JPH10503179A - 放出制御性ポリペプチド組成物および炎症性腸疾患の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は（ａ）ＴＮＦＲ、（ｂ）ＩＬ−ＩＲ、（ｃ）ＩＬ−１ｒａ、（ｄ）ＩＬ−６Ｒ並びに（ｅ）ＴＮＦ、ＩＬ−６若しくはＩＬ−１に対して免疫活性であるモノクローナル抗体からなる群より選択される有効量のポリペプチド（ここでポリペプチドはアルギネートに封入されている）を持つ放出制御性医薬調剤に関する。本発明はまた、上記の組成物をそれらを必要としている患者に投与することによる炎症性腸疾患の治療方法にも関している。

Description

【発明の詳細な説明】 放出制御性ポリペプチド組成物および炎症性腸疾患の治療方法 技術分野 本発明はポリペプチドおよびアルギン酸の塩を含む放出制御性医薬組成物に関 する。本発明はまた、そのような制御された腸放出調剤を患者に投与することに よる、腫瘍壊死因子、インターロイキン−６またはインターロイキン−１により 媒介される炎症性腸疾患の治療方法にも関している。 背景技術 炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は胃腸管の慢性炎症の存在により特徴付けられる。疾 患の一つの型は潰瘍性大腸炎であり、この疾患はもっぱら大腸に影響を及ぼし、 粘膜潰瘍化、腸壁の浅炎症性細胞湿潤および大規模に長く固執した場合の腫瘍性 転化により特徴付けられる。疾患の別の型はクローン病と称されている（局所腸 炎または局所回腸炎）。クローン病は、通常は末端回腸および上行結腸に生じる が、口から直腸までの消化管のどの部分にも影響を与える得る。最近、患者に長 く固執した潰瘍性大腸炎は結直腸癌の発生率の増加と関連していることが報告さ れている。例えば、Ｌｅｎｎａｒｄ−Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｕｔ，３１ ：８００−８０６（１９８６）；およびＥｋｂｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ ｌ．Ｊ．Ｍｅｄ ．，３２３：１２２８−１２３３（１９８８）を参照されたい。 さらに、クローン病は結直腸癌の危険性の増加と確実に関連している、Ｅｋｂｏ ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，３３６：３５７−３５９（１９９０）。 クローン病かまたは潰瘍性大腸炎の症例の約１０％は同一の解剖学的位置を含 んでいる（即ち、大腸）。炎症のこれら二つの形は部分的にまたはおそらく完全 にそれらの病原性起因は異なっているであろうが、重要な病態生理学的過程を共 有しているようである。ある種のサイトカイン、即ち、インターロイキン−１（ ＩＬ−１）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）は炎症のメディエイターで あることが、Ｐｏｄｏｌｓｋｙ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２５（１３） ：９２８−９３７（１９９１）により報告されている。Ｓｔｅｖｅｎｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，３７（６）：８１８−８ ２６（１９９２）は最近、前炎症性サイトカイン腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮ Ｆ−α）がＩＢＤ患者の小腸に発現されていることを報告している。 ＩＢＤに対して最も普通に使用されている処置剤はコルチコステロイドおよび スルファサラジンである。スルファサラジンはスルファピリジンおよび５−アミ ノサリチル酸と同族のもの（ｃｏｎｇｅｎｅｒ）である。Ｐｏｄｏｌｓｋｙ，Ｎ ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ ．，３２５（１４）：１００８−１０１６（１９９１） はスルファサラジンは、なかんづく（ｉｎｔｅｒ ａｌｉａ）プロスタグランジ ン合成酵素および５−リポキシゲナーゼの阻害剤として働くことを報告している 。スルファサラジンは一般的に安全であるが、発疹、関節炎、心膜炎、膵炎およ び胸膜炎のような過敏症のため、患者の２０％未満にしか与えられていない。