a formação de um polipep- tídeo quimérico.
[0286] Um ou mais ligantes podem estar presentes entre quaisquer duas proteínas no polipeptídeo quimérico. Em algumas modalidades, um polipeptídeo quimérico compreende um primeiro polipeptídeo que compreende (i) um polipeptídeo de FVIII e (ii) uma primeira região cons- tante de Ig ou uma porção da mesma e um segundo polipeptídeo que compreende (iii) uma proteína VWF, (iv) um ligante (por exemplo, um ligante clivável), (v) uma sequência XTEN e (vi) uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma. Em outras modalidades, um polipeptídeo quimérico compreende um primeiro polipeptídeo que com- preende (i) um polipeptídeo de FVIII e (ii) uma primeira região constante de Ig ou uma porção da mesma e um segundo polipeptídeo que com- preende (iii) uma proteína VWF, (iv) uma sequência XTEN, (v) um li- gante (por exemplo, um ligante clivável) e (vi) uma segunda região cons- tante de Ig ou uma porção da mesma. Em outras modalidades, um po- lipeptídeo quimérico compreende um primeiro polipeptídeo que compre- ende (i) um polipeptídeo de FVIII e (ii) uma primeira região constante de Ig ou uma porção da mesma e um segundo polipeptídeo que compre- ende (iii) uma proteína VWF, (iv) um primeiro ligante (por exemplo, um ligante clivável), (v) uma sequência XTEN, (vi) um segundo ligante (por exemplo, um ligante clivável) e (vii) uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma. Em algumas modalidades, o primeiro po-
lipeptídeo compreende ainda um ligante, por exemplo, um ligante clivá- vel, entre o polipeptídeo de FVIII e a primeira região constante de Ig.
[0287] Em determinadas modalidades, um polipeptídeo quimérico compreende uma única cadeia que compreende (i) um polipeptídeo de FVIII, (ii) uma primeira região constante de Ig ou uma porção da mesma, (iii) um ligante (por exemplo, um ligante processável), (iv) uma proteína VWF, (v) uma sequência XTEN e (vi) uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma. Em outras modalidades, um polipeptídeo quimérico compreende uma única cadeia que compreende (i) um poli- peptídeo de FVIII, (ii) uma primeira região constante de Ig ou uma por- ção da mesma, (iii) um primeiro ligante (por exemplo, um ligante proces- sável), (iv) uma proteína VWF, (v) um segundo ligante (por exemplo, um ligante clivável), (vi) uma sequência XTEN e (vii) uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma. O ligante processável pode ser processado após o polipeptídeo quimérico ser expresso na célula hospedeira; assim, o polipeptídeo quimérico produzido na célula hospe- deira pode estar na forma final que compreende duas ou três cadeias polipeptídicas.
[0288] O ligante útil na presente invenção pode compreender qual- quer molécula orgânica. Exemplos de ligantes que podem ser usados nos polipeptídeos quiméricos da presente invenção são descritos, por exemplo, nos documentos US 2011/0183907 A1, US 2016/0229903 A1 e US 2016/0251408 A1, cada um dos quais é incorporado aqui a título de referência na íntegra. Em algumas modalidades, o ligante compre- ende um polímero, por exemplo, polietileno glicol (PEG) ou hidroxietila- mido (HES). Em outras modalidades, o ligante compreende uma se- quência de aminoácidos. O ligante pode compreender pelo menos cerca de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800,
1900 ou 2000 aminoácidos. O ligante pode compreender 1-5 aminoáci- dos, 1-10 aminoácidos, 1-20 aminoácidos, 10-50 aminoácidos, 50-100 aminoácidos, 100-200 aminoácidos, 200-300 aminoácidos, 300-400 aminoácidos ácidos, 400-500 aminoácidos, 500-600 aminoácidos, 600- 700 aminoácidos, 700-800 aminoácidos, 800-900 aminoácidos ou 900- 1000 aminoácidos. Em algumas modalidades, o ligante compreende uma sequência XTEN. Exemplos adicionais de XTEN podem ser usa- dos de acordo com a presente invenção são descritos nas Publicações de Patentes Norte-Americanas Nos 2010/0239554 A1, 2010/0323956 A1, 2011/0046060 A1, 2011/0046061 A1, 2011/0077199 A1 ou 2011/0172146 A1 ou Publicação de Patente Internacional Nos. WO 2010091122 A1, WO 2010144502 A2, WO 2010144508 A1, WO 2011028228 A1, WO 2011028229 A1 ou WO 2011028344 A2. Em ou- tras modalidades, o ligante é uma sequência PAS.
[0289] Em determinadas modalidades, o ligante é um polímero, por exemplo, polietileno glicol (PEG) ou hidroxietilamido (HES). Em outras modalidades, o ligante é uma sequência de aminoácidos. O ligante pode compreender pelo menos cerca de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900 ou 2000 aminoácidos. O li- gante pode compreender 1-5 aminoácidos, 1-10 aminoácidos, 1-20 ami- noácidos, 10-50 aminoácidos, 50-100 aminoácidos, 100-200 aminoáci- dos, 200-300 aminoácidos, 300-400 aminoácidos ácidos, 400-500 ami- noácidos, 500-600 aminoácidos, 600-700 aminoácidos, 700-800 amino- ácidos, 800-900 aminoácidos ou 900-1000 aminoácidos.
[0290] Exemplos de ligantes são bem conhecidos na técnica. Em determinadas modalidades, o ligante compreende a sequência Gn. O ligante pode compreender a sequência (GA)n. O ligante pode compre- ender a sequência (GGS)n. Em outras modalidades, o ligante compre-
ende (GGGS)n (SEQ ID NO: 101). Em ainda outras modalidades, o li- gante compreende a sequência (GGS)n(GGGGS)n (SEQ ID NO: 95). Nestes casos, n pode ser um número inteiro de 1-100. Em outros casos, n pode ser um número inteiro de 1-20, ou seja, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20. Exemplos de ligantes in- cluem, porém sem limitações, GGG, SGGSGGS (SEQ ID NO: 96), GGSGGSGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 97), GGSGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 98), GGSGGSGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 99) ou GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 100). O ligante não elimina ou diminui a atividade da proteína VWF ou a atividade de coagulação do Fator VIII. Opcionalmente, o ligante aumenta a atividade da proteína VWF ou a atividade de coagulação da proteína Fator VIII, por exemplo, diminuindo ainda mais os efeitos do impedimento estérico e tornando a proteína VWF ou porção de Fator VIII mais acessível ao seu sítio de ligação alvo.
[0291] Em determinadas modalidades, o ligante útil para o polipep- tídeo quimérico tem 15-25 aminoácidos de comprimento. Em outras mo- dalidades, o ligante útil para o polipeptídeo quimérico tem 15-20 amino- ácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o ligante para o po- lipeptídeo quimérico tem 10-25 aminoácidos de comprimento. Em ou- tras modalidades, o ligante para o polipeptídeo quimérico tem 15 ami- noácidos de comprimento. Em ainda outras modalidades, o ligante para o polipeptídeo quimérico é (GGGGS)n (SEQ ID NO: 94), onde G repre- senta glicina, S representa serina e n é um número inteiro de 1-20. III.F. Sítios de Clivagem
[0292] Um ligante clivável pode incorporar uma porção capaz de ser clivada tanto quimicamente (por exemplo, hidrólise de uma ligação és- ter), enzimaticamente (ou seja, incorporação de uma sequência de cli- vagem de protease) ou fotoliticamente (por exemplo, um cromóforo, tal como ácido 3-amino-3-(2-nitrofenil)propiônico (ANP)) para liberar uma molécula de outra. Exemplos de ligantes cliváveis adequados para o polipeptídeo quimérico da presente invenção podem ser encontrados, por exemplo, nos documentos US 2016/0229903 A1 e US 2016/0251408 A1, cada um dos quais é incorporado aqui a título de re- ferência na íntegra.
[0293] Em determinadas modalidades, um ligante clivável compre- ende um ou mais sítios de clivagem no Terminal-N ou Terminal-C ou em ambos. Em outras modalidades, o ligante clivável consiste essencial- mente em ou consiste em um ou mais sítios cliváveis. Em outras moda- lidades, o ligante clivável compreende sequências ligantes de aminoá- cidos heterólogas descritas aqui ou polímeros e um ou mais sítios clivá- veis.
[0294] Em determinadas modalidades, um ligante clivável compre- ende um ou mais sítios de clivagem que podem ser clivados em uma célula hospedeira (isto é, sítios de processamento intracelular). Exem- plos não limitativos do sítio de clivagem incluem RRRR (SEQ ID NO: 102), RKRRKR (SEQ ID NO: 103) e RRRRS (SEQ ID NO: 104).
[0295] Em algumas modalidades, um ligante clivável compreende uma região a1 de FVIII, uma região a2 de FVIII, uma região a3 de FVIII, um sítio clivável de trombina que compreende XVPR (SEQ ID NO: 105) e um motivo de interação de PAR1, em que X é um aminoácido alifático ou qualquer combinação dos mesmos. Um ligante compreende a região a2 que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, cerca de 85 %, cerca de 90 %, cerca de 95 % ou 100 % idêntica a Glu720 a Arg740 que corresponde ao FVIII de comprimento completo, em que a região a2 é capaz de ser clivada pela trombina. Em modalida- des particulares, um ligante clivável útil para a invenção compreende uma região a2 que compreende ISDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKN- NAIEPRSFS (SEQ ID NO: 106) ou DKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKN-
NAIEPRSFS (SEQ ID NO: 88). Em outras modalidades, um ligante cli- vável para a invenção compreende a região a1 que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, cerca de 85 %, cerca de 90 %, cerca de 95 % ou 100 % idêntica a Met337 a Arg372 que corresponde ao FVIII de comprimento completo, em que a região a1 é capaz de ser clivada pela trombina. Em modalidades particulares, a re- gião a1 compreende ISMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDDNS- PSFIQIRSV (SEQ ID NO: 107). Em algumas modalidades, um ligante clivável da invenção compreende a região a3 que compreende uma se- quência de aminoácidos cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95 % ou 100 % idêntica a Glu1649 a Arg1689 que corresponde ao FVIII de comprimento completo, em que a região a3 é capaz de ser clivada pela trombina. Em determinadas modalidades, um ligante clivá- vel para a invenção compreende uma região a3 que compreende ISEI- TRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDEN QSPRSFQ (SEQ ID NO: 108).
[0296] Em outras modalidades, um ligante clivável compreende o sítio de clivagem de trombina que compreende X-V-P-R (SEQ ID NO: 105) e o motivo de interação de PAR1 e em que o motivo de interação de PAR1 compreende S-F-L-L-R-N (SEQ ID NO: 109). O motivo de in- teração de PAR1 pode compreender ainda uma sequência de aminoá- cidos selecionada a partir de P, PN, PND, PNDK (SEQ ID NO: 110), PNDKY (SEQ ID NO: 111), PNDKYE (SEQ ID NO: 112), PNDKYEP (SEQ ID NO: 113), PNDKYEPF (SEQ ID NO: 114), PNDKYEPFW (SEQ ID NO: 115), PNDKYEPFWE (SEQ ID NO: 116), PNDKYEPFWED (SEQ ID NO: 117), PNDKYEPFWEDE (SEQ ID NO: 118), PNDKYEPFWE- DEE (SEQ ID NO: 119), PNDKYEPFWEDEES (SEQ ID NO: 120) ou qualquer combinação das mesmas. Em algumas modalidades, o ami- noácido alifático é selecionado a partir de Glicina, Alanina, Valina, Leu- cina ou Isoleucina.
[0297] Em outras modalidades, um ligante clivável compreende um ou mais sítios de clivagem que são clivados por uma protease após um polipeptídeo quimérico que compreende o ligante clivável ser adminis- trado a um indivíduo.
Em algumas modalidades, o sítio de clivagem é clivado por uma protease selecionada a partir do grupo que consiste em Fator XIa, Fator XIIa, calicreína, Fator VIIa, Fator IXa, Fator Xa, Fator IIa (trombina), Elastase-2, MMP-12, MMP -13, MMP-17 e MMP-20. Em outras modalidades, o sítio de clivagem é selecionado a partir do grupo que consiste em um sítio de clivagem de FXIa (por exemplo, KLTR ↓ AET (SEQ ID NO: 121)), um sítio de clivagem de FXIa (por exemplo, DFTR ↓ VVG (SEQ ID NO: 122)), um sítio de clivagem de FXIIa (por exemplo, TMTR ↓ IVGG (SEQ ID NO: 123)), um sítio de clivagem de calicreína (por exemplo, SPFR ↓ STGG (SEQ ID NO: 124)), um sítio de clivagem de FVIIa (por exemplo, LQVR ↓ IVGG (SEQ ID NO: 125)), um sítio de clivagem de FIXa (por exemplo, PLGR ↓ IVGG (SEQ ID NO: 126)), um sítio de clivagem de FXa (por exemplo, IEGR ↓ TVGG (SEQ ID NO: 127)), um sítio de clivagem de FIIa (trombina) (por exemplo, LTPR ↓ SLLV (SEQ ID NO: 128)), um sítio de clivagem de Elastase-2 (por exemplo, LGPV ↓ SGVP (SEQ ID NO: 129)), um sítio de clivagem de Granzima-B (por exemplo, VAGD ↓ SLEE (SEQ ID NO: 130)), um sítio de clivagem de MMP-12 (por exemplo, GPAG ↓ LGGA (SEQ ID NO: 131)), um sítio de clivagem de MMP-13 (por exemplo, GPAG ↓ LRGA (SEQ ID NO: 132)), um sítio de clivagem de MMP-17 (por exemplo, APLG ↓ LRLR (SEQ ID NO: 133)), um sítio de clivagem de MMP-20 (por exemplo, PALP ↓ LVAQ (SEQ ID NO: 134)), um sítio de clivagem de TEV (por exemplo, ENLYFQ ↓ G (SEQ ID NO: 135)), um sítio de cliva- gem de Enteroquinase (por exemplo, D DDK ↓ IVGG (SEQ ID NO: 136)), um sítio de clivagem de Protease 3C (PRESCISSION™) (por exemplo, LEVLFQ ↓ GP (SEQ ID NO: 137)) e um sítio de clivagem de Sortase A
(por exemplo, LPKT ↓ GSES) (SEQ ID NO: 138). Em determinadas mo- dalidades, os sítios de clivagem de FXIa incluem, porém sem limitações, por exemplo, TQSFNDFTR (SEQ ID NO: 1) e SVSQTSKLTR (SEQ ID NO: 3). Sítios de clivagem de trombina exemplificativos não limitativos incluem, por exemplo, DFLAEGGGVR (SEQ ID NO: 4), TTKIKPR (SEQ ID NO: 5), LVPRG (SEQ ID NO: 6), DKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKN- NAIEPRSFS (SEQ ID NO: 88) ou IEPRSFS (SEQ ID NO: 88) SEQ ID NO: 194), e uma sequência que compreende, consiste essencialmente em ou consiste em ALRPR (SEQ ID NO: 7) (por exemplo, ALR- PRVVGGA (SEQ ID NO: 145)).
[0298] Em algumas modalidades, o sítio de clivagem é TLDPRS- FLLRNPNDKYEPFWEDEEK (SEQ ID NO: 146). Em outras modalida- des, o sítio de clivagem compreende DKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKN- NAIEPRSFS (SEQ ID NO: 88) ou um fragmento da mesma. Em moda- lidades particulares, o sítio de clivagem compreende IEPRSFS (SEQ ID NO: 194). Em outras modalidades, o sítio de clivagem compreende EPRSFS (SEQ ID NO: 195), em que o sítio de clivagem não é a região a2 de comprimento completo de FVIII. Em ainda outras modalidades, o sítio de clivagem compreende IEPR (SEQ ID NO: 200). Em ainda outras modalidades, o sítio de clivagem compreende IEPR (SEQ ID NO: 200), em que o sítio de clivagem não é a região a2 de comprimento completo de FVIII ou não compreende a região a2 de comprimento completo de FVIII. Em outras modalidades, o sítio de clivagem compreende DKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 88), KNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 139), NTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 140), TGDY- YEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 141), GDYYEDSYE- DISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 142), DYYEDSYEDISAY- LLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 143), YYEDSYEDISAYLLSKNNAIE- PRSFS (SEQ ID NO: 144), YEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ
ID NO: 176), EDSYEDISAYLLSKLLSKYLESSNESK: 178), EDSYE- DISAYLLSKI SKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 144). SEQ ID NO: 179), YEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 180), EDISAYLLSKNNAIE- PRSFS (SEQ ID NO: 181), DISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 182), ISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 184), DISAYLLSKNNAIE- PRSFS (SEQ ID NO: 182), ISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 183), SAQYPRSFS (SEQ ID NO: 183)), AYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 185), YLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 186), LLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 187), LSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 188), SKNNAIE- PRSFS (SEQ ID NO: 189), KNNAPRSFS (SEQ ID NO: 189), KNNA- PRSFS ID NO: 190), NNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 191), NAIEPRSFS (SEQ ID NO: 192), AIE PRSFS (SEQ ID NO: 193) ou IEPRSFS (SEQ ID NO: 194). Em outras modalidades, o sítio de clivagem compreende DKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 88), KNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 139), NTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS: 140 LLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 141), GDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 142), DYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 143) ¸ YYEDSYEDISAYLLSKNAYPRSFS (SEQ ID NO: 142), DYYEDSYE- DISAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 143), YYEDSYEDISAY- LLSKNAYPRSFSYSYEDISAYLLSKNAYNAPRSFS (SEQEDISAY- LLSKNNAIEPRSFS: 144 IDN: 144), YYEDSYEDISAYLLSKNAYNAIE- PRSFS (SEQEDISIE: 144), (SEQ ID NO: 183), SAYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 184), AYLLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 185), YLLSKN- NAIEPRSFS (SEQ ID NO: 186), LLSKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 187), LSKNNAIEPRS (188), SKNNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 189), KNNAIE- PRSFS (SEQ ID NO: 190), NNAIEPRSFS (SEQ ID NO: 191), NAIE- PRSFS (SEQ ID NO: 192), AIEPRSFS (SEQ ID NO: 193) ou IEPRSFS (SEQ ID NO: 194), em que o sítio de clivagem não é a região a2 de FVIII de comprimento completo. Em determinadas modalidades, o ligante cli- vável é clivável em um ensaio de clivagem de trombina conforme forne- cido aqui ou como conhecido na técnica.
[0299] Em modalidades particulares, o polipeptídeo quimérico da presente invenção compreende: (i) uma proteína FVIII que compreende um polipeptídeo de FVIII, uma primeira sequência XTEN e uma primeira região Fc; e (ii) um fragmento de VWF que compreende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF, uma segunda sequência XTEN, um ligante a2 de FVIII e uma segunda região Fc; em que: (a) a proteína FVIII tem uma exclusão dos aminoácidos 746 a 1648 que corresponde ao FVIII maduro; (b) a primeira sequência XTEN é inserida no polipeptídeo de FVIII imediatamente a jusante do aminoácido 745 que corresponde ao FVIII maduro; (c) a primeira sequência de XTEN compreende uma sequên- cia de aminoácidos com pelo menos cerca de 70 %, pelo menos cerca de 75 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 85 %, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 %, em pelo menos cerca de 96 %, pelo menos cerca de 97 %, pelo menos cerca de 98 %, pelo menos cerca de 99 % ou cerca de 100 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de AE288 (SEQ ID NO: 8); (d) a primeira região Fc é fundida ao Terminal-C do polipep- tídeo de FVIII; (e) a segunda sequência XTEN é fundida ao Terminal-C do fragmento de VWF; (f) a segunda sequência de XTEN compreende uma sequên- cia de aminoácidos com pelo menos cerca de 70 %, pelo menos cerca de 75 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 85 %, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 %, em pelo menos cerca de 96 %, pelo menos cerca de 97 %, pelo menos cerca de 98 %, pelo menos cerca de 99 % ou cerca de 100 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de AE144_5A (SEQ ID NO: 58); (g) o ligante a2 é fundido ao Terminal-C do XTEN; (h) o ligante a2 compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos cerca de 70 %, pelo menos cerca de 75 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 85 %, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 %, pelo menos cerca de 96 %, pelo me- nos cerca de 97 %, pelo menos cerca de 98 %, pelo menos cerca de 99 % ou cerca de 100 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 88; (i) a segunda região Fc é fundida ao Terminal-C do ligante a2; e (j) a primeira região Fc está covalentemente ligada à se- gunda região Fc através de uma ligação de dissulfeto.
[0300] Em modalidades particulares, um polipeptídeo quimérico da invenção compreende duas sequências polipeptídicas, uma primeira se- quência polipeptídica que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica a uma se- quência selecionada a partir de FVIII- 161 (SEQ ID NO: 69), FVIII-169 (SEQ ID NO: 70), FVIII-170 (SEQ ID NO: 71), FVIII-173 (SEQ ID NO: 72); FVIII-195 (SEQ ID Nº: 73); FVIII-196 (SEQ ID NO: 74), FVIII199 (SEQ ID NO: 75), FVIII-201 (SEQ ID NO: 76); FVIII-203 (SEQ ID NO: 77), FVIII-204 (SEQ ID NO: 78), FVIII-205 (SEQ ID NO: 79), FVIII-266 (SEQ ID NO: 80), FVIII-267 (SEQ ID NO: 81), FVIII-268 (SEQ ID NO: 82), FVIII-269 (SEQ ID NO: 83), FVIII-271 (SEQ ID NO: 84) ou FVIII-272 (SEQ ID NO: 85) e um segunda sequência polipeptídica que compre- ende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica a uma sequência selecionada a partir de VWF031 (SEQ ID NO: 86), VWF034 (SEQ ID NO: 87) ou VWF- 036.
[0301] Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico da in- venção compreende duas sequências polipeptídicas, uma primeira se- quência polipeptídica que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 201; e uma segunda se- quência polipeptídica que compreende um fragmento de VWF que com- preende um domínio D' de VWF e um domínio D3 de VWF e uma região Fc.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico da invenção compreende duas sequências polipeptídicas, uma primeira sequência polipeptídica que compreende o polipeptídeo de FVIII e uma região Fc; e uma segunda sequência polipeptídica que compreende uma sequên- cia de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 202. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo quimérico da invenção compreende duas sequências polipeptídicas, uma primeira sequência polipeptídica que compreende uma sequência de aminoácidos pelo me- nos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à sequência de ami- noácidos estabelecida em SEQ ID NO: 201 e uma segunda sequência polipeptídica que compreende um sequência de aminoácidos pelo me- nos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 202. Em modalidades particula- res, o polipeptídeo quimérico da invenção compreende duas sequências polipeptídicas, uma primeira sequência polipeptídica que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 201 e uma se- gunda sequência polipeptídica que compreende a sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 202. Em outras modalidades parti- culares, o polipeptídeo quimérico da invenção compreende duas se- quências polipeptídicas, uma primeira sequência polipeptídica que com- preende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 201 e uma segunda sequência polipeptídica que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 202, em que a primeira sequência polipeptídica e a segunda sequência polipeptídica são liga- das uma à outra através de uma ligação de dissulfeto. IV. Composições Farmacêuticas
[0302] As composições que contêm o polipeptídeo quimérico da presente invenção podem conter um carreador farmaceuticamente acei- tável adequado. Por exemplo, elas podem conter excipientes e/ou auxi- liares que facilitam o processamento dos compostos ativos em prepara- ções concebidas para distribuição no local de ação.
[0303] A composição farmacêutica pode ser formulada para admi- nistração parentérica (isto é, intravenosa, subcutânea ou intramuscular) por injeção em bolus. As formulações para injeção podem ser apresen- tadas na forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes com múltiplas doses com um conservante adicionado. As composições podem assumir formas tais como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos e conter agentes de for- mulação, tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou disper- são. Alternativamente, o ingrediente ativo pode estar na forma de pó para constituição com um veículo adequado, por exemplo, água apiro- gênica.
[0304] Formulações adequadas para administração parentérica também incluem soluções aquosas dos compostos ativos na forma so- lúvel em água, por exemplo, sais solúveis em água. Além disso, podem ser administradas suspensões dos compostos ativos como suspensões oleosas para injeção apropriadas. Solventes ou veículos lipofílicos ade- quados incluem óleos graxos, por exemplo, óleo de gergelim, ou ésteres de ácidos graxos sintéticos, por exemplo, oleato de etila ou triglicerí- deos. As suspensões aquosas para injeção podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão incluindo, por exemplo, car-
boximetilcelulose de sódio, sorbitol e dextrana. Opcionalmente, a sus- pensão também pode conter estabilizantes. Lipossomas também po- dem ser usados para encapsular as moléculas da invenção para distri- buição em células ou espaços intersticiais. Carreadores farmaceutica- mente aceitáveis exemplificativos são solventes fisiologicamente com- patíveis, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e retardadores de absorção, água, so- lução salina, solução salina tamponada com fosfato, dextrose, glicerol, etanol e assim por diante. Em algumas modalidades, a composição compreende agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois, tais como manitol, sorbitol ou cloreto de sódio. Em outras modalidades, as composições compreendem substâncias farmaceuticamente aceitá- veis, tais como agentes umectantes ou pequenas quantidades de subs- tâncias auxiliares, tais como agentes umectantes ou emulsificantes, conservantes ou tampões, os quais aumentam a vida útil ou a eficácia dos ingredientes ativos.
[0305] As composições da invenção podem estar em uma variedade de formas incluindo, por exemplo, líquido (por exemplo, soluções injetá- veis e infusíveis), dispersões, suspensões, formas de dosagem semis- sólidas e sólidas. A forma preferida depende do modo de administração e da aplicação terapêutica.
[0306] A composição pode ser formulada como uma solução, mi- croemulsão, dispersão, lipossoma ou outra estrutura ordenada ade- quada para alta concentração de fármaco. Soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas ao incorporar o ingrediente ativo na quantidade necessária em um solvente apropriado com um ou uma combinação dos ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido por es- terilização através de filtração. Em geral, as dispersões são preparadas ao incorporar o ingrediente ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários dentre aqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos são secagem a vácuo e liofilização, a qual produz um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma so- lução previamente esterilizada por filtração. A fluidez adequada de uma solução pode ser mantida, por exemplo, mediante uso de um revesti- mento tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula ne- cessário no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. A absorção prolongada de composições injetáveis pode ser conseguida ao incluir na composição um agente que retarda a absorção, por exemplo, sais de monoestearato e gelatina.
[0307] O ingrediente ativo pode ser formulado com uma formulação ou dispositivo de liberação controlada. Exemplos de tais formulações e dispositivos incluem implantes, adesivos transdérmicos e sistemas de distribuição microencapsulados. Polímeros biodegradáveis e biocompa- tíveis podem ser usados, por exemplo, acetato de etileno vinila, poliani- dridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido poliláctico. Métodos para a preparação de tais formulações e dispositivos são co- nhecidos na técnica. Consulte, por exemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
[0308] As formulações de depósito injetáveis podem ser feitas ao formar matrizes microencapsuladas do fármaco em polímeros biodegra- dáveis, tais como polilactídeo-poliglicolídeo. Dependendo da proporção de fármaco para polímero e da natureza do polímero empregado, a taxa de liberação de fármaco pode ser controlada. Outros polímeros biode- gradáveis exemplificativos são poliortoésteres e polianidridos. Formula- ções de depósito injetável também podem ser preparadas ao encerrar o fármaco em lipossomas ou microemulsões.
[0309] Compostos ativos suplementares podem ser incorporados nas composições. Em algumas modalidades, o polipeptídeo quimérico da invenção é formulado com outro fator de coagulação ou uma vari- ante, fragmento, análogo ou derivado do mesmo. Por exemplo, o fator de coagulação inclui, porém sem limitações, Fator V, Fator VII, Fator VIII, Fator IX, Fator X, Fator XI, Fator XII, Fator XIII, protrombina, fibri- nogênio, fator de von Willebrand ou fator tecidual solúvel recombinante (rsTF) ou formas ativadas de qualquer um dos anteriores. O fator de coagulação do agente hemostático também pode incluir fármacos anti- fibrinolíticos, por exemplo, ácido épsilon-amino-caproico, ácido tranexâ- mico.
[0310] Os regimes de dosagem podem ser ajustados para fornecer a resposta desejada ideal. Por exemplo, um único bolus pode ser admi- nistrado, várias doses divididas podem ser administradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada conforme indicado pelas exigências da situação terapêutica. É vanta- joso formular composições parentéricas na forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. Consulte, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton, Pa. 1980).
[0311] Além do composto ativo, a forma de dosagem líquida pode conter ingredientes inertes, tais como água, álcool etílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetilformamida, óleos, glicerol, álcool tetra- hidrofurfurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano.
[0312] Exemplos não limitativos de veículos farmacêuticos adequa- dos também são descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences por E. W. Martin. Alguns exemplos de excipientes incluem amido, gli- cose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, gel de sílica, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite desnatado em pó, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e assim por diante. A composição também pode conter reagentes para tampo- namento de pH e agentes umectantes ou emulsificantes.
[0313] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica compreende um polipeptídeo quimérico e um carreador farmaceutica- mente aceitável. A proteína FVIII em um polipeptídeo quimérico tem meia-vida estendida comparado com a proteína FVIII de tipo selvagem ou a proteína FVIII correspondente sem o fragmento de VWF. Em algu- mas modalidades, em que a meia-vida do polipeptídeo quimérico é es- tendida pelo menos cerca de 1,5 vezes, pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 2,5 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo me- nos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 6 vezes, pelo menos cerca de 7 vezes, pelo menos cerca de 8 vezes, pelo menos cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo me- nos cerca de 11 vezes ou pelo menos cerca de 12 vezes mais do que o FVIII de tipo selvagem. Em outras modalidades, a meia-vida do Fator VIII é de pelo menos cerca de 17 horas, pelo menos cerca de 18 horas, pelo menos cerca de 19 horas, pelo menos cerca de 20 horas, pelo me- nos cerca de 21 horas, pelo menos cerca de 22 horas, pelo menos cerca de 23 horas, pelo menos cerca de 24 horas, pelo menos cerca de 25 horas, pelo menos cerca de 26 horas, pelo menos cerca de 27 horas, pelo menos cerca de 28 horas, pelo menos cerca de 29 horas, pelo me- nos cerca de 30 horas, pelo menos cerca de 31 horas, pelo menos cerca de 32 horas, pelo menos cerca de 33 horas, pelo menos cerca de 34 horas, pelo menos cerca de 35 horas, pelo menos cerca de 36 horas, pelo menos cerca de 48 horas, pelo menos cerca de 60 horas, pelo me- nos cerca de 72 horas, pelo menos cerca de 84 horas, pelo menos cerca de 96 horas ou pelo menos cerca de 108 horas. Em algumas modalida- des, a meia-vida do polipeptídeo quimérico é estendida cerca de 3 vezes comparado com o FVIII de tipo selvagem.
[0314] Em algumas modalidades, a composição é administrada através de administração parentérica, a qual pode ser intravenosa ou subcutânea.
[0315] Em outras modalidades, a composição é usada para tratar uma doença ou condição hemorrágica em um indivíduo que precisa. A doença ou condição hemorrágica é selecionada a partir do grupo que consiste em um transtorno hemorrágico da coagulação, hemartrose, sangramento muscular, sangramento oral, hemorragia, hemorragia nos músculos, hemorragia oral, trauma, trauma capitis, sangramento gas- trintestinal, hemorragia intracraniana, hemorragia intra-abdominal, he- morragia intratorácica, fratura óssea, sangramento do sistema nervoso central, sangramento no espaço retrofaríngeo, sangramento no espaço retroperitoneal, sangramento na bainha do íliopsoas e quaisquer com- binações dos mesmos. Em ainda outras modalidades, o indivíduo está agendado para sofrer uma cirurgia. Em ainda outras modalidades, o tra- tamento é profilático ou sob demanda.
[0316] Tendo agora descrito a presente invenção em detalhes, a mesma será mais claramente entendida por meio de referência aos exemplos a seguir, os quais são incluídos aqui apenas para fins de ilus- tração e não se destinam a ser limitativos da invenção. Todas as paten- tes, publicações e artigos citados aqui são expressa e especificamente incorporados aqui a título de referência.
EXEMPLOS Exemplo 1: Primeiro estudo em ser humano de heterodímeros de FVIII-XTEN-Fc/D’D3-XTEN-Fc
[0317] A terapia de reposição com base em fator é a pedra angular do tratamento da hemofilia. Os produtos de FVIII recombinantes con- vencionais (rFVIII) têm uma meia-vida curta, requerendo administração frequente. Avanços significativos no atendimento ao paciente foram tra- zidos pelo rFVIIIFc (Eloctate), incluindo o intervalo de dosagem mais longo para hemofilia A; controle adequado do sangramento, incluindo profilaticamente, em situações agudas, perioperatórias e de emergên- cia; proteção além do controle de sangramento, incluindo proteção das articulações e melhoria da qualidade de vida; e perfil de segurança de longo prazo consistente e bem caracterizado. No entanto, a dosagem profilática de Fator VIII semanal ou mais longa ainda permanece uma necessidade não atendida para a maioria dos pe ople com hemofilia A.
[0318] O presente estudo investiga a segurança e farmacocinética (PK) de rFVIIIFc-VWF-XTEN, um polipeptídeo quimérico que compre- ende a (i) um polipeptídeo de FVIII, uma sequência XTEN inserida no domínio B do polipeptídeo de FVIII e uma primeira região Fc; e (ii) um fragmento de VWF, uma segunda sequência XTEN, um ligante a2 e uma segunda região Fc (Figura 1). Design do Estudo
[0319] O objetivo do presente estudo foi avaliar a segurança, tolera- bilidade e atividade de FVIII (PK) em uma dose única de rFVIIIFc-VWF- XTEN comparado com rFVIII. A população de pacientes incluiu homens adultos tratados previamente para hemofilia A grave (nível de atividade endógena de FVIII < 1 IU/dL [< 1 %]) com pelo menos 150 dias de ex- posição aos produtos de FVIII e sem histórico de ensaio de inibidor po- sitivo ou sinais clínicos de diminuição da resposta à administração de FVIII. Os parâmetros primários foram eventos adversos e anormalida- des clínicas em ensaios laboratoriais, incluindo o desenvolvimento de inibidores. Os principais parâmetros secundários incluíam parâmetros farmacocinéticos incluindo, porém sem limitações, meia-vida de elimi- nação (t1/2), depuração (CL), área sob a curva de 0 ao infinito (AUC 0- ), tempo médio de residência (MRT) e recuperação incremental (IR).
[0320] Os pacientes foram inscritos em uma coorte sob baixa dose (7 pacientes; Figura 2A) ou uma coorte com alta dose (9 pacientes; Fi- gura 2B). Cada paciente recebeu rFVIII (ADVATE) seguido por um pe- ríodo de amostragem de PK. Após um breve período de eliminação (≥ 3 dias para a coorte sob baixa dose (Figura 2A) e ≥ 4 dias para a coorte com alta dose (Figura 2B)), cada indivíduo recebeu, então, rFVIIIFc- VWF-XTEN seguido por um período de amostragem PK. Os indivíduos foram submetidos à observação de segurança durante 28 dias após a injeção de rFVIIIFc-VWF-XTEN, incluindo coleta de amostra para avali- ação do inibidor em 14 e 28 dias após a injeção de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Os pacientes na coorte sob baixa dose receberam 25 IU/kg de rFVIII e 25 IU/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Os pacientes na coorte com alta dose receberam 65 IU/kg de rFVIII e 65 IU/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Métodos
[0321] Os parâmetros farmacocinéticos foram medidos por meio de um ensaio de coagulação do tempo de tromboplastina parcial ativada modificado (aPTT) (ensaio em "um estágio"). Resumidamente, a ativi- dade de FVIII é medida em um ensaio aPTT modificado usando o Dade Actin FSL Activated PTT Reagent (Siemens Health Care Diag- nostics) em um analisador BCS XP (Siemens Healthcare Diagnostics). Curvas de calibração de 7 pontos (Alto: 1.500-0.050 IU/mL; Baixo: 0,150-0,0025IU/mL) foram preparadas usando um calibrador específico para rFVIIIFc-VWF-XTEN. Para a curva de calibração alta, o calibrador de rFVIIIFc-VWF-XTEN [1.000 IU/mL] é diluído em tampão de Tris/BSA (50 mM, cloreto de sódio a 150 mM, pH de 7,4 +/- 0,2, o qual contém BSA a 1 %). Esta diluição é realizada pelo analisador BCS XP para gerar níveis de atividade de FVIII de calibração pré-selecionados. Estes são, então, testados na diluição de trabalho de 1:2 preparada em tam- pão de Tris/BSA. Para a curva de calibração baixa, o calibrador de rFVIIIFc-VWF-XTEN [1.000 IU/mL] é diluído em plasma deficiente em FVIII imuno-empobrecido (Siemens Healthcare Diagnostics) pelo anali- sador BCS XP e testado puro (na ausência de um dispositivo de dilui- ção de trabalho). A calibração é realizada em duplicata. As curvas são traçadas pela atividade de FVIII em IU/mL (eixo x) e tempo de coagula- ção em segundos (eixo y). As curvas de calibração alta e baixa usam um ajuste de curva de regressão log-linear.
[0322] As amostras são testadas em duplicata usando o metaensaio da curva de calibração alta (diluições de trabalho de 1:2, 1:4 e 1:8 em Tris/BSA) ou o metaensaio da curva de calibração baixa (puro, diluições de trabalho de 1:2 e 1:4 em plasma deficiente de FVIII com depleção imune). Após a diluição de trabalho apropriada, todos os calibradores, amostras de pacientes e amostras de controle de qualidade são mistu- rados a 1:1 com plasma deficiente em FVIII imuno-empobrecido, o qual contém menos de ou igual a 0,010 IU/mL de atividade de FVIII e pelo menos 0,400 IU/mL de outros fatores de coagulação. Após as amostras serem misturadas com este plasma, o reagente aPTT é adicionado e a mistura é incubada. Após incubação, cloreto de cálcio é adicionado e o tempo para a formação de coágulo é medido opticamente. Um algoritmo examina, então, se os resultados da diluição de trabalho individual estão dentro de +/- 15,0 % da média para determinar a atividade relatada do FVIII. São necessários resultados de diluição de trabalho de, no mínimo, dois metaensaios para determinar a atividade FVIII relatada, exceto pró- ximo ao Limite Mínimo de Quantificação (LLOQ). Resultados: Coorte Sob Baixa Dose
[0323] Sete indivíduos inscritos na coorte sob baixa dose; um indi- víduo desistiu por motivos não relacionados ao estudo antes de receber rFVIIIFc-VWF-XTEN. Seis indivíduos receberam uma única baixa dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN (25 IU/kg). As características dos primeiros qua- tro indivíduos tratados na coorte sob baixa dose incluíam: indivíduos adultos do sexo masculino previamente tratados para hemofilia A grave (nível de atividade endógena do FVIII < 1 IU/dL [< 1 %]); todos os indi- víduos eram caucasianos; a idade dos indivíduos variava de 19 a 60 anos, com uma média de 33 anos; e o peso médio foi de 85 kg (variando a partir de 67,2-100,6 kg).
[0324] Em todos os pacientes, rFVIIIFc-VWF-XTEN foi geralmente bem tolerado e nenhum inibidor foi observado no Dia 14 ou Dia 28 após a dosagem.
[0325] A atividade média do FVIII pós-infusão para os primeiros seis indivíduos que receberam uma única dose baixa de rFVIIIFc-VWF- XTEN (25 IU/kg) em 5 dias foi de cerca de 12,0 % e, em 7 dias, foi de cerca de 5,3 % (Figura 3A). A atividade média do FVIII permaneceu acima de 1 % ao longo de 10 dias (Figura 3A). Os parâmetros farmaco- cinéticos, medidos pela medição do tempo de tromboplastina parcial ati- vada (aPTT), para rFVIIIFc-VWF-XTEN (25 IU/kg) e rFVIII (25 IU/kg) são mostrados na Tabela 9. Foi observado que rFVIIIFc-VWF-XTEN tem uma meia-vida média de cerca de 37,6 horas em seres humanos, a qual era mais de 4 vezes maior do que a meia-vida média para rFVIII (cerca de 9,12 horas) administrado na mesma dose. Tabela 9: Parâmetros Farmacocinéticos (PK) para a coorte sob baixa dose rFVIIIFc-VWF-XTEN rFVIII Proporção padrão Parâmetro PK Média geométrica Média geométrica [IC de 95 %] [Faixa] (N=6) [Faixa] (N=7) 37,61 9,12 4,13 [2,94, 5,79] Meia-vida, h [33,28-42,50] [6,24–13,33] P < 0,001 70,1 51,80 1,35 [1,04, 1,77] Cmax (IU/dL) [49,7–98,9] [43,3–61,9] P = 0,032 4470 638 7,00 [5,78, 8,48] AUC∞, h x IU/dL [3280–6080] [495–822] P < 0,001 56,93 12,54 4,54 [3,64, 5,66] MRT, h [49,19–65,89] [9,82–16,10] P < 0,001 0,56 3,91 0,14 [0,12, 0,17] CL, mL/h/kg [0,41–0,76] [3,05–5,02] P < 0,001 2,72 2,00 1,36 [0,98, 1,89] IR, IU/dL por IU/kg [1,95–3,80] [1,60–2,50] P = 0,063 Resultados: Coorte Sob Alta Dose
[0326] Nove indivíduos foram inscritos na coorte sob alta dose. Os indivíduos receberam uma única dose alta de rFVIIIFc-VWF-XTEN (65 IU/kg). Um indivíduo não pôde ser testado quanto aos parâmetros PK em virtude de razões não relacionadas ao estudo. As características dos indivíduos tratados na coorte sob alta dose incluíam: indivíduos adultos do sexo masculino previamente tratados para hemofilia A grave (nível de atividade endógena do FVIII < 1 IU/dL [< 1 %]); 7 de 9 indivíduos eram caucasianos; a idade dos indivíduos variava a partir de 32 a 63 anos, com uma média de 44 anos; e o peso médio foi de 81,1 kg (vari- ando a partir de 61,5-100,7 kg).
[0327] A atividade média do FVIII pós-infusão para os oito indiví- duos avaliados que receberam uma única dose alta de rFVIIIFc-VWF- XTEN (65 IU/kg) em 5 dias foi de cerca de 38,0 % e, em 7 dias, foi de cerca de 17 % (Figura 3B). A atividade média do FVIII permaneceu acima de 1 % ao longo de 14 dias (Figura 3B). Os parâmetros farmaco- cinéticos, medida através do tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT), para rFVIIIFc-VWF-XTEN (65 IU/kg) e rFVIII (65 IU/kg) são mostrados na Tabela 10. Foi observado que o rFVIIIFc-VWF-XTEN tem uma média meia-vida de cerca de 42,5 horas em seres humanos, a qual era mais de 3 vezes maior do que a meia-vida média para rFVIII (cerca de 13 horas) administrado na mesma dose. Tabela 10: Parâmetros Farmacocinéticos (PK) para a Coorte sob Alta Dose rFVIIIFc-VWF-XTEN rFVIII Proporção média Parâmetro PK Média geométrica Média geométrica [IC de 95 %] [Faixa] (N=8) [Faixa] (N=9) 42, 54 13, 15 3, 24 [2, 76, 3, 79] Meia-vida (h) [39, 72-45, 56] [10, 89-15, 87] P < 0, 001 161 138 1, 17 [1, 09-1, 25] C (IU/dL) max [142-183] [117–162] P < 0, 001 12,800 1960 6, 54 [5, 89-7, 27] AUC (h x IU/dL) 0–inf [11,100-14,900] [1670-2310] P < 0, 001 67, 66 15, 66 4, 32 [3, 96-4, 72] MRT (h) [62, 59-73, 14] [14, 06–17, 45] P < 0, 001 0,51 3, 31 0, 15 [0, 14-0, 17 CL (mL/h/kg) [0, 44–0,59] [2, 81–3, 88] P < 0, 001 2, 48 2, 11 1, 18 [1, 10-1, 26] IR (IU/dL por IU/kg) [2, 18–2, 82] [1, 79–2, 49] P < 0, 001 Conclusões:
[0328] RFVIIIFc-VWF-XTEN foi bem tolerado em todos os pacientes com hemofilia A grave que foram tratados com uma única dose baixa
(25 IU/kg) ou uma única dose alta (65 IU/kg). Nenhum paciente desen- volveu inibidor de FVIII. rFVIIIFc-VWF-XTEN demonstrou uma meia- vida que era 3 a 4 vezes maior do que rFVIII, sugerindo um avanço no limite de meia-vida imposto pelo VWF. A atividade elevada e sustentada do FVIII tem o potencial de conferir proteção estendida contra todos os tipos de sangramento. Exemplo 2: Repetição do Estudo de Dose com Heterodímeros de FVIII-XTEN-Fc/D’D3-XTEN-Fc
[0329] rFVIIIFc-VWF-XTEN foi bem tolerado e forneceu níveis sus- tentados de FVIII em uma coorte de indivíduos que receberam uma única dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN. (Exemplo 1). O presente estudo avaliará a segurança e tolerabilidade e caracterizará a farmacocinética de doses repetidas de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 1). Design do Estudo
[0330] Um total de 4 doses uma vez por semana de rFVIIIFc-VWF- XTEN serão administradas a pacientes adultos do sexo masculino com hemofilia A grave que foram previamente tratados através de tratamento com FVIII e receberam pelo menos 150 dias de exposição de tal trata- mento com FVIII. Duas coortes, cada uma consistindo em aproximada- mente dez homens adultos de 18 a 65 anos de idade, serão inscritas. Cada indivíduo na Coorte 1 receberá um total de quatro doses semanais de 50 IU/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN nos Dias 1, 8, 15 e 22. Cada indiví- duo na Coorte 2 receberá um total de quatro doses uma vez por semana de 65 IU/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN nos Dias 1, 8, 15 e 22.
[0331] Uma representação esquemática do design de estudo clínico é representada como Figura 4. Uma amostra farmacocinética pré-dose será coletada no Dia 1. Além disso, haverá várias amostras de PK cole- tadas após a dosagem nos Dias 1 e 22, e uma amostra mínima (168 h) ocorrendo antes da dosagem nos Dias 8, 15, e 22. Os indivíduos serão submetidos a um período de observação de segurança por 28 dias após a última dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN, incluindo avaliações de inibidor em 14 e 28 dias após a última dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Para os indivíduos que concluíram todas as quatro doses semanais de rFVIIIFc- VWF-XTEN, o período de observação de segurança terminará com a visita de final de estudo (EOS) no Dia 50 (+3 dias). Para indivíduos que descontinuam o tratamento precocemente, o período de observação de segurança terminará com a visita de término antecipado (TE) 28 dias após a última dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN.
[0332] O objetivo principal do estudo é avaliar a segurança e tolera- bilidade de um total de quatro doses intravenosas (IV) uma vez por se- mana de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Os parâmetros primários são a ocorrên- cia de eventos adversos (AEs) e a ocorrência de anormalidades clinica- mente significativas em ensaios de laboratório, incluindo o desenvolvi- mento de inibidores (anticorpos neutralizantes direcionados contra FVIII), conforme determinado através do ensaio Bethesda modificado por Nijmegen. (Verbruggen et al., Thrombosis and Haemostasis, 73: 247-251 (1995)).
[0333] O objetivo secundário do estudo é a caracterização da far- macocinética de rFVIIIFc-VWF-XTEN após um total de quatro doses IV uma vez por semana, com a atividade de FVIII determinada pelo tempo de tromboplastina parcial ativada em um ensaio de coagulação em um estágio (aPTT), conforme descrito no Exemplo 1. Os parâmetros secun- dários são farmacocinética avaliada através da estimativa de parâme- tros incluindo, porém sem limitações, atividade máxima (Cmax), meia- vida (t½), depuração total no estado estacionário (CLss), índice de acu- mulação (AI), área sob a curva de atividade-tempo da hora 0 ao longo do intervalo de dosagem (AUC0-tau), volume de distribuição no estado estacionário (Vss), tempo médio de residência (MRT), IR, concentração mais baixa (vale) que um medicamento atinge antes da próxima dose ser administrada (Csérica) e tempo até 1 % acima da linha de base para a atividade de FVIII.
[0334] O objetivo exploratório do estudo é caracterizar a farmacoci- nética de rFVIIIFc-VWF-XTEN após um total de quatro doses IV uma vez por semana, com a atividade de FVIII determinada por meio do en- saio de coagulação cromogênico em dois estágios. Os parâmetros ex- ploratórios são avaliados pela PK através da estimativa de parâmetros incluindo, porém sem limitações, Cmax, t½, CLss, AI, AUC0-tau, Vss, MRT, IR, Csérica e tempo até 1 % acima da linha de base para a atividade de FVIII. Métodos
[0335] A atividade de FVIII foi determinada por meio do ensaio de coagulação do tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) modifi- cado (ensaio em "um estágio"), conforme detalhado acima no Exemplo
1.
[0336] O ensaio de coagulação cromogênico em dois estágios mede a atividade de FVIII usando o ensaio BIOPHEN FVIII:C (Hyphen Biomed 221402-RUO) no analisador BCS XP (Siemens Healthcare Diagnos- tics). Resumidamente, os fosfolipídios, FVIII:C ativados por cálcio e trombina formam um complexo enzimático na presença de uma quanti- dade constante de Fator IXa. Este complexo enzimático, por sua vez, ativa o Fator X (FX), o qual é fornecido em uma concentração constante e em excesso ao Fator Xa (FXa). A ativação de FX a FXa está direta- mente relacionada à quantidade de FVIII:C, o qual é o fator limitativo do ensaio na presença de uma constante e em excesso do Fator IXa. A atividade do FXa gerado é, então, medida usando um substrato cromo- gênico específico para FXa, SXa-11 (Hyphen Biomed). O Fator Xa cliva SXa-11 e libera paranitroanilina (pNA). A quantidade de pNA liberada é diretamente proporcional à quantidade de FXa gerada. Há uma relação direta entre a quantidade de FVIII:C na amostra, a quantidade de FXa gerada e a quantidade de pNA liberado. A liberação de pNA é determi- nada pelo desenvolvimento de cor em um comprimento de onda de 405 nm.
[0337] Curvas de calibração de 8 pontos (Alto: 1.500 - 0,150 IU/mL; Baixo: 0,200 - 0,008 IU/mL) são preparadas usando um calibrador es- pecífico para rFVIIIFc-VWF-XTEN. Para a curva de calibração alta, rFVIIIFc-VWF-XTEN a 1UI/mL é diluído em tampão de Tris/BSA para gerar níveis de calibração pré-selecionados da atividade de FVIII. Esta diluição é realizada pelo analisador BCS XP. Os níveis de calibração pré-selecionados da atividade de FVIII são testados em uma diluição de trabalho de 1:4 em tampão de Tris/BSA. Para a curva de calibração baixa, rFVIIIFc-VWF-XTEN a 1 IU/mL é pré-misturado a 1:4 em plasma deficiente de FVIII congênito (Helena Laboratories) e depois diluído pelo analisador BCS XP em tampão de Tris/BSA para gerar níveis pré-ca- libração selecionados da atividade de FVIII que são testados na ausên- cia de diluição adicional na configuração da reação.
[0338] A calibração é realizada em duplicata. As curvas são traça- das para a atividade de FVIII em IU/mL (eixo x) e variação na absorbân- cia/min (eixo y). Para a curva de calibração alta, um ajuste de curva de regressão linear log-log é usado. Para a curva de calibração baixa, um ajuste de curva de regressão linear lin-lin é usado. As amostras são tes- tadas em duplicata na curva de calibração alta em uma diluição de tra- balho de 1:4 ou na curva de calibração baixa usando a diluição a 1:4 em plasma deficiente de FVIII congênito ou puro (na ausência de uma dilui- ção de trabalho). Resultados Dados Demográficos e Características Básicas
[0339] 10 indivíduos adultos do sexo masculino de 18 a 65 anos de idade (inclusive) inscritos na Coorte 1 (50 IU/kg) e 5 indivíduos adultos do sexo masculino de 18 a 65 anos de idade (inclusive) inscritos na Co- orte 2 (65 IU/kg). Todos os 10 indivíduos na coorte de dosagem de 50 IU/kg receberam 4 doses de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Três dos 5 indivíduos inscritos na coorte de dosagem de 65 IU/kg receberam pelo menos uma dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Todos os 15 indivíduos inscritos eram de um único local em Sofia, Bulgária. Dos 15 indivíduos inscritos, 13 indi- víduos receberam pelo menos uma dose de BIVV001 e foram incluídos no resumo das características demográficas e basais. Todos os indiví- duos eram do sexo masculino. A idade média era de 35 anos (variação: 25 a 55 anos) e todos os indivíduos eram brancos. O peso médio foi de 86,7 kg (intervalo: 51,0 a 130,9 kg) e o índice de massa corporal médio foi de 25,9 kg/m2 (faixa: 16,4 a 40,9 kg/m2). Análise de Segurança
[0340] Para a análise intermediária, um total de 13 indivíduos foram incluídos no Conjunto de Análise de Segurança (n = 10 da coorte com 50 IU/kg = 3 da coorte com 65 IU/kg). Todas as análises de segurança foram realizadas com base no Conjunto de Análise de Segurança e in- cluíram todos os indivíduos que receberam pelo menos uma dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN.
[0341] Um AE emergente do tratamento (TEAE) é definido como qualquer evento adverso que começou em ou após a primeira adminis- tração de rFVIIIFc-VWF-XTEN e dentro de 28 dias após administração final de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Os AEs com datas de início ausentes são considerados emergentes do tratamento, a menos que a data de inter- rupção tenha sido antes da data de dosagem. Em geral, os AEs foram resumidos por incidência no indivíduo por coorte e de modo geral, bem como apresentados em uma listagem de dados por coorte e indivíduo. Os eventos adversos graves emergentes do tratamento (TESAEs) tam- bém foram avaliados para cada indivíduo, mas nenhum foi observado nos indivíduos tratados (Tabela 11).
[0342] Dos 15 indivíduos inscritos, 13 indivíduos receberam pelo menos uma dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN e foram incluídos na análise de segurança. 19 TEAEs foram relatados em 8 dos 13 indivíduos (61,5 %) (Tabela 11). Não foram relatados TEAEs graves ou relacionados e nenhum indivíduo interrompeu o estudo em virtude de um TEAE. Os TEAEs mais comuns foram artralgia, infecção do trato respiratório su- perior, dor de cabeça e rinite (2/13 indivíduos cada; 15,4 %). Não foi detectado desenvolvimento de inibidor para o FVIII e não houve relatos de hipersensibilidade ou anafilaxia grave. Em cada nível de sumariza- ção de indivíduo, um indivíduo é contado uma vez se o indivíduo relatou um ou mais eventos. Os dados percentuais relatados na Tabela 11 são com base no número de indivíduos que receberam pelo menos uma dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN em cada coorte e no geral. Tabela 11. Resumo de eventos adversos emergentes de tratamento (TEAEs) no conjunto de análise de segurança rFVIIIFc- rFVIIIFc- rFVIIIFc- Principal VWF- VWF- VWF- Período
XTEN XTEN XTEN Cirúrgico Total tra- 50 IU/kg 65 IU/kg (N=0) tado Número de indiví- duos tratados 10 3 0 13 com rFVIIIFc- VWF-XTEN Número total de 17 2 0 19 TEAEs Indivíduos com 7 (70, 0 1 (33, 3 8 (61, 5 pelo menos um 0 %) %) %)
TEAE
Indivíduos com pelo menos um 0 0 0 0 TEAE relacionado Indivíduos que in- terromperam o 0 0 0 0 estudo em virtude de TEAE Número total de 0 0 0 0 TESAEs Indivíduos com pelo menos um 0 0 0 0
TESAE Indivíduos com pelo menos um 0 0 0 0 TESAE relacio- nado Análise de Imunogenicidade
[0343] Todos os indivíduos foram avaliados quanto ao desenvolvi- mento de inibidor e anticorpos anti-rFVIIIFc-VWF-XTEN na triagem, Dia 1, Dia 8, Dia 15, Dia 22, Dia 36 e Dia 50 (visita EOS ou ET). O ensaio de inibidores foi realizado pelo laboratório central usando o ensaio Bethesda modificado por Nijmegen. Se um resultado do ensaio Bethesda modificado por Nijmegen retornasse ≥ 0,6 BU/mL, uma amos- tra separada era coletada e testada para confirmação do desenvolvi- mento de inibidor em 2 a 4 semanas. O ensaio para a formação de an- ticorpos em potencial foi realizado em um laboratório central usando um ensaio de anticorpo anti-fármaco (ADA) específico para rFVIIIFc-VWF- XTEN validado. As amostras positivas confirmadas foram ainda carac- terizadas quanto a anticorpos específicos para FVIII, D’D3 ou XTEN. O número e a porcentagem de indivíduos com ensaio positivo para desen- volvimento de inibidor e o número e porcentagem de indivíduos com ensaio positivo para anticorpos anti-rFVIIIFc-VWF-XTEN foram resumi- dos por coorte usando o Conjunto de Análise de Segurança.
