BG66209B1 - Методи за получаване на антитела с двойна специфичност - Google Patents
Методи за получаване на антитела с двойна специфичност Download PDFInfo
- Publication number
- BG66209B1 BG66209B1 BG107483A BG10748303A BG66209B1 BG 66209 B1 BG66209 B1 BG 66209B1 BG 107483 A BG107483 A BG 107483A BG 10748303 A BG10748303 A BG 10748303A BG 66209 B1 BG66209 B1 BG 66209B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- animal
- antibodies
- library
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 156
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 title abstract description 89
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 305
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 305
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 305
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 143
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 97
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 92
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 74
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 74
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 74
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 48
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 43
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 40
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 34
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 32
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 32
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 31
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 31
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 29
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 20
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 claims description 19
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 15
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 13
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 12
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 claims description 10
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 9
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 claims description 8
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 claims description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 8
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 claims description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 7
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 claims description 7
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 6
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 6
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 claims description 5
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims description 5
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 4
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 claims description 4
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 claims 3
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 claims 3
- 230000001950 radioprotection Effects 0.000 claims 3
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 84
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 25
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 22
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 21
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 20
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 20
- 102100020881 Interleukin-1 alpha Human genes 0.000 description 20
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 19
- -1 TIRalpha / UTbeta) Proteins 0.000 description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 16
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 11
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 10
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 10
- 238000013461 design Methods 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 10
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 9
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 8
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 8
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 8
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 8
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 7
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 7
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 7
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 7
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 7
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N Jacareubin Natural products CC1(C)OC2=CC3Oc4c(O)c(O)ccc4C(=O)C3C(=C2C=C1)O UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 6
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 6
- 229960001940 sulfasalazine Drugs 0.000 description 6
- NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N sulfasalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N 0.000 description 6
- NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N sulfasalazine Natural products C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(N=NC=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 5
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 5
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 5
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 5
- 101150021185 FGF gene Proteins 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 5
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 5
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 5
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 5
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 4
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 4
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 229940073621 enbrel Drugs 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 4
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 4
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N leflunomide Chemical compound O1N=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C(F)(F)F)=C1C VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000681 leflunomide Drugs 0.000 description 4
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 101710117290 Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 3
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 3
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 3
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 3
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 3
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 3
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 3
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 3
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 3
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 3
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 3
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 3
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 3
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 3
- 102000049772 Interleukin-16 Human genes 0.000 description 3
- 101800003050 Interleukin-16 Proteins 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 3
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 3
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 3
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 3
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 3
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 3
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 3
- 239000000464 adrenergic agent Substances 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000004074 complement inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 3
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N mesalamine Chemical compound NC1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004963 mesalazine Drugs 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 238000011330 nucleic acid test Methods 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229960004110 olsalazine Drugs 0.000 description 3
- QQBDLJCYGRGAKP-FOCLMDBBSA-N olsalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=C(C(O)=CC=2)C(O)=O)=C1 QQBDLJCYGRGAKP-FOCLMDBBSA-N 0.000 description 3
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 3
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 3
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 239000003379 purinergic P1 receptor agonist Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 230000006269 (delayed) early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 2
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 2
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 2
- 101800000542 Interleukin-1 receptor type 1, soluble form Proteins 0.000 description 2
- 102400000025 Interleukin-1 receptor type 1, soluble form Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 2
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 208000001106 Takayasu Arteritis Diseases 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 2
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 229940082638 cardiac stimulant phosphodiesterase inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 229940038717 copaxone Drugs 0.000 description 2
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 229950007278 lenercept Drugs 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 2
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 2
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 2
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000002571 phosphodiesterase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 229940116176 remicade Drugs 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 2
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 238000012409 standard PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XWTYSIMOBUGWOL-UHFFFAOYSA-N (+-)-Terbutaline Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)C1=CC(O)=CC(O)=C1 XWTYSIMOBUGWOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-5-amino-2-(aminomethyl)-6-[(2r,3s,4r,5s)-5-[(1r,2r,3s,5r,6s)-3,5-diamino-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-hydroxycyclohexyl]oxy-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxyoxane-3,4-diol;sulfuric ac Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- SZXUTTGMFUSMCE-UHFFFAOYSA-N 2-(1h-imidazol-2-yl)pyridine Chemical class C1=CNC(C=2N=CC=CC=2)=N1 SZXUTTGMFUSMCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBGAYCYFNGPNPV-UHFFFAOYSA-N 2-aminooxybenzoic acid Chemical class NOC1=CC=CC=C1C(O)=O NBGAYCYFNGPNPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGHDLJAZIIFENW-UHFFFAOYSA-N 4-[1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-(4-hydroxy-3-prop-2-enylphenyl)propan-2-yl]-2-prop-2-enylphenol Chemical group C1=C(CC=C)C(O)=CC=C1C(C(F)(F)F)(C(F)(F)F)C1=CC=C(O)C(CC=C)=C1 QGHDLJAZIIFENW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- NUKYPUAOHBNCPY-UHFFFAOYSA-N 4-aminopyridine Chemical compound NC1=CC=NC=C1 NUKYPUAOHBNCPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical class O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 208000029483 Acquired immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008190 Agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 244000003377 Allium tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000005338 Allium tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010055128 Autoimmune neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 208000031212 Autoimmune polyendocrinopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000022106 Autoimmune polyendocrinopathy type 2 Diseases 0.000 description 1
- 206010050245 Autoimmune thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 206010006448 Bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 101100203600 Caenorhabditis elegans sor-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 206010008609 Cholangitis sclerosing Diseases 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- 241001136239 Cymbidium hybrid cultivar Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N Dansyl Chloride Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(Cl)(=O)=O XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000006926 Discoid Lupus Erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102400000792 Endothelial monocyte-activating polypeptide 2 Human genes 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 206010018634 Gouty Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031856 Haemosiderosis Diseases 0.000 description 1
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 206010019755 Hepatitis chronic active Diseases 0.000 description 1
- 101000662009 Homo sapiens UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- 206010020983 Hypogammaglobulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000039996 IL-1 family Human genes 0.000 description 1
- 108091069196 IL-1 family Proteins 0.000 description 1
- 108091058560 IL8 Proteins 0.000 description 1
- 208000016300 Idiopathic chronic eosinophilic pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102400000027 Interleukin-1 receptor type 2, soluble form Human genes 0.000 description 1
- 101800001003 Interleukin-1 receptor type 2, soluble form Proteins 0.000 description 1
- 108010017515 Interleukin-12 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004557 Interleukin-18 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010017537 Interleukin-18 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000011200 Kawasaki disease Diseases 0.000 description 1
- ZCVMWBYGMWKGHF-UHFFFAOYSA-N Ketotifene Chemical compound C1CN(C)CCC1=C1C2=CC=CC=C2CC(=O)C2=C1C=CS2 ZCVMWBYGMWKGHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000000867 Lipoxygenase Inhibitor Substances 0.000 description 1
- 206010062049 Lymphocytic infiltration Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M Methylprednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)CC[C@H]21 FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M 0.000 description 1
- 208000003250 Mixed connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 241001508687 Mustela erminea Species 0.000 description 1
- 206010028665 Myxoedema Diseases 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 229940123932 Phosphodiesterase 4 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 206010057244 Post viral fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 208000032056 Radiation Fibrosis Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010067953 Radiation fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000033464 Reiter syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010038546 Renal vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010062164 Seronegative arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010041591 Spinal osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000006045 Spondylarthropathies Diseases 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010042742 Sympathetic ophthalmia Diseases 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100037921 UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000005298 acute pain Diseases 0.000 description 1
- 208000018254 acute transverse myelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004026 adhesive bonding Methods 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 208000004631 alopecia areata Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229960003556 aminophylline Drugs 0.000 description 1
- FQPFAHBPWDRTLU-UHFFFAOYSA-N aminophylline Chemical compound NCCN.O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2.O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 FQPFAHBPWDRTLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009780 autoimmune polyendocrine syndrome type 2 Diseases 0.000 description 1
- 208000010928 autoimmune thyroid disease Diseases 0.000 description 1
- 201000004982 autoimmune uveitis Diseases 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 229940003504 avonex Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960004168 balsalazide Drugs 0.000 description 1
- IPOKCKJONYRRHP-FMQUCBEESA-N balsalazide Chemical compound C1=CC(C(=O)NCCC(=O)O)=CC=C1\N=N\C1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 IPOKCKJONYRRHP-FMQUCBEESA-N 0.000 description 1
- WGNZRLMOMHJUSP-UHFFFAOYSA-N benzotriazol-1-yloxy(tripyrrolidin-1-yl)phosphanium Chemical compound C1CCCN1[P+](N1CCCC1)(N1CCCC1)ON1C2=CC=CC=C2N=N1 WGNZRLMOMHJUSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014974 beta2-adrenergic receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040006828 beta2-adrenergic receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- MWKXCSMICWVRGW-UHFFFAOYSA-N calcium;phosphane Chemical compound P.[Ca] MWKXCSMICWVRGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003115 certolizumab pegol Drugs 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 201000009323 chronic eosinophilic pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229940109248 cromoglycate Drugs 0.000 description 1
- IMZMKUWMOSJXDT-UHFFFAOYSA-N cromoglycic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)=CC(=O)C2=C1C=CC=C2OCC(O)COC1=CC=CC2=C1C(=O)C=C(C(O)=O)O2 IMZMKUWMOSJXDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012926 crystallographic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000004921 cutaneous lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000003602 elastase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 229960004979 fampridine Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000005308 flint glass Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 229940040731 human interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N hydroxychloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CCO)CC)=CC=NC2=C1 XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004171 hydroxychloroquine Drugs 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000003960 inflammatory cascade Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960004461 interferon beta-1a Drugs 0.000 description 1
- 229960003161 interferon beta-1b Drugs 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940074383 interleukin-11 Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960004958 ketotifen Drugs 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 108010000525 member 1 small inducible cytokine subfamily E Proteins 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 239000003475 metalloproteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001725 mucocutaneous lymph node syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229940014456 mycophenolate Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- ZTLGJPIZUOVDMT-UHFFFAOYSA-N n,n-dichlorotriazin-4-amine Chemical compound ClN(Cl)C1=CC=NN=N1 ZTLGJPIZUOVDMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229960004398 nedocromil Drugs 0.000 description 1
- RQTOOFIXOKYGAN-UHFFFAOYSA-N nedocromil Chemical compound CCN1C(C(O)=O)=CC(=O)C2=C1C(CCC)=C1OC(C(O)=O)=CC(=O)C1=C2 RQTOOFIXOKYGAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000007935 oral tablet Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010603 pastilles Nutrition 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002587 phosphodiesterase IV inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 201000000742 primary sclerosing cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000006650 prototype reaction Methods 0.000 description 1
- 201000007801 psoriasis 2 Diseases 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000010223 real-time analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012340 reverse transcriptase PCR Methods 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000010157 sclerosing cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- VIDRYROWYFWGSY-UHFFFAOYSA-N sotalol hydrochloride Chemical compound Cl.CC(C)NCC(O)C1=CC=C(NS(C)(=O)=O)C=C1 VIDRYROWYFWGSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000005671 spondyloarthropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000005801 spondylosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229940065721 systemic for obstructive airway disease xanthines Drugs 0.000 description 1
- 208000020408 systemic-onset juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 1
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 1
- 229960000195 terbutaline Drugs 0.000 description 1
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 1
- RZWIIPASKMUIAC-VQTJNVASSA-N thromboxane Chemical compound CCCCCCCC[C@H]1OCCC[C@@H]1CCCCCCC RZWIIPASKMUIAC-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 208000005057 thyrotoxicosis Diseases 0.000 description 1
- XFYDIVBRZNQMJC-UHFFFAOYSA-N tizanidine Chemical compound ClC=1C=CC2=NSN=C2C=1NC1=NCCN1 XFYDIVBRZNQMJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000488 tizanidine Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000009174 transverse myelitis Diseases 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002447 tumor necrosis factor alpha converting enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940046728 tumor necrosis factor alpha inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002451 tumor necrosis factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/245—IL-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6845—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a cytokine, e.g. growth factors, VEGF, TNF, a lymphokine or an interferon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/545—IL-1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6869—Interleukin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
Abstract
Предоставят се методи за получаване на антитела с двойна специфичност съгласно изобретението. Антителата или участъците на антитела съгласно изобретението се използват за откриване на два различни, но структурно свързани антигена (например IL-1алфа и IL-1бета) и за инхибиране на активността на антигените (например при субект човек, страдащ от нарушение, при което се определя IL-1алфа и/или IL-1бета активността.
Description
(54) МЕТОДИ ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА АНТИТЕЛА С ДВОЙНА СПЕЦИФИЧНОСТ
Предшестващо състояние на техниката
Имунната система на бозайниците включва В лимфоцити, които, в своята цялост, експресират разнообразие от антитела, които включват стотици милиарди различни специфичности на антитела. Нормалният имунен отговор на определен антиген включва избор от това разнообразие на едно, или повече антитела, които специфично свързват антигена, и успехът на имунния отговор се базира, поне отчасти, на способността на тези антитела специфично да разпознават (и изцяло да елиминират) стимулиращия антиген и “да игнорират” други молекули от заобикалящата среда на антителата.
Използването на антитела, които специфично разпознават точно определен антиген, води до развитието на технология на моноклонално антитяло. Стандартната хибридомна технология позволява сега получаването на антитела, притежаващи единична специфичност за представляващия интерес антиген. В последно време се развиха техники зарекомбинантно антитяло, като скрининг на библиотеки на in vitro антитела. Тези техники позволяват, също така, продуциране на антитела с единична специфичност за представляващия интерес антиген.
Антитела, притежаващи специфичност за единичен антиген мишена, поне при известни обстоятелства, проявяват нежелана кръстосана реактивност, или фоново свързване с други антигени. Тази кръстосана реактивност, или фоново свързване са непредсказуеми (т.е., не е възможно да се предскаже с кой антиген ще влезе в кръстосана реакция антитялото). Освен това, обикновено се отличава от свързването на специфичен антиген, тъй като характерно представлява само една малка част от способността за свързване на антитялото (например, 1%, или помалко от общото свързване на антитялото) и характерно се наблюдава единствено при високи концентрации на антитяло (например, 1000 пъти, или повече, концентрации, които изискват наблюдение на специфичното свързване на антигена). Въпреки че съществуват антигени, които могат да принадлежат на структурно свър зани семейства протеини, отговорът на антитялото към определен член на семейството е високо специфичен. В допълнение, съществуват примери на членове на семейства протеини (например, членове на IL-1 и TNF семейства), които се свързват към същия рецептор, към съставна част на рецептора, или към структурно свързани рецептори, при което моноклонални антитела срещу един член на семейството не проявяват висока кръстосана реактивност към други членове на семейството. Би могло да съществуват две причини за тази липса на кръстосана реактивност на Mabs спрямо различни членове на семейството. Първо, при стандартното получаване на хибридоми се търсят единствено някои антитела с висока специфичност/афинитет за антигена-цел, след което се проверява за кръстосана реактивност, или фоново свързване на няколкото избрани антитела. Второ, въпреки че протеините в семейството са структурно свързани, те могат да имат изключителни, неприпокриващи се имунодоминантни епитопи. Следователно, MAbs получени чрез използване на протеин с пълна дължина могат да не влизат в кръстосана реакция с други структурно свързани протеини.
Съществуват също така, примери за моноклонални антитела, получени срещу антиген от един вид, които специфично биха се свързали към същия функционален антиген в други видове. Например, антимише X антитяло лесно свързва човешки антиген X. Това се дължи на факта, че споделят значителна сходност на последователности и структурна сходност, въпреки че не са идентични. Въпреки това, такива антитела, влизащи в междувидова кръстосана реакция не съставят антителата с “двойна специфичност”, тъй като притежават специфичност за същия антиген от различни видове.
Следователно са необходими моноклонални антитела, притежаващи предсказуема двойна, или множествена специфичност, което представлява антитела, притежаващи предсказуема двойна, или същинска специфичност за два, или повече различни антигена.
Техническа същност на изобретението
Настоящото изобретение предоставя методи за получаване на антитела, притежаващи двойна специфичност за най-малко два струк50
66209 Bl турно свързани, но въпреки това различни антигена. Методът обикновено се състои в осигуряване на антитяло, което включва обща структурна характеристика на двете различни, но структурно свързани молекули; представяне на разнообразието от антитела на антигена; и избор от разнообразието на антитяло, което специфично свързва двете различни, но структурно свързани молекули към така полученото антитяло с двойна специфичност. При клиничните установки някои членове от същото семейство протеини могат да допринесат за различните симптоми на протичането на едно заболяване. Следователно, използването на антитяло с двойна специфичност съгласно изобретението, което свързва членове на едно и също семейство протеини, за блокиране на функциите на повече от един член от семейството протеини, може да бъде благотворно за облекчаване на болестните симптоми, или за прекъсване самия процес на заболяване. Освен това, такива антитела с двойна специфичност съгласно изобретението се използват за откриване на структурно свързани антигени, за пречистване на структурно свързани антигени, и при диагностичните изследвания, включващи структурно свързани антигени.
При един предпочитан вариант за изпълнение на изобретението, антигена се проектира на основата на съседен топологичен участък на идентичност между двете различни, но структурно свързани молекули. Например, двете различни, но структурно свързани молекули могат да бъдат протеини, и антигенът може да бъде пептид, включващ аминокиселинна последователност от съседния топологичен участък на идентичност между двата протеина.
При един друг вариант за изпълнение на изобретението, антигена се проектира на основата на структурно имитираща бримка на обичайно срещано нагъване на двете различни структурно свързани молекули. Например, антигенът може да бъде цикличен пептид, който структурно имитира бримка на обичайно срещано нагъване на двата различни структурно свързани протеина.
При един друг вариант за изпълнение на изобретението, антигена се проектира на основата на слепване заедно на редуващи се и/или припокриващи се участъци на двете различни, но структурно свързани молекули, за създава не на хибридна молекула. Например, антигенът може да е хибриден пептид, получен чрез слепване заедно на редуващи се и/или припокриващи се аминокиселинни последователности на два различни, но структурно свързани протеина.
В един друг вариант за изпълнение на изобретението, антигенът може да включва една, или повече различни, но структурно свързани молекули и методът обхваща избиране на антитела, които специфично разпознават и двете свързани молекули.
В метода на изобретението разнообразието на антителата може да бъде предоставено на действието на антигена, представляващ интерес in vivo или in vitro. Например, при един вариант за изпълнение, предоставянето на разнообразието на антителата на действието на антигена включва имунизиране на животно in vivo с антигена. Този in vivo подход може освен това да включва приготвянето на панел от хибридоми от лимфоцити на животното, и избиране на хибридома, която секретира антитяло, което специфично свързва двете различни, но структурно свързани молекули. Имунизираното животно може да бъде, например, мишка, плъх, заек, или коза, или трансгенна версия на което и да е от горепосочените животни, като мишка, която е трансгенна за човешки гени на имуноглобулин, така че мишката да произвежда човешките антитела при антигенно стимулиране. Друг вид животни, които могат да бъдат имунизирани, включват мишки с тежка комбинирана имунна недостатъчност (SCID), които могат да бъдат възстановени с моноядрени клетки от човешка периферна кръв (hu-PBMC-SCID химерна мишка), или лимфоидни клетки, или техни предшественици, и мишки, които са лекувани с летално общо телесно облъчване, последвано от защита срещу радиация с клетки от костен мозък на тежка комбинирана имунна недостатъчност (SCID) мишка, следвано от присаждане на функционални човешки лимфоцити (Trimera система). Друг вид животно, което може да бъде имунизирано, е животно (например, мишка), чийто геном “нокаутиран” (например, чрез хомоложна рекомбинация) за ендогенен(ни) ген(и), кодиращ(и) антигена(и), представляващ(и) интерес, където при имунизиране с антигена(ите), представляващ(и) интерес, “нокаутираното” животно разпознава антигена(ите) като чужд(и).
66209 Bl
При друг вариант за изпълнение на изобретението, разнообразието на антителата може да бъде предоставено на действието на антигена in vitro, чрез скриниране на библиотека на рекомбинантни антитела с антигена. Библиотеката на рекомбинантни антитела може, например, да се експресира на повърхността на бактериофаг, или на повърхността на дрождеви клетки, или на повърхността на бактериални клетки. При различни варианти за изпълнение библиотеката на рекомбинантни антитела е, например, scFv библиотека, или Fab библиотека. При друг вариант за изпълнение на изобретението, библиотеки на антитела се експресират като РНК-протеин сливания.
Друг подход за получаване на антитела с двойна специфичност включва комбиниране на in vivo и in vitro подходи, като разнообразието на антителата може да бъде предоставено на действието на антигена чрез in vivo имунизиране на животно с антигена, следвано от in vitro скриниране на библиотека на рекомбинантни антитела, получена от лимфоидни клетки на животното с антигена. Друг подход включва предоставяне на разнообразието на антитела на действието на антигена чрез in vivo имунизиране на животно с антигена, следвано от in vitro афинитетно узряване на библиотека на рекомбинантни антитела, получена от лимфоидни клетки на животното. Друг подход включва предоставяне на разнообразието на антитела на действието на антигена чрез in vivo имунизиране на животно с антигена, следвано от селекция на единично антитяло, продуциращо клетки, които секретират представляващо интерес антитяло, възстановяване на тежката и леката верига на вариабилната област на сДНК-и от тези избрани клетки (например, чрез PCR) и експресиране на тежката и леката верига на вариабилните области у клетки гостоприемници от бозайник in vitro (посочен като метод на избрано лимфоцитно антитяло, или SLAM), като по този начин се дава възможност за по-нататъшна селекция и обработване на селекционираните последователности на гена на антитялото. Освен това, моноклонални антитела могат да бъдат селекционирани чрез експресионно клониране чрез експресиране на гените на тежката и леката верига на антитялото у клетки на бозайник, и селекциониране на клетки на бозайник, които секретират антитяло, притежаващо необходимата специфичност на свързване.
Методите на изобретението позволяват получаването на различни видове антитела с двойна специфичност, включително напълно човешки антитела, химерни антитела, и CDR-присадени антитела и техни антиген свързващи участъци. Предоставят се, също така, антителата с двойна специфичност, получени съгласно метода на изобретението. Предпочитано антитяло с двойна специфичност, съгласно изобретението е такова, което специфично свързва интерлевкин-1алфа и интерлевкин-1бета. Такова антитяло с двойна специфичност може да се използва при методи за откриване на 1Ь-1алфа, или IL-16eTa, включващи довеждането в контакт на Ш-1алфа, или IL-16eTa с антитялото с двойна специфичност, или негов антиген свързващ участък, така че да бъде открит и IL-1 алфа, или IL-16eTa. Неутрализиращо антитяло с двойна специфичност също може да се използва при методи за инхибиране на 1Ь-1алфа, или IL-1 бета активност, включващи довеждането в контакт на ПИалфа, или 1Б-1бета с антитялото с двойна специфичност, или негов антиген свързващ участък, така че активността на Ш-1алфа, или IL-1 бета да се инхибира. Такива антитела с двойна специфичност могат да се използват също при методи за лечение на интерлевкин-1-свързано нарушение, включващи прилагане върху субекта, страдащ от интерлевкин-1-свързано нарушение, на антитяло с двойна специфичност, или негов антиген свързващ участък.