コ ルチコステロイドの使用は副作用のかなりの危険性および潜在的に複雑な要素を 持つため幾分制限されている。クロニジン、クロモグリケート、クロロキン、イ ンターフェロンおよびメトトレキセートのような別の薬剤は、Ａｎｎ．Ｉｎｔ． Ｍｅｄ ．１１２：５０−６０（１９９０）にＰｅｐｐｅｒｃｏｒｎによりＩＢＤ のための可能性のある治療法として記載されている数少ない薬剤である。 有効な治療のための別の複雑な要素は、薬物の炎症部位への送達であった。経 口的に投与された治療物質が胃に残留する時間がその吸収に関する重要な因子で ある。ほとんどの薬剤は小腸で最適に吸収され、従って急速な胃排出は薬物の生 物学的利用を早める結果となる。しかしながら、薬物の持続的生物学的利用は遅 延された胃排出により可能である。胃腸管の通過において薬物の滞留時間を延長 させる試みが行われてきた。種々の遅放出調剤および放出制御調剤は本分野では よく知られている；例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、 ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、およびセルロー スアセテートフタレート。 よく知られたｐＨ感受性物質はアルギネートである。アルギネートは１，４− 結合−β−Ｄ−マンヌロン酸およびα−Ｌ−グルロン酸のアニオン共重合体であ る。種々の形態のアルギネートが市販品として入手可能である。そのような形態 は典型的には６０％１，４−結合−β−Ｄ−マンヌロン酸および４０％α−Ｌ− グルロン酸；または３０％１，４−結合−β−Ｄ−マンヌロン酸および７０％α −Ｌ−グルロン酸である。アルギン酸は酸性環境下、カルシウムイオンと会合す ると自発的に半透明ゲルを形成できる。除放性薬剤送達系のためのアルギネート ゲルの使用は文献に記載されている。経口投与薬剤に対するアルギネートゲル送 達系を使用する利点は、アルギネートは経口で摂取した場合無毒であり、アルギ ネートビーズは胃液から酸感受性薬剤を保護でき、および酸性環境に暴露された 場合に薬剤の制御された放出を提供できるという事実に由来する。種々の薬剤と アルギネートを組み合わせた例として、カチオン薬剤カフェイン、サリチル酸ナ トリウムおよびクロロフェニラミンのためのアルギン酸ナトリウム送達系が記載 されているＳｔｏｃｋｗｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒ ｅｌｅａｓｅ ，３：１６７−１７５（１９８６）が挙げられる。Ｓｅｇｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３７：３０９２−３０９５（１ ９８９）はカチオン薬剤、プロパノロールおよびそのアルギネートゲルビーズと の相互作用を記載している。Ｂａｈｋｏｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ． Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｂｉｏ．Ｍｏｔｅｒ ．１８ ：４４１−４４２（１９９１）により別のカチオン薬剤、テオフィリンがアルギ ネートゲルビーズと試験された。 蛋白性物質の組み込みは最近探究され始めた。アルギン酸ナトリウムゲルビー ズ中への線維芽細胞成長因子−アルファ（ＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）形 質転換成長因子（ＴＧＦ−α）の封入化（encapsulation）がＤｏｗｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１５２：４２２−４２９（１９９ ２）により記載されている。Ｄｏｗｎｓらはアルギネートビーズ内へ捕捉された 蛋白質の量は蛋白質のアルギネートアニオンとの静電的相互作用に依存すること を観察している。 上記のことを考慮すると、ＩＢＤのための有効な薬剤およびそのような薬剤を 炎症部位へ送達する有効な手段に対する要求が本分野に存続している。 発明の概要 本発明は患者の胃腸域へのポリペプチド送達のための放出制御性組成物に関す る。