[0344] Nenhum indivíduo desenvolveu um resultado positivo no en- saio de anticorpo anti-fármaco após administração de rFVIIIFc-VWF- XTEN. Análise Farmacocinética e Resultados
[0345] Em geral, os dados de segurança e PK foram resumidos usando estatísticas de resumo padrão para dados contínuos e categó- ricos. Os dados foram resumidos por coorte. As variáveis contínuas fo- ram resumidas por meio de estatísticas descritivas, incluindo o número de valores não perdidos (n), média, desvio padrão (DP), mediana, mí- nimo e máximo. Os parâmetros farmacocinéticos também foram resu- midos usando média geométrica e coeficiente de variação percentual (% CV). Variáveis categóricas foram resumidas por contagens e porcen- tagens.
[0346] Todas as análises de PK foram realizadas com base no con- junto de análise de PK (PKAS) e incluíram 9 indivíduos da coorte com dosagem de 50 IU/kg que tiveram coletas de amostras de sangue ade- quadas após administração de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Atividade de FVIII
[0347] Para caracterizar a farmacocinética de rFVIIIFc-VWF-XTEN após um total de quatro doses IV uma vez por semana, a atividade de FVIII foi determinada em cada indivíduo nos pontos de tempo pré-espe- cificados. A atividade de FVIII foi resumida por coorte, visita de PK agen- dada e ponto de tempo para o ensaio de coagulação em um estágio (tempo de tromboplastina parcial ativada [aPTT]) e o ensaio de coagu- lação cromogênico. Os perfis de atividade de FVIII em função do tempo foram representados em escala original e logarítmica para ambos os ensaios de atividade de FVIII. A atividade individual do FVIII foi listada para cada indivíduo por coorte, visita de PK agendada e ponto de tempo para ambos os ensaios de atividade de FVIII. Os resultados para a ati- vidade de FVIII de acordo com o ensaio em um estágio [aPTT] são apre- sentados na Tabela 12. Os resultados para a atividade de FVIII de acordo com o ensaio cromogênico são apresentados na Tabela 13.
[0348] Resumidamente, após a dosagem do Dia 1, as atividades médias de FVIII com base no ensaio em um estágio e ensaio cromogê- nico em 72 h foram 45,53 % e 29,37 %, em 120 h foram 21,56 % e 13,49 % e em 168 h foram 7,91 % e 5,97 %, respectivamente. Após a dosa- gem do Dia 22, as atividades médias de FVIII com base no ensaio em um estágio e ensaio cromogênico em 72 h foram 46,28 % e 30,46 %, em 120 h foram 22,30 % e 14,48 % e em 168 h foram 9,83 % e 6,74 %, respectivamente. Em geral, em todos os pacientes, pontos de tempo e com ambos os ensaios, a Csérica para rFVIIIFc-VWF-XTEN a 50 IU/kg QW nesta análise intermediária variava entre 7-10 %. Parâmetros PK
[0349] As estimativas de parâmetros de PK individuais foram lista- das para cada indivíduo e resumidas descritivamente por coorte, visita de PK agendada e ponto de tempo para ambos os ensaios de atividade de FVIII.
[0350] A meia-vida de eliminação média geométrica (t1/2) para to- dos os indivíduos que receberam rFVIIIFc-VWF-XTEN a 50 IU/kg QW nesta análise intermediária foi de 41,24 horas de acordo com o ensaio em um estágio (Tabela 16B) e 43,87 horas de acordo com o ensaio cro- mogênico (Tabela 17B).
[0351] Após a dosagem do Dia 1, a atividade FVIII máxima média geométrica (Cmax) foi de 113 IU/dL com o ensaio em um estágio (Ta- bela 14) e 108 IU/dL com o ensaio cromogênico (Tabela 15). Após a dosagem do Dia 22, a atividade média geométrica do FVIII no estado estacionário (Cmaxss) foi de 127 IU/dL de acordo com o ensaio em um estágio (Tabela 16A) e 115 IU/dL de acordo com o ensaio cromogênico (Tabela 17A).
[0352] Após a dosagem do Dia 1, a atividade FVIII cumulativa média geométrica (AUC0-tau) foi de 7650 h*IU/dL de acordo com o ensaio em um estágio (Tabela 14) e 5630 h*IU/dL de acordo com o ensaio cromo- gênico (Tabela 15). Após a dosagem do Dia 22, a AUC0-tau média geo- métrica foi de 8270 h*IU/dL de acordo com o ensaio em um estágio (Ta- bela 16A) e 5880 h*IU/dL de acordo com o ensaio cromogênico (Tabela 17A).
[0353] Os dados de Cmax e AUC0-tau no dia 1 e no dia 22 de dosa- gem indicaram acumulação mínima suportada pelo índice de acumula- ção (AI) de 1,07 (ensaio de uma etapa, Tabela 16B) e 1,08 (ensaio cro- mogênico, Tabela 17B). Para todos os dados dos parâmetros PK apre- sentados nas Tabelas 12-17, os valores abaixo do limite de quantifica- ção (BLQ) foram tratados como 0 para fins de análise. Quando neces- sário para o cálculo dos parâmetros de PK, visto que o tempo de término da infusão não foi capturado, a duração de infusão foi imputada como 8 minutos para cada indivíduo, de acordo com as orientações de adminis- tração no documento Directions for Handling and Adminstration do es- tudo. Tabela 12. Resumo dos níveis de atividade de FVIII corrigidos para a linha de base (IU/dL) com base no ensaio de coagulação aPTT em um estágio: Conjunto de Análise PK (Nível de Dose: 50 IU/kg) Dia de Ponto de tempo n Média (SD) Mediana Geo. Média %CV Min, Max Dosagem Dia 1 Pré-injeção 9 0,00 (0,000) 0,00 0,00 -------- 0,0, 0,0 30 mins a partir da SOI 9 113,17 (20,214) 118,10 111,51 17,862 82,0, 140,2 3 horas a partir da SOI 9 109,07 (19,243) 109,90 107,49 17,643 77,4, 135,5 24 horas a partir da SOI 9 91,04 (15,231) 92,80 89,88 16,730 68,9, 115,8 48 horas a partir da SOI 9 66,38 (12,231) 65,90 65,30 18,426 46,7, 80,3 72 horas a partir da SOI 9 45,53 (6,742) 45,60 45,08 14,807 36,7, 53,9 120 horas a partir da SOI 9 21,56 (4,473) 22,20 21,11 20,750 14,2, 27,1 Dia 8 Pré-injeção 9 7,91 (2,869) 7,40 7,48 36,265 4,0, 13,1 Dia 15 Pré-injeção 9 8,94 (3,322) 7,80 8,34 37,140 3,9, 13,5
Dia 22 Pré-injeção 9 9,91 (2,838) 11,61 9,49 28,633 5,0, 12,9 30 mins a partir da SOI 9 132,77 (31,741) 131,80 129,56 23,907 96,0, 190,7 3 horas a partir da SOI 9 120,94 (22,168) 126,60 119,03 18,329 85,2, 152,0 24 horas a partir da SOI 9 103,79 (18,513) 110,20 102,21 17,838 74,0, 126,3 48 horas a partir da SOI 9 69,89 (12,812) 68,10 68,84 18,332 49,8, 91,7 72 horas a partir da SOI 9 46,28 (7,720) 47,90 45,68 16,682 33,4, 58,3 120 horas a partir da SOI 9 22,30 (4,979) 21,70 21,77 22,329 13,7, 29,8 168 horas a partir da SOI 9 9,83 (3,847) 9,60 9,16 39,120 4,9, 15,5 240 horas a partir da SOI 9 2,84 (0,999) 2,80 2,68 35,117 1,4, 4,4 336 horas a partir da SOI 9 1,28 (2,651) 0,00 0,00 207,494 0,0, 8,2
Abreviações: SD = desvio padrão, Geo.
Média = média geométrica, % CV = coeficiente de variação percentual, Min = valor mínimo, Max = va- lor máximo, SOI = início da injeção Tabela 13. Resumo dos níveis de atividade de FVIII corrigidos para a linha de base (IU/dL) com base no ensaio cromogênico: Conjunto de Análise PK (Nível de Dose: 50 IU/kg) Dia de Ponto de tempo n Média (SD) Mediana Geo.
Média %CV Min, Max Dosagem Dia 1 Pré-injeção 9 0,00 (0,000) 0,00 0,00 --------- 0,0, 0,0 30 mins a partir da SOI 9 108,94 (15,126) 113,00 107,99 13,884 87,4, 129,9 3 horas a partir da SOI 9 101,86 (13,782) 102,50 100,99 13,531 79,1, 118,3 24 horas a partir da SOI 9 71,68 (14,654) 73,50 70,24 20,445 47,8, 93,5 48 horas a partir da SOI 9 43,84 (7,086) 43,40 43,32 16,163 32,5, 54,0 72 horas a partir da SOI 9 29,37 (5,319) 30,10 28,93 18,112 22,3, 37,2 120 horas a partir da SOI 9 13,49 (2,680) 13,80 13,24 19,870 9,4, 17,2
Dia 8 Pré-injeção 9 5,97 (1,764) 6,20 5,74 29,568 3,6, 9,4
Dia 15 Pré-injeção 9 6,93 (1,736) 6,70 6,74 25,044 4,8, 10,0
Dia 22 Pré-injeção 9 7,13 (1,817) 7,50 6,93 25,466 5,0, 10,4 30 mins a partir da SOI 9 113,58 (14,920) 113,25 112,72 13,137 91,3, 137,6 3 horas a partir da SOI 9 109,08 (16,394) 112,50 107,96 15,029 85,4, 132,6 24 horas a partir da SOI 9 72,13 (14,985) 71,40 70,78 20,774 56,6, 95,8 48 horas a partir da SOI 9 45,23 (4,907) 46,10 44,99 10,847 37,4, 52,3 72 horas a partir da SOI 9 30,46 (5,247) 31,20 30,04 17,230 21,4, 39,6 120 horas a partir da SOI 9 14,48 (2,862) 13,70 14,23 19,769 10,5, 18,7 168 horas a partir da SOI 9 6,74 (1,911) 6,20 6,51 28,328 4,4, 9,7 240 horas a partir da SOI 9 2,20 (1,025) 2,20 0,00 46,577 0,0, 3,7 336 horas a partir da SOI 9 0,46 (1,021) 0,00 0,00 224,158 0,0, 3,0
Abreviações: SD = desvio padrão, Geo.
Média = média geométrica, % CV = coeficiente de variação percentual, Min = valor mínimo, Max = va- lor máximo, SOI = início da injeção Tabela 14. Resumo da dosagem no dia 1 dos parâmetros farmacociné- ticos para a atividade de FVIII corrigida para a linha de base com base no ensaio de coagulação aPTT em um estágio: Conjunto de Análise PK
AUC0-tau normalizada para a IR Dose real CMAX TMAX AUC0-tau N° indivíduo dose IVR (%) (IU/dL por (IU/kg) (IU/dL) (h) (h*IU/dL) (h*kg*IU/dL/IU) IU/kg) Coorte 1 (50 IU/kg): dosagem BIVV001 Dia 1
170-001 50,0 91,7 3,13 7940 159 52,5 1,83 170-002 49,9 140 0,50 8310 166 97,4 2,81 170-003 50,2 82,0 0,50 6000 119 53,1 1,63 170-004 50,1 131 3,00 9300 186 95,9 2,61 170-006 50,0 139 0,50 7960 159 89,4 2,78 170-007 49,8 109 0,50 7480 150 71,1 2,19 170-009 50,0 121 2,85 8170 163 85 2,42 170-010 50,2 99,1 0,50 5750 115 61,3 1,97 170-011 49,8 118 0,50 8740 176 64,2 2,37 n 9 9 9 9 9 9 9 Média 50,00 115 1,33 7740 155 74,4 2,29 Mediana 50,00 118 0,5 7960 159 71,1 2,37 Std.
Dev 0,150 20,7 1,25 1180 23,8 17,9 0,42 %CV 0 18 94 15 15 24 18 Geo.
Média 50,00 113 0,91 7650 153 72,5 2,26 (95 % CI) (49,88, 50,12) (97,6, 130) (0,46, 1,81) (6750, 8670) (135, 174) (60,1, 87,5) (1,95, 2,61) Mínimo 49,8 82,0 0,50 5750 115 52,5 1,63 Máximo 50,2 140 3,13 9300 186 97,4 2,81
Abreviações: Std Dev = desvio padrão, Geo.
Média = média geométrica, % CV = coeficiente de variação percentual, CMAX = concentração má- xima no estado estacionário, TMAX = tempo para atingir a concentração máxima, CMAXSS = concentração máxima no estado estacionário, IVR = recuperação in vivo, AUC0-inf = área sob curva de atividade-tempo a partir do tempo 0 ao infinito, AUC0-tau = área sob a curva de atividade- tempo a partir da hora 0 ao longo do intervalo de dosagem, MRTINF = tempo médio de residência extrapolado para o infinito, AI = índice de acumulação, IR = recuperação incremental, Csérica = concentração mais baixa que um medicamento atinge antes da próxima dose ser adminis- trada, Cavg = concentração média após atingir o estado estacionário, t1/2 = meia-vida de eliminação, CLss = depuração no estado estacionário, Vss = volume de distribuição no estado estacionário.
Tabela 15: Resumo do dia 1 dos parâmetros farmacocinéticos para a atividade de FVIII corrigida para a linha de base com base no ensaio cromogênico: Conjunto de análise PK AUC0-tau normalizada para a IR Dose real CMAX AUC0-tau N° indivíduo TMAX (h) dose IVR (%) (IU/dL por (IU/kg) (IU/dL) (h*IU/dL) (h*kg*IU/dL/IU) IU/kg) Coorte 1 (50 IU/kg): dosagem BIVV001 Dia 1 170-001 50 90,8 0,63 5850 117 52 1,82 170-002 49,9 130 0,5 6160 123 90,2 2,6
170-003 50,2 87,4 0,5 4290 85,4 56,6 1,74 170-004 50,1 124 0,5 7030 140 90,5 2,47 170-006 50 117 0,5 5530 111 74,9 2,33 170-007 49,8 105 0,5 5580 112 68,3 2,1 170-009 50 119 0,5 6500 130 84 2,39 170-010 50,2 95,4 0,5 4360 86,9 59 1,9 170-011 49,8 113 0,5 5970 120 61,4 2,27 n 9 9 9 9 9 9 9 Média 50 109 0,51 5700 114 70,8 2,18 Mediana 50 113 0,5 5850 117 68,3 2,27 Std.
Dev 0,15 15,1 0,04 905 18,2 14,8 0,3 %CV 0 14 9 16 16 21 14 Geo.
Média 50 108 0,51 5630 113 69,4 2,16 (49,88, (0,48, (4950, (59,1, (95 % CI) (96,8, 120) (98,9, 128) (1,93, 2,41) 50,12) 0,55) 6400) 81,5) Mínimo 49,8 87,4 0,5 4290 85,4 52 1,74 Máximo 50,2 130 0,63 7030 140 90,5 2,6
Abreviações: Std Dev = desvio padrão, Geo.
Média = média geométrica, % CV = coeficiente de variação percentual, CMAX = concentração má- xima no estado estacionário, TMAX = tempo para atingir a concentração máxima, CMAXSS = concentração máxima no estado estacionário, IVR = recuperação in vivo, AUC0-inf = área sob curva de atividade-tempo a partir do tempo 0 ao infinito, AUC0-tau = área sob a curva de atividade- tempo a partir da hora 0 ao longo do intervalo de dosagem, MRTINF = tempo médio de residência extrapolado para o infinito, AI = índice de acumulação, IR = recuperação incremental, Csérica = concentração mais baixa que um medicamento atinge antes da próxima dose ser adminis- trada, Cavg = concentração média após atingir o estado estacionário, t1/2 = meia-vida de eliminação, CLss = depuração no estado estacionário, Vss = volume de distribuição no estado estacionário.
Tabela 16A.
Dia 22 - Resumo dos Parâmetros Farmacocinéticos para a Atividade de FVIII corrigida para a linha de base com base no ensaio de coagulação aPTT em um estágio: Conjunto de Análise PK (Parte 1) AUC0-inf normalizada para AUC0-tau normalizada para Dose real CMAX SS AUC0-inf AUC0-tau N° indivíduo a dose a dose (IU/kg) (IU/dL) (h*IU/dL) (h*IU/dL) (h*kg*IU/dL/IU) (h*kg*IU/dL/IU) Coorte 1 (50 IU/kg): dosagem BIVV001 Dia 22 170-001 50,1 106 9230 184 8240 165 170-002 49,9 135 8690 174 8310 167 170-003 50 104 7520 150 6950 139 170-004 50 143 11000 219 10100 201 170-006 50 165 9480 190 9210 184 170-007 49,9 132 9300 186 8550 171 170-009 49,8 154 8980 180 8580 172 170-010 49,8 96 6130 123 5810 117
170-011 49,9 129 10200 205 9560 192 n 99 9 9 9 9 9 Média 49,93 129 8940 179 8370 168 Mediana 49,9 132 9230 184 8550 171 Std.
Dev 0,1 23,2 1420 28,4 1310 26,1 %CV 0 18 16 16 16 16 Geo.
Média 49,93 127 8830 177 8270 166 (95 % CI) (49,86, 50,01) (110, 147) (7740, 10100) (155, 202) (7260, 9410) (145, 188) Mínimo 49,8 96 6130 123 5810 117 Máximo 50,1 165 11000 219 10100 201
Abreviações: Std Dev = desvio padrão, Geo.
Média = média geométrica, % CV = coeficiente de variação percentual, CMAX = concentração má- xima no estado estacionário, TMAX = tempo para atingir a concentração máxima, CMAXSS = concentração máxima no estado estacionário, IVR = recuperação in vivo, AUC0-inf = área sob curva de atividade-tempo a partir do tempo 0 ao infinito, AUC0-tau = área sob a curva de atividade- tempo a partir da hora 0 ao longo do intervalo de dosagem, MRTINF = tempo médio de residência extrapolado para o infinito, AI = índice de acumulação, IR = recuperação incremental, Csérica = concentração mais baixa que um medicamento atinge antes da próxima dose ser adminis- trada, Cavg = concentração média após atingir o estado estacionário, t1/2 = meia-vida de eliminação, CLss = depuração no estado estacionário, Vss = volume de distribuição no estado estacionário.
Tabela 16B: Dia 22 - Resumo dos Parâmetros Farmacocinéticos para a Atividade de FVIII Corrigida para a linha de Base com base no ensaio de coagulação aPTT em um estágio: Conjunto de Análise PK (Parte 2) N° indivíduo t1/2 (h) MRTINF (h) CLss (mL/h/kg Vss (mL/kg) AI Csérica (IU/dL) Cavg (IU/dL) Coorte 1 (50 IU/kg): dosagem BIVV001 Dia 22 170-001 50,05 78,56 0,61 47,8 1,11 15,2 49,1 170-002 36,86 57,13 0,6 34,3 1,04 7 49,5 170-003 43,86 66,35 0,72 47,8 1,08 9,6 41,4 170-004 45,45 69,54 0,5 34,5 1,08 15,5 60 170-006 34,21 49,79 0,54 27 1,03 4,9 54,8 170-007 48,87 67,08 0,58 39,1 1,1 11,5 50,9 170-009 34,63 56,19 0,58 32,6 1,04 7,8 51,1 170-010 38,29 58,71 0,86 50,3 1,05 5,8 34,6 170-011 42,34 63,41 0,52 33,1 1,07 11,2 56,9 n 9 9 9 9 9 9 9 Média 41,62 62,97 0,61 38,5 1,07 9,83 49,8 Mediana 42,34 63,41 0,58 34,5 1,07 9,6 50,9 Std.
Dev 5,93 8,57 0,11 8,21 0,03 3,85 7,79 %CV 14 14 18 21 3 39 16 Geo.
Média 41,24 62,46 0,6 37,7 1,07 9,16 49,2 (IC de 95 %) (36,95, 46,04) (56,27, 69,33) (0,531, 0,688) (32,0, 44,4) (1,05, 1,09) (6,70, 12,5) (43,2, 56,0)
Mínimo 34,21 49,79 0,5 27 1,03 4,9 34,6 Máximo 50,05 78,56 0,86 50,3 1,11 15,5 60
Abreviações: Std Dev = desvio padrão, Geo.
Média = média geométrica, % CV = coeficiente de variação percentual, CMAX = concentração má- xima no estado estacionário, TMAX = tempo para atingir a concentração máxima, CMAXSS = concentração máxima no estado estacionário, IVR = recuperação in vivo, AUC0-inf = área sob curva de atividade-tempo a partir do tempo 0 ao infinito, AUC0-tau = área sob a curva de atividade- tempo a partir da hora 0 ao longo do intervalo de dosagem, MRTINF = tempo médio de residência extrapolado para o infinito, AI = índice de acumulação, IR = recuperação incremental, Csérica = concentração mais baixa que um medicamento atinge antes da próxima dose ser adminis- trada, Cavg = concentração média após atingir o estado estacionário, t1/2 = meia-vida de eliminação, CLss = depuração no estado estacionário, Vss = volume de distribuição no estado estacionário.
Tabela 17A.
Dia 22 - Resumo dos Parâmetros Farmacocinéticos para a Atividade de FVIII corrigida para a linha de base com base no ensaio cromogênico: Conjunto de Análise PK (Parte 1) AUC0-inf normalizada para a AUC0-tau normalizada para a Dose real CMAX SS AUC0-inf AUC0-tau N° indivíduo dose dose (IU/kg) (IU/dL) (h*IU/dL) (h*IU/dL) (h*kg*IU/dL/IU) (h*kg*IU/dL/IU) Coorte 1 (50 IU/kg): dosagem BIVV001 Dia 22 170-001 50,1 103 6560 131 5810 116 170-002 49,9 124 6830 137 6430 129 170-003 50,0 91,3 5210 104 4780 95,5 170-004 50,0 126 7050 141 6410 128 170-006 50,0 138 6520 130 6300 126 170-007 49,9 117 6460 129 5990 120 170-009 49,8 123 6620 133 6290 126 170-010 49,8 103 5080 102 4800 96,5 170-011 49,9 113 6910 138 6450 129 n 9 9 9 9 9 9 Média 49,93 115 6360 127 5920 119 Mediana 49,9 117 6560 131 6290 126 Std.
Dev 0,100 14,5 718 14,3 674 13,5 %CV 0 13 11 11 11 11 Geo.
Média 49,93 115 6320 127 5880 118 (IC de 95 %) (49,86, 50,01) (104, 126) (5760, 6940) (115, 139) (5360, 6460) (107, 129) Mínimo 49,8 91,3 5080 102 4780 95,5
Abreviações: Std Dev = desvio padrão, Geo.
Média = média geométrica, % CV = coeficiente de variação percentual, CMAX = concentração má- xima no estado estacionário, TMAX = tempo para atingir a concentração máxima, CMAXSS = concentração máxima no estado estacionário, IVR = recuperação in vivo, AUC0-inf = área sob curva de atividade-tempo a partir do tempo 0 ao infinito, AUC0-tau = área sob a curva de atividade- tempo a partir da hora 0 ao longo do intervalo de dosagem, MRTINF = tempo médio de residência extrapolado para o infinito, AI = índice de acumulação, IR = recuperação incremental, Csérica = concentração mais baixa que um medicamento atinge antes da próxima dose ser adminis- trada, Cavg = concentração média após atingir o estado estacionário, t1/2 = meia-vida de eliminação, CLss = depuração no estado estacionário, Vss = volume de distribuição no estado estacionário.
Tabela 17B.
Dia 22 - Resumo dos Parâmetros Farmacocinéticos para a Atividade de FVIII corrigida para a linha de base com base no ensaio cromogênico: Conjunto de Análise PK (Parte 2) N° indivíduo t1/2 (h) MRTINF (h) CLss (mL/h/kg Vss (mL/kg) AI Csérica (IU/dL) Cavg (IU/dL) Coorte 1 (50 IU/kg): dosagem BIVV001 Dia 22 170-001 53,31 76,94 0,86 66,3 1,13 9,6 34,6 170-002 44,73 55,57 0,78 43,1 1,08 6 38,3 170-003 48,29 64,39 1,05 67,4 1,1 6,2 28,4 170-004 46,03 71,12 0,78 55,5 1,09 9,7 38,2 170-006 35,59 47,89 0,79 38 1,04 4,4 37,5 170-007 45,35 62,51 0,83 52 1,08 7 35,7 170-009 40,09 54,93 0,79 43,5 1,06 5,5 37,4 170-010 40,2 56,26 1,04 58,3 1,06 4,8 28,6 170-011 43,61 60,71 0,77 47 1,07 7,5 38,4 n 9 9 9 9 9 9 9 Média 44,13 61,15 0,85 52,4 1,08 6,74 35,2 Mediana 44,73 60,71 0,79 52 1,08 6,2 37,4 Std.
Dev 5,15 8,88 0,11 10,4 0,03 1,91 4,01 %CV 12 15 13 20 2 28 11 Geo.
Média 43,87 60,59 0,85 51,4 1,08 6,51 35 (IC de 95 %) (40,08, 48,01) (54,25, 67,67) (0,773, 0,932) (44,1, 60,0) (1,06, 1,10) (5,26, 8,07) (31,9, 38,4) Mínimo 35,59 47,89 0,77 38 1,04 4,4 28,4 Máximo 53,31 76,94 1,05 67,4 1,13 9,7 38,4
Abreviações: Std Dev = desvio padrão, Geo.
Média = média geométrica, % CV = coeficiente de variação percentual, CMAX = concentração má- xima no estado estacionário, TMAX = tempo para atingir a concentração máxima, CMAXSS = concentração máxima no estado estacionário, IVR = recuperação in vivo, AUC0-inf = área sob curva de atividade-tempo a partir do tempo 0 ao infinito, AUC0-tau = área sob a curva de atividade- tempo a partir da hora 0 ao longo do intervalo de dosagem, MRTINF = tempo médio de residência extrapolado para o infinito, AI = índice de acumulação, IR = recuperação incremental, Csérica = concentração mais baixa que um medicamento atinge antes da próxima dose ser adminis- trada, Cavg = concentração média após atingir o estado estacionário, t1/2 = meia-vida de eliminação, CLss = depuração no estado estacionário, Vss = volume de distribuição no estado estacionário. Conclusões
[0354] Consistente com os resultados observados no estudo de dose única (Exemplo 1), a dosagem semanal de rFVIIIFc-VWF-XTEN foi geralmente bem tolerada e nenhum inibidor foi detectado durante 28 dias após administração final de rFVIIIFc-VWF-XTEN. rFVIIIFc-VWF- XTEN na dose de 50 IU/kg exibiu meia-vida de eliminação média (t1/2) de 41,24 e 43,87 horas com os ensaios em um estágio e cromogênico, respectivamente. Estes resultados provisórios demonstram que a meia- vida aumentada observada em dosagem única de rFVIIIFc-VWF-XTEN é mantida com a dosagem repetida QW, indicando fortemente que as vantagens de rFVIIIFc-VWF-XTEN podem ser obtidas por pacientes com hemofilia A que recebem tratamento de acordo com um esquema de dosagem profilático de FVIII. Exemplo 3: Estudo de Fase 3 de rFVIIIFc-VWF-XTEN em Pacientes Tratados Anteriormente para Hemofilia A Grave
[0355] O presente estudo avaliará a segurança e tolerabilidade e caracterizará a farmacocinética da administração uma vez por semana de 50 IU/kg de rFVIIIFc-VWF-XTEN (Figura 1). O objetivo principal do estudo é avaliar a eficácia do tratamento profilático com rFVIIIFc-VWF- XTEN comparado com o tratamento sob demanda com rFVIIIFc-VWF- XTEN. A objeção secundária do estudo é avaliar rFVIIIFc-VWF-XTEN como um tratamento profilático, seu efeito sobre os episódios de san- gramento e consumo de rFVIIIFc-VWF-XTEN, saúde das articulações e qualidade de vida conforme medido pelos resultados relatados pelo pa-
ciente (PROs) e avaliar rFVIIIFc-VWF-XTEN para tratamento sob de- manda.
[0356] Além disso, o objetivo farmacocinético (PK) é caracterizar a PK da profilaxia com rFVIIIFc-VWF-XTEN na linha de base para todos os indivíduos e repetida em três meses para um subconjunto predefinido de indivíduos, com base no ensaio de atividade de FVIII aPTT. Os ob- jetivos adicionais são avaliar a eficácia de rFVIIIFc-VWF-XTEN em indi- víduos que se submetem à cirurgia e avaliar a segurança e tolerabili- dade de rFVIIIFc-VWF-XTEN. Além disso, os resultados estruturais da saúde das articulações serão avaliados por ultrassom e o impacto do tratamento sobre outras medidas de qualidade de vida e utilização de recursos de saúde serão avaliados. Design do Estudo
[0357] Este é um estudo central, de Fase 3, aberto, multicêntrico da segurança, eficácia e farmacocinética de rFVIIIFc-VWF-XTEN intrave- noso em pacientes ≥ 12 anos de idade com hemofilia A grave (definida como FVIII endógeno < 1 IU/dL [< 1 %]). Aproximadamente vinte e cinco indivíduos atualmente sob um regime sob demanda receberão rFVIIIFc- VWF-XTEN em uma dose de 50 IU/kg IV sob demanda durante vinte e seis semanas, em seguida, receberão rFVIIIFc-VWF-XTEN em uma dose de 50 IU/kg IV uma vez por semana em um regime de tratamento profilático durante vinte e seis semanas. Os indivíduos atualmente sob um regime de tratamento profilático receberão rFVIIIFc-VWF-XTEN em uma dose de 50 IU/kg IV uma vez por semana em um regime de trata- mento profilático durante cinquenta e duas semanas.
[0358] Aproximadamente 140 indivíduos ≥ 12 anos de idade serão incluídos; avaliações de farmacocinética repetidas serão realizadas em um subconjunto de aproximadamente dezesseis indivíduos em 12 se- manas.
[0359] Os indivíduos serão selecionados e, após atender aos crité- rios de inscrição, prosseguir para um dos dois regimes de tratamento (ou seja, sob demanda ou profilaxia) com rFVIIIFc-VWF-XTEN em uma dose de 50 IU/kg IV. Todos os indivíduos serão submetidos a avaliações de farmacocinética de base após um período de suspensão da medica- ção (pelo menos 4 a 5 dias, dependendo da terapia atual). Os indivíduos serão submetidos a avaliações de eficácia e segurança ao longo do es- tudo. Estas avaliações de segurança incluirão ensaios para a formação de inibidores em potencial. Uma visita de segurança de acompanha- mento ou chamada telefônica ocorrerá vinte e oito dias após a última dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN, a menos que o indivíduo se inscreva no estudo de extensão aberto.
[0360] O final do estudo (EOS) pode ocorrer quando ambos os cri- térios forem atendidos: (i) pelo menos 104 indivíduos atingiram 50 dias de exposição (EDs) e concluíram um ensaio de inibidor válido após o 50º ED; e (ii) pelo menos vinte e cinco indivíduos concluíram o braço sob demanda do estudo, incluindo o período de tratamento profilático de 26 semanas ou saíram do estudo precocemente. Além disso, os in- divíduos de qualquer braço submetidos à cirurgia durante o estudo se- rão incluídos no subconjunto de cirurgia. Um mínimo de dez grandes cirurgias em pelo menos cinco os indivíduos serão observados para avaliar o controle e prevenção de sangramento no ambiente cirúrgico.
[0361] Os indivíduos chegarão à clínica dentro de um período de triagem de aproximadamente 28 dias para determinação de elegibili- dade. Além da(s) visita(s) de triagem, os indivíduos retornarão à clínica para visitas na linha de base, semana 4, semana 12, semana 26, se- mana 36, semana 52 e EOS/ET. O período de dosagem será acima de 52 semanas. Os indivíduos que entram no grupo de tratamento profilá- tico receberão 52 doses uma vez por semana de rFVIIIFc-VWF-XTEN e doses adicionais conforme necessário para tratar episódios hemorrági- cos. Os indivíduos que entrarem no braço de tratamento sob demanda receberão rFVIIIFc-VWF-XTEN sob demanda durante o período de tra- tamento sob demanda de 26 semanas e 26 doses uma vez por semana de rFVIIIFc-VWF-XTEN e doses adicionais conforme necessário para tratar os episódios de sangramento durante o período de tratamento profilático subsequente de 26 semanas. A segurança será avaliada ao longo do estudo. Uma visita de segurança de acompanhamento ou uma chamada telefônica ocorrerá 28 dias após a última dose de rFVIIIFc- VWF-XTEN, a menos que o indivíduo se inscreva no estudo de exten- são aberto.
[0362] O objetivo primário do estudo será uma comparação intra- indivíduo da Taxa de Sangramento Anualizada (ABR) enquanto os indi- víduos estão em tratamento sob demanda com rFVIIIFc-VWF-XTEN (26 semanas) versus tratamento profilático uma vez por semana (26 sema- nas).
[0363] Os parâmetros secundários do estudo incluirão (i) uma com- paração intra-indivíduo de ABR na profilaxia de rFVIIIFc-VWF-XTEN versus o ABR histórico (para indivíduos sob profilaxia que participaram de um estudo observacional anterior); (ii) a ocorrência de episódios he- morrágicos e consumo (ABR geral, ABR por tipo e localização, e con- sumo total anualizado de rFVIIIFc-VWF-XTEN por indivíduo); (iii) a res- posta ao tratamento; (iv) índice de eficácia (porcentagem de indivíduos que mantêm o nível % mínimo de L3 no dia 7; (v) saúde das articula- ções; e (vi) alterações nas medidas de qualidade de vida (haem-A-QoL e PROMIS-SF physical Function para indivíduos com mais de 18 anos e HAEMO-QoL e PROMIS Pediatric-SF Physical Activity para indivíduo com menos de 18 anos).
[0364] A resposta ao tratamento incluirá o (i) número de infusões e a dose de rFVIIIFc-VWF-XTEN necessária para resolver um episódio de sangramento; (ii) porcentagem de episódios de sangramento que reque- rem uma única infusão para resolução; (iii) avaliação do indivíduo quanto à resposta ao tratamento com rFVIIIFc-VWF-XTEN de episódios hemorrágicos individuais com base em uma escala de resposta de 4 pontos; (iv) e a avaliação global do investigador da resposta do indivíduo ao tratamento com rFVIIIFc-VWF-XTEN com base em uma escala de resposta de 4 pontos.
[0365] A avaliação da saúde das articulações incluirá (i) ABR de epi- sódios de sangramento nas articulações; (ii) Resolução da articulação alvo em 52 semanas, com base nos critérios da International Society on Thrombosis and Haemostasis (ISTH); (iii) Resultados funcionais com base na mudança absoluta desde o início até 52 semanas avaliados pela Hemophilia Joint Health Score modificado (mHJHS) ou HJHS); (iv) Porcentagem de indivíduos sem deterioração articular em 52 semanas avaliada pelo mHJHS ou HJHS.
[0366] Parâmetros adicionais incluem (i) concentração plasmática máxima (pico) do fármaco (Cmax), meia-vida de eliminação (t½), índice de acumulação (AI), área sob a curva de concentração plasmática- tempo (AUC), volume aparente de distribuição no estado estacionário (Vss), tempo médio de residência (MRT), recuperação incremental (IR), concentração plasmática mínima (Csérica) e tempo acima dos níveis pre- definidos de atividade de FVIII; (ii) Avaliações dos investigadores ou ci- rurgiões da resposta hemostática dos indivíduos ao tratamento com rFVIIIFc-VWF-XTEN em uma escala de resposta de 4 pontos, número e dose de infusões necessárias para manter a hemostasia durante a cirurgia, consumo total de rFVIIIFc-VWF-XTEN durante o período cirúr- gico, perda estimada de sangue durante a cirurgia, número e tipo de transfusões de hemocomponentes necessárias durante a cirurgia e epi- sódios de sangramento pós-cirurgia durante o período cirúrgico; (iii) a ocorrência de eventos adversos (AEs) e eventos adversos graves
(SAEs), anormalidades clinicamente significativas no exame físico, si- nais vitais e ensaios laboratoriais, e o desenvolvimento de inibidores (anticorpos neutralizantes dirigidos contra FVIII, conforme determinado através do ensaio Bethesda modificado por Nijmegen; e (iv) resultados de saúde das articulações estruturais anatômicas por meio de imagens de ultrassom em uma subpopulação, alterações em outras medidas de QV (EQ-5D-5L, PGIC (semana 52 apenas), Intensidade da dor PRO- MIS, Interferência de dor PROMIS-SF (indivíduos ≥ 18 anos), PROMIS Pediatric-SF Pain Interference (indivíduos < 18 anos)), e HRU. Critérios de Inclusão/Exclusão
[0367] Os candidatos elegíveis devem atender aos seguintes crité- rios de elegibilidade: (1) ≥ 12 anos de idade no momento do consenti- mento informado; (2) hemofilia A grave, definida como < 1 UI/dL (< 1 %) de FVIII endógeno, conforme documentado por um laboratório clínico certificado; (3) tratamento prévio para hemofilia A (profilático ou sob de- manda) com qualquer FVIII recombinante e/ou derivado do plasma, ou crioprecipitado por pelo menos 150 EDs; (4) atualmente sob um regime de tratamento profilático com um produto FVIII comercializado e teve pelo menos quatro episódios de sangramento nos doze meses anterio- res à inscrição no estudo ou atualmente sob um regime de tratamento sob demanda com um produto FVIII comercializado e teve pelo menos doze sangramentos episódios nos doze meses anteriores à inscrição no estudo; e (5) contagem de plaquetas ≥ 100.000 células/µL na triagem (teste realizado pelo laboratório central e revisado antes da dose do Dia 1). Os participantes serão excluídos por qualquer um dos seguintes mo- tivos: (1) outro(s) transtorno(s) de coagulação conhecido(s) além da he- mofilia A; (2) histórico de hipersensibilidade ou anafilaxia associada a qualquer produto de FVIII; (3) histórico de um teste de inibidor positivo ou sinais clínicos de resposta diminuída às administrações de FVIII (his-
tórico familiar de inibidores não excluirá o indivíduo); (4) resultado posi- tivo do inibidor, obtido na triagem, definido como ≥ 0,6 BU/mL; (5) função renal anormal, definida como creatinina sérica > 2,0 mg/dL obtida na triagem; (6) alanina aminotransferase (ALT) ou aspartato aminotransfe- rase (AST) séricas > 5 × limite máximo do normal (Upper Limit of Nor- mal, ULN) obtido na triagem; (7) bilirrubina total sérica > 3 × ULN, obtido na triagem; (8) uso de fitusiran ou emicizumabe nas 12 semanas ante- riores à triagem; (9) tratamento dentro de 12 semanas antes da triagem com um anticorpo monoclonal terapêutico, uma proteína de fusão Fc diferente de rFVIIIFc ou imunoglobulina IV; (10) tratamento com ácido acetilsalicílico (AAS) nas 2 semanas anteriores à triagem ou tratamento com anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs) igual ou superior à dose máxima especificada nas informações regionais de prescrição de cada produto; (11) tratamento sistêmico dentro de 12 semanas antes da triagem com quimioterapia e/ou outros medicamentos imunossupresso- res (exceto quanto ao tratamento do vírus da hepatite C [HCV] ou HIV; o uso de corticosteroides é permitido, exceto para tratamento com cor- ticosteroides sistêmicos administrados diariamente ou em dias alterna- dos a 20 mg/dia de prednisona ou seu equivalente por > 14 dias; o uso de esteroide local, tópico e/ou inalado é permitido; e (12) cirurgia de grande porte dentro de 8 semanas antes da triagem (cirurgia de grande porte é definida como qualquer procedimento cirúrgico (eletivo ou emer- gencial) o qual geralmente, mas nem sempre, envolve anestesia geral e/ou assistência respiratória, na qual uma cavidade corporal principal é penetrada e exposta, ou um prejuízo substancial das funções físicas ou fisiológicas é produzido (por exemplo, laparotomia, toracotomia, cranio- tomia, substituição de articulação ou amputação de membro)).