При един друг вариант за изпълнение, изобретението предоставя метод за получаване на библиотека на антитяло, или антиген свързващ негов участък, чрез осъществяване на следните етапи: а) получава се библиотека А на рекомбинантна тежка верига, или на антиген свързващ негов участък, от разнообразието на антитела, получена от предоставянето на първия антиген; Ь) получава се библиотека В на рекомбинантна лека верига, или на антиген свързващ негов участък, от разнообразието на антитела, получена от предоставянето на първия антиген; с) получава се библиотека С на рекомбинантна тежка верига, или на антиген свързващ негов участък, от разнообразието на антитела, получена от предоставянето на втория антиген; d) получава се библиотека D на рекомбинантна лека верига, или на антиген свързващ негов участък,
66209 Bl от разнообразието на антитела, получена от предоставянето на втория антиген; и е) комбиниране на библиотека А на рекомбинантна тежка верига, или на антиген свързващ негов участък, с библиотека D на рекомбинантна лека верига, или на антиген свързващ негов участък, до получаването на библиотека X на антитяло, или антиген свързващ негов участък, и/или комбиниране на библиотека С на рекомбинантна тежка верига, или на антиген свързващ негов участък, с библиотека В на рекомбинантна лека верига, или на антиген свързващ негов участък, до получаването на библиотека Y на антитяло, или на антиген свързващ негов участък.
При един друг вариант за изпълнение на настоящото изобретение, непосредствено предхождащия метод на изобретението може, освен това, да включва етапа на комбиниране на библиотека X на антитяло, или на антиген свързващ негов участък с библиотека Y на антитяло, или на антиген свързващ негов участък до получаването на библиотека Z на антитяло, или на антиген свързващ негов участък.
При един друг вариант за изпълнение, настоящото изобретение е насочено към библиотеки X, Y и Z на антитяло, или на антиген свързващ негов участък.
При един друг вариант за изпълнение, методът съгласно настоящото изобретение позволява идентифицирането на антитяло с двойна специфичност, на антиген свързващ негов участък чрез селекциониране от библиотеки X, Y и/ или Z на антитяло, или на антиген свързващ негов участък, който свързва както първия, така и втория антиген.
При един друг вариант за изпълнение, настоящото изобретение е насочено към антитялото с двойна специфичност; получено, или селекционирано по който и да е от методите на настоящото изобретение.
При един друг вариант за изпълнение, настоящото изобретение е насочено също така към нуклеотидната последователност; кодираща всеки член от библиотеки X, Y и Z на антитяло, или на антиген свързващ негов участък; както и до антитяло с двойна специфичност, или до негов антиген свързващ участък, до вектор включващ горепосочените нуклеотидни последователности, и до клетки трансфектирани с горепосочения вектор.
Съгласно предпочитан вариант за изпълнение на настоящото изобретение, първият и вторият антиген, се избират независимо от група, състояща се от протеини, полипептида и пептида, при условие, че първият и вторият антиген не са един и същ. При един друг вариант за изпълнение на настоящото изобретение, протеините, полипептидите и пептидите са секретирани протеини, или повърхностни рецептори, а секретирания протеин се избира от група, състояща се от IFN, TNF и интерлевкин, IP-10, PF4, GRO, 9ЕЗ, ЕМАР-П, CSF, FGF и PDGF. При друг предпочитан вариант за изпълнение на настоящото изобретение, първият антиген е IL-1 алфа, а вторият антиген е IL-1 бета.
Подробно описание на изобретението
Изобретението се отнася до проектирането и използването на антигени за генериране на антитела с двойна специфичност, т.е антитела, притежаващи специфичност за най-малко две различни, но структурно свързани молекули, така както и до селекцията, получаването и използването на такива антитела с двойна специфичност. Структурната връзка на антигените от изобретението може да е през целия антиген (например, протеин), или само в някои структурно свързани области. Изобретението предоставя метод за получаване на антитяло с двойна специфичност, което специфично свързва две различни, но структурно свързани молекули, при което методът включва:
предоставяне на антиген, който включва обща структурна характеристика;
предоставяне на многообразието на антитяло на антигена; и избор от многообразието на антитяло, което свързва две различни, но структурно свързани молекули, за да се получи по този начин антитялото с двойна специфичност.
Трябва да се отбележи, че, докато настоящото изобретение се описва като разпознаване на два различни, но свързани антигена, трябва да се разбира че терминът “антитяло с двойна специфичност” включва антитела, които специфично разпознават даже повече от два различни, но свързани антигена, такива като антитела, които разпознават три, четири, пет, или повече структурно свързани, но различни, антигени.
66209 Bl
Освен това терминът “различни, но структурно свързани антигени” се счита, че включва антигени (например, протеини), чиито общи структури са свързани, така както антигени (например, протеини), които делят една, или повече структурно свързани области, но иначе са несвързани. Следователно “различни, но структурно свързани” антигени могат да бъдат, например, два протеина, които са членове на едно и също семейство протеини, притежаващи обща цялостна структура, или могат да бъдат, например, два протеина, чиято цялостна структура е различна (несвързани), но всеки от тях включва структурно свързан домен.
Могат да се използват различни видове антигени, за да се предизвика антителата на изобретението и могат да се приложат различни методи за получаване на антитела за получаване на антитялото с двойна специфичност на изобретението, както се разглежда подробно подолу в следващите раздели.
I. Антигени с двойна специфичност
За да се получи антитялото с двойна специфичност от изобретението, антителата се добиват антитела срещу антиген, способен да предизвика антитела с двойна специфичност. В изобретението могат да се използват множество различни видове антигени с двойна специфичност, и в следващите подраздели се описва проектирането на различни видове антигени с двойна специфичност.
А. Съседни топологични области
При един вариант за изпълнение, антигена с двойна специфичност съгласно изобретението включва съседна топологична област на идентичност, и/или подобност между две различни, но структурно свързани молекули, към които трябва да се добие антитяло с двойна специфичност. За предпочитане, антигенът съдържа най-голямата (например, най-дългата) съседна топологична област на идентичност, и/или подобност между две различни, но структурно свързани молекули. За предпочитане, двете различни, но структурно свързани молекули са протеини, и антигенът с двойна специфичност включва линеен пептид, съответстващ на най-голямата (например, най-дългата) съседна топологична област на идентичност, и/или подобност между двата протеина. Подходящата област на идентичност/подобност, която се избира, е за предпочитане област, свързваща рецептор, или лиганд, въпреки че могат да се използват и други области на идентичност/подобност.
За да се определят съседни топологични области на идентичност между две молекули (например, протеини), двете молекули (например, протеини) се сравняват (например, хомоложно моделиране, структурна информация, или подреждане) и се идентифицират идентични, или подобни области. За протеините може да се използва алгоритъм на подреждане, за да се създаде оптимално подреждане, и да се идентифицира най-голямата (например, най-дългата) съседна топологична област на идентичност, и/или подобност между двата протеина. Предпочитан, неограничаващ пример за математичен алгоритъм, използван за сравняване на две последователности е алгоритъмът на Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68, модифициран както в Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77. Един такъв алгоритъм се включва в NBLAST и XBLAST програмите на Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10. За да се получи подреждане с дупки за сравнителни цели, може да се използва Gapped BLAST, както е описано от Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Reasearch 25(17):33893402. При използване на BLAST и Gapped BLAST програмите, могат да се използват параметрите по подразбиране на съответните програми (например, XBLAST и NBLAST). Виж http:// www.ncbi.nlm.nih.gov. Алтернативен математически алгоритъм, който може да бъде използван, е този, използван в ALIGN програмата, описана от Myers and Miller (1988) Comput. Appl. Biosci. 4:11-17.
Когато се избере подходяща област на идентичност/подобност, антигенът с двойна специфичност, съответстващ на областта, може да се синтезира химически. Например, за пептидните антигени, пептида може да се синтезира чрез стандартни методи на пептиден синтез. При един вариант на изпълнение, пептидният антиген включва L аминокиселини. При други варианти на изпълнение, пептидният антиген може частично, или изцяло да бъде съставен от D аминокиселини. Пример за проектиране на антигена с двойна специфичност на базата на съседна топологична област на идентичност, и/или подобност между два различни, но структурно
66209 Bl свързани протеина се описва подробно в пример 1.
B. Циклични пептиди, имитиращи структурна бримка
При един друг вариант на изпълнение, антигенът с двойна специфичност съгласно изобретението включва циклична молекула, за предпочитане цикличен пептид, която структурно имитира бримка на обичайно срещано нагъване на двете различни структурно свързани молекули (например, протеини), към които антителата с двойна специфичност са добити. За получаването на такъв вид антиген, се сравняват структурите на двете свързани молекули и се идентифицира бримка на обичайно срещано нагъване на двете молекули. Може да се използва стандартен молекулярен анализ на моделиране и кристалографски анализ, за да се добави идентифициране на такива бримки на обичайно срещано прегъване. Идентифицират се идентични и подобни области (например, аминокиселинни последователности между два протеина) и може да се проектира консенсус последователност за подобни, но неидентични области. Линейна молекула, например, линеен пептид, се проектира на основата на тези подобни и идентични области, и тази линейна молекула може след това да бъде циклизирана чрез известни химични начини, за да се създаде антиген, имитиращ бримката. Например, може да се добави пролин и глицин към края на линейния пептид, за да се позволи циклизирането на пептида. Пример за проектиране на антигена с двойна специфичност на базата на цикличен пептид, имитиращ структурна бримка поделена от два различни, но структурно свързани протеина, се описва подробно в пример 2.
C. Хибридни молекули
При един друг вариант за изпълнение на настоящото изобретение, антигенът с двойна специфичност съгласно изобретението включва хибридна молекула, за предпочитане хибриден пептид, който включва редуващи се и/или припокриващи се участъци на двете различни, но структурно свързани молекули (протеини), към които са добити антителата с двойна специфичност. За да се получи такъв вид антиген, се сравняват структурите на двете молекули, и се идентифицират припокриващите се участъци (т.е., области на идентичност), така както и не идентичните области между двете молекули. Получава се хибридна молекула (например, хибриден пептид, когато двете свързани молекули са протеини), която за предпочитане да включва редуващи се участъци (например, аминокиселинни последователности) от всяка една от двете молекули, така както и припокриваща се област, която е обща за двете молекули. Една такава молекула може да се опише схематично като: X-YZ, където Y представлява област на идентичност, или на строга подобност между двете свързани молекули (т.е., припокриваща се област), X представлява област от една от свързаните молекули, и Z представлява област от другата от свързаните молекули. Пример за проектиране на антигена с двойна специфичност на базата на хибриден пептид, съставен от последователности на два различни, но структурно свързани протеина, се описва подробно в пример 3.
Друг вид хибридна молекула е такава, в която е бил въведен пептид в протеин с цяла дължина (отбелязван като протеин “мишена”). Избират се пептиди, които представляват функционални области на два различни, но структурно свързани протеина, например, области за взаимодействие на рецептора. Такива пептиди са предпочитани в настоящото като функционални пептиди. След това се въвежда функционален пептид на един от свързаните протеини в протеин с цяла дължина на другия свързан протеин, или алтернативно несвързан протеин. Идентифицира се, например, пептид от IL-1 алфа, съответстващ на област за взаимодействие на рецептора от 1Ь-1алфа, и този функционален пептид от IL-1 алфа се въвежда в IL-1 бета протеин с цяла дължина, за да бъде създадена хибридна IL-1 алфа/IL-1 бета молекула. Подобно, идентифицира се пептид от ПИбета, съответстващ на област за взаимодействие на рецептора от IL1 бета, и този функционален пептид от IL-1 бета, се въвежда в 1Ь-1алфа протеин с цяла дължина, за да бъде създадена хибридна IL-1 алфа/IL-1 бета молекула. Това въвеждане на функционалния пептид в свързания протеин с цяла дължина ограничава функционалния пептид в двата края, и поддържа нагънатата структура на пептида.
В случай на IL-1 алфа/IL-1 бета хибрид, функционалният пептид за предпочитане се инсертира (замества естествените аминокиселини) в област мишена, представляваща обичайно на
66209 Bl гънатите структури на IL-1 алфа и 1Ь-1бета. Такива области могат да бъдат открити по цялата дължина на протеина (например, в N-терминалната област, в средата на протеина, в С-терминалната област). Освен това, функционални пептиди, представляваща обичайно нагънатите IL1 алфа/IL-1 бета структури могат също така да бъдат инсерирани в ирелевантен протеин, като албумин, или някой друг естествено срещан в природата протеин. В този случай предпочитаният сайт за инсериране за пептида е област, която позволява пептида да поддържа желаната нагъната структура. Следователно, инсерционните сайтове могат да бъдат или при N-края, или в средата на протеина, или при С-края на протеина. Позиционирането на пептида, в който и да е естествено срещан в природата протеин се избира така, че да имитира структурните ограничения, поставени над него от нативния протеин, от който той произлиза. Докато функционалният пептид може просто да бъде инсериран в протеина мишена, така че аминокиселините на функционалния пептид да се добавят към протеина мишена, за предпочитане аминокиселините на функционалния пептид заместват участък от протеина мишена, в който той е инсериран.
Като неограничаващ пример се конструира хибридна молекула за използване като антиген с двойна специфичност за добиване на антитела с двойна специфичност за 1Ь-1алфа и IL1бета, при което функционален пептид, съответстващ на специфичен структурен елемент или на IL-1 алфа, или на IL-1 бета, се въвежда в IL-1 бета, или 1Ь-1алфа в цяла дължина в еквивалентната структурна позиция. Избраната хибридна молекула замества остатъци 160-176 на IL-1 бета с остатъци 168-184 на 1Ь-1алфа. Получената молекула притежава следната аминокиселинна последователност, в която заместените 1Ь-1алфа последователности (остатъци 168-184) са подчертани:
APVRSLNCTLRDSQQKSLVMAGPY ELKALHLQGQDMEQQWFS MGAYKSSKDDA KIW1LGLKEKNLYLSCVLKDDKPTLQLESVDPK NYPKKKMEKRFVFNKIEINNKLEFESAQFP NWYISTSQAENMPVFL GGTKGGQDIT DFTMQFVSS (SEQ ID NO: 4)
Тази молекула може да се получи при използване на стандартни техники от молекулярната биология (например клониране, полимеразна верижна реакция), при използване на обществено достъпните сДНК последователности на IL1 алфа и IL-1 бета, и техники на експресиране на рекомбинантен протеин. Хибридна сДНК може да се получи, да се въведе в подходящ експресионен вектор, и полипептида може да се експресира чрез въвеждане на експресионен вектор в подходяща клетка гостоприемник.
D. Пептиди на базата на участъци на хидрофобност
При друг вариант за изпълнение, антигена с двойна специфичност съгласно изобретението се избира на основата на участъци на хидрофобност, за да се изберат очакваните пептиди, така че да са високо антигенни. Например, антигени индекси на пептиди могат да се изчислят при използване на компютърен софтуер, както е описано от Wolf (CABIOSq 4(1), 181-186 (1988)). Представляващи интерес области за свързване на антитяло могат да се изберат, за да се увеличи до максимум вероятността за антигенност.
E. Имунизиране с клетки трансфектирани с антиген
При друг вариант за изпълнение, антитяло с двойна специфичност съгласно изобретението, се получава чрез имунизиране с клетки трансфектирани с антиген (т.е., антигените с двойна специфичност съгласно изобретението могат да бъдат клетки трансфектирани с антиген). Могат да се генерират клетъчни линии, които стабилно да експресират двата различни, но структурно свързани антигена, или техни хибридни молекула. Могат да се генерират, например, клетъчни линии, които стабилно да експресират 1Ь-1алфа, или 1Ь-1бета, или IL1 алфа/IL-1 бета хибридна молекула (например SEQ ID NO: 4). Представляващите интерес молекули могат да бъдат секретирани от клетките (в случай на разтворими протеини), или могат да се експресират на повърхността на клетките (в случай на рецептори, ензими). Доставянето на гени в клетката гостоприемник, което да позволи експресията на антигените от клетките гостоприемник може да се осъществи чрез голям брой конвенционални начини, включително, но без да се ограничава до, трансфекция, електропорация, клетъчно сливане, липофекция, бомбардиране с частици, микроинжектиране, или вирусно инфектиране. Клетъчните линии, които
66209 Bl експресират антигените, представляващи интерес, могат да се трансплантират по един или друг начин (интраперитонеално, подкожно, интрамускулно, и други подобни) в животно, представляващо интерес, за получаване на антитела. За предпочитане клетките експресират протеини с цяла дължина. Възможно е, също така, да се експресират и антигенни фрагменти. За разтворими протеини, протеините за предпочитане се секретират от клетките. За генериране на антитяло с двойна специфичност за извънклетъчния домен на два близко свързани рецептора, рецепторите за предпочитане се експресират върху клетъчната повърхност.
F. Имунизиране с една от структурно свързаните молекули
При друг вариант за изпълнение антигенът с двойна специфичност е просто един от двете различни, но структурно свързани молекули, към които трябва да се добият антитела с двойна специфичност. Една от двете свързани молекули се използва като средство за имунизиране, след което полученото множество антитела се скринира за антитела, които свързват, и по-предпочитано неутрализират, и двете от двете различни, но структурно свързани молекули. Например, някой може да имунизира или с IL1алфа, или с 1Ь-1бета, след което да скринира за алфа/бета байндери, и по-предпочитано неутрализатори. Както се използва в този вариант за изпълнение, терминът “имунизира” се счита, че широко обхваща предоставянето на множеството антитела на антигена, като IL-алфа, или 1Ь-1бета, както in vivo, така и in vitro. Следователно, този вариант за изпълнение обхваща имунизиране на животно или с IL-алфа, или IL-16eTa, и скриниране на получените антитела, добити за селекция на тези антитела, които свързват и IL-алфа, и Ш-1бета, така както и за скриниране на библиотека на рекомбинантно антитяло in vitro или с IL-алфа, или IL-1 бета, с последваща селекция на рекомбинантни антитела, които свързват и IL-алфа, и Ш-1бета.
II. Методи за получаване на антитела с двойна специфичност
За получаване на антитяло с двойна специфичност съгласно изобретението, множество антитела (както in vivo, така и in vitro) се добива за антиген с двойна специфичност, получен както е описано в предходния раздел, и от множест вото се избира подходящо антитяло с двойна специфичност. Двата елемента на разпознаване на антитяло от антиген са структурни елементи на разпознаване и са на основата на афинитет на узряване при специфични молекулярни взаимодействия. По време на естествения имунен отговор лесно се развиват антитела с нисък афинитет, които разпознават структурни мотиви (например разпознаването на един антиген от някои модели на рецептори за разпознаване), и в по-ранната фаза на имунния отговор това се следва от соматични мутации за увеличаване на афинитета на няколко клона. Развити са различни in vivo и in vitro методи за имитиране на този естествен феномен. Антитела с двойна специфичност с нисък афинитет могат да бъдат генерирани чрез който и да е от in vivo и in vitro методите, описани в настоящото, a Mabs с двойна специфичност с висок афинитет могат да бъдат получени чрез методи на соматичен мутагенез, описани в настоящото. Освен това, за да се оптимизира Mabs с двойна специфичност с висок афинитет, могат да се получат ко-кристални структури на Mabs с нисък афинитет с желаните антигени. Получената структурна информация може да насочва и друго усилване на афинитета чрез изменение (мутиране) специфичните контактни остатъци на Mabs, за да се засилят специфичните молекулярни взаимодействия, както е описано в настоящото.
Методи за получаване на антитела с двойна специфичност, които използват in vivo подходи, in vitro подходи, или тяхна комбинация, са описани подробно в следващите подраздели.
A. in vivo подходи
Стандартен in vivo подход за получаване на антитела е чрез имунизиране на подходящ животински субект с антиген, като по този начин се предоставя in vivo множеството антитела на антиген, последвано от възстановяване на представляващо интерес антитяло, или представляващи интерес антитела от животното. Такъв подход може да се приспособи към получаването на антитела с двойна специфичност, чрез използване на антиген с двойна специфичност, и селекциониране за антитела, които специфично разпознават двете структурно свързани молекули, представляващи интерес. Антитела с двойна специфичност могат да се получат чрез имунизиране на подходящ субект (например,
66209 Bl заек, коза, мишка, или друг бозайник, включително трансгенни и knockout версии на такива бозайници) с имуногенен състав на антиген с двойна специфичност. Един подходящ имуногенен състав може да съдържа, например, химически синтезиран, или рекомбинантно експресиран антиген с двойна специфичност. Съставът може, също така, да включва добавка, такава като Freund’s цялостна, или нецялостна добавка, или подобно имуностимулиращо съединение. Освен това, когато се използва за добиване на антитела, по-специално in vivo имунизация, антиген с двойна специфичност съгласно изобретението може да се използва самостоятелно, или по-предпочитано се използва като конюгат с носител протеин. Такъв подход за засилване отговорите на антитяло е добре известен в областта на техниката. Примерите за подходящи протеини носители, към които антиген с двойна специфичност може да се конюгира, включват keyhole limpet хемоцианин (KLH) и албумин.
Антитела-продуциращи клетки могат да се получат от субекта и да се използват за получаване на моноклонални антитела чрез стандартни техники, такива като техниката хибридома, оригинално описана от Kohler and Milstein (1975), Nature 256: 495-497) (виж, също така, Brown et al. (1981) J. Immunol. 127&539-46; Brown et al. (1980) J. Biol. Chem. 255:4980-83; Yeh et al. (1976) PNAS 76:2927-31; и Yeh et al. (1982) Int. J. Cancer 19:269-75). Технологията за получаване на хибридоми на моноклонално антитяло е добре известна (виж R. Н. Kenneth, in Monoclonal Antibodies: A New Dimension In Biological Analyses, Plenum Publishing Corp., New York (1980); E. A. Lerner (1981) Yale J. Biol. Med., 54:387-402; M. L. Getter et al. (1977) Somatic Cell Genet., 3:231-36). Накратко, еднаимортализирана клетъчна линия (характерно миелома) се слива към лимфоцити (характерно спленоцити, или клетки от лимфен възел, или лимфоцити от периферна кръв) от бозайник, имунизиран с имуноген с двойна специфичност, както е описано по-горе, и супернатантата на културата от получените хибридома клетки се скринират, за да се идентифицира хибридома, продуцираща моноклонално антитяло с двойна специфичност за двете различни, но структурно свързани молекули, представляващи интерес. Който и да е от много добре известните протоколи, използвани за сли ване на лимфоцити и имортализирани клетъчни линии може да се приложи за целите на генериране на моноклонални антитела с двойна специфичност (виж, например, G. Galfre et al. (1977) Nature 266:550-52; Gefter et al. Somatic Cell Genet., цитирано по-горе; Lerner, Yale J. Biol. Med., цитирано по-горе; Uenneth, Monoclonal Antibodies, цитирано по-горе). Освен това, всеки специалист в областта на техниката ще прецени, че съществуват много вариации на такива методи, които също могат да се използват. Характерно, имортализирана клетъчна линия (например, клетъчна линия миелома) е производна от същите видове бозайници както лимфоцитите. Например, миши хибридоми могат да се получат чрез сливане на лимфоцити от мишки, имунизирани с имуногенен състав съгласно изобретението с имортализирана миша клетъчна линия. Предпочитани имортализирани клетъчни линии са миши миелома клетъчни линии, които са чувствителни към културална среда, съдържаща хипоксантин, аминоптерин и тимидин (“НАТ среда”). Които и да са от многото миеломни клетъчни линии могат да се използват като партньор за сливане съгласно стандартни техники, например, P3-NS/l-Ag4-l, РЗx63-Ag8,653, или Sp2/O-Agl4 миеломни линии. Тези миеломни линии са достъпни чрез American Type Culture Collection *ATCC), Rockville, Md. Характерно, НАТ-чувствителни миши миеломни клетки се сливат към миши спленоцити, използвайки полиетилен гликол (“PEG”). Хибридома клетки, получени от сливането след това се селекционират, използвайки НАТ среда, която убива несляти и непродуктивно сляти миеломни клетки (несляти спленоцити се оцветяват след няколко дни, понеже те не са трансформирани). Хибридома клетки, продуциращи моноклонални антитела, които специфично разпознават двете структурно свързани молекули, представляващи интерес, се идентифицират чрез скриниране на супернатантите на хибридома културата за такива антитела, например, като се използва стандартно изследване ELISA, за да се изберат тези антитела, които специфично могат да свързват двете свързани молекули.