そのような放出制御性調剤は（ａ）腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体、（ｂ） インターロイキン−１受容体（ＩＬ−１Ｒ）、（ｃ）インターロイキン−１受容 体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）および（ｄ）ＴＮＦ、ＩＬ−６またはＩＬ− １に対して免疫活性であるモノクローナル抗体からなる群より選択される有効量 のポリペプチド；およびアルギン酸の塩を含んでいる。 本発明はまたＩＬ−１、ＩＬ−６またはＴＮＦにより媒介される胃腸疾患を治 療する方法にも関しており、それを必要としている患者に、（ａ）ＴＮＦ受容体 、（ｂ）インターロイキン−１受容体（ＩＬ−１Ｒ）、（ｃ）インターロイキン −１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、（ｄ）インターロイキン−６受容 体（ＩＬ−６Ｒ）および（ｅ）ＴＮＦ、ＩＬ−６またはＩＬ−１に対して免疫活 性であるモノクローナル抗体からなる群より選択される有効量のポリペプチド； およびアルギン酸の塩を含んでいる制御された腸放出医薬調剤を投与することを 特徴としている。 発明の詳細な説明 本明細書に記載される発明は、患者の胃腸腔において活性成分の制御された放 出を提供する医薬組成物に関している。そのような組成物は下部小腸へのポリペ プチド物質の送達を提供し、（ａ）腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）、（ｂ）イ ンターロイキン−１受容体（ＩＬ−１Ｒ）、（ｃ）インターロイキン−１受容体 アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）および（ｄ）ＴＮＦ、ＩＬ−６またはＩＬ−１ に対して免疫活性であるモノクローナル抗体からなる群より選択される有効量の ポリペプチド；およびアルギン酸の塩を含んでいる。 本明細書で使用される”ＴＮＦＲ”とは自主的にＴＮＦと結合する原形質膜ポ リペプチド類またはそれらの断片を意味している。二つの型のＴＮＦＲが本分野 で知られており本発明に含まれている、第一のＴＮＦＲはＳｍｉｔｈ，ｅｔ ａ ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：１０１９−１０２２（１９９０）（本明細書中 に参考文献として援用される）により記載されているような８０ｋＤの成熟蛋白 質である。第二のＴＮＦＲはＥＰ−Ａ−０３０８，３７８；Ｓｃｈａｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，６１：３６１−３７０（１９９０）；およびＬｏｅｔｓｃｈ ｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，６１：３５１−３５９（１９９０）（各々本明 細書中に参考文献として援用される）に記載されているような５５−６０ｋＤの 成熟蛋白質である。ここで使用される述語ＴＮＦＲはこれらの二つの型の可溶性 部分または断片を企図しており、ここで可溶性部分は主として蛋白質の細胞外ド メインを含んでおり、結合活性を維持し、細胞により分泌されることが可能であ る。ＴＮＦＲを含む融合蛋白質もまた本発明で企図されている。例えば、８０ｋ Ｄ ＴＮＦＲの二つの細胞外ドメインとヒトＩｇＧ１の不変部領域との二量体融 合はよく知られており（ｐ８０ＴＮＦＲ：Ｆｃ）、Ｍｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．，１５１（３）：１５４８−１５６１（１９９３）（本明細 書中に参考文献として援用される）に記載されている。５５ｋＤ ＴＮＦＲの細 胞外領域とヒトＩｇＧ１の不変部領域を用いた同様な融合は本定義に含まれてお り、Ｐｅｐｐｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７４：１４８３− １４８９（１９９１）（本明細書中に参考文献として援用される）に記載されて いる。 述語”ＩＬ−１Ｒ”とは自主的にＩＬ−１と結合する原形質膜ポリペプチド類 またはそれらの断片を意味している。二つのそのようなＩＬ−１Ｒの存在が知ら れている、即ちタイプＩ ＩＬ−１ＲおよびタイプII ＩＬ−１Ｒである。