SEQUÊNCIAS Sequência de nucleotídeos de VWF031 (SEQ ID NO: 147) 1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC
TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA
GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC
TTTGA TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC
AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG
GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA TTTTT TGACA TCCAT
TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC
CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC
TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC
TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG
TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA
CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT
GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT
CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA
AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT
TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA
GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG
GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC
CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG
CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT
GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC
ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC
CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT
GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC
TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA
CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA
CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC
GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AG-
GAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG AC-
CTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG
GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT
GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG
GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG
GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT
GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT
TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC
CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT
GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT
ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA
GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG
GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT
GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG
GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA
CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT
GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AG-
CTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA
AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG
ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GA-
CCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC
GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT
GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC
TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT
GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG
ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG
GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA
GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG
TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG
CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CA-
TTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA
GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG
TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT
CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT
CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC
TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT
CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC
CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GA-
CTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC
CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA
GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC
TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC AC-
TGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC
CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC
TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT
CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG
TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC TGGCG GTGGA
GGTTC CGGTG GCGGG 3751 GGATC CGGCG GTGGA GGTTC CGGCG GTGGA GGTTC
CGGTG GCGGG GGATC 3801 CGGTG GCGGG GGATC CCTGG TCCCC CGGGG CAGCG
GCGGT GGAGG TTCCG 3851 GTGGC GGGGG ATCCG ACAAA ACTCA CACAT GCCCA
CCGTG CCCAG CTCCA 3901 GAACT CCTGG GCGGA CCGTC AGTCT TCCTC TTCCC
CCCAA AACCC AAGGA 3951 CACCC TCATG ATCTC CCGGA CCCCT GAGGT CACAT
GCGTG GTGGT GGACG 4001 TGAGC CACGA AGACC CTGAG GTCAA GTTCA ACTGG
TACGT GGACG GCGTG 4051 GAGGT GCATA ATGCC AAGAC AAAGC CGCGG GAGGA
GCAGT ACAAC AGCAC 4101 GTACC GTGTG GTCAG CGTCC TCACC GTCCT GCACC AG-
GAC TGGCT GAATG 4151 GCAAG GAGTA CAAGT GCAAG GTCTC CAACA AAGCC
CTCCC AGCCC CCATC 4201 GAGAA AACCA TCTCC AAAGC CAAAG GGCAG CCCCG
AGAAC CACAG GTGTA 4251 CACCC TGCCC CCATC CCGCG ATGAG CTGAC CAAGA
ACCAG GTCAG CCTGA 4301 CCTGC CTGGT CAAAG GCTTC TATCC CAGCG ACATC
GCCGT GGAGT GGGAG 4351 AGCAA TGGGC AGCCG GAGAA CAACT ACAAG ACCAC
GCCTC CCGTG TTGGA 4401 CTCCG ACGGC TCCTT CTTCC TCTAC AGCAA GCTCA
CCGTG GACAA GAGCA 4451 GGTGG CAGCA GGGGA ACGTC TTCTC ATGCT CCGTG
ATGCA TGAGG CTCTG 4501 CACAA CCACT ACACG CAGAA GAGCC TCTCC CTGTC
TCCGG GTAAA TGA Sequência de proteína de VWF031 (SEQ ID NO: 86) 1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS
DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE
FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI
DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS
WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL
VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
TDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLL-
DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA-
VLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACA-
GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
CFCP PGLYMDERGD
701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM
SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK
TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF
HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ
YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE
KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD
SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS
CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY
EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC
VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP
ISGGGGSGGG 1251 GSGGGGSGGG GSGGGGSGGG GSLVPRGSGG
GGSGGGGSDK THTCPPCPAP 1301 ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE
VKFNWYVDGV 1351 EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK
VSNKALPAPI 1401 EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ VSLTCLVKGF
YPSDIAVEWE
1451 SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSR-
WQQGNV FSCSVMHEAL 1501 HNHYTQKSLS LSPGK* Sequência de nucleotídeos de VWF034 (SEQ ID NO: 148) 1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC
TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA
GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC
TTTGA TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC
AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG
GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA TTTTT TGACA TCCAT
TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC
CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC
TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC
TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG
TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA
CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT
GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT
CTCCT CTGGG GAAAT
651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA
AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT
TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA
GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG
GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC
CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG
CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT
GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC
ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC
CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT
GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC
TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA
CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA
CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC
GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AG-
GAG TTGCC ATGGA
1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG AC-
CTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG
GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT
GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG
GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG
GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT
GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT
TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC
CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT
GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT
ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA
GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG
GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT
GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG
GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA
CGGTG AGATC TTCCA
2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT
GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AG-
CTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA
AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG
ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GA-
CCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC
GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT
GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC
TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT
GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG
ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG
GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA
GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG
TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG
CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CA-
TTC TGCTG CTGGG
2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA
GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG
TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT
CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT
CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC
TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT
CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC
CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GA-
CTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC
CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA
GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC
TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC AC-
TGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC
CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC
TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT
CACCT TGAAT CCCAG
3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG
TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC GGGTA CCTCA
GAGTC TGCTA CCCCC 3751 GAGTC AGGGC CAGGA TCAGA GCCAG CCACC TCCGG
GTCTG AGACA CCCGG 3801 GACTT CCGAG AGTGC CACCC CTGAG TCCGG ACCCG
GGTCC GAGCC CGCCA 3851 CTTCC GGCTC CGAAA CTCCC GGCAC AAGCG AGAGC
GCTAC CCCAG AGTCA 3901 GGACC AGGAA CATCT ACAGA GCCCT CTGAA GGCTC
CGCTC CAGGG TCCCC 3951 AGCCG GCAGT CCCAC TAGCA CCGAG GAGGG AACCT
CTGAA AGCGC CACAC 4001 CCGAA TCAGG GCCAG GGTCT GAGCC TGCTA CCAGC
GGCAG CGAGA CACCA 4051 GGCAC CTCTG AGTCC GCCAC ACCAG AGTCC GGACC
CGGAT CTCCC GCTGG 4101 GAGCC CCACC TCCAC TGAGG AGGGA TCTCC TGCTG
GCTCT CCAAC ATCTA 4151 CTGAG GAAGG TACCT CAACC GAGCC ATCCG AGGGA
TCAGC TCCCG GCACC 4201 TCAGA GTCGG CAACC CCGGA GTCTG GACCC GGAAC
TTCCG AAAGT GCCAC 4251 ACCAG AGTCC GGTCC CGGGA CTTCA GAATC AGCAA
CACCC GAGTC CGGCC 4301 CTGGG TCTGA ACCCG CCACA AGTGG TAGTG AGACA
CCAGG ATCAG AACCT 4351 GCTAC CTCAG GGTCA GAGAC ACCCG GATCT CCGGC
AGGCT CACCA ACCTC
4401 CACTG AGGAG GGCAC CAGCA CAGAA CCAAG CGAGG
GCTCC GCACC CGGAA 4451 CAAGC ACTGA ACCCA GTGAG GGTTC AGCAC CCGGC
TCTGA GCCGG CCACA 4501 AGTGG CAGTG AGACA CCCGG CACTT CAGAG AGTGC
CACCC CCGAG AGTGG 4551 CCCAG GCACT AGTAC CGAGC CCTCT GAAGG CAGTG
CGCCA GATTC TGGCG 4601 GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG GGATC CGGTG GCGGG
GGATC CGGTG GCGGG 4651 GGATC CGGTG GCGGG GGATC CCTGG TCCCC CGGGG
CAGCG GAGGC GACAA 4701 AACTC ACACA TGCCC ACCGT GCCCA GCTCC AGAAC
TCCTG GGCGG ACCGT 4751 CAGTC TTCCT CTTCC CCCCA AAACC CAAGG ACACC
CTCAT GATCT CCCGG 4801 ACCCC TGAGG TCACA TGCGT GGTGG TGGAC GTGAG
CCACG AAGAC CCTGA 4851 GGTCA AGTTC AACTG GTACG TGGAC GGCGT GGAGG
TGCAT AATGC CAAGA 4901 CAAAG CCGCG GGAGG AGCAG TACAA CAGCA CGTAC
CGTGT GGTCA GCGTC 4951 CTCAC CGTCC TGCAC CAGGA CTGGC TGAAT GGCAA
GGAGT ACAAG TGCAA 5001 GGTCT CCAAC AAAGC CCTCC CAGCC CCCAT CGAGA
AAACC ATCTC CAAAG 5051 CCAAA GGGCA GCCCC GAGAA CCACA GGTGT ACACC
CTGCC CCCAT CCCGG 5101 GATGA GCTGA CCAAG AACCA GGTCA GCCTG ACCTG
CCTGG TCAAA GGCTT
5151 CTATC CCAGC GACAT CGCCG TGGAG TGGGA GAGCA
ATGGG CAGCC GGAGA 5201 ACAAC TACAA GACCA CGCCT CCCGT GTTGG ACTCC GA-
CGG CTCCT TCTTC 5251 CTCTA CAGCA AGCTC ACCGT GGACA AGAGC AGGTG
GCAGC AGGGG AACGT 5301 CTTCT CATGC TCCGT GATGC ATGAG GCTCT GCACA AC-
CAC TACAC GCAGA 5351 AGAGC CTCTC CCTGT CTCCG GGTAA ATGA Sequência de proteína de VWF034 (SEQ ID NO: 87) 1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS
DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE
FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI
DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS
WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL
VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
TDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLL-
DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM
501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA-
VLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACA-
GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
CFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM
SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK
TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF
HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ
YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE
KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD
SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS
CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY
EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC
VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP
ISGTSESATP
1251 ESGPGSEPAT SGSETPGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP
GTSESATPES 1301 GPGTSTEPSE GSAPGSPAGS PTSTEEGTSE SATPESGPGS
EPATSGSETP 1351 GTSESATPES GPGSPAGSPT STEEGSPAGS PTSTEEGTST
EPSEGSAPGT 1401 SESATPESGP GTSESATPES GPGTSESATP ESGPGSEPAT
SGSETPGSEP 1451 ATSGSETPGS PAGSPTSTEE GTSTEPSEGS APGTSTEPSE
GSAPGSEPAT 1501 SGSETPGTSE SATPESGPGT STEPSEGSAP
DIGGGGGSGG GGSLVPRGSG 1551 GDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV
TCVVVDVSHE 1601 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL
HQDWLNGKEY 1651 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT
KNQVSLTCLV 1701 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK
LTVDKSRWQQ 1751 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK* Sequência de nucleotídeos de VWF050 (mutante triplo IHH) (SEQ ID NO: 149) 1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC
TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA
GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC
TTTGA TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC
AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG
GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA TTTTT TGACA TCCAT
TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC
CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC
TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC
TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG
TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA
CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT
GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT
CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA
AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT
TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA
GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG
GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC
CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG
CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT
GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC
ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC
CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT
GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC
TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA
CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA
CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC
GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AG-
GAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG AC-
CTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG
GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT
GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG
GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG
GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT
GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT
TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC
CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT
GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT
ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA
GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG
GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT
GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG
GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA
CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT
GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AG-
CTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA
AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG
ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GA-
CCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC
GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT
GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC
TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT
GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG
ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG
GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA
GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG
TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG
CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CA-
TTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA
GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG
TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT
CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT
CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC
TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT
CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC
CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GA-
CTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC
CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA
GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC
TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC AC-
TGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC
CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC
TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT
CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG
TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC TGGCG GTGGA
GGTTC CGGTG GCGGG 3751 GGATC CGGCG GTGGA GGTTC CGGCG GTGGA GGTTC
CGGTG GCGGG GGATC 3801 CGGTG GCGGG GGATC CCTGG TCCCC CGGGG CAGCG
GCGGT GGAGG TTCCG 3851 GTGGC GGGGG ATCCG ACAAA ACTCA CACAT GCCCA
CCGTG CCCAG CTCCA 3901 GAACT CCTGG GCGGA CCGTC AGTCT TCCTC TTCCC
CCCAA AACCC AAGGA 3951 CACCC TCATG GCCTC CCGGA CCCCT GAGGT CACAT
GCGTG GTGGT GGACG 4001 TGAGC CACGA AGACC CTGAG GTCAA GTTCA ACTGG
TACGT GGACG GCGTG 4051 GAGGT GCATA ATGCC AAGAC AAAGC CGCGG GAGGA
GCAGT ACAAC AGCAC 4101 GTACC GTGTG GTCAG CGTCC TCACC GTCCT GGCCC
AGGAC TGGCT GAATG 4151 GCAAG GAGTA CAAGT GCAAG GTCTC CAACA AAGCC
CTCCC AGCCC CCATC 4201 GAGAA AACCA TCTCC AAAGC CAAAG GGCAG CCCCG
AGAAC CACAG GTGTA 4251 CACCC TGCCC CCATC CCGCG ATGAG CTGAC CAAGA
ACCAG GTCAG CCTGA 4301 CCTGC CTGGT CAAAG GCTTC TATCC CAGCG ACATC
GCCGT GGAGT GGGAG 4351 AGCAA TGGGC AGCCG GAGAA CAACT ACAAG ACCAC
GCCTC CCGTG TTGGA 4401 CTCCG ACGGC TCCTT CTTCC TCTAC AGCAA GCTCA
CCGTG GACAA GAGCA 4451 GGTGG CAGCA GGGGA ACGTC TTCTC ATGCT CCGTG
ATGCA TGAGG CTCTG 4501 CACAA CGCCT ACACG CAGAA GAGCC TCTCC CTGTC
TCCGG GTAAA TGA Sequência de proteína de VWF050 (mutante triplo IHH) (SEQ ID NO: 150) 1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS
DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE
FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI
DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS
WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL
VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
TDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLL-
DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA-
VLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACA-
GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
CFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM
SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK
TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF
HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ
YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE
KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD
SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS
CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY
EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC
VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP
ISGGGGSGGG 1251 GSGGGGSGGG GSGGGGSGGG GSLVPRGSGG
GGSGGGGSDK THTCPPCPAP 1301 ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ASRTPEVTCV VVDVSHEDPE
VKFNWYVDGV 1351 EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLAQD WLNGKEYKCK
VSNKALPAPI 1401 EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ VSLTCLVKGF
YPSDIAVEWE 1451 SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSR-
WQQGNV FSCSVMHEAL 1501 HNAYTQKSLS LSPGK* Sequência de nucleotídeos de VWF057 (SEQ ID NO: 151) 1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC
TCTGG CCCTC ATTTT 51 GCCAG GGACC CTTTG TGCAG AAGGA ACTCG CGGCA
GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC
TTTGA TGGGA GCATG 151 TACAG CTTTG CGGGA TACTG CAGTT ACCTC CTGGC
AGGGG GCTGC CAGAA 201 ACGCT CCTTC TCGAT TATTG GGGAC TTCCA GAATG
GCAAG AGAGT GAGCC 251 TCTCC GTGTA TCTTG GGGAA TTTTT TGACA TCCAT
TTGTT TGTCA ATGGT 301 ACCGT GACAC AGGGG GACCA AAGAG TCTCC ATGCC
CTATG CCTCC AAAGG 351 GCTGT ATCTA GAAAC TGAGG CTGGG TACTA CAAGC
TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC
TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG
TGGCA ACTTT AACAT 501 CTTTG CTGAA GATGA CTTTA TGACC CAAGA AGGGA
CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT
GGAGA ACAGT GGTGT 601 GAACG GGCAT CTCCT CCCAG CAGCT CATGC AACAT
CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA
AGAGC ACCTC GGTGT 701 TTGCC CGCTG CCACC CTCTG GTGGA CCCCG AGCCT
TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA
GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG
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CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG
CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT
GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC
ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC
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GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC
TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA
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CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC
GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AG-
GAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG AC-
CTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG
GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT
GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG
GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG
GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT
GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT
TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC
CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT
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GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG
GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA
CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT
GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AG-
CTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA
AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG
ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GA-
CCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC
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GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG
ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG
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TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG
CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CA-
TTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA
GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG
TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT
CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT
CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC
TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT
CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC
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CTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC
CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA
GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC
TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC AC-
TGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC
CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC
TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT
CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG
TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC GGGCG CGCCA
ACATC AGAGA GCGCC 3751 ACCCC TGAAA GTGGT CCCGG GAGCG AGCCA GCCAC
ATCTG GGTCG GAAAC 3801 GCCAG GCACA AGTGA GTCTG CAACT CCCGA GTCCG
GACCT GGCTC CGAGC 3851 CTGCC ACTAG CGGCT CCGAG ACTCC GGGAA CTTCC
GAGAG CGCTA CACCA 3901 GAAAG CGGAC CCGGA ACCAG TACCG AACCT AGCGA
GGGCT CTGCT CCGGG 3951 CAGCC CAGCC GGCTC TCCTA CATCC ACGGA GGAGG
GCACT TCCGA ATCCG 4001 CCACC CCGGA GTCAG GGCCA GGATC TGAAC CCGCT
ACCTC AGGCA GTGAG 4051 ACGCC AGGAA CGAGC GAGTC CGCTA CACCG GAGAG
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ACACA TGCCC ACCGT 4301 GCCCA GCTCC AGAAC TCCTG GGCGG ACCGT CAGTC
TTCCT CTTCC CCCCA 4351 AAACC CAAGG ACACC CTCAT GATCT CCCGG ACCCC
TGAGG TCACA TGCGT 4401 GGTGG TGGAC GTGAG CCACG AAGAC CCTGA GGTCA
AGTTC AACTG GTACG 4451 TGGAC GGCGT GGAGG TGCAT AATGC CAAGA CAAAG
CCGCG GGAGG AGCAG 4501 TACAA CAGCA CGTAC CGTGT GGTCA GCGTC CTCAC
CGTCC TGCAC CAGGA 4551 CTGGC TGAAT GGCAA GGAGT ACAAG TGCAA GGTCT
CCAAC AAAGC CCTCC 4601 CAGCC CCCAT CGAGA AAACC ATCTC CAAAG CCAAA
GGGCA GCCCC GAGAA 4651 CCACA GGTGT ACACC CTGCC CCCAT CCCGG GATGA
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251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
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DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
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RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
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GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
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KVCGLCGNFD
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LHNH YTQKSLSLSP 1651 GK* Sequência de nucleotídeos de VWF058 (VWF034 com mutação IHH) (SEQ ID NO: 153 ) 1 ATGAT TCCTG CCAGA TTTGC CGGGG TGCTG CTTGC
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GGTCA TCCAC GGCCC 101 GATGC AGCCT TTTCG GAAGT GACTT CGTCA ACACC
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TGTCC GGTGA GGCCT 401 ATGGC TTTGT GGCCA GGATC GATGG CAGCG GCAAC
TTTCA AGTCC TGCTG 451 TCAGA CAGAT ACTTC AACAA GACCT GCGGG CTGTG
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CCTTG ACCTC GGACC 551 CTTAT GACTT TGCCA ACTCA TGGGC TCTGA GCAGT
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CTCCT CTGGG GAAAT 651 GCAGA AGGGC CTGTG GGAGC AGTGC CAGCT TCTGA
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TTTGT GGCCC TGTGT 751 GAGAA GACTT TGTGT GAGTG TGCTG GGGGG CTGGA
GTGCG CCTGC CCTGC 801 CCTCC TGGAG TACGC CCGGA CCTGT GCCCA GGAGG
GAATG GTGCT GTACG 851 GCTGG ACCGA CCACA GCGCG TGCAG CCCAG TGTGC
CCTGC TGGTA TGGAG 901 TATAG GCAGT GTGTG TCCCC TTGCG CCAGG ACCTG
CCAGA GCCTG CACAT 951 CAATG AAATG TGTCA GGAGC GATGC GTGGA TGGCT
GCAGC TGCCC TGAGG 1001 GACAG CTCCT GGATG AAGGC CTCTG CGTGG AGAGC
ACCGA GTGTC CCTGC 1051 GTGCA TTCCG GAAAG CGCTA CCCTC CCGGC ACCTC
CCTCT CTCGA GACTG 1101 CAACA CCTGC ATTTG CCGAA ACAGC CAGTG GATCT
GCAGC AATGA AGAAT 1151 GTCCA GGGGA GTGCC TTGTC ACTGG TCAAT CCCAC
TTCAA GAGCT TTGAC 1201 AACAG ATACT TCACC TTCAG TGGGA TCTGC CAGTA
CCTGC TGGCC CGGGA 1251 TTGCC AGGAC CACTC CTTCT CCATT GTCAT TGAGA
CTGTC CAGTG TGCTG 1301 ATGAC CGCGA CGCTG TGTGC ACCCG CTCCG TCACC
GTCCG GCTGC CTGGC 1351 CTGCA CAACA GCCTT GTGAA ACTGA AGCAT GGGGC AG-
GAG TTGCC ATGGA 1401 TGGCC AGGAC ATCCA GCTCC CCCTC CTGAA AGGTG AC-
CTC CGCAT CCAGC 1451 ATACA GTGAC GGCCT CCGTG CGCCT CAGCT ACGGG
GAGGA CCTGC AGATG 1501 GACTG GGATG GCCGC GGGAG GCTGC TGGTG AAGCT
GTCCC CCGTC TATGC 1551 CGGGA AGACC TGCGG CCTGT GTGGG AATTA CAATG
GCAAC CAGGG CGACG 1601 ACTTC CTTAC CCCCT CTGGG CTGGC GGAGC CCCGG
GTGGA GGACT TCGGG 1651 AACGC CTGGA AGCTG CACGG GGACT GCCAG GACCT
GCAGA AGCAG CACAG 1701 CGATC CCTGC GCCCT CAACC CGCGC ATGAC CAGGT
TCTCC GAGGA GGCGT 1751 GCGCG GTCCT GACGT CCCCC ACATT CGAGG CCTGC
CATCG TGCCG TCAGC 1801 CCGCT GCCCT ACCTG CGGAA CTGCC GCTAC GACGT
GTGCT CCTGC TCGGA 1851 CGGCC GCGAG TGCCT GTGCG GCGCC CTGGC CAGCT
ATGCC GCGGC CTGCG 1901 CGGGG AGAGG CGTGC GCGTC GCGTG GCGCG AGCCA
GGCCG CTGTG AGCTG 1951 AACTG CCCGA AAGGC CAGGT GTACC TGCAG TGCGG
GACCC CCTGC AACCT 2001 GACCT GCCGC TCTCT CTCTT ACCCG GATGA GGAAT
GCAAT GAGGC CTGCC 2051 TGGAG GGCTG CTTCT GCCCC CCAGG GCTCT ACATG
GATGA GAGGG GGGAC 2101 TGCGT GCCCA AGGCC CAGTG CCCCT GTTAC TATGA
CGGTG AGATC TTCCA 2151 GCCAG AAGAC ATCTT CTCAG ACCAT CACAC CATGT
GCTAC TGTGA GGATG 2201 GCTTC ATGCA CTGTA CCATG AGTGG AGTCC CCGGA AG-
CTT GCTGC CTGAC 2251 GCTGT CCTCA GCAGT CCCCT GTCTC ATCGC AGCAA
AAGGA GCCTA TCCTG 2301 TCGGC CCCCC ATGGT CAAGC TGGTG TGTCC CGCTG
ACAAC CTGCG GGCTG 2351 AAGGG CTCGA GTGTA CCAAA ACGTG CCAGA ACTAT GA-
CCT GGAGT GCATG 2401 AGCAT GGGCT GTGTC TCTGG CTGCC TCTGC CCCCC
GGGCA TGGTC CGGCA 2451 TGAGA ACAGA TGTGT GGCCC TGGAA AGGTG TCCCT
GCTTC CATCA GGGCA 2501 AGGAG TATGC CCCTG GAGAA ACAGT GAAGA TTGGC
TGCAA CACTT GTGTC 2551 TGTCG GGACC GGAAG TGGAA CTGCA CAGAC CATGT
GTGTG ATGCC ACGTG 2601 CTCCA CGATC GGCAT GGCCC ACTAC CTCAC CTTCG
ACGGG CTCAA ATACC 2651 TGTTC CCCGG GGAGT GCCAG TACGT TCTGG TGCAG
GATTA CTGCG GCAGT 2701 AACCC TGGGA CCTTT CGGAT CCTAG TGGGG AATAA
GGGAT GCAGC CACCC 2751 CTCAG TGAAA TGCAA GAAAC GGGTC ACCAT CCTGG
TGGAG GGAGG AGAGA 2801 TTGAG CTGTT TGACG GGGAG GTGAA TGTGA AGAGG
CCCAT GAAGG ATGAG 2851 ACTCA CTTTG AGGTG GTGGA GTCTG GCCGG TACAT CA-
TTC TGCTG CTGGG 2901 CAAAG CCCTC TCCGT GGTCT GGGAC CGCCA CCTGA
GCATC TCCGT GGTCC 2951 TGAAG CAGAC ATACC AGGAG AAAGT GTGTG GCCTG
TGTGG GAATT TTGAT 3001 GGCAT CCAGA ACAAT GACCT CACCA GCAGC AACCT
CCAAG TGGAG GAAGA 3051 CCCTG TGGAC TTTGG GAACT CCTGG AAAGT GAGCT
CGCAG TGTGC TGACA 3101 CCAGA AAAGT GCCTC TGGAC TCATC CCCTG CCACC
TGCCA TAACA ACATC 3151 ATGAA GCAGA CGATG GTGGA TTCCT CCTGT AGAAT
CCTTA CCAGT GACGT 3201 CTTCC AGGAC TGCAA CAAGC TGGTG GACCC CGAGC
CATAT CTGGA TGTCT 3251 GCATT TACGA CACCT GCTCC TGTGA GTCCA TTGGG GA-
CTG CGCCG CATTC 3301 TGCGA CACCA TTGCT GCCTA TGCCC ACGTG TGTGC
CCAGC ATGGC AAGGT 3351 GGTGA CCTGG AGGAC GGCCA CATTG TGCCC CCAGA
GCTGC GAGGA GAGGA 3401 ATCTC CGGGA GAACG GGTAT GAGGC TGAGT GGCGC
TATAA CAGCT GTGCA 3451 CCTGC CTGTC AAGTC ACGTG TCAGC ACCCT GAGCC AC-
TGG CCTGC CCTGT 3501 GCAGT GTGTG GAGGG CTGCC ATGCC CACTG CCCTC
CAGGG AAAAT CCTGG 3551 ATGAG CTTTT GCAGA CCTGC GTTGA CCCTG AAGAC
TGTCC AGTGT GTGAG 3601 GTGGC TGGCC GGCGT TTTGC CTCAG GAAAG AAAGT
CACCT TGAAT CCCAG 3651 TGACC CTGAG CACTG CCAGA TTTGC CACTG TGATG
TTGTC AACCT CACCT 3701 GTGAA GCCTG CCAGG AGCCG ATATC GGGTA CCTCA
GAGTC TGCTA CCCCC 3751 GAGTC AGGGC CAGGA TCAGA GCCAG CCACC TCCGG
GTCTG AGACA CCCGG 3801 GACTT CCGAG AGTGC CACCC CTGAG TCCGG ACCCG
GGTCC GAGCC CGCCA 3851 CTTCC GGCTC CGAAA CTCCC GGCAC AAGCG AGAGC
GCTAC CCCAG AGTCA 3901 GGACC AGGAA CATCT ACAGA GCCCT CTGAA GGCTC
CGCTC CAGGG TCCCC 3951 AGCCG GCAGT CCCAC TAGCA CCGAG GAGGG AACCT
CTGAA AGCGC CACAC 4001 CCGAA TCAGG GCCAG GGTCT GAGCC TGCTA CCAGC
GGCAG CGAGA CACCA 4051 GGCAC CTCTG AGTCC GCCAC ACCAG AGTCC GGACC
CGGAT CTCCC GCTGG 4101 GAGCC CCACC TCCAC TGAGG AGGGA TCTCC TGCTG
GCTCT CCAAC ATCTA 4151 CTGAG GAAGG TACCT CAACC GAGCC ATCCG AGGGA
TCAGC TCCCG GCACC 4201 TCAGA GTCGG CAACC CCGGA GTCTG GACCC GGAAC
TTCCG AAAGT GCCAC 4251 ACCAG AGTCC GGTCC CGGGA CTTCA GAATC AGCAA
CACCC GAGTC CGGCC 4301 CTGGG TCTGA ACCCG CCACA AGTGG TAGTG AGACA
CCAGG ATCAG AACCT 4351 GCTAC CTCAG GGTCA GAGAC ACCCG GATCT CCGGC
AGGCT CACCA ACCTC 4401 CACTG AGGAG GGCAC CAGCA CAGAA CCAAG CGAGG
GCTCC GCACC CGGAA 4451 CAAGC ACTGA ACCCA GTGAG GGTTC AGCAC CCGGC
TCTGA GCCGG CCACA 4501 AGTGG CAGTG AGACA CCCGG CACTT CAGAG AGTGC
CACCC CCGAG AGTGG 4551 CCCAG GCACT AGTAC CGAGC CCTCT GAAGG CAGTG
CGCCA GATTC TGGCG 4601 GTGGA GGTTC CGGTG GCGGG GGATC CGGTG GCGGG
GGATC CGGTG GCGGG 4651 GGATC CGGTG GCGGG GGATC CCTGG TCCCC CGGGG
CAGCG GAGGC GACAA 4701 AACTC ACACA TGCCC ACCGT GCCCA GCTCC AGAAC
TCCTG GGCGG ACCGT 4751 CAGTC TTCCT CTTCC CCCCA AAACC CAAGG ACACC
CTCAT GGCCT CCCGG 4801 ACCCC TGAGG TCACA TGCGT GGTGG TGGAC GTGAG
CCACG AAGAC CCTGA 4851 GGTCA AGTTC AACTG GTACG TGGAC GGCGT GGAGG
TGCAT AATGC CAAGA 4901 CAAAG CCGCG GGAGG AGCAG TACAA CAGCA CGTAC
CGTGT GGTCA GCGTC 4951 CTCAC CGTCC TGGCC CAGGA CTGGC TGAAT GGCAA
GGAGT ACAAG TGCAA 5001 GGTCT CCAAC AAAGC CCTCC CAGCC CCCAT CGAGA
AAACC ATCTC CAAAG 5051 CCAAA GGGCA GCCCC GAGAA CCACA GGTGT ACACC
CTGCC CCCAT CCCGC 5101 GATGA GCTGA CCAAG AACCA GGTCA GCCTG ACCTG
CCTGG TCAAA GGCTT 5151 CTATC CCAGC GACAT CGCCG TGGAG TGGGA GAGCA
ATGGG CAGCC GGAGA 5201 ACAAC TACAA GACCA CGCCT CCCGT GTTGG ACTCC GA-
CGG CTCCT TCTTC 5251 CTCTA CAGCA AGCTC ACCGT GGACA AGAGC AGGTG
GCAGC AGGGG AACGT 5301 CTTCT CATGC TCCGT GATGC ATGAG GCTCT GCACA
ACGCC TACAC GCAGA 5351 AGAGC CTCTC CCTGT CTCCG GGTAA ATGA Sequência de proteína de VWF058 (VWF034 com mutação IHH) (SEQ ID NO: 154) 1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS
DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE
FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI
DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS
WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL
VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
TDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLL-
DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA-
VLTSP TFEACHRAVS
601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACA-
GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
CFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM
SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK
TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF
HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ
YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE
KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD
SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS
CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY
EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC
VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP
ISGTSESATP 1251 ESGPGSEPAT SGSETPGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP
GTSESATPES 1301 GPGTSTEPSE GSAPGSPAGS PTSTEEGTSE SATPESGPGS
EPATSGSETP
1351 GTSESATPES GPGSPAGSPT STEEGSPAGS PTSTEEGTST
EPSEGSAPGT 1401 SESATPESGP GTSESATPES GPGTSESATP ESGPGSEPAT
SGSETPGSEP 1451 ATSGSETPGS PAGSPTSTEE GTSTEPSEGS APGTSTEPSE
GSAPGSEPAT 1501 SGSETPGTSE SATPESGPGT STEPSEGSAP
DSGGGGSGGG GSGGGGSGGG 1551 GSGGGGSLVP RGSGGDKTHT CPPCPAPELL
GGPSVFLFPP KPKDTLMASR 1601 TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTK-
PREEQ YNSTYRVVSV 1651 LTVLAQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
PQVYTLPPSR 1701 DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP
PVLDSDGSFF 1751 LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNA YTQKSLSLSP GK* Sequência de nucleotídeos de FVIII 169 (SEQ ID NO: 155) 1 ATGCA AATAG AGCTC TCCAC CTGCT TCTTT CTGTG
CCTTT TGCGA TTCTG 51 CTTTA GTGCC ACCAG AAGAT ACTAC CTGGG TGCAG
TGGAA CTGTC ATGGG 101 ACTAT ATGCA AAGTG ATCTC GGTGA GCTGC CTGTG GA-
CGC AAGAT TTCCT 151 CCTAG AGTGC CAAAA TCTTT TCCAT TCAAC ACCTC AG-
TCG TGTAC AAAAA 201 GACTC TGTTT GTAGA ATTCA CGGAT CACCT TTTCA
ACATC GCTAA GCCAA
251 GGCCA CCCTG GATGG GTCTG CTAGG TCCTA CCATC CA-
GGC TGAGG TTTAT 301 GATAC AGTGG TCATT ACACT TAAGA ACATG GCTTC
CCATC CTGTC AGTCT 351 TCATG CTGTT GGTGT ATCCT ACTGG AAAGC TTCTG
AGGGA GCTGA ATATG 401 ATGAT CAGAC CAGTC AAAGG GAGAA AGAAG ATGAT
AAAGT CTTCC CTGGT 451 GGAAG CCATA CATAT GTCTG GCAGG TCCTG AAAGA GA-
ATG GTCCA ATGGC 501 CTCTG ACCCA CTGTG CCTTA CCTAC TCATA TCTTT
CTCAT GTGGA CCTGG 551 TAAAA GACTT GAATT CAGGC CTCAT TGGAG CCCTA
CTAGT ATGTA GAGAA 601 GGGAG TCTGG CCAAG GAAAA GACAC AGACC TTGCA
CAAAT TTATA CTACT 651 TTTTG CTGTA TTTGA TGAAG GGAAA AGTTG GCACT CA-
GAA ACAAA GAACT 701 CCTTG ATGCA GGATA GGGAT GCTGC ATCTG CTCGG
GCCTG GCCTA AAATG 751 CACAC AGTCA ATGGT TATGT AAACA GGTCT CTGCC
AGGTC TGATT GGATG 801 CCACA GGAAA TCAGT CTATT GGCAT GTGAT TGGAA
TGGGC ACCAC TCCTG 851 AAGTG CACTC AATAT TCCTC GAAGG TCACA CATTT
CTTGT GAGGA ACCAT 901 CGCCA GGCTA GCTTG GAAAT CTCGC CAATA ACTTT
CCTTA CTGCT CAAAC 951 ACTCT TGATG GACCT TGGAC AGTTT CTACT GTTTT
GTCAT ATCTC TTCCC
1001 ACCAA CATGA TGGCA TGGAA GCTTA TGTCA AAGTA GA-
CAG CTGTC CAGAG 1051 GAACC CCAAC TACGA ATGAA AAATA ATGAA GAAGC
GGAAG ACTAT GATGA 1101 TGATC TTACT GATTC TGAAA TGGAT GTGGT CAGGT
TTGAT GATGA CAACT 1151 CTCCT TCCTT TATCC AAATT CGCTC AGTTG CCAAG
AAGCA TCCTA AAACT 1201 TGGGT ACATT ACATT GCTGC TGAAG AGGAG GACTG
GGACT ATGCT CCCTT 1251 AGTCC TCGCC CCCGA TGACA GAAGT TATAA AAGTC AA-
TAT TTGAA CAATG 1301 GCCCT CAGCG GATTG GTAGG AAGTA CAAAA AAGTC
CGATT TATGG CATAC 1351 ACAGA TGAAA CCTTT AAGAC TCGTG AAGCT ATTCA
GCATG AATCA GGAAT 1401 CTTGG GACCT TTACT TTATG GGGAA GTTGG AGACA
CACTG TTGAT TATAT 1451 TTAAG AATCA AGCAA GCAGA CCATA TAACA TCTAC
CCTCA CGGAA TCACT 1501 GATGT CCGTC CTTTG TATTC AAGGA GATTA CCAAA
AGGTG TAAAA CATTT 1551 GAAGG ATTTT CCAAT TCTGC CAGGA GAAAT ATTCA AA-
TAT AAATG GACAG 1601 TGACT GTAGA AGATG GGCCA ACTAA ATCAG ATCCT
CGGTG CCTGA CCCGC 1651 TATTA CTCTA GTTTC GTTAA TATGG AGAGA GATCT AG-
CTT CAGGA CTCAT 1701 TGGCC CTCTC CTCAT CTGCT ACAAA GAATC TGTAG AT-
CAA AGAGG AAACC
1751 AGATA ATGTC AGACA AGAGG AATGT CATCC TGTTT
TCTGT ATTTG ATGAG 1801 AACCG AAGCT GGTAC CTCAC AGAGA ATATA CAACG
CTTTC TCCCC AATCC 1851 AGCTG GAGTG CAGCT TGAGG ATCCA GAGTT CCAAG
CCTCC AACAT CATGC 1901 ACAGC ATCAA TGGCT ATGTT TTTGA TAGTT TGCAG
TTGTC AGTTT GTTTG 1951 CATGA GGTGG CATAC TGGTA CATTC TAAGC ATTGG AG-
CAC AGACT GACTT 2001 CCTTT CTGTC TTCTT CTCTG GATAT ACCTT CAAAC
ACAAA ATGGT CTATG 2051 AAGAC ACACT CACCC TATTC CCATT CTCAG GAGAA AC-
TGT CTTCA TGTCG 2101 ATGGA AAACC CAGGT CTATG GATTC TGGGG TGCCA CA-
ACT CAGAC TTTCG 2151 GAACA GAGGC ATGAC CGCCT TACTG AAGGT TTCTA
GTTGT GACAA GAACA 2201 CTGGT GATTA TTACG AGGAC AGTTA TGAAG ATATT
TCAGC ATACT TGCTG 2251 AGTAA AAACA ATGCC ATTGA ACCAA GAAGC TTCTC
TCAAA ACGGC GCGCC 2301 AGGTA CCTCA GAGTC TGCTA CCCCC GAGTC AGGGC
CAGGA TCAGA GCCAG 2351 CCACC TCCGG GTCTG AGACA CCCGG GACTT CCGAG
AGTGC CACCC CTGAG 2401 TCCGG ACCCG GGTCC GAGCC CGCCA CTTCC GGCTC
CGAAA CTCCC GGCAC 2451 AAGCG AGAGC GCTAC CCCAG AGTCA GGACC AGGAA
CATCT ACAGA GCCCT
2501 CTGAA GGCTC CGCTC CAGGG TCCCC AGCCG GCAGT
CCCAC TAGCA CCGAG 2551 GAGGG AACCT CTGAA AGCGC CACAC CCGAA TCAGG
GCCAG GGTCT GAGCC 2601 TGCTA CCAGC GGCAG CGAGA CACCA GGCAC CTCTG
AGTCC GCCAC ACCAG 2651 AGTCC GGACC CGGAT CTCCC GCTGG GAGCC CCACC
TCCAC TGAGG AGGGA 2701 TCTCC TGCTG GCTCT CCAAC ATCTA CTGAG GAAGG
TACCT CAACC GAGCC 2751 ATCCG AGGGA TCAGC TCCCG GCACC TCAGA GTCGG
CAACC CCGGA GTCTG 2801 GACCC GGAAC TTCCG AAAGT GCCAC ACCAG AGTCC
GGTCC CGGGA CTTCA 2851 GAATC AGCAA CACCC GAGTC CGGCC CTGGG TCTGA
ACCCG CCACA AGTGG 2901 TAGTG AGACA CCAGG ATCAG AACCT GCTAC CTCAG
GGTCA GAGAC ACCCG 2951 GATCT CCGGC AGGCT CACCA ACCTC CACTG AGGAG
GGCAC CAGCA CAGAA 3001 CCAAG CGAGG GCTCC GCACC CGGAA CAAGC ACTGA
ACCCA GTGAG GGTTC 3051 AGCAC CCGGC TCTGA GCCGG CCACA AGTGG CAGTG
AGACA CCCGG CACTT 3101 CAGAG AGTGC CACCC CCGAG AGTGG CCCAG GCACT
AGTAC CGAGC CCTCT 3151 GAAGG CAGTG CGCCA GCCTC GAGCC CACCA GTCTT
GAAAC GCCAT CAAGC 3201 TGAAA TAACT CGTAC TACTC TTCAG TCAGA TCAAG AG-
GAA ATCGA TTATG
3251 ATGAT ACCAT ATCAG TTGAA ATGAA GAAGG AAGAT
TTTGA CATTT ATGAT 3301 GAGGA TGAAA ATCAG AGCCC CCGCA GCTTT CAAAA
GAAAA CACGA CACTA 3351 TTTTA TTGCT GCAGT GGAGA GGCTC TGGGA TTATG
GGATG AGTAG CTCCC 3401 CACAT GTTCT AAGAA ACAGG GCTCA GAGTG GCAGT
GTCCC TCAGT TCAAG 3451 AAAGT TGTTT TCCAG GAATT TACTG ATGGC TCCTT
TACTC AGCCC TTATA 3501 CCGTG GAGAA CTAAA TGAAC ATTTG GGACT CCTGG
GGCCA TATAT AAGAG 3551 CAGAA GTTGA AGATA ATATC ATGGT AACTT TCAGA AA-
TCA GGCCT CTCGT 3601 CCCTA TTCCT TCTAT TCTAG CCTTA TTTCT TATGA
GGAAG ATCAG AGGCA 3651 AGGAG CAGAA CCTAG AAAAA ACTTT GTCAA GCCTA
ATGAA ACCAA AACTT 3701 ACTTT TGGAA AGTGC AACAT CATAT GGCAC CCACT
AAAGA TGAGT TTGAC 3751 TGCAA AGCCT GGGCT TATTT CTCTG ATGTT GACCT
GGAAA AAGAT GTGCA 3801 CTCAG GCCTG ATTGG ACCCC TTCTG GTCTG CCACA
CTAAC ACACT GAACC 3851 CTGCT CATGG GAGAC AAGTG ACAGT ACAGG AATTT
GCTCT GTTTT TCACC 3901 ATCTT TGATG AGACC AAAAG CTGGT ACTTC ACTGA AA-
ATA TGGAA AGAAA 3951 CTGCA GGGCT CCCTG CAATA TCCAG ATGGA AGATC
CCACT TTTAA AGAGA
4001 ATTAT CGCTT CCATG CAATC AATGG CTACA TAATG GA-
TAC ACTAC CTGGC 4051 TTAGT AATGG CTCAG GATCA AAGGA TTCGA TGGTA
TCTGC TCAGC ATGGG 4101 CAGCA ATGAA AACAT CCATT CTATT CATTT CAGTG GA-
CAT GTGTT CACTG 4151 TACGA AAAAA AGAGG AGTAT AAAAT GGCAC TGTAC AA-
TCT CTATC CAGGT 4201 GTTTT TGAGA CAGTG GAAAT GTTAC CATCC AAAGC
TGGAA TTTGG CGGGT 4251 GGAAT GCCTT ATTGG CGAGC ATCTA CATGC TGGGA
TGAGC ACACT TTTTC 4301 TGGTG TACAG CAATA AGTGT CAGAC TCCCC TGGGA
ATGGC TTCTG GACAC 4351 ATTAG AGATT TTCAG ATTAC AGCTT CAGGA CAATA
TGGAC AGTGG GCCCC 4401 AAAGC TGGCC AGACT TCATT ATTCC GGATC AATCA
ATGCC TGGAG CACCA 4451 AGGAG CCCTT TTCTT GGATC AAGGT GGATC TGTTG
GCACC AATGA TTATT 4501 CACGG CATCA AGACC CAGGG TGCCC GTCAG AAGTT
CTCCA GCCTC TACAT 4551 CTCTC AGTTT ATCAT CATGT ATAGT CTTGA TGGGA
AGAAG TGGCA GACTT 4601 ATCGA GGAAA TTCCA CTGGA ACCTT AATGG TCTTC
TTTGG CAATG TGGAT 4651 TCATC TGGGA TAAAA CACAA TATTT TTAAC CCTCC
AATTA TTGCT CGATA 4701 CATCC GTTTG CACCC AACTC ATTAT AGCAT TCGCA
GCACT CTTCG CATGG
4751 AGTTG ATGGG CTGTG ATTTA AATAG TTGCA GCATG
CCATT GGGAA TGGAG 4801 AGTAA AGCAA TATCA GATGC ACAGA TTACT GCTTC
ATCCT ACTTT ACCAA 4851 TATGT TTGCC ACCTG GTCTC CTTCA AAAGC TCGAC
TTCAC CTCCA AGGGA 4901 GGAGT AATGC CTGGA GACCT CAGGT GAATA ATCCA
AAAGA GTGGC TGCAA 4951 GTGGA CTTCC AGAAG ACAAT GAAAG TCACA GGAGT
AACTA CTCAG GGAGT 5001 AAAAT CTCTG CTTAC CAGCA TGTAT GTGAA GGAGT
TCCTC ATCTC CAGCA 5051 GTCAA GATGG CCATC AGTGG ACTCT CTTTT TTCAG
AATGG CAAAG TAAAG 5101 GTTTT TCAGG GAAAT CAAGA CTCCT TCACA CCTGT
GGTGA ACTCT CTAGA 5151 CCCAC CGTTA CTGAC TCGCT ACCTT CGAAT TCACC
CCCAG AGTTG GGTGC 5201 ACCAG ATTGC CCTGA GGATG GAGGT TCTGG GCTGC
GAGGC ACAGG ACCTC 5251 TACGA CAAAA CTCAC ACATG CCCAC CGTGC CCAGC
TCCAG AACTC CTGGG 5301 CGGAC CGTCA GTCTT CCTCT TCCCC CCAAA ACCCA AG-
GAC ACCCT CATGA 5351 TCTCC CGGAC CCCTG AGGTC ACATG CGTGG TGGTG
GACGT GAGCC ACGAA 5401 GACCC TGAGG TCAAG TTCAA CTGGT ACGTG GACGG
CGTGG AGGTG CATAA 5451 TGCCA AGACA AAGCC GCGGG AGGAG CAGTA CAACA
GCACG TACCG TGTGG
5501 TCAGC GTCCT CACCG TCCTG CACCA GGACT GGCTG
AATGG CAAGG AGTAC 5551 AAGTG CAAGG TCTCC AACAA AGCCC TCCCA GCCCC
CATCG AGAAA ACCAT 5601 CTCCA AAGCC AAAGG GCAGC CCCGA GAACC ACAGG