В зависимост от вида на желаното антитяло, различни животни гостоприемници могат да се използват за in vivo имунизация. Може
66209 Bl да се използва гостоприемник, който самият експресира ендогенна версия на антигена(ите), представляващ(и) интерес, или, алтернативно, може да се използва гостоприемник, който е направен с недостатъчност в ендогенна версия на антигена(ите) представляващ(и) интерес. Например, показано е, че мишки, направени с недостатъчност за посочен ендогенен протеин чрез хомоложно рекомбиниране на съответния ендогенен ген (т.е., “Knockout” мишки) извличат хуморален отговор към протеина, когато са имунизирани с него, и по този начин могат да бъдат използвани за продуцирането на моноклонални антитела с висок афинитет към протеина (виж, например, Roes, J. et al. (1995) J. Immunol. Methods 183:231-237; Lunn, Μ. P. et al. (2000) J. Neurochem. 75:404-412).
За получаване на нечовешки антитела (например, срещу човешки антиген с двойна специфичност), различни бозайници, различни от човек, са подходящи като гостоприемници за продуциране на антитела, включително, но без да се ограничава от, мишки, плъхове, зайци и кози (и техни knockout версии), въпреки че мишките са предпочитани за продуциране на хибридоми. Освен това, за продуциране на изцяло човешки антитела срещу човешки антиген с двойна специфичност, могат да се използват гостоприемници животни различни от човек, които експресират множество човешки антитела. Такива животни различни от човек включват трансгенни животни (например, мишки), носещи трансгени на човешки имуноглобулин, huPBMC-SCID химерни мишки, и човек/мишка радиационни химери, всеки един от които се дискутира по-долу.
Така, съгласно един вариант за изпълнение на изобретението, животното, което се имунизира с антиген с двойна специфичност е бозайник, различен от човек, за предпочитане мишка, която е трансгенна за трансгени на човешки имуноглобулин, такива, които бозайника, различен от човек (например, мишка) превръща в човешки антитела след антигенно стимулиране. При такива животни, характерно, се внася конфигурация на трансгени на тежка и лека верига на имуноглобулин от човешка зародишна линия в животни, които са били проектирани така, че техните ендогенни локоси на тежка и лека верига са инактивирани. При антигенно стимулиране на такива животни (например, с човешки антиген), се продуцират антитела, производни на човешки имуноглобулинни последователности (т.е., човешки антитела), и човешки моноклонални антитела могат да се получат от лимфоцити на такива животни чрез стандартни хибридома технологии. За допълнително описание на трансгени мишки с човешки имуноглобулин и на тяхното използване при продуцирането на човешки антитела, виж, например, US Patent No. 5,939,598, РСТ Publication No. WO 1996/033735, PCT Publication No. WO 1996/034096, PCT Publication No. WO 1998/024893 и PCT Publication No. WO 1999/053049 to Abgenix Inc., и US Patent No. 5,545,806, No. 5,625,126, No. 5,633,425, No. 5,661,016, No. 5,770,429, No. 5,814,318, No. 5,877,397, и PCT Publication No. WO 1999/045962 to Genpharm Inc. Виж, също така, MacQuitty, J. J. and Kay, R. M. (1992) Science 257:1188; Taylor, L. D. et al. (1992) Nucleic Acids Res. 20:6287-6295; Lonberg, N. et al. (1994) Nature 368:856-859; Lonberg, N. et Huszar, D. (1995) Int. Rev. Immunol. 13:65-93; Hurding, F. A. and Lonberg N. (1995) Ann. N. Y. Acad. Sci. 764:536-546; Fiahild, D. M. et al. (1996) Nature Biotechnology 14:845-851; Mendez, M. J. et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156; Green, L. L. and Jakobovits, A. (1998) J. Exp. Med. 188:483-495; Green, L. L. (1999) J. Immunol. Methods 231:11-23; Yang, X. D. et al. (1999) J. Leukoc. Biol. 66:401-410; Gallo, M. L. et al. (2000) Eur. J. Immunol. 30:534-540.
Съгласно друг вариант за изпълнение на изобретението, животното, което се имунизира с антиген с двойна специфичност е мишка с тежка комбинирана имунонедостатъчност (SDID), която е пресъздадена с мононуклеарни клетки от човешка периферна кръв, или лимфоидни клетки, или техни прекурсори. За такива мишки, които се отнасят като hu-PBMC-ACID химерни мишки, е показано, че при антигенно стимулиране продуцират човешки имуноглобулин отговори. За допълнително описание на тези мишки и на тяхното използване в генерирането на антитела, виж, например, Leader, К. A. et al. (1992) Immunology 76:229-234; Bombil, F. et al. (1996) Immunobiol. 195:360-375; Murphy, W. J. et al. (1996) Semin. Immunol. 8:233-241; Herz, U. et al. (1997) Int. Arch. Allergy Immunol. 113:ISO152; Albert, S. E. et al. (1997) J. Immunol.
66209 Bl
159:1393-1403; Nguyen, H. et al. (1997) Microbiol. Immunol. 41:901-907; Arai, K. et al. (1998) J. Immunol. Methods 217:79-85; Yoshinari, K. and Arai, K. (1998) Hybridoma 17:41-45; Hutchians, W. A. et al. (1999) Hybridoma 18:121 -129; Murphu, W. J. et al. (1999) Clin. Immunol. 90:22-27; Smithson, S. L. et al. (1999) Mol. Immunol. 36:113124; Chamat, et al. (1999) J. Infect. Diseases 180:268-277; и Heard, C. et al. (1999) Molec. Med. 5:35-45.
Съгласно друг вариант за изпълнение на изобретението, животното, което се имунизира с антиген с двойна специфичност е мишка, на която е приложена летална доза радиоактивно облъчване върху цялото тяло, последвано от защита срещу радиоактивно облъчване с клетки от костен мозък от мишка с тежка комбинирана имунонедостатьчност (SDID), последвано от присаждане на функционални човешки лимфоцити. Този вид химери, смятани за система Trimera, са използвани за продуциране на човешки моноклонални антитела чрез имунизация на мишки с антиген представляващи интерес, последвано от получаване на моноклонални антитела, използвайки стандартна хибридомна технология. За допълнително описание на тези мишки и на тяхното използване в генерирането на антитела, виж, например, Eren, R. et al. (1998) Immunology 93:154-161; Reisner, Y. and Dagan, S. (1998) Trends Biotechnol. 16:242-246; Ilan, E. et al. (1999) Hepatology 29:553-562; и Bocher, W. O. et al. (1999) Immunology 96:634-641.
B. in vitro подходи
Алтернативно на получаването на антитяло с двойна специфичност чрез in vivo имунизация и селекция, антитяло с двойна специфичност съгласно изобретението може да се идентифицира и да се изолира чрез скриниране на библиотека на рекомбинантен комбинаторен имуноглобулин (например, антитяло на библиотека изобразяваща фаг) с антиген с двойна специфичност, като чрез това да се изолират членове на имуноглобулинова библиотека, които се свързват специфично към двете структурно свързани, но различни молекули, представляващи интерес. Набори за генериране и скриниране на библиотеки изобразяващи фаг са достъпни посредством търговската мрежа (например, the Pharmacia Recombinant Phage System, Catalog No. 27-940001; и the Stratagene SurfZAP™ Phage Display kit,
Catalog No. 240612). Съгласно различни варианти за изпълнение, библиотеката изобразяваща фаг е scFv библиотека, или Fab библиотека. Изобразяващата фаг техника за скриниране на библиотеки нарекомбинантни антитела е описана обстойно в областта на техниката. Примери за методи и съединения, особено отзивчиви за използване при генериране и скриниране на библиотека изобразяваща антитяло може да се намерят в, например, McCafferty et al. International Publication No. WO 1992/001047, US Patent No. 5,969,108 и EP 589,877 (описващ по-специално изобразяване на scFv), Ladner et al. US Patent No. 5,223,409, No. 5,403,484, No. 5,571,698, No. 5,837,500, и EP 436,597 (описващ, например, pill сливане); Dower et al. International Publication No. WO 1991/017271, US Patent No. 5,427,908, US Patent No. 5,580,717, и EP 527,839 (описващ по-специално изобразяване на Fab); Winter et al. International Publication No. WO 1992/020791, и EP 368,684 (описващ по-специално клониране на последователностите на вариабилния домен на имуноглобулина); Griffiths et al. US Patent No. 5,885,793, и EP 589,877 (описващ по-специално изолиране на човешки антигени, използвайки рекомбинантни библиотеки); Garrard et al. International Publication No. WO 1992/009690 (описващ поспециално техники на експресиране на фаг); Knappik et al. International Publication No. WO 1997/008320 (описващ по-специално библиотеката на човешко рекомбинантно антитяло HuCal); Salfeld et al. International Publication No. WO 1997/029131 (описващ получаването на човешко рекомбинантно антитяло към човешки антиген (човешки тумор некрозис фактор алфа), така както и in vitro афинитетно узряване на рекомбинантно антитяло) и Salfeld et al. US Provisional Application No. 60/126,603, също така описващ получаването на човешко рекомбинантно антитяло към човешки антиген (човешки интерлевкин 12), така както in vitro афинитетно узряване на рекомбинантно антитяло).
Други описания за скриниране на библиотека на рекомбинантно антитяло е намерено в научни публикации, такива като Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; Griffiths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al.
66209 Bl (1991) J. Mol. Biol. 226:889-896; Clarkson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1991) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al. (1991) Bio/ Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982; McCafferty et al. Nature (1990) 348:552-554; и Knappik et al. (2000) J. Mol. Biol. 296:57-86.
Алтернативно на използването на системи изобразяващи бактериофаги, библиотеки на рекомбинантно антитяло могат да бъдат експресирани върху повърхността на дрождеви клетки, или бактериални клетки. Методи за получаване и скриниране и скриниране на библиотеки, експресирани върху повърхността на дрождеви клетки се описват също така в РСТ Publication No. WO 1999/036569. Методи за получаване и скриниране и скриниране на библиотеки, експресирани върху повърхността на бактериални клетки се описват също така в РСТ Publication No. WO 1998/049286.
След като антитяло, представляващо интерес, се идентифицира от комбинаторна библиотека, ДНКи, кодиращи леките и тежките вериги на антитялото се изолират чрез стандартни техники на молекулярната биология, такива като PCR амплифициране на ДНК от изобразяващия пакет (например, фаг), изолиран по време на метода на скриниране на библиотеката. Известни са от областта на техниката нуклеотидни последователности от гени на лека и тежка верига на антитяло, от които могат да се получат PCR праймери. Например, много такива последователности са описани в Fabat, Е. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91 -3242, и в “ Vbase” данни за човешка последователност на зародишна линия.
Антитяло или участък от антитяло, съгласно изобретението, може да се получи чрез рекомбинантно експресиране на гените на леката и тежката верига на имуноглобулина в клетка гостоприемник. За да се експресира едно антитяло рекомбинантно, клетка гостоприемник се трансфекгира с един, или с няколко рекомбинантни експресионни вектори, носещи ДНК фрагменти кодиращи лека и тежка верига на имуноглобулина на антитялото, така че леката и тежката верига се експресират в клетката гостоприемник, и, за предпочитане, се секретират в средата, в която се култивират клетките гостоприемници, от която среда могат да се извлекат антителата. Използват се стандартни методологии за рекомбинантна ДНК, за да се получат гени на лека и тежка верига на антитялото, да се инкорпорират тези гени в рекомбинантни експресионни вектори, и да се въведат векторите в клетки гостоприемници, такива като тези, описани в Sambrook, Fritsh and Maniatis (eds), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N. Y., (1989), Ausubel, F. M. et al. (eds), Current Protocols on Molecular Biology, Green Publishing Assocoates, (1989) и в US Patent No. 4,816,397, от Boss et al.
След като вече се получат ДНК фрагменти кодиращи VH и VL сегментите на антитялото, представляващи интерес, тези ДНК фрагменти могат след това да се обработят чрез стандартни техники за рекомбинантна ДНК, например, да се конвертират гените на вариабилната област до гени на антитяло с пълна дължина на веригата, до гени на Fab фрагмент, или до scFv ген. При тези обработвания, ДНК фрагмент кодиращ VL, или VH се свързва операционно към друг ДНК фрагмент, кодиращ друг протеин, такъв като константна област на антитяло, или гъвкав линкер. Терминът “операционно свързан”, така както се използва в този контекст, означава, че двата ДНК фрагмента са свързани по такъв начин, че аминокиселинната последователност, кодирана от двата ДНК фрагмента остава в рамка.
Изолираната ДНК, кодираща VH областта може да бъде конвертирана в ген на тежка верига в цяла дължина чрез операционно свързване на VH-кодиращата ДНК към друга ДНК молекула, кодираща константни области на тежка верига (CH, СН2 и СНЗ). Последователностите на човешки гени от константна област на тежка верига са известни в областта на техниката (виж, например, Kabat Е. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) и ДНК фрагменти, обхващащи тези области, могат да се получат чрез стандартно PCR усилване. Константната област на тежката верига може да бъде IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM, IgD константна област, но най-предпочитано е IgGl, или IgG4 константна област. За гена на Fab фрагмента на
66209 Bl тежка верига, VH-кодиращата ДНК може операционно да бъде свързана към друга ДНК молекула, кодираща само константната област СН1 на тежката верига.
Изолираната ДНК, кодираща VL областта може да бъде конвертирана в ген на лека верига с цяла дължина (така както и гена на Fab на лека верига) чрез операционно свързване на VL-koдиращата ДНК към друга ДНК молекула, кодираща константна област на леката верига, CL. Последователностите на човешки гени от константна област на лека верига са известни в областта на техниката (виж, например, Kabat Е. А., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) и ДНК фрагменти, обхващащи тези области, могат да се получат чрез стандартно PCR усилване. Константна област на леката верига може да бъде капа, или ламбда константна област, но най-предпочитано е капа константна област.
За създаване на scFv ген, VH- и VL-кодиращите ДНК фрагменти са операционно свързани към друг фрагмент, кодиращ гъвкав линкер, например, кодиращ аминокиселинната последователност (Gly4-Ser)3, такъв, че VH и VL последователностите могат да бъдат експресирани като съседен протеин с единична верига, с VL и VH областите присъединени към гъвкавия линкер (виж, например, Bird et al. (1988) Science 242:243-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., Nature (1990) 348:552-554).
За експресиране на рекомбинантни антитела, или на участъци от антитела съгласно изобретението, ДНКи кодиращи частични, или с цяла дължина леки и тежки вериги, получени както се описва по-горе, могат да се инсерират в експресионни вектори, по такъв начин, че гените да са операционно свързани към транскрипционни и транслационни контролни последователности. В този контекст, терминът “операционно свързан” означава, че ген на антитяло е лигиран във вектор, така че транскрипционни и транслационни контролни последователности във вектора изпълняват тяхната предназначена функция за регулиране на транскрибирането и на транслирането на гена на антитялото. Експресионният вектор и експресионните конт ролни последователности се избират така, че да са съвместими с експресирането на използваната клетка. Генът на леката верига на антитялото и генът на тежката верига на антитялото могат да се инсерират в отделни вектори, или, похарактерно, двата гена се инсерират в един и същи експресионен вектор. Гените на антитялото се инсерират в експресионния вектор чрез стандартни методи (например, свързване на комплементарни рестрикционни сайтове във фрагмент от гена и вектор на антитялото, или свързване на тъп край, ако не присъстват рестрикционни сайтове). Преди инсерирането на последователностите на леката и тежката верига, експресионният вектор може вече да носи последователности на константна област на антитялото. Например, един подход за конвертиране на VH и VL последователностите в гени на антитяло с пълна дължина, е те да бъдат инсерирани в експресионни вектори вече кодиращи константни области на тежката верига и константни области на леката верига, съответно, така че VH сегментът е свързан операционно към СН сегмента(ите) във вектора, и VL сегментът е свързан операционно към CL сегмента във вектора. Освен това, или алтернативно, рекомбинантният експресионен вектор може да кодира сигнален пептид, който улеснява секретирането на веригата на антитялото от клетка гостоприемник. Генът на веригата на антитялото може да бъде клониран във вектора, така че сигналният пептид да се свърже в рамка към амино терминуса на гена на веригата на антитялото. Сигналният пептид може да е имуноглобулинов сигнален пептид, или хетероложен сигнален пептид (т.е., сигнален пептид от не-имуноглобулинов протеин).
Освен това, към гените на веригата на антитялото, рекомбинантните експресионни вектори съгласно изобретението носят регулаторни последователности, които контролират експресирането на гените на веригата на антитялото в клетка гостоприемник. Терминът “регулаторна последователност” включва промотори, енхансери и други елементи за контролиране на експресията (например, сигнали за полиаденилиране), които контролират транскрипцията, или транслирането на гените на веригата на антитялото. Такива регулаторни последователности са описани, например, в
66209 Bl
Goeddel; Gene Expretion Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990). Специалистите в областта на техниката ще преценят, че проектирането на експресионния вектор, включително изборът на регулаторни последователности, може да зависи от такива фактори, като изборът на клетката гостоприемник, която да се трансформира, от нивото на експресиране на желания протеин, и т. н. Предпочитани регулаторни последователности за експресията на клетка гостоприемник на бозайник включват жизнеспособни елементи, които водят до високи нива на експресиране на протеин в клетки на бозайник, такива като промотори и/или усилватели, произлизащи от цитомегаловирус (CMV) (такива като CMV промотор/ усилвател), Simian Virus 40 (SV40) (такива като SV40 промотор/усилвател), аденовирус, (например, главният късен промотор на аденовирус (AdMLP)) и полиома. За повече подробности за вирусни регулаторни елементи, и техни последователности, виж, например, US Patent No. 5,168,062 от Stinski, US Patent No. 4,510,245 от Bell et al. и US Patent No. 4,968,615 от Schaffner etal.
В допълнение към гените на веригата на антитялото и регулаторните последователности, рекомбинантният експресионен вектор съгласно изобретението може да носи допълнителни последователности, такива като последователности, които регулират репликацията на вектора в клетки гостоприемници (например, начала на репликация) и избираеми маркерни гени. Избираемите маркерни гени улесняват селекцията на клетки гостоприемници, в които е въведен вектора (виж, например, US Patent Nos. 4,399,216, 4,634,665 и 5,179,017, всичките от Axel et al.). Например, характерно избираемият маркерен ген придава резистентност към лекарства, такива като G418, хигромицин, или метотрексат, на клетка гостоприемник, в която векторът е въведен. Предпочитани избираеми маркерни гени включват гена на дихидрофолат редуктаза (DHFR) (за използване в dhfr клетки гостоприемници с метотрексат селекция/ усилване) и пео гена (за G418 селекция).
За експресия на леката и тежката верига, експресионният(те) вектор(и) кодиращ(и) тежката и леката верига се трансфектират в клетка гостоприемник чрез стандартни техники.
Различните форми на термина “трансфектиране” са предназначени да обхващат голямо разнообразие от техники, обичайно използвани за въвеждане на екзогенна ДНК в прокариотна, или еукариотна клетка гостоприемник, например, електропорация, калций-фосфорно утаяване, DEAE-декстран трансфектиране и други подобни. Въпреки че теоретично е възможно да се експресират антителата съгласно изобретението или в прокариотни, или в еукариотни клетки гостоприемници, експресиране на антитела в еукариотни клетки, и най за предпочитане клетки гостоприемници от бозайник, е найпредпочитаното, понеже такива еукариотни клетки, и по-специално клетки от бозайник, са по-подходящи, отколкото прокариотни клетки да се събират и да секретират правилно нагънато и имунологично активно антитяло. За прокариотно експресиране на гени на антитяло е докладвано, че е неефективно за продуциране на високи добиви на активно антитяло (Boss, М. A. and Wood, С. R. (1985) Immunology Today 6:12-13).
Предпочитани клетки гостоприемници от бозайници за експресиране на рекомбинантните антитела съгласно изобретението включват Chinese Hamster Ovary (СНО клетки) (включително dhfr-СНО клетки, описани в Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, използвани c DHFR избираем маркер, например, както се описва в R. J. Kaufman and Р. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601621), NSO миелома клетки и SP2 клетки. Когато рекомбинантни експресионни вектори, кодиращи гени на антитяло се въвеждат в клетки гостоприемници на бозайник, антителата се продуцират чрез култивиране на клетките гостоприемници в продължение на достатъчно дълъг период от време, за да се даде възможност за експресиране на антитялото на клетките гостоприемници, или, по-предпочитано, за секретиране на антитялото в културалната среда, в която са прераснали клетките гостоприемници. Антитела могат да се възстановят из културалната среда, използвайки стандартни методи за пречистване на протеин.
Клетки гостоприемници могат също така да се използват за продуциране на участъци от интактни антитела, такива като Fab фрагменти, или scFv молекули. Трябва да се разбере, че ва
66209 Bl риациите на горната процедура влизат в обхвата на настоящото изобретение. Например, може да е желателно да се трансфектира клетка гостоприемник с ДНК, кодираща или леката верига, или тежката верига (но не и двете) на антитяло съгласно това изобретение. Технология за рекомбинантна ДНК може също така да се използва, за да се отнеме малко от, или цялата ДНК кодираща която и да е от двете, било леката, било тежката вериги, която не е необходимо да се свързва към антигените, представляващи интерес. Молекулите, експресирани от такива окастрени ДНК молекули също така се обхващат от антителата съгласно изобретението. Освен това, могат да бъдат продуцирани бифункционални антитела, в които една тежка и една лека верига са антитяло съгласно изобретението, а другата тежка и лека верига са специфични за антиген, различен от антигените, представляващи интерес, чрез кръстосано свързване на антитяло съгласно изобретението към второ антитяло чрез стандартни химични методи за кръстосано свързване.