その ようなＩＬ−１Ｒおよびそれらの断片は米国特許出願第５，３１９，０７１；５ ，１８０，８１２；５，０８１，２２８および４，９６８，６０７号（これらの 各々は本明細書中に参考文献として援用される）に記載されている。タイプII ＩＬ−１ＲはＥＰ−Ａ−０４６０８４６（本明細書中に参考文献として援用され る）に記載されている。ここで使用される述語ＩＬ−１Ｒは、これらの二つの型 の可溶性部分または断片を企図しており、ここで可溶性部分は主として蛋白質の 細胞外ドメインを含んでおり、結合活性を維持し、細胞により分泌されることが 可能である。 述語”ＩＬ−１ｒａ”とはＩＬ−１へ結合でき、ＩＬ−１の結合を阻害するポ リペプチド類またはそれらの断片を意味している。ＩＬ−１ｒａはＥｉｓｅｎｂ ｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４３：３４１−３４６（１９９０） （本明細書中に参考文献として援用される）に記載されている。ＩＬ−１ｒａの 定義には、天然の蛋白質の細胞外ドメインを主として含み、結合活性を維持し、 分泌されることができるＩＬ−１ｒａの可溶性断片が含まれる。 述語”ＩＬ−６Ｒ”はＩＬ−６を結合するポリペプチド類およびそれらの断片 を意味している。そのような断片は天然のＩＬ−６蛋白質の細胞外ドメインを含 んでおり、結合活性を維持し、細胞により分泌されることが可能であるＩＬ−６ Ｒの可溶性部分を含んでいる。ＩＬ−６ＲはＹａｍａｓａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ，２４１：８２５−８２８（１９８８），Ｙａｍａｓａｋｉ，ｅ ｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０８：６７３−６７６（１９９０）（本 明細書中に参考文献として援用される）に記載されている。Ｔａｇａ ｅｔ ａ ｌ．，Ｃｅｌｌ，５８：５７３−５８１（１９８９）はヒトＩＬ−６Ｒをコード しているｃＤＮＡを発現するネオマイシン耐性Ｔ細胞株を記載している。 本発明での使用に適したＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの両方に対するモノクロ ーナル抗体はＬｕｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ．１７２：３４ ６−３５２（１９８６）（本明細書中に参考文献として援用される）に記載され ている。Ｌｕｇｅｒらにより記載されている抗体はＩＬ−１活性を阻害できる。 本発明における使用に適したＴＮＦαおよびＴＮＦβに対するモノクローナル抗 体は米国特許出願第５，２２３，３９５号および国際特許出願ＷＯ９２１６５５ ３号（その各々が本明細書中に参考文献として援用される）に記載されている。 述語”活性成分”とはここに記載されているポリペプチドを意味している、即 ち、ＴＮＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６、並びにＴＮＦ、ＩＬ−６ 若しくはＩＬ−１に対して免疫活性であるモノクローナル抗体：単独または混合 物として。 本発明はまた、ＩＬ−１、ＩＬ−６またはＴＮＦにより媒介される胃腸疾患の 治療方法にも関しており、それを必要としている患者に、（ａ）ＴＮＦＲ、（ｂ ）ＩＬ−１Ｒ、（ｃ）ＩＬ−１ｒａ、（ｄ）ＩＬ−６Ｒ並びに（ｅ）ＴＮＦ、Ｉ Ｌ−６またはＩＬ−１に対して免疫活性であるモノクローナル抗体からなる群よ り選択される有効量のポリペプチド；およびアルギン酸の塩を含んでいる制御さ れ た腸放出医薬調剤を投与することを特徴としている。 本発明の組成物において、活性成分は典型的には全組成物の約１重量パーセン トから全組成物の約７５重量パーセントで提供される。活性成分の好適な範囲は 約２５重量パーセントから約５０重量パーセントである。ビーズの製造に使用さ れる典型的なアルギネート溶液は約０．１重量／容量パーセントから約５重量／ 容量パーセントの範囲である。好適なアルギネート溶液は約０．５重量／容量パ ーセントから約２重量／容量パーセントからなっている。 胃腸管の炎症はその任意の場所で起こりうるので、炎症を起こした部位への活 性成分の送達を容易に操作できる送達系を利用するのが望ましい。