TGTAC ACCCT GCCCC 5651 CATCC CGGGA TGAGC TGACC AAGAA CCAGG TCAGC
CTGAC CTGCC TGGTC 5701 AAAGG CTTCT ATCCC AGCGA CATCG CCGTG GAGTG
GGAGA GCAAT GGGCA 5751 GCCGG AGAAC AACTA CAAGA CCACG CCTCC CGTGT
TGGAC TCCGA CGGCT 5801 CCTTC TTCCT CTACA GCAAG CTCAC CGTGG ACAAG AG-
CAG GTGGC AGCAG 5851 GGGAA CGTCT TCTCA TGCTC CGTGA TGCAT GAGGC
TCTGC ACAAC CACTA 5901 CACGC AGAAG AGCCT CTCCC TGTCT CCGGG TAAAT GA Sequência de proteína de FVIII 169 (SEQ ID NO: 70) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH
301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET
PGTSESATPE 801 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
SPAGSPTSTE 851 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP
AGSPTSTEEG 901 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES
ATPESGPGTS 951 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP
TSTEEGTSTE 1001 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE
SGPGTSTEPS
1051 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE
MKKEDFDIYD 1101 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR
AQSGSVPQFK 1151 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNI
MVTFRNQASR 1201 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH
HMAPTKDEFD 1251 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV
TVQEFALFFT 1301 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI
NGYIMDTLPG 1351 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY
KMALYNLYPG 1401 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC
QTPLGMASGH 1451 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI
KVDLLAPMII 1501 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG
TLMVFFGNVD 1551 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL
NSCSMPLGME 1601 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP
QVNNPKEWLQ 1651 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW
TLFFQNGKVK 1701 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM
EVLGCEAQDL 1751 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV
TCVVVDVSHE
1801 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL
HQDWLNGKEY 1851 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT
KNQVSLTCLV 1901 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK
LTVDKSRWQQ 1951 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK* Sequência de nucleotídeos de FVIII 263 (mutante triplo IHH) (SEQ ID NO: 156) 1 ATGCA AATAG AGCTC TCCAC CTGCT TCTTT CTGTG
CCTTT TGCGA TTCTG 51 CTTTA GTGCC ACCAG AAGAT ACTAC CTGGG TGCAG
TGGAA CTGTC ATGGG 101 ACTAT ATGCA AGGCG CGCCA ACATC AGAGA GCGCC AC-
CCC TGAAA GTGGT 151 CCCGG GAGCG AGCCA GCCAC ATCTG GGTCG GAAAC
GCCAG GCACA AGTGA 201 GTCTG CAACT CCCGA GTCCG GACCT GGCTC CGAGC
CTGCC ACTAG CGGCT 251 CCGAG ACTCC GGGAA CTTCC GAGAG CGCTA CACCA
GAAAG CGGAC CCGGA 301 ACCAG TACCG AACCT AGCGA GGGCT CTGCT CCGGG
CAGCC CAGCC GGCTC 351 TCCTA CATCC ACGGA GGAGG GCACT TCCGA ATCCG
CCACC CCGGA GTCAG 401 GGCCA GGATC TGAAC CCGCT ACCTC AGGCA GTGAG
ACGCC AGGAA CGAGC 451 GAGTC CGCTA CACCG GAGAG TGGGC CAGGG AGCCC
TGCTG GATCT CCTAC 501 GTCCA CTGAG GAAGG GTCAC CAGCG GGCTC GCCCA
CCAGC ACTGA AGAAG 551 GTGCC TCGAG CAGTG ATCTC GGTGA GCTGC CTGTG
GACGC AAGAT TTCCT 601 CCTAG AGTGC CAAAA TCTTT TCCAT TCAAC ACCTC AG-
TCG TGTAC AAAAA 651 GACTC TGTTT GTAGA ATTCA CGGAT CACCT TTTCA
ACATC GCTAA GCCAA 701 GGCCA CCCTG GATGG GTCTG CTAGG TCCTA CCATC CA-
GGC TGAGG TTTAT 751 GATAC AGTGG TCATT ACACT TAAGA ACATG GCTTC
CCATC CTGTC AGTCT 801 TCATG CTGTT GGTGT ATCCT ACTGG AAAGC TTCTG
AGGGA GCTGA ATATG 851 ATGAT CAGAC CAGTC AAAGG GAGAA AGAAG ATGAT
AAAGT CTTCC CTGGT 901 GGAAG CCATA CATAT GTCTG GCAGG TCCTG AAAGA GA-
ATG GTCCA ATGGC 951 CTCTG ACCCA CTGTG CCTTA CCTAC TCATA TCTTT
CTCAT GTGGA CCTGG 1001 TAAAA GACTT GAATT CAGGC CTCAT TGGAG CCCTA
CTAGT ATGTA GAGAA 1051 GGGAG TCTGG CCAAG GAAAA GACAC AGACC TTGCA
CAAAT TTATA CTACT 1101 TTTTG CTGTA TTTGA TGAAG GGAAA AGTTG GCACT CA-
GAA ACAAA GAACT 1151 CCTTG ATGCA GGATA GGGAT GCTGC ATCTG CTCGG
GCCTG GCCTA AAATG 1201 CACAC AGTCA ATGGT TATGT AAACA GGTCT CTGCC
AGGTC TGATT GGATG 1251 CCACA GGAAA TCAGT CTATT GGCAT GTGAT TGGAA
TGGGC ACCAC TCCTG 1301 AAGTG CACTC AATAT TCCTC GAAGG TCACA CATTT
CTTGT GAGGA ACCAT 1351 CGCCA GGCTA GCTTG GAAAT CTCGC CAATA ACTTT
CCTTA CTGCT CAAAC 1401 ACTCT TGATG GACCT TGGAC AGTTT CTACT GTTTT
GTCAT ATCTC TTCCC 1451 ACCAA CATGA TGGCA TGGAA GCTTA TGTCA AAGTA GA-
CAG CTGTC CAGAG 1501 GAACC CCAAC TACGA ATGAA AAATA ATGAA GAAGC
GGAAG ACTAT GATGA 1551 TGATC TTACT GATTC TGAAA TGGAT GTGGT CAGGT
TTGAT GATGA CAACT 1601 CTCCT TCCTT TATCC AAATT CGCTC AGTTG CCAAG
AAGCA TCCTA AAACT 1651 TGGGT ACATT ACATT GCTGC TGAAG AGGAG GACTG
GGACT ATGCT CCCTT 1701 AGTCC TCGCC CCCGA TGACA GAAGT TATAA AAGTC AA-
TAT TTGAA CAATG 1751 GCCCT CAGCG GATTG GTAGG AAGTA CAAAA AAGTC
CGATT TATGG CATAC 1801 ACAGA TGAAA CCTTT AAGAC TCGTG AAGCT ATTCA
GCATG AATCA GGAAT 1851 CTTGG GACCT TTACT TTATG GGGAA GTTGG AGACA
CACTG TTGAT TATAT 1901 TTAAG AATCA AGCAA GCAGA CCATA TAACA TCTAC
CCTCA CGGAA TCACT 1951 GATGT CCGTC CTTTG TATTC AAGGA GATTA CCAAA
AGGTG TAAAA CATTT
2001 GAAGG ATTTT CCAAT TCTGC CAGGA GAAAT ATTCA AA-
TAT AAATG GACAG 2051 TGACT GTAGA AGATG GGCCA ACTAA ATCAG ATCCT
CGGTG CCTGA CCCGC 2101 TATTA CTCTA GTTTC GTTAA TATGG AGAGA GATCT AG-
CTT CAGGA CTCAT 2151 TGGCC CTCTC CTCAT CTGCT ACAAA GAATC TGTAG AT-
CAA AGAGG AAACC 2201 AGATA ATGTC AGACA AGAGG AATGT CATCC TGTTT
TCTGT ATTTG ATGAG 2251 AACCG AAGCT GGTAC CTCAC AGAGA ATATA CAACG
CTTTC TCCCC AATCC 2301 AGCTG GAGTG CAGCT TGAGG ATCCA GAGTT CCAAG
CCTCC AACAT CATGC 2351 ACAGC ATCAA TGGCT ATGTT TTTGA TAGTT TGCAG
TTGTC AGTTT GTTTG 2401 CATGA GGTGG CATAC TGGTA CATTC TAAGC ATTGG AG-
CAC AGACT GACTT 2451 CCTTT CTGTC TTCTT CTCTG GATAT ACCTT CAAAC
ACAAA ATGGT CTATG 2501 AAGAC ACACT CACCC TATTC CCATT CTCAG GAGAA AC-
TGT CTTCA TGTCG 2551 ATGGA AAACC CAGGT CTATG GATTC TGGGG TGCCA CA-
ACT CAGAC TTTCG 2601 GAACA GAGGC ATGAC CGCCT TACTG AAGGT TTCTA
GTTGT GACAA GAACA 2651 CTGGT GATTA TTACG AGGAC AGTTA TGAAG ATATT
TCAGC ATACT TGCTG 2701 AGTAA AAACA ATGCC ATTGA ACCAA GAAGC TTCTC
TCAAA ACGGC GCGCC
2751 AGGTA CCTCA GAGTC TGCTA CCCCC GAGTC AGGGC
CAGGA TCAGA GCCAG 2801 CCACC TCCGG GTCTG AGACA CCCGG GACTT CCGAG
AGTGC CACCC CTGAG 2851 TCCGG ACCCG GGTCC GAGCC CGCCA CTTCC GGCTC
CGAAA CTCCC GGCAC 2901 AAGCG AGAGC GCTAC CCCAG AGTCA GGACC AGGAA
CATCT ACAGA GCCCT 2951 CTGAA GGCTC CGCTC CAGGG TCCCC AGCCG GCAGT
CCCAC TAGCA CCGAG 3001 GAGGG AACCT CTGAA AGCGC CACAC CCGAA TCAGG
GCCAG GGTCT GAGCC 3051 TGCTA CCAGC GGCAG CGAGA CACCA GGCAC CTCTG
AGTCC GCCAC ACCAG 3101 AGTCC GGACC CGGAT CTCCC GCTGG GAGCC CCACC
TCCAC TGAGG AGGGA 3151 TCTCC TGCTG GCTCT CCAAC ATCTA CTGAG GAAGG
TACCT CAACC GAGCC 3201 ATCCG AGGGA TCAGC TCCCG GCACC TCAGA GTCGG
CAACC CCGGA GTCTG 3251 GACCC GGAAC TTCCG AAAGT GCCAC ACCAG AGTCC
GGTCC CGGGA CTTCA 3301 GAATC AGCAA CACCC GAGTC CGGCC CTGGG TCTGA
ACCCG CCACA AGTGG 3351 TAGTG AGACA CCAGG ATCAG AACCT GCTAC CTCAG
GGTCA GAGAC ACCCG 3401 GATCT CCGGC AGGCT CACCA ACCTC CACTG AGGAG
GGCAC CAGCA CAGAA 3451 CCAAG CGAGG GCTCC GCACC CGGAA CAAGC ACTGA
ACCCA GTGAG GGTTC
3501 AGCAC CCGGC TCTGA GCCGG CCACA AGTGG CAGTG
AGACA CCCGG CACTT 3551 CAGAG AGTGC CACCC CCGAG AGTGG CCCAG GCACT
AGTAC CGAGC CCTCT 3601 GAAGG CAGTG CGCCA GCCTC GAGCC CACCA GTCTT
GAAAC GCCAT CAAGC 3651 TGAAA TAACT CGTAC TACTC TTCAG TCAGA TCAAG AG-
GAA ATCGA TTATG 3701 ATGAT ACCAT ATCAG TTGAA ATGAA GAAGG AAGAT
TTTGA CATTT ATGAT 3751 GAGGA TGAAA ATCAG AGCCC CCGCA GCTTT CAAAA
GAAAA CACGA CACTA 3801 TTTTA TTGCT GCAGT GGAGA GGCTC TGGGA TTATG
GGATG AGTAG CTCCC 3851 CACAT GTTCT AAGAA ACAGG GCTCA GAGTG GCAGT
GTCCC TCAGT TCAAG 3901 AAAGT TGTTT TCCAG GAATT TACTG ATGGC TCCTT
TACTC AGCCC TTATA 3951 CCGTG GAGAA CTAAA TGAAC ATTTG GGACT CCTGG
GGCCA TATAT AAGAG 4001 CAGAA GTTGA AGATA ATATC ATGGT AACTT TCAGA AA-
TCA GGCCT CTCGT 4051 CCCTA TTCCT TCTAT TCTAG CCTTA TTTCT TATGA
GGAAG ATCAG AGGCA 4101 AGGAG CAGAA CCTAG AAAAA ACTTT GTCAA GCCTA
ATGAA ACCAA AACTT 4151 ACTTT TGGAA AGTGC AACAT CATAT GGCAC CCACT
AAAGA TGAGT TTGAC 4201 TGCAA AGCCT GGGCT TATTT CTCTG ATGTT GACCT
GGAAA AAGAT GTGCA
4251 CTCAG GCCTG ATTGG ACCCC TTCTG GTCTG CCACA
CTAAC ACACT GAACC 4301 CTGCT CATGG GAGAC AAGTG ACAGT ACAGG AATTT
GCTCT GTTTT TCACC 4351 ATCTT TGATG AGACC AAAAG CTGGT ACTTC ACTGA AA-
ATA TGGAA AGAAA 4401 CTGCA GGGCT CCCTG CAATA TCCAG ATGGA AGATC
CCACT TTTAA AGAGA 4451 ATTAT CGCTT CCATG CAATC AATGG CTACA TAATG GA-
TAC ACTAC CTGGC 4501 TTAGT AATGG CTCAG GATCA AAGGA TTCGA TGGTA
TCTGC TCAGC ATGGG 4551 CAGCA ATGAA AACAT CCATT CTATT CATTT CAGTG GA-
CAT GTGTT CACTG 4601 TACGA AAAAA AGAGG AGTAT AAAAT GGCAC TGTAC AA-
TCT CTATC CAGGT 4651 GTTTT TGAGA CAGTG GAAAT GTTAC CATCC AAAGC
TGGAA TTTGG CGGGT 4701 GGAAT GCCTT ATTGG CGAGC ATCTA CATGC TGGGA
TGAGC ACACT TTTTC 4751 TGGTG TACAG CAATA AGTGT CAGAC TCCCC TGGGA
ATGGC TTCTG GACAC 4801 ATTAG AGATT TTCAG ATTAC AGCTT CAGGA CAATA
TGGAC AGTGG GCCCC 4851 AAAGC TGGCC AGACT TCATT ATTCC GGATC AATCA
ATGCC TGGAG CACCA 4901 AGGAG CCCTT TTCTT GGATC AAGGT GGATC TGTTG
GCACC AATGA TTATT 4951 CACGG CATCA AGACC CAGGG TGCCC GTCAG AAGTT
CTCCA GCCTC TACAT
5001 CTCTC AGTTT ATCAT CATGT ATAGT CTTGA TGGGA
AGAAG TGGCA GACTT 5051 ATCGA GGAAA TTCCA CTGGA ACCTT AATGG TCTTC
TTTGG CAATG TGGAT 5101 TCATC TGGGA TAAAA CACAA TATTT TTAAC CCTCC
AATTA TTGCT CGATA 5151 CATCC GTTTG CACCC AACTC ATTAT AGCAT TCGCA
GCACT CTTCG CATGG 5201 AGTTG ATGGG CTGTG ATTTA AATAG TTGCA GCATG
CCATT GGGAA TGGAG 5251 AGTAA AGCAA TATCA GATGC ACAGA TTACT GCTTC
ATCCT ACTTT ACCAA 5301 TATGT TTGCC ACCTG GTCTC CTTCA AAAGC TCGAC
TTCAC CTCCA AGGGA 5351 GGAGT AATGC CTGGA GACCT CAGGT GAATA ATCCA
AAAGA GTGGC TGCAA 5401 GTGGA CTTCC AGAAG ACAAT GAAAG TCACA GGAGT
AACTA CTCAG GGAGT 5451 AAAAT CTCTG CTTAC CAGCA TGTAT GTGAA GGAGT
TCCTC ATCTC CAGCA 5501 GTCAA GATGG CCATC AGTGG ACTCT CTTTT TTCAG
AATGG CAAAG TAAAG 5551 GTTTT TCAGG GAAAT CAAGA CTCCT TCACA CCTGT
GGTGA ACTCT CTAGA 5601 CCCAC CGTTA CTGAC TCGCT ACCTT CGAAT TCACC
CCCAG AGTTG GGTGC 5651 ACCAG ATTGC CCTGA GGATG GAGGT TCTGG GCTGC
GAGGC ACAGG ACCTC 5701 TACGA CAAAA CTCAC ACATG CCCAC CGTGC CCAGC
TCCAG AACTC CTGGG
5751 CGGAC CGTCA GTCTT CCTCT TCCCC CCAAA ACCCA AG-
GAC ACCCT CATGG 5801 CCTCC CGGAC CCCTG AGGTC ACATG CGTGG TGGTG
GACGT GAGCC ACGAA 5851 GACCC TGAGG TCAAG TTCAA CTGGT ACGTG GACGG
CGTGG AGGTG CATAA 5901 TGCCA AGACA AAGCC GCGGG AGGAG CAGTA CAACA
GCACG TACCG TGTGG 5951 TCAGC GTCCT CACCG TCCTG GCCCA GGACT GGCTG
AATGG CAAGG AGTAC 6001 AAGTG CAAGG TCTCC AACAA AGCCC TCCCA GCCCC
CATCG AGAAA ACCAT 6051 CTCCA AAGCC AAAGG GCAGC CCCGA GAACC ACAGG
TGTAC ACCCT GCCCC 6101 CATCC CGCGA TGAGC TGACC AAGAA CCAGG TCAGC
CTGAC CTGCC TGGTC 6151 AAAGG CTTCT ATCCC AGCGA CATCG CCGTG GAGTG
GGAGA GCAAT GGGCA 6201 GCCGG AGAAC AACTA CAAGA CCACG CCTCC CGTGT
TGGAC TCCGA CGGCT 6251 CCTTC TTCCT CTACA GCAAG CTCAC CGTGG ACAAG AG-
CAG GTGGC AGCAG 6301 GGGAA CGTCT TCTCA TGCTC CGTGA TGCAT GAGGC
TCTGC ACAAC GCCTA 6351 CACGC AGAAG AGCCT CTCCC TGTCT CCGGG TAAAT GA Sequência de proteína de FVIII 263 (mutante triplo IHH) (SEQ ID NO: 157) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP
TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT PESGPGSEPA
TSGSETPGTS 151 ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGASSSDL
GELPVDARFP 201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET
PGTSESATPE 951 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
SPAGSPTSTE 1001 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP
AGSPTSTEEG 1051 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES
ATPESGPGTS 1101 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP
TSTEEGTSTE 1151 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE
SGPGTSTEPS 1201 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE
MKKEDFDIYD 1251 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR
AQSGSVPQFK 1301 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNI
MVTFRNQASR 1351 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH
HMAPTKDEFD 1401 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV
TVQEFALFFT 1451 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI
NGYIMDTLPG 1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY
KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC
QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI
KVDLLAPMII 1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG
TLMVFFGNVD 1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL
NSCSMPLGME 1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP
QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW
TLFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM
EVLGCEAQDL 1901 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMASRTPEV
TCVVVDVSHE 1951 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL
AQDWLNGKEY 2001 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT
KNQVSLTCLV 2051 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK
LTVDKSRWQQ 2101 GNVFSCSVMH EALHNAYTQK SLSLSPGK* Sequência de nucleotídeos de FVIII 282 (SEQ ID NO: 158) 1 ATGCA AATAG AGCTC TCCAC CTGCT TCTTT CTGTG
CCTTT TGCGA TTCTG 51 CTTTA GTGCC ACCAG AAGAT ACTAC CTGGG TGCAG
TGGAA CTGTC ATGGG 101 ACTAT ATGCA AAGTG ATCTC GGTGA GCTGC CTGTG GA-
CGC AAGAT TTCCT
151 CCTAG AGTGC CAAAA TCTTT TCCAT TCAAC ACCTC AG-
TCG TGTAC AAAAA 201 GACTC TGTTT GTAGA ATTCA CGGAT CACCT TTTCA
ACATC GCTAA GCCAA 251 GGCCA CCCTG GATGG GTCTG CTAGG TCCTA CCATC CA-
GGC TGAGG TTTAT 301 GATAC AGTGG TCATT ACACT TAAGA ACATG GCTTC
CCATC CTGTC AGTCT 351 TCATG CTGTT GGTGT ATCCT ACTGG AAAGC TTCTG
AGGGA GCTGA ATATG 401 ATGAT CAGAC CAGTC AAAGG GAGAA AGAAG ATGAT
AAAGT CTTCC CTGGT 451 GGAAG CCATA CATAT GTCTG GCAGG TCCTG AAAGA GA-
ATG GTCCA ATGGC 501 CTCTG ACCCA CTGTG CCTTA CCTAC TCATA TCTTT
CTCAT GTGGA CCTGG 551 TAAAA GACTT GAATT CAGGC CTCAT TGGAG CCCTA
CTAGT ATGTA GAGAA 601 GGGAG TCTGG CCAAG GAAAA GACAC AGACC TTGCA
CAAAT TTATA CTACT 651 TTTTG CTGTA TTTGA TGAAG GGAAA AGTTG GCACT CA-
GAA ACAAA GAACT 701 CCTTG ATGCA GGATA GGGAT GCTGC ATCTG CTCGG
GCCTG GCCTA AAATG 751 CACAC AGTCA ATGGT TATGT AAACA GGTCT CTGCC
AGGTC TGATT GGATG 801 CCACA GGAAA TCAGT CTATT GGCAT GTGAT TGGAA
TGGGC ACCAC TCCTG 851 AAGTG CACTC AATAT TCCTC GAAGG TCACA CATTT
CTTGT GAGGA ACCAT
901 CGCCA GGCTA GCTTG GAAAT CTCGC CAATA ACTTT
CCTTA CTGCT CAAAC 951 ACTCT TGATG GACCT TGGAC AGTTT CTACT GTTTT
GTCAT ATCTC TTCCC 1001 ACCAA CATGA TGGCA TGGAA GCTTA TGTCA AAGTA GA-
CAG CTGTC CAGAG 1051 GAACC CCAAC TACGA ATGAA AAATA ATGAA GAAGC
GGAAG ACTAT GATGA 1101 TGATC TTACT GATTC TGAAA TGGAT GTGGT CAGGT
TTGAT GATGA CAACT 1151 CTCCT TCCTT TATCC AAATT CGCTC AGTTG CCAAG
AAGCA TCCTA AAACT 1201 TGGGT ACATT ACATT GCTGC TGAAG AGGAG GACTG
GGACT ATGCT CCCTT 1251 AGTCC TCGCC CCCGA TGACA GAAGT TATAA AAGTC AA-
TAT TTGAA CAATG 1301 GCCCT CAGCG GATTG GTAGG AAGTA CAAAA AAGTC
CGATT TATGG CATAC 1351 ACAGA TGAAA CCTTT AAGAC TCGTG AAGCT ATTCA
GCATG AATCA GGAAT 1401 CTTGG GACCT TTACT TTATG GGGAA GTTGG AGACA
CACTG TTGAT TATAT 1451 TTAAG AATCA AGCAA GCAGA CCATA TAACA TCTAC
CCTCA CGGAA TCACT 1501 GATGT CCGTC CTTTG TATTC AAGGA GATTA CCAAA
AGGTG TAAAA CATTT 1551 GAAGG ATTTT CCAAT TCTGC CAGGA GAAAT ATTCA AA-
TAT AAATG GACAG 1601 TGACT GTAGA AGATG GGCCA ACTAA ATCAG ATCCT
CGGTG CCTGA CCCGC
1651 TATTA CTCTA GTTTC GTTAA TATGG AGAGA GATCT AG-
CTT CAGGA CTCAT 1701 TGGCC CTCTC CTCAT CTGCT ACAAA GAATC TGTAG AT-
CAA AGAGG AAACC 1751 AGATA ATGTC AGACA AGAGG AATGT CATCC TGTTT
TCTGT ATTTG ATGAG 1801 AACCG AAGCT GGTAC CTCAC AGAGA ATATA CAACG
CTTTC TCCCC AATCC 1851 AGCTG GAGTG CAGCT TGAGG ATCCA GAGTT CCAAG
CCTCC AACAT CATGC 1901 ACAGC ATCAA TGGCT ATGTT TTTGA TAGTT TGCAG
TTGTC AGTTT GTTTG 1951 CATGA GGTGG CATAC TGGTA CATTC TAAGC ATTGG AG-
CAC AGACT GACTT 2001 CCTTT CTGTC TTCTT CTCTG GATAT ACCTT CAAAC
ACAAA ATGGT CTATG 2051 AAGAC ACACT CACCC TATTC CCATT CTCAG GAGAA AC-
TGT CTTCA TGTCG 2101 ATGGA AAACC CAGGT CTATG GATTC TGGGG TGCCA CA-
ACT CAGAC TTTCG 2151 GAACA GAGGC ATGAC CGCCT TACTG AAGGT TTCTA
GTTGT GACAA GAACA 2201 CTGGT GATTA TTACG AGGAC AGTTA TGAAG ATATT
TCAGC ATACT TGCTG 2251 AGTAA AAACA ATGCC ATTGA ACCAA GAAGC TTCTC
TCAAA ACGGC GCGCC 2301 AACAT CAGAG AGCGC CACCC CTGAA AGTGG TCCCG
GGAGC GAGCC AGCCA 2351 CATCT GGGTC GGAAA CGCCA GGCAC AAGTG AGTCT
GCAAC TCCCG AGTCC
2401 GGACC TGGCT CCGAG CCTGC CACTA GCGGC TCCGA
GACTC CGGGA ACTTC 2451 CGAGA GCGCT ACACC AGAAA GCGGA CCCGG AACCA
GTACC GAACC TAGCG 2501 AGGGC TCTGC TCCGG GCAGC CCAGC CGGCT CTCCT
ACATC CACGG AGGAG 2551 GGCAC TTCCG AATCC GCCAC CCCGG AGTCA GGGCC
AGGAT CTGAA CCCGC 2601 TACCT CAGGC AGTGA GACGC CAGGA ACGAG CGAGT
CCGCT ACACC GGAGA 2651 GTGGG CCAGG GAGCC CTGCT GGATC TCCTA CGTCC
ACTGA GGAAG GGTCA 2701 CCAGC GGGCT CGCCC ACCAG CACTG AAGAA GGTGC
CTCGA GCCCA CCAGT 2751 CTTGA AACGC CATCA AGCTG AAATA ACTCG TACTA
CTCTT CAGTC AGATC 2801 AAGAG GAAAT CGATT ATGAT GATAC CATAT CAGTT
GAAAT GAAGA AGGAA 2851 GATTT TGACA TTTAT GATGA GGATG AAAAT CAGAG
CCCCC GCAGC TTTCA 2901 AAAGA AAACA CGACA CTATT TTATT GCTGC AGTGG
AGAGG CTCTG GGATT 2951 ATGGG ATGAG TAGCT CCCCA CATGT TCTAA GAAAC
AGGGC TCAGA GTGGC 3001 AGTGT CCCTC AGTTC AAGAA AGTTG TTTTC CAGGA
ATTTA CTGAT GGCTC 3051 CTTTA CTCAG CCCTT ATACC GTGGA GAACT AAATG AA-
CAT TTGGG ACTCC 3101 TGGGG CCATA TATAA GAGCA GAAGT TGAAG ATAAT AT-
CAT GGTAA CTTTC
3151 AGAAA TCAGG CCTCT CGTCC CTATT CCTTC TATTC
TAGCC TTATT TCTTA 3201 TGAGG AAGAT CAGAG GCAAG GAGCA GAACC TAGAA
AAAAC TTTGT CAAGC 3251 CTAAT GAAAC CAAAA CTTAC TTTTG GAAAG TGCAA CA-
TCA TATGG CACCC 3301 ACTAA AGATG AGTTT GACTG CAAAG CCTGG GCTTA
TTTCT CTGAT GTTGA 3351 CCTGG AAAAA GATGT GCACT CAGGC CTGAT TGGAC
CCCTT CTGGT CTGCC 3401 ACACT AACAC ACTGA ACCCT GCTCA TGGGA GACAA
GTGAC AGTAC AGGAA 3451 TTTGC TCTGT TTTTC ACCAT CTTTG ATGAG ACCAA
AAGCT GGTAC TTCAC 3501 TGAAA ATATG GAAAG AAACT GCAGG GCTCC CTGCA
ATATC CAGAT GGAAG 3551 ATCCC ACTTT TAAAG AGAAT TATCG CTTCC ATGCA AT-
CAA TGGCT ACATA 3601 ATGGA TACAC TACCT GGCTT AGTAA TGGCT CAGGA
TCAAA GGATT CGATG 3651 GTATC TGCTC AGCAT GGGCA GCAAT GAAAA CATCC
ATTCT ATTCA TTTCA 3701 GTGGA CATGT GTTCA CTGTA CGAAA AAAAG AGGAG TA-
TAA AATGG CACTG 3751 TACAA TCTCT ATCCA GGTGT TTTTG AGACA GTGGA AA-
TGT TACCA TCCAA 3801 AGCTG GAATT TGGCG GGTGG AATGC CTTAT TGGCG AG-
CAT CTACA TGCTG 3851 GGATG AGCAC ACTTT TTCTG GTGTA CAGCA ATAAG
TGTCA GACTC CCCTG
3901 GGAAT GGCTT CTGGA CACAT TAGAG ATTTT CAGAT TA-
CAG CTTCA GGACA 3951 ATATG GACAG TGGGC CCCAA AGCTG GCCAG ACTTC AT-
TAT TCCGG ATCAA 4001 TCAAT GCCTG GAGCA CCAAG GAGCC CTTTT CTTGG AT-
CAA GGTGG ATCTG 4051 TTGGC ACCAA TGATT ATTCA CGGCA TCAAG ACCCA
GGGTG CCCGT CAGAA 4101 GTTCT CCAGC CTCTA CATCT CTCAG TTTAT CATCA
TGTAT AGTCT TGATG 4151 GGAAG AAGTG GCAGA CTTAT CGAGG AAATT CCACT
GGAAC CTTAA TGGTC 4201 TTCTT TGGCA ATGTG GATTC ATCTG GGATA AAACA CA-
ATA TTTTT AACCC 4251 TCCAA TTATT GCTCG ATACA TCCGT TTGCA CCCAA
CTCAT TATAG CATTC 4301 GCAGC ACTCT TCGCA TGGAG TTGAT GGGCT GTGAT
TTAAA TAGTT GCAGC 4351 ATGCC ATTGG GAATG GAGAG TAAAG CAATA TCAGA
TGCAC AGATT ACTGC 4401 TTCAT CCTAC TTTAC CAATA TGTTT GCCAC CTGGT
CTCCT TCAAA AGCTC 4451 GACTT CACCT CCAAG GGAGG AGTAA TGCCT GGAGA
CCTCA GGTGA ATAAT 4501 CCAAA AGAGT GGCTG CAAGT GGACT TCCAG AAGAC AA-
TGA AAGTC ACAGG 4551 AGTAA CTACT CAGGG AGTAA AATCT CTGCT TACCA
GCATG TATGT GAAGG 4601 AGTTC CTCAT CTCCA GCAGT CAAGA TGGCC ATCAG
TGGAC TCTCT TTTTT
4651 CAGAA TGGCA AAGTA AAGGT TTTTC AGGGA AATCA
AGACT CCTTC ACACC 4701 TGTGG TGAAC TCTCT AGACC CACCG TTACT GACTC
GCTAC CTTCG AATTC 4751 ACCCC CAGAG TTGGG TGCAC CAGAT TGCCC TGAGG
ATGGA GGTTC TGGGC 4801 TGCGA GGCAC AGGAC CTCTA CGACA AAACT CACAC
ATGCC CACCG TGCCC 4851 AGCTC CAGAA CTCCT GGGCG GACCG TCAGT CTTCC
TCTTC CCCCC AAAAC 4901 CCAAG GACAC CCTCA TGATC TCCCG GACCC CTGAG
GTCAC ATGCG TGGTG 4951 GTGGA CGTGA GCCAC GAAGA CCCTG AGGTC AAGTT
CAACT GGTAC GTGGA 5001 CGGCG TGGAG GTGCA TAATG CCAAG ACAAA GCCGC
GGGAG GAGCA GTACA 5051 ACAGC ACGTA CCGTG TGGTC AGCGT CCTCA CCGTC
CTGCA CCAGG ACTGG 5101 CTGAA TGGCA AGGAG TACAA GTGCA AGGTC TCCAA CA-
AAG CCCTC CCAGC 5151 CCCCA TCGAG AAAAC CATCT CCAAA GCCAA AGGGC AG-
CCC CGAGA ACCAC 5201 AGGTG TACAC CCTGC CCCCA TCCCG GGATG AGCTG
ACCAA GAACC AGGTC 5251 AGCCT GACCT GCCTG GTCAA AGGCT TCTAT CCCAG
CGACA TCGCC GTGGA 5301 GTGGG AGAGC AATGG GCAGC CGGAG AACAA CTACA
AGACC ACGCC TCCCG 5351 TGTTG GACTC CGACG GCTCC TTCTT CCTCT ACAGC
AAGCT CACCG TGGAC
5401 AAGAG CAGGT GGCAG CAGGG GAACG TCTTC TCATG
CTCCG TGATG CATGA 5451 GGCTC TGCAC AACCA CTACA CGCAG AAGAG CCTCT
CCCTG TCTCC GGGTA 5501 AATGA Sequência de proteína de FVIII 282 (SEQ ID NO: 159) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE
601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGAPTSE SATPESGPGS EPATSGSETP
GTSESATPES 801 GPGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGTST EPSEGSAPGS
PAGSPTSTEE 851 GTSESATPES GPGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGSPA
GSPTSTEEGS 901 PAGSPTSTEE GASSPPVLKR HQAEITRTTL QSDQEEIDYD
DTISVEMKKE 951 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP
HVLRNRAQSG 1001 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA
EVEDNIMVTF 1051 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY
FWKVQHHMAP 1101 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP
AHGRQVTVQE 1151 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN
YRFHAINGYI 1201 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHVFTV
RKKEEYKMAL 1251 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL
VYSNKCQTPL 1301 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK
EPFSWIKVDL
1351 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
RGNSTGTLMV 1401 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME
LMGCDLNSCS 1451 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR
SNAWRPQVNN 1501 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS
QDGHQWTLFF 1551 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH
QIALRMEVLG 1601 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
SRTPEVTCVV 1651 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNS-
TYRVV SVLTVLHQDW 1701 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
SRDELTKNQV 1751 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
FFLYSKLTVD 1801 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK* Sequência de nucleotídeos de FVIII 283 (FVIII 169 com mutação tri- pla IHH) (SEQ ID NO: 160) 1 ATGCA AATAG AGCTC TCCAC CTGCT TCTTT CTGTG
CCTTT TGCGA TTCTG 51 CTTTA GTGCC ACCAG AAGAT ACTAC CTGGG TGCAG
TGGAA CTGTC ATGGG 101 ACTAT ATGCA AAGTG ATCTC GGTGA GCTGC CTGTG GA-
CGC AAGAT TTCCT 151 CCTAG AGTGC CAAAA TCTTT TCCAT TCAAC ACCTC AG-
TCG TGTAC AAAAA 201 GACTC TGTTT GTAGA ATTCA CGGAT CACCT TTTCA
ACATC GCTAA GCCAA 251 GGCCA CCCTG GATGG GTCTG CTAGG TCCTA CCATC CA-
GGC TGAGG TTTAT 301 GATAC AGTGG TCATT ACACT TAAGA ACATG GCTTC
CCATC CTGTC AGTCT 351 TCATG CTGTT GGTGT ATCCT ACTGG AAAGC TTCTG
AGGGA GCTGA ATATG 401 ATGAT CAGAC CAGTC AAAGG GAGAA AGAAG ATGAT
AAAGT CTTCC CTGGT 451 GGAAG CCATA CATAT GTCTG GCAGG TCCTG AAAGA GA-
ATG GTCCA ATGGC 501 CTCTG ACCCA CTGTG CCTTA CCTAC TCATA TCTTT
CTCAT GTGGA CCTGG 551 TAAAA GACTT GAATT CAGGC CTCAT TGGAG CCCTA
CTAGT ATGTA GAGAA 601 GGGAG TCTGG CCAAG GAAAA GACAC AGACC TTGCA
CAAAT TTATA CTACT 651 TTTTG CTGTA TTTGA TGAAG GGAAA AGTTG GCACT CA-
GAA ACAAA GAACT 701 CCTTG ATGCA GGATA GGGAT GCTGC ATCTG CTCGG
GCCTG GCCTA AAATG 751 CACAC AGTCA ATGGT TATGT AAACA GGTCT CTGCC
AGGTC TGATT GGATG 801 CCACA GGAAA TCAGT CTATT GGCAT GTGAT TGGAA
TGGGC ACCAC TCCTG 851 AAGTG CACTC AATAT TCCTC GAAGG TCACA CATTT
CTTGT GAGGA ACCAT 901 CGCCA GGCTA GCTTG GAAAT CTCGC CAATA ACTTT
CCTTA CTGCT CAAAC 951 ACTCT TGATG GACCT TGGAC AGTTT CTACT GTTTT
GTCAT ATCTC TTCCC 1001 ACCAA CATGA TGGCA TGGAA GCTTA TGTCA AAGTA GA-
CAG CTGTC CAGAG 1051 GAACC CCAAC TACGA ATGAA AAATA ATGAA GAAGC
GGAAG ACTAT GATGA 1101 TGATC TTACT GATTC TGAAA TGGAT GTGGT CAGGT
TTGAT GATGA CAACT 1151 CTCCT TCCTT TATCC AAATT CGCTC AGTTG CCAAG
AAGCA TCCTA AAACT 1201 TGGGT ACATT ACATT GCTGC TGAAG AGGAG GACTG
GGACT ATGCT CCCTT 1251 AGTCC TCGCC CCCGA TGACA GAAGT TATAA AAGTC AA-
TAT TTGAA CAATG 1301 GCCCT CAGCG GATTG GTAGG AAGTA CAAAA AAGTC
CGATT TATGG CATAC 1351 ACAGA TGAAA CCTTT AAGAC TCGTG AAGCT ATTCA
GCATG AATCA GGAAT 1401 CTTGG GACCT TTACT TTATG GGGAA GTTGG AGACA
CACTG TTGAT TATAT 1451 TTAAG AATCA AGCAA GCAGA CCATA TAACA TCTAC
CCTCA CGGAA TCACT 1501 GATGT CCGTC CTTTG TATTC AAGGA GATTA CCAAA
AGGTG TAAAA CATTT 1551 GAAGG ATTTT CCAAT TCTGC CAGGA GAAAT ATTCA AA-
TAT AAATG GACAG 1601 TGACT GTAGA AGATG GGCCA ACTAA ATCAG ATCCT
CGGTG CCTGA CCCGC 1651 TATTA CTCTA GTTTC GTTAA TATGG AGAGA GATCT AG-
CTT CAGGA CTCAT
1701 TGGCC CTCTC CTCAT CTGCT ACAAA GAATC TGTAG AT-
CAA AGAGG AAACC 1751 AGATA ATGTC AGACA AGAGG AATGT CATCC TGTTT
TCTGT ATTTG ATGAG 1801 AACCG AAGCT GGTAC CTCAC AGAGA ATATA CAACG
CTTTC TCCCC AATCC 1851 AGCTG GAGTG CAGCT TGAGG ATCCA GAGTT CCAAG
CCTCC AACAT CATGC 1901 ACAGC ATCAA TGGCT ATGTT TTTGA TAGTT TGCAG
TTGTC AGTTT GTTTG 1951 CATGA GGTGG CATAC TGGTA CATTC TAAGC ATTGG AG-
CAC AGACT GACTT 2001 CCTTT CTGTC TTCTT CTCTG GATAT ACCTT CAAAC
ACAAA ATGGT CTATG 2051 AAGAC ACACT CACCC TATTC CCATT CTCAG GAGAA AC-
TGT CTTCA TGTCG 2101 ATGGA AAACC CAGGT CTATG GATTC TGGGG TGCCA CA-
ACT CAGAC TTTCG 2151 GAACA GAGGC ATGAC CGCCT TACTG AAGGT TTCTA
GTTGT GACAA GAACA 2201 CTGGT GATTA TTACG AGGAC AGTTA TGAAG ATATT
TCAGC ATACT TGCTG 2251 AGTAA AAACA ATGCC ATTGA ACCAA GAAGC TTCTC
TCAAA ACGGC GCGCC 2301 AGGTA CCTCA GAGTC TGCTA CCCCC GAGTC AGGGC
CAGGA TCAGA GCCAG 2351 CCACC TCCGG GTCTG AGACA CCCGG GACTT CCGAG
AGTGC CACCC CTGAG 2401 TCCGG ACCCG GGTCC GAGCC CGCCA CTTCC GGCTC
CGAAA CTCCC GGCAC
2451 AAGCG AGAGC GCTAC CCCAG AGTCA GGACC AGGAA
CATCT ACAGA GCCCT 2501 CTGAA GGCTC CGCTC CAGGG TCCCC AGCCG GCAGT
CCCAC TAGCA CCGAG 2551 GAGGG AACCT CTGAA AGCGC CACAC CCGAA TCAGG
GCCAG GGTCT GAGCC 2601 TGCTA CCAGC GGCAG CGAGA CACCA GGCAC CTCTG
AGTCC GCCAC ACCAG 2651 AGTCC GGACC CGGAT CTCCC GCTGG GAGCC CCACC
TCCAC TGAGG AGGGA 2701 TCTCC TGCTG GCTCT CCAAC ATCTA CTGAG GAAGG
TACCT CAACC GAGCC 2751 ATCCG AGGGA TCAGC TCCCG GCACC TCAGA GTCGG
CAACC CCGGA GTCTG 2801 GACCC GGAAC TTCCG AAAGT GCCAC ACCAG AGTCC
GGTCC CGGGA CTTCA 2851 GAATC AGCAA CACCC GAGTC CGGCC CTGGG TCTGA
ACCCG CCACA AGTGG 2901 TAGTG AGACA CCAGG ATCAG AACCT GCTAC CTCAG
GGTCA GAGAC ACCCG 2951 GATCT CCGGC AGGCT CACCA ACCTC CACTG AGGAG
GGCAC CAGCA CAGAA 3001 CCAAG CGAGG GCTCC GCACC CGGAA CAAGC ACTGA
ACCCA GTGAG GGTTC 3051 AGCAC CCGGC TCTGA GCCGG CCACA AGTGG CAGTG
AGACA CCCGG CACTT 3101 CAGAG AGTGC CACCC CCGAG AGTGG CCCAG GCACT
AGTAC CGAGC CCTCT 3151 GAAGG CAGTG CGCCA GCCTC GAGCC CACCA GTCTT
GAAAC GCCAT CAAGC
3201 TGAAA TAACT CGTAC TACTC TTCAG TCAGA TCAAG AG-
GAA ATCGA TTATG 3251 ATGAT ACCAT ATCAG TTGAA ATGAA GAAGG AAGAT
TTTGA CATTT ATGAT 3301 GAGGA TGAAA ATCAG AGCCC CCGCA GCTTT CAAAA
GAAAA CACGA CACTA 3351 TTTTA TTGCT GCAGT GGAGA GGCTC TGGGA TTATG
GGATG AGTAG CTCCC 3401 CACAT GTTCT AAGAA ACAGG GCTCA GAGTG GCAGT
GTCCC TCAGT TCAAG 3451 AAAGT TGTTT TCCAG GAATT TACTG ATGGC TCCTT
TACTC AGCCC TTATA 3501 CCGTG GAGAA CTAAA TGAAC ATTTG GGACT CCTGG
GGCCA TATAT AAGAG 3551 CAGAA GTTGA AGATA ATATC ATGGT AACTT TCAGA AA-
TCA GGCCT CTCGT 3601 CCCTA TTCCT TCTAT TCTAG CCTTA TTTCT TATGA
GGAAG ATCAG AGGCA 3651 AGGAG CAGAA CCTAG AAAAA ACTTT GTCAA GCCTA
ATGAA ACCAA AACTT 3701 ACTTT TGGAA AGTGC AACAT CATAT GGCAC CCACT
AAAGA TGAGT TTGAC 3751 TGCAA AGCCT GGGCT TATTT CTCTG ATGTT GACCT
GGAAA AAGAT GTGCA 3801 CTCAG GCCTG ATTGG ACCCC TTCTG GTCTG CCACA
CTAAC ACACT GAACC 3851 CTGCT CATGG GAGAC AAGTG ACAGT ACAGG AATTT
GCTCT GTTTT TCACC 3901 ATCTT TGATG AGACC AAAAG CTGGT ACTTC ACTGA AA-
ATA TGGAA AGAAA
3951 CTGCA GGGCT CCCTG CAATA TCCAG ATGGA AGATC
CCACT TTTAA AGAGA 4001 ATTAT CGCTT CCATG CAATC AATGG CTACA TAATG GA-
TAC ACTAC CTGGC 4051 TTAGT AATGG CTCAG GATCA AAGGA TTCGA TGGTA
TCTGC TCAGC ATGGG 4101 CAGCA ATGAA AACAT CCATT CTATT CATTT CAGTG GA-
CAT GTGTT CACTG 4151 TACGA AAAAA AGAGG AGTAT AAAAT GGCAC TGTAC AA-
TCT CTATC CAGGT 4201 GTTTT TGAGA CAGTG GAAAT GTTAC CATCC AAAGC
TGGAA TTTGG CGGGT 4251 GGAAT GCCTT ATTGG CGAGC ATCTA CATGC TGGGA
TGAGC ACACT TTTTC 4301 TGGTG TACAG CAATA AGTGT CAGAC TCCCC TGGGA
ATGGC TTCTG GACAC 4351 ATTAG AGATT TTCAG ATTAC AGCTT CAGGA CAATA
TGGAC AGTGG GCCCC 4401 AAAGC TGGCC AGACT TCATT ATTCC GGATC AATCA
ATGCC TGGAG CACCA 4451 AGGAG CCCTT TTCTT GGATC AAGGT GGATC TGTTG
GCACC AATGA TTATT 4501 CACGG CATCA AGACC CAGGG TGCCC GTCAG AAGTT
CTCCA GCCTC TACAT 4551 CTCTC AGTTT ATCAT CATGT ATAGT CTTGA TGGGA
AGAAG TGGCA GACTT 4601 ATCGA GGAAA TTCCA CTGGA ACCTT AATGG TCTTC
TTTGG CAATG TGGAT 4651 TCATC TGGGA TAAAA CACAA TATTT TTAAC CCTCC
AATTA TTGCT CGATA
4701 CATCC GTTTG CACCC AACTC ATTAT AGCAT TCGCA
GCACT CTTCG CATGG 4751 AGTTG ATGGG CTGTG ATTTA AATAG TTGCA GCATG
CCATT GGGAA TGGAG 4801 AGTAA AGCAA TATCA GATGC ACAGA TTACT GCTTC
ATCCT ACTTT ACCAA 4851 TATGT TTGCC ACCTG GTCTC CTTCA AAAGC TCGAC
TTCAC CTCCA AGGGA 4901 GGAGT AATGC CTGGA GACCT CAGGT GAATA ATCCA
AAAGA GTGGC TGCAA 4951 GTGGA CTTCC AGAAG ACAAT GAAAG TCACA GGAGT
AACTA CTCAG GGAGT 5001 AAAAT CTCTG CTTAC CAGCA TGTAT GTGAA GGAGT
TCCTC ATCTC CAGCA 5051 GTCAA GATGG CCATC AGTGG ACTCT CTTTT TTCAG
AATGG CAAAG TAAAG 5101 GTTTT TCAGG GAAAT CAAGA CTCCT TCACA CCTGT
GGTGA ACTCT CTAGA 5151 CCCAC CGTTA CTGAC TCGCT ACCTT CGAAT TCACC
CCCAG AGTTG GGTGC 5201 ACCAG ATTGC CCTGA GGATG GAGGT TCTGG GCTGC
GAGGC ACAGG ACCTC 5251 TACGA CAAAA CTCAC ACATG CCCAC CGTGC CCAGC
TCCAG AACTC CTGGG 5301 CGGAC CGTCA GTCTT CCTCT TCCCC CCAAA ACCCA AG-
GAC ACCCT CATGG 5351 CCTCC CGGAC CCCTG AGGTC ACATG CGTGG TGGTG
GACGT GAGCC ACGAA 5401 GACCC TGAGG TCAAG TTCAA CTGGT ACGTG GACGG
CGTGG AGGTG CATAA
5451 TGCCA AGACA AAGCC GCGGG AGGAG CAGTA CAACA
GCACG TACCG TGTGG 5501 TCAGC GTCCT CACCG TCCTG GCCCA GGACT GGCTG
AATGG CAAGG AGTAC 5551 AAGTG CAAGG TCTCC AACAA AGCCC TCCCA GCCCC
CATCG AGAAA ACCAT 5601 CTCCA AAGCC AAAGG GCAGC CCCGA GAACC ACAGG
TGTAC ACCCT GCCCC 5651 CATCC CGGGA TGAGC TGACC AAGAA CCAGG TCAGC
CTGAC CTGCC TGGTC 5701 AAAGG CTTCT ATCCC AGCGA CATCG CCGTG GAGTG
GGAGA GCAAT GGGCA 5751 GCCGG AGAAC AACTA CAAGA CCACG CCTCC CGTGT
TGGAC TCCGA CGGCT 5801 CCTTC TTCCT CTACA GCAAG CTCAC CGTGG ACAAG AG-
CAG GTGGC AGCAG 5851 GGGAA CGTCT TCTCA TGCTC CGTGA TGCAT GAGGC
TCTGC ACAAC GCCTA 5901 CACGC AGAAG AGCCT CTCCC TGTCT CCGGG TAAAT GA Sequência de proteína de FVIII 283 (FVIII 169 com mutação tripla IHH) (SEQ ID NO: 161) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET
PGTSESATPE 801 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
SPAGSPTSTE 851 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP
AGSPTSTEEG 901 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES
ATPESGPGTS 951 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP
TSTEEGTSTE 1001 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE
SGPGTSTEPS 1051 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE
MKKEDFDIYD 1101 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR
AQSGSVPQFK 1151 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNI
MVTFRNQASR 1201 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH
HMAPTKDEFD 1251 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV
TVQEFALFFT 1301 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI
NGYIMDTLPG 1351 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY
KMALYNLYPG 1401 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC
QTPLGMASGH 1451 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI
KVDLLAPMII 1501 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG
TLMVFFGNVD 1551 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL
NSCSMPLGME 1601 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP
QVNNPKEWLQ 1651 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW
TLFFQNGKVK 1701 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM
EVLGCEAQDL 1751 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMASRTPEV
TCVVVDVSHE 1801 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL
AQDWLNGKEY 1851 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT
KNQVSLTCLV 1901 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK
LTVDKSRWQQ 1951 GNVFSCSVMH EALHNAYTQK SLSLSPGK* Sequência de nucleotídeos de pSYNFVIII 010 -(FVIIIFc com cadeia dupla) (SEQ ID NO: 162) 1 ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT
TGCGATTCTG 51 CTTTAGTGCC ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTG-
GAA CTGTCATGGG 101 ACTATATGCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGA-
CGC AAGATTTCCT 151 CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAG-
TCG TGTACAAAAA 201 GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC
GCTAAGCCAA 251 GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCA-
GGC TGAGGTTTAT 301 GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTT-
CCCATC CTGTCAGTCT 351 TCATGCTGTT GGTGTATCCT ACTGGAAAGC
TTCTGAGGGA GCTGAATATG 401 ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGA-
TAAAGT CTTCCCTGGT
451 GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGA-
ATG GTCCAATGGC 501 CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT
GTGGACCTGG 551 TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTAC-
TAGT ATGTAGAGAA 601 GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCA-
CAAAT TTATACTACT 651 TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCA-
GAA ACAAAGAACT 701 CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGG-
CCTG GCCTAAAATG 751 CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCA-
GGTC TGATTGGATG 801 CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAA-
TGGGC ACCACTCCTG 851 AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT
GAGGAACCAT 901 CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTT-
CCTTA CTGCTCAAAC 951 ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT
ATCTCTTCCC 1001 ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGA-
CAG CTGTCCAGAG 1051 GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA GAAGCG-
GAAG ACTATGATGA 1101 TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT
GATGACAACT 1151 CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA
TCCTAAAACT
1201 TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGG-
GACT ATGCTCCCTT 1251 AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAA-
TAT TTGAACAATG 1301 GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAG-
TCCGATT TATGGCATAC 1351 ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT ATTCAG-
CATG AATCAGGAAT 1401 CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACA-
CTG TTGATTATAT 1451 TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA
CGGAATCACT 1501 GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA
CCAAAAGGTG TAAAACATTT 1551 GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT
AAATGGACAG 1601 TGACTGTAGA AGATGGGCCA ACTAAATCAG
ATCCTCGGTG CCTGACCCGC 1651 TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAGCTT
CAGGACTCAT 1701 TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGAT-
CAA AGAGGAAACC 1751 AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT
ATTTGATGAG 1801 AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACG-
CTTTC TCCCCAATCC 1851 AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAG-
CCTCC AACATCATGC 1901 ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAGTTGTC
AGTTTGTTTG
1951 CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAG-
CAC AGACTGACTT 2001 CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA
ATGGTCTATG 2051 AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAAC-
TGT CTTCATGTCG 2101 ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCA-
CAACT CAGACTTTCG 2151 GAACAGAGGC ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAG-
TTGT GACAAGAACA 2201 CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTT-
CAGC ATACTTGCTG 2251 AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCTCTCAAA
ACCCACCAGT 2301 CTTGAAACGC CATCAACGGG AAATAACTCG TACTAC-
TCTT CAGTCAGATC 2351 AAGAGGAAAT TGACTATGAT GATACCATAT CAGTTGAAAT
GAAGAAGGAA 2401 GATTTTGACA TTTATGATGA GGATGAAAAT CAGAG-
CCCCC GCAGCTTTCA 2451 AAAGAAAACA CGACACTATT TTATTGCTGC AGTGGA-
GAGG CTCTGGGATT 2501 ATGGGATGAG TAGCTCCCCA CATGTTCTAA GAAACA-
GGGC TCAGAGTGGC 2551 AGTGTCCCTC AGTTCAAGAA AGTTGTTTTC CAGGAATTTA
CTGATGGCTC 2601 CTTTACTCAG CCCTTATACC GTGGAGAACT AAATGAACAT
TTGGGACTCC 2651 TGGGGCCATA TATAAGAGCA GAAGTTGAAG ATAATAT-
CAT GGTAACTTTC
2701 AGAAATCAGG CCTCTCGTCC CTATTCCTTC TATTCTAGCC
TTATTTCTTA 2751 TGAGGAAGAT CAGAGGCAAG GAGCAGAACC
TAGAAAAAAC TTTGTCAAGC 2801 CTAATGAAAC CAAAACTTAC TTTTGGAAAG TGCAACATCA
TATGGCACCC 2851 ACTAAAGATG AGTTTGACTG CAAAGCCTGG GCTTA-
TTTCT CTGATGTTGA 2901 CCTGGAAAAA GATGTGCACT CAGGCCTGAT TGGAC-
CCCTT CTGGTCTGCC 2951 ACACTAACAC ACTGAACCCT GCTCATGGGA GACAAG-
TGAC AGTACAGGAA 3001 TTTGCTCTGT TTTTCACCAT CTTTGATGAG ACCAAAAGCT
GGTACTTCAC 3051 TGAAAATATG GAAAGAAACT GCAGGGCTCC CTGCAA-
TATC CAGATGGAAG 3101 ATCCCACTTT TAAAGAGAAT TATCGCTTCC ATGCAATCAA
TGGCTACATA 3151 ATGGATACAC TACCTGGCTT AGTAATGGCT CAGGAT-
CAAA GGATTCGATG 3201 GTATCTGCTC AGCATGGGCA GCAATGAAAA CA-
TCCATTCT ATTCATTTCA 3251 GTGGACATGT GTTCACTGTA CGAAAAAAAG AGGAGTA-
TAA AATGGCACTG 3301 TACAATCTCT ATCCAGGTGT TTTTGAGACA GTGGAAATGT
TACCATCCAA 3351 AGCTGGAATT TGGCGGGTGG AATGCCTTAT TGGCGAG-
CAT CTACATGCTG 3401 GGATGAGCAC ACTTTTTCTG GTGTACAGCA ATAAGTG-
TCA GACTCCCCTG
3451 GGAATGGCTT CTGGACACAT TAGAGATTTT CAGATTA-
CAG CTTCAGGACA 3501 ATATGGACAG TGGGCCCCAA AGCTGGCCAG ACTTCAT-
TAT TCCGGATCAA 3551 TCAATGCCTG GAGCACCAAG GAGCCCTTTT CTTGGAT-
CAA GGTGGATCTG 3601 TTGGCACCAA TGATTATTCA CGGCATCAAG ACCCA-
GGGTG CCCGTCAGAA 3651 GTTCTCCAGC CTCTACATCT CTCAGTTTAT CATCATGTAT
AGTCTTGATG 3701 GGAAGAAGTG GCAGACTTAT CGAGGAAATT CCACTG-
GAAC CTTAATGGTC 3751 TTCTTTGGCA ATGTGGATTC ATCTGGGATA AAACACAATA
TTTTTAACCC 3801 TCCAATTATT GCTCGATACA TCCGTTTGCA CCCAACTCAT
TATAGCATTC 3851 GCAGCACTCT TCGCATGGAG TTGATGGGCT GTGATT-
TAAA TAGTTGCAGC 3901 ATGCCATTGG GAATGGAGAG TAAAGCAATA TCAGATG-
CAC AGATTACTGC 3951 TTCATCCTAC TTTACCAATA TGTTTGCCAC CTGGTCTCCT
TCAAAAGCTC 4001 GACTTCACCT CCAAGGGAGG AGTAATGCCT GGAGAC-
CTCA GGTGAATAAT 4051 CCAAAAGAGT GGCTGCAAGT GGACTTCCAG AAGACAA-
TGA AAGTCACAGG 4101 AGTAACTACT CAGGGAGTAA AATCTCTGCT TACCAG-
CATG TATGTGAAGG 4151 AGTTCCTCAT CTCCAGCAGT CAAGATGGCC ATCAGTG-
GAC TCTCTTTTTT
4201 CAGAATGGCA AAGTAAAGGT TTTTCAGGGA AATCAA-
GACT CCTTCACACC 4251 TGTGGTGAAC TCTCTAGACC CACCGTTACT GACTCGC-
TAC CTTCGAATTC 4301 ACCCCCAGAG TTGGGTGCAC CAGATTGCCC TGAGGA-
TGGA GGTTCTGGGC 4351 TGCGAGGCAC AGGACCTCTA CGACAAAACT CACACA-
TGCC CACCGTGCCC 4401 AGCTCCAGAA CTCCTGGGCG GACCGTCAGT CTT-
CCTCTTC CCCCCAAAAC 4451 CCAAGGACAC CCTCATGATC TCCCGGACCC CTGAGGT-
CAC ATGCGTGGTG 4501 GTGGACGTGA GCCACGAAGA CCCTGAGGTC AAGTT-
CAACT GGTACGTGGA 4551 CGGCGTGGAG GTGCATAATG CCAAGACAAA GCCGCGG-
GAG GAGCAGTACA 4601 ACAGCACGTA CCGTGTGGTC AGCGTCCTCA CCG-
TCCTGCA CCAGGACTGG 4651 CTGAATGGCA AGGAGTACAA GTGCAAGGTC TCCAA-
CAAAG CCCTCCCAGC 4701 CCCCATCGAG AAAACCATCT CCAAAGCCAA AGGGCAG-
CCC CGAGAACCAC 4751 AGGTGTACAC CCTGCCCCCA TCCCGGGATG AGCTGAC-
CAA GAACCAGGTC 4801 AGCCTGACCT GCCTGGTCAA AGGCTTCTAT CCCAG-
CGACA TCGCCGTGGA 4851 GTGGGAGAGC AATGGGCAGC CGGAGAACAA CTACAA-
GACC ACGCCTCCCG 4901 TGTTGGACTC CGACGGCTCC TTCTTCCTCT ACAG-
CAAGCT CACCGTGGAC
4951 AAGAGCAGGT GGCAGCAGGG GAACGTCTTC TCATG-
CTCCG TGATGCATGA 5001 GGCTCTGCAC AACCACTACA CGCAGAAGAG
CCTCTCCCTG TCTCCGGGTA 5051 AATGA Sequência de proteína de pSYNFVIII 010-(FVIIIFc com cadeia dupla) (SEQ ID NO: 163) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQREITRTTL QSDQEEIDYD
DTISVEMKKE 801 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP
HVLRNRAQSG 851 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA
EVEDNIMVTF 901 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY
FWKVQHHMAP 951 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP
AHGRQVTVQE 1001 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN
YRFHAINGYI 1051 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHVFTV
RKKEEYKMAL 1101 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL
VYSNKCQTPL 1151 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK
EPFSWIKVDL 1201 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
RGNSTGTLMV 1251 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME
LMGCDLNSCS 1301 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR
SNAWRPQVNN 1351 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS
QDGHQWTLFF 1401 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH
QIALRMEVLG 1451 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
SRTPEVTCVV 1501 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNS-
TYRVV SVLTVLHQDW 1551 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
SRDELTKNQV 1601 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
FFLYSKLTVD 1651 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK* Sequência de proteína de FVIII 195 (FVIIIFc com cadeia dupla com dois XTENs 144 AE nos aminoácidos 1656 e 1900) (SEQ ID NO: 73) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE
351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQREITRTTL QGAPGTPGSG
TASSSPGASP 801 GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSPSAST
GTGPGTPGSG 851 TASSSPGASP GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG
SPGSSTPSGA 901 TGSPGSSTPS GATGSPGASP GTSSTGSPAS SSDQEEIDYD
DTISVEMKKE 951 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP
HVLRNRAQSG 1001 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA
EVEDNIMVTF 1051 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY
FWKVQHHMAP
1101 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP
AHGRQVTVQE 1151 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRGAPTS ESATPESGPG
SEPATSGSET 1201 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS
TEPSEGSAPG 1251 TSESATPESG PGSPAGSPTS TEEGSPAGSP TSTEEGSPAG
SPTSTEEGTS 1301 ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASSAPCNI QMEDPTFKEN
YRFHAINGYI 1351 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHVFTV
RKKEEYKMAL 1401 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL
VYSNKCQTPL 1451 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK
EPFSWIKVDL 1501 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
RGNSTGTLMV 1551 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME
LMGCDLNSCS 1601 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR
SNAWRPQVNN 1651 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS
QDGHQWTLFF 1701 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH
QIALRMEVLG 1751 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
SRTPEVTCVV 1801 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNS-
TYRVV SVLTVLHQDW
1851 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
SRDELTKNQV 1901 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
FFLYSKLTVD 1951 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK* Sequenciamento da proteína madura pSYN-FVIII-173 (SEQ ID NO: 72): 1 ATRRYYLGAV ELSWDYMQSD LGELPVDARF PPRVPKSFPF
NTSVVYKKTL 51 FVEFTDHLFN IAKPRPPWMG LLGPTIQAEV YDTVVITLKN
MASHPVSLHA 101 VGVSYWKASE GAEYDDQTSQ REKEDDKVFP GGSHTYVWQV
LKENGPMASD 151 PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALLVCR EGSLAKEKTQ
TLHKFILLFA 201 VFDEGKSWHS ETKNSLMQDR DAASARAWPK MHTVNGYVNR
SLPGLIGCHR 251 KSVYWHVIGM GTTPEVHSIF LEGHTFLVRN HRQASLEISP ITFL-
TAQTLL 301 MDLGQFLLFC HISSHQHDGM EAYVKVDSCP EEPQLRMKNN
EEAEDYDDDL 351 TDSEMDVVRF DDDNSPSFIQ IRSVAKKHPK TWVHYIAAEE
EDWDYAPLVL 401 APDDRSYKSQ YLNNGPQRIG RKYKKVRFMA YTDETFKTRE AI-
QHESGILG 451 PLLYGEVGDT LLIIFKNQAS RPYNIYPHGI TDVRPLYSRR
LPKGVKHLKD 501 FPILPGEIFK YKWTVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME
RDLASGLIGP
551 LLICYKESVD QRGNQIMSDK RNVILFSVFD ENRSWYLTEN IQR-
FLPNPAG 601 VQLEDPEFQA SNIMHSINGY VFDSLQLSVC LHEVAYWYIL SI-
GAQTDFLS 651 VFFSGYTFKH KMVYEDTLTL FPFSGETVFM SMENPGLWIL
GCHNSDFRNR 701 GMTALLKVSS CDKNTGDYYE DSYEDISAYL LSKNNAIEPR
SFSQNGAPGT 751 SESATPESGP GSEPATSGSE TPGTSESATP ESGPGSEPAT
SGSETPGTSE 801 SATPESGPGT STEPSEGSAP GSPAGSPTST EEGTSESATP ES-
GPGSEPAT 851 SGSETPGTSE SATPESGPGS PAGSPTSTEE GSPAGSPTST
EEGTSTEPSE 901 GSAPGTSESA TPESGPGTSE SATPESGPGT SESATPESGP
GSEPATSGSE 951 TPGSEPATSG SETPGSPAGS PTSTEEGTST EPSEGSAPGT
STEPSEGSAP 1001 GSEPATSGSE TPGTSESATP ESGPGTSTEP SEGSAPASSP
PVLKRHQREI 1051 TRTTLQSDQE EIDYDDTISV EMKKEDFDIY DEDENQSPRS
FQKKTRHYFI 1101 AAVERLWDYG MSSSPHVLRN RAQSGSVPQF KKVVFQEFTD
GSFTQPLYRG 1151 ELNEHLGLLG PYIRAEVEDN IMVTFRNQAS RPYSFYSSLI
SYEEDQRQGA 1201 EPRKNFVKPN ETKTYFWKVQ HHMAPTKDEF DCKAWAYFSD
VDLEKDVHSG 1251 LIGPLLVCHT NTLNPAHGRQ VTVQEFALFF TIFDETKSWY
FTENMERNCR
1301 APCNIQMEDP TFKENYRFHA INGYIMDTLP GLVMAQDQRI
RWYLLSMGSN 1351 ENIHSIHFSG HVFTVRKKEE YKMALYNLYP GVFETVEMLP
SKAGIWRVEC 1401 LIGEHLHAGM STLFLVYSNK CQTPLGMASG HIRDFQITAS
GQYGQWAPKL 1451 ARLHYSGSIN AWSTKEPFSW IKVDLLAPMI IHGIKTQGAR
QKFSSLYISQ 1501 FIIMYSLDGK KWQTYRGNST GTLMVFFGNV DSSGIKHNIF
NPPIIARYIR 1551 LHPTHYSIRS TLRMELMGCD LNSCSMPLGM ESKAISDAQI
TASSYFTNMF 1601 ATWSPSKARL HLQGRSNAWR PQVNNPKEWL QVDFQKTMKV
TGVTTQGVKS 1651 LLTSMYVKEF LISSSQDGHQ WTLFFQNGKV KVFQGNQDSF
TPVVNSLDPP 1701 LLTRYLRIHP QSWVHQIALR MEVLGCEAQD LYDKTHTCPP
CPAPELLGGP 1751 SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY
VDGVEVHNAK 1801 TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL
PAPIEKTISK 1851 AKGQPREPQV YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA
VEWESNGQPE 1901 NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM
HEALHNHYTQ 1951 KSLSLSPGK Sequência de proteína de FVIII 196 (FVIIIFc com cadeia dupla com três XTENs 144 AE nos aminoácidos 26, 1656 e 1900) (SEQ ID NO: 74)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVGAPGS 51 SPSASTGTGP GSSPSASTGT GPGASPGTSS TGSPGAS-