Съгласно предпочитана система за рекомбинантно експресиране на антитяло, или антигенсвързващ негов участък, съгласно изобретението, рекомбинантен експресионен вектор, кодиращ както тежката верига на антитялото, така и леката верига на антитялото, се въвежда в dhfr-CHO клетки чрез калций фосфор-медиирано трансфектиране. В рекомбинантния експресионен вектор, всяка една от тежката и леката верига на гените на антитялото са операционно свързани към CMV усилвател/AdMLP промотор регулаторни елементи, за довеждане до високи нива на транскрибиране нагоните. Рекомбинантният експресионен вектор също така носи DHFR ген, който позволява селекцията на СНО клетки, които са били трансфектирани с вектора, използвайки метотрексат селекция/амплификация. Избраните трансформирани клетки гостоприемници се култивират, за да се даде възможност за експресията на тежката и леката верига на антитялото, и се извлича интактно антитяло от културалната среда. Стандартни молекулярни биологични техники се използват за получаването на рекомбинантния експресионен вектор, за да се трансфектират клетките гостоприемници, за да се изберат трансформанти, за да се култивират клетките гостоприемници, и да се възстанови антитялото от културалната среда. Освен това, изобре тението предоставя метод за синтезиране на рекомбинантно антитяло съгласно изобретението чрез култивиране на клетка гостоприемник съгласно изобретението в подходяща културална среда, докато се синтезира рекомбинантно антитяло съгласно изобретението. Методът може, също така, да съдържа изолиране на рекомбинантното антитяло от културалната среда.
Алтернативно на скриниране на библиотеки на рекомбинантно антитяло чрез изобразяване на фаг, могат да се приложат други методики, известни в областта на техниката за скриниране големи комбинаторни библиотеки, за идентифицирането на антитела с двойна специфичност съгласно изобретението. Един вид на алтернативна експресионна система е такава, в която библиотека на рекомбинантно антитяло се експресира със сливания на РНК-протеин, както се описва в РСТ Publication No. WO 1998/031700 от Szostak and Roberts, и в Roberts, R. W. and Szostak, J. W. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12297-12302. В тази система, се създава ковалентно сливане между тРНК и пептида, или протеина, който той кодира чрез in vitro транслация на синтетични тРНК, които носят пуромицин, пептидил акцептор антибиотик, на неговия 3' край. Така, специфична тРНК може да бъде обогатена от комплексна смес от тРНКи (например, комбинаторна библиотека), на базата на свойствата на кодирания пептид, или протеин, например, антитяло, или негов участък, такава като свързваща антитялото, или негов участък, към антиген с двойна специфичност. Последователности от нуклеинова киселина кодиращи антитела, или техни участъци, възстановени от скриниране на такива библиотеки, могат да бъдат експресирани чрез рекомбинантни начини, както е описано по-горе (например, в клетки гостоприемници на бозайник), и, освен това, могат да бъдат подложени на следващо афинитетно узряване чрез допълнителни кръгове на скриниране на mPHK-пептид сливания, при които са въведени мутации в оригинално избрана(и) последователност(и), или чрез други методи за афинитетно узряване in vitro на рекомбинантни антитела, както се описва по-горе.
С. Комбинирани подходи
Антитела с двойна специфичност съгласно изобретението могат, също така, да се получат, използвайки комбинирането на in vivo
66209 Bl и in vitro подходи, такива като методи, при които антиген с двойна специфичност се предоставя оригинално на множество антитела in vivo в гостоприемник животно, за да стимулира продуцирането на антитела, които свързват антигена с двойна специфичност, но където следваща селекция и/или узряване на антитяло (т.е., подобрение), се осъществява, използвайки една, или повече in vitro техники.
Съгласно един вариант за изпълнение на изобретението, такъв комбиниран метод обхваща първо имунизиране на животно, различно от човек (например, мишка, плъх, заек, коза, или тяхна трансгенна версия, или химерна мишка) с антиген с двойна специфичност, за да се стимулира отговор на антитяло срещу антигена, последвано от получаване и скриниране на библиотека на антитяло изобразяваща фаг, използвайки имуноглобулинови последователности от лимфоцити, стимулирани in vivo чрез излагане на действието на антигена с двойна специфичност. Първият етап на тази комбинирана процедура може да се проведе както е описано в подсекция ПА по-горе, докато вторият етап на тази процедура може да се проведе както е описано в подсекция ИВ по-горе. Предпочитани методики за хиперимунизиране на животни различни от човек, последвано от in vitro скриниране на библиотеки изобразяващи фаг, получени от стимулиране на лимфоцити включват тези, описани от BioSite Inc., виж, например, РСТ Publication WO 1998/047343, РСТ Publication WO 1991/017271, US Patent No. 5,427,908 и ; US Patent No. 5,580,717.
Съгласно друг вариант за изпълнение на изобретението, комбинираният метод обхваща първо имунизиране на животно, различно от човек (например, мишка, плъх, заек, коза, или негова knockout и/или трансгенна версия, или химерна мишка) с антиген с двойна специфичност, за да се стимулира антитяло отговор срещу антигена, и селекция на лимфоцити, които са продуциращи антитела, имащи желаната двойна специфичност (например, чрез скриниране хибридоми, получени от имунизираните животни). Пренаредените гени на антитялото от избраните клони след това се изолират (чрез стандартни методи за клониране, такива като верижна реакция на обратна транскриптазаполимераза), и се подлагат на in vitro афинитет но узряване, като по този начин се улесняват свойствата за свързване на избраното антитяло, или антитела. Първият етап на тази процедура може да се проведе както е описано в подсекция ПА по-горе, докато вторият етап на тази процедура може да се проведе както е описано в подсекция ПВ по-горе, по-специално използвайки РСТ Publication WO 1997/029131, и РСТ Publication WO 2000/056772.
Съгласно друг един комбиниран метод, рекомбинантни антитела се генерират от единични, изолирани лимфоцити, използвайки процедура, известна в областта на техниката като метода на избраното лимфоцитно антитяло (SLAM), както се описва в US Patent No. 5,627,052, РСТ Publication WO 1992/002551 и Babcock, J. S. et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7843-7848. Съгласно този метод, както се прилага върху антитялото с двойна специфичност съгласно изобретението, животно, различно от човек (например, мишка, плъх, заек, коза, или негова трансгенна версия, или химерна мишка) първо се имунизира in vivo с антиген с двойна специфичност, за да се стимулира антитяло отговор срещу антигена, и след това се селекционират единични клетки, секретиращи антитела, представляващи интерес, например, специфични за антигена с двойна специфичност, използвайки изследване на специфична за антиген хемолитична плака (например, самият антиген с двойна специфичност, или структурно свързаните молекули, представляващи интерес, се присъединяват, като овчи червени кръвни клетки, използвайки линкер, такъв като биотин, като чрез това се дава възможност за идентифициране на единични клетки, които секретират антитела с подходяща специфичност, използвайки изследването на хемолитична плака). След идентифициране на секретиращите антитела клетки, представляващи интерес, сДНКи на вариабилна област на тежка и лека верига се освобождават от клетките чрез обратна транскриптаза-PCR, и тези вариабилни области могат след това да се експресират, в контекста на подходящи имуноглобулин константни области (например, човешки константни области), в клетки гостоприемници на бозайник, такива като COS, или СНО клетки. Клетките гостоприемници, трансфектирани с усилени имуноглобулинови последователности, произлизащи от in vivo селекционирани
66209 Bl лимфоцити, могат след това да претърпят следващ анализ и селекциониране in vitro, например, чрез получаване натрансфектираните клетки, за да се изолират клетки, експресиращи антитела, имащи желаната двойна специфичност. Усилените имуноглобулинови последователности след това могат да се обработят in vitro, като например in vitro афинитетно узряване, както се описва погоре.
Съгласно друг вариант за изпълнение на изобретението, комбинираният метод за продуциране на антитяло с двойна специфичност обхваща следните етапи. Първо животно, различно от човек се имунизира с първи антиген, и второ животно, различно от човек се имунизира с втори различен антиген, където за предпочитане вторият антиген структурно е подобен на първия антиген, за да се стимулира антитяло отговор in vivo. Конструират се рекомбинантна библиотека на тежка верига и рекомбинантна библиотека на лека верига от гени на антитяло, производни на първото животно, различно от човек, и на второто животно, различно от човек, съответно, както се описва в секция ПВ. Библиотеката на тежка верига от животното, имунизирано с първия антиген се комбинира с библиотеката на лека верига от животното, имунизирано с втория антиген животното, за да се генерира библиотека X. Similarly на антитяло, библиотеката на тежка верига от животното, имунизирано с втория антиген се комбинира с библиотеката на лека верига от животното, имунизирано с първия антиген животното, за да се генерира библиотека Y. Additionally на антитяло, библиотеки X и Y могат да се комбинират, за да се генерира библиотека XY. Антитела с двойна специфичност, които свързват и първия, и втория антиген, могат да се идентифицират, и да се изолират от X, Y и/или XY библиотеки.
III. Характеристики на антитела с двойна специфичност
Изобретението предоставя антитела с двойна специфичност, така както и участъци от такива антитела, които могат да се получат съгласно методите на изобретението. За предпочитане, антителата, или участъците от тях, са изолирани антитела. За предпочитане, антителата, или участъците от тях, са неутрализиращи антитела. Антителата съгласно изобретението включват моноклонални и рекомбинантни антитела, и участъ ци от тях. Съгласно различни варианти за изпълнение на изобретението, антитялото, или неговия участък, може да съдържа аминокиселинна последователност, произлизаща изцяло от единични видове, такива като изцяло човешки, или изцяло мише антитяло, или неговия участък. Съгласно други варианти за изпълнение на изобретението, антитялото, или неговия участък, може да бъде химерно антитяло, или CDR-присадено антитяло, или друго от хуманизирано антитяло.
Терминът “антитяло”, така както се използва тук, се отнася до молекули имуношобулин, които се съдържат в четири полипептидни вериги, две тежки (Н) вериги и две леки (L) вериги, взаимно съединени чрез дисулфидни връзки. Всяка тежка верига се състои от вариабилна област на тежка верига (съкратено тук като НС VR, или VH) и константна област на тежка верига. Константната област на тежката верига се състои от три домена, CHI, СН2 и СНЗ. Всяка лека верига се състои от вариабилна област на лека верига (съкратено тук като LCVR или VL) и константна област на лека верига. Константната област на леката верига се състои от един домен, CL. Областите VH и VL могат след това да подразделят на области с хипервариабилност, наречени с термина области определящи комплементарността (CDR), с разпръснати между тях области, които са посъхранени, наречени с термина области на рамката (FR). Всяка една от VH и VL се състои от три CDR и от четири FR, подредени от аминотерминала към карбокситерминала в следния ред: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Терминът “антиген-свързващ участък” на антитяло (или просто “участък от антитяло”), както се използва тук, се отнася до един, или повече фрагменти на антитяло с двойна специфичност, които запазват способността да свързват специфично два различни, но структурно свързани антигена. Беше показано, че антиген-свързващата функция на едно антитяло може да се осъществи посредством фрагменти на антитяло с пълна дължина. Примери за свързващи фрагменти, които се обхващат от термина “антиген-свързващ участък” на антитяло включват (i) Fab фрагмент, моновалентен фрагмент, състоящ се от VL, VH, CL и СН1 домени; (ii) F(ab’)2 фрагмент, бивалентен фрагмент, съдържащ два
66209 Bl
Fab фрагмента, свързани c дисулфиден мост при hinge областта; (iii) Fd фрагмент, състоящ се от VH и СН1 домени; (vi) Fv фрагмент, състоящ се от VL и VH домени на единично рамо на антитяло., (v) dAb фрагмент (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), който се състои от VH домен; и (vi) изолирана област; определяща комплементарност (CDR). Освен това, въпреки че двата домена на Fv фрагмента, VL и VH, са кодирани от различни гени, те могат да се съединят, използвайки рекомбинантни методи, посредством синтетичен линкер, който дава възможност те да бъдат получени като единична протеинова верига, в която VL и VH областите се сдвояват, като образуват моновалентни молекули (известни като Fv (scFv) с единична верига; виж, например, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; и Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883. Такива антитела c единична верига също се обхващат от термина “антигенсвързващ участък” на антитяло. Други форми на антитела с единична верига, такива като диантитела също се обхващат. Диантителата са двувалентни, двойно специфични антитела, в които VH и VL домените се експресират на единична полипептидна верига, но използвайки линкер, който е достатъчно къс, за да позволи сдвояването между двата домена на същата верига, като по този начин домените се заставят да се сдвояват с комплементарни домени от друга верига, и да се създадат два антиген свързващи сайта (виж, например, Holliger, Е, et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-123644802, Poljak, R. J., et al. (1994) Structure 2:1121-1123).
Също така, антитяло, или антиген-свързващ негов участък може да бъде участък от поголеми имуноадхезионни молекули, образувани чрез ковалентно, или нековалентно асоцииране на антитялото, или участъците от антитялото, с един, или повече други протеини, или пептиди. Примерите за такива имуноадхезионни молекули включват използване на област със сърцевина стрептавидин, за да се получи тетрамерна scFv молекула (Kipriyanov, S. М., et al. (1995) Hum Antibodies and Hybridomas 6:93-101), и използване на цистеинов остатък, на пептиден маркер и на С-терминална полихистидинова опашка, за да се образуват бивалентни и биотинилирани scFv молекули (Kipriyanov, S. М., et al. (1994) Mol. Immunobiol. 31:1047-1058). Участъци от антитяло, такива като Fab и F(ab’)2 фрагменти, могат да се получат от цяло антитяло, използвайки конвенционални техники, такива като папаиново, или пепсиново, усвояване съответно, на цяло антитяло. Освен това, антитела, участъци от антитела и имуноадхезионни молекули могат да се получат, използвайки стандартни рекомбинантни ДНК техники.
“Изолирано антитяло с двойна специфичност”, както се използва тук, се отнася до антитяло с двойна специфичност, което по същество свободно от други антитела, имащи различни антигенни специфичности (например, изолирано антитяло, което специфично свързва два различни, но структурно свързани антигена, или структурно свързани области на иначе несвързани антигени). Освен това, изолирано антитяло с двойна специфичност може да бъде по същество свободно от други клетъчни продукти и/или вещества.
“Неутрализиращо антитяло”, както се използва, се отнася до антитяло, чието свързване към специален антиген води до инхибиране на биологичната активност на антигена. Това инхибиране на биологичната активност на антигена може да се оцени чрез измерване на един, или на повече индикатори за биологичната активност на антигена, използвайки подходящо in vitro, или in vivo изследване.
“Моноклонално антитяло”, както се използва тук, се отнася до произлизащо от хибридома антитяло (например, антитяло, секретирано от хибридома, получена чрез хибридомна технология, такава като стандартната хибридомна методика на Kohler and Milstein). Така, произлизащо от хибридома антитяло с двойна специфичност съгласно изобретението се отнася също и като моноклонално антитяло, въпреки че то има антигенна специфичност за повече от единичен антиген.
Изразът “рекомбинантно антитяло” се отнася до антитела, които се получават, експресират, и се създават, или се изолират посредством рекомбинантни начини, такива като антитела експресирани, използвайки рекомбинантен експресионен вектор, трансфектиран в клетка гостоприемник, антитела изолирани от рекомбинантна, комбинативна библиотека на антитяло, антитела изолирани от животно (например, мишка), което е трансгенно за гени на човешки
66209 Bl имуноглобулин, (виж, например, Taylor, L. D., et al. (1992) Nucl. Acida Res. 20:6287-6295), или антитела, получени, експресирани, създадени, или изолирани посредством едни или други начини, които включват снаждане на определени последователности наимуноглобулиновия ген (такива като човешки последователности на имуноглобулиновия ген) към други ДНК последователности. Примерите за рекомбинантни антитела включват химерни, CDR-присадени и хуманизирани антитела.
Терминът “човешко антитяло” се отнася до антитела, имащи вариабилни и константни области, съответстващи на, или произлизащи от, имуноглобулинови последователности на човешка зародишна линия, както се описва, например, от Rabat et al. (виж Rabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U. S. Departement of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Човешките антитела съгласно изобретението, обаче, могат да включват аминокиселинни остатъци, некодирани от имуноглобулинови последователности на човешка зародишна линия (например, мутации, въведени посредством случайни, или сайт-специфични мутагенези in vitro, или посредством соматична мутация in vivo), например в CDRs и поспециално в CDR3.
Рекомбинантните човешки антитела съгласно изобретението имат вариабилни области, и могат също така да включват константни области, произлизащи от имуноглобулинови последователности на човешка зародишна линия (виж Rabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U. S. Departement of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Съгласно някои варианти за изпълнение на изобретението, обаче, такива рекомбинантни човешки антитела се подлагат на in vitro мутагенеза (или, когато се използва животно, трансгенно за човешки Ig последователности, на in vivo соматична мутагенеза) и така аминокиселинните последователности на VH и VL областите на рекомбинантните антитела са последователности, които, когато са производни от, и са свързани с последователности на VH и VL на човешка зародишна линия, може да не съществува естествено в природата в човешка зародишна линия на множество антитела in vivo. Съгласно някои варианти за изпълнение на изобретението, обаче, такива рекомбинантни човешки антитела се получават в резултат на селективна мутагенеза, или обратна мутация, или и двете.
Терминът “обратна мутация” се отнася до метод, при който някои, или всичките соматично мутирали амино киселини на човешко антитяло се заместват със съответните остатъци от зародишна линия на хомоложна последователност на антитяло на зародишна линия. Последователности на тежката и леката верига на човешко антитяло съгласно изобретението се подреждат отделно от последователностите зародишна линия в VBASE база данни, за да се идентифицират последователностите с най-висока хомоложност. Различията в човешко антитяло съгласно изобретението са връщането към последователност на зародишната линия чрез мутиране на определени нуклеотидни позиции, кодиращи такава аминокиселина. Ролята на всяка една от аминокиселините така идентифицирани като кандидати за обратна мутация трябва да се изследва за директна, или индиректна роля в свързването на антиген, и която и да е амино киселина, намерена след мутиране да влияе върху която и да е характеристика на човешко антитяло, не би трябвало да се включва в крайното човешко антитяло. За да се сведе до минимум броят на аминокиселините, подложени на обратна мутация, онези аминокиселинни позиции, за които е установено, че са различни от най-близката последователност на зародишна линия, но идентична на съответната аминокиселина във втора последователност на зародишна линия може да остане, при условие че втората последователност на зародишна линия е идентична и колинеарна на последователността на човешкото антитяло съгласно изобретението за най-малко 10, за предпочитане 12 аминокиселини, от двете страни на аминокиселината, за която става въпрос. Обратна мутация може да се появи във всеки етап на оптимизиране на антитяло.
Терминът “химерно антитяло” се отнася до антитела, които съдържат последователности на вариабилна област на тежка и лека верига от едни видове, и последователности на константна област от други видове, такива като антитела, имащи миши тежка и лека верига на вариабилни области, свързани към човешки кон
66209 Bl стантни области.
Терминът “CDR-присадено антитяло” се отнася до антитела, които съдържат последователности с тежка и лека верига на вариабилна област от едни видове, но в които последователностите на един, или повече от CDR областите на VH и/или VL са заместени с CDR последователности на други видове, такива като антитела, имащи миши тежка и лека верига на вариабилни области, в които един, или повече от мишите CDRs (например, CDR3) са били заместени с човешки CDR последователности.
Терминът “хуманизирано антитяло” се отнася до антитела, които съдържат последователности с тежка и лека верига на вариабилна област от видове различни от човек (например, мишка), но в които най-малко участък от VH и/ или VL последователностите са изменени, да са повече “човекоподобни”, т.е., по-подобни на вариабилни последователности на зародишна човешка линия germline. Един вид хуманизирано антитяло е CDR-присадено антитяло, в което човешки CDR последователности са въведени в различни от човешки VH и VL последователности, за да заместват съответните CDR последователности, различни от човешките.
Един начин за измерване кинетиката на свързване на антитяло чрез повърхностен плазмен резонанс. Терминът “повърхностен плазмен резонанс”, както се използва тук, се отнася до оптически феномен, който дава възможност да се анализира реалното време на биоспецифични взаимодействия чрез откриване на изменения в концентрациите на протеин в биосензорна матрица, например, използвайки система с ШАсърцевина Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, NJ). За допълнителни описания, виж Jonsson, U., et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jonsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627; Jonsson, B., et al. (1995) Mol. Recognit. 8:125-131; и Jonsson, B., et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.
Терминът “Koff”, както се използва тук, се отнася до off скоростната константа за дисоцииране на антитяло от антитяло/антиген комплекса.
Терминът “Ка”, както се използва тук, се отнася до дисоциационната константа на определено взаимодействие антитяло-антиген.
Антителата с двойна специфичност съгласно изобретението се получават, използвайки който и да е от различните методи за получаване на антитела, описан в подраздел II по-горе. Антителата с двойна специфичност съгласно изобретението могат да се насочат срещу по същество които и да са структурно свързани антигени, въпреки че предпочитани антитела с двойна специфичност съгласно изобретението са тези, които специфично свързват 1Ь-1алфа и IL1бета, които могат да се получат, използвайки антиген с двойна специфичност като тези, описани в примери 1-4. Други структурно свързани антигени, които могат да се приложат към настоящото изобретение включват, но не се ограничават до членове на семейството на каспазите, до семейството на цитокините, такива като членове на семейство IL-1 (например, IL-1/IL-18), до членове на семейството TNF (например, ТИРалфа/ЮТбета), членове на семейство IL-6, интерферони, членове на семейство TGF6eTa, членове на семейство EGF, членове на семейство FGF, членове на семейство PDGF, членове на семейство VEGF, членове на семейство ангиопротеини, костни морфогенни протеини, секретирани протеинази (металопротеинази), и на семейства на цитокин рецептори, такива като членове на семейство IL-1-рецептор, членове на семейство INF-рецептори, членове на семейство TGF6eTa рецептор, членове на семейство EGF рецептор, членове на семейство FGF рецептор, членове на семейство PDGF рецептор, VEGF рецептор, и членове на семейство на ангиопротеин рецептор.
Антитялото с двойна специфичност съгласно изобретението може да прояви също така, активност на свързване по отношение на двата различни, но структурно свързани антигена, към които те се свързват, или, алтернативно, антителата с двойна специфичност могат да се свързват по-предпочитано към един от двата антигена, като въпреки това имат специфичност спрямо двата свързани антигена, в сравнение с несвързани антигени. Свързващата активност на антителата с двойна специфичност спрямо структурно свързаните антигени, така както и спрямо несвързани антигени, може да се оцени, използвайки стандартни in vitro имуноизследвания, такива като ELISA, или BIAcore анализи. За предпочитане, съотношението Kd на антитяло спрямо структурно несвързани антигени към Kd на антитяло спрямо структурно свързани
66209 Bl антигени, би трябвало да е най-малко 3, даже попредпочитано, съотношението би трябвало да е най-малко 5, даже по-предпочитано, съотношението би трябвало да е най-малко 10, и даже попредпочитано, съотношението би трябвало да е най-малко 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000.
Количествено, разликата между фона на свързване и антителата с двойна специфичност е ниво, или степен. Например, фона на свързване е на ниско ниво, например, по-малко от 5%, попредпочитано по-малко от 3%, и найпредпочитано, приблизително 0,1 - 1%, докато специфична кръстосана реактивност, или свързване с двойна специфичност е на по-високо ниво, например, по-голямо от 1%, по-предпочитано поголямо от 3%, даже по-предпочитано по-голямо от 5%, и по-предпочитано по-голямо от 10%. Освен това, за предпочитане 1С50 на антитяло с двойна специфичност за антигени мишени, е близко до ED50s на антигените за дадено биоизследване.