胃腸管に滞留 するある段階での活性成分の放出は、組成物の種々のパラメーターを操作するこ とにより達成できる。アルギネートビーズの架橋に使用されるカチオンの型は活 性成分の放出速度に影響し、ビーズ表面の被覆に使用されるポリカチオンの型も 同様である、図１および２，および下記実施例１を参照されたい。活性成分−ア ルギネートビーズの凍結乾燥も非凍結乾燥ビーズと比較すると活性成分の放出速 度を著しく減少させる。下記実施例２および図３はそのような凍結乾燥の影響を 例示している。ビーズの凍結乾燥の別の利点は、活性成分の貯蔵安定性を促進す ることで実感される。さらに、アルギネートビーズ中のグルロン酸含量を変化さ せることにより、活性成分の放出を速くしたり遅くしたりできる。下記図４およ び実施例３を参照されたい。 上記のことに加え、以下の実施例が本発明の特定の態様の例示のため提供され るが、それらに発明の範囲が制限されるわけではない。 実施例１ ＴＮＦＲ：Ｆｃ−アルギネート複合体の製造 この実施例はＴＮＦＲ：Ｆｃ−アルギネートヒドロゲルビーズ複合体の製造法 を説明している。低粘度アルギネート（ＬＦ１０／６０）はＰｒｏｎｏｖａ Ｃ ｏｒｐから得られた。２パーセント（重量／容量）アルギン酸ナトリウム溶液が 蒸留水で作られた。溶液は一夜攪拌し、０．４５ミクロンの濾過ユニットを通し て濾過された。２パーセントアルギン酸ナトリウム溶液は２ｍｇのＴＮＦＲ：Ｆ ｃで１：１に希釈された。ＴＮＦＲ：Ｆｃ二量体融合蛋白質はＭｏｈｌｅｒ，ｅ ｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．，１５１（３）：１５４８−１５６１（１９９３ ）に記載されている方法に従って製造された。２５ ３／８ゲージ針を付けた３ ｍｌのプラスチックシリンジを用い、蛋白質を含むアルギン酸ナトリウム溶液を １０ｍｌの１パーセント架橋二価カチオン溶液（Ｃａ²⁺はＣａＣｌ₂として、Ｂ ａ²⁺はＢａＣｌ₂としてまたはＳｒ²⁺はＳｒ（ＮＯ₃）₂として）を含む１５ｍｌ のビーカーに穏やかに攪拌しながら１５分かけて滴加した（溶液の表面から約１ ０ｃｍ離して）。１ｍｌのアルギネート−蛋白質溶液から約２ｍｍの直径の球形 ビーズが約６０生成した。１５分後、２０ｍｌのＢｉｏ−Ｒａｄ使い捨てカラム により架橋溶液からビーズを分離した。溶液中の取り込まれなかった蛋白質は分 光学的に２８０ｎｍで決定された。カラムに保持されたビーズは２０ｍｌの蒸留 水で洗浄した。洗浄されたビーズは４ｍｌの５０ｍＭリン酸緩衝液（ＫＰｉ）、 ｐＨ７．４（放出／溶解緩衝液）を含む５ｍｌのバイアルに移し、１００ＲＰＭ で穏やかに振とうさせながら３７℃でインキュベートした。上記のＢｉｏ−Ｒａ ｄカラムを用いて溶液からビーズを分離した。４ｍｌの新しいＫＰｉをビーズに 加え、ビーズを新しいバイアルに移した。新しいＫＰｉの添加およびビーズの移 し替えを３０分または６０分毎に繰り返した。蛋白質放出もまた３０分または６ ０分ごとに決定された。放出の総計時間は４時間であった。 ビーズからのＴＮＦＲ：Ｆｃの放出に対する二価カチオンの影響の結果は下記 表Ｉに示されている。 表ＩのデータはＢａ−およびＳｒ−架橋ビーズはＣａ−架橋ビーズと比較して 延長された放出プロフィールを示したことを表示している（３．５時間対１時間 ）。カルシウム−架橋ビーズは部分的に溶解し、１時間の時点でかなりの程度塊 が形成されるので正確な蛋白質定量が困難であった。しかしながら、Ｂａ−およ びＳｒ−架橋ビーズは実験を通して球形を保っており、Ｃａ²⁺カチオンにより示 されたものより強いアルギネートアニオンに対するＢａ²⁺およびＳｒ²⁺の親和性 によるためであろう。 実施例２ ＴＮＦＲ：Ｆｃの放出動力学に対するポリ−カチオン被覆の効果 ビーズ上にポリカチオン被覆を調製するため、０.１パーセント ポリアルギ ニン（１３９ｋＤ）、ポリヒスチジン（１９ｋＤ）またはポリ−Ｌ−リシン（４ ４ｋＤ）の２ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ７．４が調製された。上記の方法を用いて ビーズ内にＴＮＦＲ：Ｆｃを取り込ませた後、ビーズを１０ｍｌの上記ポリカチ オン溶液と室温で３０分インキュベートした。ビーズはＫＰｉ放出緩衝液に懸濁 する前に蒸留水ですすいだ。蛋白質放出は１時間毎に決定し、４時間後ビーズを ０．