PGT SSTGSPGSST 101 PSGATGSPGS SPSASTGTGP GASPGTSSTG SPGSSP-
SAST GTGPGTPGSG 151 TASSSPGSST PSGATGSPGS STPSGATGSP GASPGTSSTG
SPASSDARFP 201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE
751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQREITRTTL QGAPGTPGSG
TASSSPGASP 951 GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSPSAST
GTGPGTPGSG 1001 TASSSPGASP GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG
SPGSSTPSGA 1051 TGSPGSSTPS GATGSPGASP GTSSTGSPAS SSDQEEIDYD
DTISVEMKKE 1101 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP
HVLRNRAQSG 1151 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA
EVEDNIMVTF 1201 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY
FWKVQHHMAP 1251 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP
AHGRQVTVQE 1301 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRGAPTS ESATPESGPG
SEPATSGSET 1351 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS
TEPSEGSAPG 1401 TSESATPESG PGSPAGSPTS TEEGSPAGSP TSTEEGSPAG
SPTSTEEGTS 1451 ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASSAPCNI QMEDPTFKEN
YRFHAINGYI
1501 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHVFTV
RKKEEYKMAL 1551 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL
VYSNKCQTPL 1601 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK
EPFSWIKVDL 1651 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
RGNSTGTLMV 1701 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME
LMGCDLNSCS 1751 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR
SNAWRPQVNN 1801 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS
QDGHQWTLFF 1851 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH
QIALRMEVLG 1901 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
SRTPEVTCVV 1951 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNS-
TYRVV SVLTVLHQDW 2001 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
SRDELTKNQV 2051 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
FFLYSKLTVD 2101 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK* Sequência de proteína de FVIII 199 (FVIIIFc com uma única cadeia com três XTENs 144 AE nos aminoácidos 1656 e 1900) (SEQ ID NO: 75) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP
51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQAEITRTTL QGAPGTPGSG
TASSSPGASP
801 GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSPSAST
GTGPGTPGSG 851 TASSSPGASP GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG
SPGSSTPSGA 901 TGSPGSSTPS GATGSPGASP GTSSTGSPAS SSDQEEIDYD
DTISVEMKKE 951 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP
HVLRNRAQSG 1001 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA
EVEDNIMVTF 1051 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY
FWKVQHHMAP 1101 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP
AHGRQVTVQE 1151 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRGAPTS ESATPESGPG
SEPATSGSET 1201 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS
TEPSEGSAPG 1251 TSESATPESG PGSPAGSPTS TEEGSPAGSP TSTEEGSPAG
SPTSTEEGTS 1301 ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASSAPCNI QMEDPTFKEN
YRFHAINGYI 1351 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHVFTV
RKKEEYKMAL 1401 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL
VYSNKCQTPL 1451 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK
EPFSWIKVDL 1501 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
RGNSTGTLMV
1551 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME
LMGCDLNSCS 1601 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR
SNAWRPQVNN 1651 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS
QDGHQWTLFF 1701 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH
QIALRMEVLG 1751 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
SRTPEVTCVV 1801 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNS-
TYRVV SVLTVLHQDW 1851 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
SRDELTKNQV 1901 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
FFLYSKLTVD 1951 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK* Sequência de proteína de FVIII 201 (FVIIIFc com uma única cadeia com três XTENs 144 AE nos aminoácidos 26, 1656 &1900) (SEQ ID NO: 76) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVGAPGS 51 SPSASTGTGP GSSPSASTGT GPGASPGTSS TGSPGAS-
PGT SSTGSPGSST 101 PSGATGSPGS SPSASTGTGP GASPGTSSTG SPGSSP-
SAST GTGPGTPGSG 151 TASSSPGSST PSGATGSPGS STPSGATGSP GASPGTSSTG
SPASSDARFP 201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY
251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQAEITRTTL QGAPGTPGSG
TASSSPGASP 951 GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG SPGSSPSAST
GTGPGTPGSG
1001 TASSSPGASP GTSSTGSPGA SPGTSSTGSP GASPGTSSTG
SPGSSTPSGA 1051 TGSPGSSTPS GATGSPGASP GTSSTGSPAS SSDQEEIDYD
DTISVEMKKE 1101 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP
HVLRNRAQSG 1151 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA
EVEDNIMVTF 1201 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY
FWKVQHHMAP 1251 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP
AHGRQVTVQE 1301 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRGAPTS ESATPESGPG
SEPATSGSET 1351 PGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS
TEPSEGSAPG 1401 TSESATPESG PGSPAGSPTS TEEGSPAGSP TSTEEGSPAG
SPTSTEEGTS 1451 ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGASSAPCNI QMEDPTFKEN
YRFHAINGYI 1501 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHVFTV
RKKEEYKMAL 1551 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL
VYSNKCQTPL 1601 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK
EPFSWIKVDL 1651 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
RGNSTGTLMV 1701 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME
LMGCDLNSCS
1751 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR
SNAWRPQVNN 1801 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS
QDGHQWTLFF 1851 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH
QIALRMEVLG 1901 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
SRTPEVTCVV 1951 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNS-
TYRVV SVLTVLHQDW 2001 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
SRDELTKNQV 2051 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
FFLYSKLTVD 2101 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK* Sequência de proteína de FVIII 203 (FVIIIFc com uma única cadeia com dois XTENs AE; um XTEN 288AE no domínio B e um XTEN 144 AE no aminoácido 1900) (SEQ ID NO: 77) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH
301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET
PGTSESATPE 801 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
SPAGSPTSTE 851 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP
AGSPTSTEEG 901 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES
ATPESGPGTS 951 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP
TSTEEGTSTE 1001 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE
SGPGTSTEPS
1051 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE
MKKEDFDIYD 1101 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR
AQSGSVPQFK 1151 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNI
MVTFRNQASR 1201 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH
HMAPTKDEFD 1251 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV
TVQEFALFFT 1301 IFDETKSWYF TENMERNCRG APTSESATPE SGPGSEPATS
GSETPGTSES 1351 ATPESGPGSE PATSGSETPG TSESATPESG PGTSTEPSEG
SAPGTSESAT 1401 PESGPGSPAG SPTSTEEGSP AGSPTSTEEG SPAGSPTSTE
EGTSESATPE 1451 SGPGTSTEPS EGSAPGASSA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI
NGYIMDTLPG 1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY
KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC
QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI
KVDLLAPMII 1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG
TLMVFFGNVD 1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL
NSCSMPLGME 1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP
QVNNPKEWLQ
1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW
TLFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM
EVLGCEAQDL 1901 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV
TCVVVDVSHE 1951 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL
HQDWLNGKEY 2001 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT
KNQVSLTCLV 2051 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK
LTVDKSRWQQ 2101 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK* Sequência de proteína de FVIII 204 (FVIIIFc com uma única cadeia com dois XTENs AE; um XTEN 288AE no domínio B e um XTEN 144 AE no aminoácido 403) (SEQ ID NO: 78) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE
351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDGAPTSTEP SEGSAPGSPA
GSPTSTEEGT 451 STEPSEGSAP GTSTEPSEGS APGTSESATP ESGPGTSTEP
SEGSAPGTSE 501 SATPESGPGS EPATSGSETP GTSTEPSEGS APGTSTEPSE
GSAPGTSESA 551 TPESGPGTSE SATPESGPGA SSDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET
PGTSESATPE 951 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
SPAGSPTSTE 1001 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP
AGSPTSTEEG 1051 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES
ATPESGPGTS
1101 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP
TSTEEGTSTE 1151 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE
SGPGTSTEPS 1201 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE
MKKEDFDIYD 1251 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR
AQSGSVPQFK 1301 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNI
MVTFRNQASR 1351 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH
HMAPTKDEFD 1401 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV
TVQEFALFFT 1451 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI
NGYIMDTLPG 1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY
KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC
QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI
KVDLLAPMII 1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG
TLMVFFGNVD 1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL
NSCSMPLGME 1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP
QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW
TLFFQNGKVK
1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM
EVLGCEAQDL 1901 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV
TCVVVDVSHE 1951 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL
HQDWLNGKEY 2001 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT
KNQVSLTCLV 2051 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK
LTVDKSRWQQ 2101 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK* Sequência de proteína de FVIII 205 (FVIIIFc com uma única cadeia com dois XTENs AE; um XTEN 288AE no domínio B e um XTEN 144 AE no aminoácido 18) (SEQ ID NO: 79) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP
TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT PESGPGSEPA
TSGSETPGTS 151 ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGASSSDL
GELPVDARFP 201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM
401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET
PGTSESATPE 951 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
SPAGSPTSTE 1001 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP
AGSPTSTEEG 1051 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES
ATPESGPGTS 1101 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP
TSTEEGTSTE
1151 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE
SGPGTSTEPS 1201 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE
MKKEDFDIYD 1251 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR
AQSGSVPQFK 1301 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNI
MVTFRNQASR 1351 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH
HMAPTKDEFD 1401 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV
TVQEFALFFT 1451 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI
NGYIMDTLPG 1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY
KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC
QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI
KVDLLAPMII 1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG
TLMVFFGNVD 1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL
NSCSMPLGME 1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP
QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW
TLFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM
EVLGCEAQDL
1901 YDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV
TCVVVDVSHE 1951 DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL
HQDWLNGKEY 2001 KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT
KNQVSLTCLV 2051 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK
LTVDKSRWQQ 2101 GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK* Sequência de proteína de pSYN FVIII 266 (FVIII Fc com XTEN 42 AE no aminoácido 18 e XTEN 288 AE no domínio B) SEQ ID NO: 80) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP
GSPAGSPTST 51 EEGTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPASSS DLGELPVDAR
FPPRVPKSFP 101 FNTSVVYKKT LFVEFTDHLF NIAKPRPPWM GLLGPTIQAE
VYDTVVITLK 151 NMASHPVSLH AVGVSYWKAS EGAEYDDQTS QREKEDD-
KVF PGGSHTYVWQ 201 VLKENGPMAS DPLCLTYSYL SHVDLVKDLN SGLIGALLVC
REGSLAKEKT 251 QTLHKFILLF AVFDEGKSWH SETKNSLMQD RDAASARAWP
KMHTVNGYVN 301 RSLPGLIGCH RKSVYWHVIG MGTTPEVHSI FLEGHTFLVR
NHRQASLEIS 351 PITFLTAQTL LMDLGQFLLF CHISSHQHDG MEAYVKVDSC
PEEPQLRMKN 401 NEEAEDYDDD LTDSEMDVVR FDDDNSPSFI QIRSVAKKHP
KTWVHYIAAE
451 EEDWDYAPLV LAPDDRSYKS QYLNNGPQRI GRKYK-
KVRFM AYTDETFKTR 501 EAIQHESGIL GPLLYGEVGD TLLIIFKNQA SRPYNIYPHG
ITDVRPLYSR 551 RLPKGVKHLK DFPILPGEIF KYKWTVTVED GPTKSDPRCL
TRYYSSFVNM 601 ERDLASGLIG PLLICYKESV DQRGNQIMSD KRNVILFSVF
DENRSWYLTE 651 NIQRFLPNPA GVQLEDPEFQ ASNIMHSING YVFDSLQLSV
CLHEVAYWYI 701 LSIGAQTDFL SVFFSGYTFK HKMVYEDTLT LFPFSGETVF
MSMENPGLWI 751 LGCHNSDFRN RGMTALLKVS SCDKNTGDYY EDSYEDISAY
LLSKNNAIEP 801 RSFSQNGAPG TSESATPESG PGSEPATSGS ETPGTSESAT
PESGPGSEPA 851 TSGSETPGTS ESATPESGPG TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS
TEEGTSESAT 901 PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG SPAGSPTSTE
EGSPAGSPTS 951 TEEGTSTEPS EGSAPGTSES ATPESGPGTS ESATPESGPG
TSESATPESG 1001 PGSEPATSGS ETPGSEPATS GSETPGSPAG SPTSTEEGTS
TEPSEGSAPG 1051 TSTEPSEGSA PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGTSTE
PSEGSAPASS 1101 PPVLKRHQAE ITRTTLQSDQ EEIDYDDTIS VEMKKEDFDI
YDEDENQSPR 1151 SFQKKTRHYF IAAVERLWDY GMSSSPHVLR
NRAQSGSVPQ FKKVVFQEFT
1201 DGSFTQPLYR GELNEHLGLL GPYIRAEVED NIMVTFRNQA
SRPYSFYSSL 1251 ISYEEDQRQG AEPRKNFVKP NETKTYFWKV QHHMAPT-
KDE FDCKAWAYFS 1301 DVDLEKDVHS GLIGPLLVCH TNTLNPAHGR QVTVQEFALF
FTIFDETKSW 1351 YFTENMERNC RAPCNIQMED PTFKENYRFH AINGYIMDTL
PGLVMAQDQR 1401 IRWYLLSMGS NENIHSIHFS GHVFTVRKKE EYKMALYNLY
PGVFETVEML 1451 PSKAGIWRVE CLIGEHLHAG MSTLFLVYSN KCQTPLGMAS
GHIRDFQITA 1501 SGQYGQWAPK LARLHYSGSI NAWSTKEPFS WIKVDLLAPM
IIHGIKTQGA 1551 RQKFSSLYIS QFIIMYSLDG KKWQTYRGNS TGTLMVFFGN
VDSSGIKHNI 1601 FNPPIIARYI RLHPTHYSIR STLRMELMGC DLNSCSMPLG
MESKAISDAQ 1651 ITASSYFTNM FATWSPSKAR LHLQGRSNAW RPQVNN-
PKEW LQVDFQKTMK 1701 VTGVTTQGVK SLLTSMYVKE FLISSSQDGH QWTLFFQNGK
VKVFQGNQDS 1751 FTPVVNSLDP PLLTRYLRIH PQSWVHQIAL RMEVLGCEAQ
DLYDKTHTCP 1801 PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS
HEDPEVKFNW 1851 YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT
VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA 1901 LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC
LVKGFYPSDI
1951 AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVD-
KSRW QQGNVFSCSV 2001 MHEALHNHYT QKSLSLSPGK * Sequência de proteína de pSYN FVIII 267 (FVIII Fc com XTEN 72 AE no aminoácido 18 e XTEN 288 AE no domínio B) SEQ ID NO: 81) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP
TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGASSSDLGE LPVDARFPPR VPKSFPFNTS
VVYKKTLFVE 151 FTDHLFNIAK PRPPWMGLLG PTIQAEVYDT VVITLKNMAS
HPVSLHAVGV 201 SYWKASEGAE YDDQTSQREK EDDKVFPGGS HTY-
VWQVLKE NGPMASDPLC 251 LTYSYLSHVD LVKDLNSGLI GALLVCREGS LAKEKTQTLH
KFILLFAVFD 301 EGKSWHSETK NSLMQDRDAA SARAWPKMHT VNGYVN-
RSLP GLIGCHRKSV 351 YWHVIGMGTT PEVHSIFLEG HTFLVRNHRQ ASLEISPITF
LTAQTLLMDL 401 GQFLLFCHIS SHQHDGMEAY VKVDSCPEEP QLRMKNNEEA
EDYDDDLTDS 451 EMDVVRFDDD NSPSFIQIRS VAKKHPKTWV HYIAAEEEDW
DYAPLVLAPD 501 DRSYKSQYLN NGPQRIGRKY KKVRFMAYTD ETFKTREAIQ
HESGILGPLL 551 YGEVGDTLLI IFKNQASRPY NIYPHGITDV RPLYSRRLPK
GVKHLKDFPI 601 LPGEIFKYKW TVTVEDGPTK SDPRCLTRYY SSFVNMERDL
ASGLIGPLLI 651 CYKESVDQRG NQIMSDKRNV ILFSVFDENR SWYLTENIQR
FLPNPAGVQL 701 EDPEFQASNI MHSINGYVFD SLQLSVCLHE VAYWYILSIG
AQTDFLSVFF 751 SGYTFKHKMV YEDTLTLFPF SGETVFMSME NPGLWILGCH
NSDFRNRGMT 801 ALLKVSSCDK NTGDYYEDSY EDISAYLLSK NNAIEPRSFS
QNGAPGTSES 851 ATPESGPGSE PATSGSETPG TSESATPESG PGSEPATSGS
ETPGTSESAT 901 PESGPGTSTE PSEGSAPGSP AGSPTSTEEG TSESATPESG
PGSEPATSGS 951 ETPGTSESAT PESGPGSPAG SPTSTEEGSP AGSPTSTEEG
TSTEPSEGSA 1001 PGTSESATPE SGPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGSE
PATSGSETPG 1051 SEPATSGSET PGSPAGSPTS TEEGTSTEPS EGSAPGTSTE
PSEGSAPGSE 1101 PATSGSETPG TSESATPESG PGTSTEPSEG SAPASSPPVL
KRHQAEITRT 1151 TLQSDQEEID YDDTISVEMK KEDFDIYDED ENQSPRSFQK
KTRHYFIAAV 1201 ERLWDYGMSS SPHVLRNRAQ SGSVPQFKKV VFQEFTD-
GSF TQPLYRGELN 1251 EHLGLLGPYI RAEVEDNIMV TFRNQASRPY SFYSSLISYE
EDQRQGAEPR 1301 KNFVKPNETK TYFWKVQHHM APTKDEFDCK AWAYFS-
DVDL EKDVHSGLIG 1351 PLLVCHTNTL NPAHGRQVTV QEFALFFTIF DETKSWYFTE
NMERNCRAPC 1401 NIQMEDPTFK ENYRFHAING YIMDTLPGLV MAQDQRIRWY
LLSMGSNENI 1451 HSIHFSGHVF TVRKKEEYKM ALYNLYPGVF ETVEMLPSKA
GIWRVECLIG 1501 EHLHAGMSTL FLVYSNKCQT PLGMASGHIR DFQITASGQY
GQWAPKLARL 1551 HYSGSINAWS TKEPFSWIKV DLLAPMIIHG IKTQGARQKF
SSLYISQFII 1601 MYSLDGKKWQ TYRGNSTGTL MVFFGNVDSS GIKHNIFNPP
IIARYIRLHP 1651 THYSIRSTLR MELMGCDLNS CSMPLGMESK AISDAQITAS
SYFTNMFATW 1701 SPSKARLHLQ GRSNAWRPQV NNPKEWLQVD
FQKTMKVTGV TTQGVKSLLT 1751 SMYVKEFLIS SSQDGHQWTL FFQNGKVKVF QGNQDSFTPV
VNSLDPPLLT 1801 RYLRIHPQSW VHQIALRMEV LGCEAQDLYD KTHTCPPCPA
PELLGGPSVF 1851 LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG
VEVHNAKTKP 1901 REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP
IEKTISKAKG 1951 QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW
ESNGQPENNY 2001 KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA
LHNHYTQKSL 2051 SLSPGK* Sequência de proteína de pSYN FVIII 268 (FVIII Fc com XTEN 144 AE no aminoácido 18) SEQ ID NO: 82)
1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP
TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT PESGPGSEPA
TSGSETPGTS 151 ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGASSSDL
GELPVDARFP 201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE
751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQAEITRTTL QSDQEEIDYD
DTISVEMKKE 951 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP
HVLRNRAQSG 1001 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA
EVEDNIMVTF 1051 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY
FWKVQHHMAP 1101 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP
AHGRQVTVQE 1151 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN
YRFHAINGYI 1201 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHVFTV
RKKEEYKMAL 1251 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL
VYSNKCQTPL 1301 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK
EPFSWIKVDL 1351 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
RGNSTGTLMV 1401 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME
LMGCDLNSCS 1451 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR
SNAWRPQVNN
1501 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS
QDGHQWTLFF 1551 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH
QIALRMEVLG 1601 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
SRTPEVTCVV 1651 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNS-
TYRVV SVLTVLHQDW 1701 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
SRDELTKNQV 1751 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
FFLYSKLTVD 1801 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK* Sequência de proteína de pSYN FVIII 269 (FVIII Fc com XTEN 72 AE no aminoácido 18) SEQ ID NO: 83) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP
TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGASSSDLGE LPVDARFPPR VPKSFPFNTS
VVYKKTLFVE 151 FTDHLFNIAK PRPPWMGLLG PTIQAEVYDT VVITLKNMAS
HPVSLHAVGV 201 SYWKASEGAE YDDQTSQREK EDDKVFPGGS HTY-
VWQVLKE NGPMASDPLC 251 LTYSYLSHVD LVKDLNSGLI GALLVCREGS LAKEKTQTLH
KFILLFAVFD 301 EGKSWHSETK NSLMQDRDAA SARAWPKMHT VNGYVN-
RSLP GLIGCHRKSV 351 YWHVIGMGTT PEVHSIFLEG HTFLVRNHRQ ASLEISPITF
LTAQTLLMDL 401 GQFLLFCHIS SHQHDGMEAY VKVDSCPEEP QLRMKNNEEA
EDYDDDLTDS 451 EMDVVRFDDD NSPSFIQIRS VAKKHPKTWV HYIAAEEEDW
DYAPLVLAPD 501 DRSYKSQYLN NGPQRIGRKY KKVRFMAYTD ETFKTREAIQ
HESGILGPLL 551 YGEVGDTLLI IFKNQASRPY NIYPHGITDV RPLYSRRLPK
GVKHLKDFPI 601 LPGEIFKYKW TVTVEDGPTK SDPRCLTRYY SSFVNMERDL
ASGLIGPLLI 651 CYKESVDQRG NQIMSDKRNV ILFSVFDENR SWYLTENIQR
FLPNPAGVQL 701 EDPEFQASNI MHSINGYVFD SLQLSVCLHE VAYWYILSIG
AQTDFLSVFF 751 SGYTFKHKMV YEDTLTLFPF SGETVFMSME NPGLWILGCH
NSDFRNRGMT 801 ALLKVSSCDK NTGDYYEDSY EDISAYLLSK NNAIEPRSFS
QNPPVLKRHQ 851 AEITRTTLQS DQEEIDYDDT ISVEMKKEDF DIYDEDENQS
PRSFQKKTRH 901 YFIAAVERLW DYGMSSSPHV LRNRAQSGSV PQFKKVVFQE
FTDGSFTQPL 951 YRGELNEHLG LLGPYIRAEV EDNIMVTFRN QASRPYSFYS
SLISYEEDQR 1001 QGAEPRKNFV KPNETKTYFW KVQHHMAPTK DEFDCKA-
WAY FSDVDLEKDV 1051 HSGLIGPLLV CHTNTLNPAH GRQVTVQEFA LFFTIFDETK
SWYFTENMER 1101 NCRAPCNIQM EDPTFKENYR FHAINGYIMD TLPGLVMAQD
QRIRWYLLSM 1151 GSNENIHSIH FSGHVFTVRK KEEYKMALYN LYPGVFETVE
MLPSKAGIWR 1201 VECLIGEHLH AGMSTLFLVY SNKCQTPLGM ASGHIRDFQI
TASGQYGQWA 1251 PKLARLHYSG SINAWSTKEP FSWIKVDLLA PMIIHGIKTQ
GARQKFSSLY 1301 ISQFIIMYSL DGKKWQTYRG NSTGTLMVFF GNVDSSGIKH
NIFNPPIIAR 1351 YIRLHPTHYS IRSTLRMELM GCDLNSCSMP LGMESKAISD
AQITASSYFT 1401 NMFATWSPSK ARLHLQGRSN AWRPQVNNPK EWLQV-
DFQKT MKVTGVTTQG 1451 VKSLLTSMYV KEFLISSSQD GHQWTLFFQN GKVKVFQGNQ
DSFTPVVNSL 1501 DPPLLTRYLR IHPQSWVHQI ALRMEVLGCE AQDLYDKTHT
CPPCPAPELL 1551 GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF
NWYVDGVEVH 1601 NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN
KALPAPIEKT 1651 ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS
DIAVEWESNG 1701 QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC
SVMHEALHNH 1751 YTQKSLSLSP GK* Sequência de proteína de pSYNFVIII 271 (FVIII Fc com XTEN 42 AE no aminoácido 18) SEQ ID NO: 84) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP
GSPAGSPTST
51 EEGTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPASSS DLGELPVDAR
FPPRVPKSFP 101 FNTSVVYKKT LFVEFTDHLF NIAKPRPPWM GLLGPTIQAE
VYDTVVITLK 151 NMASHPVSLH AVGVSYWKAS EGAEYDDQTS QREKEDD-
KVF PGGSHTYVWQ 201 VLKENGPMAS DPLCLTYSYL SHVDLVKDLN SGLIGALLVC
REGSLAKEKT 251 QTLHKFILLF AVFDEGKSWH SETKNSLMQD RDAASARAWP
KMHTVNGYVN 301 RSLPGLIGCH RKSVYWHVIG MGTTPEVHSI FLEGHTFLVR
NHRQASLEIS 351 PITFLTAQTL LMDLGQFLLF CHISSHQHDG MEAYVKVDSC
PEEPQLRMKN 401 NEEAEDYDDD LTDSEMDVVR FDDDNSPSFI QIRSVAKKHP
KTWVHYIAAE 451 EEDWDYAPLV LAPDDRSYKS QYLNNGPQRI GRKYK-
KVRFM AYTDETFKTR 501 EAIQHESGIL GPLLYGEVGD TLLIIFKNQA SRPYNIYPHG
ITDVRPLYSR 551 RLPKGVKHLK DFPILPGEIF KYKWTVTVED GPTKSDPRCL
TRYYSSFVNM 601 ERDLASGLIG PLLICYKESV DQRGNQIMSD KRNVILFSVF
DENRSWYLTE 651 NIQRFLPNPA GVQLEDPEFQ ASNIMHSING YVFDSLQLSV
CLHEVAYWYI 701 LSIGAQTDFL SVFFSGYTFK HKMVYEDTLT LFPFSGETVF
MSMENPGLWI 751 LGCHNSDFRN RGMTALLKVS SCDKNTGDYY EDSYEDISAY
LLSKNNAIEP
801 RSFSQNPPVL KRHQAEITRT TLQSDQEEID YDDTISVEMK
KEDFDIYDED 851 ENQSPRSFQK KTRHYFIAAV ERLWDYGMSS SPHVLRN-
RAQ SGSVPQFKKV 901 VFQEFTDGSF TQPLYRGELN EHLGLLGPYI RAEVEDNIMV
TFRNQASRPY 951 SFYSSLISYE EDQRQGAEPR KNFVKPNETK TYFWKVQHHM
APTKDEFDCK 1001 AWAYFSDVDL EKDVHSGLIG PLLVCHTNTL NPAHGRQVTV
QEFALFFTIF 1051 DETKSWYFTE NMERNCRAPC NIQMEDPTFK ENYRFHAING
YIMDTLPGLV 1101 MAQDQRIRWY LLSMGSNENI HSIHFSGHVF TVRKKEEYKM
ALYNLYPGVF 1151 ETVEMLPSKA GIWRVECLIG EHLHAGMSTL FLVYSNKCQT
PLGMASGHIR 1201 DFQITASGQY GQWAPKLARL HYSGSINAWS TKEPFSWIKV
DLLAPMIIHG 1251 IKTQGARQKF SSLYISQFII MYSLDGKKWQ TYRGNSTGTL
MVFFGNVDSS 1301 GIKHNIFNPP IIARYIRLHP THYSIRSTLR MELMGCDLNS
CSMPLGMESK 1351 AISDAQITAS SYFTNMFATW SPSKARLHLQ GRSNAWRPQV
NNPKEWLQVD 1401 FQKTMKVTGV TTQGVKSLLT SMYVKEFLIS SSQDGHQWTL
FFQNGKVKVF 1451 QGNQDSFTPV VNSLDPPLLT RYLRIHPQSW VHQIALRMEV
LGCEAQDLYD 1501 KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC
VVVDVSHEDP
1551 EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ
DWLNGKEYKC 1601 KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN
QVSLTCLVKG 1651 FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT
VDKSRWQQGN 1701 VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK* Sequência de proteína de pSYN FVIII 272 ( FVIII com XTEN 144 AE no aminoácido 18 e XTEN 244 AE no domínio B - sem Fc) SEQ ID NO: 85) 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQGAP
TSESATPESG 51 PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
ESATPESGPG 101 TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT PESGPGSEPA
TSGSETPGTS 151 ESATPESGPG SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGASSSDL
GELPVDARFP 201 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 251 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 301 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 351 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 401 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 451 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE
501 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 551 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 601 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 651 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 701 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 751 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL 801 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 851 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 901 SKNNAIEPRS FSQNGAPGTS ESATPESGPG SEPATSGSET
PGTSESATPE 951 SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGTS TEPSEGSAPG
SPAGSPTSTE 1001 EGTSESATPE SGPGSEPATS GSETPGTSES ATPESGPGSP
AGSPTSTEEG 1051 SPAGSPTSTE EGTSTEPSEG SAPGTSESAT PESGPGTSES
ATPESGPGTS 1101 ESATPESGPG SEPATSGSET PGSEPATSGS ETPGSPAGSP
TSTEEGTSTE 1151 PSEGSAPGTS TEPSEGSAPG SEPATSGSET PGTSESATPE
SGPGTSTEPS 1201 EGSAPASSPP VLKRHQAEIT RTTLQSDQEE IDYDDTISVE
MKKEDFDIYD
1251 EDENQSPRSF QKKTRHYFIA AVERLWDYGM SSSPHVLRNR
AQSGSVPQFK 1301 KVVFQEFTDG SFTQPLYRGE LNEHLGLLGP YIRAEVEDNI
MVTFRNQASR 1351 PYSFYSSLIS YEEDQRQGAE PRKNFVKPNE TKTYFWKVQH
HMAPTKDEFD 1401 CKAWAYFSDV DLEKDVHSGL IGPLLVCHTN TLNPAHGRQV
TVQEFALFFT 1451 IFDETKSWYF TENMERNCRA PCNIQMEDPT FKENYRFHAI
NGYIMDTLPG 1501 LVMAQDQRIR WYLLSMGSNE NIHSIHFSGH VFTVRKKEEY
KMALYNLYPG 1551 VFETVEMLPS KAGIWRVECL IGEHLHAGMS TLFLVYSNKC
QTPLGMASGH 1601 IRDFQITASG QYGQWAPKLA RLHYSGSINA WSTKEPFSWI
KVDLLAPMII 1651 HGIKTQGARQ KFSSLYISQF IIMYSLDGKK WQTYRGNSTG
TLMVFFGNVD 1701 SSGIKHNIFN PPIIARYIRL HPTHYSIRST LRMELMGCDL
NSCSMPLGME 1751 SKAISDAQIT ASSYFTNMFA TWSPSKARLH LQGRSNAWRP
QVNNPKEWLQ 1801 VDFQKTMKVT GVTTQGVKSL LTSMYVKEFL ISSSQDGHQW
TLFFQNGKVK 1851 VFQGNQDSFT PVVNSLDPPL LTRYLRIHPQ SWVHQIALRM
EVLGCEAQDL 1901 Y* Sequência de proteína de pSYN-FVIII-161 (SEQ ID NO: 69) (posição de aminoácidos 1-1457 na sequência de FVIII; região com subli-
nhado representa região Fc; sublinhado ondulado representa li- gante clivável entre primeiro Fc e fragmento de VWF; região com sublinhado duplo representa fragmento de VWF; região em negrito representa ligante clivável entre fragmento de VWF e Fc). 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE LSWDYMQSDL
GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPWMGL
LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDDQTSQR
EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVKDLNSG
LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNSLMQDRD
AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG TTPEVHSIFL
EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPSFIQI
RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNGPQRIGR
KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR 551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMSDKR
NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS NIMHSINGYV
FDSLQLSVCL
651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNPPVLKR HQREITRTTL QSDQEEIDYD
DTISVEMKKE 801 DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER LWDYGMSSSP
HVLRNRAQSG 851 SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH LGLLGPYIRA
EVEDNIMVTF 901 RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN FVKPNETKTY
FWKVQHHMAP 951 TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL LVCHTNTLNP
AHGRQVTVQE 1001 FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI QMEDPTFKEN
YRFHAINGYI 1051 MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS IHFSGHVFTV
RKKEEYKMAL 1101 YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH LHAGMSTLFL
VYSNKCQTPL 1151 GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY SGSINAWSTK
EPFSWIKVDL 1201 LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLDGKKWQTY
RGNSTGTLMV 1251 FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH YSIRSTLRME
LMGCDLNSCS 1301 MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP SKARLHLQGR
SNAWRPQVNN 1351 PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKSLLTSM YVKEFLISSS
QDGHQWTLFF
1401 QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLLTRY LRIHPQSWVH
QIALRMEVLG 1451 CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
SRTPEVTCVV 1501 VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNS-
TYRVV SVLTVLHQDW 1551 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
SRDELTKNQV 1601 SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
FFLYSKLTVD 1651 KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL
SPGKRRRRSG GGGSGGGGSG 1701 GGGSGGGGSG GGGSGGGGSR KRRKRSLSCR
PPMVKLVCPA DNLRAEGLEC 1751 TKTCQNYDLE CMSMGCVSGC LCPPGMVRHE NRCVA-
LERCP CFHQGKEYAP 1801 GETVKIGCNT CVCRDRKWNC TDHVCDATCS TIGMAHYLTF
DGLKYLFPGE 1851 CQYVLVQDYC GSNPGTFRIL VGNKGCSHPS VKCKKRVTIL
VEGGEIELFD 1901 GEVNVKRPMK DETHFEVVES GRYIILLLGK ALSVVWDRHL
SISVVLKQTY 1951 QEKVCGLCGN FDGIQNNDLT SSNLQVEEDP VDFGNSW-
KVS SQCADTRKVP 2001 LDSSPATCHN NIMKQTMVDS SCRILTSDVF QDCNKLVDPE
PYLDVCIYDT 2051 CSCESIGDCA AFCDTIAAYA HVCAQHGKVV TWRTATLCPQ
SCEERNLREN 2101 GYEAEWRYNS CAPACQVTCQ HPEPLACPVQ CVEG-
CHAHCP PGKILDELLQ
2151 TCVDPEDCPV CEVAGRRFAS GKKVTLNPSD PEHCQICHCD
VVNLTCEACQ 2201 EPISGTSESA TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP
GSEPATSGSE 2251 TPGTSESATP ESGPGTSTEP SEGSAPGSPA GSPTSTEEGT
SESATPESGP 2301 GSEPATSGSE TPGTSESATP ESGPGSPAGS PTSTEEGSPA
GSPTSTEEGT 2351 STEPSEGSAP GTSESATPES GPGTSESATP ESGPGTSESA
TPESGPGSEP 2401 ATSGSETPGS EPATSGSETP GSPAGSPTST EEGTSTEPSE
GSAPGTSTEP 2451 SEGSAPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP GTSTEPSEGS
APDSGGGGSG 2501 GGGSGGGGSG GGGSGGGGSL VPRGSGGDKT
HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF 2551 PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE
VHNAKTKPRE 2601 EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE
KTISKAKGQP 2651 REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES
NGQPENNYKT 2701 TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH
NHYTQKSLSL 2751 SPGK Sequência de proteína de pSYN-FVIII-170 (SEQ ID NO: 71) 1 SLSCRPPMVK LVCPADNLRA EGLECTKTCQ NYDLECMSMG
CVSGCLCPPG 51 MVRHENRCVA LERCPCFHQG KEYAPGETVK IGCNTCVCRD
RKWNCTDHVC
101 DATCSTIGMA HYLTFDGLKY LFPGECQYVL VQDYCGSNPG
TFRILVGNKG 151 CSHPSVKCKK RVTILVEGGE IELFDGEVNV KRPMKDETHF
EVVESGRYII 201 LLLGKALSVV WDRHLSISVV LKQTYQEKVC GLCGNFDGIQ
NNDLTSSNLQ 251 VEEDPVDFGN SWKVSSQCAD TRKVPLDSSP ATCHNNIMKQ
TMVDSSCRIL 301 TSDVFQDCNK LVDPEPYLDV CIYDTCSCES IGDCAAFCDT IAA-
YAHVCAQ 351 HGKVVTWRTA TLCPQSCEER NLRENGYEAE WRYNSCAPAC
QVTCQHPEPL 401 ACPVQCVEGC HAHCPPGKIL DELLQTCVDP EDCPVCEVAG
RRFASGKKVT 451 LNPSDPEHCQ ICHCDVVNLT CEACQEPISG TSESATPESG
PGSEPATSGS 501 ETPGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG
TSTEPSEGSA 551 PGSPAGSPTS TEEGTSESAT PESGPGSEPA TSGSETPGTS
ESATPESGPG 601 SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEGTSTEPS EGSAPGTSES
ATPESGPGTS 651 ESATPESGPG TSESATPESG PGSEPATSGS ETPGSEPATS
GSETPGSPAG 701 SPTSTEEGTS TEPSEGSAPG TSTEPSEGSA PGSEPATSGS
ETPGTSESAT 751 PESGPGTSTE PSEGSAPDSG GGGSGGGGSG GGGSGGGGSG
GGGSLVPRGS 801 GGASATRRYY LGAVELSWDY MQSDLGELPV DARFPPRVPK
SFPFNTSVVY
851 KKTLFVEFTD HLFNIAKPRP PWMGLLGPTI QAEVYDTVVI TLKN-
MASHPV 901 SLHAVGVSYW KASEGAEYDD QTSQREKEDD KVFPGGSHTY
VWQVLKENGP 951 MASDPLCLTY SYLSHVDLVK DLNSGLIGAL LVCREGSLAK EKT-
QTLHKFI 1001 LLFAVFDEGK SWHSETKNSL MQDRDAASAR AWPKMHTVNG
YVNRSLPGLI 1051 GCHRKSVYWH VIGMGTTPEV HSIFLEGHTF LVRNHRQASL
EISPITFLTA 1101 QTLLMDLGQF LLFCHISSHQ HDGMEAYVKV DSCPEEPQLR
MKNNEEAEDY 1151 DDDLTDSEMD VVRFDDDNSP SFIQIRSVAK KHPKTWVHYI
AAEEEDWDYA 1201 PLVLAPDDRS YKSQYLNNGP QRIGRKYKKV RFMAYTDETF
KTREAIQHES 1251 GILGPLLYGE VGDTLLIIFK NQASRPYNIY PHGITDVRPL YSRR-
LPKGVK 1301 HLKDFPILPG EIFKYKWTVT VEDGPTKSDP RCLTRYYSSF
VNMERDLASG 1351 LIGPLLICYK ESVDQRGNQI MSDKRNVILF SVFDENRSWY
LTENIQRFLP 1401 NPAGVQLEDP EFQASNIMHS INGYVFDSLQ LSVCLHEVAY
WYILSIGAQT 1451 DFLSVFFSGY TFKHKMVYED TLTLFPFSGE TVFMSMENPG
LWILGCHNSD 1501 FRNRGMTALL KVSSCDKNTG DYYEDSYEDI SAYLLSKNNA IE-
PRSFSQNP 1551 PVLKRHQREI TRTTLQSDQE EIDYDDTISV EMKKEDFDIY DE-
DENQSPRS
1601 FQKKTRHYFI AAVERLWDYG MSSSPHVLRN RAQSGSVPQF
KKVVFQEFTD 1651 GSFTQPLYRG ELNEHLGLLG PYIRAEVEDN IMVTFRNQAS
RPYSFYSSLI 1701 SYEEDQRQGA EPRKNFVKPN ETKTYFWKVQ HHMAPTKDEF
DCKAWAYFSD 1751 VDLEKDVHSG LIGPLLVCHT NTLNPAHGRQ VTVQEFALFF
TIFDETKSWY 1801 FTENMERNCR APCNIQMEDP TFKENYRFHA INGYIMDTLP
GLVMAQDQRI 1851 RWYLLSMGSN ENIHSIHFSG HVFTVRKKEE YKMALYNLYP
GVFETVEMLP 1901 SKAGIWRVEC LIGEHLHAGM STLFLVYSNK CQTPLGMASG
HIRDFQITAS 1951 GQYGQWAPKL ARLHYSGSIN AWSTKEPFSW IKVDLLAPMI
IHGIKTQGAR 2001 QKFSSLYISQ FIIMYSLDGK KWQTYRGNST GTLMVFFGNV
DSSGIKHNIF 2051 NPPIIARYIR LHPTHYSIRS TLRMELMGCD LNSCSMPLGM
ESKAISDAQI 2101 TASSYFTNMF ATWSPSKARL HLQGRSNAWR PQVNNPKEWL
QVDFQKTMKV 2151 TGVTTQGVKS LLTSMYVKEF LISSSQDGHQ WTLFFQNGKV
KVFQGNQDSF 2201 TPVVNSLDPP LLTRYLRIHP QSWVHQIALR MEVLGCEAQD LY Sequência de nucleotídeos de pSYN FVIII 310 (codifica FVIII com eliminação do domínio B inteiro, exceto 2 resíduos de aminoácidos e XTEN 288 AE inserido após aa 742) (SEQ ID NO: 170) 1 ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT
TGCGATTCTG
51 CTTTAGTGCC ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTG-
GAA CTGTCATGGG 101 ACTATATGCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGA-
CGC AAGATTTCCT 151 CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAG-
TCG TGTACAAAAA 201 GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC
GCTAAGCCAA 251 GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCA-
GGC TGAGGTTTAT 301 GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTT-
CCCATC CTGTCAGTCT 351 TCATGCTGTT GGTGTATCCT ACTGGAAAGC
TTCTGAGGGA GCTGAATATG 401 ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGA-
TAAAGT CTTCCCTGGT 451 GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGA-
ATG GTCCAATGGC 501 CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT
GTGGACCTGG 551 TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTAC-
TAGT ATGTAGAGAA 601 GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCA-
CAAAT TTATACTACT 651 TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCA-
GAA ACAAAGAACT 701 CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGG-
CCTG GCCTAAAATG 751 CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCA-
GGTC TGATTGGATG
801 CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAA-
TGGGC ACCACTCCTG 851 AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT
GAGGAACCAT 901 CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTT-
CCTTA CTGCTCAAAC 951 ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT
ATCTCTTCCC 1001 ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGA-
CAG CTGTCCAGAG 1051 GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA GAAGCG-
GAAG ACTATGATGA 1101 TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT
GATGACAACT 1151 CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA
TCCTAAAACT 1201 TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGG-
GACT ATGCTCCCTT 1251 AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAA-
TAT TTGAACAATG 1301 GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAG-
TCCGATT TATGGCATAC 1351 ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT ATTCAG-
CATG AATCAGGAAT 1401 CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACA-
CTG TTGATTATAT 1451 TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA
CGGAATCACT 1501 GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA
CCAAAAGGTG TAAAACATTT
1551 GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT
AAATGGACAG 1601 TGACTGTAGA AGATGGGCCA ACTAAATCAG
ATCCTCGGTG CCTGACCCGC 1651 TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAGCTT
CAGGACTCAT 1701 TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGAT-
CAA AGAGGAAACC 1751 AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT
ATTTGATGAG 1801 AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACG-
CTTTC TCCCCAATCC 1851 AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAG-
CCTCC AACATCATGC 1901 ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAGTTGTC
AGTTTGTTTG 1951 CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAG-
CAC AGACTGACTT 2001 CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA
ATGGTCTATG 2051 AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAAC-
TGT CTTCATGTCG 2101 ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCA-
CAACT CAGACTTTCG 2151 GAACAGAGGC ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAG-
TTGT GACAAGAACA 2201 CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTT-
CAGC ATACTTGCTG 2251 AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCGG-
TACCT CAGAGTCTGC
2301 TACCCCCGAG TCAGGGCCAG GATCAGAGCC AGCCAC-
CTCC GGGTCTGAGA 2351 CACCCGGGAC TTCCGAGAGT GCCACCCCTG AGTCCG-
GACC CGGGTCCGAG 2401 CCCGCCACTT CCGGCTCCGA AACTCCCGGC ACAAG-
CGAGA GCGCTACCCC 2451 AGAGTCAGGA CCAGGAACAT CTACAGAGCC
CTCTGAAGGC TCCGCTCCAG 2501 GGTCCCCAGC CGGCAGTCCC ACTAGCACCG AGGAGG-
GAAC CTCTGAAAGC 2551 GCCACACCCG AATCAGGGCC AGGGTCTGAG CCTGC-
TACCA GCGGCAGCGA 2601 GACACCAGGC ACCTCTGAGT CCGCCACACC AGAG-
TCCGGA CCCGGATCTC 2651 CCGCTGGGAG CCCCACCTCC ACTGAGGAGG
GATCTCCTGC TGGCTCTCCA 2701 ACATCTACTG AGGAAGGTAC CTCAACCGAG
CCATCCGAGG GATCAGCTCC 2751 CGGCACCTCA GAGTCGGCAA CCCCGGAGTC TGGAC-
CCGGA ACTTCCGAAA 2801 GTGCCACACC AGAGTCCGGT CCCGGGACTT CAGAAT-
CAGC AACACCCGAG 2851 TCCGGCCCTG GGTCTGAACC CGCCACAAGT GGTAG-
TGAGA CACCAGGATC 2901 AGAACCTGCT ACCTCAGGGT CAGAGACACC CGGA-
TCTCCG GCAGGCTCAC 2951 CAACCTCCAC TGAGGAGGGC ACCAGCACAG AACCAAG-
CGA GGGCTCCGCA 3001 CCCGGAACAA GCACTGAACC CAGTGAGGGT TCAGCAC-
CCG GCTCTGAGCC
3051 GGCCACAAGT GGCAGTGAGA CACCCGGCAC TTCA-
GAGAGT GCCACCCCCG 3101 AGAGTGGCCC AGGCACTAGT ACCGAGCCCT CTGAAGG-
CAG TGCGCCAGCC 3151 TCGAGCGAAA TAACTCGTAC TACTCTTCAG TCAGAT-
CAAG AGGAAATCGA 3201 TTATGATGAT ACCATATCAG TTGAAATGAA GAAGGAAGAT
TTTGACATTT 3251 ATGATGAGGA TGAAAATCAG AGCCCCCGCA GCTTT-
CAAAA GAAAACACGA 3301 CACTATTTTA TTGCTGCAGT GGAGAGGCTC TGGGAT-
TATG GGATGAGTAG 3351 CTCCCCACAT GTTCTAAGAA ACAGGGCTCA GAGTGG-
CAGT GTCCCTCAGT 3401 TCAAGAAAGT TGTTTTCCAG GAATTTACTG ATGGCTCCTT
TACTCAGCCC 3451 TTATACCGTG GAGAACTAAA TGAACATTTG GGAC-
TCCTGG GGCCATATAT 3501 AAGAGCAGAA GTTGAAGATA ATATCATGGT AACTTT-
CAGA AATCAGGCCT 3551 CTCGTCCCTA TTCCTTCTAT TCTAGCCTTA TTTCTTATGA
GGAAGATCAG 3601 AGGCAAGGAG CAGAACCTAG AAAAAACTTT GTCAAG-
CCTA ATGAAACCAA 3651 AACTTACTTT TGGAAAGTGC AACATCATAT GGCACCCACT
AAAGATGAGT 3701 TTGACTGCAA AGCCTGGGCT TATTTCTCTG ATGTTGA-
CCT GGAAAAAGAT 3751 GTGCACTCAG GCCTGATTGG ACCCCTTCTG GTCTG-
CCACA CTAACACACT
3801 GAACCCTGCT CATGGGAGAC AAGTGACAGT ACAGGAA-
TTT GCTCTGTTTT 3851 TCACCATCTT TGATGAGACC AAAAGCTGGT ACTTCAC-
TGA AAATATGGAA 3901 AGAAACTGCA GGGCTCCCTG CAATATCCAG ATGGAA-
GATC CCACTTTTAA 3951 AGAGAATTAT CGCTTCCATG CAATCAATGG CTACATAATG
GATACACTAC 4001 CTGGCTTAGT AATGGCTCAG GATCAAAGGA
TTCGATGGTA TCTGCTCAGC 4051 ATGGGCAGCA ATGAAAACAT CCATTCTATT CATTTCAGTG
GACATGTGTT 4101 CACTGTACGA AAAAAAGAGG AGTATAAAAT GGCACTG-
TAC AATCTCTATC 4151 CAGGTGTTTT TGAGACAGTG GAAATGTTAC CA-
TCCAAAGC TGGAATTTGG 4201 CGGGTGGAAT GCCTTATTGG CGAGCATCTA CATG-
CTGGGA TGAGCACACT 4251 TTTTCTGGTG TACAGCAATA AGTGTCAGAC
TCCCCTGGGA ATGGCTTCTG 4301 GACACATTAG AGATTTTCAG ATTACAGCTT CAGGACAATA
TGGACAGTGG 4351 GCCCCAAAGC TGGCCAGACT TCATTATTCC GGATCAA-
TCA ATGCCTGGAG 4401 CACCAAGGAG CCCTTTTCTT GGATCAAGGT GGATCTG-
TTG GCACCAATGA 4451 TTATTCACGG CATCAAGACC CAGGGTGCCC GTCA-
GAAGTT CTCCAGCCTC 4501 TACATCTCTC AGTTTATCAT CATGTATAGT CTTGATGGGA
AGAAGTGGCA
4551 GACTTATCGA GGAAATTCCA CTGGAACCTT AATGG-
TCTTC TTTGGCAATG 4601 TGGATTCATC TGGGATAAAA CACAATATTT TTAACCCTCC
AATTATTGCT 4651 CGATACATCC GTTTGCACCC AACTCATTAT AGCATT-
CGCA GCACTCTTCG 4701 CATGGAGTTG ATGGGCTGTG ATTTAAATAG TTGCAG-
CATG CCATTGGGAA 4751 TGGAGAGTAA AGCAATATCA GATGCACAGA TTACTG-
CTTC ATCCTACTTT 4801 ACCAATATGT TTGCCACCTG GTCTCCTTCA AAAG-
CTCGAC TTCACCTCCA 4851 AGGGAGGAGT AATGCCTGGA GACCTCAGGT GAATAA-
TCCA AAAGAGTGGC 4901 TGCAAGTGGA CTTCCAGAAG ACAATGAAAG TCACAG-
GAGT AACTACTCAG 4951 GGAGTAAAAT CTCTGCTTAC CAGCATGTAT GTGAAG-
GAGT TCCTCATCTC 5001 CAGCAGTCAA GATGGCCATC AGTGGACTCT CTTTTTT-
CAG AATGGCAAAG 5051 TAAAGGTTTT TCAGGGAAAT CAAGACTCCT TCACACCTGT
GGTGAACTCT 5101 CTAGACCCAC CGTTACTGAC TCGCTACCTT CGAATT-
CACC CCCAGAGTTG 5151 GGTGCACCAG ATTGCCCTGA GGATGGAGGT TCTGGG-
CTGC GAGGCACAGG 5201 ACCTCTACGA CAAAACTCAC ACATGCCCAC CGTG-
CCCAGC TCCAGAACTC 5251 CTGGGCGGAC CGTCAGTCTT CCTCTTCCCC CCAAAAC-
CCA AGGACACCCT
5301 CATGATCTCC CGGACCCCTG AGGTCACATG CGTGG-
TGGTG GACGTGAGCC 5351 ACGAAGACCC TGAGGTCAAG TTCAACTGGT ACGTGGA-
CGG CGTGGAGGTG 5401 CATAATGCCA AGACAAAGCC GCGGGAGGAG CAGTA-
CAACA GCACGTACCG 5451 TGTGGTCAGC GTCCTCACCG TCCTGCACCA GGACTGG-
CTG AATGGCAAGG 5501 AGTACAAGTG CAAGGTCTCC AACAAAGCCC TCCCAG-
CCCC CATCGAGAAA 5551 ACCATCTCCA AAGCCAAAGG GCAGCCCCGA GAACCA-
CAGG TGTACACCCT 5601 GCCCCCATCC CGGGATGAGC TGACCAAGAA CCAGGT-
CAGC CTGACCTGCC 5651 TGGTCAAAGG CTTCTATCCC AGCGACATCG CCGTGGA-
GTG GGAGAGCAAT 5701 GGGCAGCCGG AGAACAACTA CAAGACCACG CCTCCCG-
TGT TGGACTCCGA 5751 CGGCTCCTTC TTCCTCTACA GCAAGCTCAC CGTGGA-
CAAG AGCAGGTGGC 5801 AGCAGGGGAA CGTCTTCTCA TGCTCCGTGA
TGCATGAGGC TCTGCACAAC 5851 CACTACACGC AGAAGAGCCT CTCCCTGTCT CCGGG-
TAAAT GA Sequência de proteína de pSYN FVIII 310 (FVIII com eliminação do domínio B inteiro exceto 2 resíduos de aminoácidos e XTEN 288 AE inserido após aa 742) (SEQ ID NO:171) 1 ATRRYYLGAV ELSWDYMQSD LGELPVDARF PPRVPKSFPF
NTSVVYKKTL 51 FVEFTDHLFN IAKPRPPWMG LLGPTIQAEV YDTVVITLKN
MASHPVSLHA 101 VGVSYWKASE GAEYDDQTSQ REKEDDKVFP GGSHTY-
VWQV LKENGPMASD 151 PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALLVCR EGSLAKEKTQ
TLHKFILLFA 201 VFDEGKSWHS ETKNSLMQDR DAASARAWPK MHTVNGY-
VNR SLPGLIGCHR 251 KSVYWHVIGM GTTPEVHSIF LEGHTFLVRN HRQASLEISP
ITFLTAQTLL 301 MDLGQFLLFC HISSHQHDGM EAYVKVDSCP EEPQL-
RMKNN EEAEDYDDDL 351 TDSEMDVVRF DDDNSPSFIQ IRSVAKKHPK TWVHYIAAEE
EDWDYAPLVL 401 APDDRSYKSQ YLNNGPQRIG RKYKKVRFMA YTDETFKTRE
AIQHESGILG 451 PLLYGEVGDT LLIIFKNQAS RPYNIYPHGI TDVRPLYSRR
LPKGVKHLKD 501 FPILPGEIFK YKWTVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME
RDLASGLIGP 551 LLICYKESVD QRGNQIMSDK RNVILFSVFD ENRSWYLTEN
IQRFLPNPAG 601 VQLEDPEFQA SNIMHSINGY VFDSLQLSVC LHEVAYWYIL
SIGAQTDFLS 651 VFFSGYTFKH KMVYEDTLTL FPFSGETVFM SMENPGLWIL
GCHNSDFRNR 701 GMTALLKVSS CDKNTGDYYE DSYEDISAYL LSKNNAIEPR
SFGTSESATP 751 ESGPGSEPAT SGSETPGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP
GTSESATPES 801 GPGTSTEPSE GSAPGSPAGS PTSTEEGTSE SATPESGPGS
EPATSGSETP 851 GTSESATPES GPGSPAGSPT STEEGSPAGS PTSTEEGTST
EPSEGSAPGT 901 SESATPESGP GTSESATPES GPGTSESATP ESGPGSEPAT
SGSETPGSEP 951 ATSGSETPGS PAGSPTSTEE GTSTEPSEGS APGTSTEPSE
GSAPGSEPAT 1001 SGSETPGTSE SATPESGPGT STEPSEGSAP ASSEITRTTL
QSDQEEIDYD 1051 DTISVEMKKE DFDIYDEDEN QSPRSFQKKT RHYFIAAVER
LWDYGMSSSP 1101 HVLRNRAQSG SVPQFKKVVF QEFTDGSFTQ PLYRGELNEH
LGLLGPYIRA 1151 EVEDNIMVTF RNQASRPYSF YSSLISYEED QRQGAEPRKN
FVKPNETKTY 1201 FWKVQHHMAP TKDEFDCKAW AYFSDVDLEK DVHSGLIGPL
LVCHTNTLNP 1251 AHGRQVTVQE FALFFTIFDE TKSWYFTENM ERNCRAPCNI
QMEDPTFKEN 1301 YRFHAINGYI MDTLPGLVMA QDQRIRWYLL SMGSNENIHS
IHFSGHVFTV 1351 RKKEEYKMAL YNLYPGVFET VEMLPSKAGI WRVECLIGEH
LHAGMSTLFL 1401 VYSNKCQTPL GMASGHIRDF QITASGQYGQ WAPKLARLHY
SGSINAWSTK 1451 EPFSWIKVDL LAPMIIHGIK TQGARQKFSS LYISQFIIMY SLD-
GKKWQTY 1501 RGNSTGTLMV FFGNVDSSGI KHNIFNPPII ARYIRLHPTH
YSIRSTLRME 1551 LMGCDLNSCS MPLGMESKAI SDAQITASSY FTNMFATWSP
SKARLHLQGR 1601 SNAWRPQVNN PKEWLQVDFQ KTMKVTGVTT QGVKS-
LLTSM YVKEFLISSS 1651 QDGHQWTLFF QNGKVKVFQG NQDSFTPVVN SLDPPLL-
TRY LRIHPQSWVH 1701 QIALRMEVLG CEAQDLYDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF
PPKPKDTLMI 1751 SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTK-