Антитяло с двойна специфичност, или негов антиген-свързващ участък, съгласно изобретението, за предпочитане се избира така, че да има желаните кинетики на свързване (например, висок афинитет, ниска дисоциация, малка off-скорост, силна неутрализираща активност) за един, а по-предпочитано за двата, от антигените, към които се свързва специфично. Например, антитялото с двойна специфичност, или негов участък, може да свързва един, а попредпочитано двата от структурно свързаните антигена с Koff скоростна константа 0,1 s ', или помалка, по-предпочитано Koff скоростна константа 1 х 10'2s·’, или по-малка, даже по-предпочитано Koff скоростна константа 1 х lO ’s1, или по-малка, даже по-предпочитано Koff скоростна константа 1 х lOV1, или по-малка, или още по-предпочитано Koff скоростна константа 1 х lO^s1, или помалка, както се определя чрез повърхностен плазмен резонанс. Алтернативно, или допълнително, антитялото с двойна специфичност; или негов участък, може да инхибира активността на един, а по-предпочитано двата структурно свързани антигена с 1С50 от порядъка на 1 х 10'6М, или по-малка, даже по-предпочитано с 1С50 от порядъка на 1 х 107М, или по-малка, даже по-предпочитано с 1С50 от порядъка на 1 х 10’8М, или помалка, даже по-предпочитано с 1С50 от порядъка на 1 х 10_9М, или по-малка, даже по-предпочитано с 1С50 от порядъка на 1 х 10'10М, или помалка, или още по-предпочитано с 1С50 от порядъка на 1 х 1011 М, или по-малка. За предпочитане, 1С50 трябва да се измери, използвайки чувствително биоизследване, кьдето 1С50 стойностите са близко до ED50 стойността на антигена за изследването.
Изобретението също така предоставя фармацевтични състави, съдържащи антитяло с двойна специфичност, или негов антиген-свързващ участък, съгласно изобретението, и фармацевтично приемлив носител. Фармацевтичният състав съгласно изобретението може, също така, да съдържа най-малко едно допълнително терапевтично средство, например, едно, или повече терапевтични средства за лечение на смущения, при които използването на антитяло с двойна специфичност е благоприятно за подобряване на смущението. Например, когато антитялото с двойна специфичност специфично свързва IL1алфа и 1Ь-1бета, фармацевтичният състав може също така да включва едно, или повече терапевтични средства за лечение на смущения, при които IL-1 активност е определяща.
Антителата и участъците от антитела съгласно изобретението могат да бъдат включени във фармацевтични състави, подходящи за приложение върху субект. Характерно, фармацевтичният състав съдържа антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението, и фармацевтично приемлив носител. Както се използва тук, “фармацевтично приемлив носител” включва които и да са, и всички разтворители, дисперсни среди, покрития, антибактериални и противогъбични средства, изотонични и елиминиращи абсорбирането средства, и други подобни, които са физиологично съвместими. Примерите за фармацевтично приемливи носители включват един, или повече като, вода, физиологичен разтвор, фосфатно буфериран физиологичен разтвор, декстроза, глицерол, етанол и други подобни, така както и техни комбинации. В много случаи, за предпочитане е в състава да се включват изотонични средства, например, захари, полиалкохоли, такива като манитол, сорбитол или натриев хлорид. Фармацевтично приемливи носители могат, освен това, да съдържат минимални количества спомагателни вещества, такива като омокрящи, или емулгиращи средства,
66209 Bl консерванти, или буфери, които улесняват живота на обвивката, или ефикасността на антитялото, или участъкът от антитялото.
Антителата и участъците от антитела съгласно изобретението могат да бъдат включени във фармацевтичен състав, подходящи за парентерално приложение. Характерно, антитялото или участъците от антитялото трябва да се получат под формата на разтвор за инжектиране, съдържащ 0,1 - 250 mg/ml антитяло. Разтворът за инжектиране може да се състои или от течна, или от лиофилизирана форма за еднократно дозиране във флакон от флинтово стъкло, или в кехлибарен флакон, ампула, или предварително запечатана спринцовка. Буферът може да бъде L-хистидин (1-50 тМ), оптимално 5-10 тМ, при pH 5,0 до 7,0 (оптимално pH 6,0). Други подходящи буфери включват, но без да се ограничават до, натриев сукцинат, натриев цитрат, натриев фосфат, или калиев фосфат. Натриев хлорид може да се използва за модифициране токсичността на разтвора при концентрация от 0 - 300 тМ (оптимално 150 тМ за течна форма за еднократно дозиране). Криозащитни средства могат също така да се включат за лиофилизирана форма за еднократно дозиране, по принцип от 0 -10 % захароза (оптимално 0,5 -1,0 %). Други подходящи криозащитни средства включват трехалоза и лактоза. Могат да се включат средства придаващи обем за лиофилизирана форма за еднократно дозиране, по принцип от 1 -10 % манитол (оптимално 2-4 %). Стабилизатори могат да се използват и в двете, както в течната, така и в лиофилизирана форма за еднократно дозиране, по принцип от 1-150 тМ L-метионин (оптимално 5-10 тМ). Други подходящи средства придаващи обем включват глицин, аргинин, могат да бъдат включени като 0 - 0,05 % полисорбат80 (оптимално 0,005 - 0,01 %). Допълнително повърхностно активни вещества включват, но без да се ограничават до, полисорбат 20 и BRIJ повърхностно активни вещества.
Съставите съгласно това изобретение могат да бъдат в многообразие от форми. Те включват, например, течни, полутвърди и твърди форми за еднократно дозиране, такива като течни разтвори (например, инжекционни и инфузионни разтвори), дисперсни системи, или суспензии, таблетки, пилюли, прахове, липозоми и супозитории. Предпочитаната форма зави си от начина на прилагане и от терапевтичното приложение. Характерно предпочитани състави са под формата на инжекционни, или инфузионни разтвори, такива като състави, подобни на тези, използвани при пасивно имунизиране на хора с други антитела. Предпочитан начин на приложение е парентерален (например, интравенозно, подкожно, интраперитонеално, интрамускулно). Съгласно предпочитан вариант за изпълнение на изобретението, антитялото се прилага чрез интравенозна инфузия, или инжектиране. Съгласно друг предпочитан вариант за изпълнение на изобретението, антитялото се прилага чрез интрамускулно или подкожно инжектиране.
Терапевтичните състави характерно трябва да бъдат стерилни и стабилни в условията на получаване и на съхраняване на склад. Съставите могат да бъдат под формата на лекарствени форми като разтвори, микроемулсии, дисперсни системи, липозоми, или други структури, подходящи за лекарство с висока концентрация. Стерилни инжекционни разтвори могат да се получат, като се инкорпорира активното съединение (т.е., антитяло, или участък от антитяло) в необходимото количество, в подходящ разтворител, с един, или с комбинация от съставни части, изброени по-горе, както се изисква, последвано от стерилизиране чрез филтруване. Обикновено, дисперсионни системи се получават, като се инкорпорира активното съединение в стерилен вехикулум, който съдържа основна дисперсна среда, и другите необходими съставни части от тези, изброени по-горе. Когато се касае до стерилни, лиофилизирани прахове за получаването на стерилни инжекционни разтвори, предпочитаните методи за получаване са вакуум сушене и спрей-сушене, при което се получава прах от активната съставна част, плюс която и да е допълнителна желана съставна част от предварително стерилно-филтруван разтвор. Собствената текливост на разтвор може да се поддържа, например, чрез използването на покриващи средства, такива като лецитин, чрез поддържане на необходимата големина на частичките, в случай на дисперсия, и чрез използване на повърхностно активни вещества. Продължително абсорбиране на инжектируеми състави може да се преустанови, чрез включване в състава на средство, което елиминира
66209 Bl абсорирането, например, моностеаратни соли и желатин.
Антителата и участъците на антитела съгласно настоящото изобретение, могат да се прилагат чрез различни методи, известни в областта на техниката, въпреки че за много терапевтични приложения, предпочитаният начин/начин на приложение е подкожно инжектиране, интравенозно инжектиране, или инфузия. Както ще се отбележи от специалистите в областта на техниката, начинът/или начин на приложение, зависи от желаните резултати. Съгласно някои варианти за изпълнение на изобретението, активното съединение може да се получи с носител, който ще защитава съединението срещу бързо освобождаване, такива като лекарствена форма с контролирано освобождаване, включващо импланти, трансдермални пластири, и микрокапсулирани системи за доставяне. Могат да се използват биоразграждащи се, биосъвместими полимери, такива като етилен винил ацетат, полианхидриди, полигликолова киселина, колаген, полиортоестери, и полимлечна киселина. Много методи за получаването на такива лекарствени форми са патентовани или обикновено са известни на специалистите в областта на техниката. Виж, например, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Съгласно някои варианти за изпълнение на изобретението, антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението може да се прилага орално, например, с инертен разредител, или с асимилируем носител, който може да се яде. Съединението (и други съставни части, при желание) може също така да се затвори в желатинова капсула с твърда или с мека обвивка, пресована във вид на таблетка, или инкорпорирана директно в диетата на субекта. За орално приложение, съединенията могат да бъдат инкорпорирани с инертни пълнители, и използвани под формата на таблетки за поглъщане, на таблетки за устата, до пастили, до капсули, до еликсири, до суспензии, до сиропи, до вафли, и други подобни. За да се приложи съединение съгласно изобретението приложение, различно от парентералното, може да е необходимо да се покрие съединението със, или да се съприлага съединението с, продукт, който да предотвратява неговото инактивиране.
Допълнително активни съединения могат също така да се инкорпорират в съставите. Съгласно някои варианти за изпълнение на изобретението, антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението се получава под формата на лекарствена форма заедно с, и/или се прилага заедно с, едно, или повече добавъчни терапевтични средства, които са полезни за лечение на заболявалия, при които 1L-1 активността е вредна. Например, анти-1Ь-1алфаЛЬ-1бета антитела с двойна специфичност, или участъци от антитяло, съгласно изобретението, могат да се приготвят в лекарствена форма заедно с, и/ или се прилага заедно с, едно, или повече добавъчни антитела, които свързват други мишени (например, антитела, които свързват други цитокини, или които свързват молекули от клетъчната повърхност). Освен това, едно, или повече антитела съгласно изобретението могат да се използват в комбинация с две, или повече от горепосочените терапевтични средства. Такива комбинирани терапии могат благоприятно да използват ниски дози от прилаганите терапевтични средства, като по този начин се избягват възможните токсичности, или усложнения, свързани с различните монотерапии.
IV. Използвания на антитела с двойна специфичност
Като се има предвид тяхната способност да се свързват към различни структурно свързани антигени, антителата с двойна специфичност, или техни участъци, съгласно изобретението, могат да се използват за откриване на единия, или на двата от тези антигени (например, биологична проба като серум, или плазма), при използване на конвенционално имунно изследване, като ензим свързани имуносорбентни изследвания (ELISA), радиоимуноизследване (RIA), или тъканна имунохистохимия. Изобретението предоставя метод за откриване на антитяло в биологична проба, който включва привеждане в контакт на биологична проба с антитяло с двойна специфичност, или участък от антитяло съгласно изобретението, което специфично разпознава антигена, и се открива или антитялото (или участък от антитяло), свързано с антигена, или несвързано антитяло (или участък от антитяло), за да се открие по този начин антигена в биологичната проба. Антитялото е директно, или ин
66209 Bl директно маркирано с вещество за откриване, за да се улесни откриването на свързаното, или несвързаното антитяло. Подходящи вещества за откриване включват различни ензими, простетични групи, флуоресцентни продукти, луминесцентни продукти и радиоактивни продукти. Примери за подходящи ензим и антитяло с двойна специфичност участък от антитяло съгласно изобретението, свързано с антигена, или несвързано антитяло вещества за откриване включват пероксидаза от хрян, алкална фосфатаза, бетагалактозидаза, или ацетилхолинестераза; примери за подходящи комплекси на простетични групи включват стрептавидин/биотин и авидин/ биотин; примери за подходящи флуоресцентни продукти, включително умбелиферон, флуоресцеин, флуоресцеин изотиоцианат, родамин, дихлоротриазиниламин флуоресцеин, дансил хлорид, или фикоеритрин; примери за луминесцентни продукти включват луминол; и примери за подходящи радиоактивни продукти включват 1251, 131I, 35S или 3Н.
Алтернативно на белязаното антитяло, антигена(и) могат да се изследват в биологични течности чрез конкурентно радиоимунно изследване, при използване на антигенни стандартни образци, белязани с вещество за откриване и небелязано антитяло с двойна специфичност, специфично за антигена(ите). При това изследване биологичната проба, белязаните антигенни стандартни образци, и антитялото с двойна специфичност се комбинират, и се определя количеството маркиран антиген стандартен образец, свързан към немаркираното антитяло. Количеството на антигена в биологичната проба е обратно пропорционално на количеството маркиран антиген стандартен образец, свързан към немаркираното антитяло.
При един предпочитан вариант за изпълнение, антитялото с двойна специфичност специфично разпознава 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета, и се използват горните методи на определяне, за да се определят 1Ь-1алфа и/или 1Ь-1бета. В съответствие, изобретението предоставя освен това метод за определяне на 1Ь-1алфа или IL1бета в биологична проба или тъкан, който включва привеждане в контакт на биологична проба или тъкан, за които се предполага, че съдържат IL-1 алфа или IL-1 бета с антитяло с двойна специфичност, или антиген-свързващ негов участък, съгласно изобретението, и се определя IL-1 алфа или IL-1 бета, в биологична проба или тъкан. Биологичната проба може да е, например, in vitro проба, като клетъчна проба, тъканна, или телесна течност (например, кръв, плазма, урина, слюнка и други). Освен това, откритата тъкан може да е тъкан, която in vivo е локализирана в субект, например, тъкан, която е визуализирана чрез in vivo изображение на тъканта (например, използвайки белязано антитяло).
Антителата с двойна специфичност съгласно изобретението също така могат да се използват за диагностични цели. Съгласно един вариант за изпълнение, антитяло съгласно изобретението се използва в диагностично изследване in vitro, като при лабораторен тест за откриване на антиген(и) представлявайки) интерес, или като тест за безопасност, за откриване на антиген(и) представлявайки) интерес. Примери за вече установени in vitro изследвания, използващи антитела, включват ELISAs, RIAs, Western blots и други подобни. При един друг вариант за изпълнение, антитялото съгласно изобретението се използва за диагностично изследване in vivo, като in vivo тест за изображение. Например, антитялото може да бъде маркирано с вещество за откриване, което може да бъде открито in vivo, маркираното антитяло може да се приложи на субект, и белязаното антитяло може да се открие in vivo, като по този начин се позволява in vivo изображение.
Антителата с двойна специфичност съгласно изобретението, които специфично разпознава IL-1 алфа и IL-1 бета, могат да се използват при диагностично изследване за откриване на IL1алфа и/или ПИбета, за диагностични цели, например, при голям брой инфекциозни заболявалия и нарушения, така както и при спонтанна резорбция на зародиши. С оглед специфичните видове заболявалия и нарушения, анти-1Ь-1алфа/ IL-1 бета антителата с двойна специфичност съгласно изобретението могат да се използват за диагностични цели в което и да е от тук описаните заболявания/нарушения с оглед терапевтичното използване на такива антитела (виж подолу), като нарушения, при които се определя IL-1 активност, разисквано по-долу.
Антителата с двойна специфичност и участъци на антитела съгласно изобретението са способни да неутрализират, както in vitro, така и in
66209 Bl vivo, активността на антигените, към които се свързват. В съответствие такива антитела и участъци на антитела съгласно изобретението могат да се използват за инхибиране на активността на антигените, например, в клетъчна култура, съдържаща антигени, или при хора, или при други бозайници, притежаващи антигени, с които реагира антитялото с двойна специфичност съгласно изобретението. При един вариант за изпълнение изобретението предоставя метод за инхибиране на антигенна активност, който включва привеждане в контакт на антигена с антитяло е двойна специфичност, или участъци на антитяло съгласно изобретението, така че да се инхибира антигенната активност. При един предпочитан вариант за изпълнение антитялото с двойна специфичност свързва 1Ь-1алфа и 1Е-1бета, и методът е метод за инхибиране на IL-1 алфа и/или IL-1 бета активност чрез привеждане в контакт на IL-1 алфа и/или 1Ь-1бета с антитялото с двойна специфичност, или негови участъци. 1Ь-1алфа и/ или 1Ь-1бета активността може да се инхибира, например, in vitro. Например, в клетъчна култура, съдържаща, или за която се подозира, че съдържа IL-1 алфа и/или IL-1 бета, антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението, може да се добави към културалната среда, за да инхибира 1Ь-1алфа и/или 1Ь-1бета активността на културата. Алтернативно, IL-1 алфа и/или IL-1 бета активността може да се инхибира in vivo при субект.
При един вариант за изпълнение изобретението предоставя метод за инхибиране на антигенна активност при субект, страдащ от нарушение, при което тази антигенна активност е вредна. Изобретението предоставя методи за инхибиране на антигенна активност при субект, страдащ от такова нарушение, който метод включва прилагане върху субекта на антитяло с двойна специфичност, или участък от антитяло съгласно изобретението, така че да се инхибира антигенната активност в субекта. За предпочитане антигенът е човешки антиген, а субектът е човек. Антитяло съгласно изобретението може да се приложи върху човек за терапевтични цели. Освен това, антитяло съгласно изобретението може да се приложи на бозайник, който не е човек, който експресира антиген, с който се свързва антитялото, за ветеринарни цели, или като животински модел на заболяване при хората. С оглед последното, такива животински модели могат да се използват за оценяване на терапевтичната ефикасност на антителата съгласно изобретението (например, тестване на дози и време за провеждане на курс за лечение).
За предпочитане, антитялото с двойна специфичност свързва 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета, и методът за инхибиране на антигенна активност в субект е метод за инхибиране на IL-1 активност в субект, например, в субект, страдащ от нарушение, при което IL-1 активността е вредна. Както се използва в настоящото терминът “нарушение, при което IL-1 активността е вредна” се счита, че включва заболявания и други нарушения, при които е показано, или се предполага, че присъствието на IL-1 (който включва както 1Ь-1алфа, така и 1Ь-1бета) в субект, страдащ от нарушението, е отговорно за патофизиологията на нарушението, или е фактор, който спомага за влошаването на нарушението. В съответствие, нарушение, при които IL-1 активността е вредна, е нарушение, при което инхибирането на IL-1 активността (едното, или и двете от 1Ь-1алфа, и 1Ь-1бета), се очаква да облекчи симптомите и/или прогресирането на нарушението. Такива нарушения могат да бъдат установени, например, чрез повишаване на концентрацията на IL-1 в биологична течност на субект, страдащ от нарушението (например, повишаване на концентрацията на IL1 в серум, плазма, синовиална течност и т.н. на субекта), която може да се установи, например, при използване на анти-IL-l антитяло, както е описано по-горе.
Интерлевкин 1 играе критична роля в патология, асоциирана с множество заболявания, обхващащи имунни и възпалителни елементи. Тези заболявания включват, но без да се ограничават до, ревматоиден артрит, остеоартрит, младежки хроничен артрит, артрит на Lyme, псориазисен артрит, реактивен артрит, спондилоартропатия, системен еритоматозен лупус, болест на Крон, язвен колит, възпалително заболяване на червата, инсулин зависим диабет, тироидит, астма, алергични болести, псориазис, дерматит на склеродермата, болест graft versus host, отхвърляне на трансплантирани органи, остро, или хронично имунно заболяване, асоциирано с трансплантация на органи, саркоидоза, атеросклероза, дисеминирана вътресъдова
66209 Bl коагулация, болест на Kawasaki, болест на Grave, нефротичен синдром, синдром на хронична умора, грануломатоза на Wegener, HenochSchoenlein purpurea, микроскопични васкулити на бъбреците, хроничен активен хепатит, увеит, септичен шок, синдром на токсичен шок, синдром на сепсис, кахексия, инфекциозни заболявалия, паразитни заболявалия, синдром на придобита имунна недостатъчност, остър трансверсален миелит; хорея на Huntington, болест на Паркинсон, болест на Алцхаймер, удар, първична цироза на жлъчката, хемолитична анемия, злокачествени болести, слабо сърце, инфаркт на миокарда, болест на Addison, спорадично заболяване, полигландуларна недостатъчност от тип I и полигландуларна недостатъчност от тип И, синдром на Шмид, синдром на остро респираторно страдание (при възрастни), алопеция, алопеция ареата, серонегативна артопатия, артопатия, болест на Reiter, псориазисна артропатия, артропатия с язвен колит, ентеропатичен синовит, хламидия, артропатия асоциирана с иерзиния и салмонела, спондилоартропатия, атероматозно заболяване/артериосклероза, атопична алергия, автоимунно булозно (мехурчесто) заболяване, пемфигус вулгарис, пемфигоид, линеарен IgA заболяване, автоимунна хемолитична анемия, позитивна хемолитична анемия на Coombs, придобита злокачествена анемия, младежка злокачествена анемия, миалгичен енцефалит/Royal Free Disease, кандидомикозана кожата и слизестите ципи, артерит на гигантски клетки, първичен склерозиращ хепатит, криптогенен автоимунен хепатит, болест на синдром на придобита имунна недостатъчност, болести свързани с придобита имунна недостатъчност, хепатит С, обща изменена имунонедостатъчност (обща променлива хипогамаглобулинемия), разширена кардиомиопатия, безплодие у жените, отслабване на яйчниците, преждевременно отслабване на яйчниците, фиброзно заболяване на белите дробове, криптогенен фиброзиращ алвеолит, следвъзпалително интерстициално заболяване на белите дробове, интерстициален пневмонит, заболяване на белите дробове асоциирано със заболяване на съединителната тъкан, заболяване на белите дробове асоциирано със заболяване на смесена съединителна тъкан, интерстициално заболяване на белите дробове асоциирано със системна склероза, интерстициално заболяване на белите дробове асоциирано с ревматоиден артрит, заболяване на белите дробове асоциирано със системен еритематозен лупус, заболяване на белите дробове асоциирано с анкилозиращ спондилит (болест на Бехтерев), дифузно васкуларно заболяване на белите дробове, заболяване на белите дробове асоциирано с хемосидероза, интерстициално заболяване на белите дробове индуцирано от лекарствени средства, радиационна фиброза, облитериращ бронхиолит, хронична еозинофилна пневмония, лимфоцитно инфилтрирационно заболяване на белите дробове, постинфекционно интерстициално заболяване на белите дробове, подагричен артрит; автоимунен хепатит, тип-1 автоимунен хепатит (класически автоимунен, или лупоиден хепатит), тип-2 автоимунен хепатит (анти-LKM антитяло хепатит), автоимунно медиирана хипогликемия, тип В устойчивост на инсулин с папиларопигментна дистрофия на кожата, хипопаратироидизъм, остро имунно заболяване асоциирано с трансплантация на органи, хронично имунно заболяване асоциирано с трансплантация на органи, остеоартроза, първичен склерозиращ холангит, псориазис тип 1, псориазис тип 2, идиопатична левкопения, автоимунна неутропения, NOS бъбречно заболяване, гломерулонефритиди, бъбречен микроскопичен васкулит, лаймска болест, дискоиден еритематозен лупус, идиопатично, или NOS безплодие у мъжете, автоимунитет на спермата, мултиплена склероза (всички подвидове), симпатикова офталмия, пулмонарна хипертония вторична вследствие на заболяване на съединителна тъкан, синдром на Goodpasture, пулмонарна проява на нодозен полиартерит, остра ревматична треска, ревматоиден спондилит, болест на Still, системна склероза, синдром на Sjorgen, болест на Takayasu/артерит, автоимунна тромбоцитопения, идиопатична тромбоцитопения, автоимунно тироидно заболяване, хипертириоидизъм, автоимунна хипотириоидна гуша (болест на Hashimoto), атрофична автоимунен хипертириоидизъм, първична миксоедема, факогенен увеит, първичен васкулит, витилиго, заболяване на централната нервна система (например, депресия, шизофрения, Алцхаймер, Паркинсон и т.н.), остра и хронична болка, и липиден дисбаланс. Човешките антитела и участъци на антитела съгласно изобретението, могат да се използват за
66209 Bl лечение на хора, страдащи от автоимунни заболявания, по-специално асоциираните с възпаление болести, включително ревматоиден спондилит, алергия, автоимунен диабет, автоимунен увеит.