１Ｍ ＨＣｌで１時間加水分解し、その後ＫＰｉに再懸濁した。ＫＰｉ中で ２時間後、溶液中の取り込まれなかった蛋白質を分光学的に２８０ｎｍで決定し た。放出の大体のパーセントが下記表IIに示されている。 表IIのデータは、ビーズからＴＮＦＲ：Ｆｃの放出を遅らせる能力において試 験された三つの中で、ポリヒスチジンが最も有効なカチオンであったことを示し ている。ポリヒスチジン被覆ビーズは４時間までほとんどＴＮＦＲ：Ｆｃを放出 していず、その後すべてのビーズを０．１Ｍ ＨＣｌで１時間加水分解してＫＰ ｉ（ｐＨ７．４）に再懸濁した。 実施例３ アルギネートビーズ中のＴＮＦＲ：Ｆｃの 放出動力学に対する凍結乾燥の効果 ＴＮＦＲ：Ｆｃおよびアルギネート（７０％グルロン酸含有）を含むビーズは 上記のように製造した。ビーズは次に−７０℃で２−４時間凍結させた。凍結乾 燥はＶｉｒｔｉｓ １２ＳＬ凍結乾燥機を用いて一晩実施した。凍結乾燥後、ビ ーズは直ちにＫＰｉ放出／溶解緩衝液中で再構築させた。表IIIは凍結乾燥およ び非凍結乾燥試料の放出動力学を累積放出パーセントで示している。 データはビーズの凍結乾燥の結果、非凍結乾燥ビーズよりさらにＴＮＦＲ：Ｆ ｃの放出が除放性になることを示している。最初の４時間で非凍結乾燥ビーズが ＴＮＦＲ：Ｆｃを５０％放出するのに比較して２７％のみの蛋白質しか放出され なかった。さらに、凍結乾燥ビーズでは活性成分の７０％の放出に２０時間が必 要であった。 実施例４ 凍結乾燥アルギネートビーズにおけるＴＮＦＲ：Ｆｃの放出動力学 に対するグルロン酸含量の効果 アルギネート中のグルロン酸レベルが異なったものを用いて二つの組成物のビ ーズが調製された。第一の組成物は７０％グルロン酸含量を持つアルギネートを 含み、市販品として入手可能である。この組成物は以後アルギネート組成物”Ａ ”と称する。第二の組成物は４０％グルロン酸含量を持つアルギネートおよび７ ０％グルロン酸含量を持つアルギネートの１：１混合物を含んでいる。この結果 、最終混合物は数学的に５５％と計算される全グルロン酸含量を持っている。こ のアルギネート混合物は以後組成物”Ｂ”と称される。各々の場合において、ビ ーズの調製に使用された最終溶液は重量／容量で約１％の濃度のアルギネートで あった。ビーズは上記の方法を用いて凍結乾燥された。ＴＮＦＲ：Ｆｃの放出は 上記のように５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液で実施された。表IVはビーズの調製 に使用されたアルギネートのグルロン酸含量の変化がどのようにＴＮＦＲ：Ｆｃ の放出に影響するかを示している、累積放出パーセントは近似の値である。 アルギネート組成物Ｂはアルギネート組成物Ａと比較すると最初の４時間以内 にＴＮＦＲ：Ｆｃの急速な放出を起こした。約１５時間の時点では、両方の組成 物は活性成分を同一の累積パーセントで放出した（即ち、５５％）。しかしなが ら、この時点以後、アルギネート組成物Ｂはアルギネート組成物Ａと比較して活 性成分をより遅く、しかし安定して放出した。ヒト胃腸管中の物質の滞留時間は 数時間から４８時間まで変化するので、特定の時間、即ち胃腸管中の特定部位で の活性成分放出のために異なったグルロン酸含量を用いてアルギネート組成物が 最適化できる。 実施例５ 酸環境下でのＴＮＦＲ：Ｆｃ放出 この実施例は酸環境下に暴露された場合の上記の凍結乾燥されたＴＮＦＲ：Ｆ ｃ−アルギネートビーズからのＴＮＦｒ：Ｆｃ放出について説明している。ＴＮ ＦＲ：Ｆｃおよびアルギネート（７０％グルロン酸含量）を含むビーズは上記の ように調製された。ビーズを凍結乾燥し、胃で蛋白質が放出されるかどうかを決 定するためにｐＨ１.２の０.１Ｍ ＨＣｌ（胃液を模倣）中に置いた。３時間後 、ビーズを蒸留水で洗浄し、小腸の環境を模倣してＫＰｉ緩衝液溶液（ｐＨ７． ４）に懸濁した。下記表Ｖにデータが示されている放出パーセントは近似値であ る。 表Ｖは最初の３時間の間にｐＨ１．２の環境内へ１０％未満のＴＮＦＲ：Ｆｃ しか放出されていないことを示している。表Ｖはまた、ＫＰｉ緩衝液中で２時間 後には約６５％のＴＮＦＲ：Ｆｃが放出されたことも示している。結合阻害アッ セイはＨＣｌ処理後もＴＮＦＲ：Ｆｃはまだ生物学的に活性であったことを示し た。