PRE EQYNSTYRVV 1801 SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP
REPQVYTLPP 1851 SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT
TPPVLDSDGS 1901 FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK* Sequência de nucleotídeos de pSYN FVIII 312 (codifica FVIII com eliminação do domínio B inteiro exceto 5 resíduos de aminoácidos e XTEN 288 AE inserido após aa 745 – versão B5) (SEQ ID NO:172) 1 ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT
TGCGATTCTG 51 CTTTAGTGCC ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTG-
GAA CTGTCATGGG 101 ACTATATGCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGA-
CGC AAGATTTCCT 151 CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAG-
TCG TGTACAAAAA 201 GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC
GCTAAGCCAA 251 GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCA-
GGC TGAGGTTTAT
301 GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTT-
CCCATC CTGTCAGTCT 351 TCATGCTGTT GGTGTATCCT ACTGGAAAGC
TTCTGAGGGA GCTGAATATG 401 ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGA-
TAAAGT CTTCCCTGGT 451 GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGA-
ATG GTCCAATGGC 501 CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT
GTGGACCTGG 551 TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTAC-
TAGT ATGTAGAGAA 601 GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCA-
CAAAT TTATACTACT 651 TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCA-
GAA ACAAAGAACT 701 CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGG-
CCTG GCCTAAAATG 751 CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCA-
GGTC TGATTGGATG 801 CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAA-
TGGGC ACCACTCCTG 851 AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT
GAGGAACCAT 901 CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTT-
CCTTA CTGCTCAAAC 951 ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT
ATCTCTTCCC 1001 ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGA-
CAG CTGTCCAGAG
1051 GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA GAAGCG-
GAAG ACTATGATGA 1101 TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT
GATGACAACT 1151 CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA
TCCTAAAACT 1201 TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGG-
GACT ATGCTCCCTT 1251 AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAA-
TAT TTGAACAATG 1301 GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAG-
TCCGATT TATGGCATAC 1351 ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT ATTCAG-
CATG AATCAGGAAT 1401 CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACA-
CTG TTGATTATAT 1451 TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA
CGGAATCACT 1501 GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA
CCAAAAGGTG TAAAACATTT 1551 GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT
AAATGGACAG 1601 TGACTGTAGA AGATGGGCCA ACTAAATCAG
ATCCTCGGTG CCTGACCCGC 1651 TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAGCTT
CAGGACTCAT 1701 TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGAT-
CAA AGAGGAAACC 1751 AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT
ATTTGATGAG
1801 AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACG-
CTTTC TCCCCAATCC 1851 AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAG-
CCTCC AACATCATGC 1901 ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAGTTGTC
AGTTTGTTTG 1951 CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAG-
CAC AGACTGACTT 2001 CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA
ATGGTCTATG 2051 AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAAC-
TGT CTTCATGTCG 2101 ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCA-
CAACT CAGACTTTCG 2151 GAACAGAGGC ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAG-
TTGT GACAAGAACA 2201 CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTT-
CAGC ATACTTGCTG 2251 AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCTCTCAAA
ACGGTACCTC 2301 AGAGTCTGCT ACCCCCGAGT CAGGGCCAGG ATCAGAG-
CCA GCCACCTCCG 2351 GGTCTGAGAC ACCCGGGACT TCCGAGAGTG CCAC-
CCCTGA GTCCGGACCC 2401 GGGTCCGAGC CCGCCACTTC CGGCTCCGAA AC-
TCCCGGCA CAAGCGAGAG 2451 CGCTACCCCA GAGTCAGGAC CAGGAACATC TACAGAG-
CCC TCTGAAGGCT 2501 CCGCTCCAGG GTCCCCAGCC GGCAGTCCCA CTAGCAC-
CGA GGAGGGAACC
2551 TCTGAAAGCG CCACACCCGA ATCAGGGCCA GGG-
TCTGAGC CTGCTACCAG 2601 CGGCAGCGAG ACACCAGGCA CCTCTGAGTC CGCCACA-
CCA GAGTCCGGAC 2651 CCGGATCTCC CGCTGGGAGC CCCACCTCCA CTGAGGA-
GGG ATCTCCTGCT 2701 GGCTCTCCAA CATCTACTGA GGAAGGTACC TCAAC-
CGAGC CATCCGAGGG 2751 ATCAGCTCCC GGCACCTCAG AGTCGGCAAC CCCGGAG-
TCT GGACCCGGAA 2801 CTTCCGAAAG TGCCACACCA GAGTCCGGTC CCGGGAC-
TTC AGAATCAGCA 2851 ACACCCGAGT CCGGCCCTGG GTCTGAACCC GCCA-
CAAGTG GTAGTGAGAC 2901 ACCAGGATCA GAACCTGCTA CCTCAGGGTC AGAGACA-
CCC GGATCTCCGG 2951 CAGGCTCACC AACCTCCACT GAGGAGGGCA CCAGCA-
CAGA ACCAAGCGAG 3001 GGCTCCGCAC CCGGAACAAG CACTGAACCC AG-
TGAGGGTT CAGCACCCGG 3051 CTCTGAGCCG GCCACAAGTG GCAGTGAGAC ACCCGG-
CACT TCAGAGAGTG 3101 CCACCCCCGA GAGTGGCCCA GGCACTAGTA CCGAG-
CCCTC TGAAGGCAGT 3151 GCGCCAGCCT CGAGCGAAAT AACTCGTACT ACTCTT-
CAGT CAGATCAAGA 3201 GGAAATCGAT TATGATGATA CCATATCAGT TGAAATGAAG
AAGGAAGATT 3251 TTGACATTTA TGATGAGGAT GAAAATCAGA GCCCCCG-
CAG CTTTCAAAAG
3301 AAAACACGAC ACTATTTTAT TGCTGCAGTG GAGAGG-
CTCT GGGATTATGG 3351 GATGAGTAGC TCCCCACATG TTCTAAGAAA CAGGGCT-
CAG AGTGGCAGTG 3401 TCCCTCAGTT CAAGAAAGTT GTTTTCCAGG AATTTACTGA
TGGCTCCTTT 3451 ACTCAGCCCT TATACCGTGG AGAACTAAAT GAACA-
TTTGG GACTCCTGGG 3501 GCCATATATA AGAGCAGAAG TTGAAGATAA TAT-
CATGGTA ACTTTCAGAA 3551 ATCAGGCCTC TCGTCCCTAT TCCTTCTATT CTAGCCTTAT
TTCTTATGAG 3601 GAAGATCAGA GGCAAGGAGC AGAACCTAGA AAAAAC-
TTTG TCAAGCCTAA 3651 TGAAACCAAA ACTTACTTTT GGAAAGTGCA ACATCATATG
GCACCCACTA 3701 AAGATGAGTT TGACTGCAAA GCCTGGGCTT ATTT-
CTCTGA TGTTGACCTG 3751 GAAAAAGATG TGCACTCAGG CCTGATTGGA CCCCTT-
CTGG TCTGCCACAC 3801 TAACACACTG AACCCTGCTC ATGGGAGACA AGTGACA-
GTA CAGGAATTTG 3851 CTCTGTTTTT CACCATCTTT GATGAGACCA AAAGCTGGTA
CTTCACTGAA 3901 AATATGGAAA GAAACTGCAG GGCTCCCTGC AATA-
TCCAGA TGGAAGATCC 3951 CACTTTTAAA GAGAATTATC GCTTCCATGC AATCAATGGC
TACATAATGG 4001 ATACACTACC TGGCTTAGTA ATGGCTCAGG ATCAAAG-
GAT TCGATGGTAT
4051 CTGCTCAGCA TGGGCAGCAA TGAAAACATC CATTCTA-
TTC ATTTCAGTGG 4101 ACATGTGTTC ACTGTACGAA AAAAAGAGGA GTATAAA-
ATG GCACTGTACA 4151 ATCTCTATCC AGGTGTTTTT GAGACAGTGG AAATGTTACC
ATCCAAAGCT 4201 GGAATTTGGC GGGTGGAATG CCTTATTGGC GAGCATC-
TAC ATGCTGGGAT 4251 GAGCACACTT TTTCTGGTGT ACAGCAATAA GTGTCA-
GACT CCCCTGGGAA 4301 TGGCTTCTGG ACACATTAGA GATTTTCAGA TTACAGCTTC
AGGACAATAT 4351 GGACAGTGGG CCCCAAAGCT GGCCAGACTT CATTATT-
CCG GATCAATCAA 4401 TGCCTGGAGC ACCAAGGAGC CCTTTTCTTG GAT-
CAAGGTG GATCTGTTGG 4451 CACCAATGAT TATTCACGGC ATCAAGACCC AGGGTG-
CCCG TCAGAAGTTC 4501 TCCAGCCTCT ACATCTCTCA GTTTATCATC ATGTATAGTC
TTGATGGGAA 4551 GAAGTGGCAG ACTTATCGAG GAAATTCCAC TGGAAC-
CTTA ATGGTCTTCT 4601 TTGGCAATGT GGATTCATCT GGGATAAAAC ACAATATTTT
TAACCCTCCA 4651 ATTATTGCTC GATACATCCG TTTGCACCCA ACTCATTATA
GCATTCGCAG 4701 CACTCTTCGC ATGGAGTTGA TGGGCTGTGA TTTAAA-
TAGT TGCAGCATGC 4751 CATTGGGAAT GGAGAGTAAA GCAATATCAG ATGCACA-
GAT TACTGCTTCA
4801 TCCTACTTTA CCAATATGTT TGCCACCTGG TCTCCTTCAA
AAGCTCGACT 4851 TCACCTCCAA GGGAGGAGTA ATGCCTGGAG ACCTCA-
GGTG AATAATCCAA 4901 AAGAGTGGCT GCAAGTGGAC TTCCAGAAGA CAA-
TGAAAGT CACAGGAGTA 4951 ACTACTCAGG GAGTAAAATC TCTGCTTACC AGCATG-
TATG TGAAGGAGTT 5001 CCTCATCTCC AGCAGTCAAG ATGGCCATCA GTGGAC-
TCTC TTTTTTCAGA 5051 ATGGCAAAGT AAAGGTTTTT CAGGGAAATC AAGAC-
TCCTT CACACCTGTG 5101 GTGAACTCTC TAGACCCACC GTTACTGACT CGCTAC-
CTTC GAATTCACCC 5151 CCAGAGTTGG GTGCACCAGA TTGCCCTGAG GATGGA-
GGTT CTGGGCTGCG 5201 AGGCACAGGA CCTCTACGAC AAAACTCACA CATG-
CCCACC GTGCCCAGCT 5251 CCAGAACTCC TGGGCGGACC GTCAGTCTTC CTCTT-
CCCCC CAAAACCCAA 5301 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACA-
TGC GTGGTGGTGG 5351 ACGTGAGCCA CGAAGACCCT GAGGTCAAGT TCAAC-
TGGTA CGTGGACGGC 5401 GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCG CGGGAG-
GAGC AGTACAACAG 5451 CACGTACCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT CCTGCAC-
CAG GACTGGCTGA 5501 ATGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAG-
CCCT CCCAGCCCCC
5551 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AGCCAAAGGG CAG-
CCCCGAG AACCACAGGT 5601 GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGATGAGCT GAC-
CAAGAAC CAGGTCAGCC 5651 TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTATCCCA GCGACA-
TCGC CGTGGAGTGG 5701 GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGAC-
CACGC CTCCCGTGTT 5751 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCT-
CACC GTGGACAAGA 5801 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCG-
TGAT GCATGAGGCT 5851 CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTG-
TCTC CGGGTAAATG Sequência de proteína de pSYN FVIII 312 (FVIII com eliminação do domínio B inteiro exceto 5 resíduos de aminoácidos e XTEN 288 AE inserido após aa 745 – versão B5) (SEQ ID NO:173) 1 ATRRYYLGAV ELSWDYMQSD LGELPVDARF PPRVPKSFPF
NTSVVYKKTL 51 FVEFTDHLFN IAKPRPPWMG LLGPTIQAEV YDTVVITLKN
MASHPVSLHA 101 VGVSYWKASE GAEYDDQTSQ REKEDDKVFP GGSHTY-
VWQV LKENGPMASD 151 PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALLVCR EGSLAKEKTQ
TLHKFILLFA 201 VFDEGKSWHS ETKNSLMQDR DAASARAWPK MHTVNGY-
VNR SLPGLIGCHR 251 KSVYWHVIGM GTTPEVHSIF LEGHTFLVRN HRQASLEISP
ITFLTAQTLL
301 MDLGQFLLFC HISSHQHDGM EAYVKVDSCP EEPQL-
RMKNN EEAEDYDDDL 351 TDSEMDVVRF DDDNSPSFIQ IRSVAKKHPK TWVHYIAAEE
EDWDYAPLVL 401 APDDRSYKSQ YLNNGPQRIG RKYKKVRFMA YTDETFKTRE
AIQHESGILG 451 PLLYGEVGDT LLIIFKNQAS RPYNIYPHGI TDVRPLYSRR
LPKGVKHLKD 501 FPILPGEIFK YKWTVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME
RDLASGLIGP 551 LLICYKESVD QRGNQIMSDK RNVILFSVFD ENRSWYLTEN
IQRFLPNPAG 601 VQLEDPEFQA SNIMHSINGY VFDSLQLSVC LHEVAYWYIL
SIGAQTDFLS 651 VFFSGYTFKH KMVYEDTLTL FPFSGETVFM SMENPGLWIL
GCHNSDFRNR 701 GMTALLKVSS CDKNTGDYYE DSYEDISAYL LSKNNAIEPR
SFSQNGTSES 751 ATPESGPGSE PATSGSETPG TSESATPESG PGSEPATSGS
ETPGTSESAT 801 PESGPGTSTE PSEGSAPGSP AGSPTSTEEG TSESATPESG
PGSEPATSGS 851 ETPGTSESAT PESGPGSPAG SPTSTEEGSP AGSPTSTEEG
TSTEPSEGSA 901 PGTSESATPE SGPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGSE
PATSGSETPG 951 SEPATSGSET PGSPAGSPTS TEEGTSTEPS EGSAPGTSTE
PSEGSAPGSE 1001 PATSGSETPG TSESATPESG PGTSTEPSEG SAPASSEITR
TTLQSDQEEI
1051 DYDDTISVEM KKEDFDIYDE DENQSPRSFQ KKTRHYFIAA
VERLWDYGMS 1101 SSPHVLRNRA QSGSVPQFKK VVFQEFTDGS FTQPLYRGEL
NEHLGLLGPY 1151 IRAEVEDNIM VTFRNQASRP YSFYSSLISY EEDQRQGAEP
RKNFVKPNET 1201 KTYFWKVQHH MAPTKDEFDC KAWAYFSDVD LEKDVHSGLI
GPLLVCHTNT 1251 LNPAHGRQVT VQEFALFFTI FDETKSWYFT ENMERNCRAP
CNIQMEDPTF 1301 KENYRFHAIN GYIMDTLPGL VMAQDQRIRW YLLSMGSNEN
IHSIHFSGHV 1351 FTVRKKEEYK MALYNLYPGV FETVEMLPSK AGIWRVECLI
GEHLHAGMST 1401 LFLVYSNKCQ TPLGMASGHI RDFQITASGQ YGQWAPKLAR
LHYSGSINAW 1451 STKEPFSWIK VDLLAPMIIH GIKTQGARQK FSSLYISQFI
IMYSLDGKKW 1501 QTYRGNSTGT LMVFFGNVDS SGIKHNIFNP PIIARYIRLH
PTHYSIRSTL 1551 RMELMGCDLN SCSMPLGMES KAISDAQITA SSYFTNMFAT
WSPSKARLHL 1601 QGRSNAWRPQ VNNPKEWLQV DFQKTMKVTG VTT-
QGVKSLL TSMYVKEFLI 1651 SSSQDGHQWT LFFQNGKVKV FQGNQDSFTP VVNSLD-
PPLL TRYLRIHPQS 1701 WVHQIALRME VLGCEAQDLY DKTHTCPPCP APELLGGPSV
FLFPPKPKDT 1751 LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY
1801 RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK
GQPREPQVYT 1851 LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN
YKTTPPVLDS 1901 DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYT- QKS LSLSPGK* Sequência de nucleotídeos de pSYN VWF059 (codifica VWF D’D3- Fc com região do sítio ácido de trombina 2 (a2) no ligante) (SEQ ID NO: 196) 1 ATGATTCCTG CCAGATTTGC CGGGGTGCTG CTTG-
CTCTGG CCCTCATTTT 51 GCCAGGGACC CTTTGTGCAG AAGGAACTCG CGGCAGG-
TCA TCCACGGCCC 101 GATGCAGCCT TTTCGGAAGT GACTTCGTCA ACAC-
CTTTGA TGGGAGCATG 151 TACAGCTTTG CGGGATACTG CAGTTACCTC CTGGCA-
GGGG GCTGCCAGAA 201 ACGCTCCTTC TCGATTATTG GGGACTTCCA GAATGG-
CAAG AGAGTGAGCC 251 TCTCCGTGTA TCTTGGGGAA TTTTTTGACA TCCATTTGTT
TGTCAATGGT 301 ACCGTGACAC AGGGGGACCA AAGAGTCTCC ATGCCC-
TATG CCTCCAAAGG 351 GCTGTATCTA GAAACTGAGG CTGGGTACTA CAAGCTG-
TCC GGTGAGGCCT 401 ATGGCTTTGT GGCCAGGATC GATGGCAGCG GCAAC-
TTTCA AGTCCTGCTG 451 TCAGACAGAT ACTTCAACAA GACCTGCGGG CTGTG-
TGGCA ACTTTAACAT
501 CTTTGCTGAA GATGACTTTA TGACCCAAGA AGGGAC-
CTTG ACCTCGGACC 551 CTTATGACTT TGCCAACTCA TGGGCTCTGA GCAGTG-
GAGA ACAGTGGTGT 601 GAACGGGCAT CTCCTCCCAG CAGCTCATGC AACA-
TCTCCT CTGGGGAAAT 651 GCAGAAGGGC CTGTGGGAGC AGTGCCAGCT
TCTGAAGAGC ACCTCGGTGT 701 TTGCCCGCTG CCACCCTCTG GTGGACCCCG AG-
CCTTTTGT GGCCCTGTGT 751 GAGAAGACTT TGTGTGAGTG TGCTGGGGGG CTGGAG-
TGCG CCTGCCCTGC 801 CCTCCTGGAG TACGCCCGGA CCTGTGCCCA GGAGGGA-
ATG GTGCTGTACG 851 GCTGGACCGA CCACAGCGCG TGCAGCCCAG TGTG-
CCCTGC TGGTATGGAG 901 TATAGGCAGT GTGTGTCCCC TTGCGCCAGG ACCTG-
CCAGA GCCTGCACAT 951 CAATGAAATG TGTCAGGAGC GATGCGTGGA TGGCTG-
CAGC TGCCCTGAGG 1001 GACAGCTCCT GGATGAAGGC CTCTGCGTGG AGAGCAC-
CGA GTGTCCCTGC 1051 GTGCATTCCG GAAAGCGCTA CCCTCCCGGC AC-
CTCCCTCT CTCGAGACTG 1101 CAACACCTGC ATTTGCCGAA ACAGCCAGTG GATCTG-
CAGC AATGAAGAAT 1151 GTCCAGGGGA GTGCCTTGTC ACTGGTCAAT CCCACTT-
CAA GAGCTTTGAC 1201 AACAGATACT TCACCTTCAG TGGGATCTGC CAGTAC-
CTGC TGGCCCGGGA
1251 TTGCCAGGAC CACTCCTTCT CCATTGTCAT TGAGAC-
TGTC CAGTGTGCTG 1301 ATGACCGCGA CGCTGTGTGC ACCCGCTCCG TCACCG-
TCCG GCTGCCTGGC 1351 CTGCACAACA GCCTTGTGAA ACTGAAGCAT GGGGCAG-
GAG TTGCCATGGA 1401 TGGCCAGGAC ATCCAGCTCC CCCTCCTGAA AGGTGAC-
CTC CGCATCCAGC 1451 ATACAGTGAC GGCCTCCGTG CGCCTCAGCT ACGGGGA-
GGA CCTGCAGATG 1501 GACTGGGATG GCCGCGGGAG GCTGCTGGTG AAGCTG-
TCCC CCGTCTATGC 1551 CGGGAAGACC TGCGGCCTGT GTGGGAATTA CAATGG-
CAAC CAGGGCGACG 1601 ACTTCCTTAC CCCCTCTGGG CTGGCGGAGC CCCGGG-
TGGA GGACTTCGGG 1651 AACGCCTGGA AGCTGCACGG GGACTGCCAG GACCTG-
CAGA AGCAGCACAG 1701 CGATCCCTGC GCCCTCAACC CGCGCATGAC CAGGTT-
CTCC GAGGAGGCGT 1751 GCGCGGTCCT GACGTCCCCC ACATTCGAGG CCTG-
CCATCG TGCCGTCAGC 1801 CCGCTGCCCT ACCTGCGGAA CTGCCGCTAC GACGTG-
TGCT CCTGCTCGGA 1851 CGGCCGCGAG TGCCTGTGCG GCGCCCTGGC CAGCTA-
TGCC GCGGCCTGCG 1901 CGGGGAGAGG CGTGCGCGTC GCGTGGCGCG AGCCA-
GGCCG CTGTGAGCTG 1951 AACTGCCCGA AAGGCCAGGT GTACCTGCAG TGCGGGA-
CCC CCTGCAACCT
2001 GACCTGCCGC TCTCTCTCTT ACCCGGATGA GGAATG-
CAAT GAGGCCTGCC 2051 TGGAGGGCTG CTTCTGCCCC CCAGGGCTCT ACATGGA-
TGA GAGGGGGGAC 2101 TGCGTGCCCA AGGCCCAGTG CCCCTGTTAC TATGA-
CGGTG AGATCTTCCA 2151 GCCAGAAGAC ATCTTCTCAG ACCATCACAC CATGTGC-
TAC TGTGAGGATG 2201 GCTTCATGCA CTGTACCATG AGTGGAGTCC CCGGAAG-
CTT GCTGCCTGAC 2251 GCTGTCCTCA GCAGTCCCCT GTCTCATCGC AG-
CAAAAGGA GCCTATCCTG 2301 TCGGCCCCCC ATGGTCAAGC TGGTGTGTCC CGCTGA-
CAAC CTGCGGGCTG 2351 AAGGGCTCGA GTGTACCAAA ACGTGCCAGA ACTATGA-
CCT GGAGTGCATG 2401 AGCATGGGCT GTGTCTCTGG CTGCCTCTGC
CCCCCGGGCA TGGTCCGGCA 2451 TGAGAACAGA TGTGTGGCCC TGGAAAGGTG TCCCTG-
CTTC CATCAGGGCA 2501 AGGAGTATGC CCCTGGAGAA ACAGTGAAGA TTGGCTG-
CAA CACTTGTGTC 2551 TGTCGGGACC GGAAGTGGAA CTGCACAGAC CATGTG-
TGTG ATGCCACGTG 2601 CTCCACGATC GGCATGGCCC ACTACCTCAC CTTCGA-
CGGG CTCAAATACC 2651 TGTTCCCCGG GGAGTGCCAG TACGTTCTGG TGCAGGA-
TTA CTGCGGCAGT 2701 AACCCTGGGA CCTTTCGGAT CCTAGTGGGG AATAAGG-
GAT GCAGCCACCC
2751 CTCAGTGAAA TGCAAGAAAC GGGTCACCAT CCTGGTG-
GAG GGAGGAGAGA 2801 TTGAGCTGTT TGACGGGGAG GTGAATGTGA AGAGG-
CCCAT GAAGGATGAG 2851 ACTCACTTTG AGGTGGTGGA GTCTGGCCGG TACAT-
CATTC TGCTGCTGGG 2901 CAAAGCCCTC TCCGTGGTCT GGGACCGCCA CCTGAG-
CATC TCCGTGGTCC 2951 TGAAGCAGAC ATACCAGGAG AAAGTGTGTG GCCTGTG-
TGG GAATTTTGAT 3001 GGCATCCAGA ACAATGACCT CACCAGCAGC AAC-
CTCCAAG TGGAGGAAGA 3051 CCCTGTGGAC TTTGGGAACT CCTGGAAAGT GAGCTCG-
CAG TGTGCTGACA 3101 CCAGAAAAGT GCCTCTGGAC TCATCCCCTG CCACCTG-
CCA TAACAACATC 3151 ATGAAGCAGA CGATGGTGGA TTCCTCCTGT AGAA-
TCCTTA CCAGTGACGT 3201 CTTCCAGGAC TGCAACAAGC TGGTGGACCC CGAGCCA-
TAT CTGGATGTCT 3251 GCATTTACGA CACCTGCTCC TGTGAGTCCA TTGGGGA-
CTG CGCCGCATTC 3301 TGCGACACCA TTGCTGCCTA TGCCCACGTG TGTG-
CCCAGC ATGGCAAGGT 3351 GGTGACCTGG AGGACGGCCA CATTGTGCCC CCAGAG-
CTGC GAGGAGAGGA 3401 ATCTCCGGGA GAACGGGTAT GAGGCTGAGT GGCGCTA-
TAA CAGCTGTGCA 3451 CCTGCCTGTC AAGTCACGTG TCAGCACCCT GAGCCAC-
TGG CCTGCCCTGT
3501 GCAGTGTGTG GAGGGCTGCC ATGCCCACTG CCCTCCA-
GGG AAAATCCTGG 3551 ATGAGCTTTT GCAGACCTGC GTTGACCCTG AAGACTG-
TCC AGTGTGTGAG 3601 GTGGCTGGCC GGCGTTTTGC CTCAGGAAAG AAAGT-
CACCT TGAATCCCAG 3651 TGACCCTGAG CACTGCCAGA TTTGCCACTG TGATG-
TTGTC AACCTCACCT 3701 GTGAAGCCTG CCAGGAGCCG ATATCGGGCG CGCCAA-
CATC AGAGAGCGCC 3751 ACCCCTGAAA GTGGTCCCGG GAGCGAGCCA GCCACA-
TCTG GGTCGGAAAC 3801 GCCAGGCACA AGTGAGTCTG CAACTCCCGA GTCCGGA-
CCT GGCTCCGAGC 3851 CTGCCACTAG CGGCTCCGAG ACTCCGGGAA CTT-
CCGAGAG CGCTACACCA 3901 GAAAGCGGAC CCGGAACCAG TACCGAACCT AG-
CGAGGGCT CTGCTCCGGG 3951 CAGCCCAGCC GGCTCTCCTA CATCCACGGA GGAGGG-
CACT TCCGAATCCG 4001 CCACCCCGGA GTCAGGGCCA GGATCTGAAC CCGCTAC-
CTC AGGCAGTGAG 4051 ACGCCAGGAA CGAGCGAGTC CGCTACACCG GAGAG-
TGGGC CAGGGAGCCC 4101 TGCTGGATCT CCTACGTCCA CTGAGGAAGG GTCACCA-
GCG GGCTCGCCCA 4151 CCAGCACTGA AGAAGGTGCC TCGATATCTG ACAAGAA-
CAC TGGTGATTAT 4201 TACGAGGACA GTTATGAAGA TATTTCAGCA TACTTG-
CTGA GTAAAAACAA
4251 TGCCATTGAA CCAAGAAGCT TCTCTGACAA AACTCA-
CACA TGCCCACCGT 4301 GCCCAGCTCC AGAACTCCTG GGCGGACCGT CAGTCTT-
CCT CTTCCCCCCA 4351 AAACCCAAGG ACACCCTCAT GATCTCCCGG AC-
CCCTGAGG TCACATGCGT 4401 GGTGGTGGAC GTGAGCCACG AAGACCCTGA GGTCAAG-
TTC AACTGGTACG 4451 TGGACGGCGT GGAGGTGCAT AATGCCAAGA CAAAG-
CCGCG GGAGGAGCAG 4501 TACAACAGCA CGTACCGTGT GGTCAGCGTC CTCACCG-
TCC TGCACCAGGA 4551 CTGGCTGAAT GGCAAGGAGT ACAAGTGCAA
GGTCTCCAAC AAAGCCCTCC 4601 CAGCCCCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAG
CCAAAGGGCA GCCCCGAGAA 4651 CCACAGGTGT ACACCCTGCC CCCATCCCGG GATGAG-
CTGA CCAAGAACCA 4701 GGTCAGCCTG ACCTGCCTGG TCAAAGGCTT CTA-
TCCCAGC GACATCGCCG 4751 TGGAGTGGGA GAGCAATGGG CAGCCGGAGA ACAACTA-
CAA GACCACGCCT 4801 CCCGTGTTGG ACTCCGACGG CTCCTTCTTC CTCTACA-
GCA AGCTCACCGT 4851 GGACAAGAGC AGGTGGCAGC AGGGGAACGT CTTCT-
CATGC TCCGTGATGC 4901 ATGAGGCTCT GCACAACCAC TACACGCAGA AGAG-
CCTCTC CCTGTCTCCG 4951 GGTAAATGA Sequência de proteína de pSYN VWF059 (VWF D’D3-Fc com região a2 do sítio de trombina de FVIII no ligante) – área sublinhada em negrito mostra região a2 (SEQ ID NO: 197) 1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS
DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE
FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI
DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS
WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL
VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
TDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLL-
DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA-
VLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACA-
GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
CFCP PGLYMDERGD
701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM
SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK
TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF
HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ
YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE
KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD
SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS
CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY
EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC
VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP
ISGAPTSESA 1251 TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP GSEPATSGSE
TPGTSESATP 1301 ESGPGTSTEP SEGSAPGSPA GSPTSTEEGT SESATPESGP
GSEPATSGSE 1351 TPGTSESATP ESGPGSPAGS PTSTEEGSPA GSPTSTEEGA
SISDKNTGDY 1401 YEDSYEDISA YLLSKNNAIE PRSFSDKTHT CPPCPAPELL
GGPSVFLFPP
1451 KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH
NAKTKPREEQ 1501 YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT
ISKAKGQPRE 1551 PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG
QPENNYKTTP 1601 PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEA-
LHNH YTQKSLSLSP 1651 GK* Sequência de nucleotídeos de pSYN VWF062 (codifica VWF D’D3- Fc sem sítio de trombina no ligante) (SEQ ID NO: 198) 1 ATGATTCCTG CCAGATTTGC CGGGGTGCTG CTTG-
CTCTGG CCCTCATTTT 51 GCCAGGGACC CTTTGTGCAG AAGGAACTCG CGGCAGG-
TCA TCCACGGCCC 101 GATGCAGCCT TTTCGGAAGT GACTTCGTCA ACAC-
CTTTGA TGGGAGCATG 151 TACAGCTTTG CGGGATACTG CAGTTACCTC CTGGCA-
GGGG GCTGCCAGAA 201 ACGCTCCTTC TCGATTATTG GGGACTTCCA GAATGG-
CAAG AGAGTGAGCC 251 TCTCCGTGTA TCTTGGGGAA TTTTTTGACA TCCATTTGTT
TGTCAATGGT 301 ACCGTGACAC AGGGGGACCA AAGAGTCTCC ATGCCC-
TATG CCTCCAAAGG 351 GCTGTATCTA GAAACTGAGG CTGGGTACTA CAAGCTG-
TCC GGTGAGGCCT 401 ATGGCTTTGT GGCCAGGATC GATGGCAGCG GCAAC-
TTTCA AGTCCTGCTG
451 TCAGACAGAT ACTTCAACAA GACCTGCGGG CTGTG-
TGGCA ACTTTAACAT 501 CTTTGCTGAA GATGACTTTA TGACCCAAGA AGGGAC-
CTTG ACCTCGGACC 551 CTTATGACTT TGCCAACTCA TGGGCTCTGA GCAGTG-
GAGA ACAGTGGTGT 601 GAACGGGCAT CTCCTCCCAG CAGCTCATGC AACA-
TCTCCT CTGGGGAAAT 651 GCAGAAGGGC CTGTGGGAGC AGTGCCAGCT
TCTGAAGAGC ACCTCGGTGT 701 TTGCCCGCTG CCACCCTCTG GTGGACCCCG AG-
CCTTTTGT GGCCCTGTGT 751 GAGAAGACTT TGTGTGAGTG TGCTGGGGGG CTGGAG-
TGCG CCTGCCCTGC 801 CCTCCTGGAG TACGCCCGGA CCTGTGCCCA GGAGGGA-
ATG GTGCTGTACG 851 GCTGGACCGA CCACAGCGCG TGCAGCCCAG TGTG-
CCCTGC TGGTATGGAG 901 TATAGGCAGT GTGTGTCCCC TTGCGCCAGG ACCTG-
CCAGA GCCTGCACAT 951 CAATGAAATG TGTCAGGAGC GATGCGTGGA TGGCTG-
CAGC TGCCCTGAGG 1001 GACAGCTCCT GGATGAAGGC CTCTGCGTGG AGAGCAC-
CGA GTGTCCCTGC 1051 GTGCATTCCG GAAAGCGCTA CCCTCCCGGC AC-
CTCCCTCT CTCGAGACTG 1101 CAACACCTGC ATTTGCCGAA ACAGCCAGTG GATCTG-
CAGC AATGAAGAAT 1151 GTCCAGGGGA GTGCCTTGTC ACTGGTCAAT CCCACTT-
CAA GAGCTTTGAC
1201 AACAGATACT TCACCTTCAG TGGGATCTGC CAGTAC-
CTGC TGGCCCGGGA 1251 TTGCCAGGAC CACTCCTTCT CCATTGTCAT TGAGAC-
TGTC CAGTGTGCTG 1301 ATGACCGCGA CGCTGTGTGC ACCCGCTCCG TCACCG-
TCCG GCTGCCTGGC 1351 CTGCACAACA GCCTTGTGAA ACTGAAGCAT GGGGCAG-
GAG TTGCCATGGA 1401 TGGCCAGGAC ATCCAGCTCC CCCTCCTGAA AGGTGAC-
CTC CGCATCCAGC 1451 ATACAGTGAC GGCCTCCGTG CGCCTCAGCT ACGGGGA-
GGA CCTGCAGATG 1501 GACTGGGATG GCCGCGGGAG GCTGCTGGTG AAGCTG-
TCCC CCGTCTATGC 1551 CGGGAAGACC TGCGGCCTGT GTGGGAATTA CAATGG-
CAAC CAGGGCGACG 1601 ACTTCCTTAC CCCCTCTGGG CTGGCGGAGC CCCGGG-
TGGA GGACTTCGGG 1651 AACGCCTGGA AGCTGCACGG GGACTGCCAG GACCTG-
CAGA AGCAGCACAG 1701 CGATCCCTGC GCCCTCAACC CGCGCATGAC CAGGTT-
CTCC GAGGAGGCGT 1751 GCGCGGTCCT GACGTCCCCC ACATTCGAGG CCTG-
CCATCG TGCCGTCAGC 1801 CCGCTGCCCT ACCTGCGGAA CTGCCGCTAC GACGTG-
TGCT CCTGCTCGGA 1851 CGGCCGCGAG TGCCTGTGCG GCGCCCTGGC CAGCTA-
TGCC GCGGCCTGCG 1901 CGGGGAGAGG CGTGCGCGTC GCGTGGCGCG AGCCA-
GGCCG CTGTGAGCTG
1951 AACTGCCCGA AAGGCCAGGT GTACCTGCAG TGCGGGA-
CCC CCTGCAACCT 2001 GACCTGCCGC TCTCTCTCTT ACCCGGATGA GGAATG-
CAAT GAGGCCTGCC 2051 TGGAGGGCTG CTTCTGCCCC CCAGGGCTCT ACATGGA-
TGA GAGGGGGGAC 2101 TGCGTGCCCA AGGCCCAGTG CCCCTGTTAC TATGA-
CGGTG AGATCTTCCA 2151 GCCAGAAGAC ATCTTCTCAG ACCATCACAC CATGTGC-
TAC TGTGAGGATG 2201 GCTTCATGCA CTGTACCATG AGTGGAGTCC CCGGAAG-
CTT GCTGCCTGAC 2251 GCTGTCCTCA GCAGTCCCCT GTCTCATCGC AG-
CAAAAGGA GCCTATCCTG 2301 TCGGCCCCCC ATGGTCAAGC TGGTGTGTCC CGCTGA-
CAAC CTGCGGGCTG 2351 AAGGGCTCGA GTGTACCAAA ACGTGCCAGA ACTATGA-
CCT GGAGTGCATG 2401 AGCATGGGCT GTGTCTCTGG CTGCCTCTGC
CCCCCGGGCA TGGTCCGGCA 2451 TGAGAACAGA TGTGTGGCCC TGGAAAGGTG TCCCTG-
CTTC CATCAGGGCA 2501 AGGAGTATGC CCCTGGAGAA ACAGTGAAGA TTGGCTG-
CAA CACTTGTGTC 2551 TGTCGGGACC GGAAGTGGAA CTGCACAGAC CATGTG-
TGTG ATGCCACGTG 2601 CTCCACGATC GGCATGGCCC ACTACCTCAC CTTCGA-
CGGG CTCAAATACC 2651 TGTTCCCCGG GGAGTGCCAG TACGTTCTGG TGCAGGA-
TTA CTGCGGCAGT
2701 AACCCTGGGA CCTTTCGGAT CCTAGTGGGG AATAAGG-
GAT GCAGCCACCC 2751 CTCAGTGAAA TGCAAGAAAC GGGTCACCAT CCTGGTG-
GAG GGAGGAGAGA 2801 TTGAGCTGTT TGACGGGGAG GTGAATGTGA AGAGG-
CCCAT GAAGGATGAG 2851 ACTCACTTTG AGGTGGTGGA GTCTGGCCGG TACAT-
CATTC TGCTGCTGGG 2901 CAAAGCCCTC TCCGTGGTCT GGGACCGCCA CCTGAG-
CATC TCCGTGGTCC 2951 TGAAGCAGAC ATACCAGGAG AAAGTGTGTG GCCTGTG-
TGG GAATTTTGAT 3001 GGCATCCAGA ACAATGACCT CACCAGCAGC AAC-
CTCCAAG TGGAGGAAGA 3051 CCCTGTGGAC TTTGGGAACT CCTGGAAAGT GAGCTCG-
CAG TGTGCTGACA 3101 CCAGAAAAGT GCCTCTGGAC TCATCCCCTG CCACCTG-
CCA TAACAACATC 3151 ATGAAGCAGA CGATGGTGGA TTCCTCCTGT AGAA-
TCCTTA CCAGTGACGT 3201 CTTCCAGGAC TGCAACAAGC TGGTGGACCC CGAGCCA-
TAT CTGGATGTCT 3251 GCATTTACGA CACCTGCTCC TGTGAGTCCA TTGGGGA-
CTG CGCCGCATTC 3301 TGCGACACCA TTGCTGCCTA TGCCCACGTG TGTG-
CCCAGC ATGGCAAGGT 3351 GGTGACCTGG AGGACGGCCA CATTGTGCCC CCAGAG-
CTGC GAGGAGAGGA 3401 ATCTCCGGGA GAACGGGTAT GAGGCTGAGT GGCGCTA-
TAA CAGCTGTGCA
3451 CCTGCCTGTC AAGTCACGTG TCAGCACCCT GAGCCAC-
TGG CCTGCCCTGT 3501 GCAGTGTGTG GAGGGCTGCC ATGCCCACTG CCCTCCA-
GGG AAAATCCTGG 3551 ATGAGCTTTT GCAGACCTGC GTTGACCCTG AAGACTG-
TCC AGTGTGTGAG 3601 GTGGCTGGCC GGCGTTTTGC CTCAGGAAAG AAAGT-
CACCT TGAATCCCAG 3651 TGACCCTGAG CACTGCCAGA TTTGCCACTG TGATG-
TTGTC AACCTCACCT 3701 GTGAAGCCTG CCAGGAGCCG ATATCGGGCG CGCCAA-
CATC AGAGAGCGCC 3751 ACCCCTGAAA GTGGTCCCGG GAGCGAGCCA GCCACA-
TCTG GGTCGGAAAC 3801 GCCAGGCACA AGTGAGTCTG CAACTCCCGA GTCCGGA-
CCT GGCTCCGAGC 3851 CTGCCACTAG CGGCTCCGAG ACTCCGGGAA CTT-
CCGAGAG CGCTACACCA 3901 GAAAGCGGAC CCGGAACCAG TACCGAACCT AG-
CGAGGGCT CTGCTCCGGG 3951 CAGCCCAGCC GGCTCTCCTA CATCCACGGA GGAGGG-
CACT TCCGAATCCG 4001 CCACCCCGGA GTCAGGGCCA GGATCTGAAC CCGCTAC-
CTC AGGCAGTGAG 4051 ACGCCAGGAA CGAGCGAGTC CGCTACACCG GAGAG-
TGGGC CAGGGAGCCC 4101 TGCTGGATCT CCTACGTCCA CTGAGGAAGG GTCACCA-
GCG GGCTCGCCCA 4151 CCAGCACTGA AGAAGGTGCC TCGAGCGACA AAACTCA-
CAC ATGCCCACCG
4201 TGCCCAGCTC CAGAACTCCT GGGCGGACCG TCAG-
TCTTCC TCTTCCCCCC 4251 AAAACCCAAG GACACCCTCA TGATCTCCCG GAC-
CCCTGAG GTCACATGCG 4301 TGGTGGTGGA CGTGAGCCAC GAAGACCCTG AGGT-
CAAGTT CAACTGGTAC 4351 GTGGACGGCG TGGAGGTGCA TAATGCCAAG ACAAAG-
CCGC GGGAGGAGCA 4401 GTACAACAGC ACGTACCGTG TGGTCAGCGT CCTCAC-
CGTC CTGCACCAGG 4451 ACTGGCTGAA TGGCAAGGAG TACAAGTGCA AGG-
TCTCCAA CAAAGCCCTC 4501 CCAGCCCCCA TCGAGAAAAC CATCTCCAAA
GCCAAAGGGC AGCCCCGAGA 4551 ACCACAGGTG TACACCCTGC CCCCATCCCG GGATGAG-
CTG ACCAAGAACC 4601 AGGTCAGCCT GACCTGCCTG GTCAAAGGCT TCTA-
TCCCAG CGACATCGCC 4651 GTGGAGTGGG AGAGCAATGG GCAGCCGGAG AACAAC-
TACA AGACCACGCC 4701 TCCCGTGTTG GACTCCGACG GCTCCTTCTT CCTCTA-
CAGC AAGCTCACCG 4751 TGGACAAGAG CAGGTGGCAG CAGGGGAACG TCTTCT-
CATG CTCCGTGATG 4801 CATGAGGCTC TGCACAACCA CTACACGCAG AAGAG-
CCTCT CCCTGTCTCC 4851 GGGTAAATGA Sequência de proteína pSYN VWF062 (VWF D’D3-Fc sem sítio de trombina no ligante) (SEQ ID NO: 199) 1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS
DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE
FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI
DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS
WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL
VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
TDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLL-
DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA-
VLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACA-
GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
CFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM
SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK
TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF
HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ
YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE
KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD
SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS
CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY
EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC
VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP
ISGAPTSESA 1251 TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP GSEPATSGSE
TPGTSESATP 1301 ESGPGTSTEP SEGSAPGSPA GSPTSTEEGT SESATPESGP
GSEPATSGSE 1351 TPGTSESATP ESGPGSPAGS PTSTEEGSPA GSPTSTEEGA
SSDKTHTCPP 1401 CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH
EDPEVKFNWY 1451 VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV
LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL 1501 PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL
VKGFYPSDIA 1551 VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKS-
RWQ QGNVFSCSVM 1601 HEALHNHYTQ KSLSLSPGK* Sequência de nucleotídeos de pSYN VWF073 - (codificag VWFD1D2D’D3- 144 AE XTEN- FVIII truncado no sítio de trombina a2-Fc) (SEQ ID NO: 174) 1 ATGATTCCTG CCAGATTTGC CGGGGTGCTG CTTG-
CTCTGG CCCTCATTTT 51 GCCAGGGACC CTTTGTGCAG AAGGAACTCG CGGCAGG-
TCA TCCACGGCCC 101 GATGCAGCCT TTTCGGAAGT GACTTCGTCA ACAC-
CTTTGA TGGGAGCATG 151 TACAGCTTTG CGGGATACTG CAGTTACCTC CTGGCA-
GGGG GCTGCCAGAA 201 ACGCTCCTTC TCGATTATTG GGGACTTCCA GAATGG-
CAAG AGAGTGAGCC 251 TCTCCGTGTA TCTTGGGGAA TTTTTTGACA TCCATTTGTT
TGTCAATGGT 301 ACCGTGACAC AGGGGGACCA AAGAGTCTCC ATGCCC-
TATG CCTCCAAAGG 351 GCTGTATCTA GAAACTGAGG CTGGGTACTA CAAGCTG-
TCC GGTGAGGCCT 401 ATGGCTTTGT GGCCAGGATC GATGGCAGCG GCAAC-
TTTCA AGTCCTGCTG 451 TCAGACAGAT ACTTCAACAA GACCTGCGGG CTGTG-
TGGCA ACTTTAACAT 501 CTTTGCTGAA GATGACTTTA TGACCCAAGA AGGGAC-
CTTG ACCTCGGACC
551 CTTATGACTT TGCCAACTCA TGGGCTCTGA GCAGTG-
GAGA ACAGTGGTGT 601 GAACGGGCAT CTCCTCCCAG CAGCTCATGC AACA-
TCTCCT CTGGGGAAAT 651 GCAGAAGGGC CTGTGGGAGC AGTGCCAGCT
TCTGAAGAGC ACCTCGGTGT 701 TTGCCCGCTG CCACCCTCTG GTGGACCCCG AG-
CCTTTTGT GGCCCTGTGT 751 GAGAAGACTT TGTGTGAGTG TGCTGGGGGG CTGGAG-
TGCG CCTGCCCTGC 801 CCTCCTGGAG TACGCCCGGA CCTGTGCCCA GGAGGGA-
ATG GTGCTGTACG 851 GCTGGACCGA CCACAGCGCG TGCAGCCCAG TGTG-
CCCTGC TGGTATGGAG 901 TATAGGCAGT GTGTGTCCCC TTGCGCCAGG ACCTG-
CCAGA GCCTGCACAT 951 CAATGAAATG TGTCAGGAGC GATGCGTGGA TGGCTG-
CAGC TGCCCTGAGG 1001 GACAGCTCCT GGATGAAGGC CTCTGCGTGG AGAGCAC-
CGA GTGTCCCTGC 1051 GTGCATTCCG GAAAGCGCTA CCCTCCCGGC AC-
CTCCCTCT CTCGAGACTG 1101 CAACACCTGC ATTTGCCGAA ACAGCCAGTG GATCTG-
CAGC AATGAAGAAT 1151 GTCCAGGGGA GTGCCTTGTC ACTGGTCAAT CCCACTT-
CAA GAGCTTTGAC 1201 AACAGATACT TCACCTTCAG TGGGATCTGC CAGTAC-
CTGC TGGCCCGGGA 1251 TTGCCAGGAC CACTCCTTCT CCATTGTCAT TGAGAC-
TGTC CAGTGTGCTG
1301 ATGACCGCGA CGCTGTGTGC ACCCGCTCCG TCACCG-
TCCG GCTGCCTGGC 1351 CTGCACAACA GCCTTGTGAA ACTGAAGCAT GGGGCAG-
GAG TTGCCATGGA 1401 TGGCCAGGAC ATCCAGCTCC CCCTCCTGAA AGGTGAC-
CTC CGCATCCAGC 1451 ATACAGTGAC GGCCTCCGTG CGCCTCAGCT ACGGGGA-
GGA CCTGCAGATG 1501 GACTGGGATG GCCGCGGGAG GCTGCTGGTG AAGCTG-
TCCC CCGTCTATGC 1551 CGGGAAGACC TGCGGCCTGT GTGGGAATTA CAATGG-
CAAC CAGGGCGACG 1601 ACTTCCTTAC CCCCTCTGGG CTGGCGGAGC CCCGGG-
TGGA GGACTTCGGG 1651 AACGCCTGGA AGCTGCACGG GGACTGCCAG GACCTG-
CAGA AGCAGCACAG 1701 CGATCCCTGC GCCCTCAACC CGCGCATGAC CAGGTT-
CTCC GAGGAGGCGT 1751 GCGCGGTCCT GACGTCCCCC ACATTCGAGG CCTG-
CCATCG TGCCGTCAGC 1801 CCGCTGCCCT ACCTGCGGAA CTGCCGCTAC GACGTG-
TGCT CCTGCTCGGA 1851 CGGCCGCGAG TGCCTGTGCG GCGCCCTGGC CAGCTA-
TGCC GCGGCCTGCG 1901 CGGGGAGAGG CGTGCGCGTC GCGTGGCGCG AGCCA-
GGCCG CTGTGAGCTG 1951 AACTGCCCGA AAGGCCAGGT GTACCTGCAG TGCGGGA-
CCC CCTGCAACCT 2001 GACCTGCCGC TCTCTCTCTT ACCCGGATGA GGAATG-
CAAT GAGGCCTGCC
2051 TGGAGGGCTG CTTCTGCCCC CCAGGGCTCT ACATGGA-
TGA GAGGGGGGAC 2101 TGCGTGCCCA AGGCCCAGTG CCCCTGTTAC TATGA-
CGGTG AGATCTTCCA 2151 GCCAGAAGAC ATCTTCTCAG ACCATCACAC CATGTGC-
TAC TGTGAGGATG 2201 GCTTCATGCA CTGTACCATG AGTGGAGTCC CCGGAAG-
CTT GCTGCCTGAC 2251 GCTGTCCTCA GCAGTCCCCT GTCTCATCGC AG-
CAAAAGGA GCCTATCCTG 2301 TCGGCCCCCC ATGGTCAAGC TGGTGTGTCC CGCTGA-
CAAC CTGCGGGCTG 2351 AAGGGCTCGA GTGTACCAAA ACGTGCCAGA ACTATGA-
CCT GGAGTGCATG 2401 AGCATGGGCT GTGTCTCTGG CTGCCTCTGC
CCCCCGGGCA TGGTCCGGCA 2451 TGAGAACAGA TGTGTGGCCC TGGAAAGGTG TCCCTG-
CTTC CATCAGGGCA 2501 AGGAGTATGC CCCTGGAGAA ACAGTGAAGA TTGGCTG-
CAA CACTTGTGTC 2551 TGTCGGGACC GGAAGTGGAA CTGCACAGAC CATGTG-
TGTG ATGCCACGTG 2601 CTCCACGATC GGCATGGCCC ACTACCTCAC CTTCGA-
CGGG CTCAAATACC 2651 TGTTCCCCGG GGAGTGCCAG TACGTTCTGG TGCAGGA-
TTA CTGCGGCAGT 2701 AACCCTGGGA CCTTTCGGAT CCTAGTGGGG AATAAGG-
GAT GCAGCCACCC 2751 CTCAGTGAAA TGCAAGAAAC GGGTCACCAT CCTGGTG-
GAG GGAGGAGAGA
2801 TTGAGCTGTT TGACGGGGAG GTGAATGTGA AGAGG-
CCCAT GAAGGATGAG 2851 ACTCACTTTG AGGTGGTGGA GTCTGGCCGG TACAT-
CATTC TGCTGCTGGG 2901 CAAAGCCCTC TCCGTGGTCT GGGACCGCCA CCTGAG-
CATC TCCGTGGTCC 2951 TGAAGCAGAC ATACCAGGAG AAAGTGTGTG GCCTGTG-
TGG GAATTTTGAT 3001 GGCATCCAGA ACAATGACCT CACCAGCAGC AAC-
CTCCAAG TGGAGGAAGA 3051 CCCTGTGGAC TTTGGGAACT CCTGGAAAGT GAGCTCG-
CAG TGTGCTGACA 3101 CCAGAAAAGT GCCTCTGGAC TCATCCCCTG CCACCTG-
CCA TAACAACATC 3151 ATGAAGCAGA CGATGGTGGA TTCCTCCTGT AGAA-
TCCTTA CCAGTGACGT 3201 CTTCCAGGAC TGCAACAAGC TGGTGGACCC CGAGCCA-
TAT CTGGATGTCT 3251 GCATTTACGA CACCTGCTCC TGTGAGTCCA TTGGGGA-
CTG CGCCGCATTC 3301 TGCGACACCA TTGCTGCCTA TGCCCACGTG TGTG-
CCCAGC ATGGCAAGGT 3351 GGTGACCTGG AGGACGGCCA CATTGTGCCC CCAGAG-
CTGC GAGGAGAGGA 3401 ATCTCCGGGA GAACGGGTAT GAGGCTGAGT GGCGCTA-
TAA CAGCTGTGCA 3451 CCTGCCTGTC AAGTCACGTG TCAGCACCCT GAGCCAC-
TGG CCTGCCCTGT 3501 GCAGTGTGTG GAGGGCTGCC ATGCCCACTG CCCTCCA-
GGG AAAATCCTGG
3551 ATGAGCTTTT GCAGACCTGC GTTGACCCTG AAGACTG-
TCC AGTGTGTGAG 3601 GTGGCTGGCC GGCGTTTTGC CTCAGGAAAG AAAGT-
CACCT TGAATCCCAG 3651 TGACCCTGAG CACTGCCAGA TTTGCCACTG TGATG-
TTGTC AACCTCACCT 3701 GTGAAGCCTG CCAGGAGCCG GGCGCGCCAA CATCA-
GAGAG CGCCACCCCT 3751 GAAAGTGGTC CCGGGAGCGA GCCAGCCACA TCTGGG-
TCGG AAACGCCAGG 3801 CACAAGTGAG TCTGCAACTC CCGAGTCCGG ACCTGG-
CTCC GAGCCTGCCA 3851 CTAGCGGCTC CGAGACTCCG GGAACTTCCG AGAGCGC-
TAC ACCAGAAAGC 3901 GGACCCGGAA CCAGTACCGA ACCTAGCGAG GGCTCTG-
CTC CGGGCAGCCC 3951 AGCCGGCTCT CCTACATCCA CGGAGGAGGG CACTT-
CCGAA TCCGCCACCC 4001 CGGAGTCAGG GCCAGGATCT GAACCCGCTA CCTCAGG-
CAG TGAGACGCCA 4051 GGAACGAGCG AGTCCGCTAC ACCGGAGAGT GGGCCA-
GGGA GCCCTGCTGG 4101 ATCTCCTACG TCCACTGAGG AAGGGTCACC AGCGGG-
CTCG CCCACCAGCA 4151 CTGAAGAAGG TGCCTCGAGC GGCGGTGGAG GATCCGG-
TGG CGGGGGATCC 4201 GGTGGCGGGG GATCCGGTGG CGGGGGATCC GGTGG-
CGGGG GATCCGGTGG 4251 CGGGGGATCC ATTGAACCAA GAAGCTTCTC TGGCAG-
CGGA GGCGACAAAA
4301 CTCACACATG CCCACCGTGC CCAGCTCCAG AAC-
TCCTGGG CGGACCGTCA 4351 GTCTTCCTCT TCCCCCCAAA ACCCAAGGAC ACCCT-
CATGA TCTCCCGGAC 4401 CCCTGAGGTC ACATGCGTGG TGGTGGACGT GAG-
CCACGAA GACCCTGAGG 4451 TCAAGTTCAA CTGGTACGTG GACGGCGTGG AGGTGCA-
TAA TGCCAAGACA 4501 AAGCCGCGGG AGGAGCAGTA CAACAGCACG TACCGTG-
TGG TCAGCGTCCT 4551 CACCGTCCTG CACCAGGACT GGCTGAATGG CAAGGAG-
TAC AAGTGCAAGG 4601 TCTCCAACAA AGCCCTCCCA GCCCCCATCG AGAAAAC-
CAT CTCCAAAGCC 4651 AAAGGGCAGC CCCGAGAACC ACAGGTGTAC ACCCTG-
CCCC CATCCCGGGA 4701 TGAGCTGACC AAGAACCAGG TCAGCCTGAC CTG-
CCTGGTC AAAGGCTTCT 4751 ATCCCAGCGA CATCGCCGTG GAGTGGGAGA GCAA-
TGGGCA GCCGGAGAAC 4801 AACTACAAGA CCACGCCTCC CGTGTTGGAC TCCGA-
CGGCT CCTTCTTCCT 4851 CTACAGCAAG CTCACCGTGG ACAAGAGCAG GTGGCAG-
CAG GGGAACGTCT 4901 TCTCATGCTC CGTGATGCAT GAGGCTCTGC ACAAC-
CACTA CACGCAGAAG 4951 AGCCTCTCCC TGTCTCCGGG TAAATGA Sequência de proteína de pSYN VWF073 - (VWFD1D2D’D3- 144 AE XTEN-sítio de trombina a2 truncado-Fc) (SEQ ID NO: 175) 1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS
DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVSLSVYLGE
FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYGFVARI
DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSDPYDFANS
WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFARCHPL
VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
TDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLL-
DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NEECPGECLV
TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA-
VLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACA-
GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
CFCP PGLYMDERGD 701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDGFMHCTM
SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAEGLECTK
TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF
HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG LKYLFPGECQ
YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE
KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKVPLD
SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY LDVCIYDTCS
CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNLRENGY
EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KILDELLQTC
VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEACQEP
GAPTSESATP 1251 ESGPGSEPAT SGSETPGTSE SATPESGPGS EPATSGSETP
GTSESATPES 1301 GPGTSTEPSE GSAPGSPAGS PTSTEEGTSE SATPESGPGS
EPATSGSETP 1351 GTSESATPES GPGSPAGSPT STEEGSPAGS PTSTEEGASS
GGGGSGGGGS 1401 GGGGSGGGGS GGGGSGGGGS IEPRSFSGSG
GDKTHTCPPC PAPELLGGPS 1451 VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV
DGVEVHNAKT 1501 KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP
APIEKTISKA 1551 KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV
EWESNGQPEN 1601 NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMH EALHNHYTQK 1651 SLSLSPGK* Tabela 18: Sequências polipeptídicas quiméricas exemplificativas FVIII-XTEN-Fc: SEQ ID NO: 201 TRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKS- FPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFNIAK-
PRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKA SEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASD- PLCLTYSYLSHVDLVKDLNS- GLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLM QDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGM- GTTPEVHSIFLEGHT- FLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEA YVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNS- PSFIQIRSVAK- KHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGR KYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKN- QAS- RPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTV EDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVD- QRGNQIMSDKRN- VILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSING YVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHK- MVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALL KVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNGTSESA- TPESGPGSEPAT- SGSETPGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTS TEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPAT- SGSETPGTSESATPESG- PGSPAGSPTSTEEGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSESATP ESGPGTSESATPESGPGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGSE- PATSGSETPGSPAGSPTS- TEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEGSAPGSEPATSGSETPGTSESA TPESGPGTSTEPSEGSAPASSEITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMK- KEDFDIYDEDEN- QSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQ FKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVT- FRNQASRPYSFYSS- LISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCK AWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFAL- FFTIFDETKSWYFTEN- MERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRI RWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFE- TVEMLPSKAGIWRVECLI- GEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWA PKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQK- FSSLYISQFIIMYSLD- GKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTH YSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNM- FATWSPSKARLHLQGRS- NAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEF LISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLL- TRYLRIHPQSWVHQIALR- MEVLGCEAQDLYDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS- TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN- GQPENNYKTTPPVLDSDGS-
FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG VWF(D'D3)-XTEN-a2 Ligante-Fc: SEQ ID NO: 202 SLSCRPPMVKLVCPADNLRAEGLECTKTCQNYDLECMSMGCVSG- CLCPPGMVRHENRCVA-
LERCPCFHQGKEYAPGETVKIGCNTCVCRDRKWNCTDHVCDATC STIGMAHYLTFDGLKYLFPGECQYVLVQDYCGSNPGTFRIL- VGNKGCSHPSVKCKKRVTIL- VEGGEIELFDGEVNVKRPMKDETHFEVVESGRYIILLLGKALSVVW DRHLSISVVLKQTYQEKVCGLCGNFDGIQNNDLTSSNLQVEEDPV- DFGNSW- KVSSQCADTRKVPLDSSPATCHNNIMKQTMVDSSCRILTSDVFQD CNKLVDPEPYLDVCIYDTCSCESIGDCAAFCDTIAA- YAHVCAQHGKVVTWRTATLCPQS- CEERNLRENGYEAEWRYNSCAPACQVTCQHPEPLACPVQCVEGC HAHCPPGKILDELLQTCVDPEDCPVCEVAGRRFASGKKVTLNPSD- PEHCQICHCDVVN- LTCEACQEPGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGP GSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTS- TEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESG- PGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGSPAGSPT STEEGASSDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSD- KTHTCPPCPAPELLGG- PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN- KALPAPIEKTISKA- KGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN-
VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG Sequência de aminoácidos da proteína FVIII (312A): SEQ ID NO: 203 1 MQIELSTCFF LCLLRFCFSA TRRYYLGAVE
LSWDYMQSDL GELPVDARFP 51 PRVPKSFPFN TSVVYKKTLF VEFTDHLFNI AKPRPPW-
MGL LGPTIQAEVY 101 DTVVITLKNM ASHPVSLHAV GVSYWKASEG AEYDD-
QTSQR EKEDDKVFPG 151 GSHTYVWQVL KENGPMASDP LCLTYSYLSH VDLVK-
DLNSG LIGALLVCRE 201 GSLAKEKTQT LHKFILLFAV FDEGKSWHSE TKNS-
LMQDRD AASARAWPKM 251 HTVNGYVNRS LPGLIGCHRK SVYWHVIGMG
TTPEVHSIFL EGHTFLVRNH 301 RQASLEISPI TFLTAQTLLM DLGQFLLFCH ISSHQHDGME
AYVKVDSCPE 351 EPQLRMKNNE EAEDYDDDLT DSEMDVVRFD DDNSPS-
FIQI RSVAKKHPKT 401 WVHYIAAEEE DWDYAPLVLA PDDRSYKSQY LNNG-
PQRIGR KYKKVRFMAY 451 TDETFKTREA IQHESGILGP LLYGEVGDTL LIIFKNQASR
PYNIYPHGIT 501 DVRPLYSRRL PKGVKHLKDF PILPGEIFKY KWTVTVEDGP
TKSDPRCLTR
551 YYSSFVNMER DLASGLIGPL LICYKESVDQ RGNQIMS-
DKR NVILFSVFDE 601 NRSWYLTENI QRFLPNPAGV QLEDPEFQAS
NIMHSINGYV FDSLQLSVCL 651 HEVAYWYILS IGAQTDFLSV FFSGYTFKHK MVYEDTLTLF
PFSGETVFMS 701 MENPGLWILG CHNSDFRNRG MTALLKVSSC DKNTGDY-
YED SYEDISAYLL 751 SKNNAIEPRS FSQNGTSESA TPESGPGSEP AT-
SGSETPGT SESATPESGP 801 GSEPATSGSE TPGTSESATP ESGPGTSTEP
SEGSAPGSPA GSPTSTEEGT 851 SESATPESGP GSEPATSGSE TPGTSESATP ESG-
PGSPAGS PTSTEEGSPA 901 GSPTSTEEGT STEPSEGSAP GTSESATPES GPGTSE-
SATP ESGPGTSESA 951 TPESGPGSEP ATSGSETPGS EPATSGSETP
GSPAGSPTST EEGTSTEPSE 1001 GSAPGTSTEP SEGSAPGSEP ATSGSETPGT SESA-
TPESGP GTSTEPSEGS 1051 APASSEITRT TLQSDQEEID YDDTISVEMK KEDFDIYDED
ENQSPRSFQK 1101 KTRHYFIAAV ERLWDYGMSS SPHVLRNRAQ SGSVPQF-
KKV VFQEFTDGSF 1151 TQPLYRGELN EHLGLLGPYI RAEVEDNIMV TFRNQAS-
RPY SFYSSLISYE 1201 EDQRQGAEPR KNFVKPNETK TYFWKVQHHM APTKDE-
FDCK AWAYFSDVDL 1251 EKDVHSGLIG PLLVCHTNTL NPAHGRQVTV QEFALFFTIF
DETKSWYFTE
1301 NMERNCRAPC NIQMEDPTFK ENYRFHAING YIMDTL-
PGLV MAQDQRIRWY 1351 LLSMGSNENI HSIHFSGHVF TVRKKEEYKM ALYNLYPGVF
ETVEMLPSKA 1401 GIWRVECLIG EHLHAGMSTL FLVYSNKCQT PLGMAS-
GHIR DFQITASGQY 1451 GQWAPKLARL HYSGSINAWS TKEPFSWIKV DLLAPMIIHG
IKTQGARQKF 1501 SSLYISQFII MYSLDGKKWQ TYRGNSTGTL MVFFGNV-
DSS GIKHNIFNPP 1551 IIARYIRLHP THYSIRSTLR MELMGCDLNS CSMPLGMESK
AISDAQITAS 1601 SYFTNMFATW SPSKARLHLQ GRSNAWRPQV
NNPKEWLQVD FQKTMKVTGV 1651 TTQGVKSLLT SMYVKEFLIS SSQDGHQWTL
FFQNGKVKVF QGNQDSFTPV 1701 VNSLDPPLLT RYLRIHPQSW VHQIALRMEV LGCEA-
QDLYD KTHTCPPCPA 1751 PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP
EVKFNWYVDG 1801 VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ
DWLNGKEYKC KVSNKALPAP 1851 IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG
FYPSDIAVEW 1901 ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSR-
WQQGN VFSCSVMHEA 1951 LHNHYTQKSL SLSPG* Sequência de nucleotídeos que codifica FVIII 312A: SEQ ID NO:
1 ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTG-
CCTTT TGCGATTCTG 51 CTTTAGTGCC ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTG-
GAA CTGTCATGGG 101 ACTATATGCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGA-
CGC AAGATTTCCT 151 CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAG-
TCG TGTACAAAAA 201 GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAA-
CATC GCTAAGCCAA 251 GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA
CCATCCAGGC TGAGGTTTAT 301 GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTT-
CCCATC CTGTCAGTCT 351 TCATGCTGTT GGTGTATCCT ACTGGAAAGC
TTCTGAGGGA GCTGAATATG 401 ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGA-
TAAAGT CTTCCCTGGT 451 GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGA-
ATG GTCCAATGGC 501 CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCT-
CAT GTGGACCTGG 551 TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTAC-
TAGT ATGTAGAGAA 601 GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCA-
CAAAT TTATACTACT 651 TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCA-
GAA ACAAAGAACT
701 CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGG-
CCTG GCCTAAAATG 751 CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCA-
GGTC TGATTGGATG 801 CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAA-
TGGGC ACCACTCCTG 851 AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTT-
CTTGT GAGGAACCAT 901 CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTT-
CCTTA CTGCTCAAAC 951 ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGT-
CAT ATCTCTTCCC 1001 ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGA-
CAG CTGTCCAGAG 1051 GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA GAAGCG-
GAAG ACTATGATGA 1101 TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGG-
TTTGAT GATGACAACT 1151 CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG
CCAAGAAGCA TCCTAAAACT 1201 TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGG-
GACT ATGCTCCCTT 1251 AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAA-
TAT TTGAACAATG 1301 GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAG-
TCCGATT TATGGCATAC 1351 ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT ATTCAG-
CATG AATCAGGAAT 1401 CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACA-
CTG TTGATTATAT
1451 TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTAC-
CCTCA CGGAATCACT 1501 GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA
CCAAAAGGTG TAAAACATTT 1551 GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAA-
TAT AAATGGACAG 1601 TGACTGTAGA AGATGGGCCA ACTAAATCAG
ATCCTCGGTG CCTGACCCGC 1651 TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAG-
CTT CAGGACTCAT 1701 TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGAT-
CAA AGAGGAAACC 1751 AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTT-
CTGT ATTTGATGAG 1801 AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACG-
CTTTC TCCCCAATCC 1851 AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAG-
CCTCC AACATCATGC 1901 ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAG-
TTGTC AGTTTGTTTG 1951 CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAG-
CAC AGACTGACTT 2001 CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACA-
CAAA ATGGTCTATG 2051 AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAAC-
TGT CTTCATGTCG 2101 ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCA-
CAACT CAGACTTTCG 2151 GAACAGAGGC ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAG-
TTGT GACAAGAACA
2201 CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTT-
CAGC ATACTTGCTG 2251 AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCTCT-
CAAA ACGGTACCTC 2301 AGAGTCTGCT ACCCCCGAGT CAGGGCCAGG ATCA-
GAGCCA GCCACCTCCG 2351 GGTCTGAGAC ACCCGGGACT TCCGAGAGTG CCAC-
CCCTGA GTCCGGACCC 2401 GGGTCCGAGC CCGCCACTTC CGGCTCCGAA AC-
TCCCGGCA CAAGCGAGAG 2451 CGCTACCCCA GAGTCAGGAC CAGGAACATC TACA-
GAGCCC TCTGAAGGCT 2501 CCGCTCCAGG GTCCCCAGCC GGCAGTCCCA CTAG-
CACCGA GGAGGGAACC 2551 TCTGAAAGCG CCACACCCGA ATCAGGGCCA GGG-
TCTGAGC CTGCTACCAG 2601 CGGCAGCGAG ACACCAGGCA CCTCTGAGTC CGCCA-
CACCA GAGTCCGGAC 2651 CCGGATCTCC CGCTGGGAGC CCCACCTCCA CTGAG-
GAGGG ATCTCCTGCT 2701 GGCTCTCCAA CATCTACTGA GGAAGGAACC TCAAC-
CGAGC CATCCGAGGG 2751 ATCAGCTCCC GGCACCTCAG AGTCGGCAAC CCCGGA-
GTCT GGACCCGGAA 2801 CTTCCGAAAG TGCCACACCA GAGTCCGGTC CCGGGA-
CTTC AGAATCAGCA 2851 ACACCCGAGT CCGGCCCTGG GTCTGAACCC GCCA-
CAAGTG GTAGTGAGAC 2901 ACCAGGATCA GAACCTGCTA CCTCAGGGTC AGAGACA-
CCC GGATCTCCGG
2951 CAGGCTCACC AACCTCCACT GAGGAGGGCA CCAGCA-
CAGA ACCAAGCGAG 3001 GGCTCCGCAC CCGGAACAAG CACTGAACCC AG-
TGAGGGTT CAGCACCCGG 3051 CTCTGAGCCG GCCACAAGTG GCAGTGAGAC ACCCGG-
CACT TCAGAGAGTG 3101 CCACCCCCGA GAGTGGCCCA GGCACTAGTA CCGAG-
CCCTC TGAAGGCAGT 3151 GCGCCAGCCT CGAGCGAAAT AACTCGTACT ACTCTT-
CAGT CAGATCAAGA 3201 GGAAATTGAC TATGATGATA CCATATCAGT TGAAA-
TGAAG AAGGAAGATT 3251 TTGACATTTA TGATGAGGAT GAAAATCAGA GCCCCCG-
CAG CTTTCAAAAG 3301 AAAACACGAC ACTATTTTAT TGCTGCAGTG GAGAGG-
CTCT GGGATTATGG 3351 GATGAGTAGC TCCCCACATG TTCTAAGAAA CAGGGCT-
CAG AGTGGCAGTG 3401 TCCCTCAGTT CAAGAAAGTT GTTTTCCAGG AATTTAC-
TGA TGGCTCCTTT 3451 ACTCAGCCCT TATACCGTGG AGAACTAAAT GAACA-
TTTGG GACTCCTGGG 3501 GCCATATATA AGAGCAGAAG TTGAAGATAA TAT-
CATGGTA ACTTTCAGAA 3551 ATCAGGCCTC TCGTCCCTAT TCCTTCTATT CTAGCCT-
TAT TTCTTATGAG 3601 GAAGATCAGA GGCAAGGAGC AGAACCTAGA AAAAAC-
TTTG TCAAGCCTAA 3651 TGAAACCAAA ACTTACTTTT GGAAAGTGCA ACATCA-
TATG GCACCCACTA
3701 AAGATGAGTT TGACTGCAAA GCCTGGGCTT ATTT-
CTCTGA TGTTGACCTG 3751 GAAAAAGATG TGCACTCAGG CCTGATTGGA CCCCTT-
CTGG TCTGCCACAC 3801 TAACACACTG AACCCTGCTC ATGGGAGACA AGTGACA-
GTA CAGGAATTTG 3851 CTCTGTTTTT CACCATCTTT GATGAGACCA AAAG-
CTGGTA CTTCACTGAA 3901 AATATGGAAA GAAACTGCAG GGCTCCCTGC AATA-
TCCAGA TGGAAGATCC 3951 CACTTTTAAA GAGAATTATC GCTTCCATGC AATCAA-
TGGC TACATAATGG 4001 ATACACTACC TGGCTTAGTA ATGGCTCAGG ATCAAAG-
GAT TCGATGGTAT 4051 CTGCTCAGCA TGGGCAGCAA TGAAAACATC CATTCTA-
TTC ATTTCAGTGG 4101 ACATGTGTTC ACTGTACGAA AAAAAGAGGA GTATAAA-
ATG GCACTGTACA 4151 ATCTCTATCC AGGTGTTTTT GAGACAGTGG AAATGT-
TACC ATCCAAAGCT 4201 GGAATTTGGC GGGTGGAATG CCTTATTGGC GAGCATC-
TAC ATGCTGGGAT 4251 GAGCACACTT TTTCTGGTGT ACAGCAATAA GTGTCA-
GACT CCCCTGGGAA 4301 TGGCTTCTGG ACACATTAGA GATTTTCAGA TTACAG-
CTTC AGGACAATAT 4351 GGACAGTGGG CCCCAAAGCT GGCCAGACTT CATTATT-
CCG GATCAATCAA 4401 TGCCTGGAGC ACCAAGGAGC CCTTTTCTTG GAT-
CAAGGTG GATCTGTTGG
4451 CACCAATGAT TATTCACGGC ATCAAGACCC AGGGTG-
CCCG TCAGAAGTTC 4501 TCCAGCCTCT ACATCTCTCA GTTTATCATC ATGTATA-
GTC TTGATGGGAA 4551 GAAGTGGCAG ACTTATCGAG GAAATTCCAC TGGAAC-
CTTA ATGGTCTTCT 4601 TTGGCAATGT GGATTCATCT GGGATAAAAC ACAATA-
TTTT TAACCCTCCA 4651 ATTATTGCTC GATACATCCG TTTGCACCCA ACTCAT-
TATA GCATTCGCAG 4701 CACTCTTCGC ATGGAGTTGA TGGGCTGTGA TTTAAA-
TAGT TGCAGCATGC 4751 CATTGGGAAT GGAGAGTAAA GCAATATCAG ATGCACA-
GAT TACTGCTTCA 4801 TCCTACTTTA CCAATATGTT TGCCACCTGG TCTCCTT-
CAA AAGCTCGACT 4851 TCACCTCCAA GGGAGGAGTA ATGCCTGGAG ACCTCA-
GGTG AATAATCCAA 4901 AAGAGTGGCT GCAAGTGGAC TTCCAGAAGA CAA-
TGAAAGT CACAGGAGTA 4951 ACTACTCAGG GAGTAAAATC TCTGCTTACC AGCATG-
TATG TGAAGGAGTT 5001 CCTCATCTCC AGCAGTCAAG ATGGCCATCA GTGGAC-
TCTC TTTTTTCAGA 5051 ATGGCAAAGT AAAGGTTTTT CAGGGAAATC AAGAC-
TCCTT CACACCTGTG 5101 GTGAACTCTC TAGACCCACC GTTACTGACT CGCTAC-
CTTC GAATTCACCC 5151 CCAGAGTTGG GTGCACCAGA TTGCCCTGAG GATGGA-
GGTT CTGGGCTGCG
5201 AGGCACAGGA CCTCTACGAC AAAACTCACA CATG-
CCCACC GTGCCCAGCT 5251 CCAGAACTCC TGGGCGGACC GTCAGTCTTC CTCTT-
CCCCC CAAAACCCAA 5301 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCA-
CATGC GTGGTGGTGG 5351 ACGTGAGCCA CGAAGACCCT GAGGTCAAGT TCAAC-
TGGTA TGTGGACGGC 5401 GTGGAAGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCG CGGGAG-
GAGC AGTACAACAG 5451 CACGTACCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT CCTG-
CACCAA GACTGGCTGA 5501 ATGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAG-
CCCT CCCAGCCCCC 5551 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AGCCAAAGGG CAG-
CCCCGAG AACCACAGGT 5601 GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGATGAGCT GAC-
CAAGAAC CAAGTTAGCC 5651 TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTATCCCA GCGACA-
TCGC CGTGGAGTGG 5701 GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGAC-
CACGC CTCCCGTGTT 5751 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACTC CAAGCT-
CACC GTGGACAAGA 5801 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCG-
TGAT GCATGAGGCT 5851 CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTG-
TCTC CGGGTTGA Sequência de aminoácidos da proteína VWF059A: SEQ ID NO:
1 MIPARFAGVL LALALILPGT LCAEGTRGRS STARCSLFGS
DFVNTFDGSM 51 YSFAGYCSYL LAGGCQKRSF SIIGDFQNGK RVS-
LSVYLGE FFDIHLFVNG 101 TVTQGDQRVS MPYASKGLYL ETEAGYYKLS GEAYG-
FVARI DGSGNFQVLL 151 SDRYFNKTCG LCGNFNIFAE DDFMTQEGTL TSD-
PYDFANS WALSSGEQWC 201 ERASPPSSSC NISSGEMQKG LWEQCQLLKS TSVFAR-
CHPL VDPEPFVALC 251 EKTLCECAGG LECACPALLE YARTCAQEGM VLYGW-
TDHSA CSPVCPAGME 301 YRQCVSPCAR TCQSLHINEM CQERCVDGCS CPEGQLL-
DEG LCVESTECPC 351 VHSGKRYPPG TSLSRDCNTC ICRNSQWICS NE-
ECPGECLV TGQSHFKSFD 401 NRYFTFSGIC QYLLARDCQD HSFSIVIETV QCADDRDAVC
TRSVTVRLPG 451 LHNSLVKLKH GAGVAMDGQD IQLPLLKGDL RIQHTVTASV
RLSYGEDLQM 501 DWDGRGRLLV KLSPVYAGKT CGLCGNYNGN
QGDDFLTPSG LAEPRVEDFG 551 NAWKLHGDCQ DLQKQHSDPC ALNPRMTRFS EEACA-
VLTSP TFEACHRAVS 601 PLPYLRNCRY DVCSCSDGRE CLCGALASYA AACA-
GRGVRV AWREPGRCEL 651 NCPKGQVYLQ CGTPCNLTCR SLSYPDEECN EACLEG-
CFCP PGLYMDERGD
701 CVPKAQCPCY YDGEIFQPED IFSDHHTMCY CEDG-
FMHCTM SGVPGSLLPD 751 AVLSSPLSHR SKRSLSCRPP MVKLVCPADN LRAE-
GLECTK TCQNYDLECM 801 SMGCVSGCLC PPGMVRHENR CVALERCPCF
HQGKEYAPGE TVKIGCNTCV 851 CRDRKWNCTD HVCDATCSTI GMAHYLTFDG
LKYLFPGECQ YVLVQDYCGS 901 NPGTFRILVG NKGCSHPSVK CKKRVTILVE GGEIELFDGE
VNVKRPMKDE 951 THFEVVESGR YIILLLGKAL SVVWDRHLSI SVVLKQTYQE
KVCGLCGNFD 1001 GIQNNDLTSS NLQVEEDPVD FGNSWKVSSQ CADTRKV-
PLD SSPATCHNNI 1051 MKQTMVDSSC RILTSDVFQD CNKLVDPEPY
LDVCIYDTCS CESIGDCAAF 1101 CDTIAAYAHV CAQHGKVVTW RTATLCPQSC EERNL-
RENGY EAEWRYNSCA 1151 PACQVTCQHP EPLACPVQCV EGCHAHCPPG KIL-
DELLQTC VDPEDCPVCE 1201 VAGRRFASGK KVTLNPSDPE HCQICHCDVV NLTCEAC-
QEP GTSESATPES 1251 GPGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGSEP AT-
SGSETPGT SESATPESGP 1301 GTSTEPSEGS APGSPAGSPT STEEGTSESA TPESG-
PGSEP ATSGSETPGT 1351 SESATPESGP GSPAGSPTST EEGSPAGSPT STEEGAS-
SDK NTGDYYEDSY 1401 EDISAYLLSK NNAIEPRSFS DKTHTCPPCP APELLGGPSV
FLFPPKPKDT
1451 LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 1501 RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK
GQPREPQVYT 1551 LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESN-
GQPENN YKTTPPVLDS 1601 DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYT- QKS LSLSPG* Sequência de nucleotídeos que codifica proteína VWF059A: SEQ ID NO: 206 1 ATGATTCCTG CCAGATTTGC CGGGGTGCTG CTTG-
CTCTGG CCCTCATTTT 51 GCCAGGGACC CTTTGTGCAG AAGGAACTCG CGGCA-
GGTCA TCCACGGCCC 101 GATGCAGCCT TTTCGGAAGT GACTTCGTCA ACAC-
CTTTGA TGGGAGCATG 151 TACAGCTTTG CGGGATACTG CAGTTACCTC CTGGCA-
GGGG GCTGCCAGAA 201 ACGCTCCTTC TCGATTATTG GGGACTTCCA GAATGG-
CAAG AGAGTGAGCC 251 TCTCCGTGTA TCTTGGGGAA TTTTTTGACA
TCCATTTGTT TGTCAATGGT 301 ACCGTGACAC AGGGGGACCA AAGAGTCTCC ATGCCC-
TATG CCTCCAAAGG 351 GCTGTATCTA GAAACTGAGG CTGGGTACTA CAAGCTG-
TCC GGTGAGGCCT 401 ATGGCTTTGT GGCCAGGATC GATGGCAGCG GCAAC-
TTTCA AGTCCTGCTG
451 TCAGACAGAT ACTTCAACAA GACCTGCGGG CTGTG-
TGGCA ACTTTAACAT 501 CTTTGCTGAA GATGACTTTA TGACCCAAGA AGGGAC-
CTTG ACCTCGGACC 551 CTTATGACTT TGCCAACTCA TGGGCTCTGA GCAGTG-
GAGA ACAGTGGTGT 601 GAACGGGCAT CTCCTCCCAG CAGCTCATGC AACA-
TCTCCT CTGGGGAAAT 651 GCAGAAGGGC CTGTGGGAGC AGTGCCAGCT
TCTGAAGAGC ACCTCGGTGT 701 TTGCCCGCTG CCACCCTCTG GTGGACCCCG AG-
CCTTTTGT GGCCCTGTGT 751 GAGAAGACTT TGTGTGAGTG TGCTGGGGGG CTGGAG-
TGCG CCTGCCCTGC 801 CCTCCTGGAG TACGCCCGGA CCTGTGCCCA GGAGG-
GAATG GTGCTGTACG 851 GCTGGACCGA CCACAGCGCG TGCAGCCCAG TGTG-
CCCTGC TGGTATGGAG 901 TATAGGCAGT GTGTGTCCCC TTGCGCCAGG ACCTG-
CCAGA GCCTGCACAT 951 CAATGAAATG TGTCAGGAGC GATGCGTGGA TGGCTG-
CAGC TGCCCTGAGG 1001 GACAGCTCCT GGATGAAGGC CTCTGCGTGG AGAG-
CACCGA GTGTCCCTGC 1051 GTGCATTCCG GAAAGCGCTA CCCTCCCGGC AC-
CTCCCTCT CTCGAGACTG 1101 CAACACCTGC ATTTGCCGAA ACAGCCAGTG GATCTG-
CAGC AATGAAGAAT 1151 GTCCAGGGGA GTGCCTTGTC ACTGGTCAAT CCCACTT-
CAA GAGCTTTGAC
1201 AACAGATACT TCACCTTCAG TGGGATCTGC CAGTAC-
CTGC TGGCCCGGGA 1251 TTGCCAGGAC CACTCCTTCT CCATTGTCAT TGAGAC-
TGTC CAGTGTGCTG 1301 ATGACCGCGA CGCTGTGTGC ACCCGCTCCG TCACCG-
TCCG GCTGCCTGGC 1351 CTGCACAACA GCCTTGTGAA ACTGAAGCAT GGGGCAG-
GAG TTGCCATGGA 1401 TGGCCAGGAC ATCCAGCTCC CCCTCCTGAA AGGTGA-
CCTC CGCATCCAGC 1451 ATACAGTGAC GGCCTCCGTG CGCCTCAGCT ACGGG-
GAGGA CCTGCAGATG 1501 GACTGGGATG GCCGCGGGAG GCTGCTGGTG AAGCTG-
TCCC CCGTCTATGC 1551 CGGGAAGACC TGCGGCCTGT GTGGGAATTA CAATGG-
CAAC CAGGGCGACG 1601 ACTTCCTTAC CCCCTCTGGG CTGGCGGAGC CCCGGG-
TGGA GGACTTCGGG 1651 AACGCCTGGA AGCTGCACGG GGACTGCCAG GACCTG-
CAGA AGCAGCACAG 1701 CGATCCCTGC GCCCTCAACC CGCGCATGAC CAGGTT-
CTCC GAGGAGGCGT 1751 GCGCGGTCCT GACGTCCCCC ACATTCGAGG CCTG-
CCATCG TGCCGTCAGC 1801 CCGCTGCCCT ACCTGCGGAA CTGCCGCTAC GACGTG-
TGCT CCTGCTCGGA 1851 CGGCCGCGAG TGCCTGTGCG GCGCCCTGGC CAGCTA-
TGCC GCGGCCTGCG 1901 CGGGGAGAGG CGTGCGCGTC GCGTGGCGCG AGCCA-
GGCCG CTGTGAGCTG
1951 AACTGCCCGA AAGGCCAGGT GTACCTGCAG TGCGG-
GACCC CCTGCAACCT 2001 GACCTGCCGC TCTCTCTCTT ACCCGGATGA GGAATG-
CAAT GAGGCCTGCC 2051 TGGAGGGCTG CTTCTGCCCC CCAGGGCTCT ACATG-
GATGA GAGGGGGGAC 2101 TGCGTGCCCA AGGCCCAGTG CCCCTGTTAC TATGA-
CGGTG AGATCTTCCA 2151 GCCAGAAGAC ATCTTCTCAG ACCATCACAC CATGTGC-
TAC TGTGAGGATG 2201 GCTTCATGCA CTGTACCATG AGTGGAGTCC CCGGAAG-
CTT GCTGCCTGAC 2251 GCTGTCCTCA GCAGTCCCCT GTCTCATCGC AG-
CAAAAGGA GCCTATCCTG 2301 TCGGCCCCCC ATGGTCAAGC TGGTGTGTCC CGCTGA-
CAAC CTGCGGGCTG 2351 AAGGGCTCGA GTGTACCAAA ACGTGCCAGA ACTATGA-
CCT GGAGTGCATG 2401 AGCATGGGCT GTGTCTCTGG CTGCCTCTGC
CCCCCGGGCA TGGTCCGGCA 2451 TGAGAACAGA TGTGTGGCCC TGGAAAGGTG TCCCTG-
CTTC CATCAGGGCA 2501 AGGAGTATGC CCCTGGAGAA ACAGTGAAGA TTGGCTG-
CAA CACTTGTGTC 2551 TGTCGGGACC GGAAGTGGAA CTGCACAGAC CATGTG-
TGTG ATGCCACGTG 2601 CTCCACGATC GGCATGGCCC ACTACCTCAC CTTCGA-
CGGG CTCAAATACC 2651 TGTTCCCCGG GGAGTGCCAG TACGTTCTGG TGCAG-
GATTA CTGCGGCAGT
2701 AACCCTGGGA CCTTTCGGAT CCTAGTGGGG AATAAGG-
GAT GCAGCCACCC 2751 CTCAGTGAAA TGCAAGAAAC GGGTCACCAT CCTGGTG-
GAG GGAGGAGAGA 2801 TTGAGCTGTT TGACGGGGAG GTGAATGTGA AGAGG-
CCCAT GAAGGATGAG 2851 ACTCACTTTG AGGTGGTGGA GTCTGGCCGG TACAT-
CATTC TGCTGCTGGG 2901 CAAAGCCCTC TCCGTGGTCT GGGACCGCCA CCTGAG-
CATC TCCGTGGTCC 2951 TGAAGCAGAC ATACCAGGAG AAAGTGTGTG GCCTGTG-
TGG GAATTTTGAT 3001 GGCATCCAGA ACAATGACCT CACCAGCAGC AAC-
CTCCAAG TGGAGGAAGA 3051 CCCTGTGGAC TTTGGGAACT CCTGGAAAGT GAGCTCG-
CAG TGTGCTGACA 3101 CCAGAAAAGT GCCTCTGGAC TCATCCCCTG CCACCTG-
CCA TAACAACATC 3151 ATGAAGCAGA CGATGGTGGA TTCCTCCTGT AGAA-
TCCTTA CCAGTGACGT 3201 CTTCCAGGAC TGCAACAAGC TGGTGGACCC CGAG-
CCATAT CTGGATGTCT 3251 GCATTTACGA CACCTGCTCC TGTGAGTCCA TTGGGGA-
CTG CGCCGCATTC 3301 TGCGACACCA TTGCTGCCTA TGCCCACGTG TGTG-
CCCAGC ATGGCAAGGT 3351 GGTGACCTGG AGGACGGCCA CATTGTGCCC CCAGAG-
CTGC GAGGAGAGGA 3401 ATCTCCGGGA GAACGGGTAT GAGGCTGAGT GGCGC-
TATAA CAGCTGTGCA
3451 CCTGCCTGTC AAGTCACGTG TCAGCACCCT GAGCCAC-
TGG CCTGCCCTGT 3501 GCAGTGTGTG GAGGGCTGCC ATGCCCACTG
CCCTCCAGGG AAAATCCTGG 3551 ATGAGCTTTT GCAGACCTGC GTTGACCCTG AAGACTG-
TCC AGTGTGTGAG 3601 GTGGCTGGCC GGCGTTTTGC CTCAGGAAAG AAAGT-
CACCT TGAATCCCAG 3651 TGACCCTGAG CACTGCCAGA TTTGCCACTG TGATG-
TTGTC AACCTCACCT 3701 GTGAAGCCTG CCAGGAGCCG GGTACATCAG AGAGCG-
CCAC CCCTGAAAGT 3751 GGTCCCGGGA GCGAGCCAGC CACATCTGGG TCGGA-
AACGC CAGGCACATC 3801 CGAGTCTGCA ACTCCCGAGT CCGGACCTGG
CTCCGAGCCT GCCACTAGCG 3851 GCTCCGAGAC TCCGGGAACT TCCGAGAGCG CTACAC-
CAGA AAGCGGACCC 3901 GGAACCAGTA CCGAACCTAG CGAGGGCTCT
GCTCCGGGCA GCCCAGCCGG 3951 CTCTCCTACA TCCACGGAGG AGGGCACTTC CGAA-
TCCGCC ACCCCGGAGT 4001 CAGGGCCAGG ATCTGAACCC GCTACCTCAG GCAG-
TGAGAC GCCAGGAACG 4051 AGCGAGTCCG CTACACCGGA GAGTGGGCCA GGGAG-
CCCTG CTGGATCTCC 4101 TACGTCCACT GAGGAAGGGT CACCAGCGGG CTCG-
CCCACC AGCACTGAAG 4151 AAGGTGCCTC GTCTGACAAG AACACTGGTG ATTAT-
TACGA GGACAGTTAT
4201 GAAGATATTT CAGCATACTT GCTGAGTAAA AACAATG-
CCA TTGAACCAAG 4251 AAGCTTCTCT GACAAAACTC ACACATGCCC ACCGTG-
CCCA GCTCCAGAAC 4301 TCCTGGGCGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC
CCCCAAAACC CAAGGACACC 4351 CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACA TGCGTGG-
TGG TGGACGTGAG 4401 CCACGAAGAC CCTGAGGTCA AGTTCAACTG GTATGTG-
GAC GGCGTGGAAG 4451 TGCATAATGC CAAGACAAAG CCGCGGGAGG AGCAG-
TACAA CAGCACGTAC 4501 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTCCTGCAC CAAGAC-
TGGC TGAATGGCAA 4551 GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGC CCTCCCA-
GCC CCCATCGAGA 4601 AAACCATCTC CAAAGCCAAA GGGCAGCCCC GAGAAC-
CACA GGTGTACACC 4651 CTGCCCCCAT CCCGGGATGA GCTGACCAAG AAC-
CAAGTTA GCCTGACCTG 4701 CCTGGTCAAA GGCTTCTATC CCAGCGACAT CGCCGTG-
GAG TGGGAGAGCA 4751 ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCA
CGCCTCCCGT GTTGGACTCC 4801 GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CTCCAAGCTC ACCGTG-
GACA AGAGCAGGTG 4851 GCAGCAGGGG AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATG-
CATGAG GCTCTGCACA 4901 ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGG-
TTG A
A-FVIII(XTEN)-Fc: SEQ ID NO: 207 ATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKS- FPFNTSVVYK-
KTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASH PVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTY- VWQVLKENGPMASDPL- CLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFA VFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSL- PGLIGCHRKSVYWHVIGMG- TTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLF CHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAE- DYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFI- QIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNN GPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILG- PLLYGEVGDTLLIIFKNQAS- RPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTV EDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVD- QRGNQIMSDKRN- VILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSING YVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHK- MVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALL KVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNGTSESA- TPESGPGSEPAT- SGSETPGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTS TEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPAT- SGSETPGTSESATPESG- PGSPAGSPTSTEEGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSESATP ESGPGTSESATPESGPGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGSE- PATSGSETPGSPAGSPTS- TEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEGSAPGSEPATSGSETPGTSESA TPESGPGTSTEPSEGSAPASSEITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMK- KEDFDIYDEDEN- QSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQ FKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVT- FRNQASRPYSFYSS- LISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCK AWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFAL- FFTIFDETKSWYFTEN- MERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRI RWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFE- TVEMLPSKAGIWRVECLI- GEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWA PKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQK- FSSLYISQFIIMYSLD- GKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTH YSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNM- FATWSPSKARLHLQGRS- NAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEF LISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLL- TRYLRIHPQSWVHQIALR- MEVLGCEAQDLYDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS- TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN- GQPENNYKTTPPVLDSDGS- FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
Tabela 19. Sequências polipeptídicas quiméricas adicionais Descrição / Sequência SEQ ID NO.
GTSESATPES GPGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP 60
GTSTEPSEGS APGSPAGSPT STEEGTSESA AE288 TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP 120
GSPAGSPTST EEGSPAGSPT STEEGTSTEP SEQ ID NO: 8 SEGSAPGTSE SATPESGPGT SESATPESGP 180
GTSESATPES GPGSEPATSG SETPGSEPAT SGSETPGSPA GSPTSTEEGT STEPSEGSAP 240
GTSTEPSEGS APGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGTST EPSEGSAP 288 pSYN VWF059 TSTEEGASIS DKNTGDYYED SYEDISAYLL SKN-
NAIEPRS FSDKTH SEQ ID NO: 13 pSYN VWF059A
TSTEEGASSD KNTGDYYEDS YEDISAYLLS
KNNAIEPRSF SDKTH SEQ ID NO: 22
ATRRYYLGAV ELSWDYMQSD LGELPVDARF pSYN FVIII 312 PPRVPKSFPF NTSVVYKKTL FVEFTDHLFN 60
IAKPRPPWMG LLGPTIQAEV YDTVVITLKN SEQ ID NO:
MASHPVSLHA VGVSYWKASE GAEYDDQTSQ 173 120
REKEDDKVFP GGSHTYVWQV LKENGPMASD
PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALLVCR 180 EGSLAKEKTQ TLHKFILLFA VFDEGKSWHS ET- KNSLMQDR DAASARAWPK MHTVNGYVNR 240 SLPGLIGCHR KSVYWHVIGM GTTPEVHSIF LE- GHTFLVRN HRQASLEISP ITFLTAQTLL 300
MDLGQFLLFC HISSHQHDGM EAYVKVDSCP
EEPQLRMKNN EEAEDYDDDL TDSEMDVVRF 360
DDDNSPSFIQ IRSVAKKHPK TWVHYIAAEE
EDWDYAPLVL APDDRSYKSQ YLNNGPQRIG 420
RKYKKVRFMA YTDETFKTRE AIQHESGILG PLLYGEVGDT LLIIFKNQAS RPYNIYPHGI 480 TDVRPLYSRR LPKGVKHLKD FPILPGEIFK YKW- TVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME 540
RDLASGLIGP LLICYKESVD QRGNQIMSDK RNVILFSVFD ENRSWYLTEN IQRFLPNPAG 600 VQLEDPEFQA SNIMHSINGY VFDSLQLSVC LHE- VAYWYIL SIGAQTDFLS VFFSGYTFKH 660
KMVYEDTLTL FPFSGETVFM SMENPGLWIL
GCHNSDFRNR GMTALLKVSS CDKNTGDYYE 720
DSYEDISAYL LSKNNAIEPR SFSQNGTSES ATPESGPGSE PATSGSETPG TSESATPESG 780
PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGTSTE PSEGSAPGSP AGSPTSTEEG TSESATPESG 840
PGSEPATSGS ETPGTSESAT PESGPGSPAG SPTSTEEGSP AGSPTSTEEG TSTEPSEGSA 900
PGTSESATPE SGPGTSESAT PESGPGTSES ATPESGPGSE PATSGSETPG SEPATSGSET 960
PGSPAGSPTS TEEGTSTEPS EGSAPGTSTE
PSEGSAPGSE PATSGSETPG TSESATPESG 1020
PGTSTEPSEG SAPASSEITR TTLQSDQEEI
DYDDTISVEM KKEDFDIYDE DENQSPRSFQ 1080
KKTRHYFIAA VERLWDYGMS SSPHVLRNRA
QSGSVPQFKK VVFQEFTDGS FTQPLYRGEL 1140 NEHLGLLGPY IRAEVEDNIM VTFRNQASRP YS- FYSSLISY EEDQRQGAEP RKNFVKPNET 1200
KTYFWKVQHH MAPTKDEFDC KAWAYFSDVD LEKDVHSGLI GPLLVCHTNT LNPAHGRQVT 1260 VQEFALFFTI FDETKSWYFT ENMERNCRAP CNI- QMEDPTF KENYRFHAIN GYIMDTLPGL 1320
VMAQDQRIRW YLLSMGSNEN IHSIHFSGHV
FTVRKKEEYK MALYNLYPGV FETVEMLPSK 1380 AGIWRVECLI GEHLHAGMST LFLVYSNKCQ TPL- GMASGHI RDFQITASGQ YGQWAPKLAR 1440 LHYSGSINAW STKEPFSWIK VDLLAPMIIH GIKT- QGARQK FSSLYISQFI IMYSLDGKKW 1500
QTYRGNSTGT LMVFFGNVDS SGIKHNIFNP PIIARYIRLH PTHYSIRSTL RMELMGCDLN 1560
SCSMPLGMES KAISDAQITA SSYFTNMFAT
WSPSKARLHL QGRSNAWRPQ VNNPKEWLQV 1620
DFQKTMKVTG VTTQGVKSLL TSMYVKEFLI
SSSQDGHQWT LFFQNGKVKV FQGNQDSFTP 1680
VVNSLDPPLL TRYLRIHPQS WVHQIALRME VLG- CEAQDLY DKTHTCPPCP APELLGGPSV 1740
FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED
PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 1800 RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PI- EKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTK 1860
NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN
YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG 1920
NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
GSPAGSPTST EEGTSESATP ESGPGSEPAT SGSETPGTSE SATPESGPGT STEPSEGSAP 60
GTSTEPSEGS APGTSTEPSE GSAPGTSTEP SEGSAPGTST EPSEGSAPGT STEPSEGSAP 120 XTEN_AE288_2 GSPAGSPTST EEGTSTEPSE GSAPGTSESA TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP 180 SEQ ID NO: 54 GSEPATSGSE TPGTSESATP ESGPGTSTEP SEGSAPGTSE SATPESGPGS PAGSPTSTEE 240
GSPAGSPTST EEGSPAGSPT STEEGTSESA TPESGPGTST EPSEGSAP 288
TSESATPESG PGSEPATSGS ETPGTSESAT
XTEN PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG 60 AE144_5A
TSTEPSEGSA PGSPAGSPTS TEEGTSESAT
PESGPGSEPA TSGSETPGTS ESATPESGPG SEQ ID NO: 58 120
SPAGSPTSTE EGSPAGSPTS TEEG Ligante a2 de DKNTGDYYED SYEDISAYLL SKNNAIEPRS FS polipeptídeo 32 quimérico SEQ ID NO: 88 Peptídeo sinali- zador de FVIII
MQIELSTCFFLCLLRFCFS SEQ ID NO: 64
ATRRYYLGAV ELSWDYMQSD LGELPVDARF PPRVPKSFPF NTSVVYKKTL FVEFTDHLFN 60
IAKPRPPWMG LLGPTIQAEV YDTVVITLKN
MASHPVSLHA VGVSYWKASE GAEYDDQTSQ 120
REKEDDKVFP GGSHTYVWQV LKENGPMASD Fragmento 1 de PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALLVCR 180 FVIII de polipep- EGSLAKEKTQ TLHKFILLFA VFDEGKSWHS ET- tídeo quimérico KNSLMQDR DAASARAWPK MHTVNGYVNR 240 SLPGLIGCHR KSVYWHVIGM GTTPEVHSIF LE- SEQ ID NO. GHTFLVRN HRQASLEISP ITFLTAQTLL 300 215
MDLGQFLLFC HISSHQHDGM EAYVKVDSCP
EEPQLRMKNN EEAEDYDDDL TDSEMDVVRF 360
DDDNSPSFIQ IRSVAKKHPK TWVHYIAAEE
EDWDYAPLVL APDDRSYKSQ YLNNGPQRIG 420
RKYKKVRFMA YTDETFKTRE AIQHESGILG PLLYGEVGDT LLIIFKNQAS RPYNIYPHGI 480
TDVRPLYSRR LPKGVKHLKD FPILPGEIFK YKW- TVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME 540
RDLASGLIGP LLICYKESVD QRGNQIMSDK RNVILFSVFD ENRSWYLTEN IQRFLPNPAG 600 VQLEDPEFQA SNIMHSINGY VFDSLQLSVC LHE- VAYWYIL SIGAQTDFLS VFFSGYTFKH 660
KMVYEDTLTL FPFSGETVFM SMENPGLWIL
GCHNSDFRNR GMTALLKVSS CDKNTGDYYE 720
DSYEDISAYL LSKNNAIEPR SFSQN EITRTTLQSD QEEIDYDDTI SVEMKKEDFD IYDE- DENQSP RSFQKKTRHY FIAAVERLWD 60
YGMSSSPHVL RNRAQSGSVP QFKKVVFQEF TDGSFTQPLY RGELNEHLGL LGPYIRAEVE 120 DNIMVTFRNQ ASRPYSFYSS LISYEEDQRQ GAE- PRKNFVK PNETKTYFWK VQHHMAPTKD 180 Fragmento 2 de EFDCKAWAYF SDVDLEKDVH SGLIGPLLVC FVIII de polipep- HTNTLNPAHG RQVTVQEFAL FFTIFDETKS 240 tídeo quimérico WYFTENMERN CRAPCNIQME DPTFKENYRF HAINGYIMDT LPGLVMAQDQ RIRWYLLSMG 300 SEQ ID NO. SNENIHSIHF SGHVFTVRKK EEYKMALYNL 216 YPGVFETVEM LPSKAGIWRV ECLIGEHLHA 360 GMSTLFLVYS NKCQTPLGMA SGHIRDFQIT AS- GQYGQWAP KLARLHYSGS INAWSTKEPF 420
SWIKVDLLAP MIIHGIKTQG ARQKFSSLYI SQFIIMYSLD GKKWQTYRGN STGTLMVFFG 480 NVDSSGIKHN IFNPPIIARY IRLHPTHYSI RSTLR- MELMG CDLNSCSMPL GMESKAISDA 540
QITASSYFTN MFATWSPSKA RLHLQGRSNA
WRPQVNNPKE WLQVDFQKTM KVTGVTTQGV 600
KSLLTSMYVK EFLISSSQDG HQWTLFFQNG KVKVFQGNQD SFTPVVNSLD PPLLTRYLRI 660
HPQSWVHQIA LRMEVLGCEA QDLY Peptídeo sinali- zador de VWF
MIPARFAGVL LALALILPGT LC SEQ ID NO: 208
AEGTRGRSST ARCSLFGSDF VNTFDGSMYS FAGYCSYLLA GGCQKRSFSI IGDFQNGKRV 60
SLSVYLGEFF DIHLFVNGTV TQGDQRVSMP YASKGLYLET EAGYYKLSGE AYGFVARIDG 120
SGNFQVLLSD RYFNKTCGLC GNFNIFAEDD Domínio D1D2 FMTQEGTLTS DPYDFANSWA LSSGEQWCER de VWF de poli- 180 peptídeo quimé- ASPPSSSCNI SSGEMQKGLW EQCQLLKSTS rico VFARCHPLVD PEPFVALCEK TLCECAGGLE 240
CACPALLEYA RTCAQEGMVL YGWTDHSACS SEQ ID NO: PVCPAGMEYR QCVSPCARTC QSLHINEMCQ 209 300
ERCVDGCSCP EGQLLDEGLC VESTECPCVH SGKRYPPGTS LSRDCNTCIC RNSQWICSNE 360
ECPGECLVTG QSHFKSFDNR YFTFSGICQY LLARDCQDHS FSIVIETVQC ADDRDAVCTR 420
SVTVRLPGLH NSLVKLKHGA GVAMDGQDIQ LPLLKGDLRI QHTVTASVRL SYGEDLQMDW 480
DGRGRLLVKL SPVYAGKTCG LCGNYNGNQG DDFLTPSGLA EPRVEDFGNA WKLHGDCQDL 540
QKQHSDPCAL NPRMTRFSEE ACAVLTSPTF EACHRAVSPL PYLRNCRYDV CSCSDGRECL 600
CGALASYAAA CAGRGVRVAW REPGRCELNC PKGQVYLQCG TPCNLTCRSL SYPDEECNEA 660
CLEGCFCPPG LYMDERGDCV PKAQCPCYYD GEIFQPEDIF SDHHTMCYCE DGFMHCTMSG 720
VPGSLLPDAV LSSPLSHRSK R Domínio D' de VWF de poli- SLSCRPPMVK LVCPADNLRA EGLECTKTCQ peptídeo quimé- NYDLECMSMG CVSGCLCPPG MVRHENRCVA rico 60
LERCPCFHQG KEYAPGETVK IGCNTCVCRD SEQ ID NO: RKWNCTDHVC DAT 103 210
CSTIGMAHYL TFDGLKYLFP GECQYVLVQD YCGSNPGTFR ILVGNKGCSH PSVKCKKRVT 60 ILVEGGEIEL FDGEVNVKRP MKDETHFEVV ES- Domínio D3 de GRYIILLL GKALSVVWDR HLSISVVLKQ 120 VWF de poli- TYQEKVCGLC GNFDGIQNND LTSSNLQVEE peptídeo quimé- DPVDFGNSWK VSSQCADTRK VPLDSSPATC rico 180
HNNIMKQTMV DSSCRILTSD VFQDCNKLVD SEQ ID NO: PEPYLDVCIY DTCSCESIGD CAAFCDTIAA 240 214 YAHVCAQHGK VVTWRTATLC PQSCEERNLR
ENGYEAEWRY NSCAPACQVT CQHPEPLACP 300
VQCVEGCHAH CPPGKILDEL LQTCVDPEDC
PVCEVAGRRF ASGKKVTLNP SDPEHCQICH 360 CDVVNLTCEA CQEP 374
DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD 60 Região Fc
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK 120 SEQ ID NO:
GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK 217 GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 180
DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
GTSESATPES GPGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP 60
GTSTEPSEGS APGSPAGSPT STEEGTSESA TPESGPGSEP ATSGSETPGT SESATPESGP 120 XTEN AE288_3
GSPAGSPTST EEGSPAGSPT STEEGTSTEP SEGSAPGTSE SATPESGPGT SESATPESGP 180 SEQ ID NO:
GTSESATPES GPGSEPATSG SETPGSEPAT 218 SGSETPGSPA GSPTSTEEGT STEPSEGSAP 240
GTSTEPSEGS APGSEPATSG SETPGTSESA TPESGPGTST EPSEGSAPAS S 291
[0368] A descrição anterior das modalidades específicas descreverá tão completamente a natureza geral da invenção de forma que outros possam, ao aplicar o conhecimento dentro da perícia da técnica, modi- ficar e/ou adaptar prontamente tais modalidades específicas para várias aplicações, sem experimentação indevida, sem se afastar do conceito geral da presente invenção. Portanto, tais adaptações e modificações se destinam a estar dentro do significado e faixa de equivalentes das modalidades descritas, com base nos ensinamentos e orientações apre- sentados aqui. Deve ser entendido que a fraseologia ou terminologia aqui tem a finalidade de descrição e não de limitação, de modo que a terminologia ou fraseologia do presente relatório descritivo seja interpre- tada por aqueles versados na técnica à luz dos ensinamentos e orien- tação.
[0369] Outras modalidades da invenção serão evidentes para aque- les versados na técnica a partir da consideração do relatório descritivo e da prática da invenção descrita aqui. Pretende-se que o relatório des- critivo e os exemplos sejam considerados apenas exemplificativos, com o verdadeiro escopo e espírito da invenção sendo indicado pelas reivin- dicações a seguir.
[0370] Todas as patentes e publicações citadas aqui são incorpora- das por referência aqui na íntegra.

Claims (1)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Método para tratar hemofilia A em um ser humano que precisa, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indi- víduo doses múltiplas de um polipeptídeo quimérico que compreende (i) um polipeptídeo de fator VIII (FVIII) e (ii) um fragmento de fator de von Willebrand (VWF) que compreende um domínio D' de VWF e um domí- nio D3 de VWF em um intervalo de dosagem, em que pelo menos uma das múltiplas doses é a partir de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias.
    2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo de FVIII está associado ao fragmento de VWF através de uma ligação covalente.
    3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que a ligação covalente é uma ligação peptídica ou uma ligação de dissulfeto.
    4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo de FVIII compreende uma primeira porção de extensão de meia-vida.
    5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a primeira porção de extensão de meia-vida é fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do polipeptídeo de FVIII.
    6. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a primeira porção de extensão de meia-vida é inserida dentro do polipeptídeo de FVIII.
    7. Método, de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracteri- zado pelo fato de que a primeira porção de extensão de meia-vida é inserida dentro do domínio B do polipeptídeo de FVIII.
    8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a primeira porção de extensão de meia-vida é inserida dentro do polipeptídeo de FVIII imediatamente a jusante de um amino- ácido que corresponde ao resíduo de aminoácido 745 de SEQ ID NO:
    65.
    9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 8, caracterizado pelo fato de que a primeira porção de extensão de meia-vida é fundida ao polipeptídeo de FVIII através de um ligante.
    10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 9, caracterizado pelo fato de que o fragmento de VWF compreende uma segunda porção de extensão de meia-vida.
    11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a segunda porção de extensão de meia-vida é fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do fragmento de VWF.
    12. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a segunda porção de extensão de meia-vida é inserida dentro do fragmento de VWF.
    13. Método, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, carac- terizado pelo fato de que a segunda porção de extensão de meia-vida é fundida ao Terminal-C do fragmento de VWF.
    14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 13, caracterizado pelo fato de que a segunda porção de extensão de meia-vida é fundida ao fragmento de VWF através de um ligante.
    15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 14, caracterizado pelo fato de que a primeira porção de extensão de meia-vida, a segunda porção de extensão de meia-vida ou ambas são selecionadas a partir do grupo que consiste em uma albumina, uma re- gião Fc de imunoglobulina, uma sequência XTEN, o Peptídeo C-termi- nal (CTP) da subunidade β de gonadotrofina coriônica humana, uma sequência PAS, uma sequência HAP, uma transferrina, porções de li- gação à albumina ou quaisquer fragmentos, derivados, variantes e qual- quer combinação dos mesmos.
    16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 15, caracterizado pelo fato de que a primeira porção de extensão de meia-vida compreende um primeiro XTEN.
    17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o primeiro XTEN é inserido dentro do polipeptídeo de FVIII imediatamente a jusante de um aminoácido que corresponde ao resíduo de aminoácido 745 de SEQ ID NO: 65.
    18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 17, caracterizado pelo fato de que a segunda porção de extensão de meia-vida compreende um segundo XTEN.
    19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o segundo XTEN é fundido ao Terminal-C do fragmento de VWF.
    20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo de FVIII compre- ende uma primeira região constante de imunoglobulina (Ig) ou uma por- ção da mesma.
    21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do polipeptídeo de FVIII.
    22. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma é inserida dentro do polipeptídeo de FVIII.
    23. Método, de acordo com a reivindicação 20 ou 21, carac- terizado pelo fato de que a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao Terminal-C do polipeptídeo de FVIII.
    24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 23, caracterizado pelo fato de que a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao polipeptídeo de FVIII através de um ligante.
    25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 24, caracterizado pelo fato de que a primeira região constante de Ig ou a porção da mesma compreende um primeiro domínio Fc ou uma porção do mesmo.
    26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que o fragmento de VWF compreende uma segunda região constante de Ig ou uma porção da mesma.
    27. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao Terminal-C ou ao Terminal-N do fragmento de VWF.
    28. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma é inserida dentro do fragmento de VWF.
    29. Método, de acordo com a reivindicação 26 ou 27, carac- terizado pelo fato de que a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao Terminal-C do fragmento de VWF.
    30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26 a 29, caracterizado pelo fato de que a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma é fundida ao fragmento de VWF através de um ligante.
    31. Método, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o ligante é um ligante clivável.
    32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26 a 31, caracterizado pelo fato de que a segunda região constante de Ig ou a porção da mesma compreende um segundo domínio Fc ou uma porção do mesmo.
    33. Método, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a proteína FVIII e o fragmento de VWF estão associa- dos um ao outro por meio de uma ligação covalente entre o primeiro domínio Fc e o segundo domínio Fc.
    34. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que a proteína FVIII e o fragmento de VWF estão ainda associados um ao outro por meio de uma interação não covalente entre a proteína FVIII e o fragmento de VWF.
    35. Método de tratamento de hemofilia A em um ser humano, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo que precisa múltiplas doses de um polipeptídeo quimérico em um intervalo de dosagem, em que o polipeptídeo quimérico compreende: (i) uma proteína FVIII que compreende: (a) um primeiro fragmento de polipeptídeo de FVIII que com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 215; (b) uma primeira sequência XTEN que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 (AE288); (c) um segundo fragmento de polipeptídeo de FVIII que com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 216; e (d) uma primeira região Fc que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217; (ii) uma proteína VWF que compreende: (a) um domínio D' de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 210; (b) um domínio D3 de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 214; (c) uma segunda sequência XTEN que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 58 (AE144_5A); (d) um ligante a2 que compreende a sequência de aminoá- cidos de SEQ ID NO: 88; e (e) uma segunda região Fc que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 217; em que a primeira região Fc está covalentemente ligada à segunda região Fc através de uma ligação de dissulfeto.
    36. Método, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a proteína FVIII compreende ainda um peptídeo sinali- zador de FVIII que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64.
    37. Método, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a proteína VWF compreende ainda um peptídeo sinali- zador de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 208.
    38. Método, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a proteína VWF compreende ainda um domínio D1D2 de VWF que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:
    209.
    39. Método de tratamento de hemofilia A em um ser humano, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo que precisa múltiplas doses de um polipeptídeo quimérico em um intervalo de dosagem, em que o polipeptídeo quimérico compreende: (i) uma proteína FVIII que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 173, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203 ou SEQ ID NO: 207; e (ii) uma proteína VWF que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 202 ou SEQ ID NO: 205.
    40. Método de tratamento de hemofilia A em um ser humano, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo que precisa múltiplas doses de um polipeptídeo quimérico em um intervalo de dosagem, em que o polipeptídeo quimérico compreende: (i) uma proteína FVIII que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 203; e
    (ii) uma proteína VWF que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 205.
    41. Método de tratamento de hemofilia A em um ser humano, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo que precisa múltiplas doses de um polipeptídeo quimérico em um intervalo de dosagem, em que o polipeptídeo quimérico compreende: (i) uma proteína FVIII que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica a uma sequência selecionada a partir de FVIII-161 (SEQ ID NO: 69), FVIII-169 (SEQ ID NO: 70), FVIII-170 (SEQ ID NO: 71), FVIII-173 (SEQ ID NO: 72); FVIII-195 (SEQ ID NO: 73); FVIII-196 (SEQ ID NO: 74), FVIII199 (SEQ ID NO: 75), FVIII-201 (SEQ ID NO: 76); FVIII-203 (SEQ ID NO: 77), FVIII-204 (SEQ ID NO: 78), FVIII-205 (SEQ ID NO: 79), FVIII-266 (SEQ ID NO: 80), FVIII-267 (SEQ ID NO: 81), FVIII-268 (SEQ ID NO: 82), FVIII-269 (SEQ ID NO: 83), FVIII-271 (SEQ ID NO: 84), FVIII-272 (SEQ ID NO: 85), FVIII -312 (SEQ ID NO: 173) ou FVIII-312A (SEQ ID NO: 203); e (ii) uma proteína VWF que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica a uma sequência selecionada a partir de VWF031 (SEQ ID NO: 86), VWF034 (SEQ ID NO: 87), VWF059 (SEQ ID NO: 197), VWF059A (SEQ ID NO: 202) ou VWF036.
    42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das múltiplas doses é a partir de cerca de 15 IU/kg a cerca de 100 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 7 dias.
    43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das múltiplas doses é a partir de cerca de 50 IU/kg ou cerca de 65 IU/kg e o intervalo de dosagem é pelo menos cerca de 5 dias ou cerca de 7 dias.
    44. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que as doses múltiplas compreendem pelo menos duas doses, pelo menos três doses, pelo menos quatro do- ses, pelo menos cinco doses, pelo menos seis doses, pelo menos sete doses, pelo menos oito doses, pelo menos nove doses, pelo menos dez doses, pelo menos onze doses, pelo menos doze doses, pelo menos treze doses, pelo menos quatorze doses, pelo menos quinze doses, pelo menos dezesseis doses, pelo menos dezessete doses, pelo menos dezoito doses, pelo menos dezenove doses, pelo menos vinte doses ou mais.
    45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o tratamento da hemofilia A com- preende controlar ou diminuir a incidência ou frequência de um episódio de sangramento em um ser humano que precisa.
    46. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o tratamento da hemofilia A com- preende prevenir ou tratar um episódio de sangramento em um ser hu- mano que precisa.
    47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 95 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 90 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 85 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 80 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 75 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 70 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 65 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 60 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 55 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 50 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 45 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 40 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 35 IU/kg, a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 30 IU/kg ou a partir de cerca de 20 IU/kg a cerca de 25 IU/kg.
    48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 20 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 25 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 30 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 35 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 40 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 45 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 50 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 55 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 60 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 65 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 70 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 75 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 80 IU/kg a cerca de 100 IU/kg, cerca de 85 IU/kg a cerca de 100 IU/kg ou cerca de 90 IU/kg a cerca de 100 IU/kg.
    49. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é de cerca de 20 IU/kg a cerca de 80 IU/kg, a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 75 IU/kg, a partir de cerca de 30 IU/kg a cerca de 70 IU/kg, a partir de cerca de 35 IU/kg a cerca de 65 IU/kg, a partir de cerca de 40 IU/kg a cerca de 60 IU/kg ou a partir de cerca de 45 IU/kg a cerca de 55 IU/kg.
    50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é a partir de cerca de 25 IU/kg a cerca de 65 IU/kg.
    51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 20 IU/kg, cerca de 25 IU/kg, cerca de 30 IU/kg, cerca de 35 IU/kg, cerca de 40 IU/kg, cerca de 45 IU/kg, cerca de 50 IU/kg, cerca de 55 IU/kg, cerca de 60 IU/kg, cerca de 65 IU/kg, cerca de 70 IU/kg, cerca de 75 IU/kg, cerca de 80 IU/kg, cerca de 85 IU/kg, cerca de 90 IU/kg, cerca de 95 IU/kg ou cerca de 100 IU/kg.
    52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 25 IU/kg.
    53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 65 IU/kg.
    54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 80 IU/kg.
    55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o intervalo de dosagem é de pelo menos cerca de 7 dias, pelo menos cerca de 8 dias, pelo menos cerca de 9 dias, pelo menos cerca de 10 dias, pelo menos cerca de 11 dias, pelo menos cerca de 12 dias, pelo menos cerca de 13 dias, pelo menos cerca de 14 dias, pelo menos cerca de 15 dias, pelo menos cerca de 16 dias, pelo menos cerca de 17 dias, pelo menos cerca de 18 dias, pelo menos cerca de 19 dias, pelo menos cerca de 20 dias, pelo menos cerca de 21 dias, pelo menos cerca de 22 dias, pelo menos cerca de 23 dias, pelo menos cerca de 24 dias, pelo menos cerca de 25 dias, pelo menos cerca de 26 dias, pelo menos cerca de 27 dias, pelo menos cerca de 28 dias, pelo menos cerca de 29 dias, pelo menos cerca de 30 dias ou pelo menos cerca de 31 dias.
    56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que a frequência das doses é de pelo menos uma vez por semana, pelo menos uma vez a cada 2 semanas, pelo menos uma vez a cada 3 semanas ou pelo menos uma vez a cada 4 semanas.
    57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que a frequência das doses é de pelo menos uma vez por semana.
    58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    1 a 41, caracterizado pelo fato de que a frequência das doses é de pelo menos uma vez a cada duas semanas.
    59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo quimérico é admi- nistrado para tratamento profilático.
    60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo quimérico é admi- nistrado através de uma via selecionada a partir do grupo que consiste em injeção intravenosa, infusão intravenosa, administração subcutânea, administração intramuscular, administração oral, administração nasal e administração pulmonar.
    61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo quimérico, após a administração, resulta em um nível de atividade plasmática de FVIII de pelo menos cerca de 1 %, pelo menos cerca de 2 %, pelo menos cerca de 3 %, pelo menos cerca de 4 %, pelo menos cerca de 5 %, pelo menos cerca de 6 %, pelo menos cerca de 7 %, pelo menos cerca de 8 %, pelo menos cerca de 9 % ou pelo menos cerca de 10 %.
    62. Método, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que o nível de atividade plasmática de FVIII é de pelo me- nos cerca de 3 %.
    63. Método, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que o nível de atividade plasmática de FVIII é de pelo me- nos cerca de 5 %.
    64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo quimérico, após a administração, resulta em um nível de atividade plasmática de FVIII de pelo menos cerca de 1 IU/dL, pelo menos cerca de 2 IU/dL, pelo menos cerca de 3 IU/dL, pelo menos cerca de 4 IU/dL, pelo menos cerca de 5 IU/dL, pelo menos cerca de 6 IU/dL, pelo menos cerca de 7 IU/dL, pelo menos cerca de 8 IU/dL, pelo menos cerca de 9 IU/dL ou pelo menos pelo menos cerca de 10 IU/dL.
    65. Método, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que o nível de atividade plasmática de FVIII é de pelo me- nos cerca de 3 IU/dL.
    66. Método, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que o nível de atividade plasmática de FVIII é de pelo me- nos cerca de 5 IU/dL.