За предпочитане, антителата с двойна специфичност 1Ь-алфа/1Ь-1бета съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, се използват за лечение на ревматоиден артрит, на болестта на Крон, на мултиплена склероза, на инсулин зависим диабет, захарна болест и псориазис.
Антитяло с двойна специфичност IL-алфа/ IL-1 бета или участък от антитяло, съгласно изобретението, също така може да се прилага с едно, или повече терапевтични средства, използвани при лечението на автоимунни и възпалителни заболявания.
Антителата съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, могат да се използват самостоятелно, или в комбинация, за лечение на такива заболявания. Трябва да се разбере, че антителата съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци могат да се използват самостоятелно, или в комбинация с допълнително средство, например, терапевтично средство, допълнително средство, което се избира от лекуващия лекар за постигане на определена цел. Например допълнително средство може да е терапевтично средство, признато в областта на техниката като такова, което е полезно при лечение на заболяванията, или състоянията, които се лекуват от антитялото съгласно изобретението. Допълнително средство може, също така, да е средство, което придава благоприятен атрибут на терапевтичния състав, например, средство, което влияе на вискозитета на състава.
Трябва също така да се разбере, че комбинациите, които трябва да се включат в това изобретение са тези комбинации, които са полезни за постигане на определените за тях цели. Средствата, посочени по-долу са илюстративни за целите, и не са предназначени да са ограничаващи. Комбинациите, които са част от това изобретение, могат да са антителата съгласно изобретението, и най-малко едно допълнително средство, избрано от изброените по-долу. Комбинацията може, също така, да включва повече от едно допълнително средство, например, две, или три допълнителни средства, ако комбинацията е такава, че образуваният състав може да изпълни предназначените си функции.
Предпочитани комбинации е(са) нестероидно(и) и противовъзпалително(и) лекарство(а), също така наричани като NSAIDS, които включват лекарства като ибупрофен и СОХ-2 инхибитори. Други предпочитани комбинации са кортикостероиди, включващи преднизолон; добре известните странични ефекти при използване на стероид могат да се намалят, или даже да се елиминират чрез стесняване на необходимата стероидна доза, когато се лекуват пациенти в комбинация с анти-IL-l антителата съгласно това изобретение. Неограничаващи примери на терапевтични средства за ревматоиден артрит, с които антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението, може да се комбинира, включват следните: цитокин супресиращо(и) и противовъзпалително(и) лекарство(а) (CSAIDs); антибоди за, или антагонисти на други човешки цитокини, или растежни фактори, например, TNF, LT, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-15, IL-16, IL-18, ЕМАР-П, GM-CSF, FGF и PDGF. Антителата съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, могат да се комбинират с антитела на молекули от клетъчната повърхност, такива като CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (В7.1), CD86 (В7.2), CD90, или техни лиганди, включващи CD 154 (dp39, или CD40L).
Предпочитани комбинации на терапевтични средства могат да интерферират като различни точки в автоимунната и последващата възпалителна каскада; предпочитаните примери включват TNF антагонисти като химерни, хуманизирани, или човешки TNF антитела, D2E7, (РСТ Publication WO 1997/029131), СА2 (Remicade™), CDP 571, CDP 870, Талидамид и разтворими р55, или р75 TNF рецептори, техни производни (p75TNFRIgG (Enbrel™), или p55TNFRIgG (Lenercept), и също така инхибитори на ПЧРалфа конвертиращ ензим (ТАСЕ); подобни на IL-1 инхибитори на (интерлевкин-1 конвертиращ ензим, IL- 1RA и т.н.) могат да бъдат ефективни поради същата причина. Други предпочитани комбинации включват интерлевкин 11. И още една предпочитана комбинация е друг играещ ключова роля в автоимунния
66209 Bl отговор, който може да действа успоредно на, в зависимост от, или в съгласие с IL-1 функция; особено предпочитани са IL-12 и/или IL-18 антагонисти, включващи IL-12 и/или IL-18 антитела, или разтворими IL-12 и/или IL-18 рецептори, или IL-12 и/или IL-18 свързващи протеини. Показано е, че IL-12 и IL-18 имат припокриващи се, но различни функции, и комбинации на антагонисти с двата могат да бъдат найефективни. И още една предпочитана комбинация са неизчерпващи анти-СО4 инхибитори. И още една предпочитана комбинация включва антагонисти на ко-стимулаторния биосинтетичен път CD80 (В7.1), или CD86 (В7.2) включващи антитела, разтворими рецептори, или антагонистични лиганди.
Антителата съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, могат също така да се комбинират със средства, такива като метотрексат, 6-МР, азатиоприн сулфасалазин, мезалазин, олсалазин, хлорохинин/хидроксихлорокин, пенициламин, ауротиомалат (интрамускулно и орално), азатиоприн, кохицин, кортикостероиди (орално, инхалирани и локално инжектиране), бета-2-адренорецептор агонисти (салбуматол, тербуталин, салметерал), ксантини (теофилин, аминофилин), кромоглицат, недокромил, кетотифен, ипратропиум и окситропиум, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофенолат мотетил, лефлуномид, NSAIDs, например, ибупрофен, кортикостероиди, такива като преднизолон, фосфодиестераза инхибитори, аденозин агонисти, антитромбоцитни средства, комплемант инхибитори, адренержични средства, средства, които интерферират, като сигнализират чрез проинфламаторни цитокини, такива като ТОТалфа, или IL-1 (например, IRAK, NIK, IKK, рЗ 8, или MAP киназа инхибитори), IL1бета конвертиращ ензим инхибитори, ТТЧРалфа конвертиращ ензим (ТАСЕ) инхибитори, Т-клетъчни сигнализиращи инхибитори, такива като киназа инхибитори, металопротеиназа инхибитори, сулфасалазин, азатиоприн, 6меркаптопурини, ангиотенсин конвертиращ ензим инхибитори, рецептори на разтворим цитокин и негови производни (например, разтворим р55, или р75 TNF рецептори и производните p75TNFRlgG (Enbrel™ и p55TNFRlgG (Lenercept)), sIL-lRI, sIL-lRII, sIL-6R) и противовъзпалителни цитокини (например, IL-4, IL10, IL-11, IL-13, и TGF6eTa). Предпочитани комбинации включват метотрексат, или лефлуномид и в случаи на умерени, или тежки ревматоидни артрити, циклоспорин.
Неограничаващи примери на терапевтични средства за възпалителни заболявания на червата, с които антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението, може да се комбинира, включват следните: буденозид; епидермален растежен фактор; кортикостероиди; циклоспорин, сулфасалазин; аминосалицилати; 6-меркаптопурин; азатиоприн; метронидазол; липоксигеназа инхибитори; мезаламин; олсалазин; балсалазид; антиоксиданти; тромбоксан инхибитори; антагонисти HaIL-Ι рецептор; анти-1Е-1бета моноклонални антитела; анти-Ш-6 моноклонални антитела; растежни фактори; инхибитори на еластаза; пиридинил-имидазолови съединения; антитела на, или антагонисти задруги човешки цитокини, или растежни фактори, например, THF, LT, IL-2, IL-6, IL-7, IL8-, IL12, IL15, IL-16, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF и PDGF. Антитела съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци могат да се комбинират с антитела на молекули от клетъчната повърхност, такива като CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90, или техни лиганди. Антителата съгласно изобретението, или антиген-свързващите техни участъци, могат също така да се комбинират със средства, такива като метотрексат, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофенолат мофетил, лефлуномид, NSAIDs, например, ибупрофен, кортикостероиди, такива като преднизолон, инхибитори на фосфодиестераза, агонисти на аденозин, антитромбоцитни средства, инхибитори на комплемента, адренергични средства, средства, които интерферират, като сигнализират чрез проинфламаторни цитокини, такива като ТЪШалфа, или IL-1 (например, IRAK, NIK, IKK, рЗ 8 или MAP киназа инхибитори), инхибитори на IL-1 бета конвертиращ ензим, инхибитори на Т№алфа конвертиращ ензим, инхибитори на сигнала на Т-клетките, такива като инхибитори на киназа, инхибитори на металопротеиназа, сулфасалазин, азатиоприн, 6-меркаптопурини, инхибитори на ангиотенсин конвертиращ ензим, рецептори на разтворим цитокин и негови производни (например, разтворим р55, или р75 TNF рецептори, sIL-lRI, sIL-lRII, SIL-6R) и проти
66209 Bl вовъзпалителни цитокини (например, IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 и TGF6eTa).
Предпочитани примери на терапевтични средства за болест на Крон, в които едно антитяло, или антиген-свързваща участък от антитяло може да се комбинира, включват следните: TNF антагонисти, например, анти-TNF антитела, D2E7, (РСТ Publication WO 1997/029131), СА2 (Remicade™), CDP 571, TNFR-Ig структури (p75TNFRIgG (Enbrel™), и p55TNFRIgG (Lenercept) инхибитори, и PDE4 инхибитори. Антитела, или антиген-свързващи техни участъци съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, могат да се комбинират с кортикостероиди, например, буденозид и дексаметазон. Антитела съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, могат също така да се комбинират със средства, такива като сулфасалазин, 5-аминосалицилова киселина и олсалазин, и със средства, които интерферират със синтеза, или с действие на проинфламаторни цитокини, такива като IL-1, например, инхибитори на IL-1 бета конвертиращ ензим и IL1га. Антитела съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, могат също така да се използват с инхибитори на сигнала на Тклетките, например, 6-меркаптопурини като инхибитори на тирозинкиназа. Антитела съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, могат да се комбинират с IL-11.
Неограничаващи примери на терапевтични средства за мултиплена склероза, с които антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението, може да се комбинира, включват следните: преднизолон; метилпреднизолон; азатиоприн; циклофосфамид; циклоспорин; метотрексат; 4-аминопиридин; тизанидин; интерферон-бета1а (авонекс; биоген); интерферонбета1Ь (бетасерон; хирон/берлекс); съполимер 1 (сор-1; копаксон; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); хипербарен кислород; интравенозен имуноглобулин; клабрибин; антитела на, или антагонисти на други човешки цитокини, или растежни фактори, например, THF, LT, IL-2, IL-6, IL-7, IL8, IL-12, IL15, IL-16, IL-18, ЕМАР-П, GM-CSF, FGF и PDGF. Антитела съгласно изобретението, или антиген-свързващи техни участъци, могат да се комбинират с антитела на молекули от клетъчната повърхност, такива като CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40,
CD45, CD69, CD86, CD90, или техни лиганди. Антителата съгласно изобретението, или антигенсвързващите техни участъци могат също така да се комбинират със средства, такива като метотрексат, циклоспорин, FK.506, рапамицин, микофенолат мофетил, лефлуномид, NSAIDs, например, ибупрофен, СОХ-2 инхибитори, кортикостероиди, такива като преднизолон, инхибитори на фосфодиестераза, агонисти на аденозин, антитромбоцитни средства, инхибитори на комплемента, адренергични средства, средства, които интерферират, като сигнализират чрез проинфламаторни цитокини, такива като ЮТалфа, или IL-1 (например, IRAK, NIK, IKK, рЗ8, или MAP киназа инхибитори), инхибитори на IL-16eTa конвертиращ ензим, ТАСЕ инхибитори, инхибитори на сигнала Т-клетките, такива като инхибитори на киназа, инхибитори наметалопротеиназа, сулфасалазин, азатиоприн, 6-меркапто-пурини, инхибитори наангиотенсин конвертиращ ензим, рецептори на разтворим цитокин и техни производни (например, разтворим р55, или р75 TNF рецептори, sIL-lRI, sIL1RII, sUL-6R) и противовъзпалителни цитокини (например, IL-4, IL-10, IL-13 и TGF6eTa).
Предпочитани примери на терапевтични средства за мултиплена склероза, в които антитялото, или антиген-свързващия негов участък, могат да се комбинират така, че да включват интерферон-бета, например, IFN5eTala и IFN6eTalb; копаксон, кортикостероиди, IL-1 инхибитори, TNF инхибитори, и антитела към CD40 лиганда и CD80.
Фармацевтичните състави съгласно изобретението могат да включват “терапевтично ефективно количество”, или “профилактично ефективно количество” от антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението. “Терапевтично ефективно количество” се отнася до ефективно количество, при необходими дозирания и периоди от време, за постигане на желания терапевтичен резултат. Терапевтично ефективно количество от антитяло, или участък от антитяло може да варира в зависимост от фактори, такива като състояние на заболяването, възраст, пол, и тегло на индивида, и способността на антитялото, или на участъкът от антитяло да извлича желан отговор в индивида. Терапевтично ефективно количество е също така това, при което каквато и да е токсичност,
66209 Bl или вредни ефекти на антитялото, или на участъците от антитяло се превишават от терапевтично благоприятните ефекти. “Профилактично ефективно количество” се отнася до ефективно количество, при необходими дозирания и периоди от време, за постигане на желания профилактичен резултат. Характерно, профилактична доза се използва при субект преди, или на поранен етап на заболяване, профилактично ефективното количество трябва да бъде по-малко от терапевтично ефективното количество.
Схемите на дозиране могат да се регулират така, че да се осигури оптималния желан отговор (например, терапевтичен, или профилактичен отговор). Например, може да се приложи единична голяма таблетка, могат да се приложат няколко отделни форми за единично дозиране за определено време, или дозата може пропорционално да се намали, или да се повиши, както се посочва от изискванията на терапевтичната ситуация. Особено благоприятно е да се приготвят парентерални състави в единични форми за еднократно дозиране за лесно приложение и еднообразие на дозирането. Единични форми за еднократно дозиране, както се използват тук, се отнасят до физически дискретни единици, подходящи като единни дози за субекти бозайници, които трябва да се лекуват; всяка една единица съдържа предварително определено количество от активно съединение, изчислено да продуцира желания терапевтичен ефект, заедно с необходимия фармацевтичен носител. Специфицирането за единичните форми за еднократно дозиране съгласно изобретението са продиктувани от, и директно зависят от (а) уникалните характеристики на активното съединение, и от специалния терапевтичен, или профилактичен ефект, който трябва да се постигне, и (Ь) от присъщото ограничение в областта на техниката при получаването на такова активно съединение за лечението на чувствителност у индивиди.
Един примерен, неограничаващ обхват на терапевтично, или профилактично ефективно количество от антитяло, или участък от антитяло съгласно изобретението е 0,1 - 20 mg/kg, по-предпочитано 1-10 mg/kg. Трябва да се отбележи, че стойностите на дозите могат да варират в зависимост от вида и от това колко тежко е състоянието, което трябва да се облекчи. Трябва да се отбележи, освен това, че за всеки един специален субект, трябва да се регулират специфични схеми на дозиране за определено време, съгласно необходимостта на индивида, и от професионалната преценка на лицето, което прилага, или наблюдаващо прилагането на съставите, и че обхватите на дозиране, посочени тук са само примерни, и не са предназначени да ограничават обхвата, или практиката на защитения състав.
Настоящото изобретение също така се илюстрира посредством следващите примери, които не представляват ограничение по никакъв начин. Съдържанието на всички цитирани справки, включително литературни справки, издадени патенти, и публикувани патентни заявки, както се цитират в това описание, са специално включени за справка.
Примери за изпълнение на изобретението
Пример 1. Проектиране антиген с двойна специфичност на базата на съседна топологична област на идентичност
В този пример, най-голямата съседна топологична област на идентичност между два различни, но структурно свързани протеина, IL1 алфа и IL-1 бета, се определя като основа за проектиране на антиген с двойна специфичност, за добиване на антитела с двойна специфичност към 1Ь-1алфа и IL-16eTa. Използва се BLAST алгоритъма, за сравняване на двата протеина, и се предоставя един за измерване на тенденцията на един остатък да замести друг, в подобна структурни, или функционални области. Този анализ дава възможност за идентифицирането на най-голямата съседна топологична област на идентичност между IL-1 алфа и IL-1 бета, и да се изтегли тази област с които и да са разумни интервали на подобие, за да се създаде линеен пептид, който служи като антиген с двойна специфичност. Пептидът, който най-добре отговаря на тези критерии има аминокиселинна последователност, както следва:
NEAQNITDF (SEQ ID NO: 1)
Звездичката (*) посочва идентични остатъци в двата протеина, а другите остатъци са много подобни съгласно BLAST алгоритъма. Например, лизин често ще замества аргинин в хомоложни протеини, но не фенилаланин. Този пептид на SEQ ID NO: 1 е хибрид, взет от две
66209 Bl различни секции на структурите, които се пропускат в противоположни посоки, така друго разумно представяне на този епитоп е:
DNdRdAdQNITDF (където префиксът “d” показва, че аминокиселинният остатък е D аминокиселинен остатък). И двете, и версията на L амино киселина на пептида, и версията на частично заместени D аминокиселинни остатъци се синтезират чрез стандартни химични методи. След това пептида се присъединява към протеин носител (например, KLH, или албумин), и присъединения пептид се използва за избор на антитела чрез in vitro, или in vivo методи.
Пример 2. Проектиране на антиген с двойна специфичност на базата на цикличен пептид, който подражава бримка на обичайно нагъване
В този пример, цикличен пептид, който структурно подражава ключова бримка на обичайно нагъване между два различни, но структурно свързани протеина, 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета, се конструира за използване като антиген с двойна специфичност, за добиване на антитела с двойна специфичност към 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета. Избраната бримка представлява остатъци 168-184 на 1Ь-1алфа и остатъци 160-176 на 1Ь-1бета. Консенсус последователността е:
Цикло-MAFLRANQNNGKISVAL (PG) (SEQ ID NO: 2) *cbcccccccc**c*b*
Звездичката (*) посочва идентични остатъци между 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета, с посочва консенсусни остатъци, тоест, остатъци, подобни на 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета, но не присъстващи актуално на това местоположение в един от двата протеина, a b посочва, че няма ясен консенсусен остатък, така че се запазва идентичността на IL1 бета последователност. Линейният пептид се синтезира чрез стандартни химични методи. За циклизирането на този пептид се прибавят пролинов и глицинов остатък. Цикличният пептид може да се синтезира, като се използват условия за присъединяване при голямо разреждане наНИ-диметилформамид (1 mg/ml). Протичат прототипни реакции при стайна температура, използвайки излишък от присъединяващ реактив, такъв като бензотриазол-1 -ил-окси-трис-пиролидино-фосфониев хексафлуоро фосфат (РуВОР; 2 eq) и натриев бикарбонат (10 eq). След това пептида се конюгира към носител протеин (например, KLH, или албумин), и конюгирания пептид се използва, за да се изберат антитела чрез in vitro или in vivo методи.
Пример 3. Проектиране на антиген с двойна специфичност на базата на хибриден пептид.
В този пример хибриден пептид, който включва променливи, или припокриващи се последователности от два различни, но структурно свързани протеина, 1Ь-1алфаи 1Ь-1бета, се конструира за използване като антиген с двойна специфичност, за добиване на антитела с двойна специфичност към 1Ь-1алфа и ПИбета. За да се създаде хибридния пептид, променливи и припокриващи се аминокиселинни последователности на 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета се идентифицират, и се снаждат заедно, за да се генерира следния пептид:
TKGGQDITDFQILENQ (SEQ ID No: 3) bbbbbbbbbb а-тата и b-тата посочват кой протеин е източникът на остатъците (а = 1Ь-1алфа; b = IL1бета). ITDF (SEQ ID No: 4) мотива, общ за двата протеина, се включва в хибридния пептид. Освен това, този хибриден пептид фокусира върху последователности от карбокси термини на двата протеина, за които е известно, че антигенни за неутрализиращи антитела в двата протеина. Хибридният пептид се синтезира посредством стандартни химически синтетични методи. След това пептидът се конюгира към носител протеин (например, KLH, или албумин), и конюгирания пептид се използва, за да се изберат антитела чрез in vitro, или in vivo методи.
Пример 4. Генериране на антитела с двойна специфичност към 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета.
NEAQNITDF (SEQ ID NO: 1)
Uhkho-MAFLRANQNNGKISVAL(PG) (SEQ ID NO: 2)
TKGGQDITDFQILENQ (SEQ ID NO: 3)
Пептиди SEQ ID NO: 1,2 и 3 се конюгират c KLH и се имунизират отделни зайци. Антисерум от зайци, имунизирани с всеки един от трите пептида, показва добър отговор на антитяло срещу пептида, използван като антиген. Обаче, само антисерум от заек, имунизиран с пептид на SEQ ID NO: 3 е способен да свърже IL-1 алфа и IL-1 бета протеин.
Пет мишки (ВА119 - ВА123) се имунизират подкожно с пептид на SEQ ID NO: 3, коню66209 Bl гиран c KLH плюс непълна добавка на Freund (FIA), веднъж на всеки три седмици общо три пъти, последвано от две интравенозни усилвания с пептид SEQ ID NO: 3, конюгиран с KLH. На всяка мишка се взима кръв 10 дни след вся- 5 ка имунизация, и титъра на антителата се определя посредством ELISA. Клетки от далак на мишки ВА119 и ВА123 съответно, се сливат с клетъчна линия миелома P3X36Ag8.653, както се описва в раздел ПА, и получените слети клетки се посяват при една клетка на ямка, в някол ко 96-ямкови блюда, използвайки ограничаващо разреждане. Хибридомни клонове, които прерастват, първо се изследват за продуциране на IgG и IgM, чрез стандартно ELISA, за да се идентифицират антитела-продуциращи клона. Изолират се общо 945 клона от сливане на мишки #ВА123. Супернатантата от 355 клони, изследвани с ELISA, показват антиген свързваща активност към IL-1 алфа, IL-16eTa, или и за двата IL-1 алфа и IL-1 бета.
# на клона | Специфичност на антиген (срещу IL-1a и/или IL-1 β с цяла дължина) | Изотоп |
249 | само IL-1a | IgG |
19 | само IL-1a | IgM |
15 | само IL-1 β | IgG |
2 | само IL-1 β | IgM |
57 | IL-1 а и β | IgG |
13 | IL-1a и β | IgM |
Еквиваленти
Специалистите в областта на техниката познават, или са в състояние да установят, използвайки само рутинен експеримент, повече еквиваленти към специфичните варианти за изпълнение на изобретението, описани тук. Такива еквиваленти се обхващат от следващите патентни претенции.