このデータはアルギネートビーズ中の活性成分は酸環境から保護され、ｐＨ が増加すると活性な形で放出されることを示している。 実施例６ アルギネートビーズからのＩＬ−１Ｒ放出動力学 ＩＬ−１Ｒは発表されている方法を用いて製造した。７０％グルロン酸および ２ｍｇのタイプＩ ＩＬ−１Ｒを含むアルギネートビーズが実施例１のＴＮＦＲ ：Ｆｃを作るために使用された方法と同一の方法に従って調製された、ただし、 架橋カチオンとしてはＳｒ(ＮＯ₃)₂が使用された。放出動力学はＴＮＦＲ：Ｆｃ と同一の方法で決定された。放出されたＩＬ−１Ｒの量は３０分ごと総計で９０ 分まで２８０ｎｍで決定された。ＩＬ−１Ｒの放出動力学は下記表VIに示されて いる。 表VIのデータはｐＨ７．４ＫＰｉ環境下で９０分後４０％のＩＬ−１Ｒ活性成 分が放出されることを示している。期待されたように、表VIは（ＴＮＦＲ：Ｆｃ 同様に）ＩＬ−１Ｒの放出もアルギネートビーズを用いて制御できることを示し ている。 実施例７ ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６Ｒ、並びにＴＮＦ、ＩＬ−１若しくはＩＬ−６ に対するモノクローナル抗体のためのアルギネート複合体の製造 他の活性成分ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６ＲならびにＴＮＦ、ＩＬ−１またはＩＬ −６に対するモノクローナル抗体は本分野に記載されている方法を用いて製造さ れた。ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６ＲならびにＴＮＦ、ＩＬ−１またはＩＬ−６に対 するモノクローナル抗体のためのアルギネート複合体は上記実施例１に記載され ている工程に従って容易に製造される。各々の活性成分のための種々の放出動力 学プロフィールは上記のガイドラインに従って作ることができる。各々の蛋白質 の放出動力学の決定は上記の実施例に記載されている方法を用いて行われる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． （ａ）ＴＮＦＲ、（ｂ）ＩＬ−１Ｒ、（ｃ）ＩＬ−１ｒａ、（ｄ）ＩＬ −６Ｒ並びに（ｅ）ＴＮＦ、ＩＬ−６若しくはＩＬ−１に対して免疫活性である モノクローナル抗体からなる群より選択される有効量のポリペプチドを含む放出 制御性医薬調剤であって、前記ポリペプチドはアルギネートに封入されている、 前記放出制御性医薬調剤。 ２． ポリペプチドがＴＮＦＲである、請求項１に記載の放出制御性医薬調剤 。 ３． ポリペプチドがＩＬ−１Ｒである、請求項１に記載の放出制御性医薬調 剤。 ４． ポリペプチドがＩＬ−１ｒａである、請求項１に記載の放出制御性医薬 調剤。 ５． ポリペプチドがＩＬ−６Ｒである、請求項１に記載の放出制御性医薬調 剤。 ６． ポリペプチドがＴＮＦに対するモノクローナル抗体である、請求項１に 記載の放出制御性医薬調剤。 ７． ポリペプチドがＩＬ−１に対するモノクローナル抗体である、請求項１ に記載の放出制御性医薬調剤。 ８． ポリペプチドがＩＬ−６に対するモノクローナル抗体である、請求項１ に記載の放出制御性医薬調剤。 ９． ポリペプチドが固体内容物の約１％から約７５％の重量パーセントの量 で存在する、請求項１に記載の放出制御性医薬調剤。 １０． 凍結乾燥された、請求項１に記載の放出制御性医薬調剤。 １１． 組成物がポリカチオンで被覆されている、請求項１に記載の放出制御性 医薬調剤。 １２． アルギネートが約４０％から約７０％のグルロン酸を含んでいる、請求 項１に記載の放出制御性医薬調剤。 １３． （ａ）ＴＮＦＲ、（ｂ）ＩＬ−１Ｒ、（ｃ）ＩＬ−１ｒａ、（ｄ）ＩＬ −６Ｒ並びに（ｅ）ＴＮＦ、ＩＬ−６若しくはＩＬ−１に対して免疫活性である モノクローナル抗体からなる群より選択される有効量のポリペプチドを含む放出 制御性医薬調剤であって、前記ポリペプチドはアルギネートに封入されている、 前記放出制御性医薬調剤を、それらを必要としている患者に投与することからな る炎症性腸疾患の治療方法。 １４． 疾患がクローン病である、請求項１３に記載の方法。 １５． 疾患が潰瘍性大腸炎である、請求項１３に記載の方法。 １６． 組成物が凍結乾燥されている、請求項１３に記載の方法。 １７． 組成物が約４０％から約７０％のグルロン酸を含んでいる、請求項１３ に記載の方法。