    67. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o nível de atividade plasmática de FVIII é de pelo menos cerca de 10 IU/dL pelo menos cerca de 5 dias após administração do polipeptídeo quimérico.
    68. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o nível de atividade plasmática de FVIII é de pelo menos cerca de 5 IU/dL pelo menos cerca de 7 dias após administração do polipeptídeo quimérico.
    69. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o nível de atividade plasmática de FVIII é de pelo menos cerca de 3 IU/dL pelo menos cerca de 8 dias após administração do polipeptídeo quimérico.
    70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o nível de atividade plasmática de FVIII é de pelo menos cerca de 1 IU/dL pelo menos cerca de 10 dias após administração do polipeptídeo quimérico.
    71. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das doses múl- tiplas é cerca de 50 IU/kg.
    72. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que as doses múltiplas são cerca de 50 IU/kg e o intervalo de dosagem é cerca de 7 dias.
    73. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que a administração do polipeptídeo quimérico não induz a nenhum inibidor de FVIII após cerca de 7 dias, cerca de 10 dias, cerca de 11 dias, cerca de 12 dias, cerca de 13 dias, cerca de 14 dias, cerca de 15 dias, cerca de 20 dias, cerca de 24 dias, cerca de 25 dias, cerca de 28 dias, cerca de 30 dias ou cerca de 35 dias da administração.
    74. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que a administração do polipeptídeo quimérico não induz a nenhum inibidor de FVIII após cerca de 28 dias da administração.
    75. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das múltiplas doses é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 80 IU/kg.
    76. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das múltiplas doses é a partir de cerca de 50 IU/kg a cerca de 65 IU/kg.
    77. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma das múltiplas doses é a partir de cerca de 65 IU/kg a cerca de 80 IU/kg.
    78. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o intervalo de dosagem é de pelo menos cerca de 7 dias.
    79. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o intervalo de dosagem é de cerca de 7 dias a cerca de 14 dias.
    80. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o intervalo de dosagem é de pelo menos cerca de 10 dias.
    81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    1 a 41, caracterizado pelo fato de que o intervalo de dosagem é de cerca de 10 dias a cerca de 21 dias.
    82. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o intervalo de dosagem é de cerca de 14 dias a cerca de 21 dias.
    83. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o intervalo de dosagem é de cerca de 14 dias.
    84. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o ser humano é uma mulher.
    85. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o ser humano é uma criança.
    86. Método, de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que o ser humano é uma criança que tem ou tem menos de cerca de 12 anos, menos de cerca de 11 anos, menos de cerca de 10 anos, menos de cerca de 9 anos, menos de cerca de 8 anos, menos de cerca de 7 anos, menos de cerca de 6 anos, menos de cerca de 5 anos, menos de cerca de 4 anos, menos de cerca de 3 anos, menos de cerca de 2 anos ou menos de cerca de 1 ano.
    87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que a administração induz à tolerância imune ao FVIII no ser humano.
    88. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que a administração reduz a uma res- posta imune inibidora ao FVIII no ser humano.
    89. Método, de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que a resposta imune inibidora ao FVIII compreende uma elevada titulação de anticorpos anti-FVIII no ser humano.
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AU (1) AU2019270184A1 (pt)
BR (1) BR112020022164A2 (pt)
CA (1) CA3099049A1 (pt)
CO (1) CO2020014566A2 (pt)
MA (1) MA52630A (pt)
MX (1) MX2020012397A (pt)
SG (1) SG11202010767SA (pt)
TW (1) TW202015723A (pt)
WO (1) WO2019222682A1 (pt)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3674410A1 (en) * 2012-07-11 2020-07-01 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii complex with xten and von willebrand factor protein, and uses thereof
TW202015723A (zh) 2018-05-18 2020-05-01 美商百歐維拉提夫治療公司 治療ａ型血友病的方法
WO2021257899A1 (en) * 2020-06-19 2021-12-23 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods for treating hemophilia a and population pharmacokinetics tools for determining treatments and uses thereof
TW202317178A (zh) * 2021-06-23 2023-05-01 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ⅷ嵌合蛋白的配製品及其用途
WO2023064886A1 (en) * 2021-10-15 2023-04-20 Bioverativ Therapeutics Inc. Formulations of factor viii chimeric proteins and uses thereof
WO2023172893A2 (en) * 2022-03-08 2023-09-14 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilia a

Family Cites Families (434)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US836805A (en) 1904-05-10 1906-11-27 Alva Battie Dozier Telephone or switchboard plug.
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US3992518A (en) 1974-10-24 1976-11-16 G. D. Searle & Co. Method for making a microsealed delivery device
GB1478759A (en) 1974-11-18 1977-07-06 Alza Corp Process for forming outlet passageways in pills using a laser
US4284444A (en) 1977-08-01 1981-08-18 Herculite Protective Fabrics Corporation Activated polymer materials and process for making same
US4704362A (en) 1977-11-08 1987-11-03 Genentech, Inc. Recombinant cloning vehicle microbial polypeptide expression
US4200098A (en) 1978-10-23 1980-04-29 Alza Corporation Osmotic system with distribution zone for dispensing beneficial agent
US4235881A (en) 1978-12-04 1980-11-25 Cort Joseph H Method for producing high potency factor VIII
US4200984A (en) 1979-03-12 1980-05-06 Fink Ray D Detachable tool combining bracket and method
US4342832A (en) 1979-07-05 1982-08-03 Genentech, Inc. Method of constructing a replicable cloning vehicle having quasi-synthetic genes
US4215051A (en) 1979-08-29 1980-07-29 Standard Oil Company (Indiana) Formation, purification and recovery of phthalic anhydride
ZA811368B (en) 1980-03-24 1982-04-28 Genentech Inc Bacterial polypedtide expression employing tryptophan promoter-operator
US4398908A (en) 1980-11-28 1983-08-16 Siposs George G Insulin delivery system
US4456591A (en) 1981-06-25 1984-06-26 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Therapeutic method for activating factor VII
US4435173A (en) 1982-03-05 1984-03-06 Delta Medical Industries Variable rate syringe pump for insulin delivery
US4542025A (en) 1982-07-29 1985-09-17 The Stolle Research And Development Corporation Injectable, long-acting microparticle formulation for the delivery of anti-inflammatory agents
US4599311A (en) 1982-08-13 1986-07-08 Kawasaki Glenn H Glycolytic promotersfor regulated protein expression: protease inhibitor
US4713339A (en) 1983-01-19 1987-12-15 Genentech, Inc. Polycistronic expression vector construction
US4870008A (en) 1983-08-12 1989-09-26 Chiron Corporation Secretory expression in eukaryotes
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US5004804A (en) 1984-01-12 1991-04-02 Nordisk Gentofte Method and composition for preparation of factor VIIIC
US7138505B1 (en) 1984-01-12 2006-11-21 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Factor VIII:C nucleic acid molecules
DE3572982D1 (en) 1984-03-06 1989-10-19 Takeda Chemical Industries Ltd Chemically modified lymphokine and production thereof
US5916588A (en) 1984-04-12 1999-06-29 The Liposome Company, Inc. Peptide-containing liposomes, immunogenic liposomes and methods of preparation and use
US5231112A (en) 1984-04-12 1993-07-27 The Liposome Company, Inc. Compositions containing tris salt of cholesterol hemisuccinate and antifungal
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4931373A (en) 1984-05-25 1990-06-05 Zymogenetics, Inc. Stable DNA constructs for expression of α-1 antitrypsin
AU576889B2 (en) 1984-07-24 1988-09-08 Key Pharmaceuticals, Inc. Adhesive transdermal dosage layer
US4766073A (en) 1985-02-25 1988-08-23 Zymogenetics Inc. Expression of biologically active PDGF analogs in eucaryotic cells
US4885249A (en) 1984-12-05 1989-12-05 Allelix, Inc. Aspergillus niger transformation system
US4970300A (en) 1985-02-01 1990-11-13 New York University Modified factor VIII
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US5981216A (en) 1985-04-01 1999-11-09 Alusuisse Holdings A.G. Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
ES8801674A1 (es) 1985-04-12 1988-02-16 Genetics Inst Un procedimiento para la preparacion de una proteina que presenta actividad procoagulante.
GR860984B (en) 1985-04-17 1986-08-18 Zymogenetics Inc Expression of factor vii and ix activities in mammalian cells
US4770999A (en) 1985-04-22 1988-09-13 Genetics Institute, Inc. High yield production of active Factor IX
US4684479A (en) 1985-08-14 1987-08-04 Arrigo Joseph S D Surfactant mixtures, stable gas-in-liquid emulsions, and methods for the production of such emulsions from said mixtures
KR910006424B1 (ko) 1985-08-21 1991-08-24 인코텍스 비.브이 편성브리프(brief) 제조방법
US4882279A (en) 1985-10-25 1989-11-21 Phillips Petroleum Company Site selective genomic modification of yeast of the genus pichia
US5198349A (en) 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
JP2525022B2 (ja) 1986-01-03 1996-08-14 ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド ▲ＶＩＩＩ▼：ｃ因子型タンパク質の改良生産方法
US5250421A (en) 1986-01-03 1993-10-05 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C-type proteins
US4935349A (en) 1986-01-17 1990-06-19 Zymogenetics, Inc. Expression of higher eucaryotic genes in aspergillus
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
DK122686D0 (da) 1986-03-17 1986-03-17 Novo Industri As Fremstilling af proteiner
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US5422260A (en) 1986-05-29 1995-06-06 Genetics Institute, Inc. -Legal Affairs Human factor VIII:c muteins
US6759057B1 (en) 1986-06-12 2004-07-06 The Liposome Company, Inc. Methods and compositions using liposome-encapsulated non-steroidal anti-inflammatory drugs
US5543502A (en) 1986-06-24 1996-08-06 Novo Nordisk A/S Process for producing a coagulation active complex of factor VIII fragments
IE60901B1 (en) 1986-08-21 1994-08-24 Vestar Inc Improved treatment of systemic fungal infections with phospholipid particles encapsulating polyene antifungal antibiotics
US4933185A (en) 1986-09-24 1990-06-12 Massachusetts Institute Of Technology System for controlled release of biologically active compounds
US5811128A (en) 1986-10-24 1998-09-22 Southern Research Institute Method for oral or rectal delivery of microencapsulated vaccines and compositions therefor
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
US6406713B1 (en) 1987-03-05 2002-06-18 The Liposome Company, Inc. Methods of preparing low-toxicity drug-lipid complexes
US4775207A (en) 1987-03-17 1988-10-04 Bell Communications Research, Inc. Electro-optical switch
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
CA1331157C (en) 1987-04-06 1994-08-02 Randal J. Kaufman Method for producing factor viii:c-type proteins
US6060447A (en) 1987-05-19 2000-05-09 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US5171844A (en) 1987-06-12 1992-12-15 Gist-Brocades N.W. Proteins with factor viii activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
US6346513B1 (en) 1987-06-12 2002-02-12 Baxter Trading Gmbh Proteins with factor VIII activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
DE3720246A1 (de) 1987-06-19 1988-12-29 Behringwerke Ag Faktor viii:c-aehnliches molekuel mit koagulationsaktivitaet
US4897268A (en) 1987-08-03 1990-01-30 Southern Research Institute Drug delivery system and method of making the same
US4976696A (en) 1987-08-10 1990-12-11 Becton, Dickinson And Company Syringe pump and the like for delivering medication
FR2619314B1 (fr) 1987-08-11 1990-06-15 Transgene Sa Analogue du facteur viii, procede de preparation et composition pharmaceutique le contenant
US4861800A (en) 1987-08-18 1989-08-29 Buyske Donald A Method for administering the drug deprenyl so as to minimize the danger of side effects
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
AU598958B2 (en) 1987-11-12 1990-07-05 Vestar, Inc. Improved amphotericin b liposome preparation
US5270176A (en) 1987-11-20 1993-12-14 Hoechst Aktiengesellschaft Method for the selective cleavage of fusion proteins with lysostaphin
GB8807504D0 (en) 1988-03-29 1988-05-05 Sandoz Ltd Improvements in/relating to organic compounds
US5037743A (en) 1988-08-05 1991-08-06 Zymogenetics, Inc. BAR1 secretion signal
JP2717808B2 (ja) 1988-08-10 1998-02-25 テルモ株式会社 シリンジポンプ
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5534617A (en) 1988-10-28 1996-07-09 Genentech, Inc. Human growth hormone variants having greater affinity for human growth hormone receptor at site 1
US6780613B1 (en) 1988-10-28 2004-08-24 Genentech, Inc. Growth hormone variants
US5004803A (en) 1988-11-14 1991-04-02 Genetics Institute, Inc. Production of procoagulant proteins
ATE135370T1 (de) 1988-12-22 1996-03-15 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
AU648020B2 (en) 1989-02-21 1994-04-14 Washington University Modified forms of reproductive hormones
US5017378A (en) 1989-05-01 1991-05-21 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Intraorgan injection of biologically active compounds contained in slow-release microcapsules or microspheres
ATE133087T1 (de) 1989-05-04 1996-02-15 Southern Res Inst Einkapselungsverfahren
US5599907A (en) 1989-05-10 1997-02-04 Somatogen, Inc. Production and use of multimeric hemoglobins
US5298022A (en) 1989-05-29 1994-03-29 Amplifon Spa Wearable artificial pancreas
FR2647677B1 (fr) 1989-05-31 1991-09-27 Roussel Uclaf Nouvelles micro-proteines, procede de preparation et application a titre de medicaments de ces nouvelles micro-proteines
US7413537B2 (en) 1989-09-01 2008-08-19 Dyax Corp. Directed evolution of disulfide-bonded micro-proteins
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
US5318540A (en) 1990-04-02 1994-06-07 Pharmetrix Corporation Controlled release infusion device
US5492534A (en) 1990-04-02 1996-02-20 Pharmetrix Corporation Controlled release portable pump
US6552170B1 (en) 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
US5176502A (en) 1990-04-25 1993-01-05 Becton, Dickinson And Company Syringe pump and the like for delivering medication
US6517859B1 (en) 1990-05-16 2003-02-11 Southern Research Institute Microcapsules for administration of neuroactive agents
US5215680A (en) 1990-07-10 1993-06-01 Cavitation-Control Technology, Inc. Method for the production of medical-grade lipid-coated microbubbles, paramagnetic labeling of such microbubbles and therapeutic uses of microbubbles
US5583107A (en) 1990-09-04 1996-12-10 Cor Therapeutics, Inc. Agents affecting thrombosis and hemostasis
RU2114119C1 (ru) 1990-12-13 1998-06-27 Дзе Апджон Компани Слитой белок и способ выделения слитого белка
US5206161A (en) 1991-02-01 1993-04-27 Genentech, Inc. Human plasma carboxypeptidase B
US20060122376A1 (en) 1991-02-07 2006-06-08 Chiron Corporation Protein complexes having factor VIII:C activity and production thereof
US5833982A (en) 1991-02-28 1998-11-10 Zymogenetics, Inc. Modified factor VII
SG47099A1 (en) 1991-03-15 1998-03-20 Amgen Boulder Inc Pegylation of polypeptides
US5846951A (en) 1991-06-06 1998-12-08 The School Of Pharmacy, University Of London Pharmaceutical compositions
MX9204374A (es) 1991-07-25 1993-03-01 Idec Pharma Corp Anticuerpo recombinante y metodo para su produccion.
CA2078721A1 (en) 1991-09-24 1993-03-25 Hiroshi Yonemura Process for preparing human coagulation factor viii protein complex
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US6376463B1 (en) 1992-04-07 2002-04-23 Emory University Modified factor VIII
US5364771A (en) 1992-04-07 1994-11-15 Emory University Hybrid human/porcine factor VIII
US5859204A (en) 1992-04-07 1999-01-12 Emory University Modified factor VIII
US6037452A (en) 1992-04-10 2000-03-14 Alpha Therapeutic Corporation Poly(alkylene oxide)-Factor VIII or Factor IX conjugate
SK282483B6 (sk) 1992-10-02 2002-02-05 Genetics Institute, Inc. Stabilná kompozícia koagulačného faktora VIII, spôsob jej prípravy a stabilizácie
US5563045A (en) 1992-11-13 1996-10-08 Genetics Institute, Inc. Chimeric procoagulant proteins
DE669986T1 (de) 1992-11-13 1996-10-10 Idec Pharma Corp Völlig unfunktionelle konsensus-kozak-sequenzen zur säugetier-exprimierung.
US5573776A (en) 1992-12-02 1996-11-12 Alza Corporation Oral osmotic device with hydrogel driving member
US5554730A (en) 1993-03-09 1996-09-10 Middlesex Sciences, Inc. Method and kit for making a polysaccharide-protein conjugate
US6090925A (en) 1993-03-09 2000-07-18 Epic Therapeutics, Inc. Macromolecular microparticles and methods of production and use
US5981719A (en) 1993-03-09 1999-11-09 Epic Therapeutics, Inc. Macromolecular microparticles and methods of production and use
US5578709A (en) 1993-03-09 1996-11-26 Middlesex Sciences, Inc. Macromolecular microparticles and methods of production
SE504074C2 (sv) 1993-07-05 1996-11-04 Pharmacia Ab Proteinberedning för subkutan, intramuskulär eller intradermal administrering
US5576291A (en) 1993-09-13 1996-11-19 Baxter International Inc. Activated factor VIII as a therapeutic agent and method of treating factor VIII deficiency
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US20020042079A1 (en) 1994-02-01 2002-04-11 Sanford M. Simon Methods and agents for measuring and controlling multidrug resistance
US5660848A (en) 1994-11-02 1997-08-26 The Population Council, Center For Biomedical Research Subdermally implantable device
GB9422383D0 (en) 1994-11-05 1995-01-04 Wellcome Found Antibodies
SE503424C2 (sv) 1994-11-14 1996-06-10 Pharmacia Ab Process för rening av rekombinant koagulationsfaktor VIII
US6818439B1 (en) 1994-12-30 2004-11-16 Chiron Corporation Methods for administration of recombinant gene delivery vehicles for treatment of hemophilia and other disorders
US6086875A (en) 1995-01-17 2000-07-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US6485726B1 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US7846455B2 (en) 1996-07-15 2010-12-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Attenuated chimeric respiratory syncytial virus
SE9503380D0 (sv) 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
GB9526733D0 (en) 1995-12-30 1996-02-28 Delta Biotechnology Ltd Fusion proteins
JP3737518B2 (ja) 1996-03-12 2006-01-18 ピージー−ティーエックスエル カンパニー， エル．ピー． 水溶性パクリタキセルプロドラッグ
US6441025B2 (en) 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
US8183344B2 (en) 1996-04-24 2012-05-22 University Of Michigan Inactivation resistant factor VIII
US7560107B2 (en) 1996-06-26 2009-07-14 Emory University Modified factor VIII
US6458563B1 (en) 1996-06-26 2002-10-01 Emory University Modified factor VIII
EP0918872B1 (en) 1996-08-02 2008-02-20 Bristol-Myers Squibb Company A method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis
CA2263455C (en) 1996-08-23 2002-10-29 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Liposomes containing a cisplatin compound
AU4907897A (en) 1996-10-11 1998-05-11 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
NZ514133A (en) 1996-10-15 2001-09-28 Liposome Co Inc N-acyl phosphatidylethanolamine-mediated liposomal drug delivery
US6361796B1 (en) 1996-10-25 2002-03-26 Shire Laboratories, Inc. Soluble form osmotic dose delivery system
JP4863534B2 (ja) 1996-10-25 2012-01-25 スパーナス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 可溶形態浸透用量送達システム
WO1998022577A1 (en) 1996-11-15 1998-05-28 Maria Grazia Masucci Fusion proteins having increased half-lives
US6395302B1 (en) 1996-11-19 2002-05-28 Octoplus B.V. Method for the preparation of microspheres which contain colloidal systems
EP0842657A1 (en) 1996-11-19 1998-05-20 OctoPlus B.V. Microspheres for controlled release and processes to prepare these microspheres
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US20020019036A1 (en) 1996-12-13 2002-02-14 Hans-Peter Schwarz Von willebrand factor derivatives and methods of isolating proteins that bind to von willebrand factor
US6294170B1 (en) 1997-08-08 2001-09-25 Amgen Inc. Composition and method for treating inflammatory diseases
AT405516B (de) 1997-02-27 1999-09-27 Immuno Ag Faktor x-analoge mit modifizierter proteasespaltstelle
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
CA2225189C (en) 1997-03-06 2010-05-25 Queen's University At Kingston Canine factor viii gene, protein and methods of use
JP4128227B2 (ja) 1997-03-14 2008-07-30 バイオジェン・アイデック・インコーポレイテッド 哺乳類細胞内の特定部位に相同組換えによって遺伝子を組み込む方法とそれを実施するためのベクター
ES2258817T3 (es) 1997-05-21 2006-09-01 Biovation Limited Metodo para la produccion de proteinas no inmunogenas.
US6310183B1 (en) 1997-09-10 2001-10-30 Novo Nordisk A/S Coagulation factor VIIa composition
US7786070B2 (en) 1997-09-10 2010-08-31 Novo Nordisk Healthcare A/G Subcutaneous administration of coagulation factor VII
DE19747261A1 (de) 1997-10-25 1999-04-29 Bayer Ag Osmotisches Arzneimittelfreisetzungssystem
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
EP1563866B1 (en) 1998-02-05 2007-10-03 Biosense Webster, Inc. Intracardiac drug delivery
US20050260605A1 (en) 1998-02-11 2005-11-24 Maxygen, Inc. Targeting of genetic vaccine vectors
WO1999041383A1 (en) 1998-02-11 1999-08-19 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
ES2532910T3 (es) 1998-04-02 2015-04-01 Genentech, Inc. Variantes de anticuerpos y fragmentos de los mismos
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6406632B1 (en) 1998-04-03 2002-06-18 Symyx Technologies, Inc. Rapid characterization of polymers
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US7090976B2 (en) 1999-11-10 2006-08-15 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising Renilla GFP
GB9815157D0 (en) 1998-07-13 1998-09-09 Metron Designs Ltd High resolution pulse width setting from relatively low frequency clocks
WO2000009560A2 (en) 1998-08-17 2000-02-24 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US6927044B2 (en) 1998-09-25 2005-08-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-1 receptor based cytokine traps
WO2000028021A1 (de) 1998-11-10 2000-05-18 Baxter Aktiengesellschaft Ein faktor viii-polypeptid mit faktor viii:c-aktivität
EP1006183A1 (en) 1998-12-03 2000-06-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Recombinant soluble Fc receptors
US6329186B1 (en) 1998-12-07 2001-12-11 Novozymes A/S Glucoamylases with N-terminal extensions
US6358703B1 (en) 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
US6713086B2 (en) 1998-12-18 2004-03-30 Abbott Laboratories Controlled release formulation of divalproex sodium
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
MXPA01007170A (es) 1999-01-15 2002-07-30 Genentech Inc Variantes de polipeptidos con funcion efectora alterada.
DE60017099T2 (de) 1999-03-03 2006-01-12 Optinose As Nasales verabreichungsgerät
US6183770B1 (en) 1999-04-15 2001-02-06 Acutek International Carrier patch for the delivery of agents to the skin
US7666400B2 (en) 2005-04-06 2010-02-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. PEGylation by the dock and lock (DNL) technique
US6743211B1 (en) 1999-11-23 2004-06-01 Georgia Tech Research Corporation Devices and methods for enhanced microneedle penetration of biological barriers
US7829085B2 (en) 1999-07-14 2010-11-09 Life Sciences Research Partners Vzw Methods of treating hemostasis disorders using antibodies binding the C1 domain of factor VIII
WO2001007072A1 (en) 1999-07-23 2001-02-01 The Regents Of The University Of California Modulation of platelet activation
EP1203014B1 (en) 1999-08-06 2004-10-13 Genentech, Inc. Peptide antagonists of factor viia
US6458387B1 (en) 1999-10-18 2002-10-01 Epic Therapeutics, Inc. Sustained release microspheres
US20030109428A1 (en) 1999-12-01 2003-06-12 John Bertin Novel molecules of the card-related protein family and uses thereof
US20050287153A1 (en) 2002-06-28 2005-12-29 Genentech, Inc. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
US6352721B1 (en) 2000-01-14 2002-03-05 Osmotica Corp. Combined diffusion/osmotic pumping drug delivery system
WO2001058957A2 (en) 2000-02-11 2001-08-16 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
JP2003521930A (ja) 2000-02-11 2003-07-22 マキシゲン・エイピーエス 第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子様分子
WO2001079480A1 (en) 2000-04-12 2001-10-25 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
JP2001326635A (ja) 2000-05-16 2001-11-22 Matsushita Electric Ind Co Ltd インターネットの課金システム
ATE313554T1 (de) 2000-05-16 2006-01-15 Lipoxen Technologies Ltd Derivatisierung von proteinen in wässrigem lösungsmittel
CA2419115C (en) 2000-08-15 2011-03-08 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Microparticles, and method and apparatus for forming same
ES2429523T3 (es) 2000-09-13 2013-11-15 Novo Nordisk Health Care Ag Variantes del factor VII de coagulación humana
JP2004525608A (ja) 2000-09-19 2004-08-26 エモリー ユニバーシテイ 修飾された因子ｖｉｉｉ
DE10053224A1 (de) 2000-10-26 2002-05-08 Univ Goettingen Georg August Verfahren zur Exposition von Peptiden und Polypeptiden auf der Zelloberfläche von Bakterien
US20030228309A1 (en) 2000-11-08 2003-12-11 Theodora Salcedo Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
AU2002226028A1 (en) 2000-11-14 2002-05-27 Board Of Regents, Unversity Of Texas Systems Mutant human factor ix with an increased resistance to inhibition by heparin
GB0029407D0 (en) 2000-12-01 2001-01-17 Affitech As Product
JP4336498B2 (ja) 2000-12-12 2009-09-30 メディミューン，エルエルシー 延長した半減期を有する分子ならびにその組成物および用途
US20030104591A1 (en) 2000-12-14 2003-06-05 Murray Christopher J. Methods and compositions for grafting functional loops into a protein
US20030049689A1 (en) 2000-12-14 2003-03-13 Cynthia Edwards Multifunctional polypeptides
CA2433439A1 (en) 2000-12-29 2002-08-15 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
IN190699B (pt) 2001-02-02 2003-08-16 Sun Pharmaceutical Ind Ltd
KR20030078901A (ko) 2001-02-05 2003-10-08 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ⅶ 폴리펩티드 및 인자 ⅷ 폴리펩티드의 조합 사용
US6888319B2 (en) 2001-03-01 2005-05-03 Palomar Medical Technologies, Inc. Flashlamp drive circuit
JP4336771B2 (ja) 2001-03-09 2009-09-30 モルフォシス アーゲー 血清アルブミン結合部分
PE20020908A1 (es) 2001-03-21 2002-10-26 Cell Therapeutics Inc Produccion recombinante de polimeros polianionicos y uso de de los mismos
US6992174B2 (en) 2001-03-30 2006-01-31 Emd Lexigen Research Center Corp. Reducing the immunogenicity of fusion proteins
US20040106794A1 (en) 2001-04-16 2004-06-03 Schering Corporation 3,4-Di-substituted cyclobutene-1,2-diones as CXC-chemokine receptor ligands
US20050048512A1 (en) 2001-04-26 2005-03-03 Avidia Research Institute Combinatorial libraries of monomer domains
WO2002087621A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Shire Laboratories Inc. Pharmaceutical composition including ace/nep inhibitors and bioavailability enhancers
TW503179B (en) 2001-05-07 2002-09-21 Benq Corp Ink jetting device having bubble valve and the method thereof
US6838093B2 (en) 2001-06-01 2005-01-04 Shire Laboratories, Inc. System for osmotic delivery of pharmaceutically active agents
NZ530131A (en) 2001-06-15 2005-12-23 Andre C Gene therapy for hemophilia A
KR100407467B1 (ko) 2001-07-12 2003-11-28 최수봉 리모컨 방식의 인슐린 자동주사기
AU2002322394A1 (en) 2001-07-30 2003-02-17 Eli Lilly And Company Method for treating diabetes and obesity
WO2003020764A2 (en) 2001-09-04 2003-03-13 Merck Patent Gmbh Modified factor ix
JP2003110596A (ja) 2001-09-28 2003-04-11 Hitachi Ltd データ通信サービス提供方法
NZ532027A (en) 2001-10-10 2008-09-26 Neose Technologies Inc Remodeling and glycoconjugation of peptides
US7125843B2 (en) 2001-10-19 2006-10-24 Neose Technologies, Inc. Glycoconjugates including more than one peptide
US6960657B2 (en) 2001-11-02 2005-11-01 Novo Nordisk Healthcare A/G Human coagulation factor VII polypeptides
EP1451297A4 (en) 2001-12-07 2006-06-28 Toolgen Inc PHENOTYPIC SCANNING OF CHIMERIC PROTEINS
US20080194481A1 (en) 2001-12-21 2008-08-14 Human Genome Sciences, Inc. Albumin Fusion Proteins
US20080167238A1 (en) 2001-12-21 2008-07-10 Human Genome Sciences, Inc. Albumin Fusion Proteins
EP1997829A1 (en) 2001-12-21 2008-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
WO2005077042A2 (en) 2004-02-09 2005-08-25 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
KR101271635B1 (ko) 2001-12-21 2013-06-12 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 알부민 융합 단백질
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040018557A1 (en) 2002-03-01 2004-01-29 Immunomedics, Inc. Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance
EP1487992A4 (en) 2002-03-15 2007-10-31 Brigham & Womens Hospital CENTRAL AIRWAY DELIVERY FOR SYSTEMIC DRUG DELIVERY
NZ536340A (en) 2002-04-30 2006-09-29 Maxygen Holdings Ltd Factor VII or VIIa polypeptide variants with N-glycosylation
US6945952B2 (en) 2002-06-25 2005-09-20 Theraject, Inc. Solid solution perforator for drug delivery and other applications
US7294513B2 (en) 2002-07-24 2007-11-13 Wyatt Technology Corporation Method and apparatus for characterizing solutions of small particles
US7314709B2 (en) 2002-08-06 2008-01-01 Vanderbilt University Compositions and methods for detecting and quantifying COX-2 activity by lipoamino acid metabolism
AU2003262650B2 (en) 2002-08-14 2009-10-29 Macrogenics, Inc. FcgammaRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
AU2003275103A1 (en) 2002-09-17 2004-04-08 Diffusion Science, Inc. Electrochemical generation, storage and reaction of hydrogen and oxygen using gas permeable catalyst-coated hollow microspheres
US6911323B2 (en) 2002-09-25 2005-06-28 Novo Nordisk Healthcare A/G Human coagulation factor VII polypeptides
EP2345671B8 (en) 2002-09-27 2023-01-11 Xencor, Inc. Optimized fc variants and methods for their generation
AU2003286467B2 (en) 2002-10-15 2009-10-01 Abbvie Biotherapeutics Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
GB2395337B (en) 2002-11-14 2005-12-28 Gary Michael Wilson Warning Unit
WO2004063351A2 (en) 2003-01-09 2004-07-29 Macrogenics, Inc. IDENTIFICATION AND ENGINEERING OF ANTIBODIES WITH VARIANT Fc REGIONS AND METHODS OF USING SAME
US7041635B2 (en) 2003-01-28 2006-05-09 In2Gen Co., Ltd. Factor VIII polypeptide
EP1444986A1 (en) 2003-02-07 2004-08-11 Aventis Behring GmbH Pharmaceutical preparation for the improved treatment of blood-clotting disorders
CN102139114A (zh) 2003-02-26 2011-08-03 尼克塔治疗公司 聚合物-因子viii部分缀合物
WO2004076484A1 (en) 2003-02-27 2004-09-10 National Research Council Of Canada Peptide inhibitors of thrombin as potent anticoagulants
CA2515989C (en) 2003-02-28 2009-09-15 Kuraray Co., Ltd. Curable resin composition
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7132398B2 (en) 2003-05-06 2006-11-07 Dendreon Corporation Method of treatment of hemorrhagic disease using a factor VIIa/tissue factor inhibitor
EP2077121B1 (en) 2003-05-06 2011-02-09 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Clotting factor VII-Fc chimeric proteins for treatment of a hemostatic disorder
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US20070161087A1 (en) 2003-05-29 2007-07-12 Wolfgang Glaesner Glp-1 fusion proteins
EP1636360A4 (en) 2003-06-03 2006-11-08 Cell Genesys Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCED EXPRESSION OF RECOMBINANT POLYPEPTIDES FROM A SINGLE VECTOR USING A PEPTIDE CLEAVAGE SITE
ES2527102T3 (es) 2003-06-19 2015-01-20 Genentech, Inc. Composiciones y métodos para el tratamiento de trastornos relacionados con la coagulación
EP1654290B1 (en) 2003-08-12 2019-03-13 Lipoxen Technologies Limited Sialic acid derivatives for protein derivatisation and conjugation
EP1706079B1 (en) 2003-08-14 2013-02-20 ThromboGenics N.V. Antibodies against factor viii with modified glycosylation in the variable region
US7550263B2 (en) 2003-09-05 2009-06-23 Gtc Biotherapeutics, Inc. Method for the production of fusion proteins in transgenic mammal milk
US20050152979A1 (en) 2003-09-05 2005-07-14 Cell Therapeutics, Inc. Hydrophobic drug compositions containing reconstitution enhancer
ATE547519T1 (de) 2003-09-09 2012-03-15 Novo Nordisk Healthcare Ag Gerinnungsfaktor-vii-polypeptide
JP4949838B2 (ja) 2003-09-19 2012-06-13 ノヴォ ノルディスク アー／エス 新規ｇｌｐ−１誘導体
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
US20050123997A1 (en) 2003-10-30 2005-06-09 Lollar John S. Modified fVIII having reduced immunogenicity through mutagenesis of A2 and C2 epitopes
US7211559B2 (en) 2003-10-31 2007-05-01 University Of Maryland, Baltimore Factor VIII compositions and methods
EP2385069A3 (en) 2003-11-12 2012-05-30 Biogen Idec MA Inc. Neonatal Fc rReceptor (FcRn)- binding polypeptide variants, dimeric Fc binding proteins and methods related thereto
US20080193441A1 (en) 2003-11-18 2008-08-14 Iconic Therapeutics, Inc. Homogeneous Preparations of Chimeric Protein
US20060040856A1 (en) 2003-12-03 2006-02-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor IX
EP1697520A2 (en) 2003-12-22 2006-09-06 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel fc ligand binding sites
EP1706424B1 (en) 2004-01-12 2009-07-22 Applied Molecular Evolution, Inc. Fc region variants
AU2005206885B2 (en) 2004-01-14 2012-02-02 Ohio University Methods of producing peptides/proteins in plants and peptides/proteins produced thereby
US8076288B2 (en) 2004-02-11 2011-12-13 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Hybrid polypeptides having glucose lowering activity
EP1737890A2 (en) 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
WO2005123780A2 (en) 2004-04-09 2005-12-29 Protein Design Labs, Inc. Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
KR100624013B1 (ko) 2004-06-25 2006-09-19 주식회사 녹십자홀딩스 동결건조된 알부민 비함유 재조합 사람 혈액응고 제 8인자 제제
US20080233100A1 (en) 2004-06-30 2008-09-25 Yiyou Chen Targeted enzymes
WO2006085967A2 (en) 2004-07-09 2006-08-17 Xencor, Inc. OPTIMIZED ANTI-CD20 MONOCONAL ANTIBODIES HAVING Fc VARIANTS
EP2940043A1 (en) 2004-07-15 2015-11-04 Xencor, Inc. Optimized fc variants
ATE400647T1 (de) 2004-08-13 2008-07-15 Hoffmann La Roche C-terminale modifikation von polypeptiden
US7566701B2 (en) 2004-09-07 2009-07-28 Archemix Corp. Aptamers to von Willebrand Factor and their use as thrombotic disease therapeutics
BRPI0516011A (pt) 2004-09-24 2008-08-19 Amgen Inc moléculas fc modificadas
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
HUE033776T2 (en) 2004-11-12 2018-01-29 Bayer Healthcare Llc FVIII site-specific modification
MX2007005865A (es) 2004-11-16 2008-02-25 Amben Mountain View Inc Adamios de proteina y usos de los mismos.
PT1835938E (pt) 2004-12-27 2013-11-06 Baxter Int Conjugados de polímero-factor de von willebrand
CA2595695A1 (en) 2005-01-25 2006-08-03 Cell Therapeutics, Inc. Biologically active protein conjugates comprising (nn[s/t]) peptide repeats and having increased plasma half-life
US8263545B2 (en) 2005-02-11 2012-09-11 Amylin Pharmaceuticals, Inc. GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
EP1871801A2 (en) 2005-04-01 2008-01-02 Novo Nordisk Health Care AG Blood coagulation fviii analogues
GB0516091D0 (en) 2005-08-04 2005-09-14 Haemostatix Ltd Therapeutic agent
EP1924596A4 (en) 2005-08-12 2009-07-29 Human Genome Sciences Inc ALBUM INFUSION PROTEINS
WO2007039475A1 (en) 2005-09-21 2007-04-12 Novo Nordisk Health Care Ag Human coagulation factor vii polypeptides
WO2007103515A2 (en) 2006-03-06 2007-09-13 Amunix, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
US7846445B2 (en) 2005-09-27 2010-12-07 Amunix Operating, Inc. Methods for production of unstructured recombinant polymers and uses thereof
US20070191272A1 (en) 2005-09-27 2007-08-16 Stemmer Willem P Proteinaceous pharmaceuticals and uses thereof
US20090099031A1 (en) 2005-09-27 2009-04-16 Stemmer Willem P Genetic package and uses thereof
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
ES2779992T3 (es) 2005-12-20 2020-08-21 Univ Duke Métodos y composiciones para suministrar agentes activos con propiedades farmacológicas potenciadas
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8048848B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
EP1816201A1 (en) 2006-02-06 2007-08-08 CSL Behring GmbH Modified coagulation factor VIIa with extended half-life
FR2897868B1 (fr) 2006-02-24 2012-08-31 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps anti-idiotypiques neutralisant l'activite inhibitrice d'un anticorps inhibiteur dirige contre le domaine c1 du facteur viii.
US7973495B2 (en) 2006-03-13 2011-07-05 Koninklijke Philips Electronics N.V. Adaptive control apparatus and method for a solid state lighting system
US7645860B2 (en) 2006-03-31 2010-01-12 Baxter Healthcare S.A. Factor VIII polymer conjugates
KR20080108147A (ko) 2006-03-31 2008-12-11 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 페질화된 인자 ｖｉｉｉ
JO3324B1 (ar) 2006-04-21 2019-03-13 Amgen Inc مركبات علاجية مجففة بالتبريد تتعلق بالعصارة الهضمية
WO2007130535A2 (en) 2006-05-04 2007-11-15 Molecular Innovations Novel protein fusion/tag technology
KR101641899B1 (ko) 2006-06-14 2016-08-01 체에스엘 베링 게엠베하 혈액 응고 인자를 포함하는 단백질분해적으로 절단가능한 융합 단백질
US7939632B2 (en) 2006-06-14 2011-05-10 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion proteins with high molar specific activity
EP1867660A1 (en) 2006-06-14 2007-12-19 CSL Behring GmbH Proteolytically cleavable fusion protein comprising a blood coagulation factor
EP2423305A1 (en) 2006-06-19 2012-02-29 Catalyst Biosciences, Inc. Modified coagulation factor IX polypeptides and use thereof for treatment
US20080280818A1 (en) 2006-07-21 2008-11-13 Neose Technologies, Inc. Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences
WO2008028117A2 (en) 2006-08-31 2008-03-06 Centocor, Inc. Glp-2 mimetibodies, polypeptides, compositions, methods and uses
KR20090064453A (ko) 2006-09-14 2009-06-18 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 알부민 융합 단백질
US8969532B2 (en) 2006-10-03 2015-03-03 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates comprising polyalkylene oxide using hydrophobic interaction chromatography
BRPI0717505B8 (pt) 2006-10-04 2021-05-25 Novo Nordisk As conjugado de peptídeo e formulação farmacêutica
WO2008049711A1 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Novo Nordisk A/S Peptide extended insulins
CN101190945A (zh) 2006-11-29 2008-06-04 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 特异性抗凝血物质的制备及其应用
EP1935430A1 (en) 2006-12-22 2008-06-25 CSL Behring GmbH Modified coagulation factors with prolonged in vivo half-life
WO2008077616A1 (en) 2006-12-22 2008-07-03 Csl Behring Gmbh Modified coagulation factors with prolonged in vivo half-life
US8133865B2 (en) 2006-12-27 2012-03-13 Nektar Therapeutics von Willebrand factor- and factor VIII-polymer conjugates having a releasable linkage
JP5558106B2 (ja) 2007-01-03 2014-07-23 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 凝固第ｖｉｉ因子関連ポリペプチドの皮下投与
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
CA2674879A1 (en) 2007-02-01 2008-08-07 Baxter International Inc. Improved fix-mutant proteins for hemophilia b treatment
EP2147096B1 (en) 2007-04-13 2015-03-25 Catalyst Biosciences, Inc. Modified factor VII polypeptides and uses thereof
AU2008245524A1 (en) 2007-04-26 2008-11-06 Cnj Holdings, Inc. Recombinant vitamin K dependent proteins with high sialic acid content and methods of preparing same
JP2010531135A (ja) 2007-06-04 2010-09-24 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼを使用したｏ結合型グリコシル化
ES2392569T3 (es) 2007-06-13 2012-12-11 Csl Behring Gmbh Uso de preparaciones FVIII estabilizadas VWF para administración extravascular en la terapia y el tratamiento profiláctico de trastornos de hemorragias
CA2691386C (en) 2007-06-21 2014-12-23 Technische Universitaet Muenchen Biological active proteins having increased in vivo and/or in vitro stability
EP2185701A4 (en) 2007-08-15 2011-03-02 Amunix Operating Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCING THE PRODUCTION OF RECOMBINANT POLYPEPTIDES
EP2209487A4 (en) 2007-10-15 2012-06-20 Univ North Carolina VARIANTS OF HUMAN FACTOR IX WITH EXTENDED HALF-TIME
AU2008319183B2 (en) 2007-11-01 2014-09-04 University Of Rochester Recombinant factor VIII having increased stability
CA2704234A1 (en) 2007-11-09 2009-05-14 Baxter International Inc. Modified recombinant factor viii and von willebrand factor and methods of use
AR069989A1 (es) 2007-12-28 2010-03-03 Baxter Int Formulaciones de vwf recombinantes
KR100981092B1 (ko) 2008-02-29 2010-09-08 고려대학교 산학협력단 제8 혈액응고 인자와 폰 빌리 블란트 인자 변이체의 재조합발현 벡터 시스템
JP5444629B2 (ja) 2008-04-03 2014-03-19 富士通株式会社 照度センサ用光案内機構及び携帯電話機
RU2010146387A (ru) 2008-04-16 2012-05-27 БАЙЕР ХЕЛСКЕР ЛЛСи (US) Модифицированные полипептиды фактора ix и их применение
JP2011517950A (ja) 2008-04-16 2011-06-23 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 第ｉｘ因子の部位特異的修飾
TWI541020B (zh) 2008-04-17 2016-07-11 巴克斯歐塔公司 生物活性胜肽
WO2009130198A2 (en) 2008-04-21 2009-10-29 Novo Nordisk A/S Hyperglycosylated human coagulation factor ix
MX2010012044A (es) 2008-05-06 2011-05-19 Octapharma Ag Complejo que comprende proteinas de union a heparina y conjugados de heparina-almidon de hidroxialquilo.
CA2726942A1 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Bayer Healthcare Llc Fviii muteins for treatment of von willebrand disease
US8575104B2 (en) 2008-06-24 2013-11-05 Csl Behring Gmbh Factor VIII, von willebrand factor or complexes thereof with prolonged in vivo half-life
CA2728708A1 (en) 2008-06-25 2009-12-30 Bayer Healthcare Llc Factor viii muteins with reduced immunogenicity
CA2731388C (en) 2008-07-21 2018-05-01 Apogenix Gmbh Tnfsf single chain molecules
US20120027743A1 (en) 2008-11-03 2012-02-02 Bayer Healthcare Llc Method for the Treatment of Hemophilia
JP2012510060A (ja) 2008-11-24 2012-04-26 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー シリカをベースとする活性化部分トロンボプラスチン時間アッセイにおけるｐｅｇ化血液凝固因子の活性の測定方法
CL2011001856A1 (es) 2009-02-03 2012-03-09 Amunix Operating Inc Polipeptido recombinante extendido aislado (xten) que mejora las propiedades de una proteina biologicamente activa fusionada a el; proteina de fusion aislada que comprende xten ligado a una proteina biologicamente activa; composicion que comprende dicha proteina de fusion; y uso para preparar medicamentos para tratar enfermedades.
US8703717B2 (en) 2009-02-03 2014-04-22 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides and methods of making and using same
US8680050B2 (en) 2009-02-03 2014-03-25 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides fused to extended recombinant polypeptides and methods of making and using same
EA020843B1 (ru) 2009-02-03 2015-02-27 Амуникс Оперейтинг Инк. Удлиненные рекомбинантные полипептиды и содержащие их композиции
JP5739865B2 (ja) 2009-03-24 2015-06-24 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 第ｖｉｉｉ因子変異体および使用の方法
US20120121706A1 (en) 2009-04-10 2012-05-17 Tufts Medical Center, Inc. PAR-1 Activation by Metalloproteinase-1 (MMP-1)
GB0908515D0 (en) 2009-05-18 2009-06-24 Apitope Technology Bristol Ltd Peptide
SI2440241T1 (sl) 2009-06-08 2017-11-30 Amunix Operating Inc. Polipeptidni rastni hormoni in postopki za njihovo izdelavo in uporabo
ES2705249T3 (es) 2009-06-08 2019-03-22 Amunix Operating Inc Polipéptidos reguladores de glucosa y métodos para su producción y uso
CN102470182A (zh) 2009-08-20 2012-05-23 德国杰特贝林生物制品有限公司 用于在出血性紊乱的治疗和预防性处理中进行非静脉内施用的白蛋白融合凝血因子
CA2772051C (en) 2009-08-24 2020-08-18 Amunix Operating Inc. Coagulation factor ix compositions and methods of making and using same
WO2011028344A2 (en) 2009-08-25 2011-03-10 Amunix Operating Inc. Interleukin-1 receptor antagonist compositions and methods of making and using same
JP5544219B2 (ja) 2009-09-24 2014-07-09 富士フイルム株式会社 内視鏡システム
WO2011041770A1 (en) 2009-10-02 2011-04-07 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for enhancing coagulation factor viii function
TWI423962B (zh) 2009-10-07 2014-01-21 Lg Life Sciences Ltd 有效作為黃嘌呤氧化酶抑制劑之新穎化合物、其製備方法及含該化合物之醫藥組成物
BR112012011740A2 (pt) 2009-11-13 2018-03-27 Grifols Therapeutics Inc polipeptídeo, composição compreendendo o referido polipeptídeo, complexo de proteína, seqüência de nucleotídeo, vetor de expressão célula, e métodos para a preparação do complexo de proteína, para a preparação de um fviii, e para intensificar uma propriedade farmacocinética no plasma de um fviii
PT2501234T (pt) 2009-11-20 2017-12-13 Tonix Pharma Holdings Ltd Métodos e composições para o tratamento de sintomas associados com distúrbios de stress pós-traumático utilizando ciclobenzaprina
US9050318B2 (en) 2009-12-06 2015-06-09 Biogen Idec Hemophilia Inc. Factor VIII-Fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof
WO2011084808A2 (en) 2009-12-21 2011-07-14 Amunix Operating Inc. Bifunctional polypeptide compositions and methods for treatment of metabolic and cardiovascular diseases
WO2011101242A1 (en) 2010-02-16 2011-08-25 Novo Nordisk A/S Factor viii molecules with reduced vwf binding
CN102770450B (zh) 2010-02-16 2015-12-02 诺沃—诺迪斯克有限公司 因子viii融合蛋白
US8466059B2 (en) 2010-03-30 2013-06-18 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. Multi-layer interconnect structure for stacked dies
US8557961B2 (en) 2010-04-02 2013-10-15 Amunix Operating Inc. Alpha 1-antitrypsin compositions and methods of making and using same
WO2011123813A2 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Amunix Operating Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
AU2011244228B2 (en) 2010-04-21 2015-07-30 Jan Astermark Genetic factors associated with inhibitor development in hemophilia A
TWI510487B (zh) 2010-04-21 2015-12-01 Plexxikon Inc 用於激酶調節的化合物和方法及其適應症
AU2011255525B2 (en) 2010-05-20 2015-09-10 Allergan, Inc. Degradable Clostridial toxins
WO2012006623A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Biogen Idec Hemophilia Inc. Systems for factor viii processing and methods thereof
AU2011274423B2 (en) 2010-07-09 2016-02-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Chimeric clotting factors
SG186856A1 (en) 2010-07-09 2013-02-28 Biogen Idec Hemophilia Inc Factor ix polypeptides and methods of use thereof
JP2013532176A (ja) 2010-07-15 2013-08-15 ノヴォ ノルディスク アー／エス 安定化させた第ｖｉｉｉ因子バリアント
US20130017997A1 (en) 2010-08-19 2013-01-17 Amunix Operating Inc. Factor VIII Compositions and Methods of Making and Using Same
PT2717898T (pt) 2011-06-10 2019-05-20 Bioverativ Therapeutics Inc Compostos pró-coagulantes e processos para a sua utilização
WO2013009627A2 (en) 2011-07-08 2013-01-17 Biogen Idec Hemophilia Inc. Factor viii chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof
CA2850579A1 (en) 2011-10-18 2013-04-25 Carsten Horn Method for improving the stability of purified factor viii after reconstitution
KR20190062600A (ko) 2011-12-21 2019-06-05 어드밴스드 테크놀러지 머티리얼즈, 인코포레이티드 라이너에 기초한 운송 및 공급 시스템들
US8920268B2 (en) 2012-01-11 2014-12-30 Aldila Golf Corp. Small diameter crossbow bolt
SG11201403764XA (en) 2012-01-12 2014-07-30 Biogen Idec Inc Chimeric factor viii polypeptides and uses thereof
PT2802668T (pt) 2012-01-12 2018-12-04 Puget Sound Blood Center Processos para reduzir a imunogenicidade contra o fator viii em indivíduos a receber terapêutica com fator viii
EP2814840B1 (en) 2012-02-15 2019-11-13 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii compositions and methods of making and using same
WO2013120939A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Csl Behring Gmbh Von willebrand factor variants having improved factor viii binding affinity
EP3549953A1 (en) 2012-02-15 2019-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Recombinant factor viii proteins
WO2013160005A1 (en) 2012-04-24 2013-10-31 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical composition suitable for treatment of haemophilia
CN104411716B (zh) 2012-04-24 2018-09-07 诺和诺德股份有限公司 适用于治疗血友病的化合物
WO2013189827A2 (en) 2012-06-22 2013-12-27 Asml Netherlands B.V. Radiation source and lithographic apparatus.
EP3674410A1 (en) 2012-07-11 2020-07-01 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii complex with xten and von willebrand factor protein, and uses thereof
CN104619677B (zh) 2012-07-18 2016-10-26 西北大学 形成乙烯的方法
WO2014070953A1 (en) 2012-10-30 2014-05-08 Biogen Idec Ma Inc. Methods of Using FVIII Polypeptide
WO2014100913A1 (en) 2012-12-24 2014-07-03 Beijing Anxinhuaide Biotech. Co., Ltd Improving the half life of a therapeutic polypeptide by fusing with a trimeric scaffold protein via a spacer
TWI828269B (zh) 2013-03-15 2024-01-01 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ix多肽調配物
PL3666283T3 (pl) 2013-03-15 2022-10-03 Bioverativ Therapeutics Inc. Formulacje polipeptydu czynnika viii
ES2657291T3 (es) 2013-04-22 2018-03-02 Csl Ltd. Un complejo covalente de factor de von Willebrand y factor VIII asociado por un puente disulfuro
TW201536811A (zh) 2013-05-31 2015-10-01 Biogen Idec Inc 嵌合ｆｖｉｉ－ｘｔｅｎ分子及其用途
WO2014198699A2 (en) 2013-06-12 2014-12-18 Novo Nordisk A/S Compounds suitable for treatment of haemophilia
WO2014210448A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods relating to myomaker-induced muscle cell fusion
SG11201509313PA (en) 2013-06-28 2016-01-28 Biogen Ma Inc Thrombin cleavable linker with xten and its uses thereof
EP3013359A4 (en) 2013-06-28 2017-01-25 Biogen MA Inc. Thrombin cleavable linker
US10947269B2 (en) * 2013-08-08 2021-03-16 Bioverativ Therapeutics Inc. Purification of chimeric FVIII molecules
US10548953B2 (en) 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
WO2015085276A1 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Biogen Idec Ma Inc. Population pharmacokinetics tools and uses thereof
KR102409250B1 (ko) 2014-01-10 2022-06-14 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 인자 viii 키메라 단백질 및 이들의 용도
US10251940B2 (en) 2014-06-06 2019-04-09 Octapharma Ag Preparation comprising factor VIII and Von Willebrand factor peptides
AU2015283822B2 (en) 2014-07-02 2019-10-03 CSL Behring Lengnau AG Modified von willebrand factor
DK3193911T3 (da) 2014-07-25 2023-11-27 Csl Behring Gmbh Forbedrede faktor VII-præparater til brug ved behandling af hæmofili A
CN107427557B (zh) 2014-08-13 2022-01-04 费城儿童医院 用于包装和表达变体因子viii以治疗血友病的改良表达组件
EP3265483B1 (en) 2015-03-06 2019-12-11 CSL Behring Lengnau AG Modified von willebrand factor having improved half-life
US9958572B2 (en) 2015-03-31 2018-05-01 Halliburton Energy Services, Inc. Synthetic test beds for fracturing optimization and methods of manufacture and use thereof
KR20180006453A (ko) 2015-05-22 2018-01-17 체에스엘 베링 리컴비넌트 퍼실리티 아게 혈우병을 치료하기 위한 절단된 폰 빌레브란트 인자 폴리펩타이드
WO2017024060A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Biogen Ma Inc. Factor ix fusion proteins and methods of making and using same
US10144942B2 (en) 2015-10-14 2018-12-04 Translate Bio, Inc. Modification of RNA-related enzymes for enhanced production
SG11201805497QA (en) 2016-01-07 2018-07-30 Csl Behring Recombinant Facility Ag Mutated truncated von willebrand factor
WO2017117630A1 (en) 2016-01-07 2017-07-13 Csl Limited Mutated von willebrand factor
JP6877469B2 (ja) 2016-06-24 2021-05-26 モガム・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチＭｏｇａｍ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｖｉｉｉおよびｖｗｆ因子を含むキメラタンパク質、ならびにそれらの使用
JP2020504082A (ja) 2016-11-11 2020-02-06 ツェー・エス・エル・ベーリング・レングナウ・アクチエンゲゼルシャフト 血液凝固障害の処置又は予防における血管外投与のための切断型フォン・ヴィルブランド因子ポリペプチド
MX2019006444A (es) 2016-12-02 2019-10-30 Bioverativ Therapeutics Inc Métodos de tratamiento de artropatía hemofílica utilizando factores de coagulación quiméricos.
JP2019536794A (ja) 2016-12-02 2019-12-19 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 凝固因子に対する免疫寛容を誘導する方法
TW202015723A (zh) 2018-05-18 2020-05-01 美商百歐維拉提夫治療公司 治療ａ型血友病的方法
JP7050015B2 (ja) 2019-01-17 2022-04-07 古河電池株式会社 鉛蓄電池
WO2021257899A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods for treating hemophilia a and population pharmacokinetics tools for determining treatments and uses thereof
WO2022129303A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 UCB Biopharma SRL Dihydroisoquinolinyl derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
EP3793588A1 (en) 2021-03-24
MA52630A (fr) 2021-05-26
CO2020014566A2 (es) 2020-12-10
US20190375822A1 (en) 2019-12-12
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