Claims (66)
- Патентни претенции1. Метод за получаване на двойно специфично антитяло или негова антиген-свързваща част, което специфично свързва два различни, но структурно сродни белтъка, характеризиращ 45 се с това, че включва: осигуряване на антиген, аранжиран на базата на специфичен сплайсинг на припокриващи се части от два различни, но структурно сродни белтъка, за създаване на хибриден пептид, като въпросният пептид има структура X-Y-Z, кьдето Y представлява регион на идентичност или силно подобие между два сродни 35 белтъка, X представлява регион от единия от сродните белтъци и Z представлява регион от другия от сродните белтъци; експониране на пул от антитела на антигена; и подбор от пула на антитяло, което специфично свързва два различни, но структурно сродни белтъка, за получаване на двойно специфичното антитяло.
- 2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена in vivo чрез имунизиране на нехуманоидно животно с антигена.
- 3. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че се изготвя панел от хибридоми от лимфоцити на животното и се подбира хибридома, която секретира антитяло, което специфично свързва две различни, но структур66209 Bl но сродни молекули.
- 4. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че животното е избрано от група, състояща се от мишки, плъхове, зайци и кози.
- 5. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че животното е нокаут мишка, дефицитна по ендогенната версия на антигена.
- 6. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че животното е мишка, която е трансгенна по гените за човешки имуноглобулин, така че мишката синтезира човешки антитела при антигенна стимулация.
- 7. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че животното е мишка с остра комбинирана имунна недостатъчност (ОКИН), която се възстановява с помощта на човешки мононуклеарни клетки от периферна кръв или лимфоидни клетки или техни предшественици.
- 8. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че животното е мишка, която е третирана с летална като цяло за тялото радиация, последвано от радиозащита с клетки от костен мозък на мишка с остра комбинирана имунна недостатъчност (ОКИН), последвано от присаждане на функционални човешки лимфоцити.
- 9. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена in vitro чрез скриниране на библиотека от рекомбинантни антитела с антигена.
- 10. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността набактериофаг.
- 11. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността на дрождева клетка.
- 12. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността на бактериална клетка.
- 13. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира като слети РНКбелтък.
- 14. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела е scFv библиотека или Fab библиотека.
- 15. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране на нехуманоидно животно с антигена, последвано от in vitro скрининг на библиотека от рекомбинантни антитела, изготвена от лимфоидни клетки на животното с антигена.
- 16. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране на нехуманоидно животно с антигена, последвано от in vitro афинитетно зреене на библиотеката от рекомбинантни антитела, изготвена от лимфоидни клетки на животното.
- 17. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране на нехуманоидно животно с антигена, последвано от подбор на единични клетки, секретиращи антитела, които свързват антигена и получаване от единичните клетки на кДНК от тежко- и лековерижни вариабилни региони.
- 18. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е изцяло човешко антитяло.
- 19. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е химерно антитяло.
- 20. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е CDR-присадено антитяло.
- 21. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че двата различни, но структурно сродни белтъка са интерлевкин-1 алфа и интерлевкин-1 бета.
- 22. Метод съгласно претенция 21, харак- теризиращ се с това, че антигенът представлява аминокиселинна последователностTKGGQDITDFQILENQ (SEQ ID NO: 3).
- 23. Метод съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена in vivo чрез имунизиране на нехуманоидно животно с антигена.
- 24. Метод съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че се изготвя панел от хибридоми от лимфоцити на животното и се подбира хибридома, която секретира антитяло, което специфично свързва 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета.
- 25. Метод съгласно претенция 23, харак66209 Bl теризиращ се с това, че животното е избрано от група, състояща се от мишки, плъхове, зайци и кози.
- 26. Метод съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че животното е нокаут мишка, дефицитна по IL-1 алфа, IL-1 бета или едновременно по 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета.
- 27. Метод съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че животното е мишка, която е трансгенна по гените за човешки имуноглобулин, така че мишката синтезира човешки антитела при антигенна стимулация.
- 28. Метод съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че животното е мишка с остра комбинирана имунна недостатъчност (ОКИН), която се възстановява с помощта на човешки мононуклеарни клетки от периферна кръв или лимфоидни клетки или техни предшественици.
- 29. Метод съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че животното е мишка, която е третирана с летална като цяло за тялото радиация, последвано от радиозащита с клетки от костен мозък на мишка с остра комбинирана имунна недостатъчност (ОКИН), последвано от присаждане на функционални човешки лимфоцити или техни предшественици.
- 30. Метод съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена in vitvo чрез скриниране на библиотека от рекомбинантни антитела с антигена.
- 31 Метод съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността на бактериофаг.
- 32. Метод съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността на дрождева клетка.
- 33. Метод съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността на бактериална клетка.
- 34. Метод съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира като слети РНКбелтьк.
- 35. Метод съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела е scFv библиотека или Fab библиотека.
- 36. Метод съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране на животно с антигена, последвано от in vitro скрининг на библиотека от рекомбинантни антитела, изготвена от лимфоидни клетки на животното с антигена.
- 37. Метод съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране на животно с антигена, последвано от in vitro афинитетно зреене на библиотеката от рекомбинантни антитела, изготвена от лимфоидни клетки на животното.
- 38. Метод съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране на животно с антигена, последвано от подбор на единични клетки, секретиращи антитела, които свързват антигена, и получаване от единичните клетки на кДНК от тежко- и лековерижни вариабилни региони.
- 39. Метод съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е изцяло човешко антитяло.
- 40. Метод съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е химерично антитяло.
- 41. Метод съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е CDR-присадено антитяло.
- 42. Метод за получаване на двойно специфично антитяло, което специфично свързва интерлевкин-1 алфа и интерлевкин-1 бета, характеризиращ се с това, че включва: осигуряване на антиген с аминокиселинна последователност TKGGQDITDFQILENQ (SEQ ID NO: 3); експониране на пула от антитела на антигена; и подбор от пула на антитяло, което специфично свързва 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета, за получаване на двойно специфичното антитяло, като въпросното двойно специфично антитяло не е изцяло мише антитяло.
- 43. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че антигенът е аранжиран на основата на непрекъсната топологична област на идентичност между IL-1 алфа и IL-1 бета.
- 44. Метод съгласно претенция 43, характеризиращ се с това, че антигенът е с аминоки66209 Bl селинна последователност NEAQNITDF (SEQ ID NO: 1) или dNdEdAdQNITDF.
- 45. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че антигенът е аранжиран на основата на структурна мимикрия на примката от общото за 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета вгъване.
- 46. Метод съгласно претенция 45, характеризиращ се с това, че антигенът е цикличен пептид с аминокиселинни последователност ЦиклоMAFLRANQNNGKISVAL(PG) (SEQ ID NO: 2).
- 47. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че антигенът е с аминокиселинна последователностAPVRSLNCTLRDSQQKSLVMSGPY ELKALIILQGQDMEQQVVFSM GAYKSSKDDAKITVLLGLK EKNLYLSCVLKDDKPTLQLESVDPKN YPKKKMEKRF VFNKLEINNKLEFE SAQFPNWYISTSQA ENMPVFLGGTKG GQDITDFTMQFVSS (SEQ ID N0: 4).
- 48. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена in vivo чрез имунизиране на животно с антигена.
- 49. Метод съгласно претенция 48, характеризиращ се с това, че се изготвя панел от хибридоми от лимфоцити на животното и се подбира хибридома, която секретира антитяло, което специфично свързва 1Ь-1алфа и 1Ь-1бета.
- 50. Метод съгласно претенция 48, характеризиращ се с това, че животното е избрано от група, състояща се от мишки, плъхове, зайци и кози.
- 51. Метод съгласно претенция 48, характеризиращ се с това, че животното е нокаут мишка, дефицитна по 1Ь-1алфа, 1Ь-1бета или едновременно по 1Ь-1алфа и IL-16eTa.
- 52. Метод съгласно претенция 48, характеризиращ се с това, че животното е мишка, която е трансгенна по гените за човешки имуноглобулин, така че мишката синтезира човешки антитела при антигенна стимулация.
- 53. Метод съгласно претенция 48, характеризиращ се с това, че животното е мишка с остра комбинирана имунна недостатъчност (ОКИН), която се възстановява с помощта на човешки мононуклеарни клетки от периферна кръв или лимфоидни клетки или техни предшественици.
- 54. Метод съгласно претенция 48, характеризиращ се с това, че животното е мишка, която е третирана с летална за тялото като цяло радиация, последвано от радиозащита с клетки от костен мозък на мишка с остра комбинирана имунна недостатъчност (ОКИН), последвано от присаждане на функционални човешки лимфоцити или техни предшественици.
- 55. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена in vitvo чрез скриниране на библиотека от рекомбинантни антитела с антигена.
- 56. Метод съгласно претенция 55, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността на бактериофаг.
- 57. Метод съгласно претенция 55, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността на дрождева клетка.
- 58. Метод съгласно претенция 55, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира по повърхността на бактериална клетка.
- 59. Метод съгласно претенция 55, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела се експресира като слети РНК-белтък.
- 60. Метод съгласно претенция 55, характеризиращ се с това, че библиотеката от рекомбинантни антитела е scFv библиотека или Fab библиотека.
- 61. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране на животно с антигена, последвано от in vitro скрининг на библиотека от рекомбинантни антитела, изготвена от лимфоидни клетки на животното с антигена.
- 62. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране на животно с антигена, последвано от in vitro афинитетно зреене на библиотеката от рекомбинантни антитела, изготвена от лимфоидни клетки на животното.
- 63. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че пулът от антитела се експонира на антигена чрез in vivo имунизиране66209 Bl на животно с антигена, последвано от подбор на единични клетки, секретиращи антитела, които свързват антигена и получаване от единичните клетки на кДНК от тежко- и лековерижни вариабилни региони. 5
- 64. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е изцяло човешко антитяло.
- 65. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е химерно антитяло.
- 66. Метод съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че двойно-специфичното антитяло е CDR-присадено антитяло.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US21537900P | 2000-06-29 | 2000-06-29 | |
PCT/US2001/020755 WO2002002773A2 (en) | 2000-06-29 | 2001-06-28 | Dual specificity antibodies and methods of making and using |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BG107483A BG107483A (bg) | 2003-09-30 |
BG66209B1 true BG66209B1 (bg) | 2012-04-30 |
Family
ID=22802758
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BG107483A BG66209B1 (bg) | 2000-06-29 | 2003-01-21 | Методи за получаване на антитела с двойна специфичност |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US7491516B2 (bg) |
EP (4) | EP1297142B1 (bg) |
JP (2) | JP4955185B2 (bg) |
KR (2) | KR100919593B1 (bg) |
CN (3) | CN101525384A (bg) |
AT (1) | ATE420958T1 (bg) |
AU (1) | AU2001271636A1 (bg) |
BG (1) | BG66209B1 (bg) |
BR (1) | BR0112026A (bg) |
CA (1) | CA2411374C (bg) |
CZ (1) | CZ2003291A3 (bg) |
DE (1) | DE60137421D1 (bg) |
EC (1) | ECSP024409A (bg) |
ES (1) | ES2319866T3 (bg) |
HK (1) | HK1055316A1 (bg) |
HU (1) | HUP0301002A3 (bg) |
IL (3) | IL153567A0 (bg) |
MX (1) | MXPA02012867A (bg) |
NO (1) | NO20026239L (bg) |
NZ (1) | NZ523080A (bg) |
PE (1) | PE20020132A1 (bg) |
PL (1) | PL208069B1 (bg) |
SK (1) | SK1152003A3 (bg) |
TW (2) | TW200516083A (bg) |
UY (1) | UY26807A1 (bg) |
WO (1) | WO2002002773A2 (bg) |
ZA (1) | ZA200210109B (bg) |
Families Citing this family (175)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999000498A1 (en) * | 1997-06-27 | 1999-01-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Human nk-3 related prostate specific gene-1 |
EP1297142B1 (en) | 2000-06-29 | 2009-01-14 | Abbott Laboratories | Dual specificity antibodies and methods of making and using |
US7754208B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
DE60237282D1 (de) * | 2001-06-28 | 2010-09-23 | Domantis Ltd | Doppelspezifischer ligand und dessen verwendung |
GB0115841D0 (en) | 2001-06-28 | 2001-08-22 | Medical Res Council | Ligand |
US20060002935A1 (en) | 2002-06-28 | 2006-01-05 | Domantis Limited | Tumor Necrosis Factor Receptor 1 antagonists and methods of use therefor |
US7696320B2 (en) | 2004-08-24 | 2010-04-13 | Domantis Limited | Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor |
US9028822B2 (en) | 2002-06-28 | 2015-05-12 | Domantis Limited | Antagonists against TNFR1 and methods of use therefor |
US20070104710A1 (en) * | 2002-06-28 | 2007-05-10 | Domants Limited | Ligand that has binding specificity for IL-4 and/or IL-13 |
US9321832B2 (en) | 2002-06-28 | 2016-04-26 | Domantis Limited | Ligand |
CA2965865C (en) | 2002-07-18 | 2021-10-19 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
USRE47770E1 (en) | 2002-07-18 | 2019-12-17 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
US20050271660A1 (en) | 2002-09-06 | 2005-12-08 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Nebulization of monoclonal antibodies for treating pulmonary diseases |
US20110223168A1 (en) * | 2002-12-27 | 2011-09-15 | Greg Winter | Ligand that has binding specificity for il-4 and/or il-13 |
GB0230201D0 (en) * | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Retargeting |
EP2395016A3 (en) | 2003-05-30 | 2012-12-19 | Merus B.V. | Design and use of paired variable regions of specific binding molecules |
US20100069614A1 (en) | 2008-06-27 | 2010-03-18 | Merus B.V. | Antibody producing non-human mammals |
DK1737971T3 (da) * | 2004-01-20 | 2017-11-13 | Merus Nv | Blandinger af bindingsproteiner |
AU2005207003C1 (en) * | 2004-01-20 | 2013-06-13 | Humanigen, Inc. | Antibody specificity transfer using minimal essential binding determinants |
TWI439284B (zh) * | 2004-04-09 | 2014-06-01 | Abbvie Biotechnology Ltd | 用於治療TNFα相關失調症之多重可變劑量療法 |
US7790405B2 (en) | 2004-04-26 | 2010-09-07 | Centocor, Inc. | Solution phase biopanning method using engineered decoy proteins |
US7514539B2 (en) | 2004-04-26 | 2009-04-07 | Centocor, Inc. | Epitope directed selection of antibodies to murine tissue factor |
JP5017097B2 (ja) * | 2004-04-26 | 2012-09-05 | セントカー・インコーポレーテツド | 設計デコイタンパク質を用いる溶液相バイオパニング方法 |
MXPA06014031A (es) | 2004-06-01 | 2007-10-08 | Domantis Ltd | Anticuerpos de fusion biespecificos con vida media de serica mejorada. |
EP1851245B1 (en) | 2005-01-26 | 2012-10-10 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies against interleukin-1 beta |
KR100675791B1 (ko) * | 2005-02-04 | 2007-02-02 | 제주대학교 산학협력단 | 육상어류양식장용 자동먹이공급시스템 |
CA2608058C (en) | 2005-05-12 | 2013-09-10 | Crucell Holland B.V. | Host cell specific binding molecules capable of neutralizing viruses and uses thereof |
WO2006136601A1 (en) * | 2005-06-23 | 2006-12-28 | Crucell Holland B.V. | Optimization of west nile virus antibodies |
SI1912675T1 (sl) | 2005-07-25 | 2014-07-31 | Emergent Product Development Seattle, Llc | zmanjšanje števila celic B z uporabo molekul, ki se specifično vežejo na CD37 in CD20 |
US7612181B2 (en) * | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
EP2500356A3 (en) | 2005-08-19 | 2012-10-24 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
MY169746A (en) | 2005-08-19 | 2019-05-14 | Abbvie Inc | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
JP2009510002A (ja) | 2005-09-30 | 2009-03-12 | アボット ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディトゲゼルシャフト | 反発誘導分子(rgm)タンパク質ファミリーのタンパク質の結合ドメイン、及びその機能的断片、及びそれらの使用 |
EP1940880A2 (en) * | 2005-10-14 | 2008-07-09 | Novo Nordisk A/S | Treating diabetes using inhibitors of il-1 |
KR20110079922A (ko) * | 2006-04-14 | 2011-07-11 | 노파르티스 아게 | 안과 장애 치료를 위한 il-1 항체의 용도 |
AU2007255384B2 (en) * | 2006-06-06 | 2012-09-27 | Crucell Holland B.V. | Human binding molecules having killing activity against staphylococci and uses thereof |
CA2654317A1 (en) | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Single-chain multivalent binding proteins with effector function |
AU2007281479A1 (en) * | 2006-08-02 | 2008-02-07 | California Institute Of Technology | Methods and systems for detecting and/or sorting targets |
WO2008027236A2 (en) * | 2006-08-30 | 2008-03-06 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies |
RU2554747C9 (ru) * | 2006-12-20 | 2015-10-20 | Ксома (Сша) Ллс | Способы лечения il-1бета-зависимых заболеваний |
US8324350B2 (en) | 2006-12-29 | 2012-12-04 | Abbott Laboratories | Dual-specific IL-1α/IL-1β antibodies |
WO2008150491A2 (en) | 2007-05-31 | 2008-12-11 | Abbott Laboratories | BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS |
EP2195341B1 (en) | 2007-09-26 | 2017-03-22 | UCB Biopharma SPRL | Dual specificity antibody fusions |
WO2009079585A2 (en) | 2007-12-17 | 2009-06-25 | Dyax Corp. | Compositions and methods for treating osteolytic disorders comprising mmp-14 binding proteins |
US8962803B2 (en) | 2008-02-29 | 2015-02-24 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Antibodies against the RGM A protein and uses thereof |
WO2009111508A2 (en) * | 2008-03-03 | 2009-09-11 | Dyax Corp. | Metalloproteinase 9 and metalloproteinase 2 binding proteins |
WO2009111450A2 (en) | 2008-03-03 | 2009-09-11 | Dyax Corp. | Metalloproteinase 9 binding proteins |
PT2132228E (pt) | 2008-04-11 | 2011-10-11 | Emergent Product Dev Seattle | Imunoterapia de cd37 e sua combinação com um quimioterápico bifuncional |
CA2722466A1 (en) | 2008-04-29 | 2009-11-05 | Tariq Ghayur | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
US20100260668A1 (en) * | 2008-04-29 | 2010-10-14 | Abbott Laboratories | Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof |
EP2297209A4 (en) | 2008-06-03 | 2012-08-01 | Abbott Lab | IMMUNOGLOBULINS WITH TWO VARIABLE DOMAINS AND USES THEREOF |
UY31861A (es) | 2008-06-03 | 2010-01-05 | Abbott Lab | Inmunoglobulina con dominio variable dual y usos de la misma |
WO2010006060A2 (en) * | 2008-07-08 | 2010-01-14 | Abbott Laboratories | Prostaglandin e2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
EP2324061B1 (en) | 2008-09-03 | 2017-04-12 | F. Hoffmann-La Roche AG | Multispecific antibodies |
US8377429B2 (en) * | 2008-09-05 | 2013-02-19 | Xoma Technology Ltd. | Methods for improvement of beta cell function with anti-IL-1β antibodies or fragments thereof |
CA2737056C (en) * | 2008-09-12 | 2018-10-30 | Xbiotech Inc. | Targeting pathogenic monocytes |
EA201100527A1 (ru) | 2008-09-26 | 2011-10-31 | Юсб Фарма С.А. | Биологические продукты |
EP2196476A1 (en) * | 2008-12-10 | 2010-06-16 | Novartis Ag | Antibody formulation |
TW201031421A (en) * | 2009-01-29 | 2010-09-01 | Abbott Lab | IL-1 binding proteins |
BRPI1013688A8 (pt) | 2009-03-05 | 2017-02-14 | Abbott Lab | Proteínas de ligação de il-17. |
RU2598248C2 (ru) * | 2009-04-02 | 2016-09-20 | Роше Гликарт Аг | Полиспецифичные антитела, включающие антитела полной длины и одноцепочечные фрагменты fab |
CN101957365B (zh) * | 2009-07-21 | 2013-08-07 | 卫生部北京医院 | 检测抗环瓜氨酸肽和抗免疫球蛋白g双特异性抗体的试剂盒 |
TW201109438A (en) * | 2009-07-29 | 2011-03-16 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
EP3029070A1 (en) | 2009-08-29 | 2016-06-08 | AbbVie Inc. | Therapeutic dll4 binding proteins |
NZ598929A (en) | 2009-09-01 | 2014-05-30 | Abbvie Inc | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
GB201005063D0 (en) | 2010-03-25 | 2010-05-12 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
TW201119676A (en) * | 2009-10-15 | 2011-06-16 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
MX2012004412A (es) * | 2009-10-15 | 2012-05-08 | Abbott Lab | Proteinas de union a il-1. |
UY32979A (es) | 2009-10-28 | 2011-02-28 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
JP5951498B2 (ja) | 2009-12-08 | 2016-07-13 | アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー | 網膜神経線維層変性の治療に使用するためのrgmaタンパク質に対するモノクローナル抗体 |
US20130045209A1 (en) * | 2010-01-12 | 2013-02-21 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | WNT-Binding Agents and Uses Thereof |
EP3680253A3 (en) | 2010-03-02 | 2020-09-30 | AbbVie Inc. | Therapeutic dll4 binding proteins |
CA2796633C (en) * | 2010-04-23 | 2020-10-27 | Genentech, Inc. | Production of heteromultimeric proteins |
MY161302A (en) | 2010-05-14 | 2017-04-14 | Abbvie Inc | IL-1 binding proteins |
WO2012006500A2 (en) | 2010-07-08 | 2012-01-12 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein |
UY33492A (es) | 2010-07-09 | 2012-01-31 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
JP2013537415A (ja) | 2010-08-03 | 2013-10-03 | アッヴィ・インコーポレイテッド | 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用 |
KR20130100125A (ko) * | 2010-08-13 | 2013-09-09 | 제넨테크, 인크. | 질환의 치료를 위한, IL-1β 및 IL-18에 대한 항체 |
AU2011293253B2 (en) | 2010-08-26 | 2014-12-11 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
PE20141060A1 (es) | 2010-12-21 | 2014-09-26 | Abbvie Inc | Inmunoglobulinas de dominio variable dual biespecificas de il-1 alfa y beta y su uso |
MX341578B (es) * | 2011-02-08 | 2016-08-25 | Abbvie Inc | Tratamiento de la osteoartritis y del dolor. |
EP2726506A1 (en) | 2011-05-27 | 2014-05-07 | Dutalys | Removal of monomeric targets |
CN103930445B (zh) | 2011-05-27 | 2021-03-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 双靶向 |
WO2012176779A1 (ja) | 2011-06-20 | 2012-12-27 | 協和発酵キリン株式会社 | 抗erbB3抗体 |
WO2013059439A2 (en) | 2011-10-21 | 2013-04-25 | Dyax Corp. | Combination therapy comprising an mmp-14 binding protein |
WO2013063095A1 (en) | 2011-10-24 | 2013-05-02 | Abbvie Inc. | Immunobinders directed against sclerostin |
CA2853114A1 (en) | 2011-10-24 | 2013-05-02 | Abbvie Inc. | Bispecific immunobinders directed against tnf and il-17 |
SG11201402533YA (en) * | 2011-11-21 | 2014-09-26 | Abbvie Inc | Il-1 binding proteins |
RU2482181C1 (ru) * | 2011-12-07 | 2013-05-20 | Учреждение Российской академии медицинских наук Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина РАМН | Клеточная линия d11 множественной миеломы человека, используемая для гибридомной технологии |
CN107459576A (zh) | 2011-12-14 | 2017-12-12 | 艾伯维德国有限责任两合公司 | 用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法 |
JP6336397B2 (ja) | 2011-12-14 | 2018-06-06 | アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー | 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法 |
KR101963230B1 (ko) | 2011-12-26 | 2019-03-29 | 삼성전자주식회사 | 복수개의 단일 항체를 포함하는 단백질 복합체 |
US20130171059A1 (en) | 2011-12-30 | 2013-07-04 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
CA2861610A1 (en) | 2011-12-30 | 2013-07-04 | Abbvie Inc. | Dual specific binding proteins directed against il-13 and/or il-17 |
NZ625403A (en) | 2012-01-27 | 2016-03-31 | Abbvie Inc | Composition and method for diagnosis and treatment of diseases associated with neurite degeneration |
GB2502127A (en) | 2012-05-17 | 2013-11-20 | Kymab Ltd | Multivalent antibodies and in vivo methods for their production |
AU2013249985B2 (en) | 2012-04-20 | 2017-11-23 | Merus N.V. | Methods and means for the production of Ig-like molecules |
UY34905A (es) | 2012-07-12 | 2014-01-31 | Abbvie Inc | Proteínas de unión a il-1 |
KR101911438B1 (ko) | 2012-10-31 | 2018-10-24 | 삼성전자주식회사 | 이중 특이 항원 결합 단백질 복합체 및 이중 특이 항체의 제조 방법 |
NZ707641A (en) | 2012-11-01 | 2016-09-30 | Abbvie Inc | Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
SG11201503324WA (en) * | 2012-11-01 | 2015-05-28 | Abbvie Inc | Stable dual variable domain immunoglobulin protein formulations |
CA2890455A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Abbvie, Inc. | Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins |
US9915665B2 (en) | 2012-12-28 | 2018-03-13 | Abbvie Inc. | High-throughput system and method for identifying antibodies having specific antigen binding activities |
WO2014106001A2 (en) | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Abbvie, Inc. | Dual specific binding proteins having a receptor sequence |
US9856319B2 (en) | 2012-12-28 | 2018-01-02 | Abbvie Inc. | Monovalent binding proteins |
EP2948475A2 (en) | 2013-01-23 | 2015-12-02 | AbbVie Inc. | Methods and compositions for modulating an immune response |
US9469686B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-10-18 | Abbott Laboratories | Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same |
WO2014144299A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Abbvie Inc. | DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST TNFα |
TW201512219A (zh) | 2013-03-15 | 2015-04-01 | Abbvie Inc | 針對IL-1β及/或IL-17之雙特異性結合蛋白 |
WO2014197885A2 (en) | 2013-06-07 | 2014-12-11 | Duke University | Inhibitors of complement factor h |
CN103308697B (zh) * | 2013-06-09 | 2014-11-26 | 卫生部北京医院 | 检测抗丙型肝炎病毒编码的非结构蛋白ns3和ns5的天然双特异性抗体的试剂盒 |
US9879081B2 (en) | 2013-06-25 | 2018-01-30 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Protein complex, bispecific antibody including the protein complex, and method of preparation thereof |
CA2923772A1 (en) | 2013-09-17 | 2015-03-26 | University Health Network (Uhn): Technology Development And Commercialization | Agents directed against a cis rgma/neogenin interaction or lipid rafts and use of the same in methods of treatment |
MX2016003617A (es) | 2013-09-30 | 2016-07-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Metodo para producir molecula de enlace al antigeno usando fago auxiliar modificado. |
BR112016011027A2 (pt) | 2013-12-20 | 2017-12-05 | Genentech Inc | método de produção de um anticorpo, anticorpos, composição farmacêutica, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, método de tratamento de asma e método de tratamento de um distúrbio |
CN106471117A (zh) | 2014-05-06 | 2017-03-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用哺乳动物细胞产生异多聚体蛋白 |
US20160000936A1 (en) | 2014-06-10 | 2016-01-07 | Abbvie Inc. | Biomarkers for inflammatory disease and methods of using same |
WO2015191934A2 (en) | 2014-06-11 | 2015-12-17 | Abbvie Inc. | Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins for treating brain and neurological diseases |
EP2985294A1 (en) | 2014-08-14 | 2016-02-17 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Recombinant antibody molecule and its use for target cell restricted T cell activation |
WO2016094881A2 (en) | 2014-12-11 | 2016-06-16 | Abbvie Inc. | Lrp-8 binding proteins |
JP6655302B2 (ja) * | 2015-05-29 | 2020-02-26 | デンカ生研株式会社 | 被検対象の検出方法並びにそのための免疫測定器具及びモノクローナル抗体 |
TW201710286A (zh) | 2015-06-15 | 2017-03-16 | 艾伯維有限公司 | 抗vegf、pdgf及/或其受體之結合蛋白 |
MX2018003040A (es) | 2015-09-11 | 2018-04-11 | Abbvie Inc | Metodos para el tratamiento de formas recurrentes de esclerosis multiple. |
EP3352760A4 (en) | 2015-09-21 | 2019-03-06 | Aptevo Research and Development LLC | CD3 BINDING POLYPEPTIDES |
UA124925C2 (en) | 2015-10-02 | 2021-12-15 | Hoffmann La Roche | Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3 |
JP6734919B2 (ja) * | 2015-10-02 | 2020-08-05 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 同時結合を測定するための細胞ベースのfretアッセイ法 |
WO2017087784A1 (en) | 2015-11-18 | 2017-05-26 | Duke University | Tumor infiltrating lymphocytes for treatment of cancer |
JP2019509737A (ja) | 2016-03-11 | 2019-04-11 | スカラー ロック インコーポレイテッドScholar Rock,Inc. | TGFβ1結合性免疫グロブリンおよびその使用 |
US20170349653A1 (en) | 2016-06-01 | 2017-12-07 | Abbvie Inc. | Methods for treating spinal cord injury and pain |
BR112019006706A2 (pt) | 2016-10-03 | 2019-06-25 | Abbott Lab | métodos melhorados para avaliar o estado de gfap em amostras de paciente |
MX2019008197A (es) | 2017-01-06 | 2019-09-11 | Scholar Rock Inc | Inhibidores de tgfb1 permisivos del contexto, espicificos de isoformas y uso de los mismos. |
JP7346300B2 (ja) | 2017-03-23 | 2023-09-19 | アボット・ラボラトリーズ | 早期バイオマーカーであるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼl1を使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷の程度の診断及び決定の一助となるための方法 |
PE20191494A1 (es) | 2017-04-03 | 2019-10-21 | Hoffmann La Roche | Inmunoconjugados de un anticuerpo anti-pd-1 con un il-2 mutante o con il-15 |
TWI690538B (zh) | 2017-04-05 | 2020-04-11 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 特異性結合至pd1至lag3的雙特異性抗體 |
EP3610268A1 (en) | 2017-04-15 | 2020-02-19 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers |
CN110603449A (zh) | 2017-04-28 | 2019-12-20 | 雅培实验室 | 用同一人受试者的至少两种样品的早期生物标记物帮助超急性诊断确定创伤性脑损伤的方法 |
US10865238B1 (en) | 2017-05-05 | 2020-12-15 | Duke University | Complement factor H antibodies |
CA3078725A1 (en) | 2017-05-25 | 2018-11-29 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers |
AU2018275236A1 (en) | 2017-05-30 | 2019-10-31 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in diagnosing and evaluating a mild traumatic brain injury in a human subject using cardiac troponin I |
EP3649474A1 (en) | 2017-07-03 | 2020-05-13 | Abbott Laboratories | Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood |
GB201711208D0 (en) | 2017-07-12 | 2017-08-23 | Iontas Ltd | Ion channel inhibitors |
WO2019093342A1 (ja) | 2017-11-08 | 2019-05-16 | 協和発酵キリン株式会社 | CD40とEpCAMに結合するバイスペシフィック抗体 |
CN110892266A (zh) | 2017-12-09 | 2020-03-17 | 雅培实验室 | 使用gfap和uch-l1的组合辅助诊断和评价人类受试者中创伤性脑损伤的方法 |
BR112019028254A2 (pt) | 2017-12-09 | 2020-07-14 | Abbott Laboratories | métodos para ajudar no diagnóstico e avaliação de um paciente que sofreu uma lesão ortopédica e que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, tal como uma lesão cerebral traumática (lct) leve, usando a proteína ácida fibrilar glial (gfap) e/ou a hidrolase carbóxi-terminal da ubiquitina l1 (uch-l1) |
EP3732489A1 (en) | 2017-12-29 | 2020-11-04 | Abbott Laboratories | Novel biomarkers and methods for diagnosing and evaluating traumatic brain injury |
MX2021000347A (es) | 2018-07-11 | 2021-04-19 | Scholar Rock Inc | Inhibidores de tgf?1 selectivos de isoforma, de alta afinidad y usos de los mismos. |
HRP20212034T1 (hr) | 2018-07-11 | 2022-04-01 | Scholar Rock, Inc. | Izoformno selektivni inhibitori tgfbeta1 i njihove uporabe |
WO2020014473A1 (en) | 2018-07-11 | 2020-01-16 | Scholar Rock, Inc. | TGFβ1 INHIBITORS AND USE THEREOF |
CA3125316A1 (en) | 2018-12-28 | 2020-07-02 | Kyowa Kirin Co., Ltd. | Bispecific antibody binding to tfr |
EP3931573A1 (en) | 2019-03-01 | 2022-01-05 | Abbott Laboratories | Methods for predicting major adverse cardiovascular events in subjects with coronary artery disease |
EP3971293A4 (en) | 2019-05-15 | 2023-02-08 | Kyowa Kirin Co., Ltd. | BISPECIFIC ANTIBODIES CAPABLE OF BINDING TO CD40 AND GPC3 |
KR20220008820A (ko) | 2019-05-15 | 2022-01-21 | 쿄와 기린 가부시키가이샤 | Cd40과 fap에 결합하는 이중 특이적 항체 |
EP4087649A1 (en) | 2020-01-11 | 2022-11-16 | Scholar Rock, Inc. | Tgfbeta inhibitors and use thereof |
EP4087659A2 (en) | 2020-01-11 | 2022-11-16 | Scholar Rock, Inc. | Tgf-beta inhibitors and use thereof |
EP4136459A1 (en) | 2020-04-13 | 2023-02-22 | Abbott Laboratories | Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample |
CN111793131A (zh) * | 2020-05-11 | 2020-10-20 | 廊坊天光生物技术有限公司 | 一种用于检测血清中pf4含量的抗体对及其用途 |
US20220043000A1 (en) | 2020-08-04 | 2022-02-10 | Abbott Laboratories | Methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample |
WO2022119841A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Abbott Laboratories | Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi |
WO2023102384A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Abbott Laboratories | Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi |
WO2022147147A1 (en) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | Abbott Laboratories | Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample |
WO2022204581A2 (en) | 2021-03-26 | 2022-09-29 | Scholar Rock, Inc. | Tgf-beta inhibitors and use thereof |
BR112023024169A2 (pt) | 2021-05-18 | 2024-02-06 | Abbott Lab | Métodos para avaliar lesão cerebral em um indivíduo pediátrico |
EP4348260A2 (en) | 2021-06-03 | 2024-04-10 | Scholar Rock, Inc. | Tgf-beta inhibitors and therapeutic use thereof |
JP2024521476A (ja) | 2021-06-14 | 2024-05-31 | アボット・ラボラトリーズ | 音響エネルギー、電磁エネルギー、過圧波及び/又は爆風により引き起こされる脳損傷の診断法又は診断の一助となる方法 |
US20240301073A1 (en) | 2021-07-14 | 2024-09-12 | Scholar Rock, Inc. | LTBP COMPLEX-SPECIFIC INHIBITORS OF TGFb1 AND USES THEREOF |
JP2024530527A (ja) * | 2021-08-13 | 2024-08-21 | アブウィズ バイオ,インコーポレイテッド | タンパク質及び抗体のヒト化、親和性成熟、及び最適化のための方法 |
CN118715440A (zh) | 2021-08-31 | 2024-09-27 | 雅培实验室 | 诊断脑损伤的方法和系统 |
AU2022339759A1 (en) | 2021-08-31 | 2024-03-07 | Abbott Laboratories | Methods and systems of diagnosing brain injury |
AU2022354059A1 (en) | 2021-09-30 | 2024-03-28 | Abbott Laboratories | Methods and systems of diagnosing brain injury |
EP4448179A1 (en) | 2021-12-17 | 2024-10-23 | Abbott Laboratories | Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples |
AU2023216317A1 (en) | 2022-02-04 | 2024-09-05 | Abbott Laboratories | Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample |
WO2024006876A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Abbott Laboratories | Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples |
WO2024059708A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Abbott Laboratories | Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury |
WO2024187051A1 (en) | 2023-03-07 | 2024-09-12 | Scholar Rock, Inc. | Tgf-beta inhibitors for use for treating resistant or unresponsive cancer in patients |
WO2024211475A1 (en) | 2023-04-04 | 2024-10-10 | Abbott Laboratories | Use of biomarkers to determine whether a subject has sustained, may have sustained or is suspected of sustaining a subacute acquired brain injury (abi) |
Family Cites Families (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US126603A (en) | 1872-05-07 | Improvement in machines for sawing staves | ||
US4634665A (en) | 1980-02-25 | 1987-01-06 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US5179017A (en) | 1980-02-25 | 1993-01-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4510245A (en) | 1982-11-18 | 1985-04-09 | Chiron Corporation | Adenovirus promoter system |
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US5168062A (en) | 1985-01-30 | 1992-12-01 | University Of Iowa Research Foundation | Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence |
FR2577377B1 (fr) * | 1985-02-21 | 1989-06-16 | Albaret Sa | Procede pour eviter le patinage d'un tracteur equipe d'un relevage hydraulique avec un outil enfoui dans le sol, et equipement de tracteur pour mettre en oeuvre ce procede |
US4772685A (en) * | 1985-10-02 | 1988-09-20 | Merck & Co., Inc. | Immunogenic peptides of human interleukin-1 and the corresponding anti-peptide antibodies |
US4968615A (en) | 1985-12-18 | 1990-11-06 | Ciba-Geigy Corporation | Deoxyribonucleic acid segment from a virus |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
AU4308689A (en) | 1988-09-02 | 1990-04-02 | Protein Engineering Corporation | Generation and selection of recombinant varied binding proteins |
DE68913658T3 (de) | 1988-11-11 | 2005-07-21 | Stratagene, La Jolla | Klonierung von Immunglobulin Sequenzen aus den variablen Domänen |
JP3068180B2 (ja) | 1990-01-12 | 2000-07-24 | アブジェニックス インコーポレイテッド | 異種抗体の生成 |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
AU665190B2 (en) | 1990-07-10 | 1995-12-21 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
CA2090126C (en) | 1990-08-02 | 2002-10-22 | John W. Schrader | Methods for the production of proteins with a desired function |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
ATE158021T1 (de) | 1990-08-29 | 1997-09-15 | Genpharm Int | Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US6255458B1 (en) | 1990-08-29 | 2001-07-03 | Genpharm International | High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin |
US5877397A (en) | 1990-08-29 | 1999-03-02 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5814318A (en) | 1990-08-29 | 1998-09-29 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
DK0564531T3 (da) | 1990-12-03 | 1998-09-28 | Genentech Inc | Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber |
PT1024191E (pt) | 1991-12-02 | 2008-12-22 | Medical Res Council | Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos |
DE69333447T2 (de) | 1992-05-22 | 2009-09-10 | Montana State University, Bozeman | Antikörper mit spezifikäten gegen mehrere adhäsionsmoleküle |
US5622701A (en) * | 1994-06-14 | 1997-04-22 | Protein Design Labs, Inc. | Cross-reacting monoclonal antibodies specific for E- and P-selectin |
JPH10503179A (ja) * | 1994-06-24 | 1998-03-24 | イミュネックス・コーポレーション | 放出制御性ポリペプチド組成物および炎症性腸疾患の治療方法 |
DE69637481T2 (de) | 1995-04-27 | 2009-04-09 | Amgen Fremont Inc. | Aus immunisierten Xenomäusen stammende menschliche Antikörper gegen IL-8 |
AU2466895A (en) | 1995-04-28 | 1996-11-18 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
CA2229043C (en) | 1995-08-18 | 2016-06-07 | Morphosys Gesellschaft Fur Proteinoptimierung Mbh | Protein/(poly)peptide libraries |
CN103275221B (zh) | 1996-02-09 | 2016-08-17 | 艾伯维生物技术有限公司 | 结合人TNFα的人抗体 |
US6300065B1 (en) | 1996-05-31 | 2001-10-09 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
IL119587A (en) | 1996-11-07 | 2000-12-06 | Univ Ramot | Method of preparing and for obtaining bimolecular interactions |
KR20080059467A (ko) | 1996-12-03 | 2008-06-27 | 아브게닉스, 인크. | 복수의 vh 및 vk 부위를 함유하는 사람 면역글로불린유전자좌를 갖는 형질전환된 포유류 및 이로부터 생성된항체 |
DE69835143T2 (de) | 1997-01-21 | 2007-06-06 | The General Hospital Corp., Boston | Selektion von proteinen mittels rns-protein fusionen |
AU8755798A (en) | 1997-04-04 | 1998-11-13 | Biosite Diagnostics Incorporated | Polyvalent and polyclonal libraries |
WO1998049286A2 (en) | 1997-05-01 | 1998-11-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Directed evolution of enzymes and antibodies |
US20020029391A1 (en) | 1998-04-15 | 2002-03-07 | Claude Geoffrey Davis | Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling |
US6680380B1 (en) * | 1998-09-18 | 2004-01-20 | Schering Corporation | Nucleic acids encoding mammalian interleukin-1ζ, related reagents and methods |
TR200501367T2 (tr) | 1999-03-25 | 2005-09-21 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Beşeri IL-12'yi bağlayan beşeri antikorlar ve bunları üretmek için yöntemler. |
GB0001448D0 (en) | 2000-01-21 | 2000-03-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
EP1297142B1 (en) | 2000-06-29 | 2009-01-14 | Abbott Laboratories | Dual specificity antibodies and methods of making and using |
DE60237282D1 (de) | 2001-06-28 | 2010-09-23 | Domantis Ltd | Doppelspezifischer ligand und dessen verwendung |
DK1517921T3 (da) * | 2002-06-28 | 2006-10-09 | Domantis Ltd | Immunglobulin-enkeltvariable antigen-bindende domæner og dobbeltspecifikke konstruktioner deraf |
KR20080077238A (ko) | 2005-12-01 | 2008-08-21 | 도만티스 리미티드 | 인터루킨 1 수용체 타입 1에 결합하는 비경쟁적 도메인항체 포맷 |
US8324350B2 (en) * | 2006-12-29 | 2012-12-04 | Abbott Laboratories | Dual-specific IL-1α/IL-1β antibodies |
-
2001
- 2001-06-28 EP EP01950668A patent/EP1297142B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-28 AU AU2001271636A patent/AU2001271636A1/en not_active Abandoned
- 2001-06-28 DE DE60137421T patent/DE60137421D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-28 CN CNA2009101351381A patent/CN101525384A/zh active Pending
- 2001-06-28 CZ CZ2003291A patent/CZ2003291A3/cs unknown
- 2001-06-28 BR BR0112026-3A patent/BR0112026A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-06-28 JP JP2002508013A patent/JP4955185B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-28 AT AT01950668T patent/ATE420958T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-06-28 CA CA2411374A patent/CA2411374C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-28 KR KR1020027017916A patent/KR100919593B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-06-28 EP EP15154039.0A patent/EP2899210A3/en not_active Withdrawn
- 2001-06-28 CN CN2010105838125A patent/CN102120773B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-28 HU HU0301002A patent/HUP0301002A3/hu unknown
- 2001-06-28 UY UY26807A patent/UY26807A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-06-28 ES ES01950668T patent/ES2319866T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-28 EP EP10182393A patent/EP2386575A3/en not_active Withdrawn
- 2001-06-28 IL IL15356701A patent/IL153567A0/xx unknown
- 2001-06-28 MX MXPA02012867A patent/MXPA02012867A/es active IP Right Grant
- 2001-06-28 PE PE2001000641A patent/PE20020132A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-06-28 SK SK115-2003A patent/SK1152003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-06-28 PL PL359995A patent/PL208069B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-06-28 US US09/894,550 patent/US7491516B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-28 WO PCT/US2001/020755 patent/WO2002002773A2/en active Application Filing
- 2001-06-28 CN CN01814818A patent/CN1451043A/zh active Pending
- 2001-06-28 EP EP09150437A patent/EP2042518A3/en not_active Withdrawn
- 2001-06-28 KR KR1020087018593A patent/KR20080074231A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-06-28 NZ NZ523080A patent/NZ523080A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-06-29 TW TW094102248A patent/TW200516083A/zh unknown
- 2001-06-29 TW TW090115948A patent/TWI307716B/zh not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-12-12 ZA ZA200210109A patent/ZA200210109B/en unknown
- 2002-12-20 IL IL153567A patent/IL153567A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-12-27 NO NO20026239A patent/NO20026239L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-12-27 EC EC2002004409A patent/ECSP024409A/es unknown
-
2003
- 2003-01-21 BG BG107483A patent/BG66209B1/bg unknown
- 2003-08-27 HK HK03106152.8A patent/HK1055316A1/xx unknown
-
2008
- 2008-12-11 US US12/316,340 patent/US8475766B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2010
- 2010-02-14 IL IL203955A patent/IL203955A/en not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-08-31 JP JP2011188635A patent/JP2012031178A/ja active Pending
-
2013
- 2013-05-23 US US13/900,841 patent/US20140155579A1/en not_active Abandoned
-
2014
- 2014-08-26 US US14/469,122 patent/US20140378666A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-03-05 US US14/639,985 patent/US20150175694A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4955185B2 (ja) | 二重特異性抗体ならびに作製方法および使用方法 | |
JP6518917B2 (ja) | 抗cd40抗体およびその使用 | |
KR100951067B1 (ko) | 사람 인터류킨-18에 결합하는 항체 및 이를 제조하고사용하는 방법 | |
PT2423230E (pt) | Membro de ligação para o recetor de gm-csf | |
BRPI0721125A2 (pt) | Anticorpos humanos que se ligam a il-12 humana e métodos para produção | |
AU2007202323C1 (en) | Dual specificity antibodies and methods of making and using | |
AU2013203432A1 (en) | Dual specificity antibodies and methods of making and using | |
AU2012200225A1 (en) | Dual specificity antibodies and